特表 2025-500789 チェックポイント阻害剤と組み合わせてケトチフェンを使用するがんの処置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-15

(54)【発明の名称】チェックポイント阻害剤と組み合わせてケトチフェンを使用するがんの処置

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20250107BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250107BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250107BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250107BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20250107BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20250107BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20250107BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20250107BHJP

   A61K 31/4535 20060101ALI20250107BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P35/00 ZNA

A61P43/00 121

A61K39/395 T

A61K47/68

A61P35/04

A61K45/06

A61K31/704

A61K31/4535

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024534240

(86)(22)【出願日】2022-12-08

(85)【翻訳文提出日】2024-08-02

(86)【国際出願番号】 US2022081197

(87)【国際公開番号】W WO2023108082

(87)【国際公開日】2023-06-15

(31)【優先権主張番号】63/287,872

(32)【優先日】2021-12-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523220293

【氏名又は名称】マテリア セラピューティクス インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】522350678

【氏名又は名称】ユニバーシティ オブ キプロス

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】マーティン， ジョン ディー．

(72)【発明者】

【氏名】スティリアノポウロス， トリアンタフィロス

(72)【発明者】

【氏名】ムペクリス， フォティオス

(72)【発明者】

【氏名】パナギ， ミロフォラ

(72)【発明者】

【氏名】ボウトウリ， クリソバランティス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA19

4C084AA22

4C084AA23

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085DD61

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC21

4C086EA10

4C086GA04

4C086GA07

4C086MA03

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、対象におけるがんを処置するためもしくは腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効であり、および／または腫瘍細胞に対する免疫応答を惹起する、増強する、もしくは延長させることができる、ケトチフェンとチェックポイント阻害剤とを使用する併用処置を対象とする。がん免疫療法の有効性は、Ｔ細胞が腫瘍に移動し、悪性細胞に隣接する場所まで遊走して、それらを認識し、殺滅することができるか否かに依存する。本願発明は、この課題を解決する手段を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項2】

それを必要とする対象におけるチェックポイント阻害剤の効果を惹起する、増強する、もしくは延長させる、または前記対象がチェックポイント阻害剤に応答することを可能にする方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象が固形腫瘍を有する、方法。

【請求項3】

それを必要とする対象におけるチェックポイント阻害剤の効果を増強する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象が固形腫瘍を有する、方法。

【請求項4】

対象における固形腫瘍の血流を増加させる方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を前記対象に投与することを含み、前記固形腫瘍の血流を増加させることが、前記チェックポイント阻害剤の効果を増強する、方法。

【請求項5】

血流が、超音波に基づく血流測定を使用して、または低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して測定される、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

対象におけるチェックポイント阻害剤の送達または有効性を改善する方法であって、前記チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含み、前記対象が固形腫瘍を有し、それによって前記対象における治療の送達または有効性を改善する、方法。

【請求項7】

ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することが、固形腫瘍と共局在する抗腫瘍Ｔ細胞の数を増加させる、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することが。固形腫瘍の組織硬度を低減させる、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記固形腫瘍の組織硬度が、超音波エラストグラフィーを使用して測定される、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することが、前記固形腫瘍における細胞外基質タンパク質のレベルを減少させる、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記細胞外基質タンパク質が、コラーゲンＩまたはヒアルロナン結合タンパク質（ＨＡＢＰ）である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することが、前記固形腫瘍における低酸素状態を低減する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＭＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、およびＢ－７ファミリーリガンドまたはその組合せからなる群から選択されるチェックポイントタンパク質を阻害する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、またはＰＤ－１阻害剤である、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ４抗体である、請求項１３に記載の方法。

【請求項16】

前記チェックポイント阻害剤が、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。

【請求項17】

前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ－４抗体の組合せである、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日１回投与される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日２回投与される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、約１００ｍｇ～約１２００ｍｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、約１２５ｍｇ～約５００ｍｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、約１２５ｍｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、約５００ｍｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、前記チェックポイント阻害剤を前記対象に投与する前に前記対象に投与される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、前記チェックポイント阻害剤を前記対象に投与する少なくとも１日前に開始して前記対象に投与される、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、前記チェックポイント阻害剤を前記対象に投与する少なくとも２日前に開始して前記対象に投与される、請求項２５に記載の方法。

【請求項28】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、前記チェックポイント阻害剤を前記対象に投与する少なくとも３日前に開始して前記対象に投与される、請求項２５に記載の方法。

【請求項29】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩が、前記チェックポイント阻害剤を前記対象に投与する少なくとも５日前に開始して前記対象に投与される、請求項２５に記載の方法。

【請求項30】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の前記対象への投与が、前記チェックポイント阻害剤を前記対象に投与する期間の少なくとも一部の間維持される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の前記対象への投与が、前記チェックポイント阻害剤を前記対象に投与する全期間の間維持される、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記対象における１つまたは複数の治療効果が、前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、および前記チェックポイント阻害剤の投与後にベースラインと比較して改善する、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記１つまたは複数の治療効果が、がんに由来する腫瘍のサイズ、客観的奏功率、奏功期間、奏功までの時間、無増悪生存期間、および全生存期間からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記がんに由来する腫瘍のサイズが、前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、および前記チェックポイント阻害剤の投与前の前記がんに由来する腫瘍のサイズと比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％低減される、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記客観的奏功率が、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記対象が、前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、および前記チェックポイント阻害剤の投与後、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、少なくとも約１２ヶ月間、少なくとも約１８ヶ月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間の無増悪生存期間を示す、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記対象が、前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、および前記チェックポイント阻害剤の投与後、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、少なくとも約１２ヶ月間、少なくとも約１８ヶ月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間
の全生存期間を示す、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記抗体－薬物コンジュゲートに対する奏功期間が、前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、および前記チェックポイント阻害剤の投与後、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、少なくとも約１２ヶ月間、少なくとも約１８ヶ月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間である、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記固形腫瘍が、中皮腫、乳がん、乳がんの肺転移、肉腫、膵臓がん、卵巣がん、肝転移、前立腺がん、脳がん、黒色腫、腎細胞癌、結腸直腸がん、肝細胞癌、肺がん、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮癌、食道扁平上皮癌、胃がん、食道がん、子宮頸がん、メルケル細胞癌、子宮内膜癌、および皮膚扁平上皮癌からなる群から選択される、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記固形腫瘍が肉腫である、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記肉腫が、骨肉腫または線維肉腫である、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記対象がヒトである、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

追加の化学療法剤を投与することを含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記追加の化学療法剤が、ドキソルビシンまたはそのアナログもしくは誘導体である、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

（ａ）ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量；
（ｂ）チェックポイント阻害剤の有効量；および
（ｃ）前記ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記チェックポイント阻害剤を請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法に従って使用するための使用説明書
を含むキット。

【請求項46】

固形腫瘍を有する対象におけるケトチフェンの有効量を決定する方法であって：
（ａ）前記固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；
（ｂ）前記ケトチフェンの有効量を前記対象に投与するステップ；ならびに
（ｃ）前記ケトチフェンの投与後に前記固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップを含み、前記ケトチフェンの前記対象への投与後の血流の増加および／または硬度の減少が、投与された量が有効量であったことを示す、方法。

【請求項47】

それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって：
（ａ）前記固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；
（ｂ）ケトチフェンの有効量を前記対象に投与するステップ；
（ｃ）前記ケトチフェンの投与後に前記固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；ならびに
（ｄ）前記ケトチフェンの投与後に前記固形腫瘍の血流が増加する場合および／または前記固形腫瘍の硬度が減少する場合に化学療法剤を投与するステップ
を含む方法。

【請求項48】

それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって：
（ａ）前記固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；
（ｂ）ケトチフェンの有効量を前記対象に投与するステップ；
（ｃ）前記ケトチフェンの投与後に前記固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；
（ｄ）前記ケトチフェンの投与後の前記固形腫瘍の血流の増加または前記固形腫瘍の硬度の減少に基づいて、前記対象が化学療法剤に応答性であることを決定するステップ；ならびに
（ｅ）前記ケトチフェンの投与後の前記固形腫瘍の血流の増加または前記固形腫瘍の硬度の減少に基づいて、化学療法剤に応答性であると決定されている前記対象に前記化学療法剤を投与するステップ
を含む方法。

【請求項49】

化学療法剤による処置に対する応答を予測する方法であって：
（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；
（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；
（ｃ）前記ケトチフェンの投与後に前記固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ
を含み、前記ケトチフェンの投与後の前記固形腫瘍の血流の増加または前記固形腫瘍の硬度の減少が、前記対象が前記化学療法剤による処置に応答する可能性が高いことを示す、方法。

【請求項50】

前記ケトチフェンの有効量が、前記ケトチフェンの前記対象への投与後の前記固形腫瘍の血流および／または硬度の変化を測定することによって決定され、前記ケトチフェンの前記対象への投与後の血流の増加および／または硬度の減少が、投与された量が有効量であったことを示す、請求項４５～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記方法が前記固形腫瘍の血流を測定するステップを含み、前記ケトチフェンの投与後に前記固形腫瘍の血流が増加する、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記方法が前記固形腫瘍の硬度を測定するステップを含み、前記ケトチフェンの投与後に前記固形腫瘍の硬度が減少する、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記ケトチフェンが、前記化学療法剤の投与前に、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、または少なくとも５日間投与される、請求項４６～５２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

前記ケトチフェンが、前記固形腫瘍の血流を増加させ、および／または前記固形腫瘍の硬度を減少させる用量で投与される、請求項４６～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記固形腫瘍の血流および／または硬度が、超音波を使用して測定される、請求項４６～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記固形腫瘍の血流が、低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して測定される、請求項４６～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記化学療法剤がチェックポイント阻害剤である、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＭＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、およびＢ－７ファミリーリガンドまたはその組合せからなる群から選択されるチェックポイントタンパク質を阻害する、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、またはＰＤ－１阻害剤である、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ４抗体である、請求項５８に記載の方法。

【請求項61】

前記チェックポイント阻害剤が、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。

【請求項62】

前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ－４抗体の組合せである、請求項５８～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記固形腫瘍が、乳がん、乳がんの肺転移、肉腫、膵臓がん、卵巣がん、肝転移、前立腺がん、脳がん、黒色腫、腎細胞癌、結腸直腸がん、肝細胞癌、肺がん、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮癌、食道扁平上皮癌、胃がん、食道がん、子宮頸がん、メルケル細胞癌、子宮内膜癌、および皮膚扁平上皮癌からなる群から選択される、請求項４６～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

前記固形腫瘍が肉腫である、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記肉腫が、骨肉腫または線維肉腫である、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記対象がヒトである、請求項４６～６５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

前記化学療法剤がドキソルビシンである、請求項４７～５６または６３～６６のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０２１年１２月９日に提出された米国仮出願第６３／２８７，８７２号に基づく利益を主張する。

【0002】

配列表の参照による組込み
電子的配列表（２１１４８２０００２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｘｍｌ；サイズ：２３，９３７バイト；および作成日：２０２２年１２月８日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

発明の分野
本発明は、対象におけるがんを処置するためもしくは腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効であり、および／または腫瘍細胞に対する免疫応答を惹起する、増強する、もしくは延長させることができる、ケトチフェンとチェックポイント阻害剤とを使用する併用処置を開示する。

【背景技術】

【0004】

背景
がん免疫療法の有効性は部分的に、Ｔ細胞が腫瘍に移動し、悪性細胞に隣接する場所まで遊走して、それらを認識し、殺滅することができるか否かに依存する。Ｔ細胞ホーミングに対する障壁の１つは、腫瘍の血管壁であり、これはＴ細胞の付着およびエンドセリンＢ受容体を通しての移動を阻害するが、この受容体に拮抗することはまだ臨床承認薬に至っていない。１つの理由は、腫瘍における低灌流であり得、これは抗腫瘍Ｔ細胞が付着する灌流血管の表面積を制限し得る。機械的圧迫（すなわち、固体ストレス）を軽減することによって、崩壊した腫瘍血管を減圧させ、再灌流することができれば、エンドセリンＢ受容体の拮抗は、がん免疫療法の有効性を増加させることができるであろう。

【0005】

ケトチフェンは、アナフィラキシーの阻害剤として最初に上市されたシクロヘプタチオフェン誘導体薬である。ケトチフェンは、ヒスタミン（Ｈ１）受容体を選択的に遮断し、ヒスタミン放出と関連する症状を抑制する。ケトチフェンはまた、肥満細胞の活性を抑制すると報告されている。

【0006】

免疫系のＴ細胞におけるオフスイッチとして作用する免疫チェックポイントは、標的化作用剤による免疫応答を回復するために研究されており、このように体の免疫系を活性化することによってがんを間接的に処置する。

【0007】

国際特許出願ＷＯ２００２０８６０８３号、ＷＯ２００４００４７７１号、ＷＯ２００４０５６８７５号、ＷＯ２００６１２１１６８号、ＷＯ２００８１５６７１２号、ＷＯ２０１００７７６３４号、ＷＯ２０１１０６６３８９号、ＷＯ２０１４０５５８９７号、およびＷＯ２０１４１０００７９号は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１阻害性抗体および／またはそのような抗体を同定する方法を報告している。さらに、米国特許第８７３５５５３号および米国特許第８１６８７５７号などの米国特許は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害性抗体および／または融合タンパク質を報告している。ＷＯ２００２０８６０８３号、ＷＯ２００４００４７７１号、ＷＯ２００４０５６８７５号、ＷＯ２００６１２１１６８号、ＷＯ２００８１５６７１２号、ＷＯ２０１００７７６３４号、ＷＯ２０１１０６６３８９号、ＷＯ２０１４０５５８９７号、およびＷＯ２０１４１０００７９号、ならびに米国特許第８７３５５５３号および米国特許第８１６８７５７号の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0008】

その上、国際特許出願ＷＯ２０１１１６１６９９号、ＷＯ２０１２１６８９４４号、ＷＯ２０１３１４４７０４号、ＷＯ２０１３１３２３１７号、およびＷＯ２０１６０４４９００号は、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）シグナル伝達経路を抑制および／または阻害することが可能であるペプチドまたはペプチド模倣化合物を報告している。ＷＯ２０１１１６１６９９号、ＷＯ２０１２１６８９４４号、ＷＯ２０１３１４４７０４号、ＷＯ２０１３１３２３１７号、およびＷＯ２０１６０４４９００号の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0009】

さらに、国際特許出願ＷＯ２０１６１４２８５２号、ＷＯ２０１６１４２８９４号、ＷＯ２０１６１４２８８６号、ＷＯ２０１６１４２８３５号、およびＷＯ２０１６１４２８３３号は、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）シグナル伝達経路を抑制および／もしくは阻害することが可能な、ならびに／またはＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、もしくはＰＤ－Ｌ２によって誘導される免疫抑制シグナルを阻害することによって障害を処置することが可能な低分子化合物を報告している。ＷＯ２０１６１４２８５２号、ＷＯ２０１６１４２８９４号、ＷＯ２０１６１４２８８６号、ＷＯ２０１６１４２８３５号、およびＷＯ２０１６１４２８３３号の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0010】

最近、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）を標的とするモノクローナル抗体であるイピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、およびＴ細胞の表面上のプログラム細胞死タンパク質１経路（ＰＤ－１）を標的とするモノクローナル抗体であるニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））が、米国食品医薬品局によって、進行黒色腫、進行腎細胞癌、および非小細胞肺がんの処置に関して承認されている。しかし、現行のチェックポイント阻害剤治療は、部分的には既存の免疫活性化および阻害性受容体の存在により、比較的小さい集団のがん対象集団のがんを処置するのに有効である。チェックポイント阻害剤による免疫チェックポイント遮断（ＩＣＢ）は、多くのタイプの固形腫瘍の処置の革命を起こしてきたが、現在では利益をもたらすのはがん患者の２０％未満であると推定されている。応答する患者の割合およびその応答の期間を増大させることは、喫緊の臨床でのアンメットニーズである。したがって、非応答性の対象集団および応答性の対象集団の両方においてチェックポイント阻害剤の有効性を惹起するまたは増強するための方法および併用療法を開発する必要がある。

【0011】

抗腫瘍Ｔ細胞は、がん細胞に遭遇する前に、血管を通して腫瘍の中を循環し、内皮に結合し、血管壁を通過して、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）および細胞外基質（ＥＣＭ）の中を遊走しなければならない。しかし、最大８０％の腫瘍内血管が灌流を欠如していることから、Ｔ細胞がその中を遊走する血管壁の領域は限定的である。

【0012】

圧迫された血管は、腫瘍への血流および酸素の送達を損ない、腫瘍において低酸素状態の増加をもたらし、複数の機構を通して免疫療法に対する抵抗性をもたらす。血管を減圧する戦略は、ＩＣＢ抵抗性のマウス転移性乳がんモデルにおけるＩＣＢの有効性を増強する。腫瘍血管を減圧し、しかもＴ細胞の腫瘍実質への接着および遊走も容易にする方法が存在すれば、ＩＣＢに応答するがん患者の割合は増加するであろう。
特許出願、特許公報、および科学論文を含む、本明細書で引用する全ての参考文献は、各々の個々の参考文献が、具体的かつ個々に参照により本明細書に組み込まれることが示されているように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0013】

【特許文献1】国際公開第２００２／０８６０８３号

【特許文献2】国際公開第２００４／００４７７１号

【特許文献3】国際公開第２００４／０５６８７５号

【特許文献4】国際公開第２００６／１２１１６８号

【特許文献5】国際公開第２００８／１５６７１２号

【特許文献6】国際公開第２０１０／０７７６３４号

【特許文献7】国際公開第２０１１／０６６３８９号

【特許文献8】国際公開第２０１４／０５５８９７号

【特許文献9】国際公開第２０１４／１０００７９号

【特許文献10】米国特許第８７３５５５３号明細書

【特許文献11】米国特許第８１６８７５７号明細書

【特許文献12】国際公開第２０１１／１６１６９９号

【特許文献13】国際公開第２０１２／１６８９４４号

【特許文献14】国際公開第２０１３／１４４７０４号

【特許文献15】国際公開第２０１３／１３２３１７号

【特許文献16】国際公開第２０１６／０４４９００号

【特許文献17】国際公開第２０１６／１４２８５２号

【特許文献18】国際公開第２０１６／１４２８９４号

【特許文献19】国際公開第２０１６／１４２８８６号

【特許文献20】国際公開第２０１６／１４２８３５号

【特許文献21】国際公開第２０１６／１４２８３３号

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0014】

要旨
固形腫瘍の処置を必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含む、方法が本明細書に提供される。それを必要とする対象におけるチェックポイント阻害剤の効果を惹起する、増強する、もしくは延長させる、または対象がチェックポイント阻害剤に応答することを可能にする方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含み、対象が固形腫瘍を有する、方法も本明細書に提供される。それを必要とする対象におけるチェックポイント阻害剤の効果を増強する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含み、対象が固形腫瘍を有する、方法も本明細書に提供される。対象における固形腫瘍の血流を増加させる方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含み、固形腫瘍の血流を増加させることは、チェックポイント阻害剤の効果を増強する、方法も本明細書に提供される。一部の実施形態では、血流は、超音波に基づく血流測定を使用して、または低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して測定される。対象におけるチェックポイント阻害剤の送達または有効性を改善する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含み、対象が固形腫瘍を有し、それによって対象における治療の送達または有効性を改善する、方法も本明細書に提供される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することは、固形腫瘍と共局在する抗腫瘍Ｔ細胞の数を増加させる。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することが。固形腫瘍の組織硬度を低減させる。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、超音波エラストグラフィーを使用して測定される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することは、固形腫瘍における細胞外基質タンパク質のレベルを減少させる。一部の実施形態では、細胞外基質タンパク質は、コラーゲンＩまたはヒアルロナン結合タンパク質（ＨＡＢＰ）である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することは、固形腫瘍における低酸素状態を低減する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＭＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、およびＢ－７ファミリーリガンドまたはその組合せからなる群から選択されるチェックポイントタンパク質を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、またはＰＤ－１阻害剤である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ４抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ－４抗体の組合せである。
一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１日１回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１日２回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、約１００ｍｇ～約１２００ｍｇの用量で対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、約１２５ｍｇ～約５００ｍｇの用量で対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、約１２５ｍｇの用量で対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、約５００ｍｇの用量で対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤を対象に投与する前に対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも１日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも２日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも３日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも５日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の対象への投与は、チェックポイント阻害剤を対象に投与する期間の少なくとも一部の間維持される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の対象への投与は、チェックポイント阻害剤を対象に投与する全期間の間維持される。一部の実施形態では、対象における１つまたは複数の治療効果は、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、およびチェックポイント阻害剤の投与後にベースラインと比較して改善する。一部の実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、がんに由来する腫瘍のサイズ、客観的奏功率、奏功期間、奏功までの時間、無増悪生存期間、および全生存期間からなる群から選択される。一部の実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、およびチェックポイント阻害剤の投与前のがんに由来する腫瘍のサイズと比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％低減される。一部の実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％である。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、およびチェックポイント阻害剤の投与後、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、少なくとも約１２ヶ月間、少なくとも約１８ヶ月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、およびチェックポイント阻害剤の投与後、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、少なくとも約１２ヶ月間、少なくとも約１８ヶ月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間の全生存期間を示す。一部の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートに対する奏功期間は、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、およびチェックポイント阻害剤の投与後、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、少なくとも約１２ヶ月間、少なくとも約１８ヶ月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、中皮腫、乳がん、乳がんの肺転移、肉腫、膵臓がん、卵巣がん、肝転移、前立腺がん、脳がん、黒色腫、腎細胞癌、結腸直腸がん、肝細胞癌、肺がん、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮癌、食道扁平上皮癌、胃がん、食道がん、子宮頸がん、メルケル細胞癌、子宮内膜癌、および皮膚扁平上皮癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍は肉腫である。一部の実施形態では、肉腫は、骨肉腫または線維肉腫である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。前記方法のいずれかの一部の実施形態では、方法は、追加の化学療法剤を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、追加の化学療法剤は、ドキソルビシンまたはそのアナログもしくは誘導体である。

【0015】

（ａ）ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量；（ｂ）チェックポイント阻害剤の有効量；および（ｃ）ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩およびチェックポイント阻害剤を本明細書に記載の方法のいずれかに従って使用するための使用説明書を含むキットも本明細書に提供される。

【0016】

また、固形腫瘍を有する対象におけるケトチフェンの有効量を決定する方法であって、（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；ならびに（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップを含み、対象へのケトチフェンの投与後の血流の増加および／または硬度の減少が、投与された量が有効量であったことを示す、方法も本明細書に提供される。また、それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって、（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；ならびに（ｄ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流が増加する場合および／または固形腫瘍の硬度が減少する場合に化学療法剤を投与するステップを含む方法も本明細書に提供される。また、それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって、（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｄ）ケトチフェンの投与後の固形腫瘍の血流の増加または固形腫瘍の硬度の減少に基づいて、対象が化学療法剤に応答性であることを決定するステップ；ならびに（ｅ）ケトチフェンの投与後の固形腫瘍の血流の増加または固形腫瘍の硬度の減少に基づいて、化学療法剤に応答性であると決定されている対象に化学療法剤を投与するステップを含む方法も本明細書に提供される。また、化学療法剤による処置に対する応答を予測する方法であって、（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップを含み、ケトチフェンの投与後の固形腫瘍の血流の増加または固形腫瘍の硬度の減少が、対象が化学療法剤による処置に応答する可能性が高いことを示す、方法も本明細書に提供される。一部の実施形態では、ケトチフェンの有効量は、ケトチフェンの対象への投与後の固形腫瘍の血流および／または硬度の変化を測定することによって決定され、ケトチフェンの対象への投与後の血流の増加および／または硬度の減少は、投与された量が有効量であったことを示す。一部の実施形態では、方法は、固形腫瘍の血流を測定するステップを含み、ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流が増加する。一部の実施形態では、方法は、固形腫瘍の硬度を測定するステップを含み、ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の硬度が減少する。一部の実施形態では、ケトチフェンは、化学療法剤の投与前に、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、または少なくとも５日間投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンは、固形腫瘍の血流を増加させる、および／または固形腫瘍の硬度を減少させる用量で投与される。一部の実施形態では、固形腫瘍の血流および／または硬度は、超音波を使用して測定される。一部の実施形態では、固形腫瘍の血流は、低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して測定される。一部の実施形態では、化学療法剤がチェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＭＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、およびＢ－７ファミリーリガンドまたはその組合せからなる群から選択されるチェックポイントタンパク質を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、またはＰＤ－１阻害剤である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ４抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ－４抗体の組合せである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳がん、乳がんの肺転移、肉腫、膵臓がん、卵巣がん、肝転移、前立腺がん、脳がん、黒色腫、腎細胞癌、結腸直腸がん、肝細胞癌、肺がん、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮癌、食道扁平上皮癌、胃がん、食道がん、子宮頸がん、メルケル細胞癌、子宮内膜癌、および皮膚扁平上皮癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍が肉腫である。一部の実施形態では、肉腫は、骨肉腫または線維肉腫である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。前記方法の一部の実施形態では、化学療法剤は、ドキソルビシンまたはそのアナログもしくは誘導体である。

【0017】

本明細書に記載される様々な実施形態の特性の１つ、一部、または全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成してもよいと理解すべきである。本発明のこれらおよび他の態様は、当業者に明らかとなるであろう。本発明のこれらおよび他の実施形態を、以下の詳細な説明によってさらに説明する。

【0018】

本発明の代表的な実施形態は、以下の図面を参照することによって開示される。描写される実施形態は、示される正確な詳細に限定されないことが理解されるべきである。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1A】図１Ａは、ピモニダゾール塩酸塩注射後のピモニダゾール付加物について染色されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルのパラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像を示す；スケールバー＝０．２ｍｍ（上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応する低酸素染色である）。図１Ｂ～１Ｃは、ＭＣＡ２０５（図１Ｂ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図１Ｃ）腫瘍のＤＡＰＩ染色に対して正規化された低酸素領域の割合（ｆｒａｃｔｉｏｎ）の定量を示す（ｎ＝５匹のマウス／群、マウス１匹あたりＮ＝３～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図１Ｄは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置のＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＩＦＮ－γおよびＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図１Ｅは、未処置のマウスおよび７日間にわたって毎日ケトチフェンで処置したマウス（ｎ＝７匹のマウス／処置群）におけるＩＦＰレベルを示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図1B-C】図１Ａは、ピモニダゾール塩酸塩注射後のピモニダゾール付加物について染色されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルのパラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像を示す；スケールバー＝０．２ｍｍ（上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応する低酸素染色である）。図１Ｂ～１Ｃは、ＭＣＡ２０５（図１Ｂ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図１Ｃ）腫瘍のＤＡＰＩ染色に対して正規化された低酸素領域の割合の定量を示す（ｎ＝５匹のマウス／群、マウス１匹あたりＮ＝３～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図１Ｄは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置のＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＩＦＮ－γおよびＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図１Ｅは、未処置のマウスおよび７日間にわたって毎日ケトチフェンで処置したマウス（ｎ＝７匹のマウス／処置群）におけるＩＦＰレベルを示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図1D-E】図１Ａは、ピモニダゾール塩酸塩注射後のピモニダゾール付加物について染色されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルのパラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像を示す；スケールバー＝０．２ｍｍ（上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応する低酸素染色である）。図１Ｂ～１Ｃは、ＭＣＡ２０５（図１Ｂ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図１Ｃ）腫瘍のＤＡＰＩ染色に対して正規化された低酸素領域の割合の定量を示す（ｎ＝５匹のマウス／群、マウス１匹あたりＮ＝３～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図１Ｄは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置のＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＩＦＮ－γおよびＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図１Ｅは、未処置のマウスおよび７日間にわたって毎日ケトチフェンで処置したマウス（ｎ＝７匹のマウス／処置群）におけるＩＦＰレベルを示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0020】

【図2A-B】図２Ａは、対照と比較した、様々な用量（１、５、１０および２５ｍｇ／ｋｇ）のケトチフェンを毎日投与した後のＭＣＡ２０５腫瘍の増殖曲線を示す。図２Ｂは、対照と比較した、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンを毎日投与した後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍の増殖曲線を示す。図２Ｃ～２Ｄは、処置プロトコールの完了後のＭＣＡ２０５（図２Ｃ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図２Ｄ）腫瘍量の測定を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝５～７匹のマウス／処置群）。図２Ｅは、ローディング対照としてのβ－アクチンと共に、ＣＤ１１７タンパク質に対する例示的なウェスタンブロットを示す（ｎ＝４匹のマウス／群）。

【図2C-D】図２Ａは、対照と比較した、様々な用量（１、５、１０および２５ｍｇ／ｋｇ）のケトチフェンを毎日投与した後のＭＣＡ２０５腫瘍の増殖曲線を示す。図２Ｂは、対照と比較した、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンを毎日投与した後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍の増殖曲線を示す。図２Ｃ～２Ｄは、処置プロトコールの完了後のＭＣＡ２０５（図２Ｃ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図２Ｄ）腫瘍量の測定を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝５～７匹のマウス／処置群）。図２Ｅは、ローディング対照としてのβ－アクチンと共に、ＣＤ１１７タンパク質に対する例示的なウェスタンブロットを示す（ｎ＝４匹のマウス／群）。

【図2E】図２Ａは、対照と比較した、様々な用量（１、５、１０および２５ｍｇ／ｋｇ）のケトチフェンを毎日投与した後のＭＣＡ２０５腫瘍の増殖曲線を示す。図２Ｂは、対照と比較した、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンを毎日投与した後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍の増殖曲線を示す。図２Ｃ～２Ｄは、処置プロトコールの完了後のＭＣＡ２０５（図２Ｃ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図２Ｄ）腫瘍量の測定を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝５～７匹のマウス／処置群）。図２Ｅは、ローディング対照としてのβ－アクチンと共に、ＣＤ１１７タンパク質に対する例示的なウェスタンブロットを示す（ｎ＝４匹のマウス／群）。

【0021】

【図3A-F】図３Ａ～３Ｆは、対照または示された用量のケトチフェンで処置したＭＣＡ２０５（図３Ａ～３Ｃ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図３Ｄ～３Ｆ）腫瘍の研究の結論時でのマウスの体重、胸腺重量および脾臓重量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝５～７匹のマウス／処置群）。処置群を対照群^＊および１０ｍｇ／ｋｇ群と比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0022】

【図4A-C】図４Ａは、例示的な用量の１０ｍｇ／ｋｇの毎日のケトチフェン処置を用いたマウスＭＣＡ２０５腫瘍モデルに関する例示的な研究処置プロトコールを示す。図４Ｂおよび図４Ｃは、超音波弾性率計測法を使用して評価した場合の、示されたように処置したＭＣＡ２０５（図４Ｂ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図４Ｃ）腫瘍における組織レベルの巨視的ヤング係数の長手軸方向の測定を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、超音波測定についてはマウスあたりＮ＝２の画像視野）。図４Ｄ～４Ｅは、ケトチフェン処置の３日後（図４Ｄ）および７日後（図４Ｅ）の示されたように処置したＭＣＡ２０５腫瘍における血管灌流を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝４匹のマウス／処置群）。処置群を対照群^＊および１０ｍｇ／ｋｇ群と比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図４Ｆ～４Ｇは、処置の３日後（図４Ｆ）および７日後（図４Ｇ）の示されたように処置したＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍における機能的灌流を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝４匹のマウス／処置群）。処置群を対照群^＊および１０ｍｇ／ｋｇ群と比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図4D-G】図４Ａは、例示的な用量の１０ｍｇ／ｋｇの毎日のケトチフェン処置を用いたマウスＭＣＡ２０５腫瘍モデルに関する例示的な研究処置プロトコールを示す。図４Ｂおよび図４Ｃは、超音波弾性率計測法を使用して評価した場合の、示されたように処置したＭＣＡ２０５（図４Ｂ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図４Ｃ）腫瘍における組織レベルの巨視的ヤング係数の長手軸方向の測定を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、超音波測定についてはマウスあたりＮ＝２の画像視野）。図４Ｄ～４Ｅは、ケトチフェン処置の３日後（図４Ｄ）および７日後（図４Ｅ）の示されたように処置したＭＣＡ２０５腫瘍における血管灌流を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝４匹のマウス／処置群）。処置群を対照群^＊および１０ｍｇ／ｋｇ群と比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図４Ｆ～４Ｇは、処置の３日後（図４Ｆ）および７日後（図４Ｇ）の示されたように処置したＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍における機能的灌流を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（ｎ＝４匹のマウス／処置群）。処置群を対照群^＊および１０ｍｇ／ｋｇ群と比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0023】

【図5A-B】図５Ａおよび図５Ｂは、ＭＣＡ２０５（図５Ａ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図５Ｂ）のパラフィン腫瘍切片におけるピクロシリウスレッド染色の代表的な明視野画像を示す（ｎ＝４匹のマウス／群；マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｃおよび図５Ｄは、対照群に対して正規化された線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍（図５Ｃ）および骨肉腫Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図５Ｄ）におけるピクロシリウスレッド染色について陽性の領域の定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｅ～５Ｆは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後の、線維肉腫腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカーおよびα－ＳＭＡの代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｅ；上２行はα－ＳＭＡであり、下２行は対応するＫｉ６７染色である）；また、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色（図５Ｆ）に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量も示される。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｇは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３のｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｈ～５Ｉは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＭＣＡ２０５腫瘍におけるα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｈ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｉ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｊ～５Ｌは、それぞれ、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＭＣＡ２０５パラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像、スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｊ；上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応するＨＡＢＰ１染色である）、ＭＣＡ２０５腫瘍におけるＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｋ）、および組織を切断した後の腫瘍開口部の長さの量によって測定した固体応力の定量（ｎ＝４匹のマウス／群）（図５Ｌ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図5C-D】図５Ａおよび図５Ｂは、ＭＣＡ２０５（図５Ａ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図５Ｂ）のパラフィン腫瘍切片におけるピクロシリウスレッド染色の代表的な明視野画像を示す（ｎ＝４匹のマウス／群；マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｃおよび図５Ｄは、対照群に対して正規化された線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍（図５Ｃ）および骨肉腫Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図５Ｄ）におけるピクロシリウスレッド染色について陽性の領域の定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｅ～５Ｆは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後の、線維肉腫腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカーおよびα－ＳＭＡの代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｅ；上２行はα－ＳＭＡであり、下２行は対応するＫｉ６７染色である）；また、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色（図５Ｆ）に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量も示される。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｇは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３のｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｈ～５Ｉは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＭＣＡ２０５腫瘍におけるα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｈ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｉ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｊ～５Ｌは、それぞれ、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＭＣＡ２０５パラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像、スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｊ；上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応するＨＡＢＰ１染色である）、ＭＣＡ２０５腫瘍におけるＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｋ）、および組織を切断した後の腫瘍開口部の長さの量によって測定した固体応力の定量（ｎ＝４匹のマウス／群）（図５Ｌ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図5E】図５Ａおよび図５Ｂは、ＭＣＡ２０５（図５Ａ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図５Ｂ）のパラフィン腫瘍切片におけるピクロシリウスレッド染色の代表的な明視野画像を示す（ｎ＝４匹のマウス／群；マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｃおよび図５Ｄは、対照群に対して正規化された線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍（図５Ｃ）および骨肉腫Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図５Ｄ）におけるピクロシリウスレッド染色について陽性の領域の定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｅ～５Ｆは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後の、線維肉腫腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカーおよびα－ＳＭＡの代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｅ；上２行はα－ＳＭＡであり、下２行は対応するＫｉ６７染色である）；また、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色（図５Ｆ）に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量も示される。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｇは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３のｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｈ～５Ｉは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＭＣＡ２０５腫瘍におけるα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｈ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｉ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｊ～５Ｌは、それぞれ、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＭＣＡ２０５パラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像、スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｊ；上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応するＨＡＢＰ１染色である）、ＭＣＡ２０５腫瘍におけるＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｋ）、および組織を切断した後の腫瘍開口部の長さの量によって測定した固体応力の定量（ｎ＝４匹のマウス／群）（図５Ｌ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図5F-G】図５Ａおよび図５Ｂは、ＭＣＡ２０５（図５Ａ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図５Ｂ）のパラフィン腫瘍切片におけるピクロシリウスレッド染色の代表的な明視野画像を示す（ｎ＝４匹のマウス／群；マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｃおよび図５Ｄは、対照群に対して正規化された線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍（図５Ｃ）および骨肉腫Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図５Ｄ）におけるピクロシリウスレッド染色について陽性の領域の定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｅ～５Ｆは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後の、線維肉腫腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカーおよびα－ＳＭＡの代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｅ；上２行はα－ＳＭＡであり、下２行は対応するＫｉ６７染色である）；また、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色（図５Ｆ）に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量も示される。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｇは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３のｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｈ～５Ｉは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＭＣＡ２０５腫瘍におけるα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｈ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｉ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｊ～５Ｌは、それぞれ、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＭＣＡ２０５パラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像、スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｊ；上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応するＨＡＢＰ１染色である）、ＭＣＡ２０５腫瘍におけるＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｋ）、および組織を切断した後の腫瘍開口部の長さの量によって測定した固体応力の定量（ｎ＝４匹のマウス／群）（図５Ｌ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図5H-I】図５Ａおよび図５Ｂは、ＭＣＡ２０５（図５Ａ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図５Ｂ）のパラフィン腫瘍切片におけるピクロシリウスレッド染色の代表的な明視野画像を示す（ｎ＝４匹のマウス／群；マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｃおよび図５Ｄは、対照群に対して正規化された線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍（図５Ｃ）および骨肉腫Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図５Ｄ）におけるピクロシリウスレッド染色について陽性の領域の定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｅ～５Ｆは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後の、線維肉腫腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカーおよびα－ＳＭＡの代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｅ；上２行はα－ＳＭＡであり、下２行は対応するＫｉ６７染色である）；また、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色（図５Ｆ）に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量も示される。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｇは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３のｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｈ～５Ｉは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＭＣＡ２０５腫瘍におけるα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｈ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｉ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｊ～５Ｌは、それぞれ、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＭＣＡ２０５パラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像、スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｊ；上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応するＨＡＢＰ１染色である）、ＭＣＡ２０５腫瘍におけるＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｋ）、および組織を切断した後の腫瘍開口部の長さの量によって測定した固体応力の定量（ｎ＝４匹のマウス／群）（図５Ｌ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図5J】図５Ａおよび図５Ｂは、ＭＣＡ２０５（図５Ａ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図５Ｂ）のパラフィン腫瘍切片におけるピクロシリウスレッド染色の代表的な明視野画像を示す（ｎ＝４匹のマウス／群；マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｃおよび図５Ｄは、対照群に対して正規化された線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍（図５Ｃ）および骨肉腫Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図５Ｄ）におけるピクロシリウスレッド染色について陽性の領域の定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｅ～５Ｆは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後の、線維肉腫腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカーおよびα－ＳＭＡの代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｅ；上２行はα－ＳＭＡであり、下２行は対応するＫｉ６７染色である）；また、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色（図５Ｆ）に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量も示される。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｇは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３のｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｈ～５Ｉは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＭＣＡ２０５腫瘍におけるα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｈ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｉ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｊ～５Ｌは、それぞれ、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＭＣＡ２０５パラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像、スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｊ；上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応するＨＡＢＰ１染色である）、ＭＣＡ２０５腫瘍におけるＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｋ）、および組織を切断した後の腫瘍開口部の長さの量によって測定した固体応力の定量（ｎ＝４匹のマウス／群）（図５Ｌ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図5K-L】図５Ａおよび図５Ｂは、ＭＣＡ２０５（図５Ａ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図５Ｂ）のパラフィン腫瘍切片におけるピクロシリウスレッド染色の代表的な明視野画像を示す（ｎ＝４匹のマウス／群；マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｃおよび図５Ｄは、対照群に対して正規化された線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍（図５Ｃ）および骨肉腫Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図５Ｄ）におけるピクロシリウスレッド染色について陽性の領域の定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｅ～５Ｆは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後の、線維肉腫腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカーおよびα－ＳＭＡの代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｅ；上２行はα－ＳＭＡであり、下２行は対応するＫｉ６７染色である）；また、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色（図５Ｆ）に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量も示される。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｇは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３のｍＲＮＡ発現レベルの定量を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。図５Ｈ～５Ｉは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＭＣＡ２０５腫瘍におけるα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｈ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｉ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図５Ｊ～５Ｌは、それぞれ、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＭＣＡ２０５パラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像、スケールバー＝０．２ｍｍ（図５Ｊ；上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応するＨＡＢＰ１染色である）、ＭＣＡ２０５腫瘍におけるＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量（図５Ｋ）、および組織を切断した後の腫瘍開口部の長さの量によって測定した固体応力の定量（ｎ＝４匹のマウス／群）（図５Ｌ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す（組織分析については、ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0024】

【図6A】図６Ａは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカー（下の行）およびα－ＳＭＡ（上の行；上および下の行は同じ視野を示す）の代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ。図６Ｂは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図６Ｃは、対照と比較した、ケトチフェンによる処置後のα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｄは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｅは、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＫ７Ｍ２ｗｔパラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像を示す（上の行はＤＡＰＩ染色であり、下の行は対応するＨＡＢＰ１染色である）。スケールバー＝０．２ｍｍである。図６Ｆは、ＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図6B-D】図６Ａは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカー（下の行）およびα－ＳＭＡ（上の行；上および下の行は同じ視野を示す）の代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ。図６Ｂは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図６Ｃは、対照と比較した、ケトチフェンによる処置後のα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｄは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｅは、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＫ７Ｍ２ｗｔパラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像を示す（上の行はＤＡＰＩ染色であり、下の行は対応するＨＡＢＰ１染色である）。スケールバー＝０．２ｍｍである。図６Ｆは、ＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図6E】図６Ａは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカー（下の行）およびα－ＳＭＡ（上の行；上および下の行は同じ視野を示す）の代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ。図６Ｂは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図６Ｃは、対照と比較した、ケトチフェンによる処置後のα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｄは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｅは、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＫ７Ｍ２ｗｔパラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像を示す（上の行はＤＡＰＩ染色であり、下の行は対応するＨＡＢＰ１染色である）。スケールバー＝０．２ｍｍである。図６Ｆは、ＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図6F】図６Ａは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７増殖マーカー（下の行）およびα－ＳＭＡ（上の行；上および下の行は同じ視野を示す）の代表的な免疫蛍光画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ。図６Ｂは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、総α－ＳＭＡ染色に対して正規化された、α－ＳＭＡとＫｉ－６７マーカーとの両方について陽性のがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。図６Ｃは、対照と比較した、ケトチフェンによる処置後のα－ＳＭＡ染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｄは、対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＫｉ－６７染色について陽性の領域の割合の定量を示す。図６Ｅは、抗ＨＡＢＰ１で染色されたＫ７Ｍ２ｗｔパラフィン切片の代表的な免疫蛍光画像を示す（上の行はＤＡＰＩ染色であり、下の行は対応するＨＡＢＰ１染色である）。スケールバー＝０．２ｍｍである。図６Ｆは、ＨＡＢＰ１染色について陽性の領域の割合の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝５～６個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0025】

【図7A-B】図７Ａ～７Ｂは、２^{＾－ΔΔＣＴ}法（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）を使用する、未処置のＭＣＡ２０５腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、Ｃｏｌ４、およびＴＧＦＢのｍＲＮＡ発現レベルの定量（図７Ａ）ならびに未処置のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍およびケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍におけるＣｏｌ１Ａ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、およびＣｏｌ４のｍＲＮＡ発現レベルの定量（図７Ｂ）を示す。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、１０ｍｇ／ｋｇ群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0026】

【図8A】図８Ａは、図８Ｂ～８Ｈにおいて使用されるＭＣＡ２０５腫瘍モデルに関する例示的な研究処置プロトコールを示す。図８Ｂ～８Ｃは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝１０匹のマウス／群）（図８Ｂ）および示されたように処置されたＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝６匹のマウス／群）（図８Ｃ）の相対増殖曲線を示す。記号（^＊＊）は、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群と、他の全ての処置群とを比較することによる、ｔ検定によって決定されたＰ＜０．０５を示す。図８Ｄは、研究の完了、１６日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、ａ－ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン併用療法およびケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、ＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．７３４、ｐ＜０．０００１）。図８Ｅは、研究の完了、３３日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、抗ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．８５７、ｐ＜０．０００１）。図８Ｆは、ケトチフェンのみ、抗ＰＤ－Ｌ１のみ、ドキソルビシンのみ、ケトチフェンとドキソルビシンの併用療法、ドキソルビシンと抗ＰＤ－Ｌ１の併用、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１の併用療法による処置後、１６日目でのＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）の腫瘍量に対する効果を示す。図８Ｇは、ＭＣＡ２０５腫瘍細胞を再チャレンジした生存しているＭＣＡ２０５担持マウス対示された処置を用いて０日目に接種されたＭＣＡ２０５がん細胞に対してナイーブな対照マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の個々の腫瘍成長曲線を示す。図８Ｈは、示された処置による処置の４日後のＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における機能的灌流領域を示す。

【図8B-E】図８Ａは、図８Ｂ～８Ｈにおいて使用されるＭＣＡ２０５腫瘍モデルに関する例示的な研究処置プロトコールを示す。図８Ｂ～８Ｃは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝１０匹のマウス／群）（図８Ｂ）および示されたように処置されたＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝６匹のマウス／群）（図８Ｃ）の相対増殖曲線を示す。記号（^＊＊）は、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群と、他の全ての処置群とを比較することによる、ｔ検定によって決定されたＰ＜０．０５を示す。図８Ｄは、研究の完了、１６日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、ａ－ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン併用療法およびケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、ＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．７３４、ｐ＜０．０００１）。図８Ｅは、研究の完了、３３日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、抗ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．８５７、ｐ＜０．０００１）。図８Ｆは、ケトチフェンのみ、抗ＰＤ－Ｌ１のみ、ドキソルビシンのみ、ケトチフェンとドキソルビシンの併用療法、ドキソルビシンと抗ＰＤ－Ｌ１の併用、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１の併用療法による処置後、１６日目でのＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）の腫瘍量に対する効果を示す。図８Ｇは、ＭＣＡ２０５腫瘍細胞を再チャレンジした生存しているＭＣＡ２０５担持マウス対示された処置を用いて０日目に接種されたＭＣＡ２０５がん細胞に対してナイーブな対照マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の個々の腫瘍成長曲線を示す。図８Ｈは、示された処置による処置の４日後のＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における機能的灌流領域を示す。

【図8F-G】図８Ａは、図８Ｂ～８Ｈにおいて使用されるＭＣＡ２０５腫瘍モデルに関する例示的な研究処置プロトコールを示す。図８Ｂ～８Ｃは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝１０匹のマウス／群）（図８Ｂ）および示されたように処置されたＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝６匹のマウス／群）（図８Ｃ）の相対増殖曲線を示す。記号（^＊＊）は、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群と、他の全ての処置群とを比較することによる、ｔ検定によって決定されたＰ＜０．０５を示す。図８Ｄは、研究の完了、１６日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、ａ－ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン併用療法およびケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、ＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．７３４、ｐ＜０．０００１）。図８Ｅは、研究の完了、３３日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、抗ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．８５７、ｐ＜０．０００１）。図８Ｆは、ケトチフェンのみ、抗ＰＤ－Ｌ１のみ、ドキソルビシンのみ、ケトチフェンとドキソルビシンの併用療法、ドキソルビシンと抗ＰＤ－Ｌ１の併用、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１の併用療法による処置後、１６日目でのＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）の腫瘍量に対する効果を示す。図８Ｇは、ＭＣＡ２０５腫瘍細胞を再チャレンジした生存しているＭＣＡ２０５担持マウス対示された処置を用いて０日目に接種されたＭＣＡ２０５がん細胞に対してナイーブな対照マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の個々の腫瘍成長曲線を示す。図８Ｈは、示された処置による処置の４日後のＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における機能的灌流領域を示す。

【図8H】図８Ａは、図８Ｂ～８Ｈにおいて使用されるＭＣＡ２０５腫瘍モデルに関する例示的な研究処置プロトコールを示す。図８Ｂ～８Ｃは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝１０匹のマウス／群）（図８Ｂ）および示されたように処置されたＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝６匹のマウス／群）（図８Ｃ）の相対増殖曲線を示す。記号（^＊＊）は、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群と、他の全ての処置群とを比較することによる、ｔ検定によって決定されたＰ＜０．０５を示す。図８Ｄは、研究の完了、１６日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、ａ－ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン併用療法およびケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、ＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．７３４、ｐ＜０．０００１）。図８Ｅは、研究の完了、３３日目によって記録された相対腫瘍成長に対する、抗ＰＤ－Ｌ１もしくはドキソルビシンのみで、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用療法で処置された、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における４日間毎日のケトチフェン後の弾性ヤング係数の相関を示す（Ｒ^２＝０．８５７、ｐ＜０．０００１）。図８Ｆは、ケトチフェンのみ、抗ＰＤ－Ｌ１のみ、ドキソルビシンのみ、ケトチフェンとドキソルビシンの併用療法、ドキソルビシンと抗ＰＤ－Ｌ１の併用、またはケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１の併用療法による処置後、１６日目でのＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）の腫瘍量に対する効果を示す。図８Ｇは、ＭＣＡ２０５腫瘍細胞を再チャレンジした生存しているＭＣＡ２０５担持マウス対示された処置を用いて０日目に接種されたＭＣＡ２０５がん細胞に対してナイーブな対照マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の個々の腫瘍成長曲線を示す。図８Ｈは、示された処置による処置の４日後のＭＣＡ２０５腫瘍（ｎ＝５匹のマウス／群）における機能的灌流領域を示す。

【0027】

【図9A-B】図９Ａは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルの全腫瘍組織におけるＣＤ４５^＋リンパ球のうちの総ＣＤ３^＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図９Ｂは、示された処置後のＭＣＡ２０５腫瘍における、細胞傷害性ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の、ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＣＤ１２７^ｌｏＦｏｘｐ３^＋Ｔｒｅｇに対する比（ｎ＝５匹のマウス／群）を示す。図９Ｃは、Ｋ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋組織切片におけるＣＤ８（下２行）およびＫｉ６７（上２行、下２行と同じ細胞に対応する）の免疫蛍光（ＩＦ）染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｄは、示された療法による処置後の、ＣＤ８およびＫｉ６７染色について二重陽性である領域の、総ＣＤ８染色について陽性である領域に対する比としての増殖性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の対応する定量（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）を示す。図９Ｅは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ凍結組織切片におけるＣＤ３１（内皮マーカー、上２行）およびＣＤ３（下２行、上の行と同じ画像視野に対応する）のＩＦ染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｆは、示された処置後の、ＣＤ３^＋Ｔ細胞とＣＤ３１^＋内皮細胞との共局在化の対応する定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図9C】図９Ａは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルの全腫瘍組織におけるＣＤ４５^＋リンパ球のうちの総ＣＤ３^＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図９Ｂは、示された処置後のＭＣＡ２０５腫瘍における、細胞傷害性ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の、ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＣＤ１２７^ｌｏＦｏｘｐ３^＋Ｔｒｅｇに対する比（ｎ＝５匹のマウス／群）を示す。図９Ｃは、Ｋ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋組織切片におけるＣＤ８（下２行）およびＫｉ６７（上２行、下２行と同じ細胞に対応する）の免疫蛍光（ＩＦ）染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｄは、示された療法による処置後の、ＣＤ８およびＫｉ６７染色について二重陽性である領域の、総ＣＤ８染色について陽性である領域に対する比としての増殖性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の対応する定量（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）を示す。図９Ｅは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ凍結組織切片におけるＣＤ３１（内皮マーカー、上２行）およびＣＤ３（下２行、上の行と同じ画像視野に対応する）のＩＦ染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｆは、示された処置後の、ＣＤ３^＋Ｔ細胞とＣＤ３１^＋内皮細胞との共局在化の対応する定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図9D】図９Ａは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルの全腫瘍組織におけるＣＤ４５^＋リンパ球のうちの総ＣＤ３^＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図９Ｂは、示された処置後のＭＣＡ２０５腫瘍における、細胞傷害性ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の、ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＣＤ１２７^ｌｏＦｏｘｐ３^＋Ｔｒｅｇに対する比（ｎ＝５匹のマウス／群）を示す。図９Ｃは、Ｋ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋組織切片におけるＣＤ８（下２行）およびＫｉ６７（上２行、下２行と同じ細胞に対応する）の免疫蛍光（ＩＦ）染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｄは、示された療法による処置後の、ＣＤ８およびＫｉ６７染色について二重陽性である領域の、総ＣＤ８染色について陽性である領域に対する比としての増殖性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の対応する定量（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）を示す。図９Ｅは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ凍結組織切片におけるＣＤ３１（内皮マーカー、上２行）およびＣＤ３（下２行、上の行と同じ画像視野に対応する）のＩＦ染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｆは、示された処置後の、ＣＤ３^＋Ｔ細胞とＣＤ３１^＋内皮細胞との共局在化の対応する定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図9E】図９Ａは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルの全腫瘍組織におけるＣＤ４５^＋リンパ球のうちの総ＣＤ３^＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図９Ｂは、示された処置後のＭＣＡ２０５腫瘍における、細胞傷害性ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の、ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＣＤ１２７^ｌｏＦｏｘｐ３^＋Ｔｒｅｇに対する比（ｎ＝５匹のマウス／群）を示す。図９Ｃは、Ｋ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋組織切片におけるＣＤ８（下２行）およびＫｉ６７（上２行、下２行と同じ細胞に対応する）の免疫蛍光（ＩＦ）染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｄは、示された療法による処置後の、ＣＤ８およびＫｉ６７染色について二重陽性である領域の、総ＣＤ８染色について陽性である領域に対する比としての増殖性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の対応する定量（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）を示す。図９Ｅは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ凍結組織切片におけるＣＤ３１（内皮マーカー、上２行）およびＣＤ３（下２行、上の行と同じ画像視野に対応する）のＩＦ染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｆは、示された処置後の、ＣＤ３^＋Ｔ細胞とＣＤ３１^＋内皮細胞との共局在化の対応する定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図9F】図９Ａは、示されたように処置されたＭＣＡ２０５腫瘍モデルの全腫瘍組織におけるＣＤ４５^＋リンパ球のうちの総ＣＤ３^＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図９Ｂは、示された処置後のＭＣＡ２０５腫瘍における、細胞傷害性ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の、ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＣＤ１２７^ｌｏＦｏｘｐ３^＋Ｔｒｅｇに対する比（ｎ＝５匹のマウス／群）を示す。図９Ｃは、Ｋ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋組織切片におけるＣＤ８（下２行）およびＫｉ６７（上２行、下２行と同じ細胞に対応する）の免疫蛍光（ＩＦ）染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｄは、示された療法による処置後の、ＣＤ８およびＫｉ６７染色について二重陽性である領域の、総ＣＤ８染色について陽性である領域に対する比としての増殖性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の対応する定量（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）を示す。図９Ｅは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ凍結組織切片におけるＣＤ３１（内皮マーカー、上２行）およびＣＤ３（下２行、上の行と同じ画像視野に対応する）のＩＦ染色の代表的な画像を示す。スケールバー＝０．１ｍｍ。図９Ｆは、示された処置後の、ＣＤ３^＋Ｔ細胞とＣＤ３１^＋内皮細胞との共局在化の対応する定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0028】

【図10A】図１０Ａは、ピモニダゾール塩酸塩注射後のピモニダゾール付加物について染色されたＫ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋切片の代表的なＩＦ画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応する低酸素染色である；上および下の対応するパネルは同じ画像視野である）。図１０Ｂは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍のＤＡＰＩ染色に対して正規化した低酸素領域の割合の対応する定量を示す（処置あたりｎ＝４匹のマウス、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。図１０Ｃは、未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍および１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンで処置されたＭＣＡ２０５腫瘍における、ＲＴ－ｑＰＣＲによって評価され、２^{＾－ΔΔＣＴ}法を使用して定量された、内皮壁への免疫細胞の接着と関連する遺伝子の相対ｍＲＮＡレベルを示す（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）。図１０Ｄ～１０Ｅは、示された処置後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍切片におけるＣＤ３（図１０Ｄ）およびＣＤ３１（図１０Ｅ）染色について陽性の領域の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図10B】図１０Ａは、ピモニダゾール塩酸塩注射後のピモニダゾール付加物について染色されたＫ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋切片の代表的なＩＦ画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応する低酸素染色である；上および下の対応するパネルは同じ画像視野である）。図１０Ｂは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍のＤＡＰＩ染色に対して正規化した低酸素領域の割合の対応する定量を示す（処置あたりｎ＝４匹のマウス、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。図１０Ｃは、未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍および１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンで処置されたＭＣＡ２０５腫瘍における、ＲＴ－ｑＰＣＲによって評価され、２^{＾－ΔΔＣＴ}法を使用して定量された、内皮壁への免疫細胞の接着と関連する遺伝子の相対ｍＲＮＡレベルを示す（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）。図１０Ｄ～１０Ｅは、示された処置後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍切片におけるＣＤ３（図１０Ｄ）およびＣＤ３１（図１０Ｅ）染色について陽性の領域の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【図10C-E】図１０Ａは、ピモニダゾール塩酸塩注射後のピモニダゾール付加物について染色されたＫ７Ｍ２ｗｔパラフィン包埋切片の代表的なＩＦ画像を示す。スケールバー＝０．２ｍｍ（上２行はＤＡＰＩ染色であり、下２行は対応する低酸素染色である；上および下の対応するパネルは同じ画像視野である）。図１０Ｂは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍のＤＡＰＩ染色に対して正規化した低酸素領域の割合の対応する定量を示す（処置あたりｎ＝４匹のマウス、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。図１０Ｃは、未処置の（対照）ＭＣＡ２０５腫瘍および１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンで処置されたＭＣＡ２０５腫瘍における、ＲＴ－ｑＰＣＲによって評価され、２^{＾－ΔΔＣＴ}法を使用して定量された、内皮壁への免疫細胞の接着と関連する遺伝子の相対ｍＲＮＡレベルを示す（３回の生物学的反復×３回の技術的反復を使用した）。図１０Ｄ～１０Ｅは、示された処置後のＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍切片におけるＣＤ３（図１０Ｄ）およびＣＤ３１（図１０Ｅ）染色について陽性の領域の定量を示す（ｎ＝４匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝４～５個の画像視野）。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群を他の全ての処置群と^＊＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0029】

【図11A-B】図１１Ａ～１１Ｂは、ＭＣＡ２０５腫瘍の分析のためのフローサイトメトリー分析およびゲーティング設計を示す。図１１Ａは、示された処置後のＭＣＡ２０５腫瘍の骨髄性細胞のフローサイトメトリー分析を示す。骨髄ゲートをＦＳＣ／ＳＳＣ上で使用し、死んだ細胞を除外し、ＣＤ４５^＋細胞上でゲーティングした（図１１Ｂ）。ＣＤ１１ｂおよびＧｒ－１（Ｌｙ６Ｇ^＋Ｌｙ６Ｃ^＋）抗体を使用して、骨髄性細胞集団と単球とを区別し、ＭＤＳＣを、ＣＤ１１ｂとＧｒ－１タンパク質との両方の高い発現によって同定した。全てのデータを、平均±平均の標準誤差として表す。処置群を対照群と^＊比較することにより、統計分析を実施した。ｐ≦０．０５である。

【0030】

【図12】図１２は、腫瘍浸潤性リンパ球のフローサイトメトリー分析のためのゲーティング戦略を示す。ダブレット／凝集イベントを、側方散乱面積対側方散乱幅を使用してゲートアウトした。シングレット上でゲーティングした後、Ｌ／Ｄ染色を使用して生細胞を同定し、次に、リンパ球ゲート（ＣＤ４５^＋）を使用して、非リンパ球細胞を除去した。ＣＤ３^＋Ｔ細胞を、ＣＤ４およびＣＤ８抗体で染色した。ＣＤ４^＋細胞上でゲーティングした後、低レベルのＣＤ１２７および高レベルのＣＤ２５を発現する細胞（ＣＤ１２７^ｌｏＣＤ２５^ｈｉ）を同定した。この集団をゲートオンして、Ｆｏｘｐ３^＋を発現するＴｒｅｇである細胞のパーセンテージを同定した。

【0031】

【図13A-B】図１３Ａは、マウスＭＣ／９ ＭＣおよびＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞を、化学コミュニケーションのみを許容する微小孔を有するトランスウェルチャンバーによって分離した同時培養アッセイを示す。図１３Ｂは、化合物Ｃ４８／８０（Ｃ４８／８０）、ケトチフェン、およびＴＧＦβによる肥満細胞脱顆粒化に対する効果を示す。図１３Ｃは、示された処置後の線維芽細胞におけるαＳＭＡ（下の行）およびコラーゲンＩ（上の行）の免疫蛍光染色を示す。図１３Ｄは、ＤＡＰＩ核染色に対して正規化された、示された処置後の、コラーゲンＩの定量を示し、図１３Ｅは、αＳＭＡの定量を示す。通常の一元ＡＮＯＶＡ検定を使用して２つの独立群間の平均を比較することにより、統計分析を実施した。

【図13C】図１３Ａは、マウスＭＣ／９ ＭＣおよびＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞を、化学コミュニケーションのみを許容する微小孔を有するトランスウェルチャンバーによって分離した同時培養アッセイを示す。図１３Ｂは、化合物Ｃ４８／８０（Ｃ４８／８０）、ケトチフェン、およびＴＧＦβによる肥満細胞脱顆粒化に対する効果を示す。図１３Ｃは、示された処置後の線維芽細胞におけるαＳＭＡ（下の行）およびコラーゲンＩ（上の行）の免疫蛍光染色を示す。図１３Ｄは、ＤＡＰＩ核染色に対して正規化された、示された処置後の、コラーゲンＩの定量を示し、図１３Ｅは、αＳＭＡの定量を示す。通常の一元ＡＮＯＶＡ検定を使用して２つの独立群間の平均を比較することにより、統計分析を実施した。

【図13D-E】図１３Ａは、マウスＭＣ／９ ＭＣおよびＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞を、化学コミュニケーションのみを許容する微小孔を有するトランスウェルチャンバーによって分離した同時培養アッセイを示す。図１３Ｂは、化合物Ｃ４８／８０（Ｃ４８／８０）、ケトチフェン、およびＴＧＦβによる肥満細胞脱顆粒化に対する効果を示す。図１３Ｃは、示された処置後の線維芽細胞におけるαＳＭＡ（下の行）およびコラーゲンＩ（上の行）の免疫蛍光染色を示す。図１３Ｄは、ＤＡＰＩ核染色に対して正規化された、示された処置後の、コラーゲンＩの定量を示し、図１３Ｅは、αＳＭＡの定量を示す。通常の一元ＡＮＯＶＡ検定を使用して２つの独立群間の平均を比較することにより、統計分析を実施した。

【0032】

【図14A】図１４Ａは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後のＣＤ３１画像分析に基づくＭＣＡ２０５腫瘍におけるオープンルーメン（ｏｐｅｎ ｌｕｍｅｎ）の割合の定量を示す。図１４Ｂは、異なるケトチフェン濃度を用いた処置の際のＭＣＡ２０５腫瘍のＮＧ２周皮細胞マーカー（中央の２行）およびＣＤ３１内皮細胞マーカー（上２行）の代表的な免疫蛍光画像を示す（下２行における共局在化したＮＧ２／ＣＤ３１シグナル、すなわち、重複染色）。図１４Ｃは、総ＣＤ３１^＋染色に対して正規化された、ＣＤ３１およびＮＧ２の重複染色によって示される血管周皮細胞カバレッジの定量を示す。図１４Ｄは、ＣＤ３１染色（血管）について陽性の領域の割合の定量を示す（ｎ＝５匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝３～５個の画像視野）。

【図14B】図１４Ａは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後のＣＤ３１画像分析に基づくＭＣＡ２０５腫瘍におけるオープンルーメン（ｏｐｅｎ ｌｕｍｅｎ）の割合の定量を示す。図１４Ｂは、異なるケトチフェン濃度を用いた処置の際のＭＣＡ２０５腫瘍のＮＧ２周皮細胞マーカー（中央の２行）およびＣＤ３１内皮細胞マーカー（上２行）の代表的な免疫蛍光画像を示す（下２行における共局在化したＮＧ２／ＣＤ３１シグナル、すなわち、重複染色）。図１４Ｃは、総ＣＤ３１^＋染色に対して正規化された、ＣＤ３１およびＮＧ２の重複染色によって示される血管周皮細胞カバレッジの定量を示す。図１４Ｄは、ＣＤ３１染色（血管）について陽性の領域の割合の定量を示す（ｎ＝５匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝３～５個の画像視野）。

【図14C-D】図１４Ａは、対照または示されたケトチフェン用量による処置後のＣＤ３１画像分析に基づくＭＣＡ２０５腫瘍におけるオープンルーメン（ｏｐｅｎ ｌｕｍｅｎ）の割合の定量を示す。図１４Ｂは、異なるケトチフェン濃度を用いた処置の際のＭＣＡ２０５腫瘍のＮＧ２周皮細胞マーカー（中央の２行）およびＣＤ３１内皮細胞マーカー（上２行）の代表的な免疫蛍光画像を示す（下２行における共局在化したＮＧ２／ＣＤ３１シグナル、すなわち、重複染色）。図１４Ｃは、総ＣＤ３１^＋染色に対して正規化された、ＣＤ３１およびＮＧ２の重複染色によって示される血管周皮細胞カバレッジの定量を示す。図１４Ｄは、ＣＤ３１染色（血管）について陽性の領域の割合の定量を示す（ｎ＝５匹のマウス／群、マウスあたりＮ＝３～５個の画像視野）。

【0033】

【図15A-C】図１５Ａは、Ｃ４８／８０によるＭＣ／９細胞の濃度依存的活性化を示す。図１５Ｂは、Ｃ４８／８０によって誘導された肥満細胞脱顆粒化に対する異なる濃度のケトチフェンの阻害効果を示す。図１５Ｃは、２または２４時間にわたるケトチフェンまたは対照の存在下でのＮＩＨ３Ｔ３細胞生存能力の評価を示す。

【0034】

【図16】図１６は、肥満細胞によって浸潤される軟部組織肉腫を示す。異なる肉腫型を有する患者のヒト組織アレイのＣＤ１１７（ｃ－Ｋｉｔ）肥満細胞マーカーに関する免疫蛍光染色（上の行はＤＡＰＩ染色であり、下の行は対応するＣＤ１１７染色である）。

【0035】

【図17A】図１７Ａは、対照または示された用量のケトチフェンで処置されたＭＣＡ２０５腫瘍に由来する肥満細胞トリプターゼの代表的な免疫蛍光画像を示す（上２行はＤＡＰＩ核染色であり、下２行は対応するトリプターゼ染色である）。スケールバーは０．０５ｍｍである。図１７Ｂおよび図１７Ｃは、対照または示された用量のケトチフェンで処置されたＭＣＡ２０５（図１７Ｂ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図１７Ｃ）腫瘍に関するＤＡＰＩ染色に対して正規化されたトリプターゼについて陽性の領域の定量を示す。

【図17B-C】図１７Ａは、対照または示された用量のケトチフェンで処置されたＭＣＡ２０５腫瘍に由来する肥満細胞トリプターゼの代表的な免疫蛍光画像を示す（上２行はＤＡＰＩ核染色であり、下２行は対応するトリプターゼ染色である）。スケールバーは０．０５ｍｍである。図１７Ｂおよび図１７Ｃは、対照または示された用量のケトチフェンで処置されたＭＣＡ２０５（図１７Ｂ）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（図１７Ｃ）腫瘍に関するＤＡＰＩ染色に対して正規化されたトリプターゼについて陽性の領域の定量を示す。

【0036】

【図18A-B】図１８Ａは、ＭＣＡ２０５腫瘍モデルにおける対照または示された用量のケトチフェンによる処置後の腫瘍に関するピーク強度の時間での総腫瘍領域に関する正規化された灌流領域を示す。図１８Ｂは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍モデルにおける図４Ａ（ｎ＝４～５）に示された処置プロトコールの完了後の腫瘍に関するピーク強度の時間での総腫瘍領域に関する正規化された灌流領域を示す。

【0037】

【図19A-B】図１９Ａは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍における原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）を用いて測定された腫瘍微小規模の平均弾性係数を示す（ｎ＝３匹のマウス／群、Ｎ＝１０～１５の異なる２０×２０μｍ^２の力マップ、１６×１６ポイントのグリッド）。図１９Ｂは、対照またはケトチフェン処置後のＭＣＡ２０５（左上および左下）およびＫ７Ｍ２ｗｔ（右上および右下）腫瘍の代表的なＡＦＭ弾性係数分布／ヒストグラムを示す。

【発明を実施するための形態】

【0038】

詳細な説明
Ｉ．定義
本発明がより容易に理解され得るように、ある特定の科学技術用語を以下に具体的に定義する。本文書の他所で具体的に定義していない限り、本明細書で使用される全ての他の科学技術用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解される意味を有する。

【0039】

添付の特許請求の範囲を含む本明細書で使用される場合、用語の単数形、例えば「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が特に明白に指示していない限り、その対応する複数形を含む。

【0040】

１つまたは複数の詳述された要素を「含む」組成物または方法は、具体的に詳述されていない他の要素を含んでもよい。例えば、抗体を含む組成物は、抗体を単独でまたは他の成分と組み合わせて含有し得る。

【0041】

本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態を「含む」、「からなる」、および「から本質的になる」ことを含むと理解される。

【0042】

値の範囲の指定は、範囲内のまたは範囲を定義する全ての整数を含む。

【0043】

特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｕｏ， Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ， ２ｎｄ ｅｄ．， ２００２， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ３ｒｄ ｅｄ．， １９９９， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｒｅｖｉｓｅｄ， ２０００， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。

【0044】

単位、接頭辞、および記号は、その国際単位系（ＳＩ）で許容される形態で示される。数値範囲は、範囲を定義する数字を含む。本明細書で提供される見出しは、本明細書を全体として参照することによって得ることができる本開示の様々な態様の限定ではない。したがって、すぐ下に定義する用語は、本明細書のその全体を参照することによってより十分に定義される。

【0045】

「重量に基づく用量」という用語は、本明細書で参照される場合、対象に投与される用量が、対象の体重に基づいて計算されることを意味する。例えば、体重６０ｋｇの対象が、２．０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンまたはチェックポイント阻害剤を必要とする場合、対象に投与するためにケトチフェンまたはチェックポイント阻害剤の適切な量（すなわち、１２０ｍｇ）を計算し、使用することができる。

【0046】

本開示の方法および投薬量に関して「固定用量」という用語の使用は、対象の体重または体表面積（ＢＳＡ）によらず、対象に投与される用量を意味する。したがって、固定用量は、ｍｇ／ｋｇ用量として提供されるのではなく、作用剤（例えば、ケトチフェンおよび／またはチェックポイント阻害剤）の絶対量として提供される。例えば、体重６０ｋｇの対象と体重１００ｋｇの対象は、同じ用量のケトチフェンまたはチェックポイント阻害剤を投与される。

【0047】

「がん」は、体における異常な細胞の制御されない成長によって特徴付けられる広範な様々な疾患群を指す。「がん」または「がん組織」は、腫瘍を含み得る。制御されない細胞分裂および成長は、隣接する組織に侵入する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系または血流を通して体の遠位部分に転移することもできる。転移後、遠位腫瘍は、転移前の腫瘍に「由来する」と言うことができる。例えば、乳がん「に由来する腫瘍」は、転移した乳がんの結果である腫瘍を指す。

【0048】

「投与する」または「投与」は、当業者に公知の様々な方法および送達システムのいずれかを使用する治療剤の対象への物理的導入を指す。ケトチフェンおよび／またはチェックポイント阻害剤の例示的な投与経路としては、腸投与経路、および静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄内、または他の非経口投与経路、例えば注射または注入（例えば、静脈内注入）が挙げられる。「非経口投与」という語句は、本明細書で使用される場合、通常、注射による腸投与および局所投与以外の投与様式を意味し、これらに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病変内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および大槽内注射および注入、ならびにｉｎ ｖｉｖｏ電気穿孔を含む。治療剤は、非経口経路を介してまたは経口により投与することができる。他の非経口経路は、局所、表皮、または粘膜投与経路、例えば鼻腔内、膣内、直腸内、舌下、または局所を含む。投与はまた、例えば１回、複数回、および／または１つもしくは複数の長期間実施することができる。

【0049】

抗体または本明細書で記載される他のタンパク質において、配列番号によって指定される残基に対応するアミノ酸残基に対する言及は、そのような残基の翻訳後改変を含む。

【0050】

「抗体」という用語は、抗原の存在に応答して体によって産生され、抗原に結合する免疫グロブリンタンパク質、ならびにその抗原結合性断片および操作されたバリアントを指す。したがって、「抗体」という用語は、例えばインタクトなモノクローナル抗体（例えば、ハイブリドーマ技術を使用して産生された抗体）および抗原結合性抗体断片、例えば、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、一本鎖抗体、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。一般に、遺伝子操作されたインタクトな抗体および断片、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖Ｆｖ断片、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、線状抗体、多価または多特異性（例えば、二特異性）ハイブリッド抗体などもまた、含まれる。このように、「抗体」という用語は、抗体の抗原結合部位を含み、その抗原に特異的に結合することが可能な任意のタンパク質を含むために広く使用される。

【0051】

抗体またはその抗原結合性断片という用語は、抗体もしくはその抗原結合性断片が薬剤、例えば細胞傷害剤もしくは細胞傷害薬に共有結合または非共有結合した、「コンジュゲートされた」抗体またはその抗原結合性断片、または「抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）」を含む。

【0052】

「キメラ抗体」という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種（例えば、ヒト）に由来する、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属するが、鎖（複数可）の残りは、別の種（例えば、マウス）に由来する抗体中の対応する配列と同一であるかもしくは相同である、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにそれらが所望の生物活性を示す限り、そのような抗体の断片を指す。

【0053】

「抗体の抗原結合部位」は、その抗原に結合するために十分である抗体のその部分である。最小のそのような領域は典型的に、可変ドメインまたはその遺伝子操作バリアントである。シングルドメイン結合部位を、ラクダ科抗体（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ａｎｄ Ｌａｕｗｅｒｅｙｓ， Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇ． １２： １３１－１４０， １９９９；Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． １９：９２１－９３０， ２０００）、または他の種のＶＨドメイン（「ｄＡｂ」、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３４１： ５４４－５４６， １９８９；Ｗｉｎｔｅｒらに対する米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）から生成して、シングルドメイン抗体を産生することができる。一般的に、抗体の抗原結合部位は、共通のエピトープに結合する重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの両方を含む。本発明の文脈では、抗体は、抗原結合部位に加えて１つまたは複数の構成要素、例えば抗体の第２の抗原結合部位（同じもしくは異なるエピトープ、または同じもしくは異なる抗原に結合し得る）、ペプチドリンカー、免疫グロブリン定常領域、免疫グロブリンヒンジ、両親媒性ヘリックス（Ｐａｃｋ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ， Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３１： １５７９－１５８４， １９９２を参照されたい）、非ペプチドリンカー、オリゴヌクレオチド（Ｃｈａｕｄｒｉ ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４５０：２３－２６， １９９９を参照されたい）、細胞抑制薬または細胞傷害薬等を含んでもよく、単量体または多量体タンパク質であってもよい。抗体の抗原結合部位を含む分子の例は当技術分野で公知であり、例えば、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ融合体、二特異性（ｓｃＦｖ）４－ＩｇＧ、および二特異性（ｓｃＦｖ）２－Ｆａｂを含む（例えば、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５６：３０５５－３０６１， １９９６；Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３： １３０１－１３１２， １９９６；Ｃａｒｔｅｒ ａｎｄ Ｍｅｒｃｈａｎｔ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ８：４４９－４５４， １９９７；Ｚｕｏ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １３：３６１－３６７， ２０００；およびＬｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６７：２１３－２２６， ２００２を参照されたい）。

【0054】

「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子（複数可）によって実質的にコードされる１つまたは複数のポリペプチドからなるタンパク質を指す。免疫グロブリンの１つの形態は、脊椎動物における天然（すなわち、天然または親の）抗体の基本構造単位を構成する。この形態は４量体であり、各々の対が１つの軽鎖および１つの重鎖を有する免疫グロブリン鎖の２つの同一の対からなる。各々の対では、軽鎖および重鎖可変領域（ＶＬおよびＶＨ）は共に、抗原に対する結合に主に関与し、定常領域は抗体エフェクター機能に主に関与する。高等脊椎動物では、５つのクラスの免疫グロブリンタンパク質（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）が同定されている。ＩｇＧは、主要なクラスを含み、通常血漿中で見出される２番目に豊富なタンパク質として存在する。ヒトでは、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４と指定される４つのサブクラスからなる。各免疫グロブリン重鎖は、種における所定のサブクラスに関して本質的に不変である定常領域タンパク質ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３；ＩｇＧ３はＣＨ４ドメインも含有する）からなる定常領域を保有する。

【0055】

ヒトおよび非ヒト免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡ配列は当技術分野で公知である。（例えば、Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ ， ＤＮＡ １： １１－１８， １９８１；Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １０：４０７１－４０７９， １９８２；Ｋｅｎｔｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｅｔ ＵＳＡ ７９：６６６１－６６６５， １９８２；Ｓｅｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １１ ：７１９－７２６， １９８３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７， １９８８；Ａｍｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ８：２０５５－２０６５， １９８０；Ｒｕｓｃｏｎｉ ａｎｄ Ｋｏｈｌｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ ３１４：３３０－３３４， １９８５；Ｂｏｓｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １２：３７９１－３８０６， １９８４；Ｂｏｔｈｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ２９８：３８０－３８２， １９８２；ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｏｏ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４２：３３３－３４１， １９９５；Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｅｖｏｌ． ２２： １９５－２０８， １９８５；Ｋｉｎｄｓｖｏｇｅｌ ｅｔ ａｌ．， ＤＮＡ １ ：３３５－３４３， １９８２；Ｂｒｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ １８： １６５－１７４， １９８２；Ｋｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２３：２４５－２４９， １９９３；およびＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． Ｊ００２２８を参照されたい）。免疫グロブリン構造および機能に関する論評に関しては、Ｐｕｔｎａｍ， Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｖｏｌ Ｖ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．， ４９－１４０， １９８７；およびＰａｄｌａｎ， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３１： １６９－２１７， １９９４を参照されたい。「免疫グロブリン」という用語は、本明細書においてその一般的な意味で使用され、文脈に応じてインタクトな抗体、その構成要素の鎖、または鎖の断片を示す。

【0056】

全長の免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤａまたは２１４アミノ酸）は、アミノ末端で可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸をコードする）によってコードされ、カルボキシル末端でカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされる。全長の免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤａまたは４４６アミノ酸）は、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸をコードする）、およびガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン定常領域遺伝子（約３３０アミノ酸をコードする）によってコードされ、後者はそれぞれ、抗体のアイソタイプ、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥを定義する。軽鎖および重鎖において、可変領域と定常領域は、約１２個またはそれより多くのアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合し、重鎖はまた、約１０個またはそれより多くのアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。（一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ， ｅｄ．， Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．， ２ｎｄ ｅｄ． １９８９）， Ｃｈ． ７を参照されたい）。

【0057】

免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域（本明細書においてそれぞれ「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬドメイン」）、または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）とも呼ばれる）は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって中断される「フレームワーク」領域からなる。フレームワーク領域は、ＣＤＲを抗原のエピトープに特異的に結合するように整列させるために作用する。このように、「ＣＤＲ」という用語は、抗原結合に主に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。アミノ末端からカルボキシル末端に、ＶＬおよびＶＨドメインはいずれも以下のフレームワーク（ＦＲ）およびＣＤＲ領域：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４を含む。

【0058】

アミノ酸の各可変領域ドメインへの割付は、Ｋａｂａｔ， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ， １９８７ ａｎｄ １９９１）の定義に従う。Ｋａｂａｔはまた、異なる重鎖可変領域間、または異なる軽鎖可変領域間の対応する残基が同数で割付される、広く使用されるナンバリングの慣例（Ｋａｂａｔナンバリング）も提供する。ＶＬドメインのＣＤＲ１、２、および３はまた、本明細書においてそれぞれ、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３とも呼ばれる。ＶＨドメインのＣＤＲ１、２、および３はまた、本明細書においてそれぞれ、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３とも呼ばれる。そのように言及される場合、ＣＤＲの割付は、Ｋａｂａｔの代わりにＩＭＧＴ（登録商標）（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ＆ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２７：５５－７７； ２００３）に従うことができる。

【0059】

重鎖定常領域のナンバリングは、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ， １９８７ ａｎｄ １９９１）に記載されるＥＵインデックスを介する。

【0060】

文脈が特に述べていない限り、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を通して産生された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核細胞、原核細胞、またはファージクローンを含む、単クローンに由来する抗体を含み得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体である。

【0061】

「ヒト抗体」（ＨｕＭＡｂ）は、ＦＲおよびＣＤＲの両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もまた、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的突然変異によって、またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含み得る。しかし、本明細書で使用される場合「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含まないと意図される。「ヒト抗体」および「完全なヒト抗体」という用語は、同義として使用される。

【0062】

「ヒト化ＶＨドメイン」または「ヒト化ＶＬドメイン」という用語は、非ヒトドナー免疫グロブリン（例えば、マウスまたはラット）に完全にまたは実質的に由来する一部のまたは全てのＣＤＲ、およびヒト免疫グロブリン配列に完全にまたは実質的に由来する可変ドメインフレームワーク配列を含む、免疫グロブリンＶＨまたはＶＬドメインを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。一部の例では、ヒト化抗体は、適切な結合特徴（例えば、フレームワークにおける突然変異は、抗体がヒト化される場合、結合親和性を保持するために必要であり得る）を増強するために、ヒト可変ドメインフレームワーク領域内で一部の非ヒト残基を保持する。

【0063】

「ヒト化抗体」は、ヒト化ＶＨドメインおよびヒト化ＶＬドメインの１つまたは両方を含む抗体である。免疫グロブリン定常領域（複数可）が存在する必要はないが、存在する場合、それらは、ヒト免疫グロブリン定常領域に完全にまたは実質的に由来する。

【0064】

ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列にグラフトされている遺伝子操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ、米国特許第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｃａｒｔｅｒ、米国特許第６，４０７，２１３号；Ａｄａｉｒ、米国特許第５，８５９，２０５号；ならびにＦｏｏｔｅ、米国特許第６，８８１，５５７号を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば成熟ヒト抗体配列、そのような配列の複合物、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。

【0065】

ヒトアクセプター配列は、他の基準の中でもアクセプターとドナーＣＤＲとの間の典型的な形態にマッチするようにドナー配列を有する可変領域フレームワークにおける高い程度の配列同一性に関して選択することができる。このように、ヒト化抗体は、ドナー抗体に完全にまたは実質的に由来するＣＤＲ、ならびに存在する場合、ヒト抗体配列に完全にまたは実質的に由来する可変領域フレームワーク配列および定常領域を有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、典型的にドナー抗体重鎖に完全にまたは実質的に由来する３つ全てのＣＤＲ、および存在する場合は、ヒト重鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列に実質的に由来する重鎖可変領域フレームワーク配列および重鎖定常領域を有する。同様に、ヒト化軽鎖は、典型的にドナー抗体軽鎖に完全にまたは実質的に由来する３つ全てのＣＤＲ、ならびに存在する場合、ヒト軽鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列に実質的に由来する軽鎖可変領域フレームワーク配列および軽鎖定常領域を有する。

【0066】

ヒト化抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔナンバリングによって定義される）の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％、または対応する残基（Ｋａｂａｔナンバリングによって定義される）の約１００％が、それぞれのＣＤＲの間で同一である場合に、非ヒト抗体の対応するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、対応する残基（可変領域に関してＫａｂａｔナンバリングによって定義され、定常領域に関してＥＵナンバリングによって定義される）の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％、または対応する残基（可変領域に関してＫａｂａｔナンバリングによって定義され、定常領域に関してＥＵナンバリングによって定義される）の約１００％が同一である場合、それぞれ、ヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に実質的に由来する。

【0067】

ヒト化抗体はしばしば、マウス抗体の６つ全てのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔまたはＩＭＧＴ（登録商標）によって定義される）を組み込むが、それらはまた、マウス抗体からの６つ全てより少ないＣＤＲ（例えば、少なくとも３、４、または５つのＣＤＲ）から作製することもできる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６９：３０７６， ２００２；Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ３２０： ４１５－４２８， ２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３６：１０７９－１０９１， １９９９；Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， １６４： １４３２－ １４４１， ２０００）。

【0068】

ヒト化抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔ（またはＩＭＧＴ）によって定義される）の少なくとも６０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲの間で同一である場合、非ヒト抗体の対応するＣＤＲに「実質的に由来する」。ＣＤＲが非ヒト免疫グロブリンに実質的に由来するヒト化ＶＨまたはＶＬドメインの特定のバリエーションでは、ヒト化ＶＨまたはＶＬドメインのＣＤＲは、対応する非ヒトＶＨまたはＶＬ ＣＤＲと比較して３つ全てのＣＤＲに対して６つ以下（例えば、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つ以下）のアミノ酸置換（好ましくは保存的置換）を有する。抗体ＶＨもしくはＶＬドメインの可変領域フレームワーク配列、または存在する場合、免疫グロブリン定常領域の配列は、対応する残基（可変領域に関してＫａｂａｔナンバリングによって定義され、定常領域に関してＥＵナンバリングによって定義される）の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％、または対応する残基（可変領域に関してＫａｂａｔナンバリングによって定義され、定常領域に関してＥＵナンバリングによって定義される）の約１００％が同一である場合、それぞれ、ヒトＶＨもしくはＶＬフレームワーク配列またはヒト定常領域に「実質的に由来する」。よって、ＣＤＲを除くヒト化抗体の全ての部分は、典型的に天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分に完全にまたは実質的に由来する。

【0069】

抗体は、典型的に単離された形態で提供される。このことは、抗体が、干渉するタンパク質およびその産生または精製から生じる他の夾雑物の少なくとも約５０重量／重量％純粋であるが、抗体がその使用を容易にすることが意図される過剰量の薬学的に許容される担体（複数可）または他の媒体と組み合わせられる可能性を除外しないことを意味する。時に、抗体は、干渉するタンパク質および産生または精製からの夾雑物の少なくとも約６０重量／重量％、約７０重量／重量％、約８０重量／重量％、約９０重量／重量％、約９５重量／重量％、または約９９重量／重量％純粋である。単離された抗体を含む抗体を、細胞傷害剤とコンジュゲートすることができ、抗体薬物コンジュゲートとして提供することができる。

【0070】

抗体とその標的抗原との特異的結合は、典型的に、少なくとも約１０^６、約１０^７、約１０^８、約１０^９、または約１０^１０Ｍ^－１の親和性を指す。特異的結合は、検出可能に高い次数であり、少なくとも１つの非特異的標的に起こる非特異的結合とは識別される。特異的結合は、特定の官能基または特定の空間的フィット（例えば、ロックおよびキー型）の間の結合の形成の結果であり得るが、非特異的結合は典型的に、ファンデルワールス力の結果である。

【0071】

「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原の部位を指す。エピトープは、連続アミノ酸、または１つもしくは複数のタンパク質の三次元フォールディングによって近接する不連続アミノ酸から形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的に変性剤、例えば溶媒に曝露されても保持されるが、三次元フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的に、変性剤、例えば溶媒による処置によって失われる。エピトープは典型的に、一意的空間的立体構造で、少なくとも約３、およびより通常少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、または約８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的立体構造を決定する方法は、例えばｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ６６， Ｇｌｅｎｎ Ｅ． Ｍｏｒｒｉｓ， Ｅｄ． （１９９６）を参照されたい。

【0072】

同じまたは重複するエピトープを認識する抗体は、１つの抗体が標的抗原に対して別の抗体の結合と競合する能力を示す単純なイムノアッセイにおいて同定することができる。抗体のエピトープはまた、接触残基を同定するためにその抗原に結合した抗体のＸ線結晶学によっても定義することができる。

【0073】

あるいは、２つの抗体は、１つの抗体の結合を低減または除去する抗原中の全てのアミノ酸突然変異が他の結合を低減または除去する（但し、そのような突然変異は、抗原構造の全体的な変更を生じない）場合、同じエピトープを有する。２つの抗体は、１つの抗体の結合を低減または除去する一部のアミノ酸突然変異が他の抗体の結合を低減または除去する場合、重複するエピトープを有する。

【0074】

抗体間の競合は、試験抗体が共通の抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって決定することができる（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５０： １４９５， １９９０を参照されたい）。試験抗体は、過剰量の試験抗体が参照抗体の結合を阻害すれば、参照抗体と競合する。

【0075】

競合アッセイによって同定された抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および立体妨害が起こるように参照抗体が結合するエピトープに十分に近位の隣接するエピトープに結合する抗体を含む。競合アッセイによって同定された抗体はまた、標的タンパク質における立体構造の変化を引き起こすことによって参照抗体と間接的に競合し、それによって試験抗体が結合するエピトープとは異なるエピトープに参照抗体が結合するのを防止する抗体も含む。

【0076】

抗体エフェクター機能は、ＩｇのＦｃ領域が関与する機能を指す。そのような機能は、例えば抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）、または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）であり得る。そのような機能は、例えばＦｃ領域が食作用活性もしくは溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体に結合すること、または補体系の成分にＦｃ領域が結合することによって影響され得る。典型的に、Ｆｃ結合細胞または補体成分によって媒介される作用（複数可）は、ＬＩＶ１標的化細胞の阻害および／または枯渇をもたらす。抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）発現細胞を動員し、それらを抗体コーティング標的細胞と並置することができる。ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ６４）を含むＩｇＧの表面ＦｃＲを発現する細胞は、ＩｇＧコーティング細胞を破壊するためのエフェクター細胞として作用することができる。そのようなエフェクター細胞は、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、および好酸球を含む。ＦｃγＲがＩｇＧに係合すると、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰを活性化する。ＡＤＣＣは、膜孔形成タンパク質の分泌およびプロテアーゼを通してＣＤ１６＋エフェクター細胞によって媒介されるが、食作用は、ＣＤ３２＋およびＣＤ６４＋エフェクター細胞によって媒介される（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ４^ｔｈ ｅｄ．， Ｐａｕｌ ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ， Ｎ．Ｙ．， １９９７， Ｃｈａｐｔｅｒｓ ３， １７ ａｎｄ ３０；Ｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １９９：１６５９－６９， ２００４；Ａｋｅｗａｎｌｏｐ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６１：４０６１－６５， ２００１；Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． Ｔｒｅａｔ． ５３： １９９－２０７， １９９９を参照されたい）。

【0077】

ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰに加えて、細胞結合抗体のＦｃ領域もまた、ＣＤＣを誘発する補体古典的経路を活性化することができる。補体系のＣ１ｑは、それらが抗原と複合体を形成すると、抗体のＦｃ領域に結合する。Ｃ１ｑが細胞結合抗体に結合すると、Ｃ４およびＣ２のタンパク質分解活性化を伴う事象のカスケードを開始し、Ｃ３コンベルターゼを生成することができる。Ｃ３コンベルターゼによるＣ３のＣ３ｂへの切断は、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９を含む最終補体成分の活性化を可能にする。集合的に、これらのタンパク質は、抗体コーティング細胞上で膜攻撃複合体孔を形成する。これらの孔は、細胞膜の完全性を破壊し、標的細胞を殺滅する（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ， ６^ｔｈ ｅｄ．， Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ， Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎ． Ｙ．， ２００５， Ｃｈａｐｔｅｒ ２を参照されたい）。

【0078】

「抗体依存性細胞傷害性」または「ＡＤＣＣ」という用語は、抗体コーティング標的細胞と、溶解活性を保有する免疫細胞（エフェクター細胞とも呼ばれる）との相互作用に依存する細胞死を誘導する機構を指す。そのようなエフェクター細胞は、ナチュラルキラー細胞、単球／マクロファージ、および好中球を含む。エフェクター細胞は、その抗原結合部位を介して標的細胞に結合したＩｇのＦｃ領域に結合する。エフェクター細胞活性の結果として、抗体コーティング標的細胞の死滅が起こる。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の抗ＬＩＶ１ ＩｇＧ１抗体は、親抗体と比較しておよび／または抗ＬＩＶ１ ＩｇＧ３抗体と比較して等しいまたは増加したＡＤＣＣを媒介する。

【0079】

「抗体依存性細胞性食作用」または「ＡＤＣＰ」という用語は、抗体コーティング細胞が、ＩｇのＦｃ領域に結合する食作用性の免疫細胞（例えば、マクロファージ、好中球、および／または樹状細胞）によって全体または部分的に内部移行するプロセスを指す。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の抗ＬＩＶ１ ＩｇＧ１抗体は、親抗体と比較しておよび／または抗ＬＩＶ１ ＩｇＧ３抗体と比較して等しいまたは増加したＡＤＣＰを媒介する。

【0080】

「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」という用語は、標的結合抗体のＦｃ領域が一連の酵素反応を活性化して、標的細胞膜に穴を形成する、細胞死を誘導する機構を指す。

【0081】

典型的に、抗体コーティング標的細胞上の複合体などの抗原抗体複合体は、補体成分Ｃ１ｑに結合してこれを活性化し、次に補体カスケードを活性化して標的細胞死をもたらす。補体の活性化はまた、標的細胞表面上の補体成分の堆積をもたらし、これは白血球上の補体受容体（例えば、ＣＲ３）に結合することによってＡＤＣＣを容易にし得る。

【0082】

「細胞障害作用」は、標的細胞の枯渇、除去、および／または殺滅を指す。「細胞傷害剤」は、細胞に対して細胞毒性効果を有し、それによって標的細胞の枯渇、除去、および／または殺滅を媒介する化合物を指す。ある特定の実施形態では、細胞傷害剤は、抗体とコンジュゲートされるか、または抗体と組み合わせて投与される。好適な細胞傷害剤を、本明細書においてさらに説明する。

【0083】

「細胞抑制効果」は、細胞増殖の阻害を指す。「細胞抑制剤」は、細胞に対して細胞抑制効果を有し、それによって特定の細胞タイプおよび／または細胞のサブセットの成長および／または増大の阻害を媒介する化合物を指す。好適な細胞抑制剤を、本明細書においてさらに説明する。

【0084】

本明細書で使用される場合、「治療量以下の用量」は、増殖過剰疾患（例えば、がん）の処置のために単独で投与した場合に治療化合物の通常のもしくは典型的な用量より低い、および／またはケトチフェンの場合には、その適応疾患（例えば、肺高血圧症）を処置するために使用される通常のもしくは典型的な用量より低い治療化合物（例えば、ケトチフェンまたはチェックポイント阻害剤）の用量を意味する。

【0085】

例として、「抗がん剤」は、対象におけるがんの退縮を促進する。一部の実施形態では、薬物の治療有効量は、がんを除去する点までがんの退縮を促進する。「がんの退縮を促進する」とは、薬物の有効量を単独でまたは抗がん剤と組み合わせて投与することが、腫瘍成長またはサイズの低減、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の減少、疾患無症状期間の回数および期間の増加、または疾患罹患による機能障害もしくは身体障害の防止をもたらすことを意味する。加えて、処置に関連する「有効な」および「有効性」という用語は、薬理学的有効性および生理学的安全性の両方を含む。薬理学的有効性は、薬物が患者におけるがんの退縮を促進する能力を指す。生理的安全性は、薬物の投与に起因する細胞、臓器、および／または生物レベルでの毒性または他の有害な生理的作用（有害作用）のレベルを指す。

【0086】

「化学療法剤」は、がんの処置において有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；エチレンイミンおよびメチルアメラミン、例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロールメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）を含む）、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９－アミノカンプトテシン）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンガンマＩＩおよびカリケアミシンオメガＩＩ（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ．， ３３： １８３－１８６（１９９４）を参照されたい）；ＣＤＰ３２３、経口アルファ－４インテグリン阻害剤；ダイネミシン、たとえばダイネミシンＡ；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連クロモタンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（例えば、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ－９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ｐｅｇ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝剤、例えばメトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、および５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；コンブレタスタチン；葉酸アナログ、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えばフルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオン酸エステル、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えばフロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えばメイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｍｅ－Ｐｏｕｌｅｎｅ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、およびカルボプラチン；チューブリン重合が微小管を形成するのを防止するビンカ、例えばビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、およびビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸、例えばベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホネート、例えばクロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関係するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えばＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、および上皮成長因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標）））；および細胞増殖を低減させるＶＥＧＦ－Ａ等；ワクチン、例えばＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンおよび遺伝子治療ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ－１１２４８スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ－７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ－２阻害剤、例えばオブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピキサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；セリン－トレオニンキナーゼ阻害剤、例えばラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばロナファルニブ（ＳＣＨ ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））；チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＭＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、またはＢ－７ファミリーリガンドの阻害剤）；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つまたはそれより多くの組合せ、例えばシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用治療の省略語であるＣＨＯＰ；ならびに５－ＦＵおよびロイコボリンと併用したオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））による処置レジメンの省略語であるＦＯＬＦＯＸ、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つまたはそれより多くの組合せが挙げられる。

【0087】

本明細書で定義される化学療法剤は、がんの成長を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療剤」を含む。それらは、ホルモン剤そのもの、例えばこれらに限定されないが、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェンを含む；副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール等；および抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、およびゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関係するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えばＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、およびＨ－Ｒａｓ等；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、例えば遺伝子治療ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒｌＬ－２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ビノレルビンおよびエスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照されたい）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つまたはそれより多くの組合せであり得る。

【0088】

「ベースライン」または「ベースライン値」という用語は、本明細書において互換的に使用され、治療（例えば、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤）の投与前、または治療の投与開始時の症状の測定または特徴付けを指し得る。ベースライン値は、がんなどの疾患の症状の低減または改善を決定するために参照値と比較することができる。本明細書で互換的に使用される「参照」または「参照値」という用語は、治療（例えば、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤）の投与後の症状の測定または特徴付けを指し得る。参照値は、投薬レジメンもしくは処置サイクルの間に１回もしくは複数回、または投薬レジメンもしくは処置サイクルの完了時に測定することができる。「参照値」は、絶対値、相対値、上限および／もしくは下限を有する値、値の範囲、アベレージ値、中央値、平均値、またはベースライン値と比較した値であり得る。

【0089】

同様に、「ベースライン値」は、絶対値、相対値、上限および／もしくは下限を有する値、値の範囲、アベレージ値、中央値、平均値、または参照値と比較した値であり得る。参照値および／またはベースライン値は、１例の個体から、２例の異なる個体から、または個体の群（例えば、２、３、４、５例、またはそれより多くの個体の群）から得ることができる。

【0090】

「持続的応答」は、処置の中止後の腫瘍成長の低減に及ぼす持続的な作用を指す。例えば、腫瘍サイズは、投与相の開始時のサイズと比較して同じであるかまたはより小さいままであり得る。一部の実施形態では、持続的応答は、処置期間と少なくとも同じである持続を有するか、または処置期間より少なくとも１．５、２．０、２．５、もしくは３倍長い期間を有する。

【0091】

本明細書で使用される場合、「完全奏功」または「ＣＲ」は、全ての標的病変の消失を指し、「部分奏功」または「ＰＲ」は、ベースラインＳＬＤを参照として、標的病変の長径和（ＳＬＤ）の合計の少なくとも３０％減少を指し；「安定疾患」、または「ＳＤ」は、ＰＲの基準を満たすほど十分な標的病変の縮小がなく、処置開始後の最小のＳＬＤを参照として、ＰＤの基準を満たすほど十分な増加もないことを指す。

【0092】

本明細書で使用される場合、「無増悪生存期間」または「ＰＦＳ」は、処置される疾患（例えば、がん）が悪化しない、処置中および処置後の期間を指す。無増悪生存期間は、患者が完全奏功または部分奏功を経験した期間の長さ、ならびに患者が安定疾患を経験した期間の長さを含み得る。

【0093】

本明細書で使用される場合、「客観的奏功率」または「ＯＲＲ」は、完全奏功（ＣＲ）率と部分奏功（ＰＲ）率の合計を指す。

【0094】

本明細書で使用される場合、「全生存期間」または「ＯＳ」は、特定の期間後に生存している可能性が高い群における個体のパーセンテージを指す。

【0095】

「患者」または「対象」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受ける、ヒトおよび他の哺乳動物対象、例えば非ヒト霊長類、ウサギ、ラット、マウス等、およびそのトランスジェニック種を含む。

【0096】

ケトチフェンおよび／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与による固形腫瘍の処置の文脈における「有効量」という用語は、固形腫瘍の１つまたは複数の症状の発生を阻害するまたは改善するために十分であるそのようなケトチフェンおよび／またはチェックポイント阻害剤の量を指す。抗体の有効量は、「有効レジメン」で投与される。「有効レジメン」という用語は、投与されるケトチフェンおよび／またはチェックポイント阻害剤の量と、障害の予防的または治療的処置（例えば、固形腫瘍の予防的または治療的処置）を達成するために適切である投薬頻度との組合せを指す。

【0097】

「薬学的に許容される」という用語は、動物において、より詳しくはヒトにおいて使用するために、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されているもしくは承認可能であること、または米国薬局もしくは他の一般的に認められる薬局方に記載されていることを意味する。「薬学的に適合性の成分」という用語は、ケトチフェンまたはチェックポイント阻害剤を製剤化する薬学的に許容される希釈剤、補助剤、賦形剤、または媒体を指す。

【0098】

「薬学的に許容される塩」という語句は、薬学的に許容される有機または無機塩を指す。例示的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酸性酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐトルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレンビス－（２ヒドロキシ－３－ナフトエート）が挙げられる。薬学的に許容される塩は、例えば酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオンなどの追加の分子もさらに含み得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造に１つより多くの荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が、薬学的に許容される塩の一部である例は、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容される塩は、１つもしくは複数の荷電原子および／または１つもしくは複数の対イオンを有し得る。

【0099】

代替案（例えば、「または」）の使用は、代替案の１つ、両方、またはその任意の組合せのいずれかを意味すると理解すべきである。本明細書で使用される場合、不定冠詞「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、任意の詳述されたまたは列挙された構成要素の「１つまたは複数」を指すと理解すべきである。

【0100】

「および／または」という用語は、本明細書で使用される場合、他方を伴うまたは伴わない、２つの指定された特色または構成要素の各々の具体的開示であると理解すべきである。このため、「および／または」という用語は、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される場合、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むと意図される。同様に、「および／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される場合、以下の態様の各々を包含すると意図される：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。

【0101】

「約」、または「を本質的に含む」という用語は、当業者によって決定される特定の値または組成物に関する許容可能な誤差範囲内である値または組成物を指し、これらは値または組成物が測定または決定される方法、すなわち、測定系の限界に部分的に依存する。例えば、「約」または「を本質的に含む」は、当技術分野の実践に従って１標準偏差または１より大きい標準偏差内を意味し得る。あるいは、「約」または「を本質的に含む」は、最大２０％の範囲を意味し得る。さらに、特に生物システムまたはプロセスに関して、用語は、最大で一桁、または最大で値の５倍を意味し得る。特定の値または組成物が本出願および特許請求の範囲で提供されている場合、特に述べていない限り、「約」または「を本質的に含む」の意味は、その特定の値または組成物の許容可能な誤差範囲内であると仮定すべきである。

【0102】

本発明の文脈における溶媒和物は、溶媒分子との配位を通して固体または液体状態の複合体を形成する本発明の化合物の形態である。水和物は、配位が水との間で起こる溶媒和物の１つの特定の形態である。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の文脈における溶媒和物は水和物である。

【0103】

「阻害する」または「の阻害」という用語は、測定可能な量低減させること、または完全に防止することを意味する。阻害という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の阻害または低減を指し得る。

【0104】

「処置」または「処置する」という用語は、疾患または状態の臨床または診断症状の減少または消失によって証明されるように、患者における疾患または状態の進行を遅らせる、停止させる、または逆転させることを指す。処置は、例えば、症状の重症度、症状の回数、または再発の頻度の減少を含み得る。

【0105】

「プロドラッグ」という用語は、本明細書で使用される場合、ｉｎ ｖｉｖｏでの投与時に化合物の活性型へと変換される化合物を指す。例えば、活性化合物のプロドラッグ形態は、これらに限定されないが、活性化合物のアシル化（アセチル化またはその他）およびエーテル誘導体、カルボン酸エステルまたはリン酸エステル、および様々な塩の形態であり得る。当業者は、本発明の化合物をプロドラッグ形態へと容易に改変して、宿主生物または患者内の標的部位への活性化合物の送達を容易にする方法を認識するであろう。当業者はまた、該当する場合、がんの処置における化合物の意図される効果を最大限にするために宿主生物または患者内の標的部位に所望の化合物を送達するために、プロドラッグ形態の好ましい薬物動態パラメーターを利用する。

【0106】

本明細書で使用される場合、「相乗」または「相乗効果」という用語は、作用剤の組合せの有効性の説明に関連して使用する場合、個々の作用剤の効果の合計から予測される効果より大きい、組合せの任意の測定された効果を意味する。

【0107】

本明細書で使用される場合、作用剤の組合せの有効性の説明に関連して使用する場合の、「相加的」または「相加効果」という用語は、個々の作用剤の効果の合計から予測される効果と類似である、組合せの任意の測定された効果を意味する。

【0108】

「約毎週１回」、「約２週間に１回」という用語、または本明細書で使用される他の任意の類似の投与間隔の用語は、概数を意味する。「約毎週１回」は、７日±１日毎、すなわち６日毎～８日毎を含み得る。「約２週間に１回」は、１４日±２日毎、すなわち１２日毎～１６日毎を含み得る。「約３週間に１回」は、２１日±３日毎、すなわち１８日毎～２４日毎を含み得る。類似の概算が、例えば約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、および約１２週間に１回に当てはまる。一部の実施形態では、約６週間に１回または約１２週間に１回という投薬間隔は、最初の用量を、最初の週の任意の日に投与することができ、次いで次の用量をそれぞれ、６週目または１２週目の任意の日に投与することができることを意味する。他の実施形態では、約６週間に１回または約１２週間に１回という投薬間隔は、最初の用量を、最初の週の特定の日（例えば、月曜日）に投与し、次いで次の用量を、６週目または１２週目の同じ日（すなわち、月曜日）にそれぞれ投与することを意味する。

【0109】

本明細書で記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比の範囲、または整数範囲は、詳述された範囲内の任意の整数値を含み、特に示していない限り、該当する場合、その小数（例えば整数の１０分の１および１００分の１）を含むと理解すべきである。

【0110】

本開示の様々な態様を、以下の小節でさらに詳細に説明する。

【0111】

ＩＩ．ケトチフェン
化合物ケトチフェンは、比較的選択的な、非競合的ヒスタミンアンタゴニスト（Ｈ１－受容体）および肥満細胞安定剤である。ケトチフェンは、過敏性反応においてメディエーターの放出を阻害することが知られている。ケトチフェンは、経口形態と眼科用形態との両方で投与されている。ケトチフェンは、以下の式を有する：

【化1】

【0112】

一部の実施形態では、本明細書で使用される場合、ケトチフェンは、式：

【化2】

を有する、フマル酸との塩、ケトチフェンフマル酸塩などの塩を指す。

【0113】

記載される方法のいずれかの一部の実施形態では、ケトチフェンは、ケトチフェンの薬学的に許容される塩として提供される。ケトチフェンの調製は、例えば、ＷＯ２０１０／１０７５２５Ａ１、ＷＯ２００９／１３６９０３Ａ１、ＵＳ２０１０／１６０２９３Ａ１、およびＷＯ２００６／０４７４１８Ａ１に開示されている。

【0114】

ＩＩＩ．チェックポイント阻害剤
免疫チェックポイントは、末梢組織損傷を最小限にするために自己寛容を維持することおよび免疫系の応答の程度をモジュレートすることに関与する免疫系の阻害性経路を指す。しかし、腫瘍細胞はまた、免疫系のチェックポイントを活性化して、腫瘍組織に対する免疫応答の有効性を減少させる（免疫応答を「遮断する」）ことが可能である。多くの抗がん剤とは対照的に、チェックポイント阻害剤は、免疫系の内因性の抗腫瘍活性を増強するために、腫瘍細胞を直接標的とせず、むしろ、リンパ球受容体またはそのリガンドを標的とする（Ｐａｒｄｏｌｌ， ２０１２， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２－２６４）。免疫系チェックポイント、例えばＣＴＬＡ４、ＰＤ１、およびＰＤ－Ｌ１に対するアンタゴニスト性のチェックポイント遮断抗体による治療は、がんおよび他の疾患に関する免疫療法の最も有望な新規手段の１つである。追加のチェックポイント標的、例えばＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、様々なＢ－７リガンド、ＣＨＫ１およびＣＨＫ２キナーゼ、ＢＴＬＡ、Ａ２ａＲ、およびその他もまた、試験中である。チェックポイント阻害剤は、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ならびにいずれもＰＤ－１阻害剤であるペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））およびニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））を含む。

【0115】

最近のデータから、腫瘍そのものの内部で起こり得る抗ＣＴＬＡ－４抗体の二次機構が示唆されている。ＣＴＬＡ－４は、腫瘍において腫瘍内エフェクターＴ細胞（本明細書において「Ｔｅｆｆ細胞」とも呼ばれる）と比較して、制御性Ｔ細胞（本明細書において「Ｔｒｅｇ細胞」とも呼ばれる）において高レベルで発現されることが見出されており、抗ＣＴＬＡ－４がＴｒｅｇ細胞に優先的に影響を及ぼすという仮説をもたらす。

【0116】

チェックポイント遮断抗ＣＴＬＡ－４抗体が抗腫瘍効果を媒介する１つの機構は、制御性Ｔ細胞を減少させることによる。抗ＣＴＬＡ－４抗体の別個の作用機序により、それらを、エフェクターＴ細胞に付与される抑制性シグナルを放出するように作用する抗ＰＤ－１チェックポイント遮断抗体と首尾よく組み合わせることができる。これらの抗体による二重の遮断を組み合わせると、前臨床（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０１０， １０７， ４２７５－４２８０）および臨床（Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３， ３６９， １２２－１３３；Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１５， ３７２， ２００６－２０１７）の両方において抗腫瘍応答を改善する。

【0117】

一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＭＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、およびＢ－７ファミリーリガンドからなる群から選択されるチェックポイントタンパク質またはそれらの組み合わせを阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＣＴＬＡ－４を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＰＤ－１を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＰＤ－Ｌ１を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＰＤ－Ｌ２を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質Ｂ７－Ｈ３を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質Ｂ７－Ｈ４を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＢＭＡを阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＨＶＥＭを阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＴＩＭ３を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＧＡＬ９を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＬＡＧ３を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＶＩＳＴＡを阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＫＩＲを阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質２Ｂ４を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＣＤ１６０を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＣＧＥＮ－１５０４９を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＣＨＫ１を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質ＣＨＫ２を阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質Ａ２ａＲを阻害する。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、Ｂ－７ファミリーリガンドを阻害する。一部の実施形態では、チェックポイントは、抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ２抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗Ｂ７－Ｈ４抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＢＭＡ抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＨＶＥＭ抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＴＩＭ３抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＧＡＬ９抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＬＡＧ３抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＫＩＲ抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗２Ｂ４抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＤ１６０抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＧＥＮ－１５０４９抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＨＫ１抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＨＫ２抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗Ａ２ａＲ抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗Ｂ７ファミリーリガンド抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ヒト抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ヒト化抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、キメラ抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、全長抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、抗体の抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ならびにＶ_ＬまたはＶ_Ｈドメインのいずれかを含む断片からなる群から選択される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体である。一部の実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ． （１９９１）， “Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，“ ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、
アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される抗体の重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される抗体の生体類似物である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ０６８０である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＡＭＰ－２２４である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ペンブロリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ピジリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ４７３６である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、イピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、トレメリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、ＢＭＳ－９３６５５９である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体との組み合わせである。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブとイピリムマブとの組み合わせである。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ペンブロリズマブとイピリムマブとの組み合わせである。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体との組み合わせである。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、アテゾリズマブとイピリムマブとの組み合わせである。

【0118】

ＩＶ．方法
Ａ．固形腫瘍の処置
本発明の一態様は、それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるチェックポイント阻害剤の効果を惹起する、増強する、もしくは延長させる、または対象がチェックポイント阻害剤に応答することを可能にする方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含み、対象が固形腫瘍を有する、方法を提供する。別の態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるチェックポイント阻害剤の効果を増強する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含み、対象が固形腫瘍を有する、方法を提供する。対象における固形腫瘍の血流を増加させる方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与することを含み、固形腫瘍の血流を増加させることは、チェックポイント阻害剤の効果を増強する、方法も本明細書に提供される。一部の実施形態では、固形腫瘍の血流は、超音波に基づく血流測定を使用して、または低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して決定される。一部の実施形態では、固形腫瘍の血流は、超音波に基づく血流測定を使用して決定される。一部の実施形態では、固形腫瘍の血流は、低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して決定される。一部の実施形態では、血流は、固形腫瘍からの生検において低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して測定される。別の態様では、本発明は、対象におけるチェックポイント阻害剤の送達または有効性を改善する方法であって、チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含み、対象が固形腫瘍を有し、それによって対象における治療の送達または有効性を改善する、方法を提供する。一部の実施形態では、対象がヒトである。一部の実施形態では、方法は、ドキソルビシンなどの追加の化学療法剤の有効量と組み合わせた、ケトチフェン、またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ドキソルビシンなどの追加の化学療法剤の有効量と組み合わせた、およびチェックポイント阻害剤と組み合わせた、ケトチフェン、またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、追加の化学療法剤は、ドキソルビシンである。

【0119】

ドキソルビシンは、ＣＡＳ２３２１４－９２－８の式を有する低分子化合物であり、商品名アドリアマイシンの下で販売されている。ＤＯＸＩＬ（登録商標）は、ポリエチレングリコール被覆リポソーム封入型のドキソルビシンの商品名である。

【0120】

別の態様では、本発明は、固形腫瘍を有する対象におけるケトチフェンの有効量を決定する方法であって：（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；ならびに（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップを含み、ケトチフェンの対象への投与後の血流の増加および／または硬度の減少は、投与された量が有効量であったことを示す、方法を提供する。別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって：（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；ならびに（ｄ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流が増加する場合および／または固形腫瘍の硬度が減少する場合に化学療法剤を投与するステップを含む方法を提供する。別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって：（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｄ）ケトチフェンの投与後の固形腫瘍の血流の増加または固形腫瘍の硬度の減少に基づいて、対象が化学療法剤に応答性であることを決定するステップ；ならびに（ｅ）ケトチフェンの投与後の固形腫瘍の血流の増加または固形腫瘍の硬度の減少に基づいて、化学療法剤に応答性であると決定されている対象に化学療法剤を投与するステップを含む方法を提供する。別の態様では、本発明は、化学療法剤による処置に対する応答を予測する方法であって：（ａ）固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップ；（ｂ）ケトチフェンの有効量を対象に投与するステップ；（ｃ）ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流および／または硬度を測定するステップを含み、ケトチフェンの投与後の固形腫瘍の血流の増加または固形腫瘍の硬度の減少は、対象が化学療法剤による処置に応答する可能性が高いことを示す、方法を提供する。一部の実施形態では、ケトチフェンの有効量は、ケトチフェンの対象への投与後の固形腫瘍の血流および／または硬度の変化を測定することによって決定され、ケトチフェンの対象への投与後の血流の増加および／または硬度の減少は、投与された量が有効量であったことを示す。一部の実施形態では、方法が固形腫瘍の血流を測定するステップを含み、ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の血流が増加する。一部の実施形態では、方法が固形腫瘍の硬度を測定するステップを含み、ケトチフェンの投与後に固形腫瘍の硬度が減少する。一部の実施形態では、ケトチフェンは、化学療法剤の投与前に、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、または少なくとも５日間投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンは、固形腫瘍の血流を増加させ、および／または固形腫瘍の硬度を減少させる用量で投与される。一部の実施形態では、固形腫瘍の血流および／または硬度は、超音波を使用して測定される。一部の実施形態では、固形腫瘍の血流は、低酸素状態を測定するための組織学技術を使用して測定される。一部の実施形態では、化学療法剤はチェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、対象はヒトである。

【0121】

本明細書に提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、ケトチフェンの投与は、固形腫瘍の組織硬度を減少させる。本明細書に提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、ケトチフェン、またはその薬学的に許容される塩の投与は、固形腫瘍の組織硬度を減少させる。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも１０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも２０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも２５％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも３０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも４０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも５０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも６０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも７０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、少なくとも７５％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍の組織硬度は、超音波エラストグラフィーを使用して測定される。

【0122】

本明細書で提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、ケトチフェンを投与することは、固形腫瘍における細胞外基質タンパク質のレベルを減少させる。本明細書で提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することは、固形腫瘍における細胞外基質タンパク質のレベルを減少させる。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも１０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも２０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも２５％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも３０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも４０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも５０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも６０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも７０％低減される。一部の実施形態では、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルは、少なくとも７５％低減される。一部の実施形態では、細胞外基質タンパク質は、コラーゲンＩである。一部の実施形態では、細胞外基質タンパク質は、ヒアルロナン結合タンパク質（ＨＡＢＰ）である。

【0123】

本明細書で提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、ケトチフェンを投与することは、固形腫瘍における低酸素状態を低減する。本明細書で提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することは、固形腫瘍における低酸素状態を低減する。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも１０％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも２０％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも２５％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも３０％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも４０％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも５０％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも６０％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも７０％低減される。一部の実施形態では、低酸素状態は、少なくとも７５％低減される。

【0124】

本明細書で提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、固形腫瘍は、中皮腫、乳がん、乳がんの肺転移、肉腫、膵臓がん、卵巣がん、肝転移、前立腺がん、脳がん、黒色腫、腎細胞癌、結腸直腸がん、肝細胞癌、肺がん、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮癌、食道扁平上皮癌、胃がん、食道がん、子宮頸がん、メルケル細胞癌、子宮内膜癌、および皮膚扁平上皮癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍は乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、中皮腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳がんの肺転移である。一部の実施形態では、固形腫瘍は肉腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は骨肉腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は線維肉腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は膵臓がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は卵巣がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は肝転移である。一部の実施形態では、肝転移は結腸直腸がんに由来する。一部の実施形態では、固形腫瘍は前立腺がんである。一部の実施形態では、前立腺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、固形がんは脳がんである。一部の実施形態では、脳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、固形腫瘍は黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は腎細胞癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は結腸直腸がんである。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して低い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現および低いエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、固形腫瘍は肝細胞癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ｂ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体の両方を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは非小細胞肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは小細胞肺がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、頭頸部扁平上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、尿路上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、食道扁平上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は胃がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、食道がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、子宮頸がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、メルケル細胞癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、子宮内膜癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、皮膚扁平上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、圧迫された血管を有する、および／または低灌流であるがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、圧迫された血管を有するがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、低灌流であるがんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、乳がん、乳がんの肺転移、膵臓がん、卵巣がん、および肝転移からなる群から選択される。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、膵臓がんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、卵巣がんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、肝転移である。一部の実施形態では、肝転移は、結腸直腸がんに由来する。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、肺転移である。一部の実施形態では、肝転移は、乳がんに由来する。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有するがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腫瘍血管においてエンドセリン受容体発現を有するがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腫瘍線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有するがんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、膵臓がん、卵巣がん、肺がん、前立腺がん、脳がん、乳がん、および結腸直腸がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、膵臓がんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、卵巣がんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ｂ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体の両方を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非小細胞肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは小細胞肺がんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、前立腺がんである。一部の実施形態では、前立腺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、脳がんである。一部の実施形態では、脳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳がんからの肺転移である。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、結腸直腸がんである。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して低い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現および低いエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。

【0125】

Ｂ．投与経路
本明細書で記載される化学療法剤は、任意の好適な経路および様式で投与することができる。ケトチフェンもしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、任意の好適な経路および様式で投与することができる。本発明の化合物または抗体を投与する好適な経路は当技術分野で周知であり、当業者によって選択され得る。一実施形態では、ケトチフェンもしくはその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、非経口投与される。非経口投与は、腸投与および局所投与以外の、通常、注射による投与様式を指し、上皮、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、腱内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、頭蓋内、胸骨内、硬膜外、および大槽内の注射および注入を含む。一部の実施形態では、化学療法剤の投与経路は腹腔内注射である。一部の実施形態では、化学療法剤の投与経路は、静脈内注射である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与経路は、腹腔内注射である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤の投与経路は腹腔内注射である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与経路は、静脈内注射である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤の投与経路は、静脈内注射である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩、および／またはチェックポイント阻害剤は、腸投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与経路は腸である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与経路は経口である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤の投与経路は腸である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤の投与経路は経口である。一部の実施形態では、化学療法剤の投与経路は腸である。一部の実施形態では、化学療法剤の投与経路は経口である。

【0126】

Ｃ．投与の用量および回数
一態様では、本発明は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を投与することを含む、本明細書に記載される方法であって、対象が、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を特定の頻度で投与される方法を提供する。別の態様では、本発明は、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤を投与することを含む、本明細書に記載される方法であって、対象に、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤を特定の頻度で投与する方法を提供する。

【0127】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンは、対象に治療有効量で投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は治療有効量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は治療未満用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤の効果を惹起するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤の効果を増強するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、～チェックポイント阻害剤の効果を延長するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤の効果を強化するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤の固形腫瘍への送達を改善するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤の効力を改善するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、固形腫瘍に局在化する抗腫瘍Ｔ細胞の数を増大させるのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、固形腫瘍の組織硬度を低減するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルを低減するのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、固形腫瘍の血流を増大させるのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、固形腫瘍における細胞外マトリクスタンパク質のレベルを低減し、固形腫瘍の血流を増大させるのに十分な用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、固形腫瘍における低酸素状態を低減するのに十分な用量で対象に投与される。

【0128】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一部の実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で対象に投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．７５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．７５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．７５ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ／ｋｇ～約５．０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．１ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．１６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．３ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．７ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約０．９ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１．２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１．４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１．６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１．８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２．２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２．４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２．６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２．８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３．２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３．４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３．６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３．８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４．２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４．４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４．６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４．８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５．２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５．４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５．６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５．８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約６．５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約７ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学

的に許容される塩は、約７．５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約８．５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約９ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約９．５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１１ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１３ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１７ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１９ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２０ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。

【0129】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一部の実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンは、約１０ｍｇ～約１２５０ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇ～約１５０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇ～約１００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇ～約５０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇ～約１５０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇ～約１００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇ～約５０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇ～約１５０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇ～約７５ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約７５ｍｇ～約１５０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約７５ｍｇ～約１００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１００ｍｇ～約１２００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇ～約４０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇ～約３０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇ～約２０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１５ｍｇ～約４０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２０ｍｇ～約４０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３０ｍｇ～約４０ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約６０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約６２．５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約６５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約７０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約７５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約８０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約８５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約９０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約９５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１１０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１１５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１２０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１２５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１３０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１３５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１４０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１４５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１７５ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約２５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約３５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約４５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約５５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約６００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約６５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約７００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約７５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約８００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約８５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約９００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約９５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１０５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１１００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１１５０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１２００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、約１２５０ｍｇの用量で投与される。

【0130】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンは、対象に毎日、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に２日に１回、約１週間に１回、または約３週間に１回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に約１日１回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に約１日２回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１日１回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１日２回投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたはその薬学的に許容される塩は、対象に経口投与される。

【0131】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一部の実施形態では、本明細書に記載される化学療法剤は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の範囲の用量で対象に投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約７ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約８ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約９ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１０ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１１ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１３ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１４ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１５ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。

【0132】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一部の実施形態では、本明細書に記載される化学療法剤は、約１００ｍｇ～約２０００ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１００ｍｇ～約２０００ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２００ｍｇ～約１８００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２００ｍｇ～約４００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４００ｍｇ～約６００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６００ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約８００ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１０００ｍｇ～約１８００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１０００ｍｇ～約１６００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１０００ｍｇ～約１３００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１４０ｍｇ～約１８００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１６００ｍｇ～約１８００ｍｇの範囲の用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２４０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３６０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４８０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約５００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約７００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約８００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約８４０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約９００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１０００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１１００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１２００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１３００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１４００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１５００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１６００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１７００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１８００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１９００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２０００ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２００ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４００ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２４０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４８０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３６０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約８４０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１２００ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１６８０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。

【0133】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載される化学療法剤は、対象に毎日、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、対象に毎日、１日２回、１日３回または１日４回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約毎週１回～約８週間に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約５週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約７週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約８週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約２００ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６週間に１回約４００ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約２ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で投与され、チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２週間に１回約２４０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約３６０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４週間に１回約４８０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２週間に１回約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約１２週間に１回約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約６週間に１回約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約２週間に１回約８４０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約３週間に１回約１２００ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４週間に１回投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、約４週間に１回約１６８０ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、対象に静脈内注入によって投与される。

【0134】

Ｄ．処置の転帰
一態様では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤によってがんを処置する方法は、ベースラインと比較して投与後に対象において１つまたは複数の治療効果の改善をもたらす。一態様では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤によってがんを処置する方法は、ベースラインと比較して投与後に対象において１つまたは複数の治療効果の改善をもたらす。一部の実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、がん（例えば、固形腫瘍）に由来する腫瘍のサイズ、客観的奏功率、奏功期間、奏功までの期間、無増悪生存期間、全生存期間、またはそのいずれかの組合せである。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、がんに由来する腫瘍のサイズである。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、腫瘍サイズの減少である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、安定疾患である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、部分奏功である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、完全奏功である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、客観的奏功率である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、奏功期間である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、奏功までの時間である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、無増悪生存期間である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、全生存期間である。一実施形態では、１つまたは複数の治療効果は、がんの退縮である。

【0135】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤による処置に対する応答は、ＲＥＣＩＳＴ Ｃｒｉｔｅｒｉａ １．１を含み得る。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤による処置に対する応答は、ＲＥＣＩＳＴ Ｃｒｉｔｅｒｉａ １．１を含み得る。ＲＥＣＩＳＴ Ｃｒｉｔｅｒｉａ １．１は、以下の通りである：

【表4】

【0136】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤による処置の有効性は、客観的奏功率を測定することによって評価される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤による処置の有効性は、客観的奏功率を測定することによって評価される。一部の実施形態では、客観的奏功率は、既定量の腫瘍サイズ低減を有する最小期間での患者の割合である。一部の実施形態では、客観的奏功率は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に基づく。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約２０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約３０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約４０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約５０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約６０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約７０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約８５％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約９０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約９５％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約９８％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも約９９％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも２０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも３０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも４０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも５０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも６０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも７０％～８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも８０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも８５％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも９０％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも９５％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも９８％である。一実施形態では、客観的奏功率は、少なくとも９９％である。一実施形態では、客観的奏功率は、１００％である。

【0137】

本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤による処置に対する応答は、がん（例えば、固形腫瘍）に由来する腫瘍のサイズを測定することによって評価される。本明細書で提供される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤による処置に対する応答は、がん（例えば、固形腫瘍）に由来する腫瘍のサイズを測定することによって評価される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与前のがんに由来する腫瘍のサイズに対して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約１０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約２０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約３０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約４０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約５０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約６０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約７０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約８５％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約９０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約９５％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約９８％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも約９９％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与前のがんに由来する腫瘍のサイズに対して少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも１０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも２０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも３０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも４０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも５０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも６０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも７０％～８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも８０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも８５％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも９０％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも９５％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも９８％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、少なくとも９９％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、１００％低減される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって測定される。一実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、コンピューター断層撮影（ＣＴ）によって測定される。一部の実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与前の腫瘍のサイズと比較して低減されている。一部の実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩の投与前の腫瘍のサイズと比較して低減されている。一部の実施形態では、がんに由来する腫瘍のサイズは、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与前の腫瘍のサイズと比較して低減されている。

【0138】

本明細書に記載される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤による処置に対する応答は、本明細書に記載されるケトチフェンおよび／または本明細書に記載される化学療法剤の投与後の無増悪生存期間を測定することによって評価される。本明細書に記載される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤による処置に対する応答は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の無増悪生存期間を測定することによって評価される。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、少なくとも約１２ヶ月間、少なくとも約１８ヶ月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約６月の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約１年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約２年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約３年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約４年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約５年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも１月、少なくとも２月、少なくとも３月、少なくとも４月、少なくとも５月、少なくとも６月、少なくとも７月、少なくとも８月、少なくとも９月、少なくとも１０月、少なくとも１１月、少なくとも１２月、少なくとも１８月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、または少なくとも５年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも６月の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも１年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも２年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも３年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも４年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも５年の無増悪生存期間を示す。一部の実施形態では、処置に対する応答は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の無増悪生存期間を測定することによって評価される。一部の実施形態では、処置に対する応答は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩の投与後の無増悪生存期間を測定することによって評価される。一部の実施形態では、処置に対する応答は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の無増悪生存期間を測定することによって評価される。

【0139】

本明細書に記載される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤による処置に対する応答は、本明細書に記載されるケトチフェンおよび／または本明細書に記載される化学療法剤の投与後の全生存期間を測定することによって評価される。本明細書に記載される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤による処置に対する応答は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の全生存期間を測定することによって評価される。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約１月、少なくとも約２月、少なくとも約３月、少なくとも約４月、少なくとも約５月、少なくとも約６月、少なくとも約７月、少なくとも約８月、少なくとも約９月、少なくとも約１０月、少なくとも約１１月、少なくとも約１２月、少なくとも約１８月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、または少なくとも約５年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約６月の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約１年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約２年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約３年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約４年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも約５年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも１月、少なくとも２月、少なくとも３月、少なくとも４月、少なくとも５月、少なくとも６月、少なくとも７月、少なくとも８月、少なくとも９月、少なくとも１０月、少なくとも１１月、少なくとも約１２月、少なくとも１８月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、または少なくとも５年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも６月の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも１年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも２年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも３年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも４年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、対象は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に少なくとも５年の全生存期間を示す。一部の実施形態では、処置に対する応答は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の全生存期間の時間を測定することにより評価される。一部の実施形態では、処置に対する応答は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩の投与後の全生存期間の時間を測定することにより評価される。一部の実施形態では、処置に対する応答は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の全生存期間の時間を測定することにより評価される。

【0140】

本明細書に記載される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤による処置に対する応答は、本明細書に記載されるケトチフェンおよび／または本明細書に記載される化学療法剤の投与後の本明細書に記載されるケトチフェンおよび本明細書に記載される化学療法剤に対する奏功期間を測定することによって評価される。本明細書に記載される方法、または使用、または使用のための産物の一実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤による処置に対する応答は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェック
ポイント阻害剤の投与後のケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間を測定することによって評価される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与の後少なくとも約１月、少なくとも約２月、少なくとも約３月、少なくとも約４月、少なくとも約５月、少なくとも約６月、少なくとも約７月、少なくとも約８月、少なくとも約９月、少なくとも約１０月、少なくとも約１１月、少なくとも約１２月、少なくとも約１８月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、または少なくとも約５年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与の後少なくとも約６月である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも約１年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも約２年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも約３年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも約４年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも約５年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも１月、少なくとも２月、少なくとも３月、少なくとも４月、少なくとも５月、少なくとも６月、少なくとも７月、少なくとも８月、少なくとも９月、少なくとも１０月、少なくとも１１月、少なくとも１２月、少なくとも１８月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、または少なくとも５年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも６月である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも１年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも２年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも３年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも４年である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤に対する奏功期間は、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後の少なくとも５年である。一部の実施形態では、奏功期間は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に測定される。一部の実施形態では、奏功期間は、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩の投与後に測定される。一部の実施形態では、奏功期間は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与後に測定される。

【0141】

Ｖ．組成物
一部の態様では、本明細書において、本明細書に記載されるケトチフェンおよび／または本明細書に記載される化学療法剤を含む組成物（例えば、医薬組成物および治療製剤）も提供される。一部の態様では、同様に本明細書においてケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を含む組成物（例えば、医薬組成物および治療製剤）も提供される。

【0142】

治療製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分を、必要に応じた薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤と共に混合することによって貯蔵のために調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０ｔｈ Ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｋｌｉｎｓ， Ｐｕｂ．， Ｇｅｎｎａｒｏ Ｅｄ．， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， Ｐａ． ２０００）。

【0143】

許容される担体、賦形剤、または安定化剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、緩衝剤、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、ピロ亜硫酸ナトリウム；保存剤、等張剤、安定化剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ＥＤＴＡなどのキレート剤および／または非イオン性表面活性物質を含む。

【0144】

特に安定性がｐＨ依存的である場合、緩衝剤を使用してｐＨを、治療有効性を最適にする範囲に制御することができる。緩衝剤は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。本発明と共に使用するために好適な緩衝剤は、有機酸および無機酸の両方ならびにその塩を含む。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩。加えて、緩衝剤は、ヒスチジンおよびトリメチルアミン塩、例えばトリスからなり得る。

【0145】

微生物の成長を防止するために保存剤を添加することができ、典型的に保存剤は、約０．２％～１．０％（重量／体積）の範囲で存在する。本発明と共に使用するための好適な保存剤は、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化、臭化、ヨウ化）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール、レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールを含む。

【0146】

等張剤は、時に「安定化剤」としても知られ、組成物中の液体の等張性を調整または維持するために存在し得る。大きい荷電生体分子、例えばタンパク質および抗体と共に使用する場合、それらはアミノ酸側鎖の荷電基と相互作用することができ、それによって分子間および分子内相互作用の潜在性を弱めるために、しばしば「安定化剤」と呼ばれる。等張剤は、他の成分の相対量を考慮に入れて、約０．１重量％～約２５重量％の間、または約１重量％～約５重量％の間の任意の量で存在し得る。一部の実施形態では、等張剤は、多価糖アルコール、３価アルコールまたは高級糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールを含む。

【0147】

追加の賦形剤は、以下：（１）増量剤、（２）溶解増強剤、（３）安定化剤、および（４）変性または容器の壁への付着を防止する作用剤の１つまたは複数として作用し得る作用剤を含む。そのような賦形剤は、多価糖アルコール（上記で列挙した通り）；アミノ酸、例えばアラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニン等；有機糖または糖アルコール、例えばスクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイノシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール、イオウ含有還元剤、例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、ａ－モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；単糖（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖、例えばラフィノース；ならびに多糖、例えばデキストリンまたはデキストランを含む。

【0148】

非イオン性表面活性物質または界面活性剤（「湿潤剤」としても公知である）は、治療剤を可溶化するのを助けるために、ならびに撹拌誘導凝集に対して治療タンパク質を保護するために存在し得、これにより活性な治療タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく製剤を剪断表面応力に曝露させることもできる。非イオン性表面活性物質は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ～約１．０ｍｇ／ｍｌ、または約０．０７ｍｇ／ｍｌ～約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在する。一部の実施形態では、非イオン性表面活性物質は、約０．００１重量／体積％～約０．１重量／体積％、または約０．０１重量／体積％～約０．１重量／体積％、または約０．０１重量／体積％～約０．０２５重量／体積％の範囲で存在する。

【0149】

好適な非イオン性表面活性物質は、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０等）、ポリオキサマー（１８４、１８８等）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０等）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０、および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースを含む。使用することができる陰イオン性界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、およびスルホン酸ジオクチルナトリウムを含む。陽イオン性界面活性剤は、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含む。

【0150】

一部の実施形態では、ケトチフェンを含む製剤は、ケトチフェンフマル酸塩を含む。一部の実施形態では、ケトチフェンを含む製剤は、ｄｄＨ_２Ｏ中に溶解したケトチフェンフマル酸塩を含む。一部の実施形態では、ケトチフェンは、液体製剤として調製される。一部の実施形態では、ケトチフェンは、眼科用溶液として調製される。一部の実施形態では、ケトチフェンは、錠剤などの固体として調製される。

【0151】

製剤をｉｎ ｖｉｖｏ投与で使用するためには、それらを無菌としなければならない。製剤は、滅菌濾過膜を通しての濾過によって無菌的にしてもよい。本明細書における治療組成物は、通常、無菌のアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内輸液バッグまたはバイアルに入れられる。

【0152】

投与経路は、公知のおよび容認された方法に従って、例えば１回または複数回ボーラスまたは好適な様式で長期間にわたる注入、例えば皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病変内、もしくは関節内経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入、または徐放性もしくは持続放出手段によって行われる。

【0153】

本明細書における製剤はまた、処置される特定の適応にとって必要な１つより多くの活性化合物、好ましくは互いに有害な影響を及ぼさない補完的活性を有する化合物を含有してもよい。あるいはまたは加えて、組成物は、細胞傷害剤、サイトカイン、または成長阻害剤を含み得る。そのような分子は、意図される目的にとって有効である量で組み合わせて好適に存在する。

【0154】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンを含む組成物は、本明細書に記載される化学療法剤を含む組成物と同時投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩を含む組成物は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を含む組成物と同時投与される。一部の実施形態では、同時投与は、同時または連続的である。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤と同時に投与される。一部の実施形態では、同時とは、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤が、約１時間未満離して、例えば約３０分未満離して、約１５分未満離して、約１０分未満離して、または約５分未満離して対象に投与されることを意味する。一部の実施形態では、同時とは、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤が、１時間未満離して、例えば３０分未満離して、１５分未満離して、１０分未満離して、または５分未満離して対象に投与されることを意味する。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤と連続的に投与される。一部の実施形態では、連続投与とは、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤が、少なくとも１時間離して、少なくとも２時間離して、少なくとも３時間離して、少なくとも４時間離して、少なくとも５時間離して、少なくとも６時間離して、少なくとも７時間離して、少なくとも８時間離して、少なくとも９時間離して、少なくとも１０時間離して、少なくとも１１時間離して、少なくとも１２時間離して、少なくとも１３時間離して、少なくとも１４時間離して、少なくとも１５時間離して、少なくとも１６時間離して、少なくとも１７時間離して、少なくとも１８時間離して、少なくとも１９時間離して、少なくとも２０時間離して、少なくとも２１時間離して、少なくとも２２時間離して、少なくとも２３時間離して、少なくとも２４時間離して、少なくとも２日間離して、少なくとも３日間離して、少なくとも４日間離して、少なくとも５日間離して、少なくとも５日間離して、少なくとも７日間離して、少なくとも２週間離して、少なくとも３週間離して、または少なくとも４週間離して投与されることを意味する。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の投与前に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも１日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも２日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも３日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも４日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも５日前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも１週間前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも２週間前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも３週間前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する少なくとも４週間前に開始して対象に投与される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する前に開始して、対象に投与され、投与は、対象がチェックポイント阻害剤を投与されている期間の少なくとも一部の間、維持される。一部の実施形態では、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を対象に投与する前に開始して、対象に投与され、投与は、対象がチェックポイント阻害剤を投与されている全期間にわたって維持される。

【0155】

一部の実施形態では、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を含む組成物は、１つまたは追加の治療剤と同時投与される。一部の実施形態では、同時投与は、同時または連続的である。

【0156】

ＶＩ．製品およびキット
別の態様では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび／または本明細書に記載される化学療法剤を含む製品またはキットが提供される。別の態様では、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を含む製品またはキットが提供される。製品またはキットは、本発明の方法においてケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を使用するための使用説明書をさらに含み得る。このように、ある特定の実施形態では、製品またはキットは、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤の有効量を対象に投与することを含む、対象におけるがん（例えば、固形腫瘍）を処置する方法において、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤を使用するための使用説明書を含む。本明細書で提供される態様のいずれかの一部の実施形態では、固形腫瘍は、中皮腫、乳がん、乳がんの肺転移、肉腫、膵臓がん、卵巣がん、肝転移、前立腺がん、脳がん、黒色腫、腎細胞癌、結腸直腸がん、肝細胞癌、肺がん、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮癌、食道扁平上皮癌、胃がん、食道がん、子宮頸がん、メルケル細胞癌、子宮内膜癌、および皮膚扁平上皮癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍は乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳がんの肺転移である。一部の実施形態では、固形腫瘍は肉腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は骨肉腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は線維肉腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は膵臓がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は卵巣がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は肝転移である。一部の実施形態では、肝転移は結腸直腸がんに由来する。一部の実施形態では、固形腫瘍は前立腺がんである。一部の実施形態では、前立腺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、固形がんは脳がんである。一部の実施形態では、脳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、固形腫瘍は黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は腎細胞癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は結腸直腸がんである。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して低い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現および低いエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、固形腫瘍は肝細胞癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ｂ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体の両方を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは非小細胞肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは小細胞肺がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、頭頸部扁平上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、尿路上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、食道扁平上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は胃がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、食道がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、子宮頸がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、メルケル細胞癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、子宮内膜癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、皮膚扁平上皮癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、圧迫された血管を有する、および／または低灌流であるがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、圧迫された血管を有するがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、低灌流であるがんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、乳がん、乳がんの肺転移、膵臓がん、卵巣がん、および肝転移からなる群から選択される。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、膵臓がんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、卵巣がんである。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、肝転移である。一部の実施形態では、肝転移は、結腸直腸がんに由来する。一部の実施形態では、圧迫された血管を有し、および／または低灌流である固形腫瘍は、肺転移である。一部の実施形態では、肝転移は、乳がんに由来する。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有するがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腫瘍血管においてエンドセリン受容体発現を有するがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腫瘍線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有するがんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、膵臓がん、卵巣がん、肺がん、前立腺がん、脳がん、乳がん、および結腸直腸がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、膵臓がんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、卵巣がんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ｂ受容体を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体の両方を発現する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体およびエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、肺がんは、非小細胞肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは小細胞肺がんである。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、前立腺がんである。一部の実施形態では、前立腺がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、脳がんである。一部の実施形態では、脳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳がんからの肺転移である。一部の実施形態では、腫瘍血管および／または線維芽細胞においてエンドセリン受容体発現を有する固形腫瘍は、結腸直腸がんである。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して低い腫瘍エンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、非腫瘍組織と比較して高い腫瘍エンドセリン－Ａ受容体発現および低いエンドセリン－Ｂ受容体発現を有する。一部の実施形態では、対象はヒトである。

【0157】

製品またはキットは、容器をさらに含み得る。好適な容器としては、例えばボトル、バイアル（例えば、２室バイアル）、シリンジ（例えば１室または２室シリンジ）、および試験管が挙げられる。一部の実施形態では、容器はバイアルである。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料で形成され得る。容器は製剤を保持する。

【0158】

製品またはキットは、容器上にまたは容器に関連して、製剤の再構成および／または使用に関する指示を示し得るラベルまたは添付文書をさらに含み得る。ラベルまたは添付文書は、製剤が腹腔内注射、皮下、静脈内（例えば、静脈内注入）、または対象におけるがん（例えば、固形腫瘍）を処置するための他の投与様式にとって有用であるまたはそれらのために意図されることをさらに示し得る。製剤を保持する容器は、単回使用バイアルまたは再構成された製剤の繰り返し投与を可能にする複数回使用バイアルであり得る。製品またはキットは、好適な希釈剤を含む第２の容器をさらに含み得る。製品またはキットは、他の緩衝剤、希釈剤、増量剤、針、シリンジ、および使用のための使用説明書を有する添付文書を含む商業的、治療的、およびユーザーの見地から望ましい他の材料をさらに含み得る。

【0159】

本明細書における製品またはキットは、必要に応じて第２の医薬を含む容器をさらに含み、ケトチフェンまたは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩は第１の医薬であり、製品またはキットは、第２の医薬の有効量によって対象を処置するためのラベルまたは添付文書上の使用説明書をさらに含む。一部の実施形態では、第２の医薬は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、ラベルまたは添付文書は、第１および第２の医薬が、本明細書に記載されるように連続的または同時に投与されることを示す。

【0160】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるケトチフェンおよび／または本明細書に記載される化学療法剤は、凍結乾燥粉末として容器中に存在する。一部の実施形態では、ケトチフェンもしくは本明細書に記載されるその薬学的に許容される塩、および／または本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤は、凍結乾燥粉末として容器中に存在する。一部の実施形態では、凍結乾燥粉末は、活性剤の量を示す密閉容器、例えばバイアル、アンプル、またはサシェである。医薬を注射によって投与する場合、例えば注射用滅菌水または食塩水のアンプルを、成分を投与前に混合することができるように、必要に応じてキットのパーツとして提供することができる。そのようなキットは、望ましければ、様々な従来の薬学的構成要素、例えば１つまたは複数の薬学的に許容される担体を有する容器、当業者に容易に明らかとなる追加の容器等の１つまたは複数をさらに含み得る。投与される構成要素の量、投与のガイドライン、および／または構成要素を混合するためのガイドラインを示す添付文書またはラベルのいずれかとしての印刷された使用説明書もまた、キットに含めることができる。

【0161】

本発明は、以下の実施例を参照してより十分に理解される。しかし、実施例は本発明の範囲を限定すると解釈してはならない。本明細書に記載する実施例および実施形態は、単なる例示目的のためであり、それに照らした様々な改変または変化が当業者に示唆されるが、それらも本出願および添付の特許請求の範囲の精神および範囲に含まれると理解される。

【実施例】

【0162】

（実施例１）
ケトチフェンは、用量依存的様式で血管新生を阻害し、腫瘍間質内の血管灌流を回復させる
本実施例は、ケトチフェンが血管新生シグナル伝達と共に介在し、線維肉腫および骨肉腫の２つのマウスモデルにおける血管正常化を可能にすることを示す。

【0163】

細胞培養および動物腫瘍モデル
別個の肉腫サブタイプである線維肉腫（ＭＣＡ２０５細胞）および骨肉腫（Ｋ７Ｍ２ｗｔ細胞）の２つのマウスモデルを本研究に使用した。

【0164】

ＭＣＡ２０５マウス線維肉腫細胞系（ＳＣＣ１７３、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎児血清、１×非必須アミノ酸（ＴＭＳ－００１－Ｃ、Ｓｉｇｍａ）、１％抗生物質（Ａ５９５５、Ｓｉｇｍａ）、および１×β－メルカプトエタノールを含有するＲＰＭＩ－１６４０増大培地中で培養した。Ｋ７Ｍ２ｗｔマウス骨肉腫細胞系（ＣＲＬ２８３６（商標）、ＡＴＣＣ（登録商標））を、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を補充したＤＭＥＭ増大培地中で培養した。細胞は全て、３７℃／５％ＣＯ_２で維持した。

【0165】

線維肉腫同系腫瘍モデルは、５０μＬの無血清培地中のＭＣＡ２０５細胞２．５×１０^５個を６週齢のＣ５７ＢＬ／６雌性マウスの脇腹に皮下移植することによって作製した。骨肉腫同系腫瘍モデルは、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍片を６週齢のＢＡＬＢ／ｃ雌性マウスの脂肪体に移植することによって作製した。全てのマウスを、特定の病原体を含まない状態で維持し、１２時間の明暗サイクルで制御された温度／湿度（２２℃／５５％）環境で飼育し、実験期間を通して食餌および水への自由なアクセスを保持した。

【0166】

ケトチフェン処置および腫瘍成長の評価
４～７匹のマウスの各処置群は、８日間にわたって治療用量未満のケトチフェン（１、５、１０および２５ｍｇ／ｋｇ）を受けた。ケトチフェンフマル酸塩を、滅菌生理食塩水（ｄｄＨ_２Ｏ、ｗ／ｖ中の０．９％ＮａＣｌ）に溶解した。ケトチフェン１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇまたは等量の希釈剤（対照群）を、８日間にわたって１日１回、腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって投与した。ＭＣＡ２０５およびＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍モデルに関するケトチフェン処置を、平均腫瘍体積が、それぞれ、６０ｍｍ^３および１５０ｍｍ^３に達した時に開始し、６００ｍｍ^３で完了した。研究の終点で、原発腫瘍を外科的に切除し、さらなるプロセシングまで－８０℃で１×ＰＢＳ中で保存した。腫瘍の平面寸法（ｘ、ｙ）を、デジタルキャリパーを使用して２～３日毎にモニターし、腫瘍体積を、第３の寸法ｚがｓｑｒｔ（ｘ、ｙ）に等しいと仮定して、楕円体の体積から推定した。

【0167】

処置後、腫瘍成長（腫瘍体積および質量、ＭＣＡ２０５腫瘍については図２Ａおよび２Ｃ、ならびにＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍については図２Ｂおよび２Ｄを参照されたい）を、それぞれの肉腫群のマウスにおいて評価した。治療用量未満のケトチフェンは、いずれのマウス肉腫モデルにおいても抗腫瘍効果を示さなかった（図２Ａ～２Ｄ）。さらに、治療用量未満のケトチフェンは、ＣＤ１１７タンパク質レベルによって決定された場合、肥満細胞（ＭＣ）数に影響せず、ケトチフェン処置によって影響されないままであった（図２Ｅ）。研究の結論時でのマウスの体重、胸腺および脾臓の重量は、１０ｍｇ／ｋｇ用量のケトチフェンが許容されることを示していた（ＭＣＡ２０５腫瘍を担持するマウスについては図３Ａ～３Ｃ；Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍を担持するマウスについては図３Ｄ～３Ｆ）。

【0168】

低酸素研究
同所性ＭＣＡ２０５またはＫ７Ｍ２ｗｔ肉腫腫瘍を担持するマウスに、腫瘍除去の２時間前に６０ｍｇ／ｋｇのピモニダゾールＨＣｌを注射（腹腔内）した。腫瘍を切除、１×ＰＢＳ中で１０分間の洗浄を２回行い、４％ＰＦＡと共に４℃で一晩インキュベートした。固定液を吸引し、試料を１×ＰＢＳ中で１０分間の洗浄を２回行い。組織試料を、連続エタノールステップおよびキシレンで脱水した後、パラフィン包埋した。パラフィン包埋組織の連続切片（７μｍ）を、ミクロトーム（Ａｃｃｕ－Ｃｕｔ ＳＲＭ ２００ Ｒｏｔａｒｙ Ｍｉｃｒｏｔｏｍｅ、ＳＡＫＵＲＡ）を使用して生産し、水中で平坦にし、３７℃で一晩乾燥させた。次いで、切片を、組織学のために日常的にプロセシングされるようにパラフィン除去し、再水和させた。スライドをクエン酸三ナトリウム中で電子レンジ加熱し、血清溶液中でブロックし、マウス抗ピモニダゾールＲＥＤ５４９コンジュゲート抗体（ＨＰ７－１００Ｋｉｔ、１：１００）と共に４℃で一晩インキュベートした。次の日、スライドを洗浄し、核をＤＡＰＩで染色し、組織切片を封入した。スライドの免疫蛍光画像を撮影し（図１Ａ）、異なる処置群にわたって低酸素領域の割合をＤＡＰＩ染色に対して正規化した。

【0169】

ピモニダゾール陽性の割合は、未処置、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、および２５ｍｇ／ｋｇのケトチフェン処置マウスにわたって顕著であり、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェン用量を受けるマウスにおいて有意に減少した（図１Ａ～１Ｃ）。低酸素の腫瘍内レベルを、ＭＣＡ２０５（図１Ｂ）とＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図１Ｃ）との両方においてＤＡＰＩに対して正規化された画像におけるピモニダゾール付加物の蛍光シグナルを定量することによって決定した。

【0170】

ｍＲＮＡ発現レベル
この実験に関して、総ＲＮＡを、標準的なＴｒｉｚｏｌに基づくプロトコール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って乳腺腫瘍から単離し、ｃＤＮＡ合成を、逆転写酵素ＩＩＩ（ＲＴ－ＩＩＩ）酵素およびランダムヘキサマー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して実施した。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を、Ｓｙｂｒ Ｆａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＫＡＰＡ）を使用して実施した。ＩＦＮ－γ、ＶＥＧＦ、およびＢ－アクチン対照の遺伝子発現分析のために使用した特異的マウスプライマーを、以下の表１に列挙する。以下の条件：９５℃で２分、９５℃で２秒、６０℃で２０秒、６０℃で１秒、ステップ２～４を３９サイクルでＣＦＸ－９６リアルタイムＰＣＲ検出システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、反応を実施した。リアルタイムＰＣＲ分析および比較した群間の遺伝子発現の変化の計算を、ΔΔ^Ｃｔ法を使用して実施した。相対遺伝子発現を、β－アクチンの発現に基づいて正規化した。ｑＰＣＲ分析のために、処置あたり３～５個の生体試料を使用し、各試料について３回の技術的反復を行った。

【表1】

【0171】

ケトチフェンは、ＶＥＧＦのような一般的な血管新生因子のｍＲＮＡレベルに影響することなく、血管新生抑制遺伝子ＩＦＮ－γのｍＲＮＡレベルを上方調節した（図１Ｄ）。

【0172】

間質液圧
マウスをアベルチンのｉ．ｐ．注射による麻酔後で腫瘍切除前に、間質液圧（ＩＦＰ）を、「ｗｉｃｋ－ｉｎ－ｎｅｅｄｌｅ」技術を使用してｉｎ ｖｉｖｏで測定した。ｗｉｃｋ－ｉｎ－ｎｅｅｄｌｅ技術に関する追加の情報は、その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｃｈｙｍａｓｅ ｉｎ ｂｕｒｎ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｉｎ ｈａｍｓｔｅｒｓ ２０１３；５：６４３－７およびＳｈａｎｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ． ＩＦＮγ ａｎｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｐｒｅｖｅｎｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｔｕｍｏｕｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｓｈａｐｅ ｔｕｍｏｕｒ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ２００１；４１０：１１０７－１１に記載されている。

【0173】

全ての用量のケトチフェンがＩＦＰを減少させ、１０ｍｇ／ｋｇの用量が最も高い効果を示し（図１Ｅ）、血管機能の再確立による、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）への液体の漏出を防止するその能力をさらに強調する。

【0174】

全体として、これらの結果は、ケトチフェンが、用量依存的様式で血管新生を阻害し、腫瘍間質内の血管灌流を回復させ、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェン投与量が強力な効果をもたらすことを示している。

【0175】

（実施例２）
ケトチフェンは細胞外基質形成を阻害することによって腫瘍内硬度を軽減する
本実施例は、ケトチフェンが、マウス肉腫モデルのＴＭＥ内のストレス軽減を誘導することにより、腫瘍内硬度の尺度である血管減圧を容易にすることを示す。

【0176】

超音波エラストグラフィー測定
細胞培養および動物肉腫腫瘍モデルを、上記のように調製した。研究の概要は図４Ａに示される。

【0177】

基質硬度の低減におけるケトチフェンの機械治療能力を、超音波エラストグラフィーを使用して非侵襲的かつ長手軸方向に主に評価した。簡単に述べると、臨床走査のために認可された、ｅＬ１８－４リニアアレイを含むＰｈｉｌｉｐｓ ＥＰＩＱ Ｅｌｉｔｅ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄスキャナを使用する剪断波エラストグラフィーによって弾性であった腫瘍弾性係数の評価を、以前の研究において記載された通りに実施した。最高剪断波品質を示す目的の領域（ＲＯＩ）のエリアの弾性係数値を得た。提示される弾性係数値は、腫瘍領域内のアベレージである。ＭＣＡ２０５腫瘍の剪断波イメージングを、７日目のケトチフェン処置の前に実施して、処置の３日後（１１日目）および腫瘍除去の直前の処置の最終日（１５日目）に、腫瘍硬度のベースラインレベルを決定した。Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍の超音波イメージングを、２４、２８、および３１日目に実施した。ＭＣＡ２０５組織弾性に関して化学－免疫療法の組合せに対するケトチフェンの効果を、ドキソルビシン＋抗ＰＤ－Ｌ１処置の第１のサイクルの前の７日目に、第２のサイクルの１日後（１１日目）に、および最後のサイクルの２日後（１５日目）に評価した。Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍の超音波イメージングを、２２日目（すなわち、毎日のケトチフェンの４日後および併用処置の第１のサイクルの前）および処置の完了時（３２日目）に実施した。

【0178】

１０ｍｇ／ｋｇの用量のケトチフェンは、ＭＣＡ２０５線維肉腫腫瘍を担持するマウスにおいて組織硬度を最も減少させ、ヤング係数値は２０ｋＰａに達し、健康な組織の弾性と類似していた（図４Ｂ）。Ｋ７Ｍ２ｗｔ骨肉腫腫瘍は、１０ｍｇ／ｋｇの毎日のケトチフェンから同様に恩恵を受けた（図４Ｃ）。ＡＦＭによって得られた顕微鏡的弾性測定値は、巨視的データと一致していた。

【0179】

血管および機能的灌流
血管灌流および機能的灌流を、ＭＣＡ２０５を担持するマウスおよびＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍を担持するマウスにおいて、ケトチフェン処置の経過の間に、３日目および７日目に、造影剤増強超音波を使用して同時に測定した。腫瘍灌流を、８μｌのＳｏｎｏＶｕｅ／Ｌｕｍａｓｏｎ造影剤（Ｂｒａｃｃｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｇｅｎｅｖａ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のボーラス注射後に評価した。ＳｏｎｏＶｕｅは、リン脂質シェルに封入され、２．５μｍの平均直径を有する六フッ化硫黄マイクロバブルを含有する。尾静脈マイクロバブル注射は高い変動性を有する傾向があるため、それは後眼窩注射として送達される。それぞれの超音波適用前に、マウスを、アベルチン（２００ｍｇ／ｋｇ）のｉ．ｐ．注射によって麻酔した。図４Ｄ～４Ｇに示されるように、１０ｍｇ／ｋｇの用量のケトチフェンは、両方の肉腫サブタイプにおいて血管灌流および機能的灌流の有意な増加を引き起こした。

【0180】

コラーゲン染色
組織硬度はがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）によるコラーゲン発現および架橋の程度によって一部引き起こされるため、腫瘍内コラーゲンレベルを、ピクロシリウスレッドを使用する組織学的染色によって評価した。

【0181】

簡単に述べると、４匹のマウスから腫瘍を切除し、１×ＰＢＳ中で１０分間の洗浄を２回行い、４％ＰＦＡと共に４℃で一晩インキュベートした。固定液を吸引し、試料を１×ＰＢＳ中で１０分間の洗浄を２回行った。組織試料を、連続エタノールステップおよびキシレンで脱水した後、パラフィン包埋した。パラフィン包埋組織の連続切片（７μｍ）を、ミクロトーム（Ａｃｃｕ－Ｃｕｔ ＳＲＭ ２００ Ｒｏｔａｒｙ Ｍｉｃｒｏｔｏｍｅ、ＳＡＫＵＲＡ）を使用して生産し、水中で平坦にし、３７℃で一晩乾燥させた。次いで、切片を、組織学のために日常的にプロセシングされるようにパラフィン除去し、再水和させた。パラフィン除去および再水和の後、組織切片を、室温で１時間、ピクロシリウスレッド染色液に浸した。次に、組織切片を、酢酸を２回交換してすすいだ後、無水エタノールを２回交換し、最後に組織学のためのＤＰＸ封入剤（Ｓｉｇｍａ）によって封入した。コラーゲン線維は赤色に染色されたが、残りの組織は淡黄色であった。

【0182】

１０ｍｇ／ｋｇ用量のケトチフェンは、両方の肉腫サブタイプにおいてコラーゲン沈着の有意な減少を引き起こした（ＭＣＡ２０５腫瘍については図５Ａおよび５Ｃ；Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍については図５Ｂおよび５Ｄ）。

【0183】

ＣＡＦの増殖
ＣＡＦの増殖を、抗原回収後、アルファ平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）（ａｂ５６９４、Ａｂｃａｍ；１：５０希釈）タンパク質およびＫｉ－６７（Ａｂｃａｍ；１：２００希釈）増殖マーカーの存在に関する免疫染色、血清溶液（１×ＰＢＳ中の１０％ＦＢＳ、３％ロバ血清）中での１時間のインキュベーション、および内因性マウスＩｇＧ（Ａｂｃａｍ；１：１００希釈）についてはブロッキング溶液中で１時間のインキュベーションによって評価した。ＴＢＳ－Ｔ（０．２５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０）を用いた洗浄後、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－６４７抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１：４００希釈）およびＦｌｕｏｒ－４８８抗ラットＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１：４００希釈）二次抗体およびＤＡＰＲ（Ｓｉｇｍａ、１ｍｇ／ｍＬストックの１：１００希釈）を、室温で１時間にわたって適用した。次いで、切片を、ＰｒｏＬｏｎｇ ｇｏｌｄ褪色防止用封入剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して顕微鏡スライド上に封入し、カバーガラスで覆った。ＣＡＦ増殖の割合を、重複するα－ＳＭＡ（緑色）およびＫｉ６７（赤色）陽性シグナルの、総ＣＡＦシグナル（α－ＳＭＡ^＋）に対する比として検出し、ＣＡＦを示した。

【0184】

１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェン処置後のコラーゲン沈着の減少によって示される細胞外基質（ＥＣＭ）の変更（図５Ａ～５Ｄ）を検証し、図５Ｅ～５ＩにおいてＣＡＦレベルおよび増殖活性を評価した。

【0185】

図５Ｈ～５Ｉおよび図６Ｃ～６Ｄは、それぞれ、図５Ｅおよび図６Ａの代表的な免疫蛍光画像における、ＭＣＡ２０５腫瘍を担持するマウスおよびＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍を担持するマウスにおける、α－ＳＭＡ染色について陽性の領域のの割合（図５Ｈおよび６Ｃ）およびＫｉ－６７染色について陽性の領域のの割合の定量（図５Ｉおよび６Ｄ）を示す。線維肉腫腫瘍における、それぞれ、α－ＳＭＡおよびＫｉ－６７の免疫蛍光染色によって示されるように（図５Ｅ～５Ｆおよび図６Ａ～６Ｂ）、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェン処置は、両方のマウス肉腫モデルにおいてＣＡＦレベルおよび増殖活性の低下をもたらす。

【0186】

ｍＲＮＡ発現レベル
ｍＲＮＡ発現レベルを、上記のように、ｑＰＣＲによって、両方のマウス肉腫モデルにおいて評価した。遺伝子発現分析のために使用した特異的マウスプライマーを、表２に列挙する。

【表2】

【0187】

ケトチフェンは、コラーゲンＩをコードする遺伝子（Ｃｏｌ１Ａ１）および結合組織増殖因子（ＣＴＧＲ）のｍＲＮＡレベルを減少させたが、統計的に有意な程度ではなく、ＭＣＡ２０５腫瘍においてヒアルロナンシンターゼ２（Ｈａｓ２）およびヒアルロナンシンターゼ３（Ｈａｓ３）に対する効果を有しなかった（図５Ｇおよび図７Ａ）。類似の効果が、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍においても観察された（図７Ｂ）。

【0188】

ヒアルロナン評価
コラーゲンの他に、腫瘍間質の他の構造成分が圧力を発揮し、血管を変形させ得る。そのような例は、組織内で過剰の液体を生成するゲル状の領域に結合し、それを保持する、ヒアルロナン（例えば、ヒアルロン酸）である。したがって、ヒアルロン酸染色を、両方の肉腫マウスモデルにおいて実施した。

【0189】

マウスから腫瘍を切除し、１×ＰＢＳ中で１０分間の洗浄を２回行い、４％ＰＦＡと共に４℃で一晩インキュベートした。固定液を吸引し、試料を１×ＰＢＳ中で１０分間の洗浄を２回行った。組織試料を、連続エタノールステップおよびキシレンで脱水した後、パラフィン包埋した。パラフィン包埋組織の連続切片（７μｍ）を、ミクロトーム（Ａｃｃｕ－Ｃｕｔ ＳＲＭ ２００ Ｒｏｔａｒｙ Ｍｉｃｒｏｔｏｍｅ、ＳＡＫＵＲＡ）を使用して生産し、水中で平坦にし、３７℃で一晩乾燥させた。次いで、切片を、組織学のために日常的にプロセシングされるようにパラフィン除去し、再水和させた。組織切片を、抗原回収にかけ（クエン酸三ナトリウム、ｐＨ６を用いたマイクロ波熱処理、２０分）、１×ＴＢＳ／０．０２５％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００（ＴＢＳ－Ｔ）で洗浄し、ブロッキング溶液（２％ＢＳＡ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）１００ｘ）中、室温で２時間、インキュベートした。次に、スライドを、ビオチン化されたヒアルロナン結合タンパク質（ｂ－ＨＡＢＰ）（ａｍｓｂｉｏ、１：１００）と共に４℃で一晩インキュベートした。ストレプトアビジン－ＦＩＴＣコンジュゲート（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：１０００）と共にインキュベートした後、ヒアルロナンが検出され、核を、暗室中、室温で１時間、ＤＡＰＩ染色を用いて染色した。種々の処置にわたってヒアルロナンについて陽性の領域の割合を、ＤＡＰＩ染色に対して正規化した。

【0190】

ヒアルロナン結合タンパク質１（ＨＡＢＰ１）の免疫蛍光染色により、１０ｍｇ／ｋｇ用量での毎日のケトチフェンの投与がヒアルロナンタンパク質の発現を減少させることが示された（図５Ｊ～５Ｋおよび６Ｅ～Ｆ）。

【0191】

腫瘍開口
腫瘍開口実験を、切断後の開口の値を使用して、組織内に含まれる残留応力の量の指標として実施した。中程度の用量のケトチフェン（５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＭＣＡ２０５腫瘍は、より小さい開口を示したが、これは、固体応力の減少を示唆している（図５Ｌ）。

【0192】

全体として、これらの結果は、ケトチフェン（１０ｍｇ／ｋｇ）が、肉腫腫瘍における腫瘍内硬度を軽減し、毎日のケトチフェン投与が、コラーゲンおよびヒアルロナン形成を阻害することによってＥＣＭ再モデリングを誘導することを示している。

【0193】

（実施例３）
ケトチフェン前処置は、Ｔ細胞動員および細胞傷害性免疫応答を促進することによって免疫療法の抗腫瘍効果を増強する
本実施例は、ケトチフェンが併用処置において抗腫瘍免疫応答を増強することを示す。特に、本実施例は、ケトチフェンの１０ｍｇ／ｋｇの毎日レジメンがドキソルビシン／抗ＰＤ－Ｌ１併用処置の抗腫瘍免疫応答を増強することを示す。

【0194】

動物腫瘍モデル
肉腫腫瘍を担持するマウスを、１０ｍｇ／ｋｇの毎日のケトチフェン、次いで、免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた３または４用量のネオアジュバント化学療法で前処置した（図８Ａ）。

【0195】

上記のように、線維肉腫同系腫瘍モデルを生成し、ケトチフェンを調製した。マウスモノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１、クローン１０Ｆ．９Ｇ２、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）およびラットＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照、抗キーホールリンペットヘモシアニン（ＬＴＦ－２、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を、推奨されたＩｎＶｉｖｏＰｕｒｅ ｐＨ７．０希釈緩衝剤（ＩＰ００７０、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）に溶解した。ドキソルビシン塩酸塩を、２ｍｇ／ｍｌの既製の溶液としてＮｉｃｏｓｉａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌから得た。抗ＰＤ－Ｌ１を、１０ｍｇ／ｋｇの最終用量で投与し、ドキソルビシンを５ｍｇ／ｋｇで投与した。

【0196】

ＭＣＡ２０５腫瘍を有するマウスを、アベレージ腫瘍サイズが４０ｍｍ^３に達した後で術前化学療法処置前に、１０ｍｇ／ｋｇケトチフェン、または等量の希釈剤（対照群）によって毎日前処置した。腫瘍が１５０ｍｍ^３のアベレージサイズに達した場合に（７日目）開始して、ドキソルビシンおよび抗ＰＤ－Ｌ１の併用処置を３日毎に（７、１０、および１３日目）３回用量をｉ．ｐ．注射として投与した。ケトチフェンの毎日投与は、ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用処置の終了まで継続した。

【0197】

原発腫瘍が１６日目に７００ｍｍ^３のアベレージサイズに達したら、原発腫瘍を切除して保存し、マウスを再チャレンジ実験のためにモニターした。同様に、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍を、アベレージ腫瘍サイズが７０または８０ｍｍ^３に達した場合に（１８日目）、１０ｍｇ／ｋｇケトチフェンまたは等量の希釈剤（対照群）の毎日投与によって前処置し、術前化学療法処置の終了まで継続した。腫瘍が、１５０ｍｍ^３のアベレージサイズに達した場合に（２２日目）、ドキソルビシンおよび抗ＰＤ－Ｌ１併用処置を開始し、２５、２８、および３１日目に繰り返した。腫瘍が５５０ｍｍ^３の平均体積（３３日目）に達した場合に研究を終了した。マウスを屠殺し、腫瘍をｅｘ ｖｉｖｏ分析のために収集した。

【0198】

腫瘍特性評価
抗ＰＤ－Ｌ１もドキソルビシン単剤療法も、線維肉腫ＭＣＡ２０５腫瘍の腫瘍成長に影響しなかったが、ケトチフェンとのそれらの組合せは、有意な抗腫瘍応答を誘導した（図８Ｂおよび図８Ｆ）。骨肉腫腫瘍モデル（Ｋ７Ｍ２ｗｔ）においては、相対的腫瘍成長の同様の減少が、ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１の組合せを受けているマウスにおいて、ならびに、ケトチフェン－ドキソルビシンおよび抗ＰＤ－Ｌ１の三重の組合せとのケトチフェン機械治療の全組合せにおいて観察され、増殖の最大の減弱を引き起こした（図８Ｃ）。

【0199】

細胞傷害処置の有効性の増大がケトチフェン効果に起因していたとの仮説を支持するために、ケトチフェンおよび非ケトチフェン処置群における第１のサイクルの化学または免疫療法の前の組織硬度を測定し、これらの値を、最終的な体積の、第１のサイクルの化学－免疫療法処置の前に得られた体積に対する比として定義される、相対腫瘍体積と相関させた。ケトチフェンにより誘導される組織硬度の軽減を、ネオアジュバントに対する腫瘍応答との相関について評価した。ヤング係数の測定値を、以前に記載されたように決定し、ケトチフェン投与の４日後に記録した。ヤング係数の測定値は、ＭＣＡ２０５（図８Ｄ）とＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍（図８Ｅ）との両方において、ドキソルビシンおよび抗ＰＤ－Ｌ１単剤療法群および併用処置群にわたって相対腫瘍体積と正に相関する。療法に対する応答は、硬度値が両方の腫瘍モデルについて３０ｋＰａ未満に低下する場合に改善される。これらの結果は、細胞傷害処置の開始時に測定された弾性係数と、最良線形適合のＲ２値によって示される抗腫瘍有効性との間の線形の負の相関を示す（図８Ｄおよび図８Ｅ）。

【0200】

再チャレンジ実験
ドキソルビシンは、免疫療法の有効性に影響し得る、ＴＭＥ内で好ましい免疫原性状態を確立する能力を有するため、この免疫応答が同じ細胞系を用いた長期生存者の再チャレンジに対して保持されるかどうかを調査した。ＭＣＡ２０５原発腫瘍の外科的切除の８０日後に腫瘍が検出されなかった場合、マウスを長期生存者と考えた。各処置群からの５匹の長期生存者に、２．５×１０^５個のＭＣＡ２０５細胞を脇腹領域に皮下的に注射してさらに再チャレンジした。細胞を、５０μｌのＰＢＳ中で調製した。ナイーブなマウスを対照として同時に移植しだ。

【0201】

図８Ｇに示されるように、興味深いことに、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群においては腫瘍成長が生じなかったが、これは、腫瘍抗原認識時の記憶応答、すなわち、適応記憶応答の発達が、腫瘍抗原の遭遇時に誘発されることを示している。逆に、全てのナイーブな、ケトチフェンのみで処置したマウスは、進行的に増殖する腫瘍を生じた。同様に、ドキソルビシンおよび抗ＰＤ－Ｌ１群の４匹のマウスにおいて、ならびにドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１群の３匹のマウスにおいて、大きい腫瘍が形成された。ケトチフェン－ドキソルビシンおよびケトチフェン－抗ＰＤ－Ｌ１群においては、５匹のうちのたった１匹のマウスが線維肉腫を生じた。腫瘍成長測定において観察された有効性の階層と同様、ケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１の組合せは、ケトチフェンを含まないドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１に対して治療的優位性を示し、持続的寛解をもたらした。

【0202】

総合すれば、これらの知見は、ケトチフェンによる前処置が、免疫記憶をもたらす強力な抗腫瘍効果を可能にし、免疫記憶をもたらすためのドキソルビシンおよび抗ＰＤ－Ｌ１抗体処置を可能にするＴＭＥ内の好ましい免疫原性状態を確立するための必要条件であることを示している。

【0203】

（実施例４）
ケトチフェンは、血管への免疫細胞接着を上方調節することによって低酸素状態を軽減し、腫瘍内Ｔ細胞浸潤を回復させる
本実施例は、免疫応答の刺激におけるケトチフェンおよびケトチフェン併用処置の寄与を示す。

【0204】

フローサイトメトリー
ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１併用研究（例えば、図８Ａに概略される研究）の１６日目に、ＭＣＡ２０５腫瘍を１×ＨＢＳＳ（Ｂｉｏｓｅｒａ）中に収穫し、微細な断片に細断し、１ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＤおよび０．５ｍｇ／ｍｌのＤＮａｓｅＩ（Ｒｏｃｈｅ）と共に、３７℃の振とう器中で３０分間インキュベートした。１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質／抗真菌剤溶液を含有するＲＰＭＩ培地の添加によって、酵素消化を停止させた。次いで、組織ホモジェネートを、４０μｍの細胞ストレーナーを通して濾過した。赤血球を、ＡＣＫ溶解緩衝剤（Ａ１０４９２０１、Ｇｉｂｃｏ）によって除去し、単一細胞懸濁液を収集し、試料あたり１×１０^６個の細胞の最終濃度で使用した。次いで、細胞を、生細胞のゲーティングのために、固定可能な生存能力染料（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、１：１０００）と共に氷上で１０分間インキュベートした。ラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２ ｍＡｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と共に氷上で２０分間インキュベートした後、非特異的抗体結合を遮断した。

【0205】

実験において使用された抗マウス抗体は、ＣＤ４５－Ｖ５００（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３－ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ４－ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＣＤ２５－ＰＥ－Ｃｙ７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ１２７－ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）およびＣＤ８ａ－ｅ４５０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）であった。

【0206】

Ｆｏｘｐ３－ＡＦ４８８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）染色を、Ｆｏｘｐ３／転写因子染色緩衝剤セット（００－５５２３－００、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して固定および透過処理プロセス後に実施した。ＭＤＳＣ染色のために、Ｇｒ－１－ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）およびＣＤ１１ｂ－ｅ４５０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用した。フローサイトメトリーデータを、ＢＤ ＦＡＣＳＬｙｒｉｃフローサイトメーターを使用して取得し、ＢＤ ＦＡＣＳｕｉｔｅ（商標）ソフトウェアを使用して分析した。提示されるデータは、シングレットの生細胞を代表する。図１１Ａ～１１Ｂおよび図１２は、本明細書に提供されるフローサイトメトリー実験のためのゲーティング戦略に関する詳細を提供する。

【0207】

総Ｔ細胞集団を、主にＣＤ３^＋タンパク質、汎Ｔ細胞マーカーの発現によって定義した後、ＣＤ８^＋細胞傷害性または調節性Ｔ細胞サブタイプ（ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＣＤ１２７^ｌｏＦｏｘｐ３^＋）中で区別した（図９Ａ）。ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１およびケトチフェン－ドキソルビシン－抗ＰＤ－Ｌ１処置群の総Ｔ細胞動員において、統計的に有意な増加があった。ＣＤ８／Ｔｒｅｇ比の増大の規模は、乳がんのようなより免疫原性の高いがんと比較して小さいが、それはＩＣＩに対する応答と関連していた。しかしながら、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍においては、ネオアジュバントレジメンの前にケトチフェンを受けているマウス群のみが、ＣＤ３タンパク質に関する免疫蛍光染色によって示されるように、Ｔ細胞浸潤の増加を示した（図１０Ｄ）。ＣＤ８^＋Ｔ細胞の免疫抑制性Ｔｒｅｇに対する比は、ドキソルビシンを、ケトチフェンまたは／および免疫療法処置と組み合わせた後に増大した（図９Ｂ）。

【0208】

免疫蛍光およびｍＲＮＡ発現
上記のように実施された、Ｋｉ６７およびＣＤ８に関する免疫蛍光染色により、骨肉腫腫瘍（Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍）における動員されたＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化状態が確認された（図９Ｃ～９Ｄ）。次いで、Ｋ７Ｍ２ｗｔ組織切片を、低酸素状態の形成の尺度としてピモニダゾール付加物について染色した。ケトチフェンを受けている群のみが、低酸素領域の割合の有意な減少を示し、十分な腫瘍酸素化を可能にした（図１０Ａ～１０Ｂ）。

【0209】

上記のＲＴ－ｑＰＣＲを使用して、灌流血管壁への免疫細胞接着を評価した。遺伝子発現分析のために使用した特異的マウスプライマーを、表３に列挙する。

【表3】

【0210】

ケトチフェンは、免疫細胞接着分子ＩＣＡＭおよびＰ－セレクチン（Ｐ－ｓｅｌ）のｍＲＮＡ発現を増加させた（図１０Ｃ）。

【0211】

ＣＤ３およびＣＤ３１内皮マーカーの免疫蛍光染色を使用して、腫瘍毛細血管の近くでのＴ細胞の存在を評価した。Ｋ７Ｍ２ｗｔ骨肉腫腫瘍のＰＦＡ固定された組織凍結切片を、一次ウサギ抗ＣＤ３１（Ａｂｃａｍ、１：５０）およびラット抗ＣＤ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、１：５０）と共に４℃で一晩インキュベートした。ＣＤ３１シグナルを、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－４８８抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：４００）で検出し、ＣＤ３シグナルを、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－６４７抗ラットＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：４００）二次抗体で検出した。細胞核を、ＤＡＰＩで染色した。血管内容物に対する腫瘍関連Ｔ細胞を、ＤＡＰＩ染色に対して正規化した重複するＣＤ３１およびＣＤ３領域の割合によって決定した。ケトチフェンの全ての併用処置は、内皮細胞領域の割合に影響することなく、Ｔリンパ球と内皮細胞とのより高い関連を示す（図１０Ｅ）。抗ＰＤ－Ｌ１単剤療法およびドキソルビシン併用は、ＣＤ３ Ｔ細胞およびＣＤ３１の共局在化の増加を示す（図９Ｅ～９Ｆ）。

【0212】

全体として、これらの結果は、ケトチフェン機械療法が、免疫抑制細胞集団の動員を減少させることによってネオアジュバント処置を増強することを示している。

【0213】

（実施例５）
ケトチフェン効果のさらなる研究
肉腫腫瘍中の肥満細胞（ＭＣ）の存在を、ヒト組織マイクロアレイのＣＤ１１７（ｃ－Ｋｉｔ）免疫蛍光染色によって実証した。肥満細胞は様々な肉腫サブタイプにおいて見出されたが、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）のモジュレーションにおける役割およびがん関連線維芽細胞の存在を示している（図１６を参照されたい）。

【0214】

ＭＣと線維芽細胞との両方がＴＭＥ中に存在することを考慮して、マウスＭＣ／９ ＭＣおよびＮＩＨ３Ｔ３筋線維芽細胞を化学コミュニケーションのみを可能にする微小孔を有するトランスウェルチャンバーによって分離する同時培養アッセイを使用して、筋線維芽細胞上でのＭＣ活性化の結果を探索した（図１３Ａ）。このシステムでは、脱顆粒化効率を、上清中のβ－ヘキソサミニダーゼ（β－ｈｅｘ）の濃度を測定することによって決定した。ＭＣ脱顆粒化を、ＭＲＧＰＲＢ２受容体（ヒトＧタンパク質共役受容体ＭＲＧＰＲＸ２のオルソログ）に結合する化合物４８／８０（Ｃ４８／８０）への曝露によって誘導した。図１３Ｂに示されるように、ケトチフェンは、このシステムにおいてＭＣ脱顆粒化を阻害した。ビヒクル対照およびＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００で処置した同時培養物を、それぞれ、バックグラウンドおよび最大β－ｈｅｘ放出を評価するための内部アッセイ対照として使用した。トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）－β１を、ＮＩＨ３Ｔ３細胞の筋線維芽細胞表現型を誘導するその能力のため、線維芽細胞活性化因子として使用した。ＭＣ／９細胞をＮＩＨ３Ｔ３細胞と共に２４時間培養した後、低血清培地中でさらに２４時間、ケトチフェンまたはＴＧＦβのいずれかで処置し、次いで、Ｃ４８／８０で３０分間感作した。ケトチフェンは用量依存的様式で脱顆粒化を阻害することが見出され、１００μｇ／ｍｌの濃度はＣ４８／８０処置と比較してβ－ｈｅｘ放出の５０％を超える減少を引き起こした。同時培養物中のＴＧＦβの存在は、ＭＣ脱顆粒化に影響しなかった（図１３Ｂ、図１５Ａ、および図１５Ｂを参照されたい）。ケトチフェン処置は、ＮＩＨ３Ｔ３細胞の生存能力を有意に低下させなかった（図１５Ｃ）。

【0215】

ＭＣ－線維芽細胞相互作用をさらに探索するために、同時培養系におけるＮＩＨ３Ｔ３細胞の分化プロセスを、免疫蛍光染色により、筋線維芽細胞表現型の２つのマーカーであるαＳＭＡおよびコラーゲンＩのレベルをアッセイすることによってモニターした（図１３Ｃ、図１３Ｄ、および図１３Ｅ）。αＳＭＡとコラーゲンＩタンパク質発現との両方の有意な増加は、ＴＧＦβと活性化ＭＣとの両方の存在下でのみ生じたが、ＴＧＦβのみの存在下では変化は観察されなかった。ケトチフェンは、この筋線維芽細胞分化を弱めた。これらのｉｎ ｖｉｔｒｏでの結果は、ＭＣは活性化線維芽細胞によりコラーゲンの生産を支援するが、ケトチフェンはこの相互作用を阻害することを示している。

【0216】

ヒト肉腫試料中のＭＣの存在の確認およびＭＣ－線維芽細胞相互作用のｉｎ ｖｉｔｒｏでの特性評価の後、ＭＣ脱顆粒化の阻害がマウス肉腫モデルにおいて線維化を減少させるかどうかを評価した。ＭＣＡ２０５線維肉腫およびＫ７Ｍ２ｗｔ骨肉腫腫瘍をケトチフェンで処置することによるＭＣ脱顆粒化の影響を評価した。ケトチフェンを、４つの異なる用量（１、５、１０、および２５ｍｇ／ｋｇ）で、８日間にわたって、ｉ．ｐ．注射により１日１回投与した（図４Ａに示される通り）。どの用量も抗腫瘍効果を示さなかったが（前記小節に記載され、図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、および図２Ｄに示される）、最も高い用量は脾腫を引き起こした。ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍硬度に対するケトチフェンの効果を、剪断波エラストグラフィー（ＳＷＥ）を使用してモニターした。ＳＷＥ測定を、ケトチフェン処置の前、３日後（ＭＣＡ２０５について）または４日後（Ｋ７Ｍ２ｗｔについて）および研究完了時に実施した。結果は、１０ｍｇ／ｋｇの用量がＭＣＡ２０５線維肉腫腫瘍においてより効果的に組織硬度を減少させ、その弾性係数値が２０ｋＰａに達することを示した（図４Ｂ）。Ｋ７Ｍ２ｗｔ骨肉腫腫瘍は、１０ｍｇ／ｋｇの毎日のケトチフェンから同様に恩恵を受けた（図４Ｃ）。腫瘍硬度の適切な減少を、腫瘍試料の原子間力顕微鏡測定（ＡＦＭ）を使用して顕微鏡組織規模でｅｘ ｖｉｖｏでさらに検証した。ＡＦＭ分析により、Ｋ７Ｍ２ｗｔ腫瘍の弾性係数のアベレージ値の減少（図１９Ａ）と共に、低い方の値に向かう分布のシフトが示されたが、これは、コラーゲン密度の低下を示唆する（図１９Ｂ）。図１９Ｂでは、より低い弾性係数の左ピークは準拠したがん細胞に対応するが、より高い弾性係数の底部（破線の長方形）はより硬い基質成分、主にコラーゲンの寄与を表す。データは、平均±ＳＥとして提示される。通常の一元ＡＮＯＶＡ検定を使用して２つの独立群間の平均を比較することにより、統計分析を実施した。

【0217】

最後に、ＭＣ不活化に対するケトチフェンの効果を確認するために、ケトチフェンで処置された腫瘍を、筋線維芽細胞増殖およびコラーゲン合成における役割を有するＭＣにとってユニークなセリンプロテアーゼであるトリプターゼについて染色した。この結果は、両方の肉腫モデルにおいて１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンによる処置後にトリプターゼレベルが減少したことを示し、ＭＣが腫瘍におけるコラーゲン再モデリングに影響することを示している（図１７Ａ、図１７Ｂ、および図１７Ｃ）。
ケトチフェンは血管正常化によって灌流および酸素正常状態を回復させる

【0218】

ＭＣ阻害が、灌流をさらに改善することができる、腫瘍血管の構造を正常化するかどうかを評価するために、血管透過性に対するケトチフェンの効果を評価した。５、１０、および２５ｍｇ／ｋｇのケトチフェンの投与は、最低用量および未処置の対照と比較して、ＮＧ２周皮細胞マーカーおよびＣＤ３１内皮タンパク質の共局在化によって示されるように、血管壁を強化する腫瘍血管系の周皮細胞カバレッジを増加させることが見出された（図１４Ｂ、図１４Ｃ、および図１４Ｄ）。驚くべきことに、ＶＥＧＦ転写物の減少は観察されなかった。その代わりに、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェン処置後にＭＣＡ２０５腫瘍中のＩＦＮ－γ転写レベルの上方調節が観察された（図１Ｄ）。ＩＦＮγは、ＴＭＥ中のその濃度が血管正常化および血管漏出の減少と関連してきた血管新生抑制タンパク質である。さらに、ケトチフェン処置によるＩＦＰレベルの減少は、血管正常化のさらなる証拠を提供する（腫瘍の間質液圧の低下におけるケトチフェンの効果を示す、上で考察された、図１Ｅを参照されたい）。ケトチフェンは、血管減圧の結果としてオープンルーメンを有する血管の割合を増加させることも見出されたが（図１４Ａ）、これは、ケトチフェンが腫瘍血管を減圧させ、灌流を改善させることをさらに示している。

【0219】

そのような血管減圧および正常化が腫瘍血管灌流を再確立するのに十分であるかどうかを評価した。造影剤増強超音波イメージングを使用して、造影剤によって覆われた腫瘍の領域の有意な増加が、対照で処置された腫瘍と比較して、ケトチフェン処置の結果として見出された。これらの知見は、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンが、線維肉腫と骨肉腫腫瘍との両方において血管灌流の増加において非常に有効であることを示していた（図１８Ａおよび図１８Ｂ）。同様に、ピモニダゾールを使用して低酸素状態の腫瘍内レベルを測定することによって、１０ｍｇ／ｋｇのケトチフェンが、上で考察された通り、両方の腫瘍モデルにおいて低酸素状態を軽減することが観察された（図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ）。

【0220】

したがって、ケトチフェン処置、特に、１０ｍｇ／ｋｇの１日用量のケトチフェンが、肥満細胞およびがん関連線維芽細胞を効果的に再プログラミングし、腫瘍ＥＣＭと血管系との両方を正常化し、灌流および酸素化を改善することが見出された。

【0221】

結論として、ケトチフェンは、ドキソルビシンおよび／または抗ＰＤ－Ｌ１療法の細胞傷害活性と組み合わせることができる再プログラミング特性を有することが示された。ケトチフェンによる前処置は、化学療法およびチェックポイント阻害に対するＭＣＡ２０５およびＫ７Ｍ２ｗｔ腫瘍の感度を増大させたが、３つの組合せは腫瘍体積の退縮によって示されたように抗腫瘍応答を増加させた。ドキソルビシンは、免疫療法と相乗作用して、低酸素状態の軽減とは無関係に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖および血管へのＴ細胞の付着を促進したが、これは、他の機構がそのような抗腫瘍応答を強調し得ることを示唆している。これらの知見は、未熟骨髄性細胞集団のＭＤＳＣへの極性化を減少させながら、ケトチフェンが血管正常化を容易にし、次いで、Ｔ細胞溢出を支援し、動員を増加させ、これらの腫瘍中で増殖するＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を倍化するのに必要な接着分子を上方調節するＩＦＮγ依存的機構を示す。最後に、剪断波エラストグラフィーを、組織弾性特性のモニタリングによる免疫チェックポイント阻害に対する応答性の非侵襲性かつ信頼できるバイオマーカーとして示した。腫瘍弾性特性は肉腫腫瘍における免疫療法および化学療法の有効性と良好に相関し、これは、応答の予測マーカーとして役立つ腫瘍硬度の使用を強調する。

【図1A】

【図1B-C】

【図1D-E】

【図2A-B】

【図2C-D】

【図2E】

【図3A-F】

【図4A-C】

【図4D-G】

【図5A-B】

【図5C-D】

【図5E】

【図5F-G】

【図5H-I】

【図5J】

【図5K-L】

【図6A】

【図6B-D】

【図6E】

【図6F】

【図7A-B】

【図8A】

【図8B-E】

【図8F-G】

【図8H】

【図9A-B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図10A】

【図10B】

【図10C-E】

【図11A-B】

【図12】

【図13A-B】

【図13C】

【図13D-E】

【図14A】

【図14B】

【図14C-D】

【図15A-C】

【図16】

【図17A】

【図17B-C】

【図18A-B】

【図19A-B】

【配列表】

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【国際調査報告】