特表 2025-500974 メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａの複素環阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-15

(54)【発明の名称】メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａの複素環阻害剤

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20250107BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20250107BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20250107BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250107BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250107BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 147

A61K31/519

A61P1/00

A61P35/00

A61P43/00 111

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024538073

(86)(22)【出願日】2022-12-20

(85)【翻訳文提出日】2024-06-21

(86)【国際出願番号】 CN2022140380

(87)【国際公開番号】W WO2023116696

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】202111571838.2

(32)【優先日】2021-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202111571406.1

(32)【優先日】2021-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＢＲＩＪ

(71)【出願人】

【識別番号】521330404

【氏名又は名称】南京正大天晴制薬有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＪＩＮＧ ＣＨＩＡ ＴＡＩ ＴＩＡＮＱＩＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵ ＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】馬 昌友

(72)【発明者】

【氏名】黄 丹丹

(72)【発明者】

【氏名】呉 叶彬

(72)【発明者】

【氏名】蘇 進財

(72)【発明者】

【氏名】馬 力

(72)【発明者】

【氏名】代 清宇

(72)【発明者】

【氏名】左 鋭

(72)【発明者】

【氏名】裴 俊杰

(72)【発明者】

【氏名】苗 雷

(72)【発明者】

【氏名】呉 艦

(72)【発明者】

【氏名】徐 丹

(72)【発明者】

【氏名】朱 春霞

(72)【発明者】

【氏名】田 舟山

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB09

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA66

4C086ZB26

4C086ZC41

(57)【要約】

本発明は構造が一般式Ｉで示されるメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａの複素環阻害剤を提供する。各置換基は、本明細書に記載される通りに定義される。その調製方法をさらに提供する。前記一般式Ｉで示される化合物は、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａの阻害活性が顕著で、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ媒介疾患の治療に有用である。
【化１】

【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化1】

（ただし、
Ｘは、ＣＲ^３又はＮから選択され、Ｙは、ＣＲ^４又はＮから選択され、Ｚは、ＣＲ^５又はＮから選択され、Ｗは、ＣＲ^６又はＮから選択され、
ここで、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、シアノ、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｓ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、６～１０員アリール、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルケニルから選択され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルケニルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、－ＮＲ^７Ｒ^８、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルによって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルによって任意に置換され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、又はＮＯ_２によって任意に置換され、
Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、６～１０員アリール、又は９～１８員ベンゾヘテロシクリルから選択され、前記６～１０員アリール、又は９～１８員ベンゾヘテロシクリルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、－ＮＲ^９Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^９Ｒ^１０又は５～７員ヘテロアリールによって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又は５～７員ヘテロアリールとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、（Ｃ１～Ｃ３アルキル）－Ｏ－、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、
Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、及びＲ^１０は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、
条件として、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺのうち多くとも２つは同時にＮである。）

【請求項2】

式Ｉ化合物は式ＩＩで示される構造を有する、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化2】

（ただし、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、及びＲ^５の定義は式Ｉ化合物における定義と同様である。）

【請求項3】

Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換され、
好ましくは、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、ハロゲンによって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換され、
より好ましくは、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、フッ素によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、フッ素置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換される、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

Ｒ^３は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され、好ましくは、Ｒ^３は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、より好ましくは、Ｒ^３は、水素、メチル又はシクロプロピルから選択され、さらに好ましくは、Ｒ^３は、水素又はメチルから選択され、最も好ましくは、Ｒ^３は、水素から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

Ｒ^４は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、好ましくは、Ｒ^４は、水素又はメチルから選択され、より好ましくは、Ｒ^４は、水素から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

Ｒ^５は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、フッ素によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、フッ素置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^５は、水素、塩素、ヒドロキシ、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、ＣＨＦ_２Ｏ－、ＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－、４－ジフルオロメトキシフェニル、又はＣＨ_３ＣＨ_２Ｏ－から選択され、より好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、ＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－、又はＣＨ_３ＣＨ_２Ｏ－から選択され、さらに好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、又はＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－から選択され、最も好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピルから選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、

【化3】

ここで、前記基は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、－ＮＲ^９Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^９Ｒ^１０又は５～７員ヘテロアリールによって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又は５～７員ヘテロアリールとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、（Ｃ１～Ｃ３アルキル）－Ｏ－、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、

【化4】

ここで、前記基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲンによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、及びＲ^１０は、それぞれ独立して、Ｈから選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

Ｒ^１は、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、

【化5】

ここで、前記基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲンによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^１は以下の式で示されている基から選択され、

【化6】

より好ましくは、Ｒ^１は以下の式で示されている基から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化7】

【請求項9】

Ｒ^２は、フェニル又は以下の式で示されている基から選択され、

【化8】

ここで、前記基は、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、ハロゲンによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^２は以下の式で示されている基から選択され、

【化9】

より好ましくは、Ｒ^２は以下の式で示されている基から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化10】

【請求項10】

以下の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化11】

【請求項11】

治療有効量の請求項１～請求項１０のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項12】

ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態を予防及び／又は治療する薬物の調製における、請求項１～請求項１０のいずれか一項に記載の化合物、その薬学的に許容される塩又は請求項１１に記載の医薬組成物の使用であって、好ましくは、前記ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態はＭＡＴ２Ａ過剰発現により媒介される、使用。

【請求項13】

ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態を予防及び／又は治療するための方法であって、
これを必要とする個体に有効量の請求項１～請求項１０のいずれか一項に記載の化合物、その薬学的に許容される塩又は請求項１１に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項14】

ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態を予防及び／又は治療するための請求項１～請求項１０のいずれか一項に記載の化合物、その薬学的に許容される塩又は請求項１１に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬の技術分野に属し、具体的には、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａの複素環阻害剤、その調製方法及び使用に関する。

【背景技術】

【0002】

メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ（ＭＡＴ）（Ｓ－アデノシルメチオニン合成酵素とも呼ばれる）は、メチオニンとＡＴＰからのＳ－アデノシルメチオニン（ＳＡＭ又はＡｄｏＭｅｔ）の合成を触媒する細胞酵素であり、メチオニンサイクルの律速段階と考えられている。ＳＡＭはポリアミン生合成におけるアミノプロピル基供与体であり、ＤＮＡメチル化に用いられる主要なメチル供与体であるほか、遺伝子の転写、細胞増殖や二次代謝産物の生成に関与する。ＭＡＴの３種類のヒトアイソザイムはＭＡＴ１、ＭＡＴ２、及びＭＡＴ３を含み、その中でＭＡＴ１とＭＡＴ３は肝組織中に発現し、メチオニンアデノシントランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）はＭＡＴ２の亜型の１種であり、ヒト細胞タイプに広く発現し、しかも、ヒト癌中の主要な形式であり、ＳＡＭの生成にも重要な役割を果たしている。

【0003】

ＭＴＡＰ（メチルチオアデノシンホスホリラーゼ）は正常組織に広く発現している酵素で、メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）からアデニンと５－メチルチオリボース－１－リン酸への変換を触媒し、アデニンはアデノシン一リン酸に変換され、５－メチルチオリボース－１－リン酸はメチオニンとギ酸塩に変換される。ＭＴＡは、例えば、代謝拮抗物質により、プリン合成がブロックされた場合に、代替プリン源として有用である。

【0004】

ＭＴＡＰをコードする遺伝子は９番染色体上の１つの部位にあり、がん患者では、中枢神経系、膵臓、食道膀胱や肺の細胞から欠失することが多い。ＭＴＡＰが失われると、ＭＴＡＰを発現している細胞と比較してＭＴＡが蓄積されるため、ＭＴＡＰが欠失した細胞はＳＡＭの産生により依存し、したがって、ＭＡＴ２Ａ活性により依存する。約４００のがん細胞株のスクリーニングにおいて、ＭＡＴ２ＡノックダウンによりＭＴＡＰが欠失した細胞は、正常にＭＴＡＰを発現している細胞に比べて、活力がより多くの割合で失われていた。さらに、ＭＡＴ２Ａタンパク質の誘導性ノックダウンは、生体内の腫瘍の成長を低下させる。これらの結果は、ＭＡＴ２Ａ阻害剤がＭＴＡＰ欠失腫瘍患者に新たな治療法を提供する可能性を示唆している。

【0005】

現在、中国特許出願ＣＮ１０９８９０８２２Ａには、ピラゾロピリミジノン系ＭＡＴ２Ａ阻害剤が開示されており、ＷＯ２０２０１２３３９５Ａ１には、ＭＡＴ２Ａ阻害剤として２－オキソキナゾリン誘導体が開示されており、本発明には、新規な複素環系メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ阻害剤が提供される。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化1】

（ただし、Ｘは、ＣＲ^３又はＮから選択され、Ｙは、ＣＲ^４又はＮから選択され、Ｚは、ＣＲ^５又はＮから選択され、Ｗは、ＣＲ^６又はＮから選択され、
ここで、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して水素、シアノ、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｓ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、６～１０員アリール、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルケニルから選択され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルケニルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、－ＮＲ^７Ｒ^８、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルによって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルによって任意に置換され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、又はＮＯ_２によって任意に置換され、
Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、６～１０員アリール、又は９～１８員ベンゾヘテロシクリルから選択され、前記６～１０員アリール、又は９～１８員ベンゾヘテロシクリルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、－ＮＲ^９Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^９Ｒ^１０又は５～７員ヘテロアリールによって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又は５～７員ヘテロアリールとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、（Ｃ１～Ｃ３アルキル）－Ｏ－、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、
Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、及びＲ^１０は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、
条件として、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺのうち多くとも２つは同時にＮである。）

【0007】

いくつかの実施態様では、Ｘは、ＣＲ^３から選択される。

【0008】

いくつかの実施態様では、Ｙは、ＣＲ^４から選択される。

【0009】

いくつかの実施態様では、Ｚは、ＣＲ^５から選択される。

【0010】

いくつかの実施態様では、Ｗは、Ｎである。

【0011】

いくつかの実施態様では、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換される。

【0012】

いくつかの代表実施態様では、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、ハロゲンによって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換される。

【0013】

いくつかの代表実施態様では、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、フッ素によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、フッ素置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換される。

【0014】

いくつかのより代表的な実施態様では、Ｒ^３は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され、好ましくは、Ｒ^３は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択される。

【0015】

いくつかのより代表的な実施態様では、Ｒ^３は、水素、メチル又はシクロプロピルから選択され、好ましくは、Ｒ^３は、水素又はメチルから選択され、より好ましくは、Ｒ^３は、水素から選択される。

【0016】

いくつかのより代表的な実施態様では、Ｒ^４は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、好ましくは、Ｒ^４は、水素又はメチルから選択され、より好ましくは、Ｒ^４は、水素から選択される。

【0017】

いくつかのより代表的な実施態様では、Ｒ^５は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、フッ素によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、フッ素置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換される。

【0018】

いくつかのより代表的な実施態様では、Ｒ^５は、水素、塩素、ヒドロキシ、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、ＣＨＦ_２Ｏ－、ＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－、４－ジフルオロメトキシフェニル、又はＣＨ_３ＣＨ_２Ｏ－から選択され、好ましくは、Ｒ^５はシクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、ＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－、又はＣＨ_３ＣＨ_２Ｏ－から選択され、より好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、又はＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－から選択され、最も好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピルから選択される。

【0019】

いくつかの実施態様では、Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、ここで、前記基は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、－ＮＲ^９Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^９Ｒ^１０又は５～７員ヘテロアリールによって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又は５～７員ヘテロアリールとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、（Ｃ１～Ｃ３アルキル）－Ｏ－、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換される。

【化2】

【0020】

いくつかの実施態様では、Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、ここで、前記基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲンによって任意に置換される。

【化3】

【0021】

いくつかの実施態様では、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、及びＲ^１０は、それぞれ独立して、Ｈから選択される。

【0022】

いくつかの実施態様では、Ｒ^１は、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、ここで、前記基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲンによって任意に置換される。

【化4】

【0023】

いくつかの実施態様では、Ｒ^１は以下の式で示されている基から選択され、

【化5】

好ましくは、Ｒ^１は以下の式で示されている基から選択される。

【化6】

【0024】

いくつかの実施態様では、Ｒ^２は、フェニル又は以下の式で示されている基から選択され、ここで、前記基は、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、ハロゲンによって任意に置換される。

【化7】

【0025】

いくつかの実施態様では、Ｒ^２は以下の式で示されている基から選択され、

【化8】

好ましくは、Ｒ^２は以下の式で示されている基から選択される。

【化9】

【0026】

いくつかの実施態様では、前述式Ｉ化合物は式ＩＩで示される構造を有する。

【化10】

（ただし、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、及びＲ^５の定義は式Ｉ化合物における定義と同様である。）

【0027】

別の態様では、本発明は、下記化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化11】

【0028】

いくつかの実施態様では、本発明は、治療有効量の前述化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。

【0029】

いくつかの実施態様では、本発明は、治療有効量の前述化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物を提供する。

【0030】

本発明の前記医薬組成物は、経口又は非経口（例えば、静脈内）など、任意の適切な経路又は方法によって投与されてもよい。前述化合物の治療有効量は、約１ｍｇ～１ｇ／Ｋｇ体重／日である。

【0031】

経口経路投与の場合、本発明の医薬組成物は、通常、錠剤、カプセル剤又は溶液の形態で提供される。錠剤は、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、を含んでもよい。前記担体は、希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤を含むが、これらに限定されない。

【0032】

非経口経路投与の場合、本発明の医薬組成物は、静脈内注射、筋肉内注射又は皮下注射によって投与されてもよい。通常、無菌水溶液又は懸濁液又は凍結乾燥粉末として提供され、ｐＨや等張性が適切に調整される。

【0033】

別の態様では、本発明はまた、ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態を予防及び／又は治療する薬物の製造における、前述化合物又はその薬学的に許容される塩又はその医薬組成物の使用を提供する。

【0034】

別の態様では、本発明はまた、これを必要とする個体に有効量の前述化合物、その薬学的に許容される塩又はその医薬組成物を投与することを含む、ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態を予防及び／又は治療するための方法を提供する。

【0035】

別の態様では、本発明はまた、ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態を予防及び／又は治療するための本発明の前述化合物、その薬学的に許容される塩又は本発明の医薬組成物を提供する。前記ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態の例として、結腸直腸癌などが含まれる。

【0036】

いくつかの特定実施形態では、前記ＭＡＴ２Ａ媒介疾患は、ＭＡＴ２Ａ過剰発現媒介疾患である。

【0037】

別の態様では、本発明は、以下の合成スキームを含むが、これらに限定されない、式Ｉ又はＩＩ化合物の製造方法を提供する。

【化12】

（ただし、Ｘは、塩素、臭素、又はヨウ素から選択され、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^５の定義は、上記式Ｉの定義と同様であり、Ｒ^ａ、及びＲ^ｂは、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ３アルキルから選択される。）

【0038】

いくつかの実施態様では、Ｒ^ａ、及びＲ^ｂは、それぞれ独立して、メチルから選択される。

【0039】

式１－１化合物と式１－２化合物を反応させて式１－３化合物を生成し、式１－３化合物からハロゲン化水素酸の作用により式１－４化合物を生成し、式１－４化合物をハロゲン化反応させて式１－５化合物を得、式１－５化合物と式１－６化合物とを反応させて式１－７化合物を生成し、式１－７化合物を環化反応させて式１－８化合物を得、式１－８化合物と式１－９ａ又は式１－９ｂ化合物とを反応させて式１－１０化合物を生成し、式１－１０化合物と式１－１１ａ又は式１－１１ｂ化合物とを反応させて式１－１２化合物を生成し、又は式１－８化合物と式１－９ａ又は式１－９ｂ化合物とを反応させて式１－１３化合物を生成し、ここで、式１－１３化合物では、Ｒ^１、及びＲ^２は同じである。

【0040】

いくつかの実施態様では、Ｘは、塩素から選択される。

【0041】

いくつかの実施態様では、Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、以下の式で示されている基から選択され、Ｒ^５は、シクロプロピルから選択される。

【化13】

【図面の簡単な説明】

【0042】

【図1】テスト例３におけるＨＣＴ１１６ ＭＴＡＰ^－／－移植腫瘍モデルの腫瘍抑制曲線である。

【図2】テスト例３におけるＨＣＴ１１６ ＭＴＡＰ^－／－移植腫瘍モデルの腫瘍内のＳＡＭ阻害結果である。

【図3】テスト例４におけるＫＰ－４移植腫瘍モデルの腫瘍抑制曲線である。

【図4】テスト例４におけるＫＰ－４移植腫瘍モデルの腫瘍内のＳＡＭ阻害結果である。

【発明を実施するための形態】

【0043】

定義
特定の説明がない限り、明細書及び特許請求の範囲において使用される次の用語は、次の意味を有する。

【0044】

「任意」又は「任意に」という用語は、後に説明されるイベント又は状況が発生する可能性がある、又は発生しない可能性があることを意味し、この説明は、イベント又は状況が発生する場合と、発生しない場合とを含む。

【0045】

本明細書における数値範囲は、与えられた範囲内の個々の整数を意味する。例えば、「Ｃ１～Ｃ６」とは、当該基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子又は６個の炭素原子を有し得ることを意味する。「Ｃ３～Ｃ６」とは、３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子又は６個の炭素原子を有し得ることを意味する。

【0046】

「員」という用語は、環を構成する骨格原子又は原子団の数を意味する。例えば、「５～７員」とは、環を構成する骨格原子又は原子団の数が５個、６個又は７個であることを意味する。したがって、例えば、ピリジン、ピペリジン、ピペラジン及びベンゼンは６員環であり、チオフェン及びピロールは５員環である。

【0047】

「置換される」という用語は、特定の基の価数が正常であり、置換された化合物が安定である限り、特定の基上の水素原子のいずれか１つ又は複数が置換基で置き換えられることを意味する。例えば、「ハロゲンで置換される」とは、特定の基の価数が正常であり、置換された化合物が安定である限り、特定の基の水素原子のいずれか１つ又は複数がハロゲンで置き換えられることを意味する。

【0048】

「アルキル」という用語は、示された炭素原子数を有する直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を含む飽和脂肪族炭化水素基を指す。例えば、「Ｃ１～Ｃ６アルキル」という用語は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル又はＣ６アルキルを含み、その例には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、２－ヘキシル又は３－ヘキシルなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0049】

「シクロアルキル」という用語は、ヘテロ原子や二重結合を持たない単環式飽和炭化水素系を指す。「３～６員シクロアルキル」という用語の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、又はシクロヘキシルが含まれるが、これらに限定されない。

【0050】

「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。

【0051】

「アリール」という用語は、母体芳香環系の単一炭素原子から水素原子を１個除去することによって得られた共役π電子系を有する全炭素単環又は縮合二環の芳香環基を指す。飽和環、部分的不飽和環又は芳香族炭素環に縮合する二環式基を含む。その例には、フェニル、ナフチル、アントラセニル、インデン、インダン、１，２－ジヒドロナフタレン、又は１，２，３，４－テトラヒドロナフタレンが含まれるが、これらに限定されない。

【0052】

「ヘテロアリール」という用語は、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む１価のアリールを意味する。例えば、「５～７員ヘテロアリール」の例には、ピリジル、チエニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピリジル、フリル、ピラジニル、又はチアゾリルが含まれるが、これらに限定されない。

【0053】

「９～１８員ベンゾヘテロシクリル」という用語は、ベンゼン環と複素環とが縮合して形成された９～１８個の環原子又は環原子団を有する環系を指し、ベンゼン環と複素環は１対の隣接する環原子を共有し、母核構造との連結部位はベンゼン環部分に位置する。複素環部分は、環炭素原子と１～４個のシクロヘテロ原子又はヘテロ原子団とを有する５～１２員の飽和、部分不飽和又は完全不飽和の環系であり、ヘテロ原子又はヘテロ原子団は、独立して、窒素、硫黄、酸素、スルホキシド、スルホン、以下の式で示されている基から選択される。

【化14】

複素環は、単環、二環、又は三環系であってもよく、２つ以上の環は、縮合環、スピロ環、又は架橋環の形態で存在する。その例には以下の式で示されている基が含まれるが、これらに限定されない。

【化15】

【0054】

以下に示す構造の、

【化16】

以下に示す構造は、化学結合の連結箇所を意味する。

【化17】

二環又は多環に以下に示す構造が出現し、かつ、連結位置が不定である場合、原子価が許容する限り、

【化18】

連結部位は以下に示す構造が存在する単環上の任意の原子に限定されることを意味する。

【化19】

例えば、以下の式で示されている基は、連結部位が二環中のベンゼン環にのみ位置する任意の炭素原子にあり、原子価結合の要件を満たすことを意味する。

【化20】

【0055】

「薬学的に許容される塩」という用語は、生物学的な悪影響を及ぼすことなく、特定の化合物の遊離酸と塩基の生物学的効力を維持する塩を指す。例えば、酸（有機酸及び無機酸を含む）付加塩や塩基付加塩（有機塩基及び無機塩基を含む）が含まれる。

【0056】

本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、酸又は塩基を含む母体化合物から合成することができる。一般的に、このような塩の調製方法は、水又は有機溶媒中で、又は両者の混合物中で、遊離の酸又は塩基の形態のこれらの化合物を化学量論的に適切な塩基又は酸と反応させることによって調製される。

【0057】

「有効量」又は「治療有効量」という用語は、毒性はないが期待される効果を達成するのに十分な量の薬物又は薬剤を意味する。

【0058】

「薬学的に許容される担体」という用語は、生体に対して明らかな刺激作用がなく、しかも当該活性化合物の生物活性及び性能を損なうことのない担体を指す。国家食品薬品監督管理局が許可した、人又は動物に使用可能な希釈剤、崩壊剤、結合剤、流動助剤、湿潤剤を含むが、これらに限定されない。

【0059】

特許請求の範囲及び明細書において使用される略称の意味は以下のとおりである。
Ｍ：ｍｏｌ／Ｌ
ｍＭ：ｍｍｏｌ／Ｌ
μＭ：μｍｏｌ／Ｌ
ｎＭ：ｎｍｏｌ／Ｌ
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー－質量分析技術
Ｂｒｉｊ３５：ラウレスポリオキシエチレンエーテル
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、
ｒｐｍ：回転／分
Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ：トリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩
ＯＤ_６２０：波長６２０ｎｍにおける吸光度
ＳＡＭ：Ｓ－アデノシルメチオニン

【0060】

以下、本発明の化合物の製造方法をより具体的に説明するが、これらの具体的な製造方法は、本発明の範囲を限定するものではない。さらに、反応物、溶媒、塩基、使用する化合物の量、反応温度、反応時間などの反応条件は、以下の例に限定されない。

【0061】

本発明の化合物はまた、本明細書に記載された又は当該分野に知られている種々の合成方法を任意に組み合わせて容易に製造することができ、そのような組み合わせは当業者が容易に行うことができる。

【0062】

実施例
実施例１：２－シクロプロピル－７，９－ビス［４－（ジフルオロメトキシ）フェニル］－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オン

【化21】

【0063】

ａ）Ｎ－（５－メトキシピリダジン－３－イル）アセトアミドの調製
反応フラスコに３－クロロ－５－メトキシピリダジン（１ｇ）、アセトアミド（０．６１ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．３２ｇ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィン）－９，９－ジメチルキサンテン（０．４０ｇ）、炭酸セシウム（６．７６ｇ）を順次加え、次に、１，４－ジオキサン（１００ｍＬ）を加え、窒素保護下、１００℃で３時間撹拌し、減圧濃縮して、乾固まで蒸発し、残留物を得、酢酸エチル（３ｘ５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水（１×５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濾液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（移動相：酢酸エチル／石油エーテル＝１０／１（Ｖ／Ｖ））により精製し、表題化合物７８０ｍｇを得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝ １６８．０５［Ｍ＋１］^＋

【0064】

ｂ）６－アミノピリダジン－４（１Ｈ）－オンの調製
マイクロ波管にＮ－（５－メトキシピリダジン－３－イル）アセトアミド（５００ｍｇ）、臭化水素水溶液（１５ｍＬ）を加え、マイクロ波放射下、１４０℃で５時間撹拌し、減圧濃縮して、表題化合物３６０ｍｇを得た。
ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝１１１．９５［Ｍ＋１］^＋

【0065】

ｃ）６－アミノ－３，５－ジブロモピリダジン－４（１Ｈ）－オンの調製
反応フラスコに６－アミノピリダジン－４（１Ｈ）－オン（３６０ｍｇ）、Ｎ－ブロモスクシンイミド（１．７３ｇ）を加え、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中で、室温で２時間撹拌し、減圧濃縮して、乾固まで蒸発し、残留物を得、アセトニトリル（３×５ｍＬ）で洗浄し、表題化合物３６０ｍｇを得た。

【0066】

ｄ）６－アミノ－３，５－ジブロモ－１－［（１Ｅ）－３－シクロプロピル－３－オキソプロパ－１－エン－１－イル］ピリダジン－４（１Ｈ）－オンの調製
反応フラスコに６－アミノ－３，５－ジブロモピリダジン－４（１Ｈ）－オン（４３０ｍｇ）、（２Ｅ）－３－クロロ－１－シクロプロピルプロパ－２－エン－１－オン（１６７．０ｍｇ）、炭酸カリウム（６６３．０ｍｇ）を加え、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４３ｍＬ）中で、２５℃で一晩撹拌し、減圧濃縮して、混合物を得、１Ｍ塩酸で混合物のｐＨを２～３に調整し、水（３×１０ｍＬ）で混合物を洗浄し、表題化合物３３５ｍｇを得た。

【0067】

ｅ）７，９－ジブロモ－２－シクロプロピル－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オンの調製
反応フラスコに６－アミノ－３，５－ジブロモ－１－［（１Ｅ）－３－シクロプロピル－３－オキソプロパ－１－エン－１－イル］ピリダジン－４（１Ｈ）－オン（３５５ｍｇ）を加え、次に、２ｍｏｌ／Ｌの塩化水素の１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）溶液を加え、２５℃で１時間撹拌し、減圧濃縮し、乾固残留物を得、重炭酸ナトリウム水溶液（１×１０ｍＬ）で洗浄し、濾過して濾過ケーキを集め、水（３×５ｍＬ）で洗浄し、表題化合物３２０ｍｇを得た。

【0068】

ｆ）２－シクロプロピル－７，９－ビス［４－（ジフルオロメトキシ）フェニル］－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オンの調製
反応フラスコに７，９－ジブロモ－２－シクロプロピル－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オン（６０ｍｇ）、４－（ジフルオロメトキシ）フェニルボロン酸（９８．１ｍｇ）、水（０．４ｍＬ）、１，４－ジオキサン（２ｍＬ）、リン酸カリウム（１８４．６ｍｇ）、及び［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（１４．１７ｍｇ）を加え、窒素保護下で、８０℃で１時間撹拌し、減圧濃縮して、乾固残留物を得、分取して、表題化合物３７ｍｇを得た。分取の条件：クロマトグラフィーカラム：ＸＢｒｉｄｇｅ ＰｒｅｐＯＢＤ Ｃ１８ カラム、３０＊１５０ｍｍ、５μｍ；カラム温度：２５℃；移動相Ａ：水（１０ｍｍｏｌ／ＬＮＨ_４ＨＣＯ_３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：６０ｍＬ／ｍｉｎ；溶離勾配：０～１０ｍｉｎでは４５％Ｂ～８５％Ｂ溶離、１０ｍｉｎ以降では８５％Ｂ溶離；検出波長：ＵＶ２２０ｎｍ；保持時間（ｍｉｎ）：７．３２。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．７２（ｄ，Ｊ＝ ７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２７－８．２１（ｍ，２Ｈ），７．６４－７．５８（ｍ，２Ｈ），７．５６－７．２６（ｍ，３Ｈ），７．２１－７．１１（ｍ，３Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．２０（ｔｔ，Ｊ＝８．１，４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．１８－１．１０（ｍ， ２Ｈ），１．０１（ｐ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，２Ｈ）．
ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４７２［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0069】

実施例２：７，９－ビス（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソ－５－イル）－２－シクロプロピル－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オン

【化22】

【0070】

ステップｆ）の４－（ジフルオロメトキシ）フェニルボロン酸をベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソ－５－イルボロン酸（以下の式で示されている基）に変更した以外、実施例１の調製方法を参照して調製した。

【化23】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．６９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０９－６．９９（ｍ，４Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｓ，２Ｈ），６．０４（ｓ，２Ｈ），２．１８（ｔｄ，Ｊ＝８．０，４．１Ｈｚ，１Ｈ），１．１２（ｄｔ，Ｊ＝６．７，３．４Ｈｚ，２Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，２Ｈ）．
ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４２８［Ｍ＋１］^＋

【0071】

実施例３：２－シクロプロピル－９－［４－（ジフルオロメトキシ）フェニル］－７－（２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オン

【化24】

【0072】

ａ）９－ブロモ－２－シクロプロピル－７－（２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オンの調製
反応フラスコに７，９－ジブロモ－２－シクロプロピル－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オン（５０ｍｇ）、２－メチルインダゾール－５－イルボロン酸（２８．０６ｍｇ）、炭酸カリウム（６０．０９ｍｇ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（１１．８１ｍｇ）、１，４－ジオキサン（０．５ｍＬ）、水（０．１ｍＬ）を順次加え、窒素保護下、６０℃で１時間撹拌し、反応物を減圧濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（移動相：酢酸エチル／石油エーテル＝４／１（Ｖ／Ｖ））により精製し、表題化合物４０ｍｇを得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．９８（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｓ，１Ｈ），７．９５ （ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，１Ｈ），１．４６－１．１０（ｍ，４Ｈ）．
ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝３９６［Ｍ＋１］^＋

【0073】

ｂ）２－シクロプロピル－９－［４－（ジフルオロメトキシ）フェニル］－７－（２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オンの調製
反応フラスコに９－ブロモ－２－シクロプロピル－７－（２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）－８Ｈ－ピリミド［１，２－ｂ］ピリダジン－８－オン（３５ｍｇ）、４－（ジフルオロメトキシ）フェニルボロン酸（２４．９０ｍｇ）、炭酸カリウム（３６．６２ｍｇ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（７．２０ｍｇ）、１，４－ジオキサン（１ｍＬ）、水（０．２ｍＬ）を順次加え、窒素保護下、８０℃で１時間撹拌し、反応物を減圧濃縮し、分取して、表題化合物１４．４ｍｇを得た。分取の条件：クロマトグラフィーカラム：ＸＢｒｉｄｇｅ ＰｒｅｐＯＢＤ Ｃ１８ カラム、３０＊１５０ｍｍ、５μｍ；カラム温度：２５℃；移動相Ａ：水（１０ｍｍｏｌ／ＬＮＨ_４ＨＣＯ_３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：６０ｍＬ／ｍｉｎ；溶離勾配：０～１０ｍｉｎでは２５％Ｂ～７０％Ｂ溶離、１０ｍｉｎ以降では８５％Ｂ溶離；検出波長：ＵＶ２２０ｎｍ；保持時間（ｍｉｎ）：６．８。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）８．９７（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄｄ，Ｊ＝９．２，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６８－７．５９（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝７４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２２－７．１６（ｍ，２Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｓ，３Ｈ），２．１９（ｄｑ，Ｊ＝８．１，４．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ），１．１３（ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．５Ｈｚ，２Ｈ），１．０２（ｔ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，２Ｈ）．
ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４６０［Ｍ＋１］^＋

【0074】

テスト例１：生物活性テスト
一、ＭＡＴ２Ａの方法
１．実験ステップ
ａ）まず、５×ＭＡＴ２Ａテスト緩衝液（２５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０；２５０ｍＭ ＫＣｌ；７５ｍＭ ＭｇＣｌ_２；０．０２５％ＢＳＡ；０．０５％Ｂｒｉｊ３５；１．５ｍＭ ＥＤＴＡ）を調製し、部分的に１×まで希釈して、使用に備えた。

【0075】

ｂ）ＭＡＴ２Ａ酵素（ＢＰＳ、７１４０１）の調製及び添加
１×ＭＡＴ２Ａテスト緩衝液を用いてＭＡＴ２Ａ酵素を３．６７４ｎｇ／μＬ（１．６７×、最終濃度２．２０ｎｇ／μＬ）に調製し、ＢｉｏＴｅｋ（ＭｕｌｔｉＦｌｏ ＦＸ）自動分液計を用いて、化合物テストウェルと陰性対照ウェルにそれぞれ１．６７×ＭＡＴ２Ａ酵素溶液１５μＬを加えるとともに、空白対照ウェルに１×ＭＡＴ２Ａテスト緩衝液１５μＬを加えた。

【0076】

ｃ）化合物の調製及び添加
ＤＭＳＯを用いて被験化合物を１０ｍＭのストック液から１００μＭに希釈し、陽性薬ＡＧＩ－２４５１２を同様の条件で希釈し、Ｔｅｃａｎ化合物滴定装置（Ｄ３００ｅ）を用いて、設定された濃度勾配に従って、各ウェルに自動噴射し、噴射する体積が極めて小さいため無視できる。濃度勾配は１μＭから開始し、１／２ ｌｏｇ希釈で、合計８つの勾配を設置した。２５００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、２５℃で３０分間インキュベートした。

【0077】

ｄ）ＡＴＰの調製
１×ＭＡＴ２Ａテスト緩衝液を用いて１０ｍＭ ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ、Ａ７６９９）を７００μＭに希釈して、使用に備えた。

【0078】

ｅ）基質とＡＴＰ混合液の調製及び添加
５×ＭＡＴ２Ａテスト緩衝液（３μＬ／ウェル）、７５０μＭ Ｌ－メチオニン（Ａｄａｍａｓ、０１１００４６９）（２．５μＬ／ウェル）、７００μＭ ＡＴＰ（２．５μＬ／ウェル）、再蒸留水（２μＬ／ウェル）。検出ウェル数に応じて必要な混合液の総量を調製し、ＢｉｏＴｅｋ（ＭｕｌｔｉＦｌｏ ＦＸ）自動ディスペンサーを用いてウェルごとに１０μＬ加えた。２５００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、２５℃で１５０分間反応させた。

【0079】

ｆ）Ｂｉｏｍｏｌ Ｇｒｅｅｎ検出試薬の添加
ＢｉｏＴｅｋ（ＭｕｌｔｉＦｌｏ ＦＸ）自動ディスペンサーを用いてウェルごとにＢｉｏｍｏｌ Ｇｒｅｅｎ（Ｅｎｚｏ、ＢＭＬ－ＡＫ１１１）５０μＬを加え、２５００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、２５℃で２０分間インキュベートした。
ｇ）反応終了後、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０５）多機能プレートリーダーを用いてＯＤ_６２０を読み取った。

【0080】

２．データ分析
阻害率の計算式は以下のとおりである。

【数1】

【0081】

ただし、
ＯＤサンプル：サンプルウェルのＯＤ_６２０値
ＯＤｍｉｎ：酵素も被験化合物もない空白対照ウェルのＯＤ_６２０平均値を表す。
ＯＤｍａｘ：酵素があるが化合物がない陰性対照ウェルのＯＤ_６２０平均値を表す。
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅを用いて用量－反応曲線をフィッティングし、化合物によるＭＡＴ２Ａ酵素阻害のＩＣ_５０値を得た。

【0082】

二、細胞テスト方法
１．実験ステップ
ＨＣＴ１１６ ＭＴＡＰ－／－細胞（Ｈｏｒｉｚｏｎ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙより購入）：ＭＴＡＰ遺伝子欠損ヒト結腸直腸癌細胞株を、培地ＲＰＭＩ １６４０＋１０％胎児ウシ血清（ＦＢＳ：Ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）を用いて培養した。実験０日目には、対数成長期の上記細胞の生細胞密度を５０００個／ｍＬに調整し、１００μＬ／ウェルの量で９６ウェルプレートに接種し、平行に空白群を設置した。接種した細胞プレートを３７℃に置き、５％ＣＯ_２のインキュベータで一晩培養した。

【0083】

実験１日目に、一晩培養した細胞プレートを取り出し、上清を捨て、ウェルごとに無血清ＲＰＭＩ １６４０培地を８０μＬ加え、インキュベータに入れて４時間飢餓培養した。被験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ：Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）に溶解し、１０ｍＭ化合物母液を調製した。飢餓が終わった後、細胞プレートを取り出し、ウェルごとにＲＰＭＩ １６４０＋２０％ＦＢＳ培地８０μＬを補充した。細胞プレートを自動培地ディスペンサーＤ３００ｅ（Ｔｅｃａｎ）に置き、投与プログラムを以下のように設定した。化合物は最大濃度３０μＭまでテストされ、ＤＭＳＯを用いて３倍濃度勾配希釈を行い、合計１０の濃度を設定し、各濃度に２つの重複ウェルを設置し、９６ウェルプレートの各ウェルのＤＭＳＯ最終濃度を０．３％（ｖ／ｖ）とした。予め調製された１０ｍＭの被験化合物母液を取り出し、上記投与プログラムを実行して投与した。投与終了後、細胞プレートをインキュベータに入れて１２０時間培養した。

【0084】

実験６日目に細胞プレートを取り出し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａより購入）を１ウェルあたり５０μＬ加え、説明書の手順に従ってＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で蛍光信号を測定した。

【0085】

２．データ分析
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアを用いて用量－反応曲線：ｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅをフィッティングし、化合物による細胞増殖阻害のＩＣ_５０値を得た。阻害率の計算式は以下のとおりである。

【数2】

【0086】

ただし、
被検物の信号値：細胞＋培地＋化合物群の蛍光信号の平均値
空白群の信号値：培地群蛍光信号の平均値
陰性対照群の信号値：細胞＋培地群の蛍光信号の平均値

【0087】

三、実験結果：
上記の実験方法により測定した結果、ＭＡＴ２Ａに対するＡＧＩ－２４５１２の阻害ＩＣ_５０は２６．７９ｎＭであった。
ＡＧＩ－２４５１２の構造：

【化25】

【0088】

本発明の化合物の実験結果を表１に示す。

【表1】

【0089】

テスト例２：ＩＣＲマウスの生体内薬物動態学的研究
１．実験ステップ
オスＩＣＲマウス（６～１０週齢、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を、温度２０～２５℃、相対湿度４０％～７０％、明暗状態が各１２時間ＳＰＦ動物飼育室で飼育した。動物は自由に水を飲んだり、餌を取ったりした。少なくとも５日間正常に飼育した後、獣医にて検査した結果、徴候状況が良好なマウスを本実験に入選した。マウスごとに尾部に番号を付けた。

【0090】

実験前日、マウスを一晩断食させたが、水を自由に飲め、投与４時間後で給餌した。ＤＭＳＯを用いて化合物を２０ｍｇ／ｍＬのストック液に調製し、２０ｍｇ／ｍＬのストック液を適切な体積をガラス瓶に正確にピペッティングし、適当な体積のＰＥＧ４００を加えて、混合した後に、プロピレングリコール（ＰＧ）を加え、最終製剤中の溶媒の比率をＤＭＳＯ：ＰＥＧ４００：ＰＧ（ｖ／ｖ／ｖ）＝５：６５：３０とし、濃度１ｍｇ／ｍＬの各被験化合物の投与試験液を得た。

【0091】

マウスの体重を計量した後、以下の式で各マウスの理論投与体積を計算した。各マウスの実際の投与量と血液サンプルの採取時間は対応する表に詳細に記録する必要がある。

【数3】

【0092】

実験当日、各群のマウスに、各被験化合物の投与試験液を１０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。投与後、各時点でマウスの眼窩から約４０μＬ採血し、ＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固チューブに入れた。全血サンプルを１５００～１６００ｇで１０ｍｉｎ遠心分離し、分離した血漿を－４０～－２０℃の冷蔵庫に保存し、生体サンプル分析に用いた。

【0093】

２．データ分析
実験により得られた生体サンプル中の化合物の濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析法で測定した。Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｐｈｏｅｎｉｘ ７．０のノンコンパートメントモデルを用いて薬物動態パラメータを計算した。

【0094】

３．実験結果
薬物動態パラメータの計算結果を表２に示す。

【表2】

【0095】

テスト例３：ＨＣＴ１１６ ＭＴＡＰ^－／－ヌードマウス皮下異種移植腫の生体内薬効実験
１．実験ステップ
メスＮｕ／Ｎｕヌードマウス（６～８週齢、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を、温度２０～２５℃、相対湿度４０％～７０％、暗状態と明状態が各１２時間のＳＰＦ動物飼育室で飼育した。動物は自由に水を飲んだり、餌を取ったりした。試験前に動物を適応的に飼育した。

【0096】

ＨＣＴ１１６ ＭＴＡＰ^－／－細胞（Ｈｏｒｉｚｏｎ）を生体外培養して増殖させ、対数増殖期の細胞を無血清ＲＰＭＩ－１６４０培地に再懸濁させ、細胞濃度を６．０×１０^７細胞／ｍＬに調整した。１ｍＬ注射器で細胞懸濁液をヌードマウスの前右側腋窩皮下に１匹ごとに１００μＬ注射し、定期的に動物の状態を観察し、移植腫瘍の成長状況をモニタリングした。

【0097】

腫瘍体積が１００～３００ｍｍ^３に達すると、腫瘍体積が大きすぎる、小さすぎる、又は腫瘍形成が不確定な動物を淘汰し、健康状態が良好で、腫瘍体積が近い腫瘍担持マウスを選び、ランダムブロック方式を用いて群分けした。ＡＧ－２７０投与群と被験化合物投与群は、毎日経口投与し（ＡＧ－２７０：５０ｍｇ／ｋｇ、構造は以下のとおりである。被験化合物：５ｍｇ／ｋｇ）、対照群は、毎日同じ体積の空白溶媒を経口投与した。投与期間中に週２回腫瘍径を測定し、腫瘍体積を計算し、また動物の体重を計量し記録した。

【0098】

移植腫瘍内のＳＡＭの検出
試験終了時にＣＯ_２を用いて動物を安楽死させ、腫瘍組織を剥ぎ取り、冷たいＰＢＳで洗浄し、重量を計量し、液体窒素で急速冷凍した後、低温で冷凍して保存し（－８０℃）、使用に備えた。冷凍して使用に備えた腫瘍組織を取り出し、氷浴解凍後、８０％メタノール水溶液（１Ｍギ酸を含む）を加え、腫瘍組織とメタノール水溶液（１Ｍギ酸を含む）の比率を１：１０（ｗ／ｖ）とし、組織をホモジナイズした。ホモジナイズ後、ホモジネートを収集し、処理後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いてＳ－アデノシルメチオニン（ＳＡＭ：Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）を検出した。

【0099】

ＡＧ－２７０の構造：

【化26】

【0100】

２．データ分析
腫瘍体積（ＴＶ：ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）の計算式は、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ^２であり、ここで、ａは腫瘍長径を示し、ｂは腫瘍短径を示す。

【0101】

相対腫瘍体積（ＲＴＶ：ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）の計算式は、ＲＴＶ＝ＴＶ_ｔ／ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ}であり、ここで、ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ}は、群別に投与した場合に測定した腫瘍体積であり、ＴＶ_ｔは、投与期間中の測定ごとの腫瘍体積である。

【0102】

相対腫瘍成長率（Ｔ／Ｃ（％））の計算式は、Ｔ／Ｃ％＝（ＲＴＶ_Ｔ／ＲＴＶ_Ｃ）×１００％であり、ここで、ＲＴＶ_Ｔは、治療群の腫瘍相対体積を示し、ＲＴＶ_Ｃは、溶媒対照群の腫瘍相対体積を示す。

【0103】

腫瘍成長抑制率（ＴＧＩ（％）：ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）の計算式は、ＴＧＩ＝［１－（ＴＶ）_ｔ（Ｔ）－ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｔ）}）／（ＴＶ_ｔ（Ｃ）－ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｃ）}）］×１００％であり、ここで、ＴＶ_ｔ（Ｔ）は、治療群における測定ごとの腫瘍体積を示し、ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｔ）}は、群別に投与した場合の治療群の腫瘍体積を示し、ＴＶ_ｔ（Ｃ）は、溶媒対照群における測定ごとの腫瘍体積を示し、ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｃ）}は、群別に投与した場合の溶媒対照群の腫瘍体積を示す。

【0104】

動物体重減少率の計算式は、動物体重減少率＝１００％×（ＢＷ_{ｉｎｉｔｉａｌ}－ＢＷ_ｔ）／ＢＷ_{ｉｎｉｔｉａｌ}であり、ここで、ＢＷ_ｔは、投与期間中の測定ごとの動物体重を示し、ＢＷ_{ｉｎｉｔｉａｌ}は、群別に投与した場合の動物体重を示す。

【0105】

腫瘍重量による腫瘍抑制率ＩＲ（％）の計算式は、ＩＲ＝１００％×（Ｗ_Ｃ－Ｗ_Ｔ）／Ｗ_Ｃであり、ここで、Ｗ_Ｃは、対照群の腫瘍重量を示し、Ｗ_Ｔは、治療群の腫瘍重量を示す。

【0106】

試験データはＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２００７ソフトウェアで計算と関連統計学的処理を行った。データは特記を除き、平均±標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥ）で表し、両群間の比較にはｔ－検定を用いた。

【0107】

３．実験結果
ＨＣＴ１１６ ＭＴＡＰ^－／－移植腫瘍モデルの腫瘍抑制曲線と腫瘍内ＳＡＭ阻害結果をそれぞれ図１と図２に示す。

【0108】

テスト例４：ＫＰ－４マウス皮下異種移植腫の生体内薬効実験
１．実験ステップ
メスＮＯＤ ＳＣＩＤマウス（６～８週齢、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を、温度２０～２５℃、相対湿度４０％～７０％、暗状態と明状態が各１２時間のＳＰＦ動物飼育室で飼育した。動物は自由に水を飲んだり、餌を取ったりした。試験前に動物を適応的に飼育した。

【0109】

ＫＰ－４細胞（Ｃｏｂｉｏｅｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を生体外培養して増殖し、対数増殖期の細胞を無血清ＲＰＭＩ－１６４０培地に再懸濁させ、細胞濃度を１．０×１０^８細胞／ｍＬに調整した。１ｍＬ注射器で細胞懸濁液をヌードマウスの前右側腋窩皮下に１匹ごとに１００μＬ注射し、定期的に動物の状態を観察し、移植腫瘍の成長状況をモニタリングした。

【0110】

腫瘍体積が８０～１００ｍｍ^３に達した後、腫瘍体積が大きすぎる、小さすぎる、又は腫瘍形成が不確定な動物を淘汰し、健康状態が良好で、腫瘍体積が近い腫瘍担持マウスを選び、ランダムブロック方式を用いて群分けした。ＡＧ－２７０投与群と被験化合物投与群は、毎日経口投与し（ＡＧ－２７０：１００ｍｇ／ｋｇ、被験化合物：２．５ｍｇ／ｋｇ）、対照群は、毎日同じ体積の空白溶媒を経口投与した。投与期間中に週２回腫瘍径を測定し、腫瘍体積を計算し、また動物の体重を計量し記録した。

【0111】

移植腫瘍内のＳＡＭの検出
試験終了時にＣＯ_２を用いて動物を安楽死させ、腫瘍組織を剥ぎ取り、冷たいＰＢＳで洗浄し、重量を計量し、液体窒素で急速冷凍した後、低温で冷凍して保存し（－８０℃）、使用に備えた。冷凍して使用に備えた腫瘍組織を取り出し、氷浴解凍後、８０％メタノール水溶液（１Ｍギ酸を含む）を加え、腫瘍組織とメタノール水溶液（１Ｍギ酸を含む）の比率を１：１０（ｗ／ｖ）とし、組織をホモジナイズした。ホモジナイズ後、ホモジネートを収集し、処理後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いてＳ－アデノシルメチオニン（ＳＡＭ：Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）を検出した。

【0112】

２．データ分析
腫瘍体積（ＴＶ：ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）の計算式は、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ^２であり、ここで、ａは腫瘍長径を示し、ｂは腫瘍短径を示す。

【0113】

相対腫瘍体積（ＲＴＶ：ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）の計算式は、ＲＴＶ＝ＴＶ_ｔ／ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ}であり、ここで、ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ}は、群別に投与した場合に測定した腫瘍体積であり、ＴＶ_ｔは、投与期間中測定ごとの腫瘍体積である。

【0114】

相対腫瘍成長率（Ｔ／Ｃ（％））の計算式は、Ｔ／Ｃ％＝（ＲＴＶ_Ｔ／ＲＴＶ_Ｃ）×１００％であり、ここで、ＲＴＶ_Ｔは、治療群の腫瘍相対体積を示し、ＲＴＶ_Ｃは、溶媒対照群の腫瘍相対体積を示す。

【0115】

腫瘍成長抑制率（ＴＧＩ（％）：ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）の計算式は、ＴＧＩ＝［１－（ＴＶ）_ｔ（Ｔ）－ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｔ）}）／（ＴＶ_ｔ（Ｃ）－ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｃ）}）］×１００％であり、ここで、ＴＶ_ｔ（Ｔ）は、治療群における測定ごとの腫瘍体積を示し、ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｔ）}は、群別に投与した場合の治療群の腫瘍体積を示し、ＴＶ_ｔ（Ｃ）は、溶媒対照群における測定ごとの腫瘍体積を示し、ＴＶ_{ｉｎｉｔｉａｌ（Ｃ）}は、群別に投与した場合の溶媒対照群の腫瘍体積を示す。

【0116】

動物体重減少率の計算式は、動物体重減少率＝１００％×（ＢＷ_{ｉｎｉｔｉａｌ}－ＢＷ_ｔ）／ＢＷ_{ｉｎｉｔｉａｌ}であり、ここで、ＢＷ_ｔは、投与期間中の測定ごとの動物体重を示し、ＢＷ_{ｉｎｉｔｉａｌ}は、群別に投与した場合の動物体重を示す。

【0117】

腫瘍重量による腫瘍抑制率ＩＲ（％）の計算式は、ＩＲ＝１００％×（Ｗ_Ｃ－Ｗ_Ｔ）／Ｗ_Ｃであり、ここで、Ｗ_Ｃは、対照群の腫瘍重量を示し、Ｗ_Ｔは、治療群の腫瘍重量を示す。

【0118】

試験データはＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２００７ソフトウェアで計算と関連統計学的処理を行った。データは特記を除き、平均±標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥ）で表し、両群間の比較にはｔ－検定を用いた。

【0119】

３．実験結果
ＫＰ－４移植腫瘍モデルの腫瘍抑制曲線と腫瘍内ＳＡＭ阻害結果をそれぞれ図３と図４に示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【手続補正書】

【提出日】2024-06-21

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0037】

別の態様では、本発明は、以下の合成スキームを含むが、これらに限定されない、式Ｉ又はＩＩ化合物の製造方法を提供する。

【化12】

（ただし、Ｇは、塩素、臭素、又はヨウ素から選択され、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^５の定義は、上記式Ｉの定義と同様であり、Ｒ^ａ、及びＲ^ｂは、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ３アルキルから選択される。）

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0040】

いくつかの実施態様では、Ｇは、塩素から選択される。

【手続補正3】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化1】

（ただし、
Ｘは、ＣＲ^３又はＮから選択され、Ｙは、ＣＲ^４又はＮから選択され、Ｚは、ＣＲ^５又はＮから選択され、Ｗは、ＣＲ^６又はＮから選択され、
ここで、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、シアノ、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｓ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、６～１０員アリール、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルケニルから選択され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルケニルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、－ＮＲ^７Ｒ^８、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルによって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルによって任意に置換され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ２～Ｃ６アルキニルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、又はＮＯ_２によって任意に置換され、
Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、６～１０員アリール、又は９～１８員ベンゾヘテロシクリルから選択され、前記６～１０員アリール、又は９～１８員ベンゾヘテロシクリルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、－ＮＲ^９Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^９Ｒ^１０又は５～７員ヘテロアリールによって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又は５～７員ヘテロアリールとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、（Ｃ１～Ｃ３アルキル）－Ｏ－、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、
Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、及びＲ^１０は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、
条件として、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺのうち多くとも２つは同時にＮである。）

【請求項2】

式Ｉ化合物は式ＩＩで示される構造を有する、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化2】

（ただし、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、及びＲ^５の定義は式Ｉ化合物における定義と同様である。）

【請求項3】

Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換され、
好ましくは、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、ハロゲンによって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、ハロゲン置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換され、
より好ましくは、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ_２、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、フッ素によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、フッ素置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換される、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

Ｒ^３は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され、好ましくは、Ｒ^３は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、より好ましくは、Ｒ^３は、水素、メチル又はシクロプロピルから選択され、さらに好ましくは、Ｒ^３は、水素又はメチルから選択され、最も好ましくは、Ｒ^３は、水素から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

Ｒ^４は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルから選択され、好ましくは、Ｒ^４は、水素又はメチルから選択され、より好ましくは、Ｒ^４は、水素から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

Ｒ^５は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－ＮＲ^７－、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、又は６～１０員アリールから選択され、ここで、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルとして、フッ素によって任意に置換され、前記６～１０員アリールは、フッ素置換Ｃ１～Ｃ３アルコキシによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^５は、水素、塩素、ヒドロキシ、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、ＣＨＦ_２Ｏ－、ＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－、４－ジフルオロメトキシフェニル、又はＣＨ_３ＣＨ_２Ｏ－から選択され、より好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、ＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－、又はＣＨ_３ＣＨ_２Ｏ－から選択され、さらに好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピル、ＣＦ_３ＣＨ_２Ｏ－、又はＣＦ_３ＣＨ_２ＮＨ－から選択され、最も好ましくは、Ｒ^５は、シクロプロピルから選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、

【化3】

ここで、前記基は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＮＲ^７Ｒ^８、ＮＯ_２、－ＮＲ^９Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^９Ｒ^１０又は５～７員ヘテロアリールによって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部又は５～７員ヘテロアリールとして、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、（Ｃ１～Ｃ３アルキル）－Ｏ－、又は－ＮＲ^７Ｒ^８によって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^１、及びＲ^２は、それぞれ独立して、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、

【化4】

ここで、前記基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲンによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、及びＲ^１０は、それぞれ独立して、Ｈから選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

Ｒ^１は、フェニル、以下の式で示されている基から選択され、

【化5】

ここで、前記基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、自体又は他の基の一部として、ハロゲンによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^１は以下の式で示されている基から選択され、

【化6】

より好ましくは、Ｒ^１は以下の式で示されている基から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化7】

【請求項9】

Ｒ^２は、フェニル又は以下の式で示されている基から選択され、

【化8】

ここで、前記基は、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）－Ｏ－によって任意に置換され、前記Ｃ１～Ｃ６アルキルは、ハロゲンによって任意に置換され、好ましくは、Ｒ^２は以下の式で示されている基から選択され、

【化9】

より好ましくは、Ｒ^２は以下の式で示されている基から選択される、ことを特徴とする請求項１～請求項８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化10】

【請求項10】

以下の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化11】

【請求項11】

治療有効量の請求項１～請求項１０のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項12】

ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態を予防及び／又は治療するための請求項１～請求項１０のいずれか一項に記載の化合物、その薬学的に許容される塩又は請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記ＭＡＴ２Ａ媒介疾患又は病態は、ＭＡＴ２Ａの過剰発現によって媒介される、請求項１２に記載の化合物、その薬学的に許容される塩又は請求項１２に記載の医薬組成物。

【国際調査報告】