知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ ハンチョウ ティアンロン ファーマシューティカル カンパニー、リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-01-17
(54)【発明の名称】カチオン性脂質化合物、それを含む組成物及びその用途
(51)【国際特許分類】
C07C 229/08 20060101AFI20250109BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20250109BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20250109BHJP
A61K 47/28 20060101ALI20250109BHJP
A61K 9/127 20250101ALI20250109BHJP
A61K 9/51 20060101ALI20250109BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20250109BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20250109BHJP
【ＦＩ】
C07C229/08 CSP
A61K47/18
A61K47/24
A61K47/28
A61K9/127
A61K9/51
A61K31/7088
A61K31/7105
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024538670
(86)(22)【出願日】2022-01-27
(11)【特許番号】
(45)【特許公報発行日】2024-12-26
(85)【翻訳文提出日】2024-06-24
(86)【国際出願番号】 CN2022074153
(87)【国際公開番号】W WO2023133946
(87)【国際公開日】2023-07-20
(31)【優先権主張番号】202210034449.4
(32)【優先日】2022-01-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524238604
【氏名又は名称】ハンチョウ ティアンロン ファーマシューティカル カンパニー、リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000855
【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ソン、ゲンシェン
(72)【発明者】
【氏名】ワン、フアンユー
(72)【発明者】
【氏名】ジャン、ホンレイ
(72)【発明者】
【氏名】チェン、シーチャオ
(72)【発明者】
【氏名】ユー、シャオウェン
(72)【発明者】
【氏名】フアン、ダーウェイ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
4H006
【Ｆターム（参考）】
4C076AA19
4C076AA65
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC50
4C076DD15F
4C076DD15H
4C076DD49F
4C076DD49H
4C076DD63F
4C076DD63H
4C076DD70F
4C076DD70H
4C076EE23F
4C076EE23H
4C076FF16
4C076FF21
4C076FF36
4C076FF43
4C076FF65
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA10
4C086EA16
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA24
4C086MA38
4C086MA59
4C086MA66
4C086NA13
4C086ZA15
4C086ZA36
4C086ZA81
4C086ZB07
4C086ZB21
4C086ZB26
4C086ZB33
4C086ZB35
4C086ZC35
4H006AA01
4H006AA03
4H006AB20
(57)【要約】
本開示は、式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を提供する。また、前記化合物の組成物、及びこれらが治療剤又は予防剤の送達における使用が含まれることも提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。【化1】
（式（Ｉ）中、Ｇ１は、Ｃ１～６アルキレン基、Ｇ２は、Ｃ２～８アルキレン基、Ｇ３は、Ｃ１～３アルキレン基、Ｌ１はＣ６～１５直鎖アルキル基、Ｌ２は、Ｃ１２～２５分岐アルキル基である。）
【請求項2】
Ｇ１が非置換のＣ２～５アルキレン基である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項3】
Ｇ１が非置換のＣ３アルキレン基である、請求項２に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項4】
Ｇ２が非置換のＣ４～６アルキレン基である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項5】
Ｇ２が非置換のＣ５アルキレン基である、請求項４に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項6】
Ｇ３が非置換のＣ２アルキレン基である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項7】
Ｌ１が非置換のＣ８～１２直鎖アルキル基である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項8】
Ｌ１が非置換のＣ１０直鎖アルキル基である、請求項７に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項9】
Ｌ２が非置換のＣ１４～２２分岐アルキル基である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項10】
Ｌ２が非置換のＣ１８分岐アルキル基である、請求項９に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項11】
Ｌ２が、【化2】
である、
請求項９に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項12】
前記式（Ｉ）で示される化合物が以下の構造のうちの一種を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩又は立体異性体。【化3-1】
【化3-2】
【化3-3】
【請求項13】
前記式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造を有する化合物ＹＫ－００３である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。【化4】
【請求項14】
前記式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造を有する化合物ＹＫ－００６である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。【化5】
【請求項15】
前記式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造を有する化合物ＹＫ－００８である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。【化6】
【請求項16】
前記式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造を有する化合物ＹＫ－００９である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。【化7】
【請求項17】
前記式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造を有する化合物ＹＫ－０１１である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。【化8】
【請求項18】
請求項１～１７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体が含まれる前記カチオン性脂質を含む担体、を含有する、組成物。
【請求項19】
担体に対する前記カチオン性脂質のモル比が３０％～７０％である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
前記担体が中性脂質をさらに含む請求項１８に記載の組成物。
【請求項21】
前記カチオン性脂質と前記中性脂質とのモル比が１：１～１０：１である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項22】
前記中性脂質にはホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、セラミド、ステロール及びそれらの誘導体のうちの一種又は複数種が含まれる請求項２０に記載の組成物。
【請求項23】
前記中性脂質が、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロ－ル）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロ（ＤＰＰＧ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１－ステアリル－２－オレオイル－ステアロイルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ、１－ｓｔｅａｒｏｙｌ－２－ｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、及びこれらの混合物からなる群より選択される一種又は複数種である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項24】
前記中性脂質がＤＯＰＥ及び／又はＤＳＰＣである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項25】
前記担体が構造脂質をさらに含む請求項１８に記載の組成物。
【請求項26】
前記カチオン性脂質と前記構造脂質とのモル比が１：１～５：１である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項27】
前記構造脂質が、コレステロール、非ステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチン、トマチン、ウルソール酸、α－トコフェロール、及び副腎皮質ホルモンからなる群より選択される一種又は複数種である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項28】
前記構造脂質がコレステロールである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項29】
前記担体がポリマー共役脂質をさらに含む請求項１８に記載の組成物。
【請求項30】
担体に対する前記ポリマー共役脂質のモル比が０．５％～５％である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項31】
前記ポリマー共役脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールからなる群より選択される一種又は複数種である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項32】
前記ポリマー共役脂質が、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール２０００（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）、ジミリストイルグリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）、及びメトキシポリエチレングリコールジテトラデシルアセトアミド（ＡＬＣ－０１５９）からなる群より選択される一種又は複数種である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項33】
前記担体は、カチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質を含み、前記カチオン性脂質と、前記中性脂質と、前記構造脂質と、前記ポリマー共役脂質とのモル比が（２５～６５）：（５～２５）：（２５～４５）：（０．５～５）である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項34】
前記カチオン性脂質と、前記中性脂質と、前記構造脂質と、前記ポリマー共役脂質とのモル比が５０：１０：３８．５：１．５である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項35】
平均粒子径が１０ｎｍ～２１０ｎｍであり、多分散指数が５０％以下であるナノ粒子製剤である、請求項１８～３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項36】
平均粒子径が１００ｎｍ～２０５ｎｍであり、多分散指数が３０％以下であるナノ粒子製剤である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項37】
前記カチオン性脂質が、一種又は複数種のイオン化可能な他の脂質化合物をさらに含む請求項１８～３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項38】
治療剤又は予防剤をさらに含む請求項１８～３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項39】
前記担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１０：１～３０：１である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項40】
前記担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１５：１～２５：１である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項41】
前記担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１６：１である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項42】
前記治療剤又は予防剤には核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド、およびタンパク質のうちの一種又は複数種が含まれる請求項３８に記載の組成物。
【請求項43】
前記治療剤又は予防剤が免疫応答を引き起こすことができるワクチン又は化合物である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項44】
前記治療剤又は予防剤が核酸である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項45】
前記治療剤又は予防剤がリボ核酸（ＲＮＡ）である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項46】
前記治療剤又は予防剤がデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項47】
前記ＲＮＡが、低分子干渉（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ－基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項４５に記載の組成物。
【請求項48】
前記ＲＮＡがｍＲＮＡである、請求項４７に記載の組成物。
【請求項49】
薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤のうちの一種又は複数種をさらに含む請求項３８に記載の組成物。
【請求項50】
請求項１～１７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体、あるいは、請求項１８～４９のいずれか１項に記載の組成物の、核酸医薬品、遺伝子ワクチン、低分子医薬品、ポリペプチド医薬品、又はタンパク質医薬品の製造における使用。
【請求項51】
請求項１～１７のいずれか１項に記載の一般式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体、あるいは、請求項１８～４９のいずれか１項に記載の組成物の、必要とする哺乳動物の疾患又は病態を治療するための医薬品の製造における使用。
【請求項52】
前記疾患又は病態が、機能不全、異常なタンパク質又は異常なポリペプチド活性によって特徴づけられる、請求項５１に記載の使用。
【請求項53】
前記疾患又は病態が、感染症、癌及び増殖性疾患、遺伝性疾患、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患と腎血管疾患、及び代謝性疾患からなる群より選択される、請求項５１に記載の使用。
【請求項54】
前記感染症が、コロナウイルス、インフルエンザウイルス又はＨＩＶウイルスに起因する疾患、小児肺炎、リフトバレー熱、黄熱、狂犬病、及び複数種の疱疹からなる群より選択される請求項５３に記載の使用。
【請求項55】
前記哺乳動物がヒトである請求項５１～５４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項56】
前記組成物が静脈内、筋肉内、皮内、皮下、鼻腔内、又は吸入によって投与される、請求項５１～５４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項57】
前記組成物が皮下によって投与される請求項５６に記載の使用。
【請求項58】
約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記哺乳動物に前記治療剤又は予防剤を投与する、請求項５１～５４のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、２０２２年１月１３日に出願された中国特願番号第２０２２１００３４４４９．４号に基づく優先権を主張するものであり、ここには上記中国特願に開示されている内容を本願の一部として援用される。
【0002】
本発明は、医薬分野に属する。本発明は、具体的には、カチオン性脂質化合物、それを含む組成物及びその使用に関する。
【背景技術】
【0003】
低分子医薬品、ポリペプチド、タンパク質及び核酸などの生物活性物質の効果的な標的送達、特に核酸の送達は、持続的な医学的難題である。核酸治療剤は、細胞透過性が低く、特定の核酸分子（ＲＮＡを含む）の分解に対する感受性が高いため、大きな課題に直面している。
【0004】
カチオン性脂質含有組成物、リポソーム及びリポソーム複合体（ｌｉｐｏｐｌｅｘ）は送達担体として、低分子医薬品、ポリペプチド、タンパク質及び核酸などの生物活性物質を細胞及び／又は細胞内区画に送達するのに有効であることが実証されている。これらの組成物は、一般的に、１つ以上の「カチオン性」及び／又はアミノ（イオン化可能）脂質を含み、また中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質も含む。カチオン性及び／又はイオン化可能な脂質には、例えば、容易にプロトン化され得るアミン含有脂質が含まれる。このような脂質含有ナノ粒子組成物は、複数種示されているが、安全性、有効性及び特異性の点で依然として改善の余地がある。なお、脂質ナノ粒子（Ｌｉｐｉｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ、ＬＮＰ）の複雑さの増加につれてその生産が複雑になり、かつ毒性が増加するおそれがあるのは、その臨床応用を制限する主な原因となる可能性があるという点に留意すべきである。例えば、ＬＮＰ ｓｉＲＮＡ粒子（例えばパチシラン）は、ステロイドおよび抗ヒスタミン薬の事前投与により不要な免疫応答を除去することが必要である（Ｔ．Ｃｏｅｌｈｏ，Ｄ．Ａｄａｍｓ，Ａ．Ｓｉｌｖａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＲＮＡｉ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，３６９（２０１３）８１９－８２９）。そのため、核酸などの治療剤及び／又は予防剤の細胞への送達に寄与する、改良されたカチオン性脂質化合物及びそれを含む組成物を開発することが求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本開示は、カチオン性脂質化合物の構造と、細胞内トランスフェクト効率、細胞に対する毒性、及び動物体内での高度かつ持続的な発現、との間に明らかな対応関係がないという知見に少なくとも基づいてなるものである。構造的差別が小さい化合物でも、トランスフェクト効率及び／又は細胞に対する毒性、細胞内での高発現において非常に大きな差別がある。例えば、本願に係る化合物ＹＫ－００９及びＹＫ－０１０は、細胞トランスフェクト効率において６０倍近くの差があり、トランスフェクトされた細胞に対する毒性において２５％以上の差がある。また、化合物ＹＫ－００３及びＹＫ－０１０はマウス体内的発現および持続的な発現において５０倍近くの差がある。
【0006】
したがって、高いトランスフェクト効率及び細胞に対する低い毒性を有するとともに、マウス体内における高発現かつ持続的な発現ができるような、適切なカチオン性脂質化合物を選別することが困難である。本開示では、例えばＹＫ－００９、ＹＫ－００３、ＹＫ－００６、ＹＫ－００８及びＹＫ－０１１などのいくつかの化合物が、従来技術の他の化合物と比較して、高い細胞トランスフェクト効率、細胞に対する低い毒性又は無毒性、及び動物体内での高発現及び持続的な発現により核酸を送達することができ、予想以外の技術効果を得ることが、独特の設計を通じて発見した。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示の一側面は、式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体である新規なカチオン性脂質化合物を提供する。
【化1】
【0008】
Ｇ１はＣ１～６アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ２～５アルキレン基、より好ましくは非置換のＣ３アルキレン基である。
【0009】
Ｇ２はＣ２～８アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ４～６アルキレン基、より好ましくは非置換のＣ５アルキレン基である。
【0010】
Ｇ３はＣ１～３アルキレン基、好ましくは非置換のＣ２アルキレン基である。
【0011】
Ｌ１はＣ６～１５直鎖アルキル基であり、好ましくは非置換のＣ８～１２直鎖アルキル基、より好ましくは非置換のＣ１０直鎖アルキル基である。
【0012】
Ｌ２はＣ１２～２５分岐アルキル基、好ましくは非置換のＣ１４～２２分岐アルキル基、より好ましくは非置換のＣ１８分岐アルキル基である。例えば、Ｌ２は、
である。
【化2】
である。
【0013】
例えば、式（Ｉ）で示される化合物は次のような構造のうちの１つを有する。
【化3-1】
【化3-2】
【化3-3】
【0014】
本開示の他の一側面は、上記カチオン性脂質を含む担体を含む組成物を提供する。
例えば、担体に対する前記カチオン性脂質のモル比が３０％～７０％である。
例えば、担体に対する前記カチオン性脂質のモル比が３０％～７０％である。
【0015】
一実施形態において、前記担体は、中性脂質をさらに含む。例えば、前記カチオン性脂質と前記中性脂質とのモル比は１：１～１０：１である。
【0016】
一実施形態において、前記中性脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、セラミド、ステロール及びそれらの誘導体中のうちの一種又は複数種を含む。
【0017】
例えば、前記中性脂質は、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロ－ル）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロ（ＤＰＰＧ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１－ステアリル－２－オレオイル－ステアロイルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ）、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、及びこれらの混合物からなる群より選択される一種又は複数種である。
【0018】
好ましい実施形態において、前記中性脂質はＤＯＰＥ及び／又はＤＳＰＣである。
【0019】
一実施形態において、前記担体は、構造脂質をさらに含む。例えば、前記カチオン性脂質と前記構造脂質とのモル比が１：１～５：１である。
【0020】
一実施形態において、前記構造脂質は、コレステロール、非ステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチン、トマチン、ウルソール酸、α－トコフェロール、及び副腎皮質ホルモンからなる群より選択される一種又は複数種である。好ましい実施形態において、前記構造脂質はコレステロールである。
【0021】
一実施形態において、前記担体は、ポリマー共役脂質をさらに含む。例えば、担体に対する前記ポリマー共役脂質のモル比が０．５％～５％である。
【0022】
一実施形態において、前記ポリマー共役脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールからなる群より選択される一種又は複数種である。
【0023】
例えば、前記ポリマー共役脂質は、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール２０００（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）、ジミリストイルグリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）及びメトキシポリエチレングリコールジテトラデシルアセトアミド（ＡＬＣ－０１５９）からなる群より選択される一種又は複数種である。
【0024】
一実施形態において、前記担体は、中性脂質、構造脂質、及びポリマー共役脂質を含み、前記カチオン性脂質と、前記中性脂質と、前記構造脂質と、前記ポリマー共役脂質とのモル比が（２５～６５）：（５～２５）：（２５～４５）：（０．５～５）であり、好ましくは５０：１０：３８．５：１．５である。
【0025】
一実施形態において、前記組成物は、ナノ粒子製剤であり、前記ナノ粒子製剤の平均粒子径が１０ｎｍ～２１０ｎｍ、好ましくは１００ｎｍ～２０５ｎｍであり、前記ナノ粒子製剤の多分散指数が５０％以下、好ましくは３０％以下である。
【0026】
一実施形態において、前記カチオン性脂質は、さらに、一種又は複数種のイオン化可能な他の脂質化合物を含む。
【0027】
一実施形態において、組成物は、治療剤又は予防剤をさらに含む。例えば、組成物中の担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１０：１～３０：１である。
【0028】
一実施形態において、前記担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１５：１～２５：１、好ましくは１６：１である。
【0029】
一実施形態において、前記治療剤又は予防剤には、核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド及びタンパク質のうちの一種又は複数種が含まれる。
例えば、前記治療剤又は予防剤は、免疫応答を引き起こすことができるワクチン又は化合物である。
例えば、前記治療剤又は予防剤は、免疫応答を引き起こすことができるワクチン又は化合物である。
【0030】
一実施形態において、前記治療剤又は予防剤は、核酸である。例えば、治療剤又は予防剤は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）であってもよい。
【0031】
一実施形態において、前記治療剤又は予防剤は、リボ核酸（ＲＮＡ）である。
【0032】
一実施形態において、前記ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ－基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びこれらの混合物からなる群より選択される。例えば、前記ＲＮＡは、ｍＲＮＡである。
【0033】
一実施形態において、前記組成物は、薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤のうちの一種又は複数種をさらに含む。
【0034】
本開示の他の側面は、必要とする患者に治療剤又は予防剤を送達するための上記カチオン性脂質又は組成物を提供する。
【0035】
本開示の他の側面は、核酸医薬品、遺伝子ワクチン、低分子医薬品、ポリペプチド医薬品、又はタンパク質医薬品の製造における上記カチオン性脂質又は組成物の使用を提供する。
【0036】
本開示の他の側面は、必要とする哺乳動物の疾患又は病態を治療するための医薬品の製造における上記カチオン性脂質又は組成物の使用を提供する。
【0037】
本開示の他の側面は、必要とする哺乳動物の疾患又は病態を治療するための上記カチオン性脂質又は組成物を提供する。
【0038】
本開示の他の側面は、治療有効量又は予防有効量で、上記組成物を必要とする患者又は被検者に投与することを含む、疾患又は病態を治療もしくは予防する方法を提供する。
【0039】
一実施形態において、前記疾患又は病態は、機能不全、異常なタンパク質、又は異常なポリペプチド活性を特徴とする。
例えば、前記疾患又は病態は感染症、癌及び増殖性疾患、遺伝性疾患、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患及び腎血管疾患、ならびに代謝性疾患からなる群より選択される。
例えば、前記感染症は、コロナウイルス、インフルエンザウイルス又はＨＩＶウイルスに起因する疾患、小児肺炎、リフトバレー熱、黄熱、狂犬病、又は複数種の疱疹からなる群より選択される。
例えば、前記疾患又は病態は感染症、癌及び増殖性疾患、遺伝性疾患、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患及び腎血管疾患、ならびに代謝性疾患からなる群より選択される。
例えば、前記感染症は、コロナウイルス、インフルエンザウイルス又はＨＩＶウイルスに起因する疾患、小児肺炎、リフトバレー熱、黄熱、狂犬病、又は複数種の疱疹からなる群より選択される。
【0040】
好ましい実施形態において、前記哺乳動物はヒトである。
一実施形態において、前記組成物は、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、鼻腔内、又は吸入によって投与される。例えば、前記組成物は、皮下投与される。
一実施形態において、前記組成物は、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、鼻腔内、又は吸入によって投与される。例えば、前記組成物は、皮下投与される。
【0041】
一実施形態において、前記治療剤又は予防剤が前記哺乳動物に約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【図面の簡単な説明】
【0042】
本開示の実施例の技術的解決策をより明確に説明するために、実施例の図面を以下に簡単に紹介する。もちろん、以下の説明における図面は、本開示を限定するものではなく、本開示のいくつかの例にのみ関係する。
【図1】図１は、ＬＮＰ製剤を調製する際に担体（ＹＫ－００９を含む）とｍＲＮＡを異なる重量比で用いられた細胞トランスフェクション実験結果を示し、ａは担体：ｍＲＮＡ＝４：１であり、ｂは担体：ｍＲＮＡ＝１６：１であり、ｃはブランク対照である。
【図2】図２は、ＬＮＰ製剤を調製する際にカチオン性脂質ＹＫ－００９と中性脂質ＤＳＰＣを異なるモル比で用いられた細胞トランスフェクション実験結果を示し、ａは１：１であり、ｂは５：１であり、ｃは１０：１であり、ｄはブランク対照である。
【図3】図３は、ＬＮＰ製剤を調製する際に、担体（ＹＫ－００９を含む）に対するポリマー共役脂質のモル比が異なった細胞トランスフェクション実験結果を示し、ａは５％であり、ｂは１．５％であり、ｃはブランク対照である。
【図4】図４は、調製ＬＮＰ製剤を調製する際に、担体の各成分であるカチオン性脂質ＹＫ－００９、中性脂質ＤＳＰＣ、構造脂質コレステロール、及びポリマー共役脂質ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の割合が異なった細胞トランスフェクション実験結果を示し、ａは６５：８：２５：２であり、ｂは５０：１０：３８．５：１．５であり、ｃはブランク対照である。
【図6】図６は、それぞれのカチオン性脂質ＹＫ－００９及び化合物２５から調製されたＦｌｕｃ－ｍＲＮＡのＬＮＰ製剤の蛍光吸収強度を示し、ここには、Ｆｌｕｃ－ｍＲＮＡの含有量はそれぞれ０．０７５μｇ、０．１５μｇ、０．２２５μｇ及び０．３μｇである。
【発明を実施するための形態】
【0043】
本開示に係る実施例の目的、技術案及び利点をより明確にするために、以下、本開示に係る実施例の図面を参照しながら、本開示に係る実施例の技術案を明確かつ完全に説明する。もちろん、説明された実施例は、本開示の一部の実施例であり、すべての実施例ではない。説明された本開示に係る実施例に基づいて、当業者が創造的な努力なしに得た他のすべての他の実施例は本発明の保護範囲に包含されるものとする。
【0044】
本発明は、本発明の本質的な特質から逸脱することなく、他の特定の形態で実施され得る。本発明のいずれか及び全ての実施形態は、矛盾しない限り、他の実施形態又は複数の他の実施形態における技術的特徴と組み合わせて、別の実施形態を得ることを理解されたい。このような組み合わせにより得られた別の実施形態は、本発明に包含される。
【0045】
本開示で言及されている全ての出版物及び特許は、ここではこれらの全ての内容を援用することにより本開示に組み込まれる。また、組み込まれているいずれかの出版物や特許に使用されている用途や用語は、本開示で使用されている用途や用語に衝突する場合には、本開示の用途及び用語が優先する。
【0046】
本明細書で使用されているセクションのタイトルは、記事を整理することのみを目的としており、記載された主題を限定するものとして解釈されるべきではない。
特に明記しない限り、本明細書で使用されている技術用語及び科学用語は、主題の属する分野を保護することが求められる通常の意味を有する。用語に対して複数の定義が存在する場合は、本明細書での定義が優先する。
特に明記しない限り、本明細書で使用されている技術用語及び科学用語は、主題の属する分野を保護することが求められる通常の意味を有する。用語に対して複数の定義が存在する場合は、本明細書での定義が優先する。
【0047】
なお、本明細書及び特許請求の範囲に記載された定量的性質、例えばドーズ量等の全ての数字は、実施形態で説明した場合又は特別の説明がある場合以外には全ての場合において「約」で修飾されていることを理解されたい。また、本願に例示されている数値範囲は、その範囲内に包括されているすべてのサブレンジ、及び該範囲又は該サブレンジの端値の任意の組み合わせを含むことを意図していることも理解されたい。
【0048】
本開示において使用される「含む」、「含有する」又は「含まれる」等の類似する用語は、当該用語の前の要素が当該語の後に挙げれた要素及びその同等要素をカバーすることを意味し、記載されていない要素を排除するものではない。本明細書で使用されている用語「含有する」又は「含む」（含まれる）は、開放式、半密閉式及び閉鎖式であってもよい。言い換えると、前記用語には、「実質的に…からなる」又は「…から構成される」も含まれる。
【0049】
本願における「薬学的に許容される」という用語は、化合物又は組成物が、製剤を構成する他の成分と、及び／又は予防又は治療に使用されるヒト又は哺乳動物と化学的及び／又は毒物学的に適合性であることを意味する。
【0050】
本願における「被検者」又は「患者」という用語には、ヒト及び哺乳動物が含まれる。
【0051】
本明細書で使用されている「治療」という用語は疾患又は疾患の症状を患っている患者又は被検者に、疾患を治療、軽減、緩和、改善又は影響するために、１種又は複数種の薬を投与することを指す。本願の文脈では、特に反対の記載がない限り、用語「治療する」には予防も含まれる場合がある。
【0052】
本願における「溶媒和物」という用語は、組合式（Ｉ）で示される化合物又は薬学的に許容される塩と溶媒（例えば乙醇又は水）とが形成された複合体を指す。疾患又は病態の治療に使用される式Ｉ化合物の溶媒和物は、異なる性質（薬物動態特性を含む）を与える可能性があるものの、被検者に吸収されると、式Ｉの化合物が得られるので、式Ｉの化合物の使用には式Ｉの化合物のいずれの溶媒和物の使用も包含されることになることが理解される。
【0053】
「水和物」とは、上記用語「溶媒和物」において、溶媒が水である場合を意味する。
【0054】
式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、溶媒和物として単離することができ、このために前記溶媒和物はいずれも本発明の範囲に含まれることをさらに理解されたい。例えば、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、非溶媒和形態と薬学的に許容される溶媒（例えば、水、エタノールなど）との溶媒和形態で存在し得る。
【0055】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本開示に係る化合物に対する毒性がない無機酸又は有機酸付加塩を意味する。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらの「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ”、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７、６６、１－１９」を参照のこと。ここには、無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等が挙げられる。有機酸としては、例えば、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、カプロン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、安息香酸、サリチル酸、２－（４－ヒドロキシベンゾイル）－安息香酸、カンファー酸、ケイ皮酸、シクロペンタンプロピオン酸、Ｄ－グルカル酸、３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチン酸、３－フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバリン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、アジピン酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ－グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、及びスルホサリチル酸などが挙げられる。例えば、式Ｉで示される化合物と、ＨＣｌ（又は塩酸）、ＨＢｒ（又は臭化水素酸）、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸又はフマル酸とを用いて薬学的に許容される塩を形成することができる。
【0056】
本開示に係る式（Ｉ）の窒素含有化合物は、酸化剤（例えば、ｍ－クロロ過安息香酸、過酸化水素、オゾン）で処理することによりＮ－酸化物に変換され得る。したがって、原子価状態及び構造が許す条件下で、本願で特許請求される化合物には、構造式に示される窒素含有化合物だけでなく、それらのＮ－酸化物誘導体も含まれる。
【0057】
本開示の特定の化合物は、一種又は複数種の立体異性体として存在してもよい。立体異性体には、幾何異性体、ジアステレオマー及びエナンチオマーが含まれる。したがって、本開示で特許請求される化合物には、さらにラセミ混合物、単一の立体異性体、及び光学活性な混合物も含まれる。一つの立体異性体は、もう一つの立体異性体よりも良好な効果及び／又は低い副作用を有し得ることが当業者なら理解されるだろう。単一の立体異性体及び光学活性な混合物は、不斉合成法、不斉触媒、キラル分割などの方法により得られる。ラセミ体は、クロマトグラフィー分割又は化学分割によってキラルに分割できる。例えば、キラル酒石酸、キラルリンゴ酸、又は他のキラル酸分割試薬を添加して、本開示の化合物と塩を形成することで、生成物の物理化学的性質、例えば溶解度が異なることにより分離することができる。
【0058】
本発明は、本開示に係る化合物のすべての適切な同位体変異体をさらに含む。同位体変異体は、その中の少なくとも一つの原子が同じ原子番号を持つが、自然界で一般的に見られる、又は主に存在する原子質量とは異なる原子質量を持つ原子で置き換えられた化合物として定義される。本開示に係る化合物に導入可能な同位体の例としては、例えば２Ｈ（重水素）、３Ｈ（三重水素）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ及び１８Ｏなどの、水素、炭素、窒素、及び酸素の同位体が挙げられる。
【0059】
「アルキル基」という用語は、本開示において所定の炭素数を有する分枝鎖状及び直鎖状の飽和脂肪族一価炭化水素基を含むことを意味する。「アルキレン基」という用語は、本開示において所定の炭素数を有する分枝鎖状及び直鎖状の飽和脂肪族二価炭化水素基を含むことを意味する。Ｃｎ～ｍは、ｎ～ｍ個の炭素原子を有する基を指す。例えば、Ｃ２～５アルキレン基には、Ｃ２アルキレン基、Ｃ３アルキレン基、Ｃ４アルキレン基、Ｃ５アルキレン基が含まれる。
アルキル基（又はアルキレン基）は非置換されてもよい。又は、アルキル基（又はアルキレン基）は少なくとも一つの水素が他の化学基で置換されるように置換されてもよい。
アルキル基（又はアルキレン基）は非置換されてもよい。又は、アルキル基（又はアルキレン基）は少なくとも一つの水素が他の化学基で置換されるように置換されてもよい。
【0060】
「治療有効量」は、患者に投与した際に疾患や症状を改善できる治療剤の量である。「予防有効量」は、被検者に投与した際に疾患や症状を予防できる予防剤の量である。「治療有効量」となる治療剤の量又は「予防有効量」となる予防剤の量は、治療剤／予防剤、疾患状態及びその重症度、並び日患者／治療対象の年齢及び体重によって異なる。治療有効量及び予防有効量は、当業者によって知識と本開示に基づいて普通に決定することができる。
【0061】
本願において、化合物の名称と構造式と一致しない場合には、構造式を優先する。
【0062】
なお、本願に使用される「本開示に係る化合物」という用語は、文脈によって、式Ｉの化合物、Ｎ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、立体異性体、及びこれらの混合物を含んでもよい。
【0063】
本明細書で使用されている「カチオン性脂質」という用語は、選択されたｐＨ値で正に荷電した脂質を指す。
カチオン性脂質体は、負の電荷を帯びた核酸と結合しやすく、すなわち、静電力を通じて核酸中の負の電荷を帯びたリン酸基と相互作用することで脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成する。現在、ＬＮＰは主な送達担体の一つである。
カチオン性脂質体は、負の電荷を帯びた核酸と結合しやすく、すなわち、静電力を通じて核酸中の負の電荷を帯びたリン酸基と相互作用することで脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成する。現在、ＬＮＰは主な送達担体の一つである。
【0064】
本発明者らは、大量の化合物を選別する際に、高いトランスフェクト効率、低い細胞毒性、及びマウス体内における高度かつ持続的な発現という条件を同時に満たすという適切なカチオン性脂質化合物を選別することが非常に困難であることを見出した。本発明者らは、例えばＹＫ－００９、ＹＫ－００３、ＹＫ－００６、ＹＫ－００８及びＹＫ－０１１などのいくつかの化合物が、従来技術の化合物に比べて、細胞で高いトランスフェクト効率、細胞に対する低毒性又は無毒性、及び動物体内での高発現及び持続的な発現により核酸を送達することができることを見出した。構造的差別が小さい化合物でも、トランスフェクト効率及び／又は細胞に対する毒性、細胞内での高発現において非常に大きな差別がある。例えば、本願に係る化合物ＹＫ－００９及びＹＫ－０１０は、細胞トランスフェクト効率において６０倍近くの差があり、トランスフェクトされた細胞に対する毒性において２５％以上の差がある。また、化合物ＹＫ－００３及びＹＫ－０１０は、マウス体内的発現及び持続的な発現において５０倍近くの差がある。
【0065】
ここで、アルナイラム製薬公司Ａｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（ＮＡＳＤＡＱ：ＡＬＮＹ）がＣＮ１０２６２５６９６Ｂに開示されたカチオン性脂質ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭＣ３）と本発明で設計した化合物とを比較した。ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭＣ３）は、ｓｉＲＮＡの効率的かつ安全な送達に加えて、現在、ｍＲＮＡの送達にも広く使用されている。
ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭＣ３）カチオン性脂質の構造：
ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭＣ３）カチオン性脂質の構造：
【化4】
【0066】
また、本開示に係る化合物は、Ｍｏｄｅｒｎａ公司が出願した特許ＣＮ１１０５２０４０９Ａにおける構造類似化合物２３、化合物２５（すなわち、ＳＭ－１０２、ＣＡＳ Ｎｏ．：２０８９２５１－４７－６、Ｍｏｄｅｒｎａ公司の新型コロナワクチンであるｍＲＮＡ－１２７３に使用されるカチオン性脂質）、及び化合物２７と、を比較した。
【化5】
【0067】
これにより、本開示に係る化合物は、トランスフェクト効率及び／又は細胞に対する毒性の点について顕著に改善されることが判明した。例えば、化合物ＹＫ－００９はｍＲＮＡをトランスフェクトしたときの細胞トランスフェクト効率が、ＭＣ３、化合物２３及び化合物２７よりも、それぞれ４０倍、８倍及び１３倍以上向上し、また、トランスフェクトされた細胞に対する毒性が、ＭＣ３、化合物２３及び化合物２７よりも、それぞれ１２％、１３％及び１６％低下した。さらに、マウス体内における発現は、化合物ＹＫ－００９のほうがＭＣ３、化合物２３及び化合物２７よりもそれぞれ２５倍、７倍及び６倍以上向上し、化合物ＹＫ－００３のほうがＭＣ３、化合物２３及び化合物２７よりも１８倍、８倍及び７倍以上向上したことを見出した。
【0068】
化合物２５と比べて、本開示に係る化合物ＹＫ－００９は、ｍＲＮＡをトランスフェクトした時の細胞のトランスフェクト効率が７倍向上し、トランスフェクトされた細胞に対する毒性が９％低下し、マウス体内における発現が７倍以上向上した。
【0069】
本開示の一側面は新規な治療剤又は予防剤を送達するためのカチオン性脂質化合物を提供する。本開示のカチオン性脂質化合物は、核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド又はタンパク質を送達するために使用することができる。本開示のカチオン性脂質化合物は、公知のカチオン性脂質化合物に比較して、トランスフェクション効率が高く、細胞毒性が小さく、送達効率及び安全性が向上した。
【0070】
本開示は、式（Ｉ）で示される化合物、又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であるカチオン性脂質を提供する。
ここで、Ｇ１はＣ１～６アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ２～５アルキレン基、より好ましくは非置換のＣ３アルキレン基である。
Ｇ２はＣ２～８アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ４～６アルキレン基、より好ましくは非置換のＣ５アルキレン基である。
Ｇ３はＣ１～３アルキレン基、好ましくは非置換のＣ２アルキレン基である。
Ｌ１はＣ６～１５直鎖アルキル基であり、好ましくは非置換のＣ８～１２直鎖アルキル基、より好ましくは非置換のＣ１０直鎖アルキル基である。
Ｌ２はＣ１２～２５分岐アルキル基、好ましくは非置換のＣ１４～２２分岐アルキル基、より好ましくは非置換のＣ１８分岐アルキル基である。
【化6】
ここで、Ｇ１はＣ１～６アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ２～５アルキレン基、より好ましくは非置換のＣ３アルキレン基である。
Ｇ２はＣ２～８アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ４～６アルキレン基、より好ましくは非置換のＣ５アルキレン基である。
Ｇ３はＣ１～３アルキレン基、好ましくは非置換のＣ２アルキレン基である。
Ｌ１はＣ６～１５直鎖アルキル基であり、好ましくは非置換のＣ８～１２直鎖アルキル基、より好ましくは非置換のＣ１０直鎖アルキル基である。
Ｌ２はＣ１２～２５分岐アルキル基、好ましくは非置換のＣ１４～２２分岐アルキル基、より好ましくは非置換のＣ１８分岐アルキル基である。
【0071】
一実施形態において、Ｇ１は非置換のＣ２～５アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ３アルキレン基、例えば－（ＣＨ２）３－である。
【0072】
一実施形態において、Ｇ２は非置換のＣ４～６アルキレン基であり、好ましくは非置換のＣ５アルキレン基、例えば－（ＣＨ２）５－である。
【0073】
一実施形態において、Ｇ３は非置換のＣ２アルキレン基、すなわち、－（ＣＨ２）２－である。
【0074】
一実施形態において、Ｌ１は非置換のＣ８～１２直鎖アルキル基であり、好ましくは非置換のＣ１０直鎖アルキル基、例えば－（ＣＨ２）９ＣＨ３である。
【0075】
一実施形態において、Ｌ２は非置換のＣ１４～２２分岐アルキル基であり、好ましくは非置換のＣ１８分岐アルキル基である。例えば、Ｌ２は、
である。
【化7】
である。
【0076】
一実施形態において、Ｇ１は－（ＣＨ２）３－、Ｇ２は－（ＣＨ２）５－、Ｇ３は－（ＣＨ２）２－、Ｌ１は－（ＣＨ２）９ＣＨ３、Ｌ２は、
である。
【化8】
である。
【0077】
例としての実施形態において、前記化合物は、以下の化合物又はこれらのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩又は立体異性体からなる群より選択される。
【化9-1】
【化9-2】
【化9-3】
【0078】
本開示の他の側面は、担体を含む組成物を提供する。前記担体にはカチオン性脂質が含まれる。前記カチオン性脂質には上記式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、もしくは立体異性体が含まれる。
【0079】
一実施形態において、前記組成物は、ナノ粒子製剤である。前記ナノ粒子製剤の平均サイズは１０ｎｍ～２１０ｎｍ、好ましくは１００ｎｍ～２０５ｎｍである。前記ナノ粒子製剤の多分散指数は５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは２５％以下である。
【0080】
カチオン性脂質
本開示にかかる組成物／担体の一実施形態において、前記カチオン性脂質は、上記式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、もしくは立体異性体からなる群より選択された一種又は複数種である。一実施形態において、前記カチオン性脂質は、上記式（Ｉ）で示される化合物から選択される。例えば、カチオン性脂質は、化合物ＹＫ－００１、ＹＫ－００２、ＹＫ－００３、ＹＫ－００４、ＹＫ－００５、ＹＫ－００６、ＹＫ－００７、ＹＫ－００８、ＹＫ－００９、ＹＫ－０１０、又はＹＫ－０１１である。一つの好ましい実施形態において、前記カチオン性脂質は化合物ＹＫ－００９である。
本開示にかかる組成物／担体の一実施形態において、前記カチオン性脂質は、上記式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、もしくは立体異性体からなる群より選択された一種又は複数種である。一実施形態において、前記カチオン性脂質は、上記式（Ｉ）で示される化合物から選択される。例えば、カチオン性脂質は、化合物ＹＫ－００１、ＹＫ－００２、ＹＫ－００３、ＹＫ－００４、ＹＫ－００５、ＹＫ－００６、ＹＫ－００７、ＹＫ－００８、ＹＫ－００９、ＹＫ－０１０、又はＹＫ－０１１である。一つの好ましい実施形態において、前記カチオン性脂質は化合物ＹＫ－００９である。
【0081】
本開示に係る組成物／担体の他の一実施形態において、前記カチオン性脂質には、上記式（Ｉ）で示される化合物又はそのＮ－酸化物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、もしくは立体異性体からなる群より選択される一種又は複数種（ａ）、及び（ａ）とは異なる一種又は複数種の他のイオン化可能な脂質化合物（ｂ）が含まれる。（ｂ）カチオン性脂質化合物は市販品とするカチオン性脂質であってもよいし、又は文献に報告されているカチオン性脂質化合物であってもよい。例えば、（ｂ）カチオン性脂質化合物はＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭＣ３）でもよい。例えば、（ｂ）カチオン性脂質化合物はＣＮ１１０５２０４０９Ａにおける化合物２３、２５、２７などであってもよい。
【0082】
一実施形態において、担体に対する前記カチオン性脂質のモル比が３０％～７０％であり、例えば３５％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％である。
【0083】
この担体は、例えば、治療剤又は予防剤などの活性成分を送達するために用いられる。活性成分は、担体内に封入してもよいし、担体と結合してもよい。
【0084】
例えば、前記治療剤又は予防剤には、核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド又はタンパク質のうちの一種又は複数種が含まれる。前記核酸には、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、及びＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。適切なＲＮＡには、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ－基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
【0085】
中性脂質
担体は、中性脂質を含んでもよい。本開示における中性脂質とは、選定されたｐＨ値で電荷を持たない、又は両性イオンとして存在する補助的に作用する脂質を指す。当該中性脂質は、脂質相転移を促進することで効率を向上させる可能性がある一方、標的器官特異性に影響を与える可能性もある。
担体は、中性脂質を含んでもよい。本開示における中性脂質とは、選定されたｐＨ値で電荷を持たない、又は両性イオンとして存在する補助的に作用する脂質を指す。当該中性脂質は、脂質相転移を促進することで効率を向上させる可能性がある一方、標的器官特異性に影響を与える可能性もある。
【0086】
一実施形態において、前記カチオン性脂質と前記中性脂質とのモル比が約１：１～１０：１、例えば約９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１である。好ましい実施形態において、前記カチオン性脂質と前記中性脂質とのモル比が約５：１である。
【0087】
例えば、中性脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、セラミド、ステロール及びそれらの誘導体のうちの一種又は複数種が含まれる。
【0088】
カチオン性脂質を含む組成物の担体成分は、一種又は複数種の中性脂質－リン脂質、例えば一種又は複数種の（多価）不飽和脂質を含むことができる。リン脂質は、１つ又は複数の脂質二重層に組み立てることができる。一般に、リン脂質は、リン脂質の部分及び１つ又は複数の脂肪酸部分を含んでもよい。
【0089】
中性脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロ、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる群より任意的に選択されることがあるが、これらに限定されない。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、α－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる群より任意的に選択されることがあるが、これらに限定されない。また、分岐、酸化、環化及びアルキンなどの修飾と置換を有する天然物からなる非天然物も含まれる。例えば、リン脂質は、一種又は複数種のアルキン（例えば、１つ又は複数の二重結合が三重結合で置換されたアルケニル基）で官能化することができ、或いは該一種又は複数種のアルキンと架橋することができる。適切な反応条件下では、アルキニル基はアジドに曝露されると銅触媒による付加環化反応を起こすことがある。これらの反応は、膜透過又は細胞認識を促進するために組成物の脂質二重層を官能化し、又は組成物と、ターゲティングもしくはイメージング部分（例えば、色素）などの有用な成分と、をコンジュゲートするために用いることができる。
【0090】
これらの組成物に用いられる中性脂質は、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロ－ル）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロ（ＤＰＰＧ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１－ステアリル－２－オレオイル－ステアロイルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ）、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、及びこれらの混合物からなる群より選択できるが、これらに限定されるものではない。
【0091】
いくつかの実施形態において、中性脂質には、ＤＳＰＣが含まれる。ある特定の実施形態において、中性脂質には、ＤＯＰＥが含まれる。いくつかの実施形態において、中性脂質には、ＤＳＰＣ及びＤＯＰＥの両方が含まれる。
【0092】
構造脂質
カチオン性脂質を含む組成物の担体は、一種又は複数種の構造脂質をさらに含んでもよい。本開示における構造脂質とは、脂質同士の隙間を埋めることにより、ナノ粒子の安定性を高める脂質を指す。
カチオン性脂質を含む組成物の担体は、一種又は複数種の構造脂質をさらに含んでもよい。本開示における構造脂質とは、脂質同士の隙間を埋めることにより、ナノ粒子の安定性を高める脂質を指す。
【0093】
一実施形態において、前記カチオン性脂質と前記構造脂質とのモル比が、約１：１～５：１であり、例えば、約１．０：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、２．０：１である。
【0094】
構造脂質は、コレステロール、非ステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチン、トマチン、ウルソール酸、α－トコフェロール、副腎皮質ホルモン、及びこれらの混合物からなる群より選択されることがあるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、構造脂質は、コレステロールである。いくつかの実施形態において、構造脂質には、コレステロール及び副腎皮質ホルモン（例えば、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、デキサメタゾン、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）及びヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ））又はこれらの組み合わせが含まれる。
【0095】
ポリマー共役脂質
カチオン性脂質を含む組成物の担体は、一種又は複数種のポリマー共役脂質をさらに含んでもよい。ポリマー共役脂質とは、主にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾された脂質を指す。親水性ＰＥＧはＬＮＰを安定化し、脂質融合を制限することでナノ粒子サイズを制御し、マクロファージとの非特異的相互作用を減らすことでナノ粒子の半減期を増加する。
カチオン性脂質を含む組成物の担体は、一種又は複数種のポリマー共役脂質をさらに含んでもよい。ポリマー共役脂質とは、主にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾された脂質を指す。親水性ＰＥＧはＬＮＰを安定化し、脂質融合を制限することでナノ粒子サイズを制御し、マクロファージとの非特異的相互作用を減らすことでナノ粒子の半減期を増加する。
【0096】
一実施形態において、前記ポリマー共役脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールからなる群より選択される一種又は複数種である。ＰＥＧ修飾のＰＥＧ分子量は、通常３５０～５０００Ｄａである。
【0097】
例えば、前記ポリマー共役脂質は、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール２０００（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）、ジミリストイルグリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）及びメトキシポリエチレングリコールジテトラデシルアセトアミド（ＡＬＣ－０１５９）からなる群より選択される一種又は複数種である。
【0098】
本開示に係る組成物／担体の一実施形態において、前記ポリマー共役脂質はＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。
【0099】
本開示に係る組成物／担体の一実施形態において、担体は、中性脂質、構造脂質、及びポリマー共役脂質を含む。前記カチオン性脂質と、前記中性脂質と、前記構造脂質と、前記ポリマー共役脂質とのモル比が（２５～６５）：（５～２５）：（２５～４５）：（０．５～５）、例えば（４５～５５）：（９～１１）：（３４～４３）：（０．５～２．５）である。
【0100】
本開示に係る組成物／担体の一実施形態において、担体は、中性脂質、構造脂質、及びポリマー共役脂質を含む。前記カチオン性脂質と、前記中性脂質と、前記構造脂と、前記ポリマー共役脂質とのモル比が５０：１０：３８．５：１．５である。
【0101】
治療剤及び／又は予防剤
組成物は、一種又は複数種の治療剤及び／又は予防剤を含んでもよい。一実施形態において、担体と、前記治療剤又は予防剤との質量比が１０：１～３０：１であり、例えば１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２１：１、２２：１、２３：１、２４：１、２５：１である。
組成物は、一種又は複数種の治療剤及び／又は予防剤を含んでもよい。一実施形態において、担体と、前記治療剤又は予防剤との質量比が１０：１～３０：１であり、例えば１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２１：１、２２：１、２３：１、２４：１、２５：１である。
【0102】
一実施形態において、担体と、前記治療剤又は予防剤との質量比が１５：１～２５：１、好ましくは１６：１である。
【0103】
前記治療剤又は予防剤には、核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド又はタンパク質のうちの一種又は複数種が含まれるが、これらに限定されない。
【0104】
例えば、前記治療剤又は予防剤は、免疫応答を引き起こすことができるワクチン又は化合物である。
【0105】
本開示の担体により、治療剤及び／又は予防剤を哺乳動物細胞又は器官に送達することができ、そのため、本開示には、哺乳動物に治療剤及び／又は予防剤を含む組成物を投与すること、及び／又は、哺乳動物細胞を組成物と接触させること、を含む、必要とする哺乳動物の疾患や症状を治療する方法も提供する。
【0106】
治療剤及び／又は予防剤には、生物活性物質が含まれ、代わりに「活性剤」とも呼ばれる。治療剤及び／又は予防剤は、細胞や器官に送達した後、この細胞や器官中、又は他の身体組織もしくはシステムにおいて所望な変化を引き起こす物質である。このような物質は、一種又は複数種の疾患、症状又は病態を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態において、治療剤及び／又は予防剤は、特定の疾患、症状又は病態を治療するための低分子医薬品である。組成物に使用できる薬物の例として、抗異常増殖剤（例えばビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メトトレキサート及びストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ））、抗腫瘍剤（例えばアクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、シトシンアラビノシド（ｃｙｔｏｓｉｎｅ ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、アルキル化剤、白金系化合物、代謝拮抗剤、及びヌクレオシド類似体、例えばメトトレキサート、及びプリンとピリミジン類似体など）、抗感染剤、局所麻酔剤（例えばジブカイン（ｄｉｂｕｃａｉｎｅ）及びクロルプロマジン（ｃｈｌｏｒｐｒｏｍａｚｉｎｅ））、β－アドレナリン遮断剤（例えばプロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）、チモロール（ｔｉｍｏｌｏｌ）及びラベタロール（ｌａｂｅｔａｌｏｌ））、降圧剤（例えばクロニジン（ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）及びヒドララジン（ｈｙｄｒａｌａｚｉｎｅ））、抗うつ剤（例えばイミプラミン（ｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ）、アミトリプチリン（ａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎｅ）及びドキセピン（ｄｏｘｅｐｉｎ））、抗けいれん剤（例えばフェニトイン（ｐｈｅｎｙｔｏｉｎ））、抗ヒスタミン（例えばジフェンヒドラミン（ｄｉｐｈｅｎｈｙｄｒａｍｉｎｅ）、クロルフェニラミン（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒａｍｉｎｅ）及びプロメタジン（ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ））、抗バイオティクス／抗菌剤（例えばゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ）、シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）及びセフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ））、抗真菌剤（例えばミコナゾール（ｍｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、テルコナゾール（ｔｅｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、エコナゾール（ｅｃｏｎａｚｏｌｅ）、イソコナゾール（ｉｓｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、ブタコナゾール（ｂｕｔａｃｏｎａｚｏｌｅ）、クロトリマゾール（ｃｌｏｔｒｉｍａｚｏｌｅ）、イトラコナゾール（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ナイスタチン（ｎｙｓｔａｔｉｎ）、ナフチフィン（ｎａｆｔｉｆｉｎｅ）及びアムホテリシンＢ（ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ Ｂ））、抗寄生虫剤、ホルモン、ホルモン拮抗剤、免疫調節剤、神経伝達物質拮抗剤、抗緑内障薬、ビタミン、鎮静剤、及び造影剤などが挙げられるが、こちらに限定されない。
【0107】
いくつかの実施形態において、治療剤及び／又は予防剤は、細胞毒素、放射性イオン、化学療法剤、ワクチン、免疫応答を引き起こす化合物及び／又は他の治療剤及び／又は予防剤である。細胞毒素又は細胞毒性剤には、細胞に有害な任意の試薬が含まれる。例として、タキソール（ｔａｘｏｌ）、サイトカラシンＢ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ）、グラミシジンＤ（ｇｒａｍｉｃｉｄｉｎ Ｄ）、臭化エチジウム（ｅｔｈｉｄｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）、エメチン（ｅｍｅｔｉｎｅ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン（ｐｒｏｃａｉｎｅ）、テトラカイン（ｔｅｔｒａｃａｉｎｅ）、リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、プロプラノロール、ピューロマイシン、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、例えばマイタンシノール（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｌ）、ラケルマイシン（ｒａｃｈｅｌｍｙｃｉｎ）（ＣＣ－１０６５）、及びこれらの類似体又は相同体などが挙げられるが、こちらに限定されない。放射性イオンには、ヨウ素（例えばヨウ素１２５又はヨウ素１３１）、ストロンチウム８９、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸イオン、コバルト、イットリウム９０、サマリウム１５３、及びプラセオジムが含まれるが、これらに限定されない。ワクチンには、インフルエンザ、麻疹、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、狂犬病、髄膜炎、百日咳、破傷風、ペスト、肝炎、及び結核などの感染症に関連する一種又は複数種の症状に対する免疫を与える化合物及び製剤が含まれ、また、感染性疾患由来の抗原及び／又はエピトープをコードするｍＲＮＡも含まれる。さらに、ワクチンには、癌細胞に対する免疫応答を引き起こす化合物及び製剤が含まれるし、腫瘍細胞由来の抗原、エピトープ及び／又はネオエピトープをコードするｍＲＮＡも含まれる。免疫応答を引き起こす化合物には、ワクチン、副腎皮質ホルモン（例えばデキサメタゾン）及び他の種が含まれてもよい。いくつかの実施形態において、ワクチン及び／又は化合物には、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）又は（ＩＩＩ）に示される化合物（例えば化合物３、１８、２０、２５、２６、２９、３０、６０、１０８－１１２又は１２２）を含む組成物を筋肉内投与することにより免疫応答を引き起こすことができるものが含まれる。他の治療剤及び／又は予防剤には、代謝拮抗剤（例えばメトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニ、シタラビン及び５－ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（例えばメクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）、クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ラケルマイシン（ＣＣ－１０６５）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ、ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ、ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ及びｃｉｓ－ジクロロジアミノプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）、シスプラチン）、アントラサイクリン（例えばダウノルビシン（以前はダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ））及びドキソルビシンと呼ばれる）、抗生物質（例えばダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）（アクチノマイシンと呼ばれたことがある）、ブレオマイシン、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）及びアントラマイシン（Ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ、ＡＭＣ））、及び抗有糸分裂剤（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール及びメイタンシノイド）、が含まれるが、これらに限定されない。
【0108】
他の実施形態において、治療剤及び／又は予防剤はタンパク質である。本開示のナノ粒子に使用できる治療用タンパク質には、ゲンタマイシン、アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、インスリン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＶＩＲ因子、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）類似体、インターフェロン、ヘパリン、Ｂ型肝炎表面抗原、腸チフスワクチン、及びコレラワクチンが含まれるが、これらに限定されない。
【0109】
いくつかの実施形態において、治療剤は、ポリヌクレオチド又は核酸（例えば、リボ核酸又はデオキシリボ核酸）である。「ポリヌクレオチド」という用語の最も広い意味には、オリゴヌクレオチド鎖で示すか、又はオリゴヌクレオチド鎖に組み込むことができる任意の化合物及び／又は物質が含まれる。本開示に従って使用される例示的なポリヌクレオチドには、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、メッセンジャーｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ）とそのハイブリッドを含むリボ核酸（ＲＮＡ）、ＲＮＡｉ誘導因子、ＲＮＡｉ因子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、三重らせんの形成を誘導するＲＮＡ、アプタマーなどのうちの一種又は複数種が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、治療剤及び／又は予防剤はＲＮＡである。本明細書に記載の組成物及び方法に使用できるＲＮＡは、ショートメーター（ｓｈｏｒｔｍｅｒ）、アンタゴミル（ａｎｔａｇｏｍｉｒ）、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ－基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）及びそれらの混合物からなる群より任意に選択されるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＲＮＡはｍＲＮＡである。
【0110】
いくつかの実施形態において、治療剤及び／又は予防剤は、ｍＲＮＡである。ｍＲＮＡは、任意の天然、非天然又は他の修飾されたポリペプチドを含む着目のポリペプチドをコードすることができる。ｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドは、任意のサイズであり得、任意の二次構造又は活性を有しても良い。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドは、細胞内で発現されると治療効果を有することができる。
【0111】
他の実施形態において、治療剤及び／又は予防剤は、ｓｉＲＮＡである。ｓｉＲＮＡは、目的の遺伝子の発現を選択的に低下させたり、その遺伝子の発現を下方制御したりすることができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、このｓｉＲＮＡを含む組成物を必要とする被検者に投与すると、特定の疾患、症状又は病態に関連する遺伝子がサイレントになるように選択することができる。ｓｉＲＮＡは、目的の遺伝子又はタンパク質をコードするｍＲＮＡ配列に相補的な配列を含むことができる。いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡは、免疫調節性ｓｉＲＮＡであってもよい。
【0112】
いくつかの実施形態において、治療剤及び／又は予防剤はｓｇＲＮＡ及び／又はｃａｓ９ ｍＲＮＡである。ｓｇＲＮＡ及び／又はｃａｓ９ ｍＲＮＡは、遺伝子編集ツールとして使用できる。例えば、ｓｇＲＮＡ－ｃａｓ９複合体は、細胞遺伝子的ｍＲＮＡの翻訳に影響を与えることがある。
【0113】
いくつかの実施形態において、治療剤及び／又は予防剤は、ｓｈＲＮＡ又はそれでコードされる担体又はプラスミドである。ｓｈＲＮＡは、適切な構築物が核に送達された後、標的細胞内で生成される。ｓｈＲＮＡに関する構築物及び機構は、関連技術領域においてよく知られている。
【0114】
疾患又は病態
本開示の組成物／担体は、治療剤又は予防剤を被検者又は患者に送達することができる。前記治療剤又は予防剤には、核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド又はタンパク質のうちの一種又は複数種が含まれるが、これらに限定されない。そのため、本開示の組成物は、核酸医薬品、遺伝子ワクチン、低分子医薬品、ポリペプチド医薬品、又はタンパク質医薬品の製造に使用することができる。上記治療剤又は予防剤は多種多様であるため、本開示の組成物は、様々な疾患又は病態を治療又は予防に使用することができる。
本開示の組成物／担体は、治療剤又は予防剤を被検者又は患者に送達することができる。前記治療剤又は予防剤には、核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド又はタンパク質のうちの一種又は複数種が含まれるが、これらに限定されない。そのため、本開示の組成物は、核酸医薬品、遺伝子ワクチン、低分子医薬品、ポリペプチド医薬品、又はタンパク質医薬品の製造に使用することができる。上記治療剤又は予防剤は多種多様であるため、本開示の組成物は、様々な疾患又は病態を治療又は予防に使用することができる。
【0115】
一実施形態において、前記疾患又は病態は、機能不全、異常なタンパク質又は異常なポリペプチド活性を特徴とする。
【0116】
例えば、前記疾患又は病態は、感染症、癌及び増殖性疾患、遺伝性疾患、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患及び腎血管疾患、並びに代謝性疾患からなる群より選択される。
【0117】
一実施形態において、前記感染症は、コロナウイルス、インフルエンザウイルス又はＨＩＶウイルスに起因する疾患、小児肺炎、リフトバレー熱、黄熱、狂犬病、複数種の疱疹からなる群より選択される。
【0118】
その他の成分
組成物は、前述した部分で説明した以外の成分を一種又は複数種含んでもよい。例えば、組成物は、ビタミン（例えばビタミンＡ又はビタミンＥ）又はステロールなどの１つ又は複数の疎水性低分子を含んでもよい。
組成物は、前述した部分で説明した以外の成分を一種又は複数種含んでもよい。例えば、組成物は、ビタミン（例えばビタミンＡ又はビタミンＥ）又はステロールなどの１つ又は複数の疎水性低分子を含んでもよい。
【0119】
また、組成物は、透過性増強分子、炭水化物、ポリマー、表面改変剤、又は他の成分などの１つ又は複数を含んでもよい。透過性増強分子は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載されている分子であってもよい。炭水化物には、単糖類、（例えばグルコース）、及び多糖類（例えばグリコーゲンとそれらの誘導体、及び類似体）が含まれてもよい。
【0120】
表面改変剤には、陰イオン性タンパク質（例えばウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、カチオン性界面活性剤である臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム）、糖又は糖誘導体（例えばシクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えばヘパリン、ポリエチレングリコール及びポロクサマー）、粘液溶解剤（例えばアセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン（ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）、パパイン、クレロデンドルム（ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｕｍ）、ブロムヘキシン（ｂｒｏｍｈｅｘｉｎｅ）、カルボシステイン（ｃａｒｂｏｃｉｓｔｅｉｎｅ）、エプラジノン（ｅｐｒａｚｉｎｏｎｅ）、メスナ（ｍｅｓｎａ）、アンブロキソール（ａｍｂｒｏｘｏｌ）、ソブレロール（ｓｏｂｒｅｒｏｌ）、ドミオドール（ｄｏｍｉｏｄｏｌ）、レトステイン（ｌｅｔｏｓｔｅｉｎｅ）、ステプロニン（ｓｔｅｐｒｏｎｉｎ）、チオプロニン（ｔｉｏｐｒｏｎｉｎ）、ゲルソリン（ｇｅｌｓｏｌｉｎ）、チモシン（ｔｈｙｍｏｓｉｎ）β４、ドルナーゼアルファ（ｄｏｒｎａｓｅ ａｌｆａ）、ネルテネキシン（ｎｅｌｔｅｎｅｘｉｎｅ）及びエルドステイン（ｅｒｄｏｓｔｅｉｎｅ））、及びＤＮＡ酵素（例えばｒｈＤＮＡ酵素）が含まれるが、これらに限定されない。表面改変剤は、組成物のナノ粒子内部及び／又は表面上に（例えば、塗布、吸着、共有結合、又はその他の方法によって）配置されてもよい。
【0121】
組成物は、また一種又は複数種の官能化脂質を含んでもよい。例えば、脂質は、適切な反応条件下でアジドに曝露されると付加環化反応を起こす可能性があるアルキン基で官能化することができる。確認的に述べると、脂質二重層は、膜透過、細胞認識、又はイメージングを効果的に促進する一つ又は複数の基でこのように機能化できる。組成物の表面は、一種又は複数種の有用な抗体とさらに複合化してもよい。標的細胞送達、イメージング、及び膜透過に用いられる官能基及び複合体は、当技術分野でよく知られているものである。
【0122】
これらの成分以外、組成物には、医薬組成物に用いられるいずれの材料が含んでもよい。組成物には、例えば、溶媒、分散媒、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、造粒助剤、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、液体ビヒクル、結合剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、緩衝剤、潤滑剤、油、防腐剤、香料、着色剤などの薬学的に許容される賦形剤又は補助成分を一種又は複数種含んでもよいが、これらに限定されない。賦形剤は、例えばデンプン、ラクトース又はデキストリンである。薬学的に許容される賦形剤は、当技術分野でよく知られているものである（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、２００６を参照）。
【0123】
希釈剤の例としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、乳糖、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉砂糖及び／又はこれらの組み合わせたものが挙げられるが、これらに限定されない。
【0124】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の脂質を一種又は複数種含む組成物は、例えばグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、ＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチド（例えばＡ類又はＢ類）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム及びＰａｍ３ＣＳＫ４などの一種又は複数のアジュバントをさらに含む。
【0125】
本開示の組成物は、錠剤、カプセル、軟膏、エリキシル剤、シロップ、溶液、乳濁液、懸濁液、注射剤、及びエアロゾルなどの固体、半固体、液体又は気体の形態として製剤化することができる。本開示の組成物は、薬学の分野で周知の方法により調製することができる。例えば、無菌注射液は、必要な量の治療剤又は予防剤、及び必要な上記他の各成分を滅菌蒸留水などの適切な溶媒に混合した後、濾過滅菌することによって調製することができる。さらに、均一な溶液又は懸濁液の形成を促進するために、界面活性剤を添加することもできる。
【0126】
例えば、本開示の組成物は、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、鼻腔内、又は吸入によって投与されてもよい。一実施形態において、前記組成物は皮下投与される。
【0127】
本開示の組成物は治療有効量で投与される。前記治療有効量は、選択される特定の薬剤によって変化することがあるし、投与経路、治療される疾患の性質、患者の年齢及び状態によっても変化することがあるし、最終的には主治医や臨床医によって自ら決定すればよい。例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記治療剤又は予防剤を哺乳動物（例えばヒト）に投与することができる。
【実施例】
【0128】
以下に、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。実施例に特定の条件が示されていない場合は、常法の条件又はメーカーが推奨する条件に従って実施しればよい。使用される試薬や器具はメーカーの指定がない場合は、いずれも市販されている従来品であればよい。
【0129】
実施例１：カチオン性脂質化合物の合成
１．６－（（４－（ウンデシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００１）の合成
合成経路は、以下の通りである。
１．６－（（４－（ウンデシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００１）の合成
合成経路は、以下の通りである。
【化10】
【0130】
ステップ１：４－ブロモ酪酸ｎ－ウンデシル（ＹＫ－００１－ＰＭ１）の合成
ｎ－ウンデカノール（５．００ｇ、２９．０２ｍｍｏｌ）と４－ブロモ酪酸（５．１４ｇ、３０．７８ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（４０ｍＬ）に溶解した。上記溶液に、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（６．６７ｇ、３４．８２ｍｍｏｌ）と４－ジメチルアミノピリジン（１７７ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を添加した後、３０～３５℃で攪拌しながら８時間反応させた。反応終了後、反応液を飽和炭酸ナトリウム及び飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。混合物を濾過し、濾液を真空減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、４－ブロモ酪酸ｎ－ウンデシル（６．６８ｇ、２０．７９ｍｍｏｌ、７１．６４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｐ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１４．２、７．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．３９-１．１９（ｍ、１６Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
ｎ－ウンデカノール（５．００ｇ、２９．０２ｍｍｏｌ）と４－ブロモ酪酸（５．１４ｇ、３０．７８ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（４０ｍＬ）に溶解した。上記溶液に、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（６．６７ｇ、３４．８２ｍｍｏｌ）と４－ジメチルアミノピリジン（１７７ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を添加した後、３０～３５℃で攪拌しながら８時間反応させた。反応終了後、反応液を飽和炭酸ナトリウム及び飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。混合物を濾過し、濾液を真空減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、４－ブロモ酪酸ｎ－ウンデシル（６．６８ｇ、２０．７９ｍｍｏｌ、７１．６４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｐ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１４．２、７．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．３９-１．１９（ｍ、１６Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
【0131】
ステップ２：４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ウンデシル（ＹＫ－００１－ＰＭ２）の合成
４－ブロモ酪酸ｎ－ウンデシル（２．７１ｇ、８．４３ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（１．４０ｇ、２２．９２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した。上記の系に炭酸カリウム（３．１７ｇ、２２．９２ｍｍｏｌ）を加え、７０℃までに加熱し、攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、反応液が室温まで冷却して濾過し、真空減圧下で、濾液を濃縮して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー法により精製し、４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ウンデシル（１．４７ｇ、４．８８ｍｍｏｌ、５７．８９％）を得た。Ｃ１７Ｈ３５ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３０２．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６７-３．６０（ｍ、３Ｈ）、２．８２-２．７７（ｍ、２Ｈ）、２．６９（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．３８（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．１３-２．０２（ｍ、３Ｈ）、１．８４（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．６６-１．５３（ｍ、２Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝１５．５Ｈｚ、１４Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）．
４－ブロモ酪酸ｎ－ウンデシル（２．７１ｇ、８．４３ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（１．４０ｇ、２２．９２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した。上記の系に炭酸カリウム（３．１７ｇ、２２．９２ｍｍｏｌ）を加え、７０℃までに加熱し、攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、反応液が室温まで冷却して濾過し、真空減圧下で、濾液を濃縮して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー法により精製し、４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ウンデシル（１．４７ｇ、４．８８ｍｍｏｌ、５７．８９％）を得た。Ｃ１７Ｈ３５ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３０２．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６７-３．６０（ｍ、３Ｈ）、２．８２-２．７７（ｍ、２Ｈ）、２．６９（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．３８（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．１３-２．０２（ｍ、３Ｈ）、１．８４（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．６６-１．５３（ｍ、２Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝１５．５Ｈｚ、１４Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）．
【0132】
ステップ３：６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（ＹＫ－００１－ＰＭ３）の合成
６－ブロモヘキサン酸（２．６０ｇ、１３．３３ｍｍｏｌ）及び２－オクチルデカノール（３．００ｇ、１１．０９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸２－オクチルデシル（３．０５ｇ、６．８２ｍｍｏｌ、６１．５０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４０（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３-１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．６６（ｄｔ、Ｊ＝２０．５、７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．４８（ｍ、Ｊ＝８．６、６．９、４．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．３５-１．１９（ｍ、２８Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、６Ｈ）．
６－ブロモヘキサン酸（２．６０ｇ、１３．３３ｍｍｏｌ）及び２－オクチルデカノール（３．００ｇ、１１．０９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸２－オクチルデシル（３．０５ｇ、６．８２ｍｍｏｌ、６１．５０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４０（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３-１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．６６（ｄｔ、Ｊ＝２０．５、７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．４８（ｍ、Ｊ＝８．６、６．９、４．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．３５-１．１９（ｍ、２８Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、６Ｈ）．
【0133】
ステップ４：６－（（４－（ウンデシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００１）の合成
６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及び４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ウンデシル（１０２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解した。上記の系に炭酸カリウム（１８８ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）及びヨウ化カリウム（５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加え、加熱７０℃までに加熱し、攪拌しながら２０時間反応させた。反応液が室温まで冷却して濾過し、真空減圧下で、濾液を濃縮して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、前記目的化合物（３６ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、１４．７％）を得た。Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６６８．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８４-３．７２（ｍ、１Ｈ）、３．５３-３．４８（ｍ、１Ｈ）、３．４６-３．４０（ｍ、１Ｈ）、２．４２（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、７．６Ｈｚ、４Ｈ）、２．１３-２．０４（ｍ、１Ｈ）、１．７０-１．５７（ｍ、６Ｈ）、１．３９-１．１８（ｍ、５３Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及び４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ウンデシル（１０２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解した。上記の系に炭酸カリウム（１８８ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）及びヨウ化カリウム（５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加え、加熱７０℃までに加熱し、攪拌しながら２０時間反応させた。反応液が室温まで冷却して濾過し、真空減圧下で、濾液を濃縮して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、前記目的化合物（３６ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、１４．７％）を得た。Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６６８．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８４-３．７２（ｍ、１Ｈ）、３．５３-３．４８（ｍ、１Ｈ）、３．４６-３．４０（ｍ、１Ｈ）、２．４２（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、７．６Ｈｚ、４Ｈ）、２．１３-２．０４（ｍ、１Ｈ）、１．７０-１．５７（ｍ、６Ｈ）、１．３９-１．１８（ｍ、５３Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
【0134】
２．６－（（５－（デシルオキシ）－５－オキソペンチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００２）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化11】
【0135】
ステップ１：５－ブロモペンタン酸ｎ－デシル（ＹＫ－００２－ＰＭ１）の合成
５－ブロモペンタン酸（１．８１ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）及びｎ－デカノール（１．４５ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、５－ブロモペンタン酸ｎ－デシル（２．５０ｇ、７．７８ｍｍｏｌ、８４．９３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．９６-１．８５（ｍ、２Ｈ）、１．８３-１．７３（ｍ、２Ｈ）、１．６９-１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｄｄ、Ｊ＝１８．９、１５．６Ｈｚ、１４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
５－ブロモペンタン酸（１．８１ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）及びｎ－デカノール（１．４５ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、５－ブロモペンタン酸ｎ－デシル（２．５０ｇ、７．７８ｍｍｏｌ、８４．９３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．９６-１．８５（ｍ、２Ｈ）、１．８３-１．７３（ｍ、２Ｈ）、１．６９-１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｄｄ、Ｊ＝１８．９、１５．６Ｈｚ、１４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
【0136】
ステップ２：５－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ペンタン酸ｎ－デシル（ＹＫ－００２－ＰＭ２）の合成
５－ブロモペンタン酸ｎ－デシル（１．９２ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（０．３１ｇ、５．０７ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、５－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ペンタン酸ｎ－デシル（０．３４ｇ、１．１３ｍｍｏｌ、１８．９０％）を得た。Ｃ１７Ｈ３５ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３０２．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０５（ｄｄ、Ｊ＝８．９、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．００-３．９２（ｍ、１Ｈ）、３．８２-３．７７（ｍ、２Ｈ）、３．６３（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．５８-３．５１（ｍ、２Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．４１（ｍ、２Ｈ）、１．８４-１．７６（ｍ、４Ｈ）、１．６６-１．５１（ｍ、４Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝１４．２Ｈｚ、１２Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）．
５－ブロモペンタン酸ｎ－デシル（１．９２ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（０．３１ｇ、５．０７ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、５－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ペンタン酸ｎ－デシル（０．３４ｇ、１．１３ｍｍｏｌ、１８．９０％）を得た。Ｃ１７Ｈ３５ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３０２．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０５（ｄｄ、Ｊ＝８．９、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．００-３．９２（ｍ、１Ｈ）、３．８２-３．７７（ｍ、２Ｈ）、３．６３（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．５８-３．５１（ｍ、２Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．４１（ｍ、２Ｈ）、１．８４-１．７６（ｍ、４Ｈ）、１．６６-１．５１（ｍ、４Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝１４．２Ｈｚ、１２Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）．
【0137】
ステップ３：６－（（５－（デシルオキシ）－５－オキソペンチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００２）の合成
５－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ペンタン酸ｎ－デシル（１５１ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２２６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（２１６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、６４．０％）を得た。Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６６８．５。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６６－３．６４（ｍ、２Ｈ）、２．４２（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、６Ｈ）、２．３２（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、４Ｈ）、１．８８-１．７６（ｍ、５Ｈ）、１．６８-１．５８（ｍ、７Ｈ）、１．３７-１．２０（ｍ、４４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
５－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ペンタン酸ｎ－デシル（１５１ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２２６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（２１６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、６４．０％）を得た。Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６６８．５。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６６－３．６４（ｍ、２Ｈ）、２．４２（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、６Ｈ）、２．３２（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、４Ｈ）、１．８８-１．７６（ｍ、５Ｈ）、１．６８-１．５８（ｍ、７Ｈ）、１．３７-１．２０（ｍ、４４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
【0138】
３． ６－（（６－（デシルオキシ）－６－オキソヘキシル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００３）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化12】
【0139】
ステップ１：６－ブロモヘキサン酸ｎ－デシル（ＹＫ－００３－ＰＭ１）の合成
６－ブロモヘキサン酸（１．９５ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）及びｎ－デカノール（１．４５ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸ｎ－デシル（２．４１ｇ、７．１９ｍｍｏｌ、７８．４９％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３２（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９４-１．８１（ｍ、２Ｈ）、１．７３-１．５６（ｍ、３Ｈ）、１．５４-１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．３９-１．１９（ｍ、１５Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
６－ブロモヘキサン酸（１．９５ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）及びｎ－デカノール（１．４５ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸ｎ－デシル（２．４１ｇ、７．１９ｍｍｏｌ、７８．４９％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３２（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９４-１．８１（ｍ、２Ｈ）、１．７３-１．５６（ｍ、３Ｈ）、１．５４-１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．３９-１．１９（ｍ、１５Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
【0140】
ステップ２：６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸ｎ－デシル（ＹＫ－００３－ＰＭ２）の合成
６－ブロモヘキサン酸ｎ－デシル（１．１２ｇ、３．３４ｍｍｏｌ）、エタノールアミン（８．２０ｇ、１３４．２５ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解し、室温で攪拌しながら１６時間反応させた。反応液は、真空減圧下で濃縮して溶媒を除去した後、エチルアセテート（８０ｍＬ）で希釈し、飽和食塩水（５０ｍＬ×３）で洗浄した。減圧下で、有機相を濃縮した後、シリカゲルクロマトグラフィー法により精製し、６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸ｎ－デシル（０．６６ｇ、２．０９ｍｍｏｌ、 ６２．６％）を得た。Ｃ１８Ｈ３７ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３１６．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０５（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９３-３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．７２-３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．６６-３．５６（ｍ、１Ｈ）、３．５５-３．５０（ｍ、１Ｈ）、３．３４（ｓ、２Ｈ）、２．８３（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７２-２．６８（ｍ、１Ｈ）、２．３１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．６９-１．５４（ｍ、６Ｈ）、１．３５-１．２１（ｍ、１６Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
６－ブロモヘキサン酸ｎ－デシル（１．１２ｇ、３．３４ｍｍｏｌ）、エタノールアミン（８．２０ｇ、１３４．２５ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解し、室温で攪拌しながら１６時間反応させた。反応液は、真空減圧下で濃縮して溶媒を除去した後、エチルアセテート（８０ｍＬ）で希釈し、飽和食塩水（５０ｍＬ×３）で洗浄した。減圧下で、有機相を濃縮した後、シリカゲルクロマトグラフィー法により精製し、６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸ｎ－デシル（０．６６ｇ、２．０９ｍｍｏｌ、 ６２．６％）を得た。Ｃ１８Ｈ３７ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３１６．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０５（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９３-３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．７２-３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．６６-３．５６（ｍ、１Ｈ）、３．５５-３．５０（ｍ、１Ｈ）、３．３４（ｓ、２Ｈ）、２．８３（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７２-２．６８（ｍ、１Ｈ）、２．３１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．６９-１．５４（ｍ、６Ｈ）、１．３５-１．２１（ｍ、１６Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
【0141】
ステップ３：６－（（６－（デシルオキシ）－６－オキソヘキシル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００３）の合成
６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸ｎ－デシル（１５７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２２６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、４２．００％）を得た。Ｃ４２Ｈ８３ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６８２．８。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．７２（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．６４（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｔｄ、Ｊ＝７．４、２．４Ｈｚ、５Ｈ）、１．７３-１．５４（ｍ、１４Ｈ）、１．４１-１．１９（ｍ、４９Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、９Ｈ）．
６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）カプロン酸ｎ－デシル（１５７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２２６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、４２．００％）を得た。Ｃ４２Ｈ８３ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６８２．８。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．７２（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．６４（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｔｄ、Ｊ＝７．４、２．４Ｈｚ、５Ｈ）、１．７３-１．５４（ｍ、１４Ｈ）、１．４１-１．１９（ｍ、４９Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、９Ｈ）．
【0142】
４．４－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００４）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化13】
【0143】
ステップ１：４－ブロモ酪酸ｎ－デシル（ＹＫ－００４－ＰＭ１）の合成
４－ブロモ酪酸（１５．００ｇ、８９．８２ｍｍｏｌ）及び１－デカノール（１２．９０ｇ、８１．５０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、４－ブロモ酪酸ｎ－デシル（１０．５２ｇ、３４．２ｍｍｏｌ、４２．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｄｄ、Ｊ＝１２．５、５．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．６２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．３０-１．２０（ｍ、１４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
４－ブロモ酪酸（１５．００ｇ、８９．８２ｍｍｏｌ）及び１－デカノール（１２．９０ｇ、８１．５０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、４－ブロモ酪酸ｎ－デシル（１０．５２ｇ、３４．２ｍｍｏｌ、４２．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｄｄ、Ｊ＝１２．５、５．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．６２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．３０-１．２０（ｍ、１４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
【0144】
ステップ２：４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（ＹＫ－００４－ＰＭ２）の合成
４－ブロモ酪酸ｎ－デシル（８．００ｇ、２６．０４ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（４．７８ｇ、７８．２６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（４．４０ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、５８．８％）を得た。Ｃ１６Ｈ３３ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）２８８．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．７６（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝８．３、４．９Ｈｚ、４Ｈ）、３．５０（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．４５-３．３６（ｍ、２Ｈ）、２．９１-２．７６（ｍ、２Ｈ）、２．４４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．０８（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．６７-１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｓ、１２Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）．
４－ブロモ酪酸ｎ－デシル（８．００ｇ、２６．０４ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（４．７８ｇ、７８．２６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（４．４０ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、５８．８％）を得た。Ｃ１６Ｈ３３ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）２８８．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．７６（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝８．３、４．９Ｈｚ、４Ｈ）、３．５０（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．４５-３．３６（ｍ、２Ｈ）、２．９１-２．７６（ｍ、２Ｈ）、２．４４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．０８（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．６７-１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｓ、１２Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）．
【0145】
ステップ３：４－ブロモ酪酸－２－ヘプチルノニル（ＹＫ－００４－ＰＭ３）の合成
２－ヘプチルノナノール（３９０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）及び４－ブロモ酪酸（２６５ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、４－ブロモ酪酸－２－ヘプチルノニル（５００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ、８２．０７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９９（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５１（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝２１．２Ｈｚ、２９Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）．
２－ヘプチルノナノール（３９０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）及び４－ブロモ酪酸（２６５ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、４－ブロモ酪酸－２－ヘプチルノニル（５００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ、８２．０７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９９（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５１（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝２１．２Ｈｚ、２９Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）．
【0146】
ステップ４：４－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００４）の合成
４－ブロモ酪酸－２－ヘプチルノニル（２５０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）及び４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１７２ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（５０ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ、１３．３％）を得た。Ｃ３８Ｈ７５ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６２６．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．６１-３．５８（ｍ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、４Ｈ）、１．８１（ｓ、３Ｈ）、１．６５-１．５５（ｍ、３Ｈ）、１．３５-１．１８（ｍ、５０Ｈ）、０．８７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、９Ｈ）．
４－ブロモ酪酸－２－ヘプチルノニル（２５０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）及び４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１７２ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（５０ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ、１３．３％）を得た。Ｃ３８Ｈ７５ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６２６．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．６１-３．５８（ｍ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、４Ｈ）、１．８１（ｓ、３Ｈ）、１．６５-１．５５（ｍ、３Ｈ）、１．３５-１．１８（ｍ、５０Ｈ）、０．８７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、９Ｈ）．
【0147】
５．８－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン９－ヘプタデシル（ＹＫ－００５）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化14】
【0148】
ステップ１：８－ブロモオクタン酸－９－ヘプタデシル（ＹＫ－００５－ＰＭ１）の合成
８－ブロモオクタン酸（２．８７ｇ、１２．８６ｍｍｏｌ）及び９－ヘプタデシルアルコール（３．００ｇ、１１．７０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、８－ブロモオクタン酸－９－ヘプタデシル（３．１５ｇ、６．８２ｍｍｏｌ、５８．３％）を得た。
８－ブロモオクタン酸（２．８７ｇ、１２．８６ｍｍｏｌ）及び９－ヘプタデシルアルコール（３．００ｇ、１１．７０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、８－ブロモオクタン酸－９－ヘプタデシル（３．１５ｇ、６．８２ｍｍｏｌ、５８．３％）を得た。
【0149】
ステップ２：８－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン９－ヘプタデシル（ＹＫ－００５）の合成
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及び８－ブロモオクタン酸－９－ヘプタデシル（２８５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、４０．４％）を得た。Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６６８．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６３（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．７１（ｔ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．６７-２．５４（ｍ、４Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．２８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．８９-１．８０（ｍ、２Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１２．７、５．９Ｈｚ、５Ｈ）、１．５０（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、６Ｈ）、１．３８-１．１８（ｍ、４５Ｈ）、０．９０-０．８４（ｍ、９Ｈ）．
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及び８－ブロモオクタン酸－９－ヘプタデシル（２８５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、４０．４％）を得た。Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６６８．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６３（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．７１（ｔ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．６７-２．５４（ｍ、４Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．２８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．８９-１．８０（ｍ、２Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１２．７、５．９Ｈｚ、５Ｈ）、１．５０（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、６Ｈ）、１．３８-１．１８（ｍ、４５Ｈ）、０．９０-０．８４（ｍ、９Ｈ）．
【0150】
６．５－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ペンタン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００６）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化15】
【0151】
ステップ１：５－ブロモペンタン酸－２－ヘプチルノニル（ＹＫ－００６－ＰＭ１）の合成
２－ヘプチルノナノール（３００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）及び５－ブロモペンタン酸（２２０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、５－ブロモペンタン酸－２－ヘプチルノニル（４３８ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、９１．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９８（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９０（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．６、７．７、３．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．８４-１．７２（ｍ、２Ｈ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝２１．６Ｈｚ、２９Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）．
２－ヘプチルノナノール（３００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）及び５－ブロモペンタン酸（２２０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、５－ブロモペンタン酸－２－ヘプチルノニル（４３８ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、９１．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９８（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９０（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．６、７．７、３．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．８４-１．７２（ｍ、２Ｈ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝２１．６Ｈｚ、２９Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）．
【0152】
ステップ２：５－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ペンタン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００６）の合成
５－ブロモペンタン酸－２－ヘプチルノニル（２００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及び４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１３３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（６５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、２１．７％）を得た。Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６４０．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５５-３．５０（ｍ、２Ｈ）、２．６５-２．４５（ｍ、３Ｈ）２．３３（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、４Ｈ）、２．０１（ｓ、１Ｈ）、１．６１（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１０Ｈ）、１．３９-１．１０（ｍ、４４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
５－ブロモペンタン酸－２－ヘプチルノニル（２００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及び４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１３３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（６５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、２１．７％）を得た。Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６４０．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５５-３．５０（ｍ、２Ｈ）、２．６５-２．４５（ｍ、３Ｈ）２．３３（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、４Ｈ）、２．０１（ｓ、１Ｈ）、１．６１（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１０Ｈ）、１．３９-１．１０（ｍ、４４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
【0153】
７．６－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００７）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化16】
【0154】
ステップ１：６－ブロモヘキサン酸－１－ウンデシル（ＹＫ－００７－ＰＭ１）の合成
６－ブロモヘキサン酸（２．５０ｇ、１２．８２ｍｍｏｌ）及び1-ウンデカノール（２．００ｇ、１１．６１ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸１－ウンデシル（２．４０ｇ、６．８７ｍｍｏｌ、５９．２％）を得た。
６－ブロモヘキサン酸（２．５０ｇ、１２．８２ｍｍｏｌ）及び1-ウンデカノール（２．００ｇ、１１．６１ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸１－ウンデシル（２．４０ｇ、６．８７ｍｍｏｌ、５９．２％）を得た。
【0155】
ステップ２：６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸ウンデシル（ＹＫ－００７－ＰＭ２）の合成
６－ブロモヘキサン酸１－ウンデシル（２．２５ｇ、６．４４ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（１．１８ｇ、１９．２９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、ウンデシル６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサノエート（８５５ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ、４０．２％）を得た。Ｃ１９Ｈ３９ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３３０．３。
６－ブロモヘキサン酸１－ウンデシル（２．２５ｇ、６．４４ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（１．１８ｇ、１９．２９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、ウンデシル６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサノエート（８５５ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ、４０．２％）を得た。Ｃ１９Ｈ３９ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３３０．３。
【0156】
ステップ３：６－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）カプロン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００７）の合成
６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸ウンデシル（３００ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－オクチルデシル（４８８ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の方法調製により、前記目的化合物（２６０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、４１．１％）を得た。Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６９６．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０９-４．０２（ｍ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３ -３．４８（ｍ、２Ｈ）、２．３５-２．２９（ｍ、４Ｈ）、２．０１（ｄｄ、Ｊ＝１２．６、６．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．７４-１．５５（ｍ、６Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、５８Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、９Ｈ）．
６－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸ウンデシル（３００ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－オクチルデシル（４８８ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の方法調製により、前記目的化合物（２６０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、４１．１％）を得た。Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６９６．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０９-４．０２（ｍ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３ -３．４８（ｍ、２Ｈ）、２．３５-２．２９（ｍ、４Ｈ）、２．０１（ｄｄ、Ｊ＝１２．６、６．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．７４-１．５５（ｍ、６Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、５８Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、９Ｈ）．
【0157】
８．６－（（４－（ノニルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００８）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化17】
【0158】
ステップ１：４－ブロモ酪酸ｎ－ノニル（ＹＫ－００８－ＰＭ１）の合成
ｎ－ノナノール（５．００ｇ、３４．６６ｍｍｏｌ）及び４－ブロモ酪酸（６．１１ｇ、３６．５９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、４－ブロモ酪酸ｎ－ノニル（３．６６ｇ、１２．５ｍｍｏｌ、３６．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｐ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、７．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．４０-１．１９（ｍ、１２Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
ｎ－ノナノール（５．００ｇ、３４．６６ｍｍｏｌ）及び４－ブロモ酪酸（６．１１ｇ、３６．５９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、４－ブロモ酪酸ｎ－ノニル（３．６６ｇ、１２．５ｍｍｏｌ、３６．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｐ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、７．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．４０-１．１９（ｍ、１２Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
【0159】
ステップ２：４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ノニル（ＹＫ－００８－ＰＭ２）の合成
４－ブロモ酪酸ｎ－ノニル（２．４６ｇ、８．３９ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（１．２８ｇ、２０．９６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ノニル（１．２２ｇ、４．４６ｍｍｏｌ、５３．２％）を得た、Ｃ１５Ｈ３１ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）２７４．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３-３．４７（ｍ、３Ｈ）、２．６８（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．４３（ｔ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．３７（ｓ、１Ｈ）、２．１２-２．０１（ｍ、２Ｈ）、１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．６７-１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．４０-１．２１（ｍ、１０Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
４－ブロモ酪酸ｎ－ノニル（２．４６ｇ、８．３９ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（１．２８ｇ、２０．９６ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の調製方法により、４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ノニル（１．２２ｇ、４．４６ｍｍｏｌ、５３．２％）を得た、Ｃ１５Ｈ３１ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）２７４．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３-３．４７（ｍ、３Ｈ）、２．６８（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．４３（ｔ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．３７（ｓ、１Ｈ）、２．１２-２．０１（ｍ、２Ｈ）、１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．６７-１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．４０-１．２１（ｍ、１０Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）．
【0160】
ステップ３：６－（（４－（ノニルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００８）の合成
６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）と４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ノニル（１０２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（３０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１３．５％）を得た。Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６４０．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６８-３．６２（ｍ、２Ｈ）、２．３２（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、７．６Ｈｚ、４Ｈ）、１．６３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、７．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．３９-１．１７（ｍ、５２Ｈ）、０．８７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、９Ｈ）．
６－ブロモヘキサン酸－２－オクチルデシル（２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）と４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－ノニル（１０２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（３０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１３．５％）を得た。Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６４０．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６８-３．６２（ｍ、２Ｈ）、２．３２（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、７．６Ｈｚ、４Ｈ）、１．６３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、７．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．３９-１．１７（ｍ、５２Ｈ）、０．８７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、９Ｈ）．
【0161】
９．６－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００９）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化18】
【0162】
ステップ１：６－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－オクチルデシル（ＹＫ－００９）の合成
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１．００ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－オクチルデシル（１．８７ｇ、４．１８ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（０．９２ｇ、１．４１ｍｍｏｌ、４０．５％）を得た。Ｃ４０Ｈ７９ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６５４．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、４Ｈ）、３．９６（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．４９（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．２７-２．１７（ｍ、２Ｈ）、２．０１（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．６８-１．６２（ｍ、９Ｈ）、１．４６-１．４３（ｍ、３Ｈ）、１．３６-１．１５（ｍ、４４Ｈ）、０．８７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、９Ｈ）．
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１．００ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－オクチルデシル（１．８７ｇ、４．１８ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（０．９２ｇ、１．４１ｍｍｏｌ、４０．５％）を得た。Ｃ４０Ｈ７９ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６５４．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、４Ｈ）、３．９６（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．４９（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．２７-２．１７（ｍ、２Ｈ）、２．０１（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．６８-１．６２（ｍ、９Ｈ）、１．４６-１．４３（ｍ、３Ｈ）、１．３６-１．１５（ｍ、４４Ｈ）、０．８７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、９Ｈ）．
【0163】
１０．６－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－ヘプチルノニル（ＹＫ－０１０）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化19】
【0164】
ステップ１：６－ブロモヘキサン酸２－ヘプチルノニル（ＹＫ－０１０－ＰＭ１）の合成
６－ブロモヘキサン酸（２９０ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）及び２－ヘプチルノナノール（３００ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸２－ヘプチルノニル（２８０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ、５４．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３-１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．６６（ｄｔ、Ｊ＝２０．５、７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．５２-１．４３（ｍ、２Ｈ）、１．３６-１．２０（ｍ、２４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、６Ｈ）．
６－ブロモヘキサン酸（２９０ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）及び２－ヘプチルノナノール（３００ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸２－ヘプチルノニル（２８０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ、５４．０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３-１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．６６（ｄｔ、Ｊ＝２０．５、７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．５２-１．４３（ｍ、２Ｈ）、１．３６-１．２０（ｍ、２４Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、６Ｈ）．
【0165】
ステップ２：６－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－ヘプチルノニル（ＹＫ－０１０）の合成
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－ヘプチルノニル（２６０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１５０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、４６．２％）を得た。Ｃ３８Ｈ７５ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６２６．７。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．２７（ｑｄ、Ｊ＝１１．０、５．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．１３-４．０１（ｍ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｄｔ、Ｊ＝１２．５、７．３Ｈｚ、４Ｈ）、１．８６-１．８１（ｍ、１Ｈ）、１．７８-１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６７-１．５９（ｍ、４Ｈ）、１．３３-１．１７（ｍ、４９Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、９Ｈ）．
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－ヘプチルノニル（２６０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１５０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、４６．２％）を得た。Ｃ３８Ｈ７５ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６２６．７。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．２７（ｑｄ、Ｊ＝１１．０、５．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．１３-４．０１（ｍ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｄｔ、Ｊ＝１２．５、７．３Ｈｚ、４Ｈ）、１．８６-１．８１（ｍ、１Ｈ）、１．７８-１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６７-１．５９（ｍ、４Ｈ）、１．３３-１．１７（ｍ、４９Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、９Ｈ）．
【0166】
１１．６－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－ヘキシルオクチル（ＹＫ－０１１）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化20】
【0167】
ステップ１：６－ブロモヘキサン酸２－ヘキシルオクチル（ＹＫ－０１１－ＰＭ１）の合成
６－ブロモヘキサン酸（２９０ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）及び２－ヘキシルオクタノール（３００ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸２－ヘキシルオクチル（２４０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ、４１．６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９２-１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．６６（ｄｔ、Ｊ＝２０．５、７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．４８（ｄｄｄ、Ｊ＝８．６、６．８、４．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．３７-１．２０（ｍ、２０Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）．
６－ブロモヘキサン酸（２９０ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）及び２－ヘキシルオクタノール（３００ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸２－ヘキシルオクチル（２４０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ、４１．６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９２-１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．６６（ｄｔ、Ｊ＝２０．５、７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．４８（ｄｄｄ、Ｊ＝８．６、６．８、４．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．３７-１．２０（ｍ、２０Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）．
【0168】
ステップ２：６－（（４－（デシルオキシ）－４－オキソブチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサン酸２－ヘキシルオクチル（ＹＫ－０１１）の合成
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－ヘキシルオクチル（２４０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、３８．５％）を得た。Ｃ３６Ｈ７１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）５９８．５。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０９-４．０３（ｍ、４Ｈ）、３．５６－３．５３（ｍ、２Ｈ）、２．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．２２（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、１．７１-１．６３（ｍ、３Ｈ）、１．５８-１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．４２-１．１９（ｍ、４７Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
４－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酪酸ｎ－デシル（１５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸２－ヘキシルオクチル（２４０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（１２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、３８．５％）を得た。Ｃ３６Ｈ７１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）５９８．５。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．０９-４．０３（ｍ、４Ｈ）、３．５６－３．５３（ｍ、２Ｈ）、２．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．２２（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、１．７１-１．６３（ｍ、３Ｈ）、１．５８-１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．４２-１．１９（ｍ、４７Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
【0169】
１２．８－（（２－ヒドロキシエチル）（１０－（（９－ヘプタデシル）オキシ）－１０－オキソデシル）アミノ）オクタン酸ノニル（化合物２３）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化21】
【0170】
ステップ１：８－ブロモオクタン酸ｎ－ノニル（化合物２３－ＰＭ１）の合成
８－ブロモオクタン酸（２．５０ｇ、１１．２１ｍｍｏｌ）及びｎ－ノナノール（１．４７ｇ、１０．１９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、８－ブロモオクタン酸ｎ－ノニル（１．８５ｇ、５．３０ｍｍｏｌ、５２．０％）を得た。
８－ブロモオクタン酸（２．５０ｇ、１１．２１ｍｍｏｌ）及びｎ－ノナノール（１．４７ｇ、１０．１９ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、８－ブロモオクタン酸ｎ－ノニル（１．８５ｇ、５．３０ｍｍｏｌ、５２．０％）を得た。
【0171】
ステップ２：８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン酸ノニル（化合物２３－ＰＭ２）の合成
上記調製された８－ブロモオクタン酸ｎ－ノニル（１．５０ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（７．９６ｇ、１３０．３２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の方法により、８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン酸ノニル（６１０ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、４３．１％）を得た。Ｃ１９Ｈ３９ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３３０．３。
上記調製された８－ブロモオクタン酸ｎ－ノニル（１．５０ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）及びエタノールアミン（７．９６ｇ、１３０．３２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ２の方法により、８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン酸ノニル（６１０ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、４３．１％）を得た。Ｃ１９Ｈ３９ＮＯ３、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）３３０．３。
【0172】
ステップ３：１０－ブロモデカン酸－９－ヘプタデシル（化合物２３－ＰＭ３）の合成
１０－ブロモデカン酸（３．２３ｇ、１２．８６ｍｍｏｌ）及び９－ヘプタデカノール（３．００ｇ、１１．７０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、１０－ブロモデカン酸－９－ヘプタデシル（３．１０ｇ、６．７２ｍｍｏｌ、５７．４％）を得た。
１０－ブロモデカン酸（３．２３ｇ、１２．８６ｍｍｏｌ）及び９－ヘプタデカノール（３．００ｇ、１１．７０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、１０－ブロモデカン酸－９－ヘプタデシル（３．１０ｇ、６．７２ｍｍｏｌ、５７．４％）を得た。
【0173】
ステップ４：８－（１０－（（９－ヘプタデシル）オキシ）－１０－オキソデシル）アミノ）オクタン酸ノニル（化合物２３）の合成
８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン酸ノニル（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及び１０－ブロモデカン酸－９－ヘプタデシル（８４０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（５２０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、４６．１％）を得た。Ｃ４６Ｈ９１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）７３８．８。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．８８-４．８６（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．７７-２．６９（ｍ ，５Ｈ）、２．２５（ｍ，４Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１３Ｈ）、１．３８-１．１８（ｍ、５５Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン酸ノニル（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及び１０－ブロモデカン酸－９－ヘプタデシル（８４０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（５２０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、４６．１％）を得た。Ｃ４６Ｈ９１ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）７３８．８。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．８８-４．８６（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．７７-２．６９（ｍ ，５Ｈ）、２．２５（ｍ，４Ｈ）、１．６１（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１３Ｈ）、１．３８-１．１８（ｍ、５５Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、９Ｈ）．
【0174】
１３．８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－（（９－ヘプタデシル）オキシ）－６－オキソヘキシル）アミノ）オクタン酸ノニル（化合物２７）の合成
合成経路は、以下の通りである。
合成経路は、以下の通りである。
【化22】
【0175】
ステップ１：６－ブロモヘキサン酸－９－ヘプタデシル（化合物２７－ＰＭ１）の合成
６－ブロモヘキサン酸（２．５１ｇ、１２．８７ｍｍｏｌ）及び９－ヘプタデカノール（３．００ｇ、１１．７０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸－９－ヘプタデシル（２．７７ｇ、６．３９ｍｍｏｌ、５４．６％）を得た。
６－ブロモヘキサン酸（２．５１ｇ、１２．８７ｍｍｏｌ）及び９－ヘプタデカノール（３．００ｇ、１１．７０ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１－ＰＭ１の調製方法により、６－ブロモヘキサン酸－９－ヘプタデシル（２．７７ｇ、６．３９ｍｍｏｌ、５４．６％）を得た。
【0176】
ステップ２：８－（６－（（９－ヘプタデシル）オキシ）－６－オキソヘキシル）アミノ）オクタン酸ノニル（化合物２７）の合成
８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン酸ノニル（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸－９－ヘプタデシル（７６０ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（４７１ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、４５．４％）を得た。Ｃ４２Ｈ８３ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６８２．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．８３-４．８１（ｍ、１Ｈ）、４．０５－４．００（ｍ、２Ｈ）、３．７７-３．６９（ｍ、２Ｈ）、２．７５-２．５９（ｍ、５Ｈ）、２．２５-２．１９（ｍ、４Ｈ）、１．５９（ｄｄ、Ｊ＝１３．３、６．３Ｈｚ、１３Ｈ）、１．３４-１．０３（ｍ、４７Ｈ）、０．８７（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、９Ｈ）．
８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタン酸ノニル（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及び６－ブロモヘキサン酸－９－ヘプタデシル（７６０ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を原料とし、ＹＫ－００１の調製方法により、前記目的化合物（４７１ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、４５．４％）を得た。Ｃ４２Ｈ８３ＮＯ５、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ＋）６８２．６。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ４．８３-４．８１（ｍ、１Ｈ）、４．０５－４．００（ｍ、２Ｈ）、３．７７-３．６９（ｍ、２Ｈ）、２．７５-２．５９（ｍ、５Ｈ）、２．２５-２．１９（ｍ、４Ｈ）、１．５９（ｄｄ、Ｊ＝１３．３、６．３Ｈｚ、１３Ｈ）、１．３４-１．０３（ｍ、４７Ｈ）、０．８７（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、９Ｈ）．
【0177】
実施例２：ナノ脂質粒子（ＬＮＰ製剤）の調製条件の好適化
１．担体（リポソーム）とｍＲＮＡの比率の好適化
実施例１で合成されたカチオン性脂質化合物ＹＫ－００９、ＤＳＰＣ（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、コレステロール（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を５０：１０：３８．５：１．５のモル比でエタノールにそれぞれに溶解してエタノール脂質の溶液を調製した。エタノール脂質の溶液をエタノール注入法によりクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）を速やかに添加し、３０秒間ボルテックスした。ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡ（上海起発実験試剤有限公司から購入）をクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）で希釈してｍＲＮＡ水溶液を得た。固定体積のリポソーム溶液とｍＲＮＡ水溶液を用いて総脂質とｍＲＮＡの重量比がそれぞれ４：１、１０：１、１６：１、２４：１、及び３０：１となるようにリポソームを調製した。２５℃で１５分間（超音波周波数４０ｋＨｚ、超音波出力８００Ｗ）超音波処理した。得られたリポソームをＰＢＳで１０倍の体積に希釈した後、３００ＫＤａ限外濾過チューブで限外濾過してエタノールを除去した。その後、ＰＢＳで固定容積にしてカチオン性脂質ＹＫ－００９／ＤＳＰＣ／コレステロール／ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（モル百分率が５０：１０：３８．５：１．５）を用いてｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を得た。
１．担体（リポソーム）とｍＲＮＡの比率の好適化
【化23】
実施例１で合成されたカチオン性脂質化合物ＹＫ－００９、ＤＳＰＣ（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、コレステロール（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を５０：１０：３８．５：１．５のモル比でエタノールにそれぞれに溶解してエタノール脂質の溶液を調製した。エタノール脂質の溶液をエタノール注入法によりクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）を速やかに添加し、３０秒間ボルテックスした。ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡ（上海起発実験試剤有限公司から購入）をクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）で希釈してｍＲＮＡ水溶液を得た。固定体積のリポソーム溶液とｍＲＮＡ水溶液を用いて総脂質とｍＲＮＡの重量比がそれぞれ４：１、１０：１、１６：１、２４：１、及び３０：１となるようにリポソームを調製した。２５℃で１５分間（超音波周波数４０ｋＨｚ、超音波出力８００Ｗ）超音波処理した。得られたリポソームをＰＢＳで１０倍の体積に希釈した後、３００ＫＤａ限外濾過チューブで限外濾過してエタノールを除去した。その後、ＰＢＳで固定容積にしてカチオン性脂質ＹＫ－００９／ＤＳＰＣ／コレステロール／ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（モル百分率が５０：１０：３８．５：１．５）を用いてｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を得た。
【0178】
細胞のトランスフェクトの実験結果、担体とｍＲＮＡの重量比率が１０：１～３０：１の範囲にあった場合は、すべてのトランスフェクト効果が良好であった。その中で、重量比率が１６：１範囲であった場合、トランスフェクト効果が最も良好であったが、重量比率が４：１であった場合、トランスフェクト効果が低かったので、この比率でｍＲＮＡの担持に使用することはできなかった（図１）。
【0179】
２．カチオン性脂質と中性脂質の比率の好適化
第１項における方法により、ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を調製し、ここで、カチオン性脂質ＹＫ－００９と中性脂質ＤＳＰＣとのモル比がそれぞれ１：１、５：１及び１０：１であった。
細胞トランスフェクト実験により、カチオン性脂質と中性脂質のモル比が１：１～１０：１であった場合は、いずれもトランスフェクト効果があり、その中で、モル比が５：１であった場合は、トランスフェクト効率が最も高かったことが分かった。（図２）
第１項における方法により、ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を調製し、ここで、カチオン性脂質ＹＫ－００９と中性脂質ＤＳＰＣとのモル比がそれぞれ１：１、５：１及び１０：１であった。
細胞トランスフェクト実験により、カチオン性脂質と中性脂質のモル比が１：１～１０：１であった場合は、いずれもトランスフェクト効果があり、その中で、モル比が５：１であった場合は、トランスフェクト効率が最も高かったことが分かった。（図２）
【0180】
３．担体（リポソーム）に対するポリマー共役脂質の比率の好適化
第１項における方法により、ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を調製し、担体中のカチオン性脂質がＹＫ－００９であり、担体に対するポリマー共役脂質ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００のモル比がそれぞれ０．５％、１．５％、２．５％、３．５％及び５％であった。
第１項における方法により、ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を調製し、担体中のカチオン性脂質がＹＫ－００９であり、担体に対するポリマー共役脂質ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００のモル比がそれぞれ０．５％、１．５％、２．５％、３．５％及び５％であった。
【0181】
細胞トランスフェクト実験により、担体に対するポリマー共役脂質のモル比が０．５％～５％範囲にあった場合、いずれもトランスフェクト効果があり、また、トランスフェクト効率は、モル比が１．５％であった場合に最も高く、モル比が０．５％であった場合に最も低かったことが示された（図３）。
【0182】
４．担体（リポソーム）中の各成分の比率の好適化
第１項における方法により、ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を調製し、カチオン性脂質ＹＫ－００９と、中性脂質ＤＳＰＣと、構造脂質コレステロールと、ポリマー共役脂質ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００とのモル比がそれぞれ６５：８：２５：２、５０：１０：３８．５：１．５、４０：１７．５：４０：２．５及び２５：３５：３５：５であった。
第１項における方法により、ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を調製し、カチオン性脂質ＹＫ－００９と、中性脂質ＤＳＰＣと、構造脂質コレステロールと、ポリマー共役脂質ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００とのモル比がそれぞれ６５：８：２５：２、５０：１０：３８．５：１．５、４０：１７．５：４０：２．５及び２５：３５：３５：５であった。
【0183】
細胞トランスフェクト実験により、カチオン性脂質と、中性脂質と、構造脂質と、ポリマー共役脂質とのモル比が５０：１０：３８．５：１．５であった場合は、トランスフェクト効果が最も高く、モル比が６５：８：２５：２であった場合は、効果がわずかに悪くなったが、それでもトランスフェクトできた（図４）。
【0184】
実施例３：ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡのＬＮＰ製剤の細胞トランスフェクト実験
細胞復活と継代：２９３Ｔ細胞を復活させ、培養皿で培養し、必要な細胞数まで継代した。
播種プレート：培養皿内の細胞を消化し、計数した。細胞は、１ウェル当たり１０，０００で９６ウェルプレートにプレーティングし、１ウェル当たり１５０，０００で１２ウェルプレートにプレーティングした後、細胞が壁に接着するまで一晩培養した。
細胞復活と継代：２９３Ｔ細胞を復活させ、培養皿で培養し、必要な細胞数まで継代した。
播種プレート：培養皿内の細胞を消化し、計数した。細胞は、１ウェル当たり１０，０００で９６ウェルプレートにプレーティングし、１ウェル当たり１５０，０００で１２ウェルプレートにプレーティングした後、細胞が壁に接着するまで一晩培養した。
【0185】
細胞トランスフェクト実験：実施例２で調製された１．５μｇのｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤（担体中のカチオン性脂質はＹＫ－００９である）、及びｅＧＦＰ－ｍＲＮＡを含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００製剤をそれぞれ１２ウェルプレートの細胞培養培地に添加した。２４ｈ培養を継続した後、蛍光顕微鏡で観察し、蛍光強度により、さまざまなサンプルのトランスフェクト効率を調査した。
【0186】
実験の結果から、ナノ脂質粒子（ＬＮＰ製剤）の調製条件が最終的に決定された。即ち、担体とｍＲＮＡの比率を１６：１とし、カチオン性脂質と中性脂質とのモル比を５：１とし、リポソームに占めるポリマー共役脂質を１．５％とし、カチオン性脂質と、中性脂質と、構造脂質と、ポリマー共役脂質とのモル比を５０：１０：３８．５：１．５とする条件で、次の実験でナノ脂質粒子（ＬＮＰ製剤）を調製した。
【0187】
実施例４：ナノ脂質粒子（ＬＮＰ製剤）の調製（最適な比率）
表１に記載のカチオン性脂質、ＤＳＰＣ（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、コレステロール（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を５０：１０：３８．５：１．５のモル比でエタノールにそれぞれに溶解してエタノール脂質の溶液を調製した。エタノール脂質の溶液をエタノール注入法によりクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）を速やかに添加し、３０秒間ボルテックスした。ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡ（上海起発実験試剤有限公司から購入）又はＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ（上海起発実験試剤有限公司から購入）をクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）で希釈してｍＲＮＡ水溶液を得た。固定体積のリポソーム溶液とｍＲＮＡ水溶液を用いて総脂質とｍＲＮＡの重量比が１６：１となるようにリポソームを調製した。２５℃で１５ｍｉｎ（超音波周波数４０ｋＨｚ、超音波出力８００Ｗ）超音波処理した。得られたリポソームをＰＢＳで１０倍の体積に希釈した後、３００ＫＤａ限外濾過チューブで限外濾過してエタノールを除去した。その後、ＰＢＳで固定容積にしてカチオン性脂質ＹＫ－００９／ＤＳＰＣ／コレステロール／ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（モル百分率が５０：１０：３８．５：１．５）を用いてｅＧＦＰ－ｍＲＮＡ又はＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を得た。
【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
表１に記載のカチオン性脂質、ＤＳＰＣ（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、コレステロール（艾偉拓（上海）医薬科技有限公司）、及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を５０：１０：３８．５：１．５のモル比でエタノールにそれぞれに溶解してエタノール脂質の溶液を調製した。エタノール脂質の溶液をエタノール注入法によりクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）を速やかに添加し、３０秒間ボルテックスした。ｅＧＦＰ－ｍＲＮＡ（上海起発実験試剤有限公司から購入）又はＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ（上海起発実験試剤有限公司から購入）をクエン酸緩衝液（ｐＨ＝４～５）で希釈してｍＲＮＡ水溶液を得た。固定体積のリポソーム溶液とｍＲＮＡ水溶液を用いて総脂質とｍＲＮＡの重量比が１６：１となるようにリポソームを調製した。２５℃で１５ｍｉｎ（超音波周波数４０ｋＨｚ、超音波出力８００Ｗ）超音波処理した。得られたリポソームをＰＢＳで１０倍の体積に希釈した後、３００ＫＤａ限外濾過チューブで限外濾過してエタノールを除去した。その後、ＰＢＳで固定容積にしてカチオン性脂質ＹＫ－００９／ＤＳＰＣ／コレステロール／ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（モル百分率が５０：１０：３８．５：１．５）を用いてｅＧＦＰ－ｍＲＮＡ又はＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を得た。
【0188】
実施例５：ナノ脂質粒子の粒子径及び多分散指数（ＰＤＩ）の測定
粒子径及び多分散指数（ＰＤＩ）は、Ｍａｌｖｅｒｎレーザー粒子径分析装置を使用した動的光散乱によって測定した。
１０μＬのリポソーム溶液を取り出し、ＲＮａｓｅを含まない脱イオン水で１ｍＬに希釈し、サンプルプールに加えた。各サンプルを３回測定した。測定条件は、散乱角９０°、２５℃であった。測定結果を以下の表に示した。
粒子径及び多分散指数（ＰＤＩ）は、Ｍａｌｖｅｒｎレーザー粒子径分析装置を使用した動的光散乱によって測定した。
１０μＬのリポソーム溶液を取り出し、ＲＮａｓｅを含まない脱イオン水で１ｍＬに希釈し、サンプルプールに加えた。各サンプルを３回測定した。測定条件は、散乱角９０°、２５℃であった。測定結果を以下の表に示した。
【表2】
【0189】
実施例４で調製されたナノ脂質粒子の粒子径は１１０～２１０ｎｍであり、いずれもｍＲＮＡの送達に使用することができた。そして、化合物２３及びＹＫ－００３から調製された粒子の粒子径が最も小さく、それぞれが１１４．１２ｎｍ、１１９．９１ｎｍであるが、ＹＫ－００８とＭＣ３から調製された粒子の粒子径が最も大きく、それぞれが２０５．００ｎｍ、２０５．２０ｎｍである。すべてのナノ脂質粒子の多分散指数は５％～３０％であり、ＹＫ－００４の多分散指数は９．７％で最小であり、ＹＫ－００２の多分散指数は２７．７％で最大である。
【0190】
実施例６：インビトでのＬＮＰ送達担体の性能の検証
細胞復活と継代：実施例３の方法と同じである。
播種プレート：実施例３の方法と同じである。
細胞復活と継代：実施例３の方法と同じである。
播種プレート：実施例３の方法と同じである。
【0191】
１．Ｆｌｕｃ－ｍＲＮＡの蛍光測定
０．３μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤（ＬＮＰ製剤の担体成分は、モル比５０：１０：３８．５：１．５のカチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質であり、ここで、カチオン性脂質は表１に記載のカチオン性脂質である）を９６ウェルプレート的細胞培養培地に加え、さらに２４時間培養した後、Ｇａｕｓｓｉａ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔの説明書に従って対応する試薬を添加し、ＩＶＩＳ蛍光測定システムにより各ウェルの蛍光発現強度を検出した。この実験では、細胞におけるＬＮＰ製剤のトランスフェクト効率を検証した。結果を表３に示す。
０．３μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤（ＬＮＰ製剤の担体成分は、モル比５０：１０：３８．５：１．５のカチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質であり、ここで、カチオン性脂質は表１に記載のカチオン性脂質である）を９６ウェルプレート的細胞培養培地に加え、さらに２４時間培養した後、Ｇａｕｓｓｉａ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔの説明書に従って対応する試薬を添加し、ＩＶＩＳ蛍光測定システムにより各ウェルの蛍光発現強度を検出した。この実験では、細胞におけるＬＮＰ製剤のトランスフェクト効率を検証した。結果を表３に示す。
【0192】
さらに、細胞におけるカチオン性脂質ＹＫ－００９及び化合物２５から調製したＬＮＰ製剤のトランスフェクト効率を比較するために、それぞれ０．３μｇ、０．２２５μｇ、０．１５μｇ及び０．０７５μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ含有量を有するＬＮＰ製剤（ＬＮＰ製剤の担体成分はモル比５０：１０：３８．５：１．５のカチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質であり、ここで、カチオン性脂質はＹＫ－００９又は化合物２５である）を調製し、上記と同じ方法で、調製したＬＮＰ製剤の細胞内トランスフェクト活性を検出した。結果を表４に示す。
【0193】
【表3】
【0194】
【表4】
【0195】
表３及び図５から分かれるように、異なるカチオン性脂質から調製されたＦｌｕｃ－ｍＲＮＡのＬＮＰ製剤では、ＹＫ－００９は蛍光吸収が最も強く、ＲＬＵ値が５４７９３７３であり、ＹＫ－００１、ＹＫ－００２、ＹＫ－００５、ＹＫ－００６及びＹＫ－００８の蛍光吸収も非常に強く、いずれも１０６～１０７であった。ＹＫ－００９、ＹＫ－００６、ＹＫ－００１、ＹＫ－００５、ＹＫ－００２及びＹＫ－００８のＲＬＵ値はぞれぞれ化合物２３の８．４倍、４．１倍、３．４倍、２．２、２．０倍及び１．９倍であった。ＹＫ－０１０は、蛍光吸収が最も弱く、ＲＬＵ値が９３８０１であった。ＹＫ－００４、化合物２３、化合物２７及びＭＣ３の蛍光吸収も非常に弱かった。ＹＫ－００９のＲＬＵ値がぞれぞれＹＫ－０１０、ＹＫ－００４、化合物２３、化合物２７及びＭＣ３の５８倍、３９倍、８倍、１３倍及び４２倍であった。
【0196】
表４及び図６から、ＹＫ－００９及び化合物２５から調製されたＬＮＰ製剤の蛍光吸収には大きな差別があり、０．０７５μｇ、０．１５μｇ、０．２２５μｇ及び０．３μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤、ＹＫ－００９製剤の蛍光吸収がそれぞれ化合物２５製剤の３．７倍、４．０倍、７．０倍及び４．４倍であったことが分かった。
【0197】
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータを分析した。ここで、ＹＫ－００９、ＹＫ－００６、ＹＫ－００１、ＹＫ－００５、ＹＫ－００２及びＹＫ－００８は化合物２３と有意差があり、ＹＫ－００９、ＹＫ－００６、ＹＫ－００１、ＹＫ－００５、ＹＫ－００２及びＹＫ－００８は化合物２７と有意差があった。ＹＫ－００４及びＹＫ－０１０以外の全ての化合物は、ＭＣ３と有意差があった。０．０７５μｇ、０．１５μｇ、０．２２５μｇ及び０．３μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤、ＹＫ－００９は、化合物２５といずれも有意差があった。
【0198】
構造の点から見ると、ＹＫ－００９と比較して、ＹＫ－００１は、Ｌ１基におけるＣが１つ多いが他の構造が全く同一であり、ＹＫ－００２はＧ１基におけるＣが１つ多いが他の構造が全く同一であり、ＹＫ－００４はＧ２基におけるＣが２つ少ないが他の構造が全く同一であり、ＹＫ－００６はＧ２基におけるＣが１つ少ないが他の構造が全く同一であり、ＹＫ－０１０はＬ２基の各二本鎖におけるＣがそれぞれ１つ少ないが他の構造が全く同一であり、化合物２３はＧ１基におけるＣが４つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ少なく、Ｇ２基におけるＣが４つ多く、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少ないが他の構造が全く同一であり、化合物２５はＧ１基におけるＣが２つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ多く、Ｇ２基におけるＣが２つ多く、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少ないが他の構造が全く同一であり、化合物２７はＧ１基におけるＣが４つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ少なく、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少ないが他の構造が全く同一である。
【0199】
これにより、化合物の構造と細胞内のトランスフェクト効率との間に対応関係がなく、構造的差異が小さい化合物はトランスフェクション効率に非常に大きな差異を有する可能性が高いことが分かる。例えば、ＹＫ－００９と比較すると、ＹＫ－０１０、ＹＫ－００４、化合物２３及び化合物２７は構造がわずかに異なるが、ＹＫ－００９の細胞トランスフェクト効率はそれぞれこれらのカチオン性脂質化合物の５８倍、３９倍、８倍及び１３倍であった。ＹＫ－００９と化合物２５は構造の違いがわずかで、細胞トランスフェクト効率の差が７倍にもなった。したがって、構造が似ている化合物が同様のトランスフェクション効率を持たなければならないというわけではなく、トランスフェクション効率は大きく異なる可能性がある。トランスフェクション効率の高いカチオン性脂質化合物を選別することは容易ではなく、さまざまな設計と多くの創造的な努力が必要である。
【0200】
２．細胞生存率の測定
１．５μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤（ＬＮＰ製剤の担体成分は、モル比５０：１０：３８．５：１．５のカチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質であり、ここで、カチオン性脂質は表１に記載のカチオン性脂質である）を９６ウェルプレート的細胞培養培地に加え、さらに２４時間培養した後、ＣＣＫ－８溶液を各ウェルに１０μＬ添加し、培養プレートをインキュベーター内で１時間インキュベートした。４５０ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーで測定した。結果を表４に示す。
１．５μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤（ＬＮＰ製剤の担体成分は、モル比５０：１０：３８．５：１．５のカチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質であり、ここで、カチオン性脂質は表１に記載のカチオン性脂質である）を９６ウェルプレート的細胞培養培地に加え、さらに２４時間培養した後、ＣＣＫ－８溶液を各ウェルに１０μＬ添加し、培養プレートをインキュベーター内で１時間インキュベートした。４５０ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーで測定した。結果を表４に示す。
【0201】
カチオン性脂質ＹＫ－００９及び化合物２５から調製されたＬＮＰ製剤の細胞毒性を比較するために、１．５μｇ、１．１２５μｇ、０．７５μｇ及び０．３７５μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ含有量を有するＬＮＰ製剤（ＬＮＰ製剤の担体成分はモル比５０：１０：３８．５：１．５のカチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質であり、ここで、カチオン性脂質はＹＫ－００９又は化合物２５である）を調製した。細胞生存率の測定方法は上記と同じである。結果を表６に示す。
【0202】
【表5】
【0203】
【表6】
【0204】
表５及び図７から、異なるカチオン性脂質によって調製されたＦｌｕｃ－ｍＲＮＡのＬＮＰ製剤は非常に異なる細胞毒性を有することが分かった。細胞生存率は、ＹＫ－００９が１００％で最も高く、ＹＫ－０１１が９８％であったが、ＹＫ－０１０が７７％、ＹＫ－００３が８４％、ＹＫ－００１が８５％、化合物２３が８７％、化合物２７が８４％、ＭＣ３が８８％であった。これらは明らかにＹＫ－００９よりも低かった。
【0205】
表６及び図８から、ＹＫ－００９及び化合物２５から調製されたＬＮＰ製剤は、細胞に対して非常に異なる阻害活性を有していたことが分かった。ここで、１．５μｇ、１．１２５μｇ、０．７５μｇ及び０．３７５μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ含有量を有するＬＮＰ製剤、ＹＫ－００９製剤は細胞生存率がいずれも１００％であるが、細胞に対する化合物２５製剤の阻害活性は、ＹＫ－００９製剤の阻害活性よりも最大９％低かった。
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータを分析した。ここで、ＹＫ－００９、ＹＫ－０１１、ＹＫ－００６及びＹＫ－００７は、化合物２３、化合物２７及びＭＣ３と比べて細胞毒性において有意差があった。
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータを分析した。ここで、ＹＫ－００９、ＹＫ－０１１、ＹＫ－００６及びＹＫ－００７は、化合物２３、化合物２７及びＭＣ３と比べて細胞毒性において有意差があった。
【0206】
以上の実験結果から、カチオン性脂質化合物の構造と細胞毒性との間に対応関係がなく、構造的差異が小さい化合物は細胞毒性に非常に大きな差異を有することが分かった。例えば、ＹＫ－００９と比較すると、ＹＫ－０１０はＬ２基の各二本鎖におけるＣがそれぞれ１つ少なく、他の構造が全く同一であるが、細胞生存率が２３％低下した。ＹＫ－００２はＧ１基におけるＣが１つ多く、他の構造が全く同一であるが、細胞生存率が１１％低下した。化合物２３は、Ｇ１基におけるＣが４つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ少なく、Ｇ２基におけるＣが４つ多く、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少なく、他の構造が全く同一であるが、細胞生存率が１３％低下した。化合物２５はＧ１基におけるＣが２つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ多く、Ｇ２基におけるＣが２つ多く、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少なく、他の構造が全く同一であるが、細胞生存率が９％低下した。化合物２７はＧ１基におけるＣが４つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ少なく、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少なく、他の構造が全く同一であるが、細胞生存率が１６％低下した。ＹＫ－００９はＹＫ－０１０、ＹＫ－００２、化合物２３、化合物２７及び化合物２５と構造が似ているが、細胞毒性がそれぞれ２３％、１１％、１３％、１６％及び９％と低かった。このように、微小の構造違いを有するカチオン性脂質は、著しく異なる細胞毒性をもたらす可能性があることが分かった。
【0207】
実施例７：インビボでカチオン性脂質（ＬＮＰ）が送達担体としての性能の検証
さらに、本発明者らの設計したカチオン性脂質送達担体によってマウスに送達されるｍＲＮＡのタンパク質発現及び持続期間も検証した。インビボ実験では、さらに、本発明のＬＮＰ送達担体がｍＲＮＡを効果的に体内に送達し、効率的かつ持続的に発現できることが証明された。
さらに、本発明者らの設計したカチオン性脂質送達担体によってマウスに送達されるｍＲＮＡのタンパク質発現及び持続期間も検証した。インビボ実験では、さらに、本発明のＬＮＰ送達担体がｍＲＮＡを効果的に体内に送達し、効率的かつ持続的に発現できることが証明された。
【0208】
１０μｇの Ｆｌｕｃ－ｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤を４～６週齢、体重１７～１９ｇの雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス体内に筋肉内注射した。投与後、所定の時点（３時間、６時間、２４時間、４８時間、及び７２時間）でマウスに蛍光イメージング基質を腹腔内注射した。マウスを５分間自由に移動させた後、小動物ライブイメージャーを使用して、ＬＮＰによって運ばれるｍＲＮＡによってマウスにおいて発現されたタンパク質の平均放射線強度（蛍光発現強度に相当）を検出した。検出結果を表５及び図７に示す。
【0209】
カチオン性脂質ＹＫ－００９及び化合物２５から調製されたＬＮＰ製剤のマウスにおけるタンパク質発現及び持続期間を比較するために、１０μｇ、７．５μｇ、５μｇ及び２．５μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ含有量を有するＬＮＰ製剤（ＬＮＰ製剤の担体成分はモル比５０：１０：３８．５：１．５のカチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質であり、ここで、カチオン性脂質はＹＫ－００９又は化合物２５である）をそれぞれ調製した。マウス生体撮像の実験方法は上記と同じである。結果を表８に示す。
【0210】
【表7】
【0211】
【表8】
【0212】
表７及び図９から、異なるカチオン性脂質から調製されたＦｌｕｃ－ｍＲＮＡのＬＮＰ製剤は、マウス体内での発現強度が大きく異なることが分かった。３ｈから７２ｈまでに、ＹＫ－００３及びＹＫ－００９の発現強度がいずれも最も高いから、それにより調製されたＬＮＰ製剤がインビボで高度かつ持続的に発現されたことが示された。３ｈの場合に、ＹＫ－００３及びＹＫ－００９の平均放射線強度はそれぞれ１５００８２０及び１２３４２８０であり、ＹＫ－００４及びＹＫ－０１０のほうがそれぞれ６９６４０及び６０１００で最低であった。この四つが持っているｍＲＮＡは、動物体内における発現の最高値と最低値の間でＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ発現が２０倍以上異なっていた。７２ｈの場合に、ＹＫ－００３及びＹＫ－００９の平均放射線強度はそれぞれ３９５３８与２９４３５であり、ＹＫ－００４及びＹＫ－０１０の平均放射線強度は２０６６及び８１０．２で最低であった。この四つが持っているｍＲＮＡは、動物体内における発現の最高値と最低値の間でＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ発現が５０倍以上異なっていた。化合物２３及び２７の値は、３ｈの時点でそれぞれ５５４６００及び６３２４５０であるが、６ｈ～４８ｈの間に急速に減少し、７２ｈの時点で４８０１及び５５１２だけであるから、それらにより調製されたＬＮＰ製剤が持っているｍＲＮＡがマウス体内で急速に分解され、又は代謝されたことが分かった。ＭＣ３が持っているｍＲＮＡは、いずれの時点でも発現が非常に低かったことから、これが持っているｍＲＮＡがインビボで低発現され、かつ発現が持続していなかったことが示された。
【0213】
表８及び図１０から、マウス体内において、ＹＫ－００９及び化合物２５から調製されたＬＮＰ製剤の発現には大きな差別があり、２．５μｇ、５．０μｇ、７．５μｇ及び１０μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ含有量を有するＬＮＰ製剤では、ＹＫ－００９の発現は、３ｈ時点で化合物２５の１．６～２．１倍、６ｈ時点で１．４～１．７倍、２４ｈ時点で５．２～５．５倍、４８ｈ時点で６．５～７．１倍、７２ｈ時点で６．１～６．８倍となった。異なるＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ含有量のＬＮＰ製剤では、ＹＫ－００９製剤はいずれも体内で長時間高度に発現し、化合物２５製剤は、３ｈ及び６ｈ時点でより高い発現を維持できるが、６～４８ｈ時点で急速に減少した。
【0214】
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータを分析した。ここで、ＬＮＰが持っているｍＲＮＡの動物体内での高発現及び持続発現の点で、ＹＫ－００３及びＹＫ－００９は、化合物２３とは有意差があり、ＹＫ－００３及びＹＫ－００９は、化合物２５とは有意差があり、ＹＫ－００３及びＹＫ－００９は、化合物２７とは有意差があり、ＹＫ－００３及びＹＫ－００９は、ＭＣ３とは有意差があった。
【0215】
以上の実験結果から、カチオン性脂質化合物の構造とＬＮＰが持っているｍＲＮＡが動物体内における高発現かつ持続発現との間に対応関係がないことが分かった。構造的差異が小さいカチオン性脂質化合物は、マウス体内においてｍＲＮＡ発現促進に大きな差別がある。例えば、ＹＫ－００９と比較すると、ＹＫ－００４は、Ｇ２基におけるＣが２つ少ないが他の構造が全く同一であり、ＹＫ－０１０はＬ２基の各二本鎖におけるＣがそれぞれ１つ少ないが他の構造が全く同一であり、化合物２３はＧ１基におけるＣが４つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ少なく、Ｇ２基におけるＣが４つ多く、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少ないが他の構造が全く同一であり、化合物２７はＧ１基におけるＣが４つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ少なく、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少ないが他の構造が全く同一である。しかし、３ｈの時点で、この四つが持っているｍＲＮＡは、動物体内における発現の点で、最高値と最低値が２０倍以上異なった。７２ｈの時点で、この四つが持っているｍＲＮＡは、動物体内における発現の点で、最高値と最低値が５０倍以上異なった。
【0216】
ＹＫ－００９と比較すると、化合物２５は、Ｇ１基におけるＣが２つ多く、Ｌ１基におけるＣが１つ多く、Ｇ２基におけるＣが２つ多く、Ｌ２基の一本鎖におけるＣが１つ少なく、他の構造が全く同一であるが、ＹＫ－００９及び化合物２５から調製された、２．５μｇ、５．０μｇ、７．５μｇ及び１０μｇのＦｌｕｃ－ｍＲＮＡ含有量を有するそれぞれのＬＮＰ製剤は、３ｈの時点で、ＹＫ－００９が最高で化合物２５の２．１倍となり、６ｈ時点で、ＹＫ－００９が最高で化合物２５の１．７倍となり、２４ｈ時点で、ＹＫ－００９が最高で化合物２５の５．５倍となり、４８ｈ時点で、ＹＫ－００９が最高で化合物２５の７．１倍となり、７２ｈ時点で、ＹＫ－００９が最高で化合物２５の７．２倍となった。
【0217】
結論
上記インビトロ及びインビボでＬＮＰ送達担体の性能を検証するための実験により、カチオン性脂質化合物の構造と、細胞内トランスフェクト効率、細胞に対する毒性、及び動物体内での高度かつ持続的な発現との間に明らかな対応関係がないことが明らかになった。構造的差別が小さい化合物でも、トランスフェクト効率及び／又は細胞に対する毒性、細胞内での高発現において非常に大きな差別がある可能性がある。例えば、本願に係る化合物ＹＫ－００９及びＹＫ－０１０は、細胞トランスフェクト効率において６０倍近くの差があり、トランスフェクトされた細胞に対する毒性において２５％以上の差がある。また、化合物ＹＫ－００３及びＹＫ－０１０はマウス体内的発現かつ持続的な発現において５０倍近くの差がある。したがって、高いトランスフェクト効率及び細胞に対する毒性を有するとともに、マウス体内における高度かつ持続的な発現ができるように、適切なカチオン性脂質化合物を選別することが困難である。
上記インビトロ及びインビボでＬＮＰ送達担体の性能を検証するための実験により、カチオン性脂質化合物の構造と、細胞内トランスフェクト効率、細胞に対する毒性、及び動物体内での高度かつ持続的な発現との間に明らかな対応関係がないことが明らかになった。構造的差別が小さい化合物でも、トランスフェクト効率及び／又は細胞に対する毒性、細胞内での高発現において非常に大きな差別がある可能性がある。例えば、本願に係る化合物ＹＫ－００９及びＹＫ－０１０は、細胞トランスフェクト効率において６０倍近くの差があり、トランスフェクトされた細胞に対する毒性において２５％以上の差がある。また、化合物ＹＫ－００３及びＹＫ－０１０はマウス体内的発現かつ持続的な発現において５０倍近くの差がある。したがって、高いトランスフェクト効率及び細胞に対する毒性を有するとともに、マウス体内における高度かつ持続的な発現ができるように、適切なカチオン性脂質化合物を選別することが困難である。
【0218】
本願では、独特の設計及び多量のスクリーニングにより、例えばＹＫ－００９、ＹＫ－００３、ＹＫ－００６、ＹＫ－００８及びＹＫ－０１１などのいくつかの化合物を発見した。これらの化合物は、従来技術の他の化合物と比較して、高い細胞トランスフェクト効率、低い細胞に対する毒性又は無毒性、並びに動物体内での高発現及び持続的な発現により核酸を送達することができ、予想以外の技術効果が得られた。
【0219】
上記の説明は、本開示の例示的な実施形態にすぎず、添付の特許請求の範囲によって決定される本開示の保護範囲を限定することを意図したものではない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【手続補正書】
【提出日】2024-06-24
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩：
【化1】
。
【請求項2】
担体を含む組成物であって、前記担体がカチオン性脂質を含み、前記カチオン性脂質が請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する、組成物。
【請求項3】
前記担体に対する前記カチオン性脂質のモル比が３０％～７０％である、請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
前記担体が中性脂質をさらに含む請求項２に記載の組成物。
【請求項5】
前記カチオン性脂質と前記中性脂質とのモル比が１：１～１０：１である、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
前記中性脂質にはホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、セラミド、ステロール及びそれらの誘導体のうちの一種又は複数種が含まれる請求項４に記載の組成物。
【請求項7】
前記中性脂質が、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロ－ル）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１－ステアリル－２－オレオイル－ステアロイルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ、１－ｓｔｅａｒｏｙｌ－２－ｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、及びこれらの混合物からなる群より選択される一種又は複数種である、請求項４に記載の組成物。
【請求項8】
前記中性脂質がＤＯＰＥ及び／又はＤＳＰＣである、請求項７に記載の組成物。
【請求項9】
前記担体が構造脂質をさらに含む請求項２に記載の組成物。
【請求項10】
前記カチオン性脂質と前記構造脂質とのモル比が１：１～５：１である、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
前記構造脂質が、コレステロール、非ステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチン、トマチン、ウルソール酸、α－トコフェロール、及び副腎皮質ホルモンからなる群より選択される一種又は複数種である、請求項９に記載の組成物。
【請求項12】
前記構造脂質がコレステロールである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
前記担体がポリマー共役脂質をさらに含む請求項２に記載の組成物。
【請求項14】
担体に対する前記ポリマー共役脂質のモル比が０．５％～５％である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
前記ポリマー共役脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールからなる群より選択される一種又は複数種である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項16】
前記ポリマー共役脂質が、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール２０００（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）、ジミリストイルグリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）、及びメトキシポリエチレングリコールジテトラデシルアセトアミド（ＡＬＣ－０１５９）からなる群より選択される一種又は複数種である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項17】
前記担体は、カチオン性脂質、中性脂質、構造脂質及びポリマー共役脂質を含み、前記カチオン性脂質と、前記中性脂質と、前記構造脂質と、前記ポリマー共役脂質とのモル比が（２５～６５）：（５～２５）：（２５～４５）：（０．５～５）である、請求項２に記載の組成物。
【請求項18】
前記カチオン性脂質と、前記中性脂質と、前記構造脂質と、前記ポリマー共役脂質とのモル比が５０：１０：３８．５：１．５である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項19】
平均粒子径が１０ｎｍ～２１０ｎｍであり、多分散指数が５０％以下であるナノ粒子製剤である、請求項２～１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項20】
平均粒子径が１００ｎｍ～２０５ｎｍであり、多分散指数が３０％以下であるナノ粒子製剤である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項21】
前記カチオン性脂質が、一種又は複数種のイオン化可能な他の脂質化合物をさらに含む請求項２～１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項22】
治療剤又は予防剤をさらに含む請求項２～１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項23】
前記担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１０：１～３０：１である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項24】
前記担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１５：１～２５：１である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項25】
前記担体と前記治療剤又は予防剤との質量比が１６：１である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項26】
前記治療剤又は予防剤には核酸分子、小分子化合物、ポリペプチド、およびタンパク質のうちの一種又は複数種が含まれる請求項２２に記載の組成物。
【請求項27】
前記治療剤又は予防剤が免疫応答を引き起こすことができるワクチン又は化合物である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項28】
前記治療剤又は予防剤が核酸である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項29】
前記治療剤又は予防剤がリボ核酸（ＲＮＡ）である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項30】
前記治療剤又は予防剤がデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項31】
前記ＲＮＡが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ－基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項２９に記載の組成物。
【請求項32】
前記ＲＮＡがｍＲＮＡである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項33】
薬学的に許容される賦形剤の一種又は複数種をさらに含む請求項２２に記載の組成物。
【請求項34】
薬学的に許容される希釈剤の一種又は複数種をさらに含む請求項２２に記載の組成物。
【請求項35】
請求項１に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又は、請求項２～３４のいずれか１項に記載の組成物の、核酸医薬品、遺伝子ワクチン、低分子医薬品、ポリペプチド医薬品、又はタンパク質医薬品の製造における使用。
【請求項36】
請求項１に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又は、請求項２～３４のいずれか１項に記載の組成物の、それを必要とする哺乳動物の疾患又は病態を治療するための医薬品の製造における使用であって、前記疾患又は病態が、感染症、癌及び増殖性疾患、遺伝性疾患、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患と腎血管疾患、及び代謝性疾患からなる群より選択される、使用。
【請求項37】
前記感染症が、コロナウイルス、インフルエンザウイルス又はＨＩＶウイルスに起因する疾患、小児肺炎、リフトバレー熱、黄熱、狂犬病、及び複数種の疱疹からなる群より選択される請求項３６に記載の使用。
【請求項38】
前記哺乳動物がヒトである請求項３６～３７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項39】
前記組成物が静脈内、筋肉内、皮内、皮下、鼻腔内、又は吸入によって投与される、請求項３６～３７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項40】
前記組成物が皮下によって投与される請求項３９に記載の使用。
【請求項41】
０．００１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記哺乳動物に前記医薬品を投与する、請求項３６～３７のいずれか１項に記載の使用。
【国際調査報告】