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特表2025-501362キナーゼ阻害剤として使用される化合物およびその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-17

(54)【発明の名称】キナーゼ阻害剤として使用される化合物およびその使用

(51)【国際特許分類】

C07D 403/14 20060101AFI20250109BHJP

A61K 31/506 20060101ALI20250109BHJP

C07D 413/14 20060101ALI20250109BHJP

C07D 401/14 20060101ALI20250109BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20250109BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20250109BHJP

【ＦＩ】

C07D403/14 CSP

A61K31/506

C07D413/14

C07D401/14

A61P43/00 111

A61P35/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024540994

(86)(22)【出願日】2023-03-15

(85)【翻訳文提出日】2024-07-05

(86)【国際出願番号】 CN2023081557

(87)【国際公開番号】W WO2023185468

(87)【国際公開日】2023-10-05

(31)【優先権主張番号】202210348367.7

(32)【優先日】2022-04-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519419832

【氏名又は名称】ティーワイケーメディシンズインコーポレーテッド

【氏名又は名称原語表記】ＴＹＫＭＥＤＩＣＩＮＥＳＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ１４０３－２，ＢｌｏｃｋＡ，ＣｈａｎｇｘｉｎｇＷｏｒｌｄＴｒａｄｅＢｕｉｌｄｉｎｇ，Ｎｏ．１２７８，ＭｉｎｇｚｈｕＲｏａｄ，ＣｈａｎｇｘｉｎｇＥｃｏｎｏｍｉｃＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＺｏｎｅ，Ｈｕｚｈｏｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ３１３１００，ＣＨＩＮＡ

(71)【出願人】

【識別番号】523466400

【氏名又は名称】ティーワイケーメディシンズ（ジョンジョウ），インコーポレーテッド

【氏名又は名称原語表記】ＴＹＫＭＥＤＩＣＩＮＥＳ（ＺＨＥＮＧＺＨＯＵ），ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】１５／Ｆ，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ１，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＬｉｎｋｏｎｇＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰａｒｋ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＣｏｒｎｅｒＯｆＴｈｅＩｎｔｅｒｓｅｃｔｉｏｎＯｆＨｕａｎｇｈａｉＲｏａｄＡｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｅｃｏｎｄＳｔｒｅｅｔ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＡｉｒｐｏｒｔＥｃｏｎｏｍｙＺｏｎｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｈｅｎａｎ４５１１６２，Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110003971

【氏名又は名称】弁理士法人葛和国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】リー，ジュン

(72)【発明者】

【氏名】ウー，ユーション

(72)【発明者】

【氏名】ニウ，チョンシャン

(72)【発明者】

【氏名】グオ，ジョンウェイ

(72)【発明者】

【氏名】リィアン，アペン

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC42

4C086BC71

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA15

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZC20

(57)【要約】

本発明は、窒素原子を複素環原子とする複素環化合物の薬物合成の分野に属し、具体的に、キナーゼ阻害剤として使用される化合物およびその使用に関し、また、当該化合物の遊離塩基結晶形の製造に関する。当該キナーゼ阻害剤として使用される化合物は式１で表される化合物、あるいはその重水素化物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグである。以上の化合物は、生物活性実験により、ＥＧＦＲおよびＨｅｒ２のエクソン２０挿入突然変異、ＥＧＦＲのエクソン１９欠失、エクソン２１の点突然変異に良い抑制活性を有し、関連薬物の原料薬として有用であることが実証された。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

キナーゼ阻害剤として用いられる化合物であって、式１で表される化合物、あるいはその重水素化物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグであることを特徴とする、前記化合物。

【化1】

（式１において、ＸはＣＨ、Ｎから選ばれる。
Ｒ_１は

【化2】

から選ばれ、Ｒ_５はＨ、Ｃ１－Ｃ３アルキル基、Ｃ１－Ｃ３フッ化アルキル基である。
Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２はそれぞれ独立にメチル基または重水素化メチル基から選ばれる。
Ｒ_３はＣ１－Ｃ３アルキル基、Ｃ１－Ｃ３ハロアルキル基から選ばれる。
Ｒ_４０、Ｒ_４１、Ｒ_４２はそれぞれ独立にＨ、Ｄ、Ｆから選ばれる。）

【請求項2】

式２で表される化合物、あるいはその重水素化物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグであることを特徴とする、請求項１に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【化3】

【請求項3】

式２において、ＸはＣＨ、Ｎから選ばれ、Ｒ_３は－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３から選ばれ、Ｒ_４０、Ｒ_４１はいずれもＨで、Ｒ_４２はＨまたはＦから選ばれることを特徴とする、請求項２記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【請求項4】

式３で表される化合物、あるいはその重水素化物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグであることを特徴とする、請求項１に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【化4】

【請求項5】

式３において、ＸはＣＨ、Ｎから選ばれ、Ｒ_３は－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３で、Ｒ_４０、Ｒ_４１はいずれもＨで、Ｒ_４２はＨまたはＦから選ばれ、Ｒ_５は－ＣＨ_３、－ＣＦ_３から選ばれることを特徴とする、請求項４に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【請求項6】

式１で表される化合物は、以下：

【化5】

であることを特徴とする、請求項１に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【請求項7】

前記化合物は、結晶形、無定形または前記溶媒和物で、前記溶媒和物に含まれる溶媒は、非水溶媒または非水溶媒と水からなる混合溶媒であることを特徴とする、請求項１～６のいずれか一項に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【請求項8】

構造が式Ａで表される化合物で、

【化6】

結晶形が遊離塩基結晶形Ｉで、当該結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルでは、２θが９．７６°±０．２°、１０．４５°±０．２°、１６．５４°±０．２°、１８．６６°±０．２°、２０．０７°±０．２°、２５．９０°±０．２°の箇所に特徴的な回折ピークがあることを特徴とする、請求項７に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【請求項9】

前記遊離塩基結晶形Ｉの粉末Ｘ線回折スペクトルでは、２θが９．０７°±０．２°、９．７６°±０．２°、１０．４５°±０．２°、１１．５３°±０．２°、１１．８０°±０．２°、１２．９１°±０．２°、１３．７９°±０．２°、１４．６７°±０．２°、１５．０８°±０．２°、１５．６３°±０．２°、１６．５４°±０．２°、１７．５０°±０．２°、１８．６６°±０．２°、２０．０７°±０．２°、２１．１０°±０．２°、２３．２９°±０．２°、２４．１６°±０．２°、２５．９０°±０．２°の箇所に特徴的な回折ピークがあることを特徴とする、請求項８に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物。

【請求項10】

ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異による関連疾患を治療する薬物の製造における、請求項１～９のいずれか一項に記載のキナーゼ阻害剤として用いられる化合物の使用。

【請求項11】

前記ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異は、ＥＧＦＲエクソン２０挿入突然変異、ＨＥＲ２エクソン２０挿入突然変異、ＥＧＦＲエクソン１９欠失、ＥＧＦＲエクソン２１の点突然変異、ＥＧＦＲエクソン２０の点突然変異のうちの一つまたは二つ以上の組み合わせを含むことを特徴とする、請求項１０に記載の使用。

【請求項12】

前記のＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異は、ＥＧＦＲＤｅｌ１９／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ突然変異、ＥＧＦＲＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ突然変異から選ばれることを特徴とする、請求項１１に記載の使用。

【請求項13】

前記疾患は、前記ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異による癌であることを特徴とする、請求項１０、１１または１２に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、窒素原子を複素環原子とする複素環化合物の薬物合成の分野に属し、具体的に、キナーゼ阻害剤として使用される化合物およびその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

上皮成長因子受容体は受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーに属し、ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ１、ＨＥＲ２／ＥＲＢＢ２／ＮＥＵ、ＨＥＲ３／ＥＲＢＢ３およびＨＥＲ４／ＥＲＢＢ４を含む。上皮成長因子受容体はホモ二量体化またはヘテロ二量体化によってそのチロシンキナーゼ活性を活性化させ、そしてその基質をリン酸化させることで、細胞内におけるそれに関連するいくつかの下流経路、たとえば、細胞生存に関与するＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲ経路や細胞増殖に関与するＲＡＳ－ＲＡＦ－ＭＥＫ－ＥＲＫ経路などを活性化させる。上皮成長因子受容体の突然変異や増幅などはヘテロ二量体キナーゼの活性化を引き起こすことで、ヒトの多くの疾患、たとえば、悪性腫瘍の発生につながる。たとえば、非小細胞肺癌の患者のうち、米国の患者における約１０％以上の患者がＥＧＦＲ突然変異があり、亜州の患者におけるＥＧＦＲ突然変異の患者の比率が５０％近くに達する。同時に、非小細胞肺癌の患者において、ＨＥＲ２突然変異のある発症率が約２－４％である。

【0003】

ＥＧＦＲ突然変異は主に欠失、挿入および点突然変異などを含み、中では、エクソン１９欠失およびエクソン２１のＬ８５８Ｒ点突然変異はＥＧＦＲ突然変異の９０％近くを占める。このようなＥＧＦＲ突然変異のある腫瘍患者には、現在、既に市販のＥＧＦＲ－ＴＫＩは第一世代のイレッサ、タルセバ、コンマナ、第二世代のアファチニブおよびダコミチニブならびに第三世代のオシメルチニブを含む。ほかの１０％のＥＧＦＲ突然変異は主にＥＧＦＲのエクソン１８および２０に関わり、そして、ＥＧＦＲエクソン２０の挿入突然変異はＥＧＦＲ突然変異全体の９％程度を占める。ＨＥＲ２突然変異のある腫瘍患者は、最も見られるＨＥＲ２突然変異はＨＥＲ２エクソン２０の挿入突然変異である。

【0004】

ＴＡＫ－７８８はＥＧＦＲおよびＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異に治療効果があり、当該化合物は既に米国で市販され、報告された臨床実験の結果から、客観的緩和率が４３％である。最近、ＤＺＤ９００８はＥＧＦＲまたはＨＥＲ２突然変異の晩期非小細胞肺癌の治療に効果があり、ＥＧＦＲエクソン２０ｉｎｓの客観的緩和率が４０％で、治療効果が満足できるものではないという報告がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

臨床におけるＥＧＦＲおよびＨＥＲ２突然変異の患者、特にＥＧＦＲ、ＨＥＲ２エクソン２０挿入突然変異の患者の薬物の需要を満足するため、ＷＯ２０２１１８０２３８では、一連の優れたＥＧＦＲおよびＨＥＲ２エクソン２０挿入突然変異ならびにＥＧＦＲエクソン１９欠失およびエクソン２１のＬ８５８Ｒ点突然変異に対する活性を有する化合物が開示され、関連疾患を治療する薬物として開発される潜在的な可能性が高い。中では、トリペンタアミン（ｔｒｉｐｅｎｔａａｍｉｎｅ）構造を有する化合物に関し、さらなる研究では、当該トリペンタアミン構造の立体配置は非常に重要で、トランスからシスになると、体内における薬物効果が良くなり、そして関連疾患の異なる突然変異にも良い治療作用があることが示された。後続の研究開発では、より安定で生物学的利用能がより高い遊離塩基の化合物を見つけるため、本発明では、遊離塩基の化合物の多形の研究およびスクリーニングを行った。

【0006】

本発明の目的は、キナーゼ阻害剤として使用される化合物であって、シストリペンタアミン構造に属し、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２エクソン２０挿入突然変異、ＥＧＦＲエクソン１９欠失およびエクソン２１の点突然変異に良い抑制活性を有する化合物を提供することである。本発明の化合物は特許ＷＯ２０２１１８０２３８における相応するトランス構造の化合物よりも薬物効果が良く、適用性が広い。

【0007】

本発明の第二の目的は、ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異による関連疾患を治療する薬物の製造における上記化合物の使用を提供することにある。
また、本発明は、上記化合物の遊離塩基の結晶形の製造に関し、多形の研究を行うことで、安定性が高くかつ生物学的利用能がより高い実用的な結晶形を確定する。

【課題を解決するための手段】

【0008】

以上の目的を実現するため、本発明で使用される技術方案は以下の通りである。
キナーゼ阻害剤として使用される化合物であって、式１で表される化合物、あるいはその重水素化物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグである化合物。

【化1】

（式１において、ＸはＣＨ、Ｎから選ばれる。
Ｒ_１は

【化2】

【0009】

以上の化合物は、生物活性実験により、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２の突然変異に良い抑制活性を有し、関連薬物の原料薬として有用であることが実証された。
以上の原料薬に基づき、原料薬の「薬学的に許容される塩」とは薬学的に許容される、母体化合物の所望の薬理学的活性を有する塩である。このような塩は以下のようなものを含む。

【0010】

無機酸と形成した酸付加塩で、当該無機塩は、たとえば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などで、典型的な無機酸塩は塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩から選ばれる。有機酸と形成した酸付加塩で、当該有機酸は、たとえば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンチルプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、琥珀酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２－エタンジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４－クロロベンゼンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、４－トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、グルセプチン酸、４，４’－メチレンビス（３－ヒドロキシ２－エン－１－カルボン酸）、３－フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔ－ブチル酢酸、ドデシル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などで、あるいは母体化合物に存在する酸性プロトンが有機塩基（たとえば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタモール、Ｎ－メチルグルカミンなど）と配位してなる塩である。典型的な有機酸塩はギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、ピルビン酸塩、グリコール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、サリチル酸塩、ピクリン酸塩、グルタミン酸塩、アスコルビン酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩から選ばれる。当該薬学的に許容される塩は無毒性のものであることは容易に理解される。

【0011】

溶媒和物は溶媒を含有する化合物で、たとえば、水和物、ジメチルスルホキシド和物などである。
プロドラッグとは、関連疾患を治療する時、代謝または化学プロセスの化学変換によって本発明における化合物、塩、または溶媒和物を生成する化合物である。

【0012】

好適に、上記キナーゼ阻害剤として使用される化合物は式２で表される化合物、あるいはその重水素化物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグである。

【化3】

さらに好適に、式２において、ＸはＣＨ、Ｎから選ばれ、Ｒ_３は－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３から選ばれ、Ｒ_４０、Ｒ_４１はいずれもＨで、Ｒ_４２はＨまたはＦから選ばれる。

【0013】

好適に、上記キナーゼ阻害剤として使用される化合物は式３で表される化合物、あるいはその重水素化物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグである。

【化4】

式３において、ＸはＣＨ、から選ばれ、Ｒ_３は－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３で、Ｒ_４０、Ｒ_４１はいずれもＨで、Ｒ_４２はＨまたはＦから選ばれ、Ｒ_５は－ＣＨ_３、－ＣＦ_３から選ばれる。

【0014】

好適に、式１で表される化合物は以下のものである：

【化5】

【0015】

ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異による関連疾患を治療する薬物の製造のための上記キナーゼ阻害剤として使用される化合物の使用。
上記化合物はＥＧＦＲ、ＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異に良い抑制活性を有し、ＥＧＦＲエクソン１９欠失、エクソン２１の点突然変異にも良い抑制活性を有する。

【0016】

好適に、前記ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異はＥＧＦＲエクソン２０挿入突然変異、ＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異、ＥＧＦＲエクソン１９欠失、ＥＧＦＲエクソン２０点突然変異、ＥＧＦＲエクソン２１の点突然変異のうちの一つまたは二つ以上の組み合わせを含む。生物活性実験により、上記化合物は上記突然変異の種類に良い抑制効果があることが実証された。

【0017】

さらに好適に、前記ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異はＥＧＦＲＤｅｌ１９／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ突然変異、ＥＧＦＲＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ突然変異から選ばれ、上記化合物は上記突然変異の種類に良い抑制効果がある。

【0018】

好適に、前記疾患は前記ＥＧＦＲ突然変異および／またはＨＥＲ２突然変異による癌である。上記化合物はほかの薬物と併用し、癌の治療に使用してもよい。併用されるほかの薬物はＥＲＫ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤でもよい。
好適に、前記化合物は結晶形、無定形または前記溶媒和物で、前記溶媒和物に含まれる溶媒は非水溶媒または非水溶媒と水からなる混合溶媒である。

【0019】

より化合物の安定性および活性を向上させるため、一般式１で表される化合物に対し、一部を選んで結晶形の研究を行った。さらに、本発明における実施例１の化合物に対して結晶多形のスクリーニング研究を行い、安定で信頼性のある結晶形を見つけ、化合物の品質の安定性を保証しながら、薬物に臨床治療におけるより良い作用を発揮させる。実施例１の製品は結晶度の良い結晶であると見出し、かつ無水結晶形で、遊離塩基結晶形Ｉと名付けた。実施例１の化合物は式Ａで表される化合物を有し、

【化6】

結晶形が遊離塩基結晶形Ｉで、当該結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルでは、９．７６°±０．２°、１０．４５°±０．２°、１６．５４°±０．２°、１８．６６°±０．２°、２０．０７°±０．２°、２５．９０°±０．２°の箇所に特徴的な回折ピークがある。

【0020】

さらに、遊離塩基結晶形Ｉで、その粉末Ｘ線回折スペクトルでは、９．０７°±０．２°、９．７６°±０．２°、１０．４５°±０．２°、１１．５３°±０．２°、１１．８０°±０．２°、１２．９１°±０．２°、１３．７９°±０．２°、１４．６７°±０．２°、１５．０８°±０．２°、１５．６３°±０．２°、１６．５４°±０．２°、１７．５０°±０．２°、１８．６６°±０．２°、２０．０７°±０．２°、２１．１０°±０．２°、２３．２９°±０．２°、２４．１６°±０．２°、２５．９０°±０．２°の箇所に特徴的な回折ピークがある。

【0021】

実施例１の化合物の遊離塩基結晶形Ｉは多くの溶媒において懸濁結晶化、品溶媒沈殿、高低温循環や蒸発結晶化などの方法によって製造することができる。ここの溶媒はジクロロメタン、１，４－ジオキサン、ジクロロエタン、メチル－ｔ－ブチルエーテル、Ｎ－メチルピロリドン、酢酸エチル、アセトン、メタノール、ジメチルスルホキシド、酢酸イソプロピル、ブタノン、シクロヘキサン、テトラヒドロフラン、水、アセトニトリル、イソプロパノール、エタノール、ｎ－ヘプタンのうちの一つまたは二つ以上の混合溶媒などを含むが、これらに限定されない。

【0022】

本発明では、実施例１の化合物は２種類の無水結晶形（遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形Ｖ）および３種類の溶媒和物があり、遊離塩基結晶形ＩＩはエタノールの溶媒和物で、遊離塩基結晶形ＩＩＩはイソプロパノールの溶媒和物で、遊離塩基結晶形ＩＶはジクロロエタンと水の溶媒和物であることが見出され、そしてこの数種類の溶媒和物のいずれも特徴づけされた。遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形Ｖの２種類の無水結晶形に対して競争懸濁実験を行ったところ、遊離塩基結晶形Ｉは熱力学的に安定した結晶形で、より後続の開発に適すると推測された。

【0023】

遊離塩基結晶形Ｉに対して結晶形の評価を行ったが、乾式研磨、湿式研磨、打錠（３０ＭＰａ）、安定性および吸湿性などの研究を含む。５ｍｉｎ乾式研磨すると、無定形になった。５ｍｉｎの水を入れた湿式研磨をしてもほぼ変化せず、５ｍｉｎのエタノールを入れた湿式研磨をすると、結晶度がやや低下した。打錠テストでは、圧力が３０ＭＰａの場合、結晶度がある程度低下した。安定性の考察では、異なる温度および湿度において、遊離塩基結晶形Ｉは比較的に安定で、液相検出の結果が変わらなかった。動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）テストを行った結果、８０％ＲＨの場合、吸水による重量増加が０．６６％で、遊離塩基結晶形Ｉはやや吸湿性があることが示された。つまり、遊離塩基結晶形Ｉは比較的に安定した無水結晶形で、安定した固形の性質を有し、かつやや吸湿性があり、後続の薬物開発に有用である。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】図１はＬＵ０３８７モデルにおける腫瘍体積の変化（ｍｍ^３）である。

【図2】図２はＢａ／Ｆ３ＥＧＦＲＤ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤモデルにおける腫瘍体積の変化（ｍｍ^３）である。

【図3】図３は実施例１の単結晶の単結晶回折スペクトルである。

【図4】図４は遊離塩基結晶形ＩのＸＲＰＤスペクトルである。

【図5】図５は遊離塩基結晶形ＩのＤＳＣとＴＧＡの重なったグラフである。

【図6】図６は乾式研磨法によって得られた無定形のサンプルのＸＲＰＤスペクトルである。

【図7】図７は遊離塩基結晶形ＩＩのＸＲＰＤスペクトルである。

【図8】図８は遊離塩基結晶形ＩＩのＤＳＣとＴＧＡの重なったグラフである。

【図9】図９は遊離塩基結晶形ＩＩＩのＸＲＰＤスペクトルである。

【図10】図１０は遊離塩基結晶形ＩＩＩのＤＳＣとＴＧＡの重なったグラフである。

【図11】図１１は遊離塩基結晶形ＩＶのＸＲＰＤスペクトルである。

【図12】図１２は遊離塩基結晶形ＩＶのＤＳＣとＴＧＡの重なったグラフである。

【図13】図１３は遊離塩基結晶形ＶのＸＲＰＤスペクトルである。

【図14】図１４は遊離塩基結晶形ＶのＤＳＣとＴＧＡの重なったグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0025】

特許ＷＯ２０２１１８０２３８におけるトランストリペンタアミン構造を有するに対し、本発明では、シストリペンタアミン構造の体内における薬物効果がより良く、かつ関連疾患の異なる突然変異においても優れた治療作用があることが実証された。

【0026】

本発明の化合物のＸがＣＨである場合の製造方法は、反応経路が以下の通りである。

【化7】

【0027】

以下の工程を含む：
（１）化合物Ａと化合物Ｂを有機溶媒においてフリーデル・クラフツ反応させ、化合物Ｃを得る；
（２）化合物Ｃと化合物Ｄを有機溶媒において、酸の触媒下で置換反応させ、化合物Ｅを得る；
（３）化合物Ｅと化合物Ｆを有機溶媒において、塩基の触媒下で置換反応させ、化合物Ｇを得る；
（４）化合物Ｇを還元させ、化合物Ｈを得る；
（５）化合物Ｈを塩基触媒の存在下で縮合反応させ、製品を得る。

【0028】

Ｒ_１が

【化8】

でかつＲ_５が－ＣＦ_３である場合、式１で表される化合物の合成は以下の反応経路によるものでもよい。

【化9】

【0029】

以下の工程を含む：
（１）化合物ａと化合物ｂを有機溶媒において置換反応させ、化合物ｃを得る；
（２）化合物ｃを加水分解させ、化合物ｄを得る；
（３）化合物ｄを縮合反応させ、化合物ｅを得る；
（４）化合物ｅを脱保護させ、化合物ｆを得る；
（５）化合物ｆを塩基触媒の存在下でトリフルオロ酢酸無水物と閉環反応させ、化合物ｇを得る；
（６）化合物ｇを還元させ、化合物ｈを得る；
（７）化合物ｈを塩基触媒の存在下で縮合反応させ、製品を得る。

【0030】

本発明の化合物のＸがＮである場合の製造方法は、反応経路が以下の通りである。

【化10】

【0031】

以下の工程を含む：化合物Ａ’と化合物Ｂ’を置換反応させ、製品を得る。
ここで、化合物Ａ’はＷＯ２０２１１８０２３８を参照して合成して得られるもので、化合物Ｂ’はフリーデル・クラフツ反応によって得られるものである。

【0032】

以下、具体的な実施例とともに本発明の実施過程をすべて詳細に説明する。
一．キナーゼ阻害剤として使用される化合物の合成の具体的な実施例

【0033】

実施例１
本実施例のキナーゼ阻害剤として使用される化合物は、構造式が以下のとおりである。

【化11】

【0034】

本実施例の化合物の合成経路は以下の通りである。

【化12】

【0035】

化合物３の合成：２５０ｍＬ三口フラスコにおいて、窒素ガスの保護下で、化合物１（２．０１ｇ，８．５ｍｍｏｌ）を入れ、１００ｍＬのテトラヒドロフランで全部溶解させ、無水三塩化アルミニウム（２．２６ｇ，１７ｍｍｏｌ）を入れ、７０℃で１時間撹拌した。化合物２（１．３４ｇ，１０．２ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後、続いて７０℃で反応させ、プレートにサンプリングして反応をモニタリングし、４時間後、ほぼ完全に反応した。処理し、製品を１．３１ｇ得たが、収率が４６．４％であった。

【0036】

化合物５の合成：化合物３（１．３０ｇ，３．９ｍｍｏｌ）、化合物４（０．８８ｇ，４．６８ｍｍｏｌ）、およびｐ－トルエンスルホン酸（１．３５ｇ，７．８ｍｍｏｌ）を６５ｍＬの１，４－ジオキサンに入れ、Ｎ_２の保護下で、８０℃に昇温させ、一晩反応させた。プレートにサンプリングして反応をモニタリングし、完全に反応し、処理し、製品を１．５０ｇ得たが、収率が７９．７％であった。

【0037】

化合物７の合成：化合物５（６．０ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）、化合物６（６．３ｇ，１００ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．２ｇ，５０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド１２０ｍＬに入れ、９０℃で一晩反応させ、プレートにサンプリングしてモニタリングし、完全に反応した後、処理し、製品を８．０ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ９．５３（ｓ，１Ｈ），８．９７ - ８．７５（ｍ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），５．０９（ｐ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８４ - ３．６３（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，２Ｈ），２．３２（ｓ，１Ｈ），１．２７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）．

【0038】

化合物８の合成：化合物７（７．７ｇ，４１．６ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（２．４ｇ，湿潤パラジウム炭素５５％）を１００ｍＬメタノールと１００ｍＬ酢酸エチルの混合溶媒に入れ、水素ガスの雰囲気において、室温で４時間反応させ、プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を７．０ｇ得た。

【0039】

実施例１の合成：化合物８（７．００ｇ，１２．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．８２ｇ，３７．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスの保護下で０℃に降温させた後、アクリルクロリド（１．７２ｇ，１８．９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を滴下し、０℃に維持しながら１時間反応させ、プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理した。すなわち、炭酸水素ナトリウム水溶液およびジクロロメタンを入れ、撹拌して分層させ、水相をさらにジクロロメタンで１回抽出し、有机相を合併し、乾燥し、回転乾燥し、カラムを通させた。得られた粗製品をまず少量のジクロロメタンで溶解させ、さらに石油エーテルを滴下すると大量の固体が析出し、ろ過し、ケーキをそのままメタノールに入れて混ぜ、乾燥した後、最終的に製品を３．５ｇ得た。［Ｍ＋Ｈ］^＋：６１０．８；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ １０．３８（ｓ，１Ｈ），９．６０（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．６１（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．４４（ｍ，２Ｈ），６．３２（ｍ，１Ｈ），５．６８（ｍ，１Ｈ），５．００（ｐ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，２Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．６１（ｍ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．６７（ｓ，２Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）。

【0040】

実施例１を参照し、実施例２、３、４の三つの重水素化物を合成したが、具体的に下記表１に示す。
表１実施例２－４の化合物の構造と特徴付け

【表1】

【0041】

実施例５
本実施例のキナーゼ阻害剤として使用される化合物は、構造式が以下のとおりである。

【化13】

【0042】

本実施例の化合物の合成経路は以下の通りである。

【化14】

【0043】

合成過程は以下の通りである。
化合物２の合成：２０００ｍＬの単口フラスコにおいて、化合物１（５４．６ｇ，３０３ｍｍｏｌ）、アセトヒドラジド（２６．６４ｇ，３９５ｍｍｏｌ）を入れ、１０００ｍＬの１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、８０℃で４時間反応させ、大量の固体が析出した。降温させ、濃塩酸を８０ｍＬ入れ、０℃程度の低温で３０分撹拌し、吸引ろ過し、ケーキを水で一回撹拌し、５５℃で一晩真空乾燥し、製品を３２ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １１．７５（ｓ，１Ｈ），１１．５９（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ）。

【0044】

化合物３の合成：２０００ｍＬの単口フラスコにおいて、化合物２（５０．０ｇ，２５８ｍｍｏｌ）を入れ、室温でトルエン１５００ｍＬ、塩化ホスホリル（２３７ｇ，１５５０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１３３ｇ，１０３１ｍｍｏｌ）を入れ、白い霧が生成した。８０℃に加熱し、窒素ガスの保護下で、一晩撹拌した。次の日、降温させて処理し、製品を３０ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ９．１９（ｓ，１Ｈ），２．７１（ｓ，３Ｈ）。

【0045】

化合物５の合成：２０００ｍＬの単口フラスコにおいて、化合物３（３０．０ｇ，１３０ｍｍｏｌ）を入れ、１５００ｍＬの１，２－ジクロロエタンで全部溶解させ、無水三塩化アルミニウム（２９．３ｇ，２２０ｍｍｏｌ）を入れ、まず室温で３０分撹拌した。０℃に降温させ、化合物４（２２．１ｇ，１６９ｍｍｏｌ）を滴下し、低温でまず３０分撹拌した後、６０℃に昇温して反応させ、プレートにサンプリングしてモニタリングした。４時間反応させた後、降温させ、処理して製品を２０．０ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ８．８４（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．４０－７．２７（ｍ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ）。

【0046】

化合物７の合成：化合物５（２ｇ，６．１５ｍｍｏｌ）、化合物６（１．３７ｇ，７．３８ｍｍｏｌ）、およびｐ－トルエンスルホン酸（２．１１ｇ，１２．３ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジオキサンに入れ、窒素ガスの保護下で８０℃に昇温させ、一晩反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、反応完了後、処理し、製品を０．６５ｇ得た。

【0047】

化合物９の合成：化合物７（９５０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、化合物８（１．０ｇ，８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５１６ｍｇ，４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド２０ｍＬに入れ、１００ ℃で一晩反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１．０ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ９．５６（ｓ，１Ｈ），８．８８（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．８８（ｓ，３Ｈ），２．７２（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，４Ｈ）。

【0048】

化合物１０の合成：化合物９（１．０ｇ，１．７２ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（５００ｍｇ，湿潤パラジウム炭素５５％）を５０ｍＬメタノールに入れ、水素ガスの雰囲気において、室温で４時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を９００ｍｇ得た。

【0049】

実施例５の合成：化合物１０（９００ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４９５ｍｇ，４．９０ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスの雰囲気において０℃に降温させた後、アクリルクロリド（２２３ｍｇ，２．４５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を滴下し、０℃に維持しながら２時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を２００ｍｇ得た。［Ｍ＋Ｈ］^＋：６０６．８。

【0050】

実施例５を参照し、実施例６、７、８の三つの重水素化物を合成したが、具体的に下記表２に示す。
表２実施例６－８の化合物の構造と特徴付け

【表2】

【0051】

実施例９
本実施例のキナーゼ阻害剤として使用される化合物は、構造式が以下のとおりである。

【化15】

【0052】

本実施例の化合物の合成経路は以下の通りである。

【化16】

【0053】

本実施例の化合物の合成過程は以下の通りである。
化合物３の合成：化合物１（６．０ｇ，１３．３０ｍｍｏｌ）、化合物２（５．０３ｇ，３９．９１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．４３ｇ，２６．６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド６０ｍＬに入れ、８０ ℃で一晩反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を６．１７ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）－δ ９．５０（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），８．２４－７．９９（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄｔ，Ｊ＝８．２，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３１－７．２３（ｍ，１Ｈ），７．２３－７．１６（ｍ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），２．９５（ｓ，３Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８５－２．７６（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），１．９１ - １．８１（ｍ，２Ｈ）。

【0054】

化合物４の合成：化合物３（６．１７ｇ，１１．０８ｍｍｏｌ）、水酸化リチウム一水和物（２．３３ｇ，５５．３９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン／メタノール／水の体積比が６：３：１の混合溶媒に入れ、４０℃で１６時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を６．０２ｇ得た。

【0055】

化合物５の合成：化合物４（６．０２ｇ，１１．０８ｍｍｏｌ）、カルバジン酸ｔ－ブチル（４．３９ｇ，３３．２６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（８．５８ｇ，６６．４８ｍｍｏｌ）を１６０ｍＬＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに入れ、１５ｍｉｎ撹拌した後、さらに１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノヘキサフルオロホスファート（６．９０ｇ，１３．３０ｍｍｏｌ）を入れ、２５℃で１６時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１．６７ｇ得た。

【0056】

化合物６の合成：化合物５（１．６７ｇ，２．５４ｍｍｏｌ）を１５ｍＬテトラヒドロフランに溶解させ、ゆっくり１５ｍＬの４Ｍの塩化水素のジオキサン溶液に入れ、窒素ガスの保護下において４０ ℃で５時間反応させた。液体クロマトグラフィー－質量分析によってモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１．２０ｇ得た。

【0057】

化合物７の合成：化合物６（１．０ｇ，１．６８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（６７９ｍｇ，６．７２ｍｍｏｌ）を２０ｍＬジクロロメタンに入れ、１５分撹拌した後、トリフルオロ酢酸無水物（１．５９ｇ，７．５８ｍｍｏｌ）を分けて入れ、４０℃で８時間反応させ、反応が完了した。処理し、製品を５２１ｍｇ得た。

【0058】

化合物８の合成：化合物７（５２１ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（１５６ｍｇ，１０％）を２０ｍＬメタノールに溶解させ、水素ガスの雰囲気において、２５℃で撹拌しながら３時間反応させ、液体クロマトグラフィー－質量分析によってモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を４１２ｇ得た。

【0059】

実施例９の合成：化合物８（４１２ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２０６ｍｇ，２．０４ｍｍｏｌ）を１５ｍＬジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスの雰囲気において０℃に降温させた後、アクリルクロリド（９３ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を滴下し、０℃に維持しながら２時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１２２ｍｇ得た。［Ｍ＋Ｈ］^＋：６６０．５； ^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ １１．３６（ｍ，１Ｈ），９．８７（ｍ，１Ｈ），９．０９（ｍ，１Ｈ），８．９２（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｍ，２Ｈ），６．８０（ｍ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７４（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，６Ｈ），３．２９（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｍ，１Ｈ），２．７８（ｍ，８Ｈ），２．２１（ｍ，２Ｈ）。

【0060】

実施例９を参照し、実施例１０、１１、１２の三つの重水素化物を合成したが、具体的に下記表３に示す。
表３実施例１０－１２の化合物の構造と特徴付け

【表3】

【0061】

実施例１３
本実施例のキナーゼ阻害剤として使用される化合物は、構造式が以下のとおりである。

【化17】

【0062】

本実施例の化合物の合成経路は以下の通りである。

【化18】

【0063】

化合物２の合成：５００ｍＬ単口フラスコにおいて、化合物１（１０．００ｇ，６２．８８ｍｍｏｌ）を入れ、１００ｍＬテトラヒドロフランで完全に溶解させ、炭酸セシウム（２０．５０ｇ，６２．８８ｍｍｏｌ）、トリフルオロエタノール（６．２９ｇ，６２．８７ｍｍｏｌ）を入れ、添加完了後、窒素ガスで保護した。プレートにサンプリングしてモニタリングし、２３℃で６時間反応させ、ほぼ完全に反応させた。処理し、製品を１４．３５ｇ得たが、収率が９５．５％であった。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ８．０１（ｄｄ，Ｊ＝９．１，５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０９ - ６．７２（ｍ，２Ｈ），４．５０（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）。

【0064】

化合物３の合成：化合物２（１４．００ｇ，５８．５７ｍｍｏｌ）を６０ｍＬエタノールに溶解させ、１５ｍＬ水、塩化アンモニウム（９．６０ｇ，１７９．４４ｍｍｏｌ）、還元鉄粉（２０．００ｇ，３５７．１４ｍｍｏｌ）を入れ、添加完了後、８０℃に昇温させ、一晩反応させた。プレートにサンプリングして反応をモニタリングし、完全に反応し、処理し、製品を１０．５０ｇ得たが、収率が８５．７８％であった。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ６．８９ - ６．３４（ｍ，３Ｈ），４．３４（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８４ - ３．２７（ｍ，２Ｈ）。

【0065】

化合物４の合成：２５０ｍＬ三口フラスコにおいて、化合物３（１０．００ｇ，４７．８３ｍｍｏｌ）を入れ、撹拌しながら５０ｍＬ濃硫酸を入れ、０℃に降温させ、硝酸カリウム固体（６．１０ｇ，６０．３４ｍｍｏｌ）を分けて入れ、添加完了後、窒素ガスで保護した。室温で４時間反応させた後、プレートにサンプリングして反応完了後、処理し、製品を８．２６ｇ得たが、収率が６７．９８％であった。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ７．４４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｑ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），４．０１（ｍ，２Ｈ）。

【0066】

化合物６の合成：化合物４（２．００ｇ，６．０８ｍｍｏｌ）および化合物５（２．００ｇ，７．８７ｍｍｏｌ）を５０ｍＬアセトニトリルに入れ、さらにｐ－トルエンスルホン酸一水和物（０．８１ｇ，４．２６ｍｍｏｌ）を入れ、８０℃で一晩撹拌した。次の日、プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料がほぼ完全に反応した。降温させ、反応液から固体が析出し、ろ過し、ケーキを回転乾燥した後、メタノールを入れて混ぜ、製品を１．６７ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ９．８９（ｓ，１Ｈ），９．３３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．１９（ｍ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｐ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５９（ｑ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）。

【0067】

化合物８の合成：化合物６（１．５２ｇ，２．７８ｍｍｏｌ）、化合物７（１．０５ｇ，８．３３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．０５ｇ，８．１４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド２５ｍＬに入れ、９０ ℃で一晩反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１．１６ｇ得た。

【0068】

化合物９の合成：化合物８（０．５９ｇ，０．９０ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（４００ｍｇ，湿潤パラジウム炭素５５％）を２０ｍＬメタノールと２０ｍＬ酢酸エチルの混合溶媒に入れ、水素ガスの雰囲気において、室温で３時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を５２０ｍｇ得た。

【0069】

実施例１３の合成：化合物９（５２０ｍｇ，０．８３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２５３ｍｇ，２．５０ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスの雰囲気下で０℃に降温させた後、アクリルクロリド（１１４ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を滴下し、０℃に維持しながら２時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１７０ｍｇ得た。［Ｍ＋Ｈ］^＋：６０６．８。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ １０．６３（ｓ，１Ｈ），１０．１１（ｓ，１Ｈ），８．８２（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２２ - ７．１６（ｍ，１Ｈ），７．１５ - ７．０９（ｍ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．３７（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．６８（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｐ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｑ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．２７ - ２．９９（ｍ，２Ｈ），２．８７ - ２．５１（ｍ，６Ｈ），２．１１（ｍ，２Ｈ），１．１８ - ０．９１（ｍ，６Ｈ）。

【0070】

実施例１３を参照し、実施例１４を合成したが、具体的に下記表４に示す。
表４実施例１４の化合物の構造と特徴付け

【表4】

【0071】

実施例１５
本実施例のキナーゼ阻害剤として使用される化合物は、構造式が以下のとおりである。

【化19】

【0072】

本実施例の化合物の合成経路は以下の通りである。

【化20】

【0073】

実施例１５の合成：５０ｍＬ単口フラスコにおいて、化合物２（１１２ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン２０ｍｌ、塩化オキサリル（１４２ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）を入れ、窒素ガスの保護下で２時間撹拌した。０℃に降温させ、化合物１（４３８ｍｇ，７８．９２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液およびトリエチルアミン（１５２ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）を滴下し、０℃に維持しながら１時間反応させ、プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、最終的に製品を１６０ｍｇ得た。［Ｍ＋Ｈ］^＋：６２８．８；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．５３（ｍ，１Ｈ），９．１２（ｍ，１Ｈ），８．８９（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｍ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），５．８４（ｄｄ，Ｊ＝４８．２，３．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝１５．５，３．４Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｐ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｓ，６Ｈ），３．４９（ｍ，２Ｈ），２．６４（ｍ，９Ｈ），２．１９（ｍ，２Ｈ），１．０９（ｍ，６Ｈ）。

【0074】

実施例１６
本実施例のキナーゼ阻害剤として使用される化合物は、構造式が以下のとおりである。

【化21】

【0075】

本実施例の化合物の合成経路は以下の通りである。

【化22】

【0076】

化合物３の合成：１００ｍＬ単口フラスコにおいて、化合物１（３１３ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を入れ、５ｍＬアセトニトリルを入れ、さらに化合物２の粗製品（４４１ｍｇ）を入れ、添加完了後、窒素ガスで保護した。プレートにサンプリングしてモニタリングし、８０℃で一晩反応させ、ほぼ完全に反応した。処理し、製品を３００ｍｇ得た。

【0077】

化合物４の合成：化合物３（１．８３ｇ，４．５４ｍｍｏｌ）を６０ｍＬメタノールに溶解させ、１．２ｍＬの濃塩酸を入れ、添加完了後、６０℃に昇温させ、一晩反応させた。プレートにサンプリングして反応をモニタリングし、完全に反応し、処理し、製品を０．８９ｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ７．６１（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｑ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５７（ｍ，２Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），２．５９ - ２．３３（ｍ，４Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），１．７６ - １．５１（ｍ，２Ｈ）。

【0078】

化合物６の合成：１００ｍＬ単口フラスコにおいて、化合物４（７３．８ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を入れ、化合物５（５６ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）、ｐ－トルエンスルホン酸（４８ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）を入れ、さらにジオキサン５ｍＬを入れ、８０℃で一晩撹拌し、窒素ガスで保護した。プレートにサンプリングしてモニタリングし、反応完了後、処理し、製品を５０ｍｇ得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ９．７６（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３３ - ７．２７（ｍ，１Ｈ），７．２４ - ７．１７（ｍ，１Ｈ），５．１０（ｐ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９４（ｓ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），３．１８（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．０１（ｍ，３Ｈ），２．５７（ｍ，５Ｈ），２．３１（ｍ，２Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）。

【0079】

化合物７の合成：化合物６（９８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（８０ｍｇ，湿潤パラジウム炭素５５％）を３ｍＬメタノールと２ｍＬ酢酸エチルの混合溶媒に入れ、水素ガスの雰囲気において、室温で２時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を９８ｍｇ得た。

【0080】

実施例１６の合成：化合物８（３００ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５０ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスの雰囲気下で０℃に降温させた後、アクリルクロリド（７０ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を滴下し、０℃に維持しながら２時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１１８ｍｇ得た。［Ｍ＋Ｈ］^＋：６８８．８。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ １０．３９（ｓ，１Ｈ），９．９７（ｓ，１Ｈ），８．８９（ｓ，１Ｈ），８．５９（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｍ，１Ｈ），７．１４（ｍ，１Ｈ），６．４５（ｍ，１Ｈ），６．３１（ｍ，１Ｈ），５．７２（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｐ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｑ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．１４ - ２．８８（ｍ，２Ｈ），２．８５ - ２．５２（ｍ，６Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．６９（ｍ，２Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６Ｈ）。

【0081】

実施例１７
本実施例のキナーゼ阻害剤として使用される化合物は、構造式が以下のとおりである。

【化23】

【0082】

本実施例の化合物の合成経路は以下の通りである。

【化24】

【0083】

化合物２の合成：１００ｍＬ三口フラスコにおいて、化合物１（１５３ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を入れ、５ｍＬテトラヒドロフランを入れ、さらに４－ジメチルアミノピリジン（１７．８ｍｇ）を入れ、添加完了後、窒素ガスの保護下で、ジカルボン酸ジ－ｔ－ブチル（１．０６ｇ，４．８６ｍｍｏｌ）を滴下した。プレートにサンプリングしてモニタリングし、８０℃で２時間反応させ、ほぼ完全に反応させた。処理し、製品を１０４ｍｇ得た。

【0084】

化合物３の合成：化合物２（１０４ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を２ｍｌメタノールに溶解させ、５．４ｍｏｌ／Ｌのナトリウムメトキシドのメタノール溶液０．０５ｍＬを入れ、添加完了後、３０分反応させた。プレートにサンプリングして反応をモニタリングし、完全に反応し、処理し、製品を３０ｍｇ得た。

【0085】

化合物４の合成：化合物３（３０ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（１５ｍｇ，湿潤パラジウム炭素５５％）を１ｍＬメタノールと１ｍＬ酢酸エチルの混合溶媒に入れ、水素ガスの雰囲気において、室温で２時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を３０ｍｇ得た。

【0086】

化合物５の合成：化合物４（３０ｍｇ，０．０６９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１３ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスの雰囲気において０℃に降温させた後、アクリルクロリド（７ｍｇ，０．０７７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を滴下し、０℃に維持しながら２時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を１２ｍｇ得た。

【0087】

実施例１７の合成：化合物５（１２ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）および化合物６（６ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）、ｐ－トルエンスルホン酸（８ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＮ－メチルピロリドンおよび２ｍＬのエチレングリコールモノメチルエーテルに溶解させ、窒素ガスの雰囲気において１００℃に昇温させ、４時間反応させた。プレートにサンプリングしてモニタリングし、原料が完全に反応した後、処理し、製品を３ｍｇ得た。［Ｍ＋Ｈ］^＋：６７５．８。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ １０．４２（ｓ，０Ｈ），９．９７（ｓ，０Ｈ），８．９１（ｓ，０Ｈ），８．７０（ｍ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，０Ｈ），７．１８（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｍ，１Ｈ），６．４５（ｍ，１Ｈ），６．３３（ｍ，１Ｈ），５．７３（ｍ，１Ｈ），５．３５（ｍ，１Ｈ），４．８５（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｍ，２Ｈ），２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６２（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．１０ - １．９５（ｍ，２Ｈ）。

【0088】

二．化合物の生物学的テスト・評価
１．化合物の細胞増殖に対する抑制作用のテスト
１．１ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異の細胞増殖抑制活性のテスト実験：
実験において選ばれた工学的細胞Ｂａ／Ｆ３－ＦＬ－ＥＧＦＲ－Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｂａ／Ｆ３－ＦＬ－ＥＧＦＲ－Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｂａ／Ｆ３－ＦＬ－ＥＧＦＲ－Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｂａ／Ｆ３－ＦＬ－ＥＧＦＲ－Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｂａ／Ｆ３－ＨＥＲ２－Ａ７７５－Ｇ７７６ｉｎｓＹＶＭＡは合肥中科普瑞昇生物医薬科技有限公司によって提供され、そして本研究に使用される前に検証された。
２０×の被験化合物母液を調製して使用に備え、９つの濃度で、３倍勾配希釈で、１μＭから希釈した。

【0089】

対数期の細胞懸濁液を取り、９６ウェル白色細胞培養プレートに接種し、各ウェルの体積が９５ μＬ（２０００個細胞／ウェル）である。５ μＬの２０×被験化合物を取ってプレート接種の図を参照してそれぞれ上記９５ μＬ細胞懸濁液を含有する培養プレートに入れ、均一に混合した。３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーターにおいて７２時間インキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ法によって化合物の増殖抑制活性を測定した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘＰａｒａｄｉｇｍの読み値から相応する各ウェルの蛍光値ＲＬＵを得た。細胞増殖抑制率（ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＲａｔｅ）のデータは以下の式で処理された：ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＲａｔｅ（Ｉｎｈ％）＝１００－（ＲＬＵ化合物－ＲＬＵブランク）／（ＲＬＵ対照－ＲＬＵブランク）＊１００％。ＥＸＣＥＬにおいて異なる濃度の化合物に相応する細胞胞活力を計算した後、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトで細胞活力曲線図を作ってＩＣ_５０値を計算した。表５は対照品の名称および構造である。

【0090】

表５対照品の名称および構造

【表5】

【0091】

表６、表７および表８の実験結果では、ＩＣ_５０値の大きさによって３種類に分かれ、ここで、Ａ≦３０ｎＭ、３０ｎＭ＜Ｂ≦１００ｎＭ、Ｃ＞１００ｎＭである。
表６異なる化合物のＥＧＦＲエクソン２０挿入突然変異の細胞増殖抑制活性のテスト結果

【表6】

【0092】

表７異なる化合物のＨＥＲ２エクソン２０挿入突然変異の細胞増殖抑制活性のテスト結果

【表7】

【0093】

表６から、実施例における化合物はいずれもＥＧＦＲエクソン２０挿入突然変異に対して良い抑制能力があることがわかる。ＤＺＤ９００８よりも優れ、ＴＡＫ－７８８の活性に相当する。表７から、実施例５はＨＥＲ２エクソン２０挿入突然変異における細胞活性がＴＡＫ－７８８に相当し、ＤＺＤ９００８よりも良いことがわかる。

【0094】

１．２化合物の細胞系ＮＣＩ－Ｈ１９７５およびＰＣ９の細胞増殖に対する抑制活性のテスト実験：
実験において選ばれた細胞系ＮＣＩ－Ｈ１９７５およびＰＣ９は中米冠科生物技術（北京）有限公司によって提供され、そして本研究に使用される前に検証された。
１０×の被験化合物母液を調製して使用に備え、９つの濃度で、４倍勾配希釈で、１０μＭから希釈した。

【0095】

対数期の細胞懸濁液を取り、９６ウェル培養プレートに接種し、各ウェルの体積が９０ μＬ（２０００個細胞／ウェル）である。１０ μＬの１０×被験化合物を取ってプレート接種の図を参照してそれぞれ培養プレートに入れ、均一に混合した。３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーターにおいてインキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ法によって化合物の増殖抑制活性を測定した。細胞増殖抑制率（ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＲａｔｅ）のデータはＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８．０ソフトで細胞活力曲線図を作ってＩＣ_５０値を計算した。結果は表８に示す。

【0096】

表８異なる化合物の関連突然変異の細胞増殖抑制活性のテスト結果

【表8】

【0097】

表８から、本発明の化合物は細胞系ＮＣＩ－Ｈ９７５およびＰＣ９の細胞増殖に対して優れた抑制作用があり、そしてＤＺＤ９００８よりも良いことがわかる。

【0098】

２．化合物の体内薬効実験
２．１肺癌ＬＵ０３８７ＰＤＸモデルに対する薬効学の研究
肺癌ＬＵ０３８７ＰＤＸモデルは冠科の常用の異種移植腫瘍モデルで、当該モデルの実験状況の説明は以下の通りである。腫瘍担持マウスを安楽死させた後、無菌の状態において腫瘍塊を取出し、腫瘍塊を洗浄し、血の汚れおよび結合組織と壊死部分を除去し、腫瘍を２×２×２ｍｍ^３の小さい塊に切った。接種ニードルで消毒された実験マウスの右側背部の皮下に接種した。定期的に腫瘍の生長状況を観察し、腫瘍が平均体積１００～２００ｍｍ^３に生長すると、腫瘍の大きさおよびマウスの体重によってランダムに群分けして投与した。投与開始前に、すべての動物の体重を測定し、そして腫瘍直径をノギスで測定した。異なる群の間の腫瘍体積が同等になるように、マウスの腫瘍体積によってランダムに群分けを行った。各群にマウスが３匹ずつで、１日に１回経口投与し、投与後、接種部位を観察した。週に２回腫瘍体積およびマウスの体重を測定した。

【0099】

実験の設計および結果は表９に示すように、ここで、Ｐ．Ｏは経口投与で、ＱＤは１日に１回で、ＴＧＩ（腫瘍体積抑制率）＝（１－治療群の腫瘍重量／対照群の腫瘍重量）＊１００％である。

【0100】

表９ＬＵ０３８７モデルの設計および結果

【表9】

【0101】

実験において、腫瘍体積は投与日数によって変わったが、結果は図１の通りである。
図１から、ＬＵ０３８７モデルにおいて同投与量で、実施例１の薬効がＴＡＫ－７８８およびＤＺＤ９００８よりも良かったことがわかる。実施例５の薬効はＴＡＫ－７８８に類似した。実施例１の投与量の増加につれ、薬効も明らかに増強した。

【0102】

２．２Ｂａ／Ｆ３－ＥＧＦＲ－Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ工学的細胞株皮下移植腫瘍モデルに対する体内薬効学研究
細胞株Ｂａ／Ｆ３ＥＧＦＲＤ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤはＲＰＭＩ１６４０＋１０％ウシ胎児血清＋１％二重抗生物質を使用し、３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、週に２－３回継代処理した。細胞のコンフルエンスが８０－９０％になり、数が要求に達すると、細胞を回収した。０．２ｍｌ（１＊１０６個）の細胞を６－８週齢で、体重１８－２２ｇの雌ヌードマウスの右側背中に皮下接種した。腫瘍の平均体積が約１５０－２００ｍｍ^３に達したら群分けして投与した。投与開始前に、すべての動物の体重を測定し、そして腫瘍直径をノギスで測定した。異なる群の間の腫瘍体積が同等になるように、マウスの腫瘍体積によってランダムに群分けを行った。各群にマウスが３匹ずつで、１日に１回経口投与し、投与後、接種部位を観察した。週に２回腫瘍体積およびマウスの体重を測定した。

【0103】

表１０Ｂａ／Ｆ３ＥＧＦＲＤ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤモデルの群分け

【表10】

【0104】

表における実施例１８および実施例４０は特許ＷＯ２０２１１８０２３８におけるトランストリペンタアミン構造を有する化合物である。名称および構造を表１１に示す。

【0105】

表１１トランス構造の化合物の名称および構造

【表11】

【0106】

実験において、腫瘍体積は投与日数によって変わったが、結果は図２の通りである。
図２から、Ｂａ／Ｆ３－ＥＧＦＲ－Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ細胞移植モデルにおいて、同投与量で、実施例１および実施例５はいずれも体内薬効が特許ＷＯ２０２１１８０２３８におけるトランストリペンタアミン構造を有する化合物よりも遥かに良く、腫瘍抑制率が１．６倍以上に向上したことがわかる。

【0107】

上記のように、本特許における化合物はＥＧＦＲまたはＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異に良い抑制効果があり、細胞系ＮＣＩ－Ｈ１９７５およびＰＣ９の細胞増殖にも良い抑制作用がある。ＥＧＦＲエクソン２０挿入突然変異、ＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異、ＥＧＦＲエクソン１９欠失、ＥＧＦＲエクソン２０点突然変異、ＥＧＦＲエクソン２１の点突然変異のうちの一つまたは二つ以上の組み合わせには、それらの薬物は関連疾患に良い治療効果がある。

【0108】

三．実施例１の構造確認および遊離塩基結晶形の研究

【化25】

【0109】

１．構造確認
実施例１の化合物を２１４ｍｇ取り、０．５ｍＬのジクロロメタンおよび０．５ｍＬのアセトニトリルを入れ、全部溶解させてろ過し、ろ液を密封膜のあるサンプル瓶に入れ、孔を開けた後、ドラフトチャンバーにおいてゆっくり揮発させ、顆粒状の結晶を得た（遊離塩基結晶形Ｉ）。単結晶回折によって構造確認を行い、結果を図３に示し、化合物の配置を確認した。

【0110】

２．実施例１の遊離塩基結晶形の研究
実施例１で得られた化合物に対して多形スクリーニングを行い、後続の開発に適する良い結晶形態が見つかるように、その潜在的な結晶形を探した。合成された実施例１を出発原料とし、検出したところ、化合物は結晶度の良い結晶で、かつ無水結晶形であるため、遊離塩基結晶形Ｉと名付けた。その後、乾式研磨の手段によって無定形の遊離塩基化合物を製造した。以上の２種類を出発原料とし、結晶形スクリーニング実験を行った。

【0111】

２．１出発原料の製造および特徴付け
２．１．１実施例１の化合物の遊離塩基結晶形Ｉの特徴付け
実施例１の化合物の遊離塩基結晶形Ｉの原料に対して全面的な特徴付けを行った。偏光顕微鏡（ＰＬＭ）から、原料は結晶度が良い不規則な形状の結晶であることがわかる。図４は遊離塩基結晶形ＩのＸＲＰＤスペクトルで、図５は当該結晶形のＤＳＣとＴＧＡの重なったグラフである。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線は２３０℃に１つの吸熱ピークがあり、溶融ピークになる。熱重量分析（ＴＧＡ）曲線は分解前に明らかな重量減少がなく、無水結晶形である。

【0112】

表１２遊離塩基結晶形Ｉの粉末Ｘ線回折ピークのデータ

【表12】

【0113】

２．１．２実施例１の遊離塩基結晶形Ｉの溶解度テスト
１８種類の溶媒において目視測定法によって概略的に化合物の実施例１の遊離塩基結晶形Ｉの室温条件における溶解度を測定した。結果は表１３に示す。遊離塩基結晶形Ｉはジクロロエタンおよびジクロロメタンのみにおいて溶解度が高く、大半の測定された溶媒において溶解度が低かった。

【0114】

表１３実施例１の遊離塩基結晶形Ｉの溶解度の目視測定の結果

【表13】

【0115】

２．１．３無定形原料の製造および特徴付け
７３６ｍｇの実施例１の化合物（遊離塩基結晶形Ｉ）を取って５時間の乾式研磨を行い、６６９．８６ｍｇの無定形の製品を製造できた。ＸＲＰＤ検出を行った結果は図６に示す。

【0116】

２．２特徴付けにおける物理・化学的検出装置の使用方法およびパラメーター
２．２．１粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）
ＸＲＰＤ回折スペクトルはＢｒｕｋｅｒＤ２Ｐｈａｓｅｒ型によって得られた。被験サンプルを滑らかでバックグラウンドのないケイ素シートに置いて測定した。測定のパラメーターは表１４に示す。

【0117】

表1４ＸＲＰＤ方法のパラメーター

【表14】

【0118】

２．２．２偏光顕微鏡（ＰＬＭ）
ＯＰＴＥＣの光学顕微鏡ＢＫ－ＰｏｌによってＰＬＭ分析を行った。少量のサンプルを取り、スライドガラスに載せ、１滴のシリコーン油を滴下して分散させ、さらにカバーガラスをカバーし、顕微鏡において観察した。

【0119】

２．２．３示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣ曲線はＴＡ装置のＤＳＣ２５０型によって得られた。ＤＳＣ２５０型の装置の測定方法は、精密に適量のサンプルを量って穴を開けた）アルミ坩堝内に置き、１０ ℃／ｍｉｎの昇温速度で２５℃から最終の温度３００ ℃に昇温させ、流速が５０ｍＬ／ｍｉｎの窒素ガスでブローした。

【0120】

２．２．４熱重量分析（ＴＧＡ）
ＴＧＡデータはＴＡ装置のＴＧＡ５５０型によって得られた。適量のサンプルを表面を取っておいたアルミ坩堝内に置き、１０ ℃／ｍｉｎの昇温速度で室温から３００ ℃に昇温させ、天秤室を４０ｍＬ／ｍｉｎの窒素ガスでブローし、サンプル室を２５ｍＬ／ｍｉｎの窒素ガスでブローした。

【0121】

２．３実施例１の化合物の遊離塩基結晶多形の研究
主に懸濁結晶化、貧溶媒沈殿、高低温循環や蒸発結晶化などの方法によって製造した。
懸濁結晶化は実施例１の化合物の目視測定の溶解度の結果から、２５ ℃および５０ ℃の条件において、それぞれ遊離塩基結晶形Ｉおよび無定形結晶形を出発原料とし、それぞれ選ばれた単一の溶媒（溶媒はジクロロメタン、１，４－ジオキサン、ジクロロエタン、メチル－ｔ－ブチルエーテル、Ｎ－メチルピロリドン、酢酸エチル、アセトン、メタノール、ジメチルスルホキシド、酢酸イソプロピル、ブタノン、シクロヘキサン、テトラヒドロフラン、水、アセトニトリル、イソプロパノール、エタノール、ｎ－ヘプタンから選ばれる）または混合溶媒において結晶形の製造を行った。計２種類の結晶形が得られ、遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形ＩＩである。

【0122】

貧溶媒沈殿は実施例１の化合物の目視測定の溶解度の結果から、ジクロロメタンおよびジクロロエタンを良溶媒とし、そして室温（～２５ ℃）の撹拌条件においてそれぞれそれに異なる貧溶媒を入れて結晶形の製造を行った。計２種類の結晶形が得られ、遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形ＩＩＩである。

【0123】

高低温循環は化合物に溶媒（溶媒はジクロロメタン、１，４－ジオキサン、ジクロロエタン、メチル－ｔ－ブチルエーテル、Ｎ－メチルピロリドン、酢酸エチル、アセトン、メタノール、ジメチルスルホキシド、酢酸イソプロピル、ブタノン、シクロヘキサン、テトラヒドロフラン、水、アセトニトリル、イソプロパノール、エタノール、ｎ－ヘプタンから選ばれる）を入れ、さらに５０ ℃～５ ℃の温度循環の条件において撹拌して結晶形の製造を行った。計２種類の結晶形が得られ、遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形ＩＩである。

【0124】

蒸発結晶化は化合物に溶媒を入れ、調製された溶液をろ過してろ液をサンプル瓶に滴下し、開口に覆われた密封膜に穴を開けた後、ドラフトチャンバーにおいてゆっくり揮発させた。２種類の結晶形が得られ、遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形ＩＶである。遊離塩基結晶形ＩＶを１５０ ℃に加熱して脱溶媒した後、新たな結晶形を製造し、遊離塩基結晶形Ｖと名付けた。

【0125】

２．３．１遊離塩基結晶形Ｉの製造および特徴付け
遊離塩基結晶形Ｉは大半の溶媒において得られ、実施例１で得られた化合物は遊離塩基結晶形Ｉである。その特徴付けの結果を図４と図５に示す。

【0126】

２．３．２遊離塩基結晶形ＩＩの製造および特徴付け
遊離塩基結晶形ＩＩは一部のエタノールを含有する溶媒系において得られ、無定形の化合物を原料とし、単一の溶媒であるエタノールの懸濁結晶化によって遊離塩基結晶形ＩＩが得られる。その特徴付けの結果は図７と図８に示すように、遊離塩基結晶形ＩＩのＤＳＣ曲線は１２４℃および２３０℃に二つの吸熱ピークがあり、ＴＧＡ曲線は６５－１５０ ℃に４．４８％の重量減少があり、そして遊離塩基結晶形ＩＩはエタノールの溶媒系において得られる。上記から、遊離塩基結晶形ＩＩはエタノールの溶媒和物であることが推測される。ＤＳＣ曲線の１２４ ℃における吸熱ピークは脱溶媒ピークになる。

【0127】

表１５遊離塩基結晶形ＩＩの粉末Ｘ線回折ピークのデータ

【表15】

【0128】

２．３．３遊離塩基結晶形ＩＩＩの製造および特徴付け
遊離塩基結晶形ＩＩＩは一部のイソプロパノールを含有する溶媒系において得られ、貧溶媒沈殿によって結晶形を製造する場合、ジクロロメタン／イソプロパノールまたはジクロロエタン／イソプロパノール系において遊離塩基結晶形ＩＩＩが見られる。その特徴付けの結果は図９と図１０に示すように、遊離塩基結晶形ＩＩＩのＤＳＣ曲線は１２１℃および２３０℃に二つの吸熱ピークがあり、ＴＧＡ曲線は７５－１４５ ℃に９．５７％の重量減少があり、そして遊離塩基結晶形ＩＩＩは１５０℃に加熱して脱溶媒した後、ＸＲＰＤでは遊離塩基結晶形Ｉに変換する。遊離塩基結晶形ＩＩＩはイソプロパノールの溶媒系において得られ、上記から、遊離塩基結晶形ＩＩＩはイソプロパノールの溶媒和物で、ＤＳＣ曲線の１２１ ℃における吸熱ピークは脱溶媒ピークであることが推測される。

【0129】

表１６遊離塩基結晶形ＩＩＩの粉末Ｘ線回折ピークのデータ

【表16】

【0130】

２．３．４遊離塩基結晶形ＩＶの製造および特徴付け
遊離塩基結晶形ＩＶは一部のジクロロエタンを含有する溶媒系において得られる。９２．２８ｍｇの原料を取り、サンプル瓶に入れ、５．０ｍＬのジクロロエタンを入れて溶解させ、サンプル瓶の上に密封膜を覆い、穴を開けた後、ドラフトチャンバーにおいてゆっくり揮発させ、このように蒸発結晶化によって結晶形ＩＶを製造した。その特徴付けの結果は図１１と図１２に示すように、遊離塩基結晶形ＩＶのＤＳＣ曲線は１０８℃および２３１℃に二つの吸熱ピークがあり、ＴＧＡ曲線は２５－１５０ ℃に１０．４１％の重量減少があった。^１ＨＮＭＲの結果から、６．１４％のみのジクロロエタンの溶媒残留があったことから、当該サンプルに４．２７％の水分が含まれることが推測される。上記から、遊離塩基結晶形ＩＶはジクロロエタンと水の混合の溶媒和物であることが推測される。

【0131】

表１７遊離塩基結晶形ＩＶの粉末Ｘ線回折ピークのデータ

【表17】

【0132】

２．３．５遊離塩基結晶形Ｖの製造および特徴付け
遊離塩基結晶形ＩＶを１５０ ℃に加熱して脱溶媒した後、ＸＲＰＤによって特徴付けを行ったところ、新たな結晶形になったと示され、遊離塩基結晶形Ｖと名付けた。その特徴付けの結果は図１３と図１４に示すように、遊離塩基結晶形ＶのＤＳＣ曲線は２３１℃に一つの吸熱ピークがあり、ＴＧＡ曲線は分解前に明らかな重量減少が無かった。上記から、遊離塩基結晶形Ｖは無水結晶形であることが推測される。

【0133】

表１８遊離塩基結晶形Ｖの粉末Ｘ線回折ピークのデータ

【表18】

【0134】

３．遊離塩基結晶形Ｉの結晶形の評価
今回のスクリーニングの過程において遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形Ｖの２種類の無水結晶形のみが発見され、アセトンおよびアセトニトリルの２種類の溶媒を使用し、それぞれ飽和溶液を調製し、そして２５℃または５０℃で、両者を競争懸濁を行った結果、遊離塩基結晶形Ｉは化合物の熱力学的に安定した結晶形であることが推測された。そして、遊離塩基結晶形Ｖはスクリーニング実験において直接得られず、遊離塩基結晶形ＩＶの脱溶媒のみによって得られた。そのため、遊離塩基結晶形Ｉのみに対して結晶形の評価を行ったが、乾式研磨、湿式研磨、打錠（３０ＭＰａ）、安定性および吸湿性などの研究を含む。

【0135】

研磨実験から、遊離塩基結晶形Ｉは５分の乾式研磨を経て無定形の状態になったこと、５分の水を入れた湿式後、結晶度に明らかな変化が見られず、５分のエタノールを入れた湿式研磨後、結晶度がやや低下したことがわかった。
打錠実験では、圧力が３０ＭＰａの場合、結晶度がやや低下した。

【0136】

安定性実験では、遊離塩基結晶形Ｉは開放して８０℃で３日、６０℃で７日、２５ ℃／６０％ＲＨで７日、４０ ℃／７５％ＲＨで７日、そして２５ ℃／９０±５％ＲＨで７日、それぞれサンプルを取ってＸＲＰＤ検出を行ったことがわかった。結果から、遊離塩基結晶形Ｉは明らかな変化がなく、薬物の液相検出の結果も変化がなかったことがわかった。

【0137】

遊離塩基結晶形Ｉに対して動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）テストを行った結果、８０％ＲＨの場合、吸水重量増加が０．６６％で、遊離塩基結晶形Ｉはやや吸湿性があることがわかる。

【0138】

上記のように、式１で表されるこの種類の化合物の空間配置を同定し、特に実施例１の空間構造を同定した。実施例１の化合物の結晶形スクリーニング研究において、計２つの無水結晶形（遊離塩基結晶形Ｉおよび遊離塩基結晶形Ｖ）および３つの溶媒和物（遊離塩基結晶形ＩＩ、遊離塩基結晶形ＩＩＩおよび遊離塩基結晶形ＩＶ）が見出された。実験において、遊離塩基結晶形Ｉは比較的に安定した無水結晶形で、安定した固形の性質を有し、かつやや吸湿性があり、後続の薬物開発に有用であることが見出された。

【図1】