特表 2025-501430 遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-22

(54)【発明の名称】遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/705 20060101AFI20250115BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20250115BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20250115BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 5/071 20100101ALI20250115BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20250115BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 13/00 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20250115BHJP

【ＦＩ】

C07K14/705 ZNA

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C07K16/00

C07K19/00

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N5/071

C12P21/02 C

A61K38/16

A61P35/00

A61P35/02

A61P15/00

A61P13/00

A61P11/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023577369

(86)(22)【出願日】2022-12-09

(85)【翻訳文提出日】2023-12-14

(86)【国際出願番号】 US2022052373

(87)【国際公開番号】W WO2023121887

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】63/292,267

(32)【優先日】2021-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523440260

【氏名又は名称】エフビーデー バイオロジクス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】ワン ジインタン

(72)【発明者】

【氏名】テン ハンファン

(72)【発明者】

【氏名】クオ パンシェン

(72)【発明者】

【氏名】ツェン チーリン

(72)【発明者】

【氏名】チュオ ゾン シェン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG20

4B064AG26

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA05

4B065AA90X

4B065AA93Y

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA06

4C084AA07

4C084BA01

4C084BA02

4C084BA22

4C084BA34

4C084CA53

4C084NA14

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA75

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）は、ＳＩＲＰファミリー由来の調節膜糖タンパク質である。これは主に骨髄細胞によって発現され、幹細胞又はニューロンによっても発現される。ＳＩＲＰαは、阻害性受容体として作用し、広く発現される膜貫通タンパク質ＣＤ４７と相互作用する。本開示は、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント、及びその使用方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、ＢＣループ、Ｃ’Ｄループ、及び／又はＤＥループに１つ以上のアミノ酸変異を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項2】

（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａ、Ｈ、Ｎ、Ｉ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｄ、又はＬである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｆ、Ｑ、Ｌ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ａ、又はＰである、及び
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐ、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｒ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである、
のうち、１つ以上を含む、請求項１に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項3】

配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである、請求項１又は２に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項4】

配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、Ｎ、又はＴである、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項5】

配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、又はＮである、請求項４に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項6】

（ａ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑ又はＮである、及び
（ｂ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである、
のうち、１つ以上を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項7】

（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｎ又はＴである、及び
（ｂ）配列番号１のＴ２６に対応するアミノ酸が、Ｉである、
のうち、１つ以上を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項8】

（ａ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇ、Ｆ、Ｒ、Ａ、Ｌ、又はＴである、
（ｂ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒ又はＹである、及び
（ｃ）配列番号１のＤ７３に対応するアミノ酸が、Ｉである、
のうち、１つ以上を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項9】

配列番号１のＫ５３に対応するアミノ酸がＲである、請求項１～８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項10】

配列番号１のＫ５３に対応するアミノ酸がＲではない、請求項１～８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項11】

（ａ）配列番号１の位置２７に対応するアミノ酸が、Ｖ又はＬである、
（ｂ）配列番号１の位置６３に対応するアミノ酸が、Ｖである、及び
（ｃ）配列番号１の位置６８に対応するアミノ酸が、Ｋである、
のうち、１つ以上を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項12】

配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、又は４５と少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項13】

配列番号１又は配列番号２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗである、及び
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項14】

配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項15】

配列番号１又は配列番号３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｆである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｉである、及び
（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項16】

配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項17】

配列番号１又は配列番号４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｈである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｅ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び
（ｆ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項18】

配列番号４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項19】

配列番号１又は配列番号５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｉである、及び
（ｄ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項20】

配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項21】

配列番号１又は配列番号６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＴ２６に対応するアミノ酸が、Ｉである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｉである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び
（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｙである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項22】

配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項23】

配列番号１又は配列番号７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び
（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項24】

配列番号７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項25】

配列番号１又は配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｇである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｎである、及び
（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｆである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項26】

配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項27】

配列番号１又は配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び
（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｆである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項28】

配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項29】

配列番号１又は配列番号１０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｖである、及び
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｒである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項30】

配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項31】

配列番号１又は配列番号１１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｇである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、及び
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ａである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項32】

配列番号１１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項33】

配列番号１又は配列番号１２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｆである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｌである、及び
（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項34】

配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項35】

配列番号１又は配列番号１３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｓである、及び
（ｅ）配列番号１のＮ７１に対応するアミノ酸が、Ｓである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項36】

配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項37】

配列番号１又は配列番号１４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び
（ｆ）配列番号１のＤ７３に対応するアミノ酸が、Ｉである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項38】

配列番号１４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項39】

配列番号１又は配列番号３３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ａである、及び
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項40】

配列番号３３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項41】

配列番号１又は配列番号３４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｐである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、及び
（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｌである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項42】

配列番号３４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項43】

配列番号１又は配列番号３５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、及び
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｒである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項44】

配列番号３４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項45】

配列番号１又は配列番号３６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｇである、及び
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｔである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項46】

配列番号３６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項47】

配列番号１又は配列番号３７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＳ２９に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｈである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び
（ｅ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｎである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項48】

配列番号３７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項49】

配列番号１又は配列番号３８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｐである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、及び
（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｌである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項50】

配列番号３８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項51】

配列番号１又は配列番号３９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、及び
（ｄ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項52】

配列番号３９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項53】

配列番号１又は配列番号４０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、及び
（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項54】

配列番号４０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項55】

配列番号１又は配列番号４１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項56】

配列番号４１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項57】

配列番号１又は配列番号４２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項58】

配列番号４２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５７に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項59】

配列番号１又は配列番号４３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、及び
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項60】

配列番号４３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項61】

配列番号１又は配列番号４４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、及び
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項62】

配列番号４４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６１に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項63】

配列番号１又は配列番号４５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、及び
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである、
のうち、１つ以上を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項64】

配列番号４５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６３に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項65】

ＣＨ２ドメインと、ＣＨ３ドメインとを更に含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項66】

ヒンジ領域を更に含む、請求項６５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項67】

前記ＣＨ２ドメインがＩｇＧ ＣＨ２ドメインであり、かつ前記ＣＨ３ドメインがＩｇＧ ＣＨ３ドメインである、請求項６５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項68】

配列番号１５～２８及び４６～５８のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド。

【請求項69】

請求項１～６８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを含む、タンパク質構築物。

【請求項70】

２つ以上の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを含む、請求項６９に記載のタンパク質構築物。

【請求項71】

少なくとも２つの遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドが同一である、請求項７０に記載のタンパク質構築物。

【請求項72】

少なくとも２つの遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドが異なる、請求項７０に記載のタンパク質構築物。

【請求項73】

Ｆｃ領域を更に含む、請求項６９に記載のタンパク質構築物。

【請求項74】

前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項７３に記載のタンパク質構築物。

【請求項75】

前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域（例えば、ＬＡＬＡ変異又はＬＡＬＡ－ＰＧ変異を有する）である、請求項７３に記載のタンパク質構築物。

【請求項76】

タンパク質構築物であって、
請求項１～６８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドと、第１のＣＨ２ドメインと、第１のＣＨ３ドメインとを含む、第１の融合ポリペプチドと、
第２のＣＨ２ドメインと、第２のＣＨ３ドメインとを含む、第２の融合ポリペプチドと
を含み、
前記第１の融合ポリペプチド及び前記第２の融合ポリペプチドが互いに会合して二量体を形成している、
タンパク質構築物。

【請求項77】

前記第２の融合ポリペプチドが、第２の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを更に含む、請求項７６に記載のタンパク質構築物。

【請求項78】

請求項１～６８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は請求項６９～７７のいずれか一項に記載のタンパク質構築物と、
薬学的に許容される担体と
を含む、医薬組成物。

【請求項79】

請求項１～６８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は請求項６９～７７のいずれか一項に記載のタンパク質構築物をコードする、核酸。

【請求項80】

請求項７９に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項81】

請求項７９に記載の核酸を含む、細胞。

【請求項82】

ＣＨＯ細胞である、請求項８１に記載の細胞。

【請求項83】

遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は前記遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを含むタンパク質構築物を産生する方法であって、
（ａ）請求項８１又は８２に記載の細胞を、前記細胞が前記遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は前記タンパク質構築物を産生するのに十分な条件下で培養することと、
（ｂ）前記細胞によって産生された、前記遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は前記タンパク質構築物を回収することと
を含む、方法。

【請求項84】

がんを有する対象を治療する方法であって、請求項１～６８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は請求項６９～７７のいずれか一項に記載のタンパク質構築物を含む組成物の治療有効量を、前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項85】

前記対象が固形腫瘍又は血液がんを有する、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記がんが、急性骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫、乳がん、膀胱がん、卵巣がん、又は小細胞肺がん腫瘍である、請求項８４に記載の方法。

【請求項87】

腫瘍増殖の速度を低下させる方法であって、
腫瘍細胞を、請求項１～６８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は請求項６９～７７のいずれか一項に記載のタンパク質構築物を含む組成物の有効量と接触させること
を含む、方法。

【請求項88】

腫瘍細胞を殺滅する方法であって、
腫瘍細胞を、請求項１～６８のいずれか一項に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は請求項６９～７７のいずれか一項に記載のタンパク質構築物を含む組成物の有効量と接触させること
を含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本開示は、２０２１年１２月２１日出願の米国特許仮出願第６３／２９２，２６７号の優先権及び利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、５２２４６－０００４ＷＯ１＿ＳＬ＿ＳＴ２６．ｘｍｌという名称のＸＭＬファイルとして電子的に提出された配列表を含む。２０２２年１２月５日に作成されたＸＭＬファイルは、６５，０９４バイトのサイズである。ＸＭＬファイル内の資料は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

発明の分野
本開示は、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント、及びその使用方法に関する。

【背景技術】

【0004】

背景
シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）は、ＳＩＲＰファミリー由来の調節膜糖タンパク質である。これは主に骨髄細胞によって発現され、幹細胞又はニューロンによっても発現される。ＳＩＲＰαは、阻害性受容体として作用し、広く発現される膜貫通タンパク質ＣＤ４７と相互作用する。この相互作用は、宿主細胞貪食などの自然免疫細胞のエフェクター機能を負に制御する。ＳＩＲＰαは、マクロファージ膜上で横方向に拡散し、貪食シナプスに蓄積してＣＤ４７に結合し、これがマクロファージによる貪食の細胞骨格集中プロセスを阻害する。

【0005】

ＣＤ４７は、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）のＮ末端に結合することによって「ｄｏ ｎｏｔ ｅａｔ」シグナルを提供する。これは、多くの異なる腫瘍細胞において過剰発現されることが見出されている。ＣＤ４７及び／又はＳＩＲＰαを標的とすることは、がん免疫療法に有用であり得る。しかし、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用は、赤血球、血小板、及びリンパ球を脾臓マクロファージによる迅速な排除から保護するために必要である。限定された毒性を有するＣＤ４７／ＳＩＲＰα経路を標的とするがん療法を開発する必要がある。

【発明の概要】

【0006】

概要
本開示は、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント、及びその使用方法に関する。

【0007】

一態様では、本開示は、配列番号１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＢＣループ、Ｃ’Ｄループ、及び／又はＤＥループに１つ以上のアミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａ、Ｈ、Ｎ、Ｉ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｄ、又はＬである、（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｆ、Ｑ、Ｌ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ａ、又はＰである、及び（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐ、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｒ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである。

【0008】

いくつかの実施形態では、配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸は、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである。いくつかの実施形態では、配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸は、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、Ｎ、又はＴである。いくつかの実施形態では、配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸は、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、又はＮである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑ又はＮである、及び（ｂ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｎ又はＴである、（ｂ）配列番号１のＴ２６に対応するアミノ酸が、Ｉである。

【0009】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇ、Ｆ、Ｒ、Ａ、Ｌ、又はＴである、（ｂ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒ又はＹである、及び（ｃ）配列番号１のＤ７３に対応するアミノ酸が、Ｉである。

【0010】

いくつかの実施形態では、配列番号１のＫ５３に対応するアミノ酸は、Ｒである。いくつかの実施形態では、配列番号１のＫ５３に対応するアミノ酸は、Ｒではない。

【0011】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１の位置２７に対応するアミノ酸が、Ｖ又はＬである、（ｂ）配列番号１の位置６３に対応するアミノ酸が、Ｖである、及び（ｃ）配列番号１の位置６８に対応するアミノ酸が、Ｋである。

【0012】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、又は４５と少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0013】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗである、及び（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0014】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｆである、（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｉである、及び（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0015】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｎである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｈである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｅ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び（ｆ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0016】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｎである、（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｌである、（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｉである、及び（ｄ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0017】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＴ２６に対応するアミノ酸が、Ｉである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｉである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｌである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｙである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0018】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｋである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0019】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｇである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｎである、及び（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｆである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0020】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｆである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0021】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号１０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｌである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｖである、及び（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｒである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0022】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号１１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｇである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、及び（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ａである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0023】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号１２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｌである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｄである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｆである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｌである、及び（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0024】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号１３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｌである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｓである、及び（ｅ）配列番号１のＮ７１に対応するアミノ酸が、Ｓである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0025】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号１４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び（ｆ）配列番号１のＤ７３に対応するアミノ酸が、Ｉである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0026】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ａである、及び（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0027】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｐである、（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、及び（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｌである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0028】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、及び（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｒである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0029】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｇである、及び（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｔである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0030】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＳ２９に対応するアミノ酸が、Ｑである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｈである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、及び（ｅ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｎである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0031】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｐである、（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、及び（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｌである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0032】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号３９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｌである、（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、及び（ｄ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号３９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0033】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号４０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｌである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、及び（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0034】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号４１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0035】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号４２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｎである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、及び（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0036】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号４３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、及び（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0037】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号４４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｎである、（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、及び（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0038】

一態様では、本開示は、配列番号１又は配列番号４５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドに関し、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、及び（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ヒンジ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインはＩｇＧ ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３ドメインはＩｇＧ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１５～２８及び４６～５８のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0040】

一態様では、本開示は、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを含むタンパク質構築物に関する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質構築物は、２つ以上の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは同一である。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは異なる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質構築物は、Ｆｃ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域（例えば、ＬＡＬＡ変異又はＬＡＬＡ－ＰＧ変異を有する）である。

【0041】

一態様では、本開示は、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドと、第１のＣＨ２ドメインと、第１のＣＨ３ドメインとを含む、第１の融合ポリペプチドと、第２のＣＨ２ドメインと、第２のＣＨ３ドメインとを含む、第２の融合ポリペプチドとを含む、タンパク質構築物に関する。いくつかの実施形態では、第１の融合ポリペプチド及び第２の融合ポリペプチドは、互いに会合して、二量体を形成する。いくつかの実施形態では、第２の融合ポリペプチドは、第２の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを更に含む。

【0042】

一態様では、本開示は、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は本明細書に記載のタンパク質構築物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物に関する。

【0043】

一態様では、本開示は、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は本明細書に記載のタンパク質構築物をコードする、核酸に関する。一態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸を含む、ベクターに関する。一態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸を含む、細胞に関する。いくつかの実施形態では、細胞はＣＨＯ細胞である。

【0044】

一態様では、本開示は、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドを含むタンパク質構築物を産生する方法に関し、この方法は、（ａ）本明細書に記載の細胞を、この細胞が遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又はタンパク質構築物を産生するのに十分な条件下で培養することと、（ｂ）細胞によって産生された、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又はタンパク質構築物を回収することとを含む。

【0045】

一態様では、本開示は、がんを有する対象を治療する方法に関し、この方法は、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は本明細書に記載のタンパク質構築物を含む組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、固形腫瘍又は血液がんを有する。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫、乳がん、膀胱がん、卵巣がん、又は小細胞肺がん腫瘍である。

【0046】

一態様では、本開示は、腫瘍増殖の速度を低下させる方法に関し、この方法は、腫瘍細胞を、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は本明細書に記載のタンパク質構築物を含む組成物の有効量と接触させることを含む。

【0047】

一態様では、本開示は、腫瘍細胞を殺滅する方法に関し、この方法は、腫瘍細胞を、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド又は本明細書に記載のタンパク質構築物を含む組成物の有効量と接触させることを含む。

【0048】

本明細書で使用される場合、「遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチド」という用語は、１つ以上の変異（例えば、挿入、欠失、又は置換）を有する野生型ＳＩＲＰαポリペプチド又はその一部（例えば、ＳＩＲＰαの細胞外領域、又はＳＩＲＰαのＩｇＶドメイン）に由来するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＳＩＲＰαの細胞外領域を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＳＩＲＰαのＩｇＶドメインを含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、改変されたＩｇＶドメインである。

【0049】

本明細書中で使用される場合、「タンパク質構築物」という用語は、１つ以上のポリペプチドを有する複合体を指す。いくつかの実施形態では、タンパク質構築物は２つ以上のポリペプチドを有し、ポリペプチドは互いに会合して二量体又は多量体を形成することができる。

【0050】

本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、未制御で自律的な増殖の能力を有する細胞を指す。このような細胞の例としては、急速に増殖する細胞成長によって特徴付けられる異常な段階又は状態を有する細胞が挙げられる。この用語は、がん性増殖、例えば腫瘍、組織病理学的タイプ又は侵襲性の段階にかかわらず、腫瘍形成プロセス、転移組織、及び悪性形質転換した細胞、組織、又は器官を含むことを意味する。呼吸器系、心血管系、腎臓系、生殖系、血液系、神経系、肝臓系、消化器系、及び内分泌系などの様々な臓器系の悪性腫瘍、並びに、多くの結腸がん、腎細胞がん、前立腺がん及び／又は精巣腫瘍、非肺小細胞がん、及び小腸がんなどの悪性腫瘍を含む腺がんも含まれる。「自然発生する」がんは、対象へのがん細胞の移植によって実験的に誘導されていない任意のがんを含み、例えば、自然発生的ながん、患者の発がん物質への曝露によって引き起こされるがん、トランスジェニックがん遺伝子の挿入又は腫瘍抑制遺伝子のノックアウトから生じるがん、及び感染症、例えば、ウイルス感染症によって引き起こされるがんを含む。「がん腫」という用語は当技術分野で認識されており、上皮組織又は内分泌組織の悪性腫瘍を指す。この用語はまた、がん性及び肉腫性組織から構成される悪性腫瘍を含むがん肉腫を含む。「腺がん」は、腺組織に由来するがん腫、又は腫瘍細胞が認識可能な腺状構造を形成するがん腫を指す。「肉腫」という用語は当技術分野で認識されており、間葉由来の悪性腫瘍を指す。「造血器腫瘍性疾患」という用語は、造血起源の過形成／新生細胞が関与する疾患を含む。造血器腫瘍性疾患は、骨髄系統、リンパ系統若しくは赤血球系統、又はそれらの前駆細胞から生じ得る。血液がんは、骨髄などの造血組織において、又は免疫系の細胞において始まるがんである。血液がんの例としては、例えば、白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫などが挙げられる。

【0051】

本明細書中で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書全体を通して互換的に使用され、本発明の方法による処置が提供される動物（ヒト又は非ヒト）を説明する。獣医学的及び非獣医学的適用が、本開示において企図される。ヒト患者は、成人又は若年者（例えば、１８歳未満のヒト）であり得る。ヒトに加えて、患者としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、フェレット、ネコ、イヌ、及び霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジー、ゴリラなど）、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、フェレット、ウサギ）、ウサギ類、ブタ（swine）（例えば、ブタ、ミニブタ）、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ、並びに他の飼育動物、家畜、及び動物園の動物が含まれる。

【0052】

本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、少なくとも２つのアミノ酸である任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。

【0053】

本明細書中で使用される場合、「ポリヌクレオチド」、「核酸分子」、及び「核酸配列」という用語は、本明細書中で互換的に使用され、少なくとも２つのヌクレオチドである任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、及びそれらの改変体を含むが、これらに限定されない。

【0054】

特段の記載がない限り、本明細書で用いられる全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野における当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本発明で使用するための方法及び材料が本明細書に記載されており、当技術分野で既知の他の適切な方法及び材料も使用することができる。材料、方法、及び実施例は、単に例示的なものであり、限定を意図したものではない。本明細書中で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリー、及び他の参考文献は、その全体が参考として組み込まれる。矛盾のある場合、定義を含め本明細書が適用される。

【0055】

本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0056】

【図1】ヒトＳＩＲＰαのＩｇＶドメインの３Ｄタンパク質構造を示す。９つのβ鎖（Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｃ’－Ｄ－Ｅ－Ｆ－Ｇ－Ｇ２）及び５つのループ領域（ＢＣループ、ＣＣ’ループ、Ｃ’Ｄループ、ＤＥループ、及びＦＧループ）が表示されている。

【図2】ヒトＳＩＲＰαのＩｇＶドメインのアミノ酸残基を示す。この配列（配列番号１）は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ７１４０３．１（配列番号３０）のアミノ酸３１～１４８と同一である。ＢＣループ、Ｃ’Ｄループ、及びＤＥループ内の残基に下線を付す。

【図3】Ａ～Ｄは、Ｋ５３、Ｇ５５、Ｅ５４、及びＨ５６の残基スキャン結果を示す。

【図4A】５６個の選択されたクローンの発現レベル（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）、ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）、ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能、ヒトＣＤ４７結合（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）、ヒトＣＤ４７結合能（Ｂ）／発現（Ｅ）比、及びマウスＣＤ４７結合（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）のデータを示す表である。

【図4B】５６個の選択されたクローンの発現レベル（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）、ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）、ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能、ヒトＣＤ４７結合（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）、ヒトＣＤ４７結合能（Ｂ）／発現（Ｅ）比、及びマウスＣＤ４７結合（４５０ｎｍでの吸光度又はＯＤ_４５０）のデータを示す表である。

【図5】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質の概略構造を示す。２つのＳＩＲＰα ＩｇＶドメインが、ヒトＩｇＧ４ヒンジ及びＦｃ領域のＮ末端に接続されている。

【図6】野生型ＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン及び１３個の選択されたクローン（ｍｔ３～ｍｔ１５）のＢＣループ領域、Ｃ’Ｄループ領域、及びＤＥループ領域内の特定のアミノ酸変異を示す。

【図7】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＨＰＬＣ－ＳＥＣによる精製結果を示す。

【図8】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＣＤ４７－ＥＣＤ－Ｈｉｓに対するＯｃｔｅｔ（登録商標）システムによる結合親和性の結果を示す。

【図9A】それぞれ、ＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、及びＲａｊｉ細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図9B】それぞれ、ＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、及びＲａｊｉ細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図9C】それぞれ、ＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、及びＲａｊｉ細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図9D】それぞれ、ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ及びＲａｊｉ細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図9E】それぞれ、ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ及びＲａｊｉ細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図10A】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＲＢＣ結合結果を示す。ヒト赤血球を２人のドナーから採取した。

【図10B】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＲＢＣ結合結果を示す。ヒト赤血球を２人のドナーから採取した。

【図10C】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＲＢＣ結合結果を示す。ヒト赤血球を２人のドナーから採取した。

【図10D】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＲＢＣ結合結果を示す。ヒト赤血球を２人のドナーから採取した。

【図11A】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の血小板結合結果を示す。ヒト血小板を２人のドナーから採取した。

【図11B】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の血小板結合結果を示す。ヒト血小板を２人のドナーから採取した。

【図11C】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の血小板結合結果を示す。ヒト血小板を２人のドナーから採取した。

【図11D】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の血小板結合結果を示す。ヒト血小板を２人のドナーから採取した。

【図12A】ｃｙｎｏＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、又はＬＬＣ－ＭＫ２細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図12B】ｃｙｎｏＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、又はＬＬＣ－ＭＫ２細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図12C】ｃｙｎｏＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、又はＬＬＣ－ＭＫ２細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図13A】ＥＭＴ－６細胞に対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の全細胞結合の結果を示す。

【図13B】図１３Ａの低ＭＦＩ領域の拡大図である。

【図14A】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質を用いたＲＢＣ赤血球凝集アッセイの結果を示す。ヒトＲＢＣ細胞を３人のドナーから採取した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用して赤血球凝集を誘導した。

【図14B】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質を用いたＲＢＣ赤血球凝集アッセイの結果を示す。ヒトＲＢＣ細胞を３人のドナーから採取した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用して赤血球凝集を誘導した。

【図14C】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質を用いたＲＢＣ赤血球凝集アッセイの結果を示す。ヒトＲＢＣ細胞を３人のドナーから採取した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用して赤血球凝集を誘導した。

【図15A】それぞれＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＦａＤｕ細胞、及びＲａｊｉ細胞を使用したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能を示す。

【図15B】それぞれＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＦａＤｕ細胞、及びＲａｊｉ細胞を使用したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能を示す。

【図15C】それぞれＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＦａＤｕ細胞、及びＲａｊｉ細胞を使用したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能を示す。

【図15D】ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞を使用したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能を示す。

【図15E】ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞を使用したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能を示す。

【図16A】それぞれＪｕｒｋａｔ、ＦａＤｕ、及びＲａｊｉ細胞に対するＲａｗ２６４．７マウスマクロファージによるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図16B】それぞれＪｕｒｋａｔ、ＦａＤｕ、及びＲａｊｉ細胞に対するＲａｗ２６４．７マウスマクロファージによるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図16C】それぞれＪｕｒｋａｔ、ＦａＤｕ、及びＲａｊｉ細胞に対するＲａｗ２６４．７マウスマクロファージによるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図16D】それぞれＤＬＤ１、及びＲａｊｉ細胞に対するＲａｗ２６４．７マウスマクロファージによるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図16E】それぞれＤＬＤ１、及びＲａｊｉ細胞に対するＲａｗ２６４．７マウスマクロファージによるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図17A】ヒトＲＢＣ細胞に対するＲａｗ２６４．７マウスマクロファージによるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図17B】ヒト血小板に対するＲａｗ２６４．７マウスマクロファージによるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図18A】それぞれ、Ｒａｊｉ、ＤＬＤ１、及びＪｕｒｋａｔ細胞に対するヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図18B】それぞれ、Ｒａｊｉ、ＤＬＤ１、及びＪｕｒｋａｔ細胞に対するヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図18C】それぞれ、Ｒａｊｉ、ＤＬＤ１、及びＪｕｒｋａｔ細胞に対するヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図18D】ＤＬＤ１細胞に対するヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。

【図19A】ＲＢＣ細胞に対するヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。ヒトＲＢＣ細胞を２人のドナーから採取した。

【図19B】ＲＢＣ細胞に対するヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。ヒトＲＢＣ細胞を２人のドナーから採取した。

【図19C】ＲＢＣ細胞に対するヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質により誘導された貪食能を示す。ヒトＲＢＣ細胞を２人のドナーから採取した。

【図20A】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ ＴＴＩ－６２２）、又はＨｕ５Ｆ９－ＩｇＧ４で処置したＲａｊｉ異種移植片担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。対照群マウスにはプラセボを投与した。

【図20B】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ ＴＴＩ－６２２）、Ｈｕ５Ｆ９－ＩｇＧ４、又はプラセボで処置したＲａｊｉ異種移植片担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける接種後１８日目の個々の腫瘍体積を示す。

【図20C】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ ＴＴＩ－６２２）、Ｈｕ５Ｆ９－ＩｇＧ４、又はプラセボで処置したＲａｊｉ異種移植片担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの生存曲線を示す。

【図21A】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ ＴＴＩ－６２２）、又はＨｕ５Ｆ９－ＩｇＧ４で処置したＮＣＩ＿Ｈ８２異種移植片担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。対照群マウスにはプラセボを投与した。

【図21B】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ ＴＴＩ－６２２）、Ｈｕ５Ｆ９－ＩｇＧ４、又はプラセボで処置したＮＣＩ＿Ｈ８２異種移植片担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける接種後２５日目の個々の腫瘍体積を示す。

【図21C】ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ ＴＴＩ－６２２）、Ｈｕ５Ｆ９－ＩｇＧ４、又はプラセボで処置したＮＣＩ＿Ｈ８２異種移植片担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの生存曲線を示す。

【図22-1】ヒトＳＩＲＰαの野生型ＩｇＶドメイン又はＩｇＶドメイン変異体のアミノ酸配列を列挙する。

【図22-2】ヒトＳＩＲＰαの野生型ＩｇＶドメイン又はＩｇＶドメイン変異体のアミノ酸配列を列挙する。

【図23-1】本開示で説明されるタンパク質配列を列挙する。

【図23-2】本開示で説明されるタンパク質配列を列挙する。

【図23-3】本開示で説明されるタンパク質配列を列挙する。

【図23-4】本開示で説明されるタンパク質配列を列挙する。

【図23-5】本開示で説明されるタンパク質配列を列挙する。

【発明を実施するための形態】

【0057】

詳細な説明
シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰａ、又はＣＤ１７２Ａ）は、膜貫通タンパク質である。これは、３つのＩｇ様ドメインを含む細胞外領域と、タンパク質チロシンホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の結合を媒介する免疫受容体チロシン系阻害モチーフを含む細胞質領域とを有する。ＳＩＲＰαのチロシンリン酸化は、種々の増殖因子及びサイトカインによって、並びに細胞外マトリックスタンパク質へのインテグリン媒介細胞接着によって調節される。ＳＩＲＰαは、マクロファージ及び樹状細胞などの骨髄細胞において特に豊富であるが、Ｔ、Ｂ、ＮＫ、及びＮＫＴ細胞においては低レベルでしか発現されない。

【0058】

ＳＩＲＰαの細胞外領域は、そのリガンドのＣＤ４７と相互作用することができる。マクロファージ上のＳＩＲＰαと赤血球上のＣＤ４７との相互作用は、インビトロ及びインビボでマクロファージによるＩｇオプソニン化赤血球の貪食を防止する。隣接細胞上に発現されたＣＤ４７による食細胞上へのＳＩＲＰαのライゲーションは、ＳＩＲＰαの細胞質免疫受容体チロシン系阻害（ＩＴＩＭ）モチーフのリン酸化をもたらし、ＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２ホスファターゼの動員をもたらす。１つの結果として生じる下流効果は、貪食シナプスにおけるミオシン－ＩＩＡ蓄積の防止、及びその結果としての貪食の阻害である。したがって、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用は、健康な自己細胞が不適切に貪食されないことを確実にするために「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルを送信する負の免疫チェックポイントとして機能する。しかしながら、ＣＤ４７の過剰発現は、ほとんど全てのタイプの腫瘍においても見出されており、そのいくつかには、急性骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫、膀胱がん、及び乳がんが含まれる。マクロファージのそのような負の調節は、ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を遮断することによって最小限に抑えることができる。

【0059】

ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用の遮断は、細胞貪食を促進することができ、したがって、様々ながんを治療するために使用することができる。それは、自然免疫によるがん細胞の認識及び排除を誘発する。ＣＤ４７又はＳＩＲＰαを標的とする薬剤は、様々な腫瘍及びがん、例えば、固形腫瘍、血液悪性腫瘍（例えば、再発性又は難治性血液悪性腫瘍）、急性骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫、乳がん、膀胱がん、卵巣がん、及び小細胞肺がん腫瘍を治療するために使用することができる。

【0060】

ＳＩＲＰα及びその機能の詳細な説明は、例えば、Ｙａｎａｇｉｔａ ｅｔ ａｌ．「Ａｎｔｉ－ＳＩＲＰα ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｎｅｗ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．」ＪＣＩ ｉｎｓｉｇｈｔ ２．１（２０１７）；Ｓｅｉｆｆｅｒｔ ｅｔ ａｌ．「Ｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ α （ＳＩＲＰα）ｂｕｔ ｎｏｔ ＳＩＲＰβ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ， ｂｉｎｄｓ ｔｏ ＣＤ４７ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ，ａｎｄ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｉｍｍａｔｕｒｅ ＣＤ３４＋ ＣＤ３８－ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．」Ｂｌｏｏｄ ９７．９（２００１）：２７４１－２７４９；に見出すことができ、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0061】

更に、ＳＩＲＰαは、マクロファージによる、赤血球及び血小板を含むＣＤ４７発現宿主細胞のインビボクリアランスを阻害するように作用する。ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用はまた、造血幹細胞への生着に必須であるようである。ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用の遮断は、正常な赤血球の偶発的な殺滅を引き起こす可能性があり、潜在的に貧血をもたらし、炎症を誘発する。したがって、例えば、赤血球に対する限定された又は制御された影響を有する、ＳＩＲＰα標的化剤とＣＤ４７との相互作用を調節することが重要である。

【0062】

本開示は、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントを提供する。これらの遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα経路を標的化するために使用することができるが、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントとＣＤ４７との相互作用は慎重に調節される。

【0063】

遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント
ヒトＳＩＲＰαは、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）のメンバーである。シグナル調節タンパク質は、必須の細胞表面タンパク質相互作用及びシグナル伝達を媒介する細胞表面Ｉｇスーパーファミリータンパク質である。ＳＩＲＰは全て、Ｎ末端細胞外領域、単一の膜貫通ドメイン及びＣ末端細胞内領域を含む。

【0064】

ヒトＳＩＲＰα（ＵｎｉＰｒｏｔ識別子：Ｐ７８３２４）の細胞外領域は、ＩｇＶドメイン、Ｉｇ様Ｃ１タイプ１ドメイン、及びＩｇ様Ｃ１タイプ２ドメインを有する。これらは、ヒトＳＩＲＰαタンパク質（配列番号３１、ＮＰ＿５４２９７０：１）のアミノ酸３２～１３７、アミノ酸１４８～２４７、及びアミノ酸２５４～３４８に対応する。アミノ酸１～３０はシグナルペプチドである。ヒトＳＩＲＰαはまた、２つの推定される免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む長い細胞内ドメインを有する。ＳＩＲＰα ＩＴＩＭの活性化は、細胞応答を負に調節する阻害シグナルを送達する。

【0065】

ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合は、ＳＩＲＰαの細胞外ＩｇＶドメインを介して媒介される。ｈＳＩＲＰａのＩｇＶドメインは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｃ’－Ｄ－Ｅ－Ｆ－Ｇ－Ｇ２を含む９つのβ鎖を含有する。ヘリックスは、Ｅ鎖とＦ鎖との間に位置する（図１）。

【0066】

ｈＳＩＲＰαと複合体化したヒトＣＤ４７（ｈＣＤ４７）の構造に基づいて、ＣＤ４７と相互作用する残基が決定される。解析結果は、ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメインのＢＣループ（配列番号１のアミノ酸２４～３６に対応）、Ｃ’Ｄループ（配列番号１のアミノ酸５３～５６に対応）、及びＤＥループ（配列番号１のアミノ酸６１～７８に対応）内に位置する複数の相互作用残基が高度に保存されていることを示す。図１Ｂでは、これらのループ領域内のアミノ酸残基に下線が引かれている。これらの領域は変異の標的である。したがって、いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＢＣループ、Ｃ’Ｄループ、及び／又はＤＥループに１つ以上のアミノ酸置換を含むか、又はそれらからなる。

【0067】

更なる分析は、ｈＳＩＲＰαのＬｅｕ３０、Ｇｌｙ３４、Ｇｌｎ５２、Ｌｙｓ５３、Ｇｌｕ５４、Ｈｉｓ５６、Ｓｅｒ６６、Ｔｈｒ６７、Ａｒｇ６９、Ｌｙｓ９３、Ｌｙｓ９６、Ｇｌｙ９７、及びＡｓｐ１００が、ＣＤ４７との相互作用に関与することを示す。したがって、いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、Ｌｅｕ３０、Ｇｌｙ３４、Ｇｌｎ５２、Ｌｙｓ５３、Ｇｌｕ５４、Ｈｉｓ５６、Ｓｅｒ６６、Ｔｈｒ６７、Ａｒｇ６９、Ｌｙｓ９３、Ｌｙｓ９６、Ｇｌｙ９７、及び／又はＡｓｐ１００に１つ以上のアミノ酸変異を含み得る。

【0068】

加えて、Ｌｙｓ５３及びＳｅｒ６６は、ＣＤ４７に対するｈＳＩＲＰαの結合親和性を増加させるために重要であり得ることが決定されている。Ｌｙｓ５３はＣ’Ｄループ上に位置し、Ｓ６６はＤＥループ上に位置する。位置５３のＬｙｓの変異は、ＣＤ４７に対するｈＳＩＲＰαの結合親和性を増加させるために重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、配列番号１のＫ５３に対応するアミノ酸は、Ｒである。加えて、構造変化による位置５４の立体障害の排除はまた、Ｃ’Ｄループの構造の変化もまた示唆し、それもまた、ｈＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合親和性を増加させる機会を増加させ得る。Ｃ’Ｄループの変異は、ＣＤ４７に対する結合親和性の増加を提供できる固有の変異をスクリーニングするためのより柔軟なアプローチを提供する。

【0069】

残基スキャンの結果によれば、Ｌｙｓ５３は、アルギニン、ロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンなどの長い側鎖又は芳香環を有する側鎖を有するアミノ酸によって置換された場合、安定性を増加させることができる。したがって、いくつかの実施形態では、配列番号１のＫ５３に対応するアミノ酸は、アルギニン、ロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンである。いくつかの実施形態では、配列番号１のＫ５３に対応するアミノ酸は、Ｒではない。

【0070】

一方、Ｇｌｕ５４、Ｇｌｙ５５、及びＨｉｓ５６での変異を指示することは、より柔軟であり得、より有利であり得る。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を有し得る：（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａ、Ｈ、Ｎ、Ｉ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｄ又はＬである、（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｆ、Ｑ、Ｌ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ａ、又はＰである、（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐ、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｒ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである。

【0071】

Ｔｈｒ６７は、相互作用に直接関与する残基であり、ＣＤ４７に対するＴｈｒ６７の距離を減少させることによって、ＣＤ４７に対するｈＳＩＲＰαの結合親和性を増加させ得る。残基Ｓｅｒ６６及びＴｈｒ６７の置換は、ＤＥループをＣＤ４７により近くすることができる。したがって、いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下のうちの１つ以上を有し得る：（ａ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑ又はＮである、（ｂ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである。

【0072】

ＣＤ４７／ｈＳＩＲＰａ複合体のいくつかの他の界面もまた、本開示において観察される。残基Ｉｌｅ３１、Ｖａｌ３３、及びＡｒｇ６９は、正電荷ポケットを形成することができる。ＣＤ４７のＦＧループは、２つの領域の電荷及び形状の相補性のために、正電荷ポケットに完全に埋め込まれている。したがって、いくつかの実施形態では、配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸は、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、Ｎ、又はＴである。いくつかの実施形態では、配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸は、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、又はＮである。

【0073】

加えて、本開示における分析は、Ｖａｌ２７、Ｖａｌ６３、及びＬｙｓ６８がｈＳＩＲＰαの構造を維持するために重要であり得ることを示す。したがって、いくつかの実施形態では、これらのアミノ酸残基は保持される。要約すると、Ｉｌｅ３１、Ｇｌｕ５４、Ｇｌｙ５５、Ｈｉｓ５６、Ｓｅｒ６６、及びＴｈｒ６７が、ｈＳＩＲＰα変異スクリーニングの候補アミノ酸として同定される。

【0074】

したがって、一態様では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、又は４５と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0075】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号９と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１４と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４１と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４２と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４３と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４４と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号４５と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0076】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントは、配列番号１～１４及び３３～４５のいずれか１つと比較して、少なくとも又は約１個（例えば、少なくとも又は約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０個）のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有し得る。

【0077】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を有する：
（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａ、Ｈ、Ｎ、Ｉ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｄ、又はＬである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｆ、Ｑ、Ｌ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ａ又はＰである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐ、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｒ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである。

【0078】

いくつかの実施形態では、配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸は、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである。いくつかの実施形態では、配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸は、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、Ｎ、Ｉ、又はＴである。いくつかの実施形態では、配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸は、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、Ｎ、又はＩである。

【0079】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑ又はＮである、
（ｂ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである。

【0080】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒ、Ｎ、又はＴである、
（ｂ）配列番号１のＴ２６に対応するアミノ酸が、Ｉである。

【0081】

いくつかの実施形態では、配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸は、Ｎ又はＴである。

【0082】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇ、Ｆ、Ｒ、Ａ、Ｌ、又はＴである、
（ｂ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒ又はＹである、及び
（ｃ）配列番号１のＤ７３に対応するアミノ酸が、Ｉである。

【0083】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１の位置２７に対応するアミノ酸が、Ｖ又はＬである、
（ｂ）配列番号１の位置６３に対応するアミノ酸が、Ｖである、及び
（ｃ）配列番号１の位置６８に対応するアミノ酸が、Ｋである。

【0084】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒ、Ｎ、又はＴである、
（ｂ）配列番号１のＴ２６に対応するアミノ酸が、Ｉである、
（ｃ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｄ）配列番号１のＳ２９に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｅ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ａ、又はＮである、
（ｆ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａ、Ｈ、Ｎ、Ｉ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｄ、又はＬである、
（ｇ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗ、Ｆ、Ｑ、Ｌ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ａ、又はＰである、
（ｈ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐ、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｖ、Ｒ、Ｌ、Ｓ、Ｇ、又はＱである、
（ｉ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑ又はＮである、
（ｊ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである、
（ｋ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇ、Ｆ、Ｒ、Ａ、Ｌ、又はＴである、
（ｌ）配列番号１のＮ７１に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｍ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒ又はＹである、及び
（ｎ）配列番号１のＤ７３に対応するアミノ酸が、Ｉである。

【0085】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含まないか、又はそれらから構成されない：
（ａ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｉ又はＬである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｆ、Ｓ、又はＴである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐ又はＲである、
（ｅ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｔ又はＧである、
（ｆ）配列番号１のＫ６８に対応するアミノ酸が、Ｋ又はＲである、及び
（ｇ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｎである。

【0086】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである。

【0087】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号２）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0088】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｆである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｉである、
（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇである。

【0089】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0090】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｈである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｅ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｆ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。

【0091】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0092】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｉである、
（ｄ）配列番号１のＴ６７に対応するアミノ酸が、Ｇである。

【0093】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号５）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0094】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＴ２６に対応するアミノ酸が、Ｉである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｉである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｙである。

【0095】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号６）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0096】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。

【0097】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号７）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0098】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｇである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｆである。

【0099】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号８）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0100】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｆ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｆである。

【0101】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号９）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0102】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｖである、
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｒである。

【0103】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号１０）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0104】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｇである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ａである。

【0105】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号１１）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0106】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｆである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｅ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。

【0107】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号１２）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0108】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｅ）配列番号１のＮ７１に対応するアミノ酸が、Ｓである。

【0109】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号１３）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0110】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｆ）配列番号１のＤ７３に対応するアミノ酸が、Ｉである。

【0111】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号１４）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0112】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである。

【0113】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３３）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0114】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｐである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、
（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｌである。

【0115】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３４）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0116】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｒである。

【0117】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３５）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0118】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｗである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｇである、
（ｅ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｔである。

【0119】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３６）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0120】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＳ２９に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｈである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｅ）配列番号１のＳ６６に対応するアミノ酸が、Ｎである。

【0121】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３７）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0122】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｓである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｐである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｌである。

【0123】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３８）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0124】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｄである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＭ７２に対応するアミノ酸が、Ｒである。

【0125】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号３９）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0126】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＶ２７に対応するアミノ酸が、Ｌである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｃ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｐである、
（ｄ）配列番号１のＥ７０に対応するアミノ酸が、Ｇである。

【0127】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４０）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0128】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである。

【0129】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４１）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0130】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｔである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｑである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｔである。

【0131】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４２）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0132】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｙである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである。

【0133】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４３）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0134】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＩ３１に対応するアミノ酸が、Ｎである、
（ｃ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｄ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｅ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである。

【0135】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４４）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0136】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、以下の変異のうちの１つ以上を含むか、又はそれらからなる：
（ａ）配列番号１のＨ２４に対応するアミノ酸が、Ｒである、
（ｂ）配列番号１のＥ５４に対応するアミノ酸が、Ａである、
（ｃ）配列番号１のＧ５５に対応するアミノ酸が、Ｋである、
（ｄ）配列番号１のＨ５６に対応するアミノ酸が、Ｑである。

【0137】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４５）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0138】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、図６に示すように、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の変異を有する配列番号１～１４及び３３～４５（例えば、配列番号１又は配列番号４４）のいずれか１つと少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0139】

遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、更なる改変を有し得る。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＦｃのＣＨ２ドメイン及び／又はＣＨ３ドメインを有し得る。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＣＨ２ドメインのＮ末端に（例えば、任意のヒンジ領域又はＧＳリンカーを介して）連結され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、ＣＨ３ドメインのＣ末端に（例えば、任意ＧＳリンカーを介して）連結され得る。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ領域）である。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、ＩｇＧ ＣＨ２ドメイン（例えば、ＩｇＧ４ ＣＨ２ドメイン）である。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ ＣＨ３ドメイン（例えば、ＩｇＧ４ ＣＨ３ドメイン）である。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインは、配列番号２９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、１００％同一である配列を有する。

【0140】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαポリペプチドは、配列番号１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、又は５８と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0141】

ＳＩＲＰαタンパク質構築物
本開示は、ＣＤ４７に特異的に結合できる遺伝子操作されたＳＩＲＰαタンパク質構築物を提供する。いくつかの実施形態では、これらのタンパク質構築物は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達経路を遮断でき、したがって免疫応答を増加させることができる。いくつかの実施形態では、これらのタンパク質構築物は貪食を開始させることができる。

【0142】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαタンパク質構築物は、本明細書に記載の任意の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントを含むことができる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαタンパク質構築物は、配列番号１～１４及び３３～４５のいずれかの配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である配列を有し得る。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαタンパク質構築物は、配列番号１５～２８及び４６～５８のいずれかの配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である配列を含み得るか、又はそれらからなり得る。

【0143】

本開示はまた、配列番号１～１４及び３３～４５又は配列番号１５～２８及び４６～５８のいずれかの配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である配列を含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸を提供する。

【0144】

２つのアミノ酸配列又は２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、配列は、最適な比較目的のために整列される（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列の一方又は両方にギャップを導入でき、非相同配列は、比較目的のために無視することができる）。次いで、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基又はヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められている場合、分子は、その位置において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入の必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一の位置の数に応じる。例えば、２つの配列間の配列の比較及びパーセント同一性の決定は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、及びフレームシフトギャップペナルティ５で、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスを使用して達成され得る。

【0145】

遺伝子操作されたＳＩＲＰαタンパク質構築物は、抗体のＦｃ領域を更に含むことができる。これらの抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ１、ＩｇＥ２）であり得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）に由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域）である。

【0146】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントは、抗体ヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥヒンジ領域）を介してＦｃ領域に連結される。更に、Ｆｃ領域は、所望のエフェクター機能又は血清半減期を提供するように改変され得る。

【0147】

本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、免疫細胞上に発現される内因性ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の結合を遮断することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７に結合することによって、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、免疫細胞（例えば、骨髄細胞、マクロファージ及び樹状細胞）上に発現される内因性ＳＩＲＰαへのＣＤ４７（例えば、腫瘍細胞上に発現）の結合を阻害することができ、それによって、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα経路を遮断し、免疫応答を上方制御し、貪食を促進する。

【0148】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、免疫細胞（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、樹状細胞、抗原提示細胞）の免疫応答、活性又は数を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍又は２０倍増加させることができる。

【0149】

いくつかの実装形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、０．１ｓ^－１未満、０．０１ｓ^－１未満、０．００１ｓ^－１未満、０．０００１ｓ^－１未満、又は０．００００１ｓ^－１未満の解離速度（ｋ_ｏｆｆ）で、ＳＩＲＰα（例えば、ヒトＳＩＲＰα、サルＳＩＲＰα（例えば、カニクイザル（Macaca fascicularis）、マウスＳＩＲＰα）に結合することができる。いくつかの実施形態では、解離速度（ｋ_ｏｆｆ）は、０．０１ｓ^－１超、０．００１ｓ^－１超、０．０００１ｓ^－１超、０．００００１ｓ^－１超、又は０．０００００１ｓ^－１超である。

【0150】

いくつかの実施形態では、動的会合速度（ｋ_ｏｎ）は、１×１０^２／Ｍｓ超、１×１０^３／Ｍｓ超、１×１０^４／Ｍｓ超、１×１０^５／Ｍｓ超、又は１×１０^６／Ｍｓ超である。いくつかの実施形態では、動的会合速度（ｋ_ｏｎ）は、１×１０^５／Ｍｓ未満、１×１０^６／Ｍｓ未満、又は１×１０^７／Ｍｓ未満である。

【0151】

親和性は、動態速度定数の商から推定することができる（ＫＤ＝ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）。いくつかの実施形態では、ＫＤは、１×１０^－６Ｍ未満、１×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、又は１×１０^－１０Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、ＫＤは、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、又は１０ｐＭ未満である。いくつかの実施形態では、ＫＤは、１×１０^－７Ｍ超、１×１０^－８Ｍ超、１×１０^－９Ｍ超、１×１０^－１０Ｍ超、１×１０^－１１Ｍ超、又は１×１０^－１２Ｍ超である。

【0152】

親和性を測定するための一般的な手法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、サルＳＩＲＰα及び／又はマウスＳＩＲＰαに結合することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、サルＳＩＲＰα及び／又はマウスＳＩＲＰαに結合することができない。

【0153】

いくつかの実施形態では、熱安定性が決定される。本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃を超えるＴｍを有し得る。いくつかの実施形態では、Ｔｍは、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃未満である。

【0154】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物は、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、又は２００％を超える腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ％）を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物は、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、又は２００％未満である腫瘍増殖阻害率を有する。ＴＧＩ％は、例えば、治療開始から３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、若しくは３０日後、又は治療開始から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２ヶ月後に決定することができる。本明細書で使用される場合、腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ％）は、以下の式を使用して計算される。
ＴＧＩ（％）＝［１－（Ｔｉ－Ｔ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）］×１００
Ｔｉは、ｉ日目の処置群における平均腫瘍体積である。Ｔ０は、０日目の処置群における平均腫瘍体積である。Ｖｉは、ｉ日目の対照群における平均腫瘍体積である。Ｖ０は、０日目の対照群における平均腫瘍体積である。

【0155】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物の腫瘍阻害効果は、抗ＣＤ４７参照抗体、例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４、又は抗ＳＩＲＰα抗体、例えば、ＣＣ－９５２５１と同等である。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４は、例えば、Ｓｉｋｉｃ ｅｔ ａｌ．「Ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ， ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｃｌａｓｓ ｐｈａｓｅ Ｉ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ＣＤ４７ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｃａｎｃｅｒｓ．」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３７．１２（２０１９）：９４６に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＣＣ－９５２５１。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物の腫瘍阻害効果は、抗ＣＤ４７参照抗体、例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４、又は抗ＳＩＲＰα抗体、例えば、ＣＣ－９５２５１よりも少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、又は５倍大きい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク構築物の腫瘍阻害効果は、Ｔｒｉｌｌｉｕｍよりも少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、又は５倍大きい。ＴＴＩ－６２２とも名付けられたｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）の詳細。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）のアミノ酸配列を配列番号１５に示す。

【0156】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質構築物は、機能性Ｆｃ領域を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、又はヒトＩｇＧ４である。いくつかの実施形態では、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）である。いくつかの実施形態では、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は、貪食である。いくつかの実施形態では、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は、ＡＤＣＣ及び貪食である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質構築物は、エフェクター機能を有さないＦｃ領域を有する。いくつかの実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ４ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、Ｆｃは、機能性Ｆｃ領域を有さない。例えば、Ｆｃ領域は、ＬＡＬＡ変異（ＥＵ番号付けにおけるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異）、又はＬＡＬＡ－ＰＧ変異（ＥＵ番号付けにおけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ変異）を有する。

【0157】

Ｆｃ領域に対するいくつかの他の修飾を行うことができる。例えば、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それによって、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にすることができる。このようにして生成されたホモ二量体融合タンパク質は、インビトロ及び／又はインビボで任意の増加した半減期を有し得る。

【0158】

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４は、Ｓ２２８Ｐ変異（ＥＵ番号付け）を有する。Ｓ２２８Ｐ変異は、インビボ及びインビトロでのＩｇＧ４ Ｆａｂアーム交換を防止する。

【0159】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的又は間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有するＦｃ領域が提供される。例えば、そのようなＦｃ領域組成物中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％又は２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約位置２９７（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け、又はＫａｂａｔ番号付けにおける位置３１４）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、Ｆｃ領域配列における軽微な配列変異に起因して、位置２９７の約±３アミノ酸上流又は下流、すなわち位置２９４～３００に位置し得る。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。いくつかの実施形態では、グリカン不均一性を低減するために、Ｆｃ領域を更に操作して、位置２９７のアスパラギンをアラニンで置換することができる（Ｎ２９７Ａ）。

【0160】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７、サルＣＤ４７、マウスＣＤ４７、又はそれらの細胞外ドメイン）と、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物との間の結合親和性は、ＣＤ４７と野生型ＳＩＲＰα又はそのタンパク質構築物との間の結合親和性と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、又は５０倍である。

【0161】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物は、１～１．２５、１．２５～１．５、１．５～１．７５、１．７５～２、又は２超であるＢ／Ｅ比（ＣＤ４７結合ＯＤ_４５０対発現ＯＤ_４５０）を有する。ある場合には、Ｂ／Ｅ比は０．４より大きい。

【0162】

いくつかの実施形態では、ＨＰＬＣ－ＳＥＣのメインピークは、プロテインＡカラムによる精製後の本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物の少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％を占める。

【0163】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、野生型ＳＩＲＰα又はそのタンパク質構築物と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、又は５０倍の親和性で、ヒトＣＤ４７発現腫瘍細胞（例えば、ヒトＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、又はＲａｊｉ細胞）に結合することができる。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７発現腫瘍細胞（例えば、ヒトＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞）に結合する遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物のＥＣ５０値は、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３．５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１．５ｎＭ未満、又は１ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、野生型ＳＩＲＰα又はそのタンパク質構築物と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、又は５０倍の親和性で、サルＣＤ４７発現細胞（例えば、ｃｙｎｏＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、又はＬＬＣ－ＭＫ２細胞）に結合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、野生型ＳＩＲＰα又はそのタンパク質構築物と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、又は５０倍の親和性で、マウスＣＤ４７発現細胞（例えば、ＥＭＴ－６細胞）に結合することができる。

【0164】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）と比較して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、又は少なくとも１５０％の親和性で、ＣＤ４７発現腫瘍細胞（例えば、ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、又はＲａｊｉ細胞）に結合することができる。

【0165】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）と比較して、９０％未満、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、３％未満、又は１％未満の親和性で、ＲＢＣ細胞又は血小板（例えば、ヒトドナー由来）に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＲＢＣ細胞に結合する遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物のＥＣ５０値は、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１．５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、又は０．５ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、血小板に結合する遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物のＥＣ５０値は、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、又は０．１ｎＭ未満である。

【0166】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、赤血球凝集を誘導しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）と比較して、５００倍、２０００倍、５０００倍、２００００倍、又は５００００倍を超える最小濃度で赤血球凝集を誘導する。

【0167】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断できる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、ヒトＣＤ４７発現細胞（例えば、ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＦａＤｕ細胞、又はＲａｊｉ細胞）とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断できる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物の遮断能は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）と比較して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、又は少なくとも１５０％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物の遮断能は、野生型ＳＩＲＰα又はそのタンパク質構築物と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、又は５０倍である。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物がＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を遮断するためのＩＣ５０値は、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、又は０．１ｎＭ未満である。

【0168】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、マウスマクロファージ（例えば、Ｒａｗ２６４．７細胞）によるＣＤ４７発現腫瘍細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＦａＤｕ細胞、又はＲａｊｉ細胞）の貪食を誘導することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物がＣＤ４７発現腫瘍細胞の貪食を誘導するためのＥＣ５０値は、３０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、又は１ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物がＣＤ４７発現腫瘍細胞の貪食を誘導するためのＥＣ５０値は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）に匹敵する（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）よりも弱い、マウスマクロファージ（例えば、Ｒａｗ２６４．７細胞）によるＲＢＣ細胞の貪食誘導能を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）よりも弱い、マウスマクロファージ（例えば、Ｒａｗ２６４．７細胞）による血小板の貪食誘導能を有する。

【0169】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、ヒトマクロファージ（例えば、ＭＤＭ細胞）によるＣＤ４７発現腫瘍細胞（例えば、Ｒａｊｉ細胞、ＤＬＤ１細胞、又はＪｕｒｋａｔ細胞）の貪食を誘導することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物の貪食誘導能は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）に匹敵する（少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％）。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物の貪食誘導能は、野生型ＳＩＲＰα又はそのタンパク質構築物と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、又は５０倍である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、抗ＣＤ４７参照抗体（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）よりも弱い、ヒトマクロファージ（例えば、ＭＤＭ細胞）によるＲＢＣ細胞の貪食誘導能を有する。

【0170】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はそのタンパク質構築物は、腫瘍成長を阻害することができる。いくつかの実施形態では、Ｒａｊｉ細胞又はＮＣＩ－Ｈ８２細胞を免疫不全マウス（例えば、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス）に注入して、異種移植モデルを作製する。

【0171】

遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物を作製する方法
本明細書に記載のＳＩＲＰαのバリアントは、ＳＩＲＰαペプチド又はその一部をコードするＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、又はペプチド合成によって調製することができる。このようなバリアントとしては、例えば、アミノ酸配列内の残基の欠失、挿入、又は置換が挙げられる。

【0172】

スクリーニングを行うことができる。そのようなバリアントの集団において、いくつかの遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントは、ＣＤ４７に対する増加した親和性を有する。欠失、挿入及び／又は組み合わせの任意の組み合わせを行って、標的に対する結合親和性が増大したバリアントに到達することができる。バリアントに導入されるアミノ酸変化はまた、グリコシル化部位の数の変化（例えば、増加又は減少）、グリコシル化部位のタイプの変化（例えば、異なる糖が細胞中に存在する酵素によって結合されるようなアミノ酸配列の変化）、又は新たなグリコシル化部位の導入などの、ポリペプチドへの翻訳後修飾を改変又は新たに導入することができる。

【0173】

遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアントは、哺乳動物を含む任意の種の動物に由来し得る。ＳＩＲＰαバリアントの非限定的な例としては、ヒト、霊長類、例えば、サル及び類人猿、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ラクダ類（例えば、ラクダ及びラマ）、ニワトリ、ヤギ、並びに齧歯類（例えば、ラット、マウス、ハムスター及びウサギ）に由来するＳＩＲＰαバリアントが挙げられる。

【0174】

本開示はまた、本明細書に開示される単離されたポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）を含む組換えベクター（例えば、発現ベクター）、組換えベクターが導入される宿主細胞（すなわち、宿主細胞がポリヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドを含むベクターを含有するように）、並びに組換え技術による組換えポリペプチド又はその断片の産生を提供する。

【0175】

本明細書中で使用される場合、「ベクター」は、ベクターが宿主細胞に導入された場合に、目的の１つ以上のポリヌクレオチドを宿主細胞に送達し得る任意の構築物である。「発現ベクター」は、発現ベクターが導入された宿主細胞において、１つ以上の目的のポリヌクレオチドをコードされたポリペプチドとして送達及び発現することができる。したがって、発現ベクターにおいて、目的のポリヌクレオチドは、目的のポリヌクレオチドが発現ベクターが導入された宿主細胞において翻訳されるように、ベクター内又は宿主細胞のゲノム中のいずれかにおいて、目的のポリヌクレオチドの組込み部位で、又はその近くで、又は隣接して、プロモーター、エンハンサー、及び／又はポリＡテールなどの調節エレメントと作動可能に連結されることによって、ベクターにおける発現のために配置される。

【0176】

ベクターは、当技術分野で既知の方法、例えば、エレクトロポレーション、化学的トランスフェクション（例えば、ＤＥＡＥ－デキストラン）、形質転換、トランスフェクション、並びに感染及び／又は形質導入（例えば、組換えウイルスによる）によって宿主細胞に導入することができる。したがって、ベクターの非限定的な例としては、ウイルスベクター（組換えウイルスを生成するために使用され得る）、裸のＤＮＡ又はＲＮＡ、プラスミド、コスミド、ファージベクター、及びカチオン性縮合剤と会合したＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクターが挙げられる。

【0177】

いくつかの実施において、本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）は、ウイルス発現系（例えば、ワクシニア若しくは他のポックスウイルス、レトロウイルス、又はアデノウイルス）を使用して導入され、これは、非病原性（欠損）複製可能ウイルスの使用を含み得るか、又は複製欠損ウイルスを使用し得る。このような発現系にＤＮＡを組み込むための技術は、当業者に周知である。ＤＮＡは「裸」であってもよい。裸のＤＮＡの取り込みは、細胞内に効率的に輸送される生分解性ビーズ上にＤＮＡをコーティングすることによって増加させることができる。

【0178】

発現のために、本明細書に開示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ挿入物は、いくつか例を挙げると、ファージλＰＬプロモーター、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のｌａｃ、ｔｒｐ及びｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期及び後期プロモーター並びにレトロウイルスＬＴＲのプロモーターなどの適切なプロモーター（例えば、異種プロモーター）に作動可能に連結され得る。他の適切なプロモーターは当業者に既知である。いくつかの実施形態では、プロモーターはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。発現構築物は更に、転写開始、終結のための部位、及び転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を更に含み得る。構築物によって発現される成熟転写物のコード部分は、翻訳されるべきポリペプチドの始めに翻訳開始コドン、及び翻訳されるべきポリペプチドの終わりに適切に位置する終止コドン（ＵＡＡ、ＵＧＡ、又はＵＡＧ）を含み得る。

【0179】

示されるように、発現ベクターは、少なくとも１つの選択マーカーを含み得る。このようなマーカーとしては、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクターゼ又はネオマイシン耐性、並びに大腸菌及び他の細菌の培養のためのテトラサイクリン耐性遺伝子又はアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。適切な宿主の代表的な例としては、大腸菌、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）及びネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）細胞などの細菌細胞、酵母細胞などの真菌細胞、ショウジョウバエＳ２及びスポドプテラＳｆ９細胞などの昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳ、Ｂｏｗｅｓ黒色腫、及びＨＫ２９３細胞などの動物細胞、並びに植物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の宿主細胞のための適切な培養培地及び条件は、当技術分野において既知である。

【0180】

細菌における使用のための非限定的なベクターとしては、Ｑｉａｇｅｎから入手可能なｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０及びｐＱＥ－９、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ、並びにＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３－３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５が挙げられる。非限定的な真核生物ベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１及びｐＳＧ、並びにＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬが挙げられる。他の適切なベクターは、当業者に容易に明らかである。

【0181】

使用に適した非限定的な細菌プロモーターとしては、大腸菌のｌａｃＩ及びｌａｃＺプロモーター、Ｔ３及びＴ７プロモーター、ｇｐｔプロモーター、λＰＲ及びＰＬプロモーター、並びにｔｒｐプロモーターが挙げられる。適切な真核生物プロモーターとしては、ＣＭＶ即時初期プロモーター、ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、初期及び後期ＳＶ４０プロモーター、レトロウイルスＬＴＲのプロモーター、例えば、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）のプロモーター、並びにメタロチオネインプロモーター、例えば、マウスメタロチオネイン－Ｉプロモーターが挙げられる。

【0182】

酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）では、α因子、アルコールオキシダーゼ、及びＰＧＨなどの構成的又は誘導性プロモーターを含むいくつかのベクターを使用することができる。

【0183】

宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染又は他の方法によって行うことができる。そのような方法は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６）などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載されている。

【0184】

本開示のポリペプチドをコードするＤＮＡの高等真核生物による転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加され得る。エンハンサーは、所定の宿主細胞タイプにおいてプロモーターの転写活性を増加させるように作用する、通常約１０～３００ｂｐのＤＮＡのシス作用性エレメントである。エンハンサーの例としては、複製起点の後期側の塩基対１００～２７０に位置するＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。

【0185】

翻訳されたタンパク質を小胞体内腔、細胞膜周辺腔又は細胞外環境に分泌するために、適切な分泌シグナルを発現したポリペプチドに組み込むことができる。シグナルは、ポリペプチドに対して内因性であってもよく、又は異種シグナルであってもよい。

【0186】

ポリペプチド（例えば、ＳＩＲＰαバリアント）は、融合タンパク質（例えば、ＧＳＴ融合）などの改変形態で、又はヒスチジンタグと共に発現させることができ、分泌シグナルだけでなく、追加の異種機能領域も含み得る。例えば、追加のアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域をポリペプチドのＮ末端に付加して、精製中、又はその後の取り扱い及び保存中の宿主細胞における安定性及び持続性を改善することができる。また、精製を容易にするためにペプチド部分をポリペプチドに付加することができる。このような領域は、ポリペプチドの最終調製の前に除去され得る。とりわけ、分泌又は排出を引き起こすため、安定性を改善するため、及び精製を容易にするためのポリペプチドへのペプチド部分の付加は、当技術分野においてよく知られており、日常的な技術である。

【0187】

治療方法
本開示の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、様々な治療目的のために使用することができる。

【0188】

一態様では、本開示は、対象におけるがんを治療するための方法、対象における経時的な腫瘍の体積の増加率を低下させる方法、転移の発生リスクを低下させる方法、又は対象における更なる転移の発生リスクを低下させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、治療は、がんの進行を停止、緩徐化、遅延、又は阻害することができる。いくつかの実施形態では、治療は、対象におけるがんの１つ以上の症状の数、重症度、及び／又は期間の低減をもたらし得る。

【0189】

一態様では、本開示は、治療有効量の本明細書に開示される遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク構築物を、それを必要とする対象（例えば、がん（例えば、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、カルチノイドがん、子宮頸がん、子宮内膜がん、グリオーマ、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、小細胞肺がん、リンパ種、黒色腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、結腸直腸がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、膀胱がん、尿道がん、又は血液悪性疾患）を有する、又は有すると同定若しくは診断された対象）に投与することを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、がんは、切除不能黒色腫又は転移性黒色腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、膀胱がん、又は転移性ホルモン不応性前立腺がんである。いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。いくつかの実施形態では、がんは、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、腎細胞がん（ＲＣＣ）、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）、又は結腸直腸がんである。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、膵臓がん、中皮腫、血液悪性腫瘍、特に非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、慢性リンパ性白血病、又は進行性固形腫瘍である。

【0190】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、がんのリスクがある患者の治療に使用することができる。がんを有する患者は、当該分野で既知の種々の方法を用いて同定され得る。

【0191】

本明細書中で使用される場合、「有効量」とは、疾患、例えば、がんの進行の停止、緩徐化、遅延、又は阻害を含む有益な結果又は所望の結果をもたらすのに十分な量又は投与量を意味する。有効量は、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、並びに／又はそれらの組成物が投与される対象の、例えば年齢及び体重、症状の重症度及び投与経路に応じて変化し、したがって、投与は個体ベースで決定することができる。

【0192】

有効量は、１回以上の投与で投与することができる。例として、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物の有効量は、患者におけるがんの進行を改善、停止、安定化、逆転、阻害、緩徐化及び／若しくは遅延させるのに十分な量であるか、又は細胞（例えば、生検細胞、本明細書に記載のがん細胞のいずれか、若しくは細胞株（例えば、がん細胞株））の増殖をインビトロで改善、停止、安定化、逆転、緩徐化及び／若しくは遅延させるのに十分な量である。当技術分野で理解されているように、有効量は、とりわけ、患者の病歴並びに使用される遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物のタイプ（及び／又は投与量）などの他の因子に応じて変動し得る。

【0193】

本明細書に開示される遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物をコードするポリヌクレオチド、並びに／又は組成物を投与するための有効量及びスケジュールは、経験的に決定されてもよく、そのような決定を行うことは、当技術分野の技術の範囲内である。当業者は、投与しなければならない投薬量が、例えば、本明細書に開示される遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物、ポリヌクレオチド、及び／又は組成物を投与される哺乳動物、投与経路、使用される本明細書に開示されるポリヌクレオチド及び／又は組成物の特定のタイプ、並びに哺乳動物に投与される他の薬物に応じて変化することを理解するであろう。

【0194】

遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及び／又はタンパク質構築物の有効量の典型的な１日投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重１ｋｇ当たりのｍｇ）である。いくつかの実施形態では、投与量は、１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇ未満であり得る。いくつかの実施形態では、投与量は、１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇ超であり得る。いくつかの実施形態では、投与量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、又は１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、投与量は、約１～１０ｍｇ／ｋｇ、約１～５ｍｇ／ｋｇ、又は約２～５ｍｇ／ｋｇである。

【0195】

本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、少なくとも週１回（例えば、週１回、週２回、週３回、週４回、１日１回、１日２回、又は１日３回）対象に投与され得る。

【0196】

いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の治療剤を、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物を投与する前又は後に対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の治療剤は、対象における１つ以上の追加の治療剤並びに遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物の生物活性期間が重複するように、対象に投与される。

【0197】

いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の治療剤を対象に投与することができる。追加の治療剤は、Ｂ－Ｒａｆの阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫの阻害剤、ＥＲＫの阻害剤、Ｋ－Ｒａｓの阻害剤、ｃ－Ｍｅｔの阻害剤、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害剤、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の阻害剤、Ａｋｔの阻害剤、ｍＴＯＲの阻害剤、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）の阻害剤、並びにイソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ１）及び／又はイソクエン酸デヒドロゲナーゼ２（ＩＤＨ２）の阻害剤からなる群から選択される１つ以上の阻害剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ－１）（ＩＤＯ１）の阻害剤（例えば、エパカドスタット）である。

【0198】

いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＨＥＲ３の阻害剤、ＬＳＤ１の阻害剤、ＭＤＭ２の阻害剤、ＢＣＬ２の阻害剤、ＣＨＫ１の阻害剤、活性化ヘッジホッグシグナル伝達経路の阻害剤、及びエストロゲン受容体を選択的に分解する薬剤からなる群より選択される１つ以上の阻害剤を含むことができる。

【0199】

いくつかの実施形態は、追加の治療剤は、トラベクテジン、ｎａｂ－パクリタキセル、トレバナニブ、パゾパニブ、セジラニブ、パルボシクリブ、エベロリムス、フルオロピリミジン、ＩＦＬ、レゴラフェニブ、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ、アリムタ、ジカディア、スーテント、テムシロリムス、アキシチニブ、エベロリムス、ソラフェニブ、ヴォトリエント、パゾパニブ、ＩＭＡ－９０１、ＡＧＳ－００３、カボザンチニブ、ビンフルニン、Ｈｓｐ９０阻害剤、Ａｄ－ＧＭ－ＣＳＦ、Ｔｅｍａｚｏｌｏｍｉｄｅ、ＩＬ－２、ＩＦＮａ、ビンブラスチン、Ｔｈａｌｏｍｉｄ、ダカルバジン、シクロホスファミド、レナリドミド、アザシチジン、レナリドミド、ボルテゾミド、アムルビシン、カルフィルゾミブ、プララトレキサート、及びエンザスタウリンからなる群から選択される１つ以上の治療剤を含むことができる。

【0200】

いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、ＩＬ－１、ＨＭＧＢ１、ＩＬ－１０アンタゴニスト、ＩＬ－４アンタゴニスト、ＩＬ－１３アンタゴニスト、ＩＬ－１７アンタゴニスト、ＨＶＥＭアンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、ＣＸ３ＣＬ１を標的とする治療、ＣＸＣＬ９を標的とする治療、ＣＸＣＬ１０を標的とする治療、ＣＣＬ５を標的とする治療、ＬＦＡ－１アゴニスト、ＩＣＡＭ１アゴニスト、及びセレクチンアゴニストからなる群から選択される１つ以上の治療剤を含むことができる。

【0201】

いくつかの実施形態では、カルボプラチン、ｎａｂ－パクリタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、ＦＯＬＦＯＸ、又はＦＯＬＦＩＲＩが対象に投与される。

【0202】

いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ＯＸ４０抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＳＩＲＰα抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、又は抗ＧＩＴＲ抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）又は抗ＥＧＦ受容体受容体（例えば、セツキシマブ）である。

【0203】

医薬組成物及び投与経路
本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物を含有する医薬組成物も本明細書で提供される。医薬組成物は、当技術分野で既知の任意の様式で製剤化することができる。

【0204】

医薬組成物は、それらの意図される投与経路（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、又は腹腔内）に適合するように製剤化される。組成物は、滅菌希釈剤（例えば、滅菌水又は生理食塩水）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒、抗菌剤又は抗真菌剤、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム、キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸、緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩、及び等張剤、例えば、糖（例えば、デキストロース）、ポリアルコール（例えば、マンニトール又はソルビトール）、又は塩（例えば、塩化ナトリウム）、又はそれらの任意の組み合わせを含み得る。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容される担体として使用され得る。組成物の調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、又は複数回投与バイアルに製剤化及び封入することができる。必要とされる場合（例えば、注射用製剤において）、適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング又は界面活性剤の使用によって維持され得る。薬剤の吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン）を含めることによって延長することができる。あるいは、制御放出は、生分解性、生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸）を含み得るインプラント及びマイクロカプセル化送達システムによって達成され得る。

【0205】

本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物を含有する組成物は、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、又は腹腔内）投与のために、投与単位形態（すなわち、投与の容易さ及び投与量の均一性のために所定の量の活性化合物を含有する物理的に別個の単位）で製剤化され得る。

【0206】

非経口投与のための医薬組成物は、好ましくは無菌で、実質的に等張であり、Ｇｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（ＧＭＰ）条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与のための用量）で提供することができる。医薬組成物は、１つ以上の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、又は補助剤を用いて製剤化することができる。製剤は選択される投与経路に依存する。注射では、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、水溶液中で、好ましくは注射部位における不快感を低減するために生理学的に適合する緩衝液中で製剤化することができる。溶液は、懸濁化剤、安定化剤、及び／又は分散剤などの配合剤を含有することができる。あるいは、遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物は、使用前に、適切なビヒクル、例えば、発熱物質を含まない滅菌水で溶解するための凍結乾燥形態であり得る。

【0207】

組成物の毒性及び治療有効性は、細胞培養又は実験動物（例えば、サル）における標準的な薬学的手順によって決定することができる。例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定することができ、治療指数は、ＬＤ５０：ＥＤ５０の比である。高い治療指数を示す薬剤が好ましい。薬剤が望ましくない副作用を示す場合、潜在的な被害を最小限に抑える（すなわち、望ましくない副作用を低減する）ように注意を払うべきである。毒性及び治療効力は、他の標準的な薬学的手順によって決定され得る。

【0208】

例示的な用量は、対象の体重１キログラム当たり、本明細書に記載の遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物のいずれかのミリグラム又はマイクログラム量を含む（例えば、約１μｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ～約５０μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ）。これらの用量は広い範囲をカバーするが、当業者は、治療剤がそれらの効力において変化し得、有効量が当該分野で既知の方法によって決定され得ることを理解する。典型的には、最初に比較的低用量が投与され、担当の医療専門家又は獣医専門家（治療用途の場合）又は研究者（まだ開発段階である場合）は、その後、適切な応答が得られるまで用量を徐々に増加させることができる。更に、任意の特定の対象に対する特定の用量レベルは、使用される特定の化合物の活性、対象の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、及び食事、投与時間、投与経路、排出速度、並びに遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物のインビボでの半減期を含む種々の因子に依存することが理解される。

【0209】

医薬組成物は、投与のための説明書と共に、容器、パック、又はディスペンサーに含まれ得る。本開示はまた、本明細書に記載の様々な使用のための遺伝子操作されたＳＩＲＰαバリアント及びタンパク質構築物を製造する方法を提供する。

【実施例】

【0210】

本発明を以下の実施例において更に説明するが、これらは特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。

【0211】

実施例１．ヒトＳＩＲＰαの操作されたＩｇＶドメインの設計
ヒトＳＩＲＰα（ｈＳＩＲＰα）のＩｇＶドメインは、Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｃ’－Ｄ－Ｅ－Ｆ－Ｇ－Ｇ２を含む９つのβ鎖を含有する免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。ヘリックスは、Ｅ鎖とＦ鎖との間に位置する。ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメインの３Ｄ構造を図１に示す。

【0212】

ＣＤ４７／ｈＳＩＲＰa複合体構造の詳細な分析を実施した。その構造から、ｈＳＩＲＰα中のＬｅｕ３０、Ｇｌｙ３４、Ｇｌｎ５２、Ｌｙｓ５３、Ｇｌｕ５４、Ｈｉｓ５６、Ｓｅｒ６６、Ｔｈｒ６７、Ａｒｇ６９、Ｌｙｓ９３、Ｌｙｓ９６、Ｇｌｙ９７、及びＡｓｐ１００が、ＣＤ４７との相互作用に関与していることが判明した。これらの相互作用残基は、ＢＣループ、Ｃ’Ｄループ、ＤＥループ、及びＦＧループを含むｈＳＩＲＰａのループ構造上に主に位置していた。結果は、ｈＳＩＲＰａが主にそのループ領域を介してＣＤ４７と相互作用することを示した（図２）。

【0213】

更に、ｈＳＩＲＰａ－ＦＤ６の構造が解明されている（Ｗｅｉｓｋｏｐｆ，Ｋｉｐｐ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１３ Ｊｕｌｙ ５；３４１（６１４１））。ＣＤ４７／ｈＳＩＲＰａ－ＦＤ６複合体構造（ＰＤＢ ＩＤ：４ＫＪＹ）に基づくｈＳＩＲＰａ－ＦＤ６のＣＤ４７に対する相互作用残基は、Ｌｅｕ３０、Ｇｌｙ３４、Ｇｌｎ５２、Ａｒｇ５３、Ｇｌｕ５４、Ｈｉｓ５６、Ｔｈｒ６６、Ｔｈｒ６７、Ａｒｇ６９、Ｌｙｓ９３、Ｌｙｓ９６、Ｇｌｙ９７、及びＡｓｐ１００を含むと決定された。これらの残基は、ＣＤ４７／ｈＳＩＲＰａ複合体において示されるものと同じである。野生型における２つの相互作用残基、Ｌｙｓ５３及びＳｅｒ６６のみが、ｈＳＩＲＰａ－ＦＤ６においてそれぞれＡｒｇ５３及びＴｈｒ６６に変異され、ＣＤ４７に対する結合親和性の劇的な増加をもたらす。ｈＳＩＲＰaからｈＳＩＲＰａ－ＦＤ６への他の変化した残基は、ＣＤ４７相互作用に関与しない。この知見は、Ｌｙｓ５３及びＳｅｒ６６がＣＤ４７に対するｈＳＩＲＰａの結合親和性を増加させるために重要であり得ることを暗示した。

【0214】

どの残基が結合親和性に良好であり、Ｃ’Ｄループにおいて安定であるかを見出すために、位置５３、５４、５５及び５６に対する残基スキャンを、ＭＯＥ試験バージョンによって行った。残基スキャンの結果によれば、Ｌｙｓ５３は、アルギニン、ロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンなどの長い側鎖又は芳香環を有する側鎖を有するアミノ酸によって置換された場合、安定性を増加させることができる（図３Ａ）。しかしながら、この種の置換は、ｈＳＩＲＰａの親和性を改善することができない。一方、Ｇｌｕ５４、Ｇｌｙ５５、及びＨｉｓ５６の置換は、より高い柔軟性を示し（図３Ｂ、図３Ｃ、及び図３Ｄ）、ｈＳＩＲＰａの親和性及び安定性は、Ｇｌｕ５４、Ｇｌｙ５５、及びＨｉｓ５６をいくつかの他のアミノ酸に変更することによって改善され得る。そこで、スクリーニングのためにＧｌｕ５４、Ｇｌｙ５５、Ｈｉｓ５６に変異を導入した。

【0215】

更に、Ｉｌｅ３１、Ｇｌｕ５４、Ｇｌｙ５５、Ｈｉｓ５６、Ｓｅｒ６６、及びＴｈｒ６７を、構造分析によるｈＳＩＲＰａ変異スクリーニングのための候補アミノ酸として同定した。Ｖａｌ２７、Ｖａｌ６３及びＬｙｓ６８は、ｈＳＩＲＰａ自体の構造の維持に関与する。ｈＳＩＲＰａの構造に悪影響を及ぼさないために、これらの残基の変化は推奨されない。ｈＳＩＲＰα（ＰＤＢ ＩＤ：２ＪＪＴ）と複合体化したヒトＣＤ４７（ｈＣＤ４７）の構造に基づいて、相互作用残基を分析した。分析結果は、ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメインのＢＣループ、Ｃ’Ｄループ、及びＤＥループ内の複数の相互作用残基が高度に保存されていることを示す。図２に示されるように、これらのループ領域内のアミノ酸残基に下線が引かれている。

【0216】

ｈＣＤ４７に対する野生型ｈＳＩＲＰαよりも高い遮断活性（例えば、ｈＣＤ４７に対する異なる結合親和性を有する）、及び抗ＣＤ４７参照抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して低いＲＢＣ結合を有するｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン変異体をスクリーニングするために、ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメインのＢＣループ、Ｃ’Ｄループ、及びＤＥループ内の選択された残基を変異させた。これらの残基は、ＢＣループ内のＨｉｓ２４～Ｖａｌ３３の１０アミノ酸（例えば、Ｉｌｅ３１）、Ｃ’Ｄループ内のＧｌｕ５４～Ｈｉｓ５６の３アミノ酸、及びＤＥループ内のＳｅｒ６６～Ａｓｐ７３の８アミノ酸（例えば、Ｓｅｒ６６及びＴｈｒ６７）を含む。アミノ酸位置は、ｈＳＩＲＰａのＩｇＶドメイン（配列番号１）に基づく。

【0217】

実施例２．スクリーニング及び再確認
ファージミド発現系をファージディスプレイによるスクリーニングに使用した。具体的には、ＣＤ４７抗原又はＣＤ４７を発現している細胞株をパニングに使用した。得られたファージを使用してＴＧ１エレクトロポレーションコンピテント大腸菌細胞に再感染させ、次いでこれをＬＢ寒天プレート上に広げ、１６時間インキュベートした。単一コロニーを採取して、１０％緩衝リン酸を補充した７００μＬの２×ＹＴ培地に接種した。ＯＤ_６００が１に近づいたら、１ｍＭイソプロピルβ－ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加して、３０℃でタンパク質発現を誘導した。１６時間後、細菌培養物を３２００ｇで遠心分離し、上清をその後の実験のために回収した。

【0218】

発現レベルの決定
ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン変異体の発現レベルを決定するために、２μｇ／ｍＬの抗Ｈｉｓ抗体（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号：ＭＡＢ０５０－５００）でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを調製した。３０μＬの回収した上清をＥＬＩＳＡプレートに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、ヤギ抗ｃ－Ｍｙｃ ＨＲＰ（Ｂｅｔｈｙ、カタログ番号：Ａ１９０－１０４Ｐ）を１：１００００の希釈比でプレートに添加し、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＳＵＲＭＯＤＩＣＳ、カタログ番号：ＴＭＢＷ－０１００－０１）を発色のために添加した。４５０ｎｍでの吸光度値（ＯＤ_４５０）を、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（商標）ＬＵＸプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して測定した。

【0219】

ヒトＣＤ４７結合能の決定
ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン変異体のヒトＣＤ４７結合能を決定するために、１μｇ／ｍＬの、Ｆｃ領域と連結したヒトＣＤ４７細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ｈＣＤ４７ ＥＣＤ Ｆｃ）でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを調製した。３０μＬの回収した上清をＥＬＩＳＡプレートに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、ヤギ抗ｃ－Ｍｙｃ ＨＲＰを１：１００００の希釈比でプレートに添加し、ＴＭＢを発色のために添加した。４５０ｎｍでの吸光度値を、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（商標）ＬＵＸプレートリーダーを使用して測定した。

【0220】

マウスＣＤ４７結合能の決定
ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン変異体のマウスＣＤ４７結合能を決定するために、１μｇ／ｍＬのマウスＣＤ４７ ＥＣＤ Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏ、カタログ番号：５７２３１－Ｍ３１Ｈ）でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを調製した。１００μＬの回収した上清をＥＬＩＳＡプレートに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、ヤギ抗ｃ－Ｍｙｃ ＨＲＰを１：１００００の希釈比でプレートに添加し、ＴＭＢを発色のために添加した。４５０ｎｍでの吸光度値を、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（商標）ＬＵＸプレートリーダーを使用して測定した。

【0221】

ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能の決定
ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン変異体のｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能を決定するために、１μｇ／ｍＬのヒトＣＤ４７ ＥＣＤ ＦｃでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを調製した。１５０μＬの回収した上清と２０μＬのビオチン標識ＳＩＲＰα ＥＣＤ Ｈｉｓタンパク質（最終濃度２．５μｇ／ｍＬ）をＥＬＩＳＡプレートに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、アビジンＨＲＰ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号：７９００４）を１：１０００の希釈比でプレートに添加し、ＴＭＢを発色のために添加した。４５０ｎｍでの吸光度値を、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（商標）ＬＵＸプレートリーダーを使用して測定した。

【0222】

タンパク質熱安定性の決定
１００μＬの回収した上清をＰＣＲチューブに移し、これをＰＣＲ装置において６５℃又は７０℃で９０分間加熱した。ヒトＣＤ４７結合アッセイを、加熱した上清及び加熱していない上清を同時に使用して行った。具体的には、１μｇ／ｍＬのヒトＣＤ４７ ＥＣＤ ＦｃでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを調製した。３０μＬの加熱又は非加熱上清をＥＬＩＳＡプレートに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、ヤギ抗ｃ－Ｍｙｃ ＨＲＰを１：１００００の希釈比でプレートに添加し、ＴＭＢを発色のために添加した。４５０ｎｍでの吸光度値を、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（商標）ＬＵＸプレートリーダーを使用して測定した。

【0223】

ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ、ＲＢＣ、及び血小板に対する全細胞結合能の決定
３×１０^４個のＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞（ヒトＣＤ４７を発現しているトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞）、１×１０^５個のヒト赤血球（ＲＢＣ）、又は３×１０^５個のヒト血小板を、回収した上清と共に４℃で３０分間インキュベートした。次いで、抗Ｈｉｓ ＰＥ（Ａｂｃａｍ、カタログ番号：ａｂ７２４６７）を１：１００の希釈比で添加し、フローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、カタログ番号：ＣｙｔｏＦｌｅｘ）を使用してＭＦＩ（平均蛍光強度）値を検出した。

【0224】

野生型ｈＳＩＲＰαよりも高いｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断能を有するクローンを単離し、それらのヒトＣＤ４７結合ＯＤ_４５０（Ｂ）／発現ＯＤ_４５０（Ｅ）比に基づいてグループ分けした。具体的には、１２個のクローンが、２を超えるｈＣＤ４７結合Ｂ／Ｅ比を有し、５個のクローンが１．７５～２の比を有し、５個のクローンが１．５～１．７５の比を有し、７個のクローンが１．２５～１．５の比を有し、２個のクローンが１～１．２５の比を有していた。野生型ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン未満のＢ／Ｅ比を有する７個のクローンも選択した。ヒトＳＩＲＰαはマウスＣＤ４７に対して交差反応性を有さないため、０．４を超えるマウスＣＤ４７結合能対発現比を有する１８個のクローンも、このスクリーニングを通して選択した。したがって、合計５６個の候補クローンを選択し、詳細な発現、ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα遮断、及びＣＤ４７結合の結果を図４Ａ～図４Ｂに示す。

【0225】

次に、選択されたクローンを、ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ、ＲＢＣ及び血小板に対する全細胞結合能、並びに高温（例えば、６５℃及び７０℃）でのタンパク質熱安定性を決定することによって更にスクリーニングした。全細胞結合アッセイの結果に基づいて、血小板及びＲＢＣ結合能が野生型ｈＳＩＲＰα ＩｇＶドメインより低いクローン、及び異なる結合能でＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓに結合できるクローンを選択した。選択したクローンのタンパク質熱安定性を検証したところ、野生型ＳＩＲＰα ＩｇＶドメインと比較して顕著な差は認められなかった。最後に、ｍｔ３～ｍｔ１５（配列番号２～１４）及びｍｔ１６～ｍｔ２３（配列番号３３～４０）を含む２１個のクローンを選択した。ｍｔ３１～ｍｔ３５（配列番号４１～４５）を含む５つの追加のクローンも生成した。野生型ＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン又はヒトＩｇＧ４ヒンジ及びＦｃ領域に連結された遺伝子操作されたＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン変異体（配列番号２９）を発現するプラスミドを構築した。発現したタンパク質の概略構造を図５に示す。野生型ＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン及び２６個のクローンのＢＣループ領域、Ｃ’Ｄループ領域、及びＤＥループ領域内の特定のアミノ酸変異を図６に示す。

【0226】

実施例３．精製、及びＯｃｔｅｔによるＣＤ４７－ＥＣＤ－Ｈｉｓに対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃの結合親和性の決定
発現したタンパク質を、プロテインＡカラム、続いてＨＰＬＣ－ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィーと組み合わせた高速液体クロマトグラフィー、Ａｇｉｌｅｎｔ）によって精製し、高分子量ピークの割合（ＨＭＷ％）、メインピークの割合（Ｍａｉｎ％）、及び低分子量ピークの割合（ＬＭＷ％）を測定した。図７に示されるように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質は、上記の方法を用いて高純度で回収することができる。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ及び１３個のｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質（ｍｔ３～ｍｔ１５）のアミノ酸配列を、脱免疫化ツール（Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ；Ｄｈａｎｄａ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｓｔｒａｔｅｇｙ ａｎｄ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ＨＬＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．」Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５３．１ （２０１８）： １１８－１３２）を使用して分析し、免疫原性領域を同定した。免疫原性は同定されなかった。

【0227】

ＣＤ４７－ＥＣＤ－Ｈｉｓに対するｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質の結合親和性もまた、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システムによって決定した。図８に示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照とし、抗ＣＤ４７参照抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として用いて、２セットの実験を行った。各タンパク質の相対的結合親和性も、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔのＫＤ値と比較したそれぞれのＫＤ値から推定した。結果は、遺伝子操作されたＳＩＲＰα ＩｇＶドメイン変異体の大部分が、野生型ＳＩＲＰα ＩｇＶドメインと比較して、ＣＤ４７に対してより強い結合を示したことを示す。

【0228】

実施例４．ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ及びＣＤ４７発現腫瘍細胞に対する全細胞結合アッセイ
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＣＤ４７に対する全細胞結合能を決定するため、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質をプロテインＡクロマトグラフィーによって精製し、５００ｎＭから１００ｎＭ、２０ｎＭ、４ｎＭ、０．８ｎＭ、０．１６ｎＭ、０．０３２ｎＭ、及び０．０６４ｎＭまで連続希釈（５倍）した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔ（ヒトＩｇＧ４のＮ末端に連結された２つのヒトＰＤ１細胞外ドメイン、概略構造を図５に示す）を陰性対照として使用した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用した。希釈したタンパク質を、５×１０^４個のＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、又はＲａｊｉ細胞と共にインキュベートした。インキュベーション後、抗ｈＦｃｒ－ＰＥ（１：１００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号：１０９－１１５－０９８）を添加し、ＭＦＩ値をフローサイトメトリーによって測定した。

【0229】

図９Ａ～図９Ｃに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ４、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ８、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１２、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１３、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－１５は、抗ＣＤ４７抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して、ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ、Ｊｕｒｋａｔ、及びＲａｊｉ細胞に対して同様の全細胞結合能を示した。

【0230】

図９Ｄに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１９、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２２は、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１７、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１８、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１９、及びＨｕ５Ｆ９－Ｇ４よりも高いＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞結合能を示した。加えて、試験した全てのｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質は、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔよりも顕著に高いＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞結合能を示した。試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質のＥＣ５０値を以下の表に列挙する。

【0231】

【表1】

【0232】

図９Ｅに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３よりも高いＲａｊｉ細胞結合能を示した。試験した全てのｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して同様のＲａｊｉ細胞結合能を示し、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔと比較して顕著に高いＲａｊｉ細胞結合能を示した。

【0233】

実施例５．ＲＢＣ結合アッセイ
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＲＢＣ結合能を決定するため、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質をプロテインＡクロマトグラフィーによって精製し、５００ｎＭから１００ｎＭ、２０ｎＭ、４ｎＭ、０．８ｎＭ、０．１６ｎＭ、０．０３２ｎＭ、及び０．０６４ｎＭまで連続希釈（５倍）した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用した。希釈したタンパク質を、２人のドナー由来の１×１０^５個のヒトＲＢＣ細胞と共にインキュベートした。インキュベーション後、抗ｈＦｃｒ－ＰＥ（１：１００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加し、ＭＦＩ値をフローサイトメトリーによって測定した。

【0234】

図１０Ａ～図１０Ｂに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１２、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１３、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ８、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、抗ＣＤ４７抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して、より弱いＲＢＣ結合能を示した。特に、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１４、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔは、ＲＢＣへのいかなる結合も示さなかった。

【0235】

図１０Ｃに示されるように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１８及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１９は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４よりも高いＲＢＣ（ドナー１由来）結合能を示したが、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２２、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１７、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４よりも低いＲＢＣ結合能を示した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔによってＲＢＣ細胞結合は検出されなかった。試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質のＥＣ５０値を以下の表に列挙する。

【0236】

【表2】

【0237】

図１０Ｄに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４よりも顕著に低いＲＢＣ（ドナー２由来）結合能を示した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔによってＲＢＣ細胞結合は検出されなかった。

【0238】

実施例６．血小板結合アッセイ
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の血小板結合能を決定するため、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質をプロテインＡビーズによって精製し、５００ｎＭから１００ｎＭ、２０ｎＭ、４ｎＭ、０．８ｎＭ、０．１６ｎＭ、０．０３２ｎＭ、及び０．０６４ｎＭまで連続希釈（５倍）した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用した。希釈したタンパク質を、２人のドナー由来の５×１０^５個のヒト血小板と共にインキュベートした。インキュベーション後、抗ｈＦｃｒ－ＰＥ（１：１００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加し、ＭＦＩ値をフローサイトメトリーによって測定した。

【0239】

図１１Ａ～図１１Ｂに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ４、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ８、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１２、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１３、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、抗ＣＤ４７抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して強い血小板結合能を示したが、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１４、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ６は、顕著に低い血小板結合能を示した。

【0240】

図１１Ｃに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１９、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１８、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１７、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２２は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して、より強い又は同様の血小板（ドナー１由来）結合能を示した。試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質のＥＣ５０値を以下の表に列挙する。

【0241】

【表3】

【0242】

図１１Ｄに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して、より強い又は同様の血小板結合能を示した。試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質のＥＣ５０値を以下の表に列挙する。

【0243】

【表4】

【0244】

実施例７．サルＣＤ４７を発現している細胞に対する全細胞結合アッセイ
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のサルＣＤ４７に対する全細胞結合能を決定するため、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質をプロテインＡビーズによって精製し、５００ｎＭから１００ｎＭ、２０ｎＭ、４ｎＭ、０．８ｎＭ、０．１６ｎＭ、０．０３２ｎＭ、及び０．０６４ｎＭまで連続希釈（５倍）した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用した。希釈したタンパク質を、カニクイザルＣＤ４７を発現している１×１０^５個のトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞（ｃｙｎｏＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ）又は１×１０^５個のアカゲザル腎臓上皮細胞株ＬＬＣ－ＭＫ２と共にインキュベートした。インキュベーション後、抗ｈＦｃｒ－ＰＥ（１：１００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加し、ＭＦＩ値をフローサイトメトリーによって測定した。図１２Ａ～図１２Ｂに示すように、全てのｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質は、サルＣＤ４７に結合することができる。

【0245】

図１２Ｃに示すように、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４は、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３よりも強いＬＬＣ－ＭＫ２結合能を示した。

【0246】

実施例８．マウスＣＤ４７を発現している細胞に対する全細胞結合アッセイ
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のマウスＣＤ４７に対する全細胞結合能を決定するために、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質をプロテインＡビーズによって精製し、１０００ｎＭから２００ｎＭ、４０ｎＭ、８ｎＭ、１．６ｎＭ、０．３２ｎＭ、０．０６４ｎＭ、及び０．０１２８ｎＭへと連続希釈（５倍）した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。ＭＩＡＰ４１０（抗ヒトマウスＣＤ４７抗体）を陽性対照として使用した。希釈したタンパク質を、３×１０^４個のＥＭＴ－６細胞と共にインキュベートした。インキュベーション後、抗ｈＦｃｒ－ＰＥ（１：１００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加し、ＭＦＩ値をフローサイトメトリーによって測定した。ＭＩＡＰ４１０については、抗マウス（Ｈ＋Ｌ）－ＦＩＴＣ（１：１００）を使用した。図１３Ａ～図１３Ｂに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１３、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ４、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１２、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ８、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０は、マウスＣＤ４７を発現している細胞に結合することができる。しかし、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１４、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、ＥＭＴ－６細胞に結合しなかった。

【0247】

実施例９．赤血球凝集（ＨＡ）活性の決定
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質によって誘導されるＨＡ活性を決定するために、１０％ＲＢＣ溶液を、０．９％塩化ナトリウム緩衝液で２回洗浄することによって２人の健康なドナーの全血から調製し、次いで０．９％塩化ナトリウム緩衝液中で１０倍に希釈した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質を５００ｎＭ、１６６．７ｎＭ、５５．６ｎＭ、１８．５ｎＭ、６．２ｎＭ、２．１ｎＭ、６８５．８ｐＭ、２２８．６ｐＭ、７６．２ｐＭ、２５．４ｐＭ、又は８．４ｐＭの最終濃度に連続希釈（３倍）し、丸底９６ウェルプレート中で１２μＬの１０％ＲＢＣ溶液と共に室温（ＲＴ）で一晩インキュベートした。インキュベーション後、凝集したＲＢＣはウェルを均一に被覆したが、非凝集細胞はウェルの底に明確な赤い点を形成した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ及びＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。図１４Ａ～図１４Ｃに示されるように、試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のいずれも赤血球凝集を誘導しなかった。

【0248】

実施例１０．ＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ、ＦａＤｕ及びＲａｊｉ細胞に対する遮断能の決定
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のヒトＣＤ４７に対する遮断能を決定するために、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質をプロテインＡビーズによって精製し、１０００ｎＭから１２５ｎＭ、１５．６３ｎＭ、１．９５ｎＭ、０．２４ｎＭ、０．０３ｎＭ、０．００３８ｎＭ、及び０．０００４ｎＭまで連続希釈（８倍）した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を陽性対照として使用した。希釈したタンパク質を、３×１０^４個のＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞（ヒトＣＤ４７を発現しているトランスフェクトＣＨＯ－Ｓ細胞）、ＦａＤｕ細胞、又はＲａｊｉ細胞と共に、１μｇ／ｍＬのビオチン標識ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔを加えてインキュベートした。インキュベーション後、ストレプトアビジン－ＰＥ（０．３μＬ／ウェル、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：ＥＢＳ１２－４３１７－８７）を添加し、ＭＦＩ値をフローサイトメトリーによって測定した。

【0249】

図１５Ａ～図１５Ｃに示すように、試験した全てのｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質は、ｈＳＩＲＰαとＣＤ４７ ｔｆ ＣＨＯ－Ｓ細胞又はＣＤ４７発現腫瘍細胞（ＦａＤｕ及びＲａｊｉ）との間の相互作用を遮断することができる。特に、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ４、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ８、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１１、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１２、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１３、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔは、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４に匹敵する遮断能を示した。

【0250】

図１５Ｄに示すように、試験した全てのｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異体タンパク質は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して同様の全細胞遮断能を示した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔは、最も低いＣＤ４７／ＳＩＲＰα遮断能を示した。試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質のＩＣ５０値を以下の表に列挙する。

【0251】

【表5】

【0252】

図１５Ｅに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１は、最も強い全細胞遮断能を示した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して同様の全細胞遮断能を示した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔは、最も低いＣＤ４７／ＳＩＲＰα遮断能を示した。試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質のＩＣ５０値を以下の表に列挙する。

【0253】

【表6】

【0254】

実施例１１．マウスマクロファージによるＣＤ４７発現腫瘍細胞の貪食の誘導
ヒトＣＤ４７発現腫瘍細胞（Ｊｕｒｋａｔ、ＦａＤｕ、又はＲａｊｉ）の貪食を、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の存在下でＲａｗ２６４．７マウスマクロファージと共に腫瘍細胞をインキュベートすることによって決定した。実験は以下のように行った。Ｊｕｒｋａｔ、ＦａＤｕ、又はＲａｊｉ細胞を５ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号：Ｃ３４５５４）を用いて３７℃で１０分間標識した後、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を含有する完全ＤＭＥＭ培地で洗浄した。次いで、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異体タンパク質を、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、及び１０ｐＭの最終濃度に連続希釈（１０倍）した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）を陽性対照として使用した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。１×１０^５細胞／ウェルのＣＦＳＥ標識Ｊｕｒｋａｔ、ＦａＤｕ、又はＲａｊｉ細胞（標的細胞）を、希釈したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質と共に、低結合型９６ウェルＵ型プレート中、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、５×１０^４個のＲａｗ２６４．７細胞を各ウェルに添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。Ｒａｗ２６４．７細胞をＰＥ－シアニン７コンジュゲートＦ４／８０抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：２５－４８０１－８２）で染色した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の貪食誘導能を、フローサイトメトリーによって、マクロファージ由来の全Ｆ４／８０シグナルに対するマクロファージ由来のＣＦＳＥ＋Ｆ４／８０＋（マクロファージがＣＦＳＥ標識Ｊｕｒｋａｔ、ＦａＤｕ、又はＲａｊｉ細胞を貪食したことを示す）の割合を計算することによって評価した。

【0255】

図１６Ａ～図１６Ｃに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ４、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ８、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１３、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して、同等又は更に高い、ＣＤ４７発現腫瘍細胞の貪食誘導能を示した。以下の表に示すように、各腫瘍細胞に関してＥＣ５０値も計算した。

【0256】

【表7】

【0257】

【表8】

【0258】

【表9】

【0259】

図１６Ｄに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して、同等のＤＬＤ１細胞の貪食誘導能を示した。図１６Ｅに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して、同等のＤＬＤ１細胞の貪食誘導能を示した。

【0260】

実施例１２．マウスミクロファージによるＲＢＣ貪食の誘導
ヒトＲＢＣの貪食を、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の存在下でＲＢＣをＲａｗ２６４．７マウスマクロファージと共にインキュベートすることによって決定した。実験は以下のように行った。ＲＢＣを５ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ）で３７℃で１０分間標識した後、１０％ＦＢＳを含有する完全ＤＭＥＭ培地で洗浄した。次いで、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異体タンパク質を、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、及び１０ｐＭの最終濃度に連続希釈（１０倍）した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）を陽性対照として使用した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。１×１０^６細胞／ウェルのＣＦＳＥ標識ＲＢＣ（標的細胞）を、希釈したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質と共に、低結合型９６ウェルＵ型プレート中、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、５×１０^４個のＲａｗ２６４．７細胞を各ウェルに添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。Ｒａｗ２６４．７細胞をＰＥ－シアニン７コンジュゲートＦ４／８０抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のＲＢＣ貪食誘導能を、フローサイトメトリーによって、マクロファージ由来の全Ｆ４／８０シグナルに対するマクロファージ由来のＣＦＳＥ＋Ｆ４／８０＋（マクロファージがＣＦＳＥ標識ＲＢＣ細胞を貪食したことを示す）の割合を計算することによって評価した。

【0261】

図１７Ａに示すように、全ての試験したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質は、より弱い、マクロファージ（Ｒａｗ２６４．７）によるＲＢＣ貪食誘導能を示した。

【0262】

実施例１３．マウスミクロファージによる血小板貪食の誘導
ヒト血小板の貪食を、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の存在下で血小板をＲａｗ２６４．７マウスマクロファージと共にインキュベートすることによって決定した。実験は以下のように行った。血小板を５ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ）で３７℃で１０分間標識した後、１０％ＦＢＳを含有する完全ＤＭＥＭ培地で洗浄した。次いで、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質を、５００ｎＭ、５０ｎＭ、５ｎＭ、０．５ｎＭ、５０ｐＭ、５ｐＭ、及び０．５ｐＭの最終濃度に連続希釈（１０倍）した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）を陽性対照として使用した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。５×１０^５細胞／ウェルのＣＦＳＥ標識血小板（標的細胞）を、希釈したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質と共に、低結合型９６ウェルＵ型プレート中、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、５×１０^４個のＲａｗ２６４．７細胞を各ウェルに添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。Ｒａｗ２６４．７細胞をＰＥ－シアニン７コンジュゲートＦ４／８０抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の血小板貪食誘導能を、フローサイトメトリーによって、マクロファージ由来の全Ｆ４／８０シグナルに対するマクロファージ由来のＣＦＳＥ＋Ｆ４／８０＋（マクロファージがＣＦＳＥ標識ＲＢＣ細胞を貪食したことを示す）の割合を計算することによって評価した。

【0263】

図１７Ｂに示されるように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３は、より弱い、マクロファージ（Ｒａｗ２６４．７）による血小板貪食誘導能を示した。

【0264】

実施例１４．ヒトマクロファージによるＣＤ４７発現腫瘍細胞の貪食の誘導
ヒトミクロファージによるＣＤ４７発現腫瘍細胞（Ｒａｊｉ、ＤＬＤ１、又はＪｕｒｋａｔ）の貪食を以下のように決定した。ＰＢＭＣをヒト血液から単離し、１０％ＦＢＳ、１×ストレプトマイシン／ペニシリン、及び２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号：５７６３０４）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中で１０～１４日間インキュベートすることによって、単球をマクロファージに分化させた。単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）は接着性となり、非接着細胞を洗い流した。ＭＤＭを、Ａｃｃｕｔａｓｅ（登録商標）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：ＥＢＳ００－４５５５－５６）と共にインキュベートし、掻き取ってプレートから分離した。ヒトＣＤ４７発現腫瘍細胞（Ｒａｊｉ、ＤＬＤ１、又はＪｕｒｋａｔ）を５ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ）で３７℃で１０分間標識した後、１０％ＦＢＳを含有する完全ＲＰＭＩ培地で洗浄した。次いで、候補クローンを、２００ｎＭ、２０ｎＭ、２ｎＭ、２００ｐＭ、２０ｐＭ、及び２ｐＭの最終濃度に連続希釈（１０倍）した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）を陽性対照として使用した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。２．４×１０^４～６×１０^４細胞／ウェルのＣＦＳＥ標識Ｒａｊｉ、ＤＬＤ１、又はＪｕｒｋａｔ細胞（標的細胞）を、希釈したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異体タンパク質と共に、低結合型９６ウェルＵ型プレート中、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、１．２×１０^４～３×１０^４細胞／ウェルのＭＤＭ細胞（標的細胞数の半分）を各ウェルに添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。ＭＤＭ細胞を、ＰＥ－シアニン７コンジュゲートＣＤ１４抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：２５－０１４９－４２）で染色した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の貪食誘導能を、フローサイトメトリーによって、マクロファージ由来の全ＣＤ１４シグナルに対するマクロファージ由来のＣＦＳＥ＋ＣＤ１４＋（マクロファージがＣＦＳＥ標識ＲＢＣ細胞を貪食したことを示す）の割合を計算することによって評価した。

【0265】

図１８Ａ～図１８Ｃに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、及びＨｕ５Ｆ９－Ｇ４は、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ）と比較して、より良好なＭＤＭ細胞によるＣＤ４７発現腫瘍細胞の貪食誘導能を示した。

【0266】

図１８Ｄに示されるように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３は、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔと比較して、より良好な、ＭＤＭ細胞によるＤＬＤ１細胞の貪食誘導能を示した。Ｈｕ５Ｆ９は、最も高いＭＤＭ細胞による貪食誘導能を示した。

【0267】

実施例１５．ヒトミクロファージによるＲＢＣ貪食の誘導
ヒトミクロファージによるＲＢＣの貪食を以下のように決定した。ＰＢＭＣをヒト血液から単離し、１０％ＦＢＳ、１×ストレプトマイシン／ペニシリン、及び２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中で１０～１４日間インキュベートすることによって単球をマクロファージに分化させた。ＭＤＭは接着性となり、非接着細胞を洗い流した。ＭＤＭを、Ａｃｃｕｔａｓｅ（登録商標）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と共にインキュベートし、掻き取ってプレートから分離した。ＲＢＣを５ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ）で３７℃で１０分間標識し、１０％ＦＢＳを含有する完全ＲＰＭＩ培地で洗浄した。次いで、候補クローンを、２００ｎＭ、２０ｎＭ、２ｎＭ、２００ｐＭ、２０ｐＭ、及び２ｐＭの最終濃度に連続希釈（１０倍）した。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）を陽性対照として使用した。ＰＤ１－Ｆｃ－ｗｔを陰性対照として使用した。４×１０^５細胞／ウェルのＣＦＳＥ標識ＲＢＣ（標的細胞）を、希釈したｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質と共に、低結合型９６ウェルＵ型プレート中、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、４×１０^４個のＭＤＭ細胞を各ウェルに添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。ＭＤＭ細胞をＰＥ－シアニン７コンジュゲートＣＤ１４抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質の貪食誘導能を、フローサイトメトリーによって、マクロファージ由来の全ＣＤ１４シグナルに対するマクロファージ由来のＣＦＳＥ＋ＣＤ１４＋（マクロファージがＣＦＳＥ標識ＲＢＣ細胞を貪食したことを示す）の割合を計算することによって評価した。

【0268】

図１９Ａ～図１９Ｂに示されるように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１３、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、ヒトＭＤＭのＲＢＣ貪食を誘導しなかった。図１９Ｃに示すように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１６、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２１、及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ２３は、ヒトＭＤＭのＲＢＣ貪食を誘導しなかった。

【0269】

実施例１６．インビボ抗腫瘍効果の決定
ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のインビボ抗腫瘍効果を、Ｒａｊｉ細胞を使用して決定した。具体的には、０日目に、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにＲａｊｉ細胞を接種した。４日目に、マウスを対照群及び４つの処置群に分けた。処置群マウスについて、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０（Ｇ１）、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５（Ｇ２）、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ、Ｇ３）又はＨｕ５Ｆ９－Ｇ４（Ｇ４）を、接種後７日目及び１４日目に腹腔内注射によって投与した。対照群のマウスには等量のプラセボを投与した。各群のマウスの腫瘍体積を、接種後４日目、７日目、１１日目、１４日目及び１８日目に測定した。各群のマウスの平均腫瘍体積を以下の表に示す。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）及びｐ値も決定した。

【0270】

【表10】

注：^＊：ｐ＜０．０５、^＊＊：ｐ＜０．０１、^＊＊＊：ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１

【0271】

図２０Ａ～図２０Ｂに示されるように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、抗ＣＤ４７抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して同等の抗腫瘍効果を示した。更に、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５の両方は、腫瘍増殖の阻害において、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔよりも有効であった。図２０Ｃに示すように、各群のマウスの生存曲線も決定し、これは、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５の投与が、プラセボ対照と比較して、生存マウスの割合を顕著に延長し得ることを示す。

【0272】

異なる実験において、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ変異タンパク質のインビボ抗腫瘍効果を、ＮＣＩ－Ｈ８２細胞を使用して決定した。具体的には、０日目に、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにＮＣＩ－Ｈ８２細胞を接種した。４日目に、マウスを対照群及び４つの処置群に分けた。処置群マウスについて、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０（Ｇ１）、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５（Ｇ２）、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔ（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ、Ｇ３）又はＨｕ５Ｆ９－Ｇ４（Ｇ４）を、接種後４日目、７日目、１４日目、１１日目、１４日目、１８日目、２１日目、２５日目及び２８日目に腹腔内注射によって投与した。対照群のマウスには等量のプラセボを投与した。各群のマウスの腫瘍体積を、接種後４日目、７日目、１４日目、１１日目、１４日目、１８日目、２１日目、２５日目、２８日目、及び３２日目に測定した。各群のマウスの平均腫瘍体積を以下の表に示す。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）及びｐ値も決定した。

【0273】

【表11】

注：^＊：ｐ＜０．０５、^＊＊：ｐ＜０．０１、^＊＊＊：ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１。

【0274】

図２１Ａ～図２１Ｂに示されるように、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５は、抗ＣＤ４７抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と比較して同等の抗腫瘍効果を示した。更に、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５の両方は、腫瘍増殖の阻害において、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｗｔよりも有効であった。図２１Ｃに示すように、各群のマウスの生存曲線も決定し、これは、ｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１０及びｈＳＩＲＰα－Ｆｃ－ｍｔ１５の投与が、プラセボ対照と比較して、生存マウスの割合を顕著に延長し得ることを示す。

【0275】

他の実施形態
本発明を、発明を実施するための形態と併せて説明してきたが、前述の説明は、例示を意図したものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【図15E】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図16D】

【図16E】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図18D】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図21A】

【図21B】

【図21C】

【図22-1】

【図22-2】

【図23-1】

【図23-2】

【図23-3】

【図23-4】

【図23-5】

【配列表】

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【国際調査報告】