特表 2025-501452 ヒトメソテリン結合物質

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-22

(54)【発明の名称】ヒトメソテリン結合物質

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20250115BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250115BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250115BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250115BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250115BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P35/00

A61K39/395 N

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K39/395 T

A61K39/395 U

A61K39/395 G

A61K39/395 E

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024533052

(86)(22)【出願日】2022-12-09

(85)【翻訳文提出日】2024-07-24

(86)【国際出願番号】 US2022081253

(87)【国際公開番号】W WO2023108114

(87)【国際公開日】2023-06-15

(31)【優先権主張番号】63/288,162

(32)【優先日】2021-12-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522242018

【氏名又は名称】メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100216839

【弁理士】

【氏名又は名称】大石 敏幸

(74)【代理人】

【識別番号】100228980

【弁理士】

【氏名又は名称】副島 由加里

(74)【代理人】

【識別番号】100151448

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 孝博

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】フリードマン，アーサー

(72)【発明者】

【氏名】ハンダ，マサヒサ

(72)【発明者】

【氏名】シエ，チュン－ミン

(72)【発明者】

【氏名】シン，スジャータ

(72)【発明者】

【氏名】ダブリジファルド，サハバ

(72)【発明者】

【氏名】ヴェネガス，サンドラ・イザベル

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA02

4B064CA05

4B064CA06

4B064CA08

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA83X

4B065AA83Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA16

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085BB41

4C085BB43

4C085BB44

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

4H045GA15

4H045GA26

(57)【要約】

ヒトメソテリンに結合する抗体及びその抗原結合フラグメントが記載されている。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトメソテリン（ＭＳＬＮ）結合物質であって、
（ａ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、
（ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む抗体の６つのＣＤＲ、または、
（ｃ）配列番号２、２６、２７、または２８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む抗体の６つのＣＤＲ、を含み、
（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）では、前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）、またはＣｏｎｔａｃｔのナンバリングスキームを使用して定義される、前記ヒトメソテリン結合物質。

【請求項2】

前記Ｖ_Ｈが、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；前記Ｖ_Ｌが、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項3】

前記Ｖ_Ｈが、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；前記Ｖ_Ｌが、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項4】

前記Ｖ_Ｈが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；前記Ｖ_Ｌが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項5】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、
（ｉ）配列番号２に記載のアミノ酸配列、もしくはアミノ酸配列であって、配列番号２に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号２６に記載のアミノ酸配列、もしくはアミノ酸配列であって、配列番号２６に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列、もしくはアミノ酸配列であって、配列番号２７に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、または
（ｉｖ）配列番号２８に記載のアミノ酸配列、もしくはアミノ酸配列であって、配列番号２８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び
配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ
を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項6】

配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項7】

アミノ酸配列であって、配列番号２に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項8】

配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項9】

アミノ酸配列であって、配列番号２６に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項10】

配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項11】

アミノ酸配列であって、配列番号２７に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項12】

配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項13】

アミノ酸配列であって、配列番号２８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項14】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列、またはアミノ酸配列であって、配列番号１０に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び
配列番号１１に記載のアミノ酸配列、またはアミノ酸配列であって、配列番号１１に記載の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ
を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項15】

配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む、請求項１４に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項16】

アミノ酸配列であって、配列番号１０に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項１４に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項17】

配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及びアミノ酸配列であって、配列番号１１に記載の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項１４に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項18】

アミノ酸配列であって、配列番号１０に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び、アミノ酸配列であって、配列番号１１に記載の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項１４に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項19】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列、またはアミノ酸配列であって、配列番号１８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び
配列番号１９に記載のアミノ酸配列、またはアミノ酸配列であって、配列番号１９に記載の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ
を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項20】

配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む、請求項１９に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項21】

アミノ酸配列であって、配列番号１８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項１９に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項22】

配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及びアミノ酸配列であって、配列番号１９に記載の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項１９に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項23】

アミノ酸配列であって、配列番号１８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び、アミノ酸配列であって、配列番号１９に記載の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までを有し且つ前記アミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸である前記アミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ、を含む、請求項１９に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項24】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、配列番号２、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、ならびに、配列番号３に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含み、但し、前記Ｖ_Ｈが、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；前記Ｖ_Ｌが、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項25】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、ならびに、配列番号１１に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含み、但し、前記Ｖ_Ｈが、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；前記Ｖ_Ｌが、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項26】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、ならびに、配列番号１９に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含み、但し、前記Ｖ_Ｈが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；前記Ｖ_Ｌが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項27】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常ドメイン及びヒトカッパまたはヒトラムダアイソタイプの軽鎖定常ドメインを含む抗体を含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項28】

前記重鎖定常ドメインが、配列番号２９に記載のアミノ酸配列、または配列番号２９に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項29】

前記ＩｇＧ１アイソタイプの前記重鎖定常ドメインが、前記定常ドメインをエフェクターサイレントにする１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む、請求項２７に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項30】

前記エフェクターサイレント定常ドメインが、
（ｉ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３０に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３１に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号３２に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３２に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列、
（ｉｖ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３３に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列、
（ｖ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３４に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列、
（ｖｉ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３５に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列、
（ｖｉｉ）配列番号３６に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３６に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列、または
（ｖｉｉｉ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号３７に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基まで範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列
を含む、請求項２９に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項31】

前記エフェクターサイレント定常ドメインが、配列番号３１に記載のアミノ酸配列、または配列番号３１に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項32】

前記軽鎖定常ドメインが、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む前記ヒトカッパアイソタイプを含む、請求項２７に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項33】

前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆｖ領域、またはＳｃＦｖを含む、請求項１に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項34】

請求項１～３３のいずれか１つに記載のヒトＭＳＬＮ結合物質、及び薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、組成物。

【請求項35】

がんまたは増殖性疾患の処置を、前記処置を必要とする個体において行うための方法であって、前記がんまたは増殖性疾患を処置するために、請求項１～３３のいずれか１項に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質または請求項３４に記載の組成物を治療的有効量を前記個体に投与することを含む、前記方法。

【請求項36】

がんまたは増殖性疾患の処置のための、請求項１～３３のいずれか１項に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質または請求項３４に記載の組成物。

【請求項37】

がんまたは増殖性疾患を処置するための薬品の製造に使用するための、請求項１～３３のいずれか１項に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質または請求項３４に記載の組成物。

【請求項38】

請求項１～３３のいずれかに１つに記載のヒトＭＳＬＮ結合物質または請求項３４に記載の組成物、及び治療薬を含む、がんまたは増殖性疾患を処置するための併用療法。

【請求項39】

前記治療薬が、化学療法薬または治療抗体である、請求項３８に記載の併用療法。

【請求項40】

前記抗体が、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項３９に記載の併用療法。

【請求項41】

請求項１～３３のいずれか１項に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質をコードする、核酸分子。

【請求項42】

請求項４１に記載の核酸分子の１つ以上を含む、発現ベクター。

【請求項43】

請求項４２に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。

【請求項44】

ヒトＭＳＬＮ結合物質を生成する方法であって、（ａ）請求項４３に記載の宿主細胞を提供すること；（ｂ）前記ヒトＭＳＬＮ結合物質を発現するのに適した条件下で培地中で前記宿主細胞を培養すること；及び、（ｃ）前記培地から前記ヒトＭＳＬＮ結合物質を単離すること、を含む、前記方法。

【請求項45】

検出可能な部分にコンジュゲートされている、請求項１～３３のいずれか１項に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項46】

前記検出可能な部分が、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）またはＸ線画像法により検出可能である、請求項４５に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項47】

ヒトＭＳＬＮ結合物質であって、前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、
（ｉ）重鎖のＣ末端アミノ酸残基Ｋが除去されること、及び
（ｉｉ）ＶＨ、ＶＬ、重鎖、または軽鎖のＮ末端アミノ酸残基ＥまたはＱがピログルタミン酸で置換されること、
から選択される、請求項１～３３のいずれか１項に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質に対する修飾のうちの１つまたは２つを含む、前記ヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項48】

ヒトＭＳＬＮ結合物質であって、前記ヒトＭＳＬＮ結合物質が、宿主細胞内で、請求項４１に記載の核酸分子または請求項４２に記載の発現ベクターを発現させることにより得られる、前記ヒトＭＳＬＮ結合物質。

【請求項49】

患者内の細胞表面上のヒトＭＳＬＮを検出する方法であって、請求項４５または４６に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質を前記患者に投与すること、及び、前記ヒトＭＳＬＮ結合物質に結合している前記患者内の前記細胞を検出すること、を含む、前記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、２０２１年１２月１０日に提出された米国仮出願第６３／２８８，１６２号に対する優先権を主張し、この全体が、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、本出願と共にＸＭＬファイルフォーマットで提出されたコンピュータ読み取り可能な配列リストを含有し、この内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。本出願と共に提出されたＸＭＬファイルの配列リストは、「１４４６３－０４７－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｘｍｌ」という名称であり、２０２２年１２月９日に作成され、サイズが５２，００２バイトである。

【0003】

分野
本発明は、ヒトメソテリンに結合可能な抗メソテリン抗体及びその抗原結合フラグメントに関する。

【発明の概要】

【0004】

メソテリンは、分化抗原であり、その発現は、正常なヒト組織では胸膜、心膜、及び腹膜の内側を覆う中皮細胞に限定される（Ｃｈａｎｇ ＆ Ｐａｓｔａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１３６－１４０（１９９６）；Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５０：３７３－３８１（１９９２））。しかし、メソテリンは、いくつかのヒトがんにおいて高度に発現している（例えば、ほぼ全ての中皮腫及び膵臓腺癌、ならびに卵巣癌の約７０％及び肺腺癌の５０％）（Ｏｒｄｏｎｅｚ，Ｍｏｄ Ｐａｔｈｏｌ．１６：１９２－１９７（２００３）；Ａｒｇａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７：３８６２－３８６８（２００１）；Ｈａｓｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ．Ｍｏｒｐｈｏｌ．１３：２４３－２４７（２００５）；Ｏｒｄｏｎｅｚ，Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈｏｌ．２７：１４１８－１４２８（２００３））。

【0005】

メソテリン遺伝子は、７１ｋＤａの前駆体タンパク質をコードし、これが処理されて、巨核球増強因子（ＭＰＦ）と呼ばれる３１ｋＤａのｓｈｅｄタンパク質と、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーで細胞膜に付着する４０ｋＤａのフラグメント（メソテリン）になる。ＭＰＦは、膵癌細胞株の培養上清から単離され、マウス骨髄培養物でインターロイキン３の巨核球コロニー形成活性を刺激することから、その名称が付けられた。メソテリンの生物学的機能は、不明であるが、最近の研究結果では、メソテリンが、ＭＵＣ１６／ＣＡ－１２５に結合することにより卵巣癌の転移に関与し得ることを示唆する（Ｒｕｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：９１９０－９１９８（２００４））。細胞に結合しているメソテリンの少量が血清中に放出され、中皮腫及び卵巣癌患者で増加していることが示されている（Ｈａｓｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１２：４４７－４５３（２００６））。

【0006】

メソテリンは、正常組織での発現が限られており、いくつかの癌では高い発現を示す、腫瘍特異的治療の有望な候補である。これらの治療は、細胞表面のメソテリンを標的とするか、またはメソテリンに対する免疫反応を誘発する薬剤を含む。診療所にあるか、または臨床試験に入ろうとしている薬剤は、ＣＡＴ－５００１、ＭＯＲＡｂ－００９、及びＣＲＳ－２０７を含む（Ｈａｓｓａｎ＆Ｈｏ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４４：４６－５３（２００８））。

【0007】

メソテリンに結合する治療抗体は、がんの処置に有効であり得る。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、単独療法と併用療法の両方において、固形腫瘍及び血液疾患の処置に対し最も急速に成長し、最も効果的な治療方策の１つとして浮上している。２０１５年～２０１７年に、米国食品医薬品局は、２７の治療用ｍＡｂを承認し（Ｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ １１：１１９－１２７（２０１９））、２０１７年に、臨床的に使用されたｍＡｂ及びバイオシミラーの総数は、それぞれ、５７及び１１に増加した（Ｇｒｉｌｏ ＆ Ｍａｎｔａｌａｒｉｓ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３７：９－１６（２０１９））。２０１９年末現在、多数の企業が、５５０を超える新規抗体治療薬の初期段階の臨床試験をサポートしており、これらのうち約半数が腫瘍学の標的に対するものであった（Ｋａｐｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ １２：１－２４（２０２０））。

【0008】

本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むヒトメソテリン（ヒトＭＳＬＮ）に特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。これらのヒトＭＳＬＮ結合物質は、非ヒト霊長類メソテリンへの結合が弱いか、または全く検出されず、がん及び増殖性疾患の処置に有用であり得る。

【0009】

本発明のヒトＭＳＬＮ結合物質は、（ａ）配列番号２、２６、２７、または２８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、（ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、または（ｃ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ヒトＭＳＬＮ結合物質のＣＤＲ配列は、限定されないが、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）、またはＣｏｎｔａｃｔナンバリングスキームを含む、ＣＤＲ配列を定義するために有用な任意のナンバリングスキームに従って定義され得る。特定の実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔまたはＩＭＧＴで定義される。特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔで定義される。

【0010】

ヒトＭＳＬＮ結合物質のさらなる実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0011】

ヒトＭＳＬＮ結合物質のさらなる実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0012】

ヒトＭＳＬＮ結合物質のさらなる実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0013】

さらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、（ｉ）配列番号２に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号２に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２６に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号２６に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号２７に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列；または、（ｉｖ）配列番号２８に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号２８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。さらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、配列番号２、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0014】

さらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列、または配列番号１０に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び、配列番号１１に記載のアミノ酸配列、または配列番号１１に記載の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ、を含む。さらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0015】

さらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列、または配列番号１８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び、配列番号１９に記載のアミノ酸配列、または配列番号１９に記載の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ、を含む。さらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0016】

本発明は、さらに、配列番号２、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、ならびに、配列番号３に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含むヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。但し、Ｖ_Ｈは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；Ｖ_Ｌは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0017】

本発明は、さらに、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含むヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。

【0018】

本発明は、さらに、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含むヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。但し、Ｖ_Ｈは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；Ｖ_Ｌは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。

【0019】

本発明は、さらに、配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含むヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。

【0020】

本発明は、さらに、配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含むヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。但し、Ｖ_Ｈは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；Ｖ_Ｌは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。

【0021】

さらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む抗体である。特定の実施形態では、重鎖定常ドメインは、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖定常ドメインは、配列番号２９に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常ドメインは、定常ドメインをエフェクターサイレントにする１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、または配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３０に記載のアミノ酸配列、または配列番号３０に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列、または配列番号３１に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３２に記載のアミノ酸配列、または配列番号３２に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３３に記載のアミノ酸配列、または配列番号３３に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３４に記載のアミノ酸配列、または配列番号３４に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列、または配列番号３５に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３６に記載のアミノ酸配列、または配列番号３６に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エフェクターサイレント定常ドメインは、配列番号３７に記載のアミノ酸配列、または配列番号３７に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、定常ドメインは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列、または配列番号３１に記載の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基から３２９番目のアミノ酸残基までを有するアミノ酸配列を含む。

【0022】

さらなる実施形態では、軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖定常ドメインまたはラムダ軽鎖定常ドメインを含んでもよい。本明細書に開示のさらなる実施形態では、軽鎖定常ドメインは、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含んでもよい得る。

【0023】

本発明は、さらに、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆｖ領域、またはＳｃＦｖを含むヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。特定の実施形態では、二重特異性抗体が提供され、二重特異性抗体の一方のアームは、Ｆａｂ’フラグメントまたはＳｃＦｖからなる群より選択されるヒトＭＳＬＮ結合物質を含み、二重特異性抗原の他方のアームは、ヒトＭＳＬＮ以外の抗原に特異的なＦａｂ’またはＳｃＦｖを含む。

【0024】

本開示は、さらに、ヒトＭＳＬＮ結合物質を提供し、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、以下から選択される本明細書で提供されるヒトＭＳＬＮ結合物質に対する修飾のうちの１つまたは２つを含む：（ｉ）重鎖のＣ末端アミノ酸残基Ｋが除去されていること；及び、（ｉｉ）ＶＨ、ＶＬ、重鎖または軽鎖のＮ末端アミノ酸残基ＥまたはＱが、ピログルタミン酸で置換されていること。

【0025】

本発明は、さらに、本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質及び薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物を含む。

【0026】

本発明は、さらに、処置を必要とする個体のがんまたは増殖性疾患を処置するための方法を提供し、方法は、がんまたは増殖性疾患を処置するために、本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質または本明細書に開示の組成物の治療的有効量を個体に投与することを含む。

【0027】

本発明は、さらに、がんまたは増殖性疾患の処置のための、本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質または組成物を提供する。

【0028】

本発明は、さらに、がんまたは増殖性疾患を処置するための薬品の製造に、本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質を使用するために提供される。

【0029】

本発明は、さらに、本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質または組成物、及び治療薬を含む、がんまたは増殖性疾患を処置するための併用療法を提供する。さらなる実施形態では、治療薬は、化学療法薬または治療用抗体である。さらに別の実施形態では、抗体は、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0030】

本発明は、さらに、本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質のＶ_Ｈ及び／または本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質のＶ_Ｌをコードする核酸分子を提供する。さらに、本明細書に開示の核酸分子の１つ以上を含む発現ベクターが提供される。さらに、本明細書に開示の核酸分子の１つ以上を含む発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。

【0031】

本発明は、さらに、ヒトＭＳＬＮ結合物質の生成するための方法を提供し、方法は、（ａ）本明細書に開示の核酸分子の１つ以上を含む発現ベクターを含む宿主細胞を提供すること；（ｂ）ヒトＭＳＬＮ結合物質を発現するのに適した条件下で培地中で宿主細胞を培養すること、及び、（ｃ）培地からヒトＭＳＬＮ結合物質を単離すること、を含む。

【0032】

本開示は、さらに、宿主細胞内で本明細書で提供される核酸または発現ベクターを発現させることにより得られるヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。

【0033】

本発明は、さらに、検出可能な部分にコンジュゲートされている本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。

【0034】

本発明は、さらに、患者の細胞表面上のヒトＭＳＬＮを検出するための方法を提供し、方法は、検出可能な部分にコンジュゲートされている本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質を患者に投与すること、及び、検出可能な部分にコンジュゲートされているヒトＭＳＬＮ結合物質に結合している患者内の細胞を検出すること、を含む。特定の実施形態では、検出可能な部分は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）またはＸ線画像法で検出可能である。

【0035】

本発明は、さらに、細胞表面上でヒトＭＳＬＮ結合物質を発現する細胞を提供する。発現されるヒトＭＳＬＮ結合物質は、全抗体、二重特異性抗体、Ｆａｂ’フラグメント、ＳｃＦｖ、またはタンデムＳｃＦｖであり得る。特定の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質を発現する細胞は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。

【0036】

本発明は、さらに、細胞毒素にコンジュゲートされているヒトＭＳＬＮ結合物質を提供する。ヒトＭＳＬＮ結合物質は、全抗体、二重特異性抗体、Ｆａｂ’フラグメント、またはＳｃＦｖであり得る。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】可溶性及び膜結合型ヒトＭＳＬＮに対するＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２抗体及び陽性対照ＭＯＲＡＢ－００９のＥＬＩＳＡ結合を示す。ＭＯＲＡＢ－００９と同様に、ＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２は、可溶性及び膜結合型ヒトＭＳＬＮの両方に結合する。ＨｕＭＳＬＮは、ヒトＭＳＬＮを指し、ＣＨＯＫ１は、チャイニーズハムスター卵巣Ｋ１細胞を指す。

【図2】可溶性及び膜結合型ヒトＭＳＬＮに対するＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１抗体及び陽性対照ＭＯＲＡＢ－００９のＥＬＩＳＡ結合を示す。ＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１は、膜結合型ヒトＭＳＬＮにより低い効力で可溶性ヒトＭＳＬＮに結合する。ＨｕＭＳＬＮは、ヒトＭＳＬＮを指し、ＣＨＯＫ１は、チャイニーズハムスター卵巣Ｋ１細胞を指す。

【図3】可溶性及び膜結合型ヒトＭＳＬＮに対するＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１抗体及び陽性対照ＭＯＲＡＢ－００９のＥＬＩＳＡ結合を示す。ＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１は、膜結合型ヒトＭＳＬＮよりも低い効力で可溶性ヒトＭＳＬＮに結合する。ＨｕＭＳＬＮは、ヒトＭＳＬＮを指し、ＣＨＯＫ１は、チャイニーズハムスター卵巣Ｋ１細胞を指す。

【図4】Ｎ末端領域ＭＰＦ（巨核球増強因子）及び４０ｋＤａの膜結合メソテリン（細胞表面に連結されているＧＰＩ）を放出するエンドプロテアーゼフーリン切断により約７０ｋＤａの前駆体タンパク質から生成されたヒトＭＳＬＮを示す。

【発明を実施するための形態】

【0038】

定義
本発明がより容易に理解され得るように、特定の技術用語及び科学用語が以下に具体的に定義される。本文書の他の箇所で具体的に定義されていない限り、本明細書で使用される他の全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解する意味を有する。

【0039】

本明細書で使用される場合、添付の特許請求の範囲を含む、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの単数形の単語は、文脈に別途明示のない限り、対応する複数形の指示対象も含む。

【0040】

本明細書で使用される場合、「メソテリン」または「ＭＳＬＮ」という用語は、正常なヒト組織における発現が、胸膜、心膜、及び腹膜の内側を覆う中皮細胞に限定される分化抗原を指す。ＭＳＬＮは、エンドプロテアーゼであるフーリンで切断され、Ｎ末端領域のＭＰＦ（巨核球増強因子）及び４０ｋＤａの膜結合メソテリン（細胞表面に連結されているＧＰＩ）を放出する約７０ｋＤａの前駆体タンパク質から生成される（図４を参照）。ヒトメソテリン前駆体のアミノ酸配列は、配列番号１に示される。成熟形態は、アミノ酸２９６～６２２を含む。

【0041】

本明細書で使用される場合、「ヒトＭＳＬＮ」という用語は、ヒトメソテリンの成熟形態を指し、「アカゲザルＭＳＬＮ」という用語は、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）メソテリンの成熟形態を指す。アカゲザルＭＳＬＮの前駆体及び成熟形態のアミノ酸配列が配列番号３９に示される。

【0042】

本明細書で使用される場合、「ヒトＭＳＬＮ結合物質」という用語は、可溶性及び／または膜結合型ヒトＭＳＬＮに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。ヒトＭＳＬＮ結合物質は、二価抗体テトラマー（２Ｈ＋２Ｌ）、一価抗体（Ｈ＋Ｌ）、ヒトＭＳＬＮ及び別の標的を標的とする二重特異性抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆｖ領域、及びＳｃＦｖを含むが、これらに限定されない。

【0043】

本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位及びその結合パートナー（例えば、抗原）間の非共有結合相互作用の合計の強さを指す。別途指示のない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合ペア（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）で表し得る。親和性は、ＫｉｎＥｘＡ及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法で測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示的及び例示的な実施形態が以下に記載される。

【0044】

本明細書で使用される場合、「投与」及び「処置」という用語は、動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、臓器、または生体液に適用される場合、本明細書に開示のヒトＭＳＬＮ結合物質を含む外因性の医薬品、治療薬、診断薬、または組成物を、動物、ヒト、対象、細胞、組織、臓器、または生体液に接触させることを指す。細胞の処置は、試薬の細胞との接触、及び試薬の体液との接触（体液は細胞と接触している）を包含する。「投与」及び「処置」は、試薬、診断薬、結合化合物、または別の細胞による、例えば、細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｅｘ ｖｉｖｏ処置も意味する。「対象」という用語は、任意の生物、好ましくは、動物、さらに好ましくは、哺乳動物（例えば、ヒト、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ）を含む。好ましい実施形態では、「対象」という用語は、ヒトを指す。

【0045】

本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、カルボキシル基（－ＣＯＯＨ）とアミノ基（－ＮＨ_２）の両方を含む単純な有機化合物を指す。アミノ酸は、タンパク質、ポリペプチド、及びペプチドの構成単位である。アミノ酸は、Ｌ型及びＤ型で生じ、天然のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドでは、Ｌ型である。アミノ酸及びそのコード名称は、以下のチャートに示される。

【表1】

【0046】

本明細書で使用される場合、「抗体」または「免疫グロブリン」という用語は、ジスルフィド結合により相互連結されている少なくとも２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）を含む糖タンパク質を指す。各ＨＣは、重鎖可変領域またはドメイン（Ｖ_Ｈ）、及び重鎖定常領域またはドメインで構成されている。各軽鎖は、ＬＣ可変領域またはドメイン（Ｖ_Ｌ）、及びＬＣ定常ドメインからなる。特定の天然に存在するＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ抗体では、重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）で構成されている。一般に、抗体の基本的な抗体構造単位は、２つのＨＣ／ＬＣペア（２Ｈ）を含むＹ字型のテトラマーである。各テトラマーは、２つの同一のポリペプチド鎖のペアを含み、各ペアは、１つのＬＣ（約２５ｋＤａ）鎖及びＨＣ鎖（約５０～７０ｋＤａ）（Ｈ＋Ｌ）を有する。各ＨＣ：ＬＣペアは、１つのＶ_Ｈ：１つのＶ_Ｌペアを含む。１つのＶ_Ｈ：１つのＶ_Ｌのペアは、「Ｆａｂ」という用語で呼ばれ得る。従って、各抗体テトラマーは、２つのＦａｂ（Ｙ字型抗体の各アームに１つずつ）を含む。特定の実施形態では、抗体は、宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）内で組み換え発現された時に、または精製／保存中に、生じ得るその翻訳後修飾（例えば、重鎖のＣ末端リジンのクリッピング、グルタミンまたはグルタミン酸のピログルタミン酸への変換）を含んでもよい。

【0047】

ＬＣ定常ドメインは、１つのドメインＣＬで構成されている。ヒトＶ_Ｈは、Ｖ_Ｈ１、Ｖ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、Ｖ_Ｈ４、Ｖ_Ｈ５、Ｖ_Ｈ６、及びＶ_Ｈ７の７つのファミリーメンバーを含み；ヒトＶ_Ｌは、Ｖ_κ１、Ｖ_κ２、Ｖ_κ３、Ｖ_κ４、Ｖ_κ５、Ｖ_κ６、Ｖ_λ１、Ｖ_λ２、Ｖ_λ３、Ｖ_λ４、Ｖ_λ５、Ｖ_λ６、Ｖ_λ７、Ｖ_λ８、Ｖ_λ９、及びＶ_λ１０の１６のファミリーメンバーを含む。これらのファミリーメンバーはそれぞれ、さらに特定のサブタイプに分類することができる。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる）に点在する超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）空間と呼ばれる）に、さらに細分化することができる。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、３つのＣＤＲ領域及び４つのＦＲ領域で構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。Ｖ_Ｈ内のアミノ酸のナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームを使用して決定され得る。以下を参照のこと：Ｂｅｒａｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｄ．Ｇｉｎｅｔｏｕｘ，Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ Ｃ－ＤＯＭＡＩＮ，ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｅｘｏｎ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ，ｔｈｅ Ｅｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇｓ：Ｈｕｍａｎ ＩＧＨＧ，Ｃｒｅａｔｅｄ：１７／０５／２００１，Ｖｅｒｓｉｏｎ：０８／０６／２０１６（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＨＧｎｂｅｒ．ｈｔｍｌでアクセス可能）。

【0048】

抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的な補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。通常、重鎖定常ドメインのアミノ酸のナンバリングは、Ｅｕナンバリングスキームに従って１１８から開始する。Ｅｕナンバリングスキームは、ヒトＩｇＧ１（Ｅｕ）のアミノ酸配列に基づいており、これは、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．６３：７８－８５（１９６９）に記載のＩｇＧ１のアミノ酸配列のアミノ酸位置１１８から開始する定常ドメインを有し、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４定常ドメインについては、Ｂｅｒａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｏｐ．ｃｉｔに示される。

【0049】

重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用するＣＤＲを含む結合ドメインを含有する。抗体可変ドメインのＣＤＲ配列を定義するための多数の方法は、当該技術分野で利用可能である（以下を参照のこと：Ｄｏｎｄｅｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：Ａｒｔｉｃｌｅ ２２７８（２０１８））。一般的なナンバリングスキームは、以下を含む。
Ｋａｂａｔナンバリングスキームは、配列の可変性に基づいており、最も一般に使用される（以下を参照のこと：Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）（配列により抗体のＣＤＲ領域を定義））。Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームは、構造ループ領域の位置に基づいている（以下を参照のこと：Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７））。ＡｂＭナンバリングスキームは、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用される２つの間の妥協案である（以下を参照：Ｋａｒｕ ｅｔ ａｌ，ＩＬＡＲ Ｊｏｕｒｎａｌ ３７：１３２－１４１（１９９５））。Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングスキームは、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいている（以下を参照のこと：ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ：Ｐｒｏｆ．Ａｎｄｒｅｗ Ｃ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ’ｓ Ｇｒｏｕｐ；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ＆ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：３８３２－３８３９（２００８））。ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）ナンバリングスキームは、抗体の軽鎖及び重鎖の可変ドメイン、ならびに様々な種のＴ細胞受容体鎖を含む免疫グロブリンスーパーファミリーのタンパク質配列全てに対して標準化されたナンバリングシステムであり、生殖細胞系列のＶ配列アラインメントに基づいて１から１２８まで連続的に残基を数える（以下を参照のこと：Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：２０６－１１（１９９７）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １８：５０９（１９９７）；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（２００３））。

【0050】

ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ：Ｐｒｏｆ．Ａｎｄｒｅｗ Ｃ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ’ｓ Ｇｒｏｕｐで開示され、以下の表１に再現された以下の一般的な規則は、抗体が結合する抗原のエピトープを含むアミノ酸と特異的に相互作用するアミノ酸を含む抗体配列のＣＤＲを定義するために使用され得る。これらの一般に定常の特徴が発生しない稀な例があるが、Ｃｙｓ残基は、最も保存されている特徴である。

【表2】

【0051】

重鎖及び軽鎖可変領域のヌクレオチド配列全体は、通常、Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされるが、可変領域内の３つのＣＤＲは、上述のナンバリングスキームのいずれか１つに従って定義され得る。

【0052】

一般に、技術水準により、多くの場合、重鎖のＣＤＲ３領域が、抗体の特異性の主要な決定要因であると認識されており、重鎖のＣＤＲ３のみに基づく特異的抗体生成の例が当該技術分野で既知である（例えば、Ｂｅｉｂｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３－８４９（２０００）；Ｋｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８３：２５２－２６０（２０００）；Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：８９１０－８９１５（１９９８）；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：３７－４５（２０００））。本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ」という用語は、抗体のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む抗体から得られる結晶化可能なフラグメントドメインまたは領域である。抗体では、２つのＦｃドメインは、２つ以上のジスルフィド結合、及びＣＨ３ドメインの疎水性相互作用で結合している。Ｆｃドメインは、抗体をプロテアーゼパパインで消化することにより得られ得る。通常、Ｆｃドメイン内のアミノ酸は、Ｅｕナンバリング規則に従ってナンバリングされる（以下を参照のこと：Ｅｄｅｌｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．６３：７８－８５（１９６９））。

【0053】

本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、体内で免疫応答を誘発する任意の異物を指す。

【0054】

本明細書で使用される場合、「抗原結合フラグメント」という用語は、全長抗体に結合している抗原に特異的に結合する能力、及び／または抗原に特異的に結合するために全長抗体と競合する能力を保持する、全長抗体のフラグメントを含むポリペプチド（複数可）を指す。抗原結合フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖ領域、及びｓｃＦｖが挙げられるが、これらに限定されない。

【0055】

本明細書で使用される場合、「Ｆａｂフラグメント」という用語は、１つの抗体軽鎖ならびに１つの抗体重鎖のＣＨ１及びＶ_Ｈを含む抗原結合物質を指す。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成できない。「Ｆａｂフラグメント」は、抗体のパパイン切断の産物であり得る。

【0056】

本明細書で使用される場合、「Ｆａｂ’フラグメント」という用語は、１つの抗体軽鎖と、Ｖ_ＨならびにＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン間の領域までのＣＨ１ドメイン（その結果、２つのＦａｂ’フラグメントの２つの重鎖の間に、鎖間ジスルフィド結合が形成されて、Ｆ（ａｂ’）_２分子が形成され得る）を含有する１つの抗体重鎖の一部またはフラグメントを含む抗原結合物質を指す。

【0057】

本明細書で使用される場合、「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」という用語は、２つの抗体軽鎖と、Ｖ_ＨならびにＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン間の領域までのＣＨ１ドメイン（その結果、２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成される）を含有する２つの重鎖を含む抗原結合物質を指す。従って、Ｆ（ａｂ’）_２は、このフラグメントは、２つの重鎖間のジスルフィド結合により結合している２つのＦａｂ’フラグメントで構成されている。「Ｆ（ａｂ’）_２「フラグメント」は、抗体のペプシン切断産物であり得る。

【0058】

本明細書で使用される場合、「Ｆｖ領域」という用語は、抗体の重鎖と軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが定常領域を欠く抗原結合物質を指す。

【0059】

本明細書で使用される場合、「ＳｃＦｖ」または「一本鎖可変フラグメント」という用語は、１０～約２５個のアミノ酸の短いリンカーペプチドにより融合または互いに連結されているＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む融合タンパク質を指す。リンカーは、通常、柔軟性を高めるためにグリシンを多く含み、溶解性を高めるためにセリンまたはトレオニンを多く含み、Ｖ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端に連結することも、その逆で連結することもできる。このタンパク質は、定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。

【0060】

本明細書で使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合領域を有する小さな抗体フラグメントを含む抗原結合物質を指し、このフラグメントは、同じポリペプチド鎖内の軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に連結された重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）（Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングができない程短いリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインとペアリングを余儀なくされ、２つの抗原結合領域が作成される。ダイアボディは、例えば、以下でさらに詳しく記載されている：ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８。改変型抗体バリアントの概説については、一般に、以下を参照のこと：Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６－１１３６。

【0061】

これら及び他の潜在的な構成は、以下に記載されている：Ｃｈａｎ ＆ Ｃａｒｔｅｒ（２０１０）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３０１。これらの抗体フラグメントは、当業者らに既知の従来の手法を使用して得られ、フラグメントは、インタクト抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。抗原結合フラグメントは、組み換えＤＮＡ手法、またはインタクト免疫グロブリンの酵素的または化学的切断により生成することができる。

【0062】

本明細書で使用される場合、用語「単離された」抗体またはその抗原結合フラグメントは、それらが生成される細胞または細胞培養物由来の他の生物学的分子が少なくとも部分的に存在しない。そのような生物学的分子としては、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または他の物質、例えば、細胞破片及び成長培地が挙げられる。単離抗体または抗原結合フラグメントは、さらに、発現系成分、例えば、宿主細胞またはその成長培地由来の生物学的分子、が少なくとも部分的に存在しないことがある。一般に、「分離された」という用語は、そのような生物学的分子が、完全に存在しないこと、または水、緩衝液、もしくは塩が存在しないこと、または抗体もしくはフラグメントを含む医薬製剤の成分が存在しないことが意図されるものではない。

【0063】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団を指す。すなわち、集団を含む抗体分子は、微量に存在し得る起こり得る自然発生的な変異を除いて、アミノ酸配列が同一である。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体調製物は、通常、可変ドメインに異なるアミノ酸配列を有し、多くの場合、異なるエピトープに特異的である多数の異なる抗体を含む。「モノクローナル」という修飾語は、抗体が実質的に均質な抗体集団から得られるという特性を示しており、特定のいずれかの方法による抗体の生成を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法で作製されても、組み換えＤＮＡ法で作製されてもよい（例えば、以下を参照のこと：米国特許第４，８１６，５６７号）。「モノクローナル抗体」は、また、例えば、以下に記載の手法を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離され得る：Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）。以下も参照のこと：Ｐｒｅｓｔａ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１（２００５）。

【0064】

本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、生物学的機能に関連する核酸の任意のセグメントを指すために広く使用される。従って、遺伝子は、その発現に必要なコード配列及び／または調節配列を含む。例えば、「遺伝子」は、ｍＲＮＡ、機能性ＲＮＡ、または特定のタンパク質（調節配列を含む）を発現する核酸フラグメントを指す。「遺伝子」は、例えば、他のタンパク質の認識配列を形成する、発現されていないＤＮＡセグメントも含む。「遺伝子」は、目的の供給源からのクローニング、または既知の、もしくは予測される配列情報から合成することを含む様々な供給源から取得することができ、所望のパラメータを有するように設計された配列を含み得る。遺伝子は、目的の分子をコードする天然ヌクレオチド配列と、目的の分子をコードする合成由来のヌクレオチド配列（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）ヌクレオチド配列から得られる相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ））の両方を含む。

【0065】

本明細書で使用される場合、「生殖細胞系列」または「生殖細胞系列配列」という用語は、再構成されていない免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を指す。再構成されていない免疫グロブリン配列の任意の好適な供給源が使用され得る。ヒト生殖細胞系列の配列は、例えば、米国国立衛生研究所の国立関節炎・筋骨格・皮膚疾患研究所のウェブサイト上のＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ（登録商標）生殖細胞系列データベースから取得され得る。マウス生殖細胞系列の配列は、例えば、以下に記載されるように取得され得る：Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ２５６－Ｄ２６１（２００５）。

【0066】

本明細書で使用される場合、「ライブラリ」という用語は、通常は、一般に、共通のベクターバックボーンにある、関連性があるが多様なポリヌクレオチドの集合体である。例えば、軽鎖または重鎖免疫グロブリンライブラリは、共通のベクターバックボーンに、ヌクレオチド配列が多様であるが関連している軽鎖及び／または重鎖免疫グロブリンをコードするポリヌクレオチドを含有してもよく、例えば、これらの免疫グロブリンは、例えば、本発明の抗体ディスプレイシステムにおいて、他の免疫グロブリンと複合体を形成する能力が機能的に多様であり、特定の抗原に結合する。

【0067】

本明細書で使用される場合、本明細書で考察される「ポリヌクレオチド」という用語は、本発明の一部を形成する。「ポリヌクレオチド」、「ポリ核酸」、「核酸」、または「核酸分子」は、ＤＮＡ及びＲＮＡ（一本鎖または二本鎖）を含む。本発明の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、免疫グロブリン鎖または本発明の抗体ディスプレイシステムの構成要素をコードするもの）、天然調節（発現制御）配列と並んでいても、プロモーター、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）及び他のリボソーム結合部位配列、エンハンサー、応答エレメント、サプレッサー、シグナル配列、ポリアデニル化配列、イントロン、５’－及び３’－非コード領域などを含む異種配列と関連していてもよい。

【0068】

ポリヌクレオチド（例えば、本発明の抗体ディスプレイシステムの免疫グロブリン鎖または構成要素をコードするもの）は、プロモーターと作動可能に結合し得る。「プロモーター」または「プロモーター配列」は、本発明の一実施形態では、細胞内のＲＮＡポリメラーゼに結合し（例えば、直接、または他のプロモーター結合タンパク質もしくは物質を介して）、コード配列の転写を開始することが可能なＤＮＡ調節領域である。プロモーター配列は、一般に、転写開始部位により３’末端で区切られ、任意のレベルで転写を開始するために必要な最小数量の塩基またはエレメントを含むように上流（５’方向）に伸長する。プロモーター配列内には、転写開始部位（例えば、ヌクレアーゼＳ１でマッピングすることにより、都合よく定義される）と、ＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が見出され得る。プロモーターは、エンハンサー配列及びリプレッサー配列を含む他の発現制御配列、または本発明の核酸と作動可能に結合し得る。遺伝子発現を制御するために使用され得るプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（米国特許第５，３８５，８３９号及び同第５，１６８，０６２号）、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４－３１０（１９８１））、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端リピートに含有されるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ２２：７８７－７９７（１９８０））、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１４４１－１４４５（１９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９－４２（１９８２））、原核生物発現ベクター、例えば、β－ラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ－Ｋｏｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７－３７３１（１９７８））、またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０：２１－２５（１９８３））（“Ｕｓｅｆｕｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ”ｉｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ ２４２：７４－９４（１９８０）も参照のこと）、ならびに酵母または他の真菌由来のプロモーターエレメント、例えば、Ｇａｌ ４プロモーター、ＡＤＣ（アルコール脱水素酵素）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、またはアルカリホスファターゼプロモーターを含むが、これらに限定されない。

【0069】

本明細書で使用される場合、「ベクター」、「クローニングベクター」、及び「発現ベクター」という用語は、宿主を形質転換し、任意に、導入配列の発現及び／または複製を促進するために、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列を宿主細胞に導入することができるビヒクル（例えば、プラスミド）を含む。本発明の抗体ディスプレイシステムの免疫グロブリン鎖または構成要素をコードするポリヌクレオチドは、本発明の一実施形態では、ベクター内に存在してもよい。

【0070】

本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養」という用語は、互換的に使用され、そのような名称は全て、子孫を含む。従って、「形質転換体」及び「形質転換細胞」という語は、移植数に関係なく、主要な対象細胞及びそれから誘導される培養物を含む。計画的または不慮の変異により、全ての子孫が正確に同一のＤＮＡ内容を有するわけではないことも理解される。元々形質転換されている細胞でスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が含まれる。明確な指定が意図されている場合は、文脈から明らかになるであろう。

【0071】

本明細書で使用される場合、「制御配列」または「調節配列」という用語は、特定の宿主生物において作動可能に連結されているコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。真核生物での発現に適した制御配列には、例えば、タンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡの発現のためのプロモーター、オペレーターまたはエンハンサー配列、転写終結配列、及びポリアデニル化配列、ならびにメッセンジャーＲＮＡの翻訳を促進するためのリボソーム結合部位を含む。

【0072】

本明細書で使用される場合、核酸は、別の核酸配列、例えば、調節配列、と機能的な関係に置かれている時に、「作動可能に連結されている」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結されているか；プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されているか；または、リボソーム結合部位は、翻訳を容易にするように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結されている」は、連結されているＤＮＡ配列が連続していること、ならびに、分泌リーダーの場合は、連続しており、読み取り段階にあることを意味する。しかし、エンハンサーは、連続している必要はない。連結は、都合の良い制限部位においてライゲーションにより行われる。そのような部位が存在しない場合、従来の方法に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。

【0073】

本明細書で使用される場合、「コードすること」という用語は、定義されたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列と、そこから生じる生物学的特性のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマー及び巨大分子の合成のためのテンプレートとして機能するための、ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡ）内の特定のヌクレオチド配列に固有の特性を指す。従って、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳により、遺伝子が細胞または他の生物系内でタンパク質が産生される場合、その遺伝子は、タンパク質をコードする。コード鎖（このヌクレオチド配列が、ｍＲＮＡ配列と同一であり、通常、配列表で提供される）と非コード鎖（遺伝子またはｃＤＮＡの転写のテンプレートとして使用）は、双方ともに、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードするものと呼ぶことができる。別途明記のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重したバージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質及びＲＮＡをコードするヌクレオチド配列は、イントロンを含んでもよい。

【0074】

本明細書で使用される場合、「発現」という用語は、特定のヌクレオチド配列の転写及び／または翻訳として定義される。

【0075】

本明細書で使用される場合、「処置する」または「処置すること」という用語は、本発明のヒトＭＳＬＮ結合物質のいずれかを含有する組成物などの治療薬を、必要とする個体に局所、皮下、筋肉内、皮内、または全身に投与することを意味する。個体のがんまたは増殖性疾患の処置に有効な治療薬の量は、個体の傷害または病状、年齢、及び／または体重などの要因、ならびに個体において所望の応答を誘発する治療薬の能力に応じて変動し得る。治療目的が達成されているかどうかは、処置の重症度または進行状況を評価するために、医師または他の熟練医療提供者により通常使用される個体及び／または任意の臨床的測定で評価することができる。従って、これらの用語は、有益な結果が、必要とするヒトまたは動物の個体に与えられているか、または与えられるであろうことを意味する。

【0076】

本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、ヒトまたは動物の個体に適用されるような治療的処置及び診断的適用を指す。ヒトまたは動物の個体に適用されるような「処置」は、ヒトまたは動物対象に本発明の抗体または抗原結合フラグメントを接触させることを包含する。

【0077】

本明細書で使用される場合、「治療的有効量」という用語は、処置される個体において所望の効果を達成するのに十分な特定の物質の量を指す。例えば、これは、個体の疾患または障害の重症度を抑制または低減するために必要な量であってよい。

【0078】

本明細書で使用される場合、「併用療法」という用語は、第１の治療薬と第２の治療薬を連続してまたは同時に個体に投与することを含む、ヒトまたは動物の個体の処置を指す。一般に、第１及び第２の治療薬は、混合物ではなく、別々に個体に投与されるが；第１及び第２の治療薬が投与前に混合される実施形態があってよい。

【0079】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入されている細胞（そのような細胞の子孫を含む）を指す。宿主細胞は、「遺伝子改変型細胞」、「形質転換体」、及び「形質転換細胞」を含み、これは、継代数に関係なく、主要な改変型（例えば、形質転換）細胞及びそこから誘導された子孫を含む。子孫は、核酸の内容が親細胞と完全に同一ではないことがあるが、変異を含有してもよい。元々形質転換されている細胞でスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が本明細書に含まれる。必要に応じて、宿主細胞は、本明細書に記載されるように、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを安定的または一時的にトランスフェクトすることができる。

【0080】

ヒトＭＳＬＮ結合物質
本発明のヒトＭＳＬＮ結合物質は、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合するキメラまたは完全ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである。ヒトＭＳＬＮ結合物質は、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、各ドメインは、以下の配置で、３つのＣＤＲ及び４つのフレームワーク（ＦＲ）を含む：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４。
これらのヒトＭＳＬＮ結合物質は、Ｖ_Ｈからの３つのＣＤＲ、及びＶ_Ｈと対になるＶ_Ｌからの３つのＣＤＲの特定の組み合わせを含む６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ＣＤＲ配列は、限定されないが、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）、またはＣｏｎｔａｃｔナンバリングスキームを含む、ＣＤＲ配列を定義するために有用な任意のナンバリングスキームに従って定義され得る。ＣＤＲ配列を定義するためのガイダンスは、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ：Ｐｒｏｆ．Ａｎｄｒｅｗ Ｃ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ’ｓ Ｇｒｏｕｐで開示され、表１に再現されている一般的なルールに見出され得る。

【0081】

特定の実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔまたはＩＭＧＴで定義される。表２～４に示されるＣＤＲアミノ酸配列は、ＣＤＲアミノ酸配列を同定するためのＫａｂａｔナンバリングスキームに従って示される。

【表3】

【表4】

【表5】

【0082】

ＣＤＲアミノ酸配列を同定するための方式のいずれか１つを使用して決定された特定のＣＤＲアミノ酸配列（表１を参照）は、他の任意のナンバリングスキームに従って同定されたＣＤＲアミノ酸配列よりも多いまたは少ないアミノ酸を有するが、ＣＤＲアミノ酸配列は、ある程度重複するであろう。従って、Ｋａｂａｔに従って定義されたＣＤＲアミノ酸配列は、限定的なものとして解釈されるべきではなく、ＣＤＲアミノ酸配列が別のナンバリングスキームで同定されている任意のヒトＭＳＬＮ結合物質は、本発明のヒトＭＳＬＮ結合物質の範囲に入るであろう。但し、そのようなヒトＭＳＬＮ結合物質のアミノ酸配列が、Ｋａｂａｔにより同定される６つのＣＤＲアミノ酸配列を含む。本明細書に開示の全てのヒトＭＳＬＮ結合物質については、別途指示のない限り、可変ドメイン全体を含むアミノ酸は、ＣＤＲを含むアミノ酸が定義される方法とは無関係に、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従ってナンバリングされる。重鎖定常ドメインは、Ｅｕナンバリングスキームに従ってナンバリングされる。

【0083】

いくつかの実施形態では、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むヒトメソテリン結合物質が本明細書で提供される。ＣＤＲは、当該技術分野で既知の任意のナンバリングスキームに従って定義することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）、もしくはＣｏｎｔａｃｔナンバリングスキーム、またはそれらの組み合わせを使用して定義される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、表１のナンバリングスキームに従って定義される。

【0084】

いくつかの実施形態では、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む抗体の６つのＣＤＲを含むヒトメソテリン結合物質が本明細書で提供される。ＣＤＲは、当該技術分野で既知の任意のナンバリングスキームに従って定義することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）、もしくはＣｏｎｔａｃｔナンバリングスキーム、またはそれらの組み合わせを使用して定義される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、表１のナンバリングスキームに従って定義される。

【0085】

いくつかの実施形態では、配列番号２、２６、２７、または２８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む抗体の６つのＣＤＲを含むヒトメソテリン結合物質が本明細書で提供される。ＣＤＲは、当該技術分野で既知の任意のナンバリングスキームに従って定義することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）、もしくはＣｏｎｔａｃｔナンバリングスキーム、またはそれらの組み合わせを使用して定義される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、表１のナンバリングスキームに従って定義される。

【0086】

本発明の特定の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈドメイン、ならびに、（ｂ）配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌドメイン、を含み、ＣＤＲ配列が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームで定義される。

【0087】

本発明の特定の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、（ａ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈドメイン、ならびに、（ｂ）配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌドメイン、を含み、ＣＤＲ配列が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームで定義される。

【0088】

本発明の特定の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、（ａ）配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈドメイン、ならびに、（ｂ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌドメイン、を含み、ＣＤＲ配列が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームで定義される。

【0089】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインと、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメイン、を含む。

【0090】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２６に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0094】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0095】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２７に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0096】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号２８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0098】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメイン、を含む。

【0099】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0100】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１０に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0101】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１１に記載の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0102】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１０に記載の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１６番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び、配列番号１１に記載の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０７番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0103】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0104】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0105】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号１９に記載の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0106】

さらなる実施形態では、メソテリン結合物質は、配列番号１８に記載の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１１８番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｈ、及び、配列番号１９に記載の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基から１０８番目のアミノ酸残基までを有し且つアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基がピログルタミン酸であるアミノ酸配列、を含むＶ_Ｌ、を含む。

【0107】

本発明のさらなる実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、ＩｇＧ_１アイソタイプの重鎖（ＨＣ）定常ドメインを含む抗体である。特定の実施形態では、重鎖定常ドメインは、天然のＩｇＧ１アイソタイプのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失、またはそれらの組み合わせを含む。

【0108】

配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むＩｇＧ_１重鎖定常ドメインまたは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失、またはそれらの組み合わせを含むそのバリアント。

【0109】

本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示の定常ドメインは、Ｃ末端リジンを含んでも、Ｃ末端リジンまたはＣ末端グリシン－リジンジペプチドのいずれかを欠いていてもよい。

【0110】

本明細書に開示の実施形態のいずれかでは、軽鎖は、配列番号３８を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含んでもよい。

【0111】

エフェクターサイレントＦｃドメインを含むヒトＭＳＬＮ結合物質
フルサイズの抗体を含む本発明のエフェクターサイレントヒトＭＳＬＮ結合物質は、抗体が１つ以上のＦｃＲに測定可能な結合を示さないか、または同じＩｇＧアイソタイプの未修飾抗体と比較して１つ以上のＦｃＲへの結合の減少を示すように修飾されているＨＣ定常ドメインまたはそのＦｃドメインを含んでもよい。エフェクターサイレント抗体は、さらなる実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩのそれぞれに対して測定可能な結合を示さないことも、同じＩｇＧアイソタイプの未修飾型抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩのそれぞれに対する結合の低減を示してもよい。特定の実施形態では、ＨＣ定常ドメインまたはＦｃドメインは、ヒトＨＣ定常ドメインまたはＦｃドメインである。

【0112】

特定の実施形態では、エフェクターサイレント抗体は、ＨＣ定常ドメインの位置２９７（Ｅｕナンバリングシステム）のアスパラギン（Ａｓｎ）残基のＮグリコシル化を欠くように修飾されているＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。Ｎグリコシル化のコンセンサス配列は、Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（位置２９８のＸａａは、Ｐｒｏ以外の任意のアミノ酸である）であり、Ｎグリコシル化のコンセンサス配列は、Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒである。この修飾は、ＨＣ定常ドメインをコードする核酸分子の位置２９７のＡｓｎをコードするコドンを、別のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＧｌｕをコードするコドン、例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｅ、またはＮ２９７Ｄと置き換えることにより達成され得る。あるいは、位置２９８のＳｅｒのコドンが、Ｐｒｏのコドンに置換されても、位置２９９のＴｈｒのコドンが、Ｓｅｒのコドン以外の任意のコドンに置換され得る。さらに別の選択肢では、Ｎ－グリコシル化コンセンサス配列を含むアミノ酸のそれぞれが、別のアミノ酸と置換されている。そのような修飾型ＩｇＧ分子は、測定可能なエフェクター機能を有さない。特定の実施形態では、これらの変異型ＨＣ分子は、さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の追加のアミノ酸置換、挿入、及び／または欠失を含んでもよく、該置換は、保存的変異または非保存的変異であってよい。さらなる実施形態では、位置２９７のＮグリコシル化を欠くように修飾されているそのようなＩｇＧは、さらに、測定可能なエフェクター機能を排除するために本明細書に開示の１つ以上の追加の変異を含んでもよい。

【0113】

ＨＣ定常ドメインのＮ－グリコシル化を無効にする、位置２９７で変異した例示的なＩｇＧ１ ＨＣ定常ドメインは、配列番号３６に示される。特定の実施形態では、これらの変異型ＨＣ分子は、さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の追加のアミノ酸置換、挿入、及び／または欠失を含んでもよく、該置換は、保存的変異または非保存的変異であってよい。

【0114】

特定の実施形態では、エフェクターサイレント抗体を含むＩｇＧ１ ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５Ｓ、及びＰ３３１Ｓ（位置が、Ｅｕナンバリングに従って同定される）から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むように修飾され、該ＨＣ定常ドメインが、エフェクターサイレントである。特定の実施形態では、修飾型ＩｇＧ１は、さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の追加のアミノ酸置換、挿入、及び／または欠失を含み、該置換が、保存的変異または非保存的変異であってよい。

【0115】

特定の実施形態では、ＨＣ定常ドメインは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ置換を含む（位置は、Ｅｕナンバリングに従って同定される）。特定の実施形態では、ＨＣ定常ドメインは、位置Ｐｒｏ３２９のアミノ酸置換と、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５Ｓ、及びＰ３３１Ｓ（位置はＥｕナンバリングに従って同定される）から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。これら及び他の置換は、ＷＯ９４２８０２７；ＷＯ２００４０９９２４９；ＷＯ２０１２１３００８３１、米国特許第９，７０８，４０６号；同第８，９６９，５２６号；同第９，２９６，８１５号；Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４０６，２６７－２７３（２０００）に開示される。

【0116】

上記の特定の実施形態では、ＨＣ定常ドメインは、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ；Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ；Ｌ２３５Ｅ；Ｄ２６５Ａ；Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ；またはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ置換を含み、位置は、Ｅｕナンバリングに従って同定される。特定の実施形態では、ＨＣ分子は、さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の追加のアミノ酸置換、挿入、及び／または欠失を含み、該置換は、保存的変異または非保存的変異であってよい。

【0117】

特定の実施形態では、エフェクターサイレント抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを含み、ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、ＩｇＧ１の位置２３３から位置２３６のアミノ酸を、ヒトＩｇＧ２ ＨＣの対応するアミノ酸で置換すること、ならびに、位置３２７、３３０、及び３３１のアミノ酸をヒトＩｇＧ４ ＨＣの対応するアミノ酸で置換すること、によりエフェクターサイレントになるように修飾されており、位置は、Ｅｕナンバリングに従って同定される（Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４（１９９９）；Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４（２００１））。特定の実施形態では、修飾型ＩｇＧ１は、さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の追加のアミノ酸置換、挿入、及び／または欠失を含み、該置換が、保存的変異または非保存的変異であってよい。

【0118】

特定の実施形態では、エフェクターサイレント抗体は、ハイブリッドヒト免疫グロブリンＨＣ定常ドメインに融合または連結されているＶ_Ｈを含み、これは、Ｎ末端からＣ末端方向で、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含み、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＤヒンジ領域またはヒトＩｇＧ１ヒンジ領域の少なくとも部分的なアミノ酸配列を含み；ＣＨ２ドメインは、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ２ドメインのものであり、この部分は、Ｎ末端領域で、ヒトＩｇＧ２ ＣＨ２またはヒトＩｇＤ ＣＨ２ドメインのＮ末端領域の４～３７アミノ酸残基で置換されている。そのようなハイブリッドヒトＨＣ定常ドメインは、米国特許第７，８６７，４９１号に開示されており、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0119】

例示的なＩｇＧ１ ＨＣ定常ドメインには、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、及び配列番号３７に記載されているアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む。

【0120】

ヒトＭＳＬＮ結合物質の特定の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、本明細書に開示のＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む抗体であり、これは、さらにＣ末端リジンを含むか、またはＣ末端リジンまたはＣ末端グリシン－リジンジペプチドのいずれかを欠いている。

【0121】

本明細書に開示の実施形態のいずれかでは、軽鎖は、配列番号３８を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含んでもよい。

【0122】

代替的または追加的に、本開示の別の実施形態では、本明細書で提供されるヒトＭＳＬＮ結合物質及び他のペプチドは、当該技術分野で知られているように、翻訳後修飾を受け得る。翻訳後修飾の例としては、化学修飾、例えば、ジスルフィド結合、オリゴ糖、Ｎ末端ピログルタミン酸形成、Ｃ末端リジン処理（その結果、リジンが除去される）、脱アミド化、異性化、酸化、糖化、ペプチド結合切断、非還元性架橋、切断、及び当該技術分野で既知のものが挙げられるが、これらに限定されない。参照のこと：Ｌｉｕ，ｅｔ．ａｌ．，Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．ｖｏｌ．９７，ｎｏ．７，ｐｐ．２４２６－２４４７（Ｊｕｌｙ ２００８）。他のタイプの修飾としては、非共有結合性相互作用、立体配座の不均一性、及び凝集（同上）が挙げられる。

【0123】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヒトＭＳＬＮ結合物質のＮ末端ＥまたはＱは、ピログルタミン酸で置換される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヒトＭＳＬＮ結合物質のＣ末端Ｋが除去される。他の実施形態では、本明細書で提供されるヒトＭＳＬＮ結合物質のＮ末端ＥまたはＱは、ピログルタミン酸で置換され、ヒトＭＳＬＮ結合物質のＣ末端Ｋ（例えば、重鎖Ｃ末端アミノ酸）が除去される。本開示は、本明細書で提供されるヒトＭＳＬＮ結合物質及びポリペプチドのいずれかの上記翻訳後修飾のいずれかを含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ領域の最初のＮ末端アミノ酸が、ピログルタミン酸で置換され、及び／または重鎖のＣ末端アミノ酸が、除去されることを除いて、４７Ｄ７と同じ配列を含むヒトＭＳＬＮ結合物質が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ領域の最初のＮ末端アミノ酸が、ピログルタミン酸で置換され、Ｖ_Ｌ領域の最初のＮ末端アミノ酸が、ピログルタミン酸で置換され、及び／または重鎖のＣ末端アミノ酸が、除去されることを除いて、２０Ｂ１２と同じ配列を含むヒトＭＳＬＮ結合物質が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ領域の最初のＮ末端アミノ酸が、ピログルタミン酸で置換され、Ｖ_Ｌ領域の最初のＮ末端アミノ酸が、ピログルタミン酸で置換され、及び／または重鎖のＣ末端アミノ酸が、除去されることを除いて、４５Ｂ６と同じ配列を含むヒトＭＳＬＮ結合物質が、本明細書で提供される。

【0124】

いくつかの特定の実施形態では、Ｎ末端の最初のアミノ酸がピログルタミン酸に置換されていることを除いて、配列番号２、１０、１１、１８、１９、及び２６～２８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）またはポリタンパク質が本明細書で提供される。

【0125】

他の特定の実施形態では、Ｃ末端のＫが除去されていることを除いて、配列番号２９～３７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む抗体またはそのフラグメントが本明細書で提供される。

【0126】

ヒトＭＳＬＮに結合するＳｃＦｖ融合タンパク質
特定の実施形態では、本明細書に開示のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、Ｖ_Ｌドメイン及びＶ_Ｈドメインがペプチドリンカーで互いに連結されているＳｃＦｖ融合タンパク質として発現される。ペプチドリンカーは、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌペアリング及び抗原結合部位の忠実度を損なうことなく、１つの可変領域ドメインのカルボキシル末端を、他の可変ドメインのアミノ末端に結合する。従って、ＳｃＦｖは、Ｖ_ＬのＣ末端がペプチドリンカーでＶ_ＨのＮ末端に連結されている融合タンパク質、またはＶ_ＨのＣ末端がペプチドリンカーでＶ_ＬのＮ末端に連結されている融合タンパク質を含んでもよい。可変ドメインを連結するためのペプチドリンカーは、長さが１０から２５アミノ酸まで変動し得、通常は（必ずしもそうとは限らないが）Ｇ４Ｓ構造（例えば、（Ｇ４Ｓ）_ｎ、式中、ｎは、１、２、３、４、または５である）を有する親水性アミノ酸、例えば、グリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）で構成されている。より短い長さ（０～４アミノ酸）のペプチドリンカーも使用されているが、より短いリンカーを有するＳｃＦｖは、マルチマーを形成し得る。一般に、３つの繰り返しＧ４Ｓ単位を含む（Ｇ４Ｓ）_３ペプチドが、ＳｃＦｖペプチドリンカーとして使用される（例えば、以下を参照のこと：Ｌｅａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．２４：７６５－７７１（２００４）；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）；Ｉｌｉａｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４０９：４３７－４４１（１９９７））。

【0127】

例示的なＳｃＦｖ融合タンパク質としては、構造Ｖ_Ｌ－（Ｇ４Ｓ）_ｎ－Ｖ_ＨまたはＶ_Ｈ－（Ｇ４Ｓ）_ｎ－Ｖ_Ｌが挙げられ、（ａ）Ｖ_Ｌは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むか；（ｂ）Ｖ_Ｌは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むか；（ｃ）Ｖ_Ｌは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むか；（ｄ）Ｖ_Ｌは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むか；（ｅ）Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むか：または、（ｆ）Ｖ_Ｌは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ｎは、１、２、３、４、または５である。

【0128】

本明細書に開示のＳｃＦｖは、本明細書に開示されるように、ＨＳＬＮに結合するＳｃＦｖに、ペプチドリンカーにより連結されているＣＤ３結合物質（ＳｃＦｖ）を含む二重特異性形式で提供され得る。二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））と呼ばれるこれらの分子がＴ細胞上のＣＤ３と細胞表面に発現しているＨＳＬＮに結合する場合、Ｔ細胞が腫瘍部位に移動する。

【0129】

本明細書に開示のＳｃＦｖは、また、がん、自己免疫、及び／または炎症の治療用途のために、細胞毒素、放射性同位元素、サイトカイン、及び酵素と融合され得る。特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、１～１０個のＧ４Ｓペプチドユニットを含んでもよい。

【0130】

さらなる実施形態では、本明細書に開示のＳｃＦｖは、二重エピトープ結合を付与するように、インタクトＩｇＧ分子の異なる位置に連結されていても、挿入されていてもよい。例えば、２つのヘテロ二量体重鎖定常ドメインを含む二重特異性抗体が提供され得、一方の重鎖定常ドメインのＮ末端は、本明細書に開示のＳｃＦｖのＣ末端に融合されており、他方の重鎖定常ドメインのＮ末端は、ヒトＭＳＬＮ以外の抗原を標的とするＳｃＦｖまたはヒトＭＳＬＮ以外の抗原を標的とするＦａｂ’のＣ末端に融合されている。

【0131】

ヒトＭＳＬＮ結合物質をコードする核酸分子
本開示は、さらに、本発明のヒトＭＳＬＮ結合物質をコードする核酸分子を提供する。特定の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、核酸分子でコードされるＶ_Ｈドメインと、核酸分子でコードされるＶ_Ｌを含む。本明細書に開示のＨＳＬＮ結合物質をコードする核酸配列は、ＨＳＬＮ結合物質のアミノ酸配列を、ＨＳＬＮ結合物質をコードする核酸配列に逆翻訳することにより取得され得る。そのようにして得られた核酸分子のコドンは、特定の細胞型で翻訳される場合に、一般にまたはより効率的に使用されるコドンに対応するようにさらに修飾され得る。特定の宿主細胞における発現を高めるために核酸分子を逆翻訳及び／または最適化する方法及びコンピュータプログラム（例えば、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（郵便番号５２２４１ 米国アイオワ州コマーシャルパーク・コーラルビル１７１０）から入手可能なＩＤＴ Ｃｏｄｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ；米国特許第８，３２６，５４７号；ＷＯ２０２００２４９１７Ａ１）は、当該技術分野で周知である。

【0132】

特定の実施形態では、ＨＣ及びＬＣ（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ）は、ＨＣ及びＬＣ（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ）のＮ末端が、リーダーペプチドにＮ末端で融合されており、分泌経路を通じた抗体の輸送を容易にする融合タンパク質として発現される。特定の実施形態では、ＳｃＦｖ融合タンパク質のＮ末端は、分泌経路を通じた抗体の輸送を容易にするために、Ｎ末端で、リーダーペプチドまたはシグナルペプチドに融合されている。使用され得るリーダー／シグナルペプチドの例としては、配列番号３９または配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むものが挙げられる。従って、特定の実施形態では、上述の核酸分子は、ＨＳＬＮ結合物質をコードする核酸分子の５’末端に連結されているリーダーペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。

【0133】

本明細書に開示の核酸分子は、特定の宿主細胞、例えば、酵母もしくは真菌宿主細胞、非ヒト哺乳動物宿主細胞、ヒト宿主細胞、昆虫宿主細胞、または原核生物宿主細胞における核酸分子の発現を高めるために１つ以上のコドンを最適化する１つ以上の置換を含んでもよい。

【0134】

ヒトＭＳＬＮ結合物質を作成するための方法
本開示は、ヒトＭＳＬＮ結合物質を作成するための組み換え方法を含み、方法は、以下を宿主細胞に導入することを含む：（ｉ）ヒトＭＳＬＮ結合物質のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ、もしくはヒトＭＳＬＮ結合物質のＨＣ及びＬＣをコードする発現ベクター、または、（ｉｉ）２つの発現ベクター（一方は、ヒトＭＳＬＮ結合物質のＶ_ＨもしくはヒトＭＳＬＮ結合物質のＨＣをコードし、他方は、ヒトＭＳＬＮ結合物質のＶ_ＬまたはヒトＭＳＬＮ結合物質のＬＣをコードする）。Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、ＨＣ、またはＬＣをコードする核酸分子またはポリヌクレオチドは、プロモーター及び他の転写及び翻訳調節配列に作動可能に連結されている。宿主細胞は、核酸分子の発現に適した条件及び期間で培養され、その後、宿主細胞及び／または宿主細胞が成長する培地からメソテリン結合物質が単離される。例えば、以下を参照：ＷＯ２００４０４１８６２、ＷＯ２００６１２２７８６、ＷＯ２００８０２００７９、ＷＯ２００８１４２１６４、またはＷＯ２００９０６８６２７。発現ベクターは、プラスミドまたはウイルスベクターであってよい。本発明は、アルギナーゼ１結合物質またはその構成要素をコードする核酸分子、例えば、Ｖ_ＨもしくはＨＣのみ、またはＶ_ＬもしくはＨＣのみを含有する宿主または宿主細胞にも関する。

【0135】

ヒトＭＳＬＮ結合物質の発現のための宿主としての哺乳動物細胞を含む真核生物及び原核生物の宿主細胞は、当該技術分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含む。これらは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ－２９３細胞、及び他の多数の細胞株を含むが、これらに限定されない。従って、哺乳動物宿主細胞は、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、及びハムスターの細胞を含む。どの細胞株の発現レベルが高いかを判断することにより、特に好ましい細胞株が選択される。使用され得る他の細胞株は、昆虫細胞株（例えば：Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａまたはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞、及び真菌細胞である。真菌細胞は、酵母細胞及び糸状菌細胞、例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、及びＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉを含む。本開示は、本開示のヒトＭＳＬＮ結合物質を含むか、またはそのようなヒトＭＳＬＮ結合物質をコードする１つ以上の核酸分子を含むか、またはそのようなヒトＭＳＬＮ結合物質をコードする１つ以上の核酸分子を含む発現ベクターを含む、任意の宿主細胞を含む。

【0136】

さらに、産生細胞株由来のヒトＭＳＬＮ結合物質の発現は、多数の既知の手法を使用して増強することができる。例えば、グルタミン合成酵素遺伝子発現システム（ＧＳシステム）は、特定の条件下での発現を強化するための一般的なアプローチである。ＧＳシステムは、欧州特許第０２１６８４６Ｂ１号、同第０２５６０５５Ｂ１号、同第０３２３９９７Ｂ１号、及び同第０３３８８４１Ｂ１号に関連して全体的または部分的に考察されている。従って、本開示の実施形態では、哺乳動物宿主細胞は、グルタミン合成酵素遺伝子を欠いており、培地中にグルタミンが存在しない状態で成長するが、免疫グロブリン鎖をコードする核酸分子は、宿主細胞における遺伝子の欠失を補完するグルタミン合成酵素遺伝子を含む。本明細書で考察されるヒトＭＳＬＮ結合物質または核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）を含有するそのような宿主細胞、及び、そのような宿主細胞を使用してヒトＭＳＬＮ結合物質を作成するための本明細書で論じられるような発現方法は、本開示の一部である。

【0137】

本開示は、ヒトＭＳＬＮ結合物質を含む試料（例えば、培養培地、細胞溶解物、または細胞溶解物画分、例えば、溶解物の可溶性画分）を、精製媒体（例えば、陽イオン交換媒体、陰イオン交換媒体、及び／または疎水性交換媒体）に導入すること、ならびに、媒体に結合しない該試料のフロースルー画分から精製されたヒトＭＳＬＮ結合物質を収集すること；または、フロースルー画分を廃棄し、結合しているヒトＭＳＬＮ結合物質を媒体から溶出させて、溶出液を収集すること、を含むヒトＭＳＬＮ結合物質を精製するための方法を含む。本開示の一実施形態では、媒体は、試料が加えられるカラム内にある。本開示の実施形態では、精製方法は、宿主細胞におけるヒトＭＳＬＮ結合物質の組み換え発現の後に行われ、例えば、宿主細胞が、最初に溶解し、任意に、溶解物が、培地上での精製前に、不溶性物質から精製されるか、または、ヒトＭＳＬＮ結合物質が宿主細胞により培養培地に分泌され、培地もしくはその一部が、精製培地に加えられる。

【0138】

一般に、細胞株またはトランスジェニック動物で産生される糖タンパク質に特徴的である、特定の細胞株またはトランスジェニック動物で産生される糖タンパク質は、グリコシル化パターンを有するであろう。従って、ヒトＭＳＬＮ結合物質の特定のグリコシル化パターンは、ヒトＭＳＬＮ結合物質を生成するために使用される特定の細胞株またはトランスジェニック動物により異なるであろう。非フコシル化Ｎ－グリカンのみを含むヒトＭＳＬＮ結合物質は、本開示の一部であり、非フコシル化抗体が、通常、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方でフコシル化対応部分よりも強力な有効性を示すことが示されているので、有利であることがある（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６－３４７３（２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号及び同第７，２１４，７７５号）。非フコシル化Ｎグリカンを有するこれらのヒトＭＳＬＮ結合物質は、その炭水化物構造がヒト血清ＩｇＧ中に存在する集団の正常な成分であるので、免疫原性がある可能性は低い。

【0139】

本開示は、チャイニーズハムスター卵巣細胞で産生される免疫グロブリン（ＣＨＯＮ結合グリカン）または改変型酵母細胞（改変型酵母細胞（改変型Ｎ結合グリカン）、例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓに通常付加されるＮ結合グリカンを含むヒトＭＳＬＮ結合物質を含む。例えば、本開示の実施形態では、メソテリン結合物質は、「改変型酵母Ｎ結合グリカン」または「ＣＨＯ Ｎ結合型グリカン」（例えば、Ｇ０及び／またはＧ０－Ｆ及び／またはＧ１及び／またはＧ１－Ｆ及び／またはＧ２－Ｆ及び／またはＭａｎ_５）のうちの１つ以上を含む。本開示の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、改変型酵母Ｎ結合グリカン、すなわち、Ｇ０及び／またはＧ１及び／またはＧ２、任意に、さらに、Ｍａｎ５を含む。本開示の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質は、ＣＨＯＮ結合グリカン、すなわち、Ｇ０－Ｆ、Ｇ１－Ｆ、及びＧ２－Ｆ、任意に、さらに、Ｇ０及び／またはＧ１及び／またはＧ２及び／またはＭａｎ５を含む。本開示の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質上の全てのＮ結合グリカンの約８０％～約９５％（例えば、約８０～９０％、約８５％、約９０％、または約９５％）が、改変型酵母Ｎ結合グリカンまたはＣＨＯ Ｎ結合グリカンである。以下を参照のこと：Ｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｙｅａｓｔ．２８：２３７－２５２（２０１１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．３１３：１４４１－１４４３（２００６）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８（５）：３８７－３９２（２００７）。例えば、本開示の実施形態では、改変型酵母細胞が、ＧＦＩ５．０もしくはＹＧＬＹ８３１６、または米国特許第７，７９５，００２号もしくはＺｈａ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．９８８：３１－４３（２０１３）に記載されている株である。以下も参照のこと：国際特許出願公開第ＷＯ２０１３０６６７６５号。

【0140】

投与／医薬組成物
ヒトＭＳＬＮ結合物質は、ヒトＭＳＬＮ結合物質及び薬学的に許容される担体を含む好適な医薬組成物で提供され得る。担体は、ヒトＭＳＬＮ結合物質が投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、またはビヒクルであり得る。そのようなビヒクルは、液体、例えば、水及び油、例えば、石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油など、であってよい。例えば、０．４％の生理食塩水及び０．３％のグリシンが使用され得る。これらの溶液は、滅菌されており、通常は、粒子状物質は含まれない。それらは、従来の周知の滅菌手法（例えば、濾過）により滅菌され得る。組成物は、生理学的状態に近づけるために必要とされる薬学的に許容される補助物質（例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤、ならびに着色剤など）を含有してもよい。そのような医薬製剤中の分子または開示の濃度は、広く（すなわち、約０．５％未満、通常は、少なくとも約１～１５％または２０重量％と同じ程度に）変動し得、選択された特定の投与様式に従って、必要用量、液体体積、粘度などに基づいて主に選択されるであろう。他のヒトタンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、を含む好適なビヒクル及び製剤は、例えば、以下に記載されている：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１．ｓｕｐ．ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．２００６，Ｐａｒｔ ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｐ ６９１－１０９２、特に以下を参照：ｐｐ．９５８－９８９。

【0141】

ヒトＭＳＬＮ結合物質の投与様式は、任意の好適な経路、例えば、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、もしくは皮下、経肺、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸））または当該技術分野で周知の、当業者に認識されている他の手段、であってよい。

【0142】

ヒトＭＳＬＮ結合物質は、任意の好適な経路、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）注入もしくはボーラス注射による非経口投与、筋肉内もしくは皮下、または腹腔内投与により、個体（例えば、患者）に投与され得る。ｉｖ注入は、例えば、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０、もしくは２４０分間、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２時間にわたって投与され得る。

【0143】

がんまたは悪性腫瘍を有する個体に投与される用量は、処置される疾患を軽減するか、または少なくとも部分的に抑制するのに十分であり（「治療的有効量」）、場合により、０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、もしくは約５ｍｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、または約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、もしくは約２４ｍｇ／ｋｇ、または例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０ｍｇ／ｋｇであってよいが、さらに高い、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｋｇであってよい。

【0144】

固定単位用量（例えば、５０、１００、２００、５００、または１０００ｍｇ）も投与されても、用量が、患者の表面積（例えば、５００、４００、３００、２５０、２００、または１００ｍｇ／ｍ^２）に基づいてもよい。通常、がんまたは悪性腫瘍の処置には、１～８（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８）回の投与が行われ得るが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上の投与が行われ得る。

【0145】

ヒトＭＳＬＮ結合物質の投与は、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、１週間後、２週間後、３週間後、１ヶ月後、５週間後、６週間後、７週間後、２ヶ月後、３ヶ月後、４ヶ月後、５ヶ月後、６ヶ月後以降に反復され得る。反復の処置方針も可能であり、慢性投与も可能である。反復投与は、同じ用量または異なる用量であってよい。例えば、本開示の方法におけるヒトＭＳＬＮ結合物質は、８週間にわたり毎週８ｍｇ／ｋｇまたは１６ｍｇ／ｋｇで投与され、その後、さらに１６週間にわたり、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇまたは１６ｍｇ／ｋｇで投与され、その後、４週間毎に８ｍｇ／ｋｇまたは１６ｍｇ／ｋｇで静脈内注入により投与され得る。

【0146】

ヒトＭＳＬＮ結合物質は、例えば、６ヶ月以上の期間にわたり、週１回、維持療法により投与され得る。例えば、本開示の方法におけるヒトＭＳＬＮ結合物質は、単回投与または２４、１２、８、６、４、もしくは２時間毎の分割投与、またはそれらの任意の組み合わせを使用して、処置の開始から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０日目のうちの少なくとも１つに、または代わりに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０週目のうちのいずれかの１つに、あるいは、その組み合わせで、１日当たり約０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｋｇの量の１日投与量として、提供され得る。

【0147】

ヒトＭＳＬＮ結合物質は、また、がんを発症するリスクを低減し、がんの進行における事象の発生を遅延させ、及び／またはがんが寛解している時の再発リスクを低減するために、予防的に投与され得る。これは、特に、他の生物学的要因により存在することが既知の腫瘍の場所を特定することが困難である患者に有用であり得る。

【0148】

ヒトＭＳＬＮ結合物質は、保存のために凍結乾燥され、使用前に好適な担体で再構成され得る。この手法は、従来のタンパク質調製物に有効であることが示されており、周知の凍結乾燥及び再構成手法を用いることができる。

【0149】

併用療法の処置
本開示の併用療法は、ヒトＭＳＬＮ結合物質を含み、別の治療薬（小分子または抗体）は、増殖性疾患の処置、特に、がんの処置に使用され得る。特定の実施形態では、本開示の併用療法は、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、腎臓癌、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、大腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌、または唾液腺癌を処置するために使用され得る。

【0150】

別の実施形態では、本開示の併用療法は、膵癌、気管支癌、前立腺癌、膵癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮もしくは子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭の癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織のがんを処置するために使用され得る。

【0151】

ヒトＭＳＬＮ結合物質及び化学療法薬を含む併用療法
本開示の併用療法は、化学療法と組み合わせてがんを有する個体に投与され得る。個体は、本開示の併用療法を受けているのと同時に化学療法を受け得る。個体は、化学療法を完了した後に、本開示の併用療法を受け得る。個体は、併用療法の完了後に、化学療法が投与され得る。本開示の併用療法は、疾患の進行を有する再発性もしくは転移性癌、または再発性癌を有し且つ化学療法を受けているか、もしくは化学療法を完了している個体にも投与され得る。

【0152】

化学療法は、以下の群より選択される化学療法薬を含む得る：
（ｉ）アルキル化剤（限定されないが、二官能アルキル化剤、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、及びメルファランを含む）、
（ｉｉ）単官能アルキル化剤（限定されないが、ダカルバジン、ニトロソウレア、及びテモゾロミド（経口ダカルバジン）を含む）、
（ｉｉｉ）アントラサイクリン（限定されないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、及びバルルビシンを含む）、
（ｉｖ）細胞骨格破壊剤（タキサン）（限定されないが、パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、及びタキソテールを含む）、
（ｖ）エポチロン（限定されないが、イキサベピロン及びウチデロンを含む）、
（ｖｉ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（限定されないが、ボリノスタット及びロミデプシンを含む）、
（ｖｉｉ）トポイソメラーゼＩの阻害剤（限定されないが、イリノテカン及びトポテカンを含む）、
（ｖｉｉｉ）トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（限定されないが、エトポシド、テニポシド、及びタフルポシドを含む）、
（ｉｘ）キナーゼ阻害剤（限定されないが、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、及びビスモデギブを含む）。
（ｘ）ヌクレオチドアナログ及び前駆体アナログ（限定されないが、アザシチジン、アザチオプリン、フルオロピリミジン（例えば、カペシタビン、カルモフール、ドキシフルリジン、フルオロウラシル、及びテガフール）、シタラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキサート、及びチオグアニン（旧チオグアニン）を含む）、
（ｘｉ）ペプチド抗生物質（限定されないが、ブレオマイシン及びアクチノマイシンを含む）、プラチナ系薬剤（限定されないが、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンを含む）、
（ｘｉｉ）レチノイド（限定されないが、トレチノイン、アリトレチノイン、及びベキサロテンを含む）、ならびに
（ｘｉｉｉ）ビンカアルカロイド及び誘導体（限定されないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビンを含む）。

【0153】

化学療法における化学療法薬の投与量の選択は、いくつかの要因、例えば、エンティティの血清または組織のターンオーバー率、症状のレベル、エンティティの免疫原性、及び処置される個体の標的細胞、組織、または臓器へのアクセス性、により異なる。追加の治療薬の投与は、許容できるレベルの副作用を生じる量であるべきである。従って、各追加治療薬の投与量及び投与頻度は、特定の治療薬、処置されるがんの重症度、及び患者の特性により部分的に異なる。抗体、サイトカイン、及び小分子の適切な用量を選択するためのガイダンスが利用可能である。例えば、以下を参照のこと：Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ Ｅｄ）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００２）。適切な投与レジメンの決定は、例えば、処置に影響を与えることが当該技術分野で既知の、または疑われている、あるいは処置に影響を与えることが予測されるパラメータまたは要因を使用して、臨床医により行われ得、例えば、個体の臨床歴（例えば、以前の治療）、処置されるべきがんの種類及びステージ、ならびに併用療法における１つ以上の治療薬に対する反応のバイオマーカーに依存する。

【0154】

従って、本開示は、さらに、プラチナ含有化学療法、ペメトレキセド及びプラチナ化学療法、またはカルボプラチン及びパクリタキセルまたはナブパクリタキセルのいずれかを含む化学療法ステップを含む本開示の併用療法の実施形態を企図する。特定の実施形態では、化学療法ステップとの併用療法は、少なくともＮＳＣＬＣ及びＨＮＳＣＣを処置するために使用され得る。

【0155】

併用療法は、さらに、化学療法ステップと組み合わせて、任意の増殖性疾患の処置、特に、がんの処置、に使用され得る。特定の実施形態では、本開示の併用療法は、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、腎臓癌、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、大腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌、または唾液腺癌を処置するために使用され得る。

【0156】

別の実施形態では、さらに、化学療法ステップと組み合わせた併用療法は、膵癌、気管支癌、前立腺癌、膵癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮もしくは子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭の癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織のがんを処置するために使用され得る。

【0157】

特定の実施形態では、化学療法ステップとの併用療法は、黒色腫（転移性または切除不能）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、尿路上皮癌、ＭＳＩＨＣ、胃癌、子宮頸癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）、腎細胞癌（進行癌を含む）、及び皮膚扁平上皮癌から選択される１つ以上のがんを処置するために使用され得る。

【0158】

ヒトＭＳＬＮ結合物質及び治療用抗体を含む併用療法
本開示のヒトＭＳＬＮ結合物質は、がんまたは増殖性疾患の処置のために、抗体である１つ以上の治療薬と組み合わせて投与され得る。個体は、本開示の併用療法を受けているのと同時に、治療用抗体による処置を受け得る。個体は、治療用抗体による処置を完了した後、本開示の併用療法を受け得る。個体は、併用療法の完了後、治療用抗体による処置を投与され得る。本開示の併用療法は、疾患の進行を有する再発性もしくは転移性癌、または再発性癌を有し且つ化学療法を受けているか、もしくは化学療法を完了している個体にも投与され得る。特定の実施形態では、治療薬は、プログラム細胞死１受容体またはリガンド（それぞれ、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１）を標的とする。

【0159】

ヒトＭＳＬＮ結合物質との併用療法に使用され得る例示的な抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１がＰＤ－Ｌ１に結合するのを阻止する任意の抗体を含む。さらなる実施形態では、例示的な抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、及びセミプリマブ－ｒｗｌｃからなる群より選択される。例示的な抗体としては、以下の抗ＰＤ－１抗体と、抗ＰＤ－１抗体及び薬学的に許容される塩を含む組成物が挙げられる。

【0160】

ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、またはＳＣＨ－９００４７５としても既知のペンブロリズマブは、米国特許第８，３５４，５０９号及びＷＯ２００９／１１４３３５に記載されており、例えば、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．３６９（２）：１３４－１４４（２０１３）に開示されるヒト化抗ＰＤ－１抗体である。

【0161】

ＯＰＤＩＶＯ、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、またはＢＭＳ－９３６５５８としても既知のニボルマブは、ＷＯ２００６／１２１１６８及び米国特許第８，００８，４４９号に記載されている完全ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ－１抗体である。

【0162】

セミプリマブ、ＬＩＢＴＡＹＯ、またはＲＥＧＮ２８１０としても既知のセミプリマブ－ｒｗｌｃは、ＷＯ２０１５１１２８００及び米国特許第９，９８７，５００号に記載されている組み換えヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。

【0163】

特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）エフェクターサイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されているペンブロリズマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶ_Ｈ、及び、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されているペンブロリズマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶ_Ｌ、を含む。

【0164】

特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）エフェクターサイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されているニボルマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨ、及び、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されているニボルマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶ_Ｌ、を含む。

【0165】

特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）エフェクターサイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されているセミプリマブ－ｒｗｌｃの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶ_Ｈ、及び、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されているニボルマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶ_Ｌ、を含む。

【0166】

特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体のＶＨは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメイン（現在、特定のＶ_Ｈに連結されていない）に融合もしくは連結され得るか、または得られる抗ＰＤ－１抗体をエフェクターサイレントにする、Ｆｃドメインに１つ以上の変異を含むように修飾されているＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインに連結されている。

【0167】

ヒトＭＳＬＮ結合物質を投与するための注射デバイス
本開示は、本明細書に記載のヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を含む注射デバイスも提供する。注射デバイスは、非経口経路、例えば、筋肉内、皮下、または静脈内を介して、患者の体内に物質を導入するデバイスである。例えば、注射デバイスは、注射器（例えば、医薬組成物が予め充填されているもの、例えば、自動注射器）であってよく、これは、例えば、注射されるべき液体（例えば、ヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を含むもの）を保持するためのシリンダーまたはバレル、液体を注射するための皮膚及び／または血管を刺すための針；ならびに液体をシリンダーから、針の穴を通して押し出すためのプランジャー、を含む。本開示の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を含む注射デバイスは、静脈内（ＩＶ）注射デバイスである。そのようなデバイスは、カニューレまたはトロカール／針を通して対象の体内に導入される液体（例えば、生理食塩水、またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ_２を含む乳酸リンゲル液、任意に、グルコースを含む）を保持するための、バッグまたはリザーバーに取り付けられ得るチューブに取り付けられ得るカニューレまたはトロカール／針の中にヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を含む。

【0168】

本開示の実施形態では、ヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物は、トロカール及びカニューレが、対象の静脈に挿入され、トロカールが、挿入されたカニューレからが取り外されると、デバイスに導入され得る。ＩＶデバイスは、例えば、末梢静脈（例えば、手もしくは腕のもの）；上大静脈もしくは下大静脈、または心臓の右心房内（例えば、中心ＩＶ）に、あるいは鎖骨下静脈、内頸静脈、または大腿静脈内に挿入され、例えば、上大静脈または右心房に達するまで心臓に向かって進み得る（例えば、中心静脈ライン）。本開示の実施形態では、注射デバイスは、自動注射器、ジェット注射器、または外部注入ポンプである。ジェット注射器は、表皮を貫通する高圧の狭い液体ジェットを使用して、ヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を患者の体内に導入する。外部輸液ポンプは、ヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を制御された量で患者の体内に送達する医療デバイスである。外部輸液ポンプは、電気的または機械的に駆動され得る。異なるポンプは、異なる方法で作動し、例えば、シリンジポンプは、シリンジのリザーバー内に液体を保持し、可動ピストンは、液体の供給を制御し、エラストマーポンプは、伸縮可能なバルーンリザーバーに液体を保持し、バルーンの弾性壁からの圧力が液体の供給を駆動する。蠕動ポンプでは、一連のローラーが、長い柔軟なチューブを挟み、液体を前方に押し出す。マルチチャネルポンプでは、複数のリザーバーから複数の速度で液体を送ることができる。

【0169】

ヒトＭＳＬＮ結合物質を含むキット
さらに、本明細書で考察されるように、１つ以上の追加の構成成分（限定されないが、さらなる治療薬を含む）と関連して、本明細書で考察されるように、１つ以上の構成成分（限定されないが、ヒトＭＳＬＮ結合物質を含む）を含むキットが提供される。ヒトＭＳＬＮ結合物質及び／または治療薬は、純粋な組成物として、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物で製剤化することができる。

【0170】

一実施形態では、キットは、１つの容器（例えば、滅菌ガラスまたはプラスチックバイアル）に、ヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を、別の容器（例えば、滅菌ガラスまたはプラスチックバイアル）に、さらなる治療薬を含む。

【0171】

別の実施形態では、キットは、任意に、単一の共通容器内に医薬組成物中で、一緒に製剤化された１つ以上の治療薬と組み合わせて、ヒトＭＳＬＮ結合物質またはその医薬組成物を含む本開示の組み合わせを含む。

【0172】

キットが、対象者への非経口投与用の医薬組成物を含む場合、キットは、そのような投与を実施するためのデバイスを含み得る。例えば、キットは、上で考察されるように、１つ以上の皮下注射針または他の注射デバイスを含み得る。従って、本開示は、注射デバイス及びヒトＭＳＬＮ結合物質を含むキットを含み、例えば、注射デバイスがヒトＭＳＬＮ結合物質を含むか、またはヒトＭＳＬＮ結合物質が別の容器に入っている。

【0173】

キットは、キット内の医薬組成物及び剤形に関する情報を含む添付文書を含み得る。一般に、そのような情報は、患者及び医師が同梱の医薬組成物及び剤形を効果的且つ安全に使用する上で役立つ。例えば、開示の組み合わせに関する以下の情報は、添付文書で提供され得る：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症及び使用法、禁忌、警告、注意事項、有害反応、過剰投与、適切な投薬量及び投与、供給方法、適切な保管条件、参考文献、製造元／販売元情報、ならびに特許情報。

【0174】

以下の例は、本開示のさらなる理解を促進することが意図される。

【0175】

一般的な方法
タンパク質ＥＬＩＳＡ
９６ウェルプレートのウェルは、炭酸塩コーティングバッファー（２ＬのＨ_２０中５．３ｇのＮａＨＣＯ_３及び３．２ｇのＮａ_２ＣＯ_３）またはＨｙＣｌｏｎｅ Ｄｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＨ３００２８．０２）中の精製されたヒトまたはアカゲザルＭＳＬＮ ５０μＬを、１～２μｇ／ｍＬの濃度でコーティングし、４℃で一晩インキュベートする。その後、プレートのウェルを、ウェル洗浄液（０．０５％のポリソルベート２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水）で洗浄する。次に、Ｓｕｐｅｒ ＢｌｏｃｋブロッキングバッファーＴ２０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３７５３６）を添加することにより、プレートのウェルを室温で１～２時間ブロックし、その後、ウェル洗浄液で洗浄する。次に、５０μＬ／ウェルのハイブリドーマ上清画分（ニートで使用）、または１０μｇ／ｍＬから開始して、ＥＬＩＳＡバッファー（ＤＰＢＳ＋０．１％のＢＳＡ＋０．０５％のポリソルベート２０）中で４倍または５倍に段階希釈された精製抗体を、ウェルに添加する。次に、プレートを室温で１時間インキュベートし、ウェルをウェル洗浄液で洗浄し、ＥＬＩＳＡバッファーで１：３０００～５０００に希釈された５０μＬ／ウェルの西洋ワサビ過酸化物（ＨＲＰ）コンジュゲート抗種ＩｇＧをウェルに添加する。ＨＲＰコンジュゲート抗種ＩｇＧは、ヤギ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１０３０－０５）、ヤギ抗ラットＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号３０３０－０５）、及びヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃｓ、カタログ番号１０９－０３６－０９８）を含む。次に、プレートを室温で１時間インキュベートし、ウェルをウェル洗浄液で洗浄し、５０μＬ／ウェルのＡＢＴＳペルオキシダーゼ基質（Ｋｉｒｋｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）をウェルに添加する。１０分後、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して、４０５ｎｍでのＯＤを測定する。

【0176】

ＣＨＯ細胞に対する細胞ＥＬＩＳＡ
９６ウェルプレートのウェルに十分な細胞を播種して、０日目（アッセイの日）に９５～１００％のコンフルエンスを得た。０日目に、培地を除去し、５０μＬ／ウェルのハイブリドーマ上清画分、または精製抗体を１０μｇ／ｍＬまたは等モル濃度から開始し、ＣＨＯ培地（ＤＭＥＭ Ｆ１２、１０％のウシ血清）で４倍または５倍に段階希釈する。次に、プレートを室温または３７℃までの温度で１時間インキュベートする。次に、所定濃度のリガンド約５０μＬを、プレートのウェルに添加し、プレートを室温または３７℃までの温度で３０分間インキュベートする。プレートのウェルをＥＬＩＳＡ洗浄液（０．０５％のポリソルベート２０を含有するＰＢＳ）で洗浄する。次に、ＣＨＯ培地で１：２０００に希釈されたＨＲＰコンジュゲート抗種ＩｇＧを５０μＬ／ウェルで、ウェルに添加し、プレートを室温または３７℃までの温度で１時間インキュベートする。ＨＲＰコンジュゲート抗種ＩｇＧは、ヤギ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１０３０－０５）、ヤギ抗ラットＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号３０３０－０５）、及びヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃｓ、カタログ番号１０９－０３６－０９８）を含む。プレートのウェルをＥＬＩＳＡ洗浄液で洗浄する。次に、ＴＭＢ基質（１ステップ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号３４０２９）を５０μＬ／ウェルで、ウェルに追加する。ブランクが青色に変わり始めたら、５０μＬ／ウェルのＴＭＢ停止溶液（ＫＰＬ、カタログ番号５０－８５－０６）をウェルに添加し、Ａ４５０－Ａ６２０をＥＬＩＳＡリーダーで測定する。

【実施例】

【0177】

実施例１
ヒトＭＳＬＮ結合物質の免疫化及びスクリーニング
全長ヒト成熟ＭＳＬＮをコードするｍＲＮＡを使用して、Ｔｒｉａｎｎｉ（商標）マウス（ＡｂＣｅｌｌｅｒａ、ブリティッシュコロンビア州バンクーバー）を免疫した。その後、免疫動物の脾臓細胞を単離し、Ｓｐ２／０骨髄腫パートナーとの融合に使用して、ハイブリドーマを作成した。次に、ハイブリドーマを９６ウェルプレートに別々にプレーティングして、ハイブリドーマライブラリを作成し、プレーティングされたハイブリドーマからの抗体上清画分を、ヒトＭＳＬＮへの結合、種間の交差反応性、親和性、全長ヒトＭＳＬＮを発現する細胞への結合、及びヒトＭＳＬＮへの結合についてスクリーニングした。モノクローナル性を保証するために、陽性結合ウェルをサブクローニング用に選択した。次に、得られたモノクローナルハイブリドーマを、小規模な抗体の産生及び精製に使用した。精製抗体を、別のラウンドのスクリーニング（親和性、エピトープビニング、全長タンパク質結合、ヒトＭＳＬＮ結合、タンパク質及び細胞結合、ならびに競合アッセイを含む）にかけた。

【0178】

ハイブリドーマクローンＳＶ０１７．１３Ｂ１２．１Ｅ１、ＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２、ＳＶ０１７．５０Ｇ３．１Ｂ１、ＳＶ０１７．５１Ｆ４．１Ａ１、ＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１、及びＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１を分析のために選択した。

【0179】

実施例２
抗体産生
市販のプロトコール及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯ試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して、懸濁液中で成長するＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞に、抗体発現プラスミド（ＨＣ＋ＬＣ）でトランスフェクトした（Ｓｉｖａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡＢＳ９：２９－４２（２０１７））。簡単に言うと、０日目に、１ｍＬ当たり６００万細胞の密度で、細胞１ｍＬ当たり１μｇの総ＤＮＡ（ＬＣ：ＨＣ比３：２）を使用して、細胞をトランスフェクトし、Ｖｉ－Ｃｅｌｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して、９５％を超える生存率を測定した。１日目に、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）フィード及びエンハンサーを、細胞培養に添加し、細胞培養温度を３２℃に低下させた。５日目に、２回目のＥＸＰＩ－ＣＨＯ（商標）フィードを実施し、Ｖｉ－Ｃｅｌｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して、細胞生存率を測定した。細胞生存率が８０％を超えたかどうかに応じて、細胞培養を８日目～１２日目に採取し、採取された細胞培養液を遠心分離して、細胞及びデブリを除去し、清澄化された上清画分を得た。

【0180】

以下のように、プロテインＡ樹脂クロマトグラフィー（ｍＡｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（商標）ＬＸ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、抗体を清澄化した上清画分から精製した。

【0181】

ローディングバッファー中のプロテインＡ樹脂を、ローラーミキサー上で４℃で一晩、清澄化した上清画分と共にインキュベートした。その後、清澄化された上清画分からプロテインＡ樹脂を回収し、クロマトグラフィーカラムに移し、１０カラム容量（ＣＶ）のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。次に、ｐＨ３．５の２０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む溶出バッファーを使用して、抗体をクロマトグラフィーカラムから溶出させた。１カラム容量（ＣＶ）の画分を収集し、ブラッドフォードアッセイで試験して、タンパク質の存在を判定した。いくつかの場合では、プロテインＡの精製の後に、陰イオン交換クロマトグラフィー（Ｃａｐｔｏ（商標）Ｑ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）が続いた。精製抗体をバッファー交換して、２０ｍＭの酢酸ナトリウム、９％のスクロースを含む最終製剤化バッファー（ｐＨ５．５）にした。還元及び非還元キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ－ＳＤＳ）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で、精製抗体を純度についてチェックし、濃度をＡ２８０で測定し、ＢＥＨ２００ ＵＰＬＣ－ＳＥＣ分析カラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用したＳＥＣ－ＵＰＬＣ（サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー）で、凝集体含有量を分析した。Ｅｎｄｏｓａｆｅ（登録商標）ｎｅｘｇｅｎ－ＭＣＳ（商標）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を使用して、エンドトキシンを定量した。完全な質量を、Ｓｙｎａｐｔ（登録商標）Ｇ２Ｓ ＱＴＯＦまたはＸｅｖｏ（登録商標）Ｇ２ ＴＯＦ（Ｗａｔｅｒｓ）により確認した。

【0182】

ハイブリドーマクローンＳＶ０１７．１３Ｂ１２．１Ｅ１、ＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２、ＳＶ０１７．５０Ｇ３．１Ｂ１、ＳＶ０１７．５１Ｆ４．１Ａ１、ＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１、及びＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１により産生される抗体のアミノ酸配列が表６に示される。

【0183】

実施例３
ヒトＭＳＬＮまたはアカゲザルＭＳＬＮ及びＯＶＣＡＲ３細胞株を発現するように遺伝子修飾されたチャイニーズハムスター卵巣Ｋ１（ＣＨＯＫ１）細胞が発現した可溶性タンパク質としても膜結合タンパク質としても、ヒトＭＳＬＮ及び非ヒト霊長類メソテリン（アカゲザルＭＳＬＮ）への結合について、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）で、ハイブリドーマクローンＳＶ０１７．１３Ｂ１２．１Ｅ１、ＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２、ＳＶ０１７．５０Ｇ３．１Ｂ１、ＳＶ０１７．５１Ｆ４．１Ａ１、ＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１、及びＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１により産生された抗体を評価した。ＯＶＡＣＡＲ３細胞株は、高レベルのヒトＭＳＬＮを発現するヒト卵巣癌細胞株である。

【0184】

結果は、表５及び図１～３で提示される。表５に示されるように、全ての抗体は、膜結合型ヒトＭＳＬＮ（ＣＨＯＫ１またはＯＶＣＡＲ３）に強い結合を示す。クローンＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１及びＳＶ０１８．４５．１Ｇ１から同定された抗体は、アカゲザルＭＳＬＮへの検出されない結合を全く示さず、可溶性ヒトＭＳＬＮへの弱い結合を示し、クローンＳＶ０１７．１３Ｂ１２．１Ｅ１、ＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２、ＳＶ０１７．５０Ｇ３．１Ｂ１、及びＳＶ０１７．５１Ｆ４．１Ａ１由来の抗体は、アカゲザルＭＳＬＮへの弱い結合を示す。

【表6】

【0185】

図１～３は、ハイブリドーマクローンＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２、ＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１、及びＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１から同定された抗体の、陽性対照としてのＭＯＲＡＢ－００９との比較を示す。ＭＯＲＡＢ－００９は、アマツキシマブという一般名を有し、それぞれ配列番号４０及び配列番号４１に示される重鎖及び軽鎖を含む抗ヒトＭＳＬＮ抗体である。データは、ＥＬＩＳＡから生成された。

【0186】

図１は、抗体ＳＶ０１７．４７Ｄ７．１Ｃ２が、ＭＯＲＡＢ－００９と同等の効力で膜結合型ヒトＭＳＬＮに結合し、膜結合型ヒトＭＳＬＮに結合する場合の効力よりも高い効力で可溶性ヒトＭＳＬＮに結合し得ることを示す。図２は、抗体ＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１が、ＭＯＲＡＢ－００９の約半分の効力でヒトＭＳＬＮに結合し、膜結合型ヒトＭＳＬＮに結合する場合に示すよりも低い効力で可溶性ヒトＭＳＬＮに結合することを示す。図３は、抗体ＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１が、ＭＯＲＡＢ－００９の約半分の効力でヒトＭＳＬＮに結合し、膜結合型ヒトＭＳＬＮに結合する場合に示すよりも低い効力で可溶性ヒトＭＳＬＮに結合し得ることを示す。

【0187】

ＥＬＩＳＡの結果は、抗体が、膜結合型ヒトＭＳＬＮに強く結合し、膜結合型アカゲザルＭＳＬＮに弱く結合するか、または全く結合しないことを示す。膜結合型アカゲザルＭＳＬＮへの検出可能な結合を全く示さなかった抗体ＳＶ０１８．２０Ｂ１２．１Ｄ１及びＳＶ０１８．４５Ｂ６．１Ｇ１は、可溶性ヒトＭＳＬＮに対し低い効力も示し、これらの抗体がシンクになる能力を低下させていることを示す。

【表7-1】

【表7-2】

【表7-3】

【表7-4】

【表7-5】

【表7-6】

【表7-7】

【表7-8】

【0188】

本開示は、図示された実施形態を参照して本明細書に記載されているが、本開示が、これに限定されるものではないことが理解されるべきである。当業者ら及び本明細書の教示にアクセスできる者は、その範囲内で追加の修正及び実施形態が可能であることを認識するであろう。従って、本開示は、本明細書に添付された特許請求の範囲によってのみ限定される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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【国際調査報告】