特表 2025-501550 偽型化レンチウイルスベクター

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-22

(54)【発明の名称】偽型化レンチウイルスベクター

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/867 20060101AFI20250115BHJP

   C12N 15/50 20060101ALI20250115BHJP

   C07K 14/165 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250115BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20250115BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20250115BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20250115BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20250115BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20250115BHJP

【ＦＩ】

C12N15/867 Z ZNA

C12N15/50

C07K14/165

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N7/01

A61P31/14

A61K35/76

A61P11/00

A61K48/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024537353

(86)(22)【出願日】2022-12-21

(85)【翻訳文提出日】2024-08-05

(86)【国際出願番号】 GB2022053351

(87)【国際公開番号】W WO2023118871

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】2118685.3

(32)【優先日】2021-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519340400

【氏名又は名称】インペリアル・カレッジ・イノベーションズ・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＩＭＰＥＲＩＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ＩＮＮＯＶＡＴＩＯＮＳ ＬＩＭＩＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100216105

【弁理士】

【氏名又は名称】守安 智

(72)【発明者】

【氏名】スティーヴン・ハイド

(72)【発明者】

【氏名】キャムラン・ミア

(72)【発明者】

【氏名】デボラ・ギル

(72)【発明者】

【氏名】ユ・ダイ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA88X

4B065AA90X

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA13

4C084MA13

4C084MA17

4C084MA44

4C084MA52

4C084MA59

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZB331

4C084ZB332

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087CA12

4C087MA13

4C087MA17

4C087MA44

4C087MA52

4C087MA59

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZA59

4C087ZB33

4H045AA10

4H045CA01

4H045DA86

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA21

(57)【要約】

本発明は、偽型化レンチウイルスベクター、特に、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターのほか、関連の構築物、方法、および治療適応に関する。
【選択図】図４－１、図４－２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化され、プロモーターに作動可能に連結されたトランス遺伝子を含み；前記スパイクタンパク質は、
ａ）配列番号１の４９８、４９９、および６１４位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；ならびに
ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失
を含む、レンチウイルスベクター。

【請求項2】

改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化され、プロモーターに作動可能に連結されたトランス遺伝子を含み；前記スパイクタンパク質は、
ａ）配列番号１の６１４位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；
ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失；ならびに
ｃ）（ｉ）配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；ならびに／または（ｉｉ）配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異
を含む、レンチウイルスベクター。

【請求項3】

スパイクタンパク質の細胞質テールは、配列番号１のアミノ酸残基１２３５～１２７３に対応するか、もしくはこれとアライメントする、請求項１または２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項4】

スパイクタンパク質の細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失は、
ａ）細胞質テールのうちの、少なくとも１０のアミノ酸、好ましくは、少なくとも１５のアミノ酸の欠失；および／または
ｂ）配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸残基の欠失
を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項5】

配列番号１の４９８、４９９、および６１４位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における、スパイクタンパク質の突然変異のうちの１つまたはそれ以上は、アミノ酸置換であり、好ましくは、突然変異の全ては、アミノ酸置換である、請求項１～４のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項6】

アミノ酸置換は、非保存的アミノ酸置換である、請求項５に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項7】

ａ）配列番号１の４９８位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、チロシンにより置換され；
ｂ）配列番号１の４９９位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、トレオニンにより置換され；かつ／または
ｃ）配列番号１の６１４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換されている、請求項１～６のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項8】

突然変異は、Ｑ４９８Ｙ、Ｐ４９９Ｔ、および／またはＤ６１４Ｇである、請求項１～７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項9】

改変スパイクタンパク質は、ヒトアンジオテンシン転換酵素２（ＡＣＥ２）の酵素ドメインに結合することが可能である、請求項１～８のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項10】

改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株、Ｂ．１．１．７株、Ｂ．１．３５１株、Ｐ．１株、Ｂ．１．６１７．２株、Ｂ．１．４２７、Ｃ．３７、Ｂ．１．４２９、またはＡｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０（Ａｕｓ／ＶＩＣ０１）株から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に由来する、請求項１～９のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項11】

改変スパイクタンパク質は、抗コロナウイルススパイクタンパク質抗体、好ましくは、抗コロナウイルススパイクタンパク質抗体であるＭＭ４３またはＲ００１により検出されない、請求項１～１０のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項12】

改変スパイクタンパク質は、配列番号１３と、少なくとも９０配列同一性％を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項13】

改変スパイクタンパク質は、１つまたはそれ以上のさらなる突然変異をさらに含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項14】

配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異を含むか、または前記１つもしくはそれ以上のさらなる突然変異は、配列番号１の５０１位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異を含み、場合により、
ａ）配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異は、アミノ酸置換、好ましくは、非保存的アミノ酸置換、なおより好ましくは、チロシンによる置換であり；かつ／または
ｂ）１つもしくはそれ以上のさらなる突然変異は、Ｎ５０１Ｙを含む、
請求項１～１３のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項15】

改変スパイクタンパク質は、配列番号２０と、少なくとも９０配列同一性％を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項16】

前記スパイクタンパク質は、
ａ）配列番号１の８０、２１５、４１７、４８４、５０１、６１４、および７０１位のうちの１つまたはそれ以上に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異であって、好ましくは、これらの残基全ては、突然変異された突然変異；および
ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失
を含む、
請求項２～１５のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項17】

ａ）前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｂ．１．３５１株のスパイクタンパク質に由来し；
ｂ）（ｉ）配列番号１の８０位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、アラニンにより置換され；（ｉｉ）配列番号１の２１５位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換され；（ｉｉｉ）配列番号１の４１７位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、アスパラギンにより置換され；（ｉｖ）配列番号１の４８４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、リシンにより置換され；（ｖ）配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、チロシンにより置換され；（ｖｉ）配列番号１の６１４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換され、かつ／もしくは（ｖｉｉ）配列番号１の７０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、バリンにより置換され；好ましくは、これらの残基全ては、置換され；かつ／または
ｃ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失は、配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基の欠失を含むか、もしくはこれらからなる、請求項１６に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項18】

サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）ベクター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベクター、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）ベクター、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）ベクター、およびビスナ／マエディウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項19】

ｉｎ ｖｉｖｏにおける齧歯動物細胞、好ましくは、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるマウス細胞へと形質導入することが可能である、請求項１～１８のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項20】

請求項１～１６のいずれか１項に記載の改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質。

【請求項21】

請求項２０に記載の改変スパイクタンパク質をコードするポリヌクレオチド分子。

【請求項22】

プロモーターに作動可能に連結された、請求項２１に記載のポリヌクレオチドを含む発現構築物。

【請求項23】

請求項１～１９のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター、請求項２０に記載の改変スパイクタンパク質、請求項２１に記載のポリヌクレオチド、または請求項２２に記載の発現構築物を含む宿主細胞。

【請求項24】

請求項２０に記載の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含む、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）。

【請求項25】

好ましくは、治療は、遺伝子治療である、治療における使用のための、請求項１～１９のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター、請求項２０に記載の改変スパイクタンパク質、請求項２１に記載のポリヌクレオチド、請求項２２に記載の発現構築物、または請求項２４に記載のＶＬＰ。

【請求項26】

請求項１～１９のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター、請求項２０に記載の改変スパイクタンパク質、請求項２１に記載のポリヌクレオチド、請求項２２に記載の発現構築物、または請求項２４に記載のＶＬＰの、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける使用。

【請求項27】

請求項１～１９のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクターを作製する方法であって、
ａ）（ｉ）請求項２０に記載の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列；および（ｉｉ）レンチウイルスパッケージング構成要素、レンチウイルスエンベロープ構成要素、およびレンチウイルスゲノムをコードする、１つまたはそれ以上の核酸配列を、ウイルスベクター産生細胞へと導入する工程；ならびに
ｂ）レンチウイルスベクターの産生に適する条件下で、産生細胞を培養する工程
を含む方法。

【請求項28】

ａ）前記レンチウイルスベクターを採取する工程をさらに含み；
ｂ）改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列は、請求項２１に記載のポリヌクレオチド分子内、または請求項２２に記載の発現構築物内に含まれ；
ｃ）レンチウイルスパッケージング構成要素、レンチウイルスエンベロープ構成要素、およびレンチウイルスゲノムをコードする、１つまたはそれ以上の核酸配列は、（ｉ）改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列と同じ、ポリヌクレオチド分子もしくは発現構築物内、もしくは（ｉｉ）１つもしくはそれ以上の個別のポリヌクレオチド分子または発現構築物内に含まれ；かつ／または
ｄ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質は、産生細胞の培養時に共発現され、好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質は、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株もしくはＢ．１．１．５２９株に由来する、請求項２７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、偽型化レンチウイルスベクター、特に、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターのほか、関連の構築物、方法、および治療適応に関する。

【背景技術】

【0002】

新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）パンデミックは、２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）により引き起こされ、進行中の公衆衛生問題であり続けている。これは主に、全世界にわたるＣＯＶＩＤ－１９感染患者において生じる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のゲノム内における、新規の突然変異の、持続的な同定および出現に起因する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２配列についての、全世界的な、ゲノム規模における、持続的な監視の取組みは、数千に及ぶ突然変異を解明し、これらのうちの多くは、それらの出現の早期において、ＶＯＩ（ｖａｒｉａｎｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｅｓｔ）を予測するように、さらに検討される。全世界的に発見され（例えば、英国（Ｂ．１．１．７、アルファ）、南アフリカ（Ｂ．１．３５１、ベータ）；Ｂ．１．１．５２９、（オミクロン）、ブラジル（Ｐ．１、ガンマ）、およびインド（Ｂ．１．６１７．２、デルタ）に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２系統）、ますまず数を増加させつつある、独立のＶＵＩ（ｖａｒｉａｎｔ ｕｎｄｅｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）またはＶＯＣ（ｖａｒｉａｎｔ ｏｆ ｃｏｎｃｅｒｎ）は、特に重要であり；ＶＯＣは、それらの伝搬傾向の増大、および／または疾患の重症度、処置への耐性、元来、様々な程度で、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ（Ｓ）糖タンパク質ワクチンへの取組みにより誘発されたｎＡｂを含む中和抗体（ｎＡｂ）からの逃避について、ＶＯＣとして規定される。

【0003】

ＶＯＣの出現と共に、これらの新たな変異株についての、とりわけ、既存のｎＡｂ、ワクチン戦略、および治療法に対する交差検討（ｃｒｏｓｓ－ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）の持続に対する必要が増大している。しかし、真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（危険性群３の病原体）の操作は、高度のＢＳＬ（ｂｉｏｓａｆｅｔｙ ｌｅｖｅｌ）３封じ込め施設（そのアクセスおよび利用可能性が限定される）を要求する。したがって、関連の調査研究を支援するために、安全であり、改善されており、容易にアクセス可能であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２同等資源が、前例のない程度で必要とされ続けている。この必要を満たす一助となるために、偽ウイルス粒子（ＰＳＶ）を作出するための、偽型化ウイルスベクターが、感染性／病原性ウイルスをモデル化するのに、広く採用されている。一般に、ウイルス感染のための、最小限、かつ、不可欠の構成要素であり、標的細胞へのウイルスの侵入に寄与するウイルスエンベロープ糖タンパク質（複数可）は、死滅ウイルスベクターの膜上で発現される。これらのウイルス模倣体は、操作が比較的安全であり、生／真正病原体を操作するのに要求される高ＢＳＬ施設に対する必要を廃する。ヒトアンジオテンシン転換酵素２（ｈＡＣＥ２）に結合することにより、標的細胞への、ウイルスの付着を媒介し、ヒトセリンプロテアーゼ（ｈＴＭＰＲＳＳ２）を利用して、ウイルスと、標的との間の膜融合をプライミングする、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜のＳ糖タンパク質は、有用なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶを作出するように目的を変えてたやすく再利用されている。これらの場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、おそらく、ウイルスベクターの後天性エンベロープ内の、機能的三量体としてアセンブルされる。この機能の、鍵となる利点は、結果として得られるＰＳＶが、その親である病原性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と同様の標的細胞侵入機構を採用することである。現在のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２／ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックにおける、それらの活用は、ワクチン開発および治療法における取組みを前進させ、加速化させる一助となっている。しかし、十分に確立されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ＰＳＶは、多数の問題および欠点と関連し、それらの有用性を制限している。

【0004】

特に、現行のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶは、偽型化γ－レトロウイルス、ラブドウイルス、または第１／第２世代のｒＨＩＶ１ ＬＶに基づく。これらのプラットフォームは、稼働するために、なおも、高ＢＳＬ２状況へと制限されている。偽型化γ－レトロウイルスは、それらの非分裂細胞への形質導入能の限定を、さらに課題としており、これは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２関連の調査研究におけるものを含め、ＰＳＶ資源としてのそれらの有用性を制限する。現行のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶレパートリーにもかかわらず、依然として、持続的に勃興／蔓延し続ける、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株について、ロバストに交差検討するための、高力価であり、アクセス可能であり、操作が容易である、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶ資源が、全世界的に要求されつつある。Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１株またはＧ６１４株による既往の感染、および様々な程度における、第１世代ワクチンへの取組みに由来する、十分に確立された免疫を回避する、それらの能力を踏まえると、これは、とりわけ、公衆衛生に対して、さらなるレベルの脅威をもたらすＶＯＣについて当てはまる。さらに、第１世代ワクチンのデザインは、もはや、流行する、主要であり、パンデミック規定的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ではない、Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１分離株の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質に基づく。このデザインの構成は、所与のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン戦略が、最新／新規の新興ＶＯＣに対して、どの程度効果的であるのかについての懸念を引き起こしてやまない。したがって、より制御され、標準化された調査研究条件下で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株および代表的ＰＳＶについて交差検討する、持続的であり、かつ、切迫した必要が存在する。転じて、これは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連するｎＡｂ、ワクチンの効能および治療法のロバスト性および品質についての検討の標準化を可能とする。

【0005】

加えて、良好な動物モデルおよびｉｎ ｖｉｔｒｏモデルは、予防法、治療法、およびワクチン戦略についての、調査研究および開発の一助となるであろう。現在、真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、および非マウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染について利用可能なマウスモデルは、重要な主要例として述べると、ｈＡＣＥ２トランスジェニック動物、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介ノックイン動物の供給と関連する、著明な費用および動物の浪費により、操作が困難である。例えば、複製不能アデノウイルス（ＡｄＶ）、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）、またはＬＶベクターを介して、ｈＡＣＥ２を、マウスの肺および気道へと、トランスにおいて導入することによる、ヒト化の簡略化、およびマウスモデルの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する感作工程であってもなお、選択された遺伝子導入ベクターの指向性によって決まる、マウスの肺内における、ｈＡＣＥ２の、生理学的に妥当な生体分布を結果としてもたらす。加えて、動物モデルに、複数のベクター（おそらく、少なくとも２つ異なるウイルスベース物質（ｉ．ｈＡＣＥ２のヒト化を達成する遺伝子導入のための、選ばれたベクター、およびｉｉ．抗原投与用のＰＳＶまたは真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）が必要である）により抗原投与することの複雑さは、ｍＡＣＥ２共許容性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２により緩和される。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、これらの問題のうちの１つまたはそれ以上を克服しようと努める。特に、（ｉ）現行のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶと関連せず、（ｉｉ）齧歯動物馴化型、特に、マウス馴化型であり、このため、常套的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２マウスモデルと関連する問題に遭遇せずに、齧歯動物／マウス細胞へと形質導入することが可能である、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターを提供することが、本発明の目的である。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは、機能および機能力価が改善された、マウス馴化Ｓ－ＬＶベクターを作製し、これにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のモデル化、前臨床モデル（ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルおよび動物モデル）に関して、利点をもたらす。本発明のＳ－ＬＶはまた、ｈＡＣＥ２を介して細胞へと形質導入する能力も保持し、このため、潜在的に、前臨床適用と、臨床適用とのギャップに橋渡しする。本明細書で示される例として、より詳細に述べると、本発明者らは、第３世代の自己不活化（ＳＩＮ）ＨＩＶ１レンチウイルスベクターを偽型化し、臨床的に妥当である、複数のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１、Ｇ６１４、Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０（Ａｕｓ／ＶＩＣ０１）、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１を含む）に由来し、修飾（すなわち、Ｃ末端テールを、１９アミノ酸だけ切断する修飾）を伴うＳ糖タンパク質により、これらを偽型化して、「Ｓ－ＬＶ」を作製した。驚くべきことに、本発明のＳ－ＬＶは、高力価で作製され、これは、下流における適用、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株の使用範囲の拡大を可能とする。特に、本明細書で示される例として述べると、Ｓ－ＬＶの目覚ましい機能力価は、懸濁２９３Ｔ／１７への、ｅＧＦＰまたはＦＬｕｃレポーターをコードするＨＩＶ１ ＬＶゲノム、ＨＩＶ１ Ｇａｇ－Ｐｏｌ、ＨＩＶ１ Ｒｅｖプラスミド、および目的のＳ糖タンパク質をコードするプラスミド（複数可）の、一過性トランスフェクションの後に達成された。Ｓ－ＬＶは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける適用を含む、下流における使用を拡大するために、さらに濃縮および精製することができる。

【0008】

したがって、本発明者らは、目的のＳＡＲ－ＣｏＶ－２Ｓ糖タンパク質のライブラリーまたは臨床的妥当性をモデル化するのに使用され、全てを、標準的な実験用封じ込め条件下として、臨床的に妥当であるＶＯＣの感染性をモデル化し、これについて評価し、これを予測するか、またはＣＯＶＩＤ－１９から回復した患者に由来する中和抗体もしくは回復期血漿の中和傾向について調べるための手段をもたらすことにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２関連の調査研究を支援するのに使用される、Ｓ－ＬＶプラットフォームを提供する。その広範な有用性を踏まえると、このＳ－ＬＶプラットフォームは、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおいて、それらの感染プロファイルについて評価する一助となる、新興／新規のＶＵＩまたはＶＯＣを、迅速にモデル化し、これにより、全世界的衛生に対する、それらの潜在的影響をあらかじめ決定することに寄与する計量をもたらし、天然におけるそれらの潜在的出現の前に、予測される変異株をスクリーニングし、進行中のＣＯＶＩＤ－１９／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２パンデミックに直面した場合に、迅速かつ戦略的な応答を容易とするのに、潜在的に利用される。

【0009】

意義深いことに、本発明者らは、初めて、マウス気道のトランスにおけるｈＡＣＥ２の発現を必要とせずに、ＢＡＬＢ／ｃマウスのｉｎ ｖｉｖｏにおける、強力な遺伝子導入を達成する、マウス（ｍ）ＡＣＥ２馴化（ｍａ）Ｓ－ＬＶを提供した。例示されるｍａＳ－ＬＶは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質内に、突然変異である、Ｑ４９８Ｙ、Ｐ４９９Ｔ、およびΔ１９を含み、場合により、Ｎ５０１Ｙもまた含む、多数の突然変異を含む。

【0010】

本明細書で例示される通り、本発明者らは、まず、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染をモデル化する、迅速、かつ、直接的な手段として、ｈＡＣＥ２発現に依存せずに、強力な遺伝子導入能を裏付けるように、ＢＡＬＢ／ｃマウスに鼻腔内投与することにより、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、Ｓ－ＬＶを適用することの実証を提示した。全てをまとめると、このＳ－ＬＶプラットフォームは、真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、特に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質のレベルでモデル化された代表的変異株を、正確に表す。このＳ－ＬＶプラットフォームは、本研究において表される、広範なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株におけるロバスト性、および高度のＢＳＬ要件により制約されないような柔軟性を示す。したがって、Ｓ－ＬＶプラットフォームは、使用が容易であり、アクセスが容易であり、進行中のＣＯＶＩＤ－１９／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２パンデミックに対抗する、関連の調査研究のための、安全なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶ資源として機能する。

【0011】

したがって、本発明は、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化され、プロモーターに作動可能に連結されたトランス遺伝子を含み；前記スパイクタンパク質は、（ａ）配列番号１の４９８、４９９、および６１４位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；ならびに（ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失を含む、レンチウイルスベクターを提供する。

【0012】

本発明はまた、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化され、プロモーターに作動可能に連結されたトランス遺伝子を含み；前記スパイクタンパク質は、（ａ）配列番号１の６１４位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；（ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失；ならびに（ｃ）（ｉ）配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；ならびに／または（ｉｉ）配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異を含む、レンチウイルスベクターも提供する。

【0013】

スパイクタンパク質の細胞質テールは、配列番号１のアミノ酸残基１２３５～１２７３に対応するか、またはこれとアライメントしうる。スパイクタンパク質の細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失は、（ａ）細胞質テールのうちの、少なくとも１０のアミノ酸、好ましくは、少なくとも１５のアミノ酸の欠失；および／または（ｂ）配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸残基の欠失を含みうる。

【0014】

配列番号１の４９８、４９９、および６１４位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における、スパイクタンパク質の突然変異のうちの１つまたはそれ以上は、アミノ酸置換の場合があり、好ましくは、突然変異の全ては、アミノ酸置換である。アミノ酸置換は、非保存的アミノ酸置換でありうる。（ａ）配列番号１の４９８位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、チロシンにより置換されている場合があり；（ｂ）配列番号１の４９９位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、トレオニンにより置換されている場合があり；かつ／または（ｃ）配列番号１の６１４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換されている場合がある。突然変異は、Ｑ４９８Ｙ、Ｐ４９９Ｔ、およびＤ６１４Ｇでありうる。

【0015】

改変スパイクタンパク質は、ヒトアンジオテンシン転換酵素２（ＡＣＥ２）の酵素ドメインに結合することが可能でありうる。

【0016】

改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株、Ｂ．１．１．７株、Ｂ．１．３５１株、Ｐ．１株、Ｂ．１．６１７．２株、Ｂ．１．４２７、Ｂ．１．１．５２９、Ｃ．３７、Ｂ．１．４２９、またはＡｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０（Ａｕｓ／ＶＩＣ０１）株から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に由来しうる。

【0017】

改変スパイクタンパク質は、抗コロナウイルススパイクタンパク質抗体、好ましくは、抗コロナウイルススパイクタンパク質抗体であるＭＭ４３またはＲ００１により検出されない場合がある。

【0018】

改変スパイクタンパク質は、配列番号１３と、少なくとも９０配列同一性％を有するアミノ酸配列を含みうる。改変スパイクタンパク質は、場合により、配列番号１の５０１位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異を含む、１つまたはそれ以上のさらなる突然変異をさらに含みうる。

【0019】

配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異、または配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異を含む、１つもしくはそれ以上のさらなる突然変異は、場合により、（ａ）アミノ酸置換、好ましくは、非保存的アミノ酸置換、なおより好ましくは、チロシンによる置換の場合もあり；かつ／または（ｂ）Ｎ５０１Ｙを含む場合もある。

【0020】

改変スパイクタンパク質は、配列番号２０と、少なくとも９０配列同一性％を有するアミノ酸配列を含みうる。

【0021】

改変スパイクタンパク質は、（ａ）配列番号１の８０、２１５、４１７、４８４、５０１、６１４、および７０１位のうちの１つまたはそれ以上に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異であって、好ましくは、これらの残基全ては、突然変異された突然変異；および（ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失を含みうる。場合により、（ａ）前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｂ．１．３５１株のスパイクタンパク質に由来する場合があり；（ｂ）（ｉ）配列番号１の８０位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、アラニンにより置換され；（ｉｉ）配列番号１の２１５位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換され；（ｉｉｉ）配列番号１の４１７位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、アスパラギンにより置換され；（ｉｖ）配列番号１の４８４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、リシンにより置換され；（ｖ）配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、チロシンにより置換され；（ｖｉ）配列番号１の６１４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換され、かつ／もしくは（ｖｉｉ）配列番号１の７０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、バリンにより置換され；この場合、好ましくは、これらの残基全ては、置換されており；かつ／または（ｃ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失は、配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基の欠失を含むか、もしくはこれらからなる。

【0022】

本発明のレンチウイルスベクターは、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）ベクター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベクター、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）ベクター、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）ベクター、およびビスナ／マエディウイルスベクターからなる群から選択されるか、またはこれに由来しうる。

【0023】

本発明のレンチウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける齧歯動物細胞、好ましくは、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるマウス細胞へと形質導入することが可能でありうる。

【0024】

本発明はまた、本発明の改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質も提供する。

【0025】

本発明は、本発明の改変スパイクタンパク質をコードするポリヌクレオチド分子もさらに提供する。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含む発現構築物も提供し、この場合、場合により、前記ポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。

【0026】

本発明はまた、本発明のレンチウイルスベクター、本発明の改変スパイクタンパク質、本発明のポリヌクレオチド、または本発明の発現構築物を含む宿主細胞も提供する。

【0027】

本発明は、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含む、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）もさらに提供する。

【0028】

本発明はまた、治療における使用のための、本発明のレンチウイルスベクター、本発明の改変スパイクタンパク質、本発明のポリヌクレオチド、本発明の発現構築物、または本発明のＶＬＰも提供するが、この場合、好ましくは、治療は、遺伝子治療である。

【0029】

本発明は、本発明のレンチウイルスベクター、本発明の改変スパイクタンパク質、本発明のポリヌクレオチド、本発明の発現構築物、または本発明のＶＬＰの、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける使用もさらに提供する。

【0030】

本発明はまた、本発明のレンチウイルスベクターを作製する方法であって、（ａ）（ｉ）本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列；および（ｉｉ）レンチウイルスパッケージング構成要素、レンチウイルスエンベロープ構成要素、およびレンチウイルスゲノムをコードする、１つまたはそれ以上の核酸配列を、ウイルスベクター産生細胞へと導入する工程；ならびに（ｂ）レンチウイルスベクターの産生に適する条件下で、産生細胞を培養する工程を含む方法も提供する。前記方法は、前記レンチウイルスベクターを採取する工程をさらに含みうる。改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列は、本発明のポリヌクレオチド分子内、または本発明の発現構築物内に含まれる。レンチウイルスパッケージング構成要素、レンチウイルスエンベロープ構成要素、およびレンチウイルスゲノムをコードする、１つまたはそれ以上の核酸配列は、（ｉ）改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列と同じ、ポリヌクレオチド分子もしくは発現構築物内、または（ｉｉ）１つもしくはそれ以上の個別のポリヌクレオチド分子または発現構築物内に含まれる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質は、産生細胞の培養時に共発現される場合があり、この場合、好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質は、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株もしくはＢ．１．１．５２９株に由来する。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1-1】Ａ：全長Ｃ末端切断型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質、および１９アミノ酸を欠失させたＣ末端切断型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質についての代表的概略（それぞれ、上パネルおよび下パネル）、ならびにアノテーションドメインを示す図である。白三角は、Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位を指し、黒三角は、Ｓ２切断部位を指す。タンパク質およびアノテーションドメインは、縮尺通りではない。ａａ：アミノ酸（複数可）；ＣＴ：細胞質テール；ＦＬ：全長；ＦＰ：融合ペプチド；ＨＲ１およびＨＲ２：それぞれ、ヘプタッドリピート１およびヘプタッドリピート２；ＮＴＤ：Ｎ末端ドメイン；ＲＢＤ：受容体結合性ドメイン；ＳＳ：シグナル配列；ＴＭ：膜貫通ドメイン；Δ：欠失である。Ｂ：代表的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ偽型プラスミドの構成、およびそれらの関連するＳ－ＬＶ変化形（ｖ０１－０５）である。Ｃ：ｐＧＭ９９８（ｍａＳ^{４９８Ｙ，Ｐ４９９Ｔ，Ｎ５０１Ｙ＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。Ｄ：ｐＧＭ１０００（Ｓ^{１．１．７＋１．３５１ ｃｈｉｍｅｒａ＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。Ｅ：ｐＧＭ１０２７（Ｓ^{Ｂ．１．６１７．２＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。Ｆ：ｐＧＭ１０２８（Ｓ^{Ｃ．３７＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。Ｇ：ｐＧＭ１０３８（Ｓ^{Ｂ．１．６１７．２，Ｙ５０１＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。Ｈ：ｐＧＭ１０３９（Ｓ^{Ｃ．３７，Ｙ５０１＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。Ｉ：ｐＧＭ１０４０（Ｓ^{Ｂ．１．６１７．２，Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。Ｊ：ｐＧＭ１０４１（Ｓ^{Ｃ．３７，Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａ}）についてのプラスミドマップである。概略図は、ＣＭＶＩＥエンハンサーおよびニワトリβ－アクチンプロモーターの制御下で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓタンパク質を発現させるように作出された、偽型プラスミドの構成を描示する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体を規定する突然変異の特異的セットは、アミノ酸変化を強調してアノテーションされる：青色でアノテーションされた突然変異は、Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）内の突然変異を指し；赤色でアノテーションされた突然変異は、受容体結合性ドメイン（ＲＢＤ）内の突然変異を指し；黒色でアノテーションされた突然変異は、前述のドメイン（すなわち、残りのＳ１ドメインおよびＳ２ドメイン）外の突然変異を指す。ＣＢＡ／ＲＢＧイントロン：ニワトリβ－アクチンおよびウサギβ－グロビンキメライントロン；ｃｏ：コドン最適化；ＣＭＶＩＥエンハンサー：サイトメガロウイルス即初期エンハンサー；ＵＴＲ：非翻訳領域である。

【図1-2】図１－１の続き。

【図1-3】図１－２の続き。

【図1-4】図１－３の続き。

【図1-5】図１－４の続き。

【図1-6】図１－５の続き。

【図1-7】図１－６の続き。

【図1-8】図１－７の続き。

【図1-9】図１－８の続き。

【図1-10】図１－９の続き。

【図1-11】図１－１０の続き。

【図2-1】ｒＨＩＶ１レンチウイルスベクターを偽型化するのに使用された、Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体との間における、ｃＤＮＡ配列についての、複数の配列アライメントを示す図である。下線を付された配列は、ＡｇｅＩ制限酵素部位の、Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ ｃＤＮＡ配列へのサイレント導入を指し、タンパク質配列のコードに対して、影響を及ぼさない。

【図2-2】図２－１の続き。

【図2-3】図２－２の続き。

【図2-4】図２－３の続き。

【図2-5】図２－４の続き。

【図2-6】図２－５の続き。

【図2-7】図２－６の続き。

【図2-8】図２－７の続き。

【図2-9】図２－８の続き。

【図2-10】図２－９の続き。

【図2-11】図２－１０の続き。

【図2-12】図２－１１の続き。

【図2-13】図２－１２の続き。

【図3-1】ｒＨＩＶ１レンチウイルスベクターを偽型化するのに使用された、Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体との間における、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質配列についての、複数の配列アライメントを示す図である。強調され、下線を付されたアミノ酸残基または欠失は、それぞれのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体および／または＋Δ１９ａａ誘導体を作出するための、Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１参照配列と比較した、突然変異／変化を指し示す。

【図3-2】図３－１の続き。

【図3-3】図３－２の続き。

【図3-4】図３－３の続き。

【図3-5】図３－４の続き。

【図4-1】（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２の共発現が、２９３Ｔ／１７細胞の、Ｓ－ＬＶに対する許容性を有意に改善し、Ｓ－ＬＶによる形質導入をレスキューすることを示す図である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ、ＶＳＶｇ、またはｂａｌｄ ＬＶにより偽型化された、表示のＬＶ．ｅＧＦＰを、記載される通りに（材料および方法を参照されたい）、２９３Ｔ／１７ ＳＦ細胞の、一過性共トランスフェクションにより作製し、トランスフェクションの７２時間後に、粗ＬＶを回収した。希釈率を一定とする、（Ａ）ｒＨＩＶ１．ＶＳＶｇ（ｎ＝４）、ならびに原型的ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２で偽型化されたＳ－ＬＶである、（Ｂ）ＳＷｕｈａｎ Ｈｕ－１±Δ１９ａａ（ｎ＝４）、（Ｃ）ＳＧ６１４±Δ１９ａａ（ｎ＝４）、および（Ｄ）ＳＡｕｓ／ＶＩＣ０１±Δ１９ａａ（ｎ＝４）により、ｈＴＭＰＲＳＳ２を伴うか、またはこれを伴わずに（ｃｏ）ｈＡＣＥ２を発現する親２９３Ｔ／１７細胞系へと形質導入した。感染の約７２時間後、細胞を、ＥＧＦＰレポーターによる、形質導入効率についてのフローサイトメトリー解析にかけた。形質導入効率を反映する、個々のデータ点を、表示の群の平均値±ＳＤと共に提示する（^＊、^＊＊、^＊＊＊、および^＊＊＊＊は、それぞれ、Ｐ＜０．０５、＜０．０１、＜０．００１、および＜０．０００１を表す）。親細胞系および操作細胞系の、ｒＨＩＶ１．ｂａｌｄ物質と一緒の接種を使用して、フローサイトメトリーにより、ＥＧＦＰ陽性細胞集団についての平均ベースライン蛍光、および低値側のゲーティング閾値を決定し、各グラフを、点線として提示する。

【図4-2】図４－１の続き。

【図5-1】Ｓ－ＬＶプラットフォームが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＶＯＣまたはＶＯＩをモデル化し、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、それらの固有の機能を再現しうることを示す図である。表示のＳ－ＬＶおよびｍａＳ－ＬＶ、ならびにｒＨＩＶ１．ｂａｌｄを、２９３Ｔ／１７ ＳＦ細胞の、一過性共トランスフェクションにより作製し、トランスフェクションの７２時間後に、粗ＬＶを回収した。（Ａ）（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}または（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}で偽型化されたＳ－ＬＶ、およびｍａＳ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}またはｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}（各々、ｎ＝４ずつ）で偽型化されたｍａＳ－ＬＶの希釈率を一定とする、ｈＴＭＰＲＳＳ２を伴うか、またはこれを伴わずに（ｃｏ）ｈＡＣＥ２を発現する親２９３Ｔ／１７細胞系である。形質導入効率を反映する、個々のデータ点を、表示の群の平均値±ＳＤと共に提示する（^＊、^＊＊、^＊＊＊、および^＊＊＊＊は、それぞれ、Ｐ＜０．０５、＜０．０１、＜０．００１、および＜０．０００１を表す）。他方、ｍＡＣＥ２細胞侵入受容体を使用して、Ｎ５０１ＹまたはＱ４９８Ｙ、およびＰ４９９Ｔを含有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓに対する許容性を裏付けるように、（Ａ）で記載された、選択されたＳ－ＬＶおよびｍａＳ－ＬＶをまた、（Ｂ）ｈＴＭＰＲＳＳ２を伴うか、またはこれを伴わずに（ｃｏ）ｍＡＣＥ２を発現する細胞系へも形質導入した。データは、平均値±ＳＤとして提示する。親細胞系および操作細胞系の、ｒＨＩＶ１．ｂａｌｄ物質と一緒の接種を使用して、フローサイトメトリーにより、ｅＧＦＰ陽性細胞集団についての平均ベースライン蛍光、および低値側のゲーティング閾値を決定し、点線として提示する。（Ｃ）翌日、親２９３Ｔ／１７細胞を、７０％のコンフルエンシーとなるように、２４ウェルプレートへと播種した。次いで、細胞に、ｐＣＭＶ＋ｅＧＦＰレポータープラスミド２００ｎｇ、および表示のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）ＳまたはｍａＳ偽型プラスミド、またはモック対照としてのｐＣＡＧ ｅＧＦＰ １００ｎｇを、ＦｕＧｅｎｅ ６トランスフェクション試薬との比を１：２として共トランスフェクトした。細胞を培養し、表示の時点において、ｅＧＦＰ蛍光について視覚化した。白色矢印により強調された細胞は、合胞体を呈する細胞を指し示す。スケールバー＝５００μｍである。

【図5-2】図５－１の続き。

【図6】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ細胞質テールのうちの、１９アミノ酸の欠失、およびＤ６１４Ｇの付加が、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する、許容性２９３Ｔ／１７細胞におけるＳ－ＬＶ力価をレスキューすることを示す図である。偽型である、（Ａ）（ｃｏ）Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１±Δ１９ａａ}、（Ｂ）（ｃｏ）Ｓ^{Ｇ６１４±Δ１９ａａ}、（Ｃ）（ｃｏ）Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１±Δ１９ａａ}に基づくＳ－ＬＶを作製した。トランスフェクションの７２～１４４時間後の間において、２４時間間隔で採取し、次いで、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞に対して滴定した。力価は、形質導入細胞に対するＦＣＳ解析の後で決定した。推定小胞体保持シグナルを包含する、細胞質テールのうちの、１９アミノ酸の欠失を保有するＳ－ＬＶは、実質的な改善を示し、それらの全長対応物と比較して、機能力価をレスキューし、ＩＵ／ｍＬ単位のピーク力価は、トランスフェクションの７２時間後に採取された物質について計算された。さらなる偽型である、（Ｄ）（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}、および（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．１３５１＋Δ１９ａａ}、ならびに（Ｅ）ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９±Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}もまた、ＦＣＳ解析を使用する、目覚ましい力価を伴って、パッケージングの成功、および同様の産出動態を示す。

【図7】Ｎ５０１Ｙ含有／マウスＡＣＥ２馴化Ｓ－ＬＶが、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞に対して許容性であり、これらに対して滴定されることを示す図である。（Ａ）Ｇ６１４、Ｎ５０１Ｙ、またはＹ４９８、Ｔ４９９を含有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓタンパク質で偽型化されたＬＶにより、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞へと形質導入した。蛍光顕微鏡法を使用して、Ｎ５０１Ｙ、またはＹ４９８、Ｔ４９９を含有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓで偽型化されたＬＶは、Ｇ６１４含有Ｓ－ＬＶについての許容性の低減／消失への接近と比較して、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞に対する目覚ましい許容性を示した。（Ｂ）Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}、Ｓ^{Ｂ．１．１３５１＋Δ１９ａａ}、およびｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}－ＬＶを作製し、トランスフェクションの７２～１４４時間後の間において、２４時間間隔で採取し、次いで、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞に対して滴定した。力価は、形質導入細胞に対するＦＣＳ解析の後で決定した。

【図8】Ｙ４９８およびＴ４９９を介するマウスＡＣＥ２馴化が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１}偽型に基づくｍａＳ－ＬＶの機能力価を、さらにレスキューすることを示す図である。Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}－ＬＶおよびｍａＳ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}－ＬＶを作製し、トランスフェクションの７２時間後において採取し、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する、許容性２９３Ｔ／１７細胞に対して滴定した。形質導入細胞は、ＦＣＳにより解析した。Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}－ＬＶおよびｍａＳ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}－ＬＶについて計算されたＩＵ／ｍＬ単位の力価は、突然変異であるＹ４９８およびＴ４９９が、いずれも、マウスＡＣＥ２馴化を付与し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１}により偽型化されたＬＶの機能力価を、さらに潜在的にレスキューしうることを指し示す。

【図9】ＡＥＸおよびＴＦＦの後に、Ｓ－ＬＶが、高機能力価で作製され、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ＶＯＣの感染性をモデル化しうることを示す図である。ＡＥＸ／ＴＦＦ法の組合せにより、表示のＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃおよびｍａＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃベクターを、作製し、精製し、透析濾過し、濃縮した。精製および濃縮されたベクター物質を、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２または（ｃｏ）ｍＡＣＥ２（表示の通り）およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞（形質導入の当日に、３０～４０％のコンフルエンシーを達成するように播種される）に対して滴定した。感染の７２時間後、細胞を、採取し、溶解させ、希釈率に従い、ルシフェラーゼ活性を測定した。（Ａ）ウェル１つ当たりのルシフェラーゼ活性は、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞の形質導入時における、ｐ２４のｎｇ単位のインプット量に対して正規化した。群の平均値±ＳＤを指し示す（ダンの多重比較検定を伴う、クルスカル－ワリス一元ＡＮＯＶＡ；^＊＊＊＊は、Ｐ＜０．０００１を表す）。（Ｂ）ウェル１つ当たりのルシフェラーゼ活性は、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞の形質導入時における、ｐ２４のｎｇ単位のインプット量に対して正規化した。群の平均値±ＳＤを指し示す（ダンの多重比較検定を伴う、クルスカル－ワリス一元ＡＮＯＶＡ；^＊＊＊および^＊＊＊＊は、それぞれ、Ｐ＜０．００１および０．０００１を表す）。

【図10-1】ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶが、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に対して惹起された、市販の中和抗体により、強力に中和されることを示す図である。表示の作業濃度における、マウスＩｇＧ１であるＭＭ４３（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ中和抗体；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、またはアイソタイプ対照、およびウサギＩｇＧであるＲ００１（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ中和抗体；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、またはアイソタイプ対照の存在下で、感染多重度を１として、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する、許容性２９３Ｔ／１７細胞へと、Ｓ－ＬＶを形質導入した。形質導入の４８～７２時間後、細胞を、ＦＣＳにかけて、ＩＣ_５０を計算した。（Ａ）いずれかの抗体の被験範囲にわたる、ＭＭ４３またはアイソタイプ対照の存在下における、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶの形質導入プロファイルである。（Ｂ）ＭＭ４３による、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶに対する中和曲線であり；中和は、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照の形質導入％として計算した。（Ｃ）いずれかの抗体の被験範囲にわたる、Ｒ００１またはアイソタイプ対照の存在下における、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶの形質導入プロファイルである。（Ｄ）Ｒ００１による、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶに対する中和曲線であり；中和は、ウサギＩｇＧアイソタイプ対照の形質導入％として計算した。（Ｅ）Ｒ００１による、Ｇ６１４＋Δ１９ａａ；アルファ＋Δ１９ａａ、ベータ＋Δ１９ａａ、およびｍａＳ２＋Δ１９ａａに対する中和曲線である。点線は、平均ＩＣ_５０が計算される、５０％の中和を指す。（Ｆ）ＭＭ４３による、Ｇ６１４＋Δ１９ａａ；アルファ＋Δ１９ａａ、ベータ＋Δ１９ａａ、およびｍａＳ２＋Δ１９ａａに対する中和曲線である。点線は、平均ＩＣ_５０が計算される、５０％の中和を指す。

【図10-2】図１０－１の続き。

【図11】フローサイトメトリーによる、予備的ｒＳＩＶ１．Ｓ－ＬＶ力価を示すグラフである。ＶＳＶｇ偽型化ｒＳＩＶ１レンチウイルスベクター（ｎ＝１）またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}およびｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}（各々、ｎ＝２ずつ）について、２９３Ｔ／１７ ＳＦ細胞の一過性トランスフェクションを使用して、Ｓ－ＬＶを作製した。トランスフェクションの７２時間後、粗ｒＳＩＶ１．ＶＳＶｇ／ｒＳＩＶ１．Ｓ－ＬＶベクター物質を採取し、系列希釈し、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞へと形質導入した。形質導入の７２時間後、細胞を、フローサイトメトリーにかけて、ｅＧＦＰの形質導入に基づき、ＩＵ／ｍＬ単位の力価を決定した。

【図12-1】ｍａＳ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｖ０３）、およびＮ５０１Ｙを含有するＳ－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｖ０４）が、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、外因性（ｃｏ）ｈＡＣＥ２によるプライミングを伴わずに、ＢＡＬＢ／ｃマウスへと形質導入されることを示す図である。（Ａ）ｐ２４の定量（４０または１６６ｎｇ）に基づく、表示のＳ－ＬＶ用量による、鼻腔内投与後の表示の時点において、ＩＶＩＳにより、ＢＡＬＢ／ｃマウスについての生物発光画像を捕捉した。ＩＶＩＳの結果は、ｍａＳ－ＬＶおよびＮ５０１Ｙ含有Ｓ－ＬＶが、外因性（ｃｏ）ｈＡＣＥ２発現による、気道のプライミングおよびヒト化を伴わずに、マウス肺へと、ロバストに形質導入することが可能であることの証拠を提示する。（Ｂ）鼻腔および（Ｃ）肺における、群間の発光活性を決定するように、ＩＶＩＳ画像をさらに解析し、ｍａＳ－ＬＶおよびＮ５０１Ｙ含有Ｓ－ＬＶが、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２によるプライミングに依存せずに、用量依存的に、マウス呼吸器気道へと形質導入することが可能であることをさらに裏付けた。ＴＳＳＭ ＬＶ製剤用緩衝剤だけを投与されたナイーブマウスは、陰性対照として用いられ、発光なし～バックグラウンド発光を呈した。ｉ．ｎ．：鼻腔内；ｍａ：ｍＡＣＥ２馴化である。

【図12-2】図１２－１の続き。

【図13】ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルを使用して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ偽型化ＬＶの遺伝子治療適用を裏付ける、代表的探索計画を示す図である。突然変異株である、ＳＦＴＰＢ細胞モデルまたはＣＦＴＲ細胞モデル（それぞれ、ＣＦＴＲ Ｆ５０８Δを伴う、ＳＦＴＰＢ^ｋｏモデルまたは１６ＨＢＥ１４ｏ－モデル）を是正するように目的の治療用遺伝子：（ｓｏ）ＳＦＴＰＢまたは（ｓｏ）ＣＦＴＲ２をコードするＳ－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｖ０２、０３、０５；図１を参照されたい）を作製することができる。タンパク質発現プロファイルのレスキューは、ウェスタンブロットによりを裏付けることができる。

【図14】Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｍａＳ２）、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶベータ）、および媒体対照を使用する、ｉｎ ｖｉｖｏの、肺内における、ルシフェラーゼトランス遺伝子の発現を示すグラフである。（Ａ）ＩＶＩＳ ｉｎ ｖｉｖｏイメージングを使用して、肺内のルシフェラーゼ発現を、表示の送達後日数において決定した。（Ｂ）（Ａ）で提示された曲線の曲線下面積を計算することにより、研究の持続期間にわたる、肺内の累積ルシフェラーゼ発現を決定した。

【図15】マウス馴化Ｓ－ＬＶ（ｍａＳ３；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｐ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}）により形質導入された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ許容性２９３Ｔ／１７（ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を安定的に共発現する）が、非形質導入細胞のヌルバックグラウンドレベルと比較して、成熟ＳＰ－Ｂホモ二量体を発現することを示すウェスタンブロット（非還元条件下におけるＳＤＳ ＰＡＧＥ）を示す図である。ＧＡＰＤＨは、ローディング対照として用いられた。

【図16】ＣＯＶＩＤ－１９感染をモデル化するように、肺芽オルガノイド（ＬＢＯ）へと形質導入するＳ－ＬＶを示す図である。ＥＧＦＰをコードする濃縮Ｓ－ＬＶ（Ｇ６１４＋Δ１９ａａ；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}）を、フェノールレッド（比を２：１とする）と混合し、ＭＦＤ（ｍａｘｉｍｕｍ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｄｏｓｅ）を、Ｍａｔｒｉｇｅｌ内に包埋されたＬＢＯへとマイクロインジェクションした。ヒトＩｇＧをコードするｒＡＡＶ８のマイクロインジェクションは、陰性対照として用いられた。蛍光顕微鏡法（ｅＧＦＰ）は、ＥＶＯＳ ＦＬ Ａｕｔｏを使用して、注射の７２時間後に実施した。ＢＦ＝明視野顕微鏡法である。スケールバーは、５００μｍを指す。

【図17】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ２核タンパク質（Ｎ）が、組換えＨＩＶ１ レンチウイルスベクター（ＬＶ）の力価をブーストすることを示すグラフである。（Ａ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を安定的に発現する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２許容性２９３Ｔ／１７細胞上で滴定された、粗ベクター物質に由来する力価である。ｎｔ＝試験なしである。（Ｂ）（Ａ）に由来する、マッチさせられ、ｌｏｇ１０変換された力価対の間の差違を示すグラフである（対応のあるｔ検定；Ｐ＝０．０００６）。

【発明を実施するための形態】

【0032】

定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書において使用される、全ての技術用語および学術用語は、本開示が関する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、「Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、２０版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）；ならびにＨａｌｅおよびＭａｒｈａｍ、「ＨＡＲＰＥＲ ＣＯＬＬＩＮＳ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＢＩＯＬＯＧＹ」、Ｈａｒｐｅｒ Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ、ＮＹ（１９９１）は、当業者に、本開示において使用される用語の多くについての、一般的辞典を提供する。用語の意味および範囲は明らかであるものとするが；万一、何らかの潜在的な曖昧さが生じる場合、本明細書で提示される定義が、任意の辞典または明細書外の定義に対して優先される。本発明は、本明細書で記載される、特定の方法、プロトコール、および試薬などに限定されず、したがって、変動しうることを理解されたい。

【0033】

本開示は、本明細書で開示される、例示的な方法および材料により限定されず、本開示の実施形態の実施または試験では、本明細書で記載される方法および材料と類似であるか、または同等である、任意の方法および材料が使用される。本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態について記載することだけを目的とするものであり、特許請求の範囲だけにより規定される、本発明の範囲を限定することは意図されない。

【0034】

本開示の実施形態についての記載は、網羅的であることも、本開示を、開示される正確な形態へと限定することも意図されない。本明細書では、本開示についての具体的実施形態、およびこれについての例が、例示を目的として記載されるが、当業者が認識する通り、本開示の範囲内において、多様で同等な改変が可能である。例えば、方法の工程または機能は、所与の順序で提示されるが、代替的実施形態は、異なる順序で、機能を果たす場合もあり、実質的に共時的に機能が果たされる場合もある。本明細書で提示される、本開示の教示は、必要に応じて、他の手順または方法へも適用される。本明細書で記載される、多様な実施形態は、さらなる実施形態を提示するように、組み合わされる場合もある。本開示の態様は、必要な場合、本開示のなおさらなる実施形態をもたらすために、上記の参考文献および本出願の組成物、機能、および概念を利用するように改変される場合もある。さらに、生物学的な機能的同等性の検討により、生物学的作用または化学的作用の種類または量に影響を及ぼさずに、タンパク質構造において、何らかの変化が施される場合もある。発明を実施するための形態に照らして、これらの変化および他の変化が、本開示に施される場合もある。全てのこのような改変は、付属の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。

【0035】

そうでないことが指し示されない限りにおいて、それぞれ、任意の核酸配列は、左から右へと、５’側から３’側への配向性で書かれ；アミノ酸配列は、左から右へと、アミノ側からカルボキシ側への配向性で書かれる。

【0036】

本明細書で提示される見出しは、本開示の多様な態様または実施形態の限定ではない。

【0037】

動詞と共に使用される場合に、本明細書で使用される、「～ことが可能な」という用語は、対応する動詞の作用を包含するか、またはこれを意味する。例えば、「相互作用することが可能な」はまた、「相互作用する」ことも意味し、「～を切断することが可能な」はまた、「～を切断する」も意味し、「～に結合することが可能な」はまた、「～に結合する」も意味し、「～を特異的にターゲティングすることが可能な」はまた、「～を特異的にターゲティングする」も意味する。

【0038】

他の用語の定義は、本明細書を通して見出される。例示的な実施形態について、より詳細に記載される前に、本開示は、記載される、特定の実施形態に限定されず、したがって、変動しうることが理解されるものとする。本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態について記載することだけを目的とするものであり、本発明の範囲は付属の特許請求の範囲だけにより規定されるので、限定的であることは意図されないことも理解されるものとする。

【0039】

数値範囲は、範囲を規定する数を包含する。値の範囲が提示される場合は、その範囲の上限と下限との間の、文脈によりそうでないことが明確に指示されない限りにおいて、下限の単位の１０分の１までの、各中間値もまた、具体的に開示されることが理解される。言明された範囲内の、任意の言明された値または中間値と、この言明された範囲内の、他の任意の言明された値または中間値との間の、各小範囲も、本開示内に包含される。これらの小範囲の上限および下限は、独立に、範囲内に包含される場合もあり、範囲から除外される場合もあるが、限界の一方もしくは両方が小範囲内に包含される各範囲、または限界のいずれも包含されない各範囲もまた、本開示内に包含され、言明された範囲内の、任意の具体的に除外された限界下に置かれる。言明された範囲が、限界の一方または両方を包含する場合、これらの包含された限界の一方または両方を除外する範囲もまた、本開示内に包含される。

【0040】

本明細書で使用される、「ある（ａ）」および「ある（ａｎ）」という冠詞は、１つまたはそれ以上の（すなわち、少なくとも１つの）、冠詞の文法的対象を指す場合がある。さらに、文脈によりそうでないことが要求されない限りにおいて、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。本出願では、そうでないことが言明されない限りにおいて、「または」の使用は、「および／または」を意味する。さらに、「～を含むこと」という用語のほか、「～を含む」および「含まれた」など、他の形態の使用も、限定ではない。

【0041】

「約」とは一般に、測定の性格または精度を踏まえた場合に、測定される数量について許容可能な誤差の程度を意味する。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の、２０パーセント（％）以内、典型的に、１０％以内であり、より典型的に、５％以内である。好ましくは、本明細書では、「約」という用語は、それが共に使用される数の数値から、＋または－（±）５％、好ましくは、±４％、±３％、±２％、±１％、±０．５％、±０．１％として理解されるものとする。

【0042】

「～からなること」という用語は、本発明についてのこの記載において列挙されない、任意の要素を除外する、本明細書で記載される、組成物、方法、およびこれらのそれぞれの構成要素を指す。

【0043】

本明細書で使用される、「～から本質的になること」という用語は、所与の発明に要求される要素を指す。「～から本質的になること」という用語は、この発明の基本的特徴（複数可）、および新規の特徴（複数可）、または機能的特徴（複数可）（すなわち、不活性成分または非免疫原性成分）に実質的に影響を及ぼさない要素の存在を許容する。

【0044】

本明細書で、１つまたはそれ以上の構成「を含む」実施形態として記載される実施形態もまた、このような構成「からなり」かつ／またはこれら「から本質的になる」、対応する実施形態の開示として考えられる。

【0045】

本明細書では、濃度、量、容量、百分率、および他の数値は、範囲フォーマットで提示される。このような範囲フォーマットが、簡便さおよび簡略さのためだけに使用され、範囲の限界として明示的に列挙された数値だけを含むのではなく、また、各数値および部分範囲が明示的に列挙された場合と同様に、この範囲内に包含される、個々の全ての数値または部分範囲も含むと柔軟に解釈されるべきであることもまた理解されたい。

【0046】

本明細書で使用される、「ベクター」、「ウイルスベクター」、および「レンチウイルスベクター」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターを意味するように、互換的に使用される。

【0047】

本明細書で使用される、「力価」および「収量」という用語は、本発明の方法により作製されるレンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターの量を意味するように、互換的に使用される。力価は、生産効率を特徴付ける、主要な基準であり、高力価は一般に、より多くのレンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターが製造される（例えば、同じ量の試薬を使用して）ことを指し示す。力価または収量は、「活性」ウイルス粒子の尺度、すなわち、細胞へと形質導入することが可能な粒子の数である、標的細胞のゲノムへと組み込まれた、ベクターゲノムの数（組込み力価）に関する場合がある。形質導入単位（また、ＴＴＵ／ｍＬとも称される、ＴＵ／ｍＬ）とは、ある特定の組織培養物／ウイルス希釈条件下で形質導入された宿主細胞の数についての、生物学的リードアウトであり、「活性」ウイルス粒子の数についての尺度である。「活性」ウイルス粒子の数は、ＩＵ／ｍＬなど、単位容量当たりの感染単位（ＩＵ）数に関して定量される。ウイルス粒子の総数（活性ウイルス粒子＋不活性ウイルス粒子）はまた、どのくらい多くのＧａｇが、被験溶液中に存在するのか、またはどのくらい多くのコピー数のウイルスＲＮＡが、被験溶液中に存在するのかを測定することによってなど、任意の適切な手段を使用しても決定される。次いで、レンチウイルス粒子は、２０００個のＧａｇ分子、または２つのウイルスＲＮＡ分子を含有するという仮定がなされる。全粒子数および形質導入力価／ＴＵが測定されたら、粒子：感染性比が計算される。本明細書では、アミノ酸は、アミノ酸の名称、三文字式略記法、または一文字式略記法を使用して言及される。

【0048】

本明細書で使用される、「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、隣接する残基のアルファ－アミノ基とカルボキシ基との間のペプチド結合により、互いへと接合される、一連のアミノ酸残基を指示するように、本明細書で互換的に用いられる。「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、そのサイズまたは機能に関わらず、修飾アミノ酸（例えば、リン酸化アミノ酸、糖化アミノ酸、グリコシル化アミノ酸など）およびアミノ酸類似体を含む、アミノ酸のポリマーを指す。「タンパク質」および「ポリペプチド」が、比較的大型のポリペプチドに言及して使用されることが多いのに対し、「ペプチド」という用語は、小型のポリペプチドに言及して使用されることが多いが、当技術分野では、これらの用語の使用は重複する。本明細書では、遺伝子産物およびその断片に言及する場合、「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、互換的に使用される。したがって、例示的なポリペプチドまたはタンパク質は、遺伝子産物、天然に存在するタンパク質、相同体、オーソログ、パラログ、断片、および他の同等物、変異体、断片、ならびに前出の類似体を含む。

【0049】

本明細書で使用される、「ポリヌクレオチド」、「核酸」、および「核酸配列」という用語は、リボ核酸、デオキシリボ核酸、またはこれらの類似体の単位を組み込む、任意の分子、好ましくは、ポリマー分子を指す。核酸は、一本鎖の場合もあり、二本鎖の場合もある。一本鎖核酸は、変性二本鎖ＤＮＡのうちの、一方の核酸鎖でありうる。代替的に、核酸は、二本鎖ＤＮＡに由来しない、一本鎖核酸でありうる。一態様では、核酸は、ＤＮＡでありうる。別の態様では、核酸は、ＲＮＡでありうる。適切な核酸分子は、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを含むＤＮＡである。他の適切な核酸分子は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＲＮＡである。「トランス遺伝子」および「遺伝子」という用語もまた、互換的に使用され、いずれの用語も、標的タンパク質をコードする、その断片または変異体を包含する。

【0050】

本発明のトランス遺伝子は、それらの天然に存在する環境から取り出された核酸配列、組換えまたはクローニングされた、ＤＮＡ単離物、化学合成された類似体、または異種系により生体合成された類似体を含む。

【0051】

本発明のアミノ酸配列内の、微細な変異は、アミノ酸配列（複数可）内の変異が、本明細書の任意の箇所において規定される、本発明のアミノ酸配列またはその断片に対する、少なくとも６０％、少なくとも７０％、より好ましくは、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を維持し、最も好ましくは、少なくとも９７％、または少なくとも９９％の配列同一性を維持することを条件として、本発明により包含される変異として想定される。本明細書では、「相同性」という用語は、「同一性」を意味するように使用される。このように、本発明のアミノ酸配列の変異体配列または類似体配列は、置換（典型的に、保存的置換）、欠失、または挿入に基づき異なりうる。本明細書では、このような変異を含むタンパク質は、「変異体」と称される。

【0052】

本発明のタンパク質は、１つの種に由来するアミノ酸残基が、保存的位置または非保存的位置において、別の種における、対応する残基で置換された変異体を含みうる。本明細書で開示されるタンパク質分子の変異体は、本発明において、作製および使用される。多変量データ解析技法の、構造／特性－活性関係への適用における、計算化学の先例［例えば、Ｗｏｌｄら、「Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ－Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（編者：Ｂ．Ｋｏｗａｌｓｋｉ）；Ｄ．Ｒｅｉｄｅｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ、Ｈｏｌｌａｎｄ、１９８４（ＩＳＢＮ ９０－２７７－１８４６－６）を参照されたい］に従い、タンパク質の定量的活性－特性関係は、統計学的回帰、パターン認識およびパターン分類など、周知の数学的技法［例えば、Ｎｏｒｍａｎら、「Ａｐｐｌｉｅｄ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ－ｌｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；３版（１９９８年４月）ＩＳＢＮ：０４７１１７０８２８；Ｋａｎｄｅｌ，Ａｂｒａｈａｍら、「Ｃｏｍｐｕｔｅｒ－Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅａｓｏｎｉｎｇ ｉｎ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ ＰＴＲ（１９９５年５月１１日）、ＩＳＢＮ：０１３３４１８８４７；Ｋｒｚａｎｏｗｓｋｉ，Ｗｏｊｔｅｋ、「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」（Ｏｘｆｏｒｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｅｒｉｅｓ、２２号（論文））、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；（２０００年１２月）、ＩＳＢＮ：０１９８５０７０８９；Ｗｉｔｔｅｎ，Ｉａｎ Ｈ．ら、「Ｄａｔａ Ｍｉｎｉｎｇ：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｌｅａｒｎｉｎｇ Ｔｏｏｌｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｗｉｔｈ Ｊａｖａ Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ」、Ｍｏｒｇａｎ Ｋａｕｆｍａｎｎ；（１９９９年１０月１１日）、ＩＳＢＮ：１５５８６０５５２５；Ｄｅｎｉｓｏｎ Ｄａｖｉｄ Ｇ．Ｔ．ら（編）、「Ｂａｙｅｓｉａｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｎｏｎｌｉｎｅａｒ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ」（Ｗｉｌｅｙ Ｓｅｒｉｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ；（２００２年７月）、ＩＳＢＮ：０４７１４９０３６９；Ｇｈｏｓｅ，Ａｒｕｐ Ｋ．ら、「Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｔｏｏｌｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」、ＩＳＢＮ：０－８２４７－０４８７－８を参照されたい］を使用して導出される。タンパク質の特性は、タンパク質配列、機能的構造、および三次元構造についての経験的／理論的モデル（例えば、接触する可能性が高い残基についての解析、または物理化学的特性の計算）から導出され、これらの特性は、個別に、かつ、組み合わせて考えられる。

【0053】

本明細書では、アミノ酸は、アミノ酸の名称、三文字式略記法、または一文字式略記法を使用して言及される。本明細書で使用される、「タンパク質」という用語は、タンパク質、ポリペプチド、およびペプチドを含む。本明細書で使用される、「アミノ酸配列」という用語は、「ポリペプチド」という用語、および／または「タンパク質」という用語と同義である。一部の場合に、「アミノ酸配列」という用語は、「ペプチド」という用語と同義である。本明細書では、「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、互換的に使用される。本開示および特許請求の範囲では、アミノ酸残基についての、常套的な一文字コードおよび三文字コードが使用される。アミノ酸についての三文字コードは、ＩＵＰＡＣＩＵＢ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＪＣＢＮ）に準拠して規定される。遺伝子コードの縮重性のために、ポリペプチドは、１つを超えるヌクレオチド配列によりコードされることもまた理解される。

【0054】

非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的残基により置換されている場合もあり、非保存的残基により置換されている場合もある。特に、保存的なアミノ酸の置きかえが想定される。

【0055】

「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置きかえられる、アミノ酸置換である。当技術分野では、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーであって、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、またはヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、またはシステイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、またはトリプトファン）、ベータ－分枝状側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはヒスチジン）を含むファミリーが規定されている。したがって、ポリペプチド内のアミノ酸が、同じ側鎖ファミリーに由来する、別のアミノ酸で置きかえられる場合、アミノ酸置換は、保存的であると考えられる。保存的修飾変異体の、本発明のタンパク質への組入れは、変異体の他の形態、例えば、多型変異体、種間相同体、および対立遺伝子を除外しない。

【0056】

「非保存的アミノ酸置換」は、（ｉ）電気陽性側鎖（例えば、Ａｒｇ、ＨｉｓまたはＬｙｓ）を有する残基が、電気陰性残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）で、もしくはこれらにより置換されている置換、（ｉｉ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が、疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＶａｌ）で、もしくはこれらにより置換されている置換、（ｉｉｉ）システインまたはプロリンが、他の任意の残基で、もしくはこれらにより置換されている置換、または（ｉｖ）バルクの疎水性側鎖もしくは芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、またはＴｒｐ）が、小型側鎖を有する残基（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）、もしくは側鎖を有さない残基（例えば、Ｇｌｙ）で、もしくはこれらにより置換されている置換を含む。

【0057】

「挿入」または「欠失」は、典型的に、約１、２、または３アミノ酸の範囲内にある。可能とされる変異は、組換えＤＮＡ法を使用して、アミノ酸の挿入または欠失を、タンパク質内に、体系的に導入し、結果として得られる組換え変異体を、活性についてアッセイすることにより、実験的に決定される。これは、当業者に対して、規定以上の実験を要求しない。

【0058】

ポリペプチドの「断片」は、元のポリペプチドのうちの、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％またはそれ以上を含む。

【0059】

本発明のポリヌクレオチドは、当技術分野で公知である、任意の手段により製造される。例えば、大量のポリヌクレオチドは、適切な宿主細胞内の複製により作製される。所望の断片をコードする、天然または合成のＤＮＡ断片は、原核細胞または真核細胞への導入およびこれらにおける複製が可能である、組換え核酸構築物、典型的に、ＤＮＡ構築物へと組み込まれる。通例、ＤＮＡ構築物は、酵母または細菌など、単細胞宿主内の自家複製に適するであろうが、また、培養された昆虫細胞系、哺乳動物細胞系、植物細胞系、または他の真核細胞系のゲノム内への導入および組込みのためにも意図される。

【0060】

本発明のポリヌクレオチドはまた、化学合成、例えば、ホスホルアミダイト法またはトリエステル法によっても作製され、作製は、市販の自動式オリゴヌクレオチド合成器上で実施される。二本鎖断片は、相補性鎖を合成し、鎖を、適切な条件下で、併せてアニーリングすることにより、化学合成の一本鎖産物から得られる場合もあり、ＤＮＡポリメラーゼを、適切なプライマー配列と共に使用して、相補性鎖を添加することにより、化学合成の一本鎖産物から得られる場合もある。

【0061】

核酸配列へと適用された場合、本発明の文脈における、「単離された」という用語は、ポリヌクレオチド配列が、その天然の遺伝子環境から取り出されており、このため、他の外因性コード配列、または望ましくないコード配列を含まず（しかし、プロモーターおよびターミネーターなど、天然に存在する５’側非翻訳領域および３’側非翻訳領域は含みうる）、遺伝子操作タンパク質産生系内における使用に適する形態にあることを表示する。このような単離分子は、それらの天然環境から分離された分子である。

【0062】

遺伝子コードの縮重性を念頭に置くと、本発明のポリヌクレオチドの間では、かなりの配列変異が可能である。所与のアミノ酸のための、全ての可能なコドンを包含する縮重コドンは、下記に明示される：

【0063】

【表1】

【0064】

当業者は、各アミノ酸をコードする、全ての可能なコドンを表す、縮重コドンを決定する場合に、柔軟性が存在することを理解するであろう。例えば、縮重配列により包含される、一部のポリヌクレオチドは、変異体アミノ酸配列をコードしうるが、当業者は、本発明のアミノ酸配列への参照により、このような変異体配列を、容易に同定しうる。

【0065】

「変異体」核酸配列は、参照核酸配列（またはその断片）に対する、実質的な相同性または実質的な類似性を有する。他の核酸（またはその相補性鎖）と共に、最適にアライメントされた場合（適切なヌクレオチドの挿入または欠失を伴い）に、ヌクレオチド塩基のうちの、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％、またはそれ以上において、ヌクレオチド配列同一性が存在するならば、核酸配列またはその断片は、参照配列と「実質的に相同」（または「実質的に同一」）である。当技術分野では、核酸配列の相同性決定のための方法が公知である。

【0066】

代替的に、「変異体」配列と、参照配列とが、厳密な（例えば、高度に厳密な）ハイブリダイゼーション条件下で、ハイブリダイズすることが可能であるならば、「変異体」核酸配列は、参照配列（またはその断片）と、実質的に相同である（またはこれと実質的に同一である）。核酸配列のハイブリダイゼーションは、当業者によりたやすく理解される通り、塩基組成、相補性鎖の長さ、およびハイブリダイズする核酸間における、ヌクレオチド塩基ミスマッチの数に加えて、塩濃度（例えば、ＮａＣｌ）、温度、または有機溶媒などの条件の影響を受けるであろう。好ましくは、厳密な温度条件が利用され、一般に、３０℃を超え、典型的に、３７℃を超え、好ましくは、４５℃を超える温度を含む。厳密な塩条件は、通常、１０００ｍＭ未満、典型的に、５００ｍＭ未満であり、好ましくは、２００ｍＭ未満であろう。ｐＨは、典型的に、７．０～８．３の間である。パラメータの組合せは、任意の単一のパラメータより重要である。

【0067】

当技術分野では、核酸の配列同一性百分率を決定する方法が公知である。例を目的として述べると、核酸配列同一性について評価する場合、規定された数の連続ヌクレオチドを有する配列は、対応する本発明の核酸配列の一部に由来する核酸配列（同じ数の連続ヌクレオチドを有する）とアライメントされる。核酸の配列同一性百分率を決定するための、当技術分野で公知のツールは、ヌクレオチドＢＬＡＳＴ（下記で記載される）を含む。

【0068】

当業者は、異なる種が、「優先的コドン使用」を呈することを理解する。本明細書で使用される、「優先的コドン使用」という用語は、ある特定の種の細胞内で、最も高頻度に使用され、このため、各アミノ酸をコードする、可能なコドンを表す、１つまたは少数のコドンを優先するコドンを指す。例えば、アミノ酸であるトレオニン（Ｔｈｒ）は、ＡＣＡ、ＡＣＣ、ＡＣＧ、またはＡＣＴによりコードされるが、哺乳動物宿主細胞では、ＡＣＣが、最も一般に使用されるコドンであり；他の種では、異なるコドンが、優先的でありうる。特定の宿主細胞種のための優先的コドンは、当技術分野で公知の様々な方法により、本発明のポリヌクレオチドへと導入される。優先的コドン配列の、組換えＤＮＡへの導入は、例えば、特定の細胞型内または種におけるタンパク質の翻訳を、より効率的とすることにより、タンパク質の産生を増強する。したがって、本発明に従い、ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子に加えて、任意の核酸配列が、宿主細胞内または標的細胞内における発現のために、コドン最適化される。特に、ベクターゲノム（または対応するプラスミド）、ＲＥＶ遺伝子（または対応するプラスミド）、融合タンパク質（Ｆ）遺伝子（または対応するプラスミド）、および／もしくはヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）遺伝子（または対応するプラスミド）、またはこれらの任意の組合せが、コドン最適化される。

【0069】

目的のポリヌクレオチドの「断片」は、前記全長ポリヌクレオチドの配列に由来する、一連の連続ヌクレオチドを含む。例を目的として述べると、目的のポリヌクレオチドの「断片」は、前記ポリヌクレオチドの配列に由来する、少なくとも３０の連続ヌクレオチド（例えば、前記ポリヌクレオチドのうちの、少なくとも３５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１０００の連続核酸残基）を含みうる（またはこれらからなる）。断片は、少なくとも１つの抗原決定基を含む場合もあり、かつ／または対応する目的のポリペプチドの、少なくとも１つの抗原エピトープをコードする場合もある。典型的に、本明細書で規定される断片は、全長ポリヌクレオチドと同じ機能を保持する。

【0070】

本明細書では、「～を低下させる」、「低減された」、「低減」、または「～を阻害する」という用語は全て、統計学的に有意な量低下させることを意味するように使用される。「～を低減する」、「低減」、または「～を低下させる」、または「～を阻害する」という用語は、典型的に、参照レベル（例えば、所与の処置の非存在）と比較して、少なくとも１０％の低下を意味し、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％またはそれ以上の低下を含みうる。本明細書で使用される、「低減」または「阻害」は、参照レベルと比較した、完全な阻害または低減を包含する。「完全な阻害」とは、参照レベルと比較した、１００％の阻害（すなわち、失効）である。

【0071】

本明細書では、「増大した」、「～を増大させる」、「～を増強する」、または「～を活性化させる」という用語は全て、統計学的に有意な量増大させることを意味するように使用される。「増大した」、「～を増大させる」、「～を増強する」、または「～を活性化させる」という用語は、参照レベルと比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％の増大、例えば、参照レベルと比較して、少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約７５％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約１００％、もしくは少なくとも約１５０％、もしくは少なくとも約２００％、もしくは少なくとも約２５０％またはそれ以上の増大、または少なくとも約１．５倍、もしくは少なくとも約２倍、もしくは少なくとも約２．５倍、もしくは少なくとも約３倍、もしくは少なくとも約４倍、もしくは少なくとも約５倍、もしくは少なくとも約１０倍の増大、または参照レベルと比較して１．５倍～１０倍以上の間の任意の増大を意味しうる。収量または力価の文脈では、「～を増大させる」とは、このようなレベルの、観察可能な増大、または統計学的に有意な増大である。

【0072】

本明細書で使用される、「シグナルペプチド」、「シグナル配列」、「ターゲティング配列」、「リーダー配列」、および「分泌型シグナル」という用語は、分泌工程の誘発において有益な分泌型タンパク質のＮ末端において見出される、異種ペプチド配列を意味するように、互換的に使用される。特に、シグナルペプチドは、小胞体へとターゲティングされ、最終的に、細胞の細胞膜内で、特に、１回膜貫通タンパク質として分泌されるか、または保持されるように方向付けられたタンパク質内で見出される。シグナルペプチドは、典型的に、タンパク質の成熟形態を産生するために除去される。シグナルペプチドは、典型的に、約５～約３５、または約１０～約３５アミノ酸の長さ、好ましくは、約１０～約３０または約１５～約３０アミノ酸の長さなど、約５～約４０アミノ酸の長さである、通常、短鎖ペプチドである。シグナルペプチドは、疎水性アミノ酸のコアを含むことが可能であり、前記コアは、典型的に、約５～約２０、約５～約１６または約５～約１５アミノ酸の長さなど、約４～約２０アミノ酸の長さである。存在する場合、シグナルペプチドは、典型的に、タンパク質のＮ末端に存在する。

【0073】

本明細書では、「個体」、「対象」、および「患者」という用語は、診断、予後診断、疾患のモニタリング、処置、治療、および／または治療の最適化が所望される哺乳動物対象を指すように、互換的に使用される。哺乳動物は、（限定せずに述べると）ヒト、非ヒト霊長動物、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシでありうる。好ましい実施形態では、個体、対象、または患者は、ヒトである。「個体」は、成人、若年者、または幼児でありうる。「個体」は、男性の場合もあり、女性の場合もある。

【0074】

特定の状態のための処置「を必要とする対象」は、この状態を有し、この状態を有するか、またはこの状態を発症する危険性があると診断された個体でありうる。

【0075】

対象は、処置を必要とする状態、またはこのような状態と関連する、１つもしくはそれ以上の合併症もしくは症状を伴うと、既に診断されるか、またはこれを患うか、もしくはこれを有すると同定され、場合により、本明細書で規定される状態、または前記状態と関連する、１つもしくはそれ以上の合併症もしくは症状のための処置を、既に受けた対象でありうる。代替的に、対象はまた、本明細書で規定される状態、または前記状態と関連する、１つもしくはそれ以上の症状もしくは合併症を有すると、未だ診断されていない対象でもありうる。例えば、対象は、状態、または前記状態と関連する、１つもしくはそれ以上の症状もしくは合併症についての、１つまたはそれ以上の危険性因子を呈する対象の場合もあり、危険性因子を呈さない対象の場合もある。

【0076】

本明細書で使用される、「健常個体」という用語は、健常状態にある個体または個体の群、例えば、疾患の症状を示しておらず、疾患を伴うと診断されておらず、かつ／または疾患、例えば、嚢胞性線維症（ＣＦ）、もしくは本明細書で記載される、他の任意の疾患を発症する可能性が高くない個体を指す。好ましくは、前記健常個体（複数可）は、ＣＦに影響を及ぼす投薬を施されておらず、他の疾患を伴うと診断されていない。１つまたはそれ以上の健常個体は、被験個体と比較して、同様の性別、年齢、および／または体格指数（ＢＭＩ）を有しうる。医学において使用される、標準的統計学法の適用は、健常個体における通常の発現レベル、およびこのような通常レベルからの有意な偏差の決定を可能とする。

【0077】

本明細書では、「対照」および「参照集団」という用語は、互換的に使用される。

【0078】

本明細書で使用される、「薬学的に許容される」という用語は、米国連邦政府もしくは米国州政府の規制機関により承認されるか、または米国薬局方、欧州薬局方、もしくは他の一般に認知された薬局方において収載されていることを意味する。

【0079】

本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日の前における、それらの開示だけについて提示される。本明細書におけるいかなる内容も、このような刊行物が、本明細書に付属の特許請求の範囲に対する先行技術を構成することの容認として理解されるべきではない。

【0080】

本発明の多様な方法と関連する開示は、他の方法、治療的使用、もしくは治療法、データ保存媒体、またはデバイス、コンピュータプログラム製品へも、同等に適用されることが意図され、この逆も成り立つ。

【0081】

レンチウイルスベクター
本発明は、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質で偽型化された、レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターに関する。「レンチウイルス」という用語は、酵素である逆転写酵素をコードするＲＮＡウイルスのうちの、レトロウイルス科の属を指す。

【0082】

本発明における使用に適するレンチウイルスの例は、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、およびビスナ／マエディウイルスを含む。特に、好ましいレンチウイルスベクターは、ＳＩＶ－ＡＧＭ（元来、ミドリザル（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｕｓ ａｅｔｈｉｏｐｓ）である、アフリカグリーンモンキーから単離された）など、ＨＩＶベクター（全ての株および亜型を含む）、またはＳＩＶベクター（全ての株および亜型を含む）である。

【0083】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、本明細書で記載される、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化される。したがって、本発明の偽型化レンチウイルスベクターは、Ｓ－ＬＶベクターと互換的に言及される場合がある。

【0084】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、プロモーターに作動可能に連結されたトランス遺伝子を含む。トランス遺伝子は、本明細書で記載される、治療用タンパク質をコードしうる。治療用タンパク質が、分泌型タンパク質である実施形態では、治療用タンパク質は、シグナルペプチドを含みうるか、またはこれらと関連しうる。トランス遺伝子は、シグナルペプチドをコードする核酸配列（分泌型タンパク質の内因性シグナルペプチドなど）を含む場合もあり、シグナルペプチドをコードする核酸配列を除外する場合もある。治療用タンパク質は、シグナルペプチド（分泌型タンパク質の内因性シグナルペプチドなど）を含む場合もあり、シグナルペプチドを除外する場合もある。適切な場合、内因性シグナルペプチドは、本明細書の配列情報節内で同定されている。本明細書における、全ての開示は、そうでないことが明示的に言明されない限りにおいて、シグナルペプチドを含むトランス遺伝子および治療用タンパク質、ならびにシグナルペプチドを除外するトランス遺伝子および治療用タンパク質の両方に関する。非限定例を目的として述べると、変異体の配列同一性、および／または断片の長さは、シグナルペプチドを伴う配列に基づく場合もあり、これを伴わない配列に基づく場合もある。当技術分野では、適切なシグナルペプチドが公知であり、当業者により、規定の慣行により選択される。適切なシグナルペプチドの非限定例については、参照によって、その全体において本明細書に組み入れる、英国特許出願第２１０５２７７．４号において記載されている。

【0085】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、イントロンが、プロモーターと、シグナルペプチドをコードする核酸および／または治療用タンパク質をコードする核酸との間に配置されない場合がある。同様に、ベクターゲノムプラスミド内の、プロモーターと、シグナルペプチドをコードする核酸および／または治療用タンパク質をコードする核酸との間に、イントロンが存在しない場合がある。

【0086】

本発明に従うレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、インテグラーゼ－コンピテント（ＩＣ）ベクターでありうる。代替的に、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、インテグラーゼ欠損（ＩＤ）ベクターでありうる。

【0087】

本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターは、ｃＰＰＴ（ｃｅｎｔｒａｌ ｐｏｌｙｐｕｒｉｎｅ ｔｒａｃｔ）、および／またはウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を含みうる。例示的なＷＰＲＥ配列は、配列番号４６により提示される。

【0088】

本発明に従うレンチウイルスベクターなどのレンチウイルスベクターは、形質導入細胞のゲノムへと組み込まれ、長期持続性発現をもたらし、したがって、幹細胞／前駆細胞への形質導入に適するレンチウイルスベクターである。肺内では、再生能力を伴う、誘導気道内および肺胞内において、特異的細胞系統を維持するための一因となる、いくつかの細胞型が同定されている。これらは、上気道内の基底細胞および粘膜下腺管細胞、気管支気道内のクラブ細胞および神経内分泌細胞、末端細気管支内の気管支肺胞幹細胞、および肺胞内のＩＩ型肺胞上皮細胞を含む。したがって、かつ、理論に束縛されずに述べると、前記レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、トランス遺伝子を、上気道内の基底細胞および粘膜下腺管細胞、気管支気道内のクラブ細胞および神経内分泌細胞、末端細気管支内の気管支肺胞幹細胞、および肺胞内のＩＩ型肺胞上皮細胞など、１つまたはそれ以上の長寿命の気道上皮細胞または気道上皮細胞型へと導入することにより、目的のトランス遺伝子の、長期にわたる遺伝子発現を引き起こすと考えられる。

【0089】

したがって、本発明に従い作製されるレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、長期にわたる遺伝子発現を達成するように、肺（気道および呼吸器を含む）内に、潜在的再生力を伴う、１つまたはそれ以上の細胞または細胞系へと形質導入しうる。例えば、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、上気道／呼吸器内の基底細胞などの基底細胞へと形質導入しうる。基底細胞は、上皮の維持過程、および損傷後における修復過程において、中心的役割を有する。加えて、基底細胞は、ヒト呼吸器上皮に沿って、広く分布し、相対分布は、３０％（大気道）～６％（小気道）の範囲である。

【0090】

本発明に従うレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、患者への投与の前に、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて単離および拡大された幹細胞／前駆細胞へと形質導入するのに使用される。好ましくは、本発明に従い作製されるレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏの肺（または気道／呼吸器）内の細胞へと形質導入するのに使用される。

【0091】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、気管支鏡、スプレーボトル、および噴霧器など、臨床的に妥当な送達デバイス内を通過させた場合に、形質導入能の低減を軽微にとどめながら、せん断力に対する、目覚ましい耐性を示す。

【0092】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターが偽型化される、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、本明細書で記載される、齧歯動物／マウス馴化改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質である。したがって、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターが偽型化される、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ベクターが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、およびｉｎ ｖｉｖｏにおいて、齧歯動物細胞へと形質導入することを可能とする。特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターが偽型化される、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ベクターが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、およびｉｎ ｖｉｖｏにおいて、マウス細胞へと形質導入することを可能とする。これは、本発明のレンチウイルスベクターを、前臨床調査研究を含む調査研究のために、特に、有用とし、本発明のレンチウイルスベクターは、齧歯動物（特に、マウス）細胞系および動物モデルと共に使用される。これに対し、野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、齧歯動物細胞への侵入を容易とすることが可能ではない。したがって、本発明の偽型化レンチウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、およびｉｎ ｖｉｖｏにおいて、齧歯動物細胞、特に、マウス細胞へと形質導入することが可能である。

【0093】

加えて、かつ、本明細書で記載される通り、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターが偽型化される、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、典型的に、ヒトＡＣＥに結合することが可能である。したがって、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターが偽型化される、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ベクターが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、およびｉｎ ｖｉｖｏにおいて、ヒト細胞へと形質導入することを可能とする。齧歯動物／マウス細胞およびヒト細胞の両方へと形質導入する能力は、本発明のベクターが、前臨床調査研究を含む調査研究、ならびに臨床調査研究および臨床適用のいずれにおいてもまた使用されることを可能とするので、有利である。

【0094】

典型的に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、宿主細胞内で発現されるトランス遺伝子を含む。トランス遺伝子は、治療用タンパク質またはレポータータンパク質など、任意の目的のタンパク質をコードしうる。典型的に、トランス遺伝子は、本明細書で記載されるプロモーターに作動可能に連結されている。

【0095】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、高レベル（治療的レベル）の治療用タンパク質の発現を結果としてもたらす、高レベルのトランス遺伝子発現を可能とする。本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、典型的に、患者へと投与されると、高発現レベルのトランス遺伝子をもたらす。本明細書では、「高度の発現」および「治療的発現」という用語は、互換的に使用される。発現は、任意の適切な方法（定性的方法または定量的方法、好ましくは、定量的方法）により測定され、濃度は、任意の適切な測定単位、例えば、ｎｇ／ｍｌ単位またはｎＭ単位で与えられる。

【0096】

目的のトランス遺伝子の発現は、患者における対応する内因性（欠損）遺伝子の発現と比べて与えられる。発現は、ｍＲＮＡの発現に関して測定される場合もあり、タンパク質の発現に関して測定される場合もある。本発明のトランス遺伝子の発現は、内因性遺伝子と比べて定量される。非限定例を目的として述べると、本発明のレンチウイルスベクター内に含まれるトランス遺伝子が、機能的ＣＦＴＲ遺伝子である場合、トランス遺伝子の発現は、細胞１個当たりのｍＲＮＡコピー数、または他の任意の適切な単位に関して、内因性（機能不全）ＣＦＴＲ遺伝子と比べた発現でありうる。

【0097】

対象へと投与される場合、本発明のトランス遺伝子および／またはコードされる（治療用）タンパク質の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける発現レベルは、該当する場合、肺組織内、上皮被覆液中、および／または血清／血漿中で測定される。したがって、高発現レベルおよび／または治療用発現レベルとは、肺内、上皮被覆液中、および／または血清／血漿中の濃度を指す場合がある。

【0098】

ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏにおいて使用される場合、本発明のトランス遺伝子および／またはコードされる（治療用）タンパク質の発現レベルは、馴化培養培地中で測定される場合もあり、細胞内（例えば、細胞の溶解物中）で測定される場合もある。

【0099】

本発明のベクター内に含まれたトランス遺伝子は、発現を容易とするように改変される。例えば、トランス遺伝子の配列は、遺伝子発現を容易とするように、ＣｐＧ枯渇（またはＣｐＧ非含有）形態にある場合もあり、かつ／またはコドン最適化形態にある場合もある。当技術分野では、このようにして、トランス遺伝子の配列を改変するための標準的技法が公知である。

【0100】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、気道細胞への効率的な取込み、トランス遺伝子発現の増強を呈し、反復投与時に、効能の喪失を被らない。したがって、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、不要な免疫応答を誘導せずに、気道細胞内における、長期持続性であり、反復可能であり、高レベルの発現をもたらすことが可能である。

【0101】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、治療用タンパク質の長期的発現を結果としてもたらす、長期的なトランス遺伝子の発現を可能とする。本明細書で記載される、「長期的発現」、「持続的発現」、「長期持続的発現」、および「持続的発現」という語句は、互換的に使用される。本発明に従う長期的発現とは、（治療用）遺伝子および／またはタンパク質の、好ましくは、治療レベルにおける、少なくとも４５日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、少なくとも１２０日間、少なくとも１８０日間、少なくとも２５０日間、少なくとも３６０日間、少なくとも４５０日間、少なくとも７３０日間またはそれ以上にわたる発現を意味する。好ましくは、長期的発現とは、少なくとも９０日間、少なくとも１２０日間、少なくとも１８０日間、少なくとも２５０日間、少なくとも３６０日間、少なくとも４５０日間、少なくとも７２０日間またはそれ以上、より好ましくは、少なくとも３６０日間、少なくとも４５０日間、少なくとも７２０日間またはそれ以上にわたる発現を意味する。この長期的発現は、反復投与により達成される場合もあり、単回投与により達成される場合もある。

【0102】

反復投与は、毎日２回、毎日、毎週２回、毎週、毎月、２カ月ごと、３カ月ごと、４カ月ごと、６カ月ごと、毎年、２年またはそれ以上ごとに投与される。投与は、要求される限りの期間にわたり、例えば、少なくとも６カ月間、少なくとも１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間、１５年間、２０年間またはそれ以上にわたり、最長で、処置される患者の生涯にわたり（ｉｎ ｖｉｖｏにおける適用のために）、または実験の時間経過にわたり（ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏにおける適用のために）継続される。

【0103】

レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、典型的に、トランス遺伝子の発現を可能とする、トランス遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターを含む。プロモーターは、ハイブリッドヒトＣＭＶエンハンサー／ＥＦ１ａ（ｈＣＥＦ）プロモーターでありうる。このｈＣＥＦプロモーターは、ｈＣＥＦプロモーターの、ヌクレオチド５７０～７０９に対応するイントロン、およびヌクレオチド７２８～７３３に対応するエクソンを欠く場合がある。本発明のｈＣＥＦプロモーター配列の好ましい例は、配列番号４３により提示される。プロモーターは、ＣＭＶプロモーターでありうる。ＣＭＶプロモーター配列の例は、配列番号４４により提示される。プロモーターは、ヒト伸張因子１ａ（ＥＦ１ａ）プロモーターでありうる。ＥＦ１ａプロモーターの例は、配列番号４５により提示される。当技術分野では、トランス遺伝子発現のための、他のプロモーターも公知であり、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターに対する、それらの適性は、当技術分野で公知の規定の技法を使用して決定される。他のプロモーターの非限定例は、ＵｂＣおよびＵＣＯＥを含む。本明細書で記載される通り、プロモーターは、本発明のトランス遺伝子の発現をさらに調節するように改変される。

【0104】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクター内に含まれるプロモーターは、治療用遺伝子の発現の調節をさらに精緻化するように、特異的に選択および／または改変される。ここでもまた、適切なプロモーター、およびこれらの改変のための標準的技法は、当技術分野で公知である。非限定例として述べると、本発明における使用に適する、多数の適切な（ＣｐＧ非含有）プロモーターについては、参照によって、その全体において本明細書に組み入れる、Ｐｒｉｎｇｌｅら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｂｅｒｌ．、２０１２、９０（１２）：１４８７～９６）において記載されている。好ましくは、本発明のレンチウイルスベクター（特に、ＳＩＶベクター）は、ＣｐＧジヌクレオチド含量が小さいか、またはＣｐＧジヌクレオチドを含有しない、ｈＣＥＦプロモーターを含む。ｈＣＥＦプロモーターは、全てのＣＧジヌクレオチドが、ＡＧ、ＴＧ、またはＧＴのうちのいずれか１つで置きかえられる場合がある。したがって、ｈＣＥＦプロモーターは、ＣｐＧ非含有でありうる。本発明のＣｐＧ非含有ｈＣＥＦプロモーター配列の好ましい例は、配列番号４３により提示される。ＣｐＧジヌクレオチドの非存在は、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの性能を、さらに改善し、発現された抗原に対する免疫応答、または送達された発現構築物に対する炎症性応答を誘導することが所望されない状況下では、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの性能を、さらに改善する。ＣｐＧジヌクレオチドの消失は、特に、気道へと投与される場合に、構築物の投与から生じうる、風邪様症状および炎症の発生を軽減する。

【0105】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、遺伝子発現の停止を可能とするように改変される。当技術分野では、ベクターを、このようにして改変するための標準的技法が公知である。非限定例として述べると、Ｔｅｔ応答性プロモーターが、広く使用される。

【0106】

好ましくは、本発明は、プロモーターおよびトランス遺伝子を含むレンチウイルスベクター、特に、ＨＩＶ／ＳＩＶベクターに関する。本発明に従う改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質による偽型化は、特に、気道上皮内の細胞のターゲティングにおいて効率的であり、そのようなものとして、治療適用のために、典型的に、気道上皮の細胞を含む、呼吸器の細胞へと送達される。したがって、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、気道、呼吸器、または肺の疾患または障害の処置に、特に、適する。典型的に、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、遺伝性呼吸器疾患の処置のために使用される。

【0107】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、このような疾患、特に、気道、呼吸器、または肺の疾患または障害の処置のために治療的である、ポリペプチドまたはタンパク質をコードするトランス遺伝子を含みうる。

【0108】

本発明はまた、標的細胞内で、トランス遺伝子を発現させる方法であって、本明細書で規定される医薬組成物またはベクターを、標的細胞へと送達する工程を含む方法も提供する。前記送達する工程は、医薬組成物のレンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターを、標的細胞のゲノムへと組み込む工程を含みうる。

【0109】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（本明細書および当技術分野ではまた、互換的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質とも称される）は、Ｓ１サブユニットおよびＳ２サブユニットから構成される、クラスＩ融合膜貫通型構造糖タンパク質である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の構造は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの出現およびＣＯＶＩＤ－１９によるパンデミック以来、集中的な調査研究の対象となっている。このため、例えば、Ａｌｍｅｈｄｉら（参照によってその全体において本明細書に組み入れる、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ、２０２１、ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１５０１０－０２１－０１６７７－８）に記載されている通り、当技術分野では、その構造および機能の詳細について周知である。略述すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、サイズが１８０～２００ｋＤａとし、全長を１２７３～１３００アミノ酸の間である、ホモ三量体である。

【0110】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクは、シグナルペプチド（アミノ酸残基１～１３）、および２つの機能的サブユニットである、Ｓ１サブユニットおよびＳ２サブユニットを含む。Ｓ１サブユニットは、Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）および受容体結合性ドメイン（ＲＢＤ）を含む。Ｓ２サブユニットは、融合ペプチド（ＦＰ）、ヘプタッドリピート１（ＨＲ１）、中央ヘリックス（ＣＨ）、コネクタードメイン（ＣＤ）、ヘプタッドリピート２（ＨＲ２）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、および細胞質テール（ＣＴ）を含む。Ｓ１サブユニットの機能は、標的細胞上の受容体（ＡＣＥ２）に結合することである。Ｓ２サブユニットは、ウイルスの膜と、標的細胞の膜とを融合させ、これにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス粒子の、標的細胞への侵入を容易とするように機能する。Ｓ１サブユニットと、Ｓ２サブユニットとの境界部には、Ｓ１／Ｓ２プロテアーゼ切断部位と称される切断部位が存在する。全てのコロナウイルスについて述べると、標的細胞内のプロテアーゼは、Ｓ２’切断部位において、スパイクタンパク質を切断して、不可逆的コンフォメーション変化を介して、ウイルスの膜と、標的細胞の膜とを融合させるのに、極めて重要であるタンパク質を活性化させる。

【0111】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの表面から突出し、ここで、標的細胞の表面上において、ヒトアンジオテンシン転換酵素２（ＡＣＥ２）受容体を認識し、これに結合することが可能である。ＡＣＥ２は、大半の臓器内の、特異的細胞型内において見出される。例えば、ＡＣＥ２は、肺のＩＩ型肺胞上皮（ＡＴＩＩ）細胞、小腸の腸細胞、動脈／静脈内皮細胞、脳内のグリア細胞および皮質ニューロンにおいて豊富である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型化レンチウイルスベクターは、このような細胞を、効率的にターゲティングすることが、妥当に仮定される。

【0112】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞内侵入は、ウイルススパイクタンパク質の、ＡＣＥ２への結合、ＴＭＰＲＳＳ２（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｅｒｉｎｅ ２）によるスパイクタンパク質の切断により相乗作用化された相互作用に依拠する。ヒトＴＭＰＲＳＳ２についての配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号：Ｏ１５３９３（２０２１年１０月１日にアクセスされた、ｖｅｒｓｉｏｎ ３の配列）下で寄託されている。

【0113】

しかし、現在同定されている、野生で見出される、全てのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２天然変異株スパイクタンパク質は、ヒトＡＣＥ２には結合するが、齧歯動物相同体には結合しない。特に、現在同定されている、天然のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株は、マウスＡＣＥ２に結合しない。齧歯動物細胞系および齧歯動物モデルなど、標準的調査研究ツールの使用が可能でないため、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ならびにＣＯＶＩＤ－１９に対する潜在的処置およびワクチンについて調査研究する場合に、これは、技術的障害を表す。むしろ、ヒト細胞／組織だけを使用して、探索を実行する（これは、前臨床試験の費用を増大させ、その範囲を制限する）か、なおまたは齧歯動物馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を開発する（これもまた、調査研究の費用および複雑さを増大させる）ことが必要である。

【0114】

この目的のために、マウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の作出に向けて、ある程度の研究が行われている。しかし、現在までのところ、この研究の主要な焦点は、ＳＡＲＳ－Ｃｏ－Ｖ２に対する調査研究、ならびにＣＯＶＩＤ－１９のための処置およびワクチンに対する調査研究において使用されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス変異株を作出することであった。現在までのところ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と関連して、世界的に行われつつある、全ての調査研究にもかかわらず、ＣＯＶＩＤ－１９を越えて、調査研究／治療目的で、マウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を利用して、ウイルスベクターを偽型化しようとする試みはなされていない。

【0115】

本発明者らは、改変マウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質で偽型化されたレンチウイルスベクターを開発する、最初の発明者である。したがって、本発明は、本明細書で記載される、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のほか、前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化された、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを提供する。

【0116】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、任意のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に由来しうる。「～に由来する」とは、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、それが由来する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と比較して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、またはそれ以上の修飾など、１つまたはそれ以上の修飾を含みうることを意味する。

【0117】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、任意のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株のスパイクタンパク質または変異体に由来しうる。例えば、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株、Ｂ．１．１．５２９（オミクロン変異株）、Ｂ．１．３５１株（ベータ変異株）、Ｐ．１株（ガンマ変異株）、Ｂ．１．６１７．２株（デルタ変異株）、Ｂ．１．６２１株（ミュー変異株）、Ｃ．３７株（ラムダ変異株）、Ｂ．１．６２０株、Ｂ．１．１．７株（アルファ変異株）、Ｂ．１．４２７株またはＢ．１．４２９株（イプシロン変異株）、Ｂ．１．５２５株（エータ変異株）、Ｂ．１．５２６株（イオタ変異株）、Ｂ．１．６１７株（カッパ変異株）、Ｇ６１４株、Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０（Ａｕｓ／ＶＩＣ０１）株、Ｂ．１．１．５２９株（オミクロン変異株）、もしくはこれらの任意の亜株／亜系統、またはこれらのＳＡＲＳ－Ｃｏ－Ｖ－２スパイクタンパク質のうちのいずれか１つに対する、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくはこれらを超える配列同一性を有する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のうちのいずれか１つのスパイクタンパク質に由来しうる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＷｕｈａｎ－Ｈｕ－１株のスパイクタンパク質は、本明細書における配列番号１である。非限定例を目的として述べると、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号１に対する、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％またはそれ以上の配列同一性を有するスパイクタンパク質に由来しうる。

【0118】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、典型的に、配列番号１の１つまたはそれ以上の特異的アミノ酸位置に対応するか、またはこれとアライメントする、１つまたはそれ以上のアミノ酸位置における修飾を含む。改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、配列番号１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質以外のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に由来する場合、当業者は、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が由来する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、対応するアミノ酸位置を決定することが、たやすくできるであろう。非限定例を目的として述べると、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が由来する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、利用可能なアライメントツール（本明細書で記載されるＢＬＡＳＴツールなど）をたやすく使用して、配列番号１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質とアライメントされる。次いで、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が導出され、配列番号１内で同定される残基（例えば、配列番号１の残基４９８、４９９、６１４）とアライメントする／これに対応する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内のアミノ酸残基は、アライメントを使用して、たやすく同定される。

【0119】

本発明に従うアミノ酸修飾は、関連する開示が、そうでないことを明示的に言明しない限りにおいて、置換、欠失、添加、または翻訳後修飾を含む他の修飾などの突然変異でありうる。好ましくは、前記修飾は、アミノ酸置換である。言い換えれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、指定された位置におけるアミノ酸は、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が由来する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、この位置に存在するアミノ酸と異なる、天然に存在するアミノ酸または天然に存在しないアミノ酸により置換されている。代替的に、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、指定された位置におけるアミノ酸は、翻訳後において修飾される。翻訳後修飾は、グリコシル化、アセチル化、アシル化、脱アミノ化、リン酸化、イソプレニル化、グリコシルホスファチジルイノシトール化、および当業者に公知のさらなる修飾を含む。

【0120】

本明細書で記載される、１つまたはそれ以上のアミノ酸位置の修飾は、例えば、特異的突然変異誘発、または当技術分野で公知である、他の任意の方法により実施される。

【0121】

１つまたはそれ以上のアミノ酸位置が、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が由来する、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と比べて置換されている場合、置換は、保存的置換の場合もあり、非保存的置換の場合もあり、好ましくは、非保存的置換でありうる。

【0122】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、典型的に、配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれとアライメントする、各アミノ酸位置における修飾を含む。典型的に、配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４、またはこれらの任意の組合せに対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置のうちの１つまたはそれ以上における修飾は、突然変異、好ましくは、置換である。一部の、特に好ましい実施形態では、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれとアライメントする、各アミノ酸位置における置換を含む。

【0123】

配列番号１のアミノ酸位置４９８に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、チロシン残基またはヒスチジン残基により置換されている。

【0124】

配列番号１のアミノ酸位置４９９に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、トレオニン残基により置換されている。

【0125】

配列番号１のアミノ酸位置６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基により置換されている。

【0126】

これらの置換の任意の組合せは、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に含まれる。例えば、（ｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、チロシン残基により置換されている場合があり、配列番号１のアミノ酸位置４９９に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、トレオニン残基により置換されているか；（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、チロシン残基により置換されている場合があり、配列番号１のアミノ酸位置６１４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基により置換されているか；（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９９に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、トレオニン残基により置換されている場合があり、配列番号１のアミノ酸位置６１４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基により置換されているか；または（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸位置４９８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、チロシン残基により置換されている場合があり、配列番号１のアミノ酸位置４９９に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、トレオニン残基により置換されている場合があり、配列番号１のアミノ酸位置６１４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基により置換されている。好ましくは、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれらとアライメントする各アミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、この場合、配列番号１のアミノ酸位置４９８に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、チロシン残基により置換され、配列番号１のアミノ酸位置４９９に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、トレオニン残基により置換され、配列番号１のアミノ酸位置６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基により置換されている。

【0127】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、突然変異である、（ｉ）Ｑ４９８Ｙ；（ｉｉ）Ｐ４９９Ｔ；もしくは（ｉｉｉ）Ｄ６１４Ｇ；またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたはそれ以上を含みうる。本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、突然変異であるＱ４９８ＹおよびＰ４９９Ｔ、突然変異であるＱ４９８ＹおよびＤ６１４Ｇ、突然変異であるＰ４９９ＴおよびＤ６１４ＧまたはＱ４９８Ｙ、Ｐ４９９Ｔ、およびＤ６１４Ｇを含みうる。

【0128】

本発明はまた、（ａ）配列番号１の６１４位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；（ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失；ならびに（ｃ）（ｉ）配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異；ならびに／または（ｉｉ）配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異を含む、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質も提供する。疑念の回避のために述べると、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と関連する、本明細書における全ての開示は、前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に、同等に、かつ、留保なしに当てはまる。非限定例を目的として述べると、前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、本明細書で記載される、１つもしくはそれ以上のさらなる突然変異を含む場合があり、かつ／または細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失は、本明細書で記載される欠失でありうる。

【0129】

本発明者らは、マウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターの作出に成功した、最初の発明者である。したがって、本発明は、マウスＡＣＥ２を介して、細胞への侵入を可能とする、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内における、１つまたはそれ以上の突然変異を含む、レンチウイルスベクターを提供する。したがって、本発明はまた、（ａ）配列番号１のアミノ酸位置４９８および４９９に対応するか、またはこれとアライメントする、各アミノ酸位置における修飾；ならびに（ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失を含む、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質も提供する。前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、本明細書で記載される、１つまたはそれ以上のさらなる突然変異を含みうる。非限定例を目的として述べると、前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、本明細書で記載される、１つもしくはそれ以上のさらなる突然変異を含む場合があり、かつ／または細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失は、本明細書で記載される欠失でありうる。

【0130】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、突然変異、典型的に、配列番号１のアミノ酸位置４９８もしくは４９９に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における突然変異の代わりに、または配列番号１のアミノ酸位置４９８および／もしくは４９９に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における突然変異に加えて、配列番号１のアミノ酸位置４９３に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換を含みうる。配列番号１のアミノ酸位置４９３に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、リシン残基により置換されている場合がある。配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および／もしくは６１４、またはこれらの任意の組合せにおける突然変異を含む、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に関する、本明細書における任意の開示は、配列番号１のアミノ酸位置４９３に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置において突然変異を含む、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に、同等に、かつ、留保なしに当てはまる。非限定例を目的として述べると、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９３および４９８；（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９３および４９９；（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９３および６１４；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸位置４９３、４９８、および４９９；（ｖ）配列番号１のアミノ酸位置４９３、４９８、および６１４；（ｖｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９３、４９９、および６１４；または（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９３、４９８、４９９、および６１４における突然変異を有しうる。前記組合せはまた、Ｃ末端欠失、および／または本明細書で記載される、他の任意の突然変異もしくは置換も含みうる。

【0131】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、典型的に、それが由来する、非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と比較して、Ｃ末端欠失を含む。Ｃ末端欠失は、典型的に、スパイクタンパク質の、細胞質テールのうちの少なくとも一部を欠失させる。Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞質テールは、配列番号１のアミノ酸残基１２３５～１２７３に対応する。他のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に由来する、スパイクタンパク質の細胞質テールは、典型的に、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞質テールに対応するか、またはこれとアライメントする。

【0132】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、それが由来する、非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と比較して、少なくとも１０のアミノ酸、少なくとも１５のアミノ酸、少なくとも１６のアミノ酸、少なくとも１７のアミノ酸、少なくとも１８のアミノ酸、少なくとも１９のアミノ酸、少なくとも２０のアミノ酸、またはそれ以上のＣ末端欠失を含みうる。本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、全細胞質テールのＣ末端欠失を含みうる。Ｃ末端欠失は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞質テール内の、推定小胞体保留シグナル（ＥＲＳ）のうちの少なくとも一部を欠失させうる。Ｃ末端欠失は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞質テール内の、全推定小胞体保留シグナル（ＥＲＳ）において欠失しうる。一部の好ましい実施形態では、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号１のアミノ酸位置１２５５～１２７３に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸のＣ末端欠失を含みうる。

【0133】

典型的に、本発明のレンチウイルスベクターは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における修飾（突然変異、特に、置換などの）；ならびに（ｉｉ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失の両方を含む、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含む。配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における、任意の修飾は、本発明に従う、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、細胞質テールの、任意の欠失または部分的欠失と組み合わせて使用される。特に好ましい実施形態では、本発明のレンチウイルスベクターは、配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換、ならびに細胞質テールの、少なくとも１５のアミノ酸の欠失を含み、この場合、なおより好ましくは、欠失は、配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、またはこれとアライメントする。

【0134】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号１３に対する、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含みうるか、またはこれらからなりうる。

【0135】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、それが由来する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と比較した、１つまたはそれ以上のさらなる修飾、典型的に、１つまたはそれ以上のさらなる突然変異を含みうる。前記１つまたはそれ以上のさらなる突然変異は、アミノ酸置換でありうる。

【0136】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、さらなる修飾、特に、さらなる突然変異であり、なおより特定すると、置換の例は、当技術分野で周知であり、１つまたはそれ以上のさらなる修飾を選択し、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質へと導入することは、当業者の規定の技術範囲内にある。

【0137】

典型的に、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、１つまたはそれ以上のさらなる修飾を含む場合、前記１つまたはそれ以上のさらなる修飾は、配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における修飾を含むか、またはこれらからなる。配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における前記修飾は、典型的に、突然変異である。配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における前記突然変異は、非保存的アミノ酸置換または保存的アミノ酸置換である、アミノ酸置換でありうる。一部の好ましい実施形態では、配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における前記置換は、非保存的アミノ酸置換であり、チロシンによる置換が、特に、好ましい。したがって、一部の好ましい実施形態では、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換を含むか、またはこれらからなる、１つまたはそれ以上のさらなるアミノ酸修飾を含み、この場合、配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、チロシン残基により置換されている。

【0138】

したがって、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｎ５０１Ｙを含む、１つまたはそれ以上のさらなる修飾を含みうる。

【0139】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に含まれうるアミノ酸修飾の、他の非限定例は、配列番号１の残基５、６９、７０、８０、９５、１４２、１４４、１５４、１５７、２１５、２４１、２４２、２４３、２５３、３４６、４１７、４５２、４７７、４７８、４８４、４９４、５７０、９８１、７０１、７１６、８５９、９５０、９５１、９５７、９８２、１０７１、１１１８、および１１９１、またはこれらの任意の組合せに対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置のうちのいずれか１つにおける修飾を含む。特に、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に含まれうるアミノ酸修飾の、他の非限定例は、配列番号１のアミノ酸位置５に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置５に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、フェニルアラニン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置６９に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における欠失；配列番号１のアミノ酸位置７０に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における欠失；配列番号１のアミノ酸位置８０に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置８０に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基もしくはアラニン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置９５に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置９５に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、イソロイシン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置１４２に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置１４２に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アスパラギン酸残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置１４４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換もしくは欠失；配列番号１のアミノ酸位置１５４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置１５４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、リシン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置１５７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置１５７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、セリン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置２１５に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置２１５に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置２４１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における欠失；配列番号１のアミノ酸位置２４２に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における欠失；配列番号１のアミノ酸位置２４３に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における欠失；配列番号１のアミノ酸位置２５３に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置２５３に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、グリシン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置３４６に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置３４６に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、リシン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置４１７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置４１７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アスパラギンもしくはトレオニン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置４５２に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置４５２に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アルギニン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置４７７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置４７７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アスパラギン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置４７８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置４７８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、リシン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置４８４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置４８４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、リシンもしくはグルタミン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置４９４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置４９４に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、プロリン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置５７０に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置５７０に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アスパラギン酸残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置６１８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置６１８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アルギニン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置６８１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置６８１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、ヒスチジン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置７０１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置７０１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、バリン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置７１６に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置７１６に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、イソロイシン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置８５９に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置８５９に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アスパラギン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置９５０に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置９５０に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、ヒスチジン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置９５７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置９５７に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アルギニン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置９８２に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置９８２に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アラニン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置１０７１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置１０７１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、ヒスチジン残基により置換されている置換；配列番号１のアミノ酸位置１１１８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置１１１８に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、ヒスチジン残基により置換されている置換；または配列番号１のアミノ酸位置１１９１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換であって、配列番号１のアミノ酸位置１１９１に対応するか、もしくはこれらとアライメントするアミノ酸残基は、アスパラギン残基により置換されている置換；またはこれらの任意の組合せを含む。

【0140】

したがって、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、したがって、Ｌ５Ｆ、Ｔ１９Ｒ、６９ｄｅｌ、Ｖ７０Ｆ、７０ｄｅｌ、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ｇ／Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｇ１４２Ｄ、Ｙ１４４Ｘもしくは１４４ｄｅｌ、Ｅ１５４Ｋ、Ｅ１５６－、Ｆ１５７－、Ｆ１５７Ｓ、Ｒ１５８Ｇ、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、２４１ｄｅｌ、２４２ｄｅｌ、２４３ｄｅｌ、２４６－２５２ｄｅｌ、Ｄ２５３Ｇ、Ｗ２５８Ｌ、Ｒ３４６Ｋ、Ｋ４１７Ｎ／Ｔ、Ｌ４５２Ｑ／Ｒ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ｋ／Ｑ、Ｆ４９０Ｓ、Ｓ４９４Ｐ、Ａ５７０Ｄ、Ｐ６１８Ｒ、Ｐ６８１Ｈ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｔ８５９Ｎ、Ｄ９５０Ｎ／Ｈ、Ｑ９５７Ｒ、Ｓ９８２Ａ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、もしくはＫ１１９１Ｎ、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたはそれ以上を含む、１つまたはそれ以上のさらなる修飾を含みうる。

【0141】

本発明のレンチウイルスベクターは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における修飾（突然変異、特に、置換などの）；（ｉｉ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失；ならびに（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における修飾（突然変異、特に、置換などの）を含む、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含みうる。配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、および６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における、任意の修飾は、本発明に従う、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、細胞質テールの、任意の欠失または部分的欠失、および配列番号１のアミノ酸位置５０１に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における、任意の修飾と組み合わせて使用される。特に好ましい実施形態では、本発明のレンチウイルスベクターは、配列番号１のアミノ酸位置４９８、４９９、５０１、および６１４に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸位置における置換、ならびに細胞質テールの、少なくとも１５のアミノ酸の欠失を含み、この場合、なおより好ましくは、欠失は、配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、またはこれとアライメントする。

【0142】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号２０に対する、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含みうるか、またはこれらからなりうる。

【0143】

一部の実施形態では、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、配列番号１のアミノ酸位置６１４（本明細書で記載される）に対応するか、またはこれらとアライメントする位置における突然変異を含む場合があり、この場合、前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｂ．１．３５１株のスパイクタンパク質（ベータ変異株）に由来する。好ましくは、本発明のこのような改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失（本明細書で記載される）、より好ましくは、細胞質テールの、少なくとも１５のアミノ酸の欠失をさらに含み、この場合、なおより好ましくは、欠失は、配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、またはこれとアライメントする。本発明は、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ａ７０１Ｖ、および配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、またはこれとアライメントするＣ末端欠失を含む、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を提供する。このような改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、典型的に、Ｂ．１．３５１株のスパイクタンパク質（ベータ変異株）に由来する。本明細書で例示される通り、このような改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏの肺内における、トランス遺伝子発現の、さらなる増大をもたらしうる。

【0144】

したがって、本発明は、改変２型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターであって、プロモーターに作動可能に連結されたトランス遺伝子を含み、前記スパイクタンパク質は、（ａ）配列番号１の８０、２１５、４１７、４８４、５０１、６１４、および７０１位のうちの１つまたはそれ以上に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異であって、好ましくは、これらの残基全ては、突然変異された突然変異；および（ｂ）細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失を含む、レンチウイルスベクターを提供する。前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｂ．１．３５１株のスパイクタンパク質に由来しうる。一部の実施形態では、（ｉ）配列番号１の８０位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、アラニンにより置換され；（ｉｉ）配列番号１の２１５位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換され；（ｉｉｉ）配列番号１の４１７位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、アスパラギンにより置換され；（ｉｖ）配列番号１の４８４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、リシンにより置換され；（ｖ）配列番号１の５０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、チロシンにより置換され；（ｖｉ）配列番号１の６１４位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、グリシンにより置換され；かつ／または（ｖｉｉ）配列番号１の７０１位に対応するか、もしくはこれとアライメントするアミノ酸は、バリンにより置換され；この場合、好ましくは、これらの残基全ては置換されている。代替的に、または加えて、細胞質テールのうちの少なくとも一部の欠失は、配列番号１の１２５５～１２７３位に対応するか、またはこれらとアライメントするアミノ酸残基の欠失を含むか、またはこれらからなる。

【0145】

本明細書で記載される通り、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、齧歯動物馴化型、特に、マウス馴化型である。本明細書で使用される、「齧歯動物馴化型」という用語は、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、齧歯動物ＡＣＥ２に結合することが可能であり、齧歯動物ＡＣＥ２を発現する、標的齧歯動物細胞への侵入を容易とすることを意味する。同様に、「マウス馴化型］とは、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、マウスＡＣＥ２に結合することが可能であり、マウスＡＣＥ２を発現する、標的マウス細胞への侵入を容易とすることを意味する。マウス馴化を決定するための方法は、本明細書の実施例に記載されているアッセイなど、マウス細胞への形質導入を決定／定量するためのアッセイを含む。当技術分野では、他の適切な技法が公知であり、不要な負担を伴わずに、当業者により、たやすく選択および使用される。

【0146】

本発明の偽型化レンチウイルスベクター内に含まれる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の、齧歯動物／マウス馴化は、調査研究、例えば、本明細書で記載される、齧歯動物／マウス細胞もしくは齧歯動物／マウス組織を使用する、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイおよび／もしくはｅｘ ｖｉｖｏアッセイ、またはｉｎ ｖｉｖｏ齧歯動物／マウスモデルにおける使用のための、本発明の偽型化レンチウイルスベクターの柔軟性の増大を可能とする。

【0147】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、典型的に、ヒトＡＣＥ２、特に、ヒトＡＣＥ２の酵素ドメインに結合することが可能であり、ヒトＡＣＥ２を発現する、標的ヒト細胞への侵入を容易とする。典型的に、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、齧歯動物／マウス馴化型であることに加えて、ヒトＡＣＥ２、特に、ヒトＡＣＥ２の酵素ドメインに結合することが可能である。当技術分野では、結合について評価するための標準的技法（表面プラズモン共鳴など）が公知であり、不要な負担を伴わずに、当業者により、たやすく使用される。

【0148】

本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、抗コロナウイルススパイクタンパク質抗体により検出される。言い換えれば、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に特異的に結合する抗体に結合しうる／これにより認識される。これは、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に特異的に結合する中和抗体により中和されることとして記載される。非限定例を目的として述べると、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ＭＭ４３抗体および／またはＲ００１抗体（いずれも、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ：Ｒ００１＝型番：４０５９２－Ｒ００１、ＭＭ４３＝型番：４０５９１－ＭＭ４３から入手可能である）に結合する／これらにより検出／認識される。

【0149】

代替的に、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、抗コロナウイルススパイクタンパク質抗体により検出されない。言い換えれば、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に特異的に結合する抗体に結合しえない／これにより認識されない。これは、非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に特異的に結合する中和抗体による中和から逃避する、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質として記載される。非限定例を目的として述べると、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ＭＭ４３抗体および／またはＲ００１抗体に結合しえない／これにより検出／認識されない。好ましくは、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、抗コロナウイルススパイクタンパク質抗体により検出されない。したがって、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化された、本発明のレンチウイルスベクターは、偽型化レンチウイルスベクターの、前記個体への投与後における個体の免疫系を回避することが可能であり、対応する非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターと比較して、より効果的であり、かつ／またはより長期にわたり、個体の内部に存続する。

【0150】

中和、または本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質による中和からの逃避は、非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に特異的に結合する、特定の抗体に特異的でありうる。非限定例を目的として述べると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＢ．１．１．７株に由来する、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ＭＭ４３による中和から逃避しうるが、Ｒ００１による中和からは逃避しえない。さらなる非限定例を目的として述べると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＢ．１．３５１株に由来する、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、Ｒ００１による中和から逃避しうるが、ＭＭ４３による中和からは逃避しえない。

【0151】

ポリヌクレオチドおよび構築物
本発明はまた、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードするポリヌクレオチドも提供する。「ポリヌクレオチド」という用語は、ＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列の両方を包含する。

【0152】

本発明のポリヌクレオチドは、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の組換え発現のために使用される。

【0153】

本発明のポリヌクレオチドは、場合により、特定の細胞型、例えば、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、酵母細胞、昆虫細胞または植物細胞）、または原核細胞（例えば、大腸菌）における発現のために、コドン最適化される。「コドン最適化」という用語は、ベースのポリヌクレオチド配列内における、少なくとも１つのコドンの、ポリヌクレオチドが発現される宿主生物により優先的に使用されるコドンによる置きかえを指す。典型的に、宿主生物において、最も高頻度で使用されるコドンが、コドン最適化ポリヌクレオチド配列内で使用される。当技術分野では、コドン最適化の方法が周知である。

【0154】

当業者により、遺伝子コードの縮重性の結果として、多数の異なるポリヌクレオチドが、同じポリペプチドをコードしうることが理解されるであろう。当業者は、規定の技法を使用して、ポリペプチドが発現される、任意の特定の宿主生物のコドン使用を反映するように、核酸分子によりコードされるポリペプチド配列に影響を及ぼさないヌクレオチド置換を行いうることもまた理解される。したがって、そうでないことが指定されない限りにおいて、「本発明のタンパク質または免疫原性断片をコードするポリヌクレオチド」は、互いの縮重形であり、同じアミノ酸配列をコードする、全てのポリヌクレオチド配列を含む。

【0155】

本発明はまた、プロモーターに作動可能に連結された、本発明のポリヌクレオチドを含む発現カセットも提供する。プロモーターの選出は、ポリヌクレオチドの最終的発現が、どこでなされるのかに依存するであろう。一般に、構成的プロモーターが好ましいが、誘導可能なプロモーターも同様に使用される。当技術分野では、適切なプロモーター配列が周知であり、本明細書でも、例が記載される。

【0156】

発現カセットは、ＤＮＡプラスミドなどのＤＮＡの場合もあり、ｍＲＮＡベクターまたは自己増幅ＲＮＡベクターなどのＲＮＡベクターの場合もある。本発明の発現カセットは、真核細胞内および／または原核細胞内の発現が可能でありうる。

【0157】

ポリヌクレオチドまたは発現カセットはまた、適切なターミネーター配列も含みうる。当技術分野では、適切なターミネーター配列が周知である。

【0158】

本発明のポリヌクレオチドおよび発現カセットは、当技術分野で公知である、任意の適切な工程を使用して作製される。したがって、ポリヌクレオチドおよび発現カセットは、化学合成法を使用して作製される。代替的に、本発明のポリヌクレオチドおよび発現カセットは、分子生物学法を使用して作製される。

【0159】

本発明のポリヌクレオチドおよび発現カセットは、コンピュータによりデザインされ、次いで、常套的なポリヌクレオチド合成法により合成される。

【0160】

作製法
本発明はまた、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを作製する方法も提供する。

【0161】

したがって、本発明は、本明細書で記載されるレンチウイルスベクターを作製する方法であって、（ａ）（ｉ）本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列；および（ｉｉ）レンチウイルスパッケージング構成要素、レンチウイルスエンベロープ構成要素、およびレンチウイルスゲノムをコードする、１つまたはそれ以上の核酸配列を、ウイルスベクター産生細胞へと導入する工程；ならびに（ｂ）レンチウイルスベクターの産生に適する条件下で、産生細胞を培養する工程を含む方法を提供する。前記方法は、レンチウイルスベクターを採取する工程をさらに含みうる。

【0162】

改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列は、本発明のポリヌクレオチドまたは発現構築物に含まれる。

【0163】

前記方法は、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子の使用を含みうる。典型的に、本発明の作製法において使用される、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は、作製されるレンチウイルスベクターとマッチさせられる。非限定例を目的として述べると、レンチウイルスベクターが、ＨＩＶベクターである場合、本発明の作製法において使用される、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は、ＨＩＶ ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子である。非限定例を目的として述べると、レンチウイルスベクターが、ＳＩＶベクターである場合、本発明の作製法において使用される、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は、ＳＩＶ ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子である。

【0164】

コドン最適化に加えて、本発明の作製法において使用される、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は、翻訳スリップ（ＧａｇおよびＰｏｌの両方の産生を可能とするように、翻訳が、１つの領域から、別の領域へとスリップすることを可能とする）など、他の修飾を含みうる。（ｉ）ＲＣＬ産生の危険性を最小化するように、ベクターゲノムプラスミドと、Ｇａｇ－Ｐｏｌプラスミドとの相同性が低減され、（ｉｉ）コドン最適化の後、ＲＲＥの組入れがなされなくても、十分なＧａｇ－Ｐｏｌの産生がなされる（これは、相同性およびＲＣＬ産生の危険性をさらに低減する）ことを条件として、本発明のコドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子内では、コドン使用の、任意の適切な変異が使用される。

【0165】

本発明の作製法において使用される、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は完全に（１００％）コドン最適化される場合もあり、部分的にコドン最適化される場合もある。部分的コドン最適化は、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上のコドン最適化を包含する。

【0166】

好ましくは、ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子自体は、完全にコドン最適化されるが、非コドン最適化配列の非含有領域を含みうる（例えば、ｇａｇ遺伝子と、ｐｏｌ遺伝子との間に）。非限定例を目的として述べると、ｇａｇ遺伝子と、ｐｏｌ遺伝子との間の、リーディングフレームの翻訳スリップを維持するために、翻訳スリップ配列の近傍の領域は、コドン最適化されない場合がある（例えば、正確な翻訳スリップ配列が、この機能のために重要である場合）。

【0167】

本発明の方法は、スケーラブルなＧＭＰ適合法でありうる。したがって、本発明の方法は、典型的に、高力価の精製偽型化レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの作出を可能とする。

【0168】

典型的に、本明細書で記載される、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内のＣ末端欠失は、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と少なくとも同等である、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクター力価の産出と関連する。本明細書で使用される、「同等」という用語は、Ｃ末端欠失の使用が、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）の使用と比較して、著明に低下させないように規定される。非限定例を目的として述べると、Ｃ末端欠失の使用は、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）の使用と比較して、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価の、２分の１以下、１．５分の１以下、１．０分の１以下、０．５分の１以下、０．２５分の１以下、またはこれ未満であるレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を産出しうる／これと関連しうる。「同等」という用語は、Ｃ末端欠失を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価が、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と比較して、統計学的に無変化（例えば、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１）であるように規定される。

【0169】

特に、本明細書で記載される、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内のＣ末端欠失は、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）により偽型化されたレンチウイルスベクターと比較した、前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターの力価の増大を産出しうる／これと関連しうる。

【0170】

好ましくは、Ｃ末端欠失の使用は、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と比較して増大した、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を産出する／これと関連する。レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価は、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価の、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍以上の力価でありうる。

【0171】

当技術分野で記載される通り、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異の組入れは、これらの突然変異を伴わない、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と比較した、力価生産の低下と関連している。しかし、発明者らは、驚くべきことに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質による、一部のＳ－ＬＶ、特に、当技術分野で、妥当な力価の産出が困難であることが公知のＳ－ＬＶ（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＡＵＳ／ＶＩＣ１株）について、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異の組入れは、驚くべきことに、Ｓ－ＬＶ力価を増大させることを示した。配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異の組入れによる、Ｓ－ＬＶ力価の、このレスキューは、本明細書で記載されるＣ末端欠失により、さらに増大する。したがって、本発明に従い、本明細書で記載される、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異は、これらの位置の一方または両方における突然変異を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して産出される、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と、少なくとも同等である、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクター力価の産出と関連する。本明細書で使用される、「同等」という用語は、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異の使用が、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）の使用と比較して、著明に低下させないように規定される。非限定例を目的として述べると、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異の使用は、これらの突然変異を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）の使用と比較して、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価の、２分の１以下、１．５分の１以下、１．０分の１以下、０．５分の１以下、０．２５分の１以下、またはこれ未満であるレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を産出しうる／これと関連しうる。「同等」という用語は、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価が、これらの突然変異を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と比較して、統計学的に無変化（例えば、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１）であるように規定される。

【0172】

特に、本明細書で記載される、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異は、これらの突然変異を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）により偽型化されたレンチウイルスベクターと比較した、前記改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質により偽型化されたレンチウイルスベクターの力価の増大を産出しうる／これと関連しうる。この力価の改善は、特に、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、本明細書で記載および例示される、Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０（Ａｕｓ／ＶＩＣ０１）株など、妥当な力価で作製することが、従来困難である株に由来する場合に観察される。

【0173】

好ましくは、配列番号１の４９８および４９９位に対応するか、またはこれとアライメントするアミノ酸位置における突然変異の使用は、これらの突然変異を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と比較して増大したる、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を産出する／これと関連する。レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価は、これらの突然変異を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して作製されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価の、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍以上の力価でありうる。

【0174】

典型的に、本発明の方法により、または本発明のポリヌクレオチド、発現カセット、および／もしくは宿主細胞を使用して得られるレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターなど、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、高力価で作製される。特に、本明細書で記載されるＣ末端欠失を含む、本発明のレンチウイルスベクターは、高力価で作製される。力価は、本明細書で規定される、形質導入単位を単位として測定される。本明細書で記載される通り、本発明のレンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）ベクター、特に、本明細書で記載されるＣ末端欠失を含むレンチウイルスベクターは、対応する非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含む、対応するレンチウイルスベクターと同等以上の力価で作製される。特に、本明細書で記載されるＣ末端欠失を伴う、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含む、本発明のレンチウイルスベクターは、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）で偽型化された、対応するレンチウイルスベクターと同等以上の力価で作製される。したがって、本発明の方法により、または本発明のポリヌクレオチド、発現カセット、および／もしくは宿主細胞を使用して得られるレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターなど、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、場合により、少なくとも約２．０×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２．５×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３．０×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３．５×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３．７×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４．０×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４．２×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４．５×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５．０×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５．５×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５．７×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６．０×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６．１×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６．２×１０^６ＩＵ／ｍＬまたはそれ以上の力価でありうる。好ましくは、レトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターは、少なくとも約３．０×１０^６ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４．０×１０^６ＩＵ／ｍＬ、または少なくとも約６．０×１０^６ＩＵ／ｍＬの力価で作製される。

【0175】

本発明の方法は、産生細胞内で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質を共発現させる工程を含みうる。本明細書で例示される通り、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質の共発現は、Ｓ－ＬＶ産生力価をさらに増大させうる。好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質の共発現は、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して産出された、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と比較して、増大した、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を産出する／これと関連し、この場合、前記方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質の共発現を含まない。レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質の共発現を含まない方法により作製される、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）を使用して産出された、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価の、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍、少なくとも５倍以上でありうる。

【0176】

典型的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質は、産生細胞の培養時に共発現される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質をコードする核酸配列は、（ｉ）改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列と同じ、ポリヌクレオチド分子または発現構築物、および／もしくはＳ－ＬＶベクターを作製するのに必要とされる、他の構成要素のうちのいずれか、または（ｉｉ）１つもしくはそれ以上の個別のポリヌクレオチド分子または発現構築物に含まれる。

【0177】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質は、本明細書で開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株など、任意のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に由来しうる。好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質は、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株またはＢ．１．１．５２９（オミクロン）株に由来する。

【0178】

本発明に従う、高力価レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）ベクターの作製は、結果として得られるベクター産物に対して、他の所望の特性を付与しうる。例えば、理論に束縛されずに述べると、ＴＦＦなどの方法による、高度の濃縮を必要としない、高力価における作製は、対応する非改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、またはＣ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）で偽型化された、対応するレンチウイルスベクターを含むレンチウイルスベクターより高品質のベクター産物を結果としてもたらすと考えられる。理論に束縛されずに述べると、高力価で、かつ、高度の濃縮を必要とせずに作製されるベクターは、ウイルス粒子およびそれらのＲＮＡカーゴを損傷しうるせん断力に対する曝露が小さいと考えられる。

【0179】

本発明はまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質偽型化レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）ベクターの力価を増大させる方法であって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質内の、Ｃ末端欠失の使用を含む方法も提供する。本発明に従う、レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）ベクター力価を増大させる、前記方法は、力価を、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）で偽型化された、対応するレンチウイルスベクターの産出と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、もしくは少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、またはそれ以上増大させうる。代替的に、本発明に従う、レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）力価を増大させる方法は、力価を、Ｃ末端欠失を欠く、対応するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（改変または非改変）で偽型化された、対応するレンチウイルスベクターの産出と比較して、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約３００％、少なくとも約５００％またはそれ以上増大させうる。好ましくは、本発明に従う、レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）力価を増大させる方法は、力価を、（ａ）少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍；かつ／または（ｂ）少なくとも約１００％、より好ましくは、少なくとも約２００％、なおより好ましくは、少なくとも約３００％増大させうる。典型的に、対応するレンチウイルスベクター／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、それが、Ｃ末端欠失を欠くことを除き、本発明のレンチウイルスベクター／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と同一である。レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）ベクターを作製する方法と関連する、本明細書における全ての開示は、本発明の、レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）力価を増大させる方法に、同等に、かつ、留保なしに当てはまる。

【0180】

レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの作製は、典型的に、ベクターの作製に必要とされるエレメント：レトロウイルス／レンチウイルスベクターのためのゲノム、Ｇａｇ－Ｐｏｌ、Ｒｅｖ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をもたらす、１つまたはそれ以上のプラスミドを利用する。複数のエレメントは、単一のプラスミド上にもたらされる。好ましくは、ベクターゲノム、Ｇａｇ－Ｐｏｌ、Ｒｅｖ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の各々について、それぞれ、１つずつ、４つのプラスミドが存在するように、各エレメントは、個別のプラスミド上にもたらされる。

【0181】

代替的に、単一のプラスミドが、Ｇａｇ－ＰｏｌエレメントおよびＲｅｖエレメントをもたらす場合があり、パッケージングプラスミド（ｐＤＮＡ２）と称される。４つのプラスミドが、本発明に従うレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの作製のために使用されるように、個別のプラスミド（それぞれｐＤＮＡ１およびｐＤＮＡ３）によって、残りのエレメント（ゲノム、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質）がもたらされる。３プラスミド法でも、ｐＤＮＡ１およびｐＤＮＡ３は、本明細書の、４プラスミド法の文脈で記載される通りでありうる。

【0182】

本発明の、好ましい４プラスミド法では、ベクターゲノムプラスミドは、最終的なレンチウイルスベクターへとパッケージングされ、トランス遺伝子を含む、全ての遺伝物質をコードする。典型的に、ベクターゲノムプラスミド内で見出される、遺伝物質の一部だけが、ウイルスにとどまる。本明細書では、ベクターゲノムプラスミドは、「ｐＤＮＡ１」としてデザインされ、典型的に、トランス遺伝子、およびトランス遺伝子プロモーターを含む。

【0183】

他の３つのプラスミドは、Ｇａｇ－Ｐｏｌ、Ｒｅｖ、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする、製造用プラスミドである。これらのプラスミドは、それぞれ、「ｐＤＮＡ２ａ」、「ｐＤＮＡ２ｂ」、および「ｐＤＮＡ３」と名指される。

【0184】

本発明の４プラスミド法では、４つのプラスミド全ては、最終的なレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの形成に寄与する。レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの製造時において、ベクターゲノムプラスミド（ｐＤＮＡ１）は、典型的に、ウイルスの量産に重要である、エンハンサー／プロモーター、Ｐｓｉ、ＲＲＥ、ｃＰＰＴ、ｍＷＰＲＥ、ＳＩＮ ＬＴＲ、ｐｏｌｙＡ（例えば、ＳＶ４０ ｐｏｌｙＡ）をもたらす。ＲＲＥ、ｃＰＰＴ、プロモーター、トランス遺伝子、およびｍＷＰＲＥは、典型的に、最終的なレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクター内で見出される。ＳＩＮ ＬＴＲ（ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔｓ；ＳＩＮ／ＩＮ自己不活化型）およびＰｓｉ（パッケージングシグナル）は、最終的なレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクター内で見出される。

【0185】

ｐＤＮＡ３に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、標的細胞への、最終的なレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの感染、すなわち、患者の上皮細胞（典型的に、本明細書で記載される、肺細胞または鼻腔細胞）への侵入のために重要である。ｐＤＮＡ２ａプラスミドおよびｐＤＮＡ２ｂプラスミドの産物は、ウイルスによる形質導入のために、すなわち、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ＤＮＡを、宿主のゲノムに挿入するために重要である。プロモーター、調節エレメント（ＷＰＲＥなど）、およびトランス遺伝子は、標的細胞（複数可）内における、トランス遺伝子の発現のために重要である。

【0186】

本発明の方法は、以下の工程：（ａ）細胞を、懸濁液中で増殖させる工程；（ｂ）細胞に、１つまたはそれ以上のプラスミドをトランスフェクトする工程；（ｃ）ヌクレアーゼを添加する工程；（ｄ）レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）を採取する工程；および（ｅ）レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）の精製を含みうるか、またはこれらからなりうる。本発明の方法は、以下の工程：（ａ）細胞を、懸濁液中で増殖させる工程；（ｂ）細胞に、１つまたはそれ以上のプラスミドをトランスフェクトする工程；（ｃ）ヌクレアーゼを添加する工程；（ｄ）レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）を採取する工程；（ｅ）トリプシンを添加する工程；および（ｆ）レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）の精製を含みうるか、またはこれらからなりうる。

【0187】

本方法は、本明細書で記載される、４プラスミドシステムまたは３プラスミドシステムを使用しうる。したがって、好ましい４プラスミド法のために、１つまたはそれ以上のプラスミドは、ベクターゲノムプラスミドであるｐＤＮＡ１；ｇａｌｐｏｌプラスミド（コドン最適化される場合がある）であるｐＤＮＡ２ａ；ＲｅｖプラスミドであるｐＤＮＡ２ｂ；およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質プラスミドであるｐＤＮＡ３を含みうるか、またはこれらからなりうる。

【0188】

ベクターゲノムプラスミド：ｇａｇｐｏｌプラスミド：Ｒｅｖプラスミド：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質プラスミドの、任意の適切な比は、産出されるレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）力価を、さらに最適化する（増大させる）のに使用される。適切な比は、当業者によりたやすく決定される。非限定例を目的として述べると、２０：９：６：１２の比が使用される。

【0189】

方法の工程（ａ）～（ｆ）は、典型的に、工程（ａ）に始まり、工程（ｆ）まで通して引き継ぎながら、逐次的に実行される。方法は、さらなる精製工程、緩衝剤交換、精製の後における、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの濃縮、および／または精製（または濃縮）の後における、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの製剤化など、１つまたはそれ以上のさらなる工程を含みうる。工程の各々は、１つまたはそれ以上の部分工程を含みうる。例えば、採取する工程は、１つもしくはそれ以上の工程もしくは部分工程を伴う場合があり、かつ／または精製は、１つもしくはそれ以上の工程もしくは部分工程を伴いうる。

【0190】

任意の適切な細胞型は、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを作製するための、１つまたはそれ以上のプラスミドをトランスフェクトされる。典型的に、哺乳動物細胞、特に、ヒト細胞系が使用される。本発明の方法における使用に適する細胞の非限定例は、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３Ｆ細胞またはＨＥＫ２９３Ｔ細胞など）および２９３Ｔ／１７細胞である。ウイルスの産生に適する、市販の細胞系もまた、たやすく利用可能である（例えば、Ｇｉｂｃｏ Ｖｉｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｃｅｌｌｓ：ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製；型番：Ａ３５３４７）。

【0191】

細胞は、血清非含有培地を含む、動物成分非含有培地中で増殖させる。細胞は、ヒト成分を含有する培地中で増殖させる。細胞は、合成作製成分を含むか、またはこれらからなる、既知組成培地中で増殖させる。

【0192】

本発明に従い、任意の適切なトランスフェクション手段が使用される。適切なトランスフェクション手段の選択は、当業者の規定の慣行の範囲内にある。非限定例を目的として述べると、トランスフェクションは、ＰＥＩＰｒｏ（商標）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（商標）、またはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（商標）の使用により実行される。

【0193】

任意の適切なヌクレアーゼは、本発明に従い使用される。適切なヌクレアーゼの選択は、当業者の規定の慣行の範囲内にある。典型的に、ヌクレアーゼは、エンドヌクレアーゼである。非限定例を目的として述べると、ヌクレアーゼは、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（登録商標）またはＤｅｎａｒａｓｅ（登録商標）でありうる。ヌクレアーゼの添加は、採取前段階における添加の場合もあり、採取後段階における添加の場合もあり、採取する工程の間における添加の場合もある。

【0194】

使用される場合、トリプシン活性は、好ましくは、動物由来酵素非含有である、ＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ（商標）などの組換え酵素によりもたらされる。トリプシンの添加は、採取前段階における添加の場合もあり、採取後段階における添加の場合もあり、採取する工程の間における添加の場合もある。

【0195】

レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを精製するのに、任意の適切な精製手段が使用される。適切な精製工程の非限定例は、デプス／エンド濾過、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）、およびクロマトグラフィーを含む。精製ステップは、典型的に、少なくとも１つのクロマトグラフィー工程を含む。本発明に従い使用される、クロマトグラフィー工程の非限定例は、混合モードサイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および／またはアニオン交換クロマトグラフィーを含む。溶出は、塩勾配の使用を伴って実行される場合もあり、これを伴わずに実行される場合もあり、好ましくは、塩勾配の使用を伴わずに実行される。

【0196】

レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの採取は、トランスフェクションの約１２～約１４４時間後の間、トランスフェクションの約２４時間後～約９６時間後の間、トランスフェクションの約３６時間後～約９６時間後の間、トランスフェクションの約５４～約８４時間後の間、トランスフェクションの約５４時間後～約７２時間後、またはトランスフェクションの約７２時間後～約９６時間後の間など、トランスフェクション後の任意の適切な時間の後に実行される。一部の好ましい実施形態では、採取は、トランスフェクションの約７２時間後に実行される。

【0197】

本方法は、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを作製するのに使用される。

【0198】

本発明の方法は、高力価レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの作製を容易とするので、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子（またはこれらから構成されるか、もしくはこれらからなる核酸もしくはプラスミド）を使用しうる。典型的に、前記コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は、本明細書で記載される、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子を使用しない、対応する方法により産出される、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と少なくとも同等である、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価を産出するのに使用される。好ましくは、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は、本明細書で記載される、コドン最適化ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子を使用しない、対応する方法により産出される、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価と比較して増大した、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの力価の産出を可能とする。

【0199】

本発明はまた、（ｉ）本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクター、（ｉｉ）本明細書で記載される、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質；（ｉｉｉ）本発明の発現構築物および／もしくは（ｉｉｉ）本発明のポリヌクレオチド；またはこれらの任意の組合せを含む、宿主細胞（ウイルスベクター産生細胞ともまた称される）も提供する。典型的に、宿主細胞は、哺乳動物細胞、特に、ヒト細胞またはヒト細胞系である。宿主細胞の非限定例は、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３Ｆ細胞またはＨＥＫ２９３Ｔ細胞など）および２９３Ｔ／１７細胞を含む。ウイルスの産生に適する、市販の細胞系もまた、たやすく利用可能である（本明細書で記載される）。本発明の宿主細胞は、ヒトＴＭＰＲＳＳ２（ｈＴＭＰＲＳＳ２）、またはその機能的断片を、内因的に発現する場合もあり、外因性の核酸、ベクター、またはプラスミドの導入後に発現する場合もある。発現された、ＴＭＰＲＳＳ２のアミノ酸配列は、本明細書で記載される通りでありうる。

【0200】

本発明はまた、本発明の方法により、または本発明の発現構築物、ポリヌクレオチド、プラスミド、改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、および／または宿主細胞を使用することにより得られる、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターも提供する。

【0201】

レンチウイルスパッケージング構成要素、レンチウイルスエンベロープ構成要素、およびレンチウイルスゲノムをコードする、１つまたはそれ以上の核酸配列は、（ｉ）改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列と同じ、ポリヌクレオチド分子もしくは発現構築物内、または（ｉｉ）１つもしくはそれ以上の個別のポリヌクレオチド分子または発現構築物内に含まれる。本明細書では、本発明の方法における使用のための、例示的なプラスミド系が記載される。

【0202】

ウイルス様粒子
本発明はまた、本明細書で記載される、１つまたはそれ以上の、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含む、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）も提供する。

【0203】

本明細書で規定される通り、本発明のＶＬＰは、空レンチウイルス粒子である、すなわち、ＶＬＰは、レンチウイルスゲノムを欠く。

【0204】

当技術分野では、ＶＬＰを作出するための方法が公知であり（例えば、参照によって、その全体を組み入れる、ＢｒｕｎｅらＳｃｉ．Ｒｅｐ．（２０１６）、１９（６）：１９２３４を参照されたい）、本発明へと、たやすく適用される。本明細書における、本発明のベクターへの言及は、本発明のＶＬＰにも、同等に当てはまりうる。

【0205】

ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルおよび動物モデル
本発明はまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、または他の疾患もしくは障害のための予防法、治療法、およびワクチン戦略の開発における使用に適する、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルおよび動物モデルも提供する。

【0206】

本発明は、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを形質導入された、齧歯動物細胞、特に、マウス細胞を含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルを提供する。このようなモデルは、例えば、所与の抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、レンチウイルスベクターの、細胞への侵入を防止することが可能であるのかどうかについて評価するのに使用される。

【0207】

本発明はまた、ｉｎ ｖｉｖｏ動物モデル、特に、齧歯動物モデル、とりわけ、マウスモデルも提供する。例えば、候補抗体を発現させるベクターは、マウスへと投与される。前記ベクターを形質導入した後、候補抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏのマウス細胞により作製される。本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターによる、その後の抗原投与は、例えば、所与の抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、レンチウイルスベクターの、細胞への侵入を防止することが可能であるのかどうかについて評価するのに使用される。

【0208】

治療適応
本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明の偽型化レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、典型的に、（ｉ）上皮の完全性を破壊しない気道形質導入；（ｉｉ）持続的遺伝子発現；（ｉｉｉ）慢性毒性の欠如；および／または（ｉｖ）効率的な反復投与が可能である。好ましくは、治療有効レベルにおける、長期的／持続的な安定的遺伝子発現は、本発明の核酸カセットまたはベクターの反復投与を使用して達成される。代替的に、単回投与は、所望の長期的発現を達成するのに使用される。

【0209】

したがって、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、遺伝子治療において使用されると有利である。したがって、本発明は、疾患を処置または防止する方法における使用のための、本明細書で規定される、核酸カセットまたは遺伝子治療用ベクターを提供する。処置される疾患は、慢性の場合もあり、急性の場合もある。

【0210】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、遺伝子治療において有用である、任意のトランス遺伝子を送達するのに使用される。典型的に、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、気道、呼吸器、または肺の疾患または障害の処置のための遺伝子治療における使用のためのベクターである。

【0211】

例を目的として述べると、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの効率的な気道細胞取込み特性は、それらを、呼吸器（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙまたはｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｔｒａｃｔ）疾患、特に、遺伝性呼吸器疾患の処置に高度に適切とする。特に、かつ、理論に束縛されずに述べると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２により偽型化されたレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターが、肺のＡＴＩＩ細胞内において豊富であるＡＣＥ２に結合することを踏まえると、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、ＡＴＩＩ細胞内で、治療用タンパク質を発現させるのに使用される。このような治療用タンパク質の非限定例は、サーファクタントタンパク質Ａ１（ＳＰ－Ａ１：ＳＦＴＰＡ１によりコードされる）、サーファクタントタンパク質Ａ２（ＳＰ－Ａ２：ＳＦＴＰＡ２によりコードされる）、サーファクタントタンパク質Ｂ（ＳＰ－Ｂ：ＳＦＴＰＢによりコードされる）、サーファクタントタンパク質Ｃ（ＳＰ－Ｃ：ＳＦＴＰＣによりコードされる）、サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰ－Ｄ：ＳＦＴＰＤによりコードされる）、ＡＢＣＡ３（ＡＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｓｕｂ－ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ Ａ）、ＴＩＴＦ１（ｔｈｙｒｏｉｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １；ＮＫＸ２－１（ＮＫ２ ｈｏｍｅｏｂｏｘ １）によりコードされる）、およびＳＬＣ３４Ａ２（ｓｏｌｕｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｆａｍｉｌｙ ３４ ｍｅｍｂｅｒ ２）のほか、本明細書で開示される、他の治療用タンパク質を含む。ＳＰ－Ａ１および／またはＳＰ－Ａ２の発現は、ＡＲＤＳ、ＣＯＰＤ、肺線維症（例えば、ＩＰＦ）、および呼吸器感染症を含む、多数の疾患を処置するのに使用される。ＳＰ－Ｂの発現は、ＳＰ－Ｂ欠損症（ＳＭＤＰ１（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｐｕｌｍｏｎａｒｙ，１）ともまた称される）を処置するのに使用される。ＳＰ－Ｃの発現は、ＳＰ－Ｃ欠損症（ＳＭＤＰ２（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｐｕｌｍｏｎａｒｙ，２）ともまた称される）を処置するのに使用される。ＳＰ－Ｄの発現は、呼吸器感染症を処置するのに使用される。ＡＢＣＡ３の発現は、ＡＢＣＡ３欠損症（ＳＭＤＰ３（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｐｕｌｍｏｎａｒｙ，３）ともまた称される）を処置するのに使用される。ＳＬＣ３４Ａ２の発現は、肺胞微石症およびＩＰＦを処置するのに使用される。

【0212】

本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、ＡＴＩＩ細胞内で、２つまたはそれ以上の（例えば、約２つ～約１０、約２つ～約５つ、２つ、３つ、４つ、または５つの）治療用タンパク質を発現させるのに使用される。本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを使用する、ＡＴＩＩ細胞による、２つまたはそれ以上の治療用タンパク質の発現は、２つまたはそれ以上の遺伝子（例えば、約２つ～約１０、約２つ～約５つ、２つ、３つ、４つ、または５つの遺伝子）が関与する疾患または障害の処置において、有用な場合がある。例えば、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、ＳＰ－Ａ１、ＳＰ－Ａ２、ＳＰ－Ｂ、ＳＰ－Ｃ、ＳＰ－Ｄ、ＡＢＣＡ３、ＴＩＴＦ１、ＳＬＣ３４Ａ２、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）、テロメラーゼＲＮＡ構成要素（ＴＥＲＣ）、デコリン、ＴＲＩＭ７２、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦ受容体（ＣＳＦ２ＲＡおよびＣＳＦ２ＲＢを含む）から選択される、２つまたはそれ以上の（例えば、約２つ～約１０、約２つ～約５つ、２つ、３つ、４つ、または５つの）治療用タンパク質を発現させるのに使用される。このような疾患および障害の非限定例は、肺胞タンパク症（ＰＡＰ；遺伝性ＰＡＰ（ｈＰＡＰ）および／または後天性ＰＡＰ（ａＰＡＰ））および肺線維性疾患（特発性肺線維症（ＩＰＦ）を含む）を含む。例えば、ａＰＡＰの処置は、ＧＭ－ＣＳＦの発現を含みうる。ｈＰＡＰの処置は、ＣＳＦ２ＲＡおよび／またはＣＳＦ２ＲＢの発現を含みうる。ＩＰＦの処置は、ＳＰ－Ａ２、デコリン、ＴＲＩＭ７２、ＴＥＲＴ、および／またはＴＥＲＣのうちの１つまたはそれ以上の発現を含みうる。

【0213】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターはまた、治療用タンパク質の分泌を促進する、遺伝子治療法においても使用される。さらなる例を目的として述べると、本発明は、呼吸器の内腔（例えば、肺内腔）および／または循環系への、治療用タンパク質の分泌をもたらす。このような場合、ＡＴＩＩ細胞は、目的の標的細胞ではなく、治療用タンパク質は、呼吸器の内腔（例えば、肺内腔）または循環系へと分泌されるので、本発明の核酸カセットおよびベクターによる、ＡＴＩＩ細胞への形質導入は、不可欠ではない場合がある。理論に束縛されずに述べると、ＡＴＩＩ細胞による、治療用タンパク質の発現が、循環系への分泌に十分に適しうるように、ＡＴＩＩ細胞は、典型的に、呼吸器内の内皮細胞と隣接するので、ＡＴＩＩ細胞による、治療用タンパク質の発現は、有利でありうる。したがって、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの投与、および気道細胞によるその取込みは、治療用タンパク質を作製し、次いで、治療用タンパク質が分泌され、治療レベルで全身循環に入り、ここで、治療効果を誘発するように、目的の細胞／組織へと移動しうる「工場」としての、肺（または鼻腔または気道）の使用を可能とする場合がある。細胞内タンパク質または膜タンパク質と対照的に、このような分泌型タンパク質の作製は、特異的疾患の標的細胞への形質導入に依存せず、これは、著明な利点であり、高レベルのタンパク質発現を達成する。したがって、心血管疾患、特に、遺伝性心血管疾患または血液障害、特に、凝血不全症など、呼吸器疾患でない、他の疾患もまた、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＳＩＶ／ＨＩＶ）ベクターにより処置される。

【0214】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターにより発現される、治療用分泌型タンパク質の非限定例は、ＡＡＴ、第ＶＩＩＩ因子、ＳＰ－Ａ１、ＳＰ－Ａ２、ＳＰ－Ｂ、ＳＰ－Ｃ、ＳＰ－Ｄ、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、フォンヴィレブランド因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、デコリン、抗炎症性タンパク質（例えば、ＩＬ－１０またはＴＧＦβ）モノクローナル抗体、抗炎症性デコイ、および感染作用物質に対するモノクローナル抗体を含む。

【0215】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターにより発現される、他の治療用タンパク質の非限定例は、ＣＦＴＲ、ＴＲＩＭ７２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＡＢＣＡ３、ＴＩＴＦ１、ＳＬＣ３４Ａ２、ＴＥＲＴ、ＴＥＲＣ、およびＣＳＦ２ＲＢを含む。

【0216】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、疾患の是正のためのトランス遺伝子をもたらすことにより、疾患を、効果的に処置することが可能である。例えば、伏在する突然変異から独立に、ＣＦ患者における肺疾患を改善または防止するためのＣＦＴＲ遺伝子の機能的コピーの挿入。したがって、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、典型的に、本明細書で記載されるＣＦＴＲトランス遺伝子を伴う遺伝子治療により、嚢胞性線維症（ＣＦ）を処置するのに使用される。

【0217】

さらなる例として述べると、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、典型的に、本明細書で記載される、ＳＦＴＰＢトランス遺伝子を伴う遺伝子治療により、ＳＦＴＰＢ（ＳＭＤＰ１（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｐｕｌｍｏｎａｒｙ １）としてもまた公知である）欠損症を処置するのに使用される。

【0218】

別の例として述べると、本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、典型的に、本明細書で記載される、ＡＡＴトランス遺伝子（ＳＥＲＰＩＮＡ１）を伴う遺伝子治療により、アルファ１抗トリプシン（ＡＡＴ）欠損症を処置するのに使用される。ＡＡＴは、主に、肝臓内で産生され、次いで、少量で肺へとトラフィッキングされるが、肺自体においてもまた産生される、分泌型抗プロテアーゼである。ＡＡＴの主要な機能は、好中球エラスターゼに結合し、これを中和／阻害することである。本発明に従うＡＡＴによる遺伝子治療は、ＡＡＴ欠損症患者において妥当であるほか、ＣＦまたは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）など、他の肺疾患においても妥当であり、常套的な酵素置換療法（ＡＡＴが、ヒト血液から単離され、毎週、静脈内投与される）が遭遇する問題の一部を克服する機会を与え、標的組織（肺／経鼻上皮）における、安定的な長期持続性発現、投与の容易さ、および無限のアベイラビリティーをもたらす。

【0219】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターによる形質導入は、組換えタンパク質の、肺内腔ならびに循環への分泌をもたらすことが可能である。このことの１つの利益は、治療用タンパク質が、間質に到達することである。したがって、ＡＡＴによる遺伝子治療はまた、それらの非限定例が、１型／２型糖尿病、急性心筋梗塞、虚血性心疾患、関節リウマチ、炎症性腸疾患、移植拒絶、移植片対宿主（ＧｖＨ）病、多発性硬化症、肝疾患、肝硬変、血管炎、ならびに細菌感染症および／またはウイルス感染症などの感染症を含む、他の疾患適応においても有益でありうる。

【0220】

ＡＡＴは、例えば、糖尿病、移植片対宿主病、および炎症性腸疾患の前臨床モデルにおいて、他の多数の抗炎症効果および組織保護効果を及ぼす。したがって、本発明に従う形質導入後の肺および／または鼻腔におけるＡＡＴの産生は、これらの適応を含む適応へと、より広く適用可能でありうる。

【0221】

本発明に従う分泌型タンパク質による遺伝子治療で処置される疾患の他の例は、心血管疾患、ならびに血液障害、特に、血友病（Ａ型、Ｂ型、またはＣ型）、フォンヴィレブランド病、および第ＶＩＩ因子欠損症などの凝血不全症を含む。

【0222】

処置される疾患または障害の他の例は、原発性線毛運動障害（ＰＣＤ）、急性肺損傷、Ｂ型サーファクタントタンパク質（ＳＦＴＢ）欠損症、肺胞タンパク症（ＰＡＰ；遺伝性ＰＡＰおよび／または後天性ＰＡＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ＳＭＤＰ３（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ３）もしくは別のサーファクタント欠損症、急性呼吸器逼迫症候群（ＡＲＤＳ）、ＣＯＶＩＤ－１９、肺線維性疾患（特発性肺線維症を含む）、肺アレルギー状態、喘息、肺がん、もしくは肺の異形成性変化、血友病、および／またはリソソーム蓄積症もしくは肺細菌感染症、もしくは他の任意の肺疾患もしくは肺障害など、炎症性状態、感染性状態、免疫状態、もしくは代謝性状態を含む。

【0223】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、患者へと投与されると、典型的に、高発現レベルの治療用タンパク質をもたらす。本明細書では、「高度の発現」および「治療的発現」という用語は、互換的に使用される。発現は、任意の適切な方法（定性的方法または定量的方法、好ましくは、定量的方法）により測定され、濃度は、任意の適切な測定単位、例えば、ｎｇ／ｍｌ単位またはｎＭ単位で与えられる。

【0224】

目的の治療用タンパク質の発現／分泌／膜挿入は、絶対項で与えられる。代替的に、治療用タンパク質の発現／分泌／膜挿入は、相対項で、例えば、外因性シグナルペプチドを伴わないか、または治療用タンパク質の内因性シグナルペプチドを伴う、本発明の対応する核酸カセットまたはベクターによりコードされる、治療用タンパク質の発現／分泌／膜挿入と比べて与えられる場合もあり、対応する内因性（欠損）遺伝子の発現／分泌／膜挿入と比べて与えられる場合もある。

【0225】

発現は、ｍＲＮＡの発現に関して測定される場合もあり、タンパク質の発現に関して測定される場合もある。機能的ＣＦＴＲ遺伝子など、本発明の治療用タンパク質の発現は、タンパク質濃度、細胞１個当たりのｍＲＮＡコピー数、または他の任意の適切な単位に関して、内因性タンパク質、または内因性（機能不全）ＣＦＴＲ遺伝子などの遺伝子と比べて定量される場合もある。治療用タンパク質の分泌および／または膜挿入は、対応する内因性タンパク質の分泌／膜挿入と比べて定量される場合もあり、外因性シグナルペプチドを欠き、かつ／または治療用タンパク質の内因性シグナルペプチドを含む発現カセットを介して導入される、治療用タンパク質の分泌／膜挿入のレベルと比べて定量される場合もある。

【0226】

治療用タンパク質をコードする核酸の発現レベル、および／またはコードされた、本発明の治療用タンパク質の発現／分泌／膜挿入は、該当する場合、ｅｘ ｖｉｖｏで（例えば、細胞を培養するのに使用される馴化培地中で、または細胞自体の中で）測定される場合もあり、ｉｎ ｖｉｖｏで（例えば、肺組織内、上皮被覆液中、および／または血清／血漿中で）測定される場合もある。したがって、高発現レベルおよび／または治療用発現レベルとは、肺内、上皮被覆液中、および／または血清／血漿中の濃度を指す場合がある。

【0227】

本発明の核酸カセットおよびベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの反復投与は、毎日２回、毎日、毎週２回、毎週、毎月、２カ月ごと、３カ月ごと、４カ月ごと、６カ月ごと、毎年、２年またはそれ以上ごとに投与される。投与は、要求される限りの期間にわたり、例えば、少なくとも６カ月間、少なくとも１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間、１５年間、２０年間またはそれ以上にわたり、最長で、処置される患者の生涯にわたり継続される。

【0228】

本発明はまた、本発明の核酸カセットおよびベクターも提供し、特に、遺伝子治療の方法における使用のための、本明細書で記載される、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターも提供し、この場合、前記方法は、（ａ）ｅｘ ｖｉｖｏにおいて、細胞（例えば、気道細胞）へと形質導入して、目的のトランス遺伝子を発現する改変細胞を作製する工程；および（ｂ）結果として得られる改変細胞を投与する工程を含む。

【0229】

本発明は、疾患を処置する方法であって、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを、対象へと投与する工程を含む方法を提供する。本明細書で記載される、任意の疾患は、本発明に従い処置される。特に、本発明は、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを使用して、肺疾患を処置する方法を提供する。処置される疾患は、慢性疾患でありうる。

【0230】

本発明はまた、本発明の核酸カセットまたはベクターも提供し、特に、疾患を処置する方法における使用のための、本明細書で記載される、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターも提供する。本明細書で記載される、任意の疾患は、本発明に従い処置される。特に、本発明は、本発明の核酸カセットまたはベクターも提供し、特に、肺疾患を処置する方法における使用のための、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを提供する。処置される疾患は、慢性疾患でありうる。

【0231】

本発明はまた、本発明の核酸カセットまたはベクターの使用も提供し、特に、疾患を処置する方法における使用のための医薬の製造における、本明細書で記載される、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの使用も提供する。本明細書で記載される、任意の疾患は、本発明に従い処置される。特に、本発明は、本発明の核酸カセットまたはベクターの使用を提供し、特に、肺疾患を処置する方法における使用のための医薬の製造のための、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの使用を提供する。処置される疾患は、慢性疾患でありうる。

【0232】

本発明はまた、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを含む細胞も提供する。前記細胞は、本明細書で記載される気道細胞の場合もあり、本明細書で記載される、本発明の前記核酸カセットまたはベクターの産生のための宿主細胞の場合もある。

【0233】

本明細書における、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターと関連する、任意の開示および全ての開示は、本明細書で記載される治療的使用および治療法に、同等に、かつ、留保なしに当てはまる。

【0234】

好ましくは、治療有効レベルにおける、長期的／持続的な安定的遺伝子発現は、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターの反復投与を使用して達成される。代替的に、単回投与は、所望の長期的発現を達成するのに使用される。

【0235】

製剤および投与
本発明はまた、本発明の核酸カセットまたはベクターを含み、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターを含み、場合により、薬学的に許容される担体、賦形剤、緩衝剤、または希釈剤を含む組成物も提供する。

【0236】

本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレンチウイルス（例えば、ＨＩＶ／ＳＩＶ）ベクターは、所望の治療効果を達成するために適切な、任意の投与量で投与される。適切な投与量は、標準法を使用して、医師、または他の医療従事者により、それらの通常の診療コース内で決定される。本発明のウイルスベクターの、適切な投与量の非限定例は、１×１０^８形質導入単位（ＴＵ）、１×１０^９ＴＵ、１×１０^１０ＴＵ、１×１０^１１ＴＵ、またはそれ以上の投与量を含む。本発明の非ウイルスベクター／非ウイルス性送達手段の、適切な投与量の非限定例は、最大で、投与１回当たり３０ｍＬ、最大で、投与１回当たり２５ｍＬ、最大で、投与１回当たり２０ｍＬ、最大で、投与１回当たり１５ｍＬ、最大で、投与１回当たり１０ｍＬ以下、好ましくは、最大で、投与１回当たり２０ｍＬを含む。

【0237】

本発明の組成物に含まれる、薬学的に許容される担体の非限定例は、水、生理食塩液、およびリン酸緩衝生理食塩液を含む。一部の実施形態では、しかし、組成物は、凍結乾燥形態にあり、この場合、組成物は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）などの安定化剤を含みうる。一部の実施形態では、長期保存を容易とするように、組成物を、チオメルサールまたはアジドナトリウムなどの保存剤と共に製剤化することが所望でありうる。

【0238】

本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターは、任意の適切な経路により投与される。本発明の組成物（上記で記載された）を、対象の呼吸器系へと方向付けることが所望でありうる。治療用組成物／予防用組成物または治療用医薬／予防用医薬の、呼吸器内の疾患または障害の部位への効率的な伝搬は、例えば、エアゾール（例えば、経鼻スプレー）として、またはカテーテルを介して、経口投与により達成される場合もあり、鼻腔内投与により達成される場合もある。典型的に、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターは、臨床的に妥当な噴霧器、吸入器（用量計量型吸入器を含む）、カテーテル、およびエアゾールなどにおいて安定である。

【0239】

静脈内投与、鼻腔内投与、および胸膜内注射を含むがこれらに限定されない、他の投与経路もまた、本発明により包含される。当技術分野では、適切な投与経路が公知である。

【0240】

一部の実施形態では、鼻腔は、以下の理由：（ｉ）炎症性細胞および痰などの細胞外障壁が、鼻腔内では、それほど顕著ではないこと；（ｉｉ）ベクター投与の容易さ；（ｉｉｉ）要求されるベクターの数量が小さいこと；および（ｉｖ）倫理的検討事項のうちの少なくとも１つのために、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターを使用する治療用タンパク質に好ましい産生部位である。したがって、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターの経鼻投与は、目的の治療用タンパク質の、効率的（高レベル）であり、かつ、長期持続性の発現を結果としてもたらすことが可能である。したがって、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターの経鼻投与は、好ましい場合がある。

【0241】

鼻腔内投与のための製剤は、経鼻滴下剤または経鼻スプレー剤の形態でありうる。鼻腔内製剤は、おおよその直径を、５００～４０００μｍ、１０００～３０００μｍ、または１００～１０００μｍなど、１００～５０００μｍの範囲とする滴下剤を含みうる。代替的に、容量の点では、滴下剤は、０．１～５０μｌもしくは１．０～２５μｌなど、約０．００１～１００μｌ、または０．００１～１μｌなどの範囲でありうる。

【0242】

エアゾール製剤は、粉末の形態を取る場合もあり、懸濁液の形態を取る場合もあり、溶液の形態を取る場合もある。エアゾール粒子のサイズは、エアゾールの送達能に関連する。小型粒子は、大型粒子よりも、肺胞へと、さらに末端まで呼吸器気道を移動しうる。一実施形態では、エアゾール粒子は、気管支、細気管支、および肺胞の全長に沿った送達を容易とする直径分布を有する。代替的に、粒子サイズ分布は、呼吸器気道の特定の区画、例えば、肺胞をターゲティングするように選択される。医薬のエアゾール送達の場合、粒子は、直径が、おおよそ、０．１～５０μｍ、好ましくは、１～２５μｍ、より好ましくは、１～５μｍの範囲でありうる。

【0243】

エアゾール粒子は、噴霧器（例えば、口腔を介する）または経鼻スプレーを使用する送達のためのエアゾール粒子でありうる。エアゾール製剤は、場合により、高圧ガスおよび／または界面活性剤を含有しうる。

【0244】

医薬用エアゾールの製剤化は、当業者に規定の製剤化である（例えば、Ｓｃｉａｒｒａ，Ｊ．、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（前出）を参照されたい）。薬剤は、乾燥粉末のエアゾール溶液、エアゾール分散液、またはエアゾール懸濁液として製剤化される場合もあり、エマルジョンとして製剤化される場合もあり、半固体製造物として製剤化される場合もある。エアゾールは、当業者に公知である、任意の高圧ガスシステムを使用して送達される。エアゾールは、例えば、経鼻吸入により、上気道へと適用される場合もあり、下気道へと適用される場合もあり、これらの両方へと適用される場合もある。医薬が送達される肺の部分は、障害により決定される。本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターを含む組成物は、保湿剤を含む場合があり、特に、鼻腔内送達が使用される場合、保湿剤を含みうる。これは、粘膜の乾燥を低減または防止し、膜の刺激を防止する一助となりうる。適切な保湿剤は、例えば、ソルビトール、鉱物油、植物油、およびグリセリン；鎮静剤；膜コンディショナー；甘味剤；ならびにこれらの組合せを含む。組成物は、界面活性剤を含みうる。適切な界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、およびカチオン性界面活性剤を含む。使用される界面活性剤の例は、例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０、ステアリン酸ポリオキシル４０、ステアリン酸ポリオキシエチレン５０、フシジン酸塩（ｆｕｓｉｅａｔｅｓ）、胆汁塩、およびオクトキシノールなど、例えば、ソルビトール無水物の部分脂肪酸エステルのポリオキシエチレン誘導体を含む。

【0245】

場合によって、初期投与の後、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターの後続の投与が実施される場合がある。投与は、例えば、初期投与の後、少なくとも１週間、２週間、１カ月間、２カ月間、６カ月間、１年間またはそれ以上にわたる投与でありうる。一部の場合に、本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、本発明のレトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターは、少なくとも毎週１回、隔週１回、毎月１回、２カ月ごと、６カ月ごと、毎年、またはそれ以上の間隔で投与される。好ましくは、投与は、６カ月ごと、より好ましくは、毎年である。本発明の核酸カセットまたはベクター、特に、レトロウイルス／レンチウイルス（例えば、ＳＩＶ）ベクターは、例えば、既往の投与の効果が低下しつつある場合は、指示される間隔で投与される。

【0246】

配列相同性
限定せずに述べると、大域法、局所法、および、例えば、セグメント法などのハイブリッド法を含む、様々な配列アライメント法のうちのいずれかが、同一性パーセントを決定するのに使用される。同一性パーセントを決定するプロトコールは、当業者の技術範囲内にある、規定の手順である。大域法は、配列を、分子の開始部から、末端部へとアライメントし、個々の残基対のスコアを足し合わせ、ギャップペナルティーを課することにより、最良のアライメントを決定する。非限定的方法は、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗ（例えば、Ｊｕｌｉｅ Ｄ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、「ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗ：Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｔｈｒｏｕｇｈ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ，Ｐｏｓｉｔｉｏｎ － Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｉｅｓ ａｎｄ Ｗｅｉｇｈｔ Ｍａｔｒｉｘ Ｃｈｏｉｃｅ」、２２（２２）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、４６７３～４６８０（１９９４）を参照されたい）；および反復精緻化（例えば、Ｏｓａｍｕ Ｇｏｔｏｈ、「Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｉｎ Ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ ｂｙ Ｉｔｅｒａｔｉｖｅ Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ ａｓ Ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ」、２６４（４）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、８２３～８３８（１９９６）を参照されたい）を含む。局所法は、インプット配列の全てにより共有される、１つまたはそれ以上の保存的モチーフを同定することにより、配列をアライメントする。非限定的方法は、例えば、Ｍａｔｃｈ－ｂｏｘ法（例えば、Ｅｒｉｃ Ｄｅｐｉｅｒｅｕｘ ａｎｄ Ｅｒｎｅｓｔ Ｆｅｙｔｍａｎｓ、「Ｍａｔｃｈ－Ｂｏｘ：Ａ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｌｙ Ｎｅｗ Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｆｏｒ Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｅｖｅｒａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」、８（５）、ＣＡＢＩＯＳ、５０１～５０９（１９９２）を参照されたい）；ギブスサンプリング法（例えば、Ｃ．Ｅ．Ｌａｗｒｅｎｃｅら、「Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｓｕｂｔｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｓｉｇｎａｌｓ：Ａ Ｇｉｂｂｓ Ｓａｍｐｌｉｎｇ Ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ、２６２（５１３１）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０８～２１４（１９９３）を参照されたい）；Ａｌｉｇｎ－Ｍ法（例えば、Ｉｖｏ Ｖａｎ ＷａＩＩｅら、「Ａｌｉｇｎ －Ｍ － Ａ Ｎｅｗ Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｆｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈｌｙ Ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」、２０（９）、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１４２８～１４３５（２００４）を参照されたい）を含む。

【0247】

したがって、配列同一性パーセントは、常套的方法により決定される。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｂｕｌｌ．Ｍａｔｈ．Ｂｉｏ．、４８：６０３～１６、１９８６；ならびにＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：１０９１５～１９、１９９２を参照されたい。略述すると、２つのアミノ酸配列は、下記で示される通り（アミノ酸は、標準的一文字コードにより指し示される）、１０のギャップ開始ペナルティー、１のギャップ伸張ペナルティー、およびＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（同上）による、「ｂｌｏｓｕｍ ６２」評定マトリックスを使用して、アライメントスコアを最適化するようにアライメントされる。

【0248】

２つまたはそれ以上の核酸配列またはアミノ酸配列の間の「配列同一性パーセント」とは、配列により共有される、同一な位置の数の関数である。したがって、同一性％は、ヌクレオチド／アミノ酸の総数で除され、１００を乗じられた、同一なヌクレオチド／アミノ酸の数として計算される。配列同一性％の計算はまた、２つまたはそれ以上の配列のアライメントを最適化するのに導入される必要がある、ギャップの数、および各ギャップの長さも考慮に入れうる。２つまたはそれ以上の配列の間における、配列の比較および同一性パーセントの決定は、当業者が精通している、ＢＬＡＳＴなどの、特異的数学的アルゴリズムを使用して実行される。

【0249】

配列同一性を決定するためのアライメントスコア
A R N D C Q E G H I L K M F P S T W Y V
A 4
R -1 5
N -2 0 6
D -2 -2 1 6
C 0 -3 -3 -3 9
Q -1 1 0 0 -3 5
E -1 0 0 2 -4 2 5
G 0 -2 0 -1 -3 -2 -2 6
H -2 0 1 -1 -3 0 0 -2 8
I -1 -3 -3 -3 -1 -3 -3 -4 -3 4
L -1 -2 -3 -4 -1 -2 -3 -4 -3 2 4
K -1 2 0 -1 -3 1 1 -2 -1 -3 -2 5
M -1 -1 -2 -3 -1 0 -2 -3 -2 1 2 -1 5
F -2 -3 -3 -3 -2 -3 -3 -3 -1 0 0 -3 0 6
P -1 -2 -2 -1 -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 -1 -2 -4 7
S 1 -1 1 0 -1 0 0 0 -1 -2 -2 0 -1 -2 -1 4
T 0 -1 0 -1 -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1 1 5
W -3 -3 -4 -4 -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1 1 -4 -3 -2 11
Y -2 -2 -2 -3 -2 -1 -2 -3 2 -1 -1 -2 -1 3 -3 -2 -2 2 7
V 0 -3 -3 -3 -1 -2 -2 -3 -3 3 1 -2 1 -1 -2 -2 0 -3 -1 4
したがって、同一性パーセントは、
［同一であるマッチの総数］／［長い方の配列の長さ＋２つの配列をアライメントするために、長い方の配列へと導入されたギャップの数］×１００
として計算される。

【0250】

実質的に相同なポリペプチドは、１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を有するポリペプチドとして特徴付けられる。これらの変化は、好ましくは、保存的アミノ酸置換（本明細書で記載される）、およびポリペプチドのフォールディングまたは活性に著明な影響を及ぼさない、他の置換である、軽微な性格の変化；典型的に、１～約３０アミノ酸である、小型の欠失；ならびにアミノ末端のメチオニン残基など、小型のアミノ末端もしくはカルボキシル末端の伸張、最大で約２０～２５残基である、小型のリンカーペプチド、またはアフィニティータグである。

【0251】

２０の標準アミノ酸に加えて、非標準アミノ酸（４－ヒドロキシプロリン、６－Ｎ－メチルリシン、２－アミノイソ酪酸、イソバリン、およびα－メチルセリンなど）は、本発明のポリペプチドのアミノ酸残基で置換されている。限定数の非保存的アミノ酸、遺伝子コードによりコードされないアミノ酸、および非天然アミノ酸は、ポリペプチドのアミノ酸残基で置換されている。本発明のポリペプチドはまた、天然に存在しないアミノ酸残基も含みうる。

【0252】

天然に存在しないアミノ酸は、限定せずに述べると、ｔｒａｎｓ－３－メチルプロリン、２，４－メタノ－プロリン、ｃｉｓ－４－ヒドロキシプロリン、ｔｒａｎｓ－４－ヒドロキシプロリン、Ｎ－メチルグリシン、ａｌｌｏ－トレオニン、メチルトレオニン、ヒドロキシエチルシステイン、ヒドロキシエチルホモシステイン、ニトログルタミン、ホモグルタミン、ピペコリン酸、ｔｅｒｔ－ロイシン、ノルバリン、２－アザフェニルアラニン、３－アザフェニルアラニン、４－アザフェニルアラニン、および４－フルオロフェニルアラニンを含む。当技術分野では、天然に存在しないアミノ酸残基を、タンパク質へと組み込むための、いくつかの方法が公知である。例えば、化学的にアミノアシル化された、サプレッサーｔＲＮＡを使用して、ナンセンス突然変異が抑制される、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系が利用される。当技術分野では、アミノ酸およびアミノアシル化ｔＲＮＡを合成するための方法が公知である。ナンセンス突然変異を含有するプラスミドの転写および翻訳は、大腸菌Ｓ３０抽出物ならびに市販の酵素および他の試薬を含む、無細胞系において実行される。タンパク質は、クロマトグラフィーにより精製される。例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１１３：２７２２、１９９１；Ｅｌｌｍａｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、２０２：３０１、１９９１；Ｃｈｕｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５９：８０６～９、１９９３；およびＣｈｕｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：１０１４５～９、１９９３を参照されたい。第２の方法では、翻訳は、突然変異されたｍＲＮＡおよび化学的にアミノアシル化されたサプレッサーｔＲＮＡのマイクロインジェクションにより、アフリカツメガエル卵母細胞において実行される（Ｔｕｒｃａｔｔｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１：１９９９１～８、１９９６）。第３の方法の中では、大腸菌細胞が、置きかえられる天然アミノ酸（例えば、フェニルアラニン）の非存在下で、かつ、所望の天然に存在しないアミノ酸（複数可）（例えば、２－アザフェニルアラニン、３－アザフェニルアラニン、４－アザフェニルアラニン、または４－フルオロフェニルアラニン）の存在下で培養される。天然に存在しないアミノ酸は、その天然対応物の代わりに、ポリペプチドへと組み込まれる。Ｋｏｉｄｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３３：７４７０～６、１９９４を参照されたい。天然に存在するアミノ酸残基は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける化学修飾により、天然に存在しない分子種へと転換される。化学修飾は、置換の範囲をさらに拡張するように、部位指定突然変異誘発と組み合わされる（ＷｙｎｎおよびＲｉｃｈａｒｄｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．、２：３９５～４０３、１９９３）。

【0253】

限定数の非保存的アミノ酸、遺伝子コードによりコードされないアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、および非天然アミノ酸は、本発明のポリペプチドのアミノ酸残基で置換されている。

【0254】

本発明のポリペプチド内の必須アミノ酸は、部位指定突然変異誘発またはアラニン走査突然変異誘発（ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１～５、１９８９）など、当技術分野で公知の手順に従い同定される。生物学的相互作用の部位もまた、推定接触部位のアミノ酸の突然変異を伴う、核磁気共鳴、結晶構造解析、電子回折、または光アフィニティー標識付けなどの技法により決定される構造についての物理学的解析により決定される。例えば、ｄｅ Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５５：３０６～１２、１９９２；Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２４：８９９～９０４、１９９２；Ｗｌｏｄａｖｅｒら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．、３０９：５９～６４、１９９２を参照されたい。必須アミノ酸の識別もまた、本発明のポリペプチドの関連する構成要素（例えば、転座構成要素またはプロテアーゼ構成要素）との相同性についての解析から推定される。

【0255】

Ｒｅｉｄｈａａｒ－ＯｌｓｏｎおよびＳａｕｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４１：５３～７、１９８８）；またはＢｏｗｉｅおよびＳａｕｅｒ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：２１５２～６、１９８９）により開示される、突然変異誘発法およびスクリーニング法など、公知の突然変異誘発法およびスクリーニング法を使用して、複数のアミノ酸置換が施され、調べられる。略述すると、これらの著者は、ポリペプチド内の２つまたはそれ以上の位置を、同時にランダム化し、機能的なポリペプチドについて選択し、次いで、突然変異されたポリペプチドをシーケンシングして、各位置において許容可能な置換のスペクトルを決定する方法を開示する。使用される他の方法は、ファージディスプレイ法（例えば、Ｌｏｗｍａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３０：１０８３２～７、１９９１；Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｈｕｓｅ、ＷＩＰＯ公開第ＷＯ９２／０６２０４号）、および領域指定突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅら、Ｇｅｎｅ、４６：１４５、１９８６；Ｎｅｒら、ＤＮＡ、７：１２７、１９８８）を含む。

【0256】

Ｒｅｉｄｈａａｒ－ＯｌｓｏｎおよびＳａｕｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４１：５３～７、１９８８）；またはＢｏｗｉｅおよびＳａｕｅｒ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：２１５２～６、１９８９）により開示される、突然変異誘発法およびスクリーニング法など、公知の突然変異誘発法およびスクリーニング法を使用して、複数のアミノ酸置換が施され、調べられる。略述すると、これらの著者は、ポリペプチド内の２つまたはそれ以上の位置を、同時にランダム化し、機能的なポリペプチドについて選択し、次いで、突然変異されたポリペプチドをシーケンシングして、各位置において許容可能な置換のスペクトルを決定する方法を開示する。使用される他の方法は、ファージディスプレイ法（例えば、Ｌｏｗｍａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３０：１０８３２～７、１９９１；Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｈｕｓｅ、ＷＩＰＯ公開第ＷＯ９２／０６２０４号）、および領域指定突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅら、Ｇｅｎｅ、４６：１４５、１９８６；Ｎｅｒら、ＤＮＡ、７：１２７、１９８８）を含む。

【0257】

配列情報
配列解
配列番号１＝Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１スパイクタンパク質のアミノ酸配列（ｐＧＭ８８７ Ｓ－ＬＶ ｖ０１によりコードされる）
配列番号２＝Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ８９６ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
配列番号３＝Ｓ：Ｇ６１４のアミノ酸配列（ｐＧＭ９０６ Ｓ－ＬＶ ｖ０１によりコードされる）
配列番号４＝Ｓ：Ｇ６１４＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９０７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
配列番号５＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１のアミノ酸配列（ｐＧＭ８９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０１によりコードされる）
配列番号６＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９０４ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
配列番号７＝Ｓ：Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９６５ Ｓ－ＬＶ ｖ０４によりコードされる）
配列番号８＝Ｓ：Ｂ．１．１３５１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９７０ Ｓ－ＬＶ ｖ０４によりコードされる）
配列番号９＝Ｓ：Ｂ．１．１．７／Ｂ．１．１３５１キメラ＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０００ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
配列番号１０＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０２７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
配列番号１１＝Ｃ．３７＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０２８ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
配列番号１２＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９３７ Ｓ－ＬＶ ｖ０３によりコードされる）
配列番号１３＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０３によりコードされる）
配列番号１４＝ｍａＳ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０３によりコードされる）
配列番号１５＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０４によりコードされる）
配列番号１６＝Ｃ．３７，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
配列番号１７＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ４８９，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０４０ Ｓ－ＬＶ ｖ０４によりコードされる）
配列番号１８＝Ｃ．３７，Ｙ４８９，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０４１ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
配列番号１９＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
配列番号２０＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９９９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
配列番号２１＝フーリン部位をノックアウトされたＳ：Ｇ６１４のアミノ酸配列（ｐＧＭ１０２６ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
配列番号２２＝Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１スパイクタンパク質の核酸配列（ｐＧＭ８８７ Ｓ－ＬＶ ｖ０１内に含まれる）
配列番号２３＝Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ８９６ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
配列番号２４＝Ｓ：Ｇ６１４の核酸配列（ｐＧＭ９０６ Ｓ－ＬＶ ｖ０１内に含まれる）
配列番号２５＝Ｓ：Ｇ６１４＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９０７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
配列番号２６＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１の核酸配列（ｐＧＭ８９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０１内に含まれる）
配列番号２７＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９０４ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
配列番号２８＝Ｓ：Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９６５ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
配列番号２９＝Ｓ：Ｂ．１．１３５１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９７０ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
配列番号３０＝Ｓ：Ｂ．１．１．７／Ｂ．１．１３５１キメラ＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０００ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
配列番号３１＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０２７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
配列番号３２＝Ｃ．３７＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０２８ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
配列番号３３＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９３７ Ｓ－ＬＶ ｖ０３内に含まれる）
配列番号３４＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０３内に含まれる）
配列番号３５＝ｍａＳ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０３内に含まれる）
配列番号３６＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
配列番号３７＝Ｃ．３７，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
配列番号３８＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ４８９，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０４０ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
配列番号３９＝Ｃ．３７，Ｙ４８９，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０４１ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
配列番号４０＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
配列番号４１＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９９９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
配列番号４２＝フーリン部位をノックアウトされたＳ：Ｇ６１４の核酸配列（ｐＧＭ１０２６ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
配列番号４３＝ｈＣＥＦプロモーター
配列番号４４＝ＣＭＶプロモーター
配列番号４５＝ヒト伸張因子１ａ（ＥＦ１ａ）プロモーター
配列番号４６＝ＷＰＲＥ構成要素（ｍＷＰＲＥ）
配列番号４７＝（ｃｏ）ｈＡＣＥ２のためのフォワードプライマー
配列番号４８＝（ｃｏ）ｈＡＣＥ２のためのリバースプライマー
配列番号４９＝フォワードプライマー
配列番号５０＝リバースプライマー
配列番号５１＝ｈＴＭＰＲＳＳ２のためのフォワードプライマー
配列番号５２＝ｈＴＭＰＲＳＳ２のためのリバースプライマー
配列番号５３＝フォワードプライマー
配列番号５４＝リバースプライマー
配列番号５５＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１）のためのフォワードプライマー
配列番号５６＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１）のためのリバースプライマー
配列番号５７＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１）Δ１９のためのフォワードプライマー
配列番号５８＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１）Δ１９のためのリバースプライマー
配列番号５９＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０のためのフォワードプライマー
配列番号６０＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０のためのリバースプライマー
配列番号６１＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ変異株のためのフォワードプライマー
配列番号６２＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ変異株のためのリバースプライマー
配列番号６３＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｍＡＣＥ２馴化のためのフォワードプライマー
配列番号６４＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｍＡＣＥ２馴化のためのリバースプライマー

【0258】

配列
配列番号１＝Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１スパイクタンパク質のアミノ酸配列（ｐＧＭ８８７ Ｓ－ＬＶ ｖ０１によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号２＝Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ８９６ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号３＝Ｓ：Ｇ６１４のアミノ酸配列（ｐＧＭ９０６ Ｓ－ＬＶ ｖ０１によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号４＝Ｓ：Ｇ６１４＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９０７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号５＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１のアミノ酸配列（ｐＧＭ８９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０１によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号６＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９０４ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号７＝Ｓ：Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９６５ Ｓ－ＬＶ ｖ０４によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号８＝Ｓ：Ｂ．１．１３５１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９７０ Ｓ－ＬＶ ｖ０４によりコードされる）
図３を参照されたい

【0259】

配列番号９＝Ｓ：Ｂ．１．１．７／Ｂ．１．１３５１キメラ＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０００ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＫＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＹＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＶＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0260】

配列番号１０＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０２７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＶＩＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＱＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＳＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＮＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0261】

配列番号１１＝Ｃ．３７＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０２８ Ｓ－ＬＶ ｖ０２によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＶＩＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＱＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＳＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＮＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0262】

配列番号１２＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９３７ Ｓ－ＬＶ ｖ０３によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号１３＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０３によりコードされる）
図３を参照されたい
配列番号１４＝ｍａＳ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０３によりコードされる）
図３を参照されたい

【0263】

配列番号１５＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０４によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＲＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＤＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＧＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＲＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＫＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＹＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＲＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＮＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0264】

配列番号１６＝Ｃ．３７，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＶＩＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＱＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＳＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＹＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＮＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0265】

配列番号１７＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０４０ ＳＬＶ ｖ０４によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＲＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＤＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＧＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＲＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＫＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＹＴＴＹＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＲＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＮＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0266】

配列番号１８＝Ｃ．３７，Ｙ４８９，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ１０４１ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＶＩＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＱＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＳＰＬＱＳＹＧＦＹＴＴＹＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＮＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0267】

配列番号１９＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＹＴＴＹＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＤＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0268】

配列番号２０＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａのアミノ酸配列（ｐＧＭ９９９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
図３を参照されたい

【0269】

配列番号２１＝フーリン部位をノックアウトされたＳ：Ｇ６１４のアミノ酸配列（ｐＧＭ１０２６ Ｓ－ＬＶ ｖ０５によりコードされる）
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＱＣＶＮＬＴＴＲＴＱＬＰＰＡＹＴＮＳＦＴＲＧＶＹＹＰＤＫＶＦＲＳＳＶＬＨＳＴＱＤＬＦＬＰＦＦＳＮＶＴＷＦＨＡＩＨＶＳＧＴＮＧＴＫＲＦＤＮＰＶＬＰＦＮＤＧＶＹＦＡＳＴＥＫＳＮＩＩＲＧＷＩＦＧＴＴＬＤＳＫＴＱＳＬＬＩＶＮＮＡＴＮＶＶＩＫＶＣＥＦＱＦＣＮＤＰＦＬＧＶＹＹＨＫＮＮＫＳＷＭＥＳＥＦＲＶＹＳＳＡＮＮＣＴＦＥＹＶＳＱＰＦＬＭＤＬＥＧＫＱＧＮＦＫＮＬＲＥＦＶＦＫＮＩＤＧＹＦＫＩＹＳＫＨＴＰＩＮＬＶＲＤＬＰＱＧＦＳＡＬＥＰＬＶＤＬＰＩＧＩＮＩＴＲＦＱＴＬＬＡＬＨＲＳＹＬＴＰＧＤＳＳＳＧＷＴＡＧＡＡＡＹＹＶＧＹＬＱＰＲＴＦＬＬＫＹＮＥＮＧＴＩＴＤＡＶＤＣＡＬＤＰＬＳＥＴＫＣＴＬＫＳＦＴＶＥＫＧＩＹＱＴＳＮＦＲＶＱＰＴＥＳＩＶＲＦＰＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＫＫＳＴＮＬＶＫＮＫＣＶＮＦＮＦＮＧＬＴＧＴＧＶＬＴＥＳＮＫＫＦＬＰＦＱＱＦＧＲＤＩＡＤＴＴＤＡＶＲＤＰＱＴＬＥＩＬＤＩＴＰＣＳＦＧＧＶＳＶＩＴＰＧＴＮＴＳＮＱＶＡＶＬＹＱＧＶＮＣＴＥＶＰＶＡＩＨＡＤＱＬＴＰＴＷＲＶＹＳＴＧＳＮＶＦＱＴＲＡＧＣＬＩＧＡＥＨＶＮＮＳＹＥＣＤＩＰＩＧＡＧＩＣＡＳＹＱＴＱＴＮＳＰＳＲＡＳＳＶＡＳＱＳＩＩＡＹＴＭＳＬＧＡＥＮＳＶＡＹＳＮＮＳＩＡＩＰＴＮＦＴＩＳＶＴＴＥＩＬＰＶＳＭＴＫＴＳＶＤＣＴＭＹＩＣＧＤＳＴＥＣＳＮＬＬＬＱＹＧＳＦＣＴＱＬＮＲＡＬＴＧＩＡＶＥＱＤＫＮＴＱＥＶＦＡＱＶＫＱＩＹＫＴＰＰＩＫＤＦＧＧＦＮＦＳＱＩＬＰＤＰＳＫＰＳＫＲＳＦＩＥＤＬＬＦＮＫＶＴＬＡＤＡＧＦＩＫＱＹＧＤＣＬＧＤＩＡＡＲＤＬＩＣＡＱＫＦＮＧＬＴＶＬＰＰＬＬＴＤＥＭＩＡＱＹＴＳＡＬＬＡＧＴＩＴＳＧＷＴＦＧＡＧＡＡＬＱＩＰＦＡＭＱＭＡＹＲＦＮＧＩＧＶＴＱＮＶＬＹＥＮＱＫＬＩＡＮＱＦＮＳＡＩＧＫＩＱＤＳＬＳＳＴＡＳＡＬＧＫＬＱＤＶＶＮＱＮＡＱＡＬＮＴＬＶＫＱＬＳＳＮＦＧＡＩＳＳＶＬＮＤＩＬＳＲＬＤＫＶＥＡＥＶＱＩＤＲＬＩＴＧＲＬＱＳＬＱＴＹＶＴＱＱＬＩＲＡＡＥＩＲＡＳＡＮＬＡＡＴＫＭＳＥＣＶＬＧＱＳＫＲＶＤＦＣＧＫＧＹＨＬＭＳＦＰＱＳＡＰＨＧＶＶＦＬＨＶＴＹＶＰＡＱＥＫＮＦＴＴＡＰＡＩＣＨＤＧＫＡＨＦＰＲＥＧＶＦＶＳＮＧＴＨＷＦＶＴＱＲＮＦＹＥＰＱＩＩＴＴＤＮＴＦＶＳＧＮＣＤＶＶＩＧＩＶＮＮＴＶＹＤＰＬＱＰＥＬＤＳＦＫＥＥＬＤＫＹＦＫＮＨＴＳＰＤＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬＧＫＹＥＱＹＩＫＷＰＷＹＩＷＬＧＦＩＡＧＬＩＡＩＶＭＶＴＩＭＬＣＣＭＴＳＣＣＳＣＬＫＧＣＣＳＣＧＳＣＣ＊

【0270】

配列番号２２＝Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１スパイクタンパク質の核酸配列（ｐＧＭ８８７ Ｓ－ＬＶ ｖ０１内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号２３＝Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ８９６ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号２４＝Ｓ：Ｇ６１４の核酸配列（ｐＧＭ９０６ Ｓ－ＬＶ ｖ０１内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号２５＝Ｓ：Ｇ６１４＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９０７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号２６＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１の核酸配列（ｐＧＭ８９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０１内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号２７＝Ｓ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９０４ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号２８＝Ｓ：Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９６５ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号２９＝Ｓ：Ｂ．１．１３５１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９７０ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
図２を参照されたい

【0271】

配列番号３０＝Ｓ：Ｂ．１．１．７／Ｂ．１．１３５１キメラ＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０００ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＴＣＡＴＡＴＣＴＴＡＣＡＣＣＡＧＧＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧａＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣｔＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧｔＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣＣＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧｔＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0272】

配列番号３１＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０２７ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡｇｇＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧａＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣｇＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＴＣＡＴＡＴＣＴＴＡＣＡＣＣＡＧＧＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣｇＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡａＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣｇＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧａＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0273】

配列番号３２＝Ｃ．３７＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０２８ Ｓ－ＬＶ ｖ０２内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧｔＣＡｔＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣａＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣａｇｔＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣＣＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡａｃＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0274】

配列番号３３＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９３７ Ｓ－ＬＶ ｖ０３内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号３４＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０３内に含まれる）
図２を参照されたい
配列番号３５＝ｍａＳ：Ａｕｓ／ＶＩＣ０１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０３内に含まれる）
図２を参照されたい

【0275】

配列番号３６＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０３８ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡｇｇＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧａＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣｇＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＴＣＡＴＡＴＣＴＴＡＣＡＣＣＡＧＧＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣｇＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡａＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣｔＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣｇＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧａＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0276】

配列番号３７＝Ｃ．３７，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０３９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧｔＣＡｔＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣａＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣａｇｔＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣｔＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣＣＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡａｃＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0277】

配列番号３８＝Ｓ：Ｂ．１．６１７．２，Ｙ４８４，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０４０ Ｓ－ＬＶ ｖ０４内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡｇｇＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧａＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣｇＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＴＣＡＴＡＴＣＴＴＡＣＡＣＣＡＧＧＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣｇＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡａＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣｔａｔａＣＴＡＣＣｔＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣｇＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧａＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0278】

配列番号３９＝Ｃ．３７，Ｙ４８９，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ１０４１ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧｔＣＡｔＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣａＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣａｇｔＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣｔａｔａＣＴＡＣＣｔＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣＣＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡａｃＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0279】

配列番号４０＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９９８ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＴＣＡＴＡＴＣＴＴＡＣＡＣＣＡＧＧＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣｔＡｔａＣＴＡＣＣｔＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧＡＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣＣＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0280】

配列番号４１＝ｍａＳ：Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａの核酸配列（ｐＧＭ９９９ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
図２を参照されたい

【0281】

配列番号４２＝フーリン部位をノックアウトされたＳ：Ｇ６１４の核酸配列（ｐＧＭ１０２６ Ｓ－ＬＶ ｖ０５内に含まれる）
ＡＴＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＡＴＡＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＣＧＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＴＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＴＣＧＴＣＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＧＡＧＴＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＣＣＡＴＴＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＴＣＡＴＡＴＣＴＴＡＣＡＣＣＡＧＧＣＧＡＴＴＣＧＴＣＡＡＧＣＧＧＴＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＴＡＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＣＣＧＡＣＧＣＡＧＴＴＧＡＴＴＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＧＧＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＧＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＣＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＧＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＣＣＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＡＴＧＧＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＣＧＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＡＴＧＧＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＣＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＣＧＧＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＧｇＣＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＴＣＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＣＣＣＴＡＧｔＡＧＡＧＣＣＡＧｔＡＧＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＴＡＧＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＧＴＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＧＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＣＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＡＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＡＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＡＡＴＴＧＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡ

【0282】

配列番号４３＝ｈＣＥＦプロモーター
1 AGATCTGTTA CATAACTTAT GGTAAATGGC CTGCCTGGCT GACTGCCCAA TGACCCCTGC
61 CCAATGATGT CAATAATGAT GTATGTTCCC ATGTAATGCC AATAGGGACT TTCCATTGAT
121 GTCAATGGGT GGAGTATTTA TGGTAACTGC CCACTTGGCA GTACATCAAG TGTATCATAT
181 GCCAAGTATG CCCCCTATTG ATGTCAATGA TGGTAAATGG CCTGCCTGGC ATTATGCCCA
241 GTACATGACC TTATGGGACT TTCCTACTTG GCAGTACATC TATGTATTAG TCATTGCTAT
301 TACCATGGGA ATTCACTAGT GGAGAAGAGC ATGCTTGAGG GCTGAGTGCC CCTCAGTGGG
361 CAGAGAGCAC ATGGCCCACA GTCCCTGAGA AGTTGGGGGG AGGGGTGGGC AATTGAACTG
421 GTGCCTAGAG AAGGTGGGGC TTGGGTAAAC TGGGAAAGTG ATGTGGTGTA CTGGCTCCAC
481 CTTTTTCCCC AGGGTGGGGG AGAACCATAT ATAAGTGCAG TAGTCTCTGT GAACATTCAA
541 GCTTCTGCCT TCTCCCTCCT GTGAGTTTGC TAGC

【0283】

配列番号４４＝ＣＭＶプロモーター
ＣＣＧＣＧＧＡＧＡＴＣＴＣＡＡＴＡＴＴＧＧＣＣＡＴＴＡＧＣＣＡＴＡＴＴＡＴＴＣＡＴＴＧＧＴＴＡＴＡＴＡＧＣＡＴＡＡＡＴＣＡＡＴＡＴＴＧＧＣＴ ＡＴＴＧＧＣＣＡＴＴＧＣＡＴＡＣＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡＴＡＴＣＡＴＡＡＴＡＴＧＴＡＣＡＴＴＴＡＴＡＴＴＧＧＣＴＣＡＴＧＴＣＣＡＡＴＡＴＧＡＣＣ ＧＣＣＡＴＧＴＴＧＧＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡ ＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣ ＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴ ＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴ ＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴ ＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＴＧＣＧＧＴＴＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＣＣＡＡＴＧＧＧＣＧ ＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＴＴＴＧＡＣＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴＴＧＴＴＴＴＧＧ ＣＡＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＣＧＴＡＡＴＡＡＣＣＣＣＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＣＧＣＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧＧＣ ＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＡＧＧＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴＣＡＣＴＡＧＡＡＧＣＴＴＴＡＴＴＧＣ ＧＧＴＡＧＴＴＴＡＴＣＡＣＡＧＴＴＡＡＡＴＴＧＣＴＡＡＣＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＴＴＣＴＧＡＣＡＣＡＡＣＡＧＴＣＴＣＧＡＡＣＴＴＡＡＧＣＴＧＣ ＡＧＡＡＧＴＴＧＧＴＣＧＴＧＡＧＧＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＧＣＴＡＧＣ

【0284】

配列番号４５＝ヒト伸張因子１ａ（ＥＦ１ａ）プロモーター
ＡＧＡＴＣＣＡＴＡＴＣＣＧＣＧＧＣＡＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＧＧＡＡＴＡＧＧＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＧＡＣＴＡＡＴＴＡＡＴＡＴＡＡＴＡＡＣＡＡＣＡＣＡＡＴＴＡＧＡＡＡＴＡＣＡＡＣＡＴＴＴＡＣＡＡＡＣＣＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＡＡＡＴＴＴＴＡＡＡＴＴＴＴＡＧＡＧＣＣＧＣＧＧＡＧＡＴＣＣＣＧＴＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＣＣＣＧＴＣＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＡＴＴＧＡＡＣＣＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＡＧＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＣＧＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＴＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＣＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＧＴＡＧＴＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＡＧＧＣＴＡＧＣ

【0285】

配列番号４６＝ＷＰＲＥ構成要素（ｍＷＰＲＥ）
1 GGGCCCAATC AACCTCTGGA TTACAAAATT TGTGAAAGAT TGACTGGTAT TCTTAACTAT
61 GTTGCTCCTT TTACGCTATG TGGATACGCT GCTTTAATGC CTTTGTATCA TGCTATTGCT
121 TCCCGTATGG CTTTCATTTT CTCCTCCTTG TATAAATCCT GGTTGCTGTC TCTTTATGAG
181 GAGTTGTGGC CCGTTGTCAG GCAACGTGGC GTGGTGTGCA CTGTGTTTGC TGACGCAACC
241 CCCACTGGTT GGGGCATTGC CACCACCTGT CAGCTCCTTT CCGGGACTTT CGCTTTCCCC
301 CTCCCTATTG CCACGGCGGA ACTCATCGCC GCCTGCCTTG CCCGCTGCTG GACAGGGGCT
361 CGGCTGTTGG GCACTGACAA TTCCGTGGTG TTGTCGGGGA AATCATCGTC CTTTCCTTGG
421 CTGCTCGCCT GTGTTGCCAC CTGGATTCTG CGCGGGACGT CCTTCTGCTA CGTCCCTTCG
481 GCCCTCAATC CAGCGGACCT TCCTTCCCGC GGCCTGCTGC CGGCTCTGCG GCCTCTTCCG
541 CGTCTTCGCC TTCGCCCTCA GACGAGTCGG ATCTCCCTTT GGGCCGCCTC CCCGCAAGCT

【0286】

配列番号４７＝（ｃｏ）ｈＡＣＥ２のためのフォワードプライマー
ＣＧＡ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＴ ＴＴＧ ＣＡＣ ＧＴ
配列番号４８＝（ｃｏ）ｈＡＣＥ２のためのリバースプライマー
ＣＧＡ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＴ ＴＴＧ ＣＡＣ ＧＴ
配列番号４９＝フォワードプライマー
ＣＧＡ ＣＴＣ ＴＡＧ ＡＧＴ ＣＧＡ ＣＧＧ ＴＴ
配列番号５０＝リバースプライマー
ＧＡＴ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＣＡ ＧＧＣ ＡＣＣ ＧＧＧ ＣＴＴ Ｇ
配列番号５１＝ｈＴＭＰＲＳＳ２のためのフォワードプライマー
ＡＡＴ ＧＣＴ ＡＧＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＧＣ ＴＴＴ ＧＡＡ ＣＴＣ ＡＧ
配列番号５２＝ｈＴＭＰＲＳＳ２のためのリバースプライマー
ＧＴＣ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＣＣ ＧＴＣ ＴＧＣ ＣＣＴ ＣＡＴ ＴＴ
配列番号５３＝フォワードプライマー
ＡＣＧ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＣＡ ＡＣＡ ＡＡＣ ＴＴＣ ＴＣＴ ＣＴＧ ＣＴ
配列番号５４＝リバースプライマー
ＴＡＴ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＡＧ ＣＣＣ ＴＣＣ ＣＡＣ ＡＣＡ ＴＡＡ Ｃ
配列番号５５＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１）のためのフォワードプライマー
ＣＡＧ ＧＣＴ ＡＧＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＴＴ ＣＧＴ ＧＴＴ ＣＣＴ ＧＧＴ
配列番号５６＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１）のためのリバースプライマー
ＡＴＡ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＣＡＧ ＧＴＧ ＴＡＧ ＴＧＣ ＡＧＣ ＴＴＣ ＡＣ
配列番号５７＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１） Δ１９のためのフォワードプライマー
ＣＡＧ ＧＣＴ ＡＧＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＴＴ ＣＧＴ ＧＴＴ ＣＣＴ ＧＧＴ
配列番号５８＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１） Δ１９のためのリバースプライマー
ＡＴＡ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＣＡ ＧＣＡ ＧＣＡ ＧＧＡ ＣＣＣ ＡＣＡ ＣＧＡ ＡＣＡ
配列番号５９＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０のためのフォワードプライマー
ＣＣＴ ＧＣＡ ＣＡＧ ＡＡＡ ＧＴＡ ＴＣＴ ＴＡＣ ＡＣＣ ＡＧＧ ＣＧＡ ＴＴＣ
配列番号６０＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０のためのリバースプライマー
ＧＣＣ ＡＧＣ ＡＧＧ ＧＴＣ ＴＧＧ ＡＡＴ
配列番号６１＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ変異株のためのフォワードプライマー
ＧＣＴ ＧＴＡ ＣＣＡ ＧＧＧ ＣＧＴ ＧＡＡ ＴＴＧ Ｃ
配列番号６２＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ変異株のためのリバースプライマー
ＡＣＧ ＧＣＣ ＡＣＣ ＴＧＡ ＴＴＧ ＣＴＧ
配列番号６３＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｍＡＣＥ２馴化のためのフォワードプライマー
ＣＴＡ ＣＧＧ ＣＴＴ ＣＴＡ ＴＡＣ ＴＡＣ ＣＡＡ ＴＧＧ ＣＧ
配列番号６４＝ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｍＡＣＥ２馴化のためのリバースプライマー
ＣＴＣ ＴＧＣ ＡＧＡ ＧＧＧ ＡＡＧ ＴＡＧ

【0287】

実施例
ここで、下記の実施例を参照することにより、本発明について記載される。これらは、本発明の範囲に対する限定ではなく、当業者は、本発明の範囲内では、適切な均等物が使用されることを理解するであろう。したがって、実施例は、本発明の構成部分であると考えられ、実施例で記載される、個々の態様は、独立に、または任意の組合せで開示される通りであると考えられる。

【0288】

材料および方法
合成ｃＤＮＡ配列、プラスミド、クローニング、および部位指定突然変異誘発
Ｊａｖａ Ｃｏｄｏｎ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ（ＪＣａｔ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃａｔ．ｄｅ／ＣＡＩＣａｌｃｕｌａｔｉｏｎ．ｊｓｐ）を使用して、ヒト（ｈ）ＡＣＥ２ｃＤＮＡ（ＮＭ＿０２１８０４．２）を、ヒトにおける発現についてコドン最適化（（ｃｏ）ｈＡＣＥ２）し、Ｔｗｉｓｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｗｉｓｔｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｇｅｎｅｓ）により、制限酵素部位である、５’ＮｈｅＩおよび３’ＰｓｐＯＭＩを伴うクローニングプラスミド（ｐＧＭ８４５）として合成した。ＧｅｎｅＡｒｔ Ｇｅｎｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｓｅｒｖｉｃｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｏｒｄｅｒ／ｇｅｎｅａｒｔｇｅｎｅｓ）を使用して、マウス（ｍ）ＡＣＥ２（ＮＭ＿００１１３０５１３．１）を、ヒトにおける発現についてコドン最適化（（ｃｏ）ｍＡＣＥ２）し、そのカノニカル終止コドンを欠失させ、制限部位である、５’ＮｈｅＩおよび３’ＸｂａＩを付加した、クローニングプラスミド（ｐＧＭ９４２）として合成した。ｈＴＭＰＲＳＳ２ ｃＤＮＡはｐＣＳＤｅｓｔ－ｈＴＭＰＲＳＳ２によりコードされ、Ｒｏｇｅｒ Ｒｅｅｖｅｓ（Ａｄｄｇｅｎｅ、５３８８７；ｈｔｔｐ：／／ｎ２ｔ．ｎｅｔ／ａｄｄｇｅｎｅ：５３８８７；ＲＲＩＤ：Ａｄｄｇｅｎｅ＿５３８８７）から恵与された。プラスミドであるＯＣＴ４－Ｆ２Ａ－Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ｐｕｒｏＲ）およびｐＨＩＶ１．ＥＦ１ａ－ｓｐＣａｓ９－ＦＬＡＧ－Ｐ２Ａ－Ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＢＳＲ）－ＷＰＲＥは、それぞれ、Ｊａｃｏｂ Ｈａｎｎａ（Ａｄｄｇｅｎｅ、５２３７９；ｈｔｔｐ：／／ｎ２ｔ．ｎｅｔ／ａｄｄｇｅｎｅ：５２３７９；ＲＲＩＤ：Ａｄｄｇｅｎｅ＿５２３７９）、およびＦｅｎｇ Ｚｈａｎｇ（Ａｄｄｇｅｎｅ、５２９６２；ｈｔｔｐ：／／ｎ２ｔ．ｎｅｔ／ａｄｄｇｅｎｅ：５２９６２；ＲＲＩＤ：Ａｄｄｇｅｎｅ＿５２９６２）からの恵与として提供された。Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１株配列に由来する、コドン最適化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ（（ｃｏ）Ｓ）は、発現ベクターであるｐｃＤＮＡ３．１（＋）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）ＳＷｕｈａｎＨｕ－１－Ｓｔｒｅｐ ｔａｇ ＩＩとして提供され、Ｎｉｇｅｌ Ｔｅｍｐｅｒｔｏｎ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｋｅｎｔから恵与された。アルファ（Ｂ．１．１．７：Δ６９－７０、Δ１４５、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、９６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、Ｄ１１１８Ｈ）ＶＯＣ、およびベータ（Ｂ．１．３５１：Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ａ７０１Ｖ）ＶＯＣを規定する、Ｓタンパク質の突然変異を包含する、部分的ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ配列（５’ＮｈｅＩおよび３’ＳｂｆＩに由来し、これらを包含する）は、Ｔｗｉｓｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅにより、クローニングプラスミド（それぞれ、ｐＧＭ９６４およびｐＧＭ９６９）として合成された。

【0289】

第三世代の自己不活化（ＳＩＮ）ＬＶベクタープラスミドは、下記で記載される通り、ＬＶゲノムである、ｐＧＭ２８５（ｐＨＩＶ１ ＣＭＶ ｅＧＦＰ ＷＰＲＥ）、ｐＧＭ８３６（ＨＩＶ１ ＣＭＶ Ｆｉｒｅｆｌｙ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ［ＦＬｕｃ］ＷＰＲＥ）、ｐＧＭ８４９（ｐＨＩＶ１ ＣＭＶ（ｃｏ）ｈＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ ＷＰＲＥ）、ｐＧＭ８８９（ｐＨＩＶ１ ＣＭＶ ｈＴＭＰＲＳＳ２－Ｐ２Ａ－ＢＳＲ ＷＰＲＥ）、およびｐＧＭ９４３（ｐＨＩＶ１ ＣＭＶ（ｃｏ）ｍＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ ＷＰＲＥ）を含んだ。加えて、ＨＩＶ１ パッケージングプラスミドは、Ｄｉｄｉｅｒ Ｔｒｏｎｏ（それぞれ、Ａｄｄｇｅｎｅ：１２２５１；ｈｔｔｐ：／／ｎ２ｔ．ｎｅｔ／ａｄｄｇｅｎｅ：１２２５１；ＲＲＩＤ：Ａｄｄｇｅｎｅ＿１２２５１、およびＡｄｄｇｅｎｅ：１２２５３；ｈｔｔｐ：／／ｎ２ｔ．ｎｅｔ／ａｄｄｇｅｎｅ：１２２５３；ＲＲＩＤ：Ａｄｄｇｅｎｅ＿１２２５３）から恵与された、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ（ＨＩＶ１ Ｇａｇ－Ｐｏｌ）およびｐＲＳＶ－Ｒｅｖ（ＨＩＶ１ Ｒｅｖ）を含んだ。最後に、エンベローププラスミドは、Ｄｉｄｉｅｒ Ｔｒｏｎｏ（Ａｄｄｇｅｎｅ：１２２５９；ｈｔｔｐ：／／６２３ ｎ２ｔ．ｎｅｔ／ａｄｄｇｅｎｅ：１２２５９；ＲＲＩＤ：Ａｄｄｇｅｎｅ＿１２２５９）から恵与された、ＶＳＶｇをコードするｐＭＤ２－Ｇを組み入れ、ｐＧＭ８８７、ｐＧＭ８９６、ｐＧＭ８９８、ｐＧＭ９０４、ｐＧＭ９０６、ｐＧＭ９０７、ｐＧＭ９３７、ｐＧＭ９３９、ｐＧＭ９６５、およびｐＧＭ９７０は、下記で記載される通りである。

【0290】

（ｃｏ）ｈＡＣＥ２ ｃＤＮＡを、ｐＧＭ８４５から、その野生型終止コドンを欠失させた、ＮｈｅＩ－ＸｂａＩ断片（プライマー対：５’ＣＧＡ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＴ ＴＴＧ ＣＡＣ ＧＴ ３’（配列番号４７）および５’ＣＧＡ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＴ ＴＴＧ ＣＡＣ ＧＴ ３’（配列番号４８）を使用して）としてＰＣＲ増幅し、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲを、最終ＮｈｅＩ－ＮｏｔＩ断片としてアセンブルするように、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（ＮＥＢ）により、ＯＣＴ４－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ鋳型（プライマー対：５’ＣＧＡ ＣＴＣ ＴＡＧ ＡＧＴ ＣＧＡ ＣＧＧ ＴＴ ３’（配列番号４９）および５’ＧＡＴ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＣＡ ＧＧＣ ＡＣＣ ＧＧＧ ＣＴＴ Ｇ ３’（配列番号５０）を使用して）から、ＸｂａＩ－ＮｏｔＩ断片としてＰＣＲ増幅された、Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ配列と共にライゲーションした。ｈＴＭＰＲＳＳ２ ｃＤＮＡを、ｐＣＳＤｅｓｔ－ｈＴＭＰＲＳＳ２から、その野生型終止コドンを欠失させた、ＮｈｅＩ－ＸｂａＩ断片（プライマー対：５’ＡＡＴ ＧＣＴ ＡＧＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＧＣ ＴＴＴ ＧＡＡ ＣＴＣ ＡＧ ３’（配列番号５１）および５’ＧＴＣ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＣＣ ＧＴＣ ＴＧＣ ＣＣＴ ＣＡＴ ＴＴ ３’（配列番号５２）を使用して）としてＰＣＲ増幅し、ｈＴＭＰＲＳＳ２－Ｐ２Ａ－ＢＳＲを、最終ＮｈｅＩ－ＮｏｔＩ断片としてアセンブルするように、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼにより、ｐＨＩＶ１．ＥＦ１ａ－ｓｐＣａｓ９－ＦＬＡＧ－Ｐ２Ａ－ＢＳＲ－ＷＰＲＥ（プライマー対：５’ＡＣＧ ＴＣＴ ＡＧＡ ＧＣＡ ＡＣＡ ＡＡＣ ＴＴＣ ＴＣＴ ＣＴＧ ＣＴ ３’（配列番号５３）および５’ＴＡＴ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＡＧ ＣＣＣ ＴＣＣ ＣＡＣ ＡＣＡ ＴＡＡ Ｃ ３’（配列番号５４）を使用して）から、ＸｂａＩ－ＮｏｔＩ断片としてＰＣＲ増幅された、Ｐ２Ａ－ＢＳＲ配列と共にライゲーションした。アセンブルされたｃＤＮＡをゲル精製し、ＬＶゲノムプラスミドである、ｐＧＭ８４９（ｐＨＩＶ１ ＣＭＶ（ｃｏ）ｈＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ ＷＰＲＥ）およびｐＧＭ８８９（ｐＨＩＶ１ ＣＭＶ ｈＴＭＰＲＳＳ２－Ｐ２Ａ－ＢＳＲ ＷＰＲＥ）を作出するように、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（ＮＥＢ）を使用して、制限酵素部位である、ＮｈｅＩおよびＮｏｔＩを介して、ＨＩＶレンチウイルスベクターゲノムプラスミドであるｐＧＭ８３６にクローニングした。（ｃｏ）ｍＡＣＥ２配列を、Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲのオープンリーディングフレームとインフレームに保って、ＬＶゲノムプラスミドであるｐＧＭ９４３（ｐＨＩＶ１ ＣＭＶ（ｃｏ）ｍＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ－ＷＰＲＥ）を作出するように、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを使用して、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２配列を、ＮｈｅＩ－ＸｂａＩ断片として、ｐＧＭ９４２から、ｐＧＭ８４９骨格へとクローニングした。ｐｃＤＮＡ３．１－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１－Ｓｔｒｅｐ ｔａｇ ＩＩ}鋳型を、６４７の全長ｃＤＮＡ（プライマー対：５’ＣＡＧ ＧＣＴ ＡＧＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＴＴ ＣＧＴ ＧＴＴ ＣＣＴ ＧＧＴ ３’（配列番号５５）、および５’ＡＴＡ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＣＡＧ ＧＴＧ ＴＡＧ ＴＧＣ ＡＧＣ ＴＴＣ ＡＣ ３’（配列番号５６）を使用して；ＹＰ＿００９７２４３９０．１に基づき、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｃＤＮＡを回復させるように）、または最Ｃ末端の１９アミノ酸および小胞体保持シグナルに対応する３’末端の欠失（＋Δ１９ａａ；プライマー対：５’ＣＡＧ ＧＣＴ ＡＧＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＴＴ ＣＧＴ ＧＴＴ ＣＣＴ ＧＧＴ ３’（配列番号５７）、および５’ＡＴＡ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＣＡ ＧＣＡ ＧＧＡ ＣＣＣ ＡＣＡ ＣＧＡ ＡＣＡ ３’（配列番号５８）を使用する）として使用して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１）配列を、ＮｈｅＩ－ＮｏｔＩクローニング断片としてＰＣＲ増幅し、エンベローププラスミドである、ｐＣＡＧＧ－ｃｏＦｃｔ４．１骨格（ｐＧＭ３２１）へとクローニングして、エンベローププラスミドである、ｐＣＡＧ．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１}（ｐＧＭ８８７）および（ｃｏ）Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａ}（ｐＧＭ８９６）を作出した。ｐＧＭ８８７を、鋳型として使用して、それぞれ、プライマー対：５’ＣＣＴ ＧＣＡ ＣＡＧ ＡＡＡ ＧＴＡ ＴＣＴ ＴＡＣ ＡＣＣ ＡＧＧ ＣＧＡ ＴＴＣ ３’（配列番号５９）、および５’ＧＣＣ ＡＧＣ ＡＧＧ ＧＴＣ ＴＧＧ ＡＡＴ ３’（配列番号６０）、または５’ＧＣＴ ＧＴＡ ＣＣＡ ＧＧＧ ＣＧＴ ＧＡＡ ＴＴＧ Ｃ ３’（配列番号６１）、および５’ＡＣＧ ＧＣＣ ＡＣＣ ＴＧＡ ＴＴＧ ＣＴＧ ３’、（配列番号６２）を使用する、Ｑ５（登録商標）Ｓｉｔｅ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ（ＳＤＭ；ＮＥＢ）により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０（Ａｕｓ／ＶＩＣ０１；Ｓ２４７Ｒ）変異株およびＤ６１４Ｇ変異株をモデル化し；Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを使用して、それぞれ、ＮｈｅＩ－ＢｓｔＢＩ断片またはＫｐｎＩ－ＳｂｆＩ断片（Ｓ２４７ＲおよびＤ６１４Ｇを付与する突然変異を包含する）として、ｐＧＭ８８７およびｐＧＭ８９６へと、サブクローニングし戻して、エンベローププラスミドである、それぞれ、ｐＣＡＧＧ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１}（ｐＧＭ８９８）およびｐＣＡＧＧ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}（ｐＧＭ９０４）、または、それぞれ、ｐＣＡＧＧ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^Ｇ６１４（ｐＧＭ９０６）およびｐＣＡＧＧ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}（ｐＧＭ９０７）を作出した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＶＯＣである、Ｂ．１．１．７およびＢ．１．３５１を包含する配列を、プラスミドである、ｐＧＭ９６４およびｐＧＭ９６９（それぞれ）から、ｐＧＭ９０７骨格へと、ＮｈｅＩ－ＳｂｆＩ断片としてサブクローニングし戻して、エンベローププラスミドである、それぞれ、ｐＣＡＧＧ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}（ｐＧＭ９６５）および（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}（ｐＧＭ９７０）を作出した。最後に、プライマー対である、５’ＣＴＡ ＣＧＧ ＣＴＴ ＣＴＡ ＴＡＣ ＣＡＡ ＴＧＧ ＣＧ ３’（配列番号６３）、および５’ＣＴＣ ＴＧＣ ＡＧＡ ＧＧＧ ＡＡＧ ＴＡＧ ３’（配列番号６４）を、鋳型としてのプラスミドである、ｐＧＭ８９６およびｐＧＭ９０７と共に使用する、Ｑ５（登録商標）ＳＤＭにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｍＡＣＥ２馴化（ｍａＳ）を付与するように、突然変異であるＱ４９８ＹおよびＰ４９９Ｔを媒介し、次いで、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを使用して、それぞれ、骨格である、ｐＧＭ８９６およびｐＧＭ９０７へと、ＢｓｔＢＩ断片およびＫｐｎＩ断片としてサブクローニングして、エンベローププラスミドである、ｐＣＡＧＧ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｍａＳ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}（ｐＧＭ９３７）およびｐＣＡＧＧ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}（ｐＧＭ９３９）を作出した。

【0291】

細胞系および培養条件
本明細書で記載される、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３Ｔ／１７細胞（ＡＴＣ（登録商標）ＣＲＬ－１１２６８（商標））および派生細胞は、３７℃、５％のＣＯ_２雰囲気下、１０％のウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、１％のペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、およびＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（Ｇｉｂｃｏ）を補充された、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。該当する場合、ｈＴＭＰＲＳＳ２細胞系を伴うか、またはこれを伴わない、安定的（ｃｏ）ｈＡＣＥ２を、上記と同様に、５μｇ／ｍＬのブラスチシジンＳ（Ｇｉｂｃｏ）を伴うか、またはこれを伴わない、３μｇ／ｍＬのピューロマイシン（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を添加した、完全ＤＭＥＭ中で培養した。（ＨＥＫ）２９３Ｔ／１７ＳＦ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＡＣＳ－４５００（商標））は、３７℃、８％のＣＯ_２雰囲気、および１２５ｒｐｍのオービタルシェーキング下、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。

【0292】

第３世代ＳＩＮ ｒＨＩＶ１ ＬＶの作製
Ｓ－ＬＶおよびｒＨＩＶ１．ＶＳＶｇ ＬＶの作製は、ＰＥＩｐｒｏ（登録商標）（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ）を使用する、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３Ｔ／１７ ＳＦ懸濁細胞の、目的のレポーター遺伝子（表示の増強緑色蛍光タンパク質：ｅＧＦＰ、またはホタルルシフェラーゼ：ＦＬｕｃ）、ＨＩＶ１ ＧａｇＰｏｌ、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ、およびＨＩＶ１ Ｒｅｖ、ｐＲＳＶ－Ｒｅｖをコードする、第３世代のＳＩＮ ｒＨＩＶ１ ＬＶベクターゲノムプラスミドとの共トランスフェクションにより実施した。ＶＳＶｇ偽型化ＬＶは、ｐＭＤ２－Ｇを伴う共トランスフェクションにより達成し；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－ＬＶ偽型の場合、ｐＭＤ２－Ｇプラスミドを、合成ｃＤＮＡ配列、プラスミド、クローニング、および部位指定突然変異誘発において記載された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－ＬＶ偽型プラスミドで置換した。トランスフェクションの約１６時間後、細胞に、最終濃度を５ｍＭとする酪酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充された、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍをフィードした。トランスフェクトされた細胞は、合計７２時間（または、そうでない場合、言明される通りに）にわたり培養し、この時点において、ＬＶ含有培養培地を採取した。次いで、ＬＶ含有上清を、１ｍＭのＭｇＣｌ_２（Ｇｉｂｃｏ）の存在下、５０Ｕ／ｍＬのＢｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｍｅｒｃｋ）により、３７℃で、１時間にわたり処理した。適応の場合、ＬＶ含有上清を、さらに、４℃、４，６５０×ｇで、２４時間にわたり遠心分離にかけるか、またはアニオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）およびタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により精製した。全ての場合に、ＬＶ物質は、フィルターにより滅菌し、－８０℃で保存した。

【0293】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ偽型の発現および合胞研究
翌日、２９３Ｔ／１７細胞を、約７０％のコンフルエンシーとなるように、２４ウェルプレートへと播種した。細胞に、ｐＣＭＶＩＥ＋ｅＧＦＰプラスミド各ウェル２００ｎｇずつ、および表示のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ偽型プラスミド１００ｎｇをトランスフェクトした。モックトランスフェクションは、ｐＣＡＧＧ－ｅＧＦＰプラスミド２００ｎｇとの共トランスフェクションを伴った。トランスフェクションは、プラスミド対ＦｕＧＥＮＥ ６試薬の比を１：２とする、ＦｕＧＥＮＥ ６を使用して実施した。細胞は、表示のトランスフェクション後の時点において視覚化し、ｅＧＦＰ蛍光画像は、ＥＶＯＳ（商標）ＦＬ Ａｕｔｏ ２蛍光顕微鏡（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標））を使用して捕捉した。

【0294】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－ＬＶ許容性細胞系の確立
翌日、２９３Ｔ／１７細胞を、約３０～４０％のコンフルエンシーとなるように、６ウェルプレートへと播種した。ＯｐｔｉＭＥＭ－Ｉ（Ｇｉｂｃｏ）中で希釈された粗ｒＨＩＶ１（ＶＳＶｇ）ＣＭＶ（ｃｏ）ｍＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ ＷＰＲＥ ＬＶ、または粗ｒＨＩＶ１（ＶＳＶｇ）ＣＭＶ（ｃｏ）ｈＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲ ＷＰＲＥ ＬＶを、３７℃、５％のＣＯ_２、８μｇ／ｍＬのポリブレン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の存在下、６時間にわたり細胞へと形質導入し、この後、培地を培養培地で置きかえた。形質導入細胞は、５％のＣＯ^２、３７℃で、合計７２時間にわたり培養し、培養培地中に３μｇ／ｍＬのピューロマイシン（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を添加して、ピューロマイシン耐性細胞を選択した。細胞を、３μｇ／ｍＬのピューロマイシンを伴う培養培地中で、いくつかの継代にわたり保持して、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２だけの細胞系、または（ｃｏ）ｍＡＣＥ２だけの細胞系を確立した。この後、両方の細胞系を播種し、上記のｒＨＩＶ１（ＶＳＶｇ）ＣＭＶ ｈＴＭＰＲＳＳ２－Ｐ２Ａ－ＢＳＲ ＷＰＲＥ ＬＶを、これらの細胞系へと形質導入した。ピューロマイシン耐性細胞およびブラスチシジン耐性細胞について選択するように、細胞を、３μｇ／ｍＬのピューロマイシン、および５ｕｇ／ｍＬのブラスチシジン（Ｇｉｂｃｏ）を補充された培養培地により選択した。細胞を、３μｇ／ｍＬのピューロマイシン、および５μｇ／ｍＬのブラスチシジンを伴う培養培地中で、いくつかの継代にわたり保持して、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞系、または（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞系を確立した。

【0295】

ＬＶの形質導入および滴定
翌日、形質導入およびＬＶ滴定実験のために、表示の細胞系を、約３０～４０％のコンフルエンシーとなるように、２４ウェルプレートへと播種した。形質導入の当日、細胞をカウントし、培地を吸引した。ＯｐｔｉＭＥＭ－Ｉ中で希釈されたＬＶの接種物（表示の偽型）を、８μｇ／ｍＬのポリブレンの存在下で、細胞へと形質導入して、要求される感染多重度（ＭＯＩ）または希釈系列を達成した。細胞を、希釈されたベクター接種物と共に、６時間にわたりインキュベートし、この後、形質導入ミックスを、培養培地で置きかえた。合計４８～７２時間の後、細胞を、下記で記載される通り、フローサイトメトリーにかけた。端点を含む２～２０％の間の形質導入だけを、力価計算のために解析した。力価は、式：［式中、Ｎは、形質導入時にカウントされた細胞の数であり、Ｐは、ｅＧＦＰ陽性細胞の百分率であり、ＤＦは、形質導入時に適用された希釈倍数であり、Ｖは、ベクター接種物のウェル１つ当たり総容量（ｍＬ）であり、ＩＵは、感染単位である］に従い計算した。代替的に、ホタルルシフェラーゼをコードするベクターに関して述べると、系列希釈の前に、ベクター物質を、０．５％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００を伴う、最小容量のアッセイ希釈緩衝液中、室温で、１５分間にわたり溶解させる、微細な改変を加えて、製造元の指示書に従い、ｐ２４濃度を測定するように、ＬＶ物質を、ＨＩＶ１ ｐ２４ ＥＬＩＳＡ（ＳＥＫ１１６９５、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）にかけた。

【0296】

ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｓ－ＬＶ中和アッセイ
翌日、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞を、約３０～４０％のコンフルエンシーとなるように、２４ウェルプレートへと播種した。形質導入の当日、培養培地を吸引し、最終濃度を８μｇ／ｍＬとするポリブレンを伴う、ＯｐｔｉＭＥＭ－Ｉ中で希釈された、ＭＯＩを１（細胞カウントに基づく）とするＳ－ＬＶ（表示の変異体）を、ｎＡｂ（４０５９１－ＭＭ４３、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ；または４０５９２－Ｒ００１、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、または対応するヒトＩｇＧアイソタイプ対照（ＧＴＸ３５０６８、ＧｅｎｅＴｅｘ）、マウスＩｇＧアイソタイプ対照（ＭＡＢ００２、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ウサギＩｇＧアイソタイプ対照（ＡＢ－１０５－Ｃ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と共に、細胞へと形質導入した。ＩｇＧの滴定については、図キャプション中で指し示す。細胞を、抗体：Ｓ－ＬＶプレミックスと共に、５％のＣＯ_２、３７℃で、６時間にわたりインキュベートした。この後、形質導入ミックスを、培養培地で置きかえ、細胞を、最大で７２時間にわたり培養した。次いで、細胞を、下記で記載される通り、フローサイトメトリーにかけた。

【0297】

ウェスタンブロット法（ＷＢ）
精製Ｓ－ＬＶまたは形質導入／トランスフェクト細胞、およびこれらの適切な対照（図のキャプション中に表示される）を、表示の時点において、１倍濃度の氷冷ＲＩＰＡ緩衝液（プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ）を補充された、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００［ｖ／ｖ］、０．５％ナトリウムデオキシコール酸、０．１％ＳＤＳ［ｗ／ｖ］、５０ｍＭのトリス－ＨＣｌ［ｐＨ ８．０］）中に、速やかに溶解させた。不溶性破砕物は、４℃、最大速度で、３０分間にわたりペレット化させ、ＤＣタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）により、上清を、タンパク質濃度について測定した。試料を、表示の通り、最終濃度を５５０ｍＭとするβ－メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を伴うか、またはこれを伴わないＬａｅｍｌｌｉ Ｂｕｆｆｅｒ中で煮沸した後で、１０％のＳＤＳ－ＰＡＧＥを介して、タンパク質溶解物（または精製Ｓ－ＬＶについて、約３００ｎｇ相当のｐ２４）を分離した。次いで、タンパク質を、０．４５μｍのニトロセルロース膜へと転写し、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（０．１％）、および５％ミルクで、２時間にわたりブロッキングした。ブロットを、室温で、一晩にわたり、ｈＡＣＥ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＡＦ９３３；１：６５０）、ｍＡＣＥ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＡＦ３４３７；１：１０００）、ｈＴＭＰＲＳＳ２（Ａｂｃａｍ、ａｂ２４２３８４；１：２０００）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＭＡ５－３５９４６［１Ａ９］；１：４０００）、ＶＳＶｇ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ｓｃ－３６５０１９［Ｆ－６］；１：１０００）、ＨＩＶ１ ｐ２４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡＢ７３６０；１：７００）、またはＧＡＰＤＨ（Ｍｅｒｃｋ；ＣＢ１００１、１：２０，０００）についての一次抗体と共に、随時インキュベートし、次いで、これらに応じて、室温で、２時間にわたり、抗マウス－ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ａｂｃａｍ；ａｂ６７８９、１：２０，０００）、抗ウサギ－ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ａｂｃａｍ；ａｂ６７２１、１：２０，０００）、または抗ヤギ－ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ａｂｃａｍ；ａｂ６８８５ １：２０，０００）と共にインキュベートした。全ての抗体を、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ２０（０．１％）／５％のミルク中で希釈した。次いで、ブロットされたタンパク質を、Ｃｌａｒｉｔｙ（商標）Ｗｅｓｔｅｒｎ ＥＣＬ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）により、化学発光を介して検出した。化学発光シグナルを視覚化し、ｉＢｒｉｇｈｔ（商標）ＦＬ１０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））上で捕捉した。

【0298】

免疫細胞化学（ＩＣＣ）
細胞系を、２４ウェルプレート内の、滅菌Ｎｏ．１．０カバースリップへと播種した。コンフルエンシー細胞およびそれらの適切な対照（図のキャプション中に表示の通り）を、最終濃度を４％とするホルムアルデヒド溶液中、室温で、１５分間にわたり固定し、次いで、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００［ｖ／ｖ］溶液により、室温で、２０分間にわたり透過処理した。次いで、ブロッキング溶液（Ｄ－ＰＢＳ中に５ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ［ｗ／ｖ］、５％のＦＢＳ［ｖ／ｖ］）を使用して、静かに攪拌しながら、２時間にわたり、細胞をブロッキングした。次いで、細胞を、一次抗体：抗ＡＣＥ２（ＡＦ９３３、７９１；１：１００）または抗ＴＭＰＲＳＳ２（ａｂ２４２３８４；１：１００）と共に、４℃で、一晩にわたりインキュベートした。次いで、この後、細胞を、これらに応じて、二次抗ヤギ－Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲート二次抗体（Ａ１１０７８、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：５００）または抗ウサギ－Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲート二次抗体（Ａ１１００８、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：５００）と共に、室温で、静かに攪拌しながら、２時間にわたりインキュベートした。工程の間、細胞を、Ｄ－ＰＢＳで、５回にわたり洗浄した。親２９３Ｔ／１７細胞はまた、抗ＡＣＥ２または抗ＴＭＰＲＳＳ２、および非特異的一次抗体染色に対する閾値に対応する二次抗体によっても、完全に染色した。細胞を、Ｄ－ＰＢＳで、５回にわたり洗浄し、次いで、カバースリップを、ＤＡＰＩ含有マウンティング培地（Ｆｌｕｏｒｏｓｈｉｅｌｄ（商標）；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）により、顕微鏡スライドへとマウントした。画像は、ＥＶＯＳ（商標）ＦＬ Ａｕｔｏ ２蛍光顕微鏡（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標））上で捕捉した。

【0299】

フローサイトメトリー
Ｄ－ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で、細胞を洗浄することにより、細胞を採取し、ＴｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ）を使用して、細胞を、ウェルプレートから解離するようにトリプシン処理した。次いで、５００×ｇで、５分間にわたる遠心分離を伴う、Ｄ－ＰＢＳ洗浄により、細胞を製造し、最終濃度を２％とするホルムアルデヒド溶液中、室温で、１５分間にわたり固定した。固定剤を除去し、細胞を洗浄し、Ｄ－ＰＢＳ中に再懸濁させ、次いで、ＢＤ（商標）ＬＳＲ ＩＩ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ Ｓｙｓｔｅｍを使用するフローサイトメトリーにかけた。ＦｌｏｗＪｏ（商標）ｖ１０．７ソフトウェアを使用して、データを解析した。

【0300】

動物研究
実験用マウスに関与する、全ての手順は、Ａｎｉｍａｌｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ＡＣＴ １９８６（ＡＳＰＡ、１９８６）の条項下にある、ＵＫ Ｈｏｍｅ Ｏｆｆｉｃｅ ａｐｐｒｏｖｅｄ ｐｒｏｊｅｃｔ ａｎｄ ｐｅｒｓｏｎａｌ ｌｉｃｅｎｓｅｓに従い実行した。全ての動物手順は、Ｊｏｈｎ Ｒａｄｃｌｉｆｆｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫを本拠とする、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｏｘｆｏｒｄ’ｓ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（ＢＭＳ）Ｕｎｉｔにおいて実施した。

【0301】

ｉｎ ｖｉｖｏにおける、Ｓ－ＬＶ．ＦＬｕｃおよびｍａＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃの投与
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢；Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ、ＵＫ）に、表示のＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃベクターまたはｍａＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃベクター（軽度のイソフルラン麻酔下における経鼻吸引を介する、ｐ２４の定量（４０または１６６ｎｇ）に基づく、表示の用量に対応する）を投与した。Ｓ－ＬＶ．ＦＬｕｃおよびｍａＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃは、鼻腔内滴下（ｉ．ｎ．）による、単回滴下および連続滴下（合計１００μＬ）を介して、鼻孔へと、直接送達した。対照マウスには、代わりに、ＬＶ製剤緩衝液（ＴＳＳＭ）１００μＬを、ｉ．ｎ．投与した。

【0302】

ｉｎ ｖｉｖｏにおける生物発光イメージングおよび定量解析
Ｓ－ＬＶ．ＦＬｕｃおよびｍａＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃのｉｎ ｖｉｖｏにおける投与において記載された、Ｓ－ＬＶ．ＦＬｕｃ、ｍａＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃ、または対照ＴＳＳＭを投与した後の、表示の時点において、マウスに、イソフルランによる軽度麻酔下で、ｉ．ｎ．法を介して、１５ｍｇ／ｍＬのＤ－ルシフェリン（Ｘｅｎｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｌａｍｅｄａ）１００μＬを投与した。１０分間にわたるインキュベーションの後、ＩＶＩＳ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ（ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＬＴ、Ｓｅｒｉｅｓ ＩＩＩ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、生物発光イメージングを実施した。マウスの鼻腔および肺について標準化組織面積内の光強度を表す擬似カラー範囲を使用して平均生物発光（光子数／秒／ｃｍ２／ｓｒ）値を視覚化し、定量した。

【0303】

統計学
事後統計学的解析は、Ｐｒｉｓｍ８．４．３（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して実施した。適切な場合、一元ＡＮＯＶＡに続いて、選び出された比較群に対して、ダンの多重比較検定を使用するか、または適切な群としての全ての群についての、テューキーの比較を使用して、複数の群間の比較を実施した。一元ＡＮＯＶＡの仮定に反した場合、ノンパラメトリックのクルスカル－ワリス検定に続いて、選び出された比較群に対する、ダンの多重比較検定を使用するか、または、適切な場合、データを、ｌｏｇ１０変換し、一元ＡＮＯＶＡに続き、全ての群についての、テューキーの比較により解析した。データは、群平均値として、かつ／またはプロットされた個別のデータ点により提示し、適切な場合は、平均値±標準的偏差（ＳＤ）により提示する。全ての場合に、＜０．０５のＰ値を、統計学的に有意であると考えた。ｎｓ、^＊、^＊＊、^＊＊＊、および^＊＊＊＊は、それぞれ、＞０．０５、＜０．０５，＜０．０１、＜０．００１、および＜０．０００１のＰ値を指し示す。

【実施例1】

【0304】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ推定ＥＲＳの欠失、ならびに許容性（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞への形質導入は、Ｓ－ＬＶの形質導入をレスキューする
後続の滴定およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける中和のため、自社製ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ偽型化ＬＶ（Ｓ－ＬＶ）およびＢＳＬ１（ｂｉｏｓａｆｅｔｙ ｌｅｖｅｌ １）適合ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－ＬＶについて調べ、これらの機能について検討するために、まず、ＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼを伴うか、またはこれを伴わずに、ヒトＡＣＥ２受容体を発現する許容性細胞系を操作した。いずれのトランス遺伝子も、ＣＭＶプロモーターによる制御下にある、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２－Ｆ２Ａ－ｐｕｒｏＲまたはｈＴＭＰＲＳＳ２－Ｐ２Ａ－ＢＳＲをコードする、ＶＳＶｇ偽型化ＳＩＮ ｒＨＩＶ１ ＬＶ（図示しない）を使用して、ｈＴＭＰＲＳＳ２を伴うか、またはこれを伴わずに、コドン最適化（ｃｏ）ｈＡＣＥ２を共発現する安定細胞系を、親２９３Ｔ／１７細胞系から作出した。

【0305】

安定細胞系を、選択および確立し、ｈＴＭＰＲＳＳ２を伴うか、またはこれを伴わない、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２の発現を、免疫細胞化学（ＩＣＣ）およびウェスタンブロット法（ＷＢ）により確認した（データは図示しない）。意図される通り、検出可能なレベルのＡＣＥ２またはＴＭＰＲＳＳ２が、これらのそれぞれの細胞系内において、親２９３Ｔ／１７のレベルを、感知可能な程度に上回った。操作（ｃｏ）ｈＡＣＥ２細胞系は、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２発現の、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する対応物と比較した、著明な上昇を示し（データは図示しない、Ｐ＝０．０１７３、ウェルチの補正を伴う、対応のないｔ検定）、シグナル強度の、約４２．８％の低減に対応した。ｈＴＭＰＲＳＳ２の発現は、親２９３Ｔ／１７細胞系および（ｃｏ）ｈＡＣＥ２だけを発現する細胞系を上回って、感知可能な程度に良好であった（データは図示しない）。安定（ｃｏ）ｈＡＣＥ２細胞系の間における、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２発現の不均衡に関わらず、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する操作細胞系内において、発現が低度であるという事実は、その後、本発明者らが、ｈＴＭＰＲＳＳ２共発現の文脈および機能において、許容性細胞系の間で、有用な比較を行うことを可能とした。

【0306】

先に進み、かつ、原理実証として、小胞体保持シグナルを保有すると推定される、Ｃ末端テールの１９アミノ酸残基の欠失（＋Δ１９ａａ；アノテーションドメインと比べた、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質と、＋Δ１９ａａ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質との、グラフによる代表的比較については、図１Ａを参照されたい）を伴うか、またはこれを伴わない、以下のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体：Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１、Ｇ６１４、Ａｕｓ／ＶＩＣ０１をモデル化した。本研究においてＬＶを偽型化するのに使用された、モデル化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体を規定する、完全な突然変異プロファイル（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１参照プロファイルと比較した）を、表１に提示する。

【0307】

【表2】

【0308】

【表3】

【0309】

配列は、ＣＡＧプロモーターによる制御下で、コドン最適化ｃＤＮＡとして、発現プラスミドへとクローニングした（偽型プラスミド構成、および各ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体を付与する、アノテーションされた突然変異に対する概観については、図１Ｂを参照されたい）。改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体の配列は、図２にアライメントする。

【0310】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ（１９アミノ酸の欠失を伴うか、またはこれを伴わないＷｕｈａｎ Ｈｕ－１、１９アミノ酸の欠失を伴うか、またはこれを伴わないＧ６１４、および１９アミノ酸の欠失を伴うか、またはこれを伴わないＡｕｓ／ＶＩＣ０１）により偽型化されたｒＨＩＶ１ ＬＶ（ｅＧＦＰをコードする：Ｓ－ＬＶ．ｅＧＦＰ）による形質導入を、ｈＴＭＰＲＳＳ２を伴うか、もしくはこれを伴わない新規の操作（ｃｏ）ｈＡＣＥ細胞系、または親２９３Ｔ／１７において検討した（図４）。

【0311】

予測される通り、ｒＨＩＶ１．ＶＳＶｇ ＬＶは、親２９３Ｔ／１７細胞系と、操作細胞系との間で、同様に形質導入した（図４Ａ；Ｐ＞０．０５、ガイサー－グリーンハウス補正を伴う、反復測定一元ＡＮＯＶＡ、およびテューキーの多重比較検定）。これに対し、モデル化された非マウス馴化Ｓ－ＬＶ．ｅＧＦＰは、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２受容体依存性形質導入について、明らかに最小の要求量を示したことから、１９アミノ酸の欠失を伴う文脈では、形質導入効率は、一般に、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２だけを発現する細胞において、最大の改善を示す（図４Ｂ～４Ｄ；Ｐ＜０．０５、ガイサー－グリーンハウス補正を伴う、反復測定一元ＡＮＯＶＡ、およびテューキーの多重比較検定）。さらに、形質導入は、許容性細胞系による、ｈＴＭＰＲＳＳ２の共発現により、さらに顕著にレスキューされ、とりわけ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質の、１９アミノ酸を欠失させたＣ末端切断を伴うＳ－ＬＶの文脈では、さらに顕著にレスキューされた（図４Ｂ～４Ｄ；Ｐ＜０．００１、ガイサー－グリーンハウス補正を伴う、反復測定一元ＡＮＯＶＡ、およびテューキーの多重比較検定）。一般に、かつ、１９アミノ酸を欠失させた、切断型Ｓ－ＬＶ．ｅＧＦＰの被験レパートリーに関して述べると、対数による形質導入の最大の改善を、親細胞系、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２だけを発現する細胞系、および（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を発現する細胞系の間で測定した。ｈＴＭＰＲＳＳ２だけを発現する２９３Ｔ／１７は、Ｓ－ＬＶについて許容性でなかった（データは図示しない）ので、理論に束縛されずに述べると、Ｓ－ＬＶによる形質導入の実質的な改善およびレスキューは、ＡＣＥ２侵入受容体と、ｈＴＭＰＲＳＳ２との間の複雑な相互作用に帰せられる可能性が高い。

【実施例2】

【0312】

Ｓ－ＬＶプラットフォームは、ＶＯＣまたはＶＯＩに由来するＳ糖タンパク質を、迅速にモデル化しうる
ＣＯＶＩＤ－１９／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２パンデミックは、全世界的に生じつつある、新規／新興ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ＶＯＣの、度重なる急増を伴う、進行中の難題であり続けている。これらのＶＯＣは、潜在的伝染力の増大を示し、これにより、公衆衛生に対して、さらなる懸念をもたらしている。Ｂ．１．１．７／Ｂ．１．３５１ ＶＯＣ Ｓ糖タンパク質（＋Δ１９ａａ）を、迅速なＬＶ偽型化のためにモデル化した。これに加えて、Ｓ－ＬＶプラットフォームが、広範なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質により偽型化され、これにより、代替的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２をモデル化するための広範な資源として機能する能力を捕捉するために、突然変異であるＱ４９８ＹおよびＰ４９９Ｔを保有するマウス（ｍ）ＡＣＥ２馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓもまた、モデル化した（これらの偽型プラスミド構成、および各ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体を付与する、アノテーションされた突然変異については、図１Ｂの概観を参照されたい）。これらのさらなるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ／ｍａＳ変異株（Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１参照株と比較した）を規定する、完全な突然変異プロファイルもまた、表１に提示する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ／ｍａＳ変異株の核酸／アミノ酸アライメントを、それぞれ、図２および３に示す。

【0313】

Ｂ．１．１．７（Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ｅＧＦＰ）、Ｂ．１．３５１（Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ｅＧＦＰ）、およびｍａＳ（ｍａＳ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１，Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ｅＧＦＰ、およびｍａ^{ＳＹ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ｅＧＦＰ）により偽型化され、１９アミノ酸を欠失させたＣ末端切断を伴うＳ－ＬＶは、Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ、およびＳ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶと同様の性能を示し；ｈＴＭＰＲＳＳ２を伴うか、またはこれを伴わない（ｃｏ）ｈＡＣＥ細胞系および親２９３Ｔ／１７へと、予測通りに形質導入し、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２受容体依存性形質導入について、最小の要求量を示し、形質導入は、ｈＴＭＰＲＳＳ２の共発現により、さらに実質的にレスキューされた（図５Ａ；全ての場合に、各Ｓ－ＬＶ．ｅＧＦＰ形質導入群内、またはｍａＳ－ＬＶ．ｅＧＦＰ形質導入群内におけるＰを＜０．０５とする；ガイサー－グリーンハウス補正を伴う、反復測定一元ＡＮＯＶＡ、およびテューキーの多重比較検定）。

【0314】

ｍａＳ（Ｑ４９８ＹおよびＰ４９９Ｔ）－ＬＶ．ｅＧＦＰ、およびＮ５０１Ｙ含有Ｓ（特に、ＶＯＣである、Ｂ．１．１．７およびＢ．１．３５１の偽型に関する）－ＬＶ．ｅＧＦＰは、ｍＡＣＥ２発現細胞へと形質導入することがさらに可能であった（図５Ｂ）。Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ｅＧＦＰによる、ｍＡＣＥ２発現細胞系への、低度～無視できる程度の形質導入は、ｒＨＩＶ１．ｂａｌｄ処理細胞から測定される形質導入に照らして、統計学的に非有意であった（図５Ｂ；Ｐを＜０．０５とする；ガイサー－グリーンハウス補正を伴う、反復測定１９３一元ＡＮＯＶＡ、およびテューキーの多重比較検定）。ｍＡＣＥ２共許容性Ｓ－ＬＶ／ｍａＳ－ＬＶによる形質導入は、ｈＴＭＰＲＳＳ２の共発現により、さらに著明にレスキューされる（最大で、１ｌｏｇ）ことが見出された（図５Ｂ；全ての場合に、各Ｓ－ＬＶ．ｅＧＦＰ形質導入群内、またはｍａＳ－ＬＶ．ｅＧＦＰ形質導入群内における、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２細胞系と、（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞系との間のＰを＜０．０１とする；ガイサー－グリーンハウス補正を伴う、反復測定一元ＡＮＯＶＡ、およびテューキーの多重比較検定）。最後に、発現されたＳ糖タンパク質は、親２９３Ｔ／１７細胞のトランスフェクション後において、時間依存的、かつ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ Ｇ６１４含有依存的に、細胞間融合／合胞を媒介する、それらの機能を保持した（図５Ｃ）。ｅＧＦＰおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａ}、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}を共発現する共トランスフェクト細胞についての代表的蛍光イメージングは、対照としての、ｅＧＦＰモック共トランスフェクト細胞と比べて、Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａ}が、トランスフェクションの７２時間後までに、合胞を強力に媒介することが可能であることを裏付けた。培養物中で長期間後（トランスフェクションの１４４時間後）における、Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａ}共発現細胞について、細胞死および細胞傷害作用が目覚ましかったのに対し、Ｇ６１４含有Ｓ糖タンパク質共発現細胞は、トランスフェクションの７２時間後における、合胞の目覚ましい減殺を呈し、発症は、トランスフェクションの１４４時間後まで遅延した（図５Ｃ；７２時間後のｅＧＦＰパネルにおいて、合胞体の形成を強調する、白色矢印を参照されたい）。

【0315】

総じて、これらのデータは、このＳ－ＬＶプラットフォームが、機能的ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質を、モデル化されたＶＯＣおよびＶＯＩをモデル化し、ｍＡＣＥ２共許容性および合胞体の形成の媒介を含む、突然変異プロファイルを規定する、それらのＳに従い、固有の機能を再現する、ロバスト、かつ、迅速な能力を示す。特に、置換である、Ｑ４９８Ｙ、Ｐ４９９Ｔ、Ｄ６１４Ｇ、およびＮ５０１Ｙは、特に、形質導入を容易とすること、および合胞体の形成を媒介することのいずれの点でも、マウス馴化の達成において効果的であることが見出された。

【実施例3】

【0316】

Ｓ－ＬＶプラットフォームは、高力価ＰＳＶを達成する
非マウス馴化Ｓ－ＬＶに最適の形質導入は、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞を使用して達成し、これを使用して、Ｓ－ＬＶの機能力価について検討した。まず、粗ＬＶを２４時間間隔で回収する、７２～１４４時間の作製時間経過にわたり、Ｓ－ＬＶ．ｅＧＦＰ力価を検討することにより、Ｓ－ＬＶの最適の採取点を決定したところ（図６）、所与の予備力価は、トランスフェクションの４８時間後が、Ｓ－ＬＶに最適の採取ウィンドウではなかったことを示唆する（データは図示しない）。基準ｒＨＩＶ１．ＶＳＶｇ力価を、トランスフェクションの７２時間後における、約２×１０^７ＩＵ／ｍＬとすると（データは図示しない）、ｍＡＣＥ２許容性突然変異を保有し、１９アミノ酸を欠失させたＣ末端切断を含む、Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１、Ｇ６１４、Ａｕｓ／ＶＩＣ０１、ＶＯＣ株であるＢ．１．１．７およびＢ．１．３５１、ならびにＶＯＩに由来するＳ－ＬＶは、一般に、トランスフェクションの７２時間後に、ピーク機能力価をもたらし、＞１×１０^６ＩＵ／ｍＬ（それぞれ、図６Ａ～６Ｅ）を超える力価を達成し、Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ－}ＬＶ、Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ－}ＬＶ、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}ＬＶ、およびｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４８８，±Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶについて、５～７×１０^６ＩＵ／ｍＬという高値であることが見出された（それぞれ、図３Ｂ、３Ｄ、および３Ｅ）。この規則の例外は、約３×１０^５ＩＵ／ｍＬの低力価を達成した、Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}偽型であった（図３Ｄ）。１９アミノ酸を欠失させたＣ末端切断を伴わない、Ｓ^{Ｗｕｈａｎ}、Ｓ^Ｇ６１４、およびＳ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１}は、作製時間経過にわたり、性能不良であり（それぞれ、図３Ａ～３Ｃ）、図４に記載された、これらのＳ偽型化誘導体についての初期形質導入傾向と符合した。

【0317】

トランスフェクション後の培養物中では、長期間にわたり、機能力価におけるさらなる利益が測定されず；実際、機能力価は、一般に、トランスフェクションの９６時間後以降、減衰し始めた（図７）。さらに、機能力価は、１４４時間の時間経過にわたり、単量体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質およびＨＩＶ１ ｐ２４タンパク質の発現プロファイルと相関し、ウェスタンブロットにより測定された、いずれの発現ピークも、一般に、トランスフェクションの７２時間後であった（データは図示しない）。緩徐スピン遠心分離による、Ｓ－ＬＶおよびｍａＳ－ＬＶの濃縮は、実施可能なプロトコールであることが見出され、また、ＬＶを精製するのに、より常套的な、アニオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）と、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）との組合せを含む、トランスレーションに関してより適切な手段への関与を許容するようにも実施された。選ばれたＳ－ＬＶおよびｍａＳ－ＬＶ（Ｓ^{Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ、Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ、Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ、Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}－ＬＶ、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}－ＬＶ、およびｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ）の遠心分離および容量濃縮は、とりわけ、採取時に回収された、対応する粗Ｓ－ＬＶ物質の機能力価（Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}－ＬＶについての６．７５×１０^５ＩＵ／ｍＬを除き、全ての変異株について、＞１×１０^６ＩＵ／ｍＬ）に対して比較した場合に、選択された変異株についての機能力価の改善（≧１×１０^８ＩＵ／ｍＬ）により指し示される通り、達成に成功した。遠心分離されたＳ－ＬＶに対する、最大で１００倍の容量濃縮が、作出されたＳ－ＬＶライブラリーにわたり適用された場合、平均１３８．８±３５．２２倍の、機能力価の増大が裏付けられた。

【0318】

総じて、とりわけ、１９アミノ酸を欠失させたＣ末端切断を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質内に組み入れた、このＳ－ＬＶプラットフォームは、高機能力価を達成し、深甚な臨床的妥当性を有するＶＯＣをモデル化する能力を付加し、特に、マウス馴化Ｓ－ＬＶの高力価の産出を可能とし、このプラットフォームを、潜在的に貴重な調査研究ツールとする能力を示した。例示的な力価を、表２に明示する。

【0319】

次いで、Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}－ＬＶについて観察された低力価が、マウス馴化突然変異を使用して、さらにレスキューされるのかどうかについて探索した。したがって、置換であるＹ４９８およびＴ４９９が、Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１＋Δ１９ａａ}－ＬＶへと導入された、さらなる変異株Ｓ－ＬＶを作出した。図８に示される通り、図６に報告された機能力価と比較して、初期実験は、置換であるＹ４９８およびＴ４９９が、Δ１９Ｃ末端切断に加えて、Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１}－ＬＶの機能力価をさらにレスキューしうることを指し示す。

【実施例4】

【0320】

Ｓ－ＬＶは、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ＶＯＣの感染性をモデル化し、推定しうる
多種多様な、臨床的に妥当なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体、または改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体に由来する、粗Ｓ－ＬＶの高機能力価を産出することの実現可能性を確立したので、Ｓ－ＬＶライブラリーの有用性を、下流における、さらなる適用のために拡大した。遠心分離の後で、Ｓ－ＬＶの著明な容量濃縮が達成されたことを踏まえ、ｉｎ ｖｉｖｏにおける使用のための、亜臨床的に妥当な標準物質に対しても、Ｓ－ＬＶが作製されるのかどうかについて検討した。これを達成するために、ホタルルシフェラーゼをコードし、コドン最適化（ｃｏ）ＳＧ^{６１４＋Δ１９ａａ}、（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}、（ｃｏ）Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}、ｍａ（ｃｏ）Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}により偽型化された、Ｓ－ＬＶを作製し、ＡＥＸと、ＴＦＦとの組合せによる濃縮および精製にかけた。加えて、Ｎ５０１Ｙ含有Ｓ（特に、ＶＯＣである、Ｂ．１．１．７およびＢ．１．３５１偽型に関する）－ＬＶ．ｅＧＦＰが、置換であるＱ４９８ＹおよびＰ４９９Ｔを含むｍａＳ－ＬＶ（実施例２および図５を参照されたい）について観察される通り、ｍＡＣＥ２発現細胞へと形質導入することが可能であったことを踏まえ、Ｎ５０１Ｙの付加が、ｍａＳ－ＬＶの機能／機能力価をさらに改善するのかどうかについて探索するのに、置換であるＮ５０１Ｙを、ｍａＳ－ＬＶへと導入することを決定した。置換であるＮ５０１Ｙを、ｍａＳ－ＬＶ ｖ３偽型であるｃＤＮＡ（ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ；ｐＧＭ９３９）へと導入して、ｍａＳ－ＬＶ ｖ５（ｐＧＭ９９９；図１を参照されたい）を作出するクローニングを行った。ホタルルシフェラーゼをコードする、ｍａ（ｃｏ）Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}を作製し、ＡＥＸと、ＴＦＦとの組合せによる濃縮および精製にかけた。結果として得られるＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃベクターを使用して、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞へと形質導入し、溶解物を、ルシフェラーゼ活性による機能力価について検討した。

【0321】

（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する許容性細胞から捕捉されたＲＬＵを、形質導入時におけるインプットｐ２４の機能により正規化したところ、各精製Ｓ－ＬＶ（それぞれ、Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}のバッチ１～３、およびｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶについて、ｐ２４のインプット１ｎｇ当たりの溶解物２０μＬのＲＬＵを、１．５７×１０^７±８．０１×１０^６、１．１９×１０^７±３．０７×１０^６、１．４９×１０^７±２．４４×１０^６、４．１５×１０^７±２．３１×１０^７、１．３８×１０^７±３．０６×１０^６とする）の機能品質は、ほぼ同等であり、統計学的に有意ではなかった（図９Ａ；各々、ＳＧ６１４＋Δ１９ａａ－ＬＶバッチ１と比較したＰを＜０．０５とする；マン－ホイットニーのｔ検定）。モデル化されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ＶＯＣ（Ｂ．１．１．７およびＢ．１．３５１）、およびｍａ（ｃｏ）Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}は全て、Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（それぞれ、ｐ２４のインプット１ｎｇ当たりの溶解物２０μＬのＲＬＵを、４．１５×１０^７±２．２７×１０^７、６．４５×１０^７±２．７７×１０^７、および９．９２×１０^７±３．１７×１０^７とする；Ｐ＜０．００１およびＰ＜０．０００１；マン－ホイットニーのｔ検定）と比較して、ｐ２４のインプット１ｎｇ当たりのそれらの機能性の、統計学的に有意な増大を呈したことが注目される。ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（すなわち、突然変異であるＮ５０１Ｙを付加した）と、Ｇ６１４含有Ｓ変異体との間で、約７倍の機能品質の改善が計算されたことは目覚ましい。代替的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ＶＯＣをモデル化するＳ－ＬＶと、Ｇ６１４含有Ｓ変異体との間では、ｐ２４のインプット１ｎｇ当たり、３～４倍の形質導入の改善が計算された。（ｃｏ）ｍＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞から捕捉されたＲＬＵによっても、同様の改善が計算された（ｐ２４のインプット１ｎｇ当たりの、Ｓ－ＬＶの機能品質もまた、ＶＯＣをモデル化するＳ－ＬＶが、許容性細胞への形質導入の、２～３倍の改善を示すことを反映した）（図９Ｂ；各々、ｍａ（ｃｏ）Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶと比較したＰを＜０．００１とする；マン－ホイットニーのｔ検定）。

【0322】

総じて、これらのデータは、ＡＥＸおよびＴＦＦによる濃縮および精製の後における、Ｓ－ＬＶおよびｍａＳ－ＬＶ精製および濃縮の成功をさらに強調し、モデル化されたＶＯＣが、それらの感染プロファイルを、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶまたは適切なＰＳＶ参照と比べて、適格化し、確認するように、さらに評価されることをさらに強調した。データはまた、突然変異であるＮ５０１Ｙが、Ｓ－ＬＶ、特に、ｍａＳ－ＬＶによる、機能的な形質導入を改善することも裏付ける。

【実施例5】

【0323】

ｍａＳ－ＬＶは、市販のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体により中和される
次に、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶの、中和に対する感受性を調べることにより、ｍａＳ－ＬＶが、前臨床／臨床使用に有用な資源であることを実証するのかどうかについて探索した。ｍａＳ－ＬＶはまた、潜在的なＳ ＶＯＩに対する、前望的中和傾向をモデル化するのにも用いられる。（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞系へと形質導入するのに最適な、形質導入効率の飽和を伴わないＭＯＩ（１のＭＯＩは、上方値における、形質導入感受性の飽和を伴わない、高形質導入効率を裏付けた；データは図示しない）を特徴付けした後で、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶを、市販の中和抗体（ｎＡｂ）による、ｉｎ ｖｉｔｒｏ中和アッセイにかけた。

【0324】

図１０Ｃおよび１０Ｄに示される通り、ＲＢＤターゲティングＲ００１ ｎＡｂは、ｍ^{ａＳＹ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶの強力な中和を示した（ＩＣ５０＝０．０５μｇ／ｍＬ）。図１０Ａおよび１０Ｂに示される通り、Ｓ１ターゲティングＭＭ４３もまた、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶを中和することが可能であった（ＩＣ５０＝１．２μｇ／ｍＬ）。

【0325】

しかし、図１０Ｅおよび１０Ｆに示される通り、Ｓ－ＬＶは、中和抗体により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体依存的に中和される。（ｃｏ）ｈＡＣＥ２または（ｃｏ）ｍＡＣＥ２（表示の通り）およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する２９３Ｔ／１７細胞（形質導入の当日に、３０～４０％のコンフルエンシーを達成するように播種される）へと、表示の最終作業濃度における、表示のＳ－ＬＶ．ｅＧＦＰまたはｍａＳ－ＬＶ．ｅＧＦＰ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}（Ｇ６１４＋Δ１９）；Ｂ．１．１．７＋Δ１９（アルファ＋Δ１９）；Ｂ．１．３５１＋Δ１９（ベータ＋Δ１９）；およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Ｙ４９８＋Ｔ４９９＋Δ１９ａａ}（ｍａＳ２＋Δ１９））；および（Ｅ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ＲＢＤをターゲティングするＲ００１ ｎＡｂ、または（Ｆ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ１ドメインをターゲティングするＭＭ４３ ｎＡｂのプレミックスを形質導入した。感染の７２時間後における形質導入効率は、フローサイトメトリーにより測定し、中和％は、対応するＩｇＧアイソタイプ対照の平均形質導入に対する％として計算した。点線は、平均ＩＣ_５０が計算される、５０％の中和を指す。

【0326】

Ｒ００１のＩＣ５０測定値（ｕｇ／ｍＬ）は、以下の通りであった：Ｇ６１４＋１９ｄｅｌ Ｓ－ＬＶについて、０．０６であり；アルファ＋１９ｄｅｌ Ｓ－ＬＶについて、０．３２であり；ベータ＋１９ｄｅｌ Ｓ－ＬＶについて、中和を逃避し；ｍａＳ２＋１９ｄｅｌ（Ｓ－ＬＶ ｖ０２）Ｓ－ＬＶについて、０．０５である。

【0327】

ＭＭ４３のＩＣ５０測定値（ｕｇ／ｍＬ）：Ｇ６１４＋１９ｄｅｌ Ｓ－ＬＶについて、０．８であり；アルファ＋１９ｄｅｌ Ｓ－ＬＶについて、中和を逃避し；ベータ＋１９ｄｅｌ Ｓ－ＬＶについて、０．５であり；ｍａＳ２＋１９ｄｅｌ（Ｓ－ＬＶ ｖ０２）Ｓ－ＬＶについて、１．２５である。

【0328】

総じて、これらのデータは、Ｓ－ＬＶプラットフォームが、ｎＡｂを使用して、中和プロファイルまたは中和逃避プロファイルを再現することが可能であることを裏付ける一助となる。

【実施例6】

【0329】

マウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、許容可能な機能力価で、ＳＩＶ１ベクターを偽型化するのに使用される
次に、他のレンチウイルスベクターを偽型化するのに、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}を使用しうるのかどうかについて探索した。ＳＩＶ１を、概念実証研究のために使用した。

【0330】

ＶＳＶｇ偽型化ｒＳＩＶ１レンチウイルスベクター（ｎ＝１）またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}およびｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}（各々、ｎ＝２ずつ）について、２９３Ｔ／１７ ＳＦ細胞の一過性トランスフェクションを使用して、Ｓ－ＬＶを作製した。トランスフェクションの７２時間後、粗ｒＳＩＶ１．ＶＳＶｇ／ｒＳＩＶ１．Ｓ－ＬＶベクター物質を採取し、系列希釈し、（ｃｏ）ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を共発現する細胞へと形質導入した。形質導入の７２時間後、細胞を、フローサイトメトリーにかけて、ｅＧＦＰの形質導入に基づき、ＩＵ／ｍＬ単位の力価を決定した。

【0331】

図１１に示される通り、ｒＳＩＶ１ベクターゲノムは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｃｏ）Ｓ偽型でパッケージングすることができた。こうして、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}を含むＳ－ＬＶ偽型は、ＳＩＶ／ＨＩＶ ＬＶプラットフォームに依存せずに（例えば、ＳＩＶｃｔＨＮ偽型と比較して）、６～７×１０^５ＩＵ／ｍＬの範囲の力価で、エンベロープへと組み込まれた。

【実施例7】

【0332】

ｍＡＣＥ２許容性Ｓ－ＬＶは、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、トランスにおけるｈＡＣＥ２発現に依存せずに、強力な遺伝子導入ツールであることを実証する
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ｍａＳ－ＬＶによる形質導入の、ｍＡＣＥ２／ｈＡＣＥ２共許容性をさらに立証するために、遺伝子導入能へのその橋渡しについて評価するように、精製および濃縮されたｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ＦＬｕｃを、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて調べた。加えて、ＶＯＣ由来Ｓ－ＬＶにより呈される、形質導入の観察された利点を踏まえ、Ｓ－ＬＶが、実施例４（図９）において報告された、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける知見の拡張として、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてもまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体をスクリーニングする予測ツールとしてモデル化されるのかどうかについて探索した。用量滴定研究は、非ｈＡＣＥ２を発現するＢＡＬＢ／ｃマウスへの、％を増大させる、ＭＦＤ（ｍａｘｉｍｕｍ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｄｏｓｅ）の投与を伴い、ルシフェラーゼ発現動態をモニタリングした。

【0333】

時間経過にわたる、トランスにおけるｈＡＣＥ２発現に依存しない、ｉｎ ｖｉｖｏにおける生物発光により、ｍａＳ－ＬＶ．ＦＬｕｃ形質導入の、用量依存性増大が観察および推定された（図１２）。とりわけ、代表的な図１２Ａに従い、ｍａＳ－ＬＶによる形質導入は、マウス肺内で測定可能であったが、被験ｍＡＣＥ２共許容性ｍａＳ－ＬＶにより、マウス鼻腔内で、顕著に測定可能であった。ルシフェラーゼ発現は、マウスの鼻腔（図１２Ｂ）および肺（図１２Ｃ）の両方について、ナイーブ動物により推定される通り、バックグラウンドを上回って、十分に検出可能であり、鼻腔内投与の２日後までに、シグナル強度が検出され、投与の約７日後にピークに達し、マウスの鼻腔または肺について、最大で、投与後２１日間にわたり持続した（減衰せずに）（それぞれ、図１２Ｂおよび１２Ｃ）。これに加えて、マウス鼻腔内でも、２１日間の時間経過にわたり、類似の形質導入動態を、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶの間で測定したが（シグナル強度の、バックグラウンドを上回る、約１０００倍の改善）；例外は、シグナル強度の、バックグラウンドを上回る、約１００倍の改善を示した、Ｓ^{Ｂ．１．１．７＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ＦＬｕｃ ４０ｎｇを投与されたマウスであった。マウス肺内では、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ＦＬｕｃの投与について、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶのシグナル強度は、シグナル強度の、バックグラウンドを上回る、約１０倍の増大（例えば、ｍａＳ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}－ＬＶ．ＦＬｕｃについてのｐ２４の用量４０ｎｇに関して）～約１００倍の増大の間の範囲であった。

【0334】

投与されたマウスが、実質的な体重減少を示さず、一般に、ＴＳＳＭを投与された対照マウス（データは図示しない）と同等であったことを踏まえると、これらの観察は、さらに理解され、これは、被験ｎｇ単位の用量における、Ｓ－ＬＶの、ｉｎ ｖｉｖｏにおける遺伝子導入ツールとしての、十分な忍容性を推定した。

【0335】

総じて、提示されたデータは、Ｓ－ＬＶプラットフォームが、ｉｎ ｖｉｖｏのマウスの肺内および気道内の、トランスにおけるｈＡＣＥ２発現を必要とせずに投与されることを裏書きした。

【実施例8】

【0336】

遺伝子治療剤としての、ｍＡＣＥ２許容性Ｓ－ＬＶ
本明細書で例示され、図１で例示されるｍａＳ－ＬＶベクターなどのｍａＳ－ＬＶベクターは、遺伝子治療用ベクターとして使用される。突然変異株である、ＳＦＴＰＢ細胞モデルまたはＣＦＴＲ細胞モデル（それぞれ、ＣＦＴＲ Ｆ５０８Δを伴う、ＳＦＴＰＢ^ｋｏモデルまたは１６ＨＢＥ１４ｏ－モデル）を是正するように目的の治療用遺伝子：（ｓｏ）ＳＦＴＰＢまたは（ｓｏ）ＣＦＴＲ２をコードするＳ－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｖ０２、０３、０５）を作製した。タンパク質発現プロファイルのレスキューは、ウェスタンブロットによりを裏付けられた。代表的計画を、図１３に明示する。

【実施例9】

【0337】

Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶは、Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶより高度の、肺内におけるトランス遺伝子の発現を方向付ける
ｉｎ ｖｉｖｏにおける実験を行って、マウスの肺内における、トランス遺伝子の発現を比較した。特に、Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｍａＳ２）を、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶベータ）と比較した。

【0338】

Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｍａＳ２）、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶベータ）または媒体を、ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｐ２４ Ｓ－ＬＶ １６６ｎｇが送達される群１つ当たりのｎ＝６）の肺へと送達した。

【0339】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＷｕｈａｎ分離株と比較して、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶベータ）は、以下の配列変異：Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ａ７０１Ｖ、およびＣ末端における１９アミノ酸の欠失を含有した。同様に、Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｍａＳ２）は、Ｑ４９８Ｙ、Ｐ４９８Ｔ、Ｄ６１４Ｇ、およびＣ末端における１９アミノ酸の欠失を含有した。いずれのＳ－ＬＶベクターも、ＣＭＶプロモーターの制御下にある、ホタルルシフェラーゼトランス遺伝子を含有した。

【0340】

図１４Ｂに示される通り、Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｍａＳ２）およびＳ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶベータ）のいずれも、媒体処置動物より有意に大きなルシフェラーゼ活性を方向付けた（それぞれ、４７．５倍および１０７．６倍；ｐ＜０．０００１；一元ＡＮＯＶＡ）。さらに、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶベータ）は、Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶ（Ｓ－ＬＶ ｍａＳ２）の約２．３倍の、ｉｎ ｖｉｖｏの肺内におけるトランス遺伝子の発現を方向付けた（ｐ＜０．０００１；一元ＡＮＯＶＡ）。

【実施例10】

【0341】

Ｓ－ＬＶは、治療用トランス遺伝子を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２許容性ヒト細胞へと送達しうる
実施例８に従い、ｍＡＣＥ２許容性Ｓ－ＬＶ（ｍａＳ３；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｐ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}）は、サーファクタントタンパク質Ｂ（ＳＰ－Ｂ）のトランス遺伝子と共に作製し、１００μｌ、２５０μｌ、もしくは５００μｌ（粗）、または１μｌ、１０μｌ、もしくは５０μｌ（濃縮）の濃度の、粗Ｓ－ＬＶ形態または濃縮Ｓ－ＬＶ形態で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２許容性２９３Ｔ／１７（ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を安定的に共発現する）へと形質導入するのに使用した。形質導入後、細胞溶解物を、成熟ＳＰ－Ｂホモ二量体の発現についてのＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット解析（非還元条件下における）にかけ、非形質導入細胞のヌルバックグラウンドレベルと比較した。ＧＡＰＤＨは、ローディング対照として用いられた。

【0342】

図１５に示される通り、このｍＡＣＥ２許容性Ｓ－ＬＶ（ｍａＳ３；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｐ４９８，Ｔ４９９，Ｙ５０１，Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}）は、粗形態または濃縮形態として送達された場合に、投与された最低容量においてもなお、治療用トランス遺伝子（ヒトＳＦ－Ｂ）を発現するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２許容性ヒト２９３Ｔ／１７細胞を駆動することに成功した。

【0343】

加えて、（Ｇ６１４＋Δ１９ａａ；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}）を、トランス遺伝子であるＥＧＦＰと共に作製し、ヒト肺芽オルガノイド（ＬＢＯ）へとマイクロインジェクションした。ＬＢＯは、ヒトＲＵＥＳ２胚性幹細胞系から作出し、３Ｄオルガノイド内のＩＩ型肺胞上皮細胞をモデル化した。ＥＧＦＰをコードする濃縮Ｓ－ＬＶを、フェノールレッド（比を２：１とする）と混合し、ＭＦＤを、Ｍａｔｒｉｇｅｌ内に包埋されたＬＢＯへとマイクロインジェクションした。ヒトＩｇＧをコードするｒＡＡＶ８のマイクロインジェクションは、陰性対照として用いられた。蛍光顕微鏡法は、ＥＶＯＳ ＦＬ Ａｕｔｏを使用して、注射の７２時間後に実施した。

【0344】

図１６に示される通り、ＥＧＦＰは、（Ｇ６１４＋Δ１９ａａ；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}）の送達後において、ＬＢＯ内で発現された。

【実施例11】

【0345】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ２核タンパク質（Ｎ）は、組換えＨＩＶ１レンチウイルスベクター（ＬＶ）の力価をブーストする
以下のＳ－ＬＶベクターについて調べた：
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}＝Ｇ６１４＋Δ１９
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋ＦＫＯ＋Δ１９ａａ}＝Ｇ６１４＋ＦＫＯ＋Δ１９
Ｂ．１．６１７．２＋Δ１９＝デルタ＋Δ１９
Ｃ．３７＋Δ１９＝ラムダ＋Δ１９

【0346】

Ｗｕｈａｎ変異株またはオミクロン変異株に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質を伴う、ＥＧＦＰをコードする、これらのＳ－ＬＶベクター、およびこれらを伴わないＳ－ＬＶベクターを、上記の「材料および方法」節で記載された通りに作製し、共トランスフェクション時に組み入れた。Ｗｕｈａｎ変異株またはオミクロン変異株に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質の両方について、Ｂ．１．６１７．２＋Δ１９（デルタ＋Δ１９）およびＣ．３７＋Δ１９（ラムダ＋Δ１９）と共に調べた。Ｗｕｈａｎ変異株に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質だけは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}（Ｇ６１４＋Δ１９）およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋ＦＫＯ＋Δ１９ａａ}（Ｇ６１４＋ＦＫＯ＋Δ１９；ここで、ＦＫＯ＝フーリンノックアウトである）と共に調べた。

【0347】

粗ベクター物質を、ｈＡＣＥ２およびｈＴＭＰＲＳＳ２を安定的に発現する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２許容性２９３Ｔ／１７細胞上で滴定し、力価は、フローサイトメトリー解析の後で計算した（図１７Ａ）。これらの力価を、ｌｏｇ１０変換し、マッチさせられた力価対の間の差違について解析した。図１７Ｂに示される通り、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎ（Ｗｕｈａｎまたはオミクロン）を共トランスフェクトしたところ、収量および力価の有意な改善が観察された（対応のあるｔ検定；Ｐ＝０．０００６）。

【0348】

考察
高力価ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶ資源に対する要求に応えて、臨床的に妥当なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質のライブラリーをモデル化するのにたやすく利用される、Ｓ－ＬＶプラットフォームが確立されている。これは、ＶＯＣ（すなわち、Ｇ６１４、Ｂ．１．１．７、およびＢ．１．３５１）に由来するＳ、またはＳ ＶＯＩを、潜在的な新興ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株をモデル化するサロゲートとして組み入れた。特に、これは、ｍＡＣＥ２共許容性を付与することが本明細書で示されている突然変異であるＱ４９８ＹおよびＰ４９９Ｔを含む改変Ｓタンパク質を使用することにより例示されている。

【0349】

Ｓ－ＬＶプラットフォーム、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２をモデル化する能力についての包括的検討が提示された。本発明者らは、マウス馴化Ｓ－ＬＶの、目覚ましく高度の機能力価を達成した。これは、スケーラブルな２９３Ｔ／１７懸濁細胞を使用し、推定ＥＲＳを包含する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ細胞質テールの切断（＋Δ１９ａａ）を組み込み、これにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓパッケージング、およびその欠失後における力価を改善して達成した。この細胞質テールの、Δ１９ａａ切断にもかかわらず、本発明者らのＳ－ＬＶライブラリー内でコードされるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓは、天然のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓに従う、それらの天然の三次構造を、実証可能な形で保持し、機能的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を再現した（ＡＣＥ２依存性細胞侵入についての証拠、合胞を媒介する能力、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ三量体の、上記で例示されたＳ－ＬＶ ＰＳＶ製造物との共精製を踏まえ、ＩｎｔＦＯＬＤ ｔｏｏｌ３０を使用する、予測３Ｄをモデル化、および本発明者らのコードＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ配列の構造アライメント（例えば、ＰＤＢ：７ｃｚｐＡ、７ｃｗｌ、および７ａ９３Ａに従い、Ｗｕｈａｎ Ｈｕ－１Ｓタンパク質に照らして、信頼できる形で分解された予測３Ｄモデル）（データは図示しない）を使用した）。興味深いことに、本発明者らのＳ－ＬＶプラットフォームを使用し、Δ１９ａａ切断を組み込み、ＡＣＥ２侵入受容体およびｈＴＭＰＲＳＳ２セリンプロテアーゼの両方を発現する、許容性２９３Ｔ／１７細胞の使用を用いることにより、本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ偽型化ＬＶの著明なレスキュー（最大で、所与の製造物中の、対数による機能力価分のレスキュー）を観察した。これは、とりわけ、偽型化することが困難なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株について当てはまった。Ａｕｓ／ＶＩＣ０１株、とりわけ全長Ｓタンパク質としてのＡｕｓ／ＶＩＣ０１株は、モデル化された他のＳ－ＬＶと同等の力価まで偽型化することが特に、困難であることが見出されたのである。

【0350】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質およびＳ－ＬＶプラットフォームについての、さらなる精査を実施して、達成される、目覚ましい収量および力価を立証した。特に、本発明の改変ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質が、Ｓ－ＬＶプラットフォームの潜在的橋渡しの利益を改善する、周知であり、かつ、特徴付けられた、固有の機能を再現するのかどうかについて検討した。例えば、十分に確立され、市販されている中和抗体に照らして実証可能な中和が達成された。ｎＡｂからの逃避を付与する、個別の突然変異プロファイルを踏まえると、モノクローナルｎＡｂに対する中和の逃避は、予測される通り、変異株依存的に実証可能であった。さらに、発現されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質は、Ｓ２ドメイン内に配置された融合ペプチドに固有である、細胞間の融合および合胞を誘導する、強力な能力を示した。突然変異体であるＳ^Ｇ６１４株は、Ｓ糖タンパク質の安定性、未成熟Ｓ１の切断および排出の低減を改善し、Ｓ^Ｄ６１４と比べて、力動的により開放性の融合前コンフォメーションが、ＡＣＥ２への結合を容易とすることを促進することが見出された。これは、本研究では、トランスフェクション研究における合胞の開始の、実質的な遅延として観察された。

【0351】

さらなる代表的Ｓ－ＬＶを介して、本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＶＯＣ株（Ｂ．１．１．７およびＢ．１．３５１）（この場合、ＰＳＶは、Ｇ６１４変異株を表す）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、許容性細胞に、基準参照と比べて、目覚ましく感染する傾向をモデル化することに成功する能力をさらに提示することが可能であった。重要なことは、Ｎ５０１Ｙ含有ＶＯＣに固有である、測定された形質導入能の、３～４倍の改善を、文献において示唆される、真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株の通りに再現することに成功したことであった。全てをまとめると、かつ、Ｓ^{Ａｕｓ／ＶＩＣ０１}もまた念頭に置きながら、本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の、ＰＳＶとしてのモデル化が、関連するＳ糖タンパク質が、ＡＣＥ２侵入受容体を介して、許容性細胞に感染する能力について、多くのことを推定しうる例を、おそらく初めて提示する。このＳ－ＬＶツールは、どの範囲のＶＵＩ、ＶＯＣ、新興ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株、予測ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株が、許容性細胞に感染しうるのかについて、そのＳ糖タンパク質の文脈において、迅速に検討して、監視の取組みを増強するための、潜在的手段をもたらす。

【0352】

有望なことに、これらの結果はまた、選ばれたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶが、突然変異である、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ Ｑ４９８Ｙ／Ｐ４９９Ｔ１９を利用し、場合によりまた、突然変異であるＮ５０１Ｙも利用した後、トランスにおいてなされる、ｈＡＣＥ２の発現を必要とせずに、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、直接機能しうることも裏付ける。選ばれたＳ－ＬＶ（および、これを延長して、それらの対応する、真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２対応物）が、内因性のｍＡＣＥ２侵入受容体を介して感染する能力は、とりわけ、予防法、治療法、およびワクチン戦略の効能を検討する文脈において、有用な含意を有する。本発明者らは、現在、真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、および非マウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染について利用可能なマウスモデルは、重要な主要例として述べると、ｈＡＣＥ２トランスジェニック５２動物、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介ノックイン動物の供給と関連する、著明な費用および動物の浪費により、操作が困難であることに注目する。例えば、複製不能アデノウイルス（ＡｄＶ）、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）、またはＬＶベクターを介して、ｈＡＣＥ２を、マウスの肺および気道へと、トランスにおいて導入することによる、ヒト化の簡略化、およびマウスモデルの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する感作工程であってもなお、選択された遺伝子導入ベクターの指向性によって決まる、マウスの肺内における、ｈＡＣＥ２の、生理学的に妥当な生体分布を結果としてもたらす。加えて、動物モデルに、複数のベクター（おそらく、少なくとも２つの異なるウイルスベース物質（ｉ．ｈＡＣＥ２のヒト化を達成する遺伝子導入のための、選ばれたベクター、およびｉｉ．抗原投与用のＰＳＶまたは真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）が必要である）により抗原投与することの複雑さは、ｍＡＣＥ２共許容性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２により緩和される。

【0353】

さらに、Ｓ－ＬＶの、個々の変異体は、特に、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるトランス遺伝子発現に関して、全体として、本発明のＳ－ＬＶの有利な特性を凌駕し、上回る、さらなる利点をもたらす。特に、Ｓ^{Ｂ．１．３５１＋Δ１９ａａ}－ＬＶは、ｉｎ ｖｉｖｏの肺内におけるトランス遺伝子の発現の、Ｓ^{Ｙ４９８，Ｔ４９９，Ｇ６１３ Δ１９ａａ}－ＬＶと比較して有意な増大をもたらすことが示されている。

【0354】

本発明のマウス馴化Ｓ－ＬＶはなお、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２許容性ヒト細胞へと効率的に形質導入して、治療用トランス遺伝子の発現を駆動することもまた可能であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ^{Ｇ６１４＋Δ１９ａａ}は、ＩＩ型肺胞上皮細胞についての、許容可能なモデルである、ＬＢＯ内のヒト細胞へと形質導入することが可能であった。このように、これらのデータは、本発明のＳ－ＬＶが、治療用トランス遺伝子を、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるヒトＩＩ型肺胞上皮細胞へと送達するのに使用されることを示唆する。ＩＩ型肺胞上皮細胞は、サーファクタント欠損症（ＡＢＣＡ３欠損症またはＳＰ－Ｂ欠損症）および特発性肺線維症など、多数の呼吸器疾患および障害標的細胞型であるので、本発明のＳ－ＬＶは、遺伝子治療用ベクターとしての潜在的可能性を有する。

【0355】

結論として述べると、本明細書の実施例は、第３世代のＳＩＮ ＨＩＶ１ ＬＶを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓにより偽型化（Ｓ－ＬＶと称される）する能力を裏付ける。臨床的妥当性がある変異株、または標準的実験の封じ込め条件において使用される、新規のＰＳＶ資源として機能する、特に目的の変異株であるＶＯＣに由来するＳ糖タンパク質を包含し、モデル化する、広範なＳ－ＬＶライブラリーを確立した。Ｓ－ＬＶの目覚ましい機能力価は、懸濁２９３Ｔ／１７への、ｅＧＦＰまたはＦＬｕｃレポーターをコードするＨＩＶ１ ＬＶゲノム、ＨＩＶ１ ＧａｇＰｏｌ、ＨＩＶ１ Ｒｅｖプラスミド、および目的のＳ糖タンパク質をコードするプラスミド（複数可）の、一過性トランスフェクションの後に達成された。Ｓ－ＬＶは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける適用を含む、下流における使用を拡大するために、さらに濃縮および精製することができる。重要なことは、ＣＯＶＩＤ－１９から回復した患者に由来するｎＡｂもしくは回復期血漿に対する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ変異体の中和可能性、またはＳ糖タンパク質を規定する株を介して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株の感染可能性を決定する一助となる機能について精査するために、ＶＯＣおよびＶＯＩをモデル化することにより、このＳ－ＬＶプラットフォーム／ライブラリーが、ＣＯＶＩＤ－１９／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２関連の調査研究の進展を、潜在的に支援しうることである。最後に、これらの実施例は、まず、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染をモデル化する、迅速、かつ、直接的な手段として、ｈＡＣＥ２発現に依存せずに、強力な遺伝子導入能を裏付けるように、ＢＡＬＢ／ｃマウスに鼻腔内投与することにより、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、Ｓ－ＬＶを適用することの実証を提示する。全てをまとめると、このＳ－ＬＶプラットフォームは、真正ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、特に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質のレベルでモデル化された、代表的変異株を、正確に表す。このＳ－ＬＶプラットフォームは、本研究において表される、広範なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株におけるロバスト性、および高度のＢＳＬ要件により制約されないような柔軟性を示す。したがって、Ｓ－ＬＶプラットフォームは、使用が容易であり、アクセスが容易であり、進行中のＣＯＶＩＤ－１９／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２パンデミックに対抗する、関連の調査研究のための、安全なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶ資源として機能する。さらに、これらのＳ－ＬＶベクターがまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２許容性ヒト細胞へと形質導入して、治療用トランス遺伝子の発現を駆動することが可能でもあることは、これらのＳ－ＬＶが、診療所における遺伝子治療用ベクターとして有用でありうるほか、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＳＶ資源としても有用でありうることを指し示す。

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図1-4】

【図1-5】

【図1-6】

【図1-7】

【図1-8】

【図1-9】

【図1-10】

【図1-11】

【図2-1】

【図2-2】

【図2-3】

【図2-4】

【図2-5】

【図2-6】

【図2-7】

【図2-8】

【図2-9】

【図2-10】

【図2-11】

【図2-12】

【図2-13】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図3-4】

【図3-5】

【図4-1】

【図4-2】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10-1】

【図10-2】

【図11】

【図12-1】

【図12-2】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【配列表】

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【国際調査報告】