特表 2025-501731 イオン化可能なアミン脂質及び脂質ナノ粒子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-23

(54)【発明の名称】イオン化可能なアミン脂質及び脂質ナノ粒子

(51)【国際特許分類】

   C07C 219/04 20060101AFI20250116BHJP

   C07D 211/22 20060101ALI20250116BHJP

   C07D 295/15 20060101ALI20250116BHJP

   C07D 207/16 20060101ALI20250116BHJP

   C07D 211/62 20060101ALI20250116BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20250116BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20250116BHJP

   A61K 9/127 20250101ALI20250116BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20250116BHJP

   C12N 15/88 20060101ALI20250116BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20250116BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20250116BHJP

   C12N 5/071 20100101ALI20250116BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250116BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20250116BHJP

   C07K 14/00 20060101ALI20250116BHJP

【ＦＩ】

C07C219/04 CSP

C07D211/22

C07D295/15

C07D207/16

C07D211/62

A61K47/18

A61K47/22

A61K9/127

A61K9/51

C12N15/88 Z

C12N15/11 Z

C12P21/02 C

C12N5/071

C12N5/10

C12Q1/02

C07K14/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024536420

(86)(22)【出願日】2022-12-16

(85)【翻訳文提出日】2024-07-31

(86)【国際出願番号】 US2022053209

(87)【国際公開番号】W WO2023121975

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】63/291,639

(32)【優先日】2021-12-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/354,627

(32)【優先日】2022-06-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】520439645

【氏名又は名称】ビーム セラピューティクス インク．

(74)【代理人】

【識別番号】100083806

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 秀和

(74)【代理人】

【識別番号】100111235

【弁理士】

【氏名又は名称】原 裕子

(74)【代理人】

【識別番号】100195257

【弁理士】

【氏名又は名称】大渕 一志

(72)【発明者】

【氏名】サゴ、 コリー デイン

(72)【発明者】

【氏名】ハミルトン、 グレゴリー ローレンス

【テーマコード（参考）】

4B063

4B064

4B065

4C076

4H006

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B063QA01

4B063QA20

4B063QQ02

4B063QR32

4B063QR35

4B063QR48

4B063QR77

4B063QS34

4B063QS40

4B064AG01

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA05

4B065CA44

4B065CA46

4C076AA19

4C076AA65

4C076BB13

4C076CC06

4C076CC07

4C076CC50

4C076DD15F

4C076DD15H

4C076DD49F

4C076DD49H

4C076DD60F

4C076DD60H

4C076DD63F

4C076DD63H

4C076DD70F

4C076DD70H

4C076EE23F

4C076EE23H

4C076FF16

4C076FF21

4C076FF43

4C076FF65

4H006AA01

4H006AA03

4H006AB20

4H006BP90

4H006BT12

4H006BT60

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045CA40

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、組成物、調製物、ナノ粒子（脂質ナノ粒子など）、及び／又はナノ材料、並びにそれらを使用する方法について記載する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式の化合物：

【化1】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｌ^１及びＬ^１’の各々が、独立して、Ｃ_１－６アルキレンであり、
Ｌ^２及びＬ^２’の各々が、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられ、
Ｙ^１及びＹ^１’の各々が、独立して、－Ｃ（Ｏ）－又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、
Ｙ^２及びＹ^２’の各々が、独立して、存在しないか、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、又は－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－であり、
Ｒ及びＲ’の各々が、独立して、水素、

【化2】

であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基であり、
Ｌ^３ａ及びＬ^３ａ’の各々が、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられ、
Ｒ^ａ及びＲ^ａ’の各々が、独立して、水素であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基であり、
Ｘ^１が、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－、又は－ＮＲ^ｂ－であり、
Ｘ^２が、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－_１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－、－ＮＲ^ｂ－、又は－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられ、
Ｃｙ^Ａが、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のカルボシクリレン、フェニレン、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレン、並びに窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリーレンから選択される、任意選択的に置換された環であり、
Ｘ^３が、水素であるか、又は３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、フェニル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のヘテロシクリル、並びに窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリールから選択される、任意選択的に置換された基であり、
各Ｒ^ｂが、独立して、水素、又は任意選択的に置換されたＣ_１－_６脂肪族基である、化合物、若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩。

【請求項2】

前記化合物が、式Ｉ－Ａの化合物：

【化3】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

前記化合物が、式Ｉ－Ａ－ａの化合物：

【化4】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

前記化合物が、式Ｉ－Ａ－ｂの化合物：

【化5】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

前記化合物が、式Ｉ－Ａ－ｃの化合物：

【化6】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

Ｌ^１が、Ｃ_１－４アルキレンである、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｌ^１’が、Ｃ_１－４アルキレンである、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

Ｌ^２が、存在しない、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

Ｌ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

Ｌ^２’が、存在しない、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

Ｌ^２’が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

Ｙ^１が、－Ｃ（Ｏ）－である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項13】

Ｙ^１’が、－Ｃ（Ｏ）－である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項14】

Ｙ^２が、存在しない、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項15】

Ｙ^２が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項16】

Ｙ^２が、－ＯＣ（Ｏ）－である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項17】

Ｙ^２’が、存在しない、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項18】

Ｙ^２’が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項19】

Ｙ^２’が、－ＯＣ（Ｏ）－である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項20】

Ｒが、

【化7】

である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項21】

Ｒが、任意選択的に置換されたＣ_９－２０脂肪族である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項22】

Ｒ’が、

【化8】

である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項23】

Ｒ’が、任意選択的に置換されたＣ_９－２０脂肪族である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項24】

－Ｌ^２－Ｙ^２－Ｒ及び－Ｌ^２’－Ｙ^２’－Ｒ’の各々が、独立して、

【化9】

である、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項25】

各Ｌ^３ａが、存在しない、請求項１～２４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項26】

各Ｌ^３ａ’が、存在しない、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項27】

各Ｒ^ａが、任意選択的に置換されたＣ_６－１２脂肪族である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項28】

各Ｒ^ａ’が、任意選択的に置換されたＣ_６－１２脂肪族である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項29】

－Ｌ^３ａ－Ｒ^ａ及び－Ｌ^３ａ’－Ｒ^ａ’の各々が、独立して、

【化10】

である、請求項１～２８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項30】

Ｘ^１が、存在しない、請求項１～２９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項31】

Ｘ^１が、－Ｏ－である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項32】

Ｘ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖であり、１つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる、請求項１～３１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項33】

Ｘ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖であり、１つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられる、請求項１～３１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項34】

Ｃｙ^Ａが、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレンである、請求項１～３３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項35】

Ｘ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項36】

Ｘ^３が、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである、請求項１～３５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項37】

Ｘ^３が、１～２つの窒素を有する、任意選択的に置換された５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである、請求項１～３６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項38】

－Ｘ^２－Ｘ^３が、

【化11】

である、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項39】

各Ｒ^ｂが、独立して、任意選択的に置換されたＣ_１－６脂肪族である、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項40】

表１から選択される化合物、又はその薬学的に許容される塩。

【請求項41】

請求項１～４０のいずれか一項に記載のイオン化可能な脂質を含む、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物。

【請求項42】

請求項１～４０のいずれか一項に記載のイオン化可能な脂質と、
リン脂質と、
ステロールと、
コンジュゲート－リンカー脂質（例えば、ポリエチレングリコール脂質）と、を含む、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物。

【請求項43】

治療剤及び／又は予防剤を更に含む、請求項４１又は４２に記載のＬＮＰ調製物。

【請求項44】

前記治療剤及び／又は予防剤が、１つ以上の核酸であるか、又はそれらを含む、請求項４３に記載のＬＮＰ調製物。

【請求項45】

前記１つ以上の核酸が、ＲＮＡであるか、又はそれを含む、請求項４４に記載のＬＮＰ調製物。

【請求項46】

前記１つ以上の核酸が、ＤＮＡであるか、又はそれを含む、請求項４４に記載のＬＮＰ調製物。

【請求項47】

前記ＬＮＰ調製物が、前記治療剤及び／又は予防剤を標的細胞に送達するために製剤化される、請求項４３～４６のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物。

【請求項48】

前記標的細胞が、脾臓細胞（例えば、脾臓Ｂ細胞、脾臓Ｔ細胞、脾臓単球）、肝臓細胞（例えば、肝細胞）、骨髄細胞（例えば、骨髄単球）、免疫細胞、腎臓細胞、筋肉細胞、心臓細胞、肺細胞、若しくは中枢神経系における細胞であるか、又はそれらを含む、請求項４７に記載のＬＮＰ調製物。

【請求項49】

前記標的細胞が、造血幹細胞（ＨＳＣ）であるか、又はそれを含む、請求項４８に記載のＬＮＰ調製物。

【請求項50】

請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

【請求項51】

治療剤及び／又は予防剤の投与を必要とする対象にそれらを投与するための方法であって、前記方法が、請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物又は請求項５０に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項52】

疾患又は障害の治療を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、前記方法が、請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物又は請求項５０に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含み、前記治療剤及び／又は予防剤が、前記疾患の治療に有効である、方法。

【請求項53】

疾患又は障害の進行の遅延及び／又は停止を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、前記方法が、請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物又は請求項５０に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含み、前記治療剤及び／又は予防剤が、前記疾患の治療に有効である、方法。

【請求項54】

対象に由来する哺乳類細胞に治療剤及び／又は予防剤を送達する方法であって、前記方法が、請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物又は請求項５０に記載の薬学的組成物を投与されている前記対象の前記細胞を接触させることを含む、方法。

【請求項55】

哺乳類細胞において目的のポリペプチドを産生する方法であって、前記方法が、前記細胞を請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物、又は請求項５０に記載の薬学的組成物と接触させることを含み、前記治療剤及び／又は予防剤が、ｍＲＮＡであるか、又はそれを含み、前記ｍＲＮＡが、前記目的のポリペプチドをコードし、それによって、前記ｍＲＮＡが、前記細胞中で翻訳されて、前記目的のポリペプチドを産生することが可能である、方法。

【請求項56】

哺乳類細胞において目的のポリペプチドの産生を阻害する方法であって、前記方法が、前記細胞を請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物、又は請求項５０に記載の薬学的組成物と接触させることを含み、前記治療剤及び／又は予防剤が、ＲＮＡであるか、又はそれを含み、それによって、前記ＲＮＡが、前記目的のポリペプチドの産生を阻害することが可能である、方法。

【請求項57】

治療剤及び／又は予防剤を哺乳類の臓器、組織、細胞、又は細胞集団に特異的に送達する方法であって、前記方法が、哺乳類の臓器、組織、細胞、又は細胞集団を請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物、又は請求項５０に記載の薬学的組成物と接触させることを含み、それによって、前記治療剤及び／又は予防剤が、前記臓器、組織、細胞、又は細胞集団に送達される、方法。

【請求項58】

対象に、請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物、又は請求項５０に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

請求項４１～４９のいずれか一項に記載のＬＮＰ調製物、又は請求項５０に記載の薬学的組成物を投与することによって、ワクチン接種する方法。

【請求項60】

対象において獲得免疫応答を誘導する方法であって、少なくとも１つのＲＮＡを含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含み、前記組成物が、請求項１～４０のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、ＬＮＰ調製物を含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月２０日に出願された米国出願第６３／２９１，６３９号、及び２０２２年６月２２日に出願された米国出願第６３／３５４，６２７号に対する優先権及び利益を主張し、各々の内容全体が参照により本明細書に援用される。

【背景技術】

【0002】

化学、生物学、及び医学の分野において、薬物送達系の送達は、問題を抱えている。例えば、系の分子特性が組織への送達をどのように制御し、薬物有効性をどのように付与するかについての理解が不十分であることに起因して、薬物送達系は、進歩していない。

【発明の概要】

【0003】

本発明は、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料、並びにそれらを使用する方法に対する必要性を認識している。とりわけ、本開示は、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の構造的特徴が、インビボ、インビトロ、及びエクスビボでの機能的応答に影響を与えることを認識している。例えば、本開示は、とりわけ、本明細書に記載の１つ以上の構成成分の選択及び組み合わせが、脂質ナノ粒子の機能的活性に影響を及ぼすことについて記載している。一部の実施形態では、例えば、機能的活性は、所望のトロピズム、安定化、及び／又は薬物送達有効性を指し得る。一部の実施形態では、とりわけ、本開示は、１つ以上の構成成分の比が異なることによって、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の１つ以上の機能的活性に影響を及ぼすことについて記載している。

【0004】

更に、とりわけ、本開示は、脂質の化学構造が、参照脂質構造と比較して、改善された特性を付与することを認識している。例えば、一部の実施形態では、本開示は、式Ｉの化合物：

【化1】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、Ｌ^１、Ｌ^１’、Ｌ^２、Ｌ^２’、Ｙ^１、Ｙ^１’、Ｙ^２、Ｙ^２’、Ｒ、Ｒ’、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３の各々が、本明細書で定義されるとおりである、化合物若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩について記載する。

【0005】

とりわけ、本明細書に記載されるように、本開示は、三価コア（例えば、二級トリオールに由来する）特徴を含むイオン化可能な脂質、並びにそれらの組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料（例えば、ＬＮＰ、並びに／又はＬＮＰを含有する組成物、調製物、ナノ粒子、及び／若しくはナノ材料）の驚くべき属性（例えば、治療剤又は予防剤などのカーゴの予想外のトロピズム、安定化、及び送達有効性）、並びにそれらを使用する方法を示す。

【0006】

とりわけ、本開示は、１つ以上のイオン化可能な脂質を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）組成物を認識している。例えば、本開示は、予想外のトロピズムを付与した開示のイオン化可能な脂質のうちの１つ以上を含むＬＮＰの組成物及び／又は調製物を提供する。

【0007】

一部の実施形態では、提供される組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、疾患若しくは障害を治療する方法、ポリペプチドを送達、産生する方法、又は疾患若しくは障害の進行を遅延／停止する方法で使用するためのものである。

【0008】

一部の実施形態では、提供される組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、製造する方法で使用するためのものである。

【0009】

一部の実施形態では、提供される組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、特徴評価する方法で使用するためのものである。

【0010】

本発明の一態様を含む実施形態の要素（例えば、方法）は、本発明の他の態様を含む実施形態に適用され得、逆もまた同様である。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】本開示の実施形態による、ＬＮＰ調製物の例示的なｍＲＮＡスクリーニングシステムを示す。

【0012】

【図2】本開示の実施形態による、ＬＮＰ調製物の例示的なｓｉＲＮＡスクリーニングシステムを示す。

【0013】

定義
約：本明細書で使用される場合、「約」又は「およそ」という用語は、値に関して本明細書で使用される場合、参照される値に関連して、同様である値を指す。一般に、文脈に精通した当業者は、その文脈における「約」又は「およそ」によって包含される関連する程度の相違を理解するであろう。例えば、一部の実施形態では、「約」という用語は、別段の記載がない限り、又は文脈から明らかでない限り、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は参照値のいずれかの方向（より大きいか、又はより小さい）に収まる値の範囲を包含し得る（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。

【0014】

投与：本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、典型的には、対象又は系への組成物の投与を指す。当業者は、適切な状況下で、対象、例えば、ヒトへの投与に利用することができる様々な経路を認識するであろう。例えば、一部の実施形態では、投与は、眼、経口、非経口、局所などであり得る。一部の特定の実施形態では、投与は、気管支（例えば、気管支滴下による）、頬側、真皮（例えば、真皮、皮内、皮間、経皮などの局所的なもののうちの１つ以上であり得るか、又はそれらを含み得る）、経腸、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、心室内、特定の臓器内（例えば、肝内）、粘膜、鼻腔、経口、直腸、皮下、舌下、局所的、気管（例えば、気管内滴下による）、膣、硝子体などであり得る。一部の実施形態では、投与は、断続的（例えば、時間を空けて複数の用量）及び／又は定期的（例えば、同じ期間を空けて個々の用量）投与である投与を伴う。一部の実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間の連続投与（例えば、灌流）を伴い得る。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子を含む薬学的組成物は、非経口（筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）、又は皮下注射）、経皮（受動的に、又はイオン泳動若しくは電気穿孔を使用してのいずれか）、若しくは経粘膜（鼻、膣、直腸、又は舌下）の投与経路、又は生体侵食性インサートを使用することによる投与のために製剤化され得、各投与経路に適切な剤形で製剤化され得る。

【0015】

脂肪族：「脂肪族」又は「脂肪族基」という用語は、本明細書で使用される場合、完全に飽和しているか、若しくは１つ以上の不飽和単位を含有する直鎖（すなわち、分岐していない）若しくは分岐した、置換若しくは非置換の炭化水素鎖、又は完全に飽和しているか、若しくは１つ以上の不飽和単位を含有するが、（本明細書では「炭素環」、「炭素環式」、「脂環式」、又は「シクロアルキル」とも称される）芳香族ではなく、分子の残りの部分への結合点を１つ有する、単環式炭化水素若しくは二環式炭化水素を意味する。別段の定めがない限り、脂肪族基は、１～６つの脂肪族炭素原子を含有する。一部の実施形態では、脂肪族基は、１～５つの炭素原子を含有する。一部の実施形態では、脂肪族基は、１～４つの炭素原子を含有する。一部の実施形態では、脂肪族基は、１～３つの炭素原子を含有し、一部の実施形態では、脂肪族基は、１～２つの炭素原子を含有する。一部の実施形態では、「炭素環式」（又は「脂環式」、又は「炭素環」、又は「シクロアルキル」）は、任意選択的に置換された単環式Ｃ_３－Ｃ_８炭化水素、又は完全に飽和しているか、若しくは１つ以上の不飽和単位を含有するが、芳香族ではなく、分子の残りの部分に単一の結合点を有する、任意選択的に置換されたＣ_６－Ｃ_１２二環式炭化水素を指す。好適な脂肪族基としては、限定されないが、線状又は分岐状の、置換又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル基、並びに（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル、又は（シクロアルキル）アルケニルなどのそれらのハイブリッドが挙げられる。

【0016】

アルケニル：本明細書で使用される場合、「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を有する、本明細書で定義されるアルキル基を指す。一部の実施形態では、単独で又はより大きな部分の一部として使用される「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの二重結合を有し、かつ（別段の定めがない限り）２～２０、２～１８、２～１６、２～１４、２～１２、２～１０、２～８、２～６、２～４、又は２～３つの炭素原子（例えば、Ｃ_２－２０、Ｃ_２－１８、Ｃ_２－１６、Ｃ_２－１４、Ｃ_２－１２、Ｃ_２－１０、Ｃ_２－８、Ｃ_２－６、Ｃ_２－４、又はＣ_２－３）を有する、任意選択的に置換された直鎖又は分岐した炭化水素鎖を指す。例示的なアルケニル基としては、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、及びヘプテニルが挙げられる。

【0017】

アルケニレン：「アルケニレン」という用語は、二価のアルケニル基を指す。置換アルケニレン鎖は、１つ以上の水素原子が置換基で置き換えられた、少なくとも１つの二重結合を含有するポリメチレン基である。好適な置換基としては、置換脂肪族基について以下に記載されるものが挙げられる。

【0018】

アルキル：本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、当該技術分野においてその通常の意味を与えられ、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、及びシクロアルキル置換アルキル基を含む、飽和脂肪族基を挙げることができる。一部の実施形態では、アルキルは、１～１００個の炭素原子を有する。ある特定の実施形態では、直鎖又は分岐鎖アルキルは、その骨格に約１～２０個の炭素原子（例えば、直鎖ではＣ_１－Ｃ_２０、分岐鎖ではＣ_２－Ｃ_２０）、及び代替的に、約１～１０個の炭素原子を有する。一部の実施形態では、シクロアルキル環は、そのような環が、単環式又は二環式である場合その環構造に約３～１０個の炭素原子を有し、代替的に、環構造に約５、６、又は７つの炭素を有する。一部の実施形態では、アルキル基は、低級アルキル基であり得、低級アルキル基が、１～４つの炭素原子（例えば、直鎖低級アルキルではＣ_１－Ｃ_４）を含む。

【0019】

アルキレン：「アルキレン」又は「アルキレニル」という用語は、直鎖（すなわち、分岐していない）又は分岐した、置換又は非置換である二価のアルキル基（すなわち、二価の飽和炭化水素鎖）を指す。上記の一価のアルキル基のうちのいずれかは、アルキルから第２の水素原子を抜き取ることによってアルキレンになり得る。一部の実施形態では、「アルキレン」は、ポリメチレン基、すなわち、－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、ｎが、正の整数、好ましくは、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、２～５、又は４～８である。置換アルキレンは、１つ以上のメチレン水素原子が置換基で置き換えられたポリメチレン基である。好適な置換基としては、置換脂肪族基について以下に記載されるものが挙げられる。

【0020】

アルキニル：本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、１つ以上の三重結合を有する、本明細書で定義されるアルキル基を指す。一部の実施形態では、単独で又はより大きな部分の一部として使用される「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの三重結合を有し、かつ（別段の定めがない限り）２～２０、２～１８、２～１６、２～１４、２～１２、２～１０、２～８、２～６、２～４、又は２～３つの炭素原子（例えば、Ｃ_２－２０、Ｃ_２－１８、Ｃ_２－１６、Ｃ_２－１４、Ｃ_２－１２、Ｃ_２－１０、Ｃ_２－８、Ｃ_２－６、Ｃ_２－４、又はＣ_２－３）を有する、任意選択的に置換された直鎖又は分岐した鎖炭化水素基を指す。例示的なアルキニル基としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、及びヘプチニルが挙げられる。

【0021】

アミノ酸：最も広い意味では、本明細書で使用される場合、例えば、１つ以上のペプチド結合の形成を通じて、ポリペプチド鎖に組み込まれ得る任意の化合物及び／又は物質を指す。一部の実施形態では、アミノ酸は、一般構造Ｈ_２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－ＣＯＯＨを有する。一部の実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。一部の実施形態では、アミノ酸は、非天然アミノ酸であり、一部の実施形態では、アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸であり、一部の実施形態では、アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然に存在するペプチドに通常見出される２０個の標準的なＬ－アミノ酸のうちのいずれかを指す。「非標準アミノ酸」は、それが合成的に調製されるか、又は天然源から得られるかにかかわらず、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。一部の実施形態では、ポリペプチド中のカルボキシ及び／又はアミノ末端アミノ酸を含むアミノ酸は、上の一般構造と比較して、構造修飾を含有し得る。例えば、一部の実施形態では、アミノ酸は、一般構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、ペグ化、グリコシル化、リン酸化、及び／又は置換（例えば、アミノ基、カルボン酸基、１つ以上のプロトン、及び／又はヒドロキシル基）によって修飾され得る。一部の実施形態では、そのような修飾は、例えば、同一の非修飾アミノ酸を含有するポリペプチドと比較して、修飾アミノ酸を含有するポリペプチドの循環半減期を変化させることができる。一部の実施形態では、そのような修飾は、同一の非修飾アミノ酸を含有するポリペプチドと比較して、修飾アミノ酸を含有するポリペプチドの関連する活性を顕著に変化させない。文脈から明らかであろうように、一部の実施形態では、「アミノ酸」という用語は、遊離アミノ酸を指すために使用され得、一部の実施形態では、ポリペプチドのアミノ酸残基を指すために使用され得る。

【0022】

動物：本明細書で使用される場合、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「動物」は、いずれかの性別の、発達の任意の段階にあるヒトを指す。一部の実施形態では、「動物」は、発達の任意の段階にある非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳類（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／又はブタ）である。一部の実施形態では、動物としては、限定されないが、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫、及び／又は寄生虫が挙げられる。一部の実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作動物、及び／又はクローンであってもよい。

【0023】

アプタマー：本明細書で使用される場合、「アプタマー」という用語は、特定の分子標的（例えば、アンブレラトポロジーグリカン）に緊密に結合する核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ）で構成される巨大分子を指す。特定のアプタマーは、線状ヌクレオチド配列によって記載することができ、典型的には、約１５～６０ヌクレオチド長である。いかなる理論に拘束されることを望むものではないが、アプタマー中のヌクレオチド鎖は、分子を複雑な三次元形状に折り畳む分子内相互作用を形成し、この三次元形状によって、アプタマーをその標的分子の表面に緊密に結合することを可能にすることが企図される。全ての可能なヌクレオチド配列の分野内に存在する分子形状の並外れた多様性を鑑みると、タンパク質及び小分子を含む幅広い分子標的のためのアプタマーを得ることができる。高い特異性に加えて、アプタマーは、典型的には、その標的に対して非常に高い親和性（例えば、タンパク質に対するピコモルから低ナノモルの範囲の親和性）を有する。多くの実施形態では、アプタマーは、化学的に安定であり、活性を喪失することなく沸騰又は凍結させることができる。アプタマーは、合成分子であるので、特定の用途のための機能を最適化することができる様々な修飾に適している。例えば、アプタマーは、インビボ用途で使用するために、血液中の酵素による分解に対する感受性を劇的に低減するように修飾され得る。加えて、アプタマーは、それらの生体内分布又は血漿滞留時間を変化させるように修飾され得る。

【0024】

アリール：「アリール」という用語は、合計６～１４個の環メンバー（例えば、Ｃ_６－１４）を有する単環式及び二環式環系を指し、系中の少なくとも１つの環が、芳香族であり、系中の各環が、３～７つの環メンバーを含有する。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と互換的に使用され得る。一部の実施形態では、「アリール」は、１つ以上の置換基を担持し得る、限定されないが、フェニル、ナフチル、アントラシルなどを含む、芳香族環系を指す。別段の定めがない限り、「アリール」基は、炭化水素である。

【0025】

会合した：一方の存在、レベル、程度、種類、及び／又は形態が、他方のものと相関する場合にこの用語が本明細書で使用される場合、２つの事象又は実体は、互いに「会合している」。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド、遺伝子シグネチャー、代謝物、微生物）は、その存在、レベル、及び／又は形態が、（例えば、関連する集団全体にわたって）疾患、障害、又は状態の発生率及び／又は感受性と相関する場合、特定の疾患、障害、又は状態と関連するとみなされる。一部の実施形態では、２つ以上の実体が、直接的又は間接的に相互作用する場合、それらが互いに物理的に近接している、及び／又は物理的近接を維持するように、互いに物理的に「会合している」。一部の実施形態では、互いに物理的に会合している２つ以上の実体は、互いに共有結合しており、一部の実施形態では、互いに物理的に会合している２つ以上の実体は、互いに共有結合していないが、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁性、及びそれらの組み合わせによって、非共有結合的に会合している。

【0026】

生体適合性：「生体適合性」という用語は、本明細書で使用される場合、生組織と、例えばインビボで接触して配置されると、そのような組織に顕著な害を引き起こさない材料を指す。ある特定の実施形態では、材料は、細胞に毒性がない場合、「生体適合性」である。ある特定の実施形態では、材料は、インビトロでの細胞への添加が、２０％以下の細胞死をもたらす場合、及び／又はインビボでのそれらの投与が、顕著な炎症又は他のそのような有害作用を誘導しない場合、「生体適合性」である。

【0027】

生分解性：本明細書で使用される場合、「生分解性」という用語は、細胞に導入されると、細胞に顕著な毒性作用を及ぼすことなく、細胞を再利用するか又は処分することができる構成成分へと（例えば、酵素分解、加水分解、及び／又はそれらの組み合わせによるなどの細胞機構によって）分解される材料を指す。ある特定の実施形態では、生分解性材料の分解によって生成される構成成分は、生体適合性であり、したがって、インビボで顕著な炎症及び／又は他の有害作用を誘導しない。一部の実施形態では、生分解性ポリマー材料は、それらの構成成分モノマーへと分解される。一部の実施形態では、（例えば、生分解性ポリマー材料を含む）生分解性材料の分解は、エステル結合の加水分解を伴う。代替的又は追加的に、一部の実施形態では、（例えば、生分解性ポリマー材料を含む）生分解性材料の分解は、ウレタン結合の切断を伴う。例示的な生分解性ポリマーとしては、例えば、限定されないが、ポリ（ヒドロキシル酸）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、乳酸及びグリコール酸などのヒドロキシ酸のポリマー、並びにＰＥＧ、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリエステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシアルカン酸塩、ポリ（ラクチド－コ－カプロラクトン）とのコポリマー、それらのブレンド及びコポリマーが挙げられる。また、例えば、アルブミン、コラーゲン、ゼラチン、及びプロラミン、例えばゼインなどのタンパク質、並びにアルギン酸塩、セルロース誘導体、及びポリヒドロキシアルカン酸塩、例えば、ポリヒドロキシ酪酸塩ブレンド、及びそれらのコポリマーなどの多糖類を含む、多くの天然ポリマーが、生分解性である。当業者は、そのようなポリマーが、それらの生体適合性及び／又は生分解性の誘導体である場合（例えば、当該技術分野において既知である特定の化学基の置換又は付加においてのみ異なる実質的に同一の構造によって、親ポリマーに関連する場合）を理解するか、又は決定することが可能であろう。

【0028】

生物学的に活性：本明細書で使用される場合、目的の薬剤又は実体によって達成される観察可能な生物学的効果又は結果を指す。例えば、一部の実施形態では、特異的結合相互作用は、生物学的活性である。一部の実施形態では、生物学的経路又は事象の調節（例えば、誘導、増強、又は阻害）は、生物学的活性である。一部の実施形態では、生物学的活性の存在又は程度は、目的の生物学的経路又は事象によって産生される直接的又は間接的生成物の検出を通じて評価される。

【0029】

生体試料：本明細書で使用される場合、「生体試料」という用語は、典型的には、本明細書に記載の目的の生物学的源（例えば、組織、又は生物、又は細胞培養物）から得られるか、又はそれらに由来する試料を指す。一部の実施形態では、目的の供給源は、動物又はヒトなどの生物を含む。一部の実施形態では、生体試料は、生体組織又は生物流体であるか、あるいはそれを含む。一部の実施形態では、生体試料は、骨髄、血液；血液細胞；腹水；組織又は細針生検試料；細胞含有体液；遊離浮遊核酸；痰；唾液；尿；脳脊髄液、腹腔液；胸水；糞便；リンパ；婦人科液体；皮膚スワブ；膣スワブ；口腔スワブ；鼻腔スワブ；乳管洗浄液又は気管支肺胞洗浄液などの洗浄液（ｗａｓｈｉｎｇ）又は洗浄液（ｌａｖａｇｅ）；吸引物；擦過物；骨髄検体；組織生検検体；外科検体；糞便、他の体液、分泌物、及び／若しくは排泄物；並びに／又はそれらからの細胞などであり得るか、又はそれらを含む。一部の実施形態では、生体試料は、個体から得られる細胞であるか、又はそれを含む。一部の実施形態では、得られる細胞は、試料が得られる個体由来の細胞であるか、又はこれらを含む。一部の実施形態では、試料は、任意の適切な手段によって目的の供給源から直接得られる「一次試料」である。例えば、一部の実施形態では、一次生体試料は、生検（例えば、細針吸引又は組織生検）、手術、体液（例えば、血液、リンパ、糞便など）の収集などからなる群から選択される方法によって得られる。一部の実施形態では、文脈から明らかであろうように、「試料」という用語は、一次試料の処理によって（例えば、１つ以上の構成成分の除去及び／又は１つ以上の薬剤の添加によって）得られる調製物を指す。例えば、半透過性膜を使用して濾過すること。そのような「処理された試料」は、例えば、試料から抽出されたか、又はｍＲＮＡの増幅若しくは逆転写、ある特定の構成成分の単離及び／若しくは精製などの技法を一次試料に施すことによって得られた、核酸又はタンパク質を含み得る。

【0030】

二価：本明細書で使用される場合、「二価」という用語は、２つの結合点を有する化学部分を指す。例えば、「二価のＣ_１－８（又はＣ_１－６）飽和又は不飽和の直鎖又は分岐した炭化水素鎖」は、本明細書で定義される直鎖又は分岐した二価のアルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン鎖を指す。

【0031】

架橋二環式：本明細書で使用される場合、「架橋二環式」、「架橋二環」、「架橋二環式」及び「架橋二環式環」という用語は、少なくとも１つの架橋を有する、飽和又は部分的に不飽和の任意の二環式環系、すなわち、炭素環式又は複素環式を指す。ＩＵＰＡＣによって定義されるように、「架橋」は、２つの橋頭を接続する、複数の原子又は１つの原子又は原子価結合の非分岐鎖であり、「橋頭」は、３つ以上の骨格原子（水素を除く）に結合する環系の任意の骨格原子である。一部の実施形態では、架橋二環式基は、７～１２個の環員を有し、窒素、酸素、又は硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する。そのような架橋二環式基は、当該技術分野において周知であり、各基が、任意の置換可能な炭素又は窒素原子で分子の残りの部分に結合している、以下に記載の基が挙げられる。別段の定めがない限り、架橋二環式基は、脂肪族基について記載の１つ以上の置換基で任意選択的に置換される。追加的又は代替的に、架橋二環式基の任意の置換可能な窒素は、任意選択的に置換される。例示的な架橋二環式としては、限定されないが、以下が挙げられる。

【化2】

【0032】

がん：「がん（ｃａｎｃｅｒ）」、「悪性腫瘍」、「新生物」、「腫瘍」、及び「がん（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）」という用語は、細胞増殖の制御の顕著な喪失を特徴とする異常な成長表現型を示すように、比較的異常な、制御不能な、及び／又は自律的な増殖を示す細胞を指すために本明細書で使用される。一部の実施形態では、腫瘍は、前がん性（例えば、良性）、悪性、転移前、転移性、及び／又は非転移性である細胞であり得るか、又はそれらを含む。本開示は、その教示が特に関連し得るある特定のがんを特異的に同定する。一部の実施形態では、関連するがんは、固形腫瘍を特徴とし得る。一部の実施形態では、関連するがんは、血液腫瘍を特徴とし得る。一般に、当該技術分野において既知の異なる種類のがんの例としては、例えば、白血病、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキン）、骨髄腫、及び骨髄増殖性障害を含む造血がん；肉腫、黒色腫、腺腫、固形組織のがん、口、喉、喉頭、及び肺の扁平上皮がん、肝臓がん、前立腺、子宮頚、膀胱、子宮、及び子宮内膜がんなどの生殖器がん、並びに腎細胞がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、皮膚又は眼球内黒色腫、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、頭頸部がん、乳がん、胃腸がん、並びに神経系がん、乳頭腫などの良性病変などが挙げられる。

【0033】

担体：本明細書で使用される場合、組成物とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。一部の例示的な実施形態では、担体としては、例えば、水、並びに、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源の油を含む油などの滅菌液体を挙げることができる。一部の実施形態では、担体は、１つ以上の固体構成成分であるか、又はそれを含む。

【0034】

カルボシクリル：本明細書で使用される「カルボシクリル」、「炭素環」、及び「炭素環式環」という用語は、３～１４個のメンバーを有する、本明細書に記載の飽和又は部分的に不飽和の環式脂肪族単環式、二環式、又は多環式環系を指し、脂肪族環系は、本明細書に記載のように任意選択的に置換される。炭素環式基としては、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロヘプテニル、シクロオクチル、シクロオクテニル、ノルボルニル、アダマンチル、及びシクロオクタジエニルが挙げられる。一部の実施形態では、「カルボシクリル」（又は「脂環式」）は、任意選択的に置換された単環式Ｃ_３－Ｃ_８炭化水素、又は完全に飽和しているか、若しくは１つ以上の不飽和単位を含有するが、芳香族ではなく、分子の残りの部分に単一の結合点を有する、任意選択的に置換されたＣ_６－Ｃ_１２二環式炭化水素を指す。「シクロアルキル」という用語は、約３～約１０個の環炭素原子の任意選択的に置換された飽和環系を指す。一部の実施形態では、シクロアルキル基は、３～６つの炭素を有する。例示的な単環式シクロアルキル環としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロヘプチルが挙げられる。「シクロアルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を含有し、かつ約３～約１０個の炭素原子を有する、任意選択的に置換された非芳香族単環式又は多環式環系を指す。例示的な単環式シクロアルケニル環としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、及びシクロヘプテニルが挙げられる。

【0035】

比較可能な：本明細書で使用される場合、「比較可能な」という用語は、互いに同一ではない場合があるが、それらの間の比較が許容されるほどに十分に同様であるので、当業者は、観察される相違又は類似性に基づいて結論を合理的に引き出すことができることを理解するであろう、２つ以上の薬剤、実体、状況、一連の条件などを指す。一部の実施形態では、比較可能な一連の条件、状況、個体、又は集団は、複数の実質的に同一の特徴及び１つ又は少数の変動する特徴を特徴とする。当業者は、文脈に応じて、２つ以上のそのような薬剤、実体、状況、一連の条件などが比較可能であるとみなされるために、任意の所与の状況でどの程度の同一性が必要であるかを理解するであろう。例えば、当業者は、一連の状況、個体、又は集団は、異なる一連の状況、個体、又は集団の下で、又はそれらを用いて得られた結果又は観察された現象の違いが、変動するそれらの特徴の変動によって引き起こされるか、又は特徴の変動を示す合理的な結論を保証するのに十分な数及び種類の実質的に同一の特徴によって特徴評価される場合、互いに比較可能であることを理解するであろう。

【0036】

組成物：当業者は、「組成物」という用語が、１つ以上の定められた構成成分を含む別個の物理的実体を指すために使用され得ることを理解するであろう。一般に、別段の定めがない限り、組成物は、任意の形態、例えば、気体、ゲル、液体、固体などのものであり得る。

【0037】

含むこと：１つ以上の列挙される要素又はステップを「含む」として本明細書に記載される組成物又は方法は、オープンエンドであり、列挙される要素又はステップが必須であることを意味するが、他の要素又はステップが、組成物又は方法の範囲内に追加され得る。また、冗長性を回避するために、１つ以上の列挙される要素又はステップを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」）と記載される任意の組成物又は方法はまた、同じ列挙される要素又はステップ「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」（又は「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」）、対応する、より限定的な組成物又は方法について記載しており、組成物又は方法が、列挙される必須の要素又はステップを含み、また、組成物又は方法の基本的かつ新規の特徴（複数可）に物質的に影響を及ぼさない追加の要素又はステップを含み得ることを意味することも理解される。また、１つ以上の列挙される要素又はステップを「含む」か又は「本質的にそれらからなる」として本明細書に記載の任意の組成物又は方法は、任意の他の列挙されていない要素又はステップを除外するように、列挙される要素又はステップ「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」（又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」）、対応する、より限定的かつクローズエンドな組成物又は方法について記載していることも理解される。本明細書に開示の任意の組成物又は方法において、任意の列挙される必須要素又はステップの既知又は開示の同等物は、その要素又はステップで置換され得る。

【0038】

「改善する」、「増加させる」、「阻害する」、又は「低減する」：本明細書で使用される場合、「改善する」、「増加させる」、「阻害する」、「低減する」という用語、又はそれらの文法的同等物は、ベースライン又は他の参照測定値と比較した値を指標とする。一部の実施形態では、適切な参照測定値は、特定の薬剤若しくは治療（の前及び／又は後）に存在しない比較可能な条件下で、又は適切な比較可能な参照薬剤の存在下で、特定の系（例えば、単一の個体）における測定値であり得るか、又はそれを含み得る。一部の実施形態では、適切な参照測定値は、関連する薬剤又は治療の存在下で、特定の方式で応答することが既知であるか又は予想される比較可能な系における測定値であり得るか、又はそれを含み得る。

【0039】

決定する：本明細書に記載の多くの方法論は、「決定する」ステップを含む。当業者は、本明細書を読むと、そのような「決定する」ことが、例えば本明細書に明示的に言及される特定の技術を含め、当業者が利用可能な様々な技術のいずれかの使用を通して利用され得るか、又は達成され得ることを理解するだろう。一部の実施形態では、決定することは、物理的な試料の操作を伴う。一部の実施形態では、決定することは、例えば、関連する分析を行うように適合されたコンピュータ又は他の処理ユニットを利用した、データ又は情報の検討及び／又は操作を伴う。一部の実施形態では、決定することは、供給源から関連情報及び／又は資料を受信することを伴う。一部の実施形態では、決定することは、試料又は実体の１つ以上の特徴を、比較可能な参照物と比較することを伴う。

【0040】

カプセル化された：「カプセル化された」という用語は、別の材料によって完全に囲まれている物質を指すために本明細書で使用される。

【0041】

賦形剤：本明細書で使用される場合、例えば、所望の一貫性又は安定化効果を提供するか、又はそれに寄与するために、薬学的組成物に含まれ得る非治療剤を指す。好適な薬学的賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。

【0042】

発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」という用語は、核酸配列からの任意の遺伝子産生物の生成を指す。一部の実施形態では、遺伝子産生物は、転写産物であり得る。一部の実施形態では、遺伝子産生物は、ポリペプチドであり得る。一部の実施形態では、核酸配列の発現は、以下のうちの１つ以上を伴う：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの産生（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／又は３’末端形成による）、（３）ポリペプチド若しくはタンパク質へのＲＮＡの翻訳、及び／又は（４）ポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾。

【0043】

ハロ脂肪族：「ハロ脂肪族」という用語は、１つ以上のハロゲン原子（例えば、１、２、３、４、５、６、又は７つのハロ、例えば、フルオロ、ヨード、ブロモ、又はクロロ）によって置換された脂肪族基を指す。一部の実施形態では、ハロ脂肪族基は、１～７つのハロゲン原子を含有する。一部の実施形態では、ハロ脂肪族基は、１～５つのハロゲン原子を含有する。一部の実施形態では、ハロ脂肪族基は、１～３つのハロゲン原子を含有する。

【0044】

ハロアルキル：「ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハロゲン原子（例えば、１、２、３、４、５、６、又は７つのハロ、例えば、フルオロ、ヨード、ブロモ、又はクロロ）によって置換されたアルキル基を指す。一部の実施形態では、ハロアルキル基は、１～７つのハロゲン原子を含有する。一部の実施形態では、ハロアルキル基は、１～５つのハロゲン原子を含有する。一部の実施形態では、ハロアルキル基は、１～３つのハロゲン原子を含有する。

【0045】

ヘテロアルキレン：本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキレン」又は「ヘテロアルキレニル」という用語は、炭素原子に加えて、１～５つのヘテロ原子を有する、任意選択的に置換された直鎖（すなわち、分岐していない）又は分岐した二価のアルキル基（すなわち、二価の飽和炭化水素鎖）を示す。「ヘテロ原子」という用語について、以下に記載する。一部の実施形態では、ヘテロアルキレン基は、２～１０個の炭素原子を含有し、１～３つの炭素原子が、任意選択的に、かつ独立して、酸素、窒素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換えられる。一部の実施形態では、ヘテロアルキレン基は、２～８つの炭素原子を含有し、１～３つの炭素原子が、任意選択的に、かつ独立して、酸素、窒素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換えられる。一部の実施形態では、ヘテロアルキレン基は、４～８つの炭素原子を含有し、１～３つの炭素原子が、任意選択的に、かつ独立して、酸素、窒素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換えられる。一部の実施形態では、ヘテロアルキレン基は、２～５つの炭素原子を含有し、１～２つの炭素原子が、任意選択的に、かつ独立して、酸素、窒素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換えられる。更に他の実施形態では、ヘテロアルキレン基は、１～３つの炭素原子を含有し、１つの炭素原子が、任意選択的に、かつ独立して、酸素、窒素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換えられる。好適なヘテロアルキレン基としては、限定されないが、－ＣＨ_２Ｏ－、－（ＣＨ_２）_２Ｏ－、－ＣＨ_２ＯＣＨ_２－、－Ｏ（ＣＨ_２）_２－、－（ＣＨ_２）_３Ｏ－、－（ＣＨ_２）_２ＯＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_２－、－Ｏ（ＣＨ_２）_３－、－（ＣＨ_２）_４Ｏ－、－（ＣＨ_２）_３ＯＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_３－、－（ＣＨ_２）_２Ｏ（ＣＨ_２）_２－、－Ｏ（ＣＨ_２）_４－が挙げられる。別段の定めがない限り、Ｃ_ｘヘテロアルキレンは、ヘテロ原子で置き換えられる前に、ｘ個の炭素原子を有するヘテロアルキレンを指す。

【0046】

ヘテロアリール：「ヘテロアリール」、及び単独で又はより大きな部分、例えば、「ヘテロアラルキル」若しくは「ヘテロアラルコキシ」の一部として使用される「ヘテロアル－」という用語は、５～１０個の環原子（例えば、５～６員の単環式ヘテロアリール又は９～１０員の二環式ヘテロアリール）を有し、６、１０、又は１４個のπ電子を環式アレイで共有し、炭素原子に加えて１～５つのヘテロ原子を有する、単環式又は二環式環基を指す。例示的なヘテロアリール基としては、限定されないが、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリドニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル、プテリジニル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリミジニル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、チエノピリミジニル、トリアゾロピリジニル、及びベンゾイソオキサゾリルが挙げられる。「ヘテロアリール」及び「ヘテロアル－」という用語はまた、本明細書で使用される場合、複素芳香族環が、１つ以上のアリール、脂環式、又はヘテロシクリル環に縮合され、ラジカル又は結合点が、複素芳香族環（すなわち、１～３つのヘテロ原子を有する二環式ヘテロアリール環）上に存在する基を含む。非限定的な例としては、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ－キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、ピリド［２，３－ｂ］－１，４－オキサジン－３（４Ｈ）－オン、及びベンゾイソオキサゾリルが挙げられる。「ヘテロアリール」という用語は、「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」、又は「ヘテロ芳香族」という用語と互換的に使用され得、これらの用語のうちのいずれも、任意選択的に置換された環を含む。

【0047】

ヘテロ原子：「ヘテロ原子」という用語は、酸素、硫黄、窒素、リン、又はケイ素のうちの１つ以上（窒素、硫黄、リン、若しくはケイ素の任意の酸化形態；任意の塩基性窒素の四級化形態、又は；複素環式環の置換可能な窒素、例えばＮ（３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピロリルにおけるように）、ＮＨ（ピロリジニルにおけるように）、又はＮＲ^＋（Ｎ－置換ピロリジニルにおけるように）を含む）を意味する。

【0048】

複素環：「複素環」、「ヘテロシクリル」、「複素環式ラジカル」、及び「複素環式環」という用語は、本明細書において互換的に使用され、飽和又は部分的に不飽和のいずれかであり、炭素原子に加えて、上に定義される１～４つなどの１つ以上のヘテロ原子を有する、安定した３～８員の単環式、７～１２員の二環式、又は１０～１６員の多環式複素環式部分を指す。複素環の環原子に関して使用される場合、「窒素」という用語は、置換された窒素を含む。一例として、酸素、硫黄、又は窒素から選択される０～３つのヘテロ原子を有する飽和又は部分的に不飽和の環では、窒素は、Ｎ（３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピロリルにおけるように）、ＮＨ（ピロリジニルにおけるように）、又はＮＲ^＋（Ｎ置換ピロリジニルにおけるように）であり得る。複素環式環は、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子でそのペンダント基に結合され得、環原子のうちのいずれかは、任意選択的に置換され得る。そのような飽和又は部分的に不飽和の複素環式ラジカルの例としては、限定されないが、アゼチジニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピペリジニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル、チアモルホリニル、及び

【化3】

が挙げられる。ヘテロシクリル基は、単環式、二環式、三環式、又は多環式、好ましくは単環式、二環式、又は三環式、より好ましくは単環式又は二環式であり得る。「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、ヘテロシクリルによって置換されたアルキル基を指し、アルキル部分及びヘテロシクリル部分が、独立して、任意選択的に置換される。二環式複素環式環はまた、複素環式環が、１つ以上のアリール、ヘテロアリール、又は脂環式環に縮合されている基を含む。例示的な二環式複素環基としては、インドリニル、イソインドリニル、ベンゾジオキソリル、１，３－ジヒドロイソベンゾフラニル、２，３－ジヒドロベンゾフラニル、及びテトラヒドロキノリニルが挙げられる。二環式複素環式環はまた、スピロ環式環系（例えば、炭素原子に加えて、上に定義される１つ以上のヘテロ原子（例えば、１、２、３、又は４つのヘテロ原子）を有する７～１１員のスピロ環式縮合複素環式環）であり得る。二環式複素環式環はまた、架橋した環系（例えば、１、２、又は３つの架橋原子を有する７～１１員の架橋した複素環式環）であり得る。

【0049】

阻害剤：本明細書で使用される場合、「阻害剤」という用語は、その存在、レベル、又は程度が、標的のレベル又は活性の減少と相関する実体、状態、又は事象を指す）。一部の実施形態では、阻害剤は、直接的に作用し得（この場合、例えば、標的に結合することによって、その標的に直接影響を及ぼす）、一部の実施形態では、阻害剤は、間接的に作用し得る（この場合、標的のレベル及び／又は活性が低減するように、標的の調節因子と相互作用する、及び／又は標的の調節因子を変化させることによってその影響を及ぼす）。一部の実施形態では、阻害剤は、特定の参照レベル又は活性と比較して低減された（例えば、既知の阻害剤の存在、又は問題の阻害剤の非存在などの適切な参照条件下で観察される）標的レベル又は活性と、存在又はレベルが相関するものである。

【0050】

インビトロ：本明細書で使用される「インビトロ」という用語は、多細胞生物内ではなく、人工環境、例えば、試験管又は反応容器内、細胞培養物中などにおいて生じる事象を指す。

【0051】

単離された：本明細書で使用される場合、（１）（自然界及び／又は実験的環境で）最初に産生されるときに関連する構成成分のうちの少なくとも一部から分離された、並びに／又は（２）人間の手によって設計され、産生され、調製され、及び／若しくは製造された物質及び／又は実体を指す。単離された物質及び／又は実体は、それらが最初に関連する他の構成成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超から分離され得る。一部の実施形態では、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超純粋である。本明細書で使用される場合、物質は、他の構成成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。一部の実施形態では、当業者によって理解されるであろうように、物質は、例えば、１つ以上の担体又は賦形剤など（例えば、緩衝液、溶媒、水など）のある特定の他の構成成分と組み合わせた後に、依然として「単離された」か又は更には「純粋」であるとみなされ得、そのような実施形態では、物質の単離又は純度のパーセントは、そのような担体又は賦形剤を含まずに計算される。一例を挙げると、一部の実施形態では、自然界で生じるポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの生体ポリマーは、ａ）その起源又は誘導源が、自然界でその天然の状態でそれに付随する構成成分の一部又は全てと関連しないことに基づいて、ｂ）自然界でそれを産生する種からの同じ種の他のポリペプチド又は核酸を実質的に含まない場合、ｃ）自然界でそれを産生する種のものではない細胞又は他の発現系からの構成成分によって発現されるか、又は関連する場合、「単離された」とみなされる。したがって、例えば、一部の実施形態では、化学的に合成されるか、又は自然界でそれを産生するものとは異なる細胞系で合成されるポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドであるとみなされる。代替的又は追加的に、一部の実施形態では、１つ以上の精製技法を施されているポリペプチドは、ａ）それが自然界で関連する他の構成成分、及び／又はｂ）最初に産生されたときに関連していた他の構成成分から分離されている程度まで、「単離された」ポリペプチドであるとみなされ得る。

【0052】

インビボ：本明細書で使用される場合、ヒト及び非ヒト動物などの多細胞生物内で生じる事象を指す。細胞ベースのシステムの文脈では、該用語は、（例えば、インビトロシステムとは対照的に）生細胞内で生じる事象を指すために使用され得る。

【0053】

リンカー：本明細書で使用される場合、異なる要素を互いに接続する多要素薬剤のその部分を指すために使用される。例えば、当業者は、その構造に２つ以上の機能的又は組織的ドメインを含むポリペプチドが、多くの場合、それらを互いに連結するそのようなドメイン間の一続きのアミノ酸を含むことを理解する。一部の実施形態では、リンカー要素「Ｌ」を含むポリペプチドは、一般形態Ｓ１－Ｌ’－Ｓ２の全体的な構造を有し、Ｓ１及びＳ２が、同じであっても異なっていてもよく、リンカーによって互いに会合している２つのドメインを表し得る。一部の実施形態では、ポリペプチドリンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００以上のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、剛性の三次元構造を採用する傾向がなく、むしろポリペプチドに柔軟性を提供することを特徴とする。当該技術分野において既知のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を操作する場合に適切に使用することができる様々な異なるリンカー要素（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８、Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１ １２１－１１２３を参照されたい）。

【0054】

ナノ粒子：本明細書で使用される場合、「ナノ粒子」という用語は、１０００ナノメートル（ｎｍ）未満の直径を有する粒子を指す。一部の実施形態では、ナノ粒子は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎによって定義されるように、３００ｎｍ未満の直径を有する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって定義されるように、１００ｎｍ未満の直径を有する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ミセル膜によってバルク溶液から分離された密閉区画を含むという点でミセルであり、典型的には、（例えば、管腔を画定するように）空間又は区画を囲み、封入する両親媒性実体で構成される。一部の実施形態では、ミセル膜は、例えば、生体適合性及び／又は生分解性のポリマーなどの少なくとも１つのポリマーで構成される。一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約３０～約１７０ｎｍの平均流体力学的直径を有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、１５０ｎｍ、１５５ｎｍ、１６０ｎｍ、１６５ｎｍ、１７０ｎｍ、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、平均流体力学的直径を有し得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、５０ｎｍ～１００ｎｍの平均流体力学的直径を有する。

【0055】

ナノ粒子組成物：本明細書で使用される場合、「ナノ粒子組成物」という用語は、少なくとも１つのナノ粒子と、少なくとも１つの追加の薬剤又は構成成分とを含有する組成物を指す。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物は、本明細書に記載の実質的に均一なナノ粒子の集合体を含有する。

【0056】

核酸：本明細書で使用される場合、その最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、又は組み込まれ得る任意の化合物及び／又は物質を指す。一部の実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、又は組み込まれ得る化合物及び／又は物質である。文脈から明らかであろうように、一部の実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／又はヌクレオシド）を指し、一部の実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。一部の実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡであるか、又はそれを含み、一部の実施形態では、「核酸」は、ＤＮＡであるか、又はそれを含む。一部の実施形態では、核酸は、１つ以上の天然核酸残基であるか、１つ以上の天然核酸残基を含むか、又は１つ以上の天然核酸残基からなる。一部の実施形態では、核酸は、１つ以上の核酸類似体であるか、１つ以上の核酸類似体を含むか、又は１つ以上の核酸類似体からなる。一部の実施形態では、核酸類似体は、ホスホジエステル骨格を利用しない点において核酸と異なる。例えば、一部の実施形態では、核酸は、当該技術分野において既知であり、ホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を骨格に有する１つ以上の「ペプチド核酸」であるか、それを含むか、又はそれからなり、本発明の範囲内であるとみなされる。代替的又は追加的に、一部の実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオ酸塩及び／又は５’－Ｎ－ホスホラミダイト結合を有する。一部の実施形態では、核酸は、１つ以上の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン及びデオキシシチジン）であるか、１つ以上の天然ヌクレオシドを含むか、又は１つ以上の天然ヌクレオシドからなる。一部の実施形態では、核酸は、１つ以上のヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、インターカレートした塩基、及びそれらの組み合わせ）であるか、それらを含むか、又はそれらからなる。一部の実施形態では、核酸は、天然核酸中の糖類と比較して、１つ以上の修飾された糖類（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース及びヘキソース）を含む。一部の実施形態では、核酸は、ＲＮＡ又はタンパク質などの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。一部の実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含む。一部の実施形態では、核酸は、天然源からの単離、（インビボ又はインビトロでの）相補的テンプレートに基づく重合による酵素的合成、組換え細胞又は系における再産生、及び化学的合成のうちの１つ以上によって調製される。一部の実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００以上の残基の長さである。一部の実施形態では、核酸は、部分的又は完全に一本鎖であり、一部の実施形態では、核酸は、部分的又は完全に二本鎖である。一部の実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードするか、又はポリペプチドをコードする配列の相補である少なくとも１つの要素を含むヌクレオチド配列を有する。一部の実施形態では、核酸は、酵素活性を有する。

【0057】

操作可能に連結された：本明細書で使用される場合、記載された構成成分が、それらが意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。機能的要素に「操作可能に連結された」制御要素は、機能的要素の発現及び／又は活性が、制御要素と適合性である条件下で達成されるような様式で、機能的要素に会合している。一部の実施形態では、「操作可能に連結された」制御要素は、目的のコード要素と連続しており（例えば、共有結合している）、一部の実施形態では、制御要素は、目的の機能的要素にトランスで、又は目的の機能的要素で作用する。

【0058】

本発明の目的のために、化学元素は、元素周期表、ＣＡＳバージョン、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５^ｔｈ Ｅｄに従って同定される。追加的に、有機化学の一般原則は、それらの内容全体が参照により本明細書に援用される、“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９、及び“Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５^ｔｈＥｄ．，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：（２００１））に記載されている。

【0059】

非経口：本明細書で使用される「非経口投与」及び「非経口投与される」という語句は、通常、注射による腸内及び局所投与以外の投与様式を指す、それらの当該技術分野において理解される意味を有し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心室内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、及び胸骨内の注射及び注入が挙げられる。

【0060】

患者：本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、提供される組成物が、例えば、実験的、診断的、予防的、美容的、及び／又は治療的目的のために投与されるか、又は投与され得る任意の生物を指す。典型的な患者としては、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及び／又はヒトなどの哺乳類）が挙げられる。一部の実施形態では、患者は、ヒトである。一部の実施形態では、患者は、１つ以上の障害又は状態を患っている、又はそれらにかかりやすい。一部の実施形態では、患者は、障害又は状態の１つ以上の症状を示す。一部の実施形態では、患者は、１つ以上の障害又は状態を有すると診断されたことがある。一部の実施形態では、障害又は状態は、がん、又は１つ以上の腫瘍が存在するか、又はそれらを含む。一部の実施形態では、患者は、疾患、障害、又は状態を診断及び／又は治療するためのある特定の療法を受けているか、又は受けたことがある。

【0061】

薬学的組成物：本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」という用語は、１つ以上の薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された活性薬剤を指す。一部の実施形態では、活性薬剤は、関連する集団に投与されると、所定の治療効果を達成する統計的に顕著な確率を示す治療レジメンでの投与に適切な単位用量の量で存在する。一部の実施形態では、薬学的組成物は、固体又は液体の形態での投与のために特別に製剤化され得、経口投与、例えば、ドレンチ（水性又は非水性の溶液又は懸濁液）、錠剤、例えば、口腔、舌下、及び全身吸収を標的とするもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌に適用するためのペースト；例えば、無菌溶液若しくは懸濁液、若しくは持続放出製剤として非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、静脈内、若しくは硬膜外注射；例えば、クリーム、軟膏、若しくは制御放出パッチ、若しくは皮膚、肺、若しくは口腔に適用されるスプレーとして局所適用；例えば、ペッサリー、クリーム、若しくはフォームとして膣内若しくは直腸内；舌下；眼；経皮；又は鼻、肺、及び他の粘膜表面に適合するものが挙げられる。

【0062】

薬学的に許容される：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という語句は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題若しくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触する使用に好適であり、合理的な利益／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物、及び／又は剤形のものを指す。

【0063】

薬学的に許容される担体：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、対象化合物を体のある臓器又は部分から体の別の臓器又は部分へと運搬又は輸送することに関与する、液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、又は溶媒をカプセル化する材料などの薬学的に許容される材料、組成物、又はビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合するという意味で「許容され」、患者に害を及ぼさない必要がある。薬学的に許容される担体として機能することができる材料の一部の例としては、ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖；トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン；セルロース、及びカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバター及び坐剤ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及び大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張生理食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝溶液；ポリエステル、ポリカーボネート、及び／又はポリ酸無水物；並びに薬学的製剤に用いられる他の非毒性の適合する物質が挙げられる。

【0064】

薬学的に許容される塩：「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書で使用される場合、薬学的文脈での使用に適切であるそのような化合物の塩、すなわち、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などを伴わずに、ヒト及び下等動物の組織と接触して使用するのに好適であり、合理的な利益／リスク比に見合う塩を指す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．は、薬学的に許容される塩についてＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１－１９（１９７７）に詳述している。一部の実施形態では、薬学的に許容される塩としては、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸などの無機酸で、又は酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、若しくはマロン酸などの有機酸で、又はイオン交換などの当該技術分野において使用される他の方法を使用することによって形成されるアミノ基の塩である、非毒性の酸付加塩が挙げられる。一部の実施形態では、薬学的に許容される塩としては、限定されないが、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンフォレート（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、カンファスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。一部の実施形態では、薬学的に許容される塩としては、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、１～６つの炭素原子を有するアルキル、スルホン酸塩、及びアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成される非毒性のアンモニウム、四級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。

【0065】

防止する又は防止：本明細書で使用される場合、疾患、障害、及び／又は状態の発生に関連して使用される場合、疾患、障害、及び／若しくは状態を発症するリスクを低減すること、並びに／又は疾患、障害、若しくは状態の１つ以上の特徴若しくは症状の発症を遅延させることを指す。防止は、事前に定義された期間の間、疾患、障害、又は状態の発症を遅延させた場合、完了したとみなすことができる。

【0066】

タンパク質：本明細書で使用される場合、「タンパク質」という用語は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに連結された少なくとも２つのアミノ酸の鎖）を指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどであり得る）を含み得、かつ／又は処理若しくは修飾され得る。当業者は、「タンパク質」は、細胞によって産生される（シグナル配列の有無にかかわらず）完全なポリペプチド鎖であり得るか、又はその特徴的な部分であり得ることを理解するであろう。当業者は、タンパク質が、時折、例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって連結されるか、又は他の手段によって会合した、２つ以上のポリペプチド鎖を含み得ることを理解するであろう。ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、又はその両方を含有し得、当該技術分野において既知の様々なアミノ酸修飾又は類似体のうちのいずれかを含有し得る。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが挙げられる。一部の実施形態では、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びそれらの組み合わせを含み得る。「ペプチド」という用語は、一般に、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、又は１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指すために使用される。一部の実施形態では、タンパク質は、抗体、抗体断片、その生物学的に活性な部分、及び／又はその特徴的な部分である。

【0067】

ポリペプチド：「ポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、一般に、少なくとも３アミノ酸のポリマーのその技術分野において認識されている意味を有する。当業者は、「ポリペプチド」という用語が、本明細書に列挙される完全な配列を有するポリペプチドだけでなく、そのような完全なポリペプチドの機能的断片（すなわち、少なくとも１つの活性を保持する断片）を表すポリペプチドも包含するのに十分に一般的であることを意図することを理解するであろう。更に、当業者は、タンパク質配列が、一般に、活性を破壊することなく、いくつかの置換を許容することを理解している。したがって、活性を保持し、通常、少なくとも約３０～４０％の全体的な配列同一性、多くの場合、約５０％、６０％、７０％、又は８０％超の、更には通常、多くの場合、９０％、又は更には、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％超の非常に高い同一性の少なくとも１つの領域を含む、少なくとも３～４つ、多くの場合最大２０個以上のアミノ酸を包含する、１つ以上の高度に保存された領域を、同じ部類の別のポリペプチドと共有する任意のポリペプチドは、本明細書で使用される「ポリペプチド」という関連用語内に包含される。ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、又はその両方を含有し得、当該技術分野において既知の様々なアミノ酸修飾又は類似体のうちのいずれかを含有し得る。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが挙げられる。一部の実施形態では、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びそれらの組み合わせを含み得る。「ペプチド」という用語は、一般に、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、又は１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指すために使用される。一部の実施形態では、タンパク質は、抗体、抗体断片、その生物学的に活性な部分、及び／又はその特徴的な部分である。

【0068】

防止：「防止」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の疾患、障害、又は状態の１つ以上の症状の発症を遅延させること、並びに／又は頻度及び／若しくは重症度の低減を指す。一部の実施形態では、防止は、疾患、障害、又は状態にかかりやすい集団において、疾患、障害、又は状態の１つ以上の症状の発症、頻度、及び／又は強度の統計的に顕著な減少が観察される場合、薬剤が、特定の疾患、障害、又は状態を「防止する」とみなされるように、集団に基づいて評価される。防止は、事前に定義された期間の間、疾患、障害、又は状態の発症を遅延させた場合、完了したとみなすことができる。

【0069】

保護基：本明細書で使用される「保護基」という語句は、望ましくない化学的変換から潜在的に反応性官能基を保護する一時的な置換基を指す。そのような保護基の例としては、それぞれ、カルボン酸のエステル、アルコールのシリルエーテル、並びにアルデヒド及びケトンのアセタール及びケタールが挙げられる。「Ｓｉ保護基」は、Ｓｉ－トリアルキル（例えば、トリメチルシリル、トリブチルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル）、Ｓｉ－トリアリール、Ｓｉ－アルキル－ジフェニル（例えば、ｔ－ブチルジフェニルシリル）、又はＳｉ－アリール－ジアルキル（例えば、Ｓｉ－フェニルジアルキル）などのＳｉ原子を含む保護基である。一般に、Ｓｉ保護基は、酸素原子に結合される。保護基化学の分野が、考察されている（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．；Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）。そのような保護基（及び関連する保護される部分）を、以下に詳述する。

【0070】

保護されるヒドロキシル基は、当該技術分野において周知であり、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３^ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９に詳述されているものが挙げられる。好適に保護されるヒドロキシル基の例としては、限定されないが、エステル、炭酸塩、スルホン酸塩、アリルエーテル、エーテル、シリルエーテル、アルキルエーテル、アリールアルキルエーテル、及びアルコキシアルキルエーテルが更に挙げられる。好適なエステルの例としては、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、ペンタン酸塩、クロトン酸塩、及び安息香酸塩が挙げられる。好適なエステルの具体的な例としては、ギ酸塩、ギ酸ベンゾイル、クロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、メトキシ酢酸塩、トリフェニルメトキシ酢酸塩、ｐ－クロロフェノキシ酢酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、４－オキソペンタン酸塩、４，４－（エチレンジチオ）ペンタン酸塩、ピバル酸塩（トリメチル酢酸塩）、クロトン酸塩、４－メトキシ－クロトン酸塩、安息香酸塩、ｐ－ベンジル安息香酸塩、２，４，６－トリメチル安息香酸塩が挙げられる。好適な炭酸塩の例としては、９－フルオレニルメチル、エチル、２，２，２－トリクロロエチル、２－（トリメチルシリル）エチル、２－（フェニルスルホニル）エチル、ビニル、アリル、及び炭酸ｐ－ニトロベンジルが挙げられる。好適なシリルエーテルの例としては、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル、ｔ－ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリルエーテル、及び他のトリアルキルシリルエーテルが挙げられる。好適なアルキルエーテルの例としては、メチル、ベンジル、ｐ－メトキシベンジル、３，４－ジメトキシベンジル、トリチル、ｔ－ブチル、及びアリルエーテル、又はそれらの誘導体が挙げられる。アルコキシアルキルエーテルとしては、メトキシメチル、メチルチオメチル、（２－メトキシエトキシ）メチル、ベンジルオキシメチル、ベータ－（トリメチルシリル）エトキシメチル、及びテトラヒドロピラン－２－イルエーテルなどのアセタールが挙げられる。好適なアリールアルキルエーテルの例としては、ベンジル、ｐ－メトキシベンジル（ＭＰＭ）、３，４－ジメトキシベンジル、Ｏ－ニトロベンジル、ｐ－ニトロベンジル、ｐ－ハロベンジル、２，６－ジクロロベンジル、ｐ－シアノベンジル、２－及び４－ピコリルエーテルが挙げられる。

【0071】

保護されるアミンは、当該技術分野において周知であり、Ｇｒｅｅｎｅ（１９９９）に詳述されているものが挙げられる。好適なモノ保護アミンとしては、限定されないが、アラルキルアミン、カルバミン酸塩、アリルアミン、アミドなどが更に挙げられる。好適なモノ保護アミノ部分の例としては、ｔ－ブチルオキシカルボニルアミノ（－ＮＨＢＯＣ）、エチルオキシカルボニルアミノ、メチルオキシカルボニルアミノ、トリクロロエチルオキシカルボニルアミノ、アリルオキシカルボニルアミノ（－ＮＨＡｌｌｏｃ）、ベンジルオキソカルボニルアミノ（－ＮＨＣＢＺ）、アリルアミノ、ベンジルアミノ（－ＮＨＢｎ）、フルオレニルメチルカルボニル（－ＮＨＦｍｏｃ）、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、ジクロアセトアミド、トリクロアセトアミド、フェニルアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、ベンズアミド、ｔ－ブチルジフェニルシリルなどが挙げられる。好適なジ保護（ｄｉ－ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ）アミンとしては、モノ保護アミンとして上述したものから独立して選択される２つの置換基で置換されたアミンが挙げられ、更に、フタルイミド、マレイミド、スクシンイミドなどの環式イミドが挙げられる。また、好適なジ保護アミンとしては、ピロールなど、２，２，５，５－テトラメチル－［１，２，５］アザジシロリジンなど、及びアジドが挙げられる。

【0072】

保護されるアルデヒドは、当該技術分野において周知であり、Ｇｒｅｅｎｅ（１９９９）に詳述されているものが挙げられる。好適に保護されるアルデヒドとしては、限定されないが、非環式アセタール、環式アセタール、ヒドラゾン、イミンなどが更に挙げられる。そのような基の例としては、ジメチルアセタール、ジエチルアセタール、ジイソプロピルアセタール、ジベンジルアセタール、ビス（２－ニトロベンジル）アセタール、１，３－ジオキサン、１，３－ジオキソラン、セミカルバゾン、及びそれらの誘導体が挙げられる。

【0073】

保護されるカルボン酸は、当該技術分野において周知であり、Ｇｒｅｅｎｅ（１９９９）に詳述されているものが挙げられる。好適な保護されるカルボン酸としては、限定されないが、任意選択的に置換されたＣ_１－６脂肪族エステル、任意選択的に置換されたアリールエステル、シリルエステル、活性化エステル、アミド、ヒドラジドなどが更に挙げられる。そのようなエステル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ベンジル、及びフェニルエステルが挙げられ、各基は、任意選択的に置換される。追加の好適な保護されるカルボン酸としては、オキサゾリン及びオルトエステルが挙げられる。

【0074】

保護されるチオールは、当該技術分野において周知であり、Ｇｒｅｅｎｅ（１９９９）に詳述されているものが挙げられる。好適に保護されるチオールとしては、限定されないが、ジスルフィド、チオエーテル、シリルチオエーテル、チオエステル、チオ炭酸塩、及びチオカルバミン酸塩などが更に挙げられる。そのような基の例としては、限定されないが、ほんの数例を挙げれば、アルキルチオエーテル、ベンジル、及び置換ベンジルチオエーテル、トリフェニルメチルチオエーテル、並びにトリクロロエトキシカルボニルチオエステルが挙げられる。

【0075】

タンパク質：「タンパク質」という用語は、本明細書で使用される場合、別個の単位として機能する１つ以上のポリペプチドを指す。単一のポリペプチドが別個の機能単位であり、別個の機能単位を形成するために他のポリペプチドとの永続的又は一時的な物理的会合を必要としない場合、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され得る。別個の機能的単位が、互いに物理的に会合する２つ以上のポリペプチドで構成される場合、「タンパク質」という用語は、物理的に会合し、かつ別個の単位として一緒に機能する複数のポリペプチドを指すために使用され得る。一部の実施形態では、タンパク質は、アミノ酸以外の部分（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどであり得る）を含み得、かつ／又は処理若しくは修飾され得る。当業者は、一部の実施形態では、「タンパク質」という用語が、細胞によって産生される完全なポリペプチド鎖（例えば、シグナル配列を含むか又は含まない）、及び／又は細胞内で活性である形態（例えば、切断された形態又は複合体化された形態）を指し得ることを理解するであろう。タンパク質が複数のポリペプチド鎖で構成される一部の実施形態では、そのような鎖は、例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に会合し得るか、又は他の手段によって会合し得る。

【0076】

純粋：本明細書で使用される場合、薬剤又は実体は、他の構成成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。例えば、特定の薬剤又は実体を約９０％超含有する調製物は、典型的には、純粋な調製物であるとみなされる。一部の実施形態では、薬剤又は実体は、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％純粋である。

【0077】

参照：本明細書で使用される場合、基準又は対照について記載しており、それらと比較して比較が行われる。例えば、一部の実施形態では、目的の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、又は値は、参照又は対照薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、又は値と比較される。一部の実施形態では、参照又は対照は、目的の試験若しくは決定と実質的に同時に試験され、かつ／又は決定される。一部の実施形態では、参照又は対照は、歴史的な参照又は対照であり、任意選択的に、有形媒体で具現化される。典型的には、当業者に理解されるように、参照又は対照は、評価されるものと同等の条件若しくは状況下で決定されるか、又は特徴評価される。当業者は、特定の可能な参照若しくは対照に対する信頼及び／又は比較を正当化するのに十分な類似性がいつ存在するかを理解するだろう。

【0078】

試料：本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、典型的には、本明細書に記載の目的の源から得られるか、又はそれに由来する材料のアリコートを指す。一部の実施形態では、目的の源は、生物学的又は環境的源である。一部の実施形態では、目的の源は、細胞、又は微生物、植物、若しくは動物（例えば、ヒト）などの生物であり得るか、又はそれらを含み得る。一部の実施形態では、目的の源は、生体組織又は流体であるか、又はそれらを含む。一部の実施形態では、生体組織又は流体は、羊水、房水、腹水、胆汁、骨髄、血液、母乳、脳脊髄液、耳垢、乳糜、チャイム（ｃｈｉｍｅ）、射精液、内リンパ液、滲出液、糞便、胃酸、胃液、リンパ、粘液、心嚢水、外リンパ液、腹腔液、胸膜液、膿、目ヤニ、唾液、皮脂、精液、血清、恥垢、痰、滑液、汗、涙、尿、膣分泌物、硝子体、嘔吐物、及び／又はそれらの組み合わせ若しくは構成成分（複数可）であり得るか、又はそれらを含み得る。一部の実施形態では、生体液は、細胞内液、細胞外液、血管内液（血漿）、間質液、リンパ液、及び／又は細胞間液であり得るか、又はそれらを含み得る。一部の実施形態では、生体液は、植物滲出物であり得るか、又はそれを含み得る。一部の実施形態では、生体組織又は試料は、例えば、吸引、生検（例えば、細針生検又は組織生検）、スワブ（例えば、口腔、鼻、皮膚、又は膣スワブ）、擦過、手術、洗浄又は洗浄（例えば、気管支肺胞、乳管、鼻、眼、口腔、子宮、膣、又は他の洗浄又は洗浄）によって得ることができる。一部の実施形態では、生体試料は、個体から得られた細胞であるか、又はそれを含む。一部の実施形態では、試料は、任意の適切な手段によって目的の供給源から直接得られる「一次試料」である。一部の実施形態では、文脈から明らかであろうように、「試料」という用語は、一次試料を処理することによって（例えば、１つ以上の構成成分を除去することによって及び／又は１つ以上の薬剤を添加することによって）得られる調製物を指す。例えば、半透過性膜を使用して濾過すること。そのような「処理された試料」は、例えば、試料から抽出されたか、又は核酸の増幅若しくは逆転写、ある特定の構成成分の単離及び／若しくは精製などの１つ以上の技法を一次試料に施すことによって得られた、核酸又はタンパク質を含み得る。

【0079】

安定なナノ粒子組成物：「安定な」という用語は、本明細書の組成物に適用される場合、組成物が、一定期間にわたって、それらの物理的構造（例えば、粒子のサイズ範囲及び／又は分布）の１つ以上の態様を維持することを意味する。一部の実施形態では、安定なナノ粒子組成物は、平均粒径、最大粒径、粒径の範囲、及び／又は粒径の分布（すなわち、指定されたサイズを上回る、及び／又は指定されたサイズの範囲外の粒子のパーセンテージ）が、定められた条件下で一定期間維持されるものである。一部の実施形態では、安定な提供される組成物は、生物学的に関連する活性が一定期間維持されるものである。一部の実施形態では、期間は、少なくとも約１時間であり、一部の実施形態では、期間は、約５時間、約１０時間、約１（１）日、約１（１）週間、約２（２）週間、約１（１）か月、約２（２）か月、約３（３）か月、約４（４）か月、約５（５）か月、約６（６）か月、約８（８）か月、約１０（１０）か月、約１２（１２）か月、約２４（２４）か月、約３６（３６）か月、又はそれ以上である。一部の実施形態では、期間は、約１（１）日～約２４（２４）か月、約２（２）週間～約１２（１２）か月、約２（２）か月～約５（５）か月などの範囲内である。例えば、ナノ粒子の集団が、長期間の保管、温度変化、及び／又はｐＨ変化を施され、組成物中のナノ粒子の大部分が、記載の範囲内の直径を維持する場合、ナノ粒子組成物は、安定である。一部の実施形態では、安定な組成物は、周囲条件で安定である。一部の実施形態では、安定な組成物は、生物学的条件下で（すなわち、リン酸緩衝生理食塩水中３７℃で）安定である。

【0080】

ステロリル：「ステロリル」という用語は、本明細書で使用される場合、飽和又は部分的に不飽和であり、少なくとも１つのヒドロキシル基で置換されており、任意の置換可能な炭素又は酸素原子で分子の残りの部分に単一結合点を有する１７員縮合多環式環部分を指す。一部の実施形態では、ステロリル基は、コレステロリル基、又はそのバリアント若しくは誘導体である。一部の実施形態では、コレステロリル基は、修飾されている。一部の実施形態では、コレステロリル基は、酸化された（例えば、ベータ環構造又は炭化水素尾部構造で酸化された）コレステロリル基である。一部の実施形態では、コレステロリル基は、エステル化コレステロリル基である。一部の実施形態では、ステロリル基は、フィトステロリル基である。例示的なステロリル基としては、限定されないが、２５－ヒドロキシコレステロリル（２５－ＯＨ）、２０α－ヒドロキシコレステロリル（２０α－ＯＨ）、２７－ヒドロキシコレステロリル、６－ケト－５α－ヒドロキシコレステロリル、７－ケトコレステロリル、７β－ヒドロキシコレステロリル、７α－ヒドロキシコレステロリル、７β－２５－ジヒドロキシコレステロリル、ベータ－シトステロリル、スティグマステロリル、ブラシカステロリル（ｂｒａｓｓｉｃａｓｔｅｒｏｌｙｌ）、及びカンペステロリル（ｃａｍｐｅｓｔｅｒｏｌｙｌ）が挙げられる。

【0081】

対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、生物、典型的には、哺乳類（例えば、一部の実施形態では、出生前のヒト形態を含むヒト）を指す。一部の実施形態では、対象は、関連する疾患、障害、又は状態を患っている。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態にかかりやすい。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態の、１つ以上の症状又は特徴を示す。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態の、症状又は特徴を何ら示さない。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態にかかりやすいか、又はかかりやすいリスクがある特徴を１つ以上有する者である。一部の実施形態では、対象は、患者である。一部の実施形態では、対象は、診断及び／又は治療が実施されるか、及び／又は実施された個体である。

【0082】

実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、目的の特徴又は性質の全体若しくはほぼ全体の程度又は度合いを示す定性的な状態を指す。生物学の当業者は、生物学的現象及び化学的現象が、完全に終了すること、及び／又は完全に終了することに向けて進むこと、又は絶対的な結果を達成するか、又は回避することは、もしあるとしてもまれであることを理解するだろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的現象及び化学的現象に内在する潜在的に完全に終了することはないことを捕捉するために本明細書で使用される。

【0083】

置換されたか又は任意選択的に置換された：本明細書に記載の本開示の化合物は、任意選択的に置換された及び／又は置換された部分を含有し得る。一般に、「置換された」という用語は、「任意選択的に」という用語が前に付されるか否かにかかわらず、指定された部分の１つ以上の水素が好適な置換基で置き換えられることを意味する。「置換された」は、１つ以上の水素に適用され、構造から明示的又は暗示的のいずれかである（例えば、

【化4】

は、少なくとも

【化5】

を指し、

【化6】

は、少なくとも

【化7】

を指す）。別段の指示がない限り、「任意選択的に置換された」基は、基の各々の置換可能な位置に好適な置換基を有してもよく、任意の所与の構造内の２つ以上の位置が、特定の基から選択される２つ以上の置換基で置換され得る場合、置換基は、全ての位置で同じであっても異なってもよい。本開示によって想定される置換基の組み合わせは、好ましくは、安定な又は化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものである。「安定」という用語は、本明細書で使用される場合、それらの産生、検出、並びにある特定の実施形態では、それらの回収、精製、及び本明細書に開示の目的のうちの１つ以上での使用を可能にする条件を施される場合、実質的に変化しない化合物を指す。「置換された」と記載される基は、１～４つの置換基、より好ましくは１～２つの置換基を有することが好ましい。「任意選択的に置換された」と記載される基は、上に記載されるように、非置換であっても、「置換されて」いてもよい。

【0084】

好適な一価の置換基としては、ハロゲン；－（ＣＨ_２）_０－４Ｒ°；－（ＣＨ_２）_０－４ＯＲ°；－Ｏ（ＣＨ_２）_０－４Ｒ^ｏ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４ＣＨ（ＯＲ°）_２；Ｒ°で置換され得る－（ＣＨ_２）_０－４Ｐｈ；Ｒ°で置換され得る－（ＣＨ_２）_０－４Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ；Ｒ°で置換され得る－ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ°で置換され得る－（ＣＨ_２）_０－４Ｏ（ＣＨ_２）_０－１－ピリジニル；－ＮＯ_２；－ＣＮ；－Ｎ_３；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ°）_２；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；－Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°_２；－Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°_２；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；－Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；－Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°_２；－Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）Ｒ°；－Ｃ（Ｓ）Ｒ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ°_３；－（ＣＨ_２）_０－４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°；－ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０－４ＳＲ°－；－ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°_２；－Ｃ（Ｓ）ＮＲ°_２；－Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；－ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°_２；－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ°；－Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°；－（ＣＨ_２）_０－４ＳＳＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｓ（Ｏ）_２Ｒ°；－（ＣＨ_２）_０－４Ｓ（Ｏ）_２ＯＲ°；－（ＣＨ_２）_０－４ＯＳ（Ｏ）_２Ｒ°；－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ°_２；－（ＣＨ_２）_０－４Ｓ（Ｏ）Ｒ°；－Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ°_２；－Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ°；－Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ°_２；－Ｐ（Ｏ）_２Ｒ°；－Ｐ（Ｏ）Ｒ°_２；－ＯＰ（Ｏ）Ｒ°_２；－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ°）_２；－ＳｉＲ°_３；－ＯＳｉＲ°_３；－（Ｃ_１－４直鎖若しくは分岐したアルキレン）Ｏ－Ｎ（Ｒ°）_２；又は－（Ｃ_１－４直鎖若しくは分岐したアルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｎ（Ｒ°）_２が挙げられ、各Ｒ°が、以下に定義されるように置換され得、独立して、水素、Ｃ_１－６脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ、－ＣＨ_２－（５～６員のヘテロアリール環）、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分的に不飽和の環、若しくはアリール環であるか、あるいは、上に定義されてはいるが、独立した２つのＲ°の出現が、それらの介在する原子と一緒になって、以下に定義されるように置換され得る窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する３～１２員の飽和、部分的に不飽和の環、又はアリール単環式若しくは二環式環を形成する。

【0085】

Ｒ°（又は独立した２つのＲ°の出現が、介在する原子と一緒になって形成する環）上の好適な一価の置換基は、独立して、ハロゲン、－（ＣＨ_２）_０－２Ｒ^●、－（ハロＲ^●）、－（ＣＨ_２）_０－２ＯＨ、－（ＣＨ_２）_０－２ＯＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２ＣＨ（ＯＲ^●）_２；－Ｏ（ハロＲ^●）、－ＣＮ、－Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）Ｒ^●、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）ＮＲ^● _２、－（ＣＨ_２）_０－２ＳＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_０－２ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_０－２ＮＨＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２ＮＲ^● _２、－ＮＯ_２、－ＳｉＲ^● _３、－ＯＳｉＲ^● _３、－Ｃ（Ｏ）ＳＲ^● _、－（Ｃ_１－４直鎖若しくは分岐したアルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●、又は－ＳＳＲ^●であり、各Ｒ^●が、非置換であるか、あるいは「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンでのみ置換され、Ｃ_１－４脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分的に不飽和の環、若しくはアリール環から独立して選択される。Ｒ°の飽和炭素原子上の好適な二価の置換基としては、＝Ｏ及び＝Ｓが挙げられる。

【0086】

好適な二価の置換基としては、以下：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ^＊ _２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ^＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^＊、＝ＮＲ^＊、＝ＮＯＲ^＊、－Ｏ（Ｃ（Ｒ^＊ _２））_２－３Ｏ－、又は－Ｓ（Ｃ（Ｒ^＊ _２））_２－３Ｓ－が挙げられ、各々独立したＲ^＊の出現が、水素、以下に定義されるように置換され得るＣ_１－６脂肪族、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する非置換の５～６員の飽和、部分的に不飽和の環、若しくはアリール環から選択される。「任意選択的に置換された」基の近位の置換可能な炭素に結合する好適な二価の置換基としては、－Ｏ（ＣＲ^＊ _２）_２－３Ｏ－が挙げられ、各々独立したＲ^＊の出現が、水素、以下に定義されるように置換され得るＣ_１－６脂肪族、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する非置換の５～６員の飽和、部分的に不飽和の環、若しくはアリール環から選択される。

【0087】

Ｒ^＊の脂肪族基上の好適な置換基としては、ハロゲン、－Ｒ^●、－（ハロＲ^●）、－ＯＨ、－ＯＲ^●、－Ｏ（ハロＲ^●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ^●、－ＮＲ^● _２、又は－ＮＯ_２が挙げられ、各Ｒ^●が、非置換であるか、あるいは「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンでのみ置換されており、独立して、Ｃ_１－４脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分的に不飽和の環、若しくはアリール環である。

【0088】

一部の実施形態では、置換可能な窒素上の好適な置換基としては、－Ｒ^†、－ＮＲ^† _２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^†、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^†、－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ^†、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ^†、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^†、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^† _２、－Ｃ（Ｓ）ＮＲ^† _２、－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ^† _２、又は－Ｎ（Ｒ^†）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^†が挙げられ、各Ｒ^†が、独立して、水素、以下に定義されるように置換され得るＣ_１－６脂肪族、非置換の－ＯＰｈ、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する非置換の５～６員の飽和、部分的に不飽和の環、若しくはアリール環であるか、あるいは、上に定義されてはいるが、独立した２つのＲ^†の出現が、介在する原子（複数可）と一緒になって、窒素、酸素、又は硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する非置換の３～１２員の飽和、部分的に不飽和の環、又はアリール単環式若しくは二環式環を形成する。

【0089】

Ｒ^＊の脂肪族基上の好適な置換基は、独立して、ハロゲン、－Ｒ^●、－（ハロＲ^●）、－ＯＨ、－ＯＲ^●、－Ｏ（ハロＲ^●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ^●、－ＮＲ^● _２、又は－ＮＯ_２であり、各Ｒ^●が、非置換であるか、あるいは「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンでのみ置換されており、独立して、Ｃ_１－４脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分的に不飽和の環、若しくはアリール環である。

【0090】

別段の記載がない限り、本明細書に示される構造はまた、構造の全ての異性体（例えば、鏡像異性体、ジアステレオマー、及び幾何学的（又は立体構造））形態、例えば、各非対称中心のＲ及びＳ構成、Ｚ及びＥ二重結合異性体、並びにＺ及びＥ立体異性体を含むことを意味する。したがって、本化合物の単一の立体化学異性体、並びに鏡像異性体、ジアステレオマー、及び幾何学的（又は立体構造）混合物は、本発明の範囲内である。別段の記載がない限り、本発明の化合物の全ての互変異性形態は、本発明の範囲内である。追加的に、別段の記載がない限り、本明細書に示される構造は、１つ以上の同位体的に濃縮された原子の存在下でのみ異なる化合物を含むことも意図される。例えば、重水素若しくはトリチウムに水素を置き換えること、又は^１３Ｃ若しくは^１４Ｃが濃縮された炭素に炭素を置き換えることを含む、本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。そのような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイのプローブとして、又は本発明による治療剤として有用である。

【0091】

かかりやすい：疾患、障害、又は状態に「かかりやすい」個体は、疾患、障害、又は状態を発症するリスクがある。一部の実施形態では、疾患、障害、又は状態にかかりやすい個体は、疾患、障害、又は状態のいかなる症状も示していない。一部の実施形態では、疾患、障害、又は状態にかかりやすい個体は、疾患、障害、及び／又は状態を有すると診断されたことがない。一部の実施形態では、疾患、障害、又は状態にかかりやすい個体は、疾患、障害、又は状態の発症に関連する状態に曝されたことがある個体である。一部の実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態を発症するリスクは、集団に基づくリスク（例えば、疾患、障害、又は状態を患っている個人の家族）である。

【0092】

全身性：本明細書で使用される「全身投与」、「全身投与される」、「末梢投与」、及び「末梢投与される」という語句は、レシピエントの系に入るように、化合物又は組成物の投与を指すそれらの技術分野において理解される意味を有する。

【0093】

互変異性形態：本明細書で使用される「互変異性形態」という語句は、容易な相互変換が可能である有機化合物の異なる異性体形態について記載するために使用される。互変異性体は、単結合及び隣接する二重結合のスイッチを伴う、水素原子又はプロトンの形態的な移動を特徴とし得る。一部の実施形態では、互変異性体は、プロトトロピック互変異性（すなわち、プロトンの再配置）から生じ得る。一部の実施形態では、互変異性体は、原子価互変異性（すなわち、結合電子の急速な再編成）から生じ得る。そのような全ての互変異性形態は、本開示の範囲内に含まれることが意図される。一部の実施形態では、化合物の互変異性形態は、別々の物質を調製する試みが混合物の形成をもたらすように、互いに移動平衡で存在する。一部の実施形態では、化合物の互変異性形態は、分離可能かつ単離可能な化合物である。本開示の一部の実施形態では、化合物の単一の互変異性形態の純粋な調製物であるか、又はそれを含む化学組成物が提供され得る。一部の実施形態では、化学組成物は、化合物の２つ以上の互変異性形態の混合物として提供され得る。ある特定の実施形態では、そのような混合物は、等量の異なる互変異性形態を含有し、ある特定の実施形態では、そのような混合物は、異なる量の少なくとも２つの異なる互変異性形態の化合物を含有する。本開示の一部の実施形態では、化学組成物は、化合物の全ての互変異性形態を含有し得る。本開示の一部の実施形態では、化学組成物は、化合物の全てよりも少ない互変異性形態を含有し得る。本開示の一部の実施形態では、化学組成物は、相互変換の結果として経時的に変動する量で、１つ以上の互変異性形態の化合物を含有し得る。本開示の一部の実施形態では、互変異性は、ケト－エノール互変異性である。ケト－エノール互変異性体は、化学技術分野において既知の任意の好適な試薬を使用して「捕捉」（すなわち、「エノール」形態であり続けるように化学的修飾）されて、その後、当該技術分野において既知の１つ以上の好適な技法を使用して単離され得るエノール誘導体を提供することができることを、当業者は認識するであろう。別段の指示がない限り、本開示は、純粋な形態であるか、又は互いに混合しているかにかかわらず、関連する化合物の全ての互変異性形態を包含する。

【0094】

治療剤：本明細書で使用される場合、「治療剤」という語句は、対象に投与されると、治療効果を有し、並びに／又は所望の生物学的及び／若しくは薬理学的効果を誘発する薬剤を指す。一部の実施形態では、治療剤は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴の緩和、改善、軽減、阻害、防止、それらの発症の遅延、重症度の低減、及び／又は発生率の低減のために使用され得る任意の物質である。

【0095】

治療有効量：本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、治療レジメンの一部として投与されると、所望の生物学的応答を誘発する物質（例えば、治療剤、組成物、及び／又は製剤）の量を意味する。一部の実施形態では、物質の治療有効量は、疾患、障害、及び／又は状態を患っているか、又はそれらにかかりやすい対象に投与されると、疾患、障害、及び／又は状態の治療、診断、阻害、改善、防止、及び／又はそれらの発症の遅延に十分な量である。当業者によって理解されるであろうように、物質の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される物質、標的細胞又は組織などのそのような要因に応じて変動し得る。例えば、疾患、障害、及び／又は状態を治療するための製剤中の化合物の有効量は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴を緩和、改善、軽減、阻害、防止する、それらの発症を遅延させる、重症度を低減する、及び／又は発生率を低減する量である。一部の実施形態では、治療有効量は、単回用量で投与され、一部の実施形態では、治療有効量を送達するために、複数の単位用量が必要である。正確な投与量は、対象に応じた変数（例えば、年齢、免疫系の健康状態など）、疾患、及び実施される治療などの様々な要因に応じて変動するであろう。

【0096】

「組織」及び／又は「臓器」：本明細書で使用される場合、「組織」及び／又は「臓器」という用語は、別段の定めがない限り、凝集体形態、例えば、臓器の小部分、並びに分散した細胞、例えば、骨髄細胞及び子孫細胞、血液産生幹細胞及び子孫、並びに様々な他の血液要素を含む、筋肉、心筋、肝臓、又は腎臓から分散、単離、及び／又は成長した細胞における生存可能な細胞材料を指す。一部の実施形態では、組織及び／又は臓器は、腎臓、心臓肝臓、胃、脾臓、膵臓、肺、脳、眼、腸、膀胱、皮膚又は皮膚組織、血管、静脈、動脈、心臓弁、精子、及び卵母細胞（複数可）を指す。本明細書で使用される場合、「臓器」という用語は、固体臓器、例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、並びに臓器の機能的部分、例えば、皮膚の一部、動脈、静脈、移植可能な肝葉、腎臓、肺の切片などの両方を包含する。

【0097】

治療：本明細書で使用される場合、「治療」（また、「治療する」又は「治療すること」）という用語は、特定の疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状、特徴、及び／又は原因を部分的に又は完全に緩和、改善、軽減、阻害する、それらの発症を遅延させる、重症度を低減する、及び／又は発生率を低減する療法の加療を指す。一部の実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／若しくは状態の兆候を示していない対象、並びに／又は疾患、障害、及び／若しくは状態の早期兆候のみを示している対象の治療であり得る。代替的又は追加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の確立された兆候を示す対象のものであってもよい。一部の実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態を患っていると診断された対象の治療であり得る。一部の実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症のリスクの増加と統計的に相関する、１つ以上の感受性因子を有することが分かっている対象の治療であり得る。したがって、一部の実施形態では、治療は、予防的であり得、一部の実施形態では、治療的であり得る。

【発明を実施するための形態】

【0098】

本開示は、記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の構成成分のうちの１つ以上の選択及び組み合わせが、所望のトロピズム、安定化、及び薬物送達有効性などの脂質ナノ粒子の機能的活性に影響を与えることについて記載する。とりわけ、本発明は、標的細胞及び／又は組織への治療剤及び／又は予防剤の送達のための組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。例えば、本開示は、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料に使用するための脂質化合物について記載する。一部の実施形態では、組成物、調製物、及び／又はナノ材料は、指定された標的細胞、組織、及び／又は臓器にカーゴを運搬するＬＮＰを含む。

【0099】

Ｉ．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）
本発明は、脂質ナノ粒子を含む組成物、調製物、及び／又はナノ材料を提供する。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上の構成成分を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、化合物、イオン化可能な脂質、ステロール、コンジュゲート－リンカー脂質、及びリン脂質などの１つ以上の構成成分を含む。とりわけ、本開示は、本明細書に記載の構成成分のうちの１つ以上の選択及び組み合わせが、直径、ｐＫａ、安定化、及びイオン化性などの脂質ナノ粒子の特徴に影響を与えることについて記載する。

【0100】

とりわけ、本開示は、本明細書に記載の構成成分のうちの１つ以上の選択及び組み合わせが、トロピズム、安定化、及び薬物送達有効性などの脂質ナノ粒子の機能的活性に影響を与えることについて記載する。例えば、本開示は、構成成分の組み合わせが、ｓｉＲＮＡの送達により良好に適し得ることについて記載する。別の例として、本開示は、構成成分の組み合わせが、ｍＲＮＡの送達により良好に適し得ることについて記載する。別の例として、本開示は、構成成分の組み合わせが、ＤＮＡの送達により良好に適し得ることについて記載する。

【0101】

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の１つ以上の化合物を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の１つ以上のイオン化可能な脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の１つ以上のステロールを含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の１つ以上のコンジュゲート－リンカー脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の１つ以上のリン脂質を含む。

【0102】

Ａ．化合物
とりわけ、本開示は、本明細書に記載の１つ以上の化合物を含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。

【0103】

一部の実施形態では、本開示は、式Ｉの化合物：

【化8】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｌ^１及びＬ^１’の各々が、独立して、Ｃ_１－６アルキレンであり、
Ｌ^２及びＬ^２’の各々が、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられ、
Ｙ^１及びＹ^１’の各々が、独立して、－Ｃ（Ｏ）－又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、
Ｙ^２及びＹ^２’の各々が、独立して、存在しないか、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、又は－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－であり、
Ｒ及びＲ’の各々が、独立して、水素、

【化9】

であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基であり、
Ｌ^３ａ及びＬ^３ａ’の各々が、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられ、
Ｒ^ａ及びＲ^ａ’の各々が、独立して、水素であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基であり、
Ｘ^１が、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－、又は－ＮＲ^ｂ－であり、
Ｘ^２が、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－_１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－、－ＮＲ^ｂ－、又は－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられ、
Ｃｙ^Ａが、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のカルボシクリレン、フェニレン、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレン、並びに窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリーレンから選択される、任意選択的に置換された環であり、
Ｘ^３が、水素であるか、又は３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、フェニル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のヘテロシクリル、並びに窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリールから選択される、任意選択的に置換された基であり、
各Ｒ^ｂが、独立して、水素、又は任意選択的に置換されたＣ_１－_６脂肪族基である、化合物、若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。

【0104】

一部の実施形態では、本開示は、式Ｉ－Ａの化合物：

【化10】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、Ｌ^１、Ｌ^１’、Ｌ^２、Ｌ^２’、Ｙ^２、Ｙ^２’、Ｒ、Ｒ’、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３の各々が、本明細書に記載のクラス及びサブクラスで、単一で、及び組み合わせての両方で、上に記載されるとおりである、化合物、若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。

【0105】

一部の実施形態では、本開示は、式Ｉ－Ａ－ａの化合物：

【化11】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、Ｌ^１、Ｌ^１’、Ｌ^２、Ｌ^２’、Ｌ^３ａ、Ｌ^３ａ’、Ｙ^２、Ｒ、Ｒ^ａ、Ｒ^ａ’、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３の各々が、本明細書に記載のクラス及びサブクラスで、単一で、及び組み合わせての両方で、上に記載されるとおりである、化合物、若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。

【0106】

一部の実施形態では、本開示は、式Ｉ－Ａ－ｂの化合物：

【化12】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、Ｌ^１、Ｌ^１’、Ｌ^２、Ｌ^２’、Ｌ^３ａ、Ｌ^３ａ’、Ｙ^２’、Ｒ’、Ｒ^ａ、Ｒ^ａ’、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３の各々が、本明細書に記載のクラス及びサブクラスで、単一で、及び組み合わせての両方で、上に記載されるとおりである、化合物、若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。

【0107】

一部の実施形態では、本開示は、式Ｉ－Ａ－ｃの化合物：

【化13】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、Ｌ^１、Ｌ^１’、Ｌ^２、Ｌ^２’、Ｌ^３ａ、Ｌ^３ａ’、Ｒ^ａ、Ｒ^ａ’、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３の各々が、本明細書に記載のクラス及びサブクラスで、単一で、及び組み合わせての両方で、上に記載されるとおりである、化合物、若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。

【0108】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｌ^１は、Ｃ_１－６アルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ^１は、Ｃ_１－４アルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ^１は、Ｃ_１－３アルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ^１は、－（ＣＨ_２）_２－、－（ＣＨ_２）_３－、又は－（ＣＨ_２）_４－である。

【0109】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｌ^１’は、Ｃ_１－６アルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ^１’は、Ｃ_１－４アルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ^１’は、Ｃ_１－３アルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ^１’は、－（ＣＨ_２）_２－、－（ＣＨ_２）_３－、又は－（ＣＨ_２）_４－である。

【0110】

一部の実施形態では、Ｌ^１及びＬ^１’は、同じである。一部の実施形態では、Ｌ^１及びＬ^１’は、異なる。

【0111】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｌ^２は、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^２は、存在しない。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_２－７炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－５炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－３炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_２－７炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_１－５炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_１－３炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、－（ＣＨ_２）_２－である。一部の実施形態では、Ｌ^２は、－（ＣＨ_２）_４－、－（ＣＨ_２）_６－、又は－（ＣＨ_２）_７－である。

【0112】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｌ^２’は、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、存在しない。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_２－７炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－５炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－３炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_２－７炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_１－５炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、任意選択的に置換された二価の飽和した直鎖又は分岐したＣ_１－３炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、－（ＣＨ_２）_２－である。一部の実施形態では、Ｌ^２’は、－（ＣＨ_２）_４－、－（ＣＨ_２）_６－、又は－（ＣＨ_２）_７－である。

【0113】

一部の実施形態では、Ｌ^２及びＬ^２’は、同じである。一部の実施形態では、Ｌ^２及びＬ^２’は、異なる。

【0114】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｙ^１は、－Ｃ（Ｏ）－、又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^１は、－Ｃ（Ｏ）－である。一部の実施形態では、Ｙ^１は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。Ｙ^１が－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である場合、Ｙ^１のカルボニルは、式Ｉに示される酸素に結合し、Ｙ^１の酸素は、カーボネート部分（例えば、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｌ^２－）が形成されるように、Ｌ^２に結合することが理解されるであろう。

【0115】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｙ^１’は、－Ｃ（Ｏ）－、又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^１’は、－Ｃ（Ｏ）－である。一部の実施形態では、Ｙ^１’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。Ｙ^１’が－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である場合、Ｙ^１’のカルボニルは、式Ｉに示される酸素に結合し、Ｙ^１’の酸素は、カーボネート部分（例えば、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｌ^２’－）が形成されるように、Ｌ^２’に結合することが理解されるであろう。

【0116】

一部の実施形態では、Ｙ^１及びＹ^１’は、同じである。一部の実施形態では、Ｙ^１及びＹ^１’は、異なる。

【0117】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｙ^２は、存在しないか、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、又は－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２は、存在しない。一部の実施形態では、Ｙ^２は、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、又は－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２は、－ＯＣ（Ｏ）－又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２は、－ＯＣ（Ｏ）－である。一部の実施形態では、Ｙ^２は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２は、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。

【0118】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｙ^２’は、存在しないか、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、又は－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２’は、存在しない。一部の実施形態では、Ｙ^２’は、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、又は－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２’は、－ＯＣ（Ｏ）－又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２’は、－ＯＣ（Ｏ）－である。一部の実施形態では、Ｙ^２’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｙ^２’は、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。

【0119】

一部の実施形態では、Ｙ^２及びＹ^２’は、同じである。一部の実施形態では、Ｙ^２及びＹ^２’は、異なる。

【0120】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｒは、水素、

【化14】

であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基である。一部の実施形態では、Ｒは、

【化15】

である。一部の実施形態では、Ｒは、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒは、任意選択的に置換されたＣ_９－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒは、任意選択的に置換されたＣ_{１５－２０}脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_９－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_{１５－２０}脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_６－２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_９－２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_{１５－２０}アルキルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_６－２０アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_９－２０アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_{１５－２０}アルケニルである。

【0121】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｒ’は、水素、

【化16】

であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基である。一部の実施形態では、Ｒ’は、

【化17】

である。一部の実施形態では、Ｒ’は、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ’は、任意選択的に置換されたＣ_９－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ’は、任意選択的に置換されたＣ_{１５－２０}脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_９－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_{１５－２０}脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_６－２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_９－２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_{１５－２０}アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_６－２０アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_９－２０アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_{１５－２０}アルケニルである。

【0122】

一部の実施形態では、Ｒ及びＲ’は、同じである。一部の実施形態では、Ｒ及びＲ’は、異なる。

【0123】

一部の実施形態では、－Ｌ^２－Ｙ^２－Ｒ及び－Ｌ^２’－Ｙ^２’－Ｒ’の各々は、独立して、

【化18】

である。

【0124】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、各Ｌ^３ａは、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^３ａは、存在しない。一部の実施形態では、Ｌ^３ａは、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^３ａは、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である。

【0125】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、各Ｌ^３ａ’は、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^３ａ’は、存在しない。一部の実施形態では、Ｌ^３ａ’は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｌ^３ａ’は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である。

【0126】

一部の実施形態では、Ｌ^３ａ及びＬ^３ａ’は、同じである。一部の実施形態では、Ｌ^３ａ及びＬ^３ａ’は、異なる。

【0127】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、各Ｒ^ａが、独立して、水素であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基である。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、任意選択的に置換されたＣ_６－１２脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、任意選択的に置換されたＣ_７－９脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_６－１２脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_７－９脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_６－２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_６－１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_７－９アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_６－２０アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_６－１２アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａは、Ｃ_７－９アルケニルである。

【0128】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、各Ｒ^ａ’が、独立して、水素であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基である。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、任意選択的に置換されたＣ_６－１２脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、任意選択的に置換されたＣ_７－９脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_６－２０脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_６－１２脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_７－９脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_６－２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_６－１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_７－９アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_６－２０アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_６－１２アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ^ａ’は、Ｃ_７－９アルケニルである。

【0129】

一部の実施形態では、Ｒ^ａ及びＲ^ａ’は、同じである。一部の実施形態では、Ｒ^ａ及びＲ^ａ’は、異なる。

【0130】

一部の実施形態では、－Ｌ^３ａ－Ｒ^ａ及び－Ｌ^３ａ’－Ｒ^ａ’の各々は、独立して、

【化19】

である。

【0131】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｘ^１は、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－、又は－ＮＲ^ｂ－である。一部の実施形態では、Ｘ^１は、存在しない。一部の実施形態では、Ｘ^１は、－Ｏ－、－Ｓ－、又は－ＮＲ^ｂ－である。一部の実施形態では、Ｘ^１は、－Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｘ^１は、－Ｓ－である。一部の実施形態では、Ｘ^１は、－ＮＲ^ｂ－である。

【0132】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｘ^２は、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－、－ＮＲ^ｂ－、又は－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、存在しない。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－、－ＮＲ^ｂ－、又は－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖であり、１つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖であり、１つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖であり、１つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖であり、１つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられる。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖である。一部の実施形態では、Ｘ^２は、任意選択的に置換された二価の飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖である。

【0133】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｃｙ^Ａは、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のカルボシクリレン、フェニレン、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレン、並びに窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリーレンから選択される、任意選択的に置換された二価の環である。一部の実施形態では、Ｃｙ^Ａは、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレンである。一部の実施形態では、Ｃｙ^Ａは、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する、５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレンである。一部の実施形態では、Ｃｙ^Ａは、１～２つの窒素を有する、５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレンである。一部の実施形態では、Ｃｙ^Ａは、１～２つの窒素を有する、５～６員の飽和のヘテロシクリレンである。一部の実施形態では、Ｃｙ^Ａは、ピロリジン又はピペリジン環である。

【0134】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、Ｘ^３は、水素であるか、あるいは３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、フェニル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のヘテロシクリル、又は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリールから選択される、任意選択的に置換された基である。一部の実施形態では、Ｘ^３は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する、任意選択的に置換された３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～２つのヘテロ原子を有する、任意選択的に置換された５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、１～２つの窒素を有する、任意選択的に置換された５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、１～２つの窒素を有する、任意選択的に置換された５～６員の飽和ヘテロシクリル（例えば、１～２つの窒素を有し、１つ以上のＣ_１－６アルキルで任意選択的に置換された、５～６員の飽和ヘテロシクリル）である。一部の実施形態では、Ｘ^３は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～２つのヘテロ原子を有する、５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、１～２つの窒素を有する、５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、１～２つの窒素を有し、１つ以上のＣ_１－６アルキルで任意選択的に置換された、５～６員の飽和のヘテロシクリルである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、１つ以上のＣ_１－６アルキル（例えば、メチル又はエチル）で任意選択的に置換されたピロリジン又はピペリジンである。

【0135】

一部の実施形態では、－Ｘ^２－Ｘ^３は、

【化20】

である。

【0136】

本明細書に記載のいずれかの式の一部の実施形態では、各Ｒ^ｂは、独立して、水素、又は任意選択的に置換されたＣ_１－６脂肪族基である。一部の実施形態では、Ｒ^ｂは、水素である。一部の実施形態では、Ｒ^ｂは、任意選択的に置換されたＣ_１－６脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ｂは、任意選択的に置換されたＣ_１－３脂肪族である。一部の実施形態では、Ｒ^ｂは、Ｃ_１－６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂは、Ｃ_１－３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂは、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である。

【0137】

「［化合物／式］若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩」は、本明細書で使用される場合、ｉ）それぞれの化合物若しくは式、又はｉｉ）そのような化合物若しくは式のＮ－オキシドの、薬学的に許容される塩を指すことが理解されるであろう。

【0138】

一部の実施形態では、本開示は、表１から選択される化合物を提供する。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【表1-10】

【表1-11】

【表1-12】

又はその薬学的に許容される塩。

【0139】

式Ｉ、Ｉ－Ａ、Ｉ－Ａ－ａ、Ｉ－Ａ－ｂ、及びＩ－Ａ－ｃのうちのいずれかの上述の定義によって別段の定め又は禁止がない限り、上に定義され、本明細書のクラス及びサブクラスに記載されるように、変数Ｌ^１、Ｌ^１’、Ｌ^２、Ｌ^２’、Ｙ^１、Ｙ^１’、Ｙ^２、Ｙ^２’、Ｒ、Ｒ’、Ｌ^３ａ、Ｌ^３ａ’、Ｒ^ａ、Ｒ^ａ’、Ｃｙ^Ａ、Ｒ^ｂ、Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３の実施形態は、単一で、及び組み合わせての両方で、式Ｉ、Ｉ－Ａ、Ｉ－Ａ－ａ、Ｉ－Ａ－ｂ、及びＩ－Ａ－ｃのうちのいずれかの化合物に適用されることが理解されるだろう。

【0140】

一部の実施形態では、提供される化合物は、式Ｉ、Ｉ－Ａ、Ｉ－Ａ－ａ、Ｉ－Ａ－ｂ、及びＩ－Ａ－ｃのうちのいずれかの化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である。

【0141】

一部の実施形態では、提供される化合物は、塩形態（例えば、薬学的に許容される塩形態）で提供され、及び／又は利用される。本明細書で提供される化合物への言及は、別段の指示がない限り、その塩への言及を含むことが理解される。

【0142】

本開示全体を通じて、別段の指示がない限り、式Ｉの化合物への言及は、式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ａ－ａ、Ｉ－Ａ－ｂ、及びＩ－Ａ－ｃのうちのいずれか、並びに本明細書に開示のそのような式の化合物種も含むことが意図されることが理解されるであろう。

【0143】

一部の実施形態では、本開示は、提供される化合物が、例えば、参照化合物又は他の既知の化合物と比較して、ある特定の望ましい特徴を示すという認識を包含する。例えば、一部の実施形態では、提供される化合物は、本明細書に記載の１つ以上の実験において、様々な細胞型へのより強力な送達を示し、かつ／又はそれらを、他の既知の化合物よりも、治療剤若しくは予防剤などのカーゴの送達により好適にする１つ以上の他の特徴を有する。任意の特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本開示は、三価コア（例えば、二級トリオールに由来する）特徴を含む提供される化合物が、同じ三価コア特徴を欠く対応する化合物よりもある特定のより望ましい特徴（例えば、本明細書に記載の１つ以上の実験における様々な細胞型へのより強力な送達）を示すという認識を包含する。

【0144】

Ｂ．提供される化合物の調製
提供される化合物は、一般に、後に続くスキーム及び実施例に記載のプロセスによって作製することができる。

【0145】

Ｃ．イオン化可能な脂質
とりわけ、本開示は、本明細書に記載の１つ以上のイオン化可能な脂質を含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。

【0146】

とりわけ、異なる比のイオン化可能な脂質が、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の所望のトロピズム、安定化、及び薬物送達有効性などの１つ以上の機能的活性に影響を及ぼすことが驚くべきことに見出された。例えば、本開示は、当該技術分野において記載される量とは異なるイオン化可能な脂質の量（それらの両方の内容全体が参照により本明細書に援用される、例えば、米国特許第８，０５８，０６９Ｂ２号を参照するか、又は例えば、米国特許第９，３６４，４３５号を参照されたい）が、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の１つ以上の機能的活性に重要である、及び／又は影響を及ぼすという驚くべき発見を示す。例えば、一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、約５０ｍｏｌパーセント以下であるイオン化可能な脂質を有する組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、本明細書に記載の所望のトロピズム、安定化、及び薬物送達有効性などの脂質ナノ粒子の機能的活性に有用及び／又は重要であることが見出された。

【0147】

一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、頭部基上にアミン含有基を含み得る。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、本明細書に記載の化合物であるか、又はそれを含む。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物中に約３０モルパーセント～約７０モルパーセント存在する。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、約３３ｍｏｌパーセント～約６０モルパーセント存在する。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、約３４ｍｏｌパーセント～約５５モルパーセント存在する。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、約３３ｍｏｌパーセント～約５１モルパーセント存在する。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、約３４．７モルパーセントで存在する。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、約５０モルパーセントで存在する。

【0148】

とりわけ、一部の実施形態では、脂質ナノ粒子組成物は、イオン化可能な脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子調製物は、イオン化可能な脂質と、リン脂質と、コンジュゲート－リンカー脂質と、コレステロールとを含む。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、本明細書に記載の化合物による構造であるか、又はそれを含む。一部の実施形態では、イオン化可能な脂質は、脂質ナノ粒子の構成成分の総モルに基づいて、ＬＮＰ調製物中に約３０モルパーセント～約７０モルパーセント存在する。

【0149】

Ｄ．ステロール
とりわけ、本開示は、本明細書に記載の１つ以上のステロールを含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。

【0150】

一部の実施形態では、ステロールは、コレステロール、又はそのバリアント若しくは誘導体である。一部の実施形態では、コレステロールは、修飾されている。一部の実施形態では、コレステロールは、酸化コレステロールである。一部の実施形態では、コレステロールは、エステル化コレステロールである。未修飾コレステロールは、酵素によって作用して、酸化された側鎖又は環であるバリアントを形成し得る。一部の実施形態では、コレステロールは、ベータ－環構造又は炭化水素尾部構造上で酸化され得る。一部の実施形態では、ステロールは、フィトステロールである。本開示の脂質ナノ粒子での使用が考慮される例示的なステロールとしては、限定されないが、２５－ヒドロキシコレステロール（２５－ＯＨ）、２０α－ヒドロキシコレステロール（２０α－ＯＨ）、２７－ヒドロキシコレステロール、６－ケト－５α－ヒドロキシコレステロール、７－ケトコレステロール、７β－ヒドロキシコレステロール、７α－ヒドロキシコレステロール、７β－２５－ジヒドロキシコレステロール、ベータ－シトステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、カンペステロール、又はそれらの組み合わせが挙げられる。一部の実施形態では、側鎖酸化コレステロールは、他のコレステロールバリアントと比較して、カーゴ送達を増強し得る。一部の実施形態では、コレステロールは、未修飾コレステロールである。

【0151】

一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物は、約２０ｍｏｌパーセント～約５０ｍｏｌパーセントのステロールを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物は、約３８ｍｏｌパーセントのステロールを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物は、約３８．５ｍｏｌパーセントのステロールを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物は、約３３．８ｍｏｌパーセントのコレステロールを含む。

【0152】

Ｅ．コンジュゲート－リンカー脂質
とりわけ、本開示は、本明細書に記載の１つ以上のコンジュゲート－リンカー脂質を含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。

【0153】

一部の実施形態では、コンジュゲート－リンカー脂質は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質又はＰＥＧ修飾脂質であるか、又はそれを含む。一部の実施形態では、ＰＥＧ又はＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ化脂質又はＰＥＧ脂質と代替的に称され得る。インビトロでの脂質ナノ粒子コロイド安定性及びインビボでの循環時間を増強するために、ＰＥＧ化脂質を含めることが使用され得る。一部の実施形態では、ＰＥＧ部分が、血液循環中に徐々に放出されるという点で、ＰＥＧ化は可逆的である。例示的なＰＥＧ脂質としては、限定されないが、Ｃ６－Ｃ２０の長さを有する飽和又は不飽和アルキル鎖にコンジュゲートされたＰＥＧが挙げられる。ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド（ＰＥＧ－ＣＥＲ）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物。例えば、一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＥ、ＰＥＧ－ＤＳＧ、又はＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。

【0154】

一部の実施形態では、コンジュゲート－リンカー脂質は、ポリエチレングリコール脂質を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート－リンカー脂質は、ジミスチルグリセロール（ＤＭＧ）、１，２－ジパルミトイル－ｒａｃ－グリセロール、メトキシポリエチレングリコール（ＤＰＧ－ＰＥＧ）、又は１，２－ジステアロイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＳＧ－ＰＥＧ）を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート－リンカー脂質は、約５００Ｄａ～約５０００Ｄａの平均分子量を有する。一部の実施形態では、コンジュゲート－リンカー脂質は、約２０００Ｄａの平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物は、約０ｍｏｌパーセント～約５ｍｏｌパーセントのコンジュゲート－リンカー脂質を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物は、約１．５ｍｏｌパーセントのコンジュゲート－リンカー脂質を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物は、約３ｍｏｌパーセントのコンジュゲート－リンカー脂質を含む。

【0155】

Ｆ．リン脂質
とりわけ、本開示は、本明細書に記載の１つ以上のリン脂質を含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。一部の実施形態では、本開示は、１つ以上の（ポリ）不飽和脂質を含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。

【0156】

一部の実施形態では、１つ以上のリン脂質は、１つ以上の脂質二重層へと組み立てられ得る。一部の実施形態では、１つ以上のリン脂質は、リン脂質部分を含み得る。一部の実施形態では、１つ以上のリン脂質は、１つ以上の脂肪酸部分を含み得る。一部の実施形態では、１つ以上のリン脂質は、リン脂質部分と、１つ以上の脂肪酸部分とを含み得る。一部の実施形態では、リン脂質部分としては、限定されないが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンが挙げられる。一部の実施形態では、脂肪酸部分としては、限定されないが、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファリノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸が挙げられる。また、分岐、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を有する天然種を含む非天然種も企図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置き換えられたアルケニル基）で官能化又は架橋され得る。適切な反応条件下では、アルキン基は、アジドへの曝露時に銅触媒環化付加を受け得る。そのような反応は、ナノ粒子組成物の脂質二重層を官能化して、膜透過若しくは細胞認識を容易にすること、又はナノ粒子組成物を、標的化又は撮像部分（例えば、染料）などの有用な構成成分にコンジュゲートすることに有用であり得る。

【0157】

例示的なリン脂質としては、限定されないが、１，２－ジステアロイル－ｓｎグリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロホスホコリン（ＤＵＰＣ）、ｌ－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイルｌ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシルｓｎグリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１、２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、１－ステアロイル－２オレオイルホスファチジルコリン（ＳＯＰＣ）、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。一部の実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。一部の実施形態では、リン脂質は、ＤＭＰＣである。

【0158】

一部の実施形態では、リン脂質は、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－（スクシニル）（スクシニル－ＤＰＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ））、又はそれらの組み合わせを含む。

【0159】

Ｇ．直径
とりわけ、本開示は、約３０～約２２０ｎｍの平均流体力学的直径を有する組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、１５０ｎｍ、１５５ｎｍ、１６０ｎｍ、１６５ｎｍ、１７０ｎｍ、１７５ｎｍ、１８０ｎｍ、１８５ｎｍ、１９０ｎｍ、１９５ｎｍ、２００ｎｍ、２０５ｎｍ、２１０ｎｍ、２１５ｎｍ、２２０ｎｍ、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、平均流体力学的直径を有する。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、５０ｎｍ～２００ｎｍの平均流体力学的直径を有する。

【0160】

一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約３０～約２２０ｎｍの平均流体力学的直径を有する。一部の実施形態では、本明細書に脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、１５０ｎｍ、１５５ｎｍ、１６０ｎｍ、１６５ｎｍ、１７０ｎｍ、１７５ｎｍ、１８０ｎｍ、１８５ｎｍ、１９０ｎｍ、１９５ｎｍ、２００ｎｍ、２０５ｎｍ、２１０ｎｍ、２１５ｎｍ、２２０ｎｍ、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、平均流体力学的直径を有する。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、５０ｎｍ～２００ｎｍの平均流体力学的直径を有する。

【0161】

Ｈ．多分散性
とりわけ、本開示は、約０．０１～約０．３の多分散性指数（ＰＤＩ）を有する組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する、任意の範囲であるＰＤＩを有する。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、約０．０５～約０．２、約０．０６～約０．１、又は約０．０７～約０．０９のＰＤＩを有する。

【0162】

一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約０．０１～約０．３のＰＤＩを有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、ＰＤＩを有する。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約０．０５～約０．２、約０．０６～約０．１、又は約０．０７～約０．０９のＰＤＩを有する。

【0163】

Ｉ．カプセル化効率
とりわけ、本開示は、提供される組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料のカプセル化効率が、約８０％～約１００％である、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料のカプセル化効率は、約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５．５％、９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％、９９．５％、１００％、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料のカプセル化効率は、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約９５％～約９８％、又は約９５．５％～約９７．５％である。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料のカプセル化効率は、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。

【0164】

一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子のカプセル化効率は、約８０％～約１００％である。一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子のカプセル化効率は、約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５．５％、９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％、９９．５％、１００％、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子のカプセル化効率は、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約９５％～約９８％、又は約９５．５％～約９７．５％である。一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子のカプセル化効率は、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。

【0165】

Ｊ．ｐＫａ
とりわけ、本開示は、約５～約９のｐＫａを有する組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料について記載する。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、約５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、ｐＫａを有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、ｐＫａを有する。

【0166】

一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約５～約９のｐＫａを有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、ｐＫａを有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される終点を有する任意の範囲である、ｐＫａを有する。

【0167】

ＩＩ．例示的なＬＮＰ調製物
本発明は、脂質ナノ粒子を含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子調製物は、約３０モルパーセント～約７０モルパーセントのイオン化可能な脂質と、約５モルパーセント～約２５モルパーセントのリン脂質と、約２５モルパーセント～約４５モルパーセントのコレステロールと、約０モルパーセント～約５モルパーセントのコンジュゲート－リンカー脂質とを含む。

【0168】

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子調製物は、約４５モルパーセントのイオン化可能な脂質と、約９モルパーセントのリン脂質と、約４４モルパーセントのコレステロールと、約２モルパーセントのコンジュゲート－リンカー脂質とを含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子調製物は、約５０モルパーセントのイオン化可能な脂質と、約９モルパーセントのリン脂質、約３８モルパーセントのコレステロールと、約３モルパーセントのコンジュゲート－リンカー脂質とを含む。

【0169】

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子調製物は、約４０モルパーセント～約６０モルパーセントの任意の提供される化合物のイオン化可能な脂質と、約５モルパーセント～約１５モルパーセントの１－２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンと、約１モルパーセント～約５モルパーセントのＣ１４ＰＥＧ２０００と、約３０モルパーセント～約４７モルパーセントのコレステロールとを、これら４つの成分の総モルに基づいて含む。

【0170】

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物は、約２：１～及び５０：１の質量比の（イオン化可能な脂質、コレステロール、脂質－ＰＥＧ、及びリン脂質）：ｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ調製物は、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１１：１、約１２：１、約１３：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１７：１、約１８：１、約１９：１、約２０：１、約２１：１、約２２：１、約２３：１、約２４：１、約２５：１、約２６：１、約２７：１、約２８：１、約２９：１、約３０：１、約３１：１、約３２：１、約３３：１、約３４：１、約３５：１、約３６：１、約３７：１、約３８：１、約３９：１、約４０：１、約４１：１、約４２：１、約４３：１、約４４：１、約４５：１、約４６：１、約４７：１、約４８：１、約４９：１、約５０：１の質量比の（イオン化可能な脂質、コレステロール、脂質－ＰＥＧ、及びリン脂質）：ｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物は、約１１．７：１～及び１９：１の質量比の（イオン化可能な脂質、コレステロール、脂質－ＰＥＧ、及びリン脂質）：ｍＲＮＡを含む。

【0171】

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子調製物は、約２：１～及び５０：１の質量比の（イオン化可能な脂質、コレステロール、脂質－ＰＥＧ、及びリン脂質）：ｓｉＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ調製物は、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１１：１、約１２：１、約１３：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１７：１、約１８：１、約１９：１、約２０：１、約２１：１、約２２：１、約２３：１、約２４：１、約２５：１、約２６：１、約２７：１、約２８：１、約２９：１、約３０：１、約３１：１、約３２：１、約３３：１、約３４：１、約３５：１、約３６：１、約３７：１、約３８：１、約３９：１、約４０：１、約４１：１、約４２：１、約４３：１、約４４：１、約４５：１、約４６：１、約４７：１、約４８：１、約４９：１、約５０：１の質量比の（イオン化可能な脂質、コレステロール、脂質－ＰＥＧ、及びリン脂質）：ｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物は、約１１．７：１～及び１９：１の質量比の（イオン化可能な脂質、コレステロール、脂質－ＰＥＧ、及びリン脂質）：ｍＲＮＡを含む。

【0172】

一部の実施形態では、ＬＮＰ調製物は、ＲＮＡなどの１つ以上の核酸を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰ調製物中の１つ以上の核酸（例えば、ＲＮＡ）、脂質、及びそれらの量を選択して、特定のＮ／Ｐ比を提供してもよい。Ｎ／Ｐ比は、約１～約３０から選択することができる。Ｎ／Ｐ比は、約２～約１２から選択することができる。一部の実施形態では、Ｎ／Ｐ比は、約０．１～約５０である。一部の実施形態では、Ｎ／Ｐ比は、約２～約８である。一部の実施形態では、Ｎ／Ｐ比は、約２～約１５、約２～約１０、約２～約８、約２～約６、約３～約１５、約３～約１０、約３～約８、約３～約６、約４～約１５、約４～約１０、約４～約８、約４～約６、又は約５～約７である。一部の実施形態では、Ｎ／Ｐ比は、約２、約２．５、約３、約３．５、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約８、約９、又は約１０である。一部の実施形態では、Ｎ／Ｐ比は、約４～約６である。一部の実施形態では、Ｎ／Ｐ比は、約４、約４．５、約５、約５．５、又は約６である。

【0173】

本明細書で使用される場合、「Ｎ／Ｐ比」は、脂質（又は複数の脂質）中の（例えば、生理学的ｐＨ範囲内で）イオン化可能な窒素原子と核酸分子実体（又は複数の核酸分子実体）中の、例えば脂質構成成分及びＲＮＡを含むナノ粒子組成物中の、リン酸基とのモル比である。イオン化可能な窒素原子は、例えば、約ｐＨ１、約ｐＨ２、約ｐＨ３、約ｐＨ４、約ｐＨ４．５、約ｐＨ５、約ｐＨ５．５、約ｐＨ６、約ｐＨ６．５、約ｐＨ７、約ｐＨ７．５、又は約ｐＨ８、又はそれ以上でプロトン化することができる窒素原子を含み得る。生理学的ｐＨ範囲は、例えば、異なる細胞区画（臓器、組織、及び細胞など）及び体液（血液、ＣＳＦ、胃液、乳、胆汁、唾液、涙、及び尿など）のｐＨ範囲を含み得る。ある特定の具体的な実施形態では、生理学的ｐＨ範囲は、哺乳類における血液のｐＨ範囲、例えば、約７．３５～約７．４５を指す。同様に、１つ以上のイオン化可能な窒素原子を有するリン酸電荷中和剤について、Ｎ／Ｐ比は、核酸中のリン酸基に対するリン酸電荷中和剤中のイオン化可能な窒素原子のモル比を指し得る。一部の実施形態では、イオン化可能な窒素原子は、５～１４のｐＨの範囲内でイオン化可能な窒素原子を指す。

【0174】

ＩＩＩ．薬学的組成物
本発明は、薬学的組成物を含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。とりわけ、一部の実施形態では、薬学的組成物は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び脂質ナノ粒子調製物を含む。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び脂質ナノ粒子調製物は、薬学的組成物として全体的又は部分的に製剤化され得る。

【0175】

一部の実施形態では、薬学的組成物は、本明細書に記載の１つ以上のナノ粒子組成物を含み得る。例えば、薬学的組成物は、限定されないが、異なる種類の１つ以上の核酸を含む１つ以上の異なる治療薬及び／若しくは予防薬を含む１つ以上のナノ粒子組成物を含み得るか、又は異なる薬剤をコードし得る。一部の実施形態では、薬学的組成物は、限定されないが、薬学的に許容される担体を含む、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤又は補助成分を含む。

【0176】

薬学的組成物は、対象に投与され得る。一部の実施形態では、薬学的組成物は、本明細書に記載のように投与される。一部のインビボアプローチでは、本明細書に開示のナノ粒子組成物は、本明細書に記載の治療有効量で対象に投与される。

【0177】

一部の実施形態では、当業者は、レシピエントの治療的背景、年齢、及び一般的な健康状態を考慮して、様々な患者の様々な状態の治療のために、本明細書に記載の薬学的組成物を使用して、適切な投与量レベル及び投与レジメンを考案することが可能であろう。例えば、一部の実施形態では、選択された投与量は、所望の治療効果、投与経路、及び所望の治療期間に依存する。一部の実施形態では、一般に、体重ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約５ｍｇの核酸の投与量レベルが、各投与量を哺乳類に投与される。より具体的には、一部の実施形態では、開示のナノ粒子内の核酸の優先用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇである。開示のナノ粒子では、一般に、約０．２ｍｇ～約１００ｍｇの４つの構成成分（イオン化可能な脂質、コレステロール、コンジュゲート－リンカーコンジュゲート、及びリン脂質）／体重のｋｇの投与量レベルが、哺乳類に投与される。より具体的には、一部の実施形態では、開示のナノ粒子の優先用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの４つの構成成分／体重のｋｇである。

【0178】

一部の実施形態では、本明細書に記載の薬学的組成物は、例えば、治療される部位に直接注射することによって、局所的に投与される。典型的には、注射は、全身投与によって達成され得るものよりも高い、組成物の局所的濃度の増加を引き起こす。一部の実施形態では、本明細書に記載の薬学的組成物は、本明細書に記載のマトリックスと組み合わせて、治療される部位からのポリペプチドの受動的拡散を低減することによって、ポリペプチド組成物の局所的濃度の増加を作り出すことを支援することができる。

【0179】

Ａ．非経口投与のための調製物
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子を含有するものを含む、本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、水溶液中で非経口注射によって投与される。一部の実施形態では、調製物はまた、懸濁液又はエマルションの形態であり得る。一般に、有効量の脂質ナノ粒子を含む薬学的組成物が提供され、任意選択的に、薬学的に許容される希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、及び／又は担体を含む。そのような組成物は、任意選択的に、希釈剤、滅菌水、様々な緩衝液含有量の緩衝生理食塩水（例えば、トリス－ＨＣｌ、酢酸、リン酸）、ｐＨ、及びイオン強度；並びに洗剤及び可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート－２０）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリソルベート－８０））、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、及び防腐剤（例えば、Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ、ベンジルアルコール）、及び増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）などの添加剤のための１つ以上を含む。非水性溶媒又はビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えば、オリーブ油及びトウモロコシ油、ゼラチン、並びに注射用有機エステル、例えば、オレイン酸エチルである。製剤は、凍結乾燥され、使用直前に再溶解／再懸濁され得る。製剤は、例えば、細菌保持フィルタに通す濾過によって、滅菌剤を組成物中に組み込むことによって、組成物を照射することによって、又は組成物を加熱することによって滅菌され得る。

【0180】

Ｂ．制御送達ポリマーマトリックス
一部の実施形態では、本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料はまた、制御放出製剤中で投与され得る。一部の実施形態では、制御放出ポリマーデバイスは、ポリマーデバイス（ロッド、シリンダー、フィルム、ディスクなど）又は注射（微粒子など）の移植後に全身に長期放出するために作製され得る。一部の実施形態では、マトリックスは、マイクロスフェアなどの微粒子の形態であり得る。一部の実施形態では、薬剤は、固体ポリマーマトリックス又はマイクロカプセル内に分散される。一部の実施形態では、コアは、記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料のうちのいずれかのポリマーシェルとは異なる材料のものである。一部の実施形態では、ペプチドは、記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料のうちのいずれかの、本質的に液体又は固体であり得るコア中に分散又は懸濁される。本明細書で別段の具体的な定義がない限り、微粒子、マイクロスフェア、及びマイクロカプセルは、互換的に使用される。一部の実施形態では、ポリマーは、ナノメートルから４センチメートルの範囲の薄いスラブ若しくはフィルム、粉砕若しくは他の標準的な技法によって生成される粉末、又は更にはヒドロゲルなどのゲルとしてキャスト成形され得る。

【0181】

一部の実施形態では、非生分解性マトリックスは、記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の送達に使用される。一部の実施形態では、生分解性マトリックスは、記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の送達に使用される。一部の実施形態では、生分解性マトリックスが好ましい。一部の実施形態では、生分解性マトリックスは、天然又は合成ポリマーを含む。一部の実施形態では、分解プロファイル及び放出プロファイルのより良好な特徴評価に起因して、合成ポリマーが好ましい。一部の実施形態では、ポリマーは、放出が望まれる期間に基づいて選択される。一部の実施形態では、線形放出が最も有用であり得るが、他の実施形態では、パルス放出又は「バルク放出」が、より効果的な結果を提供し得る。一部の実施形態では、ポリマーは、（典型的には、最大約９０重量％の水分を吸収する）ヒドロゲルの形態であり得、多価イオン又はポリマーと任意選択的に架橋させてもよい。

【0182】

マトリックスは、溶媒蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出、及び当業者に既知の他の方法によって形成され得る。生体侵食性（Ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）マイクロスフェアは、例えば、それらの開示全体が参照により本明細書に援用される、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，５：１３－２２（１９８７）、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，６：２７５－２８３（１９８７）、及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．，３５：７５５－７７４（１９８８）によって記載の薬物送達のためのマイクロスフェアを作製するために開発された方法のうちのいずれかを使用して調製され得る。

【0183】

一部の実施形態では、記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を、局所放出用に製剤化して、移植又は注射の領域を治療することができ、典型的には、体全体の治療又は全身送達のための投与量よりもはるかに少ない投与量を送達するであろう。これらは、皮下、筋肉、脂肪へと埋め込まれるか若しくは注射してもよいか、又は飲み込まれてもよい。

【0184】

Ｃ．カーゴ
とりわけ、本発明は、本明細書に記載のカーゴを含む組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象への送達のための治療剤又は予防剤を含む。一部の実施形態では、治療剤又は予防剤は、脂質ナノ粒子によってカプセル化される。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上の核酸を充填される。

【0185】

Ｄ．治療剤及び／又は予防剤
ＬＮＰ組成物を介して送達されるカーゴは、生物学的に活性な薬剤であり得る。一部の実施形態では、カーゴは、ｍＲＮＡ、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、核酸、ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤、発現ベクター、テンプレート核酸、抗体（例えば、モノクローナル、キメラ、ヒト化、ナノボディ、及びそれらの断片など）、コレステロール、ホルモン、ペプチド、タンパク質、化学療法剤及び他の種類の抗新生物剤、低分子量薬、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素核酸、アンチセンス核酸、三重鎖形成性オリゴヌクレオチド、アンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡ組成物、キメラＤＮＡ：ＲＮＡ組成物、アロザイム、アプタマー、リボザイム、それらのデコイ及び類似体、プラスミド及び他の種類のベクター、並びに小核酸分子、ＲＮＡｉ剤、短い干渉核酸（ｓｉＮＡ）短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二重鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、並びに（レプリカーゼ酵素活性をコードし、インビボでのそれ自体の複製又は増幅を誘導することが可能な）「自己複製ＲＮＡ」分子、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロック核酸リボヌクレオチド（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ｓｉｓｉＲＮＡ（低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡ）、並びにｉＲＮＡ（非対称干渉ＲＮＡ）などの１つ以上の生物学的に活性な薬剤であるか、又はそれらを含む。生物学的に活性な薬剤の上のリストは、例示にすぎず、限定することを意図するものではない。そのような化合物は、精製又は部分精製され得、天然に存在するか又は合成され得、化学的に修飾され得る。

【0186】

ＬＮＰ組成物を介して送達されるカーゴは、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子などのＲＮＡであり得る。例えば、一部の実施形態では、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤、又はＣａｓヌクレアーゼなどのタンパク質を発現するためのｍＲＮＡが本明細書に記載される。Ｃａｓ９又はＣｐｆｌタンパク質などのクラス２Ｃａｓヌクレアーゼの細胞内での発現を可能にするＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡ、例えば、クラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡを含むＬＮＰ組成物が提供される。更に、カーゴは、１つ以上のガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含有し得る。例えば、修復又は組換えのためのテンプレート核酸もまた、組成物に含まれ得るか、又はテンプレート核酸は、本明細書に記載の方法で使用され得る。一部の実施形態では、カーゴは、任意選択的に、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｃａｓ９をコードするｍＲＮＡと、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ ｇＲＮＡとを含む。一部の実施形態では、カーゴは、任意選択的に、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｃａｓ９をコードするｍＲＮＡと、ｎｍｅ ｇＲＮＡとを含む。

【0187】

「ｍＲＮＡ」は、ポリヌクレオチドを指し、ポリペプチドに翻訳することができる（すなわち、リボソーム及びアミノ－アシル化ｔＲＮＡによって翻訳するための基質として機能することができる）オープンリーディングフレームを含む。ｍＲＮＡは、リボース残基又はその類似体、例えば、２’－メトキシリボース残基を含む、リン酸－糖骨格を含み得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡリン酸糖骨格の糖は、リボース残基、２’－メトキシリボース残基、又はそれらの組み合わせから本質的になる。一般に、ｍＲＮＡは、実質的な量のチミジン残基（例えば、０個の残基又は３０、２０、１０、５、４、３、若しくは２個未満のチミジン残基；又は１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％、若しくは０．１％未満のチミジン含有量）を含有しない。ｍＲＮＡは、そのウリジン位置のいくつか又は全てに修飾ウリジンを含有することができる。

【0188】

Ｅ．ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓカーゴ
一部の実施形態では、開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、ＣａｓヌクレアーゼなどのＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤をコードするｍＲＮＡを含む。特定の実施形態では、開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｃａｓ９などのクラス２ＣａｓヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む。

【0189】

本明細書で使用される場合、「ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤」は、ＲＮＡ及びＤＮＡ結合活性を有するポリペプチド若しくはポリペプチドの複合体、又はそのような複合体のＤＮＡ結合サブユニットを意味し、ＤＮＡ結合活性は、配列特異的であり、ＲＮＡの配列に依存する。例示的なＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤には、Ｃａｓクリバーゼ（ｃｌｅａｖａｓｅ）／ニッカーゼ及びその不活性化形態（ｄＣａｓ ＤＮＡ結合剤」）が含まれる。「Ｃａｓヌクレアーゼ」は、本明細書で使用される場合、Ｃａｓ切断酵素、Ｃａｓニッカーゼ、及びｄＣａｓ ＤＮＡ結合剤を包含する。Ｃａｓ切断酵素／ニッカーゼ及びｄＣａｓ ＤＮＡ結合剤としては、ＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲシステムのＣｓｍ又はＣｍｒ複合体、そのＣａｓｌＯ、Ｃｓｍｌ、又はＣｍｒ２サブユニット、Ｉ型ＣＲＩＳＰＲシステムのカスケード複合体、そのＣａｓ３サブユニット、及びクラス２Ｃａｓヌクレアーゼが挙げられる。本明細書で使用される場合、「クラス２Ｃａｓヌクレアーゼ」は、ＲＮＡガイドＤＮＡ結合活性を有する単鎖ポリペプチドである。クラス２Ｃａｓヌクレアーゼとしては、ＲＮＡガイドＤＮＡ切断酵素又はニッカーゼ活性を更に有するクラス２Ｃａｓ切断酵素／ニッカーゼ（例えば、Ｈ８４０Ａ、Ｄ１０Ａ、又はＮ８６３Ａバリアント）、及び切断酵素／ニッカーゼ活性が不活性化されているクラス２ｄＣａｓ ＤＮＡ結合剤が挙げられる。クラス２Ｃａｓヌクレアーゼとしては、例えば、Ｃａｓ９、Ｃｐｆｌ、Ｃ２ｃｌ、Ｃ２ｃ２、Ｃ２ｃ３、ＨＦ Ｃａｓ９（例えば、Ｎ４９７Ａ、Ｒ６６１Ａ、Ｑ６９５Ａ、Ｑ９２６Ａバリアント）、ＨｙｐａＣａｓ９（例えば、Ｎ６９２Ａ、Ｍ６９４Ａ、Ｑ６９５Ａ、Ｈ６９８Ａバリアント）、ｅＳＰＣａｓ９（１．０）（例えば、Ｋ８１０Ａ、Ｋ１００３Ａ、Ｒ１０６０Ａバリアント）、及びｅＳＰＣａｓ９（１．１）（例えば、Ｋ８４８Ａ、Ｋ１００３Ａ、Ｒ１０６０Ａバリアント）タンパク質及びそれらの修飾物が挙げられる。Ｃｐｆｌ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｚｅｔｓｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１６３：１－１３（２０１５）は、Ｃａｓ９と相同であり、ＲｕｖＣ様ヌクレアーゼドメインを含有する。ＺｅｔｓｃｈｅのＣｐｆｌ配列は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。例えば、Ｚｅｔｓｃｈｅの表Ｓｌ及びＳ３を参照されたい。例えば、それらの内容全体が本明細書に援用される、Ｍａｋａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１３（１１）：７２２－３６（２０１５）、Ｓｈｍａｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ，６０：３８５－３９７（２０１５）を参照されたい。

【0190】

本明細書で使用される場合、「リボ核タンパク質」（ＲＮＰ）又は「ＲＮＰ複合体」は、ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤、例えば、Ｃａｓヌクレアーゼ、例えば、Ｃａｓクリバーゼ、Ｃａｓニッカーゼ、又はｄＣａｓ ＤＮＡ結合剤（例えば、Ｃａｓ９）とともに含むガイドＲＮＡを指す。一部の実施形態において、ガイドＲＮＡは、Ｃａｓ９などのＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤を標的配列へとガイドし、ガイドＲＮＡは、標的配列とハイブリダイズし、薬剤が標的配列に結合し、その場合、この薬剤はクリバーゼ又はニッカーゼであり、結合の後に切断又はニッキングを行うことができる。

【0191】

一部の実施形態では、ＬＮＰ組成物のカーゴは、ヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９などのＣａｓヌクレアーゼ）であり得るＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤を標的ＤＮＡへと誘導するガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む。ｇＲＮＡは、Ｃａｓヌクレアーゼ又はクラス２Ｃａｓヌクレアーゼを標的核酸分子上の標的配列に誘導し得る。一部の実施形態では、ｇＲＮＡは、クラス２ Ｃａｓヌクレアーゼと結合し、それによる切断の特異性を提供する。一部の実施形態では、ｇＲＮＡ及びＣａｓヌクレアーゼは、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９複合体などのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体を形成し得る。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体は、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９複合体であり得る。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体は、Ｃｐｆｌ／ガイドＲＮＡ複合体などのＶ型ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体であり得る。Ｃａｓヌクレアーゼ及び同族のｇＲＮＡは対になってもよい。各クラス２Ｃａｓヌクレアーゼと対合するｇＲＮＡ足場構造は、特定のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムによって変動する。

【0192】

「ガイドＲＮＡ」、「ｇＲＮＡ」、及び単に「ガイド」は、ｃｒＲＮＡ（ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡとしても知られる）、又はｃｒＲＮＡ及びｔｒＲＮＡの組み合わせ（ｔｒａｃｒＲＮＡとしても知られる）のいずれかを指すために、本明細書で互換的に使用される。ガイドＲＮＡは、本明細書に記載されるような修飾ＲＮＡを含み得る。ｃｒＲＮＡ及びｔｒＲＮＡは、一本鎖ＲＮＡ分子（シングルガイドＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ）として会合し得るか、又は２つの別々のＲＮＡ分子（デュアルガイドＲＮＡ、ｄｇＲＮＡ）において会合し得る。「ガイドＲＮＡ」又は「ｇＲＮＡ」は、各種類を指す。ｔｒＲＮＡは、天然に存在する配列、又は天然に存在する配列と比較して修飾若しくは変異を有するｔｒＲＮＡ配列であり得る。

【0193】

本明細書で使用される場合、「ガイド配列」は、標的配列に対して相補的であり、ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤による結合又は修飾（例えば、切断）のための標的配列に対してガイドＲＮＡを指向させるように機能する、ガイドＲＮＡ内の配列を指す。「ガイド配列」は、「標的化配列」又は「スペーサー配列」とも称され得る。ガイド配列は、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（すなわち、Ｓｐｙ Ｃａｓ９）及び関連するＣａｓ９ホモログ／オルソログの場合、２０塩基対の長さであり得る。例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２１、２２、２３、２４、又は２５ヌクレオチド長のような、より短い配列又はより長い配列もまたガイドとして使用できる。一部の実施形態では、標的配列は、例えば、遺伝子内又は染色体上にあり、ガイド配列に相補的である。一部の実施形態では、ガイド配列とその対応する標的配列との間の相補性又は同一性の程度は、約又は少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％であり得る。一部の実施形態では、ガイド配列及び標的領域は、少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の連続したヌクレオチドの領域にわたって１００％相補的又は同一であり得る。他の実施形態では、ガイド配列及び標的領域は、少なくとも１つのミスマッチを含有し得る。例えば、ガイド配列及び標的配列は、１、２、３、又は４つのミスマッチを含有し得、標的配列の全長が、少なくとも１７、１８、１９、２０個以上の塩基対である。一部の実施形態では、ガイド配列及び標的領域は、１～４つのミスマッチを含有し得、ガイド配列が、少なくとも１７、１８、１９、２０個以上のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ガイド配列及び標的領域は、１、２、３、又は４つのミスマッチを含有し得、ガイド配列が、２０個のヌクレオチドを含む。

【0194】

Ｃａｓタンパク質などのＲＮＡガイドＤＮＡ結合タンパク質の標的配列は、Ｃａｓタンパク質の核酸基質が二本鎖核酸であるので、ゲノムＤＮＡの陽性鎖及び陰性鎖の両方（すなわち、所与の配列及び配列の逆の相補物）を含む。したがって、ガイド配列が、「標的配列に対して相補的」であると言われる場合、標的配列の逆相補体に結合するようにガイドＲＮＡを指向させ得ると理解されるべきである。したがって、一部の実施形態において、ガイド配列が、標的配列の逆相補体に結合する場合、ガイド配列は、ガイド配列におけるＵのＴへの置換を除いて、標的配列の特定のヌクレオチド（例えばＰＡＭを含まない標的配列）と同一である。

【0195】

標的化配列の長さは、使用するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム及び構成成分に依存し得る。例えば、異なる細菌種に由来する異なるクラス２ Ｃａｓヌクレアーゼは、変動する最適な標的化配列を有する。したがって、標的化配列は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、又は５０超のヌクレオチド長を含んでもよい。一部の実施形態では、標的化配列長は、天然に存在するヌクレオチド配列のガイド配列よりも、０、１、２、３、４、又は５ヌクレオチド長いか又は短い。

【0196】

ある特定の実施形態では、Ｃａｓヌクレアーゼ及びｇＲＮＡ足場は、同じＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムに由来するであろう。一部の実施形態では、標的化配列は、１８～２４ヌクレオチドを含み得るか、又はそれからなり得る。一部の実施形態では、標的化配列は、１９～２１ヌクレオチドを含み得るか、又はそれからなり得る。一部の実施形態では、標的化配列は、２０ヌクレオチドを含んでもよく、又はそれからなってもよい。

【0197】

一部の実施形態では、ｓｇＲＮＡは、Ｃａｓ９タンパク質によるＲＮＡガイドＤＮＡ切断を媒介することが可能な「Ｃａｓ９ ｓｇＲＮＡ」である。一部の実施形態では、ｓｇＲＮＡは、Ｃｐｆｌタンパク質によるＲＮＡガイドＤＮＡ切断を媒介することが可能な「Ｃｐｆｌ ｓｇＲＮＡ」である。一部の実施形態では、ｇＲＮＡは、Ｃａｓ９タンパク質との活性な複合体を形成し、ＲＮＡガイドＤＮＡ切断を媒介するのに十分なｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ｇＲＮＡは、Ｃｐｆｌタンパク質との活性な複合体を形成し、ＲＮＡガイドＤＮＡ切断を媒介するのに十分なｃｒＲＮＡを含む。Ｚｅｔｓｃｈｅ ２０１５を参照されたい。

【0198】

本発明のある特定の実施形態はまた、本明細書に記載のｇＲＮＡをコードする核酸、例えば、発現カセットを提供する。「ガイドＲＮＡ核酸」は、１つ以上のガイドＲＮＡをコードする核酸であるガイドＲＮＡ（例えば、ｓｇＲＮＡ又はｄｇＲＮＡ）及びガイドＲＮＡ発現カセットを指すために本明細書で使用される。

【0199】

本開示のある特定の実施形態はまた、本明細書に記載のＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用するアデニン塩基エディター（「ＡＢＥ」）の送達を提供する。ＡＢＥ及びそれを使用する方法は、例えば、各々の内容全体が参照により本明細書に援用される、米国特許第１０，１１３，１６３号及び米国特許公開第２０２１／０１３０８０５号に記載されている。

【0200】

本開示のある特定の実施形態はまた、本明細書に記載のＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用するシトシン塩基エディター（「ＣＢＥ」）の送達を提供する。ＡＢＥ及びそれを使用する方法は、例えば、各々の内容全体が参照により本明細書に援用される、米国特許第１０，１６７，４５７号及び同第９，８４０，６９９号に記載されている。

【0201】

「塩基エディター（ＢＥ）」又は「核酸塩基エディター（ＮＢＥ）」という用語は、核酸配列（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）内の塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、又はＵ）に修飾を行うことが可能であるポリペプチドを含む薬剤を指す。一部の実施形態では、塩基エディターは、核酸内の塩基を脱アミノ化することが可能である。一部の実施形態では、塩基エディターは、ＤＮＡ分子内の塩基を脱アミノ化することが可能である。一部の実施形態では、塩基エディターは、ＤＮＡのアデニン（Ａ）を脱アミノ化することが可能である。一部の実施形態では、デアミナーゼは、シトシンデアミナーゼ又はシチジンデアミナーゼである。一部の実施形態では、塩基エディターは、アデノシンデアミナーゼに融合された、核酸プログラム型ＤＮＡ結合タンパク質（ｎａｐＤＮＡｂｐ）を含む融合タンパク質である。一部の実施形態では、塩基エディターは、アデノシンデアミナーゼに融合されたＣａｓ９タンパク質である。一部の実施形態では、塩基エディターは、アデノシンデアミナーゼに融合されたＣａｓ９ニッカーゼ（ｎＣａｓ９）である。一部の実施形態では、塩基エディターは、アデノシンデアミナーゼに融合されたヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）である。一部の実施形態では、塩基エディターは、塩基除去修復の阻害因子（例えば、ＵＧＩドメイン、又はｄＩＳＮドメイン）に融合される。一部の実施形態では、融合タンパク質は、デアミナーゼに融合されたＣａｓ９ニッカーゼと、塩基除去修復の阻害因子（例えば、ＵＧＩドメイン又はｄＩＳＮドメイン）と、を含む。「核酸プログラム型ＤＮＡ結合タンパク質」又は「ｎａｐＤＮＡｂｐ」という用語は、ｎａｐＤＮＡｂｐを特定の核酸配列に誘導するガイド核酸などの核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）と会合するタンパク質を指す。例えば、Ｃａｓ９タンパク質は、ガイドＲＮＡに対する相補性を有する特異的ＤＮＡ配列にＣａｓ９タンパク質を誘導するガイドＲＮＡと会合することができる。一部の実施形態では、ｎａｐＤＮＡｂｐは、クラス２の微生物ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓエフェクターである。一部の実施形態では、ｎａｐＤＮＡｂｐは、Ｃａｓ９ドメイン、例えば、ヌクレアーゼ活性型Ｃａｓ９、Ｃａｓ９ニッカーゼ（ｎＣａｓ９）、又はヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）である。核酸プログラム型ＤＮＡ結合タンパク質の例としては、限定されないが、Ｃａｓ９（例えば、ｄＣａｓ９及びｎＣａｓ９）、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、Ｃ２ｃ１、Ｃ２ｃ２、Ｃ２Ｃ３、及びアルゴノートが挙げられる。しかしながら、核酸プログラム型ＤＮＡ結合タンパク質はまた、ＲＮＡに結合する核酸プログラム型タンパク質を含み得ることが理解されるべきである。例えば、ｎａｐＤＮＡｂｐは、ｎａｐＤＮＡｂｐをＲＮＡに誘導する核酸と会合し得る。他の核酸プログラム型ＤＮＡ結合タンパク質はまた、本開示の範囲内であるが、それらは本開示に具体的に列挙されていない場合がある。

【0202】

Ｆ．修飾ＲＮＡ
ある特定の実施形態では、開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、修飾ＲＮＡを含む修飾核酸を含む。

【0203】

修飾されたヌクレオシド又はヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えば、ｇＲＮＡ又はｍＲＮＡに存在することができる。例えば、１つ以上の修飾されたヌクレオシド又はヌクレオチドを含むｇＲＮＡ又はｍＲＮＡは、「修飾された」ＲＮＡと呼ばれ、標準的なＡ残基、Ｇ残基、Ｃ残基、及びＵ残基の代わりに又はそれらに加えて使用される１つ以上の非天然の及び／又は天然に存在する構成成分又は配置の存在を説明する。一部の実施形態において、修飾されたＲＮＡは、非標準的なヌクレオシド又はヌクレオチドによって合成され、本明細書では「修飾された」と呼ばれる。

【0204】

修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドとしては、（ｉ）ホスホジエステル骨格結合における、非結合リン酸酸素及び／又は結合リン酸酸素のうちの１つ以上のうちの１つ又は両方の改変、例えば、置き換え（例示的な骨格修飾）、（ｉｉ）リボース糖の成分、例えば、リボース糖上の２’ヒドロキシルの改変、例えば、置き換え（例示的な糖修飾）、（ｉｉｉ）リン酸部分の「デホスホ」リンカーによる大量の（ｗｈｏｌｅｓａｌｅ）置き換え（例示的な骨格修飾）、（ｉｖ）非カノニカル核酸塩基を含む、天然に存在する核酸塩基の修飾又は置き換え（例示的な塩基修飾）、（ｖ）リボース－リン酸骨格の置き換え又は修飾（例示的な骨格修飾）、（ｖｉ）オリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端の修飾、例えば、末端リン酸基の除去、修飾、若しくは置き換え、又は部分、キャップ、若しくはリンカーのコンジュゲーション（そのような３’又は５’キャップ修飾は、糖及び／又は骨格修飾を含み得る）、並びに（ｖｉｉ）糖の修飾又は置き換え（例示的な糖修飾）のうちの１つ以上を挙げることができる。ある特定の実施形態は、ｍＲＮＡ、ｇＲＮＡ、又は核酸に対する５’末端修飾を含む。ある特定の実施形態は、ｍＲＮＡ、ｇＲＮＡ、又は核酸に対する３’末端修飾を含む。修飾されたＲＮＡは、５’末端及び３’末端修飾を含有し得る。修飾されたＲＮＡは、非末端位置に１つ以上の修飾された残基を含有し得る。ある特定の実施形態では、ｇＲＮＡは、少なくとも１つの修飾残基を含む。ある特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、少なくとも１つの修飾残基を含む。

【0205】

非修飾核酸は、例えば、細胞内ヌクレアーゼ又は血清中に見られるものによる分解を受けやすい場合がある。例えば、ヌクレアーゼは核酸のホスホジエステル結合を加水分解し得る。したがって、一態様では、本明細書に記載のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｇＲＮＡ）は、例えば、細胞内又は血清に基づくヌクレアーゼに対する安定性を導入するために、１つ以上の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の修飾ｇＲＮＡ分子は、インビボ及びエクスビボの両方で、細胞集団に導入されると、低減した自然免疫応答を示し得る。「自然免疫応答」という用語は、サイトカイン（特にインターフェロン）発現及び放出の誘導及び細胞死を含む、一本鎖核酸を含む外来性核酸に対する細胞応答を含む。

【0206】

したがって、一部の実施形態では、本開示の本開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料中のＲＮＡ又は核酸は、例えば、インビボでのヌクレアーゼ消化に対する耐性の改善を含む、増加又は増強された安定性を核酸に付与する、少なくとも１つの修飾を含む。本明細書で使用される場合、「修飾」及び「修飾された」という用語は、そのような用語が、本明細書で提供される核酸に関連する場合、好ましくは、ＲＮＡ又は核酸の野生型又は天然に存在するバージョンよりも、安定性を増強し、ＲＮＡ又は核酸をより安定にする（例えば、ヌクレアーゼ消化に耐性にする）、少なくとも１つの改変を含む。本明細書で使用される場合、「安定な」及び「安定性」という用語は、そのような用語が、特にＲＮＡに関する本発明の核酸に関連する場合、例えば、そのようなＲＮＡを通常分解することが可能であるヌクレアーゼ（すなわち、エンドヌクレアーゼ又はエキソヌクレアーゼ）による分解に対する、増加又は増強された耐性を指す。増加された安定性としては、例えば、標的細胞又は組織内の内因性酵素（例えば、エンドヌクレアーゼ又はエキソヌクレアーゼ）又は条件による加水分解又は他の破壊に対する低い感受性を挙げることができ、それによって、標的細胞、組織、対象、及び／又は細胞質におけるそのようなＲＮＡの存在を増加又は増強する。本明細書で提供される安定化されたＲＮＡ分子は、それらの天然に存在する非修飾の対応物（例えば、ｍＲＮＡの野生型バージョン）と比較して、より長い半減期を示す。また、「修飾」及び「修飾された」という用語によって企図されるのは、そのような用語が、本明細書に開示のＬＮＰ組成物のｍＲＮＡに関連する場合、例えば、タンパク質翻訳の開始において機能する配列（例えば、Ｋｏｚａｃコンセンサス配列）を含めることを含む、ｍＲＮＡ核酸の翻訳を改善又は増強する改変である。（その内容全体が参照により本明細書に援用される、Ｋｏｚａｋ，Ｍ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １５（２０）：８１２５－４８（１９８７））。

【0207】

一部の実施形態では、本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料のＲＮＡ又は核酸は、それをより安定にするために化学的又は生物学的修飾を受けている。ＲＮＡに対する例示的な修飾としては、塩基の枯渇（例えば、欠失による、又は１つのヌクレオチドを別のヌクレオチドへ置換することによる）、又は塩基の修飾、例えば、塩基の化学的修飾が挙げられる。本明細書で使用される「化学的修飾」という語句は、天然に存在するＲＮＡに見られるものとは異なる化学的性質を導入する修飾、例えば、修飾ヌクレオチドの導入（例えば、ヌクレオチド類似体、又はそのようなＲＮＡ分子に天然に見出されないペンダント基を含めること）などの共有結合修飾を含む。

【0208】

骨格修飾の一部の実施形態では、修飾残基のリン酸基は、１つ以上の酸素を異なる置換基によって置き換えることによって修飾され得る。更に、修飾残基、例えば修飾核酸中に存在する修飾残基は、本明細書において記載されるように、非修飾リン酸部分の修飾リン酸基による大規模な置き換えを含み得る。一部の実施形態では、リン酸骨格の骨格修飾は、帯電していないリンカー又は非対称な電荷分布を有する帯電したリンカーのいずれかをもたらす改変を含み得る。修飾リン酸基の例は、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノリン酸、ボラノリン酸エステル、水素ホスホネート、ホスホロアミデート、アルキル又はアリールホスホネート、及びホスホトリエステルを含む。非修飾リン酸基中のリン酸原子は、アキラルである。しかしながら、非架橋酸素のうちの１つの、上述の原子又は原子群のうちの１つによる置き換えは、リン原子をキラルにすることができる。立体リン原子は、「Ｒ」配置（本明細書においてＲｐ）又は「Ｓ」配置（本明細書においてＳｐ）のいずれかを有し得る。骨格は、架橋酸素（すなわち、リン酸をヌクレオシドに連結する酸素）の、窒素（架橋ホスホロアミデート）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）、及び炭素（架橋メチレンホスホネート）による置き換えによってもまた修飾できる。置き換えは、いずれかの架橋酸素又は両方の架橋酸素において生じ得る。リン酸基は、ある骨格修飾において、非リン含有連結基によって置き換えることができる。一部の実施形態では、帯電したリン酸基は、中性部分によって置き換えられ得る。リン酸基を置き換えることのできる部分の例は、非限定的に、例えば、メチルホスホン酸、ヒドロキシルアミノ、シロキサン、カーボネート、カルボキシメチル、カルバメート、アミド、チオエーテル、エチレンオキシドリンカー、スフホネート、スルホンアミド、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｈｙｄｒａｚｏ）、メチレンジメチルヒドラゾ（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉｍｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｏ）、メチレンオキシメチルイミノ（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｏｘｙｍｅｔｈｙｌｉｍｉｎｏ）を含み得る。

【0209】

Ｇ．ｍＲＮＡ
一部の実施形態では、本開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、本明細書に記載のＣａｓヌクレアーゼ又はクラス２ＣａｓヌクレアーゼなどのＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む、ｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、Ｃａｓヌクレアーゼ又はクラス２ ＣａｓヌクレアーゼなどのＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤をコードするＯＲＦを含むｍＲＮＡが提供されるか、使用されるか、又は投与される。ｍＲＮＡは、５’キャップ、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、及びポリアデニン尾部のうちの１つ以上を含み得る。ｍＲＮＡは、例えば、核局在化配列をコードするために、又はタンパク質をコードする代替コドンを使用するように修飾された、オープンリーディングフレームを含み得る。

【0210】

開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料中のｍＲＮＡは、例えば、通常分泌される分泌ホルモン、酵素、受容体、ポリペプチド、ペプチド、又は目的の他のタンパク質をコードし得る。本発明の一実施形態では、ｍＲＮＡは、例えば、そのようなｍＲＮＡの安定性及び／若しくは半減期を改善するか、又はタンパク質産生を改善するか若しくは促進する、化学的又は生物学的修飾を任意選択的に有し得る。

【0211】

加えて、好適な修飾は、コドンが、同じアミノ酸をコードするが、ｍＲＮＡの野生型バージョンに見られるコドンよりも安定であるような、コドンの１つ以上のヌクレオチドにおける改変を含む。例えば、ＲＮＡの安定性とより多い数のシチ ジン（Ｃ）及び／又はウリジン（Ｕ）残基との間の逆関係が示されており、Ｃ残基及びＵ残基を欠くＲＮＡは、ほとんどのＲＮａｓｅに対して安定であることが見出されている（その開示全体が参照により本明細書に援用される、Ｈｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６９，２１３１－８（１９９４））。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ配列中のＣ残基及び／又はＵ残基の数が、低減される。別の実施形態では、特定のアミノ酸をコードする１つのコドンを、同じか又は関連するアミノ酸をコードする別のコドンに置換することによって、Ｃ残基及び／又はＵ残基の数が、低減される。本発明のｍＲＮＡ核酸への企図される修飾としてはまた、シュードウリジンの組み込みが挙げられる。本発明のｍＲＮＡ核酸へのシュードウリジンの組み込みは、インビボでの免疫原性の減少と同様に、安定性及び翻訳能力を増強させ得る。例えば、その内容全体が参照により本明細書に援用される、Ｋａｒｉｋｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １６（１１）：１８３３－１８４０（２００８）を参照されたい。本発明のｍＲＮＡに対する置換及び修飾は、当業者に容易に知られる方法によって行われ得る。

【0212】

配列中のＣ残基及びＵ残基の数を低減することに対する制約は、未翻訳領域と比較して、ｍＲＮＡのコード領域内でより大きい可能性が高いであろう（すなわち、所望のアミノ酸配列をコードするメッセージの能力を依然として保持しながら、メッセージに存在するＣ残基及びＵ残基の全てを排除することは可能ではない可能性が高いであろう）。しかしながら、遺伝コードの縮重は、同じコード能力を維持しながら、配列に存在するＣ残基及び／又はＵ残基の数を低減する機会を提示する（すなわち、どのアミノ酸がコドンによってコードされるかに応じて、ＲＮＡ配列の修飾のためのいくつかの異なる可能性が可能であり得る）。

【0213】

修飾という用語はまた、例えば、本発明のｍＲＮＡ配列への非ヌクレオチド結合又は修飾ヌクレオチドの組み込み（例えば、機能的分泌タンパク質又は酵素をコードするｍＲＮＡ分子の３’及び５’末端の一方又は両方への修飾）を含む。そのような修飾としては、ｍＲＮＡ配列への塩基の付加（例えば、ポリＡ尾部又はより長いポリＡ尾部を含めること）、３’ＵＴＲ又は５’ＵＴＲの改変、ｍＲＮＡを薬剤（例えば、タンパク質又は相補的核酸分子）と複合体化すること、及びｍＲＮＡ分子の構造を変化させる（例えば、二次構造を形成する）要素を含めることが挙げられる。

【0214】

ポリＡ尾部は、自然のメッセンジャーを安定させると考えられている。したがって、一実施形態では、長いポリＡ尾部がｍＲＮＡ分子に付加され得、したがって、ｍＲＮＡをより安定にすることができる。ポリＡ尾部は、当該技術分野において認識された様々な技法を使用して付加することができる。例えば、長いポリＡ尾部は、ポリＡポリメラーゼを使用して合成又はインビトロで転写ｍＲＮＡに付加することができる（その内容全体が参照により本明細書に援用される、Ｙｏｋｏｅ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９６；１４：（１２５２－１２５６）。転写ベクターはまた、長いポリＡ尾部をコードすることができる。加えて、ポリＡ尾部は、ＰＣＲ産生物から直接転写によって付加することができる。一実施形態では、ポリＡ尾部の長さは、少なくとも約９０、２００、３００、４００、少なくとも５００ヌクレオチドである。一実施形態では、ポリＡ尾の長さは、本発明の修飾ｍＲＮＡ分子の安定性、したがって、タンパク質の転写を制御するように調整される。例えば、ポリＡ尾部の長さは、ｍＲＮＡ分子の半減期に影響を及ぼし得るので、ポリＡ尾部の長さを調整して、ヌクレアーゼに対するｍＲＮＡの耐性のレベルを改変し、それによって、細胞内のタンパク質発現の時間経過を制御することができる。一実施形態では、安定化されたｍＲＮＡ分子は、（例えば、ヌクレアーゼによる）インビボ分解に対して十分に耐性があるので、転移ビヒクルを用いずに標的細胞に送達され得る。

【0215】

一部の実施形態実施形態では、ｍＲＮＡは、野生型ｍＲＮＡに天然では見出されない３’及び／又は５’の非翻訳（ＵＴＲ）配列の組み込みによって修飾することができる。一実施形態では、修飾するために、天然ではｍＲＮＡに隣接し、第２の無関係のタンパク質をコードする３’及び／又は５’の隣接配列が、治療的又は機能的タンパク質をコードするｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列に組み込まれ得る。例えば、センスｍＲＮＡ分子の安定性を増加させるために、安定であるｍＲＮＡ分子（例えば、グロビン、アクチン、ＧＡＰＤＨ、チューブリン、ヒストン、又はクエン酸回路酵素）からの３’又は５’配列が、センスｍＲＮＡ核酸分子の３’及び／又は５’領域に組み込まれ得る。例えば、その内容全体が参照により本明細書に援用される、ＵＳ２００３／００８３２７２を参照されたい。ｍＲＮＡ修飾のより詳細な記載は、その内容全体が参照により本明細書に援用される、ＵＳ２０１７／０２１０６９８Ａ１、５７～６８ページに見出すことができる。

【0216】

Ｈ．テンプレート核酸
本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料、並びに方法は、テンプレート核酸を含み得る。Ｃａｓヌクレアーゼ、例えば、クラス２ＣａｓヌクレアーゼなどのＲＮＡガイドＤＮＡ結合タンパク質の標的部位又はその付近の核酸配列を改変又は挿入するために、テンプレートが使用され得る。一部の実施形態では、本方法は、テンプレートを細胞に導入することを含む。一部の実施形態では、単一のテンプレートが提供されてもよい。一部の実施形態では、２つ以上の標的部位で編集を行うことができるように、２つ以上のテンプレートが提供され得る。例えば、異なるテンプレートが、細胞内の単一の遺伝子、又は細胞内の２つの異なる遺伝子を編集するために提供されてもよい。

【0217】

一部の実施形態では、テンプレートは、相同組換えで使用され得る。一部の実施形態では、相同組換えにより、テンプレート配列又はテンプレート配列の一部が標的核酸分子に組み込まれてもよい。一部の実施形態では、テンプレートは、相同性によって誘導される修復（ｈｏｍｏｌｏｇｙ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｒｅｐａｉｒ）に使用することができ、これは、核酸の切断部位でのＤＮＡ鎖の侵入を伴う。一部の実施形態では、相同性によって誘導される修復は、編集された標的核酸分子にテンプレート配列を含めることをもたらし得る。一部の実施形態では、テンプレートは、非相同末端結合によって媒介される遺伝子編集で使用され得る。一部の実施形態では、テンプレート配列は、切断部位付近の核酸配列と類似性を有しない。一部の実施形態では、テンプレート又はテンプレート配列の一部が組み込まれる。一部の実施形態では、テンプレートは、隣接する反転末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。

【0218】

一部の実施形態では、テンプレート配列は、標的細胞の内因性配列に対応するか、それを含むか、又はそれからなり得る。テンプレート配列は、また、又は代替的に、標的細胞の外因性配列に対応するか、それを含むか、又はそれからなってもよい。本明細書で使用される場合、「内因性配列」という用語は、細胞に固有の配列を指す。「外因性配列」という用語は、細胞に固有ではない配列、又は細胞のゲノム内の固有の位置が異なる位置にある配列を指す。一部の実施形態では、内因性配列は、細胞のゲノム配列であってもよい。

【0219】

一部の実施形態では、内因性配列は、染色体配列であっても染色体外配列であってもよい。一部の実施形態では、内因性配列は、細胞のプラスミド配列であってもよい。

【0220】

一部の実施形態では、テンプレートは、隣接する反転末端反復（ＩＴＲ）配列を含有するｓｓＤＮＡ又はｄｓＤＮＡを含有する。一部の実施形態では、テンプレートは、ベクター、プラスミド、ミニサークル、ナノサークル、又はＰＣＲ産生物として提供される。

【0221】

一部の実施形態では、核酸は、精製される。一部の実施形態では、核酸は、沈殿法（例えば、ＬｉＣｌ沈殿法、アルコール沈殿法、又は例えば、本明細書に記載の同等の方法）を使用して精製される。一部の実施形態では、核酸は、ＨＰＬＣに基づく方法又は（例えば、本明細書に記載の）同等の方法などのクロマトグラフィーに基づく方法を使用して精製される。一部の実施形態では、核酸は、沈殿法（例えば、ＬｉＣｌ沈殿法）及びＨＰＬＣに基づく方法の両方を使用して精製される。一部の実施形態では、核酸は、タンジェントフロー濾過（ＴＦＦ）によって精製される。

【0222】

ＩＶ．ＬＮＰを製造する方法
脂質ナノ粒子を製造する方法は、当該技術分野において既知である。一部の実施形態では、記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、マイクロ流体を使用して製造される。例えば、マイクロ流体を使用して脂質ナノ粒子を形成する例示的な方法は、それらの開示全体が参照により本明細書に援用される、Ｌｅｕｎｇ，Ａ．Ｋ．Ｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ，１１６：１８４４０－１８４５０（２０１２）、Ｃｈｅｎ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１３４：６９４７－６９５１（２０１２）、及びＢｅｌｌｉｖｅａｕ，Ｎ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，１：ｅ３７（２０１２）によって記載されている。

【0223】

簡潔に言えば、本明細書に記載のカーゴなどのカーゴを、第１の緩衝液中で調製する。他の脂質ナノ粒子構成成分（イオン化可能な脂質、コンジュゲート－リンカー脂質、コレステロール、及びリン脂質など）を、第２の緩衝溶液中で調製する。一部の実施形態では、シリンジポンプによって、２つの溶液をマイクロ流体デバイスに導入する。２つの溶液は、マイクロ流体デバイス内で接触して、カーゴを封入する脂質ナノ粒子を形成する。

【0224】

開示の脂質ナノ粒子をスクリーニングする方法は、その全体が参照により本明細書に援用される、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５８１７１号に記載されている。一部の実施形態では、スクリーニング方法は、ビヒクル送達調製物を特徴評価して、所望のトロピズムを有し、機能的カーゴを特定の細胞の細胞質に送達する調製物を同定する。一部の実施形態では、スクリーニング方法は、細胞に送達されると検出され得る機能性を有するレポーターを使用する。例えば、細胞内で機能的レポーターを検出することによって、ＬＮＰ調製物が機能性カーゴを細胞に送達することが示される。とりわけ、一部の実施形態では、各々異なる送達ビヒクル製剤に特異的な化学組成を追跡し続ける化学組成識別子が、各々異なる送達ビヒクル製剤に含まれる。一部の実施形態では、化学組成物識別子は、核酸バーコードである。一部の実施形態では、充填されるＬＮＰ調製物を製剤化するために使用された化学構成成分と核酸バーコードの配列が対合されるので、核酸バーコードが配列決定されると、バーコードを送達した送達ビヒクルの化学組成が同定される。代表的なバーコードとしては、限定されないが、その開示全体が参照により本明細書に援用される、Ｓａｇｏ、２０１８ ＰＮＡＳ、Ｓａｇｏ、ＪＡＣＳ２０１８に記載のバーコードが挙げられる。代表的なレポーターとしては、限定されないが、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ヌクレアーゼタンパク質、ヌクレアーゼｍＲＮＡ、小分子、エピジェネティック修飾子、及び表現型修飾子が挙げられる。ＤＮＡ（ゲノム及びＤＮＡバーコード）は、ＱｕｉｃｋＥｘｔｒａｃｔ（Ｌｕｃｉｇｅｎ）を使用して単離され、その開示全体が参照により本明細書に援用されるＳａｇｏ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２０１８、Ｓａｇｏ ｅｔ ａｌ．ＪＡＣｓ ２０１８、Ｓａｇｏ，Ｌｏｋｕｇａｍａｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１８によって記載されるようにＩｌｌｕｍｉｎａ ＭｉｎｉＳｅｑを使用して配列決定することができる。

【0225】

Ｖ．使用する方法
とりわけ、本開示は、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用する方法について記載する。例えば、一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用して、特定の細胞、組織、又は臓器にカーゴを送達する方法について記載する。別の例として、一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用して、疾患又は障害を治療する方法、並びに／又は進行を遅延及び／若しくは停止する方法について記載する。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、医学での使用のためのものである。

【0226】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、治療剤又は予防剤を必要とする対象における特定の細胞又は臓器にそれを送達する。一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、標的化リガンドの非存在下で、治療剤又は予防剤を必要とする対象における特定の細胞又は臓器にそれを送達する。一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、疾患の治療又は防止を必要とする対象においてそれを行うのに有用である。

【0227】

Ａ．細胞、組織、又は臓器にカーゴを送達する方法
とりわけ、一部の実施形態では、本明細書に開示される組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、特定の種類又はクラスの細胞（例えば、特定の臓器又はその系の細胞）、組織、細胞集団、又は臓器を標的とする。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の１つ以上のカーゴを必要とする対象に、それを送達する方法を提供する。一部の実施形態では、そのような方法は、インビボ及び／又はインビトロ送達を含む。一部の実施形態では、そのような方法は、インビボ送達を含む。一部の実施形態では、そのような方法は、インビトロ送達を含む。一部の実施形態では、本開示は、１つ以上の治療核酸及び／又は予防核酸を必要とする対象に、それを送達する方法を提供する、が本明細書に記載される。

【0228】

一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象における肝臓細胞に特異的に送達され得る、目的の治療薬及び／又は予防薬を含む。例示的な肝臓細胞としては、限定されないが、肝細胞が挙げられる。

【0229】

一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象における肺細胞に特異的に送達され得る、目的の治療薬及び／又は予防薬を含む。

【0230】

一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象における脾臓細胞に特異的に送達され得る、目的の治療薬及び／又は予防薬を含む。例示的な脾臓細胞としては、限定されないが、脾臓単球、脾臓Ｔ細胞、脾臓メモリーＢ細胞、又は脾臓Ｂ細胞が挙げられる。

【0231】

一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象における骨髄細胞に特異的に送達され得る、目的の治療薬及び／又は予防薬を含む。例示的な骨髄細胞としては、限定されないが、骨髄単球、骨髄Ｂ細胞、骨髄メモリーＢ細胞、又は骨髄Ｔ細胞が挙げられる。

【0232】

一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象における免疫細胞に特異的に送達され得る、目的の治療薬及び／又は予防薬を含む。例示的な免疫細胞としては、限定されないが、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、又はＣＤ８＋ＣＤ４＋細胞が挙げられる。

【0233】

一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象における中枢神経系の細胞に特異的に送達され得る、目的の治療薬及び／又は予防薬を含む。

【0234】

一部の実施形態では、組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、対象における造血幹細胞に特異的に送達され得る、目的の治療薬及び／又は予防薬を含む。別段の定めがない限り、「造血幹細胞（ＨＳＣ）」及び「造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）」という用語は、本開示において互換的に使用されることが理解される。

【0235】

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、標的化リガンドの非存在下で、哺乳類肝臓肝細胞、肝臓免疫細胞、脾臓Ｔ細胞、又は肺内皮細胞に送達されるように製剤化され得る。特定のクラス又は種類の細胞への特異的な送達は、より高い割合の脂質ナノ粒子が、標的の種類又はクラスの細胞に送達されることを示す。一部の実施形態では、特異的な送達は、従来のナノ粒子系（例えば、ＭＣ３含有ＬＮＰ）を使用する送達と比較して、２倍、５倍、１０倍、１５倍、又は２０倍超をもたらし得る。

【0236】

Ｂ．ポリペプチドを産生する方法
とりわけ、一部の実施形態では、本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用する方法は、ポリペプチドを産生する方法に使用される。とりわけ、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、標的細胞内でポリペプチドを産生することを必要とする対象においてそれを行うために使用され得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、標的細胞内でポリペプチドを産生することを必要とする対象においてそれを行うために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料は、細胞に送達される１つ以上の核配列を含む。

【0237】

一部の実施形態では、１つ以上の核酸が、細胞内で発現される。一部の実施形態では、核酸配列の発現は、以下のうちの１つ以上を伴う：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの産生（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／又は３’末端形成による）、（３）ポリペプチド若しくはタンパク質へのＲＮＡの翻訳、及び／又は（４）ポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾。

【0238】

Ｃ．遺伝子調節の方法
とりわけ、一部の実施形態では、本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用する方法は、遺伝子調節のために使用される。とりわけ、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、標的細胞における遺伝子発現の低減及び／又は増加を必要とする対象においてそれを行うために使用され得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、標的化リガンドを用いずに、対象における標的細胞に１つ以上の核酸を送達することができる。一部の実施形態では、核酸は、阻害剤核酸である。一部の実施形態では、阻害性核酸は、ｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、本明細書に記載の核酸である。別の例として、一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、標的化リガンドを用いずに、対象における標的細胞にカーゴを送達することができる。一部の実施形態では、カーゴは、本明細書に記載の任意のカーゴである。

【0239】

とりわけ、一部の実施形態では、細胞内の遺伝子を編集することを必要とする対象においてそれを行うための、本明細書に開示の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を使用する方法。

【0240】

一部の実施形態では、遺伝子調節のために標的とされる細胞は、免疫細胞である。免疫細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、又はＴ制御性細胞などのＴ細胞であり得る。遺伝子編集のための他の例示的な免疫細胞としては、限定されないが、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、又はナチュラルキラー細胞が挙げられる。一部の実施形態では、肝細胞における遺伝子調節のために標的とされる細胞。

【0241】

標的とされ得る例示的な遺伝子としては、限定されないが、Ｔ細胞受容体、Ｂ細胞受容体、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＯ３、ＡＫＴｓ、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、キラー免疫グロブリン様受容体、ＧＩＴＲ、ＢＴＬＡ、ＬＦＡ－４、Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂｐ３５、ＣＤ２７Ｌ受容体、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－３、Ｌ－セレクチン、Ｋｉ－２４、ＭＢ１、Ｂ７、Ｂ７０、Ｍ－ＣＳＦＲ、ＴＮＦＲ－ＩＩ、ＩＬ－７Ｒ、ＯＸ－４０、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＴＲＡＩＬ、ＣＤ２５７、ＬＩＧＨＴ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬ－Ｒ４、ＴＷＥＡＫ－Ｒ、ＴＮＦＲ、ＢＣＭＡ、Ｂ７ＤＣ、ＢＴＬＡ、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、ＩＣＯＳ、ＶＥＧＦＲ２、ＮＫＧ２Ｄ、ＪＡＧ１、ＧＩＴＲ、ＣＤ４、ＣＣＲ２、ＧＡＴＡ－３、ＭＴＯＲＣ１、ＭＴＯＲＣ２、ＲＡＰＴＯＲ、ＧＡＴＯＲ、ＦＯＸＰ３、ＮＦＡＴ、ＩＬ２Ｒ、及びＩＬ７が挙げられる。標的とされ得る他の例示的な遺伝子としては、限定されないが、ＯＣＴ、Ｇ６Ｐａｓｅ、Ｍｕｔ、ＰＣＣＡ、ＰＣＣＢ、ＰＣＳＫ９、ＡＬＡＳ１、及びＰＡＨが挙げられる。Ｔ細胞によって認識され、標的化のために企図される例示的な腫瘍関連抗原としては、限定されないが、ＭＡＧＥ１、ＭＡＧＥ３、ＭＡＧＥ６、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ１／Ｍｅｌａｎ Ａ、ＭＣ１Ｒ、ＧＰ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＰＳＡ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ－Ｂ、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、ＷＴ１、ＲＡＳ、ＣＤＫ－４、ＭＵＭ－１、ＫＲＡＳ、ＭＳＬＮ、及びβ－カテニンが挙げられる。

【0242】

Ｄ．治療される対象
一部の実施形態では、治療される対象は、がん、自己免疫疾患、感染疾患、臓器移植、臓器不全、タンパク質欠乏症、又はそれらの組み合わせを経験している哺乳類である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ある特定のタンパク質を肝細胞に翻訳させることを引き起こし得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを肝細胞に送達するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを脾臓Ｔ細胞に送達するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを脾臓Ｂ細胞に送達するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを脾臓単球に送達するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを骨髄細胞に送達するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを肺細胞に送達するために使用され得る。

【0243】

本発明が操作可能なままである限り、ある特定の動作を行うためのステップの順序又は順序は重要ではないことが理解されるべきである。更に、２つ以上のステップ又は動作は、同時に実行され得る。

【0244】

本発明は、特定の好ましい実施形態を参照して具体的に示され、記載されているが、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、形態及び詳細における様々な変更が、本発明の趣旨及び範囲の中で行われ得ることが、当業者に理解されるべきである。

【0245】

例示的な実施形態
以下の付番された実施形態は、非限定的であるが、本開示のある特定の態様の例示である。
１．以下の式の化合物：

【化21】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｌ^１及びＬ^１’の各々が、独立して、Ｃ_１－６アルキレンであり、
Ｌ^２及びＬ^２’の各々が、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられ、
Ｙ^１及びＹ^１’の各々が、独立して、－Ｃ（Ｏ）－、又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、
Ｙ^２及びＹ^２’の各々が、独立して、存在しないか、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、又は－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－であり、
Ｒ及びＲ’の各々が、独立して、水素、

【化22】

であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基であり、
Ｌ^３ａ及びＬ^３ａ’の各々が、独立して、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－又は－ＮＲ^ｂ－で置き換えられ、
Ｒ^ａ及びＲ^ａ’の各々が、独立して、水素であるか、又はＣ_６－２０脂肪族、３～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～４つのヘテロ原子を有する７～１２員の飽和若しくは部分的に不飽和の架橋したビシクリル、１－アダマンチル、２－アダマンチル、ステロリル、及びフェニルから選択される、任意選択的に置換された基であり、
Ｘ^１が、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－、又は－ＮＲ^ｂ－であり、
Ｘ^２が、存在しないか、又は任意選択的に置換された二価の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分岐したＣ_１－_１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－Ｏ－、－ＮＲ^ｂ－、又は－Ｃｙ^Ａ－で置き換えられ、
Ｃｙ^Ａが、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のカルボシクリレン、フェニレン、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリレン、並びに窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリーレンから選択される、任意選択的に置換された環であり、
Ｘ^３が、水素であるか、又は３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のカルボシクリル、フェニル、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する３～７員の飽和若しくは部分的に不飽和のヘテロシクリル、並びに窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する５～６員のヘテロアリールから選択される、任意選択的に置換された基であり、
各Ｒ^ｂが、独立して、水素、又は任意選択的に置換されたＣ_１－_６脂肪族基である、化合物、若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩。
２．化合物が、式Ｉ－Ａの化合物：

【化23】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態１に記載の化合物。
３．化合物が、式Ｉ－Ａ－ａの化合物：

【化24】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態１又は２に記載の化合物。
４．前記化合物が、式Ｉ－Ａ－ｂの化合物：

【化25】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の化合物。
５．化合物が、式Ｉ－Ａ－ｃの化合物：

【化26】

若しくはそのＮ－オキシド、又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の化合物。
６．化合物が、式Ｉ、Ｉ－Ａ、Ｉ－Ａ－ａ、Ｉ－Ａ－ｂ、及びＩ－Ａ－ｃのうちのいずれかの化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の化合物。
７．Ｌ^１’が、Ｃ_１－３アルキレンである、実施形態１～６のいずれか１つに記載の化合物。
８．Ｌ^１が、－（ＣＨ_２）_２－又は－（ＣＨ_２）_３－である、実施形態１～７のいずれか１つに記載の化合物。
９．Ｌ^１’が、Ｃ_１－３アルキレンである、実施形態１～８のいずれか１つに記載の化合物。
１０．Ｌ^１’が、－（ＣＨ_２）_２－又は－（ＣＨ_２）_３－である、実施形態１～９のいずれか１つに記載の化合物。
１１．Ｌ^２が、存在しない、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の化合物。
１２．Ｌ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の化合物。
１３．Ｌ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－５炭化水素鎖である、実施形態１～１０及び１２のいずれか１つに記載の化合物。
１４．Ｌ^２が、－（ＣＨ_２）_２－である、実施形態１～１０、１２、及び１３のいずれか１つに記載の化合物。
１５．Ｌ^２’が、存在しない、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の化合物。
１６．Ｌ^２’が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１０炭化水素鎖である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の化合物。
１７．Ｌ^２’が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－５炭化水素鎖である、実施形態１～１４及び１６のいずれか１つに記載の化合物。
１８．Ｌ^２’が、－（ＣＨ_２）_２－である、実施形態１～１４、１６、及び１７のいずれか１つに記載の化合物。
１９．Ｙ^１が、－Ｃ（Ｏ）－である、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の化合物。
２０．Ｙ^１’が、－Ｃ（Ｏ）－である、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の化合物。
２１．Ｙ^２が、存在しない、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の化合物。
２２．Ｙ^２が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の化合物。
２３．Ｙ^２’が、存在しない、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の化合物。
２４．Ｙ^２’が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の化合物。
２５．Ｒが、

【化27】

である、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の化合物。
２６．Ｒが、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の化合物。
２７．Ｒが、任意選択的に置換されたＣ_９－２０脂肪族である、実施形態１～２４及び２６のいずれか１つに記載の化合物。
２８．Ｒ’が、

【化28】

である、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の化合物。
２９．Ｒ’が、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の化合物。
３０．Ｒ’が、任意選択的に置換されたＣ_９－２０脂肪族である、実施形態１～２７及び２９のいずれか１つに記載の化合物。
３１．－Ｌ^２－Ｙ^２－Ｒ及び－Ｌ^２’－Ｙ^２’－Ｒ’の各々が、独立して、

【化29】

である、先行実施形態のいずれか１つに記載の化合物。
３２．各Ｌ^３ａが、存在しない、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の化合物。
３３．各Ｌ^３ａ’が、存在しない、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の化合物。
３４．各Ｒ^ａが、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の化合物。
３５．各Ｒ^ａが、任意選択的に置換されたＣ_６－１２脂肪族である、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の化合物。
３６．各Ｒ^ａ’が、独立して、任意選択的に置換されたＣ_６－２０脂肪族である、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の化合物。
３７．各Ｒ^ａ’が、任意選択的に置換されたＣ_６－１２脂肪族である、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の化合物。
３８．－Ｌ^３ａ－Ｒ^ａ及び－Ｌ^３ａ’－Ｒ^ａ’の各々が、独立して、

【化30】

である、実施形態１～３７のいずれか１つに記載の化合物。
３９．Ｘ^１が、存在しない、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の化合物。
４０．Ｘ^１が、－Ｏ－である、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の化合物。
４１．Ｘ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖であり、１～３つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の化合物。
４２．Ｘ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖であり、１つのメチレン単位が、任意選択的に、かつ独立して、－ＮＲ^ｂ－で置き換えられる、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の化合物。
４３．Ｘ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－１２炭化水素鎖である、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の化合物。
４４．Ｘ^２が、任意選択的に置換された二価の飽和又は不飽和の直鎖又は分岐したＣ_１－６炭化水素鎖である、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の化合物。
４５．Ｘ^３が、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１～３つのヘテロ原子を有する、３～７員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである、実施形態１～４４のいずれか１つに記載の化合物。
４６．Ｘ^３が、１～２つの窒素を有する、５～６員の飽和又は部分的に不飽和のヘテロシクリルである、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の化合物。
４７．－Ｘ^２－Ｘ^３が、

【化31】

である、先行実施形態のいずれか１つに記載の化合物。
４８．各Ｒ^ｂが、独立して、任意選択的に置換されたＣ_１－６脂肪族である、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の化合物。
４９．各Ｒ^ｂが、独立して、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の化合物。
５０．化合物が、表１から選択されるか、又はその薬学的に許容される塩である、実施形態１に記載の化合物。
５１．実施形態１～５０のいずれか１つに記載のイオン化可能な脂質を含む、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物。
５２．実施形態１～５０のいずれか１つに記載のイオン化可能な脂質と、
リン脂質と、
ステロールと、
コンジュゲート－リンカー脂質（例えば、ポリエチレングリコール脂質）と、を含む、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）調製物。
５３．治療剤及び／又は予防剤を更に含む、実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物。
５４．治療剤及び／又は予防剤が、１つ以上の核酸であるか、又はそれらを含む、実施形態５３に記載のＬＮＰ調製物。
５５．１つ以上の核酸が、ＲＮＡであるか、又はそれを含む、実施形態５４に記載のＬＮＰ調製物。
５６．１つ以上の核酸が、ＤＮＡであるか、又はそれを含む、実施形態５４に記載のＬＮＰ調製物。
５７．ＬＮＰ調製物が、治療剤及び／又は予防剤を標的細胞に送達するために製剤化される、実施形態５３～５６のいずれか１つに記載のＬＮＰ調製物。
５８．標的細胞が、脾臓細胞（例えば、脾臓Ｂ細胞、脾臓Ｔ細胞、脾臓単球）、肝臓細胞（例えば、肝細胞）、骨髄細胞（例えば、骨髄単球）、免疫細胞、腎臓細胞、筋肉細胞、心臓細胞、若しくは中枢神経系における細胞であるか、又はそれらを含む、実施形態５７に記載のＬＮＰ調製物。
５９．標的細胞が、造血幹細胞（ＨＳＣ）であるか、又はそれを含む、実施形態５８に記載のＬＮＰ調製物。
６０．実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
６１．治療剤及び／又は予防剤の投与を必要とする対象にそれらを投与するための方法であって、本方法が、実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物又は実施形態６０に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法。
６２．疾患又は障害の治療を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、本方法が、実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物又は実施形態６０に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含み、治療剤及び／又は予防剤が、疾患の治療に有効である、方法。
６３．疾患又は障害の進行の遅延及び／又は停止を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、本方法が、実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物又は実施形態６０に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含み、治療剤及び／又は予防剤が、疾患の治療に有効である、方法。
６４．対象に由来する哺乳類細胞に治療剤及び／又は予防剤を送達する方法であって、本方法が、実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物又は実施形態６０に記載の薬学的組成物を投与されている対象の細胞を接触させることを含む、方法。
６５．哺乳類細胞において目的のポリペプチドを産生する方法であって、本方法が、細胞を実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物又は実施形態６０に記載の薬学的組成物と接触させることを含み、治療剤及び／又は予防剤が、ｍＲＮＡであるか、又はそれを含み、ｍＲＮＡが、目的のポリペプチドをコードし、それによって、ｍＲＮＡが、細胞中で翻訳されて、目的のポリペプチドを産生することが可能である、方法。
６６．哺乳類細胞において目的のポリペプチドの産生を阻害する方法であって、本方法が、細胞を実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物又は実施形態６０に記載の薬学的組成物と接触させることを含み、治療剤及び／又は予防剤が、ＲＮＡであるか、又はそれを含み、それによって、ＲＮＡが、目的のポリペプチドの産生を阻害することが可能である、方法。
６７．治療剤及び／又は予防剤を哺乳類臓器に特異的に送達する方法であって、本方法が、哺乳類臓器を実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物又は実施形態６０に記載の薬学的組成物と接触させることを含み、それによって、治療剤及び／又は予防剤が、臓器に送達される、方法。
６８．対象に、実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物、又は実施形態６０に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む、実施形態６７に記載の方法。
６９．実施形態５１に記載のＬＮＰ調製物、又は実施形態６０に記載の薬学的組成物を投与することによって、ワクチン接種する方法。
７０．対象において獲得免疫応答を誘導する方法であって、少なくとも１つのＲＮＡを含む有効量の組成物を対象に投与することを含み、組成物が、実施形態１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、ＬＮＰ調製物を含む、方法。

【実施例】

【0246】

例示
本開示は、本明細書に記載の組成物、調製物、製剤、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を例示する。本開示はまた、本明細書に記載の組成物、調製物、製剤、製剤、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を調製、特徴評価、及び検証する方法を例示する。

【0247】

実施例１：材料及び方法
本実施例は、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を調製、特徴評価、及び検証する、例示的な材料及び方法を提供する。

【0248】

ＬＮＰ調製物
とりわけ、本実施例は、例示的なＬＮＰ調製物を提供する。

【0249】

脂質ナノ粒子構成成分を、定められた脂質構成成分モル比で１００％エタノール中に溶解させる。１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ４．０に核酸（ＮＡ）カーゴを溶解させ、およそ０．２２ｍｇ／ｍＬのＮＡカーゴの濃度が生じる。一部の実施形態では、ＮＡカーゴは、１：１０～１０：１の機能的ＮＡ対バーコードの質量比で混合した、機能的ＮＡ及びレポーターＤＮＡバーコードの両方を含む。本明細書に記載されるように、ＮＡは、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス、発現ＤＮＡ、又はｍＲＮＡであり得る。

【0250】

１１．７の総脂質対ＮＡの質量比でＬＮＰを調製する。製造業者のプロトコルに従って、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｓｐａｒｋ又はＢｅｎｃｈｔｏｐ ｓｅｒｉｅｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを使用して、脂質及びＮＡ溶液のマイクロ流体混合によって、ＬＮＰを形成する。異なる流量を使用する混合中に、およそ２：１又は３：１の水性溶媒対有機溶媒の比を維持する。混合後、ＬＮＰを収集し、ＰＢＳ（およそ１：１ｖ／ｖ）に希釈する。ＰＢＳ中４℃で４～２４時間の間、２０ｋＤａフィルタに対する透析を使用して、更なる緩衝液交換を実行する。この最初の透析の後、動的光散乱（ＤＬＳ）を介して各個々のＬＮＰ調製物を特徴評価して、サイズ（例えば、直径）及び多分散性を測定する。加えて、ＬＮＰの亜集団のｐＫａを、２－（ｐ－トルイジノ）－６－ナフタレンスルホン酸（ＴＮＳ）アッセイを介して測定する。比直径及び多分散性範囲内にあるＬＮＰをプールし、１００ｋＤａ透析カセットに対して４℃で１～４時間の間、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に対して更に透析する。第２の透析の後、０．２２μＭフィルタを使用してＬＮＰを滅菌濾過し、更なる使用のために４℃で保管する。

【0251】

ＬＮＰ特徴評価
ＤＬＳ－高スループット動的光散乱（ＤＬＳ）（ＤｙｎａＰｒｏ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ ＩＩ、Ｗｙａｔｔ）を使用して、ＬＮＰ流体力学的直径及び多分散性指数（ＰＤＩ）を測定する。適切な濃度まで１倍のＰＢＳにＬＮＰを希釈し、分析する。

【0252】

濃度及びカプセル化効率
製造業者の説明書に従って、Ｑｕｂｉｔ ｍｉｃｒｏＲＮＡキット（ｓｉＲＮＡ用）又はＨＳ ＲＮＡキット（ｍＲＮＡ用）によって、ＮＡの濃度を決定する。未溶解のＬＮＰ及び溶解したＬＮＰ中の核酸濃度を測定することによって、カプセル化効率を決定する。

【0253】

ｐＫａ
１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０ｍＭのＭＥＳ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、及び１４０ｎＭの塩化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）のストック溶液を調製し、塩化水素及び水酸化ナトリウムを使用して約ｐＨ４～１０の範囲までｐＨを調整する。各ｐＨ値で４回の繰り返しを使用して、９６ウェルプレートに、１４０μＬのｐＨ調整緩衝液を添加し、続いて５μＬの２－（ｐ－トルイジノ）－６－ナフタレンスルホン酸（６０μｇ／ｍＬ）を添加する。各ウェルに５μＬのＬＮＰを添加する。穏やかな振盪下での５分のインキュベーションの後、３２５ｎｍの励起波長及び４３５ｎｍの発光波長を使用して、蛍光を測定する（ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ４ Ｈｙｂｒｉｄ）。

【0254】

ＬＮＰ投与
本実施例によって記載される研究のために、およそ８～１２週齢の雄及び雌マウスを使用する。各マウスを一時的に拘束し、プールしたＬＮＰを、実験ごとに最大５匹の動物に尾部静脈注射を介して静脈（ＩＶ）投与した。また、年齢が一致するマウスを使用して、実験ごとに最大３匹の動物に尾部静脈注射を介してビヒクル（１倍のＰＢＳ）を投与する。投与後７２時間で、肝臓、脾臓、骨髄、腎臓、肺、筋肉、及び血液を含む組織を分析のために収集する。

【0255】

フロー
肝臓、腎臓、肺、及び筋肉組織を、機械によって、次いで、プロテイナーゼの混合物を使用して酵素によって消化させ、次いで、７０ｕＭフィルタに通して、単一細胞懸濁液を生成する。脾臓組織を機械によって消化させて、単一細胞懸濁液を生成する。全ての組織を（アンモニウム－塩化物－カリウム）ＡＣＫ緩衝液で処理して赤血球を溶解させ、次いで、フローサイトメトリー及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）のために蛍光標識抗体で染色する。市販の抗体を使用する。ＢＤ ＦＡＣＳＭｅｌｏｄｙ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、フローサイトメトリーを介して試料を取得し、選別前にゲートを生成する。一般に、ゲーティング構造は、サイズ→単一細胞→生細胞→目的の細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋と定義し、単球は、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋と定義し、Ｂ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋と定義する。内皮細胞は、ＣＤ３１＋、単球及びＫｕｐｆｆｅｒ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋、肝細胞は、ＣＤ３１－／ＣＤ４５－と定義する。ｓｉＲＮＡ研究では、標的遺伝子の下方制御をゲート化する。ｍＲＮＡ研究では、標的遺伝子の上方制御をゲート化する。ビヒクルを投与したマウスからの組織を使用して、選別のためのゲートを設定する。正しい表現型を有する各細胞サブセットの最大１００万個の細胞をＰＢＳ中で選別する。選別の後、遠心分離を介して細胞をペレット化し、製造業者のプロトコルに従って、Ｑｕｉｃｋ Ｅｘｔｒａｃｔ ＤＮＡ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｌｕｃｉｇｅｎ）を使用してＤＮＡを抽出する。ＤＮＡ抽出に続いて、ＤＮＡを－２０℃で保管する。

【0256】

バーコード配列決定
ＱｕｉｃｋＥｘｔｒａｃｔ（Ｌｕｃｉｇｅｎ）を使用してＤＮＡ（ゲノム及びＤＮＡバーコード）を単離し、本明細書に記載されるようにＩｌｌｕｍｉｎａ ＭｉｎｉＳｅｑを使用して配列決定し、ＦＡＣＳ単離された試料中のＤＮＡバーコード数の頻度を、注射された投薬量における頻度に対して正規化する。これらのデータは、「正規化投薬量倍数（Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ Ｆｏｌｄ Ａｂｏｖｅ Ｉｎｐｕｔ）」としてプロットする（データは示さず）。

【0257】

確認
提供されたＬＮＰの構造的及び機能的特徴は、本明細書に記載のプロトコルに基づいて確認する。

【0258】

ＬＮＰ調製物
脂質ナノ粒子構成成分を、定められた脂質構成成分モル比で１００％エタノール中に溶解させる。１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ４．０に核酸（ＮＡ）カーゴを溶解させ、およそ０．２２ｍｇ／ｍＬのＮＡカーゴの濃度が生じる。一部の実施形態では、ＮＡカーゴは、１：１０～１０：１の機能的ＮＡ対バーコードの質量比で混合した、機能的ＮＡ及びレポーターＤＮＡバーコードの両方を含む。１１．７の総脂質対ＮＡの質量比でＬＮＰを製剤化する。製造業者のプロトコルに従って、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｓｐａｒｋ又はＢｅｎｃｈｔｏｐ ｓｅｒｉｅｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを使用して、脂質及びＮＡ溶液のマイクロ流体混合によって、ＬＮＰを形成する。異なる流量を使用する混合中に、２：１又は３：１の水性溶媒対有機溶媒の比を維持する。混合の後、ＬＮＰを収集し、ＰＢＳ（およそ１：１ｖ／ｖ）に希釈し、ＰＢＳ中４℃で８～２４時間の間、２０ｋＤａフィルタに対する透析を使用して、更なる緩衝液交換を実行する。この最初の透析の後、ＤＬＳを介して各個々のＬＮＰ製剤を特徴評価して、サイズ及び多分散性を測定し、ＴＮＳアッセイを介してＬＮＰの亜集団のｐＫａを測定する。透析の後、０．２２ミクロン滅菌フィルタを使用してＬＮＰを滅菌濾過し、更なる使用のために４℃で保管する。

【0259】

ＬＮＰ特徴評価
ＤＬＳ
高スループット動的光散乱（ＤＬＳ）（ＤｙｎａＰｒｏ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ ＩＩ、Ｗｙａｔｔ）を使用して、ＬＮＰ流体力学的直径及び多分散性指数（ＰＤＩ）を測定する。適切な濃度まで１倍のＰＢＳにＬＮＰを希釈し、分析する。

【0260】

濃度及びカプセル化効率
製造業者の説明書に従って、Ｑｕｂｉｔ ｍｉｃｒｏＲＮＡキット（ｓｉＲＮＡ用）又はＨＳ ＲＮＡキット（ｍＲＮＡ用）によって、ＮＡの濃度を決定する。未溶解のＬＮＰ及び溶解したＬＮＰを測定することによって、カプセル化効率を決定する。

【0261】

ｐＫａ
１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０ｍＭのＭＥＳ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、及び１４０ｎＭの塩化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）のストック溶液を調製し、塩化水素及び水酸化ナトリウムを使用して約ｐＨ４～１０の範囲までｐＨを調整する。各ｐＨで４回の繰り返しを使用して、９６ウェルプレートに、１４０μＬのｐＨ調整緩衝液を添加し、続いて５μＬの２－（ｐ－トルイジノ）－６－ナフタレンスルホン酸（６０μｇ／ｍＬ）を添加する。各ウェルに５μＬのＬＮＰを添加する。穏やかな振盪下での５分のインキュベーションの後、３２５ｎｍの励起波長及び４３５ｎｍの発光波長を使用して、蛍光を測定する（ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ４ Ｈｙｂｒｉｄ）。

【0262】

ＬＮＰ投与
本実施例によって記載される研究のために、およそ８～１２週齢の雄及び雌マウスを使用する。各マウスを一時的に拘束し、プールしたＬＮＰを、実験ごとに最大５匹の動物に尾部静脈注射を介してＩＶ投与する。また、年齢が一致するマウスを使用して、実験ごとに最大３匹の動物に尾部静脈注射を介してビヒクル（１倍のＰＢＳ）を投与する。また、脳室心房（ＩＣＶ）、大槽内マンガ（ＩＣＭ）、髄腔内（ＩＴ）、筋肉内（ＩＭ）、噴霧、鼻腔内（ＩＮ）、皮下（ＳＣ）、関節内、及び皮内（ＩＤ）を含む追加の投与経路を行ってもよい。投与後７２時間で、肝臓、脾臓、骨髄、及び血液を含む組織を分析のために収集する。

【0263】

フロー
肝臓、腎臓、肺、及び筋肉（例えば、骨格筋及び心筋）組織を、機械によって、次いで、プロテイナーゼの混合物を使用して酵素によって消化させ、次いで、７０ｕＭフィルタに通して、単一細胞懸濁液を生成する。脾臓組織を機械によって消化させて、単一細胞懸濁液を生成する。組織をＡＣＫ緩衝液で処理して赤血球を溶解させ、次いで、フローサイトメトリー及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）のために蛍光標識抗体で染色する。本実施例では、市販の抗体を使用する。ＢＤ ＦＡＣＳＭｅｌｏｄｙ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、フローサイトメトリーを介して試料を取得し、選別前にゲートを生成する。一般に、ゲーティング構造は、サイズ→単一細胞→生細胞→目的の細胞であった。Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋と定義し、単球は、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋と定義し、Ｂ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋と定義する。それぞれ、内皮細胞は、ＣＤ３１＋、単球及びＫｕｐｆｆｅｒ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋と定義し、肝臓及び筋肉における肝細胞及び筋細胞は、ＣＤ３１－／ＣＤ４５－と定義する。ビヒクルを投与したマウスからの組織を使用して、選別のためのゲートを設定する。

【0264】

ｈＥＰＯ発現
ヒトＥＰＯ（ｈＥＰＯ）タンパク質発現のために、マウスを一時的に拘束し、投与後６時間で（尾部静脈を介して）採血する。血液をヘパリンチューブに収集し、血漿へと処理し、使用準備が整うまで－８０℃で保管する。製造業者の説明書に従ってＲ＆ＤシステムＥＬＩＳＡキット（ＤｕｏＳｅｔ；ＤＹ２８６－０５）を使用して、血漿の適切な希釈物を使用してｈＥＰＯタンパク質を測定する。

【0265】

耐容性
ＡＬＴ／ＡＳＴ定量化
ラットアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）及びアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の定量化については、ラットを一時的に拘束し、投与後２、４、６、２４、４８、及び７２時間で採血する。血液をヘパリンチューブに収集し、血漿へと処理し、使用準備が整うまで－８０℃で保管する。製造業者の説明書に従って、ＡＳＴは、ＡＳＴ／ＧＯＴ試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＴＲ７０１２１）を使用して定量し、ＡＬＴは、ＡＬＴ／ＧＰＴ試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＴＲ７１１２１）を使用して定量化する。

【0266】

ラットＭＣＰ－１ ＥＬＩＳＡ
ラット単球化学誘引タンパク質－１（ＭＣＰ－１）タンパク質発現については、ラットを一時的に拘束し、投与後２、４、６、２４、４８、及び７２時間で採血する。血液をヘパリンチューブに収集し、血漿へと処理し、使用準備が整うまで－８０℃で保管する。製造業者の説明書に従ってＲ＆ＤシステムＥＬＩＳＡキット（ＤｕｏＳｅｔ；ＤＹ３１４４－０５）を使用して、血漿の適切な希釈物を使用してＭＣＰ－１タンパク質を測定する。

【0267】

スクリーニング実験
本明細書に記載の複数のＬＮＰ（例えば、３００超のＬＮＰ調製物）を、単一のスクリーニング実験において同時に試験することができる。一部の実施形態では、３００超のＬＮＰが、単一のマウスでスクリーニングされる。一部の実施形態では、８５０超のＬＮＰが、単一のマウスでスクリーニングされる（図１及び図２を参照されたい）。スクリーニング実験を使用して、本明細書に記載されるように、細胞及び組織へのｍＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ送達を測定する。

【0268】

ｍＲＮＡ送達のために、Ｃｒｅ ｍＲＮＡ及び本明細書に記載のバーコードを担持するように各ＬＮＰ調製物を製剤化する。本明細書に記載の方法（図１を参照されたい）に従って、各ＬＮＰ調製物をＬＳＬ－ｔｄＴｏｍマウス（Ａｉ１４）に投与する（また図１を参照されたい）。図１を参照すると、１つ以上の構成成分、バーコード配列、及びＣｒｅ ｍＲＮＡを各々含むＬＮＰ調製物のライブラリを、Ｃｒｅ－ＬｏｘＰレポーターマウスに投与する。本明細書に記載されるように、細胞が、ｔｄＴｏｍ－であったか、又はｔｄＴｏｍ＋であったかに基づいて、ＦＡＣＳを使用してマウス細胞を選別する。次いで、本明細書に記載されるように、選別したｔｄＴｏｍ＋細胞を配列決定する。

【0269】

ｓｉＲＮＡ送達のために、ｓｉＧＦＰ及び本明細書に記載のバーコードを担持するように各ＬＮＰ調製物を製剤化する。本明細書に記載の方法（図２を参照されたい）に従って、各ＬＮＰ調製物をＧＦＰマウスに投与する（また図２を参照されたい）。図２を参照すると、１つ以上の構成成分、バーコード配列、及びｓｉＧＦＰを各々含むＬＮＰ調製物のライブラリを、ＧＦＰレポーターマウスに投与する。本明細書に記載されるように、ＧＦＰ発現に基づいて、ＦＡＣＳを使用して細胞を選別する。次いで、本明細書に記載されるように、選別した細胞を配列決定する。

【0270】

本明細書に記載の化合物又は比較化合物を使用して、ＬＮＰ調製物を製剤化する。対照としてＭＣ３を使用して、ＬＮＰ調製物を製剤化する。以下の測定を行う：ＬＮＰ調製物の直径、ＬＮＰ調製物の多分散性、細胞型及び組織型の任意の組み合わせに対する「正規化送達効率」、ＬＮＰ調製物のｐＫＡ（脂質ｐＫＡに関連するが、同じではない）、脂質ｐＫＡ、及びＬＮＰ調製物のイオン化性。ＬＮＰ調製物の各プールに対して、カプセル化効率及び送達効力も測定する。ｈＥＰＯ発現及びＣｒｅ発現測定は、本明細書に記載されるように行う。

【0271】

実施例２：スクリーン当たりの効力
本実施例は、例示的な組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料、並びに本明細書に記載のそのような組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料の効力をスクリーニングするための材料及び方法を提供する。

【0272】

実施例１に記載の例示的なＬＮＰスクリーニングを使用して、ＬＮＰの各プールが多くの組織にわたって非常に強力であることを示すことができる。

【0273】

実施例３：様々な細胞型への強力な送達を有する例示的なＬＮＰ調製物
本実施例は、本明細書に記載の様々な細胞型への強力な送達のための、例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本実施例は、一部の実施形態では、提供された脂質が様々な細胞型への強力な送達を示すことを示すために使用することができる。

【0274】

実施例１のスクリーニングに由来する結果に基づいて、脾臓送達で使用するための、特にＢ細胞送達で使用するための、例示的なＬＮＰ調製物を同定する。これらの同定された脂質をＬＮＰ調製物へと製剤化し、本明細書に記載のＣｒｅレポーターシステムを使用してスクリーニングする。群当たり３匹のＡｉ１４マウスを使用する。ペイロードは、０．３ｍｇ／ｋｇのＣｒｅ ｍＲＮＡを含む。注射後１６８時間にデータを収集する。結果を、対照としてのＭＣ３－ＬＮＰ調製物と比較する。

【0275】

実施例４：例示的なＬＮＰ調製物を様々な細胞型へと送達する。
本実施例は、本明細書に記載の様々な細胞型への強力な送達を有する、例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本実施例は、提供された脂質が様々な細胞型にわたって強力な送達を示すことを示すために使用することができる。

【0276】

ＬＮＰ調製物を選択して、本明細書に記載のＣｒｅレポーター系及びＡｉ１４マウスモデルを使用して、有効性結果を確認する。各実験において、群当たり３匹のＡｉ１４マウスを使用する。注射後７２時間にデータを収集する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームが、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定して、どの種類のＬＮＰ調製物が特定の細胞型に対して最も強力であるかを決定することができる。

【0277】

実施例５：例示的なＬＮＰ調製物は、機能的ｍＲＮＡを送達する。
本実施例は、機能的ｍＲＮＡを様々な細胞型に送達する例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本実施例は、脂質が、マウスにおいて機能的ｍＲＮＡを送達することが可能であることを示すことができる。

【0278】

マウスにおいて機能的ｍＲＮＡを静脈送達する各調製物の能力を決定するために、ＬＮＰ調製物を選択する。ＬＮＰ調製物は、各々０．１５ｍｇ／ｋｇのｈＥＰＯ ｍＲＮＡを担持し、２～３匹のＣ５７ＢＬ６マウスにおいて１１．７及び１９の質量比で投与する。血漿中のｈＥＰＯ発現を、ＬＮＰ調製物の注射の６時間後に測定する。

【0279】

実施例６：耐容性及び有効性実験
本実施例は、本明細書に記載の組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を調製、特徴評価、及び検証する、例示的な材料及び方法を提供する。本実施例を使用して、提供される脂質が、マウスにおいて機能的ｍＲＮＡを送達することが可能であることを示すことができる。

【0280】

本明細書に記載されるように、ラットにおけるｈＥＰＯ ｍＲＮＡ送達の耐容性及び有効性を決定するために、例示的なＬＮＰ調製物を選択する。１．０ｍｇ／ｋｇのｈＥＰＯ ｍＲＮＡを含有する各ＬＮＰ調製物を、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（Ｎ＝２）に注射する。アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、各例示的なＬＮＰ調製物の注射の２４時間後のラットの血漿から収集する（Ｕ／Ｌ）。単球化学誘引タンパク質－１（ＭＣＰ－１）を、各ＬＮＰ調製物の注射の６時間後のラットの血漿から収集する（ｎｇ／ｍＬ）。生理食塩水を対照として使用する。ビヒクル（対照）及び例示的なＬＮＰ調製物を投与した後、注射後の様々な時点（０、２、４、６、２４、４８、及び９６時間）にわたって、ｈＥＰＯの量をラットの血漿から収集する（ｎｇ／ｍＬ）。

【0281】

実施例７：イオン化可能な脂質の合成
本実施例は、本明細書に記載のイオン化可能な脂質を調製、特徴評価、及び検証する、例示的な材料及び方法を提供する。以下の実施例に記載されるように、ある特定の例示的な実施形態では、化合物は、以下の一般手順に従って調製される。一般方法は、本開示のある特定の化合物の合成を示すが、以下の一般方法及び当業者に既知の他の方法は、本明細書に記載の全ての化合物並びにこれらの化合物の各々のサブクラス及び種に適用することができることが理解されるであろう。

【0282】

一般注意事項：別段の記載がない限り、磁気撹拌を伴うフラスコ又はバイアル内の窒素雰囲気下で、無水グレードの溶媒を使用して全ての反応を実施した。無水溶媒は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、受け取ったままで使用した。予め充填されているシリカゲルカートリッジとともにＢｉｏｔａｇｅ Ｓｅｌｅｋｔ又はＴｅｌｅｄｙｎｅ－Ｉｓｃｏ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｎｅｘｔｇｅｎ３００＋を使用して、フラッシュカラムクロマトグラフィーを行った。Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０プレートを使用して薄層クロマトグラフィーを行い、ヨウ素を使用して化合物を可視化した。Ｖａｒｉａｎ ＩＮＯＶＡ ５００ＭＨｚ又はＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ４００ＭＨｚ分光計のいずれかを使用して、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法を行った；化学シフトは、ＣＤＣｌ_３試料に対するδ＝０．００ｐｐｍでのテトラメチルシランを参照してδ百万分率（ｐｐｍ）で、及びＤＭＳＯ試料に対する残留溶媒ピーク（δ＝２．５０ｐｐｍ）で報告する。以下の方法のうちの１つを使用して、ＱＤａ検出器（ＥＳＩ^＋）を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨクラスＰｌｕｓを使用して、超高速液体クロマトグラフィー－質量分析（ＵＰＬＣ－ＭＳ）を行った：

【0283】

方法Ａ：５分間実施、カラム：ＸＴＥＲＲＡ ＲＰ １８（４．６×５０ｍｍ）、５μｍ、移動相：開始時５０％［水中０．１％のＨＣＯＯＨ］及び５０％［（７０：３０）ＡＣＮ：ＴＨＦ中０．１％のＨＣＯＯＨ］、次いで、２％［水中０．１％のＨＣＯＯＨ］及び９８％［（７０：３０）ＡＣＮ：ＴＨＦ中０．１％のＨＣＯＯＨ］を２．６５分のこの移動相組成を最大３．７５分間保持し、最終的に開始状態、すなわち、５０％［水中０．１％のＨＣＯＯＨ］及び５０％［（７０：３０）ＡＣＮ：ＴＨＦ中０．１％のＨＣＯＯＨ］、を４．９０分間のこの移動相組成を最大５．１０分間保持した。流量＝１．２ｍＬ／分。

【0284】

方法Ｂ：１２分間実施、カラム：ＸＴＥＲＲＡ ＲＰ １８（４．６×５０ｍｍ）、５μｍ、移動相：開始時８０％［水中０．１％のＨＣＯＯＨ］及び２０％［（７０：３０）ＡＣＮ：ＴＨＦ中０．１％のＨＣＯＯＨ］、のこの開始時状態を０．７５分間保持し、次いで、６５％［水中０．１％のＨＣＯＯＨ］及び３５％［（７０：３０）ＡＣＮ：ＴＨＦ中０．１％のＨＣＯＯＨ］を３．０分間、次いで、２％［水中０．１％のＨＣＯＯＨ］及び９８％［（７０：３０）ＡＣＮ：ＴＨＦ中０．１％のＨＣＯＯＨ］を６．０分のこの移動相組成を最大９．０分間保持し、最終的に開始状態、すなわち、８０％［水中０．１％のＨＣＯＯＨ］及び２０％［（７０：３０）ＡＣＮ：ＴＨＦ中０．１％のＨＣＯＯＨ］、を１１．００分間のこの移動相組成を最大１２．１０分間保持した。流量＝１．２ｍｌ／分。

【0285】

略語のリスト
ＡＣＮ：アセトニトリル
ｄ：二重線
ＣＤＩ：１，１’－カルボニルジイミダゾール
ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＢＡＬ－Ｈ：水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４－（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩
Ｅｑｕｉｖ：当量
Ｅｔ：エチル
ｉ－Ｐｒ：イソプロピル
ｍ：多重線
Ｍｅ：メチル
ｐ：五重線
ＰＰＴＳ：ｐ－トルエンスルホン酸ピリジニウム
ｑ：四重線
Ｒｔ：保持時間
ｓ：単一線
ｔ：三重線
ＴＢＡＦ：フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＤＭＳＣｌ：ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン

【0286】

【化32】

実施例７－１：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート

【化33】

ステップ１：４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタンニトリル
一般手順Ａ：
ピリジニウム ｐ－トルエンスルホネート（０．１２ｇ、０．４８ｍｍｏｌ、０．０５当量）を含有するバイアルに、４，４－ジエトキシブタンニトリル（１．５ｇ、９．５ｍｍｏｌ、１当量）、及びシス－５－オクテン－１－オール（３．７ｇ、２９ｍｍｏｌ、３当量）を添加した。バイアルをしっかりとキャップし、得られた混合物を１０５℃で７２時間加熱した。この時間の後、混合物を室温まで冷却した。粗物質を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１００ｇのシリカ、２０分間ヘキサン中０～１００％のジクロロメタン）によって精製した。４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタンニトリル（１．１４ｇ、３７％）を無色の油として単離した。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ５．４３－５．２７（ｍ，４Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｔ，Ｊ＝９．３，６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｄｔ，Ｊ＝９．３，６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．１２－１．９１（ｍ，９Ｈ），１．６６－１．５４（ｍ，５Ｈ），１．４９－１．３６（ｍ，４Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，６Ｈ）．

【0287】

【化34】

ステップ２：４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸
一般手順Ｂ：
４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタンニトリル（１．１４ｇ、３．５４ｍｍｏｌ、１当量）を含有するバイアルに、水酸化カリウム（０．６０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ、３当量）、続いてエタノール（３．５ｍＬ）及び水（３．５ｍＬ）を添加した。バイアルをしっかりとキャップし、反応混合物を１１０℃まで１８時間加熱した。この時間の後、混合物を室温まで冷却した。混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、１ＭのＨＣｌを添加することによってｐＨを約５まで調整した。生じた二相性混合物を分離し、水相を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で更に２回抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸を粘着性の白色の固体として得た（１．１６ｇ、収率９６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ５．４１－５．２４（ｍ，４Ｈ），４．４５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｄｔ，Ｊ＝９．０，６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．３９（ｄｔ，Ｊ＝９．０，６．７Ｈｚ，２Ｈ），２．１７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０８－１．９８（ｍ，８Ｈ），１．８１（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．５９－１．５２（ｍ，４Ｈ），１．４４－１．３２（ｍ，４Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ）．

【0288】

【化35】

ステップ３：ジエチル ３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタンジオエート
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のジエチル ３－ヒドロキシペンタンジオエート（２ｇ、９．８０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＢＤＭＳＣｌ（１．７７ｇ、１１．７５ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（１．３３ｇ、１９．５８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を２５℃で１７時間撹拌した。完了したら、反応混合物を濾過し、濃縮した。このようにして得られた粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の１０％の酢酸エチルで溶出して、ジエチル ３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタンジオエート（１．９ｇ、６１％）を無色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．０５（ｓ，６Ｈ），０．８３（ｓ，９Ｈ），１．２３－１．２７（ｍ，６Ｈ），２．５２－２．５６（ｍ，４Ｈ），４．０７－４．１５（ｍ，４Ｈ），４．５２－４．５６（ｍ，１Ｈ）

【0289】

【化36】

ステップ４：３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジオール
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のジエチル ３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタンジオエート（１．９ｇ、６．９６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ中のＤＩＢＡＬ－Ｈ １Ｍ溶液（５．４ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を２５℃で１７時間撹拌した。完了したら、反応混合物をＭｅＯＨでクエンチし、温度を０℃に保った。固体材料を濾別した。濾液を濃縮した。このようにして得られた粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、１０％のＭｅＯＨ－ＤＣＭで溶出して、３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジオール（６００ｍｇ、４３％）を無色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．０３（ｓ，６Ｈ），０．８５（ｓ，９Ｈ），１．５０－１．６０（ｍ，４Ｈ），３．４０－３．４６（ｍ，４Ｈ），３．８８－３．９１（ｍ，１Ｈ），４．２８（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ）．

【0290】

【化37】

ステップ５：３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート
一般手順Ｃ：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸（２４０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＣＣ（２１８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。次いで、３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジオール（１６５．２ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。反応混合物を２５℃で８時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で蒸発させて粗化合物を得た。粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、溶出液として１０％酢酸エチル－ヘキサンで溶出して、３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート（２００ｍｇ、５１％）を淡黄色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．０６－０．０８（ｍ，６Ｈ），０．８８－０．９６（ｍ，１４Ｈ），１．３０－２．１０（ｍ，２４Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．３６－３．８０（ｍ，６Ｈ），４．０２－４．１５（ｍ，３Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２０－５．４０（ｍ，４Ｈ）．

【0291】

【化38】

ステップ６：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
一般手順Ｄ：
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のリノール酸（８５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７５．５６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（７．８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート（１８５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及び無水ＤＩＰＥＡ（０．２１ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で１２時間撹拌した。完了したら、反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×２５ｍＬ）で抽出した。有機層を、水（２×２５ｍＬ）及びブライン（２×１５ｍＬ）で洗浄した。有機部分を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、１０％の酢酸エチル－ヘキサンで溶出して、５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（１３５ｍｇ、５４％）を無色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．１０（ｓ，６Ｈ），０．８７－０．９６（ｍ，１９Ｈ），１．２４－１．４３（ｍ，２３Ｈ），１．５８－２．１０（ｍ，１８Ｈ），２．２０－２．４０（ｍ，４Ｈ），２．７０－２．８０（ｍ，２Ｈ），３．３０－３．６０（ｍ，４Ｈ），３．９０－４．２０（ｍ，５Ｈ），４．４０－４．５０（ｍ，１Ｈ），５．２０－５．４０（ｍ，８Ｈ）．

【0292】

【化39】

ステップ７：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
一般手順Ｅ：
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（１３５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ中の１Ｍ ＴＢＡＦ溶液（０．２ｍＬ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で６時間撹拌した。完了したら、反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈した。反応混合物を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機部分を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（１４５ｍｇ、粗）を無色の油として得て、これを次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８５－０．９６（ｍ，１６Ｈ），１．２９－２．１０（ｍ，３７Ｈ），２．２０－２．４０（ｍ，３Ｈ），２．７０－２．８０（ｍ，２Ｈ），３．３０－３．８０（ｍ，５Ｈ），４．１０－４．５０（ｍ，５Ｈ），５．２０－５．４０（ｍ，８Ｈ）

【0293】

【化40】

ステップ８：１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート
一般手順Ｆ：
トルエン（１ｍＬ）中の５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（５０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＤＩ（４５．９５ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及びＫＯＨ（０．２３ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で４時間撹拌した。完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート（５５ｍｇ、粗）を得て、これを次のステップに使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８１－０．９５（ｍ，９Ｈ），１．２４－１．８５（ｍ，２３Ｈ），１．８５－２．４０（ｍ，１６Ｈ），２．７０－２．８０（ｍ，１Ｈ），３．３０－３．６０（ｍ，３Ｈ），３．９０－３．５０（ｍ，４Ｈ），５．２０－５．４０（ｍ，５Ｈ），７．０６－７．１０（ｍ，４Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，２Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）．

【0294】

ステップ９：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（実施例７－１）
一般手順Ｇ：
乾燥トルエン（２ｍＬ）中の化合物１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート（５０ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、ＫＯＨ（１ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、０．２５当量）を添加した後、（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノール（１１ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ、１．２当量）を不活性雰囲気下で添加した。反応混合物を７０℃で４時間加熱した。完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料を、コンビフラッシュカラム精製によって精製し、１０％のＭｅＯＨ－ＤＣＭで溶出し、５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（３７％、３ステップ）を無色の液体として得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．３５分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８７４．７、実測値８７４．８．

【0295】

【化41】

実施例７－２：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジエチルアミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２６ｍｇ、３０％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．３５分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８６２．７、実測値８６２．８．

【0296】

【化42】

実施例７－３：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（エチル（メチル）アミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２１ｍｇ、３３％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１８分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８４８．７、実測値８４８．７．

【0297】

【化43】

実施例７－４：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジメチルアミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離３８ｍｇ、３７％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ），１．１９－１．５０（ｍ，１４Ｈ），１．５０－１．６７（ｍ，６Ｈ），１．８２－２．１６（ｍ，２４Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３２－２．４５（ｍ，８Ｈ），２．６２（ｓ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４－３．４６（ｍ，２Ｈ），３．５０－３．６３（ｍ，２Ｈ），４．００－４．２５（ｍ，６Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８２－４．９８（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．４３（ｍ，８Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８３４．６、実測値８３４．７．

【0298】

【化44】

実施例７－５：５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
一般手順Ｈ：
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の４－（ピロリジン－１－イル）ブタン酸（１５ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１９．３１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０５４ｍＬ、０．３１ｍｍｏｌ）及び５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（６０．１２ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で１２時間撹拌した。完了したら、反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×２５ｍＬ）で抽出した。有機層を、水（２×２５ｍＬ）及びブライン（２×１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料を、コンビフラッシュカラム精製によって精製し、１０％のＭｅＯＨ－ＤＣＭで溶出し、５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（４８ｍｇ、７３％）を無色の液体として得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８３４．６、実測値８３４．７．

【0299】

【化45】

実施例７－６：３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）

【化46】

ステップ１：３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
一般手順Ｊ：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸（２４０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＣＣ（２１８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。次いで、３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジオール（１６５．２ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を添加し、２５℃で更に８時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で蒸発させて粗化合物を得た。粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の１０％酢酸エチルで溶出して、３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）（３０ｍｇ、１１％）を淡黄色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．０３（ｓ，６Ｈ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．９２－１．０５（ｍ，１１Ｈ），１．２４－１．４３（ｍ，８Ｈ），１．７６－２．０６（ｍ，２４Ｈ），２．３４－２．３８（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．４２（ｍ，５Ｈ），３．５３－３．５９（ｍ，５Ｈ），３．８０－４．１５（ｍ，６Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２８－５．３７（ｍ，７Ｈ）．

【0300】

【化47】

ステップ２：３－ヒドロキシペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｅに従って調製。単離２３０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９０－１．００（ｍ，１２Ｈ），１．２４－２．１０（ｍ，４１Ｈ），２．３０－２．４０（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．８０（ｍ，９Ｈ），４．１０－４．４０（ｍ，４Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），５．２８－５．３７（ｍ，８Ｈ）．

【0301】

【化48】

ステップ３：３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを３－ヒドロキシペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離１７０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８５－０．９６（ｍ，１３Ｈ），１．２４－１．４２（ｍ，１２Ｈ），１．５７－１．５９（ｍ，２Ｈ），１．８５－２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．２８－２．３２（ｍ，４Ｈ），３．３５－３．５７（ｍ，８Ｈ），４．１７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ），４．４３－４．４６（ｍ，２Ｈ），５．２８－５．３７（ｍ，８Ｈ），７．００－７．１０（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ）．

【0302】

ステップ４：３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）（実施例７－６）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２０ｍｇ、３０％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．２７分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９３４．７、実測値９３４．７．

【0303】

【化49】

実施例７－７：３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジエチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１６ｍｇ、１５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．０５分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９２２．７、実測値９２２．６．

【0304】

【化50】

実施例７－８：３－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（エチル（メチル）アミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２１ｍｇ、２０％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．０８分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９０８．７、実測値９０８．６．

【0305】

【化51】

実施例７－９：３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジメチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１４ｍｇ、１７％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．０７分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８９４．７、実測値８９４．６．

【0306】

【化52】

実施例７－１０：３－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを３－ヒドロキシペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離３１ｍｇ、５５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．２６分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９０４．７、実測値９０４．８．

【0307】

【化53】

実施例７－１１：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート

【化54】

ステップ１：４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタンニトリル
シス－５－オクテン－１－オールを１－オクタノールに置換して、一般手順Ａに従って調製。単離１．４５ｇ、３９％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ０．８７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），１．２１－１．３０（ｍ，２０Ｈ），１．５３－１．５８（ｍ，４Ｈ），１．９０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．３９－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．５６－３．６１（ｍ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）．

【0308】

【化55】

ステップ２：４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタン酸
４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタンニトリルを４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタンニトリルに置換して、一般手順Ｂに従って調製。単離１．８ｇ、８４％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ０．８５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），１．２１－１．３０（ｍ，２０Ｈ），１．４３－１．４８（ｍ，４Ｈ），１．６９（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３５－３．３９（ｍ，２Ｈ），３．４４－３．５０（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），１２．０６（ｂｓ，１Ｈ）．

【0309】

【化56】

ステップ３：３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート
４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸を４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタン酸に置換して、一般手順Ｃに従って調製。単離１３０ｍｇ、４０％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ０．０１－０．０４（ｍ，６Ｈ），０．８３－０．８７（ｍ，１２Ｈ），１．１７－１．２４（ｍ，１６Ｈ），１．４４－１．７６（ｍ，１０Ｈ），２．２７－２．３２（ｍ，２Ｈ），３．３４－３．５０（ｍ，６Ｈ），３．８９－４．０９（ｍ，３Ｈ），４．３３－４．５０（ｍ，２Ｈ）

【0310】

【化57】

ステップ４：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートを３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエートに置換して、一般手順Ｄに従って調製。単離６２５ｍｇ、５３％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．１０（ｓ，６Ｈ），０．８５－０．８７（ｍ，１５Ｈ），１．１９－１．２９（ｍ，３６Ｈ），１．７６－２．０４（ｍ，９Ｈ），２．２１－２．３８（ｍ，５Ｈ），２．７５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．３６－３．５８（ｍ，６Ｈ），３．９０－４．１４（ｍ，５Ｈ），４．１０－４．１４（ｍ，５Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．３２－５．３５（ｍ，４Ｈ）．

【0311】

【化58】

ステップ５：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換して、一般手順Ｅに従って調製。単離５４０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８１－０．８７（ｍ，９Ｈ），１．２６－１．２９（ｍ，３４Ｈ），１．５２－２．４０（ｍ，２２Ｈ），２．７０－２．８０（ｍ，２Ｈ），３．３０－３．４０（ｍ，４Ｈ），４．０－４．５０（ｍ，５Ｈ），５．２０－５．４０（ｍ，４Ｈ）

【0312】

【化59】

ステップ６：１－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離１１０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８４－０．８７（ｍ，９Ｈ），１．２６－１．３０（ｍ，３２Ｈ），１．５３－１．６１（ｍ，６Ｈ），１．８５－２．４０（ｍ，１４Ｈ），２．７５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３６－３．５４（ｍ，４Ｈ），４．１０－４．１８（ｍ，３Ｈ），４．４３－４．４４（ｍ，１Ｈ），５．２８－５．３７（ｍ，４Ｈ），７．０５－７．３９（ｍ，３Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ）．

【0313】

ステップ７：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（実施例７－１１）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離３０ｍｇ、３０％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．４１分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８７８．７、実測値８７８．８．

【0314】

【化60】

実施例７－１２：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジエチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２９ｍｇ、３０％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．４２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８６６．７、実測値８６６．７．

【0315】

【化61】

実施例７－１３：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（エチル（メチル）アミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２４ｍｇ、３２％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．３８分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８５２．７、実測値８５２．８．

【0316】

【化62】

実施例７－１４：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジメチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離９３ｍｇ、４５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ｂ）：保持時間５．４９分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８３８．７、実測値８３８．７．

【0317】

【化63】

実施例７－１５：５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを５－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離３１ｍｇ、５５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．３２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８４８．７、実測値８４８．７．

【0318】

【化64】

実施例７－１６：３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）

【化65】

ステップ１：３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）
４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸を４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタン酸に置換して、一般手順Ｊに従って調製。単離６００ｍｇ、１２％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．１０（ｓ，６Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，２１Ｈ），１．１２－１．３８（ｍ，４１Ｈ），１．５０－１．５５（ｍ，６Ｈ），１．７３－２．０３（ｍ，８Ｈ），２．３４－２．３８（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．５８（ｍ，８Ｈ），３．８９－３．９２（ｍ，１Ｈ），４．０６－４．１８（ｍ，４Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）

【0319】

【化66】

ステップ２：３－ヒドロキシペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｅに従って調製。単離５０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８５－０．９２（ｍ，１４Ｈ），１．２６－１．２８（ｍ，４０Ｈ），１．５０－１．９４（ｍ，２０Ｈ），２．３６－２．４１（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．４１（ｍ，４Ｈ），３．５２－３．５７（ｍ，４Ｈ），３．７０－３．８０（ｍ，１Ｈ），４．１０－４．３２（ｍ，３Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）．

【0320】

【化67】

ステップ３：３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを３－ヒドロキシペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離４５ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８４－０．８６（ｍ，１Ｈ），１．２０－１．３０（ｍ，５Ｈ），１．８０－２．４０（ｍ，１Ｈ），３．２０－３．５０（ｍ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），７．４０－７．５０（ｍ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ）

【0321】

ステップ４：３－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）（実施例７－１６）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離３７ｍｇ、３５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．５２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９４２．８、実測値９４２．８．

【0322】

【化68】

実施例７－１７：３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジエチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１６ｍｇ、３３％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．４３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９３０．８、実測値９３０．８．

【0323】

【化69】

実施例７－１８：３－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（エチル（メチル）アミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離６７ｍｇ、３８％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．５０分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９１６．７、実測値９１６．８．

【0324】

【化70】

実施例７－１９：３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジメチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを３－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離６８ｍｇ、４５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ｂ）：保持時間５．４９分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９０２．７、実測値９０２．８．

【0325】

【化71】

実施例７－２０：３－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを３－ヒドロキシペンタン－１，５－ジイル ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離６２ｍｇ、６５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．４７分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９１２．７、実測値９１２．８．

【0326】

【化72】

実施例７－２１：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート

【化73】

ステップ１：ヘプタン－１，４，７－トリオール
ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のジエチル ４－オキソヘプタンジオエート（４ｇ、１７．３７ｍｍｏｌ））の撹拌溶液に、 ＴＨＦ中の２．４（Ｍ）のＬＡＨ（３６．１８ｍＬ、８６．８５ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応混合物を２５℃で２時間撹拌した。完了したら、Ｎａ_２ＳＯ_４・１０Ｈ_２Ｏでクエンチし、得られた沈殿物を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。有機層を減圧下で濃縮して、ヘプタン－１，４，７－トリオール（２．１ｇ、７０％）を半固体化合物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ_４）δ １．３９－１．６８（ｍ，７Ｈ），３．３０－３．３３（ｍ，２Ｈ），３．４７－３．５７（ｍ，４Ｈ）。

【0327】

【化74】

ステップ２：４，７－ジヒドロキシヘプチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジオールをヘプタン－１，４，７－トリオールに置換して、一般手順Ｃに従って調製。単離５００ｍｇ、２３％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９０－１．０（ｍ，６Ｈ），１．２０－１．５０（ｍ，９Ｈ），１．６０－１．７０（ｍ，３Ｈ），１．９０－２．１０（ｍ，１１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３６－３．６９（ｍ，１０Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），５．２６－５．３６（ｍ，５Ｈ）．

【0328】

【化75】

ステップ３：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートを４，７－ジヒドロキシヘプチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートに置換して、一般手順Ｄに従って調製。単離３００ｍｇ、３２％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８６－０．９６（ｍ，９Ｈ），１．２４－２．１０（ｍ，４８Ｈ），２．２０－２．４０（ｍ，４Ｈ），２．７０－２．８０（ｍ，２Ｈ），３．５０－３．７０（ｍ，３Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），４．４０－４．５０（ｍ，１Ｈ），５．２８－５．３９（ｍ，９Ｈ）．

【0329】

【化76】

ステップ４：１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－７－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ヘプタン－４－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離１１０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．７０－１．００（ｍ，１１Ｈ），１．２０－２．１０（ｍ，４４Ｈ），２．２０－２．５０（ｍ，４Ｈ），２．７４－２．７５（ｍ，２Ｈ），３．３０－３．６０（ｍ，４Ｈ），４．００－４．２０（ｍ，５Ｈ），４．４０－４．５０（ｍ，１Ｈ），５．００－５．４０（ｍ，１０Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ）．

【0330】

ステップ５：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（実施例７－２１）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－７－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ヘプタン－４－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２２ｍｇ、２９％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１７分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９０２．７、実測値９０２．７．

【0331】

【化77】

実施例７－２２：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジエチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－７－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ヘプタン－４－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離２６ｍｇ、３０％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８９０．７、実測値８９０．６．

【0332】

【化78】

実施例７－２３：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（エチル（メチル）アミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－７－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ヘプタン－４－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離５８ｍｇ、４０％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８７６．７、実測値８７６．７．

【0333】

【化79】

実施例７－２４：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジメチルアミノ）プロパン－１－オールに置換し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－７－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ヘプタン－４－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離７４ｍｇ、４６％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．１８－１．４６（ｍ，１４Ｈ），１．４６－１．７７（ｍ，１９Ｈ），１．８０－１．９６（ｍ，４Ｈ），１．９６－２．０９（ｍ，１１Ｈ），２．２１－２．３１（ｍ，８Ｈ），２．３３－２．４５（ｍ，４Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，２Ｈ），４．０１－４．０９（ｍ，４Ｈ），４．１７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６６－４．８３（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．４２（ｍ，８Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８６２．７、実測値８６２．６．

【0334】

【化80】

実施例７－２５：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離２２ｍｇ、５５％。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１９分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８７２．７、実測値８７２．７．

【0335】

【化81】

実施例７－２６：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ヘプチル（（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－イル）スクシネート

【化82】

ステップ１：（Ｚ）－４－（ノナ－２－エン－１－イルオキシ）－４－オキソブタン酸
ＤＣＭ（１２ｍＬ）及びＴＨＦ（５ｍＬ）中の無水コハク酸（１．５ｇ、１０．５５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（１１．８６１ｇ、９７．０９ｍｍｏｌ）を添加した後、（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－オール（２．１１ｇ、２１．１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、反応混合物を３０％のＨＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を減圧下で蒸発させて粗化合物を得た。粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、１５％の酢酸エチル－ヘキサンで溶出して、（Ｚ）－４－（ノナ－２－エン－１－イルオキシ）－４－オキソブタン酸（１．１７ｇ、３４％）を無色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ０．８４－０．８５（ｍ，３Ｈ），１．１５－１．３０（ｍ，８Ｈ），１．９８－２．０６（ｍ，２Ｈ），２．４０－２．４９（ｍ，４Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），５．４４－５．７５（ｍ，２Ｈ），１２．１９（ｓ，１Ｈ）．

【0336】

【化83】

ステップ２：（Ｚ）－４，７－ジヒドロキシヘプチル ノナ－２－エン－１－イルスクシネート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン－１，５－ジオールをヘプタン－１，４，７－トリオールに置換し、４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸を（Ｚ）－４－（ノナ－２－エン－１－イルオキシ）－４－オキソブタン酸に置換して、一般手順Ｃに従って調製。単離２３５ｍｇ、１５％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８５－０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２５－１．８０（ｍ，１７Ｈ），２．００－２．１０（ｍ，２Ｈ），２．５０－２．７０（ｍ，４Ｈ），２．８０－２．９０（ｍ，１Ｈ），３．６０－３．７０（ｍ，３Ｈ），４．１０－４．２０（ｍ，２Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５１－５．６５（ｍ，２Ｈ）．

【0337】

【化84】

ステップ３：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル（（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－イル）スクシネート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートを（Ｚ）－４，７－ジヒドロキシヘプチル ノナ－２－エン－１－イルスクシネートに置換して、リノール酸を４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸に置換して、一般手順Ｄに従って調製。単離２２５ｍｇ、４５％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８５－０．９６（ｍ，９Ｈ），１．２６－１．４１（ｍ，１４Ｈ），１．５４－２．０８（ｍ，２１Ｈ），２．３５－２．３８（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．６２（ｍ，４Ｈ），３．３８－３．６６（ｍ，６Ｈ），４．０７－４．１３（ｍ，４Ｈ），４．４８－４．６４（ｍ，４Ｈ），５．３１－５．７０（ｍ，６Ｈ）．

【0338】

ステップ４：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ヘプチル（（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－イル）スクシネート（実施例７－２６）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル（（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－イル）スクシネートに置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離６２ｍｇ、６５％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．１７－１．４６（ｍ，１９Ｈ），１．４８－１．５９（ｍ，８Ｈ），１．７１－１．８２（ｍ，４Ｈ），１．７９－１．９６（ｍ，４Ｈ），１．９６－２．１３（ｍ，１０Ｈ），２．３６（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），２．４２－２．５６（ｍ，５Ｈ），２．６１（ｓ，４Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．６１（ｍ，２Ｈ），３．９３－４．１９（ｍ，４Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．９１（ｓ，１Ｈ），５．２４－５．４２（ｍ，４Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間１．９２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８３４．６、実測値８３４．７．

【0339】

【化85】

実施例７－２７：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル（３－ペンチルオクチル）アジペート

【化86】

ステップ１：３－ペンチルオクタン酸メチル
臭化銅（Ｉ）（０．１当量）及び塩化リチウム（０．２当量）を、炎によって乾燥させたフラスコにアルゴン雰囲気下で添加した。次いで、乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）を添加し、混合物を１０分間撹拌し、その間、固体を溶解させた。反応混合物を氷浴に入れ、５分間撹拌した。その後、（Ｅ）－オクタ－２－エン酸メチル（１．０当量）及びクロロトリメチルシラン（１．１当量）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。次いで、臭化ペンチルマグネシウム（ＴＨＦ中１８％ｗ／ｖ）（１．４当量ｖ）を滴加し、反応物を０℃で更に１時間撹拌した。溶液を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。このようにして得られた粗物質を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、１～２％の酢酸エチル－ヘキサンで溶出して、３－ペンチルオクタン酸メチルを黄色の油として得た（１．０ｇ、６８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），１．０６－１．４６（ｍ，１９Ｈ），１．８２（ｓ，１Ｈ），２．２２（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｓ，２Ｈ）．

【0340】

【化87】

ステップ２：３－ペンチルオクタン－１－オール
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の３－ペンチルオクタン酸メチル（１当量）の撹拌溶液に、水素化アルミニウムリチウム（ＴＨＦ中２Ｍ）（３．０当量）を０℃で添加し、２５℃で２時間撹拌した。次いで、反応物を０℃の硫酸ナトリウム十水和物でクエンチし、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、３～５％の酢酸エチル－ヘキサンによって溶出して、３－ペンチルオクタン－１－オールを無色の油として得た（５８０ｍｇ、６５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），１．１７－１．３５（ｍ，１５Ｈ），１．３８－１．４４（ｍ，１Ｈ），１．５１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６５（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），５．２９（ｓ，１Ｈ）．

【0341】

【化88】

ステップ３：６－オキソ－６－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）ヘキサン酸
一般手順Ｋ：ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のアジピン酸（３６５ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ、５．０当量）の撹拌溶液に、ＥＤＣ（１４４ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＤＭＡＰ（３１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、０．５当量）、及びＤＩＰＥＡ（１９４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。反応混合物を２５℃で３０分間撹拌した。次いで、３－ペンチルオクタン－１－オール（１００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、２５℃で１６時間更に撹拌した。水（５０ｍＬ）を添加し、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得られた粗材料を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、３０～５０％のＥｔＯＡｃ－ヘキサンで溶出して、６－オキソ－６－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）ヘキサン酸を得た（８７ｍｇ、５３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ０．８５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ），１．１３－１．３３（ｍ，１６Ｈ），１．３２－１．４２（ｍ，１Ｈ），１．４４－１．５８（ｍ，６Ｈ），２．２０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），１２．００（ｓ，１Ｈ）．

【0342】

【化89】

ステップ４：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル（３－ペンチルオクチル）アジペート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートを４，７－ジヒドロキシヘプチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートに置換し、リノール酸を６－オキソ－６－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）ヘキサン酸に置換して、一般手順Ｄに従って調製。単離２５５ｍｇ、４３％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．２４－１．２８（ｍ，１１Ｈ），１．３７－１．４６（ｍ，６Ｈ），１．５２－１．５８（ｍ，１４Ｈ），１．６３－１．６９（ｍ，６Ｈ），１．７４－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．８９－１．９５（ｍ，２Ｈ），２．００－２．０９（ｍ，８Ｈ），２．３１（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，４Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３５－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．５２－３．６０（ｍ，２Ｈ），３．６２－３．６６（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２９－５．３９（ｍ，４Ｈ）．

【0343】

【化90】

ステップ５：４－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）－７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）ヘプチル（３－ペンチルオクチル）アジペート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル（３－ペンチルオクチル）アジペートに置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離２８０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，７Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．１８－１．３０（ｍ，２０Ｈ），１．３６－１．４２（ｍ，４Ｈ），１．５３－１．５８（ｍ，６Ｈ），１．６１－１．６５（ｍ，４Ｈ），１．８８－１．９２（ｍ，７Ｈ），２．００－２．０７（ｍ，８Ｈ），２．３０（ｓ，４Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３６－３．４３（ｍ，２Ｈ），３．５３－３．５９（ｍ，２Ｈ），３．６０－３．６６（ｍ，１Ｈ），４．０１－４．１１（ｍ，６Ｈ），４．４３－４．５２（ｍ，１Ｈ），５．２２－５．４１（ｍ，４Ｈ），７．０５－７．１３（ｍ，２Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ）．

【0344】

ステップ６：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル（３－ペンチルオクチル）アジペート（実施例７－２７）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを４－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）－７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）ヘプチル（３－ペンチルオクチル）アジペートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１１０ｍｇ、３５％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９５０．７、実測値９５１．２．

【0345】

【化91】

実施例７－２８：１－（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル）８－（３－ペンチルオクチル）オクタンジオエート

【化92】

ステップ１：８－オキソ－８－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）オクタン酸
アジピン酸をスベリン酸に置換して、一般手順Ｋに従って調製。単離９９０ｍｇ、５６％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ０．８５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），１．１８－１．２９（ｍ，２０Ｈ），１．３５－１．４０（ｍ，１Ｈ），１．４４－１．５３（ｍ，６Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．２５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１１．８４－１２．０７（ｍ，１Ｈ）．

【0346】

【化93】

ステップ２：１－（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル）８－（３－ペンチルオクチル）オクタンジオエート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートを４，７－ジヒドロキシヘプチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートに置換し、リノール酸を８－オキソ－８－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）オクタン酸に置換して、一般手順Ｄに従って調製。単離３１０ｍｇ、４３％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），０．９２－０．９７（ｍ，６Ｈ），１．２２－１．２６（ｍ，１４Ｈ），１．２８－１．３４（ｍ，９Ｈ），１．５０－１．６２（ｍ，１９Ｈ），１．７４－１．９３（ｍ，５Ｈ），２．００－２．０７（ｍ，８Ｈ），２．２４－２．２９（ｍ，４Ｈ），２．３４－２．３９（ｍ，１Ｈ），２．５７－２．６５（ｍ，１Ｈ），２．７６－２．８２（ｍ，１Ｈ），３．３５－３．４２（ｍ，１Ｈ），３．５３－３．５８（ｍ，１Ｈ），３．６１－３．６５（ｍ，２Ｈ），４．０４－４．１１（ｍ，６Ｈ），５．２６－５．３６（ｍ，４Ｈ）．

【0347】

【化94】

ステップ３：１－（４－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）－７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）ヘプチル）８－（３－ペンチルオクチル）オクタンジオエート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを１－（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル）８－（３－ペンチルオクチル）オクタンジオエートに置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離３４０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，６Ｈ），１．２２－１．２６（ｍ，１１Ｈ），１．３０－１．４２（ｍ，９Ｈ），１．５３－１．６２（ｍ，９Ｈ），１．６８－１．９２（ｍ，１２Ｈ），２．０１－２．０８（ｍ，１２Ｈ），２．２５－２．３０（ｍ，４Ｈ），２．３３－２．３９（ｍ，２Ｈ），３．３７－３．４２（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．５８（ｍ，２Ｈ），４．０１－４．１３（ｍ，６Ｈ），４．４７（ｓ，１Ｈ），５．０９－５．１６（ｍ，１Ｈ），５．２６－５．３７（ｍ，４Ｈ），７．１１－７．１５（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ）．

【0348】

ステップ４：１－（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル）８－（３－ペンチルオクチル）オクタンジオエート（実施例７－２８）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（４－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）－７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）ヘプチル）８－（３－ペンチルオクチル）オクタンジオエートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１１２ｍｇ、３１％（２ステップ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．２１－１．２５（ｍ，１４Ｈ），１．２９－１．４３（ｍ，１３Ｈ），１．５３－１．６９（ｍ，２６Ｈ），１．８６－１．９６（ｍ，３Ｈ），１．９７－２．０７（ｍ，９Ｈ），２．２３－２．３２（ｍ，５Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ），２．４９－２．５４（ｍ，１Ｈ），２．８４－３．１５（ｍ，２Ｈ），３．３４－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．６１（ｍ，２Ｈ），３．９４－３．９９（ｍ，１Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７１－４．７６（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．４１（ｍ，４Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９７８．８、実測値９７９．３．

【0349】

【化95】

実施例７－２９：７－（（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル）オキシ）－７－オキソヘプチル ２－ブチルオクタノエート

【化96】

ステップ１：７－ヒドロキシヘプチル２－ブチルオクタノエート
ＤＣＭ中の２－ブチルオクタン酸（１当量）の撹拌溶液（５ｍＬ／０．５ｍｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（３当量）、ＥＤＣ（１．５当量）、及びＤＭＡＰ（０．５当量）を２５℃で添加した。反応混合物を１５分間撹拌し、次いで１，７－ヘプタンジオール（３．０当量）を添加し、更に２５℃で１６時間撹拌した。完了したら、反応混合物をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×２５ｍＬ）、続いて水及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４に通過させ、回転蒸発器下で乾燥させた。このようにして得られた粗物質を、コンビフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１５～２０％のＥｔＯＡｃ－ヘキサンで溶出して、７－ヒドロキシヘプチル ２－ブチルオクタノエート（１．５ｇ、４９％）を無色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８２－０．９１（ｍ，６Ｈ），１．１８－１．３３（ｍ，１２Ｈ），１．３６－１．７４（ｍ，１５Ｈ），２．２４－２．３６（ｍ，１Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）．

【0350】

【化97】

ステップ２：７－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）ヘプタン酸
アセトン（３０ｍＬ）中の７－ヒドロキシヘプチル ２－ブチルオクタノエート（１．０当量）の撹拌溶液を０℃まで冷却し、これに、Ｊｏｎｅｓ試薬（Ｈ_２ＳＯ_４中２Ｍ溶液、１．５当量）を滴下して加えた。反応混合物を２５℃で１７時間撹拌した。完了したら、これにイソプロパノールを添加し、混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、アセトンで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。粗塊を水で希釈し、水層のｐＨを約６まで調整し、混合物をＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、次いで減圧下で濃縮して、７－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）ヘプタン酸（１．４５ｇ、９２％）を淡黄色のガム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ０．８２－０．８６（ｍ，６Ｈ），１．２０－１．３０（ｍ，１６Ｈ），１．４０－１．５３（ｍ，８Ｈ），２．１６－２．２１（ｍ，２Ｈ），２．２５－２．３１（ｍ，１Ｈ），３．９９－４．０３（ｍ，２Ｈ），１１．９６（ｓ，１Ｈ）．

【0351】

【化98】

ステップ３：７－（（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル）オキシ）－７－オキソヘプチル ２－ブチルオクタノエート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートを４，７－ジヒドロキシヘプチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートに置換し、リノール酸を７－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）ヘプタン酸に置換して、一般手順Ｄに従って調製。単離７３０ｍｇ、４９％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８３－０．８９（ｍ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．１８－１．２７（ｍ，１６Ｈ），１．３４－１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．５３－１．６１（ｍ，１４Ｈ），１．７４－１．７９（ｍ，１Ｈ），１．８９－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９８－２．０６（ｍ，８Ｈ），２．２５－２．３３（ｍ，３Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３６－３．４３（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．６４（ｍ，３Ｈ），４．０１－４．１２（ｍ，６Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２５－５．４０（ｍ，４Ｈ）．

【0352】

【化99】

ステップ４：（Ｚ）－３２－ブチル－１０－（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）－１３，２３，３１－トリオキソ－９，１４，２２，３０－テトラオキサオクタトリアコンタ－３－エン－１８－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを７－（（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル）オキシ）－７－オキソヘプチル ２－ブチルオクタノエートに置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離３５０ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８４－０．８８（ｍ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．２３－１．２６（ｍ，８Ｈ），１．３３－１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．５３－１．６２（ｍ，１０Ｈ），１．７２－１．８２（ｍ，１１Ｈ），１．９１（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），２．００－２．０６（ｍ，８Ｈ），２．２４－２．３２（ｍ，３Ｈ），２．３４－２．４０（ｍ，２Ｈ），３．３４－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．５３－３．６０（ｍ，２Ｈ），４．０２－４．１０（ｍ，６Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．０７－５．１７（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．４１（ｍ，４Ｈ），７．０４－７．１４（ｍ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ）．

【0353】

ステップ５：７－（（７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル）オキシ）－７－オキソヘプチル ２－ブチルオクタノエート（実施例７－２９）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを（Ｚ）－３２－ブチル－１０－（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）－１３，２３，３１－トリオキソ－９，１４，２２，３０－テトラオキサオクタトリアコンタ－３－エン－１８－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１３０ｍｇ、３５％（２ステップ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８４－０．８９（ｍ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．０６－１．２８（ｍ，３４Ｈ），１．３４－１．４４（ｍ，１０Ｈ），１．６１－１．６８（ｍ，９Ｈ），１．７６－１．８０（ｍ，１Ｈ），１．８８－１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９９－２．０６（ｍ，７Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３７－３．４２（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．６１（ｍ，３Ｈ），３．６５－３．７３（ｍ，１Ｈ），３．９９－４．１０（ｍ，７Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６８－４．７６（ｍ，１Ｈ），５．２７－５．３９（ｍ，４Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．０８分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９５０．７、実測値９５１．２．

【0354】

【化100】

実施例７－３０：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル ８－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）オクタノエート

【化101】

ステップ１：８－ヒドロキシオクチル２－ブチルオクタノエート
ＤＣＭ中の２－ブチルオクタン酸（１当量）の撹拌溶液（５ｍＬ／０．５ｍｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（３当量）、ＥＤＣ（１．５当量）、及びＤＭＡＰ（０．５当量）を２５℃で添加した。反応混合物を１５分間撹拌し、次いで１，８－オクタンジオール（３．０当量）を添加し、更に２５℃で１６時間撹拌した。完了したら、反応混合物をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×２５ｍＬ）、続いて水及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４に通過させ、回転蒸発器下で乾燥させた。このようにして得られた粗物質を、コンビフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１５～２０％のＥｔＯＡｃ－ヘキサンで溶出して、７－ヒドロキシヘプチル ２－ブチルオクタノエート（１．６ｇ、４９％）を無色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８２－０．９１（ｍ，６Ｈ），１．１３－１．４７（ｍ，２５Ｈ），１．４９－１．６９（ｍ，４Ｈ），２．２４－２．３６（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｑ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）．

【0355】

【化102】

ステップ２：８－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）オクタン酸
アセトン（３０ｍＬ）中の８－ヒドロキシオクチル ２－ブチルオクタノエート（１．０当量）の撹拌溶液を０℃まで冷却し、これに、Ｊｏｎｅｓ試薬（Ｈ_２ＳＯ_４中２Ｍ溶液、１．５当量）を滴下して加えた。反応混合物を２５℃で１７時間撹拌した。完了したら、イソプロパノールを添加し、混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、アセトンで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。粗塊を水で希釈し、水層のｐＨを約６まで調整し、混合物をＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、次いで減圧下で濃縮して、８－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）オクタン酸（１．４２ｇ、９６％）を淡黄色のガム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ０．８４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），１．１７－１．３２（ｍ，１８Ｈ），１．３３－１．５６（ｍ，８Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．２２－２．３４（ｍ，１Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１１．９４（ｓ，１Ｈ）．

【0356】

【化103】

ステップ３：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル ８－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）オクタノエート
３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－ヒドロキシペンチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートを４，７－ジヒドロキシヘプチル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエートに置換し、リノール酸を８－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）オクタン酸に置換して、一般手順Ｄに従って調製。単離７２０ｍｇ、４８％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８３－０．９０（ｍ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．１５－１．２８（ｍ，１３Ｈ），１．２９－１．３５（ｍ，７Ｈ），１．３５－１．５５（ｍ，１８Ｈ），１．６６－１．９３（ｍ，６Ｈ），１．９８－２．０６（ｍ，８Ｈ），２．２４－２．３２（ｍ，３Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．５３－３．５９（ｍ，２Ｈ），３．６２－３．６７（ｍ，１Ｈ），４．０２－４．１０（ｍ，６Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２２－５．３８（ｍ，４Ｈ）．

【0357】

【化104】

ステップ４：（Ｚ）－３３－ブチル－１０－（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）－１３，２３，３２－トリオキソ－９，１４，２２，３１－テトラオキサノナトリアコンタ－３－エン－１８－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－ヒドロキシヘプチル ８－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）オクタノエートに置換して、一般手順Ｆに従って調製。単離３５５ｍｇ、粗製物を次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８４－０．８９（ｍ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），１．１８－１．２８（ｍ，１４Ｈ），１．２９－１．３３（ｍ，６Ｈ），１．３８－１．４２（ｍ，４Ｈ），１．５２－１．６２（ｍ，１０Ｈ），１．６６－１．８０（ｍ，８Ｈ），１．９８－２．０３（ｍ，１０Ｈ），２．２３－２．３２（ｍ，３Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３６－３．４２（ｍ，２Ｈ），３．５２－３．５９（ｍ，２Ｈ），４．０２－４．１１（ｍ，６Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．０８－５．１９（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．４１（ｍ，４Ｈ），７．１１－７．１４（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ）．

【0358】

ステップ５：７－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘプチル ８－（（２－ブチルオクタノイル）オキシ）オクタノエート（実施例７－３０）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを（Ｚ）－３３－ブチル－１０－（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）－１３，２３，３２－トリオキソ－９，１４，２２，３１－テトラオキサノナトリアコンタ－３－エン－１８－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１６８ｍｇ、４１％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１０分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９６４．７、実測値９６５．３．

【0359】

【化105】

実施例７－３１：５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）

【化106】

ステップ１：３－（２，６－ジオキソシクロヘキシル）プロパン酸エチル
エタノール（１００ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）中のシクロヘキサン－１，３－ジオン（１０ｇ、８９．２４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（１２．３ｇ、８９．２４ｍｍｏｌ）及びアクリル酸エチル（１０．４ｍＬ、９８．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間還流した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、水（２０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）とに分配した。水層をＥｔＯＡｃ（８×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗化合物を得た。粗生成物を、溶出液として酢酸エチル－ヘキサン（３０％）を用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、３－（２，６－ジオキソシクロヘキシル）プロパン酸エチル（６．５ｇ、４６％）を結晶性無色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ １．２５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．８０－２．０２（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３７－２．６６（ｍ，６Ｈ），４．１７（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），９．５３（ｓ，１Ｈ）．

【0360】

【化107】

ステップ２：５－オキソノナン二酸
６ＮのＨＣｌ水溶液（５０ｍＬ）中の３－（２，６－ジオキソシクロヘキシル）プロパン酸エチル（２．８ｇ、１３．２０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、還流下で１６時間撹拌した。全ての揮発物を減圧下で蒸発させて、５－オキソノナン二酸（２．３ｇ、９２％）を黄色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １．５３－１．７３（ｍ，４Ｈ），２．１７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４Ｈ），１２．０２（ｓ，２Ｈ）．

【0361】

【化108】

ステップ３：５－オキソノナン二酸ジメチル
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の５－オキソノナン二酸（２．７ｇ、１３．３６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｈ_２ＳＯ_４（０．４ｍＬ、６．６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間還流加熱した。完了したら、全ての揮発物を減圧下で蒸発させた。粗化合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、重炭酸塩溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、続いてブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗化合物を得た。粗化合物を、フラッシュクロマトグラフィー、溶出液３０％酢酸エチル－ヘキサンによって精製して、５－オキソノナン二酸ジメチル（１．８ｇ、５３％）を褐色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ １．８１－１．９４（ｍ，４Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ），２．４６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），３．６１－３．７１（ｍ，６Ｈ）．

【0362】

【化109】

ステップ４：ノナン－１，５，９－トリオール
乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中の５－オキソノナン二酸ジメチル（０．３ｇ、１．３０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＬＡＨ（ＴＨＦ中２．４Ｍの溶液）（３．２ｍＬ、７．８２ｍｍｏｌ）を氷冷条件下で添加した。反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。フィッシャー処理を行い、濾液を減圧下で蒸発させて、ノナン－１，５，９－トリオール（２１０ｍｇ、７２％）を無色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、重水素酸化物）δ １．２５－１．８０（ｍ，１２Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），３．６８－３．８６（ｍ，１Ｈ）。

【0363】

【化110】

ステップ５：５－ヒドロキシノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
ＤＣＭ（２０ｍＬ）及びＤＭＦ（２ｍＬ）の混合物中のノナン－１，５，９－トリオール（１．２ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１．１ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（８１ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）及び４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸（２９０ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）及び無水ＤＩＰＥＡ（１．７ｍＬ、９．８７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した。完了したら、反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）で洗浄した。水層をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を、ブライン（２×１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。このようにして得られた粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、３０％の酢酸エチル－ヘキサンで溶出して、５－ヒドロキシノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）（５６３ｍｇ、３９％）を無色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１２Ｈ），１．２５－１．７８（ｍ，３０Ｈ），１．８１－２．１４（ｍ，２０Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．４９－３．６５（ｍ，４Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），５．１２－５．５４（ｍ，８Ｈ）．

【0364】

【化111】

ステップ６：５－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
トルエン（２ｍＬ）中の５－ヒドロキシノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）（２３２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１，１’－カルボニルジイミダゾール（１３８ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）及びＫＯＨ（１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で１６時間加熱した。完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、５－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）（１７８ｍｇ、粗）を得て、これを次のステップに使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１２Ｈ），１．３３－１．５０（ｍ，１２Ｈ），１．５２－１．７３（ｍ，１７Ｈ），１．８５－１．９７（ｍ，４Ｈ），１．９６－２．０９（ｍ，１６Ｈ），２．３６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，４Ｈ），４．０６（ｑ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，４Ｈ），４．４８（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），５．２４－５．４２（ｍ，８Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ）．

【0365】

ステップ７：５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）（実施例７－３１）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを５－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換し、（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジメチルアミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離４０ｍｇ、２２％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９５０．７、実測値９５１．０．

【0366】

【化112】

実施例７－３２：５－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを５－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換し、（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジエチルアミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離５３ｍｇ、２９％（２ステップ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１２Ｈ），０．９８－１．２２（ｍ，４Ｈ），１．３３－１．４６（ｍ，１２Ｈ），１．４８－１．６９（ｍ，２６Ｈ），１．９１（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），１．９６－２．０９（ｍ，１６Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．６１（ｍ，４Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．６１－４．７５（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．４２（ｍ，８Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１４分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９７８．８、実測値９７９．０．

【0367】

【化113】

実施例７－３３：５－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを５－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（エチル（メチル）アミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離４３ｍｇ、２３％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９６４．７、実測値９６５．０．

【0368】

【化114】

実施例７－３４：５－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを５－（（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１４３ｍｇ、４３％（２ステップ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１２Ｈ），１．０１－１．２２（ｍ，４Ｈ），１．３１－１．４５（ｍ，１２Ｈ），１．４８－１．６９（ｍ，１４Ｈ），１．６８－１．８３（ｍ，４Ｈ），１．９２（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，７Ｈ），１．９６－２．１３（ｍ，１８Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ），２．７４－３．１７（ｍ，２Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．６１（ｍ，４Ｈ），３．９０－４．１５（ｍ，７Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．６１－４．７４（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．４２（ｍ，８Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１４分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９９０．８、実測値９９１．０．

【0369】

【化115】

実施例７－３５：５－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを５－ヒドロキシノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離５３ｍｇ、３５％（２ステップ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１２Ｈ），１．２０－１．４６（ｍ，１９Ｈ），１．４８－１．７３（ｍ，１５Ｈ），１．８３－２．１５（ｍ，２４Ｈ），２．３０－２．４８（ｍ，６Ｈ），５．２６－５．４２（ｍ，８Ｈ），２．５８－３．２０（ｍ，５Ｈ），０．７９－０．９１（ｍ，２Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，４Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，４Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），４．７１－５．０３（ｍ，１Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１０分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９６０．７、実測値９６１．０．

【0370】

【化116】

実施例７－３６：５－（（１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを５－ヒドロキシノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換し、４－（ピロリジン－１－イル）ブタン酸を１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボン酸に置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離１６ｍｇ、４２％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．０４分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９４６．７、実測値９４７．０．

【0371】

【化117】

実施例７－３７：５－（（１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）ノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを５－ヒドロキシノナン－１，９－ジイル ビス（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート）に置換し、４－（ピロリジン－１－イル）ブタン酸を１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボン酸に置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離１１１ｍｇ、５３％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．０７分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９６０．７、実測値９６１．０．

【0372】

【化118】

実施例７－３８：９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート

【化119】

ステップ１：５，９－ジヒドロキシノニル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート
ＤＣＭ（５０ｍＬ）及びＤＭＦ（５ｍＬ）の混合物中のノナン－１，５，９－トリオール（２．５ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＥＤＣ（２．１ｇ、１１．０２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１８０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）及び４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタン酸（３．８ｇ、２２．０４ｍｍｏｌ）及び無水ＤＩＰＥＡ（４．０ｍＬ、２２．０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した。完了したら、反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（２×１００ｍＬ）及びブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。このようにして得られた粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、７０％の酢酸エチル－ヘキサンで溶出して、５，９－ジヒドロキシノニル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート（１．２ｇ、３９％）を無色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．９０－１．０２（ｍ，６Ｈ），１．２９－１．７３（ｍ，２０Ｈ），１．８６－２．０９（ｍ，１０Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４－３．４６（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．７１（ｍ，５Ｈ），４．０２－４．１２（ｍ，２Ｈ），４．４０－４．５５（ｍ，１Ｈ），５．２６－５．３９（ｍ，４Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ）．

【0373】

【化120】

ステップ２：９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－ヒドロキシノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
ＤＣＭ（１０ｍＬ）及びＤＭＦ（１ｍＬ）中の５，９－ジヒドロキシノニル ４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノエート（０．６ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（０．６ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５２ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）及びリノール酸（１．０ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）及び無水ＤＩＰＥＡ（１．１ｍＬ、６．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した。完了したら、反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を、ブライン（２×１５ｍＬ）で洗浄した。有機部分を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料を、コンビフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、１０％の酢酸エチル－ヘキサンで溶出して、９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－ヒドロキシノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（７６４ｍｇ、４６％）を無色の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８１－０．９３（ｍ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ），１．１８－１．４６（ｍ，３０Ｈ），１．５３－１．７３（ｍ，７Ｈ），１．８５－２．１５（ｍ，１２Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），），２．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３２－３．４６（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，４Ｈ），４．４４－４．５３（ｍ，１Ｈ），５．２０－５．４４（ｍ，８Ｈ）．

【0374】

【化121】

ステップ３：１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート
トルエン（２ｍＬ）中の９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－ヒドロキシノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（０．２５ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１，１’－カルボニルジイミダゾール（１６０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）及びＫＯＨ（１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で１６時間加熱した。完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレート（２３１ｍｇ、粗）を得て、これを次のステップに使用した。

【0375】

ステップ４：９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（実施例７－３８）
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換し、（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジメチルアミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離１３４ｍｇ、４２％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１１分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８９０．７、実測値８９１．１．

【0376】

【化122】

実施例７－３９：９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換し、（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（ジエチルアミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離７３ｍｇ、４１％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９１８．７、実測値９１９．１．

【0377】

【化123】

実施例７－４０：９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換し、（１－エチルピペリジン－３－イル）メタノールを３－（エチル（メチル）アミノ）プロパン－１－オールに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離５０ｍｇ、３８％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９０４．７、実測値９０５．２．

【0378】

【化124】

実施例７－４１：９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ペンタン－３－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートを１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １Ｈ－イミダゾール－１－カルボキシレートに置換して、一般手順Ｇに従って調製。単離４８ｍｇ、３５％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１４分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９３０．７、実測値９３１．１．

【0379】

【化125】

実施例７－４２：９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）ノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－ヒドロキシノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離５８ｍｇ、５４％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１２分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９００．７、実測値９０１．０．

【0380】

【化126】

実施例７－４３：１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １，３－ジメチルピロリジン－３－カルボキシレート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－ヒドロキシノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換し、４－（ピロリジン－１－イル）ブタン酸を１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボン酸に置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離３０ｍｇ、４３％（２ステップ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：８８６．７、実測値８８７．０．

【0381】

【化127】

実施例７－４４：１－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－９－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）ノナン－５－イル １，４－ジメチルピペリジン－４－カルボキシレート
５－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－３－ヒドロキシペンチル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートを９－（（４，４－ビス（（（Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イル）オキシ）ブタノイル）オキシ）－５－ヒドロキシノニル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエートに置換し、４－（ピロリジン－１－イル）ブタン酸を１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボン酸に置換して、一般手順Ｈに従って調製。単離６２ｍｇ、５５％（２ステップ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，６Ｈ），１．１７－１．４７（ｍ，２６Ｈ），１．４７－１．７１（ｍ，２０Ｈ），１．９１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．９８－２．０９（ｍ，１２Ｈ），２．１６（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．３４－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８０－５．０２（ｍ，１Ｈ），５．２３－５．４４（ｍ，８Ｈ）．ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法Ａ）：保持時間２．１３分、ｍ／ｚ計算値［Ｍ＋Ｈ］：９００．７、実測値９０１．０．

【0382】

実施例８：様々な細胞型にわたるＬＮＰ調製物のｍＲＮＡ送達
本実施例は、機能的ｍＲＮＡを様々な細胞型に送達する例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームは、様々な細胞型にわたる機能的ｍＲＮＡの送達について、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定することができる。本実施例は、提供される脂質が、ある特定の細胞型への、マウスにおける機能的ｍＲＮＡ、及び／又はレポーターをコードするｍＲＮＡの改善された送達（例えば、１．５～２倍の改善）を送達することが可能であることを示すために使用することができる。

【0383】

様々な細胞型にわたって、マウスにおいて機能的ｍＲＮＡを送達する各調製物の能力を決定するために、ＬＮＰ調製物を選択する。ＬＮＰ調製物は、各々、本明細書に記載されるように１．０ｍｇ／ｋｇのレポーターｍＲＮＡを含有する。本明細書に記載のフローアッセイを使用して、ＬＮＰ調製物注射の２４時間後のレポーター表面発現を測定する。

【0384】

例示的なＬＮＰ調製物は、様々なＨＳＣ細胞型（Ｌｉｎ－、Ｓｃａ－１＋、ＬＳＫ細胞、ＬＴ－ＨＳＣ（ＣＤ３４－Ｆｌｋ２－）、及びＬＴ－ＨＳＣ（ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－））、骨髄（ＢＭ）細胞型（生細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＣＤ１１ｂ、マクロファージ、ＮＫ細胞、ＣＤ１１ｃ）、脾臓細胞型（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＣＤ１１ｂ、マクロファージ、ＮＫ細胞、ＣＤ１１ｃ）、及び肝臓細胞型（ＣＤ３１、肝細胞、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞）にわたる、マウスへのレポーターをコードするｍＲＮＡの機能的な送達を提供することができ、各ＬＮＰ調製物が、生理食塩水対照（ビヒクル）と比較して、１．０ｍｇ／ｋｇのレポーターｍＲＮＡを含有する。

【0385】

本実施例は、提供される脂質が、ある特定の細胞型への、マウスにおける機能的ｍＲＮＡ、及び／又はレポーターをコードするｍＲＮＡの改善された送達（例えば、１．５～２倍の改善）を送達することが可能であることを示すために使用することができる。

【0386】

実施例９：脾臓、肝臓、及び骨髄細胞へのＬＮＰ調製物のｍＲＮＡ送達
本実施例は、本明細書に記載の様々な細胞型への強力な送達を有する、例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームが、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定して、どの種類のＬＮＰ調製物が特定の細胞型に対して最も強力であるかを決定することができる。

【0387】

本実施例は、イオン化可能な脂質が、マウスの様々な細胞型にわたってｍＲＮＡを効果的に送達することを示すために使用することができる。本実施例はまた、提供される脂質が、骨髄樹状細胞、骨髄Ｔ細胞、脾臓Ｂ細胞、脾臓樹状細胞、及びＬＳＫ（Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋ｃ－Ｋｉｔ＋）細胞、ＨＳＰＣ、及びマウスＬＴ－ＨＳＣを含む様々な細胞型にわたって強力な送達を示すことを示すために使用することができる。

【0388】

ＬＮＰ調製物を選択して、本明細書に記載のレポーター系及びＣ５７ＢＬ６マウスモデルを使用して、有効性結果を確認する。各実験において、群当たり３匹のＣ５７ＢＬ６マウスを使用する。注射後２４時間にデータを収集する。

【0389】

ヒートマップを使用して、様々な細胞型（骨髄樹状細胞、脾臓Ｂ細胞、及び脾臓樹状細胞）にわたる、例示的な脂質を含有するＬＮＰ調製物の平均中央蛍光値に対して正規化された、異なるイオン化可能な脂質を含有する様々なＬＮＰ調製物の平均中央蛍光値を示すことができる。各ＬＮＰ調製物は、１．０ｍｇ／ｋｇのレポーターｍＲＮＡを含有する。

【0390】

ヒートマップを使用して、異なるイオン化可能な脂質を含有する様々なＬＮＰ調製物の正規化された平均レポーター発現％又は正規化された平均中央蛍光値を示すことができる。Ｔ細胞（骨髄細胞）又はＬＳＫ（Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋ｃ－Ｋｉｔ＋）細胞に送達される例示的な脂質を含有するＬＮＰ調製物のレポーター発現％及び平均中央蛍光値に対して、それぞれ、平均レポーター％及び平均中央蛍光値を正規化する。

【0391】

実施例１０：Ｂａｌｂ／Ｃ、Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウス株＆ヒト化（ＮＳＧ－ＣＤ３４＋）免疫マウスへのＬＮＰ調製物のｍＲＮＡ送達
本実施例は、本明細書に記載の様々な細胞型への強力なｍＲＮＡ送達を有する、例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームを使用して、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定して、どの種類のＬＮＰ調製物が特定の細胞型に対して最も強力であるかを決定することができる。本実施例は、提供された脂質が骨髄生細胞、骨髄ＣＤ３４＋細胞、骨髄（ＬＳＫ細胞）、ヒトＬＴ－ＨＳＣ、血液細胞（ｈｕＣＤ４５＋）、及び血液細胞（ｍｕＣＤ４５＋）を含む様々な細胞型にわたって強力な送達を示すことを示すために使用することができる。

【0392】

ＬＮＰ調製物を選択して、本明細書に記載のレポーター系及びヒト化（ＮＳＧ－ＣＤ３４＋）マウスモデル、又は２つのマウス株（Ｂａｌｂ／Ｃ、Ｃ５７ＢＬ６Ｊ）マウスを使用して有効性結果を確認する。各ＬＮＰ調製物は、１．０ｍｇ／ｋｇのレポーターｍＲＮＡを含有する。

【0393】

本明細書に記載の例示的なＬＮＰ調製物を、２つのマウス株（Ｂａｌｂ／Ｃ、Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウス）において、血液細胞、骨髄（生細胞）、及び骨髄（ＬＳＫ細胞）への送達について試験した。

【0394】

各実験において、群当たり３匹のＢａｌｂ／Ｃマウス及び／又はＣ５７ＢＬ６Ｊ及び／又はＮＳＧ－ＣＤ３４＋マウスを使用する。注射後２４時間にデータを収集する。

【0395】

実施例１１：ｍＲＮＡを流入領域リンパ節に筋肉内送達するためのＬＮＰ調製物
本実施例は、ｍＲＮＡを流入領域リンパ節に送達する、（例えば、ｍＲＮＡワクチンとして使用するための）例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームを使用して、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定して、（例えば、ｍＲＮＡワクチンとして使用するために）どの種類のＬＮＰ調製物が、流入領域リンパ節へのｍＲＮＡ送達について最も強力であるかを決定することができる。したがって、本実施例は、提供された脂質が流入領域リンパ節への強力な送達を示すことを示すために使用することができる。

【0396】

Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて機能的ｍＲＮＡを筋肉内送達する各調製物の能力を決定するために、ＬＮＰ調製物を選択する。各ＬＮＰ調製物は、１０μｇのＴｒｉｌｉｎｋ Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡを含有する。注射の６時間後、皮膚－流入領域リンパ節（ｄＬＮ）を単離し、本明細書に記載の標準的な発光アッセイを使用して、発光を測定する。

【0397】

実施例１２：脾臓、肝臓、及び骨髄における塩基編集のためのＬＮＰ調製物の利用
本実施例は、様々な細胞型において、（例えば、塩基エディターを使用する）遺伝子編集を付与する例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームを使用して、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定して、どの種類のＬＮＰ調製物が、インビボで様々な細胞型の塩基編集に対して最も強力であるかを決定することができる（例えば、マウスで細胞の塩基編集を行うことができる）。本実施例は、提供される脂質が、骨髄、脾臓、及び肝臓を含む様々な細胞型において塩基編集を行うために使用することができること、並びに／又は特定の細胞型へのＬＮＰ調製物の送達を改善するために使用することができる。本実施例はまた、その例示的な化合物を含有するＬＮＰ調製物とともに含有されるｍＲＮＡが、送達中にＬＮＰ中でより安定化されることを示すために使用することができる。

【0398】

方法
本明細書に記載のＢａｌｂ／Ｃマウスモデルにおいて塩基編集を行う各調製物の能力を決定するために、例示的なＬＮＰ調製物を選択する。

【0399】

脂質ナノ粒子構成成分を、定められた脂質構成成分モル比で１００％エタノールに溶解させる。アデニン塩基エディターをコードするｍＲＮＡと、化学修飾されたｓｇＲＮＡとを、１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ４．０中１：１の質量比で溶解させ、およそ０．２２ｍｇ／ｍＬのＮＡカーゴの濃度が生じる。５０％のイオン化可能な脂質：３８．５％のコレステロール：１．５％のＰＥＧ２０００－ＤＭＧ：１０％のＤＳＰＣのモル比、及び１１．７：３３の総脂質対ＮＡの質量比でＬＮＰ調製物を製剤化する。製造業者のプロトコルに従って、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｓｐａｒｋ又はＢｅｎｃｈｔｏｐ ｓｅｒｉｅｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを使用して、脂質及びＮＡ溶液のマイクロ流体混合によって、ＬＮＰ調製物を形成する。異なる流量を使用する混合中に、３：１の水性溶媒対有機溶媒の比を維持する。混合の後、ＬＮＰ調製物を収集し、ＰＢＳ（およそ２：１ｖ／ｖ）に希釈し、ＰＢＳ中４℃で８～２４時間の間、２０ｋＤＡフィルタに対する透析を使用して、更なる緩衝液交換を実行する。この最初の透析の後、動的光散乱（ＤＬＳ）を介して各個々のＬＮＰ調製物を特徴評価して、サイズ及び多分散性を測定する。ＴＮＳアッセイを介してＬＮＰ調製物の亜集団のｐＫａを測定する。透析の後、０．２２ミクロン滅菌フィルタを使用してＬＮＰ調製物を滅菌濾過し、更なる使用のために４℃で保管する。一部の実施形態では、ＬＮＰ調製物は、製造業者のプロトコルに従って、１００ｋＤａのＡｍｉｃｏｎフィルタを使用して濃縮してもよい。

【0400】

ＬＮＰ特徴評価
ＤＬＳ－高スループット動的光散乱（ＤＬＳ）（ＤｙｎａＰｒｏ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ ＩＩ、Ｗｙａｔｔ）を使用して、ＬＮＰ調製物流体力学的直径及び多分散性指数（ＰＤＩ）を測定する。適切な濃度まで１倍のＰＢＳにＬＮＰ調製物を希釈し、分析する。

【0401】

濃度及びカプセル化効率
製造業者の説明書に従って、Ｑｕｂｉｔ ｍｉｃｒｏＲＮＡキット（ｓｉＲＮＡ用）又はＨＳ ＲＮＡキット（ｍＲＮＡ用）によって、ＮＡの濃度を決定する。未溶解のＬＮＰ及び溶解したＬＮＰを測定することによって、カプセル化効率を決定する。

【0402】

ＬＮＰ投与
本明細書に記載の実験に、およそ８～１２週齢の雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスを使用する。各マウスを一時的に拘束し、尾部静脈注射を介してＬＮＰ調製物をＩＶ投与する。また、年齢が一致するマウスを使用して、尾部静脈注射を介して、対照としてビヒクル（１倍のＰＢＳ）を投与する。投与の４～６日後、肝臓、脾臓、及び骨髄を含む組織を収集する。製造業者の説明書に従って、９６ウェルプレートＮｅｘｔｅｒａインデックスプライマー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、Ｎｅｘｔｅｒａ ＤＮＡ Ｆｌｅｘ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、ゲノムＤＮＡを単離し、断片化し、アダプターライゲーションする。Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によってライブラリのサイズ及び濃度を確認し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑを使用する全ゲノム配列決定のために、Ｎｏｖｏｇｅｎｅに送る。

【0403】

塩基編集
塩基編集のために、１：１（質量比）のアデニン塩基エディター（ＡＢＥ）をコードするｍＲＮＡと、ＡＬＡＳ１を標的とするガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）とを、本明細書に記載のＬＮＰ調製物内にともにカプセル化する。尾部静脈注射を通じてＢａｌｂ／ｃマウスに、３．０ｍｇ／ｋｇの総ＲＮＡでＬＮＰ調製物を投与する。投与４日後にマウスを安楽死させ、肝臓、脾臓、及び骨髄を採取する。抽出したゲノムＤＮＡを使用して、ＡＬＡＳ１標的部位で標的化された深部配列決定分析を行うことによって、塩基編集を決定する。

【0404】

実施例１３：例示的なＬＮＰ調製物をマウスＨＳＰＣへと送達する。
本実施例は、本明細書に記載の様々な細胞型への強力な送達を有する、例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本実施例は、提供された脂質が、トランスフェクトされたＨＳＰＣなどの特定の細胞型において、用量依存的な増加を示すことを示すために使用することができる。

【0405】

ＬＮＰ調製物を選択して、３つの異なる用量（０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ）で、本明細書に記載のＣｒｅレポーター系及びＡｉ１４マウスモデルを使用して、有効性結果を確認する。

【0406】

実施例１４：例示的なＬＮＰ調製物をマウスＨＳＰＣへと送達する。
本実施例は、本明細書に記載の様々な細胞型への強力な送達を有する、例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。

【0407】

ＬＮＰ調製物を選択して、本明細書に記載のＣｒｅレポーター系及びＡｉ１４マウスモデルを使用して、複数の時点（例えば、０．３ｍｇ／ｋｇのＣｒｅ ｍＲＮＡの用量でのＬＮＰ送達後２、８、及び１６週、又は１．０ｍｇ／ｋｇのＣｒｅ ｍＲＮＡの用量でのＬＮＰ送達後２、８、及び１６週）でのＨＳＰＣ中の％ｔｄＴｏｍａｔｏ＋の持続性をモニタリングすることによって、有効性結果を確認する。

【0408】

トランスフェクトされたＨＳＰＣの持続性を観察したとき、トランスフェクトされたＨＳＰＣを分析して、０．３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇのＣｒｅ ｍＲＮＡを投与したマウスコホートの単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び赤血球における、１６週の時点での末梢血中のｔｄＴｏｍａｔｏ＋％存在量を測定することによって、様々な免疫系統及び造血系統を再構築するそれらの能力を決定する。

【0409】

本実施例を使用して、提供される脂質が、ＨＳＰＣへの持続性のあるＬＮＰ送達を生じることを示すことができる。更に、本実施例を使用して、トランスフェクトされたＨＳＰＣが造血区画を再構築することができることを示すことができる。

【0410】

実施例１５：例示的なＬＮＰ調製物をインビトロでヒトＣＤ３４＋ＨＳＰＣに送達する。
本実施例は、本明細書に記載の様々な細胞型への強力な送達を有する、例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。したがって、本実施例は、提供される脂質が、ＡｐｏＥの存在下で特定の細胞型に送達される場合、レポーター発現の増加を生じることを示すために使用することができる。

【0411】

インビトロでのヒトＣＤ３４＋ＨＳＰＣにおける有効性結果を確認するために、ＬＮＰ調製物を選択する。

【0412】

簡潔に言えば、ヒトＣＤ３４＋細胞を解凍し、次いで、細胞培養プレート中４０，０００細胞／ウェルで４８ウェル組織培養プレートに配置する。細胞を４８時間インキュベートして、１０％のペニシリン－ストレプトマイシン及びＳｔｅｍＳｐａｎ ＣＤ３４＋Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＳｔｅｍＳｐａｎ細胞培養培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で恒常性に到達させる。ＬＮＰにカプセル化された１０００ｎｇのレポーターｍＲＮＡを投与し、その後、細胞を３００×Ｇで遠心分離し、前述のように補充した培地に再懸濁させる。ＬＮＰ取り込みにＡｐｏＥが必要かどうかを試験するために、目的の各ウェルに、２μＬの組換えヒトアポタンパク質Ｅ３（ＡｐｏＥ３、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加する。２４時間後、細胞Ｆｃ受容体をヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ＰＢＳで洗浄し、レポーター発現のために表現型決定マーカー及び生存可能性染料とともに蛍光染色する。

【0413】

実施例１６：ＬＮＰの調製及び特徴評価
ＬＮＰ調製物
とりわけ、本実施例は、例示的なＬＮＰ調製物を提供する。

【0414】

脂質ナノ粒子構成成分を、定められた脂質構成成分モル比で１００％エタノール中に溶解させた。１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ４．０に核酸（ＮＡ）カーゴを溶解させ、およそ０．２２ｍｇ／ｍＬのＮＡカーゴの濃度が生じた。一部の実施形態では、ＮＡカーゴは、１：１０～１０：１の機能的ＮＡ対バーコードの質量比で混合した、機能的ＮＡ及びレポーターＤＮＡバーコードの両方を含む。本明細書に記載されるように、ＮＡは、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス、発現ＤＮＡ、又はｍＲＮＡであり得る。

【0415】

ＬＮＰを、４７．５％のイオン化可能な脂質（例えば、本明細書で提供される化合物）：４０％のコレステロール：２．５％のＰＥＧ－２０００ＤＭＧ：１０％のＤＰＳＣ、並びに４～８のＮ／Ｐ比の範囲で調製した。製造業者のプロトコルに従って、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｓｐａｒｋ又はＢｅｎｃｈｔｏｐ ｓｅｒｉｅｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを使用して、脂質及びＮＡ溶液のマイクロ流体混合によって、ＬＮＰを形成した。異なる流量を使用する混合中に、およそ２：１又は３：１の水性溶媒対有機溶媒の比を維持した。混合の後、ＬＮＰを収集し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又はＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）（およそ１：１ｖ／ｖ）で希釈した。ＰＢＳ又はＴＢＳ中４℃で４～２４時間の間、２０ｋＤａフィルタに対する透析を使用して、更なる緩衝液交換を実行した。この最初の透析の後、動的光散乱（ＤＬＳ）を介して各個々のＬＮＰ調製物を特徴評価して、サイズ（例えば、直径）及び多分散性を測定した。比直径及び多分散性範囲内にあるＬＮＰをプールし、１００ｋＤａ透析カセットに対して４℃で１～４時間の間、ＰＢＳ又はＴＢＳに対して更に透析する。第２の透析の後、０．２２μＭフィルタを使用してＬＮＰを滅菌濾過し、更なる使用のために４℃で保管した。

【0416】

ＬＮＰ特徴評価
高スループット動的光散乱（ＤＬＳ）（Ｓｔｕｎｎｅｒ、Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）を使用して、ＬＮＰ流体力学的直径及び多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。適切な濃度まで１倍のＴＢＳ又はＰＢＳにＬＮＰを希釈し、分析した。

【0417】

ＲＮＡ濃度及びカプセル化効率を、Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎアッセイ（ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＬＸプレートリーダー）によって決定した。

【0418】

提供された脂質を使用して調製されたＬＮＰの特徴評価データを表２にまとめている。

【表2】

【0419】

実施例１７：ＬＮＰの投与及び生体内分布
本実施例によって記載される研究のために、およそ８～１２週齢の雄及び雌マウスを使用した。各マウスを一時的に拘束し、プールしたＬＮＰを、実験ごとに最大５匹の動物に尾部静脈注射を介してＩＶ投与した。また、年齢が一致するマウスを使用して、実験ごとに最大３匹の動物に尾部静脈注射を介してビヒクル（１倍のＴＢＳ）を投与した。また、脳室心房（ＩＣＶ）、大槽内マンガ（ＩＣＭ）、髄腔内（ＩＴ）、筋肉内（ＩＭ）、噴霧、鼻腔内（ＩＮ）、皮下（ＳＣ）、関節内、及び皮内（ＩＤ）を含む追加の投与経路を行ってもよい。投与後４時間で、肝臓、脾臓、骨髄、精巣、腓腹筋、大腿四頭筋、肺、心臓、腎臓、及び膵臓を含む組織を分析のために収集してもよい。

【0420】

フロー
肝臓、腎臓、肺、及び筋肉（例えば、骨格筋及び心筋）組織を、機械によって、次いで、プロテイナーゼの混合物を使用して酵素によって消化させ、次いで、７０μＭフィルタに通して、単一細胞懸濁液を生成してもよい。脾臓組織を機械によって消化させて、単一細胞懸濁液を生成した。組織をＡＣＫ緩衝液で処理して赤血球を溶解させ、次いで、フローサイトメトリー及び蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）のために蛍光標識抗体で染色した。本実施例では、市販の抗体を使用した。ＢＤ ＦＡＣＳＭｅｌｏｄｙ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、フローサイトメトリーを介して試料を取得し、選別前にゲートを生成した。一般に、ゲーティング構造は、サイズ→単一細胞→生細胞→目的の細胞であった。Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋と定義し、単球は、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋と定義し、Ｂ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋と定義した。それぞれ、内皮細胞は、ＣＤ３１＋、単球及びＫｕｐｆｆｅｒ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋と定義し、肝臓及び筋肉における肝細胞及び筋細胞は、ＣＤ３１－／ＣＤ４５－と定義した。ビヒクルを投与したマウスからの組織を使用して、選別のためのゲートを設定した。

【0421】

組織からのＲＮＡを、Ｒｅｌｉａｐｒｅｐ ＲＮＡ抽出キットを使用して抽出し、ＲＮＡｓｅｑキットを使用してライブラリを調製し、ＭｉＳｅｑ又はＮｅｘｔＳｅｑ５００のいずれかで配列決定した。

【0422】

標的組織への優先的なＬＮＰ送達をスクリーニングするために、１つ以上の標的組織における各バーコードの相対的な存在量を測定し、対応する相対的な入力存在量に対する各バーコードの相対的な存在量と比較して、各バーコードの入力上の倍数（ＦＡＩ）を決定した。標的組織中のバーコードのＦＡＩが、同じ組織中の異なるＬＮＰの閾値を上回るか、又はＦＡＩを上回る場合、ＬＮＰは、標的組織に優先的に送達するものとして同定され得る。

【0423】

ＦＡＩは、入力におけるその頻度と比較して、選択された試料中のバーコードの正規化された相対的な存在量である。バーコードのＦＡＩは、ＬＮＰの存在量がＬＮＰプールの残りの部分に対してどのように変化するかを示す。バーコードのＦＡＩ値は、単離された試料中のバーコード配列数における相対的な存在量を、投与入力におけるその相対的な存在量に対して正規化することによって計算した。例えば、ＦＡＩ値１は、単離された試料において、それが投与プールにおいて行うのと同じ頻度で現れるＬＮＰを表し、それが、その同じ投与プールにおける他のＬＮＰ集団と比較して測定された細胞型に対して中立的なトロピズムを示すことを表す。次いで、ＦＡＩは、入力ＬＮＰ組成物に対するＬＮＰの性能を示す。

【0424】

提供された脂質を使用して調製されたＬＮＰの生体内分布データを、表３、表４、及び表５にまとめている。各表は、１つのスクリーニング実験から得られたデータを記載する。

【表3】

【表4】

【表5】

【0425】

実施例１８：脾臓、肝臓、及び骨髄における塩基編集のためのＬＮＰ調製物の利用
本実施例は、様々な細胞型において、（例えば、塩基エディターを使用する）遺伝子編集を付与する例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームを使用して、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定して、どの種類のＬＮＰ調製物が、インビボで様々な細胞型の塩基編集に対して最も強力であるかを決定することができる（例えば、マウスで細胞の塩基編集を行うことができる）。

【0426】

本実施例は、提供される脂質が、骨髄、脾臓、及び肝臓を含む様々な細胞型において塩基編集を行うために使用することができること、並びに／又は特定の細胞型へのＬＮＰ調製物の送達を改善するために使用することができる。本実施例はまた、その例示的な化合物を含有するＬＮＰ調製物とともに含有されるｍＲＮＡが、送達中にＬＮＰ中でより安定化されることを示すために使用することができる。

【0427】

方法
本明細書に記載のＢａｌｂ／Ｃマウスモデルにおいて塩基編集を行う各調製物の能力を決定するために、例示的なＬＮＰ調製物を選択した。

【0428】

脂質ナノ粒子構成成分を、定められた脂質構成成分モル比で１００％エタノールに溶解させた。アデニン塩基エディターをコードするｍＲＮＡと、化学修飾されたｓｇＲＮＡとを、５０ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ４．０中１：１の質量比で溶解させ、およそ０．１ｍｇ／ｍＬのＮＡカーゴの濃度が生じた。

【0429】

４７．５％のイオン化可能な脂質：４０％のコレステロール：２．５％のＰＥＧ２０００－ＤＭＧ：１０％のＤＳＰＣのモル比、及び６：１２の総脂質対ＮＡの質量比でＬＮＰ調製物を製剤化した。

【0430】

製造業者のプロトコルに従って、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｉｇｎｉｔｅ ｓｅｒｉｅｓ装置を使用して、脂質及びＮＡ溶液のマイクロ流体混合によって、ＬＮＰ調製物を形成した。

【0431】

異なる流量を使用する混合中に、３：１の水性溶媒対有機溶媒の比を維持した。混合の後、ＬＮＰ調製物を収集し、ＴＢＳ（およそ７：１ｖ／ｖ）に希釈し、ＴＢＳ中４℃で８～２４時間の間、２０ｋＤＡフィルタに対する透析を使用して、更なる緩衝液交換を実行した。この最初の透析の後、動的光散乱（ＤＬＳ）を介して各個々のＬＮＰ調製物を特徴評価して、サイズ及び多分散性を測定した。ＴＮＳアッセイを介してＬＮＰ調製物の亜集団のｐＫａを測定した。

【0432】

透析の後、０．２２ミクロン滅菌フィルタを使用してＬＮＰ調製物を滅菌濾過し、更なる使用のために４℃で保管した。一部の実施形態では、ＬＮＰ調製物は、製造業者のプロトコルに従って、１００ｋＤａのＡｍｉｃｏｎフィルタを使用して濃縮した。

【0433】

ＬＮＰ特徴評価
ＤＬＳ－高スループット動的光散乱（ＤＬＳ）（ＤｙｎａＰｒｏ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ ＩＩ、Ｗｙａｔｔ）を使用して、ＬＮＰ調製物流体力学的直径及び多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。適切な濃度まで１倍のＰＢＳをＬＮＰ調製物を希釈し、分析した。

【0434】

濃度及びカプセル化効率
製造業者の説明書に従って、Ｑｕｂｉｔ ｍｉｃｒｏＲＮＡキット（ｓｉＲＮＡ用）又はＨＳ ＲＮＡキット（ｍＲＮＡ用）によって、ＮＡの濃度を測定した。未溶解のＬＮＰ及び溶解したＬＮＰを測定することによって、カプセル化効率を決定した。

【0435】

ＬＮＰ投与
本明細書に記載の実験に、およそ８～１２週齢の雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスを使用した。各マウスを一時的に拘束し、尾部静脈注射を通じてＢａｌｂ／Ｃマウスに、０．１５ｍｇ／ｋｇの総ＲＮＡでＬＮＰ調製物を投与した。

【0436】

また、年齢が一致するマウスを使用して、尾部静脈注射を介して、対照としてビヒクル（１倍のＴＢＳ）を投与した。投与の４～６日後、肝臓、脾臓、及び骨髄を含む組織を収集した。抽出したゲノムＤＮＡを使用して、ＡＬＡＳ１標的部位で標的化された深部配列決定分析を行うことによって、塩基編集を決定する。製造業者の説明書に従って、９６ウェルプレートＮｅｘｔｅｒａインデックスプライマー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、Ｎｅｘｔｅｒａ ＤＮＡ Ｆｌｅｘ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、ゲノムＤＮＡを単離し、断片化し、アダプターライゲーションした。Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によってライブラリのサイズ及び濃度を確認し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑを使用する全ゲノム配列決定について分析した。

【0437】

この実施例のプロトコルに化合物７～２１を使用して、３４．１％の塩基編集が、０．１５ｍｇ／ｋｇ用量で、肝臓において観察された。

【0438】

この実施例のプロトコルに化合物７～４１を使用して、１．７％の塩基編集が、０．１５ｍｇ／ｋｇ用量で、肝臓において観察された。

【0439】

対照ビヒクルとしてＴＢＳを使用して、肝臓において０．０６％の塩基編集が観察された。

【0440】

実施例１９：脾臓、肝臓、及び骨髄における塩基編集のためのＬＮＰ調製物の利用
本実施例は、様々な細胞型において、（例えば、塩基エディターを使用する）遺伝子編集を付与する例示的なＬＮＰ組成物、調製物、ナノ粒子、及び／又はナノ材料を提供する。本明細書に記載のスクリーニングプラットフォームを使用して、いくつかの非常に強力なＬＮＰ調製物を同定して、どの種類のＬＮＰ調製物が、インビボで様々な細胞型の塩基編集に対して最も強力であるかを決定することができる（例えば、マウスで細胞の塩基編集を行うことができる）。

【0441】

本実施例は、提供される脂質が、骨髄、脾臓、及び肝臓を含む様々な細胞型において塩基編集を行うために使用することができること、並びに／又は特定の細胞型へのＬＮＰ調製物の送達を改善するために使用することができる。本実施例はまた、その例示的な化合物を含有するＬＮＰ調製物とともに含有されるｍＲＮＡが、送達中にＬＮＰ中でより安定化されることを示すために使用することができる。

【0442】

方法
本明細書に記載のＮＢＳＧＷマウスモデルにおいて塩基編集を行う各調製物の能力を決定するために、例示的なＬＮＰ調製物を選択する。

【0443】

脂質ナノ粒子構成成分を、定められた脂質構成成分モル比で１００％エタノールに溶解させる。アデニン塩基エディターをコードするｍＲＮＡと、化学修飾されたｓｇＲＮＡとを、１０ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ３．０中１：１の質量比で溶解させ、およそ０．２ｍｇ／ｍＬのＮＡカーゴの濃度が生じる。

【0444】

５０％のイオン化可能な脂質：３８．５％のコレステロール：１．５％のＰＥＧ２０００－ＤＭＧ：１０％のＤＳＰＣのモル比、及び１９：１の総脂質対ＮＡの質量比でＬＮＰ調製物を製剤化する。

【0445】

製造業者のプロトコルに従って、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｓｐａｒｋ ｓｅｒｉｅｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを使用して、脂質及びＮＡ溶液のマイクロ流体混合によって、ＬＮＰ調製物を形成する。

【0446】

異なる流量を使用する混合中に、３：１の水性溶媒対有機溶媒の比を維持する。混合の後、ＬＮＰ調製物を収集し、ＰＢＳ（およそ２：１ｖ／ｖ）に希釈し、ＰＢＳ中４℃で８～２４時間の間、２０ｋＤＡフィルタに対する透析を使用して、更なる緩衝液交換を実行する。この最初の透析の後、動的光散乱（ＤＬＳ）を介して各個々のＬＮＰ調製物を特徴評価して、サイズ及び多分散性を測定する。ＴＮＳアッセイを介してＬＮＰ調製物の亜集団のｐＫａを測定する。

【0447】

透析の後、０．２２ミクロン滅菌フィルタを使用してＬＮＰ調製物を滅菌濾過し、更なる使用のために４℃で保管する。一部の実施形態では、ＬＮＰ調製物は、製造業者のプロトコルに従って、１００ｋＤａのＡｍｉｃｏｎフィルタを使用して濃縮してもよい。

【0448】

ＬＮＰ特徴評価
ＤＬＳ－高スループット動的光散乱（ＤＬＳ）（ＤｙｎａＰｒｏ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ ＩＩ、Ｗｙａｔｔ）を使用して、ＬＮＰ調製物流体力学的直径及び多分散性指数（ＰＤＩ）を測定する。適切な濃度まで１倍のＰＢＳにＬＮＰ調製物を希釈し、分析する。

【0449】

濃度及びカプセル化効率
製造業者の説明書に従って、Ｑｕｂｉｔ ｍｉｃｒｏＲＮＡキット（ｓｉＲＮＡ用）又はＨＳ ＲＮＡキット（ｍＲＮＡ用）によって、ＮＡの濃度を決定する。未溶解のＬＮＰ及び溶解したＬＮＰを測定することによって、カプセル化効率を決定する。

【0450】

ＬＮＰ投与及び塩基編集
投与の４週間前に、およそ８～１２週齢のＮＢＳＧＷマウスに、５ｅ５ヒトＣＤ３４＋細胞を生着させ、本明細書に記載の実験に使用する。生着の４週間前に、各マウスを一時的に拘束し、尾部静脈注射を介して３ｍｇ／ｋｇでＬＮＰ調製物をＩＶ投与する。

【0451】

また、年齢が一致するマウスを使用して、尾部静脈注射を介して、対照としてビヒクル（１倍のＰＢＳ）を投与する。投与の４～６日後、肝臓、脾臓、及び骨髄を含む組織を収集する。抽出したゲノムＤＮＡを使用して、ヒトＡＬＡＳ１標的部位で標的化された深部配列決定分析を行うことによって、塩基編集を決定する。製造業者の説明書に従って、９６ウェルプレートＮｅｘｔｅｒａインデックスプライマー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、Ｎｅｘｔｅｒａ ＤＮＡ Ｆｌｅｘ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、ゲノムＤＮＡを単離し、断片化し、アダプターライゲーションする。Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によってライブラリのサイズ及び濃度を確認し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑを使用する全ゲノム配列決定を使用して配列決定する。

【0452】

同等物
当業者であれば、通常範囲を超えない実験を使用して、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの同等物を認識するか、又は確定することができるであろう。本発明の範囲は、上の発明の概要に限定されることを意図せず、むしろ、以下の特許請求の範囲に記載されるとおりである。

【図1】

【図2】

【国際調査報告】