特表 2025-501887 アルファ因子プレプロ配列を含む組成物及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-24

(54)【発明の名称】アルファ因子プレプロ配列を含む組成物及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20250117BHJP

   C07K 14/39 20060101ALI20250117BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20250117BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250117BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250117BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250117BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250117BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20250117BHJP

   C12N 15/09 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 39/215 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 39/12 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 39/145 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 39/02 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 31/7115 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20250117BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20250117BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250117BHJP

   C07K 16/00 20060101ALN20250117BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20250117BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00

C07K14/39 ZNA

C12N15/62 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/02 C

C12N15/09 Z

A61K38/02

A61K39/215

A61K39/12

A61K39/145

A61K39/02

A61K39/00 Z

A61K39/395 A

A61K39/395 H

A61K38/17

A61K38/16

A61K48/00

A61K31/711

A61K31/7105

A61K31/7115

A61K35/12

A61P37/04

A61P43/00 105

A61P43/00 111

C07K16/00

C07K16/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024535802

(86)(22)【出願日】2023-01-05

(85)【翻訳文提出日】2024-06-14

(86)【国際出願番号】 US2023010253

(87)【国際公開番号】W WO2023133233

(87)【国際公開日】2023-07-13

(31)【優先権主張番号】63/296,824

(32)【優先日】2022-01-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522424175

【氏名又は名称】ヘリックス ナノテクノロジーズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ギル， テイラー

(72)【発明者】

【氏名】ジャメ， ケモ

(72)【発明者】

【氏名】エロシェンコ， ニコライ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG01

4B064AG27

4B064AG31

4B064AG32

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA88X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA01

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA07

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA02

4C084BA03

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA41

4C084BA44

4C084MA17

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB09

4C084ZB21

4C084ZC02

4C085AA02

4C085AA03

4C085AA11

4C085BA07

4C085BA51

4C085BA55

4C085BA71

4C085BB01

4C085EE01

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA17

4C086MA22

4C086MA23

4C086MA66

4C086NA14

4C086ZB09

4C086ZB21

4C086ZC02

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087MA17

4C087MA22

4C087MA23

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB21

4C087ZC02

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA41

4H045CA01

4H045CA11

4H045CA15

4H045CA41

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

（ｉ）ペイロードポリペプチド、及び、（ｉｉ）野生型または改変型α因子プレプロ配列、を含む改変型ポリペプチドが本明細書で開示され、野生型または改変型α因子プレプロ配列が、ペイロードポリペプチドに作動可能に連結されている。本開示の改変型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び本開示のそのようなポリヌクレオチドまたは改変型ポリペプチドを含む組成物も本明細書で提供される。開示されたポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び組成物を作成及び使用する方法も提供される。
【選択図】図４

【特許請求の範囲】

【請求項1】

改変型ポリペプチドであって、
（ｉ）ペイロードポリペプチド、
（ｉｉ）野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント、を含み、前記野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントが、前記ペイロードポリペプチドに作動可能に連結されている、前記改変型ポリペプチド。

【請求項2】

前記ペイロードポリペプチドが、治療用ポリペプチドである、請求項１に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項3】

前記ペイロードポリペプチドが、１つ以上の抗原を含む、請求項１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項4】

前記１つ以上の抗原が、１つ以上のウイルス抗原である、請求項３に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項5】

前記１つ以上のウイルス抗原が、１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原である、請求項４に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項6】

前記１つ以上のウイルス抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメインまたはそのフラグメントを含む、請求項５に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項7】

前記１つ以上のウイルス抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含む、請求項５または６に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項8】

前記１つ以上のウイルス抗原が、１つ以上のインフルエンザ抗原である、請求項４に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項9】

前記１つ以上のインフルエンザ抗原が、１つ以上のインフルエンザＡ抗原である、請求項８に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項10】

前記１つ以上の抗原が、１つ以上の細菌抗原である、請求項３に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項11】

前記１つ以上の抗原が、１つ以上のがん抗原である、請求項３に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項12】

前記１つ以上の抗原が、１つ以上の古細菌抗原である、請求項３に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項13】

前記ペイロードポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントを含む、請求項１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項14】

前記ペイロードポリペプチドが、細胞外受容体及び免疫グロブリン定常領域を含む融合タンパク質を含む、請求項１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項15】

前記ペイロードポリペプチドが、受容体アゴニスト及び免疫グロブリン定常領域を含む融合タンパク質を含む、請求項１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項16】

前記ペイロードポリペプチドが、受容体アンタゴニスト及び免疫グロブリン定常領域を含む融合タンパク質を含む、請求項１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項17】

前記野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントが、前記改変型ポリペプチドのＮ末端に存在する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項18】

前記野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントが、前記改変型ポリペプチドのＣ末端に存在する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項19】

前記改変型ポリペプチドが、野生型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントを含む、請求項１～１８のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【請求項20】

前記野生型α因子プレプロ配列が、配列番号２、配列番号６８、または配列番号６９に記載の配列を含む、請求項１９に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項21】

前記改変型ポリペプチドが、改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントを含む、請求項１～１８のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【請求項22】

前記改変型α因子プレプロ配列が、Ｓｕｒｆ４結合親和性を有するトリペプチドモチーフを含む、請求項２１に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項23】

前記トリペプチドモチーフが、ＭＰＬ（配列番号５８）である、請求項２２に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項24】

前記改変型α因子プレプロ配列が、Ｓｔｅ１３切断部位を含まず、任意に、前記Ｓｔｅ１３切断部位が、ＥＡＥＡ（配列番号５６）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項25】

前記改変型α因子プレプロ配列が、Ｋｅｘ２切断部位を含まず、任意に、前記Ｋｅｘ２切断部位が、ＫＲ（配列番号５７）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項26】

野生型α因子プレプロ配列に見られる前記Ｋｅｘ２切断部位が、前記改変型α因子プレプロ配列では、ヒトプロテアーゼのプロテアーゼ切断部位で置換されている、請求項２５に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項27】

野生型α因子プレプロ配列に見られる前記Ｋｅｘ２切断部位が、前記改変型α因子プレプロ配列では、Ｓ１Ｐ、ＰＣＳＫ４、ＰＣＳＫ９、またはフーリンのプロテアーゼ切断部位で置換されている、請求項２６に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項28】

（ａ）Ｓ１Ｐの前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５５による配列を有するか、
（ｂ）ＰＣＳＫ４の前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５３による配列を有するか、
（ｃ）ＰＣＳＫ９の前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５４による配列を有するか、または
（ｄ）フーリンの前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５２による配列を有する、請求項２７に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項29】

前記改変型α因子プレプロ配列が、ＣＡＴＨＣペプチド配列またはそのフラグメントを含み、任意に、前記ＣＡＴＨＣペプチドが、配列番号９５による配列を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項30】

前記改変型α因子プレプロ配列が、ＣＦＶＩＩペプチド配列またはそのフラグメントを含み、任意に、前記ＣＦＶＩＩペプチドが、配列番号９６による配列を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項31】

前記改変型α因子プレプロ配列が、ソルチリン１ペプチド配列またはそのフラグメントを含み、任意に、前記ソルチリン－１ペプチドが、配列番号９７による配列を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項32】

前記改変型α因子プレプロ配列が、ＢＤＮＦペプチド配列またはそのフラグメントを含み、任意に、前記ＢＤＮＦペプチドが、配列番号９８による配列を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項33】

前記改変型α因子プレプロ配列が、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号７１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、または配列番号１０９による配列を有する、請求項１～１８及び２１のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【請求項34】

前記ペイロードポリペプチドが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号７２、または配列番号７９による配列を含む、請求項１、２、及び１７～３２のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【請求項35】

前記改変型ポリペプチドが、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４３、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８１、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、または配列番号１０５による配列を有する、請求項１に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項36】

細胞、組織、または対象において評価された場合、前記改変型ポリペプチドが、比較可能なポリペプチドよりも高いレベルで、前記細胞、前記組織の細胞、または前記対象の細胞もしくは組織から分泌されることを特徴とし、任意に、前記比較可能なポリペプチドが、前記改変型ポリペプチドと同じペイロードポリペプチドと、野生型または改変型α因子プレプロ配列ではないシグナルペプチドを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド。

【請求項37】

請求項１～３６のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項38】

前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡである、請求項３７に記載のポリヌクレオチド。

【請求項39】

前記ポリヌクレオチドが、ＲＮＡであり、任意に、前記ＲＮＡが、ｍＲＮＡである、請求項３７に記載のポリヌクレオチド。

【請求項40】

前記ｍＲＮＡが、キャップ及びポリ（Ａ）テールを含む、請求項３９に記載のポリヌクレオチド。

【請求項41】

前記ポリヌクレオチドが、１つ以上のＮ４－アセチルシチジン残基を含む、請求項３９または４０に記載のポリヌクレオチド。

【請求項42】

前記ポリヌクレオチドが、１つ以上の５－ヒドロキシメチルウリジン残基を含む、請求項３９～４１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項43】

請求項１～３６のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチドまたは請求項３７～４２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、細胞。

【請求項44】

請求項１～３６のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド、請求項３７～４２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項４３に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項45】

前記組成物が、医薬組成物である、請求項４４に記載の組成物。

【請求項46】

前記医薬組成物が、
（ａ）免疫原性組成物、
（ｂ）ワクチン、
（ｃ）遺伝子療法、
（ｄ）化学療法、
（ｅ）免疫療法、または
（ｆ）細胞改変療法
であるか、またはそれを含む、請求項４５に記載の組成物。

【請求項47】

請求項１～３６のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド、請求項３７～４２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項４３に記載の細胞、または請求項４４～４６のいずれか１項に記載の組成物を、細胞、組織、または対象に投与することを含む、方法。

【請求項48】

前記細胞が哺乳動物細胞であるか、前記組織が哺乳動物組織であるか、または前記対象が哺乳動物である、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記対象が、ヒトである、請求項４７または４８に記載の方法。

【請求項50】

前記方法が、
（ａ）免疫反応を刺激する方法、
（ｂ）ワクチン接種方法、
（ｃ）遺伝子療法、
（ｄ）細胞治療改変方法、
（ｅ）免疫療法、
（ｆ）タンパク質補充療法、または
（ｇ）化学療法
である、請求項４７～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

請求項３７～４２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを細胞から発現させることを含む、改変型ポリペプチドを製造する方法。

【請求項52】

前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

（ａ）免疫反応を刺激するための、
（ｂ）ワクチンとしての、
（ｃ）免疫療法としての、
（ｄ）遺伝子療法としての、
（ｅ）タンパク質補充療法としての、
（ｆ）細胞改変療法としての、
（ｇ）化学療法としての、
請求項１～３６のいずれか１項に記載の改変型ポリペプチド、請求項３７～４２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項４３に記載の細胞、または請求項４４～４６のいずれか１項に記載の組成物の使用。

【請求項54】

前記ポリペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、または組成物が、細胞、組織、または対象に投与される、請求項５３に記載の使用。

【請求項55】

野生型または改変型α因子プレプロ配列をコードするヌクレオチド配列を、ペイロードポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に付加することを含む、ポリヌクレオチドの作成方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２２年１月５日に出願された米国仮特許出願第６３／２９６，８２４号の優先権を主張し、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

生細胞からのタンパク質分泌は、多くの医療及び科学プロセスのステップである。例えば、バイオ製造では、多くの場合、産生用の生細胞から大量の生物学的治療薬の分泌に依拠する。さらに、ｍＲＮＡワクチンは、ワクチン接種を受けた個体の細胞からのタンパク質分泌に依拠する。さらに、多くの科学分野は、タンパク質の機能及び構造の研究を含む重要な実験に生細胞タンパク質分泌を利用する。従って、タンパク質分泌の強化は、より低コスト、より少ないワクチン投与量、及びより簡単なタンパク質研究用実験手順で、より多くの生物製剤生成を可能にし得る。

【発明の概要】

【0003】

本開示は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を増加させるための技術を提供し、ポリペプチドは、外因性核酸、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ治療薬にコードされる。本開示は、さらに、哺乳動物細胞からのポリペプチド分泌レベルの増加が、ポリペプチド（例えば、治療用ポリペプチド）の製造、及びそのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの送達後の哺乳動物細胞、組織、または対象におけるポリペプチドの発現を含む、いくつかのプロセスに有益であり得ることを確認する。

【0004】

治療薬を送達するための重要なアプローチの１つは、ポリヌクレオチドを対象に送達し、次に、対象の細胞機序を使用して、送達されたポリヌクレオチドから治療用ポリペプチドを発現させることである。このアプローチの最近の例は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のｍＲＮＡ系ワクチンの導入であり、これは、対象内で発現させるための抗原ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを送達する。これらのアプローチが成功しているが、そのようなアプローチの課題は、この方法で送達された特定のポリペプチドが、発現後に細胞から分泌されることが必要とされる。

【0005】

本開示は、α因子プレプロ配列が、細胞、特に、哺乳動物細胞からのポリペプチド分泌を増加させるために使用することができるという洞察を提供する。それ故、α因子プレプロ配列を使用すると、ペイロードポリペプチド（例えば、治療用ポリペプチド）の分泌レベルを向上させ得る。投与されたポリヌクレオチドから発現するペイロードポリペプチドの分泌レベルが改善されると、送達される必要のあるポリヌクレオチドの量を低減させ得る（例えば、関連コストの削減、及び／または投与中の患者の快適性の増加）。

【0006】

ペイロードポリペプチドの発現を増加させるための本明細書に記載の技術の中には、ペイロードポリペプチド及び野生型または改変型α因子プレプロ配列を含む改変型ポリペプチドがあり、野生型または改変型α因子プレプロ配列は、ペイロードポリペプチドに作動可能に連結されている。そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも提供される。さらに、記載された技術を組み込む細胞及び方法も提供される。

【0007】

本開示は、本明細書に開示のＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）分泌ペプチド配列を単独で、または本明細書に開示のα因子プレプロ配列と組み合わせて、例えば、植物細胞、例えば、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ細胞からのポリペプチド分泌を増加させるために使用することができるという洞察を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメイン（ＲＢＤ；黒色丸）、ＲＢＤバリアント＿１（白色丸）、プレプロ配列を有するＲＢＤバリアント１（白色四角）、ＲＢＤバリアント＿２（灰色丸）、及びプレプロ配列を有するＲＢＤバリアント２（灰色四角）のそれぞれの測定された分泌レベル及びＡＣＥ２結合親和性を示すグラフである。

【0009】

【図2】天然シグナルペプチド（白色棒）及び野生型プレプロ分泌配列（灰色棒）を有する特定のポリペプチドの分泌レベルを示す棒グラフである。

【0010】

【図3】天然シグナルペプチド（白色棒）及び野生型プレプロ分泌配列（灰色棒）を有する特定のポリペプチドの分泌レベルを示す棒グラフである。

【0011】

【図4】特定のシグナルペプチドに結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドの測定された分泌レベルを示す棒グラフである。「天然ＳＰ」は、野生型ＲＢＤシグナルペプチドに結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「プレプロ」は、野生型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「フーリン」は、野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がフーリン切断部位で置換されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「ｄｅｌＳＴＥ１３」は、野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「ＰＣＳＫ４」は、そのＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ４切断部位で置換されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）そのＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉ）そのＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「Ｓｕｒｆ４＿モチーフ」は、野生型プレプロ配列のアミノ末端残基が高Ｓｕｒｆ４結合親和性を有するトリペプチドモチーフ（本明細書では「Ｓｕｒｆ４モチーフ」と呼ばれる）に変異している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「フーリン＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）そのＫｅｘ２切断部位がフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉ）そのＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。

【0012】

【図5】特定のシグナルペプチドに結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドの測定された分泌レベルを示す棒グラフである。「天然ＳＰ」は、野生型ＲＢＤシグナルペプチドに結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「プレプロ」は、野生型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「Ｓ１Ｐ＿ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位及びＰＣＳＫ９切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「３ｘ＿Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）Ｓ１Ｐ切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ＳＧ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合された２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「３ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ＳＧ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している３つの（３）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「３ｘ＿ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）ＰＣＳＫ９切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿フーリン＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がＳｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＳＰ１＿フーリン＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位及びフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「３ｘ＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）ＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「Ｓ１Ｐ＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がＳｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「３ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基が３つの（３）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がＳｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「３ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ＡＡ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がアラニン－アラニンリンカーで結合している３つの（３）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「フーリン＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がフーリン切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＰＣＳＫ９＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ＡＡ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がアラニン－アラニンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がＳｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＰＣＳＫ９＿フーリン＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位及びフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿モチーフ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基が２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「Ｓ１Ｐ＿ＰＣＳＫ９＿フーリン＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位、ＰＣＳＫ９切断部位、フーリン切断部位、及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「３ｘ＿フーリン＿ｄｅｌＳＴＥ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）フーリン切断部位で置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。

【0013】

【図6】特定のシグナルペプチドに結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドの測定された分泌レベルを示す棒グラフである。「天然ＳＰ」は、野生型ＲＢＤシグナルペプチドに結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「プレプロ」は、野生型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿３ｘ＿Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）Ｓ１Ｐ切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿３ｘ＿Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）Ｓ１Ｐ切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿Ｓ１Ｐ＿ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位及びＰＣＳＫ９切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿Ｓ１Ｐ＿ＰＣＳＫ９＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位、ＰＣＳＫ９切断部位、及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿Ｓ１Ｐ＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿３ｘ＿ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）ＰＣＳＫ９切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿フーリン＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がフーリン切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿３ｘ＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）ＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿ＰＣＳＫ９＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿ＰＣＳＫ９＿フーリン＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位及びフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿Ｓ１Ｐ＿フーリン＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位及びフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿Ｓ１Ｐ＿ＰＣＳＫ９＿フーリン＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位、ＰＣＳＫ９切断部位、及びフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿フーリン＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がフーリン切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿Ｓ１Ｐ＿フーリン＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＳ１Ｐ切断部位、フーリン切断部位、及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿ＰＣＳＫ９＿フーリン＿ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳｔｅ１３」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位がＰＣＳＫ９切断部位、フーリン切断部位、及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。

【0014】

【図7】特定のシグナルペプチドに結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドの測定された分泌レベルを示す棒グラフである。「プレプロ＿２」は、（ｉ）野生型プレプロ配列のアミノ末端残基がセリン－グリシンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフで置換されており、（ｉｉ）野生型プレプロ配列のＫｅｘ２切断部位が３つの（３）Ｓ１Ｐ切断部位で置換されており、（ｉｉｉ）野生型プレプロ配列のＳｔｅ１３切断部位が欠失している、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＣＡＴＨＣ＿３」は、カテプシンＣペプチドがプレプロ＿２のＣ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＣＡＴＨＣ＿２」は、カテプシンＣペプチドがプレプロ＿２の中央に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＣＦＶＩＩ＿２」は、凝固因子ＶＩＩペプチドがプレプロ＿２の中央に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＣＡＴＨＣ＿１」は、カテプシンＣペプチドがプレプロ＿２のＮ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＳＯＲＴ１＿３」は、ソルチリン１ペプチドがプレプロ＿２のＣ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＢＤＮＦ＿２」は、脳由来神経栄養因子ペプチドがプレプロ＿２の中央に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＣＦＶＩＩ＿１」は、凝固因子ＶＩＩペプチドがプレプロ＿２のＮ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＢＤＮＦ＿３」は、脳由来神経栄養因子ペプチドがプレプロ＿２のＣ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＣＦＶＩＩ＿３」は、凝固因子ＶＩＩペプチドがプレプロ＿２のＣ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＢＤＮＦ＿１」は、脳由来神経栄養因子ペプチドがプレプロ＿２のＮ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＳＯＲＴ１＿２」は、ソルチリン１ペプチドがプレプロ＿２の中央に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「ＳＯＲＴ１＿１」は、ソルチリン１ペプチドがプレプロ＿２のＮ末端に挿入されている、改変型α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。

【0015】

【図8】Ａ～Ｂは、特定のシグナルペプチドを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）バリアントポリペプチドの分泌レベルを示す棒グラフである。Ａは、天然スパイクシグナルペプチド（白色棒）及び野生型のプレプロ分泌配列（灰色棒）を有するＣＨＯ－Ｋ１チャイニーズハムスター卵巣細胞におけるバリアント＿１及びバリアント＿２の分泌を示す。細胞を、５０ｎｇのプラスミドＤＮＡで処置した。Ｂは、脂肪動員ホルモンシグナルペプチド（白色棒）及び野生型プレプロ分泌配列（灰色棒）を有するＳｆ９ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞における１００ｎｇのバリアント＿１の分泌を示す。細胞を、１００ｎｇのプラスミドＤＮＡで処置した。

【0016】

【図9】ワクチン接種を受けたマウスのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクに対する粘膜ＩｇＡ及び血清ＩｇＧ抗体価を示す棒グラフである。「ＳＰ（Ｓ）－ＲＢＤ」は、天然シグナルペプチドに結合している野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。「プレプロＲＢＤ」は、野生型α因子プレプロ配列に結合している野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。「プレプロ＿２－ＲＢＤ」は、改変型α因子プレプロ配列プレプロ＿２に結合している野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。

【0017】

【図10】ワクチン接種を受けたマウスのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクに対する粘膜ＩｇＡ抗体価を示す棒グラフである。「プレプロ－ＲＢＤ－Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）」は、野生型α因子プレプロ配列に結合しているＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合している野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。「プレプロ＿２－ＲＢＤ－Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）」は、改変型α因子プレプロ配列プレプロ＿２に結合しているＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合している野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。

【0018】

【図11】細胞からインタクトの未切断プロペプチドを用いて分泌されたＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドの相対量を示す棒グラフである。「ＷＴ」は、プレプロ＿２改変α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。「Ｓ１Ｐ＿ｍｕｔ」は、Ｓ１Ｐプロテアーゼ切断部位が除去されたプレプロ＿２改変α因子プレプロ配列に結合しているＲＢＤバリアント＿１ポリペプチドを指す。

【0019】

【図12】様々なシグナルペプチドに結合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ＲＢＤでワクチン接種させたマウスの血清のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス中和Ｎ５０抗体価を示す棒グラフである。「ＳＰ（Ｓ）－ＲＢＤ－Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）」は、天然のスパイクシグナルペプチドに結合しているＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。「プレプロ－ＲＢＤ－Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）」は、野生型α因子プレプロ配列に結合しているＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。「武漢／Ｄ６１４Ｇ」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２野生型ＲＢＤ（白色棒）を指す。「オミクロン（ＢＡ．１）」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロンＢＡ．１株ＲＢＤ（灰色棒）を指す。

【0020】

【図13】ワクチン接種を受けたマウスの血清のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２野生型スパイクに対する粘膜ＩｇＡ及び血清ＩｇＧ抗体価を示す棒グラフで構成される。「ＳＰ（Ｓ）－ＲＢＤ－Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）」は、天然のスパイクシグナルペプチドに結合しているＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合している野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。「プレプロ－ＲＢＤ－Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）」は、野生型α因子プレプロ配列に結合しているＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合している野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を指す。

【発明を実施するための形態】

【0021】

特定の定義
約またはおよそ：本書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、値に関して本明細書で使用される場合、参照値の文脈で類似した値を指す。一般に、文脈に精通している当業者らは、その文脈における「約」または「おおよそ」に包含される関連する分散度を理解するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の値の範囲を包含してもよい。

【0022】

投与すること：本明細書で使用される場合、「投与すること」または「投与」という用語は、通常、組成物であるか、または組成物に含まれる薬剤の送達を達成するために、対象に組成物を投与することを指す。当業者らは、適切な状況において、対象、例えば、ヒト、への投与に利用され得る様々な経路を認識するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、投与は、眼内、経口、非経口、局所などであってよい。いくつかの特定の実施形態では、投与は、気管支（例えば、気管支点滴注入による）、頬側、経皮（例えば、真皮への局所、皮内、皮間、経皮などのうちの１つ以上であっても、これらを含んでもよい）、経腸、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内、特定の臓器内（例えば、肝臓内）、粘膜、鼻腔、経口、直腸、皮下、舌下、局所、気管（例えば、気管内点滴による）、膣、硝子体などであってよい。いくつかの実施形態では、投与は、単回投与のみを含んでもよい。いくつかの実施形態では、投与は、一定の投与数の適用を含んでもよい。いくつかの実施形態では、投与は、断続的な投与（例えば、時間的に隔てられた複数の投与）及び／または周期的な投与（例えば、共通の時間間隔で隔てられた個々の投与）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間にわたる連続投与（例えば、灌流）を含んでもよい。

【0023】

α因子プレプロ配列：本明細書で使用される場合、「アルファ因子プレプロ配列」または「α因子プレプロ配列」という表現は、酵母交配フェロモンα因子前駆体タンパク質（「プレプロα因子」とも呼ばれる）の一部であるシグナルペプチドまたはその一部を指す。α因子プレプロ配列は、ポリペプチドの分泌を可能にする分泌経路への、α因子プレプロ配列またはその一部を含むポリペプチドの移行を促進する。例えば、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、α因子プレプロ配列及びペイロードポリペプチドを含み得、α因子プレプロ配列は、ペイロードポリペプチドの分泌を可能にする分泌経路へのポリペプチドの移行を促進する。α因子プレプロ配列は、α因子プレ配列とも呼ばれる約１９個のアミノ酸のＣ末端部分と、α因子プロ配列とも呼ばれる約７２個のアミノ酸のＮ末端部分を含む。いくつかの実施形態では、α因子プレプロ配列は、配列番号２の配列またはそのフラグメントもしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、配列番号２のバリアントは、配列番号７０を含む。いくつかの実施形態では、α因子プレプロ配列は、α因子プレ配列またはそのフラグメントもしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、α因子プレ配列は、配列番号６８として提供される。いくつかの実施形態では、α因子プレプロ配列は、α因子プロ配列またはそのフラグメントもしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、α因子プロ配列は、配列番号６９として提供される。

【0024】

アミノ酸：本明細書で使用される最も広い意味では、例えば、１つ以上のペプチド結合の形成を通じて、ポリペプチド鎖に組み込むことができる任意の化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造Ｈ_２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、天然アミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、非天然アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然ペプチドによく見られる、２０個の標準Ｌアミノ酸のいずれかを指す。「非標準アミノ酸」は、合成的に調製されるか、天然源から得られるかに関わらず、標準アミノ酸以外のアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチド中のカルボキシ末端アミノ酸及び／またはアミノ末端アミノ酸を含むアミノ酸は、上記の一般構造と比較して構造的修飾を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、ペグ化、グリコシル化、リン酸化、及び／または（例えば、アミノ基、カルボン酸基、１つ以上のプロトン、及び／またはヒドロキシル基の）置換により修飾され得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾は、例えば、他の点では、同一の未修飾アミノ酸を含有するものと比較して、修飾アミノ酸を含有するポリペプチドの循環半減期を変更させ得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾は、修飾型アミノ酸を含有するポリペプチドの関連活性を、他の点では同一の未修飾型アミノ酸を含有するものと比較して大幅に変動させない。文脈から明らかなように、いくつかの実施形態では、「アミノ酸」という用語は、遊離アミノ酸を指すために使用され得；いくつかの実施形態では、ポリペプチドのアミノ酸残基を指すために使用され得る。

【0025】

抗原：本明細書において使用される「抗原」という用語は、免疫応答を誘発する作用物質；及び／または、（ｉｉ）Ｔ細胞受容体（例えば、ＭＨＣ分子により提示された場合）もしくは抗体に結合する作用物質を指す。いくつかの実施形態では、抗原は、体液性応答（例えば、抗原特異的抗体の産生を含む）を誘発し；いくつかの実施形態では、抗原は、細胞性応答（例えば、受容体が抗原と特異的に相互作用するＴ細胞を含む）を誘発する。いくつかの実施形態では、抗原は、標的タンパク質の少なくとも１つのエピトープを含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、線状エピトープであってよい。いくつかの実施形態では、エピトープは、立体配座エピトープであってもよい。いくつかの実施形態では、抗原は、抗体に結合し、生物において特定の生理学的反応を誘発しても、誘発しなくてもよい。一般に、抗原は、任意の化学物質、例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質、ポリマー（いくつかの実施形態では、生物学的ポリマー以外［例えば、核酸またはアミノ酸ポリマー以外］）などであっても、それらを含んでもよい。いくつかの実施形態では、抗原は、ポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、抗原は、グリカンであるか、またはそれを含む。一般に、抗原が、単離形態または純粋形態で提供されても、または代わりに、粗製形態（例えば、他の物質と一緒に、例えば、抽出物（例えば、細胞抽出物）または抗原含有源の他の比較的粗製の調製物中）で提供されてもよいことを、当業者らは理解するであろう。いくつかの実施形態では、本発明に従って利用される抗原は、粗製の形態で提供される。いくつかの実施形態では、抗原は、組み換え抗原である。

【0026】

生物学的試料：本明細書で使用される場合、「生物学的試料」という用語は、通常、本明細書に記載の、目的の生物学的供給源（例えば、組織または生物または細胞培養）から取得または誘導された試料を指す。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、動物またはヒトなどの生物を含む。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、生物学的組織または体液であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、骨髄；血液；血球；腹水；組織もしくは細針生検試料；細胞含有体液；浮遊核酸；痰；唾液；尿；脳脊髄液；腹膜液；胸膜液；糞便；リンパ液；婦人科体液；皮膚スワブ；膣スワブ；口腔スワブ；鼻腔スワブ；洗浄液もしくは洗浄液；例えば、管洗浄液もしくは気管支肺胞洗浄液；吸引液；掻爬物；骨髄標本；組織生検標本；外科標本；糞便；他の体液；分泌物；及び／または排泄物；及び／またはそれらからの細胞などであっても、それを含んでもよい。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、個体から得られた細胞であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、得られた細胞は、試料が得られる個体由来の細胞であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、試料は、任意の適切な手段により目的の供給源から直接取得された「１次試料」である。例えば、いくつかの実施形態では、１次生物学的試料は、生検（例えば、細針吸引または組織生検）、手術、体液（例えば、血液、リンパ液、糞便など）の収集などからなる群より選択される方法で得られる。いくつかの実施形態では、文脈から明らかなように、「試料」という用語は、１次試料を処理することにより（例えば、それの１つ以上の成分を除去することにより、及び／または、それに１つ以上の薬剤を添加することにより）得られる調製物を指す。例えば、半透膜を使用した濾過。そのような「処理済み試料」は、例えば、試料から抽出されるか、または、１次試料を、手法（例えば、ｍＲＮＡの増幅もしくは逆転写、特定の成分の分離及び／または精製など）にかけることにより得られた核酸またはタンパク質を含んでもよい。

【0027】

特徴部分：本明細書で使用される場合、「特徴部分」という用語は、最も広い意味では、その存在（または不在）が物質の特定の特徴、属性、または活性の存在（または不在）と相関する物質の部分を指す。いくつかの実施形態では、物質の特徴部分は、物質に、及び特定の特徴、属性、または活性を共有する関連物質に見られるが、特定の特徴、属性、または活性を共有しない関連物質には見られない部分である。特定の実施形態では、特徴部分は、インタクトな物質と少なくとも１つの機能特性を共有する。例えば、いくつかの実施形態では、タンパク質またはポリペプチドの「特徴部分」は、タンパク質またはポリペプチドの特徴となる連続したアミノ酸ストレッチ、または連続したアミノ酸ストレッチの集合を含有する部分である。いくつかの実施形態では、そのような連続した各ストレッチは、通常、少なくとも２、５、１０、１５、２０、５０、またはそれ以上のアミノ酸を含有する。一般に、物質（例えば、タンパク質、抗体などの）の特徴部分は、上で指定された配列及び／または構造的同一性に加えて、関連するインタクトな物質と少なくとも１つの機能的特徴を共有する部分である。いくつかの実施形態では、特徴部分は、生物学的に活性であってよい。

【0028】

比較可能な：本明細書で使用される場合、「比較可能な」という用語は、互いに同一ではないことがあるが、それらの間の比較を可能にするほど十分に類似している２つ以上の薬剤、エンティティ、状況、条件セットなどを指す。その結果、当業者は、結論が観察された差異または類似点に基づいて合理的に引き出され得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、比較可能な条件、状況、個体、または集団のセットは、複数の実質的に同一の特徴と、１つまたは少数の異なる特徴を特徴とする。当業者らは、文脈上、２つ以上のそのような薬剤、エンティティ、状況、条件セットなどが比較可能であるとみなされるためには、いかなる所与の状況においても、どの程度の同一性が求められるか理解するであろう。例えば、状況、個体、または集団の異なるセットの下で、またはそれらを用いて得られた結果または観察された現象の差異が、変動する特徴のバリエーションにより引き起こされるか、またはそれを示す合理的な結論を保証するのに十分な数及び種類の実質的に同一の特徴を特徴とする場合、状況、個体、または集団のセットは、互いに比較可能であることを、当業者らは理解するであろう。

【0029】

決定：本明細書で記載されている多くの方法論は、「決定」のステップを含む。当業者らは、本明細書を読めば、そのような「決定」が、例えば、本明細書に明示的に言及されている特定の手法を含む、当業者らが利用可能な様々な手法のいずれかを使用することにより、利用するか、または実施することができることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、決定は、物理的な試料の操作を含む。いくつかの実施形態では、決定は、例えば、関連分析を実施するように適合されたコンピュータまたは他の処理ユニットを利用して、データまたは情報の考慮及び／または操作を含む。いくつかの実施形態では、決定は、供給元からの関連情報及び／または資料を受信することを含む。いくつかの実施形態では、決定は、試料またはエンティティの１つ以上の特徴を比較可能な参照と比較することを含む。

【0030】

送達／接触：本明細書で互換的に使用される場合、「送達」、「送達すること」、または「接触させること」という用語は、融合ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）または融合ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるもの）を標的細胞に導入することを指す。標的細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで培養するか、または対象内に存在することができる（ｉｎ ｖｉｖｏ）。融合ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載のもの）または融合ポリペプチド（例えば、本明細書に記載のもの）を標的細胞に導入する方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏの適用に応じて変動し得る。いくつかの実施形態では、融合ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）または融合ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるもの）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクションにより細胞培養中の標的細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、融合ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）または融合ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるもの）は、送達ビヒクル（例えば、ナノ粒子、リポソーム、及び／または細胞浸透剤との複合体）を介して標的細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、融合ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）または融合ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるもの）は、融合ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）または融合ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるもの）を対象に投与することにより、対象の標的細胞に導入することができる。

【0031】

機能的：本明細書で使用される場合、「機能的」という用語は、特定の特性及び／または活性を示すエンティティの形態またはフラグメントを指すために使用される。

【0032】

フラグメント：本明細書で記載の材料または実体の「フラグメント」は、全体の個別の部分を含むが、全体に見られる１つ以上の部分を欠いている構造を有する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、そのような個別の部分から構成される。いくつかの実施形態では、フラグメントは、全体に見られる特徴的な構造エレメントまたは部分から構成されるか、またはそれらを含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、ポリヌクレオチドフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、ポリペプチドフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドフラグメントまたはポリペプチドフラグメントは、ポリヌクレオチド全体またはポリペプチド全体に見られる、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００以上のモノマー単位（例えば、残基）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドフラグメントまたはポリペプチドフラグメントは、ポリヌクレオチド全体またはポリペプチド全体に見られるモノマー単位（例えば、残基）の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上を含むか、またはそれらからなる。ポリペプチド全体またはポリヌクレオチド全体は、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドフラグメントまたはポリペプチドフラグメントの「親」と呼ばれ得る。

【0033】

改変型：一般に、「改変型」という用語は、人の手により操作されている態様を指す。例えば、いくつかの実施形態では、小分子は、その構造及び／または生成が人の手により設計及び／または実装される場合、改変されているとみなされ得る。同様に、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、自然界ではその順序で一緒に連結されていない２つ以上の配列が、人の手により操作され、改変ポリヌクレオチド内で互いに直接連結される場合、「改変」されたとみなされ得る。例えば、本発明のいくつかの実施形態では、改変型ポリヌクレオチドは、自然界に見られる調節配列（第１のコード配列と作動可能に結合しているが、第２のコード配列とは作動可能に結合しておらず、第２のコード配列と作動可能に結合するように人の手で連結されている）を含む。同等に、細胞または生物は、遺伝情報が変更されるように操作されている（例えば、形質転換、交配、体細胞交雑、トランスフェクション、形質導入、または他の機序により、以前には存在しなかった新しい遺伝物質が導入されている、または以前に存在した遺伝物質が、例えば、置換もしくは欠失変異、または交配プロトコールにより、変更または除去される）場合、「操作された」とみなされる。当業者らには一般的な方法であり、理解されているが、改変型ポリヌクレオチドの発現産物、及び／または改変型ポリヌクレオチドもしくは細胞の子孫は、通常、依然として、実際の操作が以前のエンティティに対して実施された場合でも「改変型」と呼ばれる。

【0034】

エピトープ：本明細書で使用される場合、免疫グロブリン（例えば、抗体または受容体）結合成分により特異的に認識される任意の部分を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学原子または化学基から構成される。いくつかの実施形態では、そのような化学原子または化学基は、抗原が関連３次元立体配座をとる場合、表面に露出される。いくつかの実施形態では、そのような化学原子または化学基は、抗原がそのような立体配座をとる場合、空間内で物理的に互いに近接している。いくつかの実施形態では、抗原が別の立体配座をとる場合（例えば、直線化されている場合）、少なくともいくつかのそのような化学原子または化学基は、互いに物理的に隔てられている。

【0035】

機能性：本明細書で使用される場合、「機能的」な生物学的分子は、特徴とする特性及び／または活性を示す形態の生物学的分子である。生物学的分子は、２つの機能（すなわち、二機能性）または多くの機能（すなわち、多機能性）を有し得る。

【0036】

同一性：本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子間（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、その配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である場合に、互いに「実質的に同一」であるとみなされる。例えば、２つの核酸またはポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、最適な比較目的のために、２つの配列をアラインさせることにより実施することができる（例えば、最適なアラインのために、第１の配列及び第２の配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較目的のために、同一でない配列を無視することができる）。特定の実施形態では、比較目的でアラインされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または実質的に１００％である。次に、対応する位置のヌクレオチドが比較される。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）で占められている場合、分子は、その位置では同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列を最適にアラインさせるために導入される必要があるギャップ数及び各ギャップの長さを考慮した、配列に共有される同一位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して実行することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＭｅｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１－１７）を使用して決定することができる。いくつかの例示的な実施形態では、ＡＬＩＧＮプログラムによる核酸配列の比較は、ＰＡＭ１２０重み付き残差表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用する。あるいは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して、２つのヌクレオチド配列間の同一性の割合を決定することができる。

【0037】

改善、増加、抑制、または低減：本書で使用される場合、「改善」、「増加」、「抑制」、「低減」という用語、またはそれらの文法的同義語は、ベースラインまたは他の参照測定値に対して相対的な値を示す。いくつかの実施形態では、適切な参照測定は、特定の薬剤または処置が存在しない（例えば、その前及び／または後に）以外の点では比較可能な条件下での特定の系（例えば、単一の個体）での測定、または適切な比較可能な参照薬剤が存在する場合の測定であっても、それを含んでもよい。いくつかの実施形態では、適切な参照測定は、関連する薬剤または処置の存在下で、特定の方法で応答することが知られているか、または予想される比較可能な系における測定であっても、それを含んでもよい。

【0038】

核酸、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「核酸」及び「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、互換的に使用され、３ヌクレオチド以上のポリマーを指す。いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、二本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖部分及び二本鎖部分の両方を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のホスホジエステル結合を含む主鎖を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合及び非ホスホジエステル結合の両方を含む主鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、例えば、「ペプチド核酸」のように、１つ以上のホスホロチオアートまたは５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合及び／または１つ以上のペプチド結合を含む主鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上、または全ての天然残基（例えば、アデニン、シトシン、デオキシアデノシン、デオキシシチジン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、グアニン、チミン、ウラシル）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の、または全ての非天然残基を含む。いくつかの実施形態では、非天然残基は、ヌクレオシドアナログ（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニルシチジン、Ｃ－５プロピニルウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニルウリジン、Ｃ５－プロピニルシチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、６－Ｏ－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、挿入塩基、及びそれらの組み合わせ）を含む。いくつかの実施形態では、非天然残基は、天然残基中のものと比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡまたはポリペプチドなどの機能的な遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含むヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、酵素合成により（例えば、相補的テンプレートに基づく重合、例えば、組み換え細胞もしくは系におけるｉｎ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏでの複製、または化学合成により）調製され得る。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００、または２０，０００以上の残基またはヌクレオチド長である。ヌクレオチド数が、例えば、融合ポリヌクレオチドの、サイズの指標として使用される場合、特定のヌクレオチド数は、例えば、融合ポリヌクレオチドの、一本鎖上のヌクレオチドの数を指す。

【0039】

作動可能に連結されている：本明細書で使用される場合、記載の成分が意図された方法で機能することを可能にする関係にある並置を指す。機能エレメントに「作動可能に連結されている」制御エレメントは、機能エレメントの発現及び／または活性が制御エレメントと互換性のある条件下で実施されるように結合している。いくつかの実施形態では、「作動可能に連結されている」制御エレメントは、目的のコードエレメントと連続しており（例えば、共有結合しており）；いくつかの実施形態では、制御エレメントは、目的の機能エレメントに対しｔｒａｎｓで、または、そうでなければ、それから離れて作用する。

【0040】

ポリペプチド：本明細書で「タンパク質」という用語と互換的に使用される「ポリペプチド」という用語は、一般に、少なくとも３個以上のアミノ酸のポリマーの当該技術分野で認められた意味を有する。当業者らは、「ポリペプチド」という用語が、本明細書に記載の完全配列を有するポリペプチドを包含するだけでなく、そのような完全ポリペプチドの機能的、生物学的に活性な、または特徴的なフラグメント、部分、またはドメイン（例えば、少なくとも１つの活性を保持するフラグメント、部分、またはドメイン）を表すポリペプチドも包含するように十分に一般的であることが意図される。ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、またはその両方を含有してもよく、当該技術分野で既知の様々なアミノ酸修飾またはアナログのいずれかを含有してもよい。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びそれらの組み合わせを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、タンパク質であり得る。

【0041】

ポリリボヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ポリリボヌクレオチド」という用語は、３リボヌクレオチド以上のポリマーを指す。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、一本鎖である。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、二本鎖である。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、一本鎖部分及び二本鎖部分の両方を含む。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、上記の「核酸／オリゴヌクレオチド」の定義で記載されている主鎖構造を含み得る。ポリリボヌクレオチドは、調節ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡなど）、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）オリゴヌクレオチドであり得る。ポリリボヌクレオチドがｍＲＮＡオリゴヌクレオチドであるいくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、通常、その３’末端にポリ（Ａ）領域を含む。ポリリボヌクレオチドがｍＲＮＡオリゴヌクレオチドであるいくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、通常、その５’末端に、例えば、翻訳を開始するためのｍＲＮＡのリボソームへの認識及び結合用の、当該技術分野で認識されているキャップ構造を含む。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、ＲＮＡオリゴヌクレオチドを含む。リボヌクレオチド数が、例えば、ポリリボヌクレオチド用の、サイズの指標として使用される場合、特定のヌクレオチド数は、一本鎖上のリボヌクレオチド数を指す。

【0042】

組み換え：本明細書で使用される場合、組み換え手段により設計、改変、調製、発現、作成、製造、及び／または単離されるポリペプチド、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを使用して発現されたポリペプチド；組み換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリから単離されたポリペプチド；ポリペプチドまたはその１つ以上の成分（複数可）、部分（複数可）、エレメント（複数可）、またはドメイン（複数可）をコードし、及び／またはその発現を指示する遺伝子（複数可）または遺伝子成分を発現するようにトランスジェニックであるか、または他の方法で操作されている動物（例えば、マウス、ウサギ、ヒツジ、サカナなど）から単離されたポリペプチド；及び／または、選択核酸配列エレメントを互いにスプライシングもしくはライゲーションすること、選択配列エレメントを化学合成すること、及び／または、他の方法で、ポリペプチドもしくはその１つ以上の成分（複数可）、部分（複数可）、エレメント（複数可）、もしくはドメイン（複数可）をコードし、及び／またはその発現を指示する核酸を生成すること、を含む他の任意の手段で調製、発現、作成、または単離されたポリペプチド、を指すことが意図される。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列エレメントの１つ以上が、自然界に見られる。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列エレメントの１つ以上が、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏで設計される。いくつかの実施形態では、１つ以上のそのような選択配列エレメントは、既知の配列エレメントの変異導入（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ）から、例えば、天然または合成供給源から、例えば、目的の供給源生物（例えば、ヒト、マウスなど）の生殖系列において生ずる。

【0043】

参照：本明細書で使用される場合、比較が実施される標準または対照について記載する。例えば、いくつかの実施形態では、目的の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、または値が、参照または対照の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、または値と比較される。いくつかの実施形態では、参照または対照は、目的の試験または決定と実質的に同時に試験及び／または決定される。いくつかの実施形態では、参照または対照は、履歴参照または対照であり、任意に、有形媒体に具体化される。通常、当業者らに理解されるように、参照または対照は、評価中のものと比較可能な条件または状況下で決定または特性評価される。特定の可能な参照または対照への依存及び／または比較を証明するのに十分な類似点が存在する場合を、当業者らは理解するであろう。

【0044】

試料：本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、通常、目的の供給源から取得または誘導された物質のアリコートを指す。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、生物学的または環境的供給源である。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、細胞または生物、例えば、微生物、植物、または動物（例えば、ヒト）であっても、それを含んでもよい。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、生物学的組織または体液であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、生物学的組織または体液は、羊水、房水、腹水、胆汁、骨髄、血液、母乳、脳脊髄液、耳垢、乳糜、チャイム（ｃｈｉｍｅ）、精液、内リンパ液、滲出液、糞便、胃酸、胃液、リンパ、粘液、心膜液、外リンパ液、腹膜液、胸膜液、膿汁、カタル性分泌物、唾液、皮脂、精液、血清、恥垢、痰、滑液、汗、涙、尿、膣分泌物、硝子体液、嘔吐物、及び／またはそれらの組み合わせもしくは成分（複数可）であっても、それを含んでもよい。いくつかの実施形態では、体液は、細胞内液、細胞外液、血管内液（血漿）、間質液、リンパ液、及び／または細胞通過液であっても、それを含んでもよい。いくつかの実施形態では、体液は、植物滲出液であっても、それを含んでもよい。いくつかの実施形態では、生物学的組織または試料は、例えば、吸引、生検（例えば、細針または組織生検）、スワブ（例えば、口腔、鼻腔、皮膚、または膣スワブ）、掻爬、手術、洗浄または洗浄（例えば、気管支肺胞、管、鼻腔、眼、口腔、子宮、膣、または他の洗浄または洗浄）により取得され得る。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、個体から得られた細胞であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、試料は、任意の適切な手段により目的の供給源から直接取得された「１次試料」である。いくつかの実施形態では、文脈から明らかなように、「試料」という用語は、１次試料を処理することにより（例えば、それの１つ以上の成分を除去することにより、及び／または、それに１つ以上の薬剤を添加することにより）得られる調製物を指す。例えば、半透膜を使用した濾過。そのような「処理済み試料」は、例えば、試料から抽出されるか、または、１次試料を、１つ以上の手法（例えば、核酸の増幅もしくは逆転写、特定の成分の分離及び／または精製など）にかけることにより得られた核酸またはタンパク質を含んでもよい。

【0045】

対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、生物、通常は、哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態に罹患しやすい。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態の１つ以上の症状または特徴を示す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態のいかなる症状または特徴も示さない。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態に対する感受性またはリスクを特徴付ける１つ以上の特徴を有する者である。いくつかの実施形態では、対象は、患者である。いくつかの実施形態では、対象は、診断及び／または療法が投与されているか、及び／または投与されたことがある個体である。

【0046】

処置：本明細書で使用される場合、「処置」（「処置する」または「処置すること」とも呼ばれる）は、特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、及び／または原因を部分的または完全に緩和、改善、軽減、抑制、発症の遅延、重症度の軽減、及び／または発生率を低減させる任意の療法の投与を指す。いくつかの実施形態では、そのような処置は、関連疾患、障害、及び／または状態の徴候を示さない対象、及び／または、疾患、障害、及び／または状態の初期徴候を示す対象のものであってよい。代替的または追加的に、そのような処置は、関連疾患、障害及び／または状態の１つ以上の確立された徴候を示す対象のものであってよい。いくつかの実施形態では、処置は、関連疾患、障害、及び／または状態に罹患していると診断されている対象のものであってよい。いくつかの実施形態では、処置は、関連疾患、障害、及び／または状態の発症リスクの増加と統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有することが知られている対象のものであってよい。

【0047】

バリアント：本明細書で使用される場合、「バリアント」という用語は、参照エンティティと有意な構造的同一性を示すが、参照エンティティと比較して、１つ以上の化学部分の存在またはレベルにおいて参照エンティティとは構造的に異なるエンティティを指す。多くの実施形態では、バリアントは、その参照エンティティとは機能的にも異なる。一般に、特定のエンティティが参照エンティティの「バリアント」であると適切にみなされるかどうかは、参照エンティティとの構造的同一性の程度に基づいている。例えば、バリアントポリペプチドは、アミノ酸配列の１つ以上の相違及び／またはポリペプチド主鎖に共有結合している化学部分（例えば、炭水化物、脂質など）の１つ以上の差異の結果として、参照ポリペプチドと異なることがある。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドと少なくとも１つの特徴的な配列エレメントを共有しない。いくつかの実施形態では、参照ポリペプチドは、１つ以上の生物学的活性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性の１つ以上を共有する。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性の１つ以上を欠いている。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドと比較して、１つ以上の生物学的活性のレベルの低減を示す。

【0048】

標準的手法は、組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成（例えば、ｍＲＮＡ合成）、ならびに、組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）が使用され得る。酵素反応及び精製手法は、製造元の仕様に従って、または当該技術分野で一般に実行されるように、または本明細書に記載されているように実施され得る。上述の手法及び手順は、一般に、当該技術分野で周知の従来の方法に従って、また本明細書全体にわたって引用及び記載されている様々な一般的な参考文献及びより具体的な参考文献に記載されているように実施され得る。例えば、以下を参照のこと：Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））（これは、いかなる目的のためにも参照により本明細書に組み込まれる）。

【0049】

特定の実施形態の詳細な説明
生細胞からのタンパク質分泌は、多くの医療及び科学プロセスにおいて重要なステップである。タンパク質分泌の強化は、より低コスト、より少ないワクチン投与量、及びより簡単なタンパク質研究用実験手順で、より多くの生物製剤生成を可能にし得る。コドン最適化及び強力なプロモーターなどの発現ブースターと、ＥＲへの移行を引き起こすＮ末端シグナルペプチド配列の追加を含む方策は、生細胞からのタンパク質分泌を促進するために用いられている。しかし、タンパク質分泌をさらに増やす余地は依然としてある。

【0050】

α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）を広範囲のポリペプチドと関連付けると、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞株）からのそれらのタンパク質の分泌が促進されることを、本開示は示す。評価されるポリペプチドは、合成ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原、インフルエンザ血球凝集素、ＨＥＲ２標的一本鎖抗体、及び生物学的治療薬を含む。さらに、本開示は、α因子プレプロ配列またはそのフラグメントの最適化が、さらにもっと、ヒト細胞株からの関連ポリペプチドの分泌を増強させ得ることを実証する。

【0051】

本明細書に開示のＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）分泌ペプチド配列を単独で、または本明細書に開示のα因子プレプロ配列と組み合わせて、広範囲のポリペプチドと関連付けると、植物細胞、例えば、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ細胞からのそれらのタンパク質の分泌が促進されるという洞察も、本開示は提供する。

【0052】

α－因子プレプロ配列
可溶性分泌タンパク質は、細胞質からＥＲに移行し、次に、ゴルジ体へ、最終的に、分泌小胞へ輸送される。分泌小胞は、細胞膜と融合して、細胞からそのカーゴを分泌する。酵母交配フェロモンα因子は、融合を可能にする互換の酵母細胞タイプの受容体に結合する分泌ペプチドである（Ｎａｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。α因子は、シグナルペプチド、プロペプチド領域、及び活性ペプチドフェロモンの４つの繰り返しからなる「プレプロα因子」と呼ばれる前駆体タンパク質として合成される。シグナルペプチドは、ＥＲへの移行を促進し、ＥＲにおいて切断される。プロペプチド領域は、ＥＲから排出及びゴルジ体への輸送を可能にする（Ｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ゴルジ体におけるタンパク質分解処理により、成熟α因子ペプチドが生成される。シグナルペプチド及びプロペプチド領域（プレプロ）の両方を包含するα因子配列は、ヒトリゾチームに融合され、酵母細胞で発現される場合、発現を２０倍増加させることが示されている（Ｏｋａ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0053】

ポリペプチド
とりわけ、本開示は、ポリペプチドを提供する。本明細書に開示のポリペプチドは、ペイロードポリペプチドと、野生型または改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）を含むように改変されており、野生型または改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントは、ペイロードポリペプチドに作動可能に連結されている。いくつかの実施形態では、野生型または改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）は、ペイロードポリペプチドの輸送を媒介可能である。いくつかの実施形態では、野生型または改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）は、例えば、細胞外への分泌のために、ペイロードポリペプチドの細胞膜への輸送を媒介可能である。

【0054】

本開示は、例えば、野生型または改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）が、他のシグナルペプチドよりも高いレベルで、例えば、細胞（例えば、哺乳動物細胞）外への分泌のために、ペイロードポリペプチドの細胞膜への輸送を媒介可能であるという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、分泌レベルは、分泌速度であり得る。いくつかの実施形態では、分泌レベルは、分泌されたポリペプチドの量であり得る。

【0055】

分泌レベルの増加が、ポリペプチド（例えば、ポリペプチド治療薬）の製造、及び送達されたポリヌクレオチドからｉｎ ｖｉｖｏで発現される治療用ポリペプチドの使用を含む、治療薬の開発における多数の方法に有用であり得るという認識を、本開示は提供する。従って、いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、治療用ポリペプチドである。複数の治療用ポリペプチドが当該技術分野で知られており、本明細書に開示の技術は、多種多様な治療用ポリペプチドに使用することができる。本開示は、生物学的治療薬が健康上の懸念に対処するためにますます重要になっていることを認識する。本開示は、複数の生物学的ポリペプチドが、本明細書に記載の改変型ポリペプチドにおいて、ペイロードポリペプチドとして使用することができることを認識している。

【0056】

例えば、いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、１つ以上の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原は、１つ以上のウイルス抗原である。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルス抗原は、１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原である。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメインまたはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメインバリアントまたはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質バリアントまたはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルス抗原は、１つ以上のインフルエンザ抗原、例えば、インフルエンザＡ抗原である。

【0057】

抗原を発現するための本技術の使用は、ウイルス抗原に限定されず、他の抗原は、本明細書に開示のポリペプチドによってコードすることができる。例えば、１つ以上の抗原は、１つ以上の細菌抗原であり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原は、１つ以上のがん抗原である。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原は、１つ以上の古細菌抗原である。

【0058】

いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、抗体またはそのフラグメントを含む。抗体は、特定の標的抗原に特異的な結合を与えるのに十分な標準的な免疫グロブリン配列エレメントを含むポリペプチドを指す。当該技術分野で知られているように、自然界で生成されるインタクト抗体は、約１５０ｋＤの四量体であり、２つの同一の重鎖ポリペプチド（それぞれ約５０ｋＤ）と、２つの同一の軽鎖ポリペプチド（それぞれ約２５ｋＤ）で構成され、これらは、互いに結合して、一般に「Ｙ字型」構造と呼ばれる構造を形成する。抗体テトラマーは、２つの重鎖－軽鎖ダイマーで構成され、重鎖及び軽鎖は、単一のジスルフィド結合により互いに結合しており；他の２つのジスルフィド結合は、ダイマーが互いに結合して、テトラマーが形成されるように、重鎖のヒンジ領域を互いに結合させる。標準的な抗体が四量体であるが、本明細書で提供される抗体は、様々な形式をとり得る。例えば、抗体は、インタクトＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、もしくはＩｇＭ抗体；または二重特異性もしくは多重特異性抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）から選択される形式をとり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、及び単離ＣＤＲまたはそのセット；一本鎖Ｆｖ；ポリペプチドＦｃ融合；単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲなどのサメ単一ドメイン抗体またはそのフラグメント）；カメロイド抗体、マスク抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））；小型モジュール免疫医薬品（「ＳＭＩＰ（商標）」）；一本鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮｓ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）；Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；マイクロプロテイン；Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）；Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）；及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、自然に生成された場合に有する共有結合修飾（例えば、グリカンの結合）を欠いていることがある。いくつかの実施形態では、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、ペイロード［例えば、検出可能な部分、治療薬部分、触媒部分など］、または他のペンダント基［例えば、ポリエチレングリコールなど］の結合）を含有してもよい。

【0059】

いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、細胞外受容体を含む組み換えポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、免疫グロブリン定常領域を含む組み換えポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、細胞外受容体及び免疫グロブリン定常領域を含む組み換えポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、アフリベルセプトまたはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、アフリベルセプトは、ｈｔｔｐｓ：／／ｇｏ．ｄｒｕｇｂａｎｋ．ｃｏｍ／ｄｒｕｇｓ／ＤＢ０８８８５で提供される配列を有し得、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0060】

いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、受容体アゴニストまたはアンタゴニストを含む組み換えポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、免疫グロブリン定常領域を含む組み換えポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、受容体アゴニストまたはアンタゴニスト及び免疫グロブリン定常領域を含む組み換えポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、デュラグルチドまたはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、デュラグルチドは、ｈｔｔｐｓ：／／ｇｏ．ｄｒｕｇｂａｎｋ．ｃｏｍ／ｄｒｕｇｓ／ＤＢ０９０４５で提供される配列を有し得、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0061】

いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）またはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、トラスツズマブ、トラスツズマブｓｃＦｖ、またはトラスツズマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、ペルツズマブ、ペルツズマブｓｃＦＶ、またはペルツズマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、ＧＢ２３５、ＧＢ２３５ ｓｃＦｖ、またはＧＢ２３５のフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、アダリムマブ、アダリムマブｓｃＦｖ、またはアダリムマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、ペムブロリズマブ、ペムブロリズマブｓｃＦＶ、またはペムブロリズマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、アフリベルセプトまたはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、デュピルマブ、デュピルマブｓｃＦｖ、またはデュピルマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、ウステキヌマブ、ウステキヌマブｓｃＦｖ、またはウステキヌマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、ニボルマブ、ニボルマブｓｃＦｖ、またはニボルマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、ベバシズマブ、ベバシズマブｓｃＦｖ、またはベバシズマブのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、エタネルセプトまたはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、チサゲンレクロイセルまたはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、チサゲンレクロイセル細胞外ドメイン及び／またはチサゲンレクロイセル膜貫通ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、アキシカブタゲンシロルユーセルまたはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、アキシカブタゲンシロルユーセル細胞外ドメイン及び／またはアキシカブタゲンシロルユーセル膜貫通ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、リソカブタゲンマラルユーセルまたはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、リソカブタゲンマラルユーセル細胞外ドメイン及び／またはリソカブタゲンマラルユーセル膜貫通ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、Ａ３Ｂ１キメラ抗原受容体（Ａ３Ｂ１ ＣＡＲ）またはそのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、Ａ３Ｂ１ ＣＡＲ細胞外ドメイン及び／またはＡ３Ｂ１ ＣＡＲ膜貫通ドメインを含み得る。

【0062】

いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号７２、または配列番号７９による配列を含む。

【0063】

いくつかの実施形態では、ペイロードポリペプチドは、分泌型胎児性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）もしくはそのフラグメント；トラスツズマブ、トラスツズマブｓｃＦｖ、もしくはトラスツズマブのフラグメント；ペルツズマブ、ペルツズマブｓｃＦＶ、もしくはペルツズマブのフラグメント；ＧＢ２３５、ＧＢ２３５ ｓｃＦｖ、もしくはＧＢ２３５のフラグメント；アダリムマブ、アダリムマブｓｃＦｖ、もしくはアダリムマブのフラグメント；ペムブロリズマブ、ペムブロリズマブｓｃＦＶ、もしくはペムブロリズマブのフラグメント；アフリベルセプトもしくはそのフラグメント；デュピルマブ、デュピルマブｓｃＦｖ、もしくはデュピルマブのフラグメント；ウステキヌマブ、ウステキヌマブｓｃＦｖ、もしくはウステキヌマブのフラグメント；ニボルマブ、ニボルマブｓｃＦｖ、もしくはニボルマブのフラグメント；ベバシズマブ、ベバシズマブｓｃＦｖ、もしくはベバシズマブのフラグメント；エタネルセプトもしくはそのフラグメント；チサゲンレクロイセルもしくはそのフラグメント（例えば、チサゲンレクロイセル細胞外ドメイン及び／またはチサゲンレクロイセル膜貫通ドメイン）；アキシカブタゲンシロルユーセルもしくはそのフラグメント（例えば、アキシカブタゲンシロルユーセル細胞外ドメイン及び／またはアキシカブタゲンシロルユーセル膜貫通ドメイン）；リソカブタゲンマラルユーセルもしくはそのフラグメント（例えば、リソカブタゲンマラルユーセル細胞外ドメイン及び／またはリソカブタゲンマラルユーセル膜貫通ドメイン）；またはＡ３Ｂ１キメラ抗原受容体（Ａ３Ｂ１ ＣＡＲ）もしくはそのフラグメント（例えば、Ａ３Ｂ１ ＣＡＲ細胞外ドメイン及び／またはＡ３Ｂ１ ＣＡＲ膜貫通ドメイン）を含み得る。

【0064】

いくつかの実施形態では、野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントが、改変型ポリペプチドのＮ末端に存在する。いくつかの実施形態では、野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）が改変型ポリペプチドのＣ末端に存在する。

【0065】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、野生型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）を含む。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列は、配列番号２による配列を含む。

【0066】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、野生型α因子プレ配列を含む。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレ配列は、配列番号６８による配列を含む。

【0067】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、野生型α因子プロ配列またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、野生型α因子プロ配列は、配列番号６９による配列を含む。

【0068】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント（例えば、α因子プレ配列またはα因子プロ配列）を含む。いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、配列番号７０による配列を含む。

【0069】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、改変型α因子プロ配列またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、改変型α因子プロ配列は、配列番号７１による配列を含む。

【0070】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、改変型α因子プレプロ配列を含む。いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、Ｓｕｒｆ４結合親和性を有するトリペプチドモチーフ（Ｓｕｒｆ４モチーフ）を含む。いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のＳｕｒｆ４モチーフを含む。いくつかの実施形態では、Ｓｕｒｆ４モチーフは、ＭＰＬ（配列番号５８）である。いくつかの実施形態では、Ｓｕｒｆ４モチーフは、α因子プレプロ配列のα因子プロペプチド配列の最もＮ末端側の３つの残基を置換する。いくつかの実施形態では、α因子プレプロ配列のα因子プレペプチド配列の最もＮ末端側の３残基は、α因子プレプロ配列のα因子プロペプチド配列が切断された後も残存する。いくつかの実施形態では、α因子プレプロ配列のα因子プロペプチド配列の最もＮ末端側の３残基は、配列番号２の残基２０～２２である。

【0071】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、２つ以上、３つ以上、または４つ以上のＳｕｒｆ４モチーフを含む。いくつかの実施形態では、Ｓｕｒｆ４モチーフは、リンカーで結合している。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも２つのアミノ酸、少なくとも３つのアミノ酸、少なくとも４つのアミノ酸、少なくとも５つのアミノ酸、少なくとも６つのアミノ酸、少なくとも７つのアミノ酸、少なくとも８つのアミノ酸、少なくとも９つのアミノ酸、少なくとも１０のアミノ酸、または少なくとも１５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、セリン－グリシンリンカーである。いくつかの実施形態では、セリン－グリシンリンカーは、ＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳ（配列番号６６）の配列を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、アラニン－アラニンリンカーである。いくつかの実施形態では、セリン－グリシンリンカーは、ＡＡの配列（配列番号６７）を含み得る。

【0072】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、Ｓｔｅ１３切断部位を含まない。いくつかの実施形態では、Ｓｔｅ１３切断部位は、ＥＡＥＡ（配列番号５６）を含む。

【0073】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、Ｋｅｘ２切断部位を含まない。いくつかの実施形態では、Ｋｅｘ２切断部位は、ＫＲ（配列番号５７）を含む。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、ヒトプロテアーゼのプロテアーゼ切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、Ｓ１Ｐ、ＰＣＳＫ４、ＰＣＳＫ９、またはフーリンのプロテアーゼ切断部位で置換されている。本明細書で使用される場合、「置換する」、「置換」、及びそれらの変形形態は、直接的置換（例えば、元の配列の欠失及び別の配列の挿入）に限定されると理解されるべきではない。むしろ、「置換する」、「置換」、またはその変形形態は、元の配列が「置換」後に存在しなくなり、別の配列が「置換」後に存在するあらゆる状況を包含する。例えば、元の配列のアミノ酸は、「置換」後も残るが、元の配列は、存在しないことがある。「置換」は、例えば、元の配列の１つ以上のアミノ酸の変異（例えば、元のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の変更）により達成することができる。

【0074】

いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、Ｓ１Ｐ、ＰＣＳＫ４、ＰＣＳＫ９、フーリン、またはそれらの組み合わせの１つ以上のプロテアーゼ切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、１つ以上の切断部位は、同じである。例えば、いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のＳ１Ｐ切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のＰＣＳＫ４切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のＰＣＳＫ９切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のフーリン切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、１つ以上の切断部位は、異なる。例えば、いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、Ｓ１Ｐ切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位は、改変型α因子プレプロ配列では、２つの（２）Ｓ１Ｐ切断部位及びＰＣＳＫ４切断部位で置換されている。いくつかの実施形態では、グリシン－セリンリンカーで結合している２つの（２）Ｓｕｒｆ４モチーフを有し、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失しており、Ｋｅｘ２切断部位が３つの（３）Ｓ１Ｐ切断部位と置換されている改変型α因子プレプロ配列では、野生型α因子プレプロ配列に見られるＫｅｘ２切断部位が置換されている。これらの例示的な実施形態で説明されているように、Ｓ１Ｐ、ＰＣＳＫ４、ＰＣＳＫ９、及びフーリン切断部位の任意の組み合わせが、本明細書で開示されるように使用され得、本開示は、上で提示される特定の実施形態に限定されると理解されるべきではない。組み合わせの追加支援は、例えば、以下の実施例で見出すことができる。

【0075】

Ｓ１Ｐのプロテアーゼ切断部位は、配列番号５５による配列を有し得る。いくつかの実施形態では、ＰＣＳＫ４のプロテアーゼ切断部位は、配列番号５３による配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＣＳＫ９のプロテアーゼ切断部位は、配列番号５４による配列を有する。いくつかの実施形態では、フーリンのプロテアーゼ切断部位は、配列番号５２による配列を有する。

【0076】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、１つ以上の分泌経路を介してタンパク質を輸送する１つ以上の受容体に結合可能な配列を含む。

【0077】

いくつかの実施形態では、１つ以上の分泌経路を介してタンパク質を輸送する受容体は、ＬＭＡＮ１である。ＬＭＡＮ１に結合することが報告されているタンパク質は、カテプシンＣ（ＣＡＴＨＣ）及び凝固因子ＶＩＩ（ＣＦＶＩＩ）がある。

【0078】

いくつかの実施形態では、１つ以上の分泌経路を介してタンパク質を輸送する受容体は、ソルチリン－１である。ソルチリン－１に結合することが報告されているタンパク質の中には、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）及びソルチリン－１プロペプチドである。

【0079】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、複数の（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の）ＬＭＡＮ１結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＬＭＡＮ１結合ドメインを含むポリペプチドは、カテプシンＣまたは凝固因子ＶＩＩ（ＣＦＶＩＩ）である。

【0080】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のカテプシンＣ（ＣＡＴＨＣ）ペプチド配列またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＨＣペプチドは、ＴＰＡＮＣＴＹＬＤＬＬＧＴＷＶＦＱＶＧＳＳＧＳＱＲＤＶＮＣＳＶＭＧ（配列番号９５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＨＣペプチドは、改変型α因子プレプロ配列に以下の場所に挿入される：（１）柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフの後ろのプロペプチドＮ末端、（２）プロペプチド配列の中央、または（３）３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位の直前のＣ末端。

【0081】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、グリコシル化部位またはそのフラグメントを含有する複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）の凝固因子ＶＩＩ（ＣＦＶＩＩ）ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＦＶＩＩペプチドは、ＩＬＥＫＲＮＡＳＫＰＱＧＲ（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＦＶＩＩペプチドは、改変型α因子プレプロ配列に以下の場所に挿入される：（１）柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフの後ろのプロペプチドＮ末端、（２）プロペプチド配列の中央、または（３）３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位の直前のＣ末端。

【0082】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、複数の（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の）ソルチリン－１結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ソルチリン－１結合ドメインを含むポリペプチドは、ＢＤＮＦまたはソルチリン－１である。

【0083】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のソルチリン１ペプチドまたはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ソルチリン１ペプチドは、ＷＳＧＰＩＧＶＳＷＧＬＲ（配列番号９７）を含む。いくつかの実施形態では、ソルチリン１ペプチドは、改変型α因子プレプロ配列に以下の場所に挿入される：（１）柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフの後ろのプロペプチドＮ末端、（２）プロペプチド配列の中央、または（３）３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位の直前のＣ末端。

【0084】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、複数（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）ペプチドまたはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＢＤＮＦペプチドは、ＥＳＶＮＧＰＫＡＧＳＲＧＬＴＳＬＡＤＴＦＥＨＶＩＥＥＬＬＤＥＤＱＫＶＲＰＮＥＥＮＮＫＤＡＤＬＹＴＳＲＶＭＬＳＳＱＶＰＬ（配列番号９８）を含む。いくつかの実施形態では、ＢＤＮＦペプチドは、改変型α因子プレプロ配列に以下の場所に挿入される：（１）柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフの後ろのプロペプチドＮ末端、（２）プロペプチド配列の中央、または（３）３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位の直前のＣ末端。

【0085】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、１つ以上のタグ、例えば、１つ以上のＭｙｃタグを含む。いくつかの実施形態では、３Ｘ Ｍｙｃタグを含む改変α因子プレプロ配列が、配列番号１０６または配列番号１０７で提供される。

【0086】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、Ｓｕｒｆ４結合親和性を有する１つ以上のトリペプチドモチーフ（例えば、配列番号５８によるモチーフ）を含むか；１つ以上のＳ１Ｐ切断部位（例えば、配列番号５５による）を含むか；１つ以上のＰＣＳＫ４切断部位（例えば、配列番号５３による）を含むか；１つ以上のＰＣＳＫ９切断部位（例えば、配列番号５４による）を含むか；１つ以上のフーリン切断部位（例えば、配列番号５２による）を含むか；Ｓｔｅ１３切断部位（例えば、配列番号５６による）を含まないか；Ｋｅｘ２切断部位（例えば、配列番号５７による）を含まないか；または、それらの組み合わせである。

【0087】

いくつかの実施形態では、改変型α因子プレプロ配列は、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号７１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、または配列番号１０９による配列を有する。

【0088】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４３、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８１、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、または配列番号１０５による配列を有する。

【0089】

いくつかの実施形態では、野生型または改変型Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列またはそのフラグメントが、改変型ポリペプチドのＮ末端に存在する。いくつかの実施形態では、野生型または改変型Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列またはそのフラグメントが、改変型ポリペプチドのＣ末端に存在する。

【0090】

いくつかの実施形態では、改変型ポリペプチドは、改変型Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列もしくはそのフラグメント、改変型α因子プレプロ配列もしくはそのフラグメント、またはその両方を含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号９９を含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８２を含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８３を含む。

【0094】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８４を含む。

【0095】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８５を含む。

【0096】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８６を含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８７を含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８８を含む。

【0099】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号８９を含む。

【0100】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号９０を含む。

【0101】

いくつかの実施形態では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列は、配列番号９１を含む。

【0102】

上で検討されるように、本開示は、増加したレベルで分泌されるポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変型ポリペプチドは、細胞、組織、または対象において評価された場合、改変型ポリペプチドが、比較可能なポリペプチドよりも高いレベルで細胞、組織の細胞、または対象の細胞もしくは組織から分泌されることを特徴とする。いくつかの実施形態では、比較可能なポリペプチドは、改変型ポリペプチドと同じペイロードポリペプチドと、野生型または改変型α因子プレプロ配列ではないシグナルペプチドを含む。

【0103】

いくつかの実施形態では、分泌レベルは、分泌されたタンパク質の量（例えば、分泌されたタンパク質のグラム数もしくはモル数、または分泌されたタンパク質の濃度）である。いくつかの実施形態では、分泌レベルは、分泌速度、分泌されるタンパク質のグラム数またはモル数（培地の体積当たり、例えば、細胞培養培地の体積当たり）である。

【0104】

ポリヌクレオチド
本開示は、本明細書に記載の改変型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。当業者らに認識されるように、複数のポリヌクレオチドが、同じポリペプチドをコードし得る。さらに、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列は、通常の方法を使用して当業者らが決定することができる。

【0105】

特定の実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＤＮＡポリヌクレオチドである。

【0106】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＲＮＡポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡはキャップ及びポリ（Ａ）テールを含む。

【0107】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の化学修飾型ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、化学修飾型ヌクレオチドは、Ｎ４－アセチルシチジンであり得る。いくつかの実施形態では、化学修飾型ヌクレオチドは、５－ヒドロキシメチルウリジンであり得る。本明細書に記載のポリヌクレオチド中に化学修飾型ヌクレオチド（例えば、Ｎ４－アセチルシチジン及び／または５－ヒドロキシメチルウリジン）が含まれると、ポリヌクレオチドが自然免疫系を回避し、該ポリヌクレオチドが導入される細胞の生存率を改善し、及び／または該ポリヌクレオチドが導入される細胞におけるペイロードの発現を増加させることが可能になり得ることを、本開示は認識している。本明細書に記載のポリヌクレオチド中に化学修飾型ヌクレオチド（例えば、Ｎ４－アセチルシチジン及び／または５－ヒドロキシメチルウリジン）が含まれると、細胞、組織、または対象におけるポリヌクレオチドに対する免疫原性を低減し得ることを、本開示は認識している。

【0108】

組成物
上で検討された実施形態に加えて、本開示は、組成物を提供する。本明細書に開示の組成物は、細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書に記載の改変型ポリペプチド及び／またはポリヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。

【0109】

本明細書に開示の組成物は、本明細書に記載の改変型ポリペプチド及び／またはポリヌクレオチドを含み得る。

【0110】

医薬組成物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を含む組成物は、医薬組成物である。

【0111】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、免疫原性組成物であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ワクチンであるか、またはそれを含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、遺伝子療法であるか、またはそれを含む。

【0113】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、化学療法であるか、またはそれを含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、タンパク質補充療法であるか、またはそれを含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、免疫療法であるか、またはそれを含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、細胞改変療法であるか、またはそれを含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤を含み得、これは、本明細書で使用される場合、所望の特定の剤形に適するように、ありとあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤、固体結合剤、滑沢剤などを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６；参照により本明細書に組み込まれる）は、医薬組成物の製剤化に使用される様々な賦形剤と、それらの調製のための既知の手法について開示する。好適な薬学的に許容される担体としては、水、塩溶液（例えば、ＮａＣｌ）、生理食塩水、緩衝生理食塩水、グリセロール、糖類、例えば、マンニトール、スクロースなど、デキストロース、脂肪酸エステルなど、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0118】

医薬組成物は、必要に応じて、補助剤（例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝剤、着色剤、香味料、及び／または芳香物質など）と混合することができ、これは、活性化合物と有害反応をしないか、またはその活性を妨げない。特定の実施形態では、静脈内投与に適した水溶性キャリアが使用される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、滅菌することができる。

【0119】

好適な医薬組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有し得る。医薬組成物は、液体溶液、懸濁剤、または乳剤であり得る。

【0120】

医薬組成物は、通常の手順に従って、ヒトへの投与に適した医薬組成物として製剤化することができる。医薬組成物の製剤化は、投与方法に適合しなければならない。例えば、いくつかの実施形態では、静脈内投与用の組成物は、通常は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物は、注射部位の疼痛を緩和させるための可溶化剤及び局所麻酔剤も含んでもよい。一般に、成分は、別々に、または単位投与形態で混合されて供給され、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェットなどの密閉容器に入った凍結乾燥粉末または無水濃縮液として供給される。医薬組成物は、注入投与される予定の場合、滅菌された医薬グレードの水、生理食塩水、またはデキストロース／水を含有する点滴ボトルで分注することができる。医薬組成物が注入投与される場合、投与前に成分を混合され得るように、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。

【0121】

本明細書で提供される医薬組成物の記載は、主に、ヒトへの倫理的投与に適した医薬組成物に関するものであるが、そのような組成物が、一般に、あらゆる種類の動物または細胞へのｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏでの投与に適していることは、当業者に理解されるであろう。投与に適した組成物をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで様々な動物または細胞に与えるための、ヒトへの投与に適した医薬組成物の修飾は、よく理解されており、通常の熟練した専門家、例えば、獣医薬理学者は、あるとしても、通常の実験のみで、そのような修飾を設計及び／または実施することができる。

【0122】

本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で既知または今後開発される任意の方法により調製され得る。一般に、そのような調製方法は、有効成分を、希釈剤または別の賦形剤及び／または１つ以上の他の補助成分と組み合わせるステップと、その後に、必要及び／または望ましい場合に、生成物を所望の単回投与または複数回投与単位に成形及び／または包装するステップを含む。

【0123】

本開示による医薬組成物は、単一単位用量として、及び／または複数の単一単位用量として、バルクで調製、包装、及び／または販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、本明細書に記載の医薬組成物の個別の量である。

【0124】

本明細書に開示の組成物の使用方法
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を使用する方法を提供する。

【0125】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与する方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、組織は、哺乳動物組織である。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。

【0126】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与することを含むワクチン接種方法が、本明細書で提供される。

【0127】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与することを含む、遺伝子療法が本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、遺伝子療法は、遺伝子療法の１つ以上の成分、例えば、ガイドＲＮＡ及び／またはＣａｓポリペプチドの送達を含む。

【0128】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与することを含む、免疫応答を刺激するための方法が本明細書で提供される。

【0129】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与することを含む、細胞療法改変法も本明細書で提供される。

【0130】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与することを含む、免疫療法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、免疫療法は、抗体療法及び／または免疫チェックポイント療法の実施を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与することを含む、タンパク質補充療法が本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、タンパク質補充療法は、酵素補充療法の送達を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に投与することを含む化学療法が本明細書で提供される。

【0133】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、細胞、組織の細胞、または対象の細胞もしくは組織から分泌される改変型ポリペプチドのレベルを決定することを含む。

【0134】

いくつかの実施形態では、さらに、細胞、組織の細胞、または対象の細胞もしくは組織から分泌される改変型ポリペプチドのレベルを参照レベルと比較することを含む。いくつかの実施形態では、参照レベルは、比較可能な細胞、組織、または対象から分泌される参照ポリペプチドのレベルであり、参照ポリペプチドは、改変型ポリペプチドと同じペイロードポリペプチドと、野生型または改変型α因子プレプロ配列ではないシグナルペプチドを含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法または使用は、さらに、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞が投与されている細胞、組織、または対象における、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞の有効性を決定することを含む。

【0136】

いくつかの実施形態では、有効性の決定は、細胞、組織、または対象における抗体応答または細胞応答の決定を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞が投与されている細胞、組織、または対象は、参照と比較して、抗体応答または細胞応答の増加を示す。いくつかの実施形態では、参照は、本明細書に記載の比較可能な改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞が投与されている細胞、組織、または対象の抗体応答または細胞応答である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の比較可能な改変型ポリペプチドは、野生型または改変型α因子プレプロ配列ではないシグナルポリペプチドを含む。

【0137】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法または使用は、細胞、組織、または対象に、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／またはそれらを含む細胞を少なくとも２回投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法は、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を、細胞、組織、または対象に２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回投与することを含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法または使用は、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞の複数の用量を細胞、組織、または対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞の第２のまたは後続の用量は、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞の第１の用量と比較して、細胞、組織、または対象において、実質的に同様の有効性を有する。

【0139】

本明細書に開示の方法または使用のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、いずれかの投与経路を介して投与される：筋肉内、静脈内、皮下、髄腔内、皮内、眼内、鼻腔内、舌下、または経口。

【0140】

本明細書に開示の方法または使用のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。

【0141】

本明細書に開示の方法または使用のいずれかのいくつかの実施形態では、組織は、哺乳動物組織である。

【0142】

本明細書に開示の方法または使用のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。

【0143】

本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを細胞から発現することを含む、改変型ポリペプチドを製造する方法も提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。

【0144】

キット
本開示の別の態様は、さらに、医薬パックまたはキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の改変型ポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び／または細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、任意の適用可能な方法、例えば、本明細書に記載の方法で使用され得る。

【実施例】

【0145】

実施例１：クローニング法
本実施例は、哺乳動物、昆虫、及び植物細胞からのポリペプチド分泌を改善するためのコンストラクト及びコード化ポリペプチドを生成するための例示的な方法を提供する。

【0146】

実施例１．１：受容体結合ドメインコンストラクト
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の野生型受容体結合ドメイン（ＷＴ ＲＢＤ）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメインの他の２つのバリアント（バリアント＿１及びバリアント＿２）をコードするＤＮＡ ｇｂｌｏｃｋを注文し、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡアセンブリマスターミックス（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して、ＮａｎｏＬｕｃタンパク質融合ベクターであるｐＮＬＦ１－Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に個別にクローニングした。マスターミックスは、２つ以上のＤＮＡ片のギブソンアセンブリを迅速且つ効率的に行うための酵素及び緩衝液を含んでいた。より具体的には、ｐＮＬＦ１－Ｃベクターは、まず制限酵素ＥｃｏＲＩ－ＨＦ及びＮｈｅｌ－ＨＦで二重に消化して線状化された。次に、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、消化されたベクターを精製し、Ｚｙｍｏ ＤＮＡ Ｃｌｅａｎ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ－５（Ｚｙｍｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を使用して濃縮した。別々の反応では、それぞれ、１．５ｍｌのチューブで、精製ベクター５０ｎｇ、２倍モル過剰のインサート、マスターミックス１０μｌ、及び適切な量の超純水を混合して２０μｌの反応液を作成することにより、ＷＴ ＲＢＤ、バリアント＿１、及びバリアント＿２に対応するｇｂｌｏｃｋコンストラクトを線状ベクターに挿入した。その後、反応物を５０℃で１５分間インキュベートした。得られたコンストラクトは、ｐＮＬＦ１Ｃ＿ＲＢＤ＿ＷＴ、ｐＮＬＦ１Ｃ＿ＲＢＤ＿バリアント＿１、及びｐＮＬＦ１Ｃ＿ＲＢＤ＿バリアント＿２と呼ばれる。

【0147】

次に、ライゲーション反応物を１：４に希釈し、次に、希釈した反応物２μｌを使用して、Ｏｎｅ Ｓｈｏｔ ＴＯＰ１０ Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ Ｅ．ｃｏｌｉ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、４２℃で３０秒間の熱ショックで形質転換した。次に、細胞をアンピシリン寒天培地に塗布し、３７℃で２４時間インキュベートした。翌日、コロニーＰＣＲを使用して、キメラベクターの取り込みについて、コロニーをスクリーニングした。まず、コロニーを、１００μｌの水に懸濁させ、その混合物１μｌを、１０μＭのフォワードプライマー及びリバースプライマー１μｌ、２ｘ Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＳｕｐｅｒＦｉ ＰＣＲマスターミックス（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）１０μｌ、及び適切な量の水と混合して、１．５ｍｌのチューブ内で反応液２０μｌを作成した。次に、プライマー特性及びＰＣＲ酵素ベンダーから提供された推奨事項に基づいて、適切なサイクリングパラメータで、Ｍａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒ Ｘ５０（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を使用して、ＰＣＲを実行した。シーケンシングしてコンストラクトの挿入を確認するために、陽性コロニーのＰＣＲ産物をＧｅｎｅｗｉｚに送付した。一方、ＬＢ及びアンピシリンの溶液中で３７℃のインキュベーター内で振盪しながら、陽性コロニーを１８時間成長させた。１８時間後、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）を使用してミニプレッピングすることにより、コンストラクト毎に１つの陽性コロニーからキメラプラスミドを抽出した。再度シーケンシグして、正しいコンストラクトが挿入され、Ｅ．ｃｏｌｉ内での複製中に変異が導入されなかったことを確認するために、プラスミドを送付した。

【0148】

実施例１．２：プレプロ配列を含む受容体結合ドメインコンストラクト
ｐＮＬＦ１Ｃ＿ＲＢＤ＿バリアント＿１及びｐＮＬＦ１Ｃ＿ＲＢＤ＿バリアント＿２両方のいずれか一端に５０ｂｐの相同性を有するプレプロ配列をコードするｇＢｌｏｃｋメガプライマー（ＩＤＴ）を用いた制限フリークローニングを使用して、α因子プレプロ配列（例えば、α因子シグナルペプチド及びプロペプチド配列）をｐＮＬＦ１－Ｃのバリアント＿１及びバリアント＿２に追加した。相同性アームは、コザック配列及びＲＢＤバリアント間にプレプロ配列を挿入して、スパイク分泌ペプチドが置換されるように設計された。２７．２μＬの水、５ｘ Ｐｈｕｓｉｏｎ ＨＦ緩衝液１０μＬ、１０ｍＭのｄＮＴＰ １ｕＬ、水１ｕＬ中の２０ｎｇのｐＮＬＦ１Ｃ＿ＲＢＤ＿バリアント＿１またはｐＮＬＦ１Ｃ＿ＲＢＤ＿バリアント＿２、１０ｎｇ／μＬのプレプロメガプライマー１０μＬ、及び０．８ｕＬのＰｈｕｓｉｏｎ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）を氷上のＰＣＲチューブ内で混合した。チューブをサーマルサイクラーに入れ、以下のＰＣＲプログラムを実行した：９５℃で３０秒間。９５℃で３０秒間、６０℃で１分間、及び７２℃で５分間を２５サイクル。７２℃で７分間。これらの反応液１０μＬを、氷上のＰＣＲチューブ内で水３４μＬ、１０ｘ ＣｕｔＳｍａｒｔ緩衝液５μＬ、及びＤｐｎＩ（２０単位／μＬ）（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）１μＬと混合した。

【0149】

チューブをサーマルサイクラーに入れ、３７℃で１時間インキュベートしてテンプレートＤＮＡを消化した。反応物を水で１：４に希釈し、ＴＯＰ１０細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に形質転換し、上記のようにアンピシリン（Ｔｅｋｎｏｖａ）を含有するＬＢ寒天プレートにプレーティングした。翌日、ＮＬｕｃ＿Ｎｔｅｒｍ＿ｃＰＣＲ＿Ｆプライマー（配列番号５９）及びＮＬｕｃ＿Ｎｔｅｒｍ＿ｃＰＣＲ＿Ｒプライマー（配列番号６０）を使用して、上記のようにコロニーＰＣＲを実施して、プレプロインサートを含有するコロニーを同定した。ＮＬｕｃ＿ｓｅｑプライマー（配列番号６１）を使用して、ＰＣＲ産物をＧｅｎｅｗｉｚでシーケンシングした。インサートを含有するコロニーを、アンピシリンを含有するＬＢ培地で一晩成長させ、上記の実施例１．１で説明したようにミニプレッピングした。

【0150】

ＰＣＲを使用して、プレプロ配列をＷＴ ＲＢＤ配列に追加した。水（３１．５μＬ）、５ｘ Ｐｈｕｓｉｏｎ ＨＦ緩衝液（１０μＬ）、１０ｍＭのｄＮＴＰ（１μＬ）、１０μＭのＮＬｕｃ＿ＲＢＤ＿Ｆプライマー（配列番号６２）（２．５μＬ）、１０μＭのＮＬｕｃ＿ＲＢＤ＿Ｒプライマー（配列番号６３）（２．５μＬ）、５ｎｇ／μＬのＲＢＤ＿ＷＴ＿ＮＬｕｃ ｇＢｌｏｃｋ（１μＬ）、５ｎｇ／μＬのプレプロメガプライマーｇＢｌｏｃｋ（１μＬ）、及びＰｈｕｓｉｏｎ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）（０．５μＬ）を、ＰＣＲチューブ内で氷上で混合した。チューブを９８℃に予熱したサーマルサイクラーに移し、以下のＰＣＲプログラムを実行した：９８℃で３０秒間。９８℃で７秒間、続いて、７２℃で１５秒間を３０サイクル。７２℃で７分３０秒間。ＤＮＡ Ｃｌｅａｎ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ－５（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を使用して、ＰＣＲ反応物を精製した。上記のように、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡアセンブリマスターミックスを使用して、精製されたＰＣＲ産物をｐＮＬＦ１－Ｃにクローニングした。

【0151】

実施例１．３：最適化されたプリプロ配列
α因子プレプロ配列を最適化するために、プレプロ配列最適化ライブラリ用の上流クローニング部分を有するｐＮＬＦ１－Ｃのバリアント＿１で構成される新しいベクターを構築した。上の実施例１．１に記載されているように、ＮｈｅＩ及びＥｃｏＲＩを使用して、ｐＮＬＦ１－Ｃを消化した。上の実施例１．１に記載されるように、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡアセンブリマスターミックスを使用して、コザック配列、ＮｈｅＩ切断部位、６ｂｐスペーサー、ＥｃｏＲＩ切断部位、及びバリアント＿１を含有するｇＢｌｏｃｋ（ＩＤＴ）を、消化されたベクターにクローニングした。ｇＢｌｏｃｋの相同性アームを、ｐＮＬＦ１－ＣプラスミドからＮｈｅＩ及びＥｃｏＲＩ制限部位を除去するように設計したので、ｇＢｌｏｃｋ内の切断部位は、新しいベクター内で特有であり、ｐＳＰと呼ばれる。上の実施例１．１に記載されるように、ＮｈｅＩ及びＥｃｏＲＩを使用して、ベクターを消化した。プレプロの配列バリエーションを、長さに基づいてｅＢｌｏｃｋ、ｇＢｌｏｃｋ、またはプライマーとしてＩＤＴから注文し、バリアント＿１とのインフレームクローニングを可能にするためにｐＳＰとの２０ｂｐの相同アームを含有していた。上の実施例１．１に記載されているように、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡアセンブリマスターミックスを使用して、これらの配列を消化されたｐＳＰにクローニングした。ｅＢｌｏｃｋをｐＳＰの２倍のモル過剰に保ち、プライマーを４５ｎＭに保った。ＮＬｕｃ＿Ｎｔｅｒｍ＿ｃＰＣＲ＿Ｆ（配列番号５９）及びＮＬｕｃ＿Ｎｔｅｒｍ＿ｃＰＣＲ＿Ｒプライマー（配列番号６０）を使用して、コロニーＰＣＲを実施した。

【0152】

実施例１．４：追加のコンストラクト
上の実施例１．１に記載されているように、天然分泌ペプチドまたはプレプロを含むインフルエンザＨ１Ｎ１／ＰＲ８ヘマグルチニン細胞外ドメイン（ＨＡ）、天然分泌ペプチドまたはプレプロを含むヒト分泌胎児アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク分泌ペプチド（Ｓｓｐ）またはプレプロを含むトラスツズマブｓｃＦｖ、Ｓｓｐまたはプレプロを含むペルツズマブｓｃＦｖ、及びＳｓｐまたはプレプロを含むＧＢ２３５ ｓｃＦｖ、強力な免疫グロブリン分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むアダリムマブｓｃＦｖ、強力な免疫グロブリン分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むペムブロリズマブｓｃＦｖ、血管内皮増殖因子受容体分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むアフリベルセプト、強力な免疫グロブリン分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むデュピルマブｓｃＦｖ、強力な免疫グロブリン分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むウステキヌマブｓｃＦｖ、強力な免疫グロブリン分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むニボルマブｓｃＦｖ、強力な免疫グロブリン分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むベバシズマブｓｃＦｖ、及び腫瘍壊死因子受容体分泌ペプチドまたはＰＰＡを含むエタネルセプトを、ｐＮＬＦ１－Ｃにクローニングした。

【0153】

実施例１．５：キメラ抗原受容体コンストラクト
上の実施例１．１に記載されるように、ＣＤ８ａ分泌ペプチドまたはプレプロを有するチサゲンレクロイセル細胞外及び膜貫通ドメイン、インターロイキン２分泌ペプチドまたはプレプロを有するアキシカブタゲンシロルユーセル細胞外及び膜貫通ドメイン、ならびに免疫グロブリンカッパ分泌ペプチドまたはプレプロを有するリソカブタゲンマラルユーセルをコードするＤＮＡ ｇＢｌｏｃｋを、ＸｂａＩ及びＡｇｅＩで消化したｐｃＤＮＡ３．３－ＴＯＰＯ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にクローニングした。

【0154】

実施例１．６：昆虫細胞及び植物細胞での発現のためのコンストラクト
ＮａｎｏＬｕｃｉｆｅｒａｓｅに融合しており、脂肪動員ホルモン（ＡＫＨ）シグナルペプチドまたはα因子シグナルペプチド及びプロペプチドを有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメインバリアント＿１をコードする配列を、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ用にコドン最適化し、ＤＮＡ ｇＢｌｏｃｋ（ＩＤＴ）として注文した。上の実施例１．１に記載されているように、これらの配列を、ＮｃｏＩ及びＮｏｔＩ制限酵素で消化されたｐＩＥｘ－４昆虫細胞発現ベクター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）にクローニングした。

【0155】

ＮａｎｏＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ及びＡｒａｂｉｄｐｏｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ１、ＧＬＶ２、ＧＬＶ３、ＧＬＶ４、ＧＬＶ５、ＧＬＶ６、ＧＬＶ７、ＧＬＶ８、ＧＬＶ９、ＧＬＶ１０、またはＧＬＶ１１シグナルペプチド及びプロペプチド；α因子シグナルペプチド及びプロペプチド；Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子シグナルペプチド及びα因子プロペプチド；またはα因子シグナルペプチド及びＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子プロペプチドに融合しているバリアント＿１をコードする配列を、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ用にコドン最適化し、ＤＮＡ ｇＢｌｏｃｋ（ＩＤＴ）として注文した。上記の実施例１．１で説明したように、これらの配列をＮｄｅＩ及びＥｃｏＲＩ制限酵素で消化されたｐＲＩ １０１－ＡＮ植物細胞発現ベクター（Ｔａｋａｒａ）にクローニングした。

【0156】

実施例２：分泌スクリーニング
本実施例は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を検出するための例示的な方法を提供する。

【0157】

３７℃及び５％のＣＯ_２で、Ｃ１７０ｉ ＣｅｌｌＸｐｅｒｔ ＣＯ_２細胞培養インキュベーター（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）内で、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ペニシリン、及びストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を培養した。細胞が約９０％のコンフルエンスに達した時点で、トリプシンを使用して細胞を採取し、２００ｇで５分間回転させ、２ｘ１０^６細胞／ｍｌで再懸濁させ、次に、１ｘ１０^５細胞／ｍｌに希釈した。次に、希釈した細胞溶液１００μｌ（１ｘ１０^４細胞）を、白壁丸底９６ウェルプレートのウェルに添加した。細胞を２４時間インキュベートした。２４時間後、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００トランスフェクション試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と付属のプロトコールを使用して、細胞を適切な量のキメラプラスミドＤＮＡでトランスフェクトした。トランスフェクション後に、細胞を７２時間インキュベートした。

【0158】

約７２時間後、Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ＴＥ Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ基質／阻害薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、９６ウェルプレート内の細胞溶液の上清をルシフェラーゼ活性についてスクリーニングした。まず、細胞をインキュベーターから取り出し、室温で１５分間平衡化させた。次に、Ｐｒｏｍｅｇａプロトコールに従って、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ低血清培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で３ｘ基質溶液を調製した。次に、上清を９６ウェルＰＣＲプレートに移し、２００ｇで５分間回転させた。次に、遠沈した上清のアリコート１０μｌを白色９６ウェルプレートに移し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）９０μｌで希釈した。最後に、３ｘ基質溶液５０μｌをウェルに添加し、プレートを室温で２～３分間インキュベートした。基質溶液を添加してから１０分以内に、ＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、０．１秒の積分時間で発光を測定した。

【0159】

実施例３：ＡＣＥ２結合測定
本実施例は、ＡＣＥ２に結合するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤポリペプチドを測定するための例示的な方法を提供する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチド（例えば、ＲＢＤを含むもの）は、哺乳動物細胞の表面に発現するＡＣＥ２に結合することが知られている。従って、ＡＣＥ２結合アッセイは、細胞（例えば、哺乳動物細胞）から分泌されているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドの量を示し得る。

【0160】

ＡＣＥ２タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０１０８－Ｈ０８Ｈ）をＰＢＳ中で１μｇ／ｍＬに希釈した。１００μＬを、透明平底Ｉｍｍｕｎｏ ＭａｘｉＳｏｒｐ ９６ウェルプレートのウェルに添加した。プレートを覆い、４℃で一晩インキュベートした。プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）－２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ－Ｔ）で洗浄した（それぞれ、３００μＬ／ウェルで３回洗浄）。ＰＢＳ中３００μＬのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）－２０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３７５１６）を各ウェルに添加し、プレートを覆い、室温で１時間インキュベートし、ウェルを再度洗浄した。

【0161】

ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のトランスフェクションから７２時間後、上の実施例２に記載されるように、上清を収集した。５０μＬのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ及び５０μＬの上清を、ＡＣＥ２コーティングプレートのウェルに添加した。プレートを覆い、室温で２時間インキュベートし、次に、ウェルを再度洗浄した。１００μＬのＰＢＳを各ウェルに添加した。３ｘ完全ＮａｎｏＬｕｃ基質溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、上の実施例２に記載されるように、発光を測定した。

【0162】

実施例４：プレプロ配列による哺乳動物細胞からの組み換えポリペプチド分泌の増加
本実施例は、プレプロ配列が含まれると、哺乳動物細胞からの組み換えポリペプチドの分泌を増加させ得ることを実証する。

【0163】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ抗原のバリアント形態は、問題のエピトープ及びバリアントの中和に免疫応答を集中させる抗原として開発されている。しかし、バリアントに変異を導入すると、発現に重大な影響を及ぼし得、これらの改変抗原は、多くの場合、例えば、エンコードＲＮＡの投与後に、野生型配列と比較して大幅に低下したレベルで発現される。２つのＲＢＤバリアント（バリアント＿１及びバリアント＿２）では、天然スパイク分泌ペプチドをα因子シグナルペプチド及びプロペプチド配列（プレプロ）で置換すると、ＨＥＫ２９３Ｔヒト細胞での様々な用量でタンパク質分泌が１０～７０倍増加した（図１）。分泌されたタンパク質は、ＡＣＥ２結合の５～２０倍の増加で測定されるように、適切なフォールディングを維持した（図１）。特に、バリアント＿２の場合、分泌及びＡＣＥ２結合の両方が野生型ＲＢＤレベルにほぼ回復した。

【0164】

モデル分泌タンパク質の小規模ライブラリにおけるプレプロ配列のパフォーマンスを試験した。ライブラリは、野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ、インフルエンザＨ１Ｎ１／ＰＲ８ヘマグルチニン細胞外ドメイン（ＨＡ）、ヒト分泌胎児性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）、及び異なるエピトープを標的とするＨｅｒ２標的モノクローナル抗体から設計された３つの単鎖抗体フラグメント（トラスツズマブ（ハーセプチン）、ペルツズマブ（ペルジェタ）、及びＧＢ２３５（Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる））で構成されていた。天然分泌ペプチド（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク分泌ペプチドはｓｃＦｖに使用された）をプレプロ配列で置換すると、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞からの分泌が様々な用量で２．５～７．５倍に増加した（図２）。

【0165】

次に、２０２０年から最も売れている生物学的薬物のうちの８つにおいて、プレプロ配列のパフォーマンスを調査した（Ｂｕｎｔｚ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。これらの分子は、単鎖抗体と、免疫グロブリンドメインに融合している細胞受容体からなるキメラ融合タンパク質で構成される。天然分泌ペプチドが公的に入手できない生物製剤では、代わりに、実験的に検証されているヒト抗体配列からの強力な分泌ペプチドを選択した（Ｈａｒｙａｄｉ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。試験された８つの生物製剤全てにおいて、プレプロ配列は、天然／強力なヒト抗体分泌ペプチドよりも分泌を増強した（図３）。効果量は、１．２～４０倍の範囲であった。

【0166】

実施例５：最適化されたプレプロ配列は、分泌を増加させる
酵母細胞における分泌増強の機序に基づいて、ヒト細胞における活性について、プレプロ配列を最適化した。通常、α因子のプロペプチド領域の機能は、小胞体（ＥＲ）からの排出及びゴルジ体への輸送を可能にすることであり、それは、分泌される成熟α因子ペプチドを生成するために、ゴルジ体においてプロテアーゼで切断される。具体的には、プロペプチド配列は、細胞から分泌するためのタンパク質のＣＯＰＩＩ小胞へのパッケージ化に関与しているＥＲ膜タンパク質Ｅｒｖ２９ｐに結合する（Ｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。Ｅｒｖ２９ｐのヒト相同体は、Ｓｕｒｆ４であり、これは、シグナルペプチドの切断後に露出するアミノ末端トリペプチドとの相互作用を通じて、ＥＲ内の可溶性タンパク質の異なる定常濃度を確立する（Ｙｉｎ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。Ｓｕｒｆ４に対するトリペプチドモチーフの親和性により、カーゴタンパク質の定常濃度が決定され、全ての可能なトリペプチドのサブセットにより、連続体濃度が確立され、最も親和性の高いモチーフは、最も低いＥＲ濃度で最大の分泌量を促進する（Ｙｉｎ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。α因子プロペプチド配列のアミノ末端残基を、Ｓｕｒｆ４結合親和性の高いトリペプチドモチーフに変異させると、改変型プレプロ配列を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤバリアント抗原の分泌が増加した（図４）。

【0167】

さらに、ＥＲに入ると、プロペプチド領域が、成熟タンパク質を生成するために、プロテアーゼで切断される。具体的には、α因子プロペプチドは、酵母プロテアーゼＫｅｘ２及びＳｔｅ１３で切断される（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ ｅｔ ａｌ、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。Ｋｅｘ２切断部位がヒトプロテアーゼＳ１Ｐ、ＰＣＳＫ９、フーリン、及びＰＣＳＫ４の切断部位に変異し、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失すると、野生型プレプロ配列よりもバリアントＲＢＤ抗原の分泌が強化された（図４）。

【0168】

ヒト化プロテアーゼ部位をＳｔｅ１３欠失と組み合わせると、最大の増強が得られた。これは、さらに分泌を増強し、ヒト細胞での機能のために配列を完全に最適化するために、これらの分泌増強変異が組み合わされ得ることを示唆する。

【0169】

最初のスクリーニングで個別に分泌を強化したヒットを、２回目の配列最適化のために組み合わせた。具体的には、試験された配列は、（１）トリペプチドＳｕｒｆ４結合モチーフをヒト化プロテアーゼ切断部位との組み合わせ、（２）異なるヒト化プロテアーゼ切断部位の組み合わせ、（３）様々なスペーサー構造を有するＳｕｒｆ４結合モチーフの繰り返し、及び、（４）個々のヒト化プロテアーゼ切断部位の繰り返し、を含む。試験された配列全ては、Ｓｔｅ１３切断部位の欠失を含有していた。一般に、個々の分泌促進変異の組み合わせは、さらに、相加的に分泌を増強した（図５）。

【0170】

２回目のスクリーニングからのヒットは、３回目の配列最適化のために統合された。これらの配列は全て、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失しており、柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフを含有していた。試験された全ての組み合わせが、野生型のプレプロ配列と比較して分泌を増強したが（図６）、観察された最も大きな増強が、柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフ、Ｓｔｅ１３切断部位の欠失、及びＫｅｘ２切断部位の３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位への変異の組み合わせからもたらされた。ヒトプロテアーゼＳ１Ｐ（膜結合転写因子部位１プロテアーゼ）は、ＥＲ及びゴルジ体の分泌経路を通じて輸送されるタンパク質及びペプチド前駆体を処理する（Ｇａｒｔｅｎ ｅｔ ａｌ．、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。野生型プレプロ配列に対するこれらの変更を合わせると、分泌が１０倍に増強された。

【0171】

分泌経路を通じてタンパク質を輸送する受容体に意図的に結合する追加のペプチド配列を挿入することにより、この改変型プレプロ配列（以下、プレプロ＿２と呼ばれる）をヒト細胞における活性のためにさらに最適化した。ＬＭＡＮ１／ＥＲＧＩＣ５３は、小胞体（ＥＲ）－ゴルジ体中間区画の内在タンパク質であり、これは、糖化タンパク質をＥＲからゴルジ体へ輸送する（Ｎｉｃｈｏｌｓ ｅｔ ａｌ．）。ＬＭＡＮ１に結合する確認されているカーゴは、プロテアーゼカテプシンＣ（ＣＡＴＨＣ）及び凝固因子タンパク質を含む。グリコシル化部位を含有するＣＡＴＨＣ及び凝固因子ＶＩＩ（ＣＦＶＩＩ）からのペプチド配列は、改変型プレプロ＿２配列に挿入された場合、タンパク質分泌を増強した（図７）。ペプチド配列を、プレプロ＿２配列の３つの場所のうちの１つに挿入した：（１）柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフに続くプロペプチドＮ末端、（２）プロペプチド配列の中央、または、（３）３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位の直前のＣ末端。

【0172】

分泌経路を通じてカーゴを輸送するもう１つの膜結合受容体は、ソルチリン１（ＳＯＲＴ１）であり、これは、ゴルジ体に存在し、カーゴタンパク質を分泌小胞に輸送するのに役立つ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．）。ＳＯＲＴ１は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）を含む複数のタンパク質カーゴを結合して輸送することが示されている（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．）。さらに、ＳＯＲＴ１は、自身のプロペプチドに結合し、ゴルジ体に到達した時に切断される。ＢＤＮＦ及びＳＯＲＴ１由来のペプチド配列は、上記と同じ３つの位置のプレプロ＿２に挿入された場合、タンパク質分泌を増強した（図７）。

【0173】

これらのデータは、タンパク質を複数の独立した分泌経路受容体及び分泌機序に標的化するために、独立した配列及びドメインが単一のポリペプチド配列内で組み合わせ得る。改変型配列でＬＭＡＮ１結合ドメイン及びＳＯＲＴ１結合ドメインを組み合わせても、分泌がさらに増強されたようには見えなかった。特定の理論に束縛されることを望まないが、このデータは、プレプロ＿２コンテキストにＬＭＡＮ１結合ドメイン及びＳＯＲＴ１結合ドメインをそれぞれ含有する個別の配列が、２つの異なる分泌受容体／経路が並行して生じるように、細胞に共送達され得ることを示唆する。

【0174】

実施例６：キメラ抗原受容体の発現の測定
本実施例は、哺乳動物細胞の表面上の抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法受容体ポリペプチドの表示を検出するための例示的な方法を提供する。

【0175】

細胞表面の膜結合タンパク質は、分泌タンパク質と同様の輸送経路をたどるが、プレプロ配列が同様に機能し、膜貫通タンパク質の細胞表面表示を増強させるかどうかは不明であった。臨床的に承認されたＣＡＲ－Ｔ細胞療法の受容体は、細胞膜タンパク質の表示に対するプレプロ配列の効果を測定するためのモデルシステムとして機能し得る。具体的には、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞の表面にある抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ受容体の発現及びフォールディングの両方を、蛍光標識ＣＤ１９リガンドを使用して測定し、フローサイトメトリーを使用して細胞毎に定量することができる。

【0176】

実施例６．１：ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるキメラ抗原受容体の発現
上の実施例２で記載されるように、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、培養、採取、播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００に製剤化されるＣＡＲタンパク質をコードするプラスミドで処置する。
約７２時間後、酵素フリー細胞解離緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、細胞を採取し、黒色Ｖ底プレート中、３００ｘｇで１０分間遠沈する。上清を廃棄し、細胞を氷上に置く。２０μｇ／ｍＬのビオチン化ＣＤ１９（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を含有するｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅフローサイトメトリー染色緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に、細胞を再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートする。細胞を遠沈し、上清を廃棄し、１０μｇ／ｍＬのフィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲートストレプトアビジンを含有するｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅフローサイトメトリー染色緩衝液に細胞を再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートする。細胞を遠沈し、上清を廃棄し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅフローサイトメトリー染色緩衝液に再懸濁させる。細胞を、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅフローサイトメトリー染色緩衝液で約１ｅ５細胞／ｍＬに希釈し、フローサイトメトリー分析の直前に、３５μｍメッシュ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）で濾す。

【0177】

細胞表面へのＣＤ１９の結合は、フローサイトメトリーを使用して定量される。ＣＤ１９シグナルは、Ａｔｔｕｎｅ ＣｙｔＰｉｘフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＢＬ２チャネル（４８８ｎｍ励起レーザー、５７４／２６ｎｍフィルター発光）を使用して測定される。

【0178】

実施例６．２：初代ヒトＴ細胞におけるキメラ抗原受容体の発現
約２ｅ７個の凍結ヒト末梢血汎Ｔ細胞（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）を解凍して、５０ｍｌのチューブに移し、完全Ｔ細胞培地（ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ－ＸＦ Ｔ細胞増殖培地（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）５０ｍｌ及び０．１ｍｇ／ｍｌのＣＨＯ発現組み換えヒトＩＬ－２（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）５０ｕｌ）をチューブに撹拌しながら滴加する。チューブを３００ｇで１０分間回転させることにより、細胞をペレット化する。上清を吸引除去し、２０ｍｌの完全Ｔ細胞培地に再懸濁することにより、細胞を洗浄する。上記のように、細胞を再度ペレット化し、上清を除去することができ、細胞を５ｍｌの完全Ｔ細胞培地に再懸濁させる。細胞懸濁液を、１ｅ６細胞／ｍｌに調整する。この細胞懸濁液７ｍｌ（７ｅ６細胞）を、Ｔ２５フラスコに移す。ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ Ｈｕｍａｎ ＣＤ３／ＣＤ２８／ＣＤ２ Ｔ細胞アクチベーター（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）２０ｕｌ／１ｅ６細胞を、フラスコ内の細胞に添加する。次に、細胞を３７℃、９５％のＲＨ、５％のＣＯ２で７２時間培養する。活性化の２日後に、培地に新しい完全Ｔ細胞培地を補給することにより、フラスコ内の細胞濃度を、１ｅ６細胞／ｍｌに維持する。

【0179】

Ｇｅｎｖｏｙ－ＩＬＭＴ細胞キットであるＳｐａｒｋ（ＰＲＥＣＩＳＩＯＮ ＮＡＮＯＳＹＳＴＥＭＳ）に付属するプロトコールを使用して、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を製剤化する。簡単に説明すると、Ｓｐａｒｋ機器（ＰＲＥＣＩＳＩＯＮ ＮＡＮＯＳＹＳＴＥＭＳ）の設定３つのプロトコールを使用して、ＣＤ８シグナルペプチド、プレプロ、またはプレプロ＿２を含むチサゲンレクロイセルをコードする１ｍｇ／ｍｌのｍＲＮＡ、Ｇｅｎｖｏｙ脂質ミックス、及び水性希釈製剤緩衝液を、１：２：３の比で混合する。次に、上記のキットプロトコールに記載されている修正版Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎアッセイを使用して、ペイロード濃度、直径、及びカプセル化効率について、ＬＮＰを特性評価する。

【0180】

活性化Ｔ細胞をインキュベーターから取り出し、１５ｍｌのチューブに移す。３００ｇで１０分間回転させることにより、細胞をペレット化し、１ｕｇ／ｍｌの上清補充物に０．５ｅ６細胞／ｍｌで懸濁させる。次に、０．５ｅ６細胞／ｍｌの懸濁液１２５ｕｌを透明な平底９６ウェルプレートに移す。ＬＮＰを各ウェルに追加する。次に、プレートを、３７℃、９５％のＲＨ、５％のＣＯ２で４８時間インキュベートする。

【0181】

ＣＡＲ発現を定量するために、細胞をインキュベーターから取り出し、３００ｇで１０分間回転させることによりペレット化する。上清を除去し、２００ｕｌの１ｘ ＰＢＳに再懸濁し、ペレット化し、上清を除去することにより、細胞を洗浄する。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ固定可能なＶｉｏｌｅｔ死細胞染色（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の１：１０００希釈液１００ｕｌで、細胞を３０分間染色する。細胞をペレット化し、上清を除去することにより、生存率染色を除去する。次に、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅフローサイトメトリー染色（ＦＡＣＳ）緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中のＡＰＣ標識ヒトＣＤ１９（ＡＣＲＯＢＩＯＳＹＳＴＥＭＳ）の１：５０希釈液１００ｕｌで、細胞を１時間染色する。細胞をペレット化し、上清を除去することにより、染色試薬を除去する。細胞を氷冷ＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に懸濁させる。フローサイトメトリーを使用して細胞表面へのＣＤ１９の結合を介して代理的で、ＣＡＲ発現を定量する。Ａｔｔｕｎｅ ＣｙｔＰｉｘフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、ＶＬ１チャネル（４０５ｎｍ励起レーザー、４４０／５０ｎｍフィルター発光）を使用して、細胞生存率を測定し、ＲＬ１チャネル（６３７ｎｍ励起レーザー、６７０／１４ｎｍフィルター発光）を使用して、ＣＤ１９シグナルを測定する。

【0182】

初代ヒトＴ細胞に対する表面発現抗ＣＤ１９ ＣＡＲの活性を試験するために、ＧＦＰ及びホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）（Ｎａｌｍ６－ＦＬｕｃ／ＥＧＦＰ）（Ｉｍａｎｉｓ）を安定的に発現するＣＤ１９陽性Ｎａｌｍ６細胞に対する殺傷活性を測定する。１０％のＦＢＳ、１％のＰｅｎｎ－Ｓｔｒｅｐ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８、及び１ｕｇ／ｍｌのピューロマイシンを含有するＲＰＭＩ １６４０培地（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）で、Ｎａｌｍ６－ＦＬｕｃ／ＥＧＦＰ細胞を培養する。細胞濃度を１ｅ６細胞／ｍｌに保持するために、３日毎に継代することにより細胞を維持する。

【0183】

致死効果を試験するために、１ｅ５のＮａｌｍ６－ＦＬｕｃ／ＥＧＦＰ細胞を平底の不透明白色９６ウェルプレートで、様々な量のＣＡＲ－Ｔ細胞と共培養し、以下のエフェクター－標的比を達成する：０：１、２：１、１：１、１：２、１：４、１：８、及び１：１６。プレートを、３７℃、９５％のＲＨ、５％のＣＯ２で１８時間インキュベートする。

【0184】

１８時間後、細胞プレートをインキュベーターから取り出し、室温に平衡させる。平衡化後、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）１００ｕｌを、各プレートのウェルに添加し、室温で２分間インキュベートする。ＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロプレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、発光を測定する。次に、発光データを使用して、特定の細胞溶解を計算する。

【0185】

異なる細胞タイプは、異なる分泌要求を有し、それにより、分泌経路遺伝子及びタンパク質の特有な発現パターンを示す（Ｆｅｉｚｉ ｅｔ ａｌ．）。それ故、ある細胞タイプでのタンパク質分泌に最適化された配列は、異なる細胞タイプでのタンパク質分泌に最適な配列ではないことがある。初代Ｔ細胞（例えば、ＩｇＫ軽鎖、ＣＤ８、及びＩＬ２シグナルペプチド配列）または一般的な哺乳動物細胞（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクシグナルペプチド配列）で高タンパク質分泌を引き起こすことが知られているシグナルペプチド配列と、改変型プロ配列（プロ２）を組み合わせると、改変型プレプロ配列単独よりも初代ヒトＴ細胞上のタンパク質細胞表面表示を増強し得、上記のように、発現、フォールディング、及び活性についてスクリーニングすることができる。

【0186】

ＣＡＲ Ｔ細胞療法受容体ポリペプチド配列は、哺乳動物細胞におけるタンパク質発現及びフォールディングと、標的抗原結合について高度に最適化されており、実に、バイオ製造または臨床使用のためにうまく開発されている任意のポリペプチド配列は、これらの目的のために高度に最適化されている。多くの場合、高度に最適化されていないポリペプチド配列を利用することが理想的であり得る。例えば、抗体単鎖フラグメント開発における指向性進化及び／または親和性成熟ステップを省略すると、生物学的治療薬開発プロセスでかなりの時間を節約し得る。さらに、ＣＡＲ Ｔ細胞療法による処置は、多くの場合、標的がん細胞抗原に対する受容体の親和性が高いことから生じる重篤ないくつかの副作用、例えば、サイトカインストームまたはオフターゲット毒性（Ｒａｆｉｑ ｅｔ ａｌ．）を伴い；低親和性受容体を利用すると、これらの効果を軽減し得るが、多くの場合、タンパク質発現の低減という代償を払う。発現を強化し、それにより、有害な影響を救済するために、これらの最適でないタンパク質配列にプレプロ配列を融合し得る。例えば、抗ＣＤ１９単鎖フラグメントＡ３Ｂ１（Ｃａｓｔｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．）は、臨床的に承認されたＣＡＲ－Ｔ細胞療法単鎖フラグメントよりも低い発現及び親和性を示し、プレプロ配列が最適でないタンパク質配列の発現及び細胞表面表示に及ぼす影響を測定するためのモデルシステムとして機能し得る。具体的には、上記のように、初代ヒトＴ細胞の表面における抗ＣＤ１９単鎖フラグメントＡ３Ｂ１の発現、フォールディング、及び活性を測定することができる。

【0187】

実施例７：追加のバイオ製造細胞株での発現
本実施例は、生物学的治療薬の生成に日常的に使用される追加の哺乳動物、昆虫、及び植物細胞由来のポリペプチドの分泌を検出するための例示的な方法を提供する。

【0188】

実施例７．１：哺乳動物及び昆虫細胞株におけるバイオ製造の例示的なプロトコール
３７℃、５％のＣＯ２のＣ１７０ｉ ＣｅｌｌＸｐｅｒｔ ＣＯ２細胞培養インキュベーター（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）内の、１０％のＦＢＳ及びペニシリン及びストレプトマイシンが補充されたＦ１２Ｋ培地（ＡＴＣＣ）中で、ＣＨＯ－Ｋ１チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＡＴＣＣ）を成長させる。上の実施例２で記載されるように、細胞を、採取、播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００で製剤化された哺乳動物ｐＮＬＦ１Ｃ系プラスミドで処置する。

【0189】

２７℃の非加湿インキュベーター内の、添加された１０％のＦＢＳ及びペニシリン及びストレプトマイシンが補充されたＧｒａｃｅの昆虫培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で、昆虫Ｓｆ９細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を成長させる。上の実施例２で記載されるように、細胞を採取し、播種する。上の実施例２で記載されるように、細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００で製剤化されたｐＩＥｘ－４昆虫細胞発現ベクター系キメラプラスミドで処置する。

【0190】

実施例７．２：ＣＨＯ－Ｋ１及びＳｆ９細胞株におけるバイオ製造及び発現
３７℃、５％のＣＯ２のＣ１７０ｉ ＣｅｌｌＸｐｅｒｔ ＣＯ２細胞培養インキュベーター（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）内の、１０％のＦＢＳ及びペニシリン及びストレプトマイシンが補充されたＦ１２Ｋ培地（ＡＴＣＣ）中で、ＣＨＯ－Ｋ１チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＡＴＣＣ）を成長させた。上の実施例２で記載されるように、細胞を、採取、播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００で製剤化された哺乳動物ｐＮＬＦ１Ｃ系プラスミドで処置した。

【0191】

２７℃の非加湿インキュベーター内の、添加された１０％のＦＢＳ及びペニシリン及びストレプトマイシンが補充されたＧｒａｃｅの昆虫培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で、昆虫Ｓｆ９細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を成長させた。細胞が約９０％のコンフルエンスに達した時点で、ピペッティングすることにより細胞を採取し、２００ｇで５分間遠心分離し、Ｓｆ－９００ ＩＩＩ無血清培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に４ｘ１０^５細胞／ｍｌで再懸濁させた。次に、希釈された細胞溶液２ｍｌ（８ｘ１０^５細胞）を、６ウェルプレートのウェルに添加した。細胞を１５分間接着させた。次に、ＣｅｌｌＦｅｃｔｉｎ ＩＩ試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び付属のプロトコールを使用して、ｐＩＥｘ－４昆虫細胞発現ベクター系キメラプラスミドで細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後、上清を収集し、上の実施例２で記載されるように、発光を測定した。

【0192】

図８Ａ～８Ｂに示されるように、天然スパイクシグナルペプチド（Ｓｓｐ）をα因子シグナルペプチド及びプロペプチド配列（プレプロ）に置換すると、ＣＨＯ－Ｋ１チャイニーズハムスター卵巣細胞において、１～１００ｎｇの用量範囲にわたってＲＢＤバリアント＿１及びバリアント＿２のタンパク質分泌が１．１倍～１５．６倍増強された（図８Ａ）。細胞型特異的脂肪動員ホルモンシグナルペプチドをα因子プレプロで置換すると、Ｓｆ９ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞において、１００～１，０００ｎｇの用量範囲にわたってバリアント＿１の分泌が３．７～５．６倍増強された（図８Ｂ）。

【0193】

実施例８：植物細胞株における発現
本実施例は、生物学的治療薬の生成に日常的に使用される植物細胞からのポリペプチドの分泌を検出するための例示的な方法を提供する。

【0194】

植物Ｔ８７細胞（Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ）を、１２０ｒｐｍで軌道振盪しながら、２４℃の非加湿インキュベーター内のＮＴ－１培地中で成長させる。細胞を懸濁液中で約９０％のコンフルエンスまで成長させ、次に、エレクトロポレーションまたはアグロバクテリウム媒介トランスフェクションのいずれかを使用して、適切な量のｐＲＩ １０１－ＡＮ植物細胞発現ベクターベースのキメラプラスミドＤＮＡでトランスフェクトする。以下のプログラムの、４ｍｍ幅のキュベット内でＢｉｏ－Ｒａｄ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩを使用して、エレクトロポレーションを実施する：ポアリングパルスの場合は、３７５Ｖ／ｃｍ、１０ｍｓ、５回、及び５０ｍｓ間隔、トランスファーパルスの場合は、５０Ｖ／ｃｍ、５０ｍｓ、２０回、及び５０ｍｓ間隔。エレクトロポレーション後に、細胞を９６ウェルプレートに播種する。ＬＢＡ４４０４細胞（Ｔａｋａｒａ）を使用して、アグロバクテリウム媒介トランスフェクションを実施する。以下のプログラム（２５μＦ、２００オーム、２ｋＶ、単一パルス）で、１ｍｍ幅のキュベット中、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩを使用して、１ｎｇのｐＲＩ １０１－ＡＮベースのキメラプラスミドＤＮＡでＬＢＡ４４０４細胞をエレクトロポレーションする。ＳＯＣ培地中で１００ｒｐｍ、３０℃で１時間振盪して、細胞を回収し、その後、カナマイシンを含む寒天培地にプレーティングし、３０℃で４８時間インキュベートするであろう。次に、コロニーを選択し、３０℃で振盪しながら、カナマイシンを含有するＬＢ培地中で培養する。Ｔ８７植物細胞のトランスフェクションでは、適切なプラスミドで形質転換されたＬＢＡ４４０４細胞を、９６ウェルプレートに播種されたＴ８７細胞に添加する。トランスフェクション後に、細胞を７２時間インキュベートする。次に、上の実施例２で記載されるように、上清を収集し、発光を測定する。

【0195】

実施例９：プレプロは、ワクチン接種に対する免疫反応を増強する
本実施例は、ＩｇＧ及びＩｇＡ誘導、偽型ウイルス中和を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原ポリペプチドによるワクチン接種後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫応答を測定するための例示的な方法を提供する。それは、プレプロ及びプレプロ＿２がマウスにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤワクチン接種による血清ＩｇＧ及び粘膜ＩｇＡ反応及び偽型ウイルス中和を増強することを示すデータも含有する。最後に、それは、プロペプチドの切断を阻止することによりＩｇＡ応答を増強するために提案された実験と、ｉｎ ｖｉｔｒｏでこの方策を裏付けるデータを含有する。

【0196】

実施例９．１：ワクチン接種の方法
コンストラクトをＩＤＴ ｇＢｌｏｃｋとして合成した。アニーリング温度５０℃でＨｅｒｃｕｌａｓｅ ＩＩポリメラーゼ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して、ＤＮＡテンプレートをＴ７－ＡＧＧ＿ｆｗｄ及び１２０ｐＡ＿ｒｅｖプライマーで増幅させた。ＤＮＡ Ｃｌｅａｎ ＆ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ－２５キット（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を使用して、得られたＰＣＲ産物をクリーンアップした。１ｘ ＨｉＳｃｒｉｂｅ Ｔ７高収量緩衝液（ＮＥＢ）、各ＮＴＰ（ａｃ４－ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＡＴＰ、及びＵＴＰ）７．５ｍＭ、ＣｌｅａｎＣａｐ ＡＧ（ＴｒｉＬｉｎｋ Ｂｉｏｔｅｃｈ）７．５ｍＭ、２Ｍのベタイン（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉ）、ＭｇＣｌ２ ２０ｍＭ、及び０．１μＬ／μＬのＨｉＳｃｒｉｂｅ Ｔ７ポリメラーゼミックスからなる転写ミックス１９．９μＬを、ヌクレアーゼフリーＨ２Ｏ中のＴ７テンプレート２００ｎｇで構成される２．１ｕＬのＤＮＡ溶液に添加した。転写を５０℃で１時間実施した。５００μｇ容量のＭｏｎａｒｃｈ ＲＮＡクリーンアップキットを使用して、転写されたＲＮＡを精製し、ＤＮａｓｅ Ｉ緩衝液中の１０ＵのＤＮＡｓｅ Ｉ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）及び１００ＵのＣａｌｆ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌアルカリホスファターゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、３７℃で５分間処理し、５００μｇ容量のＭｏｎａｒｃｈカラムを使用して、再度精製した。ＮａｎｏＤｒｏｐ分光光度計を使用して、濃度を測定した。

【0197】

ＮａｎｏＡｓｓｅｍｌｒ Ｉｇｎｉｔｅマイクロ流体ミキサー（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、脂質ナノ粒子内のｍＲＮＡの製剤（ｍＲＮＡ－ＬＮＰ）を調製した。ＧｅｎＶｏｙ－ＩＬＭ脂質混合物（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ）を無水エタノールで１２．５ｍＭに希釈し、製造元推奨の配合パラメータを使用して、ＰＮＩ緩衝液（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ）中のｍＲＮＡ水溶液（０．１４ｍｇ／ｍＬ）と混合した。製剤を、直ちにリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）で３０：１に希釈し、Ａｍｉｃｏｎ遠心分離フィルター（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ ＵＦＣ９０１００８）を使用して、製剤を濃縮した。製剤を４℃で保管し、１４日以内にｉｎ ｖｉｖｏ研究に使用した。

【0198】

全ての動物実験は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌａｂ（ＣＲＡＤＬ）が定めたガイドラインに従って実施され、ＣＲＡＤＬの動物実験委員会により承認された。メスＢＡＬＢ／Ｃマウス（７～９週齢）を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、ＣＲＡＤＬで飼育した。研究開始前の少なくとも３日間、マウスを環境に慣れさせた。１日目に、マウスの右大腿四頭筋に、５０μＬのｍＲＮＡ－ＬＮＰ製剤（０．４μｇのｍＲＮＡ）を注射した。２１日目に、ブースター免疫のために、マウスの左大腿四頭筋に、５０μＬのｍＲＮＡ－ＬＮＰ製剤を注射した。２７日目に、マウスを安楽死させ、その時点で、心臓内穿刺により血液を採取した。血液を室温で３０分間凝固させ、その後、４℃、１２００ｘｇで１０分間遠心分離することにより、ＭｉｎｉＣｏｌｌｅｃｔ血清分離チューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ ４５０４７２）中で、血清を血液から分離した。新しい血清を、４℃で保存し、ＥＬＩＳＡで免疫原性を評価するために使用し、残りを分注し、－８０℃で凍結した。

【0199】

動物の死亡及びＩＣ血液採取の直後に、膣粘膜の洗浄を実施した。ｐ２０ピペットを使用して、２０μｌの滅菌ＰＢＳを膣内に導入した。液体を臓器内でピペットで８回前後させた後、試料量を１．５ｍＬのチューブに移した。毎回無菌ｐ２０チップを使用して、このプロセスを動物１匹当たり合計３回繰り返し、最終的に動物１匹当たり６０μｌのプールされた収集量を得た。膣洗浄試料を３００ｘｇで７分間遠心分離し、上清を採取して、４℃で一晩保存し、翌日のＩｇＡ ＥＬＩＳＡアッセイに使用した。

【0200】

実施例９．２：抗体価測定法
Ａｍａｎａｔ，ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔ Ｍｅｄ ２６：１０３３－１０３６，２０２０）により以前に確立されたものから、血清ＩｇＧ ＥＬＩＳＡプロトコールを採用した。９６ウェルＩｍｍｕｌｏｎ ４ ＨＢＸプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ）スパイクＳ１＋Ｓ２ ＥＣＤ－Ｈｉｓ組み換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ＃４０５８９－Ｖ０８Ｂ１）のＰＢＳ溶液（２μｇ／ｍｌ）をウェル毎に５０μｌでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。次に、自動プレート洗浄機（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して、プレートをＰＢＳ（ＰＢＳ－Ｔ）中の０．１％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０ ３００μｌで３回洗浄し、ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ＰＢＳブロッキング緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）２００μｌ／ウェルで室温で１時間ブロックした。ＰＢＳ中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋの１：３希釈液で、血清試料の連続希釈液を調製した。各段階希釈液１００μｌをプレートに添加し、室温で２時間インキュベートした。次に、上述のように、ＰＢＳ－Ｔを使用して、ウェルを３回洗浄した。ヤギ抗マウスＩｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼ結合２次抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＡＰ１２７Ｐ）の１：３，０００希釈液（Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋの１：３希釈液（ＰＢＳ中）中）５０μｌを全てのウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。再度、プレートをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。１００μｌのＳＩＧＭＡＦＡＳＴ ＯＰＤ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）溶液を各ウェルに添加し、室温で１０分間インキュベートした。１ウェル当たり２Ｎの塩酸５０μｌを添加することにより、反応を停止させた。ＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）プレートリーダーを使用して、光学密度を４９０ｎｍで測定した。同じ希釈度の未処置対照血清のシグナルの平均を超える１標準偏差未満にシグナルが低下する前の最終の希釈度を採用することにより、エンドポイント抗体価を決定した。シグナルがこの閾値を下回らなかった場合、最後の希釈度を抗体価として採用した。閾値を超えるシグナルが検出されなかった場合、最も希釈度の低い試料が使用される前の希釈系列の値を使用した。

【0201】

ＩｇＡ ＥＬＩＳＡでは、９６ウェルＩｍｍｕｌｏｎ ４ ＨＢＸプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ）スパイクＳ１＋Ｓ２ ＥＣＤ－Ｈｉｓ組み換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ＃４０５８９－Ｖ０８Ｂ１）のＰＢＳ溶液（４μｇ／ｍｌ）をウェル毎に５０μｌでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。次に、自動プレート洗浄機（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して、プレートをＰＢＳ（ＰＢＳ－Ｔ）中の０．１％のＴｗｅｅｎ（登録商標） ２０（３００μｌ）で３回洗浄し、ＰＢＳ－Ｔ中の３％の無脂肪乳（２００μｌ）をウェル当たり１時間室温でブロックした。ＰＢＳ－Ｔ中の１％の脱脂乳で、膣洗浄試料の段階希釈液を調製した。各段階希釈液７５μｌをプレートに添加し、室温で２時間インキュベートした。次に、上述のように、ＰＢＳ－Ｔを使用して、ウェルを３回洗浄した。１％のミルクＰＢＳ－Ｔ中のヤギ抗マウスＩｇＡホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート２次抗体（ａｂｃａｍ ａｂ９７２３５）の１：１，０００希釈液５０μｌを、全てのウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。再度、プレートをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。１００μｌのＳＩＧＭＡＦＡＳＴ ＯＰＤ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）溶液を各ウェルに添加し、室温で１０分間インキュベートした。１ウェル当たり２Ｎの塩酸５０μｌを添加することにより、反応を停止させた。ＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）プレートリーダーを使用して、光学密度を４９０ｎｍで測定した。同じ希釈度の未処置対照血清のシグナルの平均を超える１標準偏差未満にシグナルが低下する前の最終の希釈度を採用することにより、エンドポイント抗体価を決定した。シグナルがこの閾値を下回らなかった場合、最後の希釈度を抗体価として採用した。閾値を超えるシグナルが検出されなかった場合、最も希釈度の低い試料が使用される前の希釈系列の値を使用した。

【0202】

実施例９．３：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス中和測定法
ウイルス形質導入実験に使用されたヒトＡＣＥ２過剰発現ＨＥＫ細胞（Ｉｎｔｅｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）を、１μｇ／ｍＬのピューロマイシン、１０％の加熱不活化ウシ胎児血清、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシンが補充された高グルコースＧｌｕｔａＭＡＸ含有ＤＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １０５６４）中で維持した。ピューロマイシンフリー培地中で、第２世代レンチウイルスシステム（Ｉｎｔｅｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）を使用して構築されたスパイク偽型（Ｄ６１Ｇ武漢またはオミクロンのいずれか）Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼコードレポーターウイルス粒子と、血清希釈液を混合して、総量を１００μｌにした。ウイルス及び血清を、９６ウェル細胞培養プレート中、３７℃で１時間培養した。次に、新たに採取されたＨＥＫ細胞２０，０００個を、５０μＬのピューロマイシンフリー培地に添加し、３日間形質導入させた。細胞を分析前に－２０℃で保存した。ウミシイタケ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ルシフェラーゼを測定した。同じ希釈度の未処置対照血清のシグナルの５０％未満にシグナルが低下する前の、最終の希釈度を採用して、Ｎ５０抗体価を決定した。

【0203】

実施例９．４：プレプロ配列は、ワクチン接種に対する体液性ＩｇＧ及びＩｇＡ応答を強化する
ＢＡＬＢ／ｃマウスにワクチン接種し、上記のように、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）をコードするａｃ４Ｃ修飾ｍＲＮＡを用いて、天然スパイクシグナルペプチド、プレプロ、またはプレプロ＿２のいずれかを用いて追加免疫した。プレプロ及びプレプロ＿２は、双方ともに、血清ＩｇＧ抗体価全体及び膣粘膜ＩｇＡ抗体価の両方において、強いスパイクシグナルペプチドよりも顕著な改善を示した（図９）。分泌の改善に伴い、プレプロ＿２は、プレプロを使用した場合よりも約４倍高いＩｇＡ抗体価を示した。

【0204】

ＲＢＤを免疫刺激性Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）タンパク質ドメインに融合させた時、プレプロリーダーは、プレプロ＿２よりも２．３倍以上高い粘膜ＩｇＡ抗体価を生じた（図１０）。プレプロのプロ切断の効率がヒト適応プレプロ＿２よりも低いと予想されるので、この観察結果は、分泌抗原中のプロリーダー配列の保持が、免疫刺激性であり得ることを示唆する。特定の理論に束縛されることを望まないが、考えられる作用機序は、抗原提示細胞、血管上皮細胞、または体液性免疫応答を刺激可能な他の細胞型による、ＳＵＲＦ４が媒介する可溶性ｐｒｅ－ＲＢＤ－Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）の取り込みを含んでもよい。いくつかの実施形態では、Ｓｔｅ１３切断部位及び／またはＫｅｘ２切断部位を欠いているか、またはそれが弱体化しているプレプロリーダーと、Ｓ１Ｐ切断部位を欠いているか、またはそれが弱体化しているプレプロ＿２リーダーを、免疫刺激性となり得る。
いくつかの実施形態では、Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）または他の免疫刺激アジュバントドメインとのさらなる融合の有無に関わらず、抗原に融合しているプレプロ（ΔＳｔｅ１３ ΔＫｅｘ２）またはプレプロ＿２（ΔＳ１Ｐ）を哺乳動物にワクチン接種すると、哺乳動物シグナルペプチド（例えば、強力な哺乳動物シグナルペプチド）を使用する場合よりも強い粘膜ＩｇＡ応答が生じ得ることを、この観察は示唆する。

【0205】

実施例９．５：プレプロ＿２切断
プレプロ＿２配列が分泌前にタンパク質から切断されるかどうかを調べるために、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において、総タンパク質分泌及び未切断タンパク質分泌の両方を測定した。

【0206】

上の実施例２に記載されるように、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、培養して、トランスフェクトした。３ｘ ＭＹＣタンパク質タグを含有するプレプロ＿２を有し、ＮａｎｏＬｕｃｉｆｅｒａｓｅに融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメインバリアント＿１をコードするキメラプラスミドで細胞をトランスフェクトして、ＭＹＣ ＥＬＩＳＡを介して上清中の分泌タンパク質のプロペプチド配列の検出を可能にした。

【0207】

総タンパク質分泌を、上の実施例２で記載されるように測定した。未切断タンパク質の分泌を、ＭＹＣ ＥＬＩＳＡで測定した。捕捉抗ＭＹＣタグ抗体（Ａｂｃａｍ ａｂ３２）をＰＢＳで８μｇ／ｍＬに希釈した。１００μＬを、透明平底Ｉｍｍｕｎｏ ＭａｘｉＳｏｒｐ ９６ウェルプレートのウェルに添加した。プレートを覆い、４℃で一晩インキュベートした。プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）－２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ－Ｔ）で洗浄した（それぞれ、３００μＬ／ウェルで３回洗浄）。ＰＢＳ中３００μＬのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）－２０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３７５１６）を各ウェルに添加し、プレートを覆い、室温で１時間インキュベートし、ウェルを再度洗浄した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のトランスフェクションから７２時間後、上の実施例２で記載されるように上清を収集した。５０μＬのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ及び５０μＬの上清を、抗ＭＹＣ抗体コーティングプレートのウェルに添加した。プレートを覆い、室温で２時間インキュベートし、次に、ウェルを再度洗浄した。ＨＲＰにコンジュゲートされた検出用抗ＭＹＣタグ抗体（ａｂｃａｍ １３２６）をＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ中で４００ｎｇ／ｍＬに希釈し、ウェル毎に１００μＬを添加した。プレートを覆い、室温で１時間インキュベートし、次に、ウェルを再度洗浄した。ＳＩＧＭＡＦＡＳＴ ＯＰＤクロモゲン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）を製造者のプロトコールに従って調製し、各ウェルに１００μＬを添加した。１０分後、反応を２ＭのＨＣｌ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）５０μＬで停止させた。ＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、４９０ｎｍでの吸光度を測定した。コンストラクト間のタンパク質分泌の差異を考慮するために、未切断タンパク質分泌測定値（ＭＹＣ ＥＬＩＳＡシグナル）を総タンパク質分泌測定値（発光シグナル）に対して正規化した。

【0208】

３ｘ ＭＹＣタグ付きプレプロ＿２を含有するキメラプラスミドでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の上清中で、未切断タンパク質を検出した（図１１）。プレプロ＿２を含む上清中で検出された未切断タンパク質の量は、プロテアーゼ切断部位が除去されたプレプロ＿２で検出された量よりも少ない（図１１）。これは、プレプロ＿２のプロペプチドが分泌タンパク質から部分的に切断されていることを示唆する。特定の理論に束縛されることを望まないが、この観察結果は、プレプロ＿２プロペプチドが分泌ポリペプチドに存在し、ｉｎ ｖｉｖｏでのワクチン接種に対する抗体応答に影響を与え得ることを示唆する。

【0209】

実施例９．６：プレプロ配列は、プレプロ配列を有するＳｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）に融合しているＲＢＤを用いるワクチン接種により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの中和及び抗体価を増強する
上記のように、マウスに１０μｇのｍＲＮＡを投与し、３５日目に安楽死させたことを除いて、免疫刺激性Ｓｂｉ（ＩＩＩ－ＩＶ）タンパク質ドメインと融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株またはオミクロン株の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）をコードするａｃ４Ｃ修飾ｍＲＮＡで、天然スパイクシグナルペプチドまたはプレプロのいずれかで、ＢＡＬＢ／Ｃマウスにワクチン接種させた。

【0210】

偽型ウイルス中和アッセイは、プレプロが両方のウイルス株のＮ５０抗体価を増強することを実証した（図１２）。中和の増加と一致して、プレプロは、粘膜ＩｇＡ及び血清ＩｇＧの両方の抗体価を増強した（図１３）。

【0211】

このデータは、抗原上のプレプロ配列の存在がワクチン接種の有効性及び／または効率を高め、ワクチン接種により生成される免疫応答も増強し得ることを示す。

【0212】

例示的な実施形態
実施形態１．改変型ポリペプチドであって、
（ｉ）ペイロードポリペプチド、
（ｉｉ）野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメント、を含み
前記野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントが、前記ペイロードポリペプチドに作動可能に連結されている、前記改変型ポリペプチド。

【0213】

実施形態２．前記ペイロードポリペプチドが、治療用ポリペプチドである、実施形態１に記載の改変型ポリペプチド。

【0214】

実施形態３．前記ペイロードポリペプチドが、１つ以上の抗原を含む、実施形態１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【0215】

実施形態４．前記１つ以上の抗原が、１つ以上のウイルス抗原である、実施形態３に記載の改変型ポリペプチド。

【0216】

実施形態５．前記１つ以上のウイルス抗原が、１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原である、実施形態４に記載の改変型ポリペプチド。

【0217】

実施形態６．前記１つ以上のウイルス抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメインまたはそのフラグメントを含む、実施形態５に記載の改変型ポリペプチド。

【0218】

実施形態７．前記１つ以上のウイルス抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含む、実施形態５または６に記載の改変型ポリペプチド。

【0219】

実施形態８．前記１つ以上のウイルス抗原が、１つ以上のインフルエンザ抗原である、実施形態４に記載の改変型ポリペプチド。

【0220】

実施形態９．前記１つ以上のインフルエンザ抗原が、１つ以上のインフルエンザＡ抗原である、実施形態８に記載の改変型ポリペプチド。

【0221】

実施形態１０．前記１つ以上の抗原が、１つ以上の細菌抗原である、実施形態３に記載の改変型ポリペプチド。

【0222】

実施形態１１．前記１つ以上の抗原が、１つ以上のがん抗原である、実施形態３に記載の改変型ポリペプチド。

【0223】

実施形態１２．前記１つ以上の抗原が、１つ以上の古細菌抗原である、実施形態３に記載の改変型ポリペプチド。

【0224】

実施形態１３．前記ペイロードポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントを含む、実施形態１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【0225】

実施形態１４．前記ペイロードポリペプチドが、細胞外受容体及び免疫グロブリン定常領域を含む融合タンパク質を含む、実施形態１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【0226】

実施形態１５．前記ペイロードポリペプチドが、受容体アゴニスト及び免疫グロブリン定常領域を含む融合タンパク質を含む、実施形態１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【0227】

実施形態１６．前記ペイロードポリペプチドが、受容体アンタゴニスト及び免疫グロブリン定常領域を含む融合タンパク質を含む、実施形態１または２に記載の改変型ポリペプチド。

【0228】

実施形態１７．前記野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントが、前記改変型ポリペプチドのＮ末端に存在する、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0229】

実施形態１８．前記野生型もしくは改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントが、前記改変型ポリペプチドのＣ末端に存在する、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0230】

実施形態１９．前記改変型ポリペプチドが、野生型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントを含む、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0231】

実施形態２０．前記野生型α因子プレプロ配列が、配列番号２、配列番号６８、または配列番号６９に記載の配列を含む、実施形態１９に記載の改変型ポリペプチド。

【0232】

実施形態２１．前記改変型ポリペプチドが、改変型α因子プレプロ配列またはそのフラグメントを含む、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0233】

実施形態２２．前記改変型α因子プレプロ配列が、Ｓｕｒｆ４結合親和性を有するトリペプチドモチーフを含む、実施形態２１に記載の改変型ポリペプチド。

【0234】

実施形態２３．前記トリペプチドモチーフが、ＭＰＬ（配列番号５８）である、実施形態２２に記載の改変型ポリペプチド。

【0235】

実施形態２４．前記改変型α因子プレプロ配列が、Ｓｔｅ１３切断部位を含まない、先行実施形態のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0236】

実施形態２５．前記Ｓｔｅ１３切断部位が、ＥＡＥＡ（配列番号５６）を含む、実施形態２４に記載の改変型ポリペプチド。

【0237】

実施形態２６．前記改変型α因子プレプロ配列が、Ｋｅｘ２切断部位を含まない、先行実施形態のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0238】

実施形態２７．前記Ｋｅｘ２切断部位が、ＫＲ（配列番号５７）を含む、実施形態２６に記載の改変型ポリペプチド。

【0239】

実施形態２８．野生型α因子プレプロ配列に見られる前記Ｋｅｘ２切断部位が、前記改変型α因子プレプロ配列では、ヒトプロテアーゼのプロテアーゼ切断部位で置換されている、実施形態２６または２７に記載の改変型ポリペプチド。

【0240】

実施形態２９．野生型α因子プレプロ配列に見られる前記Ｋｅｘ２切断部位が、前記改変型α因子プレプロ配列では、Ｓ１Ｐ、ＰＣＳＫ４、ＰＣＳＫ９、またはフーリンのプロテアーゼ切断部位で置換されている、実施形態２８に記載の改変型ポリペプチド。

【0241】

実施形態３０．Ｓ１Ｐの前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５５による配列を有する、実施形態２９に記載の改変型ポリペプチド。

【0242】

実施形態３１．ＰＣＳＫ４の前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５３による配列を有する、実施形態２９に記載の改変型ポリペプチド。

【0243】

実施形態３２．ＰＣＳＫ９の前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５４による配列を有する、実施形態２９に記載の改変型ポリペプチド。

【0244】

実施形態３３．フーリンの前記プロテアーゼ切断部位が、配列番号５２による配列を有する、実施形態２９に記載の改変型ポリペプチド。

【0245】

実施形態３４．前記改変型α因子プレプロ配列が、ＣＡＴＨＣペプチド配列またはそのフラグメントを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0246】

実施形態３５．前記ＣＡＴＨＣペプチドが、配列番号９５による配列を有する、実施形態３４に記載の改変型ポリペプチド。

【0247】

実施形態３６．前記改変型α因子プレプロ配列が、ＣＦＶＩＩペプチド配列またはそのフラグメントを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0248】

実施形態３７．前記ＣＦＶＩＩペプチドが、配列番号９６による配列を有する、実施形態３６に記載の改変型ポリペプチド。

【0249】

実施形態３８．前記改変型α因子プレプロ配列が、ソルチリン１ペプチド配列またはそのフラグメントを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0250】

実施形態３９．前記ソルチリン－１ペプチドが、配列番号９７による配列を有する、実施形態３８に記載の改変型ポリペプチド。

【0251】

実施形態４０．前記改変型α因子プレプロ配列が、ＢＤＮＦペプチド配列またはそのフラグメントを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0252】

実施形態４１．前記ＢＤＮＦペプチドが、配列番号９８による配列を有する、実施形態４０に記載の改変型ポリペプチド。

【0253】

実施形態４２．前記改変型α因子プレプロ配列が、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号７１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、または配列番号１０９による配列を有する、実施形態１～１８及び２１のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0254】

実施形態４３．前記ペイロードポリペプチドが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号７２、または配列番号７９による配列を含む、実施形態１、２、及び１７～４２のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0255】

実施形態４４．前記改変型ポリペプチドが、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４３、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８１、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、または配列番号１０５による配列を有する、実施形態１に記載の改変型ポリペプチド。

【0256】

実施形態４５．細胞、組織、または対象において評価された場合、前記改変型ポリペプチドが、比較可能なポリペプチドよりも高いレベルで、前記細胞、前記組織の細胞、または前記対象の細胞もしくは組織から分泌されることを特徴とする、先行実施形態のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0257】

実施形態４６．比較可能なポリペプチドが、前記改変型ポリペプチドと同じペイロードポリペプチドと、野生型または改変型α因子プレプロ配列ではないシグナルペプチドを含む、実施形態４５に記載の改変型ポリペプチド。

【0258】

実施形態４７．実施形態１～４６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。

【0259】

実施形態４８．前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡである、実施形態４７に記載のポリヌクレオチド。

【0260】

実施形態４９．前記ポリヌクレオチドが、ＲＮＡである、実施形態４０に記載のポリヌクレオチド。

【0261】

実施形態５０．前記ＲＮＡが、ｍＲＮＡである、実施形態４９に記載のポリヌクレオチド。

【0262】

実施形態５１．前記ｍＲＮＡが、キャップ及びポリ（Ａ）テールを含む、実施形態５０に記載のポリヌクレオチド。

【0263】

実施形態５２．前記ポリヌクレオチドが、１つ以上のＮ４－アセチルシチジン残基を含む、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド。

【0264】

実施形態５３．前記ポリヌクレオチドが、１つ以上の５－ヒドロキシメチルウリジン残基を含む、実施形態４９～５２のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド。

【0265】

実施形態５４．実施形態１～４６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチドまたは実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含む、細胞。

【0266】

実施形態５５．前記細胞が、哺乳動物細胞である、実施形態５４に記載の細胞。

【0267】

実施形態５６．実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、または実施形態５４もしくは５５に記載の細胞を含む、組成物。

【0268】

実施形態５７．前記組成物が、医薬組成物である、実施形態５６に記載の組成物。

【0269】

実施形態５８．前記医薬組成物が、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、実施形態５７に記載の組成物。

【0270】

実施形態５９．前記医薬組成物が、免疫原性組成物であるか、または免疫原性組成物を含む、実施形態５７または５８に記載の組成物。

【0271】

実施形態６０．前記医薬組成物が、ワクチンであるか、またはそれを含む。実施形態５７～５９のいずれか１つに記載の組成物。

【0272】

実施形態６１．前記医薬組成物が、遺伝子療法であるか、またはそれを含む、実施形態５７または５８に記載の組成物。

【0273】

実施形態６２．前記医薬組成物が、化学療法であるか、またはそれを含む、実施形態５７または５８に記載の組成物。

【0274】

実施形態６３．前記医薬組成物が、タンパク質補充療法であるか、またはそれを含む、実施形態５７または５８に記載の組成物。

【0275】

実施形態６４．前記医薬組成物が、免疫療法であるか、またはそれを含む、実施形態５７または５８に記載の組成物。

【0276】

実施形態６５．前記医薬組成物が、細胞改変療法であるか、またはそれを含む、実施形態５７または５８に記載の組成物。

【0277】

実施形態６６．実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４もしくは５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物を、細胞、組織、または対象に投与することを含む、方法。

【0278】

実施形態６７．前記細胞が哺乳動物細胞であるか、前記組織が哺乳動物組織であるか、または前記対象が哺乳動物である、実施形態６６に記載の方法。

【0279】

実施形態６８．前記対象が、ヒトである、実施形態６６または６７に記載の方法。

【0280】

実施形態６９．実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを、細胞、組織、または対象に投与することを含む、方法。

【0281】

実施形態７０．前記細胞が哺乳動物細胞であるか、前記組織が哺乳動物組織であるか、または前記対象が哺乳動物である、実施形態６９に記載の方法。

【0282】

実施形態７１．前記対象が、ヒトである、実施形態６９または７０に記載の方法。

【0283】

実施形態７２．前記細胞、前記組織の細胞、または前記対象の細胞もしくは組織から分泌される改変型ポリペプチドのレベルを決定することを含む、実施形態６９～７１のいずれか１つに記載の方法。

【0284】

実施形態７３．さらに、前記細胞、前記組織の細胞、または前記対象の細胞もしくは組織から分泌される改変型ポリペプチドのレベルを参照レベルと比較することを含む、実施形態７２に記載の方法。

【0285】

実施形態７４．前記参照レベルが、比較可能な細胞、組織、または対象から分泌される参照ポリペプチドのレベルであり、前記参照ポリペプチドが、前記改変型ポリペプチドと同じペイロードポリペプチドと、野生型または改変型α因子プレプロ配列ではないシグナルペプチドを含む、実施形態７３に記載の方法。

【0286】

実施形態７５．前記方法が、免疫応答を刺激する方法である、実施形態６６～７４のいずれか１つに記載の方法。

【0287】

実施形態７６．前記方法が、ワクチン接種方法である、実施形態６６～７４のいずれか１つに記載の方法。

【0288】

実施形態７７．前記方法が、遺伝子療法である、実施形態６６～７４のいずれか１つに記載の方法。

【0289】

実施形態７８．前記方法が、細胞療法改変法である、実施形態６６～７４のいずれか１つに記載の方法。

【0290】

実施形態７９．前記方法が、免疫療法である、実施形態６６～７４のいずれか１つに記載の方法。

【0291】

実施形態８０．前記免疫療法が、抗体療法及び／または免疫チェックポイント療法の送達を含む、実施形態７９に記載の方法。

【0292】

実施形態８１．前記方法が、タンパク質補充療法である、実施形態６６～７４のいずれか１つに記載の方法。

【0293】

実施形態８２．前記タンパク質補充療法が、酵素補充療法の送達を含む、実施形態８１に記載の方法。

【0294】

実施形態８３．前記方法が、化学療法である、実施形態６６～７４のいずれか１つに記載の方法。

【0295】

実施形態８４．実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを細胞から発現させることを含む、改変型ポリペプチドを製造する方法。

【0296】

実施形態８５．前記細胞が、哺乳動物細胞である、実施形態８４に記載の方法。

【0297】

実施形態８６．免疫応答を刺激するための、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４または５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【0298】

実施形態８７．ワクチンとしての、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４または５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【0299】

実施形態８８．免疫療法としての、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４または５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【0300】

実施形態８９．遺伝子療法としての、実施形態１～３６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４または５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【0301】

実施形態９０．タンパク質補充療法としての、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４または５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【0302】

実施形態９１．細胞改変療法としての、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４または５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【0303】

実施形態９２．化学療法としての、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド、実施形態４７～５３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、実施形態５４または５５に記載の細胞、または実施形態５６～６５のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【0304】

実施形態９３．ポリペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、または組成物が、細胞、組織、または対象に投与される、実施形態８６～９２のいずれか１つに記載の使用。

【0305】

実施形態９４．前記細胞が哺乳動物細胞であるか、前記組織が哺乳動物組織であるか、または前記対象が哺乳動物である、実施形態９３に記載の使用。

【0306】

実施形態９５．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態９４に記載の使用。

【0307】

実施形態９６．野生型または改変型α因子プレプロ配列をコードするヌクレオチド配列を、ペイロードポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に付加することを含む、ポリヌクレオチドの作成方法。

【0308】

実施形態９７．前記改変型ポリペプチドが、さらに、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）分泌ペプチド配列またはそのフラグメントを含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0309】

実施形態９８．Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）配列が、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、または配列番号９９を含む、実施形態９７に記載の改変型ポリペプチド。

【0310】

実施形態９９．改変型ポリペプチドであって、
（ｉ）ペイロードポリペプチド、
（ｉｉ）野生型または改変型Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）分泌ペプチド配列またはそのフラグメント、を含み
前記野生型または改変型Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子（ＧＬＶ）分泌ペプチド配列またはそのフラグメントが、ペイロードポリペプチドに作動可能に連結されている、前記改変型ポリペプチド。

【0311】

実施形態１００．前記改変型ポリペプチドが、さらに、α因子プレプロ配列またはそのフラグメントを含む、実施形態９９に記載の改変型ポリペプチド。

【0312】

実施形態１０１．前記ＣＡＴＨＣペプチド、ＣＦＶＩＩペプチド、ソルチリン－１ペプチド、またはＢＤＮＦペプチドが、柔軟なグリシン－セリンリンカーを有する２ｘＳｕｒｆ４モチーフの後ろに、プロペプチドＮ末端の改変型α因子プレプロ配列に挿入されている、実施形態３４～４１のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0313】

実施形態１０２．前記ＣＡＴＨＣペプチド、ＣＦＶＩＩペプチド、ソルチリン－１ペプチド、またはＢＤＮＦペプチドが、プロペプチド配列の中央の改変型α因子プレプロ配列に挿入されている、実施形態３４～４１のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0314】

実施形態１０３．前記ＣＡＴＨＣペプチド、ＣＦＶＩＩペプチド、ソルチリン－１ペプチド、またはＢＤＮＦペプチドが、３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位の直前のＣ末端で改変型α因子プレプロ配列に挿入されている、実施形態３４～４１のいずれか１つに記載の改変型ポリペプチド。

【0315】

例示的な配列

【0316】

例示的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク分泌ペプチドアミノ酸配列（配列番号１）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡ
例示的なプレプロアミノ酸配列（配列番号２）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡ

【0317】

例示的なプレアミノ酸配列（配列番号６８）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡ

【0318】

例示的なプロアミノ酸配列（配列番号６９）：
ＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡ

【0319】

例示的なプレプロ＿２アミノ酸配列＝柔軟なグリシン－セリンリンカーとの２ｘ Ｓｕｒｆ４モチーフの置換を有し、３ｘ Ｓ１Ｐ切断部位を有し、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失しているプレプロ配列（「２ｘ＿Ｓｕｒｆ４＿ＳＧ＿３ｘ＿Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」）（配列番号７０）
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡ

【0320】

例示的なプロ＿２アミノ酸配列（配列番号７１）：
ＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡ

【0321】

例示的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２野生型受容体結合ドメイン（ＷＴ－ＲＢＤ）アミノ酸配列（配列番号３）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰ

【0322】

プレプロ配列を有するＷＴ－ＲＢＤの例示的なアミノ酸配列（配列番号４）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰ

【0323】

例示的なバリアント＿１アミノ酸配列（配列番号５）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＡＡＡＡＡＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰ

【0324】

プレプロ配列を含むバリアント＿１の例示的なアミノ酸配列（配列番号６）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＡＡＡＡＡＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰ

【0325】

例示的なバリアント＿２アミノ酸配列（配列番号７）：

【0326】

ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＡＡＡＡＣＧＰ

【0327】

プレプロ配列を有するバリアント＿２の例示的なアミノ酸配列（配列番号８）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＡＡＡＡＣＧＰ

【0328】

例示的なインフルエンザＨ１Ｎ１／ＰＲ８ヘマグルチニン細胞外ドメイン（ＨＡ）アミノ酸配列（配列番号９）：
ＭＫＡＮＬＬＶＬＬＣＡＬＡＡＡＤＡＤＴＩＣＩＧＹＨＡＮＮＳＴＤＴＶＤＴＶＬＥＫＮＶＴＶＴＨＳＶＮＬＬＥＤＳＨＮＧＫＬＣＲＬＫＧＩＡＰＬＱＬＧＫＣＮＩＡＧＷＬＬＧＮＰＥＣＤＰＬＬＰＶＲＳＷＳＹＩＶＥＴＰＮＳＥＮＧＩＣＹＰＧＤＦＩＤＹＥＥＬＲＥＱＬＳＳＶＳＳＦＥＲＦＥＩＦＰＫＥＳＳＷＰＮＨＮＴＮＧＶＴＡＡＣＳＨＥＧＫＳＳＦＹＲＮＬＬＷＬＴＥＫＥＧＳＹＰＫＬＫＮＳＹＶＮＫＫＧＫＥＶＬＶＬＷＧＩＨＨＰＰＮＳＫＥＱＱＮＬＹＱＮＥＮＡＹＶＳＶＶＴＳＮＹＮＲＲＦＴＰＥＩＡＥＲＰＫＶＲＤＱＡＧＲＭＮＹＹＷＴＬＬＫＰＧＤＴＩＩＦＥＡＮＧＮＬＩＡＰＭＹＡＦＡＬＳＲＧＦＧＳＧＩＩＴＳＮＡＳＭＨＥＣＮＴＫＣＱＴＰＬＧＡＩＮＳＳＬＰＹＱＮＩＨＰＶＴＩＧＥＣＰＫＹＶＲＳＡＫＬＲＭＶＴＧＬＲＮＩＰＳＩＱＳＲＧＬＦＧＡＩＡＧＦＩＥＧＧＷＴＧＭＩＤＧＷＹＧＹＨＨＱＮＥＱＧＳＧＹＡＡＤＱＫＳＴＱＮＡＩＮＧＩＴＮＫＶＮＴＶＩＥＫＭＮＩＱＦＴＡＶＧＫＥＦＮＫＬＥＫＲＭＥＮＬＮＫＫＶＤＤＧＦＬＤＩＷＴＹＮＡＥＬＬＶＬＬＥＮＥＲＴＬＤＦＨＤＳＮＶＫＮＬＹＥＫＶＫＳＱＬＫＮＮＡＫＥＩＧＮＧＣＦＥＦＹＨＫＣＤＮＥＣＭＥＳＶＲＮＧＴＹＤＹＰＫＹＳＥＥＳＫＬＮＲＥＫＶＤＧＶＫＬＥＳＭＧＩＹＱ

【0329】

プレプロ配列を有するＨＡの例示的なアミノ酸配列（配列番号１０）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＤＴＩＣＩＧＹＨＡＮＮＳＴＤＴＶＤＴＶＬＥＫＮＶＴＶＴＨＳＶＮＬＬＥＤＳＨＮＧＫＬＣＲＬＫＧＩＡＰＬＱＬＧＫＣＮＩＡＧＷＬＬＧＮＰＥＣＤＰＬＬＰＶＲＳＷＳＹＩＶＥＴＰＮＳＥＮＧＩＣＹＰＧＤＦＩＤＹＥＥＬＲＥＱＬＳＳＶＳＳＦＥＲＦＥＩＦＰＫＥＳＳＷＰＮＨＮＴＮＧＶＴＡＡＣＳＨＥＧＫＳＳＦＹＲＮＬＬＷＬＴＥＫＥＧＳＹＰＫＬＫＮＳＹＶＮＫＫＧＫＥＶＬＶＬＷＧＩＨＨＰＰＮＳＫＥＱＱＮＬＹＱＮＥＮＡＹＶＳＶＶＴＳＮＹＮＲＲＦＴＰＥＩＡＥＲＰＫＶＲＤＱＡＧＲＭＮＹＹＷＴＬＬＫＰＧＤＴＩＩＦＥＡＮＧＮＬＩＡＰＭＹＡＦＡＬＳＲＧＦＧＳＧＩＩＴＳＮＡＳＭＨＥＣＮＴＫＣＱＴＰＬＧＡＩＮＳＳＬＰＹＱＮＩＨＰＶＴＩＧＥＣＰＫＹＶＲＳＡＫＬＲＭＶＴＧＬＲＮＩＰＳＩＱＳＲＧＬＦＧＡＩＡＧＦＩＥＧＧＷＴＧＭＩＤＧＷＹＧＹＨＨＱＮＥＱＧＳＧＹＡＡＤＱＫＳＴＱＮＡＩＮＧＩＴＮＫＶＮＴＶＩＥＫＭＮＩＱＦＴＡＶＧＫＥＦＮＫＬＥＫＲＭＥＮＬＮＫＫＶＤＤＧＦＬＤＩＷＴＹＮＡＥＬＬＶＬＬＥＮＥＲＴＬＤＦＨＤＳＮＶＫＮＬＹＥＫＶＫＳＱＬＫＮＮＡＫＥＩＧＮＧＣＦＥＦＹＨＫＣＤＮＥＣＭＥＳＶＲＮＧＴＹＤＹＰＫＹＳＥＥＳＫＬＮＲＥＫＶＤＧＶＫＬＥＳＭＧＩＹＱ

【0330】

例示的なヒト分泌型胎児性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）アミノ酸配列（配列番号１１）：
ＭＬＧＰＣＭＬＬＬＬＬＬＬＧＬＲＬＱＬＳＬＧＩＩＰＶＥＥＥＮＰＤＦＷＮＲＥＡＡＥＡＬＧＡＡＫＫＬＱＰＡＱＴＡＡＫＮＬＩＩＦＬＧＤＧＭＧＶＳＴＶＴＡＡＲＩＬＫＧＱＫＫＤＫＬＧＰＥＩＰＬＡＭＤＲＦＰＹＶＡＬＳＫＴＹＮＶＤＫＨＶＰＤＳＧＡＴＡＴＡＹＬＣＧＶＫＧＮＦＱＴＩＧＬＳＡＡＡＲＦＮＱＣＮＴＴＲＧＮＥＶＩＳＶＭＮＲＡＫＫＡＧＫＳＶＧＶＶＴＴＴＲＶＱＨＡＳＰＡＧＴＹＡＨＴＶＮＲＮＷＹＳＤＡＤＶＰＡＳＡＲＱＥＧＣＱＤＩＡＴＱＬＩＳＮＭＤＩＤＶＩＬＧＧＧＲＫＹＭＦＲＭＧＴＰＤＰＥＹＰＤＤＹＳＱＧＧＴＲＬＤＧＫＮＬＶＱＥＷＬＡＫＲＱＧＡＲＹＶＷＮＲＴＥＬＭＱＡＳＬＤＰＳＶＴＨＬＭＧＬＦＥＰＧＤＭＫＹＥＩＨＲＤＳＴＬＤＰＳＬＭＥＭＴＥＡＡＬＲＬＬＳＲＮＰＲＧＦＦＬＦＶＥＧＧＲＩＤＨＧＨＨＥＳＲＡＹＲＡＬＴＥＴＩＭＦＤＤＡＩＥＲＡＧＱＬＴＳＥＥＤＴＬＳＬＶＴＡＤＨＳＨＶＦＳＦＧＧＹＰＬＲＧＳＳＩＦＧＬＡＰＧＫＡＲＤＲＫＡＹＴＶＬＬＹＧＮＧＰＧＹＶＬＫＤＧＡＲＰＤＶＴＥＳＥＳＧＳＰＥＹＲＱＱＳＡＶＰＬＤＥＥＴＨＡＧＥＤＶＡＶＦＡＲＧＰＱＡＨＬＶＨＧＶＱＥＱＴＦＩＡＨＶＭＡＦＡＡＣＬＥＰＹＴＡＣＤＬＡＰＰＡＧＴＴＤ

【0331】

プレプロ配列を含むＳＥＡＰの例示的なアミノ酸配列（配列番号１２）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＩＩＰＶＥＥＥＮＰＤＦＷＮＲＥＡＡＥＡＬＧＡＡＫＫＬＱＰＡＱＴＡＡＫＮＬＩＩＦＬＧＤＧＭＧＶＳＴＶＴＡＡＲＩＬＫＧＱＫＫＤＫＬＧＰＥＩＰＬＡＭＤＲＦＰＹＶＡＬＳＫＴＹＮＶＤＫＨＶＰＤＳＧＡＴＡＴＡＹＬＣＧＶＫＧＮＦＱＴＩＧＬＳＡＡＡＲＦＮＱＣＮＴＴＲＧＮＥＶＩＳＶＭＮＲＡＫＫＡＧＫＳＶＧＶＶＴＴＴＲＶＱＨＡＳＰＡＧＴＹＡＨＴＶＮＲＮＷＹＳＤＡＤＶＰＡＳＡＲＱＥＧＣＱＤＩＡＴＱＬＩＳＮＭＤＩＤＶＩＬＧＧＧＲＫＹＭＦＲＭＧＴＰＤＰＥＹＰＤＤＹＳＱＧＧＴＲＬＤＧＫＮＬＶＱＥＷＬＡＫＲＱＧＡＲＹＶＷＮＲＴＥＬＭＱＡＳＬＤＰＳＶＴＨＬＭＧＬＦＥＰＧＤＭＫＹＥＩＨＲＤＳＴＬＤＰＳＬＭＥＭＴＥＡＡＬＲＬＬＳＲＮＰＲＧＦＦＬＦＶＥＧＧＲＩＤＨＧＨＨＥＳＲＡＹＲＡＬＴＥＴＩＭＦＤＤＡＩＥＲＡＧＱＬＴＳＥＥＤＴＬＳＬＶＴＡＤＨＳＨＶＦＳＦＧＧＹＰＬＲＧＳＳＩＦＧＬＡＰＧＫＡＲＤＲＫＡＹＴＶＬＬＹＧＮＧＰＧＹＶＬＫＤＧＡＲＰＤＶＴＥＳＥＳＧＳＰＥＹＲＱＱＳＡＶＰＬＤＥＥＴＨＡＧＥＤＶＡＶＦＡＲＧＰＱＡＨＬＶＨＧＶＱＥＱＴＦＩＡＨＶＭＡＦＡＡＣＬＥＰＹＴＡＣＤＬＡＰＰＡＧＴＴＤ

【0332】

例示的なトラスツズマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号１３）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0333】

プレプロ配列を有するトラスツズマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号１４）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0334】

例示的なペルツズマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号１５）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0335】

プレプロ配列を有するペルツズマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号１６）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0336】

例示的なＧＢ２３５ ｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号１７）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＰＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＤＩＮＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＷＭＮＰＮＳＧＮＴＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＹＬＳＲＧＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0337】

プレプロ配列を有するＧＢ２３５ ｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号１８）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＰＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＤＩＮＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＷＭＮＰＮＳＧＮＴＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＹＬＳＲＧＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0338】

例示的なアダリムマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号１９）：
ＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＡＬＦＲＧＶＱＣＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0339】

プレプロ配列を有するアダリムマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号２０）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0340】

例示的なペムブロリズマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号２１）：
ＭＤＷＴＷＲＦＬＦＶＶＡＡＡＴＧＶＱＳＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0341】

プレプロ配列を有するペムブロリズマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号２２）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0342】

例示的なアフリベルセプトフラグメントアミノ酸配列（配列番号２３）：
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫ

【0343】

プレプロ配列を含むアフリベルセプトフラグメントの例示的なアミノ酸配列（配列番号２４）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫ

【0344】

例示的なデュピルマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号２５）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＥＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＧＳＧＦＴＦＲＤＹＡＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＬＳＩＴＩＲＰＲＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＹＳＩＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＳＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＦＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0345】

プレプロ配列を有するデュピルマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号２６）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0346】

例示的なウステキヌマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号２７）：
ＭＥＬＧＬＳＷＩＦＬＬＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＴＹＷＬＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＤＷＩＧＩＭＳＰＶＤＳＤＩＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＭＳＶＤＫＳＩＴＴＡＹＬＱＷＮＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＲＰＧＱＧＹＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0347】

プレプロ配列を有するウステキヌマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号２８）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＴＹＷＬＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＤＷＩＧＩＭＳＰＶＤＳＤＩＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＭＳＶＤＫＳＩＴＴＡＹＬＱＷＮＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＲＰＧＱＧＹＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0348】

例示的なニボルマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号２９）：
ＭＫＨＬＷＦＦＬＬＬＶＡＡＰＲＷＶＬＳＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0349】

プレプロ配列を有するニボルマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号３０）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0350】

例示的なベバシズマブｓｃＦｖアミノ酸配列（配列番号３１）：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0351】

プレプロ配列を有するベバシズマブｓｃＦｖの例示的なアミノ酸配列（配列番号３２）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0352】

例示的なエタネルセプトフラグメントアミノ酸配列（配列番号３３）：
ＭＡＰＶＡＶＷＡＡＬＡＶＧＬＥＬＷＡＡＡＨＡＬＰＡＱＶＡＦＴＰＹＡＰＥＰＧＳＴＣＲＬＲＥＹＹＤＱＴＡＱＭＣＣＳＫＣＳＰＧＱＨＡＫＶＦＣＴＫＴＳＤＴＶＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩＰＧＮＡＳＭＤＡＶＣＴＳＴＳＰＴＲＳＭＡＰＧＡＶＨＬＰＱＰＶＳＴＲＳＱＨＴＱＰＴＰＥＰＳＴＡＰＳＴＳＦＬＬＰＭＧＰＳＰＰＡＥＧＳＴＧＤ

【0353】

プレプロ配列を有するエタネルセプトフラグメントの例示的なアミノ酸配列（配列番号３４）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＬＰＡＱＶＡＦＴＰＹＡＰＥＰＧＳＴＣＲＬＲＥＹＹＤＱＴＡＱＭＣＣＳＫＣＳＰＧＱＨＡＫＶＦＣＴＫＴＳＤＴＶＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩＰＧＮＡＳＭＤＡＶＣＴＳＴＳＰＴＲＳＭＡＰＧＡＶＨＬＰＱＰＶＳＴＲＳＱＨＴＱＰＴＰＥＰＳＴＡＰＳＴＳＦＬＬＰＭＧＰＳＰＰＡＥＧＳＴＧＤ

【0354】

例示的なチサゲンレクロイセル細胞外及び膜貫通ドメインのアミノ酸配列（配列番号３５）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ

【0355】

プレプロ配列を有するチサゲンレクロイセル細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインの例示的なアミノ酸配列（配列番号３６）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ

【0356】

例示的なチサゲンレクロイセルアミノ酸配列（配列番号７２）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0357】

プレプロ配列を有するチサゲンレクロイセルの例示的なアミノ酸配列（配列番号７３）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0358】

プレプロ＿２配列を有するチサゲンレクロイセルの例示的なアミノ酸配列（配列番号７４）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0359】

ＩｇＫ軽鎖シグナルペプチド配列及びプロ＿２配列を有するチサゲンレクロイセルの例示的なアミノ酸配列（配列番号７５）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＳＧＡＲＣＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0360】

ＣＤ８シグナルペプチド配列及びプロ＿２配列を有するチサゲンレクロイセルの例示的なアミノ酸配列（配列番号７６）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0361】

ＩＬ２シグナルペプチド配列及びプロ＿２配列を有するチサゲンレクロイセルの例示的なアミノ酸配列（配列番号７７）：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0362】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクシグナルペプチド配列及びプロ＿２配列を有するチサゲンレクロイセルの例示的なアミノ酸配列（配列番号７８）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0363】

Ａ３Ｂ１ ＣＡＲの例示的なアミノ酸配列（配列番号７９）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＴＧＮＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＦＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＳＧＱＰＰＲＬＬＩＹＩＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＨＱＮＮＥＤＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＨＳＱＩＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＶＫＦＲＧＫＡＴＬＴＡＤＥＳＳＳＴＡＹＩＱＬＴＳＬＴＳＥＤＳＧＶＹＦＣＡＲＫＲＩＴＡＶＩＴＴＶＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0364】

プレプロ配列を有するＡ３Ｂ１ ＣＡＲの例示的なアミノ酸配列（配列番号８０）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＴＧＮＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＦＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＳＧＱＰＰＲＬＬＩＹＩＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＨＱＮＮＥＤＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＨＳＱＩＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＶＫＦＲＧＫＡＴＬＴＡＤＥＳＳＳＴＡＹＩＱＬＴＳＬＴＳＥＤＳＧＶＹＦＣＡＲＫＲＩＴＡＶＩＴＴＶＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0365】

プレプロ＿２配列を有するＡ３Ｂ１ ＣＡＲの例示的なアミノ酸配列（配列番号８１）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＴＧＮＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＦＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＳＧＱＰＰＲＬＬＩＹＩＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＨＱＮＮＥＤＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＨＳＱＩＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＶＫＦＲＧＫＡＴＬＴＡＤＥＳＳＳＴＡＹＩＱＬＴＳＬＴＳＥＤＳＧＶＹＦＣＡＲＫＲＩＴＡＶＩＴＴＶＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0366】

例示的なアキシカブタゲンシロルユーセル細胞外及び膜貫通ドメインのアミノ酸配列（配列番号３７）：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ

【0367】

プレプロ配列を有するアキシカブタゲンシロルユーセル細胞外及び膜貫通ドメインの例示的なアミノ酸配列（配列番号３８）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ

【0368】

例示的なリソカブタゲンマラルユーセル細胞外及び膜貫通ドメインのアミノ酸配列（配列番号３９）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ

【0369】

プレプロ配列を有するリソカブタゲンマラルユーセル細胞外及び膜貫通ドメインの例示的なアミノ酸配列（配列番号４０）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ

【0370】

脂肪動員ホルモンシグナルペプチド配列を有するバリアント＿１ナノルシフェラーゼ融合体の例示的なアミノ酸配列（配列番号４１）：
ＭＹＫＬＴＶＦＬＭＦＩＡＦＶＩＩＡＥＡＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＡＡＡＡＡＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＶＦＴＬＥＤＦＶＧＤＷＲＱＴＡＧＹＮＬＤＱＶＬＥＱＧＧＶＳＳＬＦＱＮＬＧＶＳＶＴＰＩＱＲＩＶＬＳＧＥＮＧＬＫＩＤＩＨＶＩＩＰＹＥＧＬＳＧＤＱＭＧＱＩＥＫＩＦＫＶＶＹＰＶＤＤＨＨＦＫＶＩＬＨＹＧＴＬＶＩＤＧＶＴＰＮＭＩＤＹＦＧＲＰＹＥＧＩＡＶＦＤＧＫＫＩＴＶＴＧＴＬＷＮＧＮＫＩＩＤＥＲＬＩＮＰＤＧＳＬＬＦＲＶＴＩＮＧＶＴＧＷＲＬＣＥＲＩＬＡ

【0371】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ１シグナルペプチド及びプロペプチド配列とのバリアント＿１ナノルシフェラーゼ融合体の例示的なアミノ酸配列（配列番号４２）：
ＭＳＣＳＬＲＳＧＬＶＩＶＦＣＦＩＬＬＬＬＳＳＮＶＧＣＡＳＡＡＲＲＬＲＳＨＫＨＨＨＨＫＶＡＳＬＤＶＦＮＧＧＥＲＲＲＡＬＧＧＶＥＴＧＥＥＶＶＶＭＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＡＡＡＡＡＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＶＦＴＬＥＤＦＶＧＤＷＲＱＴＡＧＹＮＬＤＱＶＬＥＱＧＧＶＳＳＬＦＱＮＬＧＶＳＶＴＰＩＱＲＩＶＬＳＧＥＮＧＬＫＩＤＩＨＶＩＩＰＹＥＧＬＳＧＤＱＭＧＱＩＥＫＩＦＫＶＶＹＰＶＤＤＨＨＦＫＶＩＬＨＹＧＴＬＶＩＤＧＶＴＰＮＭＩＤＹＦＧＲＰＹＥＧＩＡＶＦＤＧＫＫＩＴＶＴＧＴＬＷＮＧＮＫＩＩＤＥＲＬＩＮＰＤＧＳＬＬＦＲＶＴＩＮＧＶＴＧＷＲＬＣＥＲＩＬＡ

【0372】

プレプロ配列を有するバリアント＿１ナノルシフェラーゼ融合体の例示的なアミノ酸配列（配列番号４３）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＡＡＡＡＡＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＶＦＴＬＥＤＦＶＧＤＷＲＱＴＡＧＹＮＬＤＱＶＬＥＱＧＧＶＳＳＬＦＱＮＬＧＶＳＶＴＰＩＱＲＩＶＬＳＧＥＮＧＬＫＩＤＩＨＶＩＩＰＹＥＧＬＳＧＤＱＭＧＱＩＥＫＩＦＫＶＶＹＰＶＤＤＨＨＦＫＶＩＬＨＹＧＴＬＶＩＤＧＶＴＰＮＭＩＤＹＦＧＲＰＹＥＧＩＡＶＦＤＧＫＫＩＴＶＴＧＴＬＷＮＧＮＫＩＩＤＥＲＬＩＮＰＤＧＳＬＬＦＲＶＴＩＮＧＶＴＧＷＲＬＣＥＲＩＬＡ

【0373】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ１分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号９９）：
ＭＳＣＳＬＲＳＧＬＶＩＶＦＣＦＩＬＬＬＬＳＳＮＶＧＣＡＳＡＡＲＲＬＲＳＨＫＨＨＨＨＫＶＡＳＬＤＶＦＮＧＧＥＲＲＲＡＬＧＧＶＥＴＧＥＥＶＶＶＭ

【0374】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ２分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８２）：
ＭＡＩＲＶＳＨＫＳＦＬＶＡＬＬＬＩＬＦＩＳＳＰＴＱＡＲＳＬＲＥＶＶＲＮＲＴＬＬＶＶＥＫＳＱＥＳＲＫＩＲＨＥＧＧＧＳＤＶＤＧＬＭＤＭ

【0375】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ３分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８３）：
ＭＭＲＦＴＩＩＶＩＡＦＬＬＩＩＱＳＬＥＥＥＨＩＬＶＹＡＨＥＧＧＥＡＧＨＫＳＬＤＹＱＧＤＱＤＳＳＴＬＨＰＫＥＬＦＤＡＰＲＫＶＲＦＧＲＴＴＲＡＥＫＥＱＶＴＡＭＮＮＤＳＷＳＦＫＩＳＧＥＨＫＱＴＮＩＬＡＤＨＤＴＴＫＮＴＦＣＫＫＭＭＩＩＶＮＤＬＴＳＬＰＴＬＥＰＳＴＳＴＮＤＭＥＫＬＡＲＬＬＲＤ

【0376】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ４分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８４）：
ＭＥＭＫＫＷＳＹＡＮＬＩＴＬＡＬＬＦＬＦＦＩＩＬＬＬＡＦＱＧＧＳＲＤＤＤＨＱＨＶＨＶＡＩＲＴＫＤＩＳＭＧＲＫＬＫＳＬＫＰＩＮＰＴＫＫＮＧＦＥＹＰＤＱＧＳＨＤＶＱＥＲＥＶＹＶＥＬＲ

【0377】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ５分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８５）：
ＭＴＮＩＴＳＳＦＬＣＬＬＩＬＬＬＦＣＬＳＦＧＹＳＬＨＧＤＫＤＥＶＬＳＶＤＶＧＳＮＡＫＶＭＫＨＬＤＧＤＤＡＭＫＫＡＱＶＲＧＲＳＧＱＥＦＳＫＥＴＴＫＭＭＭＫＫＴＴＫＫＥＴＮＶＥＥＥＤＤＬＶＡＹＴＡ

【0378】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ６分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８６）：
ＭＫＬＩＲＶＴＬＦＬＣＡＬＡＩＬＬＬＶＴＰＴＳＳＬＱＬＫＨＰＹＳＳＰＳＱＧＬＳＫＫＩＶＴＫＭＡＴＲＫＬＭＩＩＳＳＥＹＶＭＴＳＴＳＨＥＧＳＳＥＱＬＲＶＴＳＳＧＫＳＫＤＥＥＫＫＬＳＥＥＥＥＥＫＫＡＬＡＫＹＬＳＭ

【0379】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ７分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８７）：
ＭＴＴＬＳＫＩＬＣＶＬＩＩＬＬＬＣＦＳＦＲＹＳＬＨＥＤＧＮＱＱＳＳＲＤＦＶＳＴＡＫＡＩＫＹＧＤＶＭＫＫＭＩＲＧＲＫＬＭＭＡＳＧＥＫＥＥＡＥＴＫＭＫＲＧＮＲＥＴＥＲＮＳＳＫＳＶＥＥＤＧＬＶＡＹＴＡ

【0380】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ８分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８８）：
ＭＫＫＷＳＹＡＫＬＭＴＳＡＬＬＬＶＦＬＳＩＩＬＬＡＦＨＧＧＳＲＧＤＮＨＬＹＤＨＶＡＩＧＴＫＤＩＬＭＧＲＫＬＫＤＬＫＰＫＴＥＳＬＫＭＩＮＰＫＫＫＮＧＦＥＹＳＤＱＶＳＳＤＬＳＲＱＥＶＦＶＤＭＭＡＲ

【0381】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ９分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号８９）：
ＭＫＫＴＳＬＫＬＭＴＬＶＬＧＦＣＦＶＩＹＬＬＱＧＰＲＧＧＳＲＮＧＤＬＬＩＡＲＫＬＩＳＬＥＰＩＥＴＫＮＡＡＲＳＬＫＤＳＩＳＴＤＬＥＥＥＶＤＲＬＭＥＨ

【0382】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ１０分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号９０）：
ＭＳＳＩＨＶＡＳＭＩＬＬＬＦＬＦＬＨＨＳＤＳＲＨＬＤＮＶＨＩＴＡＳＲＦＳＬＶＫＤＱＮＶＶＳＳＳＴＳＫＥＰＶＫＶＳＲＦＶＰＧＰＬＫＨＨＨＲＲＰＰＬＬＦＡ

【0383】

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ根成長因子ＧＬＶ１１分泌ペプチド配列の例示的なアミノ酸配列（配列番号９１）：
ＭＶＳＩＲＶＩＣＹＬＬＶＦＳＶＬＱＶＨＡＫＶＳＮＡＮＦＮＳＱＡＰＱＭＫＮＳＥＧＬＧＡＳＮＧＴＱＩＡＫＫＨＡＥＤＶＩＥＮＲＫＴＬＫＨＶＮＶＫＶＥＡＮＥＫＮＧＬＥＩＥＳＫＥＭＶＫＫＲＫＮＫＫＲＬＴＫＴＥＳＬＴＡ

【0384】

プレプロ＿２配列を有するＷＴ－ＲＢＤの例示的なアミノ酸配列（配列番号１００）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰ

【0385】

ＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の例示的なアミノ酸配列（ＳｂｉＩＩＩ－ＩＶ）（配列番号１０１）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＥＮＡＤＫＡＩＫＤＦＱＤＮＫＡＰＨＤＫＳＡＡＹＥＡＮＳＫＬＰＫＤＬＲＤＫＮＮＲＦＶＥＫＶＳＩＥＫＡＩＶＲＨＤＥＲＶＫＳＡＮＤＡＩＳＫＬＮＥＫＤＳＩＥＮＲＲＬＡＱＲＥＶＮＫＡＰＭＤＶＫＥＨＬＱＫＱＬＤ

【0386】

プレプロ配列を有するＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の例示的なアミノ酸配列（ＳｂｉＩＩＩ－ＩＶ）（配列番号１０２）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＥＮＡＤＫＡＩＫＤＦＱＤＮＫＡＰＨＤＫＳＡＡＹＥＡＮＳＫＬＰＫＤＬＲＤＫＮＮＲＦＶＥＫＶＳＩＥＫＡＩＶＲＨＤＥＲＶＫＳＡＮＤＡＩＳＫＬＮＥＫＤＳＩＥＮＲＲＬＡＱＲＥＶＮＫＡＰＭＤＶＫＥＨＬＱＫＱＬＤ

【0387】

プレプロ＿２配列を有するＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の例示的なアミノ酸配列（ＳｂｉＩＩＩ－ＩＶ）（配列番号１０３）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＧＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＳＡＳＦＳＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＫＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＮＬＤＳＫＶＧＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹＦＰＬＱＳＹＧＦＱＰＴＮＧＶＧＹＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＥＮＡＤＫＡＩＫＤＦＱＤＮＫＡＰＨＤＫＳＡＡＹＥＡＮＳＫＬＰＫＤＬＲＤＫＮＮＲＦＶＥＫＶＳＩＥＫＡＩＶＲＨＤＥＲＶＫＳＡＮＤＡＩＳＫＬＮＥＫＤＳＩＥＮＲＲＬＡＱＲＥＶＮＫＡＰＭＤＶＫＥＨＬＱＫＱＬＤ

【0388】

ＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン（ＢＡ．１）株受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の例示的なアミノ酸配列（ＳｂｉＩＩＩ－ＩＶ）（配列番号１０４）：
ＭＦＶＦＬＶＬＬＰＬＶＳＳＡＡＮＩＴＮＬＣＰＦＤＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＬＡＰＦＦＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＮＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＫＬＤＳＫＶＳＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＮＫＰＣＮＧＶＡＧＦＮＣＹＦＰＬＲＳＹＳＦＲＰＴＹＧＶＧＨＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＥＮＡＤＫＡＩＫＤＦＱＤＮＫＡＰＨＤＫＳＡＡＹＥＡＮＳＫＬＰＫＤＬＲＤＫＮＮＲＦＶＥＫＶＳＩＥＫＡＩＶＲＨＤＥＲＶＫＳＡＮＤＡＩＳＫＬＮＥＫＤＳＩＥＮＲＲＬＡＱＲＥＶＮＫＡＰＭＤＶＫＥＨＬＱＫＱＬＤ
プレプロ配列を有するＩｇＧタンパク質サブユニットＩＩＩ及びＩＶのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ結合剤に融合しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン（ＢＡ．１）株受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の例示的なアミノ酸配列（ＳｂｉＩＩＩ－ＩＶ）（配列番号１０５）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＮＩＴＮＬＣＰＦＤＥＶＦＮＡＴＲＦＡＳＶＹＡＷＮＲＫＲＩＳＮＣＶＡＤＹＳＶＬＹＮＬＡＰＦＦＴＦＫＣＹＧＶＳＰＴＫＬＮＤＬＣＦＴＮＶＹＡＤＳＦＶＩＲＧＤＥＶＲＱＩＡＰＧＱＴＧＮＩＡＤＹＮＹＫＬＰＤＤＦＴＧＣＶＩＡＷＮＳＮＫＬＤＳＫＶＳＧＮＹＮＹＬＹＲＬＦＲＫＳＮＬＫＰＦＥＲＤＩＳＴＥＩＹＱＡＧＮＫＰＣＮＧＶＡＧＦＮＣＹＦＰＬＲＳＹＳＦＲＰＴＹＧＶＧＨＱＰＹＲＶＶＶＬＳＦＥＬＬＨＡＰＡＴＶＣＧＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＥＮＡＤＫＡＩＫＤＦＱＤＮＫＡＰＨＤＫＳＡＡＹＥＡＮＳＫＬＰＫＤＬＲＤＫＮＮＲＦＶＥＫＶＳＩＥＫＡＩＶＲＨＤＥＲＶＫＳＡＮＤＡＩＳＫＬＮＥＫＤＳＩＥＮＲＲＬＡＱＲＥＶＮＫＡＰＭＤＶＫＥＨＬＱＫＱＬＤ

【0389】

改変型プレプロ配列

【0390】

フーリン切断部位を有する例示的なプレプロ配列（「フーリン」）（配列番号４４）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＲＫＲＫＲＫＲＲＥＡＥＡＡＡ

【0391】

フーリン切断部位を有し、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失している例示的なプレプロ配列（「フーリン＿ｄｅｌＳＴＥ１３」）（配列番号４５）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＲＫＲＫＲＫＲＲＡＡ

【0392】

ＰＣＳＫ４切断部位を有する例示的なプレプロ配列（「ＰＣＳＫ４」）（配列番号４６）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＫＲＥＡＥＡＡＡ

【0393】

ＰＣＳＫ４切断部位を有し、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失している例示的なプレプロ配列（「ＰＣＳＫ４＿ｄｅｌＳＴＥ１３」）（配列番号４７）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＫＲＡＡ

【0394】

Ｓ１Ｐ切断部位を有し、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失している例示的なプレプロ配列（「Ｓ１Ｐ＿ｄｅｌＳＴＥ１３」）（配列番号４８）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＡＡ

【0395】

ＰＣＳＫ９切断部位を有し、Ｓｔｅ１３切断部位を欠失している例示的なプレプロ配列（「ＰＣＳＫ９＿ｄｅｌＳＴＥ１３」）（配列番号４９）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＶＦＡＱＳＩＰＡＡ

【0396】

Ｓｔｅ１３切断部位を欠失している例示的なプレプロ配列（「ｄｅｌＳＴＥ１３」）（配列番号５０）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＡＡ

【0397】

Ｓｕｒｆ４モチーフ置換を有する例示的なプレプロ配列（「Ｓｕｒｆ４＿モチーフ」）（配列番号５１）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＫＲＥＡＥＡＡＡ

【0398】

プロペプチドのＮ末端にカテプシンＣペプチドを有する例示的なプレプロ＿２配列（「ＣＡＴＨＣ＿１」）（配列番号９２）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＴＰＡＮＣＴＹＬＤＬＬＧＴＷＶＦＱＶＧＳＳＧＳＱＲＤＶＮＣＳＶＭＧＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬ

【0399】

プロペプチドの中央にカテプシンＣペプチドを有する例示的なプレプロ＿２配列（「ＣＡＴＨＣ＿２」）（配列番号９３）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＴＰＡＮＣＴＹＬＤＬＬＧＴＷＶＦＱＶＧＳＳＧＳＱＲＤＶＮＣＳＶＭＧＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬ

【0400】

プロペプチドのＣ末端にカテプシンＣペプチドを有する例示的なプレプロ＿２配列（「ＣＡＴＨＣ＿３」）（配列番号９４）：
ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＴＰＡＮＣＴＹＬＤＬＬＧＴＷＶＦＱＶＧＳＳＧＳＱＲＤＶＮＣＳＶＭＧＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬ

【0401】

３ｘ ＭＹＣタグを含有するプレプロ＿２の例示的なアミノ酸配列（配列番号１０６）：

【0402】

ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＧＧＧＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＧＧＧＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＡＡ

【0403】

３ｘ Ｓ１Ｐプロテアーゼ切断部位を欠失している、３ｘ ＭＹＣタグを含有するプレプロ＿２の例示的なアミノ酸配列（配列番号１０７）：

【0404】

ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＧＧＧＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＧＧＧＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＡＡ

【0405】

３ｘ Ｓ１Ｐプロテアーゼ切断部位を欠失しているプレプロ＿２の例示的なアミノ酸配列（配列番号１０８）：

【0406】

ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＭＰＬＳＧＧＧＳＧＧＳＧＳＭＰＬＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＡＡ

【0407】

Ｓｔｅ１３切断部位を欠失しており、Ｋｅｘ２切断部位を欠失しているプレプロの例示的なアミノ酸配列（配列番号１０９）：

【0408】

ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＬＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＤＡＡ

【0409】

特定の最適化関連配列

【0410】

フーリン切断部位（配列番号５２）：
ＲＫＲＫＲＫＲＲ

【0411】

ＰＣＳＫ４切断部位（配列番号５３）：
ＫＲＫＲ

【0412】

ＰＣＳＫ９切断部位（配列番号５４）：
ＶＦＡＱＳＩＰ

【0413】

Ｓ１Ｐ切断部位（配列番号５５）：
ＲＲＬＬ

【0414】

Ｓｔｅ１３切断部位（配列番号５６）：
ＥＡＥＡ

【0415】

Ｋｅｘ２切断部位（配列番号５７）：
ＫＲ

【0416】

Ｓｕｒｆ４トリペプチドモチーフ（配列番号５８）：
ＭＰＬ

【0417】

カテプシンＣペプチド（配列番号９５）
ＴＰＡＮＣＴＹＬＤＬＬＧＴＷＶＦＱＶＧＳＳＧＳＱＲＤＶＮＣＳＶＭＧ

【0418】

凝固因子ＶＩＩペプチド（配列番号９６）
ＩＬＥＫＲＮＡＳＫＰＱＧＲ

【0419】

ソルチリン１ペプチド（配列番号９７）
ＷＳＧＰＩＧＶＳＷＧＬＲ

【0420】

脳由来神経栄養因子ペプチド（配列番号９８）
ＥＳＶＮＧＰＫＡＧＳＲＧＬＴＳＬＡＤＴＦＥＨＶＩＥＥＬＬＤＥＤＱＫＶＲＰＮＥＥＮＮＫＤＡＤＬＹＴＳＲＶＭＬＳＳＱＶＰＬ

【0421】

プライマー配列

【0422】

ＮＬｕｃ＿Ｎｔｅｒｍ＿ｃＰＣＲ＿Ｆ（配列番号５９）：
ＣＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＡＧＡＣＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＣＴＧＡＴＡＧＧ

【0423】

ＮＬｕｃ＿Ｎｔｅｒｍ＿ｃＰＣＲ＿Ｒ（配列番号６０）：
ＣＡＣＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴＴＣＧＴＴＴＴＣＧＡＴＴＣＣＡＣＧＣＡＴＡＴＡＣＧ

【0424】

ＮＬｕｃ＿ｓｅｑ（配列番号６１）：
ＧＧＴＣＴＴＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧ

【0425】

ＮＬｕｃ＿ＲＢＤ＿Ｆ（配列番号６２）：
ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＧＡＴＴＴＣＣ

【0426】

ＮＬｕｃ＿ＲＢＤ＿Ｒ（配列番号６３）：
ＧＡＴＡＴＣＣＧＣＧＧＴＡＧＧＡＡＴＴＣＡＧＧＡＣＣＡＣＡＡＡＣＴＧＴＣＧ

【0427】

ＮＬｕｃ＿コロニー＿フォワード（配列番号６４）：
ＣＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＡＧＡＣＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＣＴＧＡＴＡＧＧ

【0428】

ＮＬｕｃ＿コロニー＿リバース（配列番号６５）：
ＧＡＧＡＧＣＴＣＧＣＣＴＧＣＡＧＧＡＡＴＴＧＧ

【0429】

Ｔ７－ＡＧＧ＿ｆｗｄ（配列番号１１０）：
ｇａａｔｔＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＡＧＧｃｔｔｇｔｔｃｔｔｔｔｔｇｃａｇａａｇｃ

【0430】

１２０ｐＡ＿ｒｅｖ（配列番号１１１）：
ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴａｇａａｔｇｔｇａａｇａａａｃｔｔｔｃｔｔｔｔｔａｔｔａｇ

【0431】

参考文献
以下に含まれる参考文献のそれぞれは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0432】

Ａｍａｎｔ，Ｆ．ｅｔ ａ．，“Ａ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｓｓａｙ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２６：１０３３－１０３６，２０２０．

【0433】

Ｂｕｎｔｚ，Ｂ．，“５０ ｏｆ ２０２０’ｓ ｂｅｓｔ－ｓｅｌｌｉｎｇ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，”Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｒｕｇｄｉｓｃｏｖｅｒｙｔｒｅｎｄｓ．ｃｏｍ／５０－ｏｆ－２０２０ｓ－ｂｅｓｔ－ｓｅｌｌｉｎｇ－ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／，２０２１．

【0434】

Ｃａｓｔｅｌｌａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ Ｎｏｖｅｌ Ａｎｔｉ－ＣＤ１９ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ａ Ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ａｎ Ａｆｆｏｒｄａｂｌｅ ＣＡＲ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｔ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１２：１３４－１４４，２０１９．

【0435】

Ｃｈｅｎ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，“Ｓｏｒｔｉｌｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｏｒｔｉｎｇ ｏｆ Ｂｒａｉｎ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ Ｆａｃｔｏｒ ｔｏ ｔｈｅ Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ Ｐａｔｈｗａｙ，”Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２５（２６）：６１５６－６１６６，２００５．

【0436】

Ｆｅｉｚｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ｇｅｎｅｓ ａｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａ ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐａｔｔｅｒｎ ｔｏ ｍａｔｃｈ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｄｅｍａｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｏｍｅ，”ｎｐｊ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，３：２２，２０１７．

【0437】

Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｆｏｒｅｉｇｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｂｕｄｄｉｎｇ ｙｅａｓｔｓ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ｃｏｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｃｕｏｌａｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，”Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ，１３（１２５），２０１４．

【0438】

Ｇａｒｔｅｎ，Ｗ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｖｉｒｕｓ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ，”Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅｓ ｂｙ Ｈｏｓｔ Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ：２０５－２４８，２０１８．

【0439】

Ｈａｒｙａｄｉ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅａｖｙ Ｃｈａｉｎ ａｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ Ｓｉｇｎａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｆｏｒ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ＣＨＯ Ｃｅｌｌｓ，”ＰＬｏＳ ＯＮＥ，１０（２）：ｅ０１１６８７８，２０１５．

【0440】

Ｎａｉｄｅｒ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ａｌｐｈａ－ｆａｃｔｏｒ ｍａｔｉｎｇ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ：ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ａｎｄ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，５（９）：１４４１－６３，２００４．

【0441】

Ｎｉｃｈｏｌｓ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，“Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ＥＲ－Ｇｏｌｇｉ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＲＧＩＣ－５３ Ｃａｕｓｅ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｖ ａｎｄ ＶＩＩＩ，”Ｃｅｌｌ，９３（１）：６１－７０，１９９８．

【0442】

Ｏｋａ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ Ｌｙｓｏｚｙｍｅ Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ Ａｌｐｈａ－ｆａｃｔｏｒ Ｐｒｏ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ，”Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６３（１１）：１９７７－１９８３，１９９９．

【0443】

Ｏｔｔｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｓｏｒｔｉｎｇ ｓｉｇｎａｌｓ ｃａｎ ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｅｘｐｏｒｔ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎｔｏ ＣＯＰＩＩ ｖｅｓｉｃｌｅｓ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，６，１１８９－１１９４，２００４．

【0444】

Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｐｅｐｔｉｄｅ ｃｌｅａｖａｇｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｓｏｒｔｉｌｉｎ／ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－３ ｆｏｒ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ，”Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，１８：５９５－６０４，１９９９．

【0445】

Ｒａｆｉｑ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｒｏａｄｂｌｏｃｋｓ ｉｎ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１７：１４７－１６７，２０２０．

【0446】

Ｓｈｕ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉ－ＨＥＲ２ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＧＢ２３５ ｒｅｖｅｒｓｅｓ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ＨＥＲ２－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ，”Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，１０：２９８６，２０２０．

【0447】

Ｙｉｎ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｓｕｒｆ４（Ｅｒｖ２９ｐ）ｂｉｎｄｓ ａｍｉｎｏ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ ｍｏｔｉｆｓ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ｃａｒｇｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｆｆｉｎｉｔｉｅｓ，ｅｎａｂｌｉｎｇ ｐｒｉｏｒｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｅｘｉｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ，”ＰＬｏＳ Ｂｉｏ，１６（８）：ｅ２００５１４０，２０１８．

【0448】

同等物
当業者らは、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態と同等物を多数認識するか、または日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。本発明は、特に明記のない限り、または当業者にとって矛盾または不一致が生じることが明らかでない限り、列挙された請求項のうちの１つ以上からの１つ以上の制限、要素、条項、説明用語などが、同じ基本請求項（または、他の任意の関連請求項）に従属する別の請求項に導入される、全てのバリエーション、組み合わせ、及び順列を包含することを理解すべきである。さらに、明細書に具体的な除外事項が記載されているかどうかに関わらず、本発明の任意の実施形態または態様が請求項から明示的に除外され得ることも理解されるべきである。本発明の範囲は、上記の説明に限定されるものではなく、以下の特許請求の範囲に記載されるものである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【国際調査報告】