特表 2025-501967 送達のための脂質及び組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-24

(54)【発明の名称】送達のための脂質及び組成物

(51)【国際特許分類】

   C07C 229/12 20060101AFI20250117BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20250117BHJP

   A61K 9/127 20250101ALI20250117BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20250117BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250117BHJP

【ＦＩ】

C07C229/12 CSP

A61K47/18

A61K9/127

A61K9/51

A61K31/7105

A61P43/00 105

【審査請求】未請求

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2024539654

(86)(22)【出願日】2022-12-29

(85)【翻訳文提出日】2024-06-28

(86)【国際出願番号】 CN2022143074

(87)【国際公開番号】W WO2023125738

(87)【国際公開日】2023-07-06

(31)【優先権主張番号】202111638123.4

(32)【優先日】2021-12-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202210651178.7

(32)【優先日】2022-06-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516174219

【氏名又は名称】江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司

(71)【出願人】

【識別番号】521567756

【氏名又は名称】上海森輝医薬有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＳＥＮＨＵＩ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｆｌｏｏｒ ４， Ｎｏ．１４ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ， Ｎｏ．３７２８ Ｊｉｎｋｅ Ｒｏａｄ， Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｐｉｌｏｔ Ｚｏｎｅ， Ｐｕｄｏｎｇ Ｎｅｗ Ａｒｅａ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２０３， Ｃｈｉｎａ

(71)【出願人】

【識別番号】520392096

【氏名又は名称】上海盛迪医薬有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＳＨＥＮＧＤＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．１２８８ Ｈａｉｋｅ Ｒｏａｄ， Ｚｈａｎｇｊｉａｎｇ Ｔｏｗｎ， Ｐｕｄｏｎｇ Ｎｅｗ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２１０， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】祝 令建

(72)【発明者】

【氏名】石 健宇

(72)【発明者】

【氏名】劉 崇懿

(72)【発明者】

【氏名】姜 軍

(72)【発明者】

【氏名】黄 建

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C076AA19

4C076AA65

4C076CC50

4C076DD14F

4C076DD14H

4C076DD50F

4C076DD50H

4C076DD63F

4C076DD63H

4C076DD70F

4C076DD70H

4C076EE23F

4C076EE23H

4C076FF16

4C076FF21

4C076FF36

4C076FF43

4C076FF65

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA02

4C086MA05

4C086MA24

4C086MA38

4C086MA66

4C086NA13

4C086ZA15

4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB32

4H006AA01

4H006AA03

4H006AB20

4H006AB21

4H006AB22

4H006AB28

4H006AB29

4H006BN10

4H006BP10

4H006BT12

(57)【要約】

送達のための脂質及び組成物。具体的には、式Ｉに示される化合物又はその塩、そのうち、Ｒ１～Ｒ３、Ｈ１～Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２は、明細書で定義される通りである。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉに示される化合物又はその塩であって、

【化1】

そのうち、Ｌ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）_ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ－又は結合から選ばれ、Ｒ^ａは水素又はＣ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、
Ｈ^１及びＨ^２は、それぞれ独立してＣ_１－１２ヘテロアルキレン基、Ｃ_１－１２アルキレン基、Ｃ_２－１２アルケニレン基から選ばれ、且つＨ^１及びＨ^２の少なくとも１つは、Ｃ_１－１２ヘテロアルキレン基であり、
Ｈ^３は、Ｃ_１－２４アルキレン基、Ｃ_２－２４アルケニレン基、Ｃ_３－８シクロアルキレン基又はＣ_３－８シクロアルケニレン基から選ばれ、
Ｒ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_１－２４アルキル基又はＣ_２－２４アルケニル基から選ばれ、
Ｒ^３は、水素、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^４、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ^４、－ＯＲ^５又は－ＮＲ^５Ｃ（Ｏ）Ｒ^４から選ばれ、Ｒ^４は、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、Ｒ^５は、水素、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、
ｘは、０、１又は２から選ばれる、
化合物又はその塩。

【請求項2】

Ｈ^１は、Ｃ_１－１２ヘテロアルキレン基、好ましくはＣ_２－９ヘテロアルキレン基から選ばれる、
請求項１に記載の化合物又はその塩。

【請求項3】

Ｌ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－又は結合から選ばれる、
請求項１又は２に記載の化合物又はその塩。

【請求項4】

Ｒ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_２－２４アルキル基、好ましくはＣ_４－１８アルキル基から選ばれ、或いはＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_２－２４アルケニル基、好ましくはＣ_４－１８アルケニル基から選ばれる、
請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項5】

式Ｉに示される化合物は、

【化2】

であり、そのうち、Ｈ^１、Ｈ^２、Ｈ^３、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、請求項１に定義される通りである、
請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項6】

Ｈ^３は、Ｃ_２－２４アルケニレン基、Ｃ_３－８シクロアルキレン基又はＣ_３－８シクロアルケニレン基、好ましくはＣ_３－８シクロアルキレン基から選ばれ、或いはＨ^３は、Ｃ_２－２４アルキレン基から選ばれる、
請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項7】

式Ｉに示される化合物は、

【化3】

であり、そのうち、Ｒ^６は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、ｎは、１～１２の間の整数、例えば、２、３、４、５又は６から選ばれ、Ｈ^１、Ｈ^２、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、請求項１に定義される通りである、
請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項8】

Ｒ^３は、－ＣＮ又はヒドロキシ基から選ばれ、或いはＲ^３は、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^４、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ^４又は－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^４から選ばれ、Ｒ^４は請求項１に定義される通りであり、更に、Ｒ^４は、好ましくはＣ_１－６アルキル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基である、
請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項9】

式Ｉに示される化合物は、

【化4】

であり、そのうち、Ｘは、－Ｎ（Ｒ^７）－又は－Ｏ－であり、ｏは、１～１１の間の整数から選ばれ、ｐは、１～５の間の整数から選ばれ、且つｏ＋ｐは、１２以下であり、Ｒ^７は、水素、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｈ^２、Ｈ^３、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、請求項１に定義される通りである、
請求項１又は２に記載の化合物又はその塩。

【請求項10】

ｐは１又は２から選ばれる、
請求項９に記載の化合物又はその塩。

【請求項11】

Ｈ^２は、Ｃ_３－７アルキレン基又はＣ_３－７アルケニレン基から選ばれる、
請求項１に記載の化合物又はその塩。

【請求項12】

式Ｉに示される化合物は、

【化5】

であり、そのうち、Ｈ^２、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は請求項１に定義される通りであり、Ｒ^６及びｎは請求項７に定義される通りであり、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｘ、ｏ及びｐは請求項９に定義される通りである、
請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項13】

Ｒ^１は、

【化6】

から選ばれる、
請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項14】

式Ｉに示される化合物は、

【化7】

【化8】

から選ばれる、
請求項１に記載の化合物又はその塩。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物の同位体置換物であって、好ましくは、重水素原子置換である、
同位体置換物。

【請求項16】

脂質粒子であって、請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物又はその塩を含み、活性薬剤、好ましくはポリヌクレオチド又は核酸、例えばｍＲＮＡを更に含む、
脂質粒子。

【請求項17】

請求項１５又は１６に記載の脂質粒子と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、
医薬組成物。

【請求項18】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物又はその塩、或いは請求項１５に記載の同位体置換物、或いは請求項１６に記載の脂質粒子、或いは請求項１７に記載の医薬組成物の、がん、感染症、自己免疫疾患、神経変性疾患及び炎症を予防及び／又は治療するための薬剤の調製における、
使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、医薬分野に属し、送達のための脂質及び組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、プラスミドなどの核酸類ベースの薬物は、広範囲の応用の見込みを有し、体内の標的器官及び標的細胞にいかに安全且つ効率的に送達するかが、この技術の発展を制約する困難な問題である。

【0003】

現在、核酸薬物送達システムは、ウィルスベクターシステムと非ウィルス系の２つに大別され、脂質ナノ粒子を介した核酸薬物送達は、非ウィルス送達システムに属する主な方法である。

【0004】

遺伝子治療及びワクチン応用において、脂質ナノ粒子は、様々な疾患を治療するための核酸の優れたベクターであることが既に証明された。カチオン性脂質及び他のヘルパー脂質、例えばコレステロール、リン脂質及びＰＥＧ化脂質から形成された脂質ナノ粒子は、核酸を被包し、核酸を分解から保護し、そして細胞の摂取を促進し、免疫応答を低下させる。また、脂質ナノ粒子は、生物活性成分の細胞伝達を行うことで、標的指向性が良く、副作用が少なく、安定性が良く、トランスフェクション効率が高いなどの他の利点を有する。

【0005】

核酸類分子による治療分野の急速な発展に基づき、核酸類薬物の送達に対する需要が高まっており、そのため効率的で安全な核酸送達ベクターの開発が求められている。

【発明の概要】

【0006】

本開示（Ｔｈｅ ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ）は、式Ｉに示される化合物又はその塩を提供し、

【化1】

そのうち、Ｌ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）_ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ－又は結合から選ばれ、Ｒ^ａは水素又はＣ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、
Ｈ^１及びＨ^２は、それぞれ独立してＣ_１－１２ヘテロアルキレン基、Ｃ_１－１２アルキレン基、Ｃ_２－１２アルケニレン基から選ばれ、且つＨ^１及びＨ^２の少なくとも１つは、Ｃ_１－１２ヘテロアルキレン基であり、
Ｈ^３は、Ｃ_１－２４アルキレン基、Ｃ_２－２４アルケニレン基、Ｃ_３－８シクロアルキレン基又はＣ_３－８シクロアルケニレン基から選ばれ、
Ｒ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_１－２４アルキル基又はＣ_２－２４アルケニル基から選ばれ、
Ｒ^３は、水素、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^４、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ^４、－ＯＲ^５又は－ＮＲ^５Ｃ（Ｏ）Ｒ^４から選ばれ、Ｒ^４は、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、Ｒ^５は、水素、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、
ｘは、０、１又は２から選ばれる。

【0007】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＨ^１及びＨ^２の少なくとも１つは、ヘテロアルキレン基であり、上記ヘテロアルキレン基は、Ｏ、Ｎ及びＳから選ばれる少なくとも１つのヘテロ原子を含む。

【0008】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＨ^１は、Ｃ_１－１２ヘテロアルキレン基、好ましくはＣ_２－９ヘテロアルキレン基から選ばれる。幾つかの実施形態において、ヘテロアルキレン基は、少なくとも１つの酸素原子を含むヘテロアルキレン基である。幾つかの実施形態において、ヘテロアルキレン基は、２つの酸素原子を含むヘテロアルキレン基である。幾つかの実施形態において、ヘテロアルキレン基は、少なくとも１つの窒素原子を含むヘテロアルキレン基である。幾つかの実施形態において、ヘテロアルキレン基は、少なくとも１つの酸素原子を含むヘテロアルキレン基である。

【0009】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＬ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－又は結合から選ばれる。

【0010】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＬ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｏ－又は結合から選ばれる。

【0011】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＬ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－Ｓ（Ｏ）_ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－又は結合から選ばれる。

【0012】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＬ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）Ｏ－又は結合から選ばれる。

【0013】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＬ^１及びＬ^２は、それぞれ独立して－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ－又は結合から選ばれる。

【0014】

別の態様では、幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_２－２４アルキル基（Ｃ_２アルキル基、Ｃ_３アルキル基、Ｃ_４アルキル基、Ｃ_５アルキル基、Ｃ_６アルキル基、Ｃ_７アルキル基、Ｃ_８アルキル基、Ｃ_９アルキル基、Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１１アルキル基、Ｃ_１２アルキル基、Ｃ_１３アルキル基、Ｃ_１４アルキル基、Ｃ_１５アルキル基、Ｃ_１６アルキル基、Ｃ_１７アルキル基、Ｃ_１８アルキル基、Ｃ_１９アルキル基、Ｃ_２０アルキル基、Ｃ_２１アルキル基を含むが、これらに限定されない）から選ばれる。別の幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_４－１８アルキル基から選ばれる。

【0015】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立して分岐鎖Ｃ_４－１８アルキル基から選ばれる。

【0016】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立して直鎖Ｃ_４－１８アルキル基から選ばれる。

【0017】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１は、直鎖Ｃ_４－１８アルキル基から選ばれ、Ｒ^２は、分岐鎖Ｃ_４－１８アルキル基から選ばれる。

【0018】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１は、分岐鎖Ｃ_４－１８アルキル基から選ばれ、Ｒ^２は、分岐鎖Ｃ_４－１８アルキル基から選ばれる。

【0019】

幾つかの実施形態により提供される式Ｉに示される化合物又はその塩において、Ｒ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_２－２４アルケニル基（Ｃ_２アルケニル基、Ｃ_３アルケニル基、Ｃ_４アルケニル基、Ｃ_５アルケニル基、Ｃ_６アルケニル基、Ｃ_７アルケニル基、Ｃ_８アルケニル基、Ｃ_９アルケニル基、Ｃ_１０アルケニル基、Ｃ_１１アルケニル基、Ｃ_１２アルケニル基、Ｃ_１３アルケニル基、Ｃ_１４アルケニル基、Ｃ_１５アルケニル基、Ｃ_１６アルケニル基、Ｃ_１７アルケニル基、Ｃ_１８アルケニル基、Ｃ_１９アルケニル基、Ｃ_２０アルケニル基、Ｃ_２１アルケニル基を含むが、これらに限定されない）から選ばれる。別の幾つかの実施形態により提供される式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立してＣ_４－１８アルケニル基から選ばれる。

【0020】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立して分岐鎖Ｃ_４－１８アルケニル基から選ばれる。

【0021】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１及びＲ^２は、それぞれ独立して直鎖Ｃ_４－１８アルケニル基から選ばれる。

【0022】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１は、直鎖Ｃ_４－１８アルケニル基から選ばれ、Ｒ^２は、分岐鎖Ｃ_４－１８アルケニル基から選ばれる。

【0023】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１は、分岐鎖Ｃ_４－１８アルケニル基から選ばれ、Ｒ^２は、分岐鎖Ｃ_４－１８アルケニル基から選ばれる。

【0024】

更に、幾つかの実施形態により提供される式Ｉに示される化合物は、

【化2】

であり、そのうち、Ｈ^１、Ｈ^２、Ｈ^３、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、上記で定義される通りである。

【0025】

幾つかの実施形態において、式Ｉ若しくはＩＩａ若しくはＩＩｂに示される化合物又はその塩におけるＨ^３は、Ｃ_２－２４アルケニレン基、Ｃ_３－８シクロアルキレン基又はＣ_３－８シクロアルケニレン基から選ばれ、或いはＨ^３は、Ｃ_１－２４アルキレン基から選ばれる。別の幾つかの実施形態において、式Ｉ若しくはＩＩａ若しくはＩＩｂに示される化合物又はその塩におけるＨ^３は、Ｃ_３－８シクロアルキレン基から選ばれる。

【0026】

幾つかの実施形態において、Ｃ_２－２４アルケニレン基は、Ｃ_２アルケニレン基、Ｃ_３アルケニレン基、Ｃ_４アルケニレン基、Ｃ_５アルケニレン基、Ｃ_６アルケニレン基、Ｃ_７アルケニレン基、Ｃ_８アルケニレン基、Ｃ_９アルケニレン基、Ｃ_１０アルケニレン基、Ｃ_１１アルケニレン基、Ｃ_１２アルケニレン基、Ｃ_１３アルケニレン基、Ｃ_１４アルケニレン基、Ｃ_１５アルケニレン基、Ｃ_１６アルケニレン基、Ｃ_１７アルケニレン基、Ｃ_１８アルケニレン基、Ｃ_１９アルケニレン基、Ｃ_２０アルケニレン基、Ｃ_２１アルケニレン基、Ｃ_２２アルケニレン基又はＣ_２３アルケニレン基を含むが、これらに限定されない。

【0027】

幾つかの実施形態において、Ｃ_２－２４アルキレン基は、Ｃ_４アルキレン基、Ｃ_５アルキレン基、Ｃ_６アルキレン基、Ｃ_７アルキレン基、Ｃ_８アルキレン基、Ｃ_９アルキレン基、Ｃ_１０アルキレン基、Ｃ_１１アルキレン基、Ｃ_１２アルキレン基、Ｃ_１３アルキレン基、Ｃ_１４アルキレン基、Ｃ_１５アルキレン基、Ｃ_１６アルキレン基、Ｃ_１７アルキレン基、Ｃ_１８アルキレン基、Ｃ_１９アルキレン基、Ｃ_２０アルキレン基、Ｃ_２１アルキレン基、Ｃ_２２アルキレン基又はＣ_２３アルキレン基を含むが、これらに限定されない。

【0028】

別の幾つかの実施形態により提供される式Ｉ若しくはＩＩａ若しくはＩＩｂに示される化合物は、

【化3】

であり、そのうち、Ｒ^６は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、ｎは、１～１２の間の整数（２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２を含むが、これらに限定されない）から選ばれ、Ｈ^１、Ｈ^２、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、式Ｉに示される化合物に定義される通りである。

【0029】

幾つかの実施形態において、式ＩＩＩａ若しくはＩＩＩｂに示される化合物又はその塩におけるｎは、２、３、４、５又は６である。

【0030】

幾つかの実施形態において、式Ｉ若しくは式ＩＩＩａ若しくはＩＩＩｂに示される化合物又はその塩におけるＲ^３は、－ＣＮ又はヒドロキシ基から選ばれる。幾つかの実施形態において、式Ｉ若しくは式ＩＩＩａ若しくはＩＩＩｂに示される化合物又はその塩におけるＲ^３は、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^４、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ^４又は－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^４から選ばれ、Ｒ^４は、上記に定義される通りである。

【0031】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^４は、メチル基、エチル基又はプロピル基を含むがこれらに限定されないＣ_１－６アルキル基から選ばれる。

【0032】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物は、

【化4】

であり、そのうち、Ｘは、－Ｎ（Ｒ^７）－又は－Ｏ－であり、ｏは、１～１１の間の整数から選ばれ、ｐは、１～５の間の整数から選ばれ、且つｏ＋ｐは、１２以下であり、Ｒ^７は、水素、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、Ｃ_１－６アルキル基又はＣ_２－６アルケニル基から選ばれ、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｈ^２、Ｈ^３、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、式Ｉに示される化合物に定義される通りである。

【0033】

幾つかの実施形態において、式ＩＩｃ若しくはＩＩｄに示される化合物又はその塩におけるｐは、１又は２から選ばれる。

【0034】

幾つかの実施形態において、式ＩＩｃ若しくはＩＩｄに示される化合物又はその塩におけるｏは、４、５、６、７又は８から選ばれる。

【0035】

幾つかの実施形態において、式ＩＩｃ若しくはＩＩｄに示される化合物又はその塩におけるＸは、－Ｏ－である。

【0036】

幾つかの実施形態において、式ＩＩｃ若しくはＩＩｄに示される化合物又はその塩におけるＲ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１は、それぞれ独立して水素から選ばれる。

【0037】

幾つかの実施形態において、式ＩＩｃ若しくはＩＩｄに示される化合物又はその塩におけるＲ^１０、Ｒ^１１は、それぞれ独立してＣ_１－６アルキル基から選ばれる。

【0038】

幾つかの実施形態において、式ＩＩｃ若しくはＩＩｄに示される化合物又はその塩におけるＲ^３は、ヒドロキシ基から選ばれる。

【0039】

別の幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物は、

【化5】

であり、Ｈ^２、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は式Ｉに示される化合物に定義される通りであり、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｘ、ｏ及びｐは式ＩＩｃに示される化合物に定義される通りである。

【0040】

幾つかの実施形態において、式Ｉ若しくはＩＩＩｃ若しくはＩＩＩｄに示される化合物又はその塩におけるＨ^２は、Ｃ_３－７アルキレン基又はＣ_３－７アルケニレン基から選ばれる。

【0041】

幾つかの実施形態により提供される式Ｉに示される化合物は、

【化6】

であり、そのうち、Ｈ^２、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は式Ｉに示される化合物に定義される通りであり、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｘ、ｏ及びｐは式ＩＩｃに示される化合物に定義される通りであり、Ｒ^６及びｎは上記に定義される通りである。

【0042】

別の態様では、幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１、Ｒ^２は、それぞれ以下の構造：

【化7】

を有し、そのうち、Ｒ^１２ａ、Ｒ^１２ｂ、Ｒ^１２ｃは、それぞれ独立して水素、Ｃ_１－１２アルキル基又はＣ_２－１２アルケニル基から選ばれ、ｋは、２～１２の間の整数である。

【0043】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１２ｃは、水素から選ばれる。

【0044】

幾つかの実施形態において、式Ｉに示される化合物又はその塩におけるＲ^１は、

【化8】

から選ばれる。

【0045】

式Ｉに示される典型的な化合物又はその薬学的に許容される塩は、

【化9】

【化10】

を含むが、これらに限定されない。

【0046】

本開示は、上記化合物又はその塩の同位体置換物を更に提供し、好ましくは、上記同位体置換物は、重水素原子置換である。

【0047】

本開示では、上記化合物又はその塩を含む脂質粒子を更に提供する。更に、幾つかの実施形態において、上記脂質粒子は活性薬剤を更に含む。

【0048】

幾つかの実施形態において、上記活性薬剤は、ポリヌクレオチド又は核酸（例えば、リボ核酸又はデオキシリボ核酸）から選ばれる。

【0049】

幾つかの実施形態において、上記活性薬剤はｍＲＮＡから選ばれる。本開示はまた、上記脂質粒子及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を更に提供する。ある実施形態において、組成物の総重量に基づき、上記医薬組成物は、０．０１％～９９．９９％の薬学的に許容される賦形剤を含む。ある実施形態において、上記医薬組成物は、０．１％～９９．９％の薬学的に許容される賦形剤を含む。ある実施形態において、上記医薬組成物は、０．５％～９９．５％の薬学的に許容される賦形剤を含む。ある実施形態において、上記医薬組成物は、１％～９９％の薬学的に許容される賦形剤を含む。ある実施形態において、上記医薬組成物は、２％～９８％の薬学的に許容される賦形剤を含む。

【0050】

本開示は、対象における免疫応答を誘発する疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬剤の調製における、上記化合物若しくはその塩、又は同位体置換物、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物の使用を更に提供する。

【0051】

本開示は、ポリペプチドの過剰発現に関連する疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬剤の調製における、上記化合物若しくはその塩、又は同位体置換物、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物の使用を更に提供する。

【0052】

本開示は、ポリペプチドの不十分な発現に関連する疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬剤の調製における、上記化合物若しくはその塩、又は同位体置換物、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物の使用を更に提供する。

【0053】

幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状は、がん、感染症、自己免疫疾患、神経変性疾患及び炎症を含むが、これらに限定されない。

【0054】

本開示は、対象における免疫応答を誘導する疾患又は病状を予防及び／又は治療する方法であって、上記化合物若しくはその塩、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物を上記患者に投与することを含む方法を更に提供する。

【0055】

本開示は、ポリペプチドの過剰発現に関連する疾患又は病状を予防及び／又は治療する方法であって、上記化合物若しくはその塩、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物を上記患者に投与することを含む方法を更に提供する。

【0056】

本開示は、ポリペプチドの不十分な発現に関連する疾患又は病状を予防及び／又は治療する方法であって、上記化合物若しくはその塩、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物を上記患者に投与することを含む方法を更に提供する。

【0057】

別の態様では、本開示は、対象における免疫応答を誘導する疾患又は病状を予防及び／又は治療するための、上記化合物若しくはその塩、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物を更に提供する。

【0058】

本開示は、ポリペプチドの過剰発現に関連する疾患又は病状を予防及び／又は治療するための、上記化合物若しくはその塩、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物を更に提供する。

【0059】

本開示は、ポリペプチドの不十分な発現に関連する疾患又は病状を予防及び／又は治療するための、上記化合物若しくはその塩、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物を更に提供する。

【0060】

本開示は、がん、感染症、自己免疫疾患、神経変性疾患及び炎症を予防及び／又は治療するための薬剤の調製における、上記化合物若しくはその塩、又は同位体置換物、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物の使用を更に提供する。

【0061】

本開示は、がん、感染症、自己免疫疾患、神経変性疾患及び炎症を予防及び／又は治療する方法であって、上記化合物若しくはその塩、又は上記脂質粒子、又は上記医薬組成物を上記患者に投与することを含む方法を更に提供する。

【0062】

本開示に記載される化合物塩は、「酸」付加塩及び「塩基」付加塩を含む。例えば、塩基性基（アミノ基）の酸ー塩基反応によって形成される塩であり、上記酸は、有機酸又は無機酸を含む。また、上記化合物塩は、塩基性基（アミノ基）との四級化によって形成される塩を更に含み、上記四級化剤は、直鎖又は分岐鎖状の塩素化炭化水素を含む。

【0063】

本開示に係る化合物は、特定の幾何又は立体異性体の形態があってもよい。本開示は、シス異性体及びトランス異性体、（－）－と（＋）－エナンチオマー、（Ｒ）－と（Ｓ）－エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、及びそのラセミ混合物と他の混合物、例えば、エナンチオマー又はジアステレオマーに富む混合物を含み、このような化合物の全てが本開示の範囲に含まれることを意図する。アルキル基などの置換基には、他の不斉炭素原子があってもよい。このような異性体及びそれらの混合物の全ては、本開示の範囲に含まれる。本開示に係る不斉炭素原子を含む化合物は、光学活性純品の形態又はラセミ形態で単離されることができる。光学活性純品の形態は、ラセミ混合物から分割され、或いはキラル原料又はキラル試薬を使用することにより合成されてもよい。

【0064】

キラル合成又はキラル試薬又は他の通常の技術により、光学活性の（Ｒ）－と（Ｓ）－異性体及びＤとＬ異性体を調製することができる。本開示のある化合物の１つのエナンチオマーを得るには、不斉合成又はキラル助剤を有する誘導作用により調製してもよく、そのうち、得られたジアステレオマー混合物を単離し、且つ基の分裂を補助することにより、必要なエナンチオマーの純品を提供する。或いは、分子に塩基性官能基（例えば、アミノ基）又は酸性官能基（例えば、カルボキシ基）が含まれる場合、適当な光学活性の酸又は塩基と共にジアステレオマーの塩を形成し、そして本分野でよく知られている通常の方法によりジアステレオマー分割を行い、その後、回収してエナンチオマーの純品を得る。なお、エナンチオマーとジアステレオマーの単離は、一般的にクロマトグラフィーを使用することにより完成され、上記クロマトグラフィーはキラル固定相を採用し、且つ任意選択的に化学誘導法と組み合わせる（例えば、アミンからカルバメートを生成する）。

【0065】

本開示に記載される化合物の化学構造において、

【化11】

という結合は配置が指定されていないことを示し、即ち、化学構造にキラル異性体が存在する場合、

【化12】

という結合は

【化13】

であってもよく、或いは

【化14】

という２つの配置を同時に含んでもよい。本開示に記載される化合物の化学構造において、

【化15】

という結合は、配置が指定されておらず、即ち、Ｚ配置又はＥ配置であってもよく、或いは２つの配置を同時に含んでもよい。

【0066】

本開示に係る化合物と中間体は更に、異なる互変異性体形態で存在してもよく、且つ、このような形態の全ては本開示の範囲内に含まれる。「互変異性体」又は「互変異性体形態」という用語は、低いエネルギー障壁により相互変換可能な異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトン移動互変異性体ともいう）は、例えば、ケト－エノール及びイミン－エナミン、ラクタム－ラクチム異性化などのプロトリシスによる相互変換を含む。ラクタム－ラクチム平衡の実例は、以下に示すようなＡとＢの間である。

【0067】

【化16】

本開示における化合物の全ては、Ａ型又はＢ型に描かれることができる。全ての互変異性形態は本開示の範囲にある。化合物の命名は、何れの互変異性体も排除しない。

【0068】

本開示は、本願に記載されるものと同じであるが、１つ又は複数の原子が、自然界で通常見られる原子量又は質量数と異なる原子量又は質量数を有する原子で置換された同位体標識の幾つかの本開示の化合物を更に含む。本開示の化合物に結合可能な同位体の実例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素及び塩素の同位体を含み、例えば、それぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ及び^３６Ｃｌなどである。

【0069】

特に説明のない限り、１つの位置が特に重水素（Ｄ）と指定される場合、当該位置は、重水素の天然存在度（０．０１５％である）よりも少なくとも１０００倍高い存在度を有する重水素（即ち、少なくとも１０％の重水素が組み込まれた）であると理解すべきである。例における化合物の、重水素の天然存在度よりも高い存在度を有することは、少なくとも１０００倍の存在度の重水素、少なくとも２０００倍の存在度の重水素、少なくとも３０００倍の存在度の重水素、少なくとも４０００倍の存在度の重水素、少なくとも５０００倍の存在度の重水素、少なくとも６０００倍の存在度の重水素又はそれ以上の存在度の重水素であってもよい。本開示は、種々の重水素化形態の式（Ｉ）の化合物を更に含む。炭素原子に連結されるそれぞれの利用可能な水素原子は、独立的に重水素原子で置換されてもよい。当業者は、関連文献を参照して重水素化形態の式（Ｉ）の化合物を合成することができる。重水素化形態の式（Ｉ）の化合物は、調製する場合、市販の重水素化出発物質を使用してもよく、或いは、通常の技術により重水素化試薬で合成されてもよく、重水素化試薬は、重水素化ボラン、三重水素化ボランテトラヒドロフラン溶液、重水素化水素化アルミニウムリチウム、重水素化ヨードエタン及び重水素化ヨードメタンなどを含むが、これらに限定されない。

【0070】

「任意選択的に」又は「任意選択的」は、その後に説明される事象又は状況が生じてもよいが、生じなくてもよいことを意味し、この説明は、当該事象又は状況が生じる場合と生じない場合を含む。例えば、「任意選択的にハロゲン又はシアノ基で置換されるＣ_１－６アルキル基」は、ハロゲン又はシアノ基が存在してもよいが、存在しなくてもよいことを意味し、この説明は、アルキル基がハロゲン又はシアノ基で置換された場合と、アルキル基がハロゲン及びシアノ基で置換されていない場合とを含む。
用語の説明：

【0071】

「医薬組成物」は、１種若しくは複数種の本願に記載される化合物又はその生理学的に薬用可能な塩若しくはプロドラッグと他の化学成分との混合物と、生理学的に薬用可能なベクター及び賦形剤などの他の成分とを含むものを示す。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収に寄与して更に生物活性を発揮するためのものである。

【0072】

「薬学的に許容される賦形剤」は、アメリカ食品医薬品局によって承認された、ヒト又は家畜動物への使用が許容される任意の助剤、ベクター、賦形剤、流動促進剤、甘味料、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、着香剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張化剤、溶媒又は乳化剤を含むが、これらに限定されない。

【0073】

本開示に記載される「有効量」又は「有効治療量」は、医学病状の症状又は病状の改善や予防に十分な量を含む。有効量は、更に、診断の許容又は促進に十分な量を指す。特定の患者又は獣医学対象に用いられる有効量は、例えば、治療すべき病状、患者の全体的な健康状況、投与の方法経路と用量及び副作用の重症度などの要因によって変化することができる。有効量は、顕著な副作用又は毒性作用が回避される最大用量又は投与計画であってもよい。

【0074】

「核酸」という用語は、ヌクレオチド、例えばデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）又はリボヌクレオチド（ＲＮＡ）からなるポリマーである。

【0075】

「オリゴヌクレオチド」という用語は、長さ２～１００ヌクレオチドの一本鎖又は二本鎖ヌクレオチド多量体を意味する。「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドモノマーから構成される一本鎖又は二本鎖ポリマーを指す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、長さ１００以上のヌクレオチドからなる。

【0076】

別の幾つかの実施形態において、例示的なポリヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡを含む）、ＲＮＡ干渉誘導剤（ＲＮＡｉ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ及び類似体を含むが、これらに限定されない。

【0077】

「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指すことができる。この用語は、１つ又は複数のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学類似体であるアミノ酸ポリマーに、並びに天然に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。

【0078】

「白血球」という用語は、骨髄中の多能性造血幹細胞から産生され、且つそれに由来する白血球（ＷＢＣ）に関する。白血球は細胞核を有し、且つ機能的又は物理的特性に基づいて、白血球のタイプは、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球及び単球を含む５つの主要なタイプに分類され得る。

【0079】

「アルキル基」は、直鎖及び分岐鎖アルキル基を含む、飽和脂肪族炭化水素基を指す。幾つかの実施形態において、アルキル基は、１～４個の炭素を有し、Ｃ_１－４アルキル基とも呼ばれる。幾つかの実施形態において、アルキル基は、１０～２２個の炭素を有し、Ｃ_{１０－２２}アルキル基とも呼ばれる。幾つかの実施形態において、アルキル基は、４～２２個の炭素を有し、Ｃ_４－２２アルキル基とも呼ばれる。

【0080】

アルキル基は、非置換の、又はハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、オキソ、アルキル基、アルケニル基、アルコキシカルボニル基、アミド基、アルキルアミド基、ジアルキルアミド基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボキシ基、チオ及びチオアルキル基から選ばれる１つ又は複数の基で置換されていてもよい。

【0081】

「ヘテロアルキル基」は、鎖中に好ましくは１～１４個の炭素、より好ましくは２～１０個の炭素を有し、そのうち１つ又は複数の炭素がＳ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換される直鎖又は分岐鎖アルキル基を指す。例示的なヘテロアルキル基は、アルキルエーテル、第二級アルキルアミン及び第三級アルキルアミン、アミド、硫化アルキル（ａｌｋｙｌ ｓｕｌｆｉｄｅ）などを含む。

【0082】

ヘテロアルキル基は、非置換の、又はハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アミノ基、オキソ、アルケニル基、アルコキシカルボニル基、アミド基、アルキルアミド基、ジアルキルアミド基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボキシ基、チオ及びチオアルキル基から選ばれる１つ又は複数の基で置換されていてもよい。

【0083】

「アルケニル基」は、直鎖及び分岐鎖アルケニル基を含む、不飽和脂肪族炭化水素基を指す。幾つかの実施形態において、アルケニル基は、１～４個の炭素を有し、Ｃ_１－４アルケニル基とも呼ばれる。幾つかの実施形態において、アルケニル基は、１０～２２個の炭素を有し、Ｃ_{１０－２２}アルケニル基とも呼ばれる。幾つかの実施形態において、アルケニル基は、４～２２個の炭素を有し、Ｃ_４－２２アルケニル基とも呼ばれる。例示的なアルケニル基は、ビニル基、プロペニル基、ｎ－ブテニル基、イソブテニル基、３－メチルブタ－２－エニル、ｎ－ペンテニル基、ヘプテニル基、オクテニル基、シクロヘキシル－ブテニル及びデセニル基を含む。

【0084】

アルケニル基は、非置換の、又はハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、オキソ、アルキル基、アルケニル基、アルコキシカルボニル基、アミド基、アルキルアミド基、ジアルキルアミド基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボキシ基、チオ及びチオアルキル基から選ばれる１つ又は複数の基で置換されていてもよい。

【0085】

「一価基」とは、１つの化合物から「形態上」で１個の一価を除去した原子又は基である。「サブユニット」とは、化合物から「形態上」で２個の一価又は１個の二価を除去した原子又は原子団である。

【0086】

「アルキレン基」という用語は、アルカン分子から２個の水素原子を除いた残りの部分を意味し、幾つかの実施形態において、アルキレン基は、１～４個の炭素を有し、Ｃ_１－４アルキレン基とも呼ばれる。幾つかの実施形態において、アルキル基は、１０～２２個の炭素を有し、Ｃ_{１０－２２}アルキレン基とも呼ばれる。幾つかの実施形態において、アルキル基は、４～２２個の炭素を有し、Ｃ_４－２２アルキレン基とも呼ばれる。

【0087】

同様に、「アルキレンオキシ基」、「アルケニレン基」、「アルケニレンオキシ基」、「シクロアルキレン基」、「ヘテロシクロアルキレン基」の定義は「アルキレン基」の通りである。

【0088】

「ヒドロキシ基」という用語は、－ＯＨ基を指す。

【0089】

「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。

【0090】

「シアノ基」という用語は、－ＮＨ_２を指す。

【0091】

「オキソ」という用語は、＝Ｏ置換基を指す。

【0092】

「置換される」とは、基の中の１つ又は複数の水素原子、好ましくは５個以下、より好ましくは１～３個の水素原子が互いに独立的に対応する数の置換基で置換されることを指す。無論、置換基は、それらの化学的に可能な部位にしか位置せず、当業者はそれほど努力せずに（実験又は理論により）可能又は不可能な置換を決定することができる。

【図面の簡単な説明】

【0093】

【図1】肝細胞増殖因子ｍＲＮＡ脂質ナノ粒子を筋肉注射したマウスにおけるタンパク質発現量

【図2】ルシフェラーゼｍＲＮＡ脂質ナノ粒子のマウス尾静脈内注射により検出された蛍光強度

【図3】ｍＲＮＡ脂質ナノ粒子を尾静脈内注射したマウスの肝臓におけるカチオン性脂質濃度

【図4】ｍＲＮＡ脂質ナノ粒子を尾静脈内注射したマウスの脾臓におけるカチオン性脂質濃度

【図5】ｍＲＮＡ脂質ナノ粒子を尾静脈内注射したマウスの血漿におけるカチオン性脂質濃度

【図6】ｍＲＮＡ脂質ナノ粒子を尾静脈内注射したマウスの血清におけるインターロイキン－６（ＩＬ－６）濃度の検出。

【発明を実施するための形態】

【0094】

以下、実施例と合わせて本開示を更に説明するが、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものではない。

【0095】

本開示中の実施例において具体的な条件が明示されていない実験方法は、一般的に通常の条件、又は原料や商品メーカーに勧められた条件に従う。具体的な供給源が明示されていない試薬は、市販される通常の試薬である。

【0096】

化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）又は／及び質量分析（ＭＳ）によって決定される。ＮＭＲシフト（δ）は、１０^－６（ｐｐｍ）の単位で示されている。ＮＭＲの測定には、核磁気共鳴装置Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ－４００が使用され、測定溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ_６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ_３）、重水素化メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ_４）であり、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。

【0097】

ＨＰＬＣの測定には、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高圧液体クロマトグラフィー、ＧＡＳ１５Ｂ ＤＡＤ紫外線検出器、Ｗａｔｅｒ Ｖｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８ １５０×４．６ｍｍ ５μｍカラムが使用された。

【0098】

ＭＳの測定には、Ａｇｉｌｅｎｔ６１２０トリプル四重極質量分析計、Ｇ１３１５Ｄ ＤＡＤ検出器、Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８ ４．６×５０ｍｍ、５μｍカラムが使用され、正／負イオンモードで走査し、質量走査範囲は８０～１２００である。

【0099】

薄層クロマトグラフィー用シリカゲル板としては、煙台黄海ＨＳＧＦ２５４シリカゲル板が使用され、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に使用されたシリカゲル板用の仕様は、０．２ｍｍ±０．０３ｍｍであり、薄層クロマトグラフィーによる生成物の分離精製用の仕様は０．４～０．５ｍｍである。

【0100】

フラッシュカラム精製系には、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｒｆ１５０（ＴＥＬＥＤＹＮＥ ＩＳＣＯ）又はＩｓｏｌａｒａ ｏｎｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ）が使用された。

【0101】

順相カラムクロマトグラフィーには、一般的に煙台黄海シリカゲル２００～３００メッシュ又は３００～４００メッシュのシリカゲルがベクターとして使用され、或いは、常州三泰予充填超高純度順相シリカゲルカラム（４０～６３μｍ、６０ｇ、２４ｇ、４０ｇ、１２０ｇ又は他の仕様）が使用された。

【0102】

本開示における既知の出発原料は、この分野で知られている方法で、又はそれに従って合成されてもよく、或いは上海泰坦科技、ＡＢＣＲ ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、韶遠化学科技（Ａｃｃｅｌａ ＣｈｅｍＢｉｏ Ｉｎｃ）、畢得医薬などの会社から購入されてもよい。

【0103】

実施例において特に説明のない限り、反応は何れも窒素雰囲気で行うことができる。

【0104】

窒素雰囲気は、反応フラスコに容積が約１Ｌの窒素バルーンが連結されていることを指す。

【0105】

水素雰囲気は、反応フラスコに容積が約１Ｌの水素バルーンが連結されていることを指す。

【0106】

水素ガスは、上海全浦科学機器公司のＱＰＨ－１Ｌ型水素発生装置により製造される。

【0107】

窒素雰囲気又は水素雰囲気は、通常、真空引き、窒素ガス又は水素ガスの導入を３回繰り返す。

【0108】

実施例において、特に説明のない限り、溶液は水溶液を指す。

【0109】

実施例において、特に説明のない限り、反応温度は室温であり、２０～３０℃である。

【0110】

実施例における反応進行のモニターには薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）が採用され、反応に使用された展開溶媒、化合物を精製するためのカラムクロマトグラフィーの溶離剤系及び薄層クロマトグラフィーの展開溶媒系は、溶媒の体積比が化合物の極性によって調整され、少量のトリエチルアミンと酢酸などの塩基性又は酸性試薬を加えて調整してもよい。

【実施例】

【0111】

実施例１

【化17】

【0112】

ステップ１）

【化18】

６－アミノカプロン酸（２１．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）を秤量してエタノール及び水の混合液（ＥｔＯＨ／Ｈ_２Ｏ、ｖ／ｖ＝２：１、２００ｍＬ）に溶解し、ＣｓＯＨ・Ｈ_２Ｏ（４．０ｇ、１００ｍｍｏｌ）を加え、ベンジルオキシブロモエタン（１３．１ｇ、１００ｍｍｏｌ）を加え、室温で４０ｈ反応させ、エタノールの大部分を濃縮により除去し、残留物を直接逆相カラムクロマトグラフィー（アセトニトリル／水／０．１％トリフルオロ酢酸）により直接濃縮し、吸引乾燥して、白色固体５．６ｇを得て、収率は２１％であった。
ＭＳ：２６６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｄ_２Ｏ） δ ７．３６ （ｓ， ５Ｈ）， ４．５３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７２ - ３．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２０ - ３．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５ - ２．８８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．５７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １５．３， ７．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １５．０， ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．３０ - １．２２ （ｍ， ２Ｈ）．

【0113】

ステップ２）

【化19】

６－（（２－（ベンジルオキシ）エチル）アミノ）ヘキサン酸（５．６ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）をフラスコに秤量し、１，４－ジオキサン（８０ｍＬ）、水酸化ナトリウム水溶液（４２．２ｍＬ、１．０Ｍ）を加え、Ｂｏｃ_２Ｏ（５．５ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１ｈ反応させ、ＬＣ－ＭＳが反応の完了を示し、ジオキサンを濃縮し、水相を希塩酸でｐＨを５程度に調整し、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、濃縮して、ほぼ無色のゲル状物７．２ｇを得て、収率は９３％であった。そのまま次の反応に用いた。
ＭＳ：３６６．２［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。

【0114】

ステップ３）

【化20】

６－（（２－（ベンジルオキシ）エチル）（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（６．１ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）をフラスコに秤量し、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）を加え、氷浴し、ウンデカノール（２．７３ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４０８ｍｇ、３．３４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４．３ｇ、３３．４ｍｍｏｌ）を順次加え、ＥＤＣＩ（３．８４ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌し、氷浴を取り除き、室温で一晩反応させ、ＴＬＣでモニタリングし、反応を完了させ、反応液に水（１００ｍＬ）を加え、分液し、有機相を希塩酸、水、炭酸水素ナトリウムで順次洗浄し、乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１～１０：１）により、ほぼ無色のゲル状物６．８ｇを得て、収率は８２％であった。
ＭＳ：５２０．４［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３０ - ７．２０ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５１ （ｄ， Ｊ ＝ １８．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３２ （ｄ， Ｊ ＝ ２１．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ２．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．５５ （ｔｔ， Ｊ ＝ １３．３， ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ９Ｈ）， １．２１ （ｄ， Ｊ ＝ １５．５ Ｈｚ， １８Ｈ）， ０．８１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0115】

ステップ４）

【化21】

６－（（２－（ベンジルオキシ）エチル）（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸ウンデシル（７．６ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）を秤量してジクロロメタンに溶解し、ＴＦＡ（２０ｍＬ）を加え、室温で２ｈ反応させ、そのまま濃縮し、残留物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）を加え、分液し、有機相を乾燥させ、濃縮してゲル状物を得て、再びジクロロメタンで溶解し、ＨＣｌ／ｄｉｏｘａｎｅ（４．０Ｍ、４ｍＬ）を加え、そのまま濃縮して、白色固体５．０ｇを得て、収率は８１％であった。
ＭＳ：４２０．３［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．５１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．３９ - ７．２８ （ｍ， ５Ｈ）， ４．５７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ３．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．０２ （ｓ， １Ｈ）， １．９３ - １．８４ （ｍ， ２Ｈ）， １．６１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．８， ６．７ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．４２ - １．１７ （ｍ， １８Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0116】

ステップ５）

【化22】

２－（（５－（ベンジルオキシ）ペンチル）オキシ）酢酸（文献Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、１９９２、ｖｏｌ．４０、＃３、ｐ．６１７～６２３に参照して調製）（７．６ｇ、３０．１２ｍｍｏｌ）をフラスコに秤量し、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）を加え、氷浴し、ヘプタデカ－９－オール（文献ＷＯ２０２０／２１９８７６に参照して調製）（６．１８ｇ、２４．１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．６８ｇ、３０．１２ｍｍｏｌ）を順次加え、ＥＤＣＩ（６．９３ｇ、３６．１４ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌し、氷浴を取り除き、室温で一晩反応させ、ＴＬＣでモニタリングし、反応を完了させ、反応液に水（１００ｍＬ）を加え、分液し、有機相を希塩酸、水、炭酸水素ナトリウムで順次洗浄し、乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５０：１～１０：１）により、ほぼ無色のゲル状物１０．９ｇを得て、収率は９２％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３６ - ７．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３０ - ７．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．９６ （ｐ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６９ - １．６１ （ｍ， ４Ｈ）， １．５６ （ｄ， Ｊ ＝ １６．５ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．２５ （ｓ， ２４Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）．

【0117】

ステップ６）

【化23】

ヘプタデカン－９－イル２－（（５－（ベンジルオキシ）ペンチル）オキシ）アセテート（４．０ｇ、８．１５ｍｍｏｌ）を秤量し、ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（４００ｍｇ、２０％）を加え、水素ガスを流し、室温で２ｈ反応させ、ＴＬＣでモニタリングし、反応を完了させた。ろ過し、濃縮した。無色のゲル状物３．２ｇを得て、収率は９８％であった。そのまま次の反応に用いた。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．４， ６．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．６６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５４ （ｔ， Ｊ ＝６．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７１ - １．５７ （ｍ， ４Ｈ）， １．５６ - １．４２ （ｍ， ６Ｈ）， １．２５ （ｓ， ２４Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）．

【0118】

ステップ７）

【化24】

ヘプタデカン－９－イル ２－（（５－ヒドロキシペンチル）オキシ）アセテート（２．４ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を秤量してジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、氷浴下、ＤＭＰ（３．８２ｇ、９．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５ｈ反応させ、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を加え、３０分間撹拌し、分液し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥させ、濃縮し、淡黄色のゲル状物２．５ｇを得て、そのまま次の反応に用いた。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．７８ （ｓ， １Ｈ）， ４．９６ （ｐ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４９ （ｔｄ， Ｊ ＝ ７．２， １．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８１ - １．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６０ - １．４８ （ｍ， ４Ｈ）， １．２６ （ｓ， ２４Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0119】

ステップ８）

【化25】

ヘプタデカン－９－イル ２－（（５－オキソペンチル）オキシ）アセテート（２．４ｇ、６ｍｍｏｌ）を秤量してジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、６－（（２－（ベンジルオキシ）エチル）アミノ）ヘキサン酸ウンデシル塩酸塩（２．４６ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を加え、ＤＩＰＥＡ（１．１６ｇ、９．０ｍｍｏｌ）、酢酸（１．０８ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）を加え、清澄になるように撹拌し、氷浴し、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３（３．１８ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させ、ＴＬＣでモニタリングし、反応を完了させ、水（１００ｍＬ）を加え、分液し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１～２：１）により、無色の液体４．１ｇを得て、収率は８５％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３３ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ， ４Ｈ）， ７．３０ - ７．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．９９ - ４．９１ （ｍ， １Ｈ）， ４．５２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０８ - ４．０２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５７ - ３．４７ （ｍ， ４Ｈ）， ２．６８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４５ （ｓ， ４Ｈ）， ２．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６７ - １．５７ （ｍ， ６Ｈ）， １．４８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３７．５， ６．０ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．３８ - １．１８ （ｍ， ４６Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ９Ｈ）。

【0120】

ステップ９）

【化26】

ウンデシル６－（（２－（ベンジルオキシ）エチル）（５－（２－（ヘプタデカン－９－イルオキシ）－２－オキソエトキシ）ペンチル）アミノ）ヘキサノエート（１ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）をフラスコに秤量し、エタノールを加えて溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（５００ｍｇ、２０％）を加え、水素ガスを流し、室温で一晩反応させ、ＴＬＣでモニタリングし、反応を完了させた。ろ過し、濃縮した。無色のゲル状物を得て、カラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１０：１）により無色のゲル状物４５０ｍｇを得て、収率は５１％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ５．００ - ４．８９ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ - ４．０１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．６１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６８ （ｓ， ２Ｈ）， ２．５７ （ｓ， ４Ｈ）， ２．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７０ - １．５９ （ｍ， ６Ｈ）， １．５３ （ｓ， ８Ｈ）， １．４３ - １．１８ （ｍ， ４４Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ９Ｈ）。

【0121】

実施例２

【化27】

【0122】

ステップ１）

【化28】

化合物２－２（５０．４ｇ、３３１ｍｍｏｌ）を秤量してＴＨＦ（４００ｍＬ）に溶解し、ｎ－ＢｕＬｉ（２０６ｍＬ、１．６Ｍ）をドライアイスエタノール浴下でに徐々に滴下し、恒温で１時間撹拌した。化合物２－１（２０．０ｇ、１１０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、ドライアイスエタノール浴下で反応系に徐々に滴下し、恒温で１時間撹拌し、次いで室温で一晩撹拌した。試料をＬＣ－ＭＳで検出し、出発原料を完全に反応した。１Ｌの水を加え、酢酸エチル１Ｌ×３で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により、黄色の油状物９．００ｇを得て、収率は３２．３％であった。
ＭＳ：２５３．１［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．４０－７．２４ （ｍ， ５Ｈ）， ４．５７ （ｓ， ２Ｈ）， ３．６５－３．５７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．３９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７７－１．６１ （ｍ， ４Ｈ）。

【0123】

ステップ２）

【化29】

化合物２－３（１．００ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、氷水浴下でヘプタン－９－オール（９１４ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（９６．０ｍｇ、７８６μｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２．０４ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１．１４ｇ、９．９５ｍｍｏｌ）を順次加え、４０℃で一晩撹拌した。試料をＬＣＭＳとＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）で検出し、出発原料を完全に反応した。１００ｍＬの水を加え、酢酸エチル１００ｍＬ×３で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）により、無色の油状物１．５０ｇを得て、収率は７７．１％であった。
ＭＳ：５１３．３ ［Ｍ＋Ｎａ］ ^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３８－７．２４ （ｍ， ５Ｈ）， ４．９０－４．８２ （ｍ， １Ｈ）， ４．５７ （ｓ， ２Ｈ）， ３．６４－３．５８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．３１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７５－１．５９ （ｍ， ４Ｈ）， １．５５－１．４５ （ｍ， ４Ｈ）， １．３４－１．１９ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0124】

ステップ３）

【化30】

化合物２－４（１．５０ｇ、３．０６ｍｍｏｌ）を秤量してＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（３００ｍｇ、２０ｗｔ％）を加え、水素ガスで置換し、室温で一晩撹拌した。試料をＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）で検出し、出発原料を完全に反応した。ろ過し、ろ液を濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）により、無色の油状物１．１０ｇを得て、収率は８９．８％であった。
ＭＳ：４２３．３ ［Ｍ＋Ｎａ］ ^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９１－４．８２ （ｍ， １Ｈ）， ３．７６－３．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５５－３．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．９５ （ｓ， １Ｈ）， １．７６－１．５８ （ｍ， ４Ｈ）， １．５７－１．４４ （ｍ， ４Ｈ）， １．３６－１．１８ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0125】

ステップ４）

【化31】

化合物２－５（１２０ ｍｇ、３００μｍｏｌ）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶解し、氷水浴下でＤＭＰ（１９０ｍｇ、４４８μｍｏｌ）を加え、室温で２ｈ撹拌した。試料をＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）で検出し、出発原料を完全に反応した。反応液に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液１ｍＬ及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液２０ｍＬを加え、酢酸エチル２０ ｍＬ×３で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮して淡黄色の油状物８０ｍｇを得て、精製処理せずにそのまま次の反応に用いた。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．７３ （ｓ， １Ｈ）， ４．９１－４．８１ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ （ｓ， １Ｈ）， ４．０６ （ｓ， １Ｈ）， ３．６５－３．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７９－１．５９ （ｍ， ４Ｈ）， １．５７－１．４３ （ｍ， ４Ｈ）， １．３６－１．１６ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0126】

ステップ５）

【化32】

化合物２－６（１．０９ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、２－７（１．１２ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（５３０ｍｇ、４．１０ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（４９２ｍｇ、８．１９ｍｍｏｌ）を順次加え、１０ｍｉｎ撹拌した後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３（１．４５ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。試料をＴＬＣ（純粋なＥＡ）で検出し、出発原料を完全に反応した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液１００ ｍＬを加え、酢酸エチル１００ ｍＬ×３で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）により、淡黄色の油状物２９０ｍｇを得て、収率は１３．２％であった。
ＭＳ：８０２．４ ［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３９－７．２６ （ｍ， ５Ｈ）， ４．８９－４．８２ （ｍ， １Ｈ）， ４．５１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６７－３．４４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８７－２．３７ （ｍ， ６Ｈ）， ２．３３－２．２４ （ｍ， ４Ｈ）， １．７９－１．５５ （ｍ， ８Ｈ）， １．５５－１．４３ （ｍ， ６Ｈ）， １．３８－１．１５ （ｍ， ４２Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ９Ｈ）。

【0127】

ステップ６）

【化33】

化合物２－８（３９０ｍｇ、４８６μｍｏｌ）を秤量してＥｔＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（３９０ｍｇ、２０ｗｔ％）を加え、水素ガスで置換し、室温で一晩撹拌した。試料をＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で検出し、出発原料を完全に反応した。ろ過し、ろ液を濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）により、無色の油状物１１０ｍｇを得て、収率は３１．８％であった。
ＭＳ： ７１２．２［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．８９－４．８１ （ｍ， １Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５９－２．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３４－２．２６ （ｍ， ４Ｈ）， １．７２－１．５６ （ｍ， ８Ｈ）， １．５３－１．４４ （ｍ， ６Ｈ）， １．３６－１．２１ （ｍ， ４２Ｈ）， ０．８９－０．８５ （ｍ， ９Ｈ）。

【0128】

実施例３

【化34】

【0129】

ステップ１）

【化35】

３－２（５．９０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を秤量してＤＭＦ（２５０ｍＬ）に溶解し、氷水浴下でＮａＨ（２．４ｇ、６０ｍｍｏｌ）を数回に分けて加え、恒温で１時間撹拌した。３－１（１２．９ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を氷水浴下で数回に分けて反応系に加え、室温で一晩撹拌した。水３００ｍＬを加え、酢酸エチル３００ｍＬ×２で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により、淡黄色の油状物６．２０ｇを得て、収率は４２．２％であった。
ＭＳ：２９５．２ ［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３４－７．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３０－７．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２５－４．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９２ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５９－３．５３ （ｍ， １Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３９－３．３３ （ｍ， １Ｈ）， １．６８－１．５９ （ｍ， ４Ｈ）， １．４９－１．４２ （ｍ， ２Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0130】

ステップ２）

【化36】

化合物３－３（７．４０ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）に溶解し、氷水浴下でＮａＯＨ（４．００ｇ、１００ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（４０ｍＬ）溶液を徐々に加え、室温で一晩撹拌した。氷水浴で降温し、濃塩酸でｐＨを約３程度に調整し、ＤＣＭ（２００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮して、淡黄色の油状物５．５０ｇを得て、収率は８２．６％であった。
ＭＳ：２６７．２ ［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３７－７．３３ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３１－７．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．５１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９９ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６０－３．４０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６９－１．６１ （ｍ， ４Ｈ）， １．５０－１．４４ （ｍ， ５Ｈ）。

【0131】

ステップ３）

【化37】

３－４（５．３０ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）及び３－５（５．１０ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）を秤量し、ＤＣＭ（１６０ｍＬ）に溶解し、ＤＭＡＰ（４．９０ｇ、４０．０ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（４．６０ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）を秤量し、反応液に順次加え、水素ガスで置換し、室温で一晩撹拌した。順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により、淡黄色の油状物８．６０ｇを得て、収率は８５．９％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３４－７．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３１－７．２７ （ｍ， １Ｈ）， ４．９６－４．９１ （ｍ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９１ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５９－３．５３ （ｍ， １Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３８－３．３２ （ｍ， １Ｈ）， １．６８－１．６０ （ｍ， ４Ｈ）， １．５４－１．５２ （ｍ， ４Ｈ）， １．４９－１．４３ （ｍ， ２Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３５－１．１８ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0132】

ステップ４）

【化38】

化合物３－６（５．００ｇ、９．９０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、窒素ガス保護下でＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（５００ｍｇ）を加え、水素ガスで置換し、室温で一晩撹拌して水素化した。Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃをろ過により除去して回収し、ろ液を減圧下で濃縮乾燥し、順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により、無色の油状物４．００ｇを得て、収率は９６．４％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９６－４．９２ （ｍ， １Ｈ）， ３．９１ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５９－３．５３ （ｍ， １Ｈ）， ３．４０－３．３６ （ｍ， １Ｈ）， １．６８－１．５６ （ｍ， ４Ｈ）， １．５４－１．５２ （ｍ， ４Ｈ）， １．４９－１．４１ （ｍ， ２Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３５－１．１９ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0133】

ステップ５）

【化39】

化合物３－７（４．１０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８０ｍＬ）に溶解し、氷水浴で降温し、窒素ガス保護下で、ＣＢｒ_４（５．００ｇ、１５ｍｍｏｌ）及びＰＰｈ_３（３．９０ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）を順次加え、恒温で３０ｍｉｎ撹拌した後、室温で一晩撹拌した。試料をＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）で検出し、出発原料を完全に反応した。順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により、淡黄色の油状物４．３０ｇを得て、収率は９０．０％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９７－４．９０ （ｍ， １Ｈ）， ３．９１ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５９－３．５３ （ｍ， １Ｈ）， ３．４３－３．３３ （ｍ， ３Ｈ）， １．９３－１．８５ （ｍ， ２Ｈ）， １．６７－１．５９ （ｍ， ２Ｈ）， １．５７－１．４８ （ｍ， ６Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３５－１．１９ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0134】

ステップ６）

【化40】

３－８（４．３０ｇ、９．００ｍｍｏｌ）を秤量して無水ＥｔＯＨ（８５ ｍＬ）に溶解し、窒素ガス保護下で、エタノールアミン（１６．５ｇ、２７０ｍｍｏｌ）を加え、３０℃で一晩撹拌した。試料をＬＣ－ＭＳで検出し、出発原料を完全に反応した。溶媒を減圧下で濃縮乾燥し、残留物にＥＡ（２００ｍＬ）を加え、水（５０ｍＬ×２）で２回洗浄し、飽和食塩水（５０ｍＬ×２）で２回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により、無色の油状物３．３０ｇを得て、収率は８０．１％であった。
ＭＳ：４５８．４［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９６－４．８８ （ｍ， １Ｈ）， ３．９０ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６４ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５７－３．５１ （ｍ， １Ｈ）， ３．３８－３．３１ （ｍ， １Ｈ）， ２．７７ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６５－１．５７ （ｍ， ２Ｈ）， １．５６－１．４８ （ｍ， ６Ｈ）， １．４４－１．２７ （ｍ， ５Ｈ）， １．２６－１．１９ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0135】

ステップ７）

【化41】

３－９（２．３０ｇ、５．００ｍｍｏｌ）を秤量して無水ＥｔＯＨ（４６ｍＬ）に溶解し、窒素ガス保護下で、ＤＩＥＡ（１．９０ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）及び３－１０（３．５０ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で一晩撹拌した。試料をＬＣ－ＭＳで検出し、出発原料はほとんど反応した。溶媒を減圧下に濃縮乾燥し、残留物にＥＡ（１００ｍＬ）を加え、水（５０ｍＬ×２）で２回洗浄し、飽和食塩水（５０ｍＬ×２）で２回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１５：１）により、無色の油状物２．１０ｇを得て、収率は５７．９％であった。
ＭＳ ：７２６．６［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９４－４．８８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．９０ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６９－３．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５７－３．５０ （ｍ， １Ｈ）， ３．３９－３．３３ （ｍ， １Ｈ）， ２．８０－２．７０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７０－２．６０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６５－１．２０ （ｍ， ６１Ｈ）， ０．８９－０．８５ （ｍ， ９Ｈ）。

【0136】

実施例４

【化42】

【0137】

ステップ１）

【化43】

ＮａＨ（３．６３ｇ、０．０９１ｍｏｌ）を秤量してＤＭＦ（２００ｍＬ）に溶解し、アルゴンガス保護し、０℃に冷却した。４－２（１０ｇ、０．０７６ｍｏｌ）を数回に分けて系に加え、室温で攪拌した。４－１（１９．５ｇ、０．０７６ｍｏｌ）を反応に加え、室温で一晩撹拌した。水１００ｍＬを加え、酢酸エチル０．５Ｌ×２で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過、減圧濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝６：１）により、無色の油状物５．３０ｇを得て、収率は２２．３％であった。
ＭＳ：３０９．２［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．４０－７．２５ （ｍ， ５Ｈ）， ４．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６９－１．５５ （ｍ， ４Ｈ）， １．４８－１．４０ （ｍ， ２Ｈ）， １．４１ （ｓ， ６Ｈ）， １．２７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0138】

ステップ２）

【化44】

化合物４－３（５．２０ｇ、０．０１７ｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に溶解し、氷水浴下でＮａＯＨ（２．６９ｇ、０．０６７ｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液を加え、室温で一晩撹拌した。メタノールを減圧下で蒸発し、水１００ｍＬを加え、１Ｎの塩酸でｐＨ値（３～４）を調整した。酢酸エチル４００ｍＬ×２で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過し、減圧濃縮して無色の油状物４．８０ｇを得て、収率は１００％であった。
ＭＳ：２８１．２ ［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３５－７．２５ （ｍ， ５Ｈ）， ４．５１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５０－３．４２ （ｍ， ４Ｈ）， １．７０－１．５０ （ｍ， ４Ｈ）， １．５０－１．４０ （ｍ， ８Ｈ）。

【0139】

ステップ３）

【化45】

４－４（３．２９ｇ、０．０１２ｍｏｌ）を秤量してＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、４－５（２．７０ｇ、０．０１１ｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２．７０ｇ、０．０１４ｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２．８６ｇ、０．０２３ｍｏｌ）、アルゴンガスで置換し、室温で一晩撹拌した。反応液を減圧下で濃縮乾固し、粗製品を順相カラムクロマトグラフィーで精製し（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１）、無色の油状物４．７０ｇを得て、収率は８５．７％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．３６－７．２０ （ｍ， ５Ｈ）， ４．９３－４．８０ （ｍ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７０－１．５０ （ｍ， ８Ｈ）， １．４７－１．３９ （ｍ， ８Ｈ）， １．３０－１．１５ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0140】

ステップ４）

【化46】

化合物４－６（４．５０ｇ、８．６７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（９０ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（０．９０ｇ、２０ｗｔ％）を加え、水素ガスバルーンで置換し、室温で５ｈ撹拌した。反応液を減圧下で濃縮乾固し、粗製品を順相カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により、無色の油状物３．１９ｇを得て、収率は８５．７％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９３－４．８６ （ｍ， １Ｈ）， ３．６５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７０－１．５０ （ｍ， ８Ｈ）， １．４８－１．４０ （ｍ， ８Ｈ）， １．３２－１．２５ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0141】

ステップ５）

【化47】

化合物４－７（１．５０ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解し、ＣＢｒ_４（１．１６ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ_３（０．９２ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）を順次加え、アルゴンガスで保護し、室温で一晩撹拌した。試料をＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝６：１）で検出し、出発原料を完全に反応した。ろ過し、反応液を減圧下で濃縮乾固し、粗製品を順相カラムクロマトグラフィーで精製し（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１）、無色の油状物１．５０ｇを得て、収率は８７．２％であった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９２－４．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．４３－３．３５ （ｍ， ４Ｈ）， １．９３－１．８０ （ｍ， ２Ｈ）， １．６５－１．５０ （ｍ， ８Ｈ）， １．４１ （ｓ， ６Ｈ）， １．３６－１．２４ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0142】

ステップ６）

【化48】

４－８（１．２５ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を秤量してＥｔＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、エタノールアミン（４．６７ｇ、７６．５ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンガスで保護し、２５℃で一晩撹拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、飽和塩化ナトリウム溶液（１００ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により、無色の油状物０．８４ｇを得て、収率は７１．３％であった。
ＭＳ Ｃａｌｃ：４７１．４，Ｆｏｕｎｄ： ４７２．４［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９１－４．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．６８ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６２－１．５２ （ｍ， ８Ｈ）， １．４５－１．３６ （ｍ， ８Ｈ）， １．５５－１．２４ （ｍ， ２４Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。

【0143】

ステップ７）

【化49】

４－９（０．８４ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を秤量してＥｔＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、４－１０（０．８１ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．４６ｇ、３．５６ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンガスで保護し、８０℃で一晩撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）により、無色の油状物０．６１ｇを得て、収率は４６．２％であった。
ＭＳ：７４０．７［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．９０－４．８６ （ｍ， １Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７７ （ｓ， ２Ｈ）， ３．３８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９０－２．７０ （ｍ， ６Ｈ）， ２．３１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７０－１．２０ （ｍ， ６４Ｈ）， ０．９０－０．８５ （ｍ， ９Ｈ）。

【0144】

比較例１

【化50】

【0145】

ＷＯ２０１７０４９２４５における方法を参照して調製して得た。

【0146】

試験例１：脂質粒子組成物の送達能力
１．１ 調製方法
化合物１、化合物２、及び比較化合物１をそれぞれエタノール溶液に溶解し、それぞれエタノールに溶解したＤＳＰＣ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ溶液と５０：１０：３８．５：１．５のモル比で混合してエタノール脂質溶液を調製した。ヒト成長因子をコードするｍＲＮＡをクエン酸塩緩衝液に溶解し、ｍＲＮＡ水溶液を調製した。リポソームは、エタノール脂質溶液とｍＲＮＡ水溶液とをマイクロ流体で混合し、総脂質とｍＲＮＡとの重量比が約２０：１となるように調製した。エタノールをＰＢＳ溶液で透析して除去し、ｍＲＮＡを被包したリ脂質ナノ粒子組成物を得た。

【0147】

１．２ 脂質粒子組成物の特徴付け
特性付け方法
動的光散乱を使用して、１７３°後方散乱検出モードでＭａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳを使用して、脂質ナノ粒子のナノサイズ及び多分散性係数ＰＤＩを検出した。

【0148】

Ｑｕａｎｔ－ｉＴ ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ ＲＮＡ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ ＲＮＡ定量検出キットを用いて、リポソーム被包率を検出した。

【0149】

脂質ナノ粒子中のカチオンのｐＫａは、６－（ｐ－トルイジン）－２－ナフタレンスルホン酸ナトリウム塩（ＴＮＳ）に基づく蛍光分析を使用して検出した。１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、１０ｍＭのホウ酸ナトリウム、及びｐＨ３～１１．５の異なるｐＨの緩衝液を調製した。３００μＭのＴＮＳ溶液を調製し、緩衝液に加えた。脂質ナノ粒子をそれぞれ異なるｐＨの緩衝液に加え、十分に混合した後、蛍光プレートリーダーを用いて室温で励起波長３２５ｎｍ、発光波長４３５ｎｍの蛍光強度を検出した。蛍光データに対してフィッティング分析を行い、ｐＫａは、半最大蛍光強度を生じるｐＨである。相関データは表１に示される。

【0150】

【表1】

【0151】

１．３ タンパク質発現量の検出による脂質粒子組成物の体内での送達能力の評価
体内でｍＲＮＡを効率的に送達し、対応するコードされたタンパク質を発現する脂質ナノ粒子を評価するために、肝細胞成長因子を発現するｍＲＮＡで被包された脂質ナノ粒子を、６～８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃ大腿筋部位に０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で注射した。２４時間後に注射部位の筋肉を摘出し、磨砕溶解後、ＥＬＩＳＡキットを用いて肝細胞成長因子タンパク発現量（ｐｇ／ｍｇ）、即ち、単位筋肉組織総タンパク量に対応する肝細胞成長因子タンパク量を検出した。平均タンパク質濃度の計算を、各化合物に対応する脂質ナノ粒子の少なくとも３セットについて繰り返した。

【0152】

比較化合物１に対応する脂質ナノ粒子を対照として、化合物１及び２に対応する脂質ナノ粒子の体内筋肉注射によるｍＲＮＡ送達効率を検出した。相関データは図１及び表２に示される。

【0153】

図１において、＊即ち統計学的に０．０１＜Ｐ＜０．０５は、群間に統計学的に有意差があることを示し、＊＊即ち統計学的にＰ＜０．０１、＊＊＊即ち統計学的にＰ＜０．００１は、極めて有意差があることを示す。

【0154】

【表2】

【0155】

結論：表２及び図１に示されるタンパク質発現量のように、化合物１に対応する脂質ナノ粒子の体内筋肉注射によるｍＲＮＡ送達効果は、比較化合物１に比べて顕著に優れていることが分かる。化合物１は、化合物２よりも同様に顕著に優れている。化合物１に対応する脂質ナノ粒子がｍＲＮＡを筋肉部位に効率よく送達し、且つタンパク質を発現できることが示唆された。

【0156】

試験例２：脂質粒子組成物の体内尾静脈内注射によるｍＲＮＡ送達効率の評価
体内でｍＲＮＡを効率的に送達し、対応するコードされたタンパク質を発現する脂質ナノ粒子を評価するために、ルシフェラーゼを発現するｍＲＮＡで被包された脂質ナノ粒子を、６～８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃ尾静脈に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で注射した。６時間後、各マウスにルシフェラーゼ基質を腹腔内に注射し、ＩＶＩＳ小動物光学バイオイメージング装置（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅ）を用いてマウスの蛍光画像を撮影し、マウス全身の蛍光強度を統計した。蛍光強度の高さはルシフェラーゼタンパク質の発現量の高さ、即ち、脂質ナノ粒子の体内でのｍＲＮＡ送達効率を反映していることを示している。平均蛍光強度は、各化合物に対応する脂質ナノ粒子の少なくとも３セットについて生物学的反復計算を行い、データを表３及び図２に示した。図２においての蛍光強度は、即ちＩＶＩＳ小動物光学バイオイメージング装置で撮影統計したマウス全身の蛍光強度である。蛍光強度の高さは、ルシフェラーゼタンパク質発現量の高さ、即ち脂質ナノ粒子の体内でのｍＲＮＡ送達効率の高さを示す。

【0157】

比較化合物１に対応する脂質ナノ粒子を対照として、化合物１、化合物３及び化合物４に対応する脂質ナノ粒子のマウスの尾静脈内注射によるｍＲＮＡ送達効率を検出した。

【0158】

図２において、＊即ち統計学的に０．０１＜Ｐ＜０．０５は、群間に統計学的に有意差があることを示し、＊＊即ち統計学的にＰ＜０．０１、＊＊＊即ち統計学的にＰ＜０．００１は、極めて有意差があることを示す。

【0159】

【表3】

【0160】

結論：表３及び図２に示される蛍光強度のように、比較化合物１に比べて、化合物１に対応する脂質ナノ粒子の尾静脈内注射によるｍＲＮＡ送達効率が顕著に優れており、化合物１は比較化合物１に対応する脂質ナノ粒子タンパク質発現量の２．１倍であった。同時に、化合物１に対応する脂質ナノ粒子は比較化合物３よりも顕著に優れており、化合物４に対応する脂質ナノ粒子は比較化合物１よりも顕著に優れている。

【0161】

試験例３：脂質ナノ粒子の体内送達における組織標的指向性の評価
脂質ナノ粒子の体内送達における標的指向性を評価するために、肝細胞成長因子を発現するｍＲＮＡを被包した脂質ナノ粒子を、６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃ雌マウス尾静脈に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で注射した。組織サンプルを、脂質ナノ粒子注射後の１時間、２時間、４時間、６時間、２４時間及び４８時間にそれぞれ収集し、異なる組織における脂質ナノ粒子の分布を評価するために、ＬＣ－ＭＳ質量分析法を用いて、それぞれの時点での肝臓及び脾臓におけるカチオン性脂質分子の濃度を検出した。組織中の平均カチオン性脂質濃度は、各化合物に対応する脂質ナノ粒子の少なくとも３セットについて生物学的反復計算された。

【0162】

結論：図３に示されるように、肝臓内の様々な時点で採取されたサンプルは、比較化合物１に比べて、化合物１の濃度が顕著に高い。図４に示されるように、脾臓内の化合物１の濃度は、比較化合物１に比べて顕著に低い。化合物１に対応する脂質ナノ粒子は肝臓部により多く分布し、脾臓内により少なく分布することが示唆された。

【0163】

薬物動態パラメータから、投与後４８時間の組織中のカチオン性脂質の総濃度を計算して、肝臓及び脾臓内の脂質ナノ粒子の分布を評価した。表は複数のセットについて算出した平均値であり、表４に示されるように、化合物１の濃度は、肝臓中で比較化合物１に比べて顕著に高いが、脾臓中で比較化合物１に比べて顕著に低い。

【0164】

従って、化合物１に対応する脂質ナノ粒子は、比較化合物１に比べて、肝組織をよりよく標的にして核酸を送達することができる。

【0165】

図３及び図４において、＊即ち統計学的に０．０１＜Ｐ＜０．０５は、群間に統計学的に有意差があることを示し、＊＊即ち統計学的にＰ＜０．０１、＊＊＊即ち統計学的にＰ＜０．００１は、極めて有意差があることを示す。

【0166】

【表4】

【0167】

試験例４：脂質ナノ粒子の体内薬物動態の評価
脂質ナノ粒子の体内送達における標的指向性を評価するために、肝細胞成長因子を発現するｍＲＮＡを被包した脂質ナノ粒子を、６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃ雌マウス尾静脈に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で注射した。脂質ナノ粒子注射後の１時間、２時間、４時間、６時間、２４時間及び４８時間に血漿、肝臓及び脾臓サンプルを採取し、脂質ナノ粒子の代謝速度及び体内のクリアランス速度を評価するために、ＬＣ－ＭＳ質量分析法を用いて血漿中のカチオン性脂質分子の濃度をそれぞれの時点で検出した。組織中の平均カチオン性脂質濃度は、各化合物に対応する脂質ナノ粒子の少なくとも３セットについて生物学的反復計算された。

【0168】

結論：図５に示されるように、１時間の血漿中の化合物１の濃度は１１６３ｎｇ／ｍＬであり、濃度が６１７０ｎｇ／ｍＬである比較化合物１よりも顕著に低く、比較化合物１の残存濃度は化合物１の５．３倍であり、化合物１に対応する脂質ナノ粒子が標的組織に迅速に分布でき、それにより血液系内の滞留を減少させることを示している。４時間で化合物１は完全に除去されたが、比較化合物１は６時間でもまだ濃度を検出することができた。化合物１は、血液系におけるより速いクリアランス、及び体内におけるより良好な代謝を有することを示した。

【0169】

薬物動態パラメータから、組織中のカチオン性脂質の半減期を算出し、化合物１の肝臓における平均半減期は３４．２時間であり、比較化合物１の半減期６１．１時間に比べて顕著に低い。同様に脾臓における化合物１の半減期は３１．９時間であり、比較化合物１の半減期３７．９時間に比べて顕著に低い。化合物１が組織においてより良好に分解及び代謝されることが示唆された。一方、炎症などの人体に対する脂質ナノ粒子の副作用は、主にカチオン性脂質に由来する。化合物１は、より速い代謝分解を可能にし、比較化合物１に比べてより優れた生体安全性を有する。

【0170】

図５において、＊即ち統計学的に０．０１＜Ｐ＜０．０５は、群間に統計学的に有意差があることを示し、＊＊即ち統計学的にＰ＜０．０１、＊＊＊即ち統計学的にＰ＜０．００１は、極めて有意差があることを示す。

【0171】

【表5】

【0172】

試験例５：脂質ナノ粒子の体内免疫原性の評価
哺乳動物の体内への外来物質の進入は、先天性免疫応答を引き起こし、サイトカインの産生を促進する。これらの外来物質は、体内に取り込まれると炎症反応を引き起こし、発熱、浮腫などの生体の不良反応を引き起こしやすい。従って、マウスの脂質ナノ粒子の注射後の血中サイトカイン濃度、例えばインターロイキン６（ＩＬ－６）を評価することにより、体内での脂質ナノ粒子の免疫原性を評価する。より低いサイトカイン濃度は、脂質ナノ粒子がより低い免疫原性を有すること、即ちより優れた生体安全性を有することを示している。

【0173】

６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃ雌マウスにルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現するｍＲＮＡを被包した脂質ナノ粒子を０．５ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈により注射し、６時間後に採血して血清を分離した。血清中のＩＬ－６濃度を、マウスＩＬ－６ ＥＬＩＳＡキットを用いて検出した。血清中のＩＬ－６濃度を、各化合物に対応する脂質ナノ粒子の少なくとも３セットについて生物学的に反復検出し、平均値を計算した。

【0174】

結論：表６及び図６に示されるように、化合物１及び化合物４に対応する脂質ナノ粒子をそれぞれ注射したマウス血清中のＩＬ－６濃度が比較化合物１よりも顕著に低いことが分かる。化合物１及び４に対応する脂質ナノ粒子は、比較化合物１に対応する脂質ナノ粒子と比較して、体内でより低い免疫原性、より良好な生物学的安全性を有することが示唆された。

【0175】

図６において、＊即ち統計学的に０．０１＜Ｐ＜０．０５は、群間に統計学的に有意差があることを示し、＊＊即ち統計学的にＰ＜０．０１、＊＊＊即ち統計学的にＰ＜０．００１は、極めて有意差があることを示す。

【0176】

【表6】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【国際調査報告】