特表 2025-502269 シュワン細胞特異的プロモーター

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-24

(54)【発明の名称】シュワン細胞特異的プロモーター

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/11 20060101AFI20250117BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20250117BHJP

   C12N 15/09 20060101ALI20250117BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20250117BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20250117BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250117BHJP

【ＦＩ】

C12N15/11 Z ZNA

C12N15/85 Z

C12N15/09 110

A61K48/00

A61P25/00

A61P43/00 101

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024542010

(86)(22)【出願日】2023-01-12

(85)【翻訳文提出日】2024-09-04

(86)【国際出願番号】 KR2023000569

(87)【国際公開番号】W WO2023136624

(87)【国際公開日】2023-07-20

(31)【優先権主張番号】10-2022-0005303

(32)【優先日】2022-01-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516355531

【氏名又は名称】ツールゲン インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＴＯＯＬＧＥＮ ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】110000877

【氏名又は名称】弁理士法人ＲＹＵＫＡ国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ソン、ドン ウー

(72)【発明者】

【氏名】リー、ヒェリム

(72)【発明者】

【氏名】オー、ヒェ－キュン

(72)【発明者】

【氏名】チョイ、ベオム セオク

(72)【発明者】

【氏名】リー、キュ ジュン

(72)【発明者】

【氏名】ゴ、ナン イェオン

(72)【発明者】

【氏名】リー、ジャエ ヨウン

【テーマコード（参考）】

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZB211

(57)【要約】

本発明は、シュワン細胞特異的プロモーター及びその使用に関する。より具体的には、本発明は、シュワン細胞で特異的に機能する人工的に改変されたミニマルプロモーターに関するものであり、人工的に改変されたミニマルプロモーターは、ＭＰＺ（ミエリンタンパク質ゼロ又はＰ０）プロモーターに由来する。また、本発明は、シュワン細胞特異的プロモーターを使用したベクター、及び、それを使用してシュワン細胞関連疾患を治療するための方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号３；配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１３；配列番号１４；及び、配列番号３、４、８、９、１３、及び１４のうちの１つと少なくとも９０％以上の相同性を有する配列
から選択される配列を有するシュワン細胞特異的プロモーター。

【請求項2】

シュワン細胞特異的プロモーター；及び
目的遺伝子
を備え、
前記シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３；配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１３；配列番号１４；及び、配列番号３、４、８、９、１３、及び１４のうちの１つと少なくとも９０％以上の相同性を有する配列からなる群から選択される配列を有し、
前記目的遺伝子は、シュワン細胞で発現するように構成された遺伝子、又は、シュワン細胞で発現するように構成されたタンパク質をコードする核酸であり、
前記目的遺伝子は、前記シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されている、
シュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項3】

前記シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクター又は非ウイルスベクターである、
請求項２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項4】

前記ウイルスベクターは、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ））ベクター、レンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）：ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒａｌ（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ））ベクター、ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒａｌ（ｐｏｘｖｉｒｕｓ））ベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒａｌ（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ））ベクターからなる群から選択される１つ又は複数のウイルスベクターである、
請求項３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項5】

前記シュワン細胞特異的発現ベクターは更に、１つ又は複数の調節／制御エレメントを備える、
請求項２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項6】

前記調節／制御エレメントは、エンハンサー、人工イントロン、ポリアデニル化シグナル、及び／又はＷＰＲＥである、
請求項５に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項7】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記ポリアデニル化シグナルを備え、
前記ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡである、
請求項６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項8】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記人工イントロン及び前記ＷＰＲＥを備え、
前記人工イントロンは、ＭＶＭイントロンであり、
前記ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３である、
請求項６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項9】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記人工イントロン、前記ＷＰＲＥ、及び前記ポリアデニル化シグナルを備え、
前記人工イントロンは、ＭＶＭイントロンであり、
前記ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であり、
前記ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡである、
請求項６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項10】

前記目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に操作するために使用されるタンパク質をコードする核酸である、
請求項２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項11】

遺伝子を人工的に操作するための前記タンパク質は、Ｃａｓタンパク質である、
請求項１０に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項12】

前記Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質である、
請求項１１に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項13】

前記Ｃａｓ９タンパク質は、化膿連鎖球菌Ｃａｓ９（ＳｐＣａｓ９）タンパク質、黄色ブドウ球菌Ｃａｓ９（ＳａＣａｓ９）タンパク質、カンピロバクター・ジェジュニＣａｓ９（ＣｊＣａｓ９）タンパク質、又はスタフィロコッカス・アウリクラーリスＣａｓ９（ＳａｕｒｉＣａｓ９）タンパク質である、
請求項１２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項14】

前記目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患を治療すること（の治療）に関連付けられた遺伝子である、
請求項２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項15】

前記シュワン細胞に関連する疾患を治療することに関連付けられた前記遺伝子は、Ｃｘ３２（コネキシン３２）遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２（ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２）遺伝子、ＭＰＺ（ミエリンタンパク質ゼロ）遺伝子、ＥＧＲ２（初期増殖応答２）遺伝子、ＧＤＡＰ１（ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１）遺伝子、ＮＤＲＧ１（Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１）遺伝子、又はＰＭＰ２２（末梢ミエリンタンパク質２２）遺伝子である、
請求項１４に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項16】

請求項１０に記載の発現ベクターを備える組成物であって、
前記発現ベクターは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸を有し、
前記組成物は更に、ガイドＲＮＡ又は前記ガイドＲＮＡをコードする核酸を備える、
組成物。

【請求項17】

前記ガイドＲＮＡは、シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす遺伝子を標的とし、
前記シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす前記遺伝子は、Ｃｘ３２（コネキシン３２）遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２（ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２）遺伝子、ＭＰＺ（ミエリンタンパク質ゼロ）遺伝子、ＥＧＲ２（初期増殖応答２）遺伝子、ＧＤＡＰ１（ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１）遺伝子、ＮＤＲＧ１（Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１）遺伝子、又はＰＭＰ２２（末梢ミエリンタンパク質２２）遺伝子である、
請求項１６に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、シュワン細胞特異的プロモーター及びその使用に関する。より具体的には、本開示は、シュワン細胞で特異的に機能する人工的に改変されたミニマルプロモーターに関する。人工的に改変されたミニマルプロモーターは、ミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺ又はＰ０）のプロモーターに由来する。追加的に、本開示は、シュワン細胞特異的プロモーターを使用したベクター、及び、それを使用してシュワン細胞に関連する疾患を治療する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

シュワン細胞（以降、ＳＣと略記）又は神経髄鞘細胞（ｎｅｕｒｏｌｅｍｍｏｃｙｔｅ）は、末梢神経系の基本的なグリア細胞である。グリア細胞はニューロンをサポートする。ミエリンを持つ軸索では、シュワン細胞がミエリン鞘を形成する。脊椎動物の神経系はミエリン鞘によって絶縁されており、これにより軸索の膜容量が維持される。

【0003】

シャルコー・マリー・トゥース（Ｃｈａｒｃｏｔ－Ｍａｒｉｅ－Ｔｏｏｔｈ：ＣＭＴ）病は遺伝的疾患である。シャルコー・マリー・トゥース（ＣＭＴ）病は、手足の筋肉が徐々に弱まる病気である。これは、末梢神経系でミエリン鞘の形成を担うシュワン細胞の異常から起こる。ＣＭＴ病の病型のうち、シャルコー・マリー・トゥース１Ａ型（Ｃｈａｒｃｏｔ－Ｍａｒｉｅ－Ｔｏｏｔｈ ｔｙｐｅ １Ａ：ＣＭＴ１Ａ）は、末梢神経系で最も頻繁に発生する遺伝的疾患のうちの１つである。

【0004】

ＣＭＴ１Ａは全てのＣＭＴ症例の半分より多くを占め、ＣＭＴ１症例のおよそ７０％を占め、ＣＭＴの発生率は１／２５００人である。ＣＭＴ１Ａは、筋肉の衰弱及び喪失、反射神経の低下、末梢性感覚障害、手足の変形、神経伝導速度（ｎｅｒｖｅ ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ ｖｅｌｏｃｉｔｙ：ＮＣＶ）の低下、及び、タマネギ様構造の形成を伴う肥大性節性脱髄及び再ミエリン化などの病理学的性質を引き起こす。

【0005】

近年、ＣＭＴ１Ａなどのシュワン細胞機能障害によって引き起こされる疾患に対して遺伝子療法技術が適用されている。シュワン細胞を標的とする遺伝子療法技術は、ＣＭＴ病に加えて、運動ニューロン疾患（ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ：ＭＮＤ）などのシュワン細胞に関連する他の多くの疾患に適用することができ、遺伝的要因以外の要因によって引き起こされる疾患にも適用することができる。これらの疾患のほとんどの原因はそれぞれ異なり、ほとんど理解されていないため、ウイルスベクターを使用してこれらの疾患を標的とすることが有益であるかもしれない。ＣＭＴのような脱髄性ニューロパシーを含むシュワン細胞随伴疾患の治療成績を改善するには、依然として、これらの病気を標的とする方法を向上させる必要がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本開示の目的の１つは、シュワン細胞特異的プロモーターを提供することである。

【0007】

本開示の別の目的は、シュワン細胞特異的発現ベクターを提供することである。

【0008】

本開示の更に別の目的は、シュワン細胞特異的発現ベクターを使用してシュワン細胞に関連する疾患を治療する方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本開示は、シュワン細胞特異的プロモーターを提供する。

【0010】

シュワン細胞特異的プロモーターは、以下から選択される配列を含んでよい。

【0011】

配列番号３；配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１３；配列番号１４；及び、配列番号３、４、８、９、１３、及び１４のうちの１つと少なくとも７０％の相同性を有する配列。

【0012】

本開示は、シュワン細胞特異的発現ベクターを提供する。

【0013】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター；及び目的遺伝子を含んでよい。

【0014】

目的遺伝子は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。

【0015】

シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３；配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１３；配列番号１４；及び、配列番号３、４、８、９、１３、及び１４のうちの１つと少なくとも７０％の相同性を有する配列から選択される配列を含んでよい。

【0016】

目的遺伝子は、シュワン細胞で発現するように構成された遺伝子、又は、シュワン細胞で発現させるタンパク質をコードする核酸であってよい。本明細書では、目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するために使用されるタンパク質をコードする核酸であってよい。例えば、遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質は、Ｃａｓタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒ ｎｕｃｌｅａｓｅ：ＺＦＮ）、又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ｔｒａｎｓｃｔｉｐｔｉｏｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ－ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｎｕｃｌｅａｓｅ：ＴＡＬＥＮ）であってよい。本明細書では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質であってよい。例えば、Ｃａｓ９タンパク質は、化膿連鎖球菌Ｃａｓ９（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｃａｓ９：ＳｐＣａｓ９）タンパク質、黄色ブドウ球菌Ｃａｓ９（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ Ｃａｓ９：ＳａＣａｓ９）タンパク質、カンピロバクター・ジェジュニＣａｓ９（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ Ｃａｓ９：ＣｊＣａｓ９）タンパク質、又はスタフィロコッカス・アウリクラーリスＣａｓ９（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｉｃｕｌａｒｉｓ Ｃａｓ９：ＳａｕｒｉＣａｓ９）タンパク質であってよい。本明細書では、遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする遺伝子を発現させて、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子を編集することができる。これを使用することによって、タンパク質は、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子へのノックアウト効果を誘発することができる。

【0017】

また、目的遺伝子がシュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子の役割を果たすので、必要に応じて、本開示のプロモーターを使用してシュワン細胞で目的遺伝子を過剰発現させることができる。

【0018】

一例では、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子は、コネキシン３２（ｃｏｎｎｅｘｉｎ３２：Ｃｘ３２）遺伝子、ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２（ＳＨ３ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｔｅｔｒａｔｒｉｃｏｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔ ２：ＳＨ３ＴＣ２）遺伝子、ミエリンタンパク質ゼロ（ｍｙｅｌｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｚｅｒｏ：ＭＰＺ）遺伝子、初期増殖応答２（ｅａｒｌｙ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ２：ＥＧＲ２）遺伝子、ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１（ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １：ＧＤＡＰ１）遺伝子、Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１（Ｎ－Ｍｙｃ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ １：ＮＤＲＧ１）遺伝子、又は末梢ミエリンタンパク質２２（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｍｙｅｌｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ２２：ＰＭＰ２２）遺伝子であってよい。疾患治療効果を得るために、必要に応じて遺伝子をノックアウト又は過剰発現させることができる。

【0019】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクター又は非ウイルスベクターを含んでよい。本明細書では、ウイルスベクターは、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ））ベクター、レンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）：ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒａｌ（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ））ベクター、ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒａｌ（ｐｏｘｖｉｒｕｓ））ベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒａｌ（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ））ベクターからなる群から選択される１つ又は複数のウイルスベクターであってよい。

【0020】

シュワン細胞特異的発現ベクターは更に、１つ又は複数の調節／制御エレメントを含んでよい。本明細書では、調節／制御エレメントは、エンハンサー、人工イントロン、ポリアデニル化シグナル、及び／又はＷＰＲＥであってよい。別の例では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、ポリアデニル化シグナルを含んでよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。更に別の例では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、人工イントロン及びＷＰＲＥを含んでよい。本明細書では、人工イントロンはＭＶＭイントロンであってよく、ＷＰＲＥはＷＰＲＥ３であってよい。更に別の例では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、人工イントロン、ＷＰＲＥ、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。本明細書では、人工イントロンはＭＶＭイントロンであってよく、ＷＰＲＥはＷＰＲＥ３であってよく、ポリアデニル化シグナルはｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。

【0021】

本開示は、シュワン細胞特異的発現ベクターを含む組成物を提供する。

【0022】

組成物は、上述したシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。

【0023】

本開示は、シュワン細胞に関連付けられた疾患を治療する方法を提供する。

【0024】

方法は、対象に組成物を導入（又は送達）することを含んでよい。

【0025】

組成物は、シュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。本明細書では、シュワン細胞特異的発現ベクターは上述した通りである。

【0026】

対象は、シュワン細胞に関連付けられた疾患を持つヒト又は非ヒト動物であってよい。
（有利な効果）

【0027】

本開示は、シュワン細胞特異的プロモーター及びその使用に関する。本明細書に開示する技術を通じて、シュワン細胞特異的プロモーターを含むベクター及びその使用を提供することができる。また、シュワン細胞特異的プロモーターを含むベクターを使用して、シュワン細胞に関連する疾患を治療するための医薬組成物及び方法を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1】ラットシュワン細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターによるＣａｓ９の発現を示すグラフである。

【0029】

【図2】ラットシュワン細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターの制御下でのＣａｓ９の発現による、標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を示すグラフである。

【0030】

【図3】ヒトシュワン細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターによるＣａｓ９の発現を示すグラフである。

【0031】

【図4】Ｓ１６細胞における、改変されたＭＰＺプロモーターの制御下でのＣａｓ９の発現、及び、最適化されたｓｇＲＮＡベクターの発現による、標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を示すグラフである。

【0032】

【図5】ＲＴ４細胞における、改変されたＭＰＺプロモーターの制御下でのＣａｓ９の発現、及び、最適化されたｓｇＲＮＡベクターの発現による、標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を示すグラフである。

【0033】

【図6】Ｓ１６細胞における他のポリＡベクター及び改変されたＭＰＺプロモーターによるＣａｓ９の発現による、標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を示すグラフである。

【0034】

【図7】シングルＡＡＶパッケージングが可能な小型ＳａｕｒｉＣａｓ９、最適化されたエレメント（Ｉｎｔｒｏｎ、ＷＰＲＥ）、及びＲＴ４細胞における改変されたＭＰＺプロモーターの組み合わせによる、標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を示すグラフである。

【0035】

【図8】ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターの制御下でのＣａｓ９の発現による、標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を示すグラフである。

【0036】

【図9】異なる配列を持つｓｇＲＮＡ（表１）を使用した、ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターの制御下でのＣａｓ９の発現による、標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を示すグラフである。

【0037】

【図10】ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターによるｔｄＴｏｍａｔｏの発現を示すグラフである。

【0038】

【図11】ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞株へのｐＡＡＶ－ｔｄＴｏｍａｔｏ関連ベクターの形質転換のレベルを示すグラフである。

【0039】

【図12】図１２と図１３は、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ領域を標的とするｓｇＲＮＡ（表１）を発現させるベクターを、ＥＦＳプロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクター及びＩＥ２００プロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクターと共にラットの尾静脈にコトランスフェクトした後の、ラットの坐骨神経、腰神経、及び肝臓における遺伝子編集効率（インデル（ｉｎｄｅｌ））を示すグラフである。

【図13】図１２と図１３は、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ領域を標的とするｓｇＲＮＡ（表１）を発現させるベクターを、ＥＦＳプロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクター及びＩＥ２００プロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクターと共にラットの尾静脈にコトランスフェクトした後の、ラットの坐骨神経、腰神経、及び肝臓における遺伝子編集効率（インデル（ｉｎｄｅｌ））を示すグラフである。 （最良の形態）

【0040】

用語の定義

【0041】

本明細書で使用する用語の定義は以下の通りである。

【0042】

約

【0043】

本明細書で使用する「約」という用語は、基準となる数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量、又は長さに応じて３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％変化する数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量、又は長さを意味する。

【0044】

ベクター

【0045】

「ベクター」という用語は、特に指定しない限り、細胞内に遺伝子材料を輸送することができる全ての物質をまとめて指す。例えば、ベクターは、遺伝子材料、すなわち、細胞で発現させる目的遺伝子又は目的核酸、更に詳しくは、ＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓシステムのＣａｓタンパク質をコードする核酸、又は、シュワン細胞の機能に関与するタンパク質をコードする核酸を含む非ウイルスベクター又はウイルスベクターであってよいが、ベクターはこれらに限定されない。これらの用語は当業者によって認識される全ての意味を含み、文脈に応じて適宜解釈されてよい。

【0046】

ガイドＲＮＡ

【0047】

「ガイドＲＮＡ」という用語は、標的核酸に含まれる特定の配列をＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９複合体に認識させる機能を有するＲＮＡを指す。ガイドＲＮＡの組成物は、機能的に、１）足場部分、及び、２）ガイドドメイン部分に大別されてよい。足場部分は、Ｃａｓ９タンパク質と相互作用し、Ｃａｓ９タンパク質に結合して複合体を形成する部分である。足場部分は、Ｃａｓ９タンパク質が由来する微生物の種類によって決まる。ガイドドメイン部分は、標的核酸における所定の長さのヌクレオチド配列部分に相補的に結合することができる部分である。ガイドドメイン部分は、人工的に改変され得る配列であり、目的の標的ヌクレオチド配列によって決まる。また、これらの用語は、当業者によって認識される全ての意味を含み、文脈に応じて適宜解釈されてよい。

【0048】

機能可能に連結された

【0049】

「機能可能に連結された」という用語は、特定の構成要素が別の構成要素と機能的な関係で並べられ、それにより、特定の構成要素が意図した通りに機能できるように、特定の構成要素が別の構成要素に接続されていることを意味する。例えば、プロモーター配列がタンパク質Ａをコードする配列に機能可能に連結されているとき、この用語は、プロモーターがタンパク質Ａをコードする配列に連結されて、タンパク質Ａをコードする配列を細胞で転写する及び／又は発現させることを意味する。また、これらの用語は、当業者によって認識される全ての意味を含み、文脈に応じて適宜解釈されてよい。

【0050】

改変された

【0051】

「改変された」又は「人工的に改変された」という用語は、改変された又は人工的に改変された物質及び分子を、その組成が自然界に既に存在する物質及び分子と区別するために使用される。この用語は、その組成が自然界に既に存在する物質及び分子に対して人工的な改質が行われたことを意味する。例えば、「人工的に改変されたＭＰＺプロモーター」とは、自然界に存在するＭＰＺプロモーターを人工的に改質することによって得られるＭＰＺプロモーターを指す。この場合、自然界に存在するＭＰＺプロモーターの幾つかの配列が欠失する及び／又は他の配列で置換される可能性があるが、改変はこれに限定されない。また、これらの用語は、当業者によって認識される全ての意味を含み、文脈に応じて適宜解釈されてよい。

【0052】

特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術及び科学用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書で説明するものと同様又は同等の方法及び材料を本開示の実践又は試験で使用してよいが、適切な方法及び材料については後述する。本明細書で言及する全ての出版物、特許、及び他の参考文献が、全体として参照によって組み込まれる。追加的に、材料、方法、例、及び実験は一例に過ぎず、限定を意図するものではない。

【0053】

以降、本開示について説明する。

【0054】

近年、ＣＭＴ１Ａなどのシュワン細胞機能障害によって引き起こされる疾患を治療するための遺伝子療法技術が開発された。この遺伝子療法には、ウイルスベクターなどのベクター系が使用される。ベクター系の主な特徴は、シュワン細胞で目的遺伝子又は目的タンパク質を特異的に発現させるプロモーターを含むことである。

【0055】

現在、様々な研究者がシュワン細胞特異的プロモーターを開発している。特に、シュワン細胞で特異的に発現させるＭＰＺプロモーターが使用される。Ｋｌｅｏｐａｓ Ａ．Ｋｌｅｏｐａら（国際特許出願公開ＷＯ２０２０／２４５１６９）は、ＣＭＴ病を治療するために、ＭＰＺプロモーター又はミニＭＰＺプロモーターに機能可能に連結されたＧＪＢ１遺伝子を含むウイルスベクターを開発した。このとき、ＭＰＺプロモーターとしては、１．２ｋｂの全長プロモーターが使用されるか、又は、ＭＰＺ遺伝子の開始コドンの上流に存在する４１０ｂｐの部分配列を含むミニＭＰＺプロモーターが使用された。このように、ＭＰＺプロモーターはシュワン細胞特異的プロモーターとして使用される。

【0056】

一般に、ウイルスベクター系を使用した遺伝子療法の場合、ウイルスベクター系の容量には限りがある。容量はウイルスのパッケージング容量に応じて少なくとも２ｋｂ～５０ｋｂの範囲にあってよく、ウイルスの型に応じて変化してよい。従って、限られた容量を効果的に使用するには、小型プロモーターを使用する必要がある。

【0057】

従って、本発明者は、ＭＰＺプロモーターを使用して、シュワン細胞に対して特異的により高い発現効率を示し、且つ、より小さいサイズを有する、シュワン細胞特異的プロモーターを開発した。

【0058】

１．シュワン細胞特異的プロモーター

【0059】

一態様では、本開示は、シュワン細胞特異的プロモーターに関する。シュワン細胞特異的プロモーターは、シュワン細胞で特異的に機能するプロモーターである。これは、シュワン細胞特異的プロモーターを使用すると、シュワン細胞特異的プロモーターによって、シュワン細胞における目的遺伝子（例えば、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結された目的の遺伝子又はタンパク質をコードする核酸）の発現が他の細胞と比べて増加することを意味する。シュワン細胞特異的プロモーターは、上述したように、ＭＰＺプロモーターに由来する。特に、シュワン細胞特異的プロモーターは、ＭＰＺプロモーターに由来する人工的に改変されたプロモーターである。このとき、ＭＰＺプロモーターは、ヒト又はラットのＭＰＺ遺伝子のプロモーターであってよい。ラットＭＰＺ遺伝子のプロモーター（以降、ラットＭＰＺプロモーターと呼ぶ）は、以下の核酸配列を有する：ＧＴＴＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣ－３'（配列番号１）。

【0060】

ヒトＭＰＺ遺伝子のプロモーター（以降、ヒトＭＰＺプロモーターと呼ぶ）は、以下の核酸配列を有する：５'－ＡＣＴＡＴＧＣＣＴＧＧＣＡＴＡＡＡＣＴＴＣＡＴＴＴＡＴＴＡＡＡＧＴＴＴＡＴＴＴＴＧＴＣＴＴＴＡＡＴＣＴＣＴＣＡＴＡＴＡＡＣＴＴＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＴＴＴＧＴＡＣＴＣＣＣＡＧＣＡＴＴＴＴＧＴＴＣＡＴＴＡＣＴＡＡＡＧＧＡＡＧＴＧＴＣＡＴＧＧＣＴＴＡＴＴＡＴＡＣＴＴＧＡＴＴＧＴＴＧＡＴＧＧＧＴＴＴＧＴＣＣＴＣＴＧＡＴＣＴＴＣＣＣＡＴＣＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＡＡＡＣＣＡＡＡＴＴＴＴＣＡＡＣＴＣＣＴＴＧＣＴＧＧＡＡＧＧＡＣＴＴＡＡＴＴＴＴＴＡＴＴＣＣＴＣＴＣＴＣＴＡＴＴＡＣＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＡＴＡＣＴＴＴＡＣＡＴＡＴＴＧＣＴＧＧＣＡＣＴＴＡＡＴＡＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＧＣＣＴＴＧＡＡＡＴＡＡＡＴＴＧＡＡＡＴＧＧＡＣＴＴＡＡＡＣＡＧＣＡＧＣＡＴＧＡＡＧＣＡＣＴＧＡＡＧＧＡＣＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＣＧＧＡＡＡＧＧＴＣＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＧＡＡＡＡＡＣＴＴＣＴＧＴＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＴＣＧＣＡＣＡＧＧＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＧＴＧＣＧＧＧＧＡＡＡＡＡＡＡＣＴＣＣＣＡＴＡＧＧＡＣＴＴＧＧＴＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＴＣＴＧＴＡＡＴＧＣＡＧＣＣＣＡＣＡＴＴＡＧＡＧＧＡＧＡＴＡＡＣＡＧＧＧＧＡＴＡＴＣＣＴＡＴＴＴＴＣＡＧＡＧＴＴＣＴＣＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＣＴＣＣＣＴＣＴＡＧＴＴＣＣＴＡＧＧＧＣＴＧＴＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＣＴＣＴＣＡＧＧＣＡＡＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＴＴＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＡＡＴＴＧＡＧＧＴＴＣＣＡＴＡＴＣＴＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＧＡＡＧＴＧＴＧＴＣＴＧＴＧＴＣＣＣＴＧＴＴＴＴＴＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＡＡＣＡＴＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＣＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＧ－３'（配列番号２）。

【0061】

より具体的には、シュワン細胞特異的プロモーターは、ＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたＭＰＺプロモーターであってよい。

【0062】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＭＰＺプロモーターの５'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。

【0063】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＭＰＺプロモーターの３'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの３'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。

【0064】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス又はＣＡＡＴボックスを含んでよい。

【0065】

シュワン細胞特異的プロモーターは、転写開始部位（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｓｔａｒｔ ｓｉｔｅ：ＴＳＳ）を含んでよい。

【0066】

シュワン細胞特異的プロモーターは更に、５'末端にイントロンエンハンサー（ｉｎｔｒｏｎｉｃ ｅｎｈａｎｃｅｒ：ＩＥ）を含んでよい。このとき、ＩＥは、Ｅｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含んでよい。ＩＥは、ＭＰＺ遺伝子のイントロン１領域に存在するＥｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含む領域であってよい。ＩＥの配列長は、１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、又は３００～４００ｂｐの範囲にあってよい。

【0067】

シュワン細胞特異的プロモーターは更に、３'末端にイントロンエンハンサー（ＩＥ）を含んでよい。このとき、ＩＥは、Ｅｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含んでよい。ＩＥは、ＭＰＺ遺伝子のイントロン１領域に存在するＥｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含む領域であってよい。ＩＥの配列長は、１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、又は３００～４００ｂｐの範囲にあってよい。

【0068】

１－１．シュワン細胞特異的プロモーター（１）

【0069】

一実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターであってよい。

【0070】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの５'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。好ましくは、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの配列長は、２００～３００ｂｐの範囲にあってよい。

【0071】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス又はＣＡＡＴボックスを含んでよい。

【0072】

シュワン細胞特異的プロモーターは、転写開始部位（ＴＳＳ）を含んでよい。

【0073】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３に示す長さ３００ｂｐのヌクレオチド配列：５'－ＧＣＣＴＣＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＡＣＡＴＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＣＡＧＴＡＴＡＣＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＧＧＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＣＴＡＣＣＣＡＧＡＧＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣ－３'（配列番号３）を含んでよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を含んでよい。

【0074】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号４に示す長さ２００ｂｐのヌクレオチド配列：５'－ＣＡＧＡＧＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣ－３'（配列番号４）を含んでよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号４に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を含んでよい。

【0075】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターであってよい。

【0076】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの５'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。好ましくは、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの配列長は、２００～３００ｂｐの範囲にあってよい。

【0077】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス又はＣＡＡＴボックスを含んでよい。

【0078】

シュワン細胞特異的プロモーターは、転写開始部位（ＴＳＳ）を含んでよい。

【0079】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５に示す長さ３００ｂｐのヌクレオチド配列：５'－ＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＡＡＣＡＴＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＣＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＧ－３'（配列番号５）を含んでよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を含んでよい。

【0080】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号６に示す長さ２００ｂｐのヌクレオチド配列：５'－ＣＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＧ－３'（配列番号６）を含んでよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号６に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を含んでよい。

【0081】

１－２．シュワン細胞特異的プロモーター（２）

【0082】

一実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターを含み、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの５'末端に配置されるＩＥを含む。

【0083】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの５'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。好ましくは、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの配列長は、２００～３００ｂｐの範囲にあってよい。

【0084】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス又はＣＡＡＴボックスを含んでよい。

【0085】

シュワン細胞特異的プロモーターは、転写開始部位（ＴＳＳ）を含んでよい。

【0086】

ＩＥは、Ｅｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含んでよい。ＩＥは、ＭＰＺ遺伝子のイントロン１領域に存在するＥｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含む領域であってよい。ＩＥの配列長は、１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、又は３００～４００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、ＩＥの配列長は１００～２００ｂｐの範囲にあってよく、より好ましくは、ＩＥの配列長は１１７ｂｐであってよい。別の実施形態では、ＩＥは、配列番号７に示す長さ１１７ｂｐのヌクレオチド配列：５'－ＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＧＴＣＴＡＴＡＡＴＴＧＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＡＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＴＧＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＧＴＧＧＧＣＧ－３'（配列番号７）を含んでよい。代替的に、ＩＥは、配列番号７に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を含んでよい。

【0087】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号７に示す長さ１１７ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号３に示す長さ３００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの５'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８に示すヌクレオチド配列：５'－ＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＧＴＣＴＡＴＡＡＴＴＧＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＡＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＴＧＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＧＴＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＡＣＡＴＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＣＡＧＴＡＴＡＣＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＧＧＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＣＴＡＣＣＣＡＧＡＧＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣ－３'（配列番号８）を含んでよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は４１７ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0088】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号７に示す長さ１１７ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号４に示す長さ２００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの５'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号９に示すヌクレオチド配列：５'－ＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＧＴＣＴＡＴＡＡＴＴＧＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＡＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＴＧＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＡＧＡＧＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣ－３'（配列番号９）を含んでよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は３１７ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号９に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0089】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターを含み、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの５'末端に配置されるＩＥを含む。

【0090】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの５'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。好ましくは、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの配列長は、２００～３００ｂｐの範囲にあってよい。

【0091】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス又はＣＡＡＴボックスを含んでよい。

【0092】

シュワン細胞特異的プロモーターは、転写開始部位（ＴＳＳ）を含んでよい。

【0093】

ＩＥは、Ｅｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含んでよい。ＩＥは、ＭＰＺ遺伝子のイントロン１領域に存在するＥｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含む領域であってよい。ＩＥの配列長は、１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、又は３００～４００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、ＩＥの配列長は１００～２００ｂｐの範囲にあってよく、より好ましくは、ＩＥの配列長は１２３ｂｐであってよい。更に別の実施形態では、ＩＥは、配列番号１０に示す長さ１２３ｂｐのヌクレオチド配列：５'－ＧＡＣＡＡＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＡＧＡＡＣＡＡＡＡＡＧＧＴＣＴＡＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＧＴＧＴＧＧＧＴＡ－３'（配列番号１０）を含んでよい。代替的に、ＩＥは、配列番号１０に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を含んでよい。

【0094】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１０に示す長さ１２３ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号５に示す長さ３００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの５'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１１に示すヌクレオチド配列：５'－ＧＡＣＡＡＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＡＧＡＡＣＡＡＡＡＡＧＧＴＣＴＡＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＧＴＧＴＧＧＧＴＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＡＡＣＡＴＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＣＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＧ－３'（配列番号１１）を含んでよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は４２３ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１１に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0095】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１０に示す長さ１２３ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号６に示す長さ２００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの５'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１２に示すヌクレオチド配列：５'－ＧＡＣＡＡＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＡＧＡＡＣＡＡＡＡＡＧＧＴＣＴＡＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＧＴＧＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＧ－３'（配列番号１２）を含んでよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は３２３ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１２に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0096】

１－３．シュワン細胞特異的プロモーター（３）

【0097】

一実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターを含み、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの３'末端に配置されるＩＥを含む。

【0098】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの５'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。好ましくは、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの配列長は、２００～３００ｂｐの範囲にあってよい。

【0099】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス又はＣＡＡＴボックスを含んでよい。

【0100】

シュワン細胞特異的プロモーターは、転写開始部位（ＴＳＳ）を含んでよい。

【0101】

ＩＥは、Ｅｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含んでよい。ＩＥは、ＭＰＺ遺伝子のイントロン１領域に存在するＥｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含む領域であってよい。ＩＥの配列長は、１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、又は３００～４００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、ＩＥの配列長は１００～２００ｂｐの範囲にあってよく、より好ましくは、ＩＥの配列長は１１７ｂｐであってよい。別の実施形態では、ＩＥは、配列番号７に示す長さ１１７ｂｐのヌクレオチド配列であってよい。代替的に、ＩＥは、配列番号７に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0102】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号７に示す長さ１１７ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号３に示す長さ３００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの３'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３に示すヌクレオチド配列：５'－ＧＣＣＴＣＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＡＣＡＴＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＣＡＧＴＡＴＡＣＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＧＧＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＣＴＡＣＣＣＡＧＡＧＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＧＴＣＴＡＴＡＡＴＴＧＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＡＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＴＧＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＧＴＧＧＧＣＧ－３'（配列番号１３）を含んでよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は４１７ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0103】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号７に示す長さ１１７ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号４に示す長さ２００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの３'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１４に示すヌクレオチド配列：５'－ＣＡＧＡＧＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＡＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＧＴＣＴＡＴＡＡＴＴＧＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＡＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＴＧＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＧＴＧＧＧＣＧ－３'（配列番号１４）を含んでよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は３１７ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１４に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0104】

一実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターを含み、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの３'末端に配置されるＩＥを含む。

【0105】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの５'末端における幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターであってよい。このとき、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、３００～４００ｂｐ、４００～５００ｂｐ、５００～６００ｂｐ、６００～７００ｂｐ、７００～８００ｂｐ、又は８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。好ましくは、ＭＰＺプロモーターの５'末端における欠失しているヌクレオチド配列は、長さが８００～９００ｂｐの範囲にあるヌクレオチド配列であってよい。このとき、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの配列長は、１００～１０００ｂｐ、１００～９００ｂｐ、１００～８００ｂｐ、１００～７００ｂｐ、１００～６００ｂｐ、１００～５００ｂｐ、１００～４００ｂｐ、１００～３００ｂｐ、又は１００～２００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの配列長は、２００～３００ｂｐの範囲にあってよい。

【0106】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス又はＣＡＡＴボックスを含んでよい。

【0107】

シュワン細胞特異的プロモーターは、転写開始部位（ＴＳＳ）を含んでよい。

【0108】

ＩＥは、Ｅｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含んでよい。ＩＥは、ＭＰＺ遺伝子のイントロン１領域に存在するＥｇｒ２及びＳｏｘ１０結合部位を含む領域であってよい。ＩＥの配列長は、１～１００ｂｐ、１００～２００ｂｐ、２００～３００ｂｐ、又は３００～４００ｂｐの範囲にあってよい。好ましくは、ＩＥの配列長は１００～２００ｂｐの範囲にあってよく、より好ましくは、ＩＥの配列長は１２３ｂｐであってよい。更に別の実施形態では、ＩＥは、配列番号１０に示す長さ１２３ｂｐのヌクレオチド配列であってよい。代替的に、ＩＥは、配列番号１０に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0109】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１０に示す長さ１２３ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号５に示す長さ３００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの３'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１５に示すヌクレオチド配列：５'－ＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＡＡＣＡＴＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＣＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＧＧＡＣＡＡＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＡＧＡＡＣＡＡＡＡＡＧＧＴＣＴＡＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＧＴＧＴＧＧＧＴＡ－３'（配列番号１５）を含んでよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は４２３ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１５に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0110】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１０に示す長さ１２３ｂｐのヌクレオチド配列を有するＩＥが、配列番号６に示す長さ２００ｂｐのヌクレオチド配列を有する人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの３'末端に接続されている形態であってよく、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１６に示すヌクレオチド配列：５'－ＣＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＧＧＡＣＡＡＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＡＧＡＡＣＡＡＡＡＡＧＧＴＣＴＡＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＧＴＧＴＧＧＧＴＡ－３'（配列番号１６）からなってよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は３２３ｂｐであってよい。代替的に、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１６に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0111】

１－４．シュワン細胞特異的プロモーターの利点１－短い長さ及び高い発現率

【0112】

本開示のシュワン細胞特異的プロモーターには、既知のＭＰＺプロモーターよりも長さが短いという利点がある。この利点は、遺伝子を発現させるためにベクター内にプロモーターを配置すると、より短いプロモーターがより長いプロモーターよりもサイズの点で有利であるという事実に見られる。

【0113】

追加的に、シュワン細胞特異的プロモーターには、既知のＭＰＺプロモーターより高い発現率を有するという利点がある。実験例１の実験では、シュワン細胞特異的プロモーターの高い発現率が確認された。換言すると、本開示のシュワン細胞特異的プロモーターは、シュワン細胞特異的プロモーターの長さが既知のＭＰＺプロモーターの長さより短いにもかかわらず、より高い発現率を示す。

【0114】

別の実施形態では、ユーザが導入したい全ての構成を１つのベクターに載せることが有用である。このとき、概して、一般的な発現カセット（具体的にはプロモーター配列）のサイズ制約が特に重要である。例えば、シュワン細胞特異的プロモーターは、プロモーターのサイズが相対的にコンパクトなので、より大きいＭＰＺプロモーターより有利である。これにより、シュワン細胞特異的プロモーターは、限られたサイズのベクターで使用すると、より効率的になる。

【0115】

更に別の実施形態では、既知のＭＰＺプロモーターは、ヒト又はラットのＭＰＺ遺伝子のプロモーターであってよい。長さが１０００～１２００ｂｐの範囲にある配列は概して、既知のＭＰＺプロモーターに使用される。

【0116】

更に別の実施形態では、配列番号３；配列番号４；配列番号５；配列番号６；配列番号８；配列番号９；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６；及び、配列番号３、４、５、６、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、及び１６のうちの１つと少なくとも９０％の相同性を有する配列から選択される配列を有するシュワン細胞特異的プロモーターの長さは、２００～４２０ｂｐの範囲にある。シュワン細胞特異的プロモーターの長さは、既知のＭＰＺプロモーターの長さの５０％以下であってよい。具体的には、シュワン細胞特異的プロモーターの長さが２００ｂｐ、３００ｂｐ、又は３１７ｂｐであるとき、その長さは既知のＭＰＺプロモーターの長さの３０％以下に相当してよい。

【0117】

更に別の実施形態では、配列番号３；配列番号４；配列番号５；配列番号６；配列番号８；配列番号９；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６；及び、配列番号３、４、５、６、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、及び１６のうちの１つと少なくとも９０％の相同性を有する配列から選択される配列を有するシュワン細胞特異的プロモーターは、既知のＭＰＺプロモーターの長さの少なくとも半分の長さであるにもかかわらず、既知のＭＰＺプロモーターより高い発現量を示す。また、更に別の実施形態では、実験例１－４を通じて、シュワン細胞特異的プロモーターが既知のＭＰＺプロモーターよりおよそ１．５～２倍高い目的タンパク質の発現率を達成できることが確認された。

【0118】

従って、ベクターのサイズ制約がある場合、配列番号３；配列番号４；配列番号５；配列番号６；配列番号８；配列番号９；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６；及び、配列番号３、４、５、６、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、及び１６のうちの１つと少なくとも９０％の相同性を有する配列から選択される配列を有するシュワン細胞特異的プロモーターは、既知のＭＰＺプロモーターより効率的に使用され得る。

【0119】

１－５．シュワン細胞特異的プロモーターの利点２－シュワン細胞における特異的発現

【0120】

本開示のプロモーターには、シュワン細胞で目的タンパク質を特異的に発現させることができるという利点（特徴）がある。すなわち、シュワン細胞特異的プロモーターは、シュワン細胞で有意な発現を引き起こし、且つ、非シュワン細胞で低い発現を引き起こすか又は全く発現を引き起こさないプロモーターである。

【0121】

一実施形態では、体内で目的遺伝子を発現させるためのベクターを全身投与で注入してよい。このとき、目的遺伝子は、特定の種類の組織又は細胞に対して特異的に発現させる必要がある。

【0122】

遺伝子を特異的に発現させるよう意図された組織又は細胞以外の組織又は細胞で目的遺伝子を発現させると、遺伝子発現で試みた望ましい効果とは逆に、予測不可能な副作用が増加する可能性があるかもしれない。換言すると、特定の組織又は細胞で目的遺伝子をより良く選択的に発現させるプロモーターを使用する必要がある。

【0123】

例えば、プロモーターを使用してシュワン細胞で目的遺伝子を特異的に発現させるとき、本開示のシュワン細胞特異的プロモーターは、シュワン細胞に非特異的なプロモーターより効果的である。

【0124】

別の実施形態では、目的遺伝子を発現させるためのベクターを含む組成物を遺伝子療法として使用してよい。インビボで遺伝子療法を使用した治療の方法の更に別の実施形態では、対象の体に遺伝子療法を直接適用して特定の組織又は細胞で目的遺伝子を発現させる方法がある。このとき、ベクターは体内の血液を通り抜け、目的組織に加えて肝臓などの組織を通過する。従って、効果的な遺伝子療法のためには、目的組織（例えば、肝臓）以外の組織で低い遺伝子発現を示し、且つ、目的組織で特異的に最も効果的な発現を示すことが遺伝子療法にとって好ましい。本開示のプロモーターは、神経系組織で目的遺伝子を効果的に発現させることができるシュワン細胞特異的プロモーターである。

【0125】

更に別の実施形態では、本開示で後述するプロモーターを使用してシュワン細胞で目的遺伝子を特異的に発現させるとき、シュワン細胞におけるタンパク質発現率は既知のシュワン細胞特異的プロモーターより高く、非シュワン細胞におけるタンパク質発現率は既知のシュワン細胞特異的プロモーターより相対的に低い。

【0126】

配列番号３；配列番号４；配列番号５；配列番号６；配列番号８；配列番号９；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６；又は、配列番号３、４、５、６、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、及び１６のうちの１つと少なくとも９０％の相同性を有する配列から選択される配列を有するシュワン細胞特異的プロモーター。

【0127】

しかしながら、上に開示したシュワン細胞特異的プロモーターの例は例に過ぎず、これらに限定されない。

【0128】

２．シュワン細胞特異的発現ベクター

【0129】

一態様では、本開示はシュワン細胞特異的発現ベクターに関する。シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーターを含む。シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した各構成と同じ性質及び構造を有する。シュワン細胞特異的発現ベクターとは、シュワン細胞で特異的に発現させたベクターを指す。これは、シュワン細胞特異的発現ベクターに含まれるシュワン細胞特異的プロモーターによってベクターがシュワン細胞で特異的に機能することを意味する。

【0130】

より具体的には、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター及び目的遺伝子を含んでよい。

【0131】

シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した各構成と同じ性質及び構造を有する。

【0132】

目的遺伝子は、シュワン細胞で発現するように構成された遺伝子であってよい。また、目的遺伝子は、シュワン細胞で発現するように構成された目的タンパク質をコードする核酸であってよい。

【0133】

シュワン細胞特異的発現ベクターは更に、調節／制御エレメントを選択的に含んでよい。このとき、調節／制御構成要素は、ベクターに含まれる目的遺伝子に機能可能に連結されてよい。調節／制御構成要素は、エンハンサー、人工イントロン、終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、コザックコンセンサス配列、配列内リボソーム進入部位（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｉｂｏｓｏｍｅ ｅｎｔｒｙ ｓｉｔｅ：ＩＲＥＳ）、ＷＰＲＥ、スプライスアクセプター、２Ａ配列、及び／又は複製起点を含んでよいが、これらに限定されない。

【0134】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクター又は非ウイルスベクターであってよい。本明細書では、ウイルスベクターは、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ））ベクター、レンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）：ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒａｌ（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ））ベクター、ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒａｌ（ｐｏｘｖｉｒｕｓ））ベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒａｌ（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ））ベクターからなる群から選択される１つ又は複数のウイルスベクターであってよい。このとき、非ウイルスベクターは、プラスミド、ファージ、ネイキッドＤＮＡ、ＤＮＡ複合体、ｍＲＮＡ（転写物）、又はＰＣＲアンプリコンであってよいが、これらに限定されない。例えば、プラスミドは、ｐｃＤＮＡシリーズ、ｐＳＣ１０１、ｐＧＶ１１０６、ｐＡＣＹＣ１７７、ＣｏｌＥ１、ｐＫＴ２３０、ｐＭＥ２９０、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ８／９、ｐＵＣ６、ｐＢＤ９、ｐＨＣ７９、ｐＩＪ６１、ｐＬＡＦＲ１、ｐＨＶ１４、ｐＧＥＸシリーズ、ｐＥＴシリーズ、及びｐＵＣ１９からなる群から選択されるいずれかであってよい。

【0135】

２－１．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（１）

【0136】

一実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター及び目的遺伝子を含んでよい。
目的遺伝子は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。

【0137】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターであってよい。別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３又は４に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３又は４に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0138】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの５'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８又は９に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８又は９に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0139】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの３'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３又は１４に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0140】

目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子であってよい。
例えば、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子は、コネキシン３２（Ｃｘ３２）遺伝子、ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２（ＳＨ３ＴＣ２）遺伝子、ミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺ）遺伝子、初期増殖応答２（ＥＧＲ２）遺伝子、ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１（ＧＤＡＰ１）遺伝子、Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１（ＮＤＲＧ１）遺伝子、又は末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）遺伝子であってよいが、これらに限定されない。

【0141】

目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする核酸であってよい。例えば、遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質は、Ｃａｓタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒ ｎｕｃｌｅａｓｅ：ＺＦＮ）、又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）であってよいが、これらに限定されない。本明細書では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質であってよいが、これらに限定されない。

【0142】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクターであってよい。本明細書では、ウイルスベクターは、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ））ベクター、レンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）：ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒａｌ（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ））ベクター、ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒａｌ（ｐｏｘｖｉｒｕｓ））ベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒａｌ（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ））ベクターからなる群から選択される１つ又は複数のウイルスベクターであってよい。

【0143】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸を含んでよい。Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３又は４に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質は、化膿連鎖球菌Ｃａｓ９（ＳｐＣａｓ９）タンパク質、黄色ブドウ球菌Ｃａｓ９（ＳａＣａｓ９）タンパク質、カンピロバクター・ジェジュニＣａｓ９（ＣｊＣａｓ９）タンパク質、又はスタフィロコッカス・アウリクラーリスＣａｓ９（ＳａｕｒｉＣａｓ９）タンパク質であってよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0144】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸を含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８又は９に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９（ＣｊＣａｓ９）タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0145】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸を含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９（ＣｊＣａｓ９）タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0146】

２－２．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（２）

【0147】

一実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター及び目的遺伝子を含んでよい。
目的遺伝子は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。

【0148】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターであってよい。別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５又は６に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５又は６に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0149】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの５'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１１又は１２に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１１又は１２に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0150】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの３'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１５又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１５又は１６に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0151】

目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子であってよい。例えば、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子は、Ｃｘ３２遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２遺伝子、ＭＰＺ遺伝子、ＥＧＲ２遺伝子、ＧＤＡＰ１遺伝子、ＮＤＲＧ１遺伝子、又はＰＭＰ２２遺伝子であってよいが、これらに限定されない。

【0152】

目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする核酸であってよい。例えば、遺伝子を人工的に改変するために使用されるタンパク質は、Ｃａｓタンパク質、ＺＦＮ、又はＴＡＬＥＮであってよいが、これらに限定されない。本明細書では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質であってよいが、これらに限定されない。

【0153】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクターであってよい。このとき、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルスベクターからなる群から選択される１つ又は複数であってよい。

【0154】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸を含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５又は６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0155】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸を含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１１又は１２に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0156】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸を含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１５又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0157】

２－３．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（３）

【0158】

一実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、目的遺伝子、及び調節／制御エレメントを含んでよい。
このとき、目的遺伝子は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。

【0159】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターであってよい。別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３又は４に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３又は４に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0160】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの５'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８又は９に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８又は９に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0161】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ラットＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたラットＭＰＺプロモーターの３'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３又は１４に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0162】

目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子であってよい。例えば、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子は、Ｃｘ３２遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２遺伝子、ＭＰＺ遺伝子、ＥＧＲ２遺伝子、ＧＤＡＰ１遺伝子、ＮＤＲＧ１遺伝子、又はＰＭＰ２２遺伝子であってよいが、これらに限定されない。

【0163】

目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする核酸であってよい。例えば、遺伝子を人工的に改変するために使用されるタンパク質は、Ｃａｓタンパク質、ＺＦＮ、又はＴＡＬＥＮであってよいが、これらに限定されない。本明細書では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質であってよいが、これらに限定されない。

【0164】

調節／制御エレメントは、ポリアデニル化シグナル、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（Ｗｏｏｄｃｈｕｃｋ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ：ＷＰＲＥ）、及び／又は人工イントロンであってよい。

【0165】

このとき、ポリアデニル化シグナルは、ウシ増殖ホルモンポリアデニル化（ｂｏｖｉｎｅ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ：ＢＧＨＡ）シグナル、合成ポリアデニル化（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ：ｓｙｎｐＡ）シグナル、又はシミアンウイルス４０ポリアデニル化（ｓｉｍｉａｎ ｖｉｒｕｓ ４０ ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌ：ＳＶ４０ｐＡ）シグナルであってよいが、これらに限定されない。更に別の実施形態では、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列：５'－ｔｇｃｔｔｔａｔｔｔｇｔａａｃｃａｔｔａｔａａｇｃｔｇｃａａｔａａａｃａａｇｔｔａａｃａａｃａａｃａａｔｔｇｃａｔｔｃａｔｔｔｔａｔｇｔｔｔｃａｇｇｔｔｃａｇｇｇｇｇａｇａｔｇｔｇｇｇａｇｇｔｔｔｔｔｔａａａ－３'（配列番号１７）を有してよい。更に別の実施形態では、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列：５'－ＡＡＧＡＧＧＴＡＡＧＧＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＴＧＧＴＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＧＧＴＡＴＴＡＡＴＧＴＴＴＡＡＴＴＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＣＣＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＡＣＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＧＴＴＧＧ－３'（配列番号１８）を有してよい。

【0166】

このとき、ＷＰＲＥは、ガンマ、アルファ、及びベータエレメントから選択される１つ又は複数のエレメントを有してよい。更に別の実施形態では、ＷＰＲＥは、ガンマ及びアルファエレメントを含むＷＰＲＥ３であってよく、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列：５'－ＡＡＴＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＧＡＴＴＧＡＣＴＧＧＴＡＴＴＣＴＴＡＡＣＴＡＴＧＴＴＧＣＴＣＣＴＴＴＴＡＣＧＣＴＡＴＧＴＧＧＡＴＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＧＣＣＴＴＴＧＴＡＴＣＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＣＣＣＧＴＡＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＡＴＡＡＡＴＣＣＴＧＧＴＴＡＧＴＴＣＴＴＧＣＣＡＣＧＧＣＧＧＡＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＧＣＴＧＴＴＧＧＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴ－３'（配列番号１９）を有してよい。更に別の実施形態では、ＷＰＲＥは、ガンマ、アルファ、及びベータエレメントを含んでよい。このとき、ＷＰＲＥは、配列番号２０に示すヌクレオチド配列：５'－ＡＡＴＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＧＡＴＴＧＡＣＴＧＧＴＡＴＴＣＴＴＡＡＣＴＡＴＧＴＴＧＣＴＣＣＴＴＴＴＡＣＧＣＴＡＴＧＴＧＧＡＴＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＧＣＣＴＴＴＧＴＡＴＣＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＣＣＣＧＴＡＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＡＴＡＡＡＴＣＣＴＧＧＴＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＴＴＡＴＧＡＧＧＡＧＴＴＧＴＧＧＣＣＣＧＴＴＧＴＣＡＧＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＴＧＴＴＴＧＣＴＧＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＧＧＧＧＣＡＴＴＧＣＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＣＡＧＣＴＣＣＴＴＴＣＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＧＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＣＣＣＴＡＴＴＧＣＣＡＣＧＧＣＧＧＡＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＧＣＴＧＴＴＧＧＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＴＧＴＣＧＧＧＧＡＡＧＣＴＧＡＣＧＴＣＣＴＴＴＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＣＣＴＧＴＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＴＴＣＴＧＣＧＣＧＧＧＡＣＧＴＣＣＴＴＣＴＧＣＴＡＣＧＴＣＣＣＴＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡＡＴＣＣＡＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣＣＧＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＧＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＴＣＴＴＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＴＣＡＧＡＣＧＡＧＴＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＣＧＣＣＴＧ－３'（配列番号２０）を有してよい。

【0167】

このとき、人工イントロンを使用してシュワン細胞特異的発現ベクターにおける目的遺伝子の発現を改善してよい。更に別の実施形態では、人工イントロンは、マウス微小ウイルス（ｍｉｎｕｔｅ ｖｉｒｕｓ ｏｆ ｍｉｃｅ：ＭＶＭ）イントロンであってよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列：５'－ＡＡＧＡＧＧＴＡＡＧＧＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＴＧＧＴＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＧＧＴＡＴＴＡＡＴＧＴＴＴＡＡＴＴＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＣＣＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＡＣＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＧＴＴＧＧ－３'（配列番号２１）を有してよい。

【0168】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクターであってよい。このとき、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルスベクターからなる群から選択される１つ又は複数のウイルスベクターであってよい。

【0169】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３、４、８、９、１３、又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。更に別の実施形態では、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0170】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、及びＷＰＲＥを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３、４、８、９、１３、又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0171】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、及び人工イントロンを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３、４、８、９、１３、又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、人工イントロンは、ＭＶＭイントロンであってよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0172】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、ＷＰＲＥ、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３、４、８、９、１３、又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。更に別の実施形態では、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸及びポリアデニル化シグナルの間に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0173】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、人工イントロン、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３、４、８、９、１３、又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。このとき、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0174】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、人工イントロン、及びＷＰＲＥを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３、４、８、９、１３、又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0175】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、人工イントロン、ＷＰＲＥ、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３、４、８、９、１３、又は１４に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。このとき、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、ＷＰＲＥの３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0176】

２－４．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（４）

【0177】

一実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、目的遺伝子、及び調節／制御エレメントを含んでよい。
このとき、目的遺伝子は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。

【0178】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターであってよい。別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５又は６に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５又は６に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0179】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの５'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１１又は１２に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１１又は１２に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0180】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ヒトＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失している人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターを含んでよく、人工的に改変されたヒトＭＰＺプロモーターの３'末端に配置されるＩＥを含んでよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１５又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１５又は１６に示すヌクレオチド配列と少なくとも７０％以上、例えば、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、又は９５％～１００％の配列同一性又は配列類似性を有するヌクレオチド配列を有してよい。

【0181】

目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子であってよい。例えば、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子は、Ｃｘ３２遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２遺伝子、ＭＰＺ遺伝子、ＥＧＲ２遺伝子、ＧＤＡＰ１遺伝子、ＮＤＲＧ１遺伝子、又はＰＭＰ２２遺伝子であってよいが、これらに限定されない。

【0182】

目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するために使用されるタンパク質をコードする核酸であってよい。例えば、遺伝子を人工的に改変するために使用されるタンパク質は、Ｃａｓタンパク質、ＺＦＮ、又はＴＡＬＥＮであってよいが、これらに限定されない。本明細書では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質であってよいが、これらに限定されない。

【0183】

調節／制御エレメントは、ポリアデニル化シグナル、ＷＰＲＥ、及び／又は人工イントロンであってよい。

【0184】

このとき、ポリアデニル化シグナルは、ウシ増殖ホルモンポリアデニル化シグナル、合成ポリアデニル化シグナル、又はシミアンウイルス４０ポリアデニル化シグナルであってよいが、これらに限定されない。このとき、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。

【0185】

このとき、ＷＰＲＥは、ガンマ、アルファ、及びベータエレメントから選択される１つ又は複数のエレメントを有してよい。更に別の実施形態では、ＷＰＲＥは、ガンマ及びアルファエレメントを含むＷＰＲＥ３であってよく、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ＷＰＲＥは、ガンマ、アルファ、及びベータエレメントを含んでよい。このとき、ＷＰＲＥは、配列番号２０に示すヌクレオチド配列を有してよい。

【0186】

このとき、人工イントロンを使用してシュワン細胞特異的発現ベクターにおける目的遺伝子の発現を改善してよい。更に別の実施形態では、人工イントロンは、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンであってよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。

【0187】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクターであってよい。このとき、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルスベクターからなる群から選択される１つ又は複数のベクターであってよい。

【0188】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５、６、１１、１２、１５、又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。更に別の実施形態では、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0189】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、及びＷＰＲＥを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５、６、１１、１２、１５、又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0190】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、及び人工イントロンを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５、６、１１、１２、１５、又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、人工イントロンは、ＭＶＭイントロンであってよい。このとき、ＭＶＭは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0191】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、ＷＰＲＥ、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５、６、１１、１２、１５、又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質を含んでよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡを含んでよい。このとき、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸及びポリアデニル化シグナルの間に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0192】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、人工イントロン、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５、６、１１、１２、１５、又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質を含んでよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。このとき、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0193】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、人工イントロン、及びＷＰＲＥを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５、６、１１、１２、１５、又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質であってよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0194】

更に別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、人工イントロン、ＷＰＲＥ、及びポリアデニル化シグナルを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。このとき、シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号５、６、１１、１２、１５、又は１６に示すヌクレオチド配列を有してよい。本明細書では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳｐＣａｓ９タンパク質、ＳａＣａｓ９タンパク質、ＣｊＣａｓ９タンパク質、又はＳａｕｒｉＣａｓ９タンパク質を含んでよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、配列番号２１に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＭＶＭイントロンは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸の間に位置してよい。このとき、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であってよい。このとき、ＷＰＲＥ３は、配列番号１９に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ＷＰＲＥは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸の３'末端に位置してよい。本明細書では、ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡであってよい。このとき、ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７に示すヌクレオチド配列を有してよい。更に別の実施形態では、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８に示すヌクレオチド配列を有してよい。このとき、ポリアデニル化シグナルは、ＷＰＲＥの３'末端に位置してよい。このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）であってよい。

【0195】

しかしながら、上に開示したシュワン細胞特異的発現ベクターの例は例に過ぎず、これらに限定されない。

【0196】

３．目的タンパク質のシュワン細胞特異的発現の方法

【0197】

本開示で開示する一態様は、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させる方法に関する。この方法では、シュワン細胞特異的発現ベクターを使用する。より具体的には、方法は、目的タンパク質をコードする核酸（又は目的遺伝子）を含むシュワン細胞特異的発現ベクターをシュワン細胞に導入（又は移入）して、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させる方法である。このとき、シュワン細胞は、ヒトシュワン細胞又は非ヒト動物シュワン細胞であってよい。方法は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで実行され得る。このとき、インビボとは、シュワン細胞を含むヒトの体、又は非ヒト動物の体の環境を指してよい。シュワン細胞特異的発現ベクターは、セクション「２．シュワン細胞特異的発現ベクター」で上述した発現ベクターと同じであり、同セクションで説明した各構成と同じ性質及び構造を有する。

【0198】

３－１．シュワン細胞で目的タンパク質を特異的に発現させる方法例（１）

【0199】

一実施形態では、方法は、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させる方法であってよい。このとき、方法は、シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入を含んでよい。

【0200】

別の実施形態では、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及び目的タンパク質をコードする核酸（又は目的遺伝子）を含んでよい。
このとき、目的遺伝子は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。

【0201】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、セクション「２．シュワン細胞特異的発現ベクター」で上述した発現ベクターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。また、シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。また、目的遺伝子は、セクション「２．シュワン細胞特異的発現ベクター」で上述した遺伝子と同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。

【0202】

シュワン細胞は、ヒトシュワン細胞又は非ヒト動物シュワン細胞であってよい。

【0203】

シュワン細胞は、ヒト又は非ヒト動物から得られるシュワン細胞であってよい。

【0204】

シュワン細胞は、ヒトの体内又は非ヒト動物の体内に存在するシュワン細胞であってよい。

【0205】

シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入は、エレクトロポレーション法、遺伝子銃、ソノポレーション、マグネトフェクション法、ナノ粒子法、及び／又は一時的細胞圧縮又は圧迫法を使用して実行されてよい。また、シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入は、カチオン性リポソーム法、酢酸リチウム－ＤＭＳＯ、脂質媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿法、リポフェクション法、ポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ：ＰＥＩ）媒介性トランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、及び／又はナノ粒子媒介性拡散輸送（Ｐａｎｙａｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１２ Ｓｅｐ １３．ｐｉｉ：Ｓ０１６９－４０９Ｘ（１２）００２８３－９．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｄｄｒ．２０１２．０９．０２３を参照）を使用して実行されてよいが、これらに限定されない。

【0206】

シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで実行されてよい。

【0207】

シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入を行った結果として、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させてよい。このとき、シュワン細胞における目的タンパク質の発現は、シュワン細胞特異的発現ベクターによる処置の前と比べて有意に増加する可能性がある。

【0208】

更に別の実施形態では、方法は、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させる方法であってよい。このとき、方法は、シュワン細胞特異的発現ベクターでの処理、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入を含んでよい。シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、及びＣａｓ９タンパク質をコードする核酸を含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。シュワン細胞特異的発現ベクターは、セクション「２－１．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（１）」及び「２－２．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（２）」で上述した幾つかの実施形態の中から選択されるものであってよい。このとき、シュワン細胞は、ヒトシュワン細胞であってよい。このとき、方法は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで実行されてよい。また、方法は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸での処置、又はガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸のシュワン細胞への導入を含んでよい。

【0209】

３－２．シュワン細胞で目的タンパク質を特異的に発現させる方法例（２）

【0210】

一実施形態では、方法は、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させる方法であってよい。このとき、方法は、シュワン細胞特異的発現ベクターでの処理、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入を含んでよい。

【0211】

このとき、シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、目的タンパク質をコードする核酸（又は目的遺伝子）、及び調節／制御エレメントを含んでよい。
このとき、目的遺伝子は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。

【0212】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、セクション「２．シュワン細胞特異的発現ベクター」で上述した発現ベクターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。また、シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。また、目的遺伝子及び調節／制御エレメントは、セクション「２．シュワン細胞特異的発現ベクター」で上述した遺伝子及び調節／制御エレメントと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。

【0213】

シュワン細胞は、ヒトシュワン細胞又は非ヒト動物シュワン細胞であってよい。

【0214】

シュワン細胞は、ヒト又は非ヒト動物から得られるシュワン細胞であってよい。

【0215】

シュワン細胞は、ヒトの体又は非ヒト動物の体に存在するシュワン細胞であってよい。

【0216】

シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入は、エレクトロポレーション法、遺伝子銃、ソノポレーション、マグネトフェクション法、ナノ粒子法、及び／又は一時的細胞圧縮又は圧迫法を使用して実行されてよい。また、シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入は、カチオン性リポソーム法、酢酸リチウム－ＤＭＳＯ、脂質媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿法、リポフェクション法、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）媒介性トランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、及び／又はナノ粒子媒介性拡散輸送（Ｐａｎｙａｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１２ Ｓｅｐ １３．ｐｉｉ：Ｓ０１６９－４０９Ｘ（１２）００２８３－９．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｄｄｒ．２０１２．０９．０２３を参照）を使用して実行されてよいが、これらに限定されない。

【0217】

シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで実行されてよい。

【0218】

シュワン細胞特異的発現ベクターでの処置、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入を行った結果として、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させてよい。このとき、シュワン細胞における目的タンパク質の発現は、シュワン細胞特異的発現ベクターによる処置の前と比べて有意に増加する可能性がある。

【0219】

更に別の実施形態では、方法は、シュワン細胞で目的タンパク質を発現させる方法であってよい。このとき、方法は、シュワン細胞特異的発現ベクターでの処理、又はシュワン細胞へのシュワン細胞特異的発現ベクターの導入を含んでよい。シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞特異的プロモーター、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸、及び調節／制御エレメントを含んでよい。このとき、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸は、シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されてよい。シュワン細胞特異的発現ベクターは、セクション「２－３．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（３）」及び「２－４．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（４）」で上述した幾つかの実施形態の中から選択されるものであってよい。このとき、シュワン細胞は、ヒトシュワン細胞であってよい。このとき、方法は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで実行されてよい。また、方法は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸での処理、又はガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸のシュワン細胞への導入を含んでよい。

【0220】

しかしながら、上に開示した目的タンパク質のシュワン細胞特異的発現の方法の例は例に過ぎず、これらに限定されない。

【0221】

４．シュワン細胞に関連する疾患の治療における使用

【0222】

４－１．組成物

【0223】

本開示で開示する一態様は、シュワン細胞に関連する疾患を治療するための組成物に関する。組成物は、シュワン細胞特異的発現ベクターを含む。シュワン細胞特異的発現ベクターは、セクション「２．シュワン細胞特異的発現ベクター」で上述した発現ベクターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子、及び／又はシュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする核酸を目的遺伝子として含んでよい。従って、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子、及び／又はシュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする核酸を使用することによってシュワン細胞に関連する疾患を治療するために組成物を使用してよい。

【0224】

より具体的には、組成物は、以下を含むシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。

【0225】

シュワン細胞特異的プロモーター；及び

【0226】

目的遺伝子。

【0227】

シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。

【0228】

このとき、一実施形態では、目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するために使用されるタンパク質をコードする核酸であってよい。例えば、遺伝子を人工的に改変するために使用されるタンパク質は、Ｃａｓタンパク質、ＺＦＮ、又はＴＡＬＥＮであってよいが、これらに限定されない。本明細書では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質であってよいが、これらに限定されない。これを使用することによって、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子へのノックアウト効果を達成してよい。

【0229】

また、目的遺伝子がシュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子の役割を果たすので、必要に応じて、本開示のプロモーターを使用してシュワン細胞で目的遺伝子を過剰発現させてよい。

【0230】

シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子は、コネキシン３２（Ｃｘ３２）遺伝子、ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２（ＳＨ３ＴＣ２）遺伝子、ミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺ）遺伝子、初期増殖応答２（ＥＧＲ２）遺伝子、ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１（ＧＤＡＰ１）遺伝子、Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１（ＮＤＲＧ１）遺伝子、又は末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）遺伝子であってよい。疾患治療効果を得るために、必要に応じて遺伝子をノックアウト又は過剰発現させてよい。

【0231】

シュワン細胞特異的発現ベクターは更に、調節／制御エレメントを含んでよい。このとき、調節／制御構成要素は、ベクターに含まれる目的遺伝子に機能可能に連結されてよい。調節／制御構成要素は、エンハンサー、人工イントロン、終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、コザックコンセンサス配列、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、スプライスアクセプター、２Ａ配列、及び／又は複製起点であってよいが、これらに限定されない。

【0232】

シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする核酸をシュワン細胞特異的発現ベクターが含むとき、組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。このとき、ガイドＲＮＡは、シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす遺伝子を標的としてよい。別の実施形態では、ガイドＲＮＡは、ポリＴ部分が除去されている足場部分を含んでよい。更に別の実施形態では、ガイドＲＮＡのガイドドメインは、ｐｍｐ２２遺伝子の部分配列に結合する配列であってよい。

【0233】

４－１－１．組成物例（１）

【0234】

一実施形態では、組成物は、以下を含むシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。

【0235】

シュワン細胞特異的プロモーター；及び

【0236】

Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸。

【0237】

シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。

【0238】

組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。

【0239】

別の実施形態では、組成物は、セクション「２－１．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（１）」及び「２－２．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（２）」で上述した幾つかの実施形態の中から選択される１つのシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。このとき、組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。更に別の実施形態では、ガイドＲＮＡは、ポリＴ部分が除去されている足場部分を含んでよい。更に別の実施形態では、ガイドＲＮＡのガイドドメインは、ｐｍｐ２２遺伝子の部分配列に結合する配列であってよい。

【0240】

４－１－２．組成物例（２）

【0241】

一実施形態では、組成物は、以下を含むシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。

【0242】

シュワン細胞特異的プロモーター；

【0243】

Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸；及び

【0244】

調節／制御エレメント。

【0245】

シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。

【0246】

組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。

【0247】

別の実施形態では、組成物は、セクション「２－３．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（３）」及び「２－４．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（４）」で上述した幾つかの実施形態の中から選択される１つのシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。このとき、組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。更に別の実施形態では、ガイドＲＮＡは、ポリＴ部分が除去されている足場部分を含んでよい。更に別の実施形態では、ガイドＲＮＡのガイドドメインは、ｐｍｐ２２遺伝子の部分配列に結合する配列であってよい。

【0248】

４－２．治療方法

【0249】

本開示で開示する一態様は、シュワン細胞に関連する疾患を治療する方法に関する。この方法では、シュワン細胞特異的発現ベクターを含む組成物を使用する。シュワン細胞特異的発現ベクターは、セクション「２．シュワン細胞特異的発現ベクター」で上述した発現ベクターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。シュワン細胞特異的発現ベクターは、シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子、及び／又はシュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする核酸をベクターに含まれる目的遺伝子として含んでよい。従って、この組成物を使用することによってシュワン細胞に関連する疾患を治療してよい。

【0250】

方法は、対象に組成物を導入（又は投与）することを含んでよい。

【0251】

このとき、対象は、シュワン細胞に関連する疾患を持つヒト又は非ヒト動物であってよい。組成物は、セクション「４－１．組成物」で上述した組成物と同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。例えば、シュワン細胞に関連する疾患は、シャルコー・マリー・トゥース（ＣＭＴ）病又は運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を含んでよいが、これらに限定されない。

【0252】

このとき、対象への組成物の導入（又は投与）は、注射、輸血、インプランテーション、又はトランスプランテーションによって実行されてよい。このとき、対象への組成物の導入（又は投与）は、網膜下、皮下、皮内、眼内、硝子体内、腫瘍内、節内、髄内、筋肉内、静脈内、リンパ内、又は腹腔内といった投与経路から選択されるいずれか１つの投与経路を通じて実行されてよい。

【0253】

４－２－１．治療方法例（１）

【0254】

一実施形態では、治療方法は、対象に組成物を導入又は投与することを含んでよい。

【0255】

このとき、組成物は、以下を含むシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。

【0256】

シュワン細胞特異的プロモーター；及び

【0257】

Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸。

【0258】

シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。

【0259】

組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。別の実施形態では、ガイドＲＮＡは、ポリＴ部分が除去されている足場部分を含んでよい。更に別の実施形態では、ガイドＲＮＡのガイドドメインは、ｐｍｐ２２遺伝子の部分配列に結合する配列であってよい。

【0260】

対象は、シュワン細胞に関連付けられた疾患を持つヒト又は非ヒト動物であってよい。

【0261】

更に別の実施形態では、治療方法は、シュワン細胞に関連する疾患を有する被験者に組成物を導入（投与）することを含んでよい。このとき、組成物は、セクション「２－１．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（１）」及び「２－２．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（２）」で上述した実施形態の中から選択される１つのシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。このとき、組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。このとき、シュワン細胞に関連する疾患は、シャルコー・マリー・トゥース（ＣＭＴ）病であってよい。

【0262】

４－２－２．治療方法例（２）

【0263】

一実施形態では、治療方法は、対象に組成物を導入又は投与することを含んでよい。

【0264】

このとき、組成物は、以下を含むシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。

【0265】

シュワン細胞特異的プロモーター；

【0266】

Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸；及び

【0267】

調節／制御エレメント。

【0268】

シュワン細胞特異的プロモーターは、セクション「１．シュワン細胞特異的プロモーター」で上述したプロモーターと同じであり、同セクションで説明した構成と同じ性質及び構造を有する。

【0269】

組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。別の実施形態では、ガイドＲＮＡは、ポリＴ部分が除去されている足場部分を含んでよい。更に別の実施形態では、ガイドＲＮＡのガイドドメインは、ｐｍｐ２２遺伝子の部分配列に結合する配列であってよい。

【0270】

対象は、シュワン細胞に関連する疾患を持つヒト又は非ヒト動物であってよい。

【0271】

更に別の実施形態では、治療方法は、シュワン細胞に関連する疾患を有する被験者に組成物を導入（投与）することを含んでよい。このとき、組成物は、セクション「２－３．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（３）」及び「２－４．シュワン細胞特異的発現ベクターの例（４）」で上述した実施形態の中から選択される１つのシュワン細胞特異的発現ベクターを含んでよい。このとき、組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含んでよい。このとき、シュワン細胞に関連する疾患は、シャルコー・マリー・トゥース（ＣＭＴ）病であってよい。

【0272】

しかしながら、上に開示した組成物及び治療方法の例は例に過ぎず、これらに限定されない。

【0273】

以降、本明細書で提供する本開示の考えられる実施形態を列挙する。この段落で提供する以下の実施形態は開示の例に過ぎない。従って、本明細書で提供する発明を、以下の例に限定されるものとして解釈することはできない。例番号と共に提供する簡単な説明は、単にそれぞれの例を区別するための便宜上のものであり、本明細書で開示する開示に対する限定として解釈することはできない。

【0274】

開示の考えられる例

【0275】

シュワン細胞特異的プロモーター

【0276】

例１、シュワン細胞特異的プロモーター

【0277】

配列長が３００～５００ｂｐの範囲にある人工プロモーター又は改変されたプロモーターである、シュワン細胞特異的プロモーター。

【0278】

例２、プロモーターの長さの限定

【0279】

シュワン細胞特異的プロモーターの配列長は、３００～３５０ｂｐの範囲にある、例１に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0280】

例３、ＭＰＺプロモーター由来

【0281】

シュワン細胞特異的プロモーターは、既知のヒト又ラットのＭＰＺプロモーターの改変されたバージョンである、例１及び２のいずれか一方に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0282】

例４、ＭＰＺプロモーターの改変の限定

【0283】

シュワン細胞特異的プロモーターは、既知のヒト又ラットのＭＰＺプロモーターの幾つかのヌクレオチド配列が欠失しているか、又は、既知のヒト又ラットのＭＰＺプロモーターのどちらかの末端（５'及び３'）にＩＥ配列が追加されている、人工的に改変されたシュワン細胞特異的プロモーターである、例１から３のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0284】

例５、ＴＡＴＡボックス、ＣＡＡＴボックス、又はＴＳＳへの限定

【0285】

シュワン細胞特異的プロモーターは、ＴＡＴＡボックス、ＣＡＡＴボックス、又は転写開始部位（ＴＳＳ）を含む、例１から４のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0286】

例６、プロモーター配列の限定（短い形態）

【0287】

シュワン細胞特異的プロモーターは、以下から選択される配列を有する、例１から５のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的プロモーター：

【0288】

配列番号３；配列番号４；配列番号５；配列番号６；及び、配列番号３、４、５、及び６のうちの１つと少なくとも９０％の相同性を有する配列。

【0289】

例７、配列長３００ｂｐへの限定

【0290】

シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３に示す配列、又は、配列番号３と少なくとも９０％の相同性を有する配列を有する、例６に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0291】

例８、プロモーターへのＩＥ追加

【0292】

シュワン細胞特異的プロモーターは更に、３'又は５'末端にイントロンエンハンサー（ＩＥ）を含む、例１から７のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0293】

例９、ＩＥ配列の限定

【0294】

ＩＥの配列は、配列番号７に示す配列、又は、配列番号７と少なくとも９０％の相同性を有する配列である、例８に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0295】

例１０、配列の限定（ＩＥ追加形態）

【0296】

シュワン細胞特異的プロモーターは、以下から選択される配列からなる、例８及び９のいずれか一方に記載のシュワン細胞特異的プロモーター：

【0297】

配列番号８；配列番号９；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６；及び、配列番号８、９、１１、１２、１３、１４、１５、及び１６のうちの１つと少なくとも９０％の相同性を有する配列。

【0298】

例１１、配列長４１７ｂｐへの限定１

【0299】

シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号８に示す配列、又は、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する配列からなる、例１０に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0300】

例１２、配列長４１７ｂｐへの限定２

【0301】

シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号９に示す配列、又は、配列番号９と少なくとも９０％の相同性を有する配列からなる、例１０に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0302】

例１３、配列長３１７ｂｐへの限定

【0303】

シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号１３に示す配列、又は、配列番号１３と少なくとも９０％の相同性を有する配列からなる、例１０に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0304】

例１４、３倍の長さの違いの強調

【0305】

シュワン細胞特異的プロモーターの長さは、既知のＭＰＺプロモーターの長さの３分の１以下である、例７から１３のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【0306】

シュワン細胞特異的発現ベクター

【0307】

例１５、シュワン細胞特異的プロモーターの含有

【0308】

例１から１４のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的プロモーターを含むシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0309】

例１６、目的遺伝子の含有

【0310】

シュワン細胞特異的発現ベクターは更に目的遺伝子を含み、目的遺伝子はシュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されている、例１５に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0311】

例１７、目的遺伝子の限定（シュワン細胞に関連する疾患の治療）

【0312】

目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患の治療に関連付けられた遺伝子である、例１６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0313】

例１８、シュワン細胞に関連する疾患の限定

【0314】

シュワン細胞に関連する疾患に関連付けられた遺伝子は、コネキシン３２（Ｃｘ３２）遺伝子、ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２（ＳＨ３ＴＣ２）遺伝子、ミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺ）遺伝子、初期増殖応答２（ＥＧＲ２）遺伝子、ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１（ＧＤＡＰ１）遺伝子、Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１（ＮＤＲＧ１）遺伝子、又は末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）遺伝子である、例１７に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0315】

例１９、目的遺伝子の限定（遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質）

【0316】

目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質をコードする遺伝子である、例１６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0317】

例２０、遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質の限定

【0318】

遺伝子を人工的に改変するためのタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、Ｃａｓ１２ｆ１タンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である、例１９に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0319】

例２１、調節／制御エレメントの含有

【0320】

シュワン細胞特異的発現ベクターは更に、調節／制御エレメントを含む、例１５から２０のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的発現。

【0321】

例２２、調節／制御エレメントの例

【0322】

調節／制御エレメントは、ポリアデニル化シグナル、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、及び人工イントロンから選択される１つ又は複数を含む、例２１に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0323】

例２３、ポリアデニル化シグナルの限定

【0324】

ポリアデニル化シグナルは、ウシ増殖ホルモンポリアデニル化（ＢＧＨＡ）シグナル、合成ポリアデニル化（ｓｙｎｐＡ）シグナル、又はシミアンウイルス４０ポリアデニル化（ＳＶ４０ｐＡ）シグナルである、例２２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0325】

例２４、ＳＶ４０ｐＡ及びｓｙｎｐＡ配列の限定

【0326】

ＳＶ４０ｐＡは、配列番号１７、及び、配列番号１７と少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列から選択されるいずれか１つを有する、又は、ｓｙｎｐＡは、配列番号１８、及び、配列番号１８と少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列から選択されるいずれか１つを有する、例２３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0327】

例２５、ＷＲＰＥの限定

【0328】

ＷＰＲＥは、ガンマ、アルファ、及びベータエレメントから選択される１つ又は複数を含む、例２２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0329】

例２６、ＷＲＰＥ配列の限定

【0330】

ＷＰＲＥは、配列番号１９；配列番号２０；及び、配列番号１９又は配列番号２０と少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列から選択されるヌクレオチド配列を有する、例２５に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0331】

例２７、人工イントロンの限定

【0332】

人工イントロンは、シュワン細胞特異的発現ベクターにおける目的遺伝子の発現を改善するためのものである、例２２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0333】

例２８、人工イントロン配列の限定

【0334】

人工イントロンは、配列番号２１のヌクレオチド配列、及び、配列番号２１と少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列から選択されるヌクレオチド配列を有する、例２７に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0335】

例２９、ベクターの限定

【0336】

シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクターである、例１５から２８のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0337】

例３０、ベクターの種類の限定

【0338】

ウイルスベクターは、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ））ベクター、レンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）：ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒａｌ（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ））ベクター、ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒａｌ（ｐｏｘｖｉｒｕｓ））ベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒａｌ（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ））ベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、例２９に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【0339】

シュワン細胞特異的発現ベクターを含む組成物

【0340】

例３１、シュワン細胞特異的発現ベクターを含む組成物

【0341】

例１５から３０のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的発現ベクターを含む組成物。

【0342】

例３２、遺伝子を人工的に改変するための組成物

【0343】

目的遺伝子は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、Ｃａｓ１２ｆ１タンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）をコードする核酸である、例３１に記載の組成物。

【0344】

例３３、ガイドＲＮＡの追加

【0345】

組成物は更に、ガイドＲＮＡ又はガイドＲＮＡをコードする核酸を含む、例３２に記載の組成物。

【0346】

例３４、ガイドＲＮＡの性質

【0347】

ガイドＲＮＡは、シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす遺伝子を標的とする、例３３に記載の組成物。

【0348】

例３５、標的遺伝子の限定

【0349】

シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす遺伝子は、コネキシン３２（Ｃｘ３２）遺伝子、ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２（ＳＨ３ＴＣ２）遺伝子、ミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺ）遺伝子、初期増殖応答２（ＥＧＲ２）遺伝子、ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１（ＧＤＡＰ１）遺伝子、Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１（ＮＤＲＧ１）遺伝子、又は末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）遺伝子である、例３４に記載の組成物。

【0350】

例３６、担体の追加

【0351】

組成物は、結合剤（例えば、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロース、又はゼラチン）；賦形剤（例えば、リン酸二カルシウム）；崩壊剤（例えば、コーンスターチ又はサツマイモのデンプン）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、又はポリエチレングリコールワックス）；甘味料；芳香剤；シロップ；液体担体（例えば、脂肪油）；滅菌水溶液；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；注射用エステル（例えば、オレイン酸エチル）；懸濁剤；乳剤；凍結乾燥製剤；局所製剤；安定剤；緩衝剤；動物油；植物油；ワックス；パラフィン；デンプン；トラガカント；セルロース誘導体；ポリエチレングリコール；シリコン；ベントナイト；シリカ；タルク；酸化亜鉛；及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ又は複数を含む薬学的に許容される担体を含む、例３１から３４のいずれか１つに記載の組成物。

【0352】

例３７、治療のための組成物

【0353】

シュワン細胞に関連する疾患を治療するために使用されるか、又は、治療するように意図される、例３１から３６のいずれか１つに記載の組成物。

【0354】

シュワン細胞で目的遺伝子又は目的タンパク質を特異的に発現させるための方法

【0355】

例３８、シュワン細胞特異的発現ベクターを使用する方法

【0356】

例１５から３０のいずれか１つに記載のシュワン細胞特異的発現ベクターを使用してシュワン細胞で目的遺伝子又は目的タンパク質を特異的に発現させる方法。

【0357】

例３９、細胞にベクターを送達する方法の追加

【0358】

シュワン細胞にシュワン細胞特異的発現ベクターを導入又は送達することを含む、例３８に記載のシュワン細胞で目的遺伝子又は目的タンパク質を特異的に発現させる方法。

【0359】

例４０、送達方法の限定

【0360】

シュワン細胞にシュワン細胞特異的発現ベクターを導入又は送達する方法は、カチオン性リポソーム法、酢酸リチウム－ＤＭＳＯ、脂質媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿法、リポフェクション法、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）媒介性トランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、ナノ粒子媒介性拡散輸送、エレクトロポレーション法、遺伝子銃、ソノポレーション、マグネトフェクション法、ナノ粒子法、及び／又は一時的細胞圧縮又は圧迫法によって実行される、例３９に記載のシュワン細胞で目的遺伝子又は目的タンパク質を特異的に発現させる方法。

【0361】

例４１、シュワン細胞の限定

【0362】

シュワン細胞は、ヒトシュワン細胞又は非ヒト動物シュワン細胞である、例３８から４０のいずれか１つに記載のシュワン細胞で目的遺伝子又は目的タンパク質を特異的に発現させる方法。

【0363】

例４２、インビボなどの実験環境の限定

【0364】

シュワン細胞にシュワン細胞特異的発現ベクターを導入又は送達することは、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで実行される、例３８から４１のいずれか１つに記載のシュワン細胞で目的遺伝子又は目的タンパク質を特異的に発現させる方法。

【0365】

シュワン細胞に関連する疾患の治療における使用

【0366】

例４３、治療方法

【0367】

例３１から３７のいずれか１つに記載の組成物を対象に導入（又は投与）することを含む、シュワン細胞に関連する疾患を治療するための方法。

【0368】

例４４、投与方法の限定

【0369】

対象への組成物の導入（又は投与）は、注射、輸血、インプランテーション、又はトランスプランテーションといった方法によって実行される、例４４に記載のシュワン細胞に関連する疾患を治療するための方法。

【0370】

例４５、投与経路の限定

【0371】

対象への組成物の投与は、網膜下、皮下、皮内、眼内、硝子体内、腫瘍内、節内、髄内、筋肉内、静脈内、リンパ内、又は腹腔内といった投与経路から選択される任意の投与経路で実行される、例４３及び４４のいずれか一方に記載のシュワン細胞に関連する疾患を治療するための方法。

【0372】

例４６、疾患の限定

【0373】

シュワン細胞に関連する疾患は、シャルコー・マリー・トゥース（ＣＭＴ）病又は運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）である、例４３から４５のいずれか１つに記載のシュワン細胞に関連する疾患を治療するための方法。

【0374】

開示の形態

【0375】

以下では、実験例を通じて本開示について詳細に説明する。

【0376】

これらの実験例は単に本開示を更に詳しく例示するためのものであり、本開示の範囲がこれらの実験例によって限定されないことは当業者にとって明らかである。

【0377】

実験例

【0378】

実験方法

【0379】

１．プラスミド生成

【0380】

ギブソンアセンブリを使用したクローニングによってｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９関連ベクターを構築した。ＡＡＶ２又はＡＡＶ９の逆方向タンデムリピート（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ：ＩＴＲ）間にコドン最適化ＳｐＣａｓ９又はコドン最適化ＳａｕｒｉＣａｓ９配列、及び、比較対象となる目的プロモーター配列（配列番号３、７、８、１３、及び３２）のそれぞれを配置することによってベクターを構築した。そして、比較対象となる目的プロモーター配列のそれぞれは、Ｃａｓ９の上流にあった。比較対象となるプロモーター配列は、３００ｂｐの小型ＭＰＺプロモーター（ｓＭＰＺプロモーター、配列番号３）；１１７ｂｐのｅｇｒ２／ｓｏｘ１０結合部位（イントロンエンハンサー又はＩＥ、配列番号７）がｓＭＰＺプロモーターの上流に追加されたプロモーター（配列番号８）；１１７ｂｐのｅｇｒ２／ｓｏｘ１０結合部位がｓＭＰＺプロモーターの下流に追加されたプロモーター（配列番号１３）；ｓＭＰＺプロモーターの５'末端の部分がＩＥと交換されたプロモーター（配列番号９）；又は、全ての組織で高い発現率を有することが以前から知られている（シュワン細胞に非特異的な）ＥＦＳプロモーターといったバリエーションを含んでいた。

【0381】

構築したベクターに基づき、ギブソンアセンブリを使用して、ＢＧＨＡの代わりにｓｙｎｐＡ及びｓｖ４０ｐＡを含むベクターを更に構築した。ＥＰＳプロモーターは、以下の核酸配列を有していた：５'－ＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＡＴＴＧＡＴＣＣＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＡＧＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＣＧＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＴＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＣＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＧＴＡＧＴＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＡＧ－３'（配列番号３２）。

【0382】

逆方向タンデムリピート（ＩＴＲ）間のＵ６プロモーター及びｓｇＲＮＡ（未改質又はｓｆ改質）配列を運ぶｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡベクターを構築した。ＢｓｐＱＩ部位を使用したオリゴクローニングによって、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡのＳｐＣａｓ９特異的ガイドＲＮＡ（表１のガイドＲＮＡ１又はガイドＲＮＡ２）を産生した。

【0383】

ＳａｕｒｉＣａｓ９を試験するために、ＩＴＲ間に配置されたＳａｕｒｉＣａｓ９及びｓｇＲＮＡ配列の両方を含むｐＡＡＶ－ＳａｕｒｉＣａｓ９－Ｕ６－ｓｇＲＮＡベクターの形態でシングルベクターを構築した。このとき、これらのベクターでは、ＳａｕｒｉＣａｓ９の上流に比較対象となるプロモーターのそれぞれを配置し、プロモーター及びＳａｕｒｉＣａｓ９配列のそれぞれの間にｍｖｍイントロンを置き、ＳａｕｒｉＣａｓ９及びｓｖ４０ｐＡの間にＷＰＲＥ－ショートを配置した。また、活性が証明されている黄色ブドウ球菌Ｃａｓ９（ＳａＣａｓ９）のバックボーンとして、ｓｇＲＮＡバックボーンを使用した。ＢｓｐＱＩ部位を使用したオリゴクローニングによって、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡのＳａｕｒｉＣａｓ９特異的ガイドＲＮＡ（表１）を産生した。

【0384】

また、ギブソンアセンブリを使用したクローニングによって、ｐＡＡＶ－ｔｄＴｏｍａｔｏ関連ベクターを構築した。ＡＡＶ９の逆方向タンデムリピート（ＩＴＲ）間にコドン最適化ｔｄＴｏｍａｔｏ配列、及び、比較対象となる目的プロモーター配列（配列番号１、３、及び９）のそれぞれを配置することによってベクターを構築した。そして、ｔｄＴｏｍａｔｏの上流に比較対象となる目的プロモーター配列のそれぞれを配置した。比較対象となる目的プロモーター配列は、３００ｂｐの小型ＭＰＺプロモーター（ｓＭＰＺプロモーター、配列番号３））；ｓＭＰＺプロモーターの５'末端の部分がＩＥと交換されたプロモーター（配列番号９）；及び既知のＭＰＺプロモーター（配列番号１）といったバリエーションを含んでいた。ｔｄＴｏｍａｔｏは、以下の核酸配列を有していた：ＴＧＡＡＣＴＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＴＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＧＣＡＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＡＡＧＡＴＧＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＡＡＴＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＡＣＣＧＡＧＣＧＣＣＴＧＴＡＣＣＣＣＣＧＣＧＡＣＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＴＣＣＡＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＴＡＣＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＣＡＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＴＧＣＡＡＣＴＧＣＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＧＡＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＡＣＴＡＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＧＡＧＣＧＣＴＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧＴＡＧ－３'（配列番号３３）。

【0385】

【表1】

【0386】

２．細胞培養及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９（又はｔｄＴｏｍａｔｏ）トランスフェクション

【0387】

１０％ウシ胎仔血清（ＷｅｌＧｅｎｅ）及び１Ｘペニシリン／ストレプトマイシン（ＷｅｌＧｅｎｅ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）（ＷｅｌＧｅｎｅ）で毎週継代培養することによって、ヒトシュワン様細胞株（ｓＮＦ０２．２）（ＣＲＬ－２８８５、ＡＴＣＣ）、Ｓ１６細胞株（ＣＲＬ－２９４１、ＡＴＣＣ）、及びＲＴ４細胞株（ＣＲＬ２７６８、ＡＴＣＣ）を維持した。

【0388】

ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９関連ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ関連ベクターをそれぞれ０．１ｐｍｏｌの濃度でヒトシュワン様細胞（ｓＮＦ０２．２）にコトランスフェクトした。Ｎｅｏｎトランスフェクション（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用し、１０μｌチップ、１４００Ｖ、２０ｍｓ、及び２パルスという条件で１．５×１０^５個の細胞を置くことによってトランスフェクションを実行した。フォルスコリンを２．５μＭの濃度で加えて細胞を処置し、トランスフェクションの５日後に細胞ペレットを得て、Ｑｕｉｃｋ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（ＺＹＭＯ ＲＥＳＥＡＲＣＨ）を使用してＲＮＡを抽出した。

【0389】

ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９関連ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ関連ベクターをそれぞれ０．１ｐｍｏｌの濃度でＳ１６細胞にコトランスフェクトした。１０μｌチップ、１４００Ｖ、２０ｍｓ、及び２パルスという条件で１．５×１０^５個の細胞を置くことによってトランスフェクションを実行した。トランスフェクションの３日後に細胞ペレットを得て、Ｑｕｉｃｋ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（ＺＹＭＯ ＲＥＳＥＡＲＣＨ）を使用してＲＮＡを抽出した。

【0390】

ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９関連ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ関連ベクターをそれぞれ０．１ｐｍｏｌの濃度でＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にコトランスフェクトした。１０μｌチップ、１４００Ｖ、２０ｍｓ、及び２パルスという条件で１．５×１０^５個の細胞を置くことによってトランスフェクションを実行した。トランスフェクションの３日後に細胞ペレットを得て、Ｑｕｉｃｋ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（ＺＹＭＯ ＲＥＳＥＡＲＣＨ）を使用してＲＮＡを抽出した。

【0391】

ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞を１２ウェルプレートに１ウェルあたり５×１０^５個の細胞密度で播種した。ＡＡＶストックを解凍し、１細胞あたり１×１０^４に希釈した。合計１００μｌのＡＡＶを１細胞あたり１×１０^４の濃度でプレートの各ウェルに追加し、次いで３日間培養した。次に、ゲノムＤＮＡを抽出し、次いでＰＣＲで標的上（ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ）の部位を増幅した。次世代シーケンシングのために、シーケンシングプライマーに特定のアダプター及びＴｒｕＳｅｑ ＨＴ Ｄｕａｌ Ｉｎｄｅｘプライマーを取り付けることによってＰＣＲを更に実行した。その後、ペアシーケンシングリードを使用することによって、標的上のゲノム位置における挿入又は欠失（インデル）（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｏｒ ｄｅｌｅｔｉｏｎ（ｉｎｄｅｌ））の定量分析を通じてガイドＲＮＡ１（配列番号２２）及びガイドＲＮＡ２（配列番号３４）の活性を評価した。

【0392】

ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞懸濁液を６．２５×１０^５個／ｍｌの細胞密度で作り、各ウェルに８００ｕｌの細胞懸濁液を接種した。細胞を１ウェル（１２ウェルプレート）あたり５×１０^５個の細胞密度で分配し培養した。ｐＡＡＶ－ｔｄＴｏｍａｔｏ関連ベクターを１細胞あたり１×１０^６の濃度で構築した。１００μｌのｐＡＡＶ－ｔｄＴｏｍａｔｏ関連ベクターにより細胞を１細胞あたり１×１０^６ｇｃの密度で処置し、次いで培養した。Ｑｕｉｃｋ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（ＺＹＭＯ ＲＥＳＥＡＲＣＨ）を使用して培養細胞からＤＮＡ及びＲＮＡを抽出した。代替的に、培養細胞を１．５ｍＬのチューブに置き、次いで４℃の温度で２分間９０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心分離による上清を除去し、１ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液を追加して細胞を洗浄した。細胞を４℃の温度で２分間９０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を吸引し、３００ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。次に、ＦＡＣＳデバイスで分析を実行した。ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９関連ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ関連ベクターをそれぞれ０．１ｐｍｏｌの濃度でＲＴ４細胞にコトランスフェクトした。代替的に、ｐＡＡＶ－ＳａｕｒｉＣａｓ９－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ関連ベクターを０．２ｐｍｏｌの濃度でＲＴ４細胞にトランスフェクトした。１０μｌチップ、１４００Ｖ、２０ｍｓ、及び２パルスという条件で２×１０^５個の細胞を置くことによってトランスフェクションを実行した。トランスフェクションの３日後に細胞ペレットを得て、Ｑｕｉｃｋ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（ＺＹＭＯ ＲＥＳＥＡＲＣＨ）を使用してＤＮＡ及びＲＮＡを抽出した。

【0393】

ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９関連ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ関連ベクターを１：１で混合して合計１×１０^１４ｖｇ／ｋｇとし、麻酔をかけた実験動物（ラット）の尾静脈に投与した。４週間後、実験動物（ラット）を殺処分し、次いでその肝臓、坐骨神経、及び腰神経を採取した。そこから、Ｑｕｉｃｋ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（ＺＹＭＯ ＲＥＳＥＡＲＣＨ）を使用してＤＮＡ及びＲＮＡを抽出した。

【0394】

３．リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）

【0395】

抽出したＲＮＡを合計量１００～１０００ｎｇに調節し、次いでｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してｃＤＮＡを製造するためにそのＲＮＡを使用した。製造業者のプロトコル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に従ってＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘと共に１０～１５ｎｇのｃＤＮＡを使用して、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ３装置でｑＲＴ－ＰＣＲを実行した。ＣＴ値を使用してＳｐＣａｓ９の発現量を計算し、ｈＧＡＰＤＨ及びｒＧＡＰＤＨを内部コントロールとして使用した。使用したプライマーを表２に示す。

【0396】

【表2】

【0397】

４．インデル分析（標的とするディープシーケンシング）

【0398】

抽出したゲノムＤＮＡ及びプライマー（表３）を使用して標的上の部位を増幅し、次いでｉｌｌｕｍｉｎｅ ＴｒｕｅＳｅｑアダプター（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用してさらなるＰＣＲでサンプルごとにバーコードを作成した。ＰＣＲ精製キット（Ｉｎｔｒｏｎｂｉｏ）を使用して各サンプルを精製した。サンプルを等モル比でプールした後、Ｍｉｓｅｑ及びＴｒｕｅＳｅｑ（ＨＴ）デュアルインデックスシステム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用してペアシーケンシングを実行して、シーケンシングリードを産生した。ＣＲＩＳＰＲ／ＲＧＥＮ Ｔｏｏｌｓ（ｗｗｗ．ｒｇｅｎｏｍｅ．ｎｅｔ）のＣａｓ９－Ａｎａｌｙｚｅｒツールを使用して、生成したリードを分析して、標的上のゲノム位置における挿入又は欠失（インデル）リードを定量的に計算した。これにより、ベクターを介した遺伝子編集効率を比較及び評価することが可能になった。

【0399】

【表3】

【0400】

５．統計

【0401】

統計分析にはスチューデントのｔ検定を使用した。有意差は、＊がｐ＜０．０５を意味し、＊＊がｐ＜０．０１を意味し、＊＊＊がｐ＜０．００１を意味することを意味する。

【0402】

実験結果

【0403】

実験例１。ラットシュワン細胞株及びラットシュワン様細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターの効果

【0404】

実験例１－１。ラットシュワン細胞株における効果－Ｓ１６細胞

【0405】

ラットＭＰＺ遺伝子の転写開始部位（ＴＳＳ）及びＴＡＴＡボックスを含む小型ＭＰＺプロモーター（ｓＭＰＺ、配列番号３）を改変するために、ｓＭＰＺプロモーターの上流に１１７ｂｐのイントロンエンハンサー（ＩＥ、配列番号７）が追加されたプロモーター（ＩＥ－ｓＭＰＺ、配列番号８）に従ってＳｐＣａｓ９を発現させるベクター；ｓＭＰＺプロモーターの下流にＩＥが追加されたプロモーター（ｓＭＰＺ－ＩＥ、配列番号１３）に従ってＳｐＣａｓ９を発現させるベクター；及び、ｓＭＰＺプロモーターの５'末端の部分がＩＥと交換されたプロモーター（ＩＥ２００、配列番号９）に従ってＳｐＣａｓ９を発現させるベクターを構築した。ＩＥは、主要なｅｇｒ２／ｓｏｘ１０結合部位としてＭＰＺ遺伝子の最初のイントロン内に配置した。その後、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ領域を標的とするｓｇＲＮＡ（表１に示すガイドＲＮＡ１）を発現させるベクターをシュワン細胞株であるＳ１６細胞にコトランスフェクトし、次いでＳｐＣａｓ９の発現及び遺伝子編集効率を試験した。

【0406】

結果を図１及び図２に示す。

【0407】

図１は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＳ１６細胞にコトランスフェクトした後のＣａｓ９発現を確認した結果を示す（Ｎ＝３－４）。図２は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＳ１６細胞にコトランスフェクトした後のｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ標的の遺伝子編集効率（Ｂ）を検証した結果を示す（Ｎ＝３－４）。このとき、ＮＴは非トランスフェクションを意味し；ｓＭＰＺは小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；ＩＥはイントロンエンハンサー（配列番号７）を意味し；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味し；ＩＥ－ｓＭＰＺは改変されたプロモーター（配列番号８）を意味し；且つ、ｓＭＰＺ－ＩＥは改変されたプロモーター（配列番号１３）を意味する。＊、ｐ＜０．０５ ｖｓ ｓＭＰＺ；＊＊、ｐ＜０．０１ ｖｓ ｓＭＰＺ。

【0408】

図１に示すように、ｓＭＰＺプロモーターベクター、ＩＥ２００ベクター、ＩＥ－ｓＭＰＺベクター、及びｓＭＰＺ－ＩＥプロモーターベクターをトランスフェクトした細胞では、ＳｐＣａｓ９の発現及びｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ標的部位におけるインデルの発生が確認された。換言すると、本開示の全てのプロモーターが目的遺伝子を効果的に発現させる可能性がある。特に、ＩＥ２００、ＩＥ－ｓＭＰＺ、及びｓＭＰＺ－ＩＥプロモーターベクターをトランスフェクトした細胞では、ｓＭＰＺプロモーターベクターをトランスフェクトした細胞よりもＳｐＣａｓ９の発現がおよそ２～４倍高かった（図１）。

【0409】

更に、発現したＳｐＣａｓ９を介する遺伝子編集効果については、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ標的部位で発生するインデルが２倍以上増加した（図２）。

【0410】

実験例１－２。ラットシュワン様細胞における効果－ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞

【0411】

本発明者は、実験例１－１で使用したＳ１６細胞に加えて、別のシュワン様細胞株であるＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔを使用して、本開示のプロモーターの有効性を確認した。

【0412】

ｓＭＰＺプロモーター、ＩＥ２００プロモーター、ＩＥ－ｓＭＰＺプロモーター、及びｓＭＰＺ－ＩＥプロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクター、及び、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ領域を標的とするｓｇＲＮＡ（表１に示すガイドＲＮＡ１）を発現させるベクターをシュワン様細胞株であるＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にコトランスフェクトした。その後、遺伝子編集効率を試験した。

【0413】

結果を図８に示す。図８は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にコトランスフェクトした後のｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ標的の遺伝子編集効率を検証した結果を示す。このとき、ＮＴは非トランスフェクションを意味し；ｒＭＰＺは小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；ＩＥはイントロンエンハンサー（配列番号７）を意味し；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味し；ＩＥ－ｓＭＰＺは改変されたプロモーター（配列番号８）を意味し；且つ、ｓＭＰＺ－ＩＥは改変されたプロモーター（配列番号１３）を意味する。＊＊又は＊＊＊は、ｓＭｐｚ３００における遺伝子編集効率がＩＥ２００、ＩＥ－ｓＭｐｚ、及びｓＭｐｚ－ＩＥにおける遺伝子編集効率とは有意に異なっていたことを意味する。

【0414】

実験の結果として、ｓＭＰＺプロモーターベクター、ＩＥ２００ベクター、ＩＥ－ｓＭＰＺベクター、及びｓＭＰＺ－ＩＥプロモーターベクターをトランスフェクトした細胞では、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ標的部位におけるインデルの発生が観察された。特に、ＩＥ２００、ＩＥ－ｓＭＰＺ、及びｓＭＰＺ－ＩＥプロモーターベクターをトランスフェクトした細胞では、ｓＭＰＺプロモーターベクターをトランスフェクトした細胞と比べてｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ標的部位で２倍以上のインデルが発生することが確認された。この実験結果は、本開示のプロモーターがシュワン細胞及びシュワン様細胞で標的タンパク質を効果的に発現させる可能性があることを示す。

【0415】

実験例１－３。長さの異なる標的配列を持つガイドＲＮＡの使用

【0416】

本発明者は、ＩＥ２００プロモーターの制御下で発現したＳｐＣａｓ９及びガイドＲＮＡを利用した。このようにして、発明者は、長さの異なる標的配列に対する遺伝子編集効率、及び、発現したＣＲＩＳＰＲシステムが適切に機能するかどうかを確認した。

【0417】

最後に、ＩＥ２００プロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクター、及び、ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ領域を標的とするｓｇＲＮＡ（表１に示すガイドＲＮＡ１又はガイドＲＮＡ２）を発現させるベクターをシュワン様細胞株であるＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にコトランスフェクトした。その後、遺伝子編集効率を試験した。このとき、ガイドＲＮＡ１は２０ヌクレオチドのガイドドメイン（ｐｍｐ２２遺伝子の部分配列に結合する配列）を有し、ガイドＲＮＡ２は１９ヌクレオチドのガイドドメイン（ｐｍｐ２２遺伝子の部分配列に結合する配列）を有していた。

【0418】

結果を図９に示す。図９は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にコトランスフェクトした後のｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ標的の遺伝子編集効率を検証した結果を示す。このとき、ＩＥ２００は、改変されたプロモーター（配列番号９）であった。ＩＥ２００＋ガイドＲＮＡ１は、ＩＥ２００用のｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びガイドＲＮＡ１用のｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをコトランスフェクトした後のケースを意味する。ＩＥ２００＋ガイドＲＮＡ２は、ＩＥ２００用のｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びガイドＲＮＡ２用のｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをコトランスフェクトした後のケースを意味する。

【0419】

実験の結果として、ガイドＲＮＡ１及びガイドＲＮＡ２を使用すると、同様のレベルの遺伝子編集効率が確認され、発現したＣＲＩＳＰＲシステムが効果的に機能することが示された（図９）。

【0420】

この実験結果は、本開示の改変されたＭＰＺプロモーターの制御下で発現したＳｐＣａｓ９が遺伝子編集機能を効果的に実行することを示した。

【0421】

実験例１－４。ｔｄＴｏｍａｔｏ（蛍光タンパク質）の発現率

【0422】

本発明者は、目的タンパク質としての蛍光タンパク質の発現量を確認することも試みた。

【0423】

ｓＭＰＺプロモーター（３００ｂｐ）、ＩＥ２００プロモーター（３１７ｂｐ）、及び既知のＭＰＺプロモーター（１０００ｂｐ）の制御下でｔｄＴｏｍａｔｏを発現させるベクターをシュワン様細胞株であるＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にトランスフェクトして、ｔｄＴｏｍａｔｏの発現量（蛍光強度）を試験した。

【0424】

結果を図１０及び図１１に示す。図１０は、ｐＡＡＶ－ｔｄＴｏｍａｔｏ発現ベクターをＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にトランスフェクトした後の蛍光タンパク質（ｔｄＴｏｍａｔｏ）の発現量（蛍光強度）の結果を示す。このとき、ＭＰＺ１０００はＭＰＺプロモーター（配列番号１）を意味し；ＭＰＺ３００は小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；且つ、ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味する。＊＊＊は、ＭＰＺ１０００における発現率がＩＥ２００及びＭｐｚ３００における遺伝子編集効率とは有意に異なっていたことを意味する。図１１は、ｐＡＡＶ－ｔｄＴｏｍａｔｏ発現ベクターをＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ細胞にトランスフェクトした後の均一な細胞形質転換を確認した結果を示す。このとき、ＭＰＺ１０００はＭＰＺプロモーター（配列番号１）を意味し；ＭＰＺ３００は小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；且つ、ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味する。

【0425】

図１１に示すように、本開示のｓＭＰＺプロモーター及びＩＥ２００プロモーターと同様の効率で既知のＭＰＺプロモーターを細胞に形質転換した。このとき、ｖｇはベクターゲノムを意味し、ｄｇは二倍体ゲノムを意味する。

【0426】

図１０に示すように、本開示のｓＭＰＺプロモーター及びＩＥ２００プロモーターは、既知のＭＰＺプロモーターよりも蛍光タンパク質の発現において高い効率を示した。一般に、長さ１０００ｂｐの既知のＭＰＺプロモーターを使用すると、結果的に目的タンパク質の発現効率がより高くなることが予想された。しかしながら、実験の結果として、既知のＭＰＺプロモーターの長さのおよそ３分の１の長さである本開示のプロモーターは、蛍光タンパク質に発現においてはるかに高い効率を示すことが確認された。特に、ＩＥ２００プロモーターは、既知のＭＰＺプロモーターと比べて目的タンパク質の発現量が２倍より多いことを示した。

【0427】

この実験結果は、本開示のシュワン細胞特異的プロモーターが、既知のＭＰＺプロモーターよりも長さがはるかに短いにもかかわらず、既知のＭＰＺプロモーターよりはるかに高い効率でシュワン細胞における目的タンパク質の発現を有意に向上させる可能性があることを実証した。

【0428】

実験例２。ヒトシュワン細胞株における改変されたＭＰＺプロモーターの効果

【0429】

本発明者は、ヒトシュワン細胞における本開示のシュワン細胞特異的プロモーターの効果を確認しようと試みた。

【0430】

ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをヒトシュワン細胞株であるｓＮＦ０２．２にコトランスフェクトした後のＣａｓ９発現を検証した。

【0431】

結果を図３に示す。図３は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをヒトシュワン細胞株であるｓＮＦ０２．２にコトランスフェクトした後のＣａｓ９発現を検証した結果を示す。Ｃａｓ９発現を平均値で表した（Ｎ＝３）。このとき、ＮＴは非トランスフェクションを意味し；ｓＭＰＺは小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味し；ＩＥ－ｓＭＰＺは改変されたプロモーター（配列番号８）を意味し；且つ、ｓＭＰＺ－ＩＥは改変されたプロモーター（配列番号１３）を意味する。

【0432】

図３に示すように、本開示のシュワン細胞特異的プロモーターがＮＦ０２．２細胞でＳｐＣａｓ９を効果的に発現させることが確認された。特に、本開示の３つの改変されたプロモーターのうち、ＩＥ２００プロモーターによるＳｐＣａｓ９発現率が最も高いことが確認された（図３）。

【0433】

この実験結果は、本開示のプロモーターがヒトシュワン細胞においても目的タンパク質を効果的に発現させることができることを示す。換言すると、これは、本開示のシュワン細胞特異的プロモーターがヒトの遺伝子編集及び疾患治療などの目的に使用され得ることを示唆する。

【0434】

実験例３。発現系に対するさらなる改質

【0435】

本発明者は、改変されたＭＰＺプロモーターを使用してＣＲＩＳＰＲシステムを活性化することによって遺伝子編集効果を確認する実験に焦点を当てた。このプロセスでは、Ｃａｓ９タンパク質又はｇＲＮＡの発現効率を改善するためにさらなる改質エレメントを検討した。

【0436】

実験例３－１。最適化されたさらなる発現系の具体例１：目的タンパク質へのポリＡの追加

【0437】

本発明者は、より小さいサイズの他の種類のベクターにおける改変されたＭＰＺプロモーターの効果をチェックすることも試みた。ＡＡＶベクターのパッケージング容量を考慮して、ウシ増殖ホルモンポリＡ（ＢＧＨＡ、２２５ｂｐ）よりもサイズが小さい合成ポリＡ（ｓｙｎｐＡ、４９ｂｐ）又はシミアンウイルス４０ポリＡ（ｓｖ４０ｐＡ、１０４ｂｐ、配列番号１７）に基づくベクターを使用し、次いでこれらのベクターにおける遺伝子編集効率を評価した。

【0438】

結果を図６に示す。図６は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＳ１６細胞にコトランスフェクトした後の標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を検証した結果を示す（Ｎ＝３）。このとき、ＮＴは非トランスフェクションを意味し；ｓＭＰＺは小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味し；ｓｙｎｐＡは合成ポリＡ（４９ｂｐ、配列番号１８）を意味し；且つ、ｓｖ４０ｐＡはシミアンウイルス４０ポリＡ（１０４ｂｐ、配列番号１７）を意味する。＊＊＊、ｐ＜０．００１ ｖｓ ｓＭＰＺ＿ｓｙｎｐＡ。

【0439】

合成ポリＡ（ｓｙｎｐＡ、４９ｂｐ）又はシミアンウイルス４０ポリＡ（ｓｖ４０ｐＡ、１０４ｂｐ、配列番号１７）に基づくベクターを使用すると、Ｓ１６細胞でＩＥ２００プロモーターによるＣａｓ９発現の効率の増加が確認された（図６）。この実験結果は、本開示のシュワン細胞特異的プロモーターが小型ベクターでの使用に適している可能性があることを示す。

【0440】

実験例３－２。最適化されたさらなる発現系の具体例２：目的タンパク質へのＷＰＲＥ（人工イントロン）の追加

【0441】

次に、ＳｐＣａｓ９より小さく、且つ、シングルＡＡＶとして産生され得る、ＳａｕｒｉＣａｓ９ベースのベクターを使用して、ＲＴ４細胞でＩＥ２００の効果を追加的に試験した。

【0442】

結果を図７に示す。図７は、シングルｐＡＡＶ－Ｓａｕｒｉ－Ｃａｓ９－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＲＴ４細胞にトランスフェクトした後の標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を検証した結果を示す（Ｎ＝３）。このとき、ＮＴは非トランスフェクションを意味し；ｓＭＰＺは小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味し；且つ、ＭＷはｍｖｍイントロン＋ＷＰＲＥ－ショートを意味する。＊＊＊、ｐ＜０．００１ ｖｓ ｓＭＰＺ－ＭＷ。

【0443】

ｓＭＰＺを使用してＳａｕｒｉＣａｓ９を発現させるｓＭＰＺベクターと比べると、ｍｖｍイントロン及びＷＰＲＥなどの最適化エレメントを追加したｓＭＰＺ－ＭＷベクターを使用した場合、表１に示すように、ＳａｕｒｉＣａｓ９が標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率が増加した。この結果は、これらの最適化エレメント及び改変されたＭＰＺプロモーターを組み合わせたベクターで遺伝子編集効率が有意に増加したことを示す（図７）。特に、これは、様々な最適化エレメントと組み合わせて使用した場合でも、ＩＥ２００プロモーターが他の改変されたＭＰＺプロモーターより優れた効率を示したことを示す。また、これは、改変されたＭＰＺプロモーターが、デュアルＡＡＶ又はシングルＡＡＶに適用可能な全ての種類のＣａｓ９をシュワン細胞で発現させることができることを実証する。

【0444】

実験例３－３。最適化されたさらなる発現系の具体例３：ポリＴを除去したｇＲＮＡ発現ベクター

【0445】

改変されたプロモーターのうち、効率が最も高くてサイズが最も小さいことからＡＡＶとの互換性がより高いＩＥ２００を使用して、さらなる検証を実施した。特に、ＩＥ２００を遺伝子編集用の他の最適化エレメントと組み合わせて使用した場合のさらなる改善効果を確認するための研究を実施した。Ｕ６プロモーターによって推進されるｓｇＲＮＡ発現を向上させるためにｓｇＲＮＡ足場からポリＴを除去することによってｓｆ改質ベクターなどのベクターを作成し、次いでこれらの実験のためにそのベクターをＳ１６細胞にコトランスフェクトした。

【0446】

結果を図４及び図５に示す。図４は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｆ改質－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＳ１６細胞にコトランスフェクトした後の標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を検証した結果を示す（Ｎ＝３－６）。図５は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｆ改質－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをＲＴ４細胞にコトランスフェクトした後の標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を検証した結果を示す（Ｎ＝３－６）。このとき、ＮＴは非トランスフェクションを意味し；ｓＭＰＺは小型ＭＰＺコアプロモーター（配列番号３）を意味し；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）を意味し；且つ、Ｓｆ改質はｓｇＲＮＡバックボーンの足場改質を意味する。＊、ｐ＜０．０５ ｖｓ ｓＭＰＺ（図４及び図５）又はｓＭＰＺ＋ｓｆ改質（図４）；＊＊、ｐ＜０．０１ ｖｓ ｓＭＰＺ（図４及び図５）又はｓＭＰＺ＋ｓｆ改質（図４）；＊＊＊、ｐ＜０．００１ ｖｓ ｓＭＰＺ＋ｓｆ改質（図４）。

【0447】

結果として、ＩＥ２００プロモーターをｓｆ改質ベクターと併用すると、様々な投与量条件下で遺伝子編集効率が更に増加することが確認された（図４）。別の種類のラットシュワン細胞であるＲＴ４細胞でも同様に、このさらなる効果が確認された（図５）。

【0448】

実験例４。実験動物（ラット）における改変されたＭＰＺプロモーターの効果

【0449】

更に、本発明者は、本開示のプロモーターがシュワン細胞に対してより特異的な効果を有するかどうかを動物実験を通じて確認しようと試みた。換言すると、静脈内に投与されたＣＲＩＳＰＲ組成物が肝臓のような組織を通過し、神経組織でより特異的な発現を示す可能性があるかどうかが確認された。

【0450】

麻酔薬で実験動物（ＳＤラット）に麻酔をかけた後、反射症状をチェックして、その動物に麻酔がかかっているかどうかを確かめた。次に、麻酔にかかった動物を較正フレームに置いた。ｐｍｐ２２－ＴＡＴＡ領域を標的とするｓｇＲＮＡ（表１のガイドＲＮＡ１）を発現させるベクターを、ＥＦＳプロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクター及びＩＥ２００プロモーターの制御下でＳｐＣａｓ９を発現させるベクターと共に、実験動物（ラット）の尾静脈からコトランスフェクトした。

【0451】

４週間後、動物を殺処分し、肝臓、シュワン細胞が集まる坐骨神経、及びシュワン細胞が集まる腰神経を採取した。その後、採取した組織又は細胞からゲノムＤＮＡを調整し、遺伝子編集効率を試験した。

【0452】

結果を図１２及び図１３に示す。図１２は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをラットの尾静脈に注入した後の坐骨神経及び腰神経における標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を検証した結果を示す。このとき、ＥＦＳはＥＦＳプロモーター（配列番号３２）であり；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）であった。図１３は、ｐＡＡＶ－ＳｐＣａｓ９－ＢＨＧＡ発現ベクター及びｐＡＡＶ－Ｕ６－ｓｇＲＮＡ発現ベクターをラットの尾静脈に注入した後の肝臓における標的とするｐｍｐ２２－ＴＡＴＡの遺伝子編集効率を検証した結果を示す。このとき、ＥＦＳはＥＦＳプロモーター（配列番号３２）であり；ＩＥ２００は改変されたプロモーター（配列番号９）であった。

【0453】

本発明者は、改変されたＭＰＺプロモーターが神経細胞で目的タンパク質を特異的に発現させるかどうかを確認しようと試みた。特に、神経細胞以外の細胞のうち肝細胞を対照として使用して、神経細胞における特異的発現を確認した。これは、静脈内注射の場合、投与された物質のほとんどが全身投与システムで肝臓組織を通過せざるを得ないという事実を本発明者が考慮したからである。

【0454】

従って、実験例６ではベクターをラットの尾静脈から注入したので、注入されたベクターのほとんどが肝臓に移動するであろうと予想された。従って、神経細胞に対して特異的なプロモーターを使用した場合であっても肝臓におけるＣａｓ９発現及びインデル効率が十分であることが予想された。

【0455】

従って、本発明者は、肝臓細胞と比べて神経細胞における改変されたＭＰＺプロモーターのインデル効率が他のプロモーターのインデル効率より高いかどうかを判断し、それによって本開示のプロモーターが神経細胞に対してより特異的であるかどうかを確認しようと試みた。このとき、全ての組織で高い発現率を有することが知られているＥＦＳプロモーターを、改変されたＭＰＺプロモーターと比較するためのプロモーターとして使用した。

【0456】

結果として、ＥＦＳプロモーターは、肝臓組織で４５％近くの遺伝子編集効率（図１３）を示し、神経細胞でおよそ１０％の遺伝子編集効率（図１２）を示した。換言すると、神経細胞は、肝臓細胞と比べて約５分の１の効果しか示さなかった。

【0457】

これに対して、本開示の改変されたＭＰＺプロモーターであるＩＥ２００を使用すると、肝臓組織における遺伝子編集効率が約１５％（図１３）であり、神経細胞における効率が約６％～８％（図１２）であった。すなわち、神経細胞は、肝細胞と比べて約半分の効果を示した。換言すると、これは、本開示の改変されたＭＰＺプロモーターが、神経細胞でより特異的に目的タンパク質を発現させたことを意味する。

【0458】

これらの結果は、神経細胞に対して特異的に遺伝子編集が必要であるとき、他のプロモーターよりも、改変されたＭＰＺプロモーターの使用が好ましいことを示す。

【産業上の利用可能性】

【0459】

本開示は、シュワン細胞で特異的に機能する人工的に操作されたミニマルプロモーターに関する。人工的に操作されたミニマルプロモーターは、ミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺ又はＰ０）のプロモーターに由来する。

【0460】

［項目１］
配列番号３；配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１３；配列番号１４；及び、配列番号３、４、８、９、１３、及び１４のうちの１つと少なくとも９０％以上の相同性を有する配列
から選択される配列を有するシュワン細胞特異的プロモーター。
［項目２］
シュワン細胞特異的プロモーター；及び
目的遺伝子
を備え、
前記シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号３；配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１３；配列番号１４；及び、配列番号３、４、８、９、１３、及び１４のうちの１つと少なくとも９０％以上の相同性を有する配列からなる群から選択される配列を有し、
前記目的遺伝子は、シュワン細胞で発現するように構成された遺伝子、又は、シュワン細胞で発現するように構成されたタンパク質をコードする核酸であり、
前記目的遺伝子は、前記シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されている、
シュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目３］
前記シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクター又は非ウイルスベクターである、
項目２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目４］
前記ウイルスベクターは、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ））ベクター、レンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））ベクター、アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）：ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒａｌ（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ））ベクター、ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒａｌ（ｐｏｘｖｉｒｕｓ））ベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒａｌ（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ））ベクターからなる群から選択される１つ又は複数のウイルスベクターである、
項目３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目５］
前記シュワン細胞特異的発現ベクターは更に、１つ又は複数の調節／制御エレメントを備える、
項目２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目６］
前記調節／制御エレメントは、エンハンサー、人工イントロン、ポリアデニル化シグナル、及び／又はＷＰＲＥである、
項目５に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目７］
シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記ポリアデニル化シグナルを備え、
前記ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡである、
項目６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目８］
シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記人工イントロン及び前記ＷＰＲＥを備え、
前記人工イントロンは、ＭＶＭイントロンであり、
前記ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３である、
項目６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目９］
シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記人工イントロン、前記ＷＰＲＥ、及び前記ポリアデニル化シグナルを備え、
前記人工イントロンは、ＭＶＭイントロンであり、
前記ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であり、
前記ポリアデニル化シグナルは、ｓｙｎｐＡ又はＳＶ４０ｐＡである、
項目６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目１０］
前記目的遺伝子は、シュワン細胞で遺伝子を人工的に操作するために使用されるタンパク質をコードする核酸である、
項目２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目１１］
遺伝子を人工的に操作するための前記タンパク質は、Ｃａｓタンパク質である、
項目１０に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目１２］
前記Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ１２ａ１（Ｃｐｆ１）タンパク質、又はＣａｓ１２ｆ１タンパク質である、
項目１１に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目１３］
前記Ｃａｓ９タンパク質は、化膿連鎖球菌Ｃａｓ９（ＳｐＣａｓ９）タンパク質、黄色ブドウ球菌Ｃａｓ９（ＳａＣａｓ９）タンパク質、カンピロバクター・ジェジュニＣａｓ９（ＣｊＣａｓ９）タンパク質、又はスタフィロコッカス・アウリクラーリスＣａｓ９（ＳａｕｒｉＣａｓ９）タンパク質である、
項目１２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目１４］
前記目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患を治療すること（の治療）に関連付けられた遺伝子である、
項目２に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目１５］
前記シュワン細胞に関連する疾患を治療することに関連付けられた前記遺伝子は、Ｃｘ３２（コネキシン３２）遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２（ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２）遺伝子、ＭＰＺ（ミエリンタンパク質ゼロ）遺伝子、ＥＧＲ２（初期増殖応答２）遺伝子、ＧＤＡＰ１（ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１）遺伝子、ＮＤＲＧ１（Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１）遺伝子、又はＰＭＰ２２（末梢ミエリンタンパク質２２）遺伝子である、
項目１４に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。
［項目１６］
項目１０に記載の発現ベクターを備える組成物であって、
前記発現ベクターは、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸を有し、
前記組成物は更に、ガイドＲＮＡ又は前記ガイドＲＮＡをコードする核酸を備える、
組成物。
［項目１７］
前記ガイドＲＮＡは、シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす遺伝子を標的とし、
前記シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす前記遺伝子は、Ｃｘ３２（コネキシン３２）遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２（ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２）遺伝子、ＭＰＺ（ミエリンタンパク質ゼロ）遺伝子、ＥＧＲ２（初期増殖応答２）遺伝子、ＧＤＡＰ１（ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１）遺伝子、ＮＤＲＧ１（Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１）遺伝子、又はＰＭＰ２２（末梢ミエリンタンパク質２２）遺伝子である、
項目１６に記載の組成物。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-09-04

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；及び、配列番号１６から選択されるヌクレオチド配列を備えるシュワン細胞特異的プロモーターであって、
前記シュワン細胞特異的プロモーターの長さは、２００ｂｐ～５００ｂｐの範囲にある、
シュワン細胞特異的プロモーター。

【請求項2】

前記シュワン細胞特異的プロモーターの前記ヌクレオチド配列は、配列番号８；配列番号９；配列番号１３；及び配列番号１４から選択される配列である、
請求項１に記載のシュワン細胞特異的プロモーター。

【請求項3】

シュワン細胞特異的プロモーター；及び
目的遺伝子
を備え、
前記シュワン細胞特異的プロモーターは、配列番号４；配列番号８；配列番号９；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；及び、配列番号１６からなる群から選択される配列を備え、
前記シュワン細胞特異的プロモーターの長さは、２００ｂｐ～５００ｂｐの範囲にあり、
前記目的遺伝子は、シュワン細胞で発現するように構成されているか、又は、シュワン細胞で遺伝子を操作することができるタンパク質をコードする核酸であり、
前記目的遺伝子は、前記シュワン細胞特異的プロモーターに機能可能に連結されている、
シュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項4】

前記シュワン細胞特異的発現ベクターは、ウイルスベクター又は非ウイルスベクターである、
請求項３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項5】

前記シュワン細胞特異的発現ベクターは更に、１つ又は複数の調節エレメントを備える、
請求項３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項6】

前記調節エレメントは、エンハンサー、人工イントロン、ポリアデニル化シグナル、及びウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）からなる群から選択される１つ又は複数のエレメントである、
請求項５に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項7】

前記シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記ポリアデニル化シグナルを備え、
前記ポリアデニル化シグナルは、合成ポリアデニル化（ｓｙｎｐＡ）シグナル又はシミアンウイルス４０ポリアデニル化（ＳＶ４０ｐＡ）シグナルである、
請求項６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項8】

前記シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記人工イントロン及び前記ＷＰＲＥを備え、
前記人工イントロンは、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンであり、
前記ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３である、
請求項６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項9】

前記シュワン細胞特異的発現ベクターは、前記人工イントロン、前記ＷＰＲＥ、及び前記ポリアデニル化シグナルを備え、
前記人工イントロンは、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンであり、
前記ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３であり、
前記ポリアデニル化シグナルは、合成ポリアデニル化（ｓｙｎｐＡ）シグナル又はシミアンウイルス４０ポリアデニル化（ＳＶ４０ｐＡ）シグナルである、
請求項６に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項10】

遺伝子を人工的に操作することができる前記タンパク質は、Ｃａｓタンパク質である、
請求項３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項11】

前記目的遺伝子は、シュワン細胞に関連する疾患を治療することに関連付けられた遺伝子である、
請求項３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項12】

前記シュワン細胞特異的プロモーターのヌクレオチド配列は、配列番号８；配列番号９；配列番号１３；及び配列番号１４から選択される配列である、
請求項３に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター。

【請求項13】

請求項１０に記載のシュワン細胞特異的発現ベクター、及び、ガイドＲＮＡ、又は前記Ｃａｓタンパク質と複合体を形成することができる前記ガイドＲＮＡをコードする核酸を備える組成物。

【請求項14】

前記ガイドＲＮＡは、シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす遺伝子を標的とし、
前記シュワン細胞に関連する疾患を引き起こす前記遺伝子は、Ｃｘ３２（コネキシン３２）遺伝子、ＳＨ３ＴＣ２（ＳＨ３ドメイン及びテトラトリコペプチドリピート２）遺伝子、ＭＰＺ（ミエリンタンパク質ゼロ）遺伝子、ＥＧＲ２（初期増殖応答２）遺伝子、ＧＤＡＰ１（ガングリオシド誘導分化関連タンパク質１）遺伝子、ＮＤＲＧ１（Ｎ－Ｍｙｃ下流調節１）遺伝子、又はＰＭＰ２２（末梢ミエリンタンパク質２２）遺伝子である、
請求項１３に記載の組成物。

【国際調査報告】