特表 2025-502405 高純度の植物由来のコレステロールの合成方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-24

(54)【発明の名称】高純度の植物由来のコレステロールの合成方法

(51)【国際特許分類】

   C07J 9/00 20060101AFI20250117BHJP

   C07C 29/17 20060101ALI20250117BHJP

   C07C 27/02 20060101ALI20250117BHJP

   C07C 35/44 20060101ALI20250117BHJP

   C07C 69/03 20060101ALI20250117BHJP

   C07C 69/76 20060101ALI20250117BHJP

   C07F 7/18 20060101ALI20250117BHJP

【ＦＩ】

C07J9/00

C07C29/17 CSP

C07C27/02

C07C35/44

C07C69/03

C07C69/76 Z

C07F7/18 D

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024542948

(86)(22)【出願日】2022-12-30

(85)【翻訳文提出日】2024-07-18

(86)【国際出願番号】 CN2022144011

(87)【国際公開番号】W WO2023142888

(87)【国際公開日】2023-08-03

(31)【優先権主張番号】202210099911.9

(32)【優先日】2022-01-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】512198970

【氏名又は名称】華東師範大学

(71)【出願人】

【識別番号】522185623

【氏名又は名称】江蘇佳尓科薬業集団股▲ふん▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＪＩＡＮＧＳＵ ＪＩＡＥＲＫＥ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＧＲＯＵＰ ＣＯＲＰ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．３０２，Ｈｕｚｈｕａｎｇｔｏｕ，Ｓａｎｈｕａｎｇｍｉａｏ，Ｚｈｅｎｇｌｕ，Ｔｉａｎｎｉｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２１３１１１，Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110000291

【氏名又は名称】弁理士法人コスモス国際特許商標事務所

(72)【発明者】

【氏名】仇 文▲衛▼

(72)【発明者】

【氏名】顧 向忠

(72)【発明者】

【氏名】李 晨晨

(72)【発明者】

【氏名】蒋 澄宇

(72)【発明者】

【氏名】叶 如飛

【テーマコード（参考）】

4C091

4H006

4H049

【Ｆターム（参考）】

4C091AA01

4C091BB04

4C091BB05

4C091BB06

4C091CC03

4C091DD01

4C091EE03

4C091EE04

4C091EE05

4C091EE07

4C091FF01

4C091GG01

4C091HH01

4C091JJ03

4C091KK01

4C091LL01

4C091MM03

4C091NN01

4C091PA05

4C091PB03

4C091PB05

4C091QQ01

4C091RR13

4H006AA02

4H006AA03

4H006AB20

4H006AB84

4H049VN01

4H049VP01

4H049VQ20

4H049VR23

4H049VR41

4H049VS12

4H049VT49

4H049VU06

4H049VU27

4H049VU36

4H049VV05

(57)【要約】

本発明は、高純度の植物由来のコレステロールを合成する方法を開示し、当該方法は、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン、別名ビスノラールアルコール又はＢＡを原料として使用し、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、選択的水素化還元などのステップを経て上記コレステロールを合成でき、或いは、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、ヒドロキシル保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解などのステップを経て上記コレステロールを合成でき、純度は９９％以上に達することができる。従来の動物由来のコレステロールの欠点を考慮して、本発明は植物由来の原料ＢＡからコレステロールを合成し、安全性が高く、病原性細菌やウイルス感染のリスクを回避するだけでなく、合成収率も高く、良好な製品の純度、環境に優しく、産業化生産に便利であり、そして本発明では製品中の不純物のレベルを大幅に低減し、高純度のコレステロールの取得を容易にし、臨床使用の安全性を向上させる。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オンＢＡを原料として使用してコレステロールを合成する方法であって、
前記方法は、ＢＡを原料として使用し、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、選択的水素化還元を経て前記コレステロールを合成すること、或いは、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、ヒドロキシル保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解を経て前記コレステロールを合成することであり、
（ａ）第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを酸化反応させて式（２）の化合物を得るステップ；
（ｂ）第２の溶媒中で、式（２）の化合物をＷｉｔｔｉｇ反応させて式（３）の化合物を得るステップ；
（ｃ）第３の溶媒中で、式（３）の化合物をアセチル化反応させて式（４）の化合物を得るステップ；
（ｄ）第４の溶媒中で、式（４）の化合物を還元反応させて式（５）の化合物を得るステップ；
（ｅ）第５の溶媒中で、式（５）の化合物を選択的水素化還元反応させてコレステロールを得るステップ；
或いは、
（ｆ）第６の溶媒中で、式（５）の化合物をヒドロキシで保護して式（６）の化合物を得るステップ；
（ｇ）第７の溶媒中で、式（６）の化合物を選択的水素化還元反応させて式（７）の化合物を得るステップ；
（ｈ）第８の溶媒中で、式（７）の化合物を脱保護反応又は加水分解反応させてコレステロールを得るステップ；
を含み、
ここで、前記方法の反応プロセスはスキーム（Ａ）に示すとおりであるコレステロールの合成方法。

【化64】

（ここで、Ｒはエステル基、シリコンエーテル基から選ばれる。）

【請求項2】

前記エステル基は、Ｃ２－Ｃ１０直鎖エステル基、イソブチルエステル

【化65】

イソペンチルエステル基

【化66】

フェニルエステル基

【化67】

及びｐ－メトキシフェニルエステル基

【化68】

から選ばれる１つ又は複数であり、
前記シリルエーテル基はトリメチルシリルエーテル基

【化69】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化70】

のうちの１つ又は２つから選ばれる、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ステップ（ａ）において、前記酸化反応は、具体的には、前記第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム及び酸化剤と酸化反応させて、式（２）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記式（１）で表されるＢＡ、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム、酸化剤のモル比は、１：（０～１）：（０～２０）：（０～１）：（１～５）であり、及び／又は、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミドＮＣＳ、Ｎ－ブロモスクシンイミドＮＢＳ及び２－ヨードキシ安息香酸ＩＢＸから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記第１の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、ジメチルスルホキシド及び水から選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記酸化反応の温度は０～３０℃であり、及び／又は、前記酸化反応の時間は３～８時間である、ことを特徴とする請求項３に記載の方法。

【請求項5】

ステップ（ｂ）において、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応は、具体的には、１－ハロ－３－メチルブタン及びトリフェニルホスフィンを前記第２の溶媒に添加し、還流反応させ、冷却し、吸引濾過して第四級ホスフィン塩を得、その後に前記第四級ホスフィン塩、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドを第２の溶媒に添加し、さらに式（２）の化合物を加えて、Ｗｉｔｔｉｇ反応させて、式（３）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記式（２）の化合物、１－ハロ－３－メチルブタン、トリフェニルホスフィン、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドのモル比は、１：（１～４）：（１～４）：（１～４）であり、及び／又は、前記第２の溶媒は、キシレン、トルエン、ベンゼン、テトラヒドロフラン及びヘプタンから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記１－ハロ－３－メチルブタンは、１－クロロ－３－メチルブタン及び１－ブロモ－３－メチルブタンから選ばれる一つ又は２つであり、及び／又は、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の温度は－１０～１４５℃であり、及び／又は、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の時間は０．５～２４時間である、ことを特徴とする請求項５に記載の方法。

【請求項7】

ステップ（ｃ）において、前記アセチル化反応は、具体的には、前記式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、及び塩基を第３の溶媒中でアセチル化反応させて式（４）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、塩基のモル比は、１：（０．５～６２．５）：（１～６２．５）：（０～６）であり、及び／又は、前記塩基は、ピリジン、トリエチルアミン、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＡＰ及びジイソプロピルアミンから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記第３の溶媒は、無水酢酸、塩化アセチル、酢酸エチル及びジクロロメタンから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記アセチル化反応の温度は４０～１１０℃であり、及び／又は、前記アセチル化反応時間は１～１０時間である、ことを特徴とする請求項７に記載の方法。

【請求項9】

ステップ（ｄ）において、前記還元反応は、具体的には、前記式（４）の化合物と還元剤とを前記第４の溶媒中で還元反応させて式（５）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記式（４）の化合物と還元剤のモル比は１：（１～２５）であり、及び／又は、前記第４の溶媒は、テトラヒドロフラン、エタノール、水、ジクロロメタン、２－メチルテトラヒドロフラン、イソプロピルアルコール、酢酸及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記還元剤は、ＮａＢＨ_４及びＫＢＨ_４から選ばれる１種又は２種であり、及び／又は、前記還元反応の温度は０～５０℃であり、及び／又は、前記還元反応の時間は６～１２時間である、ことを特徴とする請求項９に記載の方法。

【請求項11】

ステップ（ｅ）において、前記選択的水素化還元反応は、具体的には、前記式（５）の化合物を前記第５の溶媒中で触媒の作用下で、還元剤と選択的水素化還元反応させてコレステロールを得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記還元剤はＨ_２から選ばれ、及び／又は、前記触媒はラネーＮｉであり、及び／又は、前記式（５）の化合物と触媒との質量比は１：（０．０５～５）であり、及び／又は、前記第５の溶媒は、イソプロピルアルコール、ジクロロメタン、メタノール、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、エタノール、水、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル及びトルエンから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記水素化還元反応の温度は０～６０℃であり、及び／又は、前記水素化還元反応における還元剤Ｈ_２の圧力は１～２０ａｔｍであり、及び／又は、前記水素化還元反応の時間は６～１０時間である、ことを特徴とする請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

ステップ（ｆ）において、前記ヒドロキシの保護反応は具体的には、前記式（５）の化合物とヒドロキシの保護試薬とを、塩基の作用下で第６の溶媒中で反応させ、式（６）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項14】

Ｒがエステル基である場合、前記第６の溶媒は、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ＤＭＦ、トルエン、テトラヒドロフラン及び２－メチルテトラヒドロフランから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン及びＤＭＡＰから選ばれる１種又は２種であり、及び／又は、前記式（５）の化合物、ヒドロキシの保護試薬、塩基のモル比は１：（１～４）：（０．０５～５）であり、及び／又は、前記反応の温度は０～５０℃であり、及び／又は、前記ヒドロキシの保護反応の時間は２～２４時間であり、
Ｒがシリルエーテル基である場合、前記第６の溶媒は、ＤＭＦ、ジクロロメタン、クロロホルム及び四塩化炭素のうちの１つ又は複数であり、及び／又は、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン及びＤＭＡＰから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記式（５）の化合物、ヒドロキシの保護試薬、塩基のモル比は１：（２～４）：（４～８）であり、及び／又は、前記ヒドロキシの保護反応の温度は０～５０℃であり、及び／又は、前記ヒドロキシの保護反応の時間は２～２４時間である、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

ステップ（ｇ）において、前記選択的水素化還元反応は、具体的には、前記式（６）の化合物を前記第７の溶媒中で触媒の作用下で、還元剤と選択的水素化還元反応させてコレステロールを得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記還元剤はＨ_２から選ばれ、及び／又は、前記触媒はラネーＮｉであり、及び／又は、前記式（６）の化合物と触媒との質量比は１：（０．０５～５）であり、及び／又は、前記第７の溶媒は、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、トルエン及びイソプロピルアルコールから選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記水素化還元反応の温度は０～６０℃であり、及び／又は、前記水素化還元反応における還元剤Ｈ_２の圧力は１～２０ａｔｍであり、及び／又は、前記水素化還元反応の時間は４～４８時間である、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

Ｒがエステル基である場合、ステップ（ｈ）において、前記加水分解反応は具体的には、前記式（７）の化合物を第８の溶媒中で塩基の作用下で、加水分解反応させ、コレステロールを得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項18】

前記塩基は、ＬｉＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＯＨ、ｔ－ＢｕＯＫ及びＫ_２ＣＯ_３から選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記式（７）の化合物と塩基のモル比は１：（０．５～２）であり、及び／又は、前記第８の溶媒は、メタノール、エタノールから選ばれる１種又は２種であり、及び／又は、前記加水分解反応の温度は１０～７５℃であり、及び／又は、前記加水分解反応時間は０．３～１２時間である、ことを特徴とする請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

Ｒがシリルエーテル基である場合、ステップ（ｈ）において、前記脱保護反応は、具体的には、前記式（７）の化合物を前記第８の溶媒中で触媒の作用下で、脱保護反応させ、コレステロールを得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項20】

前記触媒はフッ化テトラブチルアンモニウムＴＢＡＦ、フッ化テトラブチルアンモニウム三水和物ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏ、三フッ化ホウ素エーテル、酢酸及び塩化水素の酢酸エチル溶液から選ばれる１つ又は複数であり、及び／又は、前記式（７）の化合物と触媒の質量比は１：（１～６）であり、及び／又は、前記第８の溶媒は、テトラヒドロフラン及び水から選ばれる１種又は２種であり、及び／又は、前記脱保護反応の温度は１０～７５℃であり、及び／又は、前記脱保護反応の時間は２～４８時間である、ことを特徴とする請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

化合物の構造は、式６－２（Ｅ）、６－３（Ｅ）、６－５（Ｅ）、６－６（Ｅ）、６－２（Ｚ）、６－３（Ｚ）、６－５（Ｚ）、６－６（Ｚ）、６′－１（Ｅ）、６′－２（Ｅ）、６′－３（Ｅ）、６′－４（Ｅ）、６′－５（Ｅ）、６′－６（Ｅ）、６′－１（Ｚ）、６′－２（Ｚ）、６′－３（Ｚ）、６′－４（Ｚ）、６′－５（Ｚ）、６′－６（Ｚ）で示される通りである、ことを特徴とする化合物。

【化71】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、有機化学合成の技術分野に属し、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン、別名ビスノラールアルコール又はＢＡ（Ｂｉｓｎｏｒａｌｃｏｈｏｌ）を原料として使用してコレステロールを合成する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

コレステロールは、動物の組織細胞にとって不可欠で重要な物質であり、細胞膜の形成に関与するだけでなく、体内の胆汁酸やステロイドホルモンの合成の原料でもある。現在、商業化されたコレステロールは主に次の目的で使用されている。１．医薬品賦形剤－リポソーム添加剤、例えば新型コロナウイルスｍＲＮＡワクチンの賦形剤（リポソームを調製するときに３０～５０％のコレステロールを添加すると、リポソームの薬物担持能力及び安定性を大幅に増加させることができ）；２．化粧品添加物；３．液晶製造用の原料；４．ビタミンＤ３製造用の出発原料。現在、商業化されているコレステロールのほとんどは動物の脳幹（脳幹コレステロール）又はラノリン（ラノリンコレステロール）由来のものであり、いずれも動物由来のコレステロールである。動物由来の製品には動物の病原体やその他の有害な因子が含まれている可能性が高いことが研究で判明しており、特に狂牛病、豚レンサ球菌、鳥インフルエンザなどの感染症の発生により、コレステロールの安全性が注目されるようになった。例えば、ビタミンＤ３製造の上流原料はコレステロールであり、ヨーロッパとアメリカ諸国では、疫病の危険性を理由に、以前から脳幹コレステロールの原料としての使用を禁止していた。２０２０年７月１日からは、中国も同様に脳幹コレステロールの原料としての使用も制限した。従って、人々の健康と安全を確保するためには、植物由来の高純度コレステロール合成法の開発が急務となっている。

【0003】

コレステロールの化学合成は、主に以下の方法があると報告されている。
（１）ジオスゲニンを原料として使用し、６ステップの反応を経て総モル収率６１％でコレステロールを合成した（ＣＮ１７７２７６０Ａ、スキーム１に示す）。このスキームは、原材料の価格が比較的高く、手順が煩雑で、使用される試薬の毒性が高く、汚染性が高いため、産業生産には適しなかった。

【化1】

【0004】

（２） スチグマステロール分解生成物を原料として使用し、５ステップの反応を経て総モル収率６７％でコレステロールを合成した（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ、スキーム２に示す）。しかし、本発明の出願人は、実験を通じて、このスキームには次のような問題があることを発見した。当該特許の第１のステップの反応でオルトギ酸トリエチルを使用してＣ－３位のカルボニル基をエーテル化し保護する場合、選択性が低く、側鎖のアルデヒドの反応を引き起こしやすく、アセタールが生成してしまう（詳細は発明の内容の「比較例１」を参照）。従って、このスキームの実現可能性については深刻な疑問があった。

【化2】

【0005】

（３）プレグネノロンを原料として使用し、４ステップの反応を経て総モル収率７２％でコレステロールを合成した（ＣＮ１０５２１８６０９Ａ、スキーム３に示す）。このスキームは、使用される貴金属ロジウム触媒とキラルホスフィン配位子が高価であり、大規模な産業生産には適しない。

【化3】

【0006】

（４）プレグネノロンを原料として使用し、２ステップの反応を経て総モル収率８０％でコレステロールを合成した（ＣＮ１０４９６１７８８Ａ、スキーム４に示す）。このスキームも、使用された貴金属ロジウム触媒とキラルホスフィン配位子が高価であって、大規模な産業生産には適していない。

【化4】

【0007】

（５）スチグマステロールを原料として使用し、５ステップの反応を経て総モル収率６８％でコレステロールを合成した（ＣＮ１０５２３７６０３Ａ、スキーム５に示す）。このスキームでは合成プロセスでＯ_３が使用され、反応のモニタリングや設備に対する要求が高くなり、経済性と安全性が十分でない。

【化5】

【0008】

（６）スチグマステロールを原料として使用し、４ステップの反応を経て総モル収率７０％でコレステロールを合成した（ＣＮ１０６６３２５６５Ａ、スキーム６に示す）。このスキームでもＯ_３が使用されるため、プロセスの難易度が高くなり、反応のモニタリングや設備に対する要求が高くなり、経済性と安全性が十分でない。

【化6】

【0009】

動物由来のコレステロールは、狂牛病、豚レンサ球菌、鳥インフルエンザなどの病気に感染するリスクがある。これまでに報告されているコレステロールの化学合成スキームには、操作が煩雑で、汚染度が高く、触媒が高価で、生成物の純度が低いなどの欠点があるため、植物由来の原料を用いたより安全で効率的な高純度コレステロールの合成方法の開発は重要な価値がある。

【発明の開示】

【0010】

既存技術の欠点を解決するために、本発明の目的は、高純度の植物由来コレステロールの合成方法を提供することである。本発明は、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン、別名ビスノラールアルコール又はＢＡを原料として使用し、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、選択的水素化還元などのステップを経て上記コレステロールを合成し、或いは、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、ヒドロキシル保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解などのステップを経て上記コレステロールを合成し、純度は９９％以上に達することができる。本発明では、コレステロールを合成するための出発原料であるＢＡは、安全かつ経済的であり、コレステロールを合成する方法は操作が簡単で、収率が高く、純度が高く、環境に優しく、産業生産に便利である。

【0011】

本発明で使用する原料ＢＡ（ｂｉｓｎｏｒａｌｃｏｈｏｌ）は、製油プロセスで残存する植物ステロールを発酵させて得られる植物由来のグリーン原料であり、現在年間生産量は１０００トン級に達しており、価格も低く、先行技術の動物由来コレステロールに存在可能な病原性細菌やウイルス感染のリスクを十分に回避することができる。

【0012】

本発明の合成方法において、前記原料ＢＡには、植物ステロールの生物発酵によって得られるもの、又は化学合成法によって得られるものが含まれるが、これらに限定されない。

【0013】

本発明によって提供されるＢＡ原料を使用してコレステロールを合成する２つの方法は、以下のステップを含む。
方法１：
（ａ）第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを酸化反応させて式（２）の化合物を得るステップ；
（ｂ）第２の溶媒中で、式（２）の化合物をＷｉｔｔｉｇ反応させて式（３）の化合物を得るステップ；
（ｃ）第３の溶媒中で、式（３）の化合物をアセチル化反応させて式（４）の化合物を得るステップ；
（ｄ）第４の溶媒中で、式（４）の化合物を還元反応させて式（５）の化合物を得るステップ；
（ｅ）第５の溶媒中で、式（５）の化合物を選択的水素化還元反応させてコレステロールを得るステップ。
方法２：
（ａ）第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを酸化反応させて式（２）の化合物を得るステップ；
（ｂ）第２の溶媒中で、式（２）の化合物をＷｉｔｔｉｇ反応させて式（３）の化合物を得るステップ；
（ｃ）第３の溶媒中で、式（３）の化合物をアセチル化反応させて式（４）の化合物を得るステップ；
（ｄ）第４の溶媒中で、式（４）の化合物を還元反応させて式（５）の化合物を得るステップ；
（ｆ）第６の溶媒中で、式（５）の化合物をヒドロキシで保護して式（６）の化合物を得るステップ；
（ｇ）第７の溶媒中で、式（６）の化合物を選択的水素化還元反応させて式（７）の化合物を得るステップ；
（ｈ）第８の溶媒中で、式（７）の化合物を脱保護反応又は加水分解反応させてコレステロールを得るステップ。

【0014】

ここで、前記方法の反応プロセスはスキーム（Ａ）に示すとおりである。

【化7】

【0015】

ここで、Ｒはエステル基、シリコンエーテル基から選択され、
好ましくは、ＲはＣ２－Ｃ１０直鎖エステル基、イソブチルエステル

【化8】

イソペンチルエステル基

【化9】

フェニルエステル基

【化10】

ｐ－メトキシフェニルエステル基

【化11】

トリメチルシリルエーテル基

【化12】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化13】

から選ばれる１つ又は複数であり、
より好ましくは、Ｒはエチルエステル

【化14】

プロピルエステル

【化15】

【化16】

ブチルエステル
イソブチルエステル

【化17】

イソペンチルエステル

【化18】

フェニルエステル

【化19】

ｐ－メトキシフェニルエステル

【化20】

トリメチルシリルエーテル基

【化21】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化22】

から選ばれる１つ又は複数である。

【0016】

注：化合物式（３）～（６）では、Ｃ－２２位とＣ－２３位の間の二重結合は、Ｅ配置がメインで、Ｚ配置がサブであり、この２つの配置の比はＥ／Ｚ≒８７／１３（^１Ｈ ＮＭＲにより判定）であり、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。

【0017】

本発明のステップ（ａ）において、前記酸化反応は、具体的には、第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム及び酸化剤と酸化反応させて、式（２）の化合物を得る反応である。

【0018】

ここで、式（１）で表されるＢＡ、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム、酸化剤のモル比は、１：（０～１）：（０～２０）：（０～１）：（１～５）であり、好ましくは、１：０．０１：１．３５：０．１：１．１５である。

【0019】

ここで、前記酸化反応は、酸化剤の存在下で行われ、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミドＮＣＳ、Ｎ－ブロモスクシンイミドＮＢＳ及び２－ヨードキシ安息香酸ＩＢＸなどから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくは、Ｎ－クロロスクシンイミドＮＣＳである。

【0020】

ここで、前記第１の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、ジメチルスルホキシド及び水などから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくは、ジクロロメタンと水との混合溶媒（体積比Ｖ／Ｖ＝５／２）である。

【0021】

ここで、前記酸化反応の温度は０～３０℃であり、好ましくは０℃である。

【0022】

ここで、前記酸化反応の時間は３～８時間であり、好ましくは６時間である。

【0023】

特定の一実施形態において、式（２）の化合物の合成ステップは、式（１）で表されるＢＡを第１の溶媒に溶解し、その後にＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム及びＮＣＳを添加して、酸化反応をさせて、式（２）の化合物を得ることを含む。

【0024】

本発明のステップ（ｂ）において、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応は、具体的には、１－ハロ－３－メチルブタン及びトリフェニルホスフィンを第２の溶媒に添加し、還流反応させ、冷却し、吸引濾過して第四級ホスフィン塩を得、その後に第四級ホスフィン塩、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドを第２の溶媒に添加し、さらに式（２）の化合物を加えて、Ｗｉｔｔｉｇ反応させて、式（３）の化合物を得る反応である。

【0025】

ここで、式（２）の化合物、１－ハロ－３－メチルブタン、トリフェニルホスフィン、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドのモル比は、１：（１～４）：（１～４）：（１～４）であり、好ましくは、１：３：２：２である。

【0026】

ここで、前記第２の溶媒は、キシレン、トルエン、ベンゼン、テトラヒドロフラン及びヘプタンなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくはキシレンである。

【0027】

ここで、前記第四級ホスフィン塩を合成する場合には、溶媒がキシレンであることが好ましい。

【0028】

ここで、前記１－ハロ－３－メチルブタンは、１－クロロ－３－メチルブタン及び１－ブロモ－３－メチルブタンなどから選ばれる1つ又は２つであり、好ましくは１－ブロモ－３－メチルブタンである。

【0029】

ここで、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の温度は－１０～１４５℃であり、好ましくは１０℃である。

【0030】

ここで、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の時間は０．５～２４時間であり、好ましくは０．５～９時間であり、さらに好ましくは１時間である。

【0031】

本発明のステップ（ｃ）において、前記アセチル化反応は、具体的には、式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、及び塩基を第３の溶媒中でアセチル化反応させて式（４）の化合物を得る反応である。

【0032】

ここで、式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、塩基のモル比は、１：（０．５～６２．５）：（１～６２．５）：（０～６）であり、好ましくは１：２５：２４：４である。

【0033】

ここで、前記塩基は、ピリジン、トリエチルアミン、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＡＰ及びジイソプロピルアミンなどから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくは、ジイソプロピルアミンである。

【0034】

ここで、前記第３の溶媒は、無水酢酸、塩化アセチル、酢酸エチル及びジクロロメタンなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、塩化アセチルと無水酢酸との混合溶媒である。

【0035】

ここで、前記アセチル化反応の温度は４０～１１０℃であり、好ましくは７０℃である。

【0036】

ここで、前記アセチル化反応時間は１～１０時間であり、好ましくは２～１０時間であり、さらに好ましくは６時間である。

【0037】

ここで、前記アセチル化反応では、塩化アセチル及び無水酢酸が反応物及び溶媒の両方として使用される。

【0038】

特定の一実施形態において、式（４）の化合物の合成ステップは、式（３）の化合物に塩化アセチル、無水酢酸、及び塩基を加え、アセチル化反応させて、式（４）の化合物を得ることを含む。

【0039】

本発明のステップ（ｄ）において、前記還元反応は、具体的には、前記式（４）の化合物と還元剤とを第４の溶媒中で還元反応させて式（５）の化合物を得る反応である。

【0040】

ここで、式（４）の化合物と還元剤のモル比は１：（１～２５）であり、好ましくは１：４である。

【0041】

ここで、前記第４の溶媒は、テトラヒドロフラン、エタノール、水、ジクロロメタン、２－メチルテトラヒドロフラン、イソプロピルアルコール、酢酸及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、テトラヒドロフランとエタノールと水との混合溶媒（体積比Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１０／５／３）である。

【0042】

ここで、前記還元剤は、ＮａＢＨ_４及びＫＢＨ_４などのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、ＮａＢＨ_４である。

【0043】

ここで、前記還元反応の温度は０～５０℃であり、好ましくは２５℃である。

【0044】

ここで、前記還元反応の時間は６～１２時間であり、好ましくは８時間である。

【0045】

特定の一実施形態において、式（５）の化合物の合成ステップは、式（４）の化合物を第４の溶媒に溶解し、還元剤を用いて還元反応させて式（５）の化合物を得ることを含む。

【0046】

本発明のステップ（ｅ）において、前記選択的水素化還元反応は、具体的には、式（５）の化合物を第５の溶媒中で触媒の作用下で、還元剤と選択的水素化還元反応させてコレステロールを得る反応である。

【0047】

ここで、コレステロールを得る前に、精製ステップをさらに含み、前記精製ステップは、カラムクロマトグラフィー、再結晶及びスラリー化などのうちの１つ又は複数である。
ここで、前記触媒はラネーＮｉである。
ここで、前記還元剤はＨ_２である。

【0048】

ここで、式（５）の化合物と触媒であるラネーＮｉとの質量比は１：（０．０５～５）であり、好ましくは１：１である。

【0049】

ここで、前記第５の溶媒は、イソプロピルアルコール、ジクロロメタン、メタノール、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、エタノール、水、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル及びトルエンなどから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくはイソプロピルアルコールである。

【0050】

ここで、前記水素化還元反応の温度は０～６０℃であり、好ましくは３０℃である。

【0051】

ここで、前記水素化還元反応における還元剤Ｈ_２の圧力は１～２０ａｔｍであり、好ましくは１ａｔｍである。

【0052】

ここで、前記水素化還元反応の時間は６～１０時間であり、好ましくは６時間である。
特定の一実施形態において、コレステロールの合成ステップは、式（５）の化合物を第５の溶媒に溶解し、ラネーＮｉを添加し、Ｈ_２で置換した後、選択的水素化還元反応させて、コレステロールを得ることを含む。

【0053】

本発明のステップ（ｆ）において、ヒドロキシの保護基Ｒがエステル基である場合、前記ヒドロキシの保護反応は、具体的には、式（５）の化合物とヒドロキシの保護試薬とを、塩基の作用下で第６の溶媒中で反応させ、式（６）の化合物を得る反応である。

【0054】

前記エステル基はＣ２－Ｃ１０直鎖エステル基（エチルエステル

【化23】

プロピルエステル

【化24】

ブチルエステル

【化25】

など）、イソブチルエステル

【化26】

イソペンチルエステル

【化27】

フェニルエステル

【化28】

及びｐ－メトキシフェニルエステル

【化29】

などのうちの１つ又は複数のエステル基から選択され、好ましくは、エチルエステルである。

【0055】

ここで、前記式（５）の化合物、ヒドロキシの保護試薬、塩基のモル比は１：（１～４）：（０．０５～５）であり、好ましくは１：３：０．１である。

【0056】

ここで、前記第６の溶媒は、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ＤＭＦ、トルエン、テトラヒドロフラン及び２－メチルテトラヒドロフランなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくは酢酸エチルである。

【0057】

ここで、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン及びＤＭＡＰなどから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくはＤＭＡＰである。

【0058】

ここで、前記反応の温度は０～５０℃であり、好ましくは４５℃である。

【0059】

ここで、前記反応の時間は２～２４時間であり、好ましくは４時間である。

【0060】

本発明のステップ（ｆ）において、ヒドロキシの保護基Ｒがシリルエーテル基である場合、前記ヒドロキシの保護反応は具体的には、式（５）の化合物とヒドロキシの保護試薬とを、塩基の作用下で第６の溶媒中で反応させ、式（６）の化合物を得る反応である。

【0061】

ここで、前記シリルエーテル基は、トリメチルシリルエーテル基

【化30】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化31】

などから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくは、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化32】

である。

【0062】

ここで、前記式（５）の化合物、ヒドロキシの保護試薬、塩基のモル比は１：（２～４）：（４～８）であり、好ましくは１：２．５：４である。

【0063】

ここで、前記第６の溶媒は、ＤＭＦ、ジクロロメタン、クロロホルム及び四塩化炭素などのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、ジクロロメタンである。

【0064】

ここで、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン及びＤＭＡＰなどから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくはイミダゾールである。

【0065】

ここで、前記反応の温度は０～５０℃であり、好ましくは２５℃である。

【0066】

ここで、前記反応の時間は２～２４時間であり、好ましくは１２時間である。

【0067】

特定の一実施形態において、式（６）の化合物の合成ステップは、式（５）の化合物を第６の溶媒に溶解し、塩基の作用下でヒドロキシの保護試薬と反応させて、式（６）の化合物を得ることを含む。

【0068】

本発明のステップ（ｇ）において、前記選択的水素化還元反応は、具体的には、式（６）の化合物を第７の溶媒中で触媒の作用下で、還元剤と選択的水素化還元反応させて式（７）の化合物を得る反応である。
ここで、前記触媒はラネーＮｉである。
ここで、前記還元剤はＨ_２である。

【0069】

ここで、式（６）の化合物と触媒であるラネーＮｉとの質量比は１：（０．０５～５）であり、好ましくは１：１である。

【0070】

ここで、前記第７の溶媒は、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、トルエン及びイソプロピルアルコールなどから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくは酢酸エチルである。

【0071】

ここで、前記水素化還元反応の温度は０～６０℃であり、好ましくは３０℃である。

【0072】

ここで、前記水素化還元反応における還元剤Ｈ_２の圧力は１～２０ａｔｍであり、好ましくは１ａｔｍである。

【0073】

ここで、前記水素化還元反応の時間は４～４８時間であり、好ましくは４～３０時間であり、さらに好ましくは７時間である。

【0074】

特定の一実施形態において、式（７）の化合物の合成ステップは、式（６）の化合物を第７の溶媒に溶解し、ラネーＮｉを添加し、Ｈ_２で置換した後、選択的水素化還元反応させて、式（７）の化合物を得ることを含む。

【0075】

本発明のステップ（ｈ）において、ヒドロキシの保護基Ｒがエステル基である場合、前記加水分解反応は具体的には、前記式（７）の化合物を第８の溶媒中で塩基の作用下で、加水分解反応させ、コレステロールを得る反応である。

【0076】

ここで、前記塩基は、ＬｉＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＯＨ、ｔ－ＢｕＯＫ及びＫ_２ＣＯ_３などから選ばれる１つ又は複数であり、好ましくはＫ_２ＣＯ_３である。

【0077】

ここで、前記式（７）の化合物と塩基のモル比は１：（０．５～２）であり、好ましくは１：１．３である。

【0078】

ここで、前記第８の溶媒は、メタノール及びエタノールなどから選ばれる１種又は２種であり、好ましくはメタノールである。

【0079】

ここで、前記加水分解反応の温度は１０～７５℃であり、好ましくは６５℃である。

【0080】

ここで、前記加水分解反応時間は０．３～１２時間であり、好ましくは２時間である。

【0081】

本発明のステップ（ｈ）において、ヒドロキシの保護基Ｒがシリルエーテル基である場合、前記脱保護反応は、具体的には、前記式（７）の化合物を前記第８の溶媒中で触媒の作用下で、脱保護反応させ、コレステロールを得る反応である。

【0082】

ここで、前記触媒はフッ化テトラブチルアンモニウムＴＢＡＦ、フッ化テトラブチルアンモニウム三水和物ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏ、三フッ化ホウ素エーテル、酢酸及び塩化水素の酢酸エチル溶液から選ばれる１つ又は複数であり、好ましくは、ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏである。

【0083】

ここで、前記式（７）の化合物と触媒の質量比は１：（１～６）であり、好ましくは１：４である。

【0084】

ここで、前記第８の溶媒は、テトラヒドロフラン及び水などから選ばれる１種又は２種であり、好ましくはテトラヒドロフランである。

【0085】

ここで、前記脱保護反応の温度は１０～７５℃であり、好ましくは２５℃である。

【0086】

ここで、前記脱保護反応の時間は２～４８時間であり、好ましくは２４時間である。
特定の一実施形態において、コレステロールの合成するステップは、式（７）の化合物を第８の溶媒に溶解し、塩基又は触媒を添加して、脱保護又は加水分解反応を行い、コレステロールを得ることを含む。

【0087】

本発明はまた、２０種の化合物を提供し、当該化合物の構造は、以下の式６－２（Ｅ）、６－３（Ｅ）、６－５（Ｅ）、６－６（Ｅ）、６－２（Ｚ）、６－３（Ｚ）、６－５（Ｚ）、６－６（Ｚ）、６′－１（Ｅ）、６′－２（Ｅ）、６′－３（Ｅ）、６′－４（Ｅ）、６′－５（Ｅ）、６′－６（Ｅ）、６′－１（Ｚ）、６′－２（Ｚ）、６′－３（Ｚ）、６′－４（Ｚ）、６′－５（Ｚ）、６′－６（Ｚ）で示される通りである。

【化33】

【0088】

本発明の有益な効果には、以下のものが含まれる：本発明のコレステロールの製造方法において、使用される商業化された原料ＢＡは植物由来の原料であるため、動物由来の原料に存在する可能性のある病原性細菌及びウイルスによる感染のリスクを回避し、安価で入手が容易であり、また、得られるコレステロールが高純度（９９％以上）であり、合成工程が簡単で、収率が高く、副反応が少なく、環境に優しく、高純度コレステロールの産業的生産を達成するのに便利であり、安全性が低く、純度が低く、合成コストが高い、環境に優しくないなどの既存のコレステロール製品の問題を解決できる。

【図面の簡単な説明】

【0089】

【図1】図１は本発明の実施例５で得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【図2】図２はコレステロールの単結晶回折パターンを示す。

【図3】図３はコレステロールのＮＭＲ水素スペクトル（ＣＤＣｌ_３）を示す。

【図4】図４はコレステロールのＮＭＲ炭素スペクトル（ＣＤＣｌ_３）を示す。

【図5】図５は本発明の実施例７で得られた式（７－１）の化合物の精製品のガスクロマトグラムを示す。

【図6】図６は本発明の実施例８において、式（７－１）の化合物の加水分解反応により得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【発明を実施するための形態】

【0090】

以下の具体的な実施例及び図面に基づいて、本発明をさらに詳細に説明する。本発明を実施するためのプロセス、条件、実験方法などは、以下に特に述べる内容を除き、当該分野における普通知識や公知常識であり、その内容が本発明に特に限定されるものではない。
以下の実施例では、化合物の構造は核磁気共鳴装置と高分解能質量分析計で決定され、試薬は主に上海国薬化学試薬会社から提供され、生成物の精製は主にスラリー化とカラムクロマトグラフィーによって行われ、シリカゲル（２００－３００）は青島海洋化学工場ら入手した。

【0091】

本発明は、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン（ＢＡ）を原料としてコレステロールを合成する方法を提供し、その反応プロセスは、上記スキーム（Ａ）に示すとおりである。なお、本発明では、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン（ＢＡ）を原料としてコレステロールを合成する方法において、他の副生成物を生成させることをさらに含み、具体的な反応スキームは（Ａ’）に示す通りである。

【化34】

【0092】

注：化合物式（３）～（６）では、Ｃ－２２位とＣ－２３位の間の二重結合は、Ｅ配置がメインで、Ｚ配置がサブであり、この２つの配置の比はＥ／Ｚ≒８７／１３（^１Ｈ ＮＭＲにより判定）であり、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。化合物式（５）（３β－ＯＨ）／（５’）（３α－ＯＨ）の比は約９２／８（^１Ｈ ＮＭＲにより判定）であり、その後の精製操作がなければ、化合物式（６）／（６’）、（７）／（７’）の比は変化しない。

【0093】

本発明では、上記式（３）、式（４）、式（５）、式（５’）、式（６）及び式（６’）の化合物は、Ｗｉｔｔｉｇ反応によって導入されたＤ環側鎖二重結合（Ｃ－２２、Ｃ－２３位の二重結合）がシス－トランス配置（Ｅ及びＺ配置）を有し、２つの配置の比率がＥ／Ｚ≒８７／１３（^１Ｈ ＮＭＲにより判定）であるため、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。化合物式（５）（３β－ＯＨ）及び（５’）（３α－ＯＨ）は、化合物式（４）をＮａＢＨ_４又はＫＢＨ_４で還元することによって得られ、得られた化合物式（５）（３β－ＯＨ）及び（５’）（３α－ＯＨ）における３β－ＯＨ／３α－ＯＨの比は約９２／８（^１Ｈ ＮＭＲにより判定）であり、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。従って、式（３）、式（４）、式（５）、式（５’）、式（６）、式（６’）、式（７）及び式（７’）の化合物は単一物質ではなく、混合物である。

【0094】

実施例１ 式（２）の化合物の調製

【化35】

この実施例では、異なる実験条件下での式（２）の化合物の調製結果を示す。

【0095】

（１）フラスコにＢＡ（５０．００ｇ，０．１５ｍｏｌ）、ＴＥＭＰＯ（２３５ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（４００ｍＬ）、重炭酸ナトリウム（１７．６０ｇ，０．２１ｍｏｌ）、ＮＣＳ（２３．１０ｇ，１７３．００ｍｍｏｌ）、臭化テトラブチルアンモニウム（４．８４ｇ，１５ｍｍｏｌ）及び水（１６０ｍＬ）を順次に加え、０℃で６時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、チオ硫酸ナトリウム５水和物溶液（１１．２５ｇチオ硫酸ナトリウム５水和物／２５０ｍＬ水）を加え、５～１０℃で３０分間撹拌し、分液し、水相をジクロロメタン（３００ｍＬ×２）で抽出し、有機層を合わせ、１％水酸化ナトリウム溶液（３００ｍＬ）で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、式（２）の化合物（４７．４６ｇ、白色固体、モル収率９４．９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ９．５５（ｓ，１Ｈ），５．７１（ｓ，１Ｈ），２．４５－２．２３（ｍ，５Ｈ），１．９９（ｔ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，２Ｈ），１．９１－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４３（ｍ，５Ｈ），１．３０－１．１９（ｍ，２Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ），１．１１（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，３Ｈ），１．０６－０．８９（ｍ，３Ｈ），０．７５（ｓ，３Ｈ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ２０５．００，１９９．６５，１７１．３１，１２３．９９，５５．２５，５３．８４，５１．０４，４９．５４，４３．１０，３９．３９，３８．６８，３５．８０，３５．６８，３４．０６，３２．９３，３２．０５，２７．１１，２４．６４，２１．０６，１７．４８，１３．５３，１２．４４． ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）： ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_３２ＮａＯ_２ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋，３５１．２２９５，ｆｏｕｎｄ ３５１．２２９２．

【0096】

（２）フラスコにＢＡ（５０．００ｇ，０．１５ｍｏｌ）、ＴＥＭＰＯ（２３６ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（４００ｍＬ）、重炭酸ナトリウム（１７．６ｇ，０．２１ｍｏｌ）、ＮＢＳ（３５．６ｇ，２００ｍｍｏｌ）、臭化テトラブチルアンモニウム（４．８４ｇ，１５ｍｍｏｌ）及び水（３２０ｍＬ）を順次に加え、０℃で６時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、チオ硫酸ナトリウム５水和物溶液（１６ｇチオ硫酸ナトリウム５水和物／３００ｍＬ水）を加え、５～１０℃で２０分間撹拌し、分液し、水相をジクロロメタン（３００ｍＬ×２）で抽出し、有機層を合わせ、１％水酸化ナトリウム溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、式（２）の化合物（白色固体４７．５ｇ、モル収率９５％）を得た。
（３）フラスコに式（１）の化合物ＢＡ（５０ｇ、０．１５ｍｏｌ）、ＩＢＸ（８４ｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（３５０ｍＬ）、ＤＭＳＯ（３００ｍＬ）を順次加え、２５℃で５時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水を加え、吸引濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、ジクロロメタン（５００ｍＬ）及び水（３００ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を１％水酸化ナトリウム溶液（３００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、式（２）の化合物（白色固体４６．７ｇ、モル収率９３．４％）を得た。

【0097】

実施例２ 式（３）の化合物の調製

【化36】

この実施例では、異なる実験条件下での式（３）の化合物の調製結果を示す。

【0098】

（１）フラスコにトリフェニルホスフィン（５．２５ｇ，２０ｍｍｏｌ）、１－ブロモ－３－メチルブタン（６．０４ｇ，４０ｍｍｏｌ）、トルエン２５ｍＬを加え、７２時間加熱還流した後、２５℃まで冷却し、吸引濾過して第４級ホスホニウム塩（白色固体５．１２ｇ、モル収率６２％）を得た。

【0099】

氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．３９ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）を上記の第４級ホスホニウム塩（５．１２ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）のトルエン（２５ｍＬ）溶液に加え、０．５時間撹拌し、その後、式（２）の化合物（２．６３ｇ、８ｍｍｏｌ）をバッチで加え、１０℃で０．５時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（５ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２Ｍ ＨＣｌを加えてｐＨを６～７に調整し、有機相を水（３０ｍＬ×２）で洗浄し、減圧下で濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体をエタノール／水の混合溶液に加え、２５℃で１時間スラリー化し、濾過して式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、３Ｅ／３Ｚ≒８７／１３、白色固体２．７６ｇ、モル収率９０．２％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）： ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２７Ｈ_４２ＮａＯ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４０５．３１２８，ｆｏｕｎｄ ４０５．３１３６．

【0100】

注：本発明において、式（３）の化合物をアセチル化し、還元して得られる中間体である式（４）の化合物、式（５）の化合物及び式（６）の化合物のＥ／Ｚ配置の比は基本的に変化せず、Ｃ－２２位とＣ－２３位との間の二重結合は、Ｅ配置がメインで、Ｚ配置がサブである（３Ｅ／３Ｚ≒８７／１３）。式（６）の化合物におけるＣ－２２位とＣ－２３位の間の二重結合のシス－トランス異性体は、ラネーニッケルによって還元され、脱保護又は加水分解されて、生成物であるコレステロールが得られる。従って、対応する化合物のＥ／Ｚ配置の比は、後の実施例で表記しない。

【0101】

（２）フラスコにトリフェニルホスフィン（５．２５ｇ，２０ｍｍｏｌ）、１－ブロモ－３－メチルブタン（４．５３ｇ、３０ｍｍｏｌ）、キシレン２５ｍＬを加え、４８時間加熱還流した後、２５℃まで冷却し、吸引濾過して第４級ホスホニウム塩（白色固体７．７６ｇ、モル収率９３．９４％）を得た。

【0102】

氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２．１１ｇ、１８．７９ｍｍｏｌ）を上記の第４級ホスホニウム塩（７．７６ｇ、１８．７９ｍｍｏｌ）のキシレン（２５ｍＬ）溶液に加え、０．５時間撹拌し、その後、式（２）の化合物（４．９２ｇ、１５ｍｍｏｌ）をバッチで加え、５℃で１時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（５ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２Ｍ ＨＣｌを加えてｐＨを６～７に調整し、有機相を水（４０ｍＬ×２）で洗浄し、減圧下で濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体をエタノール／水の混合溶液に加え、２５℃で１時間スラリー化し、濾過して式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、白色固体５．３８ｇ、モル収率９３．９％）を得た。

【0103】

（３）フラスコにトリフェニルホスフィン（５．２５ｇ，２０ｍｍｏｌ）、１－クロロ－３－メチルブタン（３．２ｇ、３０ｍｍｏｌ）、キシレン２５ｍＬを加え、７２時間加熱還流した後、２５℃まで冷却し、吸引濾過して第４級ホスホニウム塩（白色固体６．１２ｇ、モル収率８３．０４％）を得た。

【0104】

氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．８６ｇ、１６．５９ｍｍｏｌ）を上記の第４級ホスホニウム塩（６．１２ｇ、１６．５９ｍｍｏｌ）のキシレン（２５ｍＬ）溶液に加え、０．５時間撹拌し、その後、式（２）の化合物（４．５８ｇ、１２ｍｍｏｌ）をバッチで加え、１０℃で０．５時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（５ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２Ｍ ＨＣｌを加えてｐＨを６～７に調整し、有機相を水（３０ｍＬ×２）で洗浄し、減圧下で濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体をエタノール／水の混合溶液に加え、２５℃で１時間スラリー化し、濾過して式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、白色固体４．０４ｇ、モル収率８８．０７％）を得た。

【0105】

実施例３ 式（４）の化合物の調製

【化37】

この実施例では、異なる実験条件下での式（４）の化合物の調製結果を示す。

【0106】

（１）フラスコに、式（３）の化合物（９．９４ｇ、２６ｍｍｏｌ）、無水酢酸（６３．７１ｇ、６２４ｍｍｏｌ）、塩化アセチル（５１．０３ｇ、６５０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルアミン（１０．５ｇ、１０３．８ｍｍｏｌ）を加え、５時間還流反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却し、減圧下で濃縮し、わずかに冷却し、反応溶液を氷水（１５０ｍＬ）に加え、１５分間撹拌し、濾過し、水を抜き、得られた固体をメタノール（２０ｍＬ）及びピリジン（１ｍＬ）に加え、２５℃で３０分間スラリー化し、濾過し、濾過ケーキをメタノール（４ｍＬ）で洗浄し、吸引濾過し、乾燥させて、式（４）の化合物（４Ｅ及び４Ｚ、白色固体１０．４７ｇ、モル収率９４．９７％）を得た。

【0107】

（２）フラスコに、式（３）の化合物（９．９４ｇ、２６ｍｍｏｌ）、無水酢酸（３９．４６ｇ、３９０ｍｍｏｌ）、塩化アセチル（８．１６ｇ、１０４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１３．３９ｇ、１０３．６ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却し、減圧下で濃縮し、わずかに冷却し、反応溶液を氷水（１５０ｍＬ）に加え、１５分間撹拌し、濾過し、水を抜き、得られた固体をメタノール（２０ｍＬ）及びピリジン（１ｍＬ）に加え、２５℃で３０分間スラリー化し、濾過し、濾過ケーキをメタノール（４ｍＬ）で洗浄し、吸引濾過し、乾燥させて、式（４）の化合物（４Ｅ及び４Ｚ、白色固体１０．１５ｇ、モル収率９２．０７％）を得た。

【0108】

（３）フラスコに、式（３）の化合物（９．９４ｇ、２６ｍｍｏｌ）、無水酢酸（６３．７１ｇ、６２４ｍｍｏｌ）及び塩化アセチル（５１．０３ｇ、６５０ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却し、減圧下で濃縮し、わずかに冷却し、反応溶液を氷水（１５０ｍＬ）に加え、１５分間撹拌し、濾過し、水を抜き、得られた固体をメタノール（２０ｍＬ）及びピリジン（１ｍＬ）に加え、２５℃で３０分間スラリー化し、濾過し、濾過ケーキをメタノール（４ｍＬ）で洗浄し、吸引濾過し、乾燥させて、式（４）の化合物（４Ｅ及び４Ｚ、白色固体９．８ｇ、モル収率８８．９％）を得た。

【0109】

実施例４ 式（５）の化合物の粗生成物の調製

【化38】

この実施例では、異なる実験条件下での式（５）の化合物の粗生成物の調製結果を示す。

【0110】

（１）フラスコに式（４）の化合物（８．４８ｇ、２０ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフランとエタノールと水の混合溶媒（１７０ｍＬ、Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１０／５／３）を加え、水素化ホウ素ナトリウム（３．０３ｇ、８０ｍｍｏｌ）をバッチで加え、３０℃で８時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、６Ｍ塩酸を加えて反応溶液のｐＨを７～８に調整し、反応溶液中に多量の固体が析出し、濾過し、濾液を取って減圧下で溶媒を蒸発させ、多量の固体が析出し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を水（１００ｍＬ）で洗浄し、撹拌し、層を分離し、減圧下で溶媒を蒸発させ、式（５）の化合物の粗生成物（淡黄色固体７．５３ｇ、モル収率９８．０４％）を得た。

【0111】

注：水素化ホウ素ナトリウムを還元剤として用いて得られる式（５）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（５）（５Ｅ及び５Ｚ、３β－ＯＨ）及び（５’）（５’Ｅ及び５’Ｚ、３α－ＯＨ）であり、^１Ｈ ＮＭＲ判定によれば、それらの比は化合物（５）／（５’）≒９２／８であった。以下の実施例で得られる式（５）化合物の粗生成物中の５（３β－ＯＨ）／５’（３α－ＯＨ）の比は、基本的にこの実施例と一致しているため、以降は表記しない。

【0112】

（２）フラスコに式（４）の化合物（８．４８ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ジクロロメタンとメタノールと水の混合溶媒（９５ｍＬ、Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１８／９／１）を加え、水素化ホウ素ナトリウム（１．５１ｇ、４０ｍｍｏｌ）をバッチで加え、２５℃で６時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、３Ｍ塩酸を加えて反応溶液のｐＨを７～８に調整し、反応溶液中に多量の固体が析出し、濾過し、濾液を取って減圧下で溶媒を蒸発させ、多量の固体が析出し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を水（１００ｍＬ）で洗浄し、撹拌し、層を分離し、減圧下で溶媒を蒸発させ、式（５）の化合物の粗生成物（淡黄色固体７．５ｇ、モル収率９７．９％）を得た。

【0113】

（３）フラスコに式（４）の化合物（８．４８ｇ、２０ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフランとエタノールと水の混合溶媒（２００ｍＬ、Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１０／５／３）を加え、水素化ホウ素カリウム（４．８６ｇ、９０ｍｍｏｌ）をバッチで加え、３０℃で８時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、６Ｍ塩酸を加えて反応溶液のｐＨを７～８に調整し、反応溶液中に多量の固体が析出し、濾過し、濾液を取って減圧下で溶媒を蒸発させ、多量の固体が析出し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を水（１００ｍＬ）で洗浄し、撹拌し、層を分離し、減圧下で溶媒を蒸発させ、式（５）の化合物の粗生成物（淡黄色固体７．５７ｇ、モル収率９８．６％）を得た。

【0114】

注：水素化ホウ素カリウムで還元されて得られる式（５）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（５）（５Ｅ及び５Ｚ、３β－ＯＨ）及び（５’）（５’Ｅ及び５’Ｚ、３α－ＯＨ）であり、このうち、化合物５’（３α－ＯＨ）の含有量がより高く、^１Ｈ ＮＭＲ判定によれば、化合物５（３β－ＯＨ）／５’（３α－ＯＨ）≒８５／１５であった。

【0115】

実施例５ 式（５）の化合物の選択的水素還元によるコレステロールの調製

【化39】

上記式（５）の化合物の粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝４０／１、ｖ／ｖ）で精製し、式（５）の化合物（５Ｅ及び５Ｚ）を得た。

【0116】

精製によって得られた式（５）の化合物（５Ｅ及び５Ｚ、３．８４ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ラネーＮｉ（３．９ｇ、湿重量）、イソプロピルアルコール（４０ｍＬ）、Ｈ_２（１ａｔｍ）をフラスコに加え、３０℃で６時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、ラネーＮｉを濾過して除去し、濾液を減圧下で濃縮して粗コレステロールを得、これを再結晶（エタノール／水）で精製して、コレステロール（白色固体３．８ｇ、モル収率９８．９％、ガスクロマトグラフィー純度９５．５４％、図１を参照、ＣＣＤＣ ２０９９４４２、単結晶構造は図２を参照）を得た。ｍｐ： １４７－１４９ ℃。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．３６－５．３４（ｍ，１Ｈ），３．５５－３．４９（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．１９（ｍ，２Ｈ），２．０６－１．９２（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．７９（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．１９（ｍ，１４Ｈ），１．１９－１．０３（ｍ，７Ｈ），１．０１（ｓ，３Ｈ），０．９８－０．９３（ｍ，１Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．８６（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．６８（ｓ，３Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １４０．７７，１２１．７３，７１．８２，５６．７８，５６．１７，５０．１４，４２．３３，４２．３２，３９．８０，３９．５３，３７．２７，３６．５２，３６．２０，３５．８０，３１．９３，３１．９２，３１．６８，２８．２５，２８．０３，２４．３１，２３．８４，２２．８４，２２．５８，２１．１０，１９．４１，１８．７３，１１．８７．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）： ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２７Ｈ_４６ＮａＯ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４０９．３４４１，ｆｏｕｎｄ ４０９．３１２１．

【0117】

実施例６ 式（６）の化合物の粗生成物の調製
１．式（６－１）の化合物の粗生成物の調製

【化40】

フラスコに酢酸エチル（７６ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６８ｇ，２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解し、ＤＭＡＰ（０．２４５ｇ，２ｍｍｏｌ）及び無水酢酸（６．１３ｇ，６０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を水、飽和食塩水で洗浄し、減圧下で濃縮して式（６－１）の化合物の粗生成物（白色固体８．１８ｇ、モル収率９５．９％）を得た。

【0118】

注：式（６－１）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－１）（６－１Ｅと６－１Ｚ）及び（６’－１）（６’－１Ｅと６’－１Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－１）／（６’－１）≒９２／８であった。

【0119】

２．式（６－２）の化合物の粗生成物の調製

【化41】

フラスコに酢酸エチル（５０ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６８ｇ，２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解し、ＤＭＡＰ（０．２４５ｇ，２ｍｍｏｌ）及び無水プロピオン酸（５．３ｇ、４０ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で５時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を水、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－２）の化合物の粗生成物（白色固体８．６４ｇ、モル収率９８．０７％）を得た。

【0120】

注：式（６－２）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－２）（６－２Ｅと６－２Ｚ）及び（６’－２）（６’－２Ｅと６’－２Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－２）／（６’－２）≒９２／８であった。

【0121】

３．式（６－３）の化合物の粗生成物の調製

【化42】

フラスコに酢酸エチル（５０ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６８ｇ，２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解し、ＤＭＡＰ（０．２４５ｇ，２ｍｍｏｌ）及び無水酪酸（９．５４ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加え、５５℃で４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を水で洗浄し、さらに飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－３）の化合物の粗生成物（白色固体８．８２ｇ、モル収率９７．０３％）を得た。

【0122】

注：式（６－３）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－３）（６－３Ｅと６－３Ｚ）及び（６’－３）（６’－３Ｅと６’－３Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－３）／（６’－３）≒９２／８であった。

【0123】

４．式（６－４）の化合物の粗生成物の調製

【化43】

フラスコに酢酸エチル（１１５ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６８ｇ，２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解し、ＤＭＡＰ（０．２４５ｇ，２ｍｍｏｌ）及び無水安息香酸（１３．５ｇ，６０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、減圧下で濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－４）の化合物の粗生成物（白色固体９．３８ｇ、モル収率９５．９％）を得った。

【0124】

注：式（６－４）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－４）（６－４Ｅと６－４Ｚ）及び（６’－４）（６’－４Ｅと６’－４Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－４）／（６’－４）≒９２／８であった。

【0125】

５．式（６－５）の化合物の粗生成物の調製

【化44】

フラスコにＤＣＭ（５０ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６８ｇ，２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解し、トリエチルアミン（２．６４ｇ，２６．１４ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（０．２４５ｇ，２ｍｍｏｌ）を加え、ｐ－クロロベンゾイルクロリド（６．８ｇ，３９．２ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり滴下し、Ｎ_２で保護しながら３５℃で１２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（３０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、ＤＣＭ（８０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、２Ｎ希塩酸、水、飽和ＮａＣｌで順次に洗浄し、減圧下で濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－５）の化合物の粗生成物（白色固体９．６８ｇ、モル収率９５．０４％）を得た。

【0126】

注：式（６－５）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－５）（６－５Ｅと６－５Ｚ）及び（６’－５）（６’－５Ｅと６’－５Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－５）／（６’－５）≒９２／８であった。

【0127】

６．式（６－６）の化合物の粗生成物の調製

【化45】

フラスコにＤＣＭ（１００ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６８ｇ，２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解させ、ＴＢＳＣｌ（９．８５ｇ、６５．３５ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（７．１２ｇ、１０４．５６ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（１００ｍＬ）を加えて１０分間撹拌し、ＤＣＭ（８０ｍＬ）で抽出、分液し、有機相を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、減圧下で濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で３時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－６）の化合物の粗生成物（白色固体９．５８ｇ、モル収率９６．０９％）を得た。
注：式（６－６）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－６）（６－６Ｅと６－６Ｚ）及び（６’－６）（６’－６Ｅと６’－６Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－６）／（６’－６）≒９２／８であった。

【0128】

実施例７ 式（７）の化合物の調製
１．式（７－１）の化合物の調製

【化46】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－１）の化合物の粗生成物（１０ｇ、２３．５４ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（１０ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ ａｔｍ）、３５℃で７時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧下で濃縮し、式（７－１）の化合物の粗生成物を得、そのまま精製ステップに直接使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流し、１５℃まで自然冷却し、４時間撹拌し、吸引濾過して式（７－１）の化合物（白色固体８．４ｇ、モル収率８４．１％、ガスクロマトグラフィー純度９９．２２％、図５）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．４０（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６８－４．５７（ｍ，１Ｈ），２．４０－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ），２．０５－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８１（ｍ，３Ｈ），１．６６－１．４３（ｍ，８Ｈ），１．４１－１．３３（ｍ，３Ｈ），１．３１－１．２４（ｍ，１Ｈ），１．２２－１．０７（ｍ，７Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），１．０３－０．９６（ｍ，２Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７０．５５，１３９．６７，１２２．６６，７３．９９，５６．６９，５６．１４，５０．０４，４２．３２，３９．７４，３９．５３，３８．１３，３７．００，３６．６０，３６．１９，３５．８０，３１．９１，３１．８７，２８．２４，２８．０２，２７．７８，２４．２９，２３．８３，２２．８３，２２．５７，２１．４５，２１．０３，１９．３２，１８．７２，１１．８６．

【0129】

注：式（７－１）の化合物の粗生成物の主成分は化合物（７－１）及び化合物（７’－１）であり、それらの比は化合物（７－１）／（７’－１）≒９２／８であった。

【0130】

２．式（７－２）の化合物の調製

【化47】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－２）の化合物の粗生成物（１０．０５ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（１５ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、５５℃で７時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧下で濃縮し、式（７－２）の化合物の粗生成物を白色固体として得、そのまま精製ステップに直接使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流し、１５℃まで自然冷却し、４時間撹拌し、吸引濾過して式（７－２）の化合物（白色固体８．１７ｇ、モル収率８１％、ガスクロマトグラフィー純度９８．６９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．３９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６７－４．６２（ｍ，１Ｈ），２．４４－２．２４（ｍ，４Ｈ），２．１０－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９３－１．８１（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．４３（ｍ，８Ｈ），１．４０－１．３４（ｍ，３Ｈ），１．２９－１．２５（ｍ，１Ｈ），１．２０－１．１０（ｍ，９Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），１．０３－０．９６（ｍ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７３．９６，１３９．７５，１２２．５９，５６．７０，５６．１４，５０．０３，４２．３２，３９．７４，３９．５３，３８．１６，３７．０１，３６．６１，３６．１９，３５．８０，３１．９１，３１．８７，２８．２４，２８．０２，２７．９４，２７．８１，２４．２９，２３．８３，２２．８３，２２．５７，２１．０４，１９．３３，１８．７２，１１．８６，９．１９．

【0131】

注：式（７－２）の化合物の粗生成物の主成分は化合物（７－２）及び化合物（７’－２）であり、それらの比は化合物（７－２）／（７’－２）≒９２／８であった。

【0132】

３．式（７－３）の化合物の調製

【化48】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－３）の化合物の粗生成物（１０ｇ、２２ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（１０ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３５℃で１０時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧下で濃縮し、式（７－３）の化合物の粗生成物を白色固体として得、そのまま精製ステップに直接使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流し、１５℃まで自然冷却し、５時間撹拌し、吸引濾過して式（７－３）の化合物（白色固体８．３ｇ、モル収率８２．５％、ガスクロマトグラフィー純度９９．１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．３９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７４－４．５８（ｍ，１Ｈ），２．３３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．０９－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９３－１．８０（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．６５－１．４１（ｍ，７Ｈ），１．４１－１．３１（ｍ，３Ｈ），１．３１－１．２４（ｍ，１Ｈ），１．２３－１．０６（ｍ，７Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），１．０３－０．９９（ｍ，２Ｈ），０．９９－０．９２（ｍ，７Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．７，２．７Ｈｚ，６Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７３．１４，１３９．７４，１２２．５９，７３．６８，５６．７０，５６．１４，５０．０３，４２．３２，３９．７４，３９．５３，３８．１８，３７．０１，３６．６０，３６．１９，３５．８０，３１．９１，３１．８７，２８．２４，２８．０２，２７．８３，２４．２９，２３．８４，２２．８３，２２．５７，２１．０４，１９．３３，１８．７２，１８．５６，１３．６５，１１．８６．

【0133】

注：式（７－３）の化合物の粗生成物の主成分は化合物（７－３）及び化合物（７’－３）であり、それらの比は化合物（７－３）／（７’－３）≒９２／８であった。

【0134】

４．式（７－４）の化合物の調製

【化49】

フラスコにテトラヒドロフラン（３５ｍＬ）と酢酸エチル（３５ｍＬ）、式（６－４）の化合物の粗生成物（１０ｇ、２０．４６ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（１０ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３５℃で２４時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧下で濃縮し、式（７－４）の化合物の粗生成物を白色固体として得、そのまま精製ステップに直接使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流し、１５℃まで自然冷却し、４～５時間撹拌し、吸引濾過して式（７－４）の化合物（白色固体８．３３ｇ、モル収率８２．９６％、ガスクロマトグラフィー純度９８．９６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ８．１１－７．９９（ｍ，２Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），５．４２（ｄｄ，Ｊ＝５．１，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８９－４．８４（ｍ，１Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．０５－１．９７（ｍ，３Ｈ），１．９４－１．９０（ｍ，１Ｈ），１．８６－１．８０（ｍ，１Ｈ），１．７７－１．７３（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．４５（ｍ，６Ｈ），１．４１－１．３０（ｍ，３Ｈ），１．２９－１．０５（ｍ，１１Ｈ），１．０４－０．９９（ｍ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １６６．０１，１３９．６９，１３２．７２，１３０．８７，１２９．５５，１２８．２７，１２２．８０，５６．７１，５６．１５，５０．０６，４２．３４，３９．７６，３９．５４，３８．２３，３７．０５，３６．６８，３６．２０，３５．８２，３１．９５，３１．９０，２８．２５，２８．０３，２７．９０，２４．３１，２３．８５，２２．８４，２２．５８，２１．０７，１９．４０，１８．７４，１１．８８．

【0135】

注：式（７－４）の化合物の粗生成物の主成分は化合物（７－４）及び化合物（７’－４）であり、それらの比は化合物（７－４）／（７’－４）≒９２／８であった。

【0136】

５．式（７－５）の化合物の調製

【化50】

フラスコにテトラヒドロフラン（３９ｍＬ）と酢酸エチル（３９ｍＬ）、式（６－５）の化合物の粗生成物（１０ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（１５ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３０℃で２０時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧下で濃縮し、式（７－５）の化合物の粗生成物を白色固体として得、そのまま精製ステップに直接使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流し、１５℃まで自然冷却し、４時間撹拌し、吸引濾過して式（７－５）の化合物（白色固体８．１ｇ、モル収率８１％、ガスクロマトグラフィー純度９８．５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ８．０２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．４４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８８－４．８２（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），２．０６－１．９８（ｍ，３Ｈ），１．９５－１．９１（ｍ，１Ｈ），１．９０－１．８１（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．６９（ｍ，１Ｈ），１．６７－１．４４（ｍ，７Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，３Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，７Ｈ），１．０９（ｓ，３Ｈ），１．０７－０．９９（ｍ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．４Ｈｚ，６Ｈ），０．７１（ｓ，３Ｈ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １６５．７８，１６３．２０，１３９．７９，１３１．５５，１２３．３１，１２２．６９，１１３．５０，６０．４１，５８．５０，５６．７１，５６．１５，５５．４２，５０．０６，４２．３３，３９．７６，３９．５３，３８．３０，３７．０７，３６．６７，３６．２０，３５．８１，３１．９５，３１．９０，２８．２５，２８．０３，２７．９５，２４．３１，２３．８４，２２．８３，２２．５８，２１．０６，１９．４０，１８．７３，１８．４６，１４．２１，１１．８７．

【0137】

注：式（７－５）の化合物の粗生成物の主成分は化合物（７－５）及び化合物（７’－５）であり、それらの比は化合物（７－５）／（７’－５）≒９２／８であった。

【0138】

６．式（７－６）の化合物の調製

【化51】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－６）の化合物の粗生成物（１０ｇ、２０．０４ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（１０ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３５℃で１５時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧下で濃縮し、式（７－６）の化合物の粗生成物を白色固体として得、そのまま精製ステップに直接使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流し、１５℃まで自然冷却し、４時間撹拌し、吸引濾過して式（７－６）の化合物（白色固体８．２５ｇ、モル収率８２．５％、ガスクロマトグラフィー純度９８．３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．４３－５．３０（ｍ，１Ｈ），３．５３－３．４７（ｍ，１Ｈ），２．３２－２．２６（ｍ，１Ｈ），２．２１－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．０７－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．８９－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．７７－１．７０（ｍ，１Ｈ），１．６２－１．４５（ｍ，８Ｈ），１．４１－１．３１（ｍ，３Ｈ），１．３１－１．２４（ｍ，１Ｈ），１．１８－１．０６（ｍ，７Ｈ），１．０２（ｓ，４Ｈ），１．０１－０．９８（ｍ，１Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．４Ｈｚ，６Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １４１．６０，１２１．１９，７２．６７，５６．８２，５６．１６，５０．２３，４２．８４，４２．３４，３９．８２，３９．５３，３７．４０，３６．６１，３６．２０，３５．７９，３２．１０，３１．９６，３１．９２，２８．２５，２８．０３，２５．９６，２４．３１，２３．８２，２２．８３，２２．５７，２１．０８，１９．４４，１８．７３，１８．２８，１１．８６．

【0139】

注：式（７－６）の化合物の粗生成物の主成分は化合物（７－６）及び化合物（７’－６）であり、それらの比は化合物（７－６）／（７’－６）≒９２／８であった。

【0140】

実施例８ 式（７）の化合物の加水分解によるコレステロールの調製
１．式（７－１）の化合物の加水分解によるコレステロールの調製

【化52】

フラスコにメタノール（４３ｍＬ）とＫ_２ＣＯ_３（２．０７ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解した後、Ｎ_２保護下、式（７－１）の化合物（４．２８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱して２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却し、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてｐＨを７～８に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、濾過ケーキに水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥して精製コレステロール（白色固体３．８０ｇ、モル収率９８．４５％、ガスクロマトグラフィー純度９９．３８％、図６）を得た。

【0141】

２．式（７－２）の化合物の加水分解によるコレステロールの調製

【化53】

フラスコにメタノール（５０ｍＬ）とＫ_２ＣＯ_３（２．０７ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解した後、Ｎ_２保護下、式（７－２）の化合物（４．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱して２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却し、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてｐＨを７～８に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、濾過ケーキに水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥して精製コレステロール（白色固体３．８１ｇ、モル収率９８．７％、ガスクロマトグラフィー純度９９．０％）を得た。

【0142】

３．式（７－３）の化合物の加水分解によるコレステロールの調製

【化54】

フラスコにメタノール（４５ｍＬ）とＫ_２ＣＯ_３（１．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解した後、Ｎ_２保護下、式（７－３）の化合物（４．５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱して２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却し、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてｐＨを７～８に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、濾過ケーキに水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥して精製コレステロール（白色固体３．８ｇ、モル収率９８．５％、ガスクロマトグラフィー純度９９．３％）を得た。

【0143】

４．式（７－４）の化合物の加水分解によるコレステロールの調製

【化55】

フラスコにメタノール（５０ｍＬ）とＫＯＨ（０．６２ｇ、１１ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解した後、Ｎ_２保護下、式（７－４）の化合物（４．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃に加熱して６時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却し、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてｐＨを５～６に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、濾過ケーキに８０％エタノール（１０ｍｌ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥して精製コレステロール（白色固体３．６６ｇ、モル収率９４．８％、ガスクロマトグラフィー純度９８．９％）を得た。

【0144】

５．式（７－５）の化合物の加水分解によるコレステロールの調製

【化56】

フラスコにメタノール（６０ｍＬ）とＫＯＨ（０．６２ｇ、１１ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解した後、Ｎ_２保護下、式（７－５）の化合物（５．２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃に加熱して８時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却し、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてｐＨを５～６に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、濾過ケーキに８０％エタノール（１０ｍｌ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥して精製コレステロール（白色固体３．６１ｇ、モル収率９３．５％、ガスクロマトグラフィー純度９８．７％）を得た。

【0145】

６．式（７－６）の化合物の脱保護によるコレステロールの調製

【化57】

フラスコにテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）、式（７－６）の化合物（５．０１ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解した後、Ｎ_２保護下、ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏ（１５．７ｇ，５０ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で２４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、飽和塩化アンモニウムを加えてクエンチし、減圧下でテトラヒドロフランを蒸発させ、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）及び水（１２０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、２Ｎ希塩酸、水、飽和ＮａＣｌで順次に洗浄し、減圧下で濃縮して粗コレステロールを得、濾過ケーキに８０％エタノール（１０ｍｌ）を加え、２５℃で２時間スラリー化し、吸引濾過して精製コレステロール（白色固体３．６８ｇ、モル収率９５．３％、ガスクロマトグラフィー純度９８．５６％）を得た。

【0146】

比較例１
特許文献（背景技術のスキーム２、ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に報告されているように、スチグマステロール分解生成物を原料として使用し、５ステップの反応を経て総モル収率６７％でコレステロールを合成した。この特許文献の技術スキームにおける第１のステップの反応は、以下の反応式１に示される。

【化58】

【0147】

特許文献ＣＮ１０５２１８６１０Ａに記載された反応式１では、ＢＡ酸化後の式（０２）の化合物を原料として使用し、エタノールを溶媒として使用し、ｐ－トルエンスルホン酸及びオルトギ酸トリエチルの作用下で、４０℃に加熱して４時間保持し、式（０３）の化合物（モル収率９７．５０％）を得た。

【0148】

上記の特許文献によって提供される実験方法に従って、本発明は、溶媒としてエタノール、基質として式（０２）の化合物を使用し、ｐ－トルエンスルホン酸及びオルトギ酸トリエチルの触媒作用下で、４０℃で保持して４時間反応させ、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された後、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）の方法に従って後処理を行うと、式（０３’）の化合物（反応式２に示す）が得られたが、当該特許文献に記載の化合物とは一致しなかった。本発明では、オルトギ酸トリエチルの量を減らすことも試みたが、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された後、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に記載されている反応式１の結果は得られず、下記反応式３の結果が得られた。これは、特許文献ＣＮ１０５２１８６１０Ａに報告されている方法に従って式（０２）の化合物の３位のカルボニル基を保護すると、Ｃ－２２位のアルデヒド基が優先的に保護されてアセタールを形成し、（０３’）及び（０３’’）の化合物が得られるが、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に記載の式（０３）の化合物が得られないことを示している。明らかに、反応式２又は式３で示される式（０３’）及び（０３’’）の化合物は、その後のＷｉｔｔｉｇ反応を起こすことができない。

【化59】

【0149】

実験方法：エタノール（４ｍｌ）、オルトギ酸トリエチル（２ｍｌ）、式（０２）の化合物（２．００ｇ，７０．２０ｍｍｏｌ）及びｐ－トルエンスルホン酸（２０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、４０℃で保持して４時間反応させ、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された。氷浴下で酢酸ナトリウム（２０ｍｇ）を加え、濾過ケーキを溶出液が中性になるまで水洗し、水切りし、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）で精製して、式（０３’）の化合物（無色の油状物２．３０ｇ、モル収率８８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．２３－５．１９（ｍ １Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８１－３．７０（ｍ，４Ｈ），３．６１－３．５５（ｍ，１Ｈ），３．４９－３．４１（ｍ，２Ｈ），２．３１－２．２５（ｍ，１Ｈ），２．１８－１．９６（ｍ，４Ｈ），１．８５－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．７１－１．５２（ｍ，７Ｈ），１．４３－１．３３（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２２－１．１８（ｍ，６Ｈ），０．９９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．９６（ｓ，３Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １５４．５２，１４１．０６，１１８．０３，１０６．０７，９９．０４，６４．６０，６３．３５，６２．１４，５６．４８，５１．８８，４８．３３，４２．５９，４０．３９，３９．６２，３５．１８，３３．８６，３１．９２，３１．８６，２７．７２，２５．５５，２４．４２，２１．１７，１８．９６，１５．４９，１５．３７，１４．６８，１１．９４，１１．８９． ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）： ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２８Ｈ_４６ＮａＯ_３ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４５３．３３３９，ｆｏｕｎｄ ４５３．３３２８．

【0150】

実験方法：エタノール（４ｍｌ）、オルトギ酸トリエチル（１ｍｌ）、式（０２）の化合物（２．００ｇ，７０．２０ｍｍｏｌ）及びｐ－トルエンスルホン酸（２０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、４０℃で保持して４時間反応させ、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された。氷浴下で酢酸ナトリウム（２０ｍｇ）を加え、濾過ケーキを溶出液が中性になるまで水洗し、水切りし、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）で精製して、式（０３’）の化合物（無色の油状物２．３２ｇ、モル収率９５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ５．６９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７８－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．５８－３．５３（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．４０（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．２１（ｍ，４Ｈ），２．０１－１．９７（ｍ，２Ｈ），１．８４－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．６９－１．５８（ｍ，３Ｈ），１．５３－１．４７（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．２７（ｍ，３Ｈ），１．２１－１．１７（ｍ，６Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，４Ｈ），１．１３－１．０８（ｍ，１Ｈ），１．０４－０．９８（ｍ，２Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９３－０．８６（ｍ，１Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９９．５８，１７１．５３，１２３．７６，１０５．９５，６４．５８，６３．４０，５５．３９，５３．８１，５１．８１，４２．５２，４０．３３，３９．４２，３５．６９，３５．６３，３３．９７，３２．９２，３２．０３，２７．６２，２４．３７，２１．０１，１７．３７，１５．４８，１５．３６，１１．９１，１１．８６．

【0151】

比較例２
特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に報告されている第２のステップのＷｉｔｔｉｇ反応は、次の反応式４に示されている。

【化60】

【0152】

この特許文献では、溶媒としてトルエンを使用し、トリフェニルホスフィン及び１－クロロ－３－メチルブタンを加えて２時間還流し、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド及び式（０３）の化合物を加えて還流して４時間反応させて、式（０４）の化合物を得た。モル収率：９０．２９％。例えば、本発明は、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）の方法（比較例２、反応式４）を採用し、１－クロロ－３－メチルブタン又は１－ブロモ－３－メチルブタンを用いて、本発明の式（２）の化合物についてＷｉｔｔｉｇ反応を行い、トリフェニルホスフィンと１－クロロ－３－メチルブタンを２時間還流させ、反応結果は反応式５に示されるように、式（３’）の化合物が得られたが、予想された式（３）の化合物は得られなかった。これは、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に開示された方法が本発明に適用できないことを示している。

【化61】

【0153】

実験方法：トリフェニルホスフィン（７９７ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、１－クロロ－３－メチルブタン（３２４ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、トルエン（１０ｍＬ）をフラスコに加え、２時間還流し反応させた後、２５℃まで冷却し、氷浴下でカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３０７ｍｇ、２．７４．０２ｍｍｏｌ）を３回に分けて加え、氷浴下で０．５時間撹拌し、次いで式（２）の化合物（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、４時間還流し反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却し、２Ｍ ＨＣｌ（４ｍＬ）を加えて溶液を中性に調整し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を水、飽和食塩水で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）で精製して、式（３’）の化合物（無色油状物５１６ｍｇ、モル収率８５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ９．５３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７２－２．６８（ｍ，１Ｈ），２．３９－２．２５（ｍ，６Ｈ），２．１０（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，４．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９４－１．８６（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．５３（ｍ，８Ｈ），１．４３－１．３０（ｍ，４Ｈ），１．２５（ｓ，３Ｈ），１．１５（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ），０．７２（ｓ，３Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ２０５．７１，１９８．５４，１６３．３０，１３３．３２，５５．４９，５４．３１，５１．８２，４８．８５，４２．２１，３９．０５，３８．９４，３８．４０，３５．３５，３５．１６，３３．９５，３２．１２，２９．７１，２８．４３，２７．３１，２６．４９，２３．７４，２３．２１，２２．５４，２０．７４，１７．８０，１３．６０，１２．９７． ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）： ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２７Ｈ_４２ＮａＯ_２ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４２１．３０７７，ｆｏｕｎｄ ４２１．３０７５．

【0154】

トリフェニルホスフィン（７９７ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、１－ブロモ－３－メチルブタン（４５９ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、トルエン１０ｍＬをフラスコに加え、２時間還流し反応させた後、２５℃まで冷却し、氷浴下でカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３０７ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）をバッチで加え、氷浴下で０．５時間撹拌し、次いで式（２）の化合物（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、２．５時間還流し反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却し、２Ｍ ＨＣｌ（４ｍＬ）を加えて溶液を中性に調整し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を水、飽和食塩水で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）で精製して、式（３’）の化合物（無色油状物５３４ｍｇ、モル収率８８％）を得た。

【0155】

比較例３
本発明において式（４）の化合物の３位エステル基をＮａＢＨ_４で還元して式（５）の化合物を得た後、式（５）の化合物をそのまま選択的水素化還元するか、ヒドロキシ保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解反応を経てコレステロールを得た。また、まず還元剤としてラネーＮｉ／Ｈ_２を用いて側鎖の二重結合の選択的水素化還元反応を行い、その後ＮａＢＨ_４を用いて３位のエステル基を還元することを試みた。反応結果は反応式６に示されるように、式（６－１）及び（６’－１）の化合物が得られたが、予想された式（９）の化合物は得られなかった。これは、ラネーＮｉ／Ｈ_２を還元剤として使用する場合、側鎖を選択的水素化還元できないことを示している。従って、本発明の反応順序を変更することができない。

【化62】

【0156】

実験方法：フラスコに式（４）の化合物（２．１０ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）、ラネーＮｉ（４．２０ｇ、湿重量）、イソプロパノール（３０ｍＬ）、Ｈ_２（１ａｔｍ）を加え、３０℃で１１時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、ラネーＮｉを濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して式（６－１）及び式（６’－１）の混合物を得た。生成物の^１Ｈ ＮＭＲの結果から判定すれば、式（６－１）の化合物と異性体式（６’－１）の化合物の比は１：０．２８であった。

【0157】

比較例４
本発明において式（６－１）の化合物の粗生成物をラネーＮｉ／Ｈ_２で還元させて、式（７－１）の化合物の粗生成物を合成した。以下の反応式７に示された通りである。

【化63】

【0158】

本発明では、還元剤としてＨ_２を使用し、触媒としてラネーＮｉを使用することにより、側鎖の二重結合を選択的水素化還元することにより、得られた式（７－１）の化合物の粗生成物は、過剰還元体である不純物の式（８－４）の化合物の含有量が０．７％未満（^１Ｈ ＮＭＲにより判定）と低く、精製によって除去するのが容易である。また、還元剤としてＨ_２、触媒として１０％Ｐｄ／Ｃを用いて側鎖の二重結合を選択的水素化還元する場合、得られた式（７－１）の化合物の粗生成物には、過剰還元体である不純物の式（８－４）の化合物の量が５％超え（^１Ｈ ＮＭＲにより判定）と多く、精製によって除去するのが困難であり、所期の目的を達成できなかった。これは、１０％Ｐｄ／Ｃは触媒活性が比較的高く、選択性が低く、側鎖の選択的水素化還元の触媒としてラネーＮｉに代わることができないことを示している。

【0159】

実験方法：フラスコに式（６－１）の化合物（１．５０ｇ，３．５６ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（１５０ｍｇ）、酢酸エチル（３０ｍＬ）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３０℃で９時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、Ｐｄ／Ｃを濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮した。生成物の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルから判断すると、過剰還元体である不純物の式（８－４）の化合物の含有量は５％を超えている。

【0160】

本発明の保護内容は上記実施例に限定されるものではない。本発明の概念の精神及び範囲から逸脱することなく、当業者によって考えられる変更及び利点はすべて本発明に含まれ、添付の特許請求の範囲が保護範囲である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【国際調査報告】