特表 2025-502440 エナボグリフロジンを含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-24

(54)【発明の名称】エナボグリフロジンを含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/351 20060101AFI20250117BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20250117BHJP

【ＦＩ】

A61K31/351

A61P3/04

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024543241

(86)(22)【出願日】2023-01-20

(85)【翻訳文提出日】2024-07-19

(86)【国際出願番号】 KR2023001008

(87)【国際公開番号】W WO2023140682

(87)【国際公開日】2023-07-27

(31)【優先権主張番号】10-2022-0008671

(32)【優先日】2022-01-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513074792

【氏名又は名称】デーウン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】ワン・ホ

(72)【発明者】

【氏名】ヒュン－ウ・イム

(72)【発明者】

【氏名】ジ・ス・チェ

(72)【発明者】

【氏名】ジュン・ソク・パク

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA07

4C086GA02

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA55

4C086NA14

4C086ZA70

(57)【要約】

本発明は、エナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物に関する。前記組成物は、肥満犬のボディコンディションスコア、体重、脂肪厚、体脂肪率、胸囲および胴囲を減少させ、血清学的指標の改善効果にも優れているので、イヌ科動物の肥満予防または治療に有用に使用できる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

エナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項2】

前記イヌ科動物は、ボディコンディションスコア（ｂｏｄｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ，ＢＣＳ）が６以上である、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項3】

前記イヌ科動物は、ボディコンディションスコア（ＢＣＳ）が７以上である、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項4】

前記エナボグリフロジンは、１日１回０．０１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項5】

前記エナボグリフロジンは、１日１回０．０５～０．７ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項6】

前記エナボグリフロジンは、１日１回０．１～０．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項7】

前記医薬組成物は、最小８週間投与される、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項8】

前記医薬組成物は、ボディコンディションスコア、体重、脂肪厚、体脂肪率、胸囲、胴囲および安静時エネルギー要求量から成る群から選択される１つ以上の指標を改善させる、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項9】

前記医薬組成物は、空腹血糖、血清インスリン濃度、ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼ（ｇａｍｍａ－ｇｌｕｔａｍｙｌ ｔｒａｎｓｐｅｐｔｉｄａｓｅ，ＧＧＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）、クレアチンホスホキナーゼ（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｋｉｎａｓｅ，ＣＰＫ）およびＣ反応性タンパク質（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＰ）から成る群から選択される１つ以上の指標を減少させる、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項10】

前記医薬組成物は、経口または非経口で投与される、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項11】

前記イヌ科動物は、高血糖症、脂質異常症および脂肪肝から成る群から選択される代謝疾患を併存する、請求項１に記載のイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物。

【請求項12】

請求項１に記載の医薬組成物を治療が必要なイヌ科動物に投与することを含むイヌ科動物の肥満治療方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、エナボグリフロジンを含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

愛玩犬を育てる人口が増え、飼料やおやつのような食べ物が多様化して豊富になっている。しかしながら、これは、愛玩犬の過食、誤った食習慣につながり、愛玩犬の過体重、肥満を誘導することができる。

【0003】

愛玩犬の肥満は、代謝異常、内分泌障害、整形外科障害、心肺疾患、泌尿生殖器系障害および腫瘍のような併存疾患を誘発し（Ｊ Ｎｕｔｒ．２００６ Ｊｕｌ；１３６（７ Ｓｕｐｐｌ）：１９４０Ｓ－１９４６Ｓ．）、また、老化を促進し、寿命を短縮する。例えば、ラブラドールレトリバー犬において中等度肥満は、期待寿命をほぼ２年短縮することが知られている（Ｊ Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ．２００２ Ｍａｙ １；２２０（９）：１３１５－２０．）。したがって、愛玩犬と長く健康に暮らすためには、愛玩犬の肥満を積極的に管理しなければならない。

【0004】

なお、ナトリウム－グルコース共輸送体２（Ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２，ＳＧＬＴ２）抑制剤は、抗高血糖薬であり、近位ネフロンでブドウ糖の再吸収を減少させて、インスリンと関係のないメカニズムを介してブドウ糖の排出を増加させることによって血糖上昇を抑制する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明者らは、肥満犬の肥満治療剤を開発するために、肥満犬にエナボグリフロジンを投与し、エナボグリフロジンが肥満犬のボディコンディションスコア、体重、脂肪厚、体脂肪率、胸囲および胴囲を減少させる効果に優れていることを確認し、本発明を完成した。

【0006】

したがって、本発明の目的は、エナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

ヒトの同様に愛玩犬のようなイヌ科動物の肥満は、代謝異常、内分泌障害、骨関節炎、膝蓋骨脱臼、椎間板疾患（ｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌ ｄｉｓｋ ｄｉｓｅａｓｅ）、心肺疾患および腫瘍などのような併存疾患を誘発する。

【0008】

愛玩犬の肥満度は、ボディコンディションスコア（ｂｏｄｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ，ＢＣＳ）を基準として判断することができ、５段階または９段階に分けることができる。５段階基準では３段階、９段階基準では４～５段階が、標準体形を示す。９段階基準で６～７段階は軽度肥満、８段階は中等度肥満、９段階は高度肥満を示す。詳しい評価基準は、実施例の表１および図１に提示されている。

【0009】

下記実施例から確認したように、エナボグリフロジンは、ボディコンディションスコアを基準として肥満犬においてボディコンディションスコアのような指標を減少させる効果を示した。

【0010】

したがって、本発明は、エナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物を提供する。

【0011】

前記イヌ科動物の代表的な例は、イヌである。イヌ以外にも、キツネ、オオカミ、コヨーテ、ジャッカル、ドール、タヌキなどがイヌ科動物に含まれる。

【0012】

本明細書に使用される「予防」という用語は、本発明による医薬組成物の投与によって肥満の発病を抑制させたり遅延させるすべての行為を意味する。

【0013】

また、本明細書に使用される「治療」という用語は、本発明による医薬組成物の投与によって肥満が好転したり有益に変更されるすべての行為を意味する。より具体的には、ボディコンディションスコア、体重、脂肪厚、体脂肪率、胸囲、胴囲および安静時エネルギー要求量から成る群から選択される指標の改善の有無で判断することができる。

【0014】

本発明の一具体例において、前記イヌ科動物は、ボディコンディションスコアが６または７以上でありうる。前述したように、９段階基準でボディコンディションスコアが６以上であれば、軽度肥満に該当する。

【0015】

イヌ科動物の肥満の予防または治療のために使用できるエナボグリフロジンの用量は、特に制限されず、投与対象であるイヌ科動物の肥満の重症度、体重、年齢、性別、その他併存疾患の有無などによって適宜調節することができる。

【0016】

下記実施例において、本発明者らは、エナボグリフロジンをそれぞれ０．２、０．５または１ｍｇ／ｋｇの用量で肥満犬に８週間経口投与した。その結果、ボディコンディションスコア、体重、脂肪厚、体脂肪率、胸囲、胴囲および安静時エネルギー要求量から成る群から選択される指標が減少することを確認した（図４、表２および表３）。

【0017】

特に、健常犬にエナボグリフロジンをそれぞれ高用量、中用量および低用量で１３週または３９週間投与したときは、投与用量依存的に体重が減少したのに対し（図２および図３）、肥満犬では、エナボグリフロジンを０．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与したとき、抗肥満効果に最も優れていた（図４、表２～表５）。

【0018】

したがって、これに制限されるものではないが、本発明の一具体例において、前記エナボグリフロジンは、１日１回０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、１日１回０．０５～０．７ｍｇ／ｋｇ、より具体的には、１日１回０．１～０．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。

【0019】

前記エナボグリフロジンを１日１回０．０１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与する場合、１日１回０．２、０．５または１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができ、１日１回０．０５～０．７ｍｇ／ｋｇの用量で投与する場合には、０．２または０．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。また、エナボグリフロジンを１日１回０．１～０．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与する場合には、０．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。

【0020】

エナボグリフロジンの投与期間は、エナボグリフロジンの投与によるイヌ科動物の肥満の予防または治療効果に基づいて臨床医によって適宜調節可能である。これに制限されるものではないが、エナボグリフロジンを有効成分として含む医薬組成物は、イヌ科動物の肥満予防または治療のために最小８週間投与することができる。

【0021】

なお、前記医薬組成物の投与は、肥満犬において空腹血糖、血清インスリン濃度、ガンマ－グルタミントランスペプチダーゼ（ｇａｍｍａ－ｇｌｕｔａｍｙｌ ｔｒａｎｓｐｅｐｔｉｄａｓｅ，ＧＧＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）、クレアチンホスホキナーゼ（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｋｉｎａｓｅ，ＣＰＫ）、血中尿素窒素（ｂｌｏｏｄ ｕｒｅａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ，ＢＵＮ）、クレアチニン（ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ，ＣＲＥ）およびＣ反応性タンパク質（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＰ）から成る群から選択される指標をも減少させる効果を示す。これは、エナボグリフロジンが、抗肥満効果だけでなく、高血糖症、脂質異常症および脂肪肝を改善することができ、肥満治療において大きなメリットを提供することを意味する。

【0022】

したがって、前記医薬組成物の投与が必要なイヌ科動物は、これに制限されるものではないが、肥満以外に高血糖症、脂質異常症および脂肪肝から成る群から選択される代謝疾患をさらに併存することができる。

【0023】

なお、本発明によるエナボグリフロジンを含む医薬組成物の投与方法は、これに制限されるものではないが、目的とする方法によって経口または非経口で投与することができる。経口投与のための製剤は、様々な形態、例えば、シロップ、錠剤、カプセル、クリームおよびトローチ剤を選択することができる。シロップ製剤は、一般的に任意に香味剤または着色剤を含む、液体担体における化合物の懸濁液または溶液、またはその塩、例えば、エタノール、ピーナッツオイル、オリーブオイル、グリセリンまたは水を含有する。

【0024】

前記組成物を錠剤形態で製造する場合、固体製剤を製造するために一般的に使用された薬学担体のうち任意の１つを使用することができる。このような担体の例としては、マグネシウムステアレート、テラアルバ、タルク、ゼラチン、アカシア、ステアリン酸、澱粉、ラクトースおよびスクロースがある。前記組成物をカプセル形態で製造する場合、一般的なカプセル化手続中の１つが使用できるが、例えば、硬質ゼラチンカプセルシェル（ｓｈｅｌｌ）内に前述した担体を使用することができる。前記組成物を軟質ゼラチンシェルカプセル形態で製造する。分散剤または懸濁液に一般的に使用される医薬組成物のうち任意の１つが水性ガム、セルロース、シリケートまたはオイルを使用して製造することができる。筋肉内または皮下投与のための製剤は、液体形態、例えば、水性溶媒、例えば、水、生理食塩水およびリンガー（Ｒｉｎｇｅｒ）溶液、または親油性溶媒、例えば、脂肪油、ゴマ油、とうもろこし油および合成脂肪酸エステルを含む溶液、懸濁液およびエマルジョンを選択することができる。

【0025】

本発明は、また、前記エナボグリフロジンを有効成分として含む医薬組成物を治療が必要なイヌ科動物に投与することを含むイヌ科動物の肥満治療方法を提供する。

【0026】

前記肥満治療方法において言及された用語または要素のうち前記イヌ科動物の肥満の予防または治療用組成物に関する説明で言及されたようなものは、請求されたイヌ科動物の肥満の予防または治療用組成物に関する説明において同じ意味で使用される。

【発明の効果】

【0027】

本発明のエナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の肥満予防または治療用医薬組成物は、肥満犬においてボディコンディションスコア、体重、脂肪厚、体脂肪率、胸囲および胴囲を減少させ、血清学的指標の改善効果にも優れているので、イヌ科動物の肥満予防または治療に有用に使用できる。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1】ボディコンディションスコアによる愛玩犬の体形を示す。

【図2a】雄性健常犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で１３週間投与しながら体重変化を確認した結果である。

【図2b】雌性健常犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で１３週間投与しながら体重変化を確認した結果である。

【図3a】雄性健常犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で３９週間投与しながら体重変化を確認した結果である。

【図3b】雌性健常犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で３９週間投与しながら体重変化を確認した結果である。

【図4a】肥満犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で投与しながらボディコンディションスコアの変化を確認した結果である。

【図4b】肥満犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で投与しながら体重の変化を確認した結果である。

【図4c】肥満犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で投与しながら体脂肪の変化を確認した結果である。

【図4d】肥満犬にエナボグリフロジンを互いに異なる用量で投与しながら脂肪厚の変化を確認した結果である。

【発明を実施するための形態】

【0029】

以下、１つ以上の具体例を実施例に基づいてより詳細に説明する。しかしながら、これらの実施例は、１つ以上の具体例を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。

【0030】

実験方法

【0031】

１．非臨床毒性試験

【0032】

６ヶ月齢の正常雌性ビーグル犬４匹、雄性４匹にエナボグリフロジンを１３週間０（対照群、ゼラチンカプセル）、１、３、６ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与し、体重変化を確認した。エナボグリフロジンは、前記用量をゼラチンカプセルに充填して毎日投与した。

【0033】

また、6ヶ月齢の正常雌性ビーグル犬４匹、雄性４匹にエナボグリフロジンを３９週間０ （対照群、ゼラチンカプセル）、０．３、１、３ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与し、体重変化を確認した。

【0034】

２．臨床試験動物選別、グループ化およびモニタリング

【0035】

品種、性別および状態変化（ａｌｔｅｒｅｄ ｓｔａｔｕｓ）に関係なく、自然的に肥満であるが、他の面では健康な成犬を選別し、臨床試験の参加に対してイヌ保護者の事前同意を得た。

【0036】

すべてのイヌは、体重およびボディコンディションスコア（ｂｏｄｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｓｃｏｒｅ；以下ＢＣＳという。合計９段階、図１および表１）を含む身体検査結果、肥満と診断されるイヌを選別した。イヌの選別に使用したＢＣＳは、合計９段階であり、ＢＣＳが６以上のイヌを選別し、詳細基準は、表１および図１に示した。

【0037】

【表1】

【0038】

選別されたイヌは、肝、心臓および／または腎臓の異常のような基底疾患なしに一般的に健康であり、個々の給食を確実にするために、家具当たり１匹のイヌだけを分析した。

【0039】

繁殖目的に使用されたり、持続性ステロイド、内分泌状態に影響を及ぼす薬物（例：脂質改善、コレステロール抑制剤、糖尿病薬物）または体重またはエネルギー消費に影響を及ぼす薬物（例：フェノバルビタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ））を臨床試験開始前３０日内に投与を受けたイヌを除いた。

【0040】

合計２０匹のイヌを選別して、各グループに５匹ずつ４個のグループに分けた：正常肥満対照群（ＯＣ（ｏｂｅｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）；以下、対照群（ＯＣ）という）、エナボグリフロジン０．２投与群、エナボグリフロジン０．５投与群およびエナボグリフロジン１投与群。対照群には、一般飼料を供給し、エナボグリフロジン投与群には、エナボグリフロジンがそれぞれ０．２、０．５または１ｍｇ／ｋｇの用量で補充された一般飼料を供給した。エナボグリフロジンは、８週間１日１回飼料に補充して、経口投与した。

【0041】

臨床試験に参加した犬種は、次の通りである：シェトランドシープドッグ（Ｓｈｅｔｌａｎｄ Ｓｈｅｅｐｄｏｇ）（５／２０）、マルチーズ（Ｍａｌｔｅｓｅ）（３／２０）、ポムピツ（Ｐｏｍｐｉｔｚ）（２／２０）、ビションフリーゼ（Ｂｉｃｈｏｎ Ｆｒｉｓｅ）（１／２０）、ボーダーコリー（Ｂｏｒｄｅｒ Ｃｏｌｌｉｅ）（１／２０）、コッカースパニエル（Ｃｏｃｋｅｒ Ｓｐａｎｉｅｌ）（１／２０）、ジャパニーズスピッツ（Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｓｐｉｔｚ）（１／２０）、ラブラドールレトリバー犬（Ｌａｂｒａｄｏｒ Ｒｅｔｒｉｅｖｅｒ）（１／２０）、プードル（Ｐｏｏｄｌｅ）（１／２０）、シーズー（Ｓｈｉｈ Ｔｚｕ）（１／２０）、ワイヤーフォクステリア（Ｗｉｒｅ Ｆｏｘ Ｔｅｒｒｉｅｒ）（１／２０）、ヨークシャーテリア（Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ Ｔｅｒｒｉｅｒ）（１／２０）および混種（ｍｉｘｅｄ）（１／２０）。

【0042】

２０匹のイヌのうちで１０匹は、雄性であり、全部中性化され、１０匹は、雌性であり、７匹が中性化された。年齢の範囲は、３歳から１１歳の間であり、平均年齢は、７．１５歳であった。２０匹のイヌのうちで９匹は、６歳以下、８匹は、７～９歳、３匹は、１０歳以上であった。

【0043】

臨床試験に参加したすべてのイヌは、試験が終るまで毎週１回獣医師に検査を受けた。

【0044】

３．体重、胸囲、胴囲および安静時エネルギー要求量の測定

【0045】

体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ，ＢＷ）、胸囲および胴囲は、エナボグリフロジンが補充された飼料の最初の摂取直前に測定し、その後、１０週間２週に１回ずつ測定した。胸囲および胴囲は、それぞれ胸の最も厚い部分と胸と後足の間の最も薄い部分をそれぞれ４回測定して、平均囲を求めた。安静時エネルギー要求量（ｒｅｓｔｉｎｇ ｅｎｅｒｇｙ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ．ＲＥＲ）は、参考文献（Ｂｒｏｏｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｎｉｍａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ５０，１－１１．（２０１４））の式１を用いて計算した。

【0046】

［式１］
ＲＥＲ（ｋｃａｌ／ｄａｙ）＝７０×（初期体重）^０．７５

【0047】

４．脂肪厚および体脂肪の測定

【0048】

脂肪厚は、エナボグリフロジン投与初日と投与４週、８週、１０週後に撮影した放射線写真（Ｔｉｔａｎ ２０００ Ｘ－ｒａｙ ｓｙｓｔｅｍ，ＣＯＭＥＤ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｅｏｕｌ，Ｋｏｒｅａ）を用いてＴ１０脊椎突起から皮膚までの直角距離を測定して評価した。体脂肪は、エナボグリフロジン投与開始後、合計１０週間２週に１回ずつ体脂肪計測器で測定した。

【0049】

５．血液、血清および尿の検査

【0050】

血液学的検査は、エナボグリフロジン最初投与の前日、その後、１０週間２週に１回ずつ施行した。検査当日に採取した血液の一部を抗凝固剤であるＥＤＴＡ－２Ｋが入っているＣＢＣチューブに保管して、赤血球（ＲＢＣ）数値、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、ヘモグロビン濃度（Ｈｂ）、白血球（ＷＢＣ）の数および血小板（ＰＬＴ）の数を自動血液分析装置（ＡＤＶＩＡ ２１２０ｉ^ＴＭ，Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）で評価した。

【0051】

生化学的分析は、次のように進めた。検査当日に採取した血液の一部を凝固活性剤が入っている真空管に移し、室温に１５～２０分間放置して固化させた後、３０００ｒｐｍで遠心分離して血清を得た。血清の生化学的パラメータは、Ｈｉｔａｃｈｉ ７１８０装置（Ｈｉｔａｃｈｉ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）で評価した。評価した生化学的指標は、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ａｓｐａｒｔａｔｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）、クレアチンホスホキナーゼ（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｋｉｎａｓｅ，ＣＰＫ）、総ビリルビン（ｔｏｔａｌ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ，ＴＢＩＬ）、ブドウ糖（ｇｌｕｃｏｓｅ，ＧＬＵ）、総コレステロール（ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＴＣ）、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ，ＴＧ）、総タンパク質（ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＴＰ）、アルブミン（ａｌｂｕｍｉｎ，ＡＬＢ）、ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼ（ｇａｍｍａ－ｇｌｕｔａｍｙｌ ｔｒａｎｓｐｅｐｔｉｄａｓｅ，ＧＧＴ）、血中尿素窒素（ｂｌｏｏｄ ｕｒｅａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ，ＢＵＮ）、クレアチニン（ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ，ＣＲＥ）、無機リン（ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，ＩＰ）、カルシウム（Ｃａ）およびＣ反応性タンパク質（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＰ）である。

【0052】

血清インスリン濃度は、製造社のプロトコルに基づいてＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ Ｃａｎｉｎｅ Ｉｎｓｕｌｉｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（カタログ番号：ＤＩＮＳ００，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）でエナボグリフロジン投与開始後２週、４週、６週、８週および１０週に測定した。尿の生化学的パラメータは、エナボグリフロジン投与開始後２週、４週、６週、１０週に尿検査紙で評価し、尿中ブドウ糖（ＧＬＵ）の排出量は、ＵｒｉＳＣＡＮ Ｓｔｒｉｐ（登録商標）（ＹＤ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＣＯＲＰ．，龍仁市、韓国）で測定した。

【0053】

６．統計分析

【0054】

データの統計分析には、Ｐｒｉｓｍ ５．０３ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用した。試験結果は、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）で表示した。統計方法は、対応のたるスチューデントｔ－検定（ｐａｉｒｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）またはウィルコクソンマッチドペア検定（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒｓ ｔｅｓｔ）を使用し、有意レベルは、ｐ＜０．０５に設定した。

【0055】

実験結果

【0056】

１．非臨床毒性試験

【0057】

１３週間エナボグリフロジンを反復経口投与した結果、対照群に比べて体重が減少した。具体的には、１、３、６ｍｇ／ｋｇ／日の用量別に雄性ビーグル犬は、体重がそれぞれ１７．７％、１６％、２９．９％減少し（図２ａ）、雌性ビーグル犬は、体重がそれぞれ１９．６％、１８．５％、３３．２％減少し、エナボグリフロジンの投与用量依存的に体重が減少した（図２ｂ）。

【0058】

３９週間エナボグリフロジンを反復経口投与したときにも、１、３、６ｍｇ／ｋｇ／日の用量別に雄性ビーグル犬は、体重がそれぞれ９．１％、１２．７％、２１．０％減少し（図３ａ）、雌性ビーグル犬は、体重がそれぞれ７．６％、１１．８％、１１．３％減少した（図３ｂ）。

【0059】

２．ＢＣＳ、体重、体脂肪、脂肪厚、胸囲および胴囲の変化

【0060】

エナボグリフロジンの投与が肥満犬のＢＣＳ、体重、体脂肪量、脂肪厚、胸および胴囲に及ぼす影響を評価した。

【0061】

エナボグリフロジン０．２投与群（ＤＷＰ０．２）のＢＣＳは、投与開始後４週、８週、１０週に対照群（ＯＣ）より有意に低く（ｐ＜０．０５）、エナボグリフロジン０．５投与群（ＤＷＰ０．５）のＢＣＳも、全体実験期間中に減少した。エナボグリフロジン１投与群（ＤＷＰ１．０）のＢＣＳは、対照群（ＯＣ）より若干増加したが、実験終了時点では、対照群（ＯＣ）より低かった（図４ａ）。

【0062】

エナボグリフロジン０．２投与群の体重は、投与開始４週後から試験終了まで対照群（ＯＣ）に比べて有意に低く（ｐ＜０．０５）、体重変化も、すべての群において最も低かった。エナボグリフロジン０．５投与群でも、同様の体重減少が発生し、体重は、試験２週と４週目に減少した後、ゆっくり増加した（図４ｂ）。体脂肪率は、すべての群において有意差がなかったが、エナボグリフロジン０．２投与群において最も低かった（図４ｃ）。脂肪厚は、すべての投与群において減少し、このような変化は、エナボグリフロジン０．２投与群の８週と１０週で有意であった（図４ｄ）。胸囲と胴囲は、すべてのエナボグリフロジン投与群において減少した（表２）。下記表２に胸囲および胴囲の変化を記載した。

【0063】

【表2】

【0064】

３．飼料摂取量および安静時エネルギー要求量の変化

【0065】

エナボグリフロジン投与１０週目に飼料摂取量は、初期飼料摂取量と比較して対照群（ＯＣ）が１０１．３５±２．５６、エナボグリフロジン０．２投与群が１６６．５９±４．７２、エナボグリフロジン０．５投与群が９８．４７±１．４４、エナボグリフロジン１．０投与群が１２３．１５±２．４５％であった。１０週間の実験期間中に飼料摂取は、対照群（ＯＣ）に比べてエナボグリフロジン０．２投与群およびエナボグリフロジン１投与群では有意に増加し（ｐ＜０．００１）、エナボグリフロジン０．５投与群では減少した（表３）。

【0066】

エナボグリフロジン投与開始後４週と８週に安静時エネルギー要求量（ｒｅｓｔｉｎｇ ｅｎｅｒｇｙ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ；ＲＥＲ）を分析した結果、対照群（ＯＣ）と比較してエナボグリフロジン０．２投与群においてＲＥＲが有意に低かった（ｐ＜０．０５；表３）。

【0067】

臨床試験期間中に各実験群の飼料摂取量と安静時エネルギー要求量の変化を表３に記載した。結果は、平均±標準偏差で記載し、＊表示は、対照群（ＯＣ）と比較してｐ＜０．０５レベルで有意な結果を示すものである。

【0068】

【表3】

【0069】

４．血液および血清の生化学的指標

【0070】

１０週間の試験期間中に血小板（ＰＬＴ）の数を除いて投与群間に血液学的指標は有意差がなかった。エナボグリフロジン１投与群の血小板（ＰＬＴ）の数は、対照群（ＯＣ）より有意に低く（ｐ＜０．０５）、エナボグリフロジン０．２投与群の血清総コレステロール（ＴＣ）およびトリグリセリド（ＴＧ）の濃度は、対照群（ＯＣ）より低かった（表４）。

【0071】

すべての投与群において空腹血糖（ｆａｓｔｉｎｇ ｇｌｕｃｏｓｅ）および血清インスリン（ｉｎｓｕｌｉｎ）濃度は、対照群（ＯＣ）に比べて減少したが、ブドウ糖（ＧＬＵ）の濃度は、エナボグリフロジン１投与群だけで、インスリン濃度は、エナボグリフロジン０．５投与群だけで対照群（ＯＣ）より有意に低かった（表４）。

【0072】

エナボグリフロジン投与群の血清トリグリセリド（ＴＧ）の濃度は、それぞれエナボグリフロジン０．２投与群が１４２．００±９５．５５ｍｇ／ｄＬ、エナボグリフロジン０．５投与群が１３３．８６±７０．１９ｍｇ／ｄＬ、およびエナボグリフロジン１投与群が２８２．６０±４１９．０３ｍｇ／ｄＬであり、対照群（３６１．６０±６２２．３４ｍｇ／ｄＬ）より顕著に低かった。また、血清ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の濃度は、対照群（ＯＣ）に比べてエナボグリフロジン０．２投与群において有意に減少した（表４）。

【0073】

表４で、結果は、平均±標準偏差で記載し、＊表示は、対照群（ＯＣ）に比べて一元ＡＮＯＶＡによる事後検定（ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔ）でｐ＜０．０５レベルで有意な結果を示すものである。

【0074】

【表4】

【0075】

尿中ブドウ糖（ＧＬＵ）の排出は、エナボグリフロジン投与群、特にエナボグリフロジン０．２投与群においてさらに多かった（表５）。

【0076】

【表5】

【0077】

５．結論

【0078】

８週間のエナボグリフロジン投与は、肥満犬においてＢＣＳ、体重、体脂肪率、脂肪厚、胸および胴囲を減少させ、飼料にエナボグリフロジンを０．２ｍｇ／ｋｇの濃度で補充したとき、最も効果的な結果が現れた。

【0079】

また、エナボグリフロジン投与群では、血糖濃度が減少し、尿中ブドウ糖の排出が増加し、肥満個体で上昇する血清総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニン（ＣＲＥ）の濃度が全部減少した。総コレステロール（ＴＣ）とトリグリセリド（ＴＧ）の濃度の上昇は、脂質異常症の指標であり、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニン（ＣＲＥ）の濃度の上昇は、腎臓障害で見ることができる。アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）濃度の増加は、脂肪肝の指標である。

【0080】

したがって、エナボグリフロジンは、肥満犬の状態を改善し、高血糖症、脂質異常症および脂肪肝の改善効果を有することが分かる。

【図1】

【図2a】

【図2b】

【図3a】

【図3b】

【図4a】

【図4b】

【図4c】

【図4d】

【国際調査報告】