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特表2025-502465改善された塩耐性および／または温度性能を有するヌクレアーゼ
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-01-24
(54)【発明の名称】改善された塩耐性および／または温度性能を有するヌクレアーゼ
(51)【国際特許分類】
C12N 9/16 20060101AFI20250117BHJP
C12P 19/34 20060101ALI20250117BHJP
A61K 38/46 20060101ALI20250117BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20250117BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20250117BHJP
C12N 15/55 20060101ALN20250117BHJP
C12N 15/63 20060101ALN20250117BHJP
C12N 15/86 20060101ALN20250117BHJP
C12N 1/21 20060101ALN20250117BHJP
【ＦＩ】
C12N9/16 Z ZNA
C12P19/34 Z
A61K38/46
A61K48/00
A61P43/00 111
A61P43/00 105
C12N15/55
C12N15/63 Z
C12N15/86 Z
C12N1/21
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024543389
(86)(22)【出願日】2023-01-20
(85)【翻訳文提出日】2024-09-24
(86)【国際出願番号】 EP2023051445
(87)【国際公開番号】W WO2023139240
(87)【国際公開日】2023-07-27
(31)【優先権主張番号】22152536.3
(32)【優先日】2022-01-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】519408700
【氏名又は名称】シー‐レクタ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング
(74)【代理人】
【識別番号】100099623
【弁理士】
【氏名又は名称】奥山 尚一
(74)【代理人】
【識別番号】100125380
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 綾子
(74)【代理人】
【識別番号】100142996
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 聡二
(74)【代理人】
【識別番号】100166268
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 祐
(74)【代理人】
【識別番号】100180231
【弁理士】
【氏名又は名称】水島 亜希子
(72)【発明者】
【氏名】フェラー，クラウディア
(72)【発明者】
【氏名】フォーゲル，アンドレアス
(72)【発明者】
【氏名】バルチ，セバスチャン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C084
【Ｆターム（参考）】
4B064AF27
4B064CA21
4B064CB02
4B064CC24
4B064CD12
4B064CD21
4B064DA01
4B065AA19X
4B065AA48Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BC01
4B065CA31
4B065CA44
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA07
4C084AA13
4C084BA01
4C084DC22
4C084NA03
4C084ZB21
4C084ZC19
(57)【要約】
本発明は、高温、低温、および／または高塩濃度における酵素活性などの特性が改善されたヌクレアーゼに関する。本発明はまた、高温、低温、または高塩濃度においてヌクレアーゼを使用してポリヌクレオチド基質を加水分解するための方法に関する。本発明は、さらにバイオ医薬品、医薬組成物、ワクチン、またはウイルスベクターの製造においてポリヌクレオチドを加水分解するためのヌクレアーゼの使用に関する。さらに、本発明は、ヌクレアーゼを含むキットに関する。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号１と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）
（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または
（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０
からなる群から選択される位置における少なくとも１つの置換と、ここで、（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸は、Ｒ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、
を含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項2】
前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼが、（ｉ）Ｐが、Ｌ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｔが、Ｒ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＲによって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）Ａが、Ｒ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ１２４における置換と
を含む、請求項１に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項3】
前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼが、（ｉ）Ｐが、Ｌ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｔが、Ｒ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＲによって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）Ａが、Ｒ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ８１における置換と
を含む、請求項１に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項4】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ７７、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される、好ましくは、Ｐ５１、Ｔ７７、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、または少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されている、請求項１～３のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項5】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ７７、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｎ１１９、およびＰ１９５からなる群から選択される、好ましくは、Ｐ５１、Ｔ７７、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ｑ１２０、およびＡ１２４からなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されている、請求項１～４のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項6】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ７７、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、Ａ１２４、およびＰ１９５からなる群から選択される、好ましくは、Ｐ５１、Ｔ７７、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＡ１２４からなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０の位置において置換されている、請求項１～５のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項7】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ７７、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｑ１２０、およびＮ１１９からなる群から選択される、好ましくは、Ｐ５１、Ｔ７７、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｎ８０、およびＱ１２０からなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、または少なくとも８の位置において置換されている、請求項１～６のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項8】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される、好ましくは、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６の追加の位置において置換されている、請求項１～７のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項9】
（ｉｉｉ）（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０からなる群から選択される位置における第３の置換と、ここで、（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている；さらに（ｉｖ）（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０からなる群から選択される別の位置における第４の置換と、ここで、（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、
を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項10】
前記（ｉｖ）第４の置換が、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒ；
Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒ；
Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒ；
Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒ；
Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒ；
Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒ；
Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋ；
Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒ；
Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｃ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｖ、およびＴ５６Ｓ、好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、およびＴ５６Ｍ、さらにより好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ、最も好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ；
Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３ＨおよびＳ５３Ａ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋ；
Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｃ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｍ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｖ、およびＮ５８Ｓ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｈ、およびＮ５８Ｖ、最も好ましくはＮ５８Ｋ、およびＮ５８Ｒ；
Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈ；
Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒ；ならびに
Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択される、請求項９に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項11】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｋ５５において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｃ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｍ、Ｋ５５Ｆ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｗ、Ｋ５５Ｙ、Ｋ５５Ｖ、およびＫ５５Ｓ、好ましくはＫ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、より好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、最も好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項12】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ａ７２において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｎ、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｃ、Ａ７２Ｑ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｉ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｍ、Ａ７２Ｆ、Ａ７２Ｐ、Ａ７２Ｔ、Ａ７２Ｗ、Ａ７２Ｙ、Ａ７２Ｖ、およびＡ７２Ｓ、好ましくはＡ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、より好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、最も好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択される、請求項１～１１のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項13】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ａ８２において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ａ８２Ｒ、Ａ８２Ｎ、Ａ８２Ｄ、Ａ８２Ｃ、Ａ８２Ｑ、Ａ８２Ｅ、Ａ８２Ｇ、Ａ８２Ｈ、Ａ８２Ｉ、Ａ８２Ｌ、Ａ８２Ｋ、Ａ８２Ｍ、Ａ８２Ｆ、Ａ８２Ｐ、Ａ８２Ｔ、Ａ８２Ｗ、Ａ８２Ｙ、Ａ８２Ｖ、およびＡ８２Ｓ、好ましくはＡ８２Ｋ、Ａ８２Ｈ、およびＡ８２Ｒ、より好ましくはＡ８２Ｒからなる群から選択される、請求項１～１２のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項14】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｋ８４において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｃ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｍ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｖ、およびＫ８４Ｓ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇからなる群から選択される、請求項１～１３のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項15】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｄ８６において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｒ、Ｄ８６Ｎ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｑ、Ｄ８６Ｅ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ｈ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｋ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｆ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｔ、Ｄ８６Ｗ、Ｄ８６Ｙ、Ｄ８６Ｖ、およびＤ８６Ｓ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択される、請求項１～１４のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項16】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ａ９４において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ａ９４Ｒ、Ａ９４Ｎ、Ａ９４Ｄ、Ａ９４Ｃ、Ａ９４Ｑ、Ａ９４Ｅ、Ａ９４Ｇ、Ａ９４Ｈ、Ａ９４Ｉ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｋ、Ａ９４Ｍ、Ａ９４Ｆ、Ａ９４Ｐ、Ａ９４Ｔ、Ａ９４Ｗ、Ａ９４Ｙ、Ａ９４Ｖ、およびＡ９４Ｓ、好ましくはＡ９４Ｇ、Ａ９４Ｖ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｉ、およびＡ９４Ｐ、より好ましくはＡ９４Ｇからなる群から選択される、請求項１～１５のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項17】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｓ１１６において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｄ、Ｓ１１６Ｃ、Ｓ１１６Ｑ、Ｓ１１６Ｅ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｍ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｔ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｖ、好ましくはＳ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択される、請求項１～１６のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項18】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｄ１１７において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｅ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、最も好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓからなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項19】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｄ１２８において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｅ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｖ、およびＤ１２８Ｓ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋ、最も好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋからなる群から選択される、請求項１～１８のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項20】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｄ１２９において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｎ、Ｑ１２９Ｄ、Ｑ１２９Ｃ、Ｑ１２９Ｅ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｍ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｔ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｙ、Ｑ１２９Ｖ、およびＱ１２９Ｓ、好ましくはＱ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択される、請求項１～１９のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項21】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｋ１３２において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３２Ｒ、Ｋ１３２Ｎ、Ｋ１３２Ｄ、Ｋ１３２Ｃ、Ｋ１３２Ｑ、Ｋ１３２Ｅ、Ｋ１３２Ｇ、Ｋ１３２Ｈ、Ｋ１３２Ｉ、Ｋ１３２Ｌ、Ｋ１３２Ｍ、Ｋ１３２Ｆ、Ｋ１３２Ｐ、Ｋ１３２Ｔ、Ｋ１３２Ｗ、Ｋ１３２Ｙ、Ｋ１３２Ｖ、およびＫ１３２Ｓ、好ましくはＫ１３２Ｒ、およびＫ１３２Ｈ、最も好ましくはＫ１３２Ｒからなる群から選択される、請求項１～２０のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項22】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｄ１３５において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｅ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｈ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｖ、およびＤ１３５Ｓ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、最も好ましくはＤ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５ＲおよびＤ１３５Ｋからなる群から選択される、請求項１～２１のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項23】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｅ１５１において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｄ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｖ、およびＥ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１ＨおよびＥ１５１Ｋ、好ましくはＥ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、およびＥ１５１Ｐ、より好ましくはＥ１５１Ｌからなる群から選択される、請求項１～２２のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項24】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｋ１６２において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｋ１６２Ａ、Ｋ１６２Ｒ、Ｋ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｄ、Ｋ１６２Ｃ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｅ、Ｋ１６２Ｇ、Ｋ１６２Ｈ、Ｋ１６２Ｉ、Ｋ１６２Ｌ、Ｋ１６２Ｍ、Ｋ１６２Ｆ、Ｋ１６２Ｐ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２Ｗ、Ｋ１６２Ｙ、Ｋ１６２Ｖ、およびＫ１６２Ｓ、好ましくはＫ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｓ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２ＣおよびＫ１６２Ｍ、最も好ましくはＫ１６２Ｎからなる群から選択される、請求項１～２３のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項25】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９１において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｗ、Ｄ１９１Ｆ、Ｄ１９１Ｙ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、Ｄ１９１Ｔ、Ｄ１９１Ｎ、Ｄ１９１Ｅ、Ｄ１９１Ｈ、Ｄ１９１ＲおよびＤ１９１Ｋ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、より好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、最も好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択される、請求項１～２４のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項26】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｐ１９５において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒからなる群から選択される、請求項１～２５のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項27】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｋ１９６において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｄ、Ｋ１９６Ｃ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｅ、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｍ、Ｋ１９６Ｆ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｗ、Ｋ１９６Ｙ、Ｋ１９６Ｖ、およびＫ１９６Ｓ、好ましくはＫ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、より好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、最も好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択される、請求項１～２６のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項28】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｇ１９７において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｎ、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｃ、Ｇ１９７Ｑ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ｉ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｍ、Ｇ１９７Ｆ、Ｇ１９７Ｐ、Ｇ１９７Ｔ、Ｇ１９７Ｗ、Ｇ１９７Ｙ、Ｇ１９７Ｖ、およびＧ１９７Ｓ、好ましくはＧ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択される、請求項１～２７のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項29】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９９において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｅ、Ｄ１９９Ｈ、Ｄ１９９ＲおよびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択される、請求項１～２８のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項30】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｒ２０４において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｄ、Ｒ２０４Ｃ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｅ、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｍ、Ｒ２０４Ｆ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｗ、Ｒ２０４Ｙ、Ｒ２０４Ｖ、およびＲ２０４Ｓ、好ましくはＲ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、最も好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択される、請求項１～２９のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項31】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｉ２１８において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｉ２１８Ｒ、Ｉ２１８Ｎ、Ｉ２１８Ｄ、Ｉ２１８Ｃ、Ｉ２１８Ｑ、Ｉ２１８Ｅ、Ｉ２１８Ｇ、Ｉ２１８Ｈ、Ｉ２１８Ａ、Ｉ２１８Ｌ、Ｉ２１８Ｋ、Ｉ２１８Ｍ、Ｉ２１８Ｆ、Ｉ２１８Ｐ、Ｉ２１８Ｔ、Ｉ２１８Ｗ、Ｉ２１８Ｙ、Ｉ２１８Ｖ、およびＩ２１８Ｓ、好ましくはＩ２１８Ｆ、Ｉ２１８ＷおよびＩ２１８Ｙ、より好ましくはＩ２１８Ｆからなる群から選択される、請求項１～３０のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項32】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ａ２２８において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｎ、Ａ２２８Ｄ、Ａ２２８Ｃ、Ａ２２８Ｑ、Ａ２２８Ｅ、Ａ２２８Ｇ、Ａ２２８Ｈ、Ａ２２８Ｉ、Ａ２２８Ｌ、Ａ２２８Ｋ、Ａ２２８Ｍ、Ａ２２８Ｆ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ａ２２８Ｙ、Ａ２２８Ｖ、およびＡ２２８Ｓ、好ましくはＡ２２８Ｋ、Ａ２２８ＨおよびＡ２２８Ｒ、より好ましくはＡ２２８Ｒからなる群から選択される、請求項１～３１のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項33】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、位置Ｅ２３９において置換されており、好ましくは、前記置換が、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｒ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｄ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｈ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｋ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｖ、およびＥ２３９Ｓ、好ましくはＥ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択される、請求項１～３２のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項34】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｈ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｈ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｈ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されている、請求項１～３３のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項35】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｇ５４Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されている、請求項１～３４のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項36】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と少なくとも７６％、さらにより好ましくは少なくとも７８％、さらにより好ましくは少なくとも８１％、最も好ましくは少なくとも８４％、および特に少なくとも８７％の同一性を有する、請求項１～３５のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項37】
前記アミノ酸配列が、配列番号１と少なくとも８８％、好ましくは少なくとも８９％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、最も好ましくは少なくとも９４％、および特に少なくとも９５％の同一性を有する、請求項１～３６のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項38】
前記アミノ酸配列が、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、または１９５と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、請求項１～３７のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項39】
前記アミノ酸配列が、配列番号２、３、４、６、７、８、１１、１２、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２３、２４、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４９、５０、５１、５２、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０７、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、または１９５と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、請求項１～３８のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項40】
前記アミノ酸配列が、配列番号５５、５７、５８、５９、６１、６４、６６、６９、８６、１２８、１３１、１３２、１３３、１３４、１３７、１３８、１３９、１４０、１４３、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、または１９５と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、請求項１～３９のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項41】
（Ｂ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または（Ｃ）配列番号１の前記野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性のいずれかを特徴とする、請求項１～４０のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項42】
配列番号１の前記野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を有し、前記Ｓ高活性は、（ｉ）少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、さらにより好ましくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも１２倍、さらにより好ましくは少なくとも１９倍向上している；
（ｉｉ）前記配列番号１と比較して、１．０１倍から２００倍、好ましくは１．５倍から１５０倍、より好ましくは２倍から１００倍、さらにより好ましくは５倍から７５倍、さらにより好ましくは１２倍から５０倍、さらにより好ましくは約２０倍向上している、請求項１～４１のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項43】
配列番号１と比較して、（ｉ）少なくとも１．０５倍から３００倍、好ましくは７倍から２５０倍、より好ましくは９倍から２００倍、さらにより好ましくは１３倍から１５０倍、さらにより好ましくは約１１５倍向上した；
（ｉｉ）少なくとも３％、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも１００％、さらにより好ましくは少なくとも１３０％、さらにより好ましくは少なくとも２００％、最も好ましくは少なくとも８００％向上した相対塩活性を有する、請求項１～４２のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項44】
前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼが、ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを加水分解することができ、ポリヌクレオチド基質を切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドへと加水分解することができる、請求項１～４３のいずれか１項に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項45】
前記ポリヌクレオチド基質が、一本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡおよびハイブリッド鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＤＮＡからなる群から選択される、請求項４４に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【請求項46】
ポリヌクレオチド基質、好ましくは、サンプルに含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法であって、（ａ）請求項１～４５のいずれかに記載のヌクレアーゼを準備するステップと；
（ｂ）ポリヌクレオチド基質を含む組成物を準備するステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で準備された前記組成物中の前記ポリヌクレオチド基質をステップ（ａ）で準備された前記ヌクレアーゼと接触させ、前記ヌクレアーゼに前記ポリヌクレオチド基質を加水分解させるステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドを含む組成物を得る
を含む、前記方法。
【請求項47】
ステップ（ｃ）が、４℃から９０℃の間、好ましくは１０℃から８０℃の間、より好ましくは２０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間、さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間、最も好ましくは３７℃、または
２０℃から９０℃の間、好ましくは２３℃から８０℃の間、より好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間、さらにより好ましくは５０℃および６５℃、最も好ましくは５１℃、または
４℃から６５℃の間、好ましくは４℃から３８℃の間、より好ましくは４℃から２５℃の間、さらにより好ましくは４℃から２０℃の間、さらにより好ましくは４℃から１５℃の間、さらにより好ましくは４℃から１０℃の間、最も好ましくは４℃から６℃の間、および最高に好ましくは５℃の温度で行われる、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
ステップ（ｃ）が、塩の存在下において行われ、前記塩は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ、好ましくはＮａＣｌである、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項49】
ステップ（ｃ）が、０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で行われる、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項50】
ステップ（ｃ）が、塩の非存在下において行われる、請求項４６～４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項51】
（ｄ）ステップ（ｃ）の後に前記ヌクレアーゼを不活性化する追加のステップを含み、それによって、切断されたポリヌクレオチドおよび不活性化ヌクレアーゼを含む組成物を得る、請求項４６～５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項52】
（ｅ）前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼを、ステップ（ｃ）で得られた切断されたポリヌクレオチドおよび任意にステップ（ｄ）で得られた不活性化ヌクレアーゼを含む前記組成物から分離する追加のステップを含む、請求項４６～５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項53】
ポリヌクレオチド基質、好ましくは、組成物に含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解するための、請求項１～４５のいずれか１項に記載のヌクレアーゼの使用。
【請求項54】
前記組成物中の前記ポリヌクレオチド基質は、細胞、好ましくは、真核生物ドメイン由来の細胞；好ましくは不死化細胞、または幹細胞、または組織細胞、または真菌細胞；より好ましくは、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ種由来、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属由来またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属由来の細胞；および／または
細菌ドメイン由来の細胞；好ましくは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ種由来、またはＢａｃｉｌｌｕｓ属由来の細胞；および／または
古細菌ドメイン由来の細胞から選択される細胞由来である、請求項５３に記載の使用。
【請求項55】
前記ポリヌクレオチド基質が、細胞破壊、分泌、溶解、または細胞破裂によって細胞から前記組成物に放出される、請求項５３または５４に記載の使用。
【請求項56】
前記組成物が、細胞発酵プロセスからの溶解細胞由来である、請求項５３～５５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項57】
前記組成物が、バイオ医薬品、医薬組成物、医薬、ワクチン、またはウイルスベクターの生成プロセスからの中間生成物または生成物である、請求項５３～５６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項58】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、植物ウイルス、バクテリオファージ、およびハイブリッドベクターウイルスからなる群から選択される、請求項５７に記載の使用。
【請求項59】
前記組成物が、体外診断に使用するための患者組織サンプルの調製中の中間生成物または生成物である、請求項５７に記載の使用。
【請求項60】
前記バイオ医薬品、医薬組成物、医薬、ワクチン、またはウイルスベクターが、遺伝子療法、および／または組織療法、および／または体外診断に使用される、請求項５７～５９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項61】
細胞ライセートにおける粘度の低下のための、請求項５３～６０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項62】
電気泳動および／またはクロマトグラフィー法におけるサンプル調製のための、請求項５３～６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項63】
０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で行われる、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項64】
塩の非存在下において行われる、請求項５３～６３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項65】
ポリヌクレオチドを切断するためのキットであって、ａ．請求項１～４５のいずれか１項に記載のヌクレアーゼと、
ｂ．ポリヌクレオチド基質を加水分解するためのバッファーと、
ｃ．任意に、前記ヌクレアーゼの不活性化および／または除去のための薬剤および／またはデバイスと
を含み、好ましくは、請求項４６～５２のいずれか１項に記載の方法または請求項５３～６４のいずれか１項に記載の使用に使用するためのものである、前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、高温、低温、および／または高塩濃度における酵素活性などの特性が改善されたヌクレアーゼに関する。本発明はまた、高温、低温、または高塩濃度においてヌクレアーゼを使用してポリヌクレオチド基質を加水分解するための方法に関する。本発明は、さらにバイオ医薬品、医薬組成物、ワクチン、またはウイルスベクターの製造においてポリヌクレオチドを加水分解するためのヌクレアーゼの使用に関する。さらに、本発明は、ヌクレアーゼを含むキットに関する。
【背景技術】
【0002】
ヌクレアーゼは、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を切断する加水分解酵素であり、広く経済的に重要である。エキソヌクレアーゼは、エンドヌクレアーゼとは区別される。エキソヌクレアーゼは、核酸の５’または３’末端からモノヌクレオチドを切断するが、エンドヌクレアーゼによる切断は核酸内で起こり、それぞれオリゴヌクレオチドが生成される。さらに、特異的なヌクレアーゼ（例えば、制限酵素）は、非特異的なヌクレアーゼ（例えば、ＲＮアーゼＡ）とは区別される。特異的なヌクレアーゼは、規定の配列または構造で核酸を特異的に認識し、切断するが、非特異的なヌクレアーゼは、核酸をランダムに切断する。制限酵素は、分子生物学において不可欠なツールになっており、さまざまなＤＮＡ分子を特異的に断片に分割する役割を果たし、その断片を、リガーゼを使用して他の断片と再び選択的に連結して、新しいＤＮＡ分子構築物を形成することができる。非特異的なヌクレアーゼは、主にさまざまなプロセスにおいて核酸の分解のために使用される。ヌクレアーゼがＤＮＡのみを切断する場合、「ＤＮアーゼ」と呼ばれ、ヌクレアーゼがＲＮＡのみを切断する場合、「ＲＮアーゼ」と呼ばれる。
【0003】
非特異的なヌクレアーゼ、特に、エンドヌクレアーゼの触媒作用下における非特異的加水分解によってサンプルからＤＮＡおよびＲＮＡを除去することは、経済的利益のあるいくつかのバイオテクノロジー製品、例えば、抗体または酵素、多糖、脂質、低分子物質、例えば、抗生物質、代謝最終生成物、中間生成物または化学物質などの製造において重要な処理ステップである。核酸を除去する必要性は、バイオテクノロジー製品の生成が生産細胞の細胞内で起こり、生成プロセス中に核酸が放出される場合、または生成中に生産細胞の一部が溶解される場合に特に重要になる。その結果、相当な量の核酸が調製物（発酵ブロス）に放出され、所望のバイオテクノロジー製品を汚染するか、またはさらなる精製をより困難にする可能性がある。例えば、無細胞インビトロ翻訳を使用したタンパク質（バイオテクノロジー製品）の生成でも同様の問題が生じる。核酸は、ろ過もしくはクロマトグラフィー操作などのバイオテクノロジー製品の分離または精製のための次のステップが不可能であるか、またはより困難になる程、調製物の粘度を増加させる。エンドヌクレアーゼの使用により、核酸を小さな断片に分解することができ、それにより、調製物の粘度を低下させ、調製物の得られた切断核酸および他の望ましくない成分を限外ろ過などの簡単な方法を使用してバイオテクノロジー製品から分離することができる。
【0004】
「Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼ」または「Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓエンドヌクレアーゼ」とも呼ばれるＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ種由来のエンドヌクレアーゼ（配列番号１）は、国際生化学分子生物学連合の酵素クラス番号に従いＥＣ３．１．３０．２と分類する。このエンドヌクレアーゼは、二本鎖または一本鎖のＤＮＡおよびＲＮＡ両方のリン酸ジエステル結合の非特異的加水分解を触媒して、より小さな５’－リン酸化オリゴヌクレオチドを生成する。Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓエンドヌクレアーゼは、商標名Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（登録商標）またはＤＥＮＡＲＡＳＥ（登録商標）として商業的に入手可能である。このエンドヌクレアーゼは、製造を容易にするために「操作されている」が、そのアミノ酸配列は、依然として野生型Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓエンドヌクレアーゼと同一である。このエンドヌクレアーゼは、３７℃の最適温度、ｐＨ８．０～９．０の最適ｐＨ、１～２ｍＭの最適濃度のＭｇ２＋イオンに関する要件、および０～２０ｍＭの一価カチオン濃度（Ｎａ＋、Ｋ＋など）での最適性能で高い活性および安定性を示す。本来、このエンドヌクレアーゼは、これらの最適な範囲外の反応条件では働きが低いか、または働かないことさえある。
【0005】
したがって、最適な範囲外であるが、それにもかかわらず工業的製造プロセスに関連する反応条件下で、特に高温、低温、または高塩濃度では、酵素の工業的使用が制限される。例えば、バイオテクノロジー製品の特定の工業的製造プロセスにおける核酸の酵素切断は、野生型酵素の最適な範囲外の反応条件下におけるヌクレアーゼの加水分解活性を必要とする。そのような条件、例えば、０．０５Ｍのように低い塩濃度もしくは１．００Ｍのように高い塩濃度のＮａＣｌもしくはＫＣｌのような塩の存在下、または４℃のような低い温度もしくは６０℃のような高い温度などは、比較的厳しい可能性がある。
【0006】
先行技術から知られている従来のヌクレアーゼはさまざまな工業的用途と関連するこれらの反応要件を満たしていないため、既知のヌクレアーゼと比較して有利なヌクレアーゼが必要とされている。特に、高温、低温、または高塩濃度に対して耐性が向上したヌクレアーゼが必要とされている。
【発明の概要】
【0007】
［発明の目的］
先行技術のヌクレアーゼと比較して、特にＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼ（配列番号１）と比較して利点を有する改善されたヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼを提供することが本発明の目的である。改善されたヌクレアーゼは、高温、低温、または高塩濃度の条件下で十分な酵素性能を示さなければならない。ヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド（ＲＮＡおよび／またはＤＮＡ）のモノヌクレオチド（例えば、エキソヌクレアーゼ活性による）またはオリゴヌクレオチド（例えば、非特異的なエンドヌクレアーゼ活性による）への工業的加水分解における使用に適していなければならない。
先行技術のヌクレアーゼと比較して、特にＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼ（配列番号１）と比較して利点を有する改善されたヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼを提供することが本発明の目的である。改善されたヌクレアーゼは、高温、低温、または高塩濃度の条件下で十分な酵素性能を示さなければならない。ヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド（ＲＮＡおよび／またはＤＮＡ）のモノヌクレオチド（例えば、エキソヌクレアーゼ活性による）またはオリゴヌクレオチド（例えば、非特異的なエンドヌクレアーゼ活性による）への工業的加水分解における使用に適していなければならない。
【0008】
この目的は、特許請求項の主題によって達成された。
【0009】
［発明の概要］
要約すると、本発明は、工業的利用可能性のより広い領域を特徴とする改善された改変ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼバリアントに関する。特に、本発明は、野生型酵素のアミノ酸配列の画定された部分配列内の配列位置にアミノ酸の置換を有する生物Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓのエンドヌクレアーゼ（配列番号１）のバリアントに関する。
要約すると、本発明は、工業的利用可能性のより広い領域を特徴とする改善された改変ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼバリアントに関する。特に、本発明は、野生型酵素のアミノ酸配列の画定された部分配列内の配列位置にアミノ酸の置換を有する生物Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓのエンドヌクレアーゼ（配列番号１）のバリアントに関する。
【0010】
驚くべきことに、０．０５Ｍから１．００Ｍの範囲内の塩濃度における高い活性を特徴とする改善された改変ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼバリアントが提供可能であることがわかった。
【0011】
さらに、驚くべきことに、４０℃から６０℃の範囲内の温度における高い活性を特徴とする改善された改変ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼバリアントが提供可能であることがわかった。さらに一層、驚くべきことに、４℃から２５℃の範囲内の温度における高い活性を特徴とする改善された改変ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼバリアントが提供可能であることがわかった。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】実施例８に示される方法によって算出された最終モデルの三次元表示を示す。
【図2】実施例８に示される方法によって算出された最終モデルの三次元表示を示す。
【図3】実施例８に示される方法によって算出された最終モデルの三次元表示を示す。
【図4】実施例８に示される方法によって算出された最終モデルの三次元表示を示す。
【発明を実施するための形態】
【0013】
本発明の第１の態様は、配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されている。
【0014】
本発明の特に好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）
（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または
（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０
からなる群から選択される位置における少なくとも１つの置換（ここで、（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合において、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）と
を含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関する。
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）
（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または
（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０
からなる群から選択される位置における少なくとも１つの置換（ここで、（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合において、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）と
を含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関する。
【0015】
本発明の特に好適な別の実施形態は、配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、それぞれの場合、選択される位置の天然のアミノ酸は、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択される；好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＰからなる群から選択される；より好ましくはＡ、Ｇ、Ｌ、およびＰからなる群から選択される；さらにより好ましくはＡ、Ｇ、およびＰからなる群から選択される；さらにより好ましくはＡ、およびＧからなる群から選択されるアミノ酸；最も好ましくはＡによって置換されている。
【0016】
本発明の特に好適なさらに別の実施形態は、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８からなる群から選択される少なくとも２のアミノ酸位置において置換されており、それぞれの場合、選択される位置の天然のアミノ酸は、Ｌ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｖ、およびＩからなる群から選択される；好ましくはＬ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、およびＶからなる群から選択される；より好ましくはＬ、Ｐ、Ｉ、およびＧからなる群から選択される；さらにより好ましくはＬ、Ｐ、およびＧからなる群から選択される；さらにより好ましくはＬ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている。
【0017】
［定義］
本明細書の目的で、ヌクレアーゼ（ヌクレオデポリメラーゼまたはポリヌクレオチダーゼとしても知られている）は、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）のヌクレオチド間のリン酸ジエステル結合を切断することができる加水分解酵素である。エキソヌクレアーゼは、核酸を５’または３’末端から消化して、モノヌクレオチドを形成し、エンドヌクレアーゼは、核酸の中間の領域に作用して、オリゴヌクレオチドを形成する。さらに、特異的なヌクレアーゼは、非特異的なヌクレアーゼとは区別され、特異的なヌクレアーゼは、規定の配列または構造で核酸を認識し切断し、非特異的なヌクレアーゼは、核酸をランダムに切断する。特定のヌクレアーゼはＤＮＡのみを切断することができ、別のヌクレアーゼはＲＮＡのみを切断することができ、別のヌクレアーゼはＤＮＡおよびＲＮＡを切断することができる。本発明によるヌクレアーゼは、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼである。好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、デオキシリボヌクレアーゼ、好ましくはデオキシリボエンドヌクレアーゼである。その他の好適な実施形態において、ヌクレアーゼは、リボヌクレアーゼ、好ましくはリボエンドヌクレアーゼである。
本明細書の目的で、ヌクレアーゼ（ヌクレオデポリメラーゼまたはポリヌクレオチダーゼとしても知られている）は、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）のヌクレオチド間のリン酸ジエステル結合を切断することができる加水分解酵素である。エキソヌクレアーゼは、核酸を５’または３’末端から消化して、モノヌクレオチドを形成し、エンドヌクレアーゼは、核酸の中間の領域に作用して、オリゴヌクレオチドを形成する。さらに、特異的なヌクレアーゼは、非特異的なヌクレアーゼとは区別され、特異的なヌクレアーゼは、規定の配列または構造で核酸を認識し切断し、非特異的なヌクレアーゼは、核酸をランダムに切断する。特定のヌクレアーゼはＤＮＡのみを切断することができ、別のヌクレアーゼはＲＮＡのみを切断することができ、別のヌクレアーゼはＤＮＡおよびＲＮＡを切断することができる。本発明によるヌクレアーゼは、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼである。好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、デオキシリボヌクレアーゼ、好ましくはデオキシリボエンドヌクレアーゼである。その他の好適な実施形態において、ヌクレアーゼは、リボヌクレアーゼ、好ましくはリボエンドヌクレアーゼである。
【0018】
本発明の意味の範囲内で、本発明のいずれかの態様の実施形態がヌクレアーゼを言及する場合はいつでも、任意のそのような実施形態が、同じ実施形態を提供するエンドヌクレアーゼおよび／または同じ実施形態を提供するポリペプチドも言及することが意図される。この点において、本発明はまた、配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むエンドヌクレアーゼおよび／またはポリペプチドにも関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されている。したがって、本発明のヌクレアーゼを参照する任意の態様のすべての実施形態も、それに対応してエンドヌクレアーゼおよび／またはポリペプチドを言及するものとする。
【0019】
本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と定義された同一性を有するアミノ酸配列を含む。これは、本発明による任意のヌクレアーゼが上記アミノ酸配列をアミノ酸配列全体の部分配列として含んでもよく、または基本的に上記アミノ酸配列からなってもよいことを意味する。本発明によるヌクレアーゼが上記アミノ酸配列をアミノ酸配列全体の部分配列として含む場合、上記アミノ酸配列全体が伸長されてもよく、すなわち、上記部分配列のＮ末端および／またはＣ末端に追加のアミノ酸残基を含んでもよい。そのような伸長は、例えば、精製のためにヌクレアーゼが固体支持体上に固定化される場合に、有利であり得る。
【0020】
本明細書の目的で、同一性パーセントは以下のとおりに算出される：配列同一性［％］＝一致数／Ｌ×１００。ここで、Ｌはアラインメントされた位置の数、すなわち、同一性と非同一性（存在する場合はギャップを含む）である。同一性は、好ましくは、以下のアルゴリズムパラメーター：Ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｇａｐ Ｃｏｓｔｓ：Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ：１１ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ：１、Ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：０．０５、およびＷｏｒｄ ｓｉｚｅ：６を用いて、ＢＬＡＳＴＰを使用して算出されるのが好ましい（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ ｅｔ ａｌ．（１９９７）“Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２；またはＡｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ（２００５）“Ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈｅｓ ｕｓｉｎｇ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｌｙ ａｄｊｕｓｔｅｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｃｅｓ．”ＦＥＢＳ Ｊ．２７２：５１０１－５１０９を参照）。ＢｌａｓｔＰは、ＮＣＢＩホームページ（ｈｔｔｐｓ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ？ＰＲＯＧＲＡＭ＝ｂｌａｓｔｐ＆ＰＡＧＥ＿ＴＹＰＥ＝ＢｌａｓｔＳｅａｒｃｈ＆ＬＩＮＫ＿ＬＯＣ＝ｂｌａｓｔｈｏｍｅ）でオンラインアクセス可能である。他のプログラム設定は、例えば、以下の設定を使用して、所望のとおり調節することができる：
－Ｆｉｅｌｄ「Ｅｎｔｅｒ Ｑｕｅｒｙ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ」：Ｑｕｅｒｙ ｓｕｂｒａｎｇｅ：なし；
－Ｆｉｅｌｄ「Ｃｈｏｏｓｅ Ｓｅａｒｃｈ Ｓｅｔ」：Ｄａｔａｂａｓｅ：ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ（ｎｒ）；任意パラメーター：なし；
－Ｆｉｅｌｄ「Ｐｒｏｇｒａｍ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ」：Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：ｂｌａｓｔｐ（ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＬＡＳＴ）
－Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：Ｆｉｅｌｄ「Ｇｅｎｅｒａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」：Ｍａｘ ｔａｒｇｅｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：５０００；Ｓｈｏｒｔ ｑｕｅｒｉｅｓ：Ａｕｔｏｍａｔｉｃａｌｌｙ ａｄｊｕｓｔ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｆｏｒ ｓｈｏｒｔ ｉｎｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；Ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：０．０５；Ｗｏｒｄ ｓｉｚｅ：６；Ｍａｘ ｍａｔｃｈｅｓ ｉｎ ａ ｑｕｅｒｙ ｒａｎｇｅ：０；
－Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：Ｆｉｅｌｄ「Ｓｃｏｒｉｎｇ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」：Ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｇａｐ Ｃｏｓｔｓ：Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ：１１ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ：１；Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｓ：Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｓｃｏｒｅ ｍａｔｒｉｘ ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ；
－Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：Ｆｉｅｌｄ「Ｆｉｌｔｅｒｓ ａｎｄ Ｍａｓｋｉｎｇ」：Ｆｉｌｔｅｒ：なし；Ｍａｓｋ：なし。
－Ｆｉｅｌｄ「Ｅｎｔｅｒ Ｑｕｅｒｙ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ」：Ｑｕｅｒｙ ｓｕｂｒａｎｇｅ：なし；
－Ｆｉｅｌｄ「Ｃｈｏｏｓｅ Ｓｅａｒｃｈ Ｓｅｔ」：Ｄａｔａｂａｓｅ：ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ（ｎｒ）；任意パラメーター：なし；
－Ｆｉｅｌｄ「Ｐｒｏｇｒａｍ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ」：Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：ｂｌａｓｔｐ（ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＬＡＳＴ）
－Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：Ｆｉｅｌｄ「Ｇｅｎｅｒａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」：Ｍａｘ ｔａｒｇｅｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：５０００；Ｓｈｏｒｔ ｑｕｅｒｉｅｓ：Ａｕｔｏｍａｔｉｃａｌｌｙ ａｄｊｕｓｔ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｆｏｒ ｓｈｏｒｔ ｉｎｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；Ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：０．０５；Ｗｏｒｄ ｓｉｚｅ：６；Ｍａｘ ｍａｔｃｈｅｓ ｉｎ ａ ｑｕｅｒｙ ｒａｎｇｅ：０；
－Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：Ｆｉｅｌｄ「Ｓｃｏｒｉｎｇ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」：Ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｇａｐ Ｃｏｓｔｓ：Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ：１１ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ：１；Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｓ：Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｓｃｏｒｅ ｍａｔｒｉｘ ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ；
－Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：Ｆｉｅｌｄ「Ｆｉｌｔｅｒｓ ａｎｄ Ｍａｓｋｉｎｇ」：Ｆｉｌｔｅｒ：なし；Ｍａｓｋ：なし。
【0021】
同一性パーセントの算出のためのデフォルトパラメータに加えて、「クエリー配列」と呼ばれる参照配列を「対象配列」と呼ばれる別の配列とアラインメントする場合、特に、クエリー配列が本発明によって提供される任意の配列、好ましくは配列番号１であり、対象配列が任意の他の配列、例えばデータベースで開示されている配列である場合、対象配列は、クエリー配列の全体の長さの少なくとも７０％をカバーする配列範囲にわたりアラインメントされなければならず（少なくとも７０％の「配列カバー率」）、両配列のアラインメントは、クエリー配列の少なくとも７０％をカバーしていなければならない。本明細書の目的で、配列カバー率は、アラインメントされた位置の数として、すなわち、同一性および非同一性をカバーする数（存在する場合はギャップを含む）をクエリー配列の全体の長さで割り、１００を掛けて算出される。対象配列によるクエリー配列の配列カバー率が低いアラインメントは、本出願の目的では配列同一性の決定から除外される。ただし、対象配列は、アラインメントの長さよりも長くてもよい。
【0022】
特定の宿主生物において天然にまたは組み換えで発現されるヌクレアーゼの発現の間に、ヌクレアーゼ遺伝子は、いわゆる、シグナルペプチド（「ＳＰ」）遺伝子配列と連結されてもよい。ＳＰ遺伝子配列は、ヌクレアーゼと共に発現され、ＳＰおよびヌクレアーゼタンパク質部分を含む単一の前駆体タンパク質を形成する。ＳＰ・ヌクレアーゼ融合タンパク質のＳＰエレメントは、通常、分泌シグナルとして働き、分泌プロセス中にヌクレアーゼから切断される。本明細書の目的で、ヌクレアーゼのシグナルペプチドの遺伝子配列またはペプチド配列は、本発明によるヌクレアーゼの同一性の計算では無視される。ＳＰ遺伝子またはタンパク質配列を特定するためのツールは、当業者に知られており、例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｈｅｌｐ／ｓｉｇｎａｌのセクション２に記載され、予測ツールＰｈｏｂｉｕｓ、Ｐｒｅｄｏｔａｒ、ＳｉｇｎａｌＰおよびＴａｒｇｅｔＰが例として示されている。
【0023】
本明細書の目的で、特定の標的アミノ酸配列が「配列番号１と比較して、特定のアミノ酸位置番号」において置換されているとは、配列番号１のアミノ酸位置番号および標的アミノ酸位置番号が同一であるか、または異なるかにかかわらず、その配列同一性の要件に従って作製されたアラインメントで「配列番号１のアミノ酸位置番号」とアラインメントされたそのような標的アミノ酸配列が標的アミノ酸配列のそのような標的アミノ酸位置番号において置換されていることを意味する。
【0024】
本明細書の目的で、特定の標的アミノ酸配列が「配列番号１と比較して、特定のアミノ酸位置番号」において置換されているとは、配列番号１の任意の特定のアミノ酸位置番号において、そのような位置の配列番号１のアミノ酸が、天然のタンパク質原性アミノ酸の群から選択される、すなわち、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、ＰまたはＳの任意の異なるアミノ酸によって置換されていることをさらに意味する。
【0025】
本明細書の目的で、ヌクレアーゼの少なくともアミノ酸位置で置換されているとは、少なくとも１つのアミノ酸位置が、（ｉ）Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または（ｉｉ）ＥおよびＤから選択される負電荷アミノ酸、または（ｉｉｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または（ｉｖ）Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または（ｖ）Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸のいずれかによって置換されていることを意味する。
【0026】
本明細書の目的で、置換されているヌクレアーゼのアミノ酸位置は少なくとも、（ｉ）別の正電荷アミノ酸によって置換されている正電荷アミノ酸、または（ｉｉ）別の負電荷アミノ酸によって置換されている負電荷アミノ酸、または（ｉｉｉ）別の脂肪族非極性アミノ酸によって置換されている脂肪族非極性アミノ酸、または（ｉｖ）別の芳香族アミノ酸によって置換されている芳香族アミノ酸、または（ｖ）別の脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されている脂肪族極性無電荷アミノ酸であってもよい。
【0027】
本明細書の目的で、置換されているヌクレアーゼのアミノ酸位置は少なくとも、（ｉ）正電荷アミノ酸であってもよく、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または（ｉｉ）負電荷アミノ酸であってもよく、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸によって置換されている；または（ｉｉｉ）脂肪族非極性アミノ酸であってもよく、芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または（ｉｖ）芳香族アミノ酸であってもよく、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または（ｖ）脂肪族極性無電荷アミノ酸であってもよく、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている。
【0028】
本明細書の目的で、配列番号１と比較して任意の位置において置換されている任意のアミノ酸の電荷の状態、特に正電荷アミノ酸Ｒ、Ｋ、およびＨの電荷ならびに負電荷アミノ酸ＥおよびＤの電荷は、７のｐＨで判断される。
【0029】
本明細書の目的で、本明細書中で開示されている特定の置換位置は、アミノ酸置換の分野における一般的な実務に従って記載されており、［非置換アミノ酸－配列位置］の形式が選択され、配列位置は、左側のまだ変異していないアミノ酸のアミノ酸文字（一文字符号）のすぐ横に位置し、そのようなアミノ酸位置の置換基として特定のアミノ酸は選択されない。明確化のみの目的で、置換「Ｐ５１」は、配列位置５１におけるアミノ酸プロリン（Ｐ）の任意の置換基による置換を示す。
【0030】
本明細書の目的で、本明細書中で開示されている特定の置換は、アミノ酸置換の分野における一般的な実務に従って記載されており、［非置換アミノ酸－配列位置－置換アミノ酸］の形式が選択され、配列位置は、左側または右側のアミノ酸文字（一文字符号）のすぐ横に位置する。明確化のみの目的で、置換「Ｐ５１Ｒ」は、配列位置５１におけるアミノ酸プロリン（Ｐ）のアミノ酸アルギニン（Ｒ）による置換を示し、すなわち、ＰがＲによって置換されている。
【0031】
＜本発明によるヌクレアーゼの構造的特徴＞
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、液体製剤中に存在する。
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、液体製剤中に存在する。
【0032】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、（ｉ）バッファー、（ｉｉ）グリセロール、スクロース、もしくは他の安定化剤および／または（ｉｉｉ）ベンゾアート、もしくは他の防腐剤を含む液体製剤中に存在する。
【0033】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、固体であるか、または固体製剤、好ましくは粉末中に存在する。
【0034】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、凍結乾燥、噴霧乾燥または最新の技術において既知の乾燥のための他の技術によって得られる粉末として存在するか、またはそのような粉末中に含まれる。
【0035】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、粗製細胞ライセート、または粗製細胞上清、または前述のもののいずれかに由来の部分的に精製された酵素、または前述のもののいずれかに由来の精製された酵素に含まれる。
【0036】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、担体上に固定化されて存在する。
【0037】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼのアミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも６６％、好ましくは少なくとも６９％、より好ましくは少なくとも７２％、さらにより好ましくは少なくとも７５％、さらにより好ましくは少なくとも７８％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも８１％、最も好ましくは少なくとも８４％、および特に少なくとも８７％の同一性を有する。本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも８８％、好ましくは少なくとも８９％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、最も好ましくは少なくとも９４％、および特に少なくとも９５％の同一性を有する。
【0038】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、配列番号１の配列とのヌクレアーゼのアミノ酸配列の同一性は、少なくとも６５％、または少なくとも６６％、または少なくとも６７％、または少なくとも６８％、または少なくとも６９％、または少なくとも７０％、または少なくとも７１％、または少なくとも７２％、または少なくとも７３％、または少なくとも７４％、または少なくとも７５％、または少なくとも７６％、または少なくとも７７％、または少なくとも７８％、または少なくとも７９％、または少なくとも８０％、または少なくとも８１％、または少なくとも８２％、または少なくとも８３％、または少なくとも８４％、または少なくとも８５％；好ましくは少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％、または少なくとも９０％；より好ましくは少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％；さらにより好ましくは少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％；さらにより好ましくは少なくとも９９．１％、または少なくとも９９．２％、または少なくとも９９．３％、または少なくとも９９．４、または少なくとも９９．５％；さらにより好ましくは少なくとも９９．６％である。
【0039】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、配列番号１の配列とのヌクレアーゼのアミノ酸配列の同一性は、少なくとも８９％、または少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％；好ましくは少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％；より好ましくは少なくとも９９．１％、または少なくとも９９．２％、または少なくとも９９．３％、または少なくとも９９．４、または少なくとも９９．５％；さらにより好ましくは少なくとも９９．６％である。
【0040】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、または１９５と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。
【0041】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、または１４７と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。
【0042】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１において置換されており、置換は、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｃ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｍ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｖ、およびＰ５１Ｓ、好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、およびＰ５１Ｉ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、さらにより好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、最も好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌからなる群から選択される。
【0043】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ５２において置換されており、置換は、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒからなる群から選択される。
【0044】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ５３において置換されており、置換は、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋからなる群から選択される。
【0045】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ５４において置換されており、置換は、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒからなる群から選択される。
【0046】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ５５において置換されており、置換は、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｃ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｍ、Ｋ５５Ｆ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｗ、Ｋ５５Ｙ、Ｋ５５Ｖ、およびＫ５５Ｓ、好ましくはＫ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、より好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、最も好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択される。
【0047】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ５６において置換されており、置換は、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｃ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｖ、およびＴ５６Ｓ、好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、およびＴ５６Ｍ、さらにより好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ、最も好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇからなる群から選択される。
【0048】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ５８において置換されており、置換は、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｃ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｍ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｖ、およびＮ５８Ｓ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖ、最も好ましくはＮ５８Ｋ、およびＮ５８Ｒからなる群から選択される。
【0049】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７２において置換されており、置換は、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｎ、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｃ、Ａ７２Ｑ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｉ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｍ、Ａ７２Ｆ、Ａ７２Ｐ、Ａ７２Ｔ、Ａ７２Ｗ、Ａ７２Ｙ、Ａ７２Ｖ、およびＡ７２Ｓ、好ましくはＡ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、より好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、最も好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択される。
【0050】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ７３において置換されており、置換は、Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒからなる群から選択される。
【0051】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７４において置換されており、置換は、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒからなる群から選択される。
【0052】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ７７において置換されており、置換は、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｄ、Ｔ７７Ｃ、Ｔ７７Ｑ、Ｔ７７Ｅ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｍ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｙ、Ｔ７７Ｖ、およびＴ７７Ｓ、好ましくはＴ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、より好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌ、最も好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌからなる群から選択される。
【0053】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ７８において置換されており、置換は、Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒからなる群から選択される。
【0054】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ８０において置換されており、置換は、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈからなる群から選択される。
【0055】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８１において置換されており、置換は、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋからなる群から選択される。
【0056】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８２において置換されており、置換は、Ａ８２Ｒ、Ａ８２Ｎ、Ａ８２Ｄ、Ａ８２Ｃ、Ａ８２Ｑ、Ａ８２Ｅ、Ａ８２Ｇ、Ａ８２Ｈ、Ａ８２Ｉ、Ａ８２Ｌ、Ａ８２Ｋ、Ａ８２Ｍ、Ａ８２Ｆ、Ａ８２Ｐ、Ａ８２Ｔ、Ａ８２Ｗ、Ａ８２Ｙ、Ａ８２Ｖ、およびＡ８２Ｓ、好ましくはＡ８２Ｋ、Ａ８２Ｈ、およびＡ８２Ｒ、より好ましくはＡ８２Ｒからなる群から選択される。
【0057】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ８４において置換されており、置換は、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｃ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｍ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｖ、およびＫ８４Ｓ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇからなる群から選択される。
【0058】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ８６において置換されており、置換は、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｒ、Ｄ８６Ｎ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｑ、Ｄ８６Ｅ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ｈ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｋ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｆ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｔ、Ｄ８６Ｗ、Ｄ８６Ｙ、Ｄ８６Ｖ、およびＤ８６Ｓ；Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択される。
【0059】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ９４において置換されており、置換は、Ａ９４Ｒ、Ａ９４Ｎ、Ａ９４Ｄ、Ａ９４Ｃ、Ａ９４Ｑ、Ａ９４Ｅ、Ａ９４Ｇ、Ａ９４Ｈ、Ａ９４Ｉ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｋ、Ａ９４Ｍ、Ａ９４Ｆ、Ａ９４Ｐ、Ａ９４Ｔ、Ａ９４Ｗ、Ａ９４Ｙ、Ａ９４Ｖ、およびＡ９４Ｓ；好ましくはＡ９４Ｇ、Ａ９４Ｖ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｉ、およびＡ９４Ｐ；より好ましくはＡ９４Ｇからなる群から選択される。
【0060】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ１１６において置換されており、置換は、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｄ、Ｓ１１６Ｃ、Ｓ１１６Ｑ、Ｓ１１６Ｅ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｍ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｔ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｖ、好ましくはＳ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択される。
【0061】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１１７において置換されており、置換は、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｅ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、最も好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、およびＤ１１７Ｓからなる群から選択される。
【0062】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ１１９において置換されており、置換は、Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒからなる群から選択される。
【0063】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２０において置換されており、置換は、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択される。
【0064】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ１２４において置換されており、置換は、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒからなる群から選択される。
【0065】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１２８において置換されており、置換は、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｅ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｖ、およびＤ１２８Ｓ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋ、最も好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋからなる群から選択される。
【0066】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２９において置換されており、置換は、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｎ、Ｑ１２９Ｄ、Ｑ１２９Ｃ、Ｑ１２９Ｅ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｍ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｔ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｙ、Ｑ１２９Ｖ、およびＱ１２９Ｓ、好ましくはＱ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択される。
【0067】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１３２において置換されており、置換は、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３２Ｒ、Ｋ１３２Ｎ、Ｋ１３２Ｄ、Ｋ１３２Ｃ、Ｋ１３２Ｑ、Ｋ１３２Ｅ、Ｋ１３２Ｇ、Ｋ１３２Ｈ、Ｋ１３２Ｉ、Ｋ１３２Ｌ、Ｋ１３２Ｍ、Ｋ１３２Ｆ、Ｋ１３２Ｐ、Ｋ１３２Ｔ、Ｋ１３２Ｗ、Ｋ１３２Ｙ、Ｋ１３２Ｖ、およびＫ１３２Ｓ、好ましくはＫ１３２Ｒ、およびＫ１３２Ｈ、最も好ましくはＫ１３２Ｒからなる群から選択される。
【0068】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１３５において置換されており、置換は、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｅ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｈ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｖ、およびＤ１３５Ｓ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、最も好ましくはＤ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５ＲおよびＤ１３５Ｋからなる群から選択される。
【0069】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ１５１において置換されており、置換は、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｄ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｖ、およびＥ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１ＨおよびＥ１５１Ｋ、好ましくはＥ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、およびＥ１５１Ｐ、より好ましくはＥ１５１Ｌからなる群から選択される。
【0070】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１６２において置換されており、置換は、Ｋ１６２Ａ、Ｋ１６２Ｒ、Ｋ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｄ、Ｋ１６２Ｃ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｅ、Ｋ１６２Ｇ、Ｋ１６２Ｈ、Ｋ１６２Ｉ、Ｋ１６２Ｌ、Ｋ１６２Ｍ、Ｋ１６２Ｆ、Ｋ１６２Ｐ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２Ｗ、Ｋ１６２Ｙ、Ｋ１６２Ｖ、およびＫ１６２Ｓ、好ましくはＫ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｓ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２ＣおよびＫ１６２Ｍ、最も好ましくはＫ１６２Ｎからなる群から選択される。
【0071】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９１において置換されており、置換は、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｗ、Ｄ１９１Ｆ、Ｄ１９１Ｙ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、Ｄ１９１Ｔ、Ｄ１９１Ｎ、Ｄ１９１Ｅ、Ｄ１９１Ｈ、Ｄ１９１ＲおよびＤ１９１Ｋ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、より好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、最も好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択される。
【0072】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ１９５において置換されており、置換は、Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒからなる群から選択される。
【0073】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１９６において置換されており、置換は、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｄ、Ｋ１９６Ｃ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｅ、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｍ、Ｋ１９６Ｆ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｗ、Ｋ１９６Ｙ、Ｋ１９６Ｖ、およびＫ１９６Ｓ、好ましくはＫ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、より好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、最も好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択される。
【0074】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ１９７において置換されており、置換は、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｎ、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｃ、Ｇ１９７Ｑ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ｉ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｍ、Ｇ１９７Ｆ、Ｇ１９７Ｐ、Ｇ１９７Ｔ、Ｇ１９７Ｗ、Ｇ１９７Ｙ、Ｇ１９７Ｖ、およびＧ１９７Ｓ、好ましくはＧ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択される。
【0075】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９９において置換されており、置換は、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｅ、Ｄ１９９Ｈ、Ｄ１９９ＲおよびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択される。
【0076】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｒ２０４において置換されており、置換は、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｄ、Ｒ２０４Ｃ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｅ、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｍ、Ｒ２０４Ｆ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｗ、Ｒ２０４Ｙ、Ｒ２０４Ｖ、およびＲ２０４Ｓ、好ましくはＲ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、最も好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択される。
【0077】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｉ２１８において置換されており、置換は、Ｉ２１８Ｒ、Ｉ２１８Ｎ、Ｉ２１８Ｄ、Ｉ２１８Ｃ、Ｉ２１８Ｑ、Ｉ２１８Ｅ、Ｉ２１８Ｇ、Ｉ２１８Ｈ、Ｉ２１８Ａ、Ｉ２１８Ｌ、Ｉ２１８Ｋ、Ｉ２１８Ｍ、Ｉ２１８Ｆ、Ｉ２１８Ｐ、Ｉ２１８Ｔ、Ｉ２１８Ｗ、Ｉ２１８Ｙ、Ｉ２１８Ｖ、およびＩ２１８Ｓ、好ましくはＩ２１８Ｆ、Ｉ２１８ＷおよびＩ２１８Ｙ、より好ましくはＩ２１８Ｆからなる群から選択される。
【0078】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ２２８において置換されており、置換は、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｎ、Ａ２２８Ｄ、Ａ２２８Ｃ、Ａ２２８Ｑ、Ａ２２８Ｅ、Ａ２２８Ｇ、Ａ２２８Ｈ、Ａ２２８Ｉ、Ａ２２８Ｌ、Ａ２２８Ｋ、Ａ２２８Ｍ、Ａ２２８Ｆ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ａ２２８Ｙ、Ａ２２８Ｖ、およびＡ２２８Ｓ、好ましくはＡ２２８Ｋ、Ａ２２８ＨおよびＡ２２８Ｒ、より好ましくはＡ２２８Ｒからなる群から選択される。
【0079】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ２３９において置換されており、置換は、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｒ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｄ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｈ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｋ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｖ、およびＥ２３９Ｓ、好ましくはＥ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択される。
【0080】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、
位置Ｐ５１、Ｐ７３、またはＰ１９５における置換は、ＰがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｓ５３、またはＳ１１６における置換は、ＳがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、またはＶからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｋ５５、Ｋ８４、Ｋ１３２、Ｋ１６２、またはＫ１９６における置換は、ＫがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｔ５６、またはＴ７７における置換は、ＴがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｎ５８、Ｎ８０、またはＮ１１９における置換は、ＮがＡ、Ｒ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ａ５２、Ａ７２、Ａ７４、Ａ８１、Ａ８２、Ａ９４、Ａ１２４、またはＡ２２８におけるにおける置換は、ＡがＲ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｇ５４、Ｇ７８、またはＧ１９７における置換は、ＧがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＤ１９９における置換は、ＤがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｑ１２０、またはＱ１２９における置換は、ＱがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｒ２０４における置換は、ＲがＡ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｉ２１８における置換は、ＩがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳがからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味する。
位置Ｅ１５１またはＥ２３９における置換は、ＥがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味する。
位置Ｐ５１、Ｐ７３、またはＰ１９５における置換は、ＰがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｓ５３、またはＳ１１６における置換は、ＳがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、またはＶからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｋ５５、Ｋ８４、Ｋ１３２、Ｋ１６２、またはＫ１９６における置換は、ＫがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｔ５６、またはＴ７７における置換は、ＴがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｎ５８、Ｎ８０、またはＮ１１９における置換は、ＮがＡ、Ｒ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ａ５２、Ａ７２、Ａ７４、Ａ８１、Ａ８２、Ａ９４、Ａ１２４、またはＡ２２８におけるにおける置換は、ＡがＲ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｇ５４、Ｇ７８、またはＧ１９７における置換は、ＧがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＤ１９９における置換は、ＤがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｑ１２０、またはＱ１２９における置換は、ＱがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｒ２０４における置換は、ＲがＡ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または
位置Ｉ２１８における置換は、ＩがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳがからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味する。
位置Ｅ１５１またはＥ２３９における置換は、ＥがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味する。
【0081】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸位置は、以下によって置換されている：
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸；または
ＥおよびＤから選択される負電荷アミノ酸；
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸；または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸；または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸。
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸；または
ＥおよびＤから選択される負電荷アミノ酸；
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸；または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸；または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸。
【0082】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸位置は、
正電荷アミノ酸であり、別の正電荷アミノ酸によって置換されている；または
負電荷アミノ酸であり、別の負電荷アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族非極性アミノ酸であり、別の脂肪族非極性アミノ酸によって置換されている；または
芳香族アミノ酸であり、別の芳香族アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族極性無電荷アミノ酸であり、別の脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されている。
正電荷アミノ酸であり、別の正電荷アミノ酸によって置換されている；または
負電荷アミノ酸であり、別の負電荷アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族非極性アミノ酸であり、別の脂肪族非極性アミノ酸によって置換されている；または
芳香族アミノ酸であり、別の芳香族アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族極性無電荷アミノ酸であり、別の脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されている。
【0083】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸位置は、
正電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または
負電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族非極性アミノ酸であり、芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または
芳香族アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族極性無電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている。
正電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または
負電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族非極性アミノ酸であり、芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または
芳香族アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または
脂肪族極性無電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている。
【0084】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、または３８のアミノ酸位置において置換されている。
【0085】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、１から８６のアミノ酸位置；好ましくは１から８４のアミノ酸位置；より好ましくは１から５０のアミノ酸位置；さらにより好ましくは１から３９のアミノ酸位置；さらにより好ましくは１から２７のアミノ酸位置；さらにより好ましくは１から１１のアミノ酸位置；さらにより好ましくは１から６のアミノ酸位置において置換されている。
【0086】
本発明の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明のいずれかに記載のヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており；
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
正電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸、または
異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
正電荷アミノ酸、または
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
脂肪族非極性アミノ酸、または
異なる正電荷アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
脂肪族非極性アミノ酸、または
極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
正電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸、または
異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
正電荷アミノ酸、または
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
脂肪族非極性アミノ酸、または
異なる正電荷アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
脂肪族非極性アミノ酸、または
極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
【0087】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明によるヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており；
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、Ａ、またはＧが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｄ、およびＥから選択される負電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、Ａ、またはＧが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｄ、およびＥから選択される負電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
【0088】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６７％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明によるヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ｔ７７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されている。
【0089】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明によるヌクレアーゼに関し、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
正電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸、または
異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
正電荷アミノ酸、または
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
脂肪族非極性アミノ酸、または
異なる正電荷アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
脂肪族非極性アミノ酸、または
極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
正電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸、または
異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
正電荷アミノ酸、または
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
負電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
脂肪族非極性アミノ酸、または
異なる正電荷アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
脂肪族非極性アミノ酸、または
極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
脂肪族非極性アミノ酸、または
芳香族アミノ酸、または
脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
【0090】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明によるヌクレアーゼに関し、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｄ、およびＥから選択される負電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭ、より好ましくはＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｄ、およびＥから選択される負電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭ、より好ましくはＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
【0091】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明によるヌクレアーゼに関し、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｐ５１は、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換され；
Ｐ５１は、ＤおよびＥから選択される負電荷アミノ酸によって置換され；
位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、またはＴ７７における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｔ７７は、Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸によって置換され；
Ｔ５６は、Ｄによって置換され；
Ｋ５５は、Ｒ、およびＨによって置換され；
Ｋ８４は、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰによって置換され；
Ｒ２０４は、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭによって置換され；
位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＥ２３９における置換は、ＤまたはＥがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６における置換は、ＤがＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｄ１２８は、Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸によって置換される。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｐ５１は、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換され；
Ｐ５１は、ＤおよびＥから選択される負電荷アミノ酸によって置換され；
位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、またはＴ７７における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｔ７７は、Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸によって置換され；
Ｔ５６は、Ｄによって置換され；
Ｋ５５は、Ｒ、およびＨによって置換され；
Ｋ８４は、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰによって置換され；
Ｒ２０４は、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭによって置換され；
位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＥ２３９における置換は、ＤまたはＥがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６における置換は、ＤがＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
Ｄ１２８は、Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸によって置換される。
【0092】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明によるヌクレアーゼに関し、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｓ５３、Ｄ１１７、またはＥ２３９における置換は、Ｓ、ＤまたはＥがＡによって置換されていることを意味し；
位置Ｐ５１、またはＴ５６における置換は、ＰまたはＴがＤによって置換されていることを意味し；
位置Ｔ７７、またはＤ１２８における置換は、ＴまたはＤがＦによって置換されていることを意味し；
位置Ｐ５１、Ｋ８４、Ｄ１２８、またはＤ１３５における置換は、Ｐ、Ｋ、またはＤがＧによって置換されていることを意味し；
Ｎ８０は、Ｈによって置換され；
位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、またはＤ１９９における置換は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、またはＴがＫによって置換されていることを意味し；
位置Ｐ５１、またはＴ７７における置換は、ＰまたはＴがＬによって置換されていることを意味し；
Ｄ１２８は、Ｍによって置換され；
位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９における置換は、ＤがＮによって置換されていることを意味し；
位置Ｔ５６、またはＤ１９１における置換は、ＤまたはＴがＰによって置換されていることを意味し；
Ｒ２０４は、Ｑによって置換され；
位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、またはＡ１２４における置換は、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、またはＴがＲによって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、またはＤ１９９における置換は、ＤがＳによって置換されていることを意味し；
Ｎ５８は、Ｖによって置換され；
Ｄ１２８は、Ｙによって置換される。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
位置Ｓ５３、Ｄ１１７、またはＥ２３９における置換は、Ｓ、ＤまたはＥがＡによって置換されていることを意味し；
位置Ｐ５１、またはＴ５６における置換は、ＰまたはＴがＤによって置換されていることを意味し；
位置Ｔ７７、またはＤ１２８における置換は、ＴまたはＤがＦによって置換されていることを意味し；
位置Ｐ５１、Ｋ８４、Ｄ１２８、またはＤ１３５における置換は、Ｐ、Ｋ、またはＤがＧによって置換されていることを意味し；
Ｎ８０は、Ｈによって置換され；
位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、またはＤ１９９における置換は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、またはＴがＫによって置換されていることを意味し；
位置Ｐ５１、またはＴ７７における置換は、ＰまたはＴがＬによって置換されていることを意味し；
Ｄ１２８は、Ｍによって置換され；
位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９における置換は、ＤがＮによって置換されていることを意味し；
位置Ｔ５６、またはＤ１９１における置換は、ＤまたはＴがＰによって置換されていることを意味し；
Ｒ２０４は、Ｑによって置換され；
位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、またはＡ１２４における置換は、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、またはＴがＲによって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、またはＤ１９９における置換は、ＤがＳによって置換されていることを意味し；
Ｎ５８は、Ｖによって置換され；
Ｄ１２８は、Ｙによって置換される。
【0093】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｄ５６Ｇ、Ｄ５６Ａ、Ｄ５６Ｖ、Ｄ５６Ｉ、Ｄ５６Ｌ、Ｄ５６Ｆ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｓ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａ；好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｓ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２のアミノ酸位置において置換されている。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｄ５６Ｇ、Ｄ５６Ａ、Ｄ５６Ｖ、Ｄ５６Ｉ、Ｄ５６Ｌ、Ｄ５６Ｆ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｓ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａ；好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｓ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２のアミノ酸位置において置換されている。
【0094】
別の好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８９％の同一性、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｍ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８のアミノ酸位置において置換されている。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｍ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８のアミノ酸位置において置換されている。
【0095】
別の好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８９％の同一性、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｍ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、または少なくとも３３のアミノ酸位置において置換されている。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｍ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、または少なくとも３３のアミノ酸位置において置換されている。
【0096】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは上記の本発明によるヌクレアーゼに関し、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＥ２３９を置換し；
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｓ１１６、Ａ１２４、またはＧ１９７を置換し；
Ｒ、ＫおよびＨ、好ましくはＫおよびＨから選択される正電荷アミノ酸は、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９を置換し；
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸は、Ｔ７７、またはＤ１２８を置換し；
Ｄは、Ｐ５１、またはＴ５６を置換し；
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸は、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９９、またはＲ２０４を置換し；
Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸は、Ｄ８６を置換する。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＥ２３９を置換し；
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｓ１１６、Ａ１２４、またはＧ１９７を置換し；
Ｒ、ＫおよびＨ、好ましくはＫおよびＨから選択される正電荷アミノ酸は、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９を置換し；
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸は、Ｔ７７、またはＤ１２８を置換し；
Ｄは、Ｐ５１、またはＴ５６を置換し；
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸は、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９９、またはＲ２０４を置換し；
Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸は、Ｄ８６を置換する。
【0097】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
アミノ酸Ａは、Ｓ５３、Ｄ１１７、またはＥ２３９を置換し；
アミノ酸Ｄは、Ｐ５１、またはＴ５６を置換し；
アミノ酸Ｆは、Ｔ７７、またはＤ１２８を置換し；
アミノ酸Ｇは、Ｐ５１、Ｋ８４、Ｄ１２８、またはＤ１３５を置換し；
アミノ酸Ｈは、Ｎ８０を置換し；
アミノ酸Ｋは、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、またはＤ１９９を置換し；
アミノ酸Ｌは、Ｐ５１、またはＴ７７を置換し；
アミノ酸Ｍは、Ｄ１２８を置換し；
アミノ酸Ｎは、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９を置換し；
アミノ酸Ｐは、Ｔ５６、またはＤ１９１を置換し；
アミノ酸Ｑは、Ｒ２０４を置換し；
アミノ酸Ｒは、Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、またはＡ１２４を置換し；
アミノ酸Ｓは、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、またはＤ１９９を置換し；
アミノ酸Ｖは、Ｎ５８を置換し；
アミノ酸Ｙは、Ｄ１２８を置換する。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、
アミノ酸Ａは、Ｓ５３、Ｄ１１７、またはＥ２３９を置換し；
アミノ酸Ｄは、Ｐ５１、またはＴ５６を置換し；
アミノ酸Ｆは、Ｔ７７、またはＤ１２８を置換し；
アミノ酸Ｇは、Ｐ５１、Ｋ８４、Ｄ１２８、またはＤ１３５を置換し；
アミノ酸Ｈは、Ｎ８０を置換し；
アミノ酸Ｋは、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、またはＤ１９９を置換し；
アミノ酸Ｌは、Ｐ５１、またはＴ７７を置換し；
アミノ酸Ｍは、Ｄ１２８を置換し；
アミノ酸Ｎは、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９を置換し；
アミノ酸Ｐは、Ｔ５６、またはＤ１９１を置換し；
アミノ酸Ｑは、Ｒ２０４を置換し；
アミノ酸Ｒは、Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、またはＡ１２４を置換し；
アミノ酸Ｓは、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、またはＤ１９９を置換し；
アミノ酸Ｖは、Ｎ５８を置換し；
アミノ酸Ｙは、Ｄ１２８を置換する。
【0098】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関し、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており、
第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され、
第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており、
第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され、
第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される。
【0099】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関し、
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており、
第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され、
第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択され、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｐ５１において置換されている場合、置換は、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｉ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄであり、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｔ５６において置換されている場合、置換は、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、およびＴ５６Ｄ、好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、およびＴ５６Ｄであり、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｔ７７において置換されている場合、置換は、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌであり、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ａ１２４において置換されている場合、置換は、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒである。
アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており、
第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され、
第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択され、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｐ５１において置換されている場合、置換は、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｉ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄであり、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｔ５６において置換されている場合、置換は、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、およびＴ５６Ｄ、好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、およびＴ５６Ｄであり、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｔ７７において置換されている場合、置換は、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌであり、
アミノ酸配列がアミノ酸位置Ａ１２４において置換されている場合、置換は、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒである。
【0100】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置はともに、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択される。
【0101】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｑ１２０、またはＱ１２９の位置における置換は、Ｓ、Ｔ、Ｑ、またはＮが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭ、より好ましくはＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｑ１２０、またはＱ１２９の位置における置換は、Ｓ、Ｔ、Ｑ、またはＮが
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、または
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭ、より好ましくはＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｄによって置換されていることを意味し；
Ｋ５５、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；
位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、または
Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、または
Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、または
Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する。
【0102】
本発明の別の好適な実施形態は、以下のものに関する。
［１］： 配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ（アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており、第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され、第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される）。
［２］： アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている、［１］に記載のヌクレアーゼ。
［３］： アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている、［１］または［２］に記載のヌクレアーゼ。
［４］： アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、または１０２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、［１］～［３］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［５］： （Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性；および／または（Ｂ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または（Ｃ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性；および／または（Ｄ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対低温活性と比較して向上した相対低温活性；および／または（Ｅ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＴ低活性と比較して向上したＴ低活性のいずれかを特徴とする、［１］～［４］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［６］： 配列番号１よりも向上した熱安定性を有し、前記熱安定性は、温度Ｔ安定性での１５分間のインキュベーション後のより高い残存活性によって特徴づけられる、［１］～［５］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［７］： ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解することができる、［１］～［６］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［８］： ポリヌクレオチド基質は、一本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡおよびハイブリッド鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＤＮＡからなる群から選択される、［１］～［７］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［９］： ポリヌクレオチド基質、好ましくは、サンプルに含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法であって、（ａ）［１］～［８］のいずれかに記載のヌクレアーゼを準備するステップと；（ｂ）ポリヌクレオチド基質を含む組成物を準備するステップと；（ｃ）ステップ（ｂ）で準備された組成物中のポリヌクレオチド基質をステップ（ａ）で準備されたヌクレアーゼと接触させ、ヌクレアーゼにポリヌクレオチド基質を加水分解させるステップを含み、それによって、切断されたポリヌクレオチドを含む組成物を得る、方法。
［１０］： ステップ（ｃ）は、（ｉ）４℃から９０℃の間；好ましくは１０℃から８０℃の間；より好ましくは２０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間；さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間；最も好ましくは３７℃；または（ｉｉ）２０℃から９０℃の間；好ましくは２３℃から８０℃の間；より好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間；さらにより好ましくは５０℃および６５℃；最も好ましくは５１℃；または（ｉｉｉ）４℃から６５℃の間；好ましくは４℃から３８℃の間；より好ましくは４℃から２５℃の間；さらにより好ましくは４℃から２０℃の間；さらにより好ましくは４℃から１５℃の間；さらにより好ましくは４℃から１０℃の間；最も好ましくは４℃から６℃の間、および最高に好ましくは５℃の温度で行われる、［９］に記載の方法。
［１１］： ステップ（ｃ）は、塩の存在下において行われ、塩は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ、好ましくはＮａＣｌである、［９］または［１０］に記載の方法。
［１２］： ステップ（ｃ）は、０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で行われる、［９］または［１１］に記載の方法。
［１３］： ステップ（ｃ）は、塩の非存在下において行われる、［９］または［１２］に記載の方法。
［１４］： （ｄ）ステップ（ｃ）の後にヌクレアーゼを不活性化する追加のステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドおよび不活性化ヌクレアーゼを含む組成物を得る、、［９］または［１３］に記載の方法。
［１５］： （ｅ）ステップ（ｃ）で得られた切断されたポリヌクレオチドおよび任意にステップ（ｄ）で得られた不活性化ヌクレアーゼを含む組成物からヌクレアーゼを分離する追加のステップを含む、［９］または［１４］に記載の方法。
［１］： 配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ（アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており、第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され、第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される）。
［２］： アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている、［１］に記載のヌクレアーゼ。
［３］： アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている、［１］または［２］に記載のヌクレアーゼ。
［４］： アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、または１０２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、［１］～［３］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［５］： （Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性；および／または（Ｂ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または（Ｃ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性；および／または（Ｄ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対低温活性と比較して向上した相対低温活性；および／または（Ｅ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＴ低活性と比較して向上したＴ低活性のいずれかを特徴とする、［１］～［４］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［６］： 配列番号１よりも向上した熱安定性を有し、前記熱安定性は、温度Ｔ安定性での１５分間のインキュベーション後のより高い残存活性によって特徴づけられる、［１］～［５］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［７］： ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解することができる、［１］～［６］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［８］： ポリヌクレオチド基質は、一本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡおよびハイブリッド鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＤＮＡからなる群から選択される、［１］～［７］のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
［９］： ポリヌクレオチド基質、好ましくは、サンプルに含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法であって、（ａ）［１］～［８］のいずれかに記載のヌクレアーゼを準備するステップと；（ｂ）ポリヌクレオチド基質を含む組成物を準備するステップと；（ｃ）ステップ（ｂ）で準備された組成物中のポリヌクレオチド基質をステップ（ａ）で準備されたヌクレアーゼと接触させ、ヌクレアーゼにポリヌクレオチド基質を加水分解させるステップを含み、それによって、切断されたポリヌクレオチドを含む組成物を得る、方法。
［１０］： ステップ（ｃ）は、（ｉ）４℃から９０℃の間；好ましくは１０℃から８０℃の間；より好ましくは２０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間；さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間；最も好ましくは３７℃；または（ｉｉ）２０℃から９０℃の間；好ましくは２３℃から８０℃の間；より好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間；さらにより好ましくは５０℃および６５℃；最も好ましくは５１℃；または（ｉｉｉ）４℃から６５℃の間；好ましくは４℃から３８℃の間；より好ましくは４℃から２５℃の間；さらにより好ましくは４℃から２０℃の間；さらにより好ましくは４℃から１５℃の間；さらにより好ましくは４℃から１０℃の間；最も好ましくは４℃から６℃の間、および最高に好ましくは５℃の温度で行われる、［９］に記載の方法。
［１１］： ステップ（ｃ）は、塩の存在下において行われ、塩は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ、好ましくはＮａＣｌである、［９］または［１０］に記載の方法。
［１２］： ステップ（ｃ）は、０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で行われる、［９］または［１１］に記載の方法。
［１３］： ステップ（ｃ）は、塩の非存在下において行われる、［９］または［１２］に記載の方法。
［１４］： （ｄ）ステップ（ｃ）の後にヌクレアーゼを不活性化する追加のステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドおよび不活性化ヌクレアーゼを含む組成物を得る、、［９］または［１３］に記載の方法。
［１５］： （ｅ）ステップ（ｃ）で得られた切断されたポリヌクレオチドおよび任意にステップ（ｄ）で得られた不活性化ヌクレアーゼを含む組成物からヌクレアーゼを分離する追加のステップを含む、［９］または［１４］に記載の方法。
【0103】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）
（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または
（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０
（（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における少なくとも１つの置換と
を含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関する。
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）
（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または
（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０
（（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における少なくとも１つの置換と
を含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関する。
【0104】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＲによって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）ＡがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ１２４における置換とを含む。
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＲによって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）ＡがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ１２４における置換とを含む。
【0105】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＲによって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）ＡがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ８１における置換とを含む。
（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換された、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＲによって置換された、位置Ｔ７７における置換と；
（ｉｉｉ）ＡがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ８１における置換とを含む。
【0106】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ７７、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、または少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されているアミノ酸配列を含む。
【0107】
好ましくは、本発明によるヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ７７、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、または少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されているアミノ酸配列を含む。
【0108】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくは、エンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される、好ましくは、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６の追加の位置において置換されているアミノ酸配列を含む。
【0109】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼのアミノ酸配列は、
（ｉｉｉ）（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０（（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における第３の置換と；さらに
（ｉｖ）（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０（（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第４の置換とを含む。
（ｉｉｉ）（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０（（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における第３の置換と；さらに
（ｉｖ）（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０（（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第４の置換とを含む。
【0110】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼのアミノ酸配列は、
（ｉｖ）第４の置換を含み、第４の置換は、以下からなる群から選択される：
Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒ；
Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒ；
Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒ；
Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒ；
Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒ；
Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒ；
Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋ；
Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒ；
Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｃ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｖ、およびＴ５６Ｓ、好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、およびＴ５６Ｍ、さらにより好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ、最も好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ；
Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３ＨおよびＳ５３Ａ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋ；
Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｃ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｍ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｖ、およびＮ５８Ｓ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｈ、およびＮ５８Ｖ、最も好ましくはＮ５８Ｋ、およびＮ５８Ｒ；
Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈ；
Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒ；ならびに
Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒ。
（ｉｖ）第４の置換を含み、第４の置換は、以下からなる群から選択される：
Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒ；
Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒ；
Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒ；
Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒ；
Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒ；
Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒ；
Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋ；
Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒ；
Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｃ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｖ、およびＴ５６Ｓ、好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、およびＴ５６Ｍ、さらにより好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ、最も好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ；
Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３ＨおよびＳ５３Ａ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋ；
Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｃ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｍ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｖ、およびＮ５８Ｓ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｈ、およびＮ５８Ｖ、最も好ましくはＮ５８Ｋ、およびＮ５８Ｒ；
Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈ；
Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒ；ならびに
Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒ。
【0111】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｈ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｈ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｈ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されているアミノ酸配列を含む。
【0112】
好ましくは、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｇ５４Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されているアミノ酸配列を含む。
【0113】
好ましくは、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号２、３、４、６、７、８、１１、１２、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２３、２４、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４９、５０、５１、５２、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０７、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３，１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、および１９５、好ましくは５５、５７、５８、５９、６１、６４、６６、６９、８６、１２８、１３１、１３２、１３３、１３４、１３７、１３８、１３９、１４０、１４３、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、および１９５と対応するアミノ酸配列を含む。
【0114】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、それぞれの場合、選択される位置の天然のアミノ酸は、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択される；好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＰからなる群から選択される；より好ましくはＡ、Ｇ、Ｌ、およびＰからなる群から選択される；さらにより好ましくはＡ、Ｇ、およびＰからなる群から選択される；さらにより好ましくはＡ、およびＧからなる群から選択されるアミノ酸；最も好ましくはＡによって置換されている。
【0115】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、
位置Ｅ２３９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択され、
位置Ｔ５６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、およびＴ５６Ｐ、好ましくはＴ５６ＰおよびＴ５６Ｇ、より好ましくはＴ５６Ｐからなる群から選択され、
位置Ｋ８４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、好ましくはＫ８４Ｇからなる群から選択され、
位置Ｄ１９１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択され、
位置Ｔ７７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、およびＴ７７Ｐ、好ましくはＴ７７Ｌからなる群から選択され、
位置Ｎ５８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、好ましくはＮ５８Ｖからなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。
位置Ｅ２３９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択され、
位置Ｔ５６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、およびＴ５６Ｐ、好ましくはＴ５６ＰおよびＴ５６Ｇ、より好ましくはＴ５６Ｐからなる群から選択され、
位置Ｋ８４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、好ましくはＫ８４Ｇからなる群から選択され、
位置Ｄ１９１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択され、
位置Ｔ７７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、およびＴ７７Ｐ、好ましくはＴ７７Ｌからなる群から選択され、
位置Ｎ５８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、好ましくはＮ５８Ｖからなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。
【0116】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される；好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される；より好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、または３７の追加の位置において置換されている、アミノ酸配列を含む。
【0117】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、置換されたアミノ酸配列を含み、アミノ酸配列は、
（ｉ）Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における置換と；さらに
（ｉｉ）Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第２の置換とを含む。
（ｉ）Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における置換と；さらに
（ｉｉ）Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第２の置換とを含む。
【0118】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、（ｉｉ）第２の置換は、以下からなる群から選択される：
Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｒ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｄ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｈ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｋ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｖ、およびＥ２３９Ｓ、好ましくはＥ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａ；
Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｃ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｖ、およびＴ５６Ｓ、好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、およびＴ５６Ｍ、さらにより好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ、最も好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ；
Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｃ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｍ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｖ、およびＫ８４Ｓ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇ；
Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｗ、Ｄ１９１Ｆ、Ｄ１９１Ｙ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、Ｄ１９１Ｔ、Ｄ１９１Ｎ、Ｄ１９１Ｅ、Ｄ１９１Ｈ、Ｄ１９１ＲおよびＤ１９１Ｋ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、より好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、最も好ましくはＤ１９１Ｐ；
Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｄ、Ｔ７７Ｃ、Ｔ７７Ｑ、Ｔ７７Ｅ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｍ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｙ、Ｔ７７Ｖ、およびＴ７７Ｓ、好ましくはＴ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、より好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌ、最も好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌ；ならびに
Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｃ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｍ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｖ、およびＮ５８Ｓ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖ、最も好ましくはＮ５８Ｋ、およびＮ５８Ｒ。
Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｒ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｄ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｈ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｋ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｖ、およびＥ２３９Ｓ、好ましくはＥ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａ；
Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｃ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｖ、およびＴ５６Ｓ、好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、およびＴ５６Ｍ、さらにより好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ、最も好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ；
Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｃ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｍ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｖ、およびＫ８４Ｓ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇ；
Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｗ、Ｄ１９１Ｆ、Ｄ１９１Ｙ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、Ｄ１９１Ｔ、Ｄ１９１Ｎ、Ｄ１９１Ｅ、Ｄ１９１Ｈ、Ｄ１９１ＲおよびＤ１９１Ｋ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、より好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、最も好ましくはＤ１９１Ｐ；
Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｄ、Ｔ７７Ｃ、Ｔ７７Ｑ、Ｔ７７Ｅ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｍ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｙ、Ｔ７７Ｖ、およびＴ７７Ｓ、好ましくはＴ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、より好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌ、最も好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌ；ならびに
Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｃ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｍ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｖ、およびＮ５８Ｓ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖ、最も好ましくはＮ５８Ｋ、およびＮ５８Ｒ。
【0119】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、アミノ酸配列を含み、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、
（ｉ）位置Ｐ５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｃ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｍ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｖ、およびＰ５１Ｓ、好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、およびＰ５１Ｉ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、さらにより好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、最も好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌからなる群から選択され、
（ｉｉ）位置Ｐ５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｃ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｍ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｖ、およびＰ５１Ｓ、好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、およびＰ５１Ｉ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、さらにより好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、最も好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌからなる群から選択され、
（ｉｉｉ）位置Ａ５２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒからなる群から選択され、
（ｉｖ）位置Ｓ５３において置換されており、好ましくは、置換は、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋからなる群から選択され、
（ｖ）位置Ｇ５４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒからなる群から選択され、
（ｖｉ）位置Ｋ５５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｃ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｍ、Ｋ５５Ｆ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｗ、Ｋ５５Ｙ、Ｋ５５Ｖ、およびＫ５５Ｓ、好ましくはＫ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、より好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、最も好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択され、
（ｖｉｉ）位置Ａ７２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｎ、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｃ、Ａ７２Ｑ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｉ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｍ、Ａ７２Ｆ、Ａ７２Ｐ、Ａ７２Ｔ、Ａ７２Ｗ、Ａ７２Ｙ、Ａ７２Ｖ、およびＡ７２Ｓ、好ましくはＡ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、より好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、最も好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択され、
（ｖｉｉｉ）位置Ｐ７３において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒからなる群から選択され、
（ｉｘ）位置Ａ７４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒからなる群から選択され、
（ｘ）位置Ｇ７８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒからなる群から選択され、
（ｘｉ）位置Ｎ８０において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈからなる群から選択され、
（ｘｉｉ）位置Ａ８１において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋからなる群から選択され、
（ｘｉｉｉ）位置Ａ８２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ８２Ｒ、Ａ８２Ｎ、Ａ８２Ｄ、Ａ８２Ｃ、Ａ８２Ｑ、Ａ８２Ｅ、Ａ８２Ｇ、Ａ８２Ｈ、Ａ８２Ｉ、Ａ８２Ｌ、Ａ８２Ｋ、Ａ８２Ｍ、Ａ８２Ｆ、Ａ８２Ｐ、Ａ８２Ｔ、Ａ８２Ｗ、Ａ８２Ｙ、Ａ８２Ｖ、およびＡ８２Ｓ、好ましくはＡ８２Ｋ、Ａ８２Ｈ、およびＡ８２Ｒ、より好ましくはＡ８２Ｒからなる群から選択され、
（ｘｉｖ）位置Ｄ８６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｒ、Ｄ８６Ｎ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｑ、Ｄ８６Ｅ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ｈ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｋ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｆ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｔ、Ｄ８６Ｗ、Ｄ８６Ｙ、Ｄ８６Ｖ、およびＤ８６Ｓ；Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択され、
（ｘｖ）位置Ａ９４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ９４Ｒ、Ａ９４Ｎ、Ａ９４Ｄ、Ａ９４Ｃ、Ａ９４Ｑ、Ａ９４Ｅ、Ａ９４Ｇ、Ａ９４Ｈ、Ａ９４Ｉ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｋ、Ａ９４Ｍ、Ａ９４Ｆ、Ａ９４Ｐ、Ａ９４Ｔ、Ａ９４Ｗ、Ａ９４Ｙ、Ａ９４Ｖ、およびＡ９４Ｓ；好ましくはＡ９４Ｇ、Ａ９４Ｖ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｉ、およびＡ９４Ｐ；より好ましくはＡ９４Ｇからなる群から選択され、
（ｘｖｉ）位置Ｓ１１６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｄ、Ｓ１１６Ｃ、Ｓ１１６Ｑ、Ｓ１１６Ｅ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｍ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｔ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｖ、好ましくはＳ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択され、
（ｘｖｉｉ）位置Ｄ１１７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｅ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、最も好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、およびＤ１１７Ｓからなる群から選択され、
（ｘｖｉｉｉ）位置Ｎ１１９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒからなる群から選択され、
（ｘｉｘ）位置Ｑ１２０において置換されており、好ましくは、置換は、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘ）位置Ａ１２４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉ）位置Ｄ１２８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｅ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｖ、およびＤ１２８Ｓ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋ、最も好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｉｉ）位置Ｑ１２９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｎ、Ｑ１２９Ｄ、Ｑ１２９Ｃ、Ｑ１２９Ｅ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｍ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｔ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｙ、Ｑ１２９Ｖ、およびＱ１２９Ｓ、好ましくはＱ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉｉｉ）位置Ｋ１３２において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３２Ｒ、Ｋ１３２Ｎ、Ｋ１３２Ｄ、Ｋ１３２Ｃ、Ｋ１３２Ｑ、Ｋ１３２Ｅ、Ｋ１３２Ｇ、Ｋ１３２Ｈ、Ｋ１３２Ｉ、Ｋ１３２Ｌ、Ｋ１３２Ｍ、Ｋ１３２Ｆ、Ｋ１３２Ｐ、Ｋ１３２Ｔ、Ｋ１３２Ｗ、Ｋ１３２Ｙ、Ｋ１３２Ｖ、およびＫ１３２Ｓ、好ましくはＫ１３２Ｒ、およびＫ１３２Ｈ、最も好ましくはＫ１３２Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉｖ）位置Ｄ１３５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｅ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｈ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｖ、およびＤ１３５Ｓ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、最も好ましくはＤ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５ＲおよびＤ１３５Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｖ）位置Ｅ１５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｄ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｖ、およびＥ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１ＨおよびＥ１５１Ｋ、好ましくはＥ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、およびＥ１５１Ｐ、より好ましくはＥ１５１Ｌからなる群から選択され、
（ｘｘｖｉ）位置Ｋ１６２において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１６２Ａ、Ｋ１６２Ｒ、Ｋ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｄ、Ｋ１６２Ｃ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｅ、Ｋ１６２Ｇ、Ｋ１６２Ｈ、Ｋ１６２Ｉ、Ｋ１６２Ｌ、Ｋ１６２Ｍ、Ｋ１６２Ｆ、Ｋ１６２Ｐ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２Ｗ、Ｋ１６２Ｙ、Ｋ１６２Ｖ、およびＫ１６２Ｓ、好ましくはＫ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｓ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２ＣおよびＫ１６２Ｍ、最も好ましくはＫ１６２Ｎからなる群から選択され、
（ｘｘｖｉｉ）位置Ｐ１９５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｖｉｉｉ）位置Ｋ１９６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｄ、Ｋ１９６Ｃ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｅ、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｍ、Ｋ１９６Ｆ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｗ、Ｋ１９６Ｙ、Ｋ１９６Ｖ、およびＫ１９６Ｓ、好ましくはＫ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、より好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、最も好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉｘ）位置Ｇ１９７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｎ、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｃ、Ｇ１９７Ｑ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ｉ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｍ、Ｇ１９７Ｆ、Ｇ１９７Ｐ、Ｇ１９７Ｔ、Ｇ１９７Ｗ、Ｇ１９７Ｙ、Ｇ１９７Ｖ、およびＧ１９７Ｓ、好ましくはＧ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｘ）位置Ｄ１９９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｅ、Ｄ１９９Ｈ、Ｄ１９９ＲおよびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｘｉ）位置Ｒ２０４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｄ、Ｒ２０４Ｃ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｅ、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｍ、Ｒ２０４Ｆ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｗ、Ｒ２０４Ｙ、Ｒ２０４Ｖ、およびＲ２０４Ｓ、好ましくはＲ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、最も好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択され、
（ｘｘｘｉｉ）位置Ｉ２１８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｉ２１８Ｒ、Ｉ２１８Ｎ、Ｉ２１８Ｄ、Ｉ２１８Ｃ、Ｉ２１８Ｑ、Ｉ２１８Ｅ、Ｉ２１８Ｇ、Ｉ２１８Ｈ、Ｉ２１８Ａ、Ｉ２１８Ｌ、Ｉ２１８Ｋ、Ｉ２１８Ｍ、Ｉ２１８Ｆ、Ｉ２１８Ｐ、Ｉ２１８Ｔ、Ｉ２１８Ｗ、Ｉ２１８Ｙ、Ｉ２１８Ｖ、およびＩ２１８Ｓ、好ましくはＩ２１８Ｆ、Ｉ２１８ＷおよびＩ２１８Ｙ、より好ましくはＩ２１８Ｆからなる群から選択され、
（ｘｘｘｉｉｉ）位置Ａ２２８において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｎ、Ａ２２８Ｄ、Ａ２２８Ｃ、Ａ２２８Ｑ、Ａ２２８Ｅ、Ａ２２８Ｇ、Ａ２２８Ｈ、Ａ２２８Ｉ、Ａ２２８Ｌ、Ａ２２８Ｋ、Ａ２２８Ｍ、Ａ２２８Ｆ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ａ２２８Ｙ、Ａ２２８Ｖ、およびＡ２２８Ｓ、好ましくはＡ２２８Ｋ、Ａ２２８ＨおよびＡ２２８Ｒ、より好ましくはＡ２２８Ｒからなる群から選択される。
（ｉ）位置Ｐ５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｃ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｍ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｖ、およびＰ５１Ｓ、好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、およびＰ５１Ｉ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、さらにより好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、最も好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌからなる群から選択され、
（ｉｉ）位置Ｐ５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｃ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｍ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｖ、およびＰ５１Ｓ、好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、およびＰ５１Ｉ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、さらにより好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、最も好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌからなる群から選択され、
（ｉｉｉ）位置Ａ５２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒからなる群から選択され、
（ｉｖ）位置Ｓ５３において置換されており、好ましくは、置換は、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋからなる群から選択され、
（ｖ）位置Ｇ５４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒからなる群から選択され、
（ｖｉ）位置Ｋ５５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｃ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｍ、Ｋ５５Ｆ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｗ、Ｋ５５Ｙ、Ｋ５５Ｖ、およびＫ５５Ｓ、好ましくはＫ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、より好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、最も好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択され、
（ｖｉｉ）位置Ａ７２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｎ、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｃ、Ａ７２Ｑ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｉ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｍ、Ａ７２Ｆ、Ａ７２Ｐ、Ａ７２Ｔ、Ａ７２Ｗ、Ａ７２Ｙ、Ａ７２Ｖ、およびＡ７２Ｓ、好ましくはＡ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、より好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、最も好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択され、
（ｖｉｉｉ）位置Ｐ７３において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒからなる群から選択され、
（ｉｘ）位置Ａ７４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒからなる群から選択され、
（ｘ）位置Ｇ７８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒからなる群から選択され、
（ｘｉ）位置Ｎ８０において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈからなる群から選択され、
（ｘｉｉ）位置Ａ８１において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋからなる群から選択され、
（ｘｉｉｉ）位置Ａ８２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ８２Ｒ、Ａ８２Ｎ、Ａ８２Ｄ、Ａ８２Ｃ、Ａ８２Ｑ、Ａ８２Ｅ、Ａ８２Ｇ、Ａ８２Ｈ、Ａ８２Ｉ、Ａ８２Ｌ、Ａ８２Ｋ、Ａ８２Ｍ、Ａ８２Ｆ、Ａ８２Ｐ、Ａ８２Ｔ、Ａ８２Ｗ、Ａ８２Ｙ、Ａ８２Ｖ、およびＡ８２Ｓ、好ましくはＡ８２Ｋ、Ａ８２Ｈ、およびＡ８２Ｒ、より好ましくはＡ８２Ｒからなる群から選択され、
（ｘｉｖ）位置Ｄ８６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｒ、Ｄ８６Ｎ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｑ、Ｄ８６Ｅ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ｈ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｋ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｆ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｔ、Ｄ８６Ｗ、Ｄ８６Ｙ、Ｄ８６Ｖ、およびＤ８６Ｓ；Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択され、
（ｘｖ）位置Ａ９４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ９４Ｒ、Ａ９４Ｎ、Ａ９４Ｄ、Ａ９４Ｃ、Ａ９４Ｑ、Ａ９４Ｅ、Ａ９４Ｇ、Ａ９４Ｈ、Ａ９４Ｉ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｋ、Ａ９４Ｍ、Ａ９４Ｆ、Ａ９４Ｐ、Ａ９４Ｔ、Ａ９４Ｗ、Ａ９４Ｙ、Ａ９４Ｖ、およびＡ９４Ｓ；好ましくはＡ９４Ｇ、Ａ９４Ｖ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｉ、およびＡ９４Ｐ；より好ましくはＡ９４Ｇからなる群から選択され、
（ｘｖｉ）位置Ｓ１１６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｄ、Ｓ１１６Ｃ、Ｓ１１６Ｑ、Ｓ１１６Ｅ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｍ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｔ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｖ、好ましくはＳ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択され、
（ｘｖｉｉ）位置Ｄ１１７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｅ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、最も好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、およびＤ１１７Ｓからなる群から選択され、
（ｘｖｉｉｉ）位置Ｎ１１９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒからなる群から選択され、
（ｘｉｘ）位置Ｑ１２０において置換されており、好ましくは、置換は、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘ）位置Ａ１２４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉ）位置Ｄ１２８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｅ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｖ、およびＤ１２８Ｓ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋ、最も好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｉｉ）位置Ｑ１２９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｎ、Ｑ１２９Ｄ、Ｑ１２９Ｃ、Ｑ１２９Ｅ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｍ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｔ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｙ、Ｑ１２９Ｖ、およびＱ１２９Ｓ、好ましくはＱ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉｉｉ）位置Ｋ１３２において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３２Ｒ、Ｋ１３２Ｎ、Ｋ１３２Ｄ、Ｋ１３２Ｃ、Ｋ１３２Ｑ、Ｋ１３２Ｅ、Ｋ１３２Ｇ、Ｋ１３２Ｈ、Ｋ１３２Ｉ、Ｋ１３２Ｌ、Ｋ１３２Ｍ、Ｋ１３２Ｆ、Ｋ１３２Ｐ、Ｋ１３２Ｔ、Ｋ１３２Ｗ、Ｋ１３２Ｙ、Ｋ１３２Ｖ、およびＫ１３２Ｓ、好ましくはＫ１３２Ｒ、およびＫ１３２Ｈ、最も好ましくはＫ１３２Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉｖ）位置Ｄ１３５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｅ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｈ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｖ、およびＤ１３５Ｓ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、最も好ましくはＤ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５ＲおよびＤ１３５Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｖ）位置Ｅ１５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｄ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｖ、およびＥ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１ＨおよびＥ１５１Ｋ、好ましくはＥ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、およびＥ１５１Ｐ、より好ましくはＥ１５１Ｌからなる群から選択され、
（ｘｘｖｉ）位置Ｋ１６２において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１６２Ａ、Ｋ１６２Ｒ、Ｋ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｄ、Ｋ１６２Ｃ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｅ、Ｋ１６２Ｇ、Ｋ１６２Ｈ、Ｋ１６２Ｉ、Ｋ１６２Ｌ、Ｋ１６２Ｍ、Ｋ１６２Ｆ、Ｋ１６２Ｐ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２Ｗ、Ｋ１６２Ｙ、Ｋ１６２Ｖ、およびＫ１６２Ｓ、好ましくはＫ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｓ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２ＣおよびＫ１６２Ｍ、最も好ましくはＫ１６２Ｎからなる群から選択され、
（ｘｘｖｉｉ）位置Ｐ１９５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｖｉｉｉ）位置Ｋ１９６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｄ、Ｋ１９６Ｃ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｅ、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｍ、Ｋ１９６Ｆ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｗ、Ｋ１９６Ｙ、Ｋ１９６Ｖ、およびＫ１９６Ｓ、好ましくはＫ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、より好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、最も好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択され、
（ｘｘｉｘ）位置Ｇ１９７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｎ、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｃ、Ｇ１９７Ｑ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ｉ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｍ、Ｇ１９７Ｆ、Ｇ１９７Ｐ、Ｇ１９７Ｔ、Ｇ１９７Ｗ、Ｇ１９７Ｙ、Ｇ１９７Ｖ、およびＧ１９７Ｓ、好ましくはＧ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｘ）位置Ｄ１９９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｅ、Ｄ１９９Ｈ、Ｄ１９９ＲおよびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択され、
（ｘｘｘｉ）位置Ｒ２０４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｄ、Ｒ２０４Ｃ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｅ、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｍ、Ｒ２０４Ｆ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｗ、Ｒ２０４Ｙ、Ｒ２０４Ｖ、およびＲ２０４Ｓ、好ましくはＲ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、最も好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択され、
（ｘｘｘｉｉ）位置Ｉ２１８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｉ２１８Ｒ、Ｉ２１８Ｎ、Ｉ２１８Ｄ、Ｉ２１８Ｃ、Ｉ２１８Ｑ、Ｉ２１８Ｅ、Ｉ２１８Ｇ、Ｉ２１８Ｈ、Ｉ２１８Ａ、Ｉ２１８Ｌ、Ｉ２１８Ｋ、Ｉ２１８Ｍ、Ｉ２１８Ｆ、Ｉ２１８Ｐ、Ｉ２１８Ｔ、Ｉ２１８Ｗ、Ｉ２１８Ｙ、Ｉ２１８Ｖ、およびＩ２１８Ｓ、好ましくはＩ２１８Ｆ、Ｉ２１８ＷおよびＩ２１８Ｙ、より好ましくはＩ２１８Ｆからなる群から選択され、
（ｘｘｘｉｉｉ）位置Ａ２２８において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｎ、Ａ２２８Ｄ、Ａ２２８Ｃ、Ａ２２８Ｑ、Ａ２２８Ｅ、Ａ２２８Ｇ、Ａ２２８Ｈ、Ａ２２８Ｉ、Ａ２２８Ｌ、Ａ２２８Ｋ、Ａ２２８Ｍ、Ａ２２８Ｆ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ａ２２８Ｙ、Ａ２２８Ｖ、およびＡ２２８Ｓ、好ましくはＡ２２８Ｋ、Ａ２２８ＨおよびＡ２２８Ｒ、より好ましくはＡ２２８Ｒからなる群から選択される。
【0120】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｒ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ；Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の位置において置換されている。
【0121】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有し、以下を含むアミノ酸配列を含む：
［１］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；ならびに（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換；
［２］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換；ならびに（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；
［３］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；ならびに（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；
［４］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；ならびに（ｉｉｉ）Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＮ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｄ１３５における置換；
［５］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＡによって置換されている、位置Ｅ２３９における置換；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；（ｉｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＤによって置換されている、位置Ｔ５６における置換。
［１］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；ならびに（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換；
［２］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換；ならびに（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；
［３］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；ならびに（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；
［４］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換；ならびに（ｉｉｉ）Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＮ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｄ１３５における置換；
［５］（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＡによって置換されている、位置Ｅ２３９における置換；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換；（ｉｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＤによって置換されている、位置Ｔ５６における置換。
【0122】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、アミノ酸配列を含み、アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも７６％、さらにより好ましくは少なくとも７８％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも８４％、特に少なくとも８７％の同一性を有する。
【0123】
好ましくは、本発明によるヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼのアミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも８８％、好ましくは少なくとも８９％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、最も好ましくは少なくとも９４％、および特に少なくとも９５％の同一性を有する。
【0124】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、アミノ酸配列を含み、アミノ酸配列は、配列番号２、４、５、８、９、１０、１３、１９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、３２、３４、３６、３７、４１、４４、４６、４８、５３、５４、６８、７２、７３、７４、７５、７６、７７、８１、９９、１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１２２、１２３、１２４、１２８、１２９、１３０、１３１、または１３７と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。
【0125】
ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、（Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性を特徴とする。
【0126】
本発明の別の好適な実施形態は、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼに関し、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８からなる群から選択される少なくとも２のアミノ酸位置において置換されており、それぞれの場合、選択される位置の天然のアミノ酸は、Ｌ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｖ、およびＩからなる群から選択される、好ましくはＬ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、およびＶからなる群から選択される、より好ましくはＬ、Ｐ、Ｉ、およびＧからなる群から選択される、さらにより好ましくはＬ、Ｐ、およびＧからなる群から選択される、さらにより好ましくはＬ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている。
【0127】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、およびＰ５１Ｌ、好ましくはＰ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、より好ましくはＰ５１Ｌからなる群から選択される。
【0128】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ５６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、およびＴ５６Ｐ、好ましくはＴ５６Ｇ、およびＴ５６Ｐからなる群から選択される。
【0129】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ８４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、好ましくはＫ８４Ｇからなる群から選択される。
【0130】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ５８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、好ましくはＮ５８Ｖからなる群から選択される。
【0131】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９；好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＥ２３９、さらにより好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、または３７の追加の位置において置換されている。
【0132】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、
［１］：（ｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＬ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における２つの置換と；さらに
［２］：（ｉｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第３の置換とを含む。
［１］：（ｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＬ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における２つの置換と；さらに
［２］：（ｉｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第３の置換とを含む。
【0133】
好適な実施形態では、（ｉｉ）第３の置換は、以下からなる群から選択される：
Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｓ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｃ、およびＰ５１Ｍ、好ましくはＰ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、およびＰ５１Ｌ、より好ましくはＰ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、さらにより好ましくはＰ５１Ｌ；
Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｃ、およびＴ５６Ｍ、好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、さらにより好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ；
Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇ；ならびに
Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｓ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｃ、およびＮ５８Ｍ；Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、およびＮ５８Ｖ、さらにより好ましくはＮ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖ。
Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｓ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｃ、およびＰ５１Ｍ、好ましくはＰ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、およびＰ５１Ｌ、より好ましくはＰ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、さらにより好ましくはＰ５１Ｌ；
Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｃ、およびＴ５６Ｍ、好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、さらにより好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ；
Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇ；ならびに
Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｓ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｃ、およびＮ５８Ｍ；Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、およびＮ５８Ｖ、さらにより好ましくはＮ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖ。
【0134】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ５２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒからなる群から選択される。
【0135】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ５３において置換されており、好ましくは、置換は、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋからなる群から選択される。
【0136】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ５４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒからなる群から選択される。
【0137】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ５５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｃ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｍ、Ｋ５５Ｆ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｗ、Ｋ５５Ｙ、Ｋ５５Ｖ、およびＫ５５Ｓ、好ましくはＫ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、より好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、最も好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択される。
【0138】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｎ、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｃ、Ａ７２Ｑ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｉ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｍ、Ａ７２Ｆ、Ａ７２Ｐ、Ａ７２Ｔ、Ａ７２Ｗ、Ａ７２Ｙ、Ａ７２Ｖ、およびＡ７２Ｓ、好ましくはＡ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、より好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、最も好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択される。
【0139】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ７３において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒからなる群から選択される。
【0140】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒからなる群から選択される。
【0141】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ７７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｄ、Ｔ７７Ｃ、Ｔ７７Ｑ、Ｔ７７Ｅ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｍ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｙ、Ｔ７７Ｖ、およびＴ７７Ｓ、好ましくはＴ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、好ましくはＴ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、およびＴ７７Ｈ、より好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、およびＴ７７Ｈ、さらにより好ましくはＴ７７Ｒからなる群から選択される。
【0142】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ７８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒからなる群から選択される。
【0143】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ８０において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈからなる群から選択される。
【0144】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８１において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋからなる群から選択される。
【0145】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８２において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ８２Ｒ、Ａ８２Ｎ、Ａ８２Ｄ、Ａ８２Ｃ、Ａ８２Ｑ、Ａ８２Ｅ、Ａ８２Ｇ、Ａ８２Ｈ、Ａ８２Ｉ、Ａ８２Ｌ、Ａ８２Ｋ、Ａ８２Ｍ、Ａ８２Ｆ、Ａ８２Ｐ、Ａ８２Ｔ、Ａ８２Ｗ、Ａ８２Ｙ、Ａ８２Ｖ、およびＡ８２Ｓ、好ましくはＡ８２Ｋ、Ａ８２Ｈ、およびＡ８２Ｒ、より好ましくはＡ８２Ｒからなる群から選択される。
【0146】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ８６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｒ、Ｄ８６Ｎ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｑ、Ｄ８６Ｅ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ｈ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｋ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｆ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｔ、Ｄ８６Ｗ、Ｄ８６Ｙ、Ｄ８６Ｖ、およびＤ８６Ｓ；Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択される。
【0147】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ９４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ９４Ｒ、Ａ９４Ｎ、Ａ９４Ｄ、Ａ９４Ｃ、Ａ９４Ｑ、Ａ９４Ｅ、Ａ９４Ｇ、Ａ９４Ｈ、Ａ９４Ｉ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｋ、Ａ９４Ｍ、Ａ９４Ｆ、Ａ９４Ｐ、Ａ９４Ｔ、Ａ９４Ｗ、Ａ９４Ｙ、Ａ９４Ｖ、およびＡ９４Ｓ；好ましくはＡ９４Ｇ、Ａ９４Ｖ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｉ、およびＡ９４Ｐ；より好ましくはＡ９４Ｇからなる群から選択される。
【0148】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ１１６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｄ、Ｓ１１６Ｃ、Ｓ１１６Ｑ、Ｓ１１６Ｅ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｍ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｔ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｖ、好ましくはＳ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択される。
【0149】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１１７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｅ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７ＦおよびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｈ、さらにより好ましくはＤ１１７Ｋからなる群から選択される。
【0150】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ１１９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒからなる群から選択される。
【0151】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２０において置換されており、好ましくは、置換は、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択される。
【0152】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ１２４において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋからなる群から選択される。
【0153】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１２８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｅ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｖ、およびＤ１２８Ｓ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋ、最も好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋからなる群から選択される。
【0154】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｎ、Ｑ１２９Ｄ、Ｑ１２９Ｃ、Ｑ１２９Ｅ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｍ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｔ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｙ、Ｑ１２９Ｖ、およびＱ１２９Ｓ、好ましくはＱ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択される。
【0155】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１３２において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３２Ｒ、Ｋ１３２Ｎ、Ｋ１３２Ｄ、Ｋ１３２Ｃ、Ｋ１３２Ｑ、Ｋ１３２Ｅ、Ｋ１３２Ｇ、Ｋ１３２Ｈ、Ｋ１３２Ｉ、Ｋ１３２Ｌ、Ｋ１３２Ｍ、Ｋ１３２Ｆ、Ｋ１３２Ｐ、Ｋ１３２Ｔ、Ｋ１３２Ｗ、Ｋ１３２Ｙ、Ｋ１３２Ｖ、およびＫ１３２Ｓ、好ましくはＫ１３２Ｒ、およびＫ１３２Ｈ、最も好ましくはＫ１３２Ｒからなる群から選択される。
【0156】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１３５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｅ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｈ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｖ、およびＤ１３５Ｓ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、およびＤ１３５Ｔ、さらにより好ましくはＤ１３５Ａ、およびＤ１３５Ｎからなる群から選択される。
【0157】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ１５１において置換されており、好ましくは、置換は、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｄ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｖ、およびＥ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１ＨおよびＥ１５１Ｋ、好ましくはＥ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、およびＥ１５１Ｐ、より好ましくはＥ１５１Ｌからなる群から選択される。
【0158】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１６２において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１６２Ａ、Ｋ１６２Ｒ、Ｋ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｄ、Ｋ１６２Ｃ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｅ、Ｋ１６２Ｇ、Ｋ１６２Ｈ、Ｋ１６２Ｉ、Ｋ１６２Ｌ、Ｋ１６２Ｍ、Ｋ１６２Ｆ、Ｋ１６２Ｐ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２Ｗ、Ｋ１６２Ｙ、Ｋ１６２Ｖ、およびＫ１６２Ｓ、好ましくはＫ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｓ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２ＣおよびＫ１６２Ｍ、最も好ましくはＫ１６２Ｎからなる群から選択される。
【0159】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９１において置換されており、置換は、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｗ、Ｄ１９１Ｆ、Ｄ１９１Ｙ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、Ｄ１９１Ｔ、Ｄ１９１Ｎ、Ｄ１９１Ｅ、Ｄ１９１Ｈ、Ｄ１９１ＲおよびＤ１９１Ｋ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、より好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、最も好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択される。
【0160】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ１９５において置換されており、好ましくは、置換は、Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒからなる群から選択される。
【0161】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１９６において置換されており、好ましくは、置換は、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｄ、Ｋ１９６Ｃ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｅ、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｍ、Ｋ１９６Ｆ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｗ、Ｋ１９６Ｙ、Ｋ１９６Ｖ、およびＫ１９６Ｓ、好ましくはＫ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、より好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、最も好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択される。
【0162】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ１９７において置換されており、好ましくは、置換は、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｎ、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｃ、Ｇ１９７Ｑ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ｉ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｍ、Ｇ１９７Ｆ、Ｇ１９７Ｐ、Ｇ１９７Ｔ、Ｇ１９７Ｗ、Ｇ１９７Ｙ、Ｇ１９７Ｖ、およびＧ１９７Ｓ、好ましくはＧ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択される。
【0163】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９９において置換されており、好ましくは、置換は、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｅ、Ｄ１９９Ｈ、Ｄ１９９ＲおよびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択される。
【0164】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｒ２０４において置換されており、好ましくは、置換は、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｄ、Ｒ２０４Ｃ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｅ、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｍ、Ｒ２０４Ｆ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｗ、Ｒ２０４Ｙ、Ｒ２０４Ｖ、およびＲ２０４Ｓ、好ましくはＲ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、最も好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択される。
【0165】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｉ２１８において置換されており、好ましくは、置換は、Ｉ２１８Ｒ、Ｉ２１８Ｎ、Ｉ２１８Ｄ、Ｉ２１８Ｃ、Ｉ２１８Ｑ、Ｉ２１８Ｅ、Ｉ２１８Ｇ、Ｉ２１８Ｈ、Ｉ２１８Ａ、Ｉ２１８Ｌ、Ｉ２１８Ｋ、Ｉ２１８Ｍ、Ｉ２１８Ｆ、Ｉ２１８Ｐ、Ｉ２１８Ｔ、Ｉ２１８Ｗ、Ｉ２１８Ｙ、Ｉ２１８Ｖ、およびＩ２１８Ｓ、好ましくはＩ２１８Ｆ、Ｉ２１８ＷおよびＩ２１８Ｙ、より好ましくはＩ２１８Ｆからなる群から選択される。
【0166】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ２２８において置換されており、好ましくは、置換は、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｎ、Ａ２２８Ｄ、Ａ２２８Ｃ、Ａ２２８Ｑ、Ａ２２８Ｅ、Ａ２２８Ｇ、Ａ２２８Ｈ、Ａ２２８Ｉ、Ａ２２８Ｌ、Ａ２２８Ｋ、Ａ２２８Ｍ、Ａ２２８Ｆ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ａ２２８Ｙ、Ａ２２８Ｖ、およびＡ２２８Ｓ、好ましくはＡ２２８Ｋ、Ａ２２８ＨおよびＡ２２８Ｒ、より好ましくはＡ２２８Ｒからなる群から選択される。
【0167】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ２３９において置換されており、置換は、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｒ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｄ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｈ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｋ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｖ、およびＥ２３９Ｓ、好ましくはＥ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択される。
【0168】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示し、
（ｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＧ、およびＬ、さらにより好ましくはＬからなる群から選択され；
（ｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
（ｉｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、Ｋ、およびＶ、さらにより好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
（ｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
（ｖｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
（ｖｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＬ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｖｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
（ｘｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
（ｘｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＹ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＹ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらに好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｖｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
（ｘｖｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｖｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、さらにより好ましくはＡ、およびＮからなる群から選択され；
（ｘｉｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｘｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；または
（ｘｘｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
（ｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＧ、およびＬ、さらにより好ましくはＬからなる群から選択され；
（ｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
（ｉｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、Ｋ、およびＶ、さらにより好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
（ｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
（ｖｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
（ｖｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＬ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｖｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
（ｘｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
（ｘｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＹ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＹ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらに好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｖ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｖｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
（ｘｖｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｖｉｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、さらにより好ましくはＡ、およびＮからなる群から選択され；
（ｘｉｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｘ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｘｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；または
（ｘｘｉｉ）アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0169】
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｆ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｎ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｙ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｋ１９６Ｒ、およびＥ２３９Ａ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１３５Ａ、およびＤ１３５Ｎからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されている。
【0170】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
【0171】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
【0172】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＧによって置換されている、位置Ｋ８４における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
【0173】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＮ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｄ１３５における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＰによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＮ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｄ１３５における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
【0174】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＧによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＲ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＫによって置換されている、位置Ａ８１における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、さらにより好ましくはＧによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＲ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＫによって置換されている、位置Ａ８１における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
【0175】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＤによって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＤによって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
【0176】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＤによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＡによって置換されている、位置Ｅ２３９における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＬによって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択されるアミノ酸、より好ましくはＤによって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＡによって置換されている、位置Ｅ２３９における置換とを含むアミノ酸配列を含む。
【0177】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも７６％、さらにより好ましくは少なくとも７８％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも８４％、および特に少なくとも８７％の同一性を有する。
【0178】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも８８％、好ましくは少なくとも８９％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、最も好ましくは少なくとも９４％、および特に少なくとも９５％の同一性を有する。
【0179】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、２９、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４９、５０、５１、５２、５７、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０２、１１２、１１６、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、または１４４と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。
【0180】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、２９、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４９、５０、５１、５２、５７、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、７７、１１２、１１６、または１１９と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。
【0181】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、アミノ酸配列は、
（ｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、８１、８３、８８、８９、９０、９４、１２０、１２２、１２３、１２８、１３１、および１３５、または
（ｉｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。
（ｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、８１、８３、８８、８９、９０、９４、１２０、１２２、１２３、１２８、１３１、および１３５、または
（ｉｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。
【0182】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、
（Ａ）配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性；および／または
（Ｂ）配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を特徴とする。
（Ａ）配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性；および／または
（Ｂ）配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を特徴とする。
【0183】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、
（ｉ）少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した、または
（ｉｉ）１．０５倍から５倍、好ましくは１．５倍から５倍、より好ましくは２倍から５倍、さらにより好ましくは約３倍向上した相対低温活性を有する。
（ｉ）少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した、または
（ｉｉ）１．０５倍から５倍、好ましくは１．５倍から５倍、より好ましくは２倍から５倍、さらにより好ましくは約３倍向上した相対低温活性を有する。
【0184】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、
（ｉ）少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上した、または
（ｉｉ）１．０１倍から２倍、好ましくは１．１倍から２倍、より好ましくは１．３倍から１．６倍、さらにより好ましくは１．５倍から１．６倍、さらにより好ましくは約１．５５倍向上したＴ低活性を有する。
（ｉ）少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上した、または
（ｉｉ）１．０１倍から２倍、好ましくは１．１倍から２倍、より好ましくは１．３倍から１．６倍、さらにより好ましくは１．５倍から１．６倍、さらにより好ましくは約１．５５倍向上したＴ低活性を有する。
【0185】
好適な実施形態では、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、低温活性および相対低温活性は、５℃のＴ低および３０℃のＴ高で測定される。
【0186】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている。
【0187】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている。
【0188】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されており、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｓ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＳ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｆ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｎ、Ｙ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｍ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｓ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＳ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｆ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｎ、Ｙ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｍ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0189】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｋ８４Ｇ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている。
【0190】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５、または少なくとも２６、または少なくとも２７、または少なくとも２８のアミノ酸位置において置換されており、アミノ酸配列は、少なくとも１つのさらなる置換をさらに含み、少なくとも１つのさらなる置換位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される。
【0191】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５、または少なくとも２６、または少なくとも２７、または少なくとも２８のアミノ酸位置において置換されており、アミノ酸配列は、少なくとも１つのさらなる置換をさらに含み、少なくとも１つのさらなる置換位置は、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される。
【0192】
＜本発明によるヌクレアーゼの機能的特徴＞
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解することができる。
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解することができる。
【0193】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドへのポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルの加水分解を触媒する。
【0194】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ポリヌクレオチド基質は、一本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡおよびハイブリッド鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＤＮＡからなる群から選択される。
【0195】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、切断されたポリヌクレオチド基質は、オリゴヌクレオチドであり、好ましくは、オリゴヌクレオチドは、少なくとも２００ヌクレオチド長、より好ましくは少なくとも１５０ヌクレオチド長、さらにより好ましくは少なくとも１００ヌクレオチド長、さらにより好ましくは少なくとも５０ヌクレオチド長、さらにより好ましくは少なくとも２５ヌクレオチド長、最も好ましくは少なくとも１３ヌクレオチド長、最高に好ましくは少なくとも５ヌクレオチド長、および特に２ヌクレオチド長であり、任意に、切断されたポリヌクレオチドは、モノヌクレオチドである。
【0196】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、
（Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性；および／または
（Ｂ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または
（Ｃ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性；および／または
（Ｄ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼ相対低温活性と比較して向上した相対低温活性；および／または
（Ｅ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＴ低活性と比較して向上したＴ低活性のいずれかを特徴とする。
（Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性；および／または
（Ｂ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または
（Ｃ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性；および／または
（Ｄ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼ相対低温活性と比較して向上した相対低温活性；および／または
（Ｅ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＴ低活性と比較して向上したＴ低活性のいずれかを特徴とする。
【0197】
本明細書の目的で、本発明によるヌクレアーゼの酵素活性は、実施例２に記載のヌクレアーゼ活性アッセイによって検出される。ヌクレアーゼ活性アッセイは、２６０ｎｍにおける吸光度の増加につながる、ＤＮＡポリヌクレオチド基質からの短い酸可溶性の切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドの放出に基づく。Ａ２６０という用語は、ヌクレアーゼ活性アッセイにおけるサンプルの吸光度を示し、そのような酵素サンプルの２６０ｎｍにおける吸光度とヌクレアーゼを含まない対照サンプルの２６０ｎｍにおける吸光度の間の差に対応する。
【0198】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１よりも向上した熱安定性を有し、上記熱安定性は、温度Ｔ安定性での１５分間のインキュベーション後のより高い残存活性によって特徴づけられる。
【0199】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、個々のヌクレアーゼの残存活性は、
（ｉ）５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むバッファー中の特定の量のヌクレアーゼとともに２つの容器をそれぞれ２３℃またはＴ安定性のいずれかで１５分間、別々にインキュベートし、
（ｉｉ）次に、氷上での１５分間のインキュベーションによって２つの容器を冷却し、変性タンパク質の除去のために容器を遠心分離し、ヌクレアーゼを含む上清を単離し、
（ｉｉｉ）特定の比率の量のいずれかのヌクレアーゼを新しい別々の容器に移し、サケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩と混合して０．８ｍｇ／ｍｌの最終濃度にし、各新しい容器を３０℃で１時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、対応する容器のヌクレアーゼの酵素活性と相関する、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度を測定することによってステップ（ｉｉ）のいずれかのヌクレアーゼの残存活性を測定し、
（ｉｖ）パーセンテージとして表されるＴ安定性および２３℃のサンプルに対して測定された吸光度の比（Ａ２６０［Ｔ安定性］：Ａ２６０［Ｔ２３℃］）として残存活性を計算することによって検出され、
任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉｉ）で２つの容器に移されるヌクレアーゼの特定の比率の量は、ステップ（ｉｉｉ）で残存活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる２３℃またはＴ安定性のいずれかでのインキュベーション後の配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される。
（ｉ）５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むバッファー中の特定の量のヌクレアーゼとともに２つの容器をそれぞれ２３℃またはＴ安定性のいずれかで１５分間、別々にインキュベートし、
（ｉｉ）次に、氷上での１５分間のインキュベーションによって２つの容器を冷却し、変性タンパク質の除去のために容器を遠心分離し、ヌクレアーゼを含む上清を単離し、
（ｉｉｉ）特定の比率の量のいずれかのヌクレアーゼを新しい別々の容器に移し、サケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩と混合して０．８ｍｇ／ｍｌの最終濃度にし、各新しい容器を３０℃で１時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、対応する容器のヌクレアーゼの酵素活性と相関する、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度を測定することによってステップ（ｉｉ）のいずれかのヌクレアーゼの残存活性を測定し、
（ｉｖ）パーセンテージとして表されるＴ安定性および２３℃のサンプルに対して測定された吸光度の比（Ａ２６０［Ｔ安定性］：Ａ２６０［Ｔ２３℃］）として残存活性を計算することによって検出され、
任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉｉ）で２つの容器に移されるヌクレアーゼの特定の比率の量は、ステップ（ｉｉｉ）で残存活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる２３℃またはＴ安定性のいずれかでのインキュベーション後の配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される。
【0200】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、残存活性は、４０℃から６０℃、好ましくは４５℃から５５℃、より好ましくは４９℃から５３℃、さらにより好ましくは５１℃の温度Ｔ安定性で測定される。
【0201】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼの熱安定性は、残存活性が５１℃の温度Ｔ安定性で測定された場合、配列番号１と比較して少なくとも１６％、好ましくは少なくとも２３％、より好ましくは少なくとも２９％、さらにより好ましくは少なくとも５９％向上している。
【0202】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、ヌクレアーゼの熱安定性は、配列番号１と比較して少なくとも１６％、好ましくは少なくとも２３％、より好ましくは少なくとも２９％、さらにより好ましくは少なくとも５９％向上している。
【0203】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、少なくとも１．０５１倍、少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、または少なくとも７倍向上した熱安定性を有する。
【0204】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、１．０５１倍から１００倍、好ましくは１．５倍から５０倍、より好ましくは２倍から４０倍、さらにより好ましくは３倍から３０倍、さらにより好ましくは４倍から２３倍、さらにより好ましくは５倍から２１倍、最も好ましくは６倍から１５倍向上した熱安定性を有する。
【0205】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、
（ｉ）塩濃度Ｓ高（Ｓ高活性）で配列番号１よりも高い酵素活性；および／または
（ｉｉ）配列番号１と比較して高い相対塩活性を有し、上記相対塩活性は、塩濃度Ｓ低と比較した塩濃度Ｓ高における酵素活性の比である。
（ｉ）塩濃度Ｓ高（Ｓ高活性）で配列番号１よりも高い酵素活性；および／または
（ｉｉ）配列番号１と比較して高い相対塩活性を有し、上記相対塩活性は、塩濃度Ｓ低と比較した塩濃度Ｓ高における酵素活性の比である。
【0206】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、Ｓ高活性、Ｓ低活性、および相対塩活性は、
（ｉ）特定の比率の量のそのようなヌクレアーゼを２つの別々の容器に移し、バッファーと混合して、５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．８ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩、ならびにそれぞれＳ低またはＳ高の塩濃度の最終濃度にし、３０℃で１時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度（検出された吸光度がそれぞれ塩濃度Ｓ低（Ｓ低活性）およびＳ高（Ｓ高活性）におけるヌクレアーゼの酵素活性と相関する）を測定することによって塩濃度Ｓ低およびＳ高におけるヌクレアーゼの酵素活性を別々に検出し、
（ｉｉ）パーセンテージとして表されるＳ高（Ｓ高活性）でインキュベートしたサンプルおよびＳ低（Ｓ低活性）でインキュベートしたサンプルに対して測定された吸光度の比として相対塩活性（Ａ２６０［Ｓ高］：Ａ２６０［Ｓ低］）を計算することによって測定し、
任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉ）で２つの容器に移されるヌクレアーゼの特定の比率の量は、ステップ（ｉｉ）でそれぞれＳ低活性またはＳ高活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される。
（ｉ）特定の比率の量のそのようなヌクレアーゼを２つの別々の容器に移し、バッファーと混合して、５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．８ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩、ならびにそれぞれＳ低またはＳ高の塩濃度の最終濃度にし、３０℃で１時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度（検出された吸光度がそれぞれ塩濃度Ｓ低（Ｓ低活性）およびＳ高（Ｓ高活性）におけるヌクレアーゼの酵素活性と相関する）を測定することによって塩濃度Ｓ低およびＳ高におけるヌクレアーゼの酵素活性を別々に検出し、
（ｉｉ）パーセンテージとして表されるＳ高（Ｓ高活性）でインキュベートしたサンプルおよびＳ低（Ｓ低活性）でインキュベートしたサンプルに対して測定された吸光度の比として相対塩活性（Ａ２６０［Ｓ高］：Ａ２６０［Ｓ低］）を計算することによって測定し、
任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉ）で２つの容器に移されるヌクレアーゼの特定の比率の量は、ステップ（ｉｉ）でそれぞれＳ低活性またはＳ高活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される。
【0207】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、塩は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ、好ましくはＮａＣｌである。
【0208】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、Ｓ高活性、Ｓ低活性、および相対塩活性を測定する際、
Ｓ低の濃度は、０．００Ｍから０．１５Ｍの範囲内、好ましくは０．００Ｍであり、
Ｓ高の濃度は、０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍである。
Ｓ低の濃度は、０．００Ｍから０．１５Ｍの範囲内、好ましくは０．００Ｍであり、
Ｓ高の濃度は、０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍである。
【0209】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも７倍、より好ましくは少なくとも９倍、さらにより好ましくは少なくとも１３倍、さらにより好ましくは少なくとも６０倍、さらにより好ましくは少なくとも１１０倍向上した相対塩活性を有する。
【0210】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、１．０５倍から３００倍、好ましくは７倍から２５０倍、より好ましくは９倍から２００倍、さらにより好ましくは１３倍から１５０倍、さらにより好ましくは約１１５倍向上した相対塩活性を有する。
【0211】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、相対塩活性は、配列番号１と比較して、少なくとも３％、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも１００％、さらにより好ましくは少なくとも１３０％、さらにより好ましくは少なくとも２００％、最も好ましくは少なくとも８００％向上している。
【0212】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１のＳ高活性と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、さらにより好ましくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも１２倍、さらにより好ましくは少なくとも１９倍向上したＳ高活性を有する。
【0213】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、１．０１倍から２００倍、好ましくは１．５倍から１５０倍、より好ましくは２倍から１００倍、さらにより好ましくは５倍から７５倍、さらにより好ましくは１２倍から５０倍、さらにより好ましくは約２０倍向上したＳ高活性を有する。
【0214】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、塩活性および相対塩活性は、０．００ＭのＳ低および５００ｍＭのＳ高で測定される。
【0215】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、
（ｉ）配列番号１よりも高い３０℃未満の温度Ｔ低における酵素活性（Ｔ低活性）；および／または
（ｉｉ）配列番号１よりも高い相対低温活性を有し、上記相対低温活性は、３０℃以上の温度Ｔ高における酵素活性に対する３０℃未満の温度Ｔ低における酵素活性の比（Ｔ低活性：Ｔ高活性）である。
（ｉ）配列番号１よりも高い３０℃未満の温度Ｔ低における酵素活性（Ｔ低活性）；および／または
（ｉｉ）配列番号１よりも高い相対低温活性を有し、上記相対低温活性は、３０℃以上の温度Ｔ高における酵素活性に対する３０℃未満の温度Ｔ低における酵素活性の比（Ｔ低活性：Ｔ高活性）である。
【0216】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、Ｔ低活性、Ｔ高活性、および相対低温活性は、
（ｉ）特定の比率の量のそのようなヌクレアーゼを２つの別々の容器に移し、バッファーと混合して、５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．８ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩の最終濃度にし、それぞれ温度Ｔ低およびＴ高で１．０時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度（検出された吸光度がそれぞれＴ低（Ｔ低活性）およびＴ高（Ｔ高活性）におけるヌクレアーゼの酵素活性と相関する）を測定することによって温度Ｔ低およびＴ高におけるヌクレアーゼの酵素活性を別々に検出し、
（ｉｉ）パーセンテージとして表されるＴ低（Ｔ低活性）でインキュベートしたサンプルおよびＴ高（Ｔ高活性）でインキュベートしたサンプルに対して測定された吸光度の比として相対低温活性（Ａ２６０［Ｔ低］：Ａ２６０［Ｔ高］）を計算することによって測定され、
任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉ）で２つの容器に移されるヌクレアーゼの特定の比率の量は、ステップ（ｉｉ）でそれぞれＴ低活性またはＴ高活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される。
（ｉ）特定の比率の量のそのようなヌクレアーゼを２つの別々の容器に移し、バッファーと混合して、５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．８ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩の最終濃度にし、それぞれ温度Ｔ低およびＴ高で１．０時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度（検出された吸光度がそれぞれＴ低（Ｔ低活性）およびＴ高（Ｔ高活性）におけるヌクレアーゼの酵素活性と相関する）を測定することによって温度Ｔ低およびＴ高におけるヌクレアーゼの酵素活性を別々に検出し、
（ｉｉ）パーセンテージとして表されるＴ低（Ｔ低活性）でインキュベートしたサンプルおよびＴ高（Ｔ高活性）でインキュベートしたサンプルに対して測定された吸光度の比として相対低温活性（Ａ２６０［Ｔ低］：Ａ２６０［Ｔ高］）を計算することによって測定され、
任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉ）で２つの容器に移されるヌクレアーゼの特定の比率の量は、ステップ（ｉｉ）でそれぞれＴ低活性またはＴ高活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される。
【0217】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、
Ｔ低は、４℃から２５℃、好ましくは４．０℃から１５℃、より好ましくは４．０℃から１０℃、さらにより好ましくは４．０℃から６．０℃の範囲内であり、さらにより好ましくは５．０℃であり、
Ｔ高は、３０℃から６０℃、好ましくは３０℃から５０℃、より好ましくは３０℃から４０℃の範囲内であり、さらにより好ましくは３０℃である。
Ｔ低は、４℃から２５℃、好ましくは４．０℃から１５℃、より好ましくは４．０℃から１０℃、さらにより好ましくは４．０℃から６．０℃の範囲内であり、さらにより好ましくは５．０℃であり、
Ｔ高は、３０℃から６０℃、好ましくは３０℃から５０℃、より好ましくは３０℃から４０℃の範囲内であり、さらにより好ましくは３０℃である。
【0218】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、Ｔ低は４．０℃から１５℃であり、Ｔ高は２５℃から６０℃であり；好ましくはＴ低は４．０℃から１０℃であり、Ｔ高は２５℃から５０℃であり；より好ましくはＴ低は４．０℃から６．０℃であり、Ｔ高は２５℃から４０℃であり；さらにより好ましくはＴ低は５．０℃であり、Ｔ高３０℃である。
【0219】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した相対低温活性を有する。
【0220】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、１．０５倍から５倍、好ましくは１．５倍から５倍、より好ましくは２倍から５倍、さらにより好ましくは約３倍向上した相対低温活性を有する。
【0221】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上したＴ低活性を有する。
【0222】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、配列番号１と比較して、１．０１倍から２倍、好ましくは１．１倍から２倍、より好ましくは１．３倍から１．６倍、さらにより好ましくは１．５倍から１．６倍、さらにより好ましくは約１．５５倍向上したＴ低活性を有する。
【0223】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、低温活性および相対低温活性は、５℃のＴ低および３０℃のＴ高で測定される。
【0224】
＜本発明によるヌクレアーゼの構造的特徴および機能的特徴の組み合わせ＞
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３のアミノ酸位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す。
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３のアミノ酸位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す。
【0225】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３の位置において置換されており、配列番号１の熱安定性と比較して少なくとも１．０５１倍、少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍；より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍；さらにより好ましくは少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、または少なくとも７倍向上した熱安定性を示す。
【0226】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ７４、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＧ、Ｌ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｑ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ９４に置換を含む場合、位置Ａ９４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＮ、さらにより好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、さらにより好ましくはＭ、Ｆ、およびＹからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、ＴおよびＮ、さらにより好ましくはＧ、およびＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ１５１に置換を含む場合、位置Ｅ１５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１６２に置換を含む場合、位置Ｋ１６２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｉ２１８に置換を含む場合、位置Ｉ２１８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｙ、およびＦ、より好ましくはＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ２２８に置換を含む場合、位置Ａ２２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＧ、Ｌ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｑ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ９４に置換を含む場合、位置Ａ９４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＮ、さらにより好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、さらにより好ましくはＭ、Ｆ、およびＹからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、ＴおよびＮ、さらにより好ましくはＧ、およびＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ１５１に置換を含む場合、位置Ｅ１５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１６２に置換を含む場合、位置Ｋ１６２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｉ２１８に置換を含む場合、位置Ｉ２１８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｙ、およびＦ、より好ましくはＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ２２８に置換を含む場合、位置Ａ２２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0227】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す。
【0228】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、置換は、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択され、ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す。
【0229】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、置換は、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択され、ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも７倍、より好ましくは少なくとも９倍、さらにより好ましくは少なくとも１３倍、さらにより好ましくは少なくとも６０倍、さらにより好ましくは少なくとも１１０倍向上した相対塩活性を示す。
【0230】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、ＱおよびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、ＳおよびＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｇ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、ＱおよびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、ＳおよびＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｇ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択される。
【0231】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｎ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、およびＤ１９９Ｓ、好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す。
【0232】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、およびＧ１９７、より好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す。
【0233】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、およびＧ１９７、より好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、さらにより好ましくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも１２倍、さらにより好ましくは少なくとも１９倍向上したＳ高活性を示す。
【0234】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、およびＧ１９７、より好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、ＱおよびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、ＱおよびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、ＧおよびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、およびＱ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、およびＳ、さらにより好ましくはＡ、Ｎ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＡ、Ｇ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｇ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、ＱおよびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、ＱおよびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、ＧおよびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、およびＱ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、およびＳ、さらにより好ましくはＡ、Ｎ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＡ、Ｇ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｇ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される。
【0235】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｋ５５Ｒ、Ｇ５４Ｒ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ａ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｎ、好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｇ５４Ｒ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋ、より好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｓ５３Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す。
【0236】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す。
【0237】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した相対低温活性を示す。
【0238】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、さらにより好ましくはＨ、およびＫ、最も好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、Ｒ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、さらにより好ましくはＨ、およびＫ、最も好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、Ｒ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される。
【0239】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、およびＤ１９９Ｓ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す。
【0240】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す。
【0241】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上したＴ低活性を示す。
【0242】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＶ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、さらにより好ましくはＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＶ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、さらにより好ましくはＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択される。
【0243】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｎ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、およびＤ１３５Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す。
【0244】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す。
【0245】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の位置において置換されており、配列番号１の熱安定性と比較して少なくとも１．０５１倍、少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、または少なくとも７倍向上した熱安定性を示す。
【0246】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＧ、Ｌ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、より好ましくはＲ、Ｇ、Ｓ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｑ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ９４に置換を含む場合、位置Ａ９４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＮ、さらにより好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｍ、Ｆ、およびＹからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｍ、Ｒ、およびＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ１５１に置換を含む場合、位置Ｅ１５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１６２に置換を含む場合、位置Ｋ１６２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、Ｙ、Ｆ、ＷおよびＰ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｉ２１８に置換を含む場合、位置Ｉ２１８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｙ、およびＦ、より好ましくはＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ２２８に置換を含む場合、位置Ａ２２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＧ、Ｌ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、より好ましくはＲ、Ｇ、Ｓ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｑ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ９４に置換を含む場合、位置Ａ９４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＮ、さらにより好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｍ、Ｆ、およびＹからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｍ、Ｒ、およびＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ１５１に置換を含む場合、位置Ｅ１５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１６２に置換を含む場合、位置Ｋ１６２のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、Ｙ、Ｆ、ＷおよびＰ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｉ２１８に置換を含む場合、位置Ｉ２１８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｙ、およびＦ、より好ましくはＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ２２８に置換を含む場合、位置Ａ２２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0247】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す。
【0248】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、置換は、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９からなる群から選択され、ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す。
【0249】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、置換は、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９からなる群から選択され、ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも７倍、より好ましくは少なくとも９倍、さらにより好ましくは少なくとも１３倍、さらにより好ましくは少なくとも６０倍、さらにより好ましくは少なくとも１１０倍向上した相対塩活性を示す。
【0250】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＨ、Ｋ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、ＤおよびＥ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、およびＱ、より好ましくはＳからなる群から選択され；アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＮ、Ｙ、Ａ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＨ、Ｋ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、ＤおよびＥ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、およびＱ、より好ましくはＳからなる群から選択され；アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＮ、Ｙ、Ａ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0251】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す。
【0252】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す。
【0253】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、さらにより好ましくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも１２倍、さらにより好ましくは少なくとも１９倍向上したＳ高活性を示す。
【0254】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、Ｄ、Ｋ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、ＤおよびＥ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、およびＱ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＹ、Ｎ、Ｈ、Ｒ、Ａ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ５２に置換を含む場合、位置Ａ５２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ５４に置換を含む場合、位置Ｇ５４のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、Ｄ、Ｋ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８２に置換を含む場合、位置Ａ８２のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、ＤおよびＥ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＥ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、およびＱ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＹ、Ｎ、Ｈ、Ｒ、Ａ、およびＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ１１９に置換を含む場合、位置Ｎ１１９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫおよびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ１９５に置換を含む場合、位置Ｐ１９５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0255】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｇ５４Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｎ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｇ５４Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｐ１９５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、およびＥ２３９Ａ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｓ５３Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ａ８１Ｋ、Ａ８２Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または少なくとも３０の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す。
【0256】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、または少なくとも２１の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す。
【0257】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、または少なくとも２１の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した相対低温活性を示す。
【0258】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、または少なくとも２１の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＹ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、さらにより好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、より好ましくはＭ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＹ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、さらにより好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、より好ましくはＭ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0259】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｍ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｅ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、または少なくとも２１の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、または少なくとも２１の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す。
【0260】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す。
【0261】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上したＴ低活性を示す。
【0262】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示し、
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＧ、およびＬ、さらにより好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、Ｋ、およびＶ、さらにより好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＬ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＹ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＹ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらに好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、さらにより好ましくはＡ、およびＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＧ、およびＬ、さらにより好ましくはＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、Ｋ、およびＶ、さらにより好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＬ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＹ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＹ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらに好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９のアミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、さらにより好ましくはＡ、およびＮからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７のアミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；または
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９のアミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される。
【0263】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｆ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｎ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｙ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｋ１９６Ｒ、およびＥ２３９Ａ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１３５Ａ、およびＤ１３５Ｎからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す。
【0264】
本発明によるヌクレアーゼの好適な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、または少なくとも３９のアミノ酸位置において置換されており、アミノ酸配列は、少なくとも１つのさらなる置換をさらに含み、少なくとも１つのさらなる置換の位置は、アミノ酸位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される。
【0265】
好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、
（Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性；および／または
（Ｂ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または
（Ｃ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性；および／または
（Ｄ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼ相対低温活性と比較して向上した相対低温活性；および／または
（Ｅ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＴ低活性と比較して向上したＴ低活性のいずれかを特徴とし、
配列番号１の配列とのヌクレアーゼのアミノ酸配列の同一性は、少なくとも６５％、または少なくとも７０％、または少なくとも７５％、または少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％、または少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％、さらにより好ましくは少なくとも９９．１％、または少なくとも９９．２％、または少なくとも９９．３％、または少なくとも９９．４、または少なくとも９９．５％、さらにより好ましくは少なくとも９９．６％である。
（Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性；および／または
（Ｂ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または
（Ｃ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性；および／または
（Ｄ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼ相対低温活性と比較して向上した相対低温活性；および／または
（Ｅ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼのＴ低活性と比較して向上したＴ低活性のいずれかを特徴とし、
配列番号１の配列とのヌクレアーゼのアミノ酸配列の同一性は、少なくとも６５％、または少なくとも７０％、または少なくとも７５％、または少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％、または少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％、さらにより好ましくは少なくとも９９．１％、または少なくとも９９．２％、または少なくとも９９．３％、または少なくとも９９．４、または少なくとも９９．５％、さらにより好ましくは少なくとも９９．６％である。
【0266】
好ましくは、本発明のこの第１の態様における、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼのいずれか１つの実施形態または好適な実施形態の開示は、本発明のこの第１の態様におけるいずれかの他の実施形態の実施形態または好適な実施形態でもある。本発明のこの第１の態様における、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼのいずれかの実施形態または好適な実施形態の開示は、互いに参照され、互いの実施形態または好適な実施形態とも考えられることが理解されるであろう。
【0267】
＜ポリヌクレオチド基質を加水分解する方法＞
本発明の別の態様は、ポリヌクレオチド基質、好ましくは、サンプルに含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法であって、
（ａ）上記の本発明によるヌクレアーゼを準備するステップと、
（ｂ）ポリヌクレオチド基質を含む組成物を準備するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）で準備された組成物中のポリヌクレオチド基質を、ステップ（ａ）で準備されたヌクレアーゼと接触させ、ヌクレアーゼにポリヌクレオチド基質を加水分解させるステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドを含む組成物を得る、方法に関する。
本発明の別の態様は、ポリヌクレオチド基質、好ましくは、サンプルに含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法であって、
（ａ）上記の本発明によるヌクレアーゼを準備するステップと、
（ｂ）ポリヌクレオチド基質を含む組成物を準備するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）で準備された組成物中のポリヌクレオチド基質を、ステップ（ａ）で準備されたヌクレアーゼと接触させ、ヌクレアーゼにポリヌクレオチド基質を加水分解させるステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドを含む組成物を得る、方法に関する。
【0268】
本発明による方法の好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド基質を、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解している。
【0269】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｃ）は、
４℃から９０℃の間、好ましくは１０℃から８０℃の間、より好ましくは２０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間、さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間、最も好ましくは３７℃、または
２０℃から９０℃の間、好ましくは２３℃から８０℃の間、より好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間、さらにより好ましくは５０℃および６５℃、最も好ましくは５１℃、または
４℃から６５℃の間、好ましくは４℃から３８℃の間、より好ましくは４℃から２５℃の間、さらにより好ましくは４℃から２０℃の間、さらにより好ましくは４℃から１５℃の間、さらにより好ましくは４℃から１０℃の間、最も好ましくは４℃から６℃の間、および最高に好ましくは５℃の温度で行われる。
４℃から９０℃の間、好ましくは１０℃から８０℃の間、より好ましくは２０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間、さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間、最も好ましくは３７℃、または
２０℃から９０℃の間、好ましくは２３℃から８０℃の間、より好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間、さらにより好ましくは５０℃および６５℃、最も好ましくは５１℃、または
４℃から６５℃の間、好ましくは４℃から３８℃の間、より好ましくは４℃から２５℃の間、さらにより好ましくは４℃から２０℃の間、さらにより好ましくは４℃から１５℃の間、さらにより好ましくは４℃から１０℃の間、最も好ましくは４℃から６℃の間、および最高に好ましくは５℃の温度で行われる。
【0270】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｃ）は、２０℃から４２℃の間、好ましくは２５℃から４２℃の間、より好ましくは２８℃から４０℃の間、さらにより好ましくは３７℃の温度で行われる。
【0271】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｃ）は、３０℃から６５℃の間、好ましくは３０℃から５５℃の間、より好ましくは４０℃から５２℃の間、さらにより好ましくは５１℃の温度で行われる。
【0272】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｃ）は、４℃から２５℃の間、好ましくは４℃から１５℃の間、より好ましくは４℃から１０℃の間、さらにより好ましくは４℃から６℃の間、さらにより好ましくは５℃の温度で行われる。
【0273】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｃ）は、塩の存在下において行われ、塩は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ、好ましくはＮａＣｌである。
【0274】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｃ）は、０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で行われる。
【0275】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｃ）は、塩の非存在下において行われる。
【0276】
好適な実施形態では、本発明による方法は、
（ｄ）ステップ（ｃ）の後にヌクレアーゼを不活性化する追加のステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドおよび不活性化ヌクレアーゼを含む組成物を得る、。
（ｄ）ステップ（ｃ）の後にヌクレアーゼを不活性化する追加のステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドおよび不活性化ヌクレアーゼを含む組成物を得る、。
【0277】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｄ）におけるヌクレアーゼの不活性化は、
（ａ）加熱不活性化によって；および／または
（ｂ）組成物のｐＨ値をｐＨ５未満に低下させることによって；および／または
（ｃ）組成物のｐＨ値をｐＨ１１超に上昇させることによって；および／または
（ｄ）組成物にキレート剤を添加することによって；および／または
（ｅ）組成物に酸化剤を添加することによって；および／または
（ｆ）タンパク質変性剤、好ましくは界面活性剤を添加することによって；および／または
（ｇ）タンパク質を加水分解する酵素、好ましくはプロテアーゼを添加することによって行われる。
（ａ）加熱不活性化によって；および／または
（ｂ）組成物のｐＨ値をｐＨ５未満に低下させることによって；および／または
（ｃ）組成物のｐＨ値をｐＨ１１超に上昇させることによって；および／または
（ｄ）組成物にキレート剤を添加することによって；および／または
（ｅ）組成物に酸化剤を添加することによって；および／または
（ｆ）タンパク質変性剤、好ましくは界面活性剤を添加することによって；および／または
（ｇ）タンパク質を加水分解する酵素、好ましくはプロテアーゼを添加することによって行われる。
【0278】
好適な実施形態では、本発明による方法は、
（ｅ）ステップ（ｃ）で得られた切断されたポリヌクレオチドおよび任意にステップ（ｄ）で得られた不活性化ヌクレアーゼを含む組成物からヌクレアーゼを分離する追加のステップを含む。
（ｅ）ステップ（ｃ）で得られた切断されたポリヌクレオチドおよび任意にステップ（ｄ）で得られた不活性化ヌクレアーゼを含む組成物からヌクレアーゼを分離する追加のステップを含む。
【0279】
本発明による方法の好適な実施形態では、ステップ（ｅ）は、クロマトグラフィー法、および／または限外ろ過、および／またはタンジェンシャルフローろ過の使用により行われる。
【0280】
本発明の別の態様は、ポリヌクレオチド基質、好ましくは、組成物に含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解するための、上記の本発明によるヌクレアーゼの使用に関する。
【0281】
本発明による使用の好適な実施形態では、組成物中のポリヌクレオチド基質は、細胞、好ましくは、
真核生物ドメイン由来の細胞、好ましくは不死化細胞株、または幹細胞、または組織細胞、または真菌細胞、より好ましくはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ種由来、もしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の種由来、もしくはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の種由来；および／または
細菌ドメイン由来の細胞、好ましくは細菌細胞、より好ましくはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ種由来、またはＢａｃｉｌｌｕｓ属の種由来；および／または
古細菌ドメイン由来の細胞から選択される細胞由来である。
真核生物ドメイン由来の細胞、好ましくは不死化細胞株、または幹細胞、または組織細胞、または真菌細胞、より好ましくはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ種由来、もしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の種由来、もしくはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の種由来；および／または
細菌ドメイン由来の細胞、好ましくは細菌細胞、より好ましくはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ種由来、またはＢａｃｉｌｌｕｓ属の種由来；および／または
古細菌ドメイン由来の細胞から選択される細胞由来である。
【0282】
本発明による使用の好適な実施形態では、ポリヌクレオチド基質は、細胞破壊、分泌、溶解、または細胞破裂によって細胞から組成物に放出される。
【0283】
本発明による使用の好適な実施形態では、組成物は、細胞発酵プロセスからの溶解細胞由来である。
【0284】
本発明による使用の好適な実施形態では、組成物は、バイオ医薬品、または医薬組成物、医薬、またはワクチン、またはウイルスベクターの生成プロセスからの中間生成物または生成物である。
【0285】
本発明による使用の好適な実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、植物ウイルス、バクテリオファージ、およびハイブリッドベクターウイルスからなる群から選択される。
【0286】
本発明による使用の好適な実施形態では、組成物は、体外診断に使用するための患者組織サンプルの調製中の中間生成物または生成物である。
【0287】
本発明による使用の好適な実施形態では、バイオ医薬品、または医薬組成物、医薬、またはワクチン、またはウイルスベクターは、遺伝子療法、および／または組織療法、および／または体外診断に使用される。
【0288】
本発明による使用の好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、細胞ライセートの粘度を低下させるために使用される。
【0289】
本発明による使用の好適な実施形態では、本発明によるヌクレアーゼは、電気泳動および／またはクロマトグラフィー法におけるサンプル調製のために使用される。
【0290】
本発明による使用の好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、
（ａ）４℃から９０℃の間、好ましくは１０℃から８０℃の間、より好ましくは２０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間、さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間、最も好ましくは３７℃、または
（ｂ）２０℃から９０℃の間、好ましくは２３℃から８０℃の間、より好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間、さらにより好ましくは５０℃および６５℃、最も好ましくは５１℃、または
（ｃ）４℃から６５℃の間、好ましくは４℃から３８℃の間、より好ましくは４℃から２５℃の間、さらにより好ましくは４℃から２０℃の間、さらにより好ましくは４℃から１５℃の間、さらにより好ましくは４℃から１０℃の間、最も好ましくは４℃から６℃の間、および最高に好ましくは５℃の温度で使用される。
（ａ）４℃から９０℃の間、好ましくは１０℃から８０℃の間、より好ましくは２０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間、さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間、最も好ましくは３７℃、または
（ｂ）２０℃から９０℃の間、好ましくは２３℃から８０℃の間、より好ましくは２５℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間、さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間、さらにより好ましくは５０℃および６５℃、最も好ましくは５１℃、または
（ｃ）４℃から６５℃の間、好ましくは４℃から３８℃の間、より好ましくは４℃から２５℃の間、さらにより好ましくは４℃から２０℃の間、さらにより好ましくは４℃から１５℃の間、さらにより好ましくは４℃から１０℃の間、最も好ましくは４℃から６℃の間、および最高に好ましくは５℃の温度で使用される。
【0291】
本発明による使用の好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で使用される。
【0292】
本発明による使用の好適な実施形態では、ヌクレアーゼは、塩の非存在下において使用される。
【0293】
本発明の別の態様は、上記の本発明による方法において、または上で定義された本発明に従って使用されるポリヌクレオチドを切断するためのキットに関し、キットは、上記の本発明によるヌクレアーゼと、ポリヌクレオチド基質を加水分解するためのバッファーと、任意にヌクレアーゼの不活性化および／または除去のための薬剤および／またはデバイスとを含む。
【0294】
下記表１－Ａは、本出願に記載の特定の選択されたヌクレアーゼの野生型配列の由来名を示す。下記表１－Ｂ、１－Ｃ、１－Ｄ、１－Ｅ、１－Ｆ、１－Ｇ、および１－Ｈは、本発明によるヌクレアーゼの例示的なバリアントの概要を示す。配列番号２から配列番号１０２の個々のそれぞれのバリアントについて、参照配列配列番号１（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ由来の野生型酵素）と比較した置換を表１－Ｂ、１－Ｃ、１－Ｄ、１－Ｅ、１－Ｆ、１－Ｇ、および１－Ｈに列挙する。
【0295】
【0296】
【0297】
【0298】
【0299】
【0300】
【0301】
【0302】
【0303】
本発明の好適な実施形態を下記条項１から１５８として列挙する。
【0304】
条項１：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されている、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ。
【0305】
条項２：位置Ｐ５１、またはＰ７３における置換は、ＰがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｓ５３、またはＳ１１６における置換は、ＳがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、またはＶからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｋ５５、Ｋ８４、Ｋ１３２、またはＫ１９６における置換は、ＫがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｔ５６、またはＴ７７における置換は、ＴがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｎ５８、またはＮ８０における置換は、ＮがＡ、Ｒ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ａ７２、Ａ７４、Ａ８１、Ａ８２、またはＡ１２４における置換は、ＡがＲ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｇ７８、またはＧ１９７における置換は、ＧがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＤ１９９における置換は、ＤがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｑ１２０、またはＱ１２９における置換は、ＱがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｒ２０４における置換は、ＲがＡ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味し；および／または位置Ｅ２３９における置換は、ＥがＡ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、またはＳからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されていることを意味する、条項１に記載のヌクレアーゼ。
【0306】
条項３：前記少なくとも１つのアミノ酸位置は、Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸；またはＥおよびＤから選択される負電荷アミノ酸；Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸；またはＷ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸；またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0307】
条項４：前記少なくとも１つのアミノ酸位置は、正電荷アミノ酸であり、別の正電荷アミノ酸によって置換されている；または負電荷アミノ酸であり、別の負電荷アミノ酸によって置換されている；または脂肪族非極性アミノ酸であり、別の脂肪族非極性アミノ酸によって置換されている；または芳香族アミノ酸であり、別の芳香族アミノ酸によって置換されている；または脂肪族極性無電荷アミノ酸であり、別の脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0308】
条項５：前記少なくとも１つのアミノ酸位置は、正電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または負電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸によって置換されている；または脂肪族非極性アミノ酸であり、芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または芳香族アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは脂肪族極性無電荷、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている；または脂肪族極性無電荷アミノ酸であり、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは芳香族アミノ酸、もしくは正電荷アミノ酸、もしくは負電荷アミノ酸によって置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0309】
条項６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９のアミノ酸位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0310】
条項７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、１から８６のアミノ酸位置、好ましくは１から８４のアミノ酸位置、より好ましくは１から５０のアミノ酸位置、さらにより好ましくは１から２７のアミノ酸位置、さらにより好ましくは１から１１のアミノ酸位置、さらにより好ましくは１から６のアミノ酸位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0311】
条項８：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが正電荷アミノ酸、または負電荷アミノ酸、または異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが正電荷アミノ酸、または脂肪族非極性アミノ酸、または芳香族アミノ酸、または脂肪族極性無電荷アミノ酸、または負電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが脂肪族非極性アミノ酸、または異なる正電荷アミノ酸、または脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが脂肪族非極性アミノ酸、または極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが脂肪族非極性アミノ酸、または芳香族アミノ酸、または脂肪族極性無電荷アミノ酸、または正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0312】
条項９：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、またはＤおよびＥから選択される負電荷アミノ酸、またはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、またはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＷ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、またはＤによって置換されていることを意味し；Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＲ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、ＤがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＷ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、またはＲ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0313】
条項１０：配列番号１と少なくとも６７％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ｔ７７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されている、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0314】
条項１１：配列番号１と少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧが正電荷アミノ酸、または負電荷アミノ酸、または異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮが正電荷アミノ酸、または脂肪族非極性アミノ酸、または芳香族アミノ酸、または脂肪族極性無電荷アミノ酸、または負電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲが脂肪族非極性アミノ酸、または異なる正電荷アミノ酸、または脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、Ｄが脂肪族非極性アミノ酸、または極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥが脂肪族非極性アミノ酸、または芳香族アミノ酸、または脂肪族極性無電荷アミノ酸、または正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0315】
条項１２：配列番号１と少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、またはＤおよびＥから選択される負電荷アミノ酸、またはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６の位置における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、またはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＷ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭ、より好ましくはＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、またはＤによって置換されていることを意味し；Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＲ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、ＤがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＷ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、またはＲ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ、さらにより好ましくは先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0316】
条項１３：配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｐ５１は、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換され；Ｐ５１は、ＤおよびＥから選択される負電荷アミノ酸によって置換され；位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、またはＳ１１６における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、またはＴ７７における置換は、Ｓ、ＴまたはＮがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｔ７７は、Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸によって置換され；Ｔ５６は、Ｄによって置換され；Ｋ５５は、Ｒ、およびＨによって置換され；Ｋ８４は、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰによって置換され；Ｒ２０４は、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭによって置換され；位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＥ２３９における置換は、ＤまたはＥがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ８６における置換は、ＤがＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥがＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、またはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；Ｄ１２８は、Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸によって置換される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0317】
条項１４：配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、位置Ｓ５３、Ｄ１１７、またはＥ２３９における置換は、Ｓ、ＤまたはＥがＡによって置換されていることを意味し；位置Ｐ５１、またはＴ５６における置換は、ＰまたはＴがＤによって置換されていることを意味し；位置Ｔ７７、またはＤ１２８における置換は、ＴまたはＤがＦによって置換されていることを意味し；位置Ｐ５１、Ｋ８４、Ｄ１２８、またはＤ１３５における置換は、Ｐ、Ｋ、またはＤがＧによって置換されていることを意味し；Ｎ８０は、Ｈによって置換され；位置Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、またはＤ１９９における置換は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、またはＴがＫによって置換されていることを意味し；位置Ｐ５１、またはＴ７７における置換は、ＰまたはＴがＬによって置換されていることを意味し；Ｄ１２８は、Ｍによって置換され；位置Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９における置換は、ＤがＮによって置換されていることを意味し；位置Ｔ５６、またはＤ１９１における置換は、ＤまたはＴがＰによって置換されていることを意味し；Ｒ２０４は、Ｑによって置換され；位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、またはＡ１２４における置換は、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、またはＴがＲによって置換されていることを意味し；位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、またはＤ１９９における置換は、ＤがＳによって置換されていることを意味し；Ｎ５８は、Ｖによって置換され；Ｄ１２８は、Ｙによって置換される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0318】
条項１５：配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｄ５６Ｇ、Ｄ５６Ａ、Ｄ５６Ｖ、Ｄ５６Ｉ、Ｄ５６Ｌ、Ｄ５６Ｆ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｓ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａ；好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｋ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｓ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２のアミノ酸位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0319】
条項１６：配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、またはＥ２３９を置換し；Ｒ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｓ１１６、Ａ１２４、またはＧ１９７を置換し；Ｒ、ＫおよびＨ、好ましくはＫおよびＨから選択される正電荷アミノ酸は、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９を置換し；Ｗ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸は、Ｔ７７、またはＤ１２８を置換し；Ｄは、Ｐ５１、またはＴ５６を置換し；Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸は、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９９、またはＲ２０４を置換し；Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸は、Ｄ８６を置換する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0320】
条項１７：配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており；アミノ酸Ａは、Ｓ５３、Ｄ１１７、またはＥ２３９を置換し；アミノ酸Ｄは、Ｐ５１、またはＴ５６を置換し；アミノ酸Ｆは、Ｔ７７、またはＤ１２８を置換し；アミノ酸Ｇは、Ｐ５１、Ｋ８４、Ｄ１２８、またはＤ１３５を置換し；アミノ酸Ｈは、Ｎ８０を置換し；アミノ酸Ｋは、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、またはＤ１９９を置換し；アミノ酸Ｌは、Ｐ５１、またはＴ７７を置換し；アミノ酸Ｍは、Ｄ１２８を置換し；アミノ酸Ｎは、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、またはＤ１９９を置換し；アミノ酸Ｐは、Ｔ５６、またはＤ１９１を置換し；アミノ酸Ｑは、Ｒ２０４を置換し；アミノ酸Ｒは、Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、またはＡ１２４を置換し；アミノ酸Ｓは、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、またはＤ１９９を置換し；アミノ酸Ｖは、Ｎ５８を置換し；アミノ酸Ｙは、Ｄ１２８を置換する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0321】
条項１８：配列番号１と少なくとも６７％、好ましくは少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており；前記第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され；前記第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択され；好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されている、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ。
【0322】
条項１９：配列番号１と少なくとも８９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも第１のアミノ酸位置および第２のアミノ酸位置において置換されており；前記第１のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択され；前記第２のアミノ酸位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択され；好ましくは、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており；前記アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｐ５１において置換されている場合、前記置換は、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｉ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｄであり；前記アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｔ５６において置換されている場合、前記置換は、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、およびＴ５６Ｄ、好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、およびＴ５６Ｄであり；前記アミノ酸配列がアミノ酸位置Ｔ７７において置換されている場合、前記置換は、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌであり；前記アミノ酸配列がアミノ酸位置Ａ１２４において置換されている場合、前記置換は、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒである、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ、より好ましくは非特異的なエンドヌクレアーゼ。
【0323】
条項２０：前記第１のアミノ酸位置および前記第２のアミノ酸位置はともに、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４からなる群から選択される、条項１８または条項１９に記載のヌクレアーゼ。
【0324】
条項２１：位置Ｐ５１、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ１２４、またはＧ１９７における置換は、Ｐ、ＡまたはＧがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、またはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される異なる脂肪族非極性アミノ酸、またはＤによって置換されていることを意味し；Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｓ１１６、Ｑ１２０、またはＱ１２９の位置における置換は、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮがＲ、Ｋ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸、またはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＷ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＳ、およびＭ、より好ましくはＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、またはＤによって置換されていることを意味し；Ｋ５５、Ｋ８４、Ｒ２０４、またはＫ１９６の位置における置換は、ＫまたはＲがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＲ、Ｋ、およびＨから選択される異なる正電荷アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ８６、またはＤ１９１における置換は、ＤがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される極性無電荷アミノ酸によって置換されていることを意味し；位置Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１１７、Ｅ２３９またはＤ１９９における置換は、ＤまたはＥがＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰから選択される脂肪族非極性アミノ酸、またはＷ、Ｆ、およびＹから選択される芳香族アミノ酸、またはＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭから選択される脂肪族極性無電荷アミノ酸、またはＲ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫ、およびＨから選択される正電荷アミノ酸によって置換されていることを意味する、条項１８から２０のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0325】
条項２１Ａ－１：配列番号１と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；（ｉｉｉ）（ａ）Ａ１２４、Ａ５２、Ｇ５４、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ａ８１、およびＰ１９５；または（ｂ）Ｔ５６、Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ８０、Ｎ１１９、およびＱ１２０（（ａ）または（ｂ）のそれぞれの場合に、配列番号１のアミノ酸がＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における少なくとも１つ置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0326】
条項２１Ａ－２：前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼは、（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＲからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；（ｉｉｉ）ＡがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ１２４における置換とを含む、条項２１Ａ－１に記載の前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼ。
【0327】
条項２１Ａ－３：前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼは、（ｉ）ＰがＬ、Ｇ、Ａ、Ｖ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｐ５１における置換と；（ｉｉ）ＴがＲ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＲからなる群から選択されるアミノ酸によって置換された、位置Ｔ７７における置換と；（ｉｉｉ）ＡがＲ、Ｈ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＫによって置換された、位置Ａ８１における置換とを含む、条項２１Ａ－１に記載の前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼ。
【0328】
条項２１Ａ－４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ７７、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される、好ましくは、Ｐ５１、Ｔ７７、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、または少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、または少なくとも３８の位置において置換されている、条項２１Ａ－１から２１Ａ－３のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0329】
条項２１Ｂ－１：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有し、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置において置換されており、それぞれの場合、選択される位置の天然のアミノ酸は、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択される；好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＰからなる群から選択される；より好ましくはＡ、Ｇ、Ｌ、およびＰからなる群から選択される；さらにより好ましくはＡ、Ｇ、およびＰからなる群から選択される；さらにより好ましくはＡ、およびＧからなる群から選択されるアミノ酸；最も好ましくはＡによって置換されている、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0330】
条項２１Ｂ－２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ２３９において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項２１Ｂ－１に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0331】
条項２１Ｂ－３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ５６において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、およびＴ５６Ｐ、好ましくはＴ５６ＰおよびＴ５６Ｇ、より好ましくはＴ５６Ｐからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項２１Ｂ－１または条項２１Ｂ－２に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0332】
条項２１Ｂ－４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ８４において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、好ましくはＫ８４Ｇからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項２１Ｂ－１、条項２１Ｂ－２または条項２１Ｂ－３に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0333】
条項２１Ｂ－５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９１において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項２１Ｂ－１、条項２１Ｂ－２、条項２１Ｂ－３または条項２１Ｂ－４に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0334】
条項２１Ｂ－６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ７７において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、およびＴ７７Ｐ、好ましくはＴ７７Ｌからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0335】
条項２１Ｂ－７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ５８において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、好ましくはＮ５８Ｖからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0336】
条項２１Ｂ－８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される；好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される；より好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、または３７の追加の位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0337】
条項２１Ｂ－９：（ｉ）Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における置換と；さらに（ｉｉ）Ｅ２３９、Ｔ５６、Ｋ８４、Ｄ１９１、Ｔ７７、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第２の置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0338】
条項２１Ｂ－１０：前記（ｉｉ）第２の置換は、（ｉ）Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｒ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｄ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｈ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｋ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｖ、およびＥ２３９Ｓ、好ましくはＥ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａ；（ｉｉ）Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｃ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｖ、およびＴ５６Ｓ、好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｌ、およびＴ５６Ｍ、さらにより好ましくはＴ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ、最も好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、およびＴ５６Ｇ；（ｉｉｉ）Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｃ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｍ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｖ、およびＫ８４Ｓ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇ；（ｉｖ）Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｗ、Ｄ１９１Ｆ、Ｄ１９１Ｙ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、Ｄ１９１Ｔ、Ｄ１９１Ｎ、Ｄ１９１Ｅ、Ｄ１９１Ｈ、Ｄ１９１ＲおよびＤ１９１Ｋ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、より好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、最も好ましくはＤ１９１Ｐ；（ｖ）Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｄ、Ｔ７７Ｃ、Ｔ７７Ｑ、Ｔ７７Ｅ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｍ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｙ、Ｔ７７Ｖ、およびＴ７７Ｓ、好ましくはＴ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、より好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌ、最も好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌ；ならびに（ｖｉ）Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｃ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｍ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｖ、およびＮ５８Ｓ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ；より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖ、最も好ましくはＮ５８Ｋ、およびＮ５８Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0339】
条項２１Ｂ－１１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｃ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｍ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｖ、およびＰ５１Ｓ、好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、およびＰ５１Ｉ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、さらにより好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、最も好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0340】
条項２１Ｂ－１２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ５２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0341】
条項２１Ｂ－１３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ５３において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0342】
条項２１Ｂ－１４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ５４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0343】
条項２１Ｂ－１５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ５５において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｃ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｍ、Ｋ５５Ｆ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｗ、Ｋ５５Ｙ、Ｋ５５Ｖ、およびＫ５５Ｓ、好ましくはＫ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、より好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、最も好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0344】
条項２１Ｂ－１６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｎ、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｃ、Ａ７２Ｑ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｉ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｍ、Ａ７２Ｆ、Ａ７２Ｐ、Ａ７２Ｔ、Ａ７２Ｗ、Ａ７２Ｙ、Ａ７２Ｖ、およびＡ７２Ｓ、好ましくはＡ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、より好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、最も好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0345】
条項２１Ｂ－１７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ７３において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0346】
条項２１Ｂ－１８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0347】
条項２１Ｂ－１９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ７８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0348】
条項２１Ｂ－２０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ８０において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0349】
条項２１Ｂ－２１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８１において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0350】
条項２１Ｂ－２２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ８２Ｒ、Ａ８２Ｎ、Ａ８２Ｄ、Ａ８２Ｃ、Ａ８２Ｑ、Ａ８２Ｅ、Ａ８２Ｇ、Ａ８２Ｈ、Ａ８２Ｉ、Ａ８２Ｌ、Ａ８２Ｋ、Ａ８２Ｍ、Ａ８２Ｆ、Ａ８２Ｐ、Ａ８２Ｔ、Ａ８２Ｗ、Ａ８２Ｙ、Ａ８２Ｖ、およびＡ８２Ｓ、好ましくはＡ８２Ｋ、Ａ８２Ｈ、およびＡ８２Ｒ、より好ましくはＡ８２Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0351】
条項２１Ｂ－２３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ８６において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｒ、Ｄ８６Ｎ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｑ、Ｄ８６Ｅ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ｈ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｋ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｆ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｔ、Ｄ８６Ｗ、Ｄ８６Ｙ、Ｄ８６Ｖ、およびＤ８６Ｓ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0352】
条項２１Ｂ－２４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ９４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ９４Ｒ、Ａ９４Ｎ、Ａ９４Ｄ、Ａ９４Ｃ、Ａ９４Ｑ、Ａ９４Ｅ、Ａ９４Ｇ、Ａ９４Ｈ、Ａ９４Ｉ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｋ、Ａ９４Ｍ、Ａ９４Ｆ、Ａ９４Ｐ、Ａ９４Ｔ、Ａ９４Ｗ、Ａ９４Ｙ、Ａ９４Ｖ、およびＡ９４Ｓ；好ましくはＡ９４Ｇ、Ａ９４Ｖ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｉ、およびＡ９４Ｐ；より好ましくはＡ９４Ｇからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0353】
条項２１Ｂ－２５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ１１６において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｄ、Ｓ１１６Ｃ、Ｓ１１６Ｑ、Ｓ１１６Ｅ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｍ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｔ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｖ、好ましくはＳ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0354】
条項２１Ｂ－２６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１１７において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｅ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、さらにより好ましくは、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓ、最も好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、およびＤ１１７Ｓからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0355】
条項２１Ｂ－２７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ１１９において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0356】
条項２１Ｂ－２８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２０において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0357】
条項２１Ｂ－２９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ１２４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0358】
条項２１Ｂ－３０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１２８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｅ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｖ、およびＤ１２８Ｓ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋ、最も好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0359】
条項２１Ｂ－３１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２９において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｎ、Ｑ１２９Ｄ、Ｑ１２９Ｃ、Ｑ１２９Ｅ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｍ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｔ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｙ、Ｑ１２９Ｖ、およびＱ１２９Ｓ、好ましくはＱ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0360】
条項２１Ｂ－３２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１３２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３２Ｒ、Ｋ１３２Ｎ、Ｋ１３２Ｄ、Ｋ１３２Ｃ、Ｋ１３２Ｑ、Ｋ１３２Ｅ、Ｋ１３２Ｇ、Ｋ１３２Ｈ、Ｋ１３２Ｉ、Ｋ１３２Ｌ、Ｋ１３２Ｍ、Ｋ１３２Ｆ、Ｋ１３２Ｐ、Ｋ１３２Ｔ、Ｋ１３２Ｗ、Ｋ１３２Ｙ、Ｋ１３２Ｖ、およびＫ１３２Ｓ、好ましくはＫ１３２Ｒ、およびＫ１３２Ｈ、最も好ましくはＫ１３２Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0361】
条項２１Ｂ－３３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１３５において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｅ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｈ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｖ、およびＤ１３５Ｓ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、最も好ましくはＤ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５ＲおよびＤ１３５Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0362】
条項２１Ｂ－３４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ１５１において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｄ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｖ、およびＥ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１ＨおよびＥ１５１Ｋ、好ましくはＥ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、およびＥ１５１Ｐ、より好ましくはＥ１５１Ｌからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0363】
条項２１Ｂ－３５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１６２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ１６２Ａ、Ｋ１６２Ｒ、Ｋ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｄ、Ｋ１６２Ｃ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｅ、Ｋ１６２Ｇ、Ｋ１６２Ｈ、Ｋ１６２Ｉ、Ｋ１６２Ｌ、Ｋ１６２Ｍ、Ｋ１６２Ｆ、Ｋ１６２Ｐ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２Ｗ、Ｋ１６２Ｙ、Ｋ１６２Ｖ、およびＫ１６２Ｓ、好ましくはＫ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｓ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２ＣおよびＫ１６２Ｍ、最も好ましくはＫ１６２Ｎからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0364】
条項２１Ｂ－３６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ１９５において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0365】
条項２１Ｂ－３７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１９６において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｄ、Ｋ１９６Ｃ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｅ、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｍ、Ｋ１９６Ｆ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｗ、Ｋ１９６Ｙ、Ｋ１９６Ｖ、およびＫ１９６Ｓ、好ましくはＫ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、より好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、最も好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0366】
条項２１Ｂ－３８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ１９７において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｎ、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｃ、Ｇ１９７Ｑ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ｉ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｍ、Ｇ１９７Ｆ、Ｇ１９７Ｐ、Ｇ１９７Ｔ、Ｇ１９７Ｗ、Ｇ１９７Ｙ、Ｇ１９７Ｖ、およびＧ１９７Ｓ、好ましくはＧ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0367】
条項２１Ｂ－３９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９９において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｅ、Ｄ１９９Ｈ、Ｄ１９９ＲおよびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0368】
条項２１Ｂ－４０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｒ２０４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｄ、Ｒ２０４Ｃ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｅ、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｍ、Ｒ２０４Ｆ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｗ、Ｒ２０４Ｙ、Ｒ２０４Ｖ、およびＲ２０４Ｓ、好ましくはＲ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、最も好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0369】
条項２１Ｂ－４１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｉ２１８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｉ２１８Ｒ、Ｉ２１８Ｎ、Ｉ２１８Ｄ、Ｉ２１８Ｃ、Ｉ２１８Ｑ、Ｉ２１８Ｅ、Ｉ２１８Ｇ、Ｉ２１８Ｈ、Ｉ２１８Ａ、Ｉ２１８Ｌ、Ｉ２１８Ｋ、Ｉ２１８Ｍ、Ｉ２１８Ｆ、Ｉ２１８Ｐ、Ｉ２１８Ｔ、Ｉ２１８Ｗ、Ｉ２１８Ｙ、Ｉ２１８Ｖ、およびＩ２１８Ｓ、好ましくはＩ２１８Ｆ、Ｉ２１８ＷおよびＩ２１８Ｙ、より好ましくはＩ２１８Ｆからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0370】
条項２１Ｂ－４２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ２２８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｎ、Ａ２２８Ｄ、Ａ２２８Ｃ、Ａ２２８Ｑ、Ａ２２８Ｅ、Ａ２２８Ｇ、Ａ２２８Ｈ、Ａ２２８Ｉ、Ａ２２８Ｌ、Ａ２２８Ｋ、Ａ２２８Ｍ、Ａ２２８Ｆ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ａ２２８Ｙ、Ａ２２８Ｖ、およびＡ２２８Ｓ、好ましくはＡ２２８Ｋ、Ａ２２８ＨおよびＡ２２８Ｒ、より好ましくはＡ２２８Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0371】
条項２１Ｂ－４３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｇ１９７、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の位置において置換されており、
（ｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＧ、Ｌ、およびＤからなる群から選択され；
（ｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｑ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
（ｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｖｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
（ｖｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ９４に置換を含む場合、位置Ａ９４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
（ｖｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｉｘ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＮ、さらにより好ましくはＮからなる群から選択され；
（ｘ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｍ、Ｆ、およびＹからなる群から選択され；
（ｘｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｍ、Ｒ、およびＮからなる群から選択され；
（ｘｉｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ１５１に置換を含む場合、位置Ｅ１５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
（ｘｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１６２に置換を含む場合、位置Ｋ１６２の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＮからなる群から選択され；（ｘｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、Ｙ、Ｆ、ＷおよびＰ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；
（ｘｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｉ２１８に置換を含む場合、位置Ｉ２１８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｙ、およびＦ、より好ましくはＦからなる群から選択され；または
（ｘｉｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ２２８に置換を含む場合、位置Ａ２２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＲからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＧ、Ｌ、およびＤからなる群から選択され；
（ｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｑ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｉｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
（ｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、ＤおよびＥ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｖｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
（ｖｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ９４に置換を含む場合、位置Ａ９４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
（ｖｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｉｘ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＮ、さらにより好ましくはＮからなる群から選択され；
（ｘ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｍ、Ｆ、およびＹからなる群から選択され；
（ｘｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＲ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
（ｘｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｍ、Ｒ、およびＮからなる群から選択され；
（ｘｉｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ１５１に置換を含む場合、位置Ｅ１５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
（ｘｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１６２に置換を含む場合、位置Ｋ１６２の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、Ｔ、およびＮ、より好ましくはＮからなる群から選択され；（ｘｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、Ｙ、Ｆ、ＷおよびＰ、好ましくはＲ、Ｋ、およびＨ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
（ｘｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；
（ｘｉｉｉ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｉ２１８に置換を含む場合、位置Ｉ２１８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｙ、およびＦ、より好ましくはＦからなる群から選択され；または
（ｘｉｖ）前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ２２８に置換を含む場合、位置Ａ２２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＲからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0372】
条項２１Ｂ－４４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｒ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ；Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｈ、Ａ８１Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ａ９４Ｇ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｅ１５１Ｌ、Ｋ１６２Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｇ１９７Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、Ｉ２１８Ｆ、Ａ２２８Ｒ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５の位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0373】
条項２１Ｂ－４５ａ：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｋ８４における置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0374】
条項２１Ｂ－４５ｂ：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｋ８４における置換と；（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0375】
条項２１Ｂ－４５ｃ：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0376】
条項２１Ｂ－４５ｄ：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；（ｉｉｉ）Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＮ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｄ１３５における置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0377】
条項２１Ｂ－４５ｅ：配列番号１と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｅ２３９における置換と；（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；（ｉｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳ、より好ましくはＤからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0378】
条項２１Ｂ－４６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも７６％、さらにより好ましくは少なくとも７８％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも８４％、および特に少なくとも８７％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0379】
条項２１Ｂ－４７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも８８％、好ましくは少なくとも８９％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、最も好ましくは少なくとも９４％、および特に少なくとも９５％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0380】
条項２１Ｂ－４８：前記アミノ酸配列は、配列番号２、４、５、８、９、１０、１３、１９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、３２、３４、３６、３７、４１、４４、４６、４８、５３、５４、６８、７２、７３、７４、７５、７６、７７、８１、９９、１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１２２、１２３、１２４、１２８、１２９、１３０、１３１、または１３７と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0381】
条項２１Ｂ－４９：前記アミノ酸配列は、配列番号２、４、５、８、９、１０、１３、１９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、３２、３４、３６、３７、４１、４４、４６、４８、５３、５４、６８、７２、７３、７４、７５、７６、７７、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、または１１１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0382】
条項２１Ｂ－５０：前記アミノ酸配列は、（ｉ）配列番号９、１３、２１、２６、４８、５４、７３、７４、７５、７５、７６、７６、８１、１０２、１２２、１２３、１２４、１２８、１２８、１２９、１３０、１３１、１３１、および１３７；または（ｉｉ）配列番号９、１３、２１、２６、４８、５４、７３、７４、７５、７５、７６、または７６と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0383】
条項２１Ｂ－５１：（Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性を特徴とする、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0384】
条項２１Ｂ－５２：配列番号１の前記野生型ヌクレアーゼの熱安定性と比較して向上した熱安定性を有し、前記熱安定性は、（ｉ）残存活性が５１℃の温度Ｔ安定性で測定された場合に、配列番号１と比較して少なくとも１６％、好ましくは少なくとも２３％、より好ましくは少なくとも２９％、さらにより好ましくは少なくとも５９％向上しているか、または（ｉｉ）配列番号１と比較して少なくとも１６％、好ましくは少なくとも２３％、より好ましくは少なくとも２９％、さらにより好ましくは少なくとも５９％向上している、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0385】
条項２１Ｂ－５３：配列番号１と比較して、（ｉ）少なくとも１．０５１倍、少なくとも１．５倍、もしくは少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、もしくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、もしくは少なくとも７倍向上した；または（ｉｉ）１．０５１倍から１００倍、好ましくは１．５倍から５０倍、より好ましくは２倍から４０倍、さらにより好ましくは３倍から３０倍、さらにより好ましくは４倍から２３倍、さらにより好ましくは５倍から２１倍、最も好ましくは６倍から１５倍向上した熱安定性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0386】
条項２１Ｂ－５４：前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解することができ、好ましくは、前記ポリヌクレオチド基質は、一本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡおよびハイブリッド鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＤＮＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0387】
条項２１Ｂ－５５：（ａ）条項１２１Ｂ－１から１２１Ｂ－５４のいずれかに記載のヌクレアーゼを準備するステップを含む、本発明の任意の態様の任意の実施形態によるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法。
【0388】
条項２１Ｂ－５６：本発明の任意の態様の任意の実施形態による、ポリヌクレオチド基質、好ましくは、組成物に含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解するための、１２１Ｂ－１から１２１Ｂ－５４のいずれかに記載のヌクレアーゼの使用。
【0389】
条項２１Ｃ－１：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有し、前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８からなる群から選択される少なくとも２のアミノ酸位置において置換されており、それぞれの場合、選択される位置の天然のアミノ酸は、Ｌ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｖ、およびＩからなる群から選択される、好ましくはＬ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、およびＶからなる群から選択される、より好ましくはＬ、Ｐ、Ｉ、およびＧからなる群から選択される、さらにより好ましくはＬ、Ｐ、およびＧからなる群から選択される、さらにより好ましくはＬ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0390】
条項２１Ｃ－２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、およびＰ５１Ｌ、好ましくはＰ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、より好ましくはＰ５１Ｌからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項２１Ｃ－１に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0391】
条項２１Ｃ－３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ５６において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、およびＴ５６Ｐ、好ましくはＴ５６Ｇ、およびＴ５６Ｐからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項３１Ｃ－１または条項２１Ｃ－２に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0392】
条項２１Ｃ－４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ８４において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、好ましくはＧからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項３１Ｃ－１、条項２１Ｃ－２、または条項２１Ｃ－３に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0393】
条項２１Ｃ－５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ５８において置換されており；好ましくは、前記置換は、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、好ましくはＶからなる群から選択される、先行条項のいずれか、好ましくは条項３１Ｃ－１、条項２１Ｃ－２、条項２１Ｃ－３、または条項２１Ｃ－４に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0394】
条項２１Ｃ－６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ａ９４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｅ１５１、Ｋ１６２、Ｄ１９１、Ｐ１９５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、Ｉ２１８、Ａ２２８、およびＥ２３９；好ましくはＰ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＥ２３９、さらにより好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、または３７の追加の位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0395】
条項２１Ｃ－７：
（ｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＬ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における２つの置換と；さらに
（ｉｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第３の置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＬ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｖ、およびＩからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される位置における２つの置換と；さらに
（ｉｉ）Ｐ５１、Ｔ５６、Ｋ８４、およびＮ５８（それぞれの場合、配列番号１の天然のアミノ酸がＧ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている）からなる群から選択される別の位置における第３の置換とを含む、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0396】
条項２１Ｃ－８：前記（ｉｉ）第３の置換は、
Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｓ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｃ、およびＰ５１Ｍ、好ましくはＰ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、およびＰ５１Ｌ、より好ましくはＰ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、さらにより好ましくはＰ５１Ｌ；
Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｃ、およびＴ５６Ｍ、好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、さらにより好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ；
Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇ；ならびに
Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｓ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｃ、およびＮ５８Ｍ；Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、およびＮ５８Ｖ、さらにより好ましくはＮ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖからなる群から選択される、条項２１Ｃ－７に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、Ｐ５１Ｆ、Ｐ５１Ｗ、Ｐ５１Ｙ、Ｐ５１Ｎ、Ｐ５１Ｔ、Ｐ５１Ｓ、Ｐ５１Ｑ、Ｐ５１Ｃ、およびＰ５１Ｍ、好ましくはＰ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｉ、およびＰ５１Ｌ、より好ましくはＰ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌ、さらにより好ましくはＰ５１Ｌ；
Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｅ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｎ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｑ、Ｔ５６Ｃ、およびＴ５６Ｍ、好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、さらにより好ましくはＴ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ；
Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ｄ、Ｋ８４Ｅ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｆ、Ｋ８４Ｗ、Ｋ８４Ｙ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇ；ならびに
Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｄ、Ｎ５８Ｅ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｙ、Ｎ５８Ｔ、Ｎ５８Ｓ、Ｎ５８Ｑ、Ｎ５８Ｃ、およびＮ５８Ｍ；Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、およびＮ５８Ｖ、さらにより好ましくはＮ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖからなる群から選択される、条項２１Ｃ－７に記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0397】
条項２１Ｃ－９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ５２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ５２Ｒ、Ａ５２Ｎ、Ａ５２Ｄ、Ａ５２Ｃ、Ａ５２Ｑ、Ａ５２Ｅ、Ａ５２Ｇ、Ａ５２Ｈ、Ａ５２Ｉ、Ａ５２Ｌ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｍ、Ａ５２Ｆ、Ａ５２Ｐ、Ａ５２Ｔ、Ａ５２Ｗ、Ａ５２Ｙ、Ａ５２Ｖ、およびＡ５２Ｓ、好ましくはＡ５２Ｒ、Ａ５２Ｋ、Ａ５２Ｈ、より好ましくはＡ５２Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0398】
条項２１Ｃ－１０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ５３において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｎ、Ｓ５３Ｄ、Ｓ５３Ｃ、Ｓ５３Ｑ、Ｓ５３Ｅ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｍ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｔ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｖ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、より好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、さらにより好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａ、最も好ましくはＳ５３Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0399】
条項２１Ｃ－１１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ５４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｎ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ５４Ｃ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｍ、Ｇ５４Ｆ、Ｇ５４Ｐ、Ｇ５４Ｔ、Ｇ５４Ｗ、Ｇ５４Ｙ、Ｇ５４Ｖ、およびＧ５４Ｓ、好ましくはＧ５４Ｄ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ５４Ｒ、Ｇ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ５４Ａ、Ｇ５４Ｖ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｉ、およびＧ５４Ｐ、好ましくはＧ５４Ｋ、Ｇ５４Ｈ、およびＧ５４Ｒ、より好ましくはＧ５４Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0400】
条項２１Ｃ－１２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ５５において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｃ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｍ、Ｋ５５Ｆ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｗ、Ｋ５５Ｙ、Ｋ５５Ｖ、およびＫ５５Ｓ、好ましくはＫ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、より好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、最も好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0401】
条項２１Ｃ－１３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｎ、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｃ、Ａ７２Ｑ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｉ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｍ、Ａ７２Ｆ、Ａ７２Ｐ、Ａ７２Ｔ、Ａ７２Ｗ、Ａ７２Ｙ、Ａ７２Ｖ、およびＡ７２Ｓ、好ましくはＡ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、より好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、最も好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0402】
条項２１Ｃ－１４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ７３において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｐ７３Ａ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｎ、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｃ、Ｐ７３Ｑ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｉ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｍ、Ｐ７３Ｆ、Ｐ７３Ｔ、Ｐ７３Ｗ、Ｐ７３Ｙ、Ｐ７３Ｖ、およびＰ７３Ｓ、好ましくはＰ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、より好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、最も好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0403】
条項２１Ｃ－１５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｎ、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｃ、Ａ７４Ｑ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｉ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｍ、Ａ７４Ｆ、Ａ７４Ｐ、Ａ７４Ｔ、Ａ７４Ｗ、Ａ７４Ｙ、Ａ７４Ｖ、およびＡ７４Ｓ、好ましくはＡ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、より好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、最も好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0404】
条項２１Ｃ－１６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ７７において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｄ、Ｔ７７Ｃ、Ｔ７７Ｑ、Ｔ７７Ｅ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｍ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｙ、Ｔ７７Ｖ、およびＴ７７Ｓ、好ましくはＴ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、好ましくはＴ７７Ｌ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、およびＴ７７Ｈ、より好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、およびＴ７７Ｈ、さらにより好ましくはＴ７７Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0405】
条項２１Ｃ－１７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ７８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｇ７８Ａ、Ｇ７８Ｒ、Ｇ７８Ｎ、Ｇ７８Ｄ、Ｇ７８Ｃ、Ｇ７８Ｑ、Ｇ７８Ｅ、Ｇ７８Ｈ、Ｇ７８Ｉ、Ｇ７８Ｌ、Ｇ７８Ｋ、Ｇ７８Ｍ、Ｇ７８Ｆ、Ｇ７８Ｐ、Ｇ７８Ｔ、Ｇ７８Ｗ、Ｇ７８Ｙ、Ｇ７８Ｖ、およびＧ７８Ｓ、好ましくはＧ７８Ｒ、Ｇ７８Ｋ、およびＧ７８Ｈ、より好ましくはＧ７８Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0406】
条項２１Ｃ－１８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ８０において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｄ、Ｎ８０Ｃ、Ｎ８０Ｑ、Ｎ８０Ｅ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｍ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｔ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｙ、Ｎ８０Ｖ、およびＮ８０Ｓ、好ましくはＮ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０ＨおよびＮ８０Ｒ、最も好ましくはＮ８０Ｈからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0407】
条項２１Ｃ－１９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８１において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ８１Ｒ、Ａ８１Ｎ、Ａ８１Ｄ、Ａ８１Ｃ、Ａ８１Ｑ、Ａ８１Ｅ、Ａ８１Ｇ、Ａ８１Ｈ、Ａ８１Ｉ、Ａ８１Ｌ、Ａ８１Ｋ、Ａ８１Ｍ、Ａ８１Ｆ、Ａ８１Ｐ、Ａ８１Ｔ、Ａ８１Ｗ、Ａ８１Ｙ、Ａ８１Ｖ、およびＡ８１Ｓ、好ましくはＡ８１Ｋ、Ａ８１Ｈ、およびＡ８１Ｒ、より好ましくはＡ８１Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0408】
条項２１Ｃ－２０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ８２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ８２Ｒ、Ａ８２Ｎ、Ａ８２Ｄ、Ａ８２Ｃ、Ａ８２Ｑ、Ａ８２Ｅ、Ａ８２Ｇ、Ａ８２Ｈ、Ａ８２Ｉ、Ａ８２Ｌ、Ａ８２Ｋ、Ａ８２Ｍ、Ａ８２Ｆ、Ａ８２Ｐ、Ａ８２Ｔ、Ａ８２Ｗ、Ａ８２Ｙ、Ａ８２Ｖ、およびＡ８２Ｓ、好ましくはＡ８２Ｋ、Ａ８２Ｈ、およびＡ８２Ｒ、より好ましくはＡ８２Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0409】
条項２１Ｃ－２１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ８６において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｒ、Ｄ８６Ｎ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｑ、Ｄ８６Ｅ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ｈ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｋ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｆ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｔ、Ｄ８６Ｗ、Ｄ８６Ｙ、Ｄ８６Ｖ、およびＤ８６Ｓ、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0410】
条項２１Ｃ－２２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ９４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ９４Ｒ、Ａ９４Ｎ、Ａ９４Ｄ、Ａ９４Ｃ、Ａ９４Ｑ、Ａ９４Ｅ、Ａ９４Ｇ、Ａ９４Ｈ、Ａ９４Ｉ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｋ、Ａ９４Ｍ、Ａ９４Ｆ、Ａ９４Ｐ、Ａ９４Ｔ、Ａ９４Ｗ、Ａ９４Ｙ、Ａ９４Ｖ、およびＡ９４Ｓ；好ましくはＡ９４Ｇ、Ａ９４Ｖ、Ａ９４Ｌ、Ａ９４Ｉ、およびＡ９４Ｐ；より好ましくはＡ９４Ｇからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0411】
条項２１Ｃ－２３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ１１６において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｄ、Ｓ１１６Ｃ、Ｓ１１６Ｑ、Ｓ１１６Ｅ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｍ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｔ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｖ、好ましくはＳ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0412】
条項２１Ｃ－２４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１１７において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｅ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７ＦおよびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｙ、さらにより好ましくはＤ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｈ、さらにより好ましくはＤ１１７Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0413】
条項２１Ｃ－２５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ１１９において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｎ１１９Ａ、Ｎ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｄ、Ｎ１１９Ｃ、Ｎ１１９Ｑ、Ｎ１１９Ｅ、Ｎ１１９Ｇ、Ｎ１１９Ｈ、Ｎ１１９Ｉ、Ｎ１１９Ｌ、Ｎ１１９Ｋ、Ｎ１１９Ｍ、Ｎ１１９Ｆ、Ｎ１１９Ｐ、Ｎ１１９Ｔ、Ｎ１１９Ｗ、Ｎ１１９Ｙ、Ｎ１１９Ｖ、およびＮ１１９Ｓ、好ましくはＮ１１９Ｒ、Ｎ１１９Ｋ、およびＮ１１９Ｈ、より好ましくはＮ１１９Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0414】
条項２１Ｃ－２６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２０において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｎ、Ｑ１２０Ｄ、Ｑ１２０Ｃ、Ｑ１２０Ｅ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｍ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｔ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｙ、Ｑ１２０Ｖ、およびＱ１２０Ｓ、好ましくはＱ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、より好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、最も好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0415】
条項２１Ｃ－２７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ１２４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｎ、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｃ、Ａ１２４Ｑ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｉ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｍ、Ａ１２４Ｆ、Ａ１２４Ｐ、Ａ１２４Ｔ、Ａ１２４Ｗ、Ａ１２４Ｙ、Ａ１２４Ｖ、およびＡ１２４Ｓ、好ましくはＡ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0416】
条項２１Ｃ－２８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１２８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｅ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｖ、およびＤ１２８Ｓ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋ、最も好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８ＲおよびＤ１２８Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0417】
条項２１Ｃ－２９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２９において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｎ、Ｑ１２９Ｄ、Ｑ１２９Ｃ、Ｑ１２９Ｅ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｍ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｔ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｙ、Ｑ１２９Ｖ、およびＱ１２９Ｓ、好ましくはＱ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0418】
条項２１Ｃ－３０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１３２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３２Ｒ、Ｋ１３２Ｎ、Ｋ１３２Ｄ、Ｋ１３２Ｃ、Ｋ１３２Ｑ、Ｋ１３２Ｅ、Ｋ１３２Ｇ、Ｋ１３２Ｈ、Ｋ１３２Ｉ、Ｋ１３２Ｌ、Ｋ１３２Ｍ、Ｋ１３２Ｆ、Ｋ１３２Ｐ、Ｋ１３２Ｔ、Ｋ１３２Ｗ、Ｋ１３２Ｙ、Ｋ１３２Ｖ、およびＫ１３２Ｓ、好ましくはＫ１３２Ｒ、およびＫ１３２Ｈ、最も好ましくはＫ１３２Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0419】
条項２１Ｃ－３１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１３５において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｅ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｈ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｖ、およびＤ１３５Ｓ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、およびＤ１３５Ｔ、さらにより好ましくはＤ１３５Ａ、およびＤ１３５Ｎからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0420】
条項２１Ｃ－３２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ１５１において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｄ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｖ、およびＥ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｗ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｙ、Ｅ１５１Ｃ、Ｅ１５１Ｍ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、Ｅ１５１ＨおよびＥ１５１Ｋ、好ましくはＥ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｉ、およびＥ１５１Ｐ、より好ましくはＥ１５１Ｌからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0421】
条項２１Ｃ－３３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１６２において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ１６２Ａ、Ｋ１６２Ｒ、Ｋ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｄ、Ｋ１６２Ｃ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｅ、Ｋ１６２Ｇ、Ｋ１６２Ｈ、Ｋ１６２Ｉ、Ｋ１６２Ｌ、Ｋ１６２Ｍ、Ｋ１６２Ｆ、Ｋ１６２Ｐ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２Ｗ、Ｋ１６２Ｙ、Ｋ１６２Ｖ、およびＫ１６２Ｓ、好ましくはＫ１６２Ｎ、Ｋ１６２Ｑ、Ｋ１６２Ｓ、Ｋ１６２Ｔ、Ｋ１６２ＣおよびＫ１６２Ｍ、最も好ましくはＫ１６２Ｎからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0422】
条項２１Ｃ－３４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９１において置換されており、前記置換は、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｗ、Ｄ１９１Ｆ、Ｄ１９１Ｙ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、Ｄ１９１Ｔ、Ｄ１９１Ｎ、Ｄ１９１Ｅ、Ｄ１９１Ｈ、Ｄ１９１ＲおよびＤ１９１Ｋ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、より好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、最も好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0423】
条項２１Ｃ－３５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ１９５において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｐ１９５Ａ、Ｐ１９５Ｒ、Ｐ１９５Ｎ、Ｐ１９５Ｄ、Ｐ１９５Ｃ、Ｐ１９５Ｑ、Ｐ１９５Ｅ、Ｐ１９５Ｇ、Ｐ１９５Ｈ、Ｐ１９５Ｉ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ１９５Ｋ、Ｐ１９５Ｍ、Ｐ１９５Ｆ、Ｐ１９５Ｔ、Ｐ１９５Ｗ、Ｐ１９５Ｙ、Ｐ１９５Ｖ、およびＰ１９５Ｓ、好ましくはＰ１９５Ｋ、Ｐ１９５ＨおよびＰ１９５Ｒ、最も好ましくはＰ１９５Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0424】
条項２１Ｃ－３６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１９６において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｄ、Ｋ１９６Ｃ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｅ、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｍ、Ｋ１９６Ｆ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｗ、Ｋ１９６Ｙ、Ｋ１９６Ｖ、およびＫ１９６Ｓ、好ましくはＫ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、より好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、最も好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0425】
条項２１Ｃ－３７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ１９７において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｎ、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｃ、Ｇ１９７Ｑ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ｉ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｍ、Ｇ１９７Ｆ、Ｇ１９７Ｐ、Ｇ１９７Ｔ、Ｇ１９７Ｗ、Ｇ１９７Ｙ、Ｇ１９７Ｖ、およびＧ１９７Ｓ、好ましくはＧ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0426】
条項２１Ｃ－３８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９９において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｅ、Ｄ１９９Ｈ、Ｄ１９９ＲおよびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0427】
条項２１Ｃ－３９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｒ２０４において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｄ、Ｒ２０４Ｃ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｅ、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｍ、Ｒ２０４Ｆ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｗ、Ｒ２０４Ｙ、Ｒ２０４Ｖ、およびＲ２０４Ｓ、好ましくはＲ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、最も好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0428】
条項２１Ｃ－４０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｉ２１８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ｉ２１８Ｒ、Ｉ２１８Ｎ、Ｉ２１８Ｄ、Ｉ２１８Ｃ、Ｉ２１８Ｑ、Ｉ２１８Ｅ、Ｉ２１８Ｇ、Ｉ２１８Ｈ、Ｉ２１８Ａ、Ｉ２１８Ｌ、Ｉ２１８Ｋ、Ｉ２１８Ｍ、Ｉ２１８Ｆ、Ｉ２１８Ｐ、Ｉ２１８Ｔ、Ｉ２１８Ｗ、Ｉ２１８Ｙ、Ｉ２１８Ｖ、およびＩ２１８Ｓ、好ましくはＩ２１８Ｆ、Ｉ２１８ＷおよびＩ２１８Ｙ、より好ましくはＩ２１８Ｆからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0429】
条項２１Ｃ－４１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ２２８において置換されており、好ましくは、前記置換は、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｎ、Ａ２２８Ｄ、Ａ２２８Ｃ、Ａ２２８Ｑ、Ａ２２８Ｅ、Ａ２２８Ｇ、Ａ２２８Ｈ、Ａ２２８Ｉ、Ａ２２８Ｌ、Ａ２２８Ｋ、Ａ２２８Ｍ、Ａ２２８Ｆ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ａ２２８Ｙ、Ａ２２８Ｖ、およびＡ２２８Ｓ、好ましくはＡ２２８Ｋ、Ａ２２８ＨおよびＡ２２８Ｒ、より好ましくはＡ２２８Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0430】
条項２１Ｃ－４２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ２３９において置換されており、前記置換は、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｒ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｄ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｈ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｋ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｖ、およびＥ２３９Ｓ、好ましくはＥ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0431】
条項２１Ｃ－４３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ａ８１、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＥ２３９、より好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＧ、およびＬ、さらにより好ましくはＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、Ｋ、およびＶ、さらにより好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＬ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＹ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＹ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらに好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、さらにより好ましくはＡ、およびＮからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＧ、およびＬ、さらにより好ましくはＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＧ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、Ｋ、およびＶ、さらにより好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＬ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ７８に置換を含む場合、位置Ｇ７８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＭおよびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ８１に置換を含む場合、位置Ａ８１の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＹ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＹ、Ｋ、Ｒ、およびＨ、さらに好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、さらにより好ましくはＡ、およびＮからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、Ｋ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0432】
条項２１Ｃ－４４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｆ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｇ７８Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｎ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｌ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｓ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｙ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｋ１９６Ｒ、およびＥ２３９Ａ、より好ましくはＰ５１Ｌ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｇ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１３５Ａ、およびＤ１３５Ｎからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または少なくとも２２の位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0433】
条項２１Ｃ－４５：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0434】
条項２１Ｃ－４６：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｋ８４における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｋ８４における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0435】
条項２１Ｃ－４７：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｋ８４における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｋ８４における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0436】
条項２１Ｃ－４８：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＮ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｄ１３５における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＰからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＮ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｄ１３５における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0437】
条項２１Ｃ－４９：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＲ、およびＫ、より好ましくはＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ａ８１における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、およびＰ、さらにより好ましくはＧからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ｒ、Ｋ、およびＨ、好ましくはＲ、およびＫ、より好ましくはＫからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ａ８１における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0438】
条項２１Ｃ－５０：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳ、より好ましくはＤからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳ、より好ましくはＤからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0439】
条項２１Ｃ－５１：配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳ、より好ましくはＤからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｅ２３９における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＬからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｐ５１における置換と；
（ｉｉ）Ｄ、Ｅ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＰ、Ｇ、Ｄ、およびＳ、より好ましくはＤからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｔ５６における置換と；
（ｉｉｉ）Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＡからなる群から選択されるアミノ酸によって置換されている、位置Ｅ２３９における置換とを含む、ヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0440】
条項２１Ｃ－５２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも７６％、さらにより好ましくは少なくとも７８％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも８４％、および特に少なくとも８７％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0441】
条項２１Ｃ－５３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも８８％、好ましくは少なくとも８９％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、最も好ましくは少なくとも９４％、および特に少なくとも９５％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0442】
条項２１Ｃ－５４：前記アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、２９、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４９、５０、５１、５２、５７、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０２、１１２、１１６、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、または１４４と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0443】
条項２１Ｃ－５５：前記アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、２９、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４９、５０、５１、５２、５７、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、７７、１１２、１１６、または１１９と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0444】
条項２１Ｃ－５６：前記アミノ酸配列は、
（ｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、８１、８３、８８、８９、９０、９４、１２０、１２２、１２３、１２８、１３１、および１３５、または
（ｉｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６、８１、８３、８８、８９、９０、９４、１２０、１２２、１２３、１２８、１３１、および１３５、または
（ｉｉ）配列番号６４、６５、６６、７３、７４、７５、７６と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0445】
条項２１Ｃ－５７：
（Ａ）配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性；および／または
（Ｂ）配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を特徴とする、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（Ａ）配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性；および／または
（Ｂ）配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を特徴とする、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0446】
条項２１Ｃ－５８：配列番号１と比較して、
（ｉ）少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した、または
（ｉｉ）１．０５倍から５倍、好ましくは１．５倍から５倍、より好ましくは２倍から５倍、さらにより好ましくは約３倍向上した相対低温活性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した、または
（ｉｉ）１．０５倍から５倍、好ましくは１．５倍から５倍、より好ましくは２倍から５倍、さらにより好ましくは約３倍向上した相対低温活性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0447】
条項２１Ｃ－５９：配列番号１と比較して、
（ｉ）少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上した、または
（ｉｉ）１．０１倍から２倍、好ましくは１．１倍から２倍、より好ましくは１．３倍から１．６倍、さらにより好ましくは１．５倍から１．６倍、さらにより好ましくは約１．５５倍向上したＴ低活性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
（ｉ）少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上した、または
（ｉｉ）１．０１倍から２倍、好ましくは１．１倍から２倍、より好ましくは１．３倍から１．６倍、さらにより好ましくは１．５倍から１．６倍、さらにより好ましくは約１．５５倍向上したＴ低活性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0448】
条項２１Ｃ－６０：前記低温活性および前記相対低温活性は、５℃のＴ低および３０℃のＴ高で測定される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0449】
条項２１Ｃ－６１：前記ヌクレアーゼ、好ましくは前記エンドヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解することができ、好ましくは、前記ポリヌクレオチド基質は、一本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡおよびハイブリッド鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＤＮＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ、好ましくはエンドヌクレアーゼ。
【0450】
条項２１Ｃ－６２：（ａ）先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼを準備するステップを含む、本発明の任意の態様の任意の実施形態によるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法。
【0451】
条項２１Ｃ－６３：本発明の任意の態様の任意の実施形態による、ポリヌクレオチド基質、好ましくは、組成物に含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解するための、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼの使用。
【0452】
条項２２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１において置換されており、前記置換は、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｅ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｋ、Ｐ５１Ｈ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ａ、Ｐ５１Ｖ、Ｐ５１Ｌ、およびＰ５１Ｉ、好ましくはＰ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、およびＰ５１Ｌからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0453】
条項２３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ５３において置換されており、前記置換は、Ｓ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３Ｉ、Ｓ５３Ｐ、Ｓ５３Ｗ、Ｓ５３Ｆ、Ｓ５３Ｙ、およびＳ５３Ｄ、好ましくはＳ５３Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ｈ、Ｓ５３Ｇ、Ｓ５３Ａ、Ｓ５３Ｖ、Ｓ５３Ｌ、Ｓ５３ＩおよびＳ５３Ｐ、より好ましくはＳ５３Ｋ、およびＳ５３Ａからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0454】
条項２４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ５５において置換されており、前記置換は、Ｋ５５Ｇ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｖ、Ｋ５５Ｌ、Ｋ５５Ｉ、Ｋ５５Ｐ、Ｋ５５Ｒ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｎ、Ｋ５５Ｑ、Ｋ５５Ｓ、Ｋ５５Ｔ、Ｋ５５Ｃ、およびＫ５５Ｍ、好ましくはＫ５５ＨおよびＫ５５Ｒ、より好ましくはＫ５５Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0455】
条項２５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ５６において置換されており、前記置換は、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｗ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｙ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、およびＴ５６Ｄ、好ましくはＴ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｈ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、およびＴ５６Ｄ、より好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄ、さらにより好ましくはＴ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、およびＴ５６Ｄからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0456】
条項２６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ５８において置換されており、前記置換は、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、Ｎ５８Ｐ、Ｎ５８Ｗ、Ｎ５８Ｆ、Ｎ５８Ｙ、およびＮ５８Ｄ、好ましくはＮ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｈ、Ｎ５８Ｇ、Ｎ５８Ａ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｌ、Ｎ５８Ｉ、およびＮ５８Ｐ、より好ましくはＮ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、およびＮ５８Ｖからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0457】
条項２７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７２において置換されており、前記置換は、Ａ７２Ｄ、Ａ７２Ｅ、Ａ７２Ｒ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｇ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｌ、Ａ７２Ｉ、およびＡ７２Ｐ、好ましくはＡ７２Ｋ、Ａ７２ＨおよびＡ７２Ｒ、より好ましくはＡ７２Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0458】
条項２８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ７３において置換されており、前記置換は、Ｐ７３Ｄ、Ｐ７３Ｅ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｈ、Ｐ７３Ｇ、Ｐ７３Ｖ、Ｐ７３Ｌ、Ｐ７３Ｉ、およびＰ７３Ａ、好ましくはＰ７３Ｋ、Ｐ７３ＨおよびＰ７３Ｒ、より好ましくはＰ７３Ｋ、およびＰ７３Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0459】
条項２９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ７４において置換されており、前記置換は、Ａ７４Ｄ、Ａ７４Ｅ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｇ、Ａ７４Ｖ、Ａ７４Ｌ、Ａ７４Ｉ、およびＡ７４Ｐ、好ましくはＡ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、およびＡ７４Ｒ、より好ましくはＡ７４Ｋ、およびＡ７４Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0460】
条項３０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｔ７７において置換されており、前記置換は、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｈ、Ｔ７７Ｇ、Ｔ７７Ａ、Ｔ７７Ｖ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｉ、Ｔ７７Ｐ、Ｔ７７Ｗ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｙ、およびＴ７７Ｄ、好ましくはＴ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｌからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0461】
条項３１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｎ８０において置換されており、前記置換は、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｈ、Ｎ８０Ｇ、Ｎ８０Ａ、Ｎ８０Ｖ、Ｎ８０Ｌ、Ｎ８０Ｉ、Ｎ８０Ｐ、Ｎ８０Ｗ、Ｎ８０Ｆ、Ｎ８０Ｙ、およびＮ８０Ｄ、好ましくはＮ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、およびＮ８０Ｈ、より好ましくはＮ８０Ｈからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0462】
条項３２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ８４において置換されており、前記置換は、Ｋ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、Ｋ８４Ｐ、Ｋ８４Ｒ、Ｋ８４Ｈ、Ｋ８４Ｎ、Ｋ８４Ｑ、Ｋ８４Ｓ、Ｋ８４Ｔ、Ｋ８４Ｃ、およびＫ８４Ｍ、好ましくはＫ８４Ｇ、Ｋ８４Ａ、Ｋ８４Ｖ、Ｋ８４Ｌ、Ｋ８４Ｉ、およびＫ８４Ｐ、より好ましくはＫ８４Ｇからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0463】
条項３３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ８６において置換されており、前記置換は、Ｄ８６Ｇ、Ｄ８６Ａ、Ｄ８６Ｖ、Ｄ８６Ｌ、Ｄ８６Ｉ、Ｄ８６Ｐ、Ｄ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、好ましくはＤ８６Ｃ、Ｄ８６Ｍ、Ｄ８６Ｓ、Ｄ８６Ｔ、およびＤ８６Ｑ、より好ましくはＤ８６Ｓからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0464】
条項３４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｓ１１６において置換されており、前記置換は、Ｓ１１６Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、Ｓ１１６Ｇ、Ｓ１１６Ａ、Ｓ１１６Ｖ、Ｓ１１６Ｌ、Ｓ１１６Ｉ、Ｓ１１６Ｐ、Ｓ１１６Ｗ、Ｓ１１６Ｆ、Ｓ１１６Ｙ、およびＳ１１６Ｄ、好ましくはＳ１１６Ｋ、Ｓ１１６Ｈ、およびＳ１１６Ｒ、より好ましくはＳ１１６Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0465】
条項３５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１１７において置換されており、前記置換は、Ｄ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７ＲおよびＤ１１７Ｋ、好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｗ、Ｄ１１７Ｆ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｈ、およびＤ１１７Ｋ、より好ましくはＤ１１７Ｇ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｖ、Ｄ１１７Ｌ、Ｄ１１７Ｉ、Ｄ１１７Ｐ、Ｄ１１７Ｃ、Ｄ１１７Ｍ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｑ、Ｄ１１７Ｔ、Ｄ１１７Ｎ、およびＤ１１７Ｋ、最も好ましくはＤ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｋ、およびＤ１１７Ｓからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0466】
条項３６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２０において置換されており、前記置換は、Ｑ１２０Ｒ、Ｑ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、Ｑ１２０Ｇ、Ｑ１２０Ａ、Ｑ１２０Ｖ、Ｑ１２０Ｌ、Ｑ１２０Ｉ、Ｑ１２０Ｐ、Ｑ１２０Ｗ、Ｑ１２０Ｆ、Ｑ１２０Ｙ、およびＱ１２０Ｄ、好ましくはＱ１２０Ｋ、Ｑ１２０Ｈ、およびＱ１２０Ｒ、より好ましくはＱ１２０Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0467】
条項３７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ａ１２４において置換されており、前記置換は、Ａ１２４Ｄ、Ａ１２４Ｅ、Ａ１２４Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｇ、Ａ１２４Ｖ、Ａ１２４Ｌ、Ａ１２４Ｉ、およびＡ１２４Ｐ、好ましくはＡ１２４Ｋ、Ａ１２４ＨおよびＡ１２４Ｒ、より好ましくはＡ１２４Ｋ、およびＡ１２４Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0468】
条項３８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１２８において置換されており、前記置換は、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ａ、Ｄ１２８Ｖ、Ｄ１２８Ｌ、Ｄ１２８Ｉ、Ｄ１２８Ｐ、Ｄ１２８Ｗ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｃ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｑ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｔ、Ｄ１２８Ｈ、およびＤ１２８Ｋ、好ましくはＤ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、およびＤ１２８Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0469】
条項３９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｑ１２９において置換されており、前記置換は、Ｑ１２９Ｒ、Ｑ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、Ｑ１２９Ｇ、Ｑ１２９Ａ、Ｑ１２９Ｖ、Ｑ１２９Ｌ、Ｑ１２９Ｉ、Ｑ１２９Ｐ、Ｑ１２９Ｗ、Ｑ１２９Ｆ、Ｑ１２９Ｙ、およびＱ１２９Ｄ、好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｈ、およびＱ１２９Ｒ、より好ましくはＱ１２９Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、さらにより好ましくはＱ１２９Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0470】
条項４０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１３５において置換されており、前記置換は、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｋ、より好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｗ、Ｄ１３５Ｆ、Ｄ１３５Ｙ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｋ、さらにより好ましくはＤ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｖ、Ｄ１３５Ｌ、Ｄ１３５Ｉ、Ｄ１３５Ｐ、Ｄ１３５Ｃ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｑ、Ｄ１３５Ｓ、Ｄ１３５Ｔ、Ｄ１３５Ｈ、およびＤ１３５Ｋ、最も好ましくはＤ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、およびＤ１３５Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0471】
条項４１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９１において置換されており、前記置換は、Ｄ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、Ｄ１９１Ｐ、Ｄ１９１Ｃ、Ｄ１９１Ｍ、Ｄ１９１Ｓ、Ｄ１９１Ｑ、およびＤ１９１Ｔ、好ましくはＤ１９１Ｇ、Ｄ１９１Ａ、Ｄ１９１Ｖ、Ｄ１９１Ｌ、Ｄ１９１Ｉ、およびＤ１９１Ｐ、より好ましくはＤ１９１Ｐからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0472】
条項４２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｋ１９６において置換されており、前記置換は、Ｋ１９６Ｇ、Ｋ１９６Ａ、Ｋ１９６Ｖ、Ｋ１９６Ｌ、Ｋ１９６Ｉ、Ｋ１９６Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｋ１９６Ｈ、Ｋ１９６Ｎ、Ｋ１９６Ｑ、Ｋ１９６Ｓ、Ｋ１９６Ｔ、Ｋ１９６Ｃ、およびＫ１９６Ｍ、好ましくはＫ１９６Ｒ、およびＫ１９６Ｈ、より好ましくはＫ１９６Ｒからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0473】
条項４３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｇ１９７において置換されており、前記置換は、Ｇ１９７Ｄ、Ｇ１９７Ｅ、Ｇ１９７Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、Ｇ１９７Ａ、Ｇ１９７Ｖ、Ｇ１９７Ｌ、Ｇ１９７Ｉ、およびＧ１９７Ｐ、好ましくはＧ１９７Ｋ、Ｇ１９７Ｈ、およびＧ１９７Ｒ、より好ましくはＧ１９７Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0474】
条項４４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｄ１９９において置換されており、前記置換は、Ｄ１９９Ｇ、Ｄ１９９Ａ、Ｄ１９９Ｖ、Ｄ１９９Ｌ、Ｄ１９９Ｉ、Ｄ１９９Ｐ、Ｄ１９９Ｗ、Ｄ１９９Ｆ、Ｄ１９９Ｙ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、およびＤ１９９Ｋ、好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｑ、Ｄ１９９Ｔ、Ｄ１９９Ｃ、Ｄ１９９Ｍ、Ｄ１９９Ｈ、およびＤ１９９Ｋ、より好ましくはＤ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、およびＤ１９９Ｋからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0475】
条項４５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｒ２０４において置換されており、前記置換は、Ｒ２０４Ｇ、Ｒ２０４Ａ、Ｒ２０４Ｖ、Ｒ２０４Ｌ、Ｒ２０４Ｉ、Ｒ２０４Ｐ、Ｒ２０４Ｋ、Ｒ２０４Ｈ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４Ｃ、およびＲ２０４Ｍ、好ましくはＲ２０４Ｑ、Ｒ２０４Ｎ、Ｒ２０４Ｓ、Ｒ２０４Ｔ、Ｒ２０４ＣおよびＲ２０４Ｍ、より好ましくはＲ２０４Ｑからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0476】
条項４６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｅ２３９において置換されており、前記置換は、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、Ｅ２３９Ｐ、Ｅ２３９Ｗ、Ｅ２３９Ｆ、Ｅ２３９Ｙ、Ｅ２３９Ｃ、Ｅ２３９Ｍ、Ｅ２３９Ｎ、Ｅ２３９Ｑ、Ｅ２３９Ｓ、Ｅ２３９Ｔ、Ｅ２３９ＨおよびＥ２３９Ｋ、好ましくはＥ２３９Ａ、Ｅ２３９Ｇ、Ｅ２３９Ｖ、Ｅ２３９Ｌ、Ｅ２３９Ｉ、およびＥ２３９Ｐ、より好ましくはＥ２３９Ａからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0477】
条項４７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0478】
条項４８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９、好ましくはＰ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されており、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｓ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＳ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｆ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｎ、Ｙ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｍ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｓ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＳ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｆ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｎ、Ｙ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１３２に置換を含む場合、位置Ｋ１３２の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｍ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0479】
条項４９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａ、好ましくはＰ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｋ８４Ｇ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５のアミノ酸位置において置換されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0480】
条項５０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５、または少なくとも２６、または少なくとも２７、または少なくとも２８のアミノ酸位置において置換されており、前記アミノ酸配列は、少なくとも１つのさらなる置換をさらに含み、前記少なくとも１つのさらなる置換位置は、Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ａ８２、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｋ１３２、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｋ１９６、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0481】
条項５１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、または少なくとも２５、または少なくとも２６、または少なくとも２７、または少なくとも２８のアミノ酸位置において置換されており、前記アミノ酸配列は、少なくとも１つのさらなる置換をさらに含み、前記少なくとも１つのさらなる置換位置は、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0482】
条項５２：配列番号１の配列との前記ヌクレアーゼの前記アミノ酸配列の同一性は、少なくとも６５％、または少なくとも６６％、または少なくとも６７％、または少なくとも６８％、または少なくとも６９％、または少なくとも７０％、または少なくとも７１％、または少なくとも７２％、または少なくとも７３％、または少なくとも７４％、または少なくとも７５％、または少なくとも７６％、または少なくとも７７％、または少なくとも７８％、または少なくとも７９％、または少なくとも８０％、または少なくとも８１％、または少なくとも８２％、または少なくとも８３％、または少なくとも８４％、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％、または少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％、さらにより好ましくは少なくとも９９．１％、または少なくとも９９．２％、または少なくとも９９．３％、または少なくとも９９．４、または少なくとも９９．５％、さらにより好ましくは少なくとも９９．６％である、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0483】
条項５３：配列番号１の前記配列との前記ヌクレアーゼの前記アミノ酸配列の同一性は、少なくとも８９％、または少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％、より好ましくは少なくとも９９．１％、または少なくとも９９．２％、または少なくとも９９．３％、または少なくとも９９．４、または少なくとも９９．５％、さらにより好ましくは少なくとも９９．６％である、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0484】
条項５４：前記アミノ酸配列は、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、または１０２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、最も好ましくは少なくとも９７％、最高に好ましくは少なくとも９８％、および特に少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0485】
条項５５：（Ａ）配列番号１の野生型ヌクレアーゼと比較して向上した熱安定性；および／または（Ｂ）配列番号１の前記野生型ヌクレアーゼの相対塩活性と比較して向上した相対塩活性；および／または（Ｃ）配列番号１の前記野生型ヌクレアーゼのＳ高活性と比較して向上したＳ高活性；および／または（Ｄ）配列番号１の前記野生型ヌクレアーゼの相対低温活性と比較して向上した相対低温活性；および／または（Ｅ）配列番号１の前記野生型ヌクレアーゼのＴ低活性と比較して向上したＴ低活性のいずれかを特徴とする、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0486】
条項５６：配列番号１よりも向上した熱安定性を有し、前記熱安定性は、温度Ｔ安定性での１５分間のインキュベーション後のより高い残存活性によって特徴づけられる、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0487】
条項５７：個々のヌクレアーゼの前記残存活性は、（ｉ）５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むバッファー中の特定の量のヌクレアーゼとともに２つの容器をそれぞれ２３℃またはＴ安定性のいずれかで１５分間、別々にインキュベートし、（ｉｉ）次に、前記２つの容器を冷却し、（ｉｉｉ）特定の比率の量のいずれかのヌクレアーゼを新しい別々の容器に移し、サケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩と混合して０．８ｍｇ／ｍｌの最終濃度にし、各新しい容器を３０℃で１時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、前記得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、対応する容器の前記ヌクレアーゼの酵素活性と相関する、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度を測定することによって、ステップ（ｉｉ）のいずれかのヌクレアーゼの前記残存活性を測定し、（ｉｖ）パーセンテージとして表されるＴ安定性および２３℃のサンプルに対して測定された吸光度の比（Ａ２６０［Ｔ安定性］：Ａ２６０［Ｔ２３℃］）として前記残存活性を計算することによって検出され、任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉｉ）で前記２つの容器に移されるヌクレアーゼの前記特定の比率の前記量は、ステップ（ｉｉｉ）で前記残存活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる２３℃またはＴ安定性のいずれかでのインキュベーション後の配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される、条項５６に記載のヌクレアーゼ。
【0488】
条項５８：前記残存活性は、４０℃から６０℃、好ましくは４５℃から５５℃、より好ましくは４９℃から５３℃、さらにより好ましくは５１℃の温度Ｔ安定性で測定される、条項５６または５７に記載のヌクレアーゼ。
【0489】
条項５９：前記ヌクレアーゼの前記熱安定性は、前記残存活性が５１℃の温度Ｔ安定性で測定された場合、配列番号１と比較して少なくとも１６％、好ましくは少なくとも２３％、より好ましくは少なくとも２９％、さらにより好ましくは少なくとも５９％向上している、条項５６から５８のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0490】
条項６０：前記ヌクレアーゼの前記熱安定性は、配列番号１と比較して少なくとも１６％、好ましくは少なくとも２３％、より好ましくは少なくとも２９％、さらにより好ましくは少なくとも５９％向上している、条項５６から５９のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0491】
条項６１：配列番号１と比較して、少なくとも１．０５１倍、少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、または少なくとも７倍向上した熱安定性を有する、条項５６から６０のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0492】
条項６２：配列番号１と比較して、１．０５１倍から１００倍、好ましくは１．５倍から５０倍、より好ましくは２倍から４０倍、さらにより好ましくは３倍から３０倍、さらにより好ましくは４倍から２３倍、さらにより好ましくは５倍から２１倍、最も好ましくは６倍から１５倍向上した熱安定性を有する、条項５６から６１のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0493】
条項６３：（ｉ）塩濃度Ｓ高（Ｓ高活性）で配列番号１よりも高い酵素活性；および／または（ｉｉ）配列番号１と比較して高い相対塩活性を有し、前記相対塩活性は、塩濃度Ｓ低と比較した塩濃度Ｓ高における酵素活性の比である、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0494】
条項６４：前記Ｓ高活性、前記Ｓ低活性、および前記相対塩活性は、（ｉ）特定の比率の量のそのようなヌクレアーゼを２つの別々の容器に移し、バッファーと混合して、５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．８ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩、ならびにそれぞれＳ低またはＳ高の塩濃度の最終濃度にし、３０℃で１時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、前記得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度（検出された吸光度がそれぞれ塩濃度Ｓ低（Ｓ低活性）およびＳ高（Ｓ高活性）における前記ヌクレアーゼの前記酵素活性と相関する）を測定することによって、塩濃度Ｓ低およびＳ高における前記ヌクレアーゼの前記酵素活性を別々に検出し、（ｉｉ）パーセンテージとして表されるＳ高（Ｓ高活性）でインキュベートしたサンプルおよびＳ低（Ｓ低活性）でインキュベートしたサンプルに対して測定された吸光度の比として前記相対塩活性（Ａ２６０［Ｓ高］：Ａ２６０［Ｓ低］）を計算することによって測定され、任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉ）で前記２つの容器に移されるヌクレアーゼの前記特定の比率の前記量は、ステップ（ｉｉ）でそれぞれＳ低活性またはＳ高活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される、条項６３に記載のヌクレアーゼ。
【0495】
条項６５：前記塩は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ、好ましくはＮａＣｌである、条項６３または６４に記載のヌクレアーゼ。
【0496】
条項６６：前記Ｓ高活性、前記Ｓ低活性、および前記相対塩活性を測定する際、Ｓ低の濃度は、０．００Ｍから０．１５Ｍの範囲内、好ましくは０．００Ｍであり、Ｓ高の濃度は、０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍである、条項６３から６５のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0497】
条項６７：配列番号１と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも７倍、より好ましくは少なくとも９倍、さらにより好ましくは少なくとも１３倍、さらにより好ましくは少なくとも６０倍、さらにより好ましくは少なくとも１１０倍向上した相対塩活性を有する、条項６３から６６のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0498】
条項６８：配列番号１と比較して、１．０５倍から３００倍、好ましくは７倍から２５０倍、より好ましくは９倍から２００倍、さらにより好ましくは１３倍から１５０倍、さらにより好ましくは約１１５倍向上した相対塩活性を有する、条項６３から６７のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0499】
条項６９：前記相対塩活性は、配列番号１と比較して、少なくとも３％、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも１００％、さらにより好ましくは少なくとも１３０％、さらにより好ましくは少なくとも２００％、最も好ましくは少なくとも８００％向上している、条項６３から６８のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0500】
条項７０：配列番号１のＳ高活性と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、さらにより好ましくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも１２倍、さらにより好ましくは少なくとも１９倍向上したＳ高活性を有する、条項６３から６９のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0501】
条項７１：配列番号１と比較して、１．０１倍から２００倍、好ましくは１．５倍から１５０倍、より好ましくは２倍から１００倍、さらにより好ましくは５倍から７５倍、さらにより好ましくは１２倍から５０倍、さらにより好ましくは約２０倍向上したＳ高活性を有する、条項６３から７０のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0502】
条項７２：前記塩活性および前記相対塩活性は、０．００ＭのＳ低および５００ｍＭのＳ高で測定される、条項６３から７１のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0503】
条項７３：（ｉ）配列番号１よりも高い３０℃未満の温度Ｔ低における酵素活性（Ｔ低活性）、および／または（ｉｉ）配列番号１よりも高い相対低温活性を有し、前記相対低温活性は、３０℃以上の温度Ｔ高における酵素活性に対する３０℃未満の温度Ｔ低における酵素活性の比（Ｔ低活性：Ｔ高活性）である、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0504】
条項７４：前記Ｔ低活性、前記Ｔ高活性、および前記相対低温活性は、（ｉ）特定の比率の量のそのようなヌクレアーゼを２つの別々の容器に移し、バッファーと混合して、５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．８ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩の最終濃度にし、それぞれ温度Ｔ低およびＴ高で１．０時間インキュベートした後、１００μｌの４％過塩素酸を添加して、反応を終わらせ、２つの得られた組成物を氷上で４５分間インキュベートし、続いて、前記得られた組成物を３，８００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、それぞれの得られた上清の２６０ｎｍにおける吸光度（検出された吸光度がそれぞれＴ低（Ｔ低活性）およびＴ高（Ｔ高活性）における前記ヌクレアーゼの前記酵素活性と相関する）を測定することによって、温度Ｔ低およびＴ高における前記ヌクレアーゼの前記酵素活性を別々に検出し、（ｉｉ）パーセンテージとして表されるＴ低（Ｔ低活性）でインキュベートしたサンプルおよびＴ高（Ｔ高活性）でインキュベートしたサンプルに対して測定された吸光度の比として前記相対低温活性（Ａ２６０［Ｔ低］：Ａ２６０［Ｔ高］）を計算することによって測定され、任意のヌクレアーゼバリアントに関する、ステップ（ｉ）で前記２つの容器に移されるヌクレアーゼの前記特定の比率の前記量は、ステップ（ｉｉ）でそれぞれＴ低活性またはＴ高活性を測定する際に検出可能で直線的なシグナルを得るために必要とされる配列番号１のヌクレアーゼの量によって規定される、条項７３に記載のヌクレアーゼ。
【0505】
条項７５：Ｔ低は、４℃から２５℃、好ましくは４．０℃から１５℃、より好ましくは４．０℃から１０℃、さらにより好ましくは４．０℃から６．０℃の範囲内、さらにより好ましくは５．０℃であり、Ｔ高は、３０℃から６０℃、好ましくは３０℃から５０℃、より好ましくは３０℃から４０℃の範囲内、さらにより好ましくは３０℃である、条項７３または７４に記載のヌクレアーゼ。
【0506】
条項７６：Ｔ低は４．０℃から１５℃であり、Ｔ高は２５℃から６０℃であり；好ましくはＴ低は４．０℃から１０℃であり、Ｔ高は２５℃から５０℃であり；より好ましくはＴ低は４．０℃から６．０℃であり、Ｔ高は２５℃から４０℃であり；さらにより好ましくはＴ低は５．０℃であり、Ｔ高は３０℃である、条項７３から７５のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0507】
条項７７：配列番号１と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した相対低温活性を有する、条項７３から７６のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0508】
条項７８：配列番号１と比較して、１．０５倍から５倍、好ましくは１．５倍から５倍、より好ましくは２倍から５倍、さらにより好ましくは約３倍向上した相対低温活性を有する、条項７３から７７のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0509】
条項７９：配列番号１と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上したＴ低活性を有する、条項７３から７８のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0510】
条項８０：配列番号１と比較して、１．０１倍から２倍、好ましくは１．１倍から２倍、より好ましくは１．３倍から１．６倍、さらにより好ましくは１．５倍から１．６倍、さらにより好ましくは約１．５５倍向上したＴ低活性を有する、条項７３から７９のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0511】
条項８１：前記低温活性および前記相対低温活性は、５℃のＴ低および３０℃のＴ高で測定される、条項７３から８０のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0512】
条項８２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５のアミノ酸位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す、先項条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0513】
条項８３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１の熱安定性と比較して少なくとも１．０５１倍、少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍；より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍；さらにより好ましくは少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、または少なくとも７倍向上した熱安定性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0514】
条項８４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＬ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、最も好ましくはＭ、およびＹからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＣ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、ＴおよびＮ、最も好ましくはＮからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＬ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、最も好ましくはＭ、およびＹからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、さらにより好ましくはＣ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、ＴおよびＮ、最も好ましくはＮからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0515】
条項８５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｖ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１９１Ｐ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0516】
条項８６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、前記置換は、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択され、前記ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0517】
条項８７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、前記置換は、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択され、前記ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも７倍、より好ましくは少なくとも９倍、さらにより好ましくは少なくとも１３倍、さらにより好ましくは少なくとも６０倍、さらにより好ましくは少なくとも１１０倍向上した相対塩活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0518】
条項８８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｋ、Ｎ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＧ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、より好ましくはＡ、Ｋ、Ｎ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＧ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＳ、Ｎ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0519】
条項８９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0520】
条項９０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0521】
条項９１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、さらにより好ましくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも１２倍、さらにより好ましくは少なくとも１９倍向上したＳ高活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0522】
条項９２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、さらにより好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、およびＳ、最も好ましくはＡ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＧ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、さらにより好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、およびＳ、最も好ましくはＡ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＧ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0523】
条項９３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｓ５３Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0524】
条項９４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0525】
条項９５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した相対低温活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0526】
条項９６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、さらにより好ましくはＨ、およびＫ、最も好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＧ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、前記置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、さらにより好ましくはＨ、およびＫ、最も好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、およびＫ、最も好ましくはＧ、Ｎ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、前記置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0527】
条項９７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0528】
条項９８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ８６、およびＳ１１６からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0529】
条項９９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ８６、およびＳ１１６からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上したＴ低活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0530】
条項１００：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ８６、およびＳ１１６からなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＶ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、前記置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＶ、さらにより好ましくはＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、前記置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0531】
条項１０１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｎ５８Ｖ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、およびＳ１１６Ｋからなる群から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の置換を含むように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0532】
条項１０２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５のアミノ酸位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0533】
条項１０３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１の熱安定性と比較して、少なくとも１．０５１倍、少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍；より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍；さらにより好ましくは少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、または少なくとも７倍向上した熱安定性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0534】
条項１０４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、およびＥ２３９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＬ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｍ、およびＹからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＭ、Ｒ、およびＮからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、より好ましくはＬ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ８０に置換を含む場合、位置Ｎ８０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＨからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＷ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＲ、より好ましくはＲ、Ｍ、およびＹからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＭ、Ｒ、およびＮからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９１に置換を含む場合、位置Ｄ１９１の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＰからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｒ２０４に置換を含む場合、位置Ｒ２０４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＣおよびＭ、より好ましくはＱからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｅ２３９に置換を含む場合、位置Ｅ２３９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0535】
条項１０５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１９１Ｐ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１と比較して向上した熱安定性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0536】
条項１０６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、前記置換は、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択され、前記ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0537】
条項１０７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、前記置換は、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択され、前記ヌクレアーゼは、配列番号１の相対塩活性と比較して、少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも７倍、より好ましくは少なくとも９倍、さらにより好ましくは少なくとも１３倍、さらにより好ましくは少なくとも６０倍、さらにより好ましくは少なくとも１１０倍向上した相対塩活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0538】
条項１０８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＮ、Ｙ、Ａ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、およびＡからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、およびＹ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＦからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＮ、Ｙ、Ａ、Ｋ、Ｈ、Ｒ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＧ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0539】
条項１０９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、または少なくとも１７の位置において置換されており、配列番号１の相対塩活性と比較して向上した相対塩活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0540】
条項１１０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0541】
条項１１１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して、少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、さらにより好ましくは少なくとも５倍、さらにより好ましくは少なくとも１２倍、さらにより好ましくは少なくとも１９倍向上したＳ高活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0542】
条項１１２：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｓ５３、Ｔ５６、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ｔ７７、Ｄ１１７、Ｑ１２０、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｑ１２９、Ｄ１３５、Ｋ１９６、およびＧ１９７からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、Ｄ、Ｋ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＹ、Ｈ、Ｒ、Ａ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＲ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ５３に置換を含む場合、位置Ｓ５３の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｃ、Ｍ、およびＤ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｓ、Ｍ、Ｄ、Ｋ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、さらにより好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７２に置換を含む場合、位置Ａ７２の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＹ、Ｈ、Ｒ、Ａ、およびＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２０に置換を含む場合、位置Ｑ１２０の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｑ１２９に置換を含む場合、位置Ｑ１２９の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＡ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、およびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ１９６に置換を含む場合、位置Ｋ１９６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0543】
条項１１３：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｓ５３Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｓ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｑ１２９Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｋ１９６Ｒ、およびＧ１９７Ｋからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または少なくとも１３の位置において置換されており、配列番号１のＳ高活性と比較して向上したＳ高活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0544】
条項１１４：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0545】
条項１１５：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２．０倍、さらにより好ましくは少なくとも３．０倍向上した相対低温活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0546】
条項１１６：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｋ５５、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ａ１２４、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｇ１９７、およびＤ１９９からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、より好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、より好ましくはＧ、Ｎ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＤ、Ｒ、Ｇ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ５５に置換を含む場合、位置Ｋ５５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＨおよびＲ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＫ、Ｒ、Ｐ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＫ、Ｒ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ７３に置換を含む場合、位置Ｐ７３の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＡ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ７４に置換を含む場合、位置Ａ７４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫ、およびＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、Ｆ、およびＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１１７に置換を含む場合、位置Ｄ１１７の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｑ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、およびＳ、より好ましくはＨ、Ｒ、およびＫ、さらにより好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ａ１２４に置換を含む場合、位置Ａ１２４の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、ＨおよびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１２８に置換を含む場合、位置Ｄ１２８の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、ＲおよびＫ、より好ましくはＧ、Ｎ、ＲおよびＫからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｇ１９７に置換を含む場合、位置Ｇ１９７の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１９９に置換を含む場合、位置Ｄ１９９の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＳ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｃ、Ｍ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、より好ましくはＮ、Ｓ、およびＫからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0547】
条項１１７：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｒ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｋ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｐ７３Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ａ１２４Ｋ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、または少なくとも１５の位置において置換されており、配列番号１の相対低温活性と比較して向上した相対低温活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0548】
条項１１８：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0549】
条項１１９：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して少なくとも１．０１倍、好ましくは少なくとも１．１倍、より好ましくは少なくとも１．３倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５倍、さらにより好ましくは少なくとも１．５５倍向上したＴ低活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0550】
条項１２０：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｔ７７、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、およびＤ１３５からなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示し、
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＮからなる群から選択され、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｐ５１に置換を含む場合、位置Ｐ５１の前記アミノ酸置換は、置換Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、およびＩ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、より好ましくはＬからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ５６に置換を含む場合、位置Ｔ５６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、より好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、およびＤ、さらにより好ましくはＰ、およびＤからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｎ５８に置換を含む場合、位置Ｎ５８の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＲ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＲ、およびＶからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｔ７７に置換を含む場合、位置Ｔ７７の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｒ、およびＨ、より好ましくはＲからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｋ８４に置換を含む場合、位置Ｋ８４の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、およびＭ、好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、およびＰ、より好ましくはＧからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ８６に置換を含む場合、位置Ｄ８６の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｃ、Ｍ、Ｓ、Ｑ、およびＴ、好ましくはＱ、Ｔ、およびＳ、より好ましくはＳからなる群から選択され；
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｓ１１６に置換を含む場合、位置Ｓ１１６の前記アミノ酸置換は、置換Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、およびＤ、好ましくはＫ、Ｈ、およびＲ、より好ましくはＫからなる群から選択され；または
前記アミノ酸置換がアミノ酸位置Ｄ１３５に置換を含む場合、位置Ｄ１３５の前記アミノ酸置換は、置換Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫ、好ましくはＣ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴ、より好ましくはＮからなる群から選択され、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0551】
条項１２１：前記アミノ酸配列は、配列番号１と比較して、それが置換Ｐ５１Ｌ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｔ７７Ｒ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６ＫおよびＤ１３５Ｎからなる群から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の置換を含むように、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６の位置において置換されており、配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を示す、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0552】
条項１２２：前記ヌクレアーゼは、ポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルを、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解することができる、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0553】
条項１２３：前記ヌクレアーゼは、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドへのポリヌクレオチド基質のリン酸ジエステルの加水分解を触媒する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0554】
条項１２４：前記ポリヌクレオチド基質は、一本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡおよびハイブリッド鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＤＮＡからなる群から選択される、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0555】
条項１２５：前記切断されたポリヌクレオチド基質は、オリゴヌクレオチドであり、好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも２００ヌクレオチド長、より好ましくは少なくとも１５０ヌクレオチド長、さらにより好ましくは少なくとも１００ヌクレオチド長、さらにより好ましくは少なくとも５０ヌクレオチド長、さらにより好ましくは少なくとも２５ヌクレオチド長、最も好ましくは少なくとも１３ヌクレオチド長、最高に好ましくは少なくとも５ヌクレオチド長、および特に２ヌクレオチド長であり、任意に、前記切断されたポリヌクレオチドは、モノヌクレオチドである、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0556】
条項１２６：前記ヌクレアーゼは、液体製剤に含まれている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0557】
条項１２７：前記ヌクレアーゼは、それぞれ適切なパーセンテージの範囲でバッファーおよびグリセロール、スクロース、もしくは他の安定化剤および／またはベンゾアートもしくは他の防腐剤を含む液体製剤に含まれている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0558】
条項１２８：前記ヌクレアーゼは、固体の形態で存在するか、または固体製剤、好ましくは粉末に含まれている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0559】
条項１２９：前記ヌクレアーゼは、凍結乾燥、噴霧乾燥もしくは最新の技術において既知の乾燥のための他の技術によって得られる粉末であるか、またはそのような粉末中に存在する、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0560】
条項１３０：前記ヌクレアーゼは、粗製細胞ライセート、または粗製細胞上清、または前述のもののいずれかに由来の部分的に精製された酵素、または前述のもののいずれかに由来の精製された酵素である、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0561】
条項１３１：前記ヌクレアーゼは、担体上に固定化されている、先行条項のいずれかに記載のヌクレアーゼ。
【0562】
条項１３２：ポリヌクレオチド基質、好ましくは、サンプルに含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解する方法であって、（ａ）先行条項のいずれかに記載の、好ましくは条項１８から１２６のいずれかに記載のヌクレアーゼを準備するステップと；（ｂ）ポリヌクレオチド基質を含む組成物を準備するステップと；（ｃ）ステップ（ｂ）で準備された前記組成物中の前記ポリヌクレオチド基質をステップ（ａ）で準備された前記ヌクレアーゼと接触させ、前記ヌクレアーゼに前記ポリヌクレオチド基質を加水分解させるステップと、それによって、切断されたポリヌクレオチドを含む組成物を得る、方法。
【0563】
条項１３３：前記ヌクレアーゼは、前記ポリヌクレオチド基質を、切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに加水分解している、条項１３２に記載の方法。
【0564】
条項１３４：ステップ（ｃ）は、４℃から９０℃の間；好ましくは１０℃から８０℃の間；より好ましくは２０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間；さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間；最も好ましくは３７℃；または２０℃から９０℃の間；好ましくは２３℃から８０℃の間；より好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間；さらにより好ましくは５０℃および６５℃；最も好ましくは５１℃；または４℃から６５℃の間；好ましくは４℃から３８℃の間；より好ましくは４℃から２５℃の間；さらにより好ましくは４℃から２０℃の間；さらにより好ましくは４℃から１５℃の間；さらにより好ましくは４℃から１０℃の間；最も好ましくは４℃から６℃の間、最高に好ましくは５℃の温度で行われる、条項１３２または１３３に記載の方法。
【0565】
条項１３５：ステップ（ｃ）は、２０℃から４２℃の間、好ましくは２５℃から４２℃の間、より好ましくは２８℃から４０℃の間、さらにより好ましくは３７℃の温度で行われる、条項１３２から１３４のいずれかに記載の方法。
【0566】
条項１３６：ステップ（ｃ）は、３０℃から６５℃の間、好ましくは３０℃から５５℃の間、より好ましくは４０℃から５２℃の間、さらにより好ましくは５１℃の温度で行われる、条項１３２から１３５のいずれかに記載の方法。
【0567】
条項１３７：ステップ（ｃ）は、４℃から２５℃の間、好ましくは４℃から１５℃の間、より好ましくは４℃から１０℃の間、さらにより好ましくは４℃から６℃の間、さらにより好ましくは５℃の温度で行われる、条項１３２から１３６のいずれかに記載の方法。
【0568】
条項１３８：ステップ（ｃ）は、塩の存在下において行われ、前記塩は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ、好ましくはＮａＣｌである、条項１３２から１３７のいずれかに記載の方法。
【0569】
条項１３９：ステップ（ｃ）は、０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で行われる、条項１３２から１３８のいずれかに記載の方法。
【0570】
条項１４０：ステップ（ｃ）は、塩の非存在下において行われる、条項１３２から１３７のいずれかに記載の方法。
【0571】
条項１４１：（ｄ）ステップ（ｃ）の後に前記ヌクレアーゼを不活性化する追加のステップを含み、それによって、切断されたポリヌクレオチドおよび不活性化ヌクレアーゼを含む組成物を得る、条項１３２から１４０のいずれかに記載の方法。
【0572】
条項１４２：ステップ（ｄ）における前記ヌクレアーゼの前記不活性化は、（ａ）加熱不活性化によって；および／または（ｂ）前記組成物のｐＨ値をｐＨ５未満に低下させることによって；および／または（ｃ）前記組成物の前記ｐＨ値をｐＨ１１超に上昇させることによって；および／または（ｄ）前記組成物にキレート剤を添加することによって；および／または（ｅ）前記組成物に酸化剤を添加することによって；および／または（ｆ）タンパク質変性剤、好ましくは界面活性剤を添加することによって；および／または（ｇ）タンパク質を加水分解する酵素、好ましくはプロテアーゼを添加することによって行われる、条項１４１に記載の方法。
【0573】
条項１４３：（ｅ）ステップ（ｃ）で得られた切断されたポリヌクレオチドおよび任意にステップ（ｄ）で得られた不活性化ヌクレアーゼを含む前記組成物から前記ヌクレアーゼを分離する追加のステップを含む、条項１３２から１４２のいずれかに記載の方法。
【0574】
条項１４４：ステップ（ｅ）は、クロマトグラフィー法、および／または限外ろ過、および／またはタンジェンシャルフローろ過の使用により行われる、条項１４３に記載の方法。
【0575】
条項１４５：ポリヌクレオチド基質、好ましくは、組成物に含まれるポリヌクレオチド基質を加水分解するための、条項１から１３１のいずれかに記載の、好ましくは条項１８から１２６のいずれかに記載のヌクレアーゼの使用。
【0576】
条項１４６：前記組成物中の前記ポリヌクレオチド基質は、細胞；好ましくは、真核生物ドメイン由来の細胞；好ましくは不死化細胞株、もしくは幹細胞、もしくは組織細胞、もしくは真菌細胞；より好ましくは、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ種由来、もしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の種由来、もしくはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の種由来；および／または細菌ドメイン由来の細胞；好ましくは、細菌細胞；より好ましくはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ種由来、もしくはＢａｃｉｌｌｕｓ属の種由来；および／または古細菌ドメイン由来の細胞から選択される細胞由来である、条項１４５に記載の使用。
【0577】
条項１４７：前記ポリヌクレオチド基質は、細胞破壊、分泌、溶解、または細胞破裂によって細胞から前記組成物に放出される、条項１４５または１４６に記載の使用。
【0578】
条項１４８：前記組成物は、細胞発酵プロセスからの溶解細胞由来である、条項１４５から１４７のいずれかに記載の使用。
【0579】
条項１４９：前記組成物は、バイオ医薬品、医薬組成物、医薬、ワクチン、またはウイルスベクターの生成プロセスからの中間生成物または生成物である、条項１４５から１４８のいずれかに記載の使用。
【0580】
条項１５０：前記ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、植物ウイルス、バクテリオファージ、およびハイブリッドベクターウイルスからなる群から選択される、条項１４９に記載の使用。
【0581】
条項１５１：前記組成物は、体外診断に使用するための患者組織サンプルの調製中の中間生成物または生成物である、条項１４９に記載の使用。
【0582】
条項１５２：前記バイオ医薬品、医薬組成物、医薬、ワクチン、またはウイルスベクターは、遺伝子療法、および／または組織療法、および／または体外診断に使用される、条項１４９から１５１のいずれかに記載の使用。
【0583】
条項１５３：細胞ライセートにおける粘度の低下のための、条項１４５から１５２のいずれかに記載の使用。
【0584】
条項１５４：電気泳動および／またはクロマトグラフィー法におけるサンプル調製のための、条項１４５から１５３のいずれかに記載の使用。
【0585】
条項１５５：（ａ）４℃から９０℃の間；好ましくは１０℃から８０℃の間；より好ましくは２０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から５０℃の間；さらにより好ましくは３４℃から４２℃の間；最も好ましくは３７℃；または（ｂ）２０℃から９０℃の間；好ましくは２３℃から８０℃の間；より好ましくは２５℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３０℃から６５℃の間；さらにより好ましくは３７℃から６５℃の間；さらにより好ましくは５０℃および６５℃；最も好ましくは５１℃；または（ｃ）４℃から６５℃の間；好ましくは４℃から３８℃の間；より好ましくは４℃から２５℃の間；さらにより好ましくは４℃から２０℃の間；さらにより好ましくは４℃から１５℃の間；さらにより好ましくは４℃から１０℃の間；最も好ましくは４℃から６℃の間、最高に好ましくは５℃の温度で行われる、条項１４５から１５４のいずれかに記載の使用。
【0586】
条項１５６：０．００Ｍから１．００Ｍ、または０．０１Ｍから１．００Ｍ、好ましくは０．１５Ｍから０．８５Ｍ、より好ましくは０．２０Ｍから０．７０Ｍ、さらにより好ましくは０．２５Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３０Ｍから０．６０Ｍ、さらにより好ましくは０．３５Ｍから０．６０Ｍ、最も好ましくは０．４０Ｍから０．６０Ｍ、および特に０．５０Ｍの塩濃度で行われる、条項１４５から１５５のいずれかに記載の使用。
【0587】
条項１５７：塩の非存在下において行われる、条項１４５から１５５のいずれかに記載の使用。
【0588】
条項１５８：ポリヌクレオチドを切断するためのキットであって、前記キットは、条項１から１３１のいずれかに記載の、好ましくは条項１８から１２６のいずれかに記載のヌクレアーゼと、ポリヌクレオチド基質を加水分解するためのバッファーと、任意に前記ヌクレアーゼの不活性化および／または除去のための薬剤および／またはデバイスとを含み、好ましくは、前記キットは、条項１３２から１４４のいずれかに記載の方法、または条項１４５から１５６のいずれかに記載の使用に使用するためのものである、前記キット。
【実施例】
【0589】
以下の実施例は、本発明をさらに例示するが、その範囲を制限すると解釈されるべきではない。
【0590】
＜実施例１：一般的な方法＞
バリアントの設計および発現：タンパク質配列、配列番号１を有し、その天然シグナルペプチド配列は有しないＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼをコードする遺伝子をＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓにおける発現のためにコドン最適化し、Ｂａｃｉｌｌｕｓ発現プラスミドベクターｐＬＥ２Ｅ０２にクローニングした。ヌクレアーゼの発現および分泌のために、培養培地へのエンドヌクレアーゼの適切な分泌のためのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来のＡｍｙＥの分泌配列をコードする配列に遺伝子を融合した。プラスミドベクターｐＬＥ２Ｅ０２は、組み換えヌクレアーゼ発現の誘導のためのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓのマルトース誘導性プロモーター、選択のためのクロラムフェニコール耐性遺伝子およびＢａｃｉｌｌｕｓ宿主細胞における複製のための機能エレメントを含む。Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＬＥ２Ａ１０６（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＤＳＭ番号４０２の類縁体）の形質転換のために得られたプラスミドを使用した。
バリアントの設計および発現：タンパク質配列、配列番号１を有し、その天然シグナルペプチド配列は有しないＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼをコードする遺伝子をＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓにおける発現のためにコドン最適化し、Ｂａｃｉｌｌｕｓ発現プラスミドベクターｐＬＥ２Ｅ０２にクローニングした。ヌクレアーゼの発現および分泌のために、培養培地へのエンドヌクレアーゼの適切な分泌のためのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来のＡｍｙＥの分泌配列をコードする配列に遺伝子を融合した。プラスミドベクターｐＬＥ２Ｅ０２は、組み換えヌクレアーゼ発現の誘導のためのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓのマルトース誘導性プロモーター、選択のためのクロラムフェニコール耐性遺伝子およびＢａｃｉｌｌｕｓ宿主細胞における複製のための機能エレメントを含む。Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＬＥ２Ａ１０６（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＤＳＭ番号４０２の類縁体）の形質転換のために得られたプラスミドを使用した。
【0591】
Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼのバリアントを当業者に既知の標準的な部位特異的変異誘発技術によって作り出し、組み換え発現させた。配列番号１の例示的なバリアントを表１に列挙する。
【0592】
９６ディープウェルプレートにおいて、１０μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールおよび１ｍＭのＭｇＳＯ４を含むＬＢ培地（１０ｇ／ｌのトリプトン、５ｇ／ｌの酵母エキス、１０ｇ／ｌのＮａＣｌ、ｐＨ７．０）中で、組み換えＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼ酵素を通常どおりに発現させた。前培養物の培養のために、培地に２％グルコースを加え、１ウェル当たり０．４ｍｌの培地に単一のクローンを接種し、３７℃にて、撹拌のために１０００ｒｐｍで一晩インキュベートした。発現培養のために、培地に０．０５％グルコースおよび２％マルトースを加え、１ウェル当たり１ｍｌの培地に１０μｌの新鮮な一晩前培養物を接種した。ヌクレアーゼの発現および培地への分泌のために培養物を振盪しながら３０℃で１９時間インキュベートした。分泌されたヌクレアーゼを含む上清を、遠心分離（３３００×ｇ；２０分；４℃）によって細胞から分離し、得られた酵素サンプルをさらなる分析のために使用した。
【0593】
＜実施例２：ヌクレアーゼ活性アッセイ＞
ヌクレアーゼ活性アッセイは、２６０ｎｍにおける吸光度の増加をもたらす、ＤＮＡ基質（ポリヌクレオチド基質）からの短い酸可溶性オリゴヌクレオチド（切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド）の放出に基づく。
ヌクレアーゼ活性アッセイは、２６０ｎｍにおける吸光度の増加をもたらす、ＤＮＡ基質（ポリヌクレオチド基質）からの短い酸可溶性オリゴヌクレオチド（切断されたポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド）の放出に基づく。
【0594】
試験対象の酵素サンプルを、通常、試験前に遠心分離（３３００×ｇ；約２０分；４℃）によって細胞、細胞片、または事前のあらゆるステップ（例えば実施例１に記載の宿主細胞からの発現または実施例３に記載のＴ安定性におけるインキュベーションなど）から生じる可能性のあるあらゆる変性タンパク質もしくは粒子から分離した。
【0595】
第１のステップでは、酵素サンプルを酵素希釈バッファー（５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ）において、この実施例２の下記ステップ５の後に記載されているとおりに選択された希釈係数（Ｄ）によって適切な希釈物に希釈した。並行して、いかなるヌクレアーゼも含まない酵素希釈バッファーのみを含むバックグラウンド対照サンプルを準備した。
【0596】
任意に、例えば、実施例４に記載されているとおりにＳ高活性、またはＳ低活性のような特定の塩濃度で酵素活性を試験する場合、基質バッファーの特定の塩濃度は調節されてもよい。
【0597】
希釈されたヌクレアーゼサンプル、対照サンプル、および基質バッファー（５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、１ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログＮｏ．Ｄ１６２６））を、第２のステップにおいて別々に９６ウェルマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）中で３０℃に予め加熱した。
【0598】
第３のステップでは、ＭＴＰ中でそれぞれ２０μｌのヌクレアーゼサンプル、または対照サンプルを８０μｌの基質バッファーと混合することによって反応物を準備した。反応物を３０℃で６０分間インキュベートした。反応物中のポリヌクレオチド基質の最終濃度は、０．８ｍｇ／ｍｌのサケ精巣由来のＤＮＡナトリウム塩である。次に、各ウェルに１容量（１００μｌ）の４％過塩素酸を添加することによって反応を止めた。
【0599】
任意に、例えば、実施例５に記載のＴ低活性、またはＴ高活性のような低温または高温で酵素活性を試験する場合、反応物は予熱または反応において異なる反応温度でインキュベートされてもよい。
【0600】
第４のステップでは、ステップ３からの反応停止アッセイサンプルを氷上で４５から６０分間インキュベートして、確実に未変換ＤＮＡを完全に沈殿させ、次に、沈殿したＤＮＡを遠心分離（３８００×ｇ；３０分；４℃）によって除去した。
【0601】
第５のステップでは、１００μｌの上清を平底ＵＶ透過性ＭＴＰに移し、吸光度を２６０ｎｍで測定した。対照ウェルの吸光度シグナル（ヌクレアーゼを含まない反応物）をヌクレアーゼ含有ウェルから差し引いて、正規化吸光度（「Ａ２６０」）を算出した。
【0602】
アッセイは、０～１．９のＡ２６０値の範囲においてヌクレアーゼ活性に対して直線的であった。サンプルの比較検出のために、ヌクレアーゼ活性アッセイにおいて酵素サンプルに提供されるヌクレアーゼの量は、Ａ２６０値がアッセイの線形範囲内にあるように調節される必要がある。これは、ステップ１の適切な希釈係数（Ｄ）での酵素サンプルの希釈によって達成される。ステップ５で測定された検出Ａ２６０値に希釈係数（Ｄ）を掛けて、試験された酵素量に補正された酵素活性を算出した。
【0603】
＜実施例３：熱安定性の検出＞
熱安定性は、高温での所与の時間のインキュベーション時に酵素活性を保持するヌクレアーゼ酵素の特性と定義される。熱安定性は、２３℃でのインキュベーション後の残存活性と比較した５１℃での１５分間のインキュベーション後のヌクレアーゼの残存活性として表される。配列番号１は、５１℃でのインキュベーション後におよそ１０～２０％の残存活性を示す。
熱安定性は、高温での所与の時間のインキュベーション時に酵素活性を保持するヌクレアーゼ酵素の特性と定義される。熱安定性は、２３℃でのインキュベーション後の残存活性と比較した５１℃での１５分間のインキュベーション後のヌクレアーゼの残存活性として表される。配列番号１は、５１℃でのインキュベーション後におよそ１０～２０％の残存活性を示す。
【0604】
Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ野生型（配列番号１）およびバリアントの熱安定性を判定するために、対応する酵素サンプルを、酵素希釈バッファー（５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ）において適切な希釈係数（Ｄ）で希釈した。各酵素サンプルについて、酵素希釈物の７０μｌのアリコートを、第１の容器中において５１℃（Ｔ安定性）で１５分間インキュベートし、第２の７０μｌのアリコートを、基準活性のために第２の容器中において別に２３℃（Ｔ２３℃）でインキュベートした。対応する温度でのインキュベーション後、サンプルを再生のために氷上で１５分間インキュベートし、変性タンパク質を遠心分離（３３００×ｇ；１５分；４℃）によって分離した。各上清を新しい容器に移し、各上清中のヌクレアーゼ活性を実施例２に記載のヌクレアーゼ活性アッセイを使用して測定した。ヌクレアーゼ活性アッセイにおける酵素活性を、それぞれ、ＮａＣｌを伴わず、または１５０ｍＭ ＮａＣｌの塩濃度で測定し、それぞれの場合、温度は３０℃とした。
【0605】
個々のそれぞれの酵素サンプルの残存活性を計算するために、Ｔ安定性でインキュベートしたサンプルの吸光度値Ａ２６０とＴ２３℃でインキュベートしたサンプルの吸光度値Ａ２６０の比（Ａ２６０［Ｔ安定性］：Ａ２６０［Ｔ２３℃］）を計算した。
【0606】
配列番号１と比較した酵素サンプルの熱安定性を計算するために、そのような酵素バリアントの残存活性と配列番号１の残存活性の比を計算する。配列番号１よりも向上した残存活性を示すバリアントは、配列番号１の熱安定性と比較して高い熱安定性を有する。バリアントの向上した熱安定性は、配列番号１と比較してｘ倍の向上と表わす。配列番号１と比較したバリアントの向上した熱安定性を表２に列挙する。
【0607】
【0608】
【0609】
表２ａおよび２ｂのデータは、本発明によるヌクレアーゼが配列番号１と比較して改善された熱安定性を有することを示している。改善された熱安定性は、特に位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４における置換、特に位置Ｐ５１もしくはＴ５６における負電荷アミノ酸もしくは脂肪族非極性アミノ酸の置換、位置Ｔ７７における正電荷アミノ酸、芳香族アミノ酸、もしくは脂肪族非極性アミノ酸の置換、または位置Ａ１２４における正電荷アミノ酸の置換、とりわけ、単独でまたは互いに組み合わせてＰ５１Ｌ、Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｇ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、およびＡ１２４Ｋからなる群から選択される置換に依存する。
【0610】
改善された熱安定性はまた、位置Ｋ５５、Ｎ５８、Ａ７４、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｅ２３９における置換、特に位置Ｋ５５、Ａ７４、もしくはＮ８０における正電荷アミノ酸の置換、位置Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ１３５、Ｄ１９１、もしくはＥ２３９における脂肪族非極性アミノ酸の置換、位置Ｄ１２８、もしくはＤ１２８における芳香族アミノ酸の置換、または位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１３５、もしくはＲ２０４における脂肪族極性無電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独でまたは互いに組み合わせてＫ５５Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７４Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１９１Ｐ、Ｒ２０４Ｑ、Ｅ２３９Ａからなる群から選択される置換にも依存する。
【0611】
＜実施例４：塩活性および相対塩活性の検出＞
Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ野生型（配列番号１）およびバリアントの塩活性を判定するために、対応する酵素サンプルをヌクレアーゼ活性アッセイ（実施例２）に記載されているとおりに分析した。ステップ３の反応中の特定の塩濃度Ｓ低（Ｓ低活性に関して）またはＳ高（Ｓ高活性に関して）を調節するために、ステップ２の基質バッファーの塩濃度を、それぞれ、酵素サンプルまたは対照サンプルとの混合時にそれぞれ最終濃度Ｓ低またはＳ高が得られるように変更する。
Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ野生型（配列番号１）およびバリアントの塩活性を判定するために、対応する酵素サンプルをヌクレアーゼ活性アッセイ（実施例２）に記載されているとおりに分析した。ステップ３の反応中の特定の塩濃度Ｓ低（Ｓ低活性に関して）またはＳ高（Ｓ高活性に関して）を調節するために、ステップ２の基質バッファーの塩濃度を、それぞれ、酵素サンプルまたは対照サンプルとの混合時にそれぞれ最終濃度Ｓ低またはＳ高が得られるように変更する。
【0612】
具体的には、各酵素サンプルを、０ｍＭ ＮａＣｌ（ＮａＣｌを含まない）の塩濃度Ｓ低および５００ｍＭ ＮａＣｌの塩濃度Ｓ高（サンプルとの混合後に５００ｍＭ ＮａＣｌの最終濃度にするために、基質バッファーを６２５ｍＭ ＮａＣｌに調節した）でインキュベートした。各塩濃度における酵素活性をヌクレアーゼ活性アッセイに記載されているとおりに測定した。Ｓ低におけるＡ２６０値はＳ低活性に対応し、Ｓ高におけるＡ２６０値はＳ高活性に対応する。相対塩活性は、Ｓ高活性とＳ低活性の比（それぞれ、Ａ２６０［Ｓ高］：Ａ２６０［Ｓ低］、またはＳ高活性：Ｓ低活性）に対応する。
【0613】
表３は、５００ｍＭ ＮａＣｌの塩濃度Ｓ高および塩を含まない塩濃度Ｓ低における配列番号１の相対塩活性と比較した配列番号１のバリアントの相対塩活性（Ｓ高活性：Ｓ低活性）を示す。表４は、５００ｍＭ ＮａＣｌにおける配列番号１のＳ高活性と比較した配列番号１のバリアントのＳ高活性を示す。
【0614】
【0615】
表３のデータは、本発明によるヌクレアーゼが配列番号１の相対塩活性と比較して改善された相対塩活性を有することを示している。改善された相対塩活性は、特に位置Ｐ５１、Ｔ７７、およびＡ１２４における置換、特に位置Ｐ５１における脂肪族非極性アミノ酸の置換（配列番号２もしくは４）、または位置Ｔ７７における正電荷アミノ酸の置換（配列番号２２もしくは２４）、または位置Ａ１２４における正電荷アミノ酸の置換（配列番号３４、３５）に依存する。本発明によるすべての置換が実現される場合、例えば、配列番号５５、５７、５８、５９、６１、６４、６６、６９、１３２、１３３、１３９、１４０、または１４３において、相乗効果さえ観察され得る。
【0616】
表３のデータは、本発明によるヌクレアーゼが配列番号１の相対塩活性と比較して改善された相対塩活性を有することを示している。改善された相対塩活性は、特に位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４における置換、特に位置Ｐ５１における正電荷アミノ酸もしくは脂肪族非極性アミノ酸の置換、位置Ｔ５６における正電荷アミノ酸の置換、または位置Ｔ７７における芳香族アミノ酸、もしくは正電荷アミノ酸の置換、または位置Ａ１２４における正電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｒ、Ａ１２４ＲおよびＡ１２４Ｋからなる群から選択される置換に依存する。
【0617】
配列番号１の相対塩活性と比較して改善された相対塩活性はまた、位置Ｋ５５、Ｎ５８、Ａ７４、Ｎ８０、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｄ１９１、Ｒ２０４、Ｅ２３９における置換、特に位置Ｓ５３、Ｋ５５、Ｎ５８、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ７４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｇ１９７、もしくはＤ１９９における正電荷アミノ酸の置換、位置Ｓ５３、Ｄ１１７、Ｄ１２８、もしくはＤ１３５における脂肪族非極性アミノ酸の置換、位置Ｄ１２８、もしくはＤ１２８における芳香族アミノ酸の置換、または位置Ｄ８６、Ｄ１１７、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９９、もしくはＤ１９９における脂肪族極性無電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｓ５３、Ｓ５３、Ｋ５５、Ｎ５８、Ｎ５８、Ａ７２、Ｐ７３、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ７４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１１７、Ｄ１１７、Ｄ１１７、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｄ１９９、Ｄ１９９からなる群から選択される置換にも依存する。
【0618】
さらに、位置Ｑ１２０およびＱ１２９における置換、特に負電荷アミノ酸による置換、とりわけ置換Ｑ１２０ＲまたはＱ１２９Ｒは、配列番号１の相対塩活性と比較してヌクレアーゼバリアントの相対塩活性に関してさらに有益な効果を示す。
【0619】
【0620】
表４のデータは、本発明によるヌクレアーゼが配列番号１の相対塩活性と比較して改善された相対塩活性を有することを示している。改善された相対塩活性は、特に位置Ｐ５１、Ｔ７７、およびＡ１２４における置換、特に位置Ｐ５１における脂肪族非極性アミノ酸の置換（配列番号２もしくは４）、または位置Ｔ７７における正電荷アミノ酸の置換（配列番号２２もしくは２４）、または位置Ａ１２４における正電荷アミノ酸の置換（配列番号３４、３５）に依存する。本発明によるすべての置換が実現される場合、例えば、配列番号５５、５７、５８、５９、６１、６４、１３２、１３３、１３９、１４０、または１４３において、相乗効果さえ観察され得る。
【0621】
表４のデータは、本発明によるヌクレアーゼが配列番号１のＳ高活性と比較して改善されたＳ高活性を有することを示している。改善されたＳ高活性は、特に位置Ｐ５１、Ｔ５６、Ｔ７７、およびＡ１２４における置換、特に位置Ｐ５１における正電荷アミノ酸もしくは脂肪族非極性アミノ酸の置換、位置Ｔ５６における正電荷アミノ酸の置換、位置Ｔ７７における正電荷アミノ酸の置換、または位置Ａ１２４における正電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７ＲおよびＡ１２４Ｋからなる群から選択される置換に依存する。
【0622】
改善されたＳ高活性はまた、位置Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ａ７４、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、およびＤ１３５における置換、特に位置Ｓ５３、Ｎ５８、Ｎ５８、Ａ７２、Ａ７４、Ａ７４、Ｄ１２８、もしくはＤ１３５における正電荷アミノ酸の置換、位置Ｄ１２８における芳香族アミノ酸の置換、または位置Ｄ１２８における脂肪族極性無電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｓ５３Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ａ７２Ｋ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、およびＤ１３５Ｒからなる群から選択される置換にも依存する。
【0623】
さらに、位置Ｑ１２０およびＱ１２９における置換、特に負電荷アミノ酸による置換、とりわけ置換Ｑ１２０ＲまたはＱ１２９Ｒは、ヌクレアーゼバリアントの改善されたＳ高活性に関してさらに有益な効果を示す。
【0624】
＜実施例５：低温活性および相対低温活性アッセイの検出＞
Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ野生型（配列番号１）およびバリアントの低温活性を判定するために、対応する酵素サンプルを、それぞれプレインキュベーション（ステップ２）およびステップ３の反応の間に温度をＴ低（Ｔ低活性に関して）またはＴ高（Ｔ高活性に関して）のいずれかに調節する以外は、ヌクレアーゼ活性アッセイ（実施例２）に記載されているとおりに分析した。
Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ野生型（配列番号１）およびバリアントの低温活性を判定するために、対応する酵素サンプルを、それぞれプレインキュベーション（ステップ２）およびステップ３の反応の間に温度をＴ低（Ｔ低活性に関して）またはＴ高（Ｔ高活性に関して）のいずれかに調節する以外は、ヌクレアーゼ活性アッセイ（実施例２）に記載されているとおりに分析した。
【0625】
具体的には、各酵素サンプルを、５℃のＴ低または３０℃のＴ高でインキュベートした。各温度における酵素活性をヌクレアーゼ活性アッセイに記載されているとおりに測定した。Ｔ低におけるＡ２６０値はＴ低活性に対応し、Ｔ高におけるＡ２６０値はＴ高活性に対応する。相対低温活性は、Ｔ低活性とＴ高活性の比（それぞれ、Ａ２６０［Ｔ低］：Ａ２６０［Ｔ高］、またはＴ低活性：Ｔ高活性）に対応する。
【0626】
表５は、それぞれ、５℃のＴ低および３０℃のＴ高の温度の配列番号１の相対低温活性と比較した配列番号１のバリアントの相対低温活性を示している。表６は、それぞれ、５℃における配列番号１のＴ低活性と比較した配列番号１のバリアントのＴ低活性の比を示している。
【0627】
【0628】
【0629】
表５ａ／ｂのデータは、本発明によるヌクレアーゼが配列番号１の相対低温活性と比較して相対低温活性を有することを示している。改善された相対低温活性は、特に位置Ｐ５１、Ｔ５６、およびＴ７７における置換、特に位置Ｐ５１もしくはＴ５６における正電荷アミノ酸、負電荷アミノ酸、もしくは脂肪族非極性アミノ酸の置換、または位置Ｔ７７における芳香族アミノ酸、脂肪族非極性アミノ酸、もしくは正電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｐ５１Ｌ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｄ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ７７Ｌ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｆ、およびＴ７７Ｒからなる群から選択される置換に依存する。
【0630】
改善された相対低温活性はまた、位置Ｋ５５、Ｎ５８、Ｎ５８、Ｎ５８、Ｐ７３、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ７４、Ｋ８４、Ｄ８６、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｇ１９７、Ｄ１９９、Ｄ１９９、およびＤ１９９における置換、特に位置Ｋ５５、Ｎ５８、Ｎ５８、Ｐ７３、Ｐ７３、Ａ７４、Ａ７４、Ｓ１１６、Ｄ１１７、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１３５、Ｇ１９７、もしくはＤ１９９Ｋにおける正電荷アミノ酸の置換、位置Ｎ５８、Ｋ８４、Ｄ１２８、もしくはＤ１３５における脂肪族非極性アミノ酸の置換、位置Ｄ１２８、もしくはＤ１２８における芳香族アミノ酸の置換、または位置Ｄ８６、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１２８、Ｄ１３５、Ｄ１９９、もしくはＤ１９９における脂肪族極性無電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｋ５５Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｋ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｋ、およびＤ１９９Ｓからなる群から選択される置換にも依存する。
【0631】
【0632】
【0633】
表６ａ／ｂのデータは、本発明によるヌクレアーゼが配列番号１のＴ低活性と比較して向上したＴ低活性を有することを示している。改善されたＴ低活性は、特に位置Ｐ５１、Ｔ５６、およびＴ７７における置換、特に位置Ｐ５１における脂肪族非極性アミノ酸の置換、または位置における脂肪族非極性アミノ酸の置換、または位置Ｔ５６における負電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｐ５１Ｌ、Ｔ５６Ｐ、およびＴ５６Ｄからなる群から選択される置換に依存する。
【0634】
改善されたＴ低活性はまた、位置Ｎ５８およびＤ８６における置換、特に位置Ｎ５８における脂肪族非極性アミノ酸の置換、または位置Ｄ８６における脂肪族極性無電荷アミノ酸の置換、とりわけ単独で、または互いに組み合わせて、Ｎ５８ＶおよびＤ８６Ｓからなる群から選択される置換にも依存する。
【0635】
＜実施例６：さまざまなヌクレアーゼの塩活性プロファイル＞
配列番号１と、バリアント配列番号５５および配列番号５９と、市販の塩活性ヌクレアーゼ（ＳＡＮ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログＮｏ．ＳＲＥ００１５）の塩活性プロファイルを比較した。ＳＡＮは、高濃度の塩で最適な酵素活性を示す一般的な非特異的エンドヌクレアーゼである。ＳＡＮのアミノ酸配列は、本出願の配列番号１０３と対応すると考えられ、これは、好冷好塩性（ｐｓｙｃｈｒｏ－ｈａｌｏｐｈｉｌｉｃ）海洋細菌Ｖｉｂｒｉｏ ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ（別称：Ａｌｉｉｖｉｂｒｉｏ ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ）由来の、ＷＯ２０１３１２１２２８Ａ１／ＵＳ９６５０６１８Ｂ２で配列番号４として開示されているエンドヌクレアーゼＩ、またはそのバリアントである。
配列番号１と、バリアント配列番号５５および配列番号５９と、市販の塩活性ヌクレアーゼ（ＳＡＮ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログＮｏ．ＳＲＥ００１５）の塩活性プロファイルを比較した。ＳＡＮは、高濃度の塩で最適な酵素活性を示す一般的な非特異的エンドヌクレアーゼである。ＳＡＮのアミノ酸配列は、本出願の配列番号１０３と対応すると考えられ、これは、好冷好塩性（ｐｓｙｃｈｒｏ－ｈａｌｏｐｈｉｌｉｃ）海洋細菌Ｖｉｂｒｉｏ ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ（別称：Ａｌｉｉｖｉｂｒｉｏ ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ）由来の、ＷＯ２０１３１２１２２８Ａ１／ＵＳ９６５０６１８Ｂ２で配列番号４として開示されているエンドヌクレアーゼＩ、またはそのバリアントである。
【0636】
ヌクレアーゼ酵素の塩活性を、ヌクレアーゼ活性アッセイ（実施例２）に記載されているとおりに分析した。それぞれの酵素に関して、特にＳＡＮに関して、予備試験で適切な希釈係数（Ｄ）を求めた。ステップ３の反応中の特定の塩濃度Ｓ低（Ｓ低活性に関して）またはＳ高（Ｓ高活性に関して）を調節するために、ステップ２の基質バッファーの塩濃度を、酵素サンプルまたは対照サンプルとの混合時にそれぞれ以下の最終濃度Ｓ低またはＳ高が得られるように変更した：
【0637】
反応における最終塩濃度：Ｓ低：０ｍＭ ＮａＣｌ、Ｓ高－１：１００ｍＭ ＮａＣｌ、Ｓ高－２：３００ｍＭ ＮａＣｌ、Ｓ高－３：５００ｍＭ ＮａＣｌ、Ｓ高－４：６５０ｍＭ ＮａＣｌ、Ｓ高－５：８００ｍＭ ＮａＣｌ。各塩濃度における酵素活性をヌクレアーゼ活性アッセイに記載されているとおりに測定した。Ｓ低およびそれぞれの対応するＳ高におけるＡ２６０値は、それぞれのＳ低またはＳ高活性に対応する。
【0638】
各酵素に対して、最大Ｓ高活性値が検出された濃度を１００％と定義し、他の濃度で検出された酵素活性値を、パーセンテージとしてその最大値と比較した相対酵素活性として表わし、各酵素に関する塩活性プロファイルを得た。各酵素に関する塩活性プロファイルを表５に列挙する。
【0639】
【0640】
表５のデータは、本発明による配列番号１のヌクレアーゼバリアントが配列番号１の野生型酵素よりも高濃度で最大塩活性を示し、生理的条件（約１００ｍＭ）から非常に高塩条件（８００ｍＭ以上）の間の最適な塩濃度範囲を含むことを示している。
【0641】
＜実施例７：Ｓｅｒｒａｔｉａ ｆｉｃａｒｉａ（配列番号１０４）およびＳｅｒｒａｔｉａ ｏｄｏｒｉｆｅｒａ（配列番号１０５）ならびにそれらのバリアントのエンドヌクレアーゼの発現および分析＞
配列番号１０４および配列番号１０５を有するＳｅｒｒａｔｉａ ｆｉｃａｒｉａおよびＳｅｒｒａｔｉａ ｏｄｏｒｉｆｅｒａのヌクレアーゼの遺伝子を、配列番号１に関して実施例１に記載されているとおりにコドン最適化し、クローニングし、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓで発現させる。
配列番号１０４および配列番号１０５を有するＳｅｒｒａｔｉａ ｆｉｃａｒｉａおよびＳｅｒｒａｔｉａ ｏｄｏｒｉｆｅｒａのヌクレアーゼの遺伝子を、配列番号１に関して実施例１に記載されているとおりにコドン最適化し、クローニングし、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓで発現させる。
【0642】
配列番号１０４および配列番号１０５のバリアントを、本明細書に従って確立された配列アラインメントにおける配列番号１の位置Ｐ５１Ｄ、Ｐ５１Ｒ、Ｐ５１Ｇ、Ｐ５１Ｌ、Ｓ５３Ｋ、Ｓ５３Ａ、Ｋ５５Ｈ、Ｋ５５Ｒ、Ｔ５６Ｓ、Ｔ５６Ｍ、Ｔ５６Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｇ、Ｔ５６Ａ、Ｔ５６Ｖ、Ｔ５６Ｌ、Ｔ５６Ｉ、Ｔ５６Ｆ、Ｔ５６Ｐ、Ｔ５６Ｄ、Ｎ５８Ｋ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｖ、Ａ７２Ｋ、Ａ７２Ｈ、Ａ７２Ｒ、Ｐ７３Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｋ、Ａ７４Ｈ、Ａ７４Ｒ、Ｔ７７Ｋ、Ｔ７７Ｒ、Ｔ７７Ｆ、Ｔ７７Ｌ、Ｎ８０Ｋ、Ｎ８０Ｒ、Ｎ８０Ｈ、Ｋ８４Ｇ、Ｄ８６Ｓ、Ｓ１１６Ｋ、Ｄ１１７Ａ、Ｄ１１７Ｎ、Ｄ１１７Ｙ、Ｄ１１７Ｋ、Ｄ１１７Ｈ、Ｄ１１７Ｒ、Ｄ１１７Ｓ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、Ｄ１２８Ｇ、Ｄ１２８Ｙ、Ｄ１２８Ｆ、Ｄ１２８Ｍ、Ｄ１２８Ｎ、Ｄ１２８Ｓ、Ｄ１２８Ｒ、Ｄ１２８Ｋ、Ｑ１２９Ｒ、Ｋ１３２Ｒ、Ｄ１３５Ａ、Ｄ１３５Ｍ、Ｄ１３５Ｇ、Ｄ１３５Ｎ、Ｄ１３５Ｒ、Ｄ１３５Ｋ、Ｄ１９１Ｐ、Ｋ１９６Ｒ、Ｇ１９７Ｋ、Ｄ１９９Ｎ、Ｄ１９９Ｓ、Ｄ１９９Ｋ、Ｒ２０４Ｑ、およびＥ２３９Ａと対応する１つ以上の位置における置換により作り出し、実施例１に記載されているとおりに発現させる。
【0643】
配列番号１０４および配列番号１０５ならびにそのバリアントの熱安定性、塩（Ｓ高）活性、相対塩活性、低温（Ｔ低）活性および相対低温活性を実施例２、３、４および５に記載されているとおりに分析する。
【0644】
配列番号１０４および配列番号１０５のバリアントは、それぞれ、その対応する野生型酵素、配列番号１０４および配列番号１０５よりも高い残存活性を示し、これは、それらが野生型ヌクレアーゼと比較して改善された熱安定性を持つことを意味する。
【0645】
さらに、配列番号１０４および配列番号１０５のバリアントは、それぞれ、対応する野生型酵素、配列番号１０４および配列番号１０５よりも高い相対塩活性および／またはＳ高活性を示す。
【0646】
配列番号１０４および配列番号１０５の特定のバリアントは、それぞれ、対応する野生型酵素、配列番号１０４および配列番号１０５よりも高い相対低温活性および／またはＴ低活性を示す。
【0647】
＜実施例８：配列番号１およびそのバリアントの物理化学的特徴の計算＞
配列番号１とＤＮＡの間の相互作用のモデル化：Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼの結晶構造（タンパク質データバンク受入コード：１ｇ８ｔ）およびＢ－ＤＮＡドデカマー（タンパク質データバンク受入コード：１Ｄ６５）の結晶構造を使用して、ヌクレアーゼとＤＮＡの相互作用をモデル化した。最初の複合ヌクレアーゼ・ＤＮＡは、ヌクレアーゼのＤＮＡ結合部位の隣に位置するＤＮＡを含んでいた。安定したＤＮＡ・ヌクレアーゼ複合体を得るために、分子動力学的シミュレーションおよびエネルギー最小化の２つの連続したステップを実施した。最初に、複合体を、ＹＡＳＡＲＡ２力場（ＹＡＳＡＲＡ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、バージョン２２．８．２２）を用いて水中で６ｎｓに供した。第２のシミュレーションでは、最初のシミュレーションから得られた複合体を水中のＡＭＢＥＲ１４力場を使用した１２５ｎｓのシミュレーションに供した。そのために、ＹＡＳＡＲＡのｍｄ＿ｒｕｎ．ｍｃｒマクロに含まれるデフォルト設定を使用した。最終モデルをエネルギー最小化に供した。図１から４に示されるとおり、この最終モデルからヌクレアーゼの表面上のＤＮＡの結合部位を決定した。
配列番号１とＤＮＡの間の相互作用のモデル化：Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼの結晶構造（タンパク質データバンク受入コード：１ｇ８ｔ）およびＢ－ＤＮＡドデカマー（タンパク質データバンク受入コード：１Ｄ６５）の結晶構造を使用して、ヌクレアーゼとＤＮＡの相互作用をモデル化した。最初の複合ヌクレアーゼ・ＤＮＡは、ヌクレアーゼのＤＮＡ結合部位の隣に位置するＤＮＡを含んでいた。安定したＤＮＡ・ヌクレアーゼ複合体を得るために、分子動力学的シミュレーションおよびエネルギー最小化の２つの連続したステップを実施した。最初に、複合体を、ＹＡＳＡＲＡ２力場（ＹＡＳＡＲＡ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、バージョン２２．８．２２）を用いて水中で６ｎｓに供した。第２のシミュレーションでは、最初のシミュレーションから得られた複合体を水中のＡＭＢＥＲ１４力場を使用した１２５ｎｓのシミュレーションに供した。そのために、ＹＡＳＡＲＡのｍｄ＿ｒｕｎ．ｍｃｒマクロに含まれるデフォルト設定を使用した。最終モデルをエネルギー最小化に供した。図１から４に示されるとおり、この最終モデルからヌクレアーゼの表面上のＤＮＡの結合部位を決定した。
【0648】
溶媒露出度：１アミノ酸当たりの溶媒露出表面積（ＳＡＳＡ）を、ソフトウェア Ｐｙｍｏｌ２．５．１（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ， ＬＬＣ．）によってモデルから算出した。表＃に示されるＳＡＳＡは、配列番号１の天然のアミノ酸の平方オングストローム（Å２）単位の面積に対応する。算出されたＳＡＳＡは、アミノ酸残基Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、およびＰ１９５がタンパク質の表面で溶媒に接触可能であることを示し、これはまた、ＳＡＳＡがそれぞれ４０．０９Å２および１１１．４１Å２であるＰ５１およびＴ７７に関しても示されている。
【0649】
最終モデルから、位置Ｐ５１、Ａ５２、Ｓ５３、Ｇ５４、Ｔ５６、Ｎ５８、Ｐ７３、Ａ７４、Ｔ７７、Ｇ７８、Ｎ８０、Ａ８１、Ｎ１１９、Ｑ１２０、Ａ１２４、およびＰ１９５のアルファ炭素が二本鎖ＤＮＡの１０Åよりも短い距離内に位置し、前述のとおり、その側鎖がタンパク質の表面に対する溶媒接触性を有することが判断された。
【0650】
ヌクレアーゼ・ＤＮＡ結合エネルギー計算：真空における予め計算された最終モデルの結合エネルギーを、ソフトウェアＹＡＳＡＲＡ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（バージョン２２．９．２４）およびＮＯＶＡ力場の使用によって得た。二本鎖ＤＮＡのヌクレアーゼとの結合エネルギーを算出するためのＹＡＳＡＲＡルーチンをコマンド「ＢｉｎｄＥｎｅｒｇｙＯｂｊ」で実行した。表６に示すとおり、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓヌクレアーゼと二本鎖ＤＮＡの間の算出された結合エネルギーは５１８．１ｋＪ／ｍｏｌであった。
【0651】
変異したバリアントとＤＮＡの間の結合エネルギーを算出するために、ＹＡＳＡＲＡにおいて「ＳｗａｐＲｅｓ」コマンドを使用することによって、モデルにおいて対象の位置の残基を置換した。次に、置換された残基の側鎖を、ＹＡＳＡＲＡの「エネルギー最小化」ルーチンを使用することによりエネルギー最小化した。
【0652】
表６に示すとおり、１つの置換Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｇ５４Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｋ、およびＰ１９５Ｒを有するバリアントは、配列番号１と比較して高い結合エネルギーを示す。Ｐ５１ＬおよびＴ７７Ｒ；Ｐ５１ＬおよびＴ７７Ｋ；Ｐ５１ＧおよびＴ７７Ｋ；Ｐ５１ＧおよびＴ７７Ｒ；Ｐ５１ＬおよびＴ７７Ｈ；Ｐ５１ＧおよびＴ７７Ｈ；Ｐ５１ＡおよびＴ７７Ｒ；Ｐ５１ＶおよびＴ７７Ｒ；Ｐ５１ＩおよびＴ７７Ｒの二重変異も配列番号１と比較して高い結合エネルギーを示す。Ａ５２Ｒ、Ｓ５３Ｋ、Ｇ５４Ｒ、Ｔ５６Ｋ、Ｔ５６Ｒ、Ｎ５８Ｒ、Ｎ５８Ｋ、Ｐ７３Ｒ、Ａ７４Ｒ、Ｇ７８Ｒ、Ｎ８０Ｒ、Ａ８１Ｋ、Ｎ１１９Ｒ、Ｑ１２０Ｒ、Ａ１２４Ｈ、Ａ１２４Ｋ、Ａ１２４Ｒ、およびＰ１９５Ｒの群から選択される第３の置換の追加が、結合エネルギーが同じ二重変異バリアントおよび配列番号１の両方の結合エネルギーよりも高いバリアントをもたらすことも示された。例えば、置換Ｐ５１Ｌ、Ｔ７７Ｒ、およびＡ１２４Ｋを有する三重変異体（６６８．６ｋＪ／ｍｏｌ）は、二重変異バリアントＰ５１ＬおよびＴ７７Ｒ（５７８．８ｋＪ／ｍｏｌ）、および配列番号１（５１８．１ｋＪ／ｍｏｌ）よりも高い結合エネルギーを有する。
【0653】
【0654】
図１から４は、実施例８に示される方法によって計算された最終モデルの三次元表示を示す。図１は、ポンチ絵として表されるモデル（ヌクレアーゼのみ）の構造を示し、ヌクレアーゼの二次構造が見える。図２は、ボールとして表されるモデル（ヌクレアーゼのみ）の構造を示し、強調されたアミノ酸は溶媒に接触可能である。図３および４は、ＤＮＡと複合体化した最終モデルの構造を示す。ＤＮＡの結合部位のアミノ酸が特定される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】
【国際調査報告】