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特表2025-502499高純度のコレステロールの合成方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-24

(54)【発明の名称】高純度のコレステロールの合成方法

(51)【国際特許分類】

C07J 9/00 20060101AFI20250117BHJP

C07B 61/00 20060101ALN20250117BHJP

【ＦＩ】

C07J9/00

C07B61/00 300

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024543848

(86)(22)【出願日】2022-12-30

(85)【翻訳文提出日】2024-07-24

(86)【国際出願番号】 CN2022144100

(87)【国際公開番号】W WO2023142890

(87)【国際公開日】2023-08-03

(31)【優先権主張番号】202210099954.7

(32)【優先日】2022-01-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】512198970

【氏名又は名称】華東師範大学

(71)【出願人】

【識別番号】522185623

【氏名又は名称】江蘇佳尓科薬業集団股▲ふん▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＪＩＡＮＧＳＵＪＩＡＥＲＫＥＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＧＲＯＵＰＣＯＲＰ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．３０２，Ｈｕｚｈｕａｎｇｔｏｕ，Ｓａｎｈｕａｎｇｍｉａｏ，Ｚｈｅｎｇｌｕ，ＴｉａｎｎｉｎｇＤｉｓｔｒｉｃｔ，Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ２１３１１１，Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110000291

【氏名又は名称】弁理士法人コスモス国際特許商標事務所

(72)【発明者】

【氏名】仇文▲衛▼

(72)【発明者】

【氏名】顧向忠

(72)【発明者】

【氏名】李晨晨

(72)【発明者】

【氏名】蒋澄宇

(72)【発明者】

【氏名】叶如飛

【テーマコード（参考）】

4C091

4H039

【Ｆターム（参考）】

4C091AA02

4C091BB06

4C091CC03

4C091DD01

4C091EE04

4C091FF01

4C091GG01

4C091HH01

4C091JJ03

4C091KK01

4C091LL01

4C091MM01

4C091NN01

4C091PA02

4C091PA05

4C091PB05

4C091QQ01

4C091RR05

4H039CA60

4H039CG90

(57)【要約】

本発明は、高純度のコレステロールを合成する方法を開示し、当該方法は、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン、別名ビスノラールアルコール又はＢＡを原料として使用し、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、ヒドロキシル保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解などのステップを経て上記コレステロールを合成し、純度は９９％以上に達することができる。従来の動物由来のコレステロールの欠点を考慮して、本発明は植物由来の原料ＢＡからコレステロールを合成し、安全性が高く、病原性細菌やウイルス感染のリスクを回避するだけでなく、合成収率も高く、良好な製品の純度、環境に優しく、産業化生産に便利であり、そして本発明では製品中の不純物のレベルを大幅に低減し、高純度のコレステロールの取得を容易にし、臨床使用の安全性を向上させる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オンＢＡを原料として使用してコレステロールを合成する方法であって、
前記方法は、ＢＡを原料として使用し、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、ヒドロキシル保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解などのステップを経て前記コレステロールを合成する方法であり、具体的には、
（ａ）第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを酸化反応させて式（２）の化合物を得るステップ、
（ｂ）第２の溶媒中で、式（２）の化合物をＷｉｔｔｉｇ反応させて式（３）の化合物を得るステップ、
（ｃ）第３の溶媒中で、式（３）の化合物をアセチル化反応させて式（４）の化合物を得るステップ、
（ｄ）第４の溶媒中で、式（４）の化合物を還元反応させて式（５）の化合物を得るステップ、
（ｅ）第５の溶媒中で、式（５）の化合物をヒドロキシル保護反応させて式（６）の化合物を得るステップ、
（ｆ）第６の溶媒中で、式（６）の化合物を選択的水素化還元反応させて式（７）の化合物を得るステップ、
（ｇ）第７の溶媒中で、式（７）の化合物を脱保護反応又は加水分解反応させてコレステロールを得るステップ、
を含み、
ここで、前記方法の反応プロセスはスキーム（Ａ）に示す通りである、コレステロールの合成方法。

【化66】

（ただし、Ｒはエステル基、シリルエーテル基から選択される。）

【請求項2】

前記エステル基は、Ｃ２－Ｃ１０直鎖エステル基、イソブチルエステル

【化67】

イソペンチルエステル基

【化68】

フェニルエステル基

【化69】

ｐ－メトキシフェニルエステル基

【化70】

から選択される１つ又は複数であり、
前記シリルエーテル基はトリメチルシリルエーテル基

【化71】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化72】

から選択される１つ又は２つである、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ステップ（ａ）において、前記酸化反応は、具体的には、前記第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム及び酸化剤と酸化反応させて、式（２）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記式（１）で表されるＢＡ、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム、酸化剤のモル比は、１：（０～１）：（０～２０）：（０～１）：（１～５）であり、及び／又は、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミドＮＣＳ、Ｎ－ブロモスクシンイミドＮＢＳ及び２－ヨードキシ安息香酸ＩＢＸから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記第１の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、ジメチルスルホキシド及び水から選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記酸化反応の温度は０～３０℃であり、及び／又は、前記酸化反応の時間は３～８時間である、ことを特徴とする請求項３に記載の方法。

【請求項5】

ステップ（ｂ）において、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応は、具体的には、前記第２の溶媒の中で式（２）の化合物、３，３－ジメチルアリルハライド、トリフェニルホスフィン、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドをＷｉｔｔｉｇ反応させて、式（３）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記式（２）の化合物、３，３－ジメチルアリルハライド、トリフェニルホスフィン、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドのモル比は、１：（１～４）：（１～４）：（１～４）であり、及び／又は、前記第２の溶媒は、トルエン、ベンゼン、テトラヒドロフラン、ヘプタンから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記３，３－ジメチルアリルハライドは、３，３－ジメチルアリルクロリド、３，３－ジメチルアリルブロミドから選択される１つ又は２つであり、及び／又は、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の温度は－１０～１１２℃であり、及び／又は、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の時間は０．５～９時間である、ことを特徴とする請求項５に記載の方法。

【請求項7】

ステップ（ｃ）において、前記アセチル化反応は、具体的には、前記式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、及び塩基を第３の溶媒中でアセチル化反応させて式（４）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、塩基のモル比は、１：（０．５～６２．５）：（１～６２．５）：（０～６）であり、及び／又は、前記塩基は、ピリジン、トリエチルアミン、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＡＰ及びジイソプロピルアミンから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記第３の溶媒は、無水酢酸、塩化アセチル、酢酸エチル及びジクロロメタンから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記アセチル化反応の温度は４０～１１０℃であり、及び／又は、前記アセチル化反応の時間は１～１０時間である、ことを特徴とする請求項７に記載の方法。

【請求項9】

ステップ（ｄ）において、前記還元反応は、具体的には、前記式（４）の化合物と還元剤とを前記第４の溶媒中で還元反応させて式（５）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記式（４）の化合物と還元剤のモル比は１：（１～２５）であり、及び／又は、前記第４の溶媒は、テトラヒドロフラン、エタノール、水、ジクロロメタン、２－メチルテトラヒドロフラン、イソプロピルアルコール、酢酸及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記還元剤は、ＮａＢＨ_４及びＫＢＨ_４から選択される１種又は２種であり、及び／又は、前記還元反応の温度は０～５０℃であり、及び／又は、前記還元反応の時間は６～１２時間である、ことを特徴とする請求項９に記載の方法。

【請求項11】

ステップ（ｅ）において、前記ヒドロキシル保護反応は、具体的には、前記式（５）の化合物とヒドロキシの保護試薬とを、塩基の作用下で前記第５の溶媒中で縮合反応させ、式（６）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項12】

Ｒがエステル基である場合、前記第５の溶媒は、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ＤＭＦ、トルエン、テトラヒドロフラン及び２－メチルテトラヒドロフランから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン、ＤＭＡＰから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記式（５）の化合物、ヒドロキシの保護試薬、塩基のモル比は、１：（１～４）：（０．０５～５）であり、及び／又は、前記反応の温度は０～５０℃であり、及び／又は、前記ヒドロキシル保護反応の時間は２～２４時間であり、
Ｒがシリルエーテル基である場合、前記第５の溶媒は、ＤＭＦ、ジクロロメタン、クロロホルム及び四塩化炭素のうちの１つ又は複数であり、及び／又は、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン、ＤＭＡＰから選択される１つ又は複数であり、前記式（５）の化合物、ヒドロキシの保護試薬、塩基のモル比は、１：（２～４）：（４～８）であり、及び／又は、前記反応の温度は０～５０℃であり、及び／又は、前記ヒドロキシル保護反応の時間は２～２４時間である、ことを特徴とする請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

ステップ（ｆ）において、前記選択的水素化還元反応は、具体的には、前記式（６）の化合物を前記第６の溶媒中で触媒の作用下で、還元剤と選択的水素化還元反応させて式（７）の化合物を得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記還元剤はＨ_２から選択され、及び／又は、前記触媒はラネーＮｉであり、及び／又は、前記式（６）の化合物と触媒との質量比は１：（０．０５～５）であり、及び／又は、前記第６の溶媒は、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、トルエン及びイソプロピルアルコールから選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記水素化還元反応の温度は０～６０℃であり、及び／又は、前記水素化還元反応における還元剤Ｈ_２の圧力は１～２０ａｔｍであり、及び／又は、前記水素化還元反応の時間は４～４８時間である、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

Ｒがエステル基である場合、ステップ（ｇ）において、前記加水分解反応は具体的には、前記式（７）の化合物を第７の溶媒中で塩基の作用下で、加水分解反応させ、コレステロールを得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記塩基は、ＬｉＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＯＨ、ｔ－ＢｕＯＫ、Ｋ_２ＣＯ_３から選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記式（７）の化合物と塩基のモル比は１：（０．５～２）であり、及び／又は、前記第７の溶媒は、メタノール、エタノールから選択される１種又は２種であり、及び／又は、前記加水分解反応の温度は１０～７５℃であり、及び／又は、前記加水分解反応の時間は０．３～１２時間である、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

Ｒがシリルエーテル基である場合、ステップ（ｇ）において、前記脱保護反応は、具体的には、前記式（７）の化合物を前記第７の溶媒中で触媒の作用下で、脱保護反応させ、コレステロールを得る反応である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項18】

前記触媒はフッ化テトラブチルアンモニウムＴＢＡＦ、フッ化テトラブチルアンモニウム三水和物ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏ、三フッ化ホウ素エーテル、酢酸及び塩化水素の酢酸エチル溶液から選択される１つ又は複数であり、及び／又は、前記式（７）の化合物と触媒のモル比は１：（１～６）であり、及び／又は、前記第７の溶媒は、テトラヒドロフラン及び水から選択される１種又は２種であり、及び／又は、前記脱保護反応の温度は１０～７５℃であり、及び／又は、前記脱保護反応の時間は２～４８時間である、ことを特徴とする請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

化合物の構造は、式（６－２Ｅ）、（６－３Ｅ）、（６－４Ｅ）、（６－５Ｅ）、（６－６Ｅ）、（６－２Ｚ）、（６－３Ｚ）、（６－４Ｚ）、（６－５Ｚ）、（６－６Ｚ）、（６′－２Ｅ）、（６′－３Ｅ）、（６′－４Ｅ）、（６′－５Ｅ）、（６′－６Ｅ）、（６′－２Ｚ）、（６′－３Ｚ）、（６′－４Ｚ）、（６′－５Ｚ）、（６′－６Ｚ）で示される通りである、ことを特徴とする化合物。

【化73】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、有機化学合成の技術分野に属し、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン、別名ビスノラールアルコール又はＢＡ（Ｂｉｓｎｏｒａｌｃｏｈｏｌ）を原料として使用して高純度のコレステロールを合成する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

コレステロールは、動物の組織細胞にとって不可欠で重要な物質であり、細胞膜の形成に関与するだけでなく、体内の胆汁酸やステロイドホルモンの合成の原料でもある。現在、商業化されたコレステロールは主に次の目的で使用されている。１．医薬品賦形剤－リポソーム添加剤、例えば新型コロナウイルスｍＲＮＡワクチンの賦形剤（リポソームを製造する時に３０～５０％のコレステロールを加えると、リポソームの薬物担持能力及び安定性を大幅に増加させることができ）；２．化粧品添加物；３．液晶製造用の原料；４．ビタミンＤ３製造用の出発原料。現在、商業化されているコレステロールのほとんどは動物の脳幹（脳幹コレステロール）又はラノリン（ラノリンコレステロール）由来のものであり、いずれも動物由来のコレステロールである。動物由来の製品には動物の病原体やその他の有害な因子が含まれている可能性が高いことが研究で判明しており、特に狂牛病、豚レンサ球菌、鳥インフルエンザなどの感染症の発生により、コレステロールの安全性が注目されるようになった。例えば、ビタミンＤ３製造の上流原料はコレステロールであり、ヨーロッパとアメリカ諸国では、疫病の危険性を理由に、以前から脳幹コレステロールの原料としての使用を禁止していた。２０２０年７月１日からは、中国も同様に脳幹コレステロールの原料としての使用も制限した。従って、人々の健康と安全を確保するためには、植物由来の高純度コレステロール合成法の開発が急務となっている。

【0003】

コレステロールの化学合成は、主に以下の方法があると報告されている。
（１）ジオスゲニンを原料として使用し、６ステップの反応を経て６１％の総モル収率でコレステロールを合成した（ＣＮ１７７２７６０Ａ、スキーム１に示す）。このスキームは、原材料の価格が比較的高く、手順が煩雑で、使用される試薬の毒性が高く、汚染性が高いため、産業生産には適しなかった。

【化1】

【0004】

（２）スチグマステロール分解生成物を原料として使用し、５ステップの反応を経て６７％の総モル収率でコレステロールを合成した（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ、スキーム２に示す通りである）。しかし、本発明の出願人は、実験を通じて、このスキームには次のような問題があることを発見した。当該特許の第１のステップの反応でオルトギ酸トリエチルを使用してＣ－３位のカルボニル基をエーテル化保護する場合、選択性が低く、側鎖のアルデヒドの反応を引き起こしやすく、アセタールが生成してしまう（詳細は発明の内容の「比較例１」を参照）。従って、このスキームの実現可能性については深刻な疑問があった。

【化2】

【0005】

（３）プレグネノロンを原料として使用し、４ステップの反応を経て７２％の総モル収率でコレステロールを合成した（ＣＮ１０５２１８６０９Ａ、スキーム３に示す通りである）。このスキームは、使用される貴金属ロジウム触媒とキラルホスフィン配位子が高価であり、大規模な産業生産には適しない。

【化3】

【0006】

（４）プレグネノロンを原料として使用し、２ステップの反応を経て８０％の総モル収率でコレステロールを合成した（ＣＮ１０４９６１７８８Ａ、スキーム４に示す通りである）。このスキームも、使用された貴金属ロジウム触媒とキラルホスフィン配位子が高価であって、大規模な産業生産には適していない。

【化4】

【0007】

（５）スチグマステロールを原料として使用し、５ステップの反応を経て６８％の総モル収率でコレステロールを合成した（ＣＮ１０５２３７６０３Ａ、スキーム５に示す通りである）。このスキームでは合成プロセスでＯ_３が使用され、反応のモニタリングや設備に対する要求が高くなり、経済性と安全性が十分ではない。

【化5】

【0008】

（６）スチグマステロールを原料として使用し、４ステップの反応を経て７０％の総モル収率でコレステロールを合成した（ＣＮ１０６６３２５６５Ａ、スキーム６に示す通りである）。このスキームでもＯ_３が使用されるため、プロセスの難易度が高くなり、反応のモニタリングや設備に対する要求が高くなり、経済性と安全性が十分でない。

【化6】

【0009】

（７）ＢＡを原料として使用し、５ステップの反応を経て７８．５％の総モル収率でコレステロールを合成した（ＣＮ１１３２４８５５７Ａ、スキーム７に示す通りである）。このスキームの精製ではカラムクロマトグラフィー精製が使用され、産業生産には適しなく、また、このスキームで得られるコレステロールの純度は高くなく（９５％～９６％）、更に精製しないと医薬品賦形剤の基準を満たすことが困難である。

【化7】

【0010】

動物由来のコレステロールは、狂牛病、豚レンサ球菌、鳥インフルエンザなどの病気に感染するリスクがある。これまでに報告されているコレステロールの化学合成スキームには、操作が煩雑で、汚染度が高く、触媒が高価で、生成物の純度が低いなどの欠点があるため、植物由来の原料を用いたより安全で効率的な高純度コレステロールの合成方法の開発は重要な価値がある。

【発明の概要】

【0011】

既存技術の欠点を解決するために、本発明の目的は、植物由来の高純度のコレステロールの合成方法を提供することである。本発明は、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン、別名ビスノラールアルコール又はＢＡを原料として使用し、酸化、Ｗｉｔｔｉｇ反応、アセチル化、還元、ヒドロキシル保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解などのステップを経て上記コレステロールを合成し、純度は９９％以上に達することができる。本発明では、コレステロールを合成するための出発原料であるＢＡは、安全かつ経済的であり、コレステロールを合成する方法は操作が簡単で、収率が高く、純度が高く、環境に優しく、産業生産に便利である。

【0012】

本発明で使用する原料ＢＡ（ｂｉｓｎｏｒａｌｃｏｈｏｌ）は、製油プロセスで残存する植物ステロールを発酵させて得られる植物由来のグリーン原料であり、現在年間生産量は１０００トン級に達しており、価格も低く、先行技術の動物由来コレステロールに存在可能な病原性細菌やウイルス感染のリスクを十分に回避することができる。

【0013】

本発明の合成方法において、前記原料ＢＡには、植物ステロールの生物発酵によって得られるもの、又は化学合成法によって得られるものが含まれるが、これらに限定されない。

【0014】

本発明によって提供されるＢＡ原料を使用してコレステロールを合成する方法は、
（ａ）第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを酸化反応させて式（２）の化合物を得るステップ、
（ｂ）第２の溶媒中で、式（２）の化合物をＷｉｔｔｉｇ反応させて式（３）の化合物を得るステップ、
（ｃ）第３の溶媒中で、式（３）の化合物をアセチル化反応させて式（４）の化合物を得るステップ、
（ｄ）第４の溶媒中で、式（４）の化合物を還元反応させて式（５）の化合物を得るステップ、
（ｅ）第５の溶媒中で、式（５）の化合物をヒドロキシル保護反応させて式（６）の化合物を得るステップ、
（ｆ）第６の溶媒中で、式（６）の化合物を選択的水素化還元反応させて式（７）の化合物を得るステップ、
（ｇ）第７の溶媒中で、式（７）の化合物を脱保護反応又は加水分解反応させてコレステロールを得るステップ、
を含み、
ここで、前記方法の反応プロセスはスキーム（Ａ）に示す通りである。

【化8】

【0015】

ここで、Ｒはエステル基、シリルエーテル基から選択され、
好ましくは、ＲはＣ２－Ｃ１０直鎖エステル基、イソブチルエステル

【化9】

イソペンチルエステル基

【化10】

フェニルエステル基

【化11】

ｐ－メトキシフェニルエステル基

【化12】

トリメチルシリルエーテル基

【化13】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化14】

から選択される１つ又は複数であり、
より好ましくは、Ｒはエチルエステル

【化15】

プロピルエステル

【化16】

ブチルエステル

【化17】

イソブチルエステル

【化18】

イソペンチルエステル

【化19】

フェニルエステル

【化20】

ｐ－メトキシフェニルエステル

【化21】

トリメチルシリルエーテル基

【化22】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化23】

から選択される１つ又は複数である。

【0016】

注：化合物式（３）～（６）では、Ｃ－２２位とＣ－２３位の間の二重結合は、いずれもＥ配置がメインで、Ｚ配置がサブであり、この２つの配置の比はＥ／Ｚ≒８７／１３（^１ＨＮＭＲにより判定）であり、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。
本発明のステップ（ａ）において、前記酸化反応は、具体的には、第１の溶媒中で、式（１）で表されるＢＡを、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム及び酸化剤と酸化反応させて、式（２）の化合物を得る反応である。

【0017】

ここで、式（１）で表されるＢＡ、ＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム、酸化剤のモル比は、１：（０～１）：（０～２０）：（０～１）：（１～５）であり、好ましくは、１：０．０１：１．３５：０．１：１．１５である。

【0018】

ここで、前記酸化反応は、酸化剤の存在下で行われ、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミドＮＣＳ、Ｎ－ブロモスクシンイミドＮＢＳ及び２－ヨードキシ安息香酸ＩＢＸなどから選択される１つ又は複数であり、好ましくは、Ｎ－クロロスクシンイミドＮＣＳである。

【0019】

ここで、前記第１の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、ジメチルスルホキシド及び水などから選択される１つ又は複数であり、好ましくは、ジクロロメタンと水との混合溶媒（体積比Ｖ／Ｖ＝５／２）である。
ここで、前記酸化反応の温度は０～３０℃であり、好ましくは０℃である。
ここで、前記酸化反応の時間は３～８時間であり、好ましくは６時間である。

【0020】

特定の一実施形態において、式（２）の化合物の合成ステップは、式（１）で表されるＢＡを第１の溶媒に溶解させ、その後にＴＥＭＰＯ、炭酸水素ナトリウム、臭化テトラブチルアンモニウム及びＮＣＳを加えて、酸化反応をさせて、式（２）の化合物を得るステップを含む。

【0021】

本発明のステップ（ｂ）において、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応は、具体的には、第２の溶媒の中で式（２）の化合物、３，３－ジメチルアリルハライド、トリフェニルホスフィン、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドをＷｉｔｔｉｇ反応させて、式（３）の化合物を得る反応である。

【0022】

ここで、式（２）の化合物、３，３－ジメチルアリルハライド、トリフェニルホスフィン、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドのモル比は、１：（１～４）：（１～４）：（１～４）であり、好ましくは、１：１．３：１．３：１．３である。
ここで、前記第２の溶媒は、トルエン、ベンゼン、テトラヒドロフラン及びヘプタンなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくはトルエンである。

【0023】

ここで、前記３，３－ジメチルアリルハライドは、３，３－ジメチルアリルクロリド、３，３－ジメチルアリルブロミドなどから選択される１つ又は複数であり、好ましくは３，３－ジメチルアリルブロミドである。
ここで、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の温度は－１０～１１２℃であり、好ましくは１０℃である。
ここで、前記Ｗｉｔｔｉｇ反応の時間は０．５～９時間であり、好ましくは０．５時間である。

【0024】

本発明のステップ（ｃ）において、前記アセチル化反応は、具体的には、式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、及び塩基を第３の溶媒中でアセチル化反応させて式（４）の化合物を得る反応である。

【0025】

ここで、式（３）の化合物、塩化アセチル、無水酢酸、塩基のモル比は、１：（０．５～６２．５）：（１～６２．５）：（０～６）であり、好ましくは１：２５：２４：４である。
ここで、前記塩基は、ピリジン、トリエチルアミン、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＡＰ及びジイソプロピルアミンなどから選択される１つ又は複数であり、好ましくは、ジイソプロピルアミンである。
ここで、前記第３の溶媒は、無水酢酸、塩化アセチル、酢酸エチル及びジクロロメタンなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、塩化アセチルと無水酢酸との混合溶媒である。
ここで、前記アセチル化反応の温度は４０～１１０℃であり、好ましくは７０℃である。
ここで、前記アセチル化反応時間は１～１０時間であり、好ましくは２～１０時間であり、更に好ましくは６時間である。
ここで、前記アセチル化反応では、塩化アセチル及び無水酢酸が反応物及び溶媒の両方として使用される。

【0026】

特定の一実施形態において、式（４）の化合物の合成ステップは、式（３）の化合物に塩化アセチル、無水酢酸、及び塩基を加え、アセチル化反応させて、式（４）の化合物を得るステップを含む。

【0027】

本発明のステップ（ｄ）において、前記還元反応は、具体的には、前記式（４）の化合物と還元剤とを第４の溶媒中で還元反応させて式（５）の化合物を得る反応である。

【0028】

ここで、式（４）の化合物と還元剤のモル比は１：（１～２５）であり、好ましくは１：４である。
ここで、前記第４の溶媒は、テトラヒドロフラン、エタノール、水、ジクロロメタン、２－メチルテトラヒドロフラン、イソプロピルアルコール、酢酸及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、テトラヒドロフランとエタノールと水との混合溶媒（体積比Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１０／５／３）である。
ここで、前記還元剤は、ＮａＢＨ_４及びＫＢＨ_４などのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、ＮａＢＨ_４である。
ここで、前記還元反応の温度は０～５０℃であり、好ましくは２５℃である。
ここで、前記還元反応の時間は６～１２時間であり、好ましくは８時間である。

【0029】

特定の一実施形態において、式（５）の化合物の合成ステップは、式（４）の化合物を第４の溶媒に溶解させ、還元剤を用いて還元反応させて式（５）の化合物を得るステップを含む。

【0030】

本発明のステップ（ｅ）において、ヒドロキシの保護基Ｒがエステル基である場合、前記ヒドロキシル保護反応は、具体的には、第５の溶媒の中で、式（５）の化合物とヒドロキシの保護試薬とを、塩基の作用下で第５の溶媒中で反応させ、式（６）の化合物を得る反応である。

【0031】

前記エステル基はＣ２－Ｃ１０直鎖エステル基（エチルエステル

【化24】

プロピルエステル

【化25】

ブチルエステル

【化26】

など）、イソブチルエステル

【化27】

イソペンチルエステル

【化28】

フェニルエステル

【化29】

及びｐ－メトキシフェニルエステル

【化30】

などのうちの１つ又は複数のエステル基から選択され、好ましくは、エチルエステルである。

【0032】

ここで、前記式（５）の化合物、エステル基の保護試薬、塩基のモル比は１：（１～４）：（０．０５～５）であり、好ましくは１：３：０．１である。
ここで、前記第５の溶媒は、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ＤＭＦ、トルエン、テトラヒドロフラン及び２－メチルテトラヒドロフランなどのうちの１つ又は複数であり、好ましくは酢酸エチルである。
ここで、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン及びＤＭＡＰなどから選択される１つ又は複数であり、好ましくはＤＭＡＰである。
ここで、前記反応の温度は０～５０℃であり、好ましくは４５℃である。
ここで、前記反応の時間は２～２４時間であり、好ましくは４時間である。

【0033】

本発明のステップ（ｅ）において、ヒドロキシの保護基がシリルエーテル基である場合、前記ヒドロキシル保護反応は、具体的には、第５の溶媒の中で、式（５）の化合物とシリルエーテル基の保護試薬とを、塩基の作用下で第５の溶媒中で反応させ、式（６）の化合物を得る反応である。

【0034】

ここで、前記シリルエーテル基は、トリメチルシリルエーテル基

【化31】

及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化32】

などから選択される１つ又は複数であり、好ましくは、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル基

【化33】

である。

【0035】

ここで、前記式（５）の化合物、シリルエーテル基の保護試薬、塩基のモル比は１：（２～４）：（４～８）であり、好ましくは１：２．５：４である。
ここで、前記第５の溶媒は、ＤＭＦ、ジクロロメタン、クロロホルム及び四塩化炭素などのうちの１つ又は複数であり、好ましくは、ジクロロメタンである。
ここで、前記塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン及びＤＭＡＰなどから選択される１つ又は複数であり、好ましくはイミダゾールである。
ここで、前記反応の温度は０～５０℃であり、好ましくは２５℃である。
ここで、前記反応の時間は２～２４時間であり、好ましくは１２時間である。

【0036】

特定の一実施形態において、式（６）の化合物の合成ステップは、式（５）の化合物を第５の溶媒に溶解させ、塩基の作用下でヒドロキシの保護試薬と反応させて、式（６）の化合物を得るステップを含む。

【0037】

本発明のステップ（ｆ）において、前記選択的水素化還元反応は、具体的には、式（６）の化合物を第６の溶媒中で触媒の作用下で、還元剤と選択的水素化還元反応させて式（７）の化合物を得る反応である。
ここで、前記触媒はラネーＮｉである。
ここで、前記還元剤はＨ_２である。
ここで、式（６）の化合物と触媒であるラネーＮｉとの質量比は１：（０．０５～５）であり、好ましくは１：１である。
ここで、前記第６の溶媒は、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、トルエン及びイソプロピルアルコールなどから選択される１つ又は複数であり、好ましくは酢酸エチルである。
ここで、前記水素化還元反応の温度は０～６０℃であり、好ましくは３０℃である。
ここで、前記水素化還元反応における還元剤Ｈ_２の圧力は１～２０ａｔｍであり、好ましくは１ａｔｍである。
ここで、前記水素化還元反応の時間は４～４８時間であり、好ましくは４～３０時間であり、更に好ましくは７時間である。

【0038】

特定の一実施形態において、コレステロールの合成ステップは、式（６）の化合物を第６の溶媒に溶解させ、ラネーＮｉを添加し、Ｈ_２で置換した後、選択的水素化還元反応させて、式（７）の化合物を得るステップを含む。

【0039】

本発明のステップ（ｇ）において、保護基Ｒがエステル基である場合、前記加水分解反応は具体的には、前記式（７）の化合物を第７の溶媒中で塩基の作用下で、加水分解反応させ、コレステロールを得る反応である。

【0040】

ここで、前記塩基は、ＬｉＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＯＨ、ｔ－ＢｕＯＫ、Ｋ_２ＣＯ_３などから選択される１つ又は複数であり、好ましくはＫ_２ＣＯ_３である。
ここで、前記式（７）の化合物と塩基のモル比は１：（０．５～２）であり、好ましくは１：１．３である。
ここで、前記第７の溶媒は、メタノール及びエタノールなどから選択される１つ又は複数であり、好ましくはメタノールである。
ここで、前記加水分解反応の温度は１０～７５℃であり、好ましくは６５℃である。
ここで、前記加水分解反応時間は０．３～１２時間であり、好ましくは２時間である。
本発明のステップ（ｇ）において、保護基Ｒがシリルエーテル基である場合、前記脱保護反応は、具体的には、前記式（７）の化合物を前記第７の溶媒中で触媒の作用下で、脱保護反応させ、コレステロールを得る反応である。
ここで、前記触媒はフッ化テトラブチルアンモニウムＴＢＡＦ、フッ化テトラブチルアンモニウム三水和物ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏ、三フッ化ホウ素エーテル、酢酸及び塩化水素の酢酸エチル溶液から選択される１つ又は複数であり、好ましくは、ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏである。
ここで、前記式（７）の化合物と触媒のモル比は１：（１～６）であり、好ましくは１：４である。
ここで、前記第７の溶媒は、テトラヒドロフラン及び水などから選択される１つ又は複数であり、好ましくはテトラヒドロフランである。
ここで、前記脱保護反応の温度は１０～７５℃であり、好ましくは２５℃である。
ここで、前記脱保護反応の時間は２～４８時間であり、好ましくは２４時間である。

【0041】

特定の一実施形態において、コレステロールの合成するステップは、式（７）の化合物を第７の溶媒に溶解させ、塩基又は触媒を加えて、脱保護又は加水分解反応を行い、コレステロールを得るステップを含む。

【0042】

本発明はまた、２０種の化合物を提供し、当該化合物の構造は、以下の式（６－２Ｅ）、（６－３Ｅ）、（６－４Ｅ）、（６－５Ｅ）、（６－６Ｅ）、（６－２Ｚ）、（６－３Ｚ）、（６－４Ｚ）、（６－５Ｚ）、（６－６Ｚ）、（６′－２Ｅ）、（６′－３Ｅ）、（６′－４Ｅ）、（６′－５Ｅ）、（６′－６Ｅ）、（６′－２Ｚ）、（６′－３Ｚ）、（６′－４Ｚ）、（６′－５Ｚ）、（６′－６Ｚ）で示される通りである。

【化34】

【0043】

本発明の有益な効果には、以下のものが含まれる。本発明の高純度コレステロールの製造方法において、使用される商業化された原料ＢＡは植物由来の原料であるため、動物由来の原料に存在する可能性のある病原性細菌及びウイルスによる感染のリスクを回避し、安価で入手が容易であり、また、得られるコレステロールが高純度（９９％以上）であり、合成工程が簡単で、収率が高く、副反応が少なく、環境に優しく、高純度コレステロールの産業的生産を達成するのに便利であり、安全性が低く、純度が低く、合成コストが高い、環境に優しくないなどの既存のコレステロール製品の問題を解決できる。

【図面の簡単な説明】

【0044】

【図1】図１は本発明の実施例６で得られた式（７－１）の化合物の粗生成物のガスクロマトグラムを示す。

【図2】図２は本発明の実施例６で得られた式（７－１）の化合物の精製品のガスクロマトグラムを示す。

【図3】図３は本発明の実施例６で得られた式（７－２）の化合物の精製品のガスクロマトグラムを示す。

【図4】図４は本発明の実施例６で得られた式（７－３）の化合物の精製品のガスクロマトグラムを示す。

【図5】図５は本発明の実施例６で得られた式（７－４）の化合物の精製品のガスクロマトグラムを示す。

【図6】図６は本発明の実施例６で得られた式（７－５）の化合物の精製品のガスクロマトグラムを示す。

【図7】図７は本発明の実施例６で得られた式（７－６）の化合物の精製品のガスクロマトグラムを示す。

【図8】図８はコレステロールの単結晶構造図を示す。

【図9】図９は式（７－１）の化合物の加水分解反応により得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【図10】図１０は式（７－２）の化合物の加水分解反応により得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【図11】図１１は式（７－３）の化合物の加水分解反応により得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【図12】図１２は式（７－４）の化合物の加水分解反応により得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【図13】図１３は式（７－５）の化合物の加水分解反応により得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【図14】図１４は式（７－６）の化合物の脱保護反応により得られたコレステロールのガスクロマトグラムを示す。

【図15】図１５は式（６－１）の化合物を１０％Ｐｄ／Ｃ触媒水素化して、得られた式（７－１）の化合物の粗生成物のガスクロマトグラムを示す。

【発明を実施するための形態】

【0045】

以下の具体的な実施例及び図面に基づいて、本発明を更に詳細に説明する。本発明を実施するためのプロセス、条件、実験方法などは、以下に特に述べる内容を除き、当該分野における普通知識や公知常識であり、その内容が本発明に特に限定されるものではない。

【0046】

以下の実施例では、化合物の構造は核磁気共鳴装置と高分解能質量分析計で決定され、試薬は主に上海国薬化学試薬会社から提供され、生成物の精製は主にスラリー化とカラムクロマトグラフィーによって行われ、シリカゲル（２００－３００）は青島海洋化学工場から入手した。

【0047】

本発明は、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン（ＢＡ）を原料としてコレステロールを合成する方法を提供し、その反応プロセスは、上記スキーム（Ａ）に示す通りである。なお、本発明では、植物由来の２１－ヒドロキシ－２０－メチルプレグナ－４－エン－３－オン（ＢＡ）を原料としてコレステロールを合成する方法において、他の副生成物を生成させることを更に含み、具体的な反応スキームは（Ａ’）に示す通りである。

【化35】

【0048】

ここで、Ｒはエステル基、シリルエーテル基から選択され、
注：化合物式（３）～（６）では、Ｃ－２２位とＣ－２３位の間の二重結合は、いずれもＥ配置がメインで、Ｚ配置がサブであり、この２つの配置の比はＥ／Ｚ≒８７／１３（^１ＨＮＭＲにより判定）であり、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。化合物式（５）（３β－ＯＨ）／（５’）（３α－ＯＨ）の比は約９２／８（^１ＨＮＭＲにより判定）であり、その後の精製操作がなければ、化合物式（６）／（６’）、（７）／（７’）の比は変化しない。

【0049】

本発明では、上記式（３）、式（４）、式（５）、式（５’）、式（６）及び式（６’）の化合物は、Ｗｉｔｔｉｇ反応によって導入されたＤ環側鎖二重結合（Ｃ－２２、Ｃ－２３位の二重結合）がシス－トランス配置（Ｅ及びＺ配置）を有し、２つの配置の比率がＥ／Ｚ≒８７／１３であるため、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。化合物式（５）（３β－ＯＨ）及び（５’）（３α－ＯＨ）は、化合物式（４）をＮａＢＨ_４又はＫＢＨ_４で還元することによって得られ、得られた化合物式（５）（３β－ＯＨ）及び（５’）（３α－ＯＨ）における３β－ＯＨ／３α－ＯＨの比は約９２／８であり、その後の精製操作がなければ、この比は変化しない。従って、式（３）、式（４）、式（５）、式（５’）、式（６）、式（６’）、式（７）及び式（７’）の化合物はすべて単一物質ではなく、混合物である。

【0050】

実施例１式（２）の化合物の製造

【化36】

この実施例では、異なる実験条件下での式（２）の化合物の製造結果を示す。

【0051】

（１）フラスコにＢＡ（２４．７９ｇ、０．０７５ｍｏｌ）、ＴＥＭＰＯ（１１８ｍｇ、０．７５０ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２００ｍＬ）、炭酸水素ナトリウム（８．８ｇ、０．１０５ｍｏｌ）、ＮＣＳ（１１．５５ｇ、８６．５ｍｍｏｌ）、臭化テトラブチルアンモニウム（２．４２ｇ、７．５ｍｍｏｌ）及び水（１６０ｍＬ）を順次に加え、０℃で６時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、チオ硫酸ナトリウム５水和物溶液（５．６ｇチオ硫酸ナトリウム５水和物／１１０ｍＬ水）を加え、５～１０℃で２０分間撹拌し、分液し、水相をジクロロメタン（１５０ｍＬ×２）で抽出し、有機層を合わせ、１％水酸化ナトリウム溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して、式（２）の化合物（２４．０ｇの白色固体、モル収率：９４．９％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ９．５５（ｓ，１Ｈ），５．７１（ｓ，１Ｈ），２．４５－２．２３（ｍ，５Ｈ），１．９９（ｔ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，２Ｈ），１．９１－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４３（ｍ，５Ｈ），１．３０－１．１９（ｍ，２Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ），１．１１（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，３Ｈ），１．０６－０．８９（ｍ，３Ｈ），０．７５（ｓ，３Ｈ）． ^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ２０５．００，１９９．６５，１７１．３１，１２３．９９，５５．２５，５３．８４，５１．０４，４９．５４，４３．１０，３９．３９，３８．６８，３５．８０，３５．６８，３４．０６，３２．９３，３２．０５，２７．１１，２４．６４，２１．０６，１７．４８，１３．５３，１２．４４．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_２２Ｈ_３２ＮａＯ_２［Ｍ＋Ｎａ］^＋，３５１．２２９５，ｆｏｕｎｄ３５１．２２９２．

【0052】

（２）フラスコにＢＡ（２４．７９ｇ、０．０７５ｍｏｌ）、ＴＥＭＰＯ（１１８ｍｇ、０．７５０ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２００ｍＬ）、炭酸水素ナトリウム（８．８ｇ、０．１０５ｍｏｌ）、ＮＢＳ（１７．８ｇ、１００ｍｍｏｌ）、臭化テトラブチルアンモニウム（２．４２ｇ、７．５ｍｍｏｌ）及び水（１６０ｍＬ）を順次に加え、０℃で６時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、チオ硫酸ナトリウム５水和物溶液（８ｇチオ硫酸ナトリウム５水和物／１６０ｍＬ水）を加え、５～１０℃で２０分間撹拌し、分液し、水相をジクロロメタン（１５０ｍＬ×２）で抽出し、有機層を合わせ、１％水酸化ナトリウム溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して、式（２）の化合物（２３．６ｇの白色固体、モル収率：９５．２％）を得た。

【0053】

（３）フラスコに式（１）の化合物ＢＡ（２４．７９ｇ、７５ｍｍｏｌ）、ＩＢＸ（４２ｇ、１５０ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２５０ｍＬ）及びＤＭＳＯ（２００ｍＬ）を順次加え、２５℃で５時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水を加え、吸引濾過し、濾液を減圧濃縮し、ジクロロメタン（４００ｍＬ）及び水（３００ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を１％水酸化ナトリウム溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して、式（２）の化合物（２３．２ｇの白色固体、モル収率：９３．５％）を得た。

【0054】

実施例２式（３）の化合物の製造

【化37】

この実施例では、異なる実験条件下での式（３）の化合物の製造結果を示す。

【0055】

（１）フラスコにトリフェニルホスフィン（２３．９７ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、３，３－ジメチルアリルブロミド（１３．６２ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、２３０ｍＬのトルエンを加え、８０℃で３０分間撹拌して反応させ、２時間加熱還流させた後、２５℃まで冷却させ、氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１０．２６ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）を加え、０．５時間撹拌し、その後、式（２）の化合物（２３．０９ｇ、７０．３０ｍｍｏｌ）をバッチで加え、１０℃で０．５時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２３ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２ＭのＨＣｌを加えてＰＨを６～７に調節し、有機相を水（１２０ｍＬ×２）で洗浄し、減圧濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体を５０％のエタノール（８０ｍＬ）に加え、２５℃で１時間スラリー化し、濾過し、ケーキを５０％のエタノール（１３ｍＬ）で濯ぎ、式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、３Ｅ／３Ｚ≒８７／１３、２４．９ｇの白色固体、モル収率：９３．１４％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_２７Ｈ_４０ＮａＯ［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４０３．２９７１，ｆｏｕｎｄ４０３．２９６７．

【0056】

注：本発明において、式（３）の化合物をアセチル化し、還元して得られる中間体である式（４）の化合物、式（５）の化合物及び式（６）の化合物のＥ／Ｚ配置の比は基本的に変化せず、Ｃ－２２位とＣ－２３位との間の二重結合は、Ｅ配置がメインで、Ｚ配置がサブである（３Ｅ／３Ｚ≒８７／１３）。式（６）の化合物におけるＣ－２２位とＣ－２３位の間の二重結合のシス－トランス異性体は、ラネーニッケルによって還元され、脱保護又は加水分解されて、生成物であるコレステロールが得られる。従って、対応する化合物のＥ／Ｚ配置の比は、後の実施例で表記しない。

【0057】

（２）フラスコにトリフェニルホスフィン（２３．９７ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、３，３－ジメチルアリルブロミド（１３．６２ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、２３０ｍＬのｎ－ヘプタンを加え、３時間加熱還流させた後、２５℃まで冷却させ、氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１０．２６ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）を加え、０．５時間撹拌し、その後、式（２）の化合物（２３．００ｇ、７０．０７ｍｍｏｌ）をバッチで加え、１５℃で１時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却させ、水（２３ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２ＭのＨＣｌを加えてＰＨを６～７に調節し、有機相を水（１２０ｍＬ×２）で洗浄し、減圧濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体を５０％のエタノール（７０ｍＬ）に加え、２５℃で１時間スラリー化し、濾過し、ケーキを５０％のエタノール（１３ｍＬ）で濯ぎ、式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、２４．５ｇの白色固体、モル収率：９１．９４％）を得た。

【0058】

（３）フラスコにトリフェニルホスフィン（２３．９７ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、３，３－ジメチルアリルブロミド（１３．６２ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、２３０ｍＬのトルエンを加え、８０℃で３０分間撹拌して反応させ、２時間加熱還流させた後、２５℃まで冷却させ、氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１１．２７ｇ、１００．５ｍｍｏｌ）を加え、４０分間撹拌し、その後、式（２）の化合物（２３．０９ｇ、７０．３０ｍｍｏｌ）をバッチで加え、１０℃で２時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２３ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２ＭのＨＣｌを加えてＰＨを６～７に調節し、有機相を水（１２０ｍＬ×２）で洗浄し、減圧濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体を５０％のエタノール（７０ｍＬ）に加え、２５℃で１時間スラリー化し、濾過し、ケーキを５０％のエタノール（１３ｍＬ）で濯ぎ、式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、２４．７３ｇの白色固体、モル収率：９２．５％）を得た。

【0059】

（４）フラスコにトリフェニルホスフィン（２３．９７ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、３，３－ジメチルアリルブロミド（１３．６２ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、２３０ｍＬのトルエンを加え、２時間還流させた後、２５℃まで冷却させ、氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（９．２３ｇ、８２．２６ｍｍｏｌ）を加え、０．５時間撹拌し、その後、式（２）の化合物（１５．００ｇ、４５．７０ｍｍｏｌ）を加え、２．５時間加熱還流させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却させ、水（２３ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２ＭのＨＣｌを加えてＰＨを６～７に調節し、有機相を水（１００ｍＬ×２）で洗浄し、減圧濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体を５０％のエタノール（４５ｍＬ）に加え、２５℃で１時間スラリー化し、式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、１６．７２ｇの白色固体、モル収率：９６．２０％）を得た。

【0060】

（５）フラスコにトリフェニルホスフィン（２３．９７ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、３，３－ジメチルアリルクロリド（９．５６ｇ、９１．４０ｍｍｏｌ）、２３０ｍＬのトルエンを加え、１０時間還流させた後、２５℃まで冷却させ、氷浴下で、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（９．２３ｇ、８２．２６ｍｍｏｌ）を加え、０．５時間撹拌し、その後、式（２）の化合物（７．５ｇ、２２．８５ｍｍｏｌ）を加え、４．５時間還流させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却させ、水（２３ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、２ＭのＨＣｌを加えてＰＨを６～７に調節し、有機相を水（１００ｍＬ×２）で洗浄し、減圧濃縮して、乳白色の固体を得た。上記固体を５０％のエタノール（４５ｍＬ）に加え、２５℃で１時間スラリー化し、式（３）の化合物（３Ｅ及び３Ｚ、６．２６ｇの白色固体、モル収率：７２．０４％）を得た。

【0061】

実施例３式（４）の化合物の製造

【化38】

この実施例では、異なる実験条件下での式（４）の化合物の製造結果を示す。

【0062】

（１）フラスコに式（３）の化合物（１５ｇ、３９．４４ｍｍｏｌ）、無水酢酸（１６．０９ｇ、１５７．７６ｍｍｏｌ）及び塩化アセチル（３．０８ｇ、３９．４４ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で６時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却させ、減圧濃縮し、わずかに冷却させ、ピリジン（２ｇ）及びメタノール（７５ｍＬ）を加え、撹拌して分散させ、減圧濃縮し、わずかに冷却させ、メタノール（７５ｍＬ）を加え、１０分間撹拌して還流させ、反応溶液を２５℃に冷却させ、３０分間撹拌し、濾過し、ケーキをメタノール（２４ｍＬ）で濯ぎ、吸引濾過し、乾燥させて、式（４）の化合物（４Ｅ及び４Ｚ、１５．５０ｇの白色固体、モル収率：９３．０３％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_２９Ｈ_４２ＮａＯ_２［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４４５．３０７７，ｆｏｕｎｄ４４５．３０８１．

【0063】

（２）フラスコに式（３）の化合物（１５ｇ、３９．４４ｍｍｏｌ）、無水酢酸（９６．６ｇ、９４６．２ｍｍｏｌ）、塩化アセチル（７７．４ｇ、９８６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３０．５８ｇ、２３６．６ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で３時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却させ、減圧濃縮し、わずかに冷却させ、反応溶液を氷水（２００ｍＬ）に加え、１５分間撹拌し、濾過し、水を抜き、得られた固体をメタノール（６０ｍＬ）及びピリジン（１．５ｍＬ）に加え、２５℃で３０分間スラリー化し、濾過し、ケーキをメタノール（１０ｍＬ）で濯ぎ、吸引濾過し、乾燥させて、式（４）の化合物（４Ｅ及び４Ｚ、１６ｇの白色固体、モル収率：９６．０４％）を得た。

【0064】

（３）フラスコに式（３）の化合物（１５ｇ、３９．４４ｍｍｏｌ）、無水酢酸（９６．３ｇ、９４３．２ｍｍｏｌ）、塩化アセチル（７４．１ｇ、９４３．２ｍｍｏｌ）を加え、６５℃で４時間還流して反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却させ、減圧濃縮し、わずかに冷却させ、反応溶液を氷水（３００ｍＬ）に加え、１５分間撹拌し、濾過し、水を抜き、得られた固体をメタノール（６０ｍＬ）及びピリジン（３ｍＬ）に加え、２５℃で３０分間スラリー化し、濾過し、ケーキをメタノール（７．５ｍＬ）で濯ぎ、吸引濾過し、乾燥させて、式（４）の化合物（４Ｅ及び４Ｚ、１４．９９ｇの白色固体、モル収率：８９．９７％）を得た。

【0065】

（４）フラスコに式（３）の化合物（１５ｇ、３９．４４ｍｍｏｌ）、無水酢酸（９５．５１ｇ、９３６．２３ｍｍｏｌ）、塩化アセチル（７３．４９ｇ、９３６．２３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルアミン（１１．９８ｇ、１１８．３５ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で４時間還流して反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃まで冷却させ、減圧濃縮し、わずかに冷却させ、反応溶液を氷水（３００ｍＬ）に加え、１５分間撹拌し、濾過し、水を抜き、得られた固体をメタノール（６０ｍＬ）及びピリジン（３ｍＬ）に加え、２５℃で３０分間スラリー化し、濾過し、ケーキをメタノール（７．５ｍＬ）で濯ぎ、吸引濾過し、乾燥させて、式（４）の化合物（４Ｅ及び４Ｚ、１６．３２ｇの白色固体、モル収率：９７．９６％）を得た。

【0066】

実施例４式（５）の化合物の粗生成物の製造

【化39】

この実施例では、異なる実験条件下での式（５）の化合物の粗生成物の製造結果を示す。

【0067】

（１）フラスコに式（４）の化合物（９．８０ｇ、２３．２１ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフランとエタノールと水の混合溶媒（１９６ｍＬ、Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１０／５／３）を加え、水素化ホウ素ナトリウム（３．５１ｇ、９２．８４ｍｍｏｌ）をバッチで加え、３０℃で８時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、６Ｍ塩酸を加えて反応溶液のＰＨを７～８に調節し、反応溶液中に多量の固体が析出し、濾過し、濾液を取って減圧下で溶媒を蒸発させ、多量の固体が析出し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を水（１００ｍＬ）で洗浄し、撹拌し、層を分離し、減圧下で溶媒を蒸発させ、式（５）の化合物の粗生成物（８．７１ｇの淡黄色固体、モル収率：９８．０９％）を得、直接に次のステップの反応に使用した。

【0068】

注：水素化ホウ素ナトリウムを還元剤として用いて得られる式（５）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（５）（５Ｅ及び５Ｚ、３β－ＯＨ）及び（５’）（５’Ｅ及び５’Ｚ、３α－ＯＨ）であり、^１ＨＮＭＲ判定によれば、それらの比は化合物（５）／（５’）≒９２／８であった。以下の実施例で得られる式（５）化合物の粗生成物中の５（３β－ＯＨ）／５’（３α－ＯＨ）の比は、基本的にこの実施例と一致しているため、以降は表記しない。

【0069】

（２）フラスコに式（４）の化合物（９．８０ｇ、２３．２１ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン、エタノールと水の混合溶媒（１４７ｍＬ、Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１０／５／２）を加え、水素化ホウ素ナトリウム（２．６４ｇ、６９．６３ｍｍｏｌ）をバッチで加え、２５℃で１０時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、６Ｍ塩酸を加えて反応溶液のＰＨを７～８に調節し、反応溶液中に多量の固体が析出し、濾過し、濾液を取って減圧下で溶媒を蒸発させ、多量の固体が析出し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を水（１００ｍＬ）で洗浄し、撹拌し、層を分離し、減圧下で溶媒を蒸発させ、式（５）の化合物の粗生成物（８．７９ｇの淡黄色固体、モル収率：９８．９％）を得、直接に次のステップの反応に使用した。

【0070】

（３）フラスコに式（４）の化合物（９．８０ｇ、２３．２１ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン、メタノールと水の混合溶媒（９５ｍＬ、Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１８／９／１）を加え、水素化ホウ素ナトリウム（１．７６ｇ、４６．４４ｍｍｏｌ）をバッチで加え、２５℃で６時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、３Ｍの塩酸を加えて反応溶液のＰＨを７～８に調節し、反応溶液中に多量の固体が析出し、濾過し、濾液を取って減圧下で溶媒を蒸発させ、多量の固体が析出し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を水（１００ｍＬ）で洗浄し、撹拌し、層を分離し、減圧下で溶媒を蒸発させ、式（５）の化合物の粗生成物（８．７７ｇの淡黄色固体、モル収率：９８．７６％）を得、直接に次のステップの反応に使用した。

【0071】

（４）フラスコに式（４）の化合物（９．８０ｇ、２３．２１ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン、エタノールと水の混合溶媒（２００ｍＬ、Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１０／５／３）を加え、水素化ホウ素カリウム（５．０１ｇ、９２．８４ｍｍｏｌ）をバッチで加え、３０℃で８時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、６Ｍ塩酸を加えて反応溶液のＰＨを７～８に調節し、反応溶液中に多量の固体が析出し、濾過し、濾液を取って減圧下で溶媒を蒸発させ、多量の固体が析出し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を水（１００ｍＬ）で洗浄し、撹拌し、層を分離し、減圧下で溶媒を蒸発させ、式（５）の化合物の粗生成物（８．８０ｇの淡黄色固体、モル収率：９９．１％）を得、直接に次のステップの反応に使用した。
注：水素化ホウ素カリウムで還元されて得られる式（５）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（５）（５Ｅ及び５Ｚ、３β－ＯＨ）及び（５’）（５’Ｅ及び５’Ｚ、３α－ＯＨ）であり、このうち、化合物５’（３α－ＯＨ）の含有量がより高く、^１ＨＮＭＲ判定によれば、化合物５（３β－ＯＨ）／５′（３α－ＯＨ）≒８５／１５であった。

【0072】

実施例５式（６）の化合物の粗生成物の製造
１．式（６－１）の化合物の粗生成物の製造

【化40】

フラスコに酢酸エチル（７６ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解させ、ＤＭＡＰ（０．２４５ｇ、２ｍｍｏｌ）及び無水酢酸（６．１３ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（７６ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を水、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮して式（６－１）の化合物の粗生成物（８．３ｇの白色固体、モル収率：９７．８％）を得た。

【0073】

注：式（６－１）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－１）（６－１Ｅと６－１Ｚ）及び（６’－１）（６’－１Ｅと６’－１Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－１）／（６’－１）≒９２／８であった。

【0074】

２．式（６－２）の化合物の粗生成物の製造

【化41】

フラスコに酢酸エチル（５０ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（５ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解させ、ＤＭＡＰ（０．１５９ｇ、１．３ｍｍｏｌ）及び無水プロピオン酸（５．０７ｇ、３９ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で５時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（７６ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を水、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－２）の化合物の粗生成物（５．６ｇの白色固体、モル収率：９８．２％）を得た。
注：式（６－２）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－２）（６－２Ｅと６－２Ｚ）及び（６’－２）（６’－２Ｅと６’－２Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－２）／（６’－２）≒９２／８であった。

【0075】

３．式（６－３）の化合物の粗生成物の製造

【化42】

フラスコに酢酸エチル（５０ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（５ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解させ、ＤＭＡＰ（０．１５９ｇ、１．３ｍｍｏｌ）及び無水酪酸（６．２ｇ、３９ｍｍｏｌ）を加え、５５℃で４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（２０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（７６ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を水、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－３）の化合物の粗生成物（５．７１ｇの白色固体、モル収率：９７％）を得た。
注：式（６－３）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－３）（６－３Ｅと６－３Ｚ）及び（６’－３）（６’－３Ｅと６’－３Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－３）／（６’－３）≒９２／８であった。

【0076】

４．式（６－４）の化合物の粗生成物の製造

【化43】

フラスコに酢酸エチル（１１５ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（７．６５ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解させ、ＤＭＡＰ（０．４８８ｇ、４ｍｍｏｌ）及び無水安息香酸（１３．５ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、減圧濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－４）の化合物の粗生成物（９．３４ｇの白色固体、モル収率：９６％）を得た。
注：式（６－４）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－４）（６－４Ｅと６－４Ｚ）及び（６’－４）（６’－４Ｅと６’－４Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－４）／（６’－４）≒９２／８であった。

【0077】

５．式（６－５）の化合物の粗生成物の製造

【化44】

フラスコにＤＣＭ（５０ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（５ｇ、１３．０７ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解させ、トリエチルアミン（２．６４ｇ、２６．１４ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（０．３１８ｇ、２．６１ｍｍｏｌ）を加え、ｐ－クロロベンゾイルクロリド（３．４ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり滴下し、Ｎ_２で保護しながら３５℃で１２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（３０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、分液し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、２Ｎ希塩酸、水、飽和ＮａＣｌで順次に洗浄し、減圧濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で５時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－５）の化合物の粗生成物（６．４ｇの白色固体、モル収率：９４．８％）を得た。
注：式（６－５）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－５）（６－５Ｅと６－５Ｚ）及び（６’－５）（６’－５Ｅと６’－５Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－５）／（６’－５）≒９２／８であった。

【0078】

６．式（６－６）の化合物の粗生成物の製造

【化45】

フラスコにＤＣＭ（１００ｍＬ）、式（５）の化合物の粗生成物（１０ｇ、２６．１４ｍｍｏｌ）を加え、攪拌して透明に溶解させ、ＴＢＳＣｌ（９．８５ｇ、６５．３５ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（７．１２ｇ、１０４．５６ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、水（１００ｍＬ）を加えて１０分間撹拌し、分液し、有機相を水及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、減圧濃縮し、メタノール／水を加え、２５℃で３時間スラリー化し、吸引濾過して式（６－６）の化合物の粗生成物（１２．４３ｇの白色固体、モル収率：９５％）を得た。
注：式（６－６）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（６－６）（６－６Ｅと６－６Ｚ）及び（６’－６）（６’－６Ｅと６’－６Ｚ）であり、それらの比は化合物（６－６）／（６’－６）≒９２／８であった。

【0079】

実施例６式（７）の化合物の製造
１．式（７－１）の化合物の製造

【化46】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－１）の化合物の粗生成物（５ｇ、１１．７７ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（５ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３５℃で７時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧濃縮し、式（７－１）の化合物の粗生成物（白色固体、ガスクロマトグラフィー純度：９１．２５％、図１を参照）を得、直接に精製ステップに使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流させ、１５℃まで自然冷却させ、５時間撹拌し、吸引濾過して式（７－１）の化合物（４．２ｇの白色固体、モル収率：８４％、ガスクロマトグラフィー純度：９９．４０％、図２を参照）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．４０（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６８－４．５７（ｍ，１Ｈ），２．４０－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ），２．０５－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８１（ｍ，３Ｈ），１．６６－１．４３（ｍ，８Ｈ），１．４１－１．３３（ｍ，３Ｈ），１．３１－１．２４（ｍ，１Ｈ），１．２２－１．０７（ｍ，７Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），１．０３－０．９６（ｍ，２Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７０．５５，１３９．６７，１２２．６６，７３．９９，５６．６９，５６．１４，５０．０４，４２．３２，３９．７４，３９．５３，３８．１３，３７．００，３６．６０，３６．１９，３５．８０，３１．９１，３１．８７，２８．２４，２８．０２，２７．７８，２４．２９，２３．８３，２２．８３，２２．５７，２１．４５，２１．０３，１９．３２，１８．７２，１１．８６．
注：式（７－１）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（７－１）及び（７’－１）であり、それらの比は化合物（７－１）／（７’－１）≒９２／８であった。

【0080】

２．式（７－２）の化合物の製造

【化47】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－２）の化合物の粗生成物（５ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（７．５ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、５５℃で７時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧濃縮し、式（７－２）の化合物の粗生成物を白色固体として得、直接に精製ステップに使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流させ、１５℃まで自然冷却させ、４時間撹拌し、吸引濾過して式（７－２）の化合物（４．０ｇの白色固体、モル収率：８０％、ガスクロマトグラフィー純度：９８．３５％、図３を参照）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．３９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６７－４．６２（ｍ，１Ｈ），２．４４－２．２４（ｍ，４Ｈ），２．１０－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９３－１．８１（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．４３（ｍ，８Ｈ），１．４０－１．３４（ｍ，３Ｈ），１．２９－１．２５（ｍ，１Ｈ），１．２０－１．１０（ｍ，９Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），１．０３－０．９６（ｍ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７３．９６，１３９．７５，１２２．５９，５６．７０，５６．１４，５０．０３，４２．３２，３９．７４，３９．５３，３８．１６，３７．０１，３６．６１，３６．１９，３５．８０，３１．９１，３１．８７，２８．２４，２８．０２，２７．９４，２７．８１，２４．２９，２３．８３，２２．８３，２２．５７，２１．０４，１９．３３，１８．７２，１１．８６，９．１９．
注：式（７－２）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（７－２）及び（７’－２）であり、それらの比は化合物（７－２）／（７’－２）≒９２／８であった。

【0081】

３．式（７－３）の化合物の製造

【化48】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－３）の化合物の粗生成物（５ｇ、１１ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（５ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３５℃で１０時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧濃縮し、式（７－３）の化合物の粗生成物を白色固体として得、直接に精製ステップに使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流させ、１５℃まで自然冷却させ、５時間撹拌し、吸引濾過して式（７－３）の化合物（４．１ｇの白色固体、モル収率：８２％、ガスクロマトグラフィー純度：９９．５％、図４を参照）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．３９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７４－４．５８（ｍ，１Ｈ），２．３３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．０９－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９３－１．８０（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．６５－１．４１（ｍ，７Ｈ），１．４１－１．３１（ｍ，３Ｈ），１．３１－１．２４（ｍ，１Ｈ），１．２３－１．０６（ｍ，７Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），１．０３－０．９９（ｍ，２Ｈ），０．９９－０．９２（ｍ，７Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．７，２．７Ｈｚ，６Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）． ^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７３．１４，１３９．７４，１２２．５９，７３．６８，５６．７０，５６．１４，５０．０３，４２．３２，３９．７４，３９．５３，３８．１８，３７．０１，３６．６０，３６．１９，３５．８０，３１．９１，３１．８７，２８．２４，２８．０２，２７．８３，２４．２９，２３．８４，２２．８３，２２．５７，２１．０４，１９．３３，１８．７２，１８．５６，１３．６５，１１．８６．
注：式（７－３）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（７－３）及び（７’－３）であり、それらの比は化合物（７－３）／（７’－３）≒９２／８であった。

【0082】

４．式（７－４）の化合物の製造

【化49】

フラスコにテトラヒドロフラン（３５ｍＬ）と酢酸エチル（３５ｍＬ）、式（６－４）の化合物の粗生成物（４．８７ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（４．８７ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３５℃で２４時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧濃縮し、式（７－４）の化合物の粗生成物を白色固体として得、直接に精製ステップに使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流させ、１５℃まで自然冷却させ、４～５時間撹拌し、吸引濾過して式（７－４）の化合物（４．１ｇの白色固体、モル収率：８４．２％、ガスクロマトグラフィー純度：９８．０８％、図５を参照）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ８．１１－７．９９（ｍ，２Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），５．４２（ｄｄ，Ｊ＝５．１，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８９－４．８４（ｍ，１Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．０５－１．９７（ｍ，３Ｈ），１．９４－１．９０（ｍ，１Ｈ），１．８６－１．８０（ｍ，１Ｈ），１．７７－１．７３（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．４５（ｍ，６Ｈ），１．４１－１．３０（ｍ，３Ｈ），１．２９－１．０５（ｍ，１１Ｈ），１．０４－０．９９（ｍ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １６６．０１，１３９．６９，１３２．７２，１３０．８７，１２９．５５，１２８．２７，１２２．８０，５６．７１，５６．１５，５０．０６，４２．３４，３９．７６，３９．５４，３８．２３，３７．０５，３６．６８，３６．２０，３５．８２，３１．９５，３１．９０，２８．２５，２８．０３，２７．９０，２４．３１，２３．８５，２２．８４，２２．５８，２１．０７，１９．４０，１８．７４，１１．８８．
注：式（７－４）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（７－４）及び（７’－４）であり、それらの比は化合物（７－４）／（７’－４）≒９２／８であった。

【0083】

５．式（７－５）の化合物の製造

【化50】

フラスコにテトラヒドロフラン（３９ｍＬ）と酢酸エチル（３９ｍＬ）、式（６－５）の化合物の粗生成物（５．１６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（１０ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３０℃で２４時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧濃縮し、式（７－５）の化合物の粗生成物を白色固体として得、直接に精製ステップに使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流させ、１５℃まで自然冷却させ、４時間撹拌し、吸引濾過して式（７－５）の化合物（４．２３ｇの白色固体、モル収率：８２％、ガスクロマトグラフィー純度：９７．９６％、図６を参照）を得た。^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ８．０２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．４４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８８－４．８２（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），２．０６－１．９８（ｍ，３Ｈ），１．９５－１．９１（ｍ，１Ｈ），１．９０－１．８１（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．６９（ｍ，１Ｈ），１．６７－１．４４（ｍ，７Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，３Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，７Ｈ），１．０９（ｓ，３Ｈ），１．０７－０．９９（ｍ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．４Ｈｚ，６Ｈ），０．７１（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １６５．７８，１６３．２０，１３９．７９，１３１．５５，１２３．３１，１２２．６９，１１３．５０，６０．４１，５８．５０，５６．７１，５６．１５，５５．４２，５０．０６，４２．３３，３９．７６，３９．５３，３８．３０，３７．０７，３６．６７，３６．２０，３５．８１，３１．９５，３１．９０，２８．２５，２８．０３，２７．９５，２４．３１，２３．８４，２２．８３，２２．５８，２１．０６，１９．４０，１８．７３，１８．４６，１４．２１，１１．８７．
注：式（７－５）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（７－５）及び（７’－５）であり、それらの比は化合物（７－５）／（７’－５）≒９２／８であった。

【0084】

６．式（７－６）の化合物の製造

【化51】

フラスコに酢酸エチル（７５ｍＬ）、式（６－６）の化合物の粗生成物（５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌して透明に溶解させ、その後にラネーＮｉ（５ｇ、湿重量、標準手順に従って活性化）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３５℃で１２時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、珪藻土濾過でラネーＮｉを除去し、濾液を減圧濃縮し、式（７－６）の化合物の粗生成物を白色固体として得、直接に精製ステップに使用した。この白色固体をメタノールと酢酸エチルの混合溶液に加え、溶液が透明になるまで加熱還流させ、１５℃まで自然冷却させ、４時間撹拌し、吸引濾過して式（７－６）の化合物（４．０５ｇの白色固体、モル収率：８１％、ガスクロマトグラフィー純度：９８．５７％、図７を参照）を得た。^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．４３－５．３０（ｍ，１Ｈ），３．５３－３．４７（ｍ，１Ｈ），２．３２－２．２６（ｍ，１Ｈ），２．２１－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．０７－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．８９－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．７７－１．７０（ｍ，１Ｈ），１．６２－１．４５（ｍ，８Ｈ），１．４１－１．３１（ｍ，３Ｈ），１．３１－１．２４（ｍ，１Ｈ），１．１８－１．０６（ｍ，７Ｈ），１．０２（ｓ，４Ｈ），１．０１－０．９８（ｍ，１Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．４Ｈｚ，６Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １４１．６０，１２１．１９，７２．６７，５６．８２，５６．１６，５０．２３，４２．８４，４２．３４，３９．８２，３９．５３，３７．４０，３６．６１，３６．２０，３５．７９，３２．１０，３１．９６，３１．９２，２８．２５，２８．０３，２５．９６，２４．３１，２３．８２，２２．８３，２２．５７，２１．０８，１９．４４，１８．７３，１８．２８，１１．８６．
注：式（７－６）の化合物の粗生成物の主成分は、化合物（７－６）及び（７’－６）であり、それらの比は化合物（７－６）／（７’－６）≒９２／８であった。

【0085】

実施例７コレステロールの製造
１．式（７－１）の化合物の加水分解によるコレステロールの製造

【化52】

フラスコにメタノール（４０ｍＬ）とＫ_２ＣＯ_３（１．２８ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解させた後、Ｎ_２保護下、式（７－１）の化合物（４ｇ、９．３３ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱して２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却させ、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてＰＨを７～８に調節し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、ケーキに水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥させて精製コレステロール（ＣＣＤＣ２０９９４４２、単結晶構造は図８を参照、３．５７ｇの白色固体、モル収率：９９．１％、ガスクロマトグラフィー純度：９９．１０％、図９を参照）を得た。ｍｐ：１４７～１４９℃。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．３６－５．３４（ｍ，１Ｈ），３．５５－３．４９（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．１９（ｍ，２Ｈ），２．０６－１．９２（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．７９（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．１９（ｍ，１４Ｈ），１．１９－１．０３（ｍ，７Ｈ），１．０１（ｓ，３Ｈ），０．９８－０．９３（ｍ，１Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．８６（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．８Ｈｚ，６Ｈ），０．６８（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １４０．７７，１２１．７３，７１．８２，５６．７８，５６．１７，５０．１４，４２．３３，４２．３２，３９．８０，３９．５３，３７．２７，３６．５２，３６．２０，３５．８０，３１．９３，３１．９２，３１．６８，２８．２５，２８．０３，２４．３１，２３．８４，２２．８４，２２．５８，２１．１０，１９．４１，１８．７３，１１．８７．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_２７Ｈ_４６ＮａＯ［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４０９．３４４１，ｆｏｕｎｄ４０９．３１２１．

【0086】

２．式（７－２）の化合物の加水分解によるコレステロールの製造

【化53】

フラスコにメタノール（４０ｍＬ）とＫ_２ＣＯ_３（１．５７ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解させた後、Ｎ_２保護下、式（７－２）の化合物（４ｇ、９ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱して２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却させ、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてＰＨを７～８に調節し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、ケーキに水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥させて精製コレステロール（３．４６ｇの白色固体、モル収率：９８．８％、ガスクロマトグラフィー純度：９８．９６％、図１０を参照）を得た。

【0087】

３．式（７－３）の化合物の加水分解によるコレステロールの製造

【化54】

フラスコにメタノール（４０ｍＬ）とＫ_２ＣＯ_３（１．５７ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解させた後、Ｎ_２保護下、式（７－３）の化合物（４ｇ、８．７６ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱して２時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却させ、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてＰＨを７～８に調節し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、ケーキに水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥させて精製コレステロール（３．３３ｇの白色固体、モル収率：９８．５％、ガスクロマトグラフィー純度：９９．４１％、図１１を参照）を得た。

【0088】

４．式（７－４）の化合物の加水分解によるコレステロールの製造

【化55】

フラスコにメタノール（２５ｍＬ）とＫＯＨ（０．３１ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解させた後、Ｎ_２保護下、式（７－４）の化合物（２．４５ｇ、５ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で６時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却させ、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてＰＨを５～６に調節し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、ケーキに８０％のエタノール（１０ｍｌ）を更に加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥させて精製コレステロール（１．８３ｇの白色固体、モル収率：９４．８％、ガスクロマトグラフィー純度：９９．４４％、図１２を参照）を得た。

【0089】

５．式（７－５）の化合物の加水分解によるコレステロールの製造

【化56】

フラスコにメタノール（２５ｍＬ）とＫＯＨ（０．３１ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解させた後、Ｎ_２保護下、式（７－５）の化合物（２．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で８時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却させ、２ｍｏｌ／Ｌの希塩酸を加えてＰＨを５～６に調節し、減圧下でメタノールを蒸発させ、水（２０ｍＬ）を加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、ケーキに８０％のエタノール（１０ｍｌ）を更に加え、２５℃で２時間撹拌し、吸引濾過し、乾燥させて精製コレステロール（１．８ｇの白色固体、モル収率：９３．３％、ガスクロマトグラフィー純度：９８．６９％、図１３を参照）を得た。

【0090】

６．式（７－６）の化合物の脱保護によるコレステロールの製造

【化57】

フラスコにテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）、式（７－６）の化合物（２．５ｇ、５ｍｍｏｌ）を加え、透明に溶解させた後、Ｎ_２保護下、ＴＢＡＦ・３Ｈ_２Ｏ（７．８８ｇ、２５ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で２４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、飽和塩化アンモニウムを加えてクエンチし、減圧下でテトラヒドロフランを蒸発させ、ジクロロメタン（７０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、分液し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、２Ｎ希塩酸、水、飽和ＮａＣｌで順次に洗浄し、減圧濃縮して粗コレステロールを得、ケーキに８０％エタノール（１０ｍｌ）を加え、２５℃で３時間スラリー化し、吸引濾過して精製コレステロール（１．８４ｇの白色固体、モル収率：９５．３％、ガスクロマトグラフィー純度：９８．６％、図１４を参照）を得た。

【0091】

式（６－１）の化合物をラネーＮｉ水素化還元して式（７－１）の化合物を得る反応過程で導入される可能性のある不純物構造は、式（８－１）、（８－２）、（８－３）及び（８－４）の化合物である。

【化58】

【0092】

本発明の実施例６で得られた式（７－１）の化合物の粗生成物ガスクロマトグラム（図１を参照）において、式（８－１）、（８－２）、（８－３）、（８－４）の化合物の保持時間は、９．１２３分（０．１１％）、９．３１８分（０．４２％）、９．５３８分（０．１６％）、１０．３２４分（０．３９％）のいずれか１つに対応する。

【0093】

本発明の式（７－１）の化合物の粗生成物は１回の再結晶により精製され、純度は９１．２５％から９９．４０％に増加し（ガスクロマトグラムは図２を参照）、この際、３α－ＯＲ副生成物は基本的に除去され、対応する保持時間に対応する不純物の含有量も減少し、それぞれ９．１６８分（０．１９％）、９．３８２分（０．１２％）、９．５７６分（０．０５％）、１０．３６６分（０．１７％）であり、この再結晶操作方法のモル収率は８４％であった。アルカリ加水分解によって得られたコレステロールのガスクロマトグラフィー純度は、９９．１０％であり（図９を参照）、これは式（７－１）の化合物の純度と基本的に一致した。

【0094】

比較例１
特許文献（背景技術のスキーム２、ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に報告されているように、スチグマステロール分解生成物を原料として使用し、５ステップの反応を経て総モル収率６７％でコレステロールを合成した。この特許文献の技術スキームにおける第１のステップの反応は、以下の反応式１に示される通りである。

【化59】

【0095】

特許文献ＣＮ１０５２１８６１０Ａに記載された反応式１では、ＢＡ酸化後の式（０２）の化合物を原料として使用し、エタノールを溶媒として使用し、ｐ－トルエンスルホン酸及びオルトギ酸トリエチルの作用下で、４０℃に加熱して４時間保持し、式（０３）の化合物（モル収率：９７．５０％）を得た。

【0096】

上記の特許文献によって提供される実験方法に従って、本発明は、溶媒としてエタノール、基質として式（０２）の化合物を使用し、ｐ－トルエンスルホン酸及びオルトギ酸トリエチルの触媒作用下で、４０℃で保持して４時間反応させ、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された後、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）の方法に従って後処理を行うと、式（０３’）の化合物（反応式２に示す通りである）が得られたが、当該特許文献に記載の化合物とは一致しなかった。本発明では、オルトギ酸トリエチルの量を減らすことも試みたが、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された後、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に記載されている反応式１の結果は得られず、下記反応式３の結果が得られた。これは、特許文献ＣＮ１０５２１８６１０Ａに報告されている方法に従って式（０２）の化合物の３位のカルボニル基を保護すると、Ｃ－２２位のアルデヒド基が優先的に保護されてアセタールを形成し、反応式２又は反応式３に示される式（０３’）及び（０３’’）の化合物が得られるが、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に記載の式（０３）の化合物が得られないことを示している。明らかに、反応式２又は式３で示される式（０３’）及び（０３’’）の化合物は、その後のＷｉｔｔｉｇ反応を起こすことができない。

【化60】

【0097】

実験方法：エタノール（４ｍｌ）、オルトギ酸トリエチル（２ｍｌ）、式（０２）の化合物（２．００ｇ、７０．２０ｍｍｏｌ）及びｐ－トルエンスルホン酸（２０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、４０℃で保持して４時間反応させ、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された。氷浴下で酢酸ナトリウム（２０ｍｇ）を加え、ケーキを溶出液が中性になるまで水洗し、水切りし、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）で精製して、式（０３’）の化合物（２．３０ｇの無色の油状物、モル収率：８８％）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ５．２３－５．１９（ｍ１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８１－３．７０（ｍ，４Ｈ），３．６１－３．５５（ｍ，１Ｈ），３．４９－３．４１（ｍ，２Ｈ），２．３１－２．２５（ｍ，１Ｈ），２．１８－１．９６（ｍ，４Ｈ），１．８５－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．７１－１．５２（ｍ，７Ｈ），１．４３－１．３３（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２２－１．１８（ｍ，６Ｈ），０．９９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．９６（ｓ，３Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １５４．５２，１４１．０６，１１８．０３，１０６．０７，９９．０４，６４．６０，６３．３５，６２．１４，５６．４８，５１．８８，４８．３３，４２．５９，４０．３９，３９．６２，３５．１８，３３．８６，３１．９２，３１．８６，２７．７２，２５．５５，２４．４２，２１．１７，１８．９６，１５．４９，１５．３７，１４．６８，１１．９４，１１．８９．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_２８Ｈ_４６ＮａＯ_３［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４５３．３３３９，ｆｏｕｎｄ４５３．３３２８．

【0098】

実験方法：エタノール（４ｍｌ）、オルトギ酸トリエチル（１ｍｌ）、式（０２）の化合物（２．００ｇ、７０．２０ｍｍｏｌ）及びｐ－トルエンスルホン酸（２０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、４０℃で保持して４時間反応させ、原料が完全に反応したことがＴＬＣにより検出された。氷浴下で酢酸ナトリウム（２０ｍｇ）を加え、ケーキを溶出液が中性になるまで水洗し、水切りし、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）で精製して、式（０３’’）の化合物（２．３２ｇの無色の油状物、モル収率：９５％）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ５．６９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７８－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．５８－３．５３（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．４０（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．２１（ｍ，４Ｈ），２．０１－１．９７（ｍ，２Ｈ），１．８４－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．６９－１．５８（ｍ，３Ｈ），１．５３－１．４７（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．２７（ｍ，３Ｈ），１．２１－１．１７（ｍ，６Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，４Ｈ），１．１３－１．０８（ｍ，１Ｈ），１．０４－０．９８（ｍ，２Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９３－０．８６（ｍ，１Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９９．５８，１７１．５３，１２３．７６，１０５．９５，６４．５８，６３．４０，５５．３９，５３．８１，５１．８１，４２．５２，４０．３３，３９．４２，３５．６９，３５．６３，３３．９７，３２．９２，３２．０３，２７．６２，２４．３７，２１．０１，１７．３７，１５．４８，１５．３６，１１．９１，１１．８６．

【0099】

比較例２
特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に報告されている第２のステップのＷｉｔｔｉｇ反応は、次の反応式４に示されている。

【化61】

【0100】

この特許文献では、溶媒としてトルエンを使用し、トリフェニルホスフィン及び１－クロロ－３－メチルブタンを加えて２時間還流させ、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド及び式（０３）の化合物を加えて還流させて４時間反応させて、式（０４）の化合物を得、モル収率は９０．２９％であった。例えば、本発明は、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）の方法（比較例２、反応式４）を採用し、１－クロロ－３－メチルブタン又は１－ブロモ－３－メチルブタンを用いて、本発明の式（２）の化合物についてＷｉｔｔｉｇ反応を行い、反応結果は反応式５に示されるように、式（３’）の化合物が得られたが、予想された式（３）の化合物は得られなかった。これは、特許文献（ＣＮ１０５２１８６１０Ａ）に開示された方法が本発明に適用できないことを示している。

【化62】

【0101】

実験方法：トリフェニルホスフィン（７９７ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、１－クロロ－３－メチルブタン（３２４ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、トルエン（１０ｍＬ）をフラスコに加え、２時間還流反応させた後、２５℃まで冷却させ、氷浴下でカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３０７ｍｇ、２．７４．０２ｍｍｏｌ）を３回に分けて加え、氷浴下で０．５時間撹拌し、次いで式（２）の化合物（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、４時間還流反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却させ、２ＭのＨＣｌ（４ｍＬ）を加えて溶液を中性に調節し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を水、飽和食塩水で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）で精製して、式（３’）の化合物（５１６ｍｇの無色油状物、モル収率：８５％）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ９．５３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７２－２．６８（ｍ，１Ｈ），２．３９－２．２５（ｍ，６Ｈ），２．１０（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，４．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９４－１．８６（ｍ，３Ｈ），１．６８－１．５３（ｍ，８Ｈ），１．４３－１．３０（ｍ，４Ｈ），１．２５（ｓ，３Ｈ），１．１５（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ），０．７２（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ２０５．７１，１９８．５４，１６３．３０，１３３．３２，５５．４９，５４．３１，５１．８２，４８．８５，４２．２１，３９．０５，３８．９４，３８．４０，３５．３５，３５．１６，３３．９５，３２．１２，２９．７１，２８．４３，２７．３１，２６．４９，２３．７４，２３．２１，２２．５４，２０．７４，１７．８０，１３．６０，１２．９７．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_２７Ｈ_４２ＮａＯ_２［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４２１．３０７７，ｆｏｕｎｄ４２１．３０７５．

【0102】

トリフェニルホスフィン（７９７ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、１－ブロモ－３－メチルブタン（４５９ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、１０ｍＬのトルエンをフラスコに加え、２時間還流反応させた後、２５℃まで冷却させ、氷浴下でカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３０７ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）をバッチで加え、氷浴下で０．５時間撹拌し、次いで式（２）の化合物（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、２．５時間還流反応させた。ＴＬＣにより反応終了を検出した後、２５℃に冷却させ、２ＭのＨＣｌ（４ｍＬ）を加えて溶液を中性に調節し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を水、飽和食塩水で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）で精製して、式（３’）の化合物（５３４ｍｇの無色油状物、モル収率：８８％）を得た。

【0103】

比較例３
本発明において式（４）の化合物の３位エステル基をＮａＢＨ_４で還元して式（５）の化合物を得た後、式（５）の化合物をヒドロキシ保護、選択的水素化還元、脱保護又は加水分解反応を経てコレステロールを得た。また、まず還元剤としてラネーＮｉ／Ｈ_２を用いて側鎖の二重結合の選択的水素化還元反応を行い、その後ＮａＢＨ_４を用いて３位のエステル基を還元することを試みた。反応結果は反応式６に示されるように、式（６－１）及び（６’－１）の化合物が得られたが、予想された式（９）の化合物は得られなかった。これは、ラネーＮｉ／Ｈ_２を還元剤として使用する場合、側鎖を選択的水素化還元できないことを示している。従って、本発明の反応順序を変更することができない。

【化63】

【0104】

実験方法：フラスコに式（４）の化合物（２．１０ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）、ラネーＮｉ（４．２０ｇ、湿重量）、イソプロパノール（３０ｍＬ）、Ｈ_２（１ａｔｍ）を加え、３０℃で１１時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を検出した後、ラネーＮｉを濾過により除去し、濾液を減圧濃縮して式（６－１）及び式（６’－１）の混合物を得た。生成物の^１ＨＮＭＲの結果から判定すれば、式（６－１）の化合物と異性体式（６’－１）の化合物の比は１：０．２８であった。

【0105】

比較例４
本発明において式（６－１）の化合物の粗生成物をラネーＮｉ／Ｈ_２で還元させて、式（７－１）の化合物の粗生成物を合成した。以下の反応式７に示された通りである。

【化64】

【0106】

本発明では、還元剤としてＨ_２を使用し、触媒としてラネーＮｉを使用することにより、側鎖の二重結合を選択的水素化還元することにより、得られた式（７－１）の化合物の粗生成物は、過剰還元体である不純物の式（８－４）の化合物の含有量が低く（０．３９％）、精製によって除去するのが容易である。また、還元剤としてＨ_２、触媒として１０％Ｐｄ／Ｃを用いて側鎖の二重結合を選択的水素化還元する場合、得られた式（７－１）の化合物の粗生成物には、過剰還元体である不純物の式（８－４）の化合物の量が多くて３．４％超え（図１５を参照）、精製によって除去するのが困難であり、所期の目的を達成できなかった。これは、１０％Ｐｄ／Ｃは触媒活性が比較的高く、選択性が低く、側鎖の選択的水素化還元の触媒としてラネーＮｉに代わることができないことを示している。

【0107】

実験方法：フラスコに式（６－１）の化合物（１．５０ｇ、３．５６ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（１５０ｍｇ）、酢酸エチル（３０ｍＬ）を加え、Ｈ_２（１ａｔｍ）、３０℃で９時間反応させ、ガスクロマトグラフィーにより反応終了を検出した後、Ｐｄ／Ｃを濾過により除去し、濾液を減圧濃縮した。生成物のガスクロマトグラムにより判断すると、式（７－１）の化合物の含有量は９１．３％であり、過剰還元体である不純物の式（８－４）の化合物の含有量は３．４％であり、中間体不純物１、２、３の合計含有量は２％であった。

【0108】

比較例５
特許文献ＣＮ１１３２４８５５７Ａにおいて、以下の反応式８に示される通りである。
式（４）の化合物を水素化ホウ素ナトリウムで還元し、カラムクロマトグラフィーで精製して式（５）（３β－ＯＨ）の化合物を得、式（５）の化合物をラネーＮｉ触媒による選択的水素化反応にかけて、コレステロールの粗生成物を得、次に、前記コレステロールの粗生成物を１回カラムクロマトグラフィー又は再結晶によって精製して、精製品のコレステロールを得、ガスクロマトグラフィー純度は９５～９６％であった。

【化65】