特表 2025-503034 補体因子Ｂを阻害するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-30

(54)【発明の名称】補体因子Ｂを阻害するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20250123BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20250123BHJP

   C07H 21/04 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 13/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 27/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 33/00 20060101ALI20250123BHJP

   A61P 37/00 20060101ALI20250123BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 Z ZNA

A61P43/00

A61K31/713

C07H21/04 B

C07H21/04 Z

A61P3/00

A61P1/00

A61P7/00

A61P9/00

A61P11/00

A61P13/00

A61P17/00

A61P21/00

A61P25/00

A61P27/00

A61P29/00

A61P31/00

A61P33/00

A61P37/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024543083

(86)(22)【出願日】2023-01-20

(85)【翻訳文提出日】2024-09-11

(86)【国際出願番号】 US2023011200

(87)【国際公開番号】W WO2023141247

(87)【国際公開日】2023-07-27

(31)【優先権主張番号】63/301,454

(32)【優先日】2022-01-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/328,629

(32)【優先日】2022-04-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523394815

【氏名又は名称】アストラゼネカ アイルランド リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】ラサロ，メリッサ

(72)【発明者】

【氏名】マクナイト，スーザン ファス

(72)【発明者】

【氏名】デュデック，ヘンリク ティー

(72)【発明者】

【氏名】パク，ジヘ

(72)【発明者】

【氏名】ブラウン，ボブ デール

(72)【発明者】

【氏名】ライ，チェンジュン

(72)【発明者】

【氏名】キム，ソンクォン

(72)【発明者】

【氏名】ビーズリー、キャスリーン ニコール

【テーマコード（参考）】

4C057

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C057AA18

4C057CC02

4C057CC03

4C057DD03

4C057MM02

4C057MM05

4C057MM09

4C086AA01

4C086AA02

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4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZA32

4C086ZA36

4C086ZA51

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA81

4C086ZA89

4C086ZA94

4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZB13

4C086ZB15

4C086ZB31

4C086ZC21

4C086ZC51

(57)【要約】

本明細書では、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）ｍＲＮＡをターゲティングするためのセンス及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）が記載される。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを使用して、細胞におけるＣＦＢ発現、レベル及び／又は活性を阻害することができる。補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患、障害又は状態の予防又は治療のためにオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を使用する方法も記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

補体因子Ｂ（ＣＦＢ）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩であって、前記オリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とは、二重らせん領域を形成し、前記アンチセンス鎖は、配列番号１３又は１４のＣＦＢ ｍＲＮＡ標的配列に対して相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５の連続したヌクレオチド長である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

前記センス鎖は、１５～５０ヌクレオチド長である、請求項１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

前記センス鎖は、１８～３６ヌクレオチド長である、請求項１若しくは２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

前記アンチセンス鎖は、１５～３０ヌクレオチド長である、請求項１～３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

前記アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖と前記センス鎖とは、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

前記センス鎖は、３６ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖と前記センス鎖とは、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する、請求項１～５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

前記相補性の領域は、少なくとも１９の連続したヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長である、請求項１～６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

前記センス鎖の３’末端は、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として記載されるステムループを含み、Ｓ１は、Ｓ２と相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成する、請求項１～７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

Ｌは、トリループ又はテトラループである、請求項８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

Ｌは、テトラループである、請求項９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

前記テトラループは、ＧＡＡＡの核酸配列を含む、請求項１０に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項12】

前記Ｓ１及びＳ２は、１～１０ヌクレオチド長であり、任意選択で、Ｓ１及びＳ２は、同じ長さを有する、請求項８～１１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項13】

Ｓ１及びＳ２は、１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド又は１０ヌクレオチド長である、請求項１２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項14】

Ｓ１及びＳ２は、６ヌクレオチド長である、請求項１３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項15】

前記ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも８５％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項８～１４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項16】

前記ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項１５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項17】

前記ステムループは、配列番号７の核酸配列を含むか又はそれからなる、請求項８～１６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項18】

前記ステムループは、配列番号７に対して最大１、２又は３つの置換、挿入又は欠失を有する核酸を含む、請求項８～１６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項19】

前記アンチセンス鎖は、１ヌクレオチド長以上の３’オーバーハング配列を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項20】

前記アンチセンス鎖は、少なくとも２つの連結されたヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項21】

前記３’オーバーハング配列は、２ヌクレオチド長であり、任意選択で、前記３’オーバーハング配列は、ＧＧである、請求項２０に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項22】

前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項23】

前記オリゴヌクレオチドは、２０～５０の修飾ヌクレオチドを含む、請求項２２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項24】

前記オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全ては、修飾されている、請求項２２若しくは２３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項25】

前記修飾ヌクレオチドは、２’－修飾を含む、請求項２２～２４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項26】

前記２’－修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である、請求項２５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項27】

前記２’－修飾は、２’－フルオロ又は２’－Ｏ－メチルであり、任意選択で、前記２’－フルオロ修飾は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドであり、及び／又は前記２’－Ｏ－メチル修飾は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドである、請求項２６に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項28】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、４０～５０の２’－Ｏ－メチル修飾を含み、任意選択で、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、４０～５０の２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドを含む、請求項２７に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項29】

前記センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７及び３１～３６の少なくとも１つ並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の少なくとも１つは、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項２８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項30】

前記センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７及び３１～３６の１０～２９個並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の１０～１６個は、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項２９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項31】

前記センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７及び３１～３６の全て並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の全ては、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３０に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項32】

前記センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７及び３１～３６の全て並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の全ては、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３０に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項33】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、５～１５の２’－フルオロ修飾、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドを含む、請求項２７～３２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項34】

前記センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の少なくとも１つ並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０及び１４の少なくとも１つは、２’－フルオロ、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項35】

前記センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の２～４つ並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０及び１４の２～７つは、２’－フルオロ、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項36】

前記センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の全て並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、５、７、１０及び１４の全ては、２’－フルオロ、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項37】

前記センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の全て並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０及び１４の全ては、２’－フルオロ、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項38】

前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項39】

前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項３８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項40】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、前記センス鎖のヌクレオチド１及び２並びに前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１及び２、２及び３、２０及び２１並びに２１及び２２間にホスホロチオエート結合を有する、請求項３９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項41】

前記センス鎖と前記アンチセンス鎖との間にヌクレオチド間結合がない、請求項１～４０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項42】

前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、リン酸塩類似体を含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項43】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、前記アンチセンス鎖の５’末端の１位にウリジンを含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項44】

前記ウリジンは、リン酸塩類似体を含む、請求項４３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項45】

前記リン酸塩類似体は、４’－Ｏ－モノメチルホスホネートである、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項46】

前記リン酸塩類似体を含む前記ウリジンは、以下の構造：

【化1】

を含む、請求項４４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項47】

前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、１つ以上のターゲティングリガンドと共役されている、請求項１～４６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項48】

各ターゲティングリガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド又は脂質を含む、請求項４７に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項49】

各ターゲティングリガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、請求項４７若しくは４８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項50】

前記ＧａｌＮＡｃ部分は、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、請求項４９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項51】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、前記センス鎖と共役された１～５つの２’－Ｏ－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、請求項８～５０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項52】

前記ステムループのＬの最大４ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている、請求項５１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項53】

前記センス鎖のヌクレオチド２８～３０位におけるヌクレオチドの１つ以上は、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている、請求項５２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項54】

前記センス鎖の２８～３０位の前記ヌクレオチドの各々は、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている、請求項５３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項55】

前記センス鎖の２８～３０位の前記ヌクレオチドは、以下の構造：

【化2】

を含み、式中、
Ｚは、結合、クリックケミストリーハンドル又は長さが１～２０（両端の値を含む）の連続した共有結合原子のリンカーを表し、これは、置換及び非置換アルキレン、置換及び非置換アルケニレン、置換及び非置換アルキニレン、置換及び非置換ヘテロアルキレン、置換及び非置換ヘテロアルケニレン、置換及び非置換ヘテロアルキニレン並びにこれらの組合せからなる群から選択され；及び
Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮである、請求項５４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項56】

Ｚは、アセタールリンカーである、請求項５５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項57】

Ｘは、Ｏである、請求項５５若しくは５６に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項58】

前記センス鎖の２８～３０位の前記ヌクレオチドは、以下の構造：

【化3】

を含む、請求項５４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項59】

前記センス鎖は、配列番号１又は配列番号４のヌクレオチド配列を含む、請求項１～５８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項60】

前記アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６のヌクレオチド配列を含む、請求項１～５９のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項61】

前記センス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ配列番号１及び３、及び
（ｂ）それぞれ配列番号４及び６
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～６０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項62】

前記センス鎖は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列を含み、及び前記アンチセンス鎖は、配列番号３に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項63】

前記センス鎖は、配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含み、及び前記アンチセンス鎖は、配列番号６に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項64】

前記センス鎖は、配列番号３７に記載のヌクレオチド配列を含み、及び前記アンチセンス鎖は、配列番号３８に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項65】

前記センス鎖は、配列番号６６に記載のヌクレオチド配列を含み、及び前記アンチセンス鎖は、配列番号６７に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩。

【請求項66】

請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤とを含む医薬組成物。

【請求項67】

補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患、障害又は状態を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくは請求項６６に記載の医薬組成物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。

【請求項68】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、前記対象の細胞におけるＣＦＢのｍＲＮＡ転写物を分解する、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記対象の前記細胞におけるＣＦＢの発現が低減される、請求項６７又は６８に記載の方法。

【請求項70】

前記対象の前記細胞におけるＣＦＢの転写が低減される、請求項６７又は６８に記載の方法。

【請求項71】

前記対象の前記細胞におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性が低減される、請求項６７に記載の方法。

【請求項72】

ＣＦＢのレベル及び／又は活性は、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物、又は請求項６７に記載のベクター、又は請求項６８に記載の細胞を投与されていない対象の細胞におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性と比較して１０％～１００％低減される、請求項６７に記載の方法。

【請求項73】

ＣＦＢのレベル及び／又は活性は、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項６６に記載の医薬組成物を投与されていない対象の細胞におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性と比較して５０％～９９％低減される、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

前記対象は、哺乳動物である、請求項６７～７３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記対象は、ヒトである、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記対象は、補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患、障害又は状態を有するものとして識別される、請求項６７～７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項77】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される前記疾患、障害又は状態は、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、免疫グロブリンＡ腎症（ＩｇＡＮ）、原発性ＭＮを含む膜性腎症（ＭＮ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）誘発性又は定型溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性、地図状萎縮、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、ベーチェットぶどう膜炎、網膜色素変性症、黄斑浮腫、多巣性脈絡膜炎、フォークト－小柳－原田症候群、散弾状脈絡膜網膜症、交感性眼炎、眼瘢痕性類天疱、眼類天疱瘡、非関節炎性虚血性視神経症、術後炎症、網膜静脈閉塞症、神経障害、多発性硬化症、脳卒中、ギラン・バレー症候群、外傷性脳損傷、パーキンソン病、血液透析合併症、超急性移植片拒絶反応、異種移植片拒絶反応、ＩＬ－２治療中のインターロイキン－２誘発毒性、炎症性疾患、自己免疫疾患の炎症、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、心筋炎、虚血再灌流後の状態、心筋梗塞、バルーン血管形成術、心肺バイパス又は腎バイパスにおけるポンプ後症候群、アテローム性動脈硬化症、血液透析、腎虚血、大動脈再建後の腸間膜動脈再灌流、感染症又は敗血症、免疫複合体障害及び自己免疫疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＳＬＥ腎炎、増殖性腎炎、肝線維症、溶血性貧血、重症筋無力症、組織再生、神経再生、呼吸困難、喀血、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、肺塞栓症及び肺梗塞、肺炎、線維性粉塵疾患、肺線維症、アレルギー、気管支収縮、過敏性肺炎、寄生虫疾患、グッドパスチャー症候群、肺血管炎、微量免疫型血管炎、免疫複合体関連炎症、抗リン脂質症候群、糸球体腎炎、肥満、関節炎、自己免疫性心疾患、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、バラケル－サイモンズ症候群、血液透析、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、クリオグロブリン血症、乾癬、移植、アルツハイマー病及び他の神経変性状態などの中枢神経系疾患、濃厚沈着症、水疱性皮膚疾患、膜増殖性糸球体腎炎ＩＩ型（ＭＰＧＮ ＩＩ）、慢性移植片対宿主病、フェルティ症候群、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、肺動脈性肺高血圧症、原発性シェーグレン症候群、原発性胆汁性胆管炎、常染色体優性多発性嚢胞腎並びにミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質抗体疾患（ＭＯＧＡＤ）からなる群から選択される、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される前記疾患、障害又は状態は、関節リウマチである、請求項７６に記載の方法。

【請求項79】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は医薬組成物は、毎日、毎週、毎月又は毎年の投与のために製剤化される、請求項６７～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は前記医薬組成物は、静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻内、舌下、髄腔内及び皮内投与のために製剤化される、請求項６７～７９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は前記医薬組成物は、皮下投与のために製剤化される、請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は前記医薬組成物は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇの用量での投与のために製剤化される、請求項６７～８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

細胞、細胞の集団又は対象におけるＣＦＢ発現を低減する方法であって、
ｉ）前記細胞又は前記細胞の集団を、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項６６に記載の医薬組成物と接触させるステップ；又は
ｉｉ）請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項６６に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップ
を含む方法。

【請求項84】

ＣＦＢ発現を低減することは、ＣＦＢ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＣＦＢタンパク質の量若しくはレベル又はその両方を低減することを含む、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記ＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方は、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項６６に記載の医薬組成物を投与されていない対象の細胞におけるＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方と比較して１０％～１００％低減される、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記ＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方は、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項６６に記載の医薬組成物を投与されていない対象の細胞におけるＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方と比較して５０％～９９％低減される、請求項８５に記載の方法。

【請求項87】

前記対象は、補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患、障害又は状態を有する、請求項８３～８６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項88】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される前記疾患、障害又は状態は、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、免疫グロブリンＡ腎症（ＩｇＡＮ）、原発性ＭＮを含む膜性腎症（ＭＮ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）誘発性又は定型溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性、地図状萎縮、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、ベーチェットぶどう膜炎、網膜色素変性症、黄斑浮腫、多巣性脈絡膜炎、フォークト－小柳－原田症候群、散弾状脈絡膜網膜症、交感性眼炎、眼瘢痕性類天疱瘡、眼類天疱瘡、非関節炎性虚血性視神経症、術後炎症、網膜静脈閉塞症、神経障害、多発性硬化症、脳卒中、ギラン・バレー症候群、外傷性脳損傷、パーキンソン病、血液透析合併症、超急性移植片拒絶反応、異種移植片拒絶反応、ＩＬ－２治療中のインターロイキン－２誘発毒性、炎症性疾患、自己免疫疾患の炎症、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、心筋炎、虚血再灌流後の状態、心筋梗塞、バルーン血管形成術、心肺バイパス又は腎バイパスにおけるポンプ後症候群、アテローム性動脈硬化症、血液透析、腎虚血、大動脈再建後の腸間膜動脈再灌流、感染症又は敗血症、免疫複合体障害及び自己免疫疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＳＬＥ腎炎、増殖性腎炎、肝線維症、溶血性貧血、重症筋無力症、組織再生、神経再生、呼吸困難、喀血、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、肺塞栓症及び肺梗塞、肺炎、線維性粉塵疾患、肺線維症、アレルギー、気管支収縮、過敏性肺炎、寄生虫疾患、グッドパスチャー症候群、肺血管炎、微量免疫型血管炎、免疫複合体関連炎症、抗リン脂質症候群、糸球体腎炎、肥満、関節炎、自己免疫性心疾患、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、バラケル－サイモンズ症候群、血液透析、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、クリオグロブリン血症、乾癬、移植、アルツハイマー病及び他の神経変性状態などの中枢神経系疾患、濃厚沈着症、水疱性皮膚疾患、膜増殖性糸球体腎炎ＩＩ型（ＭＰＧＮ ＩＩ）、慢性移植片対宿主病、フェルティ症候群、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、肺動脈性肺高血圧症、原発性シェーグレン症候群、原発性胆汁性胆管炎、常染色体優性多発性嚢胞腎並びにミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質抗体疾患（ＭＯＧＡＤ）からなる群から選択される、請求項８７に記載の方法。

【請求項89】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される前記疾患、障害又は状態は、関節リウマチである、請求項８７に記載の方法。

【請求項90】

請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項６６に記載の医薬組成物を含むキット。

【請求項91】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患、障害又は状態の予防又は治療を、それを必要とする対象において行うのに使用するための、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項６６に記載の医薬組成物。

【請求項92】

発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、（免疫グロブリンＡ腎症（ＩｇＡＮ）、膜性腎症（ＭＮ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）誘発性又は定型溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性、地図状萎縮、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、ベーチェットぶどう膜炎、網膜色素変性症、黄斑浮腫、多巣性脈絡膜炎、フォークト－小柳－原田症候群、散弾状脈絡膜網膜症、交感性眼炎、眼瘢痕性類天疱瘡、眼類天疱瘡、非関節炎性虚血性視神経症、術後炎症、網膜静脈閉塞症、神経障害、多発性硬化症、脳卒中、ギラン・バレー症候群、外傷性脳損傷、パーキンソン病、血液透析合併症、超急性移植片拒絶反応、異種移植片拒絶反応、ＩＬ－２治療中のインターロイキン－２誘発毒性、炎症性疾患、自己免疫疾患の炎症、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、心筋炎、虚血再灌流後の状態、心筋梗塞、バルーン血管形成術、心肺バイパス又は腎バイパスにおけるポンプ後症候群、アテローム性動脈硬化症、血液透析、腎虚血、大動脈再建後の腸間膜動脈再灌流、感染症又は敗血症、免疫複合体障害及び自己免疫疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＳＬＥ腎炎、増殖性腎炎、肝線維症、溶血性貧血、重症筋無力症、組織再生、神経再生、呼吸困難、喀血、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、肺塞栓症及び肺梗塞、肺炎、線維性粉塵疾患、肺線維症、アレルギー、気管支収縮、過敏性肺炎、寄生虫疾患、グッドパスチャー症候群、肺血管炎、微量免疫型血管炎、免疫複合体関連炎症、抗リン脂質症候群、糸球体腎炎、肥満、関節炎、自己免疫性心疾患、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、バラケル－サイモンズ症候群、血液透析、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、クリオグロブリン血症、乾癬、移植、アルツハイマー病及び他の神経変性状態などの中枢神経系疾患、濃厚沈着症、水疱性皮膚疾患、膜増殖性糸球体腎炎ＩＩ型（ＭＰＧＮ ＩＩ）、慢性移植片対宿主病、フェルティ症候群、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、肺動脈性肺高血圧症、原発性シェーグレン症候群、原発性胆汁性胆管炎、常染色体優性多発性嚢胞腎並びにミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質抗体疾患（ＭＯＧＡＤ）の予防又は治療を、それを必要とする対象において行うのに使用するための、請求項９１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は医薬組成物。

【請求項93】

関節リウマチの予防又は治療を、それを必要とする対象において行うのに使用するための、請求項９１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は医薬組成物。

【請求項94】

前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は医薬組成物は、皮下投与される、請求項９１～９３のいずれか一項に記載の使用のためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又は医薬組成物。

【請求項95】

前記ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩を含む、請求項１～６５のいずれか一項に記載のＲＮＡオリゴヌクレオチド。

【請求項96】

前記薬学的に許容される塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミスルホン酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン若しくはエチルアミンであるか若しくはそれを含むか、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属塩である、請求項９５に記載のＲＮＡオリゴヌクレオチド。

【請求項97】

前記アルカリ又はアルカリ土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアンモニウム（例えば、第４級アンモニウム及びテトラメチルアンモニウム）からなる群から選択される、請求項９６に記載のＲＮＡオリゴヌクレオチド。

【請求項98】

前記薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である、請求項９５に記載のＲＮＡオリゴヌクレオチド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本出願は、電子フォーマットの配列表と一緒に出願されている。配列表は、２０２３年１月１９日に作成された５０６９４－０９２ＷＯ３＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１＿１９＿２３＿ＳＴ２６．ｘｍｌという名称のファイルとして提供され、サイズは、３９４．２キロバイトである。配列表の電子フォーマットの情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

補体系は、免疫複合体のクリアランス並びに感染因子、外来抗原、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞に対する免疫応答で中心的な役割を果たす。補体は、自然免疫系の一部を形成する５０を超えるタンパク質の群からなる。補体系は、微生物感染から身体を防御する態勢を整え、組織の止血を維持するように機能する。補体は、厳重に制御された酵素カスケードであり、これは、以下の３つの経路の１つにより活性化することができる：抗体複合体が活性化をトリガーする古典的経路、「ティックオーバー」と呼ばれるプロセスによって低レベルで構成的に活性化され、且つ細菌性病原体若しくは損傷組織表面によって増幅され得る代替経路及び特定の細菌、真菌、ウイルスなどの特定の微生物に存在するマンノース残基によって開始されるレクチン経路。補体経路の無制御の活性化又は不十分な調節は、全身性炎症、細胞傷害及び組織損傷を招く恐れがある。このように、補体経路は、多くの多様な疾患の病因に関与している。補体経路活性の阻害又は調節は、有望な治療戦略として認識されている。これらの疾患に利用可能な治療選択肢の数は限られている。従って、補体経路の活性化又は調節不全に関連する疾患を治療するための革新的な戦略を開発することは、重要なアンメットニーズである。

【0003】

補体因子Ｂ（ＣＦＢ）は、代替補体経路カスケードを開始する補体経路の成分である。ＣＦＢは、Ｂａ及びＢｂ断片に切断される。Ｂｂ断片は、Ｃ３ｂと会合し、一緒にＣ３コンベルターゼを形成し、これは、代替補体経路の活性化に不可欠である。ＣＦＢの調節不全及び過剰な活性化は、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、多発性硬化症及び関節リウマチを含むいくつかの疾患に関連している。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

補体経路の活性化又は調節不全に関連する疾患を有する対象において、ＣＦＢを阻害又は沈黙させるために使用できる組成物及び方法が必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本明細書では、補体経路活性化で役割を果たすことがわかっている補体因子Ｂ（ＣＦＢ）をターゲティングするオリゴヌクレオチド（例えば、センス及びアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）が記載される。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩（例えば、そのナトリウム塩）を使用して、補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患を有する患者を治療することができる。

【0006】

本開示の第１の態様は、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩（例えば、そのナトリウム塩）を提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む。オリゴヌクレオチドのセンス鎖とアンチセンス鎖とは、二重らせん領域を形成する。オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、例えば、配列番号１３又は１４のＣＦＢ ｍＲＮＡ標的配列に対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５の連続したヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長）である。一実施形態では、センス鎖は、１５～５０ヌクレオチド長（例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０ヌクレオチド長）である。一実施形態では、センス鎖は、１８～３６ヌクレオチド長（例えば、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５又は３６ヌクレオチド長）である。一実施形態では、アンチセンス鎖は、１５～３０ヌクレオチド長（例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長）である。

【0007】

一実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、２２ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖とセンス鎖とは、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する。一部の実施形態では、センス鎖は、３６ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖とセンス鎖とは、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する。一部の実施形態では、相補性の領域は、少なくとも１９の連続したヌクレオチドの長さ、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長である。

【0008】

一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端は、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として記載されるステムループを含み、Ｓ１は、Ｓ２と相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド（例えば、３、４又は５ヌクレオチド）長のループを形成する。一部の実施形態では、Ｌは、トリループ又はテトラループである。一実施形態では、Ｌは、テトラループである。一実施形態では、テトラループは、５’ＧＡＡＡ３’の核酸配列を含む。

【0009】

一部の実施形態では、ステムループのＳ１及びＳ２は、長さが１～１０ヌクレオチド（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ヌクレオチド）である。Ｓ１及びＳ２は、同じ長さを有し得る。一部の実施形態では、Ｓ１及びＳ２は、１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド又は１０ヌクレオチド長である。一実施形態では、Ｓ１及びＳ２は、６ヌクレオチド長である。

【0010】

一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号７）を含む。一部の実施形態では、ステムループは、配列番号７に対して最大１、２又は３つの核酸置換、挿入又は欠失を有する核酸を含む。

【0011】

一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、１ヌクレオチド長以上の３’オーバーハング配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、少なくとも２つの連結されたヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。一実施形態では、３’オーバーハング配列は、２ヌクレオチド長であり、例えば、配列は、ＧＧである。一部の実施形態では、センス鎖は、少なくとも２つの連結されたヌクレオチドの５’オーバーハングを含む。

【0012】

一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２０～５０の修飾ヌクレオチド（例えば、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０の修飾ヌクレオチド）を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２０～４０（例えば、２５～４０、３０～４０、３５～４０、３０～３５、２５～３５、２０～２５、２１～３０及び３１～４０）の修飾ヌクレオチドを含む。一実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全てが修飾されている。

【0013】

修飾ヌクレオチドは、２’－修飾を含む。一部の実施形態では、２’－修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ２’－Ｏ－メチル２’－Ｏ－メトキシメチル及び２’－デオキシ２’－フルオロβ－アラビノ核酸である。一部の実施形態では、２’－修飾は、２’－フルオロ又は２’－Ｏ－メチルであり、任意選択で、２’－フルオロ修飾は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドであり、及び／又は２’－Ｏ－メチル修飾は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドである。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、４０～５０（例えば、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０）の２’－Ｏ－メチル修飾を含み、任意選択で、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、４０～５０（例えば、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０）の２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドを含む。

【0014】

一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド１～７、１１～２７及び３１～３６の少なくとも１つ並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の少なくとも１つは、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７及び３１～３６の１０～２９（例えば、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９）個並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の１０～１６（例えば、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）個が２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一実施形態では、センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７及び３１～３６の全て並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の全てが２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一実施形態では、センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７及び３１～３６の全て並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３及び１５～２２の全てが２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。

【0015】

一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、５～１５（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５）個の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の少なくとも１つ並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０及び１４の少なくとも１つが、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている。一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の２～４（例えば、２、３及び４）つ並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０及び１４の２～７（例えば、２、３、４、５、６及び７）つが２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている。一実施形態では、センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の全て並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、５、７、１０及び１４の全てが２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている。一実施形態では、センス鎖のヌクレオチド８、９、１０及び１１の全て並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０及び１４の全てが２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている。

【0016】

一実施形態では、センス鎖は、配列番号３７の核酸配列を有し、アンチセンス鎖は、配列番号３８の核酸配列を有する。一実施形態では、センス鎖は、配列番号６６の核酸配列を有し、アンチセンス鎖は、配列番号６７の核酸配列を有する。

【0017】

一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合を含む。一実施形態では、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、センス鎖のヌクレオチド１及び２間並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１及び２、２及び３、２０及び２１並びに２１及び２２間にホスホロチオエート結合を有する。一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間にヌクレオチド間結合が存在しない。

【0018】

一部の実施形態では、アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、リン酸類似体を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、アンチセンス鎖の５’末端の１位にウリジンを含む。一実施形態では、ウリジンは、リン酸類似体を含む。一実施形態では、リン酸塩類似体は、４’－Ｏ－モノメチルホスホネートである。一実施形態では、リン酸塩類似体を含むウリジンは、以下の構造：

【化1】

を含む。

【0019】

一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、１つ以上のターゲティングリガンドと共役されている。一部の実施形態では、各ターゲティングリガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド又は脂質を含む。一部の実施形態では、各ターゲティングリガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。一部の実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、センス鎖と共役された１～５個（例えば、１、２、３、４及び５個）の２’－Ｏ－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。一実施形態では、ステムループのＬの最大４ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。一実施形態では、ステムループのＬの３ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド位置２８～３０のヌクレオチドの１つ以上は、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。一実施形態では、配列番号１、４、１７、１９、２１、２３、２５、２７及び２９（並びにそれらに少なくとも８５％の配列同一性を有するそれらの変異体）のいずれか１つの２８～３０位のヌクレオチドの各々は、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。一実施形態では、配列番号１、４、１７、１９、２１、２３、２５、２７及び２９（並びにそれらに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するそれらの変異体）のいずれか１つの２８～３０位のヌクレオチドは、以下の構造：

【化2】

を含み、式中、Ｚは、結合、クリックケミストリーハンドル又は長さが１～２０（両端の値を含む）の連続した共有結合原子のリンカーを表し、これは、置換及び非置換アルキレン、置換及び非置換アルケニレン、置換及び非置換アルキニレン、置換及び非置換ヘテロアルキレン、置換及び非置換ヘテロアルケニレン、置換及び非置換ヘテロアルキニレン並びにこれらの組合せからなる群から選択され；及びＸは、Ｏ、Ｓ又はＮである。一部の実施形態では、Ｚは、アセタールリンカーである。一部の実施形態では、Ｘは、Ｏである。一実施形態では、配列番号１、４、１７、１９、２１、２３、２５、２７及び２９（並びにそれらに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するそれらの変異体）のいずれか１つの２８～３０位のヌクレオチドは、以下の構造：

【化3】

を含む。

【0020】

一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、テトラループを有するセンス鎖を含み、３つのＧａｌＮＡｃ部分は、テトラループを含むヌクレオチドに共役されており、各ＧａｌＮＡｃ部分は、１つのヌクレオチドに共役されている。一部の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＧａｌＮＡｃ共役ヌクレオチドを含むテトラループを有するセンス鎖を含み、テトラループは、以下の構造：

【化4】

を含む。

【0021】

一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのセンス鎖又はその薬学的に許容される塩は、配列番号１、配列番号２、配列番号４又は配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）のアンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１、配列番号２、配列番号４又は配列番号５に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１又は配列番号４のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、それぞれ配列番号１及び３並びにそれぞれ配列番号４及び６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。

【0022】

一実施形態では、センス鎖は、配列番号１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。別の実施形態では、センス鎖は、配列番号４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、センス鎖は、配列番号１に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号３に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。別の実施形態では、センス鎖は、配列番号４に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。別の実施形態では、センス鎖は、配列番号１に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号３に記載されるヌクレオチド配列を含む。別の実施形態では、センス鎖は、配列番号４に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６に記載されるヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、センス鎖は、配列番号３７に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号３８に記載されるヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、センス鎖は、配列番号６６に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含む。

【0023】

一部の実施形態では、ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。

【0024】

第２の態様では、本開示は、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのいずれか又はその薬学的に許容される塩のいずれか１つと、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。

【0025】

第３の態様では、本開示は、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩のセンス鎖及びアンチセンス鎖の一方又は両方をコードするベクターを提供する。

【0026】

第４の態様では、本開示は、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのいずれか又はその薬学的に許容される塩の全て又は一部をコードするベクターを含む細胞を提供する。

【0027】

第５の態様では、本開示は、補体経路活性化又は調節不全（例えば、ＣＦＢの活性化又は調節不全）に関連する疾患、障害又は状態を有する対象を治療する方法を提供し、これは、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩又はそれを含む医薬組成物、それをコードするベクター又はオリゴヌクレオチド若しくはベクターを含む細胞のいずれか１つ又は複数を治療有効量で対象に投与することを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、対象の細胞におけるＣＦＢのｍＲＮＡ転写物を分解する。一部の実施形態では、対象の細胞におけるＣＦＢの発現が低減される。一部の実施形態では、対象の細胞におけるＣＦＢの発現は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を投与されていない対象の細胞におけるＣＦＢの発現レベルと比較して１０％～１００％（例えば、１０％～９０％、１０％～７０％、１０％～５０％、１０％～３０％、２０％～１００％、４０％～１００％、６０％～１００％及び８０％～１００％）低減される。一部の実施形態では、対象におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性が低減される。一部の実施形態では、ＣＦＢのレベル及び／又は活性は、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を投与されていない対象におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性と比較して１０％～１００％（例えば、１０％～９０％、１０％～７０％、１０％～５０％、１０％～３０％、２０％～１００％、４０％～１００％、６０％～１００％及び８０％～１００％）低減される。一部の実施形態では、ＣＦＢのレベル及び／又は活性は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を投与されていない対象におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性と比較して５０％～１００％（例えば、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％及び９０％～１００％）低減される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を、それを必要とする対象に投与すると、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を投与されていない対象（未処置の対象）と比較して、対象の血液中を循環するＣＦＢの量が減少する。処置を受けた対象の血中ＣＦＢの量は、１，０００μｇ／ｍＬ、９００μｇ／ｍＬ、８００μｇ／ｍＬ、７００μｇ／ｍＬ、６００μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ若しくは５０μｇ／ｍＬ未満又はそれを下回って減少され得る。例えば、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を投与すると、処置を受けた対象の血中ＣＦＢの量を５０～１０００μｇ／ｍＬの範囲内（例えば、５０～９００μｇ／ｍＬ、５０～８００μｇ／ｍＬ、５０～７００μｇ／ｍＬ、５０～６００μｇ／ｍＬ、５０～５００μｇ／ｍＬ、５０～４００μｇ／ｍＬ、５０～３００μｇ／ｍＬ若しくは５０～２００μｇ／ｍＬの範囲内）又は５０μｇ／ｍＬ未満まで減少し得る。

【0028】

第５態様の一実施形態では、対象は、哺乳動物、例えばヒトである。

【0029】

一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター又は細胞は、毎日、毎週、毎月又は毎年の投与のために製剤化される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター若しくは細胞は、静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内、舌下、髄腔内及び皮内投与のために製剤化される。一実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター若しくは細胞は、皮下投与のために製剤化される。一実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター又は細胞は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ）の用量での投与のために製剤化される。

【0030】

第６の態様では、本開示は、本明細書に記載されるように、細胞、細胞の集団又は対象を、本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物、オリゴヌクレオチドをコードするベクター又はベクターを含む細胞と接触させることにより、細胞、細胞の集団又は対象におけるＣＦＢ発現を低減する方法を提供する。本明細書に記載されるように、本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物、オリゴヌクレオチドをコードするベクター若しくはベクターを含む細胞を対象に投与することができる。一部の実施形態では、ＣＦＢ発現の低減は、ＣＦＢ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＣＦＢタンパク質の量若しくはレベル又はその両方の低減を含む。一部の実施形態では、ＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物、オリゴヌクレオチドをコードするベクター若しくはベクターを含む細胞を投与されていない対象の細胞におけるＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方と比較して１０％～１００％（例えば、１０％～８０％、１０％～６０％、１０％～４０％、１０％～２０％、２０％～１００％、４０％～１００％、６０％～１００％及び８０％～１００％）低減する。一部の実施形態では、ＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方は、本明細書に記載されるように、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を投与されていない対象の細胞におけるＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル、ＣＦＢタンパク質のレベル又はその両方と比較して５０％～１００％（例えば、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％及び９０％～１００％）低減する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を、それを必要とする対象に投与すると、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を投与されていない対象（未処置の対象）と比較して、対象の血液中を循環するＣＦＢの量が減少する。処置を受けた対象の血中ＣＦＢ量は、１，０００μｇ／ｍＬ、９００μｇ／ｍＬ、８００μｇ／ｍＬ、７００μｇ／ｍＬ、６００μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ若しくは５０μｇ／ｍＬ未満又はそれを下回って減少され得る。例えば、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞の投与は、処置を受けた対象の血中ＣＦＢ量を５０～１０００μｇ／ｍＬの範囲内（例えば、５０～９００μｇ／ｍＬ、５０～８００μｇ／ｍＬ、５０～７００μｇ／ｍＬ、５０～６００μｇ／ｍＬ、５０～５００μｇ／ｍＬ、５０～４００μｇ／ｍＬ、５０～３００μｇ／ｍＬ若しくは５０～２００μｇ／ｍＬの範囲内）又は５０μｇ／ｍＬ未満まで減少し得る。

【0031】

第７の態様では、本開示は、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、医薬組成物、ベクター又は細胞を含むキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、本明細書に記載される細胞又は対象におけるＣＦＢのレベル及び／若しくは活性を低減する薬剤並びに任意選択で薬学的に許容される担体、賦形剤若しくは希釈剤を含有する医薬組成物を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞のいずれか１つをコードするベクターを含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載される方法のいずれかを実施するための説明を記載した添付文書を含む。一部の実施形態では、キットは、細胞又は対象におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド剤、医薬組成物、ベクター又は細胞を含有する医薬組成物；追加の治療剤；並びに本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明を有する添付文書を含む。

【0032】

第８の態様では、本開示は、補体経路活性化又は調節不全（例えば、ＣＦＢ活性化又は調節不全）によって媒介される疾患、障害又は状態の予防又は治療を、それを必要とする対象において行うのに使用するための、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、医薬組成物、ベクター又は細胞の使用を特徴とする。

【0033】

第５、第６又は第８の態様のいずれか１つでは、対象は、補体経路活性化又は調節不全（例えば、調節不全のＣＦＢ活性化）によって媒介される疾患、障害又は状態を有すると同定される。一部の実施形態では、疾患は、以下の通りである：発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、免疫グロブリンＡ腎症（ＩｇＡＮ）、原発性ＭＮを含む膜性腎症（ＭＮ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）誘発性又は定型溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性、地図状萎縮、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、ベーチェットぶどう膜炎、網膜色素変性症、黄斑浮腫、多巣性脈絡膜炎、フォークト－小柳－原田症候群、散弾状脈絡膜網膜症、交感性眼炎、眼瘢痕性類天疱瘡（ＯＣＰ）、眼類天疱瘡、非関節炎性虚血性視神経症、術後炎症、網膜静脈閉塞症、神経障害、多発性硬化症、脳卒中、ギラン・バレー症候群、外傷性脳損傷、パーキンソン病、血液透析合併症、超急性移植片拒絶反応、異種移植片拒絶反応、ＩＬ－２治療中のインターロイキン－２誘発毒性、炎症性疾患、自己免疫疾患の炎症、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、心筋炎、虚血再灌流後の状態、心筋梗塞、バルーン血管形成術、心肺バイパス又は腎バイパスにおけるポンプ後症候群、アテローム性動脈硬化症、血液透析、腎虚血、大動脈再建後の腸間膜動脈再灌流、感染症又は敗血症、免疫複合体障害及び自己免疫疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＳＬＥ腎炎、増殖性腎炎、肝線維症、溶血性貧血、重症筋無力症、組織再生、神経再生、呼吸困難、喀血、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、肺塞栓症及び肺梗塞、肺炎、線維性粉塵疾患、肺線維症、アレルギー、気管支収縮、過敏性肺炎、寄生虫疾患、グッドパスチャー症候群、肺血管炎、微量免疫型（Ｐａｕｃｉ－ｉｍｍｕｎｅ）血管炎、免疫複合体関連炎症、抗リン脂質症候群、糸球体腎炎、肥満、関節炎、自己免疫性心疾患、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、バラケル－サイモンズ（Ｂａｒｒａｑｕｅｒ－Ｓｉｍｏｎｓ）症候群、血液透析、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、クリオグロブリン血症、乾癬、移植、アルツハイマー病及び他の神経変性状態などの中枢神経系疾患、濃厚沈着症、水疱性皮膚疾患、膜増殖性糸球体腎炎ＩＩ型（ＭＰＧＮ ＩＩ）、慢性移植片対宿主病、フェルティ（Ｆｅｌｔｙ）症候群、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、肺動脈性肺高血圧症、原発性シェーグレン症候群、原発性胆汁性胆管炎、常染色体優性多発性嚢胞腎並びにミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質抗体疾患（ＭＯＧＡＤ）。一部の実施形態では、疾患は、関節リウマチである。

【0034】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡオリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミスルホン酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン若しくはエチルアミンであるか若しくはそれを含むか、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属塩である。一部の実施形態では、アルカリ又はアルカリ土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアンモニウム（例えば、第４級アンモニウム及びテトラメチルアンモニウム）からなる群から選択される。一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。

【0035】

本特許又は出願ファイルは、カラーで作成される少なくとも１つの図面を含む。カラー図面を含む本特許又は特許出願公開公報の写しは、必要な手数料の支払の要請時に特許庁から提供される。

【図面の簡単な説明】

【0036】

【図1A】化合物Ａのセンス鎖（配列番号６６）の化学構造を示す。

【図1B】化合物Ａのアンチセンス鎖（配列番号６７）の化学構造を示す。

【図1C】化合物Ａのセンス鎖（配列番号１）及びアンチセンス鎖（配列番号３）の核酸配列を示す。

【図2A】化合物Ｂのセンス鎖（配列番号３７）の化学構造を示す。

【図2B】化合物Ｂのアンチセンス鎖（配列番号３８）の核酸配列を示す。

【図2C】化合物Ｂのセンス鎖（配列番号４）及びアンチセンス鎖（配列番号６）の核酸配列を示す。

【図2D】化合物Ｂのセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図を示す。

【図2E-1-2E-2】化合物ＢのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（配列番号３７及び３８）の化学構造を示す。

【図3A】１ｎＭの量の様々なオリゴヌクレオチドでＨｕＨ－７細胞をインビトロで処理した後に残留するＣＦＢ ｍＲＮＡのパーセンテージを示すグラフである。化合物Ａ及びＢにより促進されるＣＦＢノックダウンの効果を具体的に同定する。

【図3B】０．０３ｎＭ、０．１ｎＭ及び１ｎＭの量の様々なオリゴヌクレオチドでＨｕＨ－７細胞を処理した後に残留するＣＦＢ ｍＲＮＡのパーセンテージを示すグラフである。化合物Ｂにより促進されるＣＦＢノックダウンの効果を具体的に同定する。

【図4A】単回用量：０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ又は３．０ｍｇ／ｋの化合物Ａ又は化合物Ｃの同時投与から４日後のマウスに残留するＣＦＢ ｍＲＮＡの量を示すグラフである。

【図4B】単回用量：０．３ｍｇ／ｋの化合物Ａ又は化合物Ｄの同時投与から４日後のマウスに残留するＣＦＢ ｍＲＮＡの量を示すグラフである。

【図4C】単回用量：０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩの同時投与から４日後のマウスに残留するＣＦＢ ｍＲＮＡの量を示すグラフである。

【図5】対照として投与されたＰＢＳと比較して、投与前並びに４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ～Ｉの単回用量による処置から２８日及び５６日後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中のＣＦＢ ｍＲＮＡのパーセントの測定を示すグラフである。

【図6A】対照として投与されたＰＢＳと比較して、０、２８、５６及び８４日目に１ｍｇ／ｋｇ若しくは２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂで処置した後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中のＣＦＢ ｍＲＮＡのパーセントの測定を示すグラフである。

【図6B】対照として投与されたＰＢＳと比較して、１ｍｇ／ｋｇ若しくは２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂで処置した後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の血清中のＣＦＢのパーセントの測定を示すグラフである。

【図7】２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂの単回用量投与から２８日後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中にＣＦＢ ｍＲＮＡとして測定された化合物Ａ及び化合物Ｂの概算ＥＤ_５０を示すグラフである。

【図8】ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）ＥＬＩＳＡベースの機能アッセイによって測定された、０、２８、５６及び８４日目に２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂで処置した後のカニクイザルの血清中の補体活性のパーセント（ＡＰ）を示すグラフである。ＰＢＳは、対照群と同じ複数回投与レジメンで投与した。

【図9】ウサギ赤血球溶血法により測定される通り、０、２８、５６及び８４日目に１ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂで処置した後のカニクイザルの血清からの溶解のパーセントを示すグラフである。ＰＢＳは、対照群と同じ複数回投与レジメンで投与した。

【図10A】対照として投与されたＰＢＳと比較して、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回皮下用量の投与後のＣＤ－１マウスの肝臓中のＣＦＢ ｍＲＮＡ（％）のＲＴ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。肝臓ノックダウンのレベルを６３日間追跡し、測定のために各時点で５匹のマウスを犠牲にした。

【図10B】対照として投与されたＰＢＳ（左端の列）と比較して、単回皮下用量：０．２５ｍｇ／ｋｇ（左から２番目の列）、０．５ｍｇ／ｋｇ（左から３番目の列）及び３ｍｇ／ｋｇ（右端の列）の化合物Ｊを投与された後の４２日間にわたるＣＤ－１マウスの血清中のＣＦＢ循環タンパク質（％）のイムノブロットによる定量的測定を示すグラフである。

【図11】３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回皮下用量を投与されたＣＤ－１マウスの血漿、脾臓、肝臓及び腎臓組織におけるｓｉＲＮＡ曝露量のステムループ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。測定の時間経過は、６７２時間の期間にわたるものであった。測定のために各時点で５匹のマウスを屠殺した。

【図12A】対照として投与されたＰＢＳと比較して、０、１４、２８及び４２日目に０．５ｍｇ／ｋｇ（５６日のみ）又は３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与後７０日の期間にわたるＣＤ－１マウスの肝臓中のＣＦＢ ｍＲＮＡのパーセントのＲＴ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。

【図12B】０、１４、２８及び４２日目に０．５ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与後７０日の期間にわたるＣＤ－１マウスにおけるＣＦＢ血清タンパク質のイムノブロットによる定量的測定を示すグラフである。ＣＦＢレベルは、ＰＢＳ対照群から測定されたＣＦＢ血清レベルに対するパーセンテージとして計算された（ｎ＝５／時点）。

【図13A】０、１４、２８及び４２日目に０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与したＣＤ－１マウスの肝臓組織中の化合物Ｊの濃度のステムループ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。

【図13B】０、１４、２８及び４２日目に０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与したＣＤ－１マウスの血漿中の化合物Ｊの濃度のステムループ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。

【図14A】０日目に関節炎を誘発し、３日目にＬＰＳブースター、続いて、－７、０及び７日目に０．５ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの３回用量で予防的に処置したコラーゲン抗体誘発関節炎モデルからの後肢の臨床スコアを示すグラフである。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。

【図14B】０日目に関節炎を誘発し、３日目にＬＰＳブースター投与、続いて、疾患誘発後５日目に０．５ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの単回投与で治療的に処置されたコラーゲン抗体誘発関節炎モデルからの後肢の臨床スコアを示すグラフである。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。

【図15A】０日目に投与されたコラーゲン抗体及び３日目のＬＰＳブースターによって関節炎が誘発され、続いて、－７、０及び７日目に３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの３回用量で予防的に処置された、ＣＡＩＡマウスモデルの１１日目の後肢炎症の画像である。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。

【図15B】０日目に投与されたコラーゲン抗体及び３日目のＬＰＳブースターによって関節炎が誘発され、続いて、疾患誘発後５日目に単回３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊで治療的に処置されたＣＡＩＡマウスモデルの１３日目の後肢足炎症の画像である。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。

【図16】－７、０及び７日目に化合物Ｊの３ｍｇ／ｋｇ用量の３回用量による予防的処置後の後肢への単核細胞浸潤の減少を実証するＨ＆Ｅ染色の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ炎症の陰性対照及び陽性対照として使用した。

【図17】－７、０及び７日目に３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの３回用量で動物を予防的に処置した後のＣＡＩＡ誘発関節炎モデルの膝関節において、軟骨びらん及びパンヌス形成の予防を実証するサフラニンＯ染色並びに単核細胞浸潤の減少を実証するＨ＆Ｅ染色の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。

【図18】－７、０及び７日目に３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの３回用量で動物を予防的に処置した後のＣＡＩＡ誘発関節炎モデルの膝関節における軟骨びらん及びパンヌス形成の予防を実証するサフラニンＯ染色の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。

【図19】疾患誘導後５日目に３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量による治療的処置後の免疫細胞浸潤の減少を実証する、ＣＡＩＡ誘発関節炎動物の後肢のリンパ球（ＣＤ４５＋）染色の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。

【図20】疾患誘発後５日目に３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量による治療的処置後の免疫細胞浸潤の減少を実証する、ＣＡＩＡ誘発関節炎動物の後肢の好中球及びマクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋）染色の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。

【図21】疾患誘導後５日目に３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量による治療的処置後の免疫細胞浸潤の減少を実証する、ＣＡＩＡ誘発関節炎動物の後肢のマクロファージ（Ｆ４／８０＋）染色の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。

【図22】疾患誘発後５日目に化合物Ｊの単回３ｍｇ／ｋｇ用量による治療的処置後のＣＡＩＡ誘発動物の後肢への局所補体発現及びＣＤ４５＋細胞（緑色－リンパ球）浸潤をモニターするためのＣＦＢ ｍＲＮＡ（赤色）への蛍光タグのインサイチュハイブリダイゼーションの画像を示す。

【図23】０日目に疾患が誘発され、０日目及び１日目に２用量の百日咳毒素を受け、続いて、疾患誘導後７日目から開始した３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの５回の週間用量で治療的に処置されたＭＯＧ誘発実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）マウスを用いた２つの実験からの平均臨床スコアを示すグラフである。ＰＢＳ処置ＥＡＥ動物を疾患陽性対照として使用した。

【図24】疾患陽性対照として使用したナイーブＰＢＳ処置ＥＡＥマウスと比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの５回の週間用量を受けた後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスのルクソールファストブルー脊髄染色の代表的な画像を示す。

【図25A】ナイーブＰＢＳ処置ＥＡＥマウス（疾患陽性）と比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの５回の週間用量を受けた後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスにおける肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡの量を示すグラフである。

【図25B】ナイーブＰＢＳ処置ＥＡＥマウス（疾患陽性対照）と比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの５回の週間用量を受けた後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスにおける血清ＣＦＢの量を示すグラフである。

【図26】ＰＢＳ処置ＰＨＮ動物（疾患陽性対照）及び健康な動物と比較して、０日目に単回用量のヒツジ抗ラットＦｘ１Ａでタンパク尿を誘発させ、－１４、－７及び０日目に３用量の１２ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊで予防的に処置した受動的ヘイマン腎炎（ＰＨＮ）ラットモデルからのスポット尿採取から測定されたタンパク尿：クレアチニンの比を示すグラフである。

【図27】ＰＢＳ処置ＰＨＮ動物（疾患陽性対照）及び健康な動物との比較で、疾患誘発前（－１日目）又は疾患誘発の６日後にラビット赤血球の溶血法により測定して、－１４、－７及び０日目に１２ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊで処置した後の受動的ヘイマン腎炎（ＰＨＮ）ラットモデルの血清からの溶解のパーセントを示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0037】

定義
本明細書で使用される場合、用語「約」及び「およそ」は、列挙された値の±１０％であり、任意選択で列挙された値の±５％又はより任意に列挙された値の±２％である量を指す。

【0038】

本明細書で使用される場合、「投与する」及び「投与」は、医薬製剤を対象に提供する任意の方法を指す。本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、当業者に公知の任意の方法によって投与され得る。オリゴヌクレオチドを投与するための好適な方法としては、例えば、経口、注射（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、硝子体内及び皮下）、点滴製剤などを挙げることができる。オリゴヌクレオチドを投与する方法は、皮下投与を含み得る。本明細書に記載のように調製されたオリゴヌクレオチドは、当技術分野で公知のように、治療しようとする障害並びに対象の年齢、状態及び体重に応じて、多様な形態で投与され得る。製剤は、予防的に投与することができ；即ち疾患又は状態を発症する可能性を低減するために投与される。

【0039】

本明細書で使用される場合、「ＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する薬剤」は、細胞又は対象における、例えば対象の細胞若しくは血清中のＣＦＢのレベル又は発現を低減するために使用することができる（例えば、投与される）本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を指す。「ＣＦＢのレベルを低下させる」、「ＣＦＢの発現を低減する」及び「ＣＦＢの転写を低減する」とは、例えば、オリゴヌクレオチド剤（本明細書に記載されるものなど）を細胞又は対象に投与することにより、細胞又は対象におけるＣＦＢ ｍＲＮＡ及び／若しくはＣＦＢタンパク質のレベルを低下させるか、発現を低減するか又は転写を低減することを意味する。ＣＦＢ ｍＲＮＡ及び／又はＣＦＢタンパク質のレベルは、当技術分野で公知の任意の方法を用いて（例えば、細胞若しくは対象におけるＣＦＢ ｍＲＮＡのレベル又はＣＦＢタンパク質のレベルを測定することにより）測定され得る。減少は、治療前と比較して、又は未処置の対象（例えば、補体活性化若しくは調節不全（例えば、ＣＦＢの活性化若しくは調節不全）に関する疾患又は障害を有する対象）におけるＣＦＢ ｍＲＮＡ又はＣＦＢタンパク質のレベルと比較して、又は対照対象（例えば、健康な対象（例えば、補体活性化若しくは調節不全（例えば、ＣＦＢの活性化若しくは調節不全）に関連する疾患又は障害を有しない対象）と比較して約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は約１００％）のＣＦＢ ｍＲＮＡ及び／又はＣＦＢタンパク質のレベル、発現、転写の低下であり得る。ＣＦＢは、任意のＣＦＢ（例えば、マウスＣＦＢ、ラットＣＦＢ、サルＣＦＢ又はヒトＣＦＢ）並びにＣＦＢの変異体又は突然変異体であり得る。従って、ＣＦＢは、遺伝子操作された細胞、細胞群又は生物に関連して、野生型ＣＦＢ、変異型ＣＦＢ又はトランスジェニックＣＦＢであり得る。「ＣＦＢの活性を低減する」ことは、ＣＦＢに関連する活性のレベルを低下させる（例えば、補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患に関連する補体経路の活性化を低減することによって）ことも意味する。ＣＦＢの活性は、約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は約１００％）低減し得る。ＣＦＢの活性レベルは、当技術分野で公知の任意の方法を用いて測定することができる。低減は、少なくとも約５％以上（例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド剤で処置されていない細胞又は対象に対して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は約１００％以上）のＣＦＢ ｍＲＮＡ及び／又はＣＦＢタンパク質のレベル、発現又は転写の減少であり得る。ＣＦＢ ｍＲＮＡ及び／又はＣＦＢタンパク質のレベル、発現又は転写の上記減少は、少なくとも１日以上の期間（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、１０日、１５日、２０日、３０日、４０日、５０日、６０日、７０日、８０日、９０日、１００日、１１０日、１２０日又はそれを超える）にわたり得る。低減は、例えば、少なくとも１日以上の期間（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、１０日、１５日、２０日、３０日、４０日、５０日、６０日、７０日、８０日又はそれを超える期間）にわたる、治療対象（例えば、ヒト対象）の血液中のＣＦＢタンパク質の量の少なくとも５μｇ／ｍＬ（例えば、５～１０００μｇ／ｍＬ）の減少であり得る。

【0040】

「代替ヌクレオシド」又は「代替ヌクレオチド」という用語は、本明細書に記載のものなどの代替糖又は代替核酸塩基を有するヌクレオシドを指す。代替ヌクレオシドは、プリン又はピリミジンを修飾プリン又はピリミジン、例えば置換プリン又は置換ピリミジン、例えばイソシトシン、プソイドイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウリジン、５－ブロモウリジン、５－チアゾロ－ウリジン、２－チオ－ウリジン、プソイドウリジン、１－メチルプソイドウリジン、５－メトキシウリジン、２’－チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される「代替核酸塩基」に変化させることにより、核酸塩基部分が修飾されたヌクレオシドを含み得る。代替ヌクレオシドは、糖部分が修飾されているヌクレオシド；例えば、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルシトシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２－フルオロ－デオキシアデノシン、２－フルオロ－デオキシグアノシン、２－フルオロ－デオキシシチジン、２－フルオロ－デオキシウリジンも含み得る。

【0041】

代替ウラシルを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：プソイドウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ^２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ^４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ^５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジン又は５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ^３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ^５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ^５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ^５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ^５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ^５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ^５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ^５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ^５ｓｅ^２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ^５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ^５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ^５ｓ^２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ^５Ｕ、即ち核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ^１ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ^５ｓ^２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ^１Ｓ^４ψ）、４－チオ－１－メチルプソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ^３ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ^５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ^３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ^３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ^５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、α－チオウリジン、２’－Ｏ－メチルウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ^５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｓ^２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ^５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ^５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ^３Ｕｍ）及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ^５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’‐Ｆ‐アラ－ウリジン、２’‐Ｆ－ウリジン、２’‐ＯＨ‐アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン及び５－［３－（１‐Ｅ－プロペニルアミノ）ウリジン。

【0042】

代替シトシンを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、プソイドイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ^３Ｃ）、Ｎ４－アセチルシチジン（ａｃ^４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ^５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ^４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ^５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ^２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－プソイドイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－プソイドイソシチジン、リシジン（ｋ_２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ^５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ^４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ^４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ^５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ^４ _２ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン及び２’－ＯＨ－アラ－シチジン。

【0043】

代替アデニンを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ^１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ^２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ^２ｍ^６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ^２ｉ^６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ^２ｉｏ^６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ^６Ａ）、Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ^６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ^６ｔ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ^２ｇ^６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン（ｍ^６ _２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ^２ｈｎ^６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ^６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン（ｍ^６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン（ｍ^６ _２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン（ｍ^１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－アラ－アデノシン及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシン。

【0044】

代替グアニンを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ^１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ_２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、不十分修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－キューオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ_０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ_１）、アルカエオシン（Ｇ^＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ^７Ｇ）、６－チオ－７－メチルグアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ^１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ^２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ^２ _２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ^２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ^{２，２，７}Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチルグアノシン（ｍ^２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ^２ _２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ^１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ^２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ^１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、Ｏ６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン及び２’－Ｆ－グアノシン。

【0045】

核酸塩基部分は、対応する核酸塩基各々の文字コード、例えばＡ、Ｔ、Ｇ、Ｃ又はＵにより表示される場合もあり、そうした場合、各文字は、任意選択で、同等の機能の代替核酸塩基を含み得る。

【0046】

本明細書で使用される場合、用語「代替補体経路」は、補体活性化の３つの経路の１つを指し、残りは、古典的経路及びレクチン経路である。

【0047】

本明細書で使用される用語「アンチセンス」は、内因性遺伝子（例えば、ＣＦＢ）の発現を妨害するように、遺伝子、一次転写物又はプロセシング済みｍＲＮＡ（例えば、ＣＦＢの配列（例えば、配列番号１２）の全て又は一部に対して十分に相補的であるオリゴヌクレオチドを指す。

【0048】

用語「アンチセンス鎖」及び「ガイド鎖」は、標的配列に実質的に相補的である領域、例えばＣＦＢ ｍＲＮＡ（例えば、配列番号１２）を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの鎖を指す。

【0049】

数又は一連の数の前にある「少なくとも」という用語は、文脈から明らかなように、用語「少なくとも」に隣接する数及び論理的に包含され得る全ての後続の数又は整数を含むと理解される。例えば、核酸分子中のヌクレオチドの数は整数でなければならない。例えば、「２１ヌクレオチド核酸分子の少なくとも１０ヌクレオチド」は、１０～２１ヌクレオチドの範囲、例えば１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１ヌクレオチドが、示された特性を有することを意味する。「少なくとも」が一連の数又は範囲の前に存在する場合、「少なくとも」は、系列又は範囲内の数の各々を変更できることが理解される。

【0050】

本明細書で使用される場合、用語「減弱する」とは、低減するか又は事実上停止することを意味する。非限定的な例として、本明細書に提供される処置の１つ以上は、対象における補体経路活性化又は調節不全（例えば、ＣＦＢ活性化又は調節不全）によって媒介される疾患の発症又は進行を抑制するか又は事実上停止し得る。この減弱は、例えば、補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患の１つ以上の態様（例えば、症状、組織特性及び細胞性、炎症性若しくは免疫学的活性など）、例えば本明細書に記載される疾患の低減によって例示され得る。

【0051】

用語「ｃＤＮＡ」は、ｍＲＮＡ配列のＤＮＡ同等物である（即ちチミジンで置換されたウリジンを有する）核酸配列を指す。一般に、当業者は、ウリジンがチミジンとして読み取られることを除いて、ｃＤＮＡ配列はｍＲＮＡ配列と同じであることを理解することから、ｃＤＮＡ及びｍＲＮＡという用語は、特定の遺伝子（例えば、ＣＦＢ遺伝子）に関して互換可能に使用され得る。

【0052】

本明細書で使用される場合、「ＣＦＢ」及び「補体因子Ｂ」は、用語が使用される文脈に応じて、補体因子Ｂをコードするタンパク質又は遺伝子を指す。「ＣＦＢ」という用語は、野生型ＣＦＢタンパク質の天然変異体、例えばＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１７０１．２（配列番号１１）に記載されている野生型ヒトＣＦＢのアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．９％以上の配列同一性）を有するタンパク質などの野生型ＣＦＢタンパク質の天然変異体も包含する。用語「ＣＦＢ」は、野生型ＣＦＢ遺伝子の天然変異体、例えばＮＣＢＩ参照番号ＮＭ＿００１７１０．５（配列番号１２）に記載されている野生型ヒトＣＦＢの核酸配列に対して少なくとも８５％の同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％以上の同一性）を有するものも指す。

【0053】

本明細書で使用される場合、「補体経路活性化又は調節不全」という用語は、古典的経路、代替経路及びレクチン経路を含む補体経路が病原体に対する宿主防御を賦与し、免疫複合体及び損傷細胞を排除する能力並びに免疫調節の能力における異常を指す。代替補体経路の活性化又は調節不全は、体液相及び細胞表面で発生する可能性があり、過剰な補体活性化又は不十分な調節を招く恐れがあり、どちらも組織損傷を引き起こし得る。

【0054】

本明細書で使用される場合、「相補的」とは、当業者によって理解されるように、第２のヌクレオチド又はヌクレオシド配列に関連して第１のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を表現するために使用されるとき、第１のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドが、特定の条件下で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドとハイブリダイズし、二重らせん構造を形成する能力を指す。そのような条件は、例えば、ストリンジェントな条件であり得、ストリンジェントな条件は、以下を含み得る：１２～１６時間にわたり、４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥ ｐＨ ６．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５０℃又は７０℃、続いて洗浄（例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。他の条件、例えば生物の内部で遭遇する可能性のあるような生理学的に関連する条件を適用することができる。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチド又はヌクレオシドの最終的な適用に従って、２つの配列の相補性の試験に最も適した一連の条件を決定することができるであろう。本明細書で使用される「相補的」配列は、ハイブリダイズする能力に関する上記の要件が満たされる限り、非ワトソン・クリック塩基対並びに／又は非天然及び代替ヌクレオチド若しくはヌクレオシドから形成される塩基対も含み得るか又はそれらから完全に形成され得る。このような非ワトソン・クリック塩基対として、限定されないが、Ｇ：Ｕゆらぎ又はフーグステン型塩基対が挙げられる。本明細書に記載されるように、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）内又はオリゴヌクレオチドと標的配列との間の相補的配列は、一方若しくは両方のヌクレオチド又はヌクレオシド配列の全長にわたって第１のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドと第２のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドとの塩基対を含む。このような配列は、本明細書で互いに「完全に相補的」と呼ぶことができる。第１の配列が第２の配列に関して「実質的に相補的」と称される場合、最大３０塩基対の二重らせんのためのハイブリダイゼーション時に、それらの最終的な適用（例えば、ＲＩＳＣ経路を介した発現の低減）に最も関連する条件下でハイブリダイズする能力を保持しながら、これら２つの配列は完全に相補的であるか、又は両方は、１つ以上、但し一般に５、４、３又は２つ以下のミスマッチ塩基対を形成することができる。「実質的に相補的」は、目的のｍＲＮＡの連続部分（例えば、ＣＦＢをコードするｍＲＮＡ）に対して実質的に相補的であるオリゴヌクレオチドも指し得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、配列がＣＦＢをコードするｍＲＮＡの非中断部分に対して実質的に相補的である場合、ＣＦＢ ｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である。しかし、２つのオリゴヌクレオチドがハイブリダイゼーション時に１つ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されている場合、そのようなオーバーハングは、相補性の決定に関してミスマッチとみなされないものとする。例えば、２２連結ヌクレオシド長の１つのオリゴヌクレオチドと、２０ヌクレオシド長の別のオリゴヌクレオチドとを含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、異なる長さを有する場合でも、本明細書に記載される目的のために「完全に相補的」と呼ぶことができる。

【0055】

本明細書で使用される場合、「相補的オリゴヌクレオチド」は、標準的なワトソン・クリック相補性ルールに従って塩基対形成が可能なものである。具体的には、プリンは、ピリミジンと塩基対を形成して、シトシンと対合したグアニン（Ｇ：Ｃ）並びにＤＮＡの場合にはチミンと対合したアデニン（Ａ：Ｔ）、またＲＮＡの場合にはウラシルと対合したアデニン（Ａ：Ｕ）の組合せを形成する。２つのオリゴヌクレオチドは、たとえそれらが互いに完全に相補的でなくても、各々が他方に対して実質的に相補的である少なくとも１つの領域を有する限り、互いにハイブリダイズし得ることが理解される。

【0056】

本明細書で使用される語句「細胞をオリゴヌクレオチドと接触させる」は、オリゴヌクレオチド、例えばＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例えば、一本鎖オリゴヌクレオチド又は二重らせんを形成する二本鎖オリゴヌクレオチド）と細胞を、当技術分野で公知の方法によって接触させることを含む。細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることは、インビトロで細胞をオリゴヌクレオチドと接触させること又はインビボで細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることを含む。接触は、直接又は間接的のいずれでも実施され得る。このように、例えば、オリゴヌクレオチドは、本方法を実施する個体によって細胞と物理的に接触をされ得るか、又はオリゴヌクレオチド剤は、それがその後細胞と接触することを可能にするか若しくは引き起こすことになる状況に置かれ得る。インビトロで細胞を接触させることは、例えば、細胞をオリゴヌクレオチドと一緒にインキュベートすることにより行うことができる。インビボで細胞を接触させることは、例えば、オリゴヌクレオチドを細胞が位置する組織又はその付近に注入するか、又は接触させようとする細胞が位置する組織に薬剤が後に到達するように、オリゴヌクレオチド剤を別の領域、例えば血流若しくは皮下空間に注入することによって行うことができる。例えば、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを目的の部位に向けるリガンドを含み、且つ／若しくはリガンドと連結され得るか、又はオリゴヌクレオチドを目的の部位に送達するベクター（例えば、ウイルスベクター）に組み込まれ得る。インビトロ及びインビボでの接触方法の組合せも可能である。例えば、細胞をインビトロでオリゴヌクレオチドと接触させた後、その細胞を対象に移植することもできる。

【0057】

「連続した核酸塩基領域」という用語は、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの領域（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖）を指す。この用語は、本明細書では、用語「連続的ヌクレオチド配列」又は「連続的ヌクレオチド塩基配列」と互換可能に使用され得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全ては、連続したヌクレオチド又はヌクレオシド領域に存在する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、連続したヌクレオチド領域を含み、任意選択でさらに別の１つ若しくは複数のヌクレオチド又は１つ若しくは複数のヌクレオシドを含み得る。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に対して相補的であっても又はなくてもよい。連続したヌクレオチド領域のヌクレオチド間に存在するヌクレオシド間結合には、ホスホロチオエート間ヌクレオシド結合が含まれ得る。加えて、連続したヌクレオチド領域は、１つ以上の糖修飾ヌクレオシドを含み得る。

【0058】

本明細書で使用される場合、用語「デオキシリボヌクレオチド」は、リボヌクレオチドと比較してそのペントース糖の２’位にヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドは、２’位以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するデオキシリボヌクレオチドであり、糖、リン酸基又は塩基の修飾又は置換を含む。

【0059】

本明細書で使用される場合、用語「疾患」は、身体機能、系統又は器官の中断、停止又は障害を指す。対象となる疾患又は障害には、本明細書に記載の治療方法などによってＣＦＢを標的とする、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、本明細書に記載のように二重らせんを形成する一本鎖又は二本鎖ＲＮＡ構築物）による治療から利益を得ることになるものが含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法を用いて治療することができる、補体経路活性化若しくは調節不全（例えば、ＣＦＢの調節不全若しくは活性化）によって媒介されるか又はそれに関連する疾患又は障害の非限定的な例としては、例えば、以下のものが挙げられる：皮膚障害、神経学的障害、腎臓学的障害、アキュートケア、リウマチ性障害、肺障害、皮膚科学的障害、血液学的障害及び眼科障害、例えば発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、免疫グロブリンＡ腎症（ＩｇＡＮ）、原発性ＭＮを含む膜性腎症（ＭＮ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）誘発性又は定型溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性、地図状萎縮、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、ベーチェットぶどう膜炎、網膜色素変性症、黄斑浮腫、多巣性脈絡膜炎、フォークト－小柳－原田症候群、散弾状脈絡膜網膜症、交感性眼炎、眼瘢痕性類天疱瘡、眼類天疱瘡、非関節炎性虚血性視神経症、術後炎症、網膜静脈閉塞症、神経障害、多発性硬化症、脳卒中、ギラン・バレー症候群、外傷性脳損傷、パーキンソン病、血液透析合併症、超急性移植片拒絶反応、異種移植片拒絶反応、ＩＬ－２治療中のインターロイキン－２誘発毒性、炎症性疾患、自己免疫疾患の炎症、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、心筋炎、虚血再灌流後の状態、心筋梗塞、バルーン血管形成術、心肺バイパス又は腎バイパスにおけるポンプ後症候群、アテローム性動脈硬化症、血液透析、腎虚血、大動脈再建後の腸間膜動脈再灌流、感染症又は敗血症、免疫複合体障害及び自己免疫疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＳＬＥ腎炎、増殖性腎炎、肝線維症、溶血性貧血、重症筋無力症、組織再生、神経再生、呼吸困難、喀血、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、肺塞栓症及び肺梗塞、肺炎、線維性粉塵疾患、肺線維症、アレルギー、気管支収縮、過敏性肺炎、寄生虫疾患、グッドパスチャー症候群、肺血管炎、微量免疫型血管炎、免疫複合体関連炎症、抗リン脂質症候群、糸球体腎炎、肥満、関節炎、自己免疫性心疾患、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、バラケル－サイモンズ症候群、血液透析、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、クリオグロブリン血症、乾癬、移植、アルツハイマー病及び他の神経変性状態などの中枢神経系疾患、濃厚沈着症、水疱性皮膚疾患、膜増殖性糸球体腎炎ＩＩ型（ＭＰＧＮ ＩＩ）、慢性移植片対宿主病、フェルティ症候群、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、肺動脈性肺高血圧症、原発性シェーグレン症候群、原発性胆汁性胆管炎、常染色体優性多発性嚢胞腎並びにミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質抗体疾患（ＭＯＧＡＤ）。

【0060】

本明細書で使用される場合、用語「二重らせん」は、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関して、２つのヌクレオチドの逆平行配列の相補的な塩基対形成によって形成される構造を指す。

【0061】

本明細書で使用される場合、（例えば、細胞又は対象における）ＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する薬剤（例えば、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド）の「有効量」、「治療有効量」及び「十分な量」という用語は、ヒトなどの対象に投与した場合、臨床結果を含む有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な量を指し、そのため、「有効量」又はその同義語は、それが適用されている状況に応じて変動する。例えば、補体経路の活性化又は調節不全に関連する疾患を治療する状況では、ＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する薬剤の投与なしで得られる応答と比較して、治療応答を達成するのに十分なＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する薬剤の量である。そのような量に相当する本明細書に記載のＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する所与の薬剤の量は、所与の薬剤、医薬製剤、投与経路、疾患若しくは障害のタイプ、対象のアイデンティティ（例えば、年齢、性別及び／若しくは体重）又は治療対象の宿主など、様々な容易に応じて変動し得るが、それでも当業者によって常用的に決定することができる。本明細書で使用する場合、本開示のＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する薬剤の「治療有効量」は、対照と比較して、対象に有益な又は所望の結果をもたらす量でもある。本明細書で定義されるように、本開示のＣＦＢのレベル及び／又は活性を低減する薬剤の治療有効量は、当業者により当技術分野で公知の常用的な方法によって容易に決定され得る。投与計画は、最適な治療応答を提供するように調節され得る。

【0062】

本明細書で使用される場合、用語「賦形剤」は、例えば、所望の粘稠度又は安定化効果を賦与するか又はそれに寄与するように、組成物に含有させることができる非治療薬を指す。

【0063】

「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」及び「Ｕ」の各々は、一般に、グアニン、シトシン、アデニン、チミジン及びウラシルを塩基としてそれぞれ含むヌクレオチドを表すが、リボース及びデオキシリボース以外にも代替糖部分を含み得る。「ヌクレオチド」という用語は、以下でさらに詳述するような代替ヌクレオチド又は代用置換部分を指し得ることも理解される。当業者は、グアニン、シトシン、アデニン及びウラシルが、そのような置換部分を担持するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対形成特性を実質的に改変することなく、他の部分によって置換され得ることを十分に認識している。例えば、限定するものではないが、イノシンをその塩基として含むヌクレオチドは、アデニン、シトシン又はウラシルを含むヌクレオチドと塩基対を形成することができる。従って、ウラシル、グアニン又はアデニンを含むヌクレオチドは、本開示で特に取り上げるオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列において、例えばイノシンを含むヌクレオチドによって置換され得る。別の例では、オリゴヌクレオチド中いずれかのアデニン及びシトシンをグアニン及びウラシルでそれぞれ置換して、標的ｍＲＮＡと対合するＧ－Ｕゆらぎ塩基対を形成することができる。このような置換部分を含む配列は、本開示で特に取り上げる組成物及び方法に好適である。

【0064】

本明細書で使用される場合、用語「阻害剤」は、タンパク質（例えば、ＣＦＢ）のレベル及び／又は活性を低減する任意の薬剤を指す。阻害剤の非限定的な例には、オリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ）が含まれる。本明細書で使用される用語「低減」は、「サイレンシング」、「下方制御」、「抑制」及び他の同様の用語と互換可能に使用され、５％以上（例えば、１０％、１５％、２５％、３５％、５０％、７５％及び１００％）の任意のレベルの低下を含む。健康なヒトの血清中に認められるＣＦＢタンパク質の典型的なレベルは、約２００μｇ／ｍＬであり；従って、ＣＦＢタンパク質の低下したレベルは、例えば、約２００μｇ／ｍＬ未満（例えば、５μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ及び１９０μｇ／ｍＬ）の量であり得る。

【0065】

「レベル」とは、任意選択で基準と比較した、タンパク質又はタンパク質をコードするｍＲＮＡ（例えば、ＣＦＢ）のレベル若しくは活性を意味する。基準は、本明細書で定義されるように、任意の有用な標準であり得る。タンパク質の「減少したレベル」又は「増加したレベル」とは、それぞれ基準と比較してタンパク質レベルの減少又は増加（例えば、基準と比較して例えば約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％又はそれを超える減少又は増加；例えば、基準と比較して約１０％、約１５％、約２０％、約５０％、約７５％、約１００％又は約２００％を超える減少又は増加；例えば、基準と比較して約０．０１倍、約０．０２倍、約０．１倍、約０．３倍、約０．５倍、約０．８倍若しくはそれ以下に満たない減少又は増加；例えば、基準と比較して約１．２倍、約１．４倍、約１．５倍、約１．８倍、約２．０倍、約３．０倍、約３．５倍、約４．５倍、約５．０倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約１００倍若しくは約１０００倍以上を超える減少又は増加）を意味する。タンパク質又はｍＲＮＡのレベルは、サンプル中の総タンパク質又はｍＲＮＡに対する質量／体積（例：ｇ／ｄＬ、ｍｇ／ｍＬ、μｇ／ｍＬ、ｎｇ／ｍＬ）又はパーセンテージで表すことができる。

【0066】

本明細書で使用される場合、用語「ループ」は、互いに十分に相補的である核酸の２つの逆平行領域によってフランキングされた核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）の不対領域を指し、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸緩衝液中又は細胞内）で、不対領域とフランキングする２つの逆平行領域は、ハイブリダイズして二重らせん（「ステム」と呼ばれる）を形成する。

【0067】

本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド間結合」という用語は、ホスホジエステル結合を含む基準ヌクレオチド間結合と比較して、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を指す。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、非天然に存在する連結である。典型的には、修飾ヌクレオチド間結合は、修飾ヌクレオチド間結合が存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善し得る。

【0068】

本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」という用語は、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する基準ヌクレオチドと比較して、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、非天然に存在するヌクレオチドである。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その糖、核酸塩基及び／又はリン酸基に１つ以上の化学修飾を有する。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドと共役された１つ以上の化学部分を有する。典型的には、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善し得る。

【0069】

「ニックテトラループ構造」とは、個別のセンス（パッセンジャー）鎖及びアンチセンス（ガイド）鎖の存在を特徴とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造であり、センス鎖は、アンチセンス鎖との相補性の領域を有し、且つ両鎖の少なくとも一方、一般にセンス鎖は、少なくとも一方の鎖内に形成された隣接するステム領域を安定化するように構成されたテトラループを有する。ニックテトラループ構造は、センス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチドに単一の切断を生じさせ、それにより両鎖が共有結合によりその部位で連結されないようにする。

【0070】

用語「核酸塩基」及び「塩基」は、核酸ハイブリダイゼーション時に水素結合を形成するヌクレオシド及びヌクレオチド中に存在するプリン（例えば、アデニン及びグアニン）並びにピリミジン（例えば、ウラシル、チミン及びシトシン）部分を含む。本開示に関連して、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーション中に機能性である代替核酸塩基も包含する。これに関連して、「核酸塩基」は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン及びヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基並びに代替核酸塩基の両方を指す。このような変異体は、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ．（Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．４５：ｐａｇｅ ２０５５，２０１２）及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１，２００９）に記載されている。

【0071】

用語「ヌクレオシド」は、核酸塩基と糖部分の単量体単位又は核酸塩基と糖部分を有するオリゴヌクレオチドを指す。ヌクレオシドは、天然に存在するもの並びに本明細書に記載されるものなどの代替ヌクレオシドを含み得る。ヌクレオシドの核酸塩基は、天然に存在する核酸塩基又は代替核酸塩基であり得る。同様に、ヌクレオシドの糖部分は、天然に存在する糖又は代替糖であり得る。

【0072】

本明細書で使用される「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシド及びヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの単量体単位を指す。ヌクレオシド間結合は、リン酸結合を含んでも又は含まなくてもよい。同様に、「連結されたヌクレオシド」は、リン酸結合によって連結されても又はされなくてもよい。多くの「代替ヌクレオシド間結合」は、当技術分野で公知であり、限定されないが、リン酸、ホスホロチオエート及びボロノリン酸結合を含む。代替ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシド（ＢＮＡ）（例えば、ロックヌクレオシド（ＬＮＡ）及び拘束エチル（ｃＥｔ）ヌクレオシド）、ペプチドヌクレオシド（ＰＮＡ）、ホスホトリエステル、ホスホロチオネート、ホスホロアミデート及び本明細書に記載のものを含む天然ヌクレオシドのリン酸骨格の他の変異体を含む。

【0073】

本明細書で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド」は、短い核酸、例えば１００ヌクレオチド長未満の核酸を指す。オリゴヌクレオチドは、一本鎖又はＲＮＡｉであり得る。オリゴヌクレオチドは、二重らせん領域を有しても又は有さなくてもよい。非限定的な一組の例として、オリゴヌクレオチドは、限定されないが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短いｓｉＲＮＡ又は一本鎖ｓｉＲＮＡであり得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。

【0074】

本明細書で使用される場合、用語「オーバーハング」は、１本の鎖又は領域と共に二重らせんを形成する相補鎖の末端を超えて延びる１本の鎖又は領域から生じる末端非塩基対合ヌクレオチドを指す。一部の実施形態では、オーバーハングは、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の５’末端又は３’末端の二重らせん領域から延びる１つ以上の不対ヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、オーバーハングは、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）のアンチセンス鎖又はセンス鎖上の３’若しくは５’オーバーハングである。

【0075】

本明細書で使用される場合、「それを必要とする患者」又は「それを必要とする対象」という用語は、疾患又は障害、例えば代替補体調節不全によって媒介される疾患（例えば、ＣＦＢに関連する調節不全、補体経路（例えば、代替、古典的及び／又はレクチン経路）の１つ若しくは全ての調節不全など）の治療の必要性に基づく対象の識別を指す。対象は、例えば、疾患又は障害の治療の必要性を有するものとして、例えば当業者（例えば、医師）による早期診断に基づいて識別することができる。

【0076】

基準オリゴヌクレオチド又はポリペプチド配列に対する「配列同一性パーセント（％）」は、該当配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入することにより、配列同一性の最大パーセントを達成した後、基準オリゴヌクレオチド又はポリペプチド配列中の核酸若しくはアミノ酸と同一である候補配列中の核酸若しくはアミノ酸のパーセンテージとして定義される。核酸又はアミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的とするアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２又はメガライン（Ｍｅｇａｌｉｇｎ）ソフトウェアなどの一般に利用可能なコンピュータソフトウェアを用いて、当業者の能力の範囲内の様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性パーセント（％）値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを用いて生成され得る。例示として、所与の核酸又はアミノ酸配列、Ｂに対する、それとの若しくはそれに対しての所与の核酸又はアミノ酸配列、Ａの配列同一性パーセント（又は所与の核酸又はアミノ酸配列、Ｂに対する、それとの若しくはそれに対しての特定の同一性パーセントを有する所与の核酸又はアミノ酸配列、Ａと表現することもできる）は、以下のように計算される：
（分数Ｘ／Ｙ）×１００
（式中、Ｘは、配列アラインメントプログラム（ＢＬＡＳＴなど）により、そのプログラムのＡとＢのアラインメントで同一のマッチとして評点されるヌクレオチド又はアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂの核酸の総数である。核酸又はアミノ酸配列Ａの長さが核酸又はアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性パーセントは、Ａに対するＢの配列同一性パーセントと等しくならないことは理解されるであろう。

【0077】

本明細書で使用される「薬学的に許容される賦形剤」とは、本明細書に記載の化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁又は溶解することができるビヒクル）を指し、患者において実質的に無毒性且つ非炎症性であるという特性を有する。賦形剤は、例えば、付着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、染色剤（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤又はコーティング剤、香味料、香料、流動化剤（流動促進剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤又は分散剤、甘味料及び水和水が挙げられる。例示的な賦形剤としては、限定されないが、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ及びキシリトールが挙げられる。

【0078】

本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩」は、本明細書に記載される化合物のいずれかの化合物の任意の薬学的に許容される塩を意味する。例えば、本明細書に記載の化合物のいずれかの薬学的に許容される塩には、健全な医学的判断の範囲内であり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応なしにヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適しており、適正な利益／リスク比に見合ったものが含まれる。薬学的に許容される塩は、当技術分野で周知である。例えば、薬学的に許容される塩は、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ６６：１－１９，１９７７及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｅｄｓ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８に記載されている。塩は、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることにより、本明細書に記載される化合物の最終単離及び精製中又は個別に、インサイチュで調製することができる。本明細書に記載の化合物は、薬学的に許容される塩として調製することができるようにイオン化可能な基を有し得る。これらの塩は、無機酸又は有機酸を含む酸付加塩であり得るか、又は塩は、本明細書に記載される化合物の酸性形態の場合、無機又は有機塩基から調製され得る。多くの場合、化合物は、薬学的に許容される酸又は塩基の付加生成物として調製される薬学的に許容される塩として調製又は使用される。適切な薬学的に許容される酸及び塩基並びに適切な塩の調製方法は、当技術分野で周知である。塩は、無機及び有機の酸及び塩基を含む薬学的に許容される非毒性の酸及び塩基から調製され得る。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンフォレート、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオネート、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオネート、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム、さらには無毒性アンモニウム、第四級アンモニウム並びにアミンカチオン、例えば、限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン及びエチルアミンが挙げられる。

【0079】

本明細書で使用される用語「医薬組成物」は、本明細書に記載される化合物（例えば、オリゴヌクレオチド剤）を含有する組成物を表し、これは、薬学的に許容される賦形剤と一緒に製剤化され、哺乳動物における疾患の治療のための治療レジメンの一部として政府の規制機関の承認を得て任意選択で製造又は販売される。医薬組成物は、例えば、皮下投与用、静脈内投与用（例えば、粒子状塞栓を含まない滅菌溶液として且つ静脈内使用に適した溶媒系中）；髄腔内注射用；脳室内注射用；実質内注射用；単位剤形（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ゲルキャップ又はシロップ）での経口投与用；局所投与用（例えば、クリーム、ゲル、ローション若しくは軟膏として；又は任意の他の薬学的に許容される製剤として製剤化することができる。

【0080】

本明細書で使用される場合、用語「リン酸類似体」は、リン酸基の静電的及び／又は立体的性質を模倣する化学的部分を指す。一部の実施形態では、リン酸類似体は、多くの場合、酵素的除去を被りやすい５’－リン酸の代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに位置する。一部の実施形態では、５’リン酸類似体は、ホスファターゼ耐性結合を含有する。リン酸類似体の例としては、５’ホスホネート、例えば５’メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）が挙げられる。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドにおいて、糖の４’－炭素位置にリン酸類似体（「４’－リン酸類似体」と呼ばれる）を有する。４’－リン酸類似体の一例は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えば、その４’－炭素で）結合しているオキシメチルホスホネート又はその類似体である。例えば、米国特許出願公開第２０１９／０１７７７２９号明細書を参照されたい（リン酸類似体に関する各々の内容は参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドの５’末端に関して、他の修飾が開発されている（例えば、国際公開第２０１１／１３３８７１号パンフレット；米国特許第８，９２７，５１３号明細書；及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３（６）：２９９３－３０１１を参照されたく；リン酸類似体に関する各々の内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。

【0081】

本明細書で使用される用語「プローブ」は、特定の配列に選択的に結合することができる任意の分子、例えばｍＲＮＡなどの核酸分子を指す。プローブは、当技術分野で公知であり且つ通常の方法を用いて合成され得るか、又は適切な生物学的調製物から誘導され得る。プローブは、標識されるように特別に設計され得る。プローブとして利用することができる分子の例には、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、抗体及び有機分子が含まれるが、これらに限定されない。

【0082】

本明細書で使用される場合、遺伝子の「発現低減」という用語は、適切な基準細胞若しくは対象と比較して、遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写物又はタンパク質の量の減少及び／又は細胞若しくは対象における遺伝子の活性の量の減少を指す。例えば、細胞をＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例えば、ＣＦＢ ｍＲＮＡ配列に相補的なアンチセンス鎖を有するもの）で処置する行為は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドで処置されていない細胞と比較して、ＲＮＡ転写物、タンパク質及び／又は活性（例えば、ＣＦＢ遺伝子によってコードされる）の量の減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される「発現を低減する」とは、遺伝子（例えば、ＣＦＢ）の発現低下をもたらす行為を指す。発現の低減は、本明細書に記載されるように、ＣＦＢの血清濃度の減少によって評価することができる（例：例えば、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触していない細胞に対して）。代わりに、発現の減少は、例えば、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触させていない細胞と比較して、ＣＦＢ ｍＲＮＡの転写及び／又は翻訳のレベルの低下（例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、５５％又は６０％以上の減少、例えば１％～６０％以上の範囲の減少）により評価することができる。ＣＦＢの発現低減は、ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔアッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイ、溶血アッセイ又は当技術分野で公知のアッセイを用いて測定することができる。

【0083】

「基準」とは、タンパク質又はｍＲＮＡのレベル若しくは活性を比較するために使用される任意の有用な基準を意味する。基準は、比較の目的で使用される任意のサンプル、標準、標準曲線又はレベルであり得る。基準は、通常の基準サンプル又は参照標準若しくはレベルであり得る。「基準サンプル」は、例えば、対照、例えば「正常な対照」などの所定の陰性対照値又は同じ対象から採取された以前のサンプル；正常細胞又は正常組織など、正常な健康な対象からのサンプル；疾患を有していない対象からのサンプル（例えば、細胞若しくは組織）；疾患を有すると診断されているが、本明細書に記載の化合物でまだ治療を受けていない対象からのサンプル；本明細書に記載の化合物によって治療された対象からのサンプル；又は既知の正常濃度の精製済みオリゴヌクレオチド若しくはタンパク質（例えば、本明細書に記載されるいずれか）のサンプルであり得る。「参照標準又はレベル」とは、参照サンプルから得られた値又は数値を意味する。「正常対照値」とは、非疾患状態を示す予め決定された値であり、例えば健康な対照対象で予測される値である。典型的に、正常な対照値は、範囲（「ＸとＹとの間」）、高い閾値（「Ｘ以下」）又は低い閾値（「Ｘ以上」）として表される。特定のバイオマーカーについての正常対照値内の測定値を有する対象は、典型的には、そのバイオマーカーについて「正常範囲内」であるとみなされる。正常な参照標準又はレベルは、疾患又は障害（例えば、補体経路の活性化若しくは調節不全に関連する疾患又は障害）を有していない正常な対象；本明細書に記載の化合物で治療を受けた対象から得られた値又は数値であり得る。一部の実施形態では、基準サンプル、標準又はレベルは、以下の基準：年齢、体重、性別、疾患ステージ及び健康状態全般の少なくとも１つによって対象サンプルに合致させる。精製されたオリゴヌクレオチド又はタンパク質のレベル、例えば本明細書に記載される任意の、正常な基準範囲内の標準曲線も、基準として使用することができる。

【0084】

本明細書で使用される場合、「相補性の領域」という用語は、遺伝子、一次転写物、配列（例えば、標的配列、例えばＣＦＢヌクレオチド配列）又は内因性遺伝子の発現を妨害するようにプロセシングされたｍＲＮＡ（例えば、ＣＦＢ）の全て若しくは一部に実質的に相補的であるオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上の領域を指す。相補性の領域が標的配列に対して完全に相補的ではない場合、ミスマッチは分子の内部領域若しくは末端領域に存在し得る。一般に、最も許容されるミスマッチは、末端領域、例えばオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の５’末端及び／又は３’末端の５、４、３又は２ヌクレオチド以内にある。

【0085】

本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」という用語は、そのペントース糖としてリボースを有するヌクレオチドを指し、これは、その２’位にヒドロキシル基を含有する。修飾リボヌクレオチドは、２’位以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するリボヌクレオチドであり、リボース、リン酸基又は塩基の修飾又は置換を含む。

【0086】

本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」という用語は、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）とアンチセンス鎖（ガイド）を有する二本鎖オリゴヌクレオチド（ここで、アンチセンス鎖又はアンチセンス鎖の一部が標的ｍＲＮＡの切断に際してアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼにより使用される）又は（ｂ）単一アンチセンス鎖を有する一本鎖オリゴヌクレオチド（ここで、上記アンチセンス鎖（又は上記アンチセンス鎖の一部）が標的ｍＲＮＡの切断に際してＡｇｏ２エンドヌクレアーゼにより使用される）のいずれかを指す。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ステムループなどのループ領域を含み、これは、その用語が本明細書で定義される通りのヌクレオシドを含む。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡを含み、これらは、ＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介してＲＮＡ転写物の標的切断を媒介する。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として知られるプロセスによってｍＲＮＡの配列特異的分解を指令する。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、細胞、例えば哺乳動物対象などの対象内の細胞におけるＣ３の発現を低減する。一般に、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの大部分はリボヌクレオシドであるが、本明細書に詳細に記載されるように、各鎖又は両方の鎖は、１つ以上の非リボヌクレオシド、例えばデオキシリボヌクレオシド及び／又は代替ヌクレオシドも含み得る。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、実質的に二重らせん形態である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの二重らせん領域の相補的な塩基対形成は、共有結合的に個別の核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの二重らせん領域の相補的な塩基対形成は、共有結合で連結された核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの二重らせん領域の相補的塩基対は、折り畳まれた単一の核酸鎖から形成されて（例えば、ヘアピンを介して）、一緒に塩基対合するヌクレオチドの相補的な逆平行配列を提供する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、互いに完全に二重らせん化される２つの共有結合的に個別の核酸鎖を含む。しかし、一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、部分的に二重らせん化され、例えば一方又は両方の末端にオーバーハングを有する２つの共有結合的に個別の核酸鎖を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含み、従って、１つ以上のミスマッチを有する可能性があり、これは、内部ミスマッチ又は末端ミスマッチを含み得る。

【0087】

本明細書で使用される用語「センス鎖」及び「パッセンジャー鎖」は、アンチセンス鎖の領域に実質的に相補的である領域を含むｄｓＲＮＡの鎖を指す。アンチセンス鎖の領域に相補的であるセンス鎖の領域は、標的遺伝子（例えば、ＣＦＢ遺伝子）の一部と少なくとも８５％（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％及び１００％）同一である。例えば、センス鎖は、配列番号１２の一部と例えば少なくとも１０～３６ヌクレオチド、例えば１０～３１ヌクレオチド、１０～２６ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチド又は１０～１５ヌクレオチドにわたって少なくとも８５％同一である領域を有し得る。

【0088】

「低分子干渉ＲＮＡ」としても知られる「ｓｉＲＮＡ」及び「短い干渉ＲＮＡ」という用語は、約１０～５０ヌクレオチド長のＲＮＡ剤、任意選択でＲＮＡｉ剤を指し、これらの鎖は、例えば、１、２又は３つの突出した連結ヌクレオシドを含む突出末端を有し、これは、ＲＮＡ干渉を指令又は媒介することができる。天然に存在するｓｉＲＮＡは、細胞のＲＮＡｉ機構（例えば、ダイサー又はそのホモログ）により、より長いｄｓＲＮＡ分子（例えば、＞２５連結ヌクレオシド長）から産生される。

【0089】

本明細書で使用される場合、用語「鎖」は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合）を介して互いに連結されたヌクレオチドの単一の連続した配列を指す。一部の実施形態では、鎖は、２つの自由端、例えば５’末端及び３’末端を有する。

【0090】

本明細書で使用される場合、用語「対象」は、例えば、実験、診断、予防及び／又は治療目的のために、本開示に従う組成物を投与することができる任意の生物を指す。典型的な対象は、任意の動物（例えば、哺乳動物、例えばマウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類及びヒト）を含む。対象は、治療を求めているか若しくは治療が必要であるか、治療を必要としているか、治療を受けているか、将来治療を受ける予定であるか、又は特定の疾患若しくは状態について訓練を受けた専門家によって看護を受けているヒト又は動物であり得る。

【0091】

「糖」又は「糖部分」は、フラノース環を有する天然由来の糖を含む。糖は、ヌクレオシドのフラノース環を置換することができる構造として定義される「代替糖」も含む。特定の実施形態では、代替糖は、非フラノース（又は４’－置換フラノース）環若しくは環系又は開放系である。このような構造は、６員環などの天然のフラノース環に対する単純な変化を含むか、又はペプチド核酸に使用される非環系の場合のように、より複雑であり得る。代替糖は、フラノース環が別の環系、例えばモルホリノ又はヘキシトール環系で置換されている糖代替品も含み得る。モチーフを有するオリゴヌクレオチドの調製に有用な糖部分として、限定されないが、β－Ｄ－リボース、β－Ｄ－２’－デオキシリボース、置換糖（例えば２’、５’及びビス置換糖）、４’－Ｓ－糖（例えば４’－Ｓ－リボース、４’－Ｓ－２’－デオキシリボース及び４’－Ｓ－２’置換リボース）、二環式代替糖（例えば、２’－Ｏ－ＣＨ_２－４’又は２’－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－４’架橋リボース由来二環糖）及び糖代替品（例えば、リボース環がモルホリノ又はヘキシトール環系で置換されている場合など）が挙げられる。各位置で使用される複素環式塩基及びヌクレオシド間結合のタイプは様々であり、モチーフを決定する要因ではない。代替糖部分を有するほとんどのヌクレオシドでは、複素環式核酸塩基は、概して、ハイブリダイゼーションを可能にするように維持される。

【0092】

本明細書で使用される場合、「ステムループ」という用語は、一方が５’から３’方向に読み取られ、他方が３’から５’方向に読み取られるとき、２つの領域が相補的なヌクレオチド配列を有すると共に、上記２つの領域間のヌクレオチドが不対ループを形成する、オリゴヌクレオチドの領域を指す。ステムループ領域は、ヘアピン又はヘアピンループと呼ばれることもある。

【0093】

本明細書で使用される場合、「鎖」という用語は、連結されたヌクレオシドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを指す。「核酸塩基配列を含む鎖」とは、標準的な核酸塩基命名法を用いて称される配列により表される連結ヌクレオシドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを指す。

【0094】

本明細書で使用される場合、「合成」という用語は、人工的に合成された（例えば、機械（例えば、固体核酸合成装置）を用いて）又はそれ以外では、通常、分子を産生する天然源（例えば、細胞若しくは生物）に由来しない核酸又は他の分子を指す。

【0095】

本明細書で使用される場合、「標的」又は「ターゲティング」という用語は、ＣＦＢ遺伝子又はＣＦＢ遺伝子産物をコードするＣＦＢ ｍＲＮＡに特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドを指す。例えば、当業者に公知の（例えば、アンチセンス及びＲＮＡ干渉分野において）方法により、前記遺伝子又は前記ｍＲＮＡを（例えば、その遺伝子又はｍＲＮＡによってコードされるタンパク質のレベルを低下させることにより）阻害することができるオリゴヌクレオチドを指す。

【0096】

本明細書で使用される場合、「ターゲティングリガンド」という用語は、目的の組織又は細胞の同族分子（例えば、受容体）に選択的に結合し、且つ他の物質を目的の組織又は細胞にターゲティングさせる目的で別の物質と共役可能な分子（例えば、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド若しくは脂質）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、ターゲティングリガンドは、オリゴヌクレオチドを目的の特定の組織又は細胞にターゲティングさせる目的で、オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを含むベクター（例えば、ウイルスベクター）と共役させることができる。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、細胞表面受容体に選択的に結合する。従って、いくつかの実施形態では、ターゲティングリガンドをオリゴヌクレオチド又はベクターと共役させると、細胞の表面に発現される受容体への選択的結合及びオリゴヌクレオチド、ターゲティングリガンド及び受容体を含む複合体の細胞によるエンドソーム内在化により、特定の細胞内へのオリゴヌクレオチドの送達が容易になる。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内のターゲティングリガンドから放出されるように、細胞内在化の後又は最中に切断されるリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。

【0097】

本明細書で使用される場合、用語「テトラループ」は、ヌクレオチドのフランキング配列のハイブリダイゼーションにより形成される隣接する二重らせんの安定性を高めるループを指す。安定性の増加は、無作為に選択されたヌクレオチド配列からなる同等長さの１組のループから平均して予想される隣接ステム二重らせんの融解温度（Ｔｍ）よりも高い隣接ステム二重らせんのＴｍの増加として検出可能である。例えば、テトラループは、１０ｍＭ ＮａＨＰＯ_４では、少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃又は少なくとも７５℃の融解温度を、長さが少なくとも２塩基対の二重らせんを含むヘアピンに付与することができる。一部の実施形態では、テトラループは、スタッキング相互作用によって隣接するステム二重らせん中の塩基対を安定化し得る。さらに、テトラループ中のヌクレオチド間の相互作用として、限定されないが、非ワトソン・クリック塩基対形成、スタッキング相互作用、水素結合及び接触相互作用が挙げられる（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９０ Ａｕｇ．１６；３４６（６２８５）：６８０－２；Ｈｅｕｓ ａｎｄ Ｐａｒｄｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９１ Ｊｕｌ．１２；２５３（５０１６）：１９１－４）。一部の実施形態では、テトラループは、３～６ヌクレオチドを含むか、又はそれらから構成され、典型的には、４～５ヌクレオチドである。特定の実施形態では、テトラループは、３つ、４つ、５つ又は６つのヌクレオチドを含むか又はそれらから構成されるが、これらは、修飾されても又はされなくてもよい（例えば、ターゲティング部分と共役されても又はされなくてもよい）。一実施形態では、テトラループは、４つのヌクレオチドからなる。任意のヌクレオチドをテトラループに使用し得、そのようなヌクレオチドの標準的なＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ記号は、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ（１９８５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３０２１－３０３０に記載されているように使用され得る。例えば、文字「Ｎ」は、任意の塩基がその位置にあり得ることを意味するために使用され得、文字「Ｒ」は、Ａ（アデニン）又はＧ（グアニン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）又はＴ（チミン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得る。テトラループの例には、テトラループのＵＮＣＧファミリー（例えば、ＵＵＣＧ）、テトラループのＧＮＲＡファミリー（例えば、ＧＡＡＡ）及びＣＵＵＧテトラループが含まれる。（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９０ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；８７（２１）：８４６７－７１；Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９１ Ｎｏｖ．１１；１９（２１）：５９０１－５）。ＤＮＡテトラループの例には、テトラループのｄ（ＧＮＮＡ）ファミリー（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ）、テトラループのｄ（ＧＮＲＡ））ファミリー、テトラループのｄ（ＧＮＡＢ）ファミリー、テトラループのｄ（ＣＮＮＧ）ファミリー及びテトラループのｄ（ＴＮＣＧ）ファミリー（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が含まれる。例えば、以下を参照されたい：Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１（４８），１４２８１－１４２９２，２００２．ＳＨＩＮＪＩ ｅｔ ａｌ．Ｎｉｐｐｏｎ Ｋａｇａｋｋａｉ Ｋｏｅｎ Ｙｏｋｏｓｈｕ ＶＯＬ．７８ｔｈ；ＮＯ．２；ｐｇ．７３１（２０００）（それらの関連する開示のために参照により本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、テトラループは、ニックテトラループ構造内に含まれる。

【0098】

「治療有効量」又は「予防有効量」とは、所望の局所又は全身効果（例えば、補体経路活性化又は調節不全に起因する疾患の１つ以上の症状の治療）を生み出す量（単回又は複数回用量のいずれかで投与される）の開示のオリゴヌクレオチド組成物（例えば、ｄｓＲＮＡなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を指す。本開示の方法に使用されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、そのような治療に適用可能な適正な利益／リスク比を生み出すのに十分な量で投与され得る。

【0099】

本明細書で使用される場合、用語「治療する」は、既存の状態（例えば、疾患、障害）に関して対象の健康及び／若しくはウェルビーイングを改善する目的又は状態の発生の可能性を予防又は低減する目的で、例えば対象への治療薬（例えば、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド）の投与による、それを必要とする対象に医療を提供する行為を指す。一部の実施形態では、治療は、対象が経験する状態（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの徴候、症状若しくは寄与因子の頻度又は重症度を低減することを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸又はＲＮＡｉオリゴヌクレオチド剤（例えば、ｄｓＲＮＡ）を用いて、補体経路の障害の細胞的及び臨床的症状（例えば、ＣＦＢの活性化又は調節不全によって引き起こされる障害）を制御する。

【0100】

詳細な説明
本明細書には、代替補体経路活性化に特定の役割を果たすことが知られている補体因子Ｂ（ＣＦＢ）をターゲティングする、センス鎖及びアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）並びにその薬学的に許容される塩が記載される。オリゴヌクレオチドを投与して、細胞（例えば、肝細胞）又は対象（例えば、ヒト）におけるＣＦＢのレベル及び／又は活性を低下させることができる）。例えば、オリゴヌクレオチドは、インビボで投与することができ、細胞によって（例えば、肝細胞；例えば、シアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に結合することによって）内在化され得る。細胞の内在化の後、オリゴヌクレオチドはＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に結合されて、ＣＦＢ ｍＲＮＡをターゲティングし、それによってＣＦＢ ｍＲＮＡの分解を開始し、その翻訳を阻止することができる。

【0101】

代替補体調節不全によって媒介される疾患は、多くの場合、補体の過活動の結果である。本明細書には、ＣＦＢの発現及び／又は活性レベルを低下させる本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの投与により、補体経路活性化又は調節不全によって媒介されるか若しくはそれに関連する疾患を治療する方法が記載される。本明細書に記載のオリゴヌクレオチド及び組成物により治療することができる、補体経路活性化によって媒介されるか又はそれに関連する障害の例としては、例えば、以下のものが挙げられる：皮膚障害、神経学的障害、腎臓学的障害、アキュートケア、リウマチ性障害、肺障害、皮膚科学的障害、血液学的障害及び眼科障害、例えば発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、免疫グロブリンＡ腎症（ＩｇＡＮ）、原発性ＭＮを含む膜性腎症（ＭＮ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）誘発性又は定型溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性、地図状萎縮、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、ベーチェットぶどう膜炎、網膜色素変性症、黄斑浮腫、多巣性脈絡膜炎、フォークト－小柳－原田症候群、散弾状脈絡膜網膜症、交感性眼炎、眼瘢痕性類天疱、眼類天疱瘡、非関節炎性虚血性視神経症、術後炎症、網膜静脈閉塞症、神経障害、多発性硬化症、脳卒中、ギラン・バレー症候群、外傷性脳損傷、パーキンソン病、血液透析合併症、超急性移植片拒絶反応、異種移植片拒絶反応、ＩＬ－２治療中のインターロイキン－２誘発毒性、炎症性疾患、自己免疫疾患の炎症、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、心筋炎、虚血再灌流後の状態、心筋梗塞、バルーン血管形成術、心肺バイパス又は腎バイパスにおけるポンプ後症候群、アテローム性動脈硬化症、血液透析、腎虚血、大動脈再建後の腸間膜動脈再灌流、感染症又は敗血症、免疫複合体障害及び自己免疫疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＳＬＥ腎炎、増殖性腎炎、肝線維症、溶血性貧血、重症筋無力症、組織再生、神経再生、呼吸困難、喀血、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、肺塞栓症及び肺梗塞、肺炎、線維性粉塵疾患、肺線維症、アレルギー、気管支収縮、過敏性肺炎、寄生虫疾患、グッドパスチャー症候群、肺血管炎、微量免疫型血管炎、免疫複合体関連炎症、抗リン脂質症候群、糸球体腎炎、肥満、関節炎、自己免疫性心疾患、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、バラケル－サイモンズ症候群、血液透析、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、クリオグロブリン血症、乾癬、移植、アルツハイマー病及び他の神経変性状態などの中枢神経系疾患、濃厚沈着症、水疱性皮膚疾患、膜増殖性糸球体腎炎ＩＩ型（ＭＰＧＮ ＩＩ）、慢性移植片対宿主病、フェルティ症候群、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、肺動脈性肺高血圧症、原発性シェーグレン症候群、原発性胆汁性胆管炎、常染色体優性多発性嚢胞腎並びにミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質抗体疾患（ＭＯＧＡＤ）。

【0102】

本明細書に記載される組成物及び方法は、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）及びその薬学的に許容される塩（例えば、そのナトリウム塩）を特徴とし、これは、ＣＦＢ遺伝子（例えば、ヒトＣＦＢ遺伝子）の領域に対して実質的な配列同一性を有するセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。

【0103】

オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を用いて、例えばそれを必要とする対象（例えば、ヒト）の細胞などの細胞（例えば、肝細胞）中のＣＦＢのレベル及び／又は活性を低下させることにより、補体経路活性を調節することができる。オリゴヌクレオチド剤は、補体経路のＣＦＢをターゲティングし、代替経路、古典経路及びレクチン経路の他の経路の活性化（保護）をインタクトなまま残す。従って、本開示は、補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害（例えば、ＣＦＢの活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害）を治療するための組成物及び方法を特徴とする。

【0104】

補体因子Ｂ標的配列
治療利益を達成するために使用することができるＣＦＢ発現のオリゴヌクレオチドベースの阻害剤が本明細書で提供される。ＣＦＢ ｍＲＮＡの検査（例えば、実施例１を参照されたい）並びにインビトロ及びインビボ試験から、ＣＦＢ ｍＲＮＡの配列は、オリゴヌクレオチドベースの阻害を受けやすいため、ターゲティング配列として有用であることが見出された。例えば、ＣＦＢ標的配列は、参照配列ＮＭ＿００１７１０．６（配列番号１２）を有するホモサピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）補体因子Ｂのヌクレオチド１８２７～１８４５及び４８９～５０７にそれぞれ対応する配列番号１３又は１４のいずれかに記載の配列を含み得るか又はそれらから構成され得る。これらのＣＦＢ配列は、それぞれ化合物Ａ及び化合物Ｂの標的配列並びにそれらに対して最大８５％の配列同一性を有する本明細書に記載のそれらの変異体であり得る。化合物Ａ及びＢ（並びに本明細書に記載されるそれらの変異体）は、参照配列ＸＭ＿０１５１２２６３６．２を有するアカゲザル（Ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）ＣＦＢも有効にターゲティングし得る。さらに、ＣＦＢ標的配列は、化合物Ｊ（例えば、配列番号１５のセンス配列と配列番号１６のアンチセンス配列を有するＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の標的である、参照配列ＮＭ＿００８１９８．２（配列番号３２）を有するハツカネズミ（ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）補体因子Ｂのヌクレオチド７７０～７８９に対応する配列番号３１に記載される配列を含み得るか又はそれらから構成され得る。化合物Ｊは、参照配列ＮＭ＿２１２４６６．３を有するドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）補体ＣＦＢもターゲティングし得る。ＣＦＢ ｍＲＮＡのこれらの領域は、ＣＦＢ ｍＲＮＡ発現及びその後のＣＦＢタンパク質発現を阻害する目的で、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡ剤などのオリゴヌクレオチドを用いてターゲティングすることができる。

【0105】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）剤のアンチセンス鎖は、細胞内のｍＲＮＡをターゲティングして、その発現を阻害する目的で、ＣＦＢ ｍＲＮＡに対して相補性の領域を有するように（例えば、ＣＦＢ ｍＲＮＡの標的配列内に）設計することができる。相補性の領域は、一般に、その転写を阻害する目的でＣＦＢ ｍＲＮＡに対するオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）又はその鎖のアニーリングを促進するのに適切な長さ及び塩基含有量を有するものである。相補性の領域は、少なくとも１１、例えば少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９又は少なくとも２０ヌクレオチド長であり得る。例えば、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１２～３０（例えば、１２～３０、１２～２２、１５～２５、１７～２１、１８～２７、１９～２７又は１５～３０）ヌクレオチド長の範囲にあるＣＦＢ ｍＲＮＡに対する相補性の領域を有し得る。従って、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長であるＣＦＢに対する相補性の領域を有し得る。一部の例では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１９ヌクレオチド長のＣＦＢ ｍＲＮＡに対して相補性の領域を有し得る。

【0106】

特定の例では、本開示のオリゴヌクレオチド剤は、配列番号１２に記載される配列に対して少なくとも部分的に相補的な相補性の領域を（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上に）含み得る。例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１２に記載される配列に対して完全に相補的な相補性の領域を（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上に）含み得る。（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上の）オリゴヌクレオチドの相補性の領域は、配列番号１２に記載される配列のヌクレオチドの連続配列に対して相補的であり得、上記配列は、１２～２０ヌクレオチド（例えば、１２～２０、１２～１８、１２～１６、１２～１４、１４～２０、１４～１８、１４～１６、１６～２０、１６～１８又は１８～２０）長の範囲である。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの相補性の領域（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上の）は、１９ヌクレオチド長である配列番号１２に記載の配列の連続したヌクレオチドの配列に対して相補的であり得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの相補性の領域（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖）は、２０ヌクレオチド長である配列番号１２に記載の配列の連続したヌクレオチドの配列に相補的であり得る。

【0107】

配列番号１２に記載の配列の連続したヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長の一部に及び得る。例えば、配列番号１２に記載される配列の連続したヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長の少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、少なくとも９０％、少なくとも９５％及び少なくとも９９％）に及び得る。特定の実施形態では、配列番号１２に記載される連続したヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長に及び得る。

【0108】

ＣＦＢ ｍＲＮＡに対する相補性の領域は、ＣＦＢ ｍＲＮＡの対応する配列と比較して１つ以上のミスマッチを有し得る。例えば、オリゴヌクレオチド上の相補性の領域（例えば、２０～５０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド、例えば２０～２５ヌクレオチド長（例えば、２２ヌクレオチド長）のオリゴヌクレオチドは、適切なハイブリダイゼーション条件下で、ＣＦＢ ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成する能力を維持する限り、最大１つ、最大２つ、最大３つ、最大４つ又は最大５つのミスマッチを有し得る。代わりに、オリゴヌクレオチドの相補性の領域は、適切なハイブリダイゼーション条件下でＣＦＢ ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成する能力を維持する限り、１以下、２以下、３以下、４以下又は５以下のミスマッチを有し得る。相補性領域に複数のミスマッチがある場合、オリゴヌクレオチドが適切なハイブリダイゼーション条件下でＣＦＢ ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成する能力を維持する限り、ミスマッチは連続して（例えば、２、３、４又は５つ連続して）配置されるか又は相補性の領域全体に散在し得る。例えば、オリゴヌクレオチド剤は、配列番号４の配列を有するセンスオリゴヌクレオチドと、配列番号１２の対応するＣＦＢ配列に対して最大１、２、３、４若しくは５つのミスマッチを有するその変異体又は配列番号６の対応するアンチセンス配列と、配列番号４の配列に対して１、２、３、４若しくは５個のミスマッチを有するその変異体を含み得る。

【0109】

オリゴヌクレオチドの種類
本開示の方法では、ＣＦＢをターゲティングするのに有用なオリゴヌクレオチドの様々な構造があり、ＲＮＡｉ、アンチセンスｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡなどが挙げられる。本明細書又は他の箇所に記載される構造のいずれかは、本明細書に記載される配列（例えば、配列番号１３及び１４のものなど、ＣＦＢのホットスポット配列）を組み込むか、又はターゲティングするためのフレームワークとして使用され得る。

【0110】

オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）である、本明細書に記載の組成物は、ＣＦＢ ｍＲＮＡ（例えば、配列番号１２）をターゲティングする阻害性構築物（例えば、それをコードする核酸ベクター）をコードする。ＣＦＢ発現の発現を低減するためのオリゴヌクレオチドは、ダイサー関与の上流又は下流でＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に参加することができる。例えば、長さが１９～２５ヌクレオチドで、１～５ヌクレオチドの３’オーバーハングを有するセンス又はアンチセンス鎖の少なくとも１つを含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）が開発されている（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，３７２，９６８号明細書を参照されたい）。ダイサーによりプロセシングされて、活性ＲＮＡｉ産物を産生する、より長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，８８３，９９６号明細書を参照されたい）。さらに、伸長オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）も生成されており、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか一方又は両方の５’末端若しくは３’末端のいずれか一方又は両方は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかが熱力学的安定化テトラループ構造を含むように、二重らせんターゲティング領域を超えて伸長されている（例えば、これらのオリゴヌクレオチドの開示について本明細書に参照として組み込まれる米国特許第８，５１３，２０７号明細書及び同第８，９２７，７０５号明細書並びに国際公開第２０１００３３２２５号パンフレットを参照されたい）。そうした構造は、分子の５’及び３’末端の一方又は両方における一本鎖伸長並びにＲＮＡｉ伸長を含み得る。

【0111】

加えて又は代わり、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、ダイサー関与の下流、即ちダイサーによる切断後にＲＮＡ干渉経路に参加するように設計され得る。このようなオリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端に１、２又は３ヌクレオチドを含むオーバーハングを有し得る。こうしたオリゴヌクレオチド、例えばｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡに対するアンチセンスである２２ヌクレオチドガイド鎖（例えば、配列番号１３及び１４）並びに相補的パッセンジャー鎖を含み得、そこでは、両方の鎖がアニーリングして、２０ｂｐの二重らせんと、一方又は両方の３’末端に２ヌクレオチドのオーバーハングを形成する。２３ヌクレオチドのガイド鎖及び２１ヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有するオリゴヌクレオチドを含む、より長いオリゴヌクレオチド設計も利用可能であり、パッセンジャー鎖の３’末端とガイド鎖の５’末端に平滑末端があり、またパッセンジャー鎖の５’末端及びガイド鎖の３’末端の分子の左側に２ヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハングがある。このような分子には、２１塩基対の二重らせん領域が存在する（より長いオリゴヌクレオチドに関するそれらの開示について本明細書に参照として組み込まれる、米国特許第９，０１２，１３８号明細書、同第９，０１２，６２１号明細書及び同第９，１９３，７５３号明細書を参照されたい）。

【0112】

本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、いずれも１７～２６（例えば、１７～２６、２０～２５又は２１～２３）ヌクレオチド長であるセンス及びアンチセンス鎖を含み得る。例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、いずれも１９～２２ヌクレオチド長であるセンス及びアンチセンス鎖を含み得る。センス鎖及びアンチセンス鎖は、長さが同じでもあり得る。代わりに、オリゴヌクレオチドは、センス若しくはアンチセンス鎖のいずれか又はセンス及びアンチセンス鎖の両方に３’－オーバーハングが存在するようなセンス及びアンチセンス鎖を含み得る。例えば、センス鎖、アンチセンス鎖又はセンス及びアンチセンス鎖の両方の３’オーバーハングは、１又は２ヌクレオチド長であり得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２ヌクレオチドのアンチセンス鎖と２０ヌクレオチドのセンス鎖を有し、分子の「右側」（即ちパッセンジャー鎖の３’末端及びガイド鎖の５’末端）に平滑末端があり、且つ分子の「左側」（即ちパッセンジャー鎖の５’端及びガイド鎖の３’端）に２ヌクレオチド３’－ガイド鎖オーバーハングがある。こうした分子には、例えば、２０塩基対の二重らせん領域が存在し得る。

【0113】

本明細書に開示される組成物及び方法と共に使用するための他のオリゴヌクレオチド設計としては、以下のものが挙げられる：例えば、１６－ｍｅｒ ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６を参照されたい）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ以下のステムを有する；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０；６２９：１４１－１５８を参照されたい）、平滑末端（ｂｌｕｎｔ）ｓｉＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ長の；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＲＮＡ Ｖｏｌ．１２，ｐ１６３－１７６（２００６）を参照されたい）、非対称ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６，１３７９－１３８２（２００８）を参照されたい）、非対称の短い二重らせんｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ Ａｐｒ；１７（４）：７２５－３２を参照されたい）、フォークｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ ５５７，ｉｓｓｕｅ １－３；Ｊａｎ ２００４，ｐ １９３－１９８）、一本鎖ｓｉＲＮＡ（Ｅｌｓｎｅｒ；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３０，１０６３（２０１２））、ダンベル型環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２９：１５１０８－１５１０９（２００７）を参照されたい）並びに内部セグメント化低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ；例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００７ Ｓｅｐ；３５（１７）：５８８６－５８９７を参照されたい）。前述の参考文献の各々は、その中の関連する開示についてその全体が参照により組み込まれる。ＣＦＢの発現を低減又は阻害するために一部の実施形態で使用され得るオリゴヌクレオチド構造のさらなる非限定的な例は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）及び低分子ｓｉＲＮＡである（Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｂｏ Ｊ．，２００２，２１（１７）：４６７１－４６７９を参照されたく；米国特許出願公開第２００９／００９９１１５号明細書も参照されたい）。

【0114】

オリゴヌクレオチド
ＲＮＡｉ経路を介してＣＦＢ発現をターゲティングするためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、一般に、互いに二重らせんを形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖を有する。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、一本鎖又は二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であり得る。さらに、センス鎖及びアンチセンス鎖は、共有結合で連結されていなくてもよく；例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖とアンチセンス鎖との間に切れ目（ニック）があり得る。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、薬学的に許容される塩の形態であり得る。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ナトリウム塩の形態であり得る。

【0115】

前述のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）配列は、細胞内で合成され得るＲＮＡ配列として表されるが；これらの配列は、本開示のベクターに組み込むことができる対応するＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）として表すこともできる。当業者は、ｃＤＮＡ配列がチミジンによるウリジンの置換を除いてｍＲＮＡ配列と同等であり、本明細書で同じ目的、即ちＣＦＢ ｍＲＮＡの発現を阻害するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドの生成に使用することができることを理解するであろう。ＤＮＡの場合、アンチセンス核酸を含むポリヌクレオチドは、ＤＮＡ配列である。ＤＮＡ配列は、化合物Ａ又は化合物Ｂのアンチセンス鎖に対応するものであり得、それぞれ配列番号３４若しくは配列番号３６のポリヌクレオチド配列を有し得るか又はそれらに対して少なくとも８５％以上の配列同一性を有するものであり得る。ＤＮＡ配列は、化合物Ａ又は化合物Ｂのセンス鎖に対応し得、それぞれ配列番号３３若しくは配列番号３５のポリヌクレオチド配列を有し得るか又はそれらに対して少なくとも８５％以上の配列同一性を有するものであり得る。ＲＮＡベクターの場合、導入遺伝子カセットは、本明細書に記載されるアンチセンスＤＮＡ配列のＲＮＡ同等物を組み込む。

【0116】

特定の実施形態では、センス鎖は、配列番号４又は配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得る。例えば、センス鎖は、化合物Ｂの場合と同様に、配列番号４のオリゴヌクレオチド配列を含み得る。他の実施形態では、センス鎖は、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得る。例えば、センス鎖は、化合物Ａの場合と同様に、配列番号１のオリゴヌクレオチド配列を含み得る。

【0117】

一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得る。他の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有する。例えば、アンチセンス鎖は、化合物Ｂの場合のように、配列番号６のオリゴヌクレオチド配列を含み得、及び／又はアンチセンス鎖は、化合物Ａの場合のように、配列番号３のオリゴヌクレオチド配列を含み得る。

【0118】

さらに、センス鎖は、配列番号４又は配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得、アンチセンス鎖は、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有する。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｂについて図２Ｃに示すように、配列番号４又は配列番号５のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含み得る。

【0119】

加えて、センス鎖は、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得、アンチセンス鎖は、配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有する。さらに、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ａについて図１Ｃに示すように、配列番号１又は配列番号２のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号３のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含み得る。

【0120】

さらに、センス鎖は、配列番号３７のオリゴヌクレオチド配列を含み得、アンチセンス鎖は、以下に示すような配列番号３８のオリゴヌクレオチド配列を含み得る。
センス鎖（配列番号３７）：
５’ｍＡ－Ｓ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＡ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＵ－ｆＧ－ｆＡ－ｆＧ－ｆＵ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＧ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＧ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＣ ３’
とハイブリダイズした：
アンチセンス鎖（配列番号３８）：
５’［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＵ－ｆＣ－ｆＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＵ－Ｓ－ｍＧ－Ｓ－ｍＧ ３’
（ｍＸは、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチドであり、ｆＸは、２’－フルオロ－デオキシリボヌクレオチドであり、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］は、２’－Ｏ－ＧａｌＮＡｃ修飾アデノシンであり、［Ｍｅｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］は、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンであり、「－」は、ホスホジエステル結合を示し、「－Ｓ－」は、図２Ｄ、２Ｅ－１及び２Ｅ－２に示すように、ホスホロチオエート結合を示す。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３８の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号３７の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。

【0121】

センス鎖は、配列番号１５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得、アンチセンス鎖は、配列番号１６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｊについて示されるように、配列番号１５のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号１６のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖とを含み得る。センス鎖及びアンチセンス鎖の例については、表１を参照されたい。

【0122】

【表1】

【0123】

オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖とアンチセンス鎖との間に二重らせん領域を含む。センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重らせんは、１０～３０ヌクレオチド長（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０ヌクレオチド長）であり得る。従って、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重らせんは、１５～２５ヌクレオチド長（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４及び２５ヌクレオチド長）であり得る。一部の実施形態では、二重らせん領域は、２０ヌクレオチド長であり得る。

【0124】

アンチセンス鎖と二重らせんを形成するセンス鎖上の領域は、配列番号２及び５のいずれかのオリゴヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれを超える）であるヌクレオチド配列を有し得る。例えば、アンチセンス鎖と二重らせんを形成するセンス鎖上の領域は、配列番号２及び５のいずれかのオリゴヌクレオチド配列を有し得る。

【0125】

さらに、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重らせんは、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の全長に及んでいなくてもよい。

【0126】

オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２２ヌクレオチドより長いセンス鎖（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチド長）、例えば３６ヌクレオチドセンス鎖と、１８～３６ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、例えば２２ヌクレオチドアンチセンス鎖とを含み得る。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ダイサー酵素により作用されると、その結果、成熟ＲＩＳＣに組み込まれたアンチセンス鎖が得られるような長さを有する。

【0127】

本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、一方の５’末端が他方の５’末端と比較して熱力学的に安定性が低いものを有し得る。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端における平滑末端と、アンチセンス鎖の３’末端におけるオーバーハングを含む非対称オリゴヌクレオチドであり得る。アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは、１～８ヌクレオチド長（例えば、１、２、３、４、５、６、７又は８ヌクレオチド長）であり得る。例えば、アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは、２ヌクレオチド長であり得る。典型的には、ＲＮＡｉのためのオリゴヌクレオチドは、アンチセンス、ガイド、鎖の３’末端に２ヌクレオチドオーバーハングを有する。しかし、他のオーバーハングも可能である。他の実施形態では、３’オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択で１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、３～５、５～６ヌクレオチド又は１、２、３、４、５若しくは６ヌクレオチドの長さを有し得る。いくつかの例では、オリゴヌクレオチドは、５’末端にオーバーハングを有し得る。オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択で１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～６、４～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド又は１、２、３、４、５若しくは６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングであり得る。

【0128】

アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドを修飾し得る。特定の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドは、標的ＣＦＢ ｍＲＮＡと相補的であり得る。代わりに、アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドは、標的ＣＦＢ ｍＲＮＡと相補的でなくてもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドは、ＧＧであり得る。典型的には、オリゴヌクレオチドの各３’末端にある２つの末端ＧＧヌクレオチドの一方又は両方は、標的と相補的ではない。

【0129】

センス鎖とアンチセンス鎖との間には、相補性に１つ以上（例えば、１、２、３、４、５）のミスマッチが存在し得る。センス鎖とアンチセンス鎖との間に２つ以上のミスマッチがある場合、それらは連続して（例えば、連続して２つ、３つ若しくはそれを超える）位置するか、又は相補性の領域全体に散在し得る。例えば、センス鎖の３’末端は、１つ以上のミスマッチを含み得る。従って、２つのミスマッチがセンス鎖の３’末端に組み込まれ得る。オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端におけるセグメントの塩基ミスマッチ又は不安定化は、恐らくダイサーによるプロセシングの促進により、ＲＮＡｉ中の合成二重らせんの効力を改善する可能性がある。

【0130】

一部の実施形態では、配列表に提示される配列は、オリゴヌクレオチド又は他の核酸の構造を表す上で参照され得ることを理解すべきである。そのような実施形態では、実際のオリゴヌクレオチド又は他の核酸は、１つ以上の代替ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡヌクレオチドのＲＮＡ対応物若しくはＲＮＡヌクレオチドのＤＮＡ対応物）並びに／或いは指定配列と本質的に同じ又は類似の相補的特性を保持しながら、指定配列と比較して、１つ以上の修飾ヌクレオチド及び／又は１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合及び／又は１つ以上の他の修飾を有し得る。

【0131】

アンチセンス鎖
オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、ガイド鎖と呼ばれることもある。例えば、アンチセンス鎖がＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に関与して、アルゴノートタンパク質に結合するか、又は１つ以上の類似因子に関与若しくは結合して、標的遺伝子の直接サイレンシングを指令することができれば、それは、ガイド鎖と称され得る。

【0132】

特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、センス鎖よりもヌクレオチド長が少ない。いくつかの例では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１０～４０ヌクレオチド（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９及び４０ヌクレオチド）長を含むアンチセンス鎖を有し得る。従って、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１５～３０ヌクレオチド（例えば、１５、１６、１７、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０ヌクレオチド）長を含むアンチセンス鎖を有し得る。例えば、アンチセンス鎖は、２０～２５ヌクレオチド（例えば、２０、２１、２２、２３、２４及び２５ヌクレオチド）長を含み得る。特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチド長であり得る。

【0133】

本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に相補的である長さの１２～２２ヌクレオチド（例えば、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１及び２２ヌクレオチド）間の連続配列を含むアンチセンス鎖を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に相補的である長さの１５～２１ヌクレオチド（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０及び２１ヌクレオチド）の連続配列を含むアンチセンス鎖を含み得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に相補的である１９ヌクレオチド長の連続配列を有するアンチセンス鎖を含み得る。

【0134】

本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号３又は６のいずれかの配列を有するアンチセンス鎖を含み得る。例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、図２Ｃに示される化合物Ｂのように、配列番号６のアミノ酸配列を有するアンチセンス鎖を含み得る。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号６の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。配列番号６は、図２Ｂに示すような化学構造を有し得る。代わりに、アンチセンス鎖は、図１Ｃに示される化合物Ａのように、配列番号３の配列を有し得る。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。

【0135】

加えて、アンチセンス鎖の５’末端の第１位はウリジンであり得る。ウリジンは、リン酸類似体を含み得；例えば、ウリジンは、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンであり得る。

【0136】

センス鎖
オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、パッセンジャー鎖と呼ばれることもある。特定の実施形態では、パッセンジャー鎖は、ガイド鎖よりも長さでヌクレオチド数が多い。いくつかの例では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１０～４５ヌクレオチド（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４及び４５ヌクレオチド）長を含むセンス鎖を有し得る。従って、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２０～５０ヌクレオチド（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９及び５０ヌクレオチド）長を含むセンス鎖を有し得る。特定の実施形態では、センス鎖は、２０ヌクレオチド長であり得る。他の実施形態では、センス鎖は、３６ヌクレオチド長であり得る。

【0137】

オリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に対して７～３６ヌクレオチド長（例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５及び３６ヌクレオチド長）の連続配列を含むセンス鎖を有し得る。従って、センス鎖は、配列番号１２の配列に対して１０～３０ヌクレオチド長（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０ヌクレオチド長）の連続配列を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に対して連続したヌクレオチドの配列を含むセンス鎖を含み得、これは、１９ヌクレオチド長である。

【0138】

センス鎖は、その３’末端にステムループを含み得る。一部の実施形態では、センス鎖は、その５’末端にステムループを含む。ステムループを含むセンス鎖は、１０～５０ヌクレオチド長（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９及び５０ヌクレオチド長）であり得る。従って、ステムループを含むセンス鎖は、２０～４０ヌクレオチド長（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９及び４０ヌクレオチド長）であり得る。例えば、ステムループを含むセンス鎖は、３６ヌクレオチド長であり得る。

【0139】

さらに、センス鎖上のステムループ領域は、それ自体と二重らせん領域を形成し得る。ステムループに含まれる二重らせん領域は、長さが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４ヌクレオチド長であり得る。例えば、ステムループに含まれる二重らせん領域は、６ヌクレオチド長であり得る。ステムループは、オリゴヌクレオチド剤に分解（酵素分解など）に対する保護を賦与することができ、標的細胞への送達のためのターゲティング特性を促進し得る。例えば、ループは、オリゴヌクレオチドの遺伝子発現阻害活性に実質的に影響を与えることなく改変を行うことができる付加ヌクレオチドを提供し得る。特定の実施形態では、センス鎖が（例えば、その３’末端で）Ｓ_１－Ｌ－Ｓ_２として記載されるステムループを含む、オリゴヌクレオチドが本明細書に提供され、Ｓ_１は、Ｓ_２に対して相補的であり、Ｌは、Ｓ_１とＳ_２との間の最大１０ヌクレオチド長（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ヌクレオチド長）のループを形成する。従って、Ｓ_１とＳ_２との間のループは、本明細書に記載されるように、４ヌクレオチド長であり、テトラループを形成し得る。一部の実施形態では、Ｓ_１領域は、６ヌクレオチド長であり、Ｓ_２領域は、６ヌクレオチド長であり、Ｌ領域は、４ヌクレオチドテトラループである。

【0140】

オリゴヌクレオチドのセンス鎖（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ステムループ領域と、アンチセンス鎖との二重らせんを形成する領域を含み得る。ステムループ領域は、配列番号７のオリゴヌクレオチド配列と少なくとも８５％（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）同一であるヌクレオチド配列を含み得る。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７のオリゴヌクレオチド配列を有する。

【0141】

ステムループのループ（Ｌ）は、テトラループであり得る（例えば、ニックテトラループ構造内）。ステムループのループは、ＧＡＡＡの塩基配列を有し得る。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びこれらの組合せを含み得る。典型的には、ステムループのループは、４～５ヌクレオチドを有する。しかし、一部の実施形態では、ステムループのループは、３～６ヌクレオチドを含み得る。例えば、ステムループのループは、３、４、５又は６ヌクレオチドを含み得る。ステムループのループは、グアノシンとアデノシン核酸残基の組合せを含み得る。

【0142】

本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１、２、４及び５のいずれか１つのポリヌクレオチド配列を有するセンス鎖配列を含み得る。センス鎖は、図２Ｃに示される化合物Ｂのように、配列番号４の配列を有し得る。配列番号４は、図２Ａに示すような化学構造を有し得る。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号４の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。代わりに、センス鎖は、図１Ｃに示される化合物Ａのように、配列番号１の塩基配列を有し得る。配列番号１は、図１Ａに示すような化学構造を有し得る。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。

【0143】

オリゴヌクレオチド修飾
オリゴヌクレオチドは、特異性、安定性、送達、バイオアベイラビリティ、ヌクレアーゼ分解からの耐性、免疫原性、塩基対形成特性、ＲＮＡ分布及び細胞取込み並びに治療若しくは研究用途に関連する他の特徴を改善又は制御するために、様々な方法で修飾され得る（Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００９，３７，２８６７－２８８１；Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，３（２０１２）：１－２２）。従って、一部の実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の適切な修飾を含み得る。修飾ヌクレオチドは、その塩基又は核酸塩基、糖（例えば、リボース、デオキシリボース）又はリン酸基に修飾を有し得る。

【0144】

オリゴヌクレオチド上の修飾の数及びそれらのヌクレオチド修飾の位置は、オリゴヌクレオチドの特性に影響を及ぼし得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）若しくは類似の担体にそれらを共役させるか又はそれらを包含することによってインビボで送達され得る。しかし、オリゴヌクレオチドがＬＮＰ又は類似の担体によって保護されていないとき、ヌクレオチドの少なくとも一部が修飾されることが有利である場合もある。従って、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドのいずれかの特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されている。特定の実施形態では、ヌクレオチドの半分超が修飾されている。他の実施形態では、ヌクレオチドの半分未満が修飾されている。通常、直接送達の場合、全ての糖が２’位で修飾されている。これらの修飾は、可逆的又は不可逆的であり得る。本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、所望の特性（例えば、酵素分解からの保護、インビボ投与後に所望の細胞をターゲティングする能力及び／又は熱力学的安定性）をもたらすのに十分な数及びタイプの修飾ヌクレオチドを有し得る。

【0145】

糖修飾
本明細書では糖類似体とも呼ばれる修飾糖は、修飾されたデオキシリボース又はリボース部分を含み、糖の２’、３’、４’及び／又は５’炭素位置に１つ以上の修飾が存在する。修飾糖は、ロック核酸（「ＬＮＡ」）（Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５４，３６０７－３６３０を参照されたい）、アンロック核酸（「ＵＮＡ」）（Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ，２，ｅ１０３を参照されたい）及び架橋核酸（「ＢＮＡ」）（Ｉｍａｎｉｓｈｉ ａｎｄ Ｏｂｉｋａ（２００２），Ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１６５３－１６５９を参照されたい）に存在するものなどの非天然代替炭素構造も含み得る。Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．，及びＩｍａｎｉｓｈｉ及びＯｂｉｋａは、糖修飾に関するそれらの開示について本明細書に参照として組み込まれる。

【0146】

糖でのヌクレオチド修飾は、２’－修飾を含み得る。２’－修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸であり得る。典型的には、修飾は、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル又は２’－Ｏ－メトキシエチルである。一部の実施形態では、修飾は、２’－フルオロ及び／又は２’－Ｏ－メチルである。糖における修飾は、糖環の修飾を含み得、糖環の１つ以上の炭素の修飾を有し得る。例えば、ヌクレオチドの糖の修飾は、糖の１’－炭素若しくは４’－炭素に連結された糖の２’－酸素又はエチレン若しくはメチレン架橋を介して１’－炭素若しくは４’－炭素に連結された２’－酸素を含み得る。特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－炭素－３’－炭素結合がない非環状糖を有し得る。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、チオール基を例えば糖の４’位に有し得る。

【0147】

本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０又はそれを超える）を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５又はそれを超える）を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０又はそれを超える）も含み得る。

【0148】

特定の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２０～５０（例えば、２０～３０、２４～３０、２８～３０、３０～４０、３４～４０、３８～４４、４４～５０及び４８～５０）の修飾ヌクレオチドを含有し得る。

【0149】

オリゴヌクレオチドのセンス鎖の全てのヌクレオチドが修飾され得る。さらに、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の全てのヌクレオチドが修飾され得る。一部の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方を含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）のヌクレオチドが全て修飾されている。修飾ヌクレオチドは、２’－修飾（例えば、２’－フルオロ又は２’－Ｏ－メチル）であり得る。ヌクレオチドに対する２’－修飾は、２’－フルオロ及び／又は２’－Ｏ－メチルであり得、任意選択で、２’－フルオロ修飾は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドであり、且つ／又は２’－Ｏ－メチル修飾は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドである。

【0150】

本開示は、異なる修飾パターンを有するオリゴヌクレオチドを提供する。センス鎖及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドは、４０～５０（例えば、４１、２、４３、４４、４５、４６、４７、４８及び４９）の２’－Ｏ－メチル修飾を含み得る。修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１又は４のいずれかのヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、配列番号３又は６のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含み得る（例えば、オリゴヌクレオチド剤は、配列番号４のセンス鎖と配列番号６のアンチセンス鎖とを有し得るか、又はオリゴヌクレオチド剤は、配列番号１のセンス鎖と配列番号３のアンチセンス鎖を有し得る）。一部の実施形態では、これらのオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１、２、３、４、５、６、７、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５及び３６位の１つ以上並びに／又はアンチセンス鎖の１、４、６、８、９、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１及び２２位の１つ以上が２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一部の実施形態では、センス鎖の１、２、３、４、５、６、７、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５及び３６位の全て並びにアンチセンス鎖の１、４、６、８、９、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１及び２２位の全てが２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。他の実施形態では、センス鎖の１、２、４、５、６、７、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５及び３６位の１つ以上並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１及び２２位の１つ以上が２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。特定の実施形態では、センス鎖の１、２、４、５、６、７、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５及び３６位の全て並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１、１３、１５、１７、１８、２０、２１及び２２位の全てが２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。

【0151】

センス鎖及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドは、５～１５（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４）の２’－フルオロ修飾を有し得る。これらのオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の８、９、１０及び１１位の１つ以上並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０及び１４位の１つ以上が２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。例えば、センス鎖の８、９、１０及び１１位の全て並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、５、７、１０及び１４位の全てが２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。別の例では、センス鎖の８、９、１０及び１１位の全て並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０及び１４位の全てが２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。

【0152】

配列番号４の配列を有するセンス鎖及び配列番号６の配列を有するアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１～７位、１２～２７及び３１～３６位の１つ以上並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１～１３及び１５～２２位の１つ以上が２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾され得る。さらに、センス鎖の１～７、１２～２７及び３１～３６位の全て並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１～１３及び１５～２２位の全てが２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾され得る。配列番号４の配列を有するセンス鎖と、配列番号６の配列を有するアンチセンス鎖とを有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の８～１１位の１つ以上並びにアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０及び１４位の１つ以上が２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。従って、センス鎖の８～１１位の全て及びアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０及び１４位の全てが２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。

【0153】

例えば、配列番号４の配列を有するセンス鎖と、配列番号６の配列を有するアンチセンス鎖とを有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１～７、１２～２７及び３１～３６位の全て並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１～１３及び１５～２２位の全てが２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾され得；センス鎖の８～１１位の全て並びにアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０及び１４位の全ては、それぞれ図２Ａ及び２Ｂに示さる２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。

【0154】

配列番号１の配列を有するセンス鎖と、配列番号３の配列を有するアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１～７、１２～２７及び３１～３６位の１つ以上並びに／又はアンチセンス鎖の１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２位の１つ以上は、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾され得る。一部の実施形態では、センス鎖の１～７、１２～２７及び３１～３６位の全て並びにアンチセンス鎖の１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２位の全てが２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾され得る。さらに、配列番号１の配列を有するセンス鎖と、配列番号３の配列を有するアンチセンス鎖とを含むオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の８～１１位の１つ以上並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、５、７、１０及び１４位の１つ以上は、２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。一部の実施形態では、センス鎖の８～１１位の全て並びにアンチセンス鎖の２、３、５、７、１０、１２及び１４位の全てが２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾されている。例えば、配列番号１配列を含むセンス鎖と、配列番号３の配列を有するアンチセンス鎖とを有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１～７、１２～２７及び３１～３６位の全て並びにアンチセンス鎖の１、４、６、８、９、１１～１３及び１５～２２位の全てが２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾され得；センス鎖の８～１１位の全て並びにアンチセンス鎖の２、３、５、７、１０及び１４位の全ては、それぞれ図１Ａ及び１Ｂに示される２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾され得る。

【0155】

一部の実施形態では、末端３’末端基（例えば、３’－ヒドロキシル）は、リン酸基又は他の基で修飾され得、これは、例えば、リンカー、アダプター若しくは標識を結合するか又はオリゴヌクレオチドを別の核酸に直接ライゲーションするために使用することができる。

【0156】

５’末端リン酸塩
オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の５’末端リン酸基は、アルゴノート２との相互作用を増強し得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、アンチセンス鎖の５’末端の１位にウリジンを含む。しかし、５’－リン酸基を有するオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼ又は他の酵素による分解を受けやすく、インビボでのバイオアベイラビリティを制限する可能性がある。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、そのような分解に対して耐性である５’リン酸塩の類似体を含む。そのため、アンチセンス鎖の５’末端のウリジンは、リン酸類似体を含み得る。リン酸類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート又はマロニルホスホネートであり得る。さらに、オリゴヌクレオチド鎖の５’末端は、天然５’－リン酸基の静電的性質及び立体特性を模倣する化学部分（「リン酸模倣物」）に結合し得る（Ｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１５ Ｍａｒ ３１；４３（６）：２９９３－３０１１を参照されたく；リン酸類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。５’末端に結合することができる多くのリン酸模倣体が開発されている（米国特許第８，９２７，５１３号明細書を参照されたく；リン酸塩類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドの５’末端について他の修飾が開発されている（国際公開第２０１１／１３３８７１号パンフレットを参照されたく；リン酸類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、ヒドロキシル基は、オリゴヌクレオチドの５’末端に結合し得る。

【0157】

オリゴヌクレオチドは、糖の４’－炭素位置にリン酸類似体を有し得、これは、「４’－リン酸類似体」と呼ばれる。例えば、国際公開第２０１８／０４５３１７号パンフレット（リン酸塩類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－リン酸類似体を含み得る。一部の実施形態では、リン酸塩類似体は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分に（例えば、その４’－炭素で）結合しているオキシメチルホスホネート又はその類似体である。他の実施形態では、４’－リン酸類似体は、チオメチルホスホネート又はアミノメチルホスホネートであり、チオメチル基の硫黄原子又はアミノメチル基の窒素原子が糖部分又はその類似体の４’－炭素に結合している。特定の実施形態では、４’－リン酸類似体は、オキシメチルホスホネートである。一部の実施形態では、オキシメチルホスホネートは、式－Ｏ－ＣＨ_２－ＰＯ（ＯＨ）_２又は－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＲ）_２によって表され、Ｒは、Ｈ、ＣＨ_３、アルキル基、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＮ、ＣＨ_２ＯＣＯＣ（ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｓｉ（ＣＨ_３）_３又は保護基から独立して選択される。特定の実施形態では、アルキル基は、ＣＨ_２ＣＨ_３である。より典型的には、Ｒは、Ｈ、ＣＨ_３又はＣＨ_２ＣＨ_３から独立して選択される。一部の実施形態では、Ｒは、ＣＨ３である。一部の実施形態では、４’－リン酸類似体は、５’－メトキシホスファネート－４’－オキシである。一部の実施形態では、４’－リン酸類似体は、４’－（メチルメトキシホスホネート）である。一部の実施形態では、リン酸類似体は、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート類似体である。

【0158】

一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドに結合したリン酸塩類似体は、メトキシホスホネート（ＭＯＰ）である。オリゴヌクレオチドに結合したリン酸類似体は、５’モノメチル保護ＭＯＰであり得る。一部の実施形態では、例えば、アンチセンス鎖の第１位に、リン酸類似体を含む以下のウリジンヌクレオチド：

【化5】

を使用し得、その修飾ヌクレオチドは、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン（［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］）又は５’－メトキシ，ホスホネート－４’オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン（５’－ＭｅＭＯＰ）と呼ばれる。５’－メトキシ，ホスホネート－４’オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン（５’－ＭｅＭＯＰ）は、アンチセンス鎖の５’末端側の最初のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態では、配列番号３又は６のいずれかの５’末端側の第１ヌクレオチドは、５’－メトキシ，ホスホネート－４’オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンであり得る。

【0159】

修飾ヌクレオシド間結合
オリゴヌクレオチドにおけるリン酸修飾又は置換は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも５つ又は少なくとも６つ）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドをもたらし得る。本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１～１０（例えば、１～１０、２～８、４～６、３～１０、５～１０、１～５、１～３又は１～２）の修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、５つの修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、１つの修飾ヌクレオチド間結合を含み得、アンチセンス鎖は、４つの修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。

【0160】

修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオンアルキルホスホトリエステル結合、ホスホロアミダイト結合、ホスホン酸結合又はボラノリン酸結合であり得る。本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合であり得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの全ての修飾ヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合であり得る。

【0161】

本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１及び２位、アンチセンス鎖の１及び２位、アンチセンス鎖の２及び３位、アンチセンス鎖の２０及び２１位並びにアンチセンス鎖の２１及び２２位の１つ以上の間にホスホロチオエート結合を有し得る。例えば、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、センス鎖の１位及び２位、アンチセンス鎖の１位及び２位、アンチセンス鎖の２位及び３位、アンチセンス鎖の２０位及び２１位並びにアンチセンス鎖の２１位及び２２位間にホスホロチオエート結合を有し得る。従って、配列番号１又は４の配列を有するセンス鎖は、１位及び２位間にホスホロチオエート結合を有し得、配列番号３又は６の配列を有するアンチセンス鎖は、１位及び２位、２位及び３位、２０位及び２１位並びに２１位及び２２位間にホスホロチオエート結合を有し得る。

【0162】

塩基修飾
本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を有し得る。本明細書で塩基類似体とも呼ばれる修飾核酸塩基は、ヌクレオチド糖部分の１’位に連結され得る。修飾核酸塩基は、窒素塩基であり得る。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素原子を含有し得る。例えば、米国公開特許出願第２００８０２７４４６２号明細書を参照されたい（修飾核酸塩基に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基も含み得る。しかし、特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、核酸塩基（例えば、非塩基性）を含有しない場合もある。

【0163】

一部の実施形態では、ユニバーサル塩基は、修飾ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部分の１’位又はヌクレオチド糖部分置換物における同等位置に位置する複素環部分であり、これは、二重らせん中に存在する場合、二重らせんの構造を実質的に変化させることなく、２種以上の塩基と向かい合って位置し得る。一部の実施形態では、標的核酸に対して完全に相補的である参照一本鎖核酸（例えば、オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチド）と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、相補的核酸と一緒に形成された二重らせんより低いＴ_ｍを有する標的核酸と二重らせんを形成する。しかし、一部の実施形態では、ユニバーサル塩基が１塩基で置換されて、単一のミスマッチを生成する参照一本鎖核酸と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を含む核酸と一緒に形成された二重らせんよりも高いＴ_ｍを有する標的核酸と二重らせんを形成する。ユニバーサル結合ヌクレオチドの非限定的な例としては、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール及び／又は１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられる（以下を参照されたい：米国特許出願公開第２００７／０２５４３６２号明細書；Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５ Ｎｏｖ １１；２３（２１）：４３６３－７０；Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５ Ｊｕｌ １１；２３（１３）：２３６１－６；Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９４ Ｏｃｔ １１；２２（２０）：４０３９－４３。上記文献の各々は、塩基修飾に関するその開示について、本明細書に参照として組み込まれる）。

【0164】

可逆的修飾
標的細胞に到達する前に、オリゴヌクレオチドをインビボ環境から保護するため特定の修飾を実施することができるが、そうした修飾は、標的細胞のサイトゾルに到達すると、オリゴヌクレオチドの効力又は活性を低下させる可能性がある。分子が細胞の外側で望ましい特性を保持するように、可逆的修飾を実施することができ、それらは、後に細胞のサイトゾル環境に進入すると除去される。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用又は細胞内部の化学的条件により（例えば、細胞内グルタチオンによる還元を介して）除去することができる。

【0165】

可逆的に修飾されたヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を含み得る。典型的には、核酸分子は、環状ジスルフィド部分で化学修飾されて、ヌクレオチド間二リン酸結合によって生成された負電荷をマスクすると共に、細胞の取込み及びヌクレアーゼ耐性を改善することができる。以下を参照されたい：Ｔｒａｖｅｒｓａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（「Ｔｒａｖｅｒｓａ」）に初め譲渡された米国特許出願公開第２０１１／０２９４８６９号明細書、Ｓｏｌｓｔｉｃｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｌｔｄ．（「Ｓｏｌｓｔｉｃｅ」）に譲渡されたＰＣＴ公開番号：国際公開第２０１５／１８８１９７号パンフレット、Ｍｅａｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３２：１２５６－１２６３（「Ｍｅａｄｅ」）、Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐに譲渡されたＰＣＴ公開番号：国際公開第２０１４／０８８９２０号パンフレット（これらの各々は、上記のような修飾の開示について参照により組み込まれる）。ヌクレオチド間二リン酸結合の可逆的修飾は、サイトゾル（例えば、グルタチオン）の還元環境により細胞内で切断されるように設計される。以前の例には、細胞内で切断可能であると報告された中和ホスホトリエステル修飾が含まれる（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３，１２５：９４０－９５０を参照されたい）。

【0166】

このような可逆的修飾は、オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ及び他の過酷な環境条件（例えば、ｐＨ）に曝露されるインビボ投与（例えば、血液及び／又は細胞のリソソーム／エンドソーム区画の通過）中の保護を可能にする。グルタチオンのレベルが細胞外空間と比較して高い細胞のサイトゾルに放出されると、修飾が逆転し、その結果、切断されたオリゴヌクレオチドが得られる。可逆的なグルタチオン感受性部分を使用すると、不可逆的化学修飾を用いて利用可能な選択肢と比較して、目的のオリゴヌクレオチドに、立体的により大きな化学基を導入することが可能である。これは、これらのより大きな化学基がサイトゾル中で除去されることから、細胞のサイトゾル内のオリゴヌクレオチドの生物学的活性を妨害しないと考えられるためである。その結果、これらのより大きな化学基は、ヌクレアーゼ耐性、親油性、電荷、熱安定性、特異性、免疫原性の低下など、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに様々な利点を与えるように操作することができる。グルタチオン感受性部分の構造は、その放出の速度論を改変するように操作することができる。

【0167】

一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖に結合する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、修飾ヌクレオチドの糖の２’炭素に結合する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドである場合、糖の５’－炭素に位置する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオチドである場合、糖の３’－炭素側に位置する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、スルホニル基を含む。例えば、米国特許出願公開第２０１９／０１７７３５５号明細書を参照されたい（その内容は、その関連する開示に関して参照により本明細書に組み込まれる）。

【0168】

ターゲティングリガンド
本開示のオリゴヌクレオチドを１つ以上の細胞又は１つ以上の器官（例えば、肝臓の細胞）にターゲティングさせるのが望ましい場合がある。そのような戦略は、他の器官における望ましくない作用を回避するのに役立ち得るか、又はオリゴヌクレオチドに利益をもたらさない細胞、組織若しくは器官に対するオリゴヌクレオチドの過度の喪失を回避し得る。従って、一部の実施形態では、特定の組織、細胞又は器官のターゲティングを促進するように、例えば肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するように、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドを修飾することができる。特定の実施形態では、本明細書で開示されるオリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するように修飾することができる。オリゴヌクレオチドは、１つ以上のターゲティングリガンドと共役させたヌクレオチドを含み得る。

【0169】

ターゲティングリガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質又はタンパク質の一部（例えば、抗体若しくは抗体フラグメント）又は脂質を含み得る。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、アプタマーである。例えば、ターゲティングリガンドは、腫瘍血管系若しくはグリオーマ細胞をターゲティングするために使用されるＲＧＤペプチド、腫瘍血管系若しくは間質をターゲティングするＣＲＥＫＡペプチド（配列番号７８）、トランスフェリン、ラクトフェリン又はＣＮＳ血管系に発現されるトランスフェリン受容体を標的とするアプタマー又はグリオーマ細胞上のＥＧＦＲをターゲティングする抗ＥＧＦＲ抗体であり得る。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、１つ以上のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分である。

【0170】

オリゴヌクレオチドの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５又は６つ）のヌクレオチドは、各々個別のターゲティングリガンドと共役され得る。いくつかの事例では、オリゴヌクレオチドの２～４ヌクレオチドは、各々個別のターゲティングリガンドと共役されている。ターゲティングリガンドは、ターゲティングリガンドが歯ブラシの剛毛に類似し、またオリゴヌクレオチドが歯ブラシに類似するように、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端で２～４ヌクレオチドと共役され得る（例えば、リガンドは、センス又はアンチセンス鎖の５’若しくは３’末端の２～４ヌクレオチドオーバーハング又は伸長部と共役される）。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’又は３’末端のいずれかにステムループを含み得、ステムのループの１、２、３又は４ヌクレオチドは、ターゲティングリガンドに個別と共役され得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端側にステムループを含み、ステムのループの３ヌクレオチドは、ターゲティングリガンドと個別に共役されている。

【0171】

一部の実施形態では、対象の肝臓の肝細胞に対するＣＦＢの発現を低減するオリゴヌクレオチドをターゲティングすることが望ましい。この目的のために、任意の適切な肝細胞ターゲティング部分を使用することができる。

【0172】

ＧａｌＮＡｃは、主に肝細胞細胞のシヌソイド表面に発現するアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）の高親和性リガンドであり、末端ガラクトース又はＮ－アセチルガラクトサミン残基を含む循環糖タンパク質（アシアロ糖タンパク質）の結合、内在化及びその後のクリアランスに主要な役割を果たす。本開示のオリゴヌクレオチドへのＧａｌＮＡｃ部分の間接的又は直接的な共役を使用して、これらのオリゴヌクレオチドを上記肝細胞細胞で発現されるＡＳＧＰＲにターゲティングさせることができる。

【0173】

例えば、本開示のオリゴヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃと直接的又は間接的に共役させることができる。オリゴヌクレオチドは、２つ以上（例えば、２、３、４若しくはそれを超える）一価ＧａｌＮＡｃと直接的又は間接的に共役させることができ、典型的には３又は４つの一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。ＧａｌＮＡｃ部分は、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのループ領域内に存在し得る。ＧａｌＮＡｃ部分を使用して、肝細胞上のＡＳＧＰＲに対する開示のオリゴヌクレオチドをターゲティングすることができ；その時点で、ＧａｌＮＡｃ結合オリゴヌクレオチドは内在化され、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる細胞内ＲＮＡｉ機構に組み込まれ得る。この複合体内のＲＩＳＣアルゴノート－２（Ａｒｇｏ－２）タンパク質は、オリゴヌクレオチド二重らせんのアンチセンス鎖をその相補的なＣＦＢ ｍＲＮＡにターゲティングさせ、その分解を開始し、このようにして、標的の翻訳を阻止する。

【0174】

一部の実施形態では、ステムループのループ（Ｌ）の２～４ヌクレオチドは、各々個別のＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのステムのループの３つのヌクレオチドは、３つの個別の一価ＧａｌＮＡｃ部分と直接的又は間接的に共役され得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ又は四価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。

【0175】

本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、以下に描かれるように、グアニン核酸塩基に結合した一価ＧａｌＮＡｃを含み得、これは、［ａｄｅｍＧ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－グアニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる。

【化6】

【0176】

さらに又は代替的に、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、以下に描かれるように、アデニン核酸塩基に結合した一価ＧａｌＮＡｃを含み得、これは、２’－Ｏ－ＧａｌＮＡｃ修飾アデノシン［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる。

【化7】

【0177】

このような結合の一例を、５’から３’に、ヌクレオチド配列ＧＡＡＡを含むループ（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）について以下に示し、ステム付着点が示される。このようなループは、例えば、図１Ａ及び２Ａに示す分子のヌクレオチド位置２７～３０に存在し得る（図１Ｃ及び２Ｃも参照されたい）。化学式において、

【化8】

は、オリゴヌクレオチド鎖との付着点である。

【化9】

【0178】

適切な方法又は化学（例えば、クリックケミストリー）を使用して、ターゲティングリガンドをヌクレオチドに連結させることができる。ターゲティングリガンドは、クリックリンカーを用いてヌクレオチドと共役させることができる。さらに、アセタールベースのリンカーを使用して、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つのヌクレオチドにターゲティングリガンドをコンジュゲートさせ得る。アセタール系リンカーは、例えば、２０１６年６月２３日に公開された国際特許出願公開番号：国際公開第２０１６／１００４０１Ａ１号パンフレットに開示されており、そのようなリンカーに関する内容は、参照により本明細書に組み込まれる。リンカーは不安定リンカーであり得る。しかし、他の実施形態では、リンカーは安定（非不安定）である。

【0179】

５’から３’にヌクレオチドＧＡＡＡを含むループについて、以下に一例を示し、ＧａｌＮＡｃ部分は、アセタールリンカーを用いてループのヌクレオチドに結合されている。このようなループは、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド中に存在し得る（例えば、配列番号１及び４の配列を有するオリゴヌクレオチドの２７～３０位を参照されたい）。化学式において、

【化10】

は、オリゴヌクレオチド鎖への付着点である。

【化11】

【0180】

一部の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、テトラループを有するセンス鎖を含み、３つの（３）ＧａｌＮＡｃ部分は、テトラループを含むヌクレオチドと共役されており、且つ各ＧａｌＮＡｃ部分は、１つの（１）ヌクレオチドと共役されている。一部の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＧａｌＮＡｃ共役ヌクレオチドを含むテトラループを有するセンス鎖を含み、テトラループは、下記構造：

【化12】

を含む。

【0181】

一部の実施形態では、ターゲティングリガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）とオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）との間に二重らせん伸長部（例えば、長さ最大３、４、５又は６塩基対）が賦与される。一部の実施形態では、ターゲティングリガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）とオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）との間の二重らせん伸長部は、長さが６塩基対である。

【0182】

製剤
オリゴヌクレオチドの使用を容易にするために様々な製剤が開発されている。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小限に抑え、送達及び／又は取込みを容易にするか、又は製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を賦与する製剤を使用して、対象又は細胞環境に送達することができる。一部の実施形態では、ＣＦＢの発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、一本鎖又は二本鎖オリゴヌクレオチド）を含む組成物が本明細書に提供される。このような組成物は、対象に投与されると、標的細胞の隣接環境中又は全身のいずれかに、十分な部分のオリゴヌクレオチドが細胞に進入して、ＣＦＢ発現を低減するように、好適に製剤化することができる。本明細書に開示されるように、種々の好適なオリゴヌクレオチド製剤のどれを使用しても、ＣＦＢの低減を目的とするオリゴヌクレオチドを送達することができる。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞は、リン酸緩衝生理食塩水、リポソーム、ミセル構造、ベクター及びカプシドなどの緩衝溶液中に製剤化される。

【0183】

本明細書に開示される製剤は、賦形剤を含み得る。賦形剤は、活性成分の安定性の改善、吸収性の改善、溶解性の改善及び／又は治療効果増強を組成物に付与し得る。賦形剤は、緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス塩基若しくは水酸化ナトリウム）又はビヒクル（例えば、緩衝溶液、ワセリン、ジメチルスルホキシド又は鉱油）であり得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、その貯蔵寿命を延長するために凍結乾燥され、次に、使用前に溶液することができる（例えば、対象への投与）。従って、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれか１つを含む組成物中の賦形剤は、凍結保護剤（例えば、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール若しくはポリビニルピロリドン）又は崩壊温度調整剤（例えば、デキストラン、フィコール又はゼラチン）である。

【0184】

オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、その意図する投与経路と適合性であるように製剤化され得る。投与経路の例としては、非経口、例えば皮下、静脈内、皮内、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜及び直腸投与が挙げられる。

【0185】

注射用途に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液及び滅菌注射液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体プロピレングリコールなど）を含む溶媒若しくは分散媒及びこれらの好適な混合物であり得る。多くの場合、等張化剤、例えば糖、マンニトール及びソルビトールなどのポリアルコール並びに塩化ナトリウムを組成物中に含有させることは任意である。滅菌注射液は、必要に応じて、選択された溶媒中に必要量のオリゴヌクレオチドを、上に列挙した成分の１つ又は組合せと一緒に含有させた後、濾過滅菌することによって調製することができる。

【0186】

一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、滅菌水（ＷＦＩ）を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、ＰＢＳを含む。

【0187】

一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、防腐剤を含まない溶液である。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＷＦＩ中の無菌溶液を含む。一部の実施形態では、０．１Ｎ ＮａＯＨ又は０．１Ｎ ＨＣｌを滴定して、溶液のｐＨを目標の約７．２（例えば、ｐＨ７．２）に調節し得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの濃度は、遊離酸形態として約１６０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１６０／ｍｇ／ｍＬ）であり得る。一部の実施形態では、ＷＦＩを添加して、医薬組成物を所望の総濃度のオリゴヌクレオチドにすることができる。一部の実施形態では、目標充填容積は、２ｍＬガラスバイアル中に約１．３ｍＬである。一部の実施形態では、溶液は、対象に皮下投与される。

【0188】

一部の実施形態では、組成物は、少なくとも約０．１％以上の治療薬（例えば、ＣＦＢ発現を低減するためのオリゴヌクレオチド）を含有し得るが、有効成分のパーセンテージは、組成物全体の重量又は体積の約１％～約８０％以上であり得る。溶解度、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品貯蔵寿命並びに他の薬理学的考慮事項などの要因は、そのような医薬製剤を調製する当業者によって考慮され、そのため、様々な投薬量及び治療レジメンが望ましくなり得る。

【0189】

多くの実施形態が本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれかの肝臓標的送達に向けられるが、他の組織のターゲティングも企図される。

【0190】

医薬品用途
本明細書には、細胞又は対象におけるＣＦＢの発現を低減する目的で本明細書に開示されるいずれか１つのオリゴヌクレオチドを有効量で細胞又は対象に送達する方法が開示される。

【0191】

本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、任意の適切な核酸送達方法を用いて、補体経路活性化又は調節不全（例えば、ＣＦＢの活性化又は調節不全）によって媒介される疾患又は障害を有する対象の細胞に導入することができる。例えば、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含有する溶液の注入、オリゴヌクレオチドで被覆された粒子によるボンバードメント、オリゴヌクレオチドを含む溶液への細胞若しくは生物の曝露又はオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜のエレクトロポレーションによって細胞に送達され得る。

【0192】

カチオン性脂質を用いたオリゴヌクレオチドの製剤化を使用して、細胞へのオリゴヌクレオチドのトランスフェクションを容易にすることができる。例えば、カチオン性脂質、例えばリポフェクチン、カチオン性グリセロール誘導体及びポリカチオン性分子（例えば、ポリリジン）を使用することができる。適切な脂質としては、オリゴフェクタミン、リポフェクタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）又はＦｕＧｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ）があり、これらは全て、製造者の指示に従って使用することもできる。

【0193】

従って、一部の実施形態では、製剤は、脂質ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、賦形剤は、リポソーム、脂質、脂質複合体、マイクロスフェア、微粒子、ナノスフェア若しくはナノ粒子を含むか、又はそうでなければそれを必要とする対象の細胞、組織、器官若しくは身体への投与のために製剤化され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３を参照されたい）。

【0194】

本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドの有効な細胞内濃度は、オリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドの安定な発現を介して（例えば、哺乳動物細胞の核若しくはミトコンドリアゲノムへの組込みによって）又はポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチドをコードするプラスミド若しくは他のベクター（例えば、ウイルスベクター）と接触させた細胞での一過性発現によっても達成され得る。発現ベクターの例は、例えば、国際公開第１９９４／０１１０２６号パンフレットに開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するための発現ベクターは、ＣＦＢ発現を低減するオリゴヌクレオチド配列並びに例えばこれらの薬剤の発現及び／又は哺乳動物細胞のゲノムへのこれらのポリヌクレオチド配列の組込みに使用される追加の配列要素を含有する。発現ベクターは、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はアデノ随伴ウイルスベクターであり得る。

【0195】

オリゴヌクレオチドを細胞に送達するための他の方法、例えば脂質媒介担体輸送、化学物質媒介輸送、リン酸カルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクション及びオリゴヌクレオチドを含むベクターも使用することができる。本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの送達に使用されるベクターは、ウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）、アデノウイルスベクター（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５及びＡｄ４８）並びにアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９及びＡＡＶ１０）であり得る。

【0196】

いくつかの例では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、細胞内でオリゴヌクレオチド（例えば、そのセンス鎖及びアンチセンス鎖）を発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達され得る。導入遺伝子は、前述のように、ベクター、例えばウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス若しくは単純ヘルペスウイルス）又は非ウイルスベクター（例えば、プラスミド又は合成ｍＲＮＡ）を用いて送達され得る。一部の実施形態では、導入遺伝子は、対象に直接、例えば作用源又はその付近（例えば、肝臓内若しくはその付近）又は血流内に注射することができる。

【0197】

ＣＦＢ阻害
投与時に、本開示のオリゴヌクレオチドは、ＣＦＢ ｍＲＮＡに結合して、その発現を阻害することができる。ＣＦＢ遺伝子の発現の阻害は、第１の細胞若しくは細胞群と実質的に同一であるが、同様に処置されていない第２の細胞若しくは細胞群（オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）で処置されていないか、又は目的の遺伝子にターゲティングさせたオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）で処置されていない対照細胞）と比較して、ＣＦＢ遺伝子が転写されており、ＣＦＢ遺伝子の発現が阻害されるように処置された（例えば、細胞を本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）と接触させるか、又は上記細胞が存在するか若しくは存在した対象に本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を投与することにより）第１の細胞若しくは細胞群（このような細胞は、例えば、対象由来の（例えば、対象から得られた）サンプル中に存在し得る）により発現されるｍＲＮＡの量の減少によって明らかにされ得る。標的ｍＲＮＡのレベルは、ＲＴ－ｑＰＣＲなどの当業者に周知の技術を用いて測定することができる。阻害の程度は、下記の式で表すことができる。

【数1】

【0198】

ＣＦＢ遺伝子の発現レベルの変化は、ＣＦＢ遺伝子発現と機能的に関連するパラメータ、例えばＣＦＢタンパク質発現、ＣＦＢタンパク質活性又はＣＦＢシグナル伝達経路の低減に関して評価することができる。ＣＦＢ遺伝子サイレンシングは、発現構築物からの内因性又は異種のいずれかのＣＦＢを発現する任意の細胞において且つ当技術分野で公知の任意のアッセイによって決定され得る。

【0199】

ＣＦＢ ｍＲＮＡの阻害の結果は、細胞若しくは対象の１つ以上の特性を評価するための適切なアッセイ又はＣＦＢ発現を示す分子（例えば、ＲＮＡ、タンパク質）を評価する生化学的技法によって確認することができる。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドがＣＦＢの発現レベルを低下させる程度は、発現レベルを適切な対照（例えば、オリゴヌクレオチドが送達されていないか、又は陰性対照が送達された細胞若しくは細胞集団におけるＣＦＢ ｍＲＮＡ発現のレベル）と比較することによって評価される。ＣＦＢ ｍＲＮＡ発現の適切な対照レベルは、対象レベルを毎回測定する必要がないように、所定のレベル又は値であり得る。所定のレベル又は値は、中央値又は平均値などの単一のカットオフ値を含む様々な形態をとることができる。例えば、所定のレベル又は値は、ＣＦＢタンパク質の２００ｍｇ／ｄＬのレベル又はその程度であり得、これは、健康な対象の血清中に典型的に見出されるＣＦＢタンパク質のレベルに対応する。

【0200】

サンプル中のＣＦＢ ｍＲＮＡの発現レベルは、例えば、転写されたポリヌクレオチド又はその一部、例えばｍＲＮＡを検出することによって決定することができる。ＲＮＡは、例えば、酸性フェノール／グアニジンイソチオシアネート抽出ＲＮＡＺＯＬ（商標）Ｂ；Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）、ＲＮＥＡＳＹ（商標）ＲＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ）又はＰＡＸＧＥＮＥ（商標）（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）の使用を含むＲＮＡ抽出技術を用いて細胞から抽出することができ。サンプル中のＣＦＢ ｍＲＮＡは、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）を用いて測定することもできる。例えば、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてＱＩＡｚｏ Ｌｙｓｉｓ試薬で組織サンプルをホモジナイズした後、製造業者の指示に従い、ＭＡＧＭＡＸ（登録商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて精製することによってＲＮＡを抽出することができる。次に、大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、ｃＤＮＡを調製することができる。ＣＦＢ及びハウスキープコントロール用の特定のプライマー及びプローブをＣＦＸ３８４リアルタイムＰＣＲ検出システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）でのＰＣＲに使用し、ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ Ｍａｅｓｔｒｏソフトウェアを使用してＣｔ値を推定し；発現レベルをＥＸＣＥＬ（登録商標）で計算して、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）にプロットした。ＲＴ－ＰＣＲに使用することができるプライマーには、表２に記載されているものが含まれる。配列番号３９～４２のいずれか１つの核酸配列を有するプライマーは、ヒト細胞におけるＣＦＢのレベルを決定するために使用することができる。同様に、配列番号４３及び４４の核酸配列を有するプライマーは、サル細胞におけるＣＦＢのレベルを決定するために使用することができる。さらに、配列番号４３及び４４の核酸配列を有するプライマーは、マウス細胞におけるＣＦＢのレベルを決定するために使用することができる。

【0201】

【表2】

【0202】

リボ核酸ハイブリダイゼーションを使用する典型的なアッセイフォーマットには、核ランオンアッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護アッセイ、ノーザンブロッティング、インサイチュハイブリダイゼーション及びマイクロアレイ分析が含まれる。循環ｍＲＮＡは、ＰＣＴ公開：国際公開第２０１２／１７７９０６号パンフレットに記載の方法を用いて検出することができ、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。目的の遺伝子の発現レベルは、核酸プローブを用いて決定することもできる。

【0203】

単離されたｍＲＮＡは、ハイブリダイゼーション又は増幅アッセイに使用することができ、そうしたアッセイとして、限定されないが、ノーザン又はサザン分析、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析及びプローブアレイが挙げられる。ｍＲＮＡレベルを決定するための一方法は、目的の遺伝子のｍＲＮＡにハイブリダイズすることができる核酸分子（プローブ）と、単離ｍＲＮＡを接触させることを含む。例えば、単離ｍＲＮＡをアガロースゲル上で泳動させ、ｍＲＮＡをゲルからニトロセルロースなどの膜に転写することによってｍＲＮＡを固体表面に固定化し、プローブと接触させることができる。プローブは、固体表面に固定化され得、例えばＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ（登録商標）ＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）アレイ内でｍＲＮＡをプローブと接触させる。当技術分野で公知のｍＲＮＡ検出方法は、目的の遺伝子のｍＲＮＡのレベルを決定する際の使用に適合させることができる。

【0204】

サンプル中の目的の遺伝子の発現レベルを決定するための代替方法は、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ（Ｍｕｌｌｉｓ，１９８７、米国特許第４，６８３，２０２号明細書）、リガーゼ連鎖反応（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８９－１９３）、自己持続配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４－１８７８）、転写増幅システム（Ｋｗｏｈ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：１１７３－１１７７）、Ｑβレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１１９７）、ローリングサークル複製（Ｌｉｚａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，８５４，０３３号明細書）又は任意の他の核酸増幅法によるサンプル中の例えばｍＲＮＡの核酸増幅及び／若しくは逆転写酵素（ｃＤＮＡを調製するため）のプロセス、続いて、当技術分野で公知の技術を用いた増幅分子の検出を含む。これらの検出スキームは、そのような分子が非常に少数で存在する場合の核酸分子の検出に有用である。本開示のいくつかの態様では、目的の遺伝子（例えば、ＣＦＢ）の発現レベルは、定量的蛍光ＲＴ－ＰＣＲ（即ちＴＡＱＭＡＮ（商標）Ｓｙｓｔｅｍ）又はＤＵＡＬ－ＧＬＯ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイにより決定される。

【0205】

目的の遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルは、メンブレンブロット（ノーザン、サザン、ドットなどのハイブリダイゼーション分析で使用されるようなもの）又はマイクロウェル、サンプルチューブ、ゲル、ビーズ若しくはファイバー（若しくは結合した核酸を含む任意の固体支持体）を用いてモニターすることができる。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，７７０，７２２号明細書；同第５，８７４，２１９号明細書；同第５，７４４，３０５号明細書；同第５，６７７，１９５号明細書；同第５，４４５，９３４号明細書を参照されたい。遺伝子発現レベルの決定には、溶液中の核酸プローブを使用することも含まれ得る。

【0206】

前述のアッセイを用いて、ＣＦＢ ｍＲＮＡ量の減少に基づいた本明細書に記載のオリゴヌクレオチドによる治療の有効性について決定を下すことができる。ＣＦＢ ｍＲＮＡのレベルの低下は、ＣＦＢ ｍＲＮＡの適切な対照レベル又は治療前の対象におけるＣＦＢのレベルと比較して１％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、７０％以下、８０％以下又は９０％以下の減少であり得る。適切な対照レベルは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触されていない細胞又は細胞集団におけるＣＦＢ ｍＲＮＡ発現のレベルであり得る。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法による細胞へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、有限の期間後に評価される。例えば、ＣＦＢ ｍＲＮＡのレベルは、細胞内へのオリゴヌクレオチドの導入後少なくとも８時間、１２時間、１８時間、２４時間；又は少なくとも３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０若しくは８０日間細胞内で分析され得る。

【0207】

さらに、ＣＦＢ遺伝子の阻害は、細胞又は細胞群によって発現されるＣＦＢタンパク質のレベル（例えば、対象に由来するサンプルで発現されるタンパク質のレベル）の低下によって現れ得るＣＦＢタンパク質発現の阻害をもたらすことができる。上に説明したように、ｍＲＮＡ抑制の評価のために、処置された細胞又は細胞群におけるタンパク質発現レベルの阻害も同様に、対照細胞又は細胞群におけるタンパク質レベルのパーセンテージとして表され得る。

【0208】

ＣＦＢタンパク質発現の阻害の結果は、細胞若しくは対象の１つ以上の特性を評価するための適切なアッセイ又はＣＦＢタンパク質発現を示す分子を評価する生化学的手法によって確認することができる。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドがＣＦＢタンパク質の発現レベルを低下させる程度は、発現レベルを適切な対照（例えば、オリゴヌクレオチドが送達されていないか、又は陰性対照が送達された細胞若しくは細胞集団におけるＣＦＢタンパク質発現のレベル）と比較することによって評価される。ＣＦＢタンパク質発現の適切な対照レベルは、毎回対照レベルを測定する必要がないように、所定のレベル又は値、例えば正常範囲と判定されるＣＦＢタンパク質の量、例えば血清中で約２００ｍｇ／ｄＬであり得る。所定のレベル又は値は、中央値又は平均値などの単一のカットオフ値を含む様々な形態をとることができる。

【0209】

ＣＦＢ遺伝子の発現によって産生されるＣＦＢタンパク質のレベルは、タンパク質レベルの測定のために当技術分野で公知の任意の方法を用いて決定され得る。このような方法としては、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高拡散（ｈｙｐｅｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）クロマトグラフィー、流体又はゲル沈殿素反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度測定アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（単一又は二重）、免疫電気泳動法、ウェスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、電気化学発光アッセイなどが挙げられる。こうしたアッセイは、目的の遺伝子によって産生されるタンパク質の存在又は複製を示すタンパク質の検出にも使用することができる。さらに、上記のアッセイを使用して、タンパク質機能の回復又は変化をもたらす目的のｍＲＮＡ配列の変化を報告することもでき、それにより対象に治療効果及び利益を提供し、対象の障害を治療し、且つ／又は対象の障害の症状を軽減する。

【0210】

前述のアッセイを用いて、ＣＦＢタンパク質の量の減少に基づいた本明細書に記載のオリゴヌクレオチドによる治療の有効性について決定を下すことができる。ＣＦＢタンパク質のレベルの低下は、ＣＦＢの適切な対照レベル（例えば、約２００ｍｇ／ｇＬ）と比較して１％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、７０％以下、８０％以下又は９０％以下までの減少であり得る。適切な対照レベルは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触されていない細胞又は細胞集団におけるＣＦＢ３発現のレベルであり得る。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法による細胞へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、有限の期間後に評価される。例えば、ＣＦＢのレベルは、細胞内で少なくとも８時間、１２時間、１８時間、２４時間；又はオリゴヌクレオチドの細胞への導入後少なくとも１、２、３、４、５、６、７若しくは１４日間分析され得る。ＣＦＢのレベルは、対象の再治療が必要か否かを評価するために決定され得る。例えば、ＣＦＢのレベルが治療前レベル（又は治療前レベルの少なくとも約２０％以上（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれを超える）であるレベル）まで上昇する場合、対象は再治療を必要とすると考えられる。

【0211】

さらに、本明細書に記載の方法を用いたＣＦＢ遺伝子の阻害は、補体経路活性化及び調節不全によって媒介される疾患を有すると識別された対象の細胞におけるＣＦＢｍＲＮＡの転写の低減をもたらし得る。本明細書に提供される方法は、任意の適切な細胞型（例えば、肝細胞など、ＣＦＢを発現する細胞）で有用である。一部の実施形態では、細胞は、細胞がその天然の表現型特性を実質的に維持するように、対象から得られた初代細胞であり、これは、限定数の継代を経ていてもよい。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドが送達される細胞は、エクスビボ又はインビトロである（即ち培養中の細胞又は細胞が存在する生物に送達され得る）。具体的な実施形態では、肝細胞おけるＣＦＢの発現のみを低減する目的で、有効量の本明細書に開示のオリゴヌクレオチドを細胞に送達する方法が提供される。

【0212】

本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドの有効量は、補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害、例えば本明細書に記載の疾患又は障害の１つの症状の軽減をもたらすオリゴヌクレオチドの量として決定され得る。補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害の症状の軽減は、例えば、当業者に公知の臨床評価を用いて決定される通り、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は１００％の軽減であり得る。補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害の症状の軽減の量を用いて、対象が本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞で再び治療する必要があるか否かを決定することができる。補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害の軽減を決定するためのアッセイの例には、循環ＣＦＢタンパク質の測定及び／又は定量、機能アッセイ（例えば、ＷＥＩＳＬＡＢアッセイ及び溶血アッセイ）が含まれるが、これらに限定されない。ＣＦＢ沈着の定量は、ＩＨＣ若しくは免疫蛍光を介して又は特定の疾患バイオマーカーを介して行うことができる。

【0213】

さらに、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方を二重らせんオリゴヌクレオチドとして含む本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、任意の適切な核酸送達を用いて対象の細胞に導入することができる。二重らせんオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含有する溶液の注入、オリゴヌクレオチドで被覆された粒子によるボンバードメント、オリゴヌクレオチドを含む溶液への細胞若しくは生物の曝露又はオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜のエレクトロポレーションによって細胞に送達され得る。二重らせんオリゴヌクレオチドは、脂質媒介担体輸送、化学物質媒介輸送、リン酸カルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクション及び一本鎖オリゴヌクレオチドの核酸をコードするベクターを用いても細胞に送達され得る。二重らせんオリゴヌクレオチドの送達に使用されるベクターは、ウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）、アデノウイルスベクター（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５及びＡｄ４８）並びにアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９）であり得る。

【0214】

治療方法
本明細書に記載の組成物（例えば、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドをコードするベクター、ベクターを含む細胞、医薬組成物）の投与による、対象における、例えば本明細書に開示される補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患の１つ以上を含む補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患の治療の方法も本明細書に開示される。この方法は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）の投与による、対象における補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患の治療を含み得る。本明細書に記載される方法は、典型的には、オリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩の有効量、即ち望ましい治療結果（例えば、ＣＦＢ発現のノックダウン）を生じ得る量である。治療上許容される量は、補体経路活性化又は調節不全（例えば、ＣＦＢの活性化又は調節不全）によって媒介される疾患又は障害を治療することができる量であり得る。任意の１対象に対する適切な投与量は、対象のサイズ、身体表面積、年齢、投与される具体的な組成物、組成物中の有効成分、投与の時間及び経路、健康状態全般並びに同時に投与される他の薬剤を含め、特定の要因に左右され得る。こうした治療薬を用いて、例えば補体経路活性化又は調節不全によって媒介される任意のタイプの疾患又は障害を緩徐にするか、停止するか又は予防することができ、これらは、予防的又は治療的に投与され得る。予防薬の投与は、疾患又は障害を予防するか又はその進行を遅らせるように、補体経路の活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害に特徴的な症状の検出又は発現前に実施され得る。補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害のリスクがある対象は、例えば、当技術分野で公知の診断又は予後アッセイの１つ又は組合せによって識別することができる。

【0215】

本明細書で開示される組成物は、任意の標準的な方法を用いて対象に投与され得る。例えば、本明細書で開示される組成物のいずれか１つは、経腸的に（例えば、経口的に、胃栄養チューブにより、十二指腸栄養チューブにより、胃瘻を介して若しくは直腸内に）、非経口的に（例えば、皮下注射、静脈内注射若しくは注入、動脈内注射若しくは注入、骨内注入、筋肉内注射、脳内注射、脳室内注射、髄腔内）、局所的に（例えば、経皮的、吸入、点眼剤により若しくは粘膜を介して）又は標的器官（例えば、対象の肝臓）への直接注射により投与され得る。典型的には、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、静脈内又は皮下に投与される。任意の所与の場合における投与に最も適した経路は、投与される特定の組成物、対象、治療しようとする補体経路活性化又は調節不全によって媒介される特定の疾患又は障害、医薬製剤化方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、対象の年齢、体重、性別、治療しようとする疾患の重症度、対象の食事及び対象の排泄速度に左右され得る。

【0216】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害に罹患している対象に、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドを例えば毎年（例えば、１２ヶ月に１回）、半年毎（例えば、６ヶ月に１回）、四半期毎（例えば、３ヶ月に１回）、隔月（例えば、２ヶ月に１回）、毎月又は毎週投与することができる。他の例では、オリゴヌクレオチドは、１週間、２週間又は３週間毎に１回以上、毎月１回以上、隔月毎、３ヵ月毎に１回以上、四半期毎に１回以上、６ヵ月毎に１回以上又は毎年１回以上投与することができる。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、毎日投与され得る。

【0217】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害の治療対象となる対象は、ヒト若しくは非ヒト霊長類又は別の哺乳動物対象であり得る。本明細書に記載のオリゴヌクレオチドで治療され得る他の例示的な対象としては、イヌ及びネコなどの飼いならされた動物；ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ及びニワトリなどの家畜；並びにマウス、ラット、モルモット及びハムスターなどの動物が挙げられる。

【0218】

投与量
本開示の組成物（例えば、本明細書に記載されるようなＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩を含む組成物）の投与量は、化合物の薬力学的特性、投与様式、レシピエントの年齢、健康状態及び体重、症状の性質及び程度、治療の頻度及び／又は同時治療の種類（ある場合）並びに治療対象の化合物のクリアランス速度などの多くの要因に応じて変動し得る。当業者は、上記の要因に基づいて適切な投与量を決定することができる。

【0219】

本開示のオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、（ａ）対象の細胞におけるＣＦＢタンパク質の発現の低減、（ｂ）対象の細胞におけるＣＦＢの転写の低減、（ｃ）対象の細胞におけるＣＦＢタンパク質のレベルの低下、（ｄ）対象の細胞におけるＣＦＢタンパク質の活性の低下；及び／又は（ｅ）補体経路の活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害の１つ以上の症状の軽減の１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上）をもたらすのに有効な量及び時間で投与され得る。

【0220】

従って、本開示は、補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法に関し、この方法は、ＣＦＢ ｍＲＮＡに特異的に結合して、対象におけるＣＦＢタンパク質の発現を阻害する、有効量の、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドを投与することを含む。例えば、本開示は、代替補体経路調節不全によって媒介される疾患又は障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、これは、治療有効量の本明細書に開示のオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター又は細胞を対象に投与することを含む。

【0221】

開示された方法及び組成物を使用して治療しようとする補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患又は障害は、例えば、皮膚障害、神経学的障害、腎臓学的障害、アキュートケア、リウマチ性障害、肺障害、皮膚科学的障害、血液学的障害及び眼科障害であり得る。

【0222】

補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患の治療は、本明細書に記載されるようなＣＦＢ ｍＲＮＡ（例えば、ＣＦＢタンパク質の発現）の発現及び／又は翻訳を阻害するオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩の投与によって達成され得る。

【0223】

開示された組成物は、当業者によって適切であると決定された量で投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、臨床反応に応じて、必要であれば調節することができる適切な投与量で最初に投与され得る。

【0224】

いくつかの事例では、オリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、対象の体重の０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～２０ｍｇ／ｋｇ、２０～５０ｍｇ／ｋｇ、５０～１００ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与される。特定の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～５０ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～２０ｍｇ／ｋｇ、２０～３０ｍｇ／ｋｇ、３０～４０ｍｇ／ｋｇ、４０～５０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～２０ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ、１５～２０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～１５ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～８ｍｇ／ｋｇ、８～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１２ｍｇ／ｋｇ、１２～１５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｆ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～８ｍｇ／ｋｇ、８～１０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～５ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～３ｍｇ／ｋｇ、３～４ｍｇ／ｋｇ、４～５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．１ｍｇ～２０ｍｇ（０．１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍ／ｋｇ及び１５～２０ｍ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、０．１～１ｍｇ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～７ｍｇ／ｋｇ及び７～１０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．１ｍｇ～５ｍｇ（例えば、０．１～１ｍｇ／ｋｇ、２～３ｍｇ／ｋｇ、３～４ｍｇ／ｋｇ及び４～５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の事例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～５０ｍｇ（例えば、１～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～２０ｍｇ／ｋｇ、２０～３０ｍｇ／ｋｇ、３０～４０ｍｇ／ｋｇ及び４０～５０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～２０ｍｇ（例えば、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ及び１５～２０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～７ｍｇ／ｋｇ及び７～１０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～５ｍｇ（例えば、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～３ｍｇ／ｋｇ、３～４ｍｇ／ｋｇ及び４～５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、３０ｍｇ／ｋｇ～３００ｍｇ／ｋｇ（例えば、３０～２００ｍｇ／ｋｇ、３０～１００ｍｇ／ｋｇ、３０～５０ｍｇ／ｋｇ、５０～３００ｍｇ／ｋｇ、１００～３００ｍｇ／ｋｇ、２００～３００ｍｇ／ｋｇ及び２５０～３００ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。

【0225】

特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、対象の体重ｋｇ当たり１０ｍｇ未満（例えば、９ｍｇ／ｋｇ以下、８ｍｇ／ｋｇ以下、７ｍｇ／ｋｇ以下、６ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、４ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、２ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１０ｍｇ／ｋｇ以下の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約９ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、８．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約８ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、７．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約７ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、６．９ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、約６ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、５．９ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約５ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、４．９ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約４ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、３．９ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ（例えば、２．９ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約２ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、１．９ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ及び０．５ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。

【0226】

別の実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩は、対象の体重の約０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．２～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．３～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．４～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．５～１０ｍｇ／ｋｇ、約１～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～１０ｍｇ／ｋｇ、約３～１０ｍｇ／ｋｇ、約４～１０ｍｇ／ｋｇ、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約６～１０ｍｇ／ｋｇ、約７～１０ｍｇ／ｋｇ、約８～１０ｍｇ／ｋｇ又は約９ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0227】

他の事例では、組成物（例えば、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドを含む組成物）の投与量は、予防又は治療に有効な量である。いくつかのケースでは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドを含むウイルスベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、対象当たり１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、１０^１２、１０^１３、１０^１４又は１０^１５ゲノムコピー（ＧＣ）の用量で投与される。一部の実施形態では、ウイルスベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、１０^１２、１０^１３又は１０^１４ＧＣ／ｋｇ（対象の総重量）の用量で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与される。

【0228】

任意選択で、開示されたオリゴヌクレオチドは、本明細書に記載されるように、対象への送達に好適な薬学的に許容される組成物の一部として投与され得る。開示される薬剤は、当業者によって容易に決定され得るように、所望の投薬量をもたらし、且つ／又は治療に有益な効果を引き出すのに十分な量で上記組成物中に含まれる。

【0229】

本明細書に記載される開示組成物は、対象を治療する上で又は前述したアウトカムの１つ（例えば、対象の疾患の１つ以上の症状の軽減）をもたらすのに十分な量（例えば有効量）で、且つ十分な時間にわたって投与され得る。開示される組成物は、１回又は２回以上投与され得る。開示される組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、２日に１回、週１回、週２回、週３回、２週間に１回、月１回、２ヶ月に１回、年２回又は年１回投与することができる。治療は、離散的（例えば、注射）又は連続的（例えば、インプラント若しくは注入ポンプを介した処置）であり得る。対象は、治療のために用いられる組成物及び投与経路に応じて、開示の組成物の投与後１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月又はそれを超える治療有効性について評価され得る。対象は、離散的な期間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２ヶ月）又は疾患若しくは状態が緩和されるまで治療を受け得るか、又は治療される疾患若しくは状態の重症度及び性質に応じて、治療は、長期にわたり（例えば、対象の生涯にわたって）継続し得る。例えば、治療の初期ラウンド若しくはその後のラウンドがＰＮＨに関連する症状、例えば倦怠感、虚弱性、息切れ、あざ若しくは出血しやすさ、再発性感染症、重度の頭痛、血栓及び出血の制御の困難などのいずれか１つの軽減又は対象の細胞若しくは血清中のＣＦＢ ＲＮＡのレベル若しくはＣＦＢタンパク質レベルの低下を含む治療利益を引き出さない場合、ＰＮＨと診断され、本明細書に開示される組成物で治療される対象に１種以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれを超える）の追加の治療薬を投与し得る。

【0230】

キット
本開示は、（ａ）本明細書に記載の細胞又は対象におけるＣＦＢのレベル及び／若しくは活性を低下させるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）剤又はその薬学的に許容される塩並びに任意選択で薬学的に許容される担体、賦形剤若しくは希釈剤を含む医薬組成物を含むキットも特徴とする。キットは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）をコードするベクター又は本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えばＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）をコードするベクターを含む細胞を含有し得る。キットは、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明を含む添付文書も含み得る。一部の実施形態では、キットは、（ａ）本明細書に記載される細胞又は対象におけるＣＦＢのレベル及び／若しくは活性を低下させるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）剤を含む医薬組成物、（ｂ）追加の治療薬、及び（ｃ）本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明を含む添付文書を含む。

【実施例】

【0231】

以下の実施例は、あくまで例示を目的としており、本開示を何ら限定することは意図されない。

【0232】

実施例１：ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの調製
オリゴヌクレオチドの合成及び精製
本実施例及び以下の実施例に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを、本明細書に記載の方法を用いて化学的に合成した。概して、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、公知のホスホロアミダイト合成（例えば、以下を参照されたい：Ｈｕｇｈｅｓ ａｎｄ Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ（２０１７）ＣＯＬＤ ＳＰＲＩＮＧ ＨＡＲＢ ＰＥＲＳＰＥＣＴ ＢＩＯＬ．９（１）：ａ０２３８１２；Ｂｅａｕｃａｇｅ Ｓ．Ｌ．，Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ Ｍ．Ｈ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖ：Ｄｅｏｘｙ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ－Ａ Ｎｅｗ Ｃｌａｓｓ ｏｆ Ｋｅｙ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｆｏｒ Ｄｅｏｘｙｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２２：１８５９－１８６２，１９８１；ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ００４０－４０３９（０１）９０４６１－７）に加えて、１９－２３ｍｅｒ ｓｉＲＮＡについて記載されているような固相オリゴヌクレオチド合成法（例えば、以下を参照されたい：Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：５４３３－５４４１及びＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：７８４５－７８４５；米国特許第５，８０４，６８３号明細書；同第５，８３１，０７１号明細書；同第５，９９８，２０３号明細書；同第６，００８，４００号明細書；同第６，１１１，０８６号明細書；同第６，１１７，６５７号明細書；同第６，３５３，０９８号明細書；同第６，３６２，３２３号明細書；同第６，４３７，１１７号明細書及び同第６，４６９，１５８号明細書）を用いて合成した。

【0233】

１９ｍｅｒコア配列を有するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ機構によるプロセシングを可能にするために、２５ｍｅｒセンス鎖及び２７ｍｅｒアンチセンス鎖を有する構築物にフォーマットされた。１９ｍｅｒコア配列は、ＣＦＢ ｍＲＮＡの領域に相補的であった。

【0234】

個々のＲＮＡ鎖を合成し、標準的な方法に従ってＨＰＬＣ精製した（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ）。例えば、ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、固相ホスホロアミダイト化学を用いて合成し、脱保護した後、標準的な技術（Ｄａｍｈａ ＆ Ｏｌｇｉｖｉｅ（１９９３）ＭＥＴＨＯＤＳ ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２０：８１－１１４；Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤ ＲＥＳ．２３：２６７７－２６８４）を用いて、ＮＡＰ－５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）で脱塩した。１５分のステップ線形勾配を用いるＡｍｅｒｓｈａｍ Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）でのイオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＩＥ－ＨＰＣ）を用いて、オリゴマーを精製した。勾配は、９０：１０バッファーＡ：Ｂから５２：４８バッファーＡ：Ｂまで変動し、バッファーＡは、１００ｍＭトリスｐＨ８．５であり、バッファーＢは、１００ｍＭトリスｐＨ８．５、１Ｍ ＮａＣｌであった。サンプルを２６０ｎｍでモニターし、完全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを回収し、プールし、ＮＡＰ－５カラム上で脱塩した後、凍結乾燥した。

【0235】

各オリゴマーの純度は、Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡＣＥ ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．；Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）でのキャピラリー電気泳動装置により決定した。ＣＥキャピラリーは、内径が１００μｍで、ｓｓＤＮＡ １００ＲＧｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含有する。通常、約０．６ｎｍモルのオリゴヌクレオチドをキャピラリーに注入し、４４４Ｖ／ｃｍの電界で泳動させ、２６０ｎｍのＵＶ吸光度により検出した。変性トリス－ホウ酸－７Ｍ－尿素ランニングバッファーは、Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。以下に記載される実験で使用するために、ＣＥによって評価して、少なくとも９０％純粋であったオリゴリボヌクレオチドが得られた。化合物の同一性は、製造者の推奨するプロトコルに従い、ＶＯＹＡＧＥＲ ＤＥ（商標）Ｂｉｏｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｗｏｒｋ Ｓｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）でのマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析によって検証された。全てのオリゴマーの相対分子量が得られ、多くの場合、予想される分子量の０．２％以内であった。

【0236】

二重らせんの調製
１００ｍＭ酢酸カリウム、３０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５からなる二重らせんバッファー中に一本鎖ＲＮＡオリゴマーを再懸濁した（例えば、濃度１００μＭで）。相補的なセンス鎖及びアンチセンス鎖を等モル量で混合して、例えば５０μＭ二重らせんの最終溶液を得た。サンプルを１００℃に加熱して５’ＲＮＡバッファー（ＩＤＴ）中、使用前に室温まで冷却させた。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、－２０℃で保存した。一本鎖ＲＮＡオリゴマーは、凍結乾燥又はヌクレアーゼフリー水中、－８０℃で保存した。

【0237】

実施例２：ＣＦＢ標的ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの作製
ＣＦＢ ｍＲＮＡ標的配列の同定
補体因子Ｂ（ＣＦＢ）は、補体の代替経路に関与するタンパク質である。ＣＦＢ発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害剤を生成するために、コンピュータベースのアルゴリズムを使用して、ＲＮＡｉ経路によるＣＦＢ発現の阻害をアッセイするのに適したＣＦＢ ｍＲＮＡ標的配列を計算的に同定した。各々がヒトＣＦＢ ｍＲＮＡの適切なＣＦＢ標的配列に対して相補性の領域を有する３００を超えるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドガイド（アンチセンス）鎖配列（表３を参照されたい）を調製し、ＣＦＢ発現阻害についてインビトロでアッセイした。これらのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドから、９つのサブセット（表４を参照されたい）をさらなる研究のために選択した。アルゴリズムによって同定された９つのガイド配列のサブセットは、サルＣＦＢ ｍＲＮＡの対応するＣＦＢ標的配列にも相補的であった（配列番号５１；表３）。ヌクレオチド配列類似性を有する相同性ＣＦＢ ｍＲＮＡ標的配列に対して相補性の領域を含むＣＦＢ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、相同性ＣＦＢ ｍＲＮＡをターゲティングする能力を有すると予測される。

【0238】

【表3】

【0239】

実施例３：インビボでＣＦＢ発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの同定
ＣＦＢ発現を阻害するように設計されたＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（ＤｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドとしてフォーマット化）を、細胞ベースアッセイを用いてインビトロで個別に評価した。オリゴヌクレオチドを調製するために用いた方法は、実施例１に記載されている。ＣＦＢ ｍＲＮＡ標的配列を設計及び作成するために用いた方法は、実施例２に記載されている。

【0240】

インビトロ細胞ベースアッセイ
ＣＦＢ ｍＲＮＡを減少させるように作製された各ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの能力を、インビトロ細胞ベースアッセイを用いて測定した。手短には、内因性ヒトＣＦＢ遺伝子を発現するヒト肝細胞（Ｈｕｈ７）細胞を、マルチウェル細胞培養プレートの個別のウェルに各々１ｎＭのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした（化合物Ａ～Ｉ）。修飾ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによるトランスフェクション後、細胞を２４時間維持した後、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ベースのｑＰＣＲアッセイを用いてトランスフェクト細胞からの残留ＣＦＢ ｍＲＮＡ量を測定した。３’アッセイ及び５’アッセイの２つのｑＰＣＲアッセイを使用して、６－カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）を結合させたＰＣＲプローブを用いて測定したＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを決定し、ＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子に対して正規化した。図３Ａに示すように、各プライマー対を残留ＣＦＢ ｍＲＮＡ（％）について検定した。模擬トランスフェクト細胞と比較して、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドトランスフェクト細胞中に残留する８％以下のＣＦＢ ｍＲＮＡをもたらすＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド「ヒット」とみなした。

【0241】

マルチウェル細胞培養プレートの個別のウェルにおいて、内因性ＣＦＢを発現するＨｕＨ－７ヒト肝細胞を、表示される３つの異なる濃度（０．０３ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ；図３Ｂ参照）のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドでトランスフェクトすることにより、用量反応試験を行った。トランスフェクション後２４時間細胞を維持し、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ベースのｑＰＣＲアッセイを用いてトランスフェクト細胞から残留するＣＦＢ ｍＲＮＡのレベルを測定した。２つのｑＰＣＲアッセイ（３’アッセイ及び５’アッセイ）を使用して、それぞれＨＥＸ及びＦＡＭプローブによって測定されるｍＲＮＡレベルを決した。９つのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（化合物Ａ～Ｉ）を、インビボスクリーニングアッセイでさらに試験した。

【0242】

これらの結果を総合すると、ヒトＣＦＢ ｍＲＮＡをターゲティングするように設計されたＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、対象細胞に対するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドトランスフェクト細胞におけるＣＦＢ ｍＲＮＡの量の減少によって決定されるように、細胞におけるＣＦＢの発現を阻害することが示された。これらの結果は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含むヌクレオチド配列が、ＣＦＢ発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの生成に有用であることを示している。さらに、これらの結果は、複数のＣＦＢ ｍＲＮＡ標的配列がＣＦＢ発現のＲＮＡｉ媒介阻害に適していることを示している（表４）。

【0243】

【表4】

【0244】

実施例４：ヒトＣＦＢ ｃＤＮＡを発現するマウス（ＨＤＩマウス）におけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのスクリーニング
実施例３のインビトロスクリーニングアッセイにより、ＣＦＢターゲティングオリゴヌクレオチドが標的ｍＲＮＡをノックダウンする能力を検証した。ＣＦＢをインビボでノックダウンするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの能力を確認するために、ＨＤＩマウスモデルを使用した。

【0245】

表４に示すオリゴヌクレオチドは、マウス肝臓の肝細胞でヒトＣＦＢ ｍＲＮＡを一過性発現するように操作したマウスで評価した。手短には、６～８週齢の雌ＣＤ－１マウス（ｎ＝４～５）に、ＰＢＳ中に製剤化した０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇの用量で表示ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを皮下投与した。対照群のマウス（ｎ＝５）にはＰＢＳのみを投与した。３日後（７２時間後）、ユビキタスサイトメガロウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で全ヒトＣＦＢ遺伝子（配列番１２）をコードするＤＮＡプラスミド（２５μｇ）をマウスにハイドロダイナミック法により注入（ＨＤＩ）した。ＤＮＡプラスミド導入の１日後、ＨＤＩマウスから肝臓サンプルを採取した。これらのＨＤＩマウス由来の全ＲＮＡをｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供し、実施例３に記載したようにＣＦＢ ｍＲＮＡレベルを測定した。ｍＲＮＡレベルをヒトｍＲＮＡについて測定した。ＤＮＡプラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を用いて、トランスフェクション効率について値を正規化した。

【0246】

図４Ａ～４Ｃの結果は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドで処置したＨＤＩマウスの肝臓サンプルにおけるヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ発現量の減少により決定すると、ＰＢＳのみで処置した対照ＨＤＩマウスと比較して、ヒトＣＦＢ ｍＲＮＡをターゲティングするように設計されたＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがＨＤＩマウスにおけるヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ発現を阻害したことを実証している。試験した全てのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＣＦＢ発現を低減することができた。全体として、ＨＤＩ研究は、肝臓におけるＣＦＢ発現を阻害するための多数の潜在的ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを同定した。

【0247】

実施例５：カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍａｃａｑｕｅ）におけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのスクリーニング
実施例４に記載されるように、マウススクリーニング中に予め選択された全ての化合物Ａ～Ｉを、４ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量で投与した後のＣＦＢ ｍＲＮＡサイレンシングの持続時間についてカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）（ＮＨＰ）で試験した。試験した全ての動物の肝生検（ｎ＝５／化合物）は、投与前と、注射後２８日目及び５６日目に収集した。図５に示されるように、ＲＴ－ｑＰＣＲによって決定された正規化ベースラインレベル及び同時刻ＰＢＳ対照と比較して、試験されたほとんどの化合物で肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルが少なくとも５０％減少した。２つのリード化合物（化合物Ａ及びＢ）は、複数回用量試験での試験のために、単回投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中のＣＦＢ ｍＲＮＡのノックダウンレベルに基づいて選択した。

【0248】

複数回用量ＮＨＰ試験でさらに評価するために、単回用量試験から化合物Ａ及びＢを選択した。カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）に、０日目、２８日目、５６日目及び８４日目に１ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇで計４回用量を皮下投与した。ＲＴ－ｑＰＣＲによる肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡレベルの評価のために、投与前と、初回処置後２８、５６及び１１２日目に肝生検を収集した（図６Ａ）。イムノブロットキットによるＣＦＢタンパク質レベルの評価（図６Ｂ）、ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）ＡＰアッセイによる補体活性（図８）及びウサギ赤血球の溶血（図９；化合物Ｂのみを溶血アッセイで試験した）のために、投与前、初回投与後１、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８及び１１２日目に血清サンプルを収集した。ＣＦＢ肝臓ｍＲＮＡ、ＣＦＢ血清タンパク質及び機能アッセイからの対照として、ＰＢＳ処置動物を使用した。化合物Ａ又はＢによるカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の複数回処置は、それぞれ図６Ａ、６Ｂ、８及び９に示される通り、肝臓におけるＣＦＢ ｍＲＮＡサイレンシングの持続的維持、血清中の循環ＣＦＢの有意な減少、代替経路補体活性の＞９５％の減少並びに化合物Ａ及びＢの複数回投与後の溶血アッセイにおけるウサギ赤血球の溶解の完全な阻害をもたらした。

【0249】

化合物Ａ及びＢの効力は、単回及び複数回投与の両方のＮＨＰ試験について２８日目の結果を組み合わせることによって計算した。化合物Ａ（０．６５ｍｇ／ｋｇ）と化合物Ｂ（０．６５ｍｇ／ｋｇ）のおよそのＥＤ_５０は、両方の化合物について作成された用量反応曲線から算出した（図７）。

【0250】

実施例６：ＣＤ－１マウスにおけるＣＦＢ発現に関する化合物Ｊの薬物動態及び薬力学的試験
ＣＤ－１マウスに化合物Ｊを投与し、マウスの肝臓におけるＣＦＢ ｍＲＮＡのノックダウンのパーセントと、化合物Ｊ投与によるマウスの血清中のＣＦＢタンパク質の量を評価した。化合物Ｊは、マウスＣＦＢ発現をターゲティングするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであり、化合物Ａ及び化合物ＢのようなヒトＣＦＢ発現をターゲティングするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの代替物として機能する。肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡのノックダウンパーセントを、化合物Ｊ投与の結果として、ＲＴ－ｑＰＣＲを用いて測定した。血清中のＣＦＢの量は、代わりに、イムノブロットによって測定した。マウスは、化合物Ｊを０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量で受けた。

【0251】

化合物Ｊの単回投与は、肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡの用量依存的なノックダウンパーセンテージを示し、３ｍｇ／ｋｇ用量（ｎ＝５マウス／時点）を受けた動物からの肝臓では９０％超のＣＦＢ ｍＲＮＡの減少を示した。ｍＲＮＡノックダウンの最下点は、図１０Ａに示すように、３ｍｇ／Ｋｇ用量から３～２１日であった。ＣＤ－１マウスの血清中のＣＦＢタンパク質のパーセンテージを試験期間にわたって測定したところ、それも相応に抑制された（図１０Ｂ）。

【0252】

３ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量の化合物Ｊを投与したＣＤ－１マウスの血漿、脾臓、肝臓及び腎臓組織中の化合物Ｊの量を、上記用量を受けた後６７２時間にわたってステムループｑＰＣＲを用いて測定した（図１１）。薬物動態分析では、化合物Ｊの曝露が最も高いのは肝臓であり、続いて脾臓、腎臓、血漿であることが示された（図１１）。

【0253】

肝臓ＣＦＢのパーセンテージは、ＲＴ－ｑＰＣＲを用いても測定し、血清中のＣＦＢタンパク質の量は、７０日の期間にわたるイムノブロットによって定量的に評価し、ＣＤ－１マウスは、図１２Ａ及び１２Ｂにそれぞれ示すように、０、１４、２８及び４２日目に０．５ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇのいずれかで４用量の化合物Ｊを受けた。高用量（３ｍｇ／ｋｇ）の化合物Ｊを投与した動物の場合、初回投与後３、１４、１７、２８、３１、４２、４５、５６及び７０日目に低用量（０．５ｍｇ／ｋｇ）の化合物Ｊを投与した動物では同じ時点（但し、７０日目ではなく６３日目に収集）に、肝生検と血清採取を行った。図１３Ａ及び１３Ｂにそれぞれ示すように、０．５ｍｇ／ｋｇの４用量後の化合物Ｊの肝臓及び血漿濃度を、ステムループｑＰＣＲ（ＳＬ－ｑＰＣＲ）を用いて肝生検及び血漿サンプルから分析した。ＰＢＳ処置ＣＤ－１マウスを、ＣＦＢ肝臓ｍＲＮＡ及びＣＦＢ血清タンパク質レベルの両方の対照として使用した。

【0254】

この複数回用量試験では、化合物Ｊ（マウス代用物）が肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡの用量依存的なノックダウンを示し、これは７０日の期間にわたって持続されたことが明らかにされた。循環ＣＦＢタンパク質レベルの低下は、肝臓中に観察されたＣＦＢ ｍＲＮＡの減少に対応していた。さらに、投与動物からの化合物Ｊの血漿及び肝臓濃度は、隔週投与（０．５ｍｇ／ｋｇ）の場合、化合物Ｊの蓄積を示さなかった（それぞれ図１３Ａ及び１３Ｂを参照されたい）。

【0255】

さらに、雄ＣＤ－１マウスを用いた単回投与吸収、分布、代謝及び排泄（ＡＤＭＥ）試験を実施し、３、１０若しくは１００ｍｇ／ｋｇの単回皮下投与又は３ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与後の化合物Ｂの薬物動態を特性決定した。単回皮下投与の血漿中化合物Ｂ濃度は、３回皮下用量群の全てについて１時間でＴ_ｍａｘに達し、その後、主に肝臓への急速な分布段階が続いた。３ｍｇ／ｋｇの皮下用量及び静脈用量後、ゼロから最終測定可能濃度までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_ｌａｓｔ）の比較に基づき、バイオアベイラビリティは、約２２％であった。３ｍｇ／ｋｇ用量群と比較した血漿曝露は、１０ｍｇ／ｋｇ群ではほぼ用量比例的に増加し、１００ｍｇ／ｋｇ群では用量比例よりも大きく増加した。肝臓及び腎臓曝露は、投与後に観察された最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）及びＡＵＣ_ｌａｓｔに基づき、３ｍｇ／ｋｇ用量群と比較して、１０ｍｇ／ｋｇ投与群でほぼ用量比例的に増加し、１００ｍｇ／ｋｇ用量群では用量比例よりも低く増加した。肝臓における排泄半減期は、３．９４～４．９８日であった。

【0256】

実施例７：ＣＡＩＡ誘発関節炎マウスモデルにおけるＣＦＢ発現への化合物Ｊの効果
関節炎に関連する症状の治療に対する化合物Ｊの効果を、関節リウマチの単純モデルであるコラーゲン抗体惹起関節炎（ＣＡＩＡ）誘発関節炎マウスモデルを用いて検証した。ＣＡＩＡ誘発関節炎マウスモデルは、０日目にコラーゲン抗体をマウスに投与し、続いて３日目にＬＰＳブースターを投与することによって作製した。化合物Ｊは、予防研究及び治療研究の両方で試験された。動物には、予防研究のために－７日目に１．５若しくは３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊを投与し（図１４Ａ）、且つ治療研究のために５日目の疾患発症後に投与した（図１４Ｂ）。後肢の炎症を１０日目に視覚的に分析し、予防及び治療研究の両方の結果をそれぞれ図１５Ａ及び１５Ｂに示す。化合物Ｊによる予防的処置は、このモデル特有の特徴である後肢の腫脹を予防した（図１５Ａ）。化合物Ｊによる治療的処置は、ＰＢＳ処置対照動物と比較すると、単回投与後の臨床疾患発現を完全に逆転させた（図１５Ｂ）。

【0257】

後肢及び膝の生検にヘマトキシリン及びエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色を実施し、予防的に化合物Ｊの３ｍｇ／ｋｇの３用量（図１６及び１８）で処置したマウスにおける局所単核細胞浸潤の減少を示した。さらに、６ｍｇ／ｋｇの単回用量の化合物Ｊによる治療的処置の結果としての局所炎症の減少を証明するために、リンパ球（ＣＤ４５陽性細胞）、白血球（ＣＤ１１ｂ陽性細胞）及びマクロファージ（Ｆ４／８０陽性細胞）マーカー染色を、図１９、２０及び２１にそれぞれ示すように生検サンプルに対して実施した。生検サンプルもサフラニンＯで染色して、ＣＡＩＡ誘発関節炎マウスモデルの膝の軟骨を視覚化した。３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊで処置した動物は、予防的（図１７及び図１８）に処置した場合、ＰＢＳ処置マウスと比較して、軟骨びらんの顕著な減少を示した。３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊによる処置を受けた又は受けていないＣＡＩＡ誘発関節炎マウスの局所炎症部位での補体発現を評価するために、ＣＦＢ及びＣＤ４５ ｍＲＮＡへのインサイチュハイブリダイゼーションを用いた実験を生検サンプルで実施した（これは、図２２に示す）。化合物ＪによるＣＦＢの肝ノックダウンは、対照群としてのＰＢＳ処置動物と比較して、化合物Ｊによる治療的処置の場合、リンパ球（ＣＤ４５陽性細胞）の浸潤及び局所ＣＦＢ ｍＲＮＡ発現を低減した。

【0258】

実施例８：多発性硬化症マウスモデルにおけるＣＦＢ発現への化合物Ｊの効果。
ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）誘発実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）マウスモデルを使用して、神経炎症及び脱髄の免疫介在性メカニズムを調べることができる。ＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスを３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊ（ｎ＝２実験）で予防的に処置した。化合物Ｊによる処置後の肝臓ＣＦＢ ｍＲＮＡレベル並びに血清中のＣＦＢタンパク質を、図２５Ａ及び２５Ｂに示すようにそれぞれＲＴ－ｑＰＣＲ及びイムノブロットを用いて評価した。同様に、化合物Ｊによる処置後に残っているＣＦＢ ｍＲＮＡのパーセンテージ並びに３ｍｇ／ｋｇの用量の化合物Ｊで処置した後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスの血清中のＣＦＢの量を、ＰＢＳで処置した動物と比較して評価した。化合物ＪによるＣＦＢの肝臓ノックダウンは、疾患の重症度を低下させた（図２３）。

【0259】

腰椎脊髄サンプルも、化合物Ｊで処置したＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスから得た。図２４に示すように、髄鞘形成並びに単核細胞浸潤を視覚化するために、Ｈ＆Ｅ染色と共にルクソールファストブルー染色を脊髄サンプルに実施した。図２４に示すように、ルクソールファストブルー脊髄サンプルを、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊ、ＰＢＳで処置した疾患動物間で比較した。化合物Ｊで処置したＭＯＧ誘発動物は、脱髄の中程度の減少及び免疫細胞浸潤の予防を示した。

【0260】

実施例９：ヒトにおける化合物Ｂによる多発性硬化症の治療
多発性硬化症に罹患している対象は、化合物Ｂを含有する（例えば、約３ｍｇ／ｋｇの用量で）医薬組成物で処置され得る。対象は、週に１回の頻度で例えば筋肉内注射によって約１２ヶ月以上の期間（例えば、症状が解消又は安定するまで）組成物を投与され得る。月に約１回、対象の症状及び血清ＣＦＢレベルを臨床医が評価して、化合物Ｂの有効性を評価することができる。対象の血清ＣＦＢは、血清サンプルを用いて定量され得、化合物Ｂを投与される前の対象の血清中に見出されるＣＦＢタンパク質の量若しくは対照量のＣＦＢタンパク質又は正常な対象（例えば、無病の対象）からの血清サンプル中に存在するＣＦＢタンパク質の量と比較され得る。化合物Ｂによる処置は、化合物Ｂによる処置前の血清中のＣＦＢタンパク質の量と比較して、血清中のＣＦＢタンパク質の量が少なくとも１０％減少した場合に有効であると判定され得る。加えて、多発性硬化症に関連する対象の症状、例えばかすみ目、不明瞭な発話、眩暈、打診痛、協調の欠如及び不安定歩行などを臨床医が評価して、化合物Ｂを投与される前に対象が経験していた症状と比較して、対象が経験している症状のいずれか又は全てに軽減があるか否かを評価することができる。

【0261】

実施例１０：ヒトにおける化合物Ｂによる関節炎の処置
関節炎と診断された対象は、化合物Ｂを含有する医薬組成物で処置され得る（例えば、約１．５ｍｇ／ｋｇの用量で）。対象は、月に約１回の頻度で例えば筋肉内注射によって約６ヶ月以上の期間にわたって（例えば、症状が解消するか又は安定するまで）組成物を投与され得る。例えば、１ヶ月又は２ヶ月毎に化合物Ｂの有効性を評価するために、対象は、臨床医によって（例えば、対象の症状及び／又は血清ＣＦＢレベルを評価することにより）評価され得る。対象の血清ＣＦＢは、血清サンプルを用いて定量され得、化合物Ｂが投与される前の対象の血清中に見出されるＣＦＢタンパク質の量若しくは対照量のＣＦＢタンパク質若しくは正常な対象（例えば、無病対象）からの血清サンプル中に存在するＣＦＢタンパク質の量と比較され得る。化合物Ｂによる処置は、化合物Ｂによる処置前の血清中のＣＦＢタンパク質の量と比較して、血清中のＣＦＢタンパク質の量が減少した場合、即ち少なくとも１０％減少した場合に有効であると判定され得る。加えて、関節炎に関連する対象の症状、例えば疼痛、こわばり、腫脹、発赤及び可動域の減少などを臨床医が評価することにより、化合物Ｂを投与される前に対象が経験していた症状と比較して、対象が経験している症状のいずれか又は全てに軽減があるか否かを評価することができる。

【0262】

実施例１１：カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ）及びマウスにおける毒性の評価
皮下投与した化合物Ｂの安全性及び忍容性をカニクイザル及びマウスで評価した。

【0263】

安全性薬理試験では、０．９％塩化ナトリウムを皮下投与した後、化合物Ｂの用量を増加しながら（３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇ）、同じカニクイザルに７日毎に１回投与した。どの用量レベルでも、心血管系及び神経系への影響は観察されなかった。３００ｍｇ／ｋｇでは、呼吸器系評価の際、最小限の分時換気量（ｍｉｎｕｔｅ ｖｏｌｕｍｅ）低下及び最小限の１回換気量（ｔｉｄａｌ ｖｏｌｕｍｅ）低下が認められた。これらの呼吸器系の所見は重篤度が最小限であり、試験期間を通して全ての動物が良好な健康状態を維持したことから、無毒性とみなされた。従って、本試験における無毒性レベル（ＮＯＡＥＬ）は、３００ｍｇ／ｋｇであると決定された。

【0264】

遺伝毒性評価（インビトロ小核アッセイ及びインビトロ細菌復帰転突然変異アッセイを含む）では、小核の誘発及変異原活性化についてそれぞれ陰性であった。

【0265】

６ヵ月間のマウス試験では、化合物Ｂの反復皮下投与（０、３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇを４週間毎に計７用量）による潜在的毒性並びに８週間の回復期間後の何らかの作用の可逆性、持続性又は発生遅延を評価した。本試験における用量レベルの範囲は、意図される最高臨床用量での予想曝露の少なくとも１０倍の曝露倍数を達成するように選択した。化合物Ｂの毒物動態学的特性も決定した。無毒性臨床病理学的所見には、好中球数（それぞれ２．０８倍及び１．３９倍）、単球数（それぞれ２．９０倍及び２．３８倍）並びにリンパ球数（それぞれ１．９２倍及び１．３５倍）が増加し、それにより、１７１日目に３００ｍｇ／ｋｇ／日群の雄及び雌で総白血球数（それぞれ１．９４倍及び１．３８倍）が増加し、１７１日目に３００ｍｇ／ｋｇ／日群の雄でコレステロール濃度（６２．９倍）が減少したことが含まれた。全ての臨床病理所見の完全な可逆性は、回復期間終了時に明らかであった。無毒性顕微鏡的所見には、以下が含まれた：肝細胞カリオサイト肥大、それに伴う肝臓／胆嚢重量の増加、肝臓の混合細胞炎症、腎臓の細胞質内好塩基性顆粒及び組織球の皮下浸潤、真皮の混合細胞炎症並びに肝細胞カリオサイト肥大による終末安楽死時の注射部位における筋層カルノサスの変性、壊死及び／又は再生、肝臓の混合細胞炎症、組織球の皮下浸潤並びにリカバリー安楽死の際に依然として存在した注射部位の筋層カルノサスの変性、壊死及び／又は再生。

【0266】

これらの動物の肝臓所見には、微小胞脂肪の変化、単細胞壊死、カリオサイト肥大が含まれた。肝臓は、終末安楽死時の標的組織と考えられたため、これらの死亡マウスに見られた肝臓の変化は、化合物Ｂに関連する可能性があると考えられた。２つの主要試験の死亡例に加え、毒物動態学群で化合物Ｂとの関連性が不明な早期死亡例が２匹あった。これらの動物は、死亡が確認されたか（１４日目の３００ｍｇ／ｋｇ群の雌）又は瀕死のために安楽死させた（９９日目の３０ｍｇ／ｋｇ群の雄）ものであった。これらの動物からの肉眼による所見で関連の可能性があるものは、３０ｍｇ／ｋｇ群の雄で淡色に変色した肝臓であった。主要試験の１００ｍｇ／ｋｇ及び３００ｍｇ／ｋｇ群の雌で観察された死亡率に基づいて、ＮＯＡＥＬは、雌の場合３０ｍｇ／ｋｇ、雄については３００ｍｇ／ｋｇと考えられた。これらの用量は、１６９日目の３０ｍｇ／ｋｇ／日群の雌及び３００ｍｇ／ｋｇ群の雄についてそれぞれ１７，４００及び６０９，０００ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬの血漿中平均ＡＵＣｌａｓｔ値並びに６４９０及び１４０，０００ｎｇ／ｍＬの平均Ｃｍａｘ値に相当した。

【0267】

９ヵ月間のサル試験では、反復皮下投与（４週間毎に０、３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂを計１０回用量）による潜在的毒性及び８週間の回復期間後の何らかの作用の可逆性、持続性又は発生遅延が評価された。本試験における用量レベルの範囲は、意図される最高臨床用量での予想曝露の少なくとも１０倍の曝露倍数を達成するように選択した。化合物Ｂの毒物動態学的特性及び薬力学的作用を評価した。≧３０ｍｇ／ｋｇでの本試験の投与段階終了時に、肝臓の好酸球性肝細胞球並びに複数の組織（消化器系、泌尿生殖器系、リンパ系、脳（脈絡叢）、眼（脈絡膜又は毛様体）、心臓、副腎、甲状腺、皮膚、骨格筋、大腿脛骨関節及び／又は皮下投与部位）における空胞化／顆粒状マクロファージという最小から中程度の無毒性顕微鏡的所見が認められた。これらの所見は、回復段階終了後も低い発生率及び／又は重症度で持続しており、これは、依然として不完全な回復が進行であることを示している。２８日目までに血清ＣＦＢタンパク質濃度の＞９５％の低下及び補体代替経路の補体機能活性の＞９５％の低減並びに安楽死後の肝ＣＦＢ ｍＲＮＡ発現の＞８９％の低減により示されるように、全ての用量レベルでの曝露が予想され、且つ相互に関連する薬力学的効果をもたらした。投与期間後に毒性所見が認められなかったことから、ＮＯＡＥＬは、３００ｍｇ／ｋｇであると決定され、関連するＡＵＣ_ｌａｓｔは、１３６００００ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬ、Ｃｍａｘは、６６２００ｎｇ／ｍＬであった（雄及び雌合わせて、２５３日目）。

【0268】

実施例１２．ＣＦＢ評価アッセイ
血漿又は組織中の化合物Ｂの評価、ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）補体機能活性アッセイ、循環ＣＦＢの評価、ＣＦＢ ｍＲＮＡ発現レベル及び薬物動態アッセイを含む様々なアッセイを本明細書に記載のように使用して、ＣＦＢレベルに対する化合物Ｂの効果を特徴付けることができる。

【0269】

血漿中の化合物Ｂ
マウス及びサルの化合物Ｂの血漿中濃度は、高速液体クロマトグラフィー－蛍光検出（ＨＰＬＣ－ＦＤ）分析法により測定した。３０μＬの血漿サンプル中の分析物（化合物Ｂ）をプロテイナーゼＫで酵素処理し、化合物Ｂのアンチセンス鎖と配列相補性を有する蛍光プローブ（ペプチド核酸；２２－ｍｅｒペプチド核酸ＰＮＡプローブ）とハイブリダイズさせ、蛍光検出器を備える高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に注入した。クロマトグラフィー分離は、ＤＮＡＰＡＣ（商標）ＰＡ２００分析カラムを用いたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステム上の勾配システムを用いて実施した。移動相は、移動相Ａが３０％アセトニトリル（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２Ｍ尿素）であり、移動相Ｂが移動相Ａ中の１Ｍ ＮａＣｌＯ_４であった。ＦＬ検出器により、４３６ｎｍ（Ｅｘ）～４８４ｎｍ（Ｅｍ）のシグナルをモニターした。化合物Ｂの濃度は、２．００ｎｇ／ｍＬ～２０００ｎｇ／ｍＬの定量範囲にわたり、これらの範囲の下限及び上限をそれぞれ定量下限（ＬＬＯＱ）及び定量上限（ＵＬＯＱ）と定義して、最小二乗法（１／ｃ２重み付け）を用い、線形回帰を含むＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓ ６．７０を使用して算出した。このアッセイは、例えば、上述の実施例５及び６で使用した。

【0270】

組織中の化合物Ｂ
サル及びマウス両者の肝臓及び腎臓中の化合物Ｂ濃度をＨＰＬＣ－ＦＤ分析法により測定した。５０μＬのアリコート量（組織ホモジネート）中の２．５ｍｇの組織サンプルを用いて、組織サンプル中の化合物ＢをプロテイナーゼＫで酵素処理した後、化合物Ｂのアンチセンス鎖と相補的な配列を有する２２ｍｅｒのＰＮＡプローブとのハイブリダイゼーションを行った。処理したサンプルを、蛍光検出器を備えるＨＰＬＣに注入した。クロマトグラフィー分離は、ＤＮＡＰＡＣ（商標）ＰＡ２００分析カラムを用いたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステム上の勾配システムを用いて行った。移動相は、移動相Ａが３０％アセトニトリル（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２Ｍ尿素）であり、移動相Ｂが移動相Ａ中の１Ｍ ＮａＣｌＯ_４である。化合物Ｂの濃度は、３０．０ｎｇ／ｍＬ～２０，０００ｎｇ／ｍＬの定量範囲にわたり、これらの範囲の下限及び上限をそれぞれＬＬＯＱ及びＵＬＯＱと定義して、最小二乗法（１／ｃ２重み付けを含む）を用い、線形回帰を含むＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓ ６．８９を使用して算出した。このアッセイは、例えば、上述の実施例５及び６で使用した。

【0271】

ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）補体機能活性アッセイ（ＣＣＰ、ＣＡＰ、ＣＬＰ）
補体活性化の結果として生じるヒト終末補体複合体（Ｃ５ｂ ９）複合体を検出するために、ネオアンチゲンに特異的な標識抗体を用いて、ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）補体系スクリーニングアッセイを用いて、補体古典経路（ＣＣＰ）、ＣＡＰ及び補体レクチン経路活性を評価した。これらのアッセイは、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）Ｃ５ｂ－９を検出することもできる。生成されたネオアンチゲンの量は、個別の経路の機能的活性のレベルに比例した。アッセイのマイクロタイターストリップのウェルを、古典的若しくは代替的又はレクチン経路の特異的活性化剤でコーティングした。サル血清サンプルは、それぞれの経路のみが活性化されたことを確実にする遮断薬を含む希釈液で希釈した。ウェルを洗浄し、発現したネオアンチゲンに対する特異的アルカリホスファターゼ標識抗体を用いて、Ｃ５ｂ－９を検出した。補体活性化の量は、４０５ｎｍの吸光度により測定した発色強度と相関した。試験キットで提供された陽性対照の値は、１００％補体活性化として定義された。全ての測定値は、補体活性のパーセント（％）として表され、以下のように決定された：
［（サンプル－陰性対照）／（陽性対照－陰性対照）］＊１００
このアッセイは、例えば、上記の実施例５に使用された。

【0272】

タンパク質レベル
カニクイザル循環血液中のＢ因子タンパク質レベルの量は、サルサンプル中のトランスフェリン（ＴＦ）レベルに対して正規化した相対ＣＦＢ血清タンパク質濃度の測定値を用いて、ウェスタンブロット法により評価した。サンプルバッファー中に混合させた希釈血清サンプルを蛍光マスターミックスと合わせた。サンプルを９５℃で５分間沸騰させ、ボルテックスし、スピンダウンした。サンプルを氷上に置き、ウェスタンブロットで泳動させた。定量は、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅソフトウェアを用い、製造者の指示に従って実施した。治療群におけるＣＦＢタンパク質の減少の程度は、ＰＢＳ処置対照群のサルＣＦＢレベルを１００％として、同じ試験日のＰＢＳ処置対照群の平均レベルに対する発現のパーセントとして計算した。平均値±標準偏差のグラフを作成し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用いてデータを解析した。対応のないｔ検定を実施して、化合物Ｂ治療群のサルＣＦＢタンパク質レベルを、同じ試験日のＰＢＳ処置対照群と比較した。

【0273】

循環因子Ｂタンパク質レベルの評価は、ヒトにおける補体因子Ｂ濃度の定量測定のために設計された因子Ｂ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キットを用いても評価した。補体因子Ｂ特異的抗体を９６ウェルプレート上にプレコートし、遮断した。標準物質又は試験サンプルをウェルに添加した後、補体因子Ｂ特異的ビオチン化検出抗体を添加し、その後、続いて洗浄バッファーで洗浄した。ストレプトアビジン－ペルオキシダーゼコンジュゲートを添加し、未結合コンジュゲートを洗浄バッファーで洗い流した。その後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を使用して、ストレプトアビジン－ペルオキシダーゼ酵素反応を視覚化した。ＴＭＢをストレプトアビジン－ペルオキシダーゼで触媒し、酸性停止液を添加した後に黄色に変化する青色の生成物を生成した。黄色の着色の密度は、プレートにおける補体因子Ｂ捕捉量に正比例した。サンプルの逆算濃度は、較正標準によって生成された曲線当てはめ回帰プログラムによって決定した。このアッセイは、例えば、上記の実施例５に使用された。

【0274】

ＣＦＢ ｍＲＮＡ発現レベル
カニクイザル肝臓中のＢ因子の量は、逆転写後のデュープレックスリアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）アッセイを用いて、カニクイザル肝臓から単離したＲＮＡ中のペプチジル－プロリル－シス－トランスイソメラーゼＢ（ＰＰＩＢ）ｍＲＮＡ発現に対するＢ因子ｍＲＮＡ発現を測定することにより決定した。初めに、凍結肝臓組織からｍＲＮＡを単離し、定量した。続いて、ｍＲＮＡを相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に転写した。次に、このｃＤＮＡをｑＰＣＲ反応の鋳型として用いて、ＰＰＩＢに対する正規化によりＢ因子ｍＲＮＡレベルを測定した。治療群におけるＢ因子ｍＲＮＡの発現量は、未治療群又は投与前群に対する発現（ＰＰＩＢ ｍＲＮＡレベルに対して正規化）のパーセントとして算出し、対照群におけるＢ因子ｍＲＮＡ発現を１００％と設定した。このアッセイは、例えば、上述の実施例５及び１１で使用した。

【0275】

薬物動態アッセイ
ヒト血漿中の化合物Ｂの濃度は、ＨＰＬＣ－ＦＤ分析法により測定する。３０μＬの血漿サンプル中の分析物（化合物Ｂ）をプロテイナーゼＫで酵素処理した後、化合物Ｂのアンチセンス鎖と配列相補性を有する蛍光プローブ（ペプチド核酸；２２－ｍｅｒ ＰＮＡプローブ）とハイブリダイズさせ、蛍光検出器を備えたＨＰＬＣに注入する。クロマトグラフィー分離は、ＤＮＡＰＡＣ（商標）ＰＡ２００分析カラムを用いたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステム上の勾配システムを用いて実施する。移動相は、移動相Ａが３０％アセトニトリル（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２Ｍ尿素）であり、移動相Ｂが移動相Ａ中の１Ｍ ＮａＣｌＯ_４であった。ＦＬ検出器により、４３６ｎｍ（Ｅｘ）～４８４ｎｍ（Ｅｍ）のシグナルをモニターした。化合物Ｂの濃度は、２．００ｎｇ／ｍＬ～２０００ｎｇ／ｍＬの定量範囲にわたり、これらの範囲の下限及び上限をそれぞれＬＬＯＱ及びＵＬＯＱと定義して、最小二乗法（１／ｃ２重み付け）を用い、線形回帰を含むＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓ ６．７０を使用して算出した。

【0276】

抗薬物抗体アッセイ
化合物Ｂに対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイは、ヒト血清及び電気化学発光（ＥＣＬ）ブリッジングアッセイを使用して実施され得る。陽性対照（ＰＣ）は、キーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）共役化合物Ｂと、修飾化合物Ｂ配列に対応する様々な長さのＫＬＨ共役オリゴヌクレオチドとからなる免疫原性カクテルに対して免疫されたウサギから作製される。ＰＣ、陰性対照（ＮＣ）及び試験サンプルは、周囲室温で酸解離ステップに付され、次いでＴＲＩＳ、ビオチン－化合物Ｂ及びルテニウム標識化合物Ｂを含むプレートに添加されて、サンプル中に存在する標識化合物Ｂと化合物Ｂ抗体との間に架橋複合体の形成を可能にし得る。インキュベーション後、ＮＣ、ＰＣ及び試験サンプルをストレプトアビジン被覆プレートに移し、暗所で１時間インキュベートし、その間に薬物がプレートに結合して、ＡＤＡ架橋複合体を捕捉する。次に、プレートを洗浄し、メソスケールディスカバリー（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（登録商標）（ＭＳＤ（登録商標））リードバッファーを追加して、サンプル中に存在するＡＤＡの量に正比例するＥＣＬ信号を生成し得る。

【0277】

実施例１３：膜性腎症ラットモデルにおける化合物Ｊの効果
膜性腎症に関連する症状に対する化合物Ｊの効果を、膜性腎症の単純なモデルである受動的ヘイマン腎炎（ＰＨＮ）ラットモデルを用いて試験した。ＰＨＮラットモデルは、０日目に単回用量のヒツジ抗ラットＦＸ１ａ抗体をラットに投与することにより作製した。

【0278】

化合物Ｊを予防試験で試験した。この試験では、－１４、－７及び０日目に１２ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊを動物に投与した（図２６）。腎機能は、図２６に示すように、動物から毎日採取した尿サンプルから測定したタンパク質：クレアチニンレベルの比として評価した。化合物Ｊによる予防的処置は、ＰＢＳ処置したＰＨＮ対照動物と比較して、このモデルの特徴であるタンパク尿の発生を阻止した（図２６）。

【0279】

ウサギ赤血球の溶血により補体活性を評価するために、疾患誘発前－１日目及び発症後６日目に血清サンプルを採取した（図２７）。健康及びＰＢＳ処置ＰＨＮ動物を、ＣＦＢ機能アッセイ用の対照として用いた。化合物Ｊを２用量（１日目の血清）又は３用量（６日目）投与した後のＰＨＮラットは、溶血アッセイにおけるウサギ赤血球の溶血によって測定すると、代替経路補体活性が、健康又はＰＢＳ処置ＰＨＮ対照動物の両方から観察された溶血レベルと比較して＞９５％減少を示した（図２７）。ＰＢＳを同じ複数回用量レジメンで投与して、疾患対照群を構成し、模擬（ｓｈａｍ）動物を健康な対照として使用した。

【0280】

他の実施形態
本明細書で言及された全ての刊行物、特許及び特許出願は、各々の独立した刊行物又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的且つ個別に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態が本明細書に記載されているが、当業者は、本明細書に記載される原則に概ね従う変形形態、使用又は改変形態を含め、且つ当技術分野で周知の実施又は慣例的実施の範囲内にある、本開示からのそのような逸脱を含め、さらなる修正形態及び実施形態が包含されると共に、記載される以上の本質的な特徴に適用され得、且つ以下の特許請求の範囲に記載されることを理解するであろう。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E-1】

【図2E-2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【配列表】

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【国際調査報告】