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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-01-30
(54)【発明の名称】腫瘍を治療するための医薬組み合わせ及び使用
(51)【国際特許分類】
A61K 45/06 20060101AFI20250123BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20250123BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20250123BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20250123BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20250123BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20250123BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20250123BHJP
A61K 31/4523 20060101ALI20250123BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250123BHJP
A61K 31/428 20060101ALI20250123BHJP
C12N 15/113 20100101ALN20250123BHJP
【ＦＩ】
A61K45/06
A61P43/00 121
A61P43/00 111
A61P35/00
A61P35/02
A61K31/506
A61K31/4439
A61K31/5377
A61K31/4523
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K31/428
C12N15/113 Z ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024543239
(86)(22)【出願日】2023-01-18
(85)【翻訳文提出日】2024-09-02
(86)【国際出願番号】 CN2023072974
(87)【国際公開番号】W WO2023138630
(87)【国際公開日】2023-07-27
(31)【優先権主張番号】202210071792.6
(32)【優先日】2022-01-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202211160420.7
(32)【優先日】2022-09-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522196582
【氏名又は名称】▲應▼世生物科技（南京）有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】▲張▼ 宝袁
(72)【発明者】
【氏名】▲劉▼ 学彬
(72)【発明者】
【氏名】王 在▲キ▼
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA24
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZC202
4C084ZC751
4C085AA13
4C085BB11
4C085EE03
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC36
4C086BC42
4C086BC73
4C086BC84
4C086GA02
4C086GA07
4C086GA08
4C086GA12
4C086MA03
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZB26
4C086ZC20
4C086ZC75
(57)【要約】
本開示は、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を併用して腫瘍を治療することに関する。本開示はまた、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫを併用して腫瘍を治療することに関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の、対象において腫瘍を治療するための薬物の製造における使用であって、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される使用。
【請求項2】
対象において腫瘍を治療するためのＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の医薬組み合わせ製品であって、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される医薬組み合わせ製品。
【請求項3】
腫瘍を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量のＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を同時に又は順次に投与することを含む方法。
【請求項4】
前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用、医薬組み合わせ製品又は方法。【化1】
【請求項5】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用、医薬組み合わせ製品又は方法。
【請求項6】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用、医薬組み合わせ製品又は方法。
【請求項7】
前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用、医薬組み合わせ製品又は方法。
【請求項8】
前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、結腸癌、直腸癌、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用、医薬組み合わせ製品又は方法。
【請求項9】
（ａ）ＦＡＫ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と、
（ｃ）免疫チェックポイント阻害剤と、を含む、キット又は薬学的に許容される組成物。
【請求項10】
前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、請求項９に記載のキット又は組成物。【化2】
【請求項11】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項９に記載のキット又は組成物。
【請求項12】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、請求項９～１１のいずれか一項に記載のキット又は組成物。
【請求項13】
前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、請求項９～１２のいずれか一項に記載のキット又は組成物。
【請求項14】
薬物として用いられる、請求項９～１３のいずれか一項に記載のキット又は組成物。
【請求項15】
ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の、腫瘍を治療するための薬物の製造における使用であって、前記ＦＡＫ阻害剤は、前記ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強する、使用。
【請求項16】
腫瘍の治療において、ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強するＦＡＫ阻害剤。
【請求項17】
腫瘍を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量のＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤を同時に又は順次に投与することを含み、前記ＦＡＫ阻害剤が前記ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強する方法。
【請求項18】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の使用、ＦＡＫ阻害剤又は方法。
【請求項19】
前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の使用、ＦＡＫ阻害剤又は方法。【化3】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、２０２２年１月２１日に提出された中国特許出願第２０２２１００７１７９２．６号の優先権と、２０２２年９月２２日に提出された中国特許出願第２０２２１１１６０４２０．７号の優先権とを主張するものであり、本明細書全体を通じて、上記中国特許出願に開示された内容は、本願の一部として組み込まれる。
【0002】
本発明は、薬物化学の分野に属する。具体的には、本発明は、接着斑キナーゼ（Ｆｏｃａｌ Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｋｉｎａｓｅ、ＦＡＫ）阻害剤と他の薬物を併用して腫瘍を治療することに関する。
【背景技術】
【0003】
腫瘍は、人々の健康を脅かす第２位の病気である。免疫原性細胞死（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ、ＩＣＤ）は、プログラム細胞死に基づく相加効果である。癌細胞は、化学療法薬物又は標的治療薬物に接触するとともに、細胞内部のストレスシグナルを活性化する可能性があり、このようなストレスシグナルは、小胞体ストレス（ＥＲ ｓｔｒｅｓｓ）と活性酸素ストレス（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ）を含む。ストレスシグナルの作用下で、細胞はまず、ストレスの修復を試み、ストレスによる損傷が修復能力を超えると、細胞は、プログラム死亡プロセスを開始する。このプロセスでは、損傷関連分子（Ｄａｍａｇｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎｓ、ＤＡＭＰｓ）の放出が伴うことが多い。このようなＤＡＭＰｓは、有機体内の抗原提示細胞（Ａｎｔｉｇｅｎ－ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ、ＡＰＣ）のパターン認識受容体によって特異的に認識され、ＡＰＣ成熟、分化及び活性化を誘導し、エフェクターＴ細胞などの免疫細胞に段階的に提示し、それにより、免疫細胞は、抗原記憶を形成し、同じ由来の腫瘍細胞を再度発見すると、特異的に認識して腫瘍細胞を殺す。ＩＣＤによって開始された腫瘍に対する新たな特異的免疫反応は、免疫チェックポイント阻害剤（Ｉｍｍｕｎｏ－ｃｈｅｃｋ ｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ＩＣＩ）の感受性を高めることにより、免疫チェックポイント阻害剤の作用を増強し、持続的な免疫記憶を持つ抗腫瘍反応を生じることができる。
【0004】
ＦＡＫは、タンパク質チロシンキナーゼ２（ＰＴＫ２）とも呼ばれ、非受容体チロシンキナーゼであり、接着斑複合体の重要な成分である。ＦＡＫは、は、インテグリン及び成長因子シグナルを媒介して腫瘍細胞の侵襲、増殖及び生存を調節することにおいて重要な役割を果たす。
【0005】
ＭＥＫ１は、ＭＡＰ２Ｋ１とも呼ばれ、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ（ＲＡＳ－ＲＡＦ－ＭＥＫ－ＥＲＫ）シグナル経路において重要な役割を果たす。該シグナル経路は、様々な刺激反応性によって活性化され、様々な種類の真核細胞の増殖、生存及び分化を調節することができ、特に、腫瘍細胞において該シグナル経路に過剰活性化の現象が現れる。コビメチニブは、ＭＥＫ１及びＭＥＫ２を選択的に阻害して、ＥＲＫ１／２リン酸化を低下させ、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル経路を阻害することにより、細胞増殖を阻害し、腫瘍細胞のアポトーシスを促進することができる。２０１４年に、ＦＤＡは、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ（Ｂ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤）の併用を承認し、Ｂ－ＲＡＦ Ｖ６００Ｅ又はＶ６００Ｋ突然変異患者の切除不能又は転移性悪性黒色腫に適用する。臨床試験において、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ被験者は下痢、吐き気、嘔吐、皮疹及び発熱などの不良反応を示した。
【0006】
いくつかの化学療法薬が癌細胞のＩＣＤを誘発することが観察され、ＩＣＤは該療法の抗腫瘍作用に役立つと理解されている。重要なことに、ＩＣＤは、免疫系を刺激して癌を攻撃し、特に抗ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１と併用すると、持続的な抗腫瘍効果をもたらすことができる。抗ＰＤ－１が化学療法及び標的治療と併用していくつかの成功を獲得したが、多くの臨床試験、特に、卵巣癌（ＪＡＶＥＬＩＮ Ｏｖａｒｉａｎ ２００）及びＰｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ及びｌｅｎｖａｔｉｎｉｂの併用肺癌の臨床試験は、失敗した。したがって、化学療法薬物又は標的薬物によるＩＣＤの誘導を増強することができる薬物をさらに探して、腫瘍治療の反応率及び長期の利益を得る可能性を高める必要がある。
【発明の概要】
【0007】
本開示の一態様に係る、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の、対象において腫瘍を治療するための薬物の製造における使用において、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される。
【0008】
本開示の別の態様に係る、対象において腫瘍を治療するための、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の医薬組み合わせ製品において、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される。
【0009】
本開示のまた別の態様に係る腫瘍を治療する方法は、それを必要とする対象に治療有効量のＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を同時に又は順次に投与することを含む。
【0010】
本開示の別の態様に係るキット又は薬学的に許容される組成物は、（ａ）ＦＡＫ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と、（ｃ）免疫チェックポイント阻害剤と、を含む。
【0011】
本開示の別の態様に係るＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の、腫瘍を治療するための薬物の製造における使用において、前記ＦＡＫ阻害剤は、前記ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強する。
【0012】
本開示の別の態様に係るＦＡＫ阻害剤は、腫瘍の治療において、ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強する。
【0013】
本開示の別の態様に係る腫瘍を治療する方法は、それを必要とする対象に治療有効量のＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤を同時に又は順次に投与することを含み、前記ＦＡＫ阻害剤が前記ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強する。
【0014】
本開示の別の態様は、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の、腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用を提供する。
【0015】
本開示の別の態様は、ＦＡＫ阻害剤の、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤との腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用を提供する。
【0016】
本開示の別の態様は、ＭＥＫ阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と共に腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用を提供する。
【0017】
本開示の別の態様は、免疫チェックポイント阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤と共に腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用を提供する。
【0018】
本開示の別の態様は、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の、併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用を提供する。本開示の別の態様は、ＦＡＫ阻害剤の、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【0019】
本開示の別の態様は、ＭＥＫ阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【0020】
本開示の別の態様は、免疫チェックポイント阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【0021】
本開示の別の態様に係るキットは、ＦＡＫ阻害剤と、該ＦＡＫ阻害剤が、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用して腫瘍を治療するために使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。
【0022】
本開示のまた別の態様に係るキットは、ＭＥＫ阻害剤と、該ＭＥＫ阻害剤が、ＦＡＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用して腫瘍を治療するために使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。
【0023】
本開示のまた別の態様に係るキットは、免疫チェックポイント阻害剤と、該免疫チェックポイント阻害剤が、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤と併用して腫瘍を治療するために使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。
【0024】
本開示の別の態様に係る腫瘍を治療する方法は、それを必要とする対象に治療有効量のＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤を投与することを含む。
【0025】
本開示のまた別の態様に係るＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の医薬組み合わせ製品は、それを必要とする対象において腫瘍を治療する。
【0026】
本開示のまた別の態様は、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の、腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用を提供する。
【0027】
本開示のまた別の態様は、ＦＡＫ阻害剤の、ＭＥＫ阻害剤と共に腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用を提供する。
【0028】
本開示のまた別の態様は、ＭＥＫ阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤と共に腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用を提供する。
【0029】
本開示のまた別の態様は、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の、併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【0030】
本開示のまた別の態様は、ＦＡＫ阻害剤の、ＭＥＫ阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【0031】
本開示のまた別の態様は、ＭＥＫ阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【0032】
本開示のまた別の態様に係るキットは、ＦＡＫ阻害剤と、該ＦＡＫ阻害剤が、ＭＥＫ阻害剤と併用して腫瘍を治療するために使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。
【0033】
本開示のまた別の態様に係るキットは、ＭＥＫ阻害剤と、該ＭＥＫ阻害剤が、ＦＡＫ阻害剤と併用して腫瘍を治療するために使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。
【0034】
任意選択的に、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである。
【化1】
【0035】
前記Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂは、デファクチニブとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が１３４５７１３－７１－４であり、前記ＧＳＫ２２５６０９８は、ＣＡＳ番号が１２２４８８７－１０－８であり、前記ＰＦ－００５６２２７１は、ＣＡＳ番号が７１７９０７－７５－０であり、前記ＶＳ－４７１８は、ＣＡＳ番号が１０６１３５３－６８－１であり、前記ＡＰＧ－２４４９は、亜盛医薬が開発したものであり、前記ＡＭＰ９４５は、ＣＡＳ番号が１３９３６５３－３４－３である。
【0036】
任意選択的に、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である。
【0037】
前記トラメチニブは、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ／Ｍｅｋｉｎｉｓｔとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が８７１７００－１７－３であり、前記コビメチニブは、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ／Ｃｏｔｅｌｌｉｃとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が９３４６６０－９３－２であり、前記ビニメチニブは、Ｍｅｋｔｏｖｉ／ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が６０６１４３－８９－９であり、前記セルメチニブは、Ｋｏｓｅｌｕｇｏ／Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が６０６１４３－５２－６であり、その硫酸塩のＣＡＳ番号が９４３３３２－０８－９であり、前記ＰＤ－３２５９０１は、Ｍｉｒｄａｍｅｔｉｎｉｂ又はＰＤ－０３２５９０１とも呼ばれ、ＣＡＳ番号が３９１２１０－１０－９であり、前記ＴＡＫ－７３３は、ＲＥＣ－４８８１とも呼ばれ、ＣＡＳ番号が１０３５５５５－６３－５であり、前記ＨＬ－０８５（ＨＬ０８５）は、Ｋｅｃｈｏｗ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ（上海科州薬物研発有限公司）が開発したＭＥＫ阻害剤であり、Ｅ－６２０１は、ＣＡＳ番号が６０３９８７－３５－５であり、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂは、ＡＳ７０３０２６とも呼ばれ、ＣＡＳ番号が１２３６６９９－９２－５であり、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂは、ＲＤＥＡ１１９とも呼ばれ、ＣＡＳ番号が９２３０３２－３７－５であり、ＦＣＮ－１５９は、複星医薬及びその子会社が開発したものである。
【0038】
任意選択的に、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である。
【0039】
任意選択的に、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体であり、例えば、前記抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体は、ペムブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、チスレリズマブ（Ｔｉｓｌｅｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、トリパリマブ（Ｔｏｒｉｐａｌｉｍａｂ）、アテゾリズマブ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、デュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）、カムレリズマブ（Ｃａｍｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、シンチリマブ（Ｓｉｎｔｉｌｉｍａｂ）、セミプリマブ（Ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）、エンバフォリマブ（ｅｎｖａｆｏｌｉｍａｂ）、ＢＭＳ－９３６５５９、ＪＳ００３、ＳＨＲ－１３１６、ＧＳ－４２２４、ＡＮ－４００５又はＭＸ－１０１８１、特にアテゾリズマブである。
【0040】
任意選択的に、前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤であり、例えば、前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤は、ＩＮＣＢ－０８６５５０、ラゼルチニブ（Ｌａｚｅｒｔｉｎｉｂ）、ＩＭＭＨ－０１０、ＣＡ－１７０、ＡＢＳＫ０４３又はＲＲｘ－００１である。
【0041】
任意選択的に、前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴ阻害剤であり、例えば、前記ＴＩＧＩＴ阻害剤は、オシペリマブ（Ｏｃｉｐｅｒｌｉｍａｂ／ＢＧＢ－Ａ１２１７）、ビボストリマブ（Ｖｉｂｏｓｔｏｌｉｍａｂ）、ｄｏｍｖａｎａｌｉｍａｂ（ＡＢ１５４）、チラゴルマブ（Ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ）、Ｂｅｌｒｅｓｔｏｔｕｇ、エチギリマブ（Ｅｔｉｇｉｌｉｍａｂ）、ＯＮＯ－４６８６、ＪＳ－００６、ＡＺＤ－２９３６、ＨＬＸ－３０１、ＳＥＡ－ＴＧＴ、Ｍ－６２２３、ＩＢＩ－９３９、ＣＯＭ－９０２、ＡＢ－３０８、ＡＧＥＮ－１７７７、ＡＫ－１２７、ＢＡＴ－６０２１、ＢＡＴ－６００５、ＡＳＰ－８３７４、ＰＭ－１０２２、ＢＭＳ－９８６２０７、ＨＢ００３６又はＩＢＩ－３２１である。
【0042】
任意選択的に、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌である。例えば、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、大腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である。
【0043】
本開示の実施例における技術手段をより明確に説明するために、以下、実施例の図面を簡単に説明するが、明らかに、以下の説明における図面は、本開示のいくつかの実施例に関するものに過ぎず、本発明を限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【0044】
【図1】ＦＡＫサイレンシング後のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとの併用の悪性黒色腫細胞Ａ３７５に対する７２時間傷害曲線及びＩＣ５０値を示す。
【図2】ＦＡＫサイレンシング後に１０ｎＭと３０ｎＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと併用してＡ３７５を６時間処理した後に検出された小胞体ストレス関連タンパク質の発現レベルを示す。
【図3】ＦＡＫサイレンシング後に１０ｎＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと併用してＡ３７５を４８時間処理した後に行われたＤＡＭＰｓの免疫蛍光染色を示す。
【図4】ＩＮ１００１８及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５に対する７２時間傷害曲線及びＩＣ５０値を示す。
【図5】異なる用量のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと３μＭのＩＮ１００１８の併用の悪性黒色腫細胞Ａ３７５に対する７２時間の相乗的な傷害作用（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）を示す。
【図6】１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ及び３０ｎＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂのそれぞれを３μＭのＩＮ１００１８と６時間併用した後に検出された小胞体ストレス関連タンパク質の発現レベルを示す。
【図7】１０ｎＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと３μＭのＩＮ１００１８を４８時間併用した後に行われたＤＡＭＰｓの免疫蛍光染色を示す。
【図8】マウス大腸癌ＣＴ－２６のＢＡＬＢ／ｃマウス同種移植腫瘍モデルの担癌マウスの異なる被験物質の投与後の腫瘍増殖の変化を示す。
【図9】マウス大腸癌ＣＴ－２６のＢＡＬＢ／ｃマウス同種移植腫瘍モデルの担癌マウスの異なる被験物質の投与後の動物生存率を示す。
【図10】異なる用量の薬物投与後のマウスの体重変化状況及び異なる用量の薬物投与後のマウスの体重変化を示す。
【図11】細胞及び薬物を４８時間インキュベートした後に細胞を撮影した白色光顕微鏡写真を示す。
【図12】薬物と共に４８時間インキュベートした後のＣＲＴ陽性ＣＴ２６細胞の百分率（図１２ａ）、及び薬物と共に４８時間インキュベートした後のＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ陽性ＣＴ２６細胞の百分率（図１２ｂ）を示す。
【図13】マウス大腸癌ＣＴ－２６のＢＡＬＢ／ｃマウス同種移植腫瘍モデルの担癌マウスの異なる被験物質の投与後の腫瘍増殖の変化を示す。
【図14】異なる用量の薬物投与後のマウスの体重変化状況及び異なる用量の薬物投与後のマウスの体重変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【0045】
本開示の実施例の目的、技術手段及び利点をより明確にするために、以下、本開示の実施例における図面を参照しながら、本開示の実施例における技術手段を明確かつ完全に説明する。明らかに、説明された実施例は、本開示の一部の実施例であり、全ての実施例ではない。説明された本開示の実施例に基づいて、当業者であれば、創造的な労力を要することなく取得された全ての他の実施例は、いずれも本発明の保護範囲に属する。
【0046】
本発明は、本発明の基本的な属性から逸脱することなく、他の具体的な形態で実施することができる。なお、矛盾しない限り、本発明のいずれか１つ及び全ての実施形態は、いずれか１つの他の実施形態又は複数の他の実施形態における技術的特徴と組み合わせて別の実施形態を得ることができることを理解されたい。本発明は、このような組み合わせから得られる別の実施形態を含む。
【0047】
本開示において言及される全ての刊行物及び特許は、これらの全ての内容を引用することにより本開示に組み込まれる。引用によって組み込まれた任意の刊行物及び特許に使用される用途又は用語は、本開示で使用される用途又は用語と矛盾すれば、本開示の用途及び用語を基準とする。
【0048】
本明細書で使用される節の表題は、単に文章を組み立てる目的で使用され、上記主題を制限するものとして解釈されるべきではない。
【0049】
別途に規定しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、保護を求める主題の属する分野における一般的な意味を有する。ある用語が複数の定義を有する場合、本明細書における定義を基準とする。
【0050】
本明細書及び特許請求の範囲に記載された用量などの定量的性質の全ての数値は、実施例において、又は別途明示された場合以外に、全ての場合において、用語「約」によって修飾されると理解されるべきである。なお、本願に挙げられる任意の数字範囲は、該範囲内の全てのサブ領域と該範囲又はサブ範囲の各端点との任意の組み合わせを含むことを意図する。
【0051】
本開示で使用される「含む」、「含有」又は「包含」などの類似の単語は、該単語の前に出現する要素が該単語の後に列挙された要素及びその同等物をカバーし、記載されていない要素を排除するものではないことを意図する。本明細書で使用される用語「含有」又は「含む（包含）」は、開放型、半閉鎖型及び閉鎖型であってもよい。換言すれば、上記用語は、「実質的に・・・からなる」こと又は「・・・からなる」ことも含む。
【0052】
定義
本願で使用される以下の用語及び記号は、文脈において、特に明記しない限り、以下の意味を有する。本明細書で使用される用語「ＦＡＫ阻害剤」とは、ＦＡＫの有効な阻害剤を指し、哺乳動物、特にヒトに適している。いくつかの実施形態において、上記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、上記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである。
本願で使用される以下の用語及び記号は、文脈において、特に明記しない限り、以下の意味を有する。本明細書で使用される用語「ＦＡＫ阻害剤」とは、ＦＡＫの有効な阻害剤を指し、哺乳動物、特にヒトに適している。いくつかの実施形態において、上記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、上記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである。
【化2】
【0053】
上記Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂは、デファクチニブとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が１３４５７１３－７１－４であり、上記ＧＳＫ２２５６０９８は、ＣＡＳ番号が１２２４８８７－１０－８である。上記ＰＦ－００５６２２７１は、ＣＡＳ番号が７１７９０７－７５－０であり、上記ＶＳ－４７１８は、ＣＡＳ番号が１０６１３５３－６８－１であり、上記ＡＰＧ－２４４９は、亜盛医薬が開発したものであり、上記ＡＭＰ９４５は、ＣＡＳ番号が１３９３６５３－３４－３である。いくつかの実施形態において、上記ＦＡＫ阻害剤は、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、いくつかの実施形態において、上記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩である。
【0054】
本明細書で使用される用語「ＭＥＫ」は、分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ、セリン－スレオニンキナーゼを指し、それは、細胞内シグナル伝達を媒介し、該シグナルは、タンパク質及び細胞の機能の調節に関与し、上記機能は、膜、細胞内プロセス及び細胞間プロセス、形質転換、増殖／成長、分化、生存及び死亡に関連する。
【0055】
本明細書で使用される用語「ＭＥＫ阻害剤」とは、ＭＥＫ依存性細胞シグナル伝達／機能を低減又は減少させ、ＭＥＫに関連する腫瘍細胞の増殖／成長を低減又は減少させる化合物又は薬物を指す。ＭＥＫ阻害剤の例として、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、上記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である。
【0056】
上記トラメチニブは、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ／Ｍｅｋｉｎｉｓｔとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が８７１７００－１７－３であり、上記コビメチニブは、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ／Ｃｏｔｅｌｌｉｃとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が９３４６６０－９３－２であり、上記ビニメチニブは、Ｍｅｋｔｏｖｉ／ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が６０６１４３－８９－９であり、上記セルメチニブは、Ｋｏｓｅｌｕｇｏ／Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂとも呼ばれ、ＣＡＳ番号が６０６１４３－５２－６であり、その硫酸塩のＣＡＳ番号が９４３３３２－０８－９であり、上記ＰＤ－３２５９０１は、ＣＡＳ番号が３９１２１０－１０－９であり、上記ＴＡＫ－７３３は、ＣＡＳ番号が１０３５５５５－６３－５であり、上記ＨＬ－０８５（ＨＬ０８５）は、Ｋｅｃｈｏｗ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ（上海科州薬物研発有限公司）が開発したＭＥＫ阻害剤であり、Ｅ－６２０１は、ＣＡＳ番号が６０３９８７－３５－５であり、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂは、ＡＳ７０３０２６とも呼ばれ、ＣＡＳ番号が１２３６６９９－９２－５であり、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂは、ＲＤＥＡ１１９とも呼ばれ、ＣＡＳ番号が９２３０３２－３７－５であり、ＦＣＮ－１５９は、複星医薬及びその子会社が開発したものである。
【0057】
本明細書で使用される用語「免疫チェックポイント阻害剤」とは、免疫チェックポイント経路（例えば、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３など）を調節することにより免疫系活性を向上させることができる薬物を指す。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１（プログラム細胞死タンパク質１）経路の拮抗剤（「ＰＤ－１阻害剤」とも呼ばれる）又はＴＩＧＩＴ阻害剤である。ＰＤ－１阻害剤は、本開示においてＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤とも呼ばれる。例えば、本開示の治療方法、薬物及び使用における上記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体であり、ペムブロリズマブ（キイトルーダ／Ｋｅｙｔｒｕｄａ／Ｋ薬）、チスレリズマブ（Ｔｉｓｌｅｌｉｚｕｍａｂ／ベイジーン）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、トリパリマブ（Ｔｏｒｉｐａｌｉｍａｂ／拓益）、デュルバルマブ（イミフィンジ／デュルバルマブ／ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ／Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ／Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ／Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ／Ｔ薬）、ＢＭＳ－９３６５５９（完全ヒト型抗ＰＤ－Ｌ１のＩｇＧ４モノクローナル抗体）、ＧＳ－４２２４、ＡＮ－４００５又はＭＸ－１０１８１を含むが、これらに限定されない。いくつかの好ましい実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、トリパリマブである。いくつかの好ましい実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、ヒトである対象を治療する。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１は、ヒトＰＤ－１である。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤はまた、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、例えば、ＩＮＣＢ－０８６５５０、ラゼルチニブ（Ｌａｚｅｒｔｉｎｉｂ）、ＩＭＭＨ－０１０、ＣＡ－１７０、ＡＢＳＫ０４３又はＲＲｘ－００１を含む。ＴＩＧＩＴ（ＷＵＣＡＭ、Ｖｓｔｍ３、ＶＳＩＧ９とも呼ばれる）は、Ｉｇスーパーファミリーの受容体であり、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に続く新規な免疫チェックポイントである。例えば、本開示の治療方法、薬物及び使用において、上記免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴ阻害剤（例えば、ＴＩＧＩＴ抗体）であり、オシペリマブ（Ｏｃｉｐｅｒｌｉｍａｂ／ＢＧＢ－Ａ１２１７）、ビボストリマブ（Ｖｉｂｏｓｔｏｌｉｍａｂ）、ｄｏｍｖａｎａｌｉｍａｂ（ＡＢ１５４）、チラゴルマブ（Ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ）、Ｂｅｌｒｅｓｔｏｔｕｇ、エチギリマブ（Ｅｔｉｇｉｌｉｍａｂ）、ＯＮＯ－４６８６、ＪＳ－００６、ＡＺＤ－２９３６、ＨＬＸ－３０１、ＳＥＡ－ＴＧＴ、Ｍ－６２２３、ＩＢＩ－９３９、ＣＯＭ－９０２、ＡＢ－３０８、ＡＧＥＮ－１７７７、ＡＫ－１２７、ＢＡＴ－６０２１、ＢＡＴ－６００５、ＡＳＰ－８３７４、ＰＭ－１０２２、ＢＭＳ－９８６２０７、ＨＢ００３６又はＩＢＩ－３２１である。いくつかの実施形態において、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ヒトである対象を治療する。曖昧さを避けるために、本明細書における抗体は、いずれもダイアボディを含む。
【0058】
本明細書で使用される「医薬組み合わせ」又は「医薬組み合わせ製品」とは、１つの用量単位形態の固定された組み合わせ（例えば、全ての薬物の活性成分が１つ剤型で存在する）又は組み合わせた投与製品のキットを指してもよく、１種の薬物と、該薬物と別の１種以上の薬物との併用を指示する説明書との組み合わせを指してもよい。
【0059】
本明細書で使用される「併用治療」又は「併用薬物」とは、１種の薬物と別の１種以上の薬物とを併用して疾患を治療することを指し、１種の薬物と別の１種以上の薬物との組み合わせを含むだけでなく、１種の薬物と、該薬物が別の１種以上の薬物と併用可能であることを指示する説明書との組み合わせを含む。
【0060】
「同時に又は順次に投与される」とは、本明細書において、１つの投与サイクル（例えば、４週間内、３週間内、２週間内、１週間内又は２４時間内）に２種以上の薬物を同時に又は一定の時間間隔で投与することを指し、薬物の投与方式（例えば、経口、静脈、筋肉又は皮下投与など）は、同じであってもよく、異なってもよく、２種以上の薬物の投与頻度／サイクルは、同じであってもよく、異なってもよい。本開示の治療方法、製品又は使用は、２種の薬物に関与する場合、２種の薬物を、同時にしてもよく、一定の時間間隔でそれぞれ単独に投与してもよい。本開示の治療方法、製品又は使用は、３種の薬物に関与する場合、３種の薬物を同じ時点で投与してもよく、２種の薬物を特定の時点で投与し、残りの薬物を別の時点で投与してもよく、全ての３種の薬物をそれぞれ異なる時点で投与してもよい。
【0061】
いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、静脈（例えば、静脈輸液として）又は皮下又は経口で投与される。好ましくは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、静脈輸液で投与される。
【0062】
免疫チェックポイント阻害剤は、癌を治療する能力は、腫瘍組織内の腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の存在に依存する。これは、腫瘍組織が、自身を非形質転換した対応物から、例えば、ネオアンチゲン（ｎｅｏａｎｔｉｇｅｎ）と呼ばれる新規なタンパク質生成物によって、識別する抗原を発現する必要がある。腫瘍ネオアンチゲン負荷量は、免疫原性及び感受性（例えば、チェックポイント阻害剤療法に対する感受性）に強く相関し、このことは、免疫原性が低い腫瘍が、これらの薬物に強い耐性を示すはずであることを意味する。免疫原性細胞死（ＩＣＤ）を誘導するもののようなＡＰＣによって取り込み可能な腫瘍抗原を放出する療法は、とりわけ、チェックポイント阻害剤と併用される場合、抗腫瘍免疫を効果的に促進する可能性がある。
【0063】
本明細書で使用される用語「治療」とは、疾患又は上記疾患の症状を有する対象に、１つ以上の薬物物質を投与して、上記疾患又は上記疾患の症状を治癒、緩和、軽減、改変、治療、改善、が医療又は影響することを指す。いくつかの実施形態において、上記疾患は、腫瘍又は癌である。
【0064】
本明細書で使用される用語「腫瘍」とは、機体が様々な発癌因子の作用下で、遺伝子レベルで正常な増殖調節を失った局所組織中のある特定の細胞のクローン性の異常な増殖によって形成する異常な病変を指す。実施例は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌を含むが、これらに限定されず、さらに、上記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である。
【0065】
本明細書で使用される用語「対象」又は「被験者」とは、哺乳動物及び非哺乳動物を指す。哺乳動物とは、哺乳類の任意のメンバーを指し、ヒト；チンパンジー及び他の類人猿及びサル類のような非ヒト霊長類；ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ及びブタのような農家動物；ウサギ、イヌ及びネコのような家畜；ラット、マウス及びモルモットのようなげっ歯類を含む実験動物などを含むが、これらに限定されない。非哺乳動物の例として、鳥などが挙げられるが、これに限定されない。用語「対象」は、特定の年齢又は性別に限定されない。いくつかの実施形態において、対象は、ヒトである。
【0066】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される」とは、非毒性で、生物学的に許容され、対象に投与されるのに適していることを指す。
【0067】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される塩」とは、非毒性で、生物学的に許容され、対象に投与されるのに適している酸付加塩を指し、塩酸塩、臭化水素酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、リン酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、硝酸塩などの、無機酸と形成される酸付加塩と、ギ酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩及び式ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）ｎ－ＣＯＯＨ（式中、ｎが０～４である）のアルカンジカルボン酸と形成される塩などの、有機酸と形成される酸付加塩と、
また、薬学的に許容される酸付加塩は、塩基性化合物から酸付加塩を調製するための通常の操作に従って、遊離塩基を適切な溶媒に溶解し、該溶液を酸で処理することによって生成してもよい。当業者であれば、過度の実験を行うことなく、非毒性の薬学的に許容される酸付加塩を調製するために用いられる様々な合成方法を決定することができる。
また、薬学的に許容される酸付加塩は、塩基性化合物から酸付加塩を調製するための通常の操作に従って、遊離塩基を適切な溶媒に溶解し、該溶液を酸で処理することによって生成してもよい。当業者であれば、過度の実験を行うことなく、非毒性の薬学的に許容される酸付加塩を調製するために用いられる様々な合成方法を決定することができる。
【0068】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される組成物」とは、製剤を含む他の成分、及び／又はそれを用いた治療を受ける対象と、化学的及び／又は毒性学的に適合しなければならないことを指す。本明細書で使用される用語「治療有効量」とは、通常、対象に対して有益な治療効果をもたらすのに十分な量を指す。通常の方法（例えば、モデリング、用量漸増研究又は臨床試験）で通常の影響因子（例えば、投与方式、化合物の薬物動態学、疾患の重症度及び病気の経過、対象の病歴、対象の健康状況、対象の薬物に対する反応性など）と組み合わせて本発明の治療有効量を決定することができる。
【0069】
本明細書で使用される用語「阻害」とは、生物学的活動又はプロセスのベースライン活性の低下を指す。
【0070】
本明細書で使用される用語「キット」とは、化学成分、残留薬物、ウイルスの種類などを検出する化学試薬を収容するためのボックスを指す。本発明に記載のキットは、（ｉ）ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤のうちの１種、２種又は３種と、（ｉｉ）対象において腫瘍を治療するためにＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を使用可能であることを指摘する説明書と、を含んでもよい。一実施形態において、キットは、（ｉ）ＦＡＫ阻害剤と、（ｉｉ）対象において腫瘍を治療するためにＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。一実施形態において、キットは、（ｉ）ＭＥＫ阻害剤と、（ｉｉ）対象において腫瘍を治療するためにＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。一実施形態において、キットは、（ｉ）免疫チェックポイント阻害剤と、（ｉｉ）対象において腫瘍を治療するためにＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。一実施形態において、キットは、（ｉ）ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と、（ｉｉ）対象において腫瘍を治療するためにＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。一実施形態において、キットは、（ｉ）ＦＡＫ阻害剤と、（ｉｉ）対象において腫瘍を治療するためにＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤を使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。一実施形態において、キットは、（ｉ）ＭＥＫ阻害剤と、（ｉｉ）対象において腫瘍を治療するためにＭＥＫ阻害剤及びＦＡＫ阻害剤を使用可能であることを指摘する説明書と、を含む。
【0071】
キットの化合物は、別々の容器に含まれてもよい。任意選択的に、２つ以上の化合物は、同一の容器に含まれてもよい。例えば、キットは、第１容器、第２容器、第３容器、及び添付文書を含んでもよく、第１容器は、ＦＡＫ阻害剤を含む少なくとも１つの用量の薬物を含み、第２容器は、少なくとも１つの用量のＭＥＫ阻害剤を含み、第３容器は、少なくとも１つの用量の免疫チェックポイント阻害剤の薬物を含み、上記添付文書は、薬物を使用して、対象の腫瘍を治療するための説明を含む。第１容器、第２容器及び第３容器は、同じ形状又は異なる形状（例えば、バイアル、シリンジ及びボトル）、及び／又は材料（例えば、プラスチック又はガラス）を含んでもよい。キットは、希釈剤、フィルタ、ＩＶバッグ及びパイプライン、針、及びシリンジのような、薬物を投与するのに役立つ他の材料をさらに含んでもよい。
【0072】
被験者に投与されるＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤又は免疫チェックポイント阻害剤の正確な量は、所定の薬物又は化合物、薬物製剤、投与経路、疾患のタイプ、病症、治療される被験者又は宿主の身分などの様々な因子に依存するが、依然として当業者が通常決定することができる。例えば、有効量の決定は、細胞増殖の程度、重篤度及びタイプにも依存する。当業者は、これら及び他の因子に応じて適切な用量を決定することができる。
【0073】
ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤又は免疫チェックポイント阻害剤を、経口、静脈、筋肉又は皮下投与などの適切な方式を選択して投与してもよい。
【0074】
例えば、経口投与する場合、薬物を、不活性希釈剤又は吸収可能な食用担体などの薬学的に許容される担体と共に経口投与してもよい。これらは、ハード又はソフトシェルゼラチンカプセル中に封入されてもよく、錠剤に圧縮されてもよく、患者の食物に直接的に組み込まれてもよい。例えば、薬物は、１つ以上の賦形剤と組み合わされてもよく、摂取可能な錠剤、口腔錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ又はウェハー剤などの形態で使用されてもよい。錠剤、トローチ、丸剤、カプセル剤などは、さらに、トラガカントガム、アラビアゴム、コーンスターチ又はゼラチンなどの接着剤；第二リン酸カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモスターチ、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；スクロース、フルクトース、ラクトース又はアスパルテームなどの甘味剤；或いは、調味剤を含んでもよい。
【0075】
例えば、輸液又は注射として静脈内又は腹膜内に投与する場合、薬物の溶液は、水中で調製することができ、非毒性の界面活性剤と任意に混合することができる。
【0076】
注射又は輸液用の例示的な薬物剤型は、滅菌水溶液、分散液、又は無菌注射若しくは輸液溶液若しくは分散液の即時調製に適した、活性成分を含む無菌粉末を含む。何れの場合にも、最終的な剤型は、製造及び保存条件下で無菌のものであり、流動し安定していなければならない。
【0077】
無菌注射溶液は、必要量の薬物を、必要な上記様々な他の成分と共に、適切な溶媒中に取り込み、次いで濾過滅菌を行うことにより調製されてもよい。無菌注射溶液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥技術であり、これらの方法により、活性成分の粉末に加えて、予め滅菌濾過した後に存在する何れかの所望の成分の粉末を生成することができる。
【0078】
治療に必要なＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤又は免疫チェックポイント阻害剤の量は、選択される特定の試薬によって変化することができ、投与経路、治療される疾患の性質及び患者の年齢及び状況によって変化することができ、最終的に主治医又は臨床医によって自ら決定することができる。しかしながら、一般的に、用量は、毎日約０．１～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。
【0079】
上記ＦＡＫ阻害剤は、大人における５ｍｇ／日～３００ｍｇ／日の用量範囲で投与される。具体的な実施形態において、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩は、大人における５ｍｇ／日～１００ｍｇ／日の用量で投与され、上記用量は、遊離塩基で計算される。
【0080】
上記ＭＥＫ阻害剤は、大人における毎日２～２５０ｍｇの用量範囲で投与される。具体的な実施形態において、コビメチニブ又はその薬学的に許容される塩は、大人における毎日２～２５０ｍｇの用量で投与され、上記用量は、コビメチニブで計算され、ＨＬ－０８５又はその薬学的に許容される塩は、大人における毎日２～２５０ｍｇの用量で投与され、上記用量は、ＨＬ－０８５で計算される。
【0081】
上記免疫チェックポイント阻害剤は、毎回に大人における２～１０ｍｇ／ｋｇ又は５０～１２００ｍｇの用量で投与され、２週間から３週間に１回投与される。具体的な実施形態において、上記免疫チェックポイント阻害剤は、毎回に大人における３～１０ｍｇ／ｋｇ又は１００～１２００ｍｇの用量で投与され、２週間から３週間に１回投与される。
【0082】
本明細書で使用される、具体的に定義されていない技術用語と科学用語は、本発明の当業者が一般的に理解する意味を有する。
【0083】
いくつかの実施形態において、本開示は、さらに以下の実施形態を開示する。
【0084】
１、対象において腫瘍を治療する方法に使用される、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤であって、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤。
【0085】
２、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態１に記載の前記使用に用いられる化合物。
【化3】
【0086】
３、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態１又は２に記載の前記使用に用いられる化合物。
【0087】
４、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態１～３のいずれか一項に記載の前記使用に用いられる化合物。
【0088】
５、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態１～４のいずれか一項に記載の前記使用に用いられる化合物。
【0089】
６、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらにまたさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態１～５のいずれか一項に記載の前記使用に用いられる化合物。
【0090】
７、（ａ）ＦＡＫ阻害剤と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と、
（ｃ）免疫チェックポイント阻害剤と、を含む、キット又は薬学的に許容される組成物。
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と、
（ｃ）免疫チェックポイント阻害剤と、を含む、キット又は薬学的に許容される組成物。
【0091】
８、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態７に記載のキット又は組成物。
【化4】
【0092】
９、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態７又は８に記載のキット又は組成物。
【0093】
１０、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態７～９のいずれか一項に記載のキット又は組成物。
【0094】
１１、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態７～１０のいずれか一項に記載のキット又は組成物。
【0095】
１２、薬物として用いられる、実施形態７～１１のいずれか一項に記載のキット又は組成物。
【0096】
１３、腫瘍を治療するために用いられる、実施形態７～１２のいずれか一項に記載のキット又は組成物。
【0097】
１４、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらにまたさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態１３に記載のキット又は組成物。
【0098】
１５、実施形態７～１２のいずれか一項に記載のキット又は組成物の化合物を対象に同時に又は順次に投与することを含む、対象において腫瘍を治療する方法。
【0099】
１６、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらにまたさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態１５に記載の方法。
【0100】
１７、ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強する、ＦＡＫ阻害剤。
【0101】
１８、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態１７に記載の使用のＦＡＫ阻害剤。
【0102】
１９、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態１７又は１８に記載の使用のＦＡＫ阻害剤。
【化5】
【0103】
２０、前記ＦＡＫ阻害剤と前記ＭＥＫ阻害剤は、同時に又は順次に投与される、実施形態１７～１９のいずれか一項に記載の使用のＦＡＫ阻害剤。
【0104】
２１、対象に治療有効量のＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を同時に又は順次に投与することを含む、対象において腫瘍を治療する方法。
【0105】
２２、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態２１に記載の方法。
【化6】
【0106】
２３、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態２１又は２２に記載の方法。
【0107】
２４、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態２１～２３のいずれか一項に記載の方法。
【0108】
２５、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態２１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【0109】
２６、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらにまたさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態２１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【0110】
２７、対象において免疫原性細胞死を増加させることにより腫瘍を治療する方法に使用される、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤であって、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤。
【0111】
２８、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態２７に記載の前記使用に用いられる化合物。
【化7】
【0112】
２９、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態２７又は２８に記載の方法。
【0113】
３０、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態２７～２９のいずれか一項に記載の前記使用に用いられる化合物。
【0114】
３１、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態２７～３０のいずれか一項に記載の前記使用に用いられる化合物。
【0115】
３２、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態２７～３１のいずれか一項に記載の前記使用に用いられる化合物。
【0116】
３３、対象に治療有効量のＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤を同時に又は順次に投与することを含む、対象において免疫原性細胞死を増加させることにより腫瘍を治療する方法。
【0117】
３４、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態３３に記載の方法。
【化8】
【0118】
３５、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態３３又は３４に記載の方法。
【0119】
３６、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
【0120】
３７、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態３３～３６のいずれか一項に記載の方法。
【0121】
３８、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態３３～３７のいずれか一項に記載の方法。
【0122】
３９、ＦＡＫ阻害剤の、対象において腫瘍を治療するための薬物の製造における使用であって、前記ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される、使用。
【0123】
４０、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態３９に記載の使用。
【化9】
【0124】
４１、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態３９又は４０に記載の使用。
【0125】
４２、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態３９～４１のいずれか一項に記載の使用。
【0126】
４３、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態３９～４２のいずれか一項に記載の使用。
【0127】
４４、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態３９～４３のいずれか一項に記載の使用。
【0128】
４５、ＭＥＫ阻害剤の、対象において腫瘍を治療するための薬物の製造における使用であって、ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される、使用。
【0129】
４６、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態４５に記載の使用。
【0130】
４７、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態４５又は４６に記載の使用。
【化10】
【0131】
４８、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態４５～４７のいずれか一項に記載の使用。
【0132】
４９、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態４５～４８のいずれか一項に記載の使用。
【0133】
５０、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態４５～４９のいずれか一項に記載の使用。
【0134】
５１、免疫チェックポイント阻害剤の、対象において腫瘍を治療するための薬物の製造における使用であって、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される、使用。
【0135】
５２、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の、腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用。
【0136】
５３、ＦＡＫ阻害剤の、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤との腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用。
【0137】
５４、ＭＥＫ阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤との腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用。
【0138】
５５、免疫チェックポイント阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤との腫瘍を治療するための併用薬物の製造における使用。
【0139】
５６、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の、併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用。
【0140】
５７、ＦＡＫ阻害剤の、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用。
【0141】
５８、ＭＥＫ阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用。
【0142】
５９、免疫チェックポイント阻害剤の、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤と併用して腫瘍を治療するための薬物の製造における使用。
【0143】
６０、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、実施形態５１～５９のいずれか一項に記載の使用。
【化11】
【0144】
６１、前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、実施形態５１～６０のいずれか一項に記載の使用。
【0145】
６２、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、実施形態５１～６１のいずれか一項に記載の使用。
【0146】
６３、前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、実施形態５１～６２のいずれか一項に記載の使用。
【0147】
６４、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部腺癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、繊維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、実施形態５１～６３のいずれか一項に記載の使用。
【0148】
実施例
本発明をさらに説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、例を挙げて本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではないことを理解すべきである。
本発明をさらに説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、例を挙げて本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではないことを理解すべきである。
【0149】
以下の実施例において具体的な条件が明記されない実験方法は、通常の条件又は製造メーカーによって推奨される条件に従って行われてもよい。
【0150】
以下の実施例で用いられる実験材料及び試薬は、特に説明しない限り、いずれも商業的に入手可能である。実施例で用いられる略語の意味は、以下のとおりである。
英略語 日本語名称
ｓｉＲＮＡ 低分子干渉ＲＮＡ
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＣＯＭＢＯ 併用又は組み合わせた使用
ＨＭＧＢ１ 高移動度グループボックスタンパク質１
ＡＡＡＬＡＣ 国際実験動物ケア評価認証協会
ＩＡＣＵＣ 実験動物管理及び使用委員会
ＳＰＦ 特別な病原体のない
ＢＩＷ １週２回
ＢＩＤ １日２回
ＢＷ 体重
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ＧＬＰ 医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施基準
ｐ．ｏ． 胃内投与
ｉ．ｖ． 静脈注射投与
ｉ．ｐ． 腹腔内注射投与
ＤＰＢＳ ダルベッコリン酸塩緩衝液
ＤＤＨ２Ｏ 再蒸留水
ＲＴ 室温
ＳＥＭ 標準誤差
ＴＧＩ 腫瘍増殖阻害率
ＴＶ 腫瘍体積
ＴＷ 腫瘍重量
ＦＢＳ ウシ胎児血清
ＰＢＳ リン酸塩緩衝液
ＭＣ メチルセルロース
ＣＯ２ 二酸化炭素
ＣＲＴ カルレティキュリン
Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ フルオレセインイソチオシアネート標識アネキシンＶタンパク質
ＰＩ ヨウ化プロピジウム
英略語 日本語名称
ｓｉＲＮＡ 低分子干渉ＲＮＡ
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＣＯＭＢＯ 併用又は組み合わせた使用
ＨＭＧＢ１ 高移動度グループボックスタンパク質１
ＡＡＡＬＡＣ 国際実験動物ケア評価認証協会
ＩＡＣＵＣ 実験動物管理及び使用委員会
ＳＰＦ 特別な病原体のない
ＢＩＷ １週２回
ＢＩＤ １日２回
ＢＷ 体重
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ＧＬＰ 医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施基準
ｐ．ｏ． 胃内投与
ｉ．ｖ． 静脈注射投与
ｉ．ｐ． 腹腔内注射投与
ＤＰＢＳ ダルベッコリン酸塩緩衝液
ＤＤＨ２Ｏ 再蒸留水
ＲＴ 室温
ＳＥＭ 標準誤差
ＴＧＩ 腫瘍増殖阻害率
ＴＶ 腫瘍体積
ＴＷ 腫瘍重量
ＦＢＳ ウシ胎児血清
ＰＢＳ リン酸塩緩衝液
ＭＣ メチルセルロース
ＣＯ２ 二酸化炭素
ＣＲＴ カルレティキュリン
Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ フルオレセインイソチオシアネート標識アネキシンＶタンパク質
ＰＩ ヨウ化プロピジウム
【0151】
実施例１：悪性黒色腫細胞におけるＦＡＫ標的によるＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ免疫原性細胞死の研究
実験スキーム：
１、ＦＡＫサイレンシング後に、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの感受性を向上させる
インビトロ実験では、ＦＡＫ遺伝子サイレンシングの条件下で、異なる濃度のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを投与して処理する。Ａ３７５細胞において、細胞傷害曲線を作成し、ＩＣ５０値を決定する。対照群とＦＡＫｓｉＲＮＡ群に対してＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの細胞毒性の比較を行って、ＦＡＫ標的によるＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ細胞毒への作用を探索する。
実験スキーム：
１、ＦＡＫサイレンシング後に、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの感受性を向上させる
インビトロ実験では、ＦＡＫ遺伝子サイレンシングの条件下で、異なる濃度のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを投与して処理する。Ａ３７５細胞において、細胞傷害曲線を作成し、ＩＣ５０値を決定する。対照群とＦＡＫｓｉＲＮＡ群に対してＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの細胞毒性の比較を行って、ＦＡＫ標的によるＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ細胞毒への作用を探索する。
【0152】
実験により、ＦＡＫ遺伝子サイレンシングの条件下で、異なる濃度のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５における細胞傷害曲線を測定し、ＩＣ５０値を決定した。
【0153】
２、ＦＡＫサイレンシング後に、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと併用して悪性黒色腫細胞Ａ３７５のＩＣＤ作用を効果的に誘導することができる。
【0154】
インビトロ実験により、ＦＡＫサイレンシング後のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとの６時間併用後の小胞体ストレス関連タンパク質ＧＲＰ７８及びＰｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）への影響と、４８時間併用後の細胞によるＩＣＤの主な標的Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎの放出を効果的に向上させることができるか否かとを検出した。
【0155】
実験材料：
ＦＡＫｓｉＲＮＡは、ＧｅｎｅＰｈａｒｍａ社によって提供され、配列が下記表に示すとおりである：
Ｆ：ＣＣＵＧＵＡＵＧＣＣＵＡＵＣＡＧＣＵＵＴＴ、
Ｒ：ＡＡＧＣＵＧＡＵＡＧＧＣＡＵＡＣＡＧＧＴＴ
Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥから購入され、ＧＤＣ－０９７３である。
ＦＡＫｓｉＲＮＡは、ＧｅｎｅＰｈａｒｍａ社によって提供され、配列が下記表に示すとおりである：
Ｆ：ＣＣＵＧＵＡＵＧＣＣＵＡＵＣＡＧＣＵＵＴＴ、
Ｒ：ＡＡＧＣＵＧＡＵＡＧＧＣＡＵＡＣＡＧＧＴＴ
Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥから購入され、ＧＤＣ－０９７３である。
【0156】
本実験で用いられる抗体：
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ（抗－カルレティキュリン）抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ１９６１５９）、ＦＡＫ抗体（ＣＳＴ、３２８５Ｓ）、ＧＲＰ７８抗体（ＨＵＡＢＩＯ、ＥＲ１７０６－５０）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）（ＣＳＴ、３３９８）、ｅｉｆ２α（ＣＳＴ、５３２４）、ＨＲＰ標識Ａｌｐｈａ ｔｕｂｕｌｉｎ（α－チューブリン）抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、ＨＲＰ－６６０３１）。
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ（抗－カルレティキュリン）抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ１９６１５９）、ＦＡＫ抗体（ＣＳＴ、３２８５Ｓ）、ＧＲＰ７８抗体（ＨＵＡＢＩＯ、ＥＲ１７０６－５０）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）（ＣＳＴ、３３９８）、ｅｉｆ２α（ＣＳＴ、５３２４）、ＨＲＰ標識Ａｌｐｈａ ｔｕｂｕｌｉｎ（α－チューブリン）抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、ＨＲＰ－６６０３１）。
【0157】
実験器具：
蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｕ－ＨＧＬＧＰＳ）。化学発光イメージ（ＢＩＯＲＡＤ ｃｈｅｍｉｄｏｃ ｔｏｕｃｈ）
蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｕ－ＨＧＬＧＰＳ）。化学発光イメージ（ＢＩＯＲＡＤ ｃｈｅｍｉｄｏｃ ｔｏｕｃｈ）
【0158】
実験結果：
１、ＦＡＫサイレンシング後のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとの併用のＡ３７５に対するＩＣ５０曲線
５０００個のＡ３７５細胞／ウェルで９６ウェル細胞プレートに敷き、２群に分けて対照ｓｉＲＮＡ又はＦＡＫｓｉＲＮＡをそれぞれトランスフェクションする。トランスフェクションして２４ｈ経過した後、最高濃度が１μＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを加え、３倍濃度勾配で希釈して、合計６つの濃度を得て、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの最低濃度を４．１１５ｎＭとし、薬物と細胞を共に７２時間インキュベートした後、各ウェルに１０μｌのＣＣＫ８溶液を加え、３７℃で５％二酸化炭素インキュベーターで２時間インキュベートした後、マイクロプレートリーダーで吸光度波長を４５０ｎｍに設定して読み取った。読み取った数値をＤＭＳＯ対照群と比較し、Ｇｒａｐｈｐａｄ８．０を用いてプロットした。 結果を図１に示す。
１、ＦＡＫサイレンシング後のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとの併用のＡ３７５に対するＩＣ５０曲線
５０００個のＡ３７５細胞／ウェルで９６ウェル細胞プレートに敷き、２群に分けて対照ｓｉＲＮＡ又はＦＡＫｓｉＲＮＡをそれぞれトランスフェクションする。トランスフェクションして２４ｈ経過した後、最高濃度が１μＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを加え、３倍濃度勾配で希釈して、合計６つの濃度を得て、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの最低濃度を４．１１５ｎＭとし、薬物と細胞を共に７２時間インキュベートした後、各ウェルに１０μｌのＣＣＫ８溶液を加え、３７℃で５％二酸化炭素インキュベーターで２時間インキュベートした後、マイクロプレートリーダーで吸光度波長を４５０ｎｍに設定して読み取った。読み取った数値をＤＭＳＯ対照群と比較し、Ｇｒａｐｈｐａｄ８．０を用いてプロットした。 結果を図１に示す。
【0159】
２、ＦＡＫサイレンシング後、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとの併用により、Ａ３７５の小胞体ストレスを顕著に増加させた。
【0160】
最終濃度が５０ｎＭの対照ｓｉＲＮＡ又はＦＡＫｓｉＲＮＡをそれぞれ使用してＡ３７５細胞をトランスフェクションした。トランスフェクションして２４ｈ経過した後、異なる濃度のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを投与して６時間処理し、ＦＡＫ及び小胞体ストレス関連タンパク質ＧＲＰ７８及びＰｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（リン酸化－Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α）（Ｓｅｒ５１）のタンパク質レベル発現を検出した。結果を図２に示す。
【0161】
３、ＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとＩＮ１００１８との併用により、ＩＣＤ標的Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ（カルレティキュリン）の放出及び暴露を増強させた。
【0162】
最終濃度が５０ｎＭの対照群ｓｉＲＮＡ又はＦＡＫｓｉＲＮＡをそれぞれ使用してＡ３７５細胞をトランスフェクションした。２４時間後、１０ｎＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと併用してＡ３７５を４８時間処理した後にＣａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎに免疫蛍光検出を行った。結果を図３に示す。
【0163】
実験結論：
ＦＡＫサイレンシング後に、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５の細胞傷害作用を顕著に増強することができる。該作用は、小胞体ストレスの増強に関係がある。ＩＣＤマーカーを検出する実験では、ＦＡＫサイレンシング後、ＤＡＭＰｓマーカーＣａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎの暴露及び放出を顕著に増強することができ、ＦＡＫ標的のサイレンシングが悪性黒色腫細胞の免疫原性細胞死を効果的に増強できることを示した。
ＦＡＫサイレンシング後に、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５の細胞傷害作用を顕著に増強することができる。該作用は、小胞体ストレスの増強に関係がある。ＩＣＤマーカーを検出する実験では、ＦＡＫサイレンシング後、ＤＡＭＰｓマーカーＣａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎの暴露及び放出を顕著に増強することができ、ＦＡＫ標的のサイレンシングが悪性黒色腫細胞の免疫原性細胞死を効果的に増強できることを示した。
【0164】
実施例２：ＩＮ１００１８による悪性黒色腫細胞のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ免疫原性細胞死の増強に関する研究
実験スキーム：
１、ＩＮ１００１８とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを併用して相乗的な腫瘍傷害作用をもたらす
インビトロ実験により、ＩＮ１００１８及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５における細胞傷害曲線を測定し、ＩＣ５０値を決定した。異なる用量のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと３μＭのＩＮ１００１８との併用の細胞傷害を探索した。
実験スキーム：
１、ＩＮ１００１８とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを併用して相乗的な腫瘍傷害作用をもたらす
インビトロ実験により、ＩＮ１００１８及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５における細胞傷害曲線を測定し、ＩＣ５０値を決定した。異なる用量のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと３μＭのＩＮ１００１８との併用の細胞傷害を探索した。
【0165】
２、ＩＮ１００１８とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを併用して悪性黒色腫細胞Ａ３７５のＩＣＤ作用を効果的に誘導することができる。
【0166】
インビトロ実験により、ＩＮ１００１８及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとの６時間併用後の小胞体ストレス関連タンパク質ＧＲＰ７８、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）、ＤＤＩＴ３への影響と、４８時間併用後の細胞によるＩＣＤの主な標的Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ及びＡｎｎｅｘｉｎ Ａ１（アネキシンＡ１）の放出を効果的に向上させることができるか否かとを検出した。
【0167】
実験材料：
１）本実験で用いられる薬物
ＩＮ１００１８は、特許ＷＯ２０１００５８０３２における方法で合成されたものである。Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥから購入され、ＧＤＣ－０９７３である。
１）本実験で用いられる薬物
ＩＮ１００１８は、特許ＷＯ２０１００５８０３２における方法で合成されたものである。Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥから購入され、ＧＤＣ－０９７３である。
【0168】
本実験で用いられる抗体：
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ１９６１５９）、Ａｎｎｅｘｉｎ Ａ１ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３２９３４Ｓ）、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｈ２１４９２）、ＧＲＰ７８抗体（ＨＵＡＢＩＯ、ＥＲ１７０６－５０）、ＤＤＩＴ３（ＨＵＡＢＩＯ、ＥＴ１７０３－０５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）（ＣＳＴ、３３９８）、ｅｉｆ２α（ＣＳＴ、５３２４）、ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（ＣＳＴ、４６９５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（ＣＳＴ、４３７０）、
ＨＲＰ標識Ａｌｐｈａ ｔｕｂｕｌｉｎ抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、ＨＲＰ－６６０３１）。
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ１９６１５９）、Ａｎｎｅｘｉｎ Ａ１ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３２９３４Ｓ）、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｈ２１４９２）、ＧＲＰ７８抗体（ＨＵＡＢＩＯ、ＥＲ１７０６－５０）、ＤＤＩＴ３（ＨＵＡＢＩＯ、ＥＴ１７０３－０５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）（ＣＳＴ、３３９８）、ｅｉｆ２α（ＣＳＴ、５３２４）、ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（ＣＳＴ、４６９５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（ＣＳＴ、４３７０）、
ＨＲＰ標識Ａｌｐｈａ ｔｕｂｕｌｉｎ抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、ＨＲＰ－６６０３１）。
【0169】
実験器具：
蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｕ－ＨＧＬＧＰＳ）。化学発光イメージ（ＢＩＯＲＡＤ ｃｈｅｍｉｄｏｃ ｔｏｕｃｈ）。
蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｕ－ＨＧＬＧＰＳ）。化学発光イメージ（ＢＩＯＲＡＤ ｃｈｅｍｉｄｏｃ ｔｏｕｃｈ）。
【0170】
実験結果：
１、ＩＮ１００１８とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの単一薬剤のＡ３７５に対するＩＣ５０曲線
５０００個のＡ３７５細胞／ウェルで９６ウェル細胞プレートに敷き、２４時間後に、最高濃度が１０μＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ、最高濃度が３０μＭのＩＮ１００１８の薬物を加え、３倍濃度勾配で希釈して、合計９つの濃度を得て、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの最低濃度を１．５２ｎＭとし、ＩＮ１００１８の最低濃度を４．５７ｎＭとした。 薬物と細胞を共に７２時間インキュベートした後、各ウェルに１０μＬのＣＣＫ８溶液を加え、３７℃で５％二酸化炭素インキュベーターで２時間インキュベートした後、マイクロプレートリーダーで吸光度波長を４５０ｎｍに設定して読み取った。読み取った数値をＤＭＳＯ対照群と比較し、Ｇｒａｐｈｐａｄ８．０を用いてプロットした。 結果を図４に示す。
１、ＩＮ１００１８とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの単一薬剤のＡ３７５に対するＩＣ５０曲線
５０００個のＡ３７５細胞／ウェルで９６ウェル細胞プレートに敷き、２４時間後に、最高濃度が１０μＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ、最高濃度が３０μＭのＩＮ１００１８の薬物を加え、３倍濃度勾配で希釈して、合計９つの濃度を得て、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの最低濃度を１．５２ｎＭとし、ＩＮ１００１８の最低濃度を４．５７ｎＭとした。 薬物と細胞を共に７２時間インキュベートした後、各ウェルに１０μＬのＣＣＫ８溶液を加え、３７℃で５％二酸化炭素インキュベーターで２時間インキュベートした後、マイクロプレートリーダーで吸光度波長を４５０ｎｍに設定して読み取った。読み取った数値をＤＭＳＯ対照群と比較し、Ｇｒａｐｈｐａｄ８．０を用いてプロットした。 結果を図４に示す。
【0171】
２、異なる用量のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと３μＭのＩＮ１００１８との併用のＡ３７５に対する相乗的な傷害作用
５０００個のＡ３７５細胞／ウェルで９６ウェル細胞プレートに敷き、２４時間後に、ＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂのＩＣ値を初期点としてその左側及び右側にそれぞれ４つのサブ用量を設定し、これらの用量でＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを３μＭのＩＮ１００１８と併用した。７２時間後にＣＣＫ８法で細胞生存率を測定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ８．０を用いてプロットした。結果を図５に示す。
５０００個のＡ３７５細胞／ウェルで９６ウェル細胞プレートに敷き、２４時間後に、ＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂのＩＣ値を初期点としてその左側及び右側にそれぞれ４つのサブ用量を設定し、これらの用量でＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂを３μＭのＩＮ１００１８と併用した。７２時間後にＣＣＫ８法で細胞生存率を測定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ８．０を用いてプロットした。結果を図５に示す。
【0172】
３、ＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとＩＮ１００１８との併用により、Ａ３７５の小胞体ストレスを顕著に増加させた。
【0173】
１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ及び３０ｎＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂのそれぞれを３μＭのＩＮ１００１８と併用してＡ３７５細胞を治療し、６時間後に小胞体ストレス関連タンパク質ＧＲＰ７８、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）、ＤＤＩＴ３のタンパク質レベル発現を検出した。結果から分かるように、併用群は、単一薬剤群に比べて、ＧＲＰ７８、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）、ＤＤＩＴ３の発現レベルが顕著に向上し、２種の薬物の併用により小胞体ストレスが顕著に増加した（図６に示す）ことを説明する。
【0174】
４、ＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂとＩＮ１００１８との併用により、ＩＣＤ標的Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ａｎｎｅｘｉｎ Ａ１の放出及び暴露を増強させた。
【0175】
１０ｎＭのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂと３μＭのＩＮ１００１８を併用してＡ３７５細胞を治療し、４８時間後にＣａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ及びＡｎｎｅｘｉｎ Ａ１抗体を用いて蛍光染色を行った。結果から分かるように、併用群は、単一薬剤群に比べて、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ及びＡｎｎｅｘｉｎ Ａ１の放出及び暴露がいずれも顕著に増強した（図７に示す）。
【0176】
実験結論：
ＩＮ１００１８は、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５の細胞傷害作用を顕著に増強することができる。該作用は、小胞体ストレスの増強に関係がある。ＩＣＤマーカーを検出する実験では、ＩＮ１００１８がＤＡＭＰｓマーカーＣａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ及びＡｎｎｅｘｉｎ Ａ１の暴露及び放出を顕著に増強することができることが発見し、ＩＮ１００１８が悪性黒色腫細胞の免疫原性細胞死を効果的に増強できることを示した。
ＩＮ１００１８は、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの悪性黒色腫細胞Ａ３７５の細胞傷害作用を顕著に増強することができる。該作用は、小胞体ストレスの増強に関係がある。ＩＣＤマーカーを検出する実験では、ＩＮ１００１８がＤＡＭＰｓマーカーＣａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ及びＡｎｎｅｘｉｎ Ａ１の暴露及び放出を顕著に増強することができることが発見し、ＩＮ１００１８が悪性黒色腫細胞の免疫原性細胞死を効果的に増強できることを示した。
【0177】
実施例３：Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂの結腸癌ＣＴ－２６細胞ＢＡＬＢ／ｃマウス皮下同種移植腫瘍モデルにおけるインビボ抗腫瘍薬効研究
試験材料：
マウス：６～８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスは、北京バイタル・リバー実験動物技術有限公司から購入された。動物を購入してから実験環境で適応飼育した後、実験を開始した。動物をＳＰＦ飼育室でＩＶＣ（個別換気システム）ケージで飼育した（ケージあたり６匹）。全てのケージ、床敷及び飲用水を使用前に滅菌する必要がある。すべての実験者は、飼育室で操作するときに防護服及びラテックス手袋を着用すべきである。各ケージの動物情報カードには、ケージ内の動物の数量、性別、品種、受取日時、投与スキーム、実験番号、群及び実験開始日を明記すべきである。ケージ、飼料及び飲用水を１週に２回交換した。飼育環境及び光照射状況は、以下のとおりである。
試験材料：
マウス：６～８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスは、北京バイタル・リバー実験動物技術有限公司から購入された。動物を購入してから実験環境で適応飼育した後、実験を開始した。動物をＳＰＦ飼育室でＩＶＣ（個別換気システム）ケージで飼育した（ケージあたり６匹）。全てのケージ、床敷及び飲用水を使用前に滅菌する必要がある。すべての実験者は、飼育室で操作するときに防護服及びラテックス手袋を着用すべきである。各ケージの動物情報カードには、ケージ内の動物の数量、性別、品種、受取日時、投与スキーム、実験番号、群及び実験開始日を明記すべきである。ケージ、飼料及び飲用水を１週に２回交換した。飼育環境及び光照射状況は、以下のとおりである。
【0178】
温度：２０～２６ｏＣ、湿度：４０～７０％、光照射周期：１２時間光を照射し、１２時間光を照射しない
ケージ：ポリカーボネート製で、体積が３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷としてコーンコブを使用し、１週に２回交換する。
ケージ：ポリカーボネート製で、体積が３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷としてコーンコブを使用し、１週に２回交換する。
【0179】
食物：実験動物は、実験段階全体において自由に（放射線滅菌し、乾燥した粒子状食物）を摂取することができる。
【0180】
飲用水：実験動物は、滅菌水を自由に飲むことができる。
【0181】
ケージラベル：各ケージの動物情報カードには、ケージ内の動物の数量、性別、品種、受取日時、投与スキーム、実験番号、群及び実験開始日を明記すべきである。
【0182】
動物ラベル：実験動物を耳標で標識する。
【0183】
化合物の情報を表１に示す。
化合物の情報
化合物の情報
【表1】
【0184】
大腸癌細胞ＣＴ－２６（南京科佰生物科技有限公司に由来し、商品番号：ＣＢＰ６００４３）は、応世生物科技（南京）有限公司によって継代が維持される。細胞をインビトロで単層培養し、培養条件は、ＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％のウシ胎児血清を加え、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で培養することである。１週に２～３回パンクレアチン－ＥＤＴＡを使用して通常の消化処理を行って継代させた。細胞が指数増殖期にある場合、飽和度が８０～９０％になると、細胞を回収し、カウントした後に、接種した。
【0185】
細胞接種及び群分け
３×１０５個の細胞を含有する細胞懸濁液を各マウスの後背右方に０．１ｍＬ皮下接種した。腫瘍体積が～５８ｍｍ３になる場合（接種後の１０日目）、腫瘍体積に基づいて、ランダムに群分けをして投与し、群の情報を表２に示す。
被験物質のＣＴ－２６マウス移植腫瘍モデルに対する投与スキーム
注：１、各群のマウスの数量、
２、投与体積：マウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇとし、体重減少が１５％を超えると、動物への投与を停止し、体重は、体重減少が１０％になるまで戻ると、投与を回復する。
３×１０５個の細胞を含有する細胞懸濁液を各マウスの後背右方に０．１ｍＬ皮下接種した。腫瘍体積が～５８ｍｍ３になる場合（接種後の１０日目）、腫瘍体積に基づいて、ランダムに群分けをして投与し、群の情報を表２に示す。
被験物質のＣＴ－２６マウス移植腫瘍モデルに対する投与スキーム
【表2】
２、投与体積：マウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇとし、体重減少が１５％を超えると、動物への投与を停止し、体重は、体重減少が１０％になるまで戻ると、投与を回復する。
【0186】
被験物質の調製の詳細を表３に示す。
被験物質の調製方法
被験物質の調製方法
【表3】
【0187】
実験動物の日常観察
本実験スキームの制定及び任意の修正は、いずれも雲橋生物ＩＡＣＵＣの評価承認を受けている。実験動物の使用及び介護を、ＡＡＡＬＡＣの規定に従って実行した。動物の健康状況及び死亡状況を毎日監視し、定期検査は、腫瘍増殖及び薬物治療による、行動、食物及び水の摂取量（目視のみ）、体重変化、外観的兆候又は他の異常状況などの動物の日常行為への影響を観察することを含む。各群の動物数量に基づいて群内の動物の死亡数及び副作用を記録した。
本実験スキームの制定及び任意の修正は、いずれも雲橋生物ＩＡＣＵＣの評価承認を受けている。実験動物の使用及び介護を、ＡＡＡＬＡＣの規定に従って実行した。動物の健康状況及び死亡状況を毎日監視し、定期検査は、腫瘍増殖及び薬物治療による、行動、食物及び水の摂取量（目視のみ）、体重変化、外観的兆候又は他の異常状況などの動物の日常行為への影響を観察することを含む。各群の動物数量に基づいて群内の動物の死亡数及び副作用を記録した。
【0188】
実験停止
動物の健康状況が持続的に悪化し、或いは、腫瘍体積が２５００ｍｍ３を超え、或いは、重篤な疾患又は痛みがある場合、安楽死させる必要がある。以下の状況がある場合、獣医に通知して安楽死させる。明らかに痩せ、体重減少が２０％よりも大きく、自由に食物及び水を摂取できず、対照群の腫瘍体積平均値が２５００ｍｍ３に達し、実験を停止する。動物は、毛が逆立ち、猫背、耳、鼻、目又は足の色が白くなり、息切れがし、ひきつけ、連続的な下痢、脱水、行動が遅く、声を出すという臨床症状を示し、持続的に悪化した。
動物の健康状況が持続的に悪化し、或いは、腫瘍体積が２５００ｍｍ３を超え、或いは、重篤な疾患又は痛みがある場合、安楽死させる必要がある。以下の状況がある場合、獣医に通知して安楽死させる。明らかに痩せ、体重減少が２０％よりも大きく、自由に食物及び水を摂取できず、対照群の腫瘍体積平均値が２５００ｍｍ３に達し、実験を停止する。動物は、毛が逆立ち、猫背、耳、鼻、目又は足の色が白くなり、息切れがし、ひきつけ、連続的な下痢、脱水、行動が遅く、声を出すという臨床症状を示し、持続的に悪化した。
【0189】
腫瘍測定及び実験指標
ノギスで腫瘍直径を測定し、１週に３回測定した。腫瘍体積の計算公式は、Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２であり、ａ及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径及び短径を表す。
ノギスで腫瘍直径を測定し、１週に３回測定した。腫瘍体積の計算公式は、Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２であり、ａ及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径及び短径を表す。
【0190】
群分けした後の１日目の腫瘍増殖を参照し、以下の公式に基づいて腫瘍増殖阻害率ＴＧＩ（％）を計算した。ＴＧＩ（％）＝［１－（ある投与群の平均腫瘍体積－該投与群の開始時の平均腫瘍体積）／（溶剤対照群の平均腫瘍体積－溶剤対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。
【0191】
投与して２週間経過した後、腫瘍体積が大きすぎるため、Ｇ１、Ｇ２及びＧ３群の動物を安楽死させ、残りの各群に投与し続けて動物の生存率を観察し始め、動物の自然死又は腫瘍体積が２５００ｍｍ３を超えると動物が死亡したと認め、これにより、投与後の動物の生存率及び生存期間を計算した。
【0192】
統計分析
統計分析を、試験終了時の腫瘍体積及び腫瘍重量に基づいてＰｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを用いて行った。複数の群同士を比較し、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ検定を用いて分析し、Ｐ＜０．０５が有意差があったと認めれる。
統計分析を、試験終了時の腫瘍体積及び腫瘍重量に基づいてＰｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを用いて行った。複数の群同士を比較し、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ検定を用いて分析し、Ｐ＜０．０５が有意差があったと認めれる。
【0193】
動物の生存率を、Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｔｅｓｔを用いて分析し、Ｐ＜０．０５が有意差があったと認めれる。
【0194】
実験結果：
被験物質のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ及び／又はＰＤＬ１抗体とＩＮ１００１８との併用のＣＴ－２６マウス大腸癌細胞ＢＡＬＢ／ｃマウス皮下同種移植腫瘍モデルにおけるインビボ薬効。細胞を接種した後、腫瘍増殖状況を毎日観察し、接種後の１０日目に腫瘍体積に基づいて群分けをし、割り付けされた平均腫瘍体積は、約５８ｍｍ３である。腫瘍負荷量により、対照群及び各単一薬剤群（Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ ５ｍｐｋ群を除く）のマウスを、接種後の２５日目、即ち、群分け投与後の１５日目に安楽死させ、残りの各群に対して、動物の生存期間を観察し続け、最後の群の生存率が５０％以下に低下すると、全ての実験が終了した。
被験物質のＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ及び／又はＰＤＬ１抗体とＩＮ１００１８との併用のＣＴ－２６マウス大腸癌細胞ＢＡＬＢ／ｃマウス皮下同種移植腫瘍モデルにおけるインビボ薬効。細胞を接種した後、腫瘍増殖状況を毎日観察し、接種後の１０日目に腫瘍体積に基づいて群分けをし、割り付けされた平均腫瘍体積は、約５８ｍｍ３である。腫瘍負荷量により、対照群及び各単一薬剤群（Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ ５ｍｐｋ群を除く）のマウスを、接種後の２５日目、即ち、群分け投与後の１５日目に安楽死させ、残りの各群に対して、動物の生存期間を観察し続け、最後の群の生存率が５０％以下に低下すると、全ての実験が終了した。
【0195】
群分け投与後の１５日目に、対照群の腫瘍体積は、３００７．０±７９９．４ｍｍ３である。ＩＮ１００１８（１２．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、ＰＤＬ１抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（７．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋５ｍｇ／ｋｇ）及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）の各治療群の腫瘍体積は、それぞれ２４１８．８±４３６．５ｍｍ３、２６１４．２±５６８．４ｍｍ３、１２６１．３±５６５．４ｍｍ３、１０１６．５±２７１．３ｍｍ３、１１９６．９±４１１．５ｍｍ３及び６８６．３±２９２．９ｍｍ３、詳細を表４に示す。腫瘍体積を統合して対照群と比較し、ＩＮ１００１８（１２．５ｍｐｋ）単一薬剤、ＰＤＬ１抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（７．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋５ｍｇ／ｋｇ）及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）の各治療群の腫瘍阻害率ＴＧＩは、それぞれ１９．９％（ｐ＝０．０００２）、１３．３％（ｐ＝０．０２４１）、５９．２％（ｐ＜０．０００１）、６７．５％（ｐ＜０．０００１）、６１．４％（ｐ＜０．０００１）及び７８．７％（ｐ＜０．０００１）である。腫瘍体積を統合してＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群と比較し、統計学的に分析し、対照群、ＩＮ１００１８（１２．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、ＰＤＬ１抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（７．５ｍｐｋ）単一薬剤、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群のＰ値は、それぞれ、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＝０．０００２、ｐ＝０．０８０５及びｐ＝０．００１５であり、詳細を表４に示す。各用量群の異なる時間範囲の腫瘍体積を図８に示す。
【0196】
被験物質のマウス結腸癌ＣＴ－２６細胞のＢＡＬＢ／ｃマウス移植腫瘍モデルに対する腫瘍阻害効果の評価（群分け投与後の１５日目のデータに基づく）
注：１、群分け投与後の日数に基づいて計算すると、データは、平均値±標準誤差であり、
２、対照群に比べると、＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ、
３、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群に比べると、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ。
【表4】
２、対照群に比べると、＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ、
３、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群に比べると、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ。
【0197】
投与して１５日経過した後、腫瘍体積が大きすぎるため、対照群、ＩＮ１００１８（１２．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、ＰＤＬ１抗体（５ｍｇ／ｋｇ）群を安楽死させ、残りのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（７．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋５ｍｇ／ｋｇ）及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群への投与を停止し、腫瘍体積を観察し記録し続け、腫瘍体積が２５００ｍｍ３を超える状況又は自然死を動物死亡として記録することができ、生存率が最も高い群の生存率が５０％以下に低下するまで生存率の変化を観察した。投与停止後の３１日目に、生存率が最も高い群は、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群のメディアン生存時間及び生存率は、それぞれ３０日及び１６．７％であり、残りのＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（７．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋５ｍｇ／ｋｇ）のメディアン生存時間及び生存率は、それぞれ２２日及び１６．７％、２４日及び０％、２２日及び０％である。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｔｅｓｔを用いて統計学的に分析し、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群に対して、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（７．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群のＰ値は、それぞれ、ｐ＝０．０４３４、ｐ＝０．０１３７及びｐ＝０．００２９である。詳細を表５に示す。各用量群の異なる時間範囲の生存率を図９に示す。
【0198】
被験物質のマウス結腸癌ＣＴ－２６細胞のＢＡＬＢ／ｃマウス移植腫瘍モデルに対する腫瘍生存率の評価（群分け投与後の３１日目のデータに基づく）
注：１、群分け投与後の日数に基づいて計算すると、生存率＝生存動物数量／６＊１００、
２、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群に比べると、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｔｅｓｔ
【表5】
２、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群に比べると、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｔｅｓｔ
【0199】
投与スキームに従って、実験を行って、実験過程において、動物の食物及び水の摂取などの活動を毎日観察し、動物の体重を１週に３回記録し、動物の体重曲線を図９に示す。投与サイクル全体を通じて、各群の動物は、体重が明らかに減少せず、状態が良好である。
【0200】
実験結論：
ブランク対照群に比べて、各投与群は、明らかな腫瘍増殖阻害作用を示し、対照群に比べて、いずれも統計学的差異を有する。Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）の３剤併用群の平均腫瘍体積が最も小さく、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）群以外、他の各群は、３剤併用群に比べて、いずれも統計学的差異を有し、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）群は、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）の３剤併用群に比べて、統計学的に差異がないが、平均腫瘍体積が３剤併用群よりも大きい。以上のデータは、３剤併用群が単一薬剤群及び２剤併用群に比べて、薬効がより高いことを説明する。
ブランク対照群に比べて、各投与群は、明らかな腫瘍増殖阻害作用を示し、対照群に比べて、いずれも統計学的差異を有する。Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）の３剤併用群の平均腫瘍体積が最も小さく、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）群以外、他の各群は、３剤併用群に比べて、いずれも統計学的差異を有し、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）群は、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）の３剤併用群に比べて、統計学的に差異がないが、平均腫瘍体積が３剤併用群よりも大きい。以上のデータは、３剤併用群が単一薬剤群及び２剤併用群に比べて、薬効がより高いことを説明する。
【0201】
生存率のデータから見ると、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）３剤併用群は、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（７．５ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８（７．５＋１２．５ｍｇ／ｋｇ）及びＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋５ｍｇ／ｋｇ）群に比べて、生存率及びメディアン生存時間がより良好であり、この３群を比較すると、統計学的差異がある。以上のデータは、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）３剤併用群は、動物の死亡状況を顕著に減少させることができることを説明する。
【0202】
各群の動物は、体重が明らかに減少せず、状態が良好であり、これは、動物がＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（７．５＋１２．５＋５ｍｇ／ｋｇ）の投与に対して耐性を示すことを説明する。
【0203】
実施例４：ＩＮ１００１８とＨＬ０８５の結腸癌ＣＴ－２６細胞株におけるインビトロ薬効研究
実験材料：
１）本実験で用いられる薬物
ＨＬ－０８５は、上海科州薬物研発有限公司によって提供された。
実験材料：
１）本実験で用いられる薬物
ＨＬ－０８５は、上海科州薬物研発有限公司によって提供された。
【0204】
２）本実験で用いられる抗体
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ Ｎｏ：ａｂ１９６１５９、Ｌｏｔ Ｎｏ：ＣＲ３３６７６７７３）。Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ （Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｌｏｔ Ｎｏ．：０２１９２１２１０８１１）。
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ Ｎｏ：ａｂ１９６１５９、Ｌｏｔ Ｎｏ：ＣＲ３３６７６７７３）。Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ （Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｌｏｔ Ｎｏ．：０２１９２１２１０８１１）。
【0205】
実験方法：
ＲＰＭＩ １６４０（上海元培、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｌ２１０ＫＪ、Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｆ２１０９１６）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ Ｎｏ：１００９９－１４１ｃ、Ｌｏｔ Ｎｏ：２１５８７３７ｃｐ）を用いてＣＴ２６細胞を培養し、２回継代し、細胞状態が良好であるとき、培養プレートを２４ウェルプレートに置く。細胞を広げて２４時間経過した後、４つの群を設定し、第１群を対照群として、培地を添加し、第２群をＩＮ１００１８とし、濃度を５μＭとし、第３群をＨＬ－０８５とし、濃度を１μＭとし、第４群をＩＮ１００１８（５μＭ）とＨＬ－０８５（１μＭ）の併用とする。薬物を混合し、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で４８時間培養する。
ＲＰＭＩ １６４０（上海元培、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｌ２１０ＫＪ、Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｆ２１０９１６）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ Ｎｏ：１００９９－１４１ｃ、Ｌｏｔ Ｎｏ：２１５８７３７ｃｐ）を用いてＣＴ２６細胞を培養し、２回継代し、細胞状態が良好であるとき、培養プレートを２４ウェルプレートに置く。細胞を広げて２４時間経過した後、４つの群を設定し、第１群を対照群として、培地を添加し、第２群をＩＮ１００１８とし、濃度を５μＭとし、第３群をＨＬ－０８５とし、濃度を１μＭとし、第４群をＩＮ１００１８（５μＭ）とＨＬ－０８５（１μＭ）の併用とする。薬物を混合し、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で４８時間培養する。
【0206】
実験結果
薬物を４８ｈ作用させた後、顕微鏡で細胞を観察し、撮影して細胞傷害効果を確認した。そして、細胞を収集して流動解析を行い、流動緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）及び０．５μｌのＡＦ６４７を用いて細胞を２回洗浄し、各ウェルに抗カルレティキュリン抗体（ａｂｃａｍ）を加え、混合した。４℃で避光条件下でインキュベートし、２０ｍｉｎインキュベートした後に流動緩衝液を加え、アネキシン染色キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を用いて、１９５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抱合体を加え、細胞と吹き付けて混合し、５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抗体を加え、軽く混合し、最後に１０μｌのＰＩ染料を加えて混合し、室温で遮光して１５ｍｉｎインキュベートし、サンプルをフローサイトメーターに移してシグナル検出を行った。
薬物を４８ｈ作用させた後、顕微鏡で細胞を観察し、撮影して細胞傷害効果を確認した。そして、細胞を収集して流動解析を行い、流動緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）及び０．５μｌのＡＦ６４７を用いて細胞を２回洗浄し、各ウェルに抗カルレティキュリン抗体（ａｂｃａｍ）を加え、混合した。４℃で避光条件下でインキュベートし、２０ｍｉｎインキュベートした後に流動緩衝液を加え、アネキシン染色キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を用いて、１９５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抱合体を加え、細胞と吹き付けて混合し、５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抗体を加え、軽く混合し、最後に１０μｌのＰＩ染料を加えて混合し、室温で遮光して１５ｍｉｎインキュベートし、サンプルをフローサイトメーターに移してシグナル検出を行った。
【0207】
顕微鏡で細胞を観察し、ＨＬ－０８５単一薬剤群と２剤併用群は、細胞状態が悪く、２剤併用群は、細胞状態が最も悪く、細胞死が多い。ＨＬ－０８５単一薬剤群と２剤併用群は、細胞傷害作用を有し、２剤併用群は、細胞傷害作用が最も顕著であることを説明し、対照群とＩＮ１００１８群は、細胞状態が良好であり、図１１に示すとおりである。フローサイトメーターの分析結果は、２剤併用群のＣＲＴ陽性率及びＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ陽性率が単一薬剤群及び対照群よりも顕著に優れていることを示し、図１２ａ及び１２ｂに示すとおりである。
【0208】
実施例５：ＨＬ０８５の結腸癌ＣＴ－２６細胞ＢＡＬＢ／ｃマウス皮下同種移植腫瘍モデルにおけるインビボ抗腫瘍薬効研究
試験材料：
マウス：６～８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスは、北京バイタル・リバー実験動物技術有限公司から購入された。動物を購入してから実験環境で適応飼育した後、実験を開始した。動物をＳＰＦ飼育室でＩＶＣ（個別換気システム）ケージで飼育した（ケージあたり５匹）。全てのケージ、床敷及び飲用水を使用前に滅菌する必要がある。すべての実験者は、飼育室で操作するときに防護服及びラテックス手袋を着用すべきである。各ケージの動物情報カードには、ケージ内の動物の数量、性別、品種、受取日時、投与スキーム、実験番号、群及び実験開始日を明記すべきである。ケージ、飼料及び飲用水を１週に２回交換した。飼育環境及び光照射状況は、以下のとおりである。
試験材料：
マウス：６～８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスは、北京バイタル・リバー実験動物技術有限公司から購入された。動物を購入してから実験環境で適応飼育した後、実験を開始した。動物をＳＰＦ飼育室でＩＶＣ（個別換気システム）ケージで飼育した（ケージあたり５匹）。全てのケージ、床敷及び飲用水を使用前に滅菌する必要がある。すべての実験者は、飼育室で操作するときに防護服及びラテックス手袋を着用すべきである。各ケージの動物情報カードには、ケージ内の動物の数量、性別、品種、受取日時、投与スキーム、実験番号、群及び実験開始日を明記すべきである。ケージ、飼料及び飲用水を１週に２回交換した。飼育環境及び光照射状況は、以下のとおりである。
【0209】
温度：２０～２６℃、湿度：４０～７０％、光照射周期：１２時間光を照射し、１２時間光を照射しない。
【0210】
ケージ：ポリカーボネート製で、体積が３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷としてコーンコブを使用し、１週に２回交換する。
【0211】
食物：実験動物は、実験段階全体において自由に（放射線滅菌し、乾燥した粒子状食物）を摂取することができる。
【0212】
飲用水：実験動物は、滅菌水を自由に飲むことができる。
【0213】
ケージラベル：各ケージの動物情報カードには、ケージ内の動物の数量、性別、品種、受取日時、投与スキーム、実験番号、群及び実験開始日を明記すべきである。
【0214】
動物ラベル：実験動物を耳標で標識する。
【0215】
化合物の情報を表６に示す。
化合物の情報
化合物の情報
【表6】
【0216】
大腸癌細胞ＣＴ－２６（南京科佰生物科技有限公司に由来し、商品番号：ＣＢＰ６００４３）は、応世生物科技（南京）有限公司によって継代が維持される。細胞をインビトロで単層培養し、培養条件は、ＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％のウシ胎児血清を加え、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で培養することである。１週に２～３回パンクレアチン－ＥＤＴＡを使用して通常の消化処理を行って継代させた。細胞が指数増殖期にある場合、飽和度が８０～９０％になると、細胞を回収し、カウントした後に、接種した。
【0217】
細胞接種及び群分け
０．３×１０５個の細胞を含有する細胞懸濁液を各マウスの後背右方に０．１ｍＬ皮下接種した。腫瘍体積が～５９ｍｍ３になる場合（接種後の１２日目）、腫瘍体積に基づいて、ランダムに群分けをして投与し、群の情報を表７に示す。
被験物質のＣＴ－２６マウス移植腫瘍モデルに対する投与スキーム
注：１、各群のマウスの数量、
２、投与体積：マウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇとし、体重減少が１５％を超えると、動物への投与を停止し、体重は、体重減少が１０％になるまで戻ると、投与を回復する。
０．３×１０５個の細胞を含有する細胞懸濁液を各マウスの後背右方に０．１ｍＬ皮下接種した。腫瘍体積が～５９ｍｍ３になる場合（接種後の１２日目）、腫瘍体積に基づいて、ランダムに群分けをして投与し、群の情報を表７に示す。
被験物質のＣＴ－２６マウス移植腫瘍モデルに対する投与スキーム
【表7】
２、投与体積：マウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇとし、体重減少が１５％を超えると、動物への投与を停止し、体重は、体重減少が１０％になるまで戻ると、投与を回復する。
【0218】
被験物質の調製の詳細を表８に示す。
被験物質の調製方法
被験物質の調製方法
【表8】
【0219】
実験動物の日常観察
本実験スキームの制定及び任意の修正は、いずれも雲橋生物ＩＡＣＵＣの評価承認を受けている。実験動物の使用及び介護を、ＡＡＡＬＡＣの規定に従って実行した。動物の健康状況及び死亡状況を毎日監視し、定期検査は、腫瘍増殖及び薬物治療による、行動、食物及び水の摂取量（目視のみ）、体重変化、外観的兆候又は他の異常状況などの動物の日常行為への影響を観察することを含む。各群の動物数量に基づいて群内の動物の死亡数及び副作用を記録した。
本実験スキームの制定及び任意の修正は、いずれも雲橋生物ＩＡＣＵＣの評価承認を受けている。実験動物の使用及び介護を、ＡＡＡＬＡＣの規定に従って実行した。動物の健康状況及び死亡状況を毎日監視し、定期検査は、腫瘍増殖及び薬物治療による、行動、食物及び水の摂取量（目視のみ）、体重変化、外観的兆候又は他の異常状況などの動物の日常行為への影響を観察することを含む。各群の動物数量に基づいて群内の動物の死亡数及び副作用を記録した。
【0220】
実験停止
動物の健康状況が持続的に悪化し、或いは、腫瘍体積が２５００ｍｍ３を超え、或いは、重篤な疾患又は痛みがある場合、安楽死させる必要がある。以下の状況がある場合、獣医に通知して安楽死させる。明らかに痩せ、体重減少が２０％よりも大きく、自由に食物及び水を摂取できず、対照群の腫瘍体積平均値が２５００ｍｍ３に達し、実験を停止する。動物は、毛が逆立ち、猫背、耳、鼻、目又は足の色が白くなり、息切れがし、ひきつけ、連続的な下痢、脱水、行動が遅く、声を出すという臨床症状を示し、持続的に悪化した。
動物の健康状況が持続的に悪化し、或いは、腫瘍体積が２５００ｍｍ３を超え、或いは、重篤な疾患又は痛みがある場合、安楽死させる必要がある。以下の状況がある場合、獣医に通知して安楽死させる。明らかに痩せ、体重減少が２０％よりも大きく、自由に食物及び水を摂取できず、対照群の腫瘍体積平均値が２５００ｍｍ３に達し、実験を停止する。動物は、毛が逆立ち、猫背、耳、鼻、目又は足の色が白くなり、息切れがし、ひきつけ、連続的な下痢、脱水、行動が遅く、声を出すという臨床症状を示し、持続的に悪化した。
【0221】
腫瘍測定及び実験指標
ノギスで腫瘍直径を測定し、１週に３回測定した。腫瘍体積の計算公式は、Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２であり、ａ及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径及び短径を表す。
ノギスで腫瘍直径を測定し、１週に３回測定した。腫瘍体積の計算公式は、Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２であり、ａ及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径及び短径を表す。
【0222】
群分けした後の１日目の腫瘍増殖を参照し、以下の公式に基づいて腫瘍増殖阻害率ＴＧＩ（％）を計算した。ＴＧＩ（％）＝［１－（ある投与群の平均腫瘍体積－該投与群の開始時の平均腫瘍体積）／（溶剤対照群の平均腫瘍体積－溶剤対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。
【0223】
統計分析
統計分析を、試験終了時の腫瘍体積及び腫瘍重量に基づいてＰｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを用いて行った。複数の群同士を比較し、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ検定を用いて分析した。Ｐ＜０．０５が有意差があったと認めれる。
統計分析を、試験終了時の腫瘍体積及び腫瘍重量に基づいてＰｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを用いて行った。複数の群同士を比較し、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ検定を用いて分析した。Ｐ＜０．０５が有意差があったと認めれる。
【0224】
実験結果
被験物質のＨＬ０８５及び／又はＩＮ１００１８とＰＤＬ１抗体との併用のＣＴ－２６マウス大腸癌細胞ＢＡＬＢ／ｃマウス皮下同種移植腫瘍モデルにおけるインビボ薬効。細胞を接種した後、腫瘍増殖状況を毎日観察し、接種後の１２日目に腫瘍体積に基づいて群分けをし、割り付けされた平均腫瘍体積は、約５９ｍｍ３である。腫瘍負荷量により、対照群を、接種後の２８日目、即ち、群分け投与後の１６日目に安楽死させ、残りの全ての群のマウスに投与し続け、接種後の３３日目、即ち、群分け投与後の２１日目に安楽死させ、全ての実験が終了した。
被験物質のＨＬ０８５及び／又はＩＮ１００１８とＰＤＬ１抗体との併用のＣＴ－２６マウス大腸癌細胞ＢＡＬＢ／ｃマウス皮下同種移植腫瘍モデルにおけるインビボ薬効。細胞を接種した後、腫瘍増殖状況を毎日観察し、接種後の１２日目に腫瘍体積に基づいて群分けをし、割り付けされた平均腫瘍体積は、約５９ｍｍ３である。腫瘍負荷量により、対照群を、接種後の２８日目、即ち、群分け投与後の１６日目に安楽死させ、残りの全ての群のマウスに投与し続け、接種後の３３日目、即ち、群分け投与後の２１日目に安楽死させ、全ての実験が終了した。
【0225】
群分け投与後の１６日目に、対照群の腫瘍体積は、３３３０．１±１５８７．５ｍｍ３である。ＰＤＬ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）の各治療群の腫瘍体積は、それぞれ１７２３．０±１１２２．８ｍｍ３、５２２．３±３２７．３ｍｍ３及び２２８．４±１０２．２ｍｍ３であり、詳細を表９に示す。腫瘍体積を統合して対照群と比較し、ＰＤＬ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群の腫瘍阻害率ＴＧＩは、それぞれ４９．２％（ｐ＜０．０００１）、８５．８％（ｐ＜０．０００１）及び９４．８％（ｐ＜０．０００１）である。詳細を表９に示す。各用量群の異なる時間範囲の腫瘍体積を図１３に示す。
【0226】
投与して１６日間経過した後、腫瘍体積が大きすぎるため、対照群を安楽死させ、残りのＰＤＬ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群に投与し続け、投与後の２１日目まで腫瘍体積を観察し記録し続け、それらの腫瘍体積は、それぞれ３０３８．０±１７９８．７ｍｍ３、７３７．０±６５８．５ｍｍ３及び３６０．９±１６１．３ｍｍ３である。腫瘍体積を統合してＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群と比較し、統計学的に分析し、ＰＤＬ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）のＰ値は、それぞれｐ＜０．０００１及びｐ＝０．０４６１であり、詳細を表９に示す。各用量群の異なる時間範囲の腫瘍体積を図１３に示す。
【0227】
被験物質のマウス結腸癌ＣＴ－２６細胞のＢＡＬＢ／ｃマウス移植腫瘍モデルに対する腫瘍阻害効果の評価（群分け投与後の１６日目及び２１日目のデータに基づく）
注：１、群分け投与後の日数に基づいて計算すると、データは、平均値±標準誤差であり、
２、対照群に比べると、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ、
３、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群に比べると、＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ。
【表9】
２、対照群に比べると、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ、
３、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群に比べると、＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ。
【0228】
投与スキームに従って、実験を行って、実験過程において、動物の食物及び水の摂取などの活動を毎日観察し、動物の体重を１週に３回記録し、動物の体重曲線を図１４に示す。投与サイクル全体を通じて、各群の動物は、体重が明らかに減少せず、状態が良好である。
【0229】
結論
ブランク対照群に比べて、ＰＤ－Ｌ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群は、いずれも明らかな腫瘍増殖阻害作用を示し、対照群に比べて、いずれも統計学的差異を有する。投与サイクル全体を総合すると、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群は、ＰＤ－Ｌ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）群及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）群に比べて、腫瘍体積がずっとより小さく、最後日、即ち、群分け投与後の２１日目に、この２つの群のいずれかと統計学的差異があり、ＰＤ－Ｌ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤群及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）２剤併用群に比べて、腫瘍増殖阻害効果がより高い。
ブランク対照群に比べて、ＰＤ－Ｌ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群は、いずれも明らかな腫瘍増殖阻害作用を示し、対照群に比べて、いずれも統計学的差異を有する。投与サイクル全体を総合すると、ＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８＋ＰＤＬ１抗体（１＋２５＋１０ｍｇ／ｋｇ）群は、ＰＤ－Ｌ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）群及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）群に比べて、腫瘍体積がずっとより小さく、最後日、即ち、群分け投与後の２１日目に、この２つの群のいずれかと統計学的差異があり、ＰＤ－Ｌ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）単一薬剤群及びＨＬ０８５＋ＩＮ１００１８（１＋２５ｍｇ／ｋｇ）２剤併用群に比べて、腫瘍増殖阻害効果がより高い。
【0230】
実施例６：検出対象化合物であるＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ及びＡＭＰ－９４５によるマウス乳癌４Ｔ１細胞のインビトロ免疫原性細胞死に対する標的誘導の研究
実験材料：
１）本実験で用いられる薬物
Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥによって提供され、Ｌｏｔ Ｎｏ：０７３９４である。
実験材料：
１）本実験で用いられる薬物
Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥによって提供され、Ｌｏｔ Ｎｏ：０７３９４である。
【0231】
ＡＭＰ－９４５は、ＭＣＥによって提供され、Ｌｏｔ Ｎｏ：１４３２５３である。
【0232】
２）本実験で用いられる抗体
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ Ｎｏ：ａｂ１９６１５９、Ｌｏｔ Ｎｏ：ＣＲ３３６７６７７３）。Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－アポトーシス検出キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｃ１０６２Ｌ、Ｌｏｔ Ｎｏ：１２２２２１２２０７０６）。
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ Ｎｏ：ａｂ１９６１５９、Ｌｏｔ Ｎｏ：ＣＲ３３６７６７７３）。Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－アポトーシス検出キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｃ１０６２Ｌ、Ｌｏｔ Ｎｏ：１２２２２１２２０７０６）。
【0233】
実験方法：
４Ｔ１細胞（南京科佰生物科技有限公司に由来し、商品番号：ＣＢＰ６０３５２）を、ＲＰＭＩ １６４０（上海元培、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｌ２１０ＫＪ、Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｆ２１０９１６）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ Ｎｏ：１００９９－１４１ｃ、Ｌｏｔ Ｎｏ：２１５８７３７ｃｐ）を用いて培養し、培養条件は、３７℃で、５％ＣＯ２である。１週に２～３回トリプシンを使用して通常の消化を行って継代させて処理する。細胞が指数増殖期にある場合、８０～９０％コンフルエントになると、細胞を回収し、プレーティングする。４Ｔ１細胞をトリプシンで消化した後、細胞を回収してカウントし、カウント結果に基づいて、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳで細胞を希釈し、希釈濃度を１ミリリットルあたりの５万個の細胞とし、その後に１２ウェル細胞培養プレートにプレーティングし、各ウェルに２ｍｌの細胞懸濁液、即ち、１０万個の細胞をプレーティングする。プレーティングした後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２培養器に入れて培養する。細胞を広げて２４時間経過した後、６つの群を設定し、第１群を対照群として、培地を添加し、第２群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を３μＭとし、第３群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を６μＭとし、第４群をＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（ＭＣＥ）とし、濃度を３μＭとし、第５群をＡＭＰ－９４５（３μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とし、第６群をＡＭＰ－９４５（６μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とする。薬物を混合し、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で４８時間培養する。
４Ｔ１細胞（南京科佰生物科技有限公司に由来し、商品番号：ＣＢＰ６０３５２）を、ＲＰＭＩ １６４０（上海元培、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｌ２１０ＫＪ、Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｆ２１０９１６）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ Ｎｏ：１００９９－１４１ｃ、Ｌｏｔ Ｎｏ：２１５８７３７ｃｐ）を用いて培養し、培養条件は、３７℃で、５％ＣＯ２である。１週に２～３回トリプシンを使用して通常の消化を行って継代させて処理する。細胞が指数増殖期にある場合、８０～９０％コンフルエントになると、細胞を回収し、プレーティングする。４Ｔ１細胞をトリプシンで消化した後、細胞を回収してカウントし、カウント結果に基づいて、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳで細胞を希釈し、希釈濃度を１ミリリットルあたりの５万個の細胞とし、その後に１２ウェル細胞培養プレートにプレーティングし、各ウェルに２ｍｌの細胞懸濁液、即ち、１０万個の細胞をプレーティングする。プレーティングした後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２培養器に入れて培養する。細胞を広げて２４時間経過した後、６つの群を設定し、第１群を対照群として、培地を添加し、第２群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を３μＭとし、第３群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を６μＭとし、第４群をＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（ＭＣＥ）とし、濃度を３μＭとし、第５群をＡＭＰ－９４５（３μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とし、第６群をＡＭＰ－９４５（６μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とする。薬物を混合し、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で４８時間培養する。
【0234】
実験結果
薬物を４８ｈ作用させた後、細胞を収集して流動解析を行い、流動緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）及び０．５μｌのＡＦ６４７を用いて細胞を２回洗浄し、各ウェルに抗カルレティキュリン抗体（ａｂｃａｍ）を加え、混合した。４℃で避光条件下でインキュベートし、２０ｍｉｎインキュベートした後に流動緩衝液を加え、アネキシン染色キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を用いて、１９５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抱合体を加え、細胞と吹き付けて混合し、５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抗体を加え、軽く混合し、最後に１０μｌのＰＩ染料を加えて混合し、室温で遮光して１５ｍｉｎインキュベートし、サンプルをフローサイトメーターに移してシグナル検出を行った。
薬物を４８ｈ作用させた後、細胞を収集して流動解析を行い、流動緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）及び０．５μｌのＡＦ６４７を用いて細胞を２回洗浄し、各ウェルに抗カルレティキュリン抗体（ａｂｃａｍ）を加え、混合した。４℃で避光条件下でインキュベートし、２０ｍｉｎインキュベートした後に流動緩衝液を加え、アネキシン染色キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を用いて、１９５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抱合体を加え、細胞と吹き付けて混合し、５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抗体を加え、軽く混合し、最後に１０μｌのＰＩ染料を加えて混合し、室温で遮光して１５ｍｉｎインキュベートし、サンプルをフローサイトメーターに移してシグナル検出を行った。
【0235】
フローサイトメーターの分析結果は、２剤併用群のＣＲＴ陽性率及びＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ陽性率が単一薬剤群及び対照群よりも顕著に優れていることを示し、図１５ａ及び１５ｂに示すとおりである。
【0236】
実施例７：検出対象化合物であるＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ及びＡＭＰ－９４５によるマウス大腸癌ＣＴ２６細胞のインビトロ免疫原性細胞死に対する標的誘導の研究
実験材料：
１）本実験で用いられる薬物
Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥによって提供され、Ｌｏｔ Ｎｏ：０７３９４である。
実験材料：
１）本実験で用いられる薬物
Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂは、ＭＣＥによって提供され、Ｌｏｔ Ｎｏ：０７３９４である。
【0237】
ＡＭＰ－９４５は、ＭＣＥによって提供され、Ｌｏｔ Ｎｏ：１４３２５３である。
【0238】
２）本実験で用いられる抗体
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ Ｎｏ：ａｂ１９６１５９、Ｌｏｔ Ｎｏ：ＣＲ３３６７６７７３）。Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－アポトーシス検出キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｃ１０６２Ｌ、Ｌｏｔ Ｎｏ：１２２２２１２２０７０６）。
組換えＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光Ａｎｔｉ－Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ Ｎｏ：ａｂ１９６１５９、Ｌｏｔ Ｎｏ：ＣＲ３３６７６７７３）。Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－アポトーシス検出キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｃ１０６２Ｌ、Ｌｏｔ Ｎｏ：１２２２２１２２０７０６）。
【0239】
実験方法：
ＣＴ２６細胞（南京科佰生物科技有限公司に由来し、商品番号：ＣＢＰ６００４３）を、ＲＰＭＩ １６４０（上海元培、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｌ２１０ＫＪ、Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｆ２１０９１６）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ Ｎｏ：１００９９－１４１ｃ、Ｌｏｔ Ｎｏ：２１５８７３７ｃｐ）を用いて培養し、培養条件は、３７℃で、５％ＣＯ２である。１週に２～３回トリプシンを使用して通常の消化を行って継代させて処理する。細胞が指数増殖期にある場合、８０～９０％コンフルエントになると、細胞を回収し、プレーティングする。ＣＴ２６細胞をトリプシンで消化した後、細胞を回収してカウントし、カウント結果に基づいて、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳで細胞を希釈し、希釈濃度を１ミリリットルあたりの５万個の細胞とし、その後に１２ウェル細胞培養プレートにプレーティングし、各ウェルに２ｍｌの細胞懸濁液、即ち、１０万個の細胞をプレーティングする。プレーティングした後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２培養器に入れて培養する。細胞を広げて２４時間経過した後、６つの群を設定し、第１群を対照群として、培地を添加し、第２群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を０．７５μＭとし、第３群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を１．５μＭとし、第４群をＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（ＭＣＥ）とし、濃度を３μＭとし、第５群をＡＭＰ－９４５（０．７５μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とし、第６群をＡＭＰ－９４５（１．５μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とする。薬物を混合し、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で４８時間培養する。
ＣＴ２６細胞（南京科佰生物科技有限公司に由来し、商品番号：ＣＢＰ６００４３）を、ＲＰＭＩ １６４０（上海元培、Ｃａｔ Ｎｏ：Ｌ２１０ＫＪ、Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｆ２１０９１６）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ Ｎｏ：１００９９－１４１ｃ、Ｌｏｔ Ｎｏ：２１５８７３７ｃｐ）を用いて培養し、培養条件は、３７℃で、５％ＣＯ２である。１週に２～３回トリプシンを使用して通常の消化を行って継代させて処理する。細胞が指数増殖期にある場合、８０～９０％コンフルエントになると、細胞を回収し、プレーティングする。ＣＴ２６細胞をトリプシンで消化した後、細胞を回収してカウントし、カウント結果に基づいて、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳで細胞を希釈し、希釈濃度を１ミリリットルあたりの５万個の細胞とし、その後に１２ウェル細胞培養プレートにプレーティングし、各ウェルに２ｍｌの細胞懸濁液、即ち、１０万個の細胞をプレーティングする。プレーティングした後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２培養器に入れて培養する。細胞を広げて２４時間経過した後、６つの群を設定し、第１群を対照群として、培地を添加し、第２群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を０．７５μＭとし、第３群をＡＭＰ－９４５とし、濃度を１．５μＭとし、第４群をＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（ＭＣＥ）とし、濃度を３μＭとし、第５群をＡＭＰ－９４５（０．７５μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とし、第６群をＡＭＰ－９４５（１．５μＭ）とＣｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ（３μＭ）との併用とする。薬物を混合し、３７℃で、５％ＣＯ２培養器で４８時間培養する。
【0240】
実験結果
薬物を４８ｈ作用させた後、細胞を収集して流動解析を行い、流動緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）及び０．５μｌのＡＦ６４７を用いて細胞を２回洗浄し、各ウェルに抗カルレティキュリン抗体（ａｂｃａｍ）を加え、混合した。４℃で避光条件下でインキュベートし、２０ｍｉｎインキュベートした後に流動緩衝液を加え、アネキシン染色キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を用いて、１９５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抱合体を加え、細胞と吹き付けて混合し、５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抗体を加え、軽く混合し、最後に１０μｌのＰＩ染料を加えて混合し、室温で遮光して１５ｍｉｎインキュベートし、サンプルをフローサイトメーターに移してシグナル検出を行った。
薬物を４８ｈ作用させた後、細胞を収集して流動解析を行い、流動緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）及び０．５μｌのＡＦ６４７を用いて細胞を２回洗浄し、各ウェルに抗カルレティキュリン抗体（ａｂｃａｍ）を加え、混合した。４℃で避光条件下でインキュベートし、２０ｍｉｎインキュベートした後に流動緩衝液を加え、アネキシン染色キット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を用いて、１９５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抱合体を加え、細胞と吹き付けて混合し、５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ抗体を加え、軽く混合し、最後に１０μｌのＰＩ染料を加えて混合し、室温で遮光して１５ｍｉｎインキュベートし、サンプルをフローサイトメーターに移してシグナル検出を行った。
【0241】
フローサイトメーターの分析結果は、２剤併用群のＣＲＴ陽性率及びＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ陽性率が単一薬剤群及び対照群よりも顕著に優れていることを示し、図１６ａ及び１６ｂに示すとおりである。
【0242】
本発明に言及された全ての参考文献は、各文献が個別に列挙されているようにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。本発明の開示内容を読んだ後に、当業者であれば、本発明に様々な変更又は修正を行うことができ、これらの均等物も本願の添付の特許請求の範囲によって限定される範囲に含まれることを理解されたい。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【手続補正書】
【提出日】2024-09-20
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象における腫瘍の治療における使用のための、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤であって、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与されるＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項2】
対象において腫瘍を治療するためのＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の医薬組み合わせ製品であって、前記ＦＡＫ阻害剤、前記ＭＥＫ阻害剤及び前記免疫チェックポイント阻害剤は、前記対象に同時に又は順次に投与される医薬組み合わせ製品。
【請求項3】
以下の定義：
ｉ）前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、
【化1】
ｉｉｉ）前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、
ｉｖ）前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、
ｖ）前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、結腸癌、直腸癌、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、線維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、
ｖｉ）前記腫瘍は、対象において免疫原性細胞死を増加させることにより治療される、
の一つ以上を有する、請求項１に記載の使用のための、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤、又は請求項２に記載の使用のための、医薬組み合わせ製品。
【請求項4】
（ａ）ＦＡＫ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と、
（ｃ）免疫チェックポイント阻害剤と、を含む、キット又は薬学的に許容される組成物。
【請求項5】
以下の定義：
ｉ）前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、
【化2】
ｉｉｉ）前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、
ｉｖ）前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、
の一つ以上を有する、請求項４に記載のキット又は組成物。
【請求項6】
以下の定義：
ｉ）薬物として用いられる、
ｉｉ）腫瘍の治療において用いられる、
ｉｉｉ）腫瘍の治療において用いられ、前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、結腸癌、直腸癌、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、結腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、線維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、
ｖｉ）腫瘍の治療において用いられ、前記腫瘍は、対象において免疫原性細胞死を増加させることにより治療される、
の一つ以上を有する、請求項４または５に記載のキット又は組成物。
【請求項7】
腫瘍の治療において使用するための、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤であって、前記ＦＡＫ阻害剤は、前記ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強する、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤。
【請求項8】
腫瘍の治療において、ＭＥＫ阻害剤によって誘導される免疫原性細胞死を増強するＦＡＫ阻害剤。
【請求項9】
以下の定義：
ｉ）前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ－３２５９０１、ＴＡＫ－７３３、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、コビメチニブ、ＨＬ－０８５又はそれらの薬学的に許容される塩である、
ｉｉ）前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、
【化3】
ｉｖ）ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤は、同時に又は順次に投与される、
の一つ以上を有する、請求項７に記載の使用のための、ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤、又は請求項８に記載の使用のための、ＦＡＫ阻害剤。
【請求項10】
腫瘍の併用治療における使用のための、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項11】
ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用する腫瘍の治療における使用のための、ＦＡＫ阻害剤。
【請求項12】
ＦＡＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤と併用する腫瘍の治療における使用のための、ＭＥＫ阻害剤。
【請求項13】
ＦＡＫ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤と併用する腫瘍の治療における使用のための、免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項14】
以下の定義：
ｉ）前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＰＦ－００５６２２７１、ＶＳ－４７１８、ＡＰＧ－２４４９、ＡＭＰ９４５、ＡＭＰ８８６又はそれらの薬学的に許容される塩であり、好ましくは、ＩＮ１００１８、Ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ、ＡＭＰ９４５又はそれらの薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、特に、ＩＮ１００１８酒石酸塩であり、前記ＩＮ１００１８の構造は、以下のとおりである、
【化4】
ｉｉｉ）前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤又はＴＩＧＩＴ阻害剤である、
ｉｖ）前記ＦＡＫ阻害剤は、ＩＮ１００１８又はその薬学的に許容される塩であり、前記ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ、ＨＬ－０８５、Ｅ－６２０１、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ、ＦＣＮ－１５９又はそれらの薬学的に許容される塩であり、前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１小分子阻害剤、特にアテゾリズマブである、
ｖ）前記腫瘍は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胆管癌、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、神経膠腫、結腸癌、直腸癌、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、脂肪肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、食道胃接合部癌、胸腺腫、膵臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、皮膚癌、生殖細胞癌、鼻咽頭癌、咽頭癌又は喉頭癌であり、さらに、前記腫瘍は、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、甲状腺癌、大腸癌、食道癌、肝細胞癌、卵巣癌、線維肉腫、胃癌、非小細胞肺癌又は胆管癌であり、またさらに、急性骨髄性白血病、悪性黒色腫、ぶどう膜悪性黒色腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌又は大腸癌である、
ｖｉ）前記腫瘍は、対象において免疫原性細胞死を増加させることにより治療される、
の一つ以上を有する、請求項１０に記載の使用のための、ＦＡＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤、請求項１１に記載の使用のための、ＦＡＫ阻害剤、請求項１２に記載の使用のための、ＭＥＫ阻害剤、又は請求項１３に記載の使用のための、免疫チェックポイント阻害剤。
【国際調査報告】