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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-01-30
(54)【発明の名称】クマリン化合物及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 407/12 20060101AFI20250123BHJP
C07D 311/08 20060101ALI20250123BHJP
C07D 407/06 20060101ALI20250123BHJP
A61P 35/00 20060101ALN20250123BHJP
A61K 31/506 20060101ALN20250123BHJP
A61K 31/37 20060101ALN20250123BHJP
【ＦＩ】
C07D407/12 CSP
C07D311/08
C07D407/06
A61P35/00
A61K31/506
A61K31/37
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024544468
(86)(22)【出願日】2023-01-16
(85)【翻訳文提出日】2024-09-17
(86)【国際出願番号】 CN2023072434
(87)【国際公開番号】W WO2023143206
(87)【国際公開日】2023-08-03
(31)【優先権主張番号】202210093816.8
(32)【優先日】2022-01-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202210405730.4
(32)【優先日】2022-04-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516304780
【氏名又は名称】メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(74)【代理人】
【識別番号】100221523
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 渉
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(72)【発明者】
【氏名】張 冬凱
(72)【発明者】
【氏名】譚 海忠
(72)【発明者】
【氏名】伍 文韜
(72)【発明者】
【氏名】徐 洋洋
(72)【発明者】
【氏名】孫 継奎
(72)【発明者】
【氏名】高 娜
(72)【発明者】
【氏名】張 楊
(72)【発明者】
【氏名】黎 健
(72)【発明者】
【氏名】陳 曙輝
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA03
4C086BA19
4C086BC42
4C086GA02
4C086GA07
4C086ZB26
(57)【要約】
本発明では、一連のクマリン化合物及びその使用が開示され、式（Ｉ）：
（Ｉ）
に示す化合物及びその薬学的に許容可能な塩が特に開示される。
に示す化合物及びその薬学的に許容可能な塩が特に開示される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）：【化1】
で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩
［式中、
Ｔ１はＣＨ及びＮから選択され；
Ｒ１はピリミジニル及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１～４アルキルアミノから選択され；
Ｒ２はハロゲンであり；
Ｒ３はハロゲン、Ｃ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルはそれぞれ独立して、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ４はハロゲン及びＣ１～３アルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ５はＣ１～３アルキルであり、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されている］。
【請求項2】
Ｒ１が構造：【化2】
【請求項3】
Ｒ２がＦである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項4】
Ｒ３がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＮＨＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択され、ここでＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＮＨＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２が、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されている、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項5】
Ｒ３がＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択される、請求項１または４に記載の化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項6】
Ｒ４がＦである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項7】
Ｒ５がＣＨ３である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項8】
次式：【化3】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０２２年１月２６日に出願されたＣＮ２０２２１００９３８１６．８及び２０２２年４月１８日に出願されたＣＮ２０２２１０４０５７３０．４の優先権を主張する。
【0002】
本開示は、一連のクマリン化合物及びその応用を開示し、特に式（Ｉ）で示される化合物及びその薬学的に許容可能な塩を開示する。
【背景技術】
【0003】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル経路は、真核生物のシグナル伝達ネットワークにおいて重要な経路の１つである。これは、正常状態および病的状態における、細胞増殖、分化、アポトーシス、及びストレス応答にとって重要なシグナル経路である。ＭＡＰＫは進化的に保存されたセリン－スレオニンキナーゼの一群である。ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル経路は、ＭＡＰＫ経路の１つである。これらのタンパク質の過剰発現または変異が、多くの悪性腫瘍において確認されている。ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル経路は、腫瘍分野における典型的なシグナル経路の１つである。
【0004】
統計によると、患者における非小細胞肺がんの３１％がＫＲＡＳ変異によって引き起こされ、患者における膵臓がんの９０％がＫＲＡＳ変異によって引き起こされ；加えて、子宮内膜がんの２１％、大腸がんの４５％、卵巣がんの５％などが全て、ＫＲＡＳ変異によって引き起こされ；メラノーマの２８％及び多発性骨髄腫の２０％がＮＲＡＳ変異によって引き起こされ；メラノーマの６０％、卵巣がんの３５～６０％、甲状腺乳頭がんの３０～８０％などが、ＢＲＡＦ変異によって引き起こされる。これらの患者は大勢存在する。
【0005】
市場には既に、ＲＡＦ及びＭＥＫを標的にした薬剤が幾つか存在するが、現在販売されているＲＡＦ低分子阻害剤及びＭＥＫ低分子阻害剤の承認適用は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異に伴うメラノーマに集中している。通常の状態では、ＢＲＡＦはＲＡＳにリン酸化され、その後二量化した後に初めてキナーゼ活性を有する一方で、ＢＲＡＦ変異体は常に活性化状態である。ＢＲＡＦＶ６００Ｅ単量体はＭＥＫをリン酸化し得る。ＲＡＳ変異の場合、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦはヘテロダイマーを形成し、その効果を発揮する。存在しているＲＡＦ及びＭＥＫの薬剤は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異にしか効果的でなく、ＭＡＰＫ上流のＲＡＳ変異に伴う腫瘍には効果がない。新規第二世代ＲＡＦ低分子阻害剤が必要である。同じく市場に存在するＭＥＫ阻害剤は、アロステリックキナーゼ阻害剤である。アロステリック阻害剤は、ＭＥＫに対する特異性が高いが、上流のキナーゼシグナルの影響を受けやすい。ＭＥＫリン酸化のフィードバック制御は、ＲＡＳ経路シグナルを再活性化し得て、ＭＥＫを阻害するだけでは、ＲＡＳ変異に伴う固体腫瘍を効果的に治療することはできない。したがって、ＲＡＦ／ＭＥＫの新規二重阻害剤は、ＭＡＰＫ経路活性化に伴う疾患を治療するための選択肢になり得る。
【発明の概要】
【0006】
本開示は式（Ｉ）：
（Ｉ）
で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する
［式中、
Ｔ１はＣＨ及びＮから選択され；
Ｒ１はピリミジニル及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１～４アルキルアミノから選択され；
Ｒ２はハロゲンであり；
Ｒ３はハロゲン、Ｃ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルはそれぞれ独立して、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ４はハロゲン及びＣ１～３アルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ５はＣ１～３アルキルであり、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されている］。
【化1】
で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する
［式中、
Ｔ１はＣＨ及びＮから選択され；
Ｒ１はピリミジニル及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１～４アルキルアミノから選択され；
Ｒ２はハロゲンであり；
Ｒ３はハロゲン、Ｃ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルはそれぞれ独立して、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ４はハロゲン及びＣ１～３アルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ５はＣ１～３アルキルであり、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されている］。
【0007】
本開示の幾つかの実施態様では、前記Ｒ１は式：
から選択され、他の可変部は本開示で定義される通りである。
【化2】
【0008】
本開示の幾つかの実施態様では、前記Ｒ２はＦであり、他の可変部は本開示で定義される通りである。
【0009】
本開示の幾つかの実施態様では、前記Ｒ３はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＮＨＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択され、ここでＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＮＨＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２は、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており、他の可変部は本開示で定義される通りである。
【0010】
本開示の幾つかの実施態様では、前記Ｒ３はＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択され、他の可変部は本開示で定義される通りである。
【0011】
本開示の幾つかの実施態様では、前記Ｒ４はＦであり、他の可変部は本開示で定義される通りである。
【0012】
本開示の幾つかの実施態様では、Ｒ５としてＣＨ３が選択され、他の可変部は本開示で定義される通りである。
【0013】
本開示の他の幾つかの実施態様は、上記の可変部を任意に組み合わせることによって得られる。
【0014】
本開示はまた次式：
で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【化3】
【0015】
（技術的効果）
本開示の化合物は、マウスにおいて、標的ＭＥＫ及び標的ＲＡＦを阻害し得、ＨＣＴ１１６細胞の増殖を効果的に阻害し得、かつ高い血漿中遊離曝露量、良好な経口バイオアベイラビリティ、及び有意な腫瘍阻害効果をもたらす。
本開示の化合物は、マウスにおいて、標的ＭＥＫ及び標的ＲＡＦを阻害し得、ＨＣＴ１１６細胞の増殖を効果的に阻害し得、かつ高い血漿中遊離曝露量、良好な経口バイオアベイラビリティ、及び有意な腫瘍阻害効果をもたらす。
【0016】
（関連定義）
別段の記載がない限り、本明細書で用いられる下記の用語および語句は、下記の意味を有するものとする。ある特定の用語または語句は、特定の定義が無いために不明確または不明瞭であると判断されるべきではなく、一般的な意味で理解されるべきである。本明細書で商品名が出現する場合、その対応する商品またはその活性成分を指すものとする。
別段の記載がない限り、本明細書で用いられる下記の用語および語句は、下記の意味を有するものとする。ある特定の用語または語句は、特定の定義が無いために不明確または不明瞭であると判断されるべきではなく、一般的な意味で理解されるべきである。本明細書で商品名が出現する場合、その対応する商品またはその活性成分を指すものとする。
【0017】
用語「薬学的に許容可能」は、本明細書において、化合物、原料、組成物、及び／または剤形の観点で用いられ、それらは信頼性のある医療判断の範囲において、ヒト及び動物組織に接触させて用いるのに適切であり、過剰な毒性、刺激性、アレルギー反応または他の問題若しくは合併症は無く、ベネフィット／リスクの割合が相応に妥当である。
【0018】
用語「薬学的に許容可能な塩」は、本明細書に記載の、ある特定の置換基を有する化合物と、比較的無毒な酸または塩基とを反応させて調製される、本明細書で開示される化合物の塩を意味する。本明細書で開示される化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、純粋な溶液または適切な不活性溶媒中で、前記化合物を十分な量の塩基と接触させることで、塩基付加塩を得ることができる。薬学的に許容可能な塩基付加塩として、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミン塩若しくはマグネシウム塩または類似の塩が挙げられる。本明細書で開示される化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、純粋な溶液または適切な不活性溶媒中で、前記化合物を十分な量の酸と接触させることで、酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容可能な酸付加塩の例として無機酸塩が挙げられ、ここで無機酸として、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸水素塩、リン酸、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、硫酸、硫酸水素塩、ヨウ化水素酸、亜リン酸などが挙げられ；及び有機酸塩が挙げられ、ここで有機酸として、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、及びメタンスルホン酸などが挙げられ；アミノ酸塩（例えばアルギニンなど）、有機酸塩、例えばグルクロン酸などが挙げられる。本明細書で開示される、ある特定の化合物は、塩基性及び酸性の官能基をどちらも含み、任意の塩基または酸付加塩に変換され得る。
【0019】
本明細書で開示される薬学的に許容可能な塩は、従来の化学的方法によって、酸性または塩基性の部分構造を含む親化合物から調製し得る。一般的に、このような塩は、水または有機溶媒またはそれらの混合液中において、遊離酸または遊離塩基の形態の前記化合物と、化学量論量の適切な塩基または酸とを反応させることで調製し得る。
【0020】
本明細書で開示される化合物は、ある特定の幾何形態または立体形態で存在してよい。本開示は、シス及びトランス異性体、（－）及び（＋）エナンチオマー、（Ｒ）及び（Ｓ）エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）異性体、（Ｌ）異性体、及びラセミ混合物並びにその他の混合物、例えば、エナンチオマーまたはジアステレオマーが豊富な混合物などを含めた全ての化合物を想定しており、これらの全てが本明細書で開示される範囲に包含される。置換基、例えばアルキルは、追加の不斉炭素原子を有してよい。これらの異性体及びその混合物は、本明細書で開示される範囲に包含される。
【0021】
本明細書で開示される化合物は、化合物を構成する１つ以上の元素において非天然割合の同位体元素を含んでよい。例えば、化合物は放射線同位体、例えばトリチウム（３Ｈ）、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）またはＣ１４（１４Ｃ）でラベル化されてよい。他の例として、水素を重水素に置き換えて、重水素化薬剤を形成し得る。重水素と炭素間の結合は、通常の水素と炭素間の結合よりも強固である。非重水素化薬剤と比較すると、重水素化薬剤は有毒な副作用が減少し、薬剤安定性が向上し、効能が増強し、薬剤の生物学的半減期が延長するという利点がある。本明細書で開示される化合物の同位体組成の変化は全て、放射能に関わらず、本開示の範囲に含まれる。
【0022】
用語「適宜の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「適宜（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、その後に記載されている事象あるいは状態が、起こってもよいが必要は無いことを意味し、この用語は、事象または状態が起こった場合と、事象または状態が起こらない場合とを含むことを意味する。
【0023】
用語「置換されている」は、ある特定の原子に接する１つ以上の水素原子が、重水素及び水素のバリエーションを含む置換基で置換されていることを意味し、その特定の原子の価数が通常通りであり、化合物置換体が安定である場合に限る。置換基がオキソ（すなわち＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されていることを意味する。芳香環上の位置はオキソで置換できない。用語「適宜置換されている」は、ある原子が置換基で置換されていてもよく、置換されていなくてもよいことを意味し、別段の記載がない限り、置換基の種類及び数は、化学的に達成し得る場合に限り、任意であってよい。
【0024】
前記化合物の構成または構造において、いずれかの可変部（例えばＲ）が２回以上出現する場合、可変部の定義は出現ごとに独立している。すなわち、例えばある基が０～２個のＲで置換されている場合、その基は最大２個のＲで適宜置換され得て、ここでＲの定義は出現ごとに独立している。更に、置換基及び／またはその可変部の組み合わせは、その組み合わせによって安定な化合物が得られる場合のみ許容される。
【0025】
－（ＣＲＲ）０－のように連結基の数が０である場合、その連結基が単結合であることを意味する。
【0026】
可変部の１つが単結合である場合、その単結合で連結された２つの基が直接結合していることを意味する。例えば、Ａ－Ｌ－ＺにおいてＬが単結合を表す場合、構造Ａ－Ｌ－Ｚは、実際にはＡ－Ｚである。
【0027】
列挙した連結基が連結方向を指示しない場合、連結方向は任意である。例えば、構造：
における連結基Ｌが、－Ｍ－Ｗ－である場合、－Ｍ－Ｗ－は左から右への読み順通りに、環Ａ及び環Ｂに連結して、構造：
を構成し得て、あるいは左から右への読み順とは逆方向に環Ａ及び環Ｂに連結して、構造：
を構成し得る。連結基、置換基及び／またはそれらの可変部の組み合わせは、その組み合わせによって安定な化合物が得られる場合のみ許容される。
【化4】
【化5】
【化6】
【0028】
別段の記載がない限り、ある基が１つ以上の結合可能部位を有する場合、その基の任意の１つ以上の部位は、化学結合を介して他の基に結合し得る。化学結合の結合位置が可変的であり、結合可能部位（複数可）に水素原子（複数可）があって、水素原子（複数可）を有する結合可能部位（複数可）が化学結合に結合する場合、その部位の水素原子（複数可）の数は、結合している化学結合が増加するにしたがって減少し、その基はそれに応じた価数の基になる。前記部位と他の基との化学結合は、実線の直線：
破線の直線：
または波線：
で表し得る。例えば、－ＯＣＨ３における実線の直線は、この基が他の基に酸素原子を介して結合していることを示し；構造：
における破線の直線は、この基が基内の窒素原子の２つの末端を介して他の基に結合していることを示し；構造：
における波線は、この基がフェニル基内の１及び２の炭素原子を介して他の基に結合していることを示し；構造：
は、ピペリジニル基上の任意の結合可能部位が、１つの化学結合を介して他の基に結合し得ることを示し、少なくとも次式の４つの結合様式を含み；
Ｈ原子が－Ｎ－上に描写されている場合であっても、構造：
は、構造：
の結合様式を依然として含み；
化学結合が１つ結合している場合にのみ、この部位のＨが１つ取り除かれ、前記基は対応する一価のピペリジニル基となる。
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
化学結合が１つ結合している場合にのみ、この部位のＨが１つ取り除かれ、前記基は対応する一価のピペリジニル基となる。
【0029】
別段の記載がない限り、楔形の実線で表す結合：
及び楔形の点線で表す結合：
は、不斉中心の絶対配置を示し；実線の直線で表す結合：
及び点線の直線で表す結合:
は、不斉中心の相対配置を示し；波線：
は楔形の実線で表す結合：
または楔形の点線で表す結合：
を示し；あるいは、波線：
は、実線の直線で表す結合：
または点線の直線で表す結合：
を示す。
【化16】
【化17】
【化18】
【化19】
【化20】
【化21】
【化22】
【化23】
【化24】
【化25】
【0030】
別段の記載がない限り、それ自体若しくは他の置換基の一部としての用語「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）またはヨウ素（Ｉ）原子を意味する。
【0031】
別段の記載がない限り、用語「Ｃ１～３アルキル」は、１～３個の炭素原子を含む、直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基を表すために用いられる。Ｃ１～３アルキルは、Ｃ１～２アルキル、Ｃ２～３アルキルなどを含む。これは一価（例えばメチル）、二価（例えばメチレン）または多価（メテニル）であってよい。Ｃ１～３アルキルの例として、限定されないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピル及びイソプロピルを含む）などが挙げられる。
【0032】
別段の記載がない限り、用語「Ｃ１～４アルキルアミノ」は、１～４個の炭素原子を含む、その分子の残りにアミノ基で結合しているアルキル基を意味する。Ｃ１～４アルキルアミノ基は、Ｃ１～３、Ｃ１～２、Ｃ２～４、Ｃ４、Ｃ３及びＣ２アルキルアミノ基など含む。Ｃ１～４アルキルアミノ基の例として、限定されないが、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、－ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＮＨＣＨ２（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３などが挙げられる。
【0033】
用語「４～６員含窒素ヘテロシクロアルキル」は単独で、または他の用語との組み合わせにおいてそれぞれ、４～６個の環原子を含む飽和シクリル基を表し、その基内において、１、２、３または４個の環原子は、それぞれ独立してＯ、Ｓ及びＮから選択されるヘテロ原子であり、少なくとも１つのヘテロ原子はＮ原子であり、その残りは炭素原子であり、ここで窒素原子は適宜四級化されており、窒素及び硫黄ヘテロ原子は適宜酸化されている（すなわちＮＯ及びＳ（Ｏ）ｐ、ｐは１または２）。これは単環系及び二環系を含み、ここで二環系は、スピロ環、縮合環及び架橋環を含む。加えて、「４～６員含窒素ヘテロシクロアルキル」に関して、ヘテロ原子は、ヘテロシクロアルキル基と、分子の残りの部分との結合部位に存在してよい。４～６員ヘテロシクロアルキルは、５～６員、４員、５員及び６員ヘテロシクロアルキルなどを含む。４～６員ヘテロシクロアルキルの例として、限定されないが、アゼチジニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル（１－ピペリジニル、２－ピペリジニル及び３－ピペリジニルなどを含む）、ピペラジニル（１－ピペラジニル及び２－ピペラジニルなどを含む）、モルホリニル（３－モルホリニル及び４－モルホリニルなどを含む）、ヘキサヒドロピリダジニルなどが挙げられる。
【0034】
別段の記載がない限り、Ｃｎ～ｎ＋ｍまたはＣｎ～Ｃｎ＋ｍは、ｎからｎ＋ｍ個の炭素原子のあらゆる具体的な事例を含み、例えば、Ｃ１～１２は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１及びＣ１２を含み、ｎからｎ＋ｍのあらゆる範囲も含み、例えば、Ｃ１～１２は、Ｃ１～３、Ｃ１～６、Ｃ１～９、Ｃ３～６、Ｃ３～９、Ｃ３～１２、Ｃ６～９、Ｃ６～１２及びＣ９～１２などを含み；同様に、ｎ員～ｎ＋ｍ員は、ある環の原子の数がｎ～ｎ＋ｍ個であることを示し、例えば、３～１２員環は、３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、及び１２員環を含み、ｎからｎ＋ｍのあらゆる範囲も含み、例えば、３～１２員環は３～６員環、３～９員環、５～６員環、５～７員環、６～７員環、６～８員環、６～１０員環などを含む。
【0035】
本明細書で開示される化合物は、当業者に公知である様々な合成方法、例えば下に列挙する実施態様、他の化学合成法との組み合わせにおいて下に列挙する実施態様から形成される実施態様、及び当業者に公知である等価置換、によって調製され得る。別の実施態様は、限定されないが、本明細書で開示される実施態様を含む。
【0036】
本明細書で開示される化合物の構造は、当業者に公知である従来の方法で決定され得る。本開示が化合物の絶対配置に関する場合、その絶対配置は当技術分野における従来技術、例えば単結晶Ｘ線解析（ＳＸＲＤ）によって決定され得る。単結晶Ｘ線解析（ＳＸＲＤ）において、ＣｕＫαの光源を用いた、Ｂｒｕｋｅｒ製Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回析計を、Φ／ωスキャンモードで使用して、生成した単結晶の回析強度データを集め；関連データを回収した後、絶対配置を決める直接法（Ｓｈｅｌｘｓ９７）で、その結晶構造を更に分析する。
【0037】
本開示で用いられる溶媒は市販されている。
【0038】
化合物は、当技術分野で一般的な命名規則に従って、あるいはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアで命名し、市販の化合物はその供給元のディレクトリ名で命名されている。
【図面の簡単な説明】
【0039】
図１は、種々の用量の化合物３を２８日間にわたって投与したマウスにおける、腫瘍体積の変化を示すグラフである。
【0040】
図２は、種々の用量の化合物３を２８日間にわたって投与したマウスにおける、体重の変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0041】
本開示は例示によって下で詳細に説明されている。しかし、これらの例は、本開示に不利となるいかなる制限も有さないものとする。本開示は、本明細書で詳細に説明されており、実施態様もまた本明細書で開示される。本明細書で開示される主旨と範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修正が、本明細書で開示される実施態様に対してなされてよいことは当業者にとって明らかであろう。
【実施例1】
【0042】
合成経路：
工程１：化合物１－２の合成
化合物１－１（５０ｇ）を氷酢酸（５００ｍＬ）に加えた。Ｎ－ブロモコハク酸イミド（６８．８４ｇ）及びベンゾイルペルオキシド（２．７６ｇ）を連続して加えた。前記反応系を８５℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応溶液を濃縮乾固した。水（３００ｍＬ）を加え、混合液を酢酸エチル（２００ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、飽和食塩水（１５０ｍＬ＊３）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～７０：３０）で分離及び精製し、化合物１－２を得た。
【化26】
化合物１－１（５０ｇ）を氷酢酸（５００ｍＬ）に加えた。Ｎ－ブロモコハク酸イミド（６８．８４ｇ）及びベンゾイルペルオキシド（２．７６ｇ）を連続して加えた。前記反応系を８５℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応溶液を濃縮乾固した。水（３００ｍＬ）を加え、混合液を酢酸エチル（２００ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、飽和食塩水（１５０ｍＬ＊３）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～７０：３０）で分離及び精製し、化合物１－２を得た。
【0043】
化合物１－２の特性評価は次の通りである：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.07 － 7.99 (m, 1H), 7.76 － 7.69 (m, 1H), 7.34 － 7.28 (m, 1H), 4.58 － 4.53 (m, 2H).
【0044】
工程２：化合物１－３の合成
６０％の純粋な水酸化ナトリウム（５１２．７２ｍｇ）を無水テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に、窒素条件下において０℃で加え、アセト酢酸エチル（１．６７ｇ）をゆっくりと滴加した。前記反応系を０℃で０．５時間攪拌した。上記反応溶液を、化合物１－２（３ｇ）の無水テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）溶液に、温度を０℃に維持しながら加えた。添加完了後、前記反応系を２０℃まで加熱し、１２時間攪拌した。反応終了後、前記反応系を、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）を加えることでクエンチした。前記混合液を酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出し、層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～８０：２０）で精製し、化合物１－３を得た。
６０％の純粋な水酸化ナトリウム（５１２．７２ｍｇ）を無水テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に、窒素条件下において０℃で加え、アセト酢酸エチル（１．６７ｇ）をゆっくりと滴加した。前記反応系を０℃で０．５時間攪拌した。上記反応溶液を、化合物１－２（３ｇ）の無水テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）溶液に、温度を０℃に維持しながら加えた。添加完了後、前記反応系を２０℃まで加熱し、１２時間攪拌した。反応終了後、前記反応系を、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）を加えることでクエンチした。前記混合液を酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出し、層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～８０：２０）で精製し、化合物１－３を得た。
【0045】
化合物１－３の特性評価: LCMS: m/z (ESI) = 284.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.95 － 7.88 (m, 1 H), 7.58 － 7.51 (m, 1 H), 7.23 － 7.16 (m, 1 H), 4.22 － 4.11 (m, 2 H), 3.86 － 3.66 (m, 1 H), 3.33 － 3.18 (m, 2 H), 2.27 (s, 3 H), 1.22 (t, J=7.2 Hz, 3 H).
【0046】
工程３：化合物１－４の合成
化合物１－３（６００ｍｇ）を７０％の純粋な硫酸水溶液（６ｍＬ）に溶解した。５－フルオロレゾルシノール（２７１．３５ｍｇ）を加え、反応系を２５℃で１６時間攪拌した。反応終了後、前記反応系を直接濾過した。濾過ケークを水（１０ｍＬ）でリンスし、固体を減圧下で濃縮乾固した。前記固体をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：０～９８：２）で精製し、化合物１－４を得た。
化合物１－３（６００ｍｇ）を７０％の純粋な硫酸水溶液（６ｍＬ）に溶解した。５－フルオロレゾルシノール（２７１．３５ｍｇ）を加え、反応系を２５℃で１６時間攪拌した。反応終了後、前記反応系を直接濾過した。濾過ケークを水（１０ｍＬ）でリンスし、固体を減圧下で濃縮乾固した。前記固体をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：０～９８：２）で精製し、化合物１－４を得た。
【0047】
化合物１－４の特性評価： LCMS: m/z (ESI) =348.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 10.97－10.77 (m, 1 H), 7.99 (t, J=7.2 Hz, 1 H), 7.57 (t, J=7.2 Hz, 1 H), 7.32 (t, J=8.0 Hz, 1 H), 6.69 － 6.56 (m, 2 H), 4.03 (s, 2 H), 2.47 (s, 3 H).
【0048】
工程４：化合物１－５の合成
化合物１－４（１００ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）に溶解した。炭酸セシウム（１１２．５９ｍｇ）及び２－ブロモピリミジン（１８３．１２ｍｇ）を加え、反応系を８０℃で１時間攪拌し反応させた。反応終了後、飽和食塩水（５ｍＬ）を前記系に加え、混合液を酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：０～９８：２）で分離し、化合物１－５を得た。
化合物１－４（１００ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）に溶解した。炭酸セシウム（１１２．５９ｍｇ）及び２－ブロモピリミジン（１８３．１２ｍｇ）を加え、反応系を８０℃で１時間攪拌し反応させた。反応終了後、飽和食塩水（５ｍＬ）を前記系に加え、混合液を酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１００：０～９８：２）で分離し、化合物１－５を得た。
【0049】
化合物１－５の特性評価：LCMS: m/z (ESI) =426.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 8.71 (d, J=4.4 Hz, 2 H), 8.00 (t, J=7.2 Hz, 1 H), 7.63 (t, J=7.2 Hz, 1 H), 7.41 － 7.25 (m, 4 H), 4.10 (s, 2 H), 2.56 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【0050】
工程５：化合物１－６の合成
化合物１－５（３５ｍｇ）を酢酸エチル（２ｍＬ）に溶解した。塩化すず（ＩＩ）二水和物（７４．２７ｍｇ）を加え、反応系を８０℃で４時間攪拌し、反応させた。反応終了後、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加えて、系をクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、化合物１－６を得た。
化合物１－５（３５ｍｇ）を酢酸エチル（２ｍＬ）に溶解した。塩化すず（ＩＩ）二水和物（７４．２７ｍｇ）を加え、反応系を８０℃で４時間攪拌し、反応させた。反応終了後、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加えて、系をクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、化合物１－６を得た。
【0051】
化合物１－６の特性評価：LCMS: m/z (ESI) =396.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 8.71 (d, J=4.8 Hz, 2 H), 7.37 (t, J=4.8 Hz, 1 H), 7.31 － 7.24 (m, 2 H), 6.78 － 6.68 (m, 1 H), 6.66 － 6.57 (m, 1 H), 6.28 － 6.26 (m, 1 H), 5.08 (s, 2 H), 3.93 (s, 2 H), 2.51 － 2.49 (m, 3 H).
【0052】
工程６：化合物１の合成
化合物１－６（４０ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）に溶解した。ピリジン（８０．０３ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（９８．３２ｍｇ）のアセトニトリル（１ｍＬ）溶液を加え、反応系を２０℃で２時間攪拌した。反応終了後、飽和食塩水（５ｍＬ）を加えて系をクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊５）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ分取方法：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３μｍ；移動相Ａ：１０ｍＭ 重炭酸アンモニウム水溶液（０．０５％ アンモニア水を含む）、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～６０％（８分間））で分離及び精製し、化合物１を得た。
化合物１－６（４０ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）に溶解した。ピリジン（８０．０３ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（９８．３２ｍｇ）のアセトニトリル（１ｍＬ）溶液を加え、反応系を２０℃で２時間攪拌した。反応終了後、飽和食塩水（５ｍＬ）を加えて系をクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊５）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ分取方法：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３μｍ；移動相Ａ：１０ｍＭ 重炭酸アンモニウム水溶液（０．０５％ アンモニア水を含む）、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～６０％（８分間））で分離及び精製し、化合物１を得た。
【0053】
化合物１の特性評価：LCMS: m/z (ESI) =489.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 9.36 (br s, 1 H), 8.71 (d, J=4.8 Hz, 2 H), 7.37 (t, J=4.8 Hz, 1 H), 7.32 － 7.25 (m, 3 H), 7.22－7.20 (m, 1 H), 7.04－7.02 (m, 1 H), 6.95 － 6.92 (m, 1 H), 3.99 (s, 2 H), 2.57 － 2.51 (m, 6 H).
【実施例2】
【0054】
合成経路：
工程１：化合物２－１の合成
化合物１－４（１００ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）に溶解した。炭酸カリウム（１１９．３９ｍｇ）を加えた。前記混合液を０℃で０．５時間攪拌し、その後ジメチルアミノホルミルクロリド（３７．１６ｍｇ）を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌し、反応させた。反応終了後、飽和食塩水（５ｍＬ）を系に加え、混合液を酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～６０：４０）で分離し、化合物２－１を得た。
【化27】
化合物１－４（１００ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）に溶解した。炭酸カリウム（１１９．３９ｍｇ）を加えた。前記混合液を０℃で０．５時間攪拌し、その後ジメチルアミノホルミルクロリド（３７．１６ｍｇ）を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌し、反応させた。反応終了後、飽和食塩水（５ｍＬ）を系に加え、混合液を酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～６０：４０）で分離し、化合物２－１を得た。
【0055】
化合物２－１の特性評価：LCMS: m/z (ESI) =419.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 8.07－8.00 (m, 1 H), 7.68－7.62 (m, 1 H), 7.34 － 7.27 (m, 1 H), 7.21 － 7.14 (m, 2 H), 4.08 (s, 2 H), 3.05 (s, 3 H), 2.93 (s, 3 H), 2.54 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【0056】
工程２：化合物２－２の合成
化合物２－１（１００ｍｇ）を酢酸エチル（５ｍＬ）に溶解した。塩化すず（ＩＩ）二水和物（２１５．７５ｍｇ）を加えた。反応系を８０℃で４時間攪拌し、反応させた。反応終了後、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加えて、系をクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、化合物２－２を得た。
化合物２－１（１００ｍｇ）を酢酸エチル（５ｍＬ）に溶解した。塩化すず（ＩＩ）二水和物（２１５．７５ｍｇ）を加えた。反応系を８０℃で４時間攪拌し、反応させた。反応終了後、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加えて、系をクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、化合物２－２を得た。
【0057】
化合物２－２の特性評価：LCMS: m/z (ESI) =389.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 7.19 － 7.11 (m, 2 H), 6.75 － 6.68 (m, 1 H), 6.65 － 6.56 (m, 1 H), 6.33 － 6.24 (m, 1 H), 5.08 (s, 2 H), 3.91 (s, 2 H), 3.05 (s, 3 H), 2.93 (s, 3 H), 2.56 － 2.47 (m, 3 H).
【0058】
工程３：化合物２の合成
化合物２－２（１００ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解した。ピリジン（２０３．６７ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（２５０．２１ｍｇ）のアセトニトリル（１．５ｍＬ）溶液を加え、反応系を２０℃で２時間攪拌した。反応終了後、飽和食塩水（１５ｍＬ）を加えて系をクエンチし、酢酸エチル（１５ｍＬ＊５）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ分取方法：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３μｍ；移動相Ａ：１０ｍＭ 重炭酸アンモニウム水溶液（０．０５％ アンモニア水を含む）、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～６０％（８分間））で分離及び精製し、化合物２を得た。
化合物２－２（１００ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解した。ピリジン（２０３．６７ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（２５０．２１ｍｇ）のアセトニトリル（１．５ｍＬ）溶液を加え、反応系を２０℃で２時間攪拌した。反応終了後、飽和食塩水（１５ｍＬ）を加えて系をクエンチし、酢酸エチル（１５ｍＬ＊５）で抽出した。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ分取方法：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３μｍ；移動相Ａ：１０ｍＭ 重炭酸アンモニウム水溶液（０．０５％ アンモニア水を含む）、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～６０％（８分間））で分離及び精製し、化合物２を得た。
【0059】
化合物２の特性評価：LCMS: m/z (ESI) =482.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.41 (t, J=8.0 Hz, 1 H), 7.03 (t, J=8.0 Hz, 1 H), 7.00 － 6.87 (m, 3 H), 6.60 (s, 1 H), 4.44 － 4.35 (m, 1 H), 4.08 (s, 2 H), 3.12 (s, 3 H), 3.04 (s, 3 H), 2.77 (d, J=5.2 Hz, 3 H), 2.56 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【実施例3】
【0060】
合成経路：
工程１：化合物３－２の合成
化合物３－１（４１ｇ）を無水メタノール（４１０ｍＬ）に溶解した。水素化ホウ素ナトリウム（１０．７７ｇ）を０℃でバッチに加えた。混合液を窒素条件下において２０℃で２時間攪拌した。アセトン（５０ｍＬ）を、窒素気流下で、反応溶液にゆっくりと滴加した。混合液を１時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。酢酸エチル（５００ｍＬ）、飽和食塩水（２００ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）を粗生成物に加えた。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、その後濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、化合物３－２を得た。
【化28】
化合物３－１（４１ｇ）を無水メタノール（４１０ｍＬ）に溶解した。水素化ホウ素ナトリウム（１０．７７ｇ）を０℃でバッチに加えた。混合液を窒素条件下において２０℃で２時間攪拌した。アセトン（５０ｍＬ）を、窒素気流下で、反応溶液にゆっくりと滴加した。混合液を１時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。酢酸エチル（５００ｍＬ）、飽和食塩水（２００ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）を粗生成物に加えた。層を分離した。有機層を合一し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、その後濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、化合物３－２を得た。
【0061】
化合物３－２の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =161.9 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.18 (d, J=4.8 Hz, 1 H), 7.47 (t, J=4.8 Hz, 1 H), 4.86 (s, 2 H), 2.77 (s, 1 H).
【0062】
工程２：化合物３－３の合成
化合物３－２（１０ｇ）を無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解し、その後トリエチルアミン（１２．５３ｇ）を加えた。メタンスルホン酸無水物（１２．９４ｇ）をバッチに加え、混合液を２０℃で１時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～７０：３０）で精製し、化合物３－３を得た。
化合物３－２（１０ｇ）を無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解し、その後トリエチルアミン（１２．５３ｇ）を加えた。メタンスルホン酸無水物（１２．９４ｇ）をバッチに加え、混合液を２０℃で１時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～７０：３０）で精製し、化合物３－３を得た。
【0063】
化合物３－３の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =239.9 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3), δ: 8.28 (d, J=4.8 Hz, 1 H), 7.40 (t, J=4.8 Hz, 1 H), 5.34 (s, 2 H), 3.13 (s, 3 H).
【0064】
工程３：化合物３－４の合成
ヨウ化ナトリウム（６２５．４５ｍｇ）及びアセト酢酸エチル（１．０９ｇ）を無水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解し、リチウムｔｅｒｔ－ブトキシドのテトラヒドロフラン溶液（２．２Ｍ、２．０９ｍＬ）を滴加した。添加完了後、混合液を１時間攪拌し、その後０℃に冷却した。化合物３－３（１ｇ）の無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液を窒素条件下で加えた。添加完了後、混合液を２０℃で１時間攪拌した。飽和食塩水（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。粗生成物をアルミナカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～９０：１０）で精製し、化合物３－４を得た。
ヨウ化ナトリウム（６２５．４５ｍｇ）及びアセト酢酸エチル（１．０９ｇ）を無水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解し、リチウムｔｅｒｔ－ブトキシドのテトラヒドロフラン溶液（２．２Ｍ、２．０９ｍＬ）を滴加した。添加完了後、混合液を１時間攪拌し、その後０℃に冷却した。化合物３－３（１ｇ）の無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液を窒素条件下で加えた。添加完了後、混合液を２０℃で１時間攪拌した。飽和食塩水（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。粗生成物をアルミナカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～９０：１０）で精製し、化合物３－４を得た。
【0065】
化合物３－４の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =273.9 [M+H] +.
【0066】
工程４：化合物３－５の合成
化合物３－４（０．１１ｇ）を９８％濃硫酸（７８８．３９ｍｇ）に溶解した。溶液を０℃まで冷却し、５－フルオロレゾルシノール（５１．４９ｍｇ）を加えた。混合液を２０℃で１６時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル（５ｍＬ）、飽和食塩水（３ｍＬ）、及び水（３ｍＬ）を反応溶液に加え、層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～０：１００）で精製し、化合物３－５を得た。
化合物３－４（０．１１ｇ）を９８％濃硫酸（７８８．３９ｍｇ）に溶解した。溶液を０℃まで冷却し、５－フルオロレゾルシノール（５１．４９ｍｇ）を加えた。混合液を２０℃で１６時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル（５ｍＬ）、飽和食塩水（３ｍＬ）、及び水（３ｍＬ）を反応溶液に加え、層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～０：１００）で精製し、化合物３－５を得た。
【0067】
化合物３－５の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =337.9 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 11.00 (s, 1 H), 8.13－8.11 (d, J=5.2 Hz, 1 H), 7.30－7.20 (t, J=5.2 Hz, 1 H), 6.69 － 6.51 (m, 2 H), 4.02 (s, 2 H), 2.50－2.45 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【0068】
工程５：化合物３－６の合成
化合物３－５（３１０ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解した。炭酸セシウム（３５８．９１ｍｇ）及び２－ブロモピリミジン（１７５．１３ｍｇ）を加え、混合液を８０℃で８時間攪拌した。酢酸エチル（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）を反応溶液に加え、層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～７０：３０）で精製し、化合物３－６を得た。
化合物３－５（３１０ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解した。炭酸セシウム（３５８．９１ｍｇ）及び２－ブロモピリミジン（１７５．１３ｍｇ）を加え、混合液を８０℃で８時間攪拌した。酢酸エチル（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）を反応溶液に加え、層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～７０：３０）で精製し、化合物３－６を得た。
【0069】
化合物３－６の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =416.0 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.63 (d, J=4.8 Hz, 2 H), 8.10 (d, J=4.8 Hz, 1 H), 7.18－7.14 (m, 2 H), 7.12 － 7.07 (m, 1 H), 6.96 (m, 1 H), 4.13 (s, 2 H), 2.61 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【0070】
工程６：化合物３－７の合成
化合物３－６（１４０ｍｇ）、ベンゾフェノンイミン（８２．４７ｍｇ）、トリス（ジベンジルアセトン）ジパラジウム（３０．８３ｍｇ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（３８．９７ｍｇ）、及び炭酸セシウム（３２９．１３ｍｇ）を無水トルエン（５ｍＬ）に溶解し、混合液を、窒素条件下において１１０℃で３時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去して、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～５０：５０）で精製し、化合物３－７を得た。
化合物３－６（１４０ｍｇ）、ベンゾフェノンイミン（８２．４７ｍｇ）、トリス（ジベンジルアセトン）ジパラジウム（３０．８３ｍｇ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（３８．９７ｍｇ）、及び炭酸セシウム（３２９．１３ｍｇ）を無水トルエン（５ｍＬ）に溶解し、混合液を、窒素条件下において１１０℃で３時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去して、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～５０：５０）で精製し、化合物３－７を得た。
【0071】
化合物３－７の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =561.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.63 (d, J=4.8 Hz, 2 H), 8.02 (d, J=5.2 Hz, 1 H), 7.47 － 7.28 (m, 9 H), 7.17 (t, J=4.8 Hz, 2 H), 7.07 (s, 1 H), 6.98 － 6.92 (m, 1 H), 6.81 (s, 1 H), 3.94 (s, 2 H), 2.30 (m, 3 H).
【0072】
工程７：化合物３－８の合成
化合物３－７（１３０ｍｇ）を無水テトラヒドロフラン（５．２ｍＬ）に溶解し、その後、１Ｍの希塩酸（２６０．００μＬ）を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。酢酸エチル（１０ｍＬ）、飽和食塩水（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）を反応溶液に加え、層を分離した。水層を回収し、飽和炭酸ナトリウム溶液でｐＨを９に調製し、その後、酢酸エチル（１０ｍＬ）を加えた。層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、化合物３－８を得た。
化合物３－７（１３０ｍｇ）を無水テトラヒドロフラン（５．２ｍＬ）に溶解し、その後、１Ｍの希塩酸（２６０．００μＬ）を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。酢酸エチル（１０ｍＬ）、飽和食塩水（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）を反応溶液に加え、層を分離した。水層を回収し、飽和炭酸ナトリウム溶液でｐＨを９に調製し、その後、酢酸エチル（１０ｍＬ）を加えた。層を分離した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、化合物３－８を得た。
【0073】
化合物３－８の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =397.0 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.63 (d, J=4.8 Hz, 2 H), 7.70 (d, J=5.4 Hz, 1 H), 7.17 (t, J=4.8 Hz, 1 H), 7.11 － 7.02 (m, 1 H), 7.00 － 6.90 (m, 1 H), 6.53 (t, J=5.4 Hz, 1 H), 5.19 － 5.01 (m, 2 H), 4.07 (s, 2 H), 2.58 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【0074】
工程８：化合物３の合成
化合物３－８（１０３ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．２ｍＬ）に溶解した。ピリジン（１１３．０６ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（１０１．０１ｍｇ）のアセトニトリル（０．６ｍＬ）溶液を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ分取方法：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ １００＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動相Ａ：０．１％ 重炭酸アンモニウム水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～５５％（８分間））で分離及び精製し、化合物３を得た。
化合物３－８（１０３ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．２ｍＬ）に溶解した。ピリジン（１１３．０６ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（１０１．０１ｍｇ）のアセトニトリル（０．６ｍＬ）溶液を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ分取方法：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ １００＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動相Ａ：０．１％ 重炭酸アンモニウム水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～５５％（８分間））で分離及び精製し、化合物３を得た。
【0075】
化合物３の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =490.0 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: ppm 8.71 (d, J=4.8 Hz, 2 H), 7.87 (d, J=5.0 Hz, 1 H), 7.44 － 7.23 (m, 3 H), 6.80 － 6.60 (m, 1 H), 4.00 (s, 2 H), 2.53 (m, 3 H), 2.48 (s, 3 H).
【実施例4】
【0076】
合成経路：
工程１：化合物４－１の合成
化合物３－５（３００ｍｇ）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に窒素条件下で溶解し、炭酸カリウム（３６８．３４ｍｇ）を加えた。ジメチルアミノホルミルクロリド（１２４．１９ｍｇ）を０℃で加えた。混合液を２０℃で３時間攪拌した。水（６ｍＬ）を反応溶液に加え、混合液を３０分間攪拌し、濾過した。濾過ケークを水（２ｍＬ）でリンスし、回収し、真空下においてロータリーエバポレーターで乾燥させ、化合物４－１を得た。
【化29】
化合物３－５（３００ｍｇ）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に窒素条件下で溶解し、炭酸カリウム（３６８．３４ｍｇ）を加えた。ジメチルアミノホルミルクロリド（１２４．１９ｍｇ）を０℃で加えた。混合液を２０℃で３時間攪拌した。水（６ｍＬ）を反応溶液に加え、混合液を３０分間攪拌し、濾過した。濾過ケークを水（２ｍＬ）でリンスし、回収し、真空下においてロータリーエバポレーターで乾燥させ、化合物４－１を得た。
【0077】
化合物４－１の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =409.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 8.13 (d, J=5.0 Hz, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 7.25 － 7.10 (m, 2 H), 4.08 (s, 2 H), 3.05 (s, 3 H), 2.93 (s, 3 H), 2.53 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【0078】
工程２：化合物４－２の合成
化合物４－１（３６０ｍｇ）、ベンゾフェノンイミン（２１５．４７ｍｇ）、トリス（ジベンジルアセトン）ジパラジウム（８０．６４ｍｇ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（１０１．９１ｍｇ）、及び炭酸セシウム（８６０．８１ｍｇ）をトルエン（５ｍＬ）に溶解した。混合液を、窒素条件下において、１１０℃で３時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～５０：５０）で精製し、化合物４－２を得た。
化合物４－１（３６０ｍｇ）、ベンゾフェノンイミン（２１５．４７ｍｇ）、トリス（ジベンジルアセトン）ジパラジウム（８０．６４ｍｇ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（１０１．９１ｍｇ）、及び炭酸セシウム（８６０．８１ｍｇ）をトルエン（５ｍＬ）に溶解した。混合液を、窒素条件下において、１１０℃で３時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮乾固し、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶出：石油エーテル／酢酸エチル＝１００：０～５０：５０）で精製し、化合物４－２を得た。
【0079】
化合物４－２の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =554.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.01 (d, J=5.0 Hz, 1 H), 7.91 － 7.72 (m, 2 H), 7.53 － 7.32 (m, 4 H), 7.23 － 7.06 (m, 4 H), 7.00－6.97 (m, 1 H), 6.95－6.90 (m, 1 H), 6.80 (t, J=5 Hz, 1 H), 3.92 (s, 2 H), 3.13 (s, 3 H), 3.05 (s, 3 H), 2.27 (d, J=6.0 Hz, 3 H).
【0080】
工程３：化合物４－３の合成
化合物４－２（１９０ｍｇ）を無水テトラヒドロフラン（７．６ｍＬ）に溶解し、その後、１Ｍの希塩酸水溶液（３８４．８０μＬ）を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。反応溶液を直接濾過し、濾過ケークを無水テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）でリンスした。濾過ケークを真空下において、ロータリーエバポレーターで乾燥させ、化合物４－３の塩酸塩を得た。
化合物４－２（１９０ｍｇ）を無水テトラヒドロフラン（７．６ｍＬ）に溶解し、その後、１Ｍの希塩酸水溶液（３８４．８０μＬ）を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。反応溶液を直接濾過し、濾過ケークを無水テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）でリンスした。濾過ケークを真空下において、ロータリーエバポレーターで乾燥させ、化合物４－３の塩酸塩を得た。
【0081】
化合物４－３の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =390.0 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 7.65 (d, J=6.0 Hz, 1 H), 7.26 － 7.12 (m, 2 H), 6.60 (s, 1 H), 4.03 (s, 2 H), 3.05 (s, 3 H), 2.93 (s, 3 H), 2.53 (s, 3 H).
【0082】
工程４：化合物４の合成
化合物４－３の塩酸塩（９８ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解した。ピリジン（１００．１３ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（８９．４６ｍｇ）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）溶液を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ方法：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３μｍ；移動相Ａ：０．１％重炭酸アンモニウム水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～４５％（８分間））で分離及び精製し、化合物４を得た。
化合物４－３の塩酸塩（９８ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解した。ピリジン（１００．１３ｍｇ）及びメチルアミノスルホニルクロリド（８９．４６ｍｇ）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）溶液を加えた。混合液を２０℃で２時間攪拌した。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ方法：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ 分取クロマトグラフ；カラム：Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３μｍ；移動相Ａ：０．１％重炭酸アンモニウム水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；ランニンググラジエント：Ｂ％：２５％～４５％（８分間））で分離及び精製し、化合物４を得た。
【0083】
化合物４の特性評価は次の通りである：LCMS: m/z (ESI) =483.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO－d6) δ: 7.80 (d, J=4.6 Hz, 1 H), 7.23 － 7.06 (m, 2 H), 6.62 (s, 1 H), 3.97 (s, 2 H), 3.06 (s, 3 H), 2.94 (s, 3 H), 2.55 － 2.51 (m, 3 H), 2.45 (s, 3 H).
【0084】
（評価システム）
アッセイ実施例１：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＨＣＴ１１６の細胞学的活性評価
アッセイ材料：ＭｃＣｏｙの５Ａ培地、Ｖｉｃｅｎｔｅで購入したペニシリン／ストレプトマイシン抗生物質、Ｂｉｏｓｅｒａで購入したウシ胎児血清、Ｐｒｏｍｅｇａで購入した３Ｄ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（細胞生存性化学発光検出試薬）試薬、Ｎａｎｊｉｎｇ Ｋｅｂａｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．で購入したＨＣＴ１１６細胞株、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ マルチラベル分析器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）。
アッセイ実施例１：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＨＣＴ１１６の細胞学的活性評価
アッセイ材料：ＭｃＣｏｙの５Ａ培地、Ｖｉｃｅｎｔｅで購入したペニシリン／ストレプトマイシン抗生物質、Ｂｉｏｓｅｒａで購入したウシ胎児血清、Ｐｒｏｍｅｇａで購入した３Ｄ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（細胞生存性化学発光検出試薬）試薬、Ｎａｎｊｉｎｇ Ｋｅｂａｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．で購入したＨＣＴ１１６細胞株、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ マルチラベル分析器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）。
【0085】
アッセイ方法：ＨＣＴ１１６細胞を超低接着９６穴Ｕ字型プレートに、ウェルごとに８０μＬの細胞懸濁液（１０００個のＨＣＴ１１６細胞を含む）となるように播種した。前記細胞プレートをＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。
【0086】
試験する化合物を、ピペットを用いて５倍ずつ９段階に系列希釈し、すなわち２ｍＭから５．１２ｎＭの希釈系列を作成し、これを複製した。７８μＬの培養培地を中間プレートに加え、その後ウェルごとに、２μＬの希釈系列した化合物を中間プレートの対応する位置に移した。十分に混合した後、２０μＬの混合液を細胞プレートの各ウェルに移した。細胞プレートに移された化合物の濃度範囲は、１０μＭ～０．０２５６ｎＭであった。前記細胞プレートをＣＯ２インキュベーターに供し、５日間培養した。別の細胞プレートを用意し、データ解析について、薬剤添加の日を最大値（下記方程式の最大値）としてシグナル値を読み取った。
【0087】
１００μＬの細胞生存性化学発光検出試薬を、前記細胞プレートに加え、混合液を室温で１０分間インキュベートして発光シグナルを安定化させた。プレートを、マルチラベル分析器で読み取った。
【0088】
データ分析：（サンプル－最小値）／（最大値－最小値）＊１００％の式を用いて未処理データを阻害率に変換し、ＩＣ５０値は、４種パラメーターの曲線フィッティング（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ中の「ｌｏｇ（阻害剤）ｖｓ.反応－可変傾斜」モードによって得られる）によって得てよい。本開示の化合物の、ＨＣＴ１１６細胞の増殖に対する阻害活性のアッセイ結果を表１に示す。
表１：本開示の化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングアッセイ結果
結論：本開示の化合物は、ＨＣＴ１１６細胞株中で、良好な細胞増殖阻害活性を示す。
表１：本開示の化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングアッセイ結果
【表1】
【0089】
アッセイ実施例２：化合物３のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬物動態試験
（オスのＣＤ－１マウスにおける、経口投与及び静脈注射後の試験化合物の薬物動態試験）
試験化合物を、１０％ジメチルスルホキシド／３０％ＰＥＧ－４００／６０％水溶液と混合し、ボルテックス及び超音波処理して、０．２０ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。後で使用するために、透明な溶液を微小多孔性フィルターで濾過した。７～１０週齢のオスのＣＤ－１マウスを選択し、候補化合物溶液及び基準化合物ＶＳ－６７６６溶液を静脈注射した。基準化合物及び試験化合物をそれぞれ、２０％スルホブチル－β－シクロデキストリン／８０％水溶液と混合し、ボルテックス及び超音波処理して、微粒子を含む、０．２０ｍｇ／ｍＬの透明に近い溶液を調製し、候補化合物溶液を経口投与した。ある特定の期間の後に全血液を回収し、血清を調製した。薬物濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法で分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、米国）を用いて薬物動態パラメーターを計算した。アッセイ結果を表２に示す。
表２．試験化合物の薬物動態結果
アッセイ結論：ＰＫ試験では、本開示の化合物は、マウスにおける血漿中遊離曝露量が多く、良好なバイオアベイラビリティを示す。
（オスのＣＤ－１マウスにおける、経口投与及び静脈注射後の試験化合物の薬物動態試験）
試験化合物を、１０％ジメチルスルホキシド／３０％ＰＥＧ－４００／６０％水溶液と混合し、ボルテックス及び超音波処理して、０．２０ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。後で使用するために、透明な溶液を微小多孔性フィルターで濾過した。７～１０週齢のオスのＣＤ－１マウスを選択し、候補化合物溶液及び基準化合物ＶＳ－６７６６溶液を静脈注射した。基準化合物及び試験化合物をそれぞれ、２０％スルホブチル－β－シクロデキストリン／８０％水溶液と混合し、ボルテックス及び超音波処理して、微粒子を含む、０．２０ｍｇ／ｍＬの透明に近い溶液を調製し、候補化合物溶液を経口投与した。ある特定の期間の後に全血液を回収し、血清を調製した。薬物濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法で分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、米国）を用いて薬物動態パラメーターを計算した。アッセイ結果を表２に示す。
表２．試験化合物の薬物動態結果
【表2】
【0090】
アッセイ実施例３：化合物３のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬力学試験
（メスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒト非小細胞肺がんＮＣＩ－Ｈ３５８皮下異種移植片腫瘍モデルに対する試験薬剤のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬力学試験）
１．細胞培養：ヒト肺がん細胞ＮＣＩ－Ｈ３５８（ＥＣＡＣＣ－９５１１１７３３）を、１０％ウシ胎児血清と１％二抗体を含むＲＰＭＩ１６４０培地中、再活性化及び培養した。細胞を、３７℃で５％ＣＯ２を含む細胞インキュベーター中で培養し、週に２回継代した。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞の飽和度が８０％～９０％に達した時点で、細胞を収穫、カウントし、植え付けた。
（メスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒト非小細胞肺がんＮＣＩ－Ｈ３５８皮下異種移植片腫瘍モデルに対する試験薬剤のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬力学試験）
１．細胞培養：ヒト肺がん細胞ＮＣＩ－Ｈ３５８（ＥＣＡＣＣ－９５１１１７３３）を、１０％ウシ胎児血清と１％二抗体を含むＲＰＭＩ１６４０培地中、再活性化及び培養した。細胞を、３７℃で５％ＣＯ２を含む細胞インキュベーター中で培養し、週に２回継代した。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞の飽和度が８０％～９０％に達した時点で、細胞を収穫、カウントし、植え付けた。
【0091】
２．動物：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（メス、６～８週齢、体重１８～２２ｇ）。
【0092】
腫瘍の植え付け：５×１０６ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を、マウスの首の右側にそれぞれ０．１ｍＬの体積で植え付けた。細胞懸濁液は、ＰＢＳ及びＭａｔｒｉｇｅｌ（３：１）の混合液であった。腫瘍体積の平均値が１５０～２００ｍｍ３に達した時点で、マウスを無作為に薬物投与群に振り分けた。各群における薬剤投与スキーム及び試験動物数を、下の表３に示す：
表３．試験動物群及び投薬レジメン
但し、ＱＤは１日に１回を意味する。
表３．試験動物群及び投薬レジメン
【表3】
【0093】
４．腫瘍測定及びアッセイパラメーター
アッセイの指標は、腫瘍の成長が阻害されているか遅くなっているか、または回復しているかを精査するためのものである。腫瘍の直径を、週に２回ノギスを用いて測定した。腫瘍体積の計算式は：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２であり、ここでａ及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径と短径を表している。
アッセイの指標は、腫瘍の成長が阻害されているか遅くなっているか、または回復しているかを精査するためのものである。腫瘍の直径を、週に２回ノギスを用いて測定した。腫瘍体積の計算式は：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２であり、ここでａ及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径と短径を表している。
【0094】
化合物の抗がん作用はＴＧＩ（％）または相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）によって評価した。ＴＧＩ（％）は腫瘍増殖阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）の計算は次の通りである：ＴＧＩ（％）＝［１－（ある特定の測定における、ある特定の治療群の腫瘍体積平均値－群形成時点における前記治療群の腫瘍体積平均値）／（同測定における、ビヒクル対照区群の腫瘍体積平均値－群形成時点におけるビヒクル対照区群の腫瘍体積平均値）］×１００％。相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）：計算式は次の通りである：Ｔ／Ｃ％＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療群のＲＴＶ；ＣＲＴＶ：陰性対照区群のＲＴＶ）。相対腫瘍体積（ＲＴＶ）は腫瘍測定の結果に基づいて計算された。計算式は、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であって、ここでＶ０は群形成時点で測定した腫瘍体積平均値（すなわちＰＧ－Ｄ０）であり、Ｖｔはある特定の測定における腫瘍体積平均値であり、ＴＲＴＶ及びＣＲＴＶは同日に記録される。
【0095】
ＴＧＩ（％）は腫瘍増殖抑制率を反映する。ＴＧＩ（％）＝［（１－（治療群の投薬終了時点における腫瘍体積平均値－治療群の投薬開始時点における腫瘍体積平均値））／（ビヒクル対照区群の治療終了時点における腫瘍体積平均値－ビヒクル対照区群の治療開始時点における腫瘍体積平均値）］×１００％。
【0096】
５．アッセイ結果
アッセイ結果を図１及び図２に示す。投薬から２８日経過後の結果を表４に示す。
表４．投薬後２８日目におけるＴ／Ｃ及びＴＧＩ
アッセイ結論：本開示の化合物は有意な腫瘍抑制効果を有する。
アッセイ結果を図１及び図２に示す。投薬から２８日経過後の結果を表４に示す。
表４．投薬後２８日目におけるＴ／Ｃ及びＴＧＩ
【表4】
【0097】
本明細書の投与量及び断続的投与によって、本標的に対する最大の腫瘍抑制効果を達成していてよい。将来的なｉｎ ｖｉｖｏ効能試験では、用量依存性を示し、動物忍容性を向上させるために、投薬量を減少させる、あるいは断続的投与を採択することを考慮する。
【図1】
【図2】
【手続補正書】
【提出日】2024-09-20
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）：【化1】
で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩
［式中、
Ｔ１はＣＨ及びＮから選択され；
Ｒ１はピリミジニル及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１～４アルキルアミノから選択され；
Ｒ２はハロゲンであり；
Ｒ３はハロゲン、Ｃ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキル、－ＣＨ２－Ｃ１～４アルキルアミノ及び－ＣＨ２－４～６員含窒素ヘテロシクロアルキルはそれぞれ独立して、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ４はハロゲン及びＣ１～３アルキルから選択され、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されており；
Ｒ５はＣ１～３アルキルであり、ここでＣ１～３アルキルは、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されている］。
【請求項2】
前記化合物が、次の定義ｉ）～ｖｉ）のいずれか１つ以上を充足する、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩：ｉ）Ｒ１が構造：
【化2】
ｉｉ）Ｒ２がＦである；
ｉｉｉ）Ｒ３がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＮＨＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択され、ここでＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＮＨＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２が、１、２または３個のハロゲンで適宜置換されている；
ｉｖ）Ｒ３がＣＨ３及びＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択される；
ｖ）Ｒ４がＦである；
ｖｉ）Ｒ５がＣＨ３である。
【請求項3】
次式のいずれか：【化3】
【国際調査報告】