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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-02-04
(54)【発明の名称】ＴＩＧＩＴ抗体及びその用途
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20250128BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20250128BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20250128BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20250128BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20250128BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20250128BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20250128BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250128BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20250128BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20250128BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20250128BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20250128BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20250128BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20250128BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20250128BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20250128BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20250128BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20250128BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20250128BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20250128BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20250128BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20250128BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 N
A61K39/395 L
A61K48/00
A61K35/12
A61P43/00 105
A61P37/04
A61K45/00
A61K47/68
A61P43/00 111
A61P35/00
A61P35/02
A61P37/02
A61P31/00
A61P17/00
A61P15/00
A61P11/00
A61P1/04
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024536095
(86)(22)【出願日】2022-12-15
(85)【翻訳文提出日】2024-06-14
(86)【国際出願番号】 CN2022139205
(87)【国際公開番号】W WO2023109890
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/139122
(32)【優先日】2021-12-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】524226449
【氏名又は名称】上海九葫禾生物科技有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＮＩＧＥＮＥ ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】３ｒｄ Ｆｌｏｏｒ， Ｂｌｏｃｋ １， ４００ Ｆａｎｇｃｈｕｎ Ｒｏａｄ， Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２０３， Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】高旭
(72)【発明者】
【氏名】押村 光雄
(72)【発明者】
【氏名】杜智敏
(72)【発明者】
【氏名】平松 敬
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C084
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA92X
4B065AB05
4B065AC14
4B065BA08
4B065CA25
4B065CA44
4B065CA46
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF34
4C084AA13
4C084AA17
4C084NA14
4C084ZA591
4C084ZA661
4C084ZA811
4C084ZA891
4C084ZB071
4C084ZB211
4C084ZB261
4C084ZB271
4C084ZB321
4C084ZC411
4C085AA14
4C085AA16
4C085AA25
4C085AA27
4C085BB33
4C085BB34
4C085BB35
4C085BB36
4C085BB37
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE03
4C087AA01
4C087AA03
4C087BB65
4C087CA04
4C087NA14
4C087ZA59
4C087ZA66
4C087ZA81
4C087ZA89
4C087ZB07
4C087ZB21
4C087ZB26
4C087ZB27
4C087ZB32
4C087ZC41
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、ＴＩＧＩＴと特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を含む組成物、及びＴＩＧＩＴ関連疾患の診断と治療におけるその用途を提供する。
【選択図】図６
【選択図】図６
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）と特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、且つ、前記重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３を含み、且つ、前記軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
（ａ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５、配列番号８１、及び１つ若しくは複数のアミノ酸を付加、欠失若しくは置換して生成されたそれらの変異体配列からなる群から選ばれる配列を含み、（ｂ）前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６、配列番号８２、及び１つ若しくは複数のアミノ酸を付加、欠失若しくは置換して生成されたそれらの変異体配列からなる群から選ばれる配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７、配列番号８３、及び１つ若しくは複数のアミノ酸を付加、欠失若しくは置換して生成されたそれらの変異体配列からなる群から選ばれる配列を含み、及び／又は
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２、配列番号７８、及び１つ若しくは複数のアミノ酸を付加、欠失若しくは置換して生成されたそれらの変異体配列からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３、配列番号７９、及び１つ若しくは複数のアミノ酸を付加、欠失若しくは置換して生成されたそれらの変異体配列からなる群から選ばれる配列を含み、且つ
（ｆ）前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４、配列番号８０、及び１つ若しくは複数のアミノ酸を付加、欠失若しくは置換して生成されたそれらの変異体配列からなる群から選ばれる配列を含む、請求項１に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
（ａ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５及び配列番号８１からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み、（ｂ）前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６及び配列番号８２からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７及び配列番号８３からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み、及び／又は
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２及び配列番号７８からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３及び配列番号７９からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み、且つ
（ｆ）前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４及び配列番号８０からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む、請求項１又は２に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
（ａ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５及び配列番号８１からなる群から選ばれる配列を含み、（ｂ）前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６及び配列番号８２からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７及び配列番号８３からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２及び配列番号７８からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３及び配列番号７９からなる群から選ばれる配列を含み、且つ
（ｆ）前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４及び配列番号８０からなる群から選ばれる配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
前記重鎖可変領域が、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３を含み、且つ（ａ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２３の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号２４の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号２５の配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２９の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３０の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３１の配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号３５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３７の配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４３の配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４７の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４８の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４９の配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５３の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号５４の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号５５の配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５９の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６０の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６１の配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号６５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６７の配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号７５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号７６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号７７の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号８１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号８２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号８３の配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項6】
前記軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含み、且つ（ａ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号２０の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２１の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２２の配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号２６の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２８の配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号３２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号３４の配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号３８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４０の配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号４４の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号４５の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４６の配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号５０の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５１の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５２の配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号５６の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５８の配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号６２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号６３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号６４の配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号７２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号７４の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号７８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号８０の配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項7】
（ａ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号２３の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号２４の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号２５の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号２０の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号２１の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号２２の配列を含み、（ｂ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号２９の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号３０の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号３１の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号２６の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号２７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号２８の配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号３５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号３６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号３７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号３２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号３３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号３４の配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号４１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号４２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号４３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号３８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号３９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号４０の配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号４７の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号４８の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号４９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号４４の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号４５の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号４６の配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号５３の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号５４の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号５５の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号５０の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号５１の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号５２の配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号５９の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号６０の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号６１の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号５６の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号５７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号５８の配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号６５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号６６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号６７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号６２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号６３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号６４の配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号７５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号７６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号７７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号７２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号７３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号７４の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号８１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が配列番号８２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３が配列番号８３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１が配列番号７８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が配列番号７９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３が配列番号８０の配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項8】
前記重鎖可変領域が、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号６９及び配列番号７１からなる群から選ばれる配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項9】
前記軽鎖可変領域が、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号６８及び配列番号７０からなる群から選ばれる配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項10】
（ａ）前記重鎖可変領域が配列番号５の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号４の配列を含み、（ｂ）前記重鎖可変領域が配列番号７の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号６の配列を含み、
（ｃ）前記重鎖可変領域が配列番号９の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号８の配列を含み、
（ｄ）前記重鎖可変領域が配列番号１１の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号１０の配列を含み、
（ｅ）前記重鎖可変領域が配列番号１３の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号１２の配列を含み、
（ｆ）前記重鎖可変領域が配列番号１５の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号１４の配列を含み、
（ｇ）前記重鎖可変領域が配列番号１７の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号１６の配列を含み、
（ｈ）前記重鎖可変領域が配列番号１９の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号１８の配列を含み、
（ｉ）前記重鎖可変領域が配列番号６９の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号６８の配列を含み、又は
（ｊ）前記重鎖可変領域が配列番号７１の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域が配列番号７０の配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項11】
重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、（ａ）前記ＶＨは配列番号５で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号４で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｂ）前記ＶＨは配列番号７で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号６で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｃ）前記ＶＨは配列番号９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｄ）前記ＶＨは配列番号１１で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１０で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｅ）前記ＶＨは配列番号１３で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１２で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｆ）前記ＶＨは配列番号１５で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１４で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｇ）前記ＶＨは配列番号１７で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１６で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｈ）前記ＶＨは配列番号１９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｉ）前記ＶＨは配列番号６９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号６８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、又は
（ｊ）前記ＶＨは配列番号７１で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号７０で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む、請求項１に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項12】
さらに、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ及びＩｇＤの重鎖定常領域から選ばれる重鎖定常領域を含み、及び／又は、さらに、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項13】
Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体及びその組み合わせからなる群から選ばれる形態である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項14】
試薬と結合される抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、前記試薬は、例えば、検出可能な標識又は細胞傷害性薬物である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項16】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片の発現を可能にする、発現ベクター。
【請求項17】
請求項１５に記載のポリヌクレオチド又は請求項１６に記載のベクターを含む、操作された細胞。
【請求項18】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片と、請求項１５に記載のポリヌクレオチドと、請求項１６に記載のベクター又は請求項１７に記載の細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項19】
さらに、別の免疫チェックポイント阻害剤、特に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤及び／又はＣＴＬＡ－４阻害剤を含む抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であって、特に、別の阻害剤は、抗体又はその抗原結合断片である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項20】
ＴＩＧＩＴ関連疾患を治療するための薬物の製造における、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、請求項１５に記載のポリヌクレオチド、請求項１６に記載のベクター、請求項１７に記載の細胞又は請求項１８若しくは１９に記載の医薬組成物の用途であって、好ましくは、前記ＴＩＧＩＴ関連疾患は、Ｔ細胞機能不全疾患であり、
より好ましくは、前記ＴＩＧＩＴ関連疾患は、腫瘍、免疫疾患又は感染症であり、且つ、特に、前記腫瘍の細胞は、ＣＤ１５５陽性又はＰＶＲ陽性であり、且つ
より好ましくは、前記腫瘍は、黒色腫、乳がん、非小細胞肺がん、結腸腺がん、胃がん、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫からなる群から選ばれる、用途。
【請求項21】
有効量の、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、請求項１５に記載のポリヌクレオチド、請求項１６に記載のベクター、請求項１７に記載の細胞又は請求項１８若しくは１９に記載の医薬組成物を、必要とする被験者に投与することを含む、ＴＩＧＩＴ関連疾患の治療の方法であって、好ましくは、前記ＴＩＧＩＴ関連疾患は、Ｔ細胞機能不全疾患であり、
より好ましくは、前記ＴＩＧＩＴ関連疾患は、腫瘍、免疫疾患又は感染症であり、且つ、特に、前記腫瘍の細胞は、ＣＤ１５５陽性又はＰＶＲ陽性であり、且つ
より好ましくは、前記腫瘍は、黒色腫、乳がん、非小細胞肺がん、結腸腺がん、胃がん、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫からなる群から選ばれる、方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【0001】
本願は、２０２１年１２月１７日に提出された、出願番号がＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１３９１２２で、発明名称が「ＴＩＧＩＴ抗体及びその用途」である中国ＰＣＴ出願の優先権を主張しており、その内容のすべては、援用で本明細書に取り込まれる。
【技術分野】
【0002】
本発明は、ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）と特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物及びその用途に関する。
【背景技術】
【0003】
近年、腫瘍免疫療法は、大きな進歩を遂げており、腫瘍治療では新しい方法として有望である。特に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４をはじめとする腫瘍免疫抑制チェックポイントを遮断する治療法は注目を集めている。ＦＤＡは２０００年から、黒色腫、非小細胞肺がん、前立腺がんなどのような悪性腫瘍の臨床治療へのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体の使用を相次いで承認し、良好な治療効果を上げている。しかし、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体療法は臨床応答率が依然として限られているため、その臨床的使用が大きく制限されている。そのため、新しい免疫抑制チェックポイントを探すことが、研究のホットスポットとなっている。
【0004】
ＴＩＧＩＴは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈチームが２００９年に発見した新しい免疫抑制因子である（Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００９，１０：４８－５７）。それはＰＶＲ様タンパク質ファミリーのメンバーである。ＴＩＧＩＴは、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞を含む、Ｔ細胞及びＮＫ細胞で発現される。一般的に、ＴＩＧＩＴの発現レベルは低いが、Ｔ細胞及びＮＫ細胞が活性化される時に、ＴＩＧＩＴの発現は大幅に増加する（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１２，１８８：３８６９－３８７５，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２６，９２３－９３７，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９，７２３－７３２）。今までに発見されているＴＩＧＩＴリガンドは、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３を含み、、そのうち、ＣＤ１５５がＴＩＧＩＴの主なリガンドである。結晶構造解析では、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ１５５はそれぞれホモ二量体を形成させ、リガンドと受容体との間の相互作用によりさらにヘテロ四量体を形成させることが示されている（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０１２；１０９：５３９９－４０４）。ＣＤ１１２又はＣＤ１１３に対するＴＩＧＩＴの結合親和性は、ＣＤ１５５に対するＴＩＧＩＴの結合親和性より顕著に低い。ＣＤ１５５は、主として樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ及び非造血組織（例えば、腎臓、神経系、小腸）で発現される。ＴＩＧＩＴと同じように、活性化受容体ＤＮＡＭ－１及びＣＤ９６もＣＤ１５５と結合できるが、それらの親和性はＴＩＧＩＴより弱い。要するに、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５のリガンド－受容体作用様式はＣＴＬＡ－４／ＣＤ２８経路と似ている。高い親和性を有する抑制性受容体と低い親和性を有する活性化受容体が競合して同じリガンドと結合することで、免疫応答が正確に制御される。ＣＤ１５５と結合したＴＩＧＩＴは、ＤＣの機能を制御し、エフェクターＴ細胞の活性を抑制し、ＤＮＡＭ－１の共活性化を妨害し、Ｔｒｅｇの抑制を向上させることにより免疫抑制効果を発揮することができる（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０２０ Ｍａｙ；２００（２）：１０８－１１９，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４０，５６９－５８１）。
【0005】
ヒト及びマウスを対象とするいくつかの研究により、ＴＩＧＩＴは腫瘍浸潤リンパ球で高度に発現されることが分かった。黒色腫、乳がん、非小細胞肺がん、結腸腺がん、胃がん、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫を含む様々な悪性腫瘍では、ＴＩＧＩＴが上方制御される（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０２０ Ｍａｙ；２００（２）：１０８－１１９）。また、いくつかの研究により、ＴＩＧＩＴは、ＣＤ８＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ及びＮＫ細胞で高度に発現されることも分かった。腫瘍患者では、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞におけるＴＩＧＩＴの発現が一般的に他の抑制性受容体（例えば、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、Ｔｉｍ－３）の高発現及びＤＮＡＭ－１の低発現と一致している。ＴＩＧＩＴの高発現は、一般的に悪性腫瘍の不良な予後に関係している。ＮＫ細胞におけるＴＩＧＩＴの高発現は疾患の重症度に関係している。ＴＩＧＩＴノックアウトマウスでは腫瘍の増殖が顕著に低下し、生存率が向上している。
【0006】
高分子という性質上、その抗体医薬品は一般的に免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）を伴う。ＴＩＧＩＴノックアウトマウスでは、自発的な自己免疫症状もなければ、造血細胞の発達障害もない。自己免疫疾患になる傾向のあるマウスとハイブリダイゼーションした後にのみ、自己免疫疾患の発生率は向上する。動物試験では、ＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４ ｍＡｂと比べて、抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂの投与期間中にｉｒＡＥの発生率が低いことが分かった（Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１８；７：ｅ１４４５９４９）。したがって、ＴＩＧＩＴを標的とする抗体医薬品は、副作用の生じるリスクが比較的低く、臨床抗がん剤として質の高い候補である。
【0007】
過去の臨床試験結果から分かるように、ＴＩＧＩＴ抗体とＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体との組み合わせは、患者の応答率を顕著に高め、治療効果を改善することができ、それに、一部の患者における薬剤耐性を解消している（Ｃａｎｃｅｒｓ ２０１９；１１：８７７，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ，１０：１０８６－１０８７（２０２０））。現在、世界中に販売許可の下りたＴＩＧＩＴに対するモノクローナル抗体はまだないため、高い親和性及び活性を有する抗体を候補薬物として開発することが必要である。
【発明の概要】
【0008】
本発明の発明者らは、大量の試験を経て、ヒト抗体遺伝子配列完全長を有する染色体導入マウス（ＴＣ ｍＡｂＴＭマウス）モデルを用いてスクリーニングしたところ、思いがけないことに、ＴＩＧＩＴと特異的に結合する抗体を得ている。前記抗体は、ＴＩＧＩＴに対する優れた親和性を示すとともに創薬可能性を秘めている。
【0009】
本発明は、がん及び慢性ウイルス感染症に用いて改善された薬物及び療法を提供し、前記改善された薬物及び療法は、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈｕＴＩＧＩＴ）と特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を含む。本明細書は、ｈｕＴＩＧＩＴと特異的に結合し、所望の機能特性、例えば、ｈｕＴＩＧＩＴに対する高い親和性での特異的結合、サルＴＩＧＩＴ（例えば、カニクイザルＴＩＧＩＴ）との結合、ＰＶＲ及びネクチン－２（Ｎｅｃｔｉｎ－２）に対するＴＩＧＩＴの結合の遮断能力、ＴＩＧＩＴとＤＮＡＭとの相互作用の遮断能力又はそれらの特性の任意の組み合わせを有する、分離された抗体、例えば、モノクローナル抗体、特に、ヒトモノクローナル抗体を提供する。
【0010】
本発明は、本明細書に開示されている重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を有する抗体と競合してｈｕＴＩＧＩＴと結合し、本明細書に開示されている重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を有する抗体のｈｕＴＩＧＩＴに対する結合を交差遮断する抗体に関する。
【0011】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、抗腫瘍免疫応答、例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答を増強させる。他の実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、ＴＩＧＩＴによって媒介される抑制性シグナル伝達を遮断し、ＮＫ細胞のＰＶＲ／ＤＮＡＭ共刺激を可能にすることによりＮＫ媒介性抗腫瘍応答による死滅を増加させる。別の実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、腫瘍内の制御性Ｔ細胞集団を枯渇させ、さもなければ前記制御性Ｔ細胞集団は抗腫瘍免疫応答を抑制する。別の実施形態では、ＩｇＧ１形態の本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＤ８＋枯渇性Ｔ細胞及びＴｒｅｇを枯渇させることにより、新しい非枯渇性ＣＤ８＋Ｔ細胞の流入を可能にする。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１形態の本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、腫瘍微小環境におけるＣＤ８＋ＴＩＬ集団の割合を上昇させる。他の実施形態では、前記のメカニズムは必ずしも互いに矛盾するとは限らないため、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、前記メカニズムのうちの１種又は複数種により役割を果たす。
【0012】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ＴＩＧＩＴ発現細胞の抗腫瘍活性に対する増強に依存する実施形態では、活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）と結合しない。代替の実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ＴＩＧＩＴ発現細胞（例えば、枯渇性ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＴｒｅｇ）の死滅に依存する実施形態では、１種又は複数種の活性化ＦｃγＲと結合する。
【0013】
第１の態様では、本発明は、ＴＩＧＩＴと特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を提供する。前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又は抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、且つ、前記重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３を含み、且つ、軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含む。
【0014】
本発明のいくつかの実施形態では、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５若しくは配列番号８１の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５若しくは配列番号８１に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６若しくは配列番号８２の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６若しくは配列番号８２に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７若しくは配列番号８３の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７若しくは配列番号８３に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含む。
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５若しくは配列番号８１の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５若しくは配列番号８１に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６若しくは配列番号８２の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６若しくは配列番号８２に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７若しくは配列番号８３の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７若しくは配列番号８３に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含む。
【0015】
本発明のいくつかの他の実施形態では、
（ａ）前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２若しくは配列番号７８の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２若しくは配列番号７８に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３若しくは配列番号７９の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３若しくは配列番号７９に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４若しくは配列番号８０の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４若しくは配列番号８０に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含む。
（ａ）前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２若しくは配列番号７８の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２若しくは配列番号７８に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３若しくは配列番号７９の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３若しくは配列番号７９に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４若しくは配列番号８０の配列を含み、又は前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４若しくは配列番号８０に１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換して誘導された配列を含む。
【0016】
本発明のいくつかの他の実施形態では、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５及び配列番号８１からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６及び配列番号８２からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７及び配列番号８３からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、及び／又は
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２及び配列番号７８からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３及び配列番号７９からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、且つ
（ｆ）前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４及び配列番号８０からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５及び配列番号８１からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６及び配列番号８２からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、且つ
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７及び配列番号８３からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、及び／又は
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２及び配列番号７８からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３及び配列番号７９からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、且つ
（ｆ）前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４及び配列番号８０からなる群から選ばれる配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。
【0017】
本発明のいくつかの他の実施形態では、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５及び配列番号８１からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６及び配列番号８２からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７及び配列番号８３からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２及び配列番号７８からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３及び配列番号７９からなる群から選ばれる配列を含み、且つ
（ｆ）前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４及び配列番号８０からなる群から選ばれる配列を含む。
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６５、配列番号７５及び配列番号８１からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２、配列番号４８、配列番号５４、配列番号６０、配列番号６６、配列番号７６及び配列番号８２からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５５、配列番号６１、配列番号６７、配列番号７７及び配列番号８３からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４４、配列番号５０、配列番号５６、配列番号６２、配列番号７２及び配列番号７８からなる群から選ばれる配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号７３及び配列番号７９からなる群から選ばれる配列を含み、且つ
（ｆ）前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号４６、配列番号５２、配列番号５８、配列番号６４、配列番号７４及び配列番号８０からなる群から選ばれる配列を含む。
【0018】
本発明のいくつかの他の実施形態では、前記重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３を含み、且つ
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号２４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号２５で示される配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３１で示される配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号３５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３７で示される配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４１で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４２で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４３で示される配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４７で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４８で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４９で示される配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号５４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号５５で示される配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６１で示される配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号６５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６７で示される配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号７５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号７６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号７７の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号８１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号８２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号８３の配列を含む。
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号２４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号２５で示される配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３１で示される配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号３５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３７で示される配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４１で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４２で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４３で示される配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４７で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４８で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４９で示される配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号５４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号５５で示される配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６１で示される配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号６５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６７で示される配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号７５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号７６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号７７の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号８１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号８２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号８３の配列を含む。
【0019】
本発明のいくつかの他の実施形態では、前記軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含み、且つ
（ａ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号２０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２２で示される配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号２６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２８で示される配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号３２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号３４で示される配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号３８で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３９で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４０で示される配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号４４で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号４５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４６で示される配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号５０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５２で示される配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号５６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５８で示される配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号６２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号６３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号６４で示される配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号７２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号７４の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号７８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号８０の配列を含む。
（ａ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号２０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２２で示される配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号２６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２８で示される配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号３２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号３４で示される配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号３８で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３９で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４０で示される配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号４４で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号４５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４６で示される配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号５０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５２で示される配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号５６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５８で示される配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号６２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号６３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号６４で示される配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号７２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号７４の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＬ１は配列番号７８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号８０の配列を含む。
【0020】
本発明のいくつかの他の実施形態では、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号２４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号２５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号２０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２２で示される配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号２６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２８で示される配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号３５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号３２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号３４で示される配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４１で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４２で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号３８で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３９で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４０で示される配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４７で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４８で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４９で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号４４で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号４５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４６で示される配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号５４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号５５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号５０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５２で示される配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号５６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５８で示される配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号６５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号６２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号６３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号６４で示される配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号７５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号７６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号７７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号７２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号７４の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号８１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号８２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号８３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号７８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号８０の配列を含む。
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号２４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号２５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号２０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２２で示される配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号２９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号２６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号２７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号２８で示される配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号３５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号３６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号３７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号３２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号３４で示される配列を含み、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４１で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４２で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号３８で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号３９で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４０で示される配列を含み、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号４７で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号４８で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号４９で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号４４で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号４５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号４６で示される配列を含み、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５３で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号５４で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号５５で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号５０で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５２で示される配列を含み、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号５９で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６０で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６１で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号５６で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号５７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号５８で示される配列を含み、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号６５で示される配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号６６で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号６７で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号６２で示される配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号６３で示される配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号６４で示される配列を含み、
（ｉ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号７５の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号７６の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号７７の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号７２の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号７４の配列を含み、又は
（ｊ）前記ＣＤＲＨ１は配列番号８１の配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は配列番号８２の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＨ３は配列番号８３の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ１は配列番号７８の配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は配列番号７９の配列を含み、且つ前記ＣＤＲＬ３は配列番号８０の配列を含む。
【0021】
本発明のいくつかの他の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号２３で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号２４で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号２５で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号２０で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号２１で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号２２で示され、
（ｂ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号２９で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号３０で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号３１で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号２６で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号２７で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号２８で示され、
（ｃ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号３５で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号３６で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号３７で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号３２で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号３３で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号３４で示され、
（ｄ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号４１で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号４２で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号４３で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号３８で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号３９で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号４０で示され、
（ｅ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号４７で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号４８で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号４９で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号４４で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号４５で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号４６で示され、
（ｆ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号５３で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号５４で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号５５で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号５０で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号５１で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号５２で示され、
（ｇ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号５９で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号６０で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号６１で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号５６で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号５７で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号５８で示され、
（ｈ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号６５で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号６６で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号６７で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号６２で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号６３で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号６４で示され、
（ｉ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号７５で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号７６で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号７７で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号７２で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号７３で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号７４で示され、又は
（ｊ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号８１で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号８２で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号８３で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号７８で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号７９で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号８０で示される。
（ａ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号２３で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号２４で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号２５で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号２０で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号２１で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号２２で示され、
（ｂ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号２９で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号３０で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号３１で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号２６で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号２７で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号２８で示され、
（ｃ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号３５で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号３６で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号３７で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号３２で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号３３で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号３４で示され、
（ｄ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号４１で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号４２で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号４３で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号３８で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号３９で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号４０で示され、
（ｅ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号４７で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号４８で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号４９で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号４４で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号４５で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号４６で示され、
（ｆ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号５３で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号５４で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号５５で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号５０で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号５１で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号５２で示され、
（ｇ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号５９で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号６０で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号６１で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号５６で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号５７で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号５８で示され、
（ｈ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号６５で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号６６で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号６７で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号６２で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号６３で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号６４で示され、
（ｉ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号７５で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号７６で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号７７で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号７２で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号７３で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号７４で示され、又は
（ｊ）ＣＤＲＨ１の配列は配列番号８１で示され、ＣＤＲＨ２の配列は配列番号８２で示され、且つＣＤＲＨ３の配列は配列番号８３で示され、且つＣＤＲＬ１の配列は配列番号７８で示され、ＣＤＲＬ２の配列は配列番号７９で示され、且つＣＤＲＬ３の配列は配列番号８０で示される。
【0022】
本発明のいくつかの他の実施形態では、前記重鎖可変領域は、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号６９及び配列番号７１からなる群から選ばれる配列を含む。
【0023】
本発明のいくつかの他の実施形態では、前記軽鎖可変領域は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号６８及び配列番号７０からなる群から選ばれる配列を含む。
【0024】
本発明のいくつかの他の実施形態では、
（ａ）前記重鎖可変領域は配列番号５で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号４で示される配列を含み、
（ｂ）前記重鎖可変領域は配列番号７で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号６で示される配列を含み、
（ｃ）前記重鎖可変領域は配列番号９で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号８で示される配列を含み、
（ｄ）前記重鎖可変領域は配列番号１１で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１０で示される配列を含み、
（ｅ）前記重鎖可変領域は配列番号１３で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１２で示される配列を含み、
（ｆ）前記重鎖可変領域は配列番号１５で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１４で示される配列を含み、
（ｇ）前記重鎖可変領域は配列番号１７で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１６で示される配列を含み、又は
（ｈ）前記重鎖可変領域は配列番号１９で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１８で示される配列を含む。
（ａ）前記重鎖可変領域は配列番号５で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号４で示される配列を含み、
（ｂ）前記重鎖可変領域は配列番号７で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号６で示される配列を含み、
（ｃ）前記重鎖可変領域は配列番号９で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号８で示される配列を含み、
（ｄ）前記重鎖可変領域は配列番号１１で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１０で示される配列を含み、
（ｅ）前記重鎖可変領域は配列番号１３で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１２で示される配列を含み、
（ｆ）前記重鎖可変領域は配列番号１５で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１４で示される配列を含み、
（ｇ）前記重鎖可変領域は配列番号１７で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１６で示される配列を含み、又は
（ｈ）前記重鎖可変領域は配列番号１９で示される配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号１８で示される配列を含む。
【0025】
本発明のいくつかの他の実施形態では、
（ａ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号５で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号４で示され、
（ｂ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号７で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号６で示され、
（ｃ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号９で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号８で示され、
（ｄ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１１で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１０で示され、
（ｅ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１３で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１２で示され、
（ｆ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１５で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１４で示され、
（ｇ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１７で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１６で示され、
（ｈ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１９で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１８で示され、
（ｉ）前記重鎖可変領域は配列番号６９の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号６８の配列を含み、又は
（ｊ）前記重鎖可変領域は配列番号７１の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号７０の配列を含む。
（ａ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号５で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号４で示され、
（ｂ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号７で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号６で示され、
（ｃ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号９で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号８で示され、
（ｄ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１１で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１０で示され、
（ｅ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１３で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１２で示され、
（ｆ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１５で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１４で示され、
（ｇ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１７で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１６で示され、
（ｈ）前記重鎖可変領域の配列は配列番号１９で示され、且つ前記軽鎖可変領域の配列は配列番号１８で示され、
（ｉ）前記重鎖可変領域は配列番号６９の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号６８の配列を含み、又は
（ｊ）前記重鎖可変領域は配列番号７１の配列を含み、且つ前記軽鎖可変領域は配列番号７０の配列を含む。
【0026】
本発明のいくつかの他の実施形態では、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、且つ
（ａ）前記ＶＨは配列番号５で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号４で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｂ）前記ＶＨは配列番号７で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号６で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｃ）前記ＶＨは配列番号９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｄ）前記ＶＨは配列番号１１で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１０で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｅ）前記ＶＨは配列番号１３で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１２で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｆ）前記ＶＨは配列番号１５で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１４で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｇ）前記ＶＨは配列番号１７で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１６で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｈ）前記ＶＨは配列番号１９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｉ）前記ＶＨは配列番号６９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号６８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、又は
（ｊ）前記ＶＨは配列番号７１で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号７０で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む。
（ａ）前記ＶＨは配列番号５で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号４で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｂ）前記ＶＨは配列番号７で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号６で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｃ）前記ＶＨは配列番号９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｄ）前記ＶＨは配列番号１１で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１０で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｅ）前記ＶＨは配列番号１３で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１２で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｆ）前記ＶＨは配列番号１５で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１４で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｇ）前記ＶＨは配列番号１７で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１６で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｈ）前記ＶＨは配列番号１９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号１８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、
（ｉ）前記ＶＨは配列番号６９で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号６８で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含み、又は
（ｊ）前記ＶＨは配列番号７１で示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含み、及び／若しくは前記ＶＬは配列番号７０で示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む。
【0027】
いくつかの実施形態では、本発明の分離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のうち、（ａ）いくつかの抗体は、それ自体（１Ｂ２－８Ｃ）とチラゴルマブ（Ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ）、４Ａ０４２－Ｈ３、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断でき、４Ａ０６３との結合を部分的に遮断できるが、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断できず、（ｂ）いくつかの抗体は、それ自体（４Ａ０４２－Ｈ３）、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断できるが、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断せず、（ｃ）いくつかの抗体は、それ自体（４Ａ０４２－Ｈ７）、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断でき、４Ｂ０３７ａ及び４Ａ０６３との結合を部分的に遮断できるが、４Ｂ０５６ａ、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断できず、（ｄ）いくつかの抗体は、それ自体（４Ｂ０３０ａ）との結合を遮断でき、４Ｂ０５６ａ及び４Ａ０６３の結合を部分的に遮断でき、且つ４Ｂ０３７ａ、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断せず、（ｅ）いくつかの抗体は、それら自体（４Ｂ０３７ａ、４Ａ０６３）、４Ｂ０５６ａ、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断でき、且つチラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を部分的に遮断でき、（ｆ）いくつかの抗体は、それ自体（４Ｂ０５６ａ）、４Ｂ０３７ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断でき、チラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３及び４Ｂ０３０ａとの結合を部分的に遮断できるが、４Ａ０４２－Ｈ７の結合を遮断できず、（ｇ）いくつかの抗体は、それら自体（４Ｄ０３５ａ、４Ｅ０６１ａ）、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３との結合を遮断できるが、チラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断しない。
【0028】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、カニクイザルＴＩＧＩＴとも結合する。
【0029】
本発明のいくつかの他の実施形態では、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、さらに、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ及びＩｇＤの重鎖定常領域から選ばれる重鎖定常領域を含む。
【0030】
本発明のいくつかの実施例では、前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域又はその変異体である。
【0031】
本発明のいくつかの他の実施形態では、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体及びその組み合わせからなる群から選ばれる形態である。
【0032】
本発明は、また、試薬（例えば、検出可能な標識又は細胞傷害性薬物）と結合した本明細書に記述されている抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む免疫複合体を提供する。
【0033】
他の実施形態では、本発明の抗体は、抗原結合ドメインが二重特異性分子に存在し、且つさらに、異なる免疫制御受容体と特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、前記免疫制御受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４又はＬＡＧ３を含み、ただしそれらに限定されない。
【0034】
第２の態様では、本発明は、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【0035】
第３の態様では、本発明は、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を発現する発現ベクターを提供する。
【0036】
第４の態様では、本発明は、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又は抗原結合断片を発現するベクターを含む操作された細胞を提供する。
【0037】
第５の態様では、本発明は、第１の態様の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片と、第２の態様のポリヌクレオチドと、第３の態様のベクター又は第４の態様の細胞と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明は、さらに、第１の態様の抗ＴＩＧＩＴ抗体又は抗原結合断片を含む抗体薬物複合体を提供する。本明細書は、また、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片と、取扱説明書とを含有するキットを提供する。
【0038】
第６の態様では、本発明は、ＴＩＧＩＴ関連疾患を治療するための薬物の製造における、第１の態様の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、第２の態様のポリヌクレオチド、第３の態様のベクター、第４の態様の細胞又は第５の態様の医薬組成物の用途を提供する。好ましくは、前記ＴＩＧＩＴ関連疾患は、Ｔ細胞機能不全疾患であり、より好ましくは、前記ＴＩＧＩＴ関連疾患は、腫瘍、免疫疾患又は感染症であり、より好ましくは、前記がんは、黒色腫、乳がん、非小細胞肺がん、結腸腺がん、胃がん、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫からなる群から選ばれる。より好ましくは、前記腫瘍の細胞は、ＣＤ１５５陽性又はＰＶＲ陽性である。
【0039】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片に接触させることにより、抗原特異的Ｔ細胞応答を増強させることを含む、抗原特異的Ｔ細胞応答を増強させる方法を提供し、例えば、抑制性シグナルを減少させることによりそれを増強させ、さもなければ、前記抑制性シグナルは抗腫瘍応答を弱める。いくつかの実施形態では、前記抗原特異的Ｔ細胞は、腫瘍抗原特異的エフェクターＴ細胞であり、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞であり、且つ、例えば、ＴＩＧＩＴによって媒介される抑制性エフェクターの遮断を増強させることにより、抗腫瘍活性を増加させる。本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、ＮＫ細胞中の抑制性シグナルを減少させることにより、それらの抗腫瘍活性を増加させることもできる。特定の理論に拘束されることなく、本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴとＰＶＲとの結合を遮断することによりエフェクターＴ細胞又はＮＫ細胞の機能を向上させ、これにより抑制性シグナルを減少又は解消し、さもなければ、前記抑制性シグナルは細胞に送達される。代替又は追加として、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、ＴＩＧＩＴとＤＮＡＭ－１／ＣＤ２２６との間の相互作用を抑制でき、さもなければ、前記相互作用は、ＤＮＡＭ－１によって媒介される免疫の活性化を低減させる。
【0040】
本発明は、有効量の本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体を投与することを含む、必要とする被験者の腫瘍におけるＴｒｅｇsを減少又は枯渇させる方法を提供し、前記抗体は、エフェクター機能又は増強されたエフェクター機能を有するため、腫瘍におけるＴｒｅｇsの数を減少させる。
【0041】
本発明は、有効量の本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を被験者に投与することにより、被験者の免疫応答を増強させることを含む、被験者の免疫応答を増強させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、被験者は、腫瘍を持っており、且つ腫瘍に対する免疫応答が増強される。別の実施形態では、被験者は、ウイルス感染症を持っており、且つ抗ウイルス免疫応答が増強される。
【0042】
本発明は、また、本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を被験者に投与することにより、腫瘍の増殖を抑制することを含む、被験者における腫瘍の増殖を抑制する方法を提供する。
【0043】
本発明は、さらに、例えば、治療有効量の本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片を、例えば、医薬組成物として必要とする被験者に投与することにより、がんを治療することを含む、免疫療法によりがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱がん、乳がん、子宮若しくは子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、肺がん、胃がん、胚細胞腫瘍、骨腫瘍、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、ウイルス性がんである。いくつかの実施形態では、がんは、転移性がん、難治性がん又は再発性がんである。
【0044】
第７の態様では、本発明は、有効量の、第１の態様の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、第２の態様のポリヌクレオチド、第３の態様のベクター、第４の態様の細胞又は第５の態様の医薬組成物を、必要とする被験者に投与することを含む、ＴＩＧＩＴ関連疾患の治療の方法を提供する。
【0045】
第８の態様では、本発明は、第１の態様の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、第２の態様のポリヌクレオチド、第３の態様のベクター又は第４の態様の細胞を含む、ＴＩＧＩＴ関連疾患を治療するための医薬組成物を提供する。１種若しくは複数種の別の治療薬と併用され、又は１種若しくは複数種の別の治療薬と共に二重特異性試薬として働き、前記治療薬は、例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ１３７ｍＡｂ、抗ＣＤ２７ｍＡｂ、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体及び／若しくは抗ＣＴＬＡ－４抗体、ＴＬＲ作動薬若しくはＩＤＯ若しくはＴＧＦβの低分子拮抗剤（小分子アンタゴニスト）である。特定の実施形態では、抗ｈｕＴＩＧＩＴ療法と、抗ＰＤ－１及び／又は抗ＰＤ－Ｌ１療法（例えば、ヒトＰＤ－１と結合する抗体若しくはその抗原結合断片で治療し、又はヒトＰＤ－Ｌ１と結合する抗体若しくはその抗原結合断片で治療する）とを組み合わせる。
【0046】
本発明は、また、サンプル中、サンプル中の細胞上（例えば、ＦＡＣＳ）又は細胞若しくは組織中の特定の位置（例えば、ＩＨＣ）におけるＴＩＧＩＴの存在を検出する方法、又はその表面におけるＴＩＧＩＴの存在又は不存在に基づいて細胞を選別する方法（例えば、ＦＡＣＳ）を提供し、前記方法は、抗体又はその抗原結合断片とＴＩＧＩＴとの間に複合体を形成できる条件で、サンプルを本発明の抗ｈｕＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片に接触させることと、前記複合体の形成を検出することとを含む。いくつかの実施形態では、検出用の抗ＴＩＧＩＴ抗体を検出可能な標識と結合させる。
【0047】
本発明では、ヒト抗体遺伝子配列完全長（遺伝子制御配列を含む）が導入されている染色体導入マウス（ＴＣ－ｍＡｂＴＭマウス）モデルを使用する。標的抗原は、染色体導入マウスを免疫することにより、直接的に完全ヒト化抗体を得るために用いられる。得られた抗体は、後続のヒト化及び親和性修飾が不要であるため、コストが低減され開発期間が短縮される。また、前記抗体は染色体導入マウスから誘導された完全ヒト抗体であるため、その免疫原性が顕著に低減され、薬物の開発に一層役立つ。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1】組換えｈｕＴＩＧＩＴタンパク質及び本発明における所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスを使用して誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体のｈｕＴＩＧＩＴ結合親和性の結果を示すグラフである。実施例３を参照する。
【図2A】組換えｈｕＴＩＧＩＴタンパク質及び本発明における所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスを使用して誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体のエピトープ競合の結果を示す。実施例３を参照する。
【図2B】組換えｈｕＴＩＧＩＴタンパク質及び本発明における所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスを使用して誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体のエピトープ競合の結果を示す。実施例３を参照する。
【図3A】ヒトＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ細胞及び本発明における所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスを使用して誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体の異なる濃度でのＣＨＯ－ＴＩＧＩＴ結合測定の結果を示すグラフである。
【図3B】カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｍｋＴＩＧＩＴ）を発現するＣＨＯ細胞及び本発明における所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスを使用して誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体の異なる濃度でのＣＨＯ－ＴＩＧＩＴ結合測定の結果を示すグラフである。実施例４を参照する。
【図4】ヒトＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ細胞及び本発明の所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスを使用して誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体の異なる濃度でのＣＨＯ－ＴＩＧＩＴ ＣＤ１５５遮断測定の結果を示すグラフである。実施例５を参照する。
【図5A】ヒトＴＩＧＩＴ遺伝子組換えマウスモデルにおける腫瘍増殖に対する、抗ＰＤ１抗体と併用された本発明における所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスによって誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体４Ａ０６３の抑制効果を示すグラフである。
【図5B】各群のマウスの平均体重を時間の関数として示す。実施例６を参照する。
【図6A】抗ＰＤ１抗体と併用された、所定のＴＣ ｍＡｂＴＭによって誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体４Ａ０６３で処理されたＣＴ２６腫瘍における、ＣＤ３＋Ｔ細胞集団中の腫瘍浸潤リンパ球ＣＤ８＋Ｔ（ＣＤ８＋ＴＩＬ）細胞の割合の調整を示すグラフである。実施例７を参照する。
【図6B】抗ＰＤ１抗体と併用された、所定のＴＣ ｍＡｂＴＭによって誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体４Ａ０６３で処理されたＣＴ２６腫瘍担持のヒトＴＩＧＩＴ遺伝子組換えマウスにおける、脾細胞中のＣＤ３＋Ｔ細胞集団でのＣＤ８＋Ｔ細胞の割合の調整を示すグラフである。実施例７を参照する。
【発明を実施するための形態】
【0049】
（定義）
特に定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者の一般的な理解と同じ意味を有する。本明細書には、本発明に用いる方法及び材料が記述されているが、当分野の従来の他の適切な方法及び材料を使用してもよい。材料、方法及び実施例は、例示的なもので、制限するためのものではない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ及び他の参考文献は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。矛盾が生じる場合は、本明細書（定義を含む）に準拠する。
特に定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者の一般的な理解と同じ意味を有する。本明細書には、本発明に用いる方法及び材料が記述されているが、当分野の従来の他の適切な方法及び材料を使用してもよい。材料、方法及び実施例は、例示的なもので、制限するためのものではない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ及び他の参考文献は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。矛盾が生じる場合は、本明細書（定義を含む）に準拠する。
【0050】
本開示では数値範囲及びパラメータの近似値が大きい範囲として示されているが、特定の実施例で示される数値は、なるべく正確に記述されている。しかし、いかなる数値にも固有の誤差が含まれており、前記誤差は測定にある標準偏差から発生する。また、本明細書に開示されている全ての範囲は、そのいずれかの及び全ての部分範囲をカバーしているものと理解される。例えば、範囲「１～１０」の場合は、最小値１と最大値１０（端点を含む）との間のいずれかの及び全ての部分範囲、つまり、全ての以最小値１又はより大きい値から始まる部分範囲（例えば、１～６．１）、及び最大値１０又はより小さい値で終わる部分範囲（例えば、５．５～１０）を含むものと考えられる。
【0051】
なお、１つの対象であるとはっきりと明確に限定しない限り、本明細書で単数形を使用する場合は、対象の複数形が含まれる。文脈で特に指示がない限り、用語「又は」と「及び／又は」は入れ替えて使用される。
【0052】
本明細書で使用される場合、用語「含有」又は「含む」とは、様々な成分を合わせて本発明の混合物又は組成物に用いてもよいということを意味する。したがって、用語「主に…からなる」又は「…からなる」は、用語「含有」又は「含む」のうちに含まれる。
【0053】
本明細書で使用される場合、用語「同一性」「パーセンテージ同一性」「相同性」又は「同一」とは、２つのアミノ酸配列の間又は２つの核酸配列の間の配列同一性を指す。パーセンテージ同一性は、２つの配列を整列して決定されてもよく、また、配列の共通の位置での同じ残基（即ち、アミノ酸又はヌクレオチド）の数を比較することを指す。当分野の標準的なアルゴリズム（例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，１９８１，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１０ １９７０，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８５：２４４４）又はこれらのアルゴリズムのコンピュータ化バージョン（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を利用して配列の整列及び比較を行ってもよく、前記コンピュータ化バージョンは、ＢＬＡＳＴ及びＦＡＳＴＡとして開示されて利用できる。また、アメリカ国立衛生研究所（メリーランド州・ベセスダ）で入手可能なＥＮＴＲＥＺは、配列の比較に用いることができる。ＢＬＡＳＴ又はＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合、各プログラムのデフォルトのパラメータ（例えば、アメリカ国立生物工学情報センターのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＮ）を利用してもよい。一実施形態では、ギャップ重み（Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ）が１であるＧＣＧを、２つの配列との間のパーセンテージ同一性を決定するために用いることができる。どのアミノ酸ギャップにも、２つの配列の間の１つのアミノ酸のミスマッチであるかのように、重みが付与されている。代替として、ＧＣＧ（カリフォルニア州サンディエゴ・アクセルリス社）による配列比較ソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（ｖ２．０）を使用してもよい。
【0054】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」とは、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、免疫グロブリンの軽鎖の３つのＣＤＲに由来するいずれか又は免疫グロブリンの重鎖の３つのＣＤＲに由来するいずれか）を含有し、エピトープと特異的に結合できるあらゆる抗原結合分子を指す。抗体の非限定的な例として、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、一本鎖抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体のＦｃ領域を含有してもよい。用語「抗体」には、例えば、二重特異性抗体、一本鎖抗体、ダイアボディ、線形抗体、抗体断片から形成された多重特異性抗体などの誘導体が含まれる。
【0055】
従来の抗体構造単位は、一般的に四量体を含む。各四量体は一般的に、それぞれ１つの「軽」鎖及び１つの「重」鎖を有する２対の同じポリペプチド鎖によって構成される。ヒト軽鎖はκ軽鎖及びλ軽鎖に分類される。重鎖はμ、δ、γ、α及びεに分類され、且つ、抗体のアイソタイプは、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ及びＩｇＥと定義される。ＩｇＧには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含み、ただしそれらに限定されない複数のサブクラスがある。ＩｇＭには、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含み、ただしそれらに限定されないサブクラスがある。したがって、本明細書で使用される「アイソタイプ」とは、定常領域の化学的特徴及び抗原特性によって定義される免疫グロブリンのあらゆるサブクラスを意味する。従来のヒト免疫グロブリンのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＤ及びＩｇＥである。なお、治療用抗体は、アイソタイプ及び／又はサブクラスのハイブリッドを含んでもよい。
【0056】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ領域」又は「ＣＤＲ」とは、Ｋａｂａｔらによって定義される（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，１９９１，ａｎｄ ｌａｔｅｒ）免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の超可変領域を指す。３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲがある。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ又は複数のＣＤＲ」は、それらの領域のうちの１つ、複数あるいは全てを指し、抗体と抗原又はそのエピトープとの間の親和性により結合される大多数のアミノ酸残基を含有する。
【0057】
本明細書で使用される場合、用語「抗体断片」又は「抗原結合断片」とは、抗原（例えば、ｔｉｇｉｔ）と特異的に結合する能力が保持されており、一般的に親抗体の抗原結合領域又は可変領域の少なくとも一部を含む、全長抗体及び抗体の抗体類似体の一部を指す。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、少なくとも１つの可変ドメイン（例えば、重鎖の可変ドメイン又は軽鎖の可変ドメイン）を含有する。抗体断片には、親抗体の少なくとも一部の結合特異性が保持されている。一般的に、モル数で活性を示す場合、抗体断片には親に対する結合活性が少なくとも１０％保持されている。好ましくは、抗体断片には、標的に対する親抗体の結合親和性が少なくとも、２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％保持されている。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ＦＤ断片、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、ジスルフィド安定化タンパク質（ｄｓＦｖ）などや、線形抗体、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ一本鎖抗体）（Ｇｅｎｍａｂ社の技術により作製される）、二価の一本鎖抗体、ファージ提示型単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨドメイン抗体）、ドメイン抗体（Ａｂｌｙｎｘ社の技術により作製される）や、抗体断片から形成された多重特異性抗体（例えば、三本鎖抗体、四本鎖抗体など）や、遺伝子操作による修飾抗体（例えば、ヒト化マウス抗体などのキメラ抗体）、ヘテロ複合体抗体などを含み、ただしそれらに限定されない。これらの抗体断片は、当業者が通常の技術により得るもので、且つこれらの断片の実用性は完全抗体と同じ方法でスクリーニングされる。
【0058】
本明細書で使用される場合、用語「一本鎖抗体」とは、少なくとも２つの免疫グロブリン可変ドメイン（例えば、哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖又は軽鎖の可変ドメイン）を含有し、抗原と特異的に結合できる単一のポリペプチドを指す。本明細書には一本鎖抗体の非限定的な例が記述されている。
【0059】
一実施形態では、本発明の抗体は、多重特異性抗体、特に二重特異性抗体であってもよく、「ダイアボディ」と呼ばれることもある。これらは、２種（又はそれ以上）の異なる抗原又は同じ抗原の異なるエピトープと結合する抗体である。ダイアボディは、当分野の従来の様々な方法で、例えば、化学的方法又はハイブリドーマから製造してもよい。
【0060】
本明細書で使用される場合、用語「染色体導入マウス（ＴＣ－ｍＡｂＴＭマウス）」とは、マウス人工染色体を含有するマウスを指し、前記マウス人工染色体は、ヒト抗体の重鎖の遺伝子若しくは遺伝子座及び／又はヒト抗体のκ軽鎖の遺伝子若しくは遺伝子座及び／又はヒト抗体のλ軽鎖の遺伝子若しくは遺伝子座を含有し、且つヒト抗体の遺伝子又は遺伝子座に対応する少なくとも２つのマウス内因性抗体の遺伝子若しくは遺伝子座がノックアウトされている。ＴＣ－ｍＡｂＴＭマウス及びその子孫は、ヒト抗体遺伝子を安定的に保持し、ヒト抗体を産生することができる。
【0061】
本発明の抗体は一般的に、分離された又は組み換えられたものである。「分離された」で本明細書に開示されている様々なポリペプチドを記述する場合は、ポリペプチドを発現する細胞又は細胞培養物から同定され、分離及び／又は回収されているポリペプチドを意味する。一般的には、分離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップを経由して得られる。「分離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。
【0062】
本発明は、さらに、変異体抗体を提供する。つまり、本発明の抗体に対して様々な修飾を行ってもよく、これらの修飾は、ＣＤＲにおけるアミノ酸修飾（親和性成熟）、Ｆｃ領域におけるアミノ酸修飾、グリコシル化変異体、他のタイプの共有結合修飾を含み、ただしそれらに限定されない。例えば、本明細書で「変異体」とは、少なくとも１つのアミノ酸の修飾により親ポリペプチドのポリペプチド配列と異なるポリペプチド配列を意味する。アミノ酸の修飾は、置換、挿入及び欠失を含んでもよい。一般的には、変異体は、本明細書で記述されているタンパク質の機能が保持されている限り、任意の数の修飾を含んでもよい。
【0063】
本明細書で使用される場合、用語「エピトープ」とは、抗体分子の可変領域の特異的抗原結合部位（パラトープと呼ばれる）と相互作用する決定基を指す。エピトープは、一般的に特定の構造的特徴及び特定の電荷特性を有する分子（例えば、アミノ酸又は糖側鎖）の集合である。１つの抗原は、１つ以上のエピトープを有してもよい。
【0064】
エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性成分とも呼ばれる）、及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基を含んでもよく、言い換えれば、アミノ酸残基は特異的抗原結合ペプチドのフットプリントのうちにある。エピトープは、一般的に特別な立体配座を示す少なくとも３つ、より一般的には少なくとも５つ又は８つ～１０個のアミノ酸を含む。同じエピトープを認識する抗体は、簡易なイムノアッセイにおいて検証でき、前記イムノアッセイは、標的抗原に対する別の抗体の結合を遮断する抗体の能力を示す。
【0065】
本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」と「タンパク質」は、少なくとも２つのアミノ酸からなる任意の長さのアミノ酸ポリマーを指すよう入れ替えて使用される。
【0066】
本明細書で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」、「核酸分子」と「核酸配列」は、少なくとも２つのヌクレオチドからなる任意の長さのヌクレオチドポリマーを指すよう、本明細書では入れ替えて使用され、且つ、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド及びその変異体を含み、ただしそれらに限定されない。
【0067】
本明細書で使用される場合、用語「医薬組成物」、「組合せ薬物」と「薬物組合せ」は、入れ替えて使用され、少なくとも１種の薬物と、任意選択的に、特定の目的を実現するための薬学的に許容される担体又は賦形剤の組み合わせを意味する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、時間的及び／又は空間的において分離された組み合わせを含み、それらが共に作用して本開示の目的を実現するものでさえあればよい。
【0068】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」又は「有効量」とは、投与される被験者に利点を発揮するのに十分な用量を指す。実際の投与量及び投与の速度と期間は、治療を受けるヒトの状態及び重症度に依存する。治療処方（例えば、用量の決定など）は、最終的に、一般開業医及び他の医師の責任及び判断であり、一般的に、治療する疾患、個々の患者の状態、送達部位、投与方法及び医師に知られる他の要因が考慮される。
【0069】
本明細書で使用される場合、用語「被験者」と「患者」は、明細書全体において入れ替えて使用され、本発明の方法による治療を受ける動物、ヒト又は非ヒトを指す。本発明では、獣医学的応用及び非獣医学的応用が想定される。ヒト患者は、成人又は青少年（例えば、１８歳未満の人）であってもよい。患者は、ヒトの他に、さらに、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、フェレット、ネコ、イヌ、霊長類を含み、ただしそれらに限定されない。例えば、非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジー、ゴリラなど）、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、フェレット、ウサギ）、兎形目、ブタ（例えば、家畜化イノシシ、ミニブタ）、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ及び他の家畜、農業動物、動物園の動物を含む。
【0070】
従来の方法により本発明の抗体及び化学療法製剤を被験者に投与し、例えば、単回用量の形態又は一定期間内の連続注入で静脈内投与し、筋肉内、腹腔内、脳脊髄腔内、皮下、関節内、滑膜内、髄内、経口、局所又は吸入の経路で投与する。
【0071】
本明細書では、用語「薬学的に許容される」とは、化合物をヒトに投与する時に生理学的に許容され、且つ、有害事象、例えば、胃腸疾患、めまい若しくは他の有害事象又はこれらの有害事象に類似する全身性有害事象を引き起こさないことを意味する。
【0072】
本開示では、「薬学的に許容される担体」は、結合剤（例えば、微結晶セルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば、デンプン、スクロース、グルコース、無水乳酸）、崩壊剤（例えば、架橋型ＰＶＰ、クロスグリコール酸デンプンナトリウム、クロスカルボキシメチルセルロースナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース）、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸アルミニウム、タルク、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム）、湿潤剤（例えば、グリセリン）、界面活性剤（例えば、セチルアルコール）、及び、吸収促進剤、矯味剤、甘味料、希釈剤、コーティング剤などを含み、ただしそれらに限定されない。
【0073】
特に指示がない限り、本明細書で使用される用語「ＴＩＧＩＴ」又は「Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体」とは、任意の脊椎動物に由来するあらゆる天然のＴＩＧＩＴを指し、前記脊椎動物は、哺乳動物（例えば、霊長類（例えば、ヒト））、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）を含み、ＴＩＧＩＴは、当分野でＤＫＦＺｐ６６７Ａ２０５、ＦＬＪ３９８７３、Ｖ－ｓｅｔ、免疫グロブリンドメインを含有するタンパク質９、Ｖ－ｓｅｔ、膜貫通ドメインを含有するタンパク質３、ＶＳＩＧＵ、ＶＳＴＭ３、ＷＵＣＡＭとも呼ばれる。当該用語は、「全長」、未加工のＴＩＧＩＴ（例えば、所定の配列番号のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴＩＧＩＴ）、及び、任意の形態のＴＩＧＩＴをカバーしている。前記用語は、また、天然に存在するＴＩＧＩＴ変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体をカバーしている。用語「ＴＩＧＩＴ関連疾患」とは、被験者（例えば、ヒト）における腫瘍（例えば、黒色腫、乳がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、結腸腺がん（ＣＯＡＤ）、胃がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）（Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０２０ Ｍａｙ；２００（２）：１０８－１１９））又は免疫関連疾患（例えば、Ｔ細胞機能不全疾患）におけるＴＩＧＩＴタンパク質又はそのリガンドＣＤ１５５の異常な発現を指す。抗ＴＩＧＩＴ抗体がそれとリガンドの結合を遮断すると、前記抗ＴＩＧＩＴ抗体は、腫瘍細胞の増殖を抑制し、又は他の疾患の症状を軽減させ、又は関連疾患を治癒することにより、疾患の治療効果を実現できる。このような疾患は、ＴＩＧＩＴ関連疾患と定義される。
【0074】
「Ｔ細胞機能不全疾患」は、抗原刺激に対する応答性の低減を特徴とするＴ細胞疾患又は病状である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞機能不全疾患の特徴は、Ｔ細胞の枯渇にある。特定の実施形態では、Ｔ細胞機能不全疾患は、ＯＸ４０及び／又はＯＸ４０Ｌを経由するシグナル伝達の不適切な減少に明らかに関係している疾患である。別の実施形態では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞の応答がなく又はサイトカインの分泌、増殖若しくは細胞溶解機能の実行能力が低減する疾患である。特定の態様では、応答性の低減は、免疫原を発現する病原体又は腫瘍に対する制御を無効にする。Ｔ細胞機能障害を特徴とするＴ細胞機能不全疾患の例は、未解決の急性感染症、慢性感染症、腫瘍免疫を含む。いくつかの実施形態では、被験者は、ヒトである。
【0075】
用語「がん」と「腫瘍」は入れ替えて使用される。それらは、体内の異常な細胞の制御不能な増殖を特徴とする一連の疾患を指す。制御不能な細胞分裂は、悪性腫瘍の形成又は隣接組織への細胞浸潤を引き起こす場合があり、リンパ系又は血流を介して体の遠位端に転移する場合がある。がんには、良性及び悪性がん、及び休眠状態の腫瘍又は微小転移が含まれる。がんには、血液悪性腫瘍も含まれる。
【0076】
「血液悪性腫瘍」には、リンパ腫、白血病、骨髄腫又はリンパ性悪性腫瘍、脾臓及びリンパ節のがんが含まれる。例示的なリンパ腫には、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫が含まれる。Ｂ細胞リンパ腫には、ホジキンリンパ腫、大多数の非ホジキンリンパ腫が含まれる。Ｂ細胞リンパ腫の非限定的な例として、びまん性の濾胞性リンパ腫、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病に含まれる）、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンストレーム（Ｗａｌｄｅｎｓｔｍｍ）マクログロブリン血症、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症が挙げられる。Ｔ細胞リンパ腫の非限定的な例として、節外性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫が挙げられる。血液悪性腫瘍には、白血病も含まれ、二次性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病に限定されない。血液悪性腫瘍には、さらに、骨髄腫が含まれ、多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫に限定されない。他の血液がん及び／又はＢ細胞若しくはＴ細胞関連のがんが血液悪性腫瘍という用語によってカバーされる。
【0077】
用語「ＰＶＲ陽性腫瘍」とは、がん組織におけるＰＶＲの発現が増加する腫瘍を指す。ＰＶＲ陽性腫瘍には、副腎皮質がん、嫌色素性腎細胞がん、乳頭状腎細胞がん、肝細胞がん、膵管腺がん、褐色細胞腫及び傍神経節腫、肺腺がん、頭頸部扁平上皮がん、前立腺がん、子宮体がん（子宮内膜がん）、子宮頸がん、黒色腫（皮膚）、中皮腫、尿路上皮がん（膀胱がん）、結腸・直腸腺がん、淡明細胞型腎細胞がん、肺扁平上皮がん、子宮がん肉腫、肉腫、卵巣漿液性嚢胞腺がん、甲状腺乳頭がん、多形性神経膠芽腫、乳がん、低悪性度神経膠腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫が含まれ、ただしそれらに限定されない。
【0078】
本明細書では、用語「免疫関連疾患」とは、哺乳動物免疫系の構成要素によって引き起こされ、媒介され又は他の方式で発生する哺乳動物の免疫関連疾患を指し、免疫応答を刺激又は妨害することにより疾患の進行を改善できる疾患もそのうちに含まれる。「免疫関連疾患」には、免疫介在性炎症性疾患、非免疫介在性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍などが含まれる。
【0079】
本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、被験者（例えば、ヒト）の感染又は感染症を治療するために用いてもよい。いくつかの好ましい実施形態では、感染又は感染症は、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症から選ばれ、ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ＣＭＶ、ＥＢＶ、インフルエンザウイルスが含まれ、ただしそれらに限定されない。
【0080】
以下、特定の実施例と結び付けて本発明のいくつかの好ましい実施形態及び態様をさらに記述し、ただしこれらの実施例は本発明の範囲に対する制限と捉えるべきではない。
【0081】
（実施例）
実施例１：抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の生成
１．抗原免疫化及び結合測定用のＴＩＧＩＴ組換えタンパク質
ＧｅｎＢａｎｋ配列（遺伝子座：ＮＭ＿１７３７９９）による全長ヒトＴＩＧＩＴ（ｈｕＴＩＧＩＴ、配列番号１）をコードするｃＤＮＡに基づいて合成し、前記ｃＤＮＡはＥｕｒｏｆｉｎｓから購入された。全長ヒトＴＩＧＩＴのアミノ酸（ＡＡ）１～１４１（配列番号２）に対応する細胞外ドメインＥＣＤのコード領域をＰＣＲで増幅し、且つそれを発現ベクターにクローニングすることにより、それぞれ、２つの組換え融合タンパク質Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ及びＧｓｔ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳの発現プラスミドを産生した。組換え融合タンパク質を産生するために、組換え融合タンパク質（Ｔｒｘ－ＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ及びＧｓｔ－ＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ）の発現プラスミドを大腸菌コンピテントセル（Ｅ．ｃｏｌｉ ｇａｍｉＢ（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ，Ｎｏｖａｇｅｎ）に転移して培養した。ＩＰＴＧ誘導後、大腸菌細胞を遠心分離して沈殿物を収集した。超音波の中で大腸菌を打ち砕いた後、遠心分離して沈殿物を得た。可溶化試薬を添加して沈殿物を溶解し、次にＮｉ－ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ、Ｎｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ、＃３０４１０）により精製し、それを透析した。ＰＡＧＥにより組換えタンパク質の精製の効果を検出し、次に組換えタンパク質を少量に等分して－３０℃で保存した。
ＡＴＧＣＧＣＴＧＧＴＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＧＣＣＴＣＡＧＧＡＡＴＧＡＴＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡＣＧＧＧＧＡＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＡＧＧＴＧＧＣＴＣＴＡＴＣＡＴＣＴＴＡＣＡＡＴＧＴＣＡＣＣＴＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＡＣＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＣＣＡＴＴＴＧＴＡＡＴＧＣＴＧＡＣＴＴＧＧＧＧＴＧＧＣＡＣＡＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＣＴＴＣＡＡＧＧＡＴＣＧＡＧＴＧＧＣＣＣＣＡＧＧＴＣＣＣＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＣＡＣＣＣＴＣＣＡＧＴＣＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＡＣＧＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＡＴＣＴＡＴＣＡＣＡＣＣＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＧＴＡＣＡＣＴＧＧＧＡＧＡＡＴＣＴＴＣＣＴＧＧＡＧＧＴＣＣＴＡＧＡＡＡＧＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＴＴＧＣＴＴＧＧＡＧＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＧＡＣＧＣＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＴＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＧＣＧＴＴＧＡＣＴＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＣＣＣＴＣＡＧＡＡＴＣＣＡＴＴＣＴＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＴＣＡＧＧＡＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＡＧＧＡＡＴＧＧＡＧＣＣＣＣＡＧＴＧＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＧＣＧＧＧＧＡＧＡＧＧＡＣＴＧＴＧＣＣＧＡＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＡＡＴＧＴＣＣＴＧＡＧＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＴＡＡＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＡＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＴＴＡＧ（配列番号１）
ＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲ ＦＱＩＰ（配列番号２）
実施例１：抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の生成
１．抗原免疫化及び結合測定用のＴＩＧＩＴ組換えタンパク質
ＧｅｎＢａｎｋ配列（遺伝子座：ＮＭ＿１７３７９９）による全長ヒトＴＩＧＩＴ（ｈｕＴＩＧＩＴ、配列番号１）をコードするｃＤＮＡに基づいて合成し、前記ｃＤＮＡはＥｕｒｏｆｉｎｓから購入された。全長ヒトＴＩＧＩＴのアミノ酸（ＡＡ）１～１４１（配列番号２）に対応する細胞外ドメインＥＣＤのコード領域をＰＣＲで増幅し、且つそれを発現ベクターにクローニングすることにより、それぞれ、２つの組換え融合タンパク質Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ及びＧｓｔ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳの発現プラスミドを産生した。組換え融合タンパク質を産生するために、組換え融合タンパク質（Ｔｒｘ－ＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ及びＧｓｔ－ＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ）の発現プラスミドを大腸菌コンピテントセル（Ｅ．ｃｏｌｉ ｇａｍｉＢ（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ，Ｎｏｖａｇｅｎ）に転移して培養した。ＩＰＴＧ誘導後、大腸菌細胞を遠心分離して沈殿物を収集した。超音波の中で大腸菌を打ち砕いた後、遠心分離して沈殿物を得た。可溶化試薬を添加して沈殿物を溶解し、次にＮｉ－ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ、Ｎｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ、＃３０４１０）により精製し、それを透析した。ＰＡＧＥにより組換えタンパク質の精製の効果を検出し、次に組換えタンパク質を少量に等分して－３０℃で保存した。
ＡＴＧＣＧＣＴＧＧＴＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＧＣＣＴＣＡＧＧＡＡＴＧＡＴＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡＣＧＧＧＧＡＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＡＧＧＴＧＧＣＴＣＴＡＴＣＡＴＣＴＴＡＣＡＡＴＧＴＣＡＣＣＴＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＡＣＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＣＣＡＴＴＴＧＴＡＡＴＧＣＴＧＡＣＴＴＧＧＧＧＴＧＧＣＡＣＡＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＣＴＴＣＡＡＧＧＡＴＣＧＡＧＴＧＧＣＣＣＣＡＧＧＴＣＣＣＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＣＡＣＣＣＴＣＣＡＧＴＣＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＡＣＧＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＡＴＣＴＡＴＣＡＣＡＣＣＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＧＴＡＣＡＣＴＧＧＧＡＧＡＡＴＣＴＴＣＣＴＧＧＡＧＧＴＣＣＴＡＧＡＡＡＧＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＴＴＧＣＴＴＧＧＡＧＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＧＡＣＧＣＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＴＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＧＣＧＴＴＧＡＣＴＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＣＣＣＴＣＡＧＡＡＴＣＣＡＴＴＣＴＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＴＣＡＧＧＡＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＡＧＧＡＡＴＧＧＡＧＣＣＣＣＡＧＴＧＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＧＣＧＧＧＧＡＧＡＧＧＡＣＴＧＴＧＣＣＧＡＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＡＡＴＧＴＣＣＴＧＡＧＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＴＡＡＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＡＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＴＴＡＧ（配列番号１）
ＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲ ＦＱＩＰ（配列番号２）
【0082】
２．安定発現細胞株の構築
それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ配列（ＮＭ＿７３７９９）及び（ＸＭ＿００５５４８１０１．２）による全長ヒトＴＩＧＩＴ（ｈｕＴＩＧＩＴ、配列番号１）及びカニクイザルＴＩＧＩＴ（ｍｋＴＩＧＩＴ、配列番号３）をコードするｃＤＮＡに基づいて合成し、前記ｃＤＮＡはＧｅｎｓｃｒｉｐｔから購入された。ＰＣＲ増幅後、ＤＮＡ産物をｐｃＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ＣＨＯ－Ｋ１細胞株（ＪＣＲＢ、＃ＪＣＲＢ９０１８）に形質導入することにより、ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ及びＣＨＯ－ｍｋＴＩＧＩＴ細胞株を産生した。Ｇ４１８を含んだ培地での培養、ｅＧＦＰ発現及びＦＡＣＳによる結合測定で、ＨｕＴＩＧＩＴ又はｍｋＴＩＧＩＴ高発現安定細胞株を選んだ。
ＡＴＧＣＧＧＴＧＧＴＧＴＣＴＣＴＴＣＣＴＧＡＴＣＴＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＧＣＣＴＣＡＧＧＡＡＴＧＡＴＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡＣＧＧＧＧＡＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＡＡＡＧＡＡＡＧＧＴＧＧＣＴＣＴＧＴＴＡＴＣＴＴＡＣＡＡＴＧＴＣＡＣＣＴＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＡＣＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＴＧＡＣＣＡＴＴＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＣＡＴＴＣＧＴＡＡＴＧＣＴＧＡＧＴＴＧＧＧＧＴＧＧＣＡＣＡＴＣＴＡＣＣＣＡＧＣＣＴＴＣＡＡＧＧＡＴＣＧＡＧＴＧＧＣＣＣＣＧＧＧＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＣＡＣＣＣＴＣＣＡＧＴＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＧＡＡＴＧＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＴＡＴＣＡＣＡＣＣＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＴＴＡＣＡＧＡＧＧＧＡＧＡＡＴＣＴＴＣＣＴＧＧＡＧＧＴＣＣＴＡＧＡＡＡＧＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＧＡＧＣＡＣＡＧＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＴＴＧＣＴＴＧＧＡＧＣＣＡＴＧＧＣＣＡＴＧＡＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＣＴＧＣＡＴＡＧＣＡＧＴＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＧＴＧＴＴＧＧＣＴＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＡＴＣＣＡＴＴＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＣＣＴＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＴＣＡＡＣＴＧＧＡＣＡＧＧＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＴＣＣＣＡＧＴＧＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＧＡＴＧＡＣＴＧＴＧＣＣＧＡＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＡＡＴＧＴＣＣＴＧＡＧＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＡＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＧＴＡＧ（配列番号３）
それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ配列（ＮＭ＿７３７９９）及び（ＸＭ＿００５５４８１０１．２）による全長ヒトＴＩＧＩＴ（ｈｕＴＩＧＩＴ、配列番号１）及びカニクイザルＴＩＧＩＴ（ｍｋＴＩＧＩＴ、配列番号３）をコードするｃＤＮＡに基づいて合成し、前記ｃＤＮＡはＧｅｎｓｃｒｉｐｔから購入された。ＰＣＲ増幅後、ＤＮＡ産物をｐｃＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ＣＨＯ－Ｋ１細胞株（ＪＣＲＢ、＃ＪＣＲＢ９０１８）に形質導入することにより、ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ及びＣＨＯ－ｍｋＴＩＧＩＴ細胞株を産生した。Ｇ４１８を含んだ培地での培養、ｅＧＦＰ発現及びＦＡＣＳによる結合測定で、ＨｕＴＩＧＩＴ又はｍｋＴＩＧＩＴ高発現安定細胞株を選んだ。
ＡＴＧＣＧＧＴＧＧＴＧＴＣＴＣＴＴＣＣＴＧＡＴＣＴＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＧＣＣＴＣＡＧＧＡＡＴＧＡＴＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡＣＧＧＧＧＡＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＡＡＡＧＡＡＡＧＧＴＧＧＣＴＣＴＧＴＴＡＴＣＴＴＡＣＡＡＴＧＴＣＡＣＣＴＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＡＣＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＴＧＡＣＣＡＴＴＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＣＡＴＴＣＧＴＡＡＴＧＣＴＧＡＧＴＴＧＧＧＧＴＧＧＣＡＣＡＴＣＴＡＣＣＣＡＧＣＣＴＴＣＡＡＧＧＡＴＣＧＡＧＴＧＧＣＣＣＣＧＧＧＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＣＡＣＣＣＴＣＣＡＧＴＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＧＡＡＴＧＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＴＡＴＣＡＣＡＣＣＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＴＴＡＣＡＧＡＧＧＧＡＧＡＡＴＣＴＴＣＣＴＧＧＡＧＧＴＣＣＴＡＧＡＡＡＧＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＧＡＧＣＡＣＡＧＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＴＴＣＣＡＴＴＧＣＴＴＧＧＡＧＣＣＡＴＧＧＣＣＡＴＧＡＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＣＴＧＣＡＴＡＧＣＡＧＴＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＧＴＧＴＴＧＧＣＴＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＡＴＣＣＡＴＴＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＣＣＴＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＴＣＡＡＣＴＧＧＡＣＡＧＧＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＴＣＣＣＡＧＴＧＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＧＡＴＧＡＣＴＧＴＧＣＣＧＡＧＣＴＧＣＡＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＡＡＴＧＴＣＣＴＧＡＧＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＡＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＧＴＡＧ（配列番号３）
【0083】
３．免疫化、ハイブリドーマ融合及びクローニング
６～８週齢の染色体導入マウス（ＴＣ－ｍＡｂＴＭマウス）への初回の免疫注射に備えて、ヒトＴＩＧＩＴ組換えタンパク質（Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ融合タンパク質、初回１マウスあたり１００μｇ、ブースト１マウスあたり５０μｇ）と完全フロイントアジュバント（ＦＣＡ、ＢＤから購入、カタログ番号２６３８１０、初回１マウスあたり１００μＬ）を混合し、また、Ｓｉｇｍａ Ａｄｊｕｓｔ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＳＡＳ、ｓｉｇｍａから購入、カタログ番号ｓ６３２２－１ｖｌ、ブースト１マウスあたり５０μＬ）を使用してブースト免疫注射を行い、間隔は２～３週であった。最終の免疫化はアジュバントが不要で、Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ融合タンパク質（最終１マウスあたり５０μｇ）だけでよい。全ての免疫化が腹腔内注射で行われた。
６～８週齢の染色体導入マウス（ＴＣ－ｍＡｂＴＭマウス）への初回の免疫注射に備えて、ヒトＴＩＧＩＴ組換えタンパク質（Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ融合タンパク質、初回１マウスあたり１００μｇ、ブースト１マウスあたり５０μｇ）と完全フロイントアジュバント（ＦＣＡ、ＢＤから購入、カタログ番号２６３８１０、初回１マウスあたり１００μＬ）を混合し、また、Ｓｉｇｍａ Ａｄｊｕｓｔ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＳＡＳ、ｓｉｇｍａから購入、カタログ番号ｓ６３２２－１ｖｌ、ブースト１マウスあたり５０μＬ）を使用してブースト免疫注射を行い、間隔は２～３週であった。最終の免疫化はアジュバントが不要で、Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ融合タンパク質（最終１マウスあたり５０μｇ）だけでよい。全ての免疫化が腹腔内注射で行われた。
【0084】
最終の免疫化の３日後、マウスの安楽死を実施し、無菌状態で脾臓及びリンパ節を除去し、また無菌状態でマウスリンパ球を分離及び抽出した。電気融合により、得られたリンパ球集団とマウス骨髄腫細胞（１：１、Ｐ３Ｘ６３－Ａｇ８．６５３、ＡＴＣＣ、＃ＣＲＬ－１５８０）を融合させた。融合細胞を９６ウェルプレート内のＨＡＴ培地に静置し、３７℃、５％のＣＯ２で７日間インキュベートし、ＨＴ培地と交換して、５日間インキュベートした。
【0085】
４．ＥＬＩＳＡ、免疫細胞化学（ＩＣＣ）及びフローサイトメトリーによる抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合活性の評価
ヒトＴＩＧＩＴタンパク質を使用し、ＥＬＩＳＡにより特異的抗ＴＩＧＩＴ抗体を含有する上清をスクリーニングした。９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、カタログ番号４４－２４０４）をそれぞれ、Ｇｓｔ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ融合タンパク質、Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ（５０ｎｇ／ウェル）でコーティングして、ＰＢＳ緩衝液で希釈し、また４℃で一晩インキュベートした。次に、スキムミルク及びＴｗｅｅｎ２０を含有する３００μＬのＴＢＳを使用して室温でウェルを３０分間ブロックした。洗浄後、１００μＬの上清及び／又は血清を添加し、また室温でインキュベートした。抗体の特異性を検出するために、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合した抗ヒトＩｇＧ抗体（ヤギ抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ断片交差吸着抗体がＨＲＰと結合したもの、ＢＥＴＨＹＬ、＃Ａ８０－３０４Ｐ）を、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳにおいて最適濃度に希釈し、次に、洗浄後、１００μＬ／ウェルで添加し、室温で３０分間インキュベートした。０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有する３００μＬのＴＢＳを使用してプレートを３回洗浄した。０．５ｍｇ／ｍＬのＯＰＤ及び０．０３％のＨ２Ｏ２を含有する１００μＬのマトリックス溶液を添加して、プレートを室温で３０分間インキュベートし、次に、２５μＬの１Ｍ Ｈ２ＳＯ４（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ、＃９５６２６－０６）を添加し、次に、４９２ｎｍで読み取った。陽性クローンを選び、それを新しい９６ウェルプレートに接種した。３日後、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質を使用してＥＬＩＳＡにより新しい９６ウェルプレートの上清をスクリーニングした。ヒトＴＩＧＩＴと結合したハイブリドーマ細胞株を増殖させ、２～４日間培養し、ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ及びＣＨＯ－ｍｋＴＩＧＩＴ細胞を使用してＩＣＣ及びフローサイトメトリーによりＥＬＩＳＡ陽性クローンを検出し、また陽性クローンを選んだ。数日培養した後、上記の方法に従った二次検出した。二次陽性クローンを限界まで希釈し、また２週後、再びＩＣＣ及びフローサイトメトリーでテストし、再び限界希釈を行った。
ヒトＴＩＧＩＴタンパク質を使用し、ＥＬＩＳＡにより特異的抗ＴＩＧＩＴ抗体を含有する上清をスクリーニングした。９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、カタログ番号４４－２４０４）をそれぞれ、Ｇｓｔ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ融合タンパク質、Ｔｒｘ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ（５０ｎｇ／ウェル）でコーティングして、ＰＢＳ緩衝液で希釈し、また４℃で一晩インキュベートした。次に、スキムミルク及びＴｗｅｅｎ２０を含有する３００μＬのＴＢＳを使用して室温でウェルを３０分間ブロックした。洗浄後、１００μＬの上清及び／又は血清を添加し、また室温でインキュベートした。抗体の特異性を検出するために、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合した抗ヒトＩｇＧ抗体（ヤギ抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ断片交差吸着抗体がＨＲＰと結合したもの、ＢＥＴＨＹＬ、＃Ａ８０－３０４Ｐ）を、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳにおいて最適濃度に希釈し、次に、洗浄後、１００μＬ／ウェルで添加し、室温で３０分間インキュベートした。０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有する３００μＬのＴＢＳを使用してプレートを３回洗浄した。０．５ｍｇ／ｍＬのＯＰＤ及び０．０３％のＨ２Ｏ２を含有する１００μＬのマトリックス溶液を添加して、プレートを室温で３０分間インキュベートし、次に、２５μＬの１Ｍ Ｈ２ＳＯ４（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ、＃９５６２６－０６）を添加し、次に、４９２ｎｍで読み取った。陽性クローンを選び、それを新しい９６ウェルプレートに接種した。３日後、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質を使用してＥＬＩＳＡにより新しい９６ウェルプレートの上清をスクリーニングした。ヒトＴＩＧＩＴと結合したハイブリドーマ細胞株を増殖させ、２～４日間培養し、ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ及びＣＨＯ－ｍｋＴＩＧＩＴ細胞を使用してＩＣＣ及びフローサイトメトリーによりＥＬＩＳＡ陽性クローンを検出し、また陽性クローンを選んだ。数日培養した後、上記の方法に従った二次検出した。二次陽性クローンを限界まで希釈し、また２週後、再びＩＣＣ及びフローサイトメトリーでテストし、再び限界希釈を行った。
【0086】
実施例２：抗ＴＩＧＩＴ抗体の配列解析
ＥＬＩＳＡ、ＩＣＣ及びＦＡＣＳによる予備スクリーニングを経た後、限界希釈法により陽性ハイブリドーマクローンに対してサブクローニングした。再び検証した後、クローニングされたハイブリドーマ細胞を１０ｃｍのシャーレにおいて培養した。細胞密度が８０％～９０％に達すると、細胞を収集し、溶液でそれを浮遊させた。ｍｉｃｒｏＫｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ、＃７４１０４）を用いて浮遊細胞からＲＮＡを抽出した。キット（タカラ、＃Ｚ４８５８Ｎ）を使用して５’ｃＤＮＡ末端において、抽出されたＲＮＡを迅速に増幅させた。産物の配列解析（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ）結果は、表１に示されている。前記配列に基づいて、ＴＩＧＩＴ抗体発現プラスミドを構築し、またＨＥＫ２９３細胞において発現した。８種の抗体をプロテインＡにより精製し、またＳＤＳ－ＰＡＧＥを行って分析したところ、前記抗体の純度は９５％を超えていた。得られた１０種の抗体に対してアミノ酸配列決定を行い、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列は、表１に示されている。
ＥＬＩＳＡ、ＩＣＣ及びＦＡＣＳによる予備スクリーニングを経た後、限界希釈法により陽性ハイブリドーマクローンに対してサブクローニングした。再び検証した後、クローニングされたハイブリドーマ細胞を１０ｃｍのシャーレにおいて培養した。細胞密度が８０％～９０％に達すると、細胞を収集し、溶液でそれを浮遊させた。ｍｉｃｒｏＫｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ、＃７４１０４）を用いて浮遊細胞からＲＮＡを抽出した。キット（タカラ、＃Ｚ４８５８Ｎ）を使用して５’ｃＤＮＡ末端において、抽出されたＲＮＡを迅速に増幅させた。産物の配列解析（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ）結果は、表１に示されている。前記配列に基づいて、ＴＩＧＩＴ抗体発現プラスミドを構築し、またＨＥＫ２９３細胞において発現した。８種の抗体をプロテインＡにより精製し、またＳＤＳ－ＰＡＧＥを行って分析したところ、前記抗体の純度は９５％を超えていた。得られた１０種の抗体に対してアミノ酸配列決定を行い、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列は、表１に示されている。
【0087】
【表1】
【0088】
ＩＭＧＴプログラムを利用して、ＶＬ及びＶＨのＣＤＲを予測した。結果は、表２に示されている。
【表2】
【0089】
なお、使用するＣＤＲ予測プログラムによって、同じＶＨ又は同じＶＬのＣＤＲでもわずかな違い、例えば、アミノ酸位置の変化がある。同じＶＨ又はＶＬによるこれらの異なるＣＤＲも、本発明の範囲に含まれる。
【0090】
実施例３：組換えヒトＴＩＧＩＴタンパク質に対する所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスによって誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体の親和性の測定
ＦｏｒｔｅｂｉｏＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６により、ヒトＴＩＧＩＴと結合した本発明の上述した８種の抗体の平衡解離定数（ＫＤ）を測定した。測定方法は、従来の方法で行った（Ｅｓｔｅｐ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ，ＭＡｂｓ，２０１３．５（２）：ｐ．２７０－８）。ＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ＢＩ１２０）に対する所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスによって誘導された本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体の親和性を測定した。ＮＴＡ（ＨＩＳ－タグ）センサを用いた。センサを分析用緩衝液に入れて平衡させた後、ヒトＴＩＧＩＴ－ＨＩＳをＮＴＡセンサ（ｆｏｒｔｅｂｉｏ）にロードして親和性を測定した。抗原がロードされたセンサを抗体を含んだ溶液（抗体濃度は、それぞれ、５、２．５、０．８３、０．２７８、０．０９、０．０３、０．０１μｇ／ｍＬであった）に、静止期になるまで静置し、次に、センサを分析用緩衝液に移して、解離速度の測定に備えて少なくとも２分間解離させた。１：１組合せモデルを利用して動的解析を行った。
ＦｏｒｔｅｂｉｏＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６により、ヒトＴＩＧＩＴと結合した本発明の上述した８種の抗体の平衡解離定数（ＫＤ）を測定した。測定方法は、従来の方法で行った（Ｅｓｔｅｐ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ，ＭＡｂｓ，２０１３．５（２）：ｐ．２７０－８）。ＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ＢＩ１２０）に対する所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスによって誘導された本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体の親和性を測定した。ＮＴＡ（ＨＩＳ－タグ）センサを用いた。センサを分析用緩衝液に入れて平衡させた後、ヒトＴＩＧＩＴ－ＨＩＳをＮＴＡセンサ（ｆｏｒｔｅｂｉｏ）にロードして親和性を測定した。抗原がロードされたセンサを抗体を含んだ溶液（抗体濃度は、それぞれ、５、２．５、０．８３、０．２７８、０．０９、０．０３、０．０１μｇ／ｍＬであった）に、静止期になるまで静置し、次に、センサを分析用緩衝液に移して、解離速度の測定に備えて少なくとも２分間解離させた。１：１組合せモデルを利用して動的解析を行った。
【0091】
上記で記述されているの試験では、本発明における所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスによって誘導された抗ＴＩＧＩＴ抗体のＫＤ値は、表３に示されている。
【表3】
【0092】
抗ＴＩＧＩＴ抗体参照・チラゴルマブ（ＫＥＧＧ－ＤＲＵＧデータベースに開示されているチラゴルマブ配列に基づいて合成した）と比較し、Ｏｃｔｅｔ結合テストを利用して全てのヒトＴＩＧＩＴ抗体（１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３、４Ａ０４２－Ｈ７、４Ｂ０３０ａ、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ、４Ｅ０６１ａ）のヒトＴＩＧＩＴと結合するエピトープを研究した。試験手順は次のとおりであった。ＴＩＧＩＴ－ＨＩＳ（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ＢＩ１２０）がロードされたセンサを静止期になるまで、ＴＩＧＩＴ抗体を含んだ溶液に静置し、次に、センサを分析用緩衝液に移して飽和の状態とし、次に、参照抗体（チラゴルマブ）を含んだ他の分析物又は緩衝液にセンサを移した。結合が静止期になると、それを溶離した。エピトープ群が示すように、チラゴルマブと比べて、３つの候補クローンエピトープの間で競合が認められ、つまり、それらがＴＩＧＩＴの同じ抗原エピトープと結合する。結果は、図２Ａに示されている。
【0093】
本発明の様々な抗体の間でエピトープ競合が認められる。１Ｂ２－８Ｃは、それ自体とチラゴルマブ、４Ａ０４２－Ｈ３、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断でき、４Ａ０６３との結合を部分的に遮断できるが、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断せず、チラゴルマブ及び４Ａ０４２－Ｈ３は、チラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断できるが、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断せず、４Ａ０４２－Ｈ７は、それ自体とチラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断でき、４Ｂ０３７ａ及び４Ａ０６３との結合を部分的に遮断できるが、４Ｂ０５６ａ、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断せず、４Ｂ０３０ａは、それ自体との結合を遮断でき、４Ｂ０５６ａ及び４Ａ０６３との結合を部分的に遮断でき、且つ４Ｂ０３７ａ、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断せず、４Ｂ０３７ａ及び４Ａ０６３は、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断でき、且つチラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を部分的に遮断でき、４Ｂ０５６ａは、それ自体と４Ｂ０３７ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断でき、チラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３及び４Ｂ０３０ａとの結合を部分的に遮断できるが、４Ａ０４２－Ｈ７との結合を遮断せず、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａは、４Ｂ０３７ａ、４Ｂ０５６ａ、４Ａ０６３、４Ｄ０３５ａ及び４Ｅ０６１ａとの結合を遮断できるが、チラゴルマブ、１Ｂ２－８Ｃ、４Ａ０４２－Ｈ３、４Ａ０４２－Ｈ７及び４Ｂ０３０ａとの結合を遮断しなかった。結果は、図２Ｂ及び図２Ｃに示されている。
【0094】
実施例４：細胞表面のＴＩＧＩＴに対する所定のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスによって誘導された抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合活性
ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ細胞又はＣＨＯ－ｍｋＴＩＧＩＴ細胞を９６ウェルプレートに播種した。実施例２の抗体をそれぞれ、異なる濃度に希釈し、また、細胞によって覆われた９６ウェルプレートに添加し（１００μＬ／ウェル）、４℃（氷上）で１時間インキュベートした。
ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ細胞又はＣＨＯ－ｍｋＴＩＧＩＴ細胞を９６ウェルプレートに播種した。実施例２の抗体をそれぞれ、異なる濃度に希釈し、また、細胞によって覆われた９６ウェルプレートに添加し（１００μＬ／ウェル）、４℃（氷上）で１時間インキュベートした。
【0095】
２００μＬ／ウェルで洗浄緩衝液を添加して細胞を洗浄し、また１６００ｒｐｍ（約２６０×ｇ）で４℃、３分間遠心分離し、また上清を捨て、これを２回繰り返した。各ウェルに、抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、＃１０９－５８５－１９０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ断片特異性）を含んだ３０μＬの洗浄緩衝液を添加し、細胞を４℃（氷上）で１時間培養した。２回洗浄し、細胞を平底９６ウェルプレートに移し、またＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓで細胞を分析した。１０を底とする対数を横座標、２つのチャネルの蛍光強度の中央値を縦座標として抗体濃度で製図した。ＥＣ５０（ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ及びＣＨＯ－ｍｋＴＩＧＩＴ）を曲線のピーク値と比較した。（μｇ／ｍＬ）結果は、表４、図３Ａ、図３Ｂに示されている。
【表4】
【0096】
実施例５：本発明のＴＣ－ｍＡｂＴＭマウスによって誘導された抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体によるＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の結合遮断
ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ｅＧＦＰ細胞をＶ底９６ウェルプレートに播種した。実施例２の抗体及び参照抗体をそれぞれ、異なる濃度に希釈し、また細胞によって覆われた（１００％）の９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬを添加し、４℃で１時間インキュベートした。
ＣＨＯ－ｈｕＴＩＧＩＴ－ｅＧＦＰ細胞をＶ底９６ウェルプレートに播種した。実施例２の抗体及び参照抗体をそれぞれ、異なる濃度に希釈し、また細胞によって覆われた（１００％）の９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬを添加し、４℃で１時間インキュベートした。
【0097】
２００μＬ／ウェルで洗浄緩衝液を添加して細胞を洗浄し、また１６００ｒｐｍ（約２６０×ｇ）で４℃、３分間遠心分離し、また上清を捨て、これを２回繰り返した。ビオチン化ヒトＣＤ１５５（ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲ／ＮＥＣＬ５タンパク質（Ｆｃタグ）、ビオチン化、Ｓｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１０１０９－Ｈ０２Ｈ－Ｂ）を含んだ３０μＬの洗浄緩衝液を添加し、次に、細胞を４℃（氷上）で１時間培養した。ストレプトアビジン－５９４（ｆ．ｃ．＝１０μｇ／ｍＬ）を含んだ３０μＬの洗浄緩衝液をウェルに添加し、次に、細胞を４℃で３０分間インキュベートした。１回洗浄し、また細胞を平底９６ウェルプレートに移し、またＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓで細胞を分析した。抗体濃度（μｇ／ｍＬ）の１０を底とする対数値を横座標、また各抗体濃度に対応する蛍光強度の中央値を縦座標とした。曲線のＩＣ５０を分析してＣＤ１５５とＴＩＧＩＴとの結合に対する異なる抗体の遮断能力を区別した。
【0098】
【0099】
実施例６：抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用療法のインビボ有効性
抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＤ－１抗体のインビボでの相乗効果を評価するために、マウス結腸・直腸がん細胞株ＣＴ２６．ＷＴ（５×１０５個の細胞／マウス）をＴＩＧＩＴヒト化ＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植した。平均腫瘍体積が１２０±５０ｍｍ３に達すると、腫瘍体積によりマウスをランダムに群分けし（ｎ＝３）、またＩｇＧ陰性対照抗体（抗ＨＥＬヒトＩｇＧ１アイソタイプ、ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、各回１マウスあたり２００μｇ）、抗ｍＰＤ－１抗体（インビボＭＡｂ抗マウスＰＤ－１、承認番号：７９５７２０Ｄ１、各回１マウスあたり２０μｇ）、陽性参照抗体（チラゴルマブ－ｈＩｇＧ１、各回１マウスあたり２００μｇ）と抗ｍＰＤ－１抗体（各回１マウスあたり２０μｇ）の組み合わせ、４Ａ０６３抗体（４Ａ０６３－ｈＩｇＧ１、各回１マウスあたり２００μｇ）と抗ｍＰＤ－１抗体（各回１マウスあたり２０μｇ）の組み合わせを投与し、３日ごとに１回で、合計で６回であった。腫瘍体積及び体重を、週２回測定した。
抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＤ－１抗体のインビボでの相乗効果を評価するために、マウス結腸・直腸がん細胞株ＣＴ２６．ＷＴ（５×１０５個の細胞／マウス）をＴＩＧＩＴヒト化ＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植した。平均腫瘍体積が１２０±５０ｍｍ３に達すると、腫瘍体積によりマウスをランダムに群分けし（ｎ＝３）、またＩｇＧ陰性対照抗体（抗ＨＥＬヒトＩｇＧ１アイソタイプ、ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、各回１マウスあたり２００μｇ）、抗ｍＰＤ－１抗体（インビボＭＡｂ抗マウスＰＤ－１、承認番号：７９５７２０Ｄ１、各回１マウスあたり２０μｇ）、陽性参照抗体（チラゴルマブ－ｈＩｇＧ１、各回１マウスあたり２００μｇ）と抗ｍＰＤ－１抗体（各回１マウスあたり２０μｇ）の組み合わせ、４Ａ０６３抗体（４Ａ０６３－ｈＩｇＧ１、各回１マウスあたり２００μｇ）と抗ｍＰＤ－１抗体（各回１マウスあたり２０μｇ）の組み合わせを投与し、３日ごとに１回で、合計で６回であった。腫瘍体積及び体重を、週２回測定した。
【0100】
結果は、図５に示されている。図５は、各群のマウスの平均腫瘍体積及び各群のマウスの平均体重をそれぞれ時間の関数として提供している。陽性参照抗体と比べて、４Ａ０６３は、腫瘍増殖に対する顕著な抑制（ＴＧＩ：４４％対９２．３３％）を示しており、また各群の平均体重の間で顕著な差異がなかった。
【0101】
実施例７：抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用療法のインビボ抗腫瘍活性の作用機序に関する研究
抗ＴＩＧＩＴ抗体のインビボでの作用様式を研究するために、抗ＴＩＧＩＴ抗体４Ａ０６３（ｈＩｇＧ１）と抗ＰＤ－１抗体の併用治療を行った後、フローサイトメトリーにより腫瘍の免疫細胞浸潤を分析した。実施例６で記述されているとおり、マウスに接種及び治療を行った。６回の治療から３日後、マウスを殺し、腫瘍及び脾臓を摘出した。腫瘍消化緩衝液（１ｍｇ／ｍＬのＩ型コラゲナーゼ及び２０μｇ／ｍＬのＤＮＡａｓｅ Ｉ、ｓｉｇｍａ）で腫瘍を溶解し、また脾臓を研磨した後、そのまま脾臓単細胞懸濁液を得た。Ｆｃ－ｂｌｏｃｋで染色した後、抗ＣＤ３（ＦＩＴＣ抗マウスＣＤ３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、１００２０４）、抗ＣＤ８（ＰＥ抗マウスＣＤ８ａ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、１００７０８）で細胞を染色した。さらに、市販緩衝液（ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／ＣｙｔｏｐｅｒｍＴＭ固定／透明化キット、５５４７１４）で固定及び透明化した後、抗ＩＦＮγ抗体（ＰｅｒＣＰ／Ｃｙａｎｉｎｅ５．５抗マウスＩＦＮ－γ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、５０５８２２）で細胞を染色した。通常の洗浄及び濾過を経て、フローサイトメトリーにより細胞を分析した。
抗ＴＩＧＩＴ抗体のインビボでの作用様式を研究するために、抗ＴＩＧＩＴ抗体４Ａ０６３（ｈＩｇＧ１）と抗ＰＤ－１抗体の併用治療を行った後、フローサイトメトリーにより腫瘍の免疫細胞浸潤を分析した。実施例６で記述されているとおり、マウスに接種及び治療を行った。６回の治療から３日後、マウスを殺し、腫瘍及び脾臓を摘出した。腫瘍消化緩衝液（１ｍｇ／ｍＬのＩ型コラゲナーゼ及び２０μｇ／ｍＬのＤＮＡａｓｅ Ｉ、ｓｉｇｍａ）で腫瘍を溶解し、また脾臓を研磨した後、そのまま脾臓単細胞懸濁液を得た。Ｆｃ－ｂｌｏｃｋで染色した後、抗ＣＤ３（ＦＩＴＣ抗マウスＣＤ３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、１００２０４）、抗ＣＤ８（ＰＥ抗マウスＣＤ８ａ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、１００７０８）で細胞を染色した。さらに、市販緩衝液（ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／ＣｙｔｏｐｅｒｍＴＭ固定／透明化キット、５５４７１４）で固定及び透明化した後、抗ＩＦＮγ抗体（ＰｅｒＣＰ／Ｃｙａｎｉｎｅ５．５抗マウスＩＦＮ－γ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、５０５８２２）で細胞を染色した。通常の洗浄及び濾過を経て、フローサイトメトリーにより細胞を分析した。
【0102】
結果は、図６に示されている。図６Ａに示すように、対照群と比べて、抗ＴＩＧＩＴ抗体４Ａ０６３ ｈＩｇＧ１を用いて腫瘍のインビボ併用治療を行う場合、腫瘍微小環境ではＣＤ８＋ＴＩＬ集団の割合が上昇したが（Ｐ＝０．０３３５）、ＰＤ－１抗体単独群ではこれが観察されなかった。また、脾臓細胞におけるＴ細胞のフローサイトメトリー結果（図６Ｂに示されている）は、腫瘍微小環境における結果に一致しており、併用治療群でＣＤ８＋ＴＩＬ集団の割合がサブタイプ対照群での割合より有意に高く（Ｐ＝０．００２５）、またＰＤ－１抗体単独治療群での割合より高い（Ｐ＝０．０１７１）ことが分かった。これは、併用治療を経て細胞傷害性エフェクターＴ細胞が活性化されることを示しており、実施例５で取り上げたような併用治療群とＰＤ－１単独群との間の差異はこれで説明がつく。併用治療群間の比較では、抗ＴＩＧＩＴ抗体参照（チラゴルマブ－ｈＩｇＧ１）併用群と比べて、４Ａ０６３－ｈＩｇＧ１併用群のＣＤ８＋ＴＩＬの増加がより顕著であった。抗ＴＩＧＩＴ抗体４Ａ０６３ ｈＩｇＧ１とＰＤ－１抗体の併用治療でも、腫瘍内のＴ細胞の機能が改善され、またＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮγの産生が増加していた。
【0103】
本願で言及される全ての刊行物及び特許はいずれも参照により本明細書に組み込まれる。本発明の範囲と趣旨から逸脱しない限り、本発明に記述されている方法及び組成物の様々な変更及び変形は当業者にとって自明なものである。特定の好ましい実施形態と結び付けて本発明を記述しているが、保護を主張される本発明はこれらの特定の実施形態に限定されるべきではない。実際には、ここで記述されている本発明を実施するための形態の様々な変形も、特許請求の範囲のうちに含まれることが意図され、これらの変形は当業者にとって自明なものである。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【国際調査報告】