特表 2025-504063 安定抗体製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-02-06

(54)【発明の名称】安定抗体製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20250130BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20250130BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20250130BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20250130BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20250130BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 31/06 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 17/04 20060101ALI20250130BHJP

   C07K 16/24 20060101ALN20250130BHJP

   C07K 16/46 20060101ALN20250130BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 W

A61K39/395 D

A61K39/395 Y

A61K47/12

A61K47/26

A61K47/18

A61K9/08

A61K9/19

A61P11/06

A61P37/08

A61P17/00

A61P19/02

A61P31/22

A61P11/00

A61P7/00

A61P37/02

A61P7/06

A61P27/02

A61P31/06

A61P13/12

A61P37/06

A61P35/00

A61P11/02

A61P17/04

C07K16/24 ZNA

C07K16/46

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024545182

(86)(22)【出願日】2023-04-14

(85)【翻訳文提出日】2024-07-30

(86)【国際出願番号】 CN2023088385

(87)【国際公開番号】W WO2023226617

(87)【国際公開日】2023-11-30

(31)【優先権主張番号】202210561675.8

(32)【優先日】2022-05-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522500387

【氏名又は名称】南京融捷康生物科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＣＯＲＥ ＢＩＯＴＥＣＨ ＣＯ．， ＬＴＤ

【住所又は居所原語表記】Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ０７， １６ Ｔｒｅｅ－Ｈｏｕｓｅ， Ｔａｎｍｉ Ｒｄ．， Ｊｉａｎｇｂｅｉ Ｎｅｗ Ａｒｅａ Ｎａｎｊｉｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ ２１００００， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110001841

【氏名又は名称】弁理士法人ＡＴＥＮ

(72)【発明者】

【氏名】蘇 志鵬

(72)【発明者】

【氏名】汪 洋

(72)【発明者】

【氏名】謝 維

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076AA29

4C076BB13

4C076BB16

4C076CC04

4C076CC07

4C076CC10

4C076CC14

4C076CC15

4C076CC17

4C076CC18

4C076CC27

4C076CC32

4C076DD41Z

4C076DD51Z

4C076DD67D

4C076EE23F

4C076FF14

4C076FF16

4C076FF36

4C076FF43

4C076FF61

4C076GG06

4C085AA13

4C085BB36

4C085BB42

4C085CC22

4C085EE05

4C085EE07

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は免疫学の分野に属し、安定抗体製剤に関連する。安定抗体製剤は、治療有効量の抗体分子と、等張化剤と、バッファ剤と、充填剤と、界面活性剤とを含み、そのｐＨは４．５～５．５である。前記抗体分子はＩＬ－５およびＩＬ－４Ｒαの両方に同時に特異的に結合することができ、ＩＬ－４Ｒα分子に特異的に結合することができる第一免疫グロブリン可変ドメインとＩＬ－５に特異的に結合することができる第二免疫グロブリン可変ドメインとを有する少なくとも二つの免疫グロブリン可変ドメインを含む。抗体製剤中の抗体は、保存中において物理的および化学的な安定性、およびその完全性を実質的に保持する。
【選択図】図６

【特許請求の範囲】

【請求項1】

治療有効量の抗体分子、等張化剤、バッファ剤、および界面活性剤を含み、製剤のｐＨが４．５～５．５であり、抗体分子がＩＬ－５およびＩＬ－４Ｒαの両方に特異的に結合することができる、安定抗体製剤であって、ＩＬ－４Ｒα分子に特異的に結合することができる第一免疫グロブリン可変ドメインとＩＬ－５に特異的に結合することができる第二免疫グロブリン可変ドメインとを有する少なくとも二つの免疫グロブリン可変ドメインを含む、安定抗体製剤。

【請求項2】

前記製剤のｐＨが４．７から５．３である、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項3】

第一免疫グロブリン可変ドメインが第一単一ドメイン抗体分子であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載のＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に記載のＣＤＲ３とを有し、第二免疫グロブリン可変ドメインが第二単一ドメイン抗体分子であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に記載のＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に記載のＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に記載のＣＤＲ３とを有する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項4】

抗体分子が、第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子との間のリンカーグループを含まないポリペプチド融合体である、請求項３に記載の安定抗体製剤。

【請求項5】

抗体分子が生体適合性ポリマーを含むポリペプチド融合体であり、ポリペプチド融合体の第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子とは、生体適合性ポリマーをリンカーグループとしてライゲーションされる、請求項３に記載の安定抗体製剤。

【請求項6】

第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子とがヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を介してライゲーションされ、抗体分子はホモ二量体構造を有し、４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２と名付けられ、各単鎖Ｆｃ融合タンパク質は第一免疫グロブリン可変ドメインと、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と、第二免疫グロブリン可変ドメインとからなる、請求項３に記載の安定抗体製剤。

【請求項7】

前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来である、請求項６に記載の安定抗体製剤。

【請求項8】

前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ４領域から誘導され、Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３に記載のアミノ酸配列を有するまたはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の１１６位から３５６位に位置する、請求項６に記載の安定抗体製剤。

【請求項9】

第一免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に記載のアミノ酸配列を有し、第二免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項10】

治療有効量の抗体分子、等張化剤、バッファ剤、および界面活性剤を含み、製剤のｐＨが４．５～５．５であり、抗体分子がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９または１０に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質を含む、安定抗体製剤。

【請求項11】

バッファ剤が酢酸－酢酸ナトリウムバッファであり、等張化剤がショ糖であり、界面活性剤がポリソルベートである、請求項１または１０に記載の安定抗体製剤。

【請求項12】

グリシンと塩酸アルギニンを含む充填剤をさらに有する、請求項１１に記載の安定抗体製剤。

【請求項13】

酢酸－酢酸ナトリウムの濃度が１０から２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／または塩酸アルギニンの濃度が２５から１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはショ糖の濃度が８０から１２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはグリシンの濃度が５０から７５ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはポリソルベート８０の濃度が０．０２から０．０５ｗ／ｖ％である、請求項１１に記載の安定抗体製剤。

【請求項14】

メチオニンをさらに有する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項15】

メチオニンを１０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度でさらに有する、請求項１４に記載の安定抗体製剤。

【請求項16】

前記抗体分子が１２０ｍｇ／ｍＬ未満の量で存在する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項17】

前記抗体分子の濃度が約０．０１から約１００ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項18】

１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項19】

１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、１０ｍｍｏｌ／Ｌのメチオニンと、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、請求項２に記載の安定抗体製剤。

【請求項20】

１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項21】

１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、７５ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、２５ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項22】

１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、１００ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、８０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項23】

防腐剤および／または添加物から選択される一つ以上をさらに含む、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項24】

前記製剤のモノマーの含有量が、摂氏約３７度で１４日間の保存後に５％以上減少しない、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項25】

摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、または凍結と解凍の条件下で、サンプル中のモノマーの含有量が１．５％以上変化しない、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項26】

請求項１～２５に記載の安定抗体製剤を含むコンテナ。

【請求項27】

ガラス、プラスチック、またはポリマー材料のいずれか１つ以上で作られたシリンジまたはボトルを有する、請求項２６に記載のコンテナ。

【請求項28】

請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤または請求項２６に記載のコンテナを有する、密封パッケージ。

【請求項29】

請求項１～２５のいずれかに記載の抗体製剤と、抗体製剤を含むコンテナとを有するキット。

【請求項30】

自己免疫疾患の予防および／または治療のための医薬品の調製に使用される、請求項１～２５のいずれかに記載の抗体製剤または請求項２９に記載のキット。

【請求項31】

疾患を治療するための医薬品を調製するための請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤の使用であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、安定抗体製剤の使用。

【請求項32】

前記医薬品が静脈内または皮下経路で投与される医薬品である、請求項３１に記載の使用。

【請求項33】

請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤を用いて疾患を治療する方法であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、方法。

【請求項34】

請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤を有するデリバリーシステムであって、該デリバリーシステムが使い捨てシリンジから選択される、デリバリーシステム。

【請求項35】

請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤を調製する方法であって、抗体分子を調製するステップ１と、治療有効量の抗体分子を、張力等張化剤、バッファ剤、界面活性剤および／または他の必要な成分と混合して、安定溶液を形成するステップ２とを有する方法。

【請求項36】

請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤を含み、疾患の治療に用いられる医薬品であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、医薬品。

【請求項37】

請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤の調製におけるグリシンの使用であって、前記抗体分子の濃度が抗体製剤中で１００ｍｇ／ｍｌに達しても抗体分子が安定して存在する、使用。

【請求項38】

液体製剤中の高濃度抗体の安定性を向上させる、請求項１～２５のいずれかに記載の抗体製剤の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は医薬の分野に関連する。より具体的には、本開示は安定抗体製剤の調製に関連する。

【背景技術】

【0002】

バイオテクノロジーの進歩により、組み換えＤＮＡ技術を用いて、医薬の用途に使用するためのさまざまなタンパク質を生成することが可能になった。タンパク質は従来の有機または無機の薬剤よりも大きく複雑な傾向があるため、タンパク質の製剤化には特有の問題が存在する。

【0003】

液体の抗体製品は有効期限が短く、保存中の化学的および物理的不安定性により、抗体が生物学的に無効化されるおそれがある。化学的不安定性は、脱アミド化、ラセミ化、加水分解、酸化、β－脱離、またはジスルフィド結合の交換に起因し、物理的不安定性は、抗体の変性、凝集、沈殿、または吸着に起因する。これらのうち、凝集、脱アミド化、酸化が抗体劣化の最も一般的な原因として知られている（Ｗａｎｇら、「Ｊ． ｏｆ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」 ４２ （Ｓｕｐｐｌ）、Ｓ４－Ｓ２６、１９８８年、およびＣｌｅｌａｎｄら、「Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ」 １０（４）： ３０７－３７７、１９９３年参照）。したがって、安定抗体の液体製剤が必要であり、特に高濃度の安定抗体の液体製剤が必要である。

【発明の概要】

【0004】

本開示の目的は、保存および提供時に安定した抗体製剤を提供することである。本開示によれば、安定した製剤とは、含有される抗体が保存時に物理的および化学的な安定性と完全性を本質的に保持している製剤のことを指す。皮下投与や点滴静注などの投与に適した安定した液体抗体製剤を提供することもさらなる目的である。

【0005】

一般的に、皮下注射には少量の医薬製剤の使用が好まれる。抗体を含む製剤の場合、例えば高用量の抗体療法では、皮下投与には高濃度の抗体製剤が必要となる。高い抗体濃度が必要であるため、抗体を含む製剤は、抗体の物理的および化学的安定性、凝集物の形成、製造の難しさ、保存、および抗体製剤の配送に関連する課題を抱えている。

【0006】

一般的に、副産物や分解物の形成や生物学的不活性化が、保存期間を決定する主な要因である。本開示の製剤により、これらの望ましい安定性レベルが達成される。

【0007】

十分な物理的および化学的安定性に加え、製剤は受容限度内のｐＨ値と浸透圧を持たなければならない。また、高濃度の抗体では、製剤の粘度と凝集が増加することが知られている。本開示による適切な医薬製剤は、所望の適切な粘度を有している。

【0008】

本開示によれば、抗体の活性を長期間の保存中に保持する点で有利な特性を有し、凝集を防止し、高濃度の抗体にも適切な粘度を有した、特に安定抗体の製剤が利用可能となることが分かった。本開示は、最も広範な観点で、抗体を有効成分とする医薬製剤（本開示の製剤）を提供する。この組成物には、バッファシステム、スタビライザー、および界面活性剤が含まれる。本開示の製剤は液体（例えば、水溶液）であるが、凍結乾燥され、その後、抗体濃度が低い、同じ、または高い液体製剤に成形されることにも適している。

【0009】

１．概略

【0010】

１．１ 本開示の第一の態様は、以下の安定した製剤を提供する。

【0011】

（１） 治療有効量の少なくとも一つの抗体分子と、少なくとも一つの等張化剤と、少なくとも一つのバッファ剤と、少なくとも一つの界面活性剤を含む製剤であって、該組成物（すなわち製剤）のｐＨは４．５から５．５である。

【0012】

（２） 治療有効量の少なくとも一つの抗体分子と、少なくとも一つの等張化剤と、少なくとも一つのバッファ剤と、少なくとも一つの界面活性剤を含む製剤であって、該組成物のｐＨは４．７から５．３である。

【0013】

（３） 実質的に、治療有効量の少なくとも一つの抗体分子と、少なくとも一つの等張化剤と、少なくとも一つのバッファ剤と、少なくとも一つの界面活性剤からなる製剤であって、該組成物のｐＨは５．０から５．２である。

【0014】

組成（１）ないし（３）の抗体分子は、ＩＬ－５およびＩＬ－４Ｒαの両方に特異的に結合することができ、ＩＬ－４Ｒα分子に特異的に結合することができる第一免疫グロブリン可変ドメインとＩＬ－５に特異的に結合することができる第二免疫グロブリン可変ドメインとを有する少なくとも二つの免疫グロブリン可変ドメインを含む。

【0015】

「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は治療と予防的治療の両方を意味する。治療が必要な人には、障害を患っている人だけでなく、障害を予防したい人も含まれる。治療における「哺乳類」は、哺乳類に分類されるあらゆる動物を指し、人間や、犬、馬、猫、牛などの、家畜および畜産用動物、動物園の動物、スポーツ用動物、ペット動物を含むが、これらに限定されるものではない。

【0016】

本開示の文脈において、薬理学的な意味での抗体の「治療有効量」とは、その抗体が効果的に治療できる障害に対して治療効果または予防効果を持つ量を指す。「障害」とは、抗体による治療の恩恵を受ける可能性のある任意の条件を指す。これには、慢性および急性の障害や疾患が含まれる。また、その病態条件によって哺乳類が該当の障害にかかりやすくなるものも含まれる。好ましい実施形態において、「障害」は、ＩＬ－４Ｒおよび／またはＩＬ－５の発現を伴う疾患を指す。

【0017】

本開示による製剤は、溶液中で高濃度の生物活性抗体を安定して支持するという利点を備え、静脈内、筋肉内、または皮下注射を含む経口投与に適している。

【0018】

本開示の好ましい実施形態において、ｐＨは４．５から５．５の範囲内であり、ｐＨ４．５に近い値からｐＨ４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかに近い値の間であることが望ましい。

【0019】

好ましくは、ｐＨは、ｐＨ４．６からｐＨ４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかに近い値の間のｐＨ値から選ばれる。さらに好ましくは、ｐＨは、ｐＨ４．７に近い値からｐＨ４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかに近い値の間のｐＨ値から選ばれる。さらに好ましくは、ｐＨは、ｐＨ４．８に近い値からｐＨ４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかに近い値の間のｐＨ値から選ばれる。さらに好ましくは、ｐＨは、ｐＨ４．９に近い値からｐＨ５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかに近い値の間のｐＨ値から選ばれる。さらに好ましくは、ｐＨは、ｐＨ５．０に近い値からｐＨ５．１、５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかに近い値の間のｐＨ値から選ばれる。さらに好ましくは、ｐＨは、ｐＨ５．１に近い値からｐＨ５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかに近い値の間のｐＨ値から選ばれる。好ましい実施形態において、ｐＨはｐＨ５．２に近い値からｐＨ５．３、ｐＨ５．４、またはｐＨ５．５のいずれかに近い値の範囲、ｐＨ５．３に近い値からｐＨ５．４またはｐＨ５．５に近い値からの範囲、または、ｐＨ５．４からｐＨ５．５の範囲であってもよい。

【0020】

より好ましくは、ｐＨは約４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、または５．５のいずれかのｐＨ値から選択可能であり、最も好ましくはｐＨはｐＨ５．０±０．２である。ｐＨ値がこれらの範囲にあるとき、抗体の凝集や断片化からの保護が強化された製剤が庭上され、またｐＨが注射時の痛みやアナフィラクトイド副作用のリスクを軽減するための生理的なｐＨ（約７．２～７．４）に近い。

【0021】

本開示のさらに好ましい実施形態によれば、等張化剤は、好ましくはポリオール、糖類、炭水化物、ナトリウムクロライドなどの塩、またはそれらの混合物を含むことが望ましい。好ましくは、ポリオールの分子量は約６００ｋＤ未満であることが望ましい（例えば、約１２０から約４００ｋＤの範囲であることが望ましい）。また、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセリン、ラクチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イノシトール、またはそれらの混合物から選ばれることが望ましい。好ましくは、糖類または炭水化物は、単糖類、二糖類、多糖類およびそれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは、糖類または炭水化物は、果糖、ブドウ糖、マンノース、蔗糖、ソルボース、キシロース、乳糖、マルトース、ショ糖、デキストラン、プルララン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカン、およびそれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは、等張化剤は、還元糖、非還元糖およびそれらの混合物からなる群から選択される糖類を含む。さらに好ましくは、等張化剤は、非還元糖である糖類を含み、好ましくはスクロース、トレハロース、およびそれらの混合物からなる群から選択される。最も好ましくは、等張化剤はスクロースを含む。

【0022】

等張化剤の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約３００ｍｇ／ｍｌの範囲、約１ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌの範囲、または約１ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの範囲にわたる。より好ましくは、液体組成物中の等張化剤の濃度は、約６０ｍｇ／ｍｌ、約６５ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約８１ｍｇ／ｍｌ、約８２ｍｇ／ｍｌ、約８３ｍｇ／ｍｌ、約８４ｍｇ／ｍｌ、約８５ｍｇ／ｍｌ、約８６ｍｇ／ｍｌ、約８７ｍｇ／ｍｌ、約８８ｍｇ／ｍｌ、約８９ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約９１ｍｇ／ｍｌ、約９２ｍｇ／ｍｌ、約９３ｍｇ／ｍｌ、約９４ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ、約９６ｍｇ／ｍｌ、約９７ｍｇ／ｍｌ、約９８ｍｇ／ｍｌ、約９９ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、または約１３０ｍｇ／ｍｌである。

【0023】

本開示の好ましい実施形態によれば、バッファ剤は、アセテート、サクシネート、グルコネート、クエン酸、ヒスチジン、酢酸、リン酸塩、リン酸、アスコルビン酸、酒石酸、マレイン酸、グリシン、乳酸塩、乳酸、アスコルビン酸、イミダゾール、重炭酸塩および炭酸、コハク酸、ベンゾ酸ナトリウム、ベンゾ酸、グルコネート、エデト酸、アセテート、リンゴ酸、イミダゾール、トリス、リン酸、およびそれらの混合物からなる群から選択可能である。

【0024】

本開示によれば、特に好ましいバッファ剤として酢酸バッファを用いることで、液体組成物に生理的ｐＨに近いｐＨが与えられるので、注射時の痛みやアナフィラキトイド副作用のリスクが低減され、また抗体の安定性や凝集、酸化、断片化に対する耐性が向上する。

【0025】

バッファ剤の濃度は、約０．１ミリモル（ｍＭ）から約１００ミリモル（ｍＭ）までの範囲をとることができる。好ましくはバッファ剤の濃度は約０．５ｍＭから約５０ｍＭまであり、より好ましくは約１ｍＭから約３０ｍＭまでであり、より好ましくは約１ｍＭから約２０ｍＭまでであり、より好ましくは約１０ｍＭから約２０ｍＭまでである。好ましくは、バッファ剤の濃度は約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１０ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、または約２０ｍＭである。

【0026】

本文中の「界面活性剤」という用語は、両親媒性構造を持つ有機物質、つまり、典型的には油に可溶な炭化水素鎖と水に可溶なイオン性基という、相反する溶解傾向を持つグループからなる有機物質を意味する。界面活性剤は、表面活性部位の電荷に基づいて、アニオン性の界面活性剤、カチオン性の界面活性剤、およびさまざまな医薬組成物や生物材料製剤のための分散剤に分類可能である。

【0027】

本開示のさらに好ましい実施形態によれば、本開示において適切に使用される界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤、およびゼッターイオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本開示において使用される典型的な界面活性剤の限定的な例としては、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノカプリル酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン）、トリオレイン酸ソルビタン、グリセリン脂肪酸エステル（例えば、モノカプリル酸グリセリン、モノミリスチン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン）、ポリグリセリン脂肪酸エステル（例えば、モノステアリン酸デカグリセリル、ジステアリン酸デカグリセリル、モノリノール酸デカグリセリル）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート）、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールテトラステアレート、ポリオキシエチレンソルビトールテトラオレエート）、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレングリセリルモノステアレート）、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ポリエチレングリコールジステアレート）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル（例えば、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンプロピルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル）、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル（例えばポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（例えばポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油）、ポリオキシエチレンミツロウ誘導体（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールミツロウ）、ポリオキシエチレンラノリン誘導体（例えば、ポリオキシエチレンラノリン）、ポリオキシエチレン脂肪酸アミド（例えば、ポリオキシエチレンステアリン酸アミド）、Ｃ_１０－Ｃ_１８アルキル硫酸塩（例えばセチル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、オレイル硫酸ナトリウム）、平均２～４モルのエチレンオキシド単位が付加されたポリオキシエチレンＣ_１０－Ｃ_１８アルキルエーテル硫酸塩（例えば、ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム）、Ｃ_１０－Ｃ_１８アルキルスルホコハク酸塩（例えばラウリルスルホコハク酸ナトリウム）、およびレシチン、グリセロリン脂質、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリンなど）、Ｃ_１２－Ｃ_１８脂肪酸のショ糖エステルなどの天然界面活性剤。組成物はこれらの界面活性剤のうちの一つ以上を含んでいてもよい。好ましい界面活性剤は、例えばポリソルベート２０、４０、６０、または８０のようなポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである。ポリソルベート８０（ツイーン８０）は特に使いやすい。本開示によれば、界面活性剤、特にポリソルベート８０は、液体組成物において抗体の安定性を向上させ、凝集と断片化に対する耐性を付与する。

【0028】

界面活性剤の濃度は、一般的に、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約２．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約１．５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０１．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．２ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．１ｍｇ／ｍｌ、または約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．０５ｍｇ／ｍｌである。さらに好ましくは、界面活性剤の濃度は、約５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．９ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ、約１．６ｍｇ／ｍｌ、約１．７ｍｇ／ｍｌ、約１．８ｍｇ／ｍｌ、約１．９ｍｇ／ｍｌ、または約２ｍｇ／ｍｌである。

【0029】

１．２ 本開示の一部の実施形態において、第一免疫グロブリン可変ドメインは第一単一ドメイン抗体分子であり、第一単一ドメイン抗体分子は、ＩＬ－４Ｒαに結合し、三つの相補的決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に記載されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に記載されるアミノ酸配列を有する、またはＣＤＲは、前記複数のＣＤＲと比較して、３、２もしくは１未満のアミノ酸置換（例えば保存的置換）を有するＣＤＲである。第二免疫グロブリン可変ドメインは第二単一ドメイン抗体分子であり、第二単一ドメイン抗体分子は、ＩＬ－５に結合し、三つの相補的決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４に記載されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に記載されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に記載されるアミノ酸配列を有する、またはＣＤＲは、前記複数のＣＤＲと比較して、３、２もしくは１未満のアミノ酸置換（例えば保守的置換）を有するＣＤＲである。

【0030】

１．３ 本開示の一部の実施形態では、抗体分子は、第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子との間にリンカーグループを含まないポリペプチド融合体である。

【0031】

１．４ 本開示の一部の実施形態において、抗体分子は、第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子がライゲーションされるためのリンカーグループとして、１～１００個の原子を有する生体適合性ポリマーを含むポリペプチド融合体である。リンカーグループは、当業者にとって自明の任意のリンカーグループでよい。実施形態において、リンカーグループはポリグリシン、ポリアラニン、ポリセリン、ポリリシン、ポリグルタミン酸、ポリイソロイシン、ポリアルギニン残基、またはこれらの組み合わせを含む、またはこれらで構成される。例えば、ポリグリシンまたはポリセリンのリンカーは、少なくとも５、７、８、９、１０、１２、１５、２０、３０、３５、４０のグリシンとセリンの残基を含むことができる。使用可能なリンカーとして、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ反復、例えば一回、二回、三回、四回、五回、六回、七回、またはそれ以上の反復のＧｌｙ）４－Ｓｅｒが挙げられる。多くの実施形態において、リンカーは以下の配列を有する。（ＧＩｙ）４－Ｓｅｒ－（Ｇｌｙ）３－Ｓｅｒまたは（（Ｇｌｙ）４－Ｓｅｒ）ｎ、ここでｎは４、５、または６。

【0032】

１．５ 一部の実施形態では、第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を介してライゲーションされる。ホモ二量体構造を持ち、４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２という名前の抗体分子は、二つの同一の単鎖Ｆｃ融合タンパク質を含む。各単鎖Ｆｃ融合タンパク質は、第一免疫グロブリン可変ドメインと、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と、第二免疫グロブリン可変ドメインとからなる。各単鎖Ｆｃ融合タンパク質は、各単鎖と略される。

【0033】

上記抗体の作製手順は、配列合成により抗ＩＬ－４Ｒα単一ドメイン抗体をコードする遺伝子配列または抗ＩＬ－５単一ドメイン抗体をコードする遺伝子配列をそれぞれ（中国特許出願ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」んび記載の方法で得られた）ベクターに導入し、遺伝子組換え技術により二本鎖抗体分子を作製する手順を含む。

【0034】

第一単一ドメイン抗体分子と第二免疫グロブリン可変ドメインは、天然に存在する軽鎖を持たない分子（例えば、ＶＨＨ、ナノボディ、ラクダ由来の抗体）から誘導することができる。単一ドメイン抗体分子は、ラクダ、リャマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、またはグアナコなどのラクダ科動物から誘導することができる。他の実施形態において、ＳＤＡＢ分子は、他の自然由来の単一ドメイン分子、例えばサメの単一ドメインポリペプチド（サメ免疫グロブリン新抗原受容体（ＩｇＮＡＲ））や単一ドメインスキャフォールド（例えばフィブロネクチンスキャフォールド）を含んでいてもよい。単一ドメイン分子はサメから誘導してもよい。

【0035】

１．６ 本開示の一部の実施形態において、抗体分子は、対になりかつ互いに対してライゲーションされた二つの同一の単鎖Ｆｃ融合タンパク質からなる二重鎖抗体分子であり、それぞれの単鎖Ｆｃ融合タンパク質は第一免疫グロブリン可変ドメインと、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と、第二免疫グロブリン可変ドメインとからなる。

【0036】

本出願において、二重特異抗体が認識可能な抗原の一つはＩＬ－５タンパク質であり、もう一つはＩＬ－４Ｒαタンパク質である。

【0037】

１．７ 本開示の一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から誘導される。

【0038】

１．８ 本開示の一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ４領域から誘導されたアミノ酸であり、Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３に記載のアミノ酸配列を有するまたはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の１１６位から３５６位に位置する。

【0039】

１．９ 本開示の一部実施形態において、第一免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に記載のアミノ酸配列を有し、第二免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に記載のアミノ酸配列を有する。

【0040】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に記載の第一免疫グロブリン可変ドメインは、ヒト化単一ドメイン抗体分子である。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に記載の第二免疫グロブリン可変ドメインは、ヒト化単一ドメイン抗体分子である。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７ （４Ｅ９Ｖ１０）は、中国特許出願ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」の単一ドメイン抗体４Ｅ９のアミノ酸配列のヒト化から誘導される。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８ （２Ｂ３Ｖ２）は、中国特許出願ＣＮ２０２０１０８４３５０１．１「ＩＬ－５ ＢＩＮＤＩＮＧ ＭＯＬＥＣＵＬＥＳ ＡＮＤ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ ＭＥＴＨＯＤＳ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」の単一ドメイン抗体２Ｂ３のアミノ酸配列のヒト化から誘導される。単一ドメイン抗体２Ｂ３のヒト化方法は、中国特許出願ＣＮ２０２０１０８４３５０１．１「「ＩＬ－５ ＢＩＮＤＩＮＧ ＭＯＬＥＣＵＬＥＳ ＡＮＤ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ ＭＥＴＨＯＤＳ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」に記載されている。

【0041】

単一ドメイン抗体４Ｅ９のヒト化方法は、ビッグデータ分析の結果に基づいて構築された抗体フレームワーク領域変異ライブラリの高スループットスクリーニングによるヒト化である。詳細なステップは以下の通りである。

【0042】

（１） ヒト／ラクダの抗体のデータのシーケンス解析：ＮＣＢＩのウェブサイトからバッチダウンロードされた１３，８７３件のＮｂケース（ヒト）のシーケンスに対してアミノ酸の優先度分析を実施し、申請者の２，０００個の単一ドメイン抗体のシーケンスに対してもアミノ酸の優先度分析を実施して、フレームワーク領域の各部位のアミノ末端比率データを取得する。

【0043】

（２） ヒト／ラクダ抗体の包括的重み付け解析：ＩＭＧＴの番号付け規則に従って上記のヒト／ラクダ抗体の配列に番号を付け、配列を１対１でマッチングさせ、ヒト抗体の９０％とラクダ抗体の１０％の重量に基づいて重み付け解析を行い、各部位におけるアミノ酸の重み付け割合を計算し、割合を高いものから低いものへとランク付けし、フレームワーク領域の単一部位における最終的な加重結果に従って、１０％を超えるアミノ酸種のみを保持し、全体の保持割合を１とする基準に基づいて、１０％を超える割合を持つアミノ酸の最終的な重みを計算し、以降のカスタマイズされたアミノ酸ライブラリの設計の基礎とする。

【0044】

（３） カスタマイズされたアミノ酸ライブラリのスキーム設計：変異させる単一の部位について、１０％を超えるアミノ酸の数をｎとし、１０％を超えるアミノ酸の最高比率と最低比率の比をＶとし、変異させる部位の性質を決定し、Ｖ≧３かつｎ≦２の場合、その部位を「高濃度部位」と見なし、それ以外の場合、その部位を「中低濃度部位」と見なす。この方法によれば、カスタマイズされたアミノ酸ライブラリは、「高／中濃度ライブラリ」と「低濃度ライブラリ」に分けられ、両方がカスタマイズされたアミノ酸ライブラリの構築に使用される。上述の（２）の最終重量が、ライブラリ内のアミノ酸種の種類と比率の基準となる。

【0045】

（４） カスタマイズされたアミノ酸ライブラリの高スループットスクリーニング

【0046】

非ヒト化４Ｅ９に対してヒト化抗体ライブラリを構築し、構築したライブラリを対応する抗原でパニングすることにより、親和性が高く、ヒト化度の高い抗体配列を最終的に得る。

【0047】

好ましくは、４Ｅ９Ｖ１０はＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を有する。ＦＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を有し、ＦＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を有し、ＦＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を有し、ＦＲ４はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列を有する。

【0048】

２Ｂ３Ｖ２はＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を有する。ＦＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列を有し、ＦＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のアミノ酸配列を有し、ＦＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列を有し、ＦＲ４はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を有する。

【0049】

ここで、「ヒト化抗体」とは、標的抗体（動物抗体など）の重鎖可変ドメインとヒト抗体の定常領域とを融合して得られる抗体、標的抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ１～３配列）をヒト抗体の可変領域にグラフト導入して得られる抗体、またはヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ１～４）の特性に応じて標的抗体にアミノ酸変異を施して得られる抗体をいう。ヒト化抗体を合成または部位特異的突然変異誘発によって得てもよい。

【0050】

項目１．９中の上記抗体を調製する工程は、抗ＩＬ－４Ｒαヒト化シングルドメイン抗体（４Ｅ９Ｖ１０）の遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１または１２の１位から３４５位のヌクレオチド）または抗ＩＬ－５ヒト化シングルドメイン抗体（２Ｂ３Ｖ２と命名）の遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１または１２の１０６９位から１４３４位のヌクレオチド）を、配列合成により（中国特許出願ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」に記載の方法によって得られた）ベクターに導入して遺伝子改変プラスミドを得て、そのプラスミドから二本鎖抗体を発現させる工程を含むことができる。

【0051】

１．１０ 本開示の一部の実施形態において、安定抗体製剤は、治療有効量の抗体分子、等張化剤、バッファ剤、および界面活性剤を含み、製剤のｐＨが４．５～５．５であり、抗体分子がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９または１０に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質を含む。好ましくは、抗体分子は二重鎖抗体であり、二重鎖抗体分子を構成する各単鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ９またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １０に記載のアミノ酸配列を有する。二つの単鎖Ｆｃ領域は自動的に結合して二重鎖抗体分子を形成する。

【0052】

本開示の一部の実施形態において、「４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２」と称される抗体分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９もしくは１０に記載のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば少なくとも８５％、９０％、９５％以上同一であるか、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９もしくは１０に記載のアミノ酸配列に対して最大２０、１５、１０、５、４、３、２、１個のアミノ酸改変（例えば、欠失、挿入または置換（例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列）である。

【0053】

４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９または１０に記載のアミノ酸配列を有し、対応するヌクレオチド配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１または１２に記載の通りである。４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２は三つのセグメントを含む（４Ｅ９Ｖ１０－Ｆｃセグメント－２Ｂ３Ｖ２）。ここで、４Ｅ９Ｖ１０はアミノ末端（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９または１０の１位から１１５位）に位置し、ＦｃセグメントはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９または１０の１１６位から３５６位に位置し、２Ｂ３Ｖ２はカルボキシル末端（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９または１０の３５７位から４７８位）に位置する。

【0054】

４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２は、４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１（すなわち、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９に記載のアミノ酸配列、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１に記載のヌクレオチド配列を有する）と、４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２（すなわち、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０に記載のアミノ酸配列、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２に記載のヌクレオチド配列を有する）を含む。

【0055】

２．処方

【0056】

２．１ 本開示の一部の実施形態において、項目１．１の調製バッファ剤は酢酸ナトリウム－酢酸バッファであり、等張化剤にはショ糖が含まれ、界面活性剤にはポリソルベートが含まれる。

【0057】

２．２ 本開示の一部の実施形態では、製剤はグリシンを含む充填剤と塩酸アルギニンをさらに含む。

【0058】

２．３ 酢酸－酢酸ナトリウム本開示の一部の実施形態において、製剤は（任意に）１０～２０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度の酢酸－酢酸ナトリウム、例えば、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～１９ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～１８ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～１７ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～１６ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～１５ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１４ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１３ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１２ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１１ｍｍｏｌ／Ｌ、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ、約１１ｍｍｏｌ／Ｌ、約１２ｍｍｏｌ／Ｌ、約１３ｍｍｏｌ／Ｌ、約１４ｍｍｏｌ／Ｌ、約１５ｍｍｏｌ／Ｌ、約１６ｍｍｏｌ／Ｌ、約１７ｍｍｏｌ／Ｌ、約１８ｍｍｏｌ／Ｌ、約１９ｍｍｏｌ／Ｌ、または約２０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度の酢酸－酢酸ナトリウムを含む。製剤中の酢酸の全体的な濃度と酢酸ナトリウムの濃度は、１０～２０ｍｍｏｌ／Ｌである。

【0059】

好ましくは、酢酸と酢酸ナトリウムの質量比は（０．２～２）：（１～１０）である。より好ましくは、酢酸と酢酸ナトリウムの質量比は２：９である。

【0060】

２．４ 塩酸アルギニン本開示の一部の実施形態において、製剤は（任意に）２５～１００ｍｍｏｌ／Ｌの濃度の塩酸アルギニン、例えば、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ～９０ｍｍｏｌ／Ｌ、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ～８０ｍｍｏｌ／Ｌ、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ～７０ｍｍｏｌ／Ｌ、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ～６０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ～約５０ｍｍｏｌ／Ｌ、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ～約４０ｍｍｏｌ／Ｌ、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ～約３０ｍｍｏｌ／Ｌ、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ、約３０ｍｍｏｌ／Ｌ、約４０ｍｍｏｌ／Ｌ、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ、約６０ｍｍｏｌ／Ｌ、約７０ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ、約９０ｍｍｏｌ／Ｌ、または約１００ｍｍｏｌ／Ｌの濃度の塩酸アルギニンを含む。

【0061】

２．５ ショ糖本開示の一部の実施形態において、製剤は等張化剤として（任意に）８０～１２０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度のショ糖、例えば、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１１８ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１１５ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１１０ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１０５ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ～約１００ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ～約９５ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ～約９０ｍｍｏｌ／Ｌ、約８０ｍｍｏｌ／Ｌ、約８５ｍｍｏｌ／Ｌ、約９０ｍｍｏｌ／Ｌ、約９５ｍｍｏｌ／Ｌ、約１００ｍｍｏｌ／Ｌ、約１１０ｍｍｏｌ／Ｌ、約１１５ｍｍｏｌ／Ｌ、または約１２０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度のショ糖を含む。

【0062】

２．６ グリシン本開示の一部の実施形態において、製剤はタンパク質安定剤として（任意に）５０～７５ｍｍｏｌ／Ｌの濃度のグリシン、例えば、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ～約７３ｍｍｏｌ／Ｌ、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ～約７０ｍｍｏｌ／Ｌ、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ～約６７ｍｍｏｌ／Ｌ、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ～約６４ｍｍｏｌ／Ｌ、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ～約６０ｍｍｏｌ／Ｌ、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ～約５５ｍｍｏｌ／Ｌ、約５０ｍｍｏｌ／Ｌ、約５５ｍｍｏｌ／Ｌ、約６０ｍｍｏｌ／Ｌ、約６４ｍｍｏｌ／Ｌ、約６７ｍｍｏｌ／Ｌ、約７０ｍｍｏｌ／Ｌ、または約７５ｍｍｏｌ／Ｌの濃度のグリシンを含む。

【0063】

２．７ ポリソルベート８０本開示の一部の実施形態において、製剤は界面活性剤として（任意に）約０．０２％～０．０３％（ｗ／ｖ、ｇ／ｍｌ）の濃度のポリソルベート８０、例えば、約０．０２％～約０．０３％、約０．０２％～約０．０４％、約０．０３％～約０．０４％、約０．０３％～約０．０５％、約０．０４％～約０．０５％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、または約０．０５％の濃度のポリソルベート８０を含む。

【0064】

２．８ 本開示の好ましい実施形態において、製剤はさらに酸化防止剤が含んでいてもよい。酸化防止剤は、メチオニン、亜硫酸ナトリウム、カタラーゼ、および白金からなる群から選択されることが望ましい。最も望ましいのはメチオニンである。

【0065】

２．９ 酸化防止剤の濃度は通常、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約１．０ｍｇ／ｍｌ、または約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．０２ｍｇ／ｍｌの範囲である。酸化防止剤の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、約０．０４ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、約０．１０ｍｇ／ｍｌ、０．１１ｍｇ／ｍｌ、０．１２ｍｇ／ｍｌ、０．１３ｍｇ／ｍｌ、約０．１４ｍｇ／ｍｌ、約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．１６ｍｇ／ｍｌ、約０．１７ｍｇ／ｍｌ、０．１８ｍｇ／ｍｌ、０．１９ｍｇ／ｍｌ、約０．２０ｍｇ／ｍｌ、約０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、または１．０ｍｇ／ｍｌであることが望ましい。

【0066】

２．１０ 本開示の一部の実施形態において、製剤はメチオニンを１０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で含む。

【0067】

２．１１ 本開示の実施形態において、抗体分子は１２０ｍｇ／ｍｌ未満の量で存在し、好ましくは１００ｍｇ／ｍｌ以下の量で存在する。

【0068】

本開示の好ましい実施形態では、抗体分子の濃度は約０．１から約１２０ｍｇ／ｍｌの範囲であってもよい。好ましくは、抗体の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約３．５ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約４．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約５．５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約６．５ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約７．５ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約８．５ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約９．５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３１ｍｇ／ｍｌ、約３２ｍｇ／ｍｌ、約３３ｍｇ／ｍｌ、約３４ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約３６ｍｇ／ｍｌ、約３７ｍｇ／ｍｌ、約３８ｍｇ／ｍｌ、約３９ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４１ｍｇ／ｍｌ、約４２ｍｇ／ｍｌ、約４３ｍｇ／ｍｌ、約４４ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約４６ｍｇ／ｍｌ、約４７ｍｇ／ｍｌ、約４８ｍｇ／ｍｌ、約４９ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５１ｍｇ／ｍｌ、約５２ｍｇ／ｍｌ、約５３ｍｇ／ｍｌ、約５４ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約５６ｍｇ／ｍｌ、約５７ｍｇ／ｍｌ、約５８ｍｇ／ｍｌ、約５９ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、または約１２０ｍｇ／ｍｌである。

【0069】

２．１２ 本開示の一部の実施形態において、抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体の濃度は１００ｍｇ／ｍｌである。

【0070】

２．１３ 本開示の一部の実施形態において、製剤は１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨは５．０から５．２である。

【0071】

２．１４ 本開示の一部の実施形態において、製剤は１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、１０ｍｍｏｌ／Ｌのメチオニンと、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨは５．０から５．２である。

【0072】

２．１５ 本開示の一部の実施形態において、製剤は１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨは５．０から５．２である。

【0073】

２．１６ 本開示の一部の実施形態において、製剤は１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、７５ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、２５ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨは５．０から５．２である。

【0074】

２．１７ 本開示の一部の実施形態において、製剤は１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、１００ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、８０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨは５．０から５．２である。

【0075】

２．１８ 本開示の一部の実施形態において、製剤は防腐剤および／または添加物から選択される一つ以上をさらに含む。

【0076】

２．１９ 本開示の一部の実施形態において、製剤は防腐剤を含んでいてもよい。好ましくは、防腐剤はフェノール、ｍ－クレゾール、ベンジルアルコール、ベンズアルコニウムクロライド、ベンザルトニウムクロライド、フェノキシエタノール、メチルパラベンから選択される。一般的に防腐剤の濃度は、約０．００１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．００５ｍｇ／ｍｌから約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．００８ｍｇ／ｍｌから約１２．０ｍｇ／ｍｌ、または約０．０１ｍｇ／ｍｌから約１０．０ｍｇ／ｍｌの範囲である。好ましくは、防腐剤の濃度は、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．９ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ、約２．０ｍｇ／ｍｌ、約３．０ｍｇ／ｍｌ、約４．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ、約６．０ｍｇ／ｍｌ、約７．０ｍｇ／ｍｌ、約８．０ｍｇ／ｍｌ、約９．０ｍｇ／ｍｌ、約９．１ｍｇ／ｍｌ、約９．２ｍｇ／ｍｌ、約９．３ｍｇ／ｍｌ、約９．４ｍｇ／ｍｌ、約９．５ｍｇ／ｍｌ、約９．６ｍｇ／ｍｌ、約９．７ｍｇ／ｍｌ、約９．８ｍｇ／ｍｌ、約９．９ｍｇ／ｍｌ、または約１０．０ｍｇ／ｍｌである。最も好ましくは、防腐剤の濃度は約０．１ｍｇ／ｍｌまたは９．０ｍｇ／ｍｌである。

【0077】

本開示の一部の実施形態において、製剤は酸化防止剤を含まない。

【0078】

本開示の一部の実施形態において、製剤は防腐剤を含まない。

【0079】

３．１ 粘度

【0080】

タンパク質製剤の粘度が上昇すると、加工性、例えば液体での患者への薬物投与における加工性に悪影響を及ぼす。例えば高粘度の場合、液体の製剤が注射針のゲージを通過しにくくなり、患者に不快感を与える。さらに、製造、保存、投与が容易であることの前提条件として、比較的高濃度であるが適度に低粘度の抗体製剤が望まれる。ここで使用される用語「粘度」は、「動粘度」または「絶対粘度」である。一般に、動粘度はセンチストーク（ｃＳｔ）で表される。動粘度のＳＩ単位はｍｍ^２／ｓで、１ｃＳｔに相当する。絶対粘度の単位はセンチポイズ（ｃＰ）である。絶対粘度のＳＩ単位はミリパスカル秒（ｍＰａ－ｓ）で、１ｃＰ＝１ｍＰａ．ｓである。

【0081】

本開示による適切な医薬製剤の粘度は１６ｍＰａ．ｓ未満、より好ましくは７ｍＰａ．ｓ未満、好ましくは５．７～６．１ｍＰａ．ｓである。

【0082】

３．２ 浸透圧

【0083】

本開示の一部の実施形態において、本開示の製剤は等張性である。

【0084】

「等張性」という用語は、対象の製剤が人間の血液とほぼ同じ浸透圧を持つことを意味する。実施形態において、本開示の等張性製剤は一般的に２９９から３３１ｍＯｓｍの浸透圧を有する。例えば、等張性は蒸気圧や凝固点測定器を使用して測定することができる。

【0085】

３．３ 安定性

【0086】

本開示の一部の実施形態において、本開示の製剤は、摂氏約２度から摂氏約２５度（例えば、摂氏約４度または摂氏約２５度）の温度で、少なくとも３、６、９、１２ヶ月（例えば少なくとも２４、３０、３６ヶ月）安定する。一部の実施形態において、抗体分子は、製剤内において少なくとも３、６、９、１２ヶ月（例えば、少なくとも２４、３０、３６ヶ月）、摂氏約２度から摂氏約２５度（例えば、摂氏約４度または摂氏約２５度）の温度で保管した後、完全なまま保たれる。例えば、製剤中の抗体は、摂氏約２度から摂氏約２５度（例えば、摂氏約４度または摂氏約２５度）の温度で保存した後、抗体分子の生物学的活性、例えば結合活性を、少なくとも５０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または最大１００％保持する。一部の実施形態において、製剤は、少なくとも３、６、９、１２ヶ月（例えば、少なくとも２４、３０、３６ヶ月）、摂氏約２度から摂氏約２５度（例えば、摂氏約４度または摂氏約２５度）の温度で保存した後、１０％以下、９％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。別の実施形態において、製剤は、少なくとも３、６、９、１２ヶ月（例えば、少なくとも２４、３０、３６ヶ月）、摂氏約２度から摂氏約２５度（例えば、摂氏約４度または摂氏約２５度）の温度で保存した後、１０％以下、９％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。

【0087】

さらに別の実施形態において、製剤は、少なくとも３、６、９、１２ヶ月（例えば、少なくとも２４、３０、３６ヶ月）、摂氏約２度から摂氏約２５度（例えば、摂氏約４度または摂氏約２５度）の温度で保存した後、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の酸性種を含む。さらに別の実施形態において、製剤は、少なくとも３、６、９、１２ヶ月（例えば、少なくとも２４、３０、３６ヶ月）、摂氏約２度から摂氏約２５度（例えば、摂氏約４度または摂氏約２５度）の温度で保存した後、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の基本種を含む。製剤中のＨＭＷ種、ＬＭＷ種、酸性種および基本種は、本開示のサイズ排除－高速液体クロマトグラフ法（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）などの標準的な技術を用いて検出することができる。

【0088】

一部の実施形態では、凍結乾燥された抗体製剤の再構成時に、製剤は凍結乾燥前の製剤と比較して、少なくとも８０％、９０％、９５％以上の抗体分子の構造を保持する。抗体分子の構造は、例えば結合アッセイ、バイオアッセイ、またはＨＭＷ種とＬＭＷ種との比率によって導出される。

【0089】

本開示の一部の実施形態において、製剤溶液のモノマーの含有量は、摂氏約３７度で１４日間の保存後に５％以上減少しない。本開示において、モノマーは二重鎖抗体分子を意味する。

【0090】

本開示の一部の実施形態において、摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、凍結、解凍の条件下では、サンプル中のモノマーの含有量は１．５％を超えて変動することはない。

【0091】

４．製品

【0092】

液体製剤は、取扱説明書付きの装置、シリンジ、バイアルなどの製品に含まれていてもよい。特定の実施形態において、シリンジまたはバイアルはガラス、プラスチック、または環状オレフィンポリマーやコポリマーなどのポリマー材料で作られる。他の実施形態では、製剤は注入可能なデバイスに存在してもよい。

【0093】

例えば、シリンジはプリフィルドシリンジである。シリンジは、例えば、自動注射器（例えば、ペン型注射器）、および／または取扱説明書を含む単一バイアルシステムとして、個別投与に適合させることができる。対象（例えば、患者）に、注入（例えば末梢注入）によってこの製剤を投与することができる。

【0094】

本開示の一部の実施形態において、前記安定した二重特異抗体製剤を含むコンテナが提供される。

【0095】

本開示の一部の実施形態において、前記コンテナはガラス、プラスチック、またはポリマー材料のいずれかで作られたシリンジまたはボトルを含む。

【0096】

本開示の一部の実施形態において、前記安定した二重特異抗体製剤またはコンテナのいずれかを有する密封パッケージが提供される。

【0097】

本開示の一部の実施形態において、前記安定抗体製剤を含む配送システムが提供され、使い捨てのシリンジから選択される。

【0098】

本開示の一部の実施形態において、前記安定抗体製剤を含む疾患の治療のための医薬品が提供される。

【0099】

５．疾患への適用と治療方法

【0100】

本開示の一部の実施形態が提供するのは、疾患の治療のための医薬品の調製への安定抗体製剤の使用である。前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎を含む。

【0101】

本開示の一部の実施形態において、前記医薬品は静脈内または皮下経路で投与される医薬品である。

【0102】

本開示の一部の実施形態で提供されるのは、前記抗体製剤のいずれかを使用して疾患を治療するための方法である。前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎を含む。

【0103】

本開示の一部の実施形態が提供するのは、安定抗体製剤の調製におけるグリシンの使用であって、前記抗体分子の濃度が抗体製剤中で１００ｍｇ／ｍｌに達しても抗体分子が安定して存在する、使用である。

【0104】

本開示の一部の実施形態が提供するのは、液体製剤中の高濃度抗体の安定性を向上させる、抗体製剤の使用である。

【0105】

６．準備プロセス

【0106】

本開示が提供するのは安定抗体製剤を調製する方法であって、抗体分子を調製するステップ１と、治療有効量の抗体分子を、等張化剤、バッファ剤、界面活性剤および／または他の必要な成分と混合して、安定溶液を形成するステップ２とを有する方法である。別の観点において、本開示に記載の製剤の調製方法またはプロセスについて説明する。この方法またはプロセスは以下を含む。細胞培養物中で抗体分子を発現させること、例えば、抗体分子をクロマトグラフィまたは他の類似の精製ステップ、限外濾過／透析濾過ステップの少なくとも１つに通すことで抗体分子を精製すること、および、製剤バッファ剤を使用して抗体分子の濃度を、例えば、約１０～１００ｍｇ／ｍＬに調整し、製剤のｐＨを約４．５～５．３、例えば４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２または５．３に調整すること。

【0107】

定義

【0108】

「タンパク質製剤」または「抗体製剤」という用語は、有効成分の生物学的活性が明白に有効であるような形態であり、製剤とともに投与される被験者に毒性のある追加成分を含まない製剤を指す。

【0109】

「医学的に許容される」添加物（媒体、添加剤）とは、哺乳動物に投与して有効量の有効成分を摂取させることが合理的に可能なものである。例えば、注射の受容性には、添加物の濃度も関連している。

【0110】

「安定した」製剤とは、その中に含まれるタンパク質が保存時において物理的および／または化学的な安定性および／または生物活性を実質的に保持しているものを指す。タンパク質の安定性を測定するための当業者に利用可能な様々な解析技術は例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ， ２４７－３０１， Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．， Ｐｕｂｓ （１９９１）やＪｏｎｅｓ， Ａ． Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． １０： ２９－９０ （１９９３）に記載されている。選択された温度で選択された期間について、安定性を測定することができる。さらに、製品の凍結（例えば、－８０°Ｃまで）および解凍後も、製剤は安定している。

【0111】

バイオ医薬品の製剤において、タンパク質が「物理的な安定性を保持する」とは、凝集、沈殿、および／または変性が、色および／または透明度の視覚的観察、（可視の凝集物を測定する）ＵＶ光散乱による測定、またはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による測定において、ほとんど変化しないことを意味する。ＳＥＣは、必ずしも可視凝集体の前駆体ではない可溶性凝集物の測定に使用可能である。ある時点におけるタンパク質の化学的安定性が、以下に定義するように、そのタンパク質が生物学的活性を保持すると考えられるようなものである場合、タンパク質は、バイオ医薬品製剤において「化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、タンパク質の化学的に変化した形態を検出し定量化することによって評価することができる。化学的変化は、サイズの変更（例：クリッピング）を含んでもよい。これは、ＳＥＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化法／飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ ＭＳ）を使用して評価することができる。他の種類の化学的変化は、電荷の変化（例えば、脱アミド化の結果として発生）を含む。これは、例えばイオン交換クロマトグラフィによって評価することができる。

【0112】

抗体が医薬製剤中で「その生物学的活性を保持する」場合とは、ある時点での抗体の生物学的活性の変化が、医薬製剤が例えば抗原結合アッセイで導出されたものとして調製された時に示された生物学的活性から約１０％以内（アッセイ誤差内）である場合である。抗体の「生物学的活性」に関するその他のアッセイについては以下に詳述する。

【0113】

単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、開発元のＡｂｌｙｎｘではＮａｎｏｂｏｄｙまたはＶＨＨとも呼ばれる）は当業者によく知られている。単一ドメイン抗体とは、相補性決定領域がシングルドメインポリペプチドの一部である抗体である。単一ドメイン抗体は、よって単一相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、単一ＣＤＲ２と、単一ＣＤＲ３とを有する。単一ドメイン抗体の例として、重鎖のみを持つ抗体（つまり、元々軽鎖を含まない抗体）、従来の抗体から派生した単一ドメイン抗体、およびエンジニアリングされた抗体が挙げられる。

【0114】

マウス、ヒト、ラクダ、リャマ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含む、いかなる種からでも単一ドメイン抗体を派生させることができる。例えば、自然発生のＶＨＨ分子は、ラクダ、リャマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、グアナコなどのラクダ科動物から誘導することができる。未変化の抗体と同様に、シングルドメイン抗体は特定の抗原に選択的に結合することができる。単一ドメイン抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３およびフレームワーク領域を有する免疫グロブリン鎖の可変ドメインのみを含んでいてもよい。

【0115】

本開示における「配列相同性」という用語は、二つの（核酸またはアミノ酸の）配列がアラインメントにおいて同じ位置で同一の残基を持つ程度を示し、しばしばパーセンテージで表される。好ましくは、相同性は比較される配列の全体の長さにわたって導出される。したがって、まったく同じ配列の二つのコピーは１００％の相同性を持つ。

【0116】

本開示において、二重特異性抗体は、本開示に示すＣＤＲ１～３の配列と高い相同性を有する配列からも得ることができる。実施形態の一部において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６に記載の配列と「少なくとも８０％の相同性」、「少なくとも８５％の相同性」、「少なくとも９０％の相同性」、「少なくとも９５％の相同性」、または「少なくとも９８％の相同性」を有する配列もまた、本開示の目的を達成し得る。

【0117】

実施形態の一部において、前記の配列と比較して、一つだけまたは数個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換された配列（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の保存的なアミノ酸の置換を含む）でも、本開示の目的を達成することができる。これらの変異形態には、１個以上（典型的には１～５０個、好ましくは１～３０個、より好ましくは１～２０個、最も好ましくは１～１０個）のアミノ酸の欠失、挿入および／または置換、ならびにＣ末端および／またはＮ末端における１個または数個（典型的には２０個以下、好ましくは１０個以下、より好ましくは５個以下）のアミノ酸の付加が含まれるが、これらに限定されない。実際、当業者は、二つのアミノ酸配列間の配列相同性の程度を決定する際や、単一ドメイン抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の組み合わせを決定する際に、いわゆる「保守的」アミノ酸置換を考慮することがある。置換の場合、置換はできるだけ保存的なアミノ酸の置換が好ましい。アミノ酸の保守的な置換は、一般的には、化学的構造が類似しており、ポリペプチドの機能、活性、または他の生物学的特性にほとんどまたは本質的に影響を与えない別のアミノ酸残基によって置き換えられるアミノ酸残基として説明可能である。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野において一般的に使用され、例えば、保存的アミノ酸置換は、以下の群（ａ）～（ｄ）内の１つまたは数個のアミノ酸が、同じ群内の別のまたは数個のアミノ酸残基で置換される置換である。（ａ）極性、負荷電残基およびそれらの非荷電アミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＧｌｕおよびＧｌｎ、（ｂ）極性、正荷電残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、（ｃ）芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、（ｄ）小さな脂肪族、非極性またはわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ。特に好ましい保存的アミノ酸置換は以下の通りである。ＡｓｐからＧｌｕへ、ＡｓｎからＧｌｎまたはＨｉｓへ、ＧｌｕからＡｓｐへ、ＧｌｎからＡｓｎへ、ＨｉｓからＡｓｎまたはＧｌｎへ、ＡｒｇからＬｙｓへ、ＬｙｓからＡｒｇ、Ｇｌｎへ、ＰｈｅからＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒへ、ＴｒｐからＴｙｒへ、ＴｙｒからＰｈｅ、Ｔｒｐへ、ＡｌａからＧｌｙまたはＳｅｒへ、ＳｅｒからＴｈｒへ、ＴｈｒからＳｅｒへ、ＧｌｙかららＡｌａまたはＰｒｏへ、ＭｅｔからＬｅｕ、ＴｙｒまたはＩｌｅへ、ＬｅｕからＩｌｅまたはＶａｌへ、ＩｌｅからＬｅｕまたはＶａｌへ、ＶａｌからＩｌｅまたはＬｅｕへ、ＣｙｓからＳｅｒへ。さらに、当業者であれば、単一ドメイン抗体の発明性はＣＤＲ１～３領域に反映され、フレームワーク配列ＦＲ１～４は不変ではないことを知っている。本開示に開示された配列の保守的配列変異体を、ＦＲ１～４の配列は採用することができる。

【0118】

本開示は以下の観点に関連する。

【0119】

１．治療有効量の抗体分子、等張化剤、バッファ剤、および界面活性剤を含み、製剤のｐＨが４．５～５．５であり、抗体分子がＩＬ－５およびＩＬ－４Ｒαの両方に特異的に結合することができる、安定抗体製剤であって、ＩＬ－４Ｒ等張化剤α分子に特異的に結合することができる第一免疫グロブリン可変ドメインとＩＬ－５に特異的に結合することができる第二免疫グロブリン可変ドメインとを有する少なくとも二つの免疫グロブリン可変ドメインを含む、安定抗体製剤である。

【0120】

２．前記製剤のｐＨが４．７から５．３である、項目１に記載の抗体製剤である。

【0121】

３．第一免疫グロブリン可変ドメインが第一単一ドメイン抗体分子であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載のＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に記載のＣＤＲ３とを有し、第二免疫グロブリン可変ドメインが第二単一ドメイン抗体分子であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に記載のＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に記載のＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に記載のＣＤＲ３とを有する、項目１に記載の抗体製剤である。

【0122】

４．抗体分子が、第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子との間のリンカーグループを含まないポリペプチド融合体である、項目３に記載の抗体製剤である。

【0123】

５．抗体分子がポリペプチド融合体であり、ポリペプチド融合体の第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子とは、生体適合性ポリマーをリンカーグループとしてライゲーションされる、項目３に記載の抗体製剤である。

【0124】

６．第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子とがヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を介してライゲーションされ、抗体分子はホモ二量体構造を有し、４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２と名付けられ、各単鎖Ｆｃ融合タンパク質は第一免疫グロブリン可変ドメインと、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と、第二免疫グロブリン可変ドメインとからなる、項目３に記載の抗体製剤である。

【0125】

７．前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来である、項目６に記載の抗体製剤である。

【0126】

８．前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ４領域から誘導され、Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３に記載のアミノ酸配列を有するまたはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の１１６位から３５６位に位置する、項目６に記載の抗体製剤である。

【0127】

９．第一免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に記載のアミノ酸配列を有し、第二免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に記載のアミノ酸配列を有する、項目１に記載の抗体製剤である。

【0128】

１０．治療有効量の抗体分子、等張化剤、バッファ剤、および界面活性剤を含み、製剤のｐＨが４．５～５．５であり、抗体分子がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９または１０に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質を含む、安定抗体製剤である。

【0129】

１１．バッファ剤が酢酸－酢酸ナトリウムバッファであり、等張化剤がショ糖であり、界面活性剤がポリソルベートである、項目１に記載の抗体製剤である。

【0130】

１２．グリシンと塩酸アルギニンを含む充填剤をさらに有する、項目１１に記載の抗体製剤である。

【0131】

１３．酢酸－酢酸ナトリウムの濃度が１０から２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／または塩酸アルギニンの濃度が２５から１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはショ糖の濃度が８０から１２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはグリシンの濃度が５０から７５ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはポリソルベート８０の濃度が０．０２から０．０５ｗ／ｖ％である、項目１１に記載の抗体製剤である。

【0132】

１４．メチオニンをさらに有する、項目１に記載の抗体製剤である。

【0133】

１５．メチオニンを１０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度でさらに有する、項目１４に記載の抗体製剤である。

【0134】

１６．前記抗体分子が１２０ｍｇ／ｍＬ未満の量で存在する、項目１に記載の抗体製剤である。

【0135】

１７．抗体分子の濃度が約０．０１から約１００ｍｇ／ｍｌである、項目１に記載の抗体製剤である。

【0136】

１８．１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、項目１に記載の抗体製剤である。

【0137】

１９．１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、１０ｍｍｏｌ／Ｌのメチオニンと、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、項目２に記載の抗体製剤である。

【0138】

２０．１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、項目１に記載の抗体製剤である。

【0139】

２１．１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、７５ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、２５ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、項目１に記載の抗体製剤である。

【0140】

２２．１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、１００ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、８０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、項目１に記載の抗体製剤である。

【0141】

２３．防腐剤および／または添加物から選択される一つ以上をさらに含む、項目１に記載の抗体製剤である。

【0142】

２４．前記製剤のモノマーの含有量が、摂氏約３７度で１４日間の保存後に５％以上減少しない、項目１に記載の抗体製剤である。

【0143】

２５．摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、または凍結と解凍の条件下で、サンプル中のモノマーの含有量が１．５％以上変化しない、項目１に記載の抗体製剤である。

【0144】

２６．項目１～２５に記載の安定抗体製剤を含むコンテナである。

【0145】

２７．ガラス、プラスチック、またはポリマー材料のいずれか１つ以上で作られたシリンジまたはボトルを有する、項目２６に記載のコンテナである。

【0146】

２８．項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤または項目２６に記載のコンテナを有する、密封パッケージである。

【0147】

２９．項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤と、項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤を含むコンテナとを有するキットである。

【0148】

３０．自己免疫疾患の予防および／または治療のための医薬品の調製に使用される、項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤または項目２９に記載のキットである。

【0149】

３１．疾患を治療するための医薬品を調製するための項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤の使用であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患 アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、安定抗体製剤の使用である。

【0150】

３２．前記医薬品が静脈内または皮下経路で投与される医薬品である、項目３１に記載の使用である。

【0151】

３３．項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤を用いて疾患を治療する方法であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、方法である。

【0152】

３４．請求項１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤を有するデリバリーシステムであって、該デリバリーシステムが使い捨てシリンジから選択される、デリバリーシステムである。

【0153】

３５．項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤を調製する方法であって、抗体分子を調製するステップ１と、治療有効量の抗体分子を、張力等張化剤、バッファ剤、界面活性剤および／または他の必要な成分と混合して、安定溶液を形成するステップ２とを有する方法である。

【0154】

３６．項目１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤を含み、疾患の治療に用いられる医薬品であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、成人多発血管炎性好酸球性肉芽腫症の治療、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、医薬品である。

【0155】

３７．項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤の調製におけるグリシンの使用であって、前記抗体分子の濃度が抗体製剤中で１００ｍｇ／ｍｌに達しても抗体分子が安定して存在する、使用である。

【0156】

３８．液体製剤中の高濃度抗体の安定性を向上させる、項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤の使用である。

【0157】

本開示の抗体製剤は、既存の技術と比較して、ＩＬ－４ＲαとＩＬ－５の両方に特異的に結合することができる。保存中の製剤中の抗体分子の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌから１２０ｍｇ／ｍｌである。この濃度範囲内では、特に高濃度の抗体（例えば、１００ｍｇ／ｍｌ）において、製剤は物理的および化学的安定性を保ち、完全な形で保たれる。製剤溶液のモノマーの含有量は、摂氏約３７度で１４日間の保存後に５％以上減少しない。摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、凍結、解凍の条件下では、サンプル中のモノマーの含有量は１．５％を超えて変動することはなく、高濃度抗体製剤の用途要件を満たしている。

【図面の簡単な説明】

【0158】

【図1】ＩＬ－４ＲαからＩＬ－４の結合をブロックするＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１のアッセイ結果（ＥＬＩＳＡ）を示す。

【0159】

【図2】ＩＬ－５ＲからＩＬ－５の結合をブロックするＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１のアッセイ結果（ＥＬＩＳＡ）を示す。

【0160】

【図3】ＩＬ－４誘導ＴＦ－１増殖を中和するＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異性抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１のアッセイ結果を示す。

【0161】

【図4】ＩＬ－１３誘導ＴＦ－１増殖を中和するＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異性抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１のアッセイ結果を示す。

【0162】

【図5】ＩＬ－５誘導ＴＦ－１増殖を中和するＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異性抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１のアッセイ結果を示す。

【0163】

【図6】ＩＬ－４およびＩＬ－５（４：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0164】

【図7】ＩＬ－４およびＩＬ－５（４：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0165】

【図8】ＩＬ－４およびＩＬ－５（３：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0166】

【図9】ＩＬ－４およびＩＬ－５（３：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0167】

【図10】ＩＬ－４およびＩＬ－５（２：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0168】

【図11】ＩＬ－４およびＩＬ－５（２：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0169】

【図12】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0170】

【図13】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：１）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0171】

【図14】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：２）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0172】

【図15】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：２）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0173】

【図16】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：３）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0174】

【図17】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：３）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0175】

【図18】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：４）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【0176】

【図19】ＩＬ－４およびＩＬ－５（１：４）混合物誘導ＴＦ－１増殖を中和するサンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の用量効果曲線である。

【発明を実施するための形態】

【0177】

実施例を参照しつつ本開示を以下でさらに詳細に説明するので、当業者であればこの説明に従って本開示を実施することが可能である。

【0178】

実施例１

【0179】

抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異性単一ドメイン抗体のためのＦｃ融合抗体真核発現ベクターの構築

【0180】

４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１について

【0181】

（１） 抗ＩＬ－４Ｒαヒト化単一ドメイン抗体（４Ｅ９Ｖ１０）のコドン最適化遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１の１位から３４５位）および抗ＩＬ－５ヒト化単一ドメイン抗体（２Ｂ３Ｖ２と命名）のコドン最適化遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１の１０６９位から１４３４位）を、配列合成により合成し、ベクターＲＪＫ－Ｖ４－３（中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」が開示する方法に従って得られた）にそれぞれ挿入した。

【0182】

ベクターＲＪＫ－Ｖ４－３は、本出願人により、ヒトＩｇＧ４の重鎖コード配列のＦｃセグメントを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎによる市販のベクターｐＣＤＮＡ３．４（このベクターに関する情報は次のウェブサイトから入手可能：ｈｔｔｐｓ：／／ａｓｓｅｔｓ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ＴＦＳ－Ａｓｓｅｔｓ／ＬＳＧ／ｍａｎｕａｌｓ／ｐｃｄｎａ３＿４＿ｔｏｐｏ＿ｔａ＿ｃｌｏｎｉｎｇ＿ｋｉｔ＿ｍａｎ．ｐｄｆ）、すなわち、ＩｇＧ４重鎖のヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含むベクターに基づいて融合することにより得られた。この手順は以下のように行われた。

【0183】

（１） ｐｃＤＮＡ３．４上の制限部位ＸｂａＩとＡｇｅＩとを選択した。

【0184】

（２） マルチプルクローニング部位（ＭＣＳ）と６×Ｈｉｓタグは、Ｆｃフラグメントのコーディング配列の５’と３’の末端に、オーバーラップＰＣＲを介してそれぞれ導入した。

【0185】

（３） 上述のフラグメントは、ＸｂａＩとＡｇｅＩの制限部位を持つプライマー対を用いてＰＣＲによって増幅された。

【0186】

（４） ｐｃＤＮＡ３．４と（３）の組換えＤＮＡフラグメントとをそれぞれ制限エンドヌクレアーゼＸｂａＩとＡｇｅＩで消化した。

【0187】

（５） 消化したベクターをＴ４リガーゼの作用下で挿入フラグメントとライゲーションし、ライゲーションしたものをＥ．ｃｏｌｉに変換して増幅し、検証のためにシーケンス解析を行い、組換えプラスミドを得た。

【0188】

融合ヒトＩｇＧ４の重鎖コード配列のＦｃセグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１の３４６位～１０６８位に示されるようなヌクレオチド配列を有する。

【0189】

（２） 構築された組み換え真核発現ベクターは、ＤＨ５α Ｅ． ｃｏｌｉに変換され、培養され、プラスミドマキシプレップ抽出によりエンドトキシンの除去を受けた。

【0190】

（３） 抽出されたプラスミドを同定するために再度配列を決定した。

【0191】

（４） 同定後、抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異単一ドメイン抗体の真核発現ベクターを以下のように構築した。抗ＩＬ－４Ｒα抗体の配列が存在する箇所である真核発現ベクターを、制限エンドヌクレアーゼＸｂａＩとＢａｍＨＩによって消化し、消化された抗ＩＬ－４Ｒα抗体を、抗ＩＬ－５抗体の配列を含み、同じ制限エンドヌクレアーゼの粘着末端を持つ真核発現ベクターにライゲーションし、ライゲーション産物を変換し、同定のためにシーケンスした。配列によって確認されたクローンを、エンドトキシンを除去するためにプラスミドマキシプレップ抽出にかけた。抽出されたプラスミドを同定するために再度配列を決定した。確認された組み換えベクターは、後の真核細胞への転染と発現のために準備された。

【0192】

４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２（特に４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１）と命名された抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異性抗体（二重特異性抗体の各単鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９に記載のアミノ酸配列を有し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に記載の対応する遺伝子配列を有する）は、３つのセグメントを含む（４Ｅ９Ｖ１０－Ｆｃセグメント－２Ｂ３Ｖ２）。ここで、４Ｅ９Ｖ１０はアミノ末端（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９の１位から１１５位）に位置し、ＦｃセグメントはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９の１１６位から３５６位に位置し、２Ｂ３Ｖ２はカルボキシル末端（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９の３５７位から４７８位）に位置する。

【0193】

４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２について

【0194】

（１） 抗ＩＬ－４Ｒαヒト化単一ドメイン抗体（４Ｅ９Ｖ１０）のコドン最適化遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２の１位から３４５位）および抗ＩＬ－５ヒト化単一ドメイン抗体（２Ｂ３Ｖ２と命名）のコドン最適化遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２の１０６９位から１４３４位）を、配列合成により合成し、ベクター（中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」が開示する方法に従って得られた）にそれぞれ挿入した。

【0195】

ここでのベクターは前述のＲＪＫ－Ｖ４－３と基本的に同一だが、融合されるヒトＩｇＧ４の重鎖コーディング配列のＦｃセグメントのヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２の３４６位～１０６８位の位置に示されるヌクレオチドで置換された点で異なっている。

【0196】

（２） 構築された組み換え真核発現ベクターを、ＤＨ５α Ｅ．ｃｏｌｉに変換し、培養し、プラスミドマキシプレップ抽出によりエンドトキシンを除去した。

【0197】

（３） 抽出したプラスミドを同定するために再度配列を決定した。

【0198】

（４） 同定による確認後、抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異単一ドメイン抗体の真核発現ベクターを以下のように構築した。抗ＩＬ－４Ｒα抗体の配列が存在する箇所である真核発現ベクターを、制限エンドヌクレアーゼＸｂａＩとＢａｍＨＩによって消化し、消化された抗ＩＬ－４Ｒα抗体を、抗ＩＬ－５抗体の配列を含み、同じ制限エンドヌクレアーゼの粘着末端を持つ真核発現ベクターにライゲーションし、ライゲーションされたベクターを変換し、同定のためにシーケンスした。配列によって確認したクローンを、エンドトキシンを除去するためにプラスミドマキシプレップ抽出にかけた。抽出したプラスミドを同定するために再度配列を決定した。確認された組み換えベクターは、後の真核細胞への転染と発現のために準備された。

【0199】

４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２（特に４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）と命名された抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異性抗体（二重特異性抗体の各単鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０に記載のアミノ酸配列を有し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に記載の対応する遺伝子配列を有する）は、３つのセグメントを含む（４Ｅ９Ｖ１０－Ｆｃセグメント－２Ｂ３Ｖ２）。ここで４Ｅ９Ｖ１０はアミノ末端（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０の１位から１１５位）に位置し、ＦｃセグメントはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０の１１６位から３５６位に位置し、２Ｂ３Ｖ２はカルボキシル末端（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０の３５７位から４７８位）に位置する。

【0200】

実施例２

【0201】

抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異単一ドメイン抗体を、中国特許番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」に記載のアッセイ方法に基づいて、懸濁ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞で発現させた。二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１（サンプルＡ）と二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２（サンプルＢ）とをそれぞれ発現・取得した。

【0202】

実施例３

【0203】

抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異単一ドメイン抗体を、中国特許番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「Ａｎｔｉ－ＩＬ－４Ｒα ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｒｕｇ」に記載のアッセイ方法に基づいて、懸濁２９３Ｆ細胞で発現させた。二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１（サンプルＡ）と二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２（サンプルＢ）とをそれぞれ発現させた。

【0204】

実施例４

【0205】

抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異単一ドメイン抗体を、中国特許番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」に記載のアッセイ方法に基づいて精製した。二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１（サンプルＡ）と二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２（サンプルＢ）とをそれぞれ得た。

【0206】

以下の実施例で使用されるサンプルＡとサンプルＢは、対応する組み換えベクターの発現を懸濁２９３Ｆ細胞で行い、実施例４で精製したものである。

【0207】

実施例５

【0208】

二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１（サンプルＡ）による受容体－リガンド結合のブロッキングアッセイ

【0209】

（１） 受容体タンパク質（ＩＬ－４ＲαまたはＩＬ－５Ｒ）をタンパク質希釈バッファで１μｇ／ｍｌに希釈し、プレートに４°Ｃで一晩コーティングした。

【0210】

（２） プレートを洗浄し、摂氏３７度で５％のスキムミルクによりブロックした。

【0211】

（３） バイオチン結合リガンドタンパク質（ＩＬ－４またはＩＬ－５）を、そのＥＣ８０濃度に対して２倍希釈し、抗体は初期濃度に対して２倍希釈し、その後５倍の勾配希釈を行った。リガンドタンパク質と希釈された抗体（デュピルマブ、４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１、４Ｅ９－Ｖ０または２Ｂ３、レスリズマブ）とｈＩｇＧを、それぞれ１：１で新しいディスペンシングプレートに移し、よく混ぜた。４Ｅ９Ｖ０は、中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」に記載の抗体４Ｅ９である。また、２Ｂ３は、中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０８４３５０１．１「ＩＬ－５ ＢＩＮＤＩＮＧ ＭＯＬＥＣＵＬＥＳ ＡＮＤ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ ＭＥＴＨＯＤＳ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」に記載の非ヒト化単一ドメイン抗体２Ｂ３である。この実施例および実施例６～８で使用したレスリズマブとデュピルマブは、申請者によって作成された総抗体である。この実施例および実施例６～８で使用したレスリズマブは、中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０８４３５０１．１「ＩＬ－５ ＢＩＮＤＩＮＧ ＭＯＬＥＣＵＬＥＳ ＡＮＤ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ ＭＥＴＨＯＤＳ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」に記載の方法に基づいて調製された。この実施例および実施例６～８で使用したデュピルマブは、中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」に記載の方法に基づいて調製された。

【0212】

（４）プレートを洗浄し、希釈したリガンドタンパク質と抗体の混合物をＥＬＩＳＡプレートに二度繰り返し移し、摂氏３７度でインキュベートした。

【0213】

（５）プレートを洗浄し、希釈したストレプトアビジン［ＨＲＰ］を加え、混合物を摂氏３７度でインキュベートした。

【0214】

（６） プレートを洗浄し、暗所において室温で発色のために単成分ＴＭＢを追加した。

【0215】

（７）停止液添加後、直ちにマイクロプレートリーダーでＯＤ４５０を読み取り、プロットしてＥＣ５０を算出した。４Ｅ９－Ｖ０ ２Ｂ３は非ヒト化抗ＩＬ－５単一ドメイン抗体であり、コントロールとしてデュピルマブ、レスリズマブ、およびｈＩｇＧを使用し、その結果はそれぞれ表１および表２と図５および図６に示す。

【0216】

［表１］

【0217】

［表２］

【0218】

結果は、ヒト化二重特異抗体が非減衰であり、非ヒト化抗体よりもＩＬ－４／ＩＬ－４ＲαまたはＩＬ－５／ＩＬ－５Ｒ受容体ーリガンド結合をブロックする点で、わずかに有利であることを示している。対応する商業薬品と比較して、ヒト化二重特異抗体はほぼ同じまたはわずかに有利なブロッキング能力を有している。

【0219】

実施例６

【0220】

二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１によるＩＬ－４誘導またはＩＬ－１３誘導ＴＦ１細胞増殖のアッセイ（サンプルＡ）

【0221】

（１） 回収後３～４回継代培養したＴＦ－１細胞を９６ウェルプレートに１００００細胞／ウェルでプレーティングした。

【0222】

（２） １０μｇ／ｍＬの総抗体または二重特異抗体の溶液をそれぞれ調製し、５倍の勾配希釈にかけた。

【0223】

（３） 総抗体（中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「ＡＮＴＩ－ＩＬ－４ＲΑ ＳＩＮＧＬＥ－ＤＯＭＡＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＡＳ ＷＥＬＬ ＡＳ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＲＵＧ」が開示する方法で得られた）と勾配希釈したサンプルＡを、中国特許出願番号ＣＮ２０２０１０５７６２００．７「Ａｎｔｉ－ＩＬ－４Ｒα ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｒｕｇ」が開示する増殖アッセイで得られたＥＣ８０濃度のＩＬ－４またはＩＬ１３と１：１で混合し、混合溶液を調製した。

【0224】

（４） 前のステップで混合した溶液を、細胞培養液と同体積で細胞培養ウェルに追加した。

【0225】

（５） ７２時間培養後、発光細胞生存率アッセイキットを用いて細胞生存率を検出した。

【0226】

（６） アッセイ結果に基づいて、異なる抗体のＩＬ－４誘導またはＩＬ－１３誘導ＴＦ－１細胞増殖を中和するためのＥＣ５０濃度を計算した。

【0227】

試験結果を表３、表４、図３および図４に示す。

【0228】

［表３］

【0229】

［表４］

【0230】

実施例７

【0231】

ヒト組換えＩＬ－５タンパク質誘導ＴＦ１細胞増殖および増殖を中和するツール抗体（総抗体）のアッセイ

【0232】

Ａ．ヒト組換えＩＬ－５タンパク質誘導ＴＦ１細胞増殖

【0233】

（１） 回収後３～４回継代培養したＴＦ－１細胞を９６ウェルプレートに１００００細胞／ウェルでプレーティングした。

【0234】

（２） 最大濃度が５００ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－５タンパク質の溶液を作成し、５倍の勾配希釈を行った。

【0235】

（３） ＩＬ－５タンパク質溶液を勾配希釈した後、細胞培養液と同じ体積で細胞培養ウェルに添加した。

【0236】

（４） ７２時間培養後、発光細胞生存率アッセイキットを用いて細胞生存率を検出した。

【0237】

（５） ＩＬ－５誘導ＴＦ－１細胞の増殖に対するＥＣ８０濃度をアッセイ結果に基づいて計算した。計算結果は２．９６ｎｇ／ｍＬとなった。

【0238】

Ｂ．総抗体中和ヒトＩＬ－５誘導ＴＦ１細胞増殖のアッセイ

【0239】

（１） 回収後３～４回継代培養したＴＦ－１細胞を９６ウェルプレートに１００００細胞／ウェルでプレーティングした。

【0240】

（２） １０μｇ／ｍＬの総抗体を調製し、５倍の勾配希釈にかけた。

【0241】

（３） 勾配希釈を受けた総抗体を、増殖アッセイで得られたＥＣ８０濃度のＩＬ－５と１：１で混合し、混合溶液を得た。

【0242】

（４） 混合溶液を細胞培養液と同体積で細胞培養ウェルに追加した。

【0243】

（５） ７２時間培養後、発光細胞生存率アッセイキットを用いて細胞生存率を検出した。

【0244】

（６） アッセイ結果に基づいて、ＩＬ－５誘導ＴＦ－１細胞の増殖を中和する総抗体のＥＣ５０濃度を計算した。

【0245】

実施例８

【0246】

ＩＬ－５誘導ＴＦ１細胞増殖を中和するヒト化二重特異単一ドメイン抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１のアッセイ

【0247】

（１） 回収後３～４回継代培養したＴＦ－１細胞を９６ウェルプレートに１００００細胞／ウェルでプレーティングした。

【0248】

（２） １０μｇ／ｍＬの総抗体または前記４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１抗体の溶液を調製し、５倍の勾配希釈にかけた。

【0249】

（３） 勾配希釈した総抗体および４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１抗体を、実施例７で得たＥＣ８０濃度のＩＬ－５タンパク質と１：１で混合し、混合溶液を得た。

【0250】

（４） 混合溶液を細胞培養液と同体積で細胞培養ウェルに追加した。

【0251】

（５） ７２時間培養後、発光細胞生存率アッセイキットを用いて細胞生存率を検出した。

【0252】

（６） ＩＬ－５誘導ＴＦ－１細胞の増殖を中和する異なる抗体のＥＣ５０濃度は、アッセイ結果に基づいて計算した。アッセイ結果を表５および図５に示す。

【0253】

［表５］

【0254】

結果は、ヒト化二重特異抗体が非減衰であり、非ヒト化抗体よりも、ＩＬ－５誘導ＴＦ－１細胞の増殖を中和する点で、わずかに有利であることを示している。対応する商業薬品と比較して、ヒト化二重特異抗体はほぼ同じブロッキング能力を有している。

【0255】

実施例９

【0256】

ヒト化二重特異抗体４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１のアフィニティーカイネティックアッセイを以下のように行った。

【0257】

（１） ＳＤバッファの準備：適量のウシ血清アルブミンとツイーン２０を１ ｘ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解し、ウシ血清アルブミンとツイーン２０の質量（または体積）分率がそれぞれ０．１％と０．０２％になるようにした。前述の４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－１抗体は、濃度１０μｇ／ｍＬのＳＤバッファに調製した。

【0258】

（２） 抗原作業溶液の準備：まず、抗原をＳＤバッファに２００ｎＭの濃度で調製し、その後２倍の勾配希釈を行った。ＳＤバッファをブランクコントロールとして、合計５つの濃度勾配を設定した。

【0259】

（３） 再生溶液の準備：適量の０．１Ｍのグリシンのストック溶液を脱イオン水で１０倍に希釈し、よく混合して再生溶液を得た。

【0260】

アッセイの手順：対応するコンピュータでオクテット９６とデータ収集ソフトウェアを実行した。取得プローブの下面と側面を適量の７５％エタノールを含ませたレンズティッシュで清掃し、器具を１５分以上予熱した。センサの事前湿潤：アッセイの前に、後の使用のためにセンサを１０分以上ＳＤバッファに浸した。その後、アッセイの実施のために、機械の動作をベースライン→抗体→ベースライン→抗原結合→抗原解離→センサ再生と設定した。アッセイ結果を表６に示す。

【0261】

［表６］

【0262】

結果は、ＩＬ４ＲαとＩＬ－５を標的とする二重特異抗体の親和性が二つの抗原でそれぞれ決定され、対応する親和性はどちらも１ｎＭ未満であることを示している。

【0263】

実施例１０

【0264】

この実験では、混合ヒトＩＬ－４およびＩＬ－５誘導ＴＦ－１細胞増殖を中和する４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２（サンプルＢ）の活性を測定するために、増殖中和アッセイを確立した。便宜上、以降の説明では４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２をサンプルＢとする。

【0265】

［表７］

【0266】

［表８］

【0267】

［表９］

【0268】

サンプルの作成方法

【0269】

テストバッファ：テスト媒体、ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ＦＢＳを、後の使用のために摂氏２～８度で保存した。

【0270】

ヒトＩＬ－４の準備：ヒトＩＬ－４を無菌の超純水に１００μｇ／ｍｌで溶解した。後の使用のため、準備したタンパク質を摂氏ー８０度で保存した。

【0271】

ヒトＩＬ－５の準備：ヒトＩＬ－５を無菌の超純水に１００μｇ／ｍｌで溶解した。後の使用のため、準備したタンパク質を摂氏ー８０度で保存した。

【0272】

３．テストの方法と手順

【0273】

３．１細胞培養（ＴＦ－１）

【0274】

細胞培養媒体：ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ＦＢＳ＋２ｎｇ／ｍｌ ＧＭ－ＣＳＦで、通行路濃度は３Ｅ^４から７Ｅ^５とした。

【0275】

３．２ 細胞懸濁の準備：良好な成長状態にある適量のＴＦ－１細胞を、１×１０^５から４×１０^５細胞／ｍｌの濃度で１５ｍｌの遠心チューブに入れ、１２００ｒで５分間遠心分離した。上清を捨て、沈殿を１～２ｍｌのアッセイバッファに再懸濁した。

【0276】

３．３ 細胞の計数とシーディング：細胞を再懸濁した細胞懸濁液で計数し、細胞密度を２×１０^５細胞／ｍｌに調製し、透明な底面と白い縁を持つ９６ウェル細胞培養プレートに５０μｌ／ウェルずつ、または１×１０^４細胞／ウェルずつ播種した。

【0277】

３．４ ＩＬ－４とＩＬ－５を以下の比率（４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４）で、総タンパク質濃度が１００μｇ／ｍｌになるように混合した。１００μｇ／ｍｌの混合タンパク質は、後の使用のために、テストバッファで３．１１ｎｇ／ｍｌ、２．６９２８ｎｇ／ｍｌ、３．１５３２ｎｇ／ｍｌ、５．１８４ｎｇ／ｍｌ、１５．５６８ｎｇ／ｍｌ、６．８４ｎｇ／ｍｌ、および３．９１１６ｎｇ／ｍｌに希釈した。コントロールまたはサンプルを、テストバッファで４×１０μｇ／ｍｌに希釈し、その後９段階の濃度勾配で５倍希釈し、１０番目のウェルは０μｇ／ｍｌとなった。各濃度は二度繰り返し設定した。各比率でのＩＬ－４とＩＬ－５の混合物を、希釈されたサンプルと１：１で混合した。

【0278】

３．５ 上述の混合サンプルを５０μｌ／ウェルで、細胞がプレートされている９６ウェルプレートに追加した。

【0279】

３．６ ９６ウェルプレートを、摂氏３７度および５％のＣＯ_２の細胞培養インキュベーターに置いて、７２時間培養した。

【0280】

３．７ セルプレートをインキュベーターから取り出し、各ウェルに１００μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを加え、室温の暗所で１５分間インキュベーションし、多機能マイクロプレートリーダーで各ウェルの細胞生存率を測定した。

【0281】

このアッセイでは、ポジティブコントロールとしてデュピルマブ、メポリズマブ、デュピルマブ＋メポリズマブ（１：１で混合）を使用し、ヒトＩｇＧをネガティブコントロールとして、サンプルＢ（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）をテスト対象のサンプルとして使用した。各サンプルは二度繰り返し設定した。初期濃度が４＊１０μｇ／ｍｌのサンプルを、５倍の勾配希釈によって９つの濃度に希釈した。各グループの最後の重複ウェルは、濃度０μｇ／ｍｌであった。９６ウェルセルプレートでは、２列目の濃度は１０μｇ／ｍｌ、３列目の濃度は２μｇ／ｍｌ、４列目の濃度は０．４μｇ／ｍｌ、５列目の濃度は０．０８μｇ／ｍｌ、６列目の濃度は０．０１６μｇ／ｍｌ、７列目の濃度は０．００３２μｇ／ｍｌ、８列目の濃度は０．０００６４μｇ／ｍｌ、９列目の濃度は０．０００１２８μｇ／ｍｌ、１０列目の濃度は０．００００２５６μｇ／ｍｌ、１１列目の濃度は０μｇ／ｍｌであった。以下の比率（４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４）で混合しれたＩＬ－４とＩＬ－５を、後の使用のために３．１１ｎｇ／ｍｌ、２．６９２８ｎｇ／ｍｌ、３．１５３２ｎｇ／ｍｌ、５．１８４ｎｇ／ｍｌ、１５．５６８ｎｇ／ｍｌ、６．８４ｎｇ／ｍｌ、および３．９１１６ｎｇ／ｍｌに調製し、前記サンプルと１：１で混合した。続いて、混合物と細胞を１：１の体積比で混合し、ＣＯ_２インキュベーターで７２時間培養した（摂氏３７度、５％ＣＯ_２）。最後に、多機能マイクロプレートリーダーを使用して読み取りを行い、データを処理して結論を導いた。

【0282】

ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用し、モル濃度を横軸、相対光度単位（ＲＬＵ）を縦軸として、ＥＣ５０および用量効果曲線を得るために、４つのパラメータの非線形回帰曲線フィッティングを行った。図６～図１９は用量効果曲線を図示している。

【0283】

４．主な器具と試薬

【0284】

［表１０］

【0285】

［表１１］

【0286】

５．結果の要約

【0287】

［表１２］

【0288】

結果が示すように、ＩＬ４：ＩＬ５＝４：１の場合、プレート１ではポジティブコントロールデュピルマブのテストウィンドウは１．７７倍、ＥＣ５０は０．８１２７ｎＭ、メポリズマブのテストウィンドウは１．０２倍、ＥＣ５０は０．００１２９８ｎＭ、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．５９倍、ＥＣ５０は０．４２４５ｎＭであった。プレート２では、サンプルＢのテストウィンドウは１．７８倍で、ＥＣ５０は０．３２１２ｎＭ、ポジティブコントロールデュピルマブ＋メポリズマブのウィンドウは１．６８倍で、ＥＣ５０は約０．８２５０ｎＭ、ネガティブコントロールヒトＩｇＧのウィンドウは１．０１倍で、ＥＣ５０は約０．１０５１ｎＭであった。上述のデータに基づいた適合曲線を図６、７に示す。

【0289】

ＩＬ４：ＩＬ５＝３：１の場合、プレート３ではポジティブコントロールデュピルマブのテストウィンドウは１．８３倍、ＥＣ５０は０．４４８１ｎＭ、メポリズマブのテストウィンドウは１．０５倍、ＥＣ５０は０．００１３２２ｎＭ、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．５３倍、ＥＣ５０は０．２４２９ｎＭであった。プレート４では、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．６０倍で、ＥＣ５０は０．２１８６ｎＭ、ポジティブコントロールデュピルマブ＋メポリズマブのウィンドウは１．６７倍で、ＥＣ５０は約０．９６５２ｎＭ、ネガティブコントロールヒトＩｇＧのウィンドウは１．０２倍で、ＥＣ５０は約０．０００９１４７ｎＭであった。上述のデータに基づいた適合曲線を図８、９に示す。

【0290】

ＩＬ４：ＩＬ５＝２：１の場合、プレート５ではポジティブコントロールデュピルマブのテストウィンドウは１．６０倍、ＥＣ５０は０．４５１９ｎＭ、メポリズマブのテストウィンドウは０．９９倍、ＥＣ５０は２．９３６ｎＭ、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．５５倍、ＥＣ５０は０．２４０２ｎＭであった。プレート６では、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．６３倍で、ＥＣ５０は０．２１２７ｎＭ、ポジティブコントロールデュピルマブ＋メポリズマブのウィンドウは１．７６倍で、ＥＣ５０は約１．２７９ｎＭ、ネガティブコントロールヒトＩｇＧのウィンドウは０．９９倍で、ＥＣ５０は計算不能であった。上述のデータに基づいた適合曲線を図１０、１１に示す。

【0291】

ＩＬ４：ＩＬ５＝１：１の場合、プレート７ではポジティブコントロールデュピルマブのテストウィンドウは１．７７倍、ＥＣ５０は０．５７０１ｎＭ、メポリズマブのテストウィンドウは１．１１倍、ＥＣ５０は１４．８９ｎＭ、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．７１倍、ＥＣ５０は０．３６９２ｎＭであった。プレート８では、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．７０倍で、ＥＣ５０は０．３７０９ｎＭ、ポジティブコントロールデュピルマブ＋メポリズマブのウィンドウは１．９２倍で、ＥＣ５０は約１．７３３ｎＭ、ネガティブコントロールヒトＩｇＧのウィンドウは１．０７倍で、ＥＣ５０は約１４．７０ｎＭであった。上述のデータに基づいた適合曲線を図１２、１３に示す。

【0292】

ＩＬ４：ＩＬ５＝１：２の場合、プレート９ではポジティブコントロールデュピルマブのテストウィンドウは１．６８倍、ＥＣ５０は０．８９８６ｎＭ、メポリズマブのテストウィンドウは１．０６倍、ＥＣ５０は０．００１０３８ｎＭ、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．５８倍、ＥＣ５０は０．５９４７ｎＭであった。プレート１０では、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．６４倍で、ＥＣ５０は０．７３５８ｎＭ、ポジティブコントロールデュピルマブ＋メポリズマブのウィンドウは１．６２倍で、ＥＣ５０は約１．９６０ｎＭ、ネガティブコントロールヒトＩｇＧのウィンドウは０．９９倍で、ＥＣ５０は約０．００２６４１ｎＭであった。上述のデータに基づいた適合曲線を図１４、１５に示す。

【0293】

ＩＬ４：ＩＬ５＝１：３の場合、プレート１１ではポジティブコントロールデュピルマブのテストウィンドウは１．５３倍、ＥＣ５０は０．３４２９ｎＭ、メポリズマブのテストウィンドウは１．０１倍、ＥＣ５０は０．００１４６８ｎＭ、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．５０倍、ＥＣ５０は０．１５２３ｎＭであった。プレート１２では、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．７４倍で、ＥＣ５０は０．１０７７ｎＭ、ポジティブコントロールデュピルマブ＋メポリズマブのウィンドウは１．７６倍で、ＥＣ５０は約０．８８０５ｎＭ、ネガティブコントロールヒトＩｇＧのウィンドウは０．９５倍で、ＥＣ５０は約０．００１９２６ｎＭであった。上述のデータに基づいた適合曲線を図１６、１７に示す。

【0294】

ＩＬ４：ＩＬ５＝１：４の場合、プレート１３ではポジティブコントロールデュピルマブのテストウィンドウは１．５８倍、ＥＣ５０は０．１５６２ｎＭ、メポリズマブのテストウィンドウは１．１４倍、ＥＣ５０は１．１０５ｎＭ、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．５０倍、ＥＣ５０は０．０７８８３ｎＭであった。プレート１４では、サンプルＢ二価抗体のテストウィンドウは１．６７倍で、ＥＣ５０は０．０４９８７ｎＭ、ポジティブコントロールデュピルマブ＋メポリズマブのウィンドウは１．７９倍で、ＥＣ５０は約０．３９４９ｎＭ、ネガティブコントロールヒトＩｇＧのウィンドウは１．０３倍で、ＥＣ５０は約０であった。上述のデータに基づいた適合曲線を図１８、１９に示す。

【0295】

結論：上述のアッセイ条件下で、異なる比率での混合ＩＬ－４およびＩＬ－５のアッセイにおいて、二価抗体サンプルＢのウィンドウはデュピルマブおよび混合デュピルマブ＋メポリズマブそれぞれのウィンドウと比較可能であり、ＥＣ５０はデュピルマブおよび混合デュピルマブ＋メポリズマブそれぞれのそれよりも顕著に低かった。このように、二価抗体サンプルＢの中和活性はデュピルマブと類似しており、混合デュピルマブ＋メポリズマブよりも優れていた。

【0296】

実施例１１

【0297】

製剤

【0298】

１．実施例４で準備したＩＬ－４ＲαおよびＩＬ－５を標的とする二重特異抗体（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の水溶液製剤は、以下のように調製された。

【0299】

１．１ ツイーンを含まないバッファ（１０ｍＭ酢酸ナトリウム酢酸、１２０ｍＭショ糖、７５ｍＭグリシン、２５ｍＭ塩酸アルギニン、ｐＨ５．０）は以下のように調製された。

【0300】

１） 酢酸ナトリウム、ショ糖、グリシン、および塩酸アルギニンを、表１３に従って正確に量り取り、約８００ｍｌの超純水に溶解してよく混合した。

【0301】

２） ５０ｍｌのビーカーを用意し、酢酸を表１３に従って量り、超純水で繰り返し洗浄し、すべての酢酸を上述のステップ１で得られた溶液に移し、よく混合した。

【0302】

３） 溶液を１Ｌのメスフラスコに移し、正確に定容した後、メスフラスコを繰り返し反転させてよく混合した。

【0303】

［表１３］

【0304】

１．２ 高濃度のツイーンストックバッファ（１０ｍＭ酢酸ナトリウム酢酸、１２０ｍＭショ糖、７５ｍＭグリシン、２５ｍＭ塩酸アルギニン、５％ポリソルベート８０、ｐＨ５．０）は以下のように調製された。酢酸ナトリウムは酢酸ナトリウム三水和物である。

【0305】

ａ） 酢酸ナトリウム、ショ糖、グリシン、および塩酸アルギニンを、表１４に従って正確に量り取り、約１００ｍｌの超純水に溶解してよく混合した。

【0306】

ｂ） ５０ｍｌのビーカーを用意し、酢酸を表１４に従って量り、超純水で繰り返し洗浄し、すべての酢酸を上述のステップａ）で得られた溶液に移し、よく混合した。

【0307】

ｃ） ５０ｍｌの遠心チューブを二本用意し、ポリソルベート８０を表１４に従って正確に量り取った。上述のステップｂ）で得られた溶液３５ｍｌを使用し、ポリソルベート８０をボルテックスで溶解し、よく混合し、上述のステップｂ）で得られた溶液で繰り返し洗浄し、すべてのポリソルベート８０を上述のステップｂ）で得られた溶液に移し、よく混合した。

【0308】

３） 溶液を２５０ｍｌのメスフラスコに移し、正確に定容した後、メスフラスコを繰り返し反転させてよく混合した。

【0309】

［表１４］

【0310】

１．３ フォーミュレーションバッファ（１０ｍＭアセテート－酢酸ナトリウム、１２０ｍＭスクロース、７５ｍＭグリシン、２５ｍＭ塩酸アルギニン、０．０５％ポリソルベート８０、ｐＨ５．０）を調製した。

【0311】

以下のステップを実行した。１．１で準備された１Ｌのツイーンを含まないバッファと、１．２で準備した１０．１０１ｍｌの高濃度ツイーンストックバッファをよく混合した。

【0312】

注：各バッファは、必要に応じて調製量を増やしたり減らしたりすることができる。

【0313】

望ましい製剤を準備するために、抗体タンパク質を製剤バッファに添加して、望ましい濃度の製剤を得ることができる。

【0314】

２．アッセイの方法は以下の通りである。

【0315】

２．１ ｐＨ測定

【0316】

中華人民共和国薬局方（２０１５年版、第ＩＶ部）の一般章０６３１「Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐＨ Ｖａｌｕｅ」に従って測定が行われた。

【0317】

２．２ タンパク質の濃度測定

【0318】

測定はＵＶ分光光度計を用いて行った。純水を量り、サンプルを希釈した。続いて、希釈されたサンプル溶液の吸光度を２８０ｎｍで測定した。各サンプルのテストのために、並列に２つの溶液を準備した。タンパク質の含有量は、以下の式に従って計算された。Ｃ（ｍｇ／ｍｌ）＝Ａ×Ｄ／ε ここでＡは溶液の吸光度値、Ｄは希釈倍率、εは消光係数：１．６６６（ｍｇ／ｍｌ）^－１.ｃｍ^－１タンパク質の含有量は、二つの並行計算の平均値として表現した。

【0319】

２．３ 浸透圧（モル濃度アッセイ）

【0320】

中華人民共和国薬局方（２０１５年版、第ＩＶ部）の一般章０６３２「Ｍｏｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｏｓｍｏｔｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ」に従って測定が行われた。

【0321】

２．４ 粘度

【0322】

タンパク質の粘度は、ＲｈｅｏＳｅｎｓｅのｍｉｃｒｏＶＩＳＣ粘度計を使用して測定した。

【0323】

２．５ 純度（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）

【0324】

高速液体クロマトグラフ法を使用して測定を行った。５０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸バッファ＋３００ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ＋１０％アセトニトリル、ｐＨ６．８（７．８ｇのＮａＨ_２ＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏと１７．５３ｇのＮａＣｌを秤量して８００ｍｌの超純水に溶解し、よく混合した後、１００ｍｌのアセトニトリルを加え、ＮａＯＨでｐＨ６．８に調整し、１０００ｍｌの容量にし、０．２２μｍのフィルター膜でろ過し、室温で保存）を移動相とするサイズ排除クロマトグラフィーカラムで分離を行った。流速は０．５ｍｌ／分、検出波長は２８０ｎｍ、カラム温度は摂氏２５度とした。被検サンプルは超純水で２ｍｇ／ｍｌに希釈して被検サンプル溶液とし、作業基準は超純水で２ｍｇ／ｍｌに希釈してシステム適用溶液とした。サンプルバッファは超純水で同じ倍率で希釈し、希釈したサンプルバッファをブランク溶液として使用した。５０μｌずつのブランク溶液、システム適用性溶液、および被験サンプル溶液を使用し液体クロマトグラフに注入した。

【0325】

２．６ 純度（ｎｒＣＥ－ＳＤＳ）

【0326】

測定はキャピラリーゲル電気泳動法を用いて行った。電気泳動の前に、キャピラリーカラムをそれぞれ０．１ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム、０．１ｍｏｌ／Ｌの塩酸、超純水、および電気泳動ゲル７０ｐｓｉで洗浄した。被検サンプル（タンパク質約１００μｇ含有）を適量秤量し、ｐＨ６．０のサンプルバッファ９３μｌ（０．４４ｇのＮａ_２ＨＰＯ_４・１２Ｈ_２Ｏと１．３６ｇのＮａＨ_２ＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏを５０ｍｌ遠沈管に秤量し、超純水９０ｍｌを加えて完全に溶解させ、よく混合した後、超純水を加えて１００ｍｌとし、リン酸バッファを調製した。リン酸バッファ２００μｌを正確に量り、１０％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液１００μｌと超純水７００μｌを加えてよく混合し、サンプルバッファを得た）、２μｌ内部標準（１０ ｋＤａ）、および５μｌ ２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＥＭ（３１ｍｇのＮ－エチルマレイミドを秤量し、１ｍｌの超純水に溶解）を加え、よく混合した後、摂氏７０度で１０分間加熱し、室温まで冷却した後、サンプルバイアルに移し、被検サンプル溶液とした。被験サンプルと同じ体積のサンプルバッファを使用し、同じ運用を行ってブランク溶液を作成した。サンプルの注入条件：５ｋＶ、２０秒、分離電圧：１５ｋＶ、３５分。キャピラリーカラムの温度は摂氏２５度に制御し、テストウィンドウの幅は１００×８００μｍとした。

【0327】

２．７ チャージバリアント（ｉｃＩＥＦ）

【0328】

測定はイメージングキャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＩＥＦ）を用いて行った。キャピラリーの内径は１００μｍで、総長さは５ｃｍである。サンプルの電気泳動を行う前に、キャピラリーカラムを０．５％のＭＣ（メチルセルロース）溶液と超純水で洗浄する必要がある。サンプルは５５秒間真空注入することにより充填した。プレフォーカス電圧は１．５ＫＶで１分間、フォーカシング電圧は３ＫＶで７分間であった。サンプルディスクの温度は摂氏１０度、キャピラリーカラムの温度は室温、検出波長は２８０ｎｍとした。５００ｍｍｏｌ／Ｌのアルギニン溶液を陰極安定剤として使用し、１０ｍｏｌ／Ｌの尿素溶液をタンパク質の溶解性を改善するために使用し、０．５％のＭＣ溶液をタンパク質とキャピラリーの接着を減少させるために使用した。濃縮および脱塩処理した被験サンプルを、超純水で１．０ｍｇ／ｍｌに希釈した。希釈（１．０ｍｇ／ｍｌ）された２０μｌのサンプルに、３５μｌの１％ＭＣ溶液、４μｌの両性電解質（ｐＨ３から１０）、２μｌの陰極安定剤、３μｌの１０ｍｏｌ／Ｌ尿素溶液、３４μｌの超純水、１μｌのｐＩ６．８２メーカー、１μｌのｐＩ ９．９１メーカーを混ぜて、被験サンプル溶液を作成した。サンプルバッファと作業基準溶液をそれぞれ使用して、ブランク溶液と基準溶液を同様の方法で準備した。

【0329】

２．８ 結合活性（ＥＬＩＳＡ法）

【0330】

４００μｇ／ｍｌのＩＬ－５抗原を１×ＥＬＩＳＡコーティング溶液で０．５μｇ／ｍｌに希釈し、９６ウェルプレートに５０．０μｌ／ウェルでコーティングし、摂氏２～８度で一晩放置した。コーティングされたＥＬＩＳＡプレートを取り出して、コーティング溶液を廃棄した。ＥＬＩＳＡ洗浄液を２５０μｌ／ウェルで加え、プレートを３０秒間放置し、その後ＥＬＩＳＡ洗浄液を廃棄した。洗浄は４回繰り返し行った。ＥＬＩＳＡ作業溶液を２５０μｌ／ウェルでブロッキング用に追加し、プレートを室温で２時間インキュベーションした。インキュベーション後、勾配希釈サンプルを５０．０μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに二度繰り返し転送し、室温で１時間インキュベーションした。０．５ｕｇ／ｍｌの希釈されたバイオチニル化ヒトＩＬ－４Ｒを５０．０μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに移し、室温で１時間インキュベーションした。第二抗体の作業溶液は、ＥＬＩＳＡ作業溶液中のストレプトアビジンＨＲＰを１：１００００に希釈することで得られた。第二抗体の作業溶液を５０．０μｌ／ウェルで加え、室温で１時間インキュベーションした。二次抗体作業溶液と反応した９６ウェルプレート内の反応溶液は廃棄した。ＥＬＩＳＡ洗浄溶液を２５０μｌ／ウェルで加えた後、廃棄した。洗浄は４回繰り返し行った。プレートを清潔な吸収紙で叩いて乾かした。ＴＭＢ発色溶液を１００μｌ／ウェルで加え、室温で１０分間放置した。発色後、９６ウェルマイクロプレートに５０μｌ／ウェルで２ｍｏｌ／ｌのＨ_２ＳＯ_４を加え、色反応を停止した。４５０ｎｍで吸光度値をマイクロプレートリーダーを用いて読み取り、参照波長をして６３０ｎｍとした。濃度を横軸、ＯＤ_{４５０－６３０ ｎｍ}を縦軸として、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して四つのパラメータ曲線をフィットさせ、ＥＣ_５０とＲ^２を直接取得した。被験サンプルの相対的な結合活性は、以下の処方に従って計算することができる（結合活性の結果は四捨五入した）。

【0331】

［数１］

【0332】

３．添加物比率の最適化

【0333】

３．１ 処方の設計

【0334】

表１５に示すように合計６つのグループの処方を設計した。

【0335】

［表１５］

【0336】

タンパク質４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２を濃縮し、各処方にバッファ交換した。バッファ交換が完了した後、濃度を調整して目標物（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２）の濃度を約１００ｍｇ／ｍｌにした（４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２の添加による各製剤のｐＨは、表１８のＴ０列に記載）。バッファ交換終了後、５ｍｌのＦｌｅｘｂｏｙ保存袋に入れた凍結融解検査用サンプルを除き、残りを２Ｒ中型ホウケイ酸ガラス管製のインジェクションバイアルに入れ、表１６に従って検査した。

【0337】

［表１６］

【0338】

注：－：検査点なし Ｔ０は始点（ゼロポイントまたは開始点）

【0339】

３．２ 試験結果

【0340】

以下の結果において、Ａｇｔは撹拌（６５０ｒｐｍ）を意味する。Ｆｔ－５ｃｙｃは五つの凍結－解凍サイクル（摂氏－８０度／室温）を表す。

【0341】

（１） 外観検査結果

【0342】

超遠心チューブを使用したバッファ交換中にＤ０５に明らかな層状化が見られたため、このグループの処方は調査対象から除外した。他の処方の外観結果を表１７に示す。５回の凍結－解凍サイクル後、すべての処方のサンプルは、外観上、透明で無色だった。

【0343】

サンプルはバッグの内側に平らに置かれていたため、サンプル自体のわずかに黄色い色合いが薄まった。

【0344】

Ｄ０１、Ｄ０２、およびＤ０３のサンプルの処方では、Ｔ０の時点およびさまざまな温度において、すべて乳白色でわずかに黄色であった。Ｄ０４のサンプルの処方では、Ｔ０の時点で透明でわずかに黄色であり、さまざまな温度においてわずかに乳白色かつわずかに黄色だった。Ｄ０６のサンプルの処方では、Ｔ０の時点およびさまざまな温度において強く乳白色かつわずかに黄色だった。

【0345】

［表１７］

【0346】

注：０：透明で無色（少量のため、サンプルを取り出すことなく、またペニシリンバイアルに入れることなく、直接凍結保存バッグ内で観察した）。＋：透明でわずかに黄色。＋＋：わずかに乳白色でわずかに黄色。＋＋＋：乳白色でわずかに黄色。＋＋＋＋：強く乳白色でわずかに黄色。

【0347】

（２） ｐＨテストの結果

【0348】

ｐＨ結果を表１８に示す。各処方グループの各検査点でのサンプルのｐＨには、Ｔ０と比較して顕著な差はみられなかった（すべて±０．３の許容範囲内）。

【0349】

［表１８］

【0350】

（３） タンパク質濃度の計測結果

【0351】

タンパク質濃度の結果を表１９に示す。各グループのサンプルのタンパク質濃度には、ポイントＴ０と比較して顕著な変化は見られなかった（すべて許容範囲の±１０％以内）。

【0352】

［表１９］

【0353】

粘度と浸透圧の結果を表２０に示す。全ての処方における粘度は５．７ｍから６．１ｍＰａ．ｓの範囲内であり、浸透圧は２９９ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇから３３１ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの範囲内だった。

【0354】

［表２０］

【0355】

（４） 純度（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）検査結果

【0356】

ＳＥＣ－ＨＰＬＣ（サイズ排除高速液体クロマトグラフ法）の結果を表２１から表２３に示す。摂氏２５度で４８時間の揺動を行って１４日観察すると、Ｔ０と比較してモノマー含有量は減少したが、減少率は１．０％以内だった。摂氏－２０度、摂氏５度、または凍結解凍検査の条件下では、基本的にすべての処方におけるサンプルのモノマー含有量に差異は見られなかった。Ｔ０と比較して、モノマー含有量は０．２％以内で変化した。（ＳＥＣ－ＨＰＬＣによる）純度測定結果から、成分間には大きな差は見られなかった。

【0357】

［表２１］

【0358】

【0359】

［表２２］

【0360】

［表２３］

【0361】

（５） 純度（ｎｒＣＥ－ＳＤＳ）検査結果

【0362】

ｎｒＣＥ－ＳＤＳ（非還元キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム）の結果を表２４から表２６に示す。Ｔ０と比較して、検査条件下におけるＤ０１からＤ０４のサンプルの処方のメインピーク含有量は１．０％未満で変動した。揺動検査後のＤ０６サンプルの処方のメインピーク含有量は著しく減少した。

【0363】

［表２４］

【0364】

［表２５］

【0365】

［表２６］

【0366】

（６） チャージバリアント（ｉｃＩＥＦ）検査結果

【0367】

ｉｃＩＥＦは、全カラムイメージングキャピラリー等電点電気泳動である。表２７から表２９にチャージバリアント（ｉｃＩＥＦ）結果を示す。表の結果によると、Ｄ０４サンプルの処方のメインピーク含有量の値は比較的変動が少ないことが分かるので、Ｄ０４の処方を代替処方として用いることができる。

【0368】

［表２７］

【0369】

［表２８］

【0370】

［表２９］

【0371】

Ｔ０と比較して、モノマー含有量（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）とメインピーク含有量（ｎｒＣＥ－ＳＤＳ）は１．０％以内で変動していることが純度（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、ｎｒＣＥ－ＳＤＳ）の結果から分かる。また、チャージバリアント（ｉｃＩＥＦ）の結果から、Ｄ０４サンプル処方のメインピーク含有量は比較的変動が少ないことが分かる。

【0372】

処方Ｅ０１（ＤＯ４）（１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸－酢酸ナトリウム、７５ｍｍｏｌ／Ｌグリシン、２５ｍｍｏｌ／Ｌアルギニン塩酸塩、１２０ｍｍｏｌ／Ｌスクロース、０．０５％ＰＳ８０、ｐＨ５．０、タンパク質濃度１００ｍｇ／ｍｌ）の配合を確認した。

【0373】

確認手順を表３０に示す。タンパク質を濃縮し、各処方にバッファ交換した。バッファ交換終了後、５ｍｌのＦｌｅｘｂｏｙ保存袋に入れた凍結融解検査用サンプルを除き、残りを２Ｒ中型ホウケイ酸ガラス管製のインジェクションバイアルに入れ、表３０に従って検査した。

【0374】

［表３０］

【0375】

注：―：検査点なし

【0376】

実験結果

【0377】

（１） 粘度と浸透圧のテスト結果

【0378】

粘度と浸透圧の結果を表３１に示す。粘度は４．５９０ｍＰａ．ｓであった。浸透圧は２８６ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇであった。

【0379】

［表３１］

【0380】

（２） 外観、ｐＨ、およびタンパク質濃度のテスト結果

【0381】

表３２に、外観、ｐＨ、およびタンパク質濃度の結果を示す。各検査条件下で、外観は透明かつ黄色であった。サンプルのソースの違いにより、確認時の処方の外観は、スクリーニング時の処方Ｄ０４のサンプルの状態よりも良かった。様々に異なった検査条件下でも、ｐＨ（許容範囲内の±０．３）およびタンパク質濃度（許容範囲内の±１０％）には顕著な差は見られなかった。

【0382】

［表３２］

【0383】

（４） 純度（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）検査結果

【0384】

純度（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）検査の結果を表３３に示す。摂氏３７度で１４日観察すると、モノマー含有量は２．６％減少した。摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、凍結、解凍の条件下では、サンプル中のモノマーの含有量は１．５％を超えて変動することはなかった。

【0385】

［表３３］

【0386】

（４） 純度（ｎｒＣＥ－ＳＤＳ）検査結果

【0387】

純度（ｎｒＣＥ－ＳＤＳ）検査の結果を表３４に示す。摂氏３７度で１４日観察すると、モノマー含有量は１．９％減少した。摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、凍結、解凍の条件下では、サンプル中のモノマーの含有量は１．０％を超えて変動することはなかった。

【0388】

［表３４］

【0389】

（５）チャージバリアント（ｉｃＩＥＦ）検査結果

【0390】

表３５にチャージバリアント（ｉｃＩＥＦ）検査結果を示す。摂氏３７度で１４日間調査した結果、Ｔ０と比較して、主要ピークの含有量が５．２％減少した。これは、サンプル中のチャージバリアントの各成分の含有量が高温条件下で変動したことを示している。摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、凍結、解凍の条件下では、サンプル中のメインピーク含有量は２．０％を超えて変動することはなかった。

【0391】

［表３５］

【0392】

（６） 結合活性検査結果

【0393】

結合活性（ＥＬＩＳＡ）検査の結果を表３６に示す。４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２タンパク質を摂氏－２０度および摂氏５度で３０日間および９１日間検査した後、結合活性（ＥＬＩＳＡ）の結果はすべて合格となった（判定基準：７０％～１３０％）。

【0394】

［表３６］

【0395】

（７） 概要

【0396】

すべての処方確認の結果から、摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、凍結、解凍の条件下の検査では、各成分はほとんど変化せず、摂氏－２０度および摂氏５度での９１日間の検査後、結合活性は合格基準を満たしていた。このことから、処方Ｅ０１（Ｄ０４）を含む製剤における４Ｅ９Ｖ１０－２Ｂ３Ｖ２－２は、摂氏５度、摂氏－２０度、振動、凍結、解凍の条件下で良好な安定性を示していることが分かった。

【0397】

前記実施形態において開示された本開示の実施形態は、その記載および実施形態が列挙する事例に限定されるものではない。実施形態は本開示に適したさまざまな分野に適用することが可能である。付加的な変更は当業者によって容易に実施することができ、また本開示は請求項およびそれと同等の範囲によって定義される一般的概念から逸脱することなく、特定の詳細に限定されるものではない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

2025504063000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-07-30

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１００

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0100】

本開示の一部の実施形態が提供するのは、疾患の治療のための医薬品の調製への安定抗体製剤の使用である。前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎を含む。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0102】

本開示の一部の実施形態で提供されるのは、前記抗体製剤のいずれかを使用して疾患を治療するための方法である。前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎を含む。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１４９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0149】

３１．疾患を治療するための医薬品を調製するための項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤の使用であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患 アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、安定抗体製剤の使用である。

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１５１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0151】

３３．項目１～２５のいずれかに記載の抗体製剤を用いて疾患を治療する方法であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、方法である。

【手続補正5】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１５４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0154】

３６．項目１～２５のいずれかに記載の安定抗体製剤を含み、疾患の治療に用いられる医薬品であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、季節性アレルギー性鼻炎である、医薬品である。

【手続補正6】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

治療有効量の抗体分子、等張化剤、バッファ剤、および界面活性剤を含み、製剤のｐＨが４．５～５．５であり、抗体分子がＩＬ－５およびＩＬ－４Ｒαの両方に特異的に結合することができる、安定抗体製剤であって、ＩＬ－４Ｒα分子に特異的に結合することができる第一免疫グロブリン可変ドメインとＩＬ－５に特異的に結合することができる第二免疫グロブリン可変ドメインとを有する少なくとも二つの免疫グロブリン可変ドメインを含む、安定抗体製剤。

【請求項2】

前記製剤のｐＨが４．７から５．３である、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項3】

第一免疫グロブリン可変ドメインが第一単一ドメイン抗体分子であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載のＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に記載のＣＤＲ３とを有し、第二免疫グロブリン可変ドメインが第二単一ドメイン抗体分子であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に記載のＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に記載のＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に記載のＣＤＲ３とを有する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項4】

抗体分子が、第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子との間のリンカーグループを含まないポリペプチド融合体である、請求項３に記載の安定抗体製剤。

【請求項5】

抗体分子が生体適合性ポリマーを含むポリペプチド融合体であり、ポリペプチド融合体の第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子とは、生体適合性ポリマーをリンカーグループとしてライゲーションされる、請求項３に記載の安定抗体製剤。

【請求項6】

第一単一ドメイン抗体分子と第二単一ドメイン抗体分子とがヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を介してライゲーションされ、抗体分子はホモ二量体構造を有し、各単鎖Ｆｃ融合タンパク質は第一免疫グロブリン可変ドメインと、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と、第二免疫グロブリン可変ドメインとからなる、請求項３に記載の安定抗体製剤。

【請求項7】

前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来である、請求項６に記載の安定抗体製剤。

【請求項8】

前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ４領域から誘導され、Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３に記載のアミノ酸配列を有するまたはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の１１６位から３５６位に位置する、請求項６に記載の安定抗体製剤。

【請求項9】

第一免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に記載のアミノ酸配列を有し、第二免疫グロブリン可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項10】

治療有効量の抗体分子、等張化剤、バッファ剤、および界面活性剤を含み、製剤のｐＨが４．５～５．５であり、抗体分子がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９または１０に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質を含む、安定抗体製剤。

【請求項11】

バッファ剤が酢酸－酢酸ナトリウムバッファであり、等張化剤がショ糖であり、界面活性剤がポリソルベートである、請求項１または１０に記載の安定抗体製剤。

【請求項12】

グリシンと塩酸アルギニンを含む充填剤をさらに有する、請求項１１に記載の安定抗体製剤。

【請求項13】

酢酸－酢酸ナトリウムの濃度が１０から２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／または塩酸アルギニンの濃度が２５から１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはショ糖の濃度が８０から１２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはグリシンの濃度が５０から７５ｍｍｏｌ／Ｌであり、および／またはポリソルベート８０の濃度が０．０２から０．０５ｗ／ｖ％である、請求項１１に記載の安定抗体製剤。

【請求項14】

メチオニンをさらに有する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項15】

メチオニンを１０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度でさらに有する、請求項１４に記載の安定抗体製剤。

【請求項16】

前記抗体分子が１２０ｍｇ／ｍＬ未満の量で存在する、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項17】

前記抗体分子の濃度が約０．０１から約１００ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項18】

ａ）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、
ｂ）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１００ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、１０ｍｍｏｌ／Ｌのメチオニンと、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、
ｃ）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、５０ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、
ｄ）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、７５ｍｍｏｌ／Ｌのグリシンと、２５ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、１２０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、又は、
ｅ）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ－４Ｒα／ＩＬ－５二重特異抗体と、２０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウムアセテートと、１００ｍｍｏｌ／Ｌの塩酸アルギニンと、８０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖と、０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０とを含み、ｐＨが５．０から５．２である、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項19】

前記製剤のモノマーの含有量が、摂氏約３７度で１４日間の保存後に５％以上減少しない、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項20】

摂氏－２０度、摂氏５度、揺動、または凍結と解凍の条件下で、サンプル中のモノマーの含有量が１．５％以上変化しない、請求項１に記載の安定抗体製剤。

【請求項21】

請求項１～１０、１４～２０のいずれかに記載の抗体製剤と、抗体製剤を含むコンテナとを有するキット。

【請求項22】

疾患を治療又は予防するための医薬品を調製するための請求項１～１０、１４～２０のいずれかに記載の安定抗体製剤の使用であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、又は季節性アレルギー性鼻炎から選択される、安定抗体製剤の使用。

【請求項23】

前記医薬品が静脈内または皮下経路で投与される医薬品である、請求項２２に記載の使用。

【請求項24】

請求項１～１０、１４～２０のいずれかに記載の安定抗体製剤を用いて、ヒトではない対象の疾患を治療する方法であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、又は季節性アレルギー性鼻炎から選択される、方法。

【請求項25】

請求項１～１０、１４～２０のいずれかに記載の安定抗体製剤を有するデリバリーシステムであって、該デリバリーシステムが使い捨てシリンジから選択される、デリバリーシステム。

【請求項26】

請求項１～１０、１４～２０のいずれかに記載の安定抗体製剤を調製する方法であって、抗体分子を調製するステップ１と、治療有効量の抗体分子を、張力等張化剤、バッファ剤、界面活性剤および／または他の必要な成分と混合して、安定溶液を形成するステップ２とを有する方法。

【請求項27】

請求項１～１０、１４～２０のいずれかに記載の安定抗体製剤を含み、疾患の治療に用いられる医薬品であって、前記疾患は、喘息、アレルギー性皮膚炎、湿疹、関節炎、ヘルペス、慢性原発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、川崎病、鎌状赤血球症、バセドウ病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ぶどう膜炎、結核、腎臓病、自己免疫疾患、多発血管炎性好酸球性肉芽腫症、重症好酸球性喘息、好酸球増多症候群、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープを伴わないコントロール不能な慢性副鼻腔炎、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、結節性痒疹、家族性寒冷蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、アレルギー性真菌性鼻副鼻腔炎、慢性寒冷蕁麻疹、ピーナッツアレルギー、花粉アレルギー、好酸球性食道炎、ケロイド、そう痒症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、又は季節性アレルギー性鼻炎から選択される、医薬品。

【請求項28】

請求項１～１０、１４～２０のいずれかに記載の安定抗体製剤の調製におけるグリシンの使用であって、前記抗体分子の濃度が抗体製剤中で１００ｍｇ／ｍｌに達しても抗体分子が安定して存在する、使用。

【国際調査報告】