特表 2025-504398 ＭＵＣ１６キメラ抗原受容体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-02-12

(54)【発明の名称】ＭＵＣ１６キメラ抗原受容体

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20250204BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20250204BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20250204BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20250204BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20250204BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250204BHJP

   A61K 35/17 20250101ALI20250204BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20250204BHJP

   A61K 35/768 20150101ALI20250204BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 11/04 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20250204BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20250204BHJP

   C07K 16/30 20060101ALN20250204BHJP

   C07K 16/46 20060101ALN20250204BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20250204BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20250204BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20250204BHJP

   C12N 7/01 20060101ALN20250204BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N15/867 Z

C12N15/864 100Z

C12N5/10

A61K35/17

A61K45/00

A61K35/768

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P21/00

A61P13/08

A61P15/00

A61P5/14

A61P13/12

A61P1/18

A61P43/00 105

A61P1/04

A61P11/00

A61P17/00

A61P1/16

A61P1/02

A61P11/02

A61P11/04

A61P13/10

C07K14/705

C07K16/30

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/12

C12N5/0783

C12N7/01

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024541179

(86)(22)【出願日】2023-01-10

(85)【翻訳文提出日】2024-08-28

(86)【国際出願番号】 US2023010518

(87)【国際公開番号】W WO2023133358

(87)【国際公開日】2023-07-13

(31)【優先権主張番号】63/298,141

(32)【優先日】2022-01-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】597160510

【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】パーソンズ， ジェフリー ブラックバーン

(72)【発明者】

【氏名】ディリロ， デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】アルバーシャート， ティナ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB092

4C084ZB262

4C085AA13

4C085AA14

4C085CC23

4C085EE03

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BB65

4C087BC83

4C087CA04

4C087CA12

4C087MA02

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZA34

4C087ZA59

4C087ZA66

4C087ZA67

4C087ZA75

4C087ZA81

4C087ZA89

4C087ZA94

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZC06

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA41

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ＭＵＣ１６を標的化するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞、及び癌を治療するためのこれらの組成物の使用を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドの一つ又は複数のエピトープに結合する抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片を含む細胞外ドメイン；膜貫通ドメイン、一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、及び一次シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項2】

前記ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、全長ＭＵＣ１６ポリペプチドのタンパク質分解切断後に、細胞表面上に残っているＭＵＣ１６の膜近位断片に結合する、請求項１に記載のＣＡＲ。

【請求項3】

タンパク質分解切断後に前記細胞表面上に残っているＭＵＣ１６の前記断片が、配列番号１５１を含む、請求項２に記載のＣＡＲ。

【請求項4】

前記全長ＭＵＣ１６ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで１～１６と番号付けされた１６のウニ精子、エンテロキナーゼ及びアグリン（ＳＥＡ）ドメインを含み、ＭＵＣ１６の前記断片がＳＥＡドメイン１２～１６を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項5】

前記ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する前記抗ＭＵＣ１６抗体又は抗原結合断片が、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ラクダＩｇ、ＶＨＨ、Ｉｇ ＮＡＲ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）又はその断片からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項6】

前記ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片がｓｃＦｖである、請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項7】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７において示される可変軽鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項8】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号４７、５９、７１、８３、９５、１０７、１１９、１３３、もしくは１４５のいずれか一つにおいて示される可変軽鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項9】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号８において示される可変重鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項10】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３４、もしくは１４６のいずれか一つにおいて示される可変重鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項11】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１～３のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項12】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、（ａ）配列番号４１～４３、（ｂ）配列番号５３～５５、（ｃ）配列番号６５～６７、（ｄ）配列番号７７～７９、（ｅ）配列番号８９～９１、（ｆ）配列番号１０１～１０３、（ｇ）配列番号１１３～１１５、（ｈ）配列番号１２７～１２９、又は（ｉ）配列番号１３９～１４１のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項13】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号４～６のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項14】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、（ａ）配列番号４４～４６、（ｂ）配列番号５６～５８、（ｃ）配列番号６８～７０、（ｄ）配列番号８０～８２、（ｅ）配列番号９２～９４、（ｆ）配列番号１０４～１０６、（ｇ）配列番号１１６～１１８、（ｈ）配列番号１３０～１３２、又は（ｉ）配列番号１４２～１４４のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項15】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変軽鎖アミノ酸配列を含む、又は配列番号７を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項16】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号４７、５９、７１、８３、９５、１０７、１１９、１３３、もしくは１４５のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変軽鎖アミノ酸配列を含む、又はそれらのいずれか一つを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項17】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変重鎖アミノ酸配列を含む、又は配列番号８を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項18】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３４、もしくは１４６のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変重鎖アミノ酸配列を含む、又はそれらのいずれか一つを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項19】

前記膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドからである、請求項１～１８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項20】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるポリペプチドからである、請求項１～１８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項21】

前記膜貫通ドメインがＣＤ８αからである、請求項１～１８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項22】

前記膜貫通ドメインが、配列番号１５４の配列を含む、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項23】

前記一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からである、請求項１～２２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項24】

前記一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からなる群から選択される共刺激分子からである、請求項１～２２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項25】

前記一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からである、請求項１～２２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項26】

前記共刺激シグナル伝達ドメインが、配列番号１５５の配列を含む、請求項２５に記載のＣＡＲ。

【請求項27】

前記一次シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζからである、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項28】

前記一次シグナル伝達ドメインが、配列番号１５６の配列を含む、請求項２７に記載のＣＡＲ。

【請求項29】

ヒンジ領域ポリペプチドをさらに含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項30】

前記ヒンジ領域ポリペプチドが、ＣＤ８αのヒンジ領域を含む、請求項２９に記載のＣＡＲ。

【請求項31】

前記ヒンジ領域ポリペプチドが、配列番号１５３の配列を含む、請求項３０に記載のＣＡＲ。

【請求項32】

シグナルポリペプチドをさらに含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項33】

前記シグナルポリペプチドが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体２（ＧＭ－ＣＳＦＲ２）シグナルポリペプチド、Ｉｇκシグナルポリペプチド、又はＣＤ８αシグナルポリペプチドを含む、請求項３２に記載のＣＡＲ。

【請求項34】

前記シグナルポリペプチドがＣＤ８αシグナルポリペプチドを含む、請求項３３に記載のＣＡＲ。

【請求項35】

前記シグナルポリペプチドが配列番号１５２の配列を含む、請求項３４に記載のＣＡＲ。

【請求項36】

前記可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項37】

前記可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの間の前記ポリペプチドリンカーが、配列番号１４～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載のＣＡＲ。

【請求項38】

前記可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの間の前記ポリペプチドリンカーが、配列番号２４において示される３ｘＧ４Ｓアミノ酸リンカーを含む、請求項３７に記載のＣＡＲ。

【請求項39】

前記膜貫通ドメインと一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項40】

前記膜貫通ドメインと一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインの間の前記ポリペプチドリンカーが、ＬＹＣの配列を含む、請求項３９に記載のＣＡＲ。

【請求項41】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７において示される可変軽鎖アミノ酸配列内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域ならびに配列番号８において示される可変重鎖アミノ酸配列内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含み；前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるポリペプチドからであり；前記一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からなる群から選択される共刺激分子からであり；ならびに前記一次シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζからである、請求項１～４０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項42】

前記抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７において示される可変軽鎖アミノ酸配列内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域ならびに配列番号８において示される可変重鎖アミノ酸配列内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含み；前記膜貫通ドメインがＣＤ８αからであり；前記一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からであり；ならびに前記一次シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζからである、請求項１～４０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項43】

配列番号９もしくは配列番号１１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する、又は配列番号９もしくは配列番号１１を含むアミノ酸配列を含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項44】

配列番号４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９、もしくは１５０のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する、又はそれらのいずれか一つを含むアミノ酸配列を含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項45】

ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドの一つ又は複数のエピトープへの結合について、請求項１～４４のいずれか一項に記載のＣＡＲと競合する、ＣＡＲ。

【請求項46】

請求項１～４５のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項47】

ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドであって、前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号１０もしくは配列番号１２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するポリペプチドをコードする、又は配列番号１０もしくは配列番号１２を含む、ポリヌクレオチド。

【請求項48】

ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドであって、前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号９、１１、４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９、もしくは１５０のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する、又はそれらのいずれか一つを含むポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項49】

請求項４６～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【請求項50】

前記ベクターが発現ベクターである、請求項４９に記載のベクター。

【請求項51】

前記ベクターがエピソームベクターである、請求項４９に記載のベクター。

【請求項52】

前記ベクターがウイルスベクターである、請求項４９に記載のベクター。

【請求項53】

前記ベクターがレトロウイルスベクターである、請求項４９に記載のベクター。

【請求項54】

前記ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項４９に記載のベクター。

【請求項55】

前記ベクターがアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項４９に記載のベクター。

【請求項56】

前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）；ヒト免疫不全ウイルス２（ＨＩＶ－２）、ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎－脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）からなる群から選択される、請求項５４に記載のベクター。

【請求項57】

左（５’）レトロウイルスＬＴＲ、Ｐｓｉ（Ψ）パッケージングシグナル、セントラルポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、レトロウイルスエクスポートエレメント；請求項２６又は請求項２７に記載のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーター；及び右（３’）レトロウイルスＬＴＲを含む、請求項４９～５６のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項58】

異種ポリアデニル化配列をさらに含む、請求項５７に記載のベクター。

【請求項59】

前記５’ＬＴＲの前記プロモーターが異種プロモーターで置換される、請求項５８のいずれかに記載のベクター。

【請求項60】

前記異種プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、又はサルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーターである、請求項５９に記載のベクター。

【請求項61】

前記５’ＬＴＲ又は３’ＬＴＲがレンチウイルスＬＴＲである、請求項５７～６０のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項62】

前記３’ＬＴＲが一つ又は複数の修飾を含む、請求項５７～６１のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項63】

前記３’ＬＴＲが一つ又は複数の欠失を含む、請求項５７～６２のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項64】

前記３’ＬＴＲが自己不活化（ＳＩＮ）ＬＴＲである、請求項５７～６３のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項65】

請求項４７～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドに作動可能に連結された前記プロモーターが、サイトメガロウイルス即時初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ）、伸長因子１アルファプロモーター（ＥＦ１－α）、ホスホグリセリン酸キナーゼ－１プロモーター（ＰＧＫ）、ユビキチン－Ｃプロモーター（ＵＢＱ－Ｃ）、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータ－アクチンプロモーター（ＣＡＧ）、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（ＭＣ１）、ベータアクチンプロモーター（β－ＡＣＴ）、サルウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、及び骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、ネガティブコントロール領域欠失型、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーターからなる群から選択される、請求項５７～６４のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項66】

請求項４６～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドに作動可能に連結された前記プロモーターが、ＭＮＤプロモーターである、請求項６５に記載のベクター。

【請求項67】

請求項４９～６６のいずれか一項に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項68】

請求項１～４５のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む、細胞。

【請求項69】

前記細胞が免疫エフェクター細胞である、請求項６７又は６８に記載の細胞。

【請求項70】

前記免疫エフェクター細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、又はヘルパーＴ細胞である、請求項６９に記載の細胞。

【請求項71】

前記細胞がＴ細胞である、請求項６７又は６８に記載の細胞。

【請求項72】

前記細胞が、αβ Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項６７又は６８に記載の細胞。

【請求項73】

請求項６７～７２のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項74】

請求項６７～７２のいずれか一項に記載の細胞及び生理学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項75】

請求項４６～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項４９～６６のいずれか一項に記載のベクターを免疫エフェクター細胞中に導入することを含む、請求項１～４５のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞を生成する方法。

【請求項76】

それを必要とする対象において癌を治療する方法であって、請求項７３に記載の組成物又は請求項７４に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項77】

前記癌が固形癌であり、場合により、前記固形癌がＭＵＣ１６を発現する、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記固形癌が、肉腫、前立腺癌、子宮癌、甲状腺癌、精巣癌、腎癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮頸部、中皮腫、食道癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、黒色腫、肝細胞癌、頭頸部癌、胃癌、子宮内膜癌、卵管癌、結腸直腸癌、胆管癌、乳癌、及び膀胱癌からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。

【請求項79】

前記固形癌が、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、中皮腫、ＮＳＣＬＣ、及びＳＣＬＣからなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。

【請求項80】

前記固形癌が卵巣癌である、請求項７７に記載の方法。

【請求項81】

前記組成物が、追加の治療剤との組み合わせにおいて投与される、請求項７６～８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

治療剤を受けた、又は受けている対象において癌を治療する方法であって、請求項７３に記載の組成物又は請求項７４に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項83】

前記組成物及び治療剤が、連続的に又は同時に投与される、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項84】

前記治療剤が、免疫チェックポイント阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、又は共刺激性抗体である、請求項８１～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項85】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１；ＰＤＣＤ１）、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメインタンパク質３（ＴＩＭ－３）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、バンドＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、Ｔ細胞免疫グロブリン及び免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフドメイン（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ４７、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ならびにＣＤ７０からなる群から選択されるチェックポイントタンパク質又は対応するリガンドに結合する、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項８４又は８５に記載の方法。

【請求項87】

前記ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片である、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記ＰＤ－１阻害剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、及びセミプリマブからなる群から選択される、請求項８７に記載の方法。

【請求項89】

前記共刺激性抗体が二重特異的抗体である、請求項８４に記載の方法。

【請求項90】

前記二重特異的抗体が腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）及びＣＤ３に結合する、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記二重特異的抗体がＴＡＡ及びＣＤ２８に結合する、請求項８９に記載の方法。

【請求項92】

前記ＴＡＡが、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥタンパク質、β－カテニン、ｂｒｃ－ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ８、ＣＣＲ５、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、Ｆｒａ－１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥタンパク質（例、ＧＡＧＥ－１、－２）、ＧＤ２、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ－ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ－ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ－Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＲＴ－１、ＭＬ－ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ－ＢＲ１、ＮＹ－ＢＲ６２、ＮＹ－ＢＲ８５、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ－１、ＰＲＬＲ、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、Ｓｔｅａｐ－１、Ｓｔｅａｐ－２、サバイビン、ＴＧＦ－β、ＴＭＰＲＳＳ２、Ｔｎ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、ウロプラキン３、アルファ葉酸受容体（ＦＲα）、αｖβ６インテグリン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ６、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＣＲ１、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５（また、ｆｍｃ様チロシンキナーゼ ３；ＦＬＴ３として公知である）、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、クローディン－６（ＣＬＤＮ６）、Ｃ型レクチン様分子 １（ＣＬＬ－１）、ＣＤ２サブセット １（ＣＳ－１）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（ＣＳＰＧ４）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫関連抗原１（ＣＴＡＧＥ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ２）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ４０）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、エフリンＡ型受容体２（ＥＰＨＡ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、胎児アセチルコリンエステラーゼ受容体（ＡｃｈＲ）、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１３Ｒα２、カッパ、癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１Ａ）、ラムダ、ルイスＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１－ＣＡＭ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）；黒色腫抗原遺伝子（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥＡ１０、Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡ又はＭＡＲＴ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、癌／精巣抗原 １（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、黒色腫において優先的に発現される抗原（ＰＲＡＭＥ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ－３）、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、栄養膜糖タンパク質（ＴＰＢＧ）、ＮＫＧ２Ｄリガンド、血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ならびにウィルムス腫瘍１（ＷＴ－１）からなる群から選択される、請求項９０又は請求項９１に記載の方法。

【請求項93】

前記ＴＡＡがＭＳＬＮである、請求項９０又は請求項９１に記載の方法。

【請求項94】

前記ＴＡＡがアルファ葉酸受容体（ＦＲα）である、請求項９０又は請求項９１に記載の方法。

【請求項95】

前記ＴＡＡがＭＵＣ１６である、請求項９０又は請求項９１に記載の方法。

【請求項96】

前記治療剤が血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である、請求項８１～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項97】

前記ＶＥＧＦ阻害剤がベバシズマブである、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

前記治療剤がサイトカインである、請求項８１～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項99】

前記サイトカインがＩＬ－２又はマスクドＩＬ－２である、請求項９８に記載の方法。

【請求項100】

前記治療剤が腫瘍溶解性ウイルスである、請求項８１～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項101】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、ＶＳＶ（Ｖｏｙａｇｅｒ Ｖ１）、ＨＳＶ、アデノウイルス、マラバウイルス、麻疹ウイルス、ＮＤＶ、ピコルナウイルス、レオウイルス、又はワクシニアウイルスからなる群から選択される、請求項１００に記載の方法。

【請求項102】

前記腫瘍溶解性ウイルスがＶｏｙａｇｅｒ Ｖ１である、請求項１００に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２２年１月１０日に出願された米国仮特許出願第６３／２９８，１４１号に対する優先権を主張する。前述の出願の全内容が、参照により本明細書中に明示的に組み入れられる。
本発明は、抗ＭＵＣ１６（ムチン１６、細胞表面関連）抗体又はその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、これらのＣＡＲを発現するように遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞、及び固形腫瘍を効果的に治療するためのこれらの組成物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ムチン１６（ＭＵＣ１６）は、また、癌抗原１２５（ＣＡ－１２５）として公知であり、固形腫瘍、例えば卵巣癌などにおいて過剰発現される単一の膜貫通ドメインである。癌細胞上のＭＵＣ１６の発現は、免疫系から腫瘍細胞を保護することが示されている（Ｆｅｌｄｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．２０１４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ，１３：１２９）。ＭＵＣ１６を標的化する抗体（例、オレゴボマブ及びアブゴボマブ）が研究されてきたが、それらは、限定される臨床的成功を有した。したがって、この抗原を標的化する追加の治療が必要とされる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0003】

【非特許文献1】Ｆｅｌｄｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．２０１４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ，１３：１２９

【発明の概要】

【0004】

本開示は、少なくとも部分的に、ＭＵＣ１６ポリペプチドについて特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発見に基づく。具体的には、本明細書中に記載されるＣＡＲは、全長ＭＵＣ１６ポリペプチドのタンパク質分解切断後に細胞の表面上に存在するＭＵＣ１６の断片又は部分について特異的である。本明細書中で実証されるように、開示された抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、驚くべき予想外の特性を含む。実施例においてより詳細に考察されるように、本開示のＣＡＲは、ＩＦＮ－ガンマ放出、高い形質導入効率、及び高い発現により評価される強力な抗原依存的な活性を示す（例、実施例２を参照のこと）。また、本明細書中に開示される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、用量依存的な様式において、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、又は少なくとも７０％の細胞傷害性で抗原依存的な細胞傷害性を示す（実施例３）。さらに、本明細書中に開示される特定の抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、マーカー、例えばＣＤ６２Ｌ及びＣＤ４５ＲＡなどの増加発現を示し（実施例４）、より大きなインビボでの持続性についての潜在能を伴う、より大きなナイーブ様表現型を指している。最後に、本明細書中でテストされた特定の抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、驚くべきことに、インビボでＭＵＣ１６を発現する癌細胞の数の低下を含む、インビボで優れた抗腫瘍活性を実証した（実施例６及び７）。

【0005】

したがって、一部の態様では、本開示は、以下を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する：ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドの一つ又は複数のエピトープに結合する抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片を含む細胞外ドメイン；膜貫通ドメイン、一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、及び一次シグナル伝達ドメイン。一部の態様では、ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、全長ＭＵＣ１６ポリペプチドのタンパク質分解切断後に細胞表面上に残っているＭＵＣ１６の膜近位断片に結合する。一態様では、タンパク質分解切断後に細胞表面上に残っているＭＵＣ１６の断片は、配列番号１５１を含む。一部の態様では、全長ＭＵＣ１６ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで１～１６と番号付けされた１６のウニ精子、エンテロキナーゼ及びアグリン（ＳＥＡ）ドメインを含み、ＭＵＣ１６の断片はＳＥＡドメイン１２～１６を含む。

【0006】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する抗ＭＵＣ１６抗体又は抗原結合断片は、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異的Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異的Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ラクダＩｇ、ＶＨＨ、Ｉｇ ＮＡＲ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）又はその断片からなる群から選択される。一部の態様では、ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片はｓｃＦｖである。

【0007】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７において示される可変軽鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４７、５９、７１、８３、９５、１０７、１１９、１３３、又は１４５のいずれか一つにおいて示される可変軽鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号８において示される可変重鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３４、又は１４６のいずれか一つにおいて示される可変重鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１～３のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号４１～４３、（ｂ）配列番号５３～５５、（ｃ）配列番号６５～６７、（ｄ）配列番号７７～７９、（ｅ）配列番号８９～９１、（ｆ）配列番号１０１～１０３、（ｇ）配列番号１１３～１１５、（ｈ）配列番号１２７～１２９、又は（ｉ）配列番号１３９～１４１のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４～６のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７において示される可変軽鎖アミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号８において示される可変重鎖アミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号４４～４６、（ｂ）配列番号５６～５８、（ｃ）配列番号６８～７０、（ｄ）配列番号８０～８２、（ｅ）配列番号９２～９４、（ｆ）配列番号１０４～１０６、（ｇ）配列番号１１６～１１８、（ｈ）配列番号１３０～１３２、又は（ｉ）配列番号１４２～１４４のいずれか一つにおいて示される一つ又は複数のＣＤＲを含む。

【0008】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変軽鎖アミノ酸配列を含む、又は配列番号７を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４７、５９、７１、８３、９５、１０７、１１９、１３３、もしくは１４５のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変軽鎖アミノ酸配列を含む、又はそれらのいずれか一つを含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変重鎖アミノ酸配列を含む、又は配列番号８を含む。一部の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３４、もしくは１４６のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する可変重鎖アミノ酸配列を含む、又はそれらのいずれか一つを含む。

【0009】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドからである。一部の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるポリペプチドからである。一部の態様では、膜貫通ドメインはＣＤ８αからである。一部の態様では、膜貫通ドメインは、配列番号１５４の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５４の配列を含む。一実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５４と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、膜貫通ドメインは配列番号１５４を含む。

【0010】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からである。一部の態様では、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からなる群から選択される共刺激分子からである。一部の態様では、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からである。一部の態様では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５５の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５５の配列を含む。一実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５５と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは配列番号１５５を含む。

【0011】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、一次シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζからである。一部の態様では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１５６の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５６の配列を含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１５６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは配列番号１５６を含む。

【0012】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、ＣＡＲはヒンジ領域ポリペプチドを含む。一部の態様では、ヒンジ領域ポリペプチドは、ＣＤ８αのヒンジ領域を含む。一部の態様では、ヒンジ領域ポリペプチドは、配列番号１５３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５３の配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは、配列番号１５３と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは配列番号１５３を含む。

【0013】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、ＣＡＲはシグナルペプチドを含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体２（ＧＭ－ＣＳＦＲ２）シグナルポリペプチド、Ｉｇκシグナルポリペプチド、又はＣＤ８αシグナルポリペプチドを含む。一部の態様では、シグナルポリペプチドはＣＤ８αシグナルポリペプチドを含む。一部の態様では、シグナルポリペプチドは、配列番号１５２の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５２の配列を含む。一実施形態では、シグナルポリペプチドは、配列番号１５２と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、シグナルポリペプチドは配列番号１５２を含む。

【0014】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、ＣＡＲは、可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの間に第一のポリペプチドリンカーをさらに含む。一部の態様では、可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの間のポリペプチドリンカーは、配列番号１４～２５のいずれか一つにおいて示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの間のポリペプチドリンカーは、配列番号２４において示される３ｘＧ４Ｓアミノ酸リンカーを含む。

【0015】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、ＣＡＲは、膜貫通ドメインと一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインの間に第二のポリペプチドリンカーをさらに含む。一部の態様では、膜貫通ドメインと一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインの間のポリペプチドリンカーは、ＬＹＣの配列を含む。

【0016】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７において示される可変軽鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域、ならびに配列番号８において示される可変重鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含み；膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ１、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるポリペプチドからであり；一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からなる群から選択される共刺激分子からであり；ならびに一次シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζからである。

【0017】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７において示される可変軽鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域、ならびに配列番号８において示される可変重鎖アミノ酸配列内にＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域を含み；膜貫通ドメインはＣＤ８αからであり；一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からであり；ならびに一次シグナル伝達ドメインは ＣＤ３ζからである。

【0018】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、ＣＡＲは、配列番号９もしくは配列番号１１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する、又は配列番号９もしくは配列番号１１を含むアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＣＡＲは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＣＡＲは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＣＡＲは、配列番号４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９、もしくは１５０のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する、又は配列番号４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９、もしくは１５０のいずれか一つを含むアミノ酸配列を含む。

【0019】

一部の態様では、本開示は、ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドの一つ又は複数のエピトープへの結合について、本明細書中に開示されるＣＡＲと競合するＣＡＲを提供する。

【0020】

一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の態様では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１０もしくは配列番号１２において示される。一部の態様では、本開示は、配列番号１０を含むポリヌクレオチドを提供する。一部の態様では、本開示は、配列番号１２を含むポリヌクレオチドを提供する。一部の態様では、ポリヌクレオチド配列は、配列番号９、１１、４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９、もしくは１５０のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する、又は配列番号９、１１、４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９、もしくは１５０のいずれか一つを含むポリペプチドをコードする。

【0021】

一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。一部の態様では、ベクターは発現ベクターである。一部の態様では、ベクターはエピソームベクターである。一部の態様では、ベクターはウイルスベクターである。一部の態様では、ベクターはレトロウイルスベクターである。一部の態様では、ベクターはレンチウイルスベクターである。一部の態様では、レンチウイルスベクターは、以下からなる群から選択される：ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）；ヒト免疫不全ウイルス２（ＨＩＶ－２）、ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎－脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）。一部の態様では、ベクターはアデノ随伴ウイルスベクターである。

【0022】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、ベクターは、左（５’）レトロウイルスＬＴＲ、Ｐｓｉ（Ψ）パッケージングシグナル、セントラルポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、レトロウイルスエクスポートエレメント；本明細書中に記載されるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーター；及び右（３’）レトロウイルスＬＴＲを含む。一部の態様では、ベクターは異種ポリアデニル化配列を含む。一部の態様では、５’ＬＴＲのプロモーターは、異種プロモーターで置換される。一部の態様では、異種プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、又はサルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーターである。一部の態様では、５’ＬＴＲ又は３’ＬＴＲはレンチウイルスＬＴＲである。一部の態様では、３’ＬＴＲは一つ又は複数の修飾を含む。一部の態様では、３’ＬＴＲは一つ又は複数の欠失を含む。一部の態様では、３’ＬＴＲは自己不活性化（ＳＩＮ）ＬＴＲである。一部の態様では、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターは、サイトメガロウイルス即時初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ）、伸長因子１アルファプロモーター（ＥＦ１－α）、ホスホグリセリン酸キナーゼ－１プロモーター（ＰＧＫ）、ユビキチン－Ｃプロモーター（ＵＢＱ－Ｃ）、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータ－アクチンプロモーター（ＣＡＧ）、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（ＭＣ１）、ベータアクチンプロモーター（β－ＡＣＴ）、サルウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、及び骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、ネガティブコントロール領域欠失型、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーターからなる群から選択される。一部の態様では、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターは、ＭＮＤプロモーターである。

【0023】

一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載されるベクターを含む細胞を提供する。一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載されるＣＡＲを含む細胞を提供する。一部の態様では、細胞は免疫エフェクター細胞である。一部の態様では、免疫エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、又はヘルパーＴ細胞である。一部の態様では、細胞はＴ細胞である。一部の態様では、細胞は、αβ Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。

【0024】

一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載される細胞を含む組成物を提供する。一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載される細胞及び生理学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。

【0025】

一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド又はベクターを免疫エフェクター細胞中に導入することを含む、本明細書中に記載されるＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞を生成する方法を提供する。

【0026】

一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載される組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする対象において癌を治療する方法を提供する。一部の態様では、癌は固形癌であり、場合により、固形癌はＭＵＣ１６を発現する。一部の態様では、固形癌は、肉腫、前立腺癌、子宮癌、甲状腺癌、精巣癌、腎癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮頸部、中皮腫、食道癌、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、黒色腫、肝細胞癌、頭頸部癌、胃癌、子宮内膜癌、卵管癌、結腸直腸癌、胆管癌、乳癌、及び膀胱癌からなる群から選択される。一部の態様では、固形癌は、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、中皮腫、ＮＳＣＬＣ、及びＳＣＬＣからなる群から選択される。一部の態様では、固形癌は卵巣癌である。

【0027】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、組成物は、追加の治療剤との組み合わせにおいて投与される。

【0028】

一部の態様では、本開示は、本明細書中に記載される組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、治療剤を受けた、又は受けている対象において癌を治療する方法を提供する。

【0029】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、組成物及び治療剤は、連続的に又は同時に投与される。

【0030】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、治療剤は、免疫チェックポイント阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、又は共刺激性抗体である。一部の態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群から選択されるチェックポイントタンパク質又は対応するリガンドに結合する：プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１）、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメインタンパク質３（ＴＩＭ－３）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、バンドＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、Ｔ細胞免疫グロブリン及び免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフドメイン（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ４７、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ならびにＣＤ７０。一部の態様では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である。一部の態様では、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片である。一部の態様では、ＰＤ－１阻害剤は、以下からなる群から選択される：ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、及びセミプリマブ。

【0031】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、共刺激性抗体は二重特異的抗体である。一部の態様では、二重特異的抗体は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）及びＣＤ３に結合する。一部の態様では、二重特異的抗体はＴＡＡ及びＣＤ２８に結合する。一部の態様では、ＴＡＡは、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥタンパク質、β－カテニン、ｂｒｃ－ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ８、ＣＣＲ５、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、Ｆｒａ－１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥ タンパク質（例、ＧＡＧＥ－１、－２）、ＧＤ２、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ－ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ－ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ－Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＲＴ－１、ＭＬ－ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ－ＢＲ１、ＮＹ－ＢＲ６２、ＮＹ－ＢＲ８５、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ－１、ＰＲＬＲ、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、Ｓｔｅａｐ－１、Ｓｔｅａｐ－２、サバイビン、ＴＧＦ－β、ＴＭＰＲＳＳ２、Ｔｎ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、ウロプラキン３、アルファ葉酸受容体（ＦＲα）、αｖβ６インテグリン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ６、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＣＲ１、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５（また、ｆｍｃ様チロシンキナーゼ３；ＦＬＴ３として公知である）、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、クローディン ６（ＣＬＤＮ６）、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＣＤ２サブセット１（ＣＳ－１）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（ＣＳＰＧ４）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫関連抗原１（ＣＴＡＧＥ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ２）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ４０）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、エフリンＡ型受容体２（ＥＰＨＡ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、胎児アセチルコリンエステラーゼ受容体（ＡｃｈＲ）、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１３Ｒα２、カッパ、癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１Ａ）、ラムダ、ルイスＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１－ＣＡＭ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）；黒色腫抗原遺伝子（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥＡ１０、Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡ又はＭＡＲＴ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、癌／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、黒色腫において優先的に発現される抗原（ＰＲＡＭＥ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ－３）、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、栄養膜糖タンパク質（ＴＰＢＧ）、ＮＫＧ２Ｄリガンド、血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ならびにウィルムス腫瘍１（ＷＴ－１）からなる群から選択される。一部の態様では、ＴＡＡはＭＳＬＮである。一部の態様では、ＴＡＡはアルファ葉酸受容体（ＦＲα）である。一部の態様では、ＴＡＡはＭＵＣ１６である。

【0032】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、治療剤は血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である。一実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤はベバシズマブである。一実施形態では、治療剤はサイトカインである。一実施形態では、サイトカインはＩＬ－２又はマスクドＩＬ－２である。一実施形態では、治療剤は腫瘍溶解性ウイルスである。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＶＳＶ（Ｖｏｙａｇｅｒ Ｖ１）、ＨＳＶ、アデノウイルス、マラバウイルス、麻疹ウイルス、ＮＤＶ、ピコルナウイルス、レオウイルス、又はワクシニアウイルスからなる群から選択される。一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはＶｏｙａｇｅｒ Ｖ１である。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】図１は、ＭＵＣ１６ポリペプチドの概略図である。

【図2】図２は、示されるＭＵＣ１６ ＣＡＲベクターの各々で形質導入された健常なドナーＴ細胞からのベクターコピー数（ＶＣＮ）を示すグラフである。

【図3】図３は、示されるＭＵＣ１６ ＣＡＲベクターの各々で形質導入された健常なドナーＴ細胞上のＣＡＲ発現を示すグラフである。

【図4A】図４Ａは、ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からのＩＦＮγ放出を示すグラフである。

【図4B】図４Ｂは、ＭＵＣ１６を発現するＯＶＣＡＲ３細胞の存在において共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からのＩＦＮγ放出を示すグラフである。

【図4C】図４Ｃは、ＭＵＣ１６を発現しないＪｕｒｋａｔ細胞の存在において共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からのＩＦＮγ放出を示すグラフである。

【図4D】図４Ｄは、ＭＵＣ１６を発現しないＰＡＮＣ－１細胞の存在において共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からのＩＦＮγ放出を示すグラフである。

【図5】図５は、抗原陰性腫瘍細胞株（Ｊｕｒｋａｔ、ＰＡＮＣ－１、ＨＵＨ７、Ｋ５６２、Ａ５４９、及びＲＤ）の存在において共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からのＩＦＮγ放出を示す。

【図6A】図６Ａは、高レベル、中レベル、又は低レベルのＭＵＣ１６外部ドメインを安定的に発現するＲＤ細胞におけるＭＵＣ１６外部ドメイン発現を示す。

【図6B】図６Ｂは、高レベル、中レベル、又は低レベルのＭＵＣ１６外部ドメインを安定的に発現するＲＤ細胞と共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からのＩＦＮγ放出を示す。

【図7A】図７Ａは、滴定量のＭＵＣ１６ ｎｕｂ ｍＲＮＡでエレクトロポレーションされたＫ５６２腫瘍細胞におけるＭＵＣ１６ ｎｕｂ ｍＲＮＡコピー数を示す。

【図7B】図７Ｂは、滴定量のエレクトロポレーションされたＭＵＣ１６ ｎｕｂ ｍＲＮＡを発現するＫ５６２腫瘍細胞と共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からのＩＦＮγ放出を示す。

【図8A】図８Ａは、１０：１、５：１、及び２．５：１のエフェクター対Ｔ細胞（Ｅ：Ｔ）比率で、高レベル、中レベル、又は低レベルのＭＵＣ１６外部ドメインを安定的に発現するＲＤ細胞と共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害性を示す。

【図8B】図８Ｂは、２．５：１のエフェクター対Ｔ細胞（Ｅ：Ｔ）比率で、高レベル、中レベル、又は低レベルのＭＵＣ１６外部ドメインを安定的に発現するＲＤ細胞と共培養されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害性を示す。

【図9】図９は、ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞のフローサイトメトリーを介した表現型マーカーの分析を示す。

【図10A】図１０Ａ及び１０Ｂは、ＭＵＣ１６－ｎｕｂ外部ドメイン（図１０Ａ）又はＣＡ１２５（図１０Ｂ）の存在において培養された抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ発現細胞によるＩＦＮγ産生を示すグラフを提供する。

【図10B】同上。

【図11】図１１は、ルシフェラーゼ発現における低下により示されるように、ＭＵＣ１６及びルシフェラーゼ発現ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ腫瘍細胞の低下を示すグラフである。マウスをＯＶＣＡＲ３．ＦＰ細胞で接種した後の１４日に、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置されたマウスは、ルシフェラーゼにおける低下を示した。マウスを、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与した後の２８日に、ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ腫瘍細胞で再チャレンジし、腫瘍細胞が低下し、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞の持続を示している。対照は、非形質導入細胞（ＵＴＤ）、未処置マウス（ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ）、及び溶媒のみ（溶媒）で形質導入された細胞であった。

【図12A】図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃは、ＯＶＣＡＲ３腫瘍細胞で接種されたＮＧＳマウスにおいて、示された抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示す。

【図12B】同上。

【図12C】同上。

【図13A】図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃは、ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ ＩＰ腫瘍モデルにおいて、示された抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示す。

【図13B】同上。

【図13C】同上。

【発明を実施するための形態】

【0034】

配列識別子の簡単な説明
配列番号１～３は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号４～６は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号７は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号８は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１０は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのヌクレオチド配列を示す。
配列番号１１は、本明細書中で企図される例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２は、本明細書中で企図される例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのヌクレオチド配列を示す。
配列番号１３は、ヒトＭＵＣ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４～２５は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲにおける使用のために適切な例示的なリンカーのアミノ酸配列を示す。
配列番号２６～３５は、例示的な２Ａ切断部位のアミノ酸配列を示す。
配列番号３６～３８は、例示的な切断部位のアミノ酸配列を示す。
配列番号３９は、ｍｙｃ－ｍｙｃ－ｈｉｓタグを含むタンパク質分解切断後のヒトＭＵＣ１６断片のアミノ酸配列を示す。
配列番号４０は、ｎｕｂ外部ドメイン抗原（ＣＡ１２５）を欠くヒトＭＵＣ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号４１～４３は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号４４～４６は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号４７は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号４８は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号４９は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号５０は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号５１は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号５２は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号５３～５５は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号５６～５８は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号５９は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号６０は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号６１は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号６２は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号６３は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号６４は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号６５～６７は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号６８～７０は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号７１は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号７２は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号７３は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号７４は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号７５は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号７６は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号７７～７９は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号８０～８２は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号８３は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号８４は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号８５は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号８６は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号８７は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号８８は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号８９～９１は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号９２～９４は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号９５は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９６は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９７は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号９８は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号９９は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１００は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１０１～１０３は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１０４～１０６は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１０７は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０８は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０９は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１０は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１１は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１２は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１３～１１５は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１６～１１８は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１９は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２０は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２１は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２２は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２３は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２４は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２５は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２６は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２７～１２９は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１３０～１３２は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１３３は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３４は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３５は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１３６は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１３７は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１３８は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１３９～１４１は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１４２～１４４は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１４５は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４６は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲについての抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖの例示的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４７は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１４８は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１４９は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを欠く例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５０は、本明細書中で企図されるシグナルペプチドを含む例示的な抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５１は、ｍｙｃ－ｍｙｃ－ｈｉｓタグを欠くタンパク質分解切断後のヒトＭＵＣ１６断片のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５２は、本明細書中で企図される例示的なシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５３は、本明細書中で企図される例示的なヒンジ領域ペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５４は、本明細書中で企図される例示的な膜貫通領域ペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５５は、本明細書中で企図される例示的な共刺激ペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５６は、本明細書中で企図される例示的なシグナル伝達領域ペプチドのアミノ酸配列を示す。

【0035】

詳細な説明
Ａ．概説
一部の実施形態では、本開示は、ＭＵＣ１６についての結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。ＭＵＣ１６はまた、癌抗原１２５、癌腫抗原１２５、糖抗原１２５、又はＣＡ－１２５として公知であり、高度にグリコシル化された一体型膜糖タンパク質である。ＭＵＣ１６は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、肝内胆管癌－腫瘤形成型、子宮頸部の腺癌、及び胃管の腺癌を含む癌において、ならびに炎症性腸疾患、肝硬変、心不全、腹膜感染、及び腹部手術を含む疾患及び状態において過剰発現される。（Ｈａｒｉｄａｓ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，２８：４１８３－４１９９）、及び癌細胞上のＭＵＣ１６の発現は、癌細胞を免疫系から保護することが示されている（Ｆｅｌｄｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ，１３：１２９）。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６についての結合ドメインを含むＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞は、驚くべきことに、癌細胞と共培養された場合に、非形質導入エフェクター細胞と比較して、増加した免疫応答及び細胞傷害性を示す。

【0036】

ＭＵＣ１６は、三つの主要ドメイン：細胞外Ｎ末端ドメイン、ウニ精子、エンテロキナーゼ、及びアグリン（ＳＥＡ）ドメインが散在する大きなタンデムリピートドメイン、ならびに膜貫通領域のセグメント及び短い細胞質テールを含むカルボキシル末端ドメインからなる単一の膜貫通ドメインを含む。図１は、ＭＵＣ１６のドメインを示す概略図を提供する。ＭＵＣ１６のタンパク質分解切断時に、細胞外部分の大部分が血流中に脱落する。ＭＵＣ１６の断片は、細胞の表面上に残る。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６は、Ｎ末端からＣ末端まで１～１６と番号付けられた、ポリペプチドのＣ末端に１６のＳＥＡドメインを含む。一部の実施形態では、細胞の表面上に残っているＭＵＣ１６断片は、ＳＥＡドメイン１２～１６を含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載されるＣＡＲは、ＭＵＣ１６のＳＥＡドメイン１２～１６に選択的に結合する。一部の実施形態では、本明細書中に記載されるＣＡＲは、ＭＵＣ１６のＳＥＡドメイン１～１１に結合しない。

【0037】

組み換え（即ち、操作された）ＤＮＡ、ペプチド及びオリゴヌクレオチド合成、免疫アッセイ、組織培養、形質変換（例、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、精製ならびに関連する技術及び手法が、本明細書を通じて引用され、考察されるように、微生物学、分子生物学、生化学、分子遺伝学、細胞生物学、ウイルス学及び免疫学における様々な一般的及びより具体的な参考文献において記載されるように一般的に実施されてもよい。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、２００８年７月に更新）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ ＵＳＡ，１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ：Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ ２００１ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ）；Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｊｕｌｉｅ Ｌｏｇａｎ，Ｋｉｒｓｔｉｎ Ｅｄｗａｒｄｓ ａｎｄ Ｎｉｃｋ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，２００９，Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＵＫ；Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）；Ｇｕｔｈｒｉｅ ａｎｄ Ｆｉｎｋ，Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，Ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｎｅｘｔ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｊａｎｉｔｚ，２００８ Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ）；ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｐａｒｋ，Ｅｄ．，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ ＣＣ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）；Ｒｏｉｔｔ，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８８）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ ａｎｄ Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）；Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ならびに学術誌、例えばＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙなどにおける研究論文を参照のこと。

【0038】

Ｂ．定義
他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者により普遍的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載するものと類似の又は均等の方法及び材料を、特定の実施形態の実施又は検証において使用することができるが、組成物、方法、及び材料の好ましい実施形態が本明細書中に記載されている。本開示の目的に対し、以下の用語を下に定義する。

【0039】

冠詞「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、当該冠詞の文法上の対象の一つ又は複数（即ち、少なくとも一つ、あるいは一つ又は複数）を指すために本明細書中で使用される。例示として、「エレメント（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、一つのエレメント、あるいは一つ又は複数のエレメントを意味する。

【0040】

選択肢（例、「又は」）の使用は、いずれか一つ、両方、又はその選択肢の任意の組み合わせを意味すると理解されたい。

【0041】

用語「及び／又は」は、いずれか一つ、又はその選択肢の両方を意味すると理解されたい。

【0042】

本明細書中で使用される場合、用語「約」又は「およそ」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さに対し、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％までも変化する数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さを指す。一実施形態では、用語「約」又は「およそ」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さに関し、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％又は±１％の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さの範囲を指す。

【0043】

一部の実施形態では、範囲、例えば、１～５、約１～５、又は約１～約５は、この範囲により包含される各数値を指す。例えば、一つの非限定的かつ単に例証的な実施形態では、範囲「１～５」は、表現１、２、３、４、５、又は１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、もしくは５．０、又は１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、もしくは５．０と同等である。

【0044】

本明細書中で使用するように、用語「実質的に」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さ、又は長さと比較して、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上である数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、又は長さを指す。一実施形態では、「実質的に同じ」は、基準の量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量又は長さとほぼ同じである効果、例えば、生理学的効果を産生する量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、又は長さを指す。

【0045】

本明細書全体を通じて、文脈が別段要求しない限り、言葉「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含むこと」は、述べられている工程もしくは要素又は工程もしくは要素の群の包含を暗示するが、任意の他の工程もしくは要素又は工程もしくは要素の群の除外を暗示しないことが理解されるであろう。「～からなる」により、語句「からなる」に続くもの全てを含み、それらに限定されることを意味する。このように、語句「～からなる」は、列挙される要素が要求される又は義務であり、他の要素は存在しないであろうことを示す。「本質的に～からなる」は、当該語句の後に列挙される任意の要素、及び列挙される要素に関して本開示中に特定される活性もしくは作用に干渉しない、又は寄与しない他の要素に限定される任意の要素を含むことを意味する。このように、語句「本質的に～からなる」は、列挙される要素が必須又は義務であり、しかし、列挙される要素の活性又は作用に実質的に影響を及ぼす他の要素は存在しないことを示す。

【0046】

本明細書全体を通じて「一実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態（ａ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「関連する実施形態」、「特定の実施形態（ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「追加的な実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、又はそれらの組み合わせに対する参照は、当該実施形態と関連付けて記載される特定の性質、構造又は特徴が、少なくとも一つの実施形態において含まれることを意味する。このように、本明細書全体の様々な箇所での前述の語句の出現は、必ずしも全てが同じ実施形態を指しているわけではない。さらに、特定の性質、構造、又は特徴は、一つ又は複数の実施形態において任意の適切な様式において組み合わされ得る。また、一実施形態でのある性質の肯定的な列挙は、特定の実施形態では当該性質の除外の根拠として機能することを理解されたい。

【0047】

Ｃ．キメラ抗原受容体
一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞の細胞傷害性を、ＭＵＣ１６発現細胞に対して向け直す、改善された、遺伝子操作された受容体が提供される。これらの遺伝子操作された受容体は、本明細書中では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）として言及される。ＣＡＲは、所望の抗原（例、ＭＵＣ１６）についての抗体ベースの特異性を、Ｔ細胞受容体活性化細胞内ドメインと組み合わせて、特異的な抗ＭＵＣ１６細胞免疫活性を示すキメラタンパク質を生成する分子である。本明細書中で使用される場合、用語「キメラ」は、異なる起源からの異なるタンパク質又はＤＮＡの部分で構成されていることを記載する。

【0048】

一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、ＭＵＣ１６に結合する細胞外ドメイン（また、結合ドメイン又は抗原特異的結合ドメインとして言及される）、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＡＲの抗ＭＵＣ１６抗原結合ドメインの、標的細胞の表面上のＭＵＣ１６との会合によって、ＣＡＲのクラスター化がもたらされ、ＣＡＲ含有細胞に活性化刺激が伝達される。ＣＡＲの主な特徴は、免疫エフェクター細胞の特異性を向け直させるそれらの能力であり、それにより、増殖、サイトカイン産生、ファゴサイトーシス、又は標的抗原発現細胞の細胞死を、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）非依存的な様式において媒介し得る分子の産生が誘発され、モノクローナル抗体、可溶性リガンド又は細胞特異的コレセプターの細胞特異的標的化能力が引き出される。

【0049】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒト抗ＭＵＣ１６特異的結合ドメインを含む細胞外結合ドメイン；膜貫通ドメイン；一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；及び一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0050】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒト抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片を含む細胞外結合ドメイン；一つ又は複数のヒンジドメイン又はスペーサードメイン；膜貫通ドメイン；一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；及び一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0051】

１．結合ドメイン
一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、標的細胞（例、癌細胞）上に発現されるヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに特異的に結合する抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片を含む細胞外結合ドメインを含む。用語「ＭＵＣ１６」は、本明細書中で使用される場合、非ヒト種（例、「マウスＭＵＣ１６」、「サルＭＵＣ１６」など）からであるとして特定されない限り、ヒトＭＵＣ１６タンパク質を指す。ＭＵＣ１６は、三つの主要なドメイン：細胞外Ｎ末端ドメイン、ウニ精子、エンテロキナーゼ、アグリン（ＳＥＡ）ドメインが散在する大きなタンデムリピートドメイン、ならびに膜貫通領域のセグメント及び短い細胞質テールを含むカルボキシル末端ドメインを含む。ヒトＭＵＣ１６タンパク質は、配列番号１３において示されるアミノ酸配列を有し、及び／又はＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿０７８９６６において示されるアミノ酸配列を有している。ｍｙｃ－ｍｙｃ－ｈｉｓタグを有するヒトＭＵＣ１６膜近位ドメイン（Ｐ１３８１０－Ｐ１４４５１）（ＭＵＣ１６“ｎｕｂ”）を、配列番号３９として示す。ｍｙｃ－ｍｙｃ－ｈｉｓタグを欠くヒトＭＵＣ１６膜近位ドメイン（Ｐ１３８１０－Ｐ１４４５１）（ＭＵＣ１６“ｎｕｂ”）を、配列番号１５１として示す。用語「ＣＡ１２５」は、本明細書中で使用される場合、配列番号４０として示されるＭＵＣ１６膜近位ドメイン（ＭＵＣ１６“ｎｕｂ”）を欠くヒトＭＵＣ１６ポリペプチドを指す。

【0052】

本明細書中で使用される用語「ＭＵＣ１６－ｎｕｂ」、「ｎｕｂ」、「ＭＵＣ１６外部ドメイン」、「ＭＵＣ１６－ｎｕｂ外部ドメイン」、及び「外部ドメイン」は互換性があり、切断後に細胞表面上に残っている膜近位ＭＵＣ１６ポリペプチドドメイン又は断片を指す。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６－ｎｕｂ外部ドメインはＳＥＡドメイン１２～１６を含む。

【0053】

本明細書中で使用される場合、用語「結合ドメイン」、「細胞外ドメイン」、「細胞外結合ドメイン」、「抗原特異的結合ドメイン」、及び「細胞外抗原特異的結合ドメイン」は互換的に使用され、目的の標的抗原、例えば、ＭＵＣ１６に特異的に結合する能力を伴うＣＡＲを提供する。結合ドメインは、天然、合成、半合成、又は組み換えの供給源のいずれかから由来し得る。

【0054】

本明細書中で使用される用語「特異的結合親和性」又は「特異的に結合する」又は「特異的に結合した」又は「特異的結合」又は「特異的に標的化する」は、バックグラウンド結合よりも大きな結合親和性での、ＭＵＣ１６への抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片（又は同を含むＣＡＲ）の結合を記載する。結合ドメイン（又は結合ドメインもしくは結合ドメインを含む融合タンパク質を含むＣＡＲ）は、それが、例えば、約１０^５Ｍ^－１より大きい又はそれと等しい親和性又はＫ_ａ（即ち、１／Ｍの単位を伴う特定の結合相互作用の平衡会合定数）でＭＵＣ１６に結合又は会合する場合、ＭＵＣ１６に「特異的に結合」する。特定の実施形態では、結合ドメイン（又は融合タンパク質）は、約１０^６Ｍ^－１、１０^７Ｍ^－１、１０^８Ｍ^－１、１０^９Ｍ^－１、１０^１０Ｍ^－１、１０^１１Ｍ^－１、１０^１２Ｍ^－１、又は１０^１３Ｍ^－１より大きな又はそれと等しいＫａで標的に結合する。「高親和性」結合ドメイン（又はその一本鎖融合タンパク質）は、少なくとも１０^７Ｍ^－１、少なくとも１０^８Ｍ^－１、少なくとも１０^９Ｍ^－１、少なくとも１０^１０Ｍ^－１、少なくとも１０^１１Ｍ^－１、少なくとも１０^１２Ｍ^－１、少なくとも１０^１３Ｍ^－１又はそれより大きいＫ_ａを有する結合ドメインを指す。

【0055】

あるいは、親和性は、Ｍ単位（例えば、１０^－５Ｍ～１０^－１３Ｍ、又はそれ未満）での特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋ_ｄ）として定義されてもよい。本開示による結合ドメインポリペプチド及びＣＡＲタンパク質の親和性は、従来の技術を使用して、例えば、競合ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、又は結合会合、もしくは標識リガンドを使用した置換アッセイにより、又はＢｉａｃｏｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪから入手可能な表面プラズモン共鳴装置、例えばＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００など、又はＣｏｒｎｉｎｇ及びＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒからそれぞれ入手可能な光学バイオセンサ技術、例えばＥＰＩＣシステム又はＥｎＳｐｉｒｅなどを使用して容易に決定することができる（また、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９４９）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０；及び米国特許第５，２８３，１７３号；第５，４６８，６１４号、又は等価物を参照のこと）。

【0056】

一部の実施形態では、特異的結合の親和性は、バックグラウンド結合より約２倍大きい、バックグラウンド結合より約５倍大きい、バックグラウンド結合より約１０倍大きい、バックグラウンド結合より約２０倍大きい、バックグラウンド結合より約５０倍大きい、バックグラウンド結合より約１００倍大きい、又はバックグラウンド結合より約１０００倍大きい、又はそれ以上である。

【0057】

一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、抗体又はその抗原結合断片を含む。「抗体」は、抗原のエピトープ、例えばペプチド、脂質、多糖類、又は抗原決定基を含む核酸など、例えば免疫細胞により認識されるものなどを特異的に認識し、結合する軽鎖又は重鎖免疫グロブリン可変領域を少なくとも含むポリペプチドである結合剤を指す。

【0058】

「抗原（Ａｇ）」は、動物中へ注射又は吸収される組成物（例、癌特異的タンパク質を含む組成物など）を含む、動物において抗体産生又はＴ細胞応答を刺激し得る化合物、組成物、又は物質を指す。抗原は、異種抗原、例えば開示される抗原などにより誘導される産物を含む、特異的な液性免疫又は細胞性免疫の産物と反応する。一部の実施形態では、標的抗原は、ＭＵＣ１６ポリペプチドのエピトープである。

【0059】

「エピトープ」又は「抗原性決定基」は、結合剤が結合する抗原の領域を指す。エピトープは、タンパク質の三次フォールディングにより並置される連続アミノ酸又は非連続アミノ酸の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には変性溶媒への曝露で保持される一方で、三次フォールディングにより形成されるエピトープは、典型的には変性溶媒を用いた処理で失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間構造に少なくとも３つ、より一般的には少なくとも５つ、約９つ、又は約８～１０のアミノ酸を含む。

【0060】

抗体は、その抗原結合断片、例えばラクダＩｇ、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）など、及び抗原結合について関与する全長抗体の部分を含む。この用語はまた、遺伝子操作された形態、例えばキメラ抗体（例、ヒト化マウス抗体）、ヘテロ共役抗体（二重特異的抗体など）、及びその抗原結合断片などを含む。また、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４－１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、イリノイ州ロックフォード）；Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９７を参照のこと。

【0061】

本明細書中で使用される場合、表現「二重特異的抗体」は、少なくとも第一の抗原結合ドメイン及び第二の抗原結合ドメインを含む抗体を意味する。二重特異的抗体内の各抗原結合ドメインは、単独で、あるいは一つ又は複数の追加のＣＤＲ及び／もしくはＦＲとの組み合わせにおいて、特定の抗原に特異的に結合する少なくとも一つのＣＤＲを含む。

【0062】

当業者により理解されるであろうように、及び本明細書の他の箇所に記載されるように、完全抗体は、二つの重鎖及び二つの軽鎖を含む。各重鎖は、可変領域と、第一、第二、及び第三の定常領域からなる一方で、各軽鎖は、可変領域及び定常領域からなる。哺乳動物の重鎖はα、δ、ε、γ、及びμに分類される。哺乳動物の軽鎖はλ又はκに分類される。α、δ、ε、γ、及びμ重鎖を含む免疫グロブリンは、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ａ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに分類される。完全抗体は“Ｙ”形状を形成する。Ｙの幹は、一緒に結合された二つの重鎖の第二及び第三の定常領域（またＩｇＥ及びＩｇＭについては、第四の定常領域）から成り、ジスルフィド結合（鎖間）がヒンジに形成される。重鎖γ、α及びδは、三つのタンデム（列中）Ｉｇドメインで構成される定常領域、追加の柔軟性のためのヒンジ領域を有し；重鎖μ及びεは、四つの免疫グロブリンドメインで構成される定常領域を有する。第二及び第三の定常領域は、それぞれ「ＣＨ２ドメイン」及び「ＣＨ３ドメイン」として言及される。Ｙの各アームは、単一の軽鎖の可変領域及び定常領域に結合された単一の重鎖の可変領域及び第一の定常領域を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合に関与する。

【0063】

軽鎖及び重鎖可変領域は、また、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」と呼ばれる、三つの超可変領域により中断される「フレームワーク」領域を含む。ＣＤＲは、従来の方法、例えばＫａｂａｔらに従った配列（Ｗｕ，ＴＴ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１３２（２）：２１１－５０，（１９７０）；Ｂｏｒｄｅｎ，Ｐ．ａｎｄ Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．，ＰＮＡＳ，８４：２４４０－２４４３（１９８７）；（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１を参照のこと。それは、参照により本明細書により組み入れられる）、又はＣｈｏｔｈｉａらに従った構造（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６（４）：９０１－９１７（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８８３（１９８９））などにより定義又は同定することができる。

【0064】

異なる軽鎖又は重鎖のフレームワーク領域の配列は、種、例えばヒトなどの内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域は、構成軽鎖及び重鎖の結合フレームワーク領域であり、三次元空間においてＣＤＲを位置付け、整列させる役割を果たす。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの結合を主に担う。各鎖のＣＤＲは、典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として言及され、Ｎ末端から連続的に番号付けされ、また典型的には、特定のＣＤＲが位置付けられる鎖により特定される。このように、抗体の重鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３として言及されるのに対し、抗体の軽鎖の可変ドメイン内に位置するＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３として言及される。異なる特異性を有する抗体（即ち、異なる抗原に対する異なる結合部位）は、異なるＣＤＲを有する。抗体ごとに異なるのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを構築するために適切である軽鎖ＣＤＲの例証的な例は、限定されないが、配列番号１～３において示されるＣＤＲ配列を含む。本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを構築するために適切である重鎖ＣＤＲの例証的な例は、限定されないが、配列番号４～６において示されるＣＤＲ配列を含む。

【0065】

軽鎖ＣＤＲを予測するための規則の例証的な例は、以下を含む：ＣＤＲ－Ｌ１は、約残基２４で開始し、Ｃｙｓにより先行され、約１０～１７残基であり、Ｔｒｐ（典型的には、Ｔｒｐ－Ｔｙｒ－Ｇｌｎ、しかし、また、Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ、Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ、Ｔｒｐ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ）が続き；ＣＤＲ－Ｌ２は、ＣＤＲ－Ｌ１の末端後に約１６残基で開始し、一般的にＩｌｅ－Ｔｙｒ、しかし、また、Ｖａｌ－Ｔｙｒ、Ｉｌｅ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｐｈｅにより先行され、７残基であり；及びＣＤＲ－Ｌ３は、ＣＤＲ－Ｌ２の末端後に約３３残基で開始し、Ｃｙｓにより先行され、７～１１残基であり、Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－ＸＸＸ－Ｇｌｙ（ＸＸＸは任意のアミノ酸である）が続く。

【0066】

重鎖ＣＤＲを予測するための規則の例証的な例は、以下を含む：ＣＤＲＨ１は、約残基２６で開始し、Ｃｙｓ－ＸＸＸ－ＸＸＸ－ＸＸＸにより先行され、１０～１２残基であり、Ｔｒｐ（典型的にはＴｒｐ－Ｖａｌ、しかし、また、Ｔｒｐ－Ｉｌｅ、Ｔｒｐ－Ａｌａ）が続き；ＣＤＲ－Ｈ２は、ＣＤＲ－Ｈ１の末端後に約１５残基で開始し、一般的にＬｅｕ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ、又は多数のバリエーションにより先行され、１６～１９残基であり、Ｌｙｓ／Ａｒｇ－Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ－Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａが続き；ＣＤＲ－Ｈ３は、ＣＤＲ－Ｈ２の末端後に約３３残基で開始し、Ｃｙｓ－ＸＸＸ－ＸＸＸ（典型的にはＣｙｓ－Ａｌａ－Ａｒｇ）により先行され、３～２５残基であり、Ｔｒｐ－Ｇｌｙ－ＸＸＸ－Ｇｌｙが続く。

【0067】

一部の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ方法に従って決定される。一部の実施形態では、軽鎖ＣＤＲならびに重鎖ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ方法に従って決定され、重鎖ＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ方法及びＣｌｏｔｈｉａ方法の間に含まれるＡｂＭ方法に従って決定され、例えば、Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ Ｎ＆Ｒｅｅｓ ＡＲ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２０００ Ｄｅｃ；１３（１２）：８１９－２４及びＭｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００４；２４８：５１－９１を参照のこと。ＣＤＲを予測するためのプログラムは、例えば、ＡｂＹｓｉｓ（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｙｓｉｓ／）において公的に利用可能である。

【0068】

「ＶＨ」又は「ＶＨ」への言及は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ又は本明細書中に開示される他の抗体断片を含む、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」又は「ＶＬ」への言及は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ又は本明細書中に開示される他の抗体断片を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。

【0069】

「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一クローンにより、又は単一抗体の軽鎖及び重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞により産生される抗体である。モノクローナル抗体は、例えば、骨髄腫細胞と免疫脾臓細胞の融合からハイブリッド抗体形成細胞を作製することにより、当業者に公知の方法により産生される。モノクローナル抗体はヒト化モノクローナル抗体を含む。

【0070】

「キメラ抗体」は、一つの種、例えばヒトなどから由来するフレームワーク残基、及び別の種、例えばマウスなどから由来するＣＤＲ（一般的に、抗原結合を付与する）を有する。特に好ましい実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、キメラ抗体又はその抗原結合断片である抗原特異的結合ドメインを含む。

【0071】

「ヒト化」抗体は、ヒトフレームワーク領域及び非ヒト（例えば、マウス、ラット、又は合成）免疫グロブリンからの一つ又は複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。

【0072】

特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片は、限定されないが、ラクダＩｇ（ラクダ科抗体（ＶＨＨ））、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）を含む。

【0073】

本明細書中で使用される場合、「Ｃａｍｅｌ Ｉｇ」又は「ラクダ科ＶＨＨ」は、重鎖抗体の最小の公知の抗原結合単位を指す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ、ｅｔ ａｌ、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、２１：３４９０－３４９８（２００７））。「重鎖抗体」又は「ラクダ科抗体」は、二つのＶＨドメインを含み、軽鎖を含まない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．方法２３１：２５－３８（１９９９）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。

【0074】

「免疫グロブリン新規抗原受容体」の「ＩｇＮＡＲ」は、一つの可変新規抗原受容体（ＶＮＡＲ）ドメイン及び五つの定常新規抗原受容体（ＣＮＡＲ）ドメインのホモ二量体からなるサメ免疫レパートリーからの抗体のクラスを指す。ＩｇＮＡＲは、最も小さい公知の免疫グロブリンベースのタンパク質足場の一部を表し、高度に安定であり、効率的な結合特性を持つ。固有の安定性は、（ｉ）マウス抗体にみられる従来の抗体ＶＨドメイン及びＶＬドメインと比較して、かなりの数の荷電及び親水性表面曝露残基を表す基礎となるＩｇ足場、ならびに（ｉｉ）ループ間ジスルフィド架橋を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）ループにおける構造的性質、及びループ内水素結合のパターンの安定化の両方に起因し得る。

【0075】

抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗原結合部位、及び名称が容易に結晶化するその能力を反映する、残存「Ｆｃ」断片を有する、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる二つの同一の抗原結合断片を産生する。ペプシン処理は、二つの抗原結合部位を有し、なおも抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片を生成する。

【0076】

「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含む最小抗体断片である。一実施形態では、二本鎖Ｆｖ種は、緊密な非共有結合の会合における一つの重鎖可変ドメインと一つの軽鎖可変ドメインとの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、一つの重鎖可変ドメイン及び一つの軽鎖可変ドメインが柔軟なペプチドリンカーにより共有結合的に連結され、軽鎖及び重鎖が、二本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）２種におけるものと類似の「二量体」構造において会合することができる。この構成では、各可変ドメインの三つの超可変領域（ＨＶＲ）が相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を画定する。まとめると、六つのＨＶＲは、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な三つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、抗原を認識し結合する能力を有するが、結合部位全体よりも低い親和性である。

【0077】

Ｆａｂ断片は、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを含み、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの一つ又は複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数個の残基を付加することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書中の名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学結合がまた、公知である。

【0078】

用語「ダイアボディ」は、二つの抗原結合部位を有する抗体断片を指し、その断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）中の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖上の二つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインとペアになり、二つの抗原結合部位を作製することが強制される。ダイアボディは、二価又は二重特異性であってもよい。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ １９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）においてより完全に記載されている。トリアボディ及びテトラボディがまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）において記載されている。

【0079】

「単一ドメイン抗体」又は「ｓｄＡｂ」又は「ナノボディ」は、抗体重鎖の可変領域（ＶＨドメイン）又は抗体軽鎖の可変領域（ＶＬドメイン）からなる抗体断片を指す（Ｈｏｌｔ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２１（１１）：４８４－４９０）。

【0080】

「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中、及びいずれかの配向（例えば、ＶＬ－ＶＨ又はＶＨ－ＶＬ）中に存在する。一般的に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それによって、ｓｃＦｖは、抗原結合のための所望の構造を形成することができる。ｓｃＦｖのレビューについては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編、（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４）、ｐｐ．２６９－３１５を参照のこと。

【0081】

一部の実施形態では、抗原特異的結合ドメインはｓｃＦｖである。一本鎖抗体は、所望の標的に特異的なハイブリドーマのＶ領域遺伝子からクローニングされてもよい。そのようなハイブリドーマの産生は、ルーチンとなっている。可変領域重鎖（ＶＨ）及び可変領域軽鎖（ＶＬ）をクローニングするために使用することができる技術は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９８９；８６：３８３３－３８３７において記載されてきた。

【0082】

一部の実施形態では、抗原特異的結合ドメインは、ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに結合するｓｃＦｖである。本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを構築するために適切である可変重鎖の例証的な例は、配列番号８において示されるアミノ酸配列である。本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを構築するために適切である可変軽鎖の例証的な例は、配列番号７において示されるアミノ酸配列である。

【0083】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0084】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0085】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。

【0086】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号５９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0087】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号７１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0088】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。

【0089】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0090】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0091】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0092】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0093】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号１３３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0094】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１４６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0095】

本明細書中で提供されるＭＵＣ１６特異的結合ドメインはまた、一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＣＤＲを含む。そのようなＣＤＲは、軽鎖のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３ならびに重鎖のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３から選択される非ヒトＣＤＲ又は改変された非ヒトＣＤＲであり得る。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６特異的結合ドメインは、（ａ）軽鎖ＣＤＲＬ１、軽鎖ＣＤＲＬ２、及び軽鎖ＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域、ならびに（ｂ）重鎖ＣＤＲＨ１、重鎖ＣＤＲＨ２、及び重鎖ＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む。

【0096】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１～３の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４～６の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１～３の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号４～６の重鎖ＣＤＲを含む。

【0097】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４１～４３の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４４～４６の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４１～４３の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号４４～４６の重鎖ＣＤＲを含む。

【0098】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号５３～５５の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号５６～５８の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号５３～５５の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号５６～５８の重鎖ＣＤＲを含む。

【0099】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号６５～６７の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号６８～７０の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号６５～６７の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号６８～７０の重鎖ＣＤＲを含む。

【0100】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７７～７９の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８０～８２の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号７７～７９の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号８０～８２の重鎖ＣＤＲを含む。

【0101】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８９～９１の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号９２～９４の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号８９～９１の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号９２～９４の重鎖ＣＤＲを含む。

【0102】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０１～１０３の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０４～１０６の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１０１～１０３の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１０４～１０６の重鎖ＣＤＲを含む。

【0103】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１１３～１１５の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１１６～１１８の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１１３～１１５の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１１６～１１８の重鎖ＣＤＲを含む。

【0104】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１２７～１２９の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３０～１３２の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１２７～１２９の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１３０～１３２の重鎖ＣＤＲを含む。

【0105】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３９～１４１の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１４２～１４４の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３９～１４１の軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１４２～１４４の重鎖ＣＤＲを含む。

【0106】

追加の抗ＭＵＣ１６抗体及びその抗原結合断片は、当技術分野において公知である。例えば、２０１８年３月２９日に公開されたＷＯ２０１８／０５８００３を参照のこと。各々の全内容が、参照によりそれらの全体において本明細書中に明示的に組み入れられる。

【0107】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、ヒトＭＵＣ１６の一つ又は複数の五つの膜近位ＳＥＡドメイン内のヒトＭＵＣ１６に結合する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、ヒトＭＵＣ１６の、Ｎ末端からＣ末端まで番号付けされた、ＳＥＡドメイン１２～１６に結合する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３の残基１３７９１～１４４５１において示されるヒトＭＵＣ１６のＳＥＡドメインに結合する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３の残基１３８１０～１４４５１内に結合する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、ヒトＭＵＣ１６のＮ末端からＣ末端まで番号付けされた、ＳＥＡドメイン１～１１に結合しない。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３の残基１～１３７９０内で結合しない。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１３の残基１～１３８０９内で結合しない。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号３９内で結合する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号１５１内で結合する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの抗原特異的結合ドメインは、配列番号４０内で結合しない。

【0108】

２．リンカー
一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、様々なドメイン間のリンカー残基を含み得る、例えば、分子の適した間隔及び立体構造のために加えられ得る。一部の実施形態では、リンカーは可変領域連結配列である。「可変領域を結合させる配列」は、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを繋げるアミノ酸配列であり、二つの下位結合ドメインの相互作用と適合可能なスペーサー機能を提供し、得られたポリペプチドは、同じ軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分子に対する特異的結合親和性を保持する。他の実施形態では、リンカーは、膜貫通ドメインと一つ又は複数の細胞内ドメインの間の連結配列である。

【0109】

本明細書中で企図されるＣＡＲは、一つ、二つ、三つ、四つ、又は五つ以上のリンカーを含み得る。一部の実施形態では、リンカーの長さは、約１～約２５のアミノ酸、約５～約２０のアミノ酸、又は約１０～約２０のアミノ酸、又はアミノ酸の任意の介在長である。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５個、又はそれ以上のアミノ酸長である。

【0110】

リンカーの例証的な例は、グリシンポリマー（Ｇ）_ｎ；グリシン－セリンポリマー（Ｇ_１－５Ｓ_１－５）_ｎ、式中、ｎは、少なくとも１、２、３、４又は５の整数である；グリシン－アラニンポリマー；アラニン－セリンポリマー；及び当技術分野において公知の他の柔軟なリンカーを含む。グリシン及びグリシン－セリンポリマーは比較的構造化されていなく、従って、融合タンパク質、例えば本明細書中に記載されるＣＡＲなどのドメイン間の中性テザーとして機能することができる。グリシンは、アラニンよりも有意に多くのｐｈｉ－ｐｓｉ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）を参照のこと）。当業者は、ＣＡＲの設計が、全て又は部分的に柔軟であるリンカーを含むことができ、リンカーは、柔軟なリンカーならびに所望のＣＡＲ構造を提供するためにそれほど柔軟性ではない構造を付与する一つ又は複数の部分を含むことができるようにすることを認識するであろう。

【0111】

他の例示的なリンカーは、限定されないが、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＧＧ；ＤＧＧＧＳ（配列番号１４）；ＴＧＥＫＰ（配列番号１５）（例、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ５５２５－５５３０（１９９７）を参照のこと）；ＧＧＲＲ（配列番号１６）（Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ ｅｔ ａｌ．１９９５、上記）；（ＧＧＧＧＳ）_ｎ、式中＝１、２、３、４又は５（配列番号１７）（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９３，１１５６－１１６０（１９９６．）；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号１８）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：１０６６－１０７０）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１９）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号２０）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号２１）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号２２）；ＬＲＱＫｄ（ＧＧＧＳ）_２ＥＲＰ（配列番号２３）。一部の実施形態では、リンカーはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２４）である。あるいは、柔軟なリンカーを、ＤＮＡ結合部位及びペプチド自体の両方をモデル化することが可能なコンピュータプログラムを使用して（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ＆Ｂｅｒｇ，ＰＮＡＳ ９０：２２５６－２２６０（１９９３），ＰＮＡＳ ９１：１１０９９－１１１０３（１９９４）、又はファージディスプレイ方法により、合理的に設計することができる。一部の実施形態では、リンカーは以下のアミノ酸配列を含む：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号２５）（Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０１（４）：１６３７－１６４４（２００３））。一実施形態では、リンカーはＬＹＣの配列を含む。

【0112】

３．スペーサードメイン
一部の実施形態では、ＣＡＲの結合ドメインには、一つ又は複数の「スペーサードメイン」が続き、それは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して移動させ、適当な細胞／細胞接触、抗原結合及び活性化を可能にする領域を指す（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９９；６：４１２－４１９）。スペーサードメインは、天然、合成、半合成、又は組み換えの供給源のいずれかから由来し得る。特定の実施形態では、スペーサードメインは、一つ又は複数の重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２及びＣＨ３を含む、免疫グロブリンの部分である。スペーサードメインは、天然発生型免疫グロブリンヒンジ領域、又は改変免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでもよい。

【0113】

一部の実施形態では、スペーサードメインは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。

【0114】

４．ヒンジドメイン
一部の実施形態では、ＣＡＲの結合ドメインには、一つ又は複数の「ヒンジドメイン」又は「ヒンジ領域」が続き、それは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して配置し、適当な細胞／細胞接触、抗原結合及び活性化を可能にする際に役割を果たす。一部の実施形態では、ＣＡＲは、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）の間の一つ又は複数のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、又は組み換えの供給源のいずれかから由来し得る。ヒンジドメインは、天然発生型免疫グロブリンヒンジ領域、又は改変免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでもよい。

【0115】

「改変されたヒンジ領域」は、（ａ）３０％までのアミノ酸変化（例、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％までのアミノ酸置換又は欠失）を伴う天然ヒンジ領域、（ｂ）少なくとも１０アミノ酸（例、少なくとも１２、１３、１４、又は１５アミノ酸）長であり、３０％までのアミノ酸変化（例、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％までのアミノ酸置換又は欠失）を伴う天然ヒンジ領域の部分、又は（ｃ）コアヒンジ領域を含む天然ヒンジ領域の部分（それは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５、又は少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５のアミノ酸長であり得る）を指す。一部の実施形態では、天然免疫グロブリンヒンジ領域中の一つ又は複数のシステイン残基は、一つ又は複数の他のアミノ酸残基（例、一つ又は複数のセリン残基）により置換されてもよい。改変免疫グロブリンヒンジ領域は、代替的に又は追加的に、別のアミノ酸残基（例、セリン残基）で置換された野生型免疫グロブリンヒンジ領域のプロリン残基を有してもよい。

【0116】

本明細書中に記載されるＣＡＲにおける使用のための適切な他の例証的なヒンジドメインは、１型膜タンパク質の細胞外領域、例えばＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８及びＣＤ７などから由来するヒンジ領域を含み、それらは、これら分子からの野生型ヒンジ領域であってもよく、又は改変されてもよい。一実施形態では、ヒンジドメインはＣＤ２８ヒンジ領域を含む。別の実施形態では、ヒンジドメインはＣＤ４ヒンジ領域を含む。別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジ領域を含む。

【0117】

様々な実施形態では、修飾されたヒンジ領域は、本明細書中で企図される、及び／又は当技術分野において公知の適切なヒンジドメイン／領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書中で企図されるヒンジ配列を含む、修飾されたヒンジ領域は、４つ又はそれ以下、３つ又はそれ以下の、又は２つ又はそれ以下のアミノ酸置換及び／又は欠失を有する。

【0118】

特定の実施形態では、天然ヒンジ領域／ドメインにおける一つ又は複数のシステイン残基は、修飾されたヒンジドメインを産生するために一つ又は複数の他のアミノ酸残基により置換され得る。一部の実施形態では、修飾されたヒンジドメインは、セリン又はアラニンで置換された一つ又は複数のシステイン残基を含む。別の実施形態では、修飾されたヒンジドメインは、セリンで置換された一つ又は複数のシステイン残基を含む。別の実施形態では、修飾されたヒンジドメインは、アラニンで置換された一つ又は複数のシステイン残基を含む。

【0119】

特定の実施形態では、修飾されたヒンジ領域は、別のアミノ酸残基（例えば、セリン残基）によるプロリン残基の置換を含む。

【0120】

一部の態様では、ヒンジ領域は、配列番号１５３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５３の配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは、配列番号１５３と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは配列番号１５３を含む。

【0121】

５．膜貫通（ＴＭ）ドメイン
一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、膜貫通ドメインを含む。「膜貫通ドメイン」又は「ＴＭドメイン」は、細胞外結合部分及び細胞内シグナル伝達ドメインを融合させ、ＣＡＲを、免疫エフェクター細胞の細胞膜に固定するＣＡＲの部分である。ＴＭドメインは、天然、合成、半合成、又は組み換えの供給源のいずれかから由来し得る。ＴＭドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１から由来する（即ち、それらの少なくとも膜貫通領域を含む）ことができる。特定の実施形態では、ＴＭドメインは合成であり、主に疎水性残基、例えばロイシン及びバリンなどを含む。

【0122】

一部の態様では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、ＣＤ８αから由来するＴＭドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５４の配列を含む。一実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５４と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、膜貫通ドメインは配列番号１５４を含む。

【0123】

一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、ＣＤ８αから由来するＴＭドメイン、ならびにＴＭドメイン及びＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインを連結する、好ましくは １、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸長の間の短いオリゴ又はポリペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、リンカーはグリシン－セリンベースのリンカーである。他の実施形態では、リンカーはＬＹＣリンカーである。

【0124】

別の態様では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、ＣＤ２８から由来するＴＭドメインを含む。別の態様では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、ＣＤ４から由来するＴＭドメインを含む。

【0125】

６．細胞内シグナル伝達ドメイン
一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する有効なＭＵＣ１６ ＣＡＲのメッセージを、免疫エフェクター細胞の内部に伝達して、エフェクター細胞機能、例えば、活性化、サイトカイン産生、増殖及び細胞傷害活性（ＣＡＲ結合標的細胞への細胞傷害性因子の放出を含む）、又は細胞外ＣＡＲドメインに結合する抗原で誘発される他の細胞応答を誘発する際に関与するＣＡＲの一部を指す。

【0126】

用語「エフェクター機能」は、免疫エフェクター細胞の専門的な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルプ又は活性であってもよい。このように、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを形質導入し、細胞に専門化機能を実施するように向けるタンパク質の部分を指す。通常は細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができる一方で、多くの場合では、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される程度まで、そのような切断部分は、それがエフェクター機能シグナルを形質導入する限り、ドメイン全体の代わりに使用され得る。用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを形質導入するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。

【0127】

ＴＣＲ単独を通じて生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化のために不十分であり、二次的又は共刺激性シグナルがまた要求されることが公知である。このように、Ｔ細胞活性化は、二つの異なるクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン：ＴＣＲ（例、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）を通じて抗原依存的な一次活性化を開始する一次シグナル伝達ドメイン、及び抗原依存的な様式において作用して二次的又は共刺激性シグナルを提供する共刺激シグナル伝達ドメインにより、媒介されると言うことができる。好ましい実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、一つ又は複数の「共刺激シグナル伝達ドメイン」及び「一次シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0128】

一次シグナル伝達ドメインは、刺激方法又は阻害方法のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激性に作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。

【0129】

本発明において特に使用される一次シグナル伝達ドメインを含むＩＴＡＭの例証的な例は、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄから由来するものを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン及び一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。細胞内一次シグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに、膜貫通ドメインのカルボキシル末端に連結され得る。

【0130】

本明細書中で企図されるＣＡＲは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性及び増殖を増強するための一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書中で使用される場合、用語「共刺激シグナル伝達ドメイン」又は「共刺激ドメイン」は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激分子は、抗原に結合するとＴリンパ球の効率的な活性化及び機能に必要とされる第二のシグナルを提供する、抗原受容体又はＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。そのような共刺激分子の例証的な例は、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、及びＣＤ１３４、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインからなる群から選択される一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

【0131】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８及びＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメインならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0132】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８及びＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメインならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0133】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３７及びＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメインならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0134】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0135】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0136】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0137】

一部の態様では、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）からである。一部の態様では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５５の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５５の配列を含む。一実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５５と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは配列番号１５５を含む。

【0138】

前述の又は関連する態様のいずれかでは、一次シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζからである。一部の態様では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１５６の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む、又は配列番号１５６の配列を含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１５６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは配列番号１５６を含む。

【0139】

Ｄ．例示的なキメラ抗原受容体
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドから由来する膜貫通ドメイン：ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0140】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、及びＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドから由来する膜貫通ドメイン：ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0141】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、及びＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドから由来する膜貫通ドメイン：ＴＭドメインをＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインに連結させる、好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０アミノ酸長の、短オリゴリンカー又はポリペプチドリンカーと、ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0142】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0143】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３９又は１５１内に結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドから由来する膜貫通ドメイン：ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0144】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３９又は１５１内に結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、及びＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドから由来する膜貫通ドメイン：ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0145】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３９又は１５１内に結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、及びＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ１からなる群から選択されるポリペプチドから由来する膜貫通ドメイン：場合により、ＴＭドメインを、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインに連結する、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０アミノ酸長の間の短いオリゴ又はポリペプチドリンカー；ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの一つ又は複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0146】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３９又は配列番号１５１内に結合する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0147】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１～３において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号４～６において示される重鎖ＣＤＲを含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0148】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）配列番号４１～４３において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号４４～４６において示される重鎖ＣＤＲ；（ｂ）配列番号５３～５５において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号５６～５８において示される重鎖ＣＤＲ；（ｃ）配列番号６５～６７において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号６８～７０において示される重鎖ＣＤＲ；（ｄ）配列番号７７～７９において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号８０～８２において示される重鎖ＣＤＲ；（ｅ）配列番号８９～９１において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号９２～９４において示される重鎖ＣＤＲ；（ｆ）配列番号１０１～１０３において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１０４～１０６において示される重鎖ＣＤＲ；（ｇ）配列番号１１３～１１５において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１１６～１１８において示される重鎖ＣＤＲ；（ｈ）配列番号１２７～１２９において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１３０～１３２において示される重鎖ＣＤＲ；又は（ｉ）配列番号１３９～１４１において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１４２～１４４において示される重鎖ＣＤＲを含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0149】

一部の実施形態では、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、ＣＡＲは、配列番号１～３において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号４～６において示される重鎖ＣＤＲを含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0150】

一部の実施形態では、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、ＣＡＲは、（ａ）配列番号４１～４３において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号４４～４６において示される重鎖ＣＤＲ；（ｂ）配列番号５３～５５において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号５６～５８において示される重鎖ＣＤＲ；（ｃ）配列番号６５～６７において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号６８～７０において示される重鎖ＣＤＲ；（ｄ）配列番号７７～７９において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号８０～８２において示される重鎖ＣＤＲ；（ｅ）配列番号８９～９１において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号９２～９４において示される重鎖ＣＤＲ；（ｆ）配列番号１０１～１０３において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１０４～１０６において示される重鎖ＣＤＲ；（ｇ）配列番号１１３～１１５において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１１６～１１８において示される重鎖ＣＤＲ；（ｈ）配列番号１２７～１２９において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１３０～１３２において示される重鎖ＣＤＲ；又は（ｉ）配列番号１３９～１４１において示される軽鎖ＣＤＲ及び配列番号１４２～１４４において示される重鎖ＣＤＲを含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ならびにＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0151】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７において示される可変軽鎖及び配列番号８において示される可変重鎖を含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0152】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）配列番号４７において示される可変軽鎖及び配列番号４８において示される可変重鎖；（ｂ）配列番号５９において示される可変軽鎖及び配列番号６０において示される可変重鎖；（ｃ）配列番号７１において示される可変軽鎖及び配列番号７２において示される可変重鎖；（ｄ）配列番号８３において示される可変軽鎖及び配列番号８４において示される可変重鎖；（ｅ）配列番号９５において示される可変軽鎖及び配列番号９６において示される可変重鎖；（ｆ）配列番号１０７において示される可変軽鎖及び配列番号１０８において示される可変重鎖；（ｇ）配列番号１１９において示される可変軽鎖及び配列番号１２０において示される可変重鎖；（ｈ）配列番号１３３において示される可変軽鎖及び配列番号１３４において示される可変重鎖；又は（ｉ）配列番号１４５において示される可変軽鎖及び配列番号１４６において示される可変重鎖を含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ならびにＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0153】

一部の実施形態では、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、ＣＡＲは、配列番号７において示される可変軽鎖及び配列番号８において示される可変重鎖を含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0154】

一部の実施形態では、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、ＣＡＲは、（ａ）配列番号４７において示される可変軽鎖及び配列番号４８において示される可変重鎖；（ｂ）配列番号５９において示される可変軽鎖及び配列番号６０において示される可変重鎖；（ｃ）配列番号７１において示される可変軽鎖及び配列番号７２において示される可変重鎖；（ｄ）配列番号８３において示される可変軽鎖及び配列番号８４において示される可変重鎖；（ｅ）配列番号９５において示される可変軽鎖及び配列番号９６において示される可変重鎖；（ｆ）配列番号１０７において示される可変軽鎖及び配列番号１０８において示される可変重鎖；（ｇ）配列番号１１９において示される可変軽鎖及び配列番号１２０において示される可変重鎖；（ｈ）配列番号１３３において示される可変軽鎖及び配列番号１３４において示される可変重鎖；又は（ｉ）配列番号１４５において示される可変軽鎖及び配列番号１４６において示される可変重鎖を含む抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ；ならびに、場合により、約３～約１０のアミノ酸のポリペプチドリンカー、例えばＬＹＣなどを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0155】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0156】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４９において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４９と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0157】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５１において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５１と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0158】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６１において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６１と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0159】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６３において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６３と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0160】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７３において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７３と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0161】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７５において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0162】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８５において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0163】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８７において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0164】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９７において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0165】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９９において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９９と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0166】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１０９において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１０９と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１０９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１０９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0167】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１１において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１１と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0168】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２１において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２１と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0169】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２３において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２３と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0170】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２５において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0171】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３５において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0172】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３７において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0173】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４７において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0174】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４９において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４９と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0175】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0176】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５０において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５０と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0177】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５２において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５２と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0178】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６２において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６２と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0179】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６４において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６４と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６４と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0180】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７４において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７４と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７４と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0181】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７６において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７６と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７６と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0182】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８６において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８６と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８６と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0183】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８８において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８８と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８８と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0184】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９８において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９８と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９８と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号９８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0185】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１００において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１００と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１００と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１００と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0186】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１０において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１０と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0187】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１２において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１２と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0188】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２２において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２２と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0189】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２４において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２４と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２４と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0190】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２６において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２６と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２６と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0191】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３６において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３６と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３６と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0192】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３８において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３８と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３８と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0193】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４８において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４８と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４８と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0194】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５０において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５０と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0195】

さらに、本明細書中で企図されるＣＡＲの設計は、非修飾Ｔ細胞又は他のＣＡＲを発現するように修飾されたＴ細胞と比較して、ＣＡＲを発現するＴ細胞における改善された増殖、長期持続性、及び認容できる細胞傷害性を可能にする。

【0196】

Ｅ．ポリペプチド
本開示は、部分的には、ＣＡＲポリペプチド及びその断片、それを含む細胞及び組成物、ならびにポリペプチドを発現するベクターを企図する。一部の実施形態では、配列番号９において示される一つ又は複数のＣＡＲを含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号１１において示される一つ又は複数のＣＡＲを含むポリペプチドが提供される。

【0197】

「ポリペプチド」「ポリペプチド断片」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、反対であることが明記されない限り、従来的な意味、即ち、アミノ酸配列として互換的に使用される。ポリペプチドは特定の長さに限定されず、例えば、それらは、全長タンパク質配列又は全長タンパク質の断片を含んでもよく、ポリペプチドの翻訳後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化及び同様のもの、ならびに当技術分野において公知の天然及び非天然の両方の他の修飾を含んでもよい。様々な実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲポリペプチドは、タンパク質のＮ末端にシグナル（又はリーダー）ポリペプチド配列を含み、それは、翻訳時又は翻訳後にタンパク質の転移を指示する。本明細書中に開示されるＣＡＲにおいて有用な適切なシグナルポリペプチド配列の例証的な例は、限定されないが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド配列、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体２（ＧＭ－ＣＳＦＲ２）シグナルポリペプチド配列、Ｉｇκシグナルポリペプチド配列、又はＣＤ８αシグナルポリペプチド配列を含む。ポリペプチドは、様々な周知の組み換え技術及び／又は合成技術のいずれかを使用して調製され得る。本明細書中で企図されるポリペプチドは、本開示のＣＡＲ、又は本明細書中に開示されるＣＡＲの一つ又は複数のアミノ酸からの欠失、付加、及び／又は置換を有する配列を詳細には包含する。

【0198】

「単離ペプチド」又は「単離ポリペプチド」及び同様のものは、本明細書中で使用される場合、細胞環境からの、及び細胞の他の成分との会合からの、ペプチド分子又はポリペプチド分子のインビトロでの単離及び／又は精製を指す。即ち、それは、インビボの物質と有意に関連付けられていない。同様に、「単離細胞」は、インビボ組織又は臓器から得られ、細胞外基質を実質的に含まない細胞を指す。

【0199】

ポリペプチドは、「ポリペプチドバリアント」を含む。ポリペプチドバリアントは、一つ又は複数の置換、欠失、付加、及び／又は挿入により、天然発生型ポリペプチドとは異なっている場合がある。そのようなバリアントは、天然であってもよく、又は例えば上のポリペプチド配列の一つ又は複数を修飾することにより合成的に生成されてもよい。例えば特定の実施形態では、一つ又は複数の置換、欠失、付加及び／又は挿入を結合ドメイン、ヒンジ、ＴＭドメイン、共刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＡＲポリペプチドの一次シグナル伝達ドメインに導入することにより、ＣＡＲの結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。本発明のポリペプチドは、それに対する少なくとも約６５％、７０％、７５％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含むことが好ましい。

【0200】

ポリペプチドには「ポリペプチド断片」が含まれる。ポリペプチド断片は、天然又は組み換え産生ポリペプチドのアミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、及び／又は内部欠失もしくは置換を有する、単量体又は多量体であり得るポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ポリペプチド断片は、少なくとも５～約５００アミノ酸長のアミノ酸鎖を含み得る。特定の実施形態では、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、又は４５０アミノ酸長である。特に有用なポリペプチド断片は、抗原結合ドメイン又は抗体の断片を含む機能的ドメインを含む。マウス抗ＢＣＭＡ抗体の場合、有用な断片は、限定されないが、以下を含む：ＣＤＲ領域、重鎖又は軽鎖のＣＤＲ３領域；重鎖又は軽鎖可変領域；二つのＣＤＲを含む抗体鎖又は可変領域の部分；及び同様のもの。

【0201】

ポリペプチドはまた、ポリペプチド（例えば、ポリ－Ｈｉｓ）の合成、精製、又は同定の容易さのために、又は固体支持体へのポリペプチドの結合を増強するために、インフレームで融合されてもよく、又はリンカーもしくは他の配列に結合されてもよい。

【0202】

上に記述されるように、本発明のポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、切断、及び挿入を含む様々な方法において改変され得る。そのような操作のための方法は、当技術分野において一般的に公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の変異により作製され得る。変異誘導及びヌクレオチド配列改変のための方法は、当技術分野に公知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８－４９２）、Ｋｕｎｋｅｌら、（１９８７、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１５４：３６７－３８２）、米国特許第 ４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ、Ｊ．Ｄ．ら、（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、Ｃａｌｉｆ．、１９８７）、及びそれらにおいて引用される参照文献を参照のこと。目的のタンパク質の生物学的活性に影響を及ぼさない、適したアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルにおいて見出され得る。

【0203】

一部の実施形態では、バリアントは保存的置換を含む。「保存的置換」は、アミノ酸が、類似した特性を有する別のアミノ酸について置換される置換であり、ペプチド化学分野の当業者は、ポリペプチドの二次構造及び疎水親水的性質が実質的に不変であると予測するであろう。修飾は、本発明のポリヌクレオチド及びポリペプチドの構造において作製され得るが、依然として望ましい特徴を伴うバリアント又は誘導体ポリペプチドをコードする機能的分子を得る。ポリペプチドのアミノ酸配列を改変し、等価の、又はさらには改善されたバリアントポリペプチドを作ることが望まれる場合、当業者は、例えば、表１に従い、コードＤＮＡ配列のコドンの一つ又は複数を変化させることができる。

【表1】

【0204】

生物学的活性を消失させることなく、どのアミノ酸残基を置換、挿入、又は欠失させることができるかを決定する際の指針は、当技術分野において周知のコンピュータプログラム、例えばＤＮＡＳＴＡＲＴＭソフトウェアなどを使用して見出すことができる。好ましくは、本明細書中に開示されるタンパク質バリアント中のアミノ酸の変化は、保存的アミノ酸変化、即ち、類似した荷電アミノ酸、又は非荷電アミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化には、その側鎖で関連付けられているアミノ酸ファミリーの一つの置換を含む。天然発生型アミノ酸は一般的に以下の四つのファミリーに分けられる：酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、及び非荷電極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシンは、合わせて芳香族アミノ酸として分類される場合もある。ペプチド又はタンパク質において、アミノ酸の適切な保存的置換は、当業者に公知であり、一般的に、結果として得られる分子の生物学的活性を改変させることなく作製することができる。当業者は、一般的に、ポリペプチドの非必須領域中の単一アミノ酸置換が、生物学的活性を実質的に改変させないことを認識している（例、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８７，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４を参照のこと）。例示的な保存的置換は、米国仮特許出願第６１／２４１，６４７号において記載されており、その開示は参照により本明細書中に組み入れられる。

【0205】

そのような変化を作製する際には、アミノ酸の疎水性親水性指標を考慮することができる。タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する上での疎水性親水性アミノ酸指数の重要性は、当技術分野において一般的に理解されている（Ｋｙｔｅ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２、参照により本明細書中に組み入れられる）。各アミノ酸には、その疎水性及び電荷特性に基づいて疎水性親水性指標が割り当てられている（Ｋｙｔｅ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２）。これらの値は、以下である：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（‐０．４）；トレオニン（‐０．７）；セリン（‐０．８）；トリプトファン（‐０．９）；チロシン（‐１．３）；プロリン（‐１．６）；ヒスチジン（‐３．２）；グルタミン酸（‐３．５）；グルタミン（‐３．５）；アスパラギン酸（‐３．５）；アスパラギン（‐３．５）；リジン（‐３．９）；及びアルギニン（‐４．５）。

【0206】

特定のアミノ酸は、類似の疎水性親水性指標又はスコアを有する他のアミノ酸により置換され得るが、依然として類似の生物学的活性を伴うタンパク質をもたらすこと、即ち、依然として生物学的に機能的に等価なタンパク質を得ることが当技術分野において公知である。そのような変化を作製する際には、疎水性親水性指標が±２以内のアミノ酸の置換が好ましく、±１内のアミノ酸が特に好ましく、±０．５以内のアミノ酸がさらに特に好ましい。類似のアミノ酸の置換は親水性に基づいて効果的に行うことができることも当技術分野において理解される。

【0207】

米国特許第４，５５４，１０１号に詳述されているように、以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）、トレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）；トリプトファン（－３．４）。アミノ酸は、類似の親水性値を有する別のアミノ酸に置換することができ、それでも生物学的に等価な、特に免疫学的に等価なタンパク質を得ることができることが理解される。そのような変化において、親水性値が±２以内のアミノ酸の置換が好ましく、±１内のアミノ酸が特に好ましく、±０．５以内のアミノ酸がさらに特に好ましい。

【0208】

上に概説されるように、アミノ酸置換は、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズ、及び同様のものに基づいてもよい。

【0209】

ポリペプチドバリアントにはさらに、グリコシル化形態、他の分子との凝集コンジュゲート、及び無関係な化学部分（例えば、ペグ化分子）との共有結合コンジュゲートが含まれる。共有結合バリアントは、当技術分野において公知であるように、アミノ酸鎖中、又はＮもしくはＣ末端残基で見出される基に機能性を連結することにより調製することができる。バリアントにはまた、対立遺伝子バリアント、種バリアント、及びムテインを含む。タンパク質の機能的活性に影響を及ぼさない領域の切断又は欠失がまた、バリアントである。

【0210】

一部の実施形態では、二つ又はそれ以上のポリペプチドの発現が望まれる場合、それらをコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書中の他の箇所で考察されるように、ＩＲＥＳ配列により分離されることができる。別の実施形態では、二つ以上のポリペプチドは、一つ又は複数の自己切断ポリペプチド配列を含む融合タンパク質として発現され得る。

【0211】

本開示のポリペプチドは、融合ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、融合ポリペプチド及び融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供され、例えば、ＣＡＲである。融合ポリペプチド及び融合タンパク質とは、少なくとも二つ、三つ、四つ、五つ、六つ、七つ、八つ、九つ又は１０個以上のポリペプチドセグメントを有するポリペプチドを指す。融合ポリペプチドは、典型的には、Ｃ末端からＮ末端に連結されているが、それらは、Ｃ末端からＣ末端に、Ｎ末端からＮ末端に、又はＮ末端からＣ末端に連結されてもよい。融合タンパク質のポリペプチドは、任意の順序又は指定された順序であってもよい。融合ポリペプチド又は融合タンパク質はまた、融合ポリペプチドの所望の転写活性が維持される限り、保存的に修飾されたバリアント、多型バリアント、対立遺伝子、変異体、部分配列、及び種間相同体を含むことができる。融合ポリペプチドは、化学合成法により、又は二つの部分の間の化学的結合により作製されてもよく、又は他の標準的な方法を使用して一般的に調製されてもよい。融合ポリペプチドを含む連結されたＤＮＡ配列は、本明細書の他の箇所で論じるように適切な転写又は翻訳制御エレメントに作動可能に連結される。

【0212】

一実施形態では、融合ポリペプチドは、天然の組み換えタンパク質よりも高い収率でタンパク質を発現する際に補助する配列（発現エンハンサー）を含む。他の融合パートナーは、タンパク質の溶解性を増加させるように、又はタンパク質が所望の細胞内区画に標的化されることを可能にするように、又は細胞膜を通じて融合タンパク質の輸送を促すように選択され得る。

【0213】

融合ポリペプチドは、本明細書中に記載されるポリペプチドドメインの各々の間のポリペプチド切断シグナルをさらに含み得る。なお、ポリペプチド部位は、任意のリンカーペプチド配列に入れることができる。例示的なポリペプチド切断シグナルは、ポリペプチド切断認識部位、例えばプロテアーゼ切断部位、ヌクレアーゼ切断部位（例、稀な制限酵素認識部位、自己切断リボザイム認識部位）、及び自己切断ウイルスオリゴペプチドなどを含む（ｄｅＦｅｌｉｐｅ ａｎｄ Ｒｙａｎ，２００４．Ｔｒａｆｆｉｃ，５（８）；６１６－２６を参照のこと）。

【0214】

適切なプロテアーゼ切断部位及び自己切断ペプチドは、当業者に公知である（例、Ｒｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７．Ｊ．Ｇｅｎｅｒ．Ｖｉｒｏｌ．７８，６９９－７２２；Ｓｃｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．５，５８９－５９４を参照のこと）。例示的なプロテアーゼ切断部位は、限定されないが、ポティウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えばタバコエッチ病ウイルスプロテアーゼ）、ポティウイルスＨＣプロテアーゼ、ポティウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ－２－コードプロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（ワイカウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子、及びエンテロキナーゼの切断部位を含む。その高い切断ストリンジェンシーに起因して、ＴＥＶ（タバコエッチ病ウイルス）プロテアーゼ切断部位が一実施形態において好ましく、例えば、ＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号３６）、例えば、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号３７）及びＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号３８）であり、式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表す（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧ又はＱとＳの間で生じる）。

【0215】

特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ペプチドである。

【0216】

一部の実施形態では、自己切断ペプチドは、アフトウイルス、ポティウイルス、及びカルジオウイルス２Ａペプチド、ＦＭＤＶ（口蹄疫ウイルス）、ウマ鼻炎Ａウイルス、ゾセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルス、及びブタテッショウウイルスから得られたポリペプチド配列を含む。

【0217】

一部の実施形態では、自己切断型ポリペプチド部位は、２Ａ又は２Ａ様部位、配列又はドメインを含む（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１０２７－１０４１）。２Ａ部位の例証的な例を表２中に提供する。

【表2】

【0218】

好ましい実施形態では、本明細書中で企図されるポリペプチドは、ＣＡＲポリペプチドを含む。

【0219】

Ｆ．ポリヌクレオチド
一部の実施形態では、一つ又は複数のＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供され、例えば、配列番号１０及び１２である。本明細書中で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、プレメッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、プラス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋））、マイナス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（－））、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、ＰＣＲ増幅ＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、合成ＤＮＡ、又は組み換えＤＮＡを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖及び二本鎖ポリヌクレオチドを含む。ポリヌクレオチドとは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、少なくとも１００００、もしくは少なくとも１５０００又はそれ以上のヌクレオチドの長さのヌクレオチドの多量体形態を指し、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドのいずれか、又はいずれかの種類のヌクレオチドの修飾形態、ならびに全ての中間長を指す。「中間長」は、本文脈において、例えば６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など；１５１、１５２、１５３など；２０１、２０２、２０３などの引用されている値の間の任意の長さを意味することが、容易に理解されるであろう。好ましくは、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書中に記載される参照配列（例、配列表を参照のこと）のいずれかに対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド又はバリアントが含まれ、典型的には、バリアントは、参照配列の少なくとも一つの生物学的活性を維持する。様々な例証的な実施形態では、本開示は、部分的に、発現ベクター、ウイルスベクター、及び転移プラスミドを含むポリヌクレオチド、ならびに同を含む組成物、ならびに細胞を企図する。

【0220】

一部の実施形態では、本発明のポリペプチドの少なくとも約５、１０、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、５００、１０００、１２５０、１５００、１７５０もしくは２０００又はそれ以上の連続アミノ酸残基、ならびに全ての中間長をコードするポリヌクレオチドが、本開示により提供される。「中間長」は、本文脈において、例えば６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など；１５１、１５２、１５３など；２０１、２０２、２０３などの引用されている値の間の任意の長さを意味することが、容易に理解されるであろう。

【0221】

本明細書中で使用される場合、用語「ポリヌクレオチドバリアント」及び「バリアント」及び同様のものは、参照ポリヌクレオチド配列と実質的な配列同一性を呈するポリヌクレオチド、又は本明細書中で後に定義されるストリンジェントな条件下で参照配列とハイブリダイズするポリヌクレオチドを指す。これらの用語は、一つ又は複数のヌクレオチドが、参照ポリヌクレオチドに比べて、付加もしくは欠失もしくは異なるヌクレオチドで置換されたポリヌクレオチドを含む。この点において、当技術分野において、変異、付加、欠失、及び置換を含む特定の改変又は修飾が、参照ポリヌクレオチドに対して作製されることができ、それにより、改変又は修飾されたポリヌクレオチドは、参照ポリヌクレオチドの生物学的機能又は生物学的活性を保持することが、十分に理解される。用語「ポリヌクレオチド断片」は、少なくとも１００％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％の天然ポリペプチド活性を保持するポリペプチドをコードする、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００又はそれ以上のヌクレオチド長のポリヌクレオチドを指す。

【0222】

「配列同一性」、又は例えば「～に対して５０％同一の配列」を含む、という文章は、本明細書中で使用される場合、比較ウィンドウ上で配列が、ヌクレオチド毎で同一である、又はアミノ酸ごとで同一である程度を指す。このように、「配列同一性のパーセンテージ」は、比較のウィンドウにわたる二つの最適アライメント配列を比較すること、同一核酸塩基（例、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）又は同一アミノ酸残基（例、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ及びＭｅｔ）が、両方の配列中に生じる位置の数を決定して、一致する位置の数をもたらすこと、一致する位置の数を、比較のウィンドウ中の位置の総数（即ち、ウィンドウサイズ）により割ること、及びこの結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージを算出すること、により算出されてもよい。含まれるのは、本明細書中に記載される参照配列のいずれかと少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するヌクレオチド及びポリペプチドであって、典型的には、ポリペプチドバリアントは、参照ポリペプチドの少なくとも一つの生物学的活性を維持する。

【0223】

二つ以上のポリヌクレオチド又はポリペプチド間の配列関係を記載するために使用される用語は、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」、及び「実質的な同一性」を含む。「参照配列」は、少なくとも１２、しかし、頻繁には１５～１８、しばしば、少なくとも２５の単量体単位、ヌクレオチド及びアミノ酸残基を含む、の長さである。二つのポリヌクレオチドは、各々が、（１）二つのポリヌクレオチド間で類似する配列（即ち、完全なポリヌクレオチド配列の部分のみ）、及び（２）二つのポリヌクレオチド間で発散する配列を含んでもよく、二つ（又はそれ以上）のポリヌクレオチド間の配列比較は、典型的には、配列類似性の局所領域を同定し、比較するために、二つのポリヌクレオチドの配列を「比較ウィンドウ」で比較することにより実施される。「比較ウィンドウ」は、少なくとも６つの連続する位置、通常は、約５０～約１００、より一般的には約１００～約１５０の概念セグメントを指し、配列は、二つの配列が最適に整列された後、同じ数の連続する位置の参照配列と比較される。比較ウィンドウは、二つの配列の最適なアライメントのため、参照配列（付加又は欠失を含まない）と比較して約２０％以下の付加又は欠失（即ち、ギャップ）を含みうる。比較ウィンドウを整列するための配列の最適なアラインメントは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡにおけるアルゴリズム（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化実行により、又は選択された様々な方法のいずれかにより生成される検査及び最良のアラインメント（即ち、比較ウィンドウにわたり最も高い相同性をもたらす）により行われ得る。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９により開示されるプログラムのＢＬＡＳＴファミリーを参照のこと。配列解析の詳細な考察は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ，１９９４－１９９８，Ｃｈａｐｔｅｒ １５のユニット１９．３に見ることができる。

【0224】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１０において示されるヌクレオチド配列によりコードされる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１０と少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によりコードされる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によりコードされる。一部の実施形態では、配列番号９のアミノ酸配列を含む抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１０と少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によりコードされる。

【0225】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１２において示されるヌクレオチド配列によりコードされる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１２と少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によりコードされる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によりコードされる。一部の実施形態では、配列番号１１のアミノ酸配列を含む抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲは、配列番号１２と少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によりコードされる。

【0226】

一部の実施形態では、本明細書中に開示されるのは、配列番号４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９又は１５０のいずれか一つの配列を含む抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、本明細書中に開示されるのは、配列番号４９、５０、５１、５２、６１、６２、６３、６４、７３、７４、７５、７６、８５、８６、８７、８８、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１３５、１３６、１３７、１３８、１４７、１４８、１４９又は１５０のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列である。

【0227】

本明細書中で使用される場合、「単離ポリヌクレオチド」は、自然状態で隣接する配列から精製されたポリヌクレオチドを指し、例えば、通常では当該断片と隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指す。「単離ポリヌクレオチド」はさらに、自然界では存在せず、ヒトの手により作製された相補的ＤＡＮ（ｃＤＮＡ）、組み換えＤＮＡ、又は他のポリヌクレオチドも指す。特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、合成ポリヌクレオチド、半合成ポリヌクレオチド、又は組み換え供給源から得られた、もしくは由来するポリヌクレオチドである。

【0228】

様々な実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書中で企図されるポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、キャップ、一つ又は複数のヌクレオチド、及びポリ（Ａ）テールを含む。

【0229】

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、コドン最適化されてもよい。本明細書中で使用される場合、用語「コドン最適化」は、ポリペプチドの発現、安定性、及び／又は活性を増加させるためにポリペプチドをコードするポリヌクレオチド中のコドンを置換することを指す。コドン最適化に影響を及ぼす因子は、限定されないが、以下の一つ又は複数を含む：（ｉ）二つ以上の生物体又は遺伝子又は合成構築されたバイアステーブルの間のコドンバイアスの変動、（ｉｉ）生物体、遺伝子又は遺伝子セット内のコドンバイアスの程度の変動、（ｉｉｉ）コンテキストを含むコドンの体系的変動、（ｉｖ）その解読ｔＲＮＡに伴うコドンの変動、（ｖ）三つ組全体又は三つ組の一つの位置のいずれかのＧＣ％に伴うコドンの変動、（ｖｉ）参照配列、例えば、天然配列などに対する類似性における変動、（ｖｉｉ）コドン頻度のカットオフにおける変動、（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列から転写されたｍＲＮＡの構造的性質、（ｉｘ）コドン置換セットの設計のベースとなるＤＮＡ配列の機能に関する予備知識、（ｘ）各アミノ酸に対するコドンセットの合成的変動、及び／又は（ｘｉ）誤った翻訳開始位置の分離された除去。

【0230】

ポリヌクレオチドの方向性を記載する用語には、５’（通常、遊離リン酸基を有するポリヌクレオチドの末端）及び３’（通常、遊離ヒドロキシル（ＯＨ）基を有するポリヌクレオチドの末端）が含まれる。ポリヌクレオチド配列は、５’から３’の配向又は３’から５’の配向で注釈付けされ得る。ＤＮＡ及びｍＲＮＡについて、５’から３’の鎖は、その配列が、プレメッセンジャー（プレｍＲＮＡ）の配列と同一であるために、「センス」鎖、「プラス」鎖、又は「コード」鎖と指定される［ＤＮＡ中のチミン（Ｔ）の代わりに、ＲＮＡ中のウラシル（Ｕ）を除く］。ＤＮＡ及びｍＲＮＡについては、ＲＮＡポリメラーゼにより転写された鎖である相補的な３’から５’鎖は、「鋳型」、「アンチセンス」、「マイナス」、又は「非コード」鎖として指定される。本明細書中で使用される、用語「逆方向」は、３’から５’の方向に書かれた５’から３’の配列、又は５’から３’の方向に書かれた３’から５’の配列を指す。

【0231】

用語「相補的」及び「相補性」は、塩基対形成規則により関連付けられるポリヌクレオチド（即ち、ヌクレオチドの配列）を指す。例えば、ＤＮＡ配列５’ＡＧＴＣＡＴＧ３’の相補鎖は、３’ＴＣＡＧＴＡＣ５’である。後者の配列は、しばしば、左に５’末端及び右に３’末端、５’Ｃ Ａ Ｔ Ｇ Ａ Ｃ Ｔ ３’を伴う逆相補体として書かれる。その逆相補鎖と等しい配列は、パリンドローム配列であると言われる。相補性は、核酸塩基の一部のみが塩基対合規則に従って一致する、「部分的」であり得る。又は、核酸間には、「完全」又は「総合的な」相補性が存在する。

【0232】

さらに、当業者は、遺伝子コードの縮重の結果として、本明細書中に記載されるポリペプチド又はそのバリアント断片をコードする多くのヌクレオチド配列があることを認識するであろう。これらポリヌクレオチドのいくつかは、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列に対して、最小の相同性を担持する。それにもかかわらず、コドン使用における差に起因して変動するポリヌクレオチドが、本発明により具体的に企図され、例えば、ヒト及び／又は霊長類のコドン選択について最適化されているポリヌクレオチドである。さらに、本明細書中で提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子がまた、使用され得る。対立遺伝子は、ヌクレオチドの欠失、付加及び／又は置換など、一つ又は複数の変異の結果として改変される内在性遺伝子である。

【0233】

本明細書中で使用される用語「核酸カセット」又は「発現カセット」は、ＲＮＡ、及びその後にタンパク質を発現することができるベクター内の遺伝子配列を指す。核酸カセットは、目的の遺伝子、例えば、目的のポリヌクレオチドを含む。核酸カセットは、一つ又は複数の発現制御配列、例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリ（Ａ）配列、及び目的の遺伝子、例えば、目的のポリヌクレオチドを含む。核酸カセットは、ベクター内で位置的に及び連続的に配向され、それにより、カセット中の核酸はＲＮＡに転写されることができ、必要な場合には、タンパク質又はポリペプチドに翻訳され、形質転換細胞中での活性のために要求される、適した翻訳後修飾を受け、適した細胞内区画に標的化されることにより、生物学的活性のための適した区画へと移行され、又は細胞外区画中に分泌されることができる。一部の実施形態では、カセットは、ベクター中への容易な挿入のために適合されたその３’末端及び５’末端を有し、例えば、それは、各末端に制限エンドヌクレアーゼ部位を有する。一部の実施形態では、核酸カセットは、キメラ抗原受容体の配列を含む。カセットは取り出され、単一ユニットとしてプラスミド又はウイルスベクター中に挿入されることができる。

【0234】

一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも一つの目的のポリヌクレオチドを含む。本明細書中で使用される場合、用語「目的のポリヌクレオチド」は、発現されることが望まれる発現ベクター中に挿入された、ポリペプチド（即ち、目的のポリペプチド）をコードするポリヌクレオチドを指す。ベクターは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の目的のポリヌクレオチドを含んでもよい。一部の実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、疾患又は障害の治療又は防止において治療効果を提供するポリペプチドをコードする。目的のポリヌクレオチド、及びそれからコードされるポリペプチドは、野生型ポリペプチド、ならびに機能的バリアント及び断片をコードする両方のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、機能的バリアントは、対応する野生型参照ポリヌクレオチド又はポリペプチド配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。一部の実施形態では、機能的バリアント又は断片は、対応する野生型ポリペプチドの生物学的活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％を有する。

【0235】

本開示のポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さにかかわらず、本明細書中の他の箇所に開示される、又は当技術分野において公知である、他のＤＮＡ配列、例えばプロモーター及び／又はエンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、シグナル配列、Ｋｏｚａｋ配列、ポリアデニル化シグナル、追加の制限酵素部位、マルチクローニング部位、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナーゼ認識部位（例、ＬｏｘＰ、ＦＲＴ、及びＡｔｔ部位）、終止コドン、転写終結シグナル、及び自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、エピトープタグなどと組み合わされてもよく、それらの全体的な長さが大幅に変動し得るようにする。従って、ほぼ任意の長さのポリヌクレオチド断片が用いられ得ること、全長は、好ましくは、調製の容易さ、及び意図される組み換えＤＮＡプロトコルにおける使用により限定されることが企図される。

【0236】

一部の実施形態では、ポリヌクレオチド、又はポリヌクレオチドを保有する細胞は、直接的な毒性及び／又は非制御増幅のリスクを減少させるための誘導性自殺遺伝子をはじめとする自殺遺伝子を利用する。一部の実施形態では、自殺遺伝子は、ポリヌクレオチドを保有する宿主、又は細胞に対して免疫原性ではない。使用され得る自殺遺伝子の特定の例は、カスパーゼ－９又はカスパーゼ－８又はシトシンデアミナーゼである。カスパーゼ－９は、二量体化の特定の化学誘導物質（ＣＩＤ：ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｕｃｅｒ ｏｆ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を使用して活性化され得る。

【0237】

一部の実施形態では、ベクターは、本発明の免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞を、インビボでネガティブ選択されやすいようにする遺伝子セグメントを含む。「ネガティブ選択」により、注入細胞が、個体のインビボ状態における変化の結果として除去されることができることを意味する。ネガティブ選択可能な表現型は、投与薬剤、例えば、化合物に感受性を付与する遺伝子の挿入から生じ得る。ネガティブ選択可能な遺伝子は当技術分野において公知であり、とりわけ、以下を含む：ガンシクロビル感受性を付与する単純ヘルペスウイルスＩ型チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－Ｉ ＴＫ）遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １１：２２３，１９７７）；細胞ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＡＰＲＴ）遺伝子、及び細菌シトシンデアミナーゼ、（Ｍｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：３３（１９９２））。

【0238】

一部の実施形態では、遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞などは、インビトロでネガティブ選択可能な表現型の細胞の選択を可能にするポジティブマーカーをさらに含むポリヌクレオチドを含む。ポジティブ選択可能なマーカーは、宿主細胞中に導入された際に、優性表現型を発現する遺伝子であってもよく、遺伝子を担持する細胞のポジティブ選択を可能にする。この種類の遺伝子は当技術分野において公知であり、とりわけ、ハイグロマイシンＢに対する耐性を付与するハイグロマイシン－Ｂホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｈｐｈ）、抗生物質Ｇ４１８に対する耐性をコードするＴｎ５からのアミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｎｅｏ又はａｐｈ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子（ＡＤＡ）、及び多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子を含む。

【0239】

一部の実施形態では、ポジティブ選択可能なマーカー及びネガティブ選択可能なエレメントは、ネガティブ選択可能なエレメントの喪失が必ず、また、ポジティブ選択可能なマーカーの喪失により伴われるように連結される。一部の実施形態では、ポジティブ及びネガティブ選択可能なマーカーは、一つの喪失が他の喪失に義務的に導くように融合される。発現産物として、上に記載される所望のポジティブ選択性質及びネガティブ選択性質の両方を付与するポリペプチドをもたらす融合ポリヌクレオチドの例は、ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼチミジンキナーゼ融合遺伝子（ＨｙＴＫ）である。この遺伝子の発現は、インビトロでのポジティブ選択のためのハイグロマイシンＢ耐性、及びインビボでのネガティブ選択のためのガンシクロビル感受性を付与するポリペプチドをもたらす。Ｌｕｐｔｏｎ Ｓ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．及びＣｅｌｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ １ １：３３７４－ ３３７８，１９９１を参照のこと。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、融合遺伝子、特にインビトロでのポジティブ選択のためのハイグロマイシンＢ耐性、及びインビボでのネガティブ選択のためのガンシクロビル感受性を付与するものを含むレトロウイルスベクター、例えば、Ｌｕｐｔｏｎ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）、上記において記載されるＨｙＴＫレトロウイルスベクター中にある。また、優性ポジティブ選択可能なマーカーをネガティブ選択可能なマーカーと融合することから由来する二機能的な、選択可能な融合遺伝子の使用を記載する、Ｓ．Ｄ．ＬｕｐｔｏｎによるＰＣＴ ＵＳ９１／０８４４２及びＰＣＴ／ＵＳ９４／０５６０１の刊行物を参照のこと。

【0240】

一部の実施形態では、陽性選択可能なマーカーは、ｈｐｈ、ｎｃｏ、及びｇｐｔからなる群から選択される遺伝子から由来し、陰性選択可能なマーカーは、シトシンデアミナーゼ、ＨＳＶ－Ｉ ＴＫ、ＶＺＶ ＴＫ、ＨＰＲＴ、ＡＰＲＴ、及びｇｐｔからなる群から選択される遺伝子から由来する。一部の実施形態では、マーカーは、二機能的な、選択可能な融合遺伝子であり、ポジティブ選択可能なマーカーはｈｐｈ又はｎｅｏから由来し、ネガティブ選択可能なマーカーはシトシンデアミナーゼ又はＴＫ遺伝子又は選択可能なマーカーから由来する。誘導性自殺遺伝子

【0241】

Ｇ．ベクター
ポリヌクレオチドは、当技術分野において公知であり利用可能な様々な確立された技術のいずれかを使用して調製され、操作及び／又は発現されてもよい。所望のポリペプチドを発現させるために、当該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、適したベクター中に挿入されてもよい。

【0242】

用語「ベクター」は、別の核酸分子を転移又は輸送することが可能な核酸分子を指すために本明細書中で使用される。転移された核酸は、一般的に、ベクター核酸分子に連結され、例えば、その中に挿入される。ベクターは、細胞内で自己複製に向ける配列を含んでもよく、又は宿主細胞ＤＮＡ中への組込みを可能にするのに十分な配列を含んでもよい。

【0243】

例示的なベクターは、限定されないが、自律複製配列、ｍＲＮＡ、プラスミド（例、ＤＮＡプラスミド又はＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、ファージミド、コスミド、人工染色体、例えば酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、又はＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）など、バクテリオファージ、例えばラムダファージ又はＭ１３ファージなど、及び動物ウイルスを含む。ベクターとして有用な動物ウイルスのカテゴリーの例は、限定されないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、及びパポバウイルス（例、ＳＶ４０）を含む。発現ベクターの例は、哺乳動物細胞における発現用のｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）；哺乳動物細胞におけるレンチウイルス媒介性の遺伝子転移及び発現用のｐＬｅｎｔｉ４／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、及びｐＬｅｎｔｉ６．２／Ｖ５－ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。一部の実施形態では、本明細書中に開示されるキメラタンパク質のコード配列は、哺乳動物細胞におけるキメラタンパク質の発現用のそのような発現ベクター中に連結することができる。

【0244】

一部の実施形態では、ベクターは、エピソームベクター、又は染色体外で維持されるベクターである。本明細書中で使用される場合、用語「エピソーム」は、宿主染色体ＤＮＡ中への組込みを伴うことなく複製することができるベクターであり、分裂する宿主細胞からの徐々の喪失を伴わないことはまた、当該ベクターが染色体外で、又はエピソーム的に複製することを意味している。ベクターは、リンパ増殖性ヘルペスウイルス又はガンマヘルペスウイルス、アデノウイルス、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、又は酵母からのＤＮＡ複製の起点又は「ｏｒｉ」をコードする配列、具体的には、ＥＢＶのｏｒｉＰに対応するリンパ増殖性ヘルペスウイルス又はガンマヘルペスウイルスの複製起点を保持するように操作されている。特定の態様では、リンパ増殖性ヘルペスウイルスは、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヘルペスウイルスサイミリ（ＨＳ）、又はマレック病ウイルス（ＭＤＶ）であり得る。エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）及びカポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）がまた、ガンマヘルペスウイルスの例である。典型的には、宿主細胞は、複製を活性化するウイルス複製トランスアクチベータータンパク質を含む。

【0245】

発現ベクター中に存在する「制御エレメント」、「調節配列」は、ベクターの非翻訳領域－複製起源、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナル（Ｓｈｉｎｅ Ｄａｌｇａｒｎｏ配列又はＫｏｚａｋ配列）、イントロン、ポリアデニル化配列、５’及び３’の非翻訳領域－であり、それらは、宿主の細胞タンパク質と相互作用して、転写及び翻訳を行う。そのようなエレメントは、それらの強度及び特異性において変動し得る。利用するベクター系及び宿主に応じて、ユビキタスプロモーター及び誘導性プロモーターをはじめとする任意の数の適切な転写因子及び翻訳因子を使用してもよい。

【0246】

一部の実施形態では、ベクターは、限定されないが、発現ベクター及びウイルスベクターを含み、外因性、内因性、又は異種制御配列、例えばプロモーター及び／又はエンハンサーなどを含むであろう。「内因性」制御配列は、ゲノム中で所与の遺伝子と自然に連結される配列である。「外因性」制御配列は、その遺伝子の転写が、連結されたエンハンサー／プロモーターにより向けられるように、遺伝子操作（即ち、分子生物学的技法）を用いて遺伝子と並立に配置されるものである。「異種」制御配列は、遺伝子操作される細胞とは異なる種から由来する外因性配列である。

【0247】

本明細書中で使用される場合、用語「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチド（ＤＮＡ又はＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼは、プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチドを開始及び転写する。一部の実施形態では、哺乳動物細胞において作動的なプロモーターは、転写が開始される部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置付けられるＡＴ－リッチ領域、及び／又は転写の開始から７０～８０塩基上流に見出される別の配列であるＣＮＣＡＡＴ領域を含み、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る。

【0248】

用語「エンハンサー」は、転写の強化を提供することができる配列を含むＤＮＡセグメントを指し、一部の場合では、別の制御配列に対する方向性に関係なく機能することができる。エンハンサーは、プロモーター及び／又は他のエンハンサーエレメントと協働的に又は相加的に機能することができる。用語「プロモーター／エンハンサー」は、プロモーター機能とエンハンサー機能の両方を提供することができる配列を含むＤＮＡセグメントを指す。

【0249】

用語「操作可能に連結した」は、記載される成分が、それらの意図される様式において機能することを可能にする関係にある並置を指す。一実施形態では、用語は、核酸発現制御配列（プロモーター及び／又はエンハンサーなど）と第二のポリヌクレオチド配列、例えば、目的のポリヌクレオチドの間の機能的結合を指し、ここで、発現制御配列は、第二の配列に対応する核酸の転写を指示する。

【0250】

本明細書中で使用される場合、用語「構造的発現制御配列」は、操作可能に連結された配列の継続的な、又は連続的な転写を可能にするプロモーター、エンハンサー、又はプロモーター／エンハンサーを指す。構造的発現制御配列は、様々な細胞型と組織型での発現を可能にする「ユビキタス」なプロモーター、エンハンサー、プロモーター／エンハンサーであってもよく、又は限定的な細胞型及び組織型での発現を可能にする、それぞれ「細胞特異的」、「細胞型特異的」、「細胞株特異的」、又は「組織特異的」なプロモーター、エンハンサー、又はプロモーター／エンハンサーであってもよい。

【0251】

本発明の特定の実施形態における使用のために適切な、例証的なユビキタス発現制御配列は、限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ウイルス性サルウイルス４０（ＳＶ４０）（例、初期又は後期）、モロニ－マウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルスからのＨ５、Ｐ７．５及びＰ１１プロモーター、伸長因子１アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期成長応答１（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、真核細胞翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、ヒートショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、ヒートショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、ヒートショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β－キネシン（β－ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ２６遺伝子座（Ｉｒｉｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２５，１４７７－１４８２（２００７））、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ－アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β－アクチンプロモーター及び骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、ネガティブコントロール領域欠失型、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーター（Ｃｈａｌｌｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．６９（２）：７４８－５５（１９９５））を含む。

【0252】

一部の実施形態では、ベクターはＭＮＤプロモーターを含む。一部の実施形態では、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第一イントロンを含むＥＦ１ａプロモーターを含む。一部の実施形態では、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第一イントロンを欠くＥＦ１ａプロモーターを含む。

【0253】

特定の実施形態では、Ｔ細胞特異的プロモーター由来のＣＡＲを含むポリヌクレオチドを発現させることが望ましい場合がある。

【0254】

本明細書中で使用される場合、「条件付き発現」は、限定されないが、誘導性発現；抑制性発現；特定の生理学的状態、生物学的状態もしくは疾患状態を有する細胞又は組織における発現などをはじめとする任意の種類の条件付き発現を指し得る。この定義は、細胞型特異的又は組織特異的な発現を除外することを意図しない。一部の実施形態では、目的のポリヌクレオチドの条件付き発現、例えば、発現が、細胞、組織、生物体などを、ポリヌクレオチドを発現させる、又は目的のポリヌクレオチドによりコードされるポリヌクレオチドの発現における増加もしくは減少を起こす処理又は条件に供することにより制御される。

【0255】

誘導性プロモーター／系の例証的な例は、限定されないが、ステロイド誘導性プロモーター、例えばグルココルチコイド受容体又はエストロゲン受容体をコードする遺伝子のプロモーター（対応するホルモンの処理で誘導可能）、メタロチオネインプロモーター（様々な重金属の処理で誘導可能）、ＭＸ－１プロモーター（インターフェロンで誘導可能）、「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ」ミフェプリストン調節可能系（Ｓｉｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｇｅｎｅ，３２３：６７）、クミン酸塩（ｃｕｍａｔｅ）誘導性遺伝子スイッチ（ＷＯ２００２／０８８３４６）、テトラサイクリン依存的な調節系などを含む。

【0256】

条件付き発現はまた、部位特異的ＤＮＡリコンビナーゼを使用することにより達成されることができる。本発明の特定の実施形態によれば、ベクターは、部位特異的リコンビナーゼにより媒介される組み換えのために少なくとも一つの（典型的には二つの）部位を含む。本明細書中で使用される場合、用語「リコンビナーゼ」又は「部位特異的リコンビナーゼ」は、一つ又は複数の組み換え部位（例、二つ、三つ、四つ、五つ、七つ、１０、１２、１５、２０、３０、５０など）を含む組み換え反応において含まれる切除的又は組込みタンパク質、酵素、補助因子又は関連タンパク質を含み、それは野生型タンパク質（Ｌａｎｄｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３：６９９－７０７（１９９３）を参照のこと）、又は変異体、誘導体（例、組み換えタンパク質配列又はその断片を含む融合タンパク質）、断片、及びそのバリアントであってもよい。適切したリコンビナーゼの例証的な例は、限定されないが、Ｃｒｅ、Ｉｎｔ、ＩＨＦ、Ｘｉｓ、Ｆｌｐ、Ｆｉｓ、Ｈｉｎ、Ｇｉｎ、ΦＣ３１、Ｃｉｎ、Ｔｎ３リゾルバーゼ、ＴｎｄＸ、ＸｅｒＣ、ＸｅｒＤ、ＴｎｐＸ、Ｈｊｃ、Ｇｉｎ、ＳｐＣＣＥ１、及びＰａｒＡを含む。

【0257】

ベクターは、多種多様な部位特異的リコンビナーゼのいずれかのための一つ又は複数の組み換え部位を含み得る。部位特異的リコンビナーゼのための標的部位は、ベクター、例えば、レトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクターの組込みのために要求される任意の部位への追加であることが理解されるべきである。本明細書中で使用される場合、用語「組み換え配列」、「組み換え部位」、又は「部位特異的組み換え部位」は、リコンビナーゼが認識及び結合する特定の核酸配列を指す。

【0258】

例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼのための一つの組み換え部位は、８塩基対コア配列に隣接する二つの１３塩基対逆位リピート（リコンビナーゼ結合部位としての役割を果たす）を含む３４塩基対配列であるｌｏｘＰである（Ｓａｕｅｒ，Ｂ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５：５２１－５２７（１９９４）の図１を参照のこと）。他の例示的なｌｏｘＰ部位は、限定されないが、ｌｏｘ５１１（Ｈｏｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６；Ｂｅｔｈｋｅ ａｎｄ Ｓａｕｅｒ，１９９７）、ｌｏｘ５１７１（Ｌｅｅ ａｎｄ Ｓａｉｔｏ，１９９８）、ｌｏｘ２２７２（Ｌｅｅ ａｎｄ Ｓａｉｔｏ，１９９８）、ｍ２（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００２）、ｌｏｘ７１（Ａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５）、及びｌｏｘ６６（Ａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５）を含む。

【0259】

ＦＬＰリコンビナーゼのための適切な認識部位は、限定されないが、ＦＲＴ（ＭｃＬｅｏｄ，ｅｔ ａｌ．，１９９６）、Ｆ_１、Ｆ_２、Ｆ_３（Ｓｃｈｌａｋｅ ａｎｄ Ｂｏｄｅ，１９９４）、Ｆ_４、Ｆ_５（Ｓｃｈｌａｋｅ ａｎｄ Ｂｏｄｅ，１９９４）、ＦＲＴ（ＬＥ）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９８８）、ＦＲＴ（ＲＥ）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９８８）を含む。

【0260】

認識配列の他の例は、ａｔｔＢ、ａｔｔＰ、ａｔｔＬ、及びａｔｔＲ配列であり、それらはリコンビナーゼ酵素のλインテグラーゼ、例えば、ｐｈｉ－ｃ３１により認識される。φＣ３１ ＳＳＲは、ヘテロタイプ部位ａｔｔＢ（３４ｂｐ長）とａｔｔＰ（３９ｂｐ長）の間でのみ組み換えを媒介する（Ｇｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０００）。ａｔｔＢ及びａｔｔＰは、それぞれ細菌ゲノム及びファージゲノム上のファージインテグラーゼの付着部位について名付けられたが、両方が、φＣ３１ホモ二量体により結合されている可能性が高い不完全な反転リピートを含む（Ｇｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０００）。産物部位、ａｔｔＬ及びａｔｔＲは、さらにφＣ３１媒介性組み換えに対して効果的に不活性（Ｂｅｌｔｅｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００３）であり、反応を不可逆的にする。挿入を触媒するために、ａｔｔＰ部位がゲノムａｔｔＢ部位に挿入するよりもａｔｔＢ担持ＤＮＡのほうが容易にゲノムａｔｔＰ部位に挿入されることが見出されている（Ｔｈｙａｇａｒａｊａｎ ｅｔ ａｌ．，２００１；Ｂｅｌｔｅｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００３）。このように、典型的な戦略は、相同組み換えにより、ａｔｔＰ担持「ドッキング部位」を、定義された遺伝子座中に位置付け、それは次に、挿入のためのａｔｔＢ担持ｉｎｃｏｍｉｎｇ配列とパートナーとなる。

【0261】

本明細書中で使用される場合、「内部リボソーム侵入部位」又は「ＩＲＥＳ」は、シストロン（タンパク質コード領域）の開始コドン、例えばＡＴＧなどに内部リボソームが直接侵入することを促進し、遺伝子のキャップ非依存的な翻訳に導くエレメントを指す。例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ １５（１２）：４７７－８３）及びＪａｃｋｓｏｎ ａｎｄ Ｋａｍｉｎｓｋｉ．１９９５．ＲＮＡ １（１０）：９８５－１０００を参照のこと。一部の実施形態では、ベクターは、一つ又は複数のポリペプチドをコードする一つ又は複数の目的のポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、複数のポリペプチドの各々の効率的な翻訳を達成するために、ポリヌクレオチド配列は、自己切断ポリペプチドをコードする一つ又は複数のＩＲＥＳ配列又はポリヌクレオチド配列により分離されることができる。

【0262】

本明細書中で使用される場合、用語「Ｋｏｚａｋ配列」は、リボソーム小サブユニットへのｍＲＮＡの初期結合を大きく促進し、翻訳を増加させる短いヌクレオチド配列を指す。コンセンサスＫｏｚａｋ配列は（ＧＣＣ）ＲＣＣＡＴＧＧであり、式中、Ｒはプリン（Ａ又はＧ）である（Ｋｏｚａｋ，１９８６．Ｃｅｌｌ．４４（２）：２８３－９２、及びＫｏｚａｋ，１９８７．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５（２０）：８１２５－４８）。一部の実施形態では、ベクターは、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を有し、所望のポリペプチド、例えば、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。

【0263】

１．ウイルスベクター
一部の実施形態では、細胞（例、免疫エフェクター細胞）は、ＣＡＲをコードするウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターで形質導入される。例えば、免疫エフェクター細胞は、ＭＵＣ１６ポリペプチドに結合する抗ＭＵＣ１６抗体又はその抗原結合断片を含み、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、Ｏｘ４０、又はそれらの任意の組み合わせの細胞内シグナル伝達ドメインを伴うＣＡＲをコードするベクターで形質導入される。このように、これらの形質導入細胞は、ＣＡＲ媒介性細胞傷害性応答を誘発することができる。

【0264】

本明細書中で企図される特定の実施形態での使用のために適切なウイルスベクター系の例証的な例は、限定されないが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルスベクターを含む。

【0265】

アデノウイルスベースのベクターは、多くの細胞型において非常に高い形質導入効率が可能であり、細胞分裂を要求しない。そのようなベクターを用いて、高力価及び高レベルの発現が得られている。このベクターは、比較的単純な系において大量に産生されることができる。大半のアデノウイルスベクターは、導入遺伝子がＡｄ Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、及び／又はＥ３遺伝子を置き換えるように操作され、その後、トランスで欠失した遺伝子機能を供給するヒト２９３細胞において、複製欠損ベクターが増殖される。Ａｄベクターは、非分裂細胞、分化細胞、例えば肝臓、腎臓及び筋肉中に見出される細胞などを含む、複数の種類の組織にインビボで形質導入することができる。従来的なＡｄベクターは、大きな運搬能力を有している。

【0266】

複製能力を欠く現在のアデノウイルスベクターの作製と増幅は、２９３と呼ばれるユニークなヘルパー細胞株を利用する場合がある。この細胞株は、ヒト胚腎臓細胞からＡｄ５ ＤＮＡ断片により形質転換されたものであり、Ｅ１タンパク質を構造的に発現している（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，１９７７）。Ｅ３領域は、アデノウイルスゲノムには不必要であるため（Ｊｏｎｅｓ＆Ｓｈｅｎｋ，１９７８）、現行のアデノウイルスベクターは、２９３細胞を利用して、Ｅ１、Ｄ３、又は両方のいずれかの領域に外来ＤＮＡを運搬する（Ｇｒａｈａｍ＆Ｐｒｅｖｅｃ，１９９１）。アデノウイルスベクターは、真核細胞遺伝子の発現（Ｌｅｖｒｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，１９９１；Ｇｏｍｅｚ－Ｆｏｉｘ ｅｔ ａｌ．，１９９２）及びワクチン開発（Ｇｒｕｎｈａｕｓ＆Ｈｏｒｗｉｔｚ，１９９２；Ｇｒａｈａｍ＆Ｐｒｅｖｅｃ，１９９２）に使用されている。組み換えアデノウイルスを様々な組織に投与する際での試験は、気管滴下（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９２）、筋肉注射（Ｒａｇｏｔ ｅｔ ａｌ．，１９９３）、末梢静脈注射（Ｈｅｒｚ＆Ｇｅｒａｒｄ，１９９３）、及び脳内への定位性接種（Ｌｅ Ｇａｌ Ｌａ Ｓａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９９３）を含む。臨床試験におけるＡｄベクターの使用例には、筋肉内注射を用いた抗腫瘍免疫を目的としたポリヌクレオチド療法が含まれる（Ｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：１０８３－９（１９９８））。

【0267】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲをコードするポリシストロニックメッセージをコードする一つ又は複数のポリヌクレオチドは、一つ又は複数のポリヌクレオチドを含む組み換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）で細胞を形質導入することにより、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞中に導入される。

【0268】

ＡＡＶは、小さな（約２６ｎｍ）複製欠損、主にエピソームの、非エンベロープ型ウイルスである。ＡＡＶは、分裂細胞及び非分裂細胞の両方を感染させることができ、そのゲノムを宿主細胞のゲノム中に組み入れ得る。組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は、典型的には、最小で、導入遺伝子及びその調節配列、ならびに５’及び３’のＡＡＶ逆位末端リピート（ＩＴＲ）で構成される。ＩＴＲ配列は約１４５ｂｐ長である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、又はＡＡＶ１０から単離されたＩＴＲ及びカプシド配列を含む。

【0269】

一部の実施形態では、キメラｒＡＡＶが使用される。ＩＴＲ配列は、一つのＡＡＶ血清型から単離され、カプシド配列は別のＡＡＶ血清型から単離される。例えば、ＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列及びＡＡＶ６由来のカプシド配列を含むｒＡＡＶは、ＡＡＶ２／ＡＡＶ６として言及される。特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２由来のＩＴＲと、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９又はＡＡＶ１０のいずれか一つから由来するカプシドタンパク質とを含み得る。一部の実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２から由来するＩＴＲ配列及びＡＡＶ６から由来するカプシド配列を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２から由来するＩＴＲ配列及びＡＡＶ２から由来するカプシド配列を含む。

【0270】

一部の実施形態では、操作と選択の方法をＡＡＶカプシドに行って、それらが目的の細胞に形質導入される確率を高くしてもよい。

【0271】

ｒＡＡＶベクターの構築、その産生、及び精製は、例えば、米国特許第９，１６９，４９４号；第９，１６９，４９２号；第９，０１２，２２４号；第８，８８９，６４１号；第８，８０９，０５８号；及び第８，７８４，７９９号において開示されており、その各々が、参照によりその全体において本明細書中に組み入れられる。

【0272】

様々な実施形態では、ＣＡＲをコードする一つ又は複数のポリヌクレオチドは、単純ヘルペスウイルス、例えばＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２で細胞を形質導入することにより免疫エフェクター細胞中に導入され、一つ又は複数のポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードするポリシストロニックメッセージをコードする一つ又は複数のポリヌクレオチドは、単純ヘルペスウイルスで細胞を形質導入することにより、免疫エフェクター細胞中に導入され、例えば、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、一つ又は複数のポリヌクレオチドを含む。

【0273】

成熟ＨＳＶビリオンは、１５２ｋｂである直鎖二本鎖ＤＮＡ分子からなるウイルスゲノムを含むエンベロープで覆われた二十面体カプシドからなる。一実施形態では、ＨＳＶベースのウイルスベクターは、一つ又は複数の必須又は非必須ＨＳＶ遺伝子において欠損している。一実施形態では、ＨＳＶベースのウイルスベクターは、複製欠損である。大半の複製欠損ＨＳＶベクターは、複製を防止するために一つ又は複数の最早期、早期、又は後期ＨＳＶ遺伝子を除去するための欠失を含む。例えばＨＳＶベクターは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される最早期遺伝子が欠損であり得る。ＨＳＶベクターの利点は、長期間のＤＮＡ発現をもたらし得る潜伏期に入る能力、及び２５ｋｂまでの外因性ＤＮＡを収容し得るその大きなウイルスＤＮＡゲノムである。ＨＳＶベースのベクターは、例えば、米国特許第５，８３７，５３２号、第５，８４６，７８２号及び第５，８０４，４１３号、ならびに国際特許出願ＷＯ９１／０２７８８、ＷＯ９６／０４３９４、ＷＯ９８／１５６３７及びＷＯ９９／０６５８３において記載されており、それらは、その全体において参照により本明細書中に組み入れられる。

【0274】

レトロウイルスは、遺伝子送達のための一般のツールである（Ｍｉｌｌｅｒ，２０００，Ｎａｔｕｒｅ．３５７：４５５－４６０）。特定の実施形態では、レトロウイルスは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを細胞に送達するために使用される。本明細書中で使用される場合、用語「レトロウイルス」は、そのゲノムＲＮＡを直鎖二本鎖ＤＮＡコピーに逆転写し、その後、そのゲノムＤＮＡを宿主ゲノム中に共有的に組込むＲＮＡウイルスを指す。一度、ウイルスが宿主ゲノム中に組込まれると、それは、プロウイルスとして言及される。プロウイルスは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩのための鋳型としての役割を果たし、新たなウイルス粒子を産生するために必要とされる構造タンパク質及び酵素をコードするＲＮＡ分子の発現に向ける。

【0275】

特定の実施形態での使用のために適切な、例証的なレトロウイルスは、限定されないが、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ－ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））、ならびにレンチウイルスを含む。

【0276】

本明細書中で使用される場合、用語「レンチウイルス」は、複合レトロウイルスの群（又は属）を指す。例証的なレンチウイルスは、限定されないが、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶ１型及びＨＩＶ２型を含む）；ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含む。一実施形態では、ＨＩＶベースのベクター骨格（即ち、ＨＩＶシス作用性配列エレメント）が好ましい。一部の実施形態では、レンチウイルスが、ＣＡＲを含むポリヌクレオチドを細胞に送達するために使用される。

【0277】

レトロウイルスベクター、より具体的にはレンチウイルスベクターは、本開示の特定の実施形態を実行するために使用され得る。したがって、用語「レトロウイルス」又は「レトロウイルスベクター」は、本明細書中で使用される場合、それぞれ「レンチウイルス」及び「レンチウイルスベクター」を含むことが意味される。

【0278】

当業者には明白であるように、用語「ウイルスベクター」は、典型的には核酸分子の転移又は細胞のゲノム中への組込みを促進するウイルス由来の核酸エレメントを含む核酸分子（例、転移プラスミド）又は核酸転移を媒介するウイルス粒子のいずれかを指すために広く使用される。ウイルス粒子は、典型的には、核酸に加えて、様々なウイルス成分、及び時折、また、宿主細胞成分を含む。

【0279】

用語「ウイルスベクター」は、核酸を細胞中に転移させることが可能なウイルスもしくはウイルス粒子、又は転移された核酸自体のいずれかを指し得る。ウイルスベクター及び転移プラスミドは、主にウイルスから由来する構造的及び／又は機能的遺伝子エレメントを含む。用語「レトロウイルスベクター」は、主にレトロウイルスから由来する構造的及び機能的遺伝子エレメント、又はそれらの部分を含むウイルスベクター又はプラスミドを指す。用語「レンチウイルスベクター」は、主にレンチウイルスから由来するＬＴＲを含む、構造的及び機能的遺伝子エレメント、又はそれらの部分を含むウイルスベクター又はプラスミドを指す。用語「ハイブリッドベクター」は、レトロウイルス配列、例えば、レンチウイルス配列、及び非レンチウイルス配列の両方を含むベクター、ＬＴＲ、又は他の核酸を指す。一実施形態では、ハイブリッドベクターは、逆転写、複製、組込み、及び／又はパッケージングのためのレトロウイルス配列、例えば、レンチウイルス配列を含むベクター又は転移プラスミドを指す。

【0280】

一部の実施形態では、用語「レンチウイルスベクター」、「レンチウイルス発現ベクター」は、レンチウイルス転移プラスミド及び／又は感染性レンチウイルス粒子を指すために使用され得る。参照が、エレメント、例えばクローニング部位、プロモーター、調節エレメント、異種核酸などに対して本明細書中でなされる場合、これらのエレメントの配列は、レンチウイルス粒子中でＲＮＡ形態において存在し、ＤＮＡプラスミド中でＤＮＡ形態において存在することが理解されるべきである。

【0281】

プロウイルスの各末端で、「長い末端リピート」又は「ＬＴＲ」と呼ばれる構造がある。用語「長い末端リピート（ＬＴＲ）」は、レトロウイルスＤＮＡの末端に位置付けられる塩基対のドメインを指し、それらの天然配列の状況においては、ダイレクトリピートであり、Ｕ３、Ｒ及びＵ５領域を含む。ＬＴＲは、一般的に、レトロウイルス遺伝子の発現（例、遺伝子転写物の促進、開始、及びポリアデニル化）ならびにウイルス複製に基本的な機能をもたらす。ＬＴＲは、転写調節エレメント、ポリアデニル化シグナル及びウイルスゲノムの複製及び組込みのために必要とされる配列を含む多数の調節シグナルを含む。ウイルスＬＴＲは、Ｕ３、Ｒ、及びＵ５と呼ばれる三つの領域に分けられる。Ｕ３領域は、エンハンサーエレメント及びプロモーターエレメントを含む。Ｕ５領域は、プライマー結合部位とＲ領域の間の配列であり、ポリアデニル化配列を含む。Ｒ（繰り返し）領域は、Ｕ３領域及びＵ５領域が隣接している。ＬＴＲは、Ｕ３領域、Ｒ領域及びＵ５領域から構成され、ウイルスゲノムの５’末端と３’末端の両方に存在する。５’ＬＴＲに隣接するものは、ゲノムの逆転写（ｔＲＮＡプライマー結合部位）及び粒子へのウイルスＲＮＡの効率的なパッケージング（Ｐｓｉ部位）に必要な配列である。

【0282】

本明細書中で使用される場合、用語「パッケージシグナル」又は「パッケージ配列」は、レトロウイルスゲノム内に位置付けられる配列を指し、それらは、ウイルスカプシド又はウイルス粒子中へのウイルスＲＮＡの挿入のために要求される。例えば、Ｃｌｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５．Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．４；ｐｐ．２１０１－２１０９を参照のこと。いくつかのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムのキャプシド形成のために必要とされる最小パッケージングシグナル（また。ｐｓｉ［Ψ〕配列として言及される）を使用する。このように、本明細書中で使用される場合、用語「パッケージング配列」、「パッケージングシグナル」、「ｐｓｉ」及び記号「Ψ」は、ウイルス粒子形成中のウイルスＲＮＡ鎖のキャプシド形成のために要求される非コード配列への参照において使用される。

【0283】

様々な実施形態では、ベクターは、修飾された５’ＬＴＲ及び／又は３’ＬＴＲを含む。ＬＴＲのいずれか又は両方が、限定されないが、一つ又は複数の欠失、挿入、又は置換を含む、一つ又は複数の修飾を含んでもよい。３’ＬＴＲの修飾が、しばしば、ウイルスを複製欠損にすることによりレンチウイルス系又はレトロウイルス系の安全性を改善させるために作製される。本明細書中で使用される場合、用語「複製欠損」は、感染性ビリオンが産生されないように、完全で、有効な複製が可能ではないウイルスを指す（例、複製欠損レンチウイルスの子孫）。用語「複製能力のある」は、ウイルスのウイルス複製が、感染性ビリオン（例、複製能力のあるレンチウイルスの子孫）を産生することが可能であるように、複製が可能である野生型ウイルス又は変異ウイルスを指す。

【0284】

「自己不活化」（ＳＩＮ）ベクターは、複製能力を欠いたベクターを指し、例えば、右（３’）ＬＴＲエンハンサー－プロモーター領域は、Ｕ３領域として公知であるが、（例、欠失又は置換により）修飾されて、ウイルス複製の最初のラウンドを超えたウイルス転写が防止される、レトロウイルスベクター又はレンチウイルスのベクターである。これは、右（３’）ＬＴＲ Ｕ３領域がウイルス複製中に左（５’）ＬＴＲ Ｕ３領域の鋳型として使用され、このように、ウイルス転写物は、Ｕ３エンハンサープロモーターを伴わずに作製することができないためである。本発明のさらなる実施形態では、３’ＬＴＲは、Ｕ５領域が、例えば、理想的なポリ（Ａ）配列で置換されるように修飾される。ＬＴＲに対する修飾、例えば３’ＬＴＲ、５’ＬＴＲ、又は３’ＬＴＲ及び５’ＬＴＲの両方に対する修飾などがまた、本発明中に含まれることに注意すべきである。

【0285】

追加的な安全性の強化は、５’ＬＴＲのＵ３領域を、ウイルス粒子の産生中にウイルスゲノムの転写を誘導する異種プロモーターと置き換えることで提供される。使用されることができる異種プロモーターの例は、例えば、サルウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば初期又は後期）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば前初期）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）のプロモーターを含む。典型的なプロモーターが、Ｔａｔ非依存的な様式において高レベルの転写を駆動することができる。この置換によって、複製能力のあるウイルスを生成する組み換えの可能性が低下する。なぜなら、ウイルス産生系において完全なＵ３配列がないためである。特定の実施形態では、異種プロモーターは、ウイルスゲノムが転写される様式を制御する際に追加の利点を有する。例えば、異種プロモーターは、ウイルスゲノムの全て又は一部の転写が、誘導因子が存在する場合にのみ生じるように、誘導性であることができる。誘導因子は、限定されないが、一つ又は複数の化学的化合物、又は生理学的条件、例えば宿主細胞が培養される温度もしくはｐＨなどを含む。

【0286】

一部の実施形態では、ウイルスベクターはＴＡＲエレメントを含む。用語「ＴＡＲ」は、レンチウイルス（例、ＨＩＶ）ＬＴＲのＲ領域中に位置付けられる「トランス活性化応答」遺伝子エレメントを指す。このエレメントは、レンチウイルスのトランスアクチベーター（ｔａｔ）遺伝子エレメントと相互作用して、ウイルス複製を増強する。しかし、このエレメントは、５’ＬＴＲのＵ３領域が異種プロモーターにより置換される実施形態において要求されない。

【0287】

「Ｒ領域」は、キャッピング基の開始（即ち、転写の開始）で始まり、ポリＡトラクトの開始直前に終わるレトロウイルスＬＴＲ内の領域を指す。Ｒ領域はまた、Ｕ３領域及びＵ５領域に隣接しているとして定義される。Ｒ領域は、逆転写中に、ゲノムの一つの端から他への新生ＤＮＡの移行を可能にする際に役割を果たす。

【0288】

本明細書中で使用される場合、用語「ＦＬＡＰエレメント」、又は「ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ」は、それらの配列が、レトロウイルス、例えば、ＨＩＶ－１又はＨＩＶ－２のセントラルポリプリントラクト（ｃｅｎｔｒａｌ ｐｏｌｙｐｕｒｉｎｅ ｔｒａｃｔ）及びセントラル終結配列（ｃｅｎｔｒａｌ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）（ｃＰＰＴ及びＣＴＳ）を含む核酸を指す。適切なＦＬＡＰエレメントは、米国特許第６，６８２，９０７号において、及びＺｅｎｎｏｕ，ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：１７３において記載されている。ＨＩＶ－１逆転写中、セントラルポリプリントラクト（ｃＰＰＴ）でのプラス鎖ＤＮＡの中央開始及びセントラル終結配列（ＣＴＳ）での中央終結は、三本鎖ＤＮＡ構造：ＨＩＶ－１セントラルＤＮＡフラップの形成に導く。任意の理論により拘束されることを望まないが、ＤＮＡフラップは、レンチウイルスゲノム核インポートのシス活性決定因子として作用し得る、及び／又はウイルスの力価を増加させ得る。特定の実施形態では、レトロウイルス又はレンチウイルスのベクター骨格は、ベクター中の目的の異種遺伝子の上流又は下流に一つ又は複数のＦＬＡＰエレメントを含む。例えば、特定の実施形態では、転移プラスミドはＦＬＡＰエレメントを含む。一実施形態では、本発明のベクターは、ＨＩＶ－１から単離されたＦＬＡＰエレメントを含む。別の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｃＰＰＴ及び／又はＣＴＳエレメント中に一つ又は複数の変異を伴うＦＬＡＰエレメントを含む。さらに別の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｃＰＰＴ又はＣＴＳエレメントのいずれかを含む。さらに別の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｃＰＰＴ又はＣＴＳエレメントを含まない。

【0289】

一部の実施形態では、レトロウイルス又はレンチウイルスの転移ベクターは、一つ又は複数のエクスポートエレメントを含む。用語「エクスポートエレメント」は、細胞の核から細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送を調節する、シス作用性の転写後調節エレメントを指す。ＲＮＡエクスポートエレメントの例は、限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）（例、Ｃｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：１０５３；及びＣｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｃｅｌｌ ５８：４２３を参照のこと）及びＢ型肝炎ウイルスの転写後調節エレメント（ＨＰＲＥ）を含む。一般的に、ＲＮＡエクスポートエレメントは、遺伝子の３’ＵＴＲ内に配置され、一つ又は複数のコピーとして挿入されることができる。

【0290】

一部の実施形態では、ウイルスベクター中での異種配列の発現は、転写後調節エレメント、効率的ポリアデニル化部位、及び、場合により、転写終止シグナルをベクター中に組み入れることにより増加する。様々な転写後調節エレメントが、タンパク質での異種核酸の発現を増加させることができ、例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３：２８８６）；Ｂ型肝炎ウイルスにおいて存在する転写後調節エレメント（ＨＰＲＥ）（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：３８６４）；及び同様のもの（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，９：１７６６）である。一部の実施形態では、ベクターは、転写後調節エレメント、例えばＷＰＲＥ又はＨＰＲＥなどを含む。

【0291】

一部の実施形態では、ベクターは、転写後調節エレメント（ＰＴＥ）、例えばＷＰＲＥもしくはＨＰＲＥなどを欠く、又は含まない。なぜなら、一部の事例では、これらのエレメントは、細胞形質転換のリスクを増加させる、及び／又はｍＲＮＡ転写物の量を実質的にもしくは有意に増加させない、又はｍＲＮＡ安定性を増加させるためである。従って、一部の実施形態では、ベクターはＰＴＥを欠く、又は含まない。一部の実施形態では、ベクターは、追加の安全性測定としてＷＰＲＥもしくはＨＰＲＥを欠く、又は含まない。

【0292】

異種核酸転写物の効率的な終止とポリアデニル化を誘導する因子は、異種遺伝子の発現を増加させる。転写終止シグナルは、一般的に、ポリアデニル化シグナルの下流に見出される。特定の実施形態では、ベクターは、発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのポリアデニル化配列３’を含む。本明細書中で使用される場合、用語「ポリＡ部位」又は「ポリＡ配列」は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩにより、新生ＲＮＡ転写物の終止及びポリアデニル化の両方に向けるＤＮＡ配列を示す。ポリアデニル化配列は、ポリＡテールをコード配列の３’末端に付加することによりｍＲＮＡ安定性を促進することができ、このように、増加した翻訳効率に寄与する。組み換え転写物の効率的なポリアデニル化が望ましい。なぜなら、ポリＡテールを欠く転写物は不安定であり、迅速に分解されるためである。切断及びポリアデニル化は、ＲＮＡ中のポリ（Ａ）配列により向けられる。哺乳動物プレｍＲＮＡのコアポリ（Ａ）配列は、切断ポリアデニル化部位に隣接する二つの認識エレメントを有する。典型的には、ほぼ不変のＡＡＵＡＡＡ六量体が、Ｕ残基又はＧＵ残基が豊富な、より可変性であるエレメントの上流２０～５０ヌクレオチドに位置する。新生転写物の切断は、これら二つのエレメントの間で生じ、５’切断産物に２５０までのアデノシンの付加と共役される。本発明のベクターにおいて使用されることができるポリＡシグナルの例証的な例は、理想的なポリＡ配列（例、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＧＴＡＡＡ）、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ－グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、又は当技術分野において公知の別の適切な異種もしくは内因性ポリＡ配列を含む。

【0293】

一部の実施形態では、レトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクターは、一つ又は複数のインスレーターエレメントをさらに含む。インスレーターエレメントは、レンチウイルス発現配列、例えば、治療用ポリペプチドを、ゲノムＤＮＡ中に存在するシス作用エレメントにより媒介され、転移配列の調節解除発現に導き得る組込み部位効果から保護することに寄与し得る（即ち、位置効果；例えば、Ｂｕｒｇｅｓｓ－Ｂｅｕｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９９：１６４３３；及びＺｈａｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，１０９：４７１を参照のこと）。一部の実施形態では、転移ベクターは、３’ＬＴＲの一つ又は複数のインスレーターエレメントを含み、宿主ゲノム中へのプロウイルスの組込み時に、プロウイルスは、３’ＬＴＲの重複により、５’ＬＴＲ又は３’ＬＴＲの両方で一つ又は複数のインスレーターを含む。本発明中での使用のための適切なインスレーターは、限定されないが、ニワトリβ－グロビンインスレーターを含む（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３．Ｃｅｌｌ ７４：５０５；Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７．ＰＮＡＳ ９４：５７５；及びＢｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９９．Ｃｅｌｌ ９８：３８７を参照のこと。参照により本明細書中に組み入れられる）。インスレーターエレメントの例は、限定されないが、βグロビン遺伝子座、例えばニワトリＨＳ４などからのインスレーターを含む。

【0294】

一部の実施形態では、ウイルスベクター骨格配列の大半又は全てが、レンチウイルス、例えば、ＨＩＶ－１から由来する。しかし、レトロウイルス配列及び／又はレンチウイルス配列の多くの異なる供給源を使用することができる、又は組み合わせることができ、特定のレンチウイルス配列における多数の置換及び改変が、本明細書中に記載される機能を実施する転移ベクターの能力を損なうことなく適応され得ることが理解されるべきである。さらに、様々なレンチウイルスベクターが当技術分野において公知である。Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６ａ、１９９６ｂ、及び１９９８）；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９９７）；Ｄｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９８、米国特許第６，０１３，５１６号；及び第５，９９４，１３６号を参照のこと。それらの多くが、ウイルスベクター又は転移プラスミドを産生するために適合され得る。

【0295】

一部の実施形態では、ベクターは、ＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む。ベクターは、一つ又は複数のＬＴＲを有してもよく、ＬＴＲのいずれかは、一つ又は複数の修飾、例えば一つ又は複数のヌクレオチド置換、付加、又は欠失などを含む。ベクターは、形質導入効率（例、ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、ウイルスパッケージング（例、Ｐｓｉ（Ψ）パッケージングシグナル、ＲＲＥ）、及び／又は治療用遺伝子発現を増加させる他のエレメント（例、ポリ（Ａ）配列）を増加させるためのより多くのアクセサリエレメントの一つをさらに含んでもよく、場合により、ＷＰＲＥ又はＨＰＲＥを含んでもよい。

【0296】

様々な実施形態では、ベクターは組込みウイルスベクターである。

【0297】

様々な他の実施形態では、ベクターはエピソームベクター又は非組込みウイルスベクターである。

【0298】

様々な実施形態では、本明細書中で企図されるベクターは、非組込み又は組込み欠損レトロウイルスを含む。一実施形態では、「組込み欠損」レトロウイルス又はレンチウイルスは、ウイルスゲノムを宿主細胞のゲノム中に組込む能力を欠くインテグラーゼを有するレトロウイルス又はレンチウイルスを指す。様々な実施形態では、インテグラーゼタンパク質は、そのインテグラーゼ活性を特異的に減少させるために変異される。組込み不能レンチウイルスベクターは、インテグラーゼタンパク質をコードするｐｏｌ遺伝子を修飾することにより得られ、組込み欠損インテグラーゼをコードする変異ｐｏｌ遺伝子がもたらされる。そのような組込み不能ウイルスベクターは、特許出願ＷＯ２００６／０１０８３４において記載されており、それは、参照によりその全体において本明細書中に組み入れられる。

【0299】

インテグラーゼ活性を低下させるために適切なＨＩＶ－１ ｐｏｌ遺伝子における例証的な変異は、限定されないが、Ｈ１２Ｎ、Ｈ１２Ｃ、Ｈ１６Ｃ、Ｈ１６Ｖ、Ｓ８１Ｒ、Ｄ４１Ａ、Ｋ４２Ａ、Ｈ５１Ａ、Ｑ５３Ｃ、Ｄ５５Ｖ、Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ、Ｅ６９Ａ、Ｋ７１Ａ、Ｅ８５Ａ、Ｅ８７Ａ、Ｄ１１６Ｎ、Ｄ１１６１、Ｄ１１６Ａ、Ｎ１２０Ｇ、Ｎ１２０１、Ｎ１２０Ｅ、Ｅ１５２Ｇ、Ｅ１５２Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｋ１５６Ｅ、Ｋ１５６Ａ、Ｅ１５７Ａ、Ｋ１５９Ｅ、Ｋ１５９Ａ、Ｋ１６０Ａ、Ｒ１６６Ａ、Ｄ１６７Ａ、Ｅ１７０Ａ、Ｈ１７１Ａ、Ｋ１７３Ａ、Ｋ１８６Ｑ、Ｋ１８６Ｔ、Ｋ１８８Ｔ、Ｅ１９８Ａ、Ｒ１９９ｃ、Ｒ１９９Ｔ、Ｒ１９９Ａ、Ｄ２０２Ａ、Ｋ２１１Ａ、Ｑ２１４Ｌ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２２１Ｌ、Ｗ２３５Ｆ、Ｗ２３５Ｅ、Ｋ２３６Ｓ、Ｋ２３６Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｇ２４７Ｗ、Ｄ２５３Ａ、Ｒ２６２Ａ、Ｒ２６３Ａ、及びＫ２６４Ｈを含む。

【0300】

インテグラーゼ活性を低下させるために適切なＨＩＶ－１ ｐｏｌ遺伝子における例証的な変異は、限定されないが、以下を含む：Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ、Ｅ９２Ｋ、Ｄ１１６Ｎ、Ｄ１１６１、Ｄ１１６Ａ、Ｎ１２０Ｇ、Ｎ１２０１、Ｎ１２０Ｅ、Ｅ１５２Ｇ、Ｅ１５２Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｋ１５６Ｅ、Ｋ１５６Ａ、Ｅ１５７Ａ、Ｋ１５９Ｅ、Ｋ１５９Ａ、Ｗ２３５Ｆ、及びＷ２３５Ｅ。

【0301】

特定の実施形態では、インテグラーゼは、アミノ酸Ｄ６４、Ｄ１１６又はＥ１５２の一つ又は複数において変異を含む。一実施形態では、インテグラーゼは、アミノ酸Ｄ６４、Ｄ１１６及びＥ１５２において変異を含む。特定の実施形態では、欠損ＨＩＶ－１インテグラーゼはＤ６４Ｖ変異を含む。

【0302】

「宿主細胞」は、本発明の組み換えベクター又はポリヌクレオチドを用いて、インビボ、エクスビボ、又はインビトロでエレクトロポレーション、トランスフェクト、感染、又は形質導入された細胞を含む。宿主細胞は、パッケージング細胞、産生細胞、及びウイルスベクターで感染された細胞を含み得る。特定の実施形態では、本発明のウイルスベクターで感染された宿主細胞は、治療を必要とする対象に投与される。特定の実施形態では、用語「標的細胞」は、宿主細胞と互換的に使用され、所望の細胞型のトランスフェクト細胞、感染細胞、又は形質導入細胞を指す。好ましい実施形態では、標的細胞はＴ細胞である。

【0303】

特定の実施形態において企図されるポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、個々の患者への投与により、典型的には、以下に記載されるように、全身投与（例、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下又は頭蓋内点滴）又は局所適用することによりインビボで送達され得る。あるいは、ベクターは、細胞、例えば個々の患者から外植された細胞（例、動員（ｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）された末梢血、リンパ球、骨髄吸引液、組織生検等）又はユニバーサルドナーの造血幹細胞などにエクスビボで送達されることができ、患者中への細胞の再移植が続く。

【0304】

一実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを、インビボでの細胞の形質導入のために生物に直接投与する。投与は、限定されないが、注射、注入、局所適用、及びエレクトロポレーションを含む、血液又は組織細胞との最終接触に分子を導入するために通常使用される任意の経路による。そのような核酸を投与する適切な方法は、利用可能でかつ当業者に周知であり、一つを上回る経路を使用して特定の組成物を投与することができるが、特定の経路は、しばしば、別の経路よりもより即時的かつより有効な反応を提供することができる。

【0305】

大規模なウイルス粒子産生が、合理的なウイルス力価を達成するために、しばしば必要である。ウイルス粒子は、ウイルス構造遺伝子及び／又はアクセサリ遺伝子、例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、もしくはｎｅｆ遺伝子、又は他のレトロウイルス遺伝子を含むパッケージング細胞株中に転移ベクターをトランスフェクトすることにより産生される。

【0306】

本明細書中で使用される場合、用語「パッケージングベクター」は、パッケージングシグナルを欠き、一つ、二つ、三つ、四つ又はそれ以上のウイルス構造遺伝子及び／又はアクセサリ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクター又はウイルスベクターを指す。典型的には、パッケージングベクターは、パッケージング細胞中に含まれ、トランスフェクション、形質導入、又は感染を介して細胞中に導入される。トランスフェクション、形質導入、又は感染のための方法は、当業者により周知されている。本発明のレトロウイルス／レンチウイルストランスファーベクターを、トランスフェクション、形質導入、又は感染を介してパッケージング細胞株中に導入して、産生細胞又は細胞株を生成することができる。本発明のパッケージングベクターは、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポフェクション、又はエレクトロポレーションを含む標準的な方法により、ヒト細胞又は細胞株中に導入することができる。一部の実施形態では、パッケージングベクターは、優性選択可能なマーカー、例えばネオマイシン、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、ブラストオシジン、ゼオシン、チミジンキナーゼ、ＤＨＦＲ、Ｇｌｎシンテターゼ又はＡＤＡなどと一緒に細胞中に導入され、適した薬物の存在における選択及びクローンの単離が続く。選択可能なマーカー遺伝子は、パッケージングベクターにより、例えば、ＩＲＥＳ又は自己切断ウイルスペプチドによりコードされる遺伝子に物理的に連結されることができる。

【0307】

ウイルスエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）は、細胞株から生成された組み換えレトロウイルスにより最終的に感染及び形質転換されることができる宿主細胞の範囲を決定する。レンチウイルス、例えばＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＳＩＶ、ＦＩＶ、及びＥＩＶなどの場合では、ｅｎｖタンパク質はｇｐ４１及びｇｐ１２０を含む。好ましくは、本発明のパッケージング細胞により発現されるウイルスｅｎｖタンパク質は、以前に記載されているように、ウイルスｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子とは別々のベクター上でコードされる。

【0308】

本発明において用いられることができるレトロウイルス由来ｅｎｖ遺伝子の例証的な例は、限定されないが、ＭＬＶエンベロープ、１０Ａ１エンベロープ、ＢＡＥＶ、ＦｅＬＶ－Ｂ、ＲＤ１１４、ＳＳＡＶ、エボラ、センダイ、ＦＰＶ（家禽病ウイルス）、及びインフルエンザウイルスエンベロープを含む。同様に、ＲＮＡウイルス（例、ピコルナウイルス科、カルシウイルス科、アストロウイルス科、トガウイルス科、フラビウイルス科、コロナウイルス科、パラミキソウイルス科、ラボドウイルス科、フィロウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、アレナウイルス科、レオウイルス科、ビルナウイルス科、レトロウイルス科のＲＮＡウイルスファミリー）からの、ならびにＤＮＡウイルス（ヘパドナウイルス科、シクロウイルス科、パルボウイルス科、パポバウイルス科、アドノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポキシウイルス科、及びイリドウイルス科のファミリー）からのエンベロープをコードする遺伝子が利用され得る。代表的な例は、ＦｅＬＶ、ＶＥＥ、ＨＦＶＷ、ＷＤＳＶ、ＳＦＶ、狂犬病、ＡＬＶ、ＢＩＶ、ＢＬＶ、ＥＢＶ、ＣＡＥＶ、ＳＮＶ、ＣｈＴＬＶ、ＳＴＬＶ、ＭＰＭＶ、ＳＭＲＶ、ＲＡＶ、ＦｕＳＶ、ＭＨ２、ＡＥＶ、ＡＭＶ、ＣＴ１０、ＥＩＡＶを含む。

【0309】

他の実施形態では、本発明のウイルスをシュードタイピングするためのエンベロープタンパク質は、限定されないが、以下のウイルスのいずれかを含む：インフルエンザＡ、例えばＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ３Ｎ２及びＨ５Ｎ１など（鳥類インフルエンザ）、インフルエンザＢ、インフルエンザＣウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ロタウイルス、ノーウォークウイルス群の任意のウイルス、腸内アデノウイルス、パルボウイルス、デング熱ウイルス、サル痘、モノネガウイルス、リサウイルス、例えば狂犬病ウイルス、ラゴスコウモリウイルス、モコラウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、ヨーロッパコウモリウイルス１及び２ならびにオーストラリアコウモリウイルスなど、エフェメロウイルス、ベシキュロウイルス、小胞性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ヘルペスウイルス、例えば単純ヘルペスウイルス１型及び２型など、水痘帯、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ）、ヒトヘルペスウイルス６型及び８型、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、パピローマウイルス、マウスガンマヘルペスウイルス、例えば、アルゼンチン出血熱ウイルス、ボリビア出血性発熱ウイルス、坐骨関連出血性発熱ウイルス、ベネズエラ出血性発熱ウイルス、ラッサ熱ウイルス、マチュポウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、ブニヤウイルス、例えばクリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ハンタウイルス、腎症候群の原因ウイルスを伴う出血性発熱、リフトバレー熱ウイルス、エボラ出血熱及びマールブルグ出血熱を含むフィロウイルス科（フィロウイルス）、キャサヌル森林病ウイルスを含むフラビウイルス科、オムスク出血熱ウイルス、マダニ由来脳炎の原因ウイルス、ならびにパラミキソウイルス科、例えばヘンドラウイルス及びニパウイルスなど、大痘瘡及び小痘瘡（天然痘）、アルファウイルス、例えばベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルスなど、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、ウェストナイルウイルス、任意の脳炎の原因ウイルスを含む。

【0310】

一実施形態では、本発明は、組み換えレトロウイルス、例えば、ＳＶＶ－Ｇ糖タンパク質でシュードタイプ化されたレンチウイルスを産生するパッケージング細胞を提供する。

【0311】

本明細書中で使用される場合、用語「シュードタイプ」又は「シュードタイプ化」は、そのウイルスエンベロープタンパク質が、好ましい特性を有する別のウイルスのエンベロープと置き換えられたウイルスを指す。例えば、ＨＩＶエンベロープタンパク質（ｅｎｖ遺伝子にコードされる）は通常、ＣＤ４＋提示細胞に対してウイルスを標的化するが、水泡性口炎ウイルスのＧ－タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）エンベロープタンパク質でＨＩＶをシュードタイプ化することで、広範な細胞にＨＩＶが感染できるようになる。本発明の好ましい実施形態では、レンチウイルスエンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇでシュードタイプ化される。一実施形態では、本発明は、ＶＳＶ－Ｇエンベロープ糖タンパク質でシュードタイプ化された組み換えレトロウイルス、例えば、レンチウイルスを産生するパッケージング細胞を提供する。

【0312】

本明細書中で使用される場合、用語「パッケージング細胞株」は、パッケージングシグナルを含まないが、しかし、ウイルス粒子の正確なパッケージングのために必要であるウイルス構造タンパク質及び複製酵素（例、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ）を安定的又は一過性に発現する細胞株への参照において使用される。任意の適切な細胞株を用いて、本発明のパッケージング細胞を調製することができる。一般的に、細胞は哺乳動物細胞である。特定の実施形態では、パッケージング細胞株を産生するために使用される細胞は、ヒト細胞である。使用されることができる適切な細胞株は、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、Ｃ３Ｈ １０Ｔ１／２細胞、ＦＬＹ細胞、Ｐｓｉ－２細胞、ＢＯＳＣ ２３細胞、ＰＡ３１７細胞、ＷＥＨＩ細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＳＣ １細胞、ＢＳＣ ４０細胞、ＢＭＴ １０細胞、ＶＥＲＯ細胞、Ｗ１３８細胞、ＭＲＣ５細胞、Ａ５４９細胞、ＨＴ１０８０細胞、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｂ－５０細胞、３Ｔ３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｓａｏｓ－２細胞、Ｈｕｈ７細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｗ１６３細胞、２１１細胞、及び２１１Ａ細胞を含む。好ましい実施形態では、パッケージング細胞は、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、又はＡ５４９細胞である。別の好ましい実施形態では、細胞はＡ５４９細胞である。

【0313】

本明細書中で使用される場合、用語「産生細胞株」は、パッケージング細胞株及びパッケージングシグナルを含むトランスファーベクター構築物を含む、組み換えレトロウイルス粒子を産生することが可能である細胞株を指す。感染性ウイルス粒子及びウイルスストック溶液の産生は、従来的な技術を使用して行ってもよい。ウイルスストック溶液を調製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、Ｙ．Ｓｏｎｅｏｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：６２８－６３３、及びＮ．Ｒ．Ｌａｎｄａｕ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：５１１０－５１１３により例示されている。感染性ウイルス粒子は、従来の技術を使用してパッケージング細胞から収集され得る。例えば、感染性粒子を、当技術分野で公知のように、細胞溶解、又は細胞培養の上清の収集により収集することができる。場合により、収集されたウイルス粒子を、望ましい場合、精製してもよい。適切な精製技術は当業者に周知である。

【0314】

トランスフェクションによるよりむしろ、ウイルス感染によりレトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクターを使用した遺伝子又は他のポリヌクレオチド配列の送達は、「形質導入」として言及される。一実施形態では、レトロウイルスベクターは、感染及びプロウイルス組込みを通じて細胞中に導入される。特定の実施形態では、標的細胞、例えば、Ｔ細胞は、それが、ウイルスベクター又はレトロウイルスベクターを使用した感染により細胞に送達される遺伝子又は他のポリヌクレオチド配列を含む場合、「形質導入」される。特定の実施形態では、形質導入細胞は、その細胞ゲノム中にレトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクターにより送達される一つ又は複数の遺伝子又は他のポリヌクレオチド配列を含む。

【0315】

特定の実施形態では、一つ又は複数のポリペプチドを発現する、本発明のウイルスベクターで形質導入された宿主細胞は、疾患を治療及び／又は防止するために対象に投与される。遺伝子治療におけるウイルスベクターの使用に関する他の方法は、本発明の特定の実施形態に従って利用され得るが、例えば、Ｋａｙ，Ｍ．Ａ．（１９９７）Ｃｈｅｓｔ １１１（６ Ｓｕｐｐ．）：１３８Ｓ－１４２Ｓ；Ｆｅｒｒｙ，Ｎ．ａｎｄ Ｈｅａｒｄ，Ｊ．Ｍ．（１９９８）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．９：１９７５－８１；Ｓｈｉｒａｔｏｒｙ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｌｉｖｅｒ １９：２６５－７４；Ｏｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．１１：１７９－８６；Ｔｈｕｌｅ，Ｐ．Ｍ．ａｎｄ Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍ．（２０００）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：１７４４－５２；Ｙａｎｇ，Ｎ．Ｓ．（１９９２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２：３３５－５６；Ａｌｔ，Ｍ．（１９９５）Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．２３：７４６－５８；Ｂｒｏｄｙ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ Ｃｒｙｓｔａｌ，Ｒ．Ｇ．（１９９４）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７１６：９０－１０１；Ｓｔｒａｙｅｒ，Ｄ．Ｓ．（１９９９）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ８：２１５９－２１７２；Ｓｍｉｔｈ－Ａｒｉｃａ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔ，Ｊ．Ｓ．（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｒｅｐ．３：４３－４９；及びＬｅｅ，Ｈ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：４８３－８において見出すことができる。

【0316】

Ｈ．遺伝子修飾された細胞
一部の実施形態では、本開示は、本明細書中で企図されるＣＡＲを発現するように遺伝子修飾された細胞を提供する。一部の実施形態では、遺伝子修飾された細胞は、癌（例、ＭＵＣ１６を発現する癌）の治療における使用のためである。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子操作された」又は「遺伝子修飾された」は、ＤＮＡ又はＲＮＡの形態の追加的な遺伝物質を、細胞中の総遺伝物質に加えることを指す。用語「遺伝子修飾された細胞」、「修飾された細胞」、及び「向け直された細胞」は、互換的に使用される。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子治療」は、遺伝子の発現を回復、修正、もしくは修飾する細胞内の全遺伝物質へのＤＮＡ又はＲＮＡの形態の余分な遺伝物質の導入、又は治療用ポリペプチド、例えばＣＡＲを発現する目的で、ＤＮＡ又はＲＮＡの形態の余分な遺伝物質を導入することを指す。

【0317】

一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＣＡＲは、それらの特異性を目的の標的抗原、例えば、ＭＵＣ１６ポリペプチドに向け直すように免疫エフェクター細胞において導入及び発現される。「免疫エフェクター細胞」は、一つ又は複数のエフェクター機能（例えば細胞傷害性の細胞殺傷活性、サイトカイン分泌、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣの誘導など）を有する免疫系の任意の細胞である。

【0318】

本発明の免疫エフェクター細胞は、自己／自家（“ｓｅｌｆ”）又は非自己（“ｎｏｎ－ｓｅｌｆ”、例、同種、同系又は異種）であることができる。本明細書中で使用される場合、「自家」は、同じ対象から由来する細胞を指す。本明細書中で使用される場合、「同種」は、比較した細胞と遺伝的に異なる同じ種の細胞を指す。本明細書中で使用される場合、「同系」は、比較した細胞と遺伝的に同一である、異なる対象の細胞を指す。本明細書中で使用される場合、「異種」は、比較した細胞と異なる種の細胞を指す。好ましい実施形態では、本発明の細胞は同種である。

【0319】

本明細書中で企図されるＣＡＲと使用される例証的な免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球を含む。用語「Ｔ細胞」又は「Ｔリンパ球」は、当技術分野において認識されており、胸腺細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、又は活性化Ｔリンパ球を含むことが意図される。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）又はＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４^＋Ｔ細胞）のＣＤ４^＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ：ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－Ｔ細胞、又はＴ細胞の任意の他のサブセットであってもよい。特定の実施形態における使用のために適切なＴ細胞の他の例証的な集団は、ナイーブＴ細胞（ＴＮ）、メモリーＴ細胞、Ｔメモリー幹細胞（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、及びエフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）を含む。

【0320】

当業者により理解され得るように、他の細胞がまた、本明細書中で記載されるように、ＣＡＲを伴う免疫エフェクター細胞として使用され得る。特に、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球及びマクロファージも含む。免疫エフェクター細胞は、エフェクター細胞の前駆体も含み、そのような前駆細胞は、インビボ又はインビトロで免疫エフェクター細胞に分化するように誘導されることができる。このように、一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞の前駆体、例えば臍帯血、骨髄又は動員末梢血から由来する細胞のＣＤ３４＋集団内に含まれる造血幹細胞（ＨＳＣ）などを含み、それらは対象における投与時に成熟免疫エフェクター細胞に分化する、又はインビトロで誘導されて成熟免疫エフェクター細胞に分化することができる。

【0321】

本明細書中で使用される場合、ＭＵＣ１６特異的ＣＡＲを含むように遺伝子操作された免疫エフェクター細胞は、「ＭＵＣ１６特異的な、向け直された免疫エフェクター細胞」として言及され得る。

【0322】

用語「ＣＤ３４＋細胞」は、本明細書中で使用される場合、その細胞表面上にＣＤ３４タンパク質を発現する細胞を指す。「ＣＤ３４」は、本明細書中で使用される場合、しばしば、細胞－細胞接着因子として作用し、リンパ節中へのＴ細胞侵入において含まれる細胞表面糖タンパク質（例、シアロムチンタンパク質）を指す。ＣＤ３４＋細胞集団は、造血幹細胞（ＨＳＣ）を含み、それは、患者への投与時に分化し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、及び単球／マクロファージ系統の細胞を含む、全ての造血系に寄与する。

【0323】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中で企図されるＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を作製するための方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、免疫エフェクター細胞が、本明細書中に記載される一つ又は複数のＣＡＲを発現するように、個体から単離された免疫エフェクター細胞をトランスフェクト又は形質導入することを含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、インビトロでのさらなる操作を伴わずに個体から単離され、及び遺伝子修飾される。そのような細胞を次に、個体に直接再投与してもよい。さらなる実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲを発現するように遺伝子修飾される前に、インビトロで増殖するように最初に活性化及び刺激される。これに関して、免疫エフェクター細胞は、遺伝子修飾される（即ち、本明細書中で企図されるＣＡＲを発現するように形質導入又はトランスフェクトされる）前及び／又は後に培養され得る。

【0324】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される免疫エフェクター細胞のインビトロ操作又は遺伝子修飾の前に、細胞の供給源が対象から得られる。一部の実施形態では、ＣＡＲ修飾された免疫エフェクター細胞はＴ細胞を含む。Ｔ細胞は、限定されないが、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多くの供給源から得られることができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、当業者に公知の技術、例えば沈降など、例えばＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの任意の数を使用して、対象から収集された血液ユニットから得ることができる。一部の実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェリシスにより得られる。アフェレシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、及び血小板を含むリンパ球を含む。一部の実施形態では、アフェレシスにより収集された細胞は、洗浄して、血漿画分を除去し、その後の処理のために細胞を適した緩衝液又は培地中に配置してもよい。細胞は、ＰＢＳで、又はカルシウム、マグネシウム、及び、他の全てではないにしても、大半の二価カチオンを欠く別の適切な溶液で洗浄することができる。当業者により理解されるであろうように、洗浄工程は、当業者に公知の方法により、例えば半自動フロースルー遠心分離器を使用することにより達成され得る。例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞プロセッサ、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、又は同様のもの。洗浄後、細胞は、緩衝液と共に、又は緩衝液なしで、様々な生体適合性緩衝液又は他の生理食塩水中に再懸濁されてもよい。一部の実施形態では、アフェレシスサンプルの望ましくない成分は、培養培地中で直接的に再懸濁された細胞において除去されてもよい。

【0325】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることにより、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を通した遠心分離により、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。以下のマーカー：ＣＤ３、ＣＤ２８，ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＤ４５ＲＯの一つ又は複数を発現するＴ細胞の特定の部分集団は、ポジティブ又はネガティブ選択技術によりさらに単離されることができる。一実施形態では、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＤ４５ＲＯを発現するＴ細胞の特定の部分集団は、ポジティブ又はネガティブ選択技術によりさらに単離される。例えば、ネガティブ選択によるＴ細胞集団の濃縮は、ネガティブ選択された細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組み合わせを用いて達成されることができる。本明細書中での使用のための一つの方法は、ネガティブ選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用する、ネガティブ磁気免疫接着又はフローサイトメトリーを介した細胞選別及び／又は選択である。例えば、ネガティブ選択によりＣＤ４^＋細胞について濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、及びＣＤ８に対する抗体を含む。フローサイトメトリー及び細胞選別はまた、本発明中での使用のために目的の細胞集団を単離するために使用してもよい。

【0326】

ＰＢＭＣは、本明細書中で企図される方法を使用して、ＣＡＲを発現するように直接的に遺伝子修飾されてもよい。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの単離後、Ｔリンパ球をさらに単離し、特定の実施形態では、細胞傷害性Ｔリンパ球及びヘルパーＴリンパ球の両方を、遺伝子修飾及び／又は増殖の前又は後のいずれかに、ナイーブ、メモリー及びエフェクターＴ細胞部分集団に選別することができる。

【0327】

ＣＤ８^＋細胞は、標準的な方法を使用することにより得ることができる。一部の実施形態では、ＣＤ８^＋細胞は、ＣＤ８^＋細胞のそれらの種類の各々と関連付けられる細胞表面抗原を同定することにより、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、及びエフェクター細胞にさらに選別される。

【0328】

一部の実施形態では、ナイーブＣＤ８^＋Ｔリンパ球は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ １２７、及びＣＤ４５ＲＡを含む、ナイーブＴ細胞の表現型マーカーの発現により特徴付けられる。

【0329】

一部の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８^＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ^＋及びＣＤ６２Ｌ^－サブセットの両方において存在する。ＰＢＭＣを、抗ＣＤ８抗体及び抗ＣＤ６２Ｌ抗体での染色後、ＣＤ６２Ｌ^－ＣＤ８^＋画分及びＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ８^＋画分に選別する。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、及びＣＤ１２７を含み、グランザイムＢについて陰性である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

【0330】

一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、及びＣＤ１２７について陰性であり、ならびにグランザイムＢ及びパーフォリンについて陽性である。

【0331】

一部の実施形態では、ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、部分集団中にさらに選別される。例えば、ＣＤ４^＋Ｔヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することにより、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、及びエフェクター細胞に選別することができる。ＣＤ４^＋リンパ球は、標準的な方法により得ることができる。一部の実施形態では、ナイーブＣＤ４^＋Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＣＤ４^＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ陽性及びＣＤ４５ＲＯ陽性である。一部の実施形態では、エフェクターＣＤ４^＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ４５ＲＯ陰性である。

【0332】

免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞などは、公知の方法を使用した単離後に遺伝子修飾されることができる、又は免疫エフェクター細胞は、遺伝子修飾される前に、インビトロで活性化及び増殖される（又は前駆細胞の場合には分化される）ことができる。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞などは、本明細書中で企図されるキメラ抗原受容体で遺伝子修飾され（例、ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスベクターで形質導入され）、次にインビトロで活性化及び増殖される。様々な実施形態では、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；第６，５３４，０５５号；第６，９０５，６８０号；第６，６９２，９６４号；第５，８５８，３５８号；第６，８８７，４６６号；第６，９０５，６８１号；第７，１４４，５７５号；第７，０６７，３１８号；第７，１７２，８６９号；第７，２３２，５６６号；第７，１７５，８４３号；第５，８８３，２２３号；第６，９０５，８７４号；第６，７９７，５１４号；第６，８６７，０４１号；及び米国特許出願公開２００６０１２１００５において記載される方法を使用して、ＣＡＲを発現するための遺伝子修飾の前又は後に活性化及び増殖させることができる。

【0333】

一般的に、Ｔ細胞は、それに、ＣＤ３ ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤、及びＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが付着している表面との接触により増殖される。Ｔ細胞集団は、抗ＣＤ３抗体、もしくはその抗原結合断片、又は表面上に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触により、あるいはカルシウムイオノフォアとの併用におけるタンパク質キナーゼＣアクチベーター（例、ブリオスタチン）との接触により刺激され得る。Ｔ細胞の表面上でのアクセサリ分子の共刺激がまた、企図される。

【0334】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣ又は単離Ｔ細胞は、一般的にビーズ又は他の表面上に付着された刺激剤及び共刺激剤、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体などと、適したサイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７及び／又はＩＬ－１５などを含む培養培地中で接触させる。ＣＤ４^＋Ｔ細胞又はＣＤ８^＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ－Ｔ３，ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｉｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）を含み、当技術分野において一般に公知の他の方法と同様に使用することができる（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ．２２７（１－２）：５３－６３，１９９９）。同じビーズに付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体は、「代替」抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての役割を果たす。他の実施形態では、Ｔ細胞は、方法、例えばＵＳ６０４０１７７；ＵＳ５８２７６４２；及びＷＯ２０１２１２９５１４において記載される方法などを使用して、フィーダー細胞ならびに適した抗体及びサイトカインで増殖するように活性化及び刺激され得る。

【0335】

一部の実施形態では、様々な共刺激分子及びサイトカインの安定な発現及び分泌に向けるようにＫ５６２、Ｕ９３７、７２１．２２１、Ｔ２、及びＣ１Ｒ細胞を操作することにより作製された人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）。特定の実施形態では、Ｋ３２ ａＡＰＣ又はＵ３２ ａＡＰＣを使用して、ＡＡＰＣ細胞表面上の一つ又は複数の抗体ベースの刺激分子の呈示に向けられる。ａＡＰＣ上の遺伝子の様々な組み合わせの発現は、ヒトＴ細胞活性化要件の正確な決定を可能にし、ａＡＰＣは、特定の成長要件及び別個の機能を伴うＴ細胞サブセットの最適な増殖のために調整されることができるようにする。ａＡＰＣは、天然ＡＰＣの使用とは対照的に、外因性サイトカインの添加を要求することなく、機能的ヒトＣＤ８ Ｔ細胞のエクスビボ成長及び長期増殖を支持する。Ｔ細胞の集団は、限定されないが、ＣＤ１３７Ｌ（４－１ＢＢＬ）、ＣＤ１３４Ｌ（ＯＸ４０Ｌ）及び／又はＣＤ８０もしくはＣＤ８６を含む様々な共刺激性分子を発現するａＡＰＣにより増殖させることができる。最終的に、ａＡＰＣは、遺伝子修飾されたＴ細胞を増殖させ、ＣＤ８ Ｔ細胞上のＣＤ２８発現を維持するための効率的なプラットフォームを提供する。ＷＯ０３／０５７１７１及びＵＳ２００３／０１４７８６９において提供されるａＡＰＣは、参照によりそれらの全体において本明細書により組み入れられる。

【0336】

一部の実施形態では、ＣＤ３４^＋細胞は、本明細書中で企図される核酸構築物で形質導入される。一部の実施形態では、形質導入されたＣＤ３４^＋細胞は、対象、一般的に、細胞が本来単離された対象中への投与後に、インビボで成熟免疫エフェクター細胞に分化する。一部の実施形態では、ＣＤ３４^＋細胞は、以前に報告された方法（Ａｓｈｅｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｉｍｒｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００４）に従って、以下のサイトカイン：Ｆｌｔ－３リガンド（ＦＬＴ３）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、巨核球成長及び分化因子（ＴＰＯ）、ＩＬ－３、ならびにＩＬ－６の一つ又は複数への曝露の前に、又はそれを用いて、本明細書中に記載されるＣＡＲで遺伝子修飾された後に、インビトロで刺激されてもよい。

【0337】

一部の実施形態では、本開示は、癌の治療のための、修飾された免疫エフェクター細胞の集団を提供し、修飾された免疫エフェクター細胞は、本明細書中に開示されるＣＡＲを含む。例えば、修飾された免疫エフェクター細胞の集団は、本明細書中に記載される癌と診断された患者（自己ドナー）から得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から調製される。ＰＢＭＣは、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ４＋及びＣＤ８＋であってもよいＴリンパ球の異種集団を形成する。

【0338】

ＰＢＭＣはまた、他の細胞傷害性リンパ球、例えばＮＫ細胞又はＮＫＴ細胞などを含み得る。本明細書中で企図されるＣＡＲのコード配列を担持する発現ベクターは、ヒトドナーＴ細胞、ＮＫ細胞、又はＮＫＴ細胞の集団中に導入されることができる。発現ベクターを担持する成功裏に形質導入されたＴ細胞は、フローサイトメトリーを使用してＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離して選別することができ、次に、抗ＣＤ３抗体及び又は抗ＣＤ２８抗体ならびにＩＬ－２あるいは本明細書中の他の箇所に記載されるような当技術分野において公知の任意の他の方法を使用した細胞活性化に加えて、これらのＣＡＲタンパク質を発現するＴ細胞の数を増加させるようにさらに増殖させることができる。標準的な手順は、ヒト対象で使用するための保存及び／又は調製のためのＣＡＲタンパク質Ｔ細胞を発現するＴ細胞の凍結保存に使用される。一実施形態では、Ｔ細胞のインビトロ形質導入、培養、及び／又は増殖は、非ヒト動物由来産物、例えば胎児仔ウシ血清及び胎児ウシ血清などの非存在において実施される。ＰＢＭＣの不均一な集団が遺伝子修飾されるため、結果としての形質導入細胞は、本明細書中で企図されるようなＣＡＲを標的化するＭＵＣ１６を含む、修飾された細胞の不均一な集団である。

【0339】

一部の実施形態では、例えば、一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又はそれ以上の異なる発現ベクターの混合物を、免疫エフェクター細胞のドナー集団を遺伝子修飾する際に使用することができ、各ベクターは、本明細書中で企図される異なるキメラ抗原受容体タンパク質をコードする。結果として生じる、修飾された免疫エフェクター細胞は、修飾された細胞の混合集団を形成し、二つ以上の異なるＣＡＲタンパク質を発現する、修飾された細胞の割合を伴う。

【0340】

Ｉ．Ｔ細胞製造方法
一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現するように遺伝子操作された細胞を製造するための方法を提供する。本明細書中で企図される方法により製造される細胞は、改善された養子免疫療法組成物を提供する。任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、本明細書中で企図される方法により製造された細胞組成物は、増加した生存率、分化の相対的非存在における増殖、及びインビボでの持続性を含む、優れた特性を備えていると考えられる。

【0341】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現するように遺伝子操作されたＴ細胞を製造するための方法を提供する。一部の実施形態では、Ｔ細胞を製造する方法は、細胞を、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路を調節する一つ又は複数の薬剤と接触させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞を製造する方法は、細胞を、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ細胞シグナル伝達経路を調節する一つ又は複数の薬剤と接触させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、任意の供給源から得られ、製造過程の活性化及び／又は増殖段階の間に薬剤と接触させてもよい。結果として得られたＴ細胞組成物は、増殖する、ならびに以下のバイオマーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、及びＣＤ３８の一つ又は複数を発現する能力を有する発生的に強力なＴ細胞において濃縮される。一部の実施形態では、一つ又は複数のＰＩ３Ｋ阻害剤で治療されたＴ細胞を含む細胞の集団は、以下のバイオマーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、及びＣＤ３８の一つ又は複数、あるいは全てを共発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の集団について濃縮される。

【0342】

一部の実施形態では、維持された増殖のレベル及び減少した分化を含む、修飾されたＴ細胞が製造される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、一つ又は複数の刺激シグナル及びＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤である薬剤の存在においてＴ細胞を刺激して活性化させ、増殖させることにより製造される。

【0343】

Ｔ細胞組成物の十分な治療用量を達成するために、Ｔ細胞は、しばしば、一回又は複数回の刺激、活性化、及び／又は増殖に供される。Ｔ細胞は、一般的に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；第６，５３４，０５５号；第６，９０５，６８０号；第６，６９２，９６４号；第５，８５８，３５８号；第６，８８７，４６６号；第６，９０５，６８１号；第７，１４４，５７５号；第７，０６７，３１８号；第７，１７２，８６９号；第７，２３２，５６６号；第７，１７５，８４３号；第５，８８３，２２３号；第６，９０５，８７４号；第６，７９７，５１４号；及び第６，８６７，０４１号において記載される方法を使用して活性化及び増殖することができ、その各々が、参照によりその全体において本明細書中に組み入れられる。

【0344】

Ｔ細胞を次に修飾して、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現させることができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、本明細書中で企図される抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを含むウイルスベクターでＴ細胞を形質導入することにより修飾される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤の存在において、刺激及び活性化の前に修飾される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤の存在において、刺激及び活性化の後に修飾される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤の存在において、１２時間、２４時間、３６時間、又は４８時間の刺激及び活性化以内に修飾される。

【0345】

Ｔ細胞が活性化された後、細胞を培養して増殖させる。Ｔ細胞は、少なくとも１、２、３、４、５、６、又は７日間、少なくとも２週間、少なくとも１、２、３、４、５、又は６ヵ月以上、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０回以上のラウンドの増殖で培養されてもよい。

【0346】

一部の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、ＰＩ３Ｋ経路の一つ又は複数の阻害剤の存在において製造される。阻害剤は、経路内の一つ又は複数の活性又は単一の活性を標的としうる。任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、製造過程の刺激、活性化、及び／又は増殖期の間に、Ｔ細胞を、ＰＩ３Ｋ経路の一つ又は複数の阻害剤と治療又は接触させることによって、若いＴ細胞を優先的に増加させ、それにより、優れた治療用Ｔ細胞組成物が産生される。

【0347】

一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体を発現するＴ細胞の増殖を増加させるための方法が提供される。そのような方法は、例えば、対象からＴ細胞の供給源を回収すること、ＰＩ３Ｋ経路の一つ又は複数の阻害剤の存在においてＴ細胞を刺激及び活性化すること、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現させるためのＴ細胞の修飾、及び培養中でＴ細胞を増殖させることを含み得る。

【0348】

一部の実施形態では、遺伝子修飾されたＴ細胞は、ＣＤ３ ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤、及びＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドとの接触により増殖される。

【0349】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣ又は単離Ｔ細胞は、適したサイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、及び／又はＩＬ－１５などを伴う培養培地中で、刺激剤及び共刺激剤、例えば可溶性抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体など、又はビーズもしくは他の表面上に付着された抗体と接触させる。

【0350】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣ又は単離Ｔ細胞は、適したサイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、及び／又はＩＬ－１５など、ならびに／あるいはＰＩ３Ｋ阻害剤を伴う培養培地中で、刺激剤及び共刺激剤、例えば可溶性抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体など、又はビーズもしくは他の表面上に付着された抗体と接触させる。

【0351】

一部の実施形態では、以下のバイオマーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、及びＣＤ３８の一つ又は複数の発現について濃縮されたＴ細胞の集団を産生するための方法。一部の実施形態では、若いＴ細胞は、以下の生物学的マーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、及びＣＤ３８の一つ又は複数、あるいは全てを含む。一実施形態では、ＣＤ５７、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、及びＬＡＧ３の発現を欠く若いＴ細胞が提供される。

【0352】

一部の実施形態では、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、本明細書中で企図されるＴ細胞製造方法においてＴ細胞の供給源として使用される。ＰＢＭＣは、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、又はＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋であり得るＴリンパ球の異種の集団を形成し、他の単核細胞、例えば単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞などを含み得る。本明細書中で企図される操作されたＴＣＲ又はＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、ヒトドナーＴ細胞、ＮＫ細胞、又はＮＫＴ細胞の集団中に導入されることができる。発現ベクターを担持する成功裏に形質導入されたＴ細胞は、フローサイトメトリーを使用してＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離して選別することができ、次に、抗ＣＤ３抗体及び又は抗ＣＤ２８抗体ならびにＩＬ－２、ＩＬ－７、及び／又はＩＬ－１５あるいは本明細書中の他の箇所に記載されるような当技術分野において公知の任意の他の方法を使用した細胞活性化に加えて、修飾されたＴ細胞の数を増加させるようにさらに増殖させることができる。

【0353】

本明細書中で使用される場合、用語「ＰＩ３Ｋ阻害剤」は、核酸、ペプチド、又はＰＩ３Ｋの少なくとも一つの活性に結合し、かつ阻害する小さな有機分子を指す。ＰＩ３Ｋタンパク質は、クラス１のＰＩ３Ｋ、クラス２のＰＩ３Ｋ、及びクラス３のＰＩ３Ｋの三つのクラスに分けることができる。クラス１のＰＩ３Ｋは、四つのｐ１１０触媒サブユニット（ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δ、及びｐ１１０γ）の一つ、及び二つの調節サブユニットファミリーの一つとからなるヘテロ二量体として存在する。ＰＩ３Ｋ阻害剤は、好ましくはクラス１のＰＩ３Ｋ阻害剤を標的化する。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クラス１のＰＩ３Ｋ阻害剤の一つ又は複数のアイソフォームに対する選択性を示す（即ち、ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δ、及びｐ１１０γ又はｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δ、及びｐ１１０γに対する選択性）。別の態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はアイソフォーム選択性を示さず、「汎ＰＩ３Ｋ阻害剤」とみなされる。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋ触媒ドメインへのＡＴＰとの結合について競合する。

【0354】

一部の実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、例えば、ＰＩ３ＫならびにＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲ経路中の追加のタンパク質を標的化することができる。一部の実施形態では、ｍＴＯＲ及びＰＩ３Ｋの両方を標的化するＰＩ３Ｋ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤又はＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかとして言及されることができる。ＰＩ３Ｋのみを標的化するＰＩ３Ｋ阻害剤は、選択的ＰＩ３Ｋ阻害剤として言及することができる。一部の実施形態では、選択的ＰＩ３Ｋ阻害剤は、経路中のｍＴＯＲ及び／又は他のタンパク質に関して、阻害剤のＩＣ５０よりも少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、又はそれ以上低い、ＰＩ３Ｋに関して５０％の阻害濃度を示す薬剤を指すと理解されることができる。

【0355】

一部の実施形態では、例示的なＰＩ３Ｋ阻害剤は、約２００ｎＭ又はそれ以下、好ましくは約１００ｎｍ又はそれ以下、さらにより好ましくは約６０ｎＭ又はそれ以下、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約５ｎＭ、約１ｎＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、１μＭ又はそれ以下のＩＣ５０（活性の５０％を阻害する濃度）でＰＩ３Ｋを阻害する。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、約２ｎＭ～約１００ｎｍ、より好ましくは約２ｎＭ～約５０ｎＭ、さらにより好ましくは約２ｎＭ～約１５ｎＭのＩＣ５０を伴ってＰＩ３Ｋを阻害する。

【0356】

特定の実施形態に企図されるＴ細胞製造方法での使用に適したＰＩ３Ｋ阻害剤の例証的な例は、限定されないが、ＢＫＭ１２０（クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ１４７（クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、（汎ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、及びＰＸ－８６６（クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤、ｐ１１０α、ｐ１１０β、及びｐ１１０γアイソフォーム、Ｏｎｃｏｔｈｙｒｅｏｎ）を含む。

【0357】

選択的ＰＩ３Ｋ阻害剤の他の例証的な例は、限定されないが、ＢＹＬ７１９、ＧＳＫ２６３６７７１、ＴＧＸ－２２１、ＡＳ２５２４２、ＣＡＬ－１０１、ＺＳＴＫ４７４、及びＩＰＩ－１４５を含む。汎ＰＩ３Ｋ阻害剤のさらなる例証的な例は、限定されないが、ＢＥＺ２３５、ＬＹ２９４００２、ＧＳＫ１０５９６１５、ＴＧ１００７１３、及びＧＤＣ－０９４１を含む。一部の実施形態、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＺＳＴＫ４７４である。

【0358】

一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体を発現するＴ細胞の増殖を増加させるための方法が提供される。そのような方法は、例えば、対象からＴ細胞の供給源を回収すること、Ｔ細胞を刺激及び活性化すること、ＣＡＲを発現させるためのＴ細胞の修飾、ならびに培地中でＴ細胞を増殖することを含み得るが、Ｔ細胞は、製造過程のより多くの工程のいずれか一つにおいて一つ又は複数のＰＩ３Ｋ阻害剤の存在において製造される。

【0359】

本明細書中で企図される製造方法は、ヒト対象における使用のための保存及び／又は調製のための、修飾されたＴ細胞の凍結保存をさらに含んでもよい。Ｔ細胞は、解凍時に細胞が生存したままであるように凍結保存される。必要な場合、凍結保存され、形質転換された免疫エフェクター細胞を解凍し、成長させ、より多くのそのような細胞について増殖させることができる。本明細書中で使用される場合、「凍結保存」は、ゼロ以下の温度、例えば（典型的には）７７Ｋ又は－１９６℃（液体窒素の沸点）などまで冷却することによる細胞の保存を指す。凍結保存剤は、しばしば、保存されている細胞を、低温での凍結又は室温への加熱に起因する損傷から防止するために、ゼロ以下の温度で使用される。凍結保存剤及び最適な冷却速度は、細胞損傷から保護することができる。使用することができる凍結保護剤は、限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ ａｎｄ Ｂｉｓｈｏｐ、Ｎａｔｕｒｅ、１９５９；１８３：１３９４－１３９５；Ａｓｈｗｏｏｄ－Ｓｍｉｔｈ、Ｎａｔｕｒｅ、１９６１；１９０：１２０４－１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリジン（Ｒｉｎｆｒｅｔ、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９６０；８５：５７６）、及びポリエチレングリコール（Ｓｌｏｖｉｔｅｒ ａｎｄ Ｒａｖｄｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、１９６２；１９６：４８）を含む。好ましい冷却速度は、１°～３℃／分である。少なくとも二時間後、Ｔ細胞は、－８０℃の温度に達し、長期低温貯蔵容器など、永久保存のために液体窒素（－１９６℃）に直接配置することができる。

【0360】

Ｊ．組成物及び製剤
一部の実施形態では、本開示は、本明細書中で企図されるような、一つ又は複数のポリペプチド、ポリヌクレオチド、同を含むベクター、遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞などを含む組成物を提供する。組成物は、限定されないが、医薬組成物を含む。「医薬組成物」は、細胞又は動物への投与のための医薬的に許容可能な又は生理学的に許容可能な溶液中で、単独で、又は一つ又は複数の他の治療のモダリティとの組み合わせにおいて製剤化される組成物を指す。望ましい場合には、本開示の組成物は、他の薬剤も、例えば、サイトカイン、成長因子、ホルモン、低分子、化学療法剤、プロドラッグ、薬物、抗体、又は他の様々な医薬的に活性な薬剤などとの組み合わせにおいて投与され得ることも理解されるであろう。実際に、また、組成物中に含まれ得る他の成分に限定はないが、追加の薬剤が、意図される治療を送達する組成物の能力に有害な影響を及ぼさないことを条件とする。

【0361】

語句「医薬的に許容可能な」を本明細書中で用いて、適切な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題もしくは合併症を伴わずにヒト及び動物の組織と接触した使用のために適切であり、合理的な利益／リスク比に見合った、それら化合物、材料、組成物及び／又は投薬形態を指す。

【0362】

本明細書中で使用される場合、「医薬的に又は生理学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤」は、限定されないが、ヒト又は家畜における使用のために許容可能であるとして米国食品医薬品局により承認されている、任意のアジュバント、担体、賦形剤、滑剤、甘味剤、希釈剤、保存剤、染料／着色剤、香味剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、界面活性剤、又は乳化剤を含む。例示的な医薬的に許容可能な担体は、限定されないが、糖、例えばラクトース、グルコース、及びスクロースなど；デンプン、例えばトウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなど；セルロース、ならびにその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなど；トラガカンス；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバター、ワックス、動物及び植物性脂肪、パラフィン、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、酸化亜鉛；油、例えばピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及びダイズ油など；グリコール、例えばプロピレングリコールなど；ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールなど；エステル、例えばオレイン酸エチル及びラウレートエチルなど；寒天；緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなど；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール、リン酸緩衝液、及び医薬製剤中で用いられる任意の他の適合性のある物質を含む。

【0363】

一部の実施形態では、組成物は、本明細書中で企図される量のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞を含む。本明細書中で使用される場合、用語「量」は、臨床結果を含む、有益又は所望の予防又は治療結果を達成するために、遺伝子修飾された治療用細胞、例えば、Ｔ細胞などの「有効な量」又は「有効量」を指す。

【0364】

「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために有効な遺伝子修飾された治療用細胞の量を指す。典型的には、しかし、必ずしもそうではないが、予防的投与量は、疾患の早期ステージの前の、又は早期ステージの対象において使用されるため、予防的有効量は、治療有効量よりも少ない。

【0365】

遺伝子修飾された治療用細胞の「治療有効量」は、因子、例えば個体の病態、年齢、性別、及び体重など、ならびに個体において所望の応答を引き出す幹細胞及び前駆細胞の能力に応じて変化し得る。治療有効量はまた、ウイルス又は形質導入された治療用細胞の任意の毒性又は有害な効果を、治療的に有益な効果が上回るものである。用語「治療有効量」は、対象（例、患者）を「治療する」のに有効である量を含む。治療量が示されている場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍の大きさ、感染又は転移の程度、及び状態における個々の差を考慮し、医師により決定されることができる。

【0366】

一般的に、本明細書中に記載されるＴ細胞を含む医薬組成物は、１０^２～１０^１０細胞／体重kg、好ましくは１０^５～１０^６細胞／体重kgの投与量で、当該範囲内の全ての整数値を含み、投与され得ると言える。細胞の数は、組成物が意図される最終的な使用に依存し、その中に含まれる細胞の種類と同様である。本明細書中で提示される使用について、細胞は一般的に、リットル又はそれ以下の容積中であり、５００ｍｌ又はそれ以下、さらには２５０ｍｌもしくは１００ｍｌ又はそれ以下であることができる。故に、所望の細胞の密度は、典型的には、１０^６個細胞／ｍｌを上回り、一般的には、１０^７個細胞／ｍｌを上回り、一般的には１０^８個細胞／ｍｌ又はそれ以上である。臨床的に関連する免疫細胞数は、累積的には１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１又は１０^１２個細胞と等しい、又はそれを超える複数回の注入に分けられてもよい。本発明の一部の態様では、特に全ての注入細胞が、特定の標的抗原に向け直されるため、より少ない数の細胞が、１０^６／キログラム（患者当たり１０^６～１０^１１）の範囲中で投与され得る。ＣＡＲ発現細胞組成物は、これらの範囲内の投与量で複数回投与されてもよい。細胞は、療法を受けている患者にとって同種、同系、異種、又は自己であってもよい。望ましい場合、治療はまた、本明細書中に記載されるようにマイトジェン（例、ＰＨＡ）もしくはリンホカイン、サイトカイン、及び／又はケモカイン（例、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－アルファ、ＩＬ－１８、及びＴＮＦ－ベータ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与を含み、免疫応答の誘導を増強し得る。

【0367】

一般的に、本明細書中に記載されるように活性化及び増殖された細胞を含む組成物は、免疫不全状態の個体で生じる疾患の治療及び防止において利用されてもよい。特に、本明細書中で企図されるＣＡＲ修飾されたＴ細胞を含む組成物は、ＭＵＣ１６を発現する癌の治療において使用される。本発明のＣＡＲ修飾されたＴ細胞は、単独で、又は担体、希釈剤、賦形剤との、及び／又は他の成分、例えばＩＬ－２もしくは他のサイトカインもしくは他の細胞集団などとの組み合わせにおける医薬組成物として投与されてもよい。一部の実施形態では、本明細書中で企図される医薬組成物は、一つ又は複数の医薬的に又は生理学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤との組み合わせにおける遺伝子修飾されたＴ細胞の量を含む。

【0368】

ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞集団、例えばＴ細胞などを含む、本発明の医薬組成物は、緩衝液、例えば中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水及び同様のものなど；糖、例えばグルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなど；タンパク質；ポリペプチド又はアミノ酸、例えばグリシンなど；抗酸化物質；キレート剤、例えばＥＤＴＡ又はグルタチオンなど；アジュバント（例、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。一部の実施形態では、組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内もしくは動脈内）、腹腔内又は筋肉内投与用に製剤化される。

【0369】

液体医薬組成物は、溶液、懸濁液、又は他の類似の形態であるかどうかにかかわらず、以下の一つ又は複数を含み得る：滅菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、好ましくは生理食塩液、リンガー液、等張食塩水、固定油、例えば溶媒又は懸濁媒として役立ち得る合成モノ又はジグリセリドなど、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の溶媒など；抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベンなど；抗酸化物質、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸ナトリウムなど；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸など；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩など、及び等張性の調整のための薬剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロースなど。非経口調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、又はガラスもしくはプラスチックで作製された複数回用量バイアルに封入されることができる。注射用医薬組成物は、好ましくは、滅菌である。

【0370】

一部の実施形態では、本明細書中で企図されるＴ細胞組成物は、医薬的に許容可能な細胞培養培地中で製剤化される。そのような組成物は、ヒト対象への投与のために適切である。一部の実施形態では、医薬的に許容可能な細胞培養培地は、無血清培地である。

【0371】

無血清培地は、血清含有培地を上回る利点をいくつか有しており、シンプルでより定義された組成、低下した程度の汚染物、感染性病原体の潜在的な供給源の排除、及びより低いコストを含む。一部の実施形態では、無血清培地は動物質を含まず、場合により、無タンパク質であり得る。場合により、培地は、バイオ医薬品的に許容可能な組み換えタンパク質を含み得る。「動物質を含まない」培地は、成分が非動物供給源から由来する培地を指す。組み換えタンパク質は、動物質を含まない培地中で天然動物性タンパク質を置き換え、その栄養素は合成、植物又は微生物の供給源から得られる。「タンパク質を含まない」培地は、対照的に、実質的にタンパク質を含まないと定義される。

【0372】

特定の組成物において使用される無血清培地の例証的な例は、限定されないが、ＱＢＳＦ－６０（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｉｎｃ．）、ＳｔｅｍＰｒｏ－３４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及びＸ－ＶＩＶＯ １０を含む。

【0373】

一部の実施形態では、本明細書中で企図される免疫エフェクター細胞を含む組成物は、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含む溶液中で製剤化される。

【0374】

一部の実施形態では、本明細書中で企図される免疫エフェクター細胞を含む組成物は、凍結保存培地を含む溶液中で製剤化される。例えば、凍結保存剤を含む凍結保存培地を使用して、融解後の高い細胞活性成績を維持してもよい。特定の組成物において使用される凍結保存培地の例証的な例は、限定されないが、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ５、及びＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ２を含む。

【0375】

一部の実施形態では、本明細書中で企図される免疫エフェクター細胞を含む組成物は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０に対してＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを５０：５０で含む溶液中で製剤化される。

【0376】

Ｋ．キット
一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の集団、又はその医薬組成物を含むキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、免疫エフェクター細胞の集団又はその医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するための説明書を含む。一部の実施形態では、必要とする対象は、ＭＵＣ１６を発現する癌細胞を有する。

【0377】

一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の集団、又はその医薬組成物、及び細胞又は組成物を、免疫チェックポイント阻害剤を受けた、又は受けている、それを必要とする対象に投与するための説明書を含むキットを提供する。一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の集団、又はその医薬組成物、及び細胞又は組成物を、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、又はセミプリマブを受けた、又は受けている、それを必要とする対象に投与するための説明書を含むキットを提供する。

【0378】

一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の集団、又はその医薬組成物、及び細胞又は組成物を、腫瘍関連抗原について特異的な第一の結合ドメイン及びＣＤ３について特異的な第二の結合ドメインを含む二重特異的抗体を受けた、又は受けている、それを必要とする対象に投与するための説明書を含むキットを提供する。一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の集団、又はその医薬組成物、及び細胞又は組成物を、腫瘍関連抗原について特異的な第一の結合ドメイン及びＣＤ２８について特異的な第二の結合ドメインを含む二重特異的抗体を受けた、又は受けている、それを必要とする対象に投与するための説明書を含むキットを提供する。

【0379】

Ｌ．治療方法
本明細書中で企図されるＣＡＲを発現する遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞は、癌の防止、治療、及び寛解における使用のための、又は癌に関連付けられる少なくとも一つの症状を防止、治療、もしくは寛解させるための養子免疫療法の改善された方法を提供する。

【0380】

一部の実施形態では、本明細書中で企図される遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞は、対象において癌細胞における細胞傷害性を増加させる際での、又は対象において癌細胞の数を減少させる際での使用のための養子免疫療法の改善された方法を提供する。

【0381】

一部の実施形態では、一次免疫エフェクター細胞の特異性は、本明細書中で企図されるように、一次免疫エフェクター細胞を抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲで遺伝子修飾することにより、特定の抗原、例えば、ＭＵＣ１６を発現する細胞に向け直される。一部の実施形態では、ウイルスベクターを使用して、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲをコードする特定のポリヌクレオチドで免疫エフェクター細胞を遺伝子修飾する。

【0382】

一部の実施形態では、Ｔ細胞を遺伝子修飾して、ＭＵＣ１６発現癌細胞を標的化する抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現させ、Ｔ細胞を、それを必要とするレシピエントに注入する種類の細胞治療が提供される。注入された細胞は、レシピエントにおいて疾患を起こす細胞を死滅させることができる。抗体治療とは異なり、Ｔ細胞治療は、インビボで複製することができ、持続的な癌治療に導くことができる長期持続性をもたらす。

【0383】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、頑強なインビボのＴ細胞増殖を受けて、長期間にわたって存続することができる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、任意の追加の腫瘍形成又は成長を阻害するために再活性化することができる特定のメモリーＴ細胞又は幹細胞メモリーＴ細胞に進化する。

【0384】

抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を使用して治療する、防止する、又は寛解させることができる状態の例証的な例が、特定の実施形態において企図されている。一部の実施形態では、本開示は、癌を治療するための方法を提供し、それを必要とする対象に抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞又は同を含む組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、癌は、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、卵管癌、乳癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、肝内胆管癌腫瘤形成型、子宮頸部の腺癌、及び胃管の腺癌から選択される。

【0385】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ又は同を含む組成物を発現する免疫エフェクター細胞の治療有効量を、単独で、又は一つ又は複数の治療剤との組み合わせにおいて、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態では、細胞は、癌細胞と関連付けられる状態を発生するリスクのある患者の治療において使用される。このように、特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する修飾されたＴ細胞の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、癌の少なくとも一つの症状の治療、防止、又は寛解のための方法。

【0386】

本明細書中で使用される場合、用語「個体」及び「対象」はしばしば互換的に使用され、本明細書中で他の箇所で企図される遺伝子治療ベクター、細胞ベースの治療剤、及び方法で治療されることができる疾患、障害、又は状態の症状を示す任意の動物を指す。一部の実施形態では、対象は、本明細書中の他の箇所で企図されている遺伝子治療ベクター、細胞ベースの治療剤、及び方法で治療することができる、癌に関連する疾患、障害、又は状態の症状を示す任意の動物を含む。適切な対象（例、患者）は、実験動物（例、マウス、ラット、ウサギ又はモルモット）、家畜（ｆａｒｍ ａｎｉｍａｌ、ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｉｍａｌ）、又はペット（例、ネコ又はイヌ）を含む。非ヒト霊長類、好ましくはヒト患者も含まれる。典型的な対象は、癌もしくは癌と診断された、又はそのリスクのある、又は癌を有するヒト患者を含む。

【0387】

本明細書中で使用される場合、用語「患者」は、遺伝子治療ベクター、細胞ベースの治療剤、及び本明細書の他の箇所で開示される方法を用いて治療されることができる特定の疾患、障害、又は状態と診断された対象を指す。

【0388】

本明細書中で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾患又は病理学的状態の症状もしくは病理に対する、あらゆる有益な作用又は望ましい作用を含み、治療される疾患又は状態の一つ又は複数の測定可能なマーカーにおける最小の低下さえも含み得る。治療には、任意で、疾患もしくは病態の減少、又は疾患もしくは病態の進行の遅延のいずれかが含まれてもよい。「治療」は必ずしも、疾患もしくは状態、又はその関連症状の完全な排除又は治癒を示すものではない。

【0389】

本明細書中で使用される場合、類似の言葉、例えば「防止する」、及び例えば「防止される」、「防止すること」などは、疾患もしくは状態の発生もしくは再発の可能性を防止、阻害、又は低下するためのアプローチを示す。また、疾患もしくは状態の発生又は再発の遅延、又は疾患もしくは状態の症状の発生又は再発の遅延も指す。本明細書中で使用される場合、「防止」及びその類似の言葉がまた、疾患もしくは症状の発生又は再発の前の、疾患もしくは状態の強度、作用、症状、及び／又は負荷量の低下を含む。

【0390】

本明細書中で使用される場合、「～の少なくとも一つの症状を寛解させること」は、対象が治療されている疾患もしくは状態の、減少する一つ又は複数の症状を指す。一部の実施形態では、治療されている疾患又は状態は癌であり、寛解される一つ又は複数の症状は、限定されないが、衰弱、疲労、息切れ、あざ及び出血のしやすさ、頻繁な感染、拡大したリンパ節、膨張した又は疼痛のある腹部（拡張した腹部臓器に起因する）、骨又は関節の疼痛、骨折、計画外の体重減少、食欲不振、寝汗、持続する微熱、及び減少した排尿（腎機能障害に起因する）を含む。

【0391】

「増強する」もしくは「促進する」、あるいは「増加させる」もしくは「増殖させる」により、一般的に、溶媒又は制御分子／組成物のいずれかにより起こされる応答と比較して、より大きな生理学的応答（即ち、下流効果）を産生、誘発、又は起こす、本明細書中で企図される組成物、例えば、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する遺伝子修飾されたＴ細胞の能力を指す。測定可能な生理学的応答は、とりわけ、Ｔ細胞増殖、活性化、持続性における増加、及び／又は癌細胞殺傷能力における増加を含み、当技術分野及び本明細書中の記載の理解から明白である。「増加された」又は「増強された」量は、典型的には、「統計的に有意な」量であり、溶媒又は対照組成物により産生される応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０又はそれ以上（例、５００倍、１０００倍）（その間の及び１を上回る全ての整数及び小数点を含む、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８など）である増加を含み得る。

【0392】

「減少させる」、又は「下げる」、又は「低める」、又は「低下させる」、又は「弱める」により、一般的に、溶媒又は対照の分子／組成物により起こされる応答と比較して、小さな生理学的応答（即ち、下流効果）を産生する、誘発させる、又は起こす、本明細書中で企図される組成物の能力を指す。「減少」又は「低下された」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、溶媒、対照組成物により産生される応答、又は特定の細胞株における応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０又はそれ以上（例、５００倍、１０００倍）（その間の及び１を上回る全ての整数及び小数点を含む、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８など）である減少を含み得る。

【0393】

「維持する」、又は「保存する」、又は「維持」、又は「変化がない」、又は「実質的な変化がない」、又は「実質的な減少が無い」は、一般的に、溶媒、対照の分子／組成物により起こされた反応、又は特定の細胞株における応答と比較して、細胞において類似の生理学的応答（即ち、下流効果）を産生する、誘発させる、又は起こす、本明細書中で企図される組成物の能力を指す。同等の応答は、参照応答と有意に違わない、又は測定可能なほど違わない応答である。

【0394】

一部の実施形態では、それを必要とする対象において癌を治療する方法は、例えば、本明細書中で企図される、遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞を含む組成物の有効量、例えば、治療有効量を投与することを含む。投与の量ならびに頻度は、患者の状態、患者の疾患の種類及び重症度といった因子により決定されるが、適した投与量は、臨床治験により決定されてもよい。

【0395】

一部の実施形態では、対象に投与される組成物において、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞の量は、少なくとも０．１×１０^５細胞、少なくとも０．５×１０^５細胞、少なくとも１×１０^５細胞、少なくとも５×１０^５細胞、少なくとも１×１０^６細胞、少なくとも０．５×１０^７細胞、少なくとも１×１０^７細胞、少なくとも０．５×１０^８細胞、少なくとも１×１０^８細胞、少なくとも０．５×１０^９細胞、少なくとも１×１０^９細胞、少なくとも２×１０^９細胞、少なくとも３×１０^９細胞、少なくとも４×１０^９細胞、少なくとも５×１０^９細胞又は少なくとも１×１０^１０細胞である。

【0396】

一部の実施形態では、約１×１０^７Ｔ細胞～約１×１０^９Ｔ細胞、約２×１０^７Ｔ細胞～約０．９×１０^９Ｔ細胞、約３×１０^７Ｔ細胞～約０．８×１０^９Ｔ細胞、約４×１０^７Ｔ細胞～約０．７×１０^９Ｔ細胞、約５×１０^７Ｔ細胞～約０．６×１０^９Ｔ細胞、又は約５×１０^７Ｔ細胞～約０．５×１０^９Ｔ細胞が対象に投与される。

【0397】

一部の実施形態では、対象に投与される組成物における、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞の量は、少なくとも０．１×１０^４細胞／ｋｇ体重、少なくとも０．５×１０^４細胞／ｋｇ体重、少なくとも１×１０^４細胞／ｋｇ体重、少なくとも５×１０^４細胞／ｋｇ体重、少なくとも１×１０^５細胞／ｋｇ体重、少なくとも０．５×１０^６細胞／ｋｇ体重、少なくとも１×１０^６細胞／ｋｇ体重、少なくとも０．５×１０^７細胞／ｋｇ体重、少なくとも１×１０^７細胞／ｋｇ体重、少なくとも０．５×１０^８細胞／ｋｇ体重、少なくとも１×１０^８細胞／ｋｇ体重、少なくとも２×１０^８細胞／ｋｇ体重、少なくとも３×１０^８細胞／ｋｇ体重、少なくとも４×１０^８細胞／ｋｇ体重、少なくとも５×１０^８細胞／ｋｇ体重、又は少なくとも１×１０^９細胞／ｋｇ体重である。

【0398】

一部の実施形態では、約１×１０^６Ｔ細胞／ｋｇ体重～約１×１０^８Ｔ細胞／ｋｇ体重、約２×１０^６Ｔ細胞／ｋｇ体重～約０．９×１０^８Ｔ細胞／ｋｇ体重、約３×１０^６Ｔ細胞／ｋｇ体重～約０．８×１０^８Ｔ細胞／ｋｇ体重、約４×１０^６Ｔ細胞／ｋｇ体重～約０．７×１０^８Ｔ細胞／ｋｇ体重、約５×１０^６Ｔ細胞／ｋｇ体重～約０．６×１０^８Ｔ細胞／ｋｇ体重、又は約５×１０^６Ｔ細胞／ｋｇ体重～約０．５×１０^８Ｔ細胞／ｋｇ体重が対象に投与される。

【0399】

当業者は、本明細書中で企図される組成物の複数回の投与が、所望の治療効果を発揮させるために要求され得ることを認識するであろう。例えば、組成物は、１週間、２週間、３週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、１年、２年、５年、１０年、又はそれ以上の期間にわたり、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０回以上投与されてもよい。

【0400】

一部の実施形態では、活性化された免疫エフェクター細胞が対象に投与され、次に、その後に、再採血して（又はアフェレシスを実施し）、それから由来する免疫エフェクター細胞を活性化し、これら活性化及び増殖された免疫エフェクター細胞で患者に再注入することが望ましいであろう。この過程は、数週ごとに複数回実施されてもよい。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化されることができる。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、１００ｃｃ、１５０ｃｃ、２００ｃｃ、２５０ｃｃ、３００ｃｃ、３５０ｃｃ、又は４００ｃｃ又はそれ以上の採血から活性化される。理論により拘束されないが、複数回の採血／複数回の再注入のプロトコルを使用することで、免疫エフェクター細胞の特定の群を選択するために役立ち得る。

【0401】

本明細書中で企図される組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、移植、又は移植を含む、任意の好都合な様式において行われ得る。一部の実施形態では、組成物は非経口的に投与される。本明細書中で使用される語句「非経口投与」及び「非経口的に投与」は、経腸投与及び局所投与以外の投与様式を指し、通常は注射により、限定されないが、血管内、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、腫瘍内、心臓内、皮内、腹腔内の、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、及び胸骨内注射及び注入を含む。一部の実施形態では、本明細書中で企図される組成物は、腫瘍、リンパ節、又は感染の部位中への直接注射により対象に投与される。

【0402】

一部の実施形態では、それを必要とする対象に、対象におけるＭＵＣ１６発現細胞又は腫瘍への細胞免疫応答を増加させるために有効量の組成物を投与する。免疫応答は、感染細胞を殺傷することが可能な細胞傷害性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びヘルパーＴ細胞応答により媒介される細胞免疫応答を含み得る。主にＢ細胞を活性化することが可能なヘルパーＴ細胞により媒介され、このように、抗体産生に導く液性免疫応答がまた、誘発され得る。様々な技術を、組成物により誘導される免疫応答の種類を分析するために使用してもよく、それらは、当技術分野において、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ：Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ（２００１）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．において十分に記載されている。

【0403】

一部の実施形態では、癌と診断された対象を治療する方法が提供され、対象から免疫エフェクター細胞を除去し、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターで当該免疫エフェクター細胞を遺伝子修飾し、それにより、修飾された免疫エフェクター細胞の集団を産生し、修飾された免疫エフェクター細胞の集団を同じ対象に投与することを含む。一部な実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞を含む。

【0404】

一部の実施形態では、対象において標的細胞集団に対する免疫エフェクター細胞媒介性の免疫調節応答を刺激するための方法が提供され、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲをコードする核酸構築物を発現する免疫エフェクター細胞集団を対象に投与する工程を含む。

【0405】

特定の実施形態において企図される細胞組成物を投与するための方法は、対象において抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲを直接的に発現するエクスビボ遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞の再導入、又は対象中への導入時にＣＡＲを発現する成熟免疫エフェクター細胞に分化する免疫エフェクター細胞の遺伝子修飾された前駆細胞の再導入をもたらすのに有効な任意の方法を含む。一つの方法は、本明細書中で企図される核酸構築物を用いてエクスビボで末梢血Ｔ細胞を形質導入すること、及び形質導入細胞を対象に戻すこと、を含む。

【0406】

１．併用治療
一部の実施形態では、本明細書中で企図される組成物は、例えば、一つ又は複数の治療剤との併用治療において、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の有効量を含む。本明細書中で使用される場合、「併用治療」は、組み合わせの有益な効果を提供するレジメンにおける各薬剤又は治療の連続的な様式における投与、及び実質的に同時の様式において、例えばこれらの活性薬剤の固定比率を有する単一のカプセル中で、又は各薬剤についての複数の別々のカプセル中で、など、これらの薬剤又は治療の同時投与を包含する。併用治療はまた、個々のエレメントが異なる時間で及び／又は異なる経路により投与されうるが、しかし、それらが、併用治療の各薬剤又は腫瘍治療アプローチの共作用又は薬物動態的効果及び薬力学的効果により有益な効果を提供するように組み合わせにおいて作用する組み合わせを含む。

【0407】

このように、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞組成物は、他の公知の癌治療、例えば放射線治療、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン治療、光力学的治療などとの組み合わせにおいて投与されてもよい。組成物は、抗生物質と併用して投与されてもよい。そのような治療剤は、例えば、本明細書中に記載される特定の疾患状態、例えば特定の癌などに対する標準治療として当技術分野において承認され得る。企図される例示的な治療剤は、サイトカイン、成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、抗炎症剤、化学療法剤、放射線療法剤、治療用抗体、腫瘍溶解性ウイルス、又は他の活性薬剤及び補助薬剤を含む。

【0408】

一部の実施形態では、本明細書中に開示されるＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤との併用において投与され得る。化学療法剤の例証的な例は、アルキル化剤、例えばチオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））など；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなど；アジリジン、例えばベンゾドパ、カルボコン、メチルドパ、及びウレドパなど；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスファオラミド、及びトリメチルロメラミンレジューム（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ ｒｅｓｕｍｅ）を含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；窒素マスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードなど；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなど；抗生物質、例えばアクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニクリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなど；抗代謝剤、例えばメトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）など；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど；プリン類似体、例えばフルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモファー、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵなど；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど；葉酸補充剤、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）など；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デホファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ニュージャージー州プリンストン）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、フランス、アントニー）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えばシスプラチン及びカルボプラチンなど；ビンブラストン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオミチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えばＴａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）など；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトクス）；エスペラマイシン；カペシタビン；ならびに上のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、又は誘導体を含む。また、この定義において含まれるのは、癌に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、４（５）－イミダゾールを阻害するアロマターゼ、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲンなど；ならびに抗アンドロゲン剤、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリンなど；ならびに上のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、又は誘導体。

【0409】

様々な他の治療剤が、本明細書中に記載される組成物と併せて使用されてもよい。一部の実施形態では、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞を含む組成物は、抗炎症剤と投与される。抗炎症剤又は抗炎症薬物は、限定されないが、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ医薬、シクロホスファミド及びミコフェノール酸塩を含む非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）を含む。

【0410】

他の例示的なＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ－２阻害剤、例えばＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）及びＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）など、ならびにシアリル酸塩からなる群から選ばれる。例示的な鎮痛剤は、アセトアミノフェン、オキシコドン、プロポルキシフェン（ｐｒｏｐｏｒｘｙｐｈｅｎｅ）塩酸塩のトラマドールからなる群から選ばれる。例示的なグルココルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、又はプレドニゾンからなる群から選ばれる。例示的な生物学的応答修飾剤は、細胞表面マーカー（例、ＣＤ４、ＣＤ５など）、サイトカイン阻害剤、例えばＴＮＦアンタゴニストなど（例、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ケモカイン阻害剤及び接着分子阻害剤に対して向けられた分子を含む。生物学的応答修飾剤は、モノクローナル抗体ならびに分子の組み換え型形態を含む。例示的なＤＭＡＲＤは、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）及び筋肉内）及びミノサイクリンを含む。

【0411】

本明細書中で企図されるＣＡＲ修飾されたＴ細胞との組み合わせのための適切な治療用抗体の例証的な例は、限定されないが、バビツキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン）、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、コナツムマブ、ダラツムマブ、デュリゴツマブ、ダセツズマブ、ダロツズマブ、エロツズマブ（ＨｕＬｕｃ６３）、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、インダツキシマブ、イノツズマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、ミラツズマブ、モキセツモマブ、オカラツズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、シルツキシマブ、テプロツムマブ、及びウブリツキシマブを含む。

【0412】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、サイトカインとの併用において投与される。本明細書中で使用される場合、「サイトカイン」は、一つの細胞群により放出され、別の細胞に対して細胞間メディエーターとして作用するタンパク質の総称を意味する。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び従来的なポリペプチドホルモンである。サイトカインの間に含まれるのは、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモンなど；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）など；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子アルファ及びベータ；ミュラー阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えばＮＧＦ－ベータなど；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ－アルファ及びＴＧＦ－ベータなど；インスリン様成長因子－Ｉ及び－ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン－アルファ、ベータ、及び－ガンマなど；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）など；顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）；ならびに顆粒球－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ－１、ＩＬ－１アルファ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２など；ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ－アルファ又はＴＮＦ－ベータなど；ならびにＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。一実施形態では、用語「サイトカイン」は、限定されないが、マスクドＩＬ－２を含む、「マスクド」サイトカインを含む。本明細書中で使用される場合、用語「サイトカイン」は、天然供給源からの又は組み換え細胞培養からのタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。

【0413】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせにおいて投与される。

【0414】

本明細書中で使用される場合、「免疫チェックポイント」は、抗原のＴ細胞受容体認識の振幅及び品質を調節する共刺激シグナル及び阻害シグナルを指す。一部の実施形態では、免疫チェックポイントは阻害シグナルである。一部の実施形態では、阻害シグナルは、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用である。一部の実施形態では、阻害シグナルは、ＣＤ２８結合を置換するためのＣＴＬＡ－４とＣＤ８０又はＣＤ８６の間の相互作用である。一部の実施形態では、阻害シグナルは、ＬＡＧ３分子とＭＨＣクラスＩＩ分子の間の相互作用である。一部の実施形態では、阻害シグナルは、ＴＩＭ３とガレクチン９の間の相互作用である。一部の実施形態では、阻害シグナルは、ＯＸ４０とＯＸ４０Ｌの間の相互作用である。

【0415】

Ｔ細胞活性化及びエフェクター機能は、「免疫チェックポイント」として言及される共刺激シグナル及び阻害シグナルによりバランスが取られる。Ｔ細胞エフェクター機能を調節する阻害リガンド及び受容体は、腫瘍細胞上で過剰発現される。その後、共刺激受容体のアゴニスト又は阻害シグナルのアンタゴニストは、抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。腫瘍細胞を直接的に標的化する治療用抗体とは対照的に、免疫チェックポイント阻害剤は、内因性抗腫瘍活性を増強する。特定の実施形態では、本明細書中に開示される方法における使用のための適切な免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナルのアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、又はＴＩＭ３を標的化する抗体である。これらのリガンド及び受容体は、Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．，Ｎａｔｕｒｅ．１２：２５２－２６４，２０１２において概説されている。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＴＡ４、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ４７、及びＣＤ１３７からなる群から選択される分子を標的化する。

【0416】

本明細書中で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」は、一つ又は複数のチェックポイントタンパク質を完全に又は部分的に低下させる、阻害する、それと干渉する、又はそれを調節する分子を指す。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントに関連付けられる阻害シグナルを防止する。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントに関連付けられる阻害シグナル伝達を破壊する抗体又はその断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナル伝達を破壊する小分子である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、チェックポイントブロッカータンパク質、例えば、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用を防止する抗体、又はその断片の間の相互作用を防止する、抗体、その断片、又は抗体模倣物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４とＣＤ８０又はＣＤ８６の間の相互作用を防止する抗体又はその断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３とそのリガンド、又はＴＩＭ－３とそのリガンドの間の相互作用を防止する抗体又はその断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０とそのリガンドの間の相互作用を防止する抗体又はその断片である。チェックポイントブロッカーはまた、分子（又はそのバリアント）自体の可溶性形態、例えば、可溶性ＰＤ－Ｌｌ又はＰＤ－Ｌ１融合などの形態であってもよい。

【0417】

本明細書中に開示されるのは、疾患、例えば癌などに罹患した対象を治療するための方法であって、この方法は、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ及び免疫チェックポイント阻害剤を発現するように遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞の集団を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害性免疫調節因子からのシグナル伝達を破壊又は阻害する抗体又はその抗原結合部分である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害性免疫調節因子からのシグナル伝達を破壊又は阻害する小分子である。

【0418】

一部の実施形態では、阻害性免疫調節因子（免疫チェックポイント阻害剤）は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、癌に罹患した対象の免疫療法のための方法を提供し、この方法は、ＰＤ－１受容体とそのリガンドＰＤ－Ｌ１の間の相互作用を破壊する治療有効量の抗体又はその抗原結合部分を対象に投与することを含む。ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１とそのリガンド、ＰＤ－Ｌ１の間の相互作用を破壊し、抗腫瘍免疫応答を刺激する、当技術分野において公知の抗体が、本明細書中に開示される方法における使用のために適切である。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合部分は、ＰＤ－１に特異的に結合する。例えば、ＰＤ－１を標的化する抗体は、例えば、ニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ペムブロリズマブ（ラムブロリズマブ、ＭＫ０３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）を含む。本明細書中に開示される方法における使用のための他の適切な抗体は、米国特許第８，００８，４４９号において開示される抗ＰＤ－１抗体であり、参照により本明細書中に組み入れられる。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－１とのその相互作用を阻害し、それにより、免疫活性を増加させる。ＰＤ－Ｌ１に結合し、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用を破壊し、抗腫瘍免疫応答を刺激する、当技術分野において公知の抗体が、本明細書中に開示される方法における使用のために適切である。例えば、ＰＤ－Ｌ１を標的化する抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）及びＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ）を含む。ＰＤ－Ｌ１を標的化する他の適切な抗体が、米国特許第７，９４３，７４３号において開示されている。ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１に結合し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を破壊し、抗腫瘍免疫応答を刺激する任意の抗体が、本明細書中に開示される方法における使用のために適切であることが当業者により理解されるであろう。

【0419】

本明細書中に開示される方法における使用のために適切な免疫チェックポイントを標的化する抗体は、上に記載されるものに限定されないことが理解されるべきである。さらに、他の免疫チェックポイント標的がまた、本明細書中に記載される方法においてアンタゴニスト又は抗体により標的化されることができることが、標的化が、例えば、Ｔ細胞増殖における増加、増強されたＴ細胞活性化、及び／又は増加したサイトカイン産生（例、ＩＦＮ－ｇ、ＩＬ－２）において反映される抗腫瘍免疫応答の刺激をもたらすことを条件として、当業者により理解されるであろう。

【0420】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）及び刺激分子について特異的な二重特異的抗体との組み合わせにおいて投与される。一部の実施形態では、二重特異的抗体は、ＴＡＡ及びＣＤ３について特異的である。一部の実施形態では、二重特異的抗体は、ＴＡＡ及びＣＤ２８について特異的である。

【0421】

本明細書中で使用される場合、「腫瘍関連抗原」及び「ＴＡＡ」は、腫瘍特異的抗原（即ち、癌細胞上でのみ見出される抗原）、及び健常な細胞と比べて癌又は腫瘍細胞上で上昇して発現される抗原を指す。腫瘍関連抗原の非限定的な例は、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥ タンパク質、β－カテニン、ｂｒｃ－ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ８、ＣＣＲ５、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、Ｆｒａ－１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥ タンパク質（例、ＧＡＧＥ－１、－２）、ＧＤ２、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ－ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ－ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ－Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＲＴ－１、ＭＬ－ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ－ＢＲ１、ＮＹ－ＢＲ６２、ＮＹ－ＢＲ８５、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ－１、ＰＲＬＲ、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、Ｓｔｅａｐ－１、Ｓｔｅａｐ－２、サバイビン、ＴＧＦ－β、ＴＭＰＲＳＳ２、Ｔｎ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、ウロプラキン３、アルファ葉酸受容体（ＦＲα）、αｖβ６インテグリン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ６、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＣＲ１、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５（また、ｆｍｃ 様チロシンキナーゼ ３；ＦＬＴ３として公知である）、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、クローディン ６（ＣＬＤＮ６）、Ｃ型レクチン様分子 １（ＣＬＬ－１）、ＣＤ２サブセット １（ＣＳ－１）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（ＣＳＰＧ４）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫関連抗原１（ＣＴＡＧＥ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ２）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ４０）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、エフリンＡ型受容体２（ＥＰＨＡ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、胎児アセチルコリンエステラーゼ受容体（ＡｃｈＲ）、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１３Ｒα２、カッパ、癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１Ａ）、ラムダ、ルイスＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１－ＣＡＭ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）；黒色腫抗原遺伝子（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥＡ１０、Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡ又はＭＡＲＴ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、癌／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、黒色腫において優先的に発現される抗原（ＰＲＡＭＥ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ－３）、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、栄養膜糖タンパク質（ＴＰＢＧ）、ＮＫＧ２Ｄリガンド、血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ならびにウィルムス腫瘍１（ＷＴ－１）を含む。

【0422】

本明細書中で引用される全ての刊行物、特許出願及び登録特許が、個々の公表文献、特許出願又は登録特許のそれぞれが、具体的に、及び個々に参照により組み入れられることが示されているように、参照により本明細書中に組み入れられる。

【0423】

前述の発明は、明確性及び理解を目的として、図及び実施例により詳細に記載されているが、本発明の教示に照らし、特定の変化及び修飾が、添付の請求の範囲の主旨又は範囲から逸脱することなく実施され得ることが当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、例証のみのために提供され、限定のために提供されない。当業者は、本質的に類似した結果をもたらすために変化又は修飾されうる様々な非臨界パラメータを容易に認識するであろう。

【実施例】

【0424】

実施例１
抗ＭＵＣ１６キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の初期設計
ＭＵＣ１６を標的化するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を、タンパク質分解切断後に細胞の表面上に残っているＭＵＣ１６の断片を標的化するｓｃＦｖ結合剤を有するように生成した（ＭＵＣ１６断片配列番号３９を参照のこと）。図１は、ＭＵＣ１６ポリペプチドの概略図であり、切断後に細胞表面上に残っている断片（“ｎｕｂ”）を示す。具体的には、ＣＡＲは、ＶＨ－ＶＬ（Ｈ－Ｌ）配向及びＶＬ－ＶＨ（Ｌ－Ｈ）配向の両方、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン（配列番号１～１２及び４１～１５０）において抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ結合剤を有するように設計された。公知のＭＵＣ１６結合剤、それぞれ４１ＢＢ又はＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ ＢＢ４０２０及びＢＢ４０２１がまた、設計された。

【表3】

【0425】

実施例２
抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲのインビトロ特徴の評価
１０の抗体ｓｃＦｖを軽－重、重－軽配向においてＣＡＲに変換し、２０の抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ構築物をもたらした（表４）。各構築物は、レンチウイルスベクター（ＬＶＶ）を介して、健常ドナーから由来するＴ細胞中に導入され、ベクターコピー数（ＶＣＮ）（図２）、ＣＡＲ発現（図３）ならびに抗原依存的及び非依存的活性（図４Ａ～４Ｄ）についてスクリーニングされた。抗原依存的活性は、抗原陽性（ＯＶＣＡＲ３）又は陰性（Ｊｕｒｋａｔ、ＰＡＮＣ－１）腫瘍細胞とのＣＡＲ－Ｔ細胞の共培養中で放出されたＩＦＮγにより評価されたのに対し、抗原非依存的活性は、Ｔ細胞のみの培養中で放出されたＩＦＮγにより評価された。ベクターコピー数（ＶＣＮ）を評価し、ＬＶＶの形質導入効率を評価した。スクリーニングされた２０のＣＡＲのうち、６つの構築物は、優先順位を下げた：３つの構築物、最小限に形質導入されたＴ細胞（図２：ＢＢ４００９、ＢＢ４０１３、ＢＢ４０１４）；及び十分に形質導入された構築物（即ち、ＶＣＮ＞１）のうち、三つのＣＡＲ－Ｔ産物が、低い（＜３０％）ＣＡＲ発現を示した（図３：ＢＢ４００２、ＢＢ４００３、ＢＢ４０１６）。残りの１４のＣＡＲのうち、ＢＢ４０１０は、比較的高い抗原非依存的ＩＦＮγ放出に起因して、優先順位を下げた（図４Ａ）。残りの１３のＣＡＲのうち、８が抗原依存的活性を示した。なぜなら、これらのＣＡＲは、Ｊｕｒｋａｔ（図４Ｃ）又はＰＡＮＣ－１細胞（図４Ｄ）ではなく、ＯＶＣＡＲ３（図４Ｂ）細胞と共培養された場合にＩＦＮγを放出したためである。これらの８つのＣＡＲから、ＢＢ４０００、ＢＢ４０１１、及びＢＢ４０１５を、それらのｍＡｂ親和性、結合エピトープ、及び抗原依存的反応性の範囲、＞３０％ ＣＡＲ発現、ほとんど又は全くない抗原非依存的反応性、及び＞１ ＶＣＮに基づいて、追加のインビトロ及びインビボ特徴付けのために選択した。

【0426】

実施例３
ＭＵＣ１６発現に対する抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ感受性の評価
ＢＢ４０００、ＢＢ４０１１、及びＢＢ４０１５の薬理学的感受性を、六つの抗原陰性腫瘍細胞（図５：Ｊｕｒｋａｔ、ＰＡＮＣ－１、ＨＵＨ７、Ｋ５６２、Ａ５４９、及びＲＤ）に対して評価し、抗原特異性を実証した。ＩＦＮγ放出を、ＣＡＲ Ｔ又は対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）の共培養物から収集された上清から、各抗原陰性腫瘍株と１：１の比率で２４時間にわたり測定した。ＢＢ４０１５は、評価されたＣＡＲの全てのドナーにわたって最も低い緊張性活動を実証した。

【0427】

次に、ＢＢ４０００、ＢＢ４０１１、及びＢＢ４０１５を、共培養物中に放出されたＩＦＮγによる抗原依存的活性について、高レベル、中レベル、又は低レベルのＭＵＣ１６外部ドメインを安定的に発現する、操作されたＲＤ腫瘍細胞に対して評価した（図６Ａ）。ＣＡＲ Ｔ細胞又はＵＴＤ Ｔ細胞（三人のドナーから）を、ＭＵＣ１６発現ＲＤ腫瘍細胞と１：１の比率で２４時間にわたり共培養した。ＢＢ４０００が最も高いＩＦＮγ放出をもたらし、ＢＢ４０１５及びＢＢ４０１１が続いた。滴定可能な抗原依存的応答が、全ての抗原陽性条件にわたって観察された（図６Ｂ）。

【0428】

抗原依存的活性を、滴定量のＭＵＣ１６抗原を発現するＫ５６２腫瘍細胞との、ＣＡＲ Ｔ細胞又は対照ＵＴＤ Ｔ細胞の共培養中に放出されたＩＦＮγによりさらに評価した。ＭＵＣ１６の外部ドメインをコードするｍＲＮＡ（配列番号３９）を、０．１５６μｇ～２．５μｇのｍＲＮＡの範囲のＫ５６２腫瘍細胞中にエレクトロポレーションした（図７Ａ）。三人の健常なドナーからのＣＡＲ Ｔ細胞及びＵＴＤ Ｔ細胞を、トランスフェクトされたＫ５６２ｓと１：１の比率で２４時間にわたり共培養した。Ｋ５６２ｓは、エレクトロポレーションされた腫瘍細胞条件に対して滴定可能なＩＦＮγ放出を実証した（図７Ｂ）。ＢＢ４０００、ＢＢ４０１１、及びＢＢ４０１５は全て、用量依存的な様式において抗原依存的ＩＦＮγ放出を示した。

【0429】

最後に、ＢＢ４０００、ＢＢ４０１１、及びＢＢ４０１５の抗原依存的細胞傷害性を、腫瘍細胞殺傷のパーセント（％）により評価した。三人の健常なドナーからのＣＡＲ Ｔ細胞又はＵＴＤ Ｔ細胞、及び上に記述される、操作されたＲＤ腫瘍細胞を、インピーダンス分析器上で１０：１、５：１、及び２．５：１のエフェクター対Ｔ細胞（Ｅ：Ｔ）比率で７２時間にわたり共培養した。ＢＢ４０１５、ＢＢ４０００、及びＢＢ４０１１ ＣＡＲは、ＲＤ培地又は高抗原陽性腫瘍細胞と全てのＥ：Ｔ比率にわたって培養された場合、＞７０％細胞傷害性を示した（図８Ａ）。ＢＢ４０１１及びＢＢ４０１５は、ＲＤ低抗原陽性腫瘍細胞と２．５：１のＥ：Ｔ比率で培養された場合、＜６０％の細胞傷害性を示したのに対し、ＢＢ４０００は＞６０％を示した（図８Ｂ）。Ｂ４０００、ＢＢ４０１１、及びＢＢ４０１５は全て、用量依存的な様式において抗原依存的細胞傷害性を示した。

【0430】

実施例４
抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞分化の評価
ＢＢ４０００、ＢＢ４０１１、及びＢＢ４０１５ ＣＡＲ Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを介して表現型マーカーについて特徴付けた。マーカーはＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ４５ＲＡを含んだ。ＢＢ４０００は、平均４５％ ＣＤ４＋Ｔ細胞及び平均３６．４％ ＣＤ８＋Ｔ細胞；ＢＢ４０１１、４７．１％ ＣＤ４＋Ｔ細胞及び３８％ ＣＤ８＋Ｔ細胞；ＢＢ４０１５、６０．９％ ＣＤ４＋Ｔ細胞及び２９％ ＣＤ８＋Ｔ細胞をもたらした。ＵＴＤ対照と比較した場合、ＢＢ４０１５は、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ４５ＲＡの増加発現を示し、より大きなインビボでの持続性についての潜在能を伴うより大きなナイーブ様表現型を指しているのに対し、ＢＢ４０００及びＢＢ４０１１の両方は、減少したＣＤ６２Ｌ発現を有した（図９）。

【0431】

実施例５
ＭＵＣ１６外部ドメインへの抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ結合
ヒト血液から抽出された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用して活性化させた。ＰＢＭＣからの活性化細胞を次に、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ構築物ＢＢ４０１５をコードするポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターで形質導入した（配列番号１１及び１２を参照のこと）。ＵＴＤ細胞を対照条件として使用した。形質導入細胞及びＵＴＤ細胞を、ＩＬ２の存在においてＴ細胞成長培地中で１０日間にわたり増殖させた。

【0432】

増殖後、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ形質導入細胞を、１．５４ｎｇ／ｍｌ～１１２５ｎｇ／ｍｌの間の範囲の濃度のＭＵＣ１６－ｎｕｂ外部ドメイン抗原（配列番号３９）又は１．３７Ｕ／ｍｌ～１０，０００Ｕ／ｍｌの間の範囲の濃度のＣＡ１２５（ｎｕｂ外部ドメイン抗原を欠くヒトＭＵＣ１６ポリペプチド；配列番号４０）タンパク質でコーティングされた９６ウェルプレート中で培養した。抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＭＵＣ１６ ｎｕｂ外部ドメイン濃度に比例する増加レベルのＩＦＮγを放出したのに対し（図１０Ａ）、ＣＡ１２５タンパク質は、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞からいかなる機能的応答も誘発しなかった（図１０Ｂ）。ＵＴＤ対照は、ＭＵＣ１６ ｎｕｂ又はＣＡ１２５に対する任意の機能的応答を示さなかった。これは、脱落したＣＡ１２５部分を上回る、ＭＵＣ１６外部ドメインへの抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲの特異性を例証する。

【0433】

実施例６
抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性
健常なヒトＰＢＭＣを回収し、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用して活性化させた。細胞を次に、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ ＢＢ４０１５構築物をコードするポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターで形質導入した（配列番号１１及び１２を参照のこと）。ＵＴＤ細胞を対照条件として使用した。形質導入細胞及びＵＴＤ細胞を、ＩＬ２の存在においてＴ細胞成長培地中で１０日間にわたり増殖させた。

【0434】

ＵＴＤ細胞又は抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞を、ＭＵＣ１６抗原を発現するＯＶＣＡＲ３腫瘍細胞と１：１の比率において共培養した。共培養後の２４時間に、上清を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘを使用してＩＦＮγ濃度について分析した。抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔは、ＵＴＤ対照条件と比較して、ＭＵＣ１６抗原特異的ＩＦＮγ放出を実証した（データは示さず）。

【0435】

インビボの雌ＮＳＧマウスに、２０×１０^６のルシフェラーゼ発現ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ細胞を腹腔内接種した。約１４日後、腫瘍が１．５×１０^８ｐ／ｓの腫瘍量で平均化した場合、マウスに、溶媒、２０×１０^６ＵＴＤ、又は２０×１０^６抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞のいずれかで注射した。ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ腫瘍対照が、抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞で注射された動物において、ＣＡＲ Ｔ細胞注射後の約５日目までに観察された（図１１）。ｎ＝５の抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ群は、群の各動物当たりの個々のデータ点として表される。抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ注射後の２８日に、マウスのｎ＝５群を、ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ腫瘍細胞で再注射されたＮＳＧマウスの対照ナイーブ群と共に、ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ腫瘍注射により再チャレンジした。腫瘍拒絶が再チャレンジ後に観察された。図１１は、群当たりの平均発光フラックスとして表される、ｎ＝５匹のマウスについての溶媒群、ＵＴＤ群及びＯＶＣＡＲ３．ＦＰ群を呈する。

【0436】

実施例７
ＯＶＣＡＲ３モデルにおける抗ＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性
インビボ試験を、ホタルルシフェラーゼでタグ付けされたＯＶＣＡＲ３腫瘍細胞で接種された雌ＮＳＧマウスにおいて実施し、インビボ撮像システム（ＩＶＩＳ（登録商標）；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））を介した腫瘍量モニタリングを可能にした。２０×１０^６個の腫瘍細胞を雌マウスの腹腔内腔中に注射し、適した腫瘍容積が、ＣＡＲ Ｔ注射のために達せられるまでモニタリングした。ＢＢ４０００、ＢＢ４０１１、ＢＢ４０１７、及びＢＢ４０１５ Ｔ細胞を、尾静脈を介して０．４ｍＬの総容積においてＩＶ注射した。マウスを、試験の経過にわたってＴ細胞有効性についてモニタリングした。インビボで直接テストされた場合、ＢＢ４０１５は、ＢＢ４０１１（図１２Ａ）、ＢＢ４０００（図１２Ｂ）、及びＢＢ４０１７（図１２Ｃ）よりも速く、より耐久性のある応答を実証した。

【0437】

次に、ＯＶＣＡＲ３．ＦＰ ＩＰ腫瘍モデルを、上に記載されるように用いた。０日目に、動物を、２０×１０^６、１０×１０^６、又は３×１０^６個のＣＡＲ＋細胞／マウス、ＵＴＤ細胞、又はＲＰＭＩ溶媒（対照）での、ＢＢ４０１５及びＢＢ４０００の単回ＩＶ注射で処置した。溶媒単独及びＵＴＤ対照細胞は、腫瘍量に対する効果を有さなかった。ＢＢ４０１５は、全ての用量で、ＢＢ４０００と比較された場合に、優れた用量依存的な抗腫瘍効力を示し、最高用量の２０×１０^６個のＣＡＲ＋細胞／マウスによって、約６日目までに腫瘍が除去された（図１３Ａ～１３Ｃ）。全体的には、これらの結果は、ＢＢ４０１５が、他の構築物よりも大きな用量依存的な抗腫瘍効力を伴ってＯＶＣＡＲ３．ＦＰ腫瘍成長を制御することを実証する。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【表4-4】

【表4-5】

【表4-6】

【表4-7】

【表4-8】

【表4-9】

【表4-10】

【表4-11】

【表4-12】

【表4-13】

【表4-14】

【表4-15】

【表4-16】

【表4-17】

【表4-18】

【表4-19】

【表4-20】

【表4-21】

【表4-22】

【表4-23】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【国際調査報告】