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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-02-12
(54)【発明の名称】ＢＴＬＡに対する抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20250204BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20250204BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20250204BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20250204BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20250204BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20250204BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20250204BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20250204BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20250204BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20250204BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20250204BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20250204BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20250204BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20250204BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250204BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20250204BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20250204BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
A61K48/00
A61P37/02
A61P1/04
A61P29/00 101
A61P17/06
A61P19/02
A61P19/00
A61P17/00
A61P27/02
A61P1/16
A61P11/00
A61K39/395 N
A61K39/395 U
A61K39/395 Y
A61K39/395 R
A61P29/00
A61K31/7088
C12P21/08
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024544441
(86)(22)【出願日】2023-01-29
(85)【翻訳文提出日】2024-08-19
(86)【国際出願番号】 CN2023073699
(87)【国際公開番号】W WO2023143564
(87)【国際公開日】2023-08-03
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/075109
(32)【優先日】2022-01-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522256668
【氏名又は名称】ハイファイバイオ（ホンコン）リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100113376
【弁理士】
【氏名又は名称】南条 雅裕
(74)【代理人】
【識別番号】100179394
【弁理士】
【氏名又は名称】瀬田 あや子
(74)【代理人】
【識別番号】100185384
【弁理士】
【氏名又は名称】伊波 興一朗
(74)【代理人】
【識別番号】100137811
【弁理士】
【氏名又は名称】原 秀貢人
(72)【発明者】
【氏名】リー ジュイン
(72)【発明者】
【氏名】ジャン チェン
(72)【発明者】
【氏名】シェン ビンキン
(72)【発明者】
【氏名】エイドリアン フランシスコ
(72)【発明者】
【氏名】シュワイツァー リアン
【テーマコード（参考）】
4B064
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4C084AA13
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA331
4C084ZA332
4C084ZA591
4C084ZA592
4C084ZA681
4C084ZA682
4C084ZA751
4C084ZA752
4C084ZA891
4C084ZA892
4C084ZA961
4C084ZA962
4C084ZB051
4C084ZB052
4C084ZB071
4C084ZB072
4C084ZB111
4C084ZB112
4C084ZB131
4C084ZB132
4C084ZB151
4C084ZB152
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB31
4C085BB36
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG02
4C085GG04
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA65
4C086MA66
4C086NA14
4C086ZA33
4C086ZA59
4C086ZA68
4C086ZA75
4C086ZA89
4C086ZA96
4C086ZB05
4C086ZB07
4C086ZB11
4C086ZB13
4C086ZB15
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
ＢＴＬＡに特異的なモノクローナル抗体及びその抗原結合断片、並びに併用療法を含む自己免疫疾患を処置するためにそれを使用する方法が提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）に特異的であり、それを活性化し、任意選択で、カニクイザルＢＴＬＡと交差反応性であり、前記モノクローナル抗体が、（１ａ）配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、並びに
（１ｂ）配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、
又は、
（２ａ）配列番号６１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、並びに
（２ｂ）配列番号６４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、
任意選択で、前記モノクローナル抗体が、天然に存在しない、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
（１Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が、配列番号（７＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、（１Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が、配列番号（８＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、
ｎが、１、０、及び２～２４のうちのいずれか１つであるか、又は、
（２Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が、配列番号（６７＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、
（２Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が、配列番号（６８＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、
ｎが、０～２４のうちのいずれか１つである、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
前記モノクローナル抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、又はＩｇＧ４抗体である、請求項１又は２に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
前記モノクローナル抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
前記ＩｇＧ１抗体が、配列番号５７又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の重鎖定常領域配列と、配列番号５８又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の軽鎖定常領域配列と、を含む、請求項４に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項6】
前記モノクローナル抗体が、（１）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）を調節し（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの増加した結合を介して増強されたＡＤＣＣを有するＦ２４３Ｌ、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、又はアフコシル化（非フコシル化）抗体（例えば、Ｆｃ領域におけるアフコシル化Ｎ２９７））、かつ／又は、
（２）血清半減期を増強する（例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）、前記重鎖定常領域における変異を含むＩｇＧ１抗体である、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項7】
マウス抗体、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、又は再表面化抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項8】
ヒト化抗体である、請求項７に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項9】
前記その抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ若しくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項10】
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、カニクイザル／アカゲザルＢＴＬＡと交差反応するが、マウスＢＴＬＡと実質的に交差反応しない、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項11】
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ以下より少ないＫＤでヒトＢＴＬＡを結合する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項12】
ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、ＢＴＬＡに結合するとＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項13】
ＢＴＬＡからの前記下流シグナル伝達が、Ｂ細胞増殖を阻害し、かつ／又はＴ細胞（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｈ１、ＴＦＨ、αβ、又はγδＴ細胞）及び／若しくはプラズマ細胞活性化を阻害する、請求項１２に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項14】
ＨＶＥＭへのＢＴＬＡ結合を遮断／干渉／消失しない、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項15】
１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ×６の用量で（例えば、２１日間）投与された場合（例えば、マウスに対してｉ．ｐ．）、顕著な体重減少をもたらさない、請求項１～１４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項16】
インビボで投与された場合（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ×６の用量で１４日間マウスに対してｉ．ｐ．）、ＣＤ４５＋Ｔ細胞を顕著に低減させる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項17】
アイソタイプ適合対照Ａｂと比較して、ＧｖＨＤ又はその動物モデルにおける病度（例えば、３週間で３未満の平均総疾患スコア）及び／又は全生存率（例えば、４週間で少なくとも８０％の全生存率）を顕著に低減させる、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項18】
ヒトＢＴＬＡへの結合について、請求項１～１７のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項19】
ＢＴＬＡに結合すると、Ｂ細胞増殖を阻害し、かつ／又はＴ細胞（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｈ１、ＴＦＨ、αβ、又はγδＴ－細胞）活性化を阻害する、請求項１８に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項20】
（１）配列番号９の前記ＨＣＶＲ配列、配列番号５７の前記重鎖定常領域配列、配列番号１０の前記ＬＣＶＲ配列、及び配列番号５８の前記軽鎖定常領域配列、又は、（２）配列番号５９の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０の軽鎖アミノ酸配列、を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項21】
単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、（１）配列番号９のＨＣＶＲ配列、配列番号５７の重鎖定常領域配列、配列番号１０のＬＣＶＲ配列、及び配列番号５８の軽鎖定常領域配列、又は、
（２）配列番号５９の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０の軽鎖アミノ酸配列、を含む／から本質的になる／からなる、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項22】
請求項１～２１のいずれか一項に記載の重鎖若しくは軽鎖又はその抗原結合部分をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項23】
ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている、請求項２２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項24】
請求項２２又は２３に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項25】
発現ベクター（例えば、哺乳動物、酵母、昆虫、又は細菌発現ベクター）である、請求項２４に記載のベクター。
【請求項26】
請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、請求項２２若しくは２３に記載のポリヌクレオチド、又は請求項２４若しくは２５に記載のベクターを含む、薬学的組成物。
【請求項27】
静脈内（ｉ．ｖ．）注入若しくは投与、又は皮下（ｓ．ｃ．）投与のために製剤化されている、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項28】
Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するか、又は自己免疫疾患を処置する方法であって、前記方法が、有効量の請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、請求項２２若しくは２３に記載のポリヌクレオチド、請求項２４若しくは２５に記載のベクター、又は請求項２６若しくは２７に記載の薬学的組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項29】
自己免疫疾患を処置するためのものである、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；小児潰瘍性大腸炎を含む潰瘍性大腸炎（ＵＣ）；関節リウマチ（ＲＡ）；慢性尋常性乾癬を含む乾癬（Ｐｓ）；乾癬性関節炎（ＰｓＡ）；小児クローン病を含むクローン病（ＣＤ）；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；強直性脊椎炎；多関節型若年性特発性関節炎を含む若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）；汗腺膿瘍；非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、及び汎ブドウ膜炎；自己免疫性肝炎様疾患；実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）；ＭＨＣ不適合心臓同種移植；急性気道アレルギーにおける肺の炎症；移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）；又は同種造血幹細胞移植（ａＨＳＣＴ）である、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
前記自己免疫疾患を処置するのに有効な更なる薬剤を前記患者に投与することを更に含む、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記自己免疫疾患が、狼瘡である、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するための、又は自己免疫疾患を処置するための薬品の製造における、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、請求項２２若しくは２３に記載のポリヌクレオチド、請求項２４若しくは２５に記載のベクター、又は請求項２６若しくは２７に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項34】
Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答の下方制御に使用するための、又は自己免疫疾患を処置するための、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、請求項２２若しくは２３に記載のポリヌクレオチド、請求項２４若しくは２５に記載のベクター、又は請求項２６若しくは２７に記載の薬学的組成物を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の参照
本出願は、２０２２年１月２９日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２２／０７５１０９号の出願日の優先権及び利益を主張し、任意の図面及び配列表を含むその全容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２２年１月２９日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２２／０７５１０９号の出願日の優先権及び利益を主張し、任意の図面及び配列表を含むその全容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、ＸＭＬフォーマットで電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、配列表ＸＭＬファイルを含む。２０２３年１月２３日に作成された当該ＸＭＬコピーは、１３１２０６－０１２１９＿ＳＬ＿ＸＭＬ．ｘｍｌという名前が付けられ、サイズが１７０，６３８バイトである。
本出願は、ＸＭＬフォーマットで電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、配列表ＸＭＬファイルを含む。２０２３年１月２３日に作成された当該ＸＭＬコピーは、１３１２０６－０１２１９＿ＳＬ＿ＸＭＬ．ｘｍｌという名前が付けられ、サイズが１７０，６３８バイトである。
【背景技術】
【0003】
Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（B and T lymphocyte attenuator、ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２としても知られている）は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、及びＰＤ－１も含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：６７０－６７９，２００３）。ＢＴＬＡは、免疫系全体にわたって、骨髄系細胞及びリンパ系細胞の両方で広く発現される（Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５９３１－９，２００４）。そのリガンドヘルペスウイルス侵入メディエータ（herpesvirus entry mediator、ＨＶＥＭ）による関与に続いて、ＢＴＬＡは、ホスファターゼＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２をその細胞質ドメインに動員し（Ｓｅｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：９０－８，２００５）、次に、活性化受容体のシグナル伝達カスケードを阻害する。
【0004】
無傷のＢＴＬＡ遺伝子を欠くＢＴＬＡノックアウトマウスは、インビトロでの過剰増殖性Ｂ細胞及びＴ細胞応答、免疫化後のＤＮＰ－ＫＬＨに対するより高い力価、並びにＥＡＥに対する感受性の増加を示す（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：６７０－６７９，２００３）。老齢まで観察された場合、ＢＴＬＡノックアウトマウスは、自己抗体、自己免疫性肝炎様疾患、及び多臓器における炎症性細胞浸潤物を自発的に発達させる（Ｏｙａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．５８：２４９８－２５１０，２００８）。したがって、ＢＴＬＡ阻害性受容体は、免疫ホメオスタシスの維持及び自己免疫の阻害において重要な役割を果たすようである。更に、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡシグナル伝達は、粘膜炎症及び感染免疫の調節に関与している（Ｓｈｕｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．８９：５１７－５２３，２０１１）。
【0005】
マウスＢＴＬＡに結合するモノクローナル抗体は、受容体を介したシグナル伝達を誘導して免疫細胞応答を阻害するアゴニストとして作用し得る。アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体（ｍＡｈ）の存在下で、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８活性化Ｔ細胞は、低減したＩＬ－２産生及び増殖を示す（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５，６４２０－６４７２，２００５）。抗マウスＢＴＬＡアゴニスト抗体は、移植片対宿主疾患のマウスモデルにおいて疾患を改善することが示されている（Ｓａｋｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１１７：２５０６－２５１４；Ａｌｂｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０７：２５５１－９，２０１０）。ヒトＢＴＬＡ受容体を標的とするＢＴＬＡアゴニスト抗体は、エクスビボでのＴ細胞性応答を阻害することが示されているが（Ｏｔｓｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ３４４：１１２１－７，２００６；及び国際公開第２０１１／０１４４３８号）、そのような抗体は、いずれの疾患も処置するために承認されていない。
【0006】
したがって、ＢＴＬＡ機能を調節して、自己免疫疾患と関連して自己反応性リンパ球を阻害することができる治療試薬を開発するための必要性がある。
【発明の概要】
【0007】
本発明の一態様は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、当該モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）に特異的であり、それを活性化し、任意選択で、カニクイザルＢＴＬＡと交差反応性であり、当該モノクローナル抗体が、（１ａ）配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＨＣＶＲ）、並びに（１ｂ）配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（light chain variable region、ＬＣＶＲ）、又は、（２ａ）配列番号６１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、並びに（２ｂ）配列番号６４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、任意選択で、当該モノクローナル抗体が、天然に存在しない、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0008】
ある特定の実施形態では、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、（１Ａ）ＨＣＶＲ配列は、配列番号（７＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、（１Ｂ）ＬＣＶＲ配列は、配列番号（８＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、ｎは、１、０、及び２～２４のうちのいずれか１つであるか、又は、（２Ａ）ＨＣＶＲ配列は、配列番号（６７＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、（２Ｂ）ＬＣＶＲ配列は、配列番号（６８＋２ｎ）、若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、ｎは、０～２４のうちのいずれか１つである。
【0009】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、又はＩｇＧ４抗体である。
【0010】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
【0011】
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１抗体は、配列番号５７又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の重鎖定常領域配列と、配列番号５８又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の軽鎖定常領域配列と、を含む。
【0012】
ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、（１）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（antibody dependent cell mediated cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞媒介性食作用（antibody dependent cell mediated phagocytosis、ＡＤＣＰ）を調節し（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの増加した結合を介して増強されたＡＤＣＣを有するＦ２４３Ｌ、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、又はアフコシル化（非フコシル化）抗体（例えば、Ｆｃ領域におけるアフコシル化Ｎ２９７））、かつ／又は、（２）血清半減期を増強する（例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）、重鎖定常領域における変異を含むＩｇＧ１抗体である。
【0013】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、マウス抗体、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、又は再表面化抗体である。
【0014】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化抗体である。
【0015】
ある特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ若しくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃである。
【0016】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、カニクイザル／アカゲザルＢＴＬＡと交差反応するが、マウスＢＴＬＡとは実質的に交差反応しない。
【0017】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ以下より少ないＫＤでヒトＢＴＬＡを結合する。
【0018】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、ＢＴＬＡに結合するとＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する。例えば、ある特定の実施形態では、ＢＴＬＡからの下流シグナル伝達は、Ｂ細胞増殖を阻害し、かつ／又はＴ細胞（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｈ１、ＴＦＨ、αβ、又はγδＴ細胞）及び／若しくはプラズマ細胞活性化を阻害する。
【0019】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭへのＢＴＬＡ結合を遮断／干渉／消失しない。
【0020】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ×６の用量で（例えば、２１日間）投与された場合（例えば、マウスに対してｉ．ｐ．）、顕著な体重減少をもたらさない。
【0021】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、インビボで投与された場合（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ×６の用量で１４日間マウスに対してｉ．ｐ．）、ＣＤ４５＋Ｔ細胞を顕著に低減させる。
【0022】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片がインビボで投与される場合に（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ×６の用量で１４日間マウスに対してｉ．ｐ．）、アイソタイプ適合対照Ａｂと比較して、ＧｖＨＤ又はその動物モデルにおける病度（例えば、３週間で３未満の平均総疾患スコア）及び／又は全生存率（例えば、４週間で少なくとも８０％の全生存率）を顕著に低減させる。
【0023】
本発明の別の態様は、ヒトＢＴＬＡへの結合について、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0024】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＢＴＬＡに結合すると、Ｂ細胞増殖を阻害し、かつ／又はＴ細胞（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｈ１、ＴＦＨ、αβ、又はγδＴ－細胞）活性化を阻害する。
【0025】
ある特定の実施形態では、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、（１）配列番号９のＨＣＶＲ配列、配列番号５７の重鎖定常領域配列、配列番号１０のＬＣＶＲ配列、及び配列番号５８の軽鎖定常領域配列、又は、（２）配列番号５９の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０の軽鎖アミノ酸配列を含む。
【0026】
本発明の別の態様は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、（１）配列番号９のＨＣＶＲ配列、配列番号５７の重鎖定常領域配列、配列番号１０のＬＣＶＲ配列、及び配列番号５８の軽鎖定常領域配列、又は、（２）配列番号５９の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０の軽鎖アミノ酸配列を含む／から本質的になる／からなる、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0027】
本発明の別の態様は、本発明の重鎖若しくは軽鎖又はその抗原結合部分をコードする、ポリヌクレオチドを提供する。
【0028】
ある特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている。
【0029】
本発明の別の態様は、本発明のポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。
【0030】
ある特定の実施形態では、ベクターは、発現ベクター（例えば、哺乳動物、酵母、昆虫、又は細菌発現ベクター）である。
【0031】
本発明の別の態様は、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、又は本発明のベクターを含む、薬学的組成物を提供する。
【0032】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、静脈内（intravenous、ｉ．ｖ．）注入若しくは投与、又は皮下（subcutaneous、ｓ．ｃ．）投与のために製剤化されている。
【0033】
本発明の別の態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するか、又は自己免疫疾患を処置する方法であって、方法が、有効量の本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0034】
ある特定の実施形態では、方法は、自己免疫疾患を処置するためのものである。
【0035】
ある特定の実施形態では、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス（Systemic Lupus Erythematosus、ＳＬＥ）；小児潰瘍性大腸炎を含む潰瘍性大腸炎（ulcerative colitis、ＵＣ）；関節リウマチ（rheumatoid arthritis、ＲＡ）；慢性尋常性乾癬を含む乾癬（psoriasis、Ｐｓ）；乾癬性関節炎（psoriac arthritis、ＰｓＡ）；小児クローン病を含むクローン病（Crohn's Disease、ＣＤ）；炎症性腸疾患（Inflammatory Bowel Disease、ＩＢＤ）；強直性脊椎炎；多関節型若年性特発性関節炎を含む若年性特発性関節炎（Juvenile Idiopathic Arthritis、ＪＩＡ）；汗腺膿瘍；非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、及び汎ブドウ膜炎；自己免疫性肝炎様疾患；実験的自己免疫性脳脊髄炎（experimental autoimmune encephalomyelitis、ＥＡＥ）；ＭＨＣ不適合心臓同種移植；急性気道アレルギーにおける肺の炎症；移植片対宿主疾患（graft versus host disease、ＧｖＨＤ）；又は同種造血幹細胞移植（hematopoietic stem cell transplantation、ｈＳＣＴ）である。
【0036】
ある特定の実施形態では、方法は、自己免疫疾患を処置するのに有効な更なる薬剤を患者に投与することを更に含む。
【0037】
本発明の別の態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するための、又は自己免疫疾患を処置するための薬品の製造における、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物の使用を提供する。
【0038】
本発明の別の態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答の下方制御に使用するための、又は自己免疫疾患を処置するための、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物を含む、組成物を提供する。
【0039】
本明細書に記載される本発明の任意の一実施形態（実施例又は特許請求の範囲のみに記載されるものを含む）は、本発明の任意の他の１つ以上の実施形態と、その組み合わせが明確に否定されるか、又は不適切ではない限り、組み合わされ得ることが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【0040】
【図1】ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３．ｈＢＴＬＡ）又はカニクイザルＢＴＬＡを過剰発現するＥｘｐｉ２９３細胞（ＨＥＫ２９３．ｃｙｎｏＢＴＬＡ）への抗ＢＴＬＡ抗体の結合を示す。標的細胞への抗ＢＴＬＡ抗体結合を、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体でフローサイトメトリによって定量化した（読み出し：平均蛍光強度（mean fluorescence intensity、ＭＦＩ））。
【図2A】対照及び候補抗ＢＴＬＡ抗体による抗ＩｇＭ刺激の４日後の初代Ｂ細胞増殖の阻害を示す。ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５は、ベンチマーク２２Ｂ３と同様の又はそれを上回る程度で抗ＩｇＭ媒介性Ｂ細胞増殖を阻害するその能力に基づいて選択した。Ｂ細胞増殖を、非刺激Ｂ細胞に関連するＣＦＳＥ希釈（ＣＦＳＥｌｏ％）によって定量化し、分裂％として示した。
【図2B】ＢＴＬＡに結合した場合、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５がＨＶＥＭ（ＨＶＥＭの天然リガンド）を置き換える不能性を示す。上のパネルは、ＢＴＬＡ及びＮＦＡＴ結合プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞株と共培養された、ＴＣＲ活性化因子（TCR activator、ＴＣＲａ）及びＨＶＥＭ（ＢＴＬＡのリガンド）を発現するように操作されたＣＨＯ細胞株を示す例解的なスキームである。陽性対照抗ＢＴＬＡ遮断抗体ＪＳ００４、及び多くの他の試験された抗ＢＴＬＡ抗体（下のパネルを参照されたい）は、ＨＶＥＭ媒介性Ｔ細胞阻害を用量依存的に逆転させることができた。しかし、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ－５がＨＶＥＭ媒介性Ｔ細胞阻害を逆転させる能力は、実質的に消失した（下のパネルを参照されたい）。
【図3】ベンチマーク抗体２２Ｂ３と比較した、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５によるＴＣＲシグナル伝達の阻害を示す。左のパネルは、アッセイを描画する：細胞表面上にＦｃγＲＩＩｂを発現するＣＨＯ細胞を、まず、抗ＣＤ３抗体の存在下又は非存在下で、抗ＢＴＬＡ抗体、アイソタイプ対照ＭＧＯ、又はベンチマーク抗体２２Ｂ３とインキュベートした。次いで、抗体で覆われたＣＨＯ細胞を、表面ＴＣＲ及びＢＴＬＡを発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞とインキュベートした。ＴＣＲシグナル伝達を、レポーター細胞において、ＴＣＲシグナル伝達の下流のＮＦＡＴプロモーターの転写制御下のルシフェラーゼレポーター遺伝子の活性を介して測定した。右のパネルは、アッセイにおける異なる抗体の試験からの発光読み出しを示す。
【図4】アイソタイプ対照（ＭＧＯ５３）、ベンチマーク抗体２２Ｂ３、ＨＦＢ６－４、及びＨＦＢ６－５抗体による抗ＩｇＭ刺激（１０μｇ／ｍｌ）後の初代Ｂ細胞増殖の阻害を示す。抗体の効果を、３人の異なるドナーからの初代Ｂ細胞について（左のパネル）、様々な濃度（０．４１～１００ｎＭ）（右のパネル）で試験した。
【図5】ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３．ｈＢＴＬＡ）又はカニクイザルＢＴＬＡを過剰発現するＥｘｐｉ２９３細胞（ＨＥＫ２９３．ｃｙｎｏＢＴＬＡ）へのＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５抗体のヒト化変異体の結合を示す。標的細胞への抗ＢＴＬＡ抗体結合を、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体でフローサイトメトリによって定量化した（読み出し：平均蛍光強度、ＭＦＩ）。
【図6A】アイソタイプ対照抗体（ＭＧＯ５３）、ベンチマーク抗体２２Ｂ３、並びに１及び１０μｇ／ｍｌ濃度のＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５のヒト化変異体による、抗ＩｇＭ誘導性初代Ｂ細胞増殖の阻害を示す。Ｂ細胞増殖を、非刺激Ｂ細胞に関連するＣＦＳＥ希釈（ＣＦＳＥｌｏ％）によって定量化し、分裂％として示した。
【図6B】Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞における発光レポーター遺伝子の活性によって産生された発光シグナルによって測定された、アイソタイプ対照抗体（ＭＧＯ５３）、ベンチマーク抗体２２Ｂ３、並びにＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５のヒト化変異体による、抗ＣＤ３誘導性Ｊｕｒｋａｔ細胞活性化の阻害を示す（ＲＬＵ（relative light unit）：相対光単位）。
【図7】１０ｍｇ／ｋｇ用量の静脈内注射後のＣ５７ＢＬ６マウスにおけるＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５のヒト化変異体の薬物動態プロファイルを示す。注射の１、２４、及び７２時間後に血液を採取した。
【図8A】急性移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）のＮＳＧマウスモデルにおけるヒト末梢血単核細胞（human peripheral blood mononuclear cell、ｈＰＢＭＣ）の接種後の免疫反応の阻害における目的の抗体の治療有効性を示す。図８Ａは、実験の概略図を示す。
【図8B】急性移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）のＮＳＧマウスモデルにおけるヒト末梢血単核細胞（human peripheral blood mononuclear cell、ｈＰＢＭＣ）の接種後の免疫反応の阻害における目的の抗体の治療有効性を示す。図８Ｂは、詳細な実験計画及び実験の読み出しを示す。
【図8C】急性移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）のＮＳＧマウスモデルにおけるヒト末梢血単核細胞（human peripheral blood mononuclear cell、ｈＰＢＭＣ）の接種後の免疫反応の阻害における目的の抗体の治療有効性を示す。総疾患スコア（図８Ｃ）を含む、接種後１４～２１日までの予備結果を示す。
【図8D】急性移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）のＮＳＧマウスモデルにおけるヒト末梢血単核細胞（human peripheral blood mononuclear cell、ｈＰＢＭＣ）の接種後の免疫反応の阻害における目的の抗体の治療有効性を示す。ＲＣＢＷのパーセント（図８Ｄ）を含む、接種後１４～２１日までの予備結果を示す。
【図8E】急性移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）のＮＳＧマウスモデルにおけるヒト末梢血単核細胞（human peripheral blood mononuclear cell、ｈＰＢＭＣ）の接種後の免疫反応の阻害における目的の抗体の治療有効性を示す。リンパ球集団下のｈＣＤ４５＋細胞の割合（図８Ｅ）を含む、接種後１４～２１日までの予備結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0041】
１．概要
本明細書に記載される本発明は、ヒトＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、すなわち、ＢＴＬＡアゴニスト抗体に特異的であり、それを活性化する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体は、任意選択で、非ヒト霊長類ＢＴＬＡ、例えばサル（例えば、アカゲザル及び／又はカニクイザル）ＢＴＬＡと交差反応するが、齧歯類（例えば、マウス又はラットＢＴＬＡ）とは交差反応しない場合がある。
本明細書に記載される本発明は、ヒトＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、すなわち、ＢＴＬＡアゴニスト抗体に特異的であり、それを活性化する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体は、任意選択で、非ヒト霊長類ＢＴＬＡ、例えばサル（例えば、アカゲザル及び／又はカニクイザル）ＢＴＬＡと交差反応するが、齧歯類（例えば、マウス又はラットＢＴＬＡ）とは交差反応しない場合がある。
【0042】
本明細書に記載される本発明によれば、本発明のある特定のＢＴＬＡアゴニスト抗体は、最初に、ヒトＢＴＬＡの組換え細胞外ドメイン（extracellular domain、ＥＣＤ）でマウスを免疫して一連の多様な抗体を産生することによって得られ、その後、それらの結合、交差反応性、選択性、及び／又は他の機能的活性について特徴付けられた。次いで、ある特定のそのような抗体を、初代Ｂ細胞及び／又はＴ細胞のＩｇＭ誘導性増殖を阻害するそれらの能力について選択した。機能的に選択された抗体はまた、ヒトＢＴＬＡの非ヒト霊長類（サルなど）オルソログに対して交差反応性を呈し得、これは、非ヒト宿主（例えば、非ヒト霊長類又はＮＨＰ）動物におけるヒト治療剤の毒性試験の有益な特徴であり得る。
【0043】
ヒトＢＴＬＡに対してナノモル未満又は一桁ナノモルの結合親和性を有する、本明細書においてＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５と指定される２つの例示的なマウス抗体を、更なる特徴付け及びヒト化のために最初に同定した。
【0044】
ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１を含むこれらのマウス抗体のいくつかのヒト化変異体は、ＩｇＧ１アイソタイプのように産生され、それらのそれぞれのマウス－ヒトキメラ親抗体の結合及び交差反応性プロファイル、並びにＢ細胞、Ｔ細胞、及び／又はプラズマ細胞を含む免疫細胞に対する阻害効果を保持した。
【0045】
マウス免疫障害モデルにおけるこれらの抗体についての予備的インビトロ及びインビボ有効性評価を行い、初期毒性及び開発可能性分析も行った。予備データは、主題のモノクローナル抗体がＢＴＬＡアゴニストとしてある特定のベンチマーク抗体よりも有効であり、Ｂ細胞及びＴ細胞をより有効に阻害することを示す。
【0046】
これらの抗体の機能プロファイルは、それらの有利な開発可能性及び薬物動態プロファイルとともに、様々な自己免疫疾患（例えば、移植片対宿主疾患又はＧｖＨＤ）などの免疫障害を処置するための新規治療剤としてのそれらの開発を支持する。
【0047】
したがって、本発明の一態様は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）に特異的であり、それを活性化し、任意選択で、カニクイザルＢＴＬＡと交差反応性であり、当該モノクローナル抗体が、（１ａ）配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、並びに（１ｂ）配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、又は、（２ａ）配列番号６１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、並びに（２ｂ）配列番号６４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、任意選択で、当該モノクローナル抗体が、天然に存在しない、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0048】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域配列は、ＩＭＧＴ番号付けスキームに基づく。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＭａｒｔｉｎ（増強されたＣｈｏｔｈｉａ）スキームなどの他の番号付けスキームに対応するＣＤＲ配列は、抗体配列アラインメントによって容易に導出され得る。
【0049】
関連する態様では、本発明は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、（１）配列番号９のＨＣＶＲ配列、配列番号５７の重鎖定常領域配列、配列番号１０のＬＣＶＲ配列、及び配列番号５８の軽鎖定常領域配列、又は、（２）配列番号５９の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０の軽鎖アミノ酸配列を含む／から本質的になる／からなる、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0050】
関連する態様では、本発明は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、ヒトＢＴＬＡ（配列番号１２１など）への結合について、本明細書で定義されるような定義されたＣＤＲ及び／又はＶＨ／ＶＬ領域配列を有する単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0051】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されるようなモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれかの重鎖若しくは軽鎖又はその抗原結合部分をコードする、ポリヌクレオチドを提供する。関連する態様では、本発明はまた、厳しい条件下で、ポリヌクレオチドに、又はポリヌクレオチドの相補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドを提供する。
【0052】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されるような本発明のポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。
【0053】
本発明の別の態様は、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、又は本発明のベクターを含む、薬学的組成物を提供する。
【0054】
本発明の別の態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するか、又は自己免疫疾患を処置するための方法であって、方法が、有効量の本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0055】
本発明の別の態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するための、又は自己免疫疾患を処置するための薬品の製造における、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物の使用を提供する。
【0056】
本発明の別の態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答の下方制御に使用するための、又は自己免疫疾患を処置するための、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物を含む、組成物を提供する。
【0057】
本発明の詳細な態様は、以下の様々なセクションにおいて更に別々に記載される。しかしながら、本発明の任意の一実施形態（実施例又は図面のみに記載される実施形態、及び以下の１つのセクションのみに記載される実施形態を含む）は、本発明の任意の他の実施形態と組み合わされ得ることが理解されるべきである。
【0058】
２．定義
「抗体」という用語は、最も広い意味において、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。「抗体」という用語はまた、広義には、重鎖の相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３並びに軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む分子を指し得、分子は、抗原に結合することができる。「抗体」という用語はまた、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザルなどの様々な種の抗体を含むが、これらに限定されない。
「抗体」という用語は、最も広い意味において、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。「抗体」という用語はまた、広義には、重鎖の相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３並びに軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む分子を指し得、分子は、抗原に結合することができる。「抗体」という用語はまた、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザルなどの様々な種の抗体を含むが、これらに限定されない。
【0059】
しかしながら、より狭い意味では、「抗体」は、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、及びヒトモノクローナル抗体、特に本発明のヒト化モノクローナル抗体を含む、様々なモノクローナル抗体を指す。
【0060】
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部分を含む少なくとも１つの重鎖（heavy chain、ＨＣ）と、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部分を含む少なくとも１つの軽鎖（light chain、ＬＣ）とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、各重鎖が重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部分を含む２つの重鎖と、各軽鎖が軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部分を含む２つの軽鎖とを含む。
【0061】
本明細書中で使用される場合、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又は例えば、６つ全てのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一のポリペプチド鎖を含む任意の他の抗体は、重鎖及び軽鎖を有するとみなされる。いくつかのそのような実施形態では、重鎖は、３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は、３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。
【0062】
「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、フレームワーク２（ＨＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、ＦＲ３（ＨＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域はまた、ＣＤＲ－Ｈ１に対してＮ末端であるＦＲ１（ＨＦＲ１）の少なくとも一部分（例えば、全体）、及び／又はＣＤＲ－Ｈ３に対してＣ末端であるＦＲ４（ＨＦＲ４）の少なくとも一部分（例えば、全体）を含む。
【0063】
本明細書で使用される「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的重鎖定常領域としては、γ、δ、及びαが挙げられる。非限定的な例示的重鎖定常領域としてはまた、ε及びμが挙げられる。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体は、ＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体は、ＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体は、ＩｇＡ抗体であり、ε定常領域を含む抗体は、ＩｇＥ抗体であり、μ定常領域を含む抗体は、ＩｇＭ抗体である。
【0064】
ある特定のアイソタイプは、サブクラスに更に細分することができる。例えば、ＩｇＧ抗体としては、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ＩｇＡ抗体としては、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が挙げられるが、これらに限定されず、ＩｇＭ抗体としては、ＩｇＭ１（μ１定常領域を含む）及びＩｇＭ２（μ２定常領域を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0065】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
【0066】
「重鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、リーダー配列を有するか又は有さない少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部分を含む。「完全長重鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含み、リーダー配列を有するか又は有さず、かつＣ末端リジンを有するか又は有さないポリペプチドを指す。
【0067】
「軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）」という用語は、本明細書で使用される場合、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、フレームワーク（ＦＲ）２（ＬＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、ＦＲ３（ＬＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１（ＬＦＲ１）の少なくとも一部分（例えば、全体）及び／又はＦＲ４（ＬＦＲ４）の少なくとも一部分（例えば、全体）を含む。
【0068】
「軽鎖定常領域」という用語は、本明細書で使用される場合、軽鎖定常ドメイン、ＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的軽鎖定常領域としては、λ及びκが挙げられる。
【0069】
「軽鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、リーダー配列を有するか又は有さない少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部分を含む。「完全長軽鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含み、リーダー配列を有するか又は有さないポリペプチドを指す。
【0070】
（抗体の）「抗体断片」、「抗原結合部分」、又は「抗原結合断片」という用語は、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２などの抗原に結合することができる断片を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ若しくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。
【0071】
「Ｆａｂ」という用語は、約５０，０００ダルトンの分子量を有する抗体断片を指し、抗原に結合する活性を有する。それは、ジスルフィド架橋によって連結された重鎖のＮ末端側の約半分及び軽鎖の全体を含む。Ｆａｂは、特に、プロテアーゼ、パパインによる免疫グロブリンの処理によって得ることができる。
【0072】
「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、約１００，０００ダルトンの断片及び抗原に結合する活性を指定する。この断片は、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋を介して連結された２つのＦａｂ断片よりもわずかに大きい。これらの断片は、免疫グロブリンをプロテアーゼ、ペプシンで処理することによって得られる。Ｆａｂ断片は、ヒンジ領域のジスルフィド架橋の切断によってＦ（ａｂ’）２断片から得ることができる。
【0073】
単一Ｆｖ鎖「ｓｃＦｖ」は、ＶＬ及びＶＨドメインをコードする遺伝子並びにこれらのドメインを結合することが意図されるペプチドをコードする配列を使用して合成されたＶＨ：ＶＬポリペプチドに対応する。本発明によるｓｃＦｖは、例えば遺伝子組換え技術を使用して、適切な立体構造に維持されたＣＤＲを含む。
【0074】
「ｓｃＦｖ」の二量体は、ペプチド結合によって一緒に連結された２つのｓｃＦｖ分子に対応する。このＦｖ鎖は、多くの場合、ペプチドをコードするリンカー配列によって連結されたＶＨ及びＶＬをコードする遺伝子を含む融合遺伝子の発現の結果である。ヒトｓｃＦｖ断片は、好ましくは遺伝子組換え技術の使用によって、適切な立体構造で維持されるＣＤＲ領域を含み得る。
【0075】
「ｄｓＦｖ」断片は、ジスルフィド架橋によって安定化されたＶＨ－ＶＬヘテロ二量体であり、二価（ｄｓＦＶ２）であり得る。二価Ｓｃ（Ｆｖ）２又は多価抗体の断片は、一価ｓｃＦｖの会合によって自発的に形成され得るか、又はペプチド結合配列によってｓｃＦｖ断片を連結することによって産生され得る。
【0076】
Ｆｃ断片は、抗体の生物学的特性、特に、免疫エフェクターによって認識されるその能力又は相補体を活性化するその能力の支持体である。それは、ヒンジ領域を越える重鎖の定常断片からなる。
【0077】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原固定部位を有する小さい抗体断片を意味する。これらの断片は、同じＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖中に、可変軽鎖ドメインＶＬに連結された可変重鎖ドメインＶＨを含む。同じ鎖の２つのドメインの適合を可能にするには短すぎる結合配列を使用して、別の鎖の２つの相補的ドメインとの適合が必然的に発生し、したがって２つの抗原固定部位が作成される。
【0078】
「同じエピトープに結合する抗体」又は「（別の）抗体と結合について競合する抗体」は、抗体競合アッセイによって決定され得る抗体を指す。それは、競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する。「競合する」という用語は、同じエピトープについて競合する抗体の文脈で使用される場合、抗体間の競合が、試験されている抗体が共通抗原への参照抗体の特異的結合を防止又は阻害するアッセイによって決定されることを意味する。
【0079】
多数のタイプの競合結合アッセイ、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素イムノアッセイ（enzyme immunoassay、ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９を参照されたい）；固相直接標識アッセイ；固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照されたい）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）を使用することができる。
【0080】
典型的には、そのようなアッセイは、これらの非標識試験抗原結合タンパク質及び標識参照抗体のいずれかを有する固体表面又は細胞に結合した精製抗原の使用を伴う。競合的阻害は、試験抗体の存在下で固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験抗体は、過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が発生するために参照抗体によって結合されたエピトープに十分に近位の隣接エピトープに結合する抗体を含む。いくつかの実施形態では、競合抗体が過剰に存在する場合、それは、共通抗原への参照抗体の特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％又は７５％阻害する。いくつかの事例では、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％以上阻害される。
【0081】
「抗原」という用語は、抗体又はその免疫学的に機能的な断片などの選択的結合剤によって結合することができ、加えて、その抗原に結合することができる抗体を産生するために哺乳動物において使用することができる分子又は分子の一部分を指す。抗原は、抗体と相互作用することができる１つ以上のエピトープを保有し得る。
【0082】
「エピトープ」という用語は、抗体又はその断片などの選択的結合剤によって結合されている抗原分子の部分である。この用語は、抗体に特異的に結合することができる任意の決定基を含む。エピトープは、隣接的又は非隣接的であり得る（例えば、ポリペプチドにおいて、ポリペプチド配列において互いに隣接していないが、分子の文脈において抗原結合タンパク質によって結合されているアミノ酸残基）。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗体を生成するために使用されたエピトープに類似する三次元構造を含むが、抗体を生成するために使用されたそのエピトープに見出されたアミノ酸残基を全く含まないか、又はいくつかのみを含むという点で模倣体であり得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面分子群を含み得、特異的な三次元構造特性及び／又は特異的な電荷特性を有し得る。
【0083】
いくつかの実施形態では、「エピトープ」は、それを決定するために使用される方法によって定義される。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、水素－重水素交換（hydrogen-deuterium exchange、ＨＤＸ）によって決定されるように、それらが抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。
【0084】
ある特定の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶学によって決定されるように、それらが抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。
【0085】
「キメラ抗体」は、本明細書で使用される場合、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）からの少なくとも１つの可変領域と、第２の種（例えば、ヒト、カニクイザル、ニワトリなど）からの少なくとも１つの定常領域とを含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体の可変領域の全てが、第１の種からのものであり、キメラ抗体の定常領域の全てが、第２の種からのものである。
【0086】
「ヒト化抗体」は、本明細書で使用される場合、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、カニクイザル、ニワトリなど）のフレームワーク領域における少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域からの対応するアミノ酸で置き換えられている抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。
【0087】
「ＣＤＲ移植抗体」は、本明細書で使用される場合、第１の（非ヒト）種のうちの１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２の（ヒト）種のフレームワーク領域（framework region、ＦＲ）上に移植されているヒト化抗体を指す。
【0088】
「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ヒトにおいて産生される抗体、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）などのヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物において産生される抗体、及び抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づくファージディスプレイなどのインビトロ方法を使用して選択される抗体を指す。
【0089】
「宿主細胞」は、ベクター又は単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、又はレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であり得る。例示的な真核細胞としては、霊長類又は非霊長類動物細胞などの哺乳動物細胞；酵母などの真菌細胞；植物細胞；及び昆虫細胞が挙げられる。非限定的な例示的哺乳動物細胞としては、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、並びに２９３及びＣＨＯ細胞、並びにそれぞれ、２９３－６Ｅ及びＤＧ４４細胞などのそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0090】
「単離された」という用語は、本明細書で使用される場合、それが典型的に天然に見出される成分の少なくともいくつかから分離されているか、又はそれが典型的に産生される成分の少なくともいくつかから分離されている分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離される場合、「単離された」と称される。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、産生した細胞からポリペプチドを含有する上清を物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」と考えられる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが典型的に天然に見出されるより大きいポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合に、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡなど）の一部ではない場合、又は例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合に、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」と称される。したがって、宿主細胞内のベクターに含有されるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドがそのベクター中に天然に見出されない限り、「単離された」と称され得る。
【0091】
「対象」及び「患者」という用語は、ヒトなどの哺乳動物を指すために本明細書で互換的に使用される。いくつかの実施形態では、他の非ヒト哺乳動物（齧歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳動物実験動物、哺乳動物家畜、哺乳動物スポーツ動物、及び哺乳動物ペットが挙げられるが、これらに限定されない）を処置する方法もまた提供される。いくつかの事例では、「対象」又は「患者」は、疾患又は障害の処置を必要とする（ヒト）対象又は患者を指す。
【0092】
「試料」又は「患者試料」という用語は、本明細書中で使用される場合、例えば、物理的、生化学的、化学的、及び／又は生理的特性に基づいて特徴付けられ、かつ／又は同定される細胞実体及び／又は他の分子実体を含有する目的の対象から得られるか、あるいはそれに由来する材料を指す。例えば、「疾患試料」という語句及びその変形は、特徴付けられる細胞実体及び／又は分子実体を含有することが予想されるか、あるいは含有することが知られている目的の対象から得られる任意の試料を指す。
【0093】
「組織又は細胞試料」とは、対象又は患者の組織から得られた類似の細胞の収集物を意味する。組織又は細胞試料の供給源は、新鮮な、凍結された、及び／又は保存された臓器若しくは組織試料又は生検若しくは吸引物からのような固形組織；血液又は任意の血液構成成分；痰、脳脊髄液、羊水、腹水、又は間質液などの体液；対象の妊娠又は発達における任意の時点からの細胞であり得る。組織試料はまた、初代細胞若しくは培養細胞又は細胞株であり得る。任意選択で、組織又は細胞試料は、疾患組織／臓器から得られる。組織試料は、保存剤、抗凝固剤、緩衝剤、固定剤、栄養素、抗生物質などの、天然では組織と自然に混合されない化合物を含有し得る。
【0094】
「参照試料」、「参照細胞」、又は「参照組織」は、本明細書で使用される場合、本発明の方法又は組成物が同定のために使用されている疾患又は状態に罹患していないことが知られているか又は考えられる供給源から得られた試料、細胞、又は組織を指す。一実施形態では、参照試料、参照細胞、又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は状態が同定されている同じ対象又は患者の身体の健常な部分から得られる。一実施形態では、参照試料、参照細胞、又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は状態が同定されている対象又は患者ではない少なくとも１人の個体の身体の健常な部分から得られる。いくつかの実施形態では、参照試料、参照細胞、又は参照組織は、疾患若しくは状態を発症する前に、又は疾患若しくは状態の初期段階で、患者から予め得られた。
【0095】
「障害」又は「疾患」は、本発明の１つ以上のＢＴＬＡアンタゴニストによる処置から利益を得ることになる任意の状態である。これには、哺乳動物を問題の障害に罹りやすくする病理学的状態を含む慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。本明細書において処置される障害の非限定的な例としては、自己免疫疾患が挙げられる。
【0096】
「過活動性免疫障害」は、免疫系が対象の細胞、臓器、又は移植片を不必要に攻撃するか、又は免疫系の細胞が制御不能に増殖する任意の病気を意味する。一般的な過活動性免疫障害には、自己免疫疾患、及び移植片対宿主疾患などの同種移植の拒絶反応が含まれる。
【0097】
「処置」は、例えば、目的が標的とされる病的状態又は障害を遅らせる（減少させる）ことである治療的処置、並びに例えば、目的が状態又は障害の再発を阻害することである治療的処置を指す。「処置」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患（本明細書では「障害」又は「状態」とも称される）に対する治療薬の任意の投与又は適用を網羅し、疾患若しくは疾患の進行を阻害すること、疾患若しくはその進行を阻害若しくは遅延させること、その発症を停止させること、疾患を部分的若しくは完全に軽減すること、疾患の１つ以上の症状を部分的若しくは完全に軽減すること、又は失われた、欠落した、若しくは欠陥のある機能を回復若しくは修復すること、又は非効率的なプロセスを刺激することを含む。「処置」という用語はまた、任意の表現型特性の重症度を低減すること、及び／又はその特性の発生率、程度、若しくは可能性を低減することを含む。処置を必要とする者としては、既に障害を有する者、並びに障害の再発のリスクがある者、又は障害の再発を予防若しくは遅延させるべき者が挙げられる。
【0098】
「有効量」又は「治療有効量」という用語は、対象における疾患又は障害を処置するのに有効な薬物の量を指す。いくつかの実施形態では、有効量は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な投与量及び期間で有効な量を指す。本発明の抗体の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発するアンタゴニストの能力などの要因に従って変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果が主題の抗体の任意の毒性又は有害な効果を上回る量を包含する。
【0099】
「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な投与量及び期間で有効な量を指す。典型的には、必ずしもそうではないが、予防用量は、疾患の前又は疾患の初期段階で対象に使用されるため、予防有効量は、治療有効量よりも少なくなる。
【0100】
「薬学的に許容される担体」は、対象への投与のための「薬学的組成物」を一緒に含む治療剤とともに使用するための、当該技術分野において従来的な非毒性の固体、半固体、若しくは液体の充填剤、希釈剤、封入材料、製剤補助剤、又は担体を指す。薬学的に許容される担体は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適切である。例えば、治療剤が経口投与される場合、担体は、ゲルカプセルであり得る。治療剤が皮下投与される場合、担体は、理想的には皮膚に対して刺激性でなく、注射部位反応を引き起こさない。
【0101】
「製造品」は、少なくとも１つの試薬、例えば、疾患若しくは障害の処置のための薬品、又は本明細書に記載されるバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む任意の製造品（例えば、パッケージ又は容器）又はキットである。いくつかの実施形態では、製造品又はキットは、本明細書に記載される方法を実施するためのユニットとして販売促進、流通、又は販売される。
【0102】
３．過活動性免疫障害を処置する方法
本明細書に記載される本発明は、ヒト及び他の非ヒト哺乳動物を処置する方法に使用するための抗ＢＴＬＡ抗体を提供する。
本明細書に記載される本発明は、ヒト及び他の非ヒト哺乳動物を処置する方法に使用するための抗ＢＴＬＡ抗体を提供する。
【0103】
病理学的状況では、免疫系は、過剰活性であり、正常組織及び健常組織を攻撃して、自己免疫疾患を引き起こし得る。他の病理学的状況では、免疫系の細胞は、過剰増殖性であり得る例えば、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫など）。他の状況では、免疫系は、意図されるように外来実体を攻撃するが、同種移植の場合のように、同種実体の受容が所望の結果である。
【0104】
したがって、いくつかの非限定的な実施形態では、本発明の抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体又はその抗原結合断片は、免疫応答を弱める処置から利益を得る対象、例えば、自己免疫疾患を有する対象又は同種移植片を受けている対象に使用することができる。本発明の抗ＢＴＬＡ抗体は、例えば、Ｔ細胞及び／又はＢ細胞及びプラズマ細胞の増殖及び／又は活性を阻害することによって、免疫応答の抑制をもたらす。
【0105】
すなわち、本明細書に記載される本発明は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するか、又は自己免疫疾患を処置する方法であって、方法が、有効量の本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0106】
関連する態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御すること、又は自己免疫疾患を処置することを必要とする患者において、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御するための、又は自己免疫疾患を処置するための薬品の製造における、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物の使用を提供する。
【0107】
別の関連する態様は、Ｂ細胞媒介性若しくはＴ細胞媒介性免疫応答の下方制御に使用するための、又は自己免疫疾患を処置するための、本発明の単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、又は本発明の薬学的組成物を含む、組成物を提供する。
【0108】
いくつかの実施形態では、過活動性免疫障害を処置又は予防するための方法であって、有効量の主題の抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合断片のいずれかを、そのような処置を必要とする対象に投与することを含む、方法が提供される。
【0109】
いくつかの実施形態では、過活動性免疫障害を処置するための方法であって、有効量の主題の抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体又はその抗原結合断片のいずれかを、それを必要とする対象、例えば、過活動性免疫障害、例えば、自己免疫疾患と診断された対象、それを有するリスクが高い対象、又はそれを有する症状を呈する対象に投与することを含む、方法が提供される。
【0110】
主題の抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合断片で処置され得る、非限定的な例示的過活動性免疫障害、例えば、自己免疫疾患が本明細書に提供され、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；小児潰瘍性大腸炎を含む潰瘍性大腸炎（ＵＣ）；関節リウマチ（ＲＡ）；慢性尋常性乾癬を含む乾癬（Ｐｓ）；乾癬性関節炎（ＰｓＡ）；小児クローン病を含むクローン病（ＣＤ）；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；強直性脊椎炎；多関節型若年性特発性関節炎を含む若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）；汗腺膿瘍；非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、及び汎ブドウ膜炎；自己免疫性肝炎様疾患；実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）；ＭＨＣ不適合心臓同種移植；急性気道アレルギーにおける肺の炎症；移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）；又は同種造血幹細胞移植（ａＨＳＣＴ）を含む。
【0111】
ある特定の実施形態では、過活動性免疫障害は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ又は狼瘡）である。狼瘡は、Ｂ細胞及びＴ細胞免疫調節異常から生じる、核、細胞質、及び／又は細胞表面分子に対する病原性自己抗体の病理学的形成を特徴とする。循環抗原抗体免疫複合体の局所形成及び／又は沈着は、寛解及び増悪を特徴とする広範囲の全身性及び臓器特異的臨床所見の原因である炎症反応を誘発し、多臓器系損傷及び潜在的に末端臓器不全をもたらす。狼瘡は、身体障害症状及び進行性臓器損傷を特徴とする多面的自己免疫疾患である。
【0112】
ある特定の実施形態では、過活動性免疫障害は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。ＩＢＤは、胃腸（ＧＩ）管への損傷をもたらす慢性炎症を特徴とする２つの状態、クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を包含する。ＩＢＤのいくつかの一般的な症状は、持続性下痢、腹痛、直腸出血／血便、体重減少、及び疲労である。
【0113】
ある特定の実施形態では、過活動性免疫障害は、対象の免疫系がドナーから得られた同種移植片を攻撃する状態、例えば、移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）である。ＧｖＨＤは、移植後の任意の時点で発生し得、急性又は慢性であり得る。骨髄移植において、ＧｖＨＤは、より一般的には、骨髄が細胞を作り始めた後に発生する。症状は、どのくらい長く状態を有していたかに基づいて変動するが、口腔内潰瘍、腹痛、及び発疹を含み得る。
【0114】
いくつかの実施形態では、過活動性免疫障害を予防するための方法であって、有効量の主題の抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合断片のいずれかを、過活動性免疫関連障害の症状を発症するリスクがある対象に予防的に投与することを含む、方法が提供される。例えば、主題の抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合断片は、同種移植を受ける前に対象に投与され得る。
【0115】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合断片は、単独で使用することができるか、又は代替として疾患若しくは適応症を処置することができることが知られている任意の他の好適な化合物と組み合わせて使用することができる。
【0116】
したがって、本発明の特定の実施形態によれば、先に定義したように、ＢＬＴＡを対象とし、Ｔ細胞及び／又はＢ細胞並びにプラズマ細胞を阻害する抗体は、過活動性免疫系に関連する疾患、例えば、狼瘡などの自己免疫疾患を処置するための第２の治療剤と組み合わせて使用される。
【0117】
そのような併用療法において、本発明の抗体は、第２の治療剤の前、後、又は同時に使用することができる。併用療法に関する以下の更なるセクションを参照されたい。
【0118】
４．投与経路及び担体
様々な実施形態では、主題のアゴニスト抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、皮下又は静脈内投与され得る。簡潔にするために、「主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体」は、本発明のマウス－ヒトキメラ抗ＢＴＬＡ抗体、並びにそのヒト化変異体を指す。
様々な実施形態では、主題のアゴニスト抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、皮下又は静脈内投与され得る。簡潔にするために、「主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体」は、本発明のマウス－ヒトキメラ抗ＢＴＬＡ抗体、並びにそのヒト化変異体を指す。
【0119】
いくつかの実施形態では、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、頬側、直腸、腹腔内、静脈内、及び皮下投与、吸入、皮内、局所、経皮、及び髄腔内、又はその他、例えば、移植を含むがこれらに限定されない様々な経路によってインビボで投与され得る。
【0120】
いくつかの実施形態では、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、静脈内（ｉ．ｖ．）又は皮下（ｓ．ｃ．）投与を介して投与され得る。
【0121】
主題の抗体組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座薬、浣腸剤、注射剤、吸入剤、及びエアロゾルを含むが、これらに限定されない、固体、半固体、液体、又は気体形態の調製物に製剤化され得る。
【0122】
様々な実施形態では、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体を含む組成物は、多種多様な薬学的に許容される担体を有する製剤で提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む様々な薬学的に許容される担体が利用可能である。更に、様々な薬学的に許容される補助物質（例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、張度調整剤、安定剤、湿潤剤など）もまた利用可能である。非限定的な例示的担体としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【0123】
様々な実施形態では、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体を含む組成物は、それらを、植物油若しくは他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、又はプロピレングリコールなどの水性又は非水性溶媒中に、かつ所望であれば、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、及び保存剤などの従来の添加剤とともに、溶解、懸濁、又は乳化することによって、皮下投与を含む注射用に製剤化され得る。
【0124】
様々な実施形態では、組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの加圧された許容される噴射剤を使用して、吸入用に製剤化され得る。
【0125】
組成物はまた、様々な実施形態では、生分解性又は非生分解性ポリマーなどを用いて徐放性マイクロカプセルに製剤化され得る。非限定的な例示的生分解性製剤としては、ポリ乳酸－グリコール酸（poly lactic acid-glycolic acid、ＰＬＧＡ）ポリマーが挙げられる。非限定的な例示的非生分解性製剤としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。そのような製剤を作製するある特定の方法は、例えば、欧州特許出願公開第１１２５５８４（Ａ１）号に記載されている。
【0126】
各々が主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体の１回以上の用量を含有する、１つ以上の容器を含む薬学的投与パックも提供される。いくつかの実施形態では、単位用量が提供され、単位用量は、１つ以上の追加の薬剤を含むか又は含まずに、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体を含む所定量の組成物を含有する。いくつかの実施形態では、そのような単位用量は、注射用の単回使用の充填済みシリンジで供給される。様々な実施形態では、単位用量に含有される組成物は、生理食塩水、スクロースなど；リン酸塩などの緩衝剤などを含み得、及び／又は安定かつ有効なｐＨ範囲内で製剤化され得る。代替として、いくつかの実施形態では、組成物は、適切な液体（例えば、滅菌水）の添加時に再構成され得る凍結乾燥粉末として提供され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、スクロース及びアルギニンを含むがこれらに限定されない、タンパク質凝集を阻害する１つ以上の物質を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／又はプロテオグリカンを含む。
【0127】
薬学的組成物は、特定の適応症の処置又は予防に有効な量で投与される。治療有効量は、典型的には、処置されている対象の体重、対象の身体状態若しくは健康状態、処置される状態の広範性、又は処置されている対象の年齢に依存する。
【0128】
５．併用療法
本発明の主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体（その機能的な断片を含む）は、疾患の処置のための他の生物学的に活性な物質又は他の処置手順と組み合わせて、それを必要とする対象に投与され得る。例えば、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、単独で、又は他の処置様式とともに投与され得る。それらは、免疫抑制剤などの他の処置様式の前に、それと実質的に同時に、又はその後に提供され得る。
本発明の主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体（その機能的な断片を含む）は、疾患の処置のための他の生物学的に活性な物質又は他の処置手順と組み合わせて、それを必要とする対象に投与され得る。例えば、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、単独で、又は他の処置様式とともに投与され得る。それらは、免疫抑制剤などの他の処置様式の前に、それと実質的に同時に、又はその後に提供され得る。
【0129】
過活動性免疫障害の処置のために、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、コルチコステロイド、ヤヌスキナーゼ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＩＭＤＨ阻害剤、及び他の免疫抑制剤などの免疫抑制剤のうちの１つ以上と併せて投与され得る。
【0130】
ある特定の実施形態では、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、対象、例えば、自己免疫疾患を有する対象に、同時に又は連続してのいずれかで、別の処置とともに投与される。例えば、主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体は、免疫抑制剤のうちの１つ以上とともに投与され得る。
【0131】
ある特定の実施形態では、過活動性免疫障害を有する対象の処置方法は、対象に、本発明の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体、及びコルチコステロイド（例えば、ステロイド）などの１つ以上の免疫抑制剤を投与することを含む。
【0132】
主題の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体と組み合わせて投与され得る免疫抑制剤としては、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、メフェナム酸、エトリコキシブ、インドメタシン、及び高用量アスピリンなどの非ステロイド性抗炎症薬（non-steroidal anti-inflammatory drug、ＮＳＡＩＤ）；ヒドロキシクロロキン及びリン酸クロロキンなどの抗マラリア薬；プレドニゾン、ブデソニド、及びプレドニゾロンなどのコルチコステロイド；トファシチニブなどのヤヌスキナーゼ阻害剤；シクロスポリン及びタクロリムスなどのカルシニューリン阻害剤；シロリムス及びエベロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤；並びにアザチオプリン、レフルノミド、及びミコフェノレートなどのＩＭＤＨ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【0133】
６．例示的な抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体
本明細書に記載される本発明は、ＢＴＬＡに特異的なアゴニストモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片を提供する。
本明細書に記載される本発明は、ＢＴＬＡに特異的なアゴニストモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片を提供する。
【0134】
したがって、本発明の一態様は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、ＨＦＢ６－４又はＨＦＢ６－５によって結合されたエピトープへの結合について、本明細書に記載される単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれかと競合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0135】
本発明の別の関連する態様は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、当該モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＢＴＬＡに特異的であり、当該モノクローナル抗体が、（１ａ）配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、並びに（１ｂ）配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、又は（２ａ）配列番号６１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、並びに（２ｂ）配列番号６４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0136】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤＲ領域配列は、ＩＭＧＴ番号付けスキームに基づく。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＭａｒｔｉｎ（増強されたＣｈｏｔｈｉａ）スキームなどの他の番号付けスキームに対応するＣＤＲ配列は、抗体配列アラインメントによって容易に導出され得る。
【0137】
上に記載される本発明の態様のいずれかについて、いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において：（１Ａ）ＨＣＶＲ配列は、配列番号７であり、かつ／又は（１Ｂ）ＬＣＶＲ配列は、配列番号８であるか、又は（２Ａ）ＨＣＶＲ配列は、配列番号６７であり、かつ／又は（２Ｂ）ＬＣＶＲ配列は、配列番号６８である。
【0138】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0139】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0140】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0141】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0142】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0143】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0144】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号２０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0145】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号２１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号２２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0146】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号２３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号２４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0147】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号２５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号２６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0148】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号２７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号２８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0149】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号２９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号３０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0150】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号３１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号３２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0151】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号３３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号３４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0152】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号３５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号３６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0153】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号３７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号３８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0154】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号３９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号４０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0155】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号４１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号４２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0156】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号４３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号４４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0157】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号４５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号４６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0158】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号４７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号４８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0159】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号４９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号５０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0160】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号５１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号５２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0161】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号５３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号５４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0162】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号５５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号５６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0163】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号６７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号６８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0164】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号６９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号７０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0165】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号７１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号７２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0166】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号７３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号７４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0167】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号７５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号７６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0168】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号７７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号７８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0169】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号７９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号８０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0170】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号８１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号８２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0171】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号８３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号８４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0172】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号８５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号８６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0173】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号８７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号８８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0174】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号８９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号９０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0175】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号９１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号９２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0176】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号９３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号９４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0177】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号９５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号９６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0178】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号９７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号９８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0179】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号９９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１００若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0180】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１０１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１０２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0181】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１０３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１０４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0182】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１０５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１０６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0183】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１０７若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１０８若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0184】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１０９若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１１０若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0185】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１１１若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１１２若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0186】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１１３若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１１４若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0187】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ＨＣＶＲ配列は、配列番号１１５若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体であり、並びに／又は、ＬＣＶＲ配列は、配列番号１１６若しくはそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつ軽鎖フレームワーク領域において少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含む／から本質的になる／からなる変異体である。
【0188】
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、（１ａ）配列番号１１７の重鎖配列、及び／若しくは配列番号１１８の軽鎖配列、又は（２ａ）配列番号１１９の重鎖配列、及び／若しくは（２ｂ）配列番号１２０の軽鎖配列を有する。
【0189】
本発明の抗体の配列のうちのいくつかを以下に提供する。
ＨＦＢ６－４－ｈＧ１（ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷ（配列番号１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＧＲＮＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤ（配列番号２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＣＡＳＹＥＧＹＹＥＲＦＧＹＷ（配列番号３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＣＫＳＳＱＳＬＬＤＲＤＧＫＴＹＬＮＷ（配列番号４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＣＷＱＤＴＨＦＰＹＴＦ（配列番号６）
ＨＣＶＲ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＮＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＮＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＹＥＧＹＹＥＲＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号７）
ＬＣＶＲ：
ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＲＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＤＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８）
ＨＣ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＮＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＮＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＹＥＧＹＹＥＲＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１７）
ＬＣ：ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＲＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＤＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１８）
ＨＦＢ６－５－ｈＧ１（ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＣＴＡＳＧＶＮＩＫＤＴＹＭＹＷ（配列番号６１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＧＲＩＤＰＡＮＧＹＴＲＹＤ（配列番号６２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＣＡＶＹＤＧＹＹＥＳＦＤＶＷ（配列番号６３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷ（配列番号６４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号６５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＣＷＱＧＴＬＦＰＲＴＦ（配列番号６６）
ＨＣＶＲ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＶＮＩＫＤＴＹＭＹＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＹＴＲＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＨＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＡＡＶＹＹＣＡＶＹＤＧＹＹＥＳＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号６７）
ＬＣＶＲ：
ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＮＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＬＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６８）
ＨＣ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＶＮＩＫＤＴＹＭＹＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＹＴＲＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＨＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＡＡＶＹＹＣＡＶＹＤＧＹＹＥＳＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１９）
ＬＣ：ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＮＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＬＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２０）
ＨＦＢ６－４－ｈＧ１（ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷ（配列番号１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＧＲＮＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤ（配列番号２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＣＡＳＹＥＧＹＹＥＲＦＧＹＷ（配列番号３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＣＫＳＳＱＳＬＬＤＲＤＧＫＴＹＬＮＷ（配列番号４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＣＷＱＤＴＨＦＰＹＴＦ（配列番号６）
ＨＣＶＲ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＮＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＮＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＹＥＧＹＹＥＲＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号７）
ＬＣＶＲ：
ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＲＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＤＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８）
ＨＣ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＮＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＮＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＹＥＧＹＹＥＲＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１７）
ＬＣ：ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＲＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＤＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１８）
ＨＦＢ６－５－ｈＧ１（ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＣＴＡＳＧＶＮＩＫＤＴＹＭＹＷ（配列番号６１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＧＲＩＤＰＡＮＧＹＴＲＹＤ（配列番号６２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＣＡＶＹＤＧＹＹＥＳＦＤＶＷ（配列番号６３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷ（配列番号６４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号６５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＣＷＱＧＴＬＦＰＲＴＦ（配列番号６６）
ＨＣＶＲ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＶＮＩＫＤＴＹＭＹＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＹＴＲＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＨＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＡＡＶＹＹＣＡＶＹＤＧＹＹＥＳＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号６７）
ＬＣＶＲ：
ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＮＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＬＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６８）
ＨＣ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＶＮＩＫＤＴＹＭＹＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＹＴＲＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＨＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＡＡＶＹＹＣＡＶＹＤＧＹＹＥＳＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１９）
ＬＣ：ＤＶＶＭＴＱＡＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＮＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＬＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２０）
【0190】
【表1】
【0191】
【表2】
【0192】
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、又は再表面化抗体である。
【0193】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、又はＩｇＧ４抗体である。
【0194】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１抗体である。
【0195】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５７又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の重鎖定常領域配列と、配列番号５８又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の軽鎖定常領域配列と、を含むＩｇＧ１抗体である。
【0196】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、（１）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）を調節し（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの増加した結合を介して増強されたＡＤＣＣを有するＦ２４３Ｌ、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、又はアフコシル化（非フコシル化）抗体（例えば、Ｆｃ領域におけるアフコシル化Ｎ２９７））、かつ／又は、（２）血清半減期を増強する（例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）、重鎖定常領域における変異を含むＩｇＧ１抗体である。
【0197】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、マウス抗体、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、又は再表面化抗体である。
【0198】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化抗体である。
【0199】
いくつかの実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ若しくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃである。
【0200】
ある特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡに特異的であり、例えば、マウスＢＴＬＡと実質的に交差反応しない。
【0201】
ある特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、サルＢＴＬＡ（例えば、カニクイザル又はアカゲザルＢＴＬＡ、例えば配列番号１２２）などの非ヒト初代ＢＴＬＡと交差反応する。ある特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、マウスＢＴＬＡ（例えば、配列番号１２３）などの齧歯類ＢＴＬＡと交差反応しない。ヒト、サル、及びマウスＢＴＬＡの当該技術分野において既知の例示的なアミノ酸配列を以下に列挙する。
【0202】
【表3】
【0203】
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡに対して≦１μΜ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦２５ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。
【0204】
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＨＦＢ６－４によって結合されているエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＨＦＢ６－５によって結合されているエピトープに結合する。
【0205】
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、ＢＴＬＡに結合するとＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する。
【0206】
いくつかの実施形態では、ＢＴＬＡからの当該下流シグナル伝達は、Ｂ細胞増殖を阻害し、かつ／又はＴ細胞（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｈ１、ＴＦＨ、αβ、又はγδＴ細胞）及び／若しくはプラズマ細胞活性化を阻害する。
【0207】
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭへのＢＴＬＡ結合を遮断／干渉／消失しない。
【0208】
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＢＴＬＡに結合すると、Ｂ細胞増殖を阻害し、かつ／又はＴ細胞（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｈ１、ＴＦＨ、αβ、又はγδＴ－細胞）活性化を阻害する。
【0209】
ある特定の実施形態では、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、（１）配列番号９のＨＣＶＲ配列、配列番号５７の重鎖定常領域配列、配列番号１０のＬＣＶＲ配列、及び配列番号５８の軽鎖定常領域配列、又は、（２）配列番号５９の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０の軽鎖アミノ酸配列を含む。
【0210】
関連する態様では、本発明は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、（１）配列番号９のＨＣＶＲ配列、配列番号５７の重鎖定常領域配列、配列番号１０のＬＣＶＲ配列、及び配列番号５８の軽鎖定常領域配列、又は、（２）配列番号５９の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号６０の軽鎖アミノ酸配列を含む／から本質的になる／からなる、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【0211】
いくつかの実施形態では、ヒト化モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、高温下で（例えば、２５℃又は４０℃での貯蔵で安定）、低ｐＨ条件で（例えば、ｐＨ３．５、室温付近）、及び／又は数回の凍結／解凍サイクルの後に安定であることを含む、良好な開発可能性プロファイルを有する。
【0212】
ある特定の実施形態では、ヒト化モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、抗体の開発可能性を改善するように設計されているアミノ酸配列の１つ以上の点変異を含む。例えば、Ｒａｙｂｏｕｌｄ ｅｔ ａｌ．（Ｆｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ＰＮＡＳ１１６（１０）：４０２５－４０３０，２０１９）は、治療用抗体プロファイラ（Therapeutic Antibody Profiler、ＴＡＰ）（ダウンロード可能な可変ドメイン配列の相同性モデルを構築し、５つの開発可能性ガイドラインに対してそれらを試験し、潜在的な配列の役割及び古典的な形式を報告するための計算ツール）について記載している。著者らは、ｏｐｉｇ．ｓｔａｔｓ．ｏｘ．ａｃ．ｕｋ／ｗｅｂａｐｐｓ／ｓａｂｄａｂ－ｓａｂｐｒｅｄ／ＴＡＰ．ｐｈｐで自由に利用可能なＴＡＰを更に提供している。
【0213】
抗原に対する所望の親和性を達成することに加えて、治療的ｍＡｂ開発に対する多くの障壁が存在する。これらには、固有の免疫原性、化学的及び立体構造的不安定性、自己会合、高粘度、多特異性、及び不十分な発現が含まれる。例えば、特に超可変相補性決定領域（ＣＤＲ）における、高レベルの疎水性は、凝集、粘度、及び多特異性に繰り返し関与している。重鎖及び軽鎖可変ドメインの正味電荷の非対称性は、高濃度での自己会合及び粘度とも相関している。ＣＤＲにおける正電荷及び負電荷のパッチは、高率のクリアランス及び低い発現レベルに関連している。生成物の不均一性（例えば、酸化、異性化、又はグリコシル化による）は、翻訳後修飾又は同時翻訳修飾を受けやすい特定の配列モチーフから生じることが多い。配列の役割の同定を容易にするための計算ツールが利用可能である。Ｗａｒｓｚａｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｙ ｔｈｅ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ－ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ １５（８）：ｅ１００７２０７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００７２０７）はまた、可変軽鎖－重鎖界面の自動設計によって抗体親和性及び安定性を最適化する方法を記載した。追加の方法が、候補抗体の潜在的な開発可能性の問題を同定するために利用可能であり、本発明の好ましい実施形態では、１つ以上の点変異が、従来の方法を介して候補抗体に導入されて、そのような問題に対処し、本発明の最適化された治療用抗体をもたらすことができる。
【0214】
７．ヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（human anti-mouse antibody、ＨＡＭＡ）応答）を低減又は排除するため、治療用分子として有用であり、これは、抗体治療薬に対する免疫応答及び治療薬の有効性の低下をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（human anti-mouse antibody、ＨＡＭＡ）応答）を低減又は排除するため、治療用分子として有用であり、これは、抗体治療薬に対する免疫応答及び治療薬の有効性の低下をもたらし得る。
【0215】
抗体は、任意の標準的な方法によってヒト化され得る。ヒト化の非限定的な例示的方法としては、例えば、米国特許第５５３０１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第６，１８０，３７０号；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６（１９８８）；及び米国特許出願公開第２００９／０１３６５００号に記載されている方法が挙げられる。全てが参照により組み込まれる。
【0216】
ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域における少なくとも１つのアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域における対応する位置からのアミノ酸で置き換えられている抗体である。いくつかの実施形態では、非ヒト可変領域のフレームワーク領域における少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、又は少なくとも２０個のアミノ酸が、１つ以上のヒトフレームワーク領域における１つ以上の対応する位置からのアミノ酸で置き換えられる。
【0217】
いくつかの実施形態では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸のうちのいくつかは、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域からのものである。すなわち、いくつかのそのような実施形態では、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上は、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの、又は第１のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる対応するアミノ酸で置き換えられ得、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上は、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの、又は第２のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる対応するアミノ酸で置き換えられ得、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上は、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの、又は第３のヒト免疫グロブリン遺伝子などによってコードされる対応するアミノ酸で置き換えられ得る。更に、いくつかの実施形態では、単一のフレームワーク領域（例えば、ＦＲ２）における置換のために使用される対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒトフレームワークからのものである必要はない。しかしながら、いくつかの実施形態では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸の全ては、同じヒト抗体からのものであるか、又は同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる。
【0218】
いくつかの実施形態では、抗体は、１つ以上のフレームワーク領域全体を、対応するヒトフレームワーク領域で置き換えることによってヒト化される。いくつかの実施形態では、置換されている非ヒトフレームワーク領域に対して最高レベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。いくつかの実施形態では、そのようなヒト化抗体は、ＣＤＲ移植抗体である。
【0219】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ移植に続いて、１つ以上のフレームワークアミノ酸が、マウスフレームワーク領域における対応するアミノ酸に戻される。そのような「復帰変異」は、いくつかの実施形態では、ＣＤＲのうちの１つ以上の構造に寄与すると思われる、及び／又は抗原接触に関与し得る、及び／又は抗体の全体的な構造的完全性に関与すると思われる、１つ以上のマウスフレームワークアミノ酸を保持するために行われる。いくつかの実施形態では、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、又はゼロ個の復帰変異が、ＣＤＲ移植後に抗体のフレームワーク領域に対して行われる。
【0220】
いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はまた、ヒト重鎖定常領域及び／又はヒト軽鎖定常領域を含む。
【0221】
いくつかの実施形態では、本発明のヒト化抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合断片は、表１～表２及び添付の配列表（本明細書の一部として本明細書に組み込まれる）に列挙される１つの抗体である。
【0222】
８．ヒト抗体
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の好適な方法によって作製することができる。非限定的な例示的方法としては、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することが挙げられる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１－５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－８（１９９３）；ｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９（１９９４）；並びに米国特許第５，５４５，８０７号；同第６，７１３，６１０号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１６２，９６３号；同第５，５４５，８０７号；同第６，３００，１２９号；同第６，２５５，４５８号；同第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；及び同第５，５４５，８０６号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の好適な方法によって作製することができる。非限定的な例示的方法としては、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することが挙げられる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１－５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－８（１９９３）；ｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９（１９９４）；並びに米国特許第５，５４５，８０７号；同第６，７１３，６１０号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１６２，９６３号；同第５，５４５，８０７号；同第６，３００，１２９号；同第６，２５５，４５８号；同第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；及び同第５，５４５，８０６号を参照されたい。
【0223】
非限定的な例示的方法としてはまた、ファージディスプレイライブラリを使用してヒト抗体を作製することが挙げられる。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１－８（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７（１９９１）；及びＰＣＴ国際公開第９９／１０４９４号を参照されたい。
【0224】
抗体定常領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるヒト化、キメラ、又はヒト抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態は、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、Ｋ及びλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はＦｃ融合パートナーは、例えば、ＩｇＧ１定常領域にＣ２３７Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６，９００，２９２号に記載されているように、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域においてＳ２４１Ｐ変異を含む。例えば、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５－１０８（１９９３）を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるヒト化、キメラ、又はヒト抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態は、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、Ｋ及びλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はＦｃ融合パートナーは、例えば、ＩｇＧ１定常領域にＣ２３７Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６，９００，２９２号に記載されているように、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域においてＳ２４１Ｐ変異を含む。例えば、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５－１０８（１９９３）を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【0225】
いくつかの実施形態では、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５７又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の重鎖定常領域配列と、配列番号５８又はそれに対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、かつその中にアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、及び／又は置換）を含むその変異体の軽鎖定常領域配列と、を含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む。
【0226】
重鎖定常領域の選択は、抗体がインビボでエフェクター機能を有するか否かを決定することができる。そのようなエフェクター機能は、いくつかの実施形態では、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は相補体依存性細胞傷害（complement-dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）を含み、抗体が結合している細胞の死滅をもたらし得る。典型的には、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３重鎖を含む抗体は、エフェクター機能を有する。
【0227】
いくつかの実施形態では、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）を調節する、重鎖定常領域における変異を含むＩｇＧ１抗体である（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの増加した結合を介して増強されたＡＤＣＣを有するＦ２４３Ｌ、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、又はアフコシル化（非フコシル化）抗体（例えば、Ｆｃ領域におけるアフコシル化Ｎ２９７）。
【0228】
いくつかの実施形態では、本発明の単離、重鎖定常領域における変異を含むＩｇＧ１抗体である（例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、及びＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）。
【0229】
いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、望ましくない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、炎症状態及び／又は自己免疫疾患の処置において望ましくない場合がある。いくつかのそのような実施形態では、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域が、選択又は操作される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ変異を含む。
【0230】
本明細書に記載される抗体のいずれも、任意の好適な方法によって精製され得る。そのような方法としては、親和性マトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィの使用が挙げられるが、これらに限定されない。好適な親和性リガンドとしては、抗体が結合する抗原及び／又はエピトープ、並びに抗体定常領域を結合するリガンドが挙げられる。例えば、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、タンパク質Ａ／Ｇ、又は抗体親和性カラムを使用して、定常領域を結合し、抗体を精製し得る。
【0231】
いくつかの実施形態では、疎水性相互作用クロマトグラフィ（hydrophobic interactive chromatography、ＨＩＣ）、例えば、ブチル又はフェニルカラムもまた、いくつかのポリペプチドを精製するために使用される。ポリペプチドを精製する多くの方法が、当該技術分野において既知である。
【0232】
代替として、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、無細胞系において産生される。非限定的な例示的無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載されている。
【0233】
９．本発明の抗体をコードする核酸分子
本発明はまた、本明細書に記載される抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載される抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
本発明はまた、本明細書に記載される抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載される抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
【0234】
いくつかのそのような実施形態では、重鎖及び軽鎖は、１つの核酸分子から、又は２つの別個の核酸分子から、２つの別個のポリペプチドとして発現される。いくつかの実施形態では、抗体がｓｃＦｖである場合など、単一のポリヌクレオチドは、一緒に連結された重鎖及び軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。
【0235】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳された場合に重鎖又は軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上で考察されたように、リーダー配列は、天然の重鎖若しくは軽鎖リーダー配列であり得るか、又は別の異種リーダー配列であり得る。
【0236】
核酸分子は、当該技術分野において従来的な組換えＤＮＡ技術を使用して構築され得る。いくつかの実施形態では、核酸分子は、哺乳動物細胞などの選択された宿主細胞における発現に好適な発現ベクターである。
【0237】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化される。
【0238】
１０．ベクター
本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、ベクターが提供される。そのようなベクターとしては、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列及び軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合など、単一のポリペプチドの一部として発現される。
本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、ベクターが提供される。そのようなベクターとしては、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列及び軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合など、単一のポリペプチドの一部として発現される。
【0239】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、発現ベクター（例えば、哺乳動物、酵母、昆虫、又は細菌発現ベクター）である。
【0240】
いくつかの実施形態では、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、同様の量（例えば、同様のモル量又は同様の質量）で宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、５：１～１：５の第１のベクター及び第２のベクターのモル比又は質量比が、宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態は、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターについて１：１～１：５の質量比が使用される。いくつかの実施形態は、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターについて１：２の質量比が使用される。
【0241】
いくつかの実施形態では、ＣＨＯ若しくはＣＨＯ由来細胞、又はＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されているベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載されている。いくつかの実施形態では、ベクターは、ヒトを含む動物における主題の抗体のインビボ発現のために選択される。いくつかのそのような態様では、１つ又は複数のポリペプチドの発現は、組織特異的に機能する１つ又は複数のプロモーターの制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターは、例えばＰＣＴ国際公開第２００６／０７６２８８号に記載されている。
【0242】
１１．宿主細胞
様々な実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞において、又は、真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞などの真核細胞において発現され得る。そのような発現は、例えば、当該技術分野において既知の手順に従って実施され得る。ポリペプチドを発現するために使用され得る例示的な真核細胞としては、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ－Ｓ及びＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕ細胞）；及びＮＳＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、酵母において発現され得る。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５（Ａ１）号を参照されたい。いくつかの実施形態では、特定の真核宿主細胞は、抗ＢＴＬＡ抗体の重鎖及び／又は軽鎖に対して所望の翻訳後修飾を行うその能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞において産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアル化を有するポリペプチドを産生する。
様々な実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞において、又は、真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞などの真核細胞において発現され得る。そのような発現は、例えば、当該技術分野において既知の手順に従って実施され得る。ポリペプチドを発現するために使用され得る例示的な真核細胞としては、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ－Ｓ及びＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕ細胞）；及びＮＳＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、酵母において発現され得る。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５（Ａ１）号を参照されたい。いくつかの実施形態では、特定の真核宿主細胞は、抗ＢＴＬＡ抗体の重鎖及び／又は軽鎖に対して所望の翻訳後修飾を行うその能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞において産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアル化を有するポリペプチドを産生する。
【0243】
所望の宿主細胞への１つ以上の核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成され得る。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の好適な方法に従って、所望の宿主細胞において一過的又は安定的にトランスフェクトされ得る。
【0244】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、任意の好適な方法に従って、ポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子で操作又はトランスフェクトされている動物においてインビボで産生され得る。
【実施例】
【0245】
実施例１ カニクイザルＢＴＬＡと交差反応するヒトＢＴＬＡアゴニスト抗体の同定
この実施例は、ベンチマークＢＴＬＡアゴニスト抗体（本明細書において２２Ｂ３と称される）と同様の又はそれを上回る程度まで抗ＩｇＭ媒介性Ｂ細胞増殖を阻害するそれらの能力（図２Ａ）並びにＨＶＥＭ媒介性Ｔ細胞阻害を逆転させるそれらの不能性（図２Ｂ）に基づく、２つのマウスリード抗体候補（ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５）
の同定を記載する。したがって、これらのマウス抗体は、ＢＴＬＡに結合し、ＢＴＬＡの下流で免疫抑制機能を開始するそれらの能力、並びにＢＴＬＡに結合した場合にＢＴＬＡの天然リガンド（すなわち、ＨＶＥＭ）を置き換えるそれらの不能性に起因して、「アゴニスト非遮断薬」と称されることがある。
この実施例は、ベンチマークＢＴＬＡアゴニスト抗体（本明細書において２２Ｂ３と称される）と同様の又はそれを上回る程度まで抗ＩｇＭ媒介性Ｂ細胞増殖を阻害するそれらの能力（図２Ａ）並びにＨＶＥＭ媒介性Ｔ細胞阻害を逆転させるそれらの不能性（図２Ｂ）に基づく、２つのマウスリード抗体候補（ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５）
の同定を記載する。したがって、これらのマウス抗体は、ＢＴＬＡに結合し、ＢＴＬＡの下流で免疫抑制機能を開始するそれらの能力、並びにＢＴＬＡに結合した場合にＢＴＬＡの天然リガンド（すなわち、ＨＶＥＭ）を置き換えるそれらの不能性に起因して、「アゴニスト非遮断薬」と称されることがある。
【0246】
図１において、ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞及びカニクイザルＢＴＬＡを過剰発現するＥｘｐｉ２９３細胞を、異なる濃度の抗ＢＴＬＡ親抗体とインキュベートした。標的細胞への抗ＢＴＬＡ抗体結合を、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体でフローサイトメトリによって定量化した。ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５親抗体は、一桁のｎＭ親和性でヒトＢＴＬＡ及びカニクイザルＢＴＬＡに結合することが見出された。
【0247】
図２Ａでは、初代Ｂ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＢ細胞単離キットを使用して健常ドナーＰＢＭＣから単離し、ＣＦＳＥで標識した。Ｂ細胞を、１００ｎＭの抗ＢＴＬＡ抗体又は対照抗体の存在下で１０μｇ／ｍＬ抗ＩｇＭで刺激した。４日後、Ｂ細胞増殖を、非刺激Ｂ細胞に関連するＣＦＳＥ希釈（ＣＦＳＥｌｏ％）によって定量化した。
【0248】
ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイにおいて、ＴＣＲ活性化因子（ＴＣＲα）及びＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭを発現するように操作されたＣＨＯ細胞株を、ＢＴＬＡ及びＮＦＡＴ結合プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞株と共培養した。ベンチマーク抗ＢＴＬＡ遮断抗体（本明細書においてＪＳ００４と称される）の適用は、ＨＶＥＭ媒介性Ｔ細胞阻害を逆転させることができたが、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５はできなかった（図２Ｂ）。
【0249】
ビニング実験に基づいて、ＨＦＢ６－４及び２２Ｂ３エピトープがＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ結合界面で重複することが更に確認された。したがって、異なる抗体が、一見同じ又は実質的に重複するエピトープに結合するが、実質的に異なる生物学的活性を有するようであることは特に驚くべきことである。
【0250】
具体的には、ＥＬＩＳＡビニング実験において、ＥＬＩＳＡプレートを５μｇ／ｍＬのそれぞれの捕捉抗体（ＨＦＢ６－４又は２２Ｂ３）又はリガンド（組換えＦｃタグ付きＨＶＥＭ）でコーティングした。遮断後、組換えｈｉｓタグ化ＢＴＬＡ（ＢＴＬＡ－ｈｉｓ）を、溶液中の過剰量（３０μｇ／ｍＬ）の競合抗体又はアイソタイプ対照抗体（ＭＧＯ５３）と一緒に投与した。捕捉されたＢＴＬＡ－ｈｉｓを、ＨＲＰコンジュゲート抗ｈｉｓ二次抗体で検出した。ＢＴＬＡ－ｈｉｓ捕捉阻害の割合を、競合抗体としてのＭＧＯ５３の使用に対して定量化した（以下の表を参照されたい）。
【0251】
【表4】
【0252】
データは、ＨＦＢ６－４が、組換えＢＴＬＡ（ＢＴＬＡ－ｈｉｓ）の固定化２２Ｂ３への結合（逆もまた同様）及び逆に組換えＨＶＥＭ（ＨＶＥＭ－Ｆｃ）への結合を防止することを示した。これらのデータは、ＨＦＢ６－４及び２２Ｂ３エピトープがＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ結合界面で重複することを示す。
【0253】
実施例２ ｈＢＴＬＡアゴニスト抗体ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５は、Ｔ細胞活性化を阻害する
この実験は、単離されたＨＦＢ６－４及びＨＦＢ－６－５抗体が、Ｔ細胞活性化を阻害するそれらの能力によって証明されるように、機能的ｈＢＴＬＡアゴニストであることを実証する。
この実験は、単離されたＨＦＢ６－４及びＨＦＢ－６－５抗体が、Ｔ細胞活性化を阻害するそれらの能力によって証明されるように、機能的ｈＢＴＬＡアゴニストであることを実証する。
【0254】
このアッセイでは、細胞表面上にＦｃγＲＩＩｂを発現するＣＨＯ細胞を、まず、抗ＣＤ３抗体の存在下又は非存在下で、ＨＦＢ６－４又はＨＦＢ６－５（又は陽性対照若しくは陰性対照抗体）などの試験抗体とインキュベートして、試験抗体（及び添加された場合は抗ＣＤ３抗体）を、Ｆｃ領域を介して表面ＦｃγＲＩＩｂに結合させた。
【0255】
次いで、試験抗体で覆われたＣＨＯ細胞を、表面ＴＣＲ及びＢＴＬＡを発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞とインキュベートした。抗ＣＤ３抗体がＣＨＯ細胞上にも存在する場合、抗ＣＤ３抗体によるＴＣＲ活性化の際に、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５などのＢＴＬＡアゴニスト抗体は、ＢＴＬＡに関与し、下流ＢＴＬＡシグナル伝達を刺激し、したがって、ＴＣＲ下流ＮＦＡＴプロモーターの転写制御下のルシフェラーゼレポーター遺伝子によってレポーター細胞において測定されるように、ＴＣＲシグナル伝達を阻害した。
【0256】
ＴＣＲ活性化を刺激するために抗ＣＤ３抗体を添加しなかった陰性対照では、ルシフェラーゼ活性は検出されなかった。ルシフェラーゼ活性は、ＢＴＬＡに結合しなかった対照抗体ＭＧＯの存在下で減衰しなかった。
【0257】
対照的に、ベンチマークＢＴＬＡアゴニスト抗体２２Ｂ３は、用量依存的にＴＣＲ媒介性ルシフェラーゼ活性を低減／阻害した。ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５の両方、並びに別のＢＴＬＡアゴニスト抗体Ｈ６Ｓ８－９Ａ１０Ａは、ベンチマーク抗体２２Ｂ３よりも大きい程度でＴＣＲ媒介性ルシフェラーゼ活性を阻害した。図３を参照されたい。
【0258】
データは、ＨＦＢ６－４、ＨＦＢ６－５、及びＨ６Ｓ８－９Ａ１０Ａが、ＴＣＲシグナル伝達の阻害において、ベンチマークアゴニスト抗体２２Ｂ３と少なくとも同程度（より良好ではないとしても）良好であることを示した。
【0259】
実施例３ ｈＢＴＬＡアゴニスト抗体ＨＦＢ６－４／ＨＦＢ６－５は、Ｂ細胞増殖を阻害する
この実施例は、ＢＴＬＡアゴニスト抗体ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５が、試験された全てのドナーにおいて、ベンチマークアゴニスト抗体２２Ｂ３に匹敵する程度まで初代Ｂ細胞増殖を阻害することを実証する。
この実施例は、ＢＴＬＡアゴニスト抗体ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５が、試験された全てのドナーにおいて、ベンチマークアゴニスト抗体２２Ｂ３に匹敵する程度まで初代Ｂ細胞増殖を阻害することを実証する。
【0260】
初代Ｂ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＢ細胞単離キットを使用して健常ドナーＰＢＭＣから単離し、ＣＦＳＥで標識した。Ｂ細胞を、抗ＢＴＬＡ抗体又は対照抗体の存在下で１０μｇ／ｍＬの抗ＩｇＭで刺激した。４日後、Ｂ細胞増殖を、非刺激Ｂ細胞に関連するＣＦＳＥ希釈（ＣＦＳＥｌｏ％）によって定量化した。
【0261】
ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５は、３人の異なるドナーからの初代Ｂ細胞の増殖を、ベンチマーク２２Ｂ３抗体と同様のレベル（ドナー０１５及びドナー０１７）又はそれよりも良好に（ドナー０１９）阻害した（図４、左のパネル）。ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５の濃度を増加させると、初代Ｂ細胞増殖の阻害も増加した（図４、右のパネル）。
【0262】
実施例４ ヒト化ＨＦＢ６－４／ＨＦＢ６－５変異体の結合及び交差反応性
この実験は、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５のヒト化変異体が全て、親ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５抗体のように、ｈＢＴＬＡに結合し、カニクイザルＢＴＬＡと高親和性で交差反応することを実証する。
この実験は、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５のヒト化変異体が全て、親ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５抗体のように、ｈＢＴＬＡに結合し、カニクイザルＢＴＬＡと高親和性で交差反応することを実証する。
【0263】
簡潔に述べると、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５の２４個の各ヒト化変異体（例えば、ＨＦＢ６－４－ｈｚ１～－ｈｚ２４、及びＨＦＢ６－５－ｈｚ１～ｈｚ２４）を、標準的なヒト化プロトコルに基づいて生成し、得られたヒト化変異体を試験して、ｈＢＴＬＡ及びｃｙｎｏＢＴＬＡに対する高親和性バインダーを同定した。
【0264】
ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞及びカニクイザルＢＴＬＡを過剰発現するＥｘｐｉ２９３細胞を、異なる濃度のヒト化抗ＢＴＬＡ抗体とインキュベートした。標的細胞への抗ＢＴＬＡ抗体結合を、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体でフローサイトメトリによって定量化した。図５を参照されたい
【0265】
結果は、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５ヒト化変異体が、ヒト及びカニクイザルＢＴＬＡに一桁のｎＭ親和性で結合することを示す。
【0266】
実施例５ ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５ヒト化変異体は、Ｂ細胞増殖及びＴ細胞レポーター活性を阻害する
Ｂ細胞増殖及びＴ細胞レポーター活性の阻害における選択されたＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５ヒト化変異体の能力を、親抗体及びベンチマーク対照の能力と比較した。
Ｂ細胞増殖及びＴ細胞レポーター活性の阻害における選択されたＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５ヒト化変異体の能力を、親抗体及びベンチマーク対照の能力と比較した。
【0267】
Ｂ細胞増殖抑制アッセイでは、初代Ｂ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＢ細胞単離キットを使用して健常ドナーＰＢＭＣから単離し、ＣＦＳＥで標識した。Ｂ細胞を、１μｇ／ｍＬ及び１０μｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又は対照抗体の存在下で１０μｇ／ｍＬの抗ＩｇＭで刺激した。４日後、Ｂ細胞増殖を、非刺激Ｂ細胞に関連するＣＦＳＥ希釈（ＣＦＳＥｌｏ％）によって定量化した。
【0268】
Ｔ細胞抑制レポーターアッセイにおいて、ＦｃγＲＩＩｂを発現するように操作されたＣＨＯ細胞株を使用して、抗ＣＤ３抗体及び抗ＢＴＬＡ抗体を架橋した。Ｆｃ受容体交差時に、抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体は、ＢＴＬＡ及びＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞株において、ＴＣＲ－ＮＦＡＴ経路活性化によって駆動されるルシフェラーゼレポーターシグナルを阻害することができた。
【0269】
【0270】
実施例６ 野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける選択されたＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５ヒト化変異体の望ましいＰＫプロファイル
ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５ヒト化変異体の薬物動態プロファイルを調査するために、単回用量（１０ｍｇ／ｋｇ）の選択された変異体を野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスに静脈内注射した。１時間、２４時間、及び７２時間で血液を採取し、選択された抗体の血漿濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。
ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５ヒト化変異体の薬物動態プロファイルを調査するために、単回用量（１０ｍｇ／ｋｇ）の選択された変異体を野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスに静脈内注射した。１時間、２４時間、及び７２時間で血液を採取し、選択された抗体の血漿濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。
【0271】
データは、選択されたヒト化変異体、例えばＨＦＢ６－４ヒト化変異体ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１、ＨＦＢ６－４ｈｚ６－ｈＧ１、並びにＨＦＢ６－５ヒト化変異体ＨＦＢ６－５ｈｚ１２－ｈＧ１、ＨＦＢ６－５ｈｚ１９－ｈＧ１、及びＨＦＢ６－５ｈｚ２４－ｈＧ１が、１０ｍｇ／ｋｇの単回用量として投与された場合に、マウスにおいて長期曝露を呈したことを示す。
【0272】
実施例７ 選択されたヒト化変異体の好ましい開発可能性
ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５の選択されたヒト化変異体の開発可能性を調査し、変異体は、溶融温度アッセイ、４℃及び３７℃での安定性、並びに低ｐＨ（例えば、ｐＨ３．８）での安定性などの複数のアッセイにおいて好ましい開発可能性特性を呈する。
ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５の選択されたヒト化変異体の開発可能性を調査し、変異体は、溶融温度アッセイ、４℃及び３７℃での安定性、並びに低ｐＨ（例えば、ｐＨ３．８）での安定性などの複数のアッセイにおいて好ましい開発可能性特性を呈する。
【0273】
実施例８ ｈＰＢＭＣ－ＮＳＧ急性ＧｖＨＤモデルにおける治療有効性
この実施例は、主題のＢＴＬＡアゴニスト抗体が、急性ＧｖＨＤ（移植片対宿主疾患）のＮＳＧマウスモデルにおいて免疫反応を阻害するのに有効であることを実証する。
この実施例は、主題のＢＴＬＡアゴニスト抗体が、急性ＧｖＨＤ（移植片対宿主疾患）のＮＳＧマウスモデルにおいて免疫反応を阻害するのに有効であることを実証する。
【0274】
この実験では、主題のＢＴＬＡアゴニスト抗体のインビボ有効性を、急性移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）の異種ヒト化マウスモデルにおいて評価する。このマウスモデルは、亜致死的に照射されたＮＳＧマウスにおけるヒトＰＢＭＣの関与によって誘導されるＴ細胞媒介性疾患である。実験プロトコルの概略図を図８Ａに例解する。
【0275】
図８Ｂは、各処置群についての用量及び測定される読み出しを含む、より詳細な実験計画を示す。４つの処置群の各々は、８匹のマウスを有する。それらは、ＰＢＳ陰性対照群（Ｇ１）、ＩｇＧ１アイソタイプ適合対照群（ＭＧＯ５３－ｈＧ１、Ｇ２）、ＢＴＬＡアゴニスト抗体（ＨＦＢ６－４－ｈｚ１－ｈＧ１）群（Ｇ３）、及び２２Ｂ３ベンチマーク対照群（Ｇ４）を含む。
【0276】
予備データは、ｈＰＢＭＣ接種後１４日目に、主題のＢＴＬＡアゴニスト抗体ＨＦＢ６－４－ｈｚ１－ｈＧ１で処置されたＧ３マウスが、アイソタイプ適合対照群Ｇ２と比較して、ｈＣＤ４５＋免疫細胞の割合の統計的に有意な低減を呈したことを示した。一方、ベンチマーク群Ｇ４は、同じ時点で、たとえ差があったとしても、統計的に有意な差を有するようには見えなかった。図８Ｅを参照されたい。
【0277】
更に、図８Ｆのカプラン－マイヤー生存曲線は、主題のＢＴＬＡアゴニスト抗体ＨＦＢ６－４－ｈｚ１－ｈＧ１で処置されたＧ３マウスの８５％超が２８日目の実験の終了時に生存したことを示す。これは、ＰＢＳ対照群（Ｇ１）及びアイソタイプ適合ＭＧＯ５３－ｈＧ１対照群（Ｇ２）の２０％未満の生存率よりも統計的に有意に高い。
【0278】
一方、生存率は、２２Ｂ３ベンチマーク抗体により処置されたＧ４対照処置群において１５日後に着実に低下し、処置されたマウスの４０％未満が生存した。Ｇ３群とＧ４群との間の生存率の差も統計的に有意である。
【0279】
加えて、ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１処置群（Ｇ３）は、ＰＢＳ対照群Ｇ１、アイソタイプ適合対照群Ｇ２、及び２２Ｂ３ベンチマーク群Ｇ４と比較して、顕著に低減した総疾患スコア（図８Ｃを参照されたい）及び相対対照体重（relative control body weight、ＲＣＢＤ）減少（図８Ｄ）を示した。
【0280】
ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１の用量応答有効性もまた、同じｈＰＢＭＣ－ＮＳＧ急性ＧｖＨＤモデルにおいて、高用量の対照抗体２２Ｂ３と比較して低用量のＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１で評価した（図８Ｇ）。具体的には、１、３、１０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１による処置は全て、１０ｍｇ／ｋｇの２２Ｂ３－ｈＧ４及び１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ４バージョンのＨＦＢ６－４ｈｚ１（ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ４Ｐ）よりも大きい生存利益をもたらした。ＩｇＧ４フォーマットにおいてさえ、ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ４Ｐは、１０ｍｇ／ｋｇで２２Ｂ３－ｈＧ４Ｐよりも優れている。更に、ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１（１０ｍｇ／ｋｇ）処置は、ヒトにおける急性ＧｖＨＤに対する承認された予防であるアバタセプト（６．１３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ抗体とモル当量）よりも長期生存利益を実証した。
【0281】
これらのデータは、主題のＢＴＬＡアゴニスト抗体ＨＦＢ６－４－ｈｚ１－ｈＧ１が、実験条件下で急性ＧｖＨＤのこのマウスモデルにおいてベンチマーク２２Ｂ３アゴニストよりも、少なくとも処置経過全体にわたるより良好な治療有効性、全体的により長くより良好な生存率、並びに低減された毒性に関して優れていることを示した。
【0282】
全体として、上記のデータは、ＨＦＢ６－４及びＨＦＢ６－５などの主題のＢＴＬＡアゴニスト抗体並びにそれらの誘導ヒト化変異体が、ヒト及びカニクイザルＢＴＬＡに対して一桁の結合親和性を有すること、これらの抗体の複数のヒト化変異体（ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１など）が、Ｂ細胞増殖抑制及びＴ細胞レポーターアッセイにおいて親抗体機能を保持していたこと、抗体が野生型マウスにおいて好ましいＰＫプロファイルを呈したことを実証し、これは、有効性評価のためのｑ３ｄ以下の頻度の投与を支持する。更に、急性ＧｖＨＤのインビボｈＰＢＭＣ－ＮＳＧマウスモデルにおいて、主題のヒト化変異体ＨＦＢ６－４ｈｚ１－ｈＧ１は、対照抗体の用量の１０分の１（１／１０）又は３分の１（１／３）の用量であっても、ベンチマークアゴニスト抗体２２Ｂ３よりも有効かつ低毒性であることが証明された。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【図8F】
【図8G】
【配列表】
【国際調査報告】