特表 2025-505777 抗ＩＬ－１３ＲＡ２モノクローナル抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-02-28

(54)【発明の名称】抗ＩＬ－１３ＲＡ２モノクローナル抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20250220BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20250220BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250220BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250220BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250220BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250220BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250220BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20250220BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20250220BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250220BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250220BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20250220BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20250220BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K45/00

A61K47/68

A61K39/395 Y

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P35/02

A61P29/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024548393

(86)(22)【出願日】2023-02-15

(85)【翻訳文提出日】2024-10-11

(86)【国際出願番号】 CN2023076131

(87)【国際公開番号】W WO2023155796

(87)【国際公開日】2023-08-24

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/076606

(32)【優先日】2022-02-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524134546

【氏名又は名称】ラノバ メディシンズ デベロップメント カンパニー， リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】リー， ルンシェン

(72)【発明者】

【氏名】ファン， ウェンタオ

(72)【発明者】

【氏名】リー， イーファン

(72)【発明者】

【氏名】ルオ， ジエ

(72)【発明者】

【氏名】リウ， ジファン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA92Y

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC04

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF70

4C084AA17

4C084NA13

4C084ZB11

4C084ZB26

4C084ZB27

4C085AA14

4C085AA26

4C085BB11

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

前記ヒトインターロイキン１３受容体サブユニットアルファ２（ＩＬ－１３ＲＡ２）タンパク質に対する結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントが提供される。これらの抗体は、ＩＬ－１３ＲＡ２に高親和性で結合することができ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介し、エンドサイトーシスを効果的に誘導することができる。がんおよび炎症性疾患を処置するための方法および使用も提供される。ＩＬ－１３シグナル伝達は、複雑な受容体系を介して調節される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトインターロイキン１３受容体サブユニットアルファ２（ＩＬ－１３ＲＡ２）タンパク質に対する結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域軽鎖を含み、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３２または４９のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、および
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３８または５０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３９または５１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、および
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、あるいは
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号４４または５２のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、および
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号４８または５３のアミノ酸配列を含む、抗体またはそのフラグメント。

【請求項2】

前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項3】

前記重鎖可変領域が、配列番号１３および５４～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域が、配列番号１４および５８～６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項4】

前記重鎖可変領域が配列番号５４のアミノ酸配列を含み、および前記軽鎖可変領域が配列番号５８のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項5】

前記ＣＤＲＨ１が、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３２または４９のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１が、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３が、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項6】

前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項7】

前記重鎖可変領域が、配列番号１１および６２～６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域が、配列番号１２および６６～６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項8】

前記重鎖可変領域が配列番号６２のアミノ酸配列を含み、および前記軽鎖可変領域が配列番号６６のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項9】

前記ＣＤＲＨ１が、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３８または５０のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３９または５１のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１が、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３が、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項10】

前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項11】

前記重鎖可変領域が、配列番号１９および７０～７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域が、配列番号２０および７４～７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項12】

前記重鎖可変領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含み、および前記軽鎖可変領域が配列番号７４のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項13】

前記ＣＤＲＨ１が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が、配列番号４４または５２のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３が、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１が、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３が、配列番号４８または５３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項14】

前記ＣＤＲＨ２が、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３が、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項15】

前記重鎖可変領域が、配列番号２１および７８～８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域が、配列番号２２および８２～８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項16】

前記重鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、および前記軽鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項17】

ヒト化されている、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項18】

ヒトインターロイキン１３受容体サブユニットアルファ２（ＩＬ－１３ＲＡ２）タンパク質に対する結合特異性を有し、かつ請求項１に記載の抗体もしくはそのフラグメントと同じ前記ＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質上のエピトープに結合するか、または前記ＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質への結合において請求項１に記載の抗体もしくはそのフラグメントと競合する、抗体またはそのフラグメント。

【請求項19】

抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することができる、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項20】

第２の標的タンパク質に対する結合特異性をさらに有する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント。

【請求項21】

抗新生物剤にコンジュゲートされた請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを含む、抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項22】

請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントと、薬学的に許容され得る担体とを含む、組成物。

【請求項23】

請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチド。

【請求項24】

請求項２３に記載の１またはそれを超えるポリヌクレオチドを含む、細胞。

【請求項25】

がんまたは炎症の処置を必要とする患者においてがんまたは炎症を処置する方法であって、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項26】

がんまたは炎症を処置するための医薬を調製するための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。

【請求項27】

前記がんが、膀胱がん、肝臓がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、白血病、リンパ腫、膵臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、乳がん、尿道がん、頭頸部がん、胃腸がん、胃がん、食道がん、卵巣がん、腎臓がん、黒色腫、前立腺がんおよび甲状腺がんからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法または請求項２６に記載の使用。

【請求項28】

前記炎症が感染または自己免疫疾患によって引き起こされる、請求項２５に記載の方法または請求項２６に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

背景
分化抗原群２１３Ａ２（ＣＤ２１３Ａ２）としても知られるインターロイキン１３受容体サブユニットアルファ２（ＩＬ－１３ＲＡ２またはＩＬ－１３Ｒα２）は、ＩＬ１３に結合する膜結合タンパク質である。他の受容体タンパク質とは異なり、ＩＬ－１３ＲＡ２は短い細胞質ドメインを有し、シグナルメディエーターとして機能しないようである。しかしながら、このタンパク質は、ＩＬ－１３およびＩＬ－４の両方に直接結合しないにもかかわらず、これらの両方の効果を調節することができる。

【0002】

ＩＬ－１３シグナル伝達は、複雑な受容体系を介して調節される。非造血細胞では、ＩＬ－１３は、ＩＬ－４ＲαおよびＩＬ－１３ Ｒα１から構成されるヘテロ二量体受容体に会合する。ＩＬ－１３ Ｒα１は低親和性でＩＬ－１３に結合する。しかし、ＩＬ－４Ｒαと複合体を形成する場合、それははるかに高い親和性で結合し、ＩＬ－１３のエフェクター機能を誘導する。ＩＬ－１３ＲＡ２は、ＩＬ－１３Ｒα１と密接に関連している。

【0003】

ＩＬ－１３ＲＡ２は、膵臓、卵巣、黒色腫および悪性神経膠腫を含む種々のがんにおいて過剰発現することが見出されている。高いＩＬ－１３ＲＡ２発現を有する細胞は、細胞外ＩＬ－１３を迅速かつ効率的に枯渇させ得る。同様に、ＩＬ－１３応答は、ＩＬ１３ＲＡ２を欠くマウスにおいて増強される。したがって、ＩＬ－１３ＲＡ２は、ＩＬ－１３に対するデコイ受容体として作用することができ、ＩＬ－１３に対するアンタゴニスト活性を誘発する。

【0004】

ＩＬ－１３ＲＡ２は、膜結合型および可溶性型の両方で存在する。ＩＬ－１３ＲＡ２のヒト可溶性形態は、マトリックスメタロプロテイナーゼ８による膜結合型の酵素的切断によって生成される。

【0005】

ＩＬ－１３ＲＡ２の過剰発現も炎症に関連している。例えば、鼻ポリープ（ＮＰ）を有する患者では、ＩＬ－１３ＲＡ２は、主要な病理学的特徴である気道炎症および異常なリモデリングに寄与し得る。

【発明の概要】

【0006】

概要
ヒトＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に対する高い結合親和性を有し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の媒介、細胞傷害の誘導、および細胞更新の促進において効率的である抗ＩＬ－１３ＲＡ２抗体が本明細書で発見される。したがって、これらの抗体は、がんおよび炎症性疾患などの疾患の処置に好適に用いることができ、抗体－薬物コンジュゲートの標的担体として機能する。

【0007】

一実施形態では、ヒトＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に対する特異性を有する抗体またはそのフラグメントが提供される。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域軽鎖を含む。

【0008】

いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、前記重鎖可変領域は、配列番号１３および５４～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域は、配列番号１４および５８～６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号５４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号３２または４９のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。

【0011】

いくつかの実施形態では、前記重鎖可変領域は、配列番号１１および６２～６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域は、配列番号１２および６６～６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号６６のアミノ酸配列を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号３８または５０のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３９または５１のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、前記重鎖可変領域は、配列番号１９および７０～７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域は、配列番号２０および７４～７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７０のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７４のアミノ酸配列を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号４４または５２のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４８または５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、前記重鎖可変領域は、配列番号２１および７８～８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記軽鎖可変領域は、配列番号２２および８２～８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントをコードするポリヌクレオチド、抗体またはフラグメントに基づく抗体－薬物コンジュゲート、および抗体またはそのフラグメントと薬学的に許容され得る担体とを含む組成物も提供される。

【0017】

疾患および症状を処置するための方法および使用も提供される。一実施形態では、本開示の抗体またはそのフラグメントを患者に投与することを含む、それを必要とする患者のがんまたは炎症を処置する方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1A】図１Ａ～Ｂは、Ａ３７５細胞上のＩＬ－１３ＲＡ２に対するマウス抗体の結合親和性を示す。

【図1B】図１Ａ～Ｂは、Ａ３７５細胞上のＩＬ－１３ＲＡ２に対するマウス抗体の結合親和性を示す。

【0019】

【図2A】図２Ａ～Ｂは、Ａ３７５細胞上のＩＬ－１３ＲＡ２に対するラット抗体の結合親和性を示す。

【図2B】図２Ａ～Ｂは、Ａ３７５細胞上のＩＬ－１３ＲＡ２に対するラット抗体の結合親和性を示す。

【0020】

【図3】図３は、Ａ３７５細胞上のＩＬ－１３ＲＡ２に対する特定のキメラ抗体の結合親和性を示す。

【0021】

【図4】図４は、キメラ抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を示す。

【0022】

【図5】図５は、キメラ抗体の殺細胞活性を示す。

【0023】

【図6A】図６Ａ～Ｃは、キメラ抗体の国際化を示す。

【図6B】図６Ａ～Ｃは、キメラ抗体の国際化を示す。

【図6C】図６Ａ～Ｃは、キメラ抗体の国際化を示す。

【0024】

【図7A】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7B】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7C】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7D】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7E】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7F】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7G】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7H】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7I】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【図7J】図７Ａ～図７Ｊは、ヒト化抗体の結合親和性を示す。

【0025】

【図8A】図８Ａ～Ｂは、ＩＬ－１３ＲＡ２過剰発現細胞株（Ａ）および内在性神経膠腫細胞株（Ｂ）におけるヒト化抗体のＡＤＣＣを示す。

【図8B】図８Ａ～Ｂは、ＩＬ－１３ＲＡ２過剰発現細胞株（Ａ）および内在性神経膠腫細胞株（Ｂ）におけるヒト化抗体のＡＤＣＣを示す。

【0026】

【図9A】図９Ａ～Ｃは、選択されたヒト化抗体の国際化を示す。

【図9B】図９Ａ～Ｃは、選択されたヒト化抗体の国際化を示す。

【図9C】図９Ａ～Ｃは、選択されたヒト化抗体の国際化を示す。

【0027】

【図10A】図１０Ａ～Ｃは、ヒト化抗体を使用した抗体－薬物コンジュゲートのインビトロ細胞毒性を示す。

【図10B】図１０Ａ～Ｃは、ヒト化抗体を使用した抗体－薬物コンジュゲートのインビトロ細胞毒性を示す。

【図10C】図１０Ａ～Ｃは、ヒト化抗体を使用した抗体－薬物コンジュゲートのインビトロ細胞毒性を示す。

【0028】

【図11A】図１１Ａ～Ｂは、ヒト化抗体を使用した抗体－薬物コンジュゲートのインビボ細胞毒性を示す。

【図11B】図１１Ａ～Ｂは、ヒト化抗体を使用した抗体－薬物コンジュゲートのインビボ細胞毒性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0029】

詳細な説明
定義
用語「ａ（１つの、ある）」または「ａｎ（１つの、ある）」実体は、１つまたはそれを超えるその実体を指す。例えば、「１つの抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つまたはそれを超える抗体を表すものと理解すべきである。従って、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つまたはそれを超える（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、および「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」は、本明細書において、互換的に使用され得る。

【0030】

本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」は、単数の「ポリペプチド」、ならびに複数の「ポリペプチド」を包含することが意図されており、および、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）によって直鎖状に連結されたモノマー（アミノ酸）で構成される分子を指す。用語「ポリペプチド」は、２つまたはそれを超えるアミノ酸の任意の単数の鎖または複数の鎖を指し、その産物の特定の長さを指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つまたはそれを超えるアミノ酸の単数の鎖または複数の鎖を指すために使用される任意の他の用語は、「ポリペプチド」の定義の中に含まれ、また、用語「ポリペプチド」は、これらの用語のいずれかの代わりに、またはこれらの用語のいずれかと互換的に使用され得る。用語「ポリペプチド」は、また、ポリペプチドの発現後修飾（限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、または非天然起源アミノ酸による修飾が含まれる）の産物を指すことも意図されている。ポリペプチドは、天然の生物源由来であってもよく、組換え技術によって生成されてもよいが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されなくてもよい。ポリペプチドは、化学合成を含む、いかなる方法で生成されてもよい。

【0031】

「相同性」、または「同一性」、または「類似性」は、２つのペプチド間、または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、各配列（比較の目的でアラインされてもよい）における位置を比較することによって決定することができる。比較される配列における位置が、同じ塩基またはアミノ酸によって占められている場合、その分子は、その位置において相同である。配列間の相同性の程度は、その配列によって共有されている、マッチした、または相同な位置の数の関数である。「無関係な」または「非相同」配列は、本開示の配列の１つと、４０％未満の同一性（好ましくは２５％未満の同一性であるが）を共有する。

【0032】

ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドまたはポリペプチド領域）は、他の配列とある特定のパーセンテージ（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）の「配列同一性」を有し、これは、アラインされた場合、２つの配列の比較において、そのパーセンテージの塩基（またはアミノ酸）が同一であることを意味する。

【0033】

用語「同等の核酸またはポリヌクレオチド」は、核酸またはその相補体のヌクレオチド配列に対して、ある程度の相同性または配列同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を指す。二本鎖核酸のホモログは、その相補体とまたはその相補体と（ｗｉｔｈ ｏｒ
ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒｅｏｆ）ある程度の相同性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を含むことが意図されている。１つの態様において、核酸のホモログは、核酸またはその相補体とハイブリダイズすることが可能である。同様に、「同等のポリペプチド」は、参照ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、ある程度の相同性または配列同一性を有するポリペプチドを指す。いくつかの態様において、配列同一性は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％である。いくつかの態様において、同等のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと比較して、１、２、３、４、または５つの付加、欠失、置換、およびそれらの組み合わせを有する。いくつかの態様において、前記同等の配列は、前記参照配列の活性（例えば、エピトープ結合）または構造（例えば、塩橋）を保持している。

【0034】

本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識し、結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体、およびその任意の抗原結合フラグメントまたは単鎖であり得る。よって、用語「抗体」は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む分子を含む、任意のタンパク質またはペプチドを含む。そのようなものの例には、限定されないが、重鎖または軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、またはそれらの任意の部分、または結合タンパク質の少なくとも一部分があげられる。

【0035】

用語「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」は、本明細書で使用される場合、例えばＦ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの、抗体の一部分である。構造にかかわらず、抗体フラグメントは、インタクトな抗体によって認識される、同じ抗原と結合する。用語「抗体フラグメント」は、アプタマー、スピーゲルマー、およびダイアボディーを含む。用語「抗体フラグメント」は、また、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように働く、任意の合成または遺伝子操作タンパク質も含む。

【0036】

「単鎖可変領域フラグメント」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）の融合タンパク質を指す。いくつかの態様において、この領域は、１０～約２５アミノ酸のショートリンカーペプチドによって連結される。このリンカーは、柔軟性のためにグリシンが、さらに溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であり得、ならびにＶ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端と連結するか、またはその逆のいずれかであり得る。このタンパク質は、定常領域が除去され、リンカーが導入されているにもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。ＳｃＦｖ分子は、当該技術分野において知られており、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。

【0037】

用語抗体は、生物学的に識別し得る、種々の幅広いクラスのポリペプチドを包含する。当業者は、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ，μ，α，δ，ε）に分類され、その中にいくつかのサブクラス（例えば、γ１～γ４）があることを理解する。抗体の「クラス」を、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ ＩｇＧ、またはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＧ_５などは、十分に特徴付けされ、機能特化をもたらすことが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの修飾形態は、本開示を考慮して当業者に容易に識別可能であり、したがって、本開示の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、明確に本開示の範囲内であり、以下の考察は、一般に、ＩｇＧクラスの免疫グロブリン分子に向けられる。ＩｇＧに関し、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量がおよそ２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量５３，０００～７０，０００の２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。これら４つの鎖は、典型的には、ジスルフィド結合によって連結されて「Ｙ」の配置にあり、前記軽鎖は、「Ｙ」の口で始まり可変領域を通して続く前記重鎖を挟む。

【0038】

本開示の抗体、抗原結合ポリペプチド、バリアント、またはそれらの誘導体としては、それらに限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、もしくはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書に開示のＬＩＧＨＴ抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）があげられる。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスであり得る。

【0039】

軽鎖は、カッパまたはラムダ（Κ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合され得る。一般に、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合し、２つの重鎖の「テイル」部分は、免疫グロブリンが、ハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作宿主細胞のいずれかによって生成される場合、共有ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合される。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ配置のフォーク端におけるＮ末端から、各鎖の底部におけるＣ末端まで及ぶ。

【0040】

軽鎖および重鎖は、両方とも、構造的および機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常」および「可変」は、機能的に使用される。この点について、軽鎖部分の可変ドメイン（ＶＫ）および重鎖部分の可変ドメイン（ＶＨ）は、両方とも、抗原認識および特異性を決定する。逆に、軽鎖の定常ドメイン（ＣＫ）および重鎖の定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）は、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣習により、定常領域ドメインのナンバリングは、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠ざかるにつれて増える。Ｎ末端部分は、可変領域であり、Ｃ末端部分は、定常領域であり；ＣＨ３とＣＫドメインは、実際に、それぞれ重鎖と軽鎖のカルボキシ末端を含む。

【0041】

上に示したように、可変領域は、抗体が、抗原のエピトープを選択的に認識し、特異的に結合することを可能にする。すなわち、抗体のＶＫドメインおよびＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットが組み合わさり、三次元抗原結合部位を規定する可変領域を形成する。この抗体の四次構造は、前記Ｙの各腕の末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＫ鎖それぞれの３つのＣＤＲ（すなわちＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）によって規定される。いくつかの例、例えば、ラクダ科の種に由来する、またはラクダ科免疫グロブリンに基づいて操作されたある特定の免疫グロブリン分子において、完全な免疫グロブリン分子は、軽鎖を有さず、重鎖のみからなり得る。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）を参照のこと。

【0042】

天然起源抗体において、各抗原結合ドメインに存在する６個の「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体が、水性環境において三次元配置をとった場合に抗原結合ドメインを形成するように特異的な位置を占める、短く、非連続的なアミノ酸配列である。抗原結合ドメインの残りのアミノ酸（「フレームワーク」領域と呼ばれる）は、より小さい分子間変動性を示す。フレームワーク領域は、主としてβシート構造をとり、ＣＤＲは、βシート構造を連結し、かつ、いくつかのケースではβシート構造の一部を形成する、ループを形成する。よって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合相互作用によって正しい方向のＣＤＲの配置を提供する足場を形成する役割を果たす。配置されたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに対する表面相補性を決定する。この相補的表面が、抗体の、その同族エピトープに対する非共有結合を促進する。ＣＤＲとフレームワーク領域をそれぞれ含むアミノ酸は、正確に規定されている（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，’’Ｋａｂａｔ，Ｅ．ら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；およびＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照のこと）ため、当業者によって、任意の所与の重鎖または軽鎖可変領域について、容易に決定することができる。

【0043】

当該技術分野において使用および／または受け入れられている用語の２つまたはそれを超える定義があるケースにおいて、本明細書において使用されるその用語の定義は、別段の明確な指示がある場合を除き、それらの意味の全てを含むことが意図されている。具体的な例は、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域の中に見いだされる非連続的な抗原結合部位を記述するための用語「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，’’Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ’’（１９８３）、およびＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（これらは、参照によりその全体が本明細書に援用される）によって記述されている。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義は、相互に比較した場合、アミノ酸残基のオーバーラップまたはサブセットを含む。にもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すためのどちらかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内であることが意図されている。上で引用された参考文献のそれぞれで定義されたＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基は、比較として、下記の表に記載されている。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、そのＣＤＲの配列およびサイズに応じて異なる。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列が与えられた場合、どの残基が特定のＣＤＲを含むかを日常的に決定することができる。

【表14】

【0044】

Ｋａｂａｔらは、また、任意の抗体に適用できる、可変ドメイン配列のためのナンバリングシステムも定義した。当業者は、その配列自体以外、いかなる実験データに依拠することなく、この「Ｋａｂａｔナンバリング」システムを、任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔナンバリング」は、Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，’’Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ’’（１９８３）に記述されたナンバリングシステムを指す。

【0045】

上記の表に加えて、Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、以下のようにＣＤＲ領域を記述する：ＣＤＲ－Ｈ１は、およそアミノ酸３１（すなわち、最初のシステイン残基の後およそ９残基）において始まり、およそ５～７アミノ酸を含み、次のトリプトファン残基において終わる。ＣＤＲ－Ｈ２は、ＣＤＲ－Ｈ１の末端の後の１５番目の残基において始まり、およそ１６～１９アミノ酸を含み、次のアルギニンまたはリジン残基において終わる。ＣＤＲ－Ｈ３は、ＣＤＲ－Ｈ２の末端の後のおよそ３３番目のアミノ酸残基において始まり；３～２５アミノ酸を含み；および配列Ｗ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（ここで、Ｘは、任意のアミノ酸である）において終わる。ＣＤＲ－Ｌ１は、およそ残基２４（すなわち、システイン残基の後）において始まり；およそ１０～１７残基を含み；および次のトリプトファン残基において終わる。ＣＤＲ－Ｌ２は、ＣＤＲ－Ｌ１の末端の後のおよそ１６番目の残基において始まり、およそ７残基を含む。ＣＤＲ－Ｌ３は、ＣＤＲ－Ｌ２の末端の後のおよそ３３番目の残基（すなわち、システイン残基の後）において始まり；およそ７～１１残基を含み；配列ＦまたはＷ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（ここで、Ｘは、任意のアミノ酸である）において終わる。

【0046】

本明細書に開示されている抗体は、鳥類および哺乳類を含む、任意の動物起源であり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリ抗体である。別の実施形態において、可変領域は、起源が軟骨魚（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）（例えば、サメ起源）であり得る。

【0047】

本明細書で使用される場合、用語「重鎖定常領域」は、免疫グロブリン重鎖由来のアミノ酸配列を含む。重鎖定常領域を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中央部、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそのバリアントまたはフラグメントの少なくとも１つを含む。例えば、本開示で使用するための抗原結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、少なくともヒンジドメインの一部、およびＣＨ２ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、少なくともヒンジドメインの一部、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、またはＣＨ１ドメイン、少なくともヒンジドメインの一部、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含み得る。別の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、本開示において使用するための抗体は、少なくともＣＨ２ドメインの一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全て、または一部）を欠いていてもよい。上記のように、当業者によって、重鎖定常領域は、天然起源の免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾されていてもよいことが理解されよう。

【0048】

本明細書に開示されている抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来していてもよい。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ_１分子に由来するＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含んでいてもよい。別の例において、重鎖定常領域は、部分的にＩｇＧ_１分子に由来し、部分的にＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例において、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ_１分子に由来し、部分的にＩｇＧ_４分子に由来するキメラヒンジを含み得る。

【0049】

本明細書で使用される場合、用語「軽鎖定常領域」は、抗体軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインの少なくとも１つを含む。

【0050】

「軽鎖－重鎖ペア」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインの間のジスルフィド結合によってダイマーを形成し得る、軽鎖と重鎖の集合を指す。

【0051】

先に示したように、種々の免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および三次元配置はよく知られている。本明細書で使用される場合、用語「ＶＨドメイン」は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端を含み、用語「ＣＨ１ドメイン」は、免疫グロブリン重鎖の最初の（最もアミノ末端）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに近接し、かつ免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対してアミノ末端である。

【0052】

本明細書で使用される場合、用語「ＣＨ２ドメイン」は、慣習的なナンバリングスキームを使用して、抗体の約残基２４４から残基３６０（残基２４４～３６０、Ｋａｂａｔナンバリングシステム；および残基２３１～３４０、ＥＵナンバリングシステム；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，’’Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ’’（１９８３）参照）まで伸びる重鎖分子の部分を含む。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合しないという点でユニークである。寧ろ、２つのＮ結合型分枝炭水化物鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挿入されている。また、ＣＨ３ドメインが、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで伸び、およそ１０８残基を含むことも十分に証明されている。

【0053】

本明細書で使用される場合、用語「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結する重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５残基を含み、かつフレキシブルであり、よって２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことが可能になる。ヒンジ領域は、３つの別個のドメイン、すなわち上部、中央部、および下部ヒンジドメインに細分することができる（Ｒｏｕｘら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。

【0054】

本明細書で使用される場合、用語「ジスルフィド結合」は、２つの硫黄原子の間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とジスルフィド結合または架橋を形成することができるチオール基を含む。ほとんどの天然起源のＩｇＧ分子において、ＣＨ１およびＣＫ領域は、ジスルフィド結合によって連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用して２３９および２４２（位置２２６または２２９、ＥＵナンバリングシステム）に対応する位置において、２つのジスルフィド結合によって連結される。

【0055】

本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体」は、免疫反応性領域または部位が、第１の種から得られるか、またはそれに由来し、定常領域（これは、インタクトであり得るか、一部分であり得るか、または本開示に従って修飾され得る）が、第２の種から得られる、任意の抗体を意味する。ある特定の実施形態において、標的結合領域または部位は、非ヒト源（例えば、マウスまたは霊長類）に由来し、定常領域は、ヒトである。

【0056】

本明細書で使用される場合、「パーセントヒト化」は、ヒト化ドメインと生殖系列ドメインの間のフレームワークアミノ酸の相異（すなわち、非ＣＤＲの相異）の数を決定し、この数をアミノ酸の総数から差し引き、次いでそれをアミノ酸の総数で割り、１００を掛けることによって算出する。

【0057】

「特異的に結合する」または「に対して特異性を有する」は、抗体がその抗原結合ドメインによってエピトープに結合すること、およびその結合が抗原結合ドメインとエピトープの間にいくらかの相補性を要することを一般的に意味する。この定義にしたがって、抗体は、その抗原結合ドメインによって、ランダムで無関係なエピトープに結合するであろう場合と比較して、あるエピトープにより容易に結合する場合、そのエピトープに対して「特異的に結合する」と言われる。用語「特異性」は、本明細書において、ある特定の抗体がある特定のエピトープに結合する相対的親和性を認定するために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも、所定のエピトープに対して、より高い特異性を有するとみなされ得、または抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」に対して有する特異性よりも、より高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われ得る。

【0058】

本明細書で使用される場合、用語「処置する」または「処置」は、治療的処置と、予防的または防止的手段の両方を指し、ここで、目的は、望まれない生理学的変化または障害（例えば、がんの進行）を予防または減速（軽減）させることである。有益または望まれる臨床結果は、それらに限定されないが、検出可能にせよ、検出不可能にせよ、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延または減速、疾患の状態の改善または緩和、および寛解（部分寛解にせよ、完全寛解にせよ）を含む。「処置」は、また、処置を受けなかった場合に予期される生存期間と比較して、生存期間を延長させることも意味し得る。処置を必要とする対象には、状態または障害をすでに有する対象、ならびに状態または障害を有する傾向がある対象、または状態または障害を予防すべき対象が含まれる。

【0059】

「対象」、または「個体」、または「動物」、または「患者」、または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が所望される任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象は、ヒト、飼育動物、農場動物、および動物園動物、スポーツ動物、またはペット動物（例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ（ｃａｔｔｌｅ）、ウシ（ｃｏｗ）など）を含む。

【0060】

本明細書で使用される場合、「処置を必要とする患者に対して」または「処置を必要とする対象」のような表現は、例えば、検出のために、診断手順のために、および／または処置のために使用される、本開示の抗体または組成物の投与から利益を受けるであろう対象（例えば、哺乳動物対象）を含む。
抗ＩＬ－１３ＲＡ２抗体

【0061】

本開示は、ヒトＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に対して高い親和性を有し、ＡＤＣＣおよび細胞傷害の媒介において強力であり、エンドサイトーシスを効果的に誘導し得る抗ＩＬ－１３ＲＡ２抗体およびフラグメントを提供する。さらに、インビトロ試験およびインビボ試験の両方は、ＩＬ－１３ＲＡ２発現細胞の死滅およびがんの処置におけるこれらの抗体の有効性を実証している。したがって、これらの抗体は、ＩＬ－１３ＲＡ２の過剰発現を特徴とする種々の疾患、例えば、がんおよび炎症性疾患を処置するための好適な薬剤である。

【0062】

したがって、本開示の一実施形態によれば、ＩＬ－１３ＲＡ２に結合することができる抗体およびその抗原結合フラグメントが提供される。抗体例は、表１に列挙したマウス抗体（例えば、２４Ｇ６Ｄ５、３４Ａ５Ｇ９、４２Ｅ３Ｃ４、５１Ｇ２Ｂ３、５４Ａ４Ｆ７、５７Ｆ８Ｈ３Ｆ１、６１Ｈ８Ｃ１、６２Ａ８Ｄ８、６２Ｆ６Ａ８、７２Ｂ４Ｈ４、７３Ａ１１Ｅ２および７４Ｂ５Ｅ４）、ならびに表８～１１のヒト化抗体を含む。また、本明細書に例示されるものと同じＣＤＲを含むものも含まれる。いくつかの実施形態では、開示される抗体およびフラグメントは、本明細書に例示されるエピトープと同じエピトープに結合するもの、およびＩＬ－１３ＲＡ２への結合において即座に開示されるものと競合するものを含む。

【0063】

本開示の一つの実施形態によれば、本明細書で開示されているＣＤＲ領域を有する重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体またはそのフラグメント、ならびにそれらの生物学的同等物が提供される。

【0064】

一つの実施形態において、ＣＤＲは、表８Ｂおよび８Ｄに例示されているように、６１Ｈ８Ｃ１のものまたはそのヒト化した対応物である。一つの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号２５のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２６のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号２７のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２８のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２９のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号３０のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含む。

【0065】

一実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。

【0066】

いくつかの実施形態では、６１Ｈ８Ｃ１またはそのヒト化対応物と同じＣＤＲを含むものも提供される。いくつかの実施形態では、開示される抗体およびフラグメントは、６１Ｈ８Ｃ１またはそのヒト化対応物と同じエピトープに結合するもの、およびＩＬ－１３ＲＡ２への結合においてそれらのいずれかと競合するものを含む。

【0067】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１３（マウスまたはキメラ）および５４～５７（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１３（マウスまたはキメラ）および５４～５７（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0068】

いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１４（マウスまたはキメラ）および５８～６１（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４（マウスまたはキメラ）および５８～６１（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0069】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号５４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号５８～６１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号５４～５７のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号５４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。

【0070】

一実施形態では、ＣＤＲは、表９Ｂおよび９Ｄに例示されるように、５７Ｆ８Ｈ３Ｆ１またはそのヒト化対応物のＣＤＲである。一実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号３２もしくは４９のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３３のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号３４のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号３５のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号３６のアミノ酸配列、または１、２、もしくは３個の欠失、付加、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含む。

【0071】

一実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号３２または４９のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。

【0072】

いくつかの実施形態では、５７Ｆ８Ｈ３Ｆ１またはそのヒト化対応物と同じＣＤＲを含むものも提供される。いくつかの実施形態では、開示される抗体およびフラグメントは、５７Ｆ８Ｈ３Ｆ１またはそのヒト化対応物と同じエピトープに結合するもの、およびＩＬ－１３ＲＡ２への結合においてそれらのいずれかと競合するものを含む。

【0073】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１１（マウスまたはキメラ）および６２～６５（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１１（マウスまたはキメラ）および６２～６５（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0074】

一実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１２（マウスまたはキメラ）および６６～６９（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１２（マウスまたはキメラ）および６６～６９（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号６６～６９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号６２～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号６６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号６６のアミノ酸配列を含む。

【0076】

一実施形態では、ＣＤＲは、表１０Ｂおよび１０Ｄに例示されるように、７２Ｂ４Ｈ４またはそのヒト化対応物のＣＤＲである。一実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号３７のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号３８もしくは５０のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３９もしくは５１のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号４０のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号４１のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号４２のアミノ酸配列、または１、２、もしくは３個の欠失、付加、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含む。

【0077】

一実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号３８または５０のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３９または５１のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、７２Ｂ４Ｈ４またはそのヒト化対応物と同じＣＤＲを含むものも提供される。いくつかの実施形態では、開示される抗体およびフラグメントは、７２Ｂ４Ｈ４またはそのヒト化対応物と同じエピトープに結合するもの、およびＩＬ－１３ＲＡ２への結合においてそれらのいずれかと競合するものを含む。

【0079】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１９（マウスまたはキメラ）および７０～７３（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９（マウスまたはキメラ）および７０～７３（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２０（マウスまたはキメラ）および７４～７７（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２０（マウスまたはキメラ）および７４～７７（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0081】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７０のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７４～７７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７０～７３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７０のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７４のアミノ酸配列を含む。

【0082】

一実施形態では、ＣＤＲは、表１１Ｂおよび１１Ｄに例示されるように、７３Ａ１１Ｅ２またはそのヒト化対応物のＣＤＲである。一実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号４３のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号４４もしくは５２のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号４５のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、置換もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号４７のアミノ酸配列または１、２、もしくは３個の欠失、付加、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号４８もしくは５３のアミノ酸配列、または１、２、もしくは３個の欠失、付加、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するその変異体を含む。

【0083】

一実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号４４または５２のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４８または５３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、前記ＣＤＲＨ１は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。

【0084】

いくつかの実施形態では、７３Ａ１１Ｅ２またはそのヒト化対応物と同じＣＤＲを含むものも提供される。いくつかの実施形態では、開示される抗体およびフラグメントは、７３Ａ１１Ｅ２またはそのヒト化対応物と同じエピトープに結合するもの、およびＩＬ－１３ＲＡ２への結合においてそれらのいずれかと競合するものを含む。

【0085】

いくつかの実施形態において、前記重鎖可変領域は、配列番号２１（マウスまたはキメラ）および７８～８１（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２１（マウスまたはキメラ）および７８～８１（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0086】

いくつかの実施形態において、前記軽鎖可変領域は、配列番号２２（マウスまたはキメラ）および８２～８５（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２（マウスまたはキメラ）および８２～８５（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。

【0087】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８２～８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７８～８１のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含む。

【0088】

これらのＣＤＲ領域を含む抗体は、マウス、ヒト化またはキメラにかかわらず、強力なＩＬ－１３ＲＡ２結合活性を有した。表８～１１に示すように、ＣＤＲ内の特定の残基が修飾されて、特性を保持もしくは改善するか、または翻訳後修飾（ＰＴＭ）を有する可能性を低下させ得る。そのような改変ＣＤＲは、親和性成熟ＣＤＲまたはリスク低減ＣＤＲ（例えば、配列番号４９～５３）と呼ばれ得る。

【0089】

修飾ＣＤＲは、１、２、または３つのアミノ酸付加、欠失、および／または置換を有するものを含み得る。いくつかの実施形態において、この置換は、保存的置換であり得る。

【0090】

「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において規定されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。よって、免疫グロブリンポリペプチドにおける非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えられる。別の実施形態において、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似するストリングで置き換えられ得る。

【0091】

保存的アミノ酸置換の非限定的な例は、以下の表に示されており、ここで、類似性スコアが０またはそれより高いことは、２つのアミノ酸の間が保存的置換であることを示す。

【表A】

【表B-1】

【表B-2】

【0092】

また、当業者は、本明細書で開示されている抗体は、それらが由来する天然起源の結合ポリペプチドとアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも理解する。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、類似であり得、例えば、出発配列に対してある特定のパーセント同一性を有し、例えば、出発配列と６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり得る。

【0093】

ある特定の実施形態において、抗体は、通常は抗体と関連しないアミノ酸配列、もしくは１つまたはそれを超える部分を含む。例示的な修飾は、以下により詳細に記載されている。例えば、本開示の抗体は、フレキシブルなリンカー配列を含み得、または機能的部分（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素、または標識）を付加するように修飾され得る。

【0094】

本開示の抗体、そのバリアント、または誘導体は、修飾された、すなわち、共有結合がその抗体のエピトープに対する結合を妨げないように、抗体に対して任意の種類の分子が共有結合することによって修飾された誘導体を含む。例えば、限定としてではないが、抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、リン酸化、アミド化、知られている保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質に対する結合などによって修飾され得る。多数の化学的修飾のいずれも、知られている技術（それらに限定されないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝性合成などを含む）によって実施され得る。さらに、抗体は、１つまたはそれを超える非古典的アミノ酸を含み得る。

【0095】

いくつかの実施形態において、抗体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節剤、医薬品、またはＰＥＧにコンジュゲートされ得る。

【0096】

抗体は、治療剤（放射性標識のような検出可能な標識を含んでいてもよい）、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療または診断剤、細胞傷害性薬剤（薬物または毒素であり得る）、超音波増強剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および当該技術分野において知られている他のこのような作用物質にコンジュゲートまたは融合され得る。

【0097】

抗体は、化学発光化合物に対してカップリングすることによって、検出可能に標識され得る。化学発光タグ付け抗原結合ポリペプチドの存在は、次いで、化学反応の過程の間に生じる発光の存在を検出することによって判定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、テロマティックアクリジニウムエステル（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルである。

【0098】

抗体は、また、^１５２Ｅｕ、またはランタン系列の他の金属のような蛍光放射金属を使用して検出可能に標識し得る。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を使用して抗体に結合させ得る。種々の部分を抗体にコンジュゲートするための技術はよく知られている（例えば、Ａｒｎｏｎら、’’Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ’’，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、’’Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ’’，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（ｅｄｓ．）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．６２３－５３（１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、’’Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ
Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ’’，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；’’Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ
Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ’’，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（ｅｄｓ．）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ．３０３－１６（１９８５）、およびＴｈｏｒｐｅら、’’Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ’’，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（５２：１１９－５８（１９８２））を参照のこと）。
二官能性分子および併用療法

【0099】

ＩＬ－１３ＲＡ２は、腫瘍細胞上に過剰発現する。腫瘍抗原標的化分子として、ＩＬ－１３ＲＡ２に特異的な抗体または抗原結合フラグメントは、免疫細胞に特異的な第２の抗原結合フラグメントまたは免疫チェックポイントに特異的な抗原結合フラグメントと組み合わせて、併用治療または二重特異性抗体を作製することができる。

【0100】

いくつかの実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、貪食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球、およびマスト細胞からなる群から選択される。標的化され得る免疫細胞上の分子としては、例えば、ＣＣＬ１、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、およびＣＤ６４があげられる。他の例としては、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３としても知られる）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られる）、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０またはＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭまたはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても知られる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、およびＣＤ４７があげられる。

【0101】

二重特異性抗体の異なるフォーマットも提供される。いくつかの実施形態において、抗ＩＬ－１３ＲＡ２フラグメントおよび第２のフラグメントの各々は、それぞれ独立して、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から選択される。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、Ｆｃフラグメントをさらに含む。

【0102】

単に抗体または抗原結合フラグメントだけを含むものではない二官能性分子もまた提供される。腫瘍抗原標的化分子として、ＩＬ－１３ＲＡ２に対して特異的な抗体または抗原結合フラグメント（例えば、本明細書に記載されているものなど）は、免疫サイトカインまたはリガンドと、必要に応じてペプチドリンカーによって、連結され得る。連結される免疫サイトカインまたはリガンドとしては、それらに限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴおよびＧＩＴＲＬがあげられる。このような二官能性分子は、免疫チェックポイント遮断効果を、腫瘍部位の局所的な免疫モジュレーションと組み合わせ得る。
抗体－薬物コンジュゲート

【0103】

いくつかの実施形態において、抗体またはフラグメントは、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節剤、医薬品、またはＰＥＧにコンジュゲートされ得る。

【0104】

一つの実施形態において、本開示の抗体またはフラグメントは、薬物部分に共有結合で付着される。前記薬物部分は、抗体上のコンジュゲーションポイントと反応性の基であってもよく、または抗体上のコンジュゲーションポイントと反応性の基を含むように改変されてもよい。例えば、薬物部分は、（例えば、抗体のリジンのε－アミノ基またはＮ末端における）アルキル化、酸化された炭水化物の還元的アミノ化、ヒドロキシル基とカルボキシル基の間のエステル交換反応、アミノ基またはカルボキシル基におけるアミド化、およびチオールへのコンジュゲーションによって結合され得る。

【0105】

いくつかの実施形態において、コンジュゲートされる薬物部分の数ｐは、一つの抗体分子につき、平均で１～８；１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、平均で２～８、２～７，２～６、２～５、２～４または２～３の範囲である。他の実施例において、ｐは、平均で１、２、３、４、５、６、７または８である。いくつかの実施形態において、ｐは、平均で約１～約２０、約１～約１０、約２～約１０、約２～約９、約１～約８、約１～約７、約１～約６、約１～約５、約１～約４、約１～約３、または約１～約２の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、約２～約８、約２～約７、約２～約６、約２～約５、約２～約４または約２～約３の範囲である。

【0106】

例えば、タンパク質の化学的活性化によって遊離チオール基が形成された場合、そのタンパク質は、スルフヒドリル反応性試薬とコンジュゲートされ得る。一つの態様において、前記試薬は、遊離チオール基に実質的に特異的なものである。そのような試薬としては、例えば、マレイミド（ｍａｌｅｍｉｄｅ）、ハロアセトアミド（例えば、ヨウ素、臭素または塩素）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ベンジルハライド（例えば、ヨウ化物、臭化物または塩化物）、ビニルスルホンおよびピリジルチオがあげられる。

【0107】

薬物は、抗体またはフラグメントと、リンカーによって連結され得る。適切なリンカーとしては、例えば、切断可能リンカーおよび非切断可能リンカーがあげられる。切断可能リンカーは、典型的には、細胞内条件において切断されやすい。適切な切断可能リンカーとしては、例えば、細胞内プロテアーゼ、例えばリソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼなどによって切断され得るペプチドリンカーがあげられる。例示的な実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカー、例えば、バリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）、フェニルアラニン－リジン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカー、またはマレイミドカプロニック－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｎｉｃ－ｖａｌｉｎｅ－ｃｉｔｒｕｌｉｎｅ－ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ）リンカーなどであり得る。別のリンカーは、スルホスクシンイミジル－４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓｍｃｃ）である。Ｓｕｌｆｏ－ｓｍｃｃコンジュゲーションは、スルフヒドリル（チオール、－ＳＨ）と反応するマレイミド基によって起こり、一方で、そのＳｕｌｆｏ－ＮＨＳエステルは、（リジンおよびタンパク質またはペプチドのＮ末端に見出されるような）第一級アミンに対して反応性である。さらに別のリンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）である。他の適切なリンカーとしては、ヒドラゾンリンカーなどの特定のｐＨまたはｐＨ範囲において加水分解され得るリンカーがあげられる。さらなる適切な切断可能リンカーとしては、ジスルフィドリンカーがあげられる。リンカー、例えば前記ｍｃリンカーなどは、薬物が放出されるために、抗体が細胞内で分解されなければならない程度に、抗体に共有結合され得る。

【0108】

リンカーは、抗体に対する連結のための基を含み得る。例えば、リンカーは、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシルまたはスルフヒドリル反応性基（例えば、マレイミド（ｍａｌｅｍｉｄｅ）、ハロアセトアミド（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ベンジルハライド（例えば、ヨウ化物、臭化物または塩化物）、ビニルスルホンおよびピリジルチオ）を含み得る。

【0109】

いくつかの実施形態において、薬物部分は、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤、免疫抑制剤、放射性同位体、毒素などである。コンジュゲートは、腫瘍細胞またはがん細胞の分裂増殖（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を阻害するため、腫瘍またはがん細胞におけるアポトーシスを引き起こすため、または患者におけるがんを処置するために使用され得る。コンジュゲートは、動物のがんの処置のための種々の状況において、適切に使用され得る。コンジュゲートは、薬物を腫瘍細胞またはがん細胞に送達するために使用され得る。理論に拘束されるものではないが、いくつかの実施形態において、コンジュゲートは、クローディン１８．２を発現するがん細胞と結合または会合し、また、コンジュゲートおよび／または薬物は、受容体介在性エンドサイトーシスによって腫瘍細胞またはがん細胞の内部に取り込まれ得る。

【0110】

ひとたび細胞内に入ると、コンジュゲートの中の（例えば、リンカー中の）１つまたはそれを超える特定のペプチド配列が、１つまたはそれを超える腫瘍細胞またはがん細胞関連プロテアーゼによって加水分解的に切断され、その結果、薬物が放出される。放出された薬物は、次いで、細胞内を自由に移動し、そして、細胞傷害活性もしくは細胞増殖抑制活性、またはその他の活性を誘導する。いくつかの実施形態において、薬物は、腫瘍細胞またはがん細胞の外部で抗体から切断され、その後、その薬物は、細胞内に侵入するか、または細胞表面で作用する。

【0111】

薬物部分またはペイロードの例は、ＤＭ１（マイタンシン、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－またはＮ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－マイタンシン）、ｍｃ－ＭＭＡＤ（６－マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチンＤまたはＮ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－メトキシ－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－［［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（２－チアゾリル）エチル］アミノ］プロピル］－１－ピロリジニル］－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－（９Ｃｌ）－Ｌ－バリンアミド）、ｍｃ－ＭＭＡＦ（マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチンＦまたはＮ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソヘキシル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｌ－バリル－（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－５－メチル－４－（メチルアミノ）ヘプタノイル－（αＲ，βＲ，２Ｓ）－β－メトキシ－α－メチル－２－ピロリジンプロパノイル－Ｌ－フェニルアラニン）およびｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥ（６－マレイミドカプロイル－ＶａｌｃＣｉｔ－（ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）－モノメチルアウリスタチンＥまたはＮ－［［［４－［［Ｎ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソヘキシル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－（アミノカルボニル）－Ｌ－オルニチル］アミノ］フェニル］メトキシ］カルボニル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニルエチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］－１－ピロリジニル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）からなる群から選択される。ＤＭ１は、チューブリン阻害剤マイタンシンの誘導体であり、一方で、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＥ、およびＭＭＡＦは、アウリスタチン誘導体である。いくつかの実施形態において、薬物部分は、ｍｃ－ＭＭＡＦおよびｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、薬物部分は、マイタンシノイドまたはアウリスタチンである。

【0112】

抗体またはフラグメントは、治療剤（放射性標識のような検出可能な標識を含んでいてもよい）、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療もしくは診断剤、細胞傷害性薬剤（薬物または毒素であり得る）、超音波増強剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および当該技術分野において知られている他のこのような作用物質にコンジュゲートまたは融合され得る。

【0113】

抗体は、化学発光化合物に対してそれをカップリングすることによって、検出可能に標識され得る。化学発光タグ付け抗原結合ポリペプチドの存在は、次いで、化学反応の過程の間に生じる発光の存在を検出することによって決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルである。

【0114】

抗体は、また、^１５２Ｅｕ、またはランタン系列の他の金属のような蛍光放射金属を使用して検出可能に標識し得る。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を使用して抗体に結合させ得る。種々の部分を抗体にコンジュゲートするための技術はよく知られている（例えば、Ａｒｎｏｎら、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（ｅｄｓ．）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．６２３－５３（１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（ｅｄｓ．）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ．３０３－１６（１９８５）、およびＴｈｏｒｐｅら、“Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（５２：１１９－５８（１９８２））を参照のこと）。
抗体をコードするポリヌクレオチド、および抗体の調製方法

【0115】

本開示は、また、本開示の抗体、そのバリアントまたは誘導体をコードする、単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子も提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別々のポリヌクレオチド分子上に、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域全体をコードしていてもよい。さらに、本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別々のポリヌクレオチド分子上に抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の部分をコードしていてもよい。

【0116】

抗体を作製する方法は、当該技術分野においてよく知られており、また、本明細書に記載されている。ある特定の実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域と定常領域は、両方とも、完全にヒトのものである。完全ヒト抗体は、当該技術分野において記載されている技術を使用して、および本明細書に記載されているようにして作製することができる。例えば、特定の抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原曝露に応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内在的遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物に、抗原を投与することによって調製することができる。このような抗体を作製するために使用することができる例示的な技術は、米国特許第６，１５０，５８４号；第６，４５８，５９２号；第６，４２０，１４０号（これらは、参照によりその全体が援用される）に記載されている。
処置方法

【0117】

本明細書に記載されているように、本開示の抗体、バリアント、または誘導体は、ある特定の処置および診断方法において使用され得る。

【0118】

本開示は、また、本明細書に記載されている障害または状態の１つまたはそれより多くを処置するための、動物、哺乳動物、およびヒトなどの患者に本開示の抗体を投与することを含む、抗体ベースの治療にも向けられている。本開示の治療用化合物としては、それらに限定されないが、本開示の抗体（本明細書に記載されているそれらのバリアントおよび誘導体を含む）、および本開示の抗体をコードする核酸またはポリヌクレオチド（本明細書に記載されているそれらのバリアントおよび誘導体を含む）があげられる。

【0119】

本開示の抗体は、また、がんを処置または阻害するために使用することもできる。いくつかの実施形態において、患者のがん細胞は、ＩＬ－１３ＲＡ２を発現または過剰発現する。上記の通り、ＩＬ－１３ＲＡ２は、腫瘍細胞、特に胃腫瘍、膵臓腫瘍、食道腫瘍、卵巣腫瘍、および肺腫瘍において過剰発現され得る。ＩＬ－１３ＲＡ２の阻害は、前記腫瘍の処置に有用であることが示されている。

【0120】

したがって、いくつかの実施形態において、それを必要とする患者におけるがんを処置するための方法が提供される。この方法は、一つの実施形態において、有効量の本開示の抗体を患者に投与することを要する。いくつかの実施形態において、患者において、少なくとも１つのがん細胞（例えば、間質細胞）が、ＩＬ－１３ＲＡ２を過剰発現する。

【0121】

細胞治療（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療）もまた、本開示において提供される。本開示の抗ＩＬ－１３ＲＡ２抗体と接触させた（または、代わりに、本開示の抗ＩＬ－１３ＲＡ２抗体を発現するように操作した）適切な細胞が使用され得る。いくつかの実施形態において、抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）において提示される。そのような接触または操作をしたら、次いで、処置を必要とするがん患者に細胞が導入され得る。がん患者は、本明細書に開示されている任意の型のがんを有し得る。細胞（例えば、Ｔ細胞）は、限定されないが、例えば、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。

【0122】

いくつかの実施形態において、細胞は、そのがん患者自身から単離された。いくつかの実施形態において、細胞は、ドナーにより、または細胞バンクから提供された。細胞ががん患者から単離される場合、望まれない免疫反応が最小化され得る。

【0123】

がんの非限定的な例としては、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、メラノーマ、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんがあげられる。いくつかの実施形態において、がんは、胃がん、膵臓がん、食道がん、卵巣がん、および肺がんの１つまたはそれを超えるものである。

【0124】

細胞の生存期間の増加に関連する、本開示の抗体もしくはそのバリアント、または誘導体によって処置、予防、診断、および／または予後判定され得る、さらなる障害または状態としては、それらに限定されないが、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、および赤白血病を含む）を含む）、および慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）を含む）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、および固形腫瘍（それらに限定されないが、肉腫および癌（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、へパトーマ、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーム、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、メラノーマ、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫など）を含む）などの、悪性腫瘍および関連する障害の進行、および／または転移があげられる。

【0125】

任意の特定の患者のための特定の投与および処置レジメンは、様々な因子（使用される特定の抗体、そのバリアントまたは誘導体、患者の年齢、体重、一般的健康、性別、および食事、ならびに投与の時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、処置される特定の疾患の重症度を含む）に依存する。医療介護者によるこのような因子の判断は、当業者の範囲内である。量は、また、処置される個々の患者、投与経路、製剤の種類、使用される化合物の性質、疾患の重症度、および所望の効果にも依存する。使用される量は、当該技術分野においてよく知られている薬理学的および薬物動態学的原理によって決定され得る。

【0126】

いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、炎症または炎症性疾患を処置するために使用され得る。炎症は、いくつかの実施形態では、傷害、感染、または自己免疫疾患によって引き起こされ得る。いくつかの実施形態では、炎症は、鼻ポリープ（ＮＰ）などの皮膚炎症である。

【0127】

抗体、バリアントの投与方法としては、それらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路があげられる。抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、任意の慣習的な経路、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を通した吸収によって投与され得、また、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。よって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含む医薬組成物は、経口で、直腸に、非経口で、大槽内に（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、腟内に、腹腔内に、局所に（粉末、軟膏、ドロップ、または経皮吸収パッチによって）、頬側に（ｂｕｃａｌｌｙ）に、または口腔もしくは鼻スプレーとして投与され得る。

【0128】

用語「非経口」は、本明細書で使用される場合、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、ならびに関節内注射および注入を含む、投与モードを指す。

【0129】

投与は、全身または局部であり得る。さらに、本開示の抗体を、任意の適切な経路（脳室内および髄腔内注射を含む）によって、中枢神経系内に導入することが望ましいことがあり得る；脳室内注射は、（例えば、レザバー（例えば、オマヤレザバー）に取り付けられた）脳室内カテーテルによって容易になり得る。肺投与もまた、（例えば、インへラーまたはネビュライザー、およびエアロゾル化剤を用いた製剤を使用することによって）採用することができる。

【0130】

本開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、処置を必要とする範囲に局部に投与することが望ましいことがあり得る；これは、例えば（そして限定としてではないが）、手術の間の局部注入によって、手術後の創傷被覆を用いた（例えば、組み合わせた）局所適用によって、注射によって、カテーテルによって、坐剤によって、またはインプラント（前記インプラントは、多孔性、非多孔性、またはゼラチン質材料（シラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）のような膜、または繊維を含む）である）によって、実現され得る。好ましくは、本開示のタンパク質（抗体を含む）を投与する場合、タンパク質が吸収されない材料の使用には注意しなければならない。

【0131】

炎症性、免疫性、または悪性の疾患、障害、または状態の処置、阻害、および予防において有効である本開示の抗体の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが、最適な投与量範囲の確認を助けるために、必要に応じて採用され得る。製剤において採用されるべき正確な用量は、また、投与経路ならびに疾患、障害、または状態の重篤度に依存し、また、医師の判断および各患者の状況に従って決定すべきである。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導かれる用量反応曲線から推定され得る。

【0132】

一般的な提案として、患者に投与される本開示の抗原結合ポリペプチドの投与量は、典型的には、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）、または１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）である。一般に、ヒト抗体は、外来性ポリペプチドに対する免疫応答のために、他の種に由来する抗体よりも、ヒトの体内で半減期が長い。よって、より低投与量のヒト抗体およびより低頻度の投与が可能になることが多い。さらに、修飾（例えば、脂質化など）による抗体の（例えば、脳の中への）取り込みおよび組織通過の増強によって、本開示の抗体の投与の投与量および頻度が低減され得る。

【0133】

追加の実施形態において、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得るサイトカインとしては、それらに限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αがあげられる。

【0134】

追加の実施形態において、本開示の組成物は、他の治療または予防レジメン（例えば、放射線治療など）と組み合わせて投与される。
診断方法

【0135】

ＩＬ－１３ＲＡ２の過剰発現は、ある特定の腫瘍サンプルにおいて観察され、ＩＬ－１３ＲＡ２過剰発現細胞を有する患者は、本開示の抗ＩＬ－１３ＲＡ２抗体による処置に対して応答性である可能性がある。したがって、本開示の抗体は、また、診断および予後判定目的のために使用され得る。

【0136】

好ましくは細胞を含むサンプルは、患者（がん患者または診断を望む患者であり得る）から取得され得る。細胞は、患者からの腫瘍組織もしくは腫瘍塊、血液サンプル、尿サンプル、または任意のサンプルの細胞であり得る（ｂｅ ａ ｃｅｌｌ）。必要に応じてサンプルの前処理をしたら、サンプルは、本開示の抗体と共に、サンプル中に潜在的に存在するＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質と抗体の相互作用を可能にする条件下でインキュベートされ得る。サンプル中のＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質の存在を検出するために、抗ＩＬ－１３ＲＡ２抗体を利用して、ＥＬＩＳＡなどの方法が使用され得る。

【0137】

サンプル中のＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質の存在（必要に応じて、量または濃度と共に）は、患者が抗体による処置に適していることの指標として、または患者ががん処置に応答した（または応答しなかった）ことの指標として、がんの診断のために使用され得る。予後判定方法のために、検出は、がん処置を開始したら、処置の進展を示すために、ある特定のステージにおいて、１回、２回、またはそれを超える回数実施され得る。
組成物

【0138】

本開示は、また、医薬組成物も提供する。このような組成物は、有効量の抗体、および許容され得るキャリアを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、第２の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。

【0139】

特定の実施形態において、用語「医薬的に許容され得る」は、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、または米国薬局方もしくは動物、およびより具体的にはヒトにおいて使用するための一般的に認識されている薬局方に収載されていることを意味する。さらに、「医薬的に許容され得るキャリア」は、一般的には、非毒性の固体、半固体、もしくは液体フィラー、希釈剤、封入材料、または任意の種類の製剤化補助材料である。

【0140】

用語「キャリア」は、それと共に医薬品が投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような医薬品キャリアは、滅菌液体、例えば、水および油（石油、動物、植物、または合成起源のもの（例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など）を含む）であり得る。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合、好ましいキャリアである。食塩溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液もまた、特に注射用液剤のために、液体キャリアとして採用され得る。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどがあげられる。組成物は、必要であれば、また、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、または酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩のようなｐＨ緩衝剤も含み得る。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような浸透圧調節のための剤もまた想定される。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤・散剤（ｐｏｗｄｅｒ）、徐放性製剤などの形態を取り得る。組成物は、慣用の結合剤およびトリグリセリドのようなキャリアを用いる、坐剤として製剤化され得る。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準的なキャリアを含み得る。適切な医薬品キャリアの例が、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（参照により本明細書に援用される）に記載されている。このような組成物は、患者に対する適切な投与のための形態を提供するために適切な量のキャリアと共に、治療有効量の抗原結合ポリペプチドを、好ましくは精製された形態で含む。製剤は、投与モードに適しているべきである。非経口製剤（ｐａｒｅｎｔａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）は、ガラスまたはプラスチック製の、アンプル、ディスポーザブルシリンジ、または複数回投与バイアルに封入され得る。

【0141】

ある実施形態において、組成物は、ヒトに対する静脈内投与に適合した医薬組成物として通例の手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の液剤である。必要な場合、組成物は、また、可溶化剤、および注射部位の痛みを緩和するためにリグノカインのような局所麻酔薬も含み得る。一般に、成分は、個別に供給されてもよく、単位剤形で一緒に混合して（例えば、活性薬剤の量を表示したアンプルまたはサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）のような密封された容器に入った乾燥凍結乾燥粉末または無水濃縮物として）供給されてもよい。組成物が注入によって投与されるものである場合、滅菌医薬品グレードの水または生理食塩水を含むインフュージョンボトルで投薬され得る。組成物が注射によって投与されるものである場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。

【0142】

本開示の化合物は、中性形態または塩形態で製剤化され得る。医薬的に許容され得る塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどのアニオンと形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイなどに由来するものなどのカチオンと形成される塩を含む。

【実施例】

【0143】

実施例
実施例１：ヒトＩＬ－１３ＲＡ２に対するマウスおよびラットのモノクローナル抗体の作製
ヒトＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質を、異なる系統のマウスおよびラットを免役するために使用し、それによってハイブリドーマを生成させた。ＩＬ－１３ＲＡ２陽性バインダーを選択し、サブクローニングした。その後、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合および機能的スクリーニングを行い、最も高い結合親和性および最も強い機能的能力を有するリード抗体を同定した。

【0144】

１２個のリードマウス抗体のＶＨ／ＶＬ配列が以下の表１に提供される。

【表1-1】

【表1-2】

実施例２．ＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に対するマウス抗体の結合

【0145】

この実施例では、Ａ３７５細胞上に発現されたヒトＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に結合する能力について、マウス抗体のうち２８個を試験した。

【0146】

ＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現するＡ３７５細胞がフラスコから採取された。１００μｌの１×１０^６細胞／ｍｌの細胞を、一次抗体と共に、１００ ｎＭ～０．００６ ｎＭの４倍連続希釈で氷上で３０分間インキュベーションした。２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄した後、細胞を二次抗体と氷上で３０分間インキュベーションした。細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳによって分析した。

【0147】

研究の結果（図１Ａ～Ｂおよび表２）は、精製マウス抗体が、高いＥＣ５０でＡ３７５細胞上の内因的に発現したＩＬ－１３ＲＡ２に結合し得ることを示す。

【表2】

実施例３．ＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に対するラット抗体の結合

【0148】

この実施例では、Ａ３７５細胞上に発現されたヒトＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に結合する能力について、ラット抗体のうち２４個を試験した。

【0149】

ＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現するＡ３７５細胞がフラスコから採取された。１００μｌの１×１０^６細胞／ｍｌの細胞を、一次抗体と共に、１００ ｎＭ～０．００６ ｎＭの４倍連続希釈で氷上で３０分間インキュベーションした。２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄した後、細胞を二次抗体と氷上で３０分間インキュベーションした。細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳによって分析した。

【0150】

研究の結果（図２Ａ～Ｂおよび表３）は、精製ラット抗体が、高いＥＣ５０でＡ３７５細胞上の内因的に発現したＩＬ－１３ＲＡ２に結合し得ることを示す。

【表3】

実施例４．ＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に対するキメラ抗体の結合

【0151】

この実施例では、Ａ３７５細胞上に発現したヒトＩＬ－１３ＲＡ２タンパク質に結合する能力について、マウス抗体から調製された（ヒトＦｃを有する）キメラ抗体を調製および試験した。

【0152】

マウスＶＨおよびＶＫ遺伝子を合成的に産生し、次いで、それぞれヒトガンマ１およびヒトカッパ定常ドメインを含むベクターにクローニングした。精製されたキメラ抗体は、トランスフェクションされたＣＨＯ細胞から産生された。

【0153】

ＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現するＡ３７５細胞がフラスコから採取された。１００μｌの１×１０^６細胞／ｍｌの細胞を、一次キメラ抗体と共に、３００ ｎＭ～０．００２ ｎＭの３倍連続希釈で氷上で３０分間インキュベーションした。２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄した後、細胞を二次抗体と氷上で３０分間インキュベーションした。細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳによって分析した。

【0154】

図３および表４に示されるように、キメラ抗体は、異なるＥＣ５０でヒトＩＬ－１３ＲＡ２に結合した。

【表4】

実施例５．キメラ抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）

【0155】

この実施例では、キメラ抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定した。

【0156】

ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイは、ＡＤＣＣ ＭＯＡ経路活性化：エフェクター細胞におけるＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）経路を介した遺伝子転写の活性化におけるより早い時点での代替的な読み出しを使用する。さらに、ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイは、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、Ｖ１５８（高親和性）変異体、およびホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答エレメントを安定に発現する操作されたＪｕｒｋａｔ細胞をエフェクター細胞として使用する。ＡＤＣＣ ＭＯＡにおける抗体生物活性は、ＮＦＡＴ経路活性化の結果として産生されるルシフェラーゼによって定量され；エフェクター細胞のルシフェラーゼ活性は発光読み出しで定量される。シグナルは高く、アッセイのバックグラウンドは低い。

【0157】

ＩＬ－１３ＲＡ２キメラモノクローナル抗体の段階希釈物を、操作されたＪｕｒｋａｔエフェクター細胞（ＡＤＣＣ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｃｅｌｌｓ）、ＡＤＣＣ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｔａｒｇｅｔ Ｃｅｌｌｓ（Ａ３７５細胞株）と共に３７°Ｃで６時間誘導インキュベーションした。Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）試薬を使用してルシフェラーゼ活性を定量した。

【0158】

結果は図４および表５に提示される。示されるように、これらのキメラ抗体はすべて、非常に強いＡＤＣＣ活性を示した。

【表5】

実施例６．キメラ抗体の細胞傷害活性

【0159】

この実施例では、キメラ抗体の殺細胞活性を測定した。

【0160】

ＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現させたＡ３７５細胞を９６ウェルプレートに３０００細胞／ウェルで播種した。一晩インキュベーションした後、ＭＭＡＥとコンジュゲートした各希釈試料を添加した。５日間のインキュベーション後、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬によって測定した。ルシフェラーゼ活性をＥｎｖｉｓｏｎによって検出した。

【0161】

図５および表６に示されるように、これらのキメラ抗体はすべて、非常に強い細胞傷害活性を有する。

【表6】

実施例６．キメラ抗体のエンドサイトーシス

【0162】

この実施例では、キメラ抗体を、表面ＩＬ－１３ＲＡ２に結合したときに内在化を誘導する能力について記載した。

【0163】

この方法は、中性ｐＨでは蛍光性ではないが、内在化と共に酸性ｐＨで高度に蛍光性になる新規の親水性で明るいｐＨセンサー色素（ｐＨＡｂ色素）を使用する。エンドサイトーシスの過程を検出するために使用され得る。ＣＨＯ－Ｋ１／Ｈ＿ＩＬ－１３ＲＡ２、ヒトＩＬ－１３ＲＡ２を過剰発現するＨＥＫ－２９３／Ｈ＿ＩＬ－１３ＲＡ２細胞、および標的細胞としてヒトＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現するＡ３７５、ｐＨＡｂ色素で標識した検出抗体を添加して、インビトロでＩＬ－１３ＲＡ２キメラモノクローナル抗体のエンドサイトーシスを評価した。

【0164】

ＩＬ－１３ＲＡ２キメラモノクローナル抗体の段階希釈物を３７℃で２４時間インキュベーションした。ルシフェラーゼ活性が検出された。

【0165】

結果は図６Ａ～Ｃおよび表７に示され、これらのキメラ抗体が非常に強いエンドサイトーシス活性を有することを実証する。

【表7】

実施例７．マウス抗体のヒト化

【0166】

マウス抗体のうちの４つ、６１Ｈ８Ｃ１、５７Ｆ８Ｈ３Ｆ１、７２Ｂ４Ｈ４および７３Ａ１１Ｅ２をヒト化のために選択した。

【0167】

各マウス抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列をヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体的に最も適合するヒト生殖細胞系Ｉｇ遺伝子配列を見出だした。次いで、マウス抗体のＣＤＲを一致したヒト配列にグラフトした。ｃＤＮＡを合成し、ヒト化抗体を作製するために使用した。次いで、マウス抗体からの特定の復帰突然変異をヒト化抗体に戻して導入した。翻訳後修飾の確率を減らすために、特定のアミノ酸を変異させた。

【0168】

ヒト化抗体のアミノ酸配列を以下の表８～１１に提供する。
ヒト化配列
Ａ．６１Ｈ８Ｃ１

【表8A】

【表8B】

【表8C】

【表8D】

【表8E】

Ｂ．５７Ｆ８Ｈ３Ｆ１

【表9A】

【表9B】

【表9C】

【表9D】

【表9E】

Ｃ．７２Ｂ４Ｈ４

【表10A】

【表10B】

【表10C】

【表10D】

【表10E】

Ｄ．７３Ａ１１Ｅ２

【表11A】

【表11B】

【表11C】

【表11D】

【表11E】

実施例８．ヒト化抗体の結合親和性

【0169】

この実施例では、ヒト化抗体の結合親和性を試験した。

【0170】

ＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現するＡ３７５細胞がフラスコから採取された。１００μｌの１×１０^６細胞／ｍｌの細胞を、一次ヒト化抗体と共に、２００ ｎＭ～０．００３ ｎＭの４倍連続希釈で氷上で３０分間インキュベーションした。２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄した後、細胞を二次抗体と氷上で３０分間インキュベーションした。細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳによって分析した。

【0171】

結果は図７Ａおよび表１２に提示される。示されるように、ヒト化抗体は、高いＥＣ５０でヒトＩＬ－１３ＲＡ２に結合し得る。

【表12A】

【表12B】

【表12C】

【表12D】

【表12E】

【表12F】

【表12G】

【表12H】

【表12I】

【表12J】

実施例９．ヒト化抗体のＡＤＣＣ

【0172】

この実施例では、ヒト化抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定した。

【0173】

ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイは、ＡＤＣＣ ＭＯＡ経路活性化：エフェクター細胞におけるＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）経路を介した遺伝子転写の活性化におけるより早い時点での代替的な読み出しを使用する。さらに、ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイは、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、Ｖ１５８（高親和性）変異体、およびホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答エレメントを安定に発現する操作されたＪｕｒｋａｔ細胞をエフェクター細胞として使用する。ＡＤＣＣ ＭＯＡにおける抗体生物活性は、ＮＦＡＴ経路活性化の結果として産生されるルシフェラーゼによって定量され；エフェクター細胞のルシフェラーゼ活性は発光読み出しで定量される。シグナルは高く、アッセイのバックグラウンドは低い。

【0174】

ＩＬ－１３ＲＡ２ヒト化モノクローナル抗体の段階希釈物を、操作されたＪｕｒｋａｔエフェクター細胞（ＡＤＣＣ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｃｅｌｌｓ）、ＡＤＣＣ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｔａｒｇｅｔ Ｃｅｌｌｓ（Ａ３７５細胞株）と共に３７°Ｃで６時間誘導インキュベーションした。Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）試薬を使用してルシフェラーゼ活性を定量した。

【0175】

結果は、これらのヒト化抗体が非常に強いＡＤＣＣ活性を有することを示す。

【0176】

結果を図８Ａ（ＩＬ－１３ＲＡ２過剰発現細胞株）および図８Ｂ（内因性神経膠腫細胞株）に示す。示されるように、これらのヒト化抗体はすべて、非常に強いＡＤＣＣ活性を示した。
実施例１０．ヒト化抗体のエンドサイトーシス

【0177】

この実施例では、キメラ抗体を、表面ＩＬ－１３ＲＡ２に結合したときに内在化を誘導する能力について記載した。

【0178】

この方法は、中性ｐＨでは蛍光性ではないが、内在化と共に酸性ｐＨで高度に蛍光性になる新規の親水性で明るいｐＨセンサー色素（ｐＨＡｂ色素）を使用する。エンドサイトーシスの過程を検出するために使用され得る。ＣＨＯ－Ｋ１／Ｈ＿ＩＬ－１３ＲＡ２、ヒトＩＬ－１３ＲＡ２を過剰発現するＨＥＫ－２９３／Ｈ＿ＩＬ－１３ＲＡ２細胞、および標的細胞としてヒトＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現するＡ３７５、ｐＨＡｂ色素で標識した検出抗体を添加して、インビトロでＩＬ－１３ＲＡ２キメラモノクローナル抗体のエンドサイトーシスを評価した。

【0179】

選択されたヒト化抗体の段階希釈物を３７℃で２４時間インキュベーションした。ルシフェラーゼ活性が検出された。

【0180】

結果を図９Ａ（ＩＬ－１３ＲＡ２過剰発現細胞株）および図９Ｂ～Ｃ（内因性細胞株）に示し、これらのヒト化抗体が非常に強いエンドサイトーシス活性を有することを実証する。
実施例１１．抗体－薬物コンジュゲートのインビトロ細胞傷害

【0181】

この実施例では、異なる神経膠腫細胞に対する毒性薬物（ＡＤＣ）にコンジュゲートされたヒト化抗体の細胞傷害を試験した。

【0182】

ＩＬ－１３ＲＡ２を内因的に発現するＡ３７５細胞およびＵ２５１細胞、ＩＬ－１３ＲＡ２を安定的に発現するＨＥＫ－２９３細胞を、９６ウェルプレートに３０００細胞／ウェルで播種した。一晩インキュベーションした後、ＭＭＡＥとコンジュゲートした各希釈試料を添加した。５日間のインキュベーション後、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬によって測定した。ルシフェラーゼ活性をＥｎｖｉｓｏｎによって検出した。

【0183】

図１０Ａ～Ｃに示されるように、これらのＡＤＣは非常に強い細胞傷害活性を有する。
実施例１２．抗体－薬物コンジュゲートのインビボ細胞傷害

【0184】

この実施例では、ＭＭＡＥ（ＡＤＣ）にコンジュゲートされたヒト化抗体のインビボ細胞傷害を試験した。

【0185】

この試験では、６～８週齢の雌ＮＣＧマウス（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｊｉｃｕｉ Ｙａｏｋａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を使用した。各マウスの右腋窩（外側）に、腫瘍発生のためにマトリゲル（Ｖ：Ｖ＝１：１）とＡ３７５腫瘍細胞（５×１０６）を含む０．１ ｍｌのＰＢＳを皮下接種した。腫瘍体積が約７０ｍｍ^３に達したとき、細胞接種後５日目に、動物をグループ分けし、次いで、有効性試験のために処置を開始した。

【0186】

３ｍｇ／ｋｇの用量の試験品を、０日目、７日目および１４日目に静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。実験を２３日目に終了した。腫瘍サイズは、毎週３回、ノギスを使用して２次元で測定し、体積は、式Ｖ＝０．５ａ×ｂ^２（式中、ａおよびｂは、それぞれ、腫瘍の長径および短径である）を使用して、立方ミリメートル（ｍｍ^３）で表した。次いで、この腫瘍サイズを、Ｔ／Ｃ（％）値を算出するために使用した。Ｔ／Ｃ（％）は、式Ｔ／Ｃ％＝（Ｔ_ｉ－Ｔ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）×１００（Ｔ_ｉは、所与の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｔ_０は、処置の最初の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｖｉは、Ｔ_ｉと同じ日におけるビヒクル対照群の平均腫瘍体積であり、Ｖ_０は、処置の最初の日におけるビヒクル群の平均腫瘍体積である）を使用して算出した。ＴＧＩは、各群について、式ＴＧＩ（％）＝［１００－Ｔ／Ｃ］を使用して算出した。データ点は群（ｎ＝５）平均を表し、エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。ｐ値を、ＰＢＳ対照と比較したｔ検定による腫瘍サイズに基づいて計算した。

【0187】

図１１Ａは、異なる群における担癌マウスの体重変化を示す。データ点は群平均体重を表す。エラーバーは、平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。図１１Ｂおよび表１３は、試験ＡＤＣの投与後のＡ３７５担癌マウスの腫瘍成長曲線を示す。これらの図に示されるように、ＡＤＣは強いインビボ細胞傷害活性を示した。

【表13】

＊ ＊ ＊

【0188】

本開示は、範囲において、記載されている特定の実施形態（それらは、本開示の個別の態様の１つの例証であることが意図されている）によって限定されるものではなく、機能的に同等の任意の組成物および方法は、本開示の範囲内である。本開示の趣旨および範囲を逸脱することなく、本開示の方法および組成物に種々の改変および変形を行い得ることは、当業者には明白である。よって、本開示の改変および変形が、添付の特許請求の範囲またはその均等物の範囲内であることを条件として、本開示は、そのような改変および変形を包含することが意図されている。

【0189】

本明細書において言及された全ての刊行物および特許出願は、個別の刊行物または特許出願が、それぞれ具体的かつ個別に参照により援用されるものと示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用される。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図7J】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【配列表】

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【国際調査報告】