特表 2025-506248 抗５Ｔ４抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-03-07

(54)【発明の名称】抗５Ｔ４抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20250228BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250228BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20250228BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20250228BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250228BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250228BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250228BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20250228BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C12P21/08

C12N15/13

C07K16/46

C12N15/62 Z

C12N15/12

C07K14/725

C07K19/00

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N1/15

A61K39/395 L

A61K39/395 N

A61P35/00

A61K47/68

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024548730

(86)(22)【出願日】2023-02-21

(85)【翻訳文提出日】2024-10-16

(86)【国際出願番号】 CN2023077493

(87)【国際公開番号】W WO2023155925

(87)【国際公開日】2023-08-24

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/077113

(32)【優先日】2022-02-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524069695

【氏名又は名称】コンセプト トゥー メディシン バイオテック カンパニー， リミテッド

(71)【出願人】

【識別番号】524068414

【氏名又は名称】レプ バイオファーマ カンパニー， リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】リウ， ファン

(72)【発明者】

【氏名】ゴン， ウェンツー

(72)【発明者】

【氏名】ツァイ， ジジャン

(72)【発明者】

【氏名】ヤン， リウ

(72)【発明者】

【氏名】ガオ， シャン

(72)【発明者】

【氏名】ジアン， ウェンチン

(72)【発明者】

【氏名】ファン， レイ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA20

4B064CC15

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA91X

4B065AA91Y

4B065AA93Y

4B065AB01

4B065AB05

4B065AC14

4B065BA02

4B065BA08

4B065BA21

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076EE41

4C076EE59

4C085AA14

4C085AA26

4C085BB01

4C085BB41

4C085BB43

4C085BB50

4C085CC02

4C085CC31

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA72

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、抗５Ｔ４抗体、そのバリアントおよびヒト化バージョンを提供する。新たに開示される抗体は、５Ｔ４タンパク質に対して高い親和性を示したものであり、がんを処置するために使用され得る。本開示は、様々な実施形態で、ヒト５Ｔ４タンパク質に特異的な抗体および抗原結合断片を提供する。実験的試験は、これらの新たに同定された抗体がヒト５Ｔ４タンパク質に強力にかつ特異的に結合することができることを示す。５Ｔ４を標的とするＦａｂ断片を含有する融合タンパク質であり、臨床試験において評価された、ナプツモマブとは異なり、これらの新たに同定された抗体は、カニクイザル５Ｔ４タンパク質にも同等の作用強度で結合することができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト５Ｔ４癌胎児性栄養膜糖タンパク質（５Ｔ４）タンパク質に対する特異性を有し、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合断片であって、前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、
配列番号４１、４２（または４７～５３のいずれか１つ）、４３、４４、４５および４６（または２６４もしくは２６５）；
配列番号５４、５５（または６０～６３、もしくは２６６もしくは２６７のいずれか１つ）、５６、５７、５８および５９；
配列番号６４～６９；
配列番号７０、７１（または７６）、７２、７３、７４および７５；
配列番号７７～８２；
配列番号８３～８８；
配列番号８９～９４；
配列番号９５、９６（または１０１～１０４のいずれか１つ）、９７、９８、９９および１００；
配列番号１０５～１１０；
配列番号１１１～１１６；
配列番号１１７～１２２；
配列番号１２３、１２４または１２９、１２５、１２６、１２７および１２８；
配列番号１３０～１３５；
配列番号１３６～１４１；
配列番号１４２～１４７；
配列番号１４８～１５３；
配列番号１５４～１５９；
配列番号１６０、１６１または１６６、１６２、１６３、１６４および１６５；
配列番号１６７、１６８または１７３、１６９、１７０、１７１および１７２；あるいは
配列番号１７４、１７５または１８０、１７６、１７７、１７８および１７９
のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号５５、６０～６３および２６６～２６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

前記ＶＨが、配列番号３、２１５～２２１および２４８～２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４および２２２～２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号１２４および１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

前記ＶＨが、配列番号２３、２３６～２４１および２５９～２６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２４および２４２～２４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号４２および４７～５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号４６、２６４または２６５のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号４２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号２６４または２６５のアミノ酸配列を含む、
請求項６に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

前記ＶＨが、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

前記ＶＨが、配列番号１９７のアミノ酸配列を含み、および前記ＶＬが、配列番号２６２または２６３のアミノ酸配列を含み、請求項７に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号７０のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号７１および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号７２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号７３のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号７４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項11】

前記ＶＨが、配列番号７、２２７～２２９、および２５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号８、２３０～２３５および２５８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項12】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号９５のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号９６および１０１～１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号９７のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号９８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号９９のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号１００のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項13】

前記ＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項14】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項15】

前記ＶＨが、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項16】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号１５４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１５６のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号１５９のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項17】

前記ＶＨが、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項18】

二価Ｆａｂ抗体であるか、またはＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される断片である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。

【請求項19】

薬物部分にコンジュゲートされた請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を含む、抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項20】

前記薬物部分が、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤である、請求項１９に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項21】

前記薬物部分が、メイタンシノイド、アウリスタチン、または大環状ケトン類似体である、請求項２０に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項22】

前記薬物部分が、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を含む、請求項２１に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項23】

前記薬物部分が、酸性条件下で加水分解可能であるリンカーを介して前記抗体またはその断片に結合されている、請求項１９から２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項24】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号４２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号２６４または２６５のアミノ酸配列を含む、
請求項１９から２３のいずれか一項に記載の抗体～薬物コンジュゲート。

【請求項25】

請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗原結合断片と、５Ｔ４ではない標的抗原に対して結合特異性を有する１つまたは複数の抗体または抗原結合断片とを含む、多重特異性抗体。

【請求項26】

請求項１から８のいずれか一項に記載の抗原結合断片と、膜貫通ドメインと、共刺激ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内ドメインとを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項27】

請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項２６に記載のＣＡＲをコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチド。

【請求項28】

１つまたは複数のｍＲＮＡである、請求項２７に記載のポリヌクレオチド。

【請求項29】

前記ｍＲＮＡが、化学的に改変されている、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項30】

請求項２７から２９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、細胞。

【請求項31】

請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項１９から２４のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項２５に記載の多重特異性抗体、請求項２６に記載のＣＡＲ、請求項２７から２９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、または請求項３０に記載の細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。

【請求項32】

がんを処置することを必要とする患者におけるがんを処置する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項１９から２４のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項２５に記載の多重特異性抗体、請求項２６に記載のＣＡＲ、請求項２７から２９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項３０に記載の細胞の有効量を前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項33】

がんを処置するための医薬を調製するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項１９から２４のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項２５に記載の多重特異性抗体、請求項２６に記載のＣＡＲ、請求項２７から２９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項３０に記載の細胞の、使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

背景
５Ｔ４（栄養膜糖タンパク質、ＴＰＢＧ；５Ｔ４癌胎児性栄養膜糖タンパク質；およびＷｎｔ活性化阻害因子１、ＷＡＩＦ１、としても公知）は、ヒト胎盤組織において最初に同定された脊椎動物特異的な１回膜貫通タンパク質である。５Ｔ４は、細胞外ドメイン、膜貫通ヘリックスおよび細胞質領域に８つのロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）を含む、高度にグリコシル化された堅いコアを含有する。５Ｔ４の細胞質ＰＤＺ結合モチーフＳｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌは、細胞膜付近に位置する小胞と会合する細胞質タンパク質であるＴＩＰ－２／ＧＩＰＣのＰＤＺドメインと相互作用すると報告されている。シグナル伝達のさらに下流のメカニズムは、依然として不明である。５Ｔ４は、胚の発達に重要な経路でありかつ抗がん治療薬の主な標的である、Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達経路を阻害することも判明している。

【背景技術】

【0002】

５Ｔ４は、正常な成体組織にはほとんど発現されないが、胎盤に、ならびに最も一般的な腫瘍、典型的には腎臓、乳房、結腸、前立腺および卵巣の癌の８０％より多くに、高レベルで存在する。したがって、５Ｔ４には癌胎児性抗原の特徴があり、この特徴が、５Ｔ４をがん処置のための診断マーカーまたは標的としての使用が見込まれる候補として際立たせる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

要旨
本開示は、様々な実施形態で、ヒト５Ｔ４タンパク質に特異的な抗体および抗原結合断片を提供する。実験的試験は、これらの新たに同定された抗体がヒト５Ｔ４タンパク質に強力にかつ特異的に結合することができることを示す。５Ｔ４を標的とするＦａｂ断片を含有する融合タンパク質であり、臨床試験において評価された、ナプツモマブとは異なり、これらの新たに同定された抗体（ｎｅｗｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）は、カニクイザル５Ｔ４タンパク質にも同等の作用強度（ｐｏｔｅｎｃｙ）で結合することができる。

【0004】

本開示の一実施形態によれば、ヒト５Ｔ４癌胎児性栄養膜糖タンパク質（５Ｔ４）タンパク質に対して特異性を有する抗体またはその抗原結合断片であって、ＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２とＶＨ ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＶＬ ＣＤＲ１とＶＬ ＣＤＲ２とＶＬ ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体またはその抗原結合断片が提供される。

【0005】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４１、４２（もしくは４７～５３のいずれか１つ）、４３、４４、４５および４６（または２６４または２６５）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号２６４または２６５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２６２または２６３のアミノ酸配列を含む。

【0006】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号５４、５５（もしくは６０～６３、または２６６または２６７のいずれか１つ）、５６、５７、５８および５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６４～６９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７０、７１または７６、７２、７３、７４または７５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７７～８２のアミノ酸配列を含む。

【0007】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号８３～８８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号８９～９４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号９５、９６（もしくは１０１～１０４のいずれか１つ）、９７、９８、９９および１００のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１０５～１１０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１１１～１１６のアミノ酸配列を含む。

【0008】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１１７～１２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１２３、１２４または１２９、１２５、１２６、１２７および１２８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１３０～１３５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１３６～１４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１４２～１４７のアミノ酸配列を含む。

【0009】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１４８～１５３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１５４～１５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１６０、１６１または１６６、１６２、１６３、１６４および１６５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１６７、１６８または１７３、１６９、１７０、１７１および１７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１７４、１７５または１８０、１７６、１７７、１７８および１７９のアミノ酸配列を含む。

【0010】

薬物部分にコンジュゲートされた本開示の抗体またはその断片を含む、抗体－薬物コンジュゲートも、提供される。一部の実施形態では、薬物部分は、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤である。一部の実施形態では、薬物部分は、メイタンシノイド、アウリスタチン、または大環状ケトン類似体である。一部の実施形態では、薬物部分は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を含む。一部の実施形態では、薬物部分は、酸性条件下で加水分解可能であるリンカーを介して抗体またはその断片に結合されている。

【0011】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号２６４または２６５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２６２または２６３のアミノ酸配列を含む。

【0012】

本開示の抗原結合断片と、５Ｔ４ではない標的抗原に対して結合特異性を有する１つまたは複数の抗体または抗原結合断片とを含む、多重特異性抗体も提供される。

【0013】

別の実施形態では、本開示の抗原結合断片と、膜貫通ドメインと、共刺激ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内ドメインとを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供される。

【0014】

本開示の抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドも提供される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、必要に応じて化学的に改変されている、ｍＲＮＡである。

【0015】

本開示の抗体またはその抗原結合断片を用いる、がんおよび炎症状態を処置するための方法および使用も提供される。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】図１は、ヒト５Ｔ４タンパク質に対する試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のＥＬＩＳＡ結合活性を示す。

【0017】

【図2】図２は、カニクイザル５Ｔ４タンパク質に対する試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のＥＬＩＳＡ結合活性を示す。

【0018】

【図3】図３～８は、競合ＥＬＩＳＡアッセイによる試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のエピトープ結合を示す。

【図4】図３～８は、競合ＥＬＩＳＡアッセイによる試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のエピトープ結合を示す。

【図5】図３～８は、競合ＥＬＩＳＡアッセイによる試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のエピトープ結合を示す。

【図6】図３～８は、競合ＥＬＩＳＡアッセイによる試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のエピトープ結合を示す。

【図7】図３～８は、競合ＥＬＩＳＡアッセイによる試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のエピトープ結合を示す。

【図8】図３～８は、競合ＥＬＩＳＡアッセイによる試験した抗５Ｔ４キメラ単一特異性抗体のエピトープ結合を示す。

【0019】

【図9-1】図９は、ＣＨＯ－Ｋ１の表面に発現されたヒト５Ｔ４に対する試験した抗５Ｔ４キメラｍＡｂの結合活性を示す（ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ）。

【図9-2】図９は、ＣＨＯ－Ｋ１の表面に発現されたヒト５Ｔ４に対する試験した抗５Ｔ４キメラｍＡｂの結合活性を示す（ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ）。

【0020】

【図10】図１０は、ヒト化１４Ｇ１２抗体の大部分が、キメラ１４Ｇ１２ ｍＡｂと比較して、ヒト５Ｔ４抗原に対する同様の結合活性を有することを示す。

【0021】

【図11-1】図１１は、試験したヒト化１４Ｇ１２抗体の大部分が、キメラ１４Ｇ１２抗体と比較して、ヒト５Ｔ４を過剰発現するＣＨＯＫ１に対して同様の結合活性を有することを示す。

【図11-2】図１１は、試験したヒト化１４Ｇ１２抗体の大部分が、キメラ１４Ｇ１２抗体と比較して、ヒト５Ｔ４を過剰発現するＣＨＯＫ１に対して同様の結合活性を有することを示す。

【0022】

【図12】図１２は、試験したヒト化３９３Ｅ９抗体およびそれらのキメラｍＡｂが、ヒト５Ｔ４抗原に対して同等の結合活性を有することを示す。

【0023】

【図13】図１３は、試験したヒト化３９３Ｅ９抗体の一部が、ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞に対してキメラ抗体と同様のまたはさらにはそれより強い結合活性を有することを示す。

【0024】

【図14】図１４は、試験したヒト化１５９Ｄ５抗体およびそれらのキメラｍＡｂが、ヒト５Ｔ４抗原に対して同等の結合活性を有することを示す。

【0025】

【図15】図１５は、試験したヒト化１５９Ｄ５抗体およびそれらのキメラ抗体が、ヒト５Ｔ４を過剰発現するＣＨＯＫ１に対して同等の結合活性を有することを示す。

【0026】

【図16】図１６は、試験したヒト化２８６Ｂ４抗体の一部が、キメラ抗体と比較して、ヒト５Ｔ４抗原に対する同様の結合活性を有することを示す。

【0027】

【図17】図１７は、試験したヒト化２８６Ｂ４抗体の一部が、ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞またはＭＣＦ－７細胞に対してそれらのキメラ抗体と同様のまたはさらにはそれより強い結合活性を有することを示す。

【0028】

【図18】図１８は、ＰＴＭ除去抗体が、５Ｔ４発現細胞に対してそれらのキメラ抗体より増強された結合能を有することを示す。

【0029】

【図19】図１９は、親和性成熟抗体が、ヒト５Ｔ４抗原に対してそれらの親Ｈｕ１４Ｇ１２－２８抗体より強い結合活性を有することを示す。

【0030】

【図20】図２０は、親和性成熟抗体が、５Ｔ４発現細胞に対してそれらの親Ｈｕ１４Ｇ１２－２８抗体より増強された結合能を有することを示す。

【発明を実施するための形態】

【0031】

詳細な説明
定義
用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、その実体の１つまたは複数を指し、例えば、「１つの抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つまたは複数の抗体を表すと理解されることに留意されたい。したがって、用語「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたは複数（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」および「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」は、本明細書では同義で使用され得る。

【0032】

本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合断片」は、抗原を特異的に認識し、それに結合する、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体およびその任意の抗原結合断片または一本鎖であり得る。したがって、用語「抗体」は、抗原に結合する生物活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む分子を含有する、任意のタンパク質またはペプチドを含む。そのようなものの例としては、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、あるいはその任意の部分、あるいは結合タンパク質の少なくとも一部分が挙げられるが、これらに限定されない。

【0033】

用語「抗体断片」または「抗原結合断片」は、本明細書で使用される場合、抗体の一部分、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどである。構造に関係なく、抗体断片は、無傷抗体により認識される同じ抗原と結合する。用語「抗体断片」は、アプタマー、スピーゲルアイゼン、およびダイアボディを含む。用語「抗体断片」は、特定の抗原に結合して複合体を形成することにより抗体のように動作する、任意の合成のまたは遺伝子操作されたタンパク質も含む。

【0034】

抗体という用語は、生化学的に区別され得るポリペプチドの様々な広範なクラスを包含する。重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として、一部はこれらの中のサブクラス（例えば、γ１～γ４）として、分類されることは、当業者には理解されるであろう。それは、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧまたはＩｇＥのような抗体の「クラス」を決定するこの鎖の性質である。

【0035】

免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５などは、十分に特徴付けられており、機能の特化をもたらすことが公知である。これらのクラスおよびアイソタイプの各々についての改変バージョンは、本開示に鑑みて当業者には容易に識別可能であり、したがって、本開示の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、明らかに本開示の範囲内であり、以下の論述は、一般に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関することになる。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量おおよそ２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量５３，０００～７０，０００ダルトンの２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。４本の鎖は、典型的に、ジスルフィド結合により「Ｙ」形状に連結されており、軽鎖が、「Ｙ」の口で始まって可変領域まで続いて重鎖を両側から挟んでいる。

【0036】

本開示の抗体、その抗原結合ポリペプチド、バリアントまたは誘導体は、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合性断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーにより生成される断片、ならびに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書で開示される抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）を含むが、これらに限定されない。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。

【0037】

本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体」は、免疫反応性領域または部位が第１の種から得られまたはそれに由来し、定常領域（本開示によれば、無傷であることがあり、部分的であることがあり、または改変されていることがある）が第２の種から得られる、任意の抗体を意味すると考えられたい。ある特定の実施形態では、標的結合領域または部位は、非ヒト源（例えば、マウスまたは霊長類）からのものとなり、定常領域は、ヒトのものである。

【0038】

本明細書で開示される抗体は、鳥類および哺乳動物を含む任意の動物起源のものであり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリ抗体である。一部の実施形態では、可変領域は、起源が軟骨魚網様のもの（例えば、サメからのもの）であり得る。

【0039】

本明細書で使用される場合、用語「組換え（の）」は、それがポリペプチドまたはポリヌクレオチドに付随する場合、天然に存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドの形態を意図しており、その非限定的な例は、通常は一緒に存在しないポリヌクレオチドを組み合わせることにより作出され得る。

【0040】

ハイブリドーマ技術は、異なる「ストリンジェンシー」の条件下で行われ得る。一般に、低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション反応は、約１０×ＳＳＣ、または等価のイオン強度／温度の溶液中、約４０℃で実行される。中ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、典型的に、約６×ＳＳＣ中、約５０℃で行われ、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション反応は、一般に、約１×ＳＳＣ中、約６０℃で行われる。ハイブリダイゼーション反応はまた、当業者には周知である「生理条件」下で行われ得る。生理条件の非限定的な例は、細胞に通常見られる温度、イオン強度、ｐＨおよびＭｇ^２＋濃度である。
抗５Ｔ４抗体

【0041】

別記実験例で実証されるように、本発明者らは、抗５Ｔ４抗体１４Ｇ１２、３９３Ｅ９、１１３Ｈ５、１５９Ｄ５、２４Ｆ１０、４９３Ｅ１０、２５７Ｆ１、３５３Ｈ１１、３６７Ｂ８、３８９Ｇ２、１０９Ｈ７、２８６Ｂ４、３７Ｇ６、２６７Ｂ５、４２５Ｇ１、４４９Ｈ９、４９Ｃ５、１１９Ｇ５、８５Ｂ１０および９５Ｆ１０（表１）を生成することができた。また重要なこととして、これらの抗体の多くは、５Ｔ４に対するＦａｂ部分を含むベンチマーク融合タンパク質であるナプツモマブ（ＮｅｏＴＸ）より大きい生物活性を示した。さらに、これらの抗体は、カニクイザル５Ｔ４に対して交差反応性を示しており、このことによって前臨床評価を前進させることが可能になる。

【0042】

競合結合実験は、ナプツモマブとともに、これらの新たに同定された抗体を、それらが５Ｔ４抗原に結合する場所に基づいて４つの異なるビンに分類することができることを示した。興味深いことに、１４Ｇ１２、３９３Ｅ９および１１３Ｈ５のみが、５Ｔ４への結合においてナプツモマブと競合する（「ビンＡ」と呼ばれる、表４）。ビンＢは、１５９Ｄ５、２４Ｆ１０および４９３Ｅ１０を含み、ビンＣは、２５７Ｆ１、３５３Ｈ１１、３６７Ｂ８、３８９Ｇ２および１０９Ｈ７を含み、ビンＤは、２８６Ｂ４、３７Ｇ６、２６７Ｂ５、４２５Ｇ１、４４９Ｈ９、４９Ｃ５、１１９Ｇ５、８５Ｂ１０および９５Ｆ１０を含む。配列検査は、これらのビンの各々における抗体のある特定のＣＤＲが高度に相同であり、それ故、交換可能であると想定されることを示す。

【0043】

本開示の一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト５Ｔ４タンパク質に対して結合特性を有する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＶＨ ＣＤＲ１と、ＶＨ ＣＤＲ２と、ＶＨ ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＶＬ ＣＤＲ１と、ＶＬ ＣＤＲ２と、ＶＬ ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0044】

配列解析によって、ＣＤＲのいくつかが、潜在的に、翻訳後に改変され得る残基を含むことが明らかになった。翻訳後改変（ＰＴＭ）リスクを回避するために、ひいては製造を単純にするために、本開示は、ＣＤＲのある特定のリスク回避バージョン（ｄｅ－ｒｉｓｋｅｄ ｖｅｒｓｉｏｎ）を設計し、試験した。

【0045】

一部の実施形態では、抗体３９３Ｅ９から誘導される抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号５４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号５５のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号５６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号５７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号５８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0046】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号５４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号５５、または配列番号６０～６３または２６６～２６７のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号５６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号５７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号５８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0047】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号５４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号２６６のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号５６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号５７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号５８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号５４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号２６７のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号５６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号５７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号５８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。興味深いことに、実施例１２に示されるように、ＰＴＭリスク回避バージョン、特に、Ｈｕ３９３Ｅ９－４５－Ｐ２およびＨｕ３９３Ｅ９－６２－Ｐ２（両方とも、配列番号２６７をＶＨ ＣＤＲ２として含む）は、キメラバージョンと比較して増強された親和性を有した。

【0048】

例のＶＨ配列は、配列番号３、２１５～２２１および２４８～２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号４および２２２～２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0049】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３、２１５～２２１および２４８～２５６のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３、２１５～２２１および２４８～２５６のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号４および２２２～２２６のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号４および２２２～２２６のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0050】

一部の実施形態では、５Ｔ４上の３９３Ｅ９と同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。一部の実施形態では、５Ｔ４への結合において３９３Ｅ９と競合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。

【0051】

一部の実施形態では、抗体２８６Ｂ４から誘導される抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号１２３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号１２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１２５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号１２６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号１２７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0052】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号１２３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号１２４、または配列番号１２９のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１２５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号１２６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号１２７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。興味深いことに、実施例１２に示されるように、ＰＴＭリスク回避バージョンは、キメラバージョンと比較して増強された親和性を有した。

【0053】

例のＶＨ配列は、配列番号２３、２３６～２４１および２５９～２６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２４および２４２～２４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0054】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号２３、２３６～２４１および２５９～２６１のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２３、２３６～２４１および２５９～２６１のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２４および２４２～２４７のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２４および２４２～２４７のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0055】

一部の実施形態では、５Ｔ４上の２８６Ｂ４と同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。一部の実施形態では、５Ｔ４への結合において２８６Ｂ４と競合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。

【0056】

一部の実施形態では、抗体１４Ｇ１２から誘導される抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0057】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号４２、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0058】

一部の実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ３は親和性成熟している。実施例２０、に示されるように、親和性成熟抗体Ｈｕ１４Ｇ１２－２８－８８＃およびＨｕ１４Ｇ１２－２８－１０８＃は、親１４Ｇ１２－２８抗体と比較して、それぞれ、９．４５倍および７．４１倍だけヒト５Ｔ４タンパク質に対する結合親和性を顕著に増大させた。

【0059】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0060】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号４２、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６、２６４および２６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0061】

例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらに別の例のＶＨ配列は、配列番号１９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらに別の例のＶＨ配列は、配列番号１９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0062】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９７のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１９７のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６２のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはその親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２６２のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６３のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはその親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２６３に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0063】

一部の実施形態では、５Ｔ４上の１４Ｇ１２と同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。一部の実施形態では、５Ｔ４への結合において１４Ｇ１２と競合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。

【0064】

一部の実施形態では、抗体１５９Ｄ５から誘導される抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号７０のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号７１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号７２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号７３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号７４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0065】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号７０のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号７１、または配列番号７６のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号７２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号７３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号７４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。実施例１２に示されるように、ＰＴＭリスク回避バージョン（１５９Ｄ５０－Ｐ１）は、キメラ抗体と同様の性能を有した。

【0066】

例のＶＨ配列は、配列番号７、２２７～２２９、および２５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号８、２３０～２３５および２５８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0067】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７、２２７～２２９、および２５７のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号７、２２７～２２９、および２５７のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号８、２３０～２３５および２５８のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号８、２３０～２３５および２５８のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0068】

一部の実施形態では、５Ｔ４上の１５９Ｄ５と同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。一部の実施形態では、５Ｔ４への結合において１５９Ｄ５と競合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。

【0069】

一部の実施形態では、抗体３５３Ｈ１１から誘導される抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号９５のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号９６のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号９７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号９８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号９９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0070】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号９５のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号９６、または配列番号１０１～１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号９７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号９８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号９９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0071】

例のＶＨ配列は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、例のＶＬ配列は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１５に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１６に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0072】

一部の実施形態では、５Ｔ４上の３５３Ｈ１１と同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。一部の実施形態では、５Ｔ４への結合において３５３Ｈ１１と競合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。

【0073】

一部の実施形態では、抗体１０９Ｈ７から誘導される抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号１１７のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号１１８のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１１９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号１２０のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号１２１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0074】

例のＶＨ配列は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、例のＶＬ配列は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号２１のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２１に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２２のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２２に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0075】

一部の実施形態では、５Ｔ４上の１０９Ｈ７と同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。一部の実施形態では、５Ｔ４への結合において１０９Ｈ７と競合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。

【0076】

一部の実施形態では、抗体４９Ｃ５から誘導される抗体またはその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号１５４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号１５５のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１５６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号１５７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号１５８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0077】

例のＶＨ配列は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、例のＶＬ配列は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３３に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３４に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0078】

一部の実施形態では、５Ｔ４上の４９Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。一部の実施形態では、５Ｔ４への結合において４９Ｃ５と競合する抗体およびその抗原結合断片がまた提供される。

【0079】

本明細書に開示される抗体、例えば、１４Ｇ１２、３９３Ｅ９、１１３Ｈ５、１５９Ｄ５、２４Ｆ１０、４９３Ｅ１０、２５７Ｆ１、３５３Ｈ１１、３６７Ｂ８、３８９Ｇ２、１０９Ｈ７、２８６Ｂ４、３７Ｇ６、２６７Ｂ５、４２５Ｇ１、４４９Ｈ９、４９Ｃ５、１１９Ｇ５、８５Ｂ１０および９５Ｆ１０（表１）に開示される抗体のいずれかのＣＤＲのセット（ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３）、あるいはそのＰＴＭリスク回避バージョンを含む抗体がまた提供される。ＣＤＲ配列は、表１－１～１－４１に記載される。

【0080】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４１、４２（もしくは４７～５３のいずれか１つ）、４３、４４、４５および４６（または２６４または２６５）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号５４、５５（もしくは６０～６３、または２６６または２６７のいずれか１つ）、５６、５７、５８および５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６４～６９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７０、７１または７６、７２、７３、７４または７５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７７～８２のアミノ酸配列を含む。

【0081】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号８３～８８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号８９～９４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号９５、９６（もしくは１０１～１０４のいずれか１つ）、９７、９８、９９および１００のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１０５～１１０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１１１～１１６のアミノ酸配列を含む。

【0082】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１１７～１２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１２３、１２４または１２９、１２５、１２６、１２７および１２８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１３０～１３５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１３６～１４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１４２～１４７のアミノ酸配列を含む。

【0083】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１４８～１５３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１５４～１５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１６０、１６１または１６６、１６２、１６３、１６４および１６５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１６７、１６８または１７３、１６９、１７０、１７１および１７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１７４、１７５または１８０、１７６、１７７、１７８および１７９のアミノ酸配列を含む。

【0084】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号５のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号５に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号６のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号６に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0085】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号９に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１０のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１０に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0086】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１１のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１１に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１２に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0087】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１３に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１４に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0088】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１７のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１７に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１８のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１８に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0089】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１９に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２０のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２０に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0090】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２５に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２６に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0091】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号２７のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２７に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２８のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２８に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0092】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号２９のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号２９に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３０のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３０に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0093】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３１に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３２のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３２に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0094】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３５のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３５に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３６のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３６に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0095】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３７のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３７に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３８のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３８に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0096】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３９のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号３９に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号４０に対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0097】

一部の実施形態では、１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換、欠失および／または付加を有する、本開示のＣＤＲ配列に由来するＣＤＲ配列を含む、抗体および抗原結合断片も提供される。
抗体－薬物コンジュゲート

【0098】

一部の実施形態では、抗体または断片は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答改変物質、医薬品、またはＰＥＧにコンジュゲートされ得る。

【0099】

一実施形態では、本開示の抗体または断片は、薬物部分に共有結合で付着している。薬物部分は、抗体上にコンジュゲーション点を有する反応性の基であることがあり、またはその基を含むように改変されていることがある。例えば、薬物部分は、アルキル化（例えば、抗体のイプシロン－アミノ基リシンまたはＮ末端において）、酸化された炭水化物の還元アミノ化、ヒドロキシル基とカルボキシル基とのエステル交換、アミノ基またはカルボキシル基のアミド化、およびチオールへのコンジュゲーションにより、結合され得る。

【0100】

一部の実施形態では、抗体分子当たりのコンジュゲートされた薬物部分の数、ｐは、平均１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２の範囲である。一部の実施形態では、ｐは、平均２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、または２～３の範囲である。他の実施形態では、ｐは、平均１、２、３、４、５、６、７または８である。一部の実施形態では、ｐは、平均約１～約２０、約１～約１０、約２～約１０、約２～約９、約１～約８、約１～約７、約１～約６、約１～約５、約１～約４、約１～約３、または約１～約２の範囲である。一部の実施形態では、ｐは、約２～約８、約２～約７、約２～約６、約２～約５、約２～約４、または約２～約３の範囲である。

【0101】

例えば、タンパク質の化学的活性化が遊離チオール基の形成をもたらす場合、タンパク質は、スルフヒドリル反応剤とコンジュゲートされ得る。一態様では、前記剤は、遊離チオール基に対して実質的に特異的であるものである。そのような剤としては、例えば、マレイミド（ｍａｌｅｍｉｄｅ）、ハロアセトアミド（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロゲン化ベンジル（例えば、ヨウ化物、臭化物または塩化物）、ビニルスルホンおよびピリジルチオが挙げられる。

【0102】

薬物は、リンカーにより抗体または断片に連結され得る。好適なリンカーとしては、例えば、切断性および非切断性リンカーが挙げられる。切断性リンカーは、典型的に、細胞内条件下で切断されやすい。好適な切断性リンカーとしては、例えば、リソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼなどの細胞内プロテアーゼにより切断可能なペプチドリンカーが挙げられる。例示的な実施形態では、リンカーは、ジペプチドリンカー、例えば、バリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）、フェニルアラニン－リシン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカー、またはマレイミドカプロン酸（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｎｉｃ）－バリン－シトルリン（ｃｉｔｒｕｌｉｎｅ）－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ）リンカーであり得る。別のリンカーは、スルホスクシンイミジル－４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓｍｃｃ）である。スルホ－ｓｍｃｃコンジュゲーションは、マレイミド基を介して起こり、マレイミド基は、スルフヒドリル（チオール、－ＳＨ）と反応するが、そのスルホ－ＮＨＳエステルは、第一級アミン（リシンおよびタンパク質またはペプチドＮ末端に見出されるような）に対して反応性である。さらに別のリンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）である。他の好適なリンカーとしては、特定のｐＨまたはｐＨ範囲で加水分解可能なリンカー、例えば、ヒドラゾンリンカーが挙げられる。追加の好適な切断性リンカーとしては、ジスルフィドリンカーが挙げられる。薬物を放出するために抗体が細胞内で分解されなければならないような程度まで、リンカー、例えば、ｍｃリンカーなどを抗体に共有結合させることができる。

【0103】

リンカーは、抗体への連結のための基を含み得る。例えば、リンカーは、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシルまたはスルフヒドリル反応性基（例えば、マレイミド、ハロアセトアミド（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロゲン化ベンジル（例えば、ヨウ化物、臭化物または塩化物）、ビニルスルホンおよびピリジルチオ）を含み得る。

【0104】

一部の実施形態では、薬物部分は、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤、免疫抑制剤、放射性同位体、毒素などである。コンジュゲートを、腫瘍細胞もしくはがん細胞の増殖（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を阻害するために、腫瘍もしくはがん細胞においてアポトーシスを引き起こすために、または患者におけるがんを処置するために、使用することができる。したがって、コンジュゲートを動物のがんの処置のための様々な状況で使用することができる。コンジュゲートを使用して、薬物を腫瘍細胞またはがん細胞に送達することができる。理論により拘束されるものではないが、一部の実施形態では、コンジュゲートは、ＣＬＤＮ６を発現するがん細胞に結合し、またはそれと会合し、コンジュゲートおよび／または薬物は、受容体媒介エンドサイトーシスによって腫瘍細胞またはがん細胞内に取り込まれ得る。

【0105】

一部の実施形態では、薬物部分は、メイタンシノイドまたはアウリスタチンである。一部の実施形態では、薬物部分は、大環状ケトン類似体、例えば、エリブリンである。一部の実施形態では、薬物部分は、トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、エキサテカンおよびエキサテカン誘導体である。

【0106】

細胞の中に入ると、コンジュゲート内（例えば、リンカーの中）の１つまたは複数の特定のペプチド配列は、１つまたは複数の腫瘍細胞またはがん細胞に付随するプロテアーゼによる加水分解で切断され、その結果、薬物の放出がもたらされる。その結果、放出された薬物は遊離して細胞内に移動し、細胞傷害活性または細胞増殖抑制活性または他の活性を誘導する。一部の実施形態では、薬物は、腫瘍細胞もしくはがん細胞外で抗体から切断され、その後、薬物は、細胞に浸透するか、または細胞表面で作用する。

【0107】

薬物部分またはペイロードの例は、エリブリン（２－（３－アミノ－２－ヒドロキシプロピル）ヘキサコサヒドロ－３－メトキシ－２６－メチル－２０，２７－ビス（メチレン）１１，１５－１８，２１－２４，２８－トリエポキシ－７，９－エタノ－１２，１５－メタノ－９Ｈ，１５Ｈ－フロ（３，２－ｉ）フロ（２’，３’－５，６）ピラノ（４，３－ｂ）（１，４）ジオキサシクロペンタコシン－５－（４Ｈ）－オン）、ＤＭ１（メイタンシン，Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－またはＮ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－メイタンシン）、ｍｃ－ＭＭＡＤ（６－マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチン－ＤまたはＮ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－メトキシ－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－［［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（２－チアゾリル）エチル］アミノ］プロピル］－１－ピロリジニル］－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－（９Ｃｌ）－Ｌ－バリンアミド）、ｍｃ－ＭＭＡＦ（マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチンＦまたはＮ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソへキシル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｌ－バリル－（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－５－メチル－４－（メチルアミノ）ヘプタノイル－（αＲ、βＲ，２Ｓ）－β－メトキシ－α－メチル－２－ピロリジンプロパノイル－Ｌ－フェニルアラニン）およびｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥ（６－マレイミドカプロイル－ＶａｌｃＣｉｔ－（ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）－モノメチルアウリスタチンＥまたはＮ－［［［４－［［Ｎ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソヘキシル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－（アミノカルボニル）－Ｌ－オルニチル］アミノ］フェニル］メトキシ］カルボニル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニルエチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］－１－ピロリジニル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）からなる群から選択される。ＤＭ１は、チューブリン阻害剤メイタンシンの誘導体であり、その一方で、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦは、アウリスタチンの誘導体である。一部の実施形態では、薬物部分は、ｍｃ－ＭＭＡＦおよびｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥからなる群から選択される。

【0108】

抗体または断片は、検出可能な標識、例えば放射性標識、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤または診断剤、薬物または毒素であり得る細胞傷害剤、超音波強化剤、非放射性標識、これらの組合せ、および当技術分野において公知の他のそのような薬剤を含み得る、治療剤にコンジュゲートまたは融合され得る。

【0109】

抗体を、化学発光化合物とカップリングさせることにより、検出可能に標識することができる。その結果、化学発光タグ付き抗原結合ポリペプチドの存在は、化学反応の過程において生ずる発光の存在を検出することにより決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸エステルである。

【0110】

蛍光を発する金属、例えば、^１５２Ｅｕ、またはランタニド系列の他のものを使用して、抗体を検出可能に標識することもできる。ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を使用して、これらの金属を抗体に結合させることができる。様々な部分を抗体にコンジュゲートするための技法は、周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．， “Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）， ｐｐ． ２４３－５６ （Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． （１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， “Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”， ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （２ｎｄ Ｅｄ．）， Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， （ｅｄｓ．）， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， ｐｐ． ６２３－ ５３ （１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ， “Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４： Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）， ｐｐ． ４７５－５０６ （１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｒｅｓｕｌｔｓ， Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ． ３０３－１６ （１９８５）、およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， “Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”， Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ． （５２：１１９－５８ （１９８２））を参照されたい。

【0111】

本開示の任意の抗体または抗原結合断片が、現在開示されているような抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に含めるのに好適であることは、理解される。一実施形態では、抗体または断片は、抗体１４Ｇ１２、３９３Ｅ９、１１３Ｈ５、１５９Ｄ５、２４Ｆ１０、４９３Ｅ１０、２５７Ｆ１、３５３Ｈ１１、３６７Ｂ８、３８９Ｇ２、１０９Ｈ７、２８６Ｂ４、３７Ｇ６、２６７Ｂ５、４２５Ｇ１、４４９Ｈ９、４９Ｃ５、１１９Ｇ５、８５Ｂ１０もしくは９５Ｆ１０のうちのいずれかのＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲ、またはそれらのＰＴＭリスク回避バージョンもしくは親和性成熟バージョンを含む。

【0112】

一部の実施形態では、抗体または断片は、ビンＡ（１４Ｇ１２、３９３Ｅ９、および１１３Ｈ５）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体または断片は、ビンＢ（１５９Ｄ５、２４Ｆ１０、および４９３Ｅ１０）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体または断片は、ビンＣ（２５７Ｆ１、３５３Ｈ１１、３６７Ｂ８、３８９Ｇ２、および１０９Ｈ７）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体または断片は、ビンＤ（２８６Ｂ４、３７Ｇ６、２６７Ｂ５、４２５Ｇ１、４４９Ｈ９、４９Ｃ５、１１９Ｇ５、８５Ｂ１０および９５Ｆ１０）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。

【0113】

一部の実施形態では、ＡＤＣの抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；および配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。

【0114】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号４２、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0115】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0116】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号４２、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６、２６４および２６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0117】

例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらに別の例のＶＨ配列は、配列番号１９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらに別の例のＶＨ配列は、配列番号１９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0118】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避もしくは親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９７のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１９７のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６２のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはその親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２６２のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６３のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはその親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２６３のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。
多機能性分子

【0119】

５Ｔ４に特異的な抗体または抗原結合断片、例えば、本明細書で開示されるものと
、第２の抗原に対して特異性を有する１つまたは複数の抗体または抗原結合断片とを含む、多機能性分子。

【0120】

一部の実施形態では、第２の抗原は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球およびマスト細胞などの、免疫細胞上に発現されるタンパク質である。

【0121】

一部の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３、ＣＤ４７、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＶＩＳＴＡ、ＣＳＦＲ１、Ａ２ＡＲ、ＣＤ７３、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＥＡ、ＨＥＲ２、ＣＭＥＴ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰＡ ＣＤ１６、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２７、ＶＥＧＦＲ、またはＶＥＧＦに対するものである。

【0122】

異なる形式の二重特異性抗体も提供される。一部の実施形態では、抗５Ｔ４断片および第２の断片の各々は、各々独立して、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から選択される。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆｃ断片をさらに含む。

【0123】

単に抗体を含むものでも抗原結合断片を含むものでもない、二機能性分子も提供される。腫瘍抗原標的化分子として、５Ｔ４に特異的な抗体または抗原結合断片、例えば、本明細書に記載されるものなどを、免疫サイトカインまたはリガンドと、必要に応じてペプチドリンカーを介して、化合させることができる。連結される免疫サイトカインまたはリガンドとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴおよびＧＩＴＲＬが挙げられるが、これらに限定されない。そのような二機能性分子は、免役チェックポイント遮断効果と腫瘍部位局所免疫調節を併せ持つことができる。

【0124】

一部の実施形態では、抗５Ｔ４断片は、ビンＡ（１４Ｇ１２、３９３Ｅ９、および１１３Ｈ５）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗５Ｔ４断片は、ビンＢ（１５９Ｄ５、２４Ｆ１０、および４９３Ｅ１０）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗５Ｔ４断片は、ビンＣ（２５７Ｆ１、３５３Ｈ１１、３６７Ｂ８、３８９Ｇ２、および１０９Ｈ７）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗５Ｔ４断片は、ビンＤ（２８６Ｂ４、３７Ｇ６、２６７Ｂ５、４２５Ｇ１、４４９Ｈ９、４９Ｃ５、１１９Ｇ５、８５Ｂ１０および９５Ｆ１０）の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。

【0125】

一部の実施形態では、抗５Ｔ４断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；および配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。

【0126】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号４２、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0127】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号４２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0128】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は配列番号４１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号配列番号４２、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６、２６４および２６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0129】

例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の例のＶＨ配列は、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらに別の例のＶＨ配列は、配列番号１９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらに別の例のＶＨ配列は、配列番号１９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例のＶＬ配列は、配列番号２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0130】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１、１８１～１８４、１８９～１９２、および１９５～２０４のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンもしくは親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２、１８５～１８８、１９３～１９４、２０５～２１４および２６２～２６３のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９７のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＨ ＣＤＲまたはそのＰＴＭリスク回避バージョンを保持しながら配列番号１９７のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６２のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはその親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２６２のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６３のいずれか１つのアミノ酸配列、あるいは対応するＶＬ ＣＤＲまたはその親和性成熟バージョンを保持しながら配列番号２６３のいずれか１つに対する少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。
キメラ抗原受容体

【0131】

一実施形態では、本開示の抗体またはその断片を標的化ユニットとして含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供される。一部の実施形態では、ＣＡＲは、本開示の抗体またはその断片と、膜貫通ドメインと、共刺激ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内ドメインとを含む。

【0132】

膜貫通ドメインは、抗体または断片を含む細胞外ドメインに、必要に応じてヒンジドメインを介して、融合されるように設計され得る。それは、同様に、共刺激ドメインなどの細胞内ドメインに融合され得る。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、共刺激ドメインの天然の膜貫通領域（例えば、共刺激ドメインとして利用されるＣＤ２８Ｔもしくは４－ＩＢＢのＴＭ領域）またはヒンジ領域の天然の膜貫通ドメイン（例えば、ヒンジドメインとして利用されるＣＤ８アルファまたはＣＤ２８ＴのＴＭ領域）を含み得る。

【0133】

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞膜を貫通する、しかし細胞の細胞質へとおよび／または細胞外空間へと伸びる、配列を含み得る。例えば、膜貫通のものは、細胞の細胞質および／または細胞外空間へ伸びる１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多くのアミノ酸をそれ自体がさらに含み得る、膜を貫通する配列を含み得る。したがって、膜貫通ドメインは、膜を貫通する領域を含み、その上、膜自体の内または外面を超えて伸びるアミノ酸をさらに含むことができ、それでもやはり、このような配列は、「膜貫通ドメイン」であると見なされ得る。

【0134】

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、短いリンカーを介して細胞質ドメインに融合している。必要に応じて、短いペプチドまたはポリペプチドリンカー、好ましくは、長さ２アミノ酸～１０アミノ酸の間のものは、膜貫通ドメインとキメラ受容体の近位細胞質シグナル伝達ドメインとの連結を形成し得る。グリシン－セリンダブレット（ＧＳ）、グリシン－セリン－グリシントリプレット（ＧＳＧ）、またはアラニン－アラニン－アラニントリプレット（ＡＡＡ）は、好適なリンカーになる。

【0135】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、さらに、共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、共刺激ドメインは、膜貫通ドメインと活性化ドメインの間に位置する。共刺激ドメインの例としては、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８ａ、ＣＤ８、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（Ｔ ＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＴＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３－ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（Ｔ ＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３１４（ＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（Ｋ－ｐ４６）、ＣＤ３３６（Ｋ－ｐ４４）、ＣＤ３３７（Ｋ－ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ １８）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ－１（ＣＤ １ １ａ／ＣＤ １８）、ＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ－１０、ＩＣＡＭ－１、Ｋｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、ＬＦＡ－１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ－７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、およびこれらの断片または組合せが挙げられるが、それらに限定されない。

【0136】

一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞質部分は、シグナル伝達／活性化ドメインも含む。一実施形態では、シグナル伝達／活性化ドメインは、ＣＤ３ζドメインであるか、またはＣＤ３ζドメインに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。
ポリヌクレオチド、ｍＲＮＡ、および抗体を発現させるまたは調製する方法

【0137】

本開示は、本開示の抗体、そのバリアントもしくは誘導体、またはＣＡＲをコードする、ポリヌクレオチドまたは核酸分子も提供する。本開示のポリヌクレオチドは、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域全体を同じポリヌクレオチド分子上にまたは別々のポリヌクレオチド分子上にコードし得る。加えて、本開示のポリヌクレオチドは、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の部分を同じポリヌクレオチド分子上にまたは別々のポリヌクレオチド
分子上にコードし得る。

【0138】

一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを、抗体またはその断片を発現させるための標的細胞に導入することができる。

【0139】

ｍＲＮＡを様々な公知の方法のいずれに従って合成してもよい。例えば、ｍＲＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）によって合成することができる。手短に述べると、典型的にはＩＶＴは、プロモーター、リボヌクレオチド三リン酸のプール、ＤＴＴとマグネシウムイオンとを含み得るバッファー系、および適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ）、ＤＮＡｓｅ Ｉ、ピロホスファターゼ、および／またはＲＮＡｓｅ阻害剤を含有する、直鎖状または環状の鋳型ＤＮＡを用いて行われる。厳密な条件は、具体的な応用に応じて変わる。

【0140】

一部の実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡの調製のために、鋳型ＤＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写される。好適な鋳型ＤＮＡは、典型的には、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のためのプロモーター、例えば、Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６プロモーター、続いて、所望の抗体をコードする（例えば、重鎖または軽鎖をコードする）ｍＲＮＡについての所望のヌクレオチド配列、および終結シグナルを有する。

【0141】

標準的な方法を使用して、所望の抗体をコードする（例えば、重鎖または軽鎖をコードする）ｍＲＮＡ配列を決定し、鋳型ＤＮＡに組み込むことができる。例えば、所望のアミノ酸配列（例えば、所望の重鎖または軽鎖配列）から出発して、仮想逆翻訳が縮重遺伝子コードに基づいて行われる。次いで、最適化アルゴリズムを好適なコドンの選択に使用することができる。典型的には、Ｇ／Ｃ含有量を、一方ではできる限り高いＧ／Ｃ含有量を達成するように、他方ではコドン使用頻度に従ってｔＲＮＡの頻度をできる限りよく考慮して、最適化することができる。最適化されたＲＮＡ配列を確立し、例えば適切な表示デバイスを活用して、表示し、元の（野生型）配列と比較することができる。二次構造を解析して、安定化および不安定化特性または、それぞれ、ＲＮＡの領域を算出することもできる。

【0142】

ｍＲＮＡを未改変または改変ｍＲＮＡとして合成することができる。典型的には、ｍＲＮＡは、安定性を向上させるように改変される。ｍＲＮＡの改変は、例えば、ＲＮＡのヌクレオチドの改変を含み得る。したがって、改変ｍＲＮＡは、例えば、骨格改変、糖改変または塩基改変を含み得る。一部の実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）を天然に存在するヌクレオチドおよび／またはヌクレオチド類似体（改変ヌクレオチド）から合成することができ、天然に存在するヌクレオチドおよび／またはヌクレオチド類似体（改変ヌクレオチド）には、プリン（アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ））またはピリミジン（チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル））、ならびに改変ヌクレオチドとして、プリンおよびピリミジンの類似体または誘導体、例えば、１－メチル－アデニン、２－メチル－アデニン、２－メチルチオ－Ｎ－６－イソペンテニル－アデニン、Ｎ６－メチル－アデニン、Ｎ６－イソペンテニル－アデニン、２－チオ－シトシン、３－メチル－シトシン、４－アセチル－シトシン、５－メチル－シトシン、２，６－ジアミノプリン、１－メチル－グアニン、２－メチル－グアニン、２，２－ジメチル－グアニン、７－メチル－グアニン、イノシン、１－メチル－イノシン、シュードウラシル（５－ウラシル）、ジヒドロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、４－チオ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウラシル、５－（カルボキシヒドロキシメチル）－ウラシル、５－フルオロ－ウラシル、５－ブロモ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウラシル、５－メチル－２－チオ－ウラシル、５－メチル－ウラシル、Ｎ－ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、５－メチルアミノメチル－ウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオ－ウラシル、５’－メトキシカルボニルメチル－ウラシル、５－メトキシ－ウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、１－メチル－シュードウラシル、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、１３－Ｄ－マンノシル－キューオシン、ワイブトキソシン、ならびにホスホロアミデート、ホスホロチオエート、ペプチドヌクレオチド、メチルホスホネート、７－デアザグアノシン、５－メチルシトシンおよびイノシンなどが含まれるが、これらに限定されない。このような類似体の調製は、当業者には、例えば、米国特許第４，３７３，０７１号、同第４，４０１，７９６号、同第４，４１５，７３２号、同第４，４５８，０６６号、同第４，５００，７０７号、同第４，６６８，７７７号、同第４，９７３，６７９号、同第５，０４７，５２４号、同第５，１３２，４１８号、同第５，１５３，３１９号、同第５，２６２，５３０号および同第５，７００，６４２号から公知であり、これらの開示は、その全範囲が参照によりここに含まれる。

【0143】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、ＲＮＡ骨格改変を含有し得る。典型的には、骨格改変は、ＲＮＡに含有されるヌクレオチドの骨格のリン酸が化学的に改変される、改変である。例示的な骨格改変は、典型的には、メチルホスホン酸基、メチルホスホロアミド酸基、ホスホロアミド酸基、ホスホロチオ酸（例えば、シチジン５’－Ｏ－（１－チオリン酸））基、ボラノリン酸基、正荷電グアニジニウム基などからなる群からの改変を含むがこれらに限定されず、これは、ホスホジエステル結合が他のアニオン性基、カチオン性基または中性基により置き換えられることを意味する。

【0144】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、糖改変を含有し得る。典型的な糖改変は、それが含有するヌクレオチドの糖の化学的改変であり、２’－デオキシ－２’－フルオロ－オリゴリボヌクレオチド（２’－フルオロ－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２’－フルオロ－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）、２’－デオキシ－２’－デアミン－オリゴリボヌクレオチド（２’－アミノ－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２’－アミノ－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）、２’－Ｏ－アルキルオリゴリボヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－Ｃ－アルキルオリゴリボヌクレオチド（２’－Ｏ－メチルシチジン５’－三リン酸、２’－メチルウリジン５’－三リン酸）、２’－Ｃ－アルキルオリゴリボヌクレオチド、およびこれらの異性体（２’－アラシチジン５’－三リン酸、２’－アラウリジン５’－三リン酸）、またはアジド三リン酸（２’－アジド－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２’－アジド－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）からなる群から選択される糖改変を含むが、これらに限定されない。

【0145】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、ヌクレオチドの塩基の改変（塩基改変）を含有し得る。塩基改変を含有する改変ヌクレオチドは、塩基改変ヌクレオチドとも呼ばれる。そのような塩基改変ヌクレオチドの例としては、２－アミノ－６－クロロプリンリボシド５’－三リン酸、２－アミノアデノシン５’－三リン酸、２－チオシチジン５’－三リン酸、２－チオウリジン５’－三リン酸、４－チオウリジン５’－三リン酸、５－アミノアリルシチジン５’－三リン酸、５－アミノアリルウリジン５’－三リン酸、５－ブロモシチジン５’－三リン酸、５－ブロモウリジン５’－三リン酸、５－ヨードシチジン５’－三リン酸、５－ヨードウリジン５’－三リン酸、５－メチルシチジン５’－三リン酸、５－メチルウリジン５’－三リン酸、６－アザシチジン５’－三リン酸、６－アザウリジン５’－三リン酸、６－クロロプリンリボシド５’－三リン酸、７－デアザアデノシン５’－三リン酸、７－デアザグアノシン５’－三リン酸、８－アザアデノシン５’－三リン酸、８－アジドアデノシン５’－三リン酸、ベンゾイミダゾールリボシド５’－三リン酸、Ｎ１－メチルアデノシン５’－三リン酸、Ｎ１－メチルグアノシン５’－三リン酸、Ｎ６－メチルアデノシン５’－三リン酸、Ｏ６－メチルグアノシン５’－三リン酸、シュードウリジン５’－三リン酸、ピューロマイシン５’－三リン酸またはキサントシン５’－三リン酸が挙げられるが、これらに限定されない。

【0146】

典型的には、ｍＲＮＡ合成は、Ｎ末端（５’）側終端への「キャップ」、およびＣ末端（３’）側終端への「尾部」の付加を含む。キャップの存在は、大部分の真核細胞に見られるヌクレアーゼに対する耐性を持たせる上で重要である。「尾部」の存在は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼ分解から保護するのに役立つ。

【0147】

それ故、一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、５’キャップ構造を含む。５’キャップは、典型的には次のように付加される：先ず、ＲＮＡ末端ホスファターゼが、５’ヌクレオチドから末端リン酸基の１つを除去し、２つの末端リン酸を残す；次いで、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）がグアニリルトランスフェラーゼによって末端リン酸に付加され、その結果、５’５’５三リン酸結合が生じる；次いで、グアニンの７－窒素が、メチルトランスフェラーゼによってメチル化される。キャップ構造の例としては、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’（Ａ，Ｇ（５’）ｐｐｐ（５）ＡおよびＧ（５）ｐｐｐ（５’）Ｇが挙げられるが、これらに限定されない。

【0148】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、３’ポリ（Ａ）尾部構造を含む。ｍＲＮＡの３’末端のポリＡ尾部は、典型的には、約１０～３００アデノシンヌクレオチド（例えば、約１０～２００アデノシンヌクレオチド、約１０～１７５アデノシンヌクレオチド、約１０～１５０アデノシンヌクレオチド、約１０～１２５アデノシンヌクレオチド、１０～１００アデノシンヌクレオチド、約１０～７５アデノシンヌクレオチド、約２０～７０アデノシンヌクレオチド、または約２０～６０アデノシンヌクレオチド）を含む。一部の実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、３’ポリ（Ｃ）尾部構造を含む。ｍＲＮＡの３’末端の好適なポリＣ尾部は、典型的には、約１０～２００シトシンヌクレオチド（例えば、約１０～１５０シトシンヌクレオチド、約１０～１００シトシンヌクレオチド、約２０～７０シトシンヌクレオチド、約２０～６０シトシンヌクレオチド、または約１０～４０シトシンヌクレオチド）を含む。ポリＣ尾部は、ポリＡ尾部に付加され得るか、またはポリＡ尾部を置換し得る。

【0149】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、５’および／または３’非翻訳領域を含む。一部の実施形態では、５’非翻訳領域は、ｍＲＮＡの安定性または翻訳に影響を与える１つまたは複数のエレメント、例えば、鉄応答エレメントを含む。一部の実施形態では、５’非翻訳領域は、長さ約５０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドの間（例えば、長さ約５０ヌクレオチド～４００ヌクレオチドの間、長さ約５０ヌクレオチド～３００ヌクレオチドの間、長さ約５０ヌクレオチド～２００ヌクレオチドの間、または長さ約５０ヌクレオチド～１００ヌクレオチドの間）であり得る。

【0150】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）の５’領域は、本明細書に記載されるものなどの、シグナルペプチドをコードする配列を含む。特定の実施形態では、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）に由来するシグナルペプチドが５’領域に組み込まれる。典型的には、シグナルペプチドをコードする配列は、Ｎ末端の重鎖または軽鎖をコードする配列に直接または間接的に連結される。

【0151】

本技術を使用して、当技術分野で公知の任意の抗体、および標準的な方法を使用して所望の抗原に対して産生され得る抗体を、送達することができる。本発明を使用して、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体混合物もしくはカクテル、ヒトもしくはヒト化抗体、キメラ抗体、または二重特異性抗体を送達することができる。

【0152】

抗体を作製する方法は、当技術分野において周知であり、本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域と定常領域の両方が、完全にヒトのものである。完全ヒト抗体は、当技術分野において記載されている技法を使用して、および本明細書に記載されているように作製することができる。例えば、特定の抗原に対する完全ヒト抗体を、抗原投与に応答してそのような抗体を産生するように改変されているが内在性遺伝子座が無効にされているトランスジェニック動物に抗原を投与することによって、調製することができる。そのような抗体を作製するために使用され得る例示的な技法は、米国特許第６，１５０，５８４号、同第６，４５８，５９２号、同第６，４２０，１４０号に記載されており、これらの参考特許文献は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
処置および使用

【0153】

本明細書に記載されるように、本開示の抗体、バリアント、または誘導体を、ある特定の処置および診断方法において使用することができる。

【0154】

本開示は、本開示の抗体、または断片を、本明細書に記載される障害または状態の１つまたは複数を処置するために患者、例えば、動物、哺乳動物およびヒトに投与することを含む、抗体に基づく治療に、さらに関する。本開示の治療化合物は、本開示の抗体（本明細書に記載のそのバリアントおよび誘導体を含む）、および本開示の抗体（本明細書に記載のそのバリアントおよび誘導体を含む）をコードする核酸またはポリヌクレオチドを含むが、これらに限定されない。

【0155】

本開示の抗体を使用してがんを処置または阻害することもできる。上記のとおり、５Ｔ４は、正常な成体組織にはほとんど発現されないが、胎盤に、ならびに最も一般的な腫瘍、典型的には腎臓、乳房、結腸、前立腺および卵巣の癌の８０％より多くに、高レベルで存在する。

【0156】

したがって、一部の実施形態では、それを必要とする患者におけるがんを処置するための方法が提供される。方法は、一実施形態では、本開示の抗体、または断片、または抗体－薬物コンジュゲートの有効量を患者に投与するするステップを必然的に伴う。一部の実施形態では、患者におけるがん細胞（例えば、間質細胞）の少なくとも１つは、５Ｔ４を過剰発現する。

【0157】

細胞療法、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法も、本開示で提供される。本開示の抗５Ｔ４抗体を含む（または代替的に、本開示の抗５Ｔ４抗体を発現するように操作された）ＣＡＲをコードするまたはそれと接触させるベクターによって形質導入される、好適な細胞を使用することができる。したがって、そのような接触または操作によって、細胞を、処置を必要とするがん患者に導入することができる。がん患者は、本明細書で開示されるようなタイプのいずれかのがんを有し得る。細胞（例えば、Ｔ細胞）は、例えば、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組合せであり得るが、それらに限定されない。

【0158】

一部の実施形態では、細胞は、がん患者彼または彼女自身から単離された。一部の実施形態では、細胞は、ドナーによりまたは細胞バンクから提供された。細胞が、がん患者から単離された場合、望ましくない免疫反応を最小限に抑えることができる。

【0159】

がんの非限定的な例としては、膀胱がん、乳がん、大腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんが挙げられる。一部の実施形態では、がんは、胃がん、膵臓がん、食道がん、卵巣がんおよび肺がんのうちの１つまたは複数である。

【0160】

本開示の抗体もしくはバリアント、またはそれらの誘導体によって処置、予防、診断および／または予後判定され得る、細胞生存期間の増加に関連するさらなる疾患または状態としては、悪性病変および関連障害、例えば、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、および赤白血病を含む））および慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）を含む）、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖病、および固形腫瘍の、進行および／または転移が挙げられるがこれらに限定されず、固形腫瘍には、肉腫および癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞種、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されない。

【0161】

いずれの特定の患者についても具体的な投薬量および処置レジメンは、使用される特定の抗体、そのバリアントまたは誘導体、患者の年齢、体重、総体的な健康、性別および食事、ならびに投与の回数、排泄率、薬物の組合せ、ならびに処置される特定の疾患の重症度をはじめとする、様々な因子に依存することになる。医療介護者によるそのような因子の判断は、当技術分野における通常技能の範囲内である。量は、処置すべき個々の患者、投与経路、製剤のタイプ、使用される化合物の特徴、疾患の重症度、および所望される効果にも依存することになる。使用される量を当技術分野において周知の薬理学および薬物動態の原則によって決定することができる。

【0162】

抗体または断片の投与方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路を含むが、これらに限定されない。抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、任意の適便な経路により、例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）からの吸収により、投与することができ、他の生物活性薬剤とともに投与することができる。したがって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含有する医薬組成物を、経口投与、直腸投与、非経口投与、大槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）投与、膣内投与、腹腔内投与、局所的に（粉末、軟膏、滴剤もしくは経皮パッチとして）投与、頬側投与、または口腔噴霧剤もしくは点鼻薬として投与することができる。

【0163】

用語「非経口」は、本明細書で使用される場合、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内注射および注入を含む、投与方法を指す。

【0164】

投与は、全身または局所のものであり得る。加えて、本開示の抗体を、脳室内および髄腔内注射を含む任意の好適な経路により、中枢神経系に導入することが望ましいことがあり、脳室内注射を、例えば、オマヤ貯留槽などの貯留槽に取り付けられた、脳室内カテーテルによって容易にすることができる。経肺投与も、例えば、吸入器またはネブライザー、およびエアロゾル化剤を含有する製剤を使用することにより、利用することができる。

【0165】

本開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、処置を必要とするエリアに局所投与することが望ましいことがあり、これは、例として、限定としてではなく、外科手術中の局所注入、外科手術後の創傷包帯法の、例えばそれと併せての、局所的適用により、注射により、カテーテルによって、坐薬によって、または留置剤によって達成することができ、前記留置剤は、膜、例えばシラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜、または繊維を含む、多孔質、無孔質またはゼラチン質材料のものである。好ましくは、本開示の、抗体を含む、タンパク質を投与する場合、タンパク質が吸収されない材料を使用するように心掛けなければならない。

【0166】

炎症性、免疫または悪性疾患、障害または状態の処置、阻害および予防において有効であろう、本開示の抗体または断片の量を、標準的な臨床技法により決定することができる。加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを、最適な投薬量範囲の同定を助けるために、必要に応じて利用することができる。製剤に利用されることになる正確な用量は、投与経路、および疾患、障害または状態の重篤性にも依存することになり、実施者の判断および各患者の状況に応じて決定されるべきである。有効用量をｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導出された用量応答曲線から外挿することができる。

【0167】

一般的な提案として、本開示の抗体または断片の患者に投与される投薬量は、典型的に、患者の体重のｋｇ当たり０．００１ｍｇ～１００ｍｇ、患者の体重のｋｇ当たり０．０１ｍｇ～２０ｍｇの間、または患者の体重のｋｇ当たり０．５ｍｇ～１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドへの免疫応答に起因してヒトの体内で他の動物種からの抗体より長い半減期を有する。したがって、ヒト抗体のより少ない投薬量、およびより低頻度の投与が、多くの場合、可能である。さらに、本開示の抗体の投薬量および投薬頻度を、例えば脂質化などの改変により抗体の取込みおよび組織透過性（例えば、脳への）を増強することによって、低減させることができる。

【0168】

追加の実施形態では、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物とともに投与され得るサイトカインとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αが挙げられるが、これらに限定されない。

【0169】

追加の実施形態では、本開示の組成物は、例えば放射線療法などの、他の治療または予防レジメンと組み合わせて投与される。
組成物

【0170】

本開示は、医薬組成物も提供する。そのような組成物は、抗体、または断片、または抗体－薬物コンジュゲートの有効量と、許容される担体とを含む。一部の実施形態では、組成物は、第２の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。

【0171】

具体的な実施形態では、用語「薬学的に許容される」とは、動物における、さらに特にヒトにおける使用について、連邦もしくは州政府の監督機関により承認された、または米国薬局方もしくは他の一般に認知されている薬局方に収載されている、という意味である。さらに、「薬学的に許容される担体」は、一般に、任意のタイプの、非毒性固体、半固体もしくは液体フィラー、希釈剤、カプセル化材または製剤助剤であろう。

【0172】

用語「担体」は、それを用いて治療薬が投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような医薬担体は、滅菌液、例えば、水および油であり得、この油には、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などが含まれる。水は、医薬組成物が静脈内投与されるときに好ましい担体である。生理食塩水、ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液も、液体担体として、特に、注射可能溶液に、利用することができる。好適な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、所望される場合には、少量の湿潤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩も含有し得る。抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；および浸透張力の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースも、想定される。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態をとり得る。旧来の結合剤および担体、例えば、トリグリセリドを用いて、組成物を坐薬として製剤化することができる。経口製剤は、標準的な担体、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含み得る。好適な医薬品担体の例は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。そのような組成物は、好ましくは精製された形態での、抗原結合ポリペプチドの治療有効量を、患者への適正投与のための形態を提供するために好適な量の担体とともに、含有することになる。製剤は、投与方法に適していなければならない。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与用バイアルに封入され得る。

【0173】

ある実施形態では、組成物は、人間への静脈内投与に適応する医薬組成物として常套的手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要に応じ、組成物は、可溶化剤、および注射部位の痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔薬も含み得る。一般に、これらの成分は、別々にまたは混合されて単位剤形で、のどちらかで、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたはサッシェなどの密閉シールされている容器の中の乾いた凍結粉末または無水濃縮物として供給される。組成物を注入により投与すべき場合、それは、医薬品グレードの滅菌水または食塩水が入っている注入ボトルを用いて分注され得る。組成物が注射により投与される場合、投与の前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水または食塩水のアンプルが提供され得る。

【0174】

本開示の化合物を中性または塩形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどのアニオンとで形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどのカチオンとで形成されるものを含む。

【実施例】

【0175】

（実施例１）
ヒト５Ｔ４に対するマウスモノクローナル抗体の生成
この実施例は、ハイブリドーマ技術を使用する抗ヒト５Ｔ４マウスモノクローナル抗体の生成を説明する。

【0176】

抗原：ヒト５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質およびＣＨＯ－Ｋ１発現ヒト５Ｔ４。

【0177】

免疫化：ヒト５Ｔ４を標的とするマウスモノクローナル抗体を生成するために、ＳＪＬマウス、Ｂａｌｂ／ｃマウスおよびＣ５７ＢＬ／６マウスを、先ず、５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質によって免疫した。その後、免疫化マウスに５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質またはＣＨＯ－Ｋ１発現ヒト５Ｔ４によって追加免疫した。５Ｔ４タンパク質に結合した抗体を産生するマウスを選択するために、免疫化マウスの血清をＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳによる抗体力価評価に付した。手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＥＬＩＳＡコーティング用緩衝液中の０．５または１μｇ／ｍＬのヒト５Ｔ４タンパク質またはｃｙｎｏ ５Ｔ４タンパク質、１００μＬ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、１５０μＬ／ウェルの１％ＢＳＡでブロックした。免疫化マウスからの血清の希釈物を各ウェルに添加し、１時間、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートされた抗マウスＩｇＧ抗体とともに、３０分間、３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で現像し、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。免疫応答も、ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞系に対する血清ＦＡＣＳにより試験し、ＣＨＯＫ１親細胞系が陰性対照としての役割を果たした。得られたマウスを、融合に使用した。ハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。

【0178】

細胞融合：融合を電機融合により行った。融合細胞を、融合ごとに５０の９６ウェルプレートに蒔いた。

【0179】

スクリーニング：ハイブリドーマ上清を、組換えヒト（ｒｈ）５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質および組換えｃｙｎｏ ５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質に対してＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。次いで、一次スクリーニングからの陽性上清に、ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞系に対するＦＡＣＳ結合およびＥＬＩＳＡによるタンパク質結合による確認スクリーニングを行った。

【0180】

サブクローニングおよびスクリーニング：各融合からの陽性初代クローンを、サブクローンが単一の親細胞に確実に由来するように限界希釈によってサブクローニングした。サブクローニングを初代クローンと同じアプローチでスクリーニングし、陽性クローンの培養上清に、親和性ランク付けによる追加の確認スクリーニングを行った。

【0181】

ハイブリドーマクローン１４Ｇ１２、３９３Ｅ９、１１３Ｈ５、１５９Ｄ５、２４Ｆ１０、４９３Ｅ１０、２５７Ｆ１、３５３Ｈ１１、３６７Ｂ８、３８９Ｇ２、１０９Ｈ７、２８６Ｂ４、３７Ｇ６、２６７Ｂ５、４２５Ｇ１、４４９Ｈ９、４９Ｃ５、１１９Ｇ５、８５Ｂ１０および９５Ｆ１０をさらなる解析に選択した。これらのクローンの可変領域のアミノ酸配列を下の表１に列挙する。表１－１～１－２０には、このマウス抗体からの元のＣＤＲ配列に加えて、潜在的翻訳後改変（ＰＴＭ）が除去されているまたは親和性成熟しているバージョンも含まれる。

【表1】

【表1A】

【表1B】

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【表1-10】

【表1-11】

【表1-12】

【表1-13】

【表1-14】

【表1-15】

【表1-16】

【表1-17】

【表1-18】

【表1-19】

【表1-20】

【0182】

（実施例２）
ｍＡｂの結合親和性
組換え５Ｔ４タンパク質（ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグ）に対するこれらのクローンからのキメラｍＡｂの結合を、捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅで試験した。ｍＡｂを、プロテインＡチップを使用して捕捉した。ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグタンパク質の段階希釈物を、捕捉された抗体上に２～３分間、３０μｌ／分の流速で注入した。抗原を、３６０～１０００秒間、解離させた。全ての実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。

【0183】

下の表２の結果で示されるとおり、試験した抗体の大部分は、組換えヒト５Ｔ４タンパク質に対してナノモル濃度またはナノモル濃度未満の結合親和性を示した。

【表2】

【0184】

ＥＬＩＳＡ試験を行って、ヒトおよびカニクイザルへのキメラ抗体の結合をそれぞれ評価した。５Ｔ４を標的とするナプツモマブ（ＮｅｏＴＸ）の抗体部分（本開示ではナプツモマブと略す）を生成し、ベンチマークとして使用した。

【0185】

手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのヒトおよびカニクイザル５Ｔ４タンパク質、１００μｌ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。キメラ抗体の段階希釈物を各ウェルに添加し、１時間、ＲＴでインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートされたマウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体とともに、３０分間、ＲＴでインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。全ての５Ｔ４キメラｍＡｂがヒトおよびカニクイザル５Ｔ４に結合した（図１～２および表３）。ナプツモマブは、カニクイザル５Ｔ４に対して非常に弱い交差活性を示した。
（実施例３）
５Ｔ４抗原に対する結合活性
３．１ 異種間活性

【表3】

３．２ 競合ＥＬＳＡによるエピトープビニング

【0186】

競合ＥＬＩＳＡを行って、ヒト５Ｔ４に対する結合エピトープに基づいて試験５Ｔ４ ｍＡｂを分類した。

【0187】

手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の０．５μｇ／ｍｌのヒト５Ｔ４タンパク質、１００μｌ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。キメラ抗体の段階希釈物および０．２ｕｇ／ｍｌのビオチンコンジュゲート参照ｍＡｂを、各ウェルに添加し、１時間、ＲＴでインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ストレプトアビジン－ＨＲＰとともに１５分間、ＲＴでインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。参照ｍＡｂとの競合性能に従って、５Ｔ４ ｍＡｂを図３～８および表４に示すような４つのビン（ビンＡ～Ｄ）に分けた。

【表4】

３．３ ＦＡＣＳ試験

【0188】

細胞ベースの結合：ＦＡＣＳを使用して、ＣＨＯ－Ｋ１発現ヒト５Ｔ４（ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４）に対する全ての試験したキメラｍＡｂの結合活性を評価した。

【0189】

手短に述べると、ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞をＦＡＣＳ緩衝液により洗浄し、段階希釈した５Ｔ４キメラｍＡｂを有する各ウェルに、４℃で３０分にわたって分配した。ＦＡＣＳ緩衝液により洗浄した後、ＰＥヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を各ウェルに添加し、４℃で３０分間インキュベートした。試料をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図９に示すように、全ての試験した５Ｔ４キメラｍＡｂはＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞に結合し、異なるビンにおける抗体は、異なる結合活性を示した。

【0190】

（実施例４）
１４Ｇ１２のヒト化
１４Ｇ１２可変領域遺伝子を利用して、ヒト化ｍＡｂを作出した。このプロセスの第１ステップでは、１４Ｇ１２のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列を、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体として最もよくマッチするヒト生殖細胞系列Ｉｇ遺伝子配列を見つけた。

【0191】

ＣＤＲグラフト化に使用したヒト生殖細胞系列の配列、および得られたヒト化配列を、表５に収載する。

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【表5-5】

【表5-5A】

【表5-6】

【0192】

（実施例５）
ヒト５Ｔ４抗原に対する１４Ｇ１２ヒト化抗体の結合活性
この実施例は、ヒト５Ｔ４タンパク質に対する１４Ｇ１２ヒト化抗体の結合活性を試験した。
５．１ ５Ｔ４への１４Ｇ１２ヒト化抗体のＥＬＩＳＡ結合

【0193】

ヒト５Ｔ４に対する１４Ｇ１２ヒト化抗体の結合活性を評価するために、１４Ｇ１２キメラ抗体を１４Ｇ１２ヒト化ｍＡｂとともにＥＬＩＳＡ試験に付した。

【0194】

手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのヒト５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質、１００μｌ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。抗体の段階希釈物を各ウェルに添加し、１時間、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰとともに３０分間、３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。図１０および表６に示すように、ヒト化抗体の大部分は、ヒト５Ｔ４に高い活性で結合した。

【表6-1】

【表6-2】

５．２ ５Ｔ４への１４Ｇ１２ヒト化抗体の細胞ベースの結合

【0195】

ヒト５Ｔ４に対する１４Ｇ１２ヒト化抗体の細胞ベースの結合特性を評価するために、試験した抗体をＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞においてＦＡＣＳにより解析した。各ウェルにおいて総数１×１０^５のＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中、段階希釈した抗体とともに３０分間、４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液による洗浄後、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間、インキュベートした。洗浄後、ＰＥのＭＦＩをＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図１１に示すように、列挙されている１４Ｇ１２ヒト化抗体の一部は、１４Ｇ１２キメラ抗体と同等の結合能を示した。
５．３ ５Ｔ４に対する１４Ｇ１２ヒト化抗体のタンパク質親和性ランク付け

【0196】

組換え５Ｔ４タンパク質（ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグ）への１４Ｇ１２ヒト化抗体の結合を、捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅで試験した。ｍＡｂを、プロテインＡチップを使用して捕捉した。ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグタンパク質の段階希釈物を、捕捉された抗体上に１２０～１８０秒間、３０μｌ／分の流速で注入した。抗原を、３６０～１０００秒間、解離させた。全ての実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。結果を下の表７に示す。

【表7】

【0197】

（実施例６）
３９３Ｅ９抗体のヒト化
３９３Ｅ９可変領域遺伝子を利用して、ヒト化ｍＡｂを作出した。このプロセスの第１ステップでは、３９３Ｅ９のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列を、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体として最もよくマッチするヒト生殖細胞系列Ｉｇ遺伝子配列を見つけた。

【0198】

ＣＤＲグラフト化に使用したヒト生殖細胞系列の配列、および得られたヒト化配列を、表８に収載する。

【表8-1】

【表8-2】

【0199】

（実施例７）
ヒト５Ｔ４抗原に対する３９３Ｅ９ヒト化抗体の結合活性
この実施例は、ヒト５Ｔ４タンパク質に対する３９３Ｅ９ヒト化抗体の結合活性を試験した。
７．１ ５Ｔ４への３９３Ｅ９ヒト化抗体のＥＬＩＳＡ結合

【0200】

ヒト５Ｔ４に対する３９３Ｅ９ヒト化抗体の結合活性を評価するために、３９３Ｅ９キメラ抗体（３９３Ｅ９－Ｃ）を３９３Ｅ９ヒト化ｍＡｂとともにＥＬＩＳＡ試験に付した。

【0201】

手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのヒト５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質、１００μｌ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。２０ｎＭから出発する抗体の４倍希釈物を各ウェルに添加し、１時間、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰとともに３０分間、３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。図１２および表９に示すように、ヒト化抗体の大部分は、ヒト５Ｔ４に高い活性で結合した。

【表9-1】

【表9-2】

７．２ ５Ｔ４への３９３Ｅ９ヒト化抗体の細胞ベースの結合

【0202】

ヒト５Ｔ４に対する３９３Ｅ９ヒト化抗体の細胞ベースの結合特性を評価するために、試験した抗体をＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞においてＦＡＣＳにより解析した。各ウェルにおいて総数１×１０^５のＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中、５０ｎＭから出発して３倍段階希釈した抗体とともに３０分間、４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液による洗浄後、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間、インキュベートした。洗浄後、ＰＥのＭＦＩをＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図１３に示すように、列挙されている３９３Ｅ９ヒト化抗体の一部は、３９３Ｅ９キメラ抗体と同等の結合能を示した。
７．３ ５Ｔ４に対する３９３Ｅ９ヒト化抗体のタンパク質親和性ランク付け

【0203】

組換え５Ｔ４タンパク質（ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグ）への３９３Ｅ９ヒト化抗体の結合を、捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅで試験した。ｍＡｂを、プロテインＡチップを使用して捕捉した。ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグタンパク質の段階希釈物を、捕捉された抗体上に３分間、３０μｌ／分の流速で注入した。抗原を、２８０～８００秒間、解離させた。全ての実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。結果を下の表１０に示す。

【表10】

【0204】

（実施例８）
１５９Ｄ５抗体のヒト化
１５９Ｄ５可変領域遺伝子を利用して、ヒト化ｍＡｂを作出した。このプロセスの第１ステップでは、１５９Ｄ５のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列を、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体として最もよくマッチするヒト生殖細胞系列Ｉｇ遺伝子配列を見つけた。

【0205】

ＣＤＲグラフト化に使用したヒト生殖細胞系列の配列、および得られたヒト化配列を、表１１に収載する。

【表11-1】

【表11-2】

【0206】

（実施例９）
ヒト５Ｔ４抗原に対する１５９Ｄ５ヒト化抗体の結合活性
この実施例は、ヒト５Ｔ４タンパク質に対する１５９Ｄ５ヒト化抗体の結合活性を試験した。
９．１ ５Ｔ４への１５９Ｄ５ヒト化抗体のＥＬＩＳＡ結合

【0207】

ヒト５Ｔ４に対する１５９Ｄ５ヒト化抗体の結合活性を評価するために、１５９Ｄ５キメラ抗体を１５９Ｄ５ヒト化ｍＡｂとともにＥＬＩＳＡ試験に付した。

【0208】

手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのヒト５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質、１００μｌ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。抗体の段階希釈物を各ウェルに添加し、１時間、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰとともに３０分間、３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。図１４および表１２に示すように、ヒト化抗体の大部分は、ヒト５Ｔ４に高い活性で結合した。

【表12】

９．２ ５Ｔ４への１５９Ｄ５ヒト化抗体の細胞ベースの結合

【0209】

ヒト５Ｔ４に対する１５９Ｄ５ヒト化抗体の細胞ベースの結合特性を評価するために、試験した抗体をＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞においてＦＡＣＳにより解析した。各ウェルにおいて総数１×１０^５のＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中、段階希釈した抗体とともに３０分間、４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液による洗浄後、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間、インキュベートした。洗浄後、ＰＥのＭＦＩをＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図１５に示すように、列挙されている１５９Ｄ５ヒト化抗体の大部分は、１５９Ｄ５キメラ抗体と同等の結合能を示した。
９．３ ５Ｔ４に対する１５９Ｄ５ヒト化抗体のタンパク質親和性ランク付け

【0210】

組換え５Ｔ４タンパク質（ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグ）への１５９Ｄ５ヒト化抗体の結合を、捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅで試験した。ｍＡｂを、プロテインＡチップを使用して捕捉した。ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグタンパク質の５０ｎＭを、捕捉された抗体上に３分間、３０μｌ／分の流速で注入した。抗原を、６００秒間、解離させた。全ての実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。結果を下の表１３に示す。

【表13】

【0211】

（実施例１０）
２８６Ｂ４抗体のヒト化
２８６Ｂ４可変領域遺伝子を利用して、ヒト化ｍＡｂを作出した。このプロセスの第１ステップでは、２８６Ｂ４のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列を、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体として最もよくマッチするヒト生殖細胞系列Ｉｇ遺伝子配列を見つけた。

【0212】

２８６Ｂ４の重鎖については、ＶＨ４－２８／ＪＨ６をヒト化骨格として選択した。２８６Ｂ４の軽鎖についてはＶＬ－Ｏ１８／ＪＫ４が最良適合生殖細胞系列である。次いで、ヒト化２８６Ｂ４ ＣＤＲグラフト抗体を設計し、ＣＤＲＬ１、Ｌ２およびＬ３をＶＬ－Ｏ１８－ＪＫ４のフレームワーク配列にグラフトし、ＣＤＲＨ１、Ｈ２およびＨ３をＶＨ４－２８－ＪＨ６のフレームワーク配列にグラフトした。次いで、３Ｄモデルを生成して、抗体結合および立体構造に不可欠である、元のマウスＦＲ領域配列内のアミノ酸を決定した。２８６Ｂ４ ＣＤＲグラフト抗体配列に基づいて、４本の追加のヒト化重鎖および５本の追加の軽鎖を作出した。

【0213】

ＣＤＲグラフト化に使用したヒト生殖細胞系列の配列、および得られたヒト化配列を、表１４に収載する。

【表14-1】

【表14-2】

【0214】

（実施例１１）
ヒト５Ｔ４抗原に対する２８６Ｂ４ヒト化抗体の結合活性
この実施例は、ヒト５Ｔ４タンパク質に対する２８６Ｂ４ヒト化抗体の結合活性を試験した。
１１．１ ５Ｔ４へのＥＬＩＳＡ結合

【0215】

クローンの結合活性を評価するために、２８６Ｂ４キメラ抗体を２８６Ｂ４ヒト化ｍＡｂとともにＥＬＩＳＡ試験に付した。

【0216】

手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのヒト５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質、１００μｌ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。２０ｎＭから出発する試験抗体の４倍希釈物を各ウェルに添加し、１時間、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰとともに３０分間、３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。図１６および表１５に示すように、ヒト化クローンの大部分は、ヒト５Ｔ４に高い効力で結合した。

【表15-1】

【表15-2】

１１．２ ５Ｔ４への細胞ベースの結合

【0217】

ヒト５Ｔ４に対する２８６Ｂ４ヒト化抗体の細胞ベースの結合特性を評価するために、試験した抗体をＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４（ヒト５Ｔ４高発現細胞系）またはＭＣＦ－７細胞（ヒト５Ｔ４低発現細胞系）へのそれらの結合についてＦＡＣＳにより解析した。各ウェルにおいて総数１×１０^５のＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４またはＭＣＦ７細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中、５０ｎＭから出発して４倍または３倍段階希釈した抗体とともに３０分間、４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液による洗浄後、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間、インキュベートした。洗浄後、ＰＥのＭＦＩをＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図１７Ａ（ＣＨＯ－ｈｕ５Ｔ４細胞）および図１７Ｂ（ＭＣＦ－７細胞）に示すように、列挙されている２８６Ｂ４－３／８／１３／１８／５／１０／１５ヒト化抗体の一部は、２８６Ｂ４キメラ抗体と同等の結合能を示した。
１１．３ ヒト５Ｔ４に対するタンパク質親和性ランク付け

【0218】

組換え５Ｔ４タンパク質（ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグ）への２８６Ｂ４ヒト化抗体の結合を、捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅで試験した。ｍＡｂを、プロテインＡチップを使用して捕捉した。ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグタンパク質の段階希釈物を、捕捉された抗体上に３分間、３０μｌ／分の流速で注入した。抗原を、２８０～８００秒間、解離させた。全ての実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。結果を下の表１６に示す。

【表16】

【0219】

（実施例１２）
３９３Ｅ９、１５９Ｄ５および２８６Ｂ４のＰＴＭ除去の確認
１２．１ ３９３Ｅ９のＰＴＭ除去の確認
３９３Ｅ９ ＶＨ ＣＤＲ２は、ＮＧおよびＮＳ残基（Ｋａｂａｔ番号付け）を含み、これらの残基は、翻訳後改変（ＰＴＭ）のリスクがあり、将来の製造にとって課題となる。それ故、この実施例は、ＰＴＭを防止するためにＶＨ上のＮＧをＮＡにおよびＮＳをＹＳに変異させた。潜在的なＰＴＭ除去部位の配列を表１７に列挙する。

【表17-1】

【表17-2】

【0220】

表面５Ｔ４に対するＰＴＭ除去抗体の結合特性を評価するために、Ｈｕ３９３Ｅ９－４５－Ｐ２、Ｈｕ３９３Ｅ９－５３－Ｐ２、Ｈｕ３９３Ｅ９－６２－Ｐ２またはキメラ３９３Ｅ９の抗５Ｔ４部分を有する三重特異性抗体を、ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞へのそれらの結合についてＦＡＣＳにより解析した。各ウェルにおいて総数１×１０^５の細胞を、１００ｎＭから出発して４倍段階希釈した抗体とともに３０分間、４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液による洗浄後、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間、インキュベートした。ＰＥのＭＦＩをＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図１８Ａに示すように、Ｈｕ３９３Ｅ９－４５－Ｐ２またはＨｕ３９３Ｅ９－６２－Ｐ２の抗５Ｔ４部分を有する三重特異性抗体は、５Ｔ４発現細胞に対してキメラ３９３Ｅ９を有するものより増強された結合能を示した。試験した三重特異性抗体間の唯一の違いは、抗５Ｔ４部分であった。
１２．２ １５９Ｄ５のＰＴＭ除去の確認

【0221】

１５９Ｄ５ ＶＨ ＣＤＲ２は、ＤＳ残基（Ｋａｂａｔ番号付け）を含み、この残基は、翻訳後改変（ＰＴＭ）のリスクがあり、将来の製造にとって課題となる。それ故、この実施例は、ＰＴＭを防止するためにＶＨ上のＤＳをＤＡに変異させた。潜在的なＰＴＭ除去部位の配列を表１８に列挙する。図１４Ｂ、図１５および表１３に示すように、１５９Ｄ５－Ｐ１のＰＴＭ除去抗体は、１５９Ｄ５－Ｃの１５９Ｄ５キメラ抗体と同等の結合能力を示した。

【表18-1】

【表18-2】

【表18-3】

１２．３ ２８６Ｂ４のＰＴＭ除去の確認

【0222】

２８６Ｂ４ ＶＨ ＣＤＲ２は、ＤＧ残基（Ｋａｂａｔ番号付け）を含み、この残基は、翻訳後改変（ＰＴＭ）のリスクがあり、将来の製造にとって課題となる。それ故、この実施例は、ＰＴＭを防止するためにＶＨ上のＤＧをＤＡに変異させた。潜在的なＰＴＭ除去部位の配列を表１９に列挙する。

【表19-1】

【表19-2】

【0223】

表面５Ｔ４に対するＰＴＭ除去抗体の結合特性を評価するために、Ｈｕ２８６Ｂ４－３－Ｐ１、Ｈｕ２８６Ｂ４－５－Ｐ１、Ｈｕ２８６Ｂ４－８－Ｐ１、Ｈｕ２８６Ｂ４－１５－Ｐ１またはキメラ２８６Ｂ４の抗５Ｔ４部分を有する三重特異性抗体を、ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞へのそれらの結合についてＦＡＣＳにより解析した。各ウェルにおいて総数１×１０^５の細胞を、１００ｎＭから出発して４倍段階希釈した抗体とともに３０分間、４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液による洗浄後、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間、インキュベートした。ＰＥのＭＦＩをＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図１８Ｂに示すように、ＰＴＭ除去２８６Ｂ４断片を有する三重特異性抗体は、５Ｔ４発現細胞に対してキメラ２８６Ｂ４断片を有するものより増強された結合能を示した。試験した三重特異性抗体間の唯一の違いは、抗５Ｔ４部分であった。

【0224】

（実施例１３）
ヒト化抗体Ｈｕ１４Ｇ１２－２８の親和性成熟
Ｈｕ１４Ｇ１２－２８のヒト化抗体の親和性を増強するために、親和性成熟を行った。手短に述べると、Ｈｕ１４Ｇ１２－２８のＣＤＲ領域に単点または２点飽和変異を含有する４つのファージライブラリーを構築した。ＣＤＲに特有の変異を有する２つの候補を、固体または液体パニングを用いる１ラウンドのスクリーニングにより得た。これらの候補のＣＤＲをＨｕ１４Ｇ１２－２８フレームワークに移植して、さらなる結合および親和性検証のための抗体を生成した。

【0225】

フレームワークに移植された親和性成熟候補の可変領域のアミノ酸配列を下の表２０に列挙する。

【表20-1】

【表20-2】

【表20-3】

【表20-4】

１３．１ ５Ｔ４へのＥＬＩＳＡ結合

【0226】

ヒト５Ｔ４に対する親和性成熟抗体の結合活性を評価するために、Ｈｕ１４Ｇ１２－２８をＨｕ１４Ｇ１２－２８－８８＃およびＨｕ１４Ｇ１２－２８－１０８＃とともにＥＬＩＳＡ試験に付した。

【0227】

手短に述べると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の２μｇ／ｍｌのヒト５Ｔ４－Ｈｉｓタンパク質、３０μｌ／ウェルで、４℃で一晩、コーティングし、次いで、５％ＰＢＳ／ミルクでブロッキングした。抗体の段階希釈物を各ウェルに添加し、１時間、室温でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰとともに５０分間、室温でインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によりＯＤ ４５０ｎｍで解析した。図１９に示すように、親和性成熟抗体は、親Ｈｕ１４Ｇ１２－２８抗体より高い作用強度でヒト５Ｔ４に結合した。
１３．２ ５Ｔ４への細胞ベースの結合
［０００１］表面５Ｔ４に対する親和性成熟抗体の結合特性を評価するために、試験した抗体をＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４、ＨＥＫ２９３－ｈｕ５Ｔ４またはＭＣＦ－７細胞へのそれらの結合についてＦＡＣＳにより解析した。各ウェルにおいて総数１×１０^５の細胞を、１３３ｎＭまたは１００ｎＭから出発して４倍または５倍段階希釈した抗体とともに６０分間、４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液による洗浄後、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間、インキュベートした。ＰＥのＭＦＩをＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。図２０Ａ～Ｂ（ＣＨＯＫ１－ｈｕ５Ｔ４細胞）、図２０Ｃ～Ｄ（ＨＥＫ２９３－ｈｕ５Ｔ４細胞）および図２０Ｅ（ＭＣＦ－７細胞）に示すように、親和性成熟抗体は、５Ｔ４発現細胞に対して親Ｈｕ１４Ｇ１２－２８抗体より増強された結合能を示した。
１３．３ ５Ｔ４に対する結合親和性

【0228】

組換え５Ｔ４タンパク質（ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグ）に対する試験した抗体の結合親和性を、捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅで試験した。抗体を、プロテインＡチップを使用して捕捉した。ヒト５Ｔ４－ｈｉｓタグタンパク質の段階希釈物を、捕捉された抗体上に３分間、３０μｌ／分の流速で注入した。抗原を、３００秒間、解離させた。全ての実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。

【0229】

下の表２１の結果で示されるとおり、親和性成熟抗体Ｈｕ１４Ｇ１２－２８－８８＃およびＨｕ１４Ｇ１２－２８－１０８＃は、親Ｈｕ１４Ｇ１２－２８抗体と比較してヒト５Ｔ４タンパク質に対する結合親和性をそれぞれ９．４５倍および７．４１倍、有意に増加させた。このことから、これらの親和性成熟抗体は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）にとっておよび二重特異性抗体にとって理想的な抗５Ｔ４抗体となる。

【表21】

＊ ＊ ＊

【0230】

本開示は、記載した特定の実施形態によって範囲が限定されることはなく、これらの実施形態は、本開示の個々の態様の単一の実例として意図したものであり、機能的に等価であるあらゆる組成物または方法が本開示の範囲内である。本開示の主旨および範囲を逸脱することなく、本開示の方法および組成物に様々な改変および変形を加えることができることは、当業者には明らかであろう。したがって、本開示は、本開示の改変形態および変形形態を、それらが添付の請求項およびそれらの均等物の範囲内に入ることを条件に、包含する。

【0231】

本明細書で言及した全ての公表文献および特許出願は、個々の公表文献または特許出願各々が参照により組み込まれると具体的かつ個別に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【図10】

【図11-1】

【図11-2】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【配列表】

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【国際調査報告】