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特表2025-506272タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、その調製方法および使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-03-07
(54)【発明の名称】タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、その調製方法および使用
(51)【国際特許分類】
C12N 7/01 20060101AFI20250228BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20250228BHJP
C12N 15/44 20060101ALI20250228BHJP
A61P 31/16 20060101ALI20250228BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20250228BHJP
A61K 39/145 20060101ALI20250228BHJP
C07K 14/11 20060101ALN20250228BHJP
【ＦＩ】
C12N7/01 ZNA
C12N15/63 Z
C12N15/44
A61P31/16
A61P37/04
A61K39/145
C07K14/11
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024549535
(86)(22)【出願日】2023-02-21
(85)【翻訳文提出日】2024-08-21
(86)【国際出願番号】 CN2023077449
(87)【国際公開番号】W WO2023160550
(87)【国際公開日】2023-08-31
(31)【優先権主張番号】202210160017.8
(32)【優先日】2022-02-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】519002014
【氏名又は名称】中国科学院深▲チェン▼先進技術研究院
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＥＮＺＨＥＮ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥＳ ＯＦ ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥＳ
【住所又は居所原語表記】１０６８， Ｘｕｅｙｕａｎ Ａｖｅｎｕｅ， Ｓｈｅｎｚｈｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｔｏｗｎ， Ｎａｎｓｈａｎ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｓｈｅｎｚｈｅｎ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１８０５５， Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100101454
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 卓二
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(74)【代理人】
【識別番号】100138911
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻井 陽子
(72)【発明者】
【氏名】司 龍龍
(72)【発明者】
【氏名】李 静
(72)【発明者】
【氏名】陳 麗
(72)【発明者】
【氏名】李 楽
(72)【発明者】
【氏名】申 権
(72)【発明者】
【氏名】沈 金影
(72)【発明者】
【氏名】肖 雪
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA95X
4B065AA95Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BC01
4B065CA24
4B065CA45
4C085AA03
4C085BA55
4C085CC08
4C085DD01
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA40
4H045CA01
4H045EA31
4H045FA74
(57)【要約】
【課題】本願は、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、その調製方法および使用を提供する。
【手段】前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、加水分解標的Ｍ１タンパク質を含み、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む。前記加水分解標的Ｍ１タンパク質はユビキチン－プロテアソーム系によって認識されて加水分解することができ、ウイルスの複製能力が低下し、高い安全性を有する。本願に係るタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプの種類が豊であり、インフルエンザウイルスワクチンの研究開発に対して重要な役割を果たす。
【選択図】図１
【手段】前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、加水分解標的Ｍ１タンパク質を含み、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む。前記加水分解標的Ｍ１タンパク質はユビキチン－プロテアソーム系によって認識されて加水分解することができ、ウイルスの複製能力が低下し、高い安全性を有する。本願に係るタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプの種類が豊であり、インフルエンザウイルスワクチンの研究開発に対して重要な役割を果たす。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
加水分解標的Ｍ１タンパク質を含むタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスであって、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項2】
前記ＴＥＶｐ認識部位は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項3】
前記Ｍ１タンパク質のＣ末端とＴＥＶｐ認識部位との間はフレキシブルリンカー１により連結され、好ましくは、前記フレキシブルリンカー１はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５で示されるアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記ＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間はフレキシブルリンカー２により連結され、
好ましくは、前記フレキシブルリンカー２はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５６で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項１または２に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項4】
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型のウイルスであり、好ましくは、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ８、Ｈ１Ｎ９、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ８、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ６、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ６、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ６Ｎ２、Ｈ６Ｎ４、Ｈ６Ｎ５、Ｈ６Ｎ６、Ｈ６Ｎ８、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ９Ｎ５、Ｈ９Ｎ８、Ｈ１０Ｎ３、Ｈ１０Ｎ４、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１０Ｎ９、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１１Ｎ９、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１６Ｎ３、Ｈ１７Ｎ１０またはＨ１８Ｎ１１のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む、
請求項１～３のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか１項に記載の加水分解標的Ｍ１タンパク質をコードする、核酸分子。
【請求項6】
少なくとも１つのコピーされた請求項５に記載の核酸分子を含む、組換えベクター。
【請求項7】
請求項１～４のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法であって、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築するステップ（１）と、
インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、細胞系でコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得するステップ（２）と、を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
【請求項8】
ステップ（１）において、前記発現ベクターには前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のコード配列が含まれ、好ましくは、ステップ（２）において、前記細胞系はＴＥＶｐを過剰発現する人工細胞系であり、
好ましくは、ステップ（２）において、前記インフルエンザウイルスレスキューシステムは、ＷＳＮインフルエンザウイルスの１２プラスミドレスキューシステムを含む、
請求項７に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
【請求項9】
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを、ＴＥＶｐを過剰発現する人工的に改変された細胞系で複製し、大規模に生産するステップを更に含む、請求項７または８に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
【請求項10】
請求項１～４のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを含むインフルエンザウイルスワクチンであって、好ましくは、前記インフルエンザウイルスワクチンは弱毒化ワクチン、複製欠陥生ウイルスワクチンまたは複製制御可能生ウイルスワクチンのうちのいずれか１種である、
インフルエンザウイルスワクチン。
【請求項11】
請求項１～４のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、請求項５に記載の核酸分子、請求項６に記載の組換えベクター、請求項７～９のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法または請求項１０に記載のインフルエンザウイルスワクチンのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせの、インフルエンザを治療する薬剤および／または腫瘍溶解薬剤の調製における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、バイオテクノロジー分野に属し、具体的に、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、その調製方法および使用に関する。
【背景技術】
【0002】
インフルエンザウイルスは、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型という３つのタイプに分類され、この中、インフルエンザＡウイルスの爆発は最も頻繁で影響が広い。インフルエンザＡウイルスのゲノムは、８つの独立した一本鎖ＲＮＡ断片からなり、ヘマグルチニンタンパク質（ＨＡ）、マトリックスタンパク質（Ｍ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ヌクレオカプシドタンパク質（ＮＰ）、非構造タンパク質（ＮＳ）、およびＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡという３種のポリメラーゼを含む１０種のタンパク質をコードする。ただし、マトリックスタンパク質はＭ１およびＭ２を含み、非構造タンパク質はＮＳ１およびＮＥＰを含み、ただし、マトリックスタンパク質Ｍ１およびＭ２は、ウイルス粒子形態およびウイルスの病原性を維持する上で重要な役割を果たす。
【0003】
インフルエンザＡウイルスは、ヒトおよび鳥類に季節的に感染させることができ、大規模な流行は、極めて高い発病率および死亡率を招き、ヒトの健康を厳重に脅かす。現在、ワクチン接種は、インフルエンザを予防してインフルエンザの伝播を制御する最も主な手段である。
【0004】
ＣＮ１０２８９９２９４Ａは、Ｈ１Ｎ１型豚インフルエンザウイルスワクチン株およびその使用を開示し、前記Ｈ１Ｎ１型豚インフルエンザウイルスワクチン株は、豚インフルエンザを予防する不活化ワクチンであり、同種の強毒によって攻撃された豚に対して良好な保護を提供し、良好な免疫原性を有し、単一ワクチンでも混合ワクチンでもＨ１Ｎ１型豚インフルエンザを効果的に予防することができる。
【0005】
ＣＮ１０６０７５４２４Ａは、鳥インフルエンザウイルスワクチンを開示し、前記鳥インフルエンザウイルスワクチンの抗原は、不活化されたＨ９サブタイプの鳥インフルエンザウイルスであり、前記鳥インフルエンザウイルスワクチンに使用されるＨ９サブタイプ鳥インフルエンザウイルスＦＪ１１株の新しい毒株のＨＡおよびＥＩＤ５０は、力価が高く、免疫原性が良く、且つ、各地で流行して分離したＨ９サブタイプ鳥インフルエンザウイルスの攻撃を防御することができる。前記ワクチンの安全性が良く、保存期間試験での特性形状、安全性試験および効力試験データの分析により、分析結果は同種の製品と比べ、各指標がいずれも安定して有効であり、且つ、前記Ｈ９サブタイプ鳥インフルエンザの不活化ワクチンは、抗体の生産が速い。
【0006】
しかし、不活化ワクチンは、不活化過程で、有効な抗原成分を破壊または変更し、免疫効果に影響を及ぼす可能性があり、不活化ワクチンの免疫効果の維持時間が短く、複数回接種して強化する必要があり、一般的にコストが高い。それとともに、上記インフルエンザウイルスワクチンは、少量のいくつかのサブタイプのウイルスだけを防御することができる。従って、安全で制御可能であり、標的分解してサブタイプの種類が豊であるインフルエンザウイルスライブラリを開発することは、インフルエンザウイルスワクチンの研究開発に対して重要な役割を果たす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本願は、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、その調製方法および使用を提供する。前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、加水分解標的Ｍ１タンパク質を含み、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質は、ユビキチン－プロテアソーム系によって認識できるとともに、タバコエッチングウイルスプロテアーゼ（Ｔｏｂａｃｃｏ ｅｔｃｈ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｔｅａｓｅ、ＴＥＶｐ）によって切断でき、ＴＥＶｐを過剰発現する細胞系で大量調製でき、一方、正常な細胞系で、ユビキチン－プロテアソーム系は、ウイルスタンパク質と融合したタンパク質加水分解標的分子を認識し、ウイルスタンパク質を分解し、ウイルスの複製能力が弱められ、ひいては複製能力が完全に失われ、得られたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは高い安全性を有する。前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、生ワクチン、弱毒化ワクチンとしてインフルエンザの予防に使用することもでき、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、腫瘍溶解ウイルスとして腫瘍の治療にも適用できる。本願に係るタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプの種類が豊であり、インフルエンザウイルスワクチンの研究開発に対して重要な役割を果たす。
【課題を解決するための手段】
【0008】
態様１において、本願は、
加水分解標的Ｍ１タンパク質を含むタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスであって、
前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを提供する。
加水分解標的Ｍ１タンパク質を含むタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスであって、
前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを提供する。
【0009】
本願において、前記タンパク質加水分解標的ウイルスの設計原理は、以下に示すとおりである。
【0010】
（１）ウイルスタンパク質の特定の部位に導入されたタンパク質加水分解標的分子は、正常な宿主細胞中のユビキチン－プロテアソーム系によって認識され、対応するウイルスタンパク質を分解し、ウイルスを不活性化させることができる。
【0011】
（２）ウイルスタンパク質の特定の部位に導入されたタンパク質加水分解標的分子は、特定のウイルス生産系で抑制されるか、または連結鎖により選択的に切断されてウイルスタンパク質と分離し、ウイルスタンパク質がユビキチン－プロテアソーム系によって分解されることを回避または減少することができる。
【0012】
（３）ウイルスタンパク質の特定の部位に導入されたタンパク質加水分解標的分子は、正常な宿主細胞で抑制できないか、またはタンパク質加水分解標的分子とウイルスタンパク質とを連結する連結鎖が正常な宿主細胞で切断できない。従って、調製されたウイルスは、動物および人体等の宿主細胞でユビキチン－プロテアソーム系によって認識されて分解されることができ、複製能力を低減させ、ひいては複製や繁殖能力を完全に失い、ウイルスの安全性を増加する。
【0013】
本願において、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、それぞれ条件的に切断可能な３５３種のタンパク質加水分解標的分子が導入され、人体および動物の正常細胞にユビキチン－プロテアソーム系が存在するため、ウイルスタンパク質と融合して発現するタンパク質加水分解標的分子を認識することができ、ウイルスのＭ１タンパク質をユビキチン－プロテアソーム系により分解し、ウイルスタンパク質を分解することができる。前記加水分解標的Ｍ１タンパク質を含む加水分解標的インフルエンザウイルスは、動物および人体で複製が弱められ、ひいては複製繁殖ができなくなり、ウイルスの安全性を増加し、得られた加水分解標的インフルエンザウイルスは、インフルエンザウイルス生ワクチンに調製することができる。
【0014】
前記タンパク質加水分解標的分子のアミノ酸配列は、以下に示すとおりである。その中、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４６～１６７はＫｅａｐ１－Ｃｕｌ３ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５～７はＳＯＣＳ２ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８はＳＯＣＳ３ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９はＳＯＣＳ６ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０はＫＬＨＬ－１２ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１はＣ－ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｄｅｇｒｏｎｓ－Ｃｕｌｌｉｎ－ＲＩＮＧ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２～１７はＫＬＨＤＣ３ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８～２６はＫＬＨＤＣ２ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７はＡＰＰＢＰ２ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８～３１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５３～６０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６８～１７４はＳＰＯＰ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２～３４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７５～１７６はＫＬＨＬ３ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５～３８はＫＬＨＬ２０ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３９～４０はＳＰＳＢ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４１～４３はＦＢＸＯ３１ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４４～４６、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２６～１３０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１１～３２６はβ－ＴｒＣＰ１ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４７～５０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１４～１２０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０３～３０５はＳＣＦＦＢＷ７Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５１～５２はＩＴＣＨ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６１～６４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７７～１８２はＭＤＭ２ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６５～６７はＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６８～７５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８３～２０６はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８３ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７６～８５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０７～２６０はＡＰＣ／Ｃ－Ｄｂｏｘ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８６～９０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３６～１４０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６１～２７８、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３１～３４５はＡＰＣ／Ｃ－ＫＥＮｂｏｘ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９１～９５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９４～２９８はＣＯＰ１ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９６～１００、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９９～３００はＣＲＬ４＿ＣＤＴ２＿１ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０１～１０５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０１～３０２はＮ－ｅｎｄ ＵＢＲ－ｂｏｘ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０６～１１３はＶＨＬ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２１～１２３はＳＣＦＳｋｐ２－Ｃｋｓ１Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２４～１２５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０６～３１０はＳＣＦＴＩＲ１Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３１～１３５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２７～３３０はＳＩＡＨ－１ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４１～１４５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４６～３４７はＡＰＣ／Ｃ－ＡＢＢＡ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７９～２９３はＡＰＣ／Ｃ－ＴＰＲ１ Ｅ３ユビキチンリガーゼに対応する。
【0015】
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１：ＬＤＰＥＴＧＥＹＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２：ＬＤＰＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３：ＬＤＥＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４：ＡＦＦＡＱＬＱＬＤＥＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５：ＰＶＰＤＹＴＳＩＨＩＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６：ＮＩＤＦＹＡＱＶＳＤＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７：ＡＳＦＥＹＴＩＬＤＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８：ＭＰＰＰＧＡＰＳＦＰＳＰＰＴＥＰＳＳＥＶＰＥＱＰＳＡＱＰＬＰＧＳＰＰＲＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９：ＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０：ＰＧＡＰＰＧＲＤＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１：ＹＹＣＦＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２：ＹＫＫＶＧＴＭＡＡＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３：ＲＷＧＲＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４：ＲＰＣＱＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５：ＲＡＰＲＱＲＳＲＤＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６：ＳＷＲＬＴＧＦＳＧＭＫＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７：ＲＧＰＳＳＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８：ＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９：ＲＧＰＳＳＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０：ＥＡＩＧＬＬＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１：ＨＬＲＧＳＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２：ＲＧＳＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３：ＳＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４：ＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５：ＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６：ＲＲＧＰＳＳＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７：ＶＬＩＲＶＴＹＣＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８：ＫＡＤＴＴＴＰＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９：ＰＥＱＤＣＡＶＴＳＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０：ＤＥＶＴＳＴＴＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１：ＫＡＡＳＡＤＳＴＴＥＧＴＰＡＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２：ＥＰＥＥＰＥＡＤＱＨＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３：ＧＰＰＳＶＦＰＰＥＰＥＥＰＥＡＤＱＨＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４：ＥＣＥＥＴＥＶＤＱＨＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５：ＬＰＤＬＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３６：ＬＰＤＭＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３７：ＬＧＬＰＤＬＶＡＫＹＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３８：ＬＧＬＰＤＭＶＡＫＨＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３９：ＥＬＮＮＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４０：ＤＩＮＮＮＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４１：ＰＴＤＶＲＤＶＤＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４２：ＰＴＤＶＲＤＩＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４３：ＰＴＤＶＴＡＩＨＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４４：ＫＫＥＲＬＬＤＤＲＨＤＳＧＬＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４５：ＫＡＷＱＱＱＳＹＬＤＳＧＩＨＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４６：ＬＤＳＧＩＨＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４７：ＳＰＬＰＳＧＬＬＴＰＰＱＳＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４８：ＣＳＬＩＰＴＰＤＫＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４９：ＦＥＬＬＰＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５０：ＰＰＴＰＰＧＳＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５１：ＴＰＥＡＰＰＣＹＭＤＶＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５２：ＫＦＭＰＰＰＴＹＴＥＶＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５３：ＥＶＳＩＩＱＧＡＤＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５４：ＭＶＡＤＳＴＴＫＩＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５５：ＡＤＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５６：ＥＶＳＩＩＱＧＡＤＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５７：ＡＳＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５８：ＤＥＶＴＳＴＴＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５９：ＡＳＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６０：ＰＳＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６１：ＦＳＤＬＷＫＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６２：ＦＥＨＬＷＳＳＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６３：ＦＥＡＱＷＡＡＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６４：ＦＱＨＩＷＤＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６５：ＬＶＤＫＫＳＧＥＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６６：ＦＱＣＮＱＣＧＡＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６７：ＡＩＮＩＴＮＧＥＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６８：ＲＡＶＥＮＱＹＳＦＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６９：ＲＡＩＮＮＱＹＳＦＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７０：ＧＤＹＲＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７１：ＶＤＹＲＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７２：ＧＤＹＲＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７３：ＹＤＹＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７４：ＲＤＹＲＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７５：ＤＤＥＧＤＳＹＳＤＮＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７６：ＲＫＲＬＰＶＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７７：ＲＭＷＬＫＩＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７８：ＲＲＴＬＫＭＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７９：ＲＳＧＬＱＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８０：ＲＫＡＬＥＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８１：ＰＲＲＴＬＫＶＩＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８２：ＱＲＡＡＬＧＮＩＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８３：ＰＲＴＡＬＧＤＩＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８４：ＨＲＫＨＬＱＥＩＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８５：ＳＲＫＡＬＧＮＶＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８６：ＮＫＥＮＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８７：ＤＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８８：ＤＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８９：ＥＫＥＮＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９０：ＫＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９１：ＥＥＩＲＲＶＰＥＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９２：ＤＥＱＦＶＰＤＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９３：ＳＤＱＩＶＰＥＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９４：ＥＥＨＦＬＶＰＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９５：ＥＥＰＱＴＶＰＥＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９６：ＴＰＩＴＤＹＦＰＫＲＫＫＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９７：ＲＲＶＴＤＦＦＡＲＲＲＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９８：ＭＲＶＴＤＦＦＳＱＳＫＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９９：ＲＫＬＴＤＦＹＰＶＲＲＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１００：ＰＬＩＳＤＦＦＡＫＲＫＲＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０１：ＡＫＤＡＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０２：ＲＲＦＳＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０３：ＭＲＥＧＳＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０４：ＶＤＮＮＴＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０５：ＭＣＧＧＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０６：ＬＡＰＦＶＤＴＹＤＭＭＱＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０７：ＩＡＰＶＮＴＫＡＴＩＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０８：ＬＡＰＹＩＳＭＤＤＤＦＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０９：ＬＡＰＡＡＧＤＴＩＩＳＬＤＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１０：ＬＡＰＹＩＰＭＤＤＤＦＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１１：ＬＡＰＴＰＧＤＡＩＩＳＬＤＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１２：ＬＡＰＹＩＰＭＤＧＥＤＦＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１３：ＬＡＰＶＡＰＨＳＰＦＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１４： ＬＬＰＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１５：ＰＧＴＰＰＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１６：ＬＴＰＰＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１７：ＩＴＰＦＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１８：ＰＧＥＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１９：ＦＰＰＳＰＰＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２０：ＳＬＩＰＴＰＤＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２１： ＳＶＥＱＴＰＫＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２２：ＡＶＥＱＴＰＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２３：ＳＶＥＱＴＰＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２４：ＱＩＶＧＷＰＰＶＲＳＮＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２５：ＱＶＶＧＷＰＰＶＣＳＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２６：ＤＳＧＩＥＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２７：ＤＳＧＫＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２８：ＤＳＧＩＩＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２９：ＤＳＧＨＥＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３０：ＤＳＧＮＥＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３１：ＰＰＶＡＱＶＭＰＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３２：ＩＰＴＡＣＶＲＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３３：ＩＰＣＡＡＶＳＰＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３４：ＡＰＴＡＶＶＬＰＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３５：ＲＰＶＡＭＶＲＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３６：ＮＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３７：ＤＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３８：ＥＫＥＮＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３９：ＡＫＥＮＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４０：ＤＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４１：ＦＤＩＹＭＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４２：ＦＨＶＦＥＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４３：ＩＴＶＦＤＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４４：ＦＴＰＹＶＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４５：ＦＳＩＦＤＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４６：ＮＱＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４７：ＮＥＥＮＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４８：ＮＥＥＮＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４９：ＤＮＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５０：ＤＰＥＮＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５１：ＤＨＤＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５２：ＤＰＳＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５３：ＤＰＳＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５４：ＤＧＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５５：ＳＰＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５６：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５７：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５８：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５９：ＮＶＥＳＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６０：ＱＤＩＤＬＧＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６１：ＱＤＩＤＬＧＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６２：ＤＰＳＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６３：ＤＧＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６４：ＳＰＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６５：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６６：ＮＶＥＳＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６７：ＱＤＩＤＬＧＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６８：ＡＤＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６９：ＡＤＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７０：ＰＳＳＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７１：ＰＳＳＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７２：ＶＳＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７３：ＶＳＳＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７４：ＶＴＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７５：ＬＱＬＤＥＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７６：ＥＣＥＥＴＥＶＤＱＨＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７７：ＦＥＨＬＷＳＳＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７８：ＦＳＤＬＷＫＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７９：ＦＥＡＱＷＡＡＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８０：ＦＥＡＱＷＡＡＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８１：ＦＱＨＩＷＤＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８２： ＦＳＤＬＷＫＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８３： ＬＬＱＰＮＮＹＱＦＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８４：ＤＹＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８５：ＲＡＶＥＮＱＹＳＦＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８６：ＳＨＶＥＮＤＹＩＤＮＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８７：ＬＩＥＤＮＥＹＴＡＲＱＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８８：ＳＩＦＮＳＬＹＴＴＬＳＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８９：ＳＩＦＤＮＬＹＴＴＬＳＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９０：ＶＳＦＮＰＹＥＰＥＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９１：ＬＬＱＰＮＮＹＱＦＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９２：ＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９３：ＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９４：ＩＰＦＬＤＹＲＴＹＡＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９５：ＮＥＳＶＤＹＲＡＴＦＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９６：ＹＳＧＳＤＹＲＳＧＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９７：ＡＤＹＲＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９８：ＩＰＦＬＤＹＲＴＹＡＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９９：ＲＤＹＲＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２００：ＩＲＮＴＮＥＹＴＥＧＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０１：ＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０２：ＫＧＤＧＧＬＹＳＳＬＰＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０３：ＴＬＮＳＤＧＹＴＰＥＰＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０４：ＲＤＮＶＹＹＹＤＥＥＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０５：ＫＥＤＰＩＹＤＥＰＥＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０６：ＡＥＤＳＴＹＤＥＹＥＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０７：ＲＬＣＬＰＱＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０８：ＲＮＳＬＲＱＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０９：ＲＡＰＬＳＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１０：ＲＫＡＬＥＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１１：ＲＭＫＬＰＳＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１２：ＲＮＦＬＴＥＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１３：ＲＴＰＬＳＩＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１４：ＲＹＧＬＨＰＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１５：ＲＳＡＦＥＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１６：ＲＨＦＬＤＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１７：ＲＨＣＬＰＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１８：ＲＫＫＬＶＬＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１９：ＲＬＰＬＲＡＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２０：ＲＳＰＬＬＥＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２１：ＲＫＡＬＧＴＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２２：ＲＫＡＬＧＴＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２３：ＲＧＳＬＥＧＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２４：ＲＳＰＬＦＩＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２５：ＲＳＳＬＬＳＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２６：ＲＳＴＬＡＥＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２７：ＲＣＱＬＡＫＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２８：ＫＴＰＬＫＥＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２９：ＲＧＴＬＫＲＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３０：ＲＡＡＬＡＶＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３１：ＲＤＥＬＧＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３２：ＲＦＡＬＳＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３３：ＲＰＥＬＱＤＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３４：ＲＫＦＬＳＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３５：ＲＬＰＬＲＡＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３６：ＲＲＰＬＩＬＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３７：ＲＲＲＬＰＬＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３８：ＲＬＰＬＰＶＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３９：ＲＫＳＬＳＱＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４０：ＨＬＳＬＫＤＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４１：ＲＬＰＬＶＰＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４２：ＲＡＲＬＣＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４３：ＲＶＲＬＳＷＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４４：ＲＲＦＬＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４５：ＲＬＰＬＡＱＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４６：ＲＳＰＬＴＩＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４７：ＲＡＡＬＤＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４８：ＲＮＬＬＨＤＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４９：ＲＫＲＬＧＤＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５０：ＲＲＧＬＩＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５１：ＲＥＮＬＱＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５２：ＲＱＰＬＳＥＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５３：ＲＡＳＬＮＰＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５４：ＲＭＫＬＫＫＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５５：ＲＴＰＬＡＳＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５６：ＲＴＱＬＥＴＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５７：ＲＲＳＬＳＩＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５８：ＱＲＴＶＬＧＶＩＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５９：ＮＲＫＰＬＴＶＬＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６０：ＳＲＴＰＬＴＴＬＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６１：ＮＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６２：ＥＫＥＮＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６３：ＥＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６４：ＡＫＥＮＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６５：ＤＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６６：ＮＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６７：ＱＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６８：ＮＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６９：ＥＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７０：ＳＫＥＮＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７１：ＤＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７２：ＥＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７３：ＱＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７４：ＹＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７５：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７６：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７７：ＤＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７８：ＱＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７９： ＱＹＬＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８０： ＮＫＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８１：ＦＮＱＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８２：ＶＮＨＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８３：ＲＴＴＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８４：ＲＴＱＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８５：ＫＧＮＬＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８６：ＹＫＧＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８７：ＬＭＴＭＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８８：ＶＮＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８９：ＶＮＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９０：ＦＴＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９１：ＹＲＳＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９２：ＩＬＧＭＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９３：ＨＱＧＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９４：ＤＥＱＦＶＰＤＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９５：ＥＥＬＬＭＶＰＤＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９６：ＥＥＨＦＬＶＰＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９７：ＥＱＴＬＱＥＶＰＴＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９８：ＳＬＬＤＶＱＲＶＰＳＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９９：ＴＳＭＴＤＦＹＨＳＫＲＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３００：ＮＤＩＴＮＹＹＫＶＫＲＲＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０１：ＭＣＫＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０２：ＭＣＲＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０３：ＰＰＴＰＰＰＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０４：ＰＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０５：ＰＦＬＴＰＳＰＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０６：ＱＶＶＧＷＰＰＶＲＳＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０７：ＱＩＶＧＷＰＰＶＲＳＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０８：ＱＶＶＧＷＰＰＶＲＮＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０９：ＱＶＶＧＷＰＰＩＧＬＨＲＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１０：ＰＶＶＧＷＰＰＶＲＳＳＲＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１１：ＤＳＧＲＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１２：ＤＳＧＮＹＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１３：ＤＳＧＩＣＭＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１４：ＤＳＧＶＥＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１５：ＤＳＧＬＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１６：ＤＳＧＩＨＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１７：ＤＳＧＩＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１８：ＤＳＧＩＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１９：ＤＳＧＬＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２０：ＤＳＧＬＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２１：ＤＳＧＲＧＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２２：ＤＳＧＹＮＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２３：ＤＳＧＱＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２４：ＤＳＧＩＧＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２５：ＤＳＧＹＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２６：ＳＥＧＳＤＤＳＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２７：ＲＰＴＡＡＶＴＰＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２８：ＰＰＲＡＬＶＬＰＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２９：ＫＰＡＡＶＶＡＰＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３０：ＫＰＴＡＹＶＲＰＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３１：ＮＫＥＮＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３２：ＥＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３３：ＮＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３４：ＱＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３５：ＮＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３６：ＥＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３７：ＳＫＥＮＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３８：ＤＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３９：ＥＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４０：ＱＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４１：ＹＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４２：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４３：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４４：ＤＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４５：ＱＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４６：ＦＴＩＨＶＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４７：ＦＭＬＹＥＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４８：ＩＡＲＲＮＳＬＴＲＦＬＥＫＲＫＤＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４９：ＱＡＲＫＡＳＬＡＲＦＬＥＫＲＫＥＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５０：ＱＡＲＫＡＳＬＡＲＦＬＥＫＲＫＥＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５１：ＩＡＲＲＡＳＬＨＲＦＬＥＫＲＫＤＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５２：ＬＡＲＫＡＳＬＡＲＦＬＥＫＲＫＥＲＶ、または
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５３：ＩＡＲＲＡＳＬＨＲＦＬＥＫＲＫＤＲＩ。
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２：ＬＤＰＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３：ＬＤＥＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４：ＡＦＦＡＱＬＱＬＤＥＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５：ＰＶＰＤＹＴＳＩＨＩＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６：ＮＩＤＦＹＡＱＶＳＤＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７：ＡＳＦＥＹＴＩＬＤＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８：ＭＰＰＰＧＡＰＳＦＰＳＰＰＴＥＰＳＳＥＶＰＥＱＰＳＡＱＰＬＰＧＳＰＰＲＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９：ＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０：ＰＧＡＰＰＧＲＤＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１：ＹＹＣＦＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２：ＹＫＫＶＧＴＭＡＡＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３：ＲＷＧＲＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４：ＲＰＣＱＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５：ＲＡＰＲＱＲＳＲＤＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６：ＳＷＲＬＴＧＦＳＧＭＫＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７：ＲＧＰＳＳＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８：ＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９：ＲＧＰＳＳＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０：ＥＡＩＧＬＬＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１：ＨＬＲＧＳＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２：ＲＧＳＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３：ＳＰＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４：ＰＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５：ＰＭＡＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６：ＲＲＧＰＳＳＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７：ＶＬＩＲＶＴＹＣＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８：ＫＡＤＴＴＴＰＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９：ＰＥＱＤＣＡＶＴＳＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０：ＤＥＶＴＳＴＴＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１：ＫＡＡＳＡＤＳＴＴＥＧＴＰＡＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２：ＥＰＥＥＰＥＡＤＱＨＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３：ＧＰＰＳＶＦＰＰＥＰＥＥＰＥＡＤＱＨＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４：ＥＣＥＥＴＥＶＤＱＨＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５：ＬＰＤＬＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３６：ＬＰＤＭＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３７：ＬＧＬＰＤＬＶＡＫＹＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３８：ＬＧＬＰＤＭＶＡＫＨＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３９：ＥＬＮＮＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４０：ＤＩＮＮＮＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４１：ＰＴＤＶＲＤＶＤＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４２：ＰＴＤＶＲＤＩＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４３：ＰＴＤＶＴＡＩＨＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４４：ＫＫＥＲＬＬＤＤＲＨＤＳＧＬＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４５：ＫＡＷＱＱＱＳＹＬＤＳＧＩＨＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４６：ＬＤＳＧＩＨＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４７：ＳＰＬＰＳＧＬＬＴＰＰＱＳＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４８：ＣＳＬＩＰＴＰＤＫＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４９：ＦＥＬＬＰＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５０：ＰＰＴＰＰＧＳＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５１：ＴＰＥＡＰＰＣＹＭＤＶＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５２：ＫＦＭＰＰＰＴＹＴＥＶＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５３：ＥＶＳＩＩＱＧＡＤＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５４：ＭＶＡＤＳＴＴＫＩＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５５：ＡＤＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５６：ＥＶＳＩＩＱＧＡＤＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５７：ＡＳＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５８：ＤＥＶＴＳＴＴＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５９：ＡＳＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６０：ＰＳＳＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６１：ＦＳＤＬＷＫＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６２：ＦＥＨＬＷＳＳＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６３：ＦＥＡＱＷＡＡＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６４：ＦＱＨＩＷＤＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６５：ＬＶＤＫＫＳＧＥＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６６：ＦＱＣＮＱＣＧＡＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６７：ＡＩＮＩＴＮＧＥＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６８：ＲＡＶＥＮＱＹＳＦＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６９：ＲＡＩＮＮＱＹＳＦＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７０：ＧＤＹＲＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７１：ＶＤＹＲＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７２：ＧＤＹＲＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７３：ＹＤＹＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７４：ＲＤＹＲＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７５：ＤＤＥＧＤＳＹＳＤＮＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７６：ＲＫＲＬＰＶＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７７：ＲＭＷＬＫＩＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７８：ＲＲＴＬＫＭＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７９：ＲＳＧＬＱＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８０：ＲＫＡＬＥＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８１：ＰＲＲＴＬＫＶＩＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８２：ＱＲＡＡＬＧＮＩＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８３：ＰＲＴＡＬＧＤＩＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８４：ＨＲＫＨＬＱＥＩＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８５：ＳＲＫＡＬＧＮＶＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８６：ＮＫＥＮＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８７：ＤＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８８：ＤＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８９：ＥＫＥＮＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９０：ＫＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９１：ＥＥＩＲＲＶＰＥＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９２：ＤＥＱＦＶＰＤＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９３：ＳＤＱＩＶＰＥＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９４：ＥＥＨＦＬＶＰＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９５：ＥＥＰＱＴＶＰＥＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９６：ＴＰＩＴＤＹＦＰＫＲＫＫＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９７：ＲＲＶＴＤＦＦＡＲＲＲＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９８：ＭＲＶＴＤＦＦＳＱＳＫＲＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９９：ＲＫＬＴＤＦＹＰＶＲＲＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１００：ＰＬＩＳＤＦＦＡＫＲＫＲＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０１：ＡＫＤＡＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０２：ＲＲＦＳＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０３：ＭＲＥＧＳＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０４：ＶＤＮＮＴＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０５：ＭＣＧＧＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０６：ＬＡＰＦＶＤＴＹＤＭＭＱＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０７：ＩＡＰＶＮＴＫＡＴＩＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０８：ＬＡＰＹＩＳＭＤＤＤＦＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０９：ＬＡＰＡＡＧＤＴＩＩＳＬＤＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１０：ＬＡＰＹＩＰＭＤＤＤＦＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１１：ＬＡＰＴＰＧＤＡＩＩＳＬＤＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１２：ＬＡＰＹＩＰＭＤＧＥＤＦＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１３：ＬＡＰＶＡＰＨＳＰＦＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１４： ＬＬＰＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１５：ＰＧＴＰＰＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１６：ＬＴＰＰＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１７：ＩＴＰＦＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１８：ＰＧＥＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１９：ＦＰＰＳＰＰＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２０：ＳＬＩＰＴＰＤＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２１： ＳＶＥＱＴＰＫＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２２：ＡＶＥＱＴＰＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２３：ＳＶＥＱＴＰＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２４：ＱＩＶＧＷＰＰＶＲＳＮＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２５：ＱＶＶＧＷＰＰＶＣＳＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２６：ＤＳＧＩＥＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２７：ＤＳＧＫＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２８：ＤＳＧＩＩＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２９：ＤＳＧＨＥＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３０：ＤＳＧＮＥＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３１：ＰＰＶＡＱＶＭＰＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３２：ＩＰＴＡＣＶＲＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３３：ＩＰＣＡＡＶＳＰＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３４：ＡＰＴＡＶＶＬＰＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３５：ＲＰＶＡＭＶＲＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３６：ＮＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３７：ＤＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３８：ＥＫＥＮＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３９：ＡＫＥＮＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４０：ＤＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４１：ＦＤＩＹＭＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４２：ＦＨＶＦＥＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４３：ＩＴＶＦＤＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４４：ＦＴＰＹＶＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４５：ＦＳＩＦＤＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４６：ＮＱＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４７：ＮＥＥＮＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４８：ＮＥＥＮＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４９：ＤＮＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５０：ＤＰＥＮＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５１：ＤＨＤＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５２：ＤＰＳＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５３：ＤＰＳＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５４：ＤＧＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５５：ＳＰＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５６：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５７：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５８：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５９：ＮＶＥＳＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６０：ＱＤＩＤＬＧＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６１：ＱＤＩＤＬＧＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６２：ＤＰＳＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６３：ＤＧＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６４：ＳＰＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６５：ＤＥＥＴＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６６：ＮＶＥＳＧＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６７：ＱＤＩＤＬＧＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６８：ＡＤＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６９：ＡＤＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７０：ＰＳＳＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７１：ＰＳＳＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７２：ＶＳＳＳＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７３：ＶＳＳＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７４：ＶＴＳＴＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７５：ＬＱＬＤＥＥＴＧＥＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７６：ＥＣＥＥＴＥＶＤＱＨＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７７：ＦＥＨＬＷＳＳＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７８：ＦＳＤＬＷＫＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７９：ＦＥＡＱＷＡＡＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８０：ＦＥＡＱＷＡＡＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８１：ＦＱＨＩＷＤＦＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８２： ＦＳＤＬＷＫＬＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８３： ＬＬＱＰＮＮＹＱＦＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８４：ＤＹＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８５：ＲＡＶＥＮＱＹＳＦＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８６：ＳＨＶＥＮＤＹＩＤＮＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８７：ＬＩＥＤＮＥＹＴＡＲＱＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８８：ＳＩＦＮＳＬＹＴＴＬＳＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８９：ＳＩＦＤＮＬＹＴＴＬＳＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９０：ＶＳＦＮＰＹＥＰＥＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９１：ＬＬＱＰＮＮＹＱＦＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９２：ＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９３：ＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９４：ＩＰＦＬＤＹＲＴＹＡＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９５：ＮＥＳＶＤＹＲＡＴＦＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９６：ＹＳＧＳＤＹＲＳＧＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９７：ＡＤＹＲＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９８：ＩＰＦＬＤＹＲＴＹＡＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９９：ＲＤＹＲＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２００：ＩＲＮＴＮＥＹＴＥＧＰＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０１：ＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０２：ＫＧＤＧＧＬＹＳＳＬＰＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０３：ＴＬＮＳＤＧＹＴＰＥＰＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０４：ＲＤＮＶＹＹＹＤＥＥＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０５：ＫＥＤＰＩＹＤＥＰＥＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０６：ＡＥＤＳＴＹＤＥＹＥＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０７：ＲＬＣＬＰＱＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０８：ＲＮＳＬＲＱＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０９：ＲＡＰＬＳＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１０：ＲＫＡＬＥＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１１：ＲＭＫＬＰＳＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１２：ＲＮＦＬＴＥＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１３：ＲＴＰＬＳＩＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１４：ＲＹＧＬＨＰＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１５：ＲＳＡＦＥＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１６：ＲＨＦＬＤＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１７：ＲＨＣＬＰＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１８：ＲＫＫＬＶＬＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１９：ＲＬＰＬＲＡＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２０：ＲＳＰＬＬＥＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２１：ＲＫＡＬＧＴＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２２：ＲＫＡＬＧＴＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２３：ＲＧＳＬＥＧＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２４：ＲＳＰＬＦＩＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２５：ＲＳＳＬＬＳＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２６：ＲＳＴＬＡＥＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２７：ＲＣＱＬＡＫＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２８：ＫＴＰＬＫＥＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２９：ＲＧＴＬＫＲＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３０：ＲＡＡＬＡＶＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３１：ＲＤＥＬＧＧＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３２：ＲＦＡＬＳＱＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３３：ＲＰＥＬＱＤＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３４：ＲＫＦＬＳＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３５：ＲＬＰＬＲＡＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３６：ＲＲＰＬＩＬＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３７：ＲＲＲＬＰＬＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３８：ＲＬＰＬＰＶＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３９：ＲＫＳＬＳＱＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４０：ＨＬＳＬＫＤＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４１：ＲＬＰＬＶＰＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４２：ＲＡＲＬＣＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４３：ＲＶＲＬＳＷＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４４：ＲＲＦＬＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４５：ＲＬＰＬＡＱＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４６：ＲＳＰＬＴＩＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４７：ＲＡＡＬＤＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４８：ＲＮＬＬＨＤＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４９：ＲＫＲＬＧＤＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５０：ＲＲＧＬＩＬＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５１：ＲＥＮＬＱＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５２：ＲＱＰＬＳＥＡ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５３：ＲＡＳＬＮＰＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５４：ＲＭＫＬＫＫＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５５：ＲＴＰＬＡＳＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５６：ＲＴＱＬＥＴＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５７：ＲＲＳＬＳＩＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５８：ＱＲＴＶＬＧＶＩＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５９：ＮＲＫＰＬＴＶＬＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６０：ＳＲＴＰＬＴＴＬＮ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６１：ＮＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６２：ＥＫＥＮＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６３：ＥＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６４：ＡＫＥＮＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６５：ＤＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６６：ＮＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６７：ＱＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６８：ＮＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６９：ＥＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７０：ＳＫＥＮＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７１：ＤＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７２：ＥＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７３：ＱＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７４：ＹＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７５：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７６：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７７：ＤＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７８：ＱＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７９： ＱＹＬＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８０： ＮＫＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８１：ＦＮＱＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８２：ＶＮＨＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８３：ＲＴＴＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８４：ＲＴＱＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８５：ＫＧＮＬＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８６：ＹＫＧＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８７：ＬＭＴＭＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８８：ＶＮＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８９：ＶＮＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９０：ＦＴＲＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９１：ＹＲＳＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９２：ＩＬＧＭＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９３：ＨＱＧＩＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９４：ＤＥＱＦＶＰＤＹ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９５：ＥＥＬＬＭＶＰＤＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９６：ＥＥＨＦＬＶＰＤＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９７：ＥＱＴＬＱＥＶＰＴＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９８：ＳＬＬＤＶＱＲＶＰＳＦ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９９：ＴＳＭＴＤＦＹＨＳＫＲＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３００：ＮＤＩＴＮＹＹＫＶＫＲＲＰ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０１：ＭＣＫＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０２：ＭＣＲＴＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０３：ＰＰＴＰＰＰＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０４：ＰＴＰＰＬＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０５：ＰＦＬＴＰＳＰＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０６：ＱＶＶＧＷＰＰＶＲＳＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０７：ＱＩＶＧＷＰＰＶＲＳＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０８：ＱＶＶＧＷＰＰＶＲＮＹＲＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０９：ＱＶＶＧＷＰＰＩＧＬＨＲＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１０：ＰＶＶＧＷＰＰＶＲＳＳＲＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１１：ＤＳＧＲＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１２：ＤＳＧＮＹＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１３：ＤＳＧＩＣＭＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１４：ＤＳＧＶＥＴＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１５：ＤＳＧＬＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１６：ＤＳＧＩＨＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１７：ＤＳＧＩＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１８：ＤＳＧＩＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１９：ＤＳＧＬＰＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２０：ＤＳＧＬＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２１：ＤＳＧＲＧＤＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２２：ＤＳＧＹＮＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２３：ＤＳＧＱＧＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２４：ＤＳＧＩＧＴ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２５：ＤＳＧＹＳＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２６：ＳＥＧＳＤＤＳＧＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２７：ＲＰＴＡＡＶＴＰＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２８：ＰＰＲＡＬＶＬＰＨ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２９：ＫＰＡＡＶＶＡＰＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３０：ＫＰＴＡＹＶＲＰＭ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３１：ＮＫＥＮＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３２：ＥＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３３：ＮＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３４：ＱＫＥＮＧ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３５：ＮＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３６：ＥＫＥＮＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３７：ＳＫＥＮＩ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３８：ＤＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３９：ＥＫＥＮＣ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４０：ＱＫＥＮＲ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４１：ＹＫＥＮＫ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４２：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４３：ＬＫＥＮＳ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４４：ＤＫＥＮＱ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４５：ＱＫＥＮＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４６：ＦＴＩＨＶＤ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４７：ＦＭＬＹＥＥ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４８：ＩＡＲＲＮＳＬＴＲＦＬＥＫＲＫＤＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４９：ＱＡＲＫＡＳＬＡＲＦＬＥＫＲＫＥＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５０：ＱＡＲＫＡＳＬＡＲＦＬＥＫＲＫＥＲＬ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５１：ＩＡＲＲＡＳＬＨＲＦＬＥＫＲＫＤＲＶ、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５２：ＬＡＲＫＡＳＬＡＲＦＬＥＫＲＫＥＲＶ、または
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５３：ＩＡＲＲＡＳＬＨＲＦＬＥＫＲＫＤＲＩ。
【0016】
好ましくは、前記ＴＥＶｐ認識部位は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４で示されるアミノ酸配列を含む。
【0017】
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４：ＥＮＬＹＦＱＧ。
【0018】
好ましくは、前記Ｍ１タンパク質のＣ末端とＴＥＶｐ認識部位との間はフレキシブルリンカー１により連結される。
【0019】
好ましくは、前記フレキシブルリンカー１はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５で示されるアミノ酸配列を含む。
【0020】
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５：ＧＳＧＧ。
【0021】
好ましくは、前記ＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間はフレキシブルリンカー２により連結される。
【0022】
好ましくは、前記フレキシブルリンカー２はＧＳＧのアミノ酸配列を含む。
【0023】
好ましくは、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスはＡ型、Ｂ型、Ｃ型のウイルスである。
【0024】
好ましくは、前記インフルエンザウイルスのサブタイプは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ８、Ｈ１Ｎ９、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ８、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ６、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ６、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ６Ｎ２、Ｈ６Ｎ４、Ｈ６Ｎ５、Ｈ６Ｎ６、Ｈ６Ｎ８、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ９Ｎ５、Ｈ９Ｎ８、Ｈ１０Ｎ３、Ｈ１０Ｎ４、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１０Ｎ９、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１１Ｎ９、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１６Ｎ３、Ｈ１７Ｎ１０またはＨ１８Ｎ１１のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む。
【0025】
本願において、発明者は、ＴＥＶｐ認識部位およびタンパク質加水分解標的分子のヌクレオチド配列をインフルエンザウイルスのゲノムに導入することにより、ＴＥＶｐの過剰発現する細胞系で、タンパク質加水分解標的分子を含むインフルエンザウイルスゲノムは、ウイルスゲノムの複製に伴って複製でき、且つ、ウイルスタンパク質の翻訳に伴ってウイルスタンパク質に融合して発現することができ、タンパク質加水分解標的分子によって部位特異的に修飾されたウイルス、即ち、タンパク質加水分解標的ウイルス（Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ－Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｖｉｒｕｓ、ＰＲＯＴＡＣウイルス）を取得する。
【0026】
正常細胞において、ユビキチン－プロテアソーム系は、ウイルスＭ１タンパク質と融合したタンパク質加水分解標的分子を認識し、ウイルスタンパク質を分解し、ウイルスの複製能力が弱められ、ひいては複製能力が完全に失われるため、ＰＲＯＴＡＣウイルスは高い安全性を有する。それとともに、前記ＰＲＯＴＡＣウイルスにはユビキチン－プロテアソーム系の特異的認識配列および部位が含まれるため、前記ＰＲＯＴＡＣウイルスは、腫瘍の治療で、冷たい腫瘍を熱い腫瘍に変換し、腫瘍溶解の作用を果たすことができる。
【0027】
本願において、前記ＰＲＯＴＡＣウイルスは、特定の人工的に改変された細胞系で効率的に複製し、大規模に生産して調製することができる。また、ＰＲＯＴＡＣウイルスは更に修飾されてもよく、例えば、ウイルスタンパク質の特定領域または特定のアミノ酸に免疫増強剤を導入し、性能が改善されたウイルスを取得し、免疫原性が強化されたＰＲＯＴＡＣウイルスを取得する。
【0028】
本願において、使用されるフレキシブルリンカーとＴＥＶｐ認識部位（連結鎖）、およびフレキシブルリンカーとタンパク質加水分解標的分子のアミノ酸配列構造は、Ｂ型インフルエンザに適用されてもよいし、インフルエンザウイルスの他のサブタイプに適用されてもよいし、他の種類のウイルス、例えばＨＩＶウイルス、新型コロナウイルス、手足口ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせの改変に用いられてもよい。
【0029】
態様２において、本願は、態様１に記載の加水分解標的Ｍ１タンパク質をコードする核酸分子を提供する。
【0030】
態様３において、本願は、少なくとも１つのコピーされた態様２に記載の核酸分子を含む組換えベクターを提供する。
【0031】
態様４において、本願は、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築するステップ（１）と、
インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、細胞系でコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得するステップ（２）と、を含む、
態様１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法を提供する。
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築するステップ（１）と、
インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、細胞系でコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得するステップ（２）と、を含む、
態様１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法を提供する。
【0032】
本願は、３５３種のタンパク質加水分解標的ウイルスを提供し、前記タンパク質加水分解標的ウイルスのＭ１タンパク質のＣ末端には、ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が１つ含まれ、Ｍ１タンパク質とタンパク質加水分解標的分子との間はＴＥＶｐ認識部位により連結され、ＴＥＶｐ認識部位は選択的に切断されることができ、且つ、Ｍ１タンパク質とＴＥＶｐ認識部位との間、およびＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間は、２つのフレキシブル分子により連結され、前記方法によりウイルスを改変する操作は簡単で、得られたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは安全で確実であり、免疫性が高い。
【0033】
好ましくは、ステップ（１）において、前記発現ベクターには加水分解標的Ｍ１タンパク質のコード配列を含む。
【0034】
好ましくは、ステップ（２）において、前記細胞系はＴＥＶｐを過剰発現する人工細胞系である。
【0035】
好ましくは、ステップ（２）において、前記インフルエンザウイルスレスキューシステムは、ＷＳＮインフルエンザウイルスの１２プラスミドレスキューシステムを含む。
【0036】
好ましくは、前記調製方法は、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを、ＴＥＶｐを過剰発現する人工的に改変された細胞系で複製し、大規模に生産するステップを更に含む。
【0037】
本願において、前記ＰＲＯＴＡＣウイルスは、ＴＥＶｐを過剰発現する細胞系のみで複製でき、前記ＰＲＯＴＡＣウイルスの前記ＴＥＶｐを過剰発現する細胞系に対する依存性を利用し、ＴＥＶｐを過剰発現する細胞系でインフルエンザウイルスの大量調製を行うことができる。
【0038】
本願の好ましい技術案として、前記調製方法は、以下のステップを含む。
【0039】
（１）タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築し、遺伝子工学の方法を用いてＷＳＮインフルエンザウイルスの１２プラスミドレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドを改変し、Ｍ１タンパク質の遺伝子配列のＣ末端および終止コドンの前に挿入配列を導入し、発現ベクターを取得し、前記発現ベクターは、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のコード配列を含む。
【0040】
（２）インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、置き換えた後のインフルエンザウイルスレスキューシステムとＴＥＶｐを過剰発現する人工細胞系とをコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得する。
【0041】
前記タンパク質加水分解標的ウイルスを、ＴＥＶｐを過剰発現する人工的に改変された細胞系で複製し、前記タンパク質加水分解標的ウイルスを大規模に生産する。
【0042】
態様５において、本願は、態様１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを含むインフルエンザウイルスワクチンを提供する。
【0043】
好ましくは、前記インフルエンザウイルスワクチンは、弱毒化ワクチン、複製欠陥生ウイルスワクチンまたは複製制御可能生ウイルスワクチンのうちのいずれか１種である。
【0044】
態様６において、本願は、態様１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、態様２に記載の核酸分子、態様３に記載の組換えベクター、態様４に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法または態様５に記載のインフルエンザウイルスワクチンのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせの、インフルエンザを治療する薬剤および／または腫瘍溶解薬剤の調製における使用を提供する。
【0045】
本願に係る数値範囲は、上記挙げられた点値を含むだけでなく、挙げられていない上記数値範囲間の任意の点値も含み、紙面の都合と簡明のために、本願では前記範囲に含まれる具体的な点値を網羅的に列挙しない。
【発明の効果】
【0046】
従来技術に対し、本願は、以下の有益な効果を備える。
【0047】
（１）本願は、ユビキチン－プロテアソーム系の加水分解作用およびＴＥＶｐの切断作用を利用し、ＴＥＶｐを過剰発現する細胞系でタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを大量調製し、一方、正常な細胞系で、ユビキチン－プロテアソーム系は、ウイルスタンパク質と融合したタンパク質加水分解標的分子を認識し、ウイルスタンパク質を分解し、ウイルスの複製能力が弱められ、ひいては複製能力が完全に失われる。従って、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、高い安全性を有し、且つ、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、弱毒化、複製欠陥、複製制御可能な生ウイルスである。
【0048】
（２）前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法は、操作が簡単で、安全で確実であり、本願におけるタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、哺乳動物の安定した細胞系により生産され、従来の発育鶏卵によるウイルス繁殖の欠陥（発育鶏卵によるウイルス繁殖は、人体アレルギー等の不良反応を引き起こしやすい）を克服し、得られたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは免疫原性が高く、ワクチンの調製およびウイルス感染の治療に関連する薬剤の開発に使用でき、強い研究および応用価値を有する。
【0049】
（３）前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは更に修飾されてもよく、例えば、ウイルスタンパク質の特定の領域または特定のアミノ酸に免疫増強剤を導入し、性能が改善されたウイルスを取得し、免疫原性が増強されたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得する。
【0050】
（４）前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、腫瘍の微小環境を活性化し、冷たい腫瘍を熱い腫瘍に変換し、腫瘍治療効果を増加することができる。
【図面の簡単な説明】
【0051】
【図1】実施例１におけるタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製過程の模式図である。
【図2】ＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ（＋ＴＥＶｐ）細胞および正常なＭＤＣＫ（－ＴＥＶｐ）細胞におけるタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの成長曲線である。各種のＥ３ユビキチンリガーゼが代表として１つの毒株を選択してデータ表示を行うため、図中の各毒株は、それぞれ対応するＥ３ユビキチンリガーゼを用いて再命名される。Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ２（Ｍ１－ＰＴＤ２２）、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ３（Ｍ１－ＰＴＤ４３）、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＰＢＰ２（Ｍ１－ＰＴＤ７１）、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＬ２０（Ｍ１－ＰＴＤ８４）、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＸＯ３１（Ｍ１－ＰＴＤ９１）、Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ（Ｍ１－ＰＴＤ９４）、Ｍ１－ＰＴＤＳＯＣＳ２（Ｍ１－ＰＴＤ５７）、Ｍ１－ＰＴＤＦＥＭ１Ｃ（Ｍ１－ＰＴＤ６３）、Ｍ１－ＰＴＤＩＴＣＨ（Ｍ１－ＰＴＤ１０１）、Ｍ１－ＰＴＤＳＰＯＰ（Ｍ１－ＰＴＤ１０９）、Ｍ１－ＰＴＤＭＤＭ２（Ｍ１－ＰＴＤ１１０）、Ｍ１－ＰＴＤＣＲＢＮ（Ｍ１－ＰＴＤ１１６）、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＣ／Ｃ－ＡＢＢＡ（Ｍ１－ＰＴＤ２０５）、Ｍ１－ＰＴＤＣＢＬ（Ｍ１－ＰＴＤ１１９）、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＣ／Ｃ－ＫＥＮｂｏｘ（Ｍ１－ＰＴＤ１３８）、Ｍ１－ＰＴＤＣＯＰ１（Ｍ１－ＰＴＤ１４８）、Ｍ１－ＰＴＤＮ－ｅｎｄ ＵＢＲ－ｂｏｘ（Ｍ１－ＰＴＤ１６５）、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＷ７（Ｍ１－ＰＴＤ１７４）、Ｍ１－ＰＴＤＳｋｐ２－Ｃｋｓ１（Ｍ１－ＰＴＤ１８３）、Ｍ１－ＰＴＤＳＩＡＨ－１（Ｍ１－ＰＴＤ１９４）、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＣ／Ｃ－ＴＰＲ１（Ｍ１－ＰＴＤ１４３）、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＣ／Ｃ－Ｄｂｏｘ（Ｍ１－ＰＴＤ１３２）。
【図3】マウスモデルにおけるタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの安全性の評価であり、ただし、＊＊＊は、ＷＴと比べて顕著な差があることを表す。Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ２（Ｍ１－ＰＴＤ２２）、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ３（Ｍ１－ＰＴＤ４３）、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＰＢＰ２（Ｍ１－ＰＴＤ７１）、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＬ２０（Ｍ１－ＰＴＤ８４）、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＸＯ３１（Ｍ１－ＰＴＤ９１）、Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ（Ｍ１－ＰＴＤ９４）を代表としてデータ表示を行う。
【図4】タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの作用機序の検証である。各種のＥ３ユビキチンリガーゼが代表として１つの毒株を選択してデータ表示を行うため、図中の各毒株は、それぞれ対応するＥ３ユビキチンリガーゼを用いて再命名される。
【図5】マウスモデルでのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの免疫原性の評価であり、ただし、（ａ）は中和（ＮＴ）抗体と赤血球凝集抑制（ＨＩ）抗体のレベルで、（ｂ）はＡｎｔｉ－ＨＡ ＩｇＧ、Ａｎｔｉ－ＮＰ ＩｇＧ抗体のレベルで、（ｃ）はＡｎｔｉ－ＮＰ ＩｇＡ抗体のレベルで、（ｄ）はマウス肺組織におけるインフルエンザウイルスＭ１抗原ペプチド（ＭＧＬＩＹＮＲＭ）に対するＴ細胞免疫応答で、（ｅ）はマウス脾臓組織におけるインフルエンザウイルスＮＰ抗原ペプチド（ＡＳＮＥＮＭＥＴＭＥ）（左図）およびＭ１抗原ペプチド（ＭＧＬＩＹＮＲＭ）（右図）に対するＴ細胞免疫応答のレベルで、（ｆ）はマクロファージＲａｗ２６４．７細胞におけるタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの抗原提示レベルである。＊、＊＊、＊＊＊は、野生型ウイルス（ＷＴ）と比べて顕著な差があることを表し、＃、＃＃、＃＃＃は、不活化インフルエンザワクチン（ＩＩＶ）と比べて顕著な差があることを表し、＋、＋＋、＋＋＋は、低温適応弱毒化インフルエンザワクチン（ＣＡＩＶ）と比べて顕著な差があることを表す。Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ２（Ｍ１－ＰＴＤ２２）、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ３（Ｍ１－ＰＴＤ４３）、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＰＢＰ２（Ｍ１－ＰＴＤ７１）、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＬ２０（Ｍ１－ＰＴＤ８４）、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＸＯ３１（Ｍ１－ＰＴＤ９１）、Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ（Ｍ１－ＰＴＤ９４）を代表としてデータ表示を行う。
【図6】成体（７週齢）マウスモデルにおけるタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンの交差免疫保護効果の評価であり、ただし、（ａ）は、マウスが野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスに感染した３日後に、肺組織中の野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスの力価で、（ｂ）は、マウスが野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスに感染した２週間以内のマウス体重および生存率で、（ｃ）は、マウスが野生型インフルエンザウイルスＡ／Ｘ－３１（Ｈ３Ｎ２）に感染した３日後に、肺組織中の野生型Ｘ－３１インフルエンザウイルスの力価で、（ｂ）は、マウスが野生型インフルエンザウイルスＡ／Ｘ－３１（Ｈ３Ｎ２）に感染した２週間以内のマウス体重および生存率である。Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ（Ｍ１－ＰＴＤ９４）を代表としてデータ表示を行う。
【図7】高齢（１５月齢）マウスおよびフェレットのモデルにおけるタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンの免疫保護効果の評価であり、ただし、（ａ）は、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンが高齢マウスで誘導する中和（ＮＴ）抗体、赤血球凝集抑制（ＨＩ）抗体、ａｎｔｉ－ＨＡ ＩｇＧ抗体、ａｎｔｉ－ＮＰ－ＩｇＧ抗体のレベルで、（ｂ）は、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンが高齢マウスの肺組織（左図）および脾臓（右図）で誘導する、インフルエンザウイルスＮＰ抗原ペプチド（ＡＳＮＥＮＭＥＴＭＥ）に対するＴ細胞免疫応答のレベルで、（ｃ）は、免疫したおよび免疫しなかった高齢マウスが野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスに感染した３日後に、肺組織中の野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスの力価で、（ｄ）は、免疫したおよび免疫しなかった高齢マウスが野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスに感染した２週間以内のマウスの体重および生存率で、（ｅ）免疫したおよび免疫しなかったフェレットが野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスに感染した３日後の鼻腔洗浄液内のウイルスの力価である。Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ（Ｍ１－ＰＴＤ９４）を代表としてデータ表示を行う。
【図8】タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの腫瘍抑制効果であり、ただし、Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ（Ｍ１－ＰＴＤ９４）を代表としてデータ表示を行う。
【発明を実施するための形態】
【0052】
以下、具体的な実施形態により本願の技術案を更に説明する。当業者であれば、前記実施例が本願を理解するためのものに過ぎず、本願を具体的に限定するものと見なすべきではないことが理解されるべきである。
【0053】
実施例で具体的な技術または条件が明記されていない場合、本分野内の文献で説明された技術または条件に従い、または製品の説明書に従って行う。使用される試薬または装置の中のメーカーが明記されていないものは、いずれも正規ルートを介して購入できる通常の製品である。
【実施例】
【0054】
実施例１
本実施例は、一連のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを提供し、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスには加水分解標的Ｍ１タンパク質が含まれ、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３に示すとおりである。前記ＴＥＶｐ認識部位のアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４に示すとおりであり、前記Ｍ１タンパク質のＣ末端とＴＥＶｐ認識部位との間はフレキシブルリンカー１により連結され、前記フレキシブルリンカー１のアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５に示すとおりであり、前記ＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間はフレキシブルリンカー２により連結され、前記フレキシブルリンカー２のアミノ酸配列はＧＳＧであり、Ｍ１タンパク質のＣ末端から終止コドンまでのアミノ酸配列構造は、Ｍ１タンパク質のＣ末端－フレキシブルリンカー１－ＴＥＶｐ認識部位－フレキシブルリンカー２－タンパク質加水分解標的分子である。
本実施例は、一連のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを提供し、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスには加水分解標的Ｍ１タンパク質が含まれ、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３に示すとおりである。前記ＴＥＶｐ認識部位のアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４に示すとおりであり、前記Ｍ１タンパク質のＣ末端とＴＥＶｐ認識部位との間はフレキシブルリンカー１により連結され、前記フレキシブルリンカー１のアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５に示すとおりであり、前記ＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間はフレキシブルリンカー２により連結され、前記フレキシブルリンカー２のアミノ酸配列はＧＳＧであり、Ｍ１タンパク質のＣ末端から終止コドンまでのアミノ酸配列構造は、Ｍ１タンパク質のＣ末端－フレキシブルリンカー１－ＴＥＶｐ認識部位－フレキシブルリンカー２－タンパク質加水分解標的分子である。
【0055】
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４のアミノ酸配列はＥＮＬＹＦＱＧである。
【0056】
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５のアミノ酸配列はＧＳＧＧである。
【0057】
前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子のアミノ酸配列は、表１に示すとおりである。
【0058】
【表1】
【0059】
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの中のインフルエンザウイルスは、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型のウイルスであり、前記インフルエンザウイルスのサブタイプは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ８、Ｈ１Ｎ９、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ８、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ６、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ６、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ６Ｎ２、Ｈ６Ｎ４、Ｈ６Ｎ５、Ｈ６Ｎ６、Ｈ６Ｎ８、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ９Ｎ５、Ｈ９Ｎ８、Ｈ１０Ｎ３、Ｈ１０Ｎ４、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１０Ｎ９、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１１Ｎ９、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１６Ｎ３、Ｈ１７Ｎ１０およびＨ１８Ｎ１１を含む。
【0060】
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製過程の模式図は図１に示すように、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法は、以下のステップを含む。
【0061】
（１）タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築した。
【0062】
インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをテンプレートとし、部位特異的な突然変異の方法により、Ｍ１タンパク質を発現する遺伝子配列のＣ末端、終止コドンの前に、「フレキシブルリンカー１（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５：ＧＳＧＧ）－ＴＥＶｐ認識部位（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４：ＥＮＬＹＦＱＧ）－フレキシブルリンカー２：ＧＳＧ）－タンパク質加水分解標的分子」のアミノ酸配列を発現できる遺伝子配列を挿入する。前記タンパク質加水分解標的分子のアミノ酸配列がＰＴＤ３である場合、構築されたベクターをＭ１－ＰＴＤ３と命名し、前記タンパク質加水分解標的分子のアミノ酸配列がＰＴＤ４である場合、構築されたベクターをＭ１－ＰＴＤ４と命名し、ベクターの命名規則は、このように類推する。取得された目標ベクターはシーケンシング検証を経て、発現ベクターの構築に成功した。
【0063】
（２）インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、置き換えた後のインフルエンザウイルスレスキューシステムと細胞系とをコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得した。
【0064】
ＷＳＮインフルエンザウイルスの１２プラスミドレスキューシステムを用いてＷＳＮウイルスに対してレスキューを行った。タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスをレスキューする際に、該１２プラスミドレスキューシステムにおけるＭ遺伝子を発現するためのプラスミドをステップ（１）で構築された発現ベクターに置き換えれば良く、レスキューで得られたウイルス株をステップ（１）における対応するベクターの名称で命名した。
【0065】
ＴＥＶｐを発現させる細胞を６ウェルプレートに接種し、翌日、ステップ（１）におけるＭ１－ＰＴＤ３ベクターとＷＳＮインフルエンザウイルスレスキューシステムにおける他の１１個のプラスミドとをＴＥＶｐタンパク質を発現する細胞系（ＨＥＫ２９３Ｔ細胞系）にコトランスフェクトし、６ウェルプレートの各孔に対応して各プラスミドを０．２μｇ加えた。トランスフェクトした６ｈ後に、培地を０．５％ＦＢＳ、１μｇ／ｍＬのＴＰＣＫ－ｔｒｙｐｓｉｎおよび二重特異性抗体を含む新しいＤＭＥＭ培地に交換した。その後、毎日細胞の病変状況を観察し、細胞病変が８０％になると、ウイルスの上清を収集すれば、タンパク質加水分解標的ウイルスを取得し、Ｍ１－ＰＴＤ３と命名した。
【0066】
同様の方法に従い、他のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得することができ、同様の規則で命名し、得られたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、表２に示すとおりである。
【0067】
【表2】
【0068】
得られたウイルスの上清を新たなＴＥＶｐタンパク質を発現する細胞系に感染させ、細胞病変を引き起こすことができるか否かの標準に従って構築されたタンパク質加水分解標的ウイルスを考察した。
【0069】
ＴＥＶｐタンパク質を発現する細胞系病変（例えば、ＴＥＶｐを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞および／またはＴＥＶｐを発現するＭＤＣＫ細胞）を引き起こすことができる場合、該タンパク質加水分解標的ウイルスのレスキューに成功したことを意味する。
【0070】
ＴＥＶｐを発現する細胞（例えば、ＴＥＶｐを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞および／またはＴＥＶｐを発現するＭＤＣＫ細胞）病変を引き起こすことができない場合、該タンパク質加水分解標的ウイルスのレスキューに失敗したことを意味する。
【0071】
結果によれば、全てのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのレスキューが成功したことが分かった。
【0072】
試験例１
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスに対して調製効率および安全性の評価を行った。
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスに対して調製効率および安全性の評価を行った。
【0073】
（１）細胞レベルでのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製効率および安全性の評価
【0074】
Ｍ１－ＰＴＤ３～Ｍ１－ＰＴＤ４１３インフルエンザウイルス株がＴＥＶｐを発現するＭＤＣＫ細胞系（ＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系）および正常なＭＤＣＫ細胞系で細胞病変を引き起こす状況および成長曲線を考察し、毒株の調製効率および安全性を考察した。野生型インフルエンザウイルスをコントロールとした。
【0075】
毒株の安全性の判断標準は、以下に示すとおりである。
【0076】
細胞病変に基づく観察確定：野生型インフルエンザウイルスはＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞およびＭＤＣＫ細胞でいずれも完全な細胞病変（１００％）を引き起こすことができる。毒株がＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系で明らかな細胞病変（細胞病変が５０～１００％に達した）を引き起こすことができれば、該毒株の調製効率が高いことを意味する。野生型ウイルスと比べて、毒株が正常なＭＤＣＫ細胞系で細胞病変を引き起こすことができず、または少ない細胞病変（細胞病変が野生型ウイルスによる１００％の細胞病変よりも低い）を引き起こす場合、該毒株が安全であることを意味する。
【0077】
成長曲線に基づく考察確定：野生型ウイルスと比べて、毒株がＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系で高度に複製できる（ウイルス力価が野生型ウイルスよりも高いか、野生型ウイルスに相当するか、または野生型ウイルスの千分の１以上である）場合、該毒株の調製効率が高いことを意味する。野生型ウイルスと比べて、正常なＭＤＣＫ細胞系で毒株の複製能力が低下し、ひいては複製できない（ウイルス力価が野生型ウイルスの力価よりも低い）場合、該毒株が安全であることを意味する。
【0078】
（ａ）細胞病変による検出のステップは、以下に示すとおりである。
【0079】
調製されたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスと野生型インフルエンザウイルスとをそれぞれＭＯＩ＝０．０１の割合でＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系および正常なＭＤＣＫ細胞系に感染させ、毎日細胞の病変状況を観察して記録し、４日間持続した。
【0080】
試験結果によれば、ＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系で、全てのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスおよび野生型インフルエンザウイルスがいずれも顕著な細胞病変を引き起こすことができ、一方、正常なＭＤＣＫ細胞系で、野生型インフルエンザウイルスのみが顕著な細胞病変を引き起こすことができ、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスによって引き起こされた病変が減少し、ひいては病変がなくなることが分かった。該結果は、調製されたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスが細胞レベルで安全性を有することを意味した。
【0081】
（ｂ）成長曲線による検出のステップは、以下に示すとおりである。
【0082】
調製されたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスと野生型インフルエンザウイルスとをＭＯＩ＝０．００１の割合でそれぞれＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系および正常なＭＤＣＫ細胞系に感染させ、感染した２４ｈ、４８ｈ、７２ｈおよび９６ｈ後に、細胞培養上清を取り、それぞれＴＣＩＤ５０実験およびプラーク実験で上清中のウイルス力価を検出することで、２種の細胞におけるウイルスの複製能力を知ることができた。
【0083】
図２の結果によれば、ＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系で、全てのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスおよび野生型インフルエンザウイルスが良好な複製能力を有し、一方、正常なＭＤＣＫ細胞系で、野生型インフルエンザウイルスのみが良好な複製能力を示し、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの複製能力が低下し、ひいては複製に欠陥があることが分かった。該結果は、調製されたタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスが細胞レベルで安全性を有することを意味した。
【0084】
（２）動物レベルでのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの安全性の評価
【0085】
ＢＡＬＢ／ｃおよびＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いて動物レベルでの前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの安全性を評価した。タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの代表として６つのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス毒株（Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ３、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＰＢＰ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＬ２０、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＸＯ３１、Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ）を選択し、ウイルスの安全性の評価を行った。
【0086】
安全性の評価の具体ステップは、以下に示すとおりである。
【0087】
（ａ）８０匹の７週間の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスまたはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを８グループに分け、１グループに１０匹とした。
【0088】
（ｂ）第１グループの各マウスにＰＢＳ（Ｖｅｈｉｃｌｅ）を点鼻で接種し、第２グループの各マウスに１×１０５ ＴＣＩＤ５０野生型ＷＳＮインフルエンザウイルス（ＷＴ）を点鼻で接種し、第３～８グループにそれぞれ１×１０５ ＴＣＩＤ５０のＭ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ３、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＰＢＰ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＬ２０、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＸＯ３１、またはＭ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰを点鼻で接種した。
【0089】
（ｃ）接種した３日後に、各グループに５匹のマウスを取り、その肺組織を取り、その中のウイルス力価を検出した。
【0090】
（ｄ）各グループの残りの５匹のマウスの体重および死亡状況を観察監視し続け、１４日間持続した。
【0091】
図３の結果によれば、野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスがマウスの肺で高度に複製し、マウス体重の明らかな低下およびマウスの死亡を引き起こすことができる。一方、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、マウス肺での複製能力が弱く（検出限界よりも低い）、マウス体重の低下を引き起こさず、マウスの死亡も引き起こさずことが分かった。従って、前記タンパク質加水分解標的ウイルスワクチンは良好な安全性を有する。
【0092】
試験例２
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの複製能力を考察した。
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの複製能力を考察した。
【0093】
（１）Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔを用いて前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのＭ１タンパク質の発現レベルを検出し、代表的な毒株として５株のタンパク質加水分解標的ウイルスを選択し、正常細胞における前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの複製能力を考察した。
【0094】
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスおよび野生型インフルエンザウイルスをそれぞれ正常なＭＤＣＫ細胞系（ＭＯＩ＝０．１）に感染させ、培地に２５ｎＭ、５０ｎＭおよび１００ｎＭのプロテアソーム阻害剤ＭＧ－１３２をそれぞれ補充し、ＤＭＳＯ（ウイルスと同じ希釈割合）と正常なＭＤＣＫ細胞系との混合溶液をコントロールとした。それぞれ感染した２４ｈ、４８ｈおよび７２ｈ後に、細胞サンプルを収集し、Ｗｅｓｔｅｒｎ ＢｌｏｔでウイルスＭ１タンパク質の発現レベルを検出した。
【0095】
（２）免疫蛍光実験により前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスＭ１タンパク質の発現レベルを検出し、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの複製能力を考察した。
【0096】
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスおよび野生型インフルエンザウイルスをそれぞれＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞系および正常なＭＤＣＫ細胞系（ＭＯＩ＝０．０１）に感染させ、培地にそれぞれ０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭおよび１００ｎＭのプロテアソーム阻害剤ＭＧ－１３２を補充し、ＤＭＳＯ（ウイルスと同じ希釈割合）と正常なＭＤＣＫ細胞系との混合溶液をコントロールとした。感染した４８ｈ後に、細胞を４％ＰＦＡで固定し、免疫蛍光実験により前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスＭ１タンパク質の発現レベルを検出した。
【0097】
図４の実験結果によれば、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスをＭＤＣＫ－ＴＥＶｐ細胞に感染させた後、大量に複製して大量のウイルスタンパク質を合成することができることが分かった。一方、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを正常なＭＤＣＫ細胞に感染させた後、大量複製できないため、少ないウイルスタンパク質Ｍ１のシグナルを検出し、細胞のプロテアソーム系が抑制された後、ウイルスタンパク質Ｍ１のシグナルが増加し、プロテアソーム系が抑制されてからウイルスの複製能力が増強することを意味した。検出結果は試験例２におけるＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ検出結果に合致し、タンパク質加水分解標的分子の導入が細胞のプロテアソームによるウイルスタンパク質の分解を媒介でき、ひいてはウイルスの複製能力を抑制することを更に証明し、細胞のプロテアソーム系が抑制された後、ウイルスの複製能力が回復し、これは前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの設計原理に一致した。
【0098】
試験例３
動物レベルでのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの免疫原性および保護性の考察
動物レベルでのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの免疫原性および保護性の考察
【0099】
動物レベルでの前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの免疫原性および保護性を評価した。不活化インフルエンザワクチン（ＩＩＶ）をコントロール（不活化インフルエンザウイルスワクチンは、発明者が中国薬局方による方法に基づいて同種のインフルエンザウイルス粒子を用いて調製される）とするとともに、臨床で使用される低温適応弱毒化ワクチンをコントロールとし、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの代表として６つのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス毒株（Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ３、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＰＢＰ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＬ２０、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＸＯ３１、Ｍ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ）を選択し、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの免疫原性および保護性の評価を行った。
【0100】
免疫原性および保護性の考察の具体的なステップは、以下に示すとおりである。
【0101】
（１）１８０匹の７週間の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスまたはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを９グループに分け、１グループに２０匹とした。
【0102】
（２）第１グループの各マウスにＰＢＳ（Ｖｅｈｉｃｌｅ）を点鼻で接種し、第２グループの各マウスに１×１０５ ＴＣＩＤ５０低温適応弱毒化インフルエンザワクチン（ＣＡＩＶ）を点鼻で接種し、第３グループの各マウスに１×１０５ ＴＣＩＤ５０不活化インフルエンザワクチン（ＩＩＶ）を筋肉注射で接種し、第４～９グループにそれぞれ１０５ ＴＣＩＤ５０のＭ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＤＣ３、Ｍ１－ＰＴＤＡＰＰＢＰ２、Ｍ１－ＰＴＤＫＬＨＬ２０、Ｍ１－ＰＴＤＦＢＸＯ３１、またはＭ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰを接種した。
【0103】
（３）接種した１週間後に、各グループに５匹のマウスを取り、その肺組織および脾臓を取り、その中のＴ細胞の免疫反応を検出した。
【0104】
（４）接種した３週間後に、各グループに５匹のマウスを取り、採血し、それぞれ赤血球凝集抑制（ＨＩ）試験、中和（ＮＴ）抗体検出およびＥＬＩＳＡ検出に使用し、その中の抗体免疫反応を検出した。
【0105】
（５）接種した３週間後に、各グループのマウスに２×１０５ ＰＦＵの同種の野生型ＷＳＮインフルエンザウイルスまたは異種の野生型インフルエンザウイルスＡ／Ｘ－３１（Ｈ３Ｎ２）を点鼻で接種した。
【0106】
（６）野生型インフルエンザウイルスを接種した３日後に、各グループに５匹のマウスを取り、その肺組織を取り、その中のウイルス力価を検出した。
【0107】
（７）各グループの残りの５匹のマウスの体重および死亡状況を観察監視し続け、１４日間持続した。
【0108】
図５の結果によれば、全てのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスが動物体内に高レベルで赤血球凝集抑制（ＨＩ）抗体力価、中和（ＮＴ）抗体力価、ａｎｔｉ－ＨＡ ＩｇＧ、ａｎｔｉ－ＮＰ ＩｇＧ、ａｎｔｉ－ＮＰ ＩｇＡ、Ｔ細胞免疫反応等を誘導することができ、且つ、誘導した赤血球凝集抑制抗体、中和抗体、ａｎｔｉ－ＮＰ ＩｇＧ、ａｎｔｉ－ＮＰ ＩｇＡ、Ｔ細胞免疫反応のレベルは、不活化インフルエンザワクチンによって誘導された抗体のレベルよりも著しく高く、一部の毒株によって誘導された免疫応答のレベルは、低温適応弱毒化ワクチンよりも高いことが分かった。図６の結果によれば、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンの接種は、動物肺組織中の野生型ＷＳＮインフルエンザウイルス力価およびＸ－３１（Ｈ３Ｎ２）ウイルス力価を著しく減少することができ、且つ、全ての動物の生存を保護できるため、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンは、交差免疫保護効果を提供することができ、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンにより提供する保護性は、不活化インフルエンザワクチンよりも著しく優れている。そのため、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンは、より優れている免疫原性および保護効果を持つ。また、図７の結果によれば、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスワクチンは、高齢（１５月齢）マウスおよびフェレットモデルでも高レベルの免疫保護効果を発揮できることが分かった。
【0109】
試験例４
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの腫瘍溶解ウイルスとする潜在能力を考察した。
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの腫瘍溶解ウイルスとする潜在能力を考察した。
【0110】
Ｃ５７ＢＬ／ｃの黒色腫担癌モデルを用い、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの腫瘍溶解効果を評価した。
【0111】
具体的な試験ステップは、以下に示すとおりである。
【0112】
（１）マウスの背部皮下に黒色腫を注射し、９日飼育し、腫瘍の体積が約１００ｍｍ３になると、実験操作を続ける。
【0113】
（２）腫瘍内に５０μＬのタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスＭ１－ＰＴＤβ－ＴｒＣＰ（Ｍ１－ＰＴＤ９４）およびＰＢＳをそれぞれ注射し、１日おきに１回注射し、合計４回注射した。
【0114】
（３）毎日腫瘍の体積を検出した。
【0115】
図８の結果に示すように、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスが腫瘍体積の増加を効果的に抑制できることが分かり、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスが腫瘍溶解ウイルスとなる潜在能力を有することが証明された。
【0116】
以上をまとめ、本願に係るタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されて加水分解でき、複製能力が弱く、高い安全性を有し、生ワクチン、弱毒化ワクチンとしてインフルエンザの予防に用いられることができる。前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、腫瘍治療中で腫瘍溶解ウイルスとして使用できる。本願に係るタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプの種類が豊であり、インフルエンザウイルスワクチンの研究開発および腫瘍治療に対して重要な役割を果たす。
【0117】
以上の説明は、本願の具体的な実施形態に過ぎないが、本願の保護範囲はこれに限定されるものではなく、当業者であれば、当業者が本願に開示された技術的範囲内に容易に想到可能な変更または置換は、全て本願の保護範囲および公開範囲内に含まれることを理解すべきであることを出願人より声明する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-08-21
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
加水分解標的Ｍ１タンパク質を含むタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスであって、前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項2】
前記ＴＥＶｐ認識部位は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項3】
前記Ｍ１タンパク質のＣ末端とＴＥＶｐ認識部位との間はフレキシブルリンカー１により連結され、好ましくは、前記フレキシブルリンカー１はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５で示されるアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記ＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間はフレキシブルリンカー２により連結され、
好ましくは、前記フレキシブルリンカー２はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５６で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項4】
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型のウイルスであり、好ましくは、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ８、Ｈ１Ｎ９、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ８、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ６、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ６、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ６Ｎ２、Ｈ６Ｎ４、Ｈ６Ｎ５、Ｈ６Ｎ６、Ｈ６Ｎ８、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ９Ｎ５、Ｈ９Ｎ８、Ｈ１０Ｎ３、Ｈ１０Ｎ４、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１０Ｎ９、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１１Ｎ９、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１６Ｎ３、Ｈ１７Ｎ１０またはＨ１８Ｎ１１のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む、
請求項１に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか１項に記載の加水分解標的Ｍ１タンパク質をコードする、核酸分子。
【請求項6】
少なくとも１つのコピーされた請求項５に記載の核酸分子を含む、組換えベクター。
【請求項7】
請求項１～４のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法であって、タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築するステップ（１）と、
インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、細胞系でコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得するステップ（２）と、を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
【請求項8】
ステップ（１）において、前記発現ベクターには前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のコード配列が含まれ、好ましくは、ステップ（２）において、前記細胞系はＴＥＶｐを過剰発現する人工細胞系であり、
好ましくは、ステップ（２）において、前記インフルエンザウイルスレスキューシステムは、ＷＳＮインフルエンザウイルスの１２プラスミドレスキューシステムを含む、
請求項７に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
【請求項9】
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを、ＴＥＶｐを過剰発現する人工的に改変された細胞系で複製し、大規模に生産するステップを更に含む、請求項７に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
【請求項10】
請求項１～４のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを含むインフルエンザウイルスワクチンであって、好ましくは、前記インフルエンザウイルスワクチンは弱毒化ワクチン、複製欠陥生ウイルスワクチンまたは複製制御可能生ウイルスワクチンのうちのいずれか１種である、
インフルエンザウイルスワクチン。
【請求項11】
請求項１～４のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの、インフルエンザを治療する薬剤および／または腫瘍溶解薬剤の調製における使用。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0117】
以上の説明は、本願の具体的な実施形態に過ぎないが、本願の保護範囲はこれに限定されるものではなく、当業者であれば、当業者が本願に開示された技術的範囲内に容易に想到可能な変更または置換は、全て本願の保護範囲および公開範囲内に含まれることを理解すべきであることを出願人より声明する。
本開示は、例えば、以下に関する。
［１］
加水分解標的Ｍ１タンパク質を含むタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスであって、
前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［２］
前記ＴＥＶｐ認識部位は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４で示されるアミノ酸配列を含む、
前記［１］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［３］
前記Ｍ１タンパク質のＣ末端とＴＥＶｐ認識部位との間はフレキシブルリンカー１により連結され、
好ましくは、前記フレキシブルリンカー１はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５で示されるアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記ＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間はフレキシブルリンカー２により連結され、
好ましくは、前記フレキシブルリンカー２はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５６で示されるアミノ酸配列を含む、
前記［１］または［２］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［４］
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型のウイルスであり、
好ましくは、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ８、Ｈ１Ｎ９、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ８、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ６、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ６、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ６Ｎ２、Ｈ６Ｎ４、Ｈ６Ｎ５、Ｈ６Ｎ６、Ｈ６Ｎ８、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ９Ｎ５、Ｈ９Ｎ８、Ｈ１０Ｎ３、Ｈ１０Ｎ４、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１０Ｎ９、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１１Ｎ９、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１６Ｎ３、Ｈ１７Ｎ１０またはＨ１８Ｎ１１のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む、
前記［１］～［３］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［５］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載の加水分解標的Ｍ１タンパク質をコードする、
核酸分子。
［６］
少なくとも１つのコピーされた前記［５］に記載の核酸分子を含む、
組換えベクター。
［７］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法であって、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築するステップ（１）と、
インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、細胞系でコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得するステップ（２）と、を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
［８］
ステップ（１）において、前記発現ベクターには前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のコード配列が含まれ、
好ましくは、ステップ（２）において、前記細胞系はＴＥＶｐを過剰発現する人工細胞系であり、
好ましくは、ステップ（２）において、前記インフルエンザウイルスレスキューシステムは、ＷＳＮインフルエンザウイルスの１２プラスミドレスキューシステムを含む、
前記［７］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
［９］
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを、ＴＥＶｐを過剰発現する人工的に改変された細胞系で複製し、大規模に生産するステップを更に含む、
前記［７］または［８］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
［１０］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを含むインフルエンザウイルスワクチンであって、
好ましくは、前記インフルエンザウイルスワクチンは弱毒化ワクチン、複製欠陥生ウイルスワクチンまたは複製制御可能生ウイルスワクチンのうちのいずれか１種である、
インフルエンザウイルスワクチン。
［１１］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、前記［５］に記載の核酸分子、前記［６］に記載の組換えベクター、前記［７］～［９］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法または前記［１０］記載のインフルエンザウイルスワクチンのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせの、インフルエンザを治療する薬剤および／または腫瘍溶解薬剤の調製における使用。
本開示は、例えば、以下に関する。
［１］
加水分解標的Ｍ１タンパク質を含むタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスであって、
前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のＣ末端には、ＴＥＶｐ認識部位およびユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子が順次に挿入され、前記ユビキチン－プロテアソーム系によって認識されるタンパク質加水分解標的分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～３５３で示されるアミノ酸配列を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［２］
前記ＴＥＶｐ認識部位は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５４で示されるアミノ酸配列を含む、
前記［１］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［３］
前記Ｍ１タンパク質のＣ末端とＴＥＶｐ認識部位との間はフレキシブルリンカー１により連結され、
好ましくは、前記フレキシブルリンカー１はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５５で示されるアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記ＴＥＶｐ認識部位とタンパク質加水分解標的分子との間はフレキシブルリンカー２により連結され、
好ましくは、前記フレキシブルリンカー２はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５６で示されるアミノ酸配列を含む、
前記［１］または［２］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［４］
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスは、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型のウイルスであり、
好ましくは、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスのサブタイプは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ８、Ｈ１Ｎ９、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ８、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ６、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ６、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ６Ｎ２、Ｈ６Ｎ４、Ｈ６Ｎ５、Ｈ６Ｎ６、Ｈ６Ｎ８、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ９Ｎ５、Ｈ９Ｎ８、Ｈ１０Ｎ３、Ｈ１０Ｎ４、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１０Ｎ９、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１１Ｎ９、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１６Ｎ３、Ｈ１７Ｎ１０またはＨ１８Ｎ１１のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む、
前記［１］～［３］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス。
［５］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載の加水分解標的Ｍ１タンパク質をコードする、
核酸分子。
［６］
少なくとも１つのコピーされた前記［５］に記載の核酸分子を含む、
組換えベクター。
［７］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法であって、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを調製するための発現ベクターを構築するステップ（１）と、
インフルエンザウイルスレスキューシステムにおけるインフルエンザウイルスのＭ遺伝子を発現するプラスミドをステップ（１）で得られた発現ベクターに置き換え、細胞系でコトランスフェクトし、前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを取得するステップ（２）と、を含む、
タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
［８］
ステップ（１）において、前記発現ベクターには前記加水分解標的Ｍ１タンパク質のコード配列が含まれ、
好ましくは、ステップ（２）において、前記細胞系はＴＥＶｐを過剰発現する人工細胞系であり、
好ましくは、ステップ（２）において、前記インフルエンザウイルスレスキューシステムは、ＷＳＮインフルエンザウイルスの１２プラスミドレスキューシステムを含む、
前記［７］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
［９］
前記タンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを、ＴＥＶｐを過剰発現する人工的に改変された細胞系で複製し、大規模に生産するステップを更に含む、
前記［７］または［８］に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法。
［１０］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスを含むインフルエンザウイルスワクチンであって、
好ましくは、前記インフルエンザウイルスワクチンは弱毒化ワクチン、複製欠陥生ウイルスワクチンまたは複製制御可能生ウイルスワクチンのうちのいずれか１種である、
インフルエンザウイルスワクチン。
［１１］
前記［１］～［４］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルス、前記［５］に記載の核酸分子、前記［６］に記載の組換えベクター、前記［７］～［９］のいずれか１項に記載のタンパク質加水分解標的インフルエンザウイルスの調製方法または前記［１０］記載のインフルエンザウイルスワクチンのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせの、インフルエンザを治療する薬剤および／または腫瘍溶解薬剤の調製における使用。
【国際調査報告】