特表 2025-509312 ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴに結合する抗体を含む併用療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-04-11

(54)【発明の名称】ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴに結合する抗体を含む併用療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20250404BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250404BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250404BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20250404BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20250404BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20250404BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20250404BHJP

   C07K 16/40 20060101ALN20250404BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20250404BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61P35/00 ZNA

A61P43/00 121

A61K45/00

A61P35/04

A61K31/506

C07K16/28

C07K16/40

C07K19/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024553479

(86)(22)【出願日】2023-03-07

(85)【翻訳文提出日】2024-09-06

(86)【国際出願番号】 NL2023050110

(87)【国際公開番号】W WO2023172133

(87)【国際公開日】2023-09-14

(31)【優先権主張番号】2031177

(32)【優先日】2022-03-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(31)【優先権主張番号】2032392

(32)【優先日】2022-07-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(31)【優先権主張番号】2033444

(32)【優先日】2022-11-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】510340757

【氏名又は名称】メルス ナムローゼ フェンノートシャップ

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100188558

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(72)【発明者】

【氏名】イェルン・イレス・ランメルツ・ファン・ビューレン

(72)【発明者】

【氏名】ジャンルカ・ラウス

(72)【発明者】

【氏名】ロベルト・パウル・ドールンボス

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZC202

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB36

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC42

4C086GA07

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA72

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、対象におけるがんの治療の方法における使用のための、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体との組み合わせに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるがんの治療の方法における使用のための、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、前記第２の可変ドメインが、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体との、組み合わせ。

【請求項2】

がんを有する対象を治療する方法であって、前記治療が、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、前記第２の可変ドメインが、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体との有効量の組み合わせを前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項3】

対象におけるがんの治療のための医薬品の製造における、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含み、前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、前記第２の可変ドメインが、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせの、使用。

【請求項4】

前記がんが、ＥＧＦＲ陽性及び／又はｃＭＥＴ陽性がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項5】

前記がんが、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴ異常を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項6】

前記がんが、チロシンキナーゼ阻害剤での治療に耐性がある、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項7】

前記がんが、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤に対して耐性がある、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項8】

ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤耐性が、第１、第２及び／又は第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤、好ましくは、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する耐性を含む、請求項７に記載の使用又は方法。

【請求項9】

ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤耐性が、カプマチニブ、テポチニブ、クリゾテニブ、カボザンチニブ、サボリチニブ、グレサチニブ、シトラバチニブ、ＢＭＳ－７７７６０７、メレスチニブ、チバンチニブ、ゴルバチニブ、フォレチニブ、ＡＭＧ－３３７又はＢＭＳ－７９４８３３、好ましくは、カプマチニブ又はテポチニブに対する耐性を含む、請求項７に記載の使用又は方法。

【請求項10】

前記対象が、チロシンキナーゼ阻害剤、好ましくはＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けている、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項11】

前記対象が、第１、第２又は第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けている、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項12】

前記対象が、ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けている、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項13】

前記がんが、活性化ＥＧＦＲ変異、承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲへの第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の結合を低減する変異、後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、ｃＭＥＴ変異又はｃＭＥＴ異常を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項14】

前記がんが、エクソン１９欠失変異、好ましくは、フレーム内エクソン１９欠失、エクソン２０ミスセンス変異、又はＬ８５８Ｒなどのエクソン２１変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項15】

前記がんが、ＥＧＦＲエクソン２０変異、好ましくはエクソン２０挿入変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項16】

前記がんが、オシメルチニブに耐性を付与する変異などの後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項17】

前記がんが、近ループ挿入、遠ループ挿入、好ましくは、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｖ７７４＿Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧＬ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＥＧＮ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧＤ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＨ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＰ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＧＮＰＨ、Ｈ７７３ｄｅｌｉｎｓＳＮＰＹ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＶＤＮ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＫＨ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＲＤ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｄｅｌｉｎｓＨＮＰＹ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＧＴ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＴ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＧ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＳＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＶＶ及びＶ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＭＡＳＶ；又は変異Ｔ７９０Ｍ、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｃ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｒ、Ｇ７９６Ｓ、Ｇ７９６Ｄ）、Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｃ７９７Ｓ、Ｃ７９７Ｇ）、Ｌ７９８Ｉ若しくはフレーム内エクソン２０挿入、例えば、Ｍ７６６＿Ａ７６７ｉｎｓＡＳＶ若しくはＨ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｉｎｓ７６１（ＥＡＦＱ）、Ｉｎｓ７７０（ＡＳＶ）、Ｉｎｓ７７１（Ｇ）、Ｉｎｓ７７４（ＮＰＨ）、Ｍ７６６＿Ａ７６７１ｎｓ Ａ、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ＩｎｓＳＶＡ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ＩｎｓＮＳ、Ｄ７６１＿Ｅ７６２ＩｎｓＸ１－７、Ａ７６３＿Ｙ７６４ＩｎｓＸ１－７、Ｙ７６４＿Ｙ７６５ ＩｎｓＸ１－７、Ｍ７６６＿Ａ７６７ＩｎｓＸ１－７、Ａ７６７＿Ｖ７６８ ＩｎｓＸ１－７、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ ＩｎｓＸ１－７＞Ｖ７６９＿Ｄ７７０ ＩｎｓＸ１－７＞Ｄ７７０＿Ｎ７７１ ＩｎｓＸ１－７＞Ｎ７７１＿Ｐ７７２ ＩｎｓＸ１－７＞Ｐ７７２＿Ｈ７７３ ＩｎｓＸ１－７、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ ＩｎｓＸ１－７若しくはＶ７７４＿Ｃ７７５ ＩｎｓＸ１－７から選択されるエクソン２０変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項18】

前記がんが、ｃＭＥＴ増幅、ｃＭＥＴ過剰発現、ｃＭＥＴ経路のシグナル伝達の増加、ｃＭＥＴ遺伝子増幅、ＨＧＦ発現の増加及び／又はｃＭＥＴタンパク質活性の増加などのｃＭＥＴ異常を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項19】

前記がんが、ｃＭＥＴエクソン１４スキッピング変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項20】

前記第１世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、ゲフィチニブ、エルロチニブ若しくはイコチニブを含むか、又はこれである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項21】

前記第２世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、アファチニブ、ダコミチニブ、ＸＬ６４７、ＡＰ２６１１３、ＣＯ－１６８６若しくはネラチニブを含むか、又はこれである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項22】

前記第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼが、オシメルチニブ、ラゼルチニブ、アルフルチニブ、レジベルチニブ、ロシレチニブ、オルムチニブ、アルモネルチニブ、アビベルチニブ、ＡＳＫ１２００６７、ベフォテルチニブ、ＳＨ－１０２８、ナザルチニブ（ＥＧＦ８１６）、ナコチニブ（ＡＳＰ８２７３）、マベレルチニブ（ＰＦ－０６４７７７５）、オラフェルチニブ（ＣＫ－１０１）、ケイナチニブ若しくはＥＳ－０７２、好ましくはオシメルチニブを含むか、又はこれである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項23】

前記ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤が、カプマチニブ、テポチニブ、クリゾテニブ、カボザンチニブ、サボリチニブ、グレサチニブ、シトラバチニブ、ＢＭＳ－７７７６０７、メレスチニブ、チバンチニブ、ゴルバチニブ、フォレチニブ、ＡＭＧ－３３７若しくはＢＭＳ－７９４８３３を含むか、又はこれである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項24】

前記治療が、前記二重特異性抗体と前記チロシンキナーゼ阻害剤との前記組み合わせを、それを必要とする対象に投与することを含み、好ましくは、前記二重特異性抗体を、前記第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項25】

前記対象が、チロシンキナーゼ阻害剤治療又は抗ＥＧＦＲ治療ナイーブである対象など、事前の抗がん治療を受けていない、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項26】

前記二重特異性抗体及びＴＫＩ阻害剤の投与が、一次選択治療として投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項27】

前記対象又はがんが、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴ活性化変異、例えば、エクソン１９欠失変異又はエクソン２１変異（Ｌ８５８Ｒなど）を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項28】

前記対象が、ヒト対象である、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項29】

前記がんが、肺がん、特に非小細胞肺がん、好ましくは転移性又は進行性非小細胞肺がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項30】

前記がんが、進行性又は転移性がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【請求項31】

第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、前記第２の可変ドメインが、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体とを含む、薬学的組み合わせ。

【請求項32】

前記抗体が、ヒト抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項33】

前記抗体が、ＡＤＣＣ増強されている、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項34】

前記抗体が、１：１の抗ＥＧＦＲ、抗ｃＭＥＴ化学量論を有するＩｇＧ１フォーマット抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項35】

前記抗体が、ＥＧＦＲに結合することができる１つの可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合することができる１つの可変ドメインと、を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項36】

ヒトＥＧＦＲに結合することができる前記可変ドメインが、カニクイザル及びマウスＥＧＦＲにも結合することができる、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項37】

ヒトＥＧＦＲに結合することができる前記可変ドメインが、ヒトＥＧＦＲのドメインＩＩＩに結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項38】

ｃＭＥＴに結合することができる前記可変ドメインが、ｃＭＥＴへの抗体５Ｄ５の前記結合を遮断する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項39】

ｃＭＥＴに結合することができる前記可変ドメインが、ｃＭＥＴへのＨＧＦの前記結合を遮断する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項40】

一方のＣＨ３ドメインにおける４０５位及び４０９位の前記アミノ酸が、他方のＣＨ３ドメインにおける対応する位置の前記アミノ酸と同じである（ＥＵ番号付け）、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項41】

Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｓ、Ｘ５＝Ｙ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｇであるか、
Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｓ、Ｘ５＝Ｙ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｇであるか、
Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｓ、Ｘ５＝Ｙ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｇであるか、
Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄであるか、
Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄであるか、
Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄであるか、
Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｇ、Ｘ４＝Ｙ、Ｘ５＝Ｌ、Ｘ６＝Ｄ、かつＸ７＝Ｇであるか、
Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｇ、Ｘ４＝Ｙ、Ｘ５＝Ｌ、Ｘ６＝Ｄ、かつＸ７＝Ｇであるか、又は
Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｇ、Ｘ４＝Ｙ、Ｘ５＝Ｌ、Ｘ６＝Ｄ、かつＸ７＝Ｇである、
先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項42】

Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄであるか、又はＸ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄであるか、又はＸ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項43】

Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｇ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄであるか、又はＸ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｒ、Ｘ５＝Ｈ、Ｘ６＝Ｗ、かつＸ７＝Ｄである、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項44】

前記第２の可変ドメインの前記重鎖可変領域が、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～３、７、８、１０、１３、１５、１６、１７、２１、２２又は２３の配列のうちの１つの前記アミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項45】

前記第２の可変ドメインの前記重鎖可変領域が、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号２、７、８、１０、１３又は２３の配列のうちの１つの前記アミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項46】

前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、前記第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及びＣＤＲ３配列ＥＴＹＹＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを有する重鎖可変領域を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項47】

前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、前記第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＴＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及び配列ＥＴＹＦＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項48】

前記第１及び第２の可変ドメインが、共通軽鎖、好ましくは、図４Ｂの軽鎖可変ドメインを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項49】

抗体が、ＨＧＦ成長応答性細胞のＨＧＦ誘導成長を阻害する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【請求項50】

抗体が、ＥＧＦ成長応答性細胞のＥＧＦ誘導成長を阻害する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

この開示は、抗体の分野に関する。具体的には、この開示は、異常細胞を伴う疾患の治療のための、ヒト抗体を含む、治療抗体の分野に関する。更に、この開示は、多重特異性抗体を含むＥＧＦＲ及びｃＭＥＴに結合する抗体、並びにＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ陽性細胞、特に腫瘍細胞の結合におけるそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体（ＥＧＦＲ）は、細胞外タンパク質リガンドの上皮成長因子ファミリー（ＥＧＦファミリー）のメンバーのための細胞表面受容体である。ＥＧＦＲは、ＥｒｂＢ－１受容体としても知られている。受容体には、過去に様々な名称が与えられている（ＥＧＦＲ；ＥＲＢＢ；ＥＲＢＢ１；ＨＥＲ１；ＰＩＧ６１；ｍＥＮＡ）。本開示では、ヒトにおける名称ＥｒｂＢ－１、ＥＧＦＲ又はＨＥＲ１は、互換的に使用される。ＥＧＦＲは、以下の４つの密接に関連する受容体チロシンキナーゼである受容体のＥｒｂＢファミリーのメンバーである：ＥｒｂＢ－１（ＥＧＦＲ）、ＥｒｂＢ－２（ＨＥＲ２／ｃ－ｎｅｕ；Ｈｅｒ２）、ＥｒｂＢ－３（Ｈｅｒ３）、及びＥｒｂＢ－４（Ｈｅｒ４）。

【0003】

ＥＧＦＲは、細胞表面上に存在し、上皮成長因子及び形質転換成長因子α（ＴＧＦα）を含むその特異性リガンドの結合によって活性化され得る。その成長因子リガンドによって活性化されると、受容体は、不活性である大部分がモノマーの形態から活性なホモ二量体への移行を受け得る。リガンド結合後にホモ二量体を形成することに加えて、ＥＧＦＲは、ＥｒｂＢ２などのＥｒｂＢ受容体ファミリーの別のメンバーと対合して、活性化されたヘテロ二量体を作成し得る。二量体はまた、リガンド結合の不在下で形成する場合があり、活性化されたＥＧＦＲのクラスターは、リガンド結合後に形成し得る。

【0004】

ＥＧＦＲ二量体化は、固有の細胞内タンパク質－チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）活性を刺激する。この活性は、細胞増殖及び分化をもたらすいくつかのシグナル変換カスケードを誘導する。ＥＧＦＲのキナーゼドメインは、これが複合体化されている他の受容体のチロシン残基を交差リン酸化することができ、それ自体がそのようにして活性化され得る。

【0005】

ＥＧＦＲを伴う変異は、いくつかのタイプのがんにおいて特定されている。これは、拡大するクラスの抗がん療法の標的である。そのような療法は、肺がんに対するゲフィチニブ及びエルロチニブなどのＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）、並びに結腸がん及び頭頸部がんに対するセツキシマブ及びパニツムマブなどの抗体を含む。

【0006】

セツキシマブ及びパニツムマブは、受容体を阻害するモノクローナル抗体である。臨床開発中の他のモノクローナルは、ザルツムマブ、ニモツズマブ及びマツズマブである。モノクローナル抗体は、主に受容体へのリガンド結合を遮断することによって、細胞外リガンド誘導受容体活性化を遮断することを目的としている。結合部位が遮断されると、シグナル誘導分子は、効果的に結合せず、それによって、下流シグナル伝達も活性化させない場合がある。リガンド誘導受容体活性化はまた、不活性受容体コンフォメーション（マツズマブ）の安定化によって阻害され得る。

【0007】

これまでのところ、ＥＧＦＲ標的化療法は、経時的な治療耐性の発症に関連付けられている。ＥＧＦＲ－ＴＫＩに対する耐性についての様々なメカニズムが説明されている。進行性非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を有する患者では、耐性のメカニズムは、二次又は三次変異の発生（例えば、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｌ７１８Ｑ、エクソン２０挿入変異）、代替シグナル伝達の活性化（例えば、Ｍｅｔ、ＨＧＦ、ＡＸＬ、Ｈｈ、ＩＧＦ－１Ｒ）、異常な下流経路（例えば、ＡＫＴ変異、ＰＴＥＮ減少）、ＥＧＦＲ－ＴＫＩｓ媒介性アポトーシス経路の障害（例えば、ＢＣＬ２様１１／ＢＩＭ欠失多型）、及び組織学的形質転換を含む。耐性のいくつかのメカニズムが特定されているが、他のメカニズムは特定されていないままである。更に、第３世代のＴＫＩ耐性メカニズムの場合、ＮＳＣＬＣの分子不均一性は、これまでに発見された広範囲の耐性異常への寄与に影響を与える。同様に、ＥＧＦＲ抗体で治療された結腸直腸がん患者も、経時的に耐性を発症する。これは、ＫＲＡＳ変異の出現によって発生し得る。ＫＲＡＳ変異を有しないもののうち、ＭＥＴ原がん遺伝子の増幅は、抗ＥＧＦＲ療法中の後天性耐性と関連付けられ得る（Ｂａｒｄｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｊｕｎ；３（６）：６５８－７３．ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９－８２９０．ＣＤ－１２－０５５８）。腫瘍は、最初から耐性であり得るか、又は治療中に耐性を発症し得る。ＥＧＦＲ標的化療法に対する耐性は、多くのＥＧＦＲ陽性がんに見られ、当技術分野では、ケアの標準を改善し、かつＥＧＦＲ標的化療法耐性に対処する能力の点で優れているより効き目のあるＥＧＦＲがん治療の必要性を実証している。

【0008】

ＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）及び肝細胞成長因子（ＨＧＦ）の調節不全は、様々な腫瘍で報告されている。リガンド駆動型ｃＭＥＴ活性化は、いくつかのがんで観察されている。血清及び腫瘍内ＨＧＦの上昇は、肺、乳がん及び多発性骨髄腫において観察される（Ｊ．Ｍ．Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｔｈｏｒａｃ Ｓｕｒｇ ６６，１９１５（１９９８）；Ｐ．Ｃ．Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２３，４９（２００３）；Ｂ．Ｅ．Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ８０，９１（２００２）；Ｃ．Ｓｅｉｄｅｌ，ｅｔ ａｌ，Ｍｅｄ Ｏｎｃｏｌ １５，１４５（１９９８））。ｃＭＥＴ、ｃＭＥＴ増幅又は変異の過剰発現は、結腸直腸、肺、胃及び腎臓がんなどの様々ながんにおいて報告されており、リガンド非依存性受容体活性化を駆動し得る（Ｃ．Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ４，９１５（２００３）；Ｇ．Ｍａｕｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ １３，４１（２００２））。ＨＧＦの発現は、ＨＧＦ／ｃＭＥＴシグナル伝達経路の活性化とも関連付けられており、ＥＧＦＲ標的化療法によって選択された腫瘍の逃避メカニズムのうちの１つでもある。更に、カプマチニブ又はテポチニブなどのｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤での治療は、ｃＭＥＴ異常に対する逃避メカニズムの出現と関連付けられている。

【0009】

ｃＭＥＴ受容体は、共通の前駆体のタンパク質分解処理によって、シングルパスのジスルフィド結合α／βヘテロ二量体に形成される。ｃＭＥＴの細胞外部分は、３つのドメインタイプから構成される。Ｎ末端領域フォールドは、αサブユニット全体及びβサブユニットの一部を包含する大きなセマフォリン（Ｓｅｍａ）ドメインを形成する。プレキシン－セマフォリン－インテグリン（ＰＳＩ）ドメインは、Ｓｅｍａドメインに続いており、４つのジスルフィド結合を含む。このドメインは、免疫グロブリン様ドメインに関連する４つの免疫グロブリンプレキシン転写（ＩＰＴ）ドメインを介して膜貫通ヘリックスに接続されている。細胞内では、ｃＭＥＴ受容体は、独自の膜近傍及びカルボキシ末端配列が横にあるチロシンキナーゼ触媒ドメインを含有する（Ｏｒｇａｎ ａｎｄ Ｔｓａｏ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３．１＿ｓｕｐｐｌ（２０１１）：参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＳ７－Ｓ１９）。

【0010】

ｃＭＥＴ、肝細胞成長因子（ＨＧＦ；散乱因子としても知られている）、及びそのスプライシングアイソフォーム（ＮＫ１、ＮＫ２）のリガンドは、ｃＭＥＴ受容体の既知のリガンドである。ＨＧＦは、１９９１年に、強力なマイトジェン／モルホゲンとして特定された。ＨＧＦ／ｃＭＥＴシグナル伝達経路は、様々ながんの発症及び進行において重要な役割を果たす。ヒトがんにおけるＨＧＦ又はｃＭＥＴの調節不全及び／又は過剰活性化は、予後不良に関わる。ｃＭＥＴは、過剰発現、増幅又は変異を介して活性化され得る。活性化は、がんの発症、進行、浸潤性成長及び転移を促進し得る。ｃＭＥＴは、ＨＧＦに関連付けられた、ＨＧＦに依存しない手法で活性化され得る。ＨＧＦに依存しない活性化は、ｃＭＥＴ過剰発現の場合に発生する。豊富なｃＭＥＴはまた、リガンドの不在下で、（ヘテロ）二量体化及び細胞内シグナル伝達を誘発し得る。追加のリガンドは、そのようなｃＭＥＴ過剰発現細胞の機能に影響を与えないように思われる。ｃＭＥＴ増幅は、ｃＭＥＴ過剰発現に関連付けられており、腫瘍サブタイプのバイオマーカーとして出現した。

【0011】

ＨＧＦは、身全体に遍在して発現され、この成長因子が、全身的に利用可能なサイトカインであり、また腫瘍間質からのものであることを示す。ｃＭＥＴ活性化の陽性パラクリン及び／又はオートクリンループは、更なるｃＭＥＴ発現をもたらし得る。ＨＧＦ特異性抗体リロツムマブ（ＡＭＧ１０２）は、胃がんに対して開発された。第Ｉ相及び第ＩＩ相試験は有望であったが、胃がんにおける一次選択療法としてシスプラチン及びカペシタビンを有する第ＩＩＩ相研究（ＲＩＬＯＭＥＴ－２）は、研究２００７０６２２の事前に計画されたデータ監視委員会の安全性レビューの後に終了した。

【0012】

ＥＧＦＲ標的化療法に対する耐性におけるｃＭＥＴ／ＨＧＦシグナル伝達の関連性は、耐性に対処する手法の開発を刺激した。これまでのところ、抗体ベースのアプローチは、抗ＨＧＦ抗体を含み、抗ｃＭＥＴ又はｃＭＥＴ抗体及びｃＭＥＴ／ＥＧＦＲ（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：３５－４４でレビューされた）は、臨床的に有効ではなかった。ｃＭＥＴ抗体オナルツズマブ（ＭｅｔＭａｂ（商標））及びエミベツズマブ（ＬＹ－２８７５３５８）は、第ＩＩ相臨床試験で評価した。これらのうち、オナルツズマブは、ＥＧＦＲ阻害剤エルロチニブと一緒に用いた併用治療において、結腸直腸がんに対して有効であると思われた。しかしながら、これらの結果は、無作為の第ＩＩＩ相臨床試験では繰り返すことができなかった。ＭｅｔＭＡｂは、ｃＭＥＴへのＨＧＦ結合及びその後の経路活性化を遮断する、ｃＭＥＴに対する一価モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である（Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ．６８：ｐｐ４３６０－６８）。

【0013】

抗ＥＧＦＲ、ｃＭＥＴ及びＨＧＦ免疫療法の問題を克服するため、本開示は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含む、新規の二重特異性抗体を提供する。

【0014】

これまでのところ、ある特定の二重特異性ＥＧＦＲ×ｃＭＥＴ抗体が当該技術分野で記載されている。Ｃａｓｔｏｌｄｉ Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）には、抗体５Ｄ５（又はＭｅｔＭａｂ）のｃＭＥＴ結合部位及びセツキシマブのＥＧＦＲ結合部位を有する、ＭｅｔＨｅｒ１と呼ばれる二重特異性ＥＧＦＲ×ｃＭＥＴ抗体が記載されている。二重特異性抗体は、２：１の固定ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ結合化学量論比を有する（補足図を参照）。

【0015】

ＵＳ２０１４０３７８６６４には、様々な他の二重特異性抗体のなかでも、ｃＭＥＴ×ＥＧＦＲ二重特異性抗体が記載されている。完全な二重特異性抗体は、後にタンパク質分解的に切断される単一のタンパク質として産生される。２つのＶＨ／ＶＬドメインは、単鎖Ｆｖ断片として産生される。抗体の結合は、胃がん細胞株において、ｃＭＥＴ分解及びＡｋｔリン酸化を誘導する。Ｍｏｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ（２０１６）には、ＥＵ番号付けに従って４０５位及び４０９位に変異を有する制御されたＦａｂアーム交換（ｃＦＡＥ）によって産生された、ＪＮＪ－６１１８６３７２と命名された二重特異性ｃＭＥＴ×ＥＧＦＲ抗体が記載されており、これは、免疫原性の可能性を有し得る。ＪＮＪ－６１１８６３７２は、ｃＭＥＴリガンドＨＧＦを発現する腫瘍細胞株Ｈ１９７５を有する異種移植片モデルを使用してインビボで活性であることが示された。この腫瘍モデルは、抗体のＡＤＣＣ活性に依存することが知られている（Ａｈｍｅｄ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。ＪＮＪ－６１１８６３７２は、ＥＧＦＲよりもｃＭＥＴに対して約４０倍高い親和性の親和性不均衡を有すると報告されており（Ｍｏｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０１６））、ザルツムマブに由来する抗ＥＧＦＲアームは、他の問題のなかでも、注入関連反応、皮膚障害を引き起こすことが知られている。

【0016】

ＬＹ３１６４５３０は、ｃＭＥＴ結合抗体ＬＹ２８７５３５８（Ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ；Ｋｉｍ ａｎｄ Ｋｉｍ ２０１７）の重鎖可変ドメインに融合した一本鎖Ｆｖ断片としてセツキシマブのＥＧＦＲ結合ドメインを含む、二重特異性ｃＭＥＴ×ＥＧＦＲ抗体である。これは、抗原の各々について２つの結合部位を含む、いわゆる二重可変ドメイン抗体である。抗体についてのＨＧＦ阻害に関するデータは提供されていない。抗体は、アゴニスト活性なしでｃＭＥＴ及びＥＧＦＲに結合し、これらを内在化すると報告されている。著者らは、様々なｃＭＥＴ、ＥＧＦＲ、及びｃＭＥＴ×ＥＧＦＲ標的化療法をレビューし、これまでのところ、これらの阻害剤のいずれも臨床試験において顕著な有効性を示していないという結論を導き出している。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

したがって、本明細書に記載されているような優れた特性を有し得るものを含む、新規の二重特異性ｃＭＥＴ×ＥＧＦＲ抗体が必要である。

【課題を解決するための手段】

【0018】

ある特定の態様では、本開示は、がんの治療の方法における使用のための、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせを提供する。

【0019】

ある特定の態様では、本開示は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体との有効量の組み合わせを対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療する方法を提供する。

【0020】

ある特定の態様では、本開示は、がんの治療のための医薬品の製造における、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせの使用を提供する。

【0021】

ある特定の態様では、本開示は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体とを含む薬学的組み合わせを提供する。

【0022】

ある特定の態様では、がんは、ＥＧＦＲ陽性がん、ｃＭＥＴ陽性がん、又はＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ陽性がんである。ある特定の態様では、がんは、ＥＧＦＲ異常、ｃＭＥＴ異常、又はＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ異常を含む。

【0023】

ある特定の態様では、当該がん若しくは対象は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けており、及び／又は当該がん若しくは対象は、チロシンキナーゼ阻害剤、ある特定の態様ではＥＧＦＲ及び／若しくはｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤での治療に耐性がある。ある特定の態様では、当該対象は、オシメルチニブなどの第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けている。当該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤耐性は、第１、第２及び／又は第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤を含む。ある特定の態様では、二重特異性抗体とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせの投与又はそれによる治療は、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤耐性の対象に対する二次選択治療を含む。他の態様では、二重特異性抗体とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせの投与又はそれによる治療は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けた対象の二次選択治療を含む。ある特定の態様では、当該対象は、当該第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に耐性を付与するＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴ異常を含む。ある特定の態様では、当該対象又はがんは、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対して耐性があるか、又は難治性であり、ある特定の態様では、オシメルチニブに対して耐性があるか、又は難治性である。

【0024】

ある特定の態様では、使用又は治療は、対象に、１０００、１５００又は２０００ｍｇの用量の二重特異性抗体を提供することを含む。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、毎週１回又は２週間に１回提供される。ある特定の態様では、当該第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、約５０ｍｇ～約４００ｍｇの１日量、例えば、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ又は２４０ｍｇで提供される。

【0025】

ある特定の態様では、使用又は治療は、対象に、２週間に１回、１５００ｍｇの用量の二重特異性抗体を提供することを含む。

【0026】

ある特定の態様では、当該併用治療で投与されるＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、オシメルチニブ、ラゼルチニブ、アルフルチニブ、レジベルチニブ、ロシレチニブ、オルムチニブ、アルモネルチニブ、アビベルチニブ、ＡＳＫ１２００６７、ベフォテルチニブ（ＢＰＩ－Ｄ０３１６又はＤ－０３１６とも称される）、ＳＨ－１０２８、ナザルチニブ（ＥＧＦ８１６）、ナコチニブ（ＡＳＰ８２７３）、マベレルチニブ（ＰＦ－０６４７７７５）、オラフェルチニブ（ＣＫ－１０１）、ケイナチニブ、ＥＳ－０７２を含むか、又はこれである。ある特定の態様では、当該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、オシメルチニブ、ＢＰＩ－Ｄ０３１６／ベフォテルチニブ、ラゼルチニブ又はアルモネルチニブである。

【0027】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）である。オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）は、Ｌ８５８Ｒに対して１２ｎＭ及びＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍに対して１ｎＭの見かけのＩＣ５０を各々有する共有結合型、経口活性型、不可逆的及び変異体選択型ＥＧＦＲ阻害剤である。推奨される第２相投薬は、８０ｍｇの１日用量で確立された。

【0028】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、アルモネルチニブ（ＨＳ－１０２９６）である。アルモネルチニブは、ＥＧＦＲ感作性及びＴ７９０Ｍ耐性変異に対する選択性を有する、経口利用可能な、不可逆的な、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である。アルモネルチニブは、非小細胞肺がんの研究に使用されている。推奨される第２相投薬は、１１０ｍｇの１日用量で確立された。

【0029】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、ラゼルチニブである。ラゼルチニブ（ＹＨ２５４４８）は、強力な、変異体選択型の、血液脳関門透過性の、経口利用可能な、かつ不可逆的な第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であり、非小細胞肺がんの研究に使用することができる。推奨される第２相投薬は、２４０ｍｇの１日用量で確立された。

【0030】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、ベフォテルチニブ（又はＢＰＩ－Ｄ０３１６又は場合によってＤ－０３１６）である。ベフォテルチニブ（Ｂｅｔａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃｏ．，Ｃｈｉｎａ）は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である。ベフォテルチニブは、ＥＧＦＲ陽性非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の研究に使用することができる。第ＩＩ相の単一アーム研究ＮＣＴ０５００７９３８では、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣを有する患者において、ベフォテルチニブの安全性及び有効性を、２５ｍｇ、１日３回、経口で、イコチニブ（１日３回で１２５ｍｇ、経口）と併用して評価した。第Ｉ相研究ＮＣＴ０４４６４５５１では、対象は、経口懸濁液として、７５ｍｇのＤ－０３１６の単回経口用量を受けた。第ＩＩ相単一アーム研究ＮＣＴ０３８６１１５６では、局所進行性／転移性非小細胞肺がん患者は、２１日間のサイクルで７５ｍｇの経口用量を受け、忍容性がある場合、用量を１００ｍｇに増加させた。それ以外の場合、用量は７５ｍｇに維持した。第ＩＩ／ＩＩＩ相研究ＮＣＴ０４２０６０７２では、Ｄ－０３１６の有効性及び安全性を、７０ｍｇ、１日１回、２１日間、次いで、１００ｍｇに増加させて、１日１回評価した。

【0031】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、アルフルチニブ（ＡＳＴ２８１８又はフルモネルチニブ）である。ＡＳＴ２８１８は、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性のＮＣＴ０３７８７９９２の臨床試験の対象である。

【0032】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、経口活性の、選択的な、かつ不可逆的な第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）であるレジベルチニブ（ＢＰＩ－７７１１）である。レジベルチニブは、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験ＮＣＴ０３８６６４９９の対象である。

【0033】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、７．６８ｎＭのＩＣ５０を有するピロロピリミジンベースの不可逆的上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤であるアビチニブ（アビベルチニブ／ＡＣ００１０）である。アビチニブは、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験ＮＣＴ０３８５６６９７の対象である。

【0034】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲの強力な経口活性阻害剤であるＡＳＫ１２００６７である。ＡＳＫ１２００６７は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の研究のための第３世代のＥＧＦＲ－ＴＫＩである。ＡＳＫ１２００６７は、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験（ＮＣＴ０４１４３６０７）の対象である。

【0035】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、オリチニブ（ＳＨ－１０２８、Ｎａｎｊｉｎｇ Ｓａｎｈｏｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）である。ＳＨ－１０２８は、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性のＮＣＴ０４２３９８３３の臨床試験の対象である。

【0036】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、変異体ＥＧＦＲ形態を特異的に標的とする経口送達キナーゼ阻害剤である、ロシレチニブ（ＣＯ－１６８６）である。ロシレチニブは、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験ＮＣＴ０２１８６３０１の対象であった。

【0037】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、キナーゼドメインの近くのシステイン残基に結合する経口活性の不可逆的な第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるオルムチニブ（ＨＭ６１７１３；ＢＩ－１４８２６９４）である。オルムチニブは、ＮＳＣＬＣの研究で使用することができる。オルムチニブは、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験ＮＣＴ０２４８５６５２の対象であった。

【0038】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、進行性ＥＧＦＲ変異体ＮＳＣＬＣを有する患者においてＥＧＦＲ活性化変異を選択的に阻害する第３世代のＥＧＦＲ ＴＫＩであるナザチニブ（ＥＧＦ８１６）である。ナザルチニブは、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験ＮＣＴ０３５２９０８４の対象であった。

【0039】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、経口利用可能な、不可逆的な、第３世代の、変異体選択型の、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤であるナコチニブである。ナコチニブは、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験ＮＣＴ０２５８８２６１の対象であった。

【0040】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、選択的な、経口利用可能な、かつ不可逆的なＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）であるマベレルチニブ（ＰＦ－０６４７７７５）である。マベレルチニブは、ＮＳＣＬＣにおけるその臨床有効性の臨床試験ＮＣＴ０２３４９６３３の対象であった。

【0041】

ある特定の態様では、当該対象又はがんは、第１、第２、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤又はｃＭＥＴ阻害剤での治療に耐性がある。

【0042】

ある特定の態様では、当該第１世代のチロシンキナーゼ耐性は、ゲフィチニブ、エルロチニブ若しくはイコチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。

【0043】

ある特定の態様では、当該第２世代のチロシンキナーゼ耐性は、アファチニブ、ダコミチニブ、ＸＬ６４７、ＡＰ２６１１３、ＣＯ－１６８６若しくはネラチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。

【0044】

ある特定の態様では、当該ｃＭＥＴチロシンキナーゼ耐性は、カプマチニブ、テポチニブ、クリゾテニブ、カボザンチニブ、サボリチニブ、グレサチニブ、シトラバチニブ、ＢＭＳ－７７７６０７、メレスチニブ、チバンチニブ、ゴルバチニブ、フォレチニブ、ＡＭＧ－３３７若しくはＢＭＳ－７９４８３３に対する耐性であるか、又はこれを含む。ある特定の態様では、当該ｃＭＥＴチロシンキナーゼ耐性は、テポチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。ある特定の態様では、当該ｃＭＥＴチロシンキナーゼ耐性は、カプマチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。

【0045】

ある特定の態様では、当該第３世代のチロシンキナーゼ耐性は、オシメルチニブ、ラゼルチニブ、アルフルチニブ、レジベルチニブ、オルムチニブ、アルモネルチニブ、アビベルチニブ、ＡＳＫ１２００６７、ベフォテルチニブ、ロシレチニブ、オリチニブ、ナザルチニブ、ナコチニブ、マベレルチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。ある特定の態様では、当該第３世代のチロシンキナーゼ耐性は、オシメルチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。ある特定の態様では、当該第３世代のチロシンキナーゼ耐性は、ラゼルチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。ある特定の態様では、当該第３世代のチロシンキナーゼ耐性は、ベフォテルチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。ある特定の態様では、当該第３世代のチロシンキナーゼ耐性は、アルモネルチニブに対する耐性であるか、又はこれを含む。

【0046】

ある特定の態様では、対象は、ＥＧＦＲ及び／若しくはｃＭＥＴ陽性がんのための、又はＥＧＦＲ及び／若しくはｃＭＥＴ異常を含むがんのための事前の抗がん治療を受けていない。ある特定の態様では、対象は、事前の化学療法又は抗ＥＧＦＲ抗体若しくは抗ｃＭＥＴ抗体を含む治療を受けていない。ある特定の態様では、当該対象は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤治療ナイーブ、又はセツキシマブ治療ナイーブである。ある特定の態様では、二重特異性抗体及びＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の組み合わせの投与又はそれによる治療は、一次選択治療である。ある特定の態様では、当該一次選択治療は、肺がん患者又は肺がん、特に非小細胞肺がんなどにおいて、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼメカニズムに対する耐性が発症するのを防ぐことである。ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤に対する耐性メカニズムは、特に転移性又は進行性がんなどの非小細胞肺がんを有する対象において、発症することが周知である。したがって、本開示はまた、対象においてＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤耐性を有するがんの発症又は発生を防ぐための方法における使用のための、当該第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤と当該二重特異性抗体との組み合わせを提供する。

【0047】

ある特定の態様では、対象は、ヒト対象である。

【0048】

ある特定の態様では、がんは、肺がんである。

【0049】

ある特定の態様では、当該がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。

【0050】

ある特定の態様では、当該がん又は対象は、活性化ＥＧＦＲ変異、承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲへの第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の結合を低減する変異、後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、ｃＭＥＴ変異又はｃＭＥＴ異常を含む。

【0051】

ある特定の態様では、当該がん又は対象は、ｃＭＥＴ増幅、ｃＭＥＴ過剰発現、ｃＭＥＴ経路のシグナル伝達の増加、ｃＭＥＴ遺伝子増幅、及び／又はｃＭＥＴタンパク質活性の増加などのｃＭＥＴ異常を含む。ある特定の態様では、当該がん又は対象は、ＨＧＦ発現の増加を含む。ある特定の態様では、当該がんは、ｃＭＥＴエクソン１４スキッピング変異を含む。

【0052】

ある特定の態様では、ｃＭＥＴ調節不全は、ｃＭＥＴ増幅、ｃＭＥＴ過剰発現、ｃＭＥＴ経路のシグナル伝達の増加、ｃＭＥＴ遺伝子増幅、及び／若しくはｃＭＥＴタンパク質活性の増加、又はｃＭＥＴエクソン１４スキッピング変異を含む。一態様では、当該ｃＭＥＴ調節不全は、ＨＧＦ発現の増加によって引き起こされる。

【0053】

ある特定の態様では、本開示は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体とを含む薬学的組み合わせを提供する。

【0054】

ある特定の実施形態では、薬学的組み合わせは、使用説明書を含む。

【0055】

ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、ＡＤＣＣ活性を示し、ある特定の態様では、抗体は、改善されたＡＤＣＣ活性を有する。そのような態様では、抗体は、完全なヒトＣＨ２ドメインに比べて、１つ以上のＣＨ２変異によって、変化したＡＤＣＣ活性を有し得る。したがって、アフコシル化された、本開示による二重特異性抗体が更に提供される。ある特定の態様では、本開示の抗体は、２つのアフコシル化されたＣＨ２ドメインを含む。ある特定の態様では、本開示の抗体は、どちらもアフコシル化されている、合計２つのＣＨ２ドメインを含む。ある特定の態様では、本開示の抗体は、どちらもアフコシル化されている、２つのＣＨ２ドメインを含む。

【0056】

ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、ＡＤＣＰ活性を示し、ある特定の態様では、抗体は、改善されたＡＤＣＰ活性を有する。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ結合アーム及びｃＭＥＴ結合アームの両方、又はＥＧＦＲ結合アーム及びｃＭＥＴ結合アームを含む重鎖の両方が、ＡＤＣＰに寄与する。ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、ＮＳＣＬＣ細胞に対するＡＤＣＰ活性を有するか、又はこれを呈する。ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、ＮＳＣＬＣ細胞のＡＤＣＰを誘導する。

【0057】

二重特異性抗体は、共通軽鎖を含み得る。第１及び第２の可変ドメインは、ある特定の態様では、同じ又は実質的に同じ（共通）軽鎖可変領域を含む。当該共通軽鎖可変領域は、組換えを受けたヒト可変領域遺伝子セグメントの多様性と良好に対合することが知られているものであり得る。ある特定の態様では、当該共通軽鎖は、Ｏ１２／ＩｇＶκ１－３９^＊０１可変領域遺伝子セグメントなどの生殖系列Ｖｋ遺伝子セグメントによってコードされた可変領域である。好ましい軽鎖可変領域は、再配列されたＩｇＶκ１－３９^＊０１／ＩＧＪκ１^＊０１又はＩｇＶκ１－３９^＊０１／ＩＧＪκ５^＊０１を含む。ｃＭＥＴ結合アームの軽鎖及びＥＧＦＲ結合アームの軽鎖は、ある特定の態様では、同じ（共通）軽鎖である。ある特定の態様では、共通軽鎖は、ヒト軽鎖定常領域に結合された再配列されたカッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１である。二重特異性抗体は、ヒト抗体であり得る。二重特異性抗体は、全長抗体であり得る。これは、ＥＧＦＲに結合することができる１つの可変ドメイン及びｃＭＥＴに結合することができる１つの可変ドメインを有し得る。ある特定の態様では、ヒトＥＧＦＲに結合することができる可変ドメインはまた、マウスＥＧＦＲ及び／又はカニクイザルＥＧＦＲに有益に結合することができる。ある特定の態様では、ヒトＥＧＦＲに結合するか又は結合することができる可変ドメインは、ヒトＥＧＦＲのドメインＩＩＩに結合する。ｃＭＥＴに結合することができる可変ドメインは、ｃＭＥＴへの抗体５Ｄ５の結合を遮断し得る。ｃＭＥＴに結合することができる可変ドメインは、ｃＭＥＴへのＨＧＦの結合を遮断し得る。ｃＭＥＴについての抗体のＫｄは、ＥＧＦＲについての抗体のＫｄよりも少なくとも１０倍少ない場合がある。一方のＣＨ３ドメインにおける４０５位及び４０９位のアミノ酸は、他方のＣＨ３ドメインにおける対応する位置のアミノ酸と同じであり得る（ＥＵ番号付け）。

【0058】

ある特定の態様では、本開示の抗体は、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ_１Ｘ_２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含む第１の可変ドメインを含み、
Ｘ_１＝Ｎ又はＳ、Ｘ_２＝Ａ又はＧ、Ｘ_３＝Ｄ又はＧ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ_６＝Ｄ又はＷ、かつＸ_７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ_１～Ｘ_７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する。

【0059】

ある特定の態様では、本開示の抗体は、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３（図３）の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む第２の可変ドメインを含む。

【0060】

Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇであるか、又は
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇである、
二重特異性抗体が記載されている。

【0061】

ある特定の態様では、Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、又はＸ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、又はＸ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄである。

【0062】

ある特定の態様では、Ｘ_３～Ｘ_７＝ＤＲＨＷＤであり、Ｘ_１及びＸ_２は、ＮＧ、ＳＧ又はＮＡである。

【0063】

第２の可変ドメインの重鎖可変領域が、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～３、７、８、１０、１３、１５、１６、１７、２１、２２又は２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体が記載されている。

【0064】

本開示はまた、腫瘍を有する対象の治療の方法であって、この方法が、この治療を必要としている個体に、本明細書に記載されているような二重特異性抗体を投与することを含む。典型的には、個体は、異常細胞を含む疾患を患っている個体であり、例えば、個体は、腫瘍又はがんを患っている場合がある。

【0065】

本開示はまた、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、ＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含む、本開示の治療に含まれるような二重特異性抗体であって、第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ_１Ｘ_２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、
Ｘ_１＝Ｎ又はＳ、Ｘ_２＝Ａ又はＧ、Ｘ_３＝Ｄ又はＧ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ_６＝Ｄ又はＷ、かつＸ_７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ_１～Ｘ_７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、第２の可変ドメインが、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３（図３）の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体を提供する。

【0066】

ある特定の態様における第１の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、ある特定の態様では、ＣＤＲ１配列ＳＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及びＣＤＲ３配列ＥＴＹＹＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを有する重鎖可変領域を含む。

【0067】

本開示はまた、腫瘍などの異常細胞を伴う疾患を有する対象の治療における使用のための本開示の二重特異性抗体を提供する。

【0068】

腫瘍又はがんなどの異常細胞を伴う疾患の治療のための医薬品の製造における、本開示の二重特異性抗体及び第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の使用も提供される。

【0069】

腫瘍、ある特定の態様では、ＥＧＦＲ陽性腫瘍、ｃＭＥＴ陽性腫瘍又はＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ陽性腫瘍を有する対象の治療の方法であって、この方法が、この治療を必要としている個体に、二重特異性抗体及び第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含む、方法も提供される。

【0070】

本開示の抗体は、ＥＧＦＲ ＴＫＩ耐性腫瘍細胞株のＨＧＦ及びＥＧＦ／ＨＧＦ誘導成長を阻害し、第３世代のＴＫＩと組み合わせて使用される。ＴＫＩは、ある特定の態様では、オシメルチニブである。ＴＫＩは、ある特定の態様では、ラゼルチニブである。ＴＫＩは、ある特定の態様では、アルモネルチニブである。ＴＫＩは、ある特定の態様では、ベフォテルチニブである。

【0071】

ある特定の態様における当該第３世代のチロシン阻害剤と組み合わせた本開示の抗体は、活性化ＥＧＦＲ変異、承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲへの第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の結合を低減する変異、後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、ｃＭＥＴ変異、又はｃＭＥＴ異常、ある特定の態様ではフレーム内エクソン２０挿入変異を含む細胞株又はモデルなどの、ＨＧＦ応答性細胞の、ある特定の態様では、ヒト対象、腫瘍モデル又は細胞株のＥＧＦＲ ＴＫＩ耐性又は難治性腫瘍のＨＧＦ誘導成長を阻害する。ある特定の態様では、阻害は、ＨＧＦの存在下で示される。

【0072】

ある特定の態様における第３世代のＴＫＩと組み合わせた本開示の抗体は、フレーム内エクソン２０挿入変異を含む細胞株又はモデルなどの、ＨＧＦ応答性細胞、ある特定の態様では、ＥＧＦＲ ＴＫＩ耐性腫瘍、腫瘍モデル又は細胞株のＨＧＦ誘導成長を阻害する。

【0073】

本明細書では、「難治性」という用語は、治療に応答しない疾患を指す。難治性疾患は、治療の前若しくは開始時に治療に耐性があり得るか、又は難治性疾患は、治療中に難治性になり得る。

【0074】

本明細書では、「耐性」という用語は、関与する治療剤の処方用量に投与されたときに治療に応答しないがん又は患者を指す。

【0075】

本明細書では、「第１世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤」（第１世代のＴＫＩ）という用語は、ゲフィチニブ及びエルロチニブなどの可逆的ＥＧＦＲ阻害剤を指し、これらは、エクソン１９及びエクソン２１Ｌ８５８Ｒ変異における欠失などのＥＧＦＲ活性化変異を保有するＮＳＣＬＣの一次選択治療に有効である。

【0076】

本明細書では、「第２世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤」（第２世代のＴＫＩ）という用語は、アファチニブ及びダコミチブなどの共有結合型不可逆的ＥＧＦＲ阻害剤を指し、これらは、エクソン１９及びエクソン２１Ｌ８５８Ｒ変異における欠失などのＥＧＦＲ活性化変異を保有するＮＳＣＬＣの一次選択治療に有効である。

【0077】

本明細書では、「第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤」（第３世代のＴＫＩ）という用語は、単独又はＴ７９０Ｍ変異との組み合わせで、エクソン１９及びエクソン２１Ｌ８５８Ｒにおける欠失などのＥＧＦＲ活性化変異に選択的であり、野生型ＥＧＦＲに対する阻害活性が低い、オシメルチニブ及びラゼルチニブなどの共有結合型不可逆的ＥＧＦＲ阻害剤を指す。

【0078】

本開示の抗体は、高親和性二価ＥＧＦＲ抗体に関連する発疹及び下痢などの毒性を誘導することなく、ＥＧＦ応答性細胞のＥＧＦ誘導成長を阻害する。これによって、抗体は、それ自体の毒性プロファイルを有するＴＫＩとの組み合わせに理想的に適している。

【0079】

本開示は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせた本明細書に開示されている二重特異性抗体を含む、薬学的組み合わせ、又はキットオブパーツを更に含む。薬学的組み合わせは、ある特定の態様では、物理的に連結されておらず、本開示の抗体を含有する容器及び第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含有する容器を含む。薬学的組み合わせは、ある特定の態様では、使用説明書を伴う。使用説明書は、静脈内投与の説明書などの臨床的に関連する情報を含む。ある特定の態様では、オシメルチニブ、ＢＰＩ Ｄ－０３１６／ベフォテルチニブ又はアルモネルチニブなどの第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼは、関連当局の承認後の使用説明書に従って投与される。ある特定の態様では、オシメルチニブは、１日１回、８０ｍｇの用量で投薬される。ある特定の態様では、アルモネルチニブは、１日１回、１１０ｍｇの用量で投薬される。ある特定の態様では、ラゼルチニブは、１日１回、２４０ｍｇの用量で投薬される。いくつかの態様では、ベフォテルチニブは、１日１回、７０ｍｇ、７５ｍｇ又は１００ｍｇで投薬される。ベフォテルチニブの７５の１日用量は、それぞれ２５ｍｇの３回の経口投与投薬量として提供され得る。

【0080】

ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１０００ｍｇのフラット用量を使用して、１０００ｍｇで投薬される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、毎週１回、１０００ｍｇの量で提供される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１０００ｍｇの量で提供される。

【0081】

ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１５００ｍｇのフラット用量を使用して、１５００ｍｇで投薬される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１５００ｍｇの量で提供される。

【0082】

ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に２０００ｍｇのフラット用量を使用して、２０００ｍｇで投薬される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、２０００ｍｇの量で提供される。

【0083】

本開示の抗体は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での治療に耐性があるか、又はこれに対して低減された感受性を有する、例えば、オシメルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ若しくはアファチニブ、オシメルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ若しくはアファチニブの類似体、又はそれらの各々の化合物及び／若しくは類似体のうちの１つ以上の組み合わせに耐性がある腫瘍を治療するために使用され得る。

【0084】

したがって、本開示の二重特異性抗体は、本開示のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与され得る。ある特定の態様では、当該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、当該第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含むか、又はこれである。

【0085】

本開示は、本明細書に開示されている二重特異性抗体又はそのバリアントの重鎖又は重鎖可変領域を単独で又は一緒にコードする核酸分子又は核酸分子群を更に含む。また、本明細書に開示されている抗体をコードする核酸分子又は核酸分子群も提供される。

【0086】

ある特定の態様では、重鎖は、ＩｇＧ１抗体の定常領域、ある特定の態様では、ヒトＩｇＧ１抗体を含む。当該ＩｇＧ１定常領域のＣＨ２領域は、抗体のＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ活性を変化させるように操作されても、又はそうでなくてもよい。ある特定の態様では、当該変化は、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ活性の増強をもたらす。ある特定の態様では、抗体のＣＨ３領域は、ＥＧＦＲに結合している第１の重鎖とｃＭＥＴに結合している第２の重鎖とを含む重鎖のヘテロ二量体化を容易にするように操作される。

【0087】

本開示は、本明細書に開示されているような二重特異性抗体又はそのバリアントを単独で又は一緒にコードする１つ以上の核酸分子を含む細胞を更に含む。また、ある特定の態様では、細胞の培養物からの二重特異性抗体又はそのバリアントの回収を伴って、記載されているような細胞を使用して本明細書に開示されている二重特異性抗体又はそのバリアントを産生する方法も提供される。

【0088】

本開示は、本明細書に開示されている二重特異性抗体又はそのバリアントを含む細胞系を更に含む。

【0089】

本開示は、二重特異性抗体を発現する、及び／又は当該二重特異性抗体をコードする核酸分子を含む、細胞を更に提供する。

【0090】

本開示は、本明細書で開示されているような二重特異性抗体を更に含み、これは、ある特定の態様では、インビボイメージングのための標識を更に含む。

【0091】

ある特定の態様では、本開示は、がんの治療の方法における使用のための、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせを提供する。

【0092】

ある特定の態様では、本開示は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体との有効量の組み合わせを対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療する方法を提供する。

【0093】

ある特定の態様では、本開示は、がんの治療のための医薬品の製造における、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせの使用を提供する。

【0094】

ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、本開示のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与され得る。したがって、本開示による二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との当該組み合わせは、同時、連続、又は別々の投与を包含する。ある特定の態様では、当該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、当該第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含むか、又はこれである。

【0095】

したがって、ある特定の態様では、本開示は、がんの治療の方法における使用のための、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体であって、治療が、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の投与を更に含み、任意選択的に、本開示の二重特異性抗体が、本開示のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与される、二重特異性抗体を提供する。

【0096】

したがって、ある特定の態様では、本開示は、がんの治療の方法における使用のための、有効量の第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体とを対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療する方法であって、任意選択的に、本開示の二重特異性抗体が、本開示のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与される、方法を提供する。

【0097】

したがって、ある特定の態様では、本開示は、がんの治療のための医薬品の製造における、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示による二重特異性抗体、並びに第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の使用であって、任意選択的に、本開示の二重特異性抗体が、本開示のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与される、使用を提供する。

【0098】

ＥＧＦＲは、Ｈｅｒ－又はｃＥｒｂＢ－１、－２、－３、及び－４という名称の４つの受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のファミリーのメンバーである。ＥＧＦＲは、４つのサブドメインから構成される細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を有し、そのうちの２つはリガンド結合に関与し、そのうちの１つはホモ二量体化及びヘテロ二量体化に関与する（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ（２００８））。このセクションで使用する参照番号は、「明細書で引用」という見出しの欄の参照番号の付番を指し、これは、それぞれ参照により組み込まれる。ＥＧＦＲは、様々なリガンドからの細胞外シグナルを統合し、多様な細胞内応答をもたらす（Ｙａｒｄｅｎ ａｔ ａｌ．２００１、及びＪｏｒｒｉｓｅｎ ｅｔ ａｌ．２００３）。ＥＧＦＲは、いくつかのヒト上皮悪性腫瘍、特に乳房、膀胱、非小細胞肺がん肺、結腸、卵巣、頭頸部、及び脳のがんに関与している。遺伝子における活性化変異、並びに受容体及びそのリガンドの過剰発現が見出され、自己分泌活性化ループを生じる（レビューについては、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．２０００を参照）。したがって、このＲＴＫは、がん療法の標的として広く使用されている。ＲＴＫを標的とする小分子阻害剤及び細胞外リガンド結合ドメインに指向されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の両方が開発され、これまでにいくつかの臨床的成功が示されているが、ほとんどが選択された患者群に対してである。ヒトＥＧＦＲタンパク質及びそれをコードする遺伝子のデータベース受入番号は、（ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ＿００５２２８．３）である。遺伝子及び／又はタンパク質についての他のデータベース識別子は、ＨＧＮＣ：３２３６、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１９５６、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１４６６４８、ＯＭＩＭ：１３１５５０及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ００５３３である。受入番号は、主に、ＥＧＦＲタンパク質を標的として特定する更なる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥＧＦＲタンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコード遺伝子における変異のため、変化し得る。本明細書でＥＧＦＲについて言及される場合、別段記載されない限り、参照はヒトＥＧＦＲについて言及される。ＥＧＦＲに結合する抗原結合部位は、ＥＧＦＲ及びその様々なバリアント、例えば、いくつかのＥＧＦＲ陽性腫瘍上に発現されるものに結合する。

【0099】

本明細書で使用される「ＥＧＦＲリガンド」という用語は、ＥＧＦＲに結合して活性化するポリペプチドを指す。ＥＧＦＲリガンドの例は、ＥＧＦ、ＴＧＦ－α、ＨＢ－ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベータセルリン及びエピレグリンを含むが、これらに限定されない（レビューについては、Ｏｌａｙｉｏｙｅ ＭＡ ｅｔ ａｌ．；ＥＭＢＯ Ｊ（２０００）Ｖｏｌ １９：ｐｐ３１５９－３１６７）。この用語には、天然に生じるポリペプチドの生物学的に活性な断片及び／又はバリアントが含まれる。

【0100】

例えば、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲ遺伝子増幅の変異を介したＥＧＦＲの異常に活性化された形態は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）における発がん性ドライバーであることが知られており、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での治療において生じることが知られている。本開示は、ＥＧＦＲの当該発がん性ドライバーを治療するために、本開示の抗体を第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与する、併用治療を提供する。ある特定の態様では、当該チロシンキナーゼ阻害剤耐性は、第１、第２及び／又は第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤に対する耐性を含む。

【0101】

ある特定の態様では、治療は、ＥＧＦＲのリガンド非依存性活性化及び／又はｃＭＥＴのリガンド非依存性活性化から生じるがんの治療を含む。別の態様では、治療は、ＥＧＦＲのリガンド依存性活性化及び／又はｃＭＥＴのリガンド依存性活性化から生じるがんの治療を含む。

【0102】

ある特定の態様では、がん又は対象は、オシメルチニブでの事前の治療を受けており、後天性又は三次オシメルチニブ耐性を有する。当該の事前のオシメルチニブ治療は、ある特定の態様では、一次選択又は二次選択治療であり、ある特定の態様では、一次選択治療、続いて、第２の治療としての本開示の組み合わせでの治療である。

【0103】

ある特定の態様では、がん又は対象は、活性化ＥＧＦＲ変異、承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲへの第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の結合を低減する変異、後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、ｃＭＥＴ変異、ｃＭＥＴ異常又はＨＧＦ発現の増加を含む。

【0104】

ある特定の態様では、がん又は対象は、フレーム内エクソン１９欠失変異又はエクソン２１変異などの活性化ＥＧＦＲ変異を含む（ある特定の態様では、Ｌ８５８Ｒ）。本明細書では、「活性化ＥＧＦＲ変異」という用語は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する進行後に発症する変異を意味する。ＮＳＣＬＣにおいて、最も一般的な活性化変異は、エクソン１９におけるフレーム内欠失（ｄｅｌ１９）及びエクソン２１におけるアルギニンに対するロイシンの置換（Ｌ８５８Ｒ）であり、これらは合わせて、ＮＳＣＬＣにおけるＥＧＦＲ変異の８５～９０％を占める。

【0105】

本開示の二重特異性抗体の有効性の臨床研究では、臨床有効性は、異なる遺伝的な発がん性のバックグラウンドを有する様々ながんで観察された。具体的には、臨床有効性は、ＮＳＣＬＣで観察された。例えば、臨床有効性は、ＥＧＦＲエクソン２０変異、Ｌ８５８ＲなどのＥＧＦＲエクソン２１変異、ＥＧＦＲエクソン１９欠失変異、ｃ－ＭＥＴエクソン１４スキッピング変異、ｃＭＥＴ増幅及びＥＧＦＲ増幅変異を有する患者で観察された。したがって、ある特定の態様では、がんは、ＮＳＣＬＣであり、かつ／又は対象は、Ｌ８５８ＲなどのＥＧＦＲエクソン２１変異、ＥＧＦＲエクソン１９欠失変異、若しくはｃ－ＭＥＴエクソン１４スキッピング変異を含む、ＮＳＣＬＣを患っている。

【0106】

ある特定の態様では、がん又は対象は、承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異を含む。本明細書では、「承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異」という用語は、Ｔ７９０Ｍなどのがんの治療のために現在承認されているＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する進行後に発症する耐性を意味する。承認されたチロシンキナーゼ阻害剤の例は、オシメルチニブ及びアルモネルチニブである。

【0107】

ある特定の態様では、がん又は対象は、Ｌ７１８Ｘ（例えば、Ｌ７１８Ｑ）、Ｇ７１９Ｘ（例えば、Ｇ７１９Ａ）、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｇ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｒ、Ｇ７９６Ｓ、Ｇ７９６Ｄ）、Ｃ７９７Ｘ、Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｃ７９７Ｓ、Ｃ７９７Ｇ）などの三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異を含む。本明細書では、「三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異」という用語は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する進行後に発症する耐性を意味する。

【0108】

ある特定の態様では、がん又は対象は、Ｌ７９２Ｘ、Ｌ７１８ＸなどのＥＧＦＲに対する第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の結合を低減する変異を含む。

【0109】

ある特定の態様では、がん又は対象は、後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、（Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ、エクソン１９欠失変異、Ｃ７９７Ｘ、Ｌ７９２Ｘ、Ｇ７９６Ｘ、Ｇ７２４Ｘ、Ｓ７６８Ｘ、Ｌ７１８Ｘ又はエクソン２０挿入変異など）、ある特定の態様では、Ｇ７２４Ｘ（例えば、Ｇ７２４Ｓ）、Ｓ７６８Ｘ（例えば、Ｓ７６８Ｉ）、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｃ７９７Ｘ（Ｃ７９７Ｓ及びＣ７９７Ｇを含む）、Ｌ７９８Ｘ（例えば、Ｌ７９８Ｉ）を含む、オシメルチニブに対する耐性を付与するか又はオシメルチニブに対する進行後に生じた変異を含む。本明細書では、「後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異」という用語は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する進行後など、チロシンキナーゼ阻害剤での治療に対する進行後に獲得される耐性を意味する。

【0110】

ある特定の態様では、がん又は対象は、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、例えば、オシメルチニブに対する進行後の、ＥＧＦＲｍＲＮＡの増加、又はＥＧＦＲ－ｅｘ１９ｄｅｌ対立遺伝子の存在と組み合わせた野生型ＥＧＦＲ対立遺伝子の増幅を含む。

【0111】

ある特定の態様では、がん又は対象は、ｃＭＥＴエクソン１４スキッピング変異などのｃＭＥＴ変異を含む。

【0112】

ある特定の態様では、がん又は対象は、ｃＭＥＴ増幅、ｃＭＥＴ過剰発現、ｃＭＥＴ経路のシグナル伝達の増加、ｃＭＥＴ遺伝子増幅、及び／又はｃＭＥＴタンパク質活性の増加などのｃＭＥＴ異常を含む。ある特定の態様では、当該がんは、ＮＳＣＬＣであり、当該ｃＭＥＴ増幅は、ＭＥＴ／ＣＥＰ７＞５若しくはｃｆＤＮＡ≧２コピー又はそれらの任意の組み合わせによって特性評価される。ある特定の態様では、がんは、ＨＧＦ発現の増加を含む。

【0113】

ある特定の態様では、ｃＭＥＴ増幅は、ＭＥＴ／ＣＥＰ７≧３、ある特定の態様ではＭＥＴ／ＣＥＰ７≧４、ある特定の態様ではＭＥＴ／ＣＥＰ７≧５（及び最大１５若しくは２０以下）によって、又はｃｆＤＮＡ≧１．８ｃＭＥＴコピー、例えば、（≧１．８、＜２．２）若しくは（＞２．２、＜５）若しくは（≧５）によって特性評価される。

【0114】

ある特定の態様では、がん又は対象は、エクソン１９欠失変異、ある特定の態様では、フレーム内エクソン１９欠失、エクソン２０ミスセンス変異（例えば、Ｔ７９０Ｍ）、又はＬ８５８Ｒなどのエクソン２１変異を含む。

【0115】

ある特定の態様では、がん又は対象は、ＥＧＦＲエクソン２０変異、ある特定の態様ではエクソン２０挿入変異、ある特定の態様ではフレーム内エクソン２０挿入変異を含む。

【0116】

ある特定の態様では、がん又は対象は、近ループ挿入（７６７～７７２位）、遠ループ挿入（７７３～７７５位）、ある特定の態様では、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｖ７７４＿Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧＬ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＥＧＮ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧＤ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＨ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＰ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＧＮＰＨ、Ｈ７７３ｄｅｌｉｎｓＳＮＰＹ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＶＤＮ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＫＨ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＲＤ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｄｅｌｉｎｓＨＮＰＹ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＧＴ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＴ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＧ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＳＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＶＶ及びＶ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＭＡＳＶ；又は変異Ｔ７９０Ｍ、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｃ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｒ、Ｇ７９６Ｓ、Ｇ７９６Ｄ）、Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｃ７９７Ｓ、Ｃ７９７Ｇ）、Ｌ７９８Ｉ若しくはフレーム内エクソン２０挿入、例えば、Ｍ７６６＿Ａ７６７ｉｎｓＡＳＶ若しくはＨ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｉｎｓ７６１（ＥＡＦＱ）、Ｉｎｓ７７０（ＡＳＶ）、Ｉｎｓ７７１（Ｇ）、Ｉｎｓ７７４（ＮＰＨ）、Ｍ７６６＿Ａ７６７１ｎｓ Ａ、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ＩｎｓＳＶＡ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ＩｎｓＮＳ、Ｄ７６１＿Ｅ７６２ＩｎｓＸ１－７、Ａ７６３＿Ｙ７６４ＩｎｓＸ１－７、Ｙ７６４＿Ｙ７６５ ＩｎｓＸ１－７、Ｍ７６６＿Ａ７６７ＩｎｓＸ１－７、Ａ７６７＿Ｖ７６８ ＩｎｓＸ１－７、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ ＩｎｓＸ１－７＞Ｖ７６９＿Ｄ７７０ ＩｎｓＸ１－７＞Ｄ７７０＿Ｎ７７１ ＩｎｓＸ１－７＞Ｎ７７１＿Ｐ７７２ ＩｎｓＸ１－７＞Ｐ７７２＿Ｈ７７３ ＩｎｓＸ１－７、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ ＩｎｓＸ１－７若しくはＶ７７４＿Ｃ７７５ ＩｎｓＸ１－７から選択されるエクソン２０変異を含む。ある特定の態様では、がん又は対象は、当該変異のうちの２つ以上を含む。

【0117】

ある特定の態様では、がん又は対象は、フレーム内エクソン１９欠失変異、エクソン２１変異、（ある特定の態様では、Ｌ８５８Ｒ）若しくはエクソン１９におけるフレーム内欠失（ｄｅｌ１９）、又はエクソン２１におけるアルギニンに対するロイシンの置換（Ｌ８５８Ｒ）、変異Ｌ８６１Ｘ（例えば、Ｌ８６１Ｑ）若しくはＬ８４４Ｘ（例えば、Ｌ８４４Ｖ）を含む。ある特定の態様では、がん又は対象は、当該変異のうちの２つ以上を含む。

【0118】

ある特定の態様では、がん又は対象は、ＥＧＦＲ変異Ｔ７９０Ｍを含む。

【0119】

ある特定の態様では、がん又は対象は、Ｌ７１８Ｘ（例えば、Ｌ７１８Ｑ、Ｌ７１８Ｖ）、Ｇ７１９Ｘ（例えば、Ｇ７１９Ａ）、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ、Ｌ７９２Ｆ、Ｌ７９２Ｒ、Ｌ７９２Ｙ、Ｌ７９２Ｖ及びＬ７９２Ｐ）、Ｇ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｒ、Ｇ７９６Ｓ、Ｇ７９６Ｄ）、Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｃ７９７Ｓ、Ｃ７９７Ｇ、Ｃ７９７Ｎ）、Ｍ７６６Ｘ（例えば、Ｍ７６６Ｑ）、Ｒ７７６Ｘ（例えば、Ｒ７７６Ｃ）から選択されるＥＧＦＲ変異を含む。ある特定の態様では、がん又は対象は、当該変異のうちの２つ以上を含む。

【0120】

ある特定の態様では、がん又は対象は、Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ、エクソン１９欠失変異、Ｃ７９７Ｘ、Ｌ７９２Ｘ、Ｇ７９６Ｘ、Ｇ７２４Ｘ、Ｓ７６８Ｘ、Ｌ７１８Ｘ、エクソン２０挿入変異、変異Ｇ７２４Ｘ（例えば、Ｇ７２４Ｓ）、Ｓ７６８Ｘ（例えば、Ｓ７６８Ｉ）、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｃ７９７Ｘ（Ｃ７９７Ｓ及びＣ７９７Ｇを含む）、Ｌ７９８Ｘ（例えば、Ｌ７９８Ｉ）、Ｉ９４１Ｘ（例えば、Ｉ９４１Ｒ）、Ｖ９４８Ｘ（例えば、Ｖ９４８Ｒ）から選択されるＥＧＦＲ変異を含む。ある特定の態様では、がん又は対象は、当該変異のうちの２つ以上を含む。

【0121】

ある特定の態様では、がん又は対象は、二重変異Ｌ８５８Ｘ／Ｔ７９０Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ）、Ｔ７９０Ｘ／Ｌ７９８Ｘ（例えば、Ｔ７９０Ｍ／Ｌ７９８Ｉ）、Ｔ７９０Ｘ／Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ）、Ｇ７１９Ｘ／Ｒ７７６Ｘ（例えば、Ｇ７１９Ａ／Ｒ７７６Ｃ）又はｄｅｌＥ７４６＿Ａ７５０／Ｔ７９０Ｍを含む。

【0122】

ある特定の態様では、がん又は対象は、二重変異Ｄ７７０ｉｎｓＳＶＤ／Ｅ７６２Ｘ（例えば、Ｅ７６２Ｋ）、Ｄ７７０ｉｎｓＳＶＤ／Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｉ、Ｌ７９２Ｓ）、Ｄ７７０ｉｎｓＳＶＤ／Ｐ７９４Ｘ（例えば、Ｐ７９４Ｓ）又はＤ７７０ｉｎｓＳＶＤ／Ｇ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｄ）を含む。

【0123】

ある特定の態様では、がん又は対象は、二重変異Ｈ７７３ｉｎｓＨ／Ｅ７６２Ｘ（例えば、Ｅ７６２Ｋ）、Ｈ７７３ｉｎｓＨ／Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｉ、Ｌ７９２Ｓ）、Ｈ７７３ｉｎｓＨ／Ｐ７９４Ｘ（例えば、Ｐ７９４Ｓ）又はＨ７７３ｉｎｓＨ／Ｇ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｄ）を含む。

【0124】

ある特定の態様では、がん又は対象は、二重変異Ｈ７７３ｉｎｓＮＰＨ／Ｅ７６２Ｘ（例えば、Ｅ７６２Ｋ）、Ｈ７７３ｉｎｓＮＰＨ／Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｉ、Ｌ７９２Ｓ）、Ｈ７７３ｉｎｓＮＰＨ／Ｐ７９４Ｘ（例えば、Ｐ７９４Ｓ）又はＨ７７３ｉｎｓＮＰＨ／Ｇ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｄ）を含む。

【0125】

ある特定の態様では、がん又は対象は、二重変異Ｌ８５８Ｘ／Ｌ７１８Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／ｃｉｓ－Ｌ７１８Ｑ）、Ｌ８５８Ｘ／Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／ｃｉｓ－Ｃ７９７Ｓ）、エクソン１９ｄｅｌ／Ｃ７９７Ｘ（例えば、エクソン１９ｄｅｌ／ｃｉｓ－Ｃ７９７Ｓ）を含む。

【0126】

ある特定の態様では、がん又は対象は、三重変異Ｌ８５８Ｘ／Ｔ７９０Ｘ／Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ）、Ｌ８５８Ｘ／Ｔ７９０Ｘ／Ｍ７６６Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｍ７６６Ｑ）、Ｌ８５８Ｘ／Ｔ７９０Ｘ／Ｌ７１８Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／ｃｉｓ－Ｌ７１８Ｑ、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｌ７１８Ｑ）、Ｌ８５８Ｘ／Ｔ７９０Ｘ／Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／ｃｉｓ－Ｃ７９７Ｓ）、エクソン１９ｄｅｌ／Ｔ７９０Ｘ／Ｃ７９７Ｘ（例えば、エクソン１９ｄｅｌ／Ｔ７９０Ｍ／ｃｉｓ－Ｃ７９７Ｓ）、Ｌ８５８Ｘ／Ｔ７９０Ｘ／Ｃ９４１Ｘ（例えば、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｉ９４１Ｒ）、ｄｅｌＥ７４６＿Ａ７５０／Ｔ７９０Ｘ／Ｃ７９７Ｘ（例えば、ｄｅｌＥ７４６＿Ａ７５０／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ）を含む。

【0127】

ある特定の態様では、がん又は対象は、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、例えば、オシメルチニブに対する進行後の、ＥＧＦＲｍＲＮＡの増加、又はＥＧＦＲ－ｅｘ１９ｄｅｌ対立遺伝子の存在と組み合わせた野生型ＥＧＦＲ対立遺伝子の増幅を含む。

【0128】

ある特定の態様では、がんは、ｃＭＥＴエクソン１４スキッピング変異などのｃＭＥＴ変異を含む。

【0129】

チロシンタンパク質キナーゼＭＥＴ又は肝細胞成長因子受容体（ＨＧＦＲ）とも呼ばれるｃＭＥＴは、ヒトにおいてＭＥＴ遺伝子によってコードされるタンパク質である。このタンパク質は、チロシンキナーゼ活性を有する。一次単鎖前駆体タンパク質は、翻訳後に切断されて、成熟受容体を形成するためにジスルフィド結合されているアルファ及びベータサブユニットを産生する。

【0130】

ｃＭＥＴの調節不全、又は異常に活性化されたｃＭＥＴは、腫瘍成長、腫瘍に栄養素を供給する新しい血管の形成（血管新生）、及び他の臓器へのがんの拡散（転移）を誘導し得る。ｃＭＥＴは、腎臓、肝臓、胃、乳房、及び脳のがんを含む多くのタイプのヒト悪性腫瘍で調節不全される。ｃＭＥＴ遺伝子は、ＭＥＴ原がん遺伝子、受容体チロシンキナーゼ、肝細胞成長因子受容体、チロシンタンパク質キナーゼＭＥＴ、散乱因子受容体、原がん遺伝子Ｃ－ＭＥＴ、ＨＧＦ／ＳＦ受容体、ＨＧＦ受容体、ＳＦ受容体、ＥＣ２．７．１０．１、ＭＥＴ原がん遺伝子、ＥＣ２．７．１０、ＤＦＮＢ９７、ＡＵＴＳ９、ＲＣＣＰ２、Ｃ－ＭＥＴ、ＭＥＴ、ＨＧＦＲなどの多くの異なる名称で知られており、ｃＭＥＴの外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：７０２９、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：４２３３、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１０５９７６、ＯＭＩＭ：１６４８６０及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０８５８１である。受入番号は、主に、ｃＭＥＴタンパク質を標的として特定する更なる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたｃＭＥＴタンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコード遺伝子における変異のため、変化し得る。本明細書でｃＭＥＴについて言及される場合、別段記載されない限り、参照はヒトｃＭＥＴについて言及される。ｃＭＥＴに結合する抗原結合部位は、ｃＭＥＴ及びその様々なバリアント、例えば、いくつかのｃＭＥＴ陽性腫瘍上に発現されるものに結合する。ｃＭＥＴ異常又は調節不全の例は、ｃＭＥＴ変異（エクソン１４スキッピング変異など）、ｃＭＥＴ増幅、ｃＭＥＴ過剰発現、ｃＭＥＴ経路のシグナル伝達の増加、ｃＭＥＴ遺伝子増幅、及び／又はｃＭＥＴタンパク質活性の増加を含む。また、ｃＭＥＴ調節不全は、ＨＧＦ発現の増加によって引き起こされ得る。ｃ－ＭＥＴの調節不全は、腫瘍浸潤、血管新生及び転移の確立されたドライバーである（Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３）。ｃ－ＭＥＴの３つのタイプの生物学的変化は、発がんにつながり得る：増幅、変異及び融合。これらのゲノム変化は、主に、腫瘍成長の一次又は二次ドライバーのいずれかとして見出され、そのような異常は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤でのがん患者の治療後に生じることが報告されている（参照Ｓｕｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，ＤＯＩ：１０．１２００／ＰＯ．１９．０００１１ ＪＣＯ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ－Ｍａｙ １０，Ｖｏｌ３，２０１９）。

【0131】

抗体は、典型的には、抗原の一部のみを認識する。抗原は、典型的には、必ずしもタンパク質ではない。抗体によって結合された抗原上の認識又は結合部位は、エピトープと称され、エピトープは、線状又は立体構造であり得る。抗原への抗体の結合は、典型的には、特異性である。抗体の「特異性」は、特定のエピトープに対するその選択性を指すが、「親和性」は、抗体の抗原結合部位とそれが結合するエピトープとの相互作用の強度を指す。

【0132】

本開示の例示的な抗体は、ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ、ある特定の態様ではヒトＥＧＦＲ及びヒトｃＭＥＴに結合する。本開示のＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ二重特異性抗体は、ＥＧＦＲに結合し、他の点で同一の条件下では、同じ種の相同受容体ＥｒｂＢ－２及びＥｒｂＢ－４に少なくとも１００倍低く結合する。本開示のＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ二重特異性抗体は、ｃＭＥＴに結合し、他の点で同一の条件下では、同じ種の受容体ＥｒｂＢ－２及びＥｒｂＢ－４に少なくとも１００倍低く結合する。受容体が細胞表面受容体であることを考慮すると、結合は、受容体を発現する細胞について評価され得る。ある特定の態様における本開示の二重特異性抗体は、ヒト、カニクイザルＥＧＦＲ及び／又はマウスＥＧＦＲに結合する。

【0133】

ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴに結合する抗体は、そのような他のタンパク質が同じエピトープを含有する場合、同様に他のタンパク質に結合してもよい。したがって、「結合する」という用語は、同じエピトープを含有する別の１つ以上のタンパク質への抗体の結合を排除しない。そのような結合は、典型的には、交差反応性と称される。ＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ二重特異性抗体は、典型的には、出生後、ある特定の態様では成人のヒトにおいて、細胞の膜上のＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴ以外の他のタンパク質に結合しない。本開示による抗体は、典型的には、以下でより詳細に概説されるように、少なくとも１×１０ｅ－６Ｍの結合親和性（すなわち、平衡解離定数Ｋｄ）でＥＧＦＲに結合することができる。

【0134】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、タンパク質の免疫グロブリンクラスに属するある特定の態様におけるタンパク質性分子を意味する。抗体は、典型的には、抗原上のエピトープに結合する２つの可変ドメインを含有する。そのようなドメインは、抗体の可変ドメインに由来するか、又はこれと配列相同性を共有する。ある特定の態様における本開示の二重特異性抗体は、２つの可変ドメインを含む。治療的使用のための抗体は、ある特定の態様では、可能な限り治療される対象の天然抗体に近い（例えば、ヒト対象のためのヒト抗体）。抗体結合は、特異性及び親和性に関して表され得る。特異性は、どの抗原又はそのエピトープが結合ドメインによって特異的に結合されるかを決定する。典型的には、治療用途のための抗体は、最大１×１０ｅ－１０Ｍ以上の親和性を有し得る。本開示の二重特異性抗体などの抗体は、ある特定の態様では、天然抗体の定常ドメイン（Ｆｃ部分）を含む。本開示の抗体は、典型的には、ヒトＩｇＧサブクラスのある特定の態様では、二重特異性全長抗体である。ある特定の態様では、本開示の抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。本開示のそのような抗体は、ヒトへのインビボ投与時に好ましい半減期を有し、クローン細胞での共発現時にホモ二量体よりも優先的にヘテロ二量体を形成する修飾された重鎖を提供し得るＣＨ３工学技術を有する、優れたＡＤＣＣ特性を有し得る。抗体のＡＤＣＣ活性は、当業者に既知の技法によっても改善され得る。

【0135】

本開示の抗体は、ある特定の態様では、「全長」抗体である。本開示による「全長」という用語は、本質的に完全な抗体を含むと定義されるが、必ずしも無傷な抗体の全ての機能を有するわけではない。誤解を避けるために、全長抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含有する。各鎖は、定常（Ｃ）領域及び可変（Ｖ）領域を含有し、これらは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、及びＣＬ、ＶＬと指定されたドメインに分類され得る。典型的には、抗体は、Ｆａｂ部分に含まれる可変ドメインを介して抗原に結合し、結合後、定常ドメインを介して、主にＦｃ部分を介して免疫系の分子及び細胞と相互作用することができる。本開示による全長抗体は、所望の特徴を提供する変異が存在し得る抗体を包含する。結果として得られた抗体の特異性及び／又は親和性特性を本質的に変化させることなく、１つ以上のアミノ酸残基が欠失した抗体は、「全長抗体」という用語内に包含される。例えば、ＩｇＧ抗体は、定常領域において１～２０アミノ酸残基の挿入、欠失若しくは置換、又はそれらの組み合わせを有し得る。

【0136】

ある特定の態様では、本開示の抗体は、二重特異性全長ＩｇＧ１抗体又はヒトＩｇＧ１などの二重特異性ＩｇＧ抗体である。免疫原性を理由とした、それらの典型的には好ましい半減期のため、及び完全に自己の（ヒト）分子に近いままでいることが望まれるため、全長ＩｇＧ抗体が好ましい。ある特定の態様では、本開示の抗体は、全長ＩｇＧ１、全長ＩｇＧ２、全長ＩｇＧ３又は全長ＩｇＧ４抗体である。

【0137】

ＥＧＦＲに結合することができ、かつ本明細書に示されるようなＭＦ３３７０又はそのバリアントのアミノ酸配列を含む、可変ドメインは、ある特定の態様では、ＥＧＦＲドメインＩＩＩに結合する（国際特許出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０１２４の表４を参照；参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１３０１７２）。ある特定の態様における可変ドメインは、ＥＧＦＲへのリガンドＥＧＦの結合を遮断するか、又はＥＧＦＲへの結合についてＥＧＦリガンドと競合する。ＥＧＦＲへの可変ドメインの結合は、セツキシマブによって阻害され得る。可変ドメインは、セツキシマブ及びザルツムマブによって認識されるエピトープとは異なるエピトープに結合する。例えば、可変ドメインは、マウスＥＧＦＲに結合するが、セツキシマブ及びザルツムマブは結合せず、マウスとヒトＥＧＦＲドメインＩＩとの間で異なる残基のうちの１つ以上が、セツキシマブ及びザルツムマブの結合において役割を果たすが、本開示の抗体においては役割を果たさないことを示す。ヒト、マウス、カニクイザルＥＧＦＲ交差反応性を有する本開示の二重特異性抗体の利点は、ヒトがんモデルを用いた異種移植片調査の使用を可能にすることであり、これは、抗体が受容体を有する正常なマウス細胞にも結合する一方で、カニクイザル毒性学研究における使用も可能であるため、有効性及び毒性に関してより予測的であり得る。一態様では、本開示は、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、ヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含み、当該第１の可変ドメインが、マウスＥＧＦＲ、カニクイザルＥＧＦＲ又はその両方に結合することもできる、二重特異性抗体を提供する。

【0138】

ｃＭＥＴ可変ドメインは、ある特定の態様では、本明細書に示されるようなＭＦ４３５６又はそのバリアントのアミノ酸配列を含み、ある特定の態様では、ｃＭＥＴへの抗体ＭｅｔＭａｂの結合を遮断する。ある特定の態様における可変ドメインは、ｃＭＥＴへのリガンドＨＧＦの結合を遮断するか、又はｃＭＥＴへの結合についてリガンドＨＧＦと競合する。可変ドメインは、最大半量結合条件でのｃＭＥＴへのＭｅｔＭａｂの結合が、飽和量の当該可変ドメインの存在下で、少なくとも４０％、ある特定の態様では少なくとも６０％減少される場合に、ｃＭＥＴへの抗体ＭｅｔＭａｂの結合を遮断する。可変ドメインは、ある特定の態様では、二価単一特異性抗体の文脈で提供される。ｃＭＥＴ可変ドメインは、ある特定の態様では、ｃＭＥＴのｓｅｍａドメインに結合することができる。本開示のｃＭＥＴ可変ドメインは、ｃＭＥＴへの結合について５Ｄ５と競合していても、又は５Ｄ５などの報告されている抗ｃＭＥＴ参照抗体と競合していなくてもよい。表２を参照されたい。

【0139】

本開示の可変ドメインは、ＥＧＦＲ（第１の可変ドメイン）に結合することができ、ある特定の態様では、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ_１Ｘ_２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７Ａを含むＣＤＲ３を有し、Ｘ_１＝Ｎ又はＳ、Ｘ_２＝Ａ又はＧ、Ｘ_３＝Ｄ又はＧ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ_６＝Ｄ又はＷ、かつＸ_７＝Ｄ又はＧである、重鎖可変領域を含む。

【0140】

Ｘ_１～７は、ある特定の態様では、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇであるか、又は
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇである。

【0141】

ある特定の態様では、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、又は
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄである。

【0142】

ある特定の態様では、Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄである。

【0143】

第１の可変ドメインのＣＤＲ３配列における配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７Ａにおけるアミノ酸Ａの後のアミノ酸は、様々であり得る。配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７Ａの後のアミノ酸配列は、ＦＤＹであり得る。ある特定の態様における第１の可変ドメインのＣＤＲ３は、配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７ＡＦ、ある特定の態様ではＸ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７ＡＦＤ、ある特定の態様ではＸ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７ＡＦＤＹを含む。

【0144】

ある特定の態様における第１の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及びＣＤＲ３配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７Ａを有する、重鎖可変領域を含む。

【0145】

ある特定の態様における第１の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する、重鎖可変領域を含む。第１の可変ドメインのＣＤＲ３配列における配列ＬＤＡの後のアミノ酸は、様々であり得る。配列ＬＤＡの後のアミノ酸配列は、ＦＤＹであり得る。ある特定の態様では、第１の可変ドメインのＣＤＲ３は、配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦ、ある特定の態様ではＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤ、ある特定の態様ではＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹを含む。

【0146】

ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、示される配列に関して、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する、図２に示されるような、ＭＦ３３５３、ＭＦ８２２９、ＭＦ８２２８、ＭＦ３３７０、ＭＦ８２３３、ＭＦ８２３２、ＭＦ３３９３、ＭＦ８２２７又はＭＦ８２２６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、図２に示されるような、ＭＦ３３５３、ＭＦ８２２９、ＭＦ８２２８、ＭＦ３３７０、ＭＦ８２３３、ＭＦ８２３２、ＭＦ３３９３、ＭＦ８２２７又はＭＦ８２２６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、図２に示されるような、ＭＦ３３５３、ＭＦ８２２９、ＭＦ８２２８、ＭＦ３３７０、ＭＦ８２３３、ＭＦ８２３２、ＭＦ３３９３、ＭＦ８２２７又はＭＦ８２２６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。

【0147】

ある特定の態様におけるｃＭＥＴに結合することができる可変ドメイン（第２の可変ドメイン）は、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３（図３）の配列のうちの１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の態様における第２の可変ドメインの重鎖可変領域は、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～３、７、８、１０、１３、１５、１６、１７、２１、２２又は２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を含む。ある特定の態様における第２の可変ドメインの重鎖可変領域は、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号２、７、８、１０、１３、又は２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を含む。ある特定の態様における第２の可変ドメインの重鎖可変領域は、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１３又は配列番号２３の配列のアミノ酸配列を含む。ある特定の態様では、第２の可変ドメインは、ＭＦ８２２５（配列番号１）、ＭＦ８２４３（配列番号２）、ＭＦ８２２４（配列番号３）、ＭＦ８２３９（配列番号４）、ＭＦ８２４２（配列番号５）、ＭＦ８２３７（配列番号６）、ＭＦ８２４０（配列番号７）、ＭＦ８２３４（配列番号８）、ＭＦ８２４５（配列番号９）、ＭＦ８２３１（配列番号１０）、ＭＦ８２４７（配列番号１１）、ＭＦ８２３８（配列番号１２）、ＭＦ８２３０（配列番号１３）、ＭＦ８２４８（配列番号１４）、ＭＦ８２４６（配列番号１５）、ＭＦ８２２３（配列番号１６）、ＭＦ８２２２（配列番号１７）、ＭＦ８２３５（配列番号１８）、ＭＦ８２３６（配列番号１９）、ＭＦ８２４１（配列番号２０）、ＭＦ８２４４（配列番号２１）、ＭＦ８２２１（配列番号２２）又はＭＦ４３５６（配列番号２３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。

【0148】

ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡ、ある特定の態様では配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＳＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及びＣＤＲ３配列ＥＴＹＹＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを有する重鎖可変領域を含む。ある特定の態様における、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。

【0149】

ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＴＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及び配列ＥＴＹＦＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含む。ある特定の態様における、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。

【0150】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴの細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含む、二重特異性抗体であって、第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及びＣＤＲ３配列ＥＴＹＹＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体。ある特定の態様における、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。

【0151】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴの細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含む、二重特異性抗体であって、第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＴＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及び配列ＥＴＹＦＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体。ある特定の態様における、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。

【0152】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴの細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含む、二重特異性抗体であって、第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＳＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及びＣＤＲ３配列ＥＴＹＹＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体。ある特定の態様における、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。

【0153】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴの細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含む、二重特異性抗体であって、第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＳＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＴＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及び配列ＥＴＹＦＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体。ある特定の態様における、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。

【0154】

ｃＭＥＴ結合可変ドメインが、ＣＤＲ２配列「ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ」を有すると記載されているある特定の態様では、ＣＤＲ２配列は、「ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴ」でもあり得る。

【0155】

ある特定の態様における、本明細書に記載されている、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。そのような実施形態のいくつかでは、ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰを含む。本明細書に記載されているような二重特異性抗体のいくつかの実施形態では、第１及び第２の可変ドメインは、共通軽鎖、ある特定の態様では、図４Ｂの軽鎖可変領域を含む。

【0156】

別のある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ二重特異性抗体は、図１に示されるＭＦ３７５５の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含むヒトＥＧＦＲの細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメインと、図１に示されるＭＦ４２９７の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含むヒトｃＭＥＴの細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインと、を含む。当該第１及び第２の可変ドメインにおける軽鎖可変領域は、ある特定の態様では、本明細書に記載されているような共通軽鎖可変領域である。ある特定の態様における、第１及び第２の可変ドメインの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。ある特定の態様では、抗体は、示される配列に関して、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する、図１に示されるようなＭＦ３７５５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、図１に示されるようなＭＦ３７５５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、ｃＭＥＴ（第２の可変ドメイン）に結合することができる可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図１に示されるようなＭＦ４２９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の態様における第２の可変ドメインの重鎖可変領域は、図１に示されるようなＭＦ４２９７のアミノ酸配列を含む。

【0157】

本開示の文脈における「二重特異性」（ｂｓ）という用語は、抗体が、２つの異なる標的に又は同じ標的上の２つのエピトープに結合することができることを意味し、例えば、抗体の１つの可変ドメイン（先に定義されている通り）は、ＥＧＦＲ上のエピトープに結合しており、第２の可変ドメインは、ｃＭＥＴ上のエピトープに結合している。二重特異性抗体によって認識される２つの抗原の発現レベル、（亜）細胞局在化及び化学量論に依存して、抗体の両方のＦａｂアームは、それらのエピトープに同時に結合していても、又は同時に結合していなくてもよい。二重特異性抗体の一方のアームは、典型的には、一方の抗体の可変ドメインを含有し、もう一方のアームは、別の抗体の可変ドメインを含有する（すなわち、二重特異性抗体の一方のアームは、一方の軽鎖と対合した一方の重鎖によって形成され、他方のアームは、軽鎖と対合した異なる重鎖によって形成される）。したがって、本開示の好ましい二重特異性抗体の化学量論は、１：１のＥＧＦＲ：ｃＭＥＴ結合である。

【0158】

本開示の二重特異性抗体の重鎖可変領域は、典型的には、互いに異なるが、軽鎖可変領域は、ある特定の態様では同じである。異なる重鎖可変領域が同じ軽鎖可変領域に会合している二重特異性抗体は、共通軽鎖可変領域（ｃＬｃｖ）を有する二重特異性抗体とも称される。軽鎖定常領域も同じであることが好ましい。そのような二重特異性抗体は、共通軽鎖（ｃＬｃ）を有するものと称される。したがって、両方のアームが共通軽鎖を含む、本開示による二重特異性抗体が更に提供される。

【0159】

本開示による「共通軽鎖」という用語は、同一であり得るか、又はいくつかのアミノ酸配列の差を有し得るが、全長抗体の結合特異性は影響を受けない、二重特異性抗体における１つ以上の軽鎖を指す。例えば、保存的アミノ酸変化、重鎖と対合したときに結合特異性に寄与しないか、又は部分的にしか寄与しない領域におけるアミノ酸の変化などを導入し、かつ試験することにより、同一ではないが依然として機能的に等価である軽鎖を調製するか、又は見出すことは、例えば、本明細書で使用される共通軽鎖の定義の範囲内で可能である。「再配列された」という用語の付加を伴うか否かにかかわらず、「共通軽鎖」、「共通ＬＣ」、「ｃＬＣ」、「単一軽鎖」という用語は全て、本明細書で互換的に使用される。「再配列された」という用語の付加を伴うか否かにかかわらず、「共通軽鎖可変領域」、「共通ＶＬ」、「共通ＬＣｖ」「ｃＬＣｖ」、「単一ＶＬ」という用語は全て、本明細書で互換的に使用される。本開示のある特定の態様では、多重特異性抗体は、機能的抗原結合ドメインを有する抗体を形成するために、異なる結合特異性の少なくとも２個、ある特定の態様では複数の重鎖（可変領域）と組み合わせることができる、共通軽鎖（可変領域）を有する（例えば、ＷＯ２００９／１５７７７１）。共通軽鎖（可変領域）は、ある特定の態様では、ヒト軽鎖（可変領域）である。ある特定の態様における共通軽鎖（可変領域）は、生殖系列配列を有する。好ましい生殖系列配列は、良好な熱力学的安定性、収率及び可溶性を有する軽鎖可変領域である。好ましい生殖系列軽鎖は、Ｏ１２である。ある特定の態様における共通軽鎖は、生殖系列ヒトＶｋ遺伝子セグメントによってコードされる軽鎖を含み、ある特定の態様では、再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１（図４Ａ）である。共通軽鎖可変領域は、ある特定の態様では、再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域である。ある特定の態様における共通軽鎖は、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する、図４Ｂ又は４Ｄに示されるような軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様における共通軽鎖は、軽鎖定常領域、ある特定の態様ではカッパ軽鎖定常領域を更に含む。共通軽鎖をコードする核酸は、共通軽鎖タンパク質を発現するために使用される細胞系に対してコドンを最適化され得る。コード核酸は、生殖系列核酸配列から逸脱し得る。

【0160】

ある特定の態様では、軽鎖は、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する、図４Ａに示されるようなＯ１２／ＩｇＶκ１－３９＊０１遺伝子セグメントのアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。「Ｏ１２軽鎖」という語句は、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する、示される図４Ａの一部としてのＯ１２／ＩｇＶκ１－３９^＊０１遺伝子セグメントのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖の略として、本明細書全体で使用される。ＩｇＶκ１－３９は、免疫グロブリン可変カッパ１－３９遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変１－３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１－３９、Ｏ１２ａ又はＯ１２としても知られている。この遺伝子の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。ＩｇＶκ１－３９の好ましいアミノ酸配列が図４Ｅに提示される。この図は、Ｖ領域の配列を列記する。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。図４Ｂ及び４Ｄは、Ｊ領域と組み合わせたＩｇＶκ１－３９の２つの好ましい配列を記載する。合わせられた配列は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１及びＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５と示され、代替名称は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデータベースワールドワイドウェブによる命名）である。

【0161】

軽鎖可変領域を含むＯ１２／ＩｇＶκ１－３９＊０１が生殖系列配列であることが好ましい。軽鎖可変領域を含むＩＧＪκ１＊０１又は／ＩＧＪκ５＊０１が生殖系列配列であることが更に好ましい。ある特定の態様では、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１又はＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５軽鎖可変領域は、生殖系列配列である。

【0162】

ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、生殖系列Ｏ１２／ＩｇＶκ１－３９^＊０１を含む。ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含む。ある特定の態様では、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１。ある特定の態様における軽鎖可変領域は、生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又は生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１、ある特定の態様では生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１を含む。

【0163】

Ｏ１２軽鎖を有する抗体を産生する成熟Ｂ細胞は、多くの場合、生殖系列配列、すなわち、生物の非リンパ系細胞における正常配列に対して１つ以上の変異を経た軽鎖を産生する。これらの変異に関与するプロセスは、多くの場合、体細胞（超）変異と称される。結果として得られた軽鎖は、親和性成熟軽鎖と称される。そのような軽鎖は、Ｏ１２生殖系列配列に由来する場合、Ｏ１２由来の軽鎖である。本明細書では、「共通軽鎖」という語句は、「共通軽鎖由来の軽鎖」を含み、「Ｏ１２軽鎖」という語句は、Ｏ１２由来の軽鎖を含む。体細胞超変異によって導入される変異は、研究室で人工的に導入することもできる。研究室では、他の変異も、必ずしも量ではなく種類に関して軽鎖の特性に影響を及ぼすことなく導入することができる。軽鎖は、これが、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｄ又は図４Ｅに示されるような配列を含む場合、少なくともＯ１２軽鎖である。ある特定の態様では、Ｏ１２軽鎖は、０～９個、０～８個、０～７個、０～６個、０～５個、０～４個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図４Ａ、４ｂ、４ｄ又は４ｅに示されるような配列を含む軽鎖である。ある特定の態様では、Ｏ１２軽鎖は、０～５個、ある特定の態様では０～４個、ある特定の態様では０～３個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｄ又は図４Ｅに示されるような配列を含む軽鎖である。ある特定の態様では、Ｏ１２軽鎖は、０～２個、ある特定の態様では０～１個、ある特定の態様では０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｄ又は図４Ｅに示されるような配列を含む軽鎖である。ある特定の態様では、Ｏ１２軽鎖は、言及されているアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図４Ａ又は図４Ｂに示されるような配列を含む軽鎖である。ある特定の態様では、軽鎖は、図４Ａの配列を含む。ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、図４Ｂの配列を含む。言及されている１、２、３、４又は５個のアミノ酸置換は、ある特定の態様では、保存的アミノ酸置換であり、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ領域に存在し得、挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせは、ある特定の態様では、ＶＬ鎖のＣＤＲ３領域には存在せず、ある特定の態様では、ＶＬ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３領域又はＦＲ４領域には存在しない。

【0164】

共通軽鎖は、ラムダ軽鎖を有し得、したがって、これはまた、本開示の文脈で提供されるが、しかしながら、カッパ軽鎖が好ましい。本開示の共通軽鎖の定常部分は、カッパ又はラムダ軽鎖の定常領域であり得る。これは、ある特定の態様では、カッパ軽鎖の定常領域であり、ある特定の態様では、当該共通軽鎖は、生殖系列軽鎖であり、ある特定の態様では、ＩｇＶＫｌ－３９遺伝子セグメントを含む再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖であり、ある特定の態様では、再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶＫｌ－３９＊０１／ＩＧＪＫｌ＊０１である（図４）。再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９^＊０１／ＩＧＪκ１^＊０１、ＩＧＫＶ１－３９／ＩＧＫＪ１、ｈｕＶκ１－３９軽鎖又は略してｈｕＶκ１－３９若しくは単に１－３９という用語は、本出願全体で互換的に使用される。

【0165】

共通軽鎖を産生する細胞は、例えば、再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１、及びラムダ定常領域に融合された言及されている軽鎖の可変領域を含む軽鎖を産生することができる。

【0166】

ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、０～５個、ある特定の態様では０～１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有するアミノ酸配列ＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥ ＩＫ又はＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＩＴＦＧ ＱＧＴＲＬ ＥＩＫを含む。ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に関して、０～９個、０～８個、０～７個、０～６個、０～５個、０～４個、ある特定の態様では０～３個、ある特定の態様では０～２個、ある特定の態様では０～１個、ある特定の態様では０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを含む。挿入、欠失、付加又は置換の組み合わせは、整列させた配列が５個超の位置で異ならない場合の特許請求されている組み合わせである。ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥ ＩＫ又はＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＩＴＦＧ ＱＧＴＲＬ ＥＩＫを含む。ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥ ＩＫを含む。ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＩＴＦＧ ＱＧＴＲＬ ＥＩＫを含む。

【0167】

アミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせは、ある特定の態様では軽鎖可変領域のＣＤＲ３領域内には存在せず、ある特定の態様では軽鎖可変領域のＣＤＲ１又はＣＤＲ２領域には存在しない。ある特定の態様では、軽鎖可変領域は、示される配列に関して、欠失、付加又は挿入を含まない。この態様では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に関して０～５個のアミノ酸置換を有し得る。アミノ酸置換は、ある特定の態様では、保存的アミノ酸置換である。ある特定の態様における、本開示の抗体の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ（ＩＭＧＴによる）を各々含む。

【0168】

ある特定の態様では、本明細書に記載されているような二重特異性抗体は、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合している１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせ及びｃＭＥＴの細胞外に結合している第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせを有する。ある特定の態様では、当該第１のＶＨ／ＶＬの組み合わせにおけるＶＬは、当該第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせにおけるＶＬに類似している。特定の態様では、第１及び第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせにおけるＶＬは、同一である。ある特定の態様では、二重特異性抗体は、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合している１つの重／軽（Ｈ／Ｌ）鎖の組み合わせとｃＭＥＴの細胞外部分に結合している１つのＨ／Ｌ鎖の組み合わせとを有する全長抗体である。ある特定の態様では、当該第１のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖は、当該第２のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖に類似している。特定の態様では、第１及び第２のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖は、同一である。

【0169】

二重特異性抗体又はその逆の単一特異性抗体の産生を有利にする発現を有する宿主細胞を産生するために、いくつかの方法が発表されている。本開示では、抗体分子の細胞発現は、各々の単一特異性抗体の産生よりも二重特異性抗体の産生に有利であることが好ましい。このようなことは、典型的には、重鎖の定常領域を、それらがホモ二量体化よりもヘテロ二量体化（すなわち、他の重鎖／軽鎖の組み合わせの重鎖との二量体化）を有利にするように修飾することによって達成される。ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。様々な適合性ヘテロ二量体化ドメインが当該技術分野において記載されている。適合性ヘテロ二量体化ドメインは、ある特定の態様では、適合性免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。野生型ＣＨ３ドメインを使用する場合、２つの異なる重鎖（Ａ及びＢ）と共通軽鎖の共発現は、３つの異なる抗体種、ＡＡ、ＡＢ及びＢＢをもたらすだろう。ＡＡ及びＢＢは、２つの単一特異性二価抗体の記号であり、ＡＢは、二重特異性抗体の記号である。所望の二重特異性生成物（ＡＢ）のパーセンテージを増加させるために、ＣＨ３工学が用いられ得るか、又は言い換えれば、それは、本明細書で定義される適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する重鎖を使用し得る。当該技術分野では、そのような重鎖のヘテロ二量体化を達成することができる様々な方法が記載されている。１つの手法は、「ノブイントゥーホール（ｋｎｏｂ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅ）」二重特異性抗体を生成することである。

【0170】

本明細書で使用される「適合性ヘテロ二量体化ドメイン」という用語は、操作されたドメインＡ’が優先的に操作されたドメインＢ’とヘテロ二量体を形成し、その逆もまた同様であり、Ａ’－Ａ’及びＢ’－Ｂ’の間のホモ二量体化が減少するように操作された、タンパク質ドメインを指す。

【0171】

ＵＳ１３／８６６，７４７（現在はＵＳ９，２４８，１８１として発行されている）、ＵＳ１４／０８１，８４８（現在はＵＳ９，３５８，２８６として発行されている）及びＰＣＴ／ＮＬ２０１３／０５０２９４（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／１５７９５４として公開されている）の方法及び手段は、適合性ヘテロ二量体化ドメインを使用して二重特異性抗体を産生するために開示されている。これらの手段及び方法も、本開示で有利に用いることができる。具体的には、ある特定の態様における本開示の二重特異性抗体は、宿主細胞において二重特異性全長ＩｇＧ分子の実質的な発現を産生する変異を含む。好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（「ＫＫバリアント」重鎖）、並びに第２のドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（「ＤＥバリアント」重鎖）、又はその逆である。ＵＳ９，２４８，１８１及びＵＳ９，３５８，２８６特許、並びにＷＯ２０１３／１５７９５４ＰＣＴ出願（これらは、参照により本明細書に組み込まれる）は、ＤＥバリアント及びＫＫバリアントが、優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成することを実証している。ＤＥバリアント重鎖（ＤＥＤＥホモ二量体）のホモ二量体化は、同一の重鎖間のＣＨ３－ＣＨ３界面における荷電残基間の反発に起因して不利である。

【0172】

二重特異性抗体は、効率的なヘテロ二量体化及び二重特異性抗体の形成を確実にするようにＣＨ３操作された軽鎖及び２つの異なる重鎖をコードするプラスミドの（一過性）トランスフェクションによって生成され得る。単一細胞におけるこれらの鎖の産生は、単一特異性抗体の形成よりも二重特異性抗体の形成を有利にする。本質的に二重特異性全長ＩｇＧ１分子のみを産生する好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおける３５１位及び３６６位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付けによる番号付け）（「ＫＫバリアント」重鎖）、並びに第２のＣＨ３ドメインにおける３５１位及び３６８位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（「ＤＥバリアント」重鎖）、又はその逆である（例えば、図５Ｅ及び５Ｆを参照）。

【0173】

一態様では、ＥＧＦＲに結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＤＥバリアントを含む。この態様では、ｃＭＥＴに結合することができる可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＫＫバリアントを含む。ｃＭＥＴに結合する重鎖のＫＫバリアントは、ホモ二量体を産生せず、それによって、二重特異性抗体によるＨＧＦ誘導ｃＭＥＴ活性化阻害の観察される効果を非常に正確にする。これは、場合によって二価ｃＭＥＴ抗体で観察されるｃＭＥＴの活性化（アゴニズム）を回避する。

【0174】

Ｆｃ領域は、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）などの抗体のエフェクター機能を媒介する。治療抗体又はＦｃ融合タンパク質の用途に応じて、エフェクター機能を低減又は増加させることが望ましい場合がある。本開示の態様のいくつかにあるように、免疫応答が、活性化されるか、増強されるか、又は刺激される場合、低減されたエフェクター機能が所望され得る。エフェクター機能が低下した抗体を使用して、とりわけ、免疫細胞の細胞表面分子を標的化することができる。ある特定の態様では、本開示の抗体は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を促進する。ある特定の態様では、本開示の抗体は、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を促進する。本開示の１つの利点は、ある特定の態様で、本開示の二重特異性抗体が、特にｃＭＥＴ異常を含む細胞又はがんに対して、アミバンタマブよりも強力なＡＤＣＣ活性を示すことである。

【0175】

エフェクター機能が低減した抗体は、ある特定の態様では、例えば、Ｆｃ受容体相互作用を低減させるか、又はＣ１ｑ結合を低減させるように、修飾されたＣＨ２／下部ヒンジ領域を含むＩｇＧ抗体である。いくつかの態様では、本開示の抗体は、Ｆｃ－ガンマ受容体への二重特異性ＩｇＧ抗体の相互作用が低減されるように、変異体ＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインを有するＩｇＧ抗体である。変異体ＣＨ２領域を含む抗体は、ある特定の態様では、ＩｇＧ１抗体である。ある特定の態様におけるそのような変異体ＩｇＧ１ ＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインは、２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付け）にアミノ置換を含み、ある特定の態様では、Ｌ２３５Ｇ及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む（図５Ｄ）。

【0176】

ある特定の態様における本開示の抗体は、エフェクター機能を有する。ある特定の態様における本明細書に開示されているような二重特異性抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を含む。抗体は、ＡＤＣＣ活性を増強するように操作することができる（レビューについては、Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．２００９ Ｓｅｐ；１００（９）：１５６６－７２．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｋｕｂｏｔａ Ｔ，Ｎｉｗａ Ｒ，Ｓａｔｏｈ Ｍ，Ａｋｉｎａｇａ Ｓ，Ｓｈｉｔａｒａ Ｋ，Ｈａｎａｉ Ｎを参照されたい）。ＡＤＣＣを誘発する際に抗体又はエフェクター細胞の有効性を決定するためのいくつかのインビトロ方法が存在する。それらの中には、クロム－５１［Ｃｒ５１］リリースアッセイ、ユウロピウム［Ｅｕ］リリースアッセイ、及び硫黄－３５［Ｓ３５］リリースアッセイが含まれる。通常、ある特定の表面が曝露された抗原を発現する標識標的細胞株は、その抗原に特異的な抗体とともにインキュベートされる。洗浄後、Ｆｃ受容体ＣＤ１６を発現するエフェクター細胞を、抗体標識標的細胞と共インキュベートする。続いて、標的細胞溶解を、シンチレーションカウンター又は分光光度法による細胞内標識のリリースによって測定する。一態様では、本開示の二重特異性抗体は、ＡＤＣＣ活性を呈する。そのような態様では、二重特異性抗体は、改善されたＡＤＣＣ活性を有し得る。そのような態様では、抗体は、本明細書の他の箇所に記載されているような１つ以上のＣＨ２変異によって、及び当技術分野で既知の技術によって、ＡＤＣＣ活性を変化させることができた。抗体のＡＤＣＣを増強するための１つの技術は、アフコシル化である。（例えば、Ｊｕｎｔｔｉｌａ，Ｔ．Ｔ．，Ｋ．Ｐａｒｓｏｎｓ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）．“Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｉｎ ｖｉｖｏ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＨＥＲ２－Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７０（１１）：４４８１－４４８９を参照されたい）。したがって、アフコシル化された、本開示による二重特異性抗体が更に提供される。ある特定の態様では、本開示の抗体は、２つのアフコシル化されたＣＨ２ドメインを含む。ある特定の態様では、本開示の抗体は、どちらもアフコシル化されている、合計２つのＣＨ２ドメインを含む。ある特定の態様では、本開示の抗体は、どちらもアフコシル化されている２つのＣＨ２ドメインを有する、ＩｇＧ型のものなどの全長抗体である。代替的に、又は追加的に、ＡＤＣＣの増強を達成するために、例えば、糖鎖工学（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ／Ｂｉｏｗａ、ＧｌｙｃＡｒｔ（Ｒｏｃｈｅ）及びＥｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）及び変異誘発を含む、複数の他の戦略を使用することができ、これらの全ては、低親和性活性化ＦｃγＲＩＩＩａへのＦｃ結合を改善すること、及び／又は低親和性阻害性ＦｃγＲＩＩｂへの結合を低減することを目指すものである。本開示の二重特異性抗体は、ある特定の態様では、ＡＤＣＣ活性を増強するためにアフコシル化される。ある特定の態様における本明細書の本開示の二重特異性抗体は、正常なＣＨＯ細胞において産生される同じ抗体と比較した場合、Ｆｃ領域におけるＮ連結炭水化物構造のフコシル化の量の低減を含む。

【0177】

本明細書に記載されているような抗体又は二重特異性抗体のバリアントは、抗体又は二重特異性抗体の機能部分、誘導体及び／又は類似体を含む。バリアントは、（二重特異性）抗体の結合特異性を維持する。機能部分、誘導体、及び／又は類似体は、（二重特異性）抗体の結合特異性を維持する。結合特異性は、本明細書に記載されるように、第１の膜タンパク質及び第２の膜タンパク質の細胞外部分に結合する能力によって定義される。

【0178】

本開示の二重特異性抗体は、ある特定の実施形態では、ヒトにおいて使用される。本開示の好ましい抗体は、ヒト化抗体、又はある特定の態様ではヒト抗体である。本開示の二重特異性抗体の定常領域は、ある特定の態様では、ヒト定常領域である。定常領域は、天然に生じるヒト抗体の定常領域と１以上、ある特定の態様では１０以下、ある特定の態様では５以下のアミノ酸差を含み得る。定常部分が、天然に生じるヒト抗体に完全に由来することが好ましい。本明細書で産生される様々な抗体は、ヒト抗体可変ドメインライブラリに由来する。このように、これらの可変ドメインは、ヒトである。独自のＣＤＲ領域は、ヒトに由来し得るか、合成され得るか、又は別の生物に由来し得る。可変領域は、ＣＤＲ領域を除いて、天然に生じるヒト抗体の可変領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有する場合、ヒト化可変領域とみなされる。そのような態様では、本開示のＥＧＦＲ又はｃＭＥＴに結合する抗体の可変ドメインのＶＨは、ＣＤＲ領域のアミノ酸配列における可能な差をカウントせずに、天然に生じるヒト抗体の可変領域と１以上、ある特定の態様では１０以下、ある特定の態様では５以下のアミノ酸差を含み得る。本開示の抗体におけるＥＧＦＲ結合ドメイン及び／又はｃＭＥＴ結合ドメインの軽鎖可変領域は、ＣＤＲ領域のアミノ酸配列における可能な差をカウントせずに、天然に生じるヒト抗体の可変領域と１以上、ある特定の態様では１０以下、ある特定の態様では５以下のアミノ酸差を含み得る。本開示の抗体における軽鎖は、ＣＤＲ領域のアミノ酸配列における可能な差をカウントせずに、天然に生じるヒト抗体の可変領域と１以上、ある特定の態様では１０以下、ある特定の態様では５以下のアミノ酸差を含み得る。そのような変異はまた、体細胞超変異の文脈においても自然に生じる。

【0179】

抗体は、少なくとも重鎖可変領域に関して、様々な動物種に由来し得る。そのような例えば、マウス重鎖可変領域をヒト化することが一般的な慣行である。これが達成され得る様々な方法があり、その中には、マウス重鎖可変領域の３Ｄ構造に一致する３Ｄ構造を有するヒト重鎖可変領域へのＣＤＲ移植；ある特定の態様では、マウス重鎖可変領域から既知の又は疑わしいＴ細胞又はＢ細胞エピトープを除去することによって行われる、マウス重鎖可変領域の脱免疫がある。この除去は、典型的には、エピトープの配列がもはやＴ細胞又はＢ細胞エピトープではないように修飾されるように、エピトープ中のアミノ酸のうちの１つ以上を別の（典型的には保存的）アミノ酸で置換することによるものである。

【0180】

脱免疫化マウス重鎖可変領域は、元のマウス重鎖可変領域よりもヒトにおいて免疫原性が低い。ある特定の態様では、本開示の可変領域又はドメインは、例えば、ベニヤリングされるなど、更にヒト化される。ベニヤリング技術を使用することにより、免疫系によって容易に遭遇される外部残基を選択的にヒト残基に置き換えて、弱免疫原性又は実質的に非免疫原性のベニヤリング表面のいずれかを含むハイブリッド分子を提供する。本開示で使用される動物は、ある特定の態様では哺乳動物、ある特定の態様では霊長類、ある特定の態様ではヒトである。

【0181】

ある特定の態様における本開示による二重特異性抗体は、ヒト抗体の定常領域を含む。重鎖定常ドメインの違いによって、抗体は５つのクラス又はアイソタイプ：ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＥに群分けされる。これらのクラス又はアイソタイプは、対応するギリシャ文字で命名された当該重鎖のうちの少なくとも１つを含む。ある特定の態様は、当該定常領域が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＥ定常領域の群から選択される抗体を含み、ある特定の態様では、当該定常領域は、ＩｇＧ定常領域、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＩｇＧ定常領域を含む。ある特定の態様では、当該定常領域は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域、ある特定の態様では変異体ＩｇＧ１定常領域である。ＩｇＧ１の定常領域のいくつかの変異が、天然に生じ、及び／又は結果として得られる抗体の免疫学的特性を変化させることなく許容される。変異は、抗体又はその一部にある特定の好ましい特徴を取り付けるために人工的に導入することもできる。そのような特徴は、例えば、ＣＨ２及びＣＨ３の文脈において本明細書に記載されている。典型的には、約１～１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせが、定常領域内で許容される。

【0182】

ある特定の態様における図１、２又は３のＶＨ鎖は、図１、２又は３に示されるＶＨ鎖に関して、最大１５個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有し、ある特定の態様では、図１、２又は３に示されるＶＨ鎖に関して、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有し、ある特定の態様では、０、１、２、３又は４個の挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせ、ある特定の態様では、０、１、２又は３個の挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせ、更に、ある特定の態様では、０、１又は２個の挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせ、ある特定の態様では、図１、２又は３に示されるＶＨ鎖に関して、０又は１個の欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する。１つ以上のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせは、ある特定の態様では、ＶＨ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３領域には存在しない。これらは、ある特定の態様でも、ＦＲ４領域には存在しない。アミノ酸置換は、ある特定の態様では、保存的アミノ酸置換である。

【0183】

合理的な方法は、ヒトの文脈における非ヒト残基の含有量を最小限に抑えることに向かって進化してきた。別の抗体上への抗体の抗原結合特性を上手く移植するための様々な方法が利用可能である。抗体の結合特性は、可変ドメイン全体の適切な構造と組み合わされた可変ドメイン内のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域の配列によって多くの場合支えられているＣＤＲ３領域の正確な配列に主に基づき得る。

【0184】

ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；及び／又はＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３，１９８９、及び／又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７））、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｋｔｈｕｎの番号付けシステム（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１））、ＭａｃＣａｌｌｕｍの番号付けシステム（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）、及び／又はＡｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８））、Ｌｅｆｒａｎｃの番号付けシステム（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）、並びに／又はＨｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１））によるもの、又はＩＭＧＴ（Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：２０６－２１ １（１９９７）で論じられている）によるものを含むがこれらに限定されない異なる方法を使用して定義され得る。

【0185】

これらの番号付けスキームの各々は、抗原結合に対する重鎖又は軽鎖可変領域内のアミノ酸残基の予測される寄与に基づいてＣＤＲを定義している。したがって、ＣＤＲを特定するための各方法を使用して、本開示の結合ドメインのＣＤＲを特定することができる。ある特定の態様では、本開示の結合ドメインの重鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴによるものである。ある特定の態様では、本開示の結合ドメインの重鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによるものである。ある特定の態様では、本開示の結合ドメインの重鎖ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａによるものである。ある特定の態様では、本開示の結合ドメインの重鎖ＣＤＲは、ＩＭＧＴによるものである。ある特定の態様では、本開示の結合ドメインの軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによるものである。ある特定の態様では、本開示の結合ドメインの軽鎖ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａによるものである。ある特定の態様では、本開示の結合ドメインの軽鎖ＣＤＲは、ＩＭＧＴによるものである。本明細書に示されるような重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ定義によって決定される。

【0186】

現在、ＣＤＲ領域を別の抗体の好適な可変ドメインに移植するための様々な方法が利用可能である。これらの方法のうちのいくつかは、参照により本明細書に含まれる、Ｊ．Ｃ．Ａｌｍａｇｒｏ１及びＪ．Ｆｒａｎｓｓｏｎ（２００８）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３，１６１９－１６３３でレビューされている。したがって、本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の抗原結合部位とｃＭＥＴに結合する第２の抗原結合部位とを含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、ＥＧＦＲ結合部位を含む可変ドメインは、図１のＭＦ３３７０に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３配列を含み、ｃＭＥＴ結合部位を含む可変ドメインは、図１のＭＦ４３５６に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。ある特定の態様におけるＥＧＦＲ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図１のＭＦ３３７０について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ある特定の態様におけるｃＭＥＴ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図１のＭＦ４３５６について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ＣＤＲ移植はまた、図１のＶＨのＣＤＲ領域を有するが異なるフレームワークを有するＶＨ鎖を産生するために使用され得る。異なるフレームワークは、別のヒトＶＨのもの、又は異なる哺乳動物のものであり得る。したがって、本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の抗原結合部位とｃＭＥＴに結合する第２の抗原結合部位とを含む、ヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、ＥＧＦＲ結合部位を含む可変ドメインは、図２のＭＦ８２３３に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３配列を含み、ｃＭＥＴ結合部位を含む可変ドメインは、図３のＭＦ８２３０に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。ある特定の態様におけるＥＧＦＲ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図２のＭＦ８２３３について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ある特定の態様におけるｃＭＥＴ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図３のＭＦ８２３０について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ＣＤＲ移植はまた、図２又は図３のＶＨのＣＤＲ領域を有するが異なるフレームワークを有するＶＨ鎖を産生するために使用され得る。異なるフレームワークは、別のヒトＶＨのもの、又は異なる哺乳動物のものであり得る。

【0187】

したがって、本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の抗原結合部位とｃＭＥＴに結合する第２の抗原結合部位とを含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、ＥＧＦＲ結合部位を含む可変ドメインは、図１のＭＦ３３７０に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３配列を含み、ｃＭＥＴ結合部位を含む可変ドメインは、図３のＭＦ８２３０に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。ある特定の態様におけるＥＧＦＲ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図１のＭＦ３３７０について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ある特定の態様におけるｃＭＥＴ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図３のＭＦ８２３０について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ＣＤＲ移植はまた、図２又は図３のＶＨのＣＤＲ領域を有するが異なるフレームワークを有するＶＨ鎖を産生するために使用され得る。異なるフレームワークは、別のヒトＶＨのもの、又は異なる哺乳動物のものであり得る。

【0188】

したがって、本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の抗原結合部位とｃＭＥＴに結合する第２の抗原結合部位とを含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、ＥＧＦＲ結合部位を含む可変ドメインは、図２のＭＦ８２３３に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３配列を含み、ｃＭＥＴ結合部位を含む可変ドメインは、図３のＭＦ４３５６に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。ある特定の態様におけるＥＧＦＲ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図２のＭＦ８２３３について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ある特定の態様におけるｃＭＥＴ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図３のＭＦ４３５６について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ＣＤＲ移植はまた、図２又は図３のＶＨのＣＤＲ領域を有するが異なるフレームワークを有するＶＨ鎖を産生するために使用され得る。異なるフレームワークは、別のヒトＶＨのもの、又は異なる哺乳動物のものであり得る。

【0189】

したがって、本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の抗原結合部位とｃＭＥＴに結合する第２の抗原結合部位とを含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、ＥＧＦＲ結合部位を含む可変ドメインは、図２のＭＦ８２３２に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３配列を含み、ｃＭＥＴ結合部位を含む可変ドメインは、図３のＭＦ８２３０に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。ある特定の態様におけるＥＧＦＲ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図２のＭＦ８２３２について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ある特定の態様におけるｃＭＥＴ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図３のＭＦ８２３０について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ＣＤＲ移植はまた、図２又は図３のＶＨのＣＤＲ領域を有するが異なるフレームワークを有するＶＨ鎖を産生するために使用され得る。異なるフレームワークは、別のヒトＶＨのもの、又は異なる哺乳動物のものであり得る。

【0190】

したがって、本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の抗原結合部位とｃＭＥＴに結合する第２の抗原結合部位とを含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、ＥＧＦＲ結合部位を含む可変ドメインは、図２のＭＦ８２３２に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３配列を含み、ｃＭＥＴ結合部位を含む可変ドメインは、図３のＭＦ４３５６に示されるようなＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。ある特定の態様におけるＥＧＦＲ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図２のＭＦ８２３２について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ある特定の態様におけるｃＭＥＴ結合部位を含むＶＨ可変領域は、図３のＭＦ４３５６について示されるようなＶＨ鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域の配列を含む。ＣＤＲ移植はまた、図２又は図３のＶＨのＣＤＲ領域を有するが異なるフレームワークを有するＶＨ鎖を産生するために使用され得る。異なるフレームワークは、別のヒトＶＨのもの、又は異なる哺乳動物のものであり得る。

【0191】

配列バリアントを生成するための方法は、当技術分野で周知である。配列バリアントの生成においてランダムなアプローチ又は標的アプローチをとることができ、例えば、結合親和性を増加又は減少させる可能性が高い変異を導入することを目的とすることができる。抗体結合ドメインを親和性成熟させるための日常的な方法は、当該技術分野で広く知られており、例えば、Ｔａｂａｓｉｎｅｚｈａｄ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ．２０１９；２１２：１０６－１１３を参照されたい。また、結合ドメイン、又はそのような結合ドメインを含む部分を大規模に産生するという観点から、開発可能性リスクを軽減する変異を導入することを目的とすることができる。結合特異性の減少を引き起こさない、及び／又は結合親和性に影響を与えない可能性が高い変異が導入され得る。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク領域内のアミノ酸残基が、例えば、保存的アミノ酸残基で置換され得るかどうか、並びに結合特異性及び／又は親和性の損失なしで、又は実質的になしで置換され得るかどうかは、当該技術分野で周知の方法によって決定することができる。実験例は、例えば、アラニンスキャニング（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ，Ｗｅｌｌｓ ＪＡ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９８９；２４４（４９０８）：１０８１－５）、及びディープ変異スキャニング（ｄｅｅｐ ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ）（Ａｒａｙａ ＣＬ，Ｆｏｗｌｅｒ ＤＭ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１；２９（９）：４３５－４２）を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｓｒｕｔｈｉ ＣＫ，Ｐｒａｋａｓｈ Ｍ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０２０；１５（１）：ｅ０２２７６２１，Ｃｈｏｉ Ｙ．ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１２；７（１０）：ｅ４６６８８、及びＭｕｎｒｏ Ｄ，Ｓｉｎｇｈ Ｍ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０２０；３６（２２－２３）：５３２２－９に記載されるものなどの、アミノ酸変異の効果を予測することができる計算方法も開発されている。

【0192】

本明細書では、上記方法によって産生される任意のバリアント抗ヒトＥＧＦＲ及びｃ－ＭＥＴ結合ドメイン、当該バリアント結合ドメインのいずれかを含む抗体などの結合部分、当該バリアント抗ヒトＥＧＦＲ及びｃ－ＭＥＴ結合ドメイン又は結合部分のいずれかを含む薬学的組成物、当該バリアント結合ドメインのいずれかをコードする核酸、当該核酸を含むベクター及び細胞、並びにがんの治療のための当該バリアント結合ドメイン又は薬学的組成物の使用が更に提供される。

【0193】

本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合する第２の可変ドメインと、を含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、第１の可変ドメインは、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する図２に示されるようなＭＦ３３７０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図３に示されるようなＭＦ４３５６のアミノ酸配列（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合する第２の可変ドメインと、を含む、ヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、第１の可変ドメインは、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する図２に示されるようなＭＦ８２３３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図３に示されるようなＭＦ８２３０のアミノ酸配列（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0194】

本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合する第２の可変ドメインと、を含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、第１の可変ドメインは、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する図２に示されるようなＭＦ３３７０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図３に示されるようなＭＦ８２３０のアミノ酸配列（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0195】

本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合する第２の可変ドメインと、を含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、第１の可変ドメインは、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する図２に示されるようなＭＦ８２３３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図３に示されるようなＭＦ４３５６のアミノ酸配列（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0196】

本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合する第２の可変ドメインと、を含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、第１の可変ドメインは、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する図２に示されるようなＭＦ８２３２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図３に示されるようなＭＦ４３５６のアミノ酸配列（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0197】

本開示は、ＥＧＦＲに結合する第１の可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合する第２の可変ドメインと、を含む、本開示の治療に含まれるようなヒト化又はある特定の態様ではヒト二重特異性抗体を更に提供し、第１の可変ドメインは、最大１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する図２に示されるようなＭＦ８２３２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する図３に示されるようなＭＦ８２３０のアミノ酸配列（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0198】

最大１５個、ある特定の態様では、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、ある特定の態様では０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸置換は、ある特定の態様では、保存的アミノ酸置換であり、挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせは、ある特定の態様では、ＶＨ鎖のＣＤＲ３領域には存在せず、ある特定の態様では、ＶＨ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域には存在せず、ある特定の態様では、ＦＲ４領域には存在しない。

【0199】

二重特異性抗体を産生するための様々な方法が利用可能である。１つの方法は、細胞における２つの異なる重鎖及び２つの異なる軽鎖の発現を含み、細胞によって産生される抗体を収集する。このようにして産生された抗体は、典型的には、重鎖及び軽鎖の異なる組み合わせを有する抗体の集合を含有し、そのうちのいくつかは、所望の二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、その後、収集物から精製され得る。細胞によって産生される他の抗体に対する二重特異性の比率は、様々な方法で増加され得る。ある特定の態様では、比率は、２つの異なる軽鎖ではなく、細胞内で共通軽鎖を発現することによって増加される。共通軽鎖が２つの異なる重鎖で発現される場合、細胞によって産生される他の抗体に対する二重特異性抗体の比率は、２つの異なる軽鎖の発現に対して顕著に改善される。細胞によって産生される二重特異性抗体の比率は、２つの異なる重鎖の互いの対合を２つの同一の重鎖の対合に対して刺激することによって更に改善され得る。（単一細胞からの）二重特異性抗体を産生するための方法及び手段が開示されており、それにより、単一特異性抗体の形成よりも二重特異性抗体の形成を有利にする手段が提供される。これらの方法も、本開示で有利に用いることができる。したがって、一態様における本開示は、単一の細胞から二重特異性抗体を産生するための方法であって、当該二重特異性抗体が、界面を形成することが可能な２つのＣＨ３ドメインを含み、当該方法が、当該細胞に、ａ）重鎖を含む第１のＣＨ３ドメインをコードする第１の核酸分子、ｂ）重鎖を含む第２のＣＨ３ドメインをコードする第２の核酸分子を提供することを含み、当該核酸分子に、重鎖を含む当該第１及び第２のＣＨ３ドメインを優先的に対合するための手段が提供され、当該方法が、当該宿主細胞を培養し、当該２つの核酸分子の発現を可能にし、培養物から当該二重特異性抗体を採取するステップを更に含む、方法を提供する。当該第１及び第２の核酸分子は、同じ核酸分子、ベクター又は遺伝子送達ビヒクルの一部であってもよく、宿主細胞のゲノムの同じ部位に組み込まれてもよい。代替的に、当該第１及び第２の核酸分子は、当該細胞に別々に提供される。

【0200】

ある特定の態様は、単一の細胞から本開示による二重特異性抗体を産生するための方法であって、当該二重特異性抗体が、界面を形成することが可能な２つのＣＨ３ドメインを含み、当該方法が、
－ａ）ＥＧＦＲに結合し、かつ第１のＣＨ３ドメインを含有する抗原結合部位を含む重鎖をコードする第１の核酸分子と、ｂ）ＥｒｂＢ－３に結合し、かつ第２のＣＨ３ドメインを含有する抗原結合部位を含む重鎖をコードする第２の核酸分子とを有し、当該核酸分子に、当該第１及び第２のＣＨ３ドメインを優先的に対合するための手段を提供されている、細胞、を提供することを含み、当該方法が、当該細胞を培養し、当該２つの核酸分子によってコードされたタンパク質の発現を可能にし、培養物から当該二重特異性ＩｇＧ抗体を採取するステップを更に含む、方法を提供する。ある特定の態様では、当該細胞はまた、共通軽鎖をコードする第３の核酸分子を有する。当該第１、第２及び第３の核酸分子は、同じ核酸分子、ベクター又は遺伝子送達ビヒクルの一部であってもよく、宿主細胞のゲノムの同じ部位に組み込まれてもよい。代替的に、当該第１、第２及び第３の核酸分子は、当該細胞に別々に提供される。好ましい共通軽鎖は、Ｏ１２に基づいており、ある特定の態様では、これは、上記のように、再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１である。当該第１及び当該第２のＣＨ３ドメインの優先的な対合のための手段は、ある特定の態様では、重鎖コード領域のＣＨ３ドメイン内の対応する変異である。二重特異性抗体を優先的に産生するための好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付け）、並びに第２のＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ、又はその逆である。したがって、二重特異性抗体を産生するための本開示による方法であって、当該第１のＣＨ３ドメインが、アミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付け）を含み、当該第２のＣＨ３ドメインが、アミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅを含み、当該方法が、当該細胞を培養し、当該核酸分子によってコードされたタンパク質の発現を可能にし、培養物から当該二重特異性抗体を採取するステップを更に含む、方法が更に提供される。また、二重特異性抗体を産生するための本開示による方法であって、当該第１のＣＨ３ドメインが、アミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（ＥＵ番号付け）を含み、当該第２のＣＨ３ドメインが、アミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋを含み、当該方法が、当該細胞を培養し、当該核酸分子の発現を可能にし、培養物から当該二重特異性抗体を採取するステップを更に含む、方法が提供される。これらの方法によって産生され得る抗体はまた、本開示の一部である。ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインは、ある特定の態様では、ＩｇＧ１ヘテロ二量体化ドメインである。ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインを含む重鎖定常領域は、ある特定の態様では、ＩｇＧ１定常領域である。

【0201】

本開示の一態様は、抗体重鎖可変領域をコードする核酸分子を含む。ある特定の態様では、核酸分子（典型的には、インビトロ、単離された、又は組換え核酸分子）は、図２若しくは図３に示されるような重鎖可変領域、又は１、２、３、４若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換若しくはそれらの組み合わせを有する図２若しくは図３に示されるような重鎖可変領域をコードする。ある特定の態様では、核酸分子は、図２又は図３に示されるようなアミノ酸配列をコードするコドン最適化核酸配列を含む。コドン最適化は、抗体産生細胞の種及び／又は細胞型について最適化される。例えば、ＣＨＯ産生の場合、分子の核酸配列は、チャイニーズハムスター細胞について最適化されたコドンである。本開示は、図２又は図３の重鎖をコードする核酸分子を更に提供する。

【0202】

本開示で使用される核酸分子は、典型的には、リボ核酸（ＲＮＡ）又はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）であるが、これらに限定されない。代替的な核酸は、当業者に利用可能である。本開示による核酸は、例えば、細胞に含まれる。当該核酸が当該細胞内で発現されるとき、当該細胞は、本開示による抗体を産生することができる。したがって、本開示の一態様では、本開示による抗体及び／又は本開示による核酸を含む、細胞を含む。当該細胞は、ある特定の態様では動物細胞、更に、ある特定の態様では哺乳動物細胞、ある特定の態様では霊長類細胞、ある特定の態様ではヒト細胞である。好適な細胞は、本開示による抗体及び／又は本開示による核酸を含むことが可能であり、ある特定の態様ではこれらを産生することが可能である、任意の細胞である。

【0203】

本開示は、本開示による抗体を含む、細胞を更に提供する。ある特定の態様では、当該細胞（典型的には、インビトロ、単離された、又は組換え細胞）は、当該抗体を産生する。当該細胞はまた、貯蔵部から取り出されて培養されたときに当該抗体を産生することができる貯蔵細胞であり得る。ある特定の態様では、当該細胞は、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞又はＰＥＲ－Ｃ６（商標）細胞である。特定の態様では、当該細胞は、ＣＨＯ細胞である。本開示による細胞を含む細胞培養物が更に提供される。様々な機関及び企業が、例えば、臨床使用のための抗体の大規模な産生のための細胞株を開発している。そのような細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞又はＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞である。これらの細胞は、タンパク質の産生などの他の目的にも使用される。タンパク質及び抗体の工業規模産生のために開発された細胞株は、本明細書で更に工業的細胞株と称される。したがって、ある特定の態様は、図２又は図３に示されるようなＶＨ、ＶＬ及び／又は重鎖をコードする核酸分子を含む抗体を産生するための細胞をある特定の態様で含む、本開示の抗体の産生のための抗体の大規模産生のために開発された細胞株の使用を含む。

【0204】

本開示は、本開示の細胞を培養することと、当該抗体を当該培養物から採取することと、を含む、抗体を産生するための方法を更に提供する。ある特定の態様では、当該細胞は、無血清培地中で培養される。ある特定の態様では、当該細胞は、浮遊成長に適している。本開示による抗体を産生するための方法によって得ることが可能な抗体が更に提供される。抗体は、ある特定の態様では、培養物の培地から精製される。ある特定の態様では、当該抗体は、親和性精製される。

【0205】

本開示の細胞は、例えば、ハイブリドーマ細胞株、ＣＨＯ細胞、２９３Ｆ細胞、ＮＳ０細胞、又は臨床目的の抗体産生についてのその好適性で知られている別の細胞型である。ある特定の態様では、当該細胞は、ヒト細胞である。ある特定の態様では、アデノウイルスＥ１領域によって形質転換された細胞又はその機能的等価物。そのような細胞株の好ましい例は、ＰＥＲ．Ｃ６ＴＭ細胞株又はその等価物である。ある特定の態様では、当該細胞は、ＣＨＯ細胞又はそのバリアントである。ある特定の態様では、抗体の発現のためにグルタミン合成酵素（ＧＳ）ベクター系を使用するバリアント。

【0206】

本開示の抗体は、懸濁２９３Ｆ細胞における一過性トランスフェクション後に、５０ｍｇ超／Ｌのレベルで産生することができる。二重特異性抗体は、７０％超の収率で９８％超の純度に精製することができる。分析的特性評価研究は、二価単一特異性ｌｇＧ１と同等の二重特異性ｌｇＧ１抗体プロファイルを示す。機能活性の点で、本開示の二重特異性抗体は、インビトロ及びインビボでのセツキシマブと比較して、優れた効力を実証し得る。

【0207】

本開示は、本開示による抗体と当該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせを含む、薬学的組成物を更に提供する。ある特定の態様における薬学的組成物は、ある特定の態様では、薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む。

【0208】

抗体は、標識、ある特定の態様では、インビボイメージングのための標識を含み得る。そのような標識は、典型的には、治療用途に必要ではない。例えば、診断設定では、標識が有用であり得る。例えば、体内の標的細胞を視覚化することにおいてである。様々な標識が適しており、多くのラベルが当技術分野で周知である。ある特定の態様では、標識は、検出のための放射性標識である。別のある特定の態様では、標識は、赤外線標識である。ある特定の態様では、赤外線ラベルは、インビボイメージングに適している。様々な赤外線ラベルが、当業者に利用可能である。好ましい赤外線ラベルは、例えば、ＩＲＤｙｅ ８００、ＩＲＤｙｅ ６８０ＲＤ、ＩＲＤｙｅ ６８０ＬＴ、ＩＲＤｙｅ ７５０、ＩＲＤｙｅ ７００ＤＸ、ＩＲＤｙｅ ８００ＲＳ、ＩＲＤｙｅ ６５０、ＩＲＤｙｅ ７００ホスホロアミダイト、ＩＲＤｙｅ ８００ホスホロアミダイト（ＬＩ－ＣＯＲ ＵＳＡ、４６４７ Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｓｔｒｅｅｔ、Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ）である。

【0209】

本開示は、腫瘍を有するか、又は当該腫瘍を有するリスクがある対象の治療のための方法であって、この治療を必要とする対象に、本開示の抗体及びＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤又は薬学的組成物を投与することを含む、方法を更に提供する。腫瘍は、ある特定の態様では、ＥＧＦＲ、ｃＭＥＴ又はＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ陽性腫瘍である。当該治療の開始前に、ある特定の態様における方法は、当該対象が、そのようなＥＧＦＲ、ｃＭＥＴ又はＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ陽性腫瘍を有するかどうかを決定することを更に含む。本開示は、ＥＧＦＲ、ｃＭＥＴ又はＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ陽性腫瘍を有するか、又は有するリスクがある対象の治療における使用のための、本開示の抗体又は薬学的組成物を更に提供する。

【0210】

ある特定の態様では、当該治療は、当該対象に、有効量の当該二重特異性抗体及び当該第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含む。

【0211】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴに結合する二重特異性抗体は、対象に、特にフラット用量レジメンを使用して、１０００、１５００又は２０００ｍｇの用量で提供される。フラット用量レジメンは、調製時間を低減し、かつ潜在的な用量計算ミスを低減するため、体表面又は体重投薬に対していくつかの利点を呈する。ある特定の態様では、二重特異性抗体は、毎週１回（Ｑ１Ｗ）、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）又は３週間に１回（Ｑ３Ｗ）投与される。ある特定の態様では、二重特異性抗体は、２週間に１回投与される。当技術分野では、そのような投薬スキームは、Ｑ２Ｗとして記されている。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されているフラット用量レジメンは、成人及び／又は少なくとも３５ｋｇの体重の対象における使用に好適である。当業者に理解されるように、この投薬量は、経時的に投与され得る。当業者に理解されるように、「フラット用量」又は「フラット用量レジメン」という用語は、対象が投薬レジメンを受け、対象が、毎日、実質的に同じ所定の量で二重特異性抗体又は第３世代のＥＧＦＲ ＴＫＩを受けるようにスケジュールされており、その量が、対象の体重に関係ないことを意味する。ある特定の態様によると、対象には、１０００ｍｇのフラットな週用量の二重特異性抗体が提供される。代替的に、対象には、１０００ｍｇのフラットな隔週用量の二重特異性抗体が提供される。代替的に、対象には、１５００ｍｇのフラットな隔週用量の二重特異性抗体が提供される。代替的に、対象には、２０００ｍｇのフラットな隔週用量の二重特異性抗体が提供される。また、対象には、典型的には、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の１日用量も提供される。ある特定の態様では、対象には、８０ｍｇのオシメルチニブの１日用量、１１０ｍｇのアルモネルチニブの１日用量、２４０ｍｇのラゼルチニブの１日用量、７０ｍｇのＤ－０３１６の１日用量又は７５ｍｇのＤ－０３１６の１日用量が提供される。ある特定の態様では、当該１日用量は、フラット１日用量である。ある特定の態様では、対象に、７０ｍｇのＤ－０３１６の１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供されるか、又は７５ｍｇのＤ－０３１６の１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供される。２１日間の７５ｍｇのＤ－０３１６の１日用量は、それぞれ２５ｍｇの３回の経口投薬量として提供され得る。

【0212】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１０００ｍｇのフラット用量を使用して、１０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、毎週１回、１０００ｍｇの量で投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、８０ｍｇのオシメルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0213】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１５００ｍｇのフラット用量を使用して、１５００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１５００ｍｇの量で投与される。また、対象には、８０ｍｇのオシメルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0214】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に２０００ｍｇのフラット用量を使用して、２０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、２０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、８０ｍｇのオシメルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0215】

ある特定の他の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１０００ｍｇのフラット用量を使用して、１０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、毎週１回、１０００ｍｇの量で投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、１１０ｍｇのアルモネルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0216】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１５００ｍｇのフラット用量を使用して、１５００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１５００ｍｇの量で投与される。また、対象には、１１０ｍｇのアルモネルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0217】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に２０００ｍｇのフラット用量を使用して、２０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、２０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、１１０ｍｇのアルモネルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0218】

ある特定の他の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１０００ｍｇのフラット用量を使用して、１０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、毎週１回、１０００ｍｇの量で投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、２４０ｍｇのラゼルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0219】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１５００ｍｇのフラット用量を使用して、１５００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１５００ｍｇの量で投与される。また、対象には、２４０ｍｇのラゼルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0220】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に２０００ｍｇのフラット用量を使用して、２０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、２０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、２４０ｍｇのラゼルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。

【0221】

ある特定の他の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１０００ｍｇのフラット用量を使用して、１０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、毎週１回、１０００ｍｇの量で投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、７０ｍｇ、７５ｍｇ又は１００ｍｇのベフォテルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。ある特定の態様では、７０ｍｇのベフォテルチニブの１日用量又は７５ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が提供される。ある特定の態様では、当該１日用量は、フラット１日用量である。ある特定の態様では、対象に、７０ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供されるか、又は７５ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供される。ベフォテルチニブの７５ｍｇの１日用量は、それぞれ２５ｍｇの３回の経口投与で提供され得る。

【0222】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に１５００ｍｇのフラット用量を使用して、１５００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、１５００ｍｇの量で投与される。また、対象には、７０ｍｇ、７５又は１００ｍｇのベフォテルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。ある特定の態様では、７０ｍｇのベフォテルチニブの１日用量又は７５ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が提供される。ある特定の態様では、当該１日用量は、フラット１日用量である。ある特定の態様では、対象に、７０ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供されるか、又は７５ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供される。ベフォテルチニブの７５ｍｇの１日用量は、それぞれ２５ｍｇの３回の経口投与で提供され得る。

【0223】

したがって、ある特定の態様では、本開示の二重特異性抗体は、特に２０００ｍｇのフラット用量を使用して、２０００ｍｇで投薬又は投与される。ある特定の態様では、当該二重特異性抗体は、２週間に１回、２０００ｍｇの量で投与される。また、対象には、７０ｍｇ、７５又は１００ｍｇのベフォテルチニブの１日用量を含む、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の承認された用量も提供される。ある特定の態様では、７０ｍｇのベフォテルチニブの１日用量又は７５ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が提供される。ある特定の態様では、当該１日用量は、フラット１日用量である。ある特定の態様では、対象に、７０ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供されるか、又は７５ｍｇのベフォテルチニブの１日用量が２１日間、続いて、１００ｍｇが１日用量として提供される。ベフォテルチニブの７５ｍｇの１日用量は、それぞれ２５ｍｇの３回の経口投与で提供され得る。

【0224】

腫瘍がＥＧＦＲに対して陽性であるかどうかを確認するために、当業者は、例えば、ＥＧＦＲ増幅及び／又は免疫組織化学染色を決定することができる。生検における腫瘍細胞の少なくとも１０％が陽性であるべきである。生検はまた、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％以上の陽性細胞を含み得る。腫瘍がｃＭＥＴに対して陽性であるかどうかを確認するために、当業者は、例えば、免疫組織化学におけるｃＭＥＴ増幅及び／又は染色を決定することができる。生検における腫瘍細胞の少なくとも１０％が陽性であるべきである。生検はまた、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％以上の陽性細胞を含み得る。

【0225】

がん又は腫瘍は、ＥＧＦＲ、ｃＭＥＴ又はＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ陽性がんであり得る。一態様では、本開示は、肺がん、ある特定の態様では非小細胞肺がんである、ＥＧＦＲ、ｃＭＥＴ又はＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ陽性がんである陽性がんの治療を提供する。対象は、ある特定の態様では、ヒト対象である。対象は、ある特定の態様では、セツキシマブなどのＥＧＦＲ特異性抗体を使用した抗体療法に適格な対象である。ある特定の態様では、本開示は、ある特定の態様では、腫瘍を含む対象、ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ｃＭＥＴ陽性がん、ある特定の態様では、ＥＧＦＲ ＲＴＫ耐性表現型、ＥＧＦＲモノクローナル抗体耐性表現型又はそれらの組み合わせを有する腫瘍／がんを治療し得る。

【0226】

本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、腫瘍の治療ががんの治療にも適用されるように、「腫瘍」という用語と同じように適用される。

【0227】

患者に投与される抗体の量は、典型的には、治療窓内にあり、治療効果を得るために十分な量が使用されるが、量は、許容できない程度の副作用をもたらす閾値を超えないことを意味する。所望の治療効果を得るために必要な抗体の量が少ないほど、治療窓は典型的には大きくなる。したがって、低投薬量で十分な治療効果を発揮する本開示による抗体が好ましい。投薬量は、セツキシマブの投薬レジメンの範囲内であり得る。ある特定の態様では、用量は、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ又は２０００ｍｇである。投薬は、毎週１回又は２週間に１回であり得る。

【0228】

オシメルチニブは、規制当局によって承認された用量に従って投与される。典型的には、投薬は、１日１回、８０ｍｇである。

【0229】

アルモネルチニブは、規制当局によって承認された用量に従って投与される。典型的には、投薬は、１日１回、１１０ｍｇである。

【0230】

ラゼルチニブは、規制当局によって承認された用量に従って投与される。典型的には、投薬は、１日１回、２４０ｍｇである。

【0231】

典型的には、ベフォテルチニブの投薬は、１日当たり７５ｍｇであり、２１日間、それぞれ２５ｍｇの３回の経口投与として提供され、忍容性がある場合、続いて、１日用量として１００ｍｇが提供される。代替的に、投薬は、２１日間にわたって７０ｍｇのベフォテルチニブであり、忍容性がある場合、続いて、１日用量として１００ｍｇである。

【0232】

ある特定の態様では、本開示による二重特異性抗体は、他の点で同様の条件下ではセツキシマブと比較して、より少ない皮膚毒性を誘発する。ある特定の態様における本開示による二重特異性抗体は、他の点で同様の条件下ではセツキシマブと比較して、より少ない炎症誘発性ケモカイン、ある特定の態様ではＣＸＣＬ１４を産生する。ある特定の態様における本開示による二重特異性抗体は、他の点で同様の条件下ではセツキシマブと比較して、抗菌ＲＮＡｓｅ、ある特定の態様ではＲｎａｓｅ ７のより少ない損傷を誘発する。

【0233】

本開示には、とりわけ、ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ受容体を標的とし、インビトロでのがん細胞株の強力な増殖阻害及びインビボでの腫瘍成長阻害をもたらす、抗体が記載されている。本開示の二重特異性抗体は、低毒性プロファイルを高い有効性と組み合わせることができる。本開示の抗体は、様々なタイプ及び系統のＥＧＦＲ標的化療法に有用であり得る。本開示の抗体は、両方のアームで同じ抗原に結合する抗体と比較して、増加した治療ウィンドウを有し得る。本開示の二重特異性抗体は、セツキシマブ抗体と比較した場合、インビトロ、インビボ又はそれらの組み合わせでより良好な成長阻害効果を呈し得る。

【0234】

本開示は、様々な異なる種類の腫瘍のうちの１つ以上を有し得る対象の治療における使用のための、本明細書に開示されているような二重特異性抗体を提供する。腫瘍は、ＥＧＦＲ陽性腫瘍、ｃＭＥＴ陽性腫瘍又はＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ陽性腫瘍であり得る。腫瘍は、非小細胞肺がんを含む肺がんであり得る。腫瘍は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での治療に耐性があり得る。ある特定の態様では、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であり、ある特定の態様では、オシメルチニブ又はその類似体である。治療は、当該チロシンキナーゼ阻害剤での治療を含む。当該チロシンキナーゼ阻害剤での共治療の場合、腫瘍は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での治療に耐性があり得る。共治療は、チロシンキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の感受性を少なくとも部分的に回復させる。ある特定の態様におけるＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である。臨床的に関連する第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の例は、オシメルチニブ、ラゼルチニブ、アルフルチニブ、レジベルチニブ、ロシレチニブ、オルムチニブ、アルモネルチニブ、アビベルチニブ、ＡＳＫ１２００６７、ベフォテルチニブ、オルムチニブ、ロシレチニブ又はＳＨ－１０２８（ナザルチニブ（ＥＧＦ８１６）、ナコチニブ（ＡＳＰ８２７３）、マベレルチニブ（ＰＦ－０６４７７７５）、オラフェルチニブ（ＣＫ－１０１）、ケイナチニブ、ＥＳ－０７２である。ある特定の態様では、チロシンキナーゼ阻害剤は、オシメルチニブである。ある特定の態様では、チロシンキナーゼ阻害剤は、ラゼルチニブである。ある特定の態様では、チロシンキナーゼ阻害剤は、アルモネルチニブである。ある特定の態様では、チロシンキナーゼ阻害剤は、ベフォテルチニブである。この態様及び他の態様では、腫瘍は、ＨＧＦ関連腫瘍であり得る。

【0235】

ある特定の態様では、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、オシメルチニブ、オルムチニブ又はアルモネルチニブなどの不可逆的阻害剤である。

【0236】

ＥＧＦＲ陽性腫瘍は、典型的には、ＥＧＦＲ活性化変異を有する腫瘍である。ＥＧＦＲ活性化変異は、ＥＧＦ／ＥＧＦＲシグナル伝達経路の活性化をもたらすＥＧＦＲの変異である。ＥＧＦＲ活性化変異は、腫瘍のがん状態にとって重要であり得る。そのような腫瘍がＥＧＦＲ標的化療法に非感受性になり得る手法のうちの１つは、ＨＧＦ／ｃＭＥＴシグナル伝達経路の活性化によるものである。腫瘍は、ＨＧＦ関連腫瘍であり得る。ｃＭＥＴ／ＨＧＦシグナル伝達経路の活性化は、ＥＧＦＲ陽性腫瘍がＥＧＦＲ標的化療法による治療を逃避することができる手法のうちの１つである。ｃＭＥＴ／ＨＧＦ経路は、様々な手法で活性化され得る。活性化の様々な方法が、当技術分野に記載されており、そのうちのいくつかは、本明細書に詳述されている。本開示の抗体は、ｃＭＥＴ／ＨＧＦシグナル伝達経路の活性化が、ＨＧＦが存在すること又は過剰にあることと関連付けられている、腫瘍の治療に特に適している。そのようなｃＭＥＴ陽性腫瘍は、ＨＧＦ関連腫瘍又はＨＧＦ依存性腫瘍と称される。本開示の抗体はまた、ＥＧＦＲ陽性腫瘍のこの可能な逃避メカニズムを少なくとも部分的に阻害するために使用することができる。そのような腫瘍は、更にｃＭＥＴ／ＨＧＦシグナル伝達経路が活性化される、腫瘍細胞の選択された発達によってＥＧＦＲ標的化療法を逃避することができる。そのような細胞は、ＥＧＦＲ標的化療法の開始時に存在し得る。そのような細胞は、ＨＧＦ／ｃＭＥＴシグナル伝達陰性腫瘍細胞よりも選択的成長利点を有する。腫瘍は、ＨＧＦ／ｃＭＥＴシグナル伝達経路が活性化される腫瘍であり得る。腫瘍は、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）のレベルの上昇又はＨＧＦ受容体ｃ－Ｍｅｔの過剰発現に関連する腫瘍であり得る。腫瘍は、成長がＥＧＦ及び／又はＨＧＦによって駆動される腫瘍であり得る。腫瘍は、シグナル伝達経路が成長因子の存在に応答して腫瘍の細胞内で活性化され、成長因子の除去が腫瘍の細胞の成長の阻害をもたらす場合、ある特定の成長因子によって駆動されると言われる。この減少は、減少した細胞分裂及び／又は誘導細胞死滅、例えば、アポトーシスによって測定することができる。腫瘍は、他の点で腫瘍の成長が許容されるであろう条件下では、腫瘍がＨＧＦの存在下で成長するか又は成長が速くなる場合、ＨＧＦ関連腫瘍である。

【0237】

様々な腫瘍に対するＥＧＦＲ標的化療法は、Ｖｅｃｃｈｉｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，ＥＧＦＲ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ．”Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｅｌｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ ３１７（２０１１）：２７６５－２７７１によってレビューされた。一般に、ＥＧＦＲ標的化療法は、ＥＧＦＲと相互作用し、かつ細胞内のＥＧＦＲ媒介性シグナル伝達を阻害する分子での療法である。

【0238】

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、予防を包含する。本開示の予防の態様は、具体的には、以下のように示されている。

【0239】

本開示はまた、対象におけるチロシンキナーゼ阻害剤耐性を有するがんの発生の防止の方法における使用のための、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示の二重特異性抗体との組み合わせも提供する。ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、第２の可変ドメインは、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。

【0240】

本開示の予防の態様はまた、第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む本開示の二重特異性抗体との有効量の組み合わせを対象に投与することを含む、対象におけるチロシンキナーゼ阻害剤耐性を有するがんの発生の防止の方法の提供に関する。

【0241】

具体的には、本発明のチロシンキナーゼ阻害剤耐性を有するがんの防止の方法は、第１、第２及び／又は第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での治療に対する進行から発生する変異に関連する。ある特定の態様では、当該がんは、ＮＳＣＬＣである。第１、第２又は第３世代のチロシン阻害剤でのそのようながん型の治療は、後天性耐性変異Ｔ７９０Ｍ又はエクソン２０挿入変異などのいくつかの変異をもたらすことが報告されている。

【0242】

ある特定の態様では、対象におけるチロシンキナーゼ阻害剤耐性を有するがんの発生の当該防止は、Ｔ７９０Ｍ又はエクソン２０挿入変異などの、ＥＧＦＲにおける後天性耐性変異を有するがんの発症又は発生を防止することを含む。

【0243】

ある特定の態様では、当該防止は、エクソン１９欠失、エクソン２１Ｌ８５８Ｒ点置換又はＥＧＦＲ増幅などの活性化ＥＧＦＲ変異を含むがん又は患者の治療を含む。

【0244】

ある特定の態様では、チロシンキナーゼ阻害剤耐性を有するがんの発生を防止することから利益を得る対象は、ＥＧＦＲ活性化変異の存在について診断される。ある特定の態様では、そのような対象は、白金ベースの化学療法又は当該チロシンキナーゼ阻害剤のうちの１つを含む、一次選択のケアの標準の臨床的に関連する基準に従った治療に適格である。ＮＳＣＬＣ又は他のがん型についてのそのような基準は、有資格の開業医によく知られている。ある特定の態様では、そのような基準は、放射線学的方法によるＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義されるような不治の測定可能な疾患である転移性又は局所進行性の未切除疾患のエビデンスを有する組織学的又は細胞学的に確認された固形腫瘍を含む（参照Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ４５（２００９）２２８－２４７）、治験責任医師の判断に従って、１２週間以上の平均余命を含むか含まない、０又は１のＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータス。

【0245】

本明細書では、示されたグレード及びパフォーマンスステータスを有するＥＣＯＧパフォーマンスステータススケールは、以下の通りである：
グレード０：完全に活動でき、制限なしで全ての疾患前のパフォーマンスで行うことができる。グレード１：身体的に激しい活動は制限されているが、外来であり、軽い家事、オフィスワークなどの、軽い又は座りでの仕事を行うことができる。グレード２：外来であり、全ての自身の世話が可能であるが、仕事の活動を行うことができない；起きている時間の約５０％超で動き回れる。グレード３：限られた自身の世話のみが可能であり、起きている時間の５０％超がベッド又は椅子に限られている。グレード４：全身に障害を負っており、自身の世話を行うことができない；ベッド及び椅子に完全に限られている。グレード５：死亡。

【0246】

ある特定の態様では、当該防止で使用される抗体は、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する、第１の可変ドメインと、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、第２の可変ドメインと、を含む。

【0247】

ある特定の態様において本明細書に示されるような治療における使用のための治療又は抗体の方法は、腫瘍がＨＧＦ関連腫瘍であるかどうかを決定するステップを更に含む。

【0248】

本開示の抗体は、ＨＧＦ関連腫瘍の成長を阻害することができる。

【0249】

本明細書で数字１と数字２との間で範囲が与えられている場合、範囲は、数字１及び数字２を含む。例えば、２～５の範囲は、数字２及び５を含む。

【0250】

本明細書で別の親和性よりも高い親和性について言及される場合、Ｋｄ＝他のＫｄよりも低い。誤解を避けるために、１０ｅ－９ＭのＫｄは、１０ｅ－８ＭのＫｄよりも低い。標的に対する１０ｅ－９ＭのＫｄを有する抗体の親和性は、Ｋｄが１０ｅ－８Ｍである場合よりも高い。

【0251】

ある特定の態様では、治療の開始時に、以下の包含要因ＩＦ１～ＩＦ８のうちの少なくとも１つ、１つより多く、又は全てが、治療の対象に該当する。ある特定の態様では、対象は、包含要因ＩＦ１～ＩＦ８の全てを含むか、又はこれらに準拠する：
ＩＦ１．インフォームドコンセントの署名時に１８歳以上の年齢であること。
ＩＦ２．不治の転移性又は局所進行性の未切除疾患のエビデンスを有する組織学的又は細胞学的に確認された固形腫瘍を有すること。
ＩＦ３．１．事前の標準的な一次選択治療に失敗した対象の場合：対象は、臨床的利益を提供することが知られている療法が進行しているか、又はこれに不耐性である。対象は、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）感作変異及び／若しくは承認されたＴＫＩ耐性変異を含む活性化ＥＧＦＲ変異を保有するＮＳＣＬＣ、又は任意の活性化ｃ－ＭＥＴ変異／増幅のいずれかを有する。
ＩＦ３．２．事前の一次又はそれ以上の抗がん治療を受けたことがある対象の場合：臨床的利益をもたらすことが知られている療法が進行しているか、又はこれに不耐性であること。患者は、ＮＳＣＬＣ ＥＧＦＲ感作変異（Ｄｅｌ１９、Ｌ８５８Ｒなど）を有し、抗がん治療（すなわち、一次選択治療）を受けていないか、又はオシメルチニブ耐性ＮＳＣＬＣを有し、化学療法ナイーブである。
ＩＦ４．最新の療法、アーカイブ又は新鮮な腫瘍組織試料での進行後に埋め込まれたＦＦＰＥの可用性を有すること。
ＩＦ５．放射線学的方法によるＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義されるような測定可能な疾患を有すること（測定不可能であるが評価可能な疾患を有する患者は、用量漸増部分に含まれ得る）。
ＩＦ６．０又は１のＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスを有すること。
ＩＦ７．１２週間以上の平均余命を有すること。
ＩＦ８．以下のうちの少なくとも１つ又は全てによって確立されるような適切な臓器機能を有すること：
ＩＦ８．１ 絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０^９／Ｌ。
ＩＦ８．２ ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ。
ＩＦ８．３ 血小板≧１００×１０^９／Ｌ。
ＩＦ８．４ 正常範囲内の補正総血清カルシウム。
ＩＦ８．５ 正常範囲内の（又はサプリメントで補正された）血清マグネシウム。
ＩＦ８．６ 正常範囲内の血清カリウム。
ＩＦ８．７ アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、正常上限（ＵＬＮ）の３．０倍以下であり、総ビリルビンが、１．５×ＵＬＮ以下であり、ただし、肝臓関与又は悪性腫瘍の場合、ＡＬＴ／ＡＳＴが、５×ＵＬＮ以下であり、総ビリルビンが、２×ＵＬＮ以下である。
ＩＦ８．８ ギルバート症候群の患者の場合、コンジュゲートビリルビンは、正常範囲内の値を有する。
ＩＦ８．９ ６５歳超の年齢の患者についてのＣｏｃｋｒｏｆｔ及びＧａｕｌｔ式又はＭＤＲＤ式に従って計算して、１．５×ＵＬＮ以下の血清クレアチニン又は５０ｍＬ／分以上のクレアチニンクリアランス。
ＩＦ８．１０ 血清アルブミン＞３．３ｇ／ｄＬ。

【0252】

ある特定の態様では、ＩＦ８による臓器機能測定のための全ての値は、健康な対象で観察される上限を有する。

【0253】

ある特定の態様では、治療の対象は、ＩＦ１～ＩＦ８からなる群から選択される１つ以上の要因を含む。ある特定の態様では、治療の対象は、要因ＩＦ２、ＩＦ３（ＩＦ３．１、ＩＦ３．２など）、ＩＦ５及びＩＦ８を含む。ある特定の態様では、治療の対象は、要因ＩＦ１～ＩＦ８の全てを含む。

【0254】

ある特定の態様では、治療の開始時に、以下の除外要因ＥＦ１～ＥＦ１６のうちの少なくとも１つ、１つより多く、又は全てが、治療の対象に該当する。
ＥＦ１．以下の中枢神経系転移を有すること：
ＥＦ１．１：未治療かつ症候性の中枢神経系転移を有し、その一方で、無症候性病変を有する対象が、安定していると考えられる場合に含まれ得ること、
ＥＦ１．２ 放射線又は手術を必要とする中枢神経系転移を有すること、
ＥＦ１．３ 最初の用量の投与前の投与から１４日以内に症状を制御するために、継続的なステロイド療法（１０ｍｇ超のプレドニゾン又は等価物）を必要とする中枢神経系転移を有すること。他の中枢神経系転移を有する対象は、許容される。
ＥＦ２．既知の軟髄膜関与を有すること。
ＥＦ３．最初の用量の投与前４週間以内での任意の治験薬による別の臨床研究又は治療への参加。
ＥＦ４．治験薬の最初の用量の４週間又は５半減期のいずれか短い方以内の全身抗がん療法又は免疫療法の投与。重大な遅延毒性（例えば、ミトマイシンＣ、ニトロソウレア）を有する細胞毒性剤の場合、６週間のウォッシュアウト期間が必要である。
ＥＦ５．最初の用量の投与から３週間以内に大手術又は放射線療法を受けていること。任意の時点で骨髄の２５％以上に事前の放射線療法を受けた対象は、適格ではない。
ＥＦ６．事前の抗悪性腫瘍療法に関連する１超の臨床的に顕著な毒性の持続性グレードを有すること（脱毛症を除く）；ただし、ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ ｖ５．０の２以下のグレードを有する安定した感覚性ニューロパチー及びホルモン置換で安定している２以下のグレードを有する甲状腺機能低下症は除外されない。
ＥＦ７．これらの薬剤の恒久的停止を正当化した、ヒトタンパク質又は賦形剤のいずれかに起因する過敏症反応又はいずれかの毒性の病歴を有すること。
ＥＦ８．以下を含むがこれらに限定されない臨床的に顕著な心血管疾患の病歴を有すること：
ＥＦ８．１ 治験薬の最初の投与前の１ヶ月以内の深部静脈血栓症又は肺塞栓症の診断、又は治験薬の最初の投与前の６ヶ月以内で以下のうちのいずれかの診断：心筋梗塞、不安定狭心症、脳卒中、一過性虚血発作、冠動脈／末梢動脈バイパス移植片又は急性冠症候群。
ＥＦ８．２ 延長されたＱＴ間隔＞４８０ミリ秒又は臨床的に顕著な不整脈又は電気生理学的疾患（すなわち、植込み型除細動器の配置又は制御不能な速度での心房細動）。臨床的に安定している心臓ペースメーカーを有する患者は、適格である。
ＥＦ８．３ 制御されていない（持続的）動脈性高血圧：収縮期血圧＞１８０ｍｍＨｇ及び／又は拡張期血圧＞１００ｍｍＨｇ。
ＥＦ８．４ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩ－ＩＶとして定義されているうっ血性心不全（ＣＨＦ）又は治験薬の最初の投与から６ヶ月以内のＣＨＦのための入院。
ＥＦ８．５ 臨床的に顕著な心嚢液貯留
ＥＦ８．６ 心筋炎。
ＥＦ９．薬剤誘導性間質性肺疾患、１年以内に長期ステロイド又は他の免疫抑制剤での治療を必要とする放射線性肺炎を含む間質性肺疾患の病歴を有すること。
ＥＦ１０．腫瘍が治癒又は緩和の意図をもって治療され、以前又は同時の悪性腫瘍が、治験薬の安全性及び有効性の評価に影響を及ぼさない限り、皮膚の非基底細胞がん又は子宮頸部のインサイチュがんを除く、以前又は同時の悪性腫瘍を有すること。
ＥＦ１１．制御されていない活動性感染症、臨床的に顕著な肺の、代謝性の若しくは精神の疾患を含むがそれらに限定されない現在の重篤な疾病又は精神障害を有すること。
ＥＦ１２．抗ウイルス治療を受けずに活動性Ｂ型肝炎感染（ＨＢｓＡｇ陽性）を有すること。活動性Ｂ型肝炎（ＨｂｓＡｇ陽性）の対象は、最初の用量の投与の少なくとも７日以上前に開始して、ラミブジン、テノホビル、エンテカビル又は他の抗ウイルス剤での抗ウイルス治療を受ける必要がある。Ｂ型肝炎の前例（抗ＨＢｃ陽性、ＨｂｓＡｇ及びＨＢＶ－ＤＮＡ陰性）を有する対象が適格である。
ＥＦ１３．Ｃ型肝炎リボ核酸（ＨＣＶ ＲＮＡ）の陽性試験を有すること；ＨＣＶ感染が自発的に解決した対象（検出可能なＨＣＶ－ＲＮＡなしの陽性ＨＣＶ抗体）、又は抗ウイルス治療後に持続的なウイルス学的奏効を達成し、かつ抗ウイルス治療の中止後に６ヵ月超（ＩＦＮフリーのレジメンを使用）又は１２ヵ月超（ＩＦＮベースのレジメンを使用）の検出可能なＨＣＶ ＲＮＡの欠如を示す対象が適格である。
ＥＦ１４．ＨＩＶ（ＨＩＶ１／２抗体）の既往歴を有すること。検出できないウイルス量を有するＨＩＶを有する患者は、許容される。地域の保健当局又は規制によって義務付けられていない限り、ＨＩＶ試験は必要ではない。
ＥＦ１５．妊娠可能性のある性的に活発な男性及び女性の患者の場合、研究の全期間中及びＰＢ１９４７８の最終投与後６ヶ月間、以下の避妊法のいずれかを使用することに同意する：
・排卵（経口、膣内、経皮）の阻害に関連する併用（エストロゲン及びプロゲストゲン含有）ホルモン避妊
・排卵の阻害に関連するプロゲストゲンのみのホルモン避妊（経口、注射、埋め込み）
・子宮内避妊器具（ＩＵＤ）
・子宮内ホルモン放出システム（ＩＵＳ）
・両側卵管閉塞
・精管切除されたパートナー
・性的禁欲
ＥＦ１６．妊娠中又は授乳中。

【0255】

ある特定の態様では、治療の対象は、ＥＦ１～ＥＦ１６からなる群から選択される１つ以上の要因に準拠する。ある特定の態様では、治療の対象は、要因ＥＦ１～ＥＦ１６の全てに準拠する。

【0256】

本明細書における引用されている特許文献又は他の事項への言及は、その文献若しくは事項が知られていたこと、又はそれに含まれる情報が、請求項のいずれかの優先日時点の共通の一般的な知識の一部であったことを認めるものとはみなされない。

【0257】

複数の列挙されている要素間の接続用語「及び／又は」は、個々の選択肢及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって結ばれている場合、第１の選択肢は、第２の要素なしでの第１の要素の適用可能性を指す。第２の選択肢は、第１の要素なしでの第２の要素の適用可能性を指す。第３の選択肢は、一緒になった第１の要素及び第２の要素の適用可能性を指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、この意味の範囲内にあると理解され、したがって、本明細書で使用されるような「及び／又は」という用語の要件を満たす。選択肢のうちの１つより多くの同時の適用可能性はまたこの、意味の範囲内にあると理解され、したがって、「及び／又は」という用語の要件を満たす。

【0258】

明確化及び簡潔な説明のために、特徴は、同じ又は別個の実施形態の一部として本明細書に記載されるが、本開示の範囲は、記載される特徴の全て又は一部の組み合わせを有する実施形態を含み得ると理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0259】

【図1】この出願で言及される可変ドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列。

【図2】ＭＦ３３７０及びそのバリアント。ＭＦ８２２６中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列は、左から右に下線が引かれている。他の配列内のＣＤＲは、対応する位置にある（Ｋａｂａｔによる）。

【図3-1】ＭＦ４３５６及びそのバリアント。ＭＦ４３５６中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列は、左から右に下線が引かれている。他の配列内のＣＤＲは、対応する位置にある（Ｋａｂａｔによる）。

【図3-2】ＭＦ４３５６及びそのバリアント。ＭＦ４３５６中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列は、左から右に下線が引かれている。他の配列内のＣＤＲは、対応する位置にある（Ｋａｂａｔによる）。

【図4A】単一及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖。共通軽鎖アミノ酸配列。

【図4B】単一及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖。共通軽鎖可変ドメインＤＮＡ配列及び翻訳（ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１）。

【図4C】単一及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖。共通軽鎖定常領域ＤＮＡ配列及び翻訳。

【図4D】単一及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖。ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５共通軽鎖可変ドメイン翻訳。

【図4E】単一及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖。Ｖ領域ＩＧＫＶ１－３９Ａ。

【図5A】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖。ＣＨ１領域。

【図5B】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖。ヒンジ領域。

【図5C】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖。ＣＨ２領域。

【図5D】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖。Ｌ２３５Ｇ及びＧ２３６Ｒサイレンシング置換を含有するＣＨ２。

【図5E】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖。置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＫＫ）を含有するＣＨ３ドメイン。

【図5F】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖。置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（ＤＥ）を含有するＣＨ３ドメイン。

【図6】治療スケジュールの概要。抗体、オシメルチニブ、及び抗体とオシメルチニブとの組み合わせ、又はビヒクルを、示された期間で投与した。治療の終了時（３１日目）に、腫瘍試料を収集し、標的発現分析のためにスナップ凍結した。マウスを奏効の持続時間（ＤｏＲ）及び治療終了後の再発について監視した。

【図7】７５０ｍｍ３までの生存曲線：併用群対各単剤療法群のログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）試験は、有意である。

【図8】２８日目の個々の腫瘍体積。統計分析を、Ｇｒａｐｈｐａｄ ＰｒｉｓｍにおいてＴｕｋｅｙのポスト試験を伴う混合モデルを使用して実施した。

【図9】完全な治療期間中の平均腫瘍体積±ＳＥＭ。観察期間は、１００日目に終了した。

【図10】治療スケジュールの概要。群を３週間の期間にわたって投与した。

【図11】エクソン１９に変異を保有するＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＨＣＣ８２７／ＥＲ１における抗体、オシメルチニブ、併用治療、及びビヒクルのみを含む群での治療の効果。異なる時点で示されるビヒクル及び治療群を表す腫瘍体積成長曲線（平均ＴＶ±ＳＥＭ）。

【図12】異なる治療群対ビヒクル群における、エクソン１９に変異を有するＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＨＣＣ８２７／ＥＲ１を保有するマウスの動物生存曲線。

【発明を実施するための形態】

【0260】

条項
１．対象におけるがんの治療の方法における使用のための、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、当該第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ_１Ｘ_２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＨＷＷＬＸ_７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ_１＝Ｎ又はＳ、Ｘ_２＝Ａ又はＧ、Ｘ_３＝Ｄ又はＧ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ_６＝Ｄ又はＷ、かつＸ_７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ_１～Ｘ_７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、当該第２の可変ドメインが、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体との、組み合わせ。

【0261】

２．がんを有する対象を治療する方法であって、当該治療が、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、当該第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、当該第２の可変ドメインが、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体との有効量の組み合わせを対象に投与することを含む、方法。

【0262】

３．対象におけるがんの治療のための医薬品の製造における、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、当該第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、当該第２の可変ドメインが、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせの、使用。

【0263】

４．がんが、ＥＧＦＲ陽性がん、ｃＭＥＴ陽性がん、又はＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ陽性がんである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0264】

５．当該がんが、ＥＧＦＲ異常、ｃＭＥＴ異常又はＥＧＦＲ及びｃＭＥＴ異常を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0265】

６．当該がんが、チロシンキナーゼ阻害剤での治療に耐性がある、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0266】

７．当該がんが、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤に対して耐性がある、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0267】

８．ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤耐性が、第１、第２及び／又は第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤、好ましくは、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する耐性を含む、条項７に記載の使用又は方法。

【0268】

９．当該ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤耐性が、カプマチニブ、テポチニブ、クリゾテニブ、カボザンチニブ、サボリチニブ、グレサチニブ、シトラバチニブ、ＢＭＳ－７７７６０７、メレスチニブ、チバンチニブ、ゴルバチニブ、フォレチニブ、ＡＭＧ－３３７又はＢＭＳ－７９４８３３、好ましくは、カプマチニブ又はテポチニブに対する耐性を含む、条項７に記載の使用又は方法。

【0269】

１０．対象が、チロシンキナーゼ阻害剤、好ましくはＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けている、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0270】

１１．対象が、第１、第２又は第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けている、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0271】

１２．対象が、ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤での事前の治療を受けている、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0272】

１３．当該がんが、活性化ＥＧＦＲ変異、承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異（Ｌ７１８Ｘ（例えば、Ｌ７１８Ｑ）、Ｇ７１９Ｘ（例えば、Ｇ７１９Ａ）、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｇ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｒ、Ｇ７９６Ｓ、Ｇ７９６Ｄ）、Ｃ７９７Ｘ、Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｃ７９７Ｓ、Ｃ７９７Ｇ）、ＥＧＦＲへの第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の結合を低減する変異（例えば、Ｌ７９２Ｘ、Ｌ７１８Ｘ）、後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異（Ｃ７９７Ｘ、Ｌ７９２Ｘ、Ｇ７９６Ｘ、Ｇ７２４Ｘ、Ｓ７６８Ｘ、Ｌ７１８Ｘ又はエクソン２０挿入変異など）、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、ｃＭＥＴ変異又はｃＭＥＴ異常を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0273】

１４．当該がんが、エクソン１９欠失変異、好ましくは、フレーム内エクソン１９欠失、エクソン２０ミスセンス変異（例えば、Ｔ７９０Ｍ）、又はＬ８５８Ｒなどのエクソン２１変異を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0274】

１５．がんが、ＥＧＦＲエクソン２０変異、好ましくはエクソン２０挿入変異を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0275】

１６．がんが、Ｇ７２４Ｘ（例えば、Ｇ７２４Ｓ）、Ｓ７６８Ｘ（例えば、Ｓ７６８Ｉ）、Ｔ７９０Ｘ（例えば、Ｔ７９０Ｍ）、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｃ７９７Ｘ（Ｃ７９７Ｓ及びＣ７９７Ｇを含む）、Ｌ７９８Ｘ（例えば、Ｌ７９８Ｉ）を含む、オシメルチニブに対する耐性を付与する変異などの後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0276】

１７．当該がんが、近ループ挿入（７６７～７７２位）、遠ループ挿入（７７３～７７５位）、好ましくは、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｖ７７４＿Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧＬ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＥＧＮ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧＤ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＨ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＰ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＧＮＰＨ、Ｈ７７３ｄｅｌｉｎｓＳＮＰＹ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＶＤＮ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＫＨ、Ｎ７７１ｄｅｌｉｎｓＲＤ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｄｅｌｉｎｓＨＮＰＹ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＧＴ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＴ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＧ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＳＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＶＶ及びＶ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＭＡＳＶ；又は変異Ｔ７９０Ｍ、Ｌ７９２Ｘ（例えば、Ｌ７９２Ｈ）、Ｃ７９６Ｘ（例えば、Ｇ７９６Ｒ、Ｇ７９６Ｓ、Ｇ７９６Ｄ）、Ｃ７９７Ｘ（例えば、Ｃ７９７Ｓ、Ｃ７９７Ｇ）、Ｌ７９８Ｉ若しくはフレーム内エクソン２０挿入、例えば、Ｍ７６６＿Ａ７６７ｉｎｓＡＳＶ若しくはＨ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｉｎｓ７６１（ＥＡＦＱ）、Ｉｎｓ７７０（ＡＳＶ）、Ｉｎｓ７７１（Ｇ）、Ｉｎｓ７７４（ＮＰＨ）、Ｍ７６６＿Ａ７６７１ｎｓ Ａ、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ＩｎｓＳＶＡ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ＩｎｓＮＳ、Ｄ７６１＿Ｅ７６２ＩｎｓＸ１－７、Ａ７６３＿Ｙ７６４ＩｎｓＸ１－７、Ｙ７６４＿Ｙ７６５ ＩｎｓＸ１－７、Ｍ７６６＿Ａ７６７ＩｎｓＸ１－７、Ａ７６７＿Ｖ７６８ ＩｎｓＸ１－７、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ ＩｎｓＸ１－７＞Ｖ７６９＿Ｄ７７０ ＩｎｓＸ１－７＞Ｄ７７０＿Ｎ７７１ ＩｎｓＸ１－７＞Ｎ７７１＿Ｐ７７２ ＩｎｓＸ１－７＞Ｐ７７２＿Ｈ７７３ ＩｎｓＸ１－７、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ ＩｎｓＸ１－７若しくはＶ７７４＿Ｃ７７５ ＩｎｓＸ１－７から選択されるエクソン２０（７６２～８２３）変異を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0277】

１８．当該がんが、ｃＭＥＴ増幅、ｃＭＥＴ過剰発現、ｃＭＥＴ経路のシグナル伝達の増加、ｃＭＥＴ遺伝子増幅、ｃＭＥＴタンパク質活性の増加、及び／又はＨＧＦ発現の増加などのｃＭＥＴ異常を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0278】

１９．当該がんが、ｃＭＥＴエクソン１４スキッピング変異を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0279】

２０．当該第１世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、ゲフィチニブ、エルロチニブ若しくはイコチニブを含むか、又はこれである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0280】

２１．当該第２世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、アファチニブ、ダコミチニブ、ＸＬ６４７、ＡＰ２６１１３、ＣＯ－１６８６若しくはネラチニブを含むか、又はこれである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0281】

２２．当該第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼが、オシメルチニブ、ラゼルチニブ、アルフルチニブ、レジベルチニブ、ロシレチニブ、オルムチニブ、アルモネルチニブ、アビベルチニブ、ＡＳＫ１２００６７、ベフォテルチニブ、ＳＨ－１０２８、ナザルチニブ（ＥＧＦ８１６）、ナコチニブ（ＡＳＰ８２７３）、マベレルチニブ（ＰＦ－０６４７７７５）、オラフェルチニブ（ＣＫ－１０１）、ケイナチニブ若しくはＥＳ－０７２、好ましくはオシメルチニブを含むか、又はこれである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0282】

２３．当該ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤が、カプマチニブ、テポチニブ、クリゾテニブ、カボザンチニブ、サボリチニブ、グレサチニブ、シトラバチニブ、ＢＭＳ－７７７６０７、メレスチニブ、チバンチニブ、ゴルバチニブ、フォレチニブ、ＡＭＧ－３３７若しくはＢＭＳ－７９４８３３を含むか、又はこれである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0283】

２４．治療が、当該二重特異性抗体と当該チロシンキナーゼ阻害剤との当該組み合わせを、それを必要とする対象に投与することを含み、好ましくは、当該二重特異性抗体を、当該第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与する、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0284】

２５．対象が、チロシンキナーゼ阻害剤治療又は抗ＥＧＦＲ治療ナイーブである対象など、事前の抗がん治療を受けていない、条項１～５のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0285】

２６．二重特異性抗体及びＴＫＩ阻害剤の投与が、一次選択治療として投与される、条項１～５のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0286】

２７．対象又はがんが、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴ活性化変異、例えば、エクソン１９欠失変異又はエクソン２１変異（Ｌ８５８Ｒなど）を含む、条項１～５のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0287】

２８．対象が、ヒト対象である、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0288】

２９．がんが、肺がん、特に非小細胞肺がん、好ましくは転移性又は進行性非小細胞肺がんである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0289】

３０．当該がんが、活性化ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤感作変異（エクソン１９欠失及びＬ８５８Ｘなど）、後天性ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異（Ｔ７９０Ｘ、Ｃ７９７Ｘ、Ｌ７９２Ｘ、Ｌ７９８Ｘなど）、承認されたＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲエクソン２０挿入変異、活性化ｃ－ＭＥＴ変異、好ましくはエクソン１４スキッピング変異、又は好ましくはＭＥＴ／ＣＥＰ７＞５若しくはｃｆＤＮＡ≧２コピーを含むｃＭＥＴ増幅、又はそれらの任意の組み合わせを含む、ＮＳＣＬＣである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0290】

３１．当該がんが、進行性又は転移性がんである、先行条項のいずれか一項に記載の使用又は方法。

【0291】

３２．第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含み、当該第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＸ１Ｘ２ＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＨＷＷＬＸ７Ａを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、Ｘ１＝Ｎ又はＳ、Ｘ２＝Ａ又はＧ、Ｘ３＝Ｄ又はＧ、Ｘ４＝Ｒ、Ｓ又はＹ、Ｘ５＝Ｈ、Ｌ又はＹ、Ｘ６＝Ｄ又はＷ、かつＸ７＝Ｄ又はＧであり、Ｘ１～Ｘ７以外の位置で、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し、当該第２の可変ドメインが、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む二重特異性抗体とを含む、薬学的組み合わせ。

【0292】

３３．抗体が、ヒト抗体である、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0293】

３４．抗体が、ＡＤＣＣ増強されている、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0294】

３５．抗体が、１：１の抗ＥＧＦＲ、抗ｃＭＥＴ化学量論を有するＩｇＧ１フォーマット抗体である、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0295】

３６．抗体が、ＥＧＦＲに結合することができる１つの可変ドメインと、ｃＭＥＴに結合することができる１つの可変ドメインと、を有する、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0296】

３７．ヒトＥＧＦＲに結合することができる可変ドメインが、カニクイザル及びマウスＥＧＦＲにも結合することができる、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0297】

３８．ヒトＥＧＦＲに結合することができる可変ドメインが、ヒトＥＧＦＲのドメインＩＩＩに結合する、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0298】

３９．ｃＭＥＴに結合することができる可変ドメインが、ｃＭＥＴへの抗体５Ｄ５の結合を遮断する、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0299】

４０．ｃＭＥＴに結合することができる可変ドメインが、ｃＭＥＴへのＨＧＦの結合を遮断する、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0300】

４１．一方のＣＨ３ドメインにおける４０５位及び４０９位のアミノ酸が、他方のＣＨ３ドメインにおける対応する位置のアミノ酸と同じである（ＥＵ番号付け）、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0301】

４２．Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｓ、Ｘ_５＝Ｙ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇであるか、
Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇであるか、又は
Ｘ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｇ、Ｘ_４＝Ｙ、Ｘ_５＝Ｌ、Ｘ_６＝Ｄ、かつＸ_７＝Ｇである、
先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0302】

４３．Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、又はＸ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、又はＸ_１＝Ｓ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄである、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0303】

４４．Ｘ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ｇ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄであるか、又はＸ_１＝Ｎ、Ｘ_２＝Ａ、Ｘ_３＝Ｄ、Ｘ_４＝Ｒ、Ｘ_５＝Ｈ、Ｘ_６＝Ｗ、かつＸ_７＝Ｄである、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0304】

４５．第２の可変ドメインの重鎖可変領域が、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号１～３、７、８、１０、１３、１５、１６、１７、２１、２２又は２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0305】

４６．第２の可変ドメインの重鎖可変領域が、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する配列番号２、７、８、１０、１３又は２３の配列のうちの１つのアミノ酸配列を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0306】

４７．第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及びＣＤＲ３配列ＥＴＹＹＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを有する重鎖可変領域を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0307】

４８．第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＴＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及び配列ＥＴＹＦＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0308】

４９．第１及び第２の可変ドメインが、共通軽鎖、好ましくは、図４Ｂの軽鎖を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0309】

５０．第１及び第２の可変ドメインが、（ＩＭＧＴによる）各々ＱＳＩＳＳＹ、ＡＡＳ及びＱＱＳＹＳＴＰのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含む、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0310】

５１．抗体が、ＨＧＦ成長応答性細胞のＨＧＦ誘導成長を阻害する、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0311】

５２．抗体が、ＥＧＦ成長応答性細胞のＥＧＦ誘導成長を阻害する、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0312】

５３．対象に、１０００ｍｇの二重特異性抗体を、特に１０００ｍｇのフラット用量を使用して投与する、先行条項のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0313】

５４．二重特異性抗体を毎週１回投与する、条項５３に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0314】

５５．対象に、好ましくは８０ｍｇの１日用量を含む、オシメルチニブを更に投与する、条項５３又は５４に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0315】

５６．対象に、好ましくは１１０ｍｇの１日用量を含む、アルモネルチニブを更に投与する、条項５３又は５４に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0316】

５７．対象に、好ましくは２４０ｍｇの１日用量を含む、ラゼルチニブを更に投与する、条項５３又は５４に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0317】

５８．対象に、好ましくは７５ｍｇの１日用量を含む、ベフォテルチニブを更に投与する、条項５３又は５４に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0318】

５９．二重特異性抗体を２週間に１回投与する、条項５３に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0319】

６０．対象に、好ましくは８０ｍｇの１日用量を含む、オシメルチニブを更に投与する、条項５３又は５９に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0320】

６１．対象に、好ましくは１１０ｍｇの１日用量を含む、アルモネルチニブを更に投与する、条項５３又は５９に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0321】

６２．対象に、好ましくは２４０ｍｇの１日用量を含む、ラゼルチニブを更に投与する、条項５３又は５９に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0322】

６３．対象に、好ましくは７５ｍｇの１日用量を含む、ベフォテルチニブを更に投与する、条項５３又は５９に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0323】

６４．対象に、１５００ｍｇの二重特異性抗体を、特に１５００ｍｇのフラット用量を使用して投与する、条項１～５２のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0324】

６５．二重特異性抗体を２週間に１回投与する、条項６４に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0325】

６６．対象に、好ましくは８０ｍｇの１日用量を含む、オシメルチニブを更に投与する、条項６４又は６５に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0326】

６７．対象に、好ましくは１１０ｍｇの１日用量を含む、アルモネルチニブを更に投与する、条項６４又は６５に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0327】

６８．対象に、好ましくは２４０ｍｇの１日用量を含む、ラゼルチニブを更に投与する、条項６４又は６５に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0328】

６９．対象に、好ましくは７５ｍｇの１日用量を含む、ベフォテルチニブを更に投与する、条項６４又は６５に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0329】

７０．対象に、２０００ｍｇの二重特異性抗体を、特に２０００ｍｇのフラット用量を使用して投与する、条項１～５１のいずれか一項に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0330】

７１．二重特異性抗体を２週間に１回投与する、条項７０に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0331】

７２．対象に、好ましくは８０ｍｇの１日用量を含む、オシメルチニブを更に投与する、条項７０又は７１に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0332】

７３．対象に、好ましくは１１０ｍｇの１日用量を含む、アルモネルチニブを更に投与する、条項７０又は７１に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0333】

７４．対象に、好ましくは２４０ｍｇの１日用量を含む、ラゼルチニブを更に投与する、条項７０又は７１に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【0334】

７５．対象に、好ましくは７５ｍｇの１日用量を含む、ベフォテルチニブを更に投与する、条項７０又は７１に記載の使用、方法又は薬学的組み合わせ。

【実施例】

【0335】

本明細書で使用される場合、Ｘが独立して数字０～９である「ＭＦＸＸＸＸ」は、可変ドメインを含むＦａｂを指し、ＶＨは、４桁によって識別されるアミノ酸配列を有する。別段指示されない限り、可変ドメインの軽鎖可変領域は、図４Ａ、典型的には４Ｂの配列を有する。「ＭＦＸＸＸＸ ＶＨ」は、４桁で識別されるＶＨのアミノ酸配列を指す。ＭＦは、更に、軽鎖の定常領域と、通常、軽鎖の定常領域と相互作用する重鎖の定常領域と、を含む。ＰＧは、同一の重鎖及び軽鎖を含む単一特異性抗体を指す。ＰＢは、２つの異なる重鎖を有する二重特異性抗体を指す。重鎖のＶＨ可変領域は異なり、典型的には、ＣＨ３領域も異なり、重鎖の一方はそのＣＨ３ドメインのＫＫ変異を有し、他方はそのＣＨ３ドメインの相補的ＤＥ変異を有する（参考ＰＣＴ／ＮＬ２０１３／０５０２９４（ＷＯ２０１３／１５７９５４として公開）を参照されたい）。

【0336】

本開示の抗体の産生の詳細については、ＰＣＴＮＬ／２０１８／０５０５３７（ＷＯ２０１９／０３１９６５として公開されている）を参照されたい。添付の実施例における使用及び本開示の方法における使用に好適なＥＧＦＲ及びｃＭＥＴに結合する二重特異性抗体は、表３、４、５及び６のものを含む。具体的には、二重特異性抗体ＰＢ１９４７８は、添付の実施例で好適に使用される。

【0337】

各二重特異性抗体は、ＥＧＦＲ及びｃＭＥＴに各々結合することができるＭＦ番号によって指定される２つのＶＨを含み、図５ｅ及び図５ｆに各々示されるようなＫＫ／ＤＥ ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメイン、図５ｄに示されるようなＣＨ２ドメイン、図５ｂに示されるようなヒンジドメイン、図５ａに示されるようなＣＨ１ドメイン、並びに図４ａ～ｅに示されるような共通軽鎖を有するＦｃ尾部を更に含む。例えば、ＭＦ８２３３×ＭＦ８２３０によって示される二重特異性抗体は、上記の一般的な配列、ＭＦ８２３３の配列を有するＶＨを有する可変ドメイン、及びＭＦ８２３０の配列を有するＶＨを有する可変ドメインを有し、好ましくは、添付の実施例で使用される。

【0338】

実施例１：材料及び方法
細胞株：
ＥＢＣ－１［ＪＣＲＢ０８２０］、ＰＣ－９［ＲＣＢ０４４６］、Ｈ３５８［ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８０７（商標）］、ＨＣＣ８２７［ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２８６８（商標）］、ＭＫＮ－４５［ＤＳＭＺ ＡＣＣ ４０９］Ｎ８７［ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８２２（商標）］及びＡ４３１［ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１５５５（商標）］細胞株を購入し、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）で補充した成長培地でルーチン的に維持した。ＨＥＫ２９３Ｆ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得て、２９３ ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ培地中でルーチン的に維持した。

【0339】

ｃＤＮＡ構築物：
安定した細胞株（ｃＭＥＴ及びＥＧＦＲ）の生成のための、及び免疫化（ｃＭＥＴ）のためのｃＭＥＴ及びＥＧＦＲ発現ベクターの生成
クローニングのための独自の制限部位と効率的な翻訳のためのコザックコンセンサス配列とを含む各標的の全長ｃＤＮＡを、クローニングのための独自の制限部位と効率的な翻訳のためのコザックコンセンサス配列とを導入した特異的プライマーを用いて、標的ｃＤＮＡを含有する市販の発現構築物上でのＰＣＲ増幅を介して合成するか、又は得た。各標的の全長ｃＤＮＡをｐｃＤＮＡ３．１などの真核発現構築物にクローニングし、その一方で、細胞外ドメインをｐＶＡＸ１及びｐＤｉｓｐｌａｙにクローニングした。挿入配列は、ＮＣＢＩ参照アミノ酸配列と比較して検証した。

【0340】

細胞表面上での発現のためのアミノ酸配列全長ヒトＥＧＦＲ挿入物（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＰ＿００５３３と同一）：
ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲＡＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭＲＲＲＨＩＶＲＫＲＴＬＲＲＬＬＱＥＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＴＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧＦＦＳＳＰＳＴＳＲＴＰＬＬＳＳＬＳＡＴＳＮＮＳＴＶＡＣＩＤＲＮＧＬＱＳＣＰＩＫＥＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰＴＧＡＬＴＥＤＳＩＤＤＴＦＬＰＶＰＥＹＩＮＱＳＶＰＫＲＰＡＧＳＶＱＮＰＶＹＨＮＱＰＬＮＰＡＰＳＲＤＰＨＹＱＤＰＨＳＴＡＶＧＮＰＥＹＬＮＴＶＱＰＴＣＶＮＳＴＦＤＳＰＡＨＷＡＱＫＧＳＨＱＩＳＬＤＮＰＤＹＱＱＤＦＦＰＫＥＡＫＰＮＧＩＦＫＧＳＴＡＥＮＡＥＹＬＲＶＡＰＱＳＳＥＦＩＧＡ

【0341】

そのうち：
－ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲ：シグナルペプチド。
－ＡＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳ：ヒトＥＧＦＲのＥＣＤ。
－ＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ：予測されたＴＭ領域。
－ＲＲＲＨＩＶＲＫＲＴＬＲＲＬＬＱＥＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＴＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧＦＦＳＳＰＳＴＳＲＴＰＬＬＳＳＬＳＡＴＳＮＮＳＴＶＡＣＩＤＲＮＧＬＱＳＣＰＩＫＥＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰＴＧＡＬＴＥＤＳＩＤＤＴＦＬＰＶＰＥＹＩＮＱＳＶＰＫＲＰＡＧＳＶＱＮＰＶＹＨＮＱＰＬＮＰＡＰＳＲＤＰＨＹＱＤＰＨＳＴＡＶＧＮＰＥＹＬＮＴＶＱＰＴＣＶＮＳＴＦＤＳＰＡＨＷＡＱＫＧＳＨＱＩＳＬＤＮＰＤＹＱＱＤＦＦＰＫＥＡＫＰＮＧＩＦＫＧＳＴＡＥＮＡＥＹＬＲＶＡＰＱＳＳＥＦＩＧＡ：細胞内尾部。

【0342】

エクソン２～７のフレーム内欠失によって引き起こされる、ヒトＥＧＦＲｖａｒＩＩＩの細胞外ドメインのアミノ酸配列、天然に存在するＥＧＦＲバリアントＶＡＲ＿０６６４９３［Ｊｉ Ｈ．，Ｚｈａｏ Ｘ；ＰＮＡＳ１０３：７８１７－７８２２（２００６）］。以下の＿は、アミノ酸３０～２９７を欠いている場所を示す
ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲＡＬＥＥＫＫ＿ＧＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳ

【0343】

そのうち：
－ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲ：シグナルペプチド。
－ＡＬＥＥＫＫ＿ＧＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳ：ＥＧＦＲｖａｒＩＩＩのＥＣＤ

【0344】

細胞表面上で発現のためのヒトＥＧＦＲ膜貫通及び細胞内ドメインを有する、アミノ酸配列キメラマカク（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）細胞外ＥＧＦＲドメインハイブリッド（ＧｅｎＢａｎｋ：ＸＰ＿０１４９８８９２２．１。以下の実施例で下線が引かれているヒトＥＧＦＲ配列。

【化1】

【0345】

そのうち：
－ＭＧＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲ：シグナルペプチド。
－ＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳ：ｃｙＥＧＦＲのＥＣＤ

【0346】

細胞表面上での発現のためのアミノ酸配列全長ヒトｃＭＥＴ挿入物（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｐ０８５８１－２）。この配列は、７５５～７５５に挿入を有する位置の参照配列とは異なる：Ｓ→ＳＴＷＷＫＥＰＬＮＩＶＳＦＬＦＣＦＡＳ
ＭＫＡＰＡＶＬＡＰＧＩＬＶＬＬＦＴＬＶＱＲＳＮＧＥＣＫＥＡＬＡＫＳＥＭＮＶＮＭＫＹＱＬＰＮＦＴＡＥＴＰＩＱＮＶＩＬＨＥＨＨＩＦＬＧＡＴＮＹＩＹＶＬＮＥＥＤＬＱＫＶＡＥＹＫＴＧＰＶＬＥＨＰＤＣＦＰＣＱＤＣＳＳＫＡＮＬＳＧＧＶＷＫＤＮＩＮＭＡＬＶＶＤＴＹＹＤＤＱＬＩＳＣＧＳＶＮＲＧＴＣＱＲＨＶＦＰＨＮＨＴＡＤＩＱＳＥＶＨＣＩＦＳＰＱＩＥＥＰＳＱＣＰＤＣＶＶＳＡＬＧＡＫＶＬＳＳＶＫＤＲＦＩＮＦＦＶＧＮＴＩＮＳＳＹＦＰＤＨＰＬＨＳＩＳＶＲＲＬＫＥＴＫＤＧＦＭＦＬＴＤＱＳＹＩＤＶＬＰＥＦＲＤＳＹＰＩＫＹＶＨＡＦＥＳＮＮＦＩＹＦＬＴＶＱＲＥＴＬＤＡＱＴＦＨＴＲＩＩＲＦＣＳＩＮＳＧＬＨＳＹＭＥＭＰＬＥＣＩＬＴＥＫＲＫＫＲＳＴＫＫＥＶＦＮＩＬＱＡＡＹＶＳＫＰＧＡＱＬＡＲＱＩＧＡＳＬＮＤＤＩＬＦＧＶＦＡＱＳＫＰＤＳＡＥＰＭＤＲＳＡＭＣＡＦＰＩＫＹＶＮＤＦＦＮＫＩＶＮＫＮＮＶＲＣＬＱＨＦＹＧＰＮＨＥＨＣＦＮＲＴＬＬＲＮＳＳＧＣＥＡＲＲＤＥＹＲＴＥＦＴＴＡＬＱＲＶＤＬＦＭＧＱＦＳＥＶＬＬＴＳＩＳＴＦＩＫＧＤＬＴＩＡＮＬＧＴＳＥＧＲＦＭＱＶＶＶＳＲＳＧＰＳＴＰＨＶＮＦＬＬＤＳＨＰＶＳＰＥＶＩＶＥＨＴＬＮＱＮＧＹＴＬＶＩＴＧＫＫＩＴＫＩＰＬＮＧＬＧＣＲＨＦＱＳＣＳＱＣＬＳＡＰＰＦＶＱＣＧＷＣＨＤＫＣＶＲＳＥＥＣＬＳＧＴＷＴＱＱＩＣＬＰＡＩＹＫＶＦＰＮＳＡＰＬＥＧＧＴＲＬＴＩＣＧＷＤＦＧＦＲＲＮＮＫＦＤＬＫＫＴＲＶＬＬＧＮＥＳＣＴＬＴＬＳＥＳＴＭＮＴＬＫＣＴＶＧＰＡＭＮＫＨＦＮＭＳＩＩＩＳＮＧＨＧＴＴＱＹＳＴＦＳＹＶＤＰＶＩＴＳＩＳＰＫＹＧＰＭＡＧＧＴＬＬＴＬＴＧＮＹＬＮＳＧＮＳＲＨＩＳＩＧＧＫＴＣＴＬＫＳＶＳＮＳＩＬＥＣＹＴＰＡＱＴＩＳＴＥＦＡＶＫＬＫＩＤＬＡＮＲＥＴＳＩＦＳＹＲＥＤＰＩＶＹＥＩＨＰＴＫＳＦＩＳＴＷＷＫＥＰＬＮＩＶＳＦＬＦＣＦＡＳＧＧＳＴＩＴＧＶＧＫＮＬＮＳＶＳＶＰＲＭＶＩＮＶＨＥＡＧＲＮＦＴＶＡＣＱＨＲＳＮＳＥＩＩＣＣＴＴＰＳＬＱＱＬＮＬＱＬＰＬＫＴＫＡＦＦＭＬＤＧＩＬＳＫＹＦＤＬＩＹＶＨＮＰＶＦＫＰＦＥＫＰＶＭＩＳＭＧＮＥＮＶＬＥＩＫＧＮＤＩＤＰＥＡＶＫＧＥＶＬＫＶＧＮＫＳＣＥＮＩＨＬＨＳＥＡＶＬＣＴＶＰＮＤＬＬＫＬＮＳＥＬＮＩＥＷＫＱＡＩＳＳＴＶＬＧＫＶＩＶＱＰＤＱＮＦＴＧＬＩＡＧＶＶＳＩＳＴＡＬＬＬＬＬＧＦＦＬＷＬＫＫＲＫＱＩＫＤＬＧＳＥＬＶＲＹＤＡＲＶＨＴＰＨＬＤＲＬＶＳＡＲＳＶＳＰＴＴＥＭＶＳＮＥＳＶＤＹＲＡＴＦＰＥＤＱＦＰＮＳＳＱＮＧＳＣＲＱＶＱＹＰＬＴＤＭＳＰＩＬＴＳＧＤＳＤＩＳＳＰＬＬＱＮＴＶＨＩＤＬＳＡＬＮＰＥＬＶＱＡＶＱＨＶＶＩＧＰＳＳＬＩＶＨＦＮＥＶＩＧＲＧＨＦＧＣＶＹＨＧＴＬＬＤＮＤＧＫＫＩＨＣＡＶＫＳＬＮＲＩＴＤＩＧＥＶＳＱＦＬＴＥＧＩＩＭＫＤＦＳＨＰＮＶＬＳＬＬＧＩＣＬＲＳＥＧＳＰＬＶＶＬＰＹＭＫＨＧＤＬＲＮＦＩＲＮＥＴＨＮＰＴＶＫＤＬＩＧＦＧＬＱＶＡＫＧＭＫＹＬＡＳＫＫＦＶＨＲＤＬＡＡＲＮＣＭＬＤＥＫＦＴＶＫＶＡＤＦＧＬＡＲＤＭＹＤＫＥＹＹＳＶＨＮＫＴＧＡＫＬＰＶＫＷＭＡＬＥＳＬＱＴＱＫＦＴＴＫＳＤＶＷＳＦＧＶＬＬＷＥＬＭＴＲＧＡＰＰＹＰＤＶＮＴＦＤＩＴＶＹＬＬＱＧＲＲＬＬＱＰＥＹＣＰＤＰＬＹＥＶＭＬＫＣＷＨＰＫＡＥＭＲＰＳＦＳＥＬＶＳＲＩＳＡＩＦＳＴＦＩＧＥＨＹＶＨＶＮＡＴＹＶＮＶＫＣＶＡＰＹＰＳＬＬＳＳＥＤＮＡＤＤＥＶＤＴＲＰＡＳＦＷＥＴＳ

【0347】

そのうち：
－ＭＫＡＰＡＶＬＡＰＧＩＬＶＬＬＦＴＬＶＱＲＳＮＧ：シグナルペプチド
－ＥＣＫＥＡＬＡＫＳＥＭＮＶＮＭＫＹＱＬＰＮＦＴＡＥＴＰＩＱＮＶＩＬＨＥＨＨＩＦＬＧＡＴＮＹＩＹＶＬＮＥＥＤＬＱＫＶＡＥＹＫＴＧＰＶＬＥＨＰＤＣＦＰＣＱＤＣＳＳＫＡＮＬＳＧＧＶＷＫＤＮＩＮＭＡＬＶＶＤＴＹＹＤＤＱＬＩＳＣＧＳＶＮＲＧＴＣＱＲＨＶＦＰＨＮＨＴＡＤＩＱＳＥＶＨＣＩＦＳＰＱＩＥＥＰＳＱＣＰＤＣＶＶＳＡＬＧＡＫＶＬＳＳＶＫＤＲＦＩＮＦＦＶＧＮＴＩＮＳＳＹＦＰＤＨＰＬＨＳＩＳＶＲＲＬＫＥＴＫＤＧＦＭＦＬＴＤＱＳＹＩＤＶＬＰＥＦＲＤＳＹＰＩＫＹＶＨＡＦＥＳＮＮＦＩＹＦＬＴＶＱＲＥＴＬＤＡＱＴＦＨＴＲＩＩＲＦＣＳＩＮＳＧＬＨＳＹＭＥＭＰＬＥＣＩＬＴＥＫＲＫＫＲＳＴＫＫＥＶＦＮＩＬＱＡＡＹＶＳＫＰＧＡＱＬＡＲＱＩＧＡＳＬＮＤＤＩＬＦＧＶＦＡＱＳＫＰＤＳＡＥＰＭＤＲＳＡＭＣＡＦＰＩＫＹＶＮＤＦＦＮＫＩＶＮＫＮＮＶＲＣＬＱＨＦＹＧＰＮＨＥＨＣＦＮＲＴＬＬＲＮＳＳＧＣＥＡＲＲＤＥＹＲＴＥＦＴＴＡＬＱＲＶＤＬＦＭＧＱＦＳＥＶＬＬＴＳＩＳＴＦＩＫＧＤＬＴＩＡＮＬＧＴＳＥＧＲＦＭＱＶＶＶＳＲＳＧＰＳＴＰＨＶＮＦＬＬＤＳＨＰＶＳＰＥＶＩＶＥＨＴＬＮＱＮＧＹＴＬＶＩＴＧＫＫＩＴＫＩＰＬＮＧＬＧＣＲＨＦＱＳＣＳＱＣＬＳＡＰＰＦＶＱＣＧＷＣＨＤＫＣＶＲＳＥＥＣＬＳＧＴＷＴＱＱＩＣＬＰＡＩＹＫＶＦＰＮＳＡＰＬＥＧＧＴＲＬＴＩＣＧＷＤＦＧＦＲＲＮＮＫＦＤＬＫＫＴＲＶＬＬＧＮＥＳＣＴＬＴＬＳＥＳＴＭＮＴＬＫＣＴＶＧＰＡＭＮＫＨＦＮＭＳＩＩＩＳＮＧＨＧＴＴＱＹＳＴＦＳＹＶＤＰＶＩＴＳＩＳＰＫＹＧＰＭＡＧＧＴＬＬＴＬＴＧＮＹＬＮＳＧＮＳＲＨＩＳＩＧＧＫＴＣＴＬＫＳＶＳＮＳＩＬＥＣＹＴＰＡＱＴＩＳＴＥＦＡＶＫＬＫＩＤＬＡＮＲＥＴＳＩＦＳＹＲＥＤＰＩＶＹＥＩＨＰＴＫＳＦＩＳＧＧＳＴＩＴＧＶＧＫＮＬＮＳＶＳＶＰＲＭＶＩＮＶＨＥＡＧＲＮＦＴＶＡＣＱＨＲＳＮＳＥＩＩＣＣＴＴＰＳＬＱＱＬＮＬＱＬＰＬＫＴＫＡＦＦＭＬＤＧＩＬＳＫＹＦＤＬＩＹＶＨＮＰＶＦＫＰＦＥＫＰＶＭＩＳＭＧＮＥＮＶＬＥＩＫＧＮＤＩＤＰＥＡＶＫＧＥＶＬＫＶＧＮＫＳＣＥＮＩＨＬＨＳＥＡＶＬＣＴＶＰＮＤＬＬＫＬＮＳＥＬＮＩＥＷＫＱＡＩＳＳＴＶＬＧＫＶＩＶＱＰＤＱＮＦＴ：ヒトｃＭＥＴのＥＣＤ
－ＧＬＩＡＧＶＶＳＩＳＴＡＬＬＬＬＬＧＦＦＬＷＬ：膜貫通領域
－ＫＫＲＫＱＩＫＤＬＧＳＥＬＶＲＹＤＡＲＶＨＴＰＨＬＤＲＬＶＳＡＲＳＶＳＰＴＴＥＭＶＳＮＥＳＶＤＹＲＡＴＦＰＥＤＱＦＰＮＳＳＱＮＧＳＣＲＱＶＱＹＰＬＴＤＭＳＰＩＬＴＳＧＤＳＤＩＳＳＰＬＬＱＮＴＶＨＩＤＬＳＡＬＮＰＥＬＶＱＡＶＱＨＶＶＩＧＰＳＳＬＩＶＨＦＮＥＶＩＧＲＧＨＦＧＣＶＹＨＧＴＬＬＤＮＤＧＫＫＩＨＣＡＶＫＳＬＮＲＩＴＤＩＧＥＶＳＱＦＬＴＥＧＩＩＭＫＤＦＳＨＰＮＶＬＳＬＬＧＩＣＬＲＳＥＧＳＰＬＶＶＬＰＹＭＫＨＧＤＬＲＮＦＩＲＮＥＴＨＮＰＴＶＫＤＬＩＧＦＧＬＱＶＡＫＧＭＫＹＡＳＫＫＦＶＨＲＤＬＡＡＲＮＣＭＬＤＥＫＦＴＶＫＶＡＤＦＧＬＡＲＤＭＹＤＫＥＹＹＳＶＨＮＫＴＧＡＫＬＰＶＫＷＭＡＬＥＳＬＱＴＱＫＦＴＴＫＳＤＶＷＳＦＧＶＬＬＷＥＬＭＴＲＧＡＰＰＹＰＤＶＮＴＦＤＩＴＶＹＬＬＱＧＲＲＬＬＱＰＥＹＣＰＤＰＬＹＥＶＭＬＫＣＷＨＰＫＡＥＭＲＰＳＦＳＥＬＶＳＲＩＳＡＩＦＳＴＦＩＧＥＨＹＶＨＶＮＡＴＹＶＮＶＫＣＶＡＰＹＰＳＬＬＳＳＥＤＮＡＤＤＥＶＤＴＲＰＡＳＦＷＥＴＳ：細胞内領域

【0348】

参照抗体
抗ｃＭＥＴ抗体は、当技術分野で既知である（表１）。単一特異性二価ｃＭＥＴ抗体を、公表されている情報に従って構築し、２９３Ｆ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞において発現させた。表１は、関連する開示情報を示す。ｃＭＥＴに向けられた単一特異性二価抗体を、公表されている情報に従って構築し、２９３Ｆ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞において発現させた。ＨＧＦリガンド遮断アッセイについて、患者由来（ｐａｔｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ）の抗ｃＭＥＴ抗体のＶＨ及びＶＬコード遺伝子セグメントを糸状バクテリオファージ上に表示するためのファージディスプレイベクターにおいて再クローニングした。

【0349】

参照抗体セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）をＥＧＦＲ Ｆａｂパネルの参照抗体として使用した。

【0350】

２９９４ Ｆａｂタンパク質をパパイン消化によって精製されたＰＧ２９９４ ＩｇＧから生成した。したがって、ＰＧ２９９４を、ビーズ上でカップリングしたパパインとインキュベートし（Ｐｅｉｒｃｅ＃４４９８５）、回転させながら３７℃で５．５時間消化させた。Ｆａｂ断片を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ ＬＸ上での濾過によって、消化混合物から精製した。Ｆａｂタンパク質を含有する画分をフロースルーし、ｖｉｖａｓｐｉｎ２０ １０ｋＤａを使用して３ｍｌに濃縮し、ＰＢＳ中のｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ １６／６００カラムを使用してゲル濾過によって更に精製する。

【0351】

実施例２
二価モノクローナル抗体の生成及び抗体の特性評価
ＶＨ遺伝子配列及びそのいくつかの配列バリアントによって判断されるように、独自の抗体のＶＨ遺伝子を骨格ＩｇＧ１ベクターにおいてクローニングした。懸濁に適応した２９３Ｆフリースタイル細胞を、３．０×１０^６細胞／ｍｌの密度になるまで、シェーカープラトーにおいてＴ１２５フラスコ内で培養した。細胞を、０．３～０．５×１０^６生細胞／ｍｌの密度で、２４ディープウェルプレートの各ウェル内に播種した。細胞を、個々の無菌ＤＮＡ：ＰＥｌ混合物で一過性にトランスフェクトし、更に培養した。トランスフェクションから７日後に、上清を回収し、０．２２μＭ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）に通して濾過し、バッチ精製、続いてＰＢＳへの緩衝液交換を使用してプロテインＡビーズ上で精製した。

【0352】

相互遮断アッセイｃＭＥＴ抗体
ｃＭＥＴ特異性ファージをＥＬＩＳＡにおけるｃＭＥＴ参照抗体との競合について試験した。したがって、２．５μｇ／ｍｌのｃＭＥＴ－Ｆｃ融合タンパク質を４℃でＭＡＸＩＳＯＲＰＴＭ ＥＬＩＳＡプレートに一晩かけてコーティングした。ＥＬＩＳＡプレートのウェルを、振とう（７００ｒｐｍ）しながら、室温で１時間、２％のＥＬＫを含有するＰＢＳ（ｐＨ７．２）で遮断した。次の対照又は陰性対照ＩｇＧを、５μｇ／ｍｌの濃度で添加し、室温で１５分間、７００ｒｐｍで結合させた。次に、５μｌのＰＥＧ沈殿ファージを、添加し、室温で１時間、７００ｒｐｍで結合させた。結合したファージを、ＨＲＰ標識抗Ｍ１３抗体を用いて、室温で１時間、７００ｒｐｍで検出した。対照として、この手順を、コーティングされた抗原に特異的な抗体、及び陰性対照ファージと同時に実施した。結合した二次抗体をＴＭＢ／Ｈ_２Ｏ_２染色によって視覚化し、染色をＯＤ_{４５０ｎｍ}測定によって定量化した。表２は、ＭＦ４０４０及びＭＦ４３５６が５Ｄ５参照抗体との競合を示すことを実証している。ＭＦ４２９７は、１３．３．２及びＣ８Ｈ２４１とより低い程度で競合する。陽性対照ファージは全て、対応するＩｇＧとの完全な競合を示すが、非抗体対照は、競合アッセイに影響を与えない。

【0353】

二重特異性抗体の生成
二重特異性抗体は、効率的なヘテロ二量体化及び二重特異性抗体の形成を確実にする独自のＣＨ３工学技術を使用して、異なるＶＨドメインを有するＩｇＧをコードする２つのプラスミドの一過性コトランスフェクションによって生成された。共通軽鎖はまた、同じプラスミド上又は別のプラスミド上のいずれかで同じ細胞内でコトランスフェクションされる。我々の同時係属中の出願（例えば、ＷＯ２０１３／１５７９５４及びＷＯ２０１３／１５７９５３、参照により本明細書に組み込まれる）では、単一細胞から二重特異性抗体を産生するための方法及び手段が開示されており、それにより、単一特異性抗体の形成よりも二重特異性抗体の形成を有利にする手段が提供される。これらの方法も、本開示で有利に用いることができる。具体的には、本質的に二重特異性全長ＩｇＧ分子のみを産生する好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおける３５１位及び３６６位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付けによる番号付け）（「ＫＫバリアント」重鎖）、並びに第２のＣＨ３ドメインにおける３５１位及び３６８位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｄ及び１０Ｌ３６８Ｅ（「ＤＥバリアント」重鎖）、又はその逆である。負電荷を帯びたＤＥバリアント重鎖及び正電荷を帯びたＫＫバリアント重鎖が優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成することが、我々の同時係属中の出願で以前に実証された。ＤＥバリアント重鎖（ＤＥ－ＤＥホモ二量体）又はＫＫバリアント重鎖（ＫＫ－ＫＫホモ二量体）のホモ二量体化は、同一重鎖間のＣＨ３－ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発に起因して不利である。

【0354】

表３は、どのｃＭＥＴ及びＥＧＦＲ Ｆａｂアームを適切なＫＫ及びＤＥベクターにおいてクローニングしたかを示す。産生後、二重特異性ＩｇＧをタンパク質－Ａバッチ精製によって精製し、緩衝液をＰＢＳに交換した。産生が上手くいくことによって、０．１ｍｇ／ｍｌの最小濃度でＩｇＧ１全長抗体がもたらされ、これに、２つの異なる標的結合Ｆａｂ断片の特異的な組み合わせを同定するための独自のコード（ＰＢｎｎｎｎｎ、ここで、ｎｎｎｎｎは、ランダムに生成された数を表す）を割り当てた。上手く産生された二重特異性ＩｇＧをＥＬＩＳＡにおけるそれらの各々の標的への結合について試験した。本明細書では、二重特異性抗体の産生の更なる詳細については、ＰＣＴＮＬ／２０１８／０５０５３７（ＷＯ２０１９／０３１９６５として公開されている）を参照されたい。

【0355】

実施例３
ＥＧＦ／ＨＧＦ並びにＨＧＦ及びＥＧＦ増殖アッセイにおけるｃ－ＭＥＴ×ＥＧＦＲ二重特異性抗体のスクリーニング
ｃＭＥＴ×ＥＧＦＲ二重特異性抗体のパネルの効力を、ＨＧＦ／ＥＧＦ、ＨＧＦ及びＥＧＦアッセイを使用してＮ８７細胞において試験した。Ｎ８７細胞株（正式名称ＮＣＩ－Ｎ８７）は、転移部位に由来する胃がん細胞株であり、高いＥＧＦＲ発現レベル及び中間のｃＭＥＴ発現レベルを有する（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１０）。抗体を１０μｇ／ｍｌ～３．１６ｎｇ／ｍｌの範囲の８段階の半対数滴定において試験した。各抗体を二重で試験した。抗ＲＳＶ－Ｇ抗体ＰＧ２７０８を陰性対照として使用した。参照抗体２９９４ ＦａｂをＨＧＦアッセイの陽性対照として使用し、参照抗体セツキシマブをＥＧＦアッセイの陽性対照として使用した。

【0356】

ＥＧＦ、ＨＧＦ及びＥＧＦ／ＨＧＦアッセイの陽性対照として、等モルの１：１セツキシマブ／５Ｄ５ Ｆａｂを使用した。

【0357】

１つのリガンド又はその組み合わせのいずれかを有するウェル、及び培地対照を含めて、アッセイ窓を決定した。抗体を化学的に定義された飢餓培地（ＣＤＳ：１ｍｌ当たり８０Ｕのペニシリン及び８０μｇのストレプトマイシン、０．０５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ及び１０μｇ／ｍｌのホロトランスフェリンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地）において希釈し、５０μｌの希釈抗体を９６ウェル黒色ウェルクリアボトムプレート（Ｃｏｓｔａｒ）のウェルに添加した。リガンドを添加した（４００ｎｇ／ｍｌのＨＧＦと４ｎｇ／ｍｌのＨＧＦとを含有するウェル１つ当たり５０μｌのストック溶液、並びにＣＤＳ中で希釈した４ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ／４００ｎｇ／ｍｌのＨＧＦのＥＧＦ／ＨＧＦ濃度：Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号３９６－ＨＢ及び２３６－ＥＧ）。Ｎ８７細胞を、トリプシン化し、回収し、カウントし、１００μｌのＣＤ中の８０００個の細胞をプレートの各ウェルに添加した。エッジ効果を回避するために、プレートを室温で１時間放置し、それから、３７℃の細胞培養インキュベータ内の容器に３日間入れた。４日目に、Ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＤＡＬ１１００）を添加し（ウェル１つ当たり２０μｌ）、Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ２マルチモードマイクロプレートリーダー上で５６０ｎｍの励起及び５９０ｎｍの読み出しを使用して、Ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅで６時間のインキュベーション（３７℃）後に蛍光を測定した。蛍光値を、阻害されていない成長に正規化した（抗体はなかったが、両方のリガンドを添加した）。

【0358】

表４は、様々な実験の結果を列挙する。Ｎ８７ ＨＧＦ／ＥＧＦアッセイでは、参照単一特異性抗体（セツキシマブと５Ｄ５ Ｆａｂとの等モル混合物）と同等の効力を有する１４種の異なるｃＭＥＴｘＥＧＦＲ二重特異性が同定された：ＰＢ７６７９、ＰＢ７６８６、ＰＢ８２１８、ＰＢ８２４４、ＰＢ８２９２、ＰＢ８３１６、ＰＢ８３４０、ＰＢ８３６４、ＰＢ８３８８、ＰＢ８５１１、ＰＢ８５３５、ＰＢ８５８３、ＰＢ８６０７及びＰＢ８６４０。

【0359】

Ｎ８７ ＥＧＦアッセイにおいて、単一特異性セツキシマブと同等の効力を有する１１種の異なるｃＭＥＴｘＥＧＦＲ二重特異性が同定された：ＰＢ７６７９、ＰＢ８２４４、ＰＢ８２９２、ＰＢ８３４０、ＰＢ８３６４、ＰＢ８３８８、ＰＢ８５１１、ＰＢ８５３５、ＰＢ８５８３、ＰＢ８６０７及びＰＢ８６４０。これらは全て、ＥＧＦＲ ＦａｂアームＭＦ３７５５を含有する。ＨＧＦ Ｎ８７アッセイでは、単一特異性５Ｄ５ Ｆａｂ参照抗体と比較してより高い効力を示した９種の二重特異性が同定された。ＰＢ８２１８、ＰＢ８３８８、ＰＢ８５１１、ＰＢ８５３２、ＰＢ８５３５、ＰＢ８５４５、ＰＢ８５８３、ＰＢ８６３９及びＰＢ８６４０。これらは、６種の異なるｃＭＥＴ ＦａｂアームＭＦ４０４０、ＭＦ４２９７、ＭＦ４３０１、ＭＦ４３５６、ＭＦ４４９１及びＭＦ４５０６を含有する。

【0360】

ＡＤＣＣ活性
２４種のｃＭｅｔｘＥＧＦＲ二重特異性のＡＤＣＣ活性を腫瘍細胞株Ｎ８７（ＥＧＦＲ－高、ｃＭＥＴ－低）及びＭＫＮ－４５（ＥＧＦＲ－低、ｃＭＥＴ－増幅）に対して試験した。ＡＤＣＣアッセイを、３８４ウェルプレートフォーマットのＰｒｏｍｅｇａ ＡＤＣＣバイオアッセイキットを使用して実施した。抗体を、１０μｇ／ｍｌ～１ｎｇ／ｍｌの範囲の半対数連続希釈において、９種の異なる濃度で、二重で試験した。

【0361】

参照セツキシマブ抗体をアッセイの陽性対照として含め、ＰＧ２７０８を陰性対照抗体として使用した。抗体又はアッセイ培地対照（ＩｇＧなし）を、ＡＤＣＣエフェクター細胞、及び標的細胞（Ｎ８７又はＭＫＮ－４５）と一緒に、３７℃で６時間の誘導にわたってインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を使用して定量化した。

【0362】

ＡＤＣＣアッセイの例は、ＷＯ２０１９／０３１９６５の図１５に示される。ｃＭＥＴｘＥＧＦＲ二重特異性のいずれも、両方の細胞株において有意なＡＤＣＣ活性を示さなかった。陽性対照参照セツキシマブ抗体は、両方の細胞株に対して用量依存性ＡＤＣＣ活性を示した。

【0363】

更なる分析のために、Ｎ８７ ＨＧＦ／ＥＧＦアッセイにおいて高い有効性を示し、かつ高い配列多様性を示したＥＧＦＲ及びｃＭｅｔアームからなる５種の二重特異性を選択した（表５）。５種の二重特異性のうちの２種は、ｃＭＥＴへの結合について５Ｄ５と競合するＭＦ４３５６を含有する（表２）。表５は、選択された候補の特性を要約している。

【0364】

実施例４
図２は、本明細書に開示されているようなＥＧＦＲ結合可変ドメインの重鎖の代替的な可変領域の様々な配列を示す。図３は、本明細書に開示されているようなｃＭＥＴ結合可変ドメインの重鎖の代替的な可変領域の様々な配列を示す。重鎖可変領域を使用して、多数の異なるｃＭＥＴ×ＥＧＦＲ二重特異性抗体を作成した。これらの抗体における軽鎖は、図４Ｂに示されるような配列を有する。二重特異性抗体を実施例１に記載されているように産生した。抗体はまた、ＡＤＣＣ増強型として産生された。抗体構築物の同時トランスフェクションに、ＩｇＧ１のＦｃ領域からフコース残基を除去するレダクターゼ酵素をコードするＤＮＡを含めることによって、ＡＤＣＣ増強型を産生した。使用される二重特異性抗体及びそれらのＰＢコードのリストについては、表６を参照されたい。

【0365】

実施例５
ＰＢ８５３２のｃＭＥＴ可変ドメインの重鎖可変領域（ＶＨ）は、例えば、図３に示されるように、ＭＦ４３５６のアミノ酸を含む。ＰＢ１９７４８のｃＭＥＴ可変ドメインのＶＨは、ＭＦ８２３０のアミノ酸配列を含む（図３を参照）。ＰＢ８５３２のＥＧＦＲ可変ドメインのＶＨは、例えば、図２に示されるように、ＭＦ３３７０のアミノ酸を含む。ＰＢ１９７４８のＥＧＦＲ可変ドメインのＶＨは、図２のＭＦ８２３３のアミノ酸配列を含む。ＰＢ８５３２及びＰＢ１９７４８における軽鎖は、同じであり、図４Ｂに示される。ｃＭＥＴ抗体ＬＹ２８７５３５８抗体は、なかでも、Ｋｉｍ及びＫｉｍ ２０１７に記載されている。

【0366】

実施例６
ＥＧＦＲエクソン２０挿入ＮＳＣＬＣモデルにおける二重特異性抗体ＰＢ１９４７８及びオシメルチニブの効率
この研究の目的は、ＥＧＦＲエクソン２０挿入を有する患者由来腫瘍異種移植片（ＰＤＸ）非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）モデルにおける抗体ＰＢ１９４７８の単独及びオシメルチニブとの組み合わせでの抗腫瘍有効性を評価することであった。ＥＧＦＲエクソン２０挿入（「ＥＧＦＲｅｘ２０ｉｎｓ」）は、ＥＧＦＲの構成的活性化をもたらす、７６２位と７７４位との間でクラスター化されたアミノ酸挿入を有する変異体をコードするクラスを表す。ＥＧＦＲエクソン２０挿入は、そのような変異を抱えるがんを有するヒト対象において、承認されたＥＧＦＲ ＴＫＩに耐性を付与し、予後不良と関連している。

【0367】

材料：
ＰＢ１９７４８は、Ｍｅｒｕｓによって生成され、対照材料は、ＰＢ１９７４８ビヒクルであり、抗体なしの１２％のＰＢ１９７４８製剤緩衝液からなるが、生理食塩水又はＰＢＳなどの他の陰性対照も使用され得る。

【0368】

ＰＤＸモデル特性：
モデルＬＸＦＥ２４７８は、機能的なＦｃエフェクター細胞を有するヌードマウスにおいてＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒで生成された。

【0369】

このモデルは、変異ＥＧＦＲｅｘ２０ｉｎｓ（Ｍ７６６＿Ａ７６７ｉｎｓＡＳＶ）を有する。これはまた、ｃ－ＭＥＴのリガンド結合部位に位置するｃ－ＭＥＴのＳＥＭＡドメインにおいて点変異（Ｅ１６８Ｄ）を有する。

【0370】

このモデルにおけるエクソン２０中での９つのヌクレオチドの挿入は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼドメイン（Ｍ７６６Ｘ）に影響を与え、小分子ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性を付与する。このモデルは、Ｂ－ＲＡＦ、Ｈ－／Ｎ－及びＫＲＡＳ及びＰＴＥＮ遺伝子に変異を有しない（患者腫瘍及び腫瘍異種移植片の両方について全エクソーム配列決定を行い、一致する結果が得られた）。

【0371】

ＬＸＦＥ２４７８ＰＤＸモデルにおけるＥＧＦＲ、ｃ－ＭＥＴ及びＨＧＦの発現
モデルＬＸＦＥ２４７８を、インビボ研究のためのその適合性を調べるために、ＥＧＦＲ及びｃ－ＭＥＴ受容体並びにリガンドｈｕＨＧＦの発現について分析した。

【0372】

２つの腫瘍片をＥＧＦＲ及びｃ－ＭＥＴ受容体の発現について評価し、ウェスタンブロットを介してリガンドｈｕＨＧＦの発現を評価した。ｈｕＨＧＦを分析に含めた。ＰＤＸモデルから得られた腫瘍試料を簡易ウェスタンサイズテクノロジー（ＳＷＳ）によって評価して、ＥＧＦＲ、ＨＧＦ及びｃ－ＭＥＴの発現を確認した。

【0373】

ウエスタンブロッティングによって、ＬＸＦＥ２４７８モデルがＥＧＦＲ、ＨＧＦ及びＭＥＴをタンパク質レベルで発現したことが明らかになった（表７）。

【0374】

統計的方法：
全ての群の抗腫瘍有効性を、対照ビヒクル／プラセボ緩衝液群を参照として使用して評価した。腫瘍成長阻害は、試験群のＲＴＶと対照群との比較によって決定され、最小Ｔ／Ｃ値としてパーセントで表される。抗腫瘍有効性の統計的有意性の評価のために非パラメトリックＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ試験、続いて、多重比較のためのＤｕｎｎ法を実施した。試験群及び対照群の個々のＲＴＶを、試験群で最小Ｔ／Ｃ値が達成された日に比較した。統計分析は、最初に無作為化された動物の少なくとも５０％が依然として関連群に残っている場合にのみ行った。試験群間の比較を同じ日に行った。０．０５未満の全てのｐ値は、統計的に有意であると考慮された。統計的計算を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ生体分析ソフトウェア（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｗｉｎｄｏｗｓ用のバージョン９．１０，ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を使用して実施した。

【0375】

治療スケジュール及び方法：
抗体とオシメルチニブとの組み合わせの抗腫瘍有効性をＬＸＦＥ２４７８ ＮＳＣＬＣ ＰＤＸ腫瘍モデルにおいて評価した。図６は、治療スケジュールの図式的概要を示す。

【0376】

腫瘍を、ドナーＰＤＸマウスから採取し、断片（ＬＸＦＥ２４７８：３～４ｍｍのエッジ長）に切断し、側腹部のレシピエントヌードマウス（ＳＣ）に接種した。腫瘍インプラントが十分な数の動物において約８０～２００ｍｍ３に達したとき、マウスを群に割り当てた。無作為化を「層別分布」法に基づいて実施した。処理は、無作為化と同じ日（０日目）に開始した。

【0377】

マウスを、抗体、オシメルチニブ、又は２つの化合物の組み合わせで４週間治療し、最大１００日間の無用量観察期間が続いた。治療は、登録と同じ日（０日目）に開始した。マウスは、腫瘍体積が１０００ｍｍ３超である場合、観察期間中に終了させた。

【0378】

抗体を、５ｍｇ／ｋｇ及び２５ｍｇ／ｋｇの用量で、５週間にわたって、週１回腹腔内（ＩＰ）投与した。オシメルチニブは、５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇで、３０日間にわたって、経口ゲージ（ＰＯ）当たり毎日（ＱＤ）投与した。群１のマウスを、５週間にわたって週１回、ビヒクル１（抗体緩衝液）で、又は３０日間にわたって毎日、ビヒクル２（オシメルチニブ緩衝液）で治療した。治療計画は、表８に示される。

【0379】

無作為化後に、動物を罹患率及び死亡率についてルーチン的に監視し、これらを週２回加重し、腫瘍体積（ＴＶ）をキャリパーで週２回決定した。相対体重（ＲＢＷ）は、ある特定の日の絶対体重又は体積を０日目の絶対体重で割って１００を掛けることによって計算した。相対腫瘍体積（ＲＴＶ）は、ある特定の日の個々の絶対腫瘍体積を０日目の絶対腫瘍体積で割って１００を掛けることによって計算した。

【0380】

１０％超の体重を減少したマウスについては、体重を毎日測定し、動物が飼料及び水の利用、並びにＤｉｅｔＧｅｌの利用が容易であるようにした。１５％超の体重を減少したマウスについては、これらが９０％以上のＲＢＷを回復するまで、療法を中断した。

【0381】

無用量観察期間を含めて、奏効の持続時間及び治療終了後の再発（腫瘍再成長）を比較した。更に、低用量の抗体を含めて、腫瘍成長阻害比較のための窓を作成した。

【0382】

オシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇでの治療（群２及び６）で観察された有意な体重減少（１０％超）を理由に、これらの２つの群には、１１～１４日目の間に治療化合物を投与しなかった。体重は、この無用量期間中に回復した。これらの群では、体重減少（１０％超）が２８日目に再び観察され、その後、２８日目にオシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇの投薬を停止することが決定された。２５ｍｇ／ｋｇのオシメルチニブと二重特異性抗体ＰＢ１９４７８との組み合わせは、２５ｍｇ／ｋｇのオシメルチニブ治療で観察された有害効果を増加させなかった。

【0383】

この実験の動物生存曲線が図７に示される。併用対各対応する単剤療法群のログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）試験は、以下のように有意である：
・オシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇ対抗体＋オシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇ Ｐ＝０．０１０２
・抗体２５ｍｇ／ｋｇ対抗体＋オシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇ Ｐ＝０．０３４４
・オシメルチニブ５ｍｇ／ｋｇ対抗体＋オシメルチニブ５ｍｇ／ｋｇ Ｐ＝０．０００６
・抗体５ｍｇ／ｋｇ対抗体＋オシメルチニブ５ｍｇ／ｋｇ Ｐ＝０．０１６２

【0384】

２８日目の個々の腫瘍体積が図８に示される。統計分析を、Ｔｕｋｅｙのポスト試験（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ）を伴う混合モデルを使用して行った。全ての２５ｍｇ／ｋｇ群は、腫瘍の停滞又は退行を誘発したため、併用群及び対応する単剤療法群の比較は、５ｍｇ／ｋｇ群のみで有意であった。全ての群は、２８日目にビヒクル群と有意に異なっていた。

【0385】

図９は、２８日目に治療停止が示された完全な観察期間中のＮＳＣＬＣ ＰＤＸモデルにおける腫瘍体積に対する二重特異性抗体ＰＢ１９４７８及びオシメルチニブの単剤療法及び併用療法の効果を示す。

【0386】

単剤療法の場合、二重特異性抗体ＰＢ１９４７８及びオシメルチニブの用量依存性抗腫瘍有効性が観察された。５ｍｇ／ｋｇで、モデルは、オシメルチニブ治療に対する感受性の低下を示す。更に、抗体とオシメルチニブとの組み合わせは、両方の対応する単剤療法群と比較して、腫瘍増殖阻害を増強した。

【0387】

治療停止後（２８日目）に、抗体及びオシメルチニブの併用療法は、抗体又はオシメルチニブ単独と比較して、無増悪生存期間（腫瘍サイズ＜７５０ｍｍ３として定義される）を有意に延長した。ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）試験は、対応する単剤療法群と比較して、各併用群についてＰ＜０．０５を示した。治療後１１週目に、２５ｍｇ／ｋｇ併用群の９匹のマウスのうちの１匹（１１％）のみが異種移植片の進行を示したが、２５ｍｇ／ｋｇの抗体及び２５ｍｇ／ｋｇのオシメルチニブアームにおける５／９及び６／９異種移植片は、７５０ｍｍ３に進行した（図９）。

【0388】

要約すると、これらの結果は、ＥＧＦＲエクソン２０挿入変異（Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ）を保有するＮＳＣＬＣ ＰＤＸモデルに対する抗体の前臨床抗腫瘍活性を示す。抗体とオシメルチニブとの組み合わせは、このモデルにおいて、腫瘍成長阻害を増強し、無増悪生存期間を延長する。

【0389】

実施例７
ＥＧＦＲエクソン１９欠失ＮＳＣＬＣモデルにおける二重特異性抗体ＰＢ１９４７８及びオシメルチニブの効率この研究の目的は、ＥＧＦＲエクソン１９欠失を有する細胞株由来腫瘍異種移植片（ＣＤＸ）非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）モデルにおける抗体ＰＢ１９４７８の単独及びオシメルチニブとの組み合わせでの抗腫瘍有効性を評価することであった。この腺がん細胞株、ＨＣＣ８２７－ＥＲ１は、エクソン１９に活性化ＥＧＦＲ変異（欠失Ｅ７４６～Ａ７５０）を保有し、エルロチニブなどの承認されたＥＧＦＲ ＴＫＩに耐性がある。

【0390】

材料：
ＰＢ１９７４８は、実施例５で言及されているように、Ｍｅｒｕｓによって生成された。

【0391】

ＣＤＸモデルの特性：
モデルＨＣＣ８２７－ＥＲ１をＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおいて生成した。これは、エクソン１９にＥＧＦＲ変異（欠失Ｅ７４６～Ａ７５０）を有し、野生型ＨＣＣ８２７細胞株と比較して、増幅したｃ－ＭＥＴコピー数及びＡｘｌ発現を有する。ＨＣＣ８２７－ＥＲ１細胞株は、ＥＧＦＲ ＴＫＩエルロチニブに耐性があり、エルロチニブの濃度の上昇に対する野生型細胞株の繰り返しのインビトロ曝露を介して生成された。

【0392】

実験的手順：
各マウスに、腫瘍発症のためにＭａｔｒｉｇｅｌと混合したＨＣＣ８２７－ＥＲ１腫瘍細胞を右前側腹部領域に接種した。無作為化は、平均腫瘍サイズが約１２５（７５～１７５）ｍｍ^３に達したときに開始した。合計３２匹の腫瘍を有するマウスを、腫瘍有効性研究に登録し、表９に示されるように、１つの群当たり８匹のマウスを用いて、４つの異なる群に無作為に割り当てた。無作為化の日付を０日目として示し、投薬を０日目から開始した。マウスを、抗体、オシメルチニブ、又は２つの化合物の組み合わせで３週間治療し、最大７４日間の無用量観察期間が続いた。無用量観察期間を含めて、奏効の持続時間及び治療終了後の再発（腫瘍再成長）を比較した。１５００ｍｍ^３を超える腫瘍体積を有する又は治療の初日の体重に対して２０％超の体重減少を有するマウスは、治療期間中に終了させた。抗体を、２１日の期間にわたって２５ｍｇ／ｋｇの用量で、合計７回の用量で、週２回腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。オシメルチニブは、合計２２回の用量によって、２５ｍｇ／ｋｇで、２１日間にわたって、経口ゲージ（ｐ．ｏ．）当たり毎日（ＱＤ）投与した。群１の８匹のマウスをビヒクル対照（プラセボ緩衝液）で治療した。治療スケジュールの図式的概要は、図１０に示される。腫瘍体積（ｍｍ^３）を、キャリパーを使用して二次元で１週間に２回測定した。動物を、可動性、食物及び水消費、体重増加／減少、目／毛のマット及び他の異常などの行動に対する腫瘍成長及び処置のいずれかの影響についてチェックした。体重を、無作為化後に、１週間に２回測定した。これらのマウスのいずれも１５％超の体重を減少せず、治療群のいずれにおいても治療剤の投与を中断しなかった。

【0393】

図１１は、２１日目に治療停止が示された完全な観察期間中のＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルにおける腫瘍体積に対する二重特異性抗体ＰＢ１９４７８及びオシメルチニブの単剤療法及び併用療法の効果を示す。抗体又はオシメルチニブでの単剤療法は、ビヒクル対照群と比較して、腫瘍の退行を示した。しかしながら、抗体とオシメルチニブとの併用療法は、その他の治療群と比較して、強い相乗効果及び完全な腫瘍退行を示した。全ての治療は、忍容性が良好であった。研究におけるマウスは、開始体重から１０％超の体重減少を示さなかった。群１、２及び３におけるいくつかのマウスにおける腫瘍かさぶた化又は腫瘍潰瘍化を除いて、有害事象は観察されなかった。群４について、有害事象は報告されなかった。軽度の体重減少（５～１０％の間）は、群４の１匹のマウスにおいてのみ観察された。

【0394】

動物生存曲線が図１２に示される。併用対各対応する単剤療法群のログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）試験は、以下のように有意である：
・抗体２５ｍｇ／ｋｇ＋オシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇ対抗体２５ｍｇ／ｋｇ Ｐ＝０．０００９
・抗体２５ｍｇ／ｋｇ＋オシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇ対オシメルチニブ２５ｍｇ／ｋｇ Ｐ＜０．０００１

【0395】

要約すると、これらの結果は、エクソン１９（欠失Ｅ７４６～Ａ７５０）に変異を保有するＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルに対する調査中の抗体の前臨床抗腫瘍活性を示す。抗体とオシメルチニブとの組み合わせは、このモデルにおいて、腫瘍成長阻害を増強し、無増悪生存期間を延長する。

【0396】

実施例８
用量漸増フェーズでは、二重特異性抗体ＰＢ１９４７８は、活性化ＥＧＦＲ変異（ＴＫＩ感作変異及び／又は承認されたＴＫＩ耐性変異）若しくは活性化ｃ－ＭＥＴ変異（エクソン１４スキッピング）／増幅（ＭＥＴ／ＣＥＰ７＞５又はｃｆＤＮＡ≧２コピー）を保有するＮＳＣＬＣの患者、又は進行性／転移性疾患のための事前療法を受けた後に全ての場合で進行したｃ－ＭＥＴ増幅（ＭＥＴ／ＣＥＰ７＞５又はｃｆＤＮＡ≧２コピー）の患者に、用量を増加させて投与される。

【0397】

前臨床ＰＫモデルのアロメトリックスケーリングを使用して、ヒトにおける抗体曝露を予測した。抗体の開始用量は、４週間のサイクル（２８日）で、２週間ごとに１回（ｑ２ｗ）、１００ｍｇ（フラット用量、静脈内）である。５つの用量レベルを１００～３０００ｍｇの間で調査することが計画される。

【0398】

患者のコホートは、ＭＴＤに達するか、又はより低い推奨用量が確立されるまで、抗体で処理される。

【0399】

ＲＰ２Ｄ（推奨される第２相投薬）は、ＰＫ、薬力学的活性、及び予備的抗腫瘍活性についての利用可能なデータを考慮して、ＭＴＤ以下の用量として定義される。

【0400】

用量拡大
８０ｍｇの経口１日用量で与えられるオシメルチニブと組み合わされた１５００ｍｇのＲＰ２Ｄを使用して、第２相部分における計画された拡張コホートを開始することができる。ＲＰ２Ｄの安全性は、少なくとも２サイクルにわたって、抗体単独で処置された最初の１２人の患者における用量拡大中に確認される（募集はその間継続する）。抗体の抗腫瘍活性（単独又はオシメルチニブとの組み合わせ）をＯＲＲの観点から評価し、他の有効性パラメータ、安全性、忍容性、ＰＫ、免疫原性及びバイオマーカーの評価を実施する。

【0401】

以下の局所進行性切除不能／転移性固形腫瘍のコホートを開くことができる：
拡張コホート１：ＮＳＣＬＣの一次選択治療としてのＰＢ１９４７８＋オシメルチニブ
拡張コホート２：オシメルチニブ耐性集団におけるＮＳＣＬＣの二次選択治療としてのＰＢ１９４７８＋オシメルチニブ

【0402】

オシメルチニブは、１日１回、８０ｍｇの用量で投与される。投与は、食物と一緒でも、又は一緒でなくてもよい。朝（すなわち、起床後）に服用することが好ましい。抗体注入日には、用量を注入前に服用する必要がある。用量を取り忘れた場合、取り替えるべきではなく、患者は、次の計画された用量まで待つべきである。

【0403】

研究集団
選択基準
患者は、研究に参加するために以下の要件の全てを満たさなければならない：
１．いずれかの研究手順の開始前に、インフォームドコンセントに署名した。
２．インフォームドコンセントの署名時に、年齢は１８歳以上である。
３．不治の転移性又は局所進行性の未切除疾患のエビデンスを有する組織学的又は細胞学的に確認された固形腫瘍。
１．用量漸増部－以前の標準的な一次選択治療に失敗した患者。患者は、臨床的利益をもたらすことが知られている療法が進行しているか、又はこれに不耐性である必要がある。事前処置レジメンの数に制限はない。患者は、以下を有する必要がある：
・チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）感作変異（例えば、１９ｄｅｌ及びＬ８５８Ｒ）及び／若しくは承認されたＴＫＩ耐性変異（例えば、後天性ＴＫＩ耐性変異、すなわち、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｌ７９２、Ｌ７９８Ｉ、エクソン２０挿入）、又は任意の活性化ｃ－ＭＥＴ変異／増幅（例えば、高レベルｃ－ＭＥＴ増幅［ＭＥＴ／ＣＥＰ７＞５又はｃｆＤＮＡ≧２コピー］、又はｃ－ＭＥＴエクソン１４スキッピング変異）を含む活性化ＥＧＦＲ変異を保有する非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）。
・
＊注：患者の同定は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤での過去の治療歴及びＣＬＩＡ認定ラボで実施された局所試験に基づく。
２．コホート拡大部－２Ｌ以上の患者は、臨床的利益をもたらすことが知られている療法が進行しているか、又はこれに不耐性である必要がある。事前処置レジメンの数に制限はない。
患者は、以下を有する必要がある：
コホート１：ＥＧＦＲ感作変異（Ｄｅｌ１９、Ｌ８５８Ｒなど）を保有するか、又はＥＧＦＲ感作変異を有する進行性疾患についてＮＳＣＬＣ治療ナイーブである、ＮＳＣＬＣ一次選択治療。
コホート２：ＮＳＣＬＣオシメルチニブ耐性／化学療法ナイーブの患者、又はＮＳＣＬＣオシメルチニブ耐性、及び少なくとも安定した疾患が報告されたオシメルチニブでの治療の３ヶ月後に進行。
４．アーカイブ又は新鮮な腫瘍組織試料の可用性（漸増では好ましく、拡張では必須）。
５．放射線学的方法によるＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義されるような測定可能な疾患（測定不可能であるが評価可能な疾患を有する患者は、用量漸増部分に含まれ得る）。
６．０又は１のＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータス。
７．治験責任医師によると、平均余命は１２週間以上である
８．治験責任医師の判断に従った適切な臓器機能
・絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ
・ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ
・血小板≧１００×１０９／Ｌ
・正常範囲内の補正総血清カルシウム
・正常範囲内の血清カリウム
・正常範囲内の（又はサプリメントで補正された）血清マグネシウム
・アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）≦３×正常上限（ＵＬＮ）及び総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ（Ｇｉｌｂｅｒｔ症候群の患者は、コンジュゲートビリルビン値が正常範囲内である場合に適格である）；肝臓関与の場合、ＡＬＴ／ＡＳＴ≦５×ＵＬＮ及び総ビリルビン≦２×ＵＬＮが許容される
・６５歳超の年齢の患者についてのＣｏｃｋｒｏｆｔ及びＧａｕｌｔ式又はＭＤＲＤ式に従って計算して、１．５×ＵＬＮ以下の血清クレアチニン又は５０ｍＬ／分以上のクレアチニンクリアランス。
・血清アルブミン＞３．３ｇ／ｄＬ

【0404】

除外基準
以下の基準のうちのいずれかが存在する場合には、患者は研究への参加を除外される：
１．中枢神経系転移（漸増において排他的ではなく、拡張において必須である）であって、
・未治療又は症候性であるもの（治験責任医師の判断で安定していると判断された場合、未治療の無症候性病変を有する患者が含まれ得る）
・放射線又は手術を必要とするもの
・研究登録から１４日以内に症状を制御するために、継続的なステロイド療法（１０ｍｇ超のプレドニゾン又は等価物）を必要とするもの。
２．既知の軟髄膜関与。
３．研究登録前４週間以内での任意の治験薬による別の臨床研究又は治療への参加。
４．治験薬の最初の用量の４週間又は５半減期のいずれか短い方以内の全身抗がん療法又は免疫療法。重大な遅延毒性（例えば、ミトマイシンＣ、ニトロソウレア）を有する細胞毒性剤の場合、６週間のウォッシュアウト期間が必要である。注：長い半減期を有する薬剤の場合、５回目の半減期前の登録にはスポンサーの承認が必要である。
５．治験薬の最初の投与から３週間以内の大手術又は放射線療法。任意の時点で骨髄の２５％以上に以前の放射線療法を受けた患者は、適格ではない。
６．既存の抗悪性腫瘍療法に関連する、治験責任医師の判断における、持続性グレード＞１の臨床的に顕著な毒性（脱毛症を除く）；安定した感覚性ニューロパチー≦グレード２のＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ ｖ５．０、及びホルモン置換で安定している甲状腺機能低下症≦グレード２が許容される。
７．これらの薬剤の恒久的停止を正当化した、ヒトタンパク質又は賦形剤のいずれかに起因する過敏症反応又はいずれかの毒性の病歴。
８．以下を含むがこれらに限定されない臨床的に顕著な心血管疾患の病歴：
・３つの心電図（ＥＣＧ）から得られる、延長されたＱＴ間隔＞４８０ミリ秒、又は臨床的に顕著な不整脈又は電気生理学的疾患（すなわち、植込み型除細動器の配置又は制御不能な速度での心房細動）、又はＱＴｃ延長のリスク若しくは不整脈イベント、例えば、電解質異常のリスクを増加させる任意の因子。臨床的に安定している心臓ペースメーカーを有する患者は、適格である。
・心不全、先天性長ＱＴ症候群、長ＱＴ症候群の家族歴、又は一等親族の４０歳未満の原因不明の突然死、又はＱＴ間隔を延長し、かつトルサード・ド・ポワンツを引き起こすことが知られている任意の併用薬。
・制御不能な（持続的な）動脈性高血圧：収縮期血圧＞１８０ｍｍＨｇ及び／又は拡張期血圧＞１００ｍｍＨｇ。
・Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩ－ＩＶとして定義されているうっ血性心不全（ＣＨＦ）又は治験薬の最初の投与から６ヶ月以内のＣＨＦのための入院。
９．薬剤誘導性間質性肺疾患、１年以内に長期ステロイド又は他の免疫抑制剤での治療を必要とする放射線性肺炎を含む間質性肺疾患の病歴。
１０．腫瘍が治癒又は緩和の意図をもって治療され、治験責任医師の意見では、治験依頼者の同意を得て、以前又は同時の悪性腫瘍が、治験薬の安全性及び有効性の評価に影響を及ぼさない限り、皮膚の非基底細胞がん又は子宮頸部のインサイチュがんを除く、以前又は同時の悪性腫瘍。
１１．制御されていない活動性感染症、臨床的に顕著な肺の、代謝性の若しくは精神の疾患を含むがそれらに限定されない現在の重篤な疾病又は精神障害。
１２．抗ウイルス治療を受けない活動性Ｂ型肝炎感染（ＨＢｓＡｇ陽性）。注：活動性Ｂ型肝炎（ＨｂｓＡｇ陽性）の患者は、研究治療の開始の少なくとも７日以上前に開始して、ラミブジン、テノホビル、エンテカビル又は他の抗ウイルス剤での抗ウイルス治療を受ける必要がある。Ｂ型肝炎の前例（抗ＨＢｃ陽性、ＨｂｓＡｇ及びＨＢＶ－ＤＮＡ陰性）を有する患者が適格である。
１３．Ｃ型肝炎リボ核酸（ＨＣＶ ＲＮＡ）の陽性試験；注：ＨＣＶ感染が自発的に解決した患者（検出可能なＨＣＶ－ＲＮＡなしの陽性ＨＣＶ抗体）、又は抗ウイルス治療後に持続的なウイルス学的奏効を達成し、かつ抗ウイルス治療の中止後に６ヶ月以上（ＩＦＮフリーのレジメンの使用）又は１２ヶ月以上（ＩＦＮベースのレジメンの使用）の検出可能なＨＣＶ ＲＮＡの不在を示す患者が適格である。
１４．ＨＩＶ（ＨＩＶ１／２抗体）の既往歴。検出できないウイルス量を有するＨＩＶを有する患者は、許容される。地域の保健当局又は規制によって義務付けられていない限り、ＨＩＶ試験は必要ではない。
１５．妊娠可能性のある性的に活発な男性及び女性の患者は、研究の全期間中及びＰＢ１９４７８の最終投与後６ヶ月間、以下の非常に効果的な避妊法のいずれかを使用することに同意する必要がある：
・排卵（経口、膣内、経皮）の阻害に関連する併用（エストロゲン及びプロゲストゲン含有）ホルモン避妊
・排卵の阻害に関連するプロゲストゲンのみのホルモン避妊（経口、注射、埋め込み）
・子宮内避妊器具（ＩＵＤ）
・子宮内ホルモン放出システム（ＩＵＳ）
・両側卵管閉塞
・精管切除されたパートナー
・性的禁欲
１６．妊娠中又は授乳中の女性は、この研究から除外される。

【0405】

治験療法及びレジメン
抗体は、ＲＰ２Ｄレベルとして１５００ｍｇ（フラット用量）の用量レベルで、ＩＶ注入として投与される。各患者（拡張コホートを含む）についての投与される用量、用量増加、及び投薬頻度は、患者の安全性、ＰＫ及び薬力学的データに基づいて、並びにスポンサーの推奨に基づいて変化に供される。スポンサーは、サイクル１の隔週投薬スケジュールの使用を推奨し得る。

【0406】

治療期間
研究治療は、進行性疾患（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１による）、許容できない毒性、同意の撤回、患者の非コンプライアンス、治験責任医師の決定（例えば、臨床的悪化）、又は連続した６週間超の抗体中断が確認されるまで、投与される。

【0407】

患者は、最後の抗体注入後、及び全ての関連毒性の回復又は安定化までの少なくとも３０日間の安全性、並びに最大１年にわたって３ヶ月ごとに疾患の進行及び生存状態について追跡される。

【0408】

実施例９
ＥＧＦＲ１９欠失及びＥＧＦＲ変異を有していた非小細胞肺がんを有する５４歳の女性患者に、実施例８の臨床試験プロトコルのオシメルチニブと１５００ｍｇ ｑ２ｗの二重特異性抗体ＰＢ１９４７８との組み合わせを投薬した。患者は、オシメルチニブ及び治験中の抗腫瘍薬での事前治療を受けていた。患者は、当該抗体の６回のサイクル及びオシメルチニブの６回のサイクル後に、確認された部分的奏効（ＰＲ）の形態で、臨床的に関連する効果を呈した。有害効果は、グレード１又は２以外のグレードでは観察されなかった。

【0409】

実施例１０
ＥＧＦＲ１９欠失、ＥＧＦＲ増幅及びｃＭＥＴ増幅を有していた非小細胞肺がんを有する６１歳の女性患者に、実施例８の臨床試験プロトコルのオシメルチニブ（８０ｍｇのｑ２ｗ）及び二重特異性抗体（１５００ｍｇのｑ２ｗ）ＰＢ１９４７８との組み合わせを投薬した。患者は、オシメルチニブでの事前治療を受けていた。患者は、当該抗体の３回のサイクル及びオシメルチニブの４回のサイクル後に、確認されたＰＲの形態で、臨床的に関連する効果を呈した。観察された最も重篤な有害効果は、低カリウム血症であった。更なる有害効果は、グレード１又は２以外のグレードでは観察されなかった。

【0410】

引用文献
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Ｋｉｍ，Ｋｉ－Ｈｙｕｎ ａｎｄ Ｋｉｍ，Ｈｙｏｒｉ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｂａｓｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＧＦ－ｃＭＥＴ ａｘｉｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１７），ｅ３０７；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｅｍｍ．２０１７．１７）
Ｍｏｏｒｅｓ，Ｓｈｅｒｉ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．“Ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＥＧＦＲ ａｎｄ ｃＭｅｔ ｉｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ ＥＧＦＲ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｒｓ．”Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７６．１３（２０１６）：３９４２－３９５３．
Ｏｋｅｎ ＭＭ，Ｃｒｅｅｃｈ ＲＨ，Ｔｏｒｍｅｙ ＤＣ，Ｈｏｒｔｏｎ Ｊ，Ｄａｖｉｓ ＴＥ，ＭｃＦａｄｄｅｎ ＥＴ，Ｃａｒｂｏｎｅ ＰＰ．Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｏｆ ｔｈｅ Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．１９８２ Ｄｅｃ；５（６）：６４９－６５５．ＰＭＩＤ：７１６５００９．
Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ＳＣ，Ｔｙｎａｎ Ｊ，Ｄｏｎｏｇｈｕｅ ＤＪ．ＲＴＫ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ：ｗｈｅｎ ｇｏｏｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｔｕｒｎ ｂａｄ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ ２０００；１６：３６８．
Ｙａｒｄｅｎ Ｙ．Ｔｈｅ ＥＧＦＲ ｆａｍｉｌｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｌｉｇａｎｄｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００１；３７（Ｓｕｐｐｌ ４）：Ｓ３－Ｓ８．

【表1】

【表2】

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9】

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【手続補正書】

【提出日】2024-09-10

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2025509312000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-11-20

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるがんの治療の方法における使用のための、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ３３７０又はＭＦ８２３３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第２の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ４３５６又はＭＦ８２３０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体との、組み合わせ物。

【請求項2】

がんを有する対象を治療するための医薬であって、前記医薬が、第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ３３７０又はＭＦ８２３３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第２の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ４３５６又はＭＦ８２３０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体との、組み合わせ物を含む、医薬。

【請求項3】

対象におけるがんの治療のための医薬品の製造における、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる（又はこれに結合する）第２の可変ドメインを含み、前記第１の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ３３７０又はＭＦ８２３３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第２の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ４３５６又はＭＦ８２３０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含む二重特異性抗体と第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組み合わせ物の、使用。

【請求項4】

前記がんが、ＥＧＦＲ陽性及び／又はｃＭＥＴ陽性がんである、請求項２に記載の医薬。

【請求項5】

前記がんが、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴ異常を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項6】

前記がんが、チロシンキナーゼ阻害剤での治療に耐性があり、例えば、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤に対して耐性があり、又は前記対象が、以前にＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤での治療を受けている、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項7】

ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤耐性が、第１、第２及び／又は第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤に対する耐性を含む、請求項６に記載の医薬。

【請求項8】

ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤耐性が、カプマチニブ又はテポチニブに対する耐性を含む、請求項６に記載の医薬。

【請求項9】

前記がんが、活性化ＥＧＦＲ変異、承認されたチロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、三次チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲへの第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤の結合を低減する変異、後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異、ＥＧＦＲ遺伝子増幅、ｃＭＥＴ変異又はｃＭＥＴ異常を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項10】

前記がんが、エクソン１９欠失変異、好ましくは、フレーム内エクソン１９欠失、エクソン２０ミスセンス変異、又はＬ８５８Ｒなどのエクソン２１変異を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項11】

前記がんが、ＥＧＦＲエクソン２０変異、好ましくはエクソン２０挿入変異を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項12】

前記がんが、オシメルチニブに耐性を付与する変異などの後天性チロシンキナーゼ阻害剤耐性変異を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項13】

前記がんが、ｃＭＥＴ増幅、ｃＭＥＴ過剰発現、ｃＭＥＴ経路のシグナル伝達の増加、ｃＭＥＴ遺伝子増幅、ＨＧＦ発現の増加及び／又はｃＭＥＴタンパク質活性の増加などのｃＭＥＴ異常を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項14】

前記がんが、ｃＭＥＴエクソン１４スキッピング変異を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項15】

前記第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼが、オシメルチニブを含むか、又はこれである、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項16】

前記ｃＭＥＴチロシンキナーゼ阻害剤が、カプマチニブ若しくはテポチニブを含むか、又はこれである、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項17】

前記治療が、前記二重特異性抗体と前記チロシンキナーゼ阻害剤との前記組み合わせ物を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記二重特異性抗体を、前記第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤と同時に、連続して、又は別々に投与する、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項18】

前記対象が、チロシンキナーゼ阻害剤治療又は抗ＥＧＦＲ治療ナイーブである対象など、事前の抗がん治療を受けていない、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項19】

前記二重特異性抗体及びＴＫＩ阻害剤の投与が、一次選択治療として投与される、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項20】

前記対象又はがんが、ＥＧＦＲ及び／又はｃＭＥＴ活性化変異、例えば、エクソン１９欠失変異又はエクソン２１変異（Ｌ８５８Ｒなど）を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項21】

前記対象が、ヒト対象である、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項22】

前記がんが、肺がん、特に非小細胞肺がん、好ましくは転移性又は進行性非小細胞肺がんである、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項23】

前記がんが、進行性又は転移性がんである、請求項２２に記載の医薬。

【請求項24】

前記第１の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ８２３３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第２の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ８２３０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項25】

前記第１の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ８２３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を含み、前記第２の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ８２３０の重鎖可変領域のアミノ酸配列を含み、前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を含む、請求項２又は４に記載の医薬。

【請求項26】

第３世代のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外部分に結合することができる第１の可変ドメイン及びヒトＭＥＴ原がん遺伝子である受容体チロシンキナーゼ（ｃＭＥＴ）の細胞外部分に結合することができる第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ３３７０又はＭＦ８２３３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第２の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ４３５６又はＭＦ８２３０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体とを含む、薬学的組み合わせ物。

【請求項27】

前記抗体が、ヒト抗体である、請求項２６に記載の薬学的組み合わせ物。

【請求項28】

前記抗体が、ＡＤＣＣ増強されている、請求項２６又は２７に記載の薬学的組み合わせ物。

【請求項29】

前記抗体が、１：１の抗ＥＧＦＲ、抗ｃＭＥＴ化学量論を有するＩｇＧ１フォーマット抗体である、請求項２６又は２７に記載の薬学的組み合わせ物。

【請求項30】

前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、前記第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及びＣＤＲ３配列ＥＴＹＹＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを有する重鎖可変領域を含む、請求項２６又は２７に記載の薬学的組み合わせ物。

【請求項31】

前記第１の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＳＹＧＩＳ、ＣＤＲ２配列ＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ、及び配列ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、前記第２の可変ドメインが、ＣＤＲ１配列ＴＹＳＭＮ、ＣＤＲ２配列ＷＩＮＴＹＴＧＤＰＴＹＡＱＧＦＴＧ、及び配列ＥＴＹＦＹＤＲＧＧＹＰＦＤＰを含むＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含む、請求項２６又は２７に記載の薬学的組み合わせ物。

【請求項32】

前記第１の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ８２３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を含み、前記第２の可変ドメインが、重鎖可変領域ＭＦ８２３０の重鎖可変領域のアミノ酸配列を含み、前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を含む、請求項２６又は２７に記載の薬学的組み合わせ物。

【請求項33】

前記第１及び第２の可変ドメインが、図４Ｂの共通軽鎖可変ドメインを含む、請求項２６又は２７に記載の薬学的組み合わせ物。

【国際調査報告】