特表 2025-522052 キノロン化合物を含む過敏性腸症候群用医薬組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-07-10

(54)【発明の名称】キノロン化合物を含む過敏性腸症候群用医薬組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4709 20060101AFI20250703BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20250703BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4709

A61P1/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2025501389

(86)(22)【出願日】2023-07-11

(85)【翻訳文提出日】2025-03-06

(86)【国際出願番号】 CN2023106675

(87)【国際公開番号】W WO2024012421

(87)【国際公開日】2024-01-18

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/104866

(32)【優先日】2022-07-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】000206956

【氏名又は名称】大塚製薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(72)【発明者】

【氏名】チェン，シメイ

(72)【発明者】

【氏名】ウェン，ジエ

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ジェイ フェイ

(72)【発明者】

【氏名】リウ，フェンジュ

(72)【発明者】

【氏名】フー，ウェイ

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC29

4C086GA07

4C086GA08

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA66

(57)【要約】

本発明は、過敏性腸症候群のためのキノロン化合物を含む医薬組成物に関するもので、具体的にはヒトまたは動物の過敏性腸症候群を予防または治療するための、キノロン化合物、特に１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸もしくは薬理学的に許容される塩、その水和物、溶媒和物、または重水素化物の使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

有効成分として、１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体を含む、ＩＢＳを治療および／または予防するための医薬。

【請求項2】

前記代謝体が、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（（７－アミノ－５－シアノピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボニル）オキソ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸、７－（６－アミノ－５－カルバモイルピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボン酸、または７－（６－アミノ－５－シアノピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボン酸エチルである、請求項１の医薬。

【請求項3】

経口投与用である、請求項１または２の医薬。

【請求項4】

有効成分の１日投与量が、７．５ｍｇ～２４０００ｍｇである、請求項１～３のいずれかの医薬。

【請求項5】

ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、請求項１～４のいずれかの医薬。

【請求項6】

有効成分として１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体の治療上の有効量を、必要な患者に投与することを特徴とする、ＩＢＳの治療および／または予防のための方法。

【請求項7】

ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、請求項６の方法。

【請求項8】

ＩＢＳを治療および／または予防するための医薬の製造における、１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体の使用。

【請求項9】

ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、請求項８の使用。

【請求項10】

ＩＢＳの治療および／または予防に使用するための、１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体。

【請求項11】

ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、請求項１０の１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医療分野に属し、特に低吸収キノロン化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する過敏性腸症候群の予防または治療のための薬物に関する。

【背景技術】

【0002】

ＩＢＳ（過敏性腸症候群）は、便の形態や回数の変化を伴う腹痛などの症状を伴う機能性胃腸障害であるが、現在の通常の診断ツールで検出できる構造的異常や生化学的異常とは関連していない。この状態は、ある時点において健康な人の５％～１０％に影響を及ぼし、ほとんどの人は再発と寛解を繰り返す。ローマ分類によれば、ＩＢＳは下痢型（ＩＢＳ－Ｄ）、便秘型（ＩＢＳ－Ｃ）、混合型（ＩＢＳ－Ｍ）、不明型（ＩＢＳ－Ｕ）の４つのカテゴリーに分類できる。中国では、ＩＢＳ人口は１．４～１１．５％の範囲にあり、大多数は下痢型（ＩＢＳ－Ｄ）が主体である。治療を求めて病院を訪れた患者はわずか２５％であった。

【0003】

現在、ＩＢＳの治療方法はない。主な治療法としては、症状についての患者教育、食生活の改善、水溶性食物繊維、および鎮痙薬が挙げられる。その他の治療方法は、重篤な症状のある人に限定される傾向にあるが、中枢神経調節薬、腸分泌促進薬、オピオイドまたは５－ＨＴ受容体に作用する薬、または吸収の少ない抗生物質、ならびに心理療法が挙げられる。例えば、三環系抗うつ薬はＩＢＳ－Ｄの治療に効果的であるが、睡眠、便秘、喉の渇きなどの多くの副作用がある。同様に、５ＨＴアンタゴニストはこの領域に適応されている（非特許文献１）。しかしながら、これらの薬剤を使用してもＩＢＳ-Ｄの完全な治療は期待できず、したがって既存の薬剤よりもさらに強力な薬剤の開発が望まれている。

【0004】

特許文献１には、腸管内に生息するクロストリディオイデス（クロストリジウム）ディフィシル［Clostridioides (Clostridium) difficile］に対して抗菌活性を示す特定のキノロン系抗菌剤が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】ＷＯ２０１３／０２９５４８

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ford et al, Functional Gastrointestinal Disorders. 2020, 396, 1675-1688

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明の主な目的は、既存の薬剤よりも効果的な、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、特にＩＢＳ-Ｄを治療および／または予防するための新規医薬を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者らは、鋭意検討した結果、公知のキノロン系抗菌剤である１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸が、過敏性腸症候群の特徴である拘束ラットの排便量を改善し、過敏性腸症候群の治療に有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0009】

本発明は、以下の項１～１１に記載されるように、ＩＢＳ、特にＩＢＳ－Ｄを予防または治療するためのキノロン化合物の使用を提供する。

【0010】

［項１］
有効成分として、１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体を含む、ＩＢＳを治療および／または予防するための医薬。

【0011】

［項２］
前記代謝体が、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（（７－アミノ－５－シアノピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボニル）オキソ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸、７－（６－アミノ－５－カルバモイルピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボン酸、または７－（６－アミノ－５－シアノピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボン酸エチルである、項１の医薬。

【0012】

［項３］
経口投与用である、項１または２の医薬。

【0013】

［項４］
有効成分の１日投与量が、７．５ｍｇ～２４０００ｍｇである、項１～３のいずれかの医薬。

【0014】

［項５］
ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、項１～４のいずれかの医薬。

【0015】

［項６］
有効成分として１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体の治療上の有効量を、必要な患者に投与することを特徴とする、ＩＢＳの治療および／または予防のための方法。

【0016】

［項７］
ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、項６の方法。

【0017】

［項８］
ＩＢＳを治療および／または予防するための医薬の製造における、１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体の使用。

【0018】

［項９］
ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、項８の使用。

【0019】

［項１０］
ＩＢＳの治療および／または予防に使用するための、１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体。

【0020】

［項１１］
ＩＢＳがＩＢＳ－Ｄである、項１０の１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸、またはそれの医薬的に許容される塩、前駆体もしくは代謝体、水和物、溶媒和物、または重水素体。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】図１は、拘束ストレスＲＳ-ＩＢＳモデルにおけるラットの体重に対する化合物ＯＰＳ-２０７１の効果を示す。

【図2】図２は、ＲＳ-ＩＢＳモデルにおけるラットの体重変化（ＢＷＣ）％に対する化合物ＯＰＳ-２０７１の効果を示す。

【図3】図３は、ＲＳ-ＩＢＳモデルにおけるラットの１日２時間の間に排泄される便に対する化合物ＯＰＳ-２０７１の効果を示す。

【図4】図４は、対照群とＲＳ群との間で化合物処置を記録した１日前である３日目のＲＳ-ＩＢＳモデルにおける内臓運動反応を示す。

【図5】図５は、ＲＳ-ＩＢＳモデルにおける７日目の大腸膨張に対する内臓運動反応（ｍｍＨｇ）に対する化合物ＯＰＳ-２０７１の効果を示す。

【図6】図６は、ＲＳ-ＩＢＳモデルにおける７日目の尿中のヒスタミンレベルに対する化合物ＯＰＳ-２０７１の効果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0022】

式（１）の構造を有する本発明化合物、１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸は、ＷＯ２０１３／０２９５４８に化合物２－１８として開示され、ＷＯ２０１３／０２９５４８に従って合成することができる。

【化1】

【0023】

本発明化合物は、化合物の前駆体または代謝体、例えば、下記の式（２）～（４）のそれぞれの構造を有する（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（（７－アミノ－５－シアノピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボニル）オキソ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸、７－（６－アミノ－５－カルバモイルピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボン酸、および７－（６－アミノ－５－シアノピリジン－３－イル）－１－シクロプロピル－６－フルオロ－８－メチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロキノリン－３－カルボン酸エチルも含み得る。

【化2】

【化3】

【化4】

【0024】

本発明化合物は水和物および／または溶媒和物を形成していてもよく、よって本発明化合物にはその水和物および／または溶媒和物も包含する。また、１つ以上の任意の^１Ｈ原子が^２Ｈ（Ｄ）原子で置換された本発明の化合物も本発明の範囲内である。本発明化合物またはその医薬的に許容される塩の結晶には多形が存在する場合があるが、かかる結晶多形も本発明の範囲内である。

【0025】

「医薬的に許容される塩」としては、酸付加塩として、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩等の無機酸との塩；シュウ酸塩、マロン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、プトルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩等の有機酸との塩；およびグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸との塩；並びに塩基との塩として、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；およびアンモニウム塩が挙げられる。

【0026】

本発明化合物およびその医薬組成物は、通常、通常の医薬製剤の形態で使用される。医薬製剤は、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤および滑沢剤などの従来の医薬的に許容される希釈剤または担体と混合して調製することができる。医薬製剤としては、疾患の治療に適した各種製剤、例えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、液剤や懸濁剤等の注射剤等が挙げられる。錠剤の製造においては、慣用の担体、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸塩等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、シェラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、寒天粉末、ラミナラン粉末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白砂糖、ステアリン、カカオバター、硬化油等の崩壊阻害剤、四級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の湿潤剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸塩等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸粉末およびポリエチレングリコール等の滑沢剤などが使用され得る。錠剤はまた、慣用のコーティング剤でコーティングされていてもよく、例えば、糖衣錠、ゼラチンコーティング錠、腸溶コーティング錠、フィルムコーティング錠、または二層もしくは多層錠の形態であってもよい。丸剤の調製においては、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアガム粉末、トラガカント粉末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤、ラミナラン、寒天などの崩壊剤などの慣用の担体を使用することができる。坐剤の調製においては、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールエステル、ゼラチン、半合成グリセリド等の慣用の担体を使用することができる。注射剤の調製において、化合物の溶液、乳濁液または懸濁液は滅菌され、好ましくは体液と等張にされる。これらの溶液、乳濁液および懸濁液は、活性化合物を、水、乳酸水溶液、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコールまたはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなどの慣用の希釈剤と混合することによって調製される。製剤には、体液と等張にするのに十分な量の塩化ナトリウム、ブドウ糖、またはグリセリンを配合することもできる。製剤にはまた、慣用の可溶化剤、緩衝剤、麻酔剤、さらに着色剤、保存剤、香料、香味、甘味剤、および他の薬剤を配合することもできる。ペースト、クリーム、ゲル状の製剤は、白色ワセリン、パラフィン、グリセリン、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト等を希釈剤として用いて調製することができる。有効成分の化合物が注射剤中で沈殿する場合、注射剤を安定な溶液で保存するために、必要に応じて、例えばメタンスルホン酸、プロピオン酸、塩酸、コハク酸、乳酸などの酸を注射剤に添加してもよい。

【0027】

本発明の化合物は、製剤中にどのような量で含有されてもよいが、通常、製剤全重量に対して１～７０重量％含有される。

【0028】

本発明の医薬組成物は、任意の方法で投与することができる。適当な投与方法は、製剤形態、患者の年齢、性別、疾患の重症度等に応じて選択すればよい。例えば、錠剤、丸剤、溶液、懸濁液、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤は、経口経路で投与される。注射剤の場合は、単独で、あるいはブドウ糖やアミノ液などの補助液とともに静脈内投与される。注射剤はまた、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内の経路で投与されてもよい。坐剤は直腸内経路で投与される。医薬組成物は、眼科用、軟膏、貼付剤、吸入剤の形態であってもよい。

【0029】

本発明の組成物の投与量は、投与方法、患者の年齢及び性別、疾患の重症度等により変動し得る。例えば、経口投与の場合、通常、ヒトまたは哺乳動物の体重１ｋｇあたり、約０．１２５ｍｇ～約４００ｍｇ、好ましくは約０．２５ｍｇ～約２００ｍｇ、より好ましくは約０．５ｍｇ～約１００ｍｇ、さらに好ましくは約１ｍｇ～約５０ｍｇの用量で、１～数回に分けて投与され得る。例えば、ヒトの１日用量としては、約７．５ｍｇ～約２４０００ｍｇ、好ましくは約１５ｍｇ～約１２０００ｍｇ、より好ましくは約３０ｍｇ～約６０００ｍｇ、さらにより好ましくは約６０ｍｇ～約３０００ｍｇが挙げられる。

【実施例】

【0030】

本発明を以下の実施例、実験例および製造例によって説明する。なお、本発明はこれらの実施例、実験例、調製例に限定されるものではなく、本発明の範囲や要旨を逸脱しない範囲において種々の変更や修正が可能である。

【0031】

以下の実施例で使用される拘束ストレス（ＲＳ）モデルは、ＩＢＳに対する薬効を試験する際に使用される一般的なモデルであり、Williams et al.、Gatroenterology 1988, 94: 611.に最初に提案されている。ＲＳモデルは、潰瘍を形成することなく腸内輸送の阻害と排便回数の増加を示すため、構造的または生化学的異常を伴わない腸疾患を示すＩＢＳを模倣すると考えられている。現在では、Wang et al.、Int. J. Gastroenterol. Disord. Ther. 2017、4: 131.に以前記載されているような、改良された拘束ストレスモデルが広く使用されている。内臓過敏症およびヒスタミンに関する参考文献は、例えば、Christine West, Karen-Anne McVey Neufeld, "Animal models of visceral pain and the role of the microbiome. Neurobiology of Pain" 10 (2021) 100064; Giada De PalmaChiko ShimboriDavid E. ReedYang YuVirginia RabbiaJun LuNestor Jimenez-VargasJessica SessenweinCintya Lopez-LopezMarc PigrauJosue Jaramillo-PolancoYong ZhangLauren BaergAhmad ManzarJulien PujoXiaopeng BaiMaria Ines Pinto-SanchezAlberto CamineroKaren MadsenMichael G. SuretteMichael BeyakAlan E. LomaxElena F. VerduStephen M. CollinsStephen J. VannerPremysl Bercikである。腸内微生物叢によるヒスタミン産生は、マウスのヒスタミン４受容体シグナル伝達を介して内臓痛覚過敏を誘発する（Sci. Transl. Med., 14 (655), eabj1895）。

【0032】

以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。ここで使用した本発明化合物（以下、「被験物質」という。）及び参照薬剤は以下のようにして得た。

【0033】

被験物質
ＯＰＳ－２０７１として示される１－シクロプロピル－６－フルオロ－１，４－ジヒドロ－８－メチル－７－（２－アミノ－３－シアノ－５－ピリジル）－４－オキソ－３－キノリン－カルボン酸は、大塚製薬株式会社で合成された。

【0034】

実験例１：拘束ストレス（ＲＳ）ラットモデルにおける被験物質の糞便量に及ぼす影響
（動物）
体重２００～２５０ｇの雄のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットを、チャールズ・リバー・ラボラトリーズ北京から購入し、ＯＳＲＩのＳＰＦグレード動物施設の個別換気ケージ（ＩＶＣ）で１ケージあたり３匹ずつ飼育した。すべての動物は１２時間の明暗サイクルで維持され、げっ歯類の餌と水は自由に摂取できた。すべての動物研究手順は動物福祉規則に従い、ＯＳＲＩの施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。

【0035】

（試薬）
アラビアガム（ＡＧ）はＳｉｇｍａ（CAT#: G9752-500G）から購入した。

【0036】

（拘束ストレスラットモデルの確立）
表１に示すように、ＳＤラットを体重に基づいて３つの群にランダムに登録し、１群あたり６匹のラットを割り当てた。ラット（群２および群３）を、連続１０日間（Ｄ１からＤ１０）の間、プラスチックシリンダー内で毎日午後に、２時間拘束した。対照群（群１）のラットは、実験期間中、邪魔されることなく、それぞれのケージに留まった。Ｄ４からＤ１０までＲＳモデリングを３日間繰り返した後、群２と群３のラットを、朝（午後拘束の４時間前）に連続７日間、ビヒクル（５％ ＡＧ）および試験物質（２．５ｍｇ／ｋｇ）でそれぞれ処置した。糞便ペレットの排出量を使用して、検証済みの指標として遠位結腸の運動性を推定した（Hong S et al.、Gut 2009、58: 202-210）。２時間の拘束時間中、同じ２時間の模擬観察期間中の対照群のラットと同様に、ラットの糞便排出量が収集されカウントされた。

【0037】

（結果）
ラットの行動を毎日観察し、すべての指標は正常であった。図１および２に示すように、ＯＰＳ－２０７１の処置により拘束ストレスによる体重減少が改善された。１日２時間のＲＳモデリングを７日間実施すると、非ＲＳ対照ラットで観察された体重増加が遅くなった（群２対群１）。しかし、ＯＰＳ－２０７１を２．５ｍｇ／ｋｇで７日間処置すると、その影響はある程度緩和された（群３対群２）。
食物摂取量を、処置開始後３日目（ＲＳ適用後６日目）からモニタリングした。ＯＰＳ－２０７１処置は、ＲＳ対照群で観察された食欲低下に対する保護効果を示した（群３対群２）。
拘束ストレスを与えると排便量の変化が観察された。ストレスによりＲＳ群の糞便量が増加した（群２対群１）。４日目に、試験群を２．５ｍｇ／ｋｇのＯＰＳ－２０７１で処置し、図３に示すように、糞便ペレット排出量の減少が観察された（群３対群２）。

【0038】

実験例２：拘束ストレス（ＲＳ）モデルにおける内臓過敏症およびヒスタミンレベルにおけるＯＰＳ－２０７１の有効性の評価
（拘束ストレスラットＲＳモデルの確立）
上述のように、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ ラットを、７日間連続して毎日２時間プラスチックシリンダー内で拘束した。対照群では、ラットは実験期間中、邪魔されることなく、個別のケージに入れられていた。

【0039】

（３日目と７日目の結腸直腸膨張に対する内臓運動反応）
結腸拡張－ポリエチレンバルーン（長さ 3 cm、最大直径 1.5 cm）を血圧計に取り付けられたチューブに固定し、結腸拡張をするのに使用した。バルーンに潤滑油を塗り、バルーンの先端が肛門の近位２ｃｍになるようにラットの遠位結腸に挿入した。血圧計拡張装置を使用して、ラットをプラスチック製の封じ込め装置に拘束し、試験前に１０分間馴化させた。睾丸、尾、または腹筋組織の最初の収縮が起こるまで、ラットに結腸の段階的拡張（0～100 mmHg、5 mmHgずつ上昇）を与えた。この視覚化は３人の独立したオブザーバーによって行われた。内臓痛の閾値指標は、前述のように最初の侵害受容反応として定義された（T. J. Ness; G. F. Gebhart, 「Colorectal distension as a noxious visceral stimulus: physiologic and pharmacologic characterization of pseudaffective reflexes in the rat」, Brain Research, Vol. 450, Issues 1-2, pages 153-169, May 21, 1988; Wesselmann, U.; Lai, J., 「Mechanisums of referred viiceral pain: uterine inflammation in the adult virgin rat results in neurogenic plasma extravasation in the skin」, Pain Vol. 73, Issue 3, pages 309-317, 1997）。本研究で用いた急速膨張プロトコールでは、結腸のコンプライアンスは測定しなかった。結腸の拡張を５分間の刺激間隔で３回繰り返し、侵害受容閾値での平均圧力を各ラットについて記録した。

【0040】

（処置）
ＯＰＳ－２０７１（２０７１）：週に１回、５％ ＡＧ（アラビアガム）で調製、アラビアガムはＳｉｇｍａから購入したアカシアの木由来のアラビアガム（CAT#: G9752-500G）、表２に示すように、４日目から７日目まで処置を開始した。

【0041】

サンプリング
７日目に採尿：
尿サンプルは拘束後毎日採取された。
拘束チューブの下にプラスチック皿を置き、尿サンプルを採取した。それをすぐにチューブに移し、さらに分析するまで－８０℃で保存する。ヒスタミンは、ヒスタミンＥＬＩＳＡキット（CAT#：D751012、BBI）を用いて、製造業者の指示に従って以下のように測定した。

【0042】

手順：
１．事前に必要なスラットの枚数を計算し、試験の３０分前にキットを取り出し、室温に戻す。
２．各反応ホールに標準液と検体を５０μＬずつ加える。標準液は再度穴あけが必要である。ビオチン標識ヒスタミン抗体検体液５０μＬを各反応ウェルに直ちに添加し、プレートをシールして３７℃で４５分間インキュベートした。
３．洗浄：液を捨て、振って乾かす。３５０μＬの洗浄液を各反応ホールに加え、１～２分間浸し、振って乾かすことを４回繰り返す。
４．ＨＲＰ標識ストレプトアビジン検体液１００μＬを各反応ウェルに加え、プレートを密封し、３７℃で３０分間インキュベートする。
５．洗浄：各反応ホールに洗浄液を３００μＬ加え、３０秒間隔で乾燥させる。これを４回繰り返す。
６．各反応ホールに９０μＬの発色現像液（撥光液）を加え、プレートシール後、３７℃で１５分間発色現像する。
７．各反応ウェルに５０μＬの反応終了液を添加し、直ちに酵素標識装置の波長４５０ｎｍでＯＤ値を測定する（５分以内）。
８．ＯＤ値は酵素標識装置の波長４５０ｎｍで測定した。
９．標準物質の濃度を横軸、吸光度を縦軸として標準曲線を描く。
１０．統計的有意性は、両側Ｔ検定（３日目の内臓感受性）またはＤｕｎｎｅｔｔの多重比較を用いた一元配置分散分析により算出した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。

【0043】

（結果）
図４および図５は、結腸直腸膨張に対する内臓運動反応（ｍｍＨｇ）を示し、図４は、対照群とＲＳ群との間で化合物処置を記録した１日前である３日目の内臓運動反応を、図５は、７日目の内臓運動反応を示している。
図４に示すように、３日目にはＲＳ群ラットの内臓感受性が対照群と比較して増加した（内臓感受性レベルは有意差を示した（ｐ＜０．０１）-対照群対ＲＳ群）。
２．５ｍｇ／ｋｇのＯＰＳ－２０７１を投与された処置群では、図５に示すように、７日目に内臓感受性の低下が観察された（すなわち、ＯＰＳ－２０７１投与の４日後、内臓感受性レベルは有意差を示した（ｐ＜０．０５）－処置群（２．５ｍｇ／ｋｇ）対ＲＳ群）。
図６は、ＯＰＳ－２０７１化合物処置の４日後である７日目に、ＥＬＩＳＡによって定量化された尿中のヒスタミンレベルを示す。
７日目、図６に示すように、ＲＳ群ラットの尿中ヒスタミン濃度は対照群よりも高かったが、２．５ｍｇ／ｋｇ化合物処置群で観察された尿中ヒスタミン値は減少した（尿中ヒスタミン値は対照群とＲＳ群の間で高度な有意差（ｐ＜０．０１）を示し、尿中ヒスタミンレベルは処置群（２．５ｍｇ／ｋｇ）とＲＳ群の間で高度に有意差（ｐ＜０．０１）を示した）。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【国際調査報告】