特表 2015-508061 神経突起変性に関連する疾患を診断および治療するための組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2015-508061(P2015-508061A)

(43)【公表日】2015年3月16日

(54)【発明の名称】神経突起変性に関連する疾患を診断および治療するための組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20150217BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20150217BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20150217BHJP

   A61P 3/02 20060101ALI20150217BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20150217BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20150217BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20150217BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20150217BHJP

   A61K 51/00 20060101ALI20150217BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20150217BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20150217BHJP

   G01N 33/543 20060101ALI20150217BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20150217BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20150217BHJP

【ＦＩ】

   C07K16/18ZNA

   A61P25/28

   A61P25/00

   A61P3/02 101

   A61P27/02

   A61P9/10

   A61P27/06

   A61K39/395 D

   A61K39/395 N

   A61K49/02 A

   A61K49/00 A

   A61K49/00 C

   A61K49/02 B

   A61K49/02 C

   G01N33/53 D

   G01N33/543 545A

   C12N15/00 A

   C12P21/08

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】123

(21)【出願番号】特願2014-554884(P2014-554884)

(86)(22)【出願日】2013年1月25日

(85)【翻訳文提出日】2014年9月17日

(86)【国際出願番号】US2013023277

(87)【国際公開番号】WO2013112922

(87)【国際公開日】20130801

(31)【優先権主張番号】61/591,324

(32)【優先日】2012年1月27日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IS,JP,KE,KG,KM,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US,UZ,VC

(71)【出願人】

【識別番号】513144626

【氏名又は名称】アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー

(71)【出願人】

【識別番号】512212195

【氏名又は名称】アッヴィ・インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】特許業務法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ミューラー，ベルンハルト

(72)【発明者】

【氏名】ホワン，リーリー

(72)【発明者】

【氏名】バードウェル，フィリップ・ディー

(72)【発明者】

【氏名】クツコバ，ユリヤ

(72)【発明者】

【氏名】メモット，ジョン

【テーマコード（参考）】

4B024

4B064

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B024AA01

4B024BA41

4B024BA61

4B024CA04

4B024CA11

4B024EA04

4B024GA11

4B024HA01

4B064AG26

4B064AG27

4B064CA06

4B064CA10

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB33

4C085BB35

4C085BB36

4C085BB37

4C085CC23

4C085CC32

4C085EE01

4C085GG02

4C085HH03

4C085HH07

4C085HH11

4C085HH13

4C085KA27

4C085KA28

4C085KA29

4C085KB02

4C085KB07

4C085KB09

4C085KB11

4C085KB15

4C085KB18

4C085LL13

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

神経突起変性疾患および障害を治療および診断するための抗体、およびこの抗体の使用方法が本明細書で提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

反発性ガイダンス分子ａ（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａ）（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片であって、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｇ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｈ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｊ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域；（ｋ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域；（ｌ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域；（ｍ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域；（ｎ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｏ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｐ）配列番号６１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｑ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｒ）配列番号９５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｓ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｔ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｕ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｖ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｗ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｘ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｙ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｚ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ａａ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｂｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｃｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｄｄ）配列番号６８のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｅｅ）配列番号６９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域（ｆｆ）配列番号７０のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｇｇ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｈｈ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｊｊ）配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｋｋ）配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｌｌ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｍｍ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号２９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｎｎ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号３７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｏｏ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｙ ｈｅａｖｙ ｄｏｍａｉｎ）、および配列番号４５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｐｐ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号５３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｑｑ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号６１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｒｒ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号９５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｓｓ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｔｔ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｕｕ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１１９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｖｖ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１２７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｗｗ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｘｘ）配列番号２のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｙｙ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｚｚ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ａａａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｂｂｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｃｃｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｄｄｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｅｅｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｆｆｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｇｇｇ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｈｈｈ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖；（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖；（ｊｊｊ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｋｋｋ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｌｌｌ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｍｍｍ）配列番号９２または１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９３または１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９４または１５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｎｎｎ）配列番号９６または１５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９７または１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９８または１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｏｏｏ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｐｐｐ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｑｑｑ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｒｒｒ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｓｓｓ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｔｔｔ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｕｕｕ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｖｖｖ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｗｗｗ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｘｘｘ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｙｙｙ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｚｚｚ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ａａａａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｂｂｂｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｃｃｃｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｄｄｄｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｅｅｅｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｆｆｆｆ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｇｇｇｇ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｈｈｈｈ）配列番号９２または１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９３または１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９４または１５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを
含む可変重鎖、および配列番号９６または１５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９７または１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９８または１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｉｉｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｊｊｊｊ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｋｋｋｋ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｌｌｌｌ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｍｍｍｍ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｎｎｎｎ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｏｏｏｏ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｐｐｐｐ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｑｑｑｑ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｒｒｒｒ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｓｓｓｓ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｔｔｔｔ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｕｕｕｕ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｖｖｖｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｗｗｗｗ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｘｘｘｘ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲとを含む可変重ドメイン鎖、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽ドメイン鎖；（ｙｙｙｙ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｚｚｚｚ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖からなる群より選択されるドメインまたは領域を含む、単離された抗体またはこの抗体断片。

【請求項2】

ヒト抗体、免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結Ｆｖ、モノクローナル抗体、親和性成熟、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ、Ｆａｂ’、二特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖからなる群より選択される、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項3】

ヒトである、請求項３に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項4】

モノクローナル抗体または抗体断片が、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメインおよびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群より選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項5】

ヒトＩｇＧ１定常ドメインが配列番号１４０を含む、請求項４に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項6】

ヒトＩｇＧ１定常ドメインが配列番号１４０からなる、請求項４に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項7】

配列番号１、配列番号９、配列番号１７、配列番号２５、配列番号３３、配列番号４１、配列番号４９、配列番号５７、配列番号９１、配列番号９９、配列番号１０７、配列番号１１５、配列番号１２３および配列番号１３１からなる群より選択される配列を含む可変重領域を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項8】

配列番号５、配列番号１３、配列番号２１、配列番号２９、配列番号３７、配列番号４５、配列番号５３、配列番号６１、配列番号９５、配列番号１０３、配列番号１１１、配列番号１１９、配列番号１２７および配列番号１３５からなる群より選択される配列を含む可変軽領域を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項9】

配列番号６、配列番号７および配列番号８、または配列番号６、配列番号７および配列番号６７、配列番号６、配列番号７および配列番号６８、または配列番号６、配列番号７および配列番号６９、または配列番号６、配列番号７および配列番号７０、または配列番号６、配列番号７および配列番号７１、または配列番号６、配列番号７および配列番号７２、または配列番号６、配列番号７および配列番号７３、または配列番号１４、配列番号１５および配列番号１６、または配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４、または配列番号３０、配列番号３１および配列番号３２、または配列番号３８、配列番号３９および配列番号４０、または配列番号５４、配列番号５５および配列番号５６、または配列番号６２、配列番号６３および配列番号６４、または配列番号４６、配列番号４７および配列番号４８、配列番号９６、配列番号９７および配列番号９８、配列番号１０４、配列番号１０５および配列番号１０６、配列番号１１２、配列番号１１３および配列番号１１４、配列番号１２０、配列番号１２１および配列番号１２２、配列番号１２８、配列番号１２９および配列番号１３０、配列番号１３６、配列番号１３７および配列番号１３８、ならびに配列番号１５６および配列番号１５７および配列番号１５８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項10】

配列番号２、配列番号３および配列番号４、または配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２、または配列番号１８、配列番号１９および配列番号２０、または配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８、または配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６、または配列番号５０、配列番号５１および配列番号５２、または配列番号５８、配列番号５９および配列番号６０、配列番号４２、配列番号４３および配列番号４４、配列番号９２、配列番号９３および配列番号９４、配列番号１００、配列番号１０１および配列番号１０２、配列番号１０８、配列番号１０９および配列番号１１０、配列番号１１６、配列番号１１７および配列番号１１８、配列番号１２４、配列番号１２５および配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３３および配列番号１３４、ならびに配列番号１５３および配列番号１５４および配列番号１５５の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項11】

配列番号２、配列番号３および配列番号４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号６、配列番号７および配列番号８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項12】

配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１４、配列番号１５および配列番号１６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項13】

配列番号１８、配列番号１９および配列番号２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項14】

配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号３０、配列番号３１および配列番号３２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項15】

配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号３８、配列番号３９および配列番号４０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項16】

配列番号５０、配列番号５１および配列番号５２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号５４、配列番号５５および配列番号５６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項17】

配列番号５８、配列番号５９および配列番号６０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号６２、配列番号６３および配列番号６４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項18】

配列番号４２、配列番号４３および配列番号４４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号４６、配列番号４７および配列番号４８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項19】

配列番号９２または１５３、配列番号９３または１５４および配列番号９４または１５５の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号９６または１５６、配列番号９７または１５７および配列番号９８または１５８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項20】

配列番号１００、配列番号１０１および配列番号１０２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１０４、配列番号１０５および配列番号１０６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項21】

配列番号１０８、配列番号１０９および配列番号１１０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１１２、配列番号１１３および配列番号１１４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項22】

配列番号１１６、配列番号１１７および配列番号１１８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１２０、配列番号１２１および配列番号１２２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項23】

配列番号１２４、配列番号１２５および配列番号１２６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１２８、配列番号１２９および配列番号１３０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項24】

配列番号１３２、配列番号１３３および配列番号１３４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１３６、配列番号１３７および配列番号１３８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項25】

免疫接着分子、イメージング剤および治療剤からなる群より選択される薬剤をさらに含む、請求項１に記載の抗体または抗体断片。

【請求項26】

イメージング剤が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識およびビオチンからなる群より選択される、請求項２５に記載の抗体または抗体断片。

【請求項27】

放射性標識が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏおよび１５３Ｓｍからなる群より選択される、請求項２６に記載の抗体または抗体断片。

【請求項28】

請求項１に記載の抗体、抗体断片、これらの混合物または誘導体を含む、医薬組成物。

【請求項29】

神経突起変性に関連する疾患または障害を治療、予防、調節または軽減する方法であって、治療有効量の請求項１に記載の抗体を、これを必要とする被験体に投与することを含む、方法。

【請求項30】

神経突起変性障害が、多発性硬化症、パーキンソン病、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、ゴーシェ病、ハーラー症候群、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、特発性炎症性脱髄疾患、ビタミンＢ１２欠乏症、橋中央ミエリン溶解、脊髄癆、横断性脊髄炎、デビック病、進行性多病巣性白質脳症、視神経炎、外傷性ＣＮＳ損傷、虚血性脳卒中、緑内障、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性症および大脳白質委縮症からなる群より選択される、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

被験体が神経突起変性障害を有するかを決定するための方法であって、
（ａ）被験体由来の試料におけるＲＧＭａレベルを測定すること；および
（ｂ）試料におけるＲＧＭａレベルを正常対照と比較すること
を含み、ＲＧＭａレベルの変化が、被験体が神経突起変性障害を有することを示す、方法。

【請求項32】

正常対照と比較したＲＧＭａレベルの増加が、被験体が神経突起変性障害を有することを示す、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

試料が、血液試料、脳脊髄液試料および血清試料からなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。

【請求項34】

段階（ａ）がイムノアッセイである、請求項３１に記載の方法。

【請求項35】

イムノアッセイが酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）である、請求項３５に記載の方法。

【請求項36】

ＥＬＩＳＡがサンドイッチＥＬＩＳＡである、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

配列番号１から７および６７を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項38】

配列番号１から７および６８を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項39】

配列番号１から７および６９を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項40】

配列番号１から７および７０を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項41】

配列番号１から７および７１を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項42】

配列番号１から７および７２を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項43】

配列番号１から７および７３を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗体断片。

【請求項44】

ＲＧＭａエピトープＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（ｈＲＧＭａの４７位から６９位）（配列番号７９）に結合する、請求項３７から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体。

【請求項45】

反発性ガイダンス分子ａ（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片であって、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５（式１−ＣＤＲ−Ｈ１）（式中、Ｘａａ１は、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｈ、Ｙ、Ｌ、ＳおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｇ、Ｄ、Ａ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｉ、ＭおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ５は、Ｓ、Ｎ、Ｈ、Ａ、ＴおよびＱからなる群からのアミノ酸配列である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−（Ｘａａ）_ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｈ２）（式中、ｎは、０または１であり、およびＸａａ１は、Ｙ、Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｇ、ＳおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｉ、ＭおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｎ、Ｄ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｐ、Ｙ、Ｇ、Ｗ、Ｈ、ＡおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｙ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｋ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｄ、ＴおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｅ、ＮおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｎ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｔ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、ＩおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｎ、Ｇ、Ｙ、ＴおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｙ、Ｆ、ＮおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ａ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、ＬおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｑ、Ｄ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ｋ、Ｓ、ＮおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｌ、Ｆ、Ｖ、ＫおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、Ｑ、Ｋ、ＲおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、グリシンである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−（Ｘａａ）_ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｈ３）（式中、ｎは、０から１１であり、およびＸａａ１は、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｎ、Ｌ、Ｄ、ＱおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、Ｔ、Ｒ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、ＤおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｖ、Ｄ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｍ、Ｃ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｇ、Ｌ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｐ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、ＥおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｙ、Ｖ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｇ、ＨおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕおよびＣｙｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、ＡｌａおよびＧｌｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、ＨｉｓおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、ＴｒｐおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｔｙｒ、ＧｌｙおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｍｅｔ、ＬｅｕおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、ＡｓｐおよびＧｌｙからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、Ｖａｌ、ＡｓｐおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸である。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変重ドメインを含む、単離された抗体またはこの抗体断片。

【請求項46】

反発性ガイダンス分子ａ（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片であって、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−（Ｘａａ）_ｎ（式１−ＣＤＲ−Ｌ１）（式中、ｎは、０から３であり、およびＸａａ１は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、ＧおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｄ、Ｓ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｓ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、ＮおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｓ、Ｌ、Ｇ、Ｉ、ＤおよびＰからなる群からのアミノ酸配列であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＨおよびＩからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｖ、Ｄ、Ｉ、Ｓ、ＧおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｇ、Ｋ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｎ、ＴおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｄ、Ｙ、Ａ、Ｃ、ＳおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｌ、ＶおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｉ、Ｃ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、ＮおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、ＶａｌおよびＡｓｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１４は、ＳｅｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−（Ｘａａ）_ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｌ２）（式中、ｎは、０から４であり、およびＸａａ１は、Ｄ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、ＳおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｖ、Ｄ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｓ、Ｙ、ＮおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｋ、Ｎ、Ｄ、ＱおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｒ、Ｇ、ＳおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｐ、Ｓ、ＩおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｓ、Ｈ、ＩおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ａｓｎであり；Ｘａａ９は、Ｌｙｓであり；およびＸａａ１０は、Ｇｌｙであり；Ｘａａ１１は、Ａｓｐである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−（Ｘａａ）_ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｌ３）（式中、ｎは、０から２であり、およびＸａａ１は、Ｃ、Ｑ、Ｈ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、ＹおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、ＱおよびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｙ、ＷおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｓ、ＨおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｄ、ＶおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｄ、Ｔ、Ｌ、Ｉ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｄ、Ｎ、Ｗ、Ｌ、ＦおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｌ、Ｖ、Ｇ、ＴおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｖａｌ、ＴｙｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、ＬｅｕまたはＶａｌである。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変軽ドメインを含む、単離された抗体またはこの抗体断片。

【請求項47】

反発性ガイダンス分子ａ（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片であって、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５（式１−ＣＤＲ−Ｈ１）（式中、Ｘａａ１は、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｈ、Ｙ、Ｌ、ＳおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｇ、Ｄ、Ａ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｉ、ＭおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ５は、Ｓ、Ｎ、Ｈ、Ａ、ＴおよびＱからなる群からのアミノ酸配列である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−（Ｘａａ）_ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｈ２）（式中、ｎは、０または１であり、およびＸａａ１は、Ｙ、Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｇ、ＳおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｉ、ＭおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｎ、Ｄ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｐ、Ｙ、Ｇ、Ｗ、Ｈ、ＡおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｙ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｋ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｄ、ＴおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｅ、ＮおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｎ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｔ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、ＩおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｎ、Ｇ、Ｙ、ＴおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｙ、Ｆ、ＮおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ａ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、ＬおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｑ、Ｄ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ｋ、Ｓ、ＮおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｌ、Ｆ、Ｖ、ＫおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、Ｑ、Ｋ、ＲおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、グリシンである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−（Ｘａａ）_ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｈ３）（式中、ｎは、０から１１であり、およびＸａａ１は、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｎ、Ｌ、Ｄ、ＱおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、Ｔ、Ｒ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、ＤおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｖ、Ｄ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｍ、Ｃ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｇ、Ｌ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｐ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、ＥおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｙ、Ｖ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｇ、ＨおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕおよびＣｙｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、ＡｌａおよびＧｌｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、ＨｉｓおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、ＴｒｐおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｔｙｒ、ＧｌｙおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｍｅｔ、ＬｅｕおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、ＡｓｐおよびＧｌｙからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、Ｖａｌ、ＡｓｐおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸である。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）を含む可変重ドメインを含み；ならびに、
以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−（Ｘａａ）_ｎ（式１−ＣＤＲ−Ｌ１）（式中、ｎは、０から３であり、およびＸａａ１は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、ＧおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｄ、Ｓ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｓ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、ＮおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｓ、Ｌ、Ｇ、Ｉ、ＤおよびＰからなる群からのアミノ酸配列であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＨおよびＩからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｖ、Ｄ、Ｉ、Ｓ、ＧおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｇ、Ｋ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｎ、ＴおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｄ、Ｙ、Ａ、Ｃ、ＳおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｌ、ＶおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｉ、Ｃ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、ＮおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、ＶａｌおよびＡｓｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１４は、ＳｅｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−（Ｘａａ）_ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｌ２）（式中、ｎは、０から４であり、およびＸａａ１は、Ｄ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、ＳおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｖ、Ｄ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｓ、Ｙ、ＮおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｋ、Ｎ、Ｄ、ＱおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｒ、Ｇ、ＳおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｐ、Ｓ、ＩおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｓ、Ｈ、ＩおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ａｓｎであり；Ｘａａ９は、Ｌｙｓであり；およびＸａａ１０は、Ｇｌｙであり；Ｘａａ１１は、Ａｓｐである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−（Ｘａａ）_ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｌ３）（式中、ｎは、０から２であり、およびＸａａ１は、Ｃ、Ｑ、Ｈ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、ＹおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、ＱおよびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｙ、ＷおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｓ、ＨおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｄ、ＶおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｄ、Ｔ、Ｌ、Ｉ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｄ、Ｎ、Ｗ、Ｌ、ＦおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｌ、Ｖ、Ｇ、ＴおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｖａｌ、ＴｙｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、ＬｅｕまたはＶａｌである。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む可変軽ドメインも含む、単離された抗体またはこの抗体断片。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年１月２７日に出願された米国仮出願第６１／５９１，３２４号の利益を主張するものであり、この内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＥＦＳ−ＷｅｂによってＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表であって、全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１３年１月２５日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは１１４２３ＵＳＯ．ｔｘｔという名称であり、１００，９３６バイトのサイズである。

【0003】

本発明は、神経突起変性に関連する疾患、例えば、多発性硬化症を治療および診断するための抗体、およびこの抗体の使用方法に関する。

【背景技術】

【0004】

多くの神経変性疾患の初期段階は、神経突起損傷およびシナプス機能障害を特徴とする。神経突起変性は神経細胞死につながることが多く、罹患神経のシグナル伝導を障害し、どの神経が関与しているかに応じて、感覚、運動、認知力または他の機能の障害を引き起こし得る。神経突起変性はまた、多発性硬化症（「ＭＳ」）の病的ホールマークである。ＭＳは、米国内で約３５０，０００人の人々が罹患している自己免疫性神経変性性疾患であり、若年成人における神経系障害または死亡の主な原因である。ＭＳに罹患しているヒトに共通の臨床症状は、神経の軸索を取り巻くミエリン鞘の大規模な分解に起因する神経病変の変性的形成および最終的には軸索自体の分解である。ＭＳで起こる脱髄は、３つの主要な神経性タンパク質：ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）およびミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）に対するプロテアーゼ酵素の攻撃によって開始されると考えられている。機構的には、ＭＳは、ミエリン分解産物に対する自己免疫反応によって少なくとも部分的に引き起こされる炎症性脱髄疾患である。近年の研究では、周知の脱ミエリン化機構および炎症性機構に加えて、神経突起および軸索損傷の役割が重視されている。

【0005】

患者は、通常、患者病歴、ならびに脳および脊髄の磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、電気診断手順（例えば、視覚誘発電位、脳幹聴性誘発電位または体性感覚誘発電位などの誘発電位試験）および脳脊髄液中の免疫グロブリン合成の証拠を探す腰椎穿刺を含む神経学的検査の組み合わせに基づいて、神経突起変性疾患を有すると診断される。

【0006】

現在のところ、神経突起変性に関連する疾患の治療法はないので、治療は、通常、症候の管理、ならびに再発の頻度および重症度の治療を含む。

【発明の概要】

【0007】

一態様では、本発明は、反発性ガイダンス分子ａ（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａ）（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片を対象とする。抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｇ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｈ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｊ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域；（ｋ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域；（ｌ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域；（ｍ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域；（ｎ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｏ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｐ）配列番号６１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｑ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｒ）配列番号９５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｓ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｔ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｕ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｖ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｗ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｘ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｙ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｚ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ａａ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、（ｂｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｃｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｄｄ）配列番号６８のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｅｅ）配列番号６９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域（ｆｆ）配列番号７０のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｇｇ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｈｈ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｊｊ）配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｋｋ）配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｌｌ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｍｍ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号２９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｎｎ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号３７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｏｏ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｙ ｈｅａｖｙ ｄｏｍａｉｎ）、および配列番号４５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｐｐ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号５３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｑｑ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン、および配列番号６１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｒｒ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号９５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｓｓ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｔｔ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｕｕ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１１９のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｖｖ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１２７のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｗｗ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む可変重ドメイン領域、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含む可変軽ドメイン領域、（ｘｘ）配列番号２のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｙｙ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｚｚ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ａａａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｂｂｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｃｃｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｄｄｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｅｅｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｆｆｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｇｇｇ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｈｈｈ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖；（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖；（ｊｊｊ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｋｋｋ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｌｌｌ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｍｍｍ）配列番号９２または１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９３または１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９４または１５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｎｎｎ）配列番号９６または１５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９７または１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９８または１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｏｏｏ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｐｐｐ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｑｑｑ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｒｒｒ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｓｓｓ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｔｔｔ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｕｕｕ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｖｖｖ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｗｗｗ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、（ｘｘｘ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｙｙｙ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｚｚｚ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ａａａａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｂｂｂｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｃｃｃｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｄｄｄｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｅｅｅｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｆｆｆｆ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｇｇｇｇ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｈｈｈｈ）配列番号９２または１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９３または１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９４または１５
５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号９６または１５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号９７または１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号９８または１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｉｉｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｊｊｊｊ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｋｋｋｋ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｌｌｌｌ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｍｍｍｍ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｎｎｎｎ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｏｏｏｏ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｐｐｐｐ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｑｑｑｑ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｒｒｒｒ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｓｓｓｓ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｔｔｔｔ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｕｕｕｕ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｖｖｖｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｗｗｗｗ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｘｘｘｘ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲとを含む可変重ドメイン鎖、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽ドメイン鎖；（ｙｙｙｙ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖、（ｚｚｚｚ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む可変軽鎖から選択されるドメインまたは領域を含む。

【0008】

単離された抗体または抗体断片は、ヒト抗体、免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結Ｆｖ、モノクローナル抗体、親和性成熟、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ、Ｆａｂ’、二特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２またはＦｖであり得る。抗体または抗体断片は、ヒトであり得る。抗体または抗体断片は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメインまたはヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群より選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含み得る。ヒトＩｇＧ１定常ドメインは、配列番号１４０を含み得るか、または配列番号１４０からなり得る。

【0009】

抗体またはこの断片は、配列番号１、配列番号９、配列番号１７、配列番号２５、配列番号３３、配列番号４１、配列番号４９、配列番号５７、配列番号９１、配列番号９９、配列番号１０７、配列番号１１５、配列番号１２３および配列番号１３１からなる群より選択される配列を含む可変重領域を含み得る。

【0010】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号５、配列番号１３、配列番号２１、配列番号２９、配列番号３７、配列番号４５、配列番号５３、配列番号６１、配列番号９５、配列番号１０３、配列番号１１１、配列番号１１９、配列番号１２７および配列番号１３５からなる群より選択される配列を含む可変軽領域を含み得る。

【0011】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号６、配列番号７および配列番号８、または配列番号６、配列番号７および配列番号６７、配列番号６、配列番号７および配列番号６８、または配列番号６、配列番号７および配列番号６９、または配列番号６、配列番号７および配列番号７０、または配列番号６、配列番号７および配列番号７１、または配列番号６、配列番号７および配列番号７２、または配列番号６、配列番号７および配列番号７３、または配列番号１４、配列番号１５および配列番号１６、または配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４、または配列番号３０、配列番号３１および配列番号３２、または配列番号３８、配列番号３９および配列番号４０、または配列番号５４、配列番号５５および配列番号５６、または配列番号６２、配列番号６３および配列番号６４、または配列番号４６、配列番号４７および配列番号４８、配列番号９６、配列番号９７および配列番号９８、配列番号１０４、配列番号１０５および配列番号１０６、配列番号１１２、配列番号１１３および配列番号１１４、配列番号１２０、配列番号１２１および配列番号１２２、配列番号１２８、配列番号１２９および配列番号１３０、配列番号１３６、配列番号１３７および配列番号１３８、ならびに配列番号１５６および配列番号１５７および配列番号１５８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインを含み得る。

【0012】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号２、配列番号３および配列番号４、または配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２、または配列番号１８、配列番号１９および配列番号２０、または配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８、または配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６、または配列番号５０、配列番号５１および配列番号５２、または配列番号５８、配列番号５９および配列番号６０、配列番号４２、配列番号４３および配列番号４４、配列番号９２、配列番号９３および配列番号９４、配列番号１００、配列番号１０１および配列番号１０２、配列番号１０８、配列番号１０９および配列番号１１０、配列番号１１６、配列番号１１７および配列番号１１８、配列番号１２４、配列番号１２５および配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３３および配列番号１３４、配列番号１５３および配列番号１５４および配列番号１５５の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインを含み得る。

【0013】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号２、配列番号３および配列番号４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号６、配列番号７および配列番号８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0014】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１４、配列番号１５および配列番号１６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0015】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号１８、配列番号１９および配列番号２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0016】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号３０、配列番号３１および配列番号３２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0017】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号３８、配列番号３９および配列番号４０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0018】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号５０、配列番号５１および配列番号５２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号５４、配列番号５５および配列番号５６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0019】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号５８、配列番号５９および配列番号６０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号６２、配列番号６３および配列番号６４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0020】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号４２、配列番号４３および配列番号４４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号４６、配列番号４７および配列番号４８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0021】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号９２または１５３、配列番号９３または１５４および配列番号９４または１５５の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号９６または１５６、配列番号９７または１５７および配列番号９８または１５８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0022】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号１００、配列番号１０１および配列番号１０２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１０４、配列番号１０５および配列番号１０６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0023】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号１０８、配列番号１０９および配列番号１１０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１１２、配列番号１１３および配列番号１１４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0024】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号１１６、配列番号１１７および配列番号１１８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１２０、配列番号１２１および配列番号１２２の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0025】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号１２４、配列番号１２５および配列番号１２６の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１２８、配列番号１２９および配列番号１３０の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0026】

単離された抗体または抗体断片は、配列番号１３２、配列番号１３３および配列番号１３４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号１３６、配列番号１３７および配列番号１３８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0027】

単離された抗体または抗体断片は、免疫接着分子、イメージング剤および治療剤からなる群より選択される薬剤を含み得る。イメージング剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンであり得る。放射性標識は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍであり得る。

【0028】

別の態様では、本発明は、ＲＧＭａエピトープＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（ｈＲＧＭａの４７位から６９位）（配列番号７９）に結合する抗体またはこの断片を対象とする。ＲＧＭａエピトープＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（ｈＲＧＭａの４７位から６９位）（配列番号７９）に結合する抗体は、配列番号２、配列番号３および配列番号４の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変重ドメインと、配列番号６、配列番号７および配列番号８の相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を含む可変軽ドメインとを含み得る。

【0029】

別の態様では、本発明は、反発性ガイダンス分子ａ（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片を対象とする。抗体または抗体断片は、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５（式１−ＣＤＲ−Ｈ１）（式中、Ｘａａ１は、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｈ、Ｙ、Ｌ、ＳおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｇ、Ｄ、Ａ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｉ、ＭおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ５は、Ｓ、Ｎ、Ｈ、Ａ、ＴおよびＱからなる群からのアミノ酸配列である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｈ２）（式中、ｎは、０または１であり、およびＸａａ１は、Ｗ、Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｅ、ＳおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｉ、ＭおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｎ、Ｄ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｐ、Ｙ、Ｇ、Ｗ、Ｈ、ＡおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｙ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｋ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｄ、ＴおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｅ、ＮおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｎ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｔ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、ＩおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｎ、Ｇ、Ｙ、ＴおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｙ、Ｆ、ＮおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ａ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、ＬおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｑ、Ｄ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ｋ、Ｓ、ＮおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｌ、Ｆ、Ｖ、ＫおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、Ｑ、Ｋ、ＲおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、グリシンである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｈ３）（式中、ｎは、０から１１であり、およびＸａａ１は、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｎ、Ｌ、Ｄ、ＱおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、Ｔ、Ｒ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、ＤおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｖ、Ｄ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｍ、Ｃ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｇ、Ｌ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｐ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、ＥおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｙ、Ｖ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｇ、ＨおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕおよびＣｙｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、ＡｌａおよびＧｌｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、ＨｉｓおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、ＴｒｐおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｔｙｒ、ＧｌｙおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｍｅｔ、ＬｅｕおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、ＡｓｐおよびＧｌｙからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、Ｖａｌ、ＡｓｐおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸である。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）を含む可変重ドメインを含む。

【0030】

別の態様では、本発明は、反発性ガイダンス分子ａ（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片を対象とする。抗体または抗体断片は、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−（Ｘａａ）ｎ（式１−ＣＤＲ−Ｌ１）（式中、ｎは、０から３であり、およびＸａａ１は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、ＧおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｄ、Ｓ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｓ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、ＮおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｓ、Ｌ、Ｇ、Ｉ、ＤおよびＰからなる群からのアミノ酸配列であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＨおよびＩからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｖ、Ｄ、Ｉ、Ｓ、ＧおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｇ、Ｋ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｎ、ＴおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｄ、Ｙ、Ａ、Ｃ、ＳおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｌ、ＶおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｉ、Ｃ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、ＮおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、ＶａｌおよびＡｓｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１４は、ＳｅｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｌ２）（式中、ｎは、０から４であり、およびＸａａ１は、Ｄ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、ＳおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｖ、Ｄ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｓ、Ｙ、ＮおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｋ、Ｎ、Ｄ、ＱおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｒ、Ｇ、ＳおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｐ、Ｓ、ＩおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｓ、Ｈ、ＩおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ａｓｎであり；Ｘａａ９は、Ｌｙｓであり；およびＸａａ１０は、Ｇｌｙであり；Ｘａａ１１は、Ａｓｐである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｌ３）（式中、ｎは、０から２であり、およびＸａａ１は、Ｃ、Ｑ、Ｈ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、ＹおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、ＱおよびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｙ、ＷおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｓ、ＨおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｄ、ＶおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｄ、Ｔ、Ｌ、Ｉ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｄ、Ｎ、Ｗ、Ｌ、ＦおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｌ、Ｖ、Ｇ、ＴおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｖａｌ、ＴｙｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、ＬｅｕまたはＶａｌである。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む可変軽ドメインを含む。

【0031】

別の態様では、本発明は、反発性ガイダンス分子ａ（「ＲＧＭａ」）に結合する単離された抗体またはこの抗体断片であって、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５（式１−ＣＤＲ−Ｈ１）（式中、Ｘａａ１は、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｈ、Ｙ、Ｌ、ＳおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｇ、Ｄ、Ａ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｉ、ＭおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ５は、Ｓ、Ｎ、Ｈ、Ａ、ＴおよびＱからなる群からのアミノ酸配列である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｈ２）（式中、ｎは、０または１であり、およびＸａａ１は、Ｙ、Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｇ、ＳおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｉ、ＭおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｎ、Ｄ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｐ、Ｙ、Ｇ、Ｗ、Ｈ、ＡおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｙ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｋ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｄ、ＴおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｅ、ＮおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｎ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｔ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、ＩおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｎ、Ｇ、Ｙ、ＴおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｙ、Ｆ、ＮおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ａ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、ＬおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｑ、Ｄ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ｋ、Ｓ、ＮおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｌ、Ｆ、Ｖ、ＫおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、Ｑ、Ｋ、ＲおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、グリシンである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｈ３）（式中、ｎは、０から１１であり、およびＸａａ１は、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｎ、Ｌ、Ｄ、ＱおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、Ｔ、Ｒ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、ＤおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｖ、Ｄ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｍ、Ｃ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｇ、Ｌ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｐ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、ＥおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｙ、Ｖ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｇ、ＨおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕおよびＣｙｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、ＡｌａおよびＧｌｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、ＨｉｓおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、ＴｒｐおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｔｙｒ、ＧｌｙおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｍｅｔ、ＬｅｕおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、ＡｓｐおよびＧｌｙからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、Ｖａｌ、ＡｓｐおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸である。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）を含む可変重ドメインを含み；ならびに、
以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−（Ｘａａ）ｎ（式１−ＣＤＲ−Ｌ１）（式中、ｎは、０から３であり、およびＸａａ１は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、ＧおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｄ、Ｓ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｓ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、ＮおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｓ、Ｌ、Ｇ、Ｉ、ＤおよびＰからなる群からのアミノ酸配列であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＨおよびＩからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｖ、Ｄ、Ｉ、Ｓ、ＧおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｇ、Ｋ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｎ、ＴおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｄ、Ｙ、Ａ、Ｃ、ＳおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｌ、ＶおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｉ、Ｃ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、ＮおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、ＶａｌおよびＡｓｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１４は、ＳｅｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｌ２）（式中、ｎは、０から４であり、およびＸａａ１は、Ｄ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、ＳおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｖ、Ｄ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｓ、Ｙ、ＮおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｋ、Ｎ、Ｄ、ＱおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｒ、Ｇ、ＳおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｐ、Ｓ、ＩおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｓ、Ｈ、ＩおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ａｓｎであり；Ｘａａ９は、Ｌｙｓであり；およびＸａａ１０は、Ｇｌｙであり；Ｘａａ１１は、Ａｓｐである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｌ３）（式中、ｎは、０から２であり、およびＸａａ１は、Ｃ、Ｑ、Ｈ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、ＹおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、ＱおよびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｙ、ＷおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｓ、ＨおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｄ、ＶおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｄ、Ｔ、Ｌ、Ｉ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｄ、Ｎ、Ｗ、Ｌ、ＦおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｌ、Ｖ、Ｇ、ＴおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｖａｌ、ＴｙｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、ＬｅｕまたはＶａｌである。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む可変軽ドメインも含む単離された抗体またはこの抗体断片を対象とする。

【0032】

別の態様では、本発明は、本明細書に記載される抗体、抗体断片、またはこれらの混合物もしくは誘導体を含む医薬組成物を対象とする。

【0033】

別の態様では、本発明は、神経突起変性に関連する疾患または障害を治療、予防、調節または軽減する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗体を、これを必要とする被験体に投与することを含む方法を対象とする。神経突起変性障害は、多発性硬化症；パーキンソン病；アルツハイマー病；ハンチントン病；筋萎縮性側索硬化症および他の運動ニューロン疾患；テイ・サックス病；ニーマン・ピック病；ゴーシェ病；ハーラー症候群；特発性炎症性脱髄疾患；ビタミンＢ１２欠乏症；橋中央ミエリン溶解；脊髄癆；横断性脊髄炎；デビック病；進行性多病巣性白質脳症；視神経炎；外傷性ＣＮＳ損傷；虚血性脳卒中；網膜症；例えば、緑内障；糖尿病性網膜症；加齢性黄斑変性症または大脳白質委縮症であり得る。

【0034】

別の態様では、本発明は、被験体が神経突起変性障害を有するかを決定するための方法を対象とする。方法は、前記被験体由来の試料におけるＲＧＭａレベルを測定すること；および前記試料におけるＲＧＭａレベルを正常対照と比較することを含み得る。ＲＧＭａレベルの変化は、前記被験体が神経突起変性障害を有することを示す。正常対照と比較したＲＧＭａレベルの増加は、被験体が神経突起変性障害を有することを示す。試料は、血液試料または血清試料または脳脊髄液試料であり得る。試料におけるＲＧＭａレベルを測定する段階は、イムノアッセイで行われ得る。イムノアッセイは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）であり得る。ＥＬＩＳＡは、サンドイッチＥＬＩＳＡであり得る。

【0035】

別の態様では、本発明は、配列番号１から７および６７を含む単離された抗体または抗体断片を対象とする。

【0036】

別の態様では、本発明は、配列番号１から７および６８を含む単離された抗体または抗体断片を対象とする。

【0037】

別の態様では、本発明は、配列番号１から７および６９を含む単離された抗体または抗体断片を対象とする。

【0038】

別の態様では、本発明は、配列番号１から７および７０を含む単離された抗体または抗体断片を対象とする。

【0039】

別の態様では、本発明は、配列番号１から７および７１を含む単離された抗体または抗体断片を対象とする。

【0040】

別の態様では、本発明は、配列番号１から７および７２を含む単離された抗体または抗体断片を対象とする。

【0041】

別の態様では、本発明は、配列番号１から７および７３を含む単離された抗体または抗体断片を対象とする。

【0042】

別の態様では、本発明は、ＲＧＭａエピトープＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（ｈＲＧＭａの４７位から６９位）（配列番号７９）に結合する単離されたモノクローナル抗体または抗体断片であって、配列番号１から７および６７、６８、６９、７０、７１、７２または７３を含む単離されたモノクローナル抗体または抗体断片を対象とする。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】図１は、５０μｇ／ｍｌのｈＲＧＭａ断片を使用した神経突起伸長アッセイからの試験結果を示す。この断片は、配列番号６５のＮ末端アミノ酸４７−１２７（配列番号１３９を参照のこと）を包含し、高親和性ネオゲニン相互作用ドメインおよび骨形成タンパク質相互作用ドメインの両方を含有する。

【図2】図２は、５０μｇ／ｍｌの全長ｈＲＧＭａを使用した神経突起伸長アッセイからの試験結果を示す。

【図3】図３は、抗体ＡＥ１２−１の存在下における病変部周囲（０から５００μｍ）の網膜神経節細胞軸索のインビボ再生成長レベルを反映する棒グラフを示す。

【図4】図４は、抗体ＡＥ１２−１の存在下における網膜神経節細胞軸索（５００から１０００μｍ）のインビボ再生成長レベルをヒト５Ｆ９．２３と直接比較して反映する棒グラフを示す。

【図5】図５は、トリプシン／Ａｓｐ−Ｎで切り出した、ＡＥ１２−１ｍＡｂのエシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｈＲＧＭａの還元Ｅ１画分からのＭＳスペクトルを示すものであり、このスペクトルで示されている配列（それぞれ出現順に配列番号７４および８０）に対応する２つのペプチドの＋３および＋４荷電状態（囲み枠）を示す。＊のラベルが付されたピークは、ｈＲＧＭａ抗原にアサインすることができなかったペプチドであって、この抗体に関係し得るペプチドである。

【図6-1】図６は、トリプシンおよびＡｓｐ−Ｎで切り出した、ＡＥ１２−１ｍＡｂのｈＲＧＭａ（ＭＹＣ構築物）の変性還元Ｅ１画分からのＭＳ（上）およびＭＳ／ＭＳ（下）スペクトルを示すものであり、切り出したペプチドの配列がＫＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号８１）であることを確認する。

【図6-2】図６は、トリプシンおよびＡｓｐ−Ｎで切り出した、ＡＥ１２−１ｍＡｂのｈＲＧＭａ（ＭＹＣ構築物）の変性還元Ｅ１画分からのＭＳ（上）およびＭＳ／ＭＳ（下）スペクトルを示すものであり、切り出したペプチドの配列がＫＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号８１）であることを確認する。

【図7-1】図７は、トリプシンおよびＡｓｐ−Ｎで切り出した、ＡＥ１２−１ｍＡｂのｈＲＧＭａ（ＭＹＣ構築物）の変性還元Ｅ１画分からのＭＳ（上）およびＭＳ／ＭＳ（下）スペクトルを示すものであり、切り出したペプチドの配列がＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号８９）であることを確認する。

【図7-2】図７は、トリプシンおよびＡｓｐ−Ｎで切り出した、ＡＥ１２−１ｍＡｂのｈＲＧＭａ（ＭＹＣ構築物）の変性還元Ｅ１画分からのＭＳ（上）およびＭＳ／ＭＳ（下）スペクトルを示すものであり、切り出したペプチドの配列がＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号８９）であることを確認する。

【図8】図８は、対照抗体（１０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧ；上のパネルを参照のこと）、１ｍｇ／ｋｇのＡＥ１２−１抗体（中央のパネルを参照のこと）、または１ｍｇ／ｋｇのｈ５Ｆ９．２３抗体（下のパネルを参照のこと）で治療したラットにおける神経病変の顕微鏡写真を示す。

【図9】図９は、全長ヒトＲＧＭａで治療し、ＡＥ１２−１（左の棒グラフ）およびＡＥ１２−１−Ｈ（右の棒グラフ）によってこれを中和した後における、基質フィブロネクチンでコーティングした９６ウェルプレート上のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の神経突起伸長の分析結果を示す。抗体および全長ｈＲＧＭａを同時に追加し、続いて、培養物を２４時間インキュベートした。

【図10】図１０は、全長ヒトＲＧＭａで治療し、ＡＥ１２−１−Ｋ（左の棒グラフ）およびＡＥ１２−１−Ｆ（右の棒グラフ）によってこれを中和した後における、基質フィブロネクチンでコーティングした９６ウェルプレート上のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の神経突起伸長の分析結果を示す。抗体および全長ｈＲＧＭａを同時に追加し、続いて、培養物を２４時間インキュベートした。

【図11】図１１は、全長ヒトＲＧＭａで治療し、ＡＥ１２−１−Ｉ（左の棒グラフ）およびＡＥ１２−１−Ｌ（右の棒グラフ）によってこれを中和した後における、基質フィブロネクチンでコーティングした９６ウェルプレート上のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の神経突起伸長の分析結果を示す。抗体および全長ｈＲＧＭａを同時に追加し、続いて、培養物を２４時間インキュベートした。

【図12】図１２は、全長ヒトＲＧＭａで治療し、ＡＥ１２−１−Ｖ（左の棒グラフ）およびＡＥ１２−１−Ｙ（右の棒グラフ）によってこれを中和した後における、基質フィブロネクチンでコーティングした９６ウェルプレート上のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の神経突起伸長の分析結果を示す。抗体および全長ｈＲＧＭａを同時に追加し、続いて、培養物を２４時間インキュベートした。

【図13】図１３は、ＡＥ１２−６、ＡＥ１２−１５およびＡＥ１２−２３を使用した、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞および一次ニューロンでのＲＧＭａ結合アッセイ（ＨＣＡハイコンテント分析）の結果を示す。

【図14-1】図１４は、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１システイン変異体を使用した、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞でのＲＧＭａ結合阻害アッセイ（ハイコンテント分析（ＨＣＡ）による）の結果を示す。

【図14-2】図１４は、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１システイン変異体を使用した、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞でのＲＧＭａ結合阻害アッセイ（ハイコンテント分析（ＨＣＡ）による）の結果を示す。

【図14-3】図１４は、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１システイン変異体を使用した、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞でのＲＧＭａ結合阻害アッセイ（ハイコンテント分析（ＨＣＡ）による）の結果を示す。

【図15】図１５は、ラット海馬一次ニューロンでの神経突起伸長アッセイにおける、ＲＧＭａの神経突起伸長反発作用に対するＡＥ１２−１およびＡＥ１２−６の中和作用を示す。ｒ５Ｆ９抗体を対照として使用する。

【図16】図１６は、実施例９に記載されているように、３つのＲＧＭａ選択的モノクローナル抗体、具体的には、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１Ｙおよびｈ５Ｆ９．２３が、挫滅部位を越えてＧＡＰ−４３陽性線維の大規模な再生を誘導することを示す。Ｙ軸＝挫滅部位から０から５００μｍ離れた領域における軸索束の数。＊＊＊ｐ＜０．００１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊＊ｐ＜０．０１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊ｐ＜０．０５：ヒトＩｇＧに対する有意性。

【図17】図１７は、３つのＲＧＭａ選択的モノクローナル抗体、具体的には、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１Ｙおよびｈ５Ｆ９．２３が、網膜軸索束の数を増加させ、これにより、網膜神経線維束を保護することを示す。Ｙ軸＝実施例１０に記載されているように網膜線維束の数。＊＊ｐ＜０．０１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊ｐ＜０．０５：ｈＩｇＧに対する有意性。

【図18】図１８は、実施例１１に記載されているように、ＲＧＭａ ｍＡｂであるＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１Ｙおよびｈ５Ｆ９．２３が、脊髄ｔＥＡＥモデルにおける機能回復を促進することを示す。サイトカイン注射の約１週間後に抗体治療（静脈内）を開始し、週１回反復した。投与量は、１０ｍｇ／ｋｇであった。＊＊＊ｐ＜０．００１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊＊ｐ＜０．０１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊ｐ＜０．０５：ｈＩｇＧに対する有意性。

【図19】図１９は、実施例１１に記載されているように、ＲＧＭａ ｍＡｂであるＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１ＹおよびＡＢＴ−２０７（ｈ５Ｆ９．２３）が、ヒトＩｇＧ対照抗体と直接比較して、ＧＡＰ−４３およびＭＢＰ領域を増加させ、炎症性病変を減少させることを示す。＊＊＊ｐ＜０．００１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊＊ｐ＜０．０１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊ｐ＜０．０５：ｈＩｇＧに対する有意性。

【図20】図２０は、実施例１１に記載されているように、ＲＧＭａ ｍＡｂであるＡＥ１２−１Ｙ−ＱＬが、週１回静脈内投与した３つの異なる用量０．１；１および１０ｍｇ／ｋｇで、脊髄ｔＥＡＥモデルにおける機能回復を促進したことを示す。サイトカイン注射の約１週間後に抗体治療（静脈内）を開始し、週１回反復した。＊＊＊ｐ＜０．００１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊＊ｐ＜０．０１：ｈＩｇＧに対する有意性、＊ｐ＜０．０５：ｈＩｇＧに対する有意性。

【発明を実施するための形態】

【0044】

本発明者らは、反発性ガイダンス分子ａ（「ＲＧＭａ」）に結合し、神経突起変性に関係する疾患を治療するのに使用することができる新たな抗体を見出している。本明細書で提供されるのは、神経突起変性に関係する疾患に関連する臨床兆候を軽減することができる特異的抗体および非特異的抗体である。

【0045】

１．定義
本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、限定的であることを意図するものではない。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」および「ｔｈｅ」は、文脈上特に明記されない限り、複数形に関する言及を含む。

【0046】

ａ．約
本明細書で使用される場合、「約」は、表示されている値からおおよそ＋／−１０％の変動を指し得る。このような変動は、これについて具体的に言及されているか否かにかかわらず、本明細書で提供される任意の所定値に常に含まれると理解するべきである。

【0047】

ｂ．親和性成熟抗体
本明細書では、「親和性成熟抗体」は、１つ以上のＣＤＲに対する１つ以上の改変であって、標的抗原に対する抗体の親和性（即ち、Ｋ_Ｄ、ｋ_ｄまたはｋ_ａ）を、この改変をもたない親抗体と比較して改善する改変を有する抗体を指すのに使用される。例示的な親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはさらにピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟抗体を生産するための様々な手法が当技術分野において公知であり、バイオディスプレイを使用して調製された結合抗体ライブラリのスクリーニングが挙げられる。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）には、ＶＨおよびＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ，１６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５４（７）：３３１０−３３１９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２６：８８９−８９６（１９９２）には、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発が記載されている。米国特許第６，９１４，１２８号明細書には、活性を増強するアミノ酸残基による選択的変異誘発部位および接触部位または超変異部位における選択的変異が記載されている。

【0048】

ｃ．抗体および複数の抗体
本明細書で使用される場合、「抗体」および「複数の抗体」は、モノクローナル抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体（完全または部分的ヒト化）、動物抗体、例えば限定されないが、トリ（例えば、カモまたはガチョウ）、サメ、クジラおよび非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど）または非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジーなど）を含む哺乳動物、組換え抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（「ｓｄＦｖ」）および抗イディオタイプ（「抗Ｉｄ」）抗体、二重ドメイン抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）または三重可変ドメイン（ＴＶＤ）抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびこの作製方法は、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれるＷｕ，Ｃ，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５（１１）：１２９０−１２９７（２００７）および国際公開第２００１／０５８９５６号に記載されている。）、ならびに上記のいずれかの機能的に活性なエピトープ結合断片を指す。特に、抗体としては、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、即ち分析物結合部位を含む分子が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。簡素化のために、分析物に対する抗体は、本明細書では「抗分析物抗体」または単に「分析物抗体」（例えば、抗ＲＧＭａ抗体またはＲＧＭａ抗体）と称されることが多い。

【0049】

ｄ．抗体断片
本明細書で使用される場合、「抗体断片」は、抗原結合部位または可変領域を含むインタクトな抗体の一部を指す。前記一部は、インタクトな抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（即ち、抗体のアイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＨ４）を含まない。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、１つの軽鎖可変ドメインのみを含有する一本鎖ポリペプチド、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有する一本鎖ポリペプチド、１つの重鎖可変領域のみを含有する一本鎖ポリペプチドおよび重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有する一本鎖ポリペプチドが挙げられる。

【0050】

ｅ．結合定数
結合定数を本明細書で説明する。本明細書で使用される場合、用語「会合速度定数」、「ｋ_ｏｎ」または「ｋ_ａ」は、以下の方程式によって示されているように、標的抗原に対する抗体の結合速度または抗体と抗原との間の複合体形成速度を示す値を指す：
抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ）→Ａｂ−Ａｇ。

【0051】

本明細書で互換的に使用される場合、用語「解離速度定数」、「ｋ_ｏｆｆ」または「ｋ_ｄ」は、以下の方程式によって示されているように、標的抗原からの抗体の解離速度、またはＡｂ−Ａｇ複合体が遊離抗体および抗原に経時的に分離することを示す値を指す：
抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ）←Ａｂ−Ａｇ。

【0052】

会合および解離速度定数を測定するための方法は、当技術分野において周知である。蛍光ベースの技術を使用することによって、平衡状態にある生理的緩衝液中で試料を調べるための高い感度および能力が得られる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生物分子相互作用分析）アッセイなどの他の実験的アプローチおよび装置を使用することができる（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ，ａ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ｃｏｍｐａｎｙ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な装置）。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ）アッセイも使用することができる。

【0053】

本明細書で互換的に使用される場合、用語「平衡解離定数」または「Ｋ_Ｄ」は、解離速度（ｋ_ｏｆｆ）を会合速度（ｋ_ｏｎ）で割ることによって得られた値を指す。会合速度、解離速度および平衡解離定数は、抗原に対する抗体の結合親和性を表すのに使用される。

【0054】

ｆ．結合タンパク質
本明細書では、「結合タンパク質」は、例えば、ポリペプチド、抗原、化合物または他の分子または任意の種類の基質などの結合パートナーに結合して複合体を形成する単量体または多量体タンパク質を指すのに使用される。結合タンパク質は、結合パートナーに特異的に結合する。結合タンパク質としては、抗体および当技術分野において公知のおよび本明細書における下記のこの抗原結合断片およびこの他の種々の形態および誘導体、ならびに抗原分子または抗原分子上の特定の部位（エピトープ）に結合する１つ以上の抗原−結合ドメインを含む他の分子が挙げられる。従って、結合タンパク質としては、限定されないが、抗体、四量体免疫グロブリン、ＩｇＧ分子、ＩｇＧ_１分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、親和性成熟抗体、および抗原に結合する能力を保持する任意のこのような抗体の断片が挙げられる。

【0055】

ｇ．二特異性抗体
本明細書では、「二特異性抗体」は、クアドローマ技術によって（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５（５９３４）：５３７−５４０（１９８３）を参照のこと）、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーションによって（Ｓｔａｅｒｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１４（６０１２）：６２８−６３１（１９８５）を参照のこと）、または変異をＦｃ領域に導入するノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）もしくは類似のアプローチによって（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０（１４）：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと）作製され、この結果、複数の異なる免疫グロブリン種が得られる全長抗体を指すのに使用され、このうち１つのみが、機能性二特異性抗体である。二特異性抗体は、この２つの結合アーム（一組のＨＣ／ＬＣ）の一方上で１つの抗原（またはエピトープ）に結合し、この第２のアーム（別組のＨＣ／ＬＣ）上で異なる抗原（またはエピトープ）に結合する。この定義によれば、二特異性抗体は、２つの別個の抗原結合アーム（特異性およびＣＤＲ配列の両方において）を有し、これが結合する各抗原に対して一価である。

【0056】

ｈ．ＣＤＲ
本明細書では、「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の「相補性決定領域」を指す。重鎖および軽鎖の可変領域それぞれに３つのＣＤＲがあり、これらは、各可変領域の「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」および「ＣＤＲ３」と指定されている。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲセット」は、抗原に結合する単一の可変領域中に存在する３つのＣＤＲの一群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））によって記載されているシステムは、抗体の任意の可変領域に適用可能な一義的な残基ナンバリングシステムを提供するだけではなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、「ＫａｂａｔのＣＤＲ」と称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９６：９０１−９１７（１９８７）；およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３（１９８９））は、ＫａｂａｔのＣＤＲ内の特定の下位部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造をとることを見出した。これらの下位部分は、「Ｌ１」、「Ｌ２」および「Ｌ３」または「Ｈ１」、「Ｈ２」および「Ｈ３」と指定され、ここで、「Ｌ」および「Ｈ」は、軽鎖領域および重鎖領域をそれぞれ指定する。これらの領域は、「ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ」と称され得、ＫａｂａｔのＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔのＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，９：１３３−１３９（１９９５）およびＭａｃＣａｌｌｕｍ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２６２（５）：７３２−７４５（１９９６）によって記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、本明細書のシステムの１つに厳密には従わない場合があるが、それでもなおＫａｂａｔのＣＤＲと重複し、特定の残基または残基群またはＣＤＲ全体でさえ抗原結合に有意な影響を与えないという予測または実験的知見を踏まえて、短くなることもあるし、または長くなることもある。本明細書で使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを用い得るが、特定の実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されるＣＤＲを使用する。

【0057】

ｉ．成分または複数の成分
「成分」、「複数の成分」または「少なくとも１つの成分」は、一般に、本明細書に記載される方法および当技術分野において公知の他の方法に従って、試験試料、例えば、患者の尿、血清または血漿試料をアッセイするためのキットに含まれ得る捕捉抗体、検出またはコンジュゲート較正用物質、対照、感度パネル、容器、緩衝液、希釈液、塩、酵素、酵素の補助因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止溶液などを指す。アッセイで使用するために、幾つかの成分は溶液性のものでもよいし、または再構成用に凍結乾燥したものでもよい。

【0058】

ｊ．コンセンサスまたはコンセンサス配列
本明細書で使用される場合、「コンセンサス」または「コンセンサス配列」は、特定抗原の複数のサブタイプのアライメント分析に基づいて構築された合成核酸配列または対応するポリペプチド配列を指す。前記配列は、特定抗原の複数のサブタイプまたはセロタイプに対する広範な免疫を誘導するのに使用され得る。融合タンパク質などの合成抗原をコンセンサス配列（またはコンセンサス抗原）に操作することができる。

【0059】

ｋ．対照
本明細書で使用される場合、「対照」は、対象とする分析物、例えば、ＲＧＭａ（例えば、膜結合ＲＧＭａ、可溶性ＲＧＭａ、膜結合ＲＧＭａの断片、可溶性ＲＧＭａの断片、ＲＧＭａ（膜結合ＲＧＭａまたは可溶性ＲＧＭａ）の変異体またはこれらの任意の組み合わせ）を含まないことが公知の組成物（「陰性」）、または対象とする分析物、例えば、ＲＧＭａ（例えば、膜結合ＲＧＭａ、可溶性ＲＧＭａ、膜結合ＲＧＭａの断片、可溶性ＲＧＭａの断片、ＲＧＭａ（膜結合ＲＧＭａまたは可溶性ＲＧＭａ）の変異体またはこれらの任意の組み合わせ）を含むことが公知の組成物（「陽性対照」）を指す。陽性対照は、既知濃度のＲＧＭａを含み得る。本明細書では、「対照」、「陽性対照」および「較正用物質」は、既知濃度のＲＧＭａを含む組成物を指すのに互換的に使用され得る。「陽性対照」は、アッセイの性能特性を確立するのに使用され得、試薬（例えば、分析物）の完全性の有用な指標である。「正常対照」は、鉄関連疾患または障害がない試料または被験体を指し得る。

【0060】

ｌ．誘導体
本明細書で使用される場合、抗体の「誘導体」は、非改変（ｇｅｎｕｉｎｅ）抗体または親抗体と比較して、アミノ酸配列に１つ以上の改変を有する抗体を指し、改変されたドメイン構造を示し得る。誘導体は、ネイティブな抗体に見られる典型的なドメイン構造およびアミノ酸配列を依然としてとることができ、標的（抗原）に特異的に結合することができる。抗体誘導体の典型的な例は、他のポリペプチドにカップリングされた抗体、再配置された抗体ドメイン、または抗体断片である。誘導体はまた、少なくとも１つのさらなる化合物、例えば、共有結合または非共有結合によって連結されているタンパク質ドメインを含み得る。連結は、当技術分野において公知の方法による遺伝子融合に基づくものであり得る。本発明に従って用いられる抗体を含む融合タンパク質中に存在するさらなるドメインは、好ましくは、柔軟なリンカー、有利には、さらなるタンパク質ドメインのＣ末端と抗体のＮ末端との間の距離（またはこの逆も同様である。）を結ぶのに十分な長さの複数の親水性ペプチド結合アミノ酸を含むペプチドリンカーによって連結され得る。抗体は、生物学的活性または固体支持体に対する選択的結合に適切なコンフォメーションを有するエフェクター分子、例えば、生物学的に活性な物質（例えば、サイトカインまたは成長ホルモン）、化学薬剤、ペプチド、タンパク質または薬物に連結され得る。

【0061】

ｍ．二重特異性抗体
本明細書では、「二重特異性抗体」は、この２つの結合アーム（一組のＨＣ／ＬＣ）のそれぞれにおいて２つの異なる抗原（またはエピトープ）に結合することができる全長抗体を指すのに使用される（国際公開第０２／０２７７３号を参照のこと）。従って、二重特異性結合タンパク質は、同一の特異性および同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、これが結合する各抗原に対して二価である。

【0062】

ｎ．二重可変ドメイン
本明細書では、「二重可変ドメイン」は、結合タンパク質上の２つ以上の抗原結合部位を指すのに使用され、二価（２つの抗原結合部位）、四価（４つの抗原結合部位）または多価結合タンパク質であり得る。ＤＶＤは、単一特異性、即ち、１つの抗原（または１つの特異的エピトープ）に結合することができるか、または多重特異性、即ち、２つ以上の抗原（即ち、同じ標的抗原分子の２つ以上のエピトープまたは異なる標的抗原の２つ以上のエピトープ）に結合することができる。好ましいＤＶＤ結合タンパク質は、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含み、「ＤＶＤ免疫グロブリン」または「ＤＶＤ−Ｉｇ」と称される。従って、このようなＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、四量体であり、ＩｇＧ分子を連想させるが、ＩｇＧ分子よりも多くの抗原結合性の部位を提供する。従って、四量体ＤＶＤ−Ｉｇ分子の半分はそれぞれ、ＩｇＧ分子の半分の一方を連想させ、重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むが、単一の抗原結合ドメインを提供するＩｇＧ分子の一組の重鎖および軽鎖とは異なり、ＤＶＤ−Ｉｇの一組の重鎖および軽鎖は、２つ以上の抗原結合部位を提供する。

【0063】

ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質の各抗原結合部位は、ドナー（「親」）モノクローナル抗体に由来し得、従って、抗原結合部位あたりの抗原結合に関与する合計６つのＣＤＲを有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。従って、２つの異なるエピトープ（即ち、２つの異なる抗原分子の２つの異なるエピトープまたは同じ抗原分子の２つの異なるエピトープ）に結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、第１の親モノクローナル抗体に由来する抗原結合部位および第２の親モノクローナル抗体の抗原結合部位を含む。

【0064】

ＤＶＤ−Ｉｇ結合分子の設計、発現および特性決定についての説明は、国際公開第２００７／０２４７１５号、米国特許第７，６１２，１８１号明細書、およびＷｕ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２５：１２９０−１２９７（２００７）に提供されている。このようなＤＶＤ−Ｉｇ分子の好ましい例は、構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは、重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件でリンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ｎは、０または１であるが、好ましくは、１である。）を含む重鎖；ならびに構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件でリンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず、ｎは、０または１であるが、好ましくは、１である。）を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、２つのこのような重鎖および２つのこのような軽鎖を含み得、ここで、各鎖は、可変領域の間に介在する定常領域を有さずに、タンデムに連結された可変ドメインを含み、重鎖および軽鎖は会合して、タンデムな機能性抗原結合部位を形成し、一組の重鎖および軽鎖は、別組の重鎖および軽鎖と会合して、４つの機能性抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。別の例では、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、可変ドメインの間に介在する定常領域を有さずに、タンデムに連結された３つの可変ドメイン（ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３）をそれぞれ含む重鎖および軽鎖を含み得、ここで、一組の重鎖および軽鎖は、会合して、３つの抗原結合部位を形成し得、一組の重鎖および軽鎖は、別組の重鎖および軽鎖と会合して、６つの抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。

【0065】

好ましい実施形態では、本発明のＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、この親モノクローナル抗体が結合する同じ標的分子に結合するだけではなく、１つ以上のこの親モノクローナル抗体の１つ以上の所望の特性も有する。好ましくは、このようなさらなる特性は、１つ以上の親モノクローナル抗体の抗体パラメータである。１つ以上のこの親モノクローナル抗体に由来するＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質に影響を与え得る抗体パラメータとしては、限定されないが、抗原特異性、抗原親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、タンパク質安定性、タンパク質溶解度、生産効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティ、組織交差反応性およびオルソロガス抗原結合が挙げられる。

【0066】

ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、ＲＧＭａの少なくとも１つのエピトープに結合する。ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質の非限定的な例としては、ＲＧＭａの１つ以上のエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質、ヒトＲＧＭａのエピトープおよび別の種（例えば、マウス）のＲＧＭａのエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質、ならびにヒトＲＧＭａのエピトープおよび別の標的分子（例えば、ＶＥＧＦＲ２またはＶＥＧＦＲ１）のエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質が挙げられる。

【0067】

ｏ．エピトープまたは複数のエピトープ
「エピトープ」もしくは「複数のエピトープ」または「対象とするエピトープ」は、認識される任意の分子上の部位であって、この特異的な結合パートナー上の相補的部位に結合することができる部位を指す。分子および特異的結合パートナーは、特異的結合対の一部である。例えば、エピトープは、ポリペプチド、タンパク質、ハプテン、炭水化物抗原（例えば、限定されないが、糖脂質、糖タンパク質またはリポ多糖）または多糖上にあり得る。この特異的結合パートナーは、限定されないが、抗体であり得る。

【0068】

ｐ．フレームワークまたはフレームワーク配列
本明細書で使用される場合、「フレームワーク」（ＦＲ）または「フレームワーク配列」は、ＣＤＲを除いた残りの可変領域配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、様々なシステムによって決定することができるので（例えば、上記を参照のこと）、フレームワーク配列の意味は、これに対応して様々な解釈がなされる。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２および−Ｌ３ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２および−Ｈ３）はまた、軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４つの小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分け、ここで、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２との間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３との間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４との間に位置する。他のものによって言及される場合、フレームワーク領域は、特定の小領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４と指定せずに、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内のＦＲを一体としたもの表す。本明細書で使用される場合は、ＦＲは、４つの小領域のうち１つを表し、複数のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つの小領域のうち２つ以上を表す。

【0069】

当技術分野において公知の技術を使用して非ヒト抗体をヒト化するために、重鎖および軽鎖「アクセプター」フレームワーク配列（または単に「アクセプター」配列）として使用され得るヒト重鎖および軽鎖ＦＲ配列が、当技術分野において公知である。一実施形態では、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、公的に利用可能なデータベース、例えば、Ｖ−ｂａｓｅ（ハイパーテキスト転送プロトコール：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）、または国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））情報システム（ハイパーテキスト転送プロトコール：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／）に列挙されているフレームワーク配列から選択される。

【0070】

ｑ．機能的抗原結合部位
本明細書で使用される場合、「機能的抗原結合部位」は、標的抗原に結合することができる結合タンパク質（例えば、抗体）上の部位を意味し得る。抗原結合部位の抗原結合親和性は、抗原結合部位が由来する親結合タンパク質、例えば、親抗体ほど強くなくてもよいが、抗原に結合する能力は、抗原に結合するタンパク質、例えば、抗体を評価するための様々な公知の方法のいずれか１つを使用して測定可能でなければならない。さらに、本明細書では、多価タンパク質の抗原結合部位それぞれの抗原結合親和性は、定量的に同じである必要はない。

【0071】

ｒ．ヒト抗体
本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含み得る。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダム変異誘発および部位特異的変異誘発によって、またはインビボにおける体細胞変異によって導入される変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含まないものとする。

【0072】

ｓ．ヒト化抗体
本明細書では、「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）由来の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」、即ち、ヒト生殖系列可変配列とより類似するように変更されている抗体を説明するのに使用される。「ヒト化抗体」は、対象とする抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む抗体またはこの変異体、誘導体、類似体もしくは断片である。本明細書で使用される場合、用語「実質的に」は、ＣＤＲとの関連では、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が、非ヒト免疫グロブリン（即ち、ドナー抗体）のものに対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部が、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである少なくとも１つの、通常２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含む。一実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインとを含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含み得る。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／またはヒト化重鎖のみを含有する。

【0073】

ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびに限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含み得、特定の定常ドメインは、当技術分野において周知の技術を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するように選択され得る。

【0074】

ヒト化抗体のフレームワーク領域およびＣＤＲは、親配列と正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークを少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失によって変異し、この結果、この部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基が、ドナー抗体またはコンセンサスフレームワークに対応していなくてもよい。しかしながら、好ましい実施形態では、このような変異は、大規模なものではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％は、親のＦＲおよびＣＤＲ配列のものに対応する。本明細書で使用される場合、用語「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書で使用される場合、用語「コンセンサス免疫グロブリン配列」は、関連免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も高頻度に存在するアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，１９８７）を参照のこと）。従って、「コンセンサス免疫グロブリン配列」は、「コンセンサスフレームワーク領域」および／または「コンセンサスＣＤＲ」を含み得る。免疫グロブリンのファミリーでは、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリーにおいて当該位置で最も高頻度に存在するアミノ酸によって占められている。２つのアミノ酸が等頻度に存在する場合には、コンセンサス配列中にいずれかが含まれ得る。

【0075】

ｔ．同一または同一性
本明細書では、２つ以上のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列との関連で使用される場合、「同一」または「同一性」は、当該配列が、指定領域にわたって指定割合の同一残基を有することを意味し得る。２つの配列を最適にアライメントし、指定領域にわたって２つの配列を比較し、両配列で同一残基が存在する位置の数を決定して一致位置の数を得て、一致位置の数を指定領域の位置の総数で割り、この結果に１００を乗じて配列同一性の割合を得ることによって、前記割合を計算することができる。２つの配列が異なる長さのものであるか、またはアライメントにより１つ以上の付着末端が生じ、指定の比較領域に単一配列のみが含まれる場合には、単一配列の残基を計算の分母に含めるが、分子には含めない。

【0076】

ｕ．単離されたポリヌクレオチド
本明細書で使用される場合、「単離されたポリヌクレオチド」は、ポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成起源またはこれらの組み合わせ）を意味し得、この起源によって、単離されたポリヌクレオチドは、天然では「単離されたポリヌクレオチド」が共に見られるポリヌクレオチドの全部または一部と会合していないか；天然では連結していないポリヌクレオチドと作動可能に連結されているか；または天然ではより長い配列の一部として存在しないものである。

【0077】

ｖ．標識および検出可能な標識
本明細書で使用される場合、「標識」および「検出可能な標識」は、抗体と分析物との間の反応を検出可能にするために抗体または分析物に結合された部分を指し、このようにして標識された抗体または分析物は、「検出可能に標識された」と称される。標識は、視覚的手段または機器的手段によって検出可能なシグナルを生成し得る。種々の標識としては、シグナル生成物質、例えば、色素原、蛍光化合物、化学発光化合物、放射性化合物などが挙げられる。標識の代表例としては、光を生成する部分、例えば、アクリジニウム化合物、および蛍光を生成する部分、例えば、フルオレセインが挙げられる。他の標識は、本明細書に記載されている。これに関して、部分これ自体は検出可能ではなくてもよいが、さらに別の部分と反応して検出可能になり得る。用語「検出可能に標識された」の使用は、このような標識を包含するものとする。

【0078】

当技術分野において公知の任意の検出可能な標識が使用され得る。例えば、検出可能な標識は、放射性標識（例えば、^３Ｈ、^１２５Ｉ、^３５Ｓ、^１４Ｃ、^３２Ｐおよび^３３Ｐ）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ペルオキシダーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼなど）、化学発光標識（例えば、アクリジニウムエステル、チオエステルまたはスルホンアミド；ルミノール、イソルミノール、フェナントリジニウムエステルなど）、蛍光標識（例えば、フルオレセイン（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、３’６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−ヘキサクロロ−フルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネートなど））、ローダミン、フィコビリタンパク質、Ｒ−フィコエリトリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛でキャップされたセレン化カドミウム）、温度測定標識またはイムノポリメラーゼ連鎖反応標識であり得る。標識への導入、標識化手法および標識の検出は、Ｐｏｌａｋ ａｎｄ Ｖａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２^ｎｄｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９９７）、およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎによって出版されたハンドブックとカタログの組み合わせであるＨａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（１９９６）に見られる。蛍光標識は、ＦＰＩＡで使用され得る（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，５９３，８９６号明細書、同第５，５７３，９０４号明細書、同第５，４９６，９２５号明細書、同第５，３５９，０９３号明細書および同第５，３５２，８０３号明細書を参照のこと）。アクリジニウム化合物は、均一な化学発光アッセイにおいて、検出可能な標識として使用され得る（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１６：１３２４−１３２８（２００６）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．４：２３１３−２３１７（２００４）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４：３９１７−３９２１（２００４）；およびＡｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．５：３７７９−３７８２（２００３）を参照のこと）。

【0079】

一態様では、アクリジニウム化合物は、アクリジニウム−９−カルボキサミドである。アクリジニウム−９−カルボキサミドを調製するための方法は、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ，Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．６：１０７−１１４（１９９１）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６３：５６３６−５６３９（１９９８）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５５：１０８９９−１０９１４（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１：７７９−７８１（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１１：７１４−７２４（２０００）；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；Ｄｙｋｅ，Ｋ．Ｖ．Ｅｄ．；ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ｐｐ．７７−１０５（２００２）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．５：３７７９−３７８２（２００３）；ならびに米国特許第５，４６８，６４６号明細書、同第５，５４３，５２４号明細書および同第５，７８３，６９９号明細書（これらはそれぞれ、上記に関するこの教示について全体が参照により本明細書に組み込まれる。）に記載されている。

【0080】

アクリジニウム化合物の別の例は、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルである。式ＩＩのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの例は、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウムフルオロスルホネート（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩから入手可能）である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルを調製するための方法は、ＭｃＣａｐｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．４：１１１１−２１（１９６５）；Ｒａｚａｖｉ ｅｔ ａｌ，Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ １５：２４５−２４９（２０００）；Ｒａｚａｖｉ ｅｔ ａｌ，Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ １５：２３９−２４４（２０００）；および米国特許第５，２４１，０７０号明細書（これらはそれぞれ、上記に関するこの教示について全体が参照により本明細書に組み込まれる。）に記載されている。このようなアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、シグナルの強度および／またはシグナルの速度に関して、少なくとも１つのオキシダーゼによる分析物の酸化において生成された過酸化水素の効率的な化学発光指標である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルについての化学発光の経過は、迅速に、即ち１秒未満で完了するが、アクリジニウム−９−カルボキサミドの化学発光は、２秒を超えて継続する。しかしながら、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、タンパク質の存在下でこの化学発光特性を喪失する。従って、この使用は、シグナルの生成および検出の間にタンパク質が存在しないことを必要とする。試料中のタンパク質を分離または除去するための方法は当業者に周知であり、限定されないが、限外ろ過、抽出、沈殿、透析、クロマトグラフィーおよび／または消化が挙げられる（例えば、Ｗｅｌｌｓ，Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（２００３）を参照のこと）。試験試料から除去または分離されるタンパク質の量は、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％または約９５％であり得る。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルおよびこの使用に関するさらなる詳細は、２００７年４月９日に出願された米国特許出願第１１／６９７，８３５号明細書に記載されている。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、脱気無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）または水性コール酸ナトリウムなどの任意の適切な溶媒に溶解され得る。

【0081】

ｗ．連結配列および連結ペプチド配列
「連結配列」または「連結ペプチド配列」は、対象とする１つ以上のポリペプチド配列（例えば、全長、断片など）に接続された天然または人工のポリペプチド配列を指す。用語「接続された」は、連結配列と、対象とするポリペプチド配列との結合を指す。このようなポリペプチド配列は、好ましくは、１つ以上のペプチド結合によって結合される。連結配列は、約４から約５０アミノ酸の長さを有し得る。好ましくは、連結配列の長さは、約６から約３０アミノ酸である。アミノ酸の置換、付加または欠失によって天然の連結配列を改変して、人工の連結配列を作ることができる。例示的な連結配列としては、限定されないが、以下のものが挙げられる：（ｉ）アミノ酸配列ＨＨＨＨＨＨ（配列番号１４８）を有する６ＸＨｉｓタグ（配列番号１４８）などのヒスチジン（Ｈｉｓ）タグは、対象とするポリペプチドおよび抗体の単離および精製を容易にするために連結配列として有用である；（ｉｉ）Ｈｉｓタグのようなエンテロキナーゼ切断部位は、対象とするタンパク質および抗体の単離および精製に使用される。多くの場合、エンテロキナーゼ切断部位は、対象とするタンパク質および抗体の単離および精製において、Ｈｉｓタグと共に使用される。種々のエンテロキナーゼ切断部位が、当技術分野において公知である。エンテロキナーゼ切断部位の例としては、限定されないが、アミノ酸配列ＤＤＤＤＫ（配列番号１４９）およびこの誘導体（例えば、ＡＤＤＤＤＫ（配列番号１５０）など）が挙げられる；（ｉｉｉ）一本鎖可変領域断片の軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を連結または接続するために、種々の配列を使用することができる。他の連結配列の例は、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３（１９８８）；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４（１９９０）に見られ得る。さらなる機能、例えば、薬物の結合または固体支持体への結合のために、連結配列を改変することもできる。本開示との関連では、モノクローナル抗体は、例えば、Ｈｉｓタグ、エンテロキナーゼ切断部位またはこの両方などの連結配列を含有し得る。

【0082】

ｘ．多価結合タンパク質
本明細書では、「多価結合タンパク質」は、２つ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質（本明細書では、「抗原結合ドメイン」とも称される。）を指すのに使用される。多価結合タンパク質は、好ましくは、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作され、一般に、天然に存在する抗体ではない。用語「多重特異性結合タンパク質」は、同じ標的分子の２つ以上の異なるエピトープに結合することができる結合タンパク質を含む、２つ以上の関連または非関連標的に結合することができる結合タンパク質を指す。

【0083】

ｙ．所定のカットオフおよび所定のレベル
「所定のカットオフ」および「所定のレベル」は、一般に、種々の臨床パラメータ（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善など）と既に結びつけられているかまたはこれらに関連付けられている所定のカットオフ／レベルに対してアッセイ結果を比較することによって、診断／予測／治療効果の結果を評価するのに使用されるアッセイカットオフ値を指す。本発明の開示は、例示的な所定のレベルを提供する。しかしながら、カットオフ値は、イムノアッセイの性質（例えば、用いられる抗体など）に応じて変化し得ることが周知である。さらに、この開示に基づいて、他のイムノアッセイについてのイムノアッセイ特異的カットオフ値を得るために、本明細書における開示を他のイムノアッセイに対して適合させることは、十分に当技術分野における通常の技術範囲内である。所定のカットオフ／レベルの厳密な値はアッセイ間で変化し得るのに対して、本明細書に記載されている相関関係は一般に適用可能であるはずである。

【0084】

ｚ．前処理試薬
本明細書に記載される診断アッセイで使用される場合、「前処理試薬」、例えば、溶解、沈殿および／または可溶化試薬は、任意の細胞を溶解し、および／または試験試料中に存在する任意の分析物を可溶化するものである。さらに本明細書に記載されているように、前処理は、すべての試料に必要ではない。とりわけ、分析物（即ち、ＲＧＭａ（例えば、膜結合ＲＧＭａ、可溶性ＲＧＭａ、膜結合ＲＧＭａの断片、可溶性ＲＧＭａの断片、ＲＧＭａ（膜結合ＲＧＭａまたは可溶性ＲＧＭａ）の変異体またはこれらの任意の組み合わせ））を可溶化することは、試料中に存在する任意の内在性結合タンパク質からの分析物の放出を伴う。前処理試薬は、均一（分離段階を必要としない）または不均一（分離段階を必要とする。）であり得る。不均一前処理試薬を使用する場合、アッセイの次の段階へ進む前に、沈殿した分析物結合タンパク質が試験試料から除去される。前処理試薬は、（ａ）１つ以上の溶媒および塩、（ｂ）１つ以上の溶媒、塩および洗浄剤、（ｃ）洗浄剤、（ｄ）洗浄剤および塩、または（ｅ）細胞溶解および／もしくは分析物の可溶化に適切な任意の試薬または試薬の組み合わせを場合により含み得る。

【0085】

ａａ．品質管理試薬
本明細書に記載されるイムノアッセイおよびキットとの関連では、「品質管理試薬」は、限定されないが、較正用物質、対照および感度パネルを含む。「較正用物質」または「標準」は、通常、分析物、例えば、抗体または分析物の濃度を内挿するための較正（標準）曲線を確立するのに（例えば、１つ以上、例えば複数）使用される。または、所定の正／負のカットオフに近い単一の較正用物質を使用することができる。「感度パネル」を構成するために、複数の較正用物質（即ち、２つ以上の較正用物質または様々な量の較正用物質）を併せて使用することができる。

【0086】

ｂｂ．組換え抗体および複数の組換え抗体
「組換え抗体」および「複数の組換え抗体」は、組換え技術によって、１つ以上のモノクローナル抗体の全部または一部をコードする核酸配列を適切な発現ベクター中にクローニングし、続いて、適切な宿主細胞中で抗体を発現させることを含む１つ以上の段階によって調製された抗体を指す。この用語は、限定されないが、組換え的に生産されたモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体（完全または部分的にヒト化）、抗体断片から形成された多重特異性または多価構造、二官能性抗体、ヘテロコンジュゲートＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ（登録商標）および本明細書の（ｉ）に記載される他の抗体を含む。（二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびこの作製方法は、Ｗｕ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５：１２９０−１２９７（２００７）に記載されている。）本明細書で使用される場合、用語「二官能性抗体」は、ある抗原性部位に対する特異性を有する第１のアームと、異なる抗原性部位に対する特異性を有する第２のアームとを含む抗体を指し、即ち、二官能性抗体は二重特異性を有する。

【0087】

ｃｃ．試料、試験試料および患者の試料
「試料」、「試験試料」および「患者の試料」は、本明細書では互換的に使用され得る。尿、血清、血漿、羊水、脳脊髄液、胎盤細胞もしくは組織、内皮細胞、白血球または単球の試料などの試料は、患者から得られた状態のまま直接使用することができ、または本明細書で考察される幾つかの方法もしくは当技術分野において公知の別の方法で試料の特性を改変するために、例えば、ろ過、蒸留、抽出、濃縮、遠心分離、干渉成分の不活性化および試薬の追加などによって前処理することができる。

【0088】

ｄｄ．一連の較正組成物
「一連の較正組成物」は、既知濃度のＣｙｓ−ＣＲＧＭａを含む複数の組成物を指し、これらの組成物はそれぞれ、Ｃｙｓ−ＣＲＧＭａの濃度が一連の較正組成物における他の組成物と異なる。

【0089】

ｅｅ．固相
「固相」は、不溶であるか、または後続反応によって不溶となり得る任意の材料を指す。固相は、捕捉剤を誘引および固定化する固有の能力について選択され得る。または、固相は、これに、捕捉剤を誘引および固定化する能力を有する連結剤を付着することができる。連結剤は、例えば、捕捉剤自体または捕捉剤にコンジュゲートした帯電物質に関して逆帯電した帯電物質を含み得る。一般に、連結剤は、固相上に固定化された（固相に結合した）および結合反応を通じて捕捉剤を固定化する能力を有する任意の（好ましくは特異的な）結合パートナーであり得る。連結剤によって、アッセイの実施の前またはアッセイの実施の間に、捕捉剤が固相材料に間接的に結合することが可能になる。固相は、例えば、プラスチック、誘導体化されたプラスチック、磁性金属もしくは非磁性金属、ガラスまたはケイ素であり得、例えば、試験管、マイクロタイターウェル、シート、ビーズ、微粒子、チップおよび当業者に公知の他の構造物が挙げられる。

【0090】

ｆｆ．特異的結合
本明細書で使用される場合、「特異的結合」または「特異的に結合すること」は、抗体、タンパク質またはペプチドと、第２の化学種との相互作用を指し得、ここで、相互作用は、化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存する；例えば、抗体は、タンパク質一般にではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合する。抗体が、エピトープ「Ａ」に対して特異的である場合には、標識された「Ａ」および抗体を含有する反応物中のエピトープＡ（または遊離の、標識されていないＡ）を含有する分子の存在は、抗体に結合している標識されたＡの量を減少させる。

【0091】

ｇｇ．特異的結合パートナー
「特異的結合パートナー」は、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的手段によって互いに特異的に結合する２つの異なる分子を含む。従って、一般的なイムノアッセイの抗原および抗体の特異的結合対に加えて、他の特異的結合対としては、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物およびレクチン、相補的ヌクレオチ配列、エフェクターおよび受容体分子、補助因子および酵素、酵素および酵素阻害剤などが挙げられ得る。さらに、特異的結合対としては、元の特異的結合メンバーの類似体であるメンバー、例えば、分析物類似体が挙げられ得る。免疫反応特異的結合メンバーとしては、単離されているかまたは組換え的に生産されたかにかかわらず、抗原、抗原断片およびモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体、ならびにこれらの複合体および断片が挙げられる。

【0092】

ｈｈ．ストリンジェントな条件
本明細書では、「ストリンジェントな条件」は、６ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃で、フィルタに結合したＤＮＡにハイブリダイズさせ、続いて、０．２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中、約５０から６５℃で１回以上洗浄することを説明するのに使用される。用語「高ストリンジェントな条件下」は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃で、フィルタに結合した核酸にハイブリダイズさせ、続いて、０．１ｘＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中、約６８℃で１回以上洗浄すること、または他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下を指す。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ．，１９８９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｔ ｐａｇｅｓ ６．３．１−６．３．６ ａｎｄ ２．１０．３を参照のこと。

【0093】

ｉｉ．治療する、治療することまたは治療
本明細書では、「治療する」、「治療すること」または「治療」はそれぞれ、このような用語が適用される疾患またはこのような疾患の１つ以上の症候を、回復、軽減またはこの進行を阻害することを説明するのに互換的に使用される。被験体の症状によって、この用語はまた、疾患を予防することを指し、疾患の発症を予防すること、または疾患に関連する症候を予防することを含む。治療は、急性的に実施してもよいし、慢性的に実施してもよい。この用語はまた、疾患に伴う苦痛の前に、疾患またはこのような疾患に関連する症候の重症度を減少させることを指す。苦痛の前の疾患の重症度のこのような予防または減少は、本発明の抗体または医薬組成物を、投与時点では疾患に罹患していない被験体に投与することを指す。「予防すること」はまた、疾患またはこのような疾患に関連する１つ以上の症候の再発の予防を指す。「治療」および「治療的に」は、「治療すること」について上に定義したような治療行為を指す。

【0094】

ｊｊ．トレーサー
本明細書で使用される場合、「トレーサー」は、標識にコンジュゲートした分析物または分析物断片、例えば、フルオレセイン部分にコンジュゲートしたＣｙｓ−ＣＲＧＭａを指し、ここで、標識にコンジュゲートした分析物は、分析物に特異的な抗体上の部位に対して分析物と有効に競合することができる。

【0095】

ｋｋ．変異体
本明細書では、「変異体」は、アミノ酸の挿入、欠失または保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチドまたはポリペプチドを説明するのに使用される。「生物学的活性」の代表例としては、特異的抗体によって結合される能力、または免疫反応を促進する能力が挙げられる。本明細書では、変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を説明するのに使用される。アミノ酸の保存的置換、即ち、アミノ酸を、同様の特性（例えば、親水性および荷電領域の程度および分布）の異なるアミノ酸と置換することは、当技術分野では、通常、微小変化を含むと認識されている。これらの微小変化は、部分的には、当技術分野において理解されるように、アミノ酸の疎水性親水性指数を考慮することによって同定され得る。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸の疎水性親水性指数は、この疎水性および電荷を考慮することに基づいている。同様の疎水性親水性指数のアミノ酸は、置換してもタンパク質機能を依然として保持し得るということが当技術分野において公知である。一態様では、±２の疎水性親水性指数を有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性はまた、生物学的機能を保持するタンパク質をもたらす置換を明らかにするのに使用され得る。ペプチドとの関連でアミノ酸の親水性を考慮することによって、抗原性および免疫原性と十分に相関すると報告されている有用な尺度であるこのペプチドの最大局所平均親水性を算出することが可能になる。全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，５５４，１０１号明細書を参照のこと。当技術分野において理解されるように、同様の親水性値を有するアミノ酸の置換は、生物学的活性、例えば、免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。置換は、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて実施され得る。アミノ酸の疎水性指数および親水性値は両方とも、アミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。この知見と一致して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、大きさおよび他の特性によって明らかにされるように、アミノ酸、特に、これらのアミノ酸の側鎖の相対類似性に依存すると理解される。「変異体」はまた、抗ＲＧＭａ抗体の抗原反応性断片であって、対応する抗ＲＧＭａ抗体断片とはアミノ酸配列が異なるが依然として抗原反応性であり、ＲＧＭａに対する結合について、対応する抗ＲＧＭａ抗体断片と競合することができる抗原反応性断片を指すのに使用され得る。「変異体」はまた、タンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾などによって異なってプロセシングされるが、この抗原反応性を依然として保持するポリペプチドまたはこの断片を説明するのに使用され得る。

【0096】

ｌｌ．ベクター
本明細書では、「ベクター」は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を説明するのに使用される。ベクターの一種は、「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム中にライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、これらが導入されている宿主細胞において自己複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノム中に組み込まれることができ、これにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、これらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドは、最もよく使用される形態のベクターであるので、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、同等の機能を果たす他の形態の発現ベクター、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を使用することができる。これに関して、本開示との関連では、ＲＮＡ型のベクター（ＲＮＡウイルスベクターを含む。）も用途があり得る。

【0097】

本明細書における数値範囲の記載については、これらの間にある各数値を同程度の正確性で明確に意図する。例えば、６から９の範囲の場合、６および９に加えて、７および８という数値を意図し、６．０から７．０の範囲の場合、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９および７．０という数値を明確に意図する。

【0098】

２．抗ＲＧＭａ抗体
神経突起変性疾患および障害を治療する方法に使用するための抗体が本明細書で提供される。本明細書に記載される抗体の幾つかは、ＲＧＭａに結合するが、反発性ガイダンス分子ｃ（「ＲＧＭｃ」）との反応性を最小化または排除するのを選択したものである。例えば、表４を参照すると、ＰＲＯ融合由来モノクローナル抗体ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１変異体（ＡＥ１２−１Ｆ、ＡＥ１２−１Ｈ、ＡＥ１２−１Ｌ、ＡＥ１２−１Ｖ、ＡＥ１２−１Ｉ、ＡＥ１２−１ＫおよびＡＥ１２−１Ｙ）は、ＲＧＭｃと交差反応せずに（低検出）ＲＧＭａ中和活性を示す。ＲＧＭａに対して生じる抗体はＲＧＭｃと交差反応し得ることが多く、高静脈内用量では、肝細胞における鉄蓄積をもたらし得るので、本明細書に記載される抗体のＲＧＭａに対する特異的結合は治療上有益である。さらに、これらの抗体の高選択性は、広い治療用量域または治療範囲をもたらす。

【0099】

ａ．ＲＧＭａ
４７アミノ酸の予測Ｎ末端シグナルペプチドと、Ｃ末端ＧＰＩ結合シグナルとを有する４５０アミノ酸のタンパク質として存在し得るヒトＲＧＭａは、神経発達および細胞生存において役割を果たす分泌分子であるネトリンの受容体でもある膜貫通タンパク質ネオゲニンに結合することによって、網膜軸索の誘導を調節すると最初に提案された。網膜軸索の誘導に加えて、ＲＧＭａは、成体ラットにおける軸索成長を阻害することが示されている。Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００７）１７：１−６を参照のこと。これらの機構と一致して、ＲＧＭａ発現は脊髄損傷後に増加するが、この間にＲＧＭａを阻害すると軸索成長が増強される。Ｋｉｔａｙａｍａ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，（２０１１）Ｖｏｌ．６（９），ｐａｇｅｓ １−９；およびＨａｔａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００６）１７３：４７−５８を参照のこと。ＲＧＭａ発現はまた、局所的脳虚血または外傷性脳損傷を患っているヒトの病変部位および瘢痕組織でアップレギュレートしている。Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００７）１７：１−６；Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ，Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏｌ（２００５）２２：２１３４−２１４４；およびＭｕｒａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１１）１７：４８８−９４を参照のこと。

【0100】

ＲＧＭａは、以下のアミノ酸配列を有し得る：

【0101】

【化1】

ＲＧＭａは、配列番号６５の断片または変異体であり得る。

【0102】

ＲＧＭａ断片は、５から４２５アミノ酸、１０から４００アミノ酸、５０から３５０アミノ酸、１００から３００アミノ酸、１５０から２５０アミノ酸、２００から３００アミノ酸または７５から１５０アミノ酸の長さであり得る。断片は、配列番号６５の幾つかの連続したアミノ酸を含み得る。

【0103】

ＲＧＭａ断片は、以下のアミノ酸配列を有し得る：

【0104】

【化2】

配列番号６５の４７位から１６８位のアミノ酸に対応する。

【0105】

ＲＧＭａ断片は、配列番号６６の断片であり得る。ＲＧＭａ断片は、配列番号６６の変異体であり得る。ＲＧＭａ断片は、以下のＲＧＭａ配列を有し得る：ＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号７４）。

【0106】

ＲＧＭａは、細胞膜結合型および／または可溶型として存在し得る。

【0107】

ｂ．ＲＧＭａを認識する抗体
抗体は、ＲＧＭａ、この断片またはこの変異体に結合する抗体である。抗体は、抗ＲＧＭａ抗体またはこの変異体もしくは誘導体の断片であり得る。抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。抗体は、キメラ抗体、一本鎖抗体、親和性成熟抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体または抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片またはこれらの混合物であり得る。抗体断片または誘導体は、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦｖまたはｓｃＦｖ断片を含み得る。抗体誘導体は、ペプチド模倣によって生産され得る。さらに、一本鎖抗体の生産について記載されている技術を、一本鎖抗体を生産するために適合させることができる。

【0108】

ヒト抗体は、ファージディスプレイ技術、またはヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスに由来し得る。ヒトのインビボ免疫反応の結果としてヒト抗体を作製して単離し得る。例えば、Ｆｕｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８（８）：８５を参照のこと。従って、抗体は、動物のレパートリではなくヒトの産物であり得る。これがヒト起源であることにより、自己抗原に対する反応性のリスクを最小限に抑えることができる。または、ヒト抗ＲＧＭａ抗体を選択および単離するために、標準的な酵母ディスプレイライブラリおよびディスプレイ技術を使用することができる。例えば、ヒト抗ＲＧＭａ抗体を選択するために、ナイーブなヒト一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のライブラリを使用することができる。ヒト抗体を発現させるために、トランスジェニック動物を使用することができる。

【0109】

ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体由来の抗体分子であって、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する抗体分子であり得る。

【0110】

抗体は、当技術分野において公知のものとは異なる生物学的機能を有する点で、公知の抗体と区別可能である。例えば、本発明の抗体はＲＧＭａを認識して結合するだけではなく、さらなる生物学的機能、例えば、神経突起変性に関連する疾患に関連する臨床兆候を軽減する能力を有することをさらに特徴とする。

【0111】

抗体は、ＲＧＭａに特異的に結合し得る。ＲＧＭａ特異的ＲＧＭａ抗体は、配列番号１および５；配列番号２から４および６から８；配列番号２から４、６、７および６７；配列番号２から４、６、７および６８；配列番号２から４、６、７および６９；配列番号２から４、６、７および７０；配列番号２から４、６、７および７１；配列番号２から４、６、７および７２；または配列番号２から４、６、７および７３を含み得る。抗体は、配列番号６５、配列番号６６、配列番号７４、またはこれらの断片もしくは変異体に結合し得る。抗体は、上記ＲＧＭａポリペプチドまたは変異体上に存在するエピトープを認識して特異的に結合し得る。エピトープは、配列番号６６、配列番号７４またはこれらの変異体であり得る。

【0112】

（１）抗体の結合特性
抗体は、ＲＧＭａ（配列番号６５）、配列番号６６、配列番号７４、これらの断片またはこれらの変異体に免疫特異的に結合し得、少なくとも１．０ｘ１０^−３ｓ^−１、少なくとも１．０ｘ１０^−４ｓ^−１、少なくとも１．０ｘ１０^−５ｓ^−１、少なくとも１．０ｘ１０^−６ｓ^−１のｋ_ｏｆｆ（またはｋ_ｄ）を有し得るか、または１．０ｘ１０^−３ｓ^−１から１．０ｘ１０^−６ｓ^−１、１．０ｘ１０^−３ｓ^−１から１．０ｘ１０^−５ｓ^−１もしくは１．０ｘ１０^−３ｓ^−１から１．０ｘ１０^−４ｓ^−１の範囲のｋ_ｏｆｆ（またはｋ_ｄ）を有する。断片は、配列番号６６または配列番号７４であり得る。

【0113】

抗体は、ＲＧＭａ（配列番号６５）、配列番号６６、配列番号７４、これらの断片またはこれらの変異体に免疫特異的に結合し得、少なくとも２．４ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約２．５ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約３．３ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約５．０ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１．２５ｘ１０^６Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１．３５ｘ１０^６Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１．０ｘ１０^６Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１．０ｘ１０^７Ｍ^−１ｓ^−１のｋ_ｏｎ（またはｋ_ａ）を有するか、または約５．０ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１から約１．０ｘ１０^８Ｍ^−１ｓ^−１、約３．３ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１から約１．０ｘ１０^９Ｍ^−１ｓ^−１、約２．５ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１から約１．２５ｘ１０^６Ｍ^−１ｓ^−１、約２．４ｘ１０^４Ｍ^−１ｓ^−１から約１．３５ｘ１０^７Ｍ^−１ｓ^−１の範囲のｋ_ｏｎ（またはｋ_ａ）を有する。断片は、配列番号６６または配列番号７４であり得る。

【0114】

（２）抗体の構造
（ａ）重鎖および軽鎖のＣＤＲ
抗体は、ＲＧＭａ（配列番号６５）、配列番号６６、配列番号７４、これらの断片またはこれらの変異体に免疫特異的に結合し得、表１に示されている可変重鎖および／または可変軽鎖を含み得る。抗体は、ＲＧＭａ、この断片またはこの変異体に免疫特異的に結合し得、また表１に示されている重鎖または軽鎖のＣＤＲ配列の１つ以上を含み得る。抗体の軽鎖は、カッパ鎖またはラムダ鎖であり得る。例えば、表１を参照のこと。

【0115】

ＲＧＭａ、この断片またはこの変異体に免疫特異的に結合する抗体をコードする単離された核酸が本明細書で提供される。単離された核酸は、表１に示されている重鎖または軽鎖のＣＤＲ配列を含む抗体をコードする核酸分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含み得る。

【0116】

【表1】

【0117】

抗体またはこの変異体もしくは誘導体は、配列番号１から６４および６７から７３の１つ以上と９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、または５０％を超えて同一である１つ以上のアミノ酸配列を含有し得る。抗体またはこの変異体もしくは誘導体は、配列番号１から６４および６７から７３の１つ以上と９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、または５０％を超えて同一である１つ以上の核酸配列によってコードされ得る。ポリペプチドの同一性および相同性は、例えば、報告：Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０，７２６−７３０（１９８３）に記載されているアルゴリズムによって決定され得る。本明細書に記載される抗体、この変異体または誘導体は、配列番号３から４２の１つ以上の相補体にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされ得る。本明細書に記載される抗体、この変異体または誘導体は、配列番号１から６４および６７から７３の１つ以上をコードする１つ以上の核酸の相補体に高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされ得る。

【0118】

抗体は配列番号８を含み得、ここで、配列番号８のＣｙｓ残基は別のアミノ酸に置換されている。抗体は配列番号１および５、または２から４および６から８を含み得、ここで、配列番号８のＣｙｓ残基は別のアミノ酸に置換されているか、または配列番号５の９１位のＣｙｓ残基は別のアミノ酸に置換されている。配列番号５の９１位のＣｙｓ残基は、例えば、フェニルアラニン、ヒスチジン、ロイシン、バリン、イソロイシン、リシンまたはチロシンで置換され得る。配列番号８のＣｙｓ残基は、例えば、フェニルアラニン（配列番号６７を参照のこと）、ヒスチジン（配列番号６８を参照のこと）、ロイシン（配列番号６９を参照のこと）、バリン（配列番号７０を参照のこと）、イソロイシン（配列番号７１を参照のこと）、リシン（配列番号７２を参照のこと）またはチロシン（配列番号７３を参照のこと）で置換され得る。表２を参照のこと。

【0119】

抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ分子クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。例えば、抗体は、以下の定常領域配列を有するＩｇＧ１分子であり得る：

【0120】

【化3】

【0121】

配列番号１４０における上記定常領域は、野生型定常領域配列の２３４位および２３５位における２つの（２）変異を含有する。具体的には、これらの変異は、２３４位および２３５位のそれぞれにおけるロイシンからアラニンへの変化（これは、「ＬＬＡＡ」変異と称される。）である。これらの変異は、上記では太字下線で示されている。これらの変異の目的は、エフェクター機能を排除することである。

【0122】

または、ＩｇＧ１分子は、１つ以上の変異を含有する上記定常領域配列（配列番号１４０）を有し得る。例えば、配列番号１４０の定常領域配列は、以下の表２Ａに示されているように、トレオニンがグルタミンで置換されるアミノ酸２５０の変異（配列番号１４１）、メチオニンがロイシンで置換されるアミノ酸４２８の変異（配列番号１４２）、またはトレオニンがグルタミンで置換されるアミノ酸２５０の変異およびメチオニンがロイシンで置換されるアミノ酸４２８の変異（配列番号１４３）を含有し得る。

【0123】

または、ＩｇＧ１分子は、以下の表２Ｂに示されているように、ＡＥ１２−１（ＶＨ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号２）、ＡＥ１２−１（ＶＨ）ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号３）、ＡＥ１２−１（ＶＨ）ＣＤＲ−Ｈ３（配列番号４）を含む重鎖と、ＡＥ１２−１（ＶＬ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号６）、ＡＥ１２−１（ＶＬ）ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号７）およびＡＥ１２−１−Ｖ（ＶＬ）ＣＤＲ−Ｌ３（配列番号７０）を含む軽鎖と、配列番号１４３の定常配列とを含有し得る（この抗体はＡＥ１２−１Ｖ−ＱＬと称され、配列番号１４４の軽鎖配列と、配列番号１４５の重鎖配列とを有する。）。

【0124】

または、ＩｇＧ１分子は、以下の表２Ｂに示されているように、ＡＥ１２−１（ＶＨ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号２）、ＡＥ１２−１（ＶＨ）ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号３）、ＡＥ１２−１（ＶＨ）ＣＤＲ−Ｈ３（配列番号４）を含む重鎖と、ＡＥ１２−１（ＶＬ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号６）、ＡＥ１２−１（ＶＬ）ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号７）およびＡＥ１２−１−Ｙ（ＶＬ）ＣＤＲ−Ｌ３（配列番号７３）を含む軽鎖と、配列番号１４３の定常配列とを含有し得る（この抗体はＡＥ１２−１Ｙ−ＱＬと称され、配列番号１４６の軽鎖配列と、配列番号１４７の重鎖配列とを有する。）。

【0125】

【表2】

【0126】

【表3】

【0127】

【表4】

【0128】

抗体または抗体断片は、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５（式１−ＣＤＲ−Ｈ１）（式中、Ｘａａ１は、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｈ、Ｙ、Ｌ、ＳおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｇ、Ｄ、Ａ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｉ、ＭおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ５は、Ｓ、Ｎ、Ｈ、Ａ、ＴおよびＱからなる群からのアミノ酸配列である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｈ２）（式中、ｎは、０または１であり、およびＸａａ１は、Ｗ、Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｅ、ＳおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｉ、ＭおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｎ、Ｄ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｐ、Ｙ、Ｇ、Ｗ、Ｈ、ＡおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｙ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｋ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｄ、ＴおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｅ、ＮおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｎ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｔ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、ＩおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｎ、Ｇ、Ｙ、ＴおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｙ、Ｆ、ＮおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ａ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、ＬおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｑ、Ｄ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ｋ、Ｓ、ＮおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｌ、Ｆ、Ｖ、ＫおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、Ｑ、Ｋ、ＲおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、グリシンである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｈ３）（式中、ｎは、０から１１であり、およびＸａａ１は、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｎ、Ｌ、Ｄ、ＱおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、Ｔ、Ｒ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、ＤおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｖ、Ｄ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｍ、Ｃ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｇ、Ｌ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｐ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、ＥおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｙ、Ｖ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｇ、ＨおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕおよびＣｙｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、ＡｌａおよびＧｌｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、ＨｉｓおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、ＴｒｐおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｔｙｒ、ＧｌｙおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｍｅｔ、ＬｅｕおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、ＡｓｐおよびＧｌｙからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、Ｖａｌ、ＡｓｐおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸である。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）を含む可変重ドメインを含み得る。

【0129】

単離された抗体またはこの抗体断片は、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−（Ｘａａ）ｎ（式１−ＣＤＲ−Ｌ１）（式中、ｎは、０から３であり、およびＸａａ１は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、ＧおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｄ、Ｓ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｓ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、ＮおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｓ、Ｌ、Ｇ、Ｉ、ＤおよびＰからなる群からのアミノ酸配列であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＨおよびＩからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｖ、Ｄ、Ｉ、Ｓ、ＧおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｇ、Ｋ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｎ、ＴおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｄ、Ｙ、Ａ、Ｃ、ＳおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｌ、ＶおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｉ、Ｃ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、ＮおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、ＶａｌおよびＡｓｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１４は、ＳｅｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｌ２）（式中、ｎは、０から４であり、およびＸａａ１は、Ｄ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、ＳおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｖ、Ｄ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｓ、Ｙ、ＮおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｋ、Ｎ、Ｄ、ＱおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｒ、Ｇ、ＳおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｐ、Ｓ、ＩおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｓ、Ｈ、ＩおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ａｓｎであり；Ｘａａ９は、Ｌｙｓであり；およびＸａａ１０は、Ｇｌｙであり；Ｘａａ１１は、Ａｓｐである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｌ３）（式中、ｎは、０から２であり、およびＸａａ１は、Ｃ、Ｑ、Ｈ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、ＹおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、ＱおよびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｙ、ＷおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｓ、ＨおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｄ、ＶおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｄ、Ｔ、Ｌ、Ｉ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｄ、Ｎ、Ｗ、Ｌ、ＦおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｌ、Ｖ、Ｇ、ＴおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｖａｌ、ＴｙｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、ＬｅｕまたはＶａｌである。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む可変軽ドメインを含み得る。

【0130】

抗体または抗体断片は、以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５（式１−ＣＤＲ−Ｈ１）（式中、Ｘａａ１は、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｈ、Ｙ、Ｌ、ＳおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｇ、Ｄ、Ａ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｉ、ＭおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ５は、Ｓ、Ｎ、Ｈ、Ａ、ＴおよびＱからなる群からのアミノ酸配列である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｈ２）（式中、ｎは、０または１であり、およびＸａａ１は、Ｙ、Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｇ、ＳおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｉ、ＭおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｎ、Ｄ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｐ、Ｙ、Ｇ、Ｗ、Ｈ、ＡおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｙ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｋ、ＧおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｄ、ＴおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｇ、Ｓ、Ｉ、Ｅ、ＮおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｎ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｔ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、ＩおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｎ、Ｇ、Ｙ、ＴおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｙ、Ｆ、ＮおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ａ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、ＬおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｑ、Ｄ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ｋ、Ｓ、ＮおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｌ、Ｆ、Ｖ、ＫおよびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、Ｑ、Ｋ、ＲおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、グリシンである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｈ３）（式中、ｎは、０から１１であり、およびＸａａ１は、Ｖ、Ｓ、Ｅ、Ｎ、Ｌ、Ｄ、ＱおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、Ｔ、Ｒ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、ＤおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｓ、Ｖ、Ｄ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｍ、Ｃ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｇ、Ｌ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｐ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｖ、Ｇ、Ｔ、ＥおよびＷからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｙ、Ｖ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｇ、ＨおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕおよびＣｙｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、ＡｌａおよびＧｌｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、ＨｉｓおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、ＴｒｐおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、Ｔｙｒ、ＧｌｙおよびＡｓｐからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１４は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＰｒｏおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１５は、Ｍｅｔ、ＬｅｕおよびＰｈｅからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１６は、ＡｓｐおよびＧｌｙからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１７は、Ｖａｌ、ＡｓｐおよびＴｙｒからなる群より選択されるアミノ酸である。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）を含む可変重ドメインを含み；ならびに、
以下の式：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−（Ｘａａ）ｎ（式１−ＣＤＲ−Ｌ１）（式中、ｎは、０から３であり、およびＸａａ１は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、ＧおよびＱからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｇ、ＬおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｄ、Ｓ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｓ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、ＮおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｓ、Ｌ、Ｇ、Ｉ、ＤおよびＰからなる群からのアミノ酸配列であり；Ｘａａ６は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＨおよびＩからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｖ、Ｄ、Ｉ、Ｓ、ＧおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｇ、Ｋ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｎ、ＴおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｄ、Ｙ、Ａ、Ｃ、ＳおよびＦからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｓ、Ａ、Ｇ、Ｌ、ＶおよびＮからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、Ｉ、Ｃ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、ＮおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１２は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１３は、ＶａｌおよびＡｓｎからなる群より選択されるアミノ酸であり；およびＸａａ１４は、ＳｅｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸である。）；
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−（Ｘａａ）ｎ（式２−ＣＤＲ−Ｌ２）（式中、ｎは、０から４であり、およびＸａａ１は、Ｄ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、ＳおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｖ、Ｄ、ＮおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｔ、Ｓ、Ｙ、ＮおよびＫからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ｋ、Ｎ、Ｄ、ＱおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｒ、Ｇ、ＳおよびＬからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｐ、Ｓ、ＩおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｓ、Ｈ、ＩおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ａｓｎであり；Ｘａａ９は、Ｌｙｓであり；およびＸａａ１０は、Ｇｌｙであり；Ｘａａ１１は、Ａｓｐである。）；および
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−（Ｘａａ）ｎ（式３−ＣＤＲ−Ｌ３）（式中、ｎは、０から２であり、およびＸａａ１は、Ｃ、Ｑ、Ｈ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、ＹおよびＡからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、ＱおよびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ３は、Ｙ、ＷおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ４は、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｓ、ＨおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ５は、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｄ、ＶおよびＴからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ６は、Ｉ、Ｔ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、ＦおよびＹからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ７は、Ｄ、Ｔ、Ｌ、Ｉ、ＰおよびＳからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ８は、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｄ、Ｎ、Ｗ、Ｌ、ＦおよびＰからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ９は、Ｌ、Ｖ、Ｇ、ＴおよびＨからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１０は、Ｖａｌ、ＴｙｒおよびＨｉｓからなる群より選択されるアミノ酸であり；Ｘａａ１１は、ＬｅｕまたはＶａｌである。）
にそれぞれ対応する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ−Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む可変軽ドメインも含む。

【0131】

式１−ＣＤＲ−Ｌ１では、ｎが１である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２。

【0132】

式１−ＣＤＲ−Ｌ１では、ｎが２である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３。

【0133】

式１−ＣＤＲ−Ｌ１では、ｎが３である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４。

【0134】

式２−ＣＤＲ−Ｌ２では、ｎが１である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８。

【0135】

式２−ＣＤＲ−Ｌ２では、ｎが２である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９。

【0136】

式２−ＣＤＲ−Ｌ２では、ｎが３である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０。

【0137】

式２−ＣＤＲ−Ｌ２では、ｎが４である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１。

【0138】

式３−ＣＤＲ−Ｌ３では、ｎが１である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０。

【0139】

式３−ＣＤＲ−Ｌ３では、ｎが２である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１。

【0140】

式２−ＣＤＲ−Ｈ２では、ｎが１である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７。

【0141】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが１である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７。

【0142】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが２である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８。

【0143】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが３である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９。

【0144】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが４である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０。

【0145】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが５である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１。

【0146】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが６である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２。

【0147】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが７である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３。

【0148】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが８である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４。

【0149】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが９である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５。

【0150】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが１０である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６。

【0151】

式３−ＣＤＲ−Ｈ３では、ｎが１１である場合、式は以下のとおりである：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７。

【0152】

ｃ．抗体の調製／生産
抗体は、様々な技術によって調製され得る。一般に、組換え体であり得る抗体の生産を可能にするためには、抗体は、従来の技術による、または抗体遺伝子、重鎖および／または軽鎖を適切な細菌または哺乳動物細胞宿主にトランスフェクトすることによるモノクローナル抗体の作製を含む細胞培養技術によって生産され得る。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞に導入するためによく使用される多種多様な技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。原核生物または真核生物の宿主細胞のいずれかにおいて、本発明の抗体を発現させることが可能であるが、このような真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立て分泌する可能性が原核細胞よりも高いので、好ましくは真核細胞、最も好ましくは哺乳動物宿主細胞で抗体を発現させる。

【0153】

本発明の組換え抗体を発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１５９：６０１−６２１（１９８２）に記載されているＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０（１９８０）に記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む。）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合、宿主細胞における抗体の発現、より好ましくは、宿主細胞を成長させる培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって、抗体を生産する。抗体は、標準タンパク質精製法を使用して培養培地から回収され得る。

【0154】

宿主細胞はまた、機能的抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子を生産するのに使用され得る。上記手順の変法は、本発明の範囲内であることが理解されよう。例えば、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡで宿主細胞をトランスフェクトすることが望ましい場合がある。組換えＤＮＡ技術はまた、対象とする抗原との結合に必要ではない、軽鎖および重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全部を除去するのに使用され得る。このような短縮型ＤＮＡ分子から発現された分子もまた、本発明の抗体によって包含される。加えて、標準化学的架橋法によって本発明の抗体を第２の抗体に架橋することによって、一方の重鎖および一方の軽鎖が本発明の抗体であり（即ち、ヒトＲＧＭａに結合する）もう一方の重鎖および軽鎖がヒトＲＧＭａ以外の抗原に対して特異的である二官能性抗体が生産され得る。

【0155】

本発明の抗体またはこの抗原結合部分を組換え発現するのに好ましい系では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクター内では、抗体重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、この遺伝子の高レベルの転写を駆動するようにＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに作動可能に連結されている。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保持する。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にするように培養され、インタクトな抗体が培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収するために、標準分子生物学技術が使用される。またさらに、本発明は、本発明の宿主細胞を、本発明の組換え抗体が合成されるまで適切な培養培地中で培養することによって、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。この方法は、培養培地から組換え抗体を単離することをさらに含み得る。

【0156】

モノクローナル抗体を調製するための方法は、所望の特異性を有する抗体を産生することができる不死細胞株の調製を含む。このような細胞株は、免疫感作された動物から得られた脾臓細胞から生産され得る。動物は、ＲＧＭａまたはこの断片および／もしくは変異体で免疫感作され得る。例えば、配列番号６５、配列番号６６、配列番号７４、配列番号６５、配列番号６６もしくは配列番号７４の断片、または配列番号６５、配列番号６６、配列番号７４の変異体のいずれかが、動物を免疫感作するのに使用され得る。動物を免疫感作するのに使用されるペプチドは、ヒトＦｃ、例えば、ヒト抗体の断片結晶化可能領域または尾領域をコードするアミノ酸を含み得る。次いで、例えば、骨髄腫細胞融合パートナーと融合することによって、脾臓細胞を不死化し得る。様々な融合技術が用いられ得る。例えば、非イオン性洗剤と共に脾臓細胞および骨髄腫細胞を数分間混ぜ合わせ、次いで、骨髄腫細胞ではなくハイブリッド細胞の成長を支援する選択培地上に低密度でプレートし得る。このような技術の１つは、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（ＨＡＴ）選択を使用する。十分な時間、通常は約１から２週間後、ハイブリッドのコロニーが観察される。単一コロニーを選択し、これらの培養上清を、ポリペプチドに対する結合活性について試験する。高い反応性および特異性を有するハイブリドーマが使用され得る。

【0157】

モノクローナル抗体は、成長中のハイブリドーマコロニーの上清から単離され得る。加えて、収率を高めるために、マウスなどの適切な脊椎動物宿主の腹膜腔にハイブリドーマ細胞株を注入するなどの様々な技術が用いられ得る。次いで、モノクローナル抗体を腹水または血液から回収し得る。クロマトグラフィー、ゲルろ過、沈殿および抽出などの従来の技術によって、抗体から混入物質を除去し得る。アフィニティクロマトグラフィーは、抗体精製工程に使用され得る方法の一例である。

【0158】

タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を選択的に切断して幾つかの断片を生成し、このうちの２つ（Ｆ（ａｂ）断片）はそれぞれ、インタクトな抗原結合部位を含む共有ヘテロダイマーを含む。酵素ペプシンはＩｇＧ分子を切断して、両抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含む幾つかの断片を提供することができる。

【0159】

Ｆｖ断片は、ＩｇＭおよび稀にはＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の選択的タンパク質切断によって生成され得る。組換え技術を使用して、Ｆｖ断片を生成し得る。Ｆｖ断片としては、ネイティブな抗体分子の抗原認識および抗原結合能力の大部分を保持する抗原結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーが挙げられる。

【0160】

抗体、抗体断片または誘導体は、重鎖および軽鎖の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）セットを含み得、これらは、ＣＤＲを支えてＣＤＲ相互の空間関係を規定する重鎖および軽鎖のフレームワーク（「ＦＲ」）セットの間にそれぞれ挿入されている。ＣＤＲセットは、重鎖または軽鎖のＶ領域の３つの超可変領域を含有し得る。これらの領域は、重鎖または軽鎖のＮ末端から順に、それぞれ「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」および「ＣＤＲ３」という名称である。従って、抗原結合部位は、重鎖および軽鎖の各Ｖ領域のＣＤＲセットを含む６つのＣＤＲを含み得る。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、「分子認識ユニット」と称され得る。抗原−抗体複合体の結晶学的解析により、ＣＤＲのアミノ酸残基は結合抗原と広範な接触を形成し、最も広範な抗原接触は重鎖ＣＤＲ３とのものであることが実証されている。従って、分子認識ユニットは、抗原結合部位の特異性の主な一因であり得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的およびほぼ実質的に関与する。

【0161】

当技術分野において公知の方法を使用して、限定されないが、例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ（Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ，Ｄｅｌ）、Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ（Ａｂｅｒｄｅｅｎ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ，ＵＫ）Ｂｉｏｌｎｖｅｎｔ（Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）などの種々の商業ベンダーから市販されているペプチドまたはタンパク質ライブラリ（例えば、限定されないが、バクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、酵母など、ディスプレイライブラリ）から組換え抗体を選択する方法を含む、必要な特異性の抗体を生産または単離する他の適切な方法を使用することができる。米国特許第４，７０４，６９２号明細書；同第５，７２３，３２３号明細書；同第５，７６３，１９２号明細書；同第５，８１４，４７６号明細書；同第５，８１７，４８３号明細書；同第５，８２４，５１４号明細書；同第５，９７６，８６２号明細書を参照のこと。代替法は、当技術分野において公知および／または本明細書に記載されているような、ヒト抗体のレパートリを産生することができるトランスジェニック動物の免疫化に基づくものである（例えば、ＳＣＩＤマウス、 Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：９０１−９０７；Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９５−１１８；Ｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：１５４−１６１）。このような技術としては、限定されないが、リボソーム・ディスプレイ（Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：４９３７−４９４２；Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：１４１３０−１４１３５）；単一細胞抗体産生技術（例えば、選択的リンパ球抗体法（「ＳＬＡＭ」）（米国特許第５，６２７，０５２号明細書、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７−８９２；Ｂａｂｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：７８４３−７８４８）；ゲル・ミクロ小滴およびフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：３３３−３３７；Ｏｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ）．；Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１８２：１５５−１６３；Ｋｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１３：７８７−７９０）；Ｂ細胞選択（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ １９：１２５−１３４（１９９４））が挙げられる。

【0162】

親和性成熟抗体は、当技術分野において公知の幾つかの手順のいずれか１つによって生産され得る。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）には、ＶＨおよびＶＬドメインをシャッフルすることによる親和性成熟が記載されている。Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ，１６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５４（７）：３３１０−３３１９（１９９５）；Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２６：８８９−８９６（１９９２）には、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発が記載されている。米国特許第６，９１４，１２８号明細書には、活性を増強するアミノ酸残基による選択的変異誘発部位および接触部位または超変異部位における選択的変異が記載されている。

【0163】

また、本発明の抗体変異体は、このような抗体を乳中に産生するトランスジェニック動物または哺乳動物、例えば、ヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどを提供するように、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドを適切な宿主に送達することを使用して調製され得る。これらの方法は、当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第５，８２７，６９０号明細書；同第５，８４９，９９２号明細書；同第４，８７３，３１６号明細書；同第５，８４９，９９２号明細書；同第５，９９４，６１６号明細書；同第５，５６５，３６２号明細書；および同第５，３０４，４８９号明細書に記載されている。

【0164】

また、このような抗体、特定部分または変異体を植物部分中またはこれ由来の培養細胞中に産生するトランスジェニック植物および培養植物細胞（例えば、限定されないが、タバコ、トウモロコシおよびウキクサ）を提供するように本発明のポリヌクレオチドを送達することによって、抗体変異体を調製することができる。例えば、Ｃｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８およびそこで引用されている参考文献には、例えば、誘導性プロモーターを使用した、大量の組換えタンパク質を発現するトランスジェニック・タバコ葉の生産が記載されている。トランスジェニック・トウモロコシは、他の組換え系で生産されたか、または天然の供与源から精製されたものと同等の生物学的活性をもつ哺乳類タンパク質を、商業的な生産レベルで発現させるのに使用されている。例えば、Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．（１９９９）４６４：１２７−１４７およびそこで引用されている参考文献を参照のこと。また、抗体変異体は、タバコ種子およびジャガイモ塊茎を含む、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）などの抗体断片を含むトランスジェニック植物種子から大量に生産されている。例えば、Ｃｏｎｒａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９およびそこで引用されている参考文献を参照のこと。従って、本発明の抗体はまた、公知の方法に従って、トランスジェニック植物を使用して生産することができる。

【0165】

抗体誘導体は、例えば、外来性配列を追加して、免疫原性を改変するか、または結合、親和性、ｏｎ速度、ｏｆｆ速度、アビディティ、特異性、半減期もしくは任意の他の適切な特徴を減少、増強または改変することによって生産することができる。一般に、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部または全部は維持するが、可変領域および定常領域の非ヒト配列は、ヒトまたは他のアミノ酸で置換する。

【0166】

小さな抗体断片は、２つの抗原結合部位を有するダイアボディであり得、断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ ＶＬ）の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。例えば、欧州特許第４０４，０９７号明細書；国際公開第９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８を参照のこと。同じ鎖上の２つのドメイン間で対合することができないほど短いリンカーを使用することにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を作製する。全体が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｅｎらの米国特許第６，６３２，９２６号明細書も参照すると、親抗体の超可変領域に挿入された１つ以上のアミノ酸と、抗原に対する親抗体の結合親和性よりも少なくとも約２倍強力な、標的抗原に対する結合親和性とを有する抗体変異体が開示されている。

【0167】

抗体は、直鎖状抗体であり得る。直鎖状抗体を作製するための手順は、当技術分野において公知であり、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２に記載されている。簡潔には、これらの抗体は、一対の抗原結合領域を形成する一対の直列型Ｆｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直鎖状抗体は、二特異性または単一特異性であり得る。

【0168】

限定されないが、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、リン酸セルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む公知の方法によって、組換え細胞培養物から抗体を回収し、精製することができる。また、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）も、精製に使用することができる。

【0169】

抗体を検出可能にまたは治療的に標識することも有用であり得る。抗体をこれらの薬剤にコンジュゲートするための方法は、当技術分野において公知である。例示のみの目的であるが、抗体は、放射性原子、発色団、フルオロフォアなどの検出可能な部分で標識することができる。このような標識された抗体は、インビボまたは単離された試験試料で診断技術に使用することができる。また、抗体は、例えば、化学療法剤または毒素などの医薬品にコンジュゲートすることができる。これらは、サイトカインに、リガンドに、別の抗体に連結することができる。抗体にカップリングして抗腫瘍効果を達成するのに適切な薬剤としては、インターロイキン２（ＩＬ−２）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカイン；アルミニウム（ＩＩＩ）フタロシアニンテトラスルホナート、ヘマトポルフィリンおよびフタロシアニンを含む、光感作療法に使用するための光増感剤；ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、イットリウム９０（９０Ｙ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス−２１３（２ｌ３Ｂｉ）、テクネチウム９９ｍ（９９ｍＴｃ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）およびレニウム−１８８（１８８Ｒｅ）などの放射性核種；ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、ダウノマイシン、ネオカルチノスタチンおよびカルボプラチンなどの抗生物質；ジフテリア毒素、プソイドモナス外毒素Ａ、ブドウ球菌腸毒素Ａ、アブリン−Ａ毒素、リシンＡ（脱グリコシルされたリシンＡおよび天然のリシンＡ）、ＴＧＦアルファ毒素、チャイニーズ・コブラ（ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ）由来の細胞毒およびゲロニン（植物性毒素）などの、細菌、植物、ならびに他の毒素；レストリクトシン（アスペルギルス・レストリクタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｅｓｔｒｉｃｔｕｓ）によって産生されるリボソーム不活性化タンパク質）、サポリン（ｓａｐｏｒｉｎ）（サポナリア・オフィシナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）由来のリボソーム不活性化タンパク質）およびＲＮａｓｅなどの、植物、細菌、ならびに真菌由来のリボソーム不活性化タンパク質；チロシンキナーゼ阻害剤；ｌｙ２０７７０２（二フッ化プリンヌクレオシド）；抗嚢胞性薬（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、毒素、メトトレキセートなどをコードするプラスミド）を含むリポソーム；ならびに他の抗体またはＦ（ａｂ）などの抗体断片が挙げられる。

【0170】

抗体は、組換えまたは合成手段によって配列決定および複製され得る。これらはまた、これらをコードする直線状ヌクレオチド配列にさらに配列決定され得る。従って、本発明は、本発明の抗体の配列をコードするこれらのポリヌクレオチドを単独で、または上記担体、ベクターもしくは宿主細胞と組み合わせて提供する。

【0171】

ハイブリドーマ技術、選択的リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、トランスジェニック動物、および組換え抗体ライブラリを使用する抗体生産を以下により詳細に説明する。

【0172】

（１）ハイブリドーマ技術を使用する抗ＲＧＭａモノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換えおよびファージディスプレイ技術またはこれらの組み合わせの使用を含む、当技術分野において公知の多種多様な技術を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示されるものを含むハイブリドーマ技術を使用して生産され得る。本明細書では、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって生産される抗体に限定されないことも留意されたい。用語「モノクローナル抗体」は、任意の真核生物クローン、原核生物クローンまたはファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体を指すのであって、これが生産される方法を指すのではない。

【0173】

一実施形態では、本発明は、モノクローナル抗体を作製する方法ならびに前記方法によって生産される抗体を提供する。前記方法は、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含み得、ここで、好ましくは、ハイブリドーマは、ＲＧＭａで免疫感作された動物、例えば、ラットまたはマウスから単離された脾細胞を、骨髄腫細胞と融合すること、次いで、本発明のポリペプチドに結合することができる抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて、融合から得られたハイブリドーマをスクリーニングすることによって作製される。簡潔には、ラットは、ＲＧＭａ抗原で免疫感作され得る。好ましい実施形態では、ＲＧＭａ抗原は、免疫反応を刺激するためにアジュバントと共に投与される。このようなアジュバントとしては、完全または不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が挙げられる。このようなアジュバントは、ポリペプチドを局所沈着に隔離することによって、急速な分散からこれを保護し得るか、またはこれらは、マクロファージおよび免疫系の他の成分に対して走化性の因子を分泌するように宿主を刺激する物質を含有し得る。好ましくは、ポリペプチドが投与される場合には、免疫感作スケジュールは、数週間にわたって展開される２回以上のポリペプチドの投与を含むが、単回のポリペプチド投与も使用され得る。

【0174】

ＲＧＭａ抗原で動物を免疫感作した後、抗体および／または抗体を産生する細胞が動物から得られ得る。抗ＲＧＭａ抗体を含有する血清は、動物を出血させるかまたは屠殺することによって動物から得られる。血清を動物から得られたまま使用してもよいし、免疫グロブリン画分を血清から得てもよいし、または抗ＲＧＭａ抗体を血清から精製してもよい。この方法で得られた血清または免疫グロブリンは、ポリクローナルであり、従って、不均一な特性のアレイを有する。

【0175】

免疫反応が検出されたら、例えば、抗原ＲＧＭａに対して特異的な抗体がラット血清中で検出されたら、ラット脾臓を回収し、脾細胞を単離する。次いで、周知の技術によって脾細胞を任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．，ＵＳ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞に融合する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によってクローニングする。次いで、当技術分野において公知の方法によって、ＲＧＭａに結合することができる抗体を分泌する細胞についてハイブリドーマクローンをアッセイする。一般に、高レベルの抗体を含有する腹水は、陽性ハイブリドーマクローンでラットを免疫感作することによって作製することができる。

【0176】

別の実施形態では、抗体を産生する不死化されたハイブリドーマは、免疫感作された動物から調製され得る。免疫感作後、当技術分野において周知であるように、動物を屠殺し、脾臓Ｂ細胞を不死化された骨髄腫細胞と融合する。例えば、前掲のＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅを参照のこと。好ましい実施形態では、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌細胞株）。融合し、抗生物質選択した後、ＲＧＭａもしくはこの部分またはＲＧＭａを発現する細胞を使用して、ハイブリドーマをスクリーニングする。好ましい実施形態では、初回スクリーニングは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、好ましくは、ＥＬＩＳＡを使用して実施される。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、国際公開第００／３７５０４号に提供されている。

【0177】

抗ＲＧＭａ抗体を産生するハイブリドーマを選択し、クローニングし、以下にさらに論じられる、ロバストなハイブリドーマ成長、高抗体産生および所望の抗体特徴を含む所望の特徴についてさらにスクリーニングする。インビボでは同系動物、免疫系を欠く動物、例えば、ヌードマウスで、またはインビトロでは細胞培養でハイブリドーマを培養して増殖し得る。ハイブリドーマを選択、クローニングおよび増殖する方法は、当業者に周知である。

【0178】

好ましい実施形態では、ハイブリドーマは、ラットハイブリドーマである。別の実施形態では、ハイブリドーマは、マウス、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマなどの非ヒト、非ラット種において産生される。さらに別の好ましい実施形態では、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫を、抗ＲＧＭａ抗体を発現するヒト細胞と融合したヒトハイブリドーマである。

【0179】

特定のエピトープを認識する抗体断片は、公知の技術によって作製され得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（２つの同一のＦａｂ断片を生産するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）_２断片を生産するため）などの酵素を使用する免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生産され得る。ＩｇＧ分子のＦ（ａｂ’）２断片は、軽鎖（可変軽鎖および定常軽鎖領域を含有する。）、重鎖のＣＨ１ドメインおよび親ＩｇＧ分子のジスルフィド形成ヒンジ領域の両方を含む、より大きな（「親」）ＩｇＧ分子の２つの抗原結合部位を保持する。従って、Ｆ（ａｂ’）２断片は、依然として、親ＩｇＧ分子のように抗原分子を架橋することができる。

【0180】

（２）ＳＬＡＭを使用する抗ＲＧＭａモノクローナル抗体。

【0181】

本発明の別の態様では、組換え抗体は、米国特許第５，６２７，０５２号明細書；国際公開第９２／０２５５１号；およびＢａｂｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：７８４３−７８４８（１９９６））に記載されている当技術分野では選択的リンパ球抗体法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｅｔｈｏｄ）（ＳＬＡＭ）と称される手順を使用して、単一の単離されたリンパ球から作製される。この方法では、対象とする抗体を分泌する単細胞、例えば、免疫感作された動物のいずれか１つから得られたリンパ球は、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用してスクリーニングされ、これでは、抗原ＲＧＭａ、ＲＧＭａのサブユニットまたはこの断片が、ビオチンなどのリンカーを使用してヒツジ赤血球にカップリングされ、ＲＧＭａに対して特異性を有する抗体を分泌する単細胞を同定するのに使用される。対象とする抗体を分泌する細胞を同定した後、重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡが逆転写酵素−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって細胞からレスキューされ、次いで、これらの可変領域が、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞などの哺乳動物宿主細胞において、適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）との関連で発現され得る。次いで、インビボで選択されたリンパ球由来の増幅された免疫グロブリン配列でトランスフェクトされた宿主細胞をさらに分析し、例えば、トランスフェクトされた細胞をパニングすることによってインビトロ選択して、ＲＧＭａに対する抗体を発現する細胞を単離することができる。増幅された免疫グロブリン配列は、インビトロ親和性成熟法などによってインビトロでさらに操作され得る。例えば、国際公開第９７／２９１３１号および同第００／５６７７２号参照のこと。

【0182】

（３）トランスジェニック動物を使用する抗ＲＧＭａモノクローナル抗体。

【0183】

本発明の別の実施形態では、ＲＧＭａ抗原で非ヒト動物を免疫感作することによって、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部または全部を含む抗体が生産される。一実施形態では、非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスであり、これは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きな断片を含み、マウス抗体産生に欠陥のある人為操作されたマウス系統である。例えば、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，７：１３−２１（１９９４）および米国特許第５，９１６，７７１号明細書；同第５，９３９，５９８号明細書；同第５，９８５，６１５号明細書；同第５，９９８，２０９号明細書；同第６，０７５，１８１号明細書；同第６，０９１，００１号明細書；同第６，１１４，５９８号；および同第６，１３０，３６４号明細書を参照のこと。国際公開第９１／１０７４１号；同第９４／０２６０２号；同第９６／３４０９６号；同第９６／３３７３５号；同第９８／１６６５４号；同第９８／２４８９３号；同第９８／５０４３３号；同第９９／４５０３１号；同第９９／５３０４９号；同第００／０９５６０号；および同第００／３７５０４号も参照のこと。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリを産生し、抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を生成する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列立体配置ＹＡＣ断片の導入によってヒト抗体レパートリのおよそ８０％を含有する。開示が参照により本明細書に組み込まれるＭｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６（１９９７）、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８８：４８３−４９５（１９９８）を参照のこと。

【0184】

（４）組換え抗体ライブラリを使用する抗ＲＧＭａモノクローナル抗体。

【0185】

本発明の抗体を作製するためにインビトロ法も使用され得、ここで、所望のＲＧＭａ結合特異性を有する抗体を同定するために、抗体ライブラリがスクリーニングされる。このような組換え抗体ライブラリをスクリーニングする方法は、当技術分野において周知であり、例えば、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，２２３，４０９号明細書（Ｌａｄｎｅｒら）；国際公開第９２／１８６１９号（Ｋａｎｇら）；同第９１／１７２７１号（Ｄｏｗｅｒら）；同第９２／２０７９１号（Ｗｉｎｔｅｒら）；同第９２／１５６７９号（Ｍａｒｋｌａｎｄら）；同第９３／０１２８８号（Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら）；同第９２／０１０４７号（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら）；同第９２／０９６９０号（Ｇａｒｒａｒｄら）；Ｆｕｃｈｓ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３６９−１３７２（１９９１）；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，３：８１−８５（１９９２）；Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５−１２８１（１９８９）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：７２５−７３４（１９９３）；Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２６：８８９−８９６（１９９２）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：３５７６−３５８０（１９９２）；Ｇａｒｒａｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７３−１３７７（１９９１）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：４１３３−４１３７（１９９１）；Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：７９７８−７９８２（１９９１）；米国特許出願公開第２００３／０１８６３７４号明細書；および国際公開第９７／２９１３１号に記載されている方法が挙げられる。

【0186】

組換え抗体ライブラリは、ＲＧＭａまたはＲＧＭａの部分で免疫感作された被験体に由来し得る。または、組換え抗体ライブラリは、ヒトＲＧＭａで免疫感作されていないヒト被験体由来のヒト抗体ライブラリなどの、ナイーブな被験体、即ち、ＲＧＭａで免疫感作されていないものに由来し得る。本発明の抗体は、ヒトＲＧＭａを含むペプチドを用いて組換え抗体ライブラリをスクリーニングし、これによってＲＧＭａを認識する抗体を選択することによって選択される。このようなスクリーニングおよび選択を実施する方法は当技術分野において周知であり、例えば、前述の段落における参考文献に記載されている。ＲＧＭａに対して特定の結合親和性を有する本発明の抗体、例えば、特定のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＲＧＭａから解離するものを選択するために、当技術分野において公知の表面プラズモン共鳴法を使用して、所望のＫ_ｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択することができる。ｈＲＧＭａに対して特定の中和活性を有する本発明の抗体、例えば、特定のＩＣ_５０を有するものを選択するために、ＲＧＭａ活性の阻害を評価するための当技術分野において公知の標準法が使用され得る。

【0187】

一態様では、本発明は、ヒトＲＧＭａに結合する単離された抗体またはこの抗原結合部分に関する。好ましくは、抗体は、中和抗体である。種々の実施形態では、抗体は、組換え抗体またはモノクローナル抗体である。

【0188】

例えば、本発明の抗体はまた、当技術分野において公知の種々のファージディスプレイ法を使用して作製され得る。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、これらをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面にディスプレイされる。このようなファージは、レパートリまたはコンビナトリアル抗体ライブラリ（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために利用され得る。対象とする抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して選択または同定され得る。これらの方法において使用されるファージは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換え融合された、Ｆａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む糸状ファージである。本発明の抗体を作製するのに使用され得るファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ，１８７：９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，５７：１９１−２８０（１９９４）；国際公開第９２／０１０４７号；同第９０／０２８０９号；同第９１／１０７３７号；同第９２／０１０４７号；同第９２／１８６１９号；同第９３／１１２３６号；同第９５／１５９８２号；同第９５／２０４０１号；および米国特許第５，６９８，４２６号明細書；同第５，２２３，４０９号明細書；同第５，４０３，４８４号明細書；同第５，５８０，７１７号明細書；同第５，４２７，９０８号明細書；同第５，７５０，７５３号明細書；同第５，８２１，０４７号明細書；同第５，５７１，６９８号明細書；同第５，４２７，９０８号明細書；同第５，５１６，６３７号明細書；同第５，７８０，２２５号明細書；同第５，６５８，７２７号明細書；同第５，７３３，７４３号明細書；および同第５，９６９，１０８号明細書に開示されているものが挙げられる。

【0189】

上記の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、抗体コード領域は、ファージから単離され、ヒト抗体または任意の他の所望の抗原結合断片を含む全抗体を作製するのに使用され、例えば、以下に詳細に記載される哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）_２断片を組換え生産するための技術も、当技術分野において公知の方法、例えば、国際公開第９２／２２３２４号；Ｍｕｌｌｉｎａｘ ｅｔ ａｌ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１２（６）：８６４−８６９（１９９２）；Ｓａｗａｉ ｅｔ ａｌ，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（１９８８）に開示されているものを使用して用いられ得る。一本鎖Ｆｖおよび抗体を生産するのに使用され得る技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号明細書および同第５，２５８，４９８号明細書；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３：４６−８８（１９９１）；Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７９９５−７９９９（１９９３）；およびＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０３８−１０４１（１９８８）に記載されているものが挙げられる。

【0190】

ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリのスクリーニングに代えて、大きなコンビナトリアルライブラリをスクリーニングするための当技術分野において公知の他の方法論が、本発明の抗体の同定に適用され得る。代替発現系の一種は、国際公開第９８／３１７００号（ＳｚｏｓｔａｋおよびＲｏｂｅｒｔｓ）に、ならびにＲｏｂｅｒｔｓ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１２２９７−１２３０２（１９９７）に記載されているような、組換え抗体ライブラリをＲＮＡ−タンパク質融合物として発現させるものである。この系では、ピューロマイシン、ペプチジルアクセプター抗生物質を３’末端に保持する合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳によって、ｍＲＮＡとこれがコードするペプチドまたはタンパク質との間に共有結合融合が作られる。従って、特異的ｍＲＮＡは、コードされたペプチドまたはタンパク質、例えば、抗体またはこの部分の特性、例えば、抗体またはこの部分の二重特異性抗原との結合に基づいて、複合的なｍＲＮＡ混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリ）から濃縮され得る。このようなライブラリのスクリーニングから回収される抗体またはこの部分をコードする核酸配列を、上記組換え手段によって（例えば、哺乳動物宿主細胞において）発現させることができ、さらに、最初に選択された配列中に変異が導入されているｍＲＮＡ−ペプチド融合物のスクリーニングのさらなるラウンドによって、または上記の組換え抗体のインビトロ親和性成熟のための他の方法によってのいずれかで、さらなる親和性成熟に供することができる。この方法論の好ましい例は、ＰＲＯ融合ディスプレイ技術である。

【0191】

別のアプローチでは、本発明の抗体はまた、当技術分野において公知の酵母ディスプレイ法を使用して作製され得る。酵母ディスプレイ法では、抗体ドメインを酵母細胞壁に繋ぎ止め、これらを酵母の表面上にディスプレイするために遺伝学的方法が使用される。特に、このような酵母は、レパートリまたはコンビナトリアル抗体ライブラリ（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために利用され得る。本発明の抗体を作製するのに使用され得る酵母ディスプレイ法の例としては、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，６９９，６５８号明細書（Ｗｉｔｔｒｕｐら）に開示されているものが挙げられる。

【0192】

ｄ．組換えＲＧＭａ抗体の生産
本発明の抗体は、当技術分野において公知の幾つかの技術のいずれかによって生産され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターが、標準技術によって宿主細胞中にトランスフェクトされている宿主細胞からの発現。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞に導入するためによく使用される様々な技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。原核生物または真核生物の宿主細胞のいずれかにおいて、本発明の抗体を発現させることが可能であるが、このような真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立て分泌する可能性が原核細胞よりも高いので、好ましくは真核細胞、最も好ましくは哺乳動物宿主細胞で抗体を発現させる。

【0193】

本発明の組換え抗体を発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１５９：６０１−６２１（１９８２）に記載されているＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０（１９８０）に記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む。）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合、宿主細胞における抗体の発現、より好ましくは、宿主細胞を成長させる培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって、抗体を生産する。抗体は、標準タンパク質精製法を使用して培養培地から回収され得る。

【0194】

宿主細胞はまた、機能的抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子を生産するのに使用され得る。上記手順の変法は、本発明の範囲内であることが理解されよう。例えば、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡで宿主細胞をトランスフェクトすることが望ましい場合がある。組換えＤＮＡ技術はまた、対象とする抗原との結合に必要ではない、軽鎖および重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全部を除去するのに使用され得る。このような短縮型ＤＮＡ分子から発現された分子もまた、本発明の抗体によって包含される。加えて、標準化学的架橋法によって本発明の抗体を第２の抗体に架橋することによって、一方の重鎖および一方の軽鎖が本発明の抗体であり（即ち、ヒトＲＧＭａに結合する）もう一方の重鎖および軽鎖がヒトＲＧＭａ以外の抗原に対して特異的である二官能性抗体が生産され得る。

【0195】

抗体またはこの抗原結合部分を組換え発現するのに好ましい系では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクター内では、抗体重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、この遺伝子の高レベルの転写を駆動するようにＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに作動可能に連結されている。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保持する。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にするように培養され、インタクトな抗体が培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収するために、標準分子生物学技術が使用される。またさらに、本発明は、本発明の宿主細胞を、本発明の組換え抗体が合成されるまで適切な培養培地中で培養することによって、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。この方法は、培養培地から組換え抗体を単離することをさらに含み得る。

【0196】

（ａ）ヒト化抗体
ヒト化抗体は、対象とする抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む抗体またはこの変異体、誘導体、類似体もしくは部分であり得る。ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体由来の抗体であって、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する抗体に由来し得る。

【0197】

本明細書で使用される場合、用語「実質的に」は、ＣＤＲとの関連では、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が、非ヒト免疫グロブリン（即ち、ドナー抗体）のものに対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部が、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである少なくとも１つの、通常２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含む。一態様では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインとを含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含み得る。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖および／または重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。

【0198】

ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびに限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含み得、特定の定常ドメインは、当技術分野において周知の技術を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するように選択され得る。

【0199】

ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は、親配列と正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークを少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失によって変異し、この結果、この部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基が、ドナー抗体またはコンセンサスフレームワークに対応していなくてもよい。しかしながら、一実施形態では、このような変異は、大規模なものではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％は、親のＦＲおよびＣＤＲ配列のものに対応する。本明細書で使用される場合、用語「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書で使用される場合、用語「コンセンサス免疫グロブリン配列」は、関連免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も高頻度に存在するアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，１９８７）を参照のこと）。免疫グロブリンのファミリーでは、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリーにおいて当該位置で最も高頻度に存在するアミノ酸によって占められている。２つのアミノ酸が等頻度に存在する場合には、コンセンサス配列中にいずれかが含まれ得る。

【0200】

ヒト化抗体は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療適用の継続期間および有効性を制限する齧歯類抗ヒト抗体に対する望ましくない免疫反応を最小化するように設計され得る。ヒト化抗体は、非ヒト起源由来のこれに導入された１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒト残基は「インポート」残基と称されることが多く、通常可変ドメインに由来している。ヒト化は、超可変領域配列をヒト抗体の対応する配列で置換することによって実施され得る。従って、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインのごく一部が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体である。例えば、内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照のこと。ヒト化抗体は、幾つかの超可変領域残基および可能な場合には幾つかのＦＲが、齧歯類抗体の類似部位由来の残基で置換されたヒト抗体であり得る。本発明の抗体のヒト化または人為操作は、任意の公知の方法、例えば限定されないが、米国特許第５，７２３，３２３号明細書；同第５，９７６，８６２号明細書；同第５，８２４，５１４号明細書；同第５，８１７，４８３号明細書；同第５，８１４，４７６号明細書；同第５，７６３，１９２号明細書；同第５，７２３，３２３号明細書；同第５，７６６，８８６号明細書；同第５，７１４，３５２号明細書；同第６，２０４，０２３号明細書；同第６，１８０，３７０号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，２２５，５３９号明細書；および同第４，８１６，５６７号明細書に記載されているものを使用して実施され得る。

【0201】

ヒト化抗体は、ＲＧＭａに対する高親和性および他の好ましい生物学的特性を保持し得る。ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用して親配列および種々の概念的ヒト化産物を分析する工程によって調製され得る。三次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能である。選択された候補免疫グロブリン配列のあり得る三次元立体構造を例証および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイの観察によって、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のあり得る役割の分析、即ち、候補免疫グロブリンのこの抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、ＲＧＭａに対する親和性の増大などの所望の抗体特徴が達成されるようにレシピエント配列およびインポート配列から選択され、組み合わされ得る。一般に、超可変領域残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接的におよび最も実質的に関与し得る。

【0202】

ヒト化の代替手段として、ヒト抗体（本明細書では「完全ヒト抗体」とも称される。）が作製され得る。例えば、ＰＲＯ融合および／または酵母関連技術によって、ライブラリからヒト抗体を単離することが可能である。以下に提供される実施例を参照のこと。トランスジェニック動物（例えば、免疫感作すると、内因性免疫グロブリンを産生せずに、十分なレパートリのヒト抗体を産生することができるマウス）を生産することも可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（Ｊ_Ｈ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全阻害をもたらす。このような生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移動は、抗原チャレンジによるヒト抗体の産生をもたらすであろう。ヒト化抗体または完全ヒト抗体は、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，７７０，４２９号明細書；同第５，８３３，９８５号明細書；同第５，８３７，２４３号明細書；同第５，９２２，８４５号明細書；同第６，０１７，５１７号明細書；同第６，０９６，３１１号明細書；同第６，１１１，１６６号明細書；同第６，２７０，７６５号明細書；同第６，３０３，７５５号明細書；同第６，３６５，１１６号明細書；同第６，４１０，６９０号明細書；同第６，６８２，９２８号明細書；および同第６，９８４，７２０号明細書に記載されている方法に従って調製され得る。

【0203】

３．医薬組成物
抗体は、医薬組成物中の一成分であり得る。医薬組成物はまた、医薬として許容される担体を含有し得る。本発明の抗体を含む医薬組成物は、限定されないが、障害の診断、検出またはモニタリングにおいて；障害またはこの１つ以上の症候の予防、治療、管理または改善において；および／または研究において使用される。特定の実施形態では、組成物は、本発明の１つ以上の抗体を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、本発明の１つ以上の抗体と、標的ＲＧＭａ活性が有害である障害を治療するための本発明の抗体以外の１つ以上の予防剤または治療剤とを含む。さらなる実施形態では、予防剤または治療剤は、障害またはこの１つ以上の症候の予防、治療、管理または改善に有用であることが公知であるか、またはこれらにおいて使用されていたか、またはこれらにおいて現在使用されている。これらの実施形態に従って、組成物は、担体、希釈液または賦形剤をさらに含み得る。

【0204】

本発明の抗体は、被験体に投与するのに適切な医薬組成物中に組み込まれ得る。通常、医薬組成物は、本発明の抗体および医薬として許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「医薬として許容される担体」としては、生理学的に適合される、任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。医薬として許容される担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどならびにこれらの組み合わせの１つ以上が挙げられる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコールまたは塩化ナトリウムを含むことが好ましい。医薬として許容される担体は、抗体の有効期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、保存料または緩衝液などの微量の補助物質をさらに含み得る。

【0205】

さらなる実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示される障害を治療するための少なくとも１つのさらなる治療剤を含む。

【0206】

種々の送達系が公知であり、本発明の１つ以上の抗体、または本発明の１つ以上の抗体と障害または１つ以上のこの症候を予防、管理、治療または改善するのに有用な予防剤または治療剤との組み合わせを投与するのに使用され得るが、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおけるカプセル封入、抗体または抗体断片を発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸構築物などが挙げられる。本発明の予防剤または治療剤を投与する方法としては、限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）が挙げられる。加えて、肺投与は、例えば、吸入器または噴霧器およびエアロゾル化剤を有する製剤の使用によって用いられ得る。例えば、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，０１９，９６８号明細書；同第５，９８５，３２０号明細書；同第５，９８５，３０９号明細書；同第５，９３４，２７２号明細書；同第５，８７４，０６４号明細書；同第５，８５５，９１３号明細書；同第５，２９０，５４０号明細書；および同第４，８８０，０７８号明細書；および国際公開第９２／１９２４４号、同第９７／３２５７２号、同第９７／４４０１３号、同第９８／３１３４６号および同第９９／６６９０３号を参照のこと。一実施形態では、本発明の抗体、併用療法または本発明の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（登録商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。特定の実施形態では、本発明の予防剤または治療剤は、筋肉内投与、静脈内投与、腫瘍内投与、経口投与、鼻腔内投与、肺投与にまたは皮下投与される。予防剤または治療剤は、任意の従来経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜内層を通る吸収によって（例えば、経口粘膜、直腸および腸管粘膜など）投与してもよいし、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与してもよい。投与は、全身でもよいし、または局所でもよい。

【0207】

特定の実施形態では、本発明の抗体を、治療を必要とする領域に局所投与することが望ましい場合がある；これは、例えば、限定されないが、局所注入として、注射によって、またはインプラントによって達成され得、前記インプラントは、サイラスティックメンブラン、ポリマー、繊維性マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））またはコラーゲンマトリックスなどのメンブランおよびマトリックスを含む多孔性または非多孔性材料である。一実施形態では、有効量の本発明の１つ以上の抗体は、障害またはこの症候を予防、治療、管理および／または改善するために被験体の罹患領域に局所投与される。別の実施形態では、有効量の本発明の１つ以上の抗体は、本発明の抗体以外の有効量の１つ以上の治療（例えば、１つ以上の予防剤または治療剤）と組み合わせて、障害またはこの１つ以上の症候を予防、治療、管理および／または改善するために被験体の罹患領域に局所投与される。

【0208】

別の実施形態では、抗体は、制御放出または持続放出系で送達され得る。一実施形態では、制御放出または持続放出を達成するためにポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ，前掲；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照のこと）。別の実施形態では、本発明の治療の制御放出または持続放出を達成するためにポリマー材料が使用され得る（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照のこと；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７ １：１０５）；米国特許第５，６７９，３７７号明細書；同第５，９１６，５９７号明細書；同第５，９１２，０１５号明細書；同第５，９８９，４６３号明細書；および同第５，１２８，３２６号明細書；および国際公開第９９／１５１５４号および同第９９／２０２５３号も参照のこと。）持続放出製剤において使用されるポリマーの例としては、限定されないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）およびポリオルトエステルが挙げられる。特定の実施形態では、持続放出製剤において使用されるポリマーは、不活性であり、漏出性の不純物を含まず、保存に対して安定であり、無菌であり、生分解性である。さらに別の実施形態は、制御放出または持続放出系は、予防標的または治療標的の近くに配置することができ、従って、全身用量の一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，前掲，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照のこと）。

【0209】

制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒによる総説（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３）において論じられている。１つ以上の本発明の抗体を含む持続放出製剤を生産するために当業者に公知の任意の技術が使用され得る。例えば、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，５２６，９３８号明細書、国際公開第９１／０５５４８号、同第９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ，１９９６，「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ」，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９−１８９；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ，１９９５，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ」，ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５０：３７２−３９７；Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ，１９９７，「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ａ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４；およびＬａｍ ｅｔ ａｌ．，１９９７，「Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０を参照のこと。

【0210】

本発明の組成物が、抗体をコードする核酸である特定の実施形態では、このコードされる抗体の発現を促進するために、適切な核酸発現ベクターの一部としてこれを構築することおよび細胞内になるようにこれを投与することによって、例えば、レトロウイルスベクターを使用することによって（米国特許第４，９８０，２８６号明細書を参照のこと）、または直接注射によって、または微粒子銃を使用することによって（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤を用いてコーティングすることによって、または核に入ることが公知のホメオボックス様ペプチドに結合して投与することによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４−１８６８を参照のこと）、核酸はインビボ投与され得る。または、核酸は、相同組換えによる発現のために細胞内に導入され、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る。

【0211】

本発明の医薬組成物は、この意図される投与経路と適合するように製剤化される。投与経路の例としては、限定されないが、非経口（例えば、静脈内の）、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜および直腸投与が挙げられる。特定の実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または局所投与に適している医薬組成物として、常法に従って製剤化される。通常、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤および注射の部位での疼痛を和らげるためリグノカインなどの局所麻酔薬も含み得る。

【0212】

本発明の組成物が局所投与される場合には、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、エマルジョンの形態または当業者に周知の他の形態で製剤化され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）を参照のこと。噴霧不可能な局所剤形の場合、局所適用に適合する担体または１つ以上の賦形剤を含み、水よりも大きい動粘性係数を有する粘性から半固体または固体形態が、通常使用される。適切な製剤としては、限定されないが、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、散剤、リニメント剤、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）などが挙げられ、これらは、所望により、例えば、浸透圧などの種々の特性に影響を及ぼすために、滅菌され、または補助剤（例えば、保存料、安定化剤、湿潤剤、緩衝液または塩）と混合される。他の適切な局所剤形としては、固体または液体不活性担体と組み合わせた有効成分が、加圧された揮発性物質（例えば、ガス状噴射剤、例えば、フレオン）との混合物中にまたはスクイーズボトル中にパッケージされている噴霧可能なエアロゾル調製物が挙げられる。所望により、保湿剤または保水剤も、医薬組成物および剤形に追加され得る。このようなさらなる成分の例は、当技術分野において周知である。

【0213】

本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合には、組成物は、エアロゾル形態、スプレー、ミストまたは液滴の形態で製剤化され得る。特に、本発明に従って使用するための予防剤または治療剤は、適切な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガス）を使用して、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー調製物の形態で送達され得ることが好都合である。加圧エアロゾルの場合には、投与単位は、定量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。化合物およびラクトースまたはデンプンなどの適切な散剤基剤の散剤ミックスを含有する、吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）または吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）において使用するためのカプセル剤およびカートリッジ（例えば、ゼラチンからなる。）が製剤化され得る。

【0214】

本発明の方法が経口投与を含む場合には、組成物は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ジェルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で経口的に製剤化され得る。錠剤またはカプセル剤は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの医薬として許容される賦形剤を用いて、従来の手段によって調製され得る。錠剤は、当技術分野において周知の方法によってコーティングされ得る。経口投与用の液体調製物は、限定されないが、溶液、シロップ剤または懸濁液の形態をとってもよいし、またはこれらは使用前に水もしくは他の適切なビヒクルで構成するための乾燥製品として提示してもよい。このような液体調製物は、懸濁液（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または硬化食用脂肪）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアガム）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコールまたは精留植物油）；および保存料（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの医薬として許容される添加剤を用いて、従来の手段によって調製され得る。調製物はまた、必要に応じて、緩衝液塩、香味剤、着色剤および甘味剤も含有し得る。経口投与用の調製物は、予防剤または治療剤の徐放、制御放出または持続放出のために適切に製剤化され得る。

【0215】

本発明の方法は、例えば、エアロゾル化剤を用いて製剤化された組成物の吸入器または噴霧器の使用による肺投与を含み得る。例えば、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号明細書；同第５，９８５，３２０号明細書；同第５，９８５，３０９号明細書；同第５，９３４，２７２号明細書；同第５，８７４，０６４号明細書；同第５，８５５，９１３号明細書；同第５，２９０，５４０号明細書；および同第４，８８０，０７８号明細書；および国際公開第９２／１９２４４号、同第９７／３２５７２号、同第９７／４４０１３号、同第９８／３１３４６号および同第９９／６６９０３号を参照のこと。特定の実施形態では、本発明の抗体、併用療法および／または本発明の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（登録商標）肺薬剤送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。

【0216】

本発明の方法は、注射による（例えば、ボーラス注射または連続注入による）非経口投与用に製剤化された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、保存料を加えた単位剤形で（例えば、アンプルまたは複数回投与容器で）提示され得る。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとり得、懸濁液、安定化剤および／または分散剤などの処方剤を含有し得る。または、有効成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば、滅菌発熱物質不含水）を用いて構成するための散剤形態であり得る。本発明の方法は、デポー調製物として製剤化された組成物の投与をさらに含み得る。このような長時間作用型製剤は、移植（例えば、皮下に、または筋肉内に）によって、または筋肉注射によって投与され得る。従って、例えば、組成物は、適切なポリマー物質または疎水性物質を用いて（例えば、許容されるオイル中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂を用いて、または難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）製剤化され得る。

【0217】

本発明の方法は、中性のまたは塩の形態として製剤化された組成物の投与を包含する。医薬として許容される塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されるものなどの陰イオンを用いて形成されるもの、ならびにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの陽イオンを用いて形成されるものが挙げられる。

【0218】

一般に、組成物の成分は、別個に、または単位剤形中に一緒に混合されて、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉された容器中の無水凍結乾燥散剤または無水濃縮物として供給される。投与様式が注入である場合には、組成物は、滅菌医薬等級水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて分配され得る。投与様式が注射によるものである場合には、滅菌注射水または生理食塩水のアンプルは、成分が投与に先立って混合され得るように提供され得る。

【0219】

特に、本発明はまた、本発明の抗体または医薬組成物のうち１つ以上が、抗体の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉された容器中にパッケージングされることを提供する。一実施形態では、本発明の抗体または医薬組成物のうち１つ以上が、密閉された容器中の無水滅菌凍結乾燥散剤または無水濃縮物として供給され、（例えば、水または生理食塩水を用いて）被験体に投与するための適切な濃度に再構成され得る。一実施形態では、本発明の抗体または医薬組成物のうち１つ以上は、少なくとも５ｍｇ、例えば、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇまたは少なくとも１００ｍｇの単位投与量で密閉された容器中の無水滅菌凍結乾燥散剤として供給される。本発明の凍結乾燥抗体または医薬組成物は、この元の容器中で、２℃から８℃の間で保存されなくてはならず、本発明の抗体または医薬組成物は、再構成された後、１週間以内に、例えば、５日以内に、７２時間以内に、４８時間以内に、２４時間以内に、１２時間以内に、６時間以内に、５時間以内に、３時間以内にまたは１時間以内に投与されなくてはならない。代替の実施形態では、本発明の抗体または医薬組成物のうち１つ以上が、抗体の量および濃度を示す密閉された容器中の液体形態で供給される。さらなる実施形態では、投与される組成物の液体形態は、密閉された容器中、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、例えば、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで供給される。液体形態は、この元の容器中で、２℃から８℃の間で保存されなくてはならない。

【0220】

本発明の抗体は、非経口投与に適切な医薬組成物中に組み込まれ得る。一態様では、抗体は、０．１から２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射用溶液として調製される。注射用溶液は、フリントまたはアンバーバイアル、アンプルまたは薬剤充填済みシリンジ中の液体または凍結乾燥剤形のいずれかからなり得る。緩衝液は、ｐＨ５．０から７．０（最適には、ｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１から５０ｍＭ）、最適には、５から１０ｍＭであり得る。他の適切な緩衝液としては、限定されないが、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが挙げられる。溶液の毒性を改変するために、塩化ナトリウムが、０から３００ｍＭ（最適には、液体剤形の場合には１５０ｍＭ）の濃度で使用され得る。凍結乾燥剤形には、凍結保護物質、主に０から１０％スクロース（最適には、０．５から１．０％）が含まれ得る。他の適切な凍結保護物質としては、トレハロースおよびラクトースが挙げられる。凍結乾燥剤形には、充填剤、主に、１から１０％マンニトール（最適には、２から４％）が含まれ得る。液体および凍結乾燥剤形の両方において、安定化剤、主に、１から５０ｍＭ Ｌ−メチオニン（最適には、５から１０ｍＭ）が使用され得る。他の適切な充填剤としては、グリシン、アルギニンが挙げられ、０から０．０５％ポリソルベート−８０（最適には、０．００５から０．０１％）として含まれ得る。さらなる界面活性剤としては、限定されないが、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられる。非経口投与用の注射溶液として調製された本発明の抗体を含む医薬組成物は、アジュバントとして有用な薬剤、例えば、抗体の吸収または分散を増加させるのに使用されるものをさらに含み得る。特に有用なアジュバントは、Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）などのヒアルロニダーゼである。ヒアルロニダーゼを注射溶液中に追加することにより、非経口投与、特に皮下投与後におけるヒトのバイオアベイラビリティが改善される。これにより、痛みおよび不快感をほとんど伴わずに、および注射部位反応の発生率を最小にして、注射部位容量をより大きく（即ち、１ｍｌ超）することも可能である。（参照により本明細書に組み込まれる国際公開第０４／０７８１４０号および米国特許出願公開第２００６１０４９６８号明細書を参照のこと）

【0221】

本発明の組成物は、種々の形態であり得る。これらとしては、例えば、液体溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）、分散物または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤などの液体、半固体および固体剤形が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療適用に依存する。組成物は、他の抗体を用いるヒトの受動免疫感作に使用されるものと類似の組成物などの注射用溶液または注入用溶液の形態であり得る。一実施形態では、抗体は、静脈内注入または注射によって投与される。別の実施形態では、抗体は、筋肉内注射または皮下注射によって投与される。

【0222】

治療用組成物は、通常、無菌で、製造および保存の条件下で安定でなくてはならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソームまたは高い薬物濃度に適切な他の秩序構造として製剤化され得る。滅菌注射用溶液は、適切な溶媒中の必要な量で活性化合物（即ち、本発明の結合タンパク質、例えば、抗体）を、必要に応じて上記で列挙された成分のうち１つまたはこれらの組み合わせと共に組み込むこと、続いて、ろ過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散物は、活性化合物を、基本分散媒および上記で列挙されたもののうち必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌凍結乾燥散剤の場合には、調製方法は、真空乾燥ならびに有効成分および先に滅菌ろ過したこの溶液に由来する任意のさらなる所望の成分の散剤が得られる噴霧乾燥を含む。溶液の適切な流動度は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散物の場合には必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持され得る。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。

【0223】

本発明の抗体は、当技術分野において公知の様々な方法によって投与され得る。多くの治療適用にとって、投与経路／様式は、皮下注射、静脈内注射または注入であり得る。当業者によって理解されているように、投与経路および／または様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。特定の実施形態では、活性化合物は、化合物を迅速放出から保護する担体、例えば、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤と共に調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような製剤を調製するための多数の方法が、特許されているか、当業者には一般に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。

【0224】

特定の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、不活性希釈液または同化食用担体と共に経口投与され得る。抗体（および所望により、他の成分）はまた、ハードシェルゼラチンカプセル剤またはソフトシェルゼラチンカプセル剤中に封入されるか、錠剤に圧縮されるか、または被験体の食事に直接組み込まれ得る。経口治療的投与の場合、抗体は、賦形剤と共に組み込まれ、摂取可能な錠剤、口腔錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウェーハなどの形態で使用され得る。本発明の抗体を、非経口投与以外によって投与するには、抗体をこの不活化を防ぐ物質でコーティングするか、または抗体をこの不活化を防ぐ物質と共に同時投与する必要があり得る。

【0225】

補足の活性化合物もまた、組成物中に組み込まれ得る。特定の実施形態では、本発明の抗体は、本明細書に記載される障害または疾患を治療するのに有用な１つ以上のさらなる治療剤と共に同時製剤化および／または同時投与される。例えば、本発明の抗ＲＧＭａ抗体は、他の標的に結合する１つ以上のさらなる抗体（例えば、他の可溶性抗原に結合する抗体または細胞表面分子に結合する抗体）と共に同時製剤化および／または同時投与され得る。さらに、１つ以上の本発明の抗体は、前述の治療剤のうち２つ以上と組み合わせて使用され得る。このような併用療法は、有利には、より低い投与量の投与治療剤を用いるので、種々の単剤療法に関連する潜在的な毒性または合併症を回避し得る。

【0226】

特定の実施形態では、本発明の抗体は、当技術分野において公知の半減期延長ビヒクルに連結される。このようなビヒクルとしては、限定されないが、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランが挙げられる。このようなビヒクルは、例えば、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第０９／４２８，０８２号明細書および国際公開第９９／２５０４４号に記載されている。

【0227】

特定の実施形態では、本発明の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列が、遺伝子療法によって、障害またはこの１つ以上の症候を治療、予防、管理または改善するために投与される。遺伝子療法は、発現されたまたは発現可能な核酸を被験体に投与することによって実施される治療を指す。本発明のこの実施形態では、核酸は、予防効果または治療効果を媒介するこれらによってコードされる本発明の抗体を生成する。

【0228】

当技術分野において利用可能な遺伝子療法のための方法のいずれかが、本発明に従って使用され得る。遺伝子療法の方法の一般的な総説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａｌ，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２（１９９３）；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５を参照のこと。使用され得る組換えＤＮＡ技術の当技術分野において周知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。遺伝子療法の種々の方法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号明細書に開示されている。

【0229】

神経突起変性に関連する疾患または症状、例えば、多発性硬化症、アルツハイマー病、ダウン症候群、認知症、パーキンソン病、外傷性中枢神経系損傷、またはＲＧＭａに関連する任意の他の疾患もしくは症状を治療するために、本発明の抗体は単独でまたは組み合わせて使用され得る。

【0230】

本発明の抗体は単独で、または１つ以上のさらなる薬剤、例えば、治療剤（例えば、低分子または生物学的製剤）と組み合わせて使用され得ることを理解するべきであり、前記さらなる薬剤は、意図する目的のために当業者によって選択されるものである。例えば、さらなる治療剤は、免疫抑制剤、または多発性硬化症に関連する１つ以上の症候を治療する薬剤であり得る。さらなる薬物は、βインターフェロンであり得る。Ａｖｏｎｅｘ、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ、ＥｘｔａｖｉａおよびＲｅｂｉｆなどのβインターフェロンは、多発性硬化症の症候が経時的に悪化する速度を遅らせ得る。さらなる薬剤は、ミエリンに対する免疫系の攻撃を遮断し得るグラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）であり得る。さらなる薬剤は、リンパ節内の免疫細胞を捕捉し得るフィンゴリモド（Ｇｉｌｅｎｙａ）であり得る。さらなる薬剤は、潜在的に有害な免疫細胞が血流から脳および脊髄に移動するのを妨げ得るナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ）であり得る。さらなる薬物は、免疫抑制薬物であるミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）であり得る。

【0231】

さらなる治療剤は、ヒトの脳の認知能力（即ち、思考、学習および記憶）の障害を改善する薬物である「認識促進薬」であり得る。認識促進薬は、神経化学物質（例えば、神経伝達物質、酵素およびホルモン）のアベイラビリティを変化させることによって、酸素供給を改善することによって、神経成長を刺激することによって、または神経損傷を阻害することによって働く。認識促進薬の例としては、アセチルコリンの活性を増大する化合物、例えば、限定されないが、アセチルコリン受容体アゴニスト（例えば、ニコチン性α−７受容体アゴニストもしくはアロステリックモジュレーター、α４β２ニコチン性受容体アゴニストもしくはアロステリックモジュレーター）、アセチルコリンエステラーゼ阻害物質（例えば、ドネペジル、リバスチグミンおよびガランタミン）、ブチリルコリンエステラーゼ阻害物質、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト（例えば、メマンチン）、活性依存性神経保護タンパク質（ＡＤＮＰ）アゴニスト、セロトニン５−ＨＴ１Ａ受容体アゴニスト（例えば、キサリプロデン）、５−ＨＴ４受容体アゴニスト、５−ＨＴ６受容体アンタゴニスト、セロトニン１Ａ受容体アンタゴニスト、ヒスタミンＨ３受容体アンタゴニスト、カルパイン阻害物質、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）タンパク質もしくはアゴニスト、栄養成長因子、抗アポトーシス性化合物、ＡＭＰＡ型グルタメート受容体活性化物質、Ｌ型もしくはＮ型カルシウムチャネルブロッカーもしくはモジュレーター、カリウムチャネルブロッカー、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）活性化物質、ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼ阻害物質、抗炎症薬、アミロイドＡβペプチドもしくはアミロイドプラークの阻害物質、タウ過剰リン酸化の阻害物質、ホスホジエステラーゼ５阻害物質（例えば、タダラフィル、シルデナフィル）、ホスホジエステラーゼ４阻害物質、モノアミンオキシダーゼ阻害物質、またはこれらの医薬として許容される塩が挙げられる。このような認識促進薬の具体例としては、限定されないが、コリンエステラーゼ阻害物質、例えば、ドネペジル（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標））、リバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標））、ガランタミン（Ｒｅｍｉｎｙｌ（登録商標））、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸アンタゴニスト、例えばメマンチン（Ｎａｍｅｎｄａ（登録商標））が挙げられる。本発明の抗体によって治療されている疾患または症状を治療するのに有用であると現在認められているかまたは将来認められる薬剤を含む少なくとも１つの認識促進薬が、本発明の抗体と共に同時投与され得るか、または（任意の順序で）本発明の抗体と共に連続投与され得る。加えて、本明細書に記載される組み合わせは、上記治療に使用した場合に相加効果または相乗効果を有し得ると考えられる。さらなる薬剤はまた、有益な特性を治療用組成物に付与する薬剤、例えば、組成物の粘性に影響を与える薬剤であり得る。

【0232】

組み合わせは、意図される目的にとって有用な組み合わせであるということは理解されなければならない。上記薬剤は例示目的であり、限定的であることを意図するものではない。組み合わせは、抗体および以下の一覧から選択される少なくとも１つのさらなる薬剤を含み得る。組み合わせはまた、形成された組成物が意図される機能を遂行し得るようなものであれば、２つ以上のさらなる薬剤、例えば、２つまたは３つのさらなる薬剤を含み得る。

【0233】

医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の抗体を含み得る。「治療有効量」は、必要な投与量および期間で、所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。抗体の治療有効量は、当業者によって決定され得、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに抗体が個体において所望の反応を誘導する能力などの要因に従って変化し得る。治療有効量はまた、治療上有益な作用が、もしあれば抗体の毒性作用または有害作用を上回るものである。「予防有効量」は、必要な投与量および期間で、所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。通常、予防用量は、被験体において疾患に先立って、または疾患の初期段階で使用されるので、予防有効量は、治療有効量よりも少ないものとなる。

【0234】

投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療反応または予防反応）を提供するように調整され得る。例えば、単回ボーラスが投与される場合も、幾つかの分割用量が経時的に投与される場合も、または治療状況の危急によって、用量が比例的に減少または増加される場合もある。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を単位剤形で製剤化することは特に有利である。本明細書で使用した場合、単位剤形は、治療するべき哺乳動物被験体のための単位投与量として適切な物理的に別個の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように算出された所定量の活性化合物を含有する。単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成するべき特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の治療のための、このような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、これらに直接的に依存する。

【0235】

抗体の治療有効量または予防有効量の例示的な非限定的範囲は、０．１から２００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１から１０ｍｇ／ｋｇの用量である。抗体の治療有効量または予防有効量は、１から２００ｍｇ／ｋｇ、１０から２００ｍｇ／ｋｇ、２０から２００ｍｇ／ｋｇ、５０から２００ｍｇ／ｋｇ、７５から２００ｍｇ／ｋｇ、１００から２００ｍｇ／ｋｇ、１５０から２００ｍｇ／ｋｇ、５０から１００ｍｇ／ｋｇ、５から１０ｍｇ／ｋｇまたは１から１０ｍｇ／ｋｇであり得る。投与量の値は、緩和するべき症状の種類および重症度によって変化し得ることに留意するべきである。さらに、抗体の用量は当業者によって決定され得、疾患状態、個体の年齢、性別および体重、ならびに抗体が個体において所望の反応を誘導する能力などの要因に従って変化し得る。用量はまた、治療上有益な効果が、もしあれば抗体の毒性作用または有害作用を上回るものである。任意の特定の被験体について、具体的な投与計画は、個体の要求、および組成物投与の施行者または監督者の専門的な判断に従って経時的に調整されるべきであり、本明細書に記載される投与量範囲は例示的なものにすぎず、特許請求の範囲に記載されている組成物の範囲または実施を限定するものではないことをさらに理解するべきである。

【0236】

４．神経突起変性に関連する疾患を治療、予防、調節または軽減する方法
任意の被験体において、被験体が神経突起変性障害を有するかについての評価が行われ得る。評価は、予防療法、維持療法または緩和療法などの治療法の適切な経過を示し得る。従って、神経突起変性の疾患／障害を治療、予防、調節または軽減する方法が本明細書で提供される。抗体は、これを必要とする被験体に投与され得る。抗体は、治療有効量で投与され得る。

【0237】

一般に、投与される抗体の投与量は、患者の年齢、体重、身長、性別、一般的な医学的状態および過去の病歴などの要因に応じて変化するであろう。通常、約１ｐｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ（薬剤の量／患者の体重）の範囲内の投与量の抗体成分、免疫コンジュゲートまたは融合タンパク質をレシピエントに提供することが望ましいが、状況に応じてより低い投与量またはより高い投与量も投与され得る。投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療反応または予防反応）を提供するように調整され得る。例えば、単回ボーラスが投与される場合も、幾つかの分割用量が経時的に投与される場合も、または治療状況の危急によって、用量が比例的に減少または増加される場合もある。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を単位剤形で製剤化することは特に有利である。本明細書で使用される場合、単位剤形は、治療するべき哺乳動物被験体のための単位投与量として適切な物理的に別個の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように算出された所定量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成するべき特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の治療のための、このような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、これらに直接的に依存する。

【0238】

本発明の抗体または抗体部分の治療有効量または予防有効量の例示的な非限定的範囲は、０．１から２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．５から１０ｍｇ／ｋｇである。投与量の値は、緩和するべき症状の種類および重症度によって変化し得ることに留意するべきである。任意の特定の被験体について、具体的な投与計画は、個体の要求、および組成物投与の施行者または監督者の専門的な判断に従って経時的に調整されるべきであり、本明細書に記載される投与量範囲は例示的なものにすぎず、特許請求の範囲に記載されている組成物の範囲または実施を限定するものではないことをさらに理解するべきである。

【0239】

患者への抗体の投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、くも膜下、眼内、硝子体内、局所カテーテルによる灌流、または直接的な病巣内注射であり得る。注射によって治療タンパク質を投与する場合、投与は、持続注入または単回もしくは複数回ボーラスによるものであり得る。静脈内注射は、抗体を循環系に十分に急速分布させるので、有用な投与様式を提供する。抗体は、例えば、不活性希釈液または同化食用担体と共に経口投与され得る。所望により、抗体および他の成分は、ハードシェルゼラチンカプセル剤またはソフトシェルゼラチンカプセル剤中に封入され、錠剤、口腔錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液（ｓｓｐｅｎｓｉｏｎｓ）、シロップ、ウェーハなどに圧縮され得る。

【0240】

抗ＲＧＭａ抗体は、タンパク質２０ミリグラムから２グラム／用量などの低タンパク質用量で１回または反復して非経口投与され得る。または、抗体は、タンパク質２０から１０００ミリグラム／用量、またはタンパク質２０から５００ミリグラム／用量、またはタンパク質２０から１００ミリグラム／用量の用量で投与され得る。

【0241】

抗体は単独で投与してもよいし、またはこれらをリポソームにコンジュゲートし、医薬として有用な組成物を調製するための公知の方法に従って製剤化することができ、これにより、抗体を医薬として許容される担体と混ぜ合わせる。「医薬として許容される担体」は、レシピエント患者が許容し得るものである。滅菌リン酸緩衝生理食塩水は、医薬として許容される担体の一例である。他の適切な担体は、当業者に周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９ｔｈ Ｅｄ．（１９９５）を参照のこと。

【0242】

治療目的の場合、抗体は、医薬として許容される担体中の治療有効量で患者に投与される。「治療有効量」は、生理学的に有意なものである。抗体は、この存在が、レシピエント患者の生理機能に検出可能な変化をもたらす場合、生理学的に有意である。本文脈では、抗体は、この存在が、例えば、ＣＤ４^＋Ｔ細胞からのインターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１７の分泌の減少をもたらす場合、生理学的に有意であり得る。薬剤は、この存在が、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における増殖反応および／または炎症促進性サイトカインの発現の減少をもたらす場合、生理学的に有意である。

【0243】

治療適用における抗体の作用持続時間を制御するために、さらなる治療方法が用いられ得る。制御放出調製物は、抗体を複合体化または吸着するためのポリマーを使用することによって調製され得る。例えば、生体適合性ポリマーとしては、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）のマトリックス、およびステアリン酸ダイマーとセバシン酸とのポリ無水物コポリマーのマトリックスが挙げられる。Ｓｈｅｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１４４６（１９９２）。このようなマトリックスからの抗体の放出速度は、タンパク質の分子量、マトリックス内の抗体の量および分散粒子のサイズに依存する。Ｓａｌｔｚｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．５５：１６３（１９８９）；Ｓｈｅｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ、前掲。他の固体剤形は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９ｔｈ ｅｄ．（１９９５）に記載されている。

【0244】

ａ．神経突起変性障害／疾患
神経突起障害／疾患は、神経突起損傷およびシナプス機能障害が存在する任意の疾患または障害であり得る。この損傷および機能障害は、十分な髄鞘形成を欠く神経および／または軸索離断に起因し得る。神経突起変性障害または疾患は、例えば、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症および他の運動ニューロン疾患、ハンチントン病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、ゴーシェ病、ハーラー症候群、特発性炎症性脱髄疾患、ビタミンＢ１２欠乏症、橋中央ミエリン溶解、脊髄癆、横断性脊髄炎、デビック病、進行性多病巣性白質脳症、視神経炎、および神経突起変性に関連する他の網膜症、例えば、緑内障、糖尿病性網膜症および加齢性黄斑変性症、外傷性中枢神経系損傷または大脳白質委縮症であり得る。神経突起変性障害または疾患は、ミエリンと称される脂肪（リポタンパク質）から構成される組織層による十分なラッピングを欠く神経線維に起因し得る。これらの層は、ミエリン鞘を形成する。ミエリン鞘により、電気インパルスは、神経線維に沿って素早く正確に伝導され得る。ミエリン鞘が損傷または喪失すると、神経は、電気インパルスを正常に伝導しない。場合により、ミエリン鞘が損傷または喪失した結果として、神経線維も損傷し得る。

【0245】

年少乳児は、通常、成熟ミエリン鞘を欠く場合がある。この結果として、年少乳児の動きは、ぎくしゃくしており、まとまりがなく、ぎごちないものである。ミエリン鞘が発達するにつれて、動きが、よりスムーズに、より意図的に、よりまとまったものになる。しかしながら、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、ゴーシェ病およびハーラー症候群などのある特定の疾患を有する子供では、ミエリン鞘は正常に発達しない。

【0246】

成人では、ミエリン鞘は、脳卒中、炎症、免疫障害、代謝障害および栄養失調（例えば、ビタミンＢ１２の欠乏）によって破壊され得る。毒物、薬物（例えば、抗生物質エタンブトール）およびアルコール過剰摂取は、ミエリン鞘を損傷または破壊し得る。鞘がこれ自体を修復および再生することができる場合、正常な神経機能が回復し得る。しかしながら、鞘が重度に損傷した場合、基にある神経線維が死滅し得る。中枢神経系（脳および脊髄）の神経線維はめったに再生しないので、このような損傷は不可逆的である。

【0247】

脱髄を引き起こす幾つかの神経突起変性障害は、主に、中枢神経系に影響を与える。他のものは、主に、体の他の部分の神経に影響を与える。中枢神経系で脱髄を引き起こす原因不明の神経突起変性障害は、原発性脱髄障害と称される。多発性硬化症は、これらの障害の中で最も一般的なものである。

【0248】

（１）多発性硬化症
ＭＳの臨床経過は、４つの主要カテゴリ（またはサブタイプ）：再発寛解型（ＲＲＭＳ）、二次進行型（ＳＰＭＳ）、一次進行型（ＰＭＳ）および進行再発型（ＰＲＭＳ）に分けられ得る。臨床的安定の介在期間を伴って数カ月または数年毎に臨床的再発を有する患者は、ＲＲＭＳを定義する。１０歳代または２０歳代では、ＲＲＭＳは、女性では男性よりも２倍超多い可能性がある。ＲＲＭＳとは対照的に、ＳＰＭＳを有する患者は、再発間に進行性悪化を示す。ＲＲＭＳ患者は、時間と共に、神経機能が徐々に低下することを特徴とするＳＰＭＳに変わり得る。ＭＳ患者の約１５％は、晩期発症と、神経機能が疾患発症から間断なく悪化することとを特徴とするＰＰＭＳを有する。良性ＭＳは、初期診断後１５年超経過した後でも依然として移動可能であり、軽度の障害のみを示すＲＲＭＳ患者と任意に定義されている（Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｔｕｓ Ｓｃａｌｅ［ＥＤＳＳ］）。通常、これらの患者は、初回発作後に進行をほとんど示さないかまたは全く示さず、治療的介入を必要としない；しかしながら、ＭＳの発症から５年までにこのＭＳ型を診断することは不可能である。

【0249】

（２）パーキンソン病
パーキンソン病は西半球全体で広まっており、１８１７年に医師Ｊａｍｅｓ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎによって最初に報告された。パーキンソン病は手足の振戦として最初に検出され得、最終的には３つの他の兆候：（ｉ）「歯車」様の動きおよび「鉛管様」硬直を特徴とする硬直；（ｉｉ）運動緩慢または動作緩慢、および（ｉｉｉ）前屈姿勢および歩行障害に関連する姿勢の不安定を含むまでに進行し得る。これらの動作変化は運動機能障害の特徴であるが、加えて、全パーキンソン病患者の４０％では精神障害も存在し得る。

【0250】

パーキンソン病は、脳のレボドーパミン欠乏状態によって引き起こされ得る。より具体的には、レボドーパミンは、パーキンソン病患者における運動障害および黒質の脱神経の結果を誘発し得る。これまでに、医療科学は、注射剤型のレボドパが脳に到達して血液脳関門を上手く通過することを可能にする基質を見出していない。現在のドーパミン補充療法は、直接的な補充、または脳内のドーパミン受容体部位における作用の模倣を目的とするものである。レボドパ療法は、最初は幾つかの有益な変化を起こし得るが、これらの変化は時間と共に弱まり、重度の睡眠障害、運動障害および恒常的な吐き気などの他の問題を引き起こし得る。パーキンソン病に対する医学的方法としては、脳組織の外科的破壊、および脳の罹患部位への微小電極の挿入（脳深部電気刺激）が挙げられる。電極の挿入は、可逆的であるという利点を有する。しかしながら、これらの介入は一般に一時的なものであり、パーキンソン病状態の永続的変化を引き起こすものでもないし、疾患の作用を低減するものでもない。

【0251】

パーキンソン病は、過酸化により進展する多因子神経変性障害であり得る。黒質は酸化的損傷に対して感受性であり、このことは、パーキンソン病形成についてのこの理論を裏付けている。酸化的リン酸化の異常は黒質のミトコンドリアを障害し、フリーラジカルの生成を増大させる。

【0252】

（３）活性酸素種（フリーラジカル）による損傷
活性酸素種（ＲＯＳ）は数種類の組織を攻撃し得、ＲＯＳへの慢性的な曝露は種々の生物学的機能を弱め、神経突起変性障害および疾患を含む数種類の深刻な障害のリスクを増加させ得る。ＲＯＳはニューロンを攻撃し、細胞死を誘導し得る。例えば、低濃度の過酸化水素によるニューロンの治療は、神経突起ビーズ（ｎｅｕｒｉｔｅ ｂｅａｄｉｎｇ）と称されることもある有害な神経突起形態変化に影響を与えることによって、神経突起損傷を誘導し得る。神経突起ビーズは、過酸化水素で治療されたニューロンの死滅誘導前の初期神経変性事象の１つであり得る。

【0253】

（４）アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、高齢者における認知症の主な原因である。通常は家族歴を判断しないので、遺伝型ＡＤはめったに存在しないが、ほとんどの患者は散発性ＡＤを有すると分類される。病理学的には、ＡＤはニューロンおよびシナプスの変性、および老人斑および神経原線維濃縮体の数が、同年齢の非認知症個体と比較して増加することを特徴とする。

【0254】

アルツハイマー病に特徴的な老人斑は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の分解産物である凝集β−アミロイドの中核から構成される。神経原線維濃縮体は、微小管に関連するタウと称される過リン酸型タンパク質から構成される不溶性の細胞内糸状構造物である。

【0255】

アルツハイマー病患者の脳組織の死後切片は、アミロイドが、ＡＤに特徴的な老人斑のタンパク質細胞外コアの形態で存在することを示す。これらの老人斑のアミロイドコアは、主にβ−プリーツシート構造の配置をとるβ−アミロイドと称されるタンパク質から構成される。Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７：１７０８２（１９９２）；Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ ８３：５０３（１９８６）。老人斑は、この疾患の初期のおよび不変の側面である。Ｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．８９：１６９；Ｍａｎｎ，Ｍｅｃｈ．Ａｇｅｉｎｇ Ｄｅｖ．３１：２１３（１９８５）；Ｔｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ ４６：２６２（１９８７）。

【0256】

Ａβの初期沈着は、臨床症候が顕著になる前に起こり得る。ＡＤの診断に現在推奨されている「最低顕微鏡基準（ｍｉｎｉｍｕｍ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ）」は、脳において見られる老人斑の数に基づくものである。Ｋｈａｃｈａｔｕｒｉａｎ，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ、前掲（１９８５）。残念なことに、老人斑を数える評価は、死亡後まで待たなければならない。

【0257】

アミロイドを含む老人斑は、ＡＤおよびダウン症候群、ならびにＡＤを発症する可能性が非常に高い、アポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子がホモ接合性の者の脳の選択領域の顕著な特徴である。Ｃｏｒｄｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：９２１（１９９３）；Ｄｉｖｒｙ，Ｐ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｐｓｙｃｈ．２７：６４３−６５７（１９２７）；Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ，ｉｎ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ，Ｈ．Ｍ．（ｅｄ．）：ＰＲＯＧＲＥＳＳ ＩＮ ＮＥＵＲＯＰＡＴＨＯＬＯＧＹ（Ｇｒｕｎｅ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｔｏｎ，Ｎ．Ｙ．１９７３）ｐｐ．１−２６。脳アミロイドは、脳の切片をチオフラビンＳまたはコンゴーレッドで染色することによって容易に実証される。Ｐｕｃｈｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．１０：３５（１９６２）。コンゴーレッドで染色したアミロイドは二色性を呈することを特徴とし、黄緑色の偏光色を示す。この二色性の結合は、アミロイドタンパク質のβ−プリーツシート構造によるものである。Ｇｌｅｎｎｅｒ，Ｇ．Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０２：１２８３（１９８０）。アミロイドの生化学および組織化学についての詳細な議論は、Ｇｌｅｎｎｅｒ，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３０２：１３３３（１９８０）に見られ得る。

【0258】

（５）外傷性中枢神経系損傷
米国における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の発生率は、控えめに見積もっても毎年２００万人よりも多く、約５００，０００人が入院している。これらのうち、約７０，０００人から９０，０００人の頭傷害生存者は回復不能の障害がある。

【0259】

機械的もしくは化学的外傷、またはニューロンを死の危険性にさらすのに十分な神経障害性変性をニューロンが受けた場合には、被験体の中枢神経系の神経経路は危険にさらされている。多数の神経障害が今日までに同定されており、これらの一部は末梢または中枢神経系におけるニューロンの亜集団または系のみを侵す。ニューロンこれ自体または関連グリア細胞を侵し得る神経障害は、細胞代謝機能不全、感染症、毒性作用物質への曝露、自己免疫不全、栄養失調または虚血に起因し得る。ある場合では、細胞機能不全は、細胞死を直接的に誘導すると考えられている。他の場合では、神経障害は、身体の免疫／炎症系、および最初の神経傷害に対する身体の免疫反応の機構を刺激するのに十分な組織壊死を誘導し得、次いで、ニューロンおよびこれらのニューロンによって規定される経路を破壊する。

【0260】

ｂ．被験体
被験体は哺乳動物であり得、ヒトであり得る。被験体は、神経突起変性障害または疾患を有し得るか、またはこれらを発症するリスクを有し得る。被験体は、神経突起変性障害または疾患の治療を既に受けていてもよい。

【0261】

５．診断方法
被験体が神経突起変性疾患または障害を有するかを決定するための方法が本明細書で提供される。膜結合ＲＧＭａレベルを測定し、対照試料におけるＲＧＭａレベルと比較し得る。対照試料は、正常組織由来のものであり得る。対照と比較したＲＧＭａレベルの変化は、被験体が神経突起変性疾患または障害を有することを示し得る。例えば、正常対照と比較したＲＧＭａレベルの増加は、被験体が神経突起変性疾患または障害を有することを示し得る。ＲＧＭａレベルは、本明細書に記載される抗体を使用して測定され得る。

【0262】

ａ．試料
試料は、被験体由来の任意の組織試料であり得る。試料は、被験体由来のタンパク質を含み得る。試料は、血清、血漿または組織生検であり得る。試料は、被験体から得られた状態のまま直接使用することもできるし、または試料の特性を改変するための前処理の後に使用することもできる。前処理としては、抽出、濃縮、干渉成分の不活性化および／または試薬の追加を挙げることができる。

【0263】

試料を得るために、任意の細胞型、組織または体液が用いられ得る。このような細胞型、組織および液体としては、組織切片、例えば、生検および解剖試料、組織学的目的で採取された凍結切片、血液、血漿、血清、痰、排泄物、涙、粘液、唾液、髪の毛および皮膚を挙げることができる。細胞型および組織としては、リンパ液、腹水（ａｓｃｅｔｉｃ ｆｌｕｉｄ）、婦人科学的液体、尿、腹腔液、脳脊髄液、腟の洗浄によって採取された液体、または腟のフラッシングによって採取された液体も挙げることができる。組織または細胞型は、動物から細胞を取り出すことによって提供され得るが、予め単離された細胞（例えば、別の者、別の時間および／または別の目的で単離されたもの）を使用することによって達成することもできる。治療歴または転帰歴を有するものなどのアーカイブ組織も使用され得る。タンパク質精製は必要でない場合がある。

【0264】

ｂ．ＲＧＭａの検出
体試料中に存在するＲＧＭａの存在または量は、例えば、ＲＧＭａに対する本明細書に記載される抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）またはこの断片を使用して、質量分析、イムノアッセイまたは免疫組織化学（例えば、組織生検の切片を用いる。）によって容易に決定され得る。抗ＲＧＭａ抗体およびこの断片は、上記のように生産され得る。他の検出方法としては、例えば、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，１４３，５７６号明細書；同第６，１１３，８５５号明細書；同第６，０１９，９４４号明細書；同第５，９８５，５７９号明細書；同第５，９４７，１２４号明細書；同第５，９３９，２７２号明細書；同第５，９２２，６１５号明細書；同第５，８８５，５２７号明細書；同第５，８５１，７７６号明細書；同第５，８２４，７９９号明細書；同第５，６７９，５２６号明細書；同第５，５２５，５２４号明細書；および同第５，４８０，７９２号明細書に記載されているものが挙げられる。

【0265】

（１）イムノアッセイ
ＲＧＭａおよび／またはこのペプチドは、イムノアッセイを使用して分析され得る。ＲＧＭａの存在または量は、本明細書に記載される抗体を使用し、ＲＧＭａに対する特異的結合を検出することによって決定され得る。例えば、抗体またはこの断片は、配列番号６５を含むポリペプチドまたはこの断片に特異的に結合し得る。抗体またはこの断片は、配列番号６６を含むポリペプチドまたはこの断片に特異的に結合し得る。

【0266】

任意のイムノアッセイが用いられ得る。イムノアッセイは、例えば、酵素結合免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫検定法（ＲＩＡ）、競合阻害アッセイ、例えば、フォワードもしくはリバース競合阻害アッセイ、蛍光偏光アッセイまたは競合結合アッセイであり得る。ＥＬＩＳＡは、サンドイッチＥＬＩＳＡであり得る。ＲＧＭａに対する抗体の特異的な免疫学的結合は、直接標識、例えば、抗体に付加された蛍光または発光タグ、金属および放射性核種によって、または間接標識、例えば、アルカリ性フォスファターゼもしくは西洋ワサビペルオキシダーゼによって検出することができる。

【0267】

固定化抗体またはこの断片の使用もイムノアッセイに組み込まれ得る。これらの抗体は、様々な支持体、例えば、磁気またはクロマトグラフマトリックス粒子、アッセイプレート（例えば、マイクロタイターウェル）の表面、幾つかの固体基質材料などの上に固定化することができる。アッセイストリップは、抗体または複数の抗体を固体支持体上のアレイにコーティングすることにより作製することができる。次いで、このストリップを試験生体試料中に浸し、次いで洗浄および検出段階によって迅速に処理して、着色スポットなどの測定可能なシグナルを生成することができる。

【0268】

（ａ）サンドイッチＥＬＩＳＡ
サンドイッチＥＬＩＳＡは、２つの抗体層（即ち、捕捉抗体および検出抗体）間の抗原の量を測定する。測定するべきＲＧＭａは、抗体に結合することができる少なくとも２つの抗原部位を含有し得る。サンドイッチＥＬＩＳＡでは、捕捉抗体および検出抗体として、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかが使用され得る。

【0269】

一般に、少なくとも２つの抗体を用いて、試験試料中のＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片を分離および定量する。より具体的には、少なくとも２つの抗体が、ＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片のある特定のエピトープに結合して、「サンドイッチ」と称される免疫複合体を形成する。１つ以上の抗体を用いて、試験試料中のＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片を捕捉することができ（これらの抗体は、「捕捉」抗体または複数の「捕捉」抗体と称されることが多い。）、１つ以上の抗体を用いて、検出可能な（即ち、定量可能な）標識をサンドイッチに結合させる（これらの抗体は、「検出」抗体または複数の「検出」抗体と称されることが多い。）。サンドイッチアッセイでは、エピトープに結合する両抗体を、アッセイにおける任意の他の抗体の各エピトープに対する結合によって減少されないようにできる。換言すれば、ＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片を含むと疑われる試験試料と接触させる１つ以上の第１の抗体が、第２のまたはこれ以降の抗体によって認識されるエピトープの全部または一部に結合して、１つ以上の第２の検出抗体がＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片に結合する能力を妨害しないように抗体を選択し得る。

【0270】

前記イムノアッセイでは、抗体は、第１の抗体として使用され得る。好ましくは、抗体は、配列番号６５、６６または７４の少なくとも３つの連続するアミノ酸を含むエピトープに免疫特異的に結合する。本発明の抗体に加えて、前記イムノアッセイは、配列番号６５、６６または７４の少なくとも３つの連続するアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに免疫特異的に結合する第２の抗体を含み得、ここで、第２の抗体が結合する連続する３つのアミノ酸は、第１の抗体が結合する連続する３つのアミノ酸とは異なるものである。

【0271】

好ましい実施形態では、ＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片を含むと疑われる試験試料を、少なくとも１つの第１の捕捉抗体（または抗体）および少なくとも１つの第２の検出抗体と同時にまたは連続して接触させることができる。サンドイッチアッセイ形式では、ＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片を含むと疑われる試験試料を最初に、第１の抗体−ＲＧＭａ複合体の形成を可能とする条件下で、特定のエピトープに特異的に結合する少なくとも１つの第１の捕捉抗体と接触させる。複数の捕捉抗体を用いる場合、第１の多捕捉抗体−ＲＧＭａ複合体が形成される。サンドイッチアッセイでは、抗体、好ましくは少なくとも１つの捕捉抗体を、試験試料で予想されるＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片の最大量の過剰モル量で用いる。例えば、微粒子コーティング緩衝液１ｍｌあたり約５μｇ／ｍｌから約１ｍｇ／ｍｌの抗体を用いることができる。

【0272】

場合により、少なくとも１つの第１の捕捉抗体と試験試料を接触させる前に、前記少なくとも１つの第１の捕捉抗体を、試験試料からの第１の抗体−ＲＧＭａ複合体の分離を容易にする固体支持体に結合させることができる。限定されないが、ポリマー材料製の固体支持体であって、ウェル、チューブまたはビーズの形態のものを含む当技術分野において公知の固体支持体を使用することができる。この抗体（または複数の抗体）を、吸着によって、化学カップリング薬を用いる共有結合によって、または当技術分野において公知の他の手段によって固体支持体に結合させることができるが、ただし、このような結合は、抗体がＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片に結合する能力を妨害するものではない。さらに、必要に応じて、抗体上の種々の官能基との反応性を可能とするために、固体支持体を誘導体化することができる。このような誘導体化には、ある特定のカップリング剤、例えば限定されないが、無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドおよび１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドの使用が必要である。

【0273】

ＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片を含むと疑われる試験試料を少なくとも１つの第１の捕捉抗体と接触させた後、第１の捕捉抗体（または多抗体）−ＲＧＭａ複合体の形成を可能にするために、試験試料をインキュベートする。このインキュベーションは、約４．５から約１０．０のｐＨで、約２℃から約４５℃の温度で、少なくとも約１分間から約１８時間、約２から６分間、約３から４分間の期間にわたって行うことができる。

【0274】

第１の／多捕捉抗体−ＲＧＭａ複合体の形成後、この複合体を少なくとも１つの第２の検出抗体と接触させる（第１の／多抗体−ＲＧＭａ−第２の抗体複合体の形成を可能とする条件下で）。第１の抗体−ＲＧＭａ複合体を複数の検出抗体と接触させる場合、第１の／多捕捉抗体−ＲＧＭａ−多検出抗体複合体が形成される。第１の抗体の場合と同様に、少なくとも第２の（およびこれ以降の）抗体を第１の抗体−ＲＧＭａ複合体と接触させる場合、第１の／多抗体−ＲＧＭａ−第２の／多抗体複合体の形成には上記のものと同様の条件下でのインキュベーション期間が必要である。好ましくは、少なくとも１つの第２の抗体は、検出可能な標識を含む。検出可能な標識は、第１の／多抗体−ＲＧＭａ−第２の／多抗体複合体の形成の前、これと同時にまたはこの後に、少なくとも１つの第２の抗体に結合させることができる。当技術分野において公知の任意の検出可能な標識を用いることができる。

【0275】

（ｂ）フォワード競合阻害
フォワード競合形式では、既知濃度の標識ＲＧＭａ、ＲＧＭａ断片またはこのＲＧＭａ変異体のアリコートを用いて、ＲＧＭａ抗体（例えば、本発明の抗体）に対する結合について試験試料中のＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片と競合させる。

【0276】

フォワード競合アッセイでは、固定化抗体（例えば、本発明の抗体）を、試験試料および標識ＲＧＭａ、ＲＧＭａ断片またはこのＲＧＭａ変異体と連続してまたは同時に接触させることができる。ＲＧＭａペプチド、ＲＧＭａ断片またはＲＧＭａ変異体は、抗ＲＧＭａ抗体との関連で前述した検出可能な標識を含む任意の検出可能な標識で標識することができる。このアッセイでは、抗体を固体支持体上に固定化することができる。または、抗体を、微粒子などの固体支持体上に固定化した抗体、例えば、抗種抗体にカップリングすることができる。

【0277】

標識ＲＧＭａペプチド、ＲＧＭａ断片またはＲＧＭａ変異体、試験試料および抗体を、サンドイッチアッセイ形式に関連して前述したものと同様の条件下でインキュベートする。次いで、２つの異なる種類の抗体−ＲＧＭａ複合体が生成され得る。具体的には、生成された抗体−ＲＧＭａ複合体のうちの１つは検出可能な標識を含み、他方の抗体−ＲＧＭａ複合体は検出可能な標識を含まない。抗体−ＲＧＭａ複合体は、検出可能な標識の定量の前に残りの試験試料から分離することができるが、必須ではない。抗体−ＲＧＭａ複合体を残りの試験試料から分離するかにかかわらず、次いで、抗体−ＲＧＭａ複合体中の検出可能な標識の量を定量する。次いで、抗体−ＲＧＭａ複合体中の検出可能な標識の量を標準曲線と比較することによって、試験試料中のＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片の濃度を求めることができる。標準曲線は、既知濃度のＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片の連続希釈物を用いて、質量分析、重量測定および当技術分野において公知の他の技術によって作成することができる。

【0278】

サンドイッチアッセイ形式に関連して前述した固体支持体などの固体支持体に抗体を結合させ、次いで、残りの試験試料を固体支持体との接触から引き離すことによって、抗体−ＲＧＭａ複合体を試験試料から分離することができる。

【0279】

（ｃ）リバース競合アッセイ
リバース競合アッセイでは、固定化ＲＧＭａペプチド、ＲＧＭａ断片またはこのＲＧＭａ変異体を、試験試料および少なくとも１つの標識抗体と連続してまたは同時に接触させることができる。好ましくは、抗体は、配列番号６５または６６の少なくとも３つの連続するアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合する。ＲＧＭａペプチド、ＲＧＭａ断片またはＲＧＭａ変異体は、サンドイッチアッセイ形式との関連で前述した固体支持体などの固体支持体に結合させることができる。ＲＧＭａペプチド断片は、配列番号６５または６６を含むアミノ酸配列を有し得る。

【0280】

固定化ＲＧＭａペプチド、ＲＧＭａペプチド断片またはこのＲＧＭａ変異体、試験試料および少なくとも１つの標識抗体を、サンドイッチアッセイ形式に関連して前述したものと同様の条件下でインキュベートする。次いで、２つの異なる種類のＲＧＭａ−抗体複合体が生成される。具体的には、生成されたＲＧＭａ−抗体複合体のうちの一方は固定化され、検出可能な標識を含むが、他方のＲＧＭａ−抗体複合体は固定化されず、検出可能な標識を含む。固定化されていないＲＧＭａ−抗体複合体および残りの試験試料を、洗浄などの当技術分野において公知の技術によって固定化ＲＧＭａ−抗体複合体の存在から除去する。固定化されていないＲＧＭａ抗体複合体を除去したら、次いで、固定化ＲＧＭａ−抗体複合体中の検出可能な標識の量を定量する。次いで、ＲＧＭａ−複合体中の検出可能な標識の量を標準曲線と比較することによって、試験試料中のＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片の濃度を求めることができる。標準曲線は、既知濃度のＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片の連続希釈物を用いて、質量分析、重量測定および当技術分野において公知の他の技術によって作成することができる。

【0281】

（ｄ）蛍光偏光
蛍光偏光アッセイでは、抗体またはこの機能活性断片を最初に、ＲＧＭａまたはこのＲＧＭａ断片を含むと疑われる未標識試験試料と接触させて、未標識ＲＧＭａ−抗体複合体を形成させ得る。次いで、未標識ＲＧＭａ−抗体複合体を、蛍光標識ＲＧＭａ、ＲＧＭａ断片またはこのＲＧＭａ変異体と接触させる。標識ＲＧＭａ、ＲＧＭａ断片またはＲＧＭａ変異体は、抗体またはこの機能活性断片に対する結合について、試験試料中の任意の未標識ＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片と競合する。形成された標識ＲＧＭａ−抗体複合体の量を求め、標準曲線を用いることによって試験試料中のＲＧＭａの量を求める。

【0282】

蛍光偏光アッセイで用いられる抗体は、配列番号６５または配列番号６６または配列番号７４の少なくとも３つのアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合する。

【0283】

抗体、標識ＲＧＭａペプチド、ＲＧＭａペプチド断片またはこのＲＧＭａ変異体ならびに試験試料および少なくとも１つの標識抗体を、サンドイッチイムノアッセイに関連して前述したものと同様の条件下でインキュベートし得る。

【0284】

または、抗体またはこの機能活性断片を、蛍光標識ＲＧＭａ、ＲＧＭａ断片またはこのＲＧＭａ変異体、ならびにＲＧＭａまたはこのＲＧＭａ断片を含むと疑われる未標識試験試料と同時に接触させて、標識ＲＧＭａ−抗体複合体および未標識ＲＧＭａ−抗体複合体の両方を形成させ得る。形成された標識ＲＧＭａ−抗体複合体の量を求め、標準曲線を用いることによって試験試料中のＲＧＭａの量を求める。

【0285】

または、抗体またはこの機能活性断片を最初に、蛍光標識ＲＧＭａ、ＲＧＭａ断片またはこのＲＧＭａ変異体と接触させて、標識ＲＧＭａ−抗体複合体を形成させる。次いで、標識ＢＮＰ−抗体複合体を、ＲＧＭａまたはこのＲＧＭａ断片を含むと疑われる未標識試験試料と接触させる。試験試料中の任意の未標識ＲＧＭａまたはＲＧＭａ断片は、抗体またはこの機能活性断片に対する結合について標識ＲＧＭａ、ＲＧＭａ断片またはＲＧＭａ変異体と競合する。形成された標識ＲＧＭａ−抗体複合体の量を求め、標準曲線を用いることによって試験試料中のＲＧＭａの量を求める。このイムノアッセイで用いられる抗体は、配列番号６５、６６または７４の少なくとも３つの連続するアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合する。

【0286】

（ｅ）質量分析
質量分析（ＭＳ）のみを用いて、または他の方法と組み合わせて使用することができる。他の方法としては、イムノアッセイ、および特定のポリヌクレオチドを検出するための上記方法が挙げられる。質量分析法を用いて、１つ以上のバイオマーカーの存在および／または量を決定することができる。ＭＳ分析は、例えば、直接−スポットＭＡＬＤＩ−ＴＯＦまたは液体クロマトグラフィーＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析などのマトリックス支援レーザー脱着／イオン化（ＭＡＬＤＩ）飛行時間（ＴＯＦ）ＭＳ分析法を含み得る。幾つかの実施形態では、ＭＳ分析は、例えば、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）ＥＳＩ−ＭＳなどのエレクトロスプレー・イオン化（ＥＳＩ）ＭＳを含む。質量分析は、市販のスペクトロメーターを用いて行うことができる。生体試料中のバイオマーカーペプチドの存在および量を検出するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳおよびＥＳＩ−ＭＳを含むＭＳ分析を利用する方法が使用され得る。ガイダンスについては、例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，９２５，３８９号明細書、同第６，９８９，１００号明細書；および同第６，８９０，７６３号明細書を参照のこと。

【0287】

ｃ．対照
対照試料を含めることが望ましい場合がある。対照試料は、上記被験体由来の試料と同時に分析され得る。被験体試料から得られた結果を、対照試料から得られた結果と比較し得る。生体試料のアッセイ結果を比較し得る標準曲線が提供され得る。このような標準曲線は、アッセイ単位の、即ち、蛍光標識が使用される場合には蛍光シグナルの強度の関数として、マーカーのレベルを示す。複数のドナーから採取した試料を用いて、正常組織における対照ＲＧＭａレベル、および上記特徴の１つ以上を有し得るドナーから採取した組織における「リスクのある」ＲＧＭａレベルについて、標準曲線を提供し得る。

【0288】

６．キット
被験体を治療または診断するのに使用され得るキットが本明細書で提供される。キットは、抗体と、抗体を投与するための手段とを含み得る。キットは、キットを使用し、分析、モニタリングまたは治療を行うための説明書をさらに含み得る。

【0289】

キットはまた、バイアルまたはボトルなどの１つ以上の容器を含み得、各容器は、別個の試薬を含有する。キットは、本明細書に記載される分析、モニタリング、治療または方法をどのようにして実施または解釈するかを説明し得る取扱説明書をさらに含み得る。

【0290】

本発明は、以下の非限定的な実施例によって例証される複数の態様を有する。

【実施例】

【0291】

［実施例１］
抗ＲＧＭａヒトモノクローナル抗体の生産および単離
ＰＲＯ融合ｍＲＮＡディスプレイ技術、プールされたヒト膵臓、扁桃腺、ＰＢＭＣおよびリンパ節を使用して、ＲＧＭａ抗原：１００ｎＭビオチン標識ヒトまたはラットＲＧＭａに対して、抗体ライブラリを８ラウンドにわたって選択した。ＰＲＯ融合技術は、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１０／００９９１０３号明細書および同第２０１０／０１０５５６９号明細書に記載されている。選択したｓｃ−Ｆｖ断片を完全ヒトＩｇＧに再編成した。ＲＧＭａベースのＥＬＩＳＡでＩｇＧをスクリーニングした後、ヒトおよびラットＲＧＭａに対する陽性結合体としてＡＥ１２−１からＡＥ１２−８を同定した。

【0292】

抗体ＡＥ１２−１３、ＡＥ１２−１５、ＡＥ１２−２０、ＡＥ１２−２１、ＡＥ１２−２３およびＡＥ１２−２４は、標準的な酵母ディスプレイ技術を使用してヒトＲＧＭａに対して選択した大きなナイーブヒトｓｃＦｖ酵母ライブラリから同定された完全ヒト抗ＲＧＭａ抗体である。このライブラリに対して、１００ｎＭビオチン化ヒトＲＧＭａを選択抗原として使用して、２ラウンドの磁気活性化細胞分類（ＭＡＣＳ）および４ラウンドの蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を実施した。また、最終ラウンドの分類では、ヒトＲＧＭｃ−Ｆｃ抗原に対して、細胞をネガティブ選択した。選択したｓｃ−Ｆｖ断片を完全ヒトＩｇＧに再編成した。ヒトＲＧＭａ ＥＬＩＳＡでＩｇＧをスクリーニングした後、ヒトＲＧＭａに対する陽性結合体としてＡＥ１２−１３、−１５、−２０、−２１、−２３および−２４を同定した。ＥＬＩＳＡによって評価したところ、ＡＥ１２−１３、ＡＥ１２−１５およびＡＥ１２−２３は、ヒトＲＧＭｃとも交差反応した。

【0293】

［実施例２］
抗体の特性決定
ヒトＲＧＭａ（ｈＲＧＭａ）およびラットＲＧＭａに対する結合、ならびにｈＲＧＭｃに対する交差反応性を調べるために、８つのＰＲＯ融合ｍＡｂ（ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−２、ＡＥ１２−３、ＡＥ１２−４、ＡＥ１２−５、ＡＥ１２−６、ＡＥ１２−７およびＡＥ１２−８）を直接結合ＥＬＩＳＡによって試験した。これらのｍＡｂのいずれが、ｈＲＧＭａに対する結合についてｈ５Ｆ９．２３と競合するかを試験するために、ｈＲＧＭａ競合ＥＬＩＳＡを用いた。ｈ５Ｆ９．２３は、ラットハイブリドーマ由来のヒト化抗ＲＧＭａリードｍＡｂであり、ＲＧＭａのＮ末端ドメインに結合することが公知である。ｈ５Ｆ９．２３は、以下の配列を有する：

【0294】

【表5】

【0295】

これらのｍＡｂが、受容体ネオゲニンまたはＢＭＰ−２／ＢＭＰ−４に対するｈＲＧＭａの結合を遮断するかを決定するために、ネオゲニンまたはＢＭＰ−２／ＢＭＰ−４競合ＥＬＩＳＡを用いた。

【0296】

ＥＬＩＳＡのデータによれば、８つのＰＲＯ融合ｍＡｂはすべて、ヒトおよびラットＲＧＭａに結合した（表３）。ＥＬＩＳＡにおけるＲＧＭｃ結合については、３つのｍＡｂ（ＡＥ１２−６、−７および−８）はｈＲＧＭｃに対する結合を示し、ＡＥ１２−４は高濃度で弱い結合を示し、他の４つのｍＡｂ（ＡＥ１２−１、−２、−３および−５）は、１００ｎＭまでの濃度でｈＲＧＭｃに対する結合を示さなかった。ｈＲＧＭａ競合ＥＬＩＳＡでは、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−３およびＡＥ１２−６は、ｈＲＧＭａに対する結合についてｈ５Ｆ９．２３と競合することができたが、このことは、これら３つのｍＡｂの結合エピトープが、ｈ５Ｆ９．２３のエピトープの近くであるかまたはこれとオーバーラップすることを示唆している。ｈＲＧＭａ断片を用いたドットブロッティングアッセイにより、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−６はＮ末端断片に結合し、ＡＥ１２−２およびＡＥ１２−４はＣ末端断片に結合し、他の４つのＡｂはいかなる検出可能な結合シグナルも示さなかったことが示された。競合ＥＬＩＳＡにおけるネオゲニンに対するｈＲＧＭａの結合の遮断については、ＡＥ１２−５およびＡＥ１２−６のみが、ｈ５Ｆ９．２３と同程度であるかまたはこれよりも優れた遮断活性を示し、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−４は弱い阻害を示し、ＡＥ１２−２、−３、−７および−８は１００ｎＭまでの濃度で阻害を示さなかった。ＢＭＰ−２／ＢＭＰ−４競合ＥＬＩＳＡでは、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−４およびＡＥ１２−６のみが、ＢＭＰ−２／ＢＭＰ−４に対するｈＲＧＭａの結合を遮断した。

【0297】

細胞ベースの結合アッセイにおいて、神経細胞に対するｈＲＧＭａの結合を遮断する能力について、ＰＲＯ融合ｍＡｂをさらに試験した。ＭＳＤベースの細胞結合アッセイにおいて、細胞をビオチン化ｈＲＧＭａ−Ｆｃと共に室温でインキュベートし、ストレプトアビジン−スルホ−タグによってｈＲＧＭａの結合を検出したところ、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−６のみが、ｈ５Ｆ９．２３と同様に、ヒトＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経細胞に対するｈＲＧＭａの結合を遮断した（表３）。

【0298】

しかしながら、ハイコンテントスクリーニング（ＨＣＳ）アッセイにおいて、細胞をｈＲＧＭａ−Ｆｃと共に３７℃でインキュベートし、Ｃｙ３標識抗Ｆｃ ＡｂによってｈＲＧＭａの結合を検出し、ハイコンテント蛍光画像分析（ｈｉｇｈ ｃｏｎｔｅｎｔ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｉｍａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）で計算したところ、ＰＲＯ融合抗体の中でＡＥ１２−６のみが、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経細胞およびラット海馬一次ニューロンの両方に対するＲＧＭａの結合に対して強い阻害を示した（表３、図１３）。図１３にも示されているように、ナイーブヒトｓｃＦｖ酵母ライブラリ由来の抗体であるＡＥ１２−１５およびＡＥ１２−２３は、細胞に対するｈＲＧＭａの結合を阻害した。

【0299】

Ｋｏｒｃｈｙｎｓｋｙｉおよびｔｅｎ Ｄｉｊｋｅ（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２，２７７：４８８３）によって記載されている配列に基づいて、オーバーラップオリゴを使用してＢＭＰ応答配列（ＢＲＥ）を構築し、基本的なルシフェラーゼレポーターベクターｐＧＬ４．２７［ｌｕｃ２Ｐ／ｍｉｎＰ／Ｈｙｇｒｏ］（Ｐｒｏｍｅｇａ）にクローニングして、ＢＲＥルシフェラーゼレポーター構築物を作製した。ＲＧＭファミリーメンバー（ＲＧＭａ、ＲＧＭｂおよびＲＧＭｃ）は、ＢＭＰシグナル伝達の共受容体である。ＢＭＰレポータープラスミドおよびＲＧＭａまたはＲＧＭｃ発現プラスミドで２９３ＨＥＫ細胞をコトランスフェクトすることによって、ＲＧＭａおよびＲＧＭｃ ＢＭＰレポーターアッセイの両方を確立し、ＲＧＭａおよびＲＧＭｃに対する中和活性について、ｍＡｂをスクリーニングするのに使用した。ＲＧＭａ ＢＭＰレポーターアッセイでは、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−６がＲＧＭａ活性を中和したが、このことは、ＭＳＤベースの細胞結合アッセイからのデータと一致している（表３）。ＲＧＭｃ ＢＭＰレポーターアッセイでは、ＡＥ１２−６はＲＧＭｃ活性を中和したのに対して、ＡＥ１２−１はＲＧＭｃ活性を中和しなかった。従って、ＡＥ１２−１は、ＲＧＭａに対して特異的な中和ｍＡｂである。

【0300】

ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経細胞を用いたケモタキシスアッセイにおいて、ＲＧＭａを中和する能力について、ＰＲＯ融合ｍＡｂをさらに試験した。このアッセイでは、ＲＧＭａは反発性分子として作用して、細胞のケモタキシスを阻害する。ＡＥ１２−１は、ｈＲＧＭａに対する強い中和活性を示した（表３）。ＡＥ１２−４およびＡＥ１２−６は、いくらかの中和活性を示した。

【0301】

ヒトＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経細胞を用いた神経突起伸長アッセイにおいて、ＡＥ１２−１を試験した。このアッセイでは、全長またはＮ末端断片のいずれかのＲＧＭａが、神経突起の伸長を阻害する。ＲＧＭａ ＢＭＰレポーターアッセイおよびケモタキシスアッセイにおける機能活性と一致して、ＡＥ１２−１は、全長ｈＲＧＭａまたはＮ末端断片のいずれかに対する強い中和活性を示した（表３）。

【0302】

ｈＲＧＭｃならびにヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ）およびラットＲＧＭａに対するＡＥ１２−１のＢＩＡｃｏｒｅ分析により、ＡＥ１２−１はｈＲＧＭｃに結合しなかったが、ヒト、カニクイザルおよびラットＲＧＭａに対して同程度の親和性で優れた交差反応性を示したことが実証された。表４を参照のこと。

【0303】

【表6】

【0304】

表３に関して、「^ａＮｅｇ」は、ドットブロッティングで試験したすべての断片との結合がネガティブであることに対応する。「^ｂＭＳＤ」は、ストレプトアビジン−スルホ−タグと複合体化したビオチン化ｈＲＧＭａ−Ｆｃを使用して、細胞と共に室温（ＲＴ）でインキュベートしたことに対応する。「^ｃＨＣＳ」は、Ｃｙ３標識抗Ｆｅ Ａｂと複合体化したｈＲＧＭａ−Ｆｃを使用して、細胞と共に３７℃でインキュベート（ｉｎｂａｔｉｏｎ）したことに対応する。「^ｄＡＥ１２−１」は、ＭＳＤによってＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞に対するビオチン−ＲＧＭａ−Ｆｃの結合が阻害されたのとは対照的に、細胞に対するＲＧＭａ−Ｆｃの結合が劇的に増強したことに対応する。「^ｅ？」は、ＡＥ１２−７の不確定データに対応する。「ＡＥ１２−４」−ケモタキシスアッセイにおけるＡＥ１２−４の濃度は、中和活性と逆相関している。

【0305】

ＢＭＰ応答レポーターアッセイでは、ＲＧＭａまたはＲＧＭｃが、ＢＭＰと相互作用することによってＢＭＰシグナル伝達を増強するところ、配列番号１および５を含む抗体（ＡＥ１２−１）は、ＲＧＭａ活性を遮断したがＲＧＭｃ活性を遮断せず、このことは、ＲＧＭａに対するこの機能的拮抗作用および結合特異性と一致している。

【0306】

図１３および１４は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞およびラット海馬一次ニューロンの生細胞結合アッセイを使用して、神経細胞に対するＲＧＭａの結合に対する特定抗体の中和作用を示すものである。Ｆｃタグ付ＲＧＭａおよびＣｙ３標識抗Ｆｃ抗体を４℃で６０分間複合体化し、続いて、この複合体を遮断抗体と共に室温で１０分間インキュベートする。次いで、ＲＧＭａ−Ｃｙ３＋抗体複合体をＨｏｅｃｈｓｔｓ３３３４２と共に細胞に３７℃で３０分間にわたって追加して、細胞に結合させる。次いで、細胞を培養培地で２回洗浄し、ＰＦＨで固定する。ＢＤ Ｐａｔｈｗａｙで細胞のイメージングを実施し、Ｄｅｆｍｉｅｎｓ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔソフトウェアで画像を分析する。

【0307】

上述のように、ＡＥ１２−６、ＡＥ１２−１５およびＡＥ１２−２３は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞および一次ニューロンに対するＲＧＭａの結合を遮断した。図１３を参照のこと。ＨＣＳアッセイでは、ＡＥ１２−１は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞に対するＲＧＭａの結合を阻害しなかった。図１４を参照のこと。最高濃度のＡＥ１２−１は細胞に対するＲＧＭａ−Ｆｃの結合を増強したのに対して、より低濃度では、このレベルは対照ＲＧＭａ結合レベルと同等であった。このことは、ＭＳＤ（ＭＳＤは、ストレプトアビジン−スルホ−タグと複合体化したビオチン化ｈＲＧＭａ−Ｆｃを使用して、細胞と共に室温でインキュベートしたことに対応する。）によって、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞に対するビオチン−ＲＧＭａ−Ｆｃの結合が阻害されるのとは対照的である。ＭＳＤとＨＣＳアッセイとの間の差は、異なるアッセイ条件に起因し得る。

【0308】

図１５は、神経突起伸長アッセイにおける、ＲＧＭａ反発性に対するｒ５Ｆ９（対照）、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−６の中和作用を示す。ポリ−ｌ−リシンでコーティングした９６ウェルイメージングプレート上に、１ウェルあたり６５００個のラット海馬一次ニューロンをプレートした。抗ＲＧＭａ抗体と組み合わせて、配列番号６５の４７位から１２７位のＲＧＭａ断片（配列番号１３９）で細胞を２４時間治療した。細胞を固定し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅの神経突起伸長キットプロトコールを使用してＢＩＩＩ−チューブリンで染色した。ＢＤ Ｐａｔｈｗａｙで画像を取得し、Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔで分析して、ニューロン１個あたりの神経突起伸長を測定した。

【0309】

［実施例３］
抗体変異体および結合データ
表４は、ＡＥ１２−１ ＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８）のＣｙｓ残基を置換することによって、改善されたｈＲＧＭａ親和性を有する変異体を作製することができることを示す。配列番号６７から７３を参照のこと。例えば、表４を参照すると、抗体クローンＡＥ１２−１−Ｙは少なくとも１０倍増加したｈＲＧＭａ親和性を示し、ＡＥ１２−１−Ｆは５倍増加したｈＲＧＭａ親和性を示した。他のものは、親のＡＥ１２−１と同程度の親和性を示した。すべての変異体が、ＭＳＤベースの細胞結合アッセイでは、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞に対するｈＲＧＭａの結合を遮断し、ＢＭＰレポーターアッセイではＲＧＭａ活性を中和したがＲＧＭｃ活性を中和せず、予備処方研究では高い熱安定性および優れた溶解性を示した。

【0310】

【表7】

【0311】

［実施例４］
神経突起伸長
図１、２および１５に示されているように、ＡＥ１２−１は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞およびラット海馬一次ニューロンで示されているように全長ｈＲＧＭａおよびｈＲＧＭａ断片を完全に中和した。ここに示されているように、このｈＲＧＭａ断片は、配列番号６５のアミノ酸４７から１２７に対応する：

【0312】

【化4】

【0313】

ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１変異体の作用を評価するために、さらなる神経突起伸長実験を実施した。これらの抗体は、配列番号１および５または２から４および６から８を含み、配列番号８のＣｙｓ残基が別のアミノ酸に置換されているか、または配列番号５の９１位のＣｙｓ残基が別のアミノ酸に置換されている（即ち、ＡＥ１２−１−Ｆ、ＡＥ１２−１−Ｈ、ＡＥ１２−１−Ｌ、ＡＥ１２−１−Ｖ、ＡＥ１２−１−Ｉ、ＡＥ１２−１−ＫおよびＡＥ１２−１−Ｙ）。ＦＬ ｈＲＧＭａで治療したＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の神経突起伸長に対する前記抗体による阻害（２４時間のインキュベート）が示されている図９から１２を参照のこと。

【0314】

［実施例５］
インビボ研究
図３および４に示されているように、ＡＥ１２−１は、病変部周囲（０から５００μｍ）の網膜神経節細胞軸索の反発性成長を増強した（ｎ＝ラット３から５匹／群）。図３を参照のこと。抗体ＡＥ１２−１は、病変からさらに離れた領域（５００から１０００μｍ）への網膜神経節細胞軸索の反発性成長も増強した（ｎ＝ラット３から５匹／群）。

【0315】

［実施例６］
ラット視神経挫滅実験
ＡＥ１２−１は、ラット視神経挫滅実験で活性であった。図８を参照のこと。雄性ウィスターラットの眼の２から４ｍｍ後ろに、片側視神経挫滅損傷を施した。ラットを６週間経過観察し（８群、ｎ＝６）、抗体を１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇのいずれかで週１回静脈内投与した。ｈＩｇＧ１対照を１０ｍｇ／ｋｇで週１回静脈内投与した（ｎ＝ラット６匹）。ＡＥ１２−１治療ラットでは、再生線維は視神経挫滅損傷を越えて成長することができたのに対して、対照抗体ｈＩｇＧ１治療ラットでは、再生線維は、損傷を克服することができなかったため損傷部に蓄積した。図８を参照のこと。

【0316】

［実施例７］
モノクローナル抗体ＡＥ１２−１を用いたヒトＲＧＭａ（ｈＲＧＭａ）のエピトープマッピング
モノクローナル抗体ＡＥ１２−１について、エピトープマッピング研究を行った。データにより、ＡＥ１２−１に対するエピトープは、ＲＧＭａのＮ末端領域に位置することが示唆された。幾つかのｈＲＧＭａ構築物を用いて、ＡＥ１２−１に対するエピトープを決定しようと試みた。これらの構築物には、以下のものが含まれていた：
組換え生産したｐｅｌＢ−Ｍ−［ＲＧＭＡ（４７−１６８）］−６Ｈｉｓ（配列番号１４８として開示されている「６Ｈｉｓ」）（エシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ））。抗原は、ＣｈｅｍＴａｇ＃１６２１１、Ｓ１００緩衝液、ｐＨ８、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、１０％（ｖ／ｖ）グリセロール中、０．４１ｍｇ／ｍＬである。この第１の抗原構築物の配列は、

【0317】

【化5】

である。

【0318】

組換え生産した［ＩｇＫ−リーダー］−ＡｔｔＢｌ−［ｈＲＧＭＡ（４７−４２２）］−ＡｔｔＢ２−ＭＹＣ−６Ｈｉｓ（配列番号１４８として開示されている「６Ｈｉｓ」）、ＰＢＳ中０．８５ｍｇ／ｍｌ。この第２の抗原構築物の配列は、

【0319】

【化6】

である。

【0320】

組換え生産した［ＩｇＫ−リーダー］−ＡｔｔＢｌ−［ｈＲＧＭＡ（４７−１６８）］−Ｘａ−［ｈＩｇＧ Ｌ Ｆｃ（２５７−４８１）］（哺乳動物構築物）、ＰＢＳ中１．１８ｍｇ／ｍＬ。この第３の抗原構築物の配列は、

【0321】

【化7】

である。

【0322】

使用した抗原はすべて、ＲＧＭａ（４７−１６８）のアミノ酸配列を含有しており、配列位置を特定するのに使用したナンバリングは、親タンパク質のナンバリングに対応する。ｈＲＧＭａ（４７−１６８）の配列は、

【0323】

【化8】

である。

【0324】

エピトープを切り出すのに使用した緩衝液は、以下のとおりであった：
緩衝液Ａ：１００ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８；
緩衝液Ｂ：１００ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８；
緩衝液Ｃ：１００ｍＭ ＮａＯＡｃ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ４；および
緩衝液Ｄ：１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８。

【0325】

モノクローナル抗体を以下のように固定化した。２０ミリグラムのＣＮＢｒ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ Ｓｗｅｄｅｎ）を計量して３５μｍフリットのコンパクト反応カラム（ＵＳＢ Ｃｏｒｐ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）に入れ、２００μｌの１ｍＭ ＨＣｌで３回洗浄し、続いて２００μｌの緩衝液Ａで３回洗浄した。

【0326】

１０，０００ ＭＷＣＯ Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ ｍｉｎｉ透析機器（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用して、約５から６ｎｍｏｌのＡＥ１２−１ｍＡｂ溶液をＰＢＳに対して約４０分間透析して、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅに対する抗体の結合を妨げるヒスチジン緩衝液を除去した。透析したｍＡｂ溶液を活性化樹脂に追加し、ロテータ（Ｍｉｘ−Ａｌｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｕｂｅ Ｍｉｘｅｒ，Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ Ｍａｒｃｏｓ，ＣＡ）上、室温で４時間混合した。結合後、樹脂通過画分を収集し、樹脂を２００μｌの緩衝液Ａで３回洗浄した。樹脂を２００μｌの緩衝液Ｄに懸濁し、室温で１時間回転させて、樹脂内の過剰結合部位をブロッキングした。緩衝液Ｄ溶液を流し出し、樹脂を２００μｌの緩衝液Ｃおよび緩衝液Ｄで交互に合計で各３回洗浄した（低／高ｐＨ洗浄）。樹脂を２００μｌの緩衝液Ｂで３回洗浄して、抗原にカップリングすることができる状態にした。

【0327】

固定化ＡＥ１２−１モノクローナル抗体をｈＲＧＭａにカップリングした。コンパクト反応カラム（ＣＲＣ）の３５μｍフリットを２００μｌの緩衝液Ｂで３回洗浄することによって、ＣＲＣを抗原カップリング用に調製した。抗体が結合した樹脂を穏やかに混合して樹脂を均一に再懸濁し、調製した各ＣＲＣに５０μｌの樹脂を入れた。樹脂を２００μｌの緩衝液Ｂで３回洗浄した。総容量を少なくとも２００μｌとするのに十分な緩衝液Ｂを用いて、約１．５ｎｍｏｌのｈＲＧＭａ抗原を樹脂に追加した。抗原カップリングの前に、３５００ＭＷＣＯ Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ ｍｉｎｉ透析機器を使用して、エシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）が産生した抗原をＰＢＳ緩衝液に対して約３０分間透析して、抗原緩衝液からＤＴＴを除去した。ロテータ上で、抗原／樹脂混合物を室温で４時間混合した。通過画分（ＦＴ）を収集し、樹脂を２００μｌの緩衝液Ｂで３回洗浄した。

【0328】

トリプシンおよびエンドプロテアーゼＡｓｐ−Ｎを使用して、エピトープを切り出した。固定化抗体／抗原複合体を含有する樹脂を２００μｌの緩衝液Ｂに懸濁した。２０μｇのトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を含むバイアルを１００μｌの再懸濁緩衝液（５０ｍＭ ＨＯＡｃ）に０．２μｇ／μｌの濃度で溶解し、２μｇバイアルのエンドプロテアーゼＡｓｐ−Ｎ（Ｒｏｃｈｅ）を５０μｌの水に溶解した（０．０４μｇ／μｌ）。酵素：抗原を１：１００の比（ｗ／ｗ）にして、抗原の切断を実施した。反応は、回転させながら室温で４から６時間進行させた。

【0329】

消化後、ＦＴを収集し、樹脂を２００μｌの緩衝液Ｂで２回洗浄し（洗浄１および２）、２００μｌの緩衝液Ａで洗浄し（洗浄３）、次いで２００μｌの緩衝液Ｂで洗浄した（洗浄４）（各洗浄液は別個に収集）。２００μｌアリコートの２％ギ酸を３つ用いて、抗体に結合した抗原ペプチドを樹脂から溶離し、各溶離液を別個に収集した（溶離１、２および３）。エピトープ領域を決定するために、質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）によって溶離１画分を分析した。

【0330】

Ａｇｉｌｅｎｔ ６５１０ ＱＴＯＦ ＭＳに接続したＣｈｉｐ Ｃｕｂｅ（４０ｎＬ濃縮カラム、７５μｍ×４３ｍｍ分析カラム、Ｃ８ ＺＯＲＢＡＸチップ）を備えるＡｇｉｌｅｎｔ（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）１１００キャピラリーＨＰＬＣローディングポンプおよび１２００ｎａｎｏ−ＨＰＬＣ勾配ポンプを使用して、ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（陽イオン）によって、消化後に収集した溶離１画分を分析した。最大７μｌの注入量を使用し、特定のＭＳシグナル基準を満たす上位３つのイオンについて、ＭＳ／ＭＳを実施した。

【0331】

エピトープ切り出し画分（溶離１）の初回ＭＳ分析により、大きなペプチド種の存在が示されたが、おそらくはジスルフィド結合ペプチドの存在により、予想タンパク質分解ペプチドとマッチしなかった。ジスルフィド結合を還元するために、希釈ＮａＯＨを使用して、１０μｌアリコートを約ｐＨ８にｐＨ調整し、ＭＳによる再分析前に、５ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）中、３７℃で３０分間還元した。幾つかの画分では、還元を達成するのに変性を要したが、この場合、ＤＴＴの追加前に、アリコートを等容量の８Ｍ塩酸グアニジン、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）で希釈した。

【0332】

種々のｈＲＧＭａ構築物にカップリングしたＡＥ１２−１ｍＡｂの酵素消化物の溶離１画分すべてをＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ分析することにより、分子量範囲が８．５から１２ｋＤａである幾つかの大きなペプチド種の存在が示された。大きな種の質量および断片化は、ペプチドを同定するのに十分ではなかった。エピトープペプチドを同定するためには、ジスルフィド結合の還元が必要であった。すべての場合において、ペプチドのＭＳシグナル強度は還元後に有意に減少し、変性剤の存在下で還元しない限り検出不可能な場合もあった。

【0333】

ＤＴＴで溶離１画分を還元した後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによってこの画分を再分析した。エシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）が産生したｈＲＧＭａを使用した切り出し実験では、イオンクロマトグラムで観察されたピークのほとんどが単一荷電種であり、多くは、ポリマーまたは他の添加物関連のものであった。使用したｈＲＧＭａ構築物関連のものとして、２つのペプチドを同定した。図５を参照のこと。第１は、モノアイソトピック分子量が２４２０．２Ｄａのペプチドであった。このペプチドの分子量、およびＭＳ／ＭＳスペクトルで観察されたわずかな断片の質量（示さず）は、配列ＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（ｈＲＧＭａ４７−６９）（配列番号７９）と一致するが、アサインメントは酵素特異性と矛盾していた。モノアイソトピック分子量が２５５１．２Ｄａの第２のエピトープペプチド候補は、配列ＭＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号８０）と一致したわずか２から３つの同定可能なＭＳ／ＭＳ断片を示した。酵素特異性は、一致していなかった；しかしながら、出発抗原の分子量は配列全体の計算質量とマッチしなかったので、抗原はＮ末端の不均一性を有する可能性があり、これが、明らかに矛盾した酵素特異性の原因であろう。

【0334】

第２の抗原構築物を使用したところ、ＤＴＴ還元後のＭＳスペクトルではペプチドを観察することができなかった。変性条件下における還元後のＭＳ分析により、単一荷電バックグラウンドイオンの中のペプチドが明らかになった。変性および還元したＥ１画分において、抗原由来の４つのペプチドを同定した。第１の抗原関連ペプチドは、２７６３．３Ｄａのモノアイソトピック分子量を有しており、ＭＳ／ＭＳ断片化と同様に、配列ＫＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号８１）（４つのさらなるＮ末端残基を有するｈＲＧＭａ４７−６９）と一致した。このペプチドに関連するスペクトルを図６に示す。同じスペクトルにおける非常に低強度のペプチドシグナル（分子量（ＭＷ）２８７８．４Ｄａ；ｍ／ｚ７２０．８４で＋４、図６ではアスタリスクでマークされている。）は、配列ＫＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＰＡＳＤ（配列番号８２）と一致した。図７に示されている分子量（ＭＷ）２６３５．２のペプチドは、配列ＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＰＡＳ（配列番号９０）と一致した。図７ではアスタリスクでマークされているｍ／ｚ６８８．８２（最も多い同位体、＋４荷電状態）のさらなるペプチドは、分子量（ＭＷ）２６３５．２のペプチドと共に共溶出した。この低強度の成分で得られた限定的なＭＳ／ＭＳデータは、配列ＡＧＳＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＰＡＳＤ（配列番号８３）（分子量（ＭＷ）２７５０．３Ｄａ）と一致した。

【0335】

ＡＥ１２−１を用いてエピトープを確認しようとして、第３のｈＲＧＭａ構築物を使用した。ＤＴＴを還元した溶離１画分では、非常にわずかな還元が観察されたが、他の抗原構築物からの結果と一致して、ｈＲＧＭａ抗原関連のものとして１つのペプチドを同定した。このペプチドはｍ／ｚ６９１．６０（＋４荷電状態）で観察され、モノアイソトピック分子量は２７６２．４Ｄａである。このペプチドについて得られた限定的なＭＳ／ＭＳデータ（示さず）は、配列がＴＫＬＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（配列番号８４）であることを示唆している。ＭＳスペクトルで観察された他のペプチドであって、ｈＲＧＭａ（４７−１６８）の領域に関連するものと決定することができたペプチドには、ＤＳＰＥＩＣＨＹＥＫ（配列番号８５）；ＧＤＬＡＹＨＳＡＶＨＧＩＥ（配列番号８６）；ＤＬＡＹＨＳＡＶＨＧＩＥ（配列番号８７）；およびＤＤＴＰＥＦＣＡＡＬＲ（配列番号８８）が含まれていた。

【0336】

ＡＥ１２−１に結合したｈＲＧＭａのエピトープ切り出し実験からの溶離１画分（トリプシン／Ａｓｐ−Ｎ消化）では、３つの抗原構築物から、ペプチドｈＲＧＭａ（４７−６９）を同定した。ＡＥ１２−１を用いてｈＲＧＭａエピトープとして同定したペプチドは、ＰＣＫＩＬＫＣＮＳＥＦＷＳＡＴＳＧＳＨＡＰＡＳ（ｈＲＧＭａ４７−６９）（配列番号７９）である。

【0337】

［実施例８］
毒性研究
肝細胞における鉄蓄積、および脾臓における鉄の減少は、ＲＧＭｃ中和に起因し得るので、本明細書に記載されるＲＧＭａ選択的モノクローナル抗体のトキシコキネティクスおよび忍容性を研究した。研究では、ＲＧＭａ選択的モノクローナル抗体をスプラーグドーリーラットに投与すると、肝細胞における鉄蓄積、および脾臓における鉄の枯渇が起こらないと予想される。

【0338】

［実施例９］
ＲＧＭａ選択的モノクローナル抗体ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１Ｙは、ヒト化モノクローナル抗体５Ｆ９と同様に、視神経損傷ラットモデルにおいて、挫滅損傷した視神経軸索の再生を誘導する
視神経挫滅（「視神経損傷」とも称される。）モデルは、視神経線維の再生を刺激し、網膜神経節細胞の大規模な細胞死を軽減する種々の物質を試験するための動物モデルを提供する。

【0339】

Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｄ）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した成体の雄性ウィスターラットで実験を行った。餌および水を自由に利用することができる１２：１２時間明暗周期の単一ケージで、動物を維持する。視神経挫滅は常に、内容が参照により本明細書に組み込まれるＰ．Ｍｏｎｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３１：１０４９４−１０５０５（２０１１）に記載されている最低限の前方手術によって左眼のみに施し、ヒトの前方視力手術法に従う。手術前および手術中に、セボフルラン（Ａｂｂｏｔｔ ＧｍｂＨ Ｃｏ．＆ＫＧ，Ｄｅｌｋｅｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して吸入麻酔によって実験動物を麻酔し、四肢に締め付け金具および粘着テープを使用することによって手術台上に固定する。動物を加温パッド上に載せることによって、体温の低下を防止する。ラット視神経の前方挫滅手術では、靱帯および結合組織から左眼を慎重に分離する。最初の段階として、眼の外周コーナにおける隣接組織に、顕微手術による切れ込み（２から３ｍｍ）を施す。次の段階として、鉗子１丁を使用して眼筋および涙腺を当該部位に移動させ、これをスペアリングすることによって、視神経を曝露させる。さらなる段階として、マイクロ剪刀を使用することによって髄膜を縦方向に切開して、視神経を曝露させた。この結果、眼がより大きく移動可能になり、眼を外旋させて左視神経に接触することができる。一定の最大圧力を１０から２０秒間提供するために、鉗子セット１丁を使用して、眼の約１から３ｍｍ後ろにおいて、視神経を損傷する。眼への血管供給を損傷しないように特に注意する。

【0340】

低侵襲手術の後、体温を制御するために、動物が動き始めるまで、保温器上に置いたクリーンケージ内のペーパータオル上に動物を置く。細菌感染および強膜の乾燥を防ぐために、抗生物質（Ｇｅｎｔａｍｙｔｒｅｘ，Ｄｒ．Ｍａｎｎ Ｐｈａｒｍａ）を含有する軟膏を眼に塗布する。

【0341】

手術直後の術後疼痛治療のために、カルプロフェン（Ｒｉｍａｄｙｌ、５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内適用し、その後は３日間にわたって１日２回腹腔内適用する。すべての動物が生存し、麻酔および手術から回復したことを確認するために、手術直後の数時間およびその後２から４日間にわたって、動物を観察および調節管理する。

【0342】

上記の修正前方視神経挫滅法は、後眼部からの標準的な視神経挫滅法と比較して大きな利点を有する。具体的には、本明細書に記載される手法では、縫合を必要とする大きな開放創が生じず、非常に小さな創傷の感染リスクが有意に減少する。加えて、挫滅に必要な時間がより少ない結果として（上記前方方法は、当技術分野において公知の後方方法よりも約３倍速い。）、動物の苦痛が軽減され、従ってストレスが軽減される。また、動物が苦しめられる痛みの程度が有意に軽減し、動物はより多い割合ではるかに早く回復する。

【0343】

抗体の全身投与
抗体の全身送達については、ヒト化ＲＧＭａおよびＲＧＭｃ−遮断５Ｆ９抗体（ｈ５Ｆ９）（ｎ＝動物８匹）（ヒト化抗体５Ｆ９は、内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１０／００２８３４０号明細書に記載されている。）、本明細書に記載されるＲＧＭａ選択的ヒト抗体ＡＥ１２−１、および同様に本明細書に記載される近縁のＲＧＭａ ｍＡｂ ＡＥ１２−１Ｙ、およびヒト同位体対照抗体（ｈＩｇＧ）（ｎ＝動物８匹）を用いて、雄性ウィスターラットを全身静脈内（ｉｖ）治療した。１０ｍｇ／ｋｇの投与抗体をラットに週１回静脈内注射し、視神経挫滅直後に注射を開始した。すべてのラットに５回注射し、挫滅損傷の６週間後に動物を安楽死させた。実験は盲検化されており、組織の単離、加工、切片の調製および定量分析は、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれるＰ．Ｍｏｎｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３１：１０４９４−１０５０５（２０１１）およびＫｏｅｂｅｒｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１６９：４９５−５０４（２０１０）に記載されているように行った。ラット視神経の合成画像を作成し、挫滅部位を特定し、５００μｍにわたって挫滅部位を越えて伸長しているＧＡＰ−４３陽性線維を計数した。図１６に示されているように、３つのＲＧＭａ抗体−ｈ５Ｆ９、ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１Ｙはすべて、ｈＩｇＧで治療した対照動物とは対照的に、挫滅部位を越えて有意な再生成長を誘導した。

【0344】

［実施例１０］
ＲＧＭａ選択的モノクローナル抗体ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１Ｙは、ヒト化抗体５Ｆ９と同様に、変性から網膜神経線維束（ＲＮＬＦ）を保護する
ＲＮＬＦ変性の保護を観察するために、新たなラボラトリーアッセイ法を使用した。この方法は、視神経挫滅を有するラットであって、抗体５Ｆ９、ＡＥ１２−１、ＡＥ２−１Ｙおよび対照抗体ヒトＩｇＧで全身治療したラットの眼の成体ラット網膜を移植および分析することに基づいている。この方法は、Ｐ．Ｍｏｎｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３１：１０４９４−１０５０５（２０１１）およびＫｏｅｂｅｒｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１６９：４９５−５０４（２０１０）．Ｐ．Ｍｏｎｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３１：１０４９４−１０５０５（２０１１）およびＫｏｅｂｅｒｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１６９：４９５−５０４（２０１０）によって記載されている方法を改変したものである。１０ｍｇ／ｋｇの投与抗体を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した成体雄性ウィスターラットに週１回静脈内注射し、視神経挫滅直後に注射を開始した。すべてのラットに５回注射し、挫滅損傷の６週間後に動物を安楽死させた。

【0345】

網膜の調製および免疫蛍光染色：
セボフルラン（８％；Ａｂｂｏｔｔ ＧｍｂＨ Ｃｏ．＆ＫＧ，Ｄｅｌｋｅｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で動物を深麻酔し、この直後に胸郭を切開することによって屠殺し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）溶液を左心室に通して灌流した。結合組織を調整して眼を解剖し、網膜の調製を行うまで４％ＰＦＡ中に入れた。

【0346】

ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ、マグネシウムおよびカルシウムフリー；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃１４１７００７０）中で、網膜の調製を実施した。ピンセットによって眼を結合組織に固定し、角膜周辺の強膜に丸い切れ込みを作った。網膜の半球に４地点で切れ込みを入れ、切開し、グレーニトロセルロース膜（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ，＃１３００６−５０−Ｎ）上に広げた。必要な場合は、網膜を載せた膜を５から１０秒間空気乾燥した。その後、免疫蛍光染色を実施するまで、膜上の網膜を＋４℃の１０％中性リン酸緩衝ホルムアルデヒド溶液（ｐＨ７．３；Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃Ｆ／１５２０／２１）に入れた。染色は、下記プロトコールに従って実施する。

【0347】

網膜調製物をＴＢＳで洗浄し、続いて、５％ＢＳＡ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００のＴＢＳ溶液で３０分間にわたってブロッキングおよび透過処理し、次いで、ＴＢＳで再度洗浄した。一次抗体、即ち、モノクローナルＡｂ ＴＵＪ−１（マウス抗βＩＩＩチューブリンＡｂ、ＡｂＣａｍ，＃ａｂｌ４５４５；１：５００希釈、ＴＢＳ中、５％ＢＳＡ）を暗所、室温で１時間追加し、続いてＴＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。次に、二次抗体、即ち、ロバ抗マウスＣｙ３（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｄｉａｎｏｖａ）７１５−１６５−１５１、１：１０００希釈）およびビスベンズイミド（５０μｇ／ｍｌ １：１００希釈、ＴＢＳ中、５％ＢＳＡ）を暗所、室温で１時間追加し、続いてＴＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、続いて脱塩Ｈ_２Ｏで洗浄した。次いで、調製物をＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔＧでマウントし、暗所に＋４℃で保存した。

【0348】

眼の網膜神経線維束（ＲＮＦＬ）に対するＲＧＭａ抗体の保護効果の定量分析
Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して、各網膜の無作為に選択した画像（ｎ＝１２）を選択し、各画像について神経線維数を決定した。これらの実験では、各群：ｈ５Ｆ９ ＭＡｂ群、ｈＩｇＧ対照ＭＡｂ群ならびにＡＥ１２．１およびＡＥ１２−１Ｙ ＭＡｂ群について、視神経を挫滅した５から８つの網膜を使用した。ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍプログラムを使用して、データ分析および統計分析を実施した。

【0349】

結果を図１７に示す。具体的には、本発明のＲＧＭａ抗体で全身治療した動物の網膜では、神経線維束の数が、ｈＩｇＧ対照抗体で治療した動物と比較して有意に多いことが観察される。

【0350】

［実施例１１］
ＲＧＭａ抗体は、限局性脊髄実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルにおいて、機能回復を促進する
Ｋｅｒｓｃｈｅｎｓｔｅｉｎｅｒら（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６４：１４５５−６９，２００４）は、大きな炎症性病変が脊髄、脳および視神経で無作為に広がらないが、脊髄または他の脳領域のいずれかでこれを選択的に誘発することができる限局性局所ＥＡＥモデルを開発した。この限局性または標的化ＥＡＥモデルを使用して、ＭＳ脊髄病変によく似た大きな炎症性病変を脊髄後索で誘発して、皮質脊髄路を侵す。このモデルでは、ミエリンタンパク質ＭＯＧでラットを最初に免疫感作する。免疫感作の２から３週間後、ＭＯＧ抗体の力価を測定し、免疫反応が陽性の動物にサイトカイン混合物（２５０ｎｇのＴＮＦα、１５０ＵのＩＦＮｇ）を胸部レベル８（ｔｈｏｒａｃｉｃａｌ ｌｅｖｅｌ ８）（Ｔ８）に局所注射した。サイトカイン注射後１週間以内に、ラットは後肢の運動障害を発症し、尾の麻痺および歩行障害は、ＥＡＥスコア２．５に達した。サイトカイン注射の４週間後、このスコアは、ＥＡＥスコア１に改善した（Ｋｅｒｓｃｈｅｎｓｔｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６４：１４５５−６９，２００４）。

【0351】

生理食塩水に溶解し、次いで７５μｌの不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ，Ｓｉｇｍａ，＃Ｆ５５０６）で乳化したＭＯＧ（７５μｇ、１−１２５ａａ、ＢｌｕｅＳｋｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ）７５μｌを雌性ルイスラットに皮下注射した。ＭＯＧ抗体の試料を分析するために、注射の直前およびその後７から８日毎に、動物から血液試料を採取した。

【0352】

ＭＯＧ免疫感作の２または３週間後、免疫感作したラットから血液を採取し、ＭＯＧ特異的抗体を検出するために、ＥＬＩＳＡを実施した。免疫感作すると、免疫感作したラットの９０％超において、ＭＯＧ抗体が誘導される。しかしながら、この系統では、ＭＯＧ抗体の誘導は、いかなる疾患症候ももたらさなかった。２つの炎症性サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＦＮｇ）を胸部レベル８（Ｔ８）の胸部脊髄に局所注射した後、ルイスラットは運動障害のみを発症した。

【0353】

サイトカイン注射のために、セボフルラン（８％；Ａｂｂｏｔｔ ＧｍｂＨ Ｃｏ．＆ＫＧ，Ｄｅｌｋｅｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）でラットを吸入麻酔し、標準的な手順によって椎弓切除を実施した。具体的には、ラットの背中の皮膚を剃毛し、７０％エタノールで消毒し、次いで剃毛領域をプロジンで拭き、メスを用いておおよそＴ３−４からＴ１１−１２までに２から３ｃｍの切れ込みを作った。ファイン剪刀を用いて表面脂肪を筋肉から分離し、脊椎に沿って正中線付近で片側から筋肉を切断した。Ｔ８とＴ９との間のギャップを位置決定し、Ｔ８を隣接組織から除いた。マイクロドリルを使用して直径約１から２ｍｍの丸い穴をＴ８に作り、小チップ鉗子（ｓｍａｌｌ ｔｉｐｐｅｄ ｆｏｒｃｅｐｓ）を使用して、骨膜および骨断片を除去した。次に、マイクロ剪刀を用いて硬膜を除去し、ルアーチップ（ＬＴ）付１０μｌハミルトンシリンジに接続した非常に薄いガラスキャピラリーであって、鉱油（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を充填したガラスキャピラリーを用いて、定位注射を行った。

【0354】

自動注射器を使用して、３μｌのサイトカイン混合物を含むＰＢＳまたはＰＢＳのみを微量のエバンスブルーと共にキャピラリーに充填した。Ｋｅｒｓｃｈｅｎｓｔｅｉｎｅｒら（２００４）によって報告されているように、４倍高用量のＴＮＦα（１０００ｎｇ）および同用量のＩＦＮγ（１５０Ｕ）を使用した。ビヒクルまたは対照治療ラットでは、４倍高用量は、回復過程を有意に延長させた。

【0355】

次の段階では、ガラスキャピラリーを深さ０．７ｍｍまで挿入し、自動注射器を使用して５分間にわたって、２μｌのサイトカイン混合物を（Ｔ８）の脊髄中央に注射した。リドカインを適用し、傷口を縫合した後、ラットを鎮痛薬Ｒｉｍａｄｙｌで治療した（手術直後、およびさらに３から４日間にわたって毎日）。次いで、クリーンケージ（ｃｌｅａｎ ｐａｇｅ）内のペーパータオル上にラットを置き、これらが覚醒するまで保温した。

【0356】

ラットは、サイトカイン注射後１週間以内に最初の症候を発症した。サイトカイン適用後７日目または８日目に、抗体治療を開始した。ｈＩｇＧ対照抗体および幾つかの異なるＲＧＭａ抗体（即ち、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１Ｙおよびヒト化５Ｆ９．２３（米国特許出願公開第２０１０／００２８３４０号明細書に記載されているｈ５ｆ９．２３））を使用し、ラットを静脈内経路により週１回治療した。ＥＡＥのスコア化を毎日行って、スコアを記録した。実験を行う者は、異なる治療群について盲検化されていた。サイトカイン投与の２７から２９日後に、動物を屠殺し、脊髄を単離し、以下のタンパク質：ＧＡＰ−４３（再生マーカー）、ＣＤ６８（活性化小膠細胞およびマクロファージの炎症マーカー）およびＭＰＢ（ミエリン塩基性タンパク質、再ミエリン化または保存ミエリン管（ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｍｙｅｌｉｎ ｔｒａｃｔｓ）のマーカー）の発現について分析した。これらのマーカー領域を測定し、分析し、一元配置ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ有意性検定を使用して統計的に評価した。図１８に示されているように、３つのＲＧＭａ抗体はすべて、脊髄ｔＥＡＥモデルにおいて機能回復を促進した。

【0357】

脊髄ｔＥＡＥモデルでは、ＲＧＭａ抗体はすべて、よく似た再生および神経保護刺激活性を示した。ＲＧＭａ選択的抗体ＡＥ１２−１およびＡＥ１２−１Ｙは、ＲＧＭａおよびＲＧＭｃの両方を中和するｈ５Ｆ９．２３と比較して同様の活性を示した。ＲＧＭｃの中和は、有効性に必要であるとは思われない。従って、限局性脊髄ＥＡＥモデルにおける３つのＲＧＭａ ｍＡｂすべての作用機序をより良く理解するために、抗体治療ラットの脊髄の幾つかの連続切片において、幾つかのマーカーを評価したところ、ＡＥ１２−１Ｙ、ＡＥ１２−１およびｈ５Ｆ９．２３は、再生領域（ＧＡＰ−４３）、再ミエリン化領域（ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ））を増加させ、脊髄病変部位周辺の炎症性ＣＤ６８（ＣＤ６８陽性）領域を減少させた（図１９を参照のこと）。

【0358】

この脊髄ｔＥＡＥモデルにおけるこの抗体の活性用量を決定するために、ＲＧＭａ選択的抗体ＡＥ１２−１Ｙ−ＱＬを試験した。具体的には、４つの異なる抗体用量（即ち、０．０１、０．１、１、１０ｍｇ／ｋ）をラットに週１回全身静脈内（ＩＶ）投与した。ＡＥ１２−１Ｙ−ＱＬは、０．１、１および１０ｍｇ／ｋｇで有意な活性を示した（図２０）。しかしながら、０．０１ｍｇ／ｋｇの用量は、有効性を示さなかった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7-1】

【図7-2】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14-1】

【図14-2】

【図14-3】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【配列表】

2015508061000001.app

【国際調査報告】