特表 2016-540787 フェルラ酸エチルエステルおよびアリールアルカノールを含む組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2016-540787(P2016-540787A)

(43)【公表日】2016年12月28日

(54)【発明の名称】フェルラ酸エチルエステルおよびアリールアルカノールを含む組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/37 20060101AFI20161205BHJP

   A61K 8/34 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 8/06 20060101ALI20161205BHJP

   A61Q 90/00 20090101ALI20161205BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 31/216 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 31/045 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 31/047 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 31/11 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 31/08 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 31/192 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 47/08 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20161205BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20161205BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20161205BHJP

【ＦＩ】

   A61K8/37

   A61K8/34

   A61K8/06

   A61Q90/00

   A61P31/04

   A61K31/216

   A61K31/045

   A61K31/047

   A61K31/11

   A61K31/08

   A61K31/192

   A61K47/10

   A61K47/08

   A61K47/12

   A61K9/107

   A61P17/00 101

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】22

(21)【出願番号】特願2016-539091(P2016-539091)

(86)(22)【出願日】2014年7月4日

(85)【翻訳文提出日】2016年6月13日

(86)【国際出願番号】EP2014064364

(87)【国際公開番号】WO2015090634

(87)【国際公開日】20150625

(31)【優先権主張番号】102013226507.7

(32)【優先日】2013年12月18日

(33)【優先権主張国】DE

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US

(71)【出願人】

【識別番号】591036572

【氏名又は名称】レール・リキード−ソシエテ・アノニム・プール・レテュード・エ・レクスプロワタシオン・デ・プロセデ・ジョルジュ・クロード

(74)【代理人】

【識別番号】100090398

【弁理士】

【氏名又は名称】大渕 美千栄

(74)【代理人】

【識別番号】100090387

【弁理士】

【氏名又は名称】布施 行夫

(72)【発明者】

【氏名】ウルフギャング・ベイルフス

(72)【発明者】

【氏名】クラウス・ウェーバー

(72)【発明者】

【氏名】ペーター・オルトマンズ

(72)【発明者】

【氏名】サビネ・ハーウェグ

(72)【発明者】

【氏名】ザーラ・エーリクセン

(72)【発明者】

【氏名】カーステン・ブンゲンストック

(72)【発明者】

【氏名】ソニア・ルスジェ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C083

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076AA17

4C076BB31

4C076CC31

4C076DD37

4C076DD38

4C076DD39

4C076DD40

4C076DD43

4C076FF36

4C083AC071

4C083AC111

4C083AC121

4C083AC151

4C083AC152

4C083AC171

4C083AC211

4C083AC311

4C083AC312

4C083AC341

4C083AC342

4C083BB48

4C083CC02

4C083CC05

4C083DD32

4C083DD33

4C083EE01

4C083EE09

4C206AA01

4C206AA02

4C206CA11

4C206DB21

4C206DB43

4C206MA02

4C206MA03

4C206MA04

4C206MA05

4C206MA42

4C206MA83

4C206NA03

4C206ZB35

(57)【要約】

本発明は、ａ）フェルラ酸エチルエステルと、ｂ）１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールとを含む組成物に関する。成分ａ）およびｂ）の組合せは、化粧品などの製品に抗菌効果を与える。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）フェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールと
を含む組成物。

【請求項2】

成分ａ）が、シス−フェルラ酸エチルエステル、トランス−フェルラ酸エチルエステルおよびそれらの混合物から選択され、ここで、トランス−フェルラ酸エチルエステルが、成分ａ）として特に好ましいことを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記アリールアルカノールが、３−フェニル−１−プロパノール、フェネチルアルコール、ベラトリルアルコール、４−メチル−ベンジルアルコール、ベンジルアルコールおよび２−メチル−１−フェニル−２−プロパノール、好ましくは、３−フェニル−１−プロパノール、フェネチルアルコールおよびベンジルアルコールから選択されることを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

成分ｂ）が、３−フェニル−１−プロパノールまたは３−フェニル−１−プロパノールとベンジルアルコールとの混合物であり、ここで、特に好ましくは、成分ｂ）が、３−フェニル−１−プロパノールであることを特徴とする請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

濃縮物として存在し、
ａ）１〜３０重量％のフェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）７０〜９５重量％の１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールと
を含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

ｃ）１，３−プロパンジオール、バニリルブチルエーテル、１−（２−エチルヘキシル）グリセリンエーテル、１，２−オクタンジオール、１−ウンデカノール、１，２−ペンタンジオール、フェルラ酸またはそれらの混合物も含むことを特徴とする請求項５に記載の濃縮物。

【請求項7】

ａ）１０〜１８重量％のフェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）８２〜９０重量％の３−フェニル−１−プロパノールと
を含むことを特徴とする請求項５または６に記載の濃縮物。

【請求項8】

消費者製品であり、ここで、前記消費者製品が、好ましくは、局所的に適用される消費者製品、特に、局所的に適用される水中油型もしくは油中水型消費者製品などの局所的に適用される塗布消費者製品であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

ａ）０．０１〜１．０重量％のフェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）０．１〜４重量％の１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールと
を含むことを特徴とする請求項８に記載の消費者製品。

【請求項10】

水中油型もしくは油中水型エマルションとして存在することを特徴とする請求項８または９に記載の消費者製品。

【請求項11】

局所的に適用される消費者製品における抗菌効果を与えるための、特に、局所的に適用される塗布消費者製品の抗菌保存のための、例えば、局所的に適用される水中油型もしくは油中水型消費者製品の抗菌保存のための、請求項５〜７のいずれか一項に記載の濃縮物の使用。

【請求項12】

１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールを含む消費者製品の抗菌保存を向上させるためのフェルラ酸エチルエステルの使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ａ）フェルラ酸エチルエステルと、ｂ）１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールとを含む組成物に関する。この組成物は、例えば（抗菌作用のある）濃縮物または（抗菌剤を含有する）消費者製品（例えば化粧品）の形態であり得る。さらに、本発明は、局所的に適用される消費者製品における抗菌効果を与えるための濃縮物の使用に関する。本発明は、１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールを含む消費者製品の抗菌効果を向上させるためのフェルラ酸エチルエステルの使用にも関する。

【背景技術】

【0002】

化粧品の保存のために、通常、ホルムアルデヒド分離剤、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル（パラベン）、有機酸、イソチアゾリン−３−オン、フェノキシエタノールまたはベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、フェネチルアルコールとの組合せおよびフェニルプロパノールとの組合せなどの活性成分が使用される。これらの活性成分のうちのいくつかの欠点は、低い安定性および著しい臭いである。さらに、使用可能な活性成分の数は、毒性学的要件および規制上の要件によって次第に厳しく制限されるようになっている。化粧品市場において、できるだけ皮膚に優しく、天然由来の活性成分が、保存のためにますます必要とされている。

【0003】

カナダ国特許出願公開第２，０１２，２８８Ａ号明細書は、ａ）フェノール化合物、ｂ）芳香族アルコールおよびｃ）湿潤剤、界面活性剤およびプラントの衛生用の消毒剤としての通常の添加剤の組合せの使用に関する。フェルラ酸が、フェノール化合物（すなわち、４−ヒドロキシ−３−メトキシケイ皮酸）として記載されている。

【0004】

特に好ましい芳香族アルコールは、フェノキシエタノールである。

【0005】

Ｈ．Ｅｇｇｅｎｓｐｅｒｇｅｒ（Ｍｕｌｔｉａｋｔｉｖｅ Ｗｉｒｋｓｔｏｆｆｅ ｉｎ Ｋｏｓｍｅｔｉｋａ，Ｖｅｒｌａｇ ｆｕｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ ２０００，ｖｏｌｕｍｅ ２，ｐ．１９−６５）は、フェルラ酸についての酸化防止剤効果、光防護効果、消臭効果、抗炎症効果および抗菌効果を記載している。フェルラ酸エチルエステルについては、化粧品効果が記載されている（Ｈ．Ｅｇｇｅｎｓｐｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｗｉｌｋｅｒ，ＳＯＥＦＷ−Ｊｏｕｒｎａｌ，１２２．Ｊｇ．，３／９６，ｐ．１４６−１５６；４／９６，ｐ．２１０−２１５および８／９６，ｐ．５５４−５５６も参照）。

【0006】

フェルラ酸エチルエステルの含量を有するＲａｈｎ ＡＧ社（Ｚｕｅｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）の製品ＣＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）については、前記エステルは、紫外線吸収特性を有する天然の酸化防止剤である。仏国特許出願公開第２９２１５６０Ａ１号明細書には、保存料組成物の一部としてフェルラ酸が記載されている。フェルラ酸エチルエステルは、高価な活性成分であるほか、水溶性も低いため、特に、化粧品または医薬品用エマルションの水相のための、抗菌機能のために使用される唯一の固形物として適さないであろう。本発明に関する予備的な研究の際、フェルラ酸エチルエステルが、フェルラ酸自体よりはるかに弱い抗菌効果を有することも発見された。カルボン酸エステルが、典型的に、基礎となるカルボン酸より抗菌効果がはるかに弱いことが当業者に公知である。しかしながら、抗菌剤としてのカルボン酸の欠点は、それらが、通常、酸性のｐＨ範囲内でのみ有効であるため、化粧品におけるそれらの適用性が限られることである。

【0007】

国際公開第２０１３／０８０１４０Ａ２号パンフレットには、紫外線フィルタ、芳香族カルボン酸またはその塩、芳香族アルコールおよび外見上許容できる水性担体の組合せを含む日焼け止め剤用の保存料系が記載されている。芳香族カルボン酸の一例は、フェルラ酸である。あるいは、アニス酸のエステルが、芳香族カルボン酸の誘導体として記載されている。好ましい芳香族アルコールは、フェノキシエタノールである。

【0008】

国際公開第２０１３／０９１７７５Ａ２号パンフレットには、化粧品用の抗菌性活性成分としての選択されたシクロヘキサノール誘導体の使用が開示されている。この化粧品は、色素沈着を抑制するために、例えばフェルラ酸と組み合わせることができ、またはフェルラ酸によって抗菌性にされ得る。

【0009】

さらに、フェノキシエタノール（アリールオキシアルカノール）などの芳香族アルコールが、化粧品において抗菌活性のために使用される（独国特許発明第１０２０１２２１２２８１Ｂ３号明細書も参照）。しかしながら、フェノキシエタノールは、現在議論されており、例えばベビー用品用などのある用途では減少されるかまたは禁止されることがある。一般に、アリールオキシアルカノールは、世界中で、消費者にますます受け入れられなくなっている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

したがって、本発明の根本的な目的は、化粧品の抗菌目的（すなわち、保存）のための活性成分の組合せを提供することである。活性成分のこの組合せは、使用の際に、公知の活性成分および活性成分の組合せの上述された欠点を示さない活性成分に基づくべきである。活性成分の組合せは、天然または天然と同等の成分に基づくべきであり、できるだけ低い濃度で有効であるべきである。さらに、それらはまた、多用途であるべきであり、すなわち、それらの使用は、保存される製品の特定のｐＨ値に制限されるべきではない。

【課題を解決するための手段】

【0011】

この目的が、
ａ）フェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールと
を含む組成物によって達成されることが意外にも分かった。

【0012】

本発明はまた、ａ）フェルラ酸エチルエステルと、ｂ）１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールとの組合せが、相乗的に作用し、ここで、比較的高い濃度でのみ抗菌効果を有するフェルラ酸エチルエステルが、極めて低い濃度でもアリールアルカノールの効果を高める（すなわち、促進剤として働く）ことが分かったことに基づいている。

【0013】

３−フェニル−１−プロパノール（アリールアルカノール）は、保存料として前に列挙されていないが、良好な抗菌効果を有し、天然同等であることも示されている。しかしながら、全てのアリールアルカノールは、明らかな特異臭を有し、これは、アリールオキシアルカノールの特異臭よりある程度強い。ａ）フェルラ酸エチルエステルの使用によるアリールアルカノールの向上した抗菌効果（この効果は、アリールオキシアルカノールを用いた場合よりはるかに顕著である）にもかかわらず、保存に必要とされるアリールアルカノールの必要量を減少させることができる。

【0014】

したがって、本発明の教示は、化粧品用の塗布製剤の天然または天然同等の保存または抗菌性の安定化、すなわち、保存料を含まない化粧品としての抗菌製品の提供を可能にする。

【発明を実施するための形態】

【0015】

ａ）フェルラ酸エチルエステル
フェルラ酸エチルエステルとして、天然および合成由来のシス−フェルラ酸エチルエステル、トランス−フェルラ酸エチルエステルおよびシス／トランス−混合物が好適である。好ましくは、成分ａ）は、フェルラ酸エチルエステルのトランス体である。

【0016】

ｂ）アリールアルカノール
好ましい実施形態において、アリールアルカノールは、３−フェニル−１−プロパノール、フェネチルアルコール、ベラトリルアルコール、ベンジルアルコール、４−メチル−ベンジルアルコールおよび２−メチル−１−フェニル−２−プロパノール、好ましくは、３−フェニル−１−プロパノール、フェネチルアルコールおよびベンジルアルコールから選択される。特に、成分ｂ）は、３−フェニル−１−プロパノールまたは３−フェニル−１−プロパノールとベンジルアルコールとの混合物である。特に、成分ｂ）が３−フェニル−１−プロパノール（アリールアルカノールとしてのみ）であることが好ましい。

【0017】

濃縮物
第１の代替例によれば、組成物は、濃縮物の形態であり、
ａ）１〜３０重量％、好ましくは、８〜２０重量％、特に、１０〜１８重量％（１２〜１６重量％、例えば約１４重量％など）のフェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）７０〜９５重量％、好ましくは、８０〜９２重量％、特に、８２〜９０重量％（８４〜８８重量％、例えば約８６重量％など）の１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールと
を含む。

【0018】

特定の実施形態によれば、上記で定義される組成物は、
ａ）８〜２０重量％のフェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）８０〜９２重量％、特に、８２〜９０重量％（８４〜８８重量％、例えば約８６重量％など）の１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールと
を含む。

【0019】

特に好ましい濃縮物は、
ａ）１０〜１８重量％（１２〜１６重量％、例えば約１４重量％など）のフェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）８２〜９０重量％（８４〜８８重量％、例えば約８６重量％など）の３−フェニル−１−プロパノールと
を含む。

【0020】

組成物が、（典型的に液体）濃縮物の形態である場合、組成物は、ｃ）１，３−プロパンジオール、バニリルブチルエーテル、１−（２−エチルヘキシル）グリセリンエーテル（ビタミンＥで安定化される、Ｓｃｈｕｅｌｋｅ ＆ Ｍａｙｒ ＧｍｂＨ社（Ｎｏｒｄｅｒｓｔｅｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の商品Ｓｅｎｓｉｖａ（登録商標）ＳＣ ５０）、１，２−オクタンジオール、１−ウンデカノール、１，２−ペンタンジオールまたはフェルラ酸、またはそれらの混合物などのさらなる活性成分または添加剤を含み得る。

【0021】

特に好ましくは、本発明に係る濃縮物は、ａ）フェルラ酸エチルエステルおよびｂ）１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノール（好ましくは、３−フェニル−１−プロパノール単独）以外の他の成分を含有せず、すなわち、濃縮物は、好ましくは、成分ａ）フェルラ酸エチルエステルおよびｂ）１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールからなる。特に、ａ）フェルラ酸エチルエステルおよびｂ）３−フェニル−１−プロパノールからなる、すなわち、これらの２つの成分以外の他の成分を含有しない濃縮物が好ましい。

【0022】

消費者製品
第２の代替例によれば、組成物は、消費者製品として提供され、ここで、この消費者製品は、好ましくは、局所的に適用される消費者製品（すなわち、外部から、局部的に）、特に、例えば、局所的に適用される水中油型もしくは油中水型消費者製品、例えば、水中油型もしくは油中水型ローションまたは水中油型もしくは油中水型エマルションなどの局所的に適用される塗布消費者製品である。

【0023】

消費者製品は、好ましくは、化粧品、皮膚用剤混合物、医薬品混合物または原体、好ましくは、化粧品である。

【0024】

典型的に、本発明に係る抗菌効果がある消費者製品は、
ａ）０．０１〜１．０重量％、好ましくは、０．０２〜０．５重量％、特に、０．０４〜０．２５重量％（０．０６〜０．１５重量％、例えば約０．１重量％など）のフェルラ酸エチルエステルと、
ｂ）０．１〜４重量％、好ましくは、０．２〜２重量％、特に、０．３〜１．０重量％（０．４〜０．８重量％、例えば約０．６重量％など）の１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールと
を含み、ここで、成分ｂ）は、特に好ましくは、具体的に３−フェニル−１−プロパノールである。

【0025】

特定の実施形態によれば、上記で定義される消費者製品は、１００重量％になるまでの、１種またはそれ以上の局所的に許容できる成分、０．０２〜０．５重量％のフェルラ酸エチルエステルおよび０．２〜２重量％の１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールを含む化粧品である。

【0026】

本発明は、特に、局所的に適用される塗布消費者製品の抗菌保存のための、例えば、化粧用クリームまたはエマルションなどの局所的に適用される水中油型消費者製品の抗菌保存のための、局所的に適用される消費者製品における抗菌効果を与えるための濃縮物の使用にも関する。

【0027】

さらに、本発明は、１種、２種またはそれ以上のアリールアルカノールを含む消費者製品の抗菌保存を向上させるためのフェルラ酸エチルエステルの使用に関する。言い換えると、ａ）フェルラ酸エチルエステルおよびｂ）アリールアルカノールは、化粧品の抗菌効果について相乗的に作用し、すなわち、効果が、個々の成分の効果から予測され得る効果を明らかに超えている。

【0028】

したがって、本発明は、以下の利点を提供する：
−アリールアルカノールの濃度の低減、
−従来の「天然の保存料」と比較して低い濃度、
−向上した市場受け入れ性、
−フリーラジカルからの皮膚の向上した保護、
−向上したアンチエイジング特性、
−比較的低い濃度での良好な殺真菌効果、
−抗菌性の安定化のための、天然同等の、保存料を含まない活性成分系の使用、
−抗炎症効果および
−ｐＨに依存しない活性。

【0029】

３−フェニル−１−プロパノールの利点：
−ｐＨ−中性、
−ｐＨに依存しない効果、すなわち、（弱）アルカリ性化粧品においても有効である。

【0030】

フェルラ酸エチルエステルの利点：
−フリーラジカルから皮膚を保護する、
−皮膚への鎮静効果、抗炎症性、アンチエイジング特性。

【0031】

本発明の利点は、特に、以下の実施例に記載される。特に示されない限り、パーセンテージは重量基準である。

【実施例】

【0032】

方法１：細菌数低減試験
この細菌数低減試験の目的は、実験室において注入される試料のための好適な保存料および反応時間を決定することである。

【0033】

使用される溶液および培地：
ＣＳＡ カゼインペプトン−大豆粉ペプトン−寒天
ＳＡ サブロー寒天
ＣＳＬ カゼインペプトン−大豆粉ペプトン−ブイヨン
ＮａＣｌ 生理食塩水、０．８５％

【0034】

使用される試験生物
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）または緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ブラジリエンシス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）。

【0035】

注入溶液の調製
細菌：
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）／大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の２４時間ＣＳ−傾斜寒天培地（継代１代）から、２４時間ＣＳＬ−培地（継代２代）を生成する。培養を３７℃で行う。細菌懸濁液の力価は、約１０^９ＣＦＵ／ｍｌである。

【0036】

酵母：
ＳＡ−寒天（継代２代）上の４日齢のカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）培地を、５ｍｌの生理食塩水で洗浄し、硫酸バリウム標準（ＤＶＧ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓを参照）にしたがって調整する。カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）懸濁液の力価は、１０^８ＣＦＵ／ｍｌである。

【0037】

カビ：
ＳＡ寒天（２５℃±１℃）上の７〜１４日齢のアスペルギルス・ブラジリエンシス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）培地を、５ｍｌの生理食塩水で洗浄し、グラスウールを含むガラス漏斗によってろ過し、１００ｍｌになるまで生理食塩水を充填する。アスペルギルス・ブラジリエンシス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）懸濁液の力価は、約１０^７ＣＦＵ／ｍｌである。

【0038】

それぞれ生成された試験生物懸濁液の力価を、生理食塩水中の希釈系列によって決定し、記録する。

【0039】

実施：
試料を、様々な濃度の好適な保存料と取り替える。試験細菌ごとに、希釈系列が必要とされる。試料に、それぞれの試験生物懸濁液を個々に注入し、十分に撹拌する：
２５ｇの試料＝０．１ｍｌの細菌懸濁液
５０ｇの試料＝０．２ｍｌの細菌懸濁液。

【0040】

指示された反応時間の後、試料を、まず、滅菌したガラス棒を用いて均一に撹拌し、次に、ＣＳＡまたはＳＡ寒天上に広げる。細菌試料をＣＳＡ上に広げ、４８時間にわたって３７℃で培養する。カビおよび酵母試料をＳＡ寒天上に広げ、４８時間にわたって３７℃（カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ））および２５℃（アスペルギルス・ブラジリエンシス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ））で培養する。

【0041】

方法２：ＫｏＫｏ試験
以下に記載される試験を行って、化粧品における保存効果を決定する。

【0042】

原理
記載される方法によって、化学保存料の有効性は、化粧品の缶内保存について試験される。このために、様々な異なる試験において、試験される保存料を、保存処理されていない試料に様々な濃度で加える。連続細菌負荷を、試験培地に定期的に注入することによって行う。注入と並行して、塗抹標本を、この直前に個々の培地から採取する。塗抹標本の細菌増殖について評価を行う。細菌増殖が最初に出現するまでの期間が長いほど、保存料の有効性が高い。

【0043】

実施
試験される２５ｇの化粧品を、ねじ込みキャップを備えた広口瓶（ＬＤＰＥ）中に量り分ける。試験される保存料を、それらの適用濃度で分離した堆積物に加える。保存処理されていない試料を、増殖対照として使用する。保存料の添加の２日後、試料を、以下の試験生物からなる０．１ｍｌの注入溶液に感染させる。注入溶液は、約１０^７〜１０^８個の細菌／ｍｌの力価を有する（表１）。

【0044】

【表1】

【0045】

次に、試験堆積物を、週に１回、寒天プレート（細菌についてはカゼインペプトン−大豆粉ペプトン−寒天（ＣＳＡ）ならびに酵母およびカビについてはサブローデキストロース寒天（ＳＡ））上に広げ、次に、注入した。最初の汚染の全てをできるだけ明らかにするために、非阻害培地（ＴＬＳＨ）および非阻害でない培地の両方で第１のスメア（無菌試験）を行う。塗抹標本の細菌増殖の評価を、２５℃での３日間の培養後に行う。陰性塗抹標本を、念のためさらに２日間にわたって観察し、次に、再度評価する。個々の製品濃度の保存効果の評価を、個々の塗抹標本の増殖に対して半定量的方法で行う。

【0046】

［表］

【0047】

結果の評価
上記の実験室条件下で、試料に影響を与える細菌を含まずに６週間の期間にわたって試料が保たれる場合、すなわち、６回目の注入の後でも細菌増殖の兆候がない場合、試料は、基準Ａにしたがって十分に保存されている。この試験方法の長年の経験から、化粧品のために推奨される３０ヶ月を超える微生物的安定性を定義することができる。

【0048】

試料が、６回の注入サイクル中に低い細菌増殖（＋）を示す場合、試料は基準Ｂを満たす。微生物学的リスク分析が、製剤と無関係の制御因子を含む場合、基準Ｂが、十分な保存を表し得る。これには、例えば、缶の代わりにポンプを含む包装の使用および／または医薬品適正製造基準（ｇｏｏｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｒａｃｔｉｃｅ）（ＧＭＰ）の高い要求が含まれ得る。

【0049】

実施例１
方法１にしたがって行われる試験の結果が、表２に示され、０．７５％の３−フェニル−１−プロパノール単独と比較して、０．７％の（フェルラ酸＋３−フェニル−１−プロパノール）および特に、０．７％の（フェルラ酸エチルエステル＋３−フェニル−１−プロパノール）の組合せの向上した有効性を示す。それらの結果は、フェルラ酸（２−エチルヘキシル）エステル＋３−フェニル−１−プロパノールの組合せのごく中程度の有効性および特にフェルラ酸のエチルエステルとの本発明に係る組合せが有利であることも示す。

【0050】

しかしながら、フェルラ酸エステルとアリールオキシアルカノールフェノキシエタノールとの９：１混合物は、フェノキシエタノール単独を上回る利点をほとんど示さず、これは、アリールアルカノール３−フェニル−１−プロパノールとの本発明に係る組合せの有効性が意外であったことを示す。さらに、比較的低い濃度の活性成分によるカビに対する有効性は明白である。

【0051】

実施例２
方法２にしたがって行われる試験の結果が、表３に示され、３−フェニル−１−プロパノール＋フェルラ酸エチルエステル（少なくとも基準Ｂ）の６：１の組合せの有効性を証明し、フェノキシエタノール＋フェルラ酸エチルエステルの６：１混合物より高い有効性を示す。

【0052】

実施例３
方法１にしたがって行われる試験の結果が、表４にも示され、細菌に対するフェルラ酸の固有の有効性を証明する一方、フェルラ酸エステル自体は、比較的高い濃度の２％で有効でない。結果として、フェルラ酸エステルを含有する組合せがより有効であることは意外であった。

【0053】

【表2】

【0054】

［表］

【0055】

【表2】

【0056】

［表］

【0057】

【表3】

【0058】

【表4】

【0059】

【表4】

【0060】

実施例４
方法２にしたがって行われる試験の結果が、以下の表５に表され、１：６の重量比のａ）フェルラ酸エチルエステルおよびｂ）３−フェニル−１−プロパノールの特に好ましい濃縮物の有効性を示す（ＫｏＫｏ試験では基準Ａで合格した）。

【0061】

【表5】

【国際調査報告】