特表 2017-514843 眼疾患の治療のための膜付着性の自己組織化システム

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2017-514843(P2017-514843A)

(43)【公表日】2017年6月8日

(54)【発明の名称】眼疾患の治療のための膜付着性の自己組織化システム

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/24 20060101AFI20170512BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 47/38 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20170512BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 47/28 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 47/14 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 31/573 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 31/56 20060101ALI20170512BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20170512BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20170512BHJP

   A61P 27/04 20060101ALI20170512BHJP

   A61P 27/14 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20170512BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20170512BHJP

【ＦＩ】

   A61K47/24

   A61K9/08

   A61K47/10

   A61K47/36

   A61K47/38

   A61K47/34

   A61K47/32

   A61K47/28

   A61K47/14

   A61K31/573

   A61K31/56

   A61P27/02

   A61P27/06

   A61P27/04

   A61P27/14

   A61K9/10

   A61K9/51

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】28

(21)【出願番号】特願2016-565482(P2016-565482)

(86)(22)【出願日】2015年5月1日

(85)【翻訳文提出日】2016年10月27日

(86)【国際出願番号】US2015028748

(87)【国際公開番号】WO2015168523

(87)【国際公開日】20151105

(31)【優先権主張番号】61/987,012

(32)【優先日】2014年5月1日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US

(71)【出願人】

【識別番号】516323253

【氏名又は名称】インテグラル バイオシステムズ エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】特許業務法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】バルマン シーカ ピー．

(72)【発明者】

【氏名】テケダス リテッシュ ヴイ．

(72)【発明者】

【氏名】ワード ケビン エル．

(72)【発明者】

【氏名】クロムウィック アン−マリー

(72)【発明者】

【氏名】バルマン コーシック

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076AA22

4C076AA65

4C076CC04

4C076CC30

4C076DD26

4C076DD37

4C076DD41

4C076DD46

4C076DD63

4C076DD70

4C076EE09

4C076EE23

4C076EE30

4C076EE32

4C076EE36

4C076EE37

4C076EE47

4C076EE48

4C076GG41

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA08

4C086DA10

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA21

4C086NA13

4C086ZA33

4C086ZB11

(57)【要約】

眼投与のための液晶性ドラッグデリバリーシステム。粘膜付着性であり、生体適合性であり、非刺激性であり、かつ組織透過性のドラッグデリバリーシステムは、水溶液中に安定的に分散されたナノ粒子を含有するとともに、持続放出用に製剤化することができる。また、該ドラッグデリバリーシステムの製造方法及び該ドラッグデリバリーシステムを被験者に投与することによって眼疾患を治療する方法も提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

液晶性ドラッグデリバリーシステムを製造する方法であって、該方法は、
脂質成分及びアルコールを含有する第１の溶液を形成し、該第１の溶液を第１の温度に維持することと、
粘膜付着性の親水性ポリマー及びバッファーを含む水溶液である第２の溶液を得て、該第２の溶液を第２の温度に維持することと、
前記第１の溶液と前記第２の溶液とを混合することで、ナノ分散液とマイクロ分散液とが組み合わされた分散液を形成するが、該混合は高エネルギー混合プロセスによって達成されることと、
前記ナノ分散液とマイクロ分散液とが組み合わされた分散液を第三の温度でマイクロ流動化にかけることで、ナノ分散液を形成することと、
該ナノ分散液を２℃〜５℃でインキュベートすることで、液晶性ドラッグデリバリーシステムを形成することと、
を含み、ここで前記第１の溶液と前記第２の溶液との間の重量比は、１：１〜１：１５である、方法。

【請求項2】

前記脂質成分は、ホスファチジルコリン及び中鎖脂肪を含み、前記アルコールは、セチルアルコールであり、かつ前記粘膜付着性の親水性ポリマーは、ヒアルロン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、１−４β−グルカン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）−ポリ（エチレンオキシド）、タマリンド種子多糖類、アルギン酸ナトリウム、ポリカーボポール及びポリカルボフィル又はそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記第１の溶液は、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ステアリン酸ＰＥＧ、ポロキサマー４０７、チロキサポール、ポリソルベート８０又はヒマシ油を更に含有する、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ナノ分散液を、インキュベートする工程の前に、−１０℃〜１５℃で１６時間〜２４時間にわたり混合する工程を更に含む、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記高エネルギー混合プロセスは、超音波処理又は高剪断混合である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記第１の温度は、４０℃〜５５℃であり、前記第２の温度は、５℃〜５５℃であり、かつ前記第三の温度は、４０℃〜５５℃である、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記第１の温度、前記第２の温度、及び前記第三の温度は、全て４０℃〜５５℃である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記第１の溶液中に医薬品有効成分（ＡＰＩ）を溶解させることを更に含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ＡＰＩは、プロピオン酸フルチカゾン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、トリアムシノロンアセトニド、メチルプレドニゾロン、コルチゾン、ベクロメタゾン、フロ酸フルチカゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、エタボン酸ロテプレドノール、ジフルプレドナート、フルオロメトロン、リメキソロン、トラボプロスト、モキシフロキサシン及び酢酸プレドニゾロンからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記ＡＰＩは、プロピオン酸フルチカゾンであり、前記第１の溶液は、１０重量％のホスファチジルコリン及び中鎖脂肪、１０重量％のセチルアルコール、２０重量％のＰＥＧ−４００、１０重量％のＰＰＧ、７重量％のステアリン酸ＰＥＧ、２．２重量％のポロキサマー４０７、１重量％のチロキサポール、１重量％のポリソルベート８０並びに３８重量％のヒマシ油を含有し、前記水溶液は、０．２重量％の一塩基性リン酸ナトリウム、０．５重量％の二塩基性リン酸ナトリウム及び１．５重量％のヒアルロン酸を含有し、かつ前記第１の溶液と前記第２の溶液との間の重量比は、１：９である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記第１の溶液は、０．２重量％〜２重量％のコレステロールを更に含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

水溶液中に分散されたナノ粒子を含む液晶性ドラッグデリバリーシステムであって、ここで該ナノ粒子は、脂質成分及びアルコールを含み、前記水溶液は、粘膜付着性の親水性ポリマー及びバッファーを含有し、該脂質成分は、該システムの０．１重量％〜１重量％で存在し、該アルコールは、該システムの０．１重量％〜５重量％で存在し、前記粘膜付着性の親水性ポリマーは、該システムの１重量％〜５重量％で存在し、かつ前記ナノ粒子は、４０ｎｍ〜９００ｎｍのサイズを有する、液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項13】

前記脂質成分は、ホスファチジルコリン及び中鎖脂肪を含み、前記アルコールは、セチルアルコールであり、かつ前記粘膜付着性の親水性ポリマーは、ヒアルロン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、１−４β−グルカン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）−ポリ（エチレンオキシド）、タマリンド種子多糖類、アルギン酸ナトリウム、ポリカーボポール及びポリカルボフィル又はそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１２に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項14】

前記ナノ粒子は、コレステロール、グリセロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ステアリン酸ＰＥＧ、ポロキサマー４０７、チロキサポール、ポリソルベート８０、ヒマシ油、ＰＥＧ化ヒマシ油又はそれらの混合物を更に含む、請求項１３に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項15】

前記ナノ粒子は、コレステロールを含み、かつ前記粘膜付着性の親水性ポリマーは、ヒアルロン酸ナトリウムである、請求項１４に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項16】

医薬品有効成分（ＡＰＩ）を前記システムの０．０１重量％〜０．５重量％で更に含み、ここで該ＡＰＩは、前記ナノ粒子中に入れられている、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項17】

前記ＡＰＩは、プロピオン酸フルチカゾン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、トリアムシノロンアセトニド、メチルプレドニゾロン、コルチゾン、ベクロメタゾン、フロ酸フルチカゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、エタボン酸ロテプレドノール、ジフルプレドナート、フルオロメトロン、リメキソロン、トラボプロスト、モキシフロキサシン及び酢酸プレドニゾロンからなる群から選択される、請求項１６に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項18】

６〜７．５のｐＨ、２５０ｍＯｓｍ／Ｌ〜３４０ｍＯｓｍ／Ｌのモル浸透圧濃度、及び２００ｃＰ〜１０００ｃＰの粘度を有する、請求項１７に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項19】

前記ＡＰＩは、プロピオン酸フルチカゾンであり、前記システムの０．１重量％で存在する、請求項１８に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項20】

前記ナノ粒子は、前記システムの１重量％のホスファチジルコリン及び中鎖脂肪、１重量％のセチルアルコール、２重量％のＰＥＧ−４００、１重量％のＰＰＧ、０．７重量％のステアリン酸ＰＥＧ、０．２２重量％のポロキサマー４０７、０．１０重量％のチロキサポール、０．１０重量％のポリソルベート８０並びに３．８重量％のヒマシ油を含み、かつ前記水溶液は、前記システムの０．０２重量％の一塩基性リン酸ナトリウム、０．０５重量％の二塩基性リン酸ナトリウム及び０．１５重量％のヒアルロン酸を含有する、請求項１９に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項21】

前記ナノ粒子は、コレステロールを前記システムの０．２重量％で更に含む、請求項２０に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項22】

被験者における眼疾患を治療する方法であって、眼疾患を有する被験者を特定することと、該被験者の眼に請求項１２に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与することとを含む、方法。

【請求項23】

前記眼疾患は、術後炎症、炎症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、マイボーム腺機能不全、感染症、結膜炎、角膜炎、潰瘍、眼瞼炎、緑内障、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、眼内炎、脈路膜血管新生、涙管機能不全、角膜水疱又はドライアイ病である、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

被験者における眼疾患を治療する方法であって、眼疾患を有する被験者を特定することと、該被験者の眼に請求項２０に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与することとを含む、方法。

【請求項25】

前記眼疾患は、術後炎症、炎症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、マイボーム腺機能不全、感染症、結膜炎、角膜炎、潰瘍、眼瞼炎、緑内障、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、眼内炎、脈路膜血管新生、涙管機能不全、角膜水疱又はドライアイ病である、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

被験者における眼疾患を治療する方法であって、眼疾患を有する被験者を特定することと、該被験者の眼に請求項２１に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与することとを含む、方法。

【請求項27】

前記眼疾患は、術後炎症、炎症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、マイボーム腺機能不全、感染症、結膜炎、角膜炎、潰瘍、眼瞼炎、緑内障、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、眼内炎、脈路膜血管新生、涙管機能不全、角膜水疱又はドライアイ病である、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

請求項１に記載の方法によって製造される、液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項29】

請求項１０に記載の方法によって製造される、液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項30】

請求項１１に記載の方法によって製造される、液晶性ドラッグデリバリーシステム。

【請求項31】

被験者における眼疾患を治療する方法であって、眼疾患を有する被験者を特定することと、該被験者の眼に請求項２８に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与することとを含む、方法。

【請求項32】

被験者における眼疾患を治療する方法であって、眼疾患を有する被験者を特定することと、該被験者の眼に請求項２９に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与することとを含む、方法。

【請求項33】

被験者における眼疾患を治療する方法であって、眼疾患を有する被験者を特定することと、該被験者の眼に請求項３０に記載の液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与することとを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、ナノ構造化された分散液を眼表面に、前眼房中に、そして後眼房中に投与することによって眼の疾患及び疾病を効果的に治療するために使用することができるナノ構造化された分散液に関する。

【背景技術】

【0002】

多くの眼科用製剤は、鉱油とワセリンとから構成される軟膏中に懸濁された薬剤結晶を含む。そのような製剤は、しばしば眼に刺激を引き起こし、視界のぼやけ及び不便さのため患者のノンコンプライアンス（non-compliance）をもたらす。他の眼科用製剤は、水溶液中の薬剤懸濁液を含有する点眼液であり、それらの幾つかは眼表面に留まる時間を延ばすために粘性である。

【0003】

点眼液の効果的な使用は、多くの治療的に有効な作用剤が、眼に局所投薬した場合に局所的な刺激を引き起こすという事実により限定される。角膜は、化学剤の適用に対して非常に感受性が高い。したがって、この感受性は、他の点では有用であるのに多くの治療剤の使用を限定する。

【0004】

現存の眼用医薬製剤でのもう一つの問題は、薬剤の不十分なバイオアベイラビリティである。例えば、眼の正面に対して懸濁液、例えば点眼液として送達される難溶性の薬剤は、拡散によって眼内に吸収される前に溶けねばならない。問題となるのは、薬剤の溶解速度は、一般的に、眼表面からの涙液クリアランス（fluid clearance）の速度よりもかなり遅いことである。このように、非効率的な薬剤吸収、すなわち不十分なバイオアベイラビリティは、眼の正面の（front-of-the-eye）ドラッグデリバリーを失敗に導く問題の一つである。

【0005】

この問題に対処するために、不溶性又は難溶性の薬剤、例えばプロスタグランジン類及びジフルプレドナートは、一般的に有機賦形剤中に溶解され、引き続き水性ビヒクル中に乳化される。エマルジョンの使用は、しばしば眼表面に刺激を引き起こすが、これは、眼表面の炎症を引き起こす賦形剤の使用により生ずるものである。このことは、その投薬が、慢性的な眼表面疾病の療法、例えば緑内障、ドライアイ及びアレルギー用の療法のために利用される場合に特に当てはまる。

【0006】

さらに、エマルジョンは、本来不安定であるため、合一（coalescence：コアレッセンス）に引き続き相分離を引き起こす。

【0007】

それらの問題は、眼底の疾病の場合には異なっている。例えば、トリアムシノロンアセトニドの薬剤懸濁液は、糖尿病性黄斑浮腫より生ずる炎症を軽減するために硝子体内に注射されている。後眼部内への頻回注射は、眼内炎及び段階的な網膜剥離を引き起こすことがある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

非刺激性で、安定で、かつ延長された期間にわたり薬剤を治療濃度で送達することができる眼投与用の製剤が必要とされている。さらに、無毒性でかつ膜模倣的な持続放出型のデリバリーシステムが、眼底の（back-of-the-eye）疾病の治療のために必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0009】

先に論じられた要求を満たすために、液晶性ドラッグデリバリーシステムが提供される。該システムは、水溶液中に分散された４０ｎｍ〜９００ｎｍのサイズを有するナノ粒子を含有する。該ナノ粒子は、脂質成分及びアルコールを含む。該水溶液は、粘膜付着性の親水性ポリマー及びバッファーを含有する。

【0010】

上記脂質成分は、上記システムの０．１重量％〜１重量％で存在し、上記アルコールは、上記システムの０．１重量％〜５重量％で存在する。上記粘膜付着性の親水性ポリマーは、上記システムの１重量％〜５重量％で存在する。

【0011】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムを製造する方法も開示されている。該方法は、（ｉ）脂質成分及びアルコールを含有する第１の溶液を形成し、その第１の溶液を第１の温度に維持する工程と、（ｉｉ）粘膜付着性の親水性ポリマー及びバッファーを含む水溶液である第２の溶液を得て、その第２の溶液を第２の温度に維持する工程と、（ｉｉｉ）上記第１の溶液と上記第２の溶液とを混合することで、ナノ分散液とマイクロ分散液とが組み合わされた分散液を形成するが、該混合は高エネルギー混合プロセスによって達成される工程と、（ｉｖ）上記ナノ分散液とマイクロ分散液とが組み合わされた分散液を第三の温度でマイクロ流動化にかけることで、ナノ分散液を形成する工程と、（ｖ）該ナノ分散液を２℃〜５℃でインキュベートすることで、液晶性ドラッグデリバリーシステムを形成する工程とを含む。

【0012】

先に開示した方法において、上記第１の溶液と上記第２の溶液とは、１：１〜１：１５の重量比で混合される。

【0013】

さらに、上記方法によって製造された液晶性ドラッグデリバリーシステムが提供される。

【0014】

さらに、被験者における眼疾患を治療する方法であって、眼疾患を有する被験者を特定する工程と、該被験者の眼に上記液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与する工程とを含む、方法が開示されている。

【0015】

もう一つの態様においては、眼疾患の治療のための医薬の製造における上記液晶性ドラッグデリバリーシステムの使用が開示されている。

【0016】

本発明の１つ又は複数の実施形態の詳細は、以下の図面及び詳細な説明に示されている。本発明の他の特徴、目的及び利点は、詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。本明細書で引用される全ての文献の内容はその全体、引用することによって本明細書の一部をなす。

【発明を実施するための形態】

【0017】

上述のように、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、水溶液中に分散されたナノ粒子を含む。該デリバリーシステムは、持続放出及び吸収のために、隙間に溶解された状態で難溶性薬剤分子を含む独特の内部形態を有し、こうして懸濁液によって可能となるよりも高いバイオアベイラビリティがもたらされる。親水性薬剤と疎水性薬剤との両方を、該液晶性ドラッグデリバリーシステム中に、個別的に又は組合せのいずれにおいても導入することができる。

【0018】

該デリバリーシステムは、連続的水相と一緒に含有されるナノ粒子相を有する二相液体である。薬剤は、親水性成分と疎水性成分との両方を含有するナノ粒子相中に溶解される。一緒に混ぜると、それらの相は互いに相互作用を起こして、液晶相を形成する。上記ナノ粒子相と連続相との間の相互作用は、秩序的なナノ構造化された集成物（assembly）の独特な特性を示す。それらの相は、別々では秩序的でもなければ、又は液晶性でもない。

【0019】

液晶相は、通常の液体と固体結晶との間の特性を有する物の状態として定義される。液晶は、液体のように流れることができるが、それらの分子は結晶様の配向において存在し得る。液晶相は、交差偏光板のもと光学顕微鏡で見ると、多色の組織、すなわち複屈折を示すであろう。結晶は光のブラッグ反射を示す能力があるため、液晶の特性決定のためにも使用される示差走査熱量測定−Ｘ線回折法によって測定されるように、液晶相は、加熱したときに明らかな融解相転移も有する。

【0020】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、角膜及び強膜のような眼の全ての組織を通じて容易に透過することができる４０ｎｍから９００ｎｍまでのサイズを有するナノ粒子を含有する。該デリバリーシステムは、眼表面に留まる時間を延ばすために、粘膜付着性であるように設計されている。

【0021】

上述のように、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、水溶液中に分散されたナノ粒子を含む。また上述のように、該ナノ粒子は、脂質成分及びアルコールを含む。該脂質成分は、例えばホスファチジルコリン及び中鎖脂肪を含んでよい。該アルコールは、セチルアルコールであってよい。

【0022】

上記ナノ粒子は、コレステロール、グリセロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ステアリン酸ＰＥＧ、ポロキサマー４０７、チロキサポール、ポリソルベート８０、ヒマシ油及びＰＥＧ化ヒマシ油の１種又は複数種を含んでもよい。さらに、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）のようなポリマーが、持続放出型製剤のためにナノ粒子中に含まれてよい。

【0023】

一実施形態においては、上記ナノ粒子は、ホスファチジルコリン、中鎖脂肪及びセチルアルコールを含む。もう一つの実施形態においては、上記ナノ粒子は、ホスファチジルコリン、中鎖脂肪、コレステロール及びセチルアルコールを含む。

【0024】

上述の水溶液は、粘膜付着性の親水性ポリマーを含有する。該ポリマーは、これらに限定されるものではないが、ヒアルロン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、アルブミン、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ムチン、１−４β−グルカン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）−ポリ（エチレンオキシド）、タマリンド種子多糖類、アルギン酸ナトリウム、ポリカーボポール（polycarbopol）及びポリカルボフィル又はそれらの誘導体並びにそれらの混合物であってよい。

【0025】

上記水溶液は、バッファーも含む。該バッファーは、これらに限定されるものではないが、酢酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、ε−アミノカプロン酸、アミノ酸塩、例えばグルタミン酸ナトリウム、ホウ酸及びクエン酸であってよい。好ましくは、該バッファーは、リン酸塩バッファーである。

【0026】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムの特定の実施形態においては、上記ナノ粒子は、ホスファチジルコリン及び中鎖脂肪、セチルアルコール、ＰＥＧ−４００、ＰＰＧ、ステアリン酸ＰＥＧ、ポロキサマー４０７、チロキサポール、ポリソルベート８０並びにヒマシ油を含み、かつ上記水溶液は、ヒアルロン酸ナトリウム（sodium hyaluronan）を含有する。もう一つの特定の実施形態においては、上記ナノ粒子は、ホスファチジルコリン及び中鎖脂肪、コレステロール、セチルアルコール、ＰＥＧ−４００、ＰＰＧ、ステアリン酸ＰＥＧ、ポロキサマー４０７、チロキサポール、ポリソルベート８０並びにヒマシ油を含み、かつ上記水溶液は、ヒアルロン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム及び一塩基性リン酸ナトリウムを含有する。

【0027】

上述の成分は、液晶性ドラッグデリバリーシステム中に、該システムの重量％として表現される以下の量で含まれていてよい：０．１％〜１％のホスファチジルコリン及び中鎖脂肪；０．１％〜５％のセチルアルコール；０．２％〜２％のＰＥＧ−４００；０．２％〜１％のＰＰＧ；０．１％〜０．７％のステアリン酸ＰＥＧ；０．１％〜０．２５％のポロキサマー４０７；０．０１％〜０．１５％のチロキサポール；０．０１％〜０．０２％のポリソルベート８０；１％〜５％のヒマシ油；０．１％〜０．５％のヒアルロン酸ナトリウム、０．０１％〜０．０２％の一塩基性リン酸ナトリウム、０．０５％の二塩基性リン酸ナトリウム、並びに７５％〜９０％の脱イオン水（ｄＨ_２Ｏ）。代替的な液晶性ドラッグデリバリーシステムは、これらの成分の全てを含有するとともに、０．０２％〜０．２％のコレステロールも含有する。更なる実施形態は、ヒアルロン酸ナトリウムに代えて０．１％〜０．５％のキサンタンガムを含む。追加の実施形態は、ヒアルロン酸ナトリウムに代えて０．１％〜０．５％のカルボキシメチルセルロースを含有する。

【0028】

具体的な実施形態においては、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、１重量％のホスファチジルコリン及び中鎖脂肪、１重量％のセチルアルコール、２重量％のＰＥＧ−４００、１重量％のＰＰＧ、１重量％、０．７重量％のステアリン酸ＰＥＧ、０．２２重量％のポロキサマー４０７、０．１０重量％のチロキサポール、０．１０重量％のポリソルベート８０、並びに３．８重量％のヒマシ油、０．１４重量％のヒアルロン酸ナトリウム、０．０２重量％の一塩基性リン酸ナトリウム、０．０５重量％の二塩基性リン酸ナトリウムと、残部にｄＨ_２Ｏとを含む。代替的な液晶性ドラッグデリバリーシステムは、全てのこれらの成分を同じ量含有するとともに、０．２％のコレステロールも含有する。

【0029】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、医薬品有効成分（ＡＰＩ）を、該システムの０．０１重量％〜０．５重量％で含有してもよい。該ＡＰＩは、上記ナノ粒子中に入れられている。該ＡＰＩは、これらに限定されるものではないが、プロピオン酸フルチカゾン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、トリアムシノロンアセトニド、メチルプレドニゾロン、コルチゾン、ベクロメタゾン、フロ酸フルチカゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、エタボン酸ロテプレドノール、ジフルプレドナート、フルオロメトロン、リメキソロン、トラボプロスト、モキシフロキサシン、酢酸プレドニゾロン、ポサコナゾール、ブデソニド、ネチルマイシン又はムピロシンであってよい。

【0030】

特定の実施形態においては、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、０．０１重量％〜０．１重量％のプロピオン酸フルチカゾン、０．０１重量％〜０．１重量％のデキサメタゾン、０．０１重量％〜０．１重量％のジフルプレドナート、０．１重量％〜０．５重量％のエタボン酸ロテプレドノール、０．１重量％〜０．５重量％のポサコナゾール、０．１重量％〜０．５重量％のブデソニド、０．０５重量％〜０．５重量％のネチルマイシン又は０．０５重量％〜０．５重量％のムピロシンを含む。

【0031】

具体的な実施形態においては、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、０．１重量％のプロピオン酸フルチカゾンを含有する。

【0032】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムの上記実施形態のそれぞれは、６〜７．５のｐＨ、２５０ｍＯｓｍ／Ｌ〜３４０ｍＯｓｍ／Ｌのモル浸透圧濃度、及び２００ｃＰ〜１０００ｃＰの粘度を有してよい。

【0033】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、貯蔵安定性である。例えば、水溶液中に分散されたナノ粒子は、該分散液から少なくとも９０日間にわたって沈殿しない。

【0034】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、スプレー、注射式システムであってよく、又は点眼液として製剤化されてよい。上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、注射器に予備充填された高粘度液体であってよい。

【0035】

本明細書に開示される液晶性ドラッグデリバリーシステムは、以下の工程によって製造することができる。

【0036】

まず、脂質成分及びアルコールを含有する第１の溶液を形成する。上該脂質成分は、好ましい実施形態においては、ホスファチジルコリン及び中鎖脂肪を含んでよい。該アルコールは、セチルアルコールであってよい。上記溶液の形成後に、その溶液は４０℃〜５５℃に維持することができる。代替的な実施形態においては、ＡＰＩが該第１の溶液中に溶解される。

【0037】

次いで、粘膜付着性の親水性ポリマー及びバッファーを含む水溶液である第２の溶液が得られる。該粘膜付着性の親水性ポリマーは、ヒアルロン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、１−４β−グルカン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）−ポリ（エチレンオキシド）、タマリンド種子多糖類、アルギン酸ナトリウム、ポリカーボポール及びポリカルボフィル又はそれらの混合物であってよい。該バッファーは、これらに限定されるものではないが、酢酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、ε−アミノカプロン酸、アミノ酸塩、例えばグルタミン酸ナトリウム、ホウ酸及びクエン酸であってよい。 好ましくは、該バッファーは、リン酸塩バッファーである。該第２の溶液は、５℃〜５５℃の温度、好ましくは４０℃〜５５℃の温度で維持することができる。

【0038】

上記第１の溶液及び上記第２の溶液を一緒に混ぜることで、ナノ分散液とマイクロ分散液とが組み合わされた分散液が形成される。該第１の溶液と該第２の溶液との間の重量比は、１：１〜１：１５（例えば１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：４、１：１５）であってよい。好ましくは、その比は、１：９である。

【0039】

上述のように、ナノ分散液とマイクロ分散液とが組み合わされた分散液を形成するための上記第１の溶液と上記第２の溶液との混合は、高エネルギー混合プロセスによって達成される。該高エネルギー混合プロセスは、例えば高剪断混合、超音波処理又は両方のプロセスの組合せであってよい。

【0040】

そのナノ分散液とマイクロ分散液とが組み合わされた分散液をマイクロ流動化にかけることで、ナノ分散液が形成される。該マイクロ流動化は、例えば高圧均質化によって実施することができる。該マイクロ流動化は、４０℃〜５５℃で８時間〜２４時間の時間にわたり実施することができる。

【0041】

こうして形成されたナノ分散液を２℃〜５℃で１２時間〜２４時間の時間にわたりインキュベートすることで、液晶性ドラッグデリバリーシステムを形成することができる。

【0042】

本方法の代替的な実施形態は、上述の工程の全てに加えて、上記ナノ分散液を、１６時間〜２４時間にわたり混合してから、それらを２℃〜５℃で１２時間〜２４時間の期間にわたりインキュベートする工程を含む。この混合工程は、高剪断混合によって達成することができる。さらに、この混合工程は、−１０℃〜１５℃で実施することができる。一実施形態においては、該混合は、−１０℃〜−１℃で実施される。代替的な実施形態においては、該混合は、８℃〜１５℃で実施される。もう一つの実施形態においては、該混合は、室温で実施される。

【0043】

上述の第１の溶液は、脂質成分及びアルコールに加えて、ＰＥＧ−４００、ＰＰＧ、ステアリン酸ＰＥＧ、ポロキサマー４０７、チロキサポール、ポリソルベート８０及びヒマシ油を添加することによって形成することもできる。もう一つの実施形態においては、該第１の溶液の形成のために、コレステロールも添加される。更なる実施形態においては、該第１の溶液にＰＬＧＡが添加される。

【0044】

本方法の特定の実施形態においては、上記第１の溶液は、１０重量％のホスファチジルコリン及び中鎖脂肪、１０重量％のセチルアルコール、２０重量％のＰＥＧ−４００、１０重量％のＰＰＧ、７重量％のステアリン酸ＰＥＧ、２．２重量％のポロキサマー４０７、１重量％のチロキサポール、１重量％のポリソルベート８０並びに３８重量％のヒマシ油から形成される。該第１の溶液は、これらの成分に加えて、２重量％のコレステロールと一緒に形成することもできる。プロピオン酸フルチカゾンは、該第１の溶液中に１％で溶解される。この特定の実施形態においては、上記第２の溶液は、０．２重量％の一塩基性リン酸ナトリウム、０．５重量％の二塩基性リン酸ナトリウム及び１．５重量％のヒアルロン酸ナトリウムを含有する。上記第１の溶液と上記第２の溶液とは、１：９の重量比で混合される。

【0045】

上記の第１の溶液は、段階的に製造することができる。例えば、ＡＰＩを、まずは上記脂質成分及びアルコール中で可溶化させることができる。この可溶化は、所望の量のＡＰＩを溶解するのに必要とされる温度で実施することができる。その温度は、例えば２５℃〜６５℃であってよい。該ＡＰＩを可溶化した後に、上記の追加の賦形剤の１種又は複数種を添加することで、第１の溶液を形成することができる。該第１の溶液の温度は、そのＡＰＩの可溶化のためにより高い温度が使用されたのであれば、３０℃〜４５℃に下げることができる。

【0046】

先に詳細に記載されたように、該第１の溶液は、高エネルギー混合プロセスによって、粘膜付着性の親水性ポリマーを含有する第２の溶液と混合される。代替的な実施形態においては、該粘膜付着性の親水性ポリマーは、第２の溶液から省かれ、そしてマイクロ流動化後であるが、最終インキュベーション工程の前に添加される。この代替的なプロセスは、混合工程において剪断力に感受性の特定の粘膜付着性の親水性ポリマーが使用される場合に必要となることがある。

【0047】

また、被験者における眼疾患を治療する方法も上述されている。該方法は、眼疾患を有する被験者を特定する工程と、該被験者の眼に上記の液晶性ドラッグデリバリーシステムを投与する工程とを含む。

【0048】

当業者は、眼疾患を有する被験者を、当該技術分野で通常の方法、例えば眼の検査によって特定することができる。該液晶性ドラッグデリバリーシステムで治療することができる眼疾患は、これらに限定されるものではないが、術後炎症、炎症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、マイボーム腺機能不全、感染症、結膜炎、角膜炎、潰瘍、眼瞼炎、緑内障、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、眼内炎、脈路膜血管新生、涙管機能不全、角膜水疱及びドライアイ病を含む。

【0049】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、眼に点眼液、スプレー及び注射によって投与することができる。特定の実施形態においては、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、硝子体注射によって投与される。

【0050】

投与される液晶性ドラッグデリバリーシステムは、好ましくは、眼疾患を治療するために有効であると知られるＡＰＩと一緒に製剤化される。該ＡＰＩは、これらに限定されるものではないが、プロピオン酸フルチカゾン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、トリアムシノロンアセトニド、メチルプレドニゾロン、コルチゾン、ベクロメタゾン、フロ酸フルチカゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、エタボン酸ロテプレドノール、ジフルプレドナート、フルオロメトロン、リメキソロン、トラボプロスト、モキシフロキサシン、酢酸プレドニゾロン、ポサコナゾール、ブデソニド、ネチルマイシン又はムピロシンであってよい。

【0051】

他の実施形態においては、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、非ステロイド系抗炎症薬、例えばこれらに限定されるものではないが、ネパフェナク、ブロムフェナクナトリウム、ジクロフェナク、フルルビプロフェンナトリウム、ケトロラックトロメタミン及びフルルビプロフェンナトリウムと一緒に製剤化することができる。

【0052】

もう一つの実施形態においては、抗微生物剤を、上記液晶性ドラッグデリバリーシステム中に導入してよい。該抗微生物剤は、これらに限定されるものではないが、トブラマイシン、ネチルマイシン、エリスロマイシン、バシトラシン、アジスロマイシン、シプロフロキサシン、ガチフロキサシン、硫酸ゲンタマイシン、レボフロキサシン、塩酸モキシフロキサシン、オフロキサシン、スルファセタミドナトリウム、硫酸ポリミキシンＢ、スルファセタミド、硫酸ネオマイシン、亜鉛バシトラシン及びグラミシジンを含む。

【0053】

上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、疎水性薬剤と一緒に製剤化することができる。疎水性薬剤の例は、これらに限定されるものではないが、ＲＯＣＫ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、Ａ−１アゴニスト、ＰＡＲＰ阻害剤、ＳＯＤミメティック、ＰＰＡＲアゴニスト、ＷＮＴ阻害剤、ＳＹＫ特異的阻害剤、ＪＡＫ特異的阻害剤、ＳＹＫ／ＪＡＫ若しくはマルチキナーゼ阻害剤、ＭＴＯＲ、ＳＴＡＴ３阻害剤、ＶＥＧＦＲ／ＰＤＧＦＲ阻害剤、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ｐ３８／ＭＡＰＫ阻害剤、マクロライド類、アゾール誘導体、プロスタグランジン類、ＮＯ放出剤、ペプチド類、ＮＳＡＩＤ、ステロイド類、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫剤、血圧降下剤、癌医薬又は抗新生物剤、免疫調節剤、診断剤及び抗酸化剤を含む。

【0054】

上記のＡＰＩのいずれかの組合せを、上記液晶性ドラッグデリバリーシステム中に導入してもよい。

【0055】

代替的には、上記液晶性ドラッグデリバリーシステムは、ＡＰＩを用いずに製剤化することができ、そして涙液産生に欠陥があるか、又はそれを欠いている眼の状態を治療するために投与することができる。

【0056】

更なる推敲をせずとも、当業者であれば、上記詳細な説明に基づき、本発明をその最大限の範囲まで利用できると考えられる。以下の具体的な実施例は、単に説明を目的とするものと解釈されるべきであって、本開示の残りを決して限定するものではない。

【実施例】

【0057】

実施例１： 方法開発の最適化
上述のように、ナノ粒子（相Ｉ）は、製剤のＡＰＩ含有部分である。該ＡＰＩは、共可溶性であるとともに、該ＡＰＩの可溶化もする膜模倣型の賦形剤の混合物中に溶解される。使用される賦形剤は、一般的に安全とみなされており（ＧＲＡＳ）、かつ眼科用途のために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の承認が下りているべきである。相Ｉ中でのＡＰＩの高い溶解度は、最終ナノ分散液中での該ＡＰＩの高濃度を保証するであろう。少なくとも１種の疎水性成分及び少なくとも１種の親水性成分を含有する相Ｉは、上記液晶性分散液システムにおける分散相でもある。

【0058】

ＡＰＩの溶解度は、種々の相Ｉの混合物において試験した。

【0059】

まず、プロピオン酸フルチカゾンの溶解度を、ＰＨＯＳＡＬ（商標）Ｍｅｄｉｕｍ Ｃｈａｉｎ Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ（「ＭＣＴ」）とポリエチレングリコール−４００（ＰＥＧ−４００）との７：３（重量／重量）混合物から構成される１０ｇの相Ｉ中で求めた。ＭＣＴ、つまりホスファチジルコリンと中鎖脂肪との混合物は、疎水性成分であり、かつＰＥＧ−４００は、この例示される相Ｉにおいては親水性成分である。ＭＣＴ及びＰＥＧ−４００を、ガラスバイアル中に加え、その混合物を２分間にわたり該成分が均質な混合物を形成するまでボルテックスにかけた。プロピオン酸フルチカゾンを増分的に添加し、そしてＳｃｉｌｏｇｅｘ ＭＳＨ ２８０ Ｐｒｏホットプレートスターラーを使用して８５０ｒｐｍで３７℃の温度で撹拌した。撹拌を、飽和溶解度に達するまで続けた。プロピオン酸フルチカゾンは、この相Ｉの混合物１０ｇ中で１０８．７ｍｇの飽和溶解度を有していた。

【0060】

相Ｉ中でのプロピオン酸フルチカゾンの溶解度を高めるために、鉱油（Ｄｒａｋｅｏｌ ６００ＬＴ）を組成物中に加えた。ＭＣＴ：ＰＥＧ−４００：鉱油を７：２：１の重量比で含有する相Ｉを上記のように調製した。相Ｉの全量は１０ｇであった。プロピオン酸フルチカゾンを増分的に添加し、その混合物を５分間にわたり撹拌し、そして混合物中にプロピオン酸フルチカゾンをそれぞれ添加した後に５分間にわたりボルテックスにかけた。この相Ｉ中で、９８．２ｍｇのプロピオン酸フルチカゾンが３７分間で完全に溶けた。

【0061】

ＰＥＧ−４００、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）及びクレモホールを重量比２．９：７：０．１で含有するもう一つの相Ｉの混合物も評価した。クレモホールは、難溶性薬剤の溶解度を高めるための補助溶剤として広く使用されているため使用された。この相Ｉ中でのプロピオン酸フルチカゾンの飽和溶解度は、４５℃、２０分間９９０ｒｐｍで撹拌した後に、１０ｇ中に１０３．７ｍｇであった。

【0062】

プロピオン酸フルチカゾンの溶解度を、エタノール中の５％セチルアルコール中でも評価した。この相Ｉ中で、４５℃で２分間にわたり１２００ｒｐｍで撹拌したときに、２００．３０ｍｇのプロピオン酸フルチカゾンが１０ｇ中に完全に溶けた。

【0063】

３０％（重量／重量）のＰＥＧ−４００、６０％（重量／重量）のＰＰＧ、５％（重量／重量）のＭＣＴ、０．２５％（重量／重量）のセチルアルコール及び４．７５％（重量／重量）のエタノールを含有する、もう一つの相Ｉの混合物を製造した。１０ｇのこの相Ｉ中で、４５℃で１５分間にわたり１２８０ｒｐｍで撹拌した後に、１８０ｍｇのプロピオン酸フルチカゾンが完全に溶けた。

【0064】

異なるＡＰＩ、つまりトリアムシノロンアセトニドもこの相Ｉを用いて試験した。４５℃で２０分間にわたり１２８０ｒｐｍで撹拌した後に、２２０ｍｇのトリアムシノロンアセトニドが１０ｇの相Ｉ中に溶けることが判明した。トリアムシノロンアセトニドは、低い水溶性を有する非ステロイド系抗炎症薬である。

【0065】

相Ｉを更に変更したものを、ＡＰＩの溶解度を更に高める目的で試験した。この目的を達成するために、追加の疎水性の成分を相Ｉ中に導入した。

【0066】

３０％（重量／重量）のＰＥＧ−４００、２０％（重量／重量）のＰＰＧ、０．５％（重量／重量）のセチルアルコール、９．５％（重量／重量）のエタノール、５％（重量／重量）のＭＣＴ及び３５％（重量／重量）のヒマシ油を含有する相Ｉを製造した。トリアムシノロンアセトニドを増分的に添加し、そしてその混合物を、４５℃に合わせたＳｃｉｌｏｇｅｘ ＭＳＨ ２８０ Ｐｒｏを使用して８４０ｒｐｍで撹拌した。１０ｇのこの相Ｉ中でのトリアムシノロンアセトニドの飽和溶解度は、２３０ｍｇであった。

【0067】

相ＩＩは水相であり、そこに相Ｉが注がれ、圧送され、又は注入された後に、混合される。相ＩＩ、つまり親水性賦形剤のみを含有する水溶液は、ｐＨを維持するとともに、最終製剤におけるｐＨに関連した不安定性からＡＰＩを保護するバッファーを供給する。相ＩＩの最適化は、相Ｉと混合して相ＩＩＩを形成することによって確認した。上述のように、相ＩＩＩは、高エネルギープロセスを使用して相Ｉ及び相ＩＩを混合したときに形成されるエマルジョンについて使用される用語である。

【0068】

０．５％（重量／重量）のヒアルロン酸ナトリウム、０．６３％（重量／重量）の塩化ナトリウム、０．３％（重量／重量）の二塩基性リン酸ナトリウム、０．０４％（重量／重量）の一塩基性リン酸ナトリウム及び９８．５６％（重量／重量）の蒸留Ｈ_２Ｏ（ｄＨ_２Ｏ）を含むｐＨ６．５±０．１の相ＩＩを作った。

【0069】

３０％（重量／重量）のＰＥＧ−４００、２０％（重量／重量）のＰＰＧ、０．５％（重量／重量）のセチルアルコール、９．５％（重量／重量）のエタノール、５％（重量／重量）のＭＣＴ及び３５％（重量／重量）のヒマシ油を含有する１重量部の相Ｉを、９重量部の相ＩＩ中に０．５ｇ／分の流速で注入して、相ＩＩＩを形成した。混合プロセスは、Ｈｅｉｌｓｃｈｅｒ ＵＰ２００Ｓ超音波プロセッサと組み合わせてｓｏｎｏｔｒｏｄｅ Ｓ３マイクロチップを使用し、該プロセッサを２５％の振幅及び０．５サイクルに合わせて実施した。その相ＩＩを、３２℃に合わせたジャケット付き容器内に入れた。

【0070】

Ｈｏｒｉｂａ ＬＡ９５２粒子アナライザーによって測定されたこの相ＩＩＩの平均粒度は、２６μｍであると判明した。このプロセスによって製造されたエマルジョンは、粒度の点で均一ではなかった。粒度分布の分散は２１５７．６０であった。

【0071】

相ＩＩＩの不均一性と大きな粒度を減らすことを試みるにあたり、ステアリン酸ポリエチレングリコール（ステアリン酸ＰＥＧ）を相Ｉに添加した。ステアリン酸ＰＥＧは、マクロゴール類（ポリオキシエチレンポリマー類）と相応の遊離のグリコールとの混合物の二ステアリン酸エステルの混合物である。ステアリン酸ＰＥＧは、一般的に、医薬品化合物における乳化剤及び可溶化剤として使用される。さらに、より高い濃度の疎水性含分を達成するとともに、該製剤中の高濃度のエタノールを回避するために、より多量のＭＣＴを使用し、そして上記のようにセチルアルコールを使用した。より低温でのセチルアルコールの凝集を回避するために、該疎水性成分を、６７℃で２５０ｒｐｍにおいて混合した。２８％（重量／重量）のＰＥＧ−４００、１０％（重量／重量）のＰＰＧ、１０％（重量／重量）のセチルアルコール、１０％（重量／重量）のＰｈｏｓａｌ ＭＣＴ、２％（重量／重量）のステアリン酸ＰＥＧ及び４０％（重量／重量）のヒマシ油を含有する相Ｉを製造した。この相Ｉ（１重量部）を、５重量部の相ＩＩ（０．５％（重量／重量）のヒアルロン酸ナトリウム、０．６３％（重量／重量）の塩化ナトリウム、０．３％（重量／重量）の二塩基性リン酸ナトリウム、０．０４％（重量／重量）の一塩基性リン酸ナトリウム、９８．５６％（重量／重量）のｄＨ_２Ｏ）中に０．５ｇ／分の流速で注入することで、相ＩＩＩを形成した。混合プロセスは、上記のようにして２５％の振幅及び０．５サイクルに合わせた超音波プロセッサを用いて実施した。相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器内に入れた。該相ＩＩＩの平均粒度は、３０μｍであることが見出された。このプロセスによって製造されたエマルジョンは、粒度の均一性の点ではより良好であり、ここで、粒度分布の分散は６５３．４であったが、粒度は大きくなった。

【0072】

粒度を更に低下させるために、相Ｉと相ＩＩとの間の比を、それらの組成を一定に保ったまま変更した。相ＩＩＩの形成のために、１重量部の相Ｉ及び１５重量部の相ＩＩ（両方とも先の段落に記載されている）を、３０％の振幅及び１サイクルに合わせた超音波プロセッサを使用して混合した。相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器内に入れた。この変更したプロセスによって製造されたエマルジョンは、粒度の均一性の点ではより良好であり、ここで、粒度分布の分散は、６．３５であり、かつ平均粒度は、３．６μｍであった。この変更において、超音波プロセッサで合わせた振幅は、上記の２５％とは異なって３０％であった。高められた振幅が使用されたにもかかわらず、超音波処理後の最終相ＩＩＩの温度は、相Ｉと相ＩＩとを１：５の比で有する相ＩＩＩのエマルジョンよりも低いことが見出された。

【0073】

このように、粒度に有利な影響を及ぼすための２つの要因、つまりより低い相ＩＩＩの温度と、より低い相Ｉ対相ＩＩの比が見出された。

【0074】

相Ｉ対相ＩＩの比の１：５から１：１５への低下は、最終製剤中のＡＰＩの濃度の希釈の効果を伴うこととなる。したがって、１：１５の比ほど大きく薬剤濃度を下げない更なる相Ｉ／相ＩＩの比を試験した。

【0075】

上述の相Ｉ及び相ＩＩの組成は変えずに保った。相ＩＩＩを１：１１の比の相Ｉ対相ＩＩから形成した。ここでも、混合プロセスは、３０％の振幅及び１サイクルに合わせた超音波プロセッサを用いて実施した。相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器内に入れた。こうして製造された相ＩＩＩの平均粒度は５．８７μｍであり、その際、粒度分布の分散は、８６．３０であった。相Ｉと相ＩＩとの間の比は、エマルジョンにおける粒度に重要な役割を担った。薬剤の最適濃度を（過度に希釈することなく）もたらす比率は、効果的なドラッグデリバリーシステムを形成するにあたり最重要視されるものである。

【0076】

上述のように、相ＩＩＩの温度を低く保つことは、より小さい粒度を得るためには重要な要因であった。さらに、超音波処理の期間を長くすることがもう一つの要因であった。超音波処理の期間を長くすることは、相ＩＩＩの温度の増大をもたらすため問題である。この増大は、また粒度の増大の原因となる。温度上昇による粒度の増大を避けるために、相ＩＩＩの浴内超音波処理をプロセスに導入した。

【0077】

相Ｉ及び相ＩＩの組成は変えずに保ち、相の比は１：１１に保った。相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器内に入れた。超音波による混合プロセスを、上記のようにして、３０％の振幅及び１サイクルを使用して実施することで、相ＩＩＩを形成した。こうして形成された相ＩＩＩを、１５分間の浴内超音波処理にかけた。相ＩＩＩの平均粒度は５．４８μｍであり、ここで、粒度分布の分散は、８．２３であった。相ＩＩＩの温度は、２８℃であり、それは、該相ＩＩＩの温度が比較的一定に留まったことを示している。製剤開発における浴内超音波処理プロセスの付加は、粒度が同じに留まる一方で、上記分散が８６．３０から８．３へと低下し、それは均一性の向上を示すものであるため、有利な変更であった。液晶性ナノエマルジョンの場合には、該エマルジョンにおいて、大きな分散から明らかなより大きな粒子の存在は、該エマルジョンにおいて合一をもたらし、場合により相分離をもたらすことが確認された。したがって、その分散も安定性の指標である。

【0078】

さらに粒度を減らすことを試みるにあたり、様々な界面活性剤を試験した。アルキルアリールポリエーテルアルコール型の非イオン性液状ポリマーであるとともに、液化を助けるために使用される界面活性剤であるチロキサポールを、その臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）の０．０１８ｍＭより高くなるまで相ＩＩに添加した。

【0079】

相Ｉの組成は、変えずに保ち（２８％（重量／重量）のＰＥＧ−４００、１０％（重量／重量）のＰＰＧ、１０％（重量／重量）のセチルアルコール、１０％（重量／重量）のＰｈｏｓａｌ ＭＣＴ、２％（重量／重量）のステアリン酸ＰＥＧ、４０％（重量／重量）のヒマシ油）、そして相ＩＩを、０．５％（重量／重量）のヒアルロン酸ナトリウム、０．６３％（重量／重量）の塩化ナトリウム、０．３％（重量／重量）の二塩基性リン酸ナトリウム、０．０４％（重量／重量）の一塩基性リン酸ナトリウム、４％の０．１ｍＭのチロキサポール溶液及び９８．５６％（重量／重量）のｄＨ_２Ｏを用いて作った。相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器内に入れた。相ＩＩＩは、相Ｉ対相ＩＩの１：１１の比から、まず上記のようにして３０％の振幅及び１サイクルに合わせたプロセッサを用いて超音波処理で混合することによって形成した。該相ＩＩＩの混合物を、１５分間の浴内超音波処理にかけた。こうして形成された相ＩＩＩの平均粒度は１．８１μｍであり、ここで、粒度分布の分散は、１．０２であり、それはエマルジョンが均一な粒度を有することを示すものであった。相ＩＩＩの温度は、一貫して２９℃であり、それは、その温度がほぼ変わらず留まったことを示している。製剤開発におけるチロキサポールの添加は、粒度が６００％だけ低下するとともに、上記分散が８．３から１．０２へと低下し、それは安定なエマルジョンを示すものであるため、有利な変更であった。

【0080】

試験されたもう一つの界面活性剤は、ポリソルベート８０であった。ポリソルベート８０は、そのＣＭＣ未満で使用した。相Ｉの組成は、変えずに保ち、その一方で、相ＩＩは、０．５％（重量／重量）のヒアルロン酸ナトリウム、０．６３％（重量／重量）の塩化ナトリウム、０．３％（重量／重量）の二塩基性リン酸ナトリウム、０．０４％（重量／重量）の一塩基性リン酸ナトリウム、０．０００１５％（重量／重量）のポリソルベート８０及び９８．５６％（重量／重量）のｄＨ_２Ｏを用いて作った。相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器内に入れた。相Ｉ対相ＩＩの比は、１：１１に保った。混合プロセスは、先の段落に記載されるようにして実施した。相ＩＩＩの形成の後に、該相ＩＩＩを、１５分間の浴内超音波処理にかけた。相ＩＩＩの平均粒度は５３．７５μｍであり、ここで、粒度分布の分散は、６．０５であり、それは、ＣＭＣ未満でのＴｗｅｅｎの添加が粒径を低下させないことを示すものであった。

【0081】

粒度に対するＣＭＣ未満のチロキサポールの効果を評価するために、同様の研究を行った。チロキサポールの存在は、ポリソルベート８０をそのＣＭＣ未満で用いて製造された相ＩＩＩのエマルジョンと比較して粒度を低下させた。さらに、この相ＩＩＩは、粒度の点で良好な均一性を示し、それは、安定な製剤であることを示している。

【0082】

温度とチロキサポールとの相乗効果を評価するために実験を行った。これらの実験は、相ＩＩのジャケット付き容器を１５℃に合わせることによって実現される、より低い温度で実施した。得られた相ＩＩＩの超音波処理後の温度は、２２℃であった。より低い相ＩＩＩの温度が達成されたが、粒度は７．１４μｍであり、１３６．１８の分散を有し、両方の値はより高い温度で得られるものよりも大きかった。粒度の増大は、より低い温度で相ＩＩの粘度を高めるヒアルロン酸ナトリウムの存在によるものであった。このように、安定化剤の存在は、プロセスの温度によって覆い隠され、そしてプロセスの温度が、エマルジョンのためのより重要な要因であることが分かった。

【0083】

超音波処理強度の粒度に対する効果を評価するために、別の一連の研究を行った。混合プロセスが上記のように４０％の振幅（上記の３０％とは異なる）及びサイクル１に合わされた超音波プロセッサを使用して実施した場合に、平均粒度は、２．４１μｍに低下し、１．５８の分散を有することが確認された。より高い超音波処理は、より小さい粒度をもたらすことは明らかであった。さらに、一連の実験から、超音波処理強度は、粒度を求める際の相ＩＩＩの混合段階の温度よりも重要な役割を担うことが確認された。

【0084】

より高い超音波の振幅は一つの有利な要因であることが見出されたので、その超音波の強度は、サイクル１で６０％の振幅にまで高めた。相の比は、１：１１ではなく１：１０（相Ｉ対相ＩＩ）に低下させ、そして相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器中に入れた。相ＩＩＩの形成の後に、該相ＩＩＩを、１５分間の浴内超音波処理にかけた。平均粒度は、１．０９μｍであることが判明し、そして該エマルジョンは、わずか０．２１１６の分散で極めて均一であった。

【0085】

ヒアルロン酸ナトリウム、すなわち様々な結合組織、上皮組織及び神経組織において見出されるグリコサミノグリカンであるヒアルロン酸のナトリウム塩の効果を更に評価するために一連の実験を実施した。ヒアルロン酸ナトリウム、つまりグルクロン酸ナトリウム−Ｎ−アセチルグルコサミンの繰り返し二糖単位を含む長鎖ポリマーは、角膜内皮に天然に存在する。ヒアルロン酸ナトリウムは、２つの理由のために相ＩＩ中に導入した：（ａ）ヒアルロン酸ナトリウムが組織潤滑剤として機能し、創傷治癒を促進することと、及び（ｂ）ヒアルロン酸ナトリウムが製剤の粘度を高め、それによりデリバリーシステムと標的器官との間の接触時間を延ばすこと。相Ｉの組成は、変えずに保った（２８％（重量／重量）のＰＥＧ−４００、１０％（重量／重量）のＰＰＧ、１０％（重量／重量）のセチルアルコール、０％（重量／重量）のＭＣＴ、２％（重量／重量）のステアリン酸ＰＥＧ、４０％（重量／重量）のヒマシ油）。様々な濃度のヒアルロン酸ナトリウムを相ＩＩに添加した（０．６３％（重量／重量）の塩化ナトリウム、０．３％（重量／重量）の二塩基性リン酸ナトリウム及び０．０４％（重量／重量）の一塩基性リン酸ナトリウム、ｄＨ_２Ｏ）。結果を以下の表１に示す。０．４％（重量／重量）のヒアルロン酸ナトリウムの相ＩＩへの添加は、より低い粒度（１μｍ未満の粒子が５０％、すなわちＤ５０＜１μｍ）を有するエマルジョンをもたらすが、一方で、他の濃度のヒアルロン酸ナトリウムは１μｍより高い粒度をもたらすことが確認された。

【0086】

【表1】

【0087】

該エマルジョン中の粒度を更に低下させるために、高剪断混合をプロセスに導入した。高剪断スクリーンを備えたＳｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｌ５ＭＡミキサーを、相Ｉ及び相ＩＩの混合のために使用した。

【0088】

具体例において、相Ｉの組成は、２７％（重量／重量）のＰＥＧ−４００、１０％（重量／重量）のＰＰＧ、１０％（重量／重量）のセチルアルコール、１０％（重量／重量）のＭＣＴ、２％（重量／重量）のステアリン酸ＰＥＧ、４０％（重量／重量）のヒマシ油及び１％（重量／重量）のデキサメタゾンであった。相Ｉの製造方法は、デキサメタゾンの導入のために上記のものから変更した。疎水性成分を秤量し、そして５０℃〜５５℃で混合することで、均質な混合物を形成した。親水性成分を次いで添加し、その混合物を均質になるまで連続的に撹拌した。最後に、デキサメタゾンを添加し、そして５０℃〜５５℃で、薬剤が完全に溶けて、澄明な溶液が得られるまで混ぜ続けた。

【0089】

相ＩＩは、０．４％（重量／重量）のヒアルロン酸ナトリウム、０．６３％（重量／重量）の塩化ナトリウム、０．３％（重量／重量）の二塩基性リン酸ナトリウム、０．０４％（重量／重量）の一塩基性リン酸ナトリウム、０．２８％（重量／重量）のステアリン酸ＰＥＧ、０．１４％（重量／重量）のポリソルベート８０及び９８．２１％（重量／重量）のｄＨ_２Ｏを含有していた。

【0090】

１／１０の相Ｉ／相ＩＩの比を有する５５０ｇの相ＩＩＩを形成するために、５００ｇの相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器中に注いだ。３９℃の相Ｉ（５０ｇ）を相ＩＩ中に０．５ｇ／分（±０．１）で、１００００ｒｐｍで高剪断スクリーンを用いて１５分間にわたり混合しながら注入した。該ミキサーを、次の６０分間については６０００ｒｐｍに下げた。こうして形成された相ＩＩＩの平均粒度は、０．８５μｍ（±０．４４）であり、０．１９６の分散を有した。

【0091】

製剤を更に改善するために、先の段落で記載した相Ｉ及び相ＩＩの組成を、相Ｉ中のステアリン酸ＰＥＧの濃度を３％に高めて、相ＩＩからはステアリン酸ＰＥＧを省くことによって変更した。さらに、チロキサポールを相ＩＩへと０．３％（重量／重量）で添加した。

【0092】

１／１０の相Ｉ／相ＩＩの比を有する１００ｇの相ＩＩＩを製造するために、９０ｇの相ＩＩを混合工程の前に冷却し、プロセスの全体温度を下げ、その後に、相ＩＩを１５℃に合わせたジャケット付き容器中に注いだ。５０℃の相Ｉ（１０ｇ）を相ＩＩ中に０．５ｇ／分（±０．１）で、乳化用スクリーンが取り付けられたＳｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｌ５ＭＡによって６０００ｒｐｍで６０分間にわたり、そして１００００ｒｐｍで次に１５分間にわたり３０℃で混合しながら注入した。相ＩＩＩの平均粒度は、４．５８μｍ（±９．５８）であり、９１．５８の大きな分散を有した。非常に大きな粒子が存在するので、そのミキサーのヘッドを乳化用スクリーンから正方形の穴が空いた高剪断スクリーンへと交換した。それというのも、後者の方がより高い剪断をもたらすからである。該エマルジョンを更に追加して５分間にわたり混合した。高剪断スクリーンを用いた混合は、粒子の平均サイズを０．６８μｍ（±０．３８）にまで低下させた。

【0093】

該製剤のモル浸透圧濃度は、製剤開発における一つの重要な要因である。測定すると、先の段落で記載した製剤のモル浸透圧濃度は、３６０ｍＯｓｍ／ｋｇであることが分かった。該製剤のモル浸透圧濃度を下げるために、ＰＥＧ−４００の量を２０％（重量／重量）にまで減らし、そしてステアリン酸ＰＥＧの量を７％（重量／重量）にまで高めた。さらに、ヒアルロン酸ナトリウムは、相ＩＩの粘度を高めることで混合の間のより大きな粒度の原因となるため除去した。

【0094】

１／１０の相Ｉ／相ＩＩの比を有する１００ｇの量の相ＩＩＩは、５００ｇの相ＩＩを、２５℃に合わせたジャケット付き容器中で５０ｇの相Ｉと一緒に５０℃〜５５℃で混合することによって形成した。該相Ｉを、相ＩＩ中に１．０ｇ／分（±０．１）で、高剪断スクリーンを用いて、２５℃、７００ｒｐｍで１５分間にわたり、１９℃、６０００ｒｐｍで６０分にわたり、引き続き３０℃、１００００ｒｐｍで１０分間にわたり混合しながら注入した。相ＩＩＩの平均粒度は、０．１４１μｍ（±１３．３８）であり、１８４．１４の大きな分散を有した。

【0095】

相Ｉの相ＩＩ中への流速は、相ＩＩＩの製剤の粒度に影響する一つの重要な要因である。これは、高剪断混合を使用した製剤開発プロセスにおいてはより明らかであった。相ＩＩＩのエマルジョンの粒度に対する相Ｉの流速の効果を評価するために一連の実験を行った。分散は、平均、モード又はメジアン径の代わりに安定性の尺度とみなされるものであった。それというのも、分散は、エマルジョンの全体の均一性の指標であるからである。例えば、該エマルジョンが０．１μｍの平均粒度及び２．０μｍの分散を有する場合に、該エマルジョンが、望むよりも大きい粒子の小さい集団を有するとともに、それらの存在が合一及び相分離を場合によりもたらし得るということを示している。結果を以下の表２に示す。高められた流速がより高い分散、すなわち低い安定性をもたらすことが明らかである。

【0096】

【表2】

【0097】

様々な混合プロセスで調製された製剤の間に粒度の点でかなり大きな差が存在した。上記のように、３つの異なる混合プロトコルを、該製剤の開発において使用した。高剪断混合による相Ｉと相ＩＩとの混合は、２００ｎｍ未満の粒子の、一貫して８０％より高いパーセンテージをもたらした。超音波処理単独による相Ｉと相ＩＩとの混合は、２００ｎｍ以下の粒子を０．８％未満有する製剤を生成し、その一方で、超音波処理と混合との組合せは、２００ｎｍ未満のサイズの粒子を１２％〜５０％有する製剤をもたらした。

【0098】

様々なＡＰＩを、このドラッグデリバリーのプラットフォームの実現性を試験するために使用した。該プラットフォームが、多くの難水溶性の非ステロイド系抗炎症薬を使用してナノ分散液を製造するのに効果的であることが判明した。例示される薬剤は以下の通りであり、対応するＤ５０値及びＤ９０値と一緒に表す：デキサメタゾン（Ｄ５０＝０．１３９μｍ；Ｄ９０＝０．１７０μｍ）、トリアムシノロンアセトニド（Ｄ５０＝０．１３４μｍ；Ｄ９０＝０．１９７μｍ）、及びプロピオン酸フルチカゾン（Ｄ５０＝０．１４１μｍ；Ｄ９０＝０．１８１μｍ）。

【0099】

実施例２：分析法
分散液の２０μＬの小滴の画像化は、該小滴を顕微鏡のスライドに置いて、それをエマルジョンの完全性を維持することに注意してカバーガラスで覆うことによって実施した。該分散液は、交差偏光板のもと、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５１Ｐ偏光顕微鏡の１００倍対物レンズを油滴で覆って使用して試験した。薬剤含有の分散液及び薬剤不含の分散液の両方を実験した。

【0100】

粒度測定は、約２０μＬの相ＩＩＩの分散液を、２％（重量／重量）のグリセリン、０．１％（重量／重量）のピロリン酸ナトリウム十水和物の溶液中に添加することによって実施した。相ＩＩＩのナノ分散液の粒度分布は、Ｈｏｒｉｂａ ＬＡ−９５０Ｖ２粒度アナライザーを使用して室温で、すなわち２２℃〜２５℃で測定した。

【0101】

封入効率（ｍｇ／Ｇ）は、１．０ｇの薬剤含有相ＩＩＩを１．５ｍＬの遠心分離チューブ中に入れ、そしてＥｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５１４５Ｄを使用して室温、６０００ｒｐｍで１０分間にわたり遠心分離チューブを遠心分離することによって測定した。１００μＬの遠心分離物を、９００μＬの７５％アセトニトリル／２５％水が入ったＨＰＬＣバイアルに移した。該試料を、薬剤、例えばデキサメタゾンの濃度について、λ_ｍａｘ＝２３９ｎｍでのＨＰＬＣによって測定した。該濃度は、相ＩＩＩの分散液１ｇ当たりの薬剤のｍｇ数として計算された。

【0102】

ｉｎ−ｖｉｔｒｏ薬剤放出は３７℃でｐＨ７．４において以下のようにして求めた：相ＩＩＩの分散液（１ｇ）をＳｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒｅ Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ Ｇ２透析装置中に移し、次いでそれを、リン酸塩バッファー（ｐＨ７．４、３７℃）中の１％のヒドロキシルプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ）４０ｇが入った５０ｍＬのロック式遠心分離チューブ中に入れた。全集成物をRobbins Scientificのモデル４００の回転式インキュベーターに入れた。それぞれの時点で、１ｍＬの試料を回収し、新たなバッファーを添加して、取り出した容量を置き換えた。試料を、薬剤含量について、ＨＰＬＣを使用してλ_ｍａｘ＝２３９ｎｍで測定した。

【0103】

ｅｘ−ｖｉｖｏ角膜透過性試験は、それらの眼の組織を透過する能力について製剤をスクリーニングするために有用なツールである。摘出したばかりの角膜を使用して、製剤をそれらの角膜を通じて拡散する能力について試験することができる。生物学的膜を通じて拡散する能力は、製剤の賦形剤、その物理的状態（例えば懸濁液、溶液、エマルジョン、分散液）並びにその分配係数（Ｐ）及びｌｏｇＰに直接関連している。

【0104】

新鮮な仔ウシの眼を近くの屠殺場から入手し、滅菌法を使用してその角膜を慎重に摘出した。該角膜は、摘出したばかりでなければならず、かつ１時間〜２時間以内で使用せねばならない。該角膜を、滅菌された層流フードにおいて、クラス１００の環境で摘出した。該摘出は、房水をまず排出し、引き続き角膜を最初の切り込みのために外科用メスを使用して慎重に切り出すことにより実施した。鉗子とはさみを用いて残りの組織を切断した。摘出された角膜を、０．１重量％のグルタチオン、０．０５１重量％のリン酸二ナトリウム及び９９．４５重量％のＨ_２Ｏを含有するｐＨ７．０の少量の水和液を含むペトリ皿中で貯蔵した。

【0105】

レセプター液中のＡＰＩの溶解度は、角膜透過性実験において非常に重要である。レセプター液中の薬剤の飽和溶解度は、レセプター液中の薬剤の総理論濃度よりもかなり大きいものでなければならない。典型的なレセプター液の組成は、１重量％のＨＰ−β−ＣＤ、０．０５１重量％のリン酸二ナトリウム、０．０１７重量％の一塩基性リン酸ナトリウム、及び９８．５５重量％のＨ_２Ｏである。

【0106】

角膜の透過性の研究は、フランツセル拡散チャンバーシステムを使用して実施した。該フランツセルシステムは、個々の磁気撹拌プレートを備えた単独のユニットに取り付けられた６つの直列のジャケット付きセルからなり、それぞれのセルはメインシステムのウォータージャケットに接続されている。該ジャケットは、実験の間にわたり再循環加熱浴を使用して３７℃で維持した。それぞれのセルは、既知の容量の製剤がピペットで加えられる頂部のドナーセルと、下方に試料採取用側枝を有するレセプターセルとからなる。ドナーセルとレセプターセルとの間のジョイント部は、角膜の形状を模した上向きの凸状である。それぞれのレセプターセルには、５ｍＬのレセプター液が入れられ、そしてそれぞれのドナーセルには、研究される２００μＬの製剤が入れられる。

【0107】

レセプター液を、それぞれのレセプターセルへと針を備えた注射器を使用して添加した。該レセプター液は、ドナーセルのジョイント部に凸状のメニスカスができるまでゆっくりと添加した。該容量を記録し、セルの残りを満たした。

【0108】

角膜を秤量した後に、レセプターセルとドナーセルとのジョイント部の上部に一対の鉗子を使用して、角膜内に折り目ができず、かつ気泡がないようにすることに気をつけて角膜を置いた。置いた時点で、ドナーセルのキャップを慎重に取り付け、適所に金属のクリップで固定した。

【0109】

試料を、立て続けに２００μＬの上記製剤をそれぞれのドナーチャンバ中へと、較正されたピペットを使用して堆積させることによって添加し、回数を記録した。そのドナーチャンバ及び試料採取用側枝を、著しい蒸発が発生しないように封止した。

【0110】

試料を、レセプターセルから２時間、４時間、６時間、７時間及び２２時間に抜き出した。試料を、ＡＰＩ含量についてＨＰＬＣによって上記のようにして分析した。

【0111】

透過流束（Ｊ）は、単位時間当たりに膜を通過する薬剤の量である。透過流束は、質量／面積／時間の単位で示される。透過流束は、式：Ｊ＝Ｑ／（Ａ・ｔ）によって計算することができ、その式中、Ｑは、時間ｔにおいて膜を横切る化合物の量であり、かつＡは、露出した膜の面積（ｃｍ^２）である。透過流束の単位は、重量（マイクログラム）／ｃｍ^２／分である。

【0112】

実施例３： ０．１％のプロピオン酸フルチカゾンを含有するナノ構造化された分散液の調製
相Ｉの調製
３０ｇの量の相Ｉを、３ｇのＰＨＯＳＡＬ（商標）Ｍｉｘｅｄ Ｃｈａｉｎ Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ（「ＭＣＴ」）、３ｇのセチルアルコール及び１１ｇのヒマシ油を予め風袋引きされた（pre-tared）ガラスビーカー中に加えることによって調製した。その混合物を連続的に撹拌しながらホットプレート上で５５℃に加熱して、均質な混合物を形成した。この混合物に、６ｇのポリエチレングリコール−４００、３ｇのポリプロピレングリコール、２．１ｇのステアリン酸ＰＥＧ−４０、０．６６６ｇのポロキサマー４０７、０．３ｇのチロキサポール及び０．３ｇのＴｗｅｅｎ ８０を添加し、引き続き５５℃で撹拌した。均質な混合物に至ったことが確認された後に、撹拌プレートの加熱素子のスイッチを切った。プロピオン酸フルチカゾン（０．２４ｇ）を該混合物へと、該混合物が４０℃〜４５℃に冷えた時点で添加した。該混合物を、プロピオン酸フルチカゾンが完全に溶けて粒状物が視認されない均質な澄明な溶液となるまで撹拌し、それにより相Ｉが形成された。

【0113】

相ＩＩの調製
３００ｇの量の相ＩＩを、０．０５１ｇの一塩基性リン酸ナトリウム、０．１５６ｇの二塩基性リン酸ナトリウム及び２９９．７９６ｇの蒸留Ｈ_２Ｏ（ｄＨ_２Ｏ）から、それらを風袋引きされたガラスビーカー中に加えて調製した。この混合物を、ナトリウム塩が完全に溶けるまで撹拌し、それにより相ＩＩが形成された。相ＩＩのｐＨは、７．３であった。

【0114】

相ＩＩＩの調製
相ＩＩＩは、相Ｉ及び相ＩＩが高エネルギープロセスを使用して混合されたときに形成される分散液に使用される用語である。この実施例では、最終分散液を得るために高剪断混合を使用した。

【0115】

１００ｇの相ＩＩＩを得るために、１０ｇの相Ｉを、９０ｇの相ＩＩ中に１ｇ／分の流速で注入し、そして混合物を、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｌ５ＭＡ高剪断研究室用ミキサーを使用して連続的に混合した。注入の間に、相Ｉを４０℃〜４５℃に維持し、そして相ＩＩは８℃に冷却した。より具体的には、相ＩＩを、−１０℃に合わせた冷却器に接続されたジャケット付き容器中に注いだ。

【0116】

最終分散液、すなわち相ＩＩＩを得るために、２つの混合速度を使用した。７５００ＲＰＭの高速は、相Ｉを相ＩＩ中に注入するときに使用した。相Ｉを完全に添加した時点で、その混合速度を、残りの混合時間の間で５０４０ＲＰＭへと低下させた。その混合は、全体で１５０分間にわたって実施した。この実施例では、高い混合速度を最初の１０分間で使用し、次により低い速度を使用した。プロピオン酸フルチカゾンの最終濃度は、相ＩＩＩの０．１重量％であった。

【0117】

上記分散液中の粒度の統計学的なモードは、１２０ｎｍであった。該分散液の中央は１２２ｎｍであり、そして全粒子の８５％が３００ｎｍよりも小さかった。その分散液は乳白色に見え、均質であり、かつ室温での貯蔵に際して安定であった。

【0118】

偏光光学顕微鏡による試験をした場合に、上記分散液は、液晶状態に似た独特のナノ構造を示した。分散相は半固体であり、相ＩＩの相Ｉ中へのインターカレーションによってそのような状態になった。該分散液のナノサイズは、該分散液を組織中への透過に適したものにする。

【0119】

実施例４： デキサメタゾンを含有するナノ構造化された分散液の調製
相Ｉの調製
３０ｇの量の相Ｉを、３ｇのＭＣＴ、３ｇのセチルアルコール及び１２ｇのヒマシ油をガラスビーカー中で混合することによって調製した。この混合物を連続的に撹拌しながらホットプレート上で５５℃に加熱することで、均質な混合物を形成した。この混合物に、６ｇのポリエチレングリコール−４００、３ｇのポリプロピレングリコール、２．１ｇのステアリン酸ＰＥＧ−４０、及び０．６ｇのポロキサマー４０７を添加し、引き続き５５℃で撹拌し続けた。均質な混合物が形成された後に、撹拌プレートの加熱素子のスイッチを切った。デキサメタゾン（０．３ｇ）をその混合物へと、該混合物が４０℃〜４５℃に冷えた時点で添加した。その混合物を、デキサメタゾンが完全に溶けるまで撹拌した。

【0120】

相ＩＩの調製
３００ｇの量の相ＩＩを、０．０５１ｇの一塩基性リン酸ナトリウム、０．１５６ｇの二塩基性リン酸ナトリウム及び２９９．７９６ｇのｄＨ_２Ｏをガラスビーカー中で混合することによって調製した。この混合物を、ナトリウム塩が完全に溶けるまで撹拌した。相ＩＩのｐＨは、７．３であった。

【0121】

相ＩＩＩの調製
相ＩＩＩは、以下の通りに形成した：９０ｇの相ＩＩを、−１０℃に合わせた冷却器に接続されたジャケット付き容器中に注ぐことによって８℃に冷却した。４０℃〜４５℃に維持した１０ｇの量の相Ｉを、相ＩＩ中に１ｇ／分の流速でＳｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｌ５ＭＡ高剪断ミキサーを使用して連続的に混合しながら注入した。

【0122】

上記の実施例３と同様に、最終分散液、すなわち相ＩＩＩを得るために、２つの混合速度を使用した。まず、１００００ＲＰＭの高速、すなわち一次混合を、相Ｉを相ＩＩ中に注入する間に使用した。全ての相Ｉを導入した後に、５０４０ＲＰＭのより低い速度で混合を、すなわち二次混合を、残りの混合時間にわたって実施した。混合は、合計１５０分にわたり実施され、その際、高い混合速度は最初の１０分間にわたり使用され、引き続いてより低い速度を使用した。デキサメタゾンの最終濃度は、相ＩＩＩの０．１重量％であった。

【0123】

上記分散液の分析は、粒度分布の中央値（ｄ５０）が１４３ｎｍであり、モードが１４１ｎｍであり、かつ分散されたナノ構造化された粒子の９０％が２４５ｎｍ未満であることを明らかにした。そのナノ構造化された分散液は、室温で経時的に安定であった。顕微鏡で調査した場合に、該分散液は、秩序的であるが液体様の状態を示す秩序的な微細構造を示した。

【0124】

追加の分析は、デキサメタゾンが０．８４５ｍｇ／Ｇでカプセル化されたことを明らかにした。ｉｎ−ｖｉｔｒｏ薬剤放出アッセイは、デキサメタゾンの少なくとも２５％が３時間にわたって放出されることを示しており、こうしてバイオアベイラビリティの高い製剤であることを示している。

【0125】

０．１％デキサメタゾンのナノ構造化された製剤の角膜透過性は、上記のようにして試験した。角膜に適用された約３５％のデキサメタゾンは、２２時間の時間にわたりレセプター液中に放出され、それは該製剤のバイオアベイラビリティが高いことを示している。反対に、同じアッセイで試験されたデキサメタゾンの懸濁液は、２２時間で５％未満のかなり低い角膜透過性を示した。さらに、拡散研究を終えた後に、該角膜をアセトニトリル中で抽出し、そしてデキサメタゾン含量について分析した。該製剤で処置された角膜において実質的なデポー様効果が確認され、それは、この製剤で持続放出効果を達成することができることを示している。より具体的には、角膜から抽出されたデキサメタゾンの量は、角膜上に最初に加えられた合計の平均で３５％であった。

【0126】

実施例５： エタボン酸ロテプレドノールを含有するナノ構造化された分散液の調製
相Ｉの調製
３０ｇの量の相Ｉを、エタボン酸ロテプレドノール（０．３ｇ）をデキサメタゾンの代わりに添加したことを除き、実施例４で先に記載されるようにして調製した。

【0127】

相ＩＩの調製
３００ｇの量の相ＩＩもまた、上記の実施例４に記載されるようにして調製した。

【0128】

相ＩＩＩの調製
相ＩＩＩは、実施例４で先に記載したように、相Ｉ対相ＩＩの１：９の比（重量／重量）で形成された。エタボン酸ロテプレドノールの最終濃度は、相ＩＩＩの０．１重量％であった。

【0129】

上記分散液の分析は、粒度分布の中央値（ｄ５０）が１５９ｎｍであり、モードが１６０ｎｍであり、かつ分散されたナノ構造の９０％が３０３ｎｍ未満であることを明らかにした。そのナノ構造化された分散液は、室温で、沈降又は分解が観察されることなく、少なくとも６０日間にわたり安定であった。顕微鏡で調査した場合に、該分散液は、秩序的であるが液体様の状態を示す秩序的な微細構造を示した。

【0130】

追加の分析は、カプセル化されたエタボン酸ロテプレドノールの量が１．２４ｍｇ／Ｇであることを示した。該薬剤は、３時間で３５％のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出を有した。驚くべきことに、エタボン酸ロテプレドノールの角膜透過性は、この薬剤の市販の製剤、すなわちＬｏｔｅｍａｘ（商標）ゲルに関しての８％とは異なり、２２時間で３６％であった。

【0131】

実施例６： 高剪断混合及びマイクロ流動化による薬剤不含のナノ構造化された分散液の調製
相Ｉの調製
７０ｇの量の相Ｉを、７．０１ｇのＭＣＴ、７．０１ｇのセチルアルコール及び２８ｇのヒマシ油をガラスビーカー中で混合することによって調製した。この混合物を連続的に撹拌しながらホットプレート上で５５℃に加熱して、均質な混合物を形成した。この混合物に、７．０７ｇのポリエチレングリコール−４００、７．０７ｇのポリプロピレングリコール、及び４．９７ｇのステアリン酸ＰＥＧ−４０を添加し、引き続き５５℃で撹拌し続けた。均質な混合物が形成された後に、撹拌プレートの加熱素子のスイッチを切った。

【0132】

相ＩＩの調製
７００ｇの量の相ＩＩを、０．２１ｇのチロキサポール、０．１１ｇのＴｗｅｅｎ ８０、１．４４１ｇのクエン酸一水和物、６．９６８８ｇのクエン酸ナトリウム二水和物、０．１４０ｇのポロキサマー４０７及び６９１．６８ｇのｄＨ_２Ｏをガラスビーカー中に添加して混合することによって調製した。この混合物を、塩が完全に溶けるまで撹拌した。相ＩＩのｐＨは、６．０であった。

【0133】

相ＩＩＩの調製
合計６００ｇの相ＩＩＩは、以下の通りに形成した：５４０ｇの相ＩＩを、５０℃に合わせた冷却器に接続されたジャケット付き容器中で５０℃〜５５℃で維持した。５０℃〜５５℃に維持した６０ｇの量の相Ｉを、相ＩＩ中に注ぎ、そして７５００ＲＰＭに合わせたＳｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｌ５ＭＡ高剪断ミキサーを使用して１５分間にわたり混合した。得られた分散液を、２８ｐｓｉの圧力でマイクロ流動化装置（microfluidizer）に４回通過させた。

【0134】

上記分散液の分析は、粒度分布の中央値（ｄ５０）が１７６ｎｍであり、モードが２０７ｎｍであり、かつ分散されたナノ構造の９０％が３５８ｎｍ未満であることを明らかにした。そのナノ構造化された分散液は、室温で経時的に安定であり、かつ顕微鏡で調査した場合に、該分散液は、秩序的であるが液体様の状態を示す秩序的な微細構造を示した。マイクロ流動化工程により、単峰性の分散液が得られた。

【0135】

実施例７： 高剪断混合及び超音波処理による薬剤不含のナノ構造化された分散液の調製
相Ｉの調製
７０ｇの量の相Ｉを、実施例６で上記したようにして調製した。

【0136】

相ＩＩの調製
７０ｇの量の相ＩＩもまた、実施例６で上記したようにして調製した。

【0137】

相ＩＩＩの調製
合計６００ｇの相ＩＩＩは、以下の通りに形成した：５４０ｇの相ＩＩを、冷却器に接続されたジャケット付き容器中で４０℃〜４５℃で維持した。４０℃〜４５℃に維持した６０ｇの量の相Ｉを、相ＩＩ中に注ぎ、そして７５００ＲＰＭに合わせたＳｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｌ５ＭＡ高剪断ミキサーを使用して１５分間にわたり混合した。得られた分散液を、ｓｏｎｏｔｒｏｄｅ Ｓ３マイクロチップを使用して５０％の振幅に合わせたＨｅｉｌｓｃｈｅｒ ＵＰ２００Ｓ超音波プロセッサで超音波処理にかけた。該分散液を３回超音波処理し、そして超音波処理の効果を確認するために毎回アリコートを採取した。

【0138】

上記分散液の分析は、粒度分布の中央値（ｄ５０）が１６７ｎｍであり、モードが１４０ｎｍであり、かつ分散されたナノ構造の７５％が３１６ｎｍ未満であることを明らかにした。さらに、該ナノ構造化された分散液は、室温で経時的に安定であり、そして顕微鏡で調査した場合に秩序的な微細構造を示した。

【0139】

実施例８： ナノ構造化された分散液中でのプロピオン酸フルチカゾンの溶解度
ＰＥＧ−４００を２０％で、ＰＰＧを１０％で、セチルアルコールを１０％で、ＭＣＴを１％で、ステアリン酸ＰＥＧを７％で、ポロキサマー４０７を２．２２％で、チロキサポールを１％で、ポリソルベート８０を１％で、ヒマシ油を３８％で、そしてプロピオン酸フルチカゾンを１％〜２％で含有する相Ｉを調製した。

【0140】

相ＩＩの組成は、一塩基性リン酸ナトリウム（０．０１７％）、二塩基性リン酸ナトリウム（０．０５２％）、ヒアルロン酸ナトリウム（０．１５％）及びｄＨ_２Ｏ（９９．７８％）であった。

【0141】

相Ｉと相ＩＩとを重量比１：９で混合した。

【0142】

この製剤で達成可能なプロピオン酸フルチカゾンの濃度は、０．１％〜０．２％であった。特に、プロピオン酸フルチカゾンをそれぞれの賦形剤中に別々に溶かして、それぞれの賦形剤により与えられる溶解を足しても、予想されるプロピオン酸フルチカゾンの最高濃度はわずか０．０５％である。けれども、該製剤は、驚くべきことに、プロピオン酸フルチカゾンを０．１重量％〜０．２重量％で溶解した。

【0143】

また、セチルアルコールとＭＣＴとが組み合わされて存在することで、ＭＣＴ中のプロピオン酸フルチカゾンの溶解度が僅か（０．１５０ｍｇ／ｍｌ）であるとしても、高められた可溶化が提供されることも確かめられた。セチルアルコール中のプロピオン酸フルチカゾンの溶解度は、０．３ｍｇ／ｍｌであった。このように、最終分散液は、１ｍｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌ（０．１％〜０．２％）のプロピオン酸フルチカゾン濃度を有する。

【0144】

理論により縛れるものではないが、おそらく、上記薬剤の高められた溶解度は、複数の相が協同的に自己組織化することで、インターカレートされた秩序的な相が形成することによるものと考えられる。

【0145】

実施例９： 相Ｉの疎水性の効果
この実施例において、より高濃度の疎水性賦形剤を得るためにコレステロールを添加した。相Ｉの組成は、ＰＥＧ−４００（２０％）、ＰＰＧ（１０％）、セチルアルコール（１０％）、コレステロール（２％）、ＭＣＴ（１０％）、ステアリン酸ＰＥＧ（５％）、ポロキサマー４０７（２．２２％）、チロキサポール（１％）、ポリソルベート８０（１％）、ヒマシ油（３６．９％）、及びプロピオン酸フルチカゾン（１％〜５％）であった。

【0146】

相ＩＩの組成は、一塩基性リン酸ナトリウム（０．０１７％）、二塩基性リン酸ナトリウム（０．０５２％）、ヒアルロン酸ナトリウム（０．１５％）及びｄＨ_２Ｏ（９９．７８％）であった。

【0147】

相Ｉと相ＩＩとを重量比１：９で混合した。

【0148】

この製剤で達成可能なプロピオン酸フルチカゾンの最終濃度は、０．１％〜０．５％であった。それぞれの別個の賦形剤中に溶解される量を加えることによって、可溶化されると予測されるプロピオン酸フルチカゾンの最大量は、０．０６％である。

【0149】

この実施例９においてもまた、相Ｉのそれぞれの個々の成分によって理論的に可能な薬剤の可溶化よりも高い濃度の疎水性薬剤が上記ナノ分散液で達成された。

【0150】

実施例１０： ナノ分散液からのｉｎ ｖｉｔｒｏ薬剤放出
ナノ分散液は、デキサメタゾンをプロピオン酸フルチカゾンの代わりに導入したことを除き、実施例８で上記の相Ｉ及び相ＩＩを使用して製造した。相Ｉと相ＩＩとを、両方の相ともに４０℃〜４５℃の温度でＳｉｌｖｅｒｓｏｎ高剪断ホモジナイザーを用いて混合し、引き続きマイクロ流動化装置を用いて高圧均質化を行った。その混合物を、室温で１回〜５回にわたり該流動化装置に通した。次いで、得られた混合物を、−１０℃でＳｉｌｖｅｒｓｏｎ高剪断ホモジナイザーを用いて一晩（１８時間〜２２時間）混合した。混合後に、その分散液を２℃〜５℃の間で２２時間〜２４時間にわたり貯蔵した。

【0151】

マイクロ分散液を、同じ成分から、オーバーヘッド型Ｓｃｉｌｏｇｉｘ撹拌パドルミキサーを用いて１８００ＲＰＭで２時間〜３時間にわたり相Ｉ及び相ＩＩを混合することによって形成させた。それぞれの相の温度は、４０℃〜４５℃であった。そのマイクロ分散液は、２℃〜５℃で２２時間〜２４時間にわたりインキュベートしなかった。

【0152】

粒度測定は、ナノ分散液のＤ５０が１００ｎｍ〜２５０ｎｍの間であり、その一方で、マイクロ分散液のＤ５０が６０μｍ〜９０μｍの間であることを明らかにした。

【0153】

ナノ分散液及びマイクロ分散液からのデキサメタゾンのｉｎ−ｖｉｔｒｏでの累積放出速度を、リン酸緩衝生理食塩水（３７℃でｐＨ７．４）中で求めた。それらの結果は、マイクロ分散液中に最初に加えられたデキサメタゾンの１００％が４０時間後に放出されることを示した。それに対して、ナノ分散液中に最初に加えられたデキサメタゾンの約５５％だけが同じ時間にわたり放出されるにすぎなかった。デキサメタゾンの初期量の５０％の累積放出は、ナノ分散液の場合の２４時間に比べてマイクロ分散液の場合には１０時間で測定された。

【0154】

マイクロ分散液のより大きな粒子は、薬剤放出のためにより大きい拡散経路長を有する。マイクロ分散液からの放出は、ナノ分散液からよりも遅いであろうと予測されるものであった。したがって、この結果は予想外であった。

【0155】

ここでも、理論により縛られるものではないが、ナノ分散液のインターカレートされた秩序的なナノ構造は、放出されるべき薬剤分子のための曲がりくねった拡散経路を作り出すと考えられる。

【0156】

実施例１１： 角膜透過性によって測定されるバイオアベイラビリティ
改善されたバイオアベイラビリティに導くパラメーターを突きとめるために、プロピオン酸フルチカゾン（０．１％）の４種の異なる製剤を調製した。製剤Ｉは、ＭＣＴ、セチルアルコール及びヒアルロン酸ナトリウムを除いて実施例８で先に列挙された賦形剤の全てを含んでいた。製剤ＩＩは、製剤Ｉと同じであるが、ヒアルロン酸ナトリウムも含んでいた。製剤ＩＩＩは、実施例８に記載されるものと同一であった。製剤ＩＶは、実施例９に記載されるものと同一であった。

【0157】

４種の製剤は、実施例８に記載されるのと同じ混合プロトコルに従って調製した。それら４種の製剤を、実施例２で先に記載したように角膜透過性について試験した。

【0158】

それらの結果は、製剤Ｉ中のプロピオン酸フルチカゾンの２．３９％だけが、該製剤を角膜に適用した後に７時間〜２２時間にわたり角膜を通して透過するにすぎないことを示した。同様に、製剤ＩＩ中のプロピオン酸フルチカゾンの２．３％だけが、７時間〜２２時間で角膜を通じて拡散したに過ぎなかった。

【0159】

それに対して、製剤ＩＩＩ及び製剤ＩＶからは１７％及び２０％のプロピオン酸フルチカゾンが、それぞれ７時間〜２２時間で角膜を通じて拡散した。明らかに、これらの２種の製剤は、製剤Ｉ及びＩＩ、つまり両方ともＭＣＴとセチルアルコールとを欠いている製剤と比較してより高いバイオアベイラビリティを示した。

【0160】

他の実施形態
本明細書に開示される特徴の全てを任意の組合せで組み合わせてよい。本明細書に開示されるそれぞれの特徴は、同じ目的、同等の目的又は類似の目的にかなう代替的な特徴によって置き換えることができる。このように、表現上特に記載が無い限り、開示されるそれぞれの特徴は、一連の包括的な同等の特徴又は類似の特徴の一例に過ぎない。

【0161】

上記詳細な説明から、当業者は、本開示の必須の特性を容易に突きとめることができ、そしてその趣旨及び範囲から逸脱しなければ、それを様々な使用及び状況に適合させるために、本開示の様々な変化及び変更を行うことが可能である。このように、他の実施形態も特許請求の範囲内である。

【国際調査報告】