特表 2017-516856 ＦＸＢ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するためのコラン誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2017-516856(P2017-516856A)

(43)【公表日】2017年6月22日

(54)【発明の名称】ＦＸＢ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するためのコラン誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07J 9/00 20060101AFI20170526BHJP

   C07J 11/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61K 31/575 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 5/50 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 5/38 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20170526BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20170526BHJP

【ＦＩ】

   C07J9/00CSP

   C07J11/00

   A61K31/575

   A61P1/00

   A61P1/16

   A61P9/00

   A61P9/10 101

   A61P3/00

   A61P31/00

   A61P35/00

   A61P13/12

   A61P29/00

   A61P25/00

   A61P43/00 111

   A61P1/04

   A61P3/06

   A61P9/10

   A61P5/50

   A61P3/10

   A61P5/38

   A61P3/04

   A61P31/18

   A61P31/20

   A61P31/14

   A61P29/00 101

   A61P19/02

   A61P21/00

   A61P17/02

   A61P37/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】61

(21)【出願番号】特願2017-514960(P2017-514960)

(86)(22)【出願日】2015年5月28日

(85)【翻訳文提出日】2017年1月13日

(86)【国際出願番号】EP2015061802

(87)【国際公開番号】WO2015181275

(87)【国際公開日】20151203

(31)【優先権主張番号】FI2014A000130

(32)【優先日】2014年5月29日

(33)【優先権主張国】IT

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US

(71)【出願人】

【識別番号】516357214

【氏名又は名称】バール ファーマシューティカルズ ソチエタ レスポンサビリタ リミタータ

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100077517

【弁理士】

【氏名又は名称】石田 敬

(74)【代理人】

【識別番号】100087871

【弁理士】

【氏名又は名称】福本 積

(74)【代理人】

【識別番号】100087413

【弁理士】

【氏名又は名称】古賀 哲次

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100197169

【弁理士】

【氏名又は名称】柴田 潤二

(72)【発明者】

【氏名】アンジェラ ザンペッラ

(72)【発明者】

【氏名】ステファノ フィオルッチ

【テーマコード（参考）】

4C086

4C091

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086AA04

4C086DA11

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA05

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZA36

4C086ZA42

4C086ZA45

4C086ZA66

4C086ZA70

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZA89

4C086ZA94

4C086ZA96

4C086ZB05

4C086ZB11

4C086ZB15

4C086ZB26

4C086ZB32

4C086ZB33

4C086ZC08

4C086ZC21

4C086ZC33

4C086ZC35

4C086ZC41

4C086ZC55

4C091AA01

4C091BB01

4C091CC01

4C091DD01

4C091EE01

4C091EE04

4C091FF01

4C091FF04

4C091FF06

4C091GG01

4C091GG02

4C091GG13

4C091HH01

4C091JJ03

4C091KK01

4C091LL01

4C091MM03

4C091NN01

4C091PA02

4C091PA05

4C091PB04

4C091RR01

4C091RR08

(57)【要約】

本発明は、式（Ｉ）のコラン骨格を有する化合物に関するものであり、前記化合物は、ＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するためのものである。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物：

【化1】

[式中、
Ｒ_１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ_２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ_３又はＨであり；
Ｒ_３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、かつ、Ｒ_３がＯＨである場合であって：
ｎが０又は１である場合は、Ｒ_１がα−ＯＨの時にRがＣＨ_２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ_１がβ−ＯＨ若しくはＨの時にＲがＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
ｎが３である場合は、Ｒ_１及びＲが上記に定義されるものであり；
Ｒ_２がＨである場合であって：
Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ_３がβ−ＯＨである場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり、或いは、ｎが３である時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ_１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ_３がα−ＯＨの場合は、ＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
Ｒ_１及びＲ_３がＨである場合は、ｎが０の時にRがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである］、
無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物又はアミノ酸結合物を含む化合物であり；
ここで、以下の化合物：

【表1】

を除く、化合物。

【請求項2】

式中、
Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、Ｒ_３がＯＨであり、及び、
ｎが０又は１の場合は、Ｒ_１がα−ＯＨの時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ_１がβ−ＯＨ又はＨの時にＲがＣＨ_２ＯＨ、ＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨであり；
ｎが３の場合は、Ｒ_１、Ｒ_３及びＲが上記で定義されるものである、
請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

式中、
ｎが０又は１であり、ＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＮであり、かつ、Ｒ_１がα−ＯＨである、或いは、ｎが０又は１であり、ＲがＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり、かつ、Ｒ_１がβ−ＯＨ又はＨである、
請求項２に記載の化合物。

【請求項4】

式中、
Ｒ_２がＥｔであり、ｎが３であり、Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ_３がα−ＯＨである、
請求項２に記載の化合物。

【請求項5】

式中、
Ｒ_２がＨであり、及び、
Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ_３がβ−ＯＨである場合に、ｎが０の時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである、或いは、ｎが３の時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＯＯＨである；
Ｒ_１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ_３がα−ＯＨである場合に、ＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである；
Ｒ_１及びＲ_３がＨである場合に、ｎが０の時にＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨである、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである、
請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

医薬として使用するための化合物であって、式（Ｉ）の前記化合物：

【化2】

[式中、
Ｒ_１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ_２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ_３又はＨであり；
Ｒ_３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、かつ、Ｒ_３がＯＨである場合であって：
ｎが０又は１である場合は、Ｒ_１がα−ＯＨの時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ_１がβ−ＯＨ若しくはＨの時にＲがＣＨ_２ＯＨ、ＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨであり；
ｎが３である場合は、Ｒ_１及びＲは上記に定義されるものであり；
Ｒ_２がＨである場合であって：
Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ_３がβ−ＯＨの場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり、或いは、ｎが３である時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ_１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ_３がα−ＯＨの場合は、ＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
Ｒ_１及びＲ_３がＨである場合は、ｎが０の時にRがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである］、
無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物又はアミノ酸結合物を含む化合物。

【請求項7】

請求項６に記載の医薬として使用するための化合物であり、請求項２〜５のいずれか１項に定義される式（Ｉ）の前記化合物。

【請求項8】

請求項６に記載の医薬として使用するための化合物であり、以下：

【化3】

からなる群から選択される、式（Ｉ）の前記化合物。

【請求項9】

消化器疾患、肝疾患、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、代謝疾患、代謝障害、感染症、癌、腎障害、炎症性疾患、及び神経障害の予防及び／又は治療において、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーターとして使用するための化合物であり、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の前記化合物。

【請求項10】

式（Ｉ）の化合物と、少なくとも別の医薬成分とを含む医薬組成物であって、前記化合物が請求項６〜８のいずれか１項に定義される式（Ｉ）の前記化合物である、医薬組成物。

【請求項11】

式中、Ｒ_２が＝ＣＨ−ＣＨ_３又はＥｔであり、かつ、Ｒ_３がHではない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、
式（ＶＩＩＩ）の化合物をアルドール縮合に供し、式（ＶＩＩＩ）の化合物：

【化4】

［式中、ｎ＝０、１であり、Ｐはアルコール保護基である］を、アルキルリチウム、例えばｎＢｕＬｉと接触させ、続いてアセトアルデヒドと、好ましくはＢＦ_３（ＯＥｔ）_２も存在下にて、接触させて、式（ＩＸ）の化合物：

【化5】

［式中、ｎ及びＰが上述のものである］を得る、方法。

【請求項12】

請求項１１に記載の方法であって、ここで、式（ＩＸ）の化合物を触媒水素化に供し、式（Ｘ）の化合物：

【化6】

を得る、方法。

【請求項13】

請求項１２に記載の方法であり、式（Ｘ）の化合物をＮａＢＨ_４又はＣａ（ＢＨ_４）_２と接触させることによって、式（Ｘ）の化合物がＣ７においてカルボニルの還元に供して、Ｃ７においてα−ＯＨ及びβ−ＯＨの混合物を得；続いて、側鎖のメチルエステル官能基を−ＣＨ_２ＯＨへ完全に還元するＬｉＢＨ_４を用いた処理に供する、方法。

【請求項14】

請求項１〜４のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、ここで、Ｒ_２がα−Ｅｔであり、前記方法が、式（ＸＩＶ）の化合物：

【化7】

［式中、ｎが０又は１であり、Ｒ_８がβ−ＯＨ、ＯＡｃ又はＨである］をＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨと接触させて、Ｃ６立体中心のエピマー化を得て、式（ＸＩ）の化合物：

【化8】

［式中、Ｒ_８がＯＡｃである場合、ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨで処理すると、同時にＣ３アセトキシ基の加水分解が生じる］を得ることを含む、方法。

【請求項15】

請求項１４に記載の方法であり、ここで、Ｃ７におけるカルボニルの還元が、式（ＸＩ）の化合物又は側鎖にＣＯＯＨを有する対応する化合物をＬｉＢＨ_４と接触させて、Ｃ７においてほぼ独占的にα−ＯＨを得ることにより得られ；ここで、ＬｉＢＨ_４を用いた処理が、同時に、側鎖上のメチルエステル官能基を、存在する場合は、−ＣＨ_２ＯＨに同時に還元し、ＯＡｃを、Ｃ３に存在する場合には、脱保護することである、方法。

【請求項16】

ｎ＝３である、請求項１〜２及び４〜５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であり、前記方法が、対応する式（ＩＶ）の化合物：

【化9】

［式中、ｍ＝ｎ−２＝１であり、Ｒ_４及びＲ_５が、Ｈ以外であれば、ＯＰ（Ｐはアルコール保護基である）であり、かつ、Ｒ_２がＨ又はＥｔである］を、ワンポッドのスワーン酸化／ウィッティヒＣ２ホモログ化に供し、式（Ｖ）：

【化10】

［式中、ｍ＝１であり、Ｒ_２が請求項１に定義されるものであり、Ｒ_４及びＲ_５が、Ｈ以外であれば、ＯＰ（Ｐはアルコール保護官能基である）である］の保護されたメチルエステルを得ることを含む、方法。

【請求項17】

ｎ＝０である、請求項１〜３及び５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であり、前記方法が、式（ＸＩＩ）の化合物：

【化11】

をＨＣＯＯＨ及びＨＣｌＯ_４と接触させ、続いて得られた化合物をＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物及びＮａＮＯ２と接触させて、式（ＶＩＩ）の化合物：

【化12】

を得ることを含む、方法。

【請求項18】

Ｒ_１がβ−ＯＨである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であり、前記方法が式（ＸＩＩＩ）を有する化合物：

【化13】

［式中、Ｒ_２がＥｔであり、ｎが０又は１である］から出発すること、及び、塩基の存在下にてトシルクロリドで処理した後にＣＨ_３ＣＯＯＫで処理することによりＣ３ヒドロキシル立体配置を反転させることを含む、方法。

【請求項19】

Ｒ_１がＨである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であり、前記方法が、式（ＸＩＩＩ）の化合物：

【化14】

［式中、ｎが０又は１であり、Ｒ_２がＥｔ又はＨである］を、Ｃ−３ヒドロキシル基でのトシル化及び脱離に続き、触媒水素化による二重結合還元に供することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、コラン骨格を有する化合物に関するものであり、前記化合物は、ＦＸＢ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するためのものである。

【背景技術】

【0002】

技術水準
胆汁酸（ＢＡｓ）は、２種類の専用細胞受容体である、細胞内核受容体及び細胞表面受容体と相互作用するシグナル伝達分子である。核内受容体には、内因性胆汁酸センサーとして同定されたファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）が含まれる（Ｍａｋｉｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９９，２８４，１３６２；Ｐａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９９，２８４，１３６５）。

【0003】

腸肝組織（肝臓及び腸）において高度に発現する、ＦＸＲは胆汁酸ホメオスタシス、脂質及びグルコースホメオスタシスも含む代謝経路を制御する（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００６，１０３，１００６）。さらに、ＦＸＲアゴニストは、抗炎症性及び抗線維性及び抗癌効果をもたらす（Ｒｅｎｇａ ｅｔ ａｌ．ＦＡＳＥＢ Ｊ．２０１２，２６，３０２１−３０３１）。

【0004】

胆汁酸細胞表面受容体（ＧＰＢＡＲ１、Ｍ−ＢＡＲ１、ＧＰ−ＢＡＲ１、ＴＧＲ５）は、Ｇタンパク質共役型受容体のロドプシン様スーパーファミリーに属する（Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２００２，５２０，９７；Ｋａｗａｍａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３，２７８，９４３５）。

【0005】

リガンドがＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に結合すると、細胞内ｃＡＭＰレベルが上昇し、結果としてシグナル伝達カスケードが活性化される。ＧＰＢＡＲ１は、肝臓及び腸だけでなく、筋肉、脳、脂肪組織、マクロファージ及び内皮細胞においても高度に発現する。筋肉及び褐色脂肪組織において、ＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１は、腸内分泌Ｌ細胞のエネルギー消費と酸素消費を増加させ（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２００６，４３９，４８４）、ＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１の活性化は、グルコース血中レベル、胃腸運動及び食欲を調節する膵臓インスリン放出を改善するインクレチンである、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１の分泌を刺激する（Ｔｈｏｍａｓら、Ｃｅｌｌ。Ｍｅｔａｂ。２００９、１０、１６７）。

【0006】

【化1】

【0007】

化学的にＢＡは、切断されたコレステロール側鎖誘導体である。それらの分子レパートリーは、一次胆汁酸、コール酸（ＣＡ）及びケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）の産生を伴い、肝臓で最初に生成される。腸内での微生物変換は、二次胆汁酸、デオキシコール酸（ＤＣＡ）及びリトコール酸（ＬＣＡ）を生成する。人体では、胆汁酸はグリシン及びタウリンに結合する。２つのＢＡ受容体に対する活性は、最も強力な内因性ＦＸＲ活性化因子であるＣＤＣＡ、及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１の最も強力な天然アゴニストであるＬＣＡ及びＴＬＣＡに構造依存性である。

【0008】

胆汁うっ滞性そう痒症は、ＰＢＣにおけるＦＸＲアゴニストの使用に伴う重篤な副作用として注目されており、最近の研究は、この副作用の発症に関与する分子標的としてＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１を示した（Ａｌｅｍｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１３，１２３，１５１３−１５３０）。

【0009】

国際公開第２０１３／１９２０９７号は、抗胆汁うっ滞性作用を有する強力かつ選択的なＦＸＲアゴニストである６−α−エチル−ケノデオキシコール酸（６−ＥＣＤＣＡ）を記載している。

【0010】

国際公開第２００８／００２５７３号には、ＦＸＲが介在する疾患又は状態の予防又は治療のためのＦＸＲリガンドとしての胆汁酸誘導体を記載している。

【0011】

国際公開第２０１０／０１４８３６及びＳａｔｏ Ｈ．（Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２００８，５１，４８４９）は、ＴＧＲ５モジュレーターを記載している。

【0012】

Ｄ’Ａｍｏｒｅ Ｃ．ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７，９３７）は、ＧＰ−ＢＡＲ１／ＦＸＲデュアルアゴニストの設計、合成、及び生物学的評価を記載している。Ｄ’Ａｍｏｒｅ Ｃ．ｅｔ ａｌ．は、合成中間体として、化合物ＢＡＢ５０２及びＢＡＢ５０４を記載している。

【0013】

Ｉｇｕｃｈｉ Ｙ．ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．２０１０，５１，１４３２）は、胆汁アルコールがＴＧＲ５のリガンドとして機能することを記載している。

【0014】

化合物ＢＡＢ１０７は、Ｋｉｈｉｒａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．による合成中間体として開示されている（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９９２，５７（４），１９３−１９８）。

【0015】

Ｓｗａａｎ Ｐ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｃｏｍｐ．−Ａｉｄ．Ｍｏｌ．Ｄｅｓ．１９９７，１１，５８１−５８８）は、腸内胆汁酸担体の分子モデリングにおいて、胆汁酸結合体のセット中のウルソコレート（ｕｒｓｏｃｈｏｌａｔｅ）（その文献では化合物１５、本明細書ではＢＡＲｎ４０６）を試験した。ＢＡＲｎ４０６は、ＣａＣｏ−２細胞においてタウロコール酸輸送を阻害する検出できない能力を有する結果となった。

【0016】

Ｂｕｒｎｓ ｅｔ ａｌ．（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ ２０１１，７６（３），２９１−３００）は、ウミシイタケ（Ｐｅｔｒｏｍｙｚｏｎ ｍａｒｉｎｕｓ）において、非天然の硫酸化５−胆汁酸誘導体の合成及び嗅覚活動を記載している。そこに開示された化合物９ｅ（本明細書では化合物ＢＡＲ４０７）は嗅覚応答を誘発しなかった。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

本発明の目的は、コラン化学骨格を含有し、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１を調節する新規な化合物を同定することである。

【課題を解決するための手段】

【0018】

発明の概要
本発明の主題は、式（Ｉ）の化合物であり、

【0019】

【化2】

［式中、
Ｒ_１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ_２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ_３又はＨであり；
Ｒ_３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、かつ、Ｒ_３がＯＨである場合であって：
ｎが０又は１である場合は、Ｒ_１がα−ＯＨの時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ_１がβ−ＯＨ若しくはＨの時にＲがＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
ｎが３である場合は、Ｒ_１及びＲが上記に定義されるものであり；
Ｒ_２がＨである場合であって：
Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ_３がβ−ＯＨである場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり、或いは、ｎが３である時にＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ_１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ_３がα−ＯＨの場合は、ＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
Ｒ_１及びＲ_３がＨである場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである］
無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物及びアミノ酸結合物を含んでおり；
ここで、以下の化合物を除く。

【0020】

【表1】

【0021】

上記のような化合物は、ＦＸＲ及び／またはＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーターであることが判明しており、従って、ＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療に有用である。

【0022】

従って、一態様では、本発明は、医薬として使用するための化合物に関するものであり、式（Ｉ）の前記化合物
［式中、
Ｒ_１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ_２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ_３又はＨであり；
Ｒ_３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、かつ、Ｒ_３がＯＨである場合に：
ｎが０又は１である場合、Ｒ_１がα−ＯＨの時はRがＣＨ_２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ_１がβ−ＯＨ若しくはＨの時はＲがＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
ｎが３である場合、Ｒ_１及びＲは上記に定義されるものであり；
Ｒ_２がＨである場合に：
Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ_３がβ−ＯＨの場合、ｎが０の時はＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり、或いは、ｎが３である時はＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ_１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ_３がα−ＯＨの場合、ＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
Ｒ_１及びＲ_３がＨである場合、ｎが０の時はＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時はＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである］
であり、無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物及びアミノ酸結合物を含んでいる。

【0023】

更なる態様では、本発明は、胃腸障害、肝臓疾患、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、代謝疾患、感染症、癌、腎障害、炎症性疾患、及び神経障害（例えば脳卒中）の予防及び／又は治療に使用するための、化合物ＢＡＲ１０７、ＢＡＲｎ４０６、ＢＡＲ５０４、ＢＡＲ４０７及びＢＡＲ５０２を含む、上述の式（Ｉ）の化合物に関するものであり、式（Ｉ）の前記化合物は、上記のものである。

【0024】

本発明はまた、上記の化合物を調製する方法に関する。

【発明を実施するための形態】

【0025】

発明の詳細な説明
本発明によれば、Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、かつ、Ｒ_３がＯＨである化合物が好ましく；より好ましくは、ｎが０又は１であり、ＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＮであり、かつＲ_１がα−ＯＨであり、或いは、ｎが０又は１であり、ＲがＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり、かつ、Ｒ_１がβ−ＯＨ又はＨである化合物である。

【0026】

Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、かつ、Ｒ_３がＯＨである場合、好ましくは、以下、

【化3】

からなる群から選択される化合物である。

【0027】

本発明によれば、Ｒ_２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、Ｒ_３がＯＨであり、ｎが３であり、Ｒ_１及びＲが上記で定義したものである化合物も好ましく；より好ましくは、Ｒ_２がＥｔであり、Ｒ_３がα−ＯＨであり、ｎが３であり、かつ、Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒが上記で定義したものである。

【0028】

好ましくは、

【化4】

からなる群から選択される化合物である。

【0029】

本発明によれば、ここで、Ｒ_２がＨであり、かつ、
Ｒ_１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ_３がβ−ＯＨの場合、ｎが０の時はＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり、或いは、ｎが３の時はＲがＣＨ_２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ_１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ_３がα−ＯＨの場合、ＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈであり；
Ｒ_１及びＲ_３がＨである場合、ｎが０の時はＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時はＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである、
これらの化合物がこのましく、
これらの中でも、以下、

【0030】

【化5】

からなる群から選択される化合物が好ましい。

【0031】

特に好ましくは、以下：

【化6】

からなる群から選択される本発明の化合物である。

【0032】

化合物ＢＡＲ１０７、ＢＡＲｎ４０６、ＢＡＲ５０４、ＢＡＲ４０７及びＢＡＲ５０２を含む本発明の化合物は、高度に選択的なＦＸＲ又はＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーター又はデュアルＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーターであることが判明しており、従って、特に、消化器疾患、肝疾患、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、代謝疾患、代謝障害、感染症、癌、腎障害、炎症性疾患、及び脳卒中などの神経障害の予防及び／又は治療において有用である。

【0033】

特定の実施形態では、肝疾患は、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、脳腱黄色腫症（ＣＴＸ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、薬物誘発性胆汁うっ滞、妊娠性肝内胆汁うっ滞、非経口栄養関連胆汁うっ滞、細菌異常増殖及び敗血症関連胆汁うっ滞、自己免疫性肝炎、慢性ウイルス性肝炎、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝臓移植関連移植片対宿主病、生体ドナー移植、肝再生、先天性肝線維症、肉芽腫性肝疾患、肝臓内又は肝臓外悪性腫瘍、ウィルソン病、ヘモクロマトーシス及びα１−抗トリプシン欠乏症からなる群から選択される。

【0034】

特定の実施形態では、消化器疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病、潰瘍性大腸炎及び未知の大腸炎を含む）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、細菌過増殖、急性及び慢性膵炎、吸収障害、放射線照射後大腸炎（ｐｏｓｔ−ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｃｏｌｉｔｉｓ）、及び顕微鏡的大腸炎からなる群から選択される。

【0035】

特定の実施形態において、腎疾患は、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、慢性糸球体腎炎及び慢性移植糸球体症を含む慢性糸球体疾患、慢性尿細管間質性疾患及び腎臓血管障害からなる群から選択される。

【0036】

特定の実施形態では、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症、異脂肪血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、動脈性高血圧としても知られる高血圧、心筋炎及び心内膜炎を含む炎症性心疾患、虚血性心疾患安定性狭心症（ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｔａｂｌｅ ａｎｇｉｎａ）、不安定狭心症、心筋梗塞、肺高血圧症を含む肺心疾患、末梢血管疾患（ＰＶＤ）末梢動脈閉塞症としても知られている末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、及び末梢性閉塞動脈症（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｏｂｌｉｔｅｒａｔｉｖｅ ａｒｔｅｒｉｏｐａｔｈｙ）からなる群から選択される。

【0037】

特定の実施形態では、代謝性疾患は、インスリン抵抗性、メタボリックシンドローム、I型及びII型糖尿病、低血糖症、副腎皮質機能不全を含む副腎皮質障害からなる群から選択される。

【0038】

特定の実施形態では、代謝障害は、肥満及び肥満外科手術に関連する状態からなる群から選択される。

【0039】

特定の実施形態において、癌は、肝臓癌、胆管癌、膵臓癌、胃癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌及び化学療法抵抗性に関連する状態の群において選択される。

【0040】

特定の実施形態において、感染症は、ヒト免疫不全関連疾患（ＡＩＤＳ）及び関連障害、ウイルスＢ及びウイルスＣ感染の群において選択される。

【0041】

特定の実施形態において、炎症性障害は、関節リウマチ、線維筋痛、ショーグレン症候群、強皮症、ベーチェット症候群、血管炎及び全身性エリテマトーデスの群において選択される。

【0042】

ＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に対する本発明の特定の化合物の活性に関するデータを以下の表に記載する。この表において、ＦＸＲ及びＧＰＢＡＲ１に対する本発明の化合物の活性を参照化合物の活性、すなわちＦＸＲに対するＣＤＣＡ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に対するＴＬＣＡを比較した。各化合物を１０μＭの濃度で試験し、ＦＸＲに対するＣＤＣＡ及びＣＲＥ（すなわちＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１）に対するＴＬＣＡのトランスアクチベーション活性を１００％とみなした。

【0043】

【表2】

【0044】

一態様では、本発明は、化合物がＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１デュアルアゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。この群の選択例はＢＡＲ５０２である。驚くべきことに、ＢＡＲ５０２は、ＡＮＩＴ又はエストロゲンの投与によって胆汁うっ滞したた動物に投与された場合に掻痒を誘発しない。コレステロール症候群では、胆汁酸の体内蓄積が掻痒を引き起こすと考えられている。最近、ＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１は、ＤＣＡ及びＬＣＡの皮内投与によって引き起こされる掻痒を媒介することが示された（Ａｌｅｍｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１３，１２３，１５１３−１５３０）。臨床試験では、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）を罹患した患者にオベチコール酸を投与すると、約８０％の患者で重度の掻痒が生じた。ＢＡＲ５０２の具体的かつ驚くべき利点の１つは、この薬剤が、ｄ−ナフチル−イソチオシアネート（ＡＮＩＴ）又は１７ｏｃ−エチニルエストラジオール（胆汁うっ滞の２つの有効なモデル）の投与によって胆汁うっ滞した動物に投与された場合に、掻痒を誘導しない点である。これらの実験設定において、ＢＡＲ５０２投与は生存を増加させ、血清アルカリホスファターゼレベルを減弱させ、掻痒症を誘導することなく、ＯＳＴα、ＢＳＥＰ、ＳＨＰ及びＭＤＲ１を含むカノニカルＦＸＲ標的遺伝子の肝臓発現を強力に調節する。１７ｏｃ−エチニルエストラジオールモデルでは、ＢＡＲ５０２は胆汁うっ滞を軽減し、掻痒を誘発することなく、胆汁酸プールを再形成し、非閉塞性胆汁うっ滞のモデルでは、ＢＡＲ５０２が掻痒を引き起こすことなく肝臓の損傷を減弱させることが示される。

【0045】

１つの局面において、本発明は、化合物が単独で投与される場合にＧＰＢＡＲ１に対して影響を与えないが、ＴＬＣＡ（１０μＭ）に起因するＧＰＢＡＲ１活性化の阻害に有効であり、ＧＰＢＡＲ１アンタゴニストとして振る舞う、高選択性ＦＸＲアゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。一態様では、本発明は、化合物がＦＸＲに影響を与えない高選択性ＧＰＢＡＲ１アゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。一態様では、本発明は、化合物がＦＸＲに影響を与えない高選択性ＧＰＢＡＲ１アンタゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。

【0046】

本発明はまた、上記のような式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。

【0047】

一態様では、本発明は、ＲがＣＨ_２ＯＨである上述の式（Ｉ）の化合物を製造する方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）に関するものであって、前記方法が、ＲがＣＯＯＭｅである式（Ｉ）の対応する化合物をＬｉＢＨ_４と接触させることを含む方法に関する。

【0048】

一態様では、本発明は、ＲがＣＯＯＨである上述の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法は、ＲがＣＯＯＭｅである式（Ｉ）の対応する化合物をアルカリ加水分解すること；好ましくはＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ中の５％ＮａＯＨで処理すること、を含んでいる。

【0049】

一態様では、本発明は、ＲがＣＨ_２ＯＳＯ_３Ｈである上記の式（Ｉ）の化合物及びその塩を調製する方法であって、前記方法が、式（ＩＩ）の対応する化合物：

【0050】

【化7】

［式中ｎ及びＲ_２が上述のものであり、かつ、Ｒ_４及びＲ_５がＨと異なる場合、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）］と、トリアルキルアミン−三酸化硫黄（ｔｒｉａｌｋｙｌａｍｉｎｅ−ｓｕｌｆｕｒ ｔｒｉｏｘｉｄｅ）とを接触させ、式（ＩＩＩ）の化合物：

【化8】

［式中、ｎ、Ｒ_２、Ｒ_４及びＲ_５が上述のものである］を得ることを含む、方法である。

【0051】

次いで、上記の式（ＩＩＩ）の化合物から、対応する式（Ｉ）の化合物は、Ｃ３及びＣ７におけるヒドロキシル官能基の脱保護によって得ることができる。

【0052】

一態様では、本発明は、ｎ＝３である上記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、式（ＩＶ）の対応する化合物：

【化9】

［式中、ｍ＝ｎ−２＝１であり、Ｒ_４及びＲ_５が、Ｈ以外の場合、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）であり、かつ、Ｒ_２が上述のものである（好ましくは、Ｒ_２はＨ又はα−Ｅｔ）］を、ワンポットのスワーン酸化／ウィッティヒＣ２ホモログ化（Ｓｗｅｒｎ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ／Ｗｉｔｔｉｇ Ｃ２ ｈｏｍｏｌｏｇａｔｉｏｎ）に供し、式（Ｖ）：

【化10】

［式中、ｍ＝１であり、Ｒ_２は上述のものであり（好ましくはＲ_２はＨ又はα−Ｅｔ）、Ｒ_４及びＲ_５が、Ｈ以外であれば、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）である］の保護されたメチルエステルを得ることを含む、方法である。

【0053】

スワーン酸化は、塩化オキサリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びトリエチルアミンのような有機塩基を用いて、第一級又は第二級アルコールをアルデヒド又はケトンに酸化する化学反応である。

【0054】

ウィッティヒ反応、又はウィッティヒオレフィン化は、アルデヒド又はケトンと、トリフェニルホスホニウムイリド（しばしばウィッティヒ試薬と呼ばれる）との化学反応であり、アルケン及びトリフェニルホスフィンオキシドを生成する。トリフェニルホスホニウムイリドは、好ましくはメチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテートである。

【0055】

好ましくは、上記の方法は、さらに、上記の式（Ｖ）の化合物を触媒水素化に供することを含むものであり、従って、式（ＶＩ）の化合物：

【化11】

［式中、ｎ＝ｍ＋２＝３、Ｒ_２は上述のものであり、Ｒ_４及びＲ_５が、Ｈ以外の場合、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）である］を提供する方法である。

【0056】

好ましくは、ＯＰはシリルエーテル、より好ましくはｔ−ブチルジメチルシリルエーテルである。従って、脱保護は、好ましくは酸性加水分解によって、好ましくはＨＣｌで処理することによって実施される。

【0057】

一態様では、本発明は、ｎ＝０である上記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法は、式（ＸＩＩ）の化合物：

【化12】

を、ＨＣＯＯＨ及びＨＣｌＯ_４と接触させ、続いて、ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物及びＮａＮＯ_２と接触させ、式（ＶＩＩ）の化合物：

【化13】

を得ることを含む方法である。

【0058】

次いで、簡単でよく知られている化学変換は、−ＣＮ基がＣＯＯＨに加水分解され得、同様にＯＣＨＯ基がヒドロキシル基へと加水分解され得、又は、＝Ｏ基がヒドロキシル基へと還元することができるように、式（ＶＩＩ）の化合物から上記の式（Ｉ）の化合物をもたらすことができる。

【0059】

一態様では、本発明は、Ｒ_２が＝ＣＨ−ＣＨ_３又はＥｔであり、かつＲ_３がHではない、上記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法に関するものであり、前記方法は、式（ＶＩＩＩ）の化合物をアルドール縮合に供し、式（ＶＩＩＩ）の化合物：

【化14】

［式中、ｎ＝０、１であり、Ｐはアルコール保護基であり、好ましくは、ＯＡｃである］を、アルキルリチウム、例えばＢｕＬｉと接触させ、続いてアセトアルデヒドと、好ましくはＢＦ_３（ＯＥｔ）_２も存在の下で、接触させ、式（ＩＸ）の化合物：

【化15】

［式中、ｎ及びＰが上述のものである］を得ることを含む、方法である。

【0060】

アルドール縮合は、アルデヒドへのケトンエノラートの求核付加を含むアルドール付加反応であり、一旦形成されると、アルドール生成物は水分子を失って、α，β−不飽和カルボニル化合物を形成する。

【0061】

式（ＩＸ）の化合物を触媒水素添加、好ましくはＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃの存在下Ｈ_２で処理することにより、式（Ｘ）の化合物を得ることができる。

【化16】

【0062】

一態様では、本発明は、Ｒ_２がα−Ｅｔである式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、式（ＸＩＶ）の化合物：

【化17】

［式中、ｎは０又は１であり、Ｒ_８がβ−ＯＨ、ＯＡｃ又はＨである］をＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨと接触させ、Ｃ６立体中心のエピマー化（ｅｐｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を得て、化合物（ＸＩ）の化合物：

【化18】

［式中、ｎが０又は１であり、Ｒ_８が上述のものである］を得ることを含む方法である。Ｒ_８がＯＡｃである場合、ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨを用いた処理は、Ｃ３アセトキシ基の加水分解が同時に起こり、従ってＲ_８がＯＨである式（ＸＩ）の化合物が得られる。

【0063】

Ｃ７におけるカルボニルの還元は、β−ＯＨ（化合物ＢＡＲ５０１及びＢＡＲｎ５０１の場合は７０％まで）及びα−ＯＨの混合物を得るために、式（Ｘ）の化合物をＮａＢＨ_４又はＣａ（ＢＨ_４）_２と接触させることにより、得ることができる。その後、ＬｉＢＨ_４での処理は、存在する場合、側鎖のメチルエステル官能基を−ＣＨ_２ＯＨに還元し、Ｃ３のＯＡｃ保護基をＯＨに還元する。

【0064】

Ｃ７におけるカルボニルの還元は、式（ＸＩ）の化合物又は側鎖にＣＯＯＨを有する対応する化合物を、ＬｉＢＨ_４と接触させることで得ることができ、Ｃ７にてほとんど独占的にα−ＯＨを得る。同時に、ＬｉＢＨ_４での処理は、存在する場合、側鎖のメチルエステル官能基を−ＣＨ_２ＯＨに還元し、ＯＡｃ保護基をＣ３からＯＨに還元する。式（Ｉ）（式中、Ｒ_１はα−ＯＨであり、Ｒ_２は＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、Ｒ_３はβ−ＯＨであり、ｎ＝０、１であり、ＲはＣＨ_２ＯＨである）の化合物を得るために、式（ＩＸ）の化合物をＮａＢＨ_４還元に供した後、ＬｉＢＨ_４で処理して、Ｃ３での同時脱保護、特に脱アセチル化を伴うＣ７及び側鎖での還元を生成した。

【0065】

式中のＲ_１がα−ＯＨであり、Ｒ_２が＝ＣＨ−ＣＨ_３であり、Ｒ_３がβ−ＯＨであり、ｎ＝０、１であり、ＲがＣＨ_２ＯＨである上記式（Ｉ）の化合物を触媒水素化、好ましくはＨ_２及びＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃと共に供し、式中のＲ_１がα−ＯＨであり、Ｒ_２がα−Ｅｔであり、Ｒ_３がβ−ＯＨであり、ｎ＝０、１であり、ＲがＣＨ_２ＯＨである式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

【0066】

一態様では、本発明は、Ｒ_１がβ−ＯＨである式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、該方法が、式（ＸＩＩＩ）の化合物：

【化19】

［式中、Ｒ_２はＥｔ又はＨ、好ましくはＥｔである］から出発すること、及び、塩基の存在下にてトシルクロリドで処理した後、その後ＣＨ_３ＣＯＯＫで処理することによってＣ３ヒドロキシ立体配置を反転すること、を含む方法である。

【0067】

一態様では、本発明は、Ｒ_１がＨである式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、上述の式（ＸＩＩＩ）の化合物をトシル化に供すること、及びＣ−３ヒドロキシル基の脱離に続く二重結合を還元することを含む方法である。

【0068】

トシル化は、好ましくは、ＴｓＣｌ及びピリジンを用いて行われる。

【0069】

脱離は、還流温度にてＤＭＦ中、ＬｉＢｒ及びＬｉ_２ＣＯ_３を用いて実施するのが好ましい。

【0070】

二重結合還元は、好ましくは、接触水素添加、好ましくはＨ_２及びＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃを用いて行われる。

【0071】

本発明は、以下の実施例及び実験の項に照らしてよりよく理解することができるであろう。

【実施例】

【0072】

実験セクション
化学
実施例１．Ｒ_２＝Ｈの式（Ｉ）の化合物の調製
実施例１Ａ．ビス−ホモウルソデオキシコール酸誘導体の合成

【0073】

Ｃ３及びＣ７におけるアルコール官能基の保護、側鎖メチルエステルの還元、及びその後のワンポットのスワーン酸化／ウィッティヒＣ２ホモログ化を含む、１の４段階反応シーケンスが、Δ^{２４，２５}−ビスホモＵＤＣＡの保護メチルエステルが得られた。側鎖二重結合水素化及びアルコール官能基脱保護により、ビスホモＵＤＣＡメチルエステル４が得られ、出発物質としてＢＡＲ３０５及びそれに対応するアルコール、ＢＡＲ３０４の調製においてそれぞれＬｉＯＨ及びＬｉＢＨ_４で処理して使用した。

【化20】

ａ）２，６−ルチジン、ｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃； ｂ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２段階にわたる定量的収率； ｃ）ＤＭＳＯ、塩化オキサリル、ＴＥＡ乾燥、、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−７８℃、次いでメチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート、７６％；ｄ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ Ｄｅｇｕｓｓａ型、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１、定量的収率； ｅ）ＨＣｌ ３７％、ＭｅＯＨ、定量的収率；ｆ）ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ、６０％中のＮａＯＨ ５％； ｇ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７７％。

【0074】

工程ａ，ｂ）３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オール（２）の調製

【0075】

化合物１（１．２ｇ、３ｍｍｏｌ）をＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、２つのアルコール保護基にて保護し、１．９ｇの無色の針状のメチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オエート（定量的収率）を得て、精製することなく次の工程に付した。

【0076】

Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、０℃で乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のメチルエステル（１．９ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液に、メタノール（８５０μＬ、２１ｍｍｏｌ）及びＬｉＢＨ_４（１０．５ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ、２１ｍｍｏｌ）を添加した。シリカゲルによる精製により（ヘキサン／酢酸エチル９９：１及び０．５％ＴＥＡ）、白色固体として２を得た（１．８ｇ、定量的収率）。

【0077】

工程ｃ）メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５８−ｃｈｏｌ−２４−エン−２６−オエート（３）のワンポッド調製。

【0078】

乾燥ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の塩化オキサリル（７．５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）の溶液に−７８℃でアルゴン雰囲気下にてＤＭＳＯ（２．１ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下した。３０分後、乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２中の２の溶液（１．８ｇ、３ｍｍｏｌ）をカニューレで加え、混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。Ｅｔ_３Ｎ（２．５ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を滴下した。１時間後、メチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート（２．０ｇ、６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温に温めた。ＮａＣｌ飽和溶液を加え、水相をジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。シリカゲルによる精製により（ヘキサン−酢酸エチル９５：５及び０．５％ＴＥＡ）、化合物３を無色の油状物（１．５ｇ、７６％）として得た。

【0079】

工程ｄ）メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエートの調製。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、ＴＨＦ乾燥／ＭｅＯＨ乾燥（２５ｍＬ／２５ｍＬ、ｖ／ｖ）中の化合物３（１．５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｐｄ（ＯＨ）_２ ５重量％の存在下、活性炭Ｄｅｇｕｓｓａ型（２０ｍｇ）上で水素付加し、３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエート（１．５ｇ、定量的収率）を得て、精製することなく、工程ｅ）に付した。

【0080】

工程ｅ）メチル３α，７β−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエート（４）の調製

【0081】

メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエート（１．５ｇ）をメタノール（７０ｍＬ）に溶解した。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、この溶液に、ＨＣｌ（２ｍＬ、３７％ｖ／ｖ）を添加し、無色アモルファス固体として４を得た（１．０ｇ、定量的収率）。

【0082】

工程ｆ）３α，７β−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オイック酸（ＢＡＲ３０５）の調製。化合物４の一部（４３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ（２０ｍＬ）の溶液中、ＮａＯＨ（４００ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）で４時間還流にて加水分解した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（９５：５）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；４．６ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）にてＨＰＬＣによって精製した（流速１ｍＬ／分）（ｔ_Ｒ＝５分）。

【0083】

ＢＡＲ３０５：Ｃ_２６Ｈ_４４Ｏ_４
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：
δ 3.47 (2H, m, H-3及びH-7), 2.27 (2H, t, J= 7.2 Hz, H₂-25), 0.96 (3H, s, H₃-19), 0.94(3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.70 (3H, s, H3-18)

【0084】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ 178.2, 72.1, 71.9, 57.6, 56.7, 44.8, 44.5, 44.0, 41.6, 40.7, 38.6, 38.0, 36.9, 36.8, 36.1, 35.3, 35.2, 30.9, 29.8, 27.9, 26.7, 26.6, 23.9, 22.4, 19.3, 12.7.

【0085】

工程ｇ）２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−３α，７β，２６−トリオール（ＢＡＲ３０４）。化合物４（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を、工程ｂ）に記載したのと同じ操作条件下で還元した。シリカゲルによる精製により（ＣＨ_２Ｃｌ_２ ／メタノール９：１）、ＢＡＲ３０４を無色の油状物として得た（３７５ｍｇ、７７％）。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８５：１５）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；４．６ｍｍ ｉ．ｄ．ｘ２５０ｍｍ）で分析サンプルをＨＰＬＣにより精製した（流速１ｍＬ／分）（ｔ_Ｒ＝９分）。

【0086】

ＢＡＲ ３０４：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：
δ 3.53 (2H, t, J= 6.5 Hz, H₂-26), 3.48 (2H, m, H-3及びH-7), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.93 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.70 (3H, s, H₃-18).
¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ 72.1, 71.9, 63.0, 57.5, 56.7, 44.7, 44.4, 44.0, 41.6, 40.7, 38.5, 37.9, 37.2, 37.0, 36.1, 35.2, 33.7, 30.9, 29.8, 27.9, 27.4, 27.1, 23.9, 22.4, 19.4, 12.7.

【0087】

実施例１Ｂ．３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル−２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ１０６）及び３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ１０７）の合成

【0088】

ＢＡＲ１０６は、ＵＤＣＡから出発して、ヒドロキシル基でのパラホルミル化、Ｃ２４のベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎｎ）一炭素分解、及び対応するメチルエステル中間体へのＣ２３カルボキシル基の変換を含む反応順序によって調製された。シリルエーテルとしてのＣ−３及びＣ−７のヒドロキシル基の保護、Ｃ２３メチルエステルの還元、Ｃ２３第一級アルコール官能基の硫酸化、及び最後に脱保護してアンモニウム塩として粗製ＢＡＲ１０６を得た。アンバーライトで精製し、次にＨＰＬＣによりナトリウム塩として表題のＢＡＲ１０６を得た。

【0089】

【化21】

ａ）ＨＣＯＯＨ、ＨＣｌＯ_４、９６％； ｂ）ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物、ＮａＮＯ２、９６％； ｃ）ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ、９７％中のＫＯＨ３０％； ｄ）ｐ−ＴＳＯＨ、ＭｅＯＨ乾燥、９８％； ｅ）２，６−ルチジン、ｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、８８％； ｆ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、定量的収率； ｇ）Ｅｔ_３Ｎ．ＳＯ_３、ＤＭＦ、９５℃； ｈ）ＨＣｌ ３７％、ＭｅＯＨ、次いでアンバーライトＣＧ−１２０、ＭｅＯＨ、２工程で８６％； ｉ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、定量的収率

【0090】

工程ａ，ｄ）メチル３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（６）の調製。

【0091】

Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、ウルソデオキシコール酸（２．０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）をメチル３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（６、１．６ｇ、８７％）に変換した。

【0092】

工程ｅ）メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オエートの調製。

【0093】

化合物６（１．２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を、実施例１Ａの工程ａ）に記載したものと同じ操作条件下で、ヒドロキシル基で保護した。溶出液としてヘキサン／酢酸エチル９：１及び０．５％トリエチルアミンを使用してシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、保護されたメチルエステルを得た（１．６ｇ、８８％）。

【0094】

工程ｆ）３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オール（７）の調製

【0095】

側鎖メチルエステル（８１８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を実施例１Ａの工程ｂ）に記載の同じ操作条件下で還元した。ヘキサン／酢酸エチル９８：２及び０．５％トリエチルアミンを溶出液として用いたシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、７を得た（７７０ｍｇ、定量的収率）。

【0096】

工程ｇ、ｈ）３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル−２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ１０６）の調製

【0097】

Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、トリエチルアミン−硫黄三酸化物複合体（２．０ｇ、１１ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（２５ｍＬ）中の７（６６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶出液（流速３ｍＬ／分）としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（６５：３５）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ内×２５０ｍｍ）上のＨＰＬＣによりＢＡＲ１０６（ｔ_Ｒ＝８．４分）４４２ｍｇ（２段階で８６％）を得た。
ＢＡＲ１０６：Ｃ_２３Ｈ_３９ＮａＯ_６Ｓ

【0098】

¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ4.04 (2H, m, H₂-23), 3.48 (2H, m, H-3及びH-7), 1.00 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.97(3Ｈ, ｓ, H₃-19), 0.72 (3H, s, H₃-18)

【0099】

工程ｉ）３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ１０７）の調製

【0100】

化合物6を工程fに記載したのと同じ操作条件下にてＢＡＲ１０７中で変換した。

【0101】

ＢＡＲ１０７：Ｃ_２３Ｈ_４０Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ3.60 (1H, m, H-7), 3.51 (1H, m, H-3), 3.50 (2H, m, H₂-23), 0.97 (3H, d, ovl, H_３-21), 0.96 (3H, s, H₃-19), 0.72 (3H, s, H₃-18)

【0102】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ72.1, 71.9, 60.8, 57.5, 57.1, 44.8, 44.5, 44.0, 41.6, 40.7, 39.9, 38.6, 38.0, 36.1, 35.2, 34.1, 31.0, 29.8, 27.9, 23.9, 22.4, 19.5, 12.6;

【0103】

実施例１Ｃ．７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル−２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ４０２）の合成

【0104】

メチルエステル８上のＣ−３ヒドロキシル基でのトシル化及び脱離の後の二重結合還元、その後のＬｉＢＨ_４処理及びＣ−２４第一級ヒドロキシル基の位置選択的な硫酸化によりＢＡＲ４０２が得られた。

【化22】

ａ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、定量的収率； ｂ）ＬｉＢｒ、Ｌｉ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、灌流、 ｃ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１、室温、定量的収率； ｄ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７９％； ｅ）Ｅｔ_３Ｎ．ＳＯ_３、ＤＭＦ、９５℃

【0105】

工程ａ−ｃ）メチル７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（９）の調製

【0106】

乾燥ピリジン（１００ｍＬ）中の８（９６５ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、トシルクロリド（４．７ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。それを冷水（１５０ｍＬ）に注ぎ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ_２溶液（１５０ｍＬ）、及び水（１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、減圧下で蒸発させて１．４ｇのメチル３α−トシルオキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（定量的収率）を得た。乾燥ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の３α−トシルオキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１．４ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、臭化リチウム（４３４ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び炭酸リチウム（３７０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間還流した。室温に冷却後、混合物を１０％ＨＣｌ溶液（２０ｍＬ）にゆっくり注ぎ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液及び水で連続して洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、蒸発乾固してオレオ残留物（ｏｌｅｏｓ ｒｅｓｉｄｕｅ）９６５ｍｇを得た（定量的収率）。

【0107】

実施例１Ａの工程ｄに記載したのと同じ操作条件下にてＰｄ（ＯＨ）_２上での水素化が９７５ｍｇの９（定量的収率）を与え、これを精製することなく次の工程に付した。

【0108】

工程ｄ）５β−コラン−７α，２４−ジオール

【0109】

実施例１Ａの工程ｂに記載したのと同じ操作条件にて、化合物９をＬｉＢＨ_４処理し、シリカゲルで精製する（酢酸エチル−ヘキサン、８５：１５）と、５β−コラン−７α，２４−ジオールが白色固体として得られた（７１４ｍｇ、７９％）。

【0110】

工程ｅ）７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル−２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ４０２）の調製。Ｃ２４上での硫酸化は、実施例１Ｂの工程ｇ）に記載したのと同じ操作条件下で行い、アンモニウム塩として未精製のＢＡＲ４０２を得た。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（９０：１０）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ内×２５０ｍｍ）上でＲＰ１８／ＨＰＬＣにより（流速３ｍＬ／分）、ナトリウム塩としてＢＡＲ４０２（ｔＲ＝６．６分）を得た。

【0111】

ＢＡＲ４０２：Ｃ_２４Ｈ_４１ＮａＯ_５Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.96 (2H, t, J= 6.6 Hz, H₂-24), 3.78 (1H, br s, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.92 (3H, s, H₃-19), 0.69 (3H, s, H₃-18);

【0112】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 69.7, 69.4, 57.7, 51.6, 45.0, 43.8, 41.2, 41.0, 39.0, 37.1, 37.0 36.3, 34.2, 33.3, 31.7, 29.5, 29.0, 27.3, 24.8, 24.3, 22.7, 21.9, 19.2, 12.3.

【0113】

実施例２．Ｒ_２＝Ｅｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ_３である式（Ｉ）の化合物の調製
実施例２Ａ．６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１）の合成

【0114】

７−ＫＬＣＡ上のＣ−３ヒドロキシル基のメチルエステル形成とアセチル化により、中間体１０を２工程にわたって収率８４％で得た。シリルエノールエーテル中間体へのアルドール付加は、環外二重結合（Ｐｄ（ＯＨ）_２上のＨ_２）で水素化された１１を生成し、３工程にわたって収率８０％で１２を生じた。メタノール中でのＮａＢＨ_４処理に続いて、粗反応生成物のＬｉＢＨ_４還元により、そのＨＰＬＣ精製（８８％ ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ）がそのＣ７エピマー、ＢＡＲ５０４−６ｂに対して７９％収率で純粋なＢＡＲ５０１を与えた混合物を得た。

【化23】

ａ）ｐ−ＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ乾燥； ｂ）無水酢酸、ピリジン、２工程で収率８４％； ｃ）ＤＩＰＡ、ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＭＳＣｌ、ＴＥＡ乾燥、ＴＨＦ乾燥 −７８℃、； ｄ）アセトアルデヒド、_ＢＦ３（ＯＥｔ）_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−６０℃、２工程で８０％； ｅ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１、定量的収率； ｆ）ＮａＢＨ_４、ＭｅＯＨ； ｇ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で７９％。

【0115】

工程ａ−ｄ）．メチル３α−アセトキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１１）の調製

【0116】

１００ｍＬの乾燥メタノールに溶解した７−ケトリトコール酸（５ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（１１ｇ、６４．１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で２時間静置した。ＮａＨＣＯ_３飽和溶液を加えて混合物を反応停止（ｑｕｅｎｃｈ）した。メタノールの蒸発後、残留物をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を鹹水（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させて無定形固体としてメチルエステルを得た（５．１３ｇ、定量的収率）。

【0117】

乾燥ピリジン（１００ｍＬ）中のメチルエステル（５．１３ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、過剰の無水酢酸（８．４ｍＬ、８９ｍｍｏｌ）を添加した。反応が完了したら、ピリジンを真空下で濃縮した。残留物を冷水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＡｃＯＥｔ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮して、さらに溶出液としてヘキサン／酢酸エチル８：２及び０．５％トリエチルアミンを使用してシリカゲル上にてフラッシュクロマトグラフィーで生成して、残留物を得た（白色固体として４．８ｇの１０、２工程で収率８４％）。

【0118】

乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（２３ｍＬ、０．１６ｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ブチルリチウム（６０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ、０．１５ｍｏｌ）の溶液を−７８℃で滴下した。３０分後、トリメチルクロロシラン（２７．１ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）を添加した。さらに３０分後、乾燥ＴＨＦ（７０ｍＬ）中の化合物１０（４．８ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）溶液を添加した。反応物を−７８℃でさらに４５分間撹拌し、次いでトリエチルアミン（５４ｍＬ、０．３８ｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応混合物を−２０℃まで加熱し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１００ｍＬ）で処理し、２時間で室温まで上げた。水相を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を次にＮａＨＣＯ_３飽和溶液、水及び鹹水で洗浄した。無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥した後、残留物を真空下で蒸発させて、黄色残留物６ｇを得、これを乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈し、−７８℃で冷却した。この攪拌溶液に、アセトアルデヒド（３ｍＬ、５３ｍｍｏｌ）及びＢＦ_３・ＯＥｔ_２（１３．５ｍＬ、０．１０７ｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を−６０℃で２時間撹拌し、室温まで加熱した。混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和水溶液で反応停止し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。合わせた有機相を鹹水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。

【0119】

シリカゲルによる精製（ヘキサン−酢酸エチル９：１及び０．５％ＴＥＡ）により、化合物１１（４．１ｇ、８０％）を得た。ＮＭＲ分析は、ジアステレオマー比Ｅ／Ｚ＞９５％を示した。環外二重結合におけるE配置は、Ｎｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）でＨ_３−２６（δ１．６７）／Ｈ−５（δ２．６２）の双極子カップリングによって確立された。

【0120】

（Ｅ）−３α−アセトキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１１）：Ｃ_２９Ｈ_４４Ｏ_５

【0121】

¹H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ_３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 6.16 (1H, q, J= 7.0 Hz, H-25), 4.74 (1H, m, H-3), 3.64 (3H, s, COOCH₃), 2.62 (1H, dd, J= 13.0, 3.6 Hz, H-5), 1.98 (3H, s, COCH₃), 1.67 (3H, d, J= 7.0 Hz, H₃-26), 1.00 (3H, s, H₃-19), 0.92 (3H, d, J= 6.0 Hz, H₃-21), 0.67 (3H, s, H₃-18)

【0122】

¹³C NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ_３を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ 204.5, 174.6, 170.7, 143.1, 130.2, 72.5, 54.5, 51.4, 50.7, 48.6, 45.2, 43.5, 39.1, 38.9, 35.1, 34.9, 34.1, 33.4, 31.0, 30.9, 28.4, 25.9 (2C), 22.8, 21.4, 21.2, 18.4, 12.7, 12.2.

【0123】

工程ｅ）メチル３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１２）の調製

【0124】

ＴＨＦ乾燥／ＭｅＯＨ乾燥（１００ｍＬ、１：１ ｖ／ｖ）中の１１（４．０ｇ、８．５ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｐｄ（ＯＨ）_２ ２０ｗｔ％の存在下、活性炭（１００ｍｇ）ｄｅｇｕｓｓａ型で水素化した。混合物を標準ＰＡＲＲ装置に移し、窒素、及び、次に水素にて数回フラッシュした。装置を５０ｐｓｉのＨ_２下でゆっくりと動かした（ｓｈａｃｋｅｄ）。反応物を室温で８時間撹拌した。触媒をセライト（Ｃｅｌｉｔｅ）で濾過し、回収した濾液を減圧下で濃縮して１２（４．０ｇ、定量的収率）を得た。

【0125】

メチル３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１２）：Ｃ_２９Ｈ_４６Ｏ_５

【0126】

¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 4.65 (1H, m, H-3), 3.66 (3H, s, COOCH₃), 2.56 (1H, t, J= 11.5 Hz, H-8), 2.35 (1H, m, H-23a), 2.22 (1H, m, H-23b), 1.99 (3H, s, COCH₃), 1.22 (3H, s, H₃-19), 0.92 (3H, d, J= 6.3 Hz, H₃-21), 0.83 (3H, t, J= 7.2 Hz, H₃-26), 0.67 (3H, s, H₃-18)

【0127】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 214.7, 174.3, 170.2, 72.6, 61.7, 54.8, 51.3, 49.0, 48.5, 45.3, 42.7, 42.3 (2C), 38.6, 35.4, 35.1, 35.0, 31.0, 30.8, 28.0 (2C), 26.4, 25.7, 24.7, 21.3, 21.1, 18.2, 12.9, 11.9

【0128】

Ｃ６のエチル基のβ立体配置はＮｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）で双極性カップリングＨ３−２６（δ０．８３）／Ｈ３−１９（δ１．２２）及びＨ−８（δ２．５６）／Ｈ−２５（δ１．８３）で決定した。

【0129】

工程ｆ，ｇ）６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１）の調製

【0130】

化合物１２（１．１８ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のメタノール溶液に、大過剰のＮａＢＨ_４を０℃にて添加した。混合物を室温で２時間放置した後、水及びＭｅＯＨを１５分間０℃で滴加して、沸騰を観察した。溶媒を蒸発させた後、残留物を水で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を鹹水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させて１．３ｇの粗残留物を得、これをさらに精製することなく次の工程に付した。粗残留物を実施例１Ａの工程ｂ）に記載したのと同じ操作条件下にて、ＬｉＢＨ_４（ＴＨＦ中２Ｍ）で処理した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ内×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、８０２ｍｇのＢＡＲ５０１（７９％、ｔ_Ｒ＝１１分）を得た。

【0131】

あるいは、工程ｆは、その場で生成されたＣａ（ＢＨ４）_２を用いて実施した。

【0132】

０℃で、化合物１２（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）及び無水エタノール（４ｍＬ）の溶液に、ＣａＣｌ_２（４６６ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加えた。同じ溶液に、無水エタノール（４ｍＬ）中のＮａＢＨ_４（１５９ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。−５℃で４時間後、ＭｅＯＨを滴下した。次いで、溶媒を蒸発させた後、残留物を水で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を鹹水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させて粗残留物５００ｍｇを得、これをさらに精製することなく工程ｇに付した。

【0133】

ＢＡＲ５０１：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した：δ 3.74 (1H, dd, J= 10.3, 6.0 Hz, H-7), 3.51 (1H, ovl, H-3), 3.49 (2H, ovl, H₂-24), 1.00 (3H, s, H₃-19), 0.97 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.96 (3H, t, J= 7.6 Hz, H₃-26), 0.72 (3H, s, H₃-18)

【0134】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した：δ 75.3 71.9, 63.6, 57.5, 56.5, 51.6, 45.7, 44.9, 42.1, 41.5, 40.4, 40.3, 37.1, 35.8, 32.4, 30.7, 30.3, 29.7, 29.6, 28.3, 26.2, 23.4, 22.1, 19.4, 14.8, 12.7

【0135】

実施例２Ｂ．６β−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０４−６ｂ）

【0136】

ＢＡＲ５０４−６ｂを、実施例２Ａに記載のように調製した（ｔ_Ｒ＝２０．４分）。

【0137】

ＢＡＲ５０４−６ｂ：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した：δ 3.60 (1H, s, H-7), 3.51 (2H, m, H₂-24), 3.35 (1H, ovl, H-3), 2.30 (1H, q, J=13.5 Hz,H-4a), 0.97 (3H, d, J= 6.8 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, t, J= 7.3 Hz, H₃-26), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0138】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した：δ 71.9, 71.8, 62.7, 56.8, 51.7, 50.5, 46.7, 42.5, 41.4, 40.1, 36.6, 36.4, 36.2, 36.0, 33.2, 32.4, 30.1, 29.5, 28.8, 28.5, 25.3, 23.9, 20.7, 18.4, 13.7, 11.4.

【0139】

実施例２Ｃ．６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ５０２）、６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１）及び６β−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０４−６ｂ）

【0140】

７−ＫＬＣＡ（１ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）をＣ２４でベックマン分解し、Ｃ−２３でメチル化して、収率６６％で１３を得た。Ｃ−３にてアセチル化して、アルキル化により１４を得て、それを水素化して１５を得た。ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨ処理により、Ｃ−３にて加水分解及びＣ−６にてエピマー化を同時に与えた。Ｃ−２３メチルエステル官能基及びＣ−７カルボニル基の同時還元により、ＢＡＲ５０２を収率８９％にて提供した。ＢＡＲｎ５０１及びＢＡＲｎ５０４−６ｂの調製において、出発物質として中間体１５（２５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）も使用した。

【化24】

ａ）ＨＣＯＯＨ、ＨＣｌＯ_４； ｂ）ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物、ＮａＮＯ_２； ｃ）ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ中のＫＯＨ３０％、３工程で８８％； ｄ）ｐ−ＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ乾燥； ｅ）無水酢酸、ピリジン； ｆ）ＤＩＰＡ、ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＭＳＣｌ、ＴＥＡ乾燥、ＴＨＦ乾燥−７８℃； ｇ）アセトアルデヒド、ＢＦ_３（ＯＥｔ）_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−６０℃、４工程で６０％； ｈ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１、定量的収率； ｉ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ； ｊ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ乾燥、０℃、２工程で７０％； ｋ）ＮａＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、０℃； ｌ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ乾燥、０℃、２工程で７７％

【0141】

工程ａ−ｄ）メチル７−ケト−２４−ノル−ＬＣＡ（１３）の調製
実施例１Ｂ、工程ａ−ｄ）に記載したものと同じ操作条件下で、７−ＫＬＣＡから化合物１３（６６０ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ、４工程で６６％）を調製した。

【0142】

工程ｅ−ｈ）メチル３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１５）の調製。化合物１３（６６０ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を、実施例２Ａ、工程ｂ〜ｄに記載したのと同じ操作条件に付して、６０３ｍｇの１４（３工程で７８％）を得た。ＮＭＲ分析は、ジアステレオマー比Ｅ／Ｚ＞９５％を示した。環外二重結合におけるＥ配置は、Ｎｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）における双極子カップリングＨ_３−２５（δ１．６７）／Ｈ−５（δ２．６１）により確立された。

【0143】

（Ｅ）−３α−アセトキシ−６−エチリデン−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１４）：Ｃ_２８Ｈ_４２Ｏ_５

【0144】

¹H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ_３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 6.17 (1H, q, J= 7.2 Hz, H-24), 4.75 (1H, m, H-3), 3.04 (3H, s, COOCH₃), 2.61 (1 H, dd, J= 13.1, 4.0 Hz, H-5), 1.98 (3H, s, COCH₃), 1.67 (3H, d, J= 7.2 Hz, H₃-25), 1.00 (3H, s, H₃-19), 0.97 (3H, d, J= 6.8 Hz, H₃-21), 0.67 (3H, s, H₃-18)

【0145】

¹³C NMRは、溶媒としてCDCl₃を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 204.5, 174.2, 170.5, 143.0, 130.6, 72.5, 54.7, 51.4, 50.7, 48.6, 45.3, 43.7, 41.5, 39.1, 38.8, 34.6, 34.2, 33.6, 33.4, 28.5, 25.9 (2C), 22.8, 21.3 (2C), 19.7, 12.7, 12.1

【0146】

実施例２Ａ、工程ｅに記載したものと同じ操作条件下で、Ｐｄ（ＯＨ）_２上の水素化により、６００ｍｇの１５（定量的収率）を得た。

【0147】

Ｃ−６におけるエチル基のβ配置は、Ｎｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）における双極子カップリングＨ_３−２５（δ０．８３）／Ｈ_３−１９（δ１．２２）によって決定した。

【0148】

３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１５）：Ｃ_２８Ｈ_４４Ｏ_５
¹H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ_３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 4.65 (1H, m, H-3), 3.67 (3H, s, COOCH₃), 2.60 (1H, t, J= 11.2 Hz, H-8), 2.43 (1H, dd, J= 14.2, 2.6 Hz, H-22a), 1.98 (3H, s, COCH₃), 1.88 (1H, m ovl, H-6), 1.22 (3H, s, H₃-19), 0.98 (3H, d, J= 6.4 Hz, H₃-21), 0.83 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-25), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0149】

¹³C NMRは、溶媒としてCDCl₃を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 215.3, 174.0, 170.5, 72.8, 61.9, 55.0, 51.4, 49.2, 48.7, 45.5, 42.9, 42.6, 41.4, 38.7 (2C), 35.6, 35.3, 34.9, 28.3 (2C), 26.5, 25.9, 24.8, 21.4, 21.3, 19.6, 13.0, 12.1

【0150】

工程ｉ、ｊ）６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ５０２）の調製

【0151】

化合物１５（４５０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び乾燥メタノール（４ｍＬ）の溶液にＭｅＯＮａ（２０ｍＬ、ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。２４時間後、Ｈ_２Ｏを滴下した。次いで、溶媒を蒸発させた後、残留物を水で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させて１６を得、これをさらに精製することなく工程ｇに付した。

【0152】

メチル６α−エチル−３α−ヒドロキシ−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１６）：Ｃ_２６Ｈ_４２Ｏ_４

【0153】

¹H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ_３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (3H, s, COOCH₃), 3.45 (1H, m, H-3), 2.83 (1H, q, J= 7.3 Hz, H-6), 2.51 (1H, t, J=11.2 Hz, H-8), 2.45 (1H, dd, J= 14.5, 3.2 Hz, H-22a), 1.26 (3H, s, H₃-19), 0.98 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.81 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-25), 0.73 (3H, s, H₃-18)

【0154】

¹³C NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ_３を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 214.9, 175.4, 71.6, 56.2, 53.2, 52.0, 51.9, 51.0, 50.5, 45.2, 43.8, 42.2, 40.2, 36.7, 35.3, 34.8, 32.5, 30.5, 29.4, 25.6, 24.0, 22.9, 20.1, 20.0, 12.6, 12.4

【0155】

化合物１６を、実施例１Ａの工程ｇに記載の同じ操作条件下でＬｉＢＨ_４還元に供した。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ６：４で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより、ＢＡＲ５０２（２７４ｍｇ、２工程で７０％）を得た。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８８：１２）を用いて、Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；４．６ｍｍ ｉ．ｄ．ｘ２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより分析サンプルを得た（流速１ｍＬ／分、ｔ_Ｒ＝１０．８分）。

【0156】

ＢＡＲ５０２：Ｃ_２５Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, s, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.53 (1H, m, H-23b) 3.31 (1H, m, H-3), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.92 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-25), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0157】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 73.2, 71.1, 60.7, 57.7, 51.4, 46.9, 43.8, 42.9, 41.3, 40.9, 39.8, 36.7, 36.5, 34.6, 34.5, 34.2, 31.2, 29.4, 24.5, 23.7, 23.4, 21.8, 19.3, 12.1, 11.9

【0158】

工程ｋ、ｌ）．６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１）及び６β−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０４−６ｂ）。化合物１５（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、実施例２Ａの工程ｆ〜ｇに記載のものと同じ操作条件に付した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８６：１４）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ i.d.×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、４７ｍｇのＢＡＲｎ５０１（５４％、ｔ_Ｒ＝１１分）及び２０ｍｇのＢＡＲｎ５０４−６ｂ（２３％、ｔ_Ｒ＝１５分）を得た。

【0159】

ＢＡＲｎ５０１：Ｃ_２５Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.73 (1H, dd, J= 10.5, 5.5 Hz, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.51 (1H, m, ovl, H-23b), 3.51 (1H, m, ovl, H-3), 0.98 (3H, d, ovl, H₃-21), 0.97 (3H, s, H₃-19), 0.96 (3H, t, ovl, H₃-25), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0160】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 75.2, 71.8, 60.8, 57.5, 56.6, 51.5, 45.5, 44.8, 42.0, 41.4, 40.7, 40.3, 39.9, 36.9, 36.0, 34.2, 30.5, 29.6, 28.3, 26.2, 23.4, 22.0, 19.4, 14.7, 12.9

【0161】

ＢＡＲｎ５０４−６ｂ：Ｃ_２５Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ3.63 (1H, m, H-23a), 3.60 (1H, m, H-7), 3.55 (1H, m, H-23b), 3.37 (1H, m, H-3), 2.30 (1H, q, J= 12.5 Hz, H-4a), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.95 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-25), 0.72 (3H, s, H₃-18)

【0162】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 72.8, 72.7, 60.8, 57.9, 52.7, 51.4, 47.5, 43.7, 42.3, 41.0, 39.9, 37.5, 37.3, 36.7, 34.2, 33.3, 31.0, 29.6, 29.4, 26.2, 24.8, 21.6, 19.3, 14.5, 12.1

【0163】

実施例２Ｄ．６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０３）、６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１−６ａ）、６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０３）及び６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１−６ａ）

【0164】

中間体１１をＮａＢＨ_４還元に供し、続いてＬｉＢＨ_４で処理した。あるいは、直接的方法で進行させたＬｉＡｌＨ_４処理は、Ｃ−２４及びＣ−７同時還元をもたらす。ＢＡＲ５０３はまた、Ｐｄ（ＯＨ）_２触媒上での水素化によって、ＢＡＲ５０１−６ａの出発物質として使用した。同じ合成プロトコルを、対応する２３−誘導体、ＢＡＲｎ５０３及びＢＡＲｎ５０１−６ａを生成する中間体１４で実施した。

【0165】

【化25】

ａ）ＮａＢＨ_４、ＭｅＯＨ； ｂ）ＬｉＢＨ_４，ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で８５％； ｃ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ：ＭｅＯＨ １：１ ｖ／ｖ

【0166】

工程ａ，ｂ）．６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール （ＢＡＲ５０３）及び６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０３）の調製

【0167】

化合物１１（１ｇ、２．１１ｍｍｏｌ）を実施例２Ａ、工程ｆ、ｇに記載の同じ操作条件に付した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ i.d.×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、７２７ｍｇのＢＡＲ５０３(２工程で８５％、ｔ_Ｒ＝９．２分）を得た。代替的に、１１のＬｉＡｌＨ_４処理により、ＢＡＲ５０３を得た。

【0168】

ＢＡＲ５０３：Ｃ_２６Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 5.66 (1H, q, J= 6.9 Hz, H-25), 3.90 (1H, d, J= 9.8 Hz, H-7), 3.55 (1H, m, H-3), 3.50 (2H, m, H₂-24), 2.50 (1H, dd, J= 4.0, 13.1 Hz, H-5), 1.62 (3H, d, J= 6.9 Hz, H₃-26), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.81 (3H, s, H₃-19), 0.70 (3H, S, H₃-18)

【0169】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 142.7, 114.5, 73.4, 71.1, 63.6, 57.1, 56.1, 45.2, 44.9, 44.2, 40.7, 40.2, 36.3, 36.2, 35.9, 34.7, 32.4, 30.2, 29.5, 28.8, 27.4, 22.6, 21.5, 18.5, 11.8, 11.7

【0170】

同様の合成プロトコルを中間体１４で実施した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８６：１４）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ１００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、ＢＡＲｎ５０３（ｔ_Ｒ＝８分）を得た。

【0171】

ＢＡＲｎ５０３：Ｃ_２５Ｈ_４２Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 5.66 (1H, q, J= 6.8 Hz, H-24), 3.92 (1H, d, J= 9.9 Hz, H-7), 3.60 (1H, m, H-23a), 3.56 (1H, m, H-3), 3.55 (1H, m, H-23b), 2.52 (1H, dd, J= 3.7, 13.2 Hz, H-5), 1.63 (3H, d, J= 6.8 Hz, H₃-25), 0.98 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0172】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 143.7, 115.4, 74.1, 71.8, 60.8, 58.0, 57.1, 46.1, 45.9, 45.1, 41.6, 41.1, 39.9, 37.0, 36.4, 35.8, 34.1, 30.9, 29.8, 28.1, 23.5, 22.5, 19.5, 12.7, 12.6

【0173】

工程ｃ）．６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１−６ａ）及び６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１−６ａ）

【0174】

ＢＡＲ５０３（３５０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を実施例２Ａの工程ｅに記載したのと同じ操作条件に付し、ＢＡＲ５０１−６ａを定量的収率で得た。

【0175】

ＢＡＲ５０１−６ａ：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.50 (2H, t, J= 6.8 Hz, H₃-24), 3.44 (1 H, m, H-3), 3.07 (1H, t, J= 9.8 Hz, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.66 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-26), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0176】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 76.5, 72.3, 63.6, 57.9, 57.3, 46.3, 45.0, 44.8, 41.8, 41.0, 39.9, 37.0, 36.4, 35.5, 33.3, 31.3, 31.0, 30.3, 29.8, 27.8, 24.3, 22.5, 22.0, 19.3, 12.8, 11.8

【0177】

ＢＡＲｎ５０３を、実施例２Ａの工程ｅに記載したのと同じ操作条件に付し、定量的収率でＢＡＲｎ５０１−６ａを得た。

【0178】

ＢＡＲｎ５０１−６ａ：Ｃ_２５Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 3.62 (1H, m, H-23a), 3.54 (1H, m, H-23b), 3.45 (1H, m, H-3), 3.08 (1H, t, J= 9.8 Hz, H-7), 0.97 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.66 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-25), 0.73 (3H, s, H₃-18)

【0179】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 76.4, 72.5, 60.8, 57.9, 57.2, 46.2, 45.1, 44.7, 41.8, 41.2, 40.0, 39.8, 36.5, 35.6, 34.2, 31.2, 30.9, 29.9, 27.9, 24.1, 22.7, 22.0, 19.5, 12.7, 11.7

【0180】

実施例２Ｅ ６α−エチル−３α，７ａ−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−ニトリル（ＢＡＲ５０６）

【0181】

７−ＫＬＣＡを、実施例１Ｂの工程ａ〜ｂに記載したものと同じ合成手順に従ってニトリル１７に変換した。アルキル化に続き、実施例２Ａの工程ｃ〜ｄ及び実施例２Ｃの工程ｉに記載と同じ操作条件下で、二重結合還元及びＣ−６でのエピマー化それぞれにより、１８を得た。実施例２Ｃの工程ｊのように、ＬｉＢＨ_４処理により、ＢＡＲ５０６に所望の７αヒドロキシル基が得られた。

【化26】

ａ）ＨＣＯＯＨ、ＨＣｌＯ_４； ｂ）ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物、ＮａＮＯ_２； ｃ）ＤＩＰＡ、ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＭＳＣｌ、ＴＥＡ乾燥、ＴＨＦ乾燥−７８℃； ｄ）アセトアルデヒド、ＢＦ_３（ＯＥｔ）_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−６０℃； ｅ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１； ｆ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ； ｇ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ乾燥、０℃

【0182】

ＢＡＲ５０６：Ｃ_２５Ｈ_４１ＮＯ_２
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.66 (1H, br s, H-7), 3.31 (1H, ovl, H-3), 2.46 (1H, dd, J= 3.8,16.9 Hz, H-22a), 2.34 (1H, dd, J= 7.4, 16.9 Hz, H-22b), 1.16 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.91 (3H, t, J= 7.5 Hz, H₃-25), 0.92 (3H, s, H₃-19), 0.73 (3H, s, H₃-18)

【0183】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 120.3, 72.9, 70.9, 56.1, 51.5, 46.7, 43.4, 42.9, 41.4, 40.2, 36.5, 36.2, 34.3 (2C), 34.2, 30.7, 29.2, 24.9, 24.4, 23.4, 23.3, 21.9, 18.5, 12.1, 11.6

【0184】

実施例２Ｆ．６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０１）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル ２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ）、６β−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０２）、６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０３）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７０４）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイル タウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７０４）、６β−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０５）及び６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１１）

【0185】

化合物１２をメタノール中のＭｅＯＮａで処理して、Ｃ−３で脱アセチル化及びＣ−６では逆を得た。環Ａ上の二重結合のトシル化、脱離及び水素化は、２０を与えた。メチルエステル官能基での加水分解及びその後のＬｉＢＨ_４処理は、高い化学収率でＢＡＲ７０４をもたらした。中間体２０をＢＡＲ７０１の出発物質として使用した。ＢＡＲ７０１の少量のアリコートのＣ−２４上での硫酸化により、ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆが得られた。

【化27】

ａ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ； ｂ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、２工程にわたる定量的収率； ｃ）ＬｉＢｒ，Ｌｉ２ＣＯ３、ＤＭＦ、灌流、ｄ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１、室温、２工程で８８％。 ｅ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ、８２％； ｆ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、８３％； ｇ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ_３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥； ｈ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７７％； ｉ）Ｅｔ_３Ｎ．ＳＯ_３、ＤＭＦ、９５℃

【0186】

工程ａ〜ｆ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７０４）の調製。

【0187】

化合物１２（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＭｅＯＮａ（２．１ｍＬ、ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、１．０５ｍｍｏｌ）ので、実施例２Ｃの工程ｉと同じ操作条件で一晩処理した。実施例１Ｃの工程ａと同じ操作条件で、粗反応生成物のトシル化により１９（６２０ｍｇ、２工程にわたる定量的収率）を得た。中間体１９（５００ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を実施例１Ｃの工程ｂ、ｃと同じ操作条件に付して、３１２ｍｇの２０（２工程にわたって８８％）を得た。

【0188】

実施例１Ａの工程ｆと同じ操作条件下で、ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ（１０ｍＬ）の溶液中で、化合物２０（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（９６ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）で加水分解した。粗乾燥カルボン酸中間体（１９０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ乾燥（５ｍＬ）中のＬｉＢＨ_４（１．６５ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ、３．３ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（１３３μＬ、３．３ｍｍｏｌ）で処理した。シリカゲル（ＣＨ_２Ｃｌ_２−ＭｅＯＨ ９９：１）で精製すると１５７ｍｇのＢＡＲ７０４（８３％）が得られた。同様の実施形態において、アルカリ加水分解後のＬｉＢＨ_４処理は、少量（約１０％）の６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１１）を産生し、これを、溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８８：１２）で、Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製によって単離した。

【0189】

ＢＡＲ７０４：Ｃ_２６Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, br s, H-7), 2.34 (1H, m, H-23a), 2.20 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.3 Hz, H₃-21), 0.92 (3H, s, H₃-19), 0.89 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0190】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 178.0, 71.6, 57.4, 51.7, 48.7, 43.8, 43.3, 41.5, 41.1, 39.3, 37.4, 36.8, 34.6, 32.5 (2C), 29.3, 28.8, 25.1, 24.6 (2C), 23.5, 22.5, 22.0, 18.8, 12.2, 12.1

【0191】

ＢＡＲ７１１：Ｃ_２６Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.08 (1H, t, J= 9.6 Hz, H-7), 2.32 (1H, m, H-23a), 2.20 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.2 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.85 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0192】

工程ｇ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７０４）の調製

【0193】

ＤＭＦ乾燥（５ｍＬ）中のＢＡＲ７０４（１０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）のアリコートを、ＤＭＴ−ＭＭ（２０．５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８３μＬ、０．６ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温で１０分間攪拌した。次いで、混合物にタウリン（１８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。３時間後、反応混合物を真空下で濃縮し、水（５ｍＬ）に溶解した。Ｃ１８シリカゲルカラムで精製し、次いで、溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８３：１７）を用いて次いでＮｕｃｌｅｏｄｕｒ１００−５ Ｃ１８（５μｍ； １０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）のＨＰＬＣにより（流速３ｍＬ／分）、４．５ｍｇのＢＡＲＴ７０４（ｔ_Ｒ＝１０分）を得た。

【0194】

ＢＡＲＴ７０４：Ｃ_２８Ｈ_４８ＮＮａＯ_５Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, br s, H-7), 3.58 (2H, t, J= 7.0 Hz, CH₂-N), 2.96 (2H, t, J= 9.6 Hz, CH₂-S), 2.25 (1H, m, H-23a), 2.10 (1H, m, H-23b), 0.97 (3H, d, J= 6.4 Hz, H₃-21), 0.92 (3H, s, H₃-19), 0.89 (3H, t, J= 7.1 Hz, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0195】

工程ｈ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０１）の調製

【0196】

化合物２０（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を実施例２Ｃの工程ｊと同じ操作条件下で処理した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（９２：８）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ、１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製して（流速３ｍＬ／分）、６４ｍｇのＢＡＲ７０１（ｔ_Ｒ＝３１分）と、少量の６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０３）（８ｍｇ、ｔ_Ｒ＝２４．８分）を得た。

【0197】

ＢＡＲ７０１：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_２
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H₂-24), 0.97 (3H, d, J= 6.3 Hz, H₃-21), 0.92 (3H, s, H₃-19), 0.89 (3H, t, J= 7.3 Hz, H₃-26), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0198】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 71.6, 63.6, 57.6, 51.8, 48.7, 43.7, 43.3, 41.5, 41.1, 39.3, 37.5, 37.0, 34.6, 33.2, 30.3, 29.4, 28.8, 25.1, 24.6 (2C), 23.5, 22.5, 22.0, 19.2, 12.3, 12.1

【0199】

ＢＡＲ７０３ Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_２
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.51 (2H, m, H₂-24), 3.07 (1 H, t, J= 10.0 Hz, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.84 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-26), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0200】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 76.3, 63.6, 57.9, 56.8, 46.3, 45.3, 45.0, 44.7, 41.7, 41.1, 38.8, 37.0, 36.3, 33.3, 30.3, 28.1, 27.9 (2c), 25.0 (2c), 22.0, 21.9 (2c), 19.4, 12.7, 11.6

【0201】

工程ｉ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ）

【0202】

ＢＡＲ７０１の少量のアリコート上のＣ−２４上の硫酸化を、実施例１Ｂの工程ｇ）に記載したものと同じ操作条件下で行い、アンモニウム塩として粗製のＢＡＲ７０１ｓｏｌｆを得た。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８２：１８）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）上のＲＰ１８／ＨＰＬＣにより（流速３ｍＬ／分）、ナトリウム塩として、ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ（ｔ_Ｒ＝１４．２分）を得た。

【0203】

ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ：Ｃ_２６Ｈ_４５ＮａＯ_５Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.96 (2H, t, J= 6.3 Hz, H₂-24), 3.64 (1H, br s, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.91 (3H, s, H₃-19), 0.88 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-26), 0.69 (3H, s, H₃-18)

【0204】

６β−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０２）及び６β−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０５）の調製

【0205】

化合物１２（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、反応時間（２時間）を除いて、実施例２Ｃの工程ｉと同じ操作条件下で、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＭｅＯＮａ（２．１ｍＬ、ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、１．０５ｍｍｏｌ）で処理した。実施例１Ｃの工程ａと同じ操作条件にて粗反応生成物のトシル化により、２１（６２０ｍｇ、２工程にわたる定量的収率）を与えた。中間体２１（６００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を実施例１Ｃの工程ｂ、ｃと同じ操作条件に付して、４００ｍｇの２２（９４％）を得た。化合物２２（３５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を、実施例２Ａの工程ｆ、ｇと同じ操作条件下でＮａＢＨ_４／ＬｉＢＨ_４で還元した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（９２：８）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ i.d.×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、１８０ｍｇのＢＡＲ７０２（ｔ_Ｒ＝２５分）及び７５．４ｍｇのＢＡＲ７０５（ｔ_Ｒ＝１３分）を得た。あるいは、工程ｅを、その場で生成されたＣａ（ＢＨ_４）_２を用いて実施した。

【化28】

ａ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ； ｂ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、２工程の定量的収率； ｃ）ＬｉＢｒ、Ｌｉ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、灌流；ｄ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１、室温、２工程で９４％； ｅ）ＮａＢＨ_４、ＭｅＯＨ； ｆ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で７８％

【0206】

ＢＡＲ７０２：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_２
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.67 (1H, dd, J= 8.7, 4.7 Hz, H-7), 3.51 (2H, m, H₂-24), 0.98 (3H, s, H₃-19), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.96 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-26), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0207】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 75.5, 63.8, 57.6, 56.5, 44.2, 43.7, 42.8, 41.0, 40.9, 40.8, 38.2 (2C), 36.9, 34.4, 32.8, 29.7, 28.9, 27.0, 26.1, 24.7, 22.2, 22.0 (2C), 19.2, 13.9, 12.3

【0208】

ＢＡＲ７０５：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_２
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.59 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H₂-24), 2.23 (1H, dq, J= 13.9, 4.0 Hz, H-4a), 0.97 (3H, d, J= 6.6, H₃-21), 0.95 (3H, t, J= 7.1 Hz, H₃-26), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0209】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 73.1, 63.2, 57.3, 52.8, 51.4, 49.4, 43.8, 41.3, 39.7, 37.4 (2C), 37.2, 34.2, 32.6 (2C), 29.9, 29.5, 28.9, 28.3, 27.3, 24.5, 21.7, 21.2, 18.8, 14.3, 12.3

【0210】

実施例２Ｇ．６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０６）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル ２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ）、６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０７）、６β−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０８）及び６β−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０９）及び６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１２）の合成

【0211】

誘導体１９のＣ−３において収束プロトコル逆転（convergent protocol inversion）に続き、ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨの処理により、ＢＡＲ７０６、ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ、ＢＡＲ７１０及びＢＡＲＴ７１０の合成の出発物質として使用した２３が得られた。Ｃ−３での反転、それに続くＣ−７及びＣ−２４での還元が、ＢＡＲ７０８及びＢＡＲ７０９を産生した。

【0212】

【化29】

ａ）ＣＨ_３ＣＯＯＫ、ＤＭＦ：Ｈ_２Ｏ ５：１ ｖ／ｖ； ｂ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、２工程で７４％； ｃ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ； ｄ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で６５％； ｅ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ_３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥； ｆ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、５８％； ｇ）Ｅｔ_３Ｎ．ＳＯ_３、ＤＭＦ、９５℃； ｈ）ＣＨ_３ＣＯＯＫ、ＤＭＦ：Ｈ_２Ｏ ５：１； ｉ）ＮａＢＨ_４、ＭｅＯＨ； ｊ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、３工程にわたり７４％

【0213】

工程ａ−ｄ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１０）の調製

【0214】

水（２ｍＬ）及びＮ、Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍＬ）に溶解した２１（６００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_３ＣＯＯＫ（９８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を２時間還流した。溶液を室温で冷却し、次いで酢酸エチル及び水を加えた。分離した水相を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水で洗浄し、乾燥させ（Na₂SO₄）、蒸発乾固して６００ｍｇの混合物を得た。シリカゲルで精製して（ヘキサン−酢酸エチル８：２及び０．５％ＴＥＡ）、オレオ油３５０ｍｇを得た。実施例２Ｃの工程ｉに記載したのと同じ操作条件下でＣ−６反転により、２３（３２０ｍｇ、２工程にわたって７４％）が得られ、それを加水分解に付し、続いて、実施例２Ｆの工程ｅ、ｆの記載のようにＬｉＢＨ_４処理を行った。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、２０８ｍｇのＢＡＲ７１０（６５％、ｔ_Ｒ＝１１分）を得た。代替的に、２１に対してＣ−３で反転し、その後、アルカリ加水分解し、次いでＬｉＢＨ_４処理により、ＢＡＲ７１０が直接的に得られた。

【0215】

同一の実施形態では、アルカリ加水分解後のＬｉＢＨ_４処理により、少量（約１０％）の６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１２）が産生され、溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８８：１２）を用いて、Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）にてＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分、ｔ_Ｒ＝８分）単離した。

【0216】

ＢＡＲ７１０：Ｃ_２６Ｈ_４４Ｏ_４
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.67 (1H, br s, H-7), 2.33 (1H, m, H-23a), 2.21 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.5 Hz, H₃-21), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 7.6 Hz, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0217】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 178.3, 71.3, 67.5, 57.4, 51.7, 43.8, 42.8, 41.5, 41.2, 41.0, 37.0, 36.7, 33.8, 32.4, 32.0, 31.1 (2C), 29.3, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.2, 18.8, 12.3, 12.2

【0218】

ＢＡＲ７１２：Ｃ_２６Ｈ_４４Ｏ_４
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 4.01 (1H, br s, H-3), 3.06 (1H, t, J= 9.7 Hz, H-7), 2.32 (1H, m, H-23a), 2.19 (1H, m, H-23b), 0.97 (3H, s, H₃-19), 0.96 (3H, d, ovl, H₃-21), 0.87 (3H, t, J= 7.7 Hz, H₃-26), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0219】

工程ｅ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７１０）の調製

【0220】

ＢＡＲ７１０（１０ｍｇ）のアリコートを実施例２Ｆの工程ｇと同じ操作条件下で処理した。

【0221】

ＢＡＲＴ７１０：Ｃ_２８Ｈ_４８ＮＮａＯ_６Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.67 (1H, br s, H-7), 3.59 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH₂-N), 2,96 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH₂-S), 0.97 (3H, d, J= 6.4 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 7.1 Hz, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0222】

工程ｆ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０６）及び６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０７）の調製

【0223】

中間体２３（５００ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を、実施例２Ｃの工程ｊに記載のように乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬｉＢＨ_４（４ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（３２７μＬ、８．１ｍｍｏｌ）で処理した。溶出液（としてＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ １００−５ Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、ＢＡＲ７０６（２５０ｍｇ、ｔ_Ｒ＝１２．６分）及び少量の６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０７）（２３ｍｇ、ｔ_Ｒ＝８．２分）を得た。

【0224】

ＢＡＲ７０６：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3) ,3.66 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H₂-24), 0.96 (3H, d, J= 6.6Hz, H₃-21), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 7.5 Hz, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0225】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 135 MHzにて記録した： δ 71.4, 67.4, 63.6, 57.6, 51.7, 43.7, 42.8, 41.5, 41.2, 41.1, 37.1 (2C), 33.8, 33.2, 31.3 (2C), 30.3, 29.4, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.3, 19.2, 12.7, 12.1

【0226】

ＢＡＲ７０７：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 4.01 (1H, br s, H-3), 3.51 (2H, m, H₂-24), 3.05 (1H, t, J= 9.7 Hz, H-7), 0.97 (3H, s, H₃-19), 0.96 (3H, d, J= 6.4 Hz, H₃-21), 0.88 (3H, t, J= 7.6 Hz, H₃-26), 0.72 (3H, s, H₃-18)

【0227】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 76.3, 67.1, 63.6, 57.8, 56.8, 45.0, 44.8, 44.5, 41.7, 40.3, 39.1, 37.0, 35.9, 33.0, 31.2, 30.2, 29.8, 28.4, 28.0, 27.9, 24.8, 22.9, 21.8, 19.3, 12.8, 11.6

【0228】

工程ｇ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル ２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ）

【0229】

ＢＡＲ７０６の少量のアリコートにおけるＣ−２４上の硫酸化を、実施例１Ｂの段階ｇに記載の同じ操作条件下で行った。

【0230】

ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ：Ｃ_２６Ｈ_４５ＮａＯ_６Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s ovl, H-3), 3.96 (2H, t ovl, H₂-24), 3.65 (1H, br s, H-7), 0.96 (3H, d, J=6.6 Hz, H₃-21), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.90 (3H, t, J= 7.5 Hz, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0231】

工程ｈ、ｉ、ｊ）６β−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０８）及び６β−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０９）の調製

【0232】

化合物１９を工程ａと同じ操作条件下で処理した。実施例２Ａの工程ｆ、ｇの同じ操作条件で１００ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）のＮａＢＨ_４／ＬｉＢＨ_４還元により、そのＨＰＬＣ精製（８８％ ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ）により、純粋な６β−エチル−３β,７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０８）（４８．３ｍｇ、ｔ_Ｒ＝１１分）及び６β−エチル−３β,７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０９）（２０．７ｍｇ、ｔ_Ｒ＝１３分）の混合物を得た。あるいは、工程ｉを、その場で生成されたＣａ（ＢＨ_４）_２を用いて実施した。

【0233】

ＢＡＲ７０８：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.59 (1H, br s, H-3), 3.57 (1H, dd, J=12.6, 2.3 Hz, H-7), 3.51 (2H, m, H₂-24), 0.98 (3H, s, H₃-19), 0.96 (3H, ovl, H₃-21), 0.96 (3H, t, ovl, H₃-26), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0234】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 75.2, 68.3, 63.6, 58.3, 57.1, 45.7 (2C), 44.2, 41.8 (2C), 41.2, 40.0, 37.0, 35.9, 33.3, 31.1, 30.3, 29.4 (2C), 26.6 (2C), 23.2 (2C), 19.3, 13.0, 12.3

【0235】

ＢＡＲ７０９：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.91 (1H, br s, H-3), 3.60 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H₂-24), 2.45 (1H, t, J= 13.3 Hz, H-4a), 0.97 (3H, s, H₃-19), 0.97 (3H, ovl, H₃-21), 0.95 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-26), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0236】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 72.8, 67.4, 63.4, 57.2, 51.3, 51.2, 43.2, 41.6, 40.5, 37.3, 37.1 (2C), 36.9, 34.0, 33.3, 32.1, 30.3, 29.3, 28.9, 28.6, 26.3, 24.9, 22.0, 19.3, 13.8, 12.1

【0237】

実施例２Ｈ．６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイック酸（ＢＡＲｎ７０４）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴｎ７０４）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ７０１）及び６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲｎ７０１ｓｏｌｆ）

【0238】

ＢＡＲｎ７０４、ＢＡＲＴｎ７０４、ＢＡＲｎ７０１及びＢＡＲｎ７０１ｓｏｌｆを、１５から出発して、それらのＣ２４相同体について記載したのと同じ合成プロトコルに従って調製した（実施例２Ｆ、工程ａ〜ｉ）。

【0239】

【化30】

ａ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ； ｂ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、２工程で７３％； ｃ）ＬｉＢｒ、Ｌｉ２ＣＯ３、ＤＭＦ、灌流、ｄ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ １：１、室温、２工程にわたる定量的収率； ｅ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ、８０％； ｆ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、９２％； ｇ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ_３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥； ｈ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７０％； ｉ）Ｅｔ_３Ｎ．ＳＯ_３、ＤＭＦ、９５℃

【0240】

ＢＡＦｎ７０４：Ｃ_２５Ｈ_４２Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (1H, br s, H-7), 2.41 (1H, dd, J= 11.0, 2.6 Hz, H-22a), 1.00 (3H, d, J= 6.0 Hz, H₃-21), 0.90 (3H, s, H₃-19), 0.87 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-25), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0241】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 178.9, 71.6, 57.5, 51.7, 48.6, 43.8, 43.4, 43.3, 41.5, 40.9, 39.1, 37.4, 35.2, 34.6, 29.4, 28.8, 25.0, 24.6 (2C), 23.5, 22.4, 22.0, 20.1, 12.2, 12.1

【0242】

ＢＡＲＴｎ７０４：Ｃ_２７Ｈ_４６ＮＮａＯ_５Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (1H, br s, H-7), 3.59 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH₂-N), 2.96 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH₂-S), 2.40 (1H, dd, J= 11.0, 2.8 Hz, H-22a), 1.00 (3H, d, J= 6.0 Hz, H₃-21), 0.89 (3H, s, H₃-19), 0.86 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-25), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0243】

ＢＡＲｎ７０１：Ｃ_２５Ｈ_４４Ｏ_２
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.66 (1H, br s, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.54 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.7 Hz, H₃-21), 0.91 (3H, s, H₃-19), 0.89 (3H, t, J= 7.3 Hz, H₃-25), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0244】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 71.5, 60.8, 57.8, 51.7, 48.6, 43.8, 43.3, 41.5, 41.1, 39.9, 39.2, 37.4, 34.5, 34.2, 29.4, 28.8, 25.0, 24.6 (2C), 23.5, 22.5, 22.0, 19.4, 12.2, 12.1

【0245】

ＢＡＲｎ７０１ｓｏｌｆ：Ｃ_２５Ｈ_４３ＮａＯ_５Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 4.02 (2H, m, H₂-23), 3.65 (1H, br s, H-7), 0.97 (3H, d, J= 6.7 Hz, H₃-21), 0.91 (3H, s, H₃-19), 0.88 (3H, t, J= 7.5 Hz, H₃-25), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0246】

実施例２Ｉ．６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイック酸（ＢＡＲｎ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴｎ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ７０６）、及び６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲｎ７０６ｓｏｌｆ）

【0247】

【化31】

ａ）ＣＨ_３ＣＯＯＫ、ＤＭＦ：Ｈ_２Ｏ ５：１ ｖ／ｖ； ｂ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ； ｃ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で５８％； ｄ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ_３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥； ｅ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、５７％； ｆ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ_３、ＤＭＦ、９５℃

【0248】

ＢＡＲｎ７１０、ＢＡＲＴｎ７１０、ＢＡＲｎ７０６及びＢＡＲｎ７０６ｓｏｌｆを、２４から出発して、それらのＣ２４同族体について記載したものと同じ合成プロトコルに従って調製した（実施例２Ｇ、工程ｃ〜ｇ）。

【0249】

ＢＡＲｎ７１０：Ｃ_２５Ｈ_４２Ｏ_４
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.66 (1H, br s, H-7), 2.42 (1H, dd, J= 11.3, 3.3 Hz, H-22a), 1.02 (3H, d, J= 6.0 Hz, H₃-21), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 7.3 Hz, H₃-25), 0.73 (3H, s, H₃-18)

【0250】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 177.7, 71.3, 67.4, 57.4, 51.8, 43.8 (2C), 42.8, 41.5, 41.2, 41.0, 37.0, 35.1, 33.8, 31.3, 31.2, 29.4, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.2, 20.0, 12.2, 12.1

【0251】

ＢＡＲＴｎ７１０：Ｃ_２７Ｈ_４６ＮＮａＯ_６Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1 H, br s, H-3), 3.66 (1 H, br s, H-7), 3.59 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH₂-N), 2.96 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH₂-S), 2.42 (1H, dd, J= 11.3, 3.3 Hz, H-22a), 1.00 (3H, d, J= 6.3 Hz, H₃-21), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.90 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-25), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0252】

ＢＡＲｎ７０６：Ｃ_２５Ｈ_４４Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.67 (1H, br s, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.55 (1H, m, H-23b), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H₃-21), 0.95 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 7.4 Hz, H₃-25), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0253】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 71.4, 67.4, 60.8, 57.9, 51 .8, 43.8, 42.8, 41.5, 41 .2, 41.1 , 39.9, 37.0, 34.2, 33.8, 31.3, 31.2, 29.4, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.3, 19.4, 12.2, 12.1

【0254】

ＢＡＲｎ７０６ｓｏｌｆ：Ｃ_２５Ｈ_４３ＮａＯ_６Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 4.05 (2H, m, H₂-23), 3.97 (1H, br s, H-3), 3.66 (1H, br s, H-7), 1.00 (3H, d, J= 6.0 Hz, H₃-21), 0.94 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 6.9 Hz, H₃-25), 0.71 (3H, s, H₃-18)

【0255】

実施例２Ｊ．６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オイック酸（ＢＡＲ８０２）、６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オール（ＢＡＲ８０３）及び６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−イル−２６−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ８０４）

【0256】

【化32】

ａ）２，６−ルチジン，ｔ−ブチルジメチルシリル トリフルオロメタンスルホネート、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃； ｂ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＥ、０℃、２工程で６８％； ｃ）ＤＭＳＯ、塩化オキサリル、ＴＥＡ乾燥、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−７８℃、次にメチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート、７９％； ｄ）Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ Ｄｅｇｕｓｓａ型、ＴＨＥ／ＭｅＯＨ １：１、定量的収率； ｅ）ＨＣｌ ３７％、ＭｅＯＨ ８７％； ｆ）ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ １：１ ｖ／ｖ中のＮａＯＨ ５％、８９％； ｇ）ＬｉＢＨ_４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７８％； ｈ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ_３、ＤＭＦ、９５℃、２５％

【0257】

ＢＡＲ８０２−８０４は、実施例１Ａの工程ａ〜ｇと同じ合成プロトコルに従って調製した。実施例１Ｂの工程ｇと同じ操作条件下でＢＡＲ８０３の少量のアリコートを硫酸化してＢＡＲ８０４を得た。

【0258】

ＢＡＲ８０２：Ｃ_２８Ｈ_４８Ｏ_４
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.66 (1H, br s, H-7), 3.31 (1H, m ovl, H-3), 2.24 (2H, t, J= 7.3 Hz, H₂-25), 0.95 (3H, d, J= 6.4 Hz, H₃-21), 0.92 (3H, s, H₃-19), 0.91 (3H, t, J= 6.9 Hz, H₃-28), 0.70 (3H, s, H₃-18)

【0259】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 186.7, 73.3, 71.3, 57.7, 51.7, 47.0, 43.7, 43.1, 41.6, 41.1, 37.1, 36.9, 36.8, 36.6, 34.5, 34.4 (2C), 31.3, 29.4, 27.0 (2C), 24.6, 23.8, 23.5, 22.0, 19.2, 12.2, 12.0

【0260】

ＢＡＲ８０３：Ｃ_２８Ｈ_５０Ｏ_３
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (1H, br s, H-7), 3.53 (2H, t, J= 6.6 Hz, H₂-26), 3.30 (1H, m ovl, H-3), 0.94 (3H, d, J= 6.7 Hz, H₃-21), 0.91 (3H, s, H₃-19), 0.90 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-28), 0.68 (3H, s, H₃-18)

【0261】

¹³C NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 73.3, 71.3, 63.1, 57.7, 51.7, 47.0, 43.7, 43.1 , 41.6, 41.1, 37.1, 36.8 (2C), 36.6, 34.5, 34.4, 33.7, 31.3, 29.5, 27.4, 27.0, 24.6, 23.8, 23.5, 22.0, 19.3, 12.3, 12.0.

【0262】

ＢＡＲ８０４：Ｃ_２８Ｈ_４９ＮａＯ_６Ｓ
¹H NMRは、溶媒としてCD₃ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.99 (2H, t, J= 6.6 Hz, H₂-26), 3.65 (1 H, br s, H-7), 3.31 (1 H, m ovl, H-3), 0.94 (3H, d, J= 6.2 Hz, H₃-21), 0.91 (3H, s, H₃-19), 0.90 (3H, t, J= 7.0 Hz, H₃-28), 0.69 (3H, s, H₃-18)

【0263】

生物学的活性。選択された化合物の活性を、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）及びＴＬＣＡと比較してＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に対し、表１に示す化合物の選択性を確立するためにレポーター遺伝子でトランスフェクトした全細胞モデルを用いてインビトロで試験した。ＣＤＣＡはＦＸＲの内因性リガンドとして機能する一次胆汁酸であり、ＴＬＣＡはＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１の生理学的リガンドである。このアッセイにおいて、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％Ｌ−グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するアールス塩（Ｅａｒｌ’ｓ ｓａｌｔｓ）を用いてＨｅｐＧ２細胞（肝臓由来細胞株）を３７℃にて最小必須培地で培養した。ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％Ｌ−グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤ−ＭＥＭ中で３７℃にて培養した。トランスフェクション実験は、製造仕様に従ってＦｕｇｅｎｅ ＨＤを用いて行った。細胞を２４ウェルプレートに５×１０^４細胞／ウェルで播種した。ＦＸＲが介在するトランス活性化のために、１００ｎｇのｐＳＧ５−ＦＸＲ、１００ｎｇのｐＳＧ５−ＲＸＲ、１００ｎｇのｐＧＬ４．７０ヒトレニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）遺伝子をコードするベクター及び２５０ｎｇの、熱ショックタンパク質２７（ｈｓｐ２７）のプロモーターからクローニングされたＦＸＲ応答エレメントＩＲ１を含むレポーターベクターｐ（ｈｓｐ２７）−ＴＫ−ＬＵＣをＨｅｐＧ２へトランスフェクトした。

【0264】

ＧＰＢＡＲ１を介在するトランス活性化のために、ルシフェラーゼレポーター遺伝子ｌｕｃ２Ｐの転写を駆動するｃＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥ）を含むレポーターベクターである２００ｎｇのｐＧＬ４．２９、１００ｎｇのｐＣＭＶＳＰＯＲＴ６−ヒトＧＰＢＡＲ１、及びヒトレニラ遺伝子をコードするベクターである１００ｎｇのｐＧＬ４．７０をＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。対照実験では、化合物がＧＰＢＡＲ１非依存的にＣＲＥを活性化する可能性を排除するために、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にベクターｐＧＬ４．２９及びｐＧＬ４．７０のみをトランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後、細胞を、対照薬剤として１０μＭ ＴＬＣＡ又は同じ濃度で、推定ＧＰＢＡＲ１アゴニストにて１８時間刺激した。処理後、１００μＬの溶解緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−リン酸、ｐＨ７．８；２ｍＭ ＤＴＴ；１０％グリセロール；１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）中で細胞を溶解し、２０μＬの細胞溶解物についてルシフェラーゼアッセイシステムを用いて、ルシフェラーゼ活性をアッセイした。発光は、Ｇｌｏｍａｘ ２０／２０ルミノメーターを用いて測定した。ルシフェラーゼ活性はレニラ活性に対して標準化された。ＧＰＢＡＲ１／ＴＧＲ５のＦＸＲに対する拮抗作用は、アゴニズムの例としてＴＬＣＡの活性を示すトランス活性化アッセイにおける活性のパーセントとして測定した。

【0265】

動物及びプロトコル。ＧＰＢＡＲ１ヌルマウス（ＧＰＢＡＲ１−Ｂ６＝ＧＰＢＡＲ１２／２マウス、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌバックグラウンドに直接作製）、及びＣ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌの同系同腹仔を、制御された温度（２２℃）及び光周期（１２時間：１２時間 明／暗サイクル）で飼育し、標準的なマウス飼料及び水道水への無制限のアクセスを可能にし、実験を行う前にこれらの状態に少なくとも５日間順応させた。

【0266】

スクラッチテスト。この研究には、雄のＧＰＢＡＲ１^−／−マウス及びその同系同腹子（８〜１２週齢）を用いた。頚部の基部の毛皮を剃り、マウスをガラス棚の個々のシリンダーに入れた。直径約０．５ｃｍの円周を頚部に描き、この領域に試験剤を注射した。実験前の２日間連続して２時間にわたって、マウスを、実験室、拘束装置及び研究者に順応させた。スクラッチング行動は、試験した薬剤又は遺伝子型を知らない２人の観察者によって定量化した。スクラッチは、注射部位に後肢を持ち上げた後、ストローク数にかかわらず、足を床に置くこととして定義された。カウントが３０分の間に５回以上のスクラッチが異なった場合、両方の観察者は記録を再評価した。結果は、観察の３０分又は６０分の間のすくラッチング事象の数として表された。試験された薬剤は：ＤＣＡ（２５μｇ）、ＴＬＣＡ（２５μｇ）、ＵＤＣＡ（２５μｇ）及びＢＡＲ５０２（２５μｇ）、又はベツリン酸（５０μｇ）、オレアノール酸（５０μｇ）であった。ＬＣＡ及びＤＣＡをＤＭＳＯに溶解し、他の薬剤を０．９％ＮａＣｌ（１０μＬ）に溶解した。別の実験設定において、ＧＰＢＡＲ１^−／−マウス及びそれらの同系同腹子に、オリーブ油に溶解したα−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）（２５ｍｇ／ｋｇ、経口）又はオリーブ油単独（対照マウス）又は、ＡＮＩＴ＋ＢＡＲ５０２の組み合わせ（１５ｍｇ／ｋｇ、１日１回、経口）を１０日間投与した。５日目に、自発的引っ掻きをＤＣＡ２５μｇの皮下注射後、６０分間評価した。Ｈｉｔａｃｈｉ７１７自動分析装置で行われる日常の臨床化学試験により、総ビリルビン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアルカリホスファターゼの血清レベルを測定した。エストロゲンモデルでは、腹腔内に１０ｍｇ／ＫｇにてＰＥＧに溶解した１７α−エチニルエストラジオール（１７αＥ_２）又はＰＥＧ単独（対照マウス）又は１７αＥ２及びＢＡＲ５０２（１５ｍｇ／Ｋｇ、毎日、経口）の組合せを、８日間投与した。研究の終わりに、25μgのＤＣＡの皮下注射によって誘発された自発的なスクラッチング及びスクラッチングを記録した。胆嚢重量並びにビリルビン及びアルカリホスファターゼの血清レベルもまた測定した。研究を通して、動物は、月曜日から金曜日まで少なくとも１日２回、週末は１回、調査員及び動物施設の獣医師を含む高度に訓練された動物施設職員によって視覚的に評価された。動物を毎日秤量し、指示された時点、又は、７日間で基礎体重の２５％を超える体重の減少によって評価されるような臨床状態が重大になる場合に屠殺した。さらに、毎日の評価で、彼らが立ち上がり又は歩行不能であることが示された場合に動物を屠殺した。ペントバルビタールナトリウムの過剰投与（＞１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）によりマウスを安楽死させた。

【国際調査報告】