特表 2017-532310 免疫原性／治療用糖コンジュゲート組成物およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2017-532310(P2017-532310A)

(43)【公表日】2017年11月2日

(54)【発明の名称】免疫原性／治療用糖コンジュゲート組成物およびその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20171006BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20171006BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20171006BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20171006BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20171006BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20171006BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20171006BHJP

   C07K 14/435 20060101ALN20171006BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/00 HZNA

   A61P35/00

   A61P43/00 111

   A61P37/04

   A61K47/64

   A61K47/26

   A61K39/39

   C07K14/435

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】131

(21)【出願番号】特願2017-514552(P2017-514552)

(86)(22)【出願日】2015年9月15日

(85)【翻訳文提出日】2017年5月11日

(86)【国際出願番号】US2015050270

(87)【国際公開番号】WO2016044326

(87)【国際公開日】20160324

(31)【優先権主張番号】62/050,567

(32)【優先日】2014年9月15日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US

(71)【出願人】

【識別番号】516080655

【氏名又は名称】オービーアイ ファーマ，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ユー， チェン−ダー トニー

(72)【発明者】

【氏名】シェイ， イー ファン

(72)【発明者】

【氏名】チェン， イ ジュ

(72)【発明者】

【氏名】リー， ウェイ−ハン

(72)【発明者】

【氏名】ワン， ナン−シュアン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA01

4C076AA06

4C076AA09

4C076AA12

4C076AA16

4C076AA17

4C076AA22

4C076AA24

4C076AA29

4C076AA36

4C076AA53

4C076AA61

4C076BB01

4C076BB13

4C076BB14

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB27

4C076BB29

4C076BB31

4C076CC07

4C076CC27

4C076EE41

4C076FF04

4C076FF05

4C076FF06

4C076FF09

4C076FF12

4C076FF14

4C076FF16

4C076FF21

4C076FF39

4C076FF52

4C076FF53

4C076FF61

4C085AA03

4C085AA38

4C085BB24

4C085CC31

4C085CC33

4C085DD32

4C085DD86

4C085EE01

4C085EE06

4C085FF01

4C085FF02

4C085FF03

4C085FF12

4C085FF13

4C085FF14

4C085FF17

4C085FF18

4C085FF19

4C085FF20

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG08

4C085GG10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA53

4H045CA50

4H045EA31

(57)【要約】

本開示は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（ＯＢＩ−８２２）および／または治療用アジュバント（ＯＢＩ−８２１／ＯＢＩ−８３４）を含む免疫原性／治療用組成物、ならびにがんなどの増殖性疾患を処置するためにそれらを作出し使用する方法を包含する。治療用コンジュゲートは、担体と連結した抗原を含む。詳細には、治療用コンジュゲートは、任意選択でリンカーを介して連結した、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分ならびにＫＬＨ部分および／または誘導体化ＫＬＨ部分サブユニットを含む。治療用組成物は、一部において、体の、がん細胞などの損傷を受けたまたは異常な細胞によって生じる危険から免疫系を通じて自身を保護する天然の能力を高めるためのがんワクチンとして作用することが予想される。

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【特許請求の範囲】

【請求項1】

１〜２０個（ｎ＝１〜２０）のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分と共有結合により連結した複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む組成物であって、前記Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分が、前記ＫＬＨ部分と１個または複数のアミノ酸残基において共有結合により結合している、組成物。

【請求項2】

前記アミノ酸残基が、塩基性、中性、疎水性アミノ酸残基および／またはそれらの組合せである、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記アミノ酸残基が、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン、プロリン、グルタミンおよび／またはそれらの組合せである、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記ＫＬＨ部分が、単量体（ｎ＝１）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記ＫＬＨ部分が、二量体（ｎ＝２）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記ＫＬＨ部分が、三量体（ｎ＝３）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記ＫＬＨ部分が、四量体（ｎ＝４）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

前記ＫＬＨ部分が、五量体（ｎ＝５）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項9】

前記ＫＬＨ部分が、六量体（ｎ＝６）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

前記ＫＬＨ部分が、七量体（ｎ＝７）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項11】

前記ＫＬＨ部分が、八量体（ｎ＝８）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

前記ＫＬＨ部分が、九量体（ｎ＝９）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

前記ＫＬＨ部分が、十量体（ｎ＝１０）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項14】

前記ＫＬＨ部分が、十一量体（ｎ＝１１）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項15】

前記ＫＬＨ部分が、十二量体（ｎ＝１２）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項16】

前記ＫＬＨ部分が、十三量体（ｎ＝１３）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項17】

前記ＫＬＨ部分が、十四量体（ｎ＝１４）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項18】

前記ＫＬＨ部分が、十五量体（ｎ＝１５）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項19】

前記ＫＬＨ部分が、十六量体（ｎ＝１６）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項20】

前記ＫＬＨ部分が、十七量体（ｎ＝１７）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項21】

前記ＫＬＨ部分が、十八量体（ｎ＝１８）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項22】

前記ＫＬＨ部分が、十九量体（ｎ＝１９）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項23】

前記ＫＬＨ部分が、二十量体（ｎ＝２０）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項24】

前記ＫＬＨ部分が互いに同じである、請求項１に記載の組成物。

【請求項25】

前記ＫＬＨ部分が互いに異なる、請求項１に記載の組成物。

【請求項26】

各ＫＬＨ部分が、同じ数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項27】

各ＫＬＨ部分が、異なる数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項28】

前記Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分が、（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項29】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、配列番号１のものである、請求項１に記載の組成物。

【請求項30】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号１のＫＬＨ部分と少なくとも９５％同一である、請求項１に記載の組成物。

【請求項31】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号１のＫＬＨ部分と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載の組成物。

【請求項32】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号１のＫＬＨ部分と少なくとも８０％同一である、請求項１に記載の組成物。

【請求項33】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、配列番号２のものである、請求項１に記載の組成物。

【請求項34】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号２のＫＬＨ部分と少なくとも９５％同一である、請求項１に記載の組成物。

【請求項35】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号２のＫＬＨ部分と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載の組成物。

【請求項36】

前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号２のＫＬＨ部分と少なくとも８０％同一である、請求項１に記載の組成物。

【請求項37】

キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結したＧｌｏｂｏ Ｈ部分が、４−（４−Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）連結によって連結している、請求項１に記載の組成物。

【請求項38】

少なくとも１５０：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の単離された治療用コンジュゲート。

【請求項39】

少なくとも１２５：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項40】

少なくともまたは約１００：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の単離された治療用コンジュゲート。

【請求項41】

少なくとも７５：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項42】

少なくとも５０：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項43】

少なくとも２５：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項44】

少なくとも１０：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項45】

少なくとも１：１のエピトープ比を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項46】

それを必要とする患者においてがんを処置する方法であって、前記患者に治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項47】

前記がんが、乳がん、肺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、膵がん、前立腺がん、卵巣がん、上皮がんまたは子宮体がんである、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記がんが、Ｇｌｏｂｏ Ｈ発現がんである、請求項４６に記載の方法。

【請求項49】

治療または診断に使用するためのモノクローナル抗体を創出するために対象において抗体を誘導する方法であって、前記対象に有効量の請求項１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項50】

前記対象が、動物またはヒトである、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

（ａ）１個または複数のＫＬＨ部分サブユニットと共有結合により連結した複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分と、
（ｂ）α−ガラクトシル−セラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）アジュバントと
を含む医薬組成物。

【請求項52】

前記α−ＧａｌＣｅｒアジュバントが以下の構造：

【化14】

[この文献は図面を表示できません]

を有する、請求項５１に記載の組成物。

【請求項53】

前記ＫＬＨ部分が、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、六量体、七量体、八量体、九量体、十量体、十一量体、十二量体、十三量体、十四量体、十五量体、十六量体、十七量体、十八量体、十九量体または二十量体を形成し得る、請求項５１に記載の組成物。

【請求項54】

治療または診断に使用するためのモノクローナル抗体を創出するために、対象において抗体を誘導する方法であって、前記対象に有効量の請求項５１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項55】

前記対象が、動物またはヒトである、請求項５４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、がん免疫療法のための組成物および方法、特に抗がん免疫応答を引き出すことができる免疫原性／治療用糖コンジュゲートを対象とする。

【背景技術】

【0002】

炭水化物抗原Ｇｌｏｂｏ Ｈ（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）は、１９８４年に、Ｈａｋｏｍｏｒｉらにより乳がんＭＣＦ−７細胞からセラミドと連結した糖脂質として最初に単離され、同定された（Bremer E Gら（１９８４年）J Biol Chem ２５９巻：１４７７３〜１４７７７頁）。抗Ｇｌｏｂｏ Ｈモノクローナル抗体を用いたさらなる試験により、Ｇｌｏｂｏ Ｈは、前立腺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、肺がん、卵巣がんおよび結腸がんを含めた多くの他のがんに存在し、免疫系が容易に近づくことができない正常な分泌組織の管腔側での発現は最小のものでしかないことが示された（Ragupathi Gら（１９９７年）Angew Chem Int Ed ３６巻：１２５〜１２８頁）。さらに、乳がん患者の血清が高レベルの抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体を含有することが確立されている（Gilewski Tら（２００１年）Proc Natl Acad Sci USA ９８巻：３２７０〜３２７５頁；Huang C-Yら（２００６年）Proc Natl Acad Sci USA １０３巻：１５〜２０頁；Wang C-Cら（２００８年）Proc Natl Acad Sci USA １０５巻（３３号）：１１６６１〜１１６６６頁）。Ｇｌｏｂｏ Ｈ陽性腫瘍を有する患者は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ陰性腫瘍を有する患者と比較して生存が短いことが示された（Chang, Y-Jら（２００７年）Proc Natl Acad Sci USA １０４巻（２５号）：１０２９９〜１０３０４頁）。これらの所見から、六糖エピトープであるＧｌｏｂｏ Ｈは魅力的な腫瘍マーカー、およびがんワクチン開発のための実現可能な標的となる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0003】

【非特許文献1】Bremer E Gら（１９８４年）J Biol Chem ２５９巻：１４７７３〜１４７７７頁

【非特許文献2】Ragupathi Gら（１９９７年）Angew Chem Int Ed ３６巻：１２５〜１２８頁

【非特許文献3】Gilewski Tら（２００１年）Proc Natl Acad Sci USA ９８巻：３２７０〜３２７５頁

【非特許文献4】Huang C-Yら（２００６年）Proc Natl Acad Sci USA １０３巻：１５〜２０頁

【非特許文献5】Wang C-Cら（２００８年）Proc Natl Acad Sci USA １０５巻（３３号）：１１６６１〜１１６６６頁

【非特許文献6】Chang, Y-Jら（２００７年）Proc Natl Acad Sci USA １０４巻（２５号）：１０２９９〜１０３０４頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

Ｇｌｏｂｏ Ｈに対する抗体応答を引き出すためのワクチンが開発されてきたが、Ｇｌｏｂｏ Ｈの抗原性が低いことに起因して、それらのワクチンの抗がん有効性は不十分なものである。Ｇｌｏｂｏ Ｈを標的とする高レベルの免疫応答を引き出すことができる新しいワクチンが必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0005】

ＫＬＨは、集合して十量体（１０−ｍｅｒ）粒子、二十量体（ｄｉｄｅｃａｍｅｒｉｃ）（２０−ｍｅｒ）粒子、およびより大きな粒子を形成することができるグリコシル化ポリペプチドサブユニットを含有する。これらの多量体構造は超遠心技法によって特徴付けられており、解離したサブユニットについては１１〜１９Ｓ、二十量体多量体については９２〜１０７Ｓの沈降係数が得られた。ＫＬＨを含めた軟体動物ヘモシアニンのサイズ分布には種々の因子が影響を及ぼす可能性がある。これらの因子としては、イオン強度、ｐＨ、温度、ｐＯ２、ならびに、ある特定の二価カチオン、特にカルシウムおよびマグネシウムの利用可能性が挙げられる。
本発明者らは、複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分と連結したＫＬＨの二量体、三量体ならびに他の多量体で主に構成される、有効性が驚くほど増大した組成物を開発した。

【0006】

したがって、本開示は、一般に、Ｇｌｏｂｏ Ｈを含む治療用かつ／または予防用組成物、ならびに、免疫療法薬、ワクチン、剤形、キット、および製造の方法、およびその取扱いを包含する。

【0007】

一実施形態では、本発明は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと連結したＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む単離された治療用コンジュゲートを包含する。ある特定の実施形態では、連結は、共有結合的結合である。

【0008】

別の実施形態では、本発明は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結したＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む単離された治療用コンジュゲートであって、ＫＬＨが誘導体化ＫＬＨである、単離された治療用コンジュゲートを包含する。本明細書で使用される「共有結合により連結した」という用語は、Ｇｌｏｂｏ−ＨおよびＫＬＨについて言及する場合、Ｇｌｏｂｏ−ＨとＫＬＨが直接共有結合により連結しているか、Ｇｌｏｂｏ−Ｈと誘導体化ＫＬＨ（本明細書に記載の）が共有結合により連結しているか、Ｇｌｏｂｏ−ＨとＫＬＨがリンカー基（本明細書に記載の）を通じて共有結合により連結しているか、または、Ｇｌｏｂｏ−ＨとＫＬＨがリンカー基および誘導体化ＫＬＨの両方を通じて共有結合により連結していることを意味する。

【0009】

ある特定の例示的な実施形態では、本発明の誘導体化ＫＬＨは、以下の構造：

【化1】

[この文献は図面を表示できません]

を有する。

【0010】

一実施形態では、本発明は、リンカー分子を通じてキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結したＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む単離された治療用コンジュゲートを包含する。

【0011】

一実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分は、ＫＬＨ部分サブユニットのリシン残基に結合している。

【0012】

一実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分に対して利用可能であるまたはそれと実際に直接もしくは間接的に結合する総リシン残基は、ＫＬＨ部分サブユニット当たり、合計で、正確にまたは約１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０個存在する。

【0013】

別の実施形態では、本発明は、４−（４−Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）リンカー基を介してキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結したＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む単離された治療用コンジュゲートを包含する。本発明のＭＭＣＣＨリンカーは、以下の構造：

【化2】

[この文献は図面を表示できません]

を有する。

【0014】

別の例示的な実施形態では、本発明は、以下の一般構造：

【化3】

[この文献は図面を表示できません]

（式中、ｎは、約１〜約１６０の整数である）
を有する単離された治療用コンジュゲートを包含する。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分は、約１〜約１６０個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。構造はイミニウム塩酸塩として例示されているが、イミン形態としても存在または共存し得ることが当業者には理解されよう。したがって、本発明は、イミンならびに例えばイミニウム塩酸塩を含めたその塩の両方を包含する。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分は、約個〜約１２５個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分は、約１〜約１００個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分は、１〜約７５個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分は、約１〜約５０個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分は、約１〜約２５個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分は、約１〜約１０個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。

【0015】

ある特定の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分をＫＬＨ部分に、ある特定のアミノ酸残基への共有結合によりコンジュゲートする。ある特定の実施形態では、アミノ酸残基は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、アスパラギン、プロリン、グルタミンまたはそれらの組合せを含んでも、これらが排除されてもよい。

【0016】

別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分を単量体ＫＬＨ部分サブユニット上のリシンコンジュゲーション部位に結合させる。

【0017】

別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分との結合に利用可能であるまたは実際に結合する、各単量体ＫＬＨ部分サブユニット上のリシンコンジュゲーション部位は、正確にまたは約６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９または１１０カ所存在する。別の実施形態では、各ＫＬＨ部分サブユニット上のそのようなリシンコンジュゲーション部位は、６２、６６、６７、６８、７０、７２、７６、８６、８７、８８、９０、９２、９３、１００カ所存在する。

【0018】

部分サブユニット（例えば、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２またはそれらのバリアント）の混合物を含有するある特定の治療用組成物の実施形態では、利用可能なリシンの総数（両方のサブユニットについて）は、異なるサブユニット型にわたって合わせて計数され、その数は、正確に約２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９または３１０個であり得るかまたはそれである。そのような実施形態では、リシンコンジュゲーション部位は、異なるサブユニット（例えば、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２またはそれらのバリアント）にわたって合わせて、正確にまたは約１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９または１６０カ所存在する。他のそのような実施形態では、リシンコンジュゲーション部位は、１３６、１３７、１４１、１４０、１４３、１４７または１５５カ所存在する。

【0019】

別の例示的な実施形態では、本発明は、以下の一般構造：

【化4】

[この文献は図面を表示できません]

（式中、ｎは、独立に、約１〜約３０００の整数であり、ｍは、独立に、約１〜約２０の整数である）を有する単離された免疫原性／治療用コンジュゲートを包含する。ある特定の実施形態では、ｍが１を超える場合、ＫＬＨ部分は凝集して多量体構造を形成し得る。ある特定の実施形態では、凝集は共有結合的結合である。ある特定の他の実施形態では、凝集は共有結合的結合ではない（例えば、凝集はＨ−結合または疎水性相互作用によって形成される）。ある特定の実施形態では、単量体ＫＬＨ部分（すなわち、ｍ＝１の場合）は、約１〜約１６０個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、二量体ＫＬＨ部分（すなわち、ｍ＝２の場合）は、約１〜約３００個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、三量体ＫＬＨ部分（すなわち、ｍ＝３の場合）は、約１〜約４５０個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、四量体ＫＬＨ部分（すなわち、ｍ＝４の場合）は、約１〜約６００個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、五量体ＫＬＨ部分（すなわち、ｍ＝５の場合）は、約１〜約７５０個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、六量体ＫＬＨ部分（すなわち、ｍ＝６の場合）は、約１〜約９００個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。ある特定の実施形態では、二十量体ＫＬＨ部分（すなわち、ｍ＝２０の場合）は、約１〜約３０００個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含み得る。

【0020】

別の例示的な実施形態では、本発明は、以下の一般構造：

【化5】

[この文献は図面を表示できません]

（式中、ｎは、独立に、約１〜約１５０の整数であり、ｍは、独立に、約１〜約２０の整数である）を有する単離された免疫原性／治療用コンジュゲートを包含する。

【0021】

別の実施形態では、本発明は、以下の一般構造：

【化6】

[この文献は図面を表示できません]

（ｎは、独立に、約１〜約１６０の整数であり、ｍは、独立に、約１〜約２０の整数である）を有する単離された治療用コンジュゲートを包含する。ある特定の実施形態では、ｍは、約１〜約５の整数である。ある特定の実施形態では、ｍは、約１〜約３の整数である。ある特定の実施形態では、ｍは１である。ある特定の実施形態では、ｍは２である。ある特定の実施形態では、ｍは３である。ある特定の実施形態では、ｍは４である。ある特定の実施形態では、ｍは５である。ある特定の実施形態では、ｍは６である。ある特定の実施形態では、ｍは７である。ある特定の実施形態では、ｍは８である。ある特定の実施形態では、ｍは９である。ある特定の実施形態では、ｍは１０である。ある特定の実施形態では、ｍは１１である。ある特定の実施形態では、ｍは１２である。ある特定の実施形態では、ｍは１３である。ある特定の実施形態では、ｍは１４である。ある特定の実施形態では、ｍは１５である。ある特定の実施形態では、ｍは１６である。ある特定の実施形態では、ｍは１７である。ある特定の実施形態では、ｍは１８である。ある特定の実施形態では、ｍは１９である。ある特定の実施形態では、ｍは２０である。上記の実施形態のいずれかに関するある特定の実施形態では、ｍが１〜２０である場合、各ｎは、それぞれ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、または１６０である。

【0022】

ある特定の実施形態では、各単量体ＫＬＨ部分に１個超のＧｌｏｂｏ Ｈ部分が付着している。ある特定の例示的な実施形態では、各ＫＬＨ部分に付着した１個超のＧｌｏｂｏ Ｈ部分は、リンカーを介して付着している。他の例示的な実施形態では、各ＫＬＨ部分に付着した１個超のＧｌｏｂｏ Ｈ部分は、リンカーを介して付着しており、かつ、誘導体化ＫＬＨ部分に付着している。

【0023】

別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも１である。別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも１０である。別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分との比は少なくとも２５である。別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも５０である。さらなる実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも１００である。さらなる実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも１５０である。さらに別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも５００である。さらに別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも７５０である。さらに別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも１０００である。さらに別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも１５００である。さらに別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比は少なくとも２０００である。

【0024】

種々の実施形態では、本発明は、それぞれ多数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分が付着した、ＫＬＨの単一の単量体から多数のＫＬＨサブユニット（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個）を包含する。ある特定の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分との比は同じである。他の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分との比は異なる。

【0025】

本発明の別の実施形態は、少なくとも２個のＫＬＨ部分を含む組成物を包含する。例えば、二量体の形態の誘導体化ＫＬＨ部分。別の実施形態では、少なくとも２個のＫＬＨ部分は同じである。別の実施形態では、少なくとも２個のＫＬＨ部分は異なる。さらなる実施形態では、少なくとも２個のＫＬＨ部分は、同じＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。さらに別の実施形態では、少なくとも２個のＫＬＨ部分は、異なるＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。

【0026】

本発明の別の実施形態は、少なくとも３個のＫＬＨ部分、例えば、三量体の形態の誘導体化ＫＬＨ部分を含む治療用組成物を包含する。ある特定の実施形態では、少なくとも３個のＫＬＨ部分は同じである。別の実施形態では、少なくとも３個のＫＬＨ部分は同じではない。さらなる実施形態では、少なくとも３個のＫＬＨ部分は、同じＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。さらに別の実施形態では、少なくとも３個のＫＬＨ部分は、異なるＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。

【0027】

本発明の別の実施形態は、少なくとも４個のＫＬＨ部分、例えば、四量体の形態の誘導体化ＫＬＨ部分を含む治療用組成物を包含する。ある特定の実施形態では、少なくとも４個のＫＬＨ部分は同じである。別の実施形態では、少なくとも４個のＫＬＨ部分は同じではない。さらなる実施形態では、少なくとも４個のＫＬＨ部分は、同じＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。さらに別の実施形態では、少なくとも４個のＫＬＨ部分は、異なるＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。

【0028】

本発明の別の実施形態は、少なくとも５個のＫＬＨ部分、例えば、五量体の形態の誘導体化ＫＬＨ部分を含む治療用組成物を包含する。ある特定の実施形態では、少なくとも５個のＫＬＨ部分は同じである。別の実施形態では、少なくとも５個のＫＬＨ部分は同じではない。さらなる実施形態では、少なくとも５個のＫＬＨ部分は、同じＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。さらに別の実施形態では、少なくとも５個のＫＬＨ部分は、異なるＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。

【0029】

本発明の別の実施形態は、少なくとも６個のＫＬＨ部分、例えば、六量体の形態の誘導体化ＫＬＨ部分を含む治療用組成物を包含する。ある特定の実施形態では、少なくとも６個のＫＬＨ部分は同じである。別の実施形態では、少なくとも６個のＫＬＨ部分は同じではない。さらなる実施形態では、少なくとも６個のＫＬＨ部分は、同じＧｌｏｂｏ Ｈ部分とのＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。さらに別の実施形態では、少なくとも６個のＫＬＨ部分は、異なるＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。

【0030】

本発明の別の実施形態は、少なくとも２０個のＫＬＨ部分、例えば、二十量体（ｄｉｄｅｃａｍｅｒ）の形態の誘導体化ＫＬＨ部分を含む治療用組成物を包含する。ある特定の実施形態では、少なくとも２０個のＫＬＨ部分は同じである。別の実施形態では、少なくとも２０個のＫＬＨ部分は同じではない。さらなる実施形態では、少なくとも２０個のＫＬＨ部分は、同じＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとの比を有する。さらに別の実施形態では、少なくとも２０個のＫＬＨ部分は、異なるＧｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分サブユニットとのを有する。

【0031】

一実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分は、（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）を含む。さらなる実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニットは、ＫＬＨ−１部分またはＫＬＨ−２部分またはそれらの組合せである。本明細書で使用される場合、「ＫＬＨ」という用語は、ＫＬＨ−１、ＫＬＨ−２、および／またはそれらの組合せを指す。

【0032】

別の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニットは、対応する天然に存在するＫＬＨ部分サブユニットと少なくとも９９％同一である。

【0033】

別の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニットは、対応する天然に存在するＫＬＨ部分サブユニットと少なくとも９５％同一である。

【0034】

別の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニットは、対応する天然に存在するＫＬＨ部分サブユニットと少なくとも９０％同一である。

【0035】

別の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニットは、対応する天然に存在するＫＬＨ部分サブユニットと少なくとも８０％同一である。

【0036】

別の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニットは、対応する天然に存在するＫＬＨ部分サブユニットと少なくとも７０％同一である。

【0037】

別の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニットは、対応する天然に存在するＫＬＨ部分サブユニットと少なくとも６０％同一である。

【0038】

別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと、リンカーを介して共有結合により連結している。さらに別の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと、４−（４−Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）連結によって共有結合により連結している。別のさらなる実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分は、誘導体化キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結しており、４−（４−Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）連結によって連結している。

【0039】

別の実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、約３５０ＫＤａ〜約４００ＫＤａの分子量を有するＫＬＨ単量体に基づいて、少なくともまたは約１５０であるエピトープ比を有する。別の実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、少なくともまたは約１００のエピトープ比を有する。さらなる実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、少なくともまたは約７５のエピトープ比を有する。さらに別の実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、少なくともまたは約５０のエピトープ比を有する。さらに別の実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、少なくともまたは約２５のエピトープ比を有する。さらに別の実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、少なくともまたは約１５のエピトープ比を有する。さらに別の実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、少なくともまたは約５のエピトープ比を有する。さらに別の実施形態では、単離された治療用コンジュゲートは、少なくともまたは約１のエピトープ比を有する。

【0040】

本発明の別の実施形態は、ＫＬＨ部分サブユニットを含む医薬組成物であって、各ＫＬＨ部分サブユニットが、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結した１個または複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む医薬組成物を包含する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも２個のＫＬＨ部分サブユニットの二量体を含み、各ＫＬＨ部分サブユニットは、ＫＬＨ部分サブユニットと共有結合により連結した１個または複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも３個のＫＬＨ部分サブユニットの三量体を含み、各ＫＬＨ部分サブユニットは、ＫＬＨ部分サブユニットと共有結合により連結した１個または複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも４個のＫＬＨ部分サブユニットを含み、各ＫＬＨ部分サブユニットは、ＫＬＨ部分サブユニットと共有結合により連結した１個または複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ＫＬＨ部分サブユニット（例えば、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体など）の混合物を含み、各ＫＬＨ部分サブユニットは、ＫＬＨ部分サブユニットと共有結合により連結した多数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む。

【0041】

本発明の別の態様は、ＫＬＨ部分の単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体またはそれらの組合せを含む医薬組成物であって、各ＫＬＨが、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結した１個または複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む医薬組成物に関する。

【0042】

本発明の一実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートのエピトープ比は、約１〜３０００の範囲である。さらなる実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートのエピトープ比は、約７５〜２０００の範囲である。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートのエピトープ比は、約１００〜１０００の範囲である。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの平均エピトープ比は、約１５０〜５００の範囲である。

【0043】

別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約１％〜９９％はＫＬＨ単量体である。さらなる実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％はＫＬＨ二量体である。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％はＫＬＨ三量体である。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％はＫＬＨ四量体である。さらなる実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約１％〜９９％はＫＬＨ五量体である。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は６個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は７個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は８個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は９個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１０個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１１個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１２個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１３個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１４個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１５個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１６個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１７個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１８個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は１９個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約０％〜９９％は２０個のＫＬＨサブユニットを含む。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約１％〜９９％は単量体、二量体、三量体、四量体またはそれらの組合せである。さらに別の実施形態では、組成物中の治療用コンジュゲートの約９９％は単量体、二量体、三量体、四量体またはそれらの組合せである。

【0044】

ある特定の実施形態では、ある特定の例示的な組成物の実施形態およびその使用方法は、本明細書に記載されている他の代表的な化合物および／または組成物の実施形態の任意の１つまたは複数を含んでもよく、これらが排除されてもよい（例えば条件付きで除く）。

【0045】

別の実施形態では、医薬組成物は、アジュバントを含む。本明細書で使用される場合、「免疫学的アジュバント（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ａｄｊｕｖａｎｔ）」という用語は、免疫原と併せて使用される、免疫原に対する免疫応答を増強または改変する物質を指す。具体的には、「アジュバント」および「免疫アジュバント（ｉｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔ）」という用語は、本発明では互換的に使用され、宿主に単独で投与された場合には非免疫原性であり得るが、別の抗原と共同で投与されるとその抗原に対する宿主の免疫応答を強化する化合物または混合物を指す。アジュバントにより媒介される免疫応答の増強および／または持続時間の延長は、これだけに限定することなく、以下のうちの１つまたは複数を含めた当技術分野で公知の任意の方法によって評価することができる：（ｉ）アジュバント／抗原組合せを用いた免疫に応答して産生される抗体の数が、抗原を単独で用いた免疫に応答して産生される抗体の数よりも増加すること；（ｉｉ）抗原またはアジュバントを認識するＴ細胞の数が増加すること；および（ｉｉｉ）１つまたは複数のＩ型サイトカインのレベルが上昇すること。

【0046】

アジュバントは、抗原を含む医薬組成物もしくはワクチン組成物の一部として、または抗原を含有する第２の組成物と共同で投与される別の製剤として投与することができる。これらの組成物のいずれにおいても、スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を他のアジュバントおよび／または賦形剤／担体と組み合わせることができる。これらの他のアジュバントとしては、これだけに限定されないが、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、ＭＦ５９、またはＳＡＦなどの、油乳剤および乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）に基づくアジュバント；水酸化アルミニウム（ミョウバン）、リン酸アルミニウムまたはリン酸カルシウムなどの無機ゲル；コレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＬＴ）、突然変異毒素（例えば、ＬＴＫ６３またはＬＴＲ７２）、Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、ＤＮＡ ＣｐＧモチーフ、ムラミルジペプチド、またはモノホスホリルリピドＡなどの、微生物由来のアジュバント；免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、リポソーム、生分解性マイクロスフェア、またはサポニン（例えば、ＱＳ−２１）などの粒子アジュバント；ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２またはＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカイン；非イオン性ブロック共重合体、ムラミルペプチド類似体（例えば、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン［ｔｈｒ−ＭＤＰ］、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−［１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ］−エチルアミン）、ポリホスファゼン、または合成ポリヌクレオチドなどの合成アジュバント、ならびに、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、炭化水素乳剤、またはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などの表面活性物質、Ｔｏｌｌ様受容体分子、ＬＰＳ、リポタンパク質、リポペプチド、フラジェリン、二本鎖ＲＮＡ、ウイルスＤＮＡ、非メチル化ＣｐＧアイランド、レバミソール、カルメット−ゲラン桿菌、イソプリノシン、Ｚａｄａｘｉｎ、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤ−１抗体、ＣＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ抗体、インターロイキン、サイトカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、糖脂質、アルミニウム塩に基づくもの、リン酸アルミニウム、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リポソーム、ＴＬＲ２アゴニスト、リポペプチド、ナノ粒子、モノホスホリルリピドＡ、ＯＢＩ−８２１サポニン、サポニン、ＯＢＩ−８３４アジュバント、Ｃ３４アジュバント、水中油型ナノ乳剤、ならびに細菌様粒子が挙げられる。これらの追加的なアジュバントは、ヒトにおける使用に関して薬学的に許容されるものでもあることが好ましい。

【0047】

別の実施形態では、医薬組成物は、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＧＦ−βからなる群から選択されるサイトカインを含む。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ケモカインを含む。

【0048】

さらなる実施形態では、免疫原性／治療剤は、医薬組成物として投与される。

【0049】

さらに別の実施形態では、医薬組成物は、モノクローナル抗体、化学療法薬、ホルモン治療剤、レチノイド受容体モジュレーター、細胞傷害性／細胞増殖抑制剤、抗新生物剤、抗増殖剤、抗ｍＴＯＲ剤、抗Ｈｅｒ２剤、抗ＥＧＦＲ剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、血管新生阻害剤、ベバシズマブ、細胞増殖および生存シグナル伝達経路の阻害剤、アポトーシス誘導剤、細胞周期チェックポイントに干渉する薬剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に干渉する薬剤、インテグリン遮断薬、ＮＳＡＩＤ、ＰＰＡＲアゴニスト、固有の多剤耐性（ＭＤＲ）の阻害剤、制吐剤、貧血の処置に有用な薬剤、好中球減少の処置に有用な薬剤、免疫増強性薬、ビスホスホネート（biphosphonate）、アロマターゼ阻害剤、新生細胞の最終分化を誘導する薬剤、γ−セレクターゼ阻害剤、がんワクチン（例えば、能動免疫療法）、モノクローナル抗体治療薬（例えば、受動免疫療法）、およびそれらの任意の組合せを含む。

【0050】

別の実施形態では、本発明の治療用組成物は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球（ＣＴＬ）免疫療法）、ＣＴＬＡ−４免疫療法、ＣＤＫ４／６阻害剤（標的療法）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（標的療法）、ｍＴＯＲ阻害剤（標的療法）、ＡＫＴ阻害剤（標的療法）、Ｐａｎ−Ｈｅｒ阻害剤（標的療法）をさらに含んでよい。これらの阻害剤は、それぞれのモノクローナル抗体も生成されるように改変することができる。そのような抗体は、本発明の治療用組成物に含めることができる。

【0051】

別の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。さらなる実施形態では、医薬組成物は、がんワクチンである。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、皮下投与用に製剤化さる。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、動脈内投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化される。

【0052】

本発明の別の実施形態は、それを必要とする患者を処置する方法であって、患者に、治療有効量のＧｌｏｂｏ ＨおよびＫＬＨを含む治療用組成物を投与するステップを含む方法を包含する。一実施形態では、患者は、がんの診断を受けている、またはがんを有する疑いがある。別の実施形態では、がんは、上皮がんである。さらなる実施形態では、がんは、乳がんである。さらに別の実施形態では、医薬／治療用組成物中のＧｌｏｂｏ−Ｈ部分の治療有効量は、約０．００１μｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。さらに別の実施形態では、医薬／治療用組成物中のＧｌｏｂｏ−Ｈ部分の治療有効量は、用量当たり、１つの治療用コンジュゲートを約１０μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ含む。さらに別の実施形態では、医薬／治療用組成物中のＧｌｏｂｏ−Ｈ部分の治療有効量は、用量当たり、１つの治療用コンジュゲートを約０．１０μｇ／ｋｇ〜約０．７５μｇ／ｋｇ含む。

【0053】

さらに別の実施形態では、治療用組成物中のＧｌｏｂｏ−Ｈ−ＫＬＨ複合体の治療有効量は、約０．００１μｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。さらに別の実施形態では、治療用組成物中のＧｌｏｂｏ−Ｈ−ＫＬＨ複合体の治療有効量は、用量当たり、１つの治療用コンジュゲートを約１０μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ含む。さらに別の実施形態では、治療用組成物中のＧｌｏｂｏ−Ｈ−ＫＬＨ複合体の治療有効量は、用量当たり、１つの治療用コンジュゲートを約０．６０μｇ／ｋｇ〜約４．５０μｇ／ｋｇ含む。

【0054】

さらに別の実施形態では、本方法により、無増悪生存を対照プラセボと比較して約または少なくとも１週間延長させることができる。さらに別の実施形態では、本方法により、無増悪生存を対照プラセボと比較して約または少なくとも２週間延長させることができる。さらに別の実施形態では、本方法により、無増悪生存を対照プラセボと比較して約または少なくとも１カ月延長させることができる。さらに別の実施形態では、本方法により、無増悪生存を対照プラセボと比較して約または少なくとも３カ月延長させることができる。さらに別の実施形態では、本方法により、無増悪生存を対照プラセボと比較して約または少なくとも６カ月延長させることができる。さらに別の実施形態では、本方法により、全生存を対照プラセボと比較して約または少なくとも１２カ月延長させることができる。

【0055】

付属の図面をその後の詳細な説明と併せて考慮して、参照することにより、本発明のより完全な理解を得ることができる。図面に例示されている実施形態は、単に本発明を例証することを意図するものであり、例示されている実施形態に本発明を限定するものとは解釈されるべきではない。

【図面の簡単な説明】

【0056】

【図1】図１Ａは、Ｇｌｏｂｏ Ｈならびにいくつかの例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ類似体の化学構造を示す図である。Ｇｌｃはグルコースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、ＧａｌＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミンを表し、Ｆｕｃはフコースを表す。図１Ｂは、ＭＭＣＣＨリンカーを経由してコンジュゲートした例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットを示す図である。

【0057】

【図2】図２Ａは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットコンジュゲーション合成経路を示す図である。図２Ｂは、本発明のＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ二量体およびＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ三量体を、Slovinら（１９９９年）、Proc Natl Acad Sci USA ９６巻：５７１０〜５頁およびGilewskiら（２００１年）、Proc Natl Acad Sci USA ９８巻：３２７０〜５頁に開示されているＧｌｏｂｏ Ｈコンジュゲートと比較して示す図である。

【0058】

【図3】図３は、ネイティブなＫＬＨ（８．３ＭＤａ）に関する多角レーザー散乱分光法（ｍｕｌｔｉ−ａｎｇｌｅ ｌａｓｅｒ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）（ＭＡＬＳ）の結果を示す図である。

【0059】

【図4-1】図４Ａは、多角レーザー散乱分光法（ＭＡＬＳ）を検出器として使用した、ＫＬＨに関するサイズ排除クロマトグラフィーの結果を示すグラフである。図４Ｂは、ＫＬＨの質量分布分析を示すグラフである。

【図4-2】図４Ｃは、多角レーザー散乱分光法（ＭＡＬＳ）を検出器として使用した、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（ＯＢＩ−８２２ロット番号１４００１）に関するサイズ排除クロマトグラフィーの結果を示すグラフである。図４Ｄは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲートの質量分布分析を示すグラフである。

【0060】

【図5A】図５Ａは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（７．５μｇおよび２５μｇ）を用いて免疫したＬｅｗｉｓラットにおけるＢ細胞集団の経時的な増大を示すグラフである。

【図5B】図５Ｂは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（７．５μｇおよび２５μｇ）を用いて免疫したＬｅｗｉｓラットにおけるＣＤ３ Ｔ細胞集団の経時的な増大を示すグラフである。

【図5C】図５Ｃは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（７．５μｇおよび２５μｇ）を用いて免疫したＬｅｗｉｓラットにおけるＣＤ４ Ｔ細胞集団の経時的な増大を示すグラフである。

【図5D】図５Ｄは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（７．５μｇおよび２５μｇ）を用いて免疫したＬｅｗｉｓラットにおけるＣＤ８ Ｔ細胞集団の経時的な増大を示すグラフである。データは、ＰＢＳ群の細胞数の百分率に対して正規化した、示されている群における細胞数の百分率として示されている。二元配置ＡＮＯＶＡを使用して多重比較分析を行い、その後、ボンフェローニの事後検定を行った。ＰＢＳと比較して、＊、ｐ＜０．０５、＊＊、ｐ＜０．０１、および＊＊＊、ｐ＜０．００１。

【0061】

【図6】図６Ａは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（７．５μｇおよび２５μｇ）を用いて免疫したＬｅｗｉｓラット由来の血液中のＩｇＭ抗体の相互力価の経時的な変化を示すグラフである。図６Ｂは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（７．５μｇおよび２５μｇ）を用いて免疫したＬｅｗｉｓラット由来の血液中のＩｇＧ抗体の相互力価の経時的な変化を示すグラフである。

【0062】

【図7】図７は、Ｇｌｏｂｏ ＨとＫＬＨの間のコンジュゲーション比（０．１７：１および０．０７：１）に応答したマウスにおけるＩｇＭ抗体価を示すグラフである。

【0063】

【図8】図８は、ＰＢＳ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート＋サポニンアジュバント（ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８２１）、およびＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート＋Ｃ３４アジュバント（ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８３４）を用いて免疫したＣ５７ＢＬ／６マウスに関する免疫原性を例示するグラフである。抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ ＩｇＭ抗体産生および抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ ＩｇＧ抗体産生を決定するためのＥＬＩＳＡ分析用に血清を４２日目に採取した。図８Ａは、ＩｇＭ産生を示す。図８Ｂは、ＩｇＧ産生を示す。Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲートを２μｇ、およびアジュバントを２０μｇ皮下（ＳＣ）投与した。

【0064】

【図9A】図９は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと同系の、０．１ｍＬ中５．０×１０^６個のルイス肺癌（ＬＬ／２、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６４２）細胞を注射した免疫適格性（６〜８週齢）病原体除去（ＳＰＦ）雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの６つの群について、１６日目に実験マウスの外側の腹部領域に皮下注射したことを例示する写真である。０、５、１１、１９、２９、３４および３９日目に、３つの試験条件（ＰＢＳのみ、ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８２１アジュバントおよびＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８３４アジュバント）を０．２ｍＬ／マウス（腹部の左側と右側の両方に、０．１ｍＬ／部位）で皮下投与したか、または１０ｍＬ／ｋｇの投薬体積で腹腔内投与した。４２日目に屠殺した後、腫瘍を含めた全身の写真を撮った。

【図9B】図９は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと同系の、０．１ｍＬ中５．０×１０^６個のルイス肺癌（ＬＬ／２、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６４２）細胞を注射した免疫適格性（６〜８週齢）病原体除去（ＳＰＦ）雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの６つの群について、１６日目に実験マウスの外側の腹部領域に皮下注射したことを例示する写真である。０、５、１１、１９、２９、３４および３９日目に、３つの試験条件（ＰＢＳのみ、ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８２１アジュバントおよびＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８３４アジュバント）を０．２ｍＬ／マウス（腹部の左側と右側の両方に、０．１ｍＬ／部位）で皮下投与したか、または１０ｍＬ／ｋｇの投薬体積で腹腔内投与した。４２日目に屠殺した後、腫瘍を含めた全身の写真を撮った。

【0065】

【図10】図１０は、０、５、１１、１９、２９、３４および３９日目にＰＢＳ、ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８２１アジュバントおよびＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８３４アジュバントを用いて皮下にワクチン接種した、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲートを用いて免疫したＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＬＬ／２（ルイス肺癌細胞株）腫瘍の成長を例示するグラフである。１６日目にＬＬ／２細胞（０．１ｍＬ中５．０×１０^６個）を各マウスに皮下注射した。１６、１９、２３、２６、３０、３４、３７、４０および４２日目に腫瘍サイズをモニターした。

【0066】

【図11】図１１は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体の化学構造を例示する図である。図１１Ａは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体［化学式：Ｃ（５６）Ｈ（９１）Ｎ（５）Ｏ（３３）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：１３９３．５３１７Ｄａ］を例示する。図１１Ｂは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体の中性損失形態を例示する。化学式１：Ｃ（１８）Ｈ（２８）Ｎ（４）Ｏ（４）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：３９６．１８３１Ｄａ；化学式２：Ｃ（２４）Ｈ（３８）Ｎ（４）Ｏ（９）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：５５８．２３６０Ｄａ；化学式３：Ｃ（３０）Ｈ（４８）Ｎ（４）Ｏ（１４）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：７２０．２８８８Ｄａ；化学式４：Ｃ（３６）Ｈ（５８）Ｎ（４）Ｏ（１９）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：８８２．３４１６Ｄａ；化学式５：Ｃ（４４）Ｈ（７１）Ｎ（５）Ｏ（２４）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：１０８５．４２１０Ｄａ。

【0067】

【図12】図１２は、ＭＭＣＣＨ誘導体の化学構造を例示する図である。図１２Ａは、ＭＭＣＣＨ誘導体の化学構造を例示する［化学式：Ｃ（１６）Ｈ（２４）Ｎ（４）Ｏ（３）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：３５２．１５６９Ｄａ］。図１２Ｂは、脱アミドＭＭＣＣＨ誘導体を例示する［化学式：Ｃ（１６）Ｈ（２２）Ｎ（２）Ｏ（４）Ｓ（１）、モノアイソトピックＭＷ付加：３３８．１３００Ｄａ］。

【0068】

【図13】図１３は、リシン残基におけるＧｌｏｂｏ ＨおよびＭＭＣＣＨ誘導体ペプチド同定の要約を示す表である。

【0069】

【図14A】図１４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図14B】図１４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0070】

【図15A】図１５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図15B】図１５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0071】

【図16A】図１６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図16B】図１６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0072】

【図17A】図１７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図17B】図１７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0073】

【図18A】図１８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図18B】図１８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0074】

【図19A】図１９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図19B】図１９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0075】

【図20A】図２０は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図20B】図２０は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0076】

【図21A】図２１は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図21B】図２１は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＧｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0077】

【図22A-1】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22A-2】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22A-3】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22A-4】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22A-5】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22B-1】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22B-2】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22B-3】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図22B-4】図２２は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0078】

【図23A-1】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23A-2】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23A-3】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23A-4】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23A-5】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23B-1】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23B-2】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23B-3】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図23B-4】図２３は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0079】

【図24A-1】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24A-2】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24A-3】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24A-4】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24A-5】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24B-1】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24B-2】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24B-3】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図24B-4】図２４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0080】

【図25A-1】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25A-2】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25A-3】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25A-4】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25A-5】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25B-1】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25B-2】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25B-3】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図25B-4】図２５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0081】

【図26A-1】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26A-2】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26A-3】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26A-4】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26A-5】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26B-1】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26B-2】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26B-3】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図26B-4】図２６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0082】

【図27A-1】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27A-2】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27A-3】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27A-4】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27A-5】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27B-1】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27B-2】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27B-3】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図27B-4】図２７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0083】

【図28A-1】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28A-2】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28A-3】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28A-4】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28A-5】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28B-1】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28B-2】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28B-3】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図28B-4】図２８は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0084】

【図29A-1】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図29A-2】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図29A-3】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図29A-4】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図29B-1】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図29B-2】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図29B-3】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図29B-4】図２９は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのリシン残基におけるＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【図30A】図３０は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）；ＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についての、Ｇｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【図30B】図３０は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）；ＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についての、Ｇｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【図30C】図３０は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）；ＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についての、Ｇｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【図30D】図３０は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）；ＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についての、Ｇｌｏｂｏ−Ｈとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【0085】

【図31A】図３１は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）、ならびにＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【図31B】図３１は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）、ならびにＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【図31C】図３１は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）、ならびにＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【図31D】図３１は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての（１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）、ならびにＫＬＨ１（Ｃ）およびＫＬＨ２（Ｄ）についての（２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたリシン部位の同定の要約を例示する表である。

【0086】

【図32】図３２は、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳの実行（Ａ）および２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳの実行（Ｂ）におけるＧｌｏｂｏ−Ｈコンジュゲーション分析の要約を例示する表である。

【0087】

【図33】図３３は、ヒスチジン（Ｈ）残基、アスパラギン（Ｎ）残基、プロリン（Ｐ）残基、グルタミン（Ｑ）残基およびアルギニン（Ｒ）残基における例示的なＧｌｏｂｏ ＨおよびＭＭＣＣＨ誘導体ペプチド同定の要約を示す表である。

【0088】

【図34】図３４は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料１（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＨＮＰＱＲ残基におけるＧｌｏｂｏ ＨおよびＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0089】

【図35】図３５は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料２（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＨＮＰＱＲ残基におけるＧｌｏｂｏ ＨおよびＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0090】

【図36】図３６は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料３（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＨＮＰＱＲ残基におけるＧｌｏｂｏ ＨおよびＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0091】

【図37】図３７は、ＫＬＨ１（Ａ）およびＫＬＨ２（Ｂ）についての、試料４（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）についてのＨＮＰＱＲ残基におけるＧｌｏｂｏ ＨおよびＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの同定の詳細を例示する表である。

【0092】

【図38】図３８は、ヒスチジン（Ｈ）残基、アスパラギン（Ｎ）残基、プロリン（Ｐ）残基、グルタミン（Ｑ）残基およびアルギニン（Ｒ）残基における例示的なＧｌｏｂｏ ＨおよびＭＭＣＣＨ誘導体分析の要約を例示する表である。

【発明を実施するための形態】

【0093】

本発明の実施には、別段の指定のない限り、当技術分野の技術の範囲内に入る分子生物学、微生物学、および免疫学の従来の技法を用いる。そのような技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Molecular Cloning A Laboratory Manual、第２版、Sambrook、FritschおよびManiatis編（Cold Spring Harbor Laboratory Press、１９８９年）；DNA Cloning、Ｉ巻およびＩＩ巻（D. N. Glover編、１９８５年）；Culture Of Animal Cells（R. I. Freshney、Alan R. Liss, Inc.、１９８７年）；Immobilized Cells And Enzymes（IRL Press、１９８６年）；B. Perbal、A Practical Guide To Molecular Cloning（１９８４年）；Methods In Enzymology全巻（Academic Press, Inc.、N.Y.）；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells（J. H. MillerおよびM. P. Calos編、１９８７年、Cold Spring Harbor Laboratory）；Methods In Enzymology、１５４巻および１５５巻（Wuら編）、Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology（MayerおよびWalker編、Academic Press、London、１９８７年）；Antibodies: A Laboratory Manual、HarlowおよびLanes（Cold Spring Harbor Laboratory Press、１９８８年）；ならびにHandbook Of Experimental Immunology、Ｉ〜ＩＶ巻（D. M. WeirおよびC. C. Blackwell編、１９８６年）を参照されたい。

【0094】

抗体を引き出すための、合成炭水化物コンジュゲートの使用は、１９２９年にＧｏｅｂｅｌおよびＡｖｅｒｙによって最初に実証された（Goebel, W. F.、およびAvery, O. T.、J. Exp. Med.、１９２９年、５０巻、５２１頁；Avery, O. T.、およびGoebel, W. F.、J. Exp. Med.、１９２９年、５０巻、５３３頁）。炭水化物がベンゼンジアゾニウム配糖体を介して担体タンパク質に連結された。合成抗原を用いたウサギの免疫により、ポリクローナル抗体が生成された。他の研究者ら（Allen, P. Z.、およびGoldstein, I. J.、Biochemistry、１９６７年、６巻、３０２９頁；Rude, E.、およびDelius, M. M.、Carbohydr. Res.、１９６８年、８巻、２１９頁；Himmelspach, K.ら、Eur. J. Immunol.、１９７１年、１巻、１０６頁；Fielder, R. J.ら、J. Immunol.、１９７０年、１０５巻、２６５頁）により、炭水化物とタンパク質担体をコンジュゲーションするための同様の技法が開発された。

【0095】

腫瘍細胞の公知の標的作用物質を特異的に標的とするために、ワクチン接種から生じる能動免疫療法において糖コンジュゲートを使用することができる。炭水化物抗原に対する応答には、通常、腫瘍に対する体の拒絶反応を補助するＴ細胞の使用が関与しない。コンジュゲートを用いたワクチン接種の結果としての完全な腫瘍拒絶反応の確率は可能性が低いと考えられるが、そのような処置により、免疫サーベイランスが高められ、新しい腫瘍コロニーの再発が低下し得る。（Dennis, J.、Oxford Glycosystems Glyconews Second、１９９２年；Lloyd, K. O.、Specific Immunotherapy of Cancer with Vaccines、１９９３年、New York Academy of Sciences、５０〜５８頁）。ToyokuniおよびSinghalは、測定可能なＩｇＧ力価を刺激する合成糖コンジュゲートについて記載しており、（Toyokuni, T.ら、J. Am. Chem. Soc.、１９９４年、１１６巻、３９５頁）、ＩｇＧ応答は一般にヘルパーＴ細胞の関与を伴うので、これは有意な結果である。

【0096】

合成Ｇｌｏｂｏ Ｈワクチンと免疫学的アジュバントの組合せにより、前立腺がん患者と転移性乳がん患者のどちらにおいても、主にＩｇＭ抗体、およびより少ない程度にＩｇＧ抗体が誘導されることが示された。第Ｉ相臨床試験において、ワクチンはまた、ワクチン接種部位における一過性の局部的な皮膚反応の最小の毒性を示した。（Gilewski Tら（２００１年）Proc Natl Acad Sci USA ９８巻：３２７０〜３２７５頁；Ragupathi Gら（１９９７年）Angew Chem Int Ed ３６巻：１２５〜１２８頁；Slovin S Fら（１９９７年）Proc Natl Acad Sci USA ９６巻：５７１０〜５７１５頁）。患者の一部において観察された軽度のインフルエンザ様症状は、おそらく、ＱＳ−２１の副作用に関連付けられる。マレイミド修飾担体タンパク質ＫＬＨとコンジュゲートした５種の前立腺および乳がん関連炭水化物抗原であるＧｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ＳＴｎ、ＴＦおよびＴｎを含有する五価ワクチンにより、抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ血清が産生され、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＩｇＧの力価がＩｇＭよりも高いことが報告されている。（Zhu J.ら（２００９年）J. Am. Chem. Soc. １３１巻（２６号）：９２９８〜９３０３頁）。

【0097】

したがって、本開示は、Ｇｌｏｂｏ Ｈの標的となる／それによって媒介される免疫原性／治療用化合物、組成物、および／または医薬製剤組成物、ならびに、免疫療法薬、ワクチン、剤形、キット、および製造の方法、およびその取扱いを対象とする。

【0098】

「ａ（１つの）」または「ａｎ（１つの）」という単語の使用は、特許請求の範囲および／または本明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と併せて使用される場合、「ｏｎｅ（１つの）」を意味し得るが、「１つまたは複数の（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」、および「１つまたは１つ超の（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｏｎｅ）」という意味とも一致する。

【0099】

本出願全体を通して、「約」という用語は、値が、例えば、測定デバイス、値を決定するために用いられる方法に固有の誤差の変動、または試験対象の中に存在する変動を含むことを示すために使用される。一般には、用語は、状況に応じておよそまたは１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％または２０％未満の変動性を包含することを意味する。

【0100】

本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、別段の指定のない限り、置換されていても置換されていなくてもよい１〜２０個の炭素原子を含有する、例えば、Ｃ１〜Ｃ８またはＣ１〜Ｃ４の直鎖状または分枝の一価炭化水素を指す。アルキルの例としては、これだけに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、およびｔ−ブチルが挙げられる。

【0101】

特許請求の範囲における「または（ｏｒ）」という用語の使用は、択一選択のみを指すまたは択一選択が相互排他的であることが明示されていなければ、「および／または」を意味するために使用されるが、択一選択と「および／または」とを指すに過ぎないとする定義を本開示は支持する。

【0102】

本明細書および請求項（複数可）で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）の任意の形態）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」などの、有する（ｈａｖｉｎｇ）の任意の形態）、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」などの、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）の任意の形態）または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」などの、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）の任意の形態）という単語は、包括的またはオープンエンドであり、追加的な必要でない要素または方法のステップを排除するものではない。本明細書において考察されている任意の実施形態は本発明の任意の方法または組成物に関して実行することができ、逆もまた同じであることが企図されている。さらに、本発明の組成物を使用して本発明の方法を実現することができる。

【0103】

「処置すること（Ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、本明細書では、障害、障害の症状、障害に続発する病態、または障害に対する素因を治癒する、緩和する、軽減する、矯正する、防止する、または好転させる目的で、対象に治療用組成物を投与することとみなされる。

【0104】

「有効量」とは、処置される対象において、本明細書に詳述されている医学的に望ましい結果を生じさせることができる、治療用組成物の量である。医学的に望ましい結果は、客観的（すなわち、いくつかの検査またはマーカーによって測定可能である）、または主観的（すなわち、対象が効果の兆候を示すまたは効果を感じる）であってもよい。

【0105】

「治療用組成物を用いた処置に適している疾患」とは、本明細書で言及される場合、本明細書に開示されている治療用組成物を投与することによって処置することができる任意の手技、状態、障害、不快および／または疾病を意味する。

【0106】

「増殖性障害」とは、一部の細胞型が過剰に産生され、その結果、健康悪化が生じる障害である。増殖性障害は、良性または悪性であり得る。増殖性障害としては、例えば、がんを挙げることができる。

【0107】

本明細書で使用される場合、本明細書に開示されている治療用組成物によって処置することができる「がん」とは、成長の状態が異常な細胞を含む。がん細胞は、正常な制御機構の喪失により特徴付けられ得、したがって、継続的に拡大し、隣接する組織に浸潤し、体の遠位パートに移動し、細胞が栄養分を得るための新しい血管の成長を促進することができる。本明細書で使用される場合、がんは、悪性または良性であり得る。がんは、体内の任意の組織から発生し得る。細胞が成長し増大するにしたがい、細胞は腫瘍と称される組織の塊を形成する。腫瘍という用語は、異常な成長または塊を含み得る。腫瘍は、がん性（悪性）または非がん性（良性）であり得る。がん性腫瘍は、近接する組織に浸潤し、体中に拡散（転移）し得る。しかし、良性腫瘍は、一般に、近接する組織に浸潤せず、体中に拡散しない。がんは、血液および血液形成組織のがん（白血病およびリンパ腫）と「固形」腫瘍とに分けることができる。「固形」腫瘍は、癌腫または肉腫を含み得る。

【0108】

本発明の治療用組成物によって処置することができるがんとしては、口腔および咽頭（唇、舌、唾液腺、口腔底、歯肉および他の口、上咽頭、扁桃、中咽頭、下咽頭、他の口腔／咽頭）のがん；消化器系（食道；胃；小腸；結腸および直腸；肛門、肛門管、および肛門直腸；肝臓；肝内胆管；胆嚢；他の胆管；膵臓；後腹膜；腹膜、網、および腸間膜；他の消化器）のがん；呼吸器系（鼻腔、中耳、および洞；喉頭；肺および気管支；胸膜；気管、縦隔、および他の呼吸器）のがん；中皮腫のがん；骨および関節；ならびに心臓を含めた軟部組織；黒色腫および他の非上皮性皮膚がん（ｓｋｉｎ ｃａｎｃｅｒ）を含めた皮膚がん（ｓｋｉｎ ｃａｎｃｅｒ）；カポジ肉腫および乳がん；女性生殖器系（子宮頸部；子宮体；子宮、卵巣；膣；外陰部；および他の女性生殖器）のがん；男性生殖器系（前立腺；精巣；陰茎；および他の男性生殖器）のがん；泌尿器系（膀胱；腎臓および腎盤；尿管；および他の泌尿器）のがん；眼および眼窩のがん；脳および神経系（脳；および他の神経系）のがん；内分泌系（甲状腺および胸腺を含めた他の内分泌）のがん；リンパ腫（ホジキン病および非ホジキンリンパ腫）、多発性骨髄腫、および白血病（リンパ球性白血病；骨髄性白血病；単球性白血病；および他の白血病）を含めた、部位によって分類されるものが挙げられる。

【0109】

本発明による治療用組成物に適した標的であり得る、組織型によって分類される他のがんとしては、これだけに限定されないが、新生物、悪性；癌腫、ＮＯＳ；癌腫、未分化型、ＮＯＳ；巨細胞および紡錘細胞癌；小細胞癌、ＮＯＳ；乳頭癌、ＮＯＳ；扁平上皮細胞癌、ＮＯＳ；リンパ上皮癌；基底細胞癌、ＮＯＳ；石灰化上皮腫；移行上皮癌、ＮＯＳ；乳頭状移行上皮癌；腺癌、ＮＯＳ；ガストリノーマ、悪性；胆管細胞癌；肝細胞癌、ＮＯＳ；混合型肝癌；柱状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープ内腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポーシス；固形癌、ＮＯＳ；カルチノイド腫瘍、悪性；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌、ＮＯＳ；嫌色素性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性癌；明細胞腺癌、ＮＯＳ；顆粒細胞癌；濾胞腺癌、ＮＯＳ；乳頭状濾胞状腺癌；非被包性硬化性癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘膜表皮癌；嚢胞腺癌、ＮＯＳ；乳頭状嚢胞腺癌、ＮＯＳ；乳頭漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌、ＮＯＳ；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌、ＮＯＳ；小葉癌；炎症性癌；パジェット病、乳房の；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫、悪性；莢膜細胞腫、悪性；顆粒膜細胞腫、悪性；男性ホルモン産生細胞腫、悪性；セルトリ細胞腫；ライディッヒ細胞腫、悪性；脂質細胞腫、悪性；傍神経節腫、悪性；乳房外傍神経節腫、悪性；褐色細胞腫；グロームス血管肉腫；悪性黒色腫、ＮＯＳ；無色素性黒色腫；表在拡大型黒色腫；巨大色素性母斑の悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；青色母斑、悪性；肉腫、ＮＯＳ；線維肉腫、ＮＯＳ；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫、ＮＯＳ；平滑筋肉腫、ＮＯＳ；横紋筋肉腫、ＮＯＳ；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫、ＮＯＳ；混合腫瘍、悪性、ＮＯＳ；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫、ＮＯＳ；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫、ＮＯＳ；中皮腫、悪性；未分化胚細胞腫；胎児性癌、ＮＯＳ；奇形腫、悪性、ＮＯＳ；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛癌；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉腫；血管外皮腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫、ＮＯＳ；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫、ＮＯＳ；軟骨芽細胞腫、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨の巨細胞腫；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル芽細胞歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル芽細胞線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫；神経膠腫、悪性；上衣腫、ＮＯＳ；星状細胞腫、ＮＯＳ；原形質性星状細胞腫；線維性星細胞腫；星状芽細胞腫；神経膠芽腫、ＮＯＳ；乏突起膠腫、ＮＯＳ；乏突起膠芽腫；原始神経外胚葉性；小脳肉腫、ＮＯＳ；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫、ＮＯＳ；網膜芽細胞腫、ＮＯＳ；嗅神経原性腫瘍；髄膜腫、悪性；神経線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞腫、悪性；悪性リンパ腫、ＮＯＳ；ホジキン病、ＮＯＳ；ホジキン；側肉芽腫、ＮＯＳ；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、大細胞、びまん性；悪性リンパ腫、濾胞性、ＮＯＳ；菌状息肉腫；他の指定の非ホジキンリンパ腫；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病、ＮＯＳ；リンパ性白血病、ＮＯＳ；形質細胞白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞性白血病；骨髄性白血病、ＮＯＳ；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病、ＮＯＳ；肥満細胞性白血病；巨核芽球性白血病；骨髄肉腫；およびヘアリー細胞白血病が挙げられる。

【0110】

本明細書で定義される「上皮がん」とは、上皮または関連する皮膚の組織、管腔臓器、および他の器官から発生するがん（複数可）を指す。上皮がんとしては、これだけに限定されないが、乳がん、肺がん、肝がん、頬側がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、鼻咽頭がん、皮膚がん（ｄｅｒｍａｌ ｃａｎｃｅｒ）、腎がん、脳腫瘍、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮体がん、腸がん、膵がん、および膀胱がんが挙げられる。

【0111】

「患者」または「対象」とは、本明細書で使用される場合、がんなどの増殖性疾患と診断されたまたはそれを有する疑いがあるまたはそれが発生している哺乳動物の対象を指す。例示的な患者は、がんなどの増殖性疾患が発生する可能性があるヒト、類人猿、イヌ、ブタ、ウシ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、齧歯類および他の哺乳動物であり得る。

【0112】

本明細書で使用される場合、「実質的に精製された」または「実質的に単離された」とは、そのネイティブな状態では通常付随する実質的に全ての他の分子から分離された状態にある分子（例えば、化合物）を指す。実質的に精製された分子は、調製物中に存在する優勢な種であることが好ましい。特に、実質的に精製された分子は、天然の混合物中に存在する他の分子（溶媒を除く）から６０％超遊離、好ましくは７５％遊離、より好ましくは９０％遊離、最も好ましくは９５％遊離している。「実質的に精製された」または「実質的に単離された」という用語は、それらの天然の状態において存在する分子または物質を含むものではない。ある特定の実施形態では、「実質的に精製された」または「実質的に単離された」という用語は、１個のＫＬＨ部分を別のＫＬＨ部分から精製する（例えば、ＫＬＨ二量体部分をＫＬＨ三量体部分から実質的に精製するまたは実質的に単離する）ことを含む。別の実施形態では、「実質的に精製された」または「実質的に単離された」という用語は、１個のＫＬＨ部分を別のＫＬＨ部分から精製することは含まない（例えば、実質的に精製されたまたは実質的に単離された組成物中にＫＬＨ二量体およびＫＬＨ三量体が含まれる）が、不純物は実質的に除去される。

【0113】

「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」とは、本明細書では、本発明の治療用組成物を患者に提供することとみなされる。例として、限定するものではなく、組成物の投与、例えば注射は、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、皮下（ｓ．ｃ．）注射、皮内（ｉ．ｄ．）注射、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射、または筋肉内（ｉ．ｍ．）注射によって実施することができる。そのような経路を１つまたは複数用いることができる。非経口投与は、例えば、ボーラス注射による、またはある期間にわたった段階的な灌流によるものであってもよい。あるいは、または同時に、投与は、経口経路によるものであってもよい。さらに、投与はまた、ボーラスの外科的沈着または医療機器の設置によるものであってもよい。

【0114】

「それを必要とする患者」とは、本明細書では、増殖性障害と診断されたまたはそれを有する疑いがある患者とみなされる。一実施形態では、患者は、がんを有する、またはそれが発生する可能性がある。

【0115】

本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、タンパク質担体および／またはアジュバントの補助を伴ってまたは伴わずに免疫応答を引き出すことができる任意の物質と定義される。本発明の組成物の抗原は、炭水化物、より好ましくはグリカン−抗原、最も好ましくはＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含むことが好ましい。

【0116】

本明細書で使用される場合、「免疫原性」という用語は、免疫原、抗原、またはワクチンの、免疫応答を刺激する能力を指す。

【0117】

本明細書で使用される場合、「免疫療法」という用語は、予防上および／または治療上の目標を実現するための免疫系の調節の概念に基づく処置戦略のアレイを指す。

【0118】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合性部位と接触する抗原分子のパートと定義される。

【0119】

本発明の「治療用組成物」は、「免疫原性コンジュゲート」および／または「治療用コンジュゲート」および／または「治療用抗体」を含む。治療用コンジュゲートは、少なくとも１つの担体と連結した抗原を含む。治療用コンジュゲートの連結は共有結合であることが好ましい。治療用コンジュゲートの一実施形態では、抗原はＧｌｏｂｏ Ｈ部分などのグリカンであり、担体はＫＬＨ部分および／またはＫＬＨ部分サブユニットである。そのように、治療用コンジュゲートという用語は、１個または複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分と連結した１個または複数のＫＬＨ部分サブユニットを包含する。一実施形態では、治療用コンジュゲートという用語は、約または少なくとも１、１０、１０^２または１０^３個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分と連結した１個または複数のＫＬＨ部分を包含する。別の実施形態では、治療用コンジュゲートという用語は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０個、またはそれ超のＧｌｏｂｏ Ｈ部分と連結した１個または複数のＫＬＨ部分を包含する。別の実施形態は、ＫＬＨ部分サブユニットと連結したそのようなＧｌｏｂｏ Ｈの単離された二量体、三量体、四量体、五量体または六量体、またはそれらの組合せを包含する。

【0120】

一実施形態では、治療用コンジュゲートは、Ｆｕｃα（１→２）Ｇａｌβ（１→３）ＧａｌＮＡｃβ（１→３）Ｇａｌα（１→４）Ｇａｌβ（１→４）Ｇｌｕβ（１−Ｏ−エチルヒドラジル−１−カルボニル−シクロヘキシル−４−（メチル−Ｎ−マレイミド）−３−（チオブチル−イミジル）−キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）であり、ＯＢＩ−８２２とも称される。

【0121】

「治療用抗体」は、本発明の治療用コンジュゲートおよび好ましくは治療用コンジュゲートのＧｌｏｂｏ Ｈ部分ポーションに特異的に結合する抗体（下でさらに定義される）と定義される。

【0122】

本明細書で使用される場合、「ワクチン」という用語は、抗原に関連する疾患に対する免疫を付与するために使用される治療用コンジュゲートを含有する治療用組成物を指す。がんワクチンは、体の、がん細胞などの損傷を受けたまたは異常な細胞によって生じる危険から免疫系を通じて自身を保護する天然の能力が高まるように設計される。防御免疫応答は、これだけに限定されないが、疾患の防止、疾患の発症の遅延、症状の重症度の低下、罹患率の低下、および死亡の遅延を含めた、疾患の重症度を低下させるものである。ワクチンは、体液性免疫応答（例えば、Ｂリンパ球による抗体の産生の刺激）と細胞性免疫応答（例えば、Ｔ−リンパ球ならびに／またはＮＫ細胞およびマクロファージなどの他の細胞によって媒介される免疫応答）の両方を活性化することができるものであることが好ましい。酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、細胞増殖アッセイ、ＣＴＬアッセイ、およびＡＤＣＣ／ＣＤＣアッセイなどの、免疫応答を決定するための標準のアッセイが開発されてきた。

【0123】

本明細書で使用される場合、「グリカン」という用語は、多糖、またはオリゴ糖を指す。グリカンはまた、本明細書では、糖タンパク質、糖脂質、糖ペプチド、グリコプロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖またはプロテオグリカンなどの糖コンジュゲートの炭水化物ポーションを指すためにも使用される。グリカンは、通常、単糖間のＯ−グリコシド連結のみからなる。例えば、セルロースは、β−１，４連結したＤ−グルコースで構成されるグリカン（またはより具体的にはグルカン）であり、キチンは、β−１，４連結したＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンで構成されるグリカンである。グリカンは、単糖残基のホモポリマーまたはヘテロポリマーであり得、また、直鎖または分枝であり得る。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンでのように、タンパク質に付着して見いだされ得る。グリカンは、一般に、細胞の外面上に見いだされる。Ｏ連結グリカンおよびＮ連結グリカンは、真核生物において非常に一般的であるが、原核生物においても、あまり一般的ではないが見いだされる場合がある。Ｎ連結グリカンは、シークオン内のアスパラギンのＲ基窒素（Ｎ）に付着して見いだされる。シークオンは、Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ配列であり、Ｘはプロリン（praline）以外の任意のアミノ酸である。好ましいグリカンは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分である。

【0124】

Ｇｌｏｂｏ Ｈは、六糖であり、種々の型のがん、特に、乳房、前立腺、膵臓、胃、卵巣、結腸、および肺のがんにおいて高度に発現する抗原性炭水化物のファミリーのメンバーである。例示的な実施形態では、ある特定の患者ではゼロ時間において抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体レベルは示されず、本発明の治療用組成物を用いた免疫後に、高い力価が検出された。他の例示的な実施形態では、ある特定の患者ではゼロ時間において抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体レベルが示され、本発明の治療用組成物を用いた免疫後に、高い力価が検出された。ある特定の実施形態では、抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体は、がん細胞表面上に糖脂質として、および場合によって糖タンパク質として発現する。他の実施形態では、乳がん患者の血清には、Ｇｌｏｂｏ Ｈエピトープに対する抗体が高レベルで含有されていた。ある特定の実施形態では、このエピトープはまた、免疫組織化学的試験において、モノクローナル抗体Ｍｂｒ１、ＶＫ９および抗ＳＳＥＡ−３によっても標的とされる。正常な乳房組織、膵臓組織、小腸組織、および前立腺組織を含めたある特定の正常組織もＭｂｒ１と反応するが、これらの組織中の抗原は、主に、免疫系の利用が制限される分泌縁に局在する。

【0125】

「Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分」とは、本明細書では、Ｇｌｏｂｏ Ｈまたはその断片もしくは類似体であるグリカン（すなわち、糖部分を含有する分子）であると定義される。Ｇｌｏｂｏ Ｈは、六糖エピトープ（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）、および任意選択で非糖部分を含有するグリカンである。その断片は、六糖エピトープの断片、および、該当する場合には非糖部分を含有するグリカンである。これらのオリゴ糖は、常套的な方法によって調製することができる（Huangら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA １０３巻：１５〜２０頁（２００６年）参照）。所望であれば、これらを非糖部分に連結することができる。米国特許出願第１２／４８５，５４６号は、Ｇｌｏｂｏ Ｈまたはその断片に特異的な抗体を、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、またはウマ）に上記の免疫組成物を投与し、哺乳動物からＧｌｏｂｏ Ｈまたはその断片に結合する抗体を単離することによって作製する方法に関する。

【0126】

Ｇｌｏｂｏ Ｈの類似体はグリカンマイクロアレイを使用して生成することができ、それらとして、Wangら、Proc Natl Acad Sci U S A. ２００８年８月１９日；１０５巻（３３号）：１１６６１〜１１６６６頁に開示されているもの、また、図１に示されているものが挙げられる。

【0127】

Ｇｌｏｂｏ Ｈ類似体は、抗体ＶＫ−９、Ｍｂｒ１、および抗ＳＳＥＡ−３に結合することが好ましい。Ｇｌｏｂｏ Ｈ類似体は、特定の解離定数（ＫＤ，ｓｕｒｆ）で結合することが好ましい。結合曲線を分析して表面上での解離定数（ＫＤ，ｓｕｒｆ）を生成するために、ラングミュア等温式を使用することができる。インキュベーション中の平衡条件において、反復スポットの平均蛍光（Ｆｏｂｓ）は、以下によって説明することができる：
Ｆ_ｏｂｓ＝Ｆ_ｍａｘ［Ｐ］／（Ｋ_{Ｄ，ｓｕｒｆ}＋［Ｐ］）
（式中、Ｆｍａｘは、表面上の活性な炭水化物の量の尺度である最大蛍光強度であり、［Ｐ］は、総抗体濃度であり、ＫＤ，ｓｕｒｆは、表面炭水化物および抗体についての平衡解離定数である）。Wangらに記載の通り。一部の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ類似体の好ましい（ＫＤ，ｓｕｒｆ）は、Wangらに記載の通り、ＶＫ−９、Ｍｂｒ１、および抗ＳＳＥＡ−３抗体に関して、少なくとも、約、または正確に０．４、０．５．、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５または１．６ｎＭである。

【0128】

「キーホールリンペットヘモシアニン」（ＫＬＨ）は、巨大なキーホールリンペットであるＭｅｇａｔｈｕｒａ ｃｒｅｎｕｌａｔａの血リンパ中に見いだされる、大きな、多サブユニットの、酸素を運搬する金属タンパク質である。ＫＬＨは、サブユニットからなる異種性グリコシル化タンパク質であり、凝集体での分子量が約３５０，０００〜約３９０，０００であり、分子量が約４００ｋＤａ（例えば、ＫＬＨ単量体）〜約８０００ｋＤａ（例えば、ＫＬＨ二十量体）である。ＫＬＨサブユニットの各ドメインは、単一の酸素分子に一緒に結合する２個の銅原子を含有する。酸素がヘモシアニンに結合すると、分子は示差的な、透明な乳白青色を呈する。ある特定の実施形態では、ＫＬＨタンパク質は、強力に免疫原性であるが、それでもヒトにおいて安全である。ある特定の実施形態では、ＫＬＨは、Ｍｅｇａｔｈｕｒａ ｃｒｅｎｕｌａｔａの血リンパから、一般には硫酸アンモニウム沈殿および透析を含み、最高純度を得るためにクロマトグラフィーによる精製を伴い得る一連のステップによって精製することができる。ある特定の実施形態では、ＫＬＨ精製は、内毒素除去も含んでよいが、内毒素は抗体産生のために注射されるとアジュバントとしての機能を果たす可能性があるので、このステップは不必要であり得る。澄んだ乳白青色の高品質のＫＬＨ調製物がＫＬＨ溶解性の最良の指標であることが好ましい。ある特定の実施形態では、ＫＬＨ単量体単位が集合して、総分子量が約４，０００ｋＤａ〜８，０００ｋＤａの大きな多量体（十量体または二十量体）になる。「キーホールリンペットヘモシアニン部分」または「ＫＬＨ部分」とは、本明細書では、ＫＬＨ１（配列番号１）またはＫＬＨ２（配列番号２）タンパク質またはそれと実質的に同一のタンパク質またはそれらの混合物と定義される。実質的に同一とは、この文脈では、各ＫＬＨ部分が、ネイティブな野生型ＫＬＨのものと、少なくとも、約、または正確に：１００、９９、９８、９７、９６、９５、９４、９３、９２、９１、９０、８９、８８、８７、８６、８５、８４、８３、８２、８１、８０、７９、７８、７７、７６または７５パーセント同一であるアミノ配列を有することを意味する。ある特定の実施形態では、本発明のＫＬＨは、増強された免疫原性活性、特に増強された抗腫瘍活性を有する。ある特定の実施形態では、本発明の組成物中のＫＬＨは、分子量がおよそ４００，０００のインタクトな分解されていないサブユニットを含む。他の実施形態では、本発明のＫＬＨは、高次のＫＬＨ多量体を含む。

【0129】

ある特定の実施形態では、高次のＫＬＨ多量体は、およそ８００万〜１０００万の分子量を有し、沈降係数が約９２〜１０７Ｓである。存在する高次のＫＬＨ多量体の量は、沈降−平衡および／または沈降−速度超遠心分析に基づく。他の実施形態では、本発明のＫＬＨにより、増強された免疫原性活性、特に増強された抗腫瘍活性が実証される。増強された免疫原性活性は、これだけに限定されないが、例えば、（ａ）ＫＬＨを注射（アジュバントを用いない）することで、（ｂ）ＫＬＨをアジュバントとして使用することで、（ｃ）ＫＬＨをハプテンまたは免疫原性の弱い抗原に対する担体免疫原として使用することで、および（ｄ）ＫＬＨを抗腫瘍剤として使用することで、見られる。本発明のＫＬＨ組成物は、これだけに限定されないが、膀胱、乳房、卵巣腫瘍などを含めた多くの腫瘍に対して増強された抗腫瘍活性を示す。ある特定の実施形態では、２個のＫＬＨ部分がＫＬＨ単量体間の共有結合性の連結によって二量体を形成し得る。理論により限定されることなく、ＫＬＨ部分間の共有結合性の連結はジスルフィド結合によるものであると考えられる。ある特定の実施形態では、２個またはそれ超のＫＬＨ部分は、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体などをＫＬＨ単量体、二量体、三量体などの間の共有結合性の連結によって形成し得る。理論により限定されることなく、ＫＬＨ部分間の共有結合性の連結はジスルフィド結合によるものであると考えられる。

【0130】

直接コンジュゲーションおよび４−（４−Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）などの二官能性リンカー基を用いたコンジュゲーションを含めた、ＫＬＨ部分と抗原を連結するための種々の方法が存在する。そのような連結技法は、米国特許第６，５４４，９５２号に開示されている。一部の実施形態では、本発明の治療用コンジュゲートを調製するために、例えば、Ｇｌｏｂｏ Ｈアリル配糖体をオゾン分解によってアルデヒドに変換し、アルデヒド基を架橋剤ＭＭＣＣＨ上のＮＨ基に付着させ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨをもたらす；担体タンパク質であるＫＬＨをチオール化に供してＫＬＨ−ＳＨを作製する；次いで、チオール化したＫＬＨ上のスルフヒドリル基をＭＭＣＣＨ上のマレイミド基に付着させ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨコンジュゲートを作製する。

【0131】

一実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈアリル配糖体を化学合成によって調製する。チオール化試薬である２−イミノチオランおよびｃＧＭＰグレードのＫＬＨおよび４−（４−Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）リンカーも使用する。一部の実施形態では、以下のステップを行う：（１）Ｇｌｏｂｏ Ｈアリル配糖体をＧｌｏｂｏ Ｈ−アルデヒドに変換するステップ；（２）Ｇｌｏｂｏ Ｈ−アルデヒドを個々にＭＭＣＣＨとカップリングしてＧｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨにするステップ；（３）ＫＬＨを化学的チオール化するステップ；（４）Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨとチオール化したＫＬＨをコンジュゲーションするステップ；および（５）Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（ＯＢＩ−８２２）を精製するステップ。Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットコンジュゲーション経路を図２Ａに示す。

【0132】

ある特定の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分タンパク質とＫＬＨ部分のコンジュゲーションの間に、ある特定の実施形態におけるＫＬＨ部分タンパク質は、インタクトな分子と比較して、好ましくはＧｌｏｂｏ Ｈ部分サブユニットの解離に起因して分子量の減少を示す。他の実施形態では、本明細書に開示されているコンジュゲーション方法により、以前には報告されていないＫＬＨサブユニットの解離がもたらされる。いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、本発明のＧｌｏｂｏ Ｈ部分−ＫＬＨ部分サブユニットコンジュゲートのグリコシル化レベルが高いことにより、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分間に水素結合が形成されることが予想される。そのように、ある特定の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニット間のファンデルワールス力および疎水性相互作用はＧｌｏｂｏ Ｈ水素結合に置き換えられ、これにより、ＫＬＨ部分サブユニットの分離がもたらされる。コンジュゲーション後、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分−ＫＬＨ部分コンジュゲートのＫＬＨ部分サブユニットが凝集して新規の単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体またはそれらの任意の組合せが形成されることが好ましい。得られる例示的な治療用Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分−ＫＬＨ部分コンジュゲートは、予想外に大きなエピトープ比を有し、驚くほど、かつ予想外に優れた免疫原性の属性を有する。ある特定の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ１およびＫＬＨ２上のリシンをコンジュゲートする。他の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ１およびＫＬＨ２上のリシンをコンジュゲートしない。ある特定の実施形態では、ペプチドマッピング分析において、Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートしたリシン部位は変化しないことが見いだされ、これにより、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート組成物の構造が独特であることが示唆される。

【0133】

一実施形態では、本発明の治療用組成物は、１個または複数のＫＬＨ部分サブユニットを含み、そのようなサブユニットの少なくとも１個が、少なくとも、約、または正確に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８，１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６，１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４，１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９または１６０またはそれ超のＧｌｏｂｏ Ｈ部分と１、１０、１００または１０００倍コンジュゲートしている。

【0134】

本発明者らは、質量分析を使用して、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨのリシン残基がコンジュゲートすることを見いだした。したがって、ある特定の実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分をリシン残基とコンジュゲートすることが好ましい。

【0135】

一実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニット当たり、合計で、正確にまたは約１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０個の総リシン残基が存在する。別の実施形態では、ＫＬＨ部分サブユニット当たり、正確にまたは約１５０個または１５６個のリシン残基が存在する。別の実施形態では、正確にまたは約６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９または１１０個のＧｌｏｂｏ Ｈ部分との結合に利用可能であるまたは実際に結合する各ＫＬＨ部分サブユニット上のリシンコンジュゲーション部位が存在する。別の実施形態では、そのような各ＫＬＨ部分サブユニット上のリシンコンジュゲーション部位が６２、６６、６７、６８、７０、７２、７６、８６、８７、８８、９０、９２、９３、１００個存在する。リシンコンジュゲーション部位は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分および／または例えばＭＭＣＣＨリンカーなどのＧｌｏｂｏ Ｈ部分へのリンカーとの結合に利用可能であるまたは実際に結合するＫＬＨ部分内のリシン残基である。

【0136】

部分サブユニット（例えば、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２またはそれらのバリアント）の混合物を含有するある特定の治療用実施形態では、利用可能なリシンの総数（両方のサブユニットについて）は、異なるサブユニット型にわたって合わせて計数され、その数は、正確に約２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９または３１０個であり得るかまたはそれである。そのような実施形態では、異なるサブユニット（例えば、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２またはそれらのバリアント）にわたって合わせて、正確にまたは約１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９または１６０カ所のリシンコンジュゲーション部位が存在するまたは存在し得る。他のそのような実施形態では、１３６、１３７、１４１、１４０、１４３、１４７または１５５カ所のリシンコンジュゲーション部位が存在する。

【0137】

最も好ましい実施形態では、ＫＬＨ１／ＫＬＨ２内の合計３０６個のリシン残基のうち、リシンコンジュゲーション部位が１３６、１３７、１４０、１４１、１４３、１４７または１５５カ所存在する。

【0138】

ある特定の実施形態では、本発明の治療用組成物は、ＫＬＨ部分サブユニット−Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分コンジュゲートの混合物を含有し、そのようなコンジュゲートは、単量体のままであるか、または二量体、三量体、四量体、五量体、六量体もしくはそれらの任意の組合せを形成する。別の実施形態では、本発明の治療用組成物は、単離されたＫＬＨ部分サブユニット−Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分コンジュゲートの単量体、二量体、三量体または四量体またはそれらの組合せを含む。さらなる実施形態では、本発明の治療用組成物は、ＫＬＨ部分サブユニット−Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分コンジュゲートの二量体および三量体のみを含む。

【0139】

別の実施形態では、治療用組成物は、少なくとも２個のＫＬＨ部分サブユニットを含有し、２個のＫＬＨ部分サブユニットのそれぞれが異なるグリカンに連結している。ＫＬＨ部分サブユニットと連結可能な他の腫瘍関連グリカン抗原としては、これだけに限定されないが、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、フコシル、ＧＭ１、ｓＴｎ、シアリル−Ｌｅｗｉｓ^ｘ、Ｌｅｗｉｓ^ｘ、シアリルＬｅｗｉｓ^ａ、Ｌｅｗｉｓ^ａ、ｓＴｎ、ＴＦ、ポリシアル酸、Ｌｅｗｉｓ^ｙ、ムチン、Ｔ抗原などが挙げられ得る。一部の実施形態では、治療用組成物中のＫＬＨ部分サブユニットは、たった、少なくともまたは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００パーセントがＧｌｏｂｏ Ｈ部分と連結し、残りの治療用組成物中のＫＬＨ部分サブユニットは他の腫瘍関連グリカン抗原と連結する。

【0140】

本明細書で使用される場合、本明細書に開示されている治療用コンジュゲートに関する「エピトープ比」とは、例えば、治療用コンジュゲート中の抗原エピトープと担体分子の関係を指す。エピトープ比は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分とＫＬＨ部分の関係を指すことが好ましい。治療用コンジュゲートのエピトープ比は、次式＝（実際のＧｌｏｂｏ Ｈ部分の重量／Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分の分子量）／（実際のＫＬＨ部分の重量／ＫＬＨ部分の分子量）組合せを使用して計算されることが最も好ましい。エピトープ比は、当業者が容易に決定できる。Ｇｌｏｂｏ Ｈの重量は、例えば、パルスアンペロメトリック検出を伴う高性能陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ）によって決定されることが好ましい。

【0141】

本発明の治療用コンジュゲートのエピトープ比は、約、少なくとも、または正確に：１、１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００、１０２５、１０５０、１０７５、１１００、１１２５、１１５０、１１７５、１２００、１２２５、１２５０、１２７５、１３００、１３２５、１３５０、１３７５、１４００、１４２５、１４５０、１４７５、１５００、１５２５、１５５０、１５７５、１６００、１６２５、１６５０、１６７５、１７００、１７２５、１７５０、１７７５、１８００、１８２５、１８５０、１８７５、１９００、１９２５、１９５０、１９７５、２０００、２０２５、２０５０、２０７５、２１００、２１２５、２１５０、２１７５、２２００、２２２５、２２５０、２２７５、２３００、２３２５、２３５０、２３７５、２４００、２４２５、２４５０、２４７５、２５００、２５２５、２５５０、２５７５、２６００、２６２５、２６５０、２６７５、２７００、２７２５、２７５０、２７７５、２８００、２８２５、２８５０、２８７５、２９００、２９２５、２９５０、２９７５または３０００であることが好ましい。

【0142】

一実施形態では、本発明の治療用組成物は、様々なエピトープ比を有する治療用コンジュゲートの混合物を含む。一実施形態では、治療用組成物中の治療用コンジュゲートのエピトープ比の範囲、平均または中央値は、約１０〜約３２００、約８００〜約２５００、約１０００〜約２０００、約１２５０〜約１７５０または約１４００〜約１６００である。別の実施形態では、治療用組成物中の治療用コンジュゲートのエピトープ比の範囲、平均または中央値は、約１０〜約１５０、約４０〜約１２５、約５０〜約１００、約６２〜約８７または約７０〜約８０である。別の実施形態では、治療用組成物中の治療用コンジュゲートのエピトープ比の範囲、平均または中央値は、約２０〜約３００、約８０〜約２５０、約１００〜約２００、約１２５〜約１７５または約１４０〜約１６０である。別の実施形態では、治療用組成物中の治療用コンジュゲートのエピトープ比の範囲、平均または中央値は、約３０〜約４５０、約１２０〜約３７５、約１５０〜約３００、約１８５〜約２６０または約２１０〜約２４０である。一部の医薬組成物では、治療用コンジュゲートの少なくともまたは約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９８、９９、または１００％が単量体として、または二量体、三量体、四量体、五量体、六量体もしくはそれらの組合せとして存在する。
治療用コンジュゲートに対する抗体

【0143】

ある特定の例示的な実施形態では、本発明は、本明細書に開示されている治療用コンジュゲートに親和性を伴って特異的に結合する単離された治療用抗体、ならびに、増殖性疾患の処置および／または診断におけるそれらの使用も包含する。

【0144】

本明細書で使用される場合、「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」（免疫グロブリン）という用語は、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体（ｃａｍｅｌｉｓｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物学的活性を示す抗体断片、ジスルフィド連結したＦｖ（ｓｄＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、細胞内抗体、および上記のいずれかのエピトープ結合性断片を包含する。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、抗原結合性部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであってよい。

【0145】

エピトープ、例えば、本明細書に記載の処置（複数可）において使用される治療用コンジュゲートのＧｌｏｂｏ Ｈ部分に対する抗体の「親和性」とは、当技術分野においてよく理解されている用語であり、抗体のエピトープへの結合の程度、または強度を意味する。親和性は、これだけに限定されないが、平衡解離定数（ＫＤまたはＫｄ）、見かけの平衡解離定数（ＫＤ’またはＫｄ’）、およびＩＣ５０（競合アッセイにおいて５０％阻害をもたらすために必要な量）を含めた、当技術分野で公知のいくつもの様式で測定し、かつ／または表すことができる。本発明の目的に関して、親和性は、エピトープに結合する抗体の所与の集団についての平均親和性であることが理解される。本明細書において１ｍＬ当たりのＩｇＧのｍｇ数またはｍｇ／ｍＬの単位で報告されているＫＤ’の値は、血清１ｍＬ当たりのＩｇのｍｇ数を示すが、血漿を使用することもできる。抗体親和性を本明細書に記載の処置方法の投与の基礎として使用するまたは本明細書に記載の処置方法に選択する場合、抗体親和性は、処置前および／または処置中に測定することができ、得られた値は、臨床医が、ヒト患者がその処置に適する候補であるかどうかの評価に使用することができる。

【0146】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」という用語は、結合対間（例えば、抗体と抗原）の相互作用を指す。種々の例では、特異的に結合するとは、親和定数が少なくともまたは約１０−６モル／リットル、約１０−７モル／リットル、または約１０−８モル／リットル、またはそれ未満であることによって具体化することができる。

【0147】

Ｇｌｏｂｏ Ｈに対する例示的な抗体は、血清などの所望の抗体の増加について検査を受けた免疫された対象から体液を採取することによって、および任意の従来の方法によって血液から血清を分離することによって調製することができる。

【0148】

抗体は、一般に、関連する抗原およびアジュバントを多数回注射することによって上昇する。関連する抗原を、免疫される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニンとコンジュゲートすることが有用であり得る。

【0149】

抗原を用いて動物を免疫する方法は、当技術分野で公知である。抗原の腹腔内注射または皮下注射が、哺乳動物を免疫するための標準方法である。より詳細には、抗原を希釈し、適量のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理的食塩水などに懸濁させることができる。所望であれば、抗原懸濁液を適量のアジュバントと混合し、次いで、対象に投与することができる。

【0150】

ある特定の実施形態では、対象を、適切な量のアジュバントと混合した抗原を数回投与することによって力価プラトーまで高めることができる。免疫のために適切な担体も使用することができる。上記の通り免疫した後、血清を所望の抗体の量の増加について方法によって検査する。
生物学的アッセイ

【0151】

一実施形態では、本発明の治療用コンジュゲートを含有する治療用組成物は、患者に投与されると、同じ実験において、投与前の同じ抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体価（すなわち、処置前ベースライン力価）の少なくともまたは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、５０、１００、２５０、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、４０００、または５０００倍の抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体価を誘導することができる。ある特定の実施形態では、抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体はＩｇＭ抗体である。別の実施形態では、抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体はＩｇＧ抗体である。

【0152】

本発明の治療用組成物により、対象において体液性応答および細胞性応答の両方を誘導することができる。ある特定の実施形態では、本発明のワクチン組成物により、Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分に特異的なＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体の産生、ならびにＢ細胞およびＴ細胞（例えば、ＣＤ３^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）の増大が誘導される。一般には、これらの免疫応答は、投与後に経時的に起こる。特定の例では、投与後に、Ｂ細胞産生が約３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、または６０日目に、その後、ＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体の産生が約１０、２０、３０、６０、または９０日目に、その後、Ｔ細胞産生が約２４、３０、４０、５０、６０、９０、１２０、１５０、または１８０日目に生じる。本発明のワクチン組成物は、少数のがん細胞の成長を防止することができる長期の免疫学的保護効果を潜在的にもたらすものであり、それにより、疾患の安定化および生存の改善を実現するために、微小残存病変に対して理想的なものである。

【0153】

「抗体依存性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」とは、非特異的な細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）によって標的細胞に結合した抗体が認識され、その後、標的細胞の溶解が引き起こされる、細胞媒介性反応を指す。一実施形態では、そのような細胞はヒト細胞である。いかなる特定の作用機構にも限定されることを望むものではないが、ＡＤＣＣを媒介するこれらの細胞傷害性細胞は、一般に、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する。ＡＤＣＣを媒介する主な細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩを発現し、一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、RavetchおよびKinet、Annu. Rev. Immunol.、９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）に要約されている。分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを実施することができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。その代わりにまたはそれに加えて、本発明の治療用コンジュゲートのＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、例えば、Clynesら、Proc. Natl. Acad. Sci.（USA）、９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されているものなどの動物モデルにおいて評価することができる。

【0154】

ある特定の実施形態では、医薬組成物の投与により、Ｇｌｏｂｏ Ｈに特異的に結合する抗体の生成を含めた免疫応答を生じさせることができる。ある特定の実施形態では、がん細胞の表面上に発現するＧｌｏｂｏ Ｈのうちの１個または複数を標的とし、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣを誘発してこれらの細胞を死滅させる抗体を発生させる。ある特定の実施形態では、抗体は、主にＩｇＧ抗体を含む。ある特定の実施形態では、本明細書において提供される免疫原性組成物は、主にＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃおよびＩｇＧ３を誘導する。

【0155】

「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で補体活性化を開始させ、標的を溶解する治療用コンジュゲートの能力を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）が同族抗原と複合体を形成した分子（例えば、抗体）に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Gazzano-Santaroら、J. Immunol. Methods、２０２巻：１６３頁（１９９６年）に記載されているＣＤＣアッセイを実施することができる。

【0156】

別の実施形態では、本発明の治療用コンジュゲートを含有する治療用組成物は、患者に投与されると、患者／対象において、Ｇｌｏｂｏ Ｈ陽性がん細胞株、例えばＭＣＦ−７細胞に特異的に結合する抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ免疫血清の産生を誘導することができる。
組合せ

【0157】

治療用組成物は、他の抗がん／抗増殖性薬ならびにアジュバントおよびサイトカインまたはケモカインなどの他の免疫調節分子を含んでよい。ある特定の実施形態では、組合せは、別々の薬剤／組成物または共製剤（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）の同時投与であってよい。これらの薬剤は、別々の容器または単一の容器に一緒に入ったキットとして送達することができる。薬剤は、投与時、または、投与の、少なくとも、もしくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３もしくは２４分、時間もしくは日前に組み合わせることができる。

【0158】

アジュバントは、他の薬剤の効果を改変する薬理学的または免疫学的薬剤である。アジュバントは、所与の抗原に対する免疫応答を増強する無機または有機化学物質、巨大分子またはがん細胞全体もしくはその一部であってよい。アジュバントとしては、完全フロイントアジュバントおよび不完全フロイントアジュバント、Ｔｏｌｌ様受容体分子およびその模倣物、ＬＰＳ、リポタンパク質、リポペプチド、フラジェリン、二本鎖ＲＮＡ、非メチル化ＣｐＧアイランド、レバミソール、カルメット−ゲラン桿菌、オクトレオチド、イソプリノシンおよびＺａｄａｘｉｎ、細菌およびウイルスによって古典的に放出される様々な形態のＤＮＡおよびＲＮＡ、ＰＤ−１アンタゴニストならびにＣＴＬＡアンタゴニストが挙げられる。一実施形態では、アジュバントは、サポニンアジュバントである。

【0159】

ある特定の実施形態では、サポニンアジュバントは、実質的に純粋なＯＢＩ−８２１サポニンである。他の実施形態では、ＯＢＩ−８２１サポニンは、その生物学的に活性な断片である。アジュバントは、ＯＢＩ−８２１サポニンの不純な形態も包含し得る。精製ＯＢＩ−８２１サポニンは、本明細書に記載のワクチンと共に投与した、または他の実質的に純粋なサポニンもしくは非サポニンアジュバントと混和した場合にアジュバント効果の増強を示す。

【0160】

ＯＢＩ−８２１サポニンは、天然に存在する配糖体であり、例えば、その内容全体が参照により組み込まれる米国特許第５，０５７，５４０号および米国特許第６，５２４，５８４号に記載の通り、Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの木から高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、低圧液体シリカクロマトグラフィー、および親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）によって高純度で抽出される。高圧液体クロマトグラフィー分析により、ＯＢＩ−８２１が構造的に関連する異性体化合物の混合物であることが示される。ＯＢＩ−８２１サポニンの種々の精製異性体化合物が同定されており、本明細書に開示されている。

【0161】

ある特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２１サポニンは、少なくとも１つの、以下の式Ｉの単離された化合物：

【化7】

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（式中、
Ｒ１はβ−Ｄ−アピオースまたはβ−Ｄ−キシロースであり、
Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ、アルキル、

【化8】

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（化合物１９８９の脂肪アシル部分）、または

【化9】

[この文献は図面を表示できません]

（化合物１８５７の脂肪アシル部分）
である）
を含む。

【0162】

ＯＢＩ−８２１サポニンはまた、式Ｉの単離された化合物であって、
式中、
（ｉ）Ｒ^１がβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２が上記の１９８９化合物の脂肪アシル部分であり、Ｒ^３がＨである（１９８９化合物Ｖ１Ａ）；
（ｉｉ）Ｒ^１がβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が上記の１９８９化合物の脂肪アシル部分である（１９８９化合物Ｖ１Ｂ）；
（ｉｉｉ）Ｒ^１がβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２が上記の１９８９化合物の脂肪アシル部分であり、Ｒ^３がＨである（１９８９化合物Ｖ２Ａ）；または
（ｉｖ）Ｒ^１がβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が上記の１９８９化合物の脂肪アシル部分である（１９８９化合物Ｖ２Ｂ）
化合物を含んでもよい。集合的に、１９８９化合物Ｖ１Ａ、１９８９化合物Ｖ１Ｂ、１９８９化合物Ｖ２Ａおよび１９８９化合物Ｖ２Ｂは「１９８９化合物混合物」と称する。

【0163】

表１は、１９８９化合物の官能基および１８５７化合物混合物中の各１８５７化合物のモル％の要約である。

【表1-1】

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【表1-2】

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【0164】

ＯＢＩ−８２１サポニンは、式Ｉの単離された化合物であって、
式中、
（ｉ）Ｒ^１がβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２が上記の１８５７化合物の脂肪アシル部分であり、Ｒ^３がＨである（１８５７化合物Ｖ１Ａ）；
（ｉｉ）Ｒ^１がβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が上記の１８５７化合物の脂肪アシル部分である（１８５７化合物Ｖ１Ｂ）；
（ｉｉｉ）Ｒ^１がβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２が上記の１８５７化合物の脂肪アシル部分であり、Ｒ^３がＨである（１８５７化合物Ｖ２Ａ）；または
（ｉｖ）Ｒ^１がβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が上記の１８５７化合物の脂肪アシル部分である（１８５７化合物Ｖ２Ｂ）
化合物を含んでよい。集合的に、１８５７化合物Ｖ１Ａ、１８５７化合物Ｖ１Ｂ、１８５７化合物Ｖ２Ａおよび１８５７化合物Ｖ２Ｂを「１８５７化合物混合物」と称する。

【0165】

表２は、１８５７化合物の官能基および１８５７化合物混合物中の各１８５７化合物のモル％の要約である。ＨＰＬＣ。

【表2-1】

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【表2-2】

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【0166】

ＯＢＩ−８２１サポニンは、以下の化合物：
（ｉ）１８５７化合物Ｖ１Ａ；
（ｉｉ）１８５７化合物Ｖ１Ｂ；
（ｉｉｉ）１８５７化合物Ｖ２Ａ；
（ｉｖ）１８５７化合物Ｖ２Ｂ；
（ｖ）１９８９化合物Ｖ１Ａ；
（ｖｉ）１９８９化合物Ｖ１Ｂ；
（ｖｉｉ）１９８９化合物Ｖ２Ａ；または
（ｖｉｉｉ）１９８９化合物Ｖ２Ｂ
のうちの１つまたは複数を含む。

【0167】

ＯＢＩ−８２１サポニン中の１８５７化合物混合物および１９８９化合物混合物の百分率は、以下の範囲であってよい：
（ｉ）ＯＢＩ−８２１の約１モル％〜約１５モル％が１８５７化合物混合物で構成され；
（ｉｉ）ＯＢＩ−８２１の約８５モル％〜約９９モル％が１９８９化合物混合物で構成される。

【0168】

モル％は全て、０．１％きざみで変動し得る（例えば、約８７％〜約９０％、約９０．５％〜約９７％、約３．５％〜約１１％、約１０％〜約１４％）。

【0169】

１９８９化合物混合物は、約６０〜７０モル％の１９８９化合物Ｖ１Ａ；約１〜５モル％の１９８９化合物Ｖ１Ｂ；約３０〜４０モル％の１９８９化合物Ｖ２Ａ；および約０．１〜３モル％の１９８９化合物Ｖ２Ｂを含み得る。モル％は全て、０．１きざみで変動し得る（例えば、６５％、２．５％、３５．６％）。

【0170】

１８５７化合物混合物は、約６０〜７０モル％の１８５７化合物Ｖ１Ａ；約１〜５モル％の１８５７化合物Ｖ１Ｂ；約３０〜４０モル％の１８５７化合物Ｖ２Ａ；および約０．１〜３モル％の１８５７化合物Ｖ２Ｂを含み得る。モル％は全て、０．１きざみで変動し得る（例えば、６５％、２．５％、３５．６％）。

【0171】

別の実施形態では、実質的に純粋なＯＢＩ−８２１は粗製Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ抽出物から精製され、前記ＯＢＩ−８２１は、粒子サイズ５ｕｍ、ポア１００Å、ＩＤ ４．６ｍｍ×Ｌ ２５ｃｍの対称Ｃ１８カラムで、移動相Ａが０．１％トリフルオロ酢酸を伴う蒸留水であり、移動相Ｂが０．１％トリフルオロ酢酸を伴うアセトニトリルである移動相、Ａ：Ｂが９５％：５％〜７５％：２５％で、１１分、１ｍｌ／分の流速で含む溶出プログラムを用いた逆相ＨＰＬＣで分析した場合に、溶媒ピークを除いて、クロマトグラムの全ピークの総面積の９０％またはそれ超を構成する単一の優勢なピークによって特徴付けられる。

【0172】

一実施形態では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物

【化10】

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（式中、
Ｒ^１はβ−Ｄ−アピオースまたはβ−Ｄ−キシロースであり、
Ｒ^２およびＲ^３は、独立に、Ｈ、アルキル、または

【化11】

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（１８５７化合物の脂肪アシル部分）である）
および、薬学的に許容される担体を含む。

【0173】

ワクチンは、炭水化物抗原またはその免疫原性断片およびＯＢＩ−８２１サポニンを含んでよい。さらに別の実施形態では、ワクチンは、炭水化物抗原またはその免疫原性断片；担体タンパク質およびＯＢＩ−８２１サポニンを含む。別の実施形態では、ワクチンは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＫＬＨ、およびＯＢＩ−８２１サポニンから選択される炭水化物抗原を含む。担体タンパク質の非限定的な例としては、ＫＬＨが挙げられる。

【0174】

「ａ−ガラクトシル−セラミド」および「ａ−ＧａｌＣｅｒ」という用語は、その内容全体が参照により組み込まれる米国特許第８，２６８，９６９に号記載の通り、ナチュラルキラーＴ細胞を刺激してＴヘルパー１（ＴＨ１）サイトカインとＴＨ２サイトカインの両方を産生させる糖脂質を指す。ある特定の実施形態では、ＯＢＩ−８３４（Ｃ３４として公知）アジュバントは、以下の例示的な構造によって特徴付けられる：

【化12】

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【0175】

本明細書で使用される場合、「サイトカイン」という用語は、前駆細胞が別個の特殊化した細胞型になる遺伝子発現の変化に通常関与する免疫細胞分化プロセスに影響を及ぼすことによって免疫応答の強度および持続時間を調節する多数の小さな分泌タンパク質のいずれかを指す。サイトカインは、それらの推定される機能、分泌細胞、または作用の標的に基づいて、リンフォカイン、インターロイキン、およびケモカインとして多様に名付けられている。例えば、一部の一般的なインターロイキンとして、これだけに限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＴＧＦ−βが挙げられる。

【0176】

本明細書で使用される場合、「ケモカイン」という用語は、リンパ球の動員および活性化をもたらす、感染の部位で放出される種々の小さな走化性サイトカインのいずれかを指す。ケモカインは白血球を感染部位に誘引する。ケモカインは、保存されたシステイン残基を有し、それにより、ケモカインを４つの群に割り当てることが可能である。群は、代表的なケモカインと共に、Ｃ−Ｃケモカイン（ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、およびＭＩＰ−１β）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン（ＩＬ−８）、Ｃケモカイン（リンホタクチン）、およびＣＸＸＸＣケモカイン（フラクタルカイン）である。

【0177】

本発明の治療用組成物は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球（ＣＴＬ）免疫療法）、ＣＴＬＡ−４免疫療法、ＣＤＫ４／６阻害剤（標的療法）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（標的療法）、ｍＴＯＲ阻害剤（標的療法）、ＡＫＴ阻害剤（標的療法）、Ｐａｎ−Ｈｅｒ阻害剤（標的療法）をさらに含んでよい。これらの阻害剤は、それぞれのモノクローナル抗体も生成されるように改変することができる。そのような抗体は、本発明の治療用組成物に含めることができる。

【0178】

治療用組成物は、他の抗がん／抗増殖剤または化学療法剤を含んでよい。一部の実施形態では、そのような薬剤の例は、Cancer Principles and Practice of Oncology、V.T. DevitaおよびS. Hellman（編者）、第６版（２００１年２月１５日）、Lippincott Williams & Wilkins Publishersにおいて見いだされる。そのような抗がん剤としては、これだけに限定されないが、以下が挙げられる：ホルモン治療剤（例えば、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター）、モノクローナル抗体療法、化学療法、レチノイド受容体モジュレーター、細胞傷害性／細胞増殖抑制剤、抗新生物剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、細胞増殖および生存シグナル伝達経路の阻害剤、アポトーシス誘導剤、細胞周期チェックポイントに干渉する薬剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に干渉する薬剤、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）阻害剤の哺乳動物標的、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、インテグリン遮断薬、ＮＳＡＩＤ、ＰＰＡＲアゴニスト、固有の多剤耐性（ＭＤＲ）の阻害剤、制吐剤、貧血の処置に有用な薬剤、好中球減少の処置に有用な薬剤、免疫増強性薬、ビスホスホネート、アロマターゼ阻害剤、新生細胞の最終分化を誘導する薬剤、γ−セレクターゼ阻害剤、がんワクチン、およびそれらの任意の組合せ。
本発明の製剤

【0179】

治療用組成物（本明細書では、医薬組成物とも称される）は、一般に、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という語は、医薬投与に適合する溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などを含む。補足的な活性化合物も組成物に組み入れることができる。医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化する。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、筋肉内、動脈内、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸内投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用に使用する溶液または懸濁液は、以下の構成成分を含んでよい：注射用水、生理食塩水溶液、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝液、および、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの、張度を調整するための薬剤。ｐＨ値は、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調整することができる。非経口用調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回用量バイアルに封入することができる。

【0180】

注射による使用に適した医薬組成物は、滅菌注射用溶液または分散液を即時調製するための滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液および滅菌粉末を含む。静脈内投与に関しては、適切な担体として、生理的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は滅菌されているべきであり、また、容易な注射可能性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する限りでは流体であるべきである。組成物は、製造および保管の条件下で安定であり、細菌および真菌などの微生物の混入作用から保護されるべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、および適切なそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒であってよい。妥当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散液の場合では必要な粒子サイズを維持することによっておよび界面活性物質を使用することによって維持することができる。微生物の作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって実現することができる。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムが組成物に含まれることが好ましい。注射用組成物の持続的な吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。

【0181】

滅菌注射用溶液は、必要量の活性化合物を、上に列挙されている成分の１つ、または成分の組合せを伴う適切な溶媒中に組み入れ、必要に応じて、その後、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を塩基性分散媒および上に列挙されているものからの他の必要な成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み入れることによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合では、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥を含み、それにより、活性成分と、予め滅菌濾過したその溶液由来の任意の追加的な所望の成分との散剤を得る。

【0182】

一般に、経口用組成物は、不活性な希釈剤または食用担体を含む。経口治療的投与のために、活性化合物を賦形剤と組み合わせ、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセルの形態で使用することができる。経口用組成物は、洗口剤として使用するために、流体担体を使用して調製することもできる。薬学的に適合する結合剤またはアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のいずれか、または性質が同様である化合物を含有してよい：結晶セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンなどのバインダー；デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはトウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香味剤などの香味剤。

【0183】

さらに、経口投与に関しては、本発明の製剤は、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊促進剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤と共に従来の手段によって調製された錠剤またはカプセル剤の形態をとってよい。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングすることができる。本発明の組成物は、例えば、ポリ−グリコール酸／乳酸（ＰＧＬＡ）製のマイクロスフェアまたはマイクロカプセルに導入することもできる（米国特許第５，８１４，３４４号；同第５，１００，６６９号および同第４，８４９，２２２号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１１０１０号および同第ＷＯ９３／０７８６１号参照）。経口投与用の液体調製物は、例えば、溶剤、シロップ剤、乳剤または懸濁剤の形態をとってもよく、使用する前に水または他の適切なビヒクルを用いて復元するための乾燥生成物として提供してもよい。そのような液体調製物は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ剤、セルロース誘導体または水素化食用脂肪）；乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分画された植物油）；および防腐剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸またはソルビン酸）などの薬学的に許容される添加剤を用いて、従来の手段によって調製することができる。調製物は、必要に応じて、緩衝塩、香味剤、着色剤、および甘味剤も含有してよい。経口投与用の調製物は、活性化合物の徐放がもたらされるように適切に製剤化することができる。

【0184】

吸入による投与に関しては、化合物は、適切な噴射剤、例えば二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからエアロゾル噴霧剤の形態で送達される。

【0185】

全身投与は、経粘膜または経皮であってもよい。経粘膜または経皮投与に関しては、関門を透過させるのに適した浸透剤を製剤に使用する。そのような浸透剤は、一般に、当技術分野で公知であり、それらとしては、例えば、経粘膜投与に関しては、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、経鼻噴霧剤または坐剤を使用することによって実現することができる。経皮投与に関しては、当技術分野で一般に公知の通り、活性化合物を軟膏剤、膏薬、ゲル剤、またはクリーム剤に製剤化する。化合物は、坐剤（例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤を用いて）または直腸送達用の停留浣腸の形態に調製することもできる。

【0186】

実行に応じて、埋め込み物およびマイクロカプセル封入送達系を含めた徐放製剤などの、化合物を体から迅速に排除されることから保護する担体を用いて活性化合物を調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製するための方法は、当業者には明らかになるであろう。材料は、商業的に得ることもできる。リポソーム懸濁剤（細胞に特異的な抗原に対するモノクローナル抗体を用いて感染細胞に標的化されるリポソームを含む）を薬学的に許容される担体として使用することもできる。これらは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，５２２，８１１号に記載の通り、当業者に公知の方法に従って調製することができる。

【0187】

経口用組成物または非経口用組成物は、投与しやすくし、かつ投与量を均一にするために単位投与形態に製剤化することが有利である。単位投与形態とは、本明細書で使用される場合、処置される対象に対する単位投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果がもたらされるように計算された所定の数量の活性化合物を含有する。

【0188】

本発明の免疫原性製剤は、非経口的に、すなわち、例えば、ボーラス注射、持続注入、または遺伝子銃（例えば、裸のＤＮＡまたはＲＮＡなどのベクターワクチンを対象に投与するため）を介した直接注射による静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）（ｓ．ｄ．）、または皮内（ｉ．ｄ．）投与によって送達することができる。注射用の製剤は、防腐剤を添加した単位剤形として、例えば、アンプルまたは複数回用量容器中に入れて提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の賦形剤、懸濁剤、溶剤または乳剤などの形態をとってよく、また、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化用薬剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含有してよい。あるいは、活性成分は、使用する前に適切なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリー水を用いて復元するための散剤の形態であってよい。

【0189】

本発明では、種々の粘膜のワクチン接種戦略も企図されている。
剤形

【0190】

そのような治療用組成物の毒性および治療有効性は、例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ_５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準の薬学的手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は治療指数であり、ＬＤ_５０／ＥＤ_５０比として表すことができる。高い治療指数を示す治療用組成物が好ましい。毒性の副作用を示す化合物を使用することもできるが、感染していない細胞に対する潜在的な損傷を最小限にし、それにより、副作用を低下させるために、そのような化合物を罹患場所部位に標的化する送達系の設計に対して注意を払うべきである。

【0191】

細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータを、ヒトにおける使用のための投与量の範囲の策定に使用することができる。そのような化合物の投与量は、毒性はほとんどまたは全く伴わずに、ＥＤ_５０を含む循環濃度の範囲内に入ることが好ましい。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。本開示の方法において使用される化合物のいずれに関しても、最初に細胞培養アッセイから治療有効用量を推定することができる。用量は、動物モデルにおいて、細胞培養において決定されたＩＣ_５０を含む循環血漿中濃度範囲（すなわち、症状の最大半量の阻害が実現される試験化合物の濃度）が実現されるように策定することができる。そのような情報を使用して、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。

【0192】

開示された組成物では、抗原およびアジュバントの両方が免疫原性的に有効な量で存在する。特異的な抗原のそれぞれについて、免疫原性的に有効な最適量を実験により決定するべきである（所与の患者の具体的な特徴および／または処置の型を考慮する）。一般に、この量は、体重１ｋｇ当たり抗原０．０１μｇ〜２５０ｍｇの範囲にある。本発明のある特定の例示的なアジュバントに関しては、免疫原性的に有効な量は、体重１ｋｇ当たりアジュバント１０〜２５０μｇの範囲にあり得る。

【0193】

一部の実施形態では、治療有効量の治療用組成物（すなわち、有効な投与量）は、約０．００１μｇ／ｋｇ〜約２５０ｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ〜１０ｇ／ｋｇ、もしくは０．１μｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇの範囲、または、患者の体重１キログラム当たり約もしくは少なくとも０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９；０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９；０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、もしくは２５０グラムもしくはマイクログラム、または、本明細書において列挙されている数のいずれかの間の任意の範囲、または当業者には過度な実験を伴わずに明らかであるか理解される他の範囲であり得る。これだけに限定されないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の全体的な健康または年齢、および存在する他の疾患を含めたある特定の因子が、対象を有効に処置するために必要な投与量およびタイミングに影響を及ぼし得ることが当業者には理解されよう。

【0194】

他の実施形態では、治療用組成物中のＧｌｏｂｏ−Ｈ部分の治療有効量（すなわち、有効な投与量）は、約０．００１μｇ／ｋｇ〜約２５０ｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ〜１０ｇ／ｋｇ、もしくは０．１μｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇの範囲、または、患者の体重１キログラム当たり約もしくは少なくとも０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９；０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９；０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、もしくは２５０グラムもしくはマイクログラム、または本明細書において列挙されている数のいずれかの間の任意の範囲、または当業者には過度な実験を伴わずに明らかであるか理解される他の範囲であり得る。これだけに限定されないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の全体的な健康または年齢、および存在する他の疾患を含めたある特定の因子が、対象を有効に処置するために必要な投与量およびタイミングに影響を及ぼし得ることが当業者には理解されよう。

【0195】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示されている治療用組成物は、少なくとも１つの治療用コンジュゲートまたは治療用抗体を含有するまたはそれを伴い、それによって、少なくとも１つの治療用コンジュゲートまたは治療用抗体のそれぞれが、用量当たり、約または少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９（それぞれ×１０^−９、１０^−８、１０^−７、１０^−７、１０^−６、１０^−５、１０^−４、１０^−３、１０^−２、１０^−１）モル濃度、またはそれ超の濃度の単回用量で存在する。治療用コンジュゲートは、約１〜１００、２〜６０、３〜５０、４〜４０、５〜３０、６〜２０、７〜１５、８〜１０、２〜１８、３〜１６、４〜１４、５〜１２、６〜１０または７〜８μＭの間、または本明細書において列挙されている数のいずれかの間の任意の範囲の濃度の単回用量で存在することが好ましい。

【0196】

一部の実施形態では、本明細書に開示されている治療用組成物は、少なくとも１つの治療用コンジュゲートまたは治療用抗体を含有するまたはそれを伴い、それによって、少なくとも１つの治療用コンジュゲートまたは治療用抗体のそれぞれが、約または少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９（それぞれ×１０^−３、１０^−２、１０^−１、または１０）マイクログラム、またはそれ超の濃度の単回用量で存在する。ある特定の実施形態では、１つの治療用コンジュゲートまたは治療用抗体が用量当たり約または少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２００、２５０マイクログラムまたはそれ超で含まれる。

【0197】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示されている治療用組成物を、１日、１週間、または１カ月当たり、約または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４回、またはそれ超の用量で、約または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４日、数週間、数カ月、数年、またはそれ超にわたって投与する。

【0198】

有効用量および安全性評価

【0199】

本発明の方法に従って、本明細書に記載の医薬組成物およびワクチン組成物を患者に免疫原性的に有効な用量で、好ましくは最小の毒性で投与する。「定義」という表題のセクションにおいて記載されている通り、開示されている製剤の「免疫原性的に有効な用量」または「治療有効用量」とは、処置される対象における有効な免疫応答を生じさせるために十分であり、したがって、前記対象に健康的利益をもたらすために十分である、抗原および／またはアジュバントの量を指す。
キット

【0200】

別の態様によると、当業者は１つまたは複数のキットオブパーツを構想することができ、キットオブパーツは本明細書において開示されている方法の少なくとも１つを実施するためのものであり、キットオブパーツは、１つまたは複数の治療用コンジュゲート、抗がん／抗増殖剤、アジュバント、サイトカインおよび／またはケモカインを含む。治療用組成物は、上記の方法の少なくとも１つに従って本明細書に開示されている治療用組成物を単独でまたは組み合わせて有効量で含む。上述の薬剤は、キット内で単一の容器中に入っていてもよく異なる容器中に入っていてもよい。

【0201】

所望であれば、組成物は、活性成分（すなわち、抗原および／またはスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含有するアジュバント）を含有する単位剤形を１つまたは複数含有してよいパックまたはディスペンサーデバイス中に存在してよい。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックホイルを含んでよい。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与の説明書が付随してよい。適合する医薬担体中に製剤化された本発明の組成物はまた、調製し、適切な容器中に入れ、示された状態の処置に関して標識することもできる。

【0202】

キットは、場合によって、生物学的事象の識別子または本開示を読めば当業者が同定可能な他の化合物も含む。キットはまた、本明細書に開示されている治療用組成物を有効量で含む少なくとも１つの組成物も含んでよい。本明細書において開示されている少なくとも１つの方法を当業者が同定可能な手順に従って実施するためのキットの治療用組成物。

【0203】

本開示は、本明細書に開示されている治療用組成物を利用して増殖性疾患を処置する方法も含む。一実施形態では、本方法は、がん、例えば乳がんの処置を含む。方法は、一般に、本明細書に開示されている治療用組成物を、それを必要とする患者に、増殖性障害を処置するために有効な量で提供することを含む。

【0204】

一部の実施形態では、本発明の治療用組成物を、それを必要とする対象（例えば、乳がんなどのがんを有する対象）に、無増悪生存または全生存を、対照プラセボ、例えば、リン酸緩衝生理食塩水プラセボと比較して、平均で約または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０日、週間、カ月、または年延長させる方法において投与する。

【0205】

一部の実施形態では、治療用組成物を、許容されない毒性または疾患の進行の非存在下で、第０〜２週、第６週、第１４週、および第２６週に、皮下に投与する。

【0206】

一部の実施形態では、本発明の治療用組成物を、それを必要とする対象（例えば、乳がんなどのがんを有する対象）に、対照プラセボ、例えば、リン酸緩衝生理食塩水プラセボと比較して、患者における腫瘍の体積を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０日、週間、カ月、または年の経過にわたって、平均で約または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９パーセントまたはそれ超縮小させる方法において投与する。

【0207】

一部の実施形態では、腫瘍体積は、ＣＴスキャン（推奨されるＣＴスキャンスライス厚は２．５ｍｍ〜５ｍｍの間である）により、１０ｍｍの最小サイズで、少なくとも１つの寸法で正確に測定することができる（測定値の平面での最長の直径を記録する）。
本発明の組成物の合成方法

【0208】

本発明の治療用組成物のＧｌｏｂｏ Ｈ六糖ポーションをアリル配糖体として化学的に合成し、次いで、ＫＬＨとのコンジュゲーションのために調製した。

【0209】

例示的な一実施形態では、Ｇｌｏｂｏ Ｈの化学合成は、以下の一般的なステップを伴う：

【化13-1】

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【化13-2】

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【0210】

ＫＬＨを、水性緩衝液中２−イミノチオランを用いて処理した。次いで、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５カラムのサイズ排除カラムによってチオール化したＫＬＨを未反応の２−イミノチオランから単離した。チオール化したＫＬＨを不活性ガス（窒素またはアルゴン）雰囲気下で保管し、すぐにＧｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨとのコンジュゲーションのために使用した。

【実施例】

【0211】

（実施例１）
本発明の糖コンジュゲート（Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ）の調製

【0212】

Ｇｌｏｂｏ Ｈアリル配糖体（市販）をオゾン分解によってアルデヒドに変換した。Ｇｌｏｂｏ ＨアルデヒドをＭＭＣＣＨリンカーおよびＮａＣＮＢＨ_３と反応させてＧｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨを得た。カラムを用いて混合物を精製してＧｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨを入手した。Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨ陽性の画分を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって確認し、次いで、まとめてプールした。ＫＬＨをチオール化緩衝液中に溶解させ、２−イミノチオランを反応物に少しずつ添加した。反応を、完了までインキュベートし、次いで、ＫＬＨ−ＳＨをカラムによって精製した。Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＭＭＣＣＨおよびＫＬＨ−ＳＨを合わせた。反応を、完了まで撹拌した。次いで、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲートを精製して最終産物を得た。

【0213】

（実施例２）
糖コンジュゲート中のＧｌｏｂｏ ＨとＫＬＨとの重量比の分析

【0214】

調製された糖コンジュゲート中のＧｌｏｂｏ ＨとＫＬＨとの重量比を、パルスアンペロメトリック検出を伴う高性能陰イオン交換クロマトグラフィーによって確認した（ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ）。結果を表３に示した。

【0215】

【表3】

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【0216】

（実施例３）
糖コンジュゲート中のＧｌｏｂｏ ＨとＫＬＨとのエピトープ比の分析

【0217】

ＫＬＨ二十量体（自然に凝集した形態）の分子量は、Micron ３０巻（１９９９年）５９７〜６２３頁などの文献に記載の通り、およそ７．５ＭＤａ〜８．６ＭＤａである。ネイティブなＫＬＨをサイズ排除クロマトグラフィーおよび多角レーザー散乱分光法（ＭＡＬＳ）によって確認し、分子量はおよそ８．６ＭＤａであった（図３参照）。

【0218】

ＫＬＨおよびＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（ＯＢＩ−８２２、ロット番号１４００１）の質量分布を、多角レーザー散乱分光計（ＳＥＣ−ＭＡＬＳ）を使用してサイズ排除クロマトグラフィーによって推定し、引き出した。タンパク質含有量に基づいて分子量を計算した（ε＝１．３９）（図４参照）。図４Ａでは、ＫＬＨの二十量体（ｎ＝２０）および多十量体（ｍｕｌｔｉ−ｄｅｃａｍｅｒ）（ｎ＞２０）が観察された。図４Ｂには、二十量体のピーク面積が７４．３％であり、多十量体が２５．７％であったことが示されている。図４Ｃでは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（ＯＢＩ−８２２）単量体〜六量体（ｎ＝１〜６）および多量体（ｎ＞７〜２０）が観察された。図４Ｄには、単量体〜六量体（ｎ＝１〜６）のピーク面積が主要な構成成分（＞９７％）であり、多量体（ｎ＞７〜２０）は少量のみであった（２．２％）ことが示されている。ＫＬＨおよびＯＢＩ−８２２オリゴマーの質量分布分析の要約を表４に示した。

【0219】

【表4】

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【0220】

結果から、本発明の糖コンジュゲートではネイティブな凝集ＫＬＨ二十量体と比較して分子量単位の質量の減少が示されることが示された。分子比は表５の通り計算した。

【0221】

【表5】

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【0222】

上記を考慮すると、本発明のある特定の糖コンジュゲート実施形態では、ＫＬＨ単量体単位は、Ｇｌｏｂｏ Ｈとのコンジュゲーション後に単量体、二量体、三量体、四量体、五量体および／または六量体を形成する。

【0223】

（実施例４）
ワクチン組成物の調製およびラットにおける免疫

【0224】

実施例１において調製した糖コンジュゲート（Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ）の種々の試料を４℃で保管し、層流フードの下でサポニンアジュバントと混合した。得られたワクチン組成物を氷上に置き、その後の免疫のために動物施設に移送した。

【0225】

表６に示されている通り、３群のＬｅｗｉｓラットを種々のワクチン組成物を用いて免疫した。

【0226】

【表6】

[この文献は図面を表示できません]

【0227】

０、７、１４、および２１日目にラットを免疫した。０、３、１０、１７、２４、および３１日目に末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）および血漿を採取した。３１日目に脾臓、リンパ節、および腹膜洗浄液を回収した。

【0228】

（実施例５）
ラットにおける体液性および細胞性免疫応答の誘導に関するアッセイ

【0229】

実施例５．１：フローサイトメトリーによる免疫エフェクター細胞亜集団の分析

【0230】

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を動物から単離し、次いで、ＰＢＭＣ中の種々の免疫エフェクター細胞亜集団を、種々の細胞マーカーに対する特異的な抗体を使用したフローサイトメトリーによって同定した。免疫したラットから０、３、１０、１７、２４、および３１日目に単離したＰＢＭＣを異なる蛍光（ＦＩＴＣ）コンジュゲート抗体で染色し、３０分間氷上に置いた。インキュベーション後、細胞を洗浄緩衝液（１％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）およびリン酸緩衝生理食塩水（ＵｎｉＲｅｇｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）中０．１％ＮａＮ_３（Ｓｉｇｍａ）で洗浄し、３５０ｇで５分間遠心分離した。ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）による蛍光の決定のために、細胞を洗浄緩衝液に再懸濁させた。ＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）ソフトウェアを用いてデータを分析した。結果から、本発明の糖コンジュゲートによって免疫したラットでは、ＰＢＳ対照群と比較してＢ細胞およびＴ細胞が有意に増大したことが示される。具体的には、最初にＢ細胞集団が３日目に生じ、その後、ＣＤ３Ｔ、ＣＤ４ＴおよびＣＤ８Ｔ細胞が２４日目に生じた。図５Ａ〜図５Ｄを参照されたい。

【0231】

実施例５．２：ＥＬＩＳＡによるＧｌｏｂｏ Ｈに特異的な抗体の試験

【0232】

免疫したラット由来の血漿におけるＧｌｏｂｏ Ｈに特異的な抗体の産生をＥＬＩＳＡアッセイによって決定した。結果から、Ｇｌｏｂｏ Ｈに特異的なＩｇＧの力価が免疫後１０日目に上昇し始め、１７日目にピークに達したことが示された。Ｇｌｏｂｏ Ｈに特異的なＩｇＭ抗体の産生に関して同様のパターンが観察された。図６Ａ〜図６Ｂを参照されたい。ＰＢＳのみで処置したラットでは、Ｇｌｏｂｏ Ｈに特異的なＩｇＧおよびＩｇＭ抗体の応答はなかった。

【0233】

要約すると、免疫したラットでは、Ｂ細胞産生が３日目に生じ、その後、Ｇｌｏｂｏ Ｈに対するＩｇＭおよびＩｇＧ抗体の産生が１０日目に生じ、その後、ＣＤ３Ｔ、ＣＤ４Ｔ、およびＣＤ８Ｔ細胞が２４日目に生じた。本発明の糖コンジュゲート（Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ）は体液性応答および細胞性応答の両方を誘導するのに有効であった。

【0234】

（実施例６）
マウスにおける免疫およびＥＬＩＳＡによる抗体検査

【0235】

糖コンジュゲート（Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ）の種々の試料を４℃で保管し、層流フードの下でサポニンアジュバントと混合した。得られたワクチン組成物を氷上に置き、その後の免疫のために動物施設に移送した。

【0236】

およそ８週齢のＢａｌｂ／ｃマウスにＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲートを種々の炭水化物：タンパク質（Ｇｌｏｂｏ Ｈ：ＫＬＨ）比で４週間、週に１回（０、７、１４、および２１日目）皮下注射によって与えた。免疫前または各ワクチン接種（１０、１７および２４日目）後０日目および３日目に血液試料を後眼窩静脈または顔面静脈を通じて抗凝固薬を用いずに採取した。次いで、試料を遠心分離して血清と赤血球を分離した。血清を採取し、−２０℃で保管し、それを後でＥＬＩＳＡによって分析した。統計分析にはマン・ホイットニーｔ検定を使用した。

【0237】

図７に示されている通り、本発明による糖コンジュゲート（Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ）とサポニンアジュバントの組合せにより、動物モデルにおいて、Ｇｌｏｂｏ Ｈに特異的なＩｇＭ抗体応答がＰＢＳ対照群と比較して有意に誘導されることが実証された。具体的には、重量比が０．１７：１（Ｇｌｏｂｏ Ｈ：ＫＬＨ）である糖コンジュゲートにより、重量比が０．０７：１（Ｇｌｏｂｏ Ｈ：ＫＬＨ）である糖コンジュゲートよりも良好な抗体価が誘導された。

【0238】

要約すると、本発明によるＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ糖コンジュゲート（ＯＢＩ−８２２）と適切なアジュバントの組合せにより、動物モデルにおける予想外に優れた体液性および細胞性免疫応答、特に、がん免疫療法において重要である、ＣＴＬならびにＩｇＭおよびＩｇＧ応答を含めたＢ細胞およびＴ細胞の増大が誘導されることが実証された。

【0239】

（実施例７）
マウスにおける、異なるアジュバントを伴うＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨの免疫原性試験

【0240】

異なるアジュバント（ＯＢＩ−８２１／ＯＢＩ−８３４）と対にした場合の、本発明のＧｌｏｂｏ Ｈ組成物のマウスにおける免疫応答を引き出す能力を実施した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスと同系の、生存可能なルイス肺癌（ＬＬ／２、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６４２）細胞（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ Ｐａｎｌａｂｓ Ｔａｉｗａｎ Ｌｔｄ．からの提供、０．１ｍＬ中５．０×１０^６個）を１６日目に実験マウスの外側の腹部領域に皮下注射した。６〜８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの６つの群に、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２）および異なるアジュバントを用いて皮下に免疫した。ＯＢＩ−８２２の用量レベルは各群で等価量であった。各注射は、０．２ｍＬ／マウス（腹部の左側と右側の両方に、０．１ｍＬ／部位）で皮下投与された２．０μｇのワクチン（ＯＢＩ−８２２）および２０μｇのアジュバント（ＯＢＩ−８２１／ＯＢＩ−８３４）と同等の用量を含有した。０、５、１１、１９、２９、３４および３９日目に免疫が生じ、ＥＬＩＳＡによる比較分析のために血清を０日目（注射前）および４２日目に採取した。血清学的応答をＥＬＩＳＡによって測定して、Ｇｌｏｂｏ Ｈに対するＩｇＭおよびＩｇＧ抗体の力価を決定した。

【0241】

図８に示されている通り、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて処置したマウスでは応答はなかった。対照的に、ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ８２１およびＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８３４を用いて処置したマウスは、有意なＩｇＭ抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ力価で応答した（図８Ａ）。しかし、平均ＩｇＧ力価はＩｇＧよりも低かった（図８Ｂ）。これにより、ＯＢＩ−８２１アジュバントおよびＯＢＩ−８３４アジュバントのどちらによってもＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２）の免疫原性を誘導できることが示された。Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨおよびアジュバントを用いたワクチン接種により、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＩｇＧ抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ応答とＩｇＭ抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ応答の両方が引き出されること実証された。

【0242】

図９に示されている通り、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの６つの群を、１６、１９、２３、２６、３０、３４、３７、４０および４２日目に体重および腫瘍サイズについてモニターした。４２日目に屠殺した後、腫瘍を含めた全身の写真を撮った。図１０に示されている通り、腫瘍体積（ｍｍ^３）は、長軸楕円体についての式：長さ（ｍｍ）×［幅（ｍｍ）］^２×０．５に従って推定される。化合物を用いて処置した動物における腫瘍の成長は、Ｔ／Ｃ（治療／対照）×１００％として計算される。一元配置ＡＮＯＶＡ、その後のダネット検定または対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、抗腫瘍活性が実証される腫瘍の成長の有意な阻害を決定した。４２日目における腫瘍阻害率は、ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８２１では約３５％であり、ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８３４では約２２％であった。ＯＢＩ−８２１アジュバントおよびＯＢＩ−８３４アジュバントはどちらも、Ｇｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２）と共に腫瘍の成長を阻害できるようであった。

【0243】

（実施例８）
ＫＬＨ上のＧｌｏｂｏ−Ｈコンジュゲーション部位（リシン）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析

【0244】

４つのＫＬＨ試料においてＧｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション部位を多数の酵素消化およびＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して同定した。Ｇｌｏｂｏ ＨとコンジュゲートしたＫＬＨの試料４つを、まず、４つの異なる酵素を用いて消化し、次いで、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよびＭａｓｃｏｔデータベース検索によって分析した。２つの型の誘導体：Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体（Ｇｌｏｂｏ Ｈ＋ＭＭＣＣＨ）およびＭＭＣＣＨ誘導体（ＭＭＣＣＨ単独）を同定した。Ｇｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション部位の同定に関してはＧｌｏｂｏ Ｈ誘導体およびその中性損失形態を考慮に入れた。ＭＭＣＣＨコンジュゲーション部位の同定に関してはＭＭＣＣＨ形態およびその脱アミド形態を考慮に入れた。高品質のＭＳ／ＭＳスペクトルおよびＭａｓｃｏｔスコアを有するペプチドのみを考慮に入れた。Ｇｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション分析については、ＯＢＩ−８２２−１３００１−ＤＰ（試料１）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが３１個および２８個観察され、ＯＢＩ−８２２−１３００２−ＤＰ（試料２）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが１９個および２１個観察され、ＯＢＩ−８２２−１３００３−ＤＰ（試料３）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが１０個および１１個観察され、ＯＢＩ−８２２−１３００４−ＤＳ（試料４）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが１８個および１９個観察された。ＭＭＣＣＨコンジュゲーション分析については、ＯＢＩ−８２２−１３００１−ＤＰ（試料１）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが１５５個および１４１個見いだされ、ＯＢＩ−８２２−１３００２−ＤＰ（試料２）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが１４３個および１３７個見いだされ、ＯＢＩ−８２２−１３００３−ＤＰ（試料３）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが１４７個および１４３個見いだされ、ＯＢＩ−８２２−１３００４−ＤＳ（試料４）に関する２回の反復ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析からはコンジュゲートしたリシンが１４０個および１３６個見いだされた。

【0245】

実施例８の材料および方法：

【0246】

略語を以下の通り列挙する：
Ｋ＝リシン；ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析；ＤＴＴ＝ジチオトレイトール（Dithiolthreitol）；ＩＡＭ＝ヨードアセトアミド；ＡＣＮ＝アセトニトリル；ＦＡ＝ギ酸；Ｇｌｕ−Ｃ＝エンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃ；ＡＢＣ＝炭酸水素アンモニウム；ＲＴ＝室温；ＭＷ＝分子量。

【0247】

４つのＫＬＨ試料、試料１〜４に対して、まず、１００ｋＤａカットオフＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒによって緩衝液を５０ｍＭの炭酸水素アンモニウム緩衝溶液に交換し、６Ｍの尿素を用いて変性させる処理を行った。次いで、試料を、１０ｍＭのＤＴＴを用いて３７℃で１時間還元し、５０ｍＭのＩＡＭを使用して暗闇中ＲＴで３０分間アルキル化し、５０ｍＭのＤＴＴを用いて室温で５分間クエンチした。得られたタンパク質を尿素濃度が１Ｍになるまで希釈し、以下のセクションに記載の通り異なる酵素を用いた溶液中消化に供した。

【0248】

異なる酵素を用いた溶液中消化は以下の消化条件を用いて実施した：（１）３７℃で２４時間のトリプシン消化（タンパク質：酵素＝４０：１）（２）３７℃で２４時間のＧｌｕ−Ｃ消化（タンパク質：酵素＝２５：１）；（３）室温で２４時間のキモトリプシン消化（タンパク質：酵素＝２５：１）；（４）３７℃で２４時間のサーモリシン消化（タンパク質：酵素＝２５：１）。

【0249】

ギ酸を添加することによって消化反応を終了させ、４つの消化処理した試料の全てをＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析に供した。Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とＵｌｔｉｍａｔｅ ３０００ ＲＳＬＣシステム（Ｄｉｏｎｅｘ）と連結して用いて試料を分析した。Ｃ１８カラム（Ａｃｃｌａｉｍ ＰｅｐＭａｐ ＲＳＬＣ、７５μｍ×１５０ｍｍ、２μｍ、１００Å）を使用し、表７に示されている勾配を用いてＬＣ分離を実施した。

【0250】

【表7-1】

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【表7-2】

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【0251】

インソースＣＩＤを４５ｅＶに設定した。ｍ／ｚ ３５０〜２０００の範囲を用いて完全ＭＳスキャンを実施し、ＭＳスキャンからの最も強いイオン１０種をＭＳ／ＭＳスペクトルのために断片化に供した。Ｍａｓｃｏｔデータベース検索のためにＰｒｏｔｅｏｍｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ １．４によって生のデータを処理してピーク一覧を得た。

【0252】

ＫＬＨ１配列（配列番号１）およびＫＬＨ２配列（配列番号２）に対してＭａｓｃｏｔバージョン２．４．１およびＴｈｅｒｍｏ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒバージョン１．４を用いてデータベース検索を実施した。使用したパラメーターは以下の通りであった：
酵素：消化方法に応じて、トリプシン、Ｇｌｕ−Ｃ、キモトリプシンおよびサーモリシン；固定修飾：カルバミドメチル（Ｃ）；
ＭＭＣＣＨ誘導体（ＭＭＣＣＨ単独）に対する変動修飾：脱アミド（ＮＱ）、酸化（Ｍ）、ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ−１（Ｋ）、ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ−２（Ｋ）；
Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体（Ｇｌｏｂｏ Ｈ＋ＭＭＣＣＨ）に対する変動修飾：脱アミド（ＮＱ）、酸化（Ｍ）、Ｇｌｏｂｏ＿Ｈ＿ＭＭＣＣＨ（Ｋ）、ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ９９７（Ｋ）、ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ８３５（Ｋ）、ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ６７３（Ｋ）、ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ５１１（Ｋ）、ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ３０８（Ｋ）；
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｍａｓｓ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：±１０ｐｐｍ；Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｍａｓｓ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：±０．０５Ｄａ；Ｍａｘ Ｍｉｓｓｅｄ Ｃｌｅａｖａｇｅｓ：５；計器の型：ＥＳＩ−ＴＲＡＰ；Ｉｏｎ ｃｕｔ−ｏｆｆ ｓｃｏｒｅ：１３。

【0253】

検索パラメーター中の「ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ−１」は、３５２．１５６９ＤａのＭＷ付加を伴う、ＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたリシンを示す。

【0254】

検索パラメーター中の「ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ−２」は、３３８．１３００ＤａのＭＷ付加を伴う、ＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたリシンの脱アミド形態を示す。

【0255】

検索パラメーター中の「Ｇｌｏｂｏ＿Ｈ＿ＭＭＣＣＨ（Ｋ）」は、１３９３．５３１７ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートしたリシンを示す。

【0256】

検索パラメーター中の「ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ９９７」は、３９６．１８３１ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートしたリシンの中性損失形態を示す。

【0257】

検索パラメーター中の「ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ８３５」は、５５８．２３６０ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートしたリシンの中性損失形態を示す。

【0258】

検索パラメーター中の「ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ６７３」は、７２０．２８８８ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートしたリシンの中性損失形態を示す。

【0259】

検索パラメーター中の「ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ５１１」は、８８２．３４１６ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートしたリシンの中性損失形態を示す。

【0260】

検索パラメーター中の「ｄＫ＿ＭＭＣＣＨ＿ＮＬ３０８」は、１０８５．４２１０ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートしたリシンの中性損失形態を示す。

【0261】

「ＭＷ付加」は、インタクトなリシン残基と比較した分子量付加を意味する。

【0262】

実施例８の結果：

【0263】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳに基づく技法は、タンパク質を同定し、アミノ酸修飾を特徴付けるための重要なツールとして登場した。ペプチド配列および修飾部位に関する詳細な情報は、ＭＳ／ＭＳスペクトルが与えたフラグメントイオンの帰属によって得ることができる。Ｍａｓｃｏｔは、検索エンジンであり、その確率に基づくスコア化アルゴリズムは広く認められている。この試験では、タンパク質配列決定およびＧｌｏｂｏ ＨまたはＭＭＣＣＨコンジュゲーション部位の同定に関する信頼度の参照としてＭａｓｃｏｔスコアを採用した。試料１〜４におけるＧｌｏｂｏ ＨまたはＭＭＣＣＨコンジュゲーション部位の分布を広範囲にわたって分析するために、これらの試料を、多数の酵素を用いて消化し、その後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を行った。

【0264】

Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体（Ｇｌｏｂｏ Ｈ＋ＭＭＣＣＨ）についての予測される化学構造が図１１Ａに示されており、結果において、リシンを含有するペプチドに対する１３９３．５３Ｄａの対応するＭＷ付加を観察することができる。加えて、不安定な多糖はＬＣ−ＭＳ分析におけるエレクトロスプレーイオン化の間に中性損失によって減少する傾向がある。したがって、図１１Ｂに示されている通り、糖コンジュゲートを形成したペプチドについては中性損失の結果生じる３９６．１８Ｄａ、５５８．２４Ｄａ、７２０．２９Ｄａ、８８２．３４Ｄａおよび１０８５．４２Ｄａの分子量付加も観察することができる。全ての誘導体化形態をＧｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション部位の同定に関して考察した。

【0265】

さらに、これらのＧｌｏｂｏ ＨとコンジュゲートしたＫＬＨ試料においてＭＭＣＣＨ誘導体も観察される（ＭＭＣＣＨ単独）。ＭＭＣＣＨ誘導体およびその脱アミド形態についての予測される化学構造が図１２Ａおよび図１２Ｂに示されており、結果において、リシンを含有するペプチドに対するそれぞれ３５２．１６Ｄａおよび３３８．１３Ｄａの対応するＭＷ付加を観察することができる。両方の誘導体化形態をＭＭＣＣＨコンジュゲーション部位の同定に関して考察した。Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体からＭＭＣＣＨへの変換は明らかではないが、試料処理の間に起こると思われる。

【0266】

前駆イオンについて±１０ｐｐｍおよびフラグメントイオンについて±０．０５Ｄａの質量精度をタンパク質同定およびスペクトル解釈のための基準として使用した。Ｇｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション部位の同定のための変動修飾としてＧｌｏｂｏ Ｈ誘導体ならびにその中性損失形態を選択し、ＭＭＣＣＨコンジュゲーション部位の同定のための変動修飾としてＭＭＣＣＨ誘導体ならびにその脱アミド形態を選択した。ＫＬＨ１（配列番号１）およびＫＬＨ２（配列番号２）の配列に対してデータベース検索を実施した。高品質のＭＳ／ＭＳスペクトル（イオンスコア≧１３、ｐ＜０．０５）を有するペプチドのみを報告に列挙した。

【0267】

結果が再現可能であることを実証するために、図１３Ａおよび図１３Ｂに要約されている通り、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を２回実施し、その後、Ｇｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション部位の同定およびＭＭＣＣＨ接合部位の同定の両方について個々のＭａｓｃｏｔデータベース検索を行った。

【0268】

Ｇｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション部位分析では、試料１については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ３１個および２８個見いだされ、試料２については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ１９個および２１個見いだされ、試料３については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ１０個および１１個見いだされ、試料４については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ１８個および１９個見いだされた。同定の詳細は図１４〜２１に列挙した。ＭＭＣＣＨコンジュゲーション分析では、試料１については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ１５５個および１４１個見いだされ、試料２については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ１４３個および１３７個見いだされ、試料３については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ１４７個および１４３個見いだされ、試料４については、１回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよび２回目のＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおいてリシンがそれぞれ１４０個および１３６個見いだされた。同定の詳細は図２２〜２９に列挙した。

【0269】

多数の酵素を用いた実験からのＧｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーション部位を図３０に要約し、ＭＭＣＣＨコンジュゲーション部位を図３１に要約した。Ｇｌｏｂｏ Ｈとコンジュゲートした試料についての全体的なコンジュゲーション部位分析結果を図３２に要約した。

【0270】

実施例８の結論：

【0271】

Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体とコンジュゲートしたペプチドの質量分析シグナルは、中性損失形態が多数あることおよび多糖のイオン化効率が低いことに起因して、ＭＭＣＣＨとコンジュゲートしたペプチドの質量分析シグナルよりも低く、それにより、Ｇｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーションの直接同定がより難しいものになっている。これが、ＭＭＣＣＨコンジュゲーション分析で同定されるペプチドの数がより多いことの理由である。したがって、ＭＭＣＣＨの結果をＧｌｏｂｏ Ｈコンジュゲーションに対応するものとして使用することができる。

【0272】

コンジュゲーション部位分析により、ＫＬＨ１／ＫＬＨ２内の合計３０６個のリシン残基のうち、試料１〜４についてそれぞれ同定された１５５、１４３、１４７および１４０カ所のリシンコンジュゲーション部位があることが示唆される。反復分析では、試料１〜４についてそれぞれ１４１、１３７、１４３および１３６カ所のコンジュゲーション部位が同定された。

【0273】

（実施例９）
ＫＬＨ上のＧｌｏｂｏ−Ｈコンジュゲーション部位（ヒスチジン、アスパラギン、プロリン、グルタミンおよびアルギニン）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析

【0274】

５個の残基、Ｈ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ上の２つの型の誘導体：ＧＭｄ（Ｇｌｏｂｏ Ｈ＋ＭＭＣＣＨリンカー＋リシン誘導体）およびＭｄ（ＭＭＣＣＨリンカー＋リシン誘導体）を調査した。

【0275】

ＨＮＰＱＲ（ＧＭｄおよびＭｄ）に対する修飾分析により、ＯＢＩ−８２２−１３００１−ＤＰ（試料１）については、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２においてコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位がそれぞれ６カ所および１３カ所、ＯＢＩ−８２２−１３００２−ＤＰ（試料２）については、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２においてコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位がそれぞれ１１カ所および１０カ所、ＯＢＩ−８２２−１３００３−ＤＰ（試料３）については、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２においてコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位がそれぞれ１３カ所および９カ所、ＯＢＩ−８２２−１３００４−ＤＳ（試料４）については、ＫＬＨ１およびＫＬＨ２においてコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位がそれぞれ８カ所および１０カ所明らかになった。

【0276】

実施例９の材料および方法：

【0277】

略語を以下の通り列挙する：
Ｋ＝リシン；Ｈ＝ヒスチジン；Ｎ＝アスパラギン；Ｐ＝プロリン；Ｑ＝グルタミン；Ｒ＝アルギニン；ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析；ＭＷ＝分子量。

【0278】

ＫＬＨ１配列（配列番号１）およびＫＬＨ２配列（配列番号２）に対してＭａｓｃｏｔバージョン２．４．１を用いてデータベース検索を実施した。使用したパラメーターは以下の通りであった：
酵素：消化方法に応じてトリプシン、Ｇｌｕ−Ｃ、キモトリプシンおよびサーモリシン；
固定修飾：カルバミドメチル（Ｃ）；
変動修飾：酸化（Ｍ）、脱アミド（ＮＱ）；
１．ＯＢＩ８２２＿ＧＭｄ（ＨＫＮＰＱＲ）、ＧＭｄ＿ＮＬ９９７（ＨＫＮＰＱＲ）；
２．ＯＢＩ８２２＿Ｍｄ（ＨＫＮＰＱＲ）、Ｍｄ＿脱アミド（ＨＫＮＰＱＲ）；
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｍａｓｓ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：±１０ｐｐｍ；Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｍａｓｓ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：±０．０５Ｄａ；Ｍａｘ Ｍｉｓｓｅｄ Ｃｌｅａｖａｇｅｓ：５；計器の型：ＥＳＩ−ＴＲＡＰ；Ｉｏｎ ｃｕｔ−ｏｆｆ ｓｃｏｒｅ：１３。

【0279】

検索パラメーター中の「ＯＢＩ８２２＿ＧＭｄ」は、１３９３．５３１７ＤａのＭＷ付加を伴う、ＧＭｄとコンジュゲートした残基（ＨＫＮＰＱＲ）を示す。

【0280】

検索パラメーター中の「ＧＭｄ＿ＮＬ９９７」は、３９６．１８３１ＤａのＭＷ付加を伴う、ＧＭｄとコンジュゲートした残基（ＨＫＮＰＱＲ）の中性損失形態を示す。

【0281】

検索パラメーター中の「ＯＢＩ８２２＿Ｍｄ」は、３５２．１５６９ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｍｄとコンジュゲートした残基（ＨＫＮＰＱＲ）を示す。

【0282】

検索パラメーター中の「Ｍｄ＿脱アミド」は、３３８．１３００ＤａのＭＷ付加を伴う、Ｍｄとコンジュゲートした残基（ＨＫＮＰＱＲ）の脱アミド形態を示す。

【0283】

実施例９の結果：

【0284】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳに基づく技法は、タンパク質を同定し、アミノ酸修飾を特徴付けるための重要なツールとして登場した。ペプチド配列および修飾部位に関する詳細な情報は、ＭＳ／ＭＳスペクトルが与えたフラグメントイオンの帰属によって得ることができる。Ｍａｓｃｏｔは、現在最も一般的な検索エンジンであり、広く受け入れられている確率に基づくスコア化アルゴリズムである。試料１〜４におけるリシン（Ｋ）および他の特定の残基（ＨＮＰＱＲ）上の異なる修飾を同定するために、検索結果の全てについて、その後の手動での確認を行って高品質のＭＳ／ＭＳスペクトルを有するペプチドのみをスクリーニングした。

【0285】

ＨＮＰＱＲ残基におけるＧＭｄ（Ｇｌｏｂｏ Ｈ＋ＭＭＣＣＨリンカー＋リシン誘導体）およびＭｄ（ＭＭＣＣＨリンカー＋リシン誘導体）修飾についてのＭＡＳＣＯＴ検索の間に、誤ったペプチドが同定された。帰属された修飾部位がリシン残基の近くにある場合、そのリシンが実際の修飾部位である可能性があった。これらのペプチドは同定一覧から排除した。近くにリシン残基を観察することができない場合、ＨＮＰＱＲ上の修飾を確認することができる。図３８に示されている通り、ＧＭｄ修飾部位分析により、ＫＬＨ１において、試料１〜４についてそれぞれ１、２、２および３カ所のコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位が、ＫＬＨ２において、試料１〜４についてそれぞれ４、４、２および３カ所のコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位が明らかになった。Ｍｄ修飾部位分析により、ＫＬＨ１において、試料１〜４についてそれぞれ５、９、１１および５カ所のコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位が、ＫＬＨ２において、試料１〜４についてそれぞれ９、６、７および７カ所のコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位が明らかになった。

【0286】

実施例９の結論：

【0287】

これらの、４つの試料の中で、特定の残基（ＨＮＰＱＲ）に対するＧＭｄおよびＭｄ修飾分析により、ＫＬＨ１において、試料１〜４についてそれぞれ６、１１、１３および８カ所のコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位が、ＫＬＨ２において、試料１〜４についてそれぞれ１３、１０、９および１０カ所のコンジュゲートしたＨＮＰＱＲ部位が存在したことが示唆される。

【0288】

別段の定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語ならびに任意の頭字語は、本発明の分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等である任意の組成物、方法、キット、および情報伝達手段を使用して本発明を実施することができるが、本明細書には好ましい組成物、方法、キット、および情報伝達手段が記載されている。

【0289】

本明細書において引用されている全ての参考文献は、法律により認められる最大限まで参照により本明細書に組み込まれる。これらの参考文献についての考察は、ただ単にそれらの著者らによりなされた主張を要約するものである。いずれの参考文献（またはいずれの参考文献の一部）も、関連する先行技術であると認めるものではない。出願人らは、引用された参考文献のいずれの正確度および妥当性についても異議を申し立てる権利を留保する。

【図1】

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【図2】

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【図3】

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【図4-1】

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【図4-2】

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【図5A】

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【図5B】

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【図5C】

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【図5D】

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【図6】

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【図7】

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【図8】

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【図9A】

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【図9B】

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【図10】

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【図11】

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【図12】

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【図13】

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【図14A】

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【図14B】

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【図15A】

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【図15B】

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【図16A】

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【図16B】

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【図17A】

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【図17B】

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【図18A】

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【図18B】

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【図19A】

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【図19B】

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【図20A】

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【図20B】

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【図21A】

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【図21B】

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【図22A-1】

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【図22A-2】

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【図22A-3】

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【図22A-4】

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【図22A-5】

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【図22B-4】

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【図23A-1】

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【図23B-4】

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【図24A-1】

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【図24A-2】

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【図24A-3】

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【図24A-4】

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【図24A-5】

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【図24B-3】

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【図24B-4】

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【図25A-1】

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【図25A-2】

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【図25A-3】

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【図25A-4】

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【図25A-5】

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【図25B-1】

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【図25B-2】

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【図25B-3】

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【図25B-4】

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【図26A-1】

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【図26A-2】

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【図26A-3】

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【図26A-4】

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【図26A-5】

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【図26B-1】

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【図26B-2】

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【図26B-3】

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【図26B-4】

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【図27A-1】

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【図27A-2】

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【図27A-3】

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【図27A-4】

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【図27A-5】

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【図27B-1】

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【図27B-2】

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【図27B-3】

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【図27B-4】

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【図28A-1】

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【図28A-2】

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【図28A-3】

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【図28A-4】

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【図28A-5】

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【図28B-1】

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【図28B-2】

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【図28B-3】

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【図28B-4】

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【図29A-1】

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【図29A-2】

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【図29A-3】

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【図29A-4】

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【図29B-1】

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【図29B-2】

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【図29B-3】

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【図29B-4】

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【図30A】

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【図30B】

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【図30C】

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【図30D】

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【図31A】

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【図31B】

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【図31C】

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【図31D】

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【図32】

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【図33】

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【図34】

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【図35】

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【図36】

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【図37】

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【図38】

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【配列表】

2017532310000001.app

【手続補正書】

【提出日】2017年5月16日

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0056】

【図1A-1】図１Ａは、Ｇｌｏｂｏ Ｈならびにいくつかの例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ類似体の化学構造を示す図である。Ｇｌｃはグルコースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、ＧａｌＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミンを表し、Ｆｕｃはフコースを表す。図１Ｂは、ＭＭＣＣＨリンカーを経由してコンジュゲートした例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットを示す図である。

【図1A-2】図１Ａは、Ｇｌｏｂｏ Ｈならびにいくつかの例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ類似体の化学構造を示す図である。Ｇｌｃはグルコースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、ＧａｌＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミンを表し、Ｆｕｃはフコースを表す。図１Ｂは、ＭＭＣＣＨリンカーを経由してコンジュゲートした例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットを示す図である。

【図1B】図１Ａは、Ｇｌｏｂｏ Ｈならびにいくつかの例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ類似体の化学構造を示す図である。Ｇｌｃはグルコースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、ＧａｌＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミンを表し、Ｆｕｃはフコースを表す。図１Ｂは、ＭＭＣＣＨリンカーを経由してコンジュゲートした例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットを示す図である。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0057】

【図2A】図２Ａは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットコンジュゲーション合成経路を示す図である。図２Ｂは、本発明のＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ二量体およびＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ三量体を、Slovinら（１９９９年）、Proc Natl Acad Sci USA ９６巻：５７１０〜５頁およびGilewskiら（２００１年）、Proc Natl Acad Sci USA ９８巻：３２７０〜５頁に開示されているＧｌｏｂｏ Ｈコンジュゲートと比較して示す図である。

【図2B】図２Ａは、例示的なＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨサブユニットコンジュゲーション合成経路を示す図である。図２Ｂは、本発明のＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ二量体およびＧｌｏｂｏ Ｈ−ＫＬＨ三量体を、Slovinら（１９９９年）、Proc Natl Acad Sci USA ９６巻：５７１０〜５頁およびGilewskiら（２００１年）、Proc Natl Acad Sci USA ９８巻：３２７０〜５頁に開示されているＧｌｏｂｏ Ｈコンジュゲートと比較して示す図である。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２８９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0289】

本明細書において引用されている全ての参考文献は、法律により認められる最大限まで参照により本明細書に組み込まれる。これらの参考文献についての考察は、ただ単にそれらの著者らによりなされた主張を要約するものである。いずれの参考文献（またはいずれの参考文献の一部）も、関連する先行技術であると認めるものではない。出願人らは、引用された参考文献のいずれの正確度および妥当性についても異議を申し立てる権利を留保する。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
１〜２０個（ｎ＝１〜２０）のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分と共有結合により連結した複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を含む組成物であって、前記Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分が、前記ＫＬＨ部分と１個または複数のアミノ酸残基において共有結合により結合している、組成物。
（項目２）
前記アミノ酸残基が、塩基性、中性、疎水性アミノ酸残基および／またはそれらの組合せである、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記アミノ酸残基が、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン、プロリン、グルタミンおよび／またはそれらの組合せである、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記ＫＬＨ部分が、単量体（ｎ＝１）である、項目１に記載の組成物。
（項目５）
前記ＫＬＨ部分が、二量体（ｎ＝２）である、項目１に記載の組成物。
（項目６）
前記ＫＬＨ部分が、三量体（ｎ＝３）である、項目１に記載の組成物。
（項目７）
前記ＫＬＨ部分が、四量体（ｎ＝４）である、項目１に記載の組成物。
（項目８）
前記ＫＬＨ部分が、五量体（ｎ＝５）である、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記ＫＬＨ部分が、六量体（ｎ＝６）である、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記ＫＬＨ部分が、七量体（ｎ＝７）である、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記ＫＬＨ部分が、八量体（ｎ＝８）である、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
前記ＫＬＨ部分が、九量体（ｎ＝９）である、項目１に記載の組成物。
（項目１３）
前記ＫＬＨ部分が、十量体（ｎ＝１０）である、項目１に記載の組成物。
（項目１４）
前記ＫＬＨ部分が、十一量体（ｎ＝１１）である、項目１に記載の組成物。
（項目１５）
前記ＫＬＨ部分が、十二量体（ｎ＝１２）である、項目１に記載の組成物。
（項目１６）
前記ＫＬＨ部分が、十三量体（ｎ＝１３）である、項目１に記載の組成物。
（項目１７）
前記ＫＬＨ部分が、十四量体（ｎ＝１４）である、項目１に記載の組成物。
（項目１８）
前記ＫＬＨ部分が、十五量体（ｎ＝１５）である、項目１に記載の組成物。
（項目１９）
前記ＫＬＨ部分が、十六量体（ｎ＝１６）である、項目１に記載の組成物。
（項目２０）
前記ＫＬＨ部分が、十七量体（ｎ＝１７）である、項目１に記載の組成物。
（項目２１）
前記ＫＬＨ部分が、十八量体（ｎ＝１８）である、項目１に記載の組成物。
（項目２２）
前記ＫＬＨ部分が、十九量体（ｎ＝１９）である、項目１に記載の組成物。
（項目２３）
前記ＫＬＨ部分が、二十量体（ｎ＝２０）である、項目１に記載の組成物。
（項目２４）
前記ＫＬＨ部分が互いに同じである、項目１に記載の組成物。
（項目２５）
前記ＫＬＨ部分が互いに異なる、項目１に記載の組成物。
（項目２６）
各ＫＬＨ部分が、同じ数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を有する、項目１に記載の組成物。
（項目２７）
各ＫＬＨ部分が、異なる数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分を有する、項目１に記載の組成物。
（項目２８）
前記Ｇｌｏｂｏ Ｈ部分が、（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２９）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、配列番号１のものである、項目１に記載の組成物。
（項目３０）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号１のＫＬＨ部分と少なくとも９５％同一である、項目１に記載の組成物。
（項目３１）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号１のＫＬＨ部分と少なくとも９０％同一である、項目１に記載の組成物。
（項目３２）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号１のＫＬＨ部分と少なくとも８０％同一である、項目１に記載の組成物。
（項目３３）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、配列番号２のものである、項目１に記載の組成物。
（項目３４）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号２のＫＬＨ部分と少なくとも９５％同一である、項目１に記載の組成物。
（項目３５）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号２のＫＬＨ部分と少なくとも９０％同一である、項目１に記載の組成物。
（項目３６）
前記ＫＬＨ部分サブユニットが、対応する配列番号２のＫＬＨ部分と少なくとも８０％同一である、項目１に記載の組成物。
（項目３７）
キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）部分サブユニットと共有結合により連結したＧｌｏｂｏ Ｈ部分が、４−（４−Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）連結によって連結している、項目１に記載の組成物。
（項目３８）
少なくとも１５０：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の単離された治療用コンジュゲート。
（項目３９）
少なくとも１２５：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の組成物。
（項目４０）
少なくともまたは約１００：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の単離された治療用コンジュゲート。
（項目４１）
少なくとも７５：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の組成物。
（項目４２）
少なくとも５０：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の組成物。
（項目４３）
少なくとも２５：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の組成物。
（項目４４）
少なくとも１０：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の組成物。
（項目４５）
少なくとも１：１のエピトープ比を有する、項目１に記載の組成物。
（項目４６）
それを必要とする患者においてがんを処置する方法であって、前記患者に治療有効量の項目１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
（項目４７）
前記がんが、乳がん、肺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、膵がん、前立腺がん、卵巣がん、上皮がんまたは子宮体がんである、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記がんが、Ｇｌｏｂｏ Ｈ発現がんである、項目４６に記載の方法。
（項目４９）
治療または診断に使用するためのモノクローナル抗体を創出するために対象において抗体を誘導する方法であって、前記対象に有効量の項目１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
（項目５０）
前記対象が、動物またはヒトである、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
（ａ）１個または複数のＫＬＨ部分サブユニットと共有結合により連結した複数のＧｌｏｂｏ Ｈ部分と、
（ｂ）α−ガラクトシル−セラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）アジュバントと
を含む医薬組成物。
（項目５２）
前記α−ＧａｌＣｅｒアジュバントが以下の構造：

【化14】

[この文献は図面を表示できません]

を有する、項目５１に記載の組成物。
（項目５３）
前記ＫＬＨ部分が、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、六量体、七量体、八量体、九量体、十量体、十一量体、十二量体、十三量体、十四量体、十五量体、十六量体、十七量体、十八量体、十九量体または二十量体を形成し得る、項目５１に記載の組成物。
（項目５４）
治療または診断に使用するためのモノクローナル抗体を創出するために、対象において抗体を誘導する方法であって、前記対象に有効量の項目５１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
（項目５５）
前記対象が、動物またはヒトである、項目５４に記載の方法。

【手続補正4】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図1A-1】

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【図1A-2】

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【図1B】

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【図2A】

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【図2B】

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【図3】

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【図4-1】

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【図4-2】

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【図5A】

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【図5B】

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【図5C】

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【図5D】

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【図6】

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【図7】

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【図8】

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【図9A】

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【図9B】

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【図10】

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【図11】

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【図12】

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【図13】

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【図14A】

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【図14B】

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【図15A】

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【図15B】

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【図16A】

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【図16B】

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【図17A】

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【図17B】

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【図18A】

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【図18B】

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【図19A】

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【図19B】

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【図20A】

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【図20B】

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【図21A】

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【図21B】

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【図22A-1】

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【図22A-2】

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【図22A-3】

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【図22A-4】

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【図22A-5】

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【図22B-1】

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【図22B-2】

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【図22B-3】

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【図22B-4】

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【図23A-1】

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【図23A-2】

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【図23A-3】

[この文献は図面を表示できません]

【図23A-4】

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【図23A-5】

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【図23B-1】

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【図23B-2】

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【図23B-3】

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【図23B-4】

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【図24A-1】

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【図24A-2】

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【図24A-3】

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【図24A-4】

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【図24A-5】

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【図24B-1】

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【図24B-2】

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【図24B-3】

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【図24B-4】

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【図25A-1】

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【図25A-2】

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【図25A-3】

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【図25A-4】

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【図25A-5】

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【図25B-1】

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【図25B-2】

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【図25B-3】

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【図25B-4】

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【図26A-1】

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【図26A-2】

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【図26A-3】

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【図26A-4】

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【図26A-5】

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【図26B-1】

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【図26B-2】

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【図26B-3】

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【図26B-4】

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【図27A-1】

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【図27A-2】

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【図27A-3】

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【図27A-4】

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【図27A-5】

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【図27B-1】

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【図27B-2】

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【図27B-3】

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【図27B-4】

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【図28A-1】

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【図28A-2】

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【図28A-3】

[この文献は図面を表示できません]

【図28A-4】

[この文献は図面を表示できません]

【図28A-5】

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【図28B-1】

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【図28B-2】

[この文献は図面を表示できません]

【図28B-3】

[この文献は図面を表示できません]

【図28B-4】

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【図29A-1】

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【図29A-2】

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【図29A-3】

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【図29A-4】

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【図29B-1】

[この文献は図面を表示できません]

【図29B-2】

[この文献は図面を表示できません]

【図29B-3】

[この文献は図面を表示できません]

【図29B-4】

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【図30A】

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【図30B】

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【図30C】

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【図30D】

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【図31A】

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【図31B】

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【図31C】

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【図31D】

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【図32】

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【図33】

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【図34】

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【図35】

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【図36】

[この文献は図面を表示できません]

【図37】

[この文献は図面を表示できません]

【図38】

[この文献は図面を表示できません]

【国際調査報告】

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