特表 2018-519311 ステロイド系ラクタムおよびビス（２−クロロエチル）アミノフェノキシプロパン酸誘導体のエステル

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2018-519311(P2018-519311A)

(43)【公表日】2018年7月19日

(54)【発明の名称】ステロイド系ラクタムおよびビス（２−クロロエチル）アミノフェノキシプロパン酸誘導体のエステル

(51)【国際特許分類】

   C07J 73/00 20060101AFI20180622BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20180622BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20180622BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180622BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20180622BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20180622BHJP

   A61K 31/196 20060101ALI20180622BHJP

   A61K 31/58 20060101ALI20180622BHJP

【ＦＩ】

   C07J73/00

   A61P13/08

   A61P15/00

   A61P35/00

   A61P35/02

   A61K47/54

   A61K31/196

   A61K31/58

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】34

(21)【出願番号】特願2017-567610(P2017-567610)

(86)(22)【出願日】2016年6月28日

(85)【翻訳文提出日】2018年1月15日

(86)【国際出願番号】EP2016065071

(87)【国際公開番号】WO2017001439

(87)【国際公開日】20170105

(31)【優先権主張番号】15386022.6

(32)【優先日】2015年6月29日

(33)【優先権主張国】EP

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US

(71)【出願人】

【識別番号】517449051

【氏名又は名称】ガレニカ・エス．アー．

(71)【出願人】

【識別番号】517449062

【氏名又は名称】エネルジョンビオ・テクノロジーズ・エス．アー．

(74)【代理人】

【識別番号】100140109

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 新次郎

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100120112

【弁理士】

【氏名又は名称】中西 基晴

(74)【代理人】

【識別番号】100133765

【弁理士】

【氏名又は名称】中田 尚志

(72)【発明者】

【氏名】トラファリス，ディミトリウス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

4C091

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076AA06

4C076AA09

4C076AA12

4C076AA22

4C076AA29

4C076AA36

4C076AA53

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB25

4C076BB31

4C076CC17

4C076CC27

4C076DD60

4C076EE59

4C076FF02

4C076FF05

4C076FF06

4C076FF09

4C076FF12

4C076FF13

4C076FF16

4C076FF17

4C076FF39

4C076FF43

4C076FF61

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA12

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA17

4C086MA23

4C086MA28

4C086MA35

4C086MA37

4C086MA43

4C086MA52

4C086MA59

4C086MA63

4C086NA05

4C086NA07

4C086NA14

4C086ZA81

4C086ZB26

4C086ZB27

4C091AA06

4C091AA07

4C091BB03

4C091BB05

4C091BB06

4C091CC05

4C091DD01

4C091EE03

4C091EE07

4C091FF01

4C091GG02

4C091GG13

4C091HH01

4C091JJ03

4C091KK01

4C091KK12

4C091LL01

4C091MM03

4C091NN01

4C091PA02

4C091PA05

4C091PA09

4C091PB05

4C091QQ01

4C091RR08

4C206AA01

4C206AA02

4C206FA31

4C206MA01

4C206MA04

4C206MA37

4C206MA43

4C206MA48

4C206MA55

4C206MA57

4C206MA63

4C206MA72

4C206MA79

4C206MA83

4C206NA05

4C206NA07

4C206NA14

4C206ZA81

4C206ZB26

4C206ZB27

(57)【要約】

アルキル化ビス（２−クロロエチル）アミノフェノキシプロパン酸および置換誘導体を有する新規なホモ−アザ−ステロイド系エステル、それらの調製方法、それらを含有する医薬組成物、および癌の治療におけるそれらの使用。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）：

【化1】

［ここで、Ｒ_１は、

【化2】

からなる群から選択され、
Ｒ_２は、Ｈ、−ＣＨ_３、−ＣＨ＝ＣＨ_２、−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、

【化3】

からなる群から選択され、
Ｒ_３は、Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ_２からなる群から選択される］
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項2】

Ｒ_１は、

【化4】

からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項3】

Ｒ_１は、

【化5】

からなる群から選択される、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項4】

Ｒ_１は、

【化6】

からなる群から選択される、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項5】

Ｒ_２は、Ｈ、−ＣＨ_３、−ＣＨ＝ＣＨ_２、−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項6】

Ｒ_２はＨである、請求項５に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項7】

Ｒ_３はＨである、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項8】

Ｒ_３は−ＮＨ_２である、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項9】

薬剤に使用するための、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項10】

癌の治療に使用するための、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項11】

卵巣癌、乳癌、前立腺癌または白血病の治療に使用するための、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項12】

請求項１乃至８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ビス（２−クロロエチル）アミノフェノキシプロパン酸およびその置換誘導体などのアニリンの誘導体であるアルキル化マスタードを有する新規のホモ−アザ−ステロイド系エステルに関する。

【背景技術】

【0002】

今日において、窒素マスタードのようなアルキル化抗癌剤は、現状の臨床診療では抗腫瘍薬として依然有効な部類のままであり、それらの治療効果は、アルキル基を細胞のＤＮＡに結合して顕著なＤＮＡ損傷を生成する能力に由来している(Hurley LH, Nature Rev Cancer, 2002, 2:188-200; Brendel M and Ruhland A, Mutat Res, 1984; 133:51-85)。

【0003】

ステロイド系共役体は、全身毒性を低減しかつ癌治療の有効性を改善するので、以前から細胞傷害性のアルキル化剤の担体として使用されてきた(Wall ME et al, J Med Chem, 1969, 12:810-8; Catane R, Cancer Treat Rep, 1978; 62:1264-5)。前立腺癌およびリンパ増殖性悪性腫瘍のそれぞれを処置する癌治療に、エストラムスチン（エストラジオールおよびメクロレタミンのエステル）およびプレドニムスチン（プレドニゾロンおよびクロラムブシルのエステル）などのステロイド系アルキル化剤が現在適用されている(Catane R, Cancer Treat Rep, 1978, 62:1264-5; Matsumoto K et al, Med Oncol, 2013, 30:717; IARC Monogr Eval Carcinog Risks Hum, 1990, 50:115-22; Hiddemann W, Eur J Cancer, 1995, 31A(13-14):2141-5)。

【0004】

【化1】

【0005】

これらの薬物のアルキル化成分が単独で生じる毒性は非常に高いのとは裏腹に、該薬物が引き起こす急性毒性や全身毒性は低減されるが、それに反して該薬物の抗癌活性はあまり改善されず、ならびに癌細胞の標的化への特異性は、初期の見積りよりもむしろ少ない。しかしながら、エストラムスチンとプレドニムスチンが抗癌活性を発揮する主要な分子薬理学的メカニズムが、ステロイド受容体における特異的作用とは多少異なっていても、一般にそれらは臨床診療において良好で治療効果の改善を示した。

【0006】

いくつかのホモ−アザ−またはラクタムステロイド系エステル（アルキル化剤と共役したステロイド環内にラクタム基−ＮＨＣ＝Ｏ−を含有するステロイド）は、過去に合成されていて、前臨床設定、生体外、および生体内において、毒性および抗癌活性について試験されている（Wampler GL and Catsoulacos P, Cancer Treat Rep, 1977, 61:37-41; Catsoulacos P and Catsoulacos D, Anticancer Res, 1991, 11:1773-7; Catsoulacos P and Catsoulacos D, Anticancer Res, 1993, 13(4):1203-8; Catsoulacos P et al, Oncology, 1994, 51:74-8; Catsoulacos P and Catsoulacos D, Anticancer Res, 1994, 14(6B):2525-8; Camoutsis C and Trafalis DT, Invest New Drugs, 2003, 21:47-54; Koutsourea AI et al, Bioorg Med Chem, 2008, 16:5207-15）。

【0007】

ラクタムステロイドアルキル化エステルは、生体内で顕著に急性毒性の減少を生じることを示したが、それらは生体外および生体内で向上した非常に有望な抗腫瘍活性を示し、一方で非修飾（非ラクタム）のステロイド系アルキル化剤は、それぞれの実験的腫瘍システムに対して、顕著に低い抗癌活性を生じるか、またはほとんど生じなかった。細胞ＤＮＡ損傷の発生を除いて、ラクタムステロイドアルキル化エステルが抗癌効果を顕著に改善した分子薬理学的メカニズムは、依然未知のままである。さらに、１つ以上のラクタム基がステロイド系構造内に組み込まれるという位置の生物学的重要性もまた未知である。さらに、ラクタムステロイド上にエステル結合を介して共役したアルキル化剤は、重要な役割を果たし、かつ急性毒性と抗腫瘍活性の比率、すなわち結果としてラクタムステロイド系アルキル化剤が生み出す治療可能比の程度を調節する。現在までに、いくつもの活性なラクタムステロイド系アルキル化剤が合成され試験されてきたが、より高い抗腫瘍活性を示す該アルキル化剤ではより毒性が高く、より低い毒性を示す該アルキル化剤では活性がより低かった。これらの所見は、より低い毒性かつより高い抗癌活性、すなわち最適な治療指数を適正に生成する新規の活性ラクタムステロイド系アルキル化共役剤を開発し、かつ製造する明白な必要性があることを示している。

【0008】

窒素マスタード誘導体のラクタムステロイド系アルキル化エステルに関する従来までの研究では、３β−ヒドロキシ−１３α−アミノ−１３，１７−セコ−５α−アンドロスタン−１７−オイック−１３，１７−ラクタム−［ｐ−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］フェニル］アセテート（ASE、NSC-290205）が、生体内での急性毒性および生体外かつ生体内での抗腫瘍活性についての前臨床試験において、非常にバランスの良い効果をもたらし、顕著に高い治療指数を保持することを示していた。

【0009】

【化2】

【0010】

したがってＡＳＥは、同じ部類の薬剤の新しい分子を開発し、治療効能についてＡＳＥの薬剤と比較してそれら分子を試験することに対し、「ゴールデン」の判定基準を申し立てていた。

【発明の概要】

【0011】

本発明は、ステロイド系ラクタムおよびアルキル化剤の新規なエステルを提供する。より詳細には、本発明の化合物は、ビス（２−クロロエチル）アミノフェノキシプロパン酸の誘導体を有するステロイド系ラクタムのエステルである。これらの化合物は、従来技術のラクタムステロイドアルキル化エステルと比較して、より高い抗腫瘍活性およびより低い急性毒性を示し、かつ抗悪性腫瘍薬および癌治療剤として有用である。

【発明を実施するための形態】

【0012】

本発明は、式（Ｉ）：

【0013】

【化3】

【0014】

の化合物またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式（Ｉ）において、Ｒ_１は下記の式：

【0015】

【化4】

【0016】

からなる群から選択され、
Ｒ_２は、Ｈ、−ＣＨ_３、−ＣＨ＝ＣＨ_２、−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、および下記の式：

【0017】

【化5】

【0018】

からなる群から選択され、
Ｒ_３は、Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ_２からなる群から選択される。
好ましくは、Ｒ_１は、下記の式：

【0019】

【化6】

【0020】

からなる群から選択される。
より好ましくは、Ｒ_１は、下記の式：

【0021】

【化7】

【0022】

からなる群から選択される。
好ましくは、Ｒ_２は、Ｈ、−ＣＨ_３、−ＣＨ＝ＣＨ_２、−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ_２は、Ｈである。

【0023】

好ましくは、Ｒ_３は、ＨまたはＮＨ_２である。
式（Ｉ）の化合物のビス（２−クロロエチル）アミノフェノール部分のヒドロキシル基は、フェニル環のアミノ基に対して、オルト位、メタ位またはパラ位に存在することができる。

【0024】

式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１つの不斉中心を含む。不斉中心の立体化学が特定されていない際には、その構造は、全ての個々の立体異性体、ならびにそれらの混合物を包含することを意図している。

【0025】

式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１つの塩基性官能基を含み、従って、好適な酸で処理することによって薬学的に許容可能な塩を形成することができる。好適な酸として、薬学的に許容可能な無機酸、および薬学的に許容可能な有機酸を含む。 薬学的に許容可能な塩の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩および安息香酸塩が挙げられる。

【0026】

式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、広範囲の癌の治療に使用することができる。好ましくは、これらは、卵巣癌、乳癌、前立腺癌または白血病の治療のために使用される。

【0027】

式（Ｉ）の化合物またはそれらの薬学的に許容可能な塩は、従来技術のラクタムステロイドアルキル化エステルと比較して、より高い抗腫瘍活性およびより低い急性毒性を示し、かつ抗悪性腫瘍薬および癌治療剤として有用である。以下の実施例に開示する生物活性の前臨床試験には、２つの効果のある対照、単独のアルキル化剤（３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸、ｐＢＣＥＡＰＯＰＡ）、および「ゴールデン」の判定基準として記載済みの部類の実験的なラクタムステロイドアルキル化剤：ＡＳＥ（ＮＳＣ−２９０２０５）に対する癌治療効力が、新規のアルキル化ラクタムステロイドエステルの優位性を示すために、比較して組み込まれている。

【0028】

本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。その医薬組成物は、経口、経鼻、局所または非経口の各経路などの任意の適切な経路での投与のために製剤化できる。例えば、医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末、溶液、懸濁液、クリームまたはゲルとして製剤化できる。その組成物は、一般に、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩に加えて、薬学的に許容可能な担体を含む。その担体は、希釈剤、結合剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、溶媒、懸濁剤、増粘剤、緩衝剤、防腐剤などの当技術分野で周知の賦形剤を含む。これらの組成物は、当技術分野で周知の方法に従って調製することができる。

【0029】

本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の調製方法を提供する。
式（Ｉ）の化合物中のステロイド系ラクタム（アザ−ホモステロイド）は、塩基性ステロイド系骨格の環に１つ以上のアミド官能基を有する。 そのステロイド系ラクタムは、対応するオキシムおよびベックマン転位を介して、ケトステロイドから合成できることが知られている（Koutsourea AI et al, Steroids, 2003, 68(7-8):659-66; Mazur RH, J Org Chem, 1963, 28(1):248-250; Morzycki JW et al, Bioorg Med Chem, 1996, 4(8): 1209-15; Camoutsis C and Catsoulacos P, J Heterocycl Chem, 1983, 20(4):1093-4; Huang Y et al, Molecules, 2013, 18(7):7436-47）。

【0030】

ベックマン転位のための一般的手順
オキシム（１ｍｍｏｌ）を１７．５ｍＬの乾燥ジオキサン中に溶解した。混合物を０℃に冷却し、塩化チオニル（１．９ｍＬ）を滴下した。混合物を室温になるまで放置し、２４時間撹拌した。反応をＮａＨＣＯ_３で停止し、混合物を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをさらにＳｉＯ_２クロマトグラフィーにより精製した。

【0031】

本発明の化合物であるビス（２−クロロエチル）アミノフェノキシプロパン酸誘導体は、以下のように調製することができる。

【0032】

【化8】

【0033】

置換した３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸を４−ニトロフェノールから出発して合成した。異なる３−クロロプロパン酸による４−ニトロフェノールのアルキル化で、３−（４−ニトロフェノキシ）プロパン酸が生成し、Ｈ_２および触媒としてＰｄ／Ｃを使用して、それをアミノ誘導体にさらに還元した。次に、既知の手順（Valu et al, J Med Chem, 1990, 33 (11): 3014-19）に従って、アミノ基をＣＨ_３ＣＯＯＨ、ＴＨＦ中でオキシランでビスアルキル化した。最後に、アルコール基をＰＯＣｌ_３のベンゼン溶液を用いかつ加熱して対応する塩化物に転化し、対応する３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸を得た。場合によって、アミノ基またはヒドロキシル基が存在する際には、保護反応および脱保護反応のための追加の工程が必要である。例えば、Ｒ_３がＮＨ_２基またはＯＨ基である場合に、Ｂｏｃ保護基またはアセチル保護基がそれぞれ使用される（Valu KK et al, J Med Chem, 1990, 33(11):3014-9）。同工程に続いて、かつ２−ニトロフェノールまたは３−ニトロフェノールから出発して、ヒドロキシル基がアミノ基に対してオルト位またはメタ位にある式（Ｉ）の誘導体を合成することができる。

【0034】

アルキル化剤を用いたステロイド系ラクタムエステルの製造において、ＯＨ基を含有するステロイド系ラクタムは、ＤＮＡアルキル化剤と反応する。例えば、ステロイド系ラクタムは、ＤＣＣ、ＤＭＡＰを用いて３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸と反応し、または３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパノイルクロリドと反応し、または３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸の混合無水物と反応して、対応するエステルを生成する。任意のステロイド系モノ−またはビス−ラクタムは、本方法を使用して誘導体化することができる。

【0035】

ステロイド系ラクタムのエステル化のための一般的手順Ａ
アルコール（１ｍｍｏｌ）を２８ｍＬの乾燥ジクロロメタンに溶解した。次いで、酸（２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（２ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰ（３ｍｏｌ％）を添加した。得られた溶液を室温で２４時間撹拌した後に、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。

【0036】

ステロイド系ラクタムのエステル化のための一般的手順Ｂ
丸底フラスコ内で、１ｍｍｏｌの酸を３．３ｍＬの乾燥ベンゼン中で希釈した。２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド（１．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＡｒ下で１時間還流した。この混合物に、３．３ｍＬの乾燥ベンゼン中のステロイド系アルコールの５０ｍｇ（１ｍｍｏｌ）溶液および触媒量の４−ジメチルアミノピリジンを添加した。還流を３時間継続した。真空中での蒸発によりベンゼンを完全に除去し、残った残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈した。得られた混合物を５％ＨＣｌ水溶液で抽出し、有機層を７％ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、最後は水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによりクロマトグラフィーを実施した。

【0037】

ステロイド系ラクタムのエステル化のための一般的手順Ｃ
アルコール（１ｍｍｏｌ）、Ｅｔ_３Ｎ（１．３ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰの混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）に溶解し、続いて塩化ベンゾイル（０．１２ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応をＴＬＣでモニターし、室温で２４時間撹拌し、次いでＣＨ_２Ｃｌ_２で溶解して、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で停止した。有機層を乾燥し、粗生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した。

【実施例】

【0038】

以下の実施例は、本発明の実例である。
実施例１

【0039】

【化9】

【0040】

１： ３−アザ−１７β−ヒドロキシ−Ａ−ホモ−４α−アンドロステン−４−オンを、テストステロン１７−β−アセテートからの三つの工程を一部修正した（Camoutsis C and Catsoulacos P, J Heterocycl Chem, 1983, 20(4):1093-4）手順により合成した。テストステロン１７−β−アセテート（９１４ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの乾燥ピリジンに溶解した。ヒドロキシルアミン塩酸塩（４６１ｍｇ、６．６４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を還流下で６時間撹拌した。溶液を水に注ぎ、混合物を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをさらにＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン−酢酸エチル＝４／１）により精製して、６７５ｍｇのシン型およびアンチ型オキシム（７４％）を白色固体として得た。

【0041】

２： シン型およびアンチ型テストステロン−１７−アセテートオキシム（１００ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）を３．５ｍＬの乾燥ジオキサンに溶解した。混合物を０℃に冷却し、塩化チオニル（０．６ｍＬ）を滴下した。混合物を室温になるまで放置し、３時間撹拌した。反応をＮａＨＣＯ_３で停止し、混合物を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをさらにＳｉＯ_２クロマトグラフィー（酢酸エチル）により精製して、６３ｍｇの３−アザ−１７β−アセトキシ−Ａ−ホモ−４α−アンドロステン−４−オン（６３％）を白色固体として得た。

【0042】

３−アザ−１７β−アセトキシ−Ａ−ホモ−４α−アンドロステン−４−オン、１を４．９ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、ＬｉＯＨ（１Ｎ、２ｍＬ）を滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した。反応をＮＨ_４Ｃｌで停止し、混合物をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、８７ｍｇの３−アザ−１７β−ヒドロキシ−Ａ−ホモ−４α−アンドロステン−４−オン２を収率７４％で得た。

【0043】

３： ３−アザ−１７β−ヒドロキシ−Ａ−ホモ−４α−アンドロステン−４−オン２を２８ｍＬの乾燥ジクロロメタンに溶解した。次いで、３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸（１０６ｍｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（１１９ｍｇ、０．５７４ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを添加した。得られた溶液を室温で２４時間撹拌した後に、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン−酢酸エチル＝１／２）により精製して、共役体３（１９１ｍｇ、９９％）を得た。３：融点＝５３〜５６℃；［α］_Ｄ^２３＋１０．５（ｃ＝０．９１ ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ６．９２（ｓ、１Ｈ）、６．８３（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．６６（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、５．７２（ｓ、１Ｈ）、４．６６（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．６３（ｍ、４Ｈ）、３．５９（ｍ、４Ｈ）、３．３２〜３．０４（ｍ、２Ｈ）、２．７５（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．４８（ｍ、１Ｈ）、２．２７（ｍ、１Ｈ）、２．１５（ｍ、２Ｈ）、１．５０〜１．９８（ｍ、１０Ｈ）、１．３３（ｍ、２Ｈ）、１．１４（ｓ、３Ｈ）、１．０５（ｍ、１Ｈ）、０．８０（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ１７１．０、１７０．４、１６１．３、１５１．３、１４０．８、１１８．８、１１６．３、１１４．４、８２．７、６４．４、５４．２、５３．２、５０．２、４４．５、４２．７、４１．９、４０．７、３６．７、３６．２、３５．３、３３．８、３３．１、２７．５、２５．６、２４．９、２３．４、２１．３、１２．１；ＦＴ−ＩＲ：３４５０、２９２５、１７３１、１６５１、１６０７、１５１２、１４６９、１３５３、１２３８、１１８１、１０４１、８６９、８１３。

【0044】

実施例２

【0045】

【化10】

【0046】

４： エストロンオキシムを、過去に記載された手順（Ivanenko TI et al, Pharm Chem J, 1982, 16(10):751-6）に従って合成した。エストロン（１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の２．２ｍＬの無水エタノール溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（６２ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．２ｍＬ）を添加した。混合物を６時間還流した。次に水を加え、混合物を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをさらにＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）により精製して、１０５ｍｇのエストロンオキシム（１００％）を白色固体として得た。

【0047】

５： ラクタム５を、過去に記載された手順（Regan BM and Newton Hayes F, J Am Chem Soc, 1956, 78(3): 639-43）に従って合成した。エストロンオキシム（１０８ｍｇ、０．３７６ｍｍｏｌ）を６．３ｍＬの乾燥ジオキサンに溶解した。混合物を０℃に冷却し、塩化チオニル（０．７ｍＬ）を滴下した。混合物を室温になるまで放置し、２４時間撹拌した。反応をＮａＨＣＯ_３で停止し、混合物をジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをさらにＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）により精製して、回収した出発物質［３２ｍｇの出発物質（０．１１２ｍｍｏｌ）］を伴って４２ｍｇのラクタム５（回収された出発物質に基づいて５６％）を得た。

【0048】

６： ラクタム５を１４ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解した。次いで、３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸（９０ｍｇ、０．２９３ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（６１ｍｇ、０．２９３ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを添加した。得られた溶液を室温で２４時間撹拌した後に、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液；ジクロロメタン／アセトン＝２／１）で精製して、共役体６（５６ｍｇ、６８％）を得た。共役体６：［α］_Ｄ^２３＋７３．５（ｃ＝０．９０ ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ７．２５（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、６．６８（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．３１（ｓ、１Ｈ）、４．３０（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．６２（ｄｔ、Ｊ＝２９．２，６．６Ｈｚ、８Ｈ）、２．９７（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、９．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．８８（ｍ、２Ｈ）、２．５８〜２．３６（ｍ、４Ｈ）、２．２３〜２．００（ｍ、２Ｈ）、１．９２〜１．６６（ｍ、３Ｈ）、１．６０〜１．２９（ｍ、４Ｈ）、１．１９（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１７１．７、１６９．８、１５１．３、１４８．５、１４１．０、１３７．８、１３７．２、１２６．１、１２１．３、１１８．７、１１６．５、１１４．５、６４．４、５４．４、５４．２、４６．６、４３．４、４０．７、３９．９、３８．９、３４．９、３０．５、２９．５、２６．５、２５．９、２２．１、１９．８；ＦＴＩＲ：３３２９、２９２７、２８５０、１７５７、１６２６、１５７７、１５１２、１４３７、１３１１、１２４４、１１５７、１０８８、１０４５、８９２。

【0049】

実施例３

【0050】

【化11】

【0051】

７： １７−ヒドロキシアンドロスト−４−エン−３，１１−ジオン（４８４ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を２．２ｍＬの無水酢酸に溶解した。次いで、４ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰおよび０．２５ｍＬの乾燥ピリジンを添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。反応を水で停止し、混合物を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをさらにＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）により精製して、４７２ｍｇの１７−アセトキシアンドロスト−４−エン−３，１１−ジオンを収率８６％で得た。７：融点＝１６２〜１６４℃［α］_Ｄ^２３＋１４８．０（ｃ１．６８ ＣＨＣｌ_３）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ５．６９（ｓ、１Ｈ）、４．７６（ｔ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．８３〜２．６９（ｍ、１Ｈ）、２．５４〜２．２０（ｍ、６Ｈ）、２．０１（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．９２（ｍ、３Ｈ）、１．８５〜１．５５（ｍ、４Ｈ）、１．５１〜１．４１（ｍ、１Ｈ）、１．４４〜１．３４（ｍ、３Ｈ）、１．３２〜１．１０（ｍ、２Ｈ）、０．８５〜０．６９（ｍ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ２０８．３、１９９．５、１７０．８、１６８．３、１２４．６、８０．２、６２．６、５４．８、４９．４、４６．２、３８．２、３７．０、３４．７、３３．７、３２．１、３１．７、２７．６、２２．９、２０．９、１７．２、１２．８；ＦＴ−ＩＲ：３４４３、２９５８、２９３５、２８５０、１７３２、１７０２、１６７７、１６１８、１４２６、１３７３、１３６０、１３４３、１２７１、１２３８、１２２４、１０４５、１０２７。

【0052】

８： ７ｍＬの無水エタノール中の１７−アセトキシアンドロスト−４−エン−３，１１−ジオン（４６５ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）および乾燥ピリジン（４．２ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。次いで、水を加え、混合物を酢酸エチル（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；ジクロロメタン：酢酸エチル＝２０：１）でさらに精製して、４６１ｍｇのオキシム８（９５％）を得た。

【0053】

９： オキシム８（２６４ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を１３ｍＬの乾燥ジオキサンに溶解した。混合物を０℃に冷却し、塩化チオニル（１．４ｍＬ）を滴下した。混合物を室温になるまで放置し、２４時間撹拌した。反応をＮａＨＣＯ_３で停止し、混合物を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；酢酸エチル：メタノール＝１：０．０３）によりさらに精製して、１６３ｍｇのラクタム９を収率６２％で得た。９：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ６．３９（ｓ、１Ｈ）、５．７５（ｓ、１Ｈ）、４．７８（ｔ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３５〜３．１８（ｍ、１Ｈ）、３．０９（ｄｔ、Ｊ＝１４．７、７．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．６７（ｄｄ、Ｊ＝１４．９、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．４８（ｔｄ、Ｊ＝１３．６、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．３４〜２．２０（ｍ、３Ｈ）、２．１４（ｄｄ、Ｊ＝９．３、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．０３（ｓ、３Ｈ）、２．０１〜１．８６（ｍ、２Ｈ）、１．８３〜１．５３（ｍ、５Ｈ）、１．４８〜１．３７（ｍ、１Ｈ）、１．３８（ｓ、３Ｈ）、１．２８〜１．０８（ｍ、１Ｈ）、０．７６（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ２０９．０、１７０．８、１６９．５、１５８．４、１２０．１、８０．１、６２．４、５５．１、４９．９、４６．７、４３．６、４０．４、３６．８、３６．８、３５．５、３３．２、２７．６、２２．８、２１．１、２０．９、１２．８；ＦＴ−ＩＲ：３４２８、２９７１、２９２０、２８７８、２３６４、２３４１、１７３６、１７０１、１６６４、１６３９、１５９９、１４４４、１３７５、１３３９、１２４５、１１２７、１０８９、１０４６。

【0054】

１０： ７６ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）のラクタム９を３ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、ＬｉＯＨ（１Ｎ、１．２ｍＬ）を滴下した。混合物を室温で１時間撹拌した。反応をＮＨ_４Ｃｌで停止し、混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して６７ｍｇのラクタム１０を得た。１０：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｄｍｓｏ）δ７．７２（ｓ、１Ｈ）、５．５１（ｓ、１Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．６６（ｄｄ、Ｊ＝１３．４、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．０８〜２．９０（ｍ、２Ｈ）、２．４７〜２．３２（ｍ、２Ｈ）、２．２９（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２１（ｄ、Ｊ＝１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．１４〜２．０１（ｍ、２Ｈ）、２．０１〜１．７８（ｍ、３Ｈ）、１．７４〜１．５０（ｍ、３Ｈ）、１．４０（ｍ、１Ｈ）、１．２８（ｓ、３Ｈ）、１．２３（ｓ、１Ｈ）、１．１５〜１．０２（ｍ、１Ｈ）、０．５５（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｄｍｓｏ）δ２１０．２、１６７．８、１５７．３、１２０．３、７８．１、６１．０、５４．５、４８．８、４７．１、４３．１、４０．４、３６．８、３５．５、３４．９、３３．１、２９．９、２２．３、２０．９、１１．８；ＦＴ−ＩＲ：３４２３、３２６２、２９５２、２９２３、２８５３、１６９３、１６４７、１６０９、１４５８、１４０７、１３７５、１３５３、１２６１、１０６２。

【0055】

１１： ラクタム１０を８．２ｍＬの乾燥ＤＣＭに溶解した。次いで、３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸（５１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（５１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを添加した。得られた溶液を室温で２４時間撹拌した後に、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液；酢酸エチル）により精製して、共役体１１（４８．５ｍｇ、９６％）を得た。共役体１１：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ６．８３（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．６７（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．１１（ｓ、１Ｈ）、５．７６（ｓ、１Ｈ）、４．８６（ｔ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．６１（ｍ、８Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、３．１８〜３．０１（ｍ、１Ｈ）、２．８４〜２．５９（ｍ、２Ｈ）、２．５９〜２．３８（ｍ、１Ｈ）、２．３７〜２．２５（ｍ、３Ｈ）、２．１６（ｍ、１Ｈ）、２．１０〜１．８９（ｍ、３Ｈ）、１．８７〜１．５５（ｍ、４Ｈ）、１．３９（ｓ、３Ｈ）、１．２６（ｍ、２Ｈ）、１．１２（ｍ、１Ｈ）、０．７６（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ２０８．９、１７０．９、１６９．５、１５８．７、１５１．３、１４０．９、１１９．９、１１６．２、１１４．５、８０．４、６４．２、６２．４、５５．１、５４．３、４９．９、４６．８、４３．６、４０．７、３６．８、３５．５、３４．９、３３．９、２７．６、２５．６、２４．９、２２．８、２１．２、１２．８；ＦＴ−ＩＲ：３４３２、３３２８、２９２７、２８５０、１７３３、１７０１、１６６４、１６２６、１５９９、１５１３、１４４４、１３８９、１３６９、１３１０、１２７３、１２４３、１１７９、１０８７、１０４１、９９９。

【0056】

実施例４

【0057】

【化12】

【0058】

１３： 密封管中の化合物１２（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の１．５ｍＬ無水エタノール溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）および乾燥ピリジン（０．９ｍＬ）を加えた。混合物を１４０℃で７日間加熱した。次いで、水を加え、混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

【0059】

１４： 前記の粗オキシム１３（０．２８ｍｍｏｌ）を４．９ｍＬの乾燥ジオキサンに溶解した。混合物を０℃に冷却し、塩化チオニル（０．５４ｍＬ）を滴下した。混合物を室温になるまで放置し、２４時間撹拌した。反応をＮａＨＣＯ_３で停止し、混合物を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；酢酸エチル：メタノール＝１：０．１）によりさらに精製して５２ｍｇのラクタムを収率５０％で得た。１４：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ７．００（ｓ、１Ｈ）、５．７７（ｓ、１Ｈ）、５．５９（ｓ、１Ｈ）、４．６１（ｔ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２０（ｍ、２Ｈ）、３．０２（ｄｄ、Ｊ＝９．６、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４８〜２．４０（ｍ、２Ｈ）、２．３１（ｄ、Ｊ＝１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．１６（ｍ、２Ｈ）、２．０９〜２．０〜１．９７（ｍ、５Ｈ）、１．７４〜１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．５１〜１．４０（ｍ、２Ｈ）、１．３５〜１．３０（ｍ、１Ｈ）、１．２４（ｓ、３Ｈ）、１．２３（ｍ、１Ｈ）、１．０８（ｍ、１Ｈ）、０．９５（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ１７５．１、１７０．９、１６９．４、１５６．３、１２０．４、８０．１、６４．２、５５．５、４５．２、４４．６、４１．０、４０．８、３８．０、３６．３、３４．４、３１．０、２５．４、２５．２、２１．９、２１．０、１１．７。

【0060】

１５： ２８ｍｇ（０．０８４ｍｍｏｌ）のラクタム１４を１．２ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、ＬｉＯＨ（１Ｎ、０．５ｍＬ）を滴下した。混合物を室温で１時間撹拌した。反応をＮＨ_４Ｃｌで停止し、混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮した。粗生成物をＳｉＯ_２クロマトグラフィー（溶出液；酢酸エチル：メタノール＝１：０．１）によりさらに精製して、２８ｍｇのラクタム１５を収率１００％で得た。１５：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｄｍｓｏ）δ７．７５（ｓ、１Ｈ）、６．１３（ｄ、Ｊ＝３．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．５３（ｓ、１Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｍ、２Ｈ）、３．１１〜２．９３（ｍ、２Ｈ）、２．４４〜２．３４（ｍ、１Ｈ）、２．２９（ｓ、２Ｈ）、２．０４〜１．７２（ｍ、５Ｈ）、１．６５（ｍ、２Ｈ）、１．２４（ｍ、３Ｈ）、１．２０（ｓ、３Ｈ）、０．８９（ｍ、１Ｈ）、０．６６（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｄｍｓｏ）δ１７４．６、１６７．７、１５６．１、１２０．１、７８．１、６９．８、６３．４、４４．９、４４．２、４１．２、４０．４、３７．７、３５．３、３３．７、３１．３、２７．７、２４．４、２０．９、１０．７。

【0061】

１６： ラクタム１５（３０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を９ｍＬの乾燥ＤＣＭに溶解した。次いで、３−（４−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェノキシ）プロパン酸（６７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（６０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを添加した。得られた溶液を室温で２４時間撹拌した後に、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液；酢酸エチル／ＭｅＯＨ＝１０／１）で精製して、共役体１６（３９ｍｇ、７０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ６．８５（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．７６（ｓ、１Ｈ）、６．６５（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、５．７９（ｓ、１Ｈ）、５．４６（ｓ、１Ｈ）、４．６８（ｔ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．６０（ｍ、４Ｈ）、３．５１〜３．４２（ｍ、１Ｈ）、３．１８（ｍ、２Ｈ）、３．０２（ｄｄ、Ｊ＝９．５、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．８５〜２．６７（ｍ、２Ｈ）、２．５１（ｄ、Ｊ＝１３．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．４４（ｄｄ、Ｊ＝１３．６、１０．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．３３（ｄ、Ｊ＝１３．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．２５〜２．０６（ｍ、２Ｈ）、２．０７〜１．７３（ｍ、５Ｈ）、１．７３〜１．２８（ｍ、５Ｈ）、１．２５（ｓ、３Ｈ）、１．１７〜１．０３（ｍ、２Ｈ）、０．９６（ｓ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ１７４．７、１７０．９、１６９．１、１５５．６、１５１．３、１４０．９、１２０．７、１１６．３、１１４．４、８０．５、６４．２、６４．１、５５．５、５４．２、４５．３、４４．５、４１．１、４０．７、３８．１、３６．３、３４．８、３４．４、３３．９、３１．０、２５．６、２５．５、２５．２、２４．９、２１．９、１１．８。ＦＴ−ＩＲ：３４１０、３３３０、２９２６、２８５０、１７３４、１６５４、１６２７、１５７７、１５１３、１４４５、１３４９、１２７３、１２４３、１１８０、１１３３、１１１０、１０８７、１０４４、８９０。

【0062】

実施例５

【0063】

【化13】

【0064】

ラクタム１７は、Koutsourea et al (Steroids, 2003, 68(7-8):659-66)に従って合成した。
１８： 丸底フラスコ中で、４８ｍｇ（０．１５７ｍｍｏｌ）の酸を０．５ｍｌの乾燥ベンゼンで希釈した。２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド（３０μｌ、０．１８９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５３μｌ、０．３７８ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＡｒ下で１時間還流した。この混合物に、０．５ｍｌの乾燥ベンゼン中のステロイド系アルコール５０ｍｇ（０．１５７ｍｍｏｌ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジンの溶液を添加した。還流を３時間継続した。真空中で蒸発することによりベンゼンを完全に除去し、残った残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈した。得られた混合物を５％ＨＣｌ水溶液で抽出し、有機層を７％ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、最後に水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；酢酸エチル／ＭｅＯＨ＝１００／１）を実施して、４６ｍｇの共役体１８を収率４８％で得た。共役体１８：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ６．８４（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．６７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、５．９０（ｓ、１Ｈ）、５．８６（ｓ、１Ｈ）、４．７８（ｍ、１Ｈ）、４．１９（ｍ、２Ｈ）、３．５８〜３．５９（ｍ、８Ｈ）、３．４８（ｍ、１Ｈ）、２．６１〜１．２５（１８Ｈ）、１．２９（ｓ、３Ｈ）、０．８８（ｓ、３Ｈ）；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６０５。

【0065】

実施例６

【0066】

【化14】

【0067】

ラクタム１９は、Koutsourea et al (Steroids, 2003, 68(7-8):659-66)に従って合成した。
２０： 丸底フラスコ中で、４６ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）の酸を０．５ｍｌの乾燥ベンゼンに希釈した。２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド（２８μｌ、０．１８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５０μｌ、０．３６ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＡｒ下で１時間還流した。この混合物に、０．５ｍｌの乾燥ベンゼン中のステロイド系アルコール５０ｍｇ（０．１５０ｍｍｏｌ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジンの溶液を添加した。還流を３時間継続した。真空中で蒸発することによりベンゼンを完全に除去し、残った残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈した。得られた混合物を５％ＨＣｌ水溶液で抽出し、有機層を７％ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、最後に水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；酢酸エチル／ＭｅＯＨ＝１００／２）を実施し、１９ｍｇの共役体２０を収率２０％で得た。２０：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ７．１８（ｓ、１Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．６５（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．６０（ｓ、１Ｈ）、５．８２（ｓ、１Ｈ）、４．８０（１Ｈ、ｍ）、４．２１（２Ｈ、ｍ）、３．５０（ｍ、８Ｈ）、３．２０（１Ｈ、ｍ）、２．８０〜１．３０（１９Ｈ）、１．２０（ｓ、３Ｈ）、０．９（ｓ、３Ｈ）；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６２１。

【0068】

実施例７

【0069】

【化15】

【0070】

ラクタム２１は、Koutsourea et al (Steroids, 2003, 68(7-8):659-66)に従って合成した。
２２： 丸底フラスコ中で、３７ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）の酸を０．４ｍｌの乾燥ベンゼンに希釈した。２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド（２２μｌ、０．１４４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４０μｌ、０．２８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＡｒ下で１時間還流した。この混合物に、０．４ｍｌの乾燥ベンゼン中のステロイド系アルコール５０ｍｇ（０．１２０ｍｍｏｌ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジンの溶液を添加した。還流を３時間継続した。真空中で蒸発することによりベンゼンを完全に除去し、残った残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈した。得られた混合物を５％ＨＣｌ水溶液で抽出し、有機層を７％ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、最後に水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル）を実施し、３４ｍｇの共役体２２を収率４０％で得た。２２：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ_３）δ６．８４（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．６０（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、５．９０（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｓ、１Ｈ）、４．８０（ｍ、１Ｈ）、４．１５（ｍ、２Ｈ）、３．５（ｍ、８Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．８〜０．８（２２Ｈ）；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６０５。

【0071】

実施例８
生体外および生体内における抗癌活性の生物学的試験
Ａ）生体外における抗癌活性
９種の十分に確立されたヒト癌細胞株（表１）を、新たに合成した化合物により生じる細胞増殖抑制活性および細胞傷害活性を試験するために処理した。該細胞株を、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手し、指示に従って異なる培養培地で増殖した。ＭＴＴ（（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイは、薬物および化学物質の細胞増殖抑制活性および細胞傷害活性の評価のために十分に確立された標準的な方法である（Trafalis DT et al, J BUON, 2003, 8:333-9; Trafalis DT et al, J BUON, 2004, 9(3):275-82; Trafalis DT et al, J BUON, 2005; 10:227-34; Trafalis DT et al, Breast Cancer Res Treat, 2006, 97:17-31）。簡潔に説明すると、細胞を９６ウェルプレートにウェル当り３×１０^４細胞／ｍｌの密度で播種し、５％ＣＯ_２のインキュベーター内に３７℃で７２時間維持し、単層または懸濁液として増殖した。２４時間後に、細胞を０．１〜１００μｍｏｌ／ｌの該化合物で４８時間処理した。培養細胞の生存率を、前記のＭＴＴ（Sigma, St Louis, Missouri, USA）代謝アッセイで評価した。ＥＬＩＳＡ読取器（Versamax, Orleans, USA）を用いて、変換された色素の吸光度を５４０ｎｍの波長で測定した。５０％または全量（１００％）での細胞増殖阻害性を生じた各薬物の平均濃度（それぞれＧＩ５０およびＴＧＩ）、ならびに培養細胞の５０％に対して細胞傷害性を生じた薬物濃度［最大細胞傷害濃度の半分（ＩＣ５０）］を線形回帰法により計算した。７種の吸光度測定値［２４時間（Ｃｔ２４）、対照成長の７２時間（Ｃｔ７２）、および５種の濃度レベルの薬物の存在下での試験増殖（Ｔｔ７２ｘ）］を用いて、増殖の百分率を薬物濃度の各レベルで計算した。国立癌研究所（ＮＣＩ）に従って、増殖阻害の百分率を、Ｔｔ７２ｘ＞Ｃｔ２４の濃度については（Ｔｔ７２ｘ）−（Ｃｔ２４）／（Ｃｔ７２）−（Ｃｔ２４）］×１００として、Ｔｔ７２ｘ＜Ｃｔ２４の濃度については［（Ｔｔ７２ｘ）−（Ｃｔ２４）］／Ｃｔ２４］×１００として計算した。ＧＩ５０は、［（Ｔｔ７２ｘ）−（Ｃｔ２４）／（Ｃｔ７２）−（Ｃｔ２４）］×１００＝５０から計算し、ＴＧＩは、［（Ｔｔ７２ｘ）−（Ｃｔ２４）／（Ｃｔ７２）−（Ｃｔ２４）］×１００＝０から計算し、ＩＣ５０は、［（Ｔｔ７２ｘ）−（Ｃｔ２４）／（Ｃｔ２４）］×１００＝５０から計算した。全ての実験を３回実施した。

【0072】

【表1】

【0073】

ヒト癌細胞株に対する試験化合物によって誘発された生体外での細胞増殖阻害性（ＧＩ５０、ＴＧＩ）および細胞傷害性（ＩＣ５０）効果の結果を表２、３、４に示す。

【0074】

【表2】

【0075】

【表3】

【0076】

【表4】

【0077】

Ｂ）生体内における急性毒性
腹腔内（ｉ．ｐ．）処理のために、試験化合物の保存溶液を使用直前に調製した。 １０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に最初に溶解した後に、それらを所望の濃度のトウモロコシ油に懸濁させた。この濃度だけでは観察可能な毒性効果は生じなかった。

【0078】

Ｃ５７Ｂｌ／６雌マウスを毒性試験に用いた。マウスはヘレニック・パスツール研究所の実験部から取得した。
簡潔に説明すると、過去に非常に詳細に記載されてきたように（Catsoulacos P et al, Cancer Chemother Pharmacol, 1979, 3(1):67-70; Catsoulacos P et al, J Pharm Sci, 1978, 67(9):1342-3; Catsoulacos P et al, Anticancer Res, 1995; 15:827-30）、４種の異なる用量で１０匹のＣ５７Ｂｌ／６マウスの群への単回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射後に、試験化合物によって誘導された急性毒性を評価し、すなわちマウスを３０日間観察して、通常ＬＤ１０（１０％の動物に対する致死量）ならびにＬＤ５０（５０％の動物に対する致死量）として規定される化合物の治療用量を、図式的に推定（３０日の曲線）した後に決定した。試験化合物の毒性を、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの致死率から評価した。ＬＤ５０値およびＬＤ１０値を図式的にで推定し、ここで、各用量の毒性による死亡率を縦座標に示し、投与量を横座標に示した（表５）。

【0079】

Ｃ）生体内における抗腫瘍活性
実験は、米国国立癌研究所（ＮＣＩ）の実験計画に従って、Ｐ３８８リンパ球性白血病の１０^６個の腹水細胞を腹腔内（ｉ．ｐ．）に移植することを０日目として開始した。ｉ．ｐ．処置に向けて、試験化合物の保存溶液を使用直前に調製した。抗腫瘍活性は、薬物処置した動物（Ｔ）の生理食塩水処置した対照（Ｃ）に対する生存時間中央値（ＭＳＴ）を意味する腫瘍化パラメータＴ／Ｃ％により評価した。ＮＣＩ（米国）によると、活性の最低基準はＴ／Ｃが１２５％より高いことである。さらに、抗腫瘍活性は、長期生存数から評価された（治癒は、腫瘍接種後９０日間生きているマウスとして定義される）（Golidim A et al, Nat Cancer Inst Monogr, 1980, 55: 25-26; NCI Monograph, NIH publication 1986, 55:80-193）。

【0080】

ＢＡＬＢ／ｃ ｓｃｉｄ雌マウスを抗腫瘍性の評価に用いた。これらの動物は、ＢＡＬＢ／ｃの素性に重篤な複合免疫不全突然変異（ｓｃｉｄ）を保有し、国立デモクリトス科学研究センター生物学研究所から取得した。マウスは、一定の温湿度条件下で、無菌ケージ中で、水および食物とともに維持した。６匹のマウスを各処置群中に、かつ８匹のマウスを対照群中に含めた。

【0081】

試験した化合物の治療用量は、それぞれのＬＤ１０（ｍｇ／ｋｇｒ）で定義した。

【0082】

【表5】

【0083】

【表6】

【0084】

ＢＡＬＢ／ｃ ｓｃｉｄ雌マウスを、ヒト卵巣癌ＳＣＯＶ−３に対する試験化合物の生体内抗腫瘍性評価のために使用した。３×１０^６個のＳＣＯＶ−３癌細胞／０．２ｍｌ／マウスの懸濁液を、各動物の右側腹部または左側腹部に皮下接種した。マウスを一定の温湿度条件下で、滅菌ケージ中で、水および食物とともに維持した。１０匹のマウスを処置および対照の各群に含めた。試験は、十分に確立された実験計画に従って実施した。薬物の有効性は、対照（Ｃ）に対する処置動物（Ｔ）の腫瘍体積の平均変化（Ｔ／Ｃ％＝ＴＩ、腫瘍阻害）および腫瘍細胞動力学および生物学的特性に従う生存時間中央値の増加によって決定した。腫瘍体積または重量は、０．５２×ａ^２×ｂとして計算され、ここでａおよびｂは、腫瘍の短軸および長軸であり、データは、平均腫瘍体積±平均標準誤差（±ＳＥＭ）対処置後の時間の半対数グラフ上にプロットされる。腫瘍が０．０８５〜０．１ｍｍ^３の体積に達したときに、マウスを対照群および薬物処置群（１０匹のマウス／群）に分割し、このとき各群の平均腫瘍体積は類似している。試験化合物は、１日目、５日目および９日目にそれぞれＬＤ１０／４の用量で腹腔内投与された。

【0085】

抗腫瘍性効果の評価のために、（ａ）週毎に平均腫瘍重量変化または平均腫瘍体積変化を測定し、腫瘍阻害（ＴＩ）を式：ＴＩ（％）＝［１）（ＴＷＴ）ＴＷＺ）／（ＴＷＣ）ＴＷＺ）］×１００により計算し、ここでＴＷＴは、評価時の処置動物における腫瘍重量（ｍｇ）または腫瘍体積（ｍｍ^３）として測定され、ＴＷＺは、処置開始時（ゼロ時間または１日目）の腫瘍重量（ｍｇ）または腫瘍体積（ｍｍ^３）として測定され、ＴＷＣは、評価時の未処置動物（対照）における腫瘍重量（ｍｇ）または腫瘍体積（ｍｍ^３）として測定され、さらに（ｂ）７０日目の生存マウスの百分率（ＯＳ％）、（ｃ）７０日目の腫瘍進行のない生存マウスの百分率（ＰＦＳ％）を測定する。これらの結果を表７に示す。

【0086】

【表7】

【0087】

Ｄ）薬理学的効果
新しいラクタムステロイド系アルキル化剤は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ１／２）活性に対して顕著な阻害効果を誘導し、かつ周知のＰＡＲＰ１／２阻害剤である３−アミノベンズアミド（３−ＡＢ）よりも優れた１．７μＭ未満の最大阻害濃度の半値（ＩＣ５０）を示す。さらに、新しいラクタムステロイド系アルキル化剤は、生体外および生体内において用量依存および時間依存的にＰＡＲＰ１およびＰＡＲＰ２の転写およびｍＲＮＡ発現に顕著な変化を生じる。初回用量または低用量では、それらはＰＡＲＰ１およびＰＡＲＰ２のｍＲＮＡ発現の増加を誘発することができ、この発現は、対照値より５〜４００倍高い値に達し、細胞内ＮＡＤ＋濃度および細胞性ＡＴＰ枯渇に変化を生じさせ、その後の用量またはより高用量では、それらはＰＡＲＰ１およびＰＡＲＰ２のｍＲＮＡ発現の低減を誘発し、該発現を１００％に近づけることが可能となる。姉妹染色体交換（ＳＣＥ’ｓ）アッセイにより生体外で評価し、かつ血清または尿中の８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）付加物を生成することにより生体内で評価したように、新しいラクタムステロイド系アルキル化剤は、それらのアルキル化成分単独によって誘発されたものに匹敵する顕著なＤＮＡ損傷を生じ、それらは著しく高い抗腫瘍活性を生じる。さらに、新しいラクタムステロイド系アルキル化剤は、ＥＲＫ１／２およびＡＫＴ１／２のリン酸化反応、および結果としてＰＩ３Ｋ分子およびＭＡＰＫ分子のシグナル伝達経路の活性化を顕著に（＞６０％）阻害する。初めてラクタムステロイド系アルキル化剤の分子薬理学的効果を深く研究した。

【国際調査報告】