特表 2018-521121 （Ｚ）−４−（５−（（３−ベンジル−４−オキソ−２−チオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）フラン−２−イル）安息香酸の固体形状

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2018-521121(P2018-521121A)

(43)【公表日】2018年8月2日

(54)【発明の名称】（Ｚ）−４−（５−（（３−ベンジル−４−オキソ−２−チオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）フラン−２−イル）安息香酸の固体形状

(51)【国際特許分類】

   C07D 417/14 20060101AFI20180706BHJP

   A61K 31/427 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20180706BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20180706BHJP

【ＦＩ】

   C07D417/14CSP

   A61K31/427

   A61P29/00

   A61P13/12

   A61P1/18

   A61P35/00

   A61P37/06

   A61P27/06

   A61P27/02

   A61P43/00 111

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】90

(21)【出願番号】特願2018-516398(P2018-516398)

(86)(22)【出願日】2016年6月10日

(85)【翻訳文提出日】2018年2月8日

(86)【国際出願番号】US2016037067

(87)【国際公開番号】WO2016201356

(87)【国際公開日】20161215

(31)【優先権主張番号】62/175,066

(32)【優先日】2015年6月12日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/275,655

(32)【優先日】2016年1月6日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517430451

【氏名又は名称】アドハエア ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100192201

【弁理士】

【氏名又は名称】岡部 佐知子

(72)【発明者】

【氏名】アントニオ ジェイ．バルボーザ

【テーマコード（参考）】

4C063

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C063AA01

4C063BB03

4C063CC75

4C063DD62

4C063EE01

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC82

4C086GA02

4C086GA10

4C086GA13

4C086GA14

4C086GA15

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA33

4C086ZA66

4C086ZA81

4C086ZB08

4C086ZB26

4C086ZC41

(57)【要約】

本発明は、式ＩによるロイカドヘリンＬＡ１［（Ｚ）−４−（５−（（３−ベンジル−４−オキソ−２−チオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）フラン−２−イル）安息香酸］の新しい塩及び結晶形を提供する。前記塩及び結晶形を調製するための方法、並びにその塩及び結晶形を使用したβ２インテグリン媒介性疾患及び病態を処置するための方法もまた記載する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉ：

【化1】

の化合物のコリン塩。

【請求項2】

式Ｉ：

【化2】

の化合物のコリン塩の結晶形Ｇ。

【請求項3】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、７．９、１１．２、１３．３、１５．０、１５．７、１６．１、１６．２、１６．５、１６．６、１７．８、１８．１、１８．５、１９．１、１９．８、２０．０、２１．１、２３．０、２４．６、２５．０、２５．６、２６．６、２６．８、２６．９、２９．３、２９．７、３０．６、３０．７、及び３４．４°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２に記載の結晶形Ｇ。

【請求項4】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１３．３、１５．０、１５．７、１６．１、１６．６、１９．１、２４．６、２５．０、２５．６、及び２６．８°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２に記載の結晶形Ｇ。

【請求項5】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１３．３、１５．０、１５．７、１６．１、１６．６、１９．１、２４．６、２５．０、２５．６、及び２６．８°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２に記載の結晶形Ｇ。

【請求項6】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図５ＢによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２に記載の結晶形Ｇ。

【請求項7】

式Ｉ：

【化3】

の化合物のコリン塩の結晶形Ｏ。

【請求項8】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．４、８．８、９．３、１３．３、１４．３、１６．７、１７．０、１８．１、１９．４、１９．６、１９．９、２０．７、２０．９、２１．４、２１．７、２２．５、２３．４、２４．１、及び２５．５°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項７に記載の結晶形Ｏ。

【請求項9】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．４、８．８、９．３、１６．７、１９．９、２０．７、２１．７、２２．５、２３．４、及び２５．５°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項７に記載の結晶形Ｏ。

【請求項10】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図６ＥによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項７に記載の結晶形Ｏ。

【請求項11】

式Ｉ：

【化4】

の化合物のコリン塩の結晶形Ｑ。

【請求項12】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．０、５．２、８．４、９．６、９．９、１１．５、１２．６、１２．８、１３．３、１４．４、１５．８、１６．１、１６．６、１７．５、１８．０、１９．３、２０．６、２０．７、２１．５、２１．７、２２．９、２３．７、２４．８、２５．１、２５．３、２５．３、２５．５、２６．３、２６．９、２７．０、２８．１、２８．８、３０．４、３１．２、３２．０、３５．７、及び３７．４°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１１に記載の結晶形Ｑ。

【請求項13】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．０、８．４、９．６、９．９、１１．５、１２．８、１３．３、１４．４、１８．０、１９．３、２３．７、及び２５．５°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１１に記載の結晶形Ｑ。

【請求項14】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．０、８．４、９．６、９．９、１１．５、１２．８、１３．３、１４．４、１８．０、１９．３、２３．７、及び２５．５°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１１に記載の結晶形Ｑ。

【請求項15】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１０ＤによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１１に記載の結晶形Ｑ。

【請求項16】

式Ｉ：

【化5】

の化合物のコリン塩の結晶形Ｒ。

【請求項17】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、５．６、８．０、８．２、８．４、９．８、１１．２、１２．７、１３．４、１４．６、１５．１、１５．７、１６．１、１６．３、１６．７、１７．１、１７．８、１８．２、１８．５、１９．１、１９．９、２０．１、２１．１、２２．６、２３．０、２３．４、２４．０、２４．５、２４．７、２５．０、２５．６、２６．０、２６．６、２６．８、２７．１、２７．４、２７．７、２８．１、２９．３、２９．７、３０．６、３１．１、３１．７、３２．２、３２．８、３３．２、３３．５、３４．５、３４．８、３５．１、３５．４、３６．５、３７．６、３８．５、３９．５、４０．４、４１．３、４２．７、及び４４．４°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１６に記載の結晶形Ｒ。

【請求項18】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１５．１、１６．３、１６．７、１９．１、２０．１、２１．１、２３．０、２４．５、２５．０、２５．６、２６．０、３１．１、３２．８、及び３３．５±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１６に記載の結晶形Ｒ。

【請求項19】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１５．１、１６．３、１６．７、１９．１、２０．１、２１．１、２３．０、２４．５、２５．０、２５．６、２６．０、３１．１、３２．８、及び３３．５±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも９つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１６に記載の結晶形Ｒ。

【請求項20】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、図７によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項１６に記載の結晶形Ｒ。

【請求項21】

式Ｉ：

【化6】

の化合物のコリン塩の結晶形Ｓ。

【請求項22】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、８．４、９．６、１０．０、１１．６、１２．９、１３．３、１４．４、１４．９、１５．８、１６．６、１７．４、１８．０、１９．２、１９．３、２０．６、２１．４、２１．７、２２．７、２３．７、２４．８、２５．４、２６．３、２６．８、２８．１、２８．７、２９．６、３０．３、３１．０、３１．９、３３．０、３４．０、３５．７、３７．４、３９．２、４０．５、及び４１．７°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２１に記載の結晶形Ｓ。

【請求項23】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、８．４、９．６、１０．０、１２．９、１３．３、１６．６、１７．４、１８．０、１９．２、２０．６、２１．４、２１．７、２３．７、２５．４、及び２８．１°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２１に記載の結晶形Ｓ。

【請求項24】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、８．４、９．６、１０．０、１２．９、１３．３、１６．６、１７．４、１８．０、１９．２、２０．６、２１．４、２１．７、２３．７、２５．４、及び２８．１°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２１に記載の結晶形Ｓ。

【請求項25】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図８によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２１に記載の結晶形Ｓ。

【請求項26】

式Ｉ：

【化7】

の化合物のメグルミン塩。

【請求項27】

式Ｉ：

【化8】

の化合物のメグルミン塩の結晶形Ｈ。

【請求項28】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２７に記載の結晶形Ｈ。

【請求項29】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２７に記載の結晶形Ｈ。

【請求項30】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２７に記載の結晶形Ｈ。

【請求項31】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図６ＢによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項２７に記載の結晶形Ｈ。

【請求項32】

式Ｉ：

【化9】

の化合物のメグルミン塩の結晶形Ｌ。

【請求項33】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．９、８．５、９．０、９．９、１０．６、１０．９、１１．６、１２．０、１２．６、１３．１、１４．５、１４．８、１５．０、１５．３、１５．９、１６．２、１６．９、１７．４、１７．８、１８．０、１８．４、１８．８、１９．２、２０．２、２０．８、２１．３、２１．７、２２．１、２３．２、２３．８、２４．５、２５．２、２５．５、２６．３、２６．９、２７．３、２７．９、２８．４、２８．９、２９．２、２９．８、３０．３、３０．６、３１．１、３２．１、３２．８、３４．１、３４．５、３４．９、３５．１、３６．０、３６．５、３７．５、３８．０、３８．９、３９．６、４０．７、４１．７、４２．５、及び４２．９°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３２に記載の結晶形Ｌ。

【請求項34】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１０．９、１５．０、１６．９、２０．２、２１．７、２３．８、２４．５、２５．２、２６．３、２９．２、及び２９．８°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３２に記載の結晶形Ｌ。

【請求項35】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１０．９、１５．０、１６．９、２０．２、２１．７、２３．８、２４．５、２５．２、２６．３、２９．２、及び２９．８°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３２に記載の結晶形Ｌ。

【請求項36】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１１によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３２に記載の結晶形Ｌ。

【請求項37】

式Ｉ：

【化10】

の化合物のメグルミン塩の結晶形Ｍ。

【請求項38】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．５、８．５、９．０、９．９、１０．６、１１．６、１４．４、１４．８、１５．０、１５．３、１５．９、１６．１、１６．９、１７．８、１８．０、１９．０、２０．４、２０．８、２１．３、２１．７、２３．６、２４．５、２５．２、２６．３、２６．９、２７．５、２７．９、２８．５、２８．９、２９．８、３０．６、３２．１、３２．８、３３．８、３４．５、３６．０、３６．４、３７．１、３８．０、３９．７、４０．７、４１．７、４３．０、及び４４．０°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３７に記載の結晶形Ｍ。

【請求項39】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１４．８、１５．０、１６．９、１８．０、２１．７、２４．５、２５．２、２６．３、及び２９．８°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３７に記載の結晶形Ｍ。

【請求項40】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１４．８、１５．０、１６．９、１８．０、２１．７、２４．５、２５．２、２６．３、及び２９．８±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも９つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３７に記載の結晶形Ｍ。

【請求項41】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１２によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項３７に記載の結晶形Ｍ。

【請求項42】

式Ｉ：

【化11】

の化合物のメグルミン塩の結晶形Ｎ。

【請求項43】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、４．３、５．０、５．４、６．１、７．５、７．９、８．９、９．５、１０．０、１０．８、１１．４、１２．１、１２．５、１３．８、１４．３、１４．８、１５．６、１６．１、１６．７、１７．４、１８．１、１９．２、１９．５、２０．１、２０．９、２１．４、２１．５、２２．１、２２．５、２３．９、２４．６、２５．３、２６．３、２６．７、２７．１、２７．６、２８．２、２９．０、３０．４、３０．９、３２．０、３２．９、３３．９、３４．７、３６．９、３８．３、３９．１、３９．６、４０．２、及び４１．４°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４２に記載の結晶形Ｎ。

【請求項44】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．１、７．９、８．９、９．５、１０．０、１２．５、１４．３、１４．８、１５．６、１６．１、１７．４、１８．１、１９．５、２０．９、２１．４、２１．５、２３．９、２４．６、２５．３、及び２９．０°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４２に記載の結晶形Ｎ。

【請求項45】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．１、７．９、８．９、９．５、１０．０、１２．５、１４．３、１４．８、１５．６、１６．１、１７．４、１８．１、１９．５、２０．９、２１．４、２１．５、２３．９、２４．６、２５．３、及び２９．０°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４２に記載の結晶形Ｎ。

【請求項46】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１３によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４２に記載の結晶形Ｎ。

【請求項47】

式Ｉ：

【化12】

の化合物のメグルミン塩の結晶形Ｔ。

【請求項48】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．９、８．２、８．４、９．４、１１．６、１５．０、１５．１、１５．５、１７．２、１７．８、１８．１、２０．５、２１．３、２１．９、２２．３、２３．５、２５．０、及び２６．７°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４７に記載の結晶形Ｔ。

【請求項49】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．９、８．４、９．４、１１．６、１５．５、１７．２、２１．３、２１．９、２２．３、２３．５、２５．０、及び２６．７°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４７に記載の結晶形Ｔ。

【請求項50】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから成る群から選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４７に記載の結晶形Ｔ。

【請求項51】

Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１０ＥによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする、請求項４７に記載の結晶形Ｔ。

【請求項52】

医薬的に許容し得る賦形剤、及び、請求項１に記載の塩、請求項２６に記載の塩、請求項２〜２５のいずれか１項に記載の結晶形、又は請求項２７〜５１のいずれか１項に記載の結晶形を含む医薬製剤。

【請求項53】

医薬的に許容し得る賦形剤、及び、実質的に式Ｉ：

【化13】

による化合物又は医薬的に許容し得るその塩から成る粒子であって、該粒子の平均直径が、５０μｍ未満である、
を含む、医薬製剤。

【請求項54】

前記粒子の平均直経が、２５μｍ未満である、請求項５３に記載の医薬製剤。

【請求項55】

前記粒子が、実質的に式（Ｉ）の化合物の遊離酸形態から成る、請求項５３又は請求項５４に記載の医薬製剤。

【請求項56】

β２インテグリン媒介性病態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、請求項１に記載の塩、請求項２６に記載の塩、請求項２〜２５のいずれか１項に記載の結晶形請求項２７〜５１のいずれか１項に記載の結晶形、又は請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。

【請求項57】

前記β２インテグリン媒介性病態が、急性炎症、慢性炎、慢性の腎臓病、血管障害に関連した新生内膜肥厚、組織傷害、腹膜炎、糖尿病性腎症、自己免疫疾患、癌、緑内障、移植片対宿主病、黄斑変性、及びブドウ膜炎から成る群から選択される、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

β２インテグリン媒介性病態が癌である、請求項５７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、２０１５年６月１２日に出願された米国特許仮出願第６２／１７５，０６６号及び２０１６年１月６日に出願された米国特許仮出願第６２／２７５，６５５号に対して優先権を主張し、そして、それらの出願全体を参照により本明細書に援用する。

【0002】

連邦政府によって支援された研究開発下で成された発明に対する権利に関する記載
本発明は、NIAID Advanced Technology SBIR（ＮＩＡＩＤ−ＡＴ−ＳＢＩＲ［Ｒ４３／Ｒ４４］）助成金番号１Ｒ４３ ＡＩ１００４９９−０１Ａ１の下で提供された基金を用いて成された。合衆国政府は、本発明において特定の権利を有する。

【背景技術】

【0003】

白血球（Leukocyte）（すなわち、白血球細胞（white blood cell））の活性化、遊走、及び動員は、傷害や感染症に対する免疫応答、並びに様々な炎症性及び自己免疫性傷害において不可欠である。β２インテグリン（高度に発現されるインテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８を含めたα／βヘテロ二量体インテグリン受容体のサブファミリー）は、細胞接着、遊走、動員、及び活性化を含めた白血球機能を調節する白血球特異的受容体である。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８は、様々なものの中でも、リガンドとして補体断片ｉＣ３ｂ、フィブリノゲン、及びＩＣＡＭ−１を認識する。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８は、虚血再灌流障害（急性腎不全やアテローム性動脈硬化症を含む）、ループス、炎症性腸疾患、クローン病、関節リウマチ、多発性硬化症、ループス腎炎、巣状分節状糸球体硬化、腎傷害、組織損傷、緑内障、眼の異常、同種移植片拒絶反応（ネフロパシーなど）、移植、移植片対宿主病、脳卒中、血管障害に対応した新生内膜肥厚、及び炎症プロセスの消散などの多くの炎症性及び自己免疫性疾患に影響を与えている。

【0004】

白血球性β２インテグリンはまた、腫瘍増殖、腫瘍再増殖、腫瘍転移、腫瘍浸潤、炎症性及び自己免疫疾患の増強作用、反応性酸素分子種の産生、並びに炎症細胞における多くの炎症誘発性及び抗炎症性遺伝子の調節を含めたプロセスにも貢献する。β２インテグリン（ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８を含む）及びそれらのリガンドの遮断は、特定の実験モデルのインビトロにおける炎症反応の重症度の軽減を示した。しかしながら、斯かる遮断剤はヒトの炎症性／自己免疫疾患の処置においてほとんど成功していなかった。

【0005】

最近になって、インテグリンを活性化して、そして、固定化リガンドへのインテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８依存性細胞接着を増強することによって組織内での炎症性免疫細胞の動員を低減する化合物を使用する新しい抗炎症剤組成物及び方法が開発された。ロイカドヘリン（Leukadherins）は、インテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８を標的とする斯かる小分子作動薬の群である（Maiguel, et al. 2011. Sci. Signal. 4:1-14; Park, et al. 2007. J. Biomol. Screen. 12:406-417; Faridi, et al. 2009. Bioorg. Med. Chem. Lett. 19:6902-6906.）。ロイカドヘリンはまた、白血球活性化及び炎症誘発性シグナル伝達経路を低減する。その中でも、ロイカドヘリン１（「ＬＡ１」；（Ｚ）−４−（５−（（３−ベンジル−４−オキソ−２−チオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）フラン−２−イル）安息香酸；以下の式Ｉ）は、特有の抗炎症効能を実証した。ＬＡ１は、マウスの急性腹膜炎中の白血球の動員を低減し、ラットの血管障害による新生内膜肥厚を低減し、及びマウスの腎虚血／再潅流損傷を低減することを示した。ＬＡ１及びその用途は、米国特許第９，０２３，８７６号、並びに国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３４７５３及びＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３７５４８に記載されており、そしてその全体を参照により本明細書に援用する。

【化1】

【0006】

ＬＡ１の改善された製剤には、ＬＡ１が先に概説した試験において示した有用性を更に利用することが必要とされる。新製剤によって提供された改善された溶解特性、薬物動態プロファイル、及び／又は安定性プロファイルは、有効性を高め、且つ、有利な剤形を可能にすると予想される。本発明は、改善されたＬＡ１製剤の需要を満たす新しい塩及び結晶形を提供する。

【発明の概要】

【0007】

一態様において、本発明は、ＬＡ１［（Ｚ）−４−（５−（（３−ベンジル−４−オキソ−２−チオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）フラン−２−イル）安息香酸］の塩及びその結晶形を提供する。ＬＡ１塩の結晶形としては：本明細書中に記載した式Ｉの化合物のコリン（choline）塩の結晶形Ｇ；本明細書中に記載した式Ｉの化合物のコリン塩の結晶形Ｏ；本明細書中に記載した式Ｉの化合物のコリン塩の結晶形Ｑ；本明細書中に記載した式Ｉの化合物のメグルミン塩の結晶形Ｈ；本明細書中に記載した式Ｉの化合物のメグルミン塩の結晶形Ｔが挙げられる。関連する態様において、本発明は、本明細書中に記載した塩及び結晶形を作製する方法、並びに本明細書中に記載した塩又は結晶形の少なくとも１つ及び医薬的に許容し得る賦形剤を含む医薬製剤を提供する。

【0008】

別の態様において、本発明は、β２インテグリンによって媒介される病態を処置するための方法を提供する。該方法は、それを必要としている患者に治療上有効な量の、本明細書中に記載した塩又は結晶形を投与することを含む。

【0009】

本発明の塩及び結晶形、並びにそれらに関連している他の態様、物体、及び利点は、続く詳述な説明と図面を読解することでより明らかになる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１は、ＬＡ１ ＤＭＳＯ溶媒和物、形態ＢのＸ線結晶構造を示す。

【0011】

【図2】図２は、ＬＡ１遊離酸、形態Ａに関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。

【0012】

【図3】図３は、ＬＡ１遊離酸に関する熱重量−示差熱分析（ＴＧ−ＤＴＡ）データを示す。

【0013】

【図4】図４は、ＬＡ１遊離酸に関して記録された示差走査熱量計測（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。

【0014】

【図5】図５は、不規則結晶性ＬＡ１、形態Ａ（図５Ａ）及びＬＡ１コリン塩、形態Ｇ（図５Ｂ）に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0015】

【図6】図６は：ＬＡ１重炭酸塩（図６Ａ）；ＬＡ１メグルミン塩、形態Ｈ（図６Ｂ）；ＬＡ１トロメタミン塩（図６Ｃ及び図６Ｄ）；ＬＡ１コリン塩、形態Ｏ（図６Ｅ）に関するＸＲＰＤパターンを示す。

【0016】

【図7】図７は、ＬＡ１コリン塩、形態Ｒに関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0017】

【図8】図８は、ＬＡ１コリン塩、形態Ｓに関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0018】

【図9】図９は、不規則な固形：ＬＡ１塩（図９Ａ）；ＬＡ１カルシウム塩（図９Ｂ）；ＬＡ１マグネシウム塩（図９Ｃ）；ＬＡ１ナトリウム塩（図９Ｄ）；ＬＡ１カリウム塩（図９Ｅ）；ＬＡ１アンモニウム塩（図９Ｆ）；ＬＡ１カルシウム塩（図９Ｇ）；ＬＡ１ピペラジン塩（図９Ｈ）に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0019】

【図10】図１０は、小規模で調製されたコリン及びメグルミン塩：不規則なＬＡ１、形態Ａ（図１０Ａ）；エタノール：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルからのＬＡ１コリン塩（図１０Ｂ）；アセトンからのＬＡ１コリン塩（図１０Ｃ）；酢酸エチルからのＬＡ１コリン塩、形態Ｑ（図１０Ｄ）；エタノールからのＬＡ１メグルミン塩、形態Ｔ（図１０Ｅ）に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0020】

【図11】図１１は、ＬＡ１メグルミン塩、形態Ｌに関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0021】

【図12】図１２は、ＬＡ１メグルミン塩、形態Ｍに関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0022】

【図13】図１３は、ＬＡ１メグルミン塩、形態Ｎに関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0023】

【図14】図１４は、大スケールで調製されたコリン及びメグルミン塩：エタノールからのＬＡ１コリン塩（図１４Ａ）；エタノールからのＬＡ１コリン塩（図１４Ｂ）；アセトンからのＬＡ１コリン塩（図１４Ｃ）；エタノールからのＬＡ１メグルミン塩（図１４Ｄ）；エタノールからのＬＡ１メグルミン塩（図１４Ｅ）に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0024】

【図15】図１５は、様々な溶媒中のＬＡ１メグルミン塩に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0025】

【図16】図１６は、様々な溶媒中のＬＡ１コリン塩に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0026】

【図17】図１７は、Sprague Dawleyラットへの微粉化ＬＡ１（２ｍｇ／ｋｇ）の経口投与後のＬＡ１の濃度対時間プロファイルを示す。

【0027】

【図18】図１８は、Sprague DawleyラットへのＬＡ１（２ｍｇ／ｋｇ）のＩＰ投与後のＬＡ１の濃度対時間プロファイル、及びＬＡ１コリン（２ｍｇ／ｋｇ）及びＬＡ１メグルミン（２ｍｇ／ｋｇ）のＩＰ投与後のＬＡ１放出を示す。

【0028】

【図19】図１９は、Sprague DawleyラットへのＬＡ１（１ｍｇ／ｋｇ）のＩＶ投与後のＬＡ１の濃度対時間プロファイル、及びＬＡ１コリン（１ｍｇ／ｋｇ）及びＬＡ１メグルミン（１ｍｇ／ｋｇ）のＩＶ投与後のＬＡ１放出を示す。

【0029】

【図20】図２０は、ビーグル犬に静脈内投与された微粉化ＬＡ１（１ｍｇ／ｋｇ）の濃度対時間プロファイルに示す。

【0030】

【図21】図２１は、ビーグル犬に経口投与された微粉化ＬＡ１（１ｍｇ／ｋｇ）の濃度対時間プロファイルを示す。

【0031】

【図22】図２２は、ビーグル犬に経口（５ｍｇ／ｋｇ）及び静脈内（０．５ｍｇ／ｋｇ）投与されたＬＡ１コリン塩の濃度対時間プロファイルを示す。

【0032】

【図23】図２３は、ビヒクル、ＬＡ１メグルミン塩、α−ＰＤ１抗体、又はＬＡ１メグルミン塩＋α−ＰＤ１抗体で処置したマウスの黒色腫進行を示す。

【0033】

【図24】図２４は、様々な量のＬＡ１コリン塩で処置したマウスにおける黒色腫進行を示す。

【0034】

【図25】図２５は、ビヒクル、ＬＡ１コリン塩（３ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｂ．ｉ．ｄ．）、α−ＰＤ１抗体（１００μｇ／マウス、ｉ．ｐ．、４日ごと）、又はＬＡ１コリン塩＋α−ＰＤ１抗体で処置したマウスにおける黒色腫進行を示す。

【0035】

【図26】図２６は、ビヒクル、ＬＡ１コリン塩（３ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｂ．ｉ．ｄ．）、α−ＣＴＬＡ−４抗体（１００μｇ／マウス、ｉ．ｐ．、４日ごと）、又はＬＡ１コリン塩＋α−ＣＴＬＡ−４抗体で処置したマウスにおける黒色腫進行を示す。

【発明を実施するための形態】

【0036】

Ｉ．概要
本発明は、ロイカドヘリン１（ＬＡ１；（Ｚ）−４−（５−（（３−ベンジル−４−オキソ−２−チオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）フラン−２−イル）安息香酸）の新規の塩及び結晶形を提供する。ＬＡ１のこれらの新しい形態は、経口投与された医薬製剤の増強されたバイオアベイラビリティを含めた多くの利点を提供する。従って、本発明は、β２インテグリン媒介性病態を処置するための改善方法を可能にする。
ＩＩ．定義

【0037】

「ＬＡ１」は、式Ｉに示された化合物（Ｚ）−４−（５−（（３−ベンジル−４−オキソ−２−チオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）フラン−２−イル）安息香酸を指す。

【0038】

「塩」は、ＬＡ１遊離酸を医薬的に許容し得る塩基と組み合わせることによって調製された塩基付加塩を指す。

【0039】

「医薬的に許容し得る」とは、当該技術分野において認識され、そして、本明細書中で使用される場合、組成物、賦形剤、アジュバント、又はその他の材料及び／又は剤形を指し、健全な医学的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比に見合う過度の毒性、過敏、アレルギー応答、又は他の問題若しくは合併症なしでヒトと動物の組織との接触に使用するのに好適なである物質を指す。医薬的に許容し得る塩基の例としては、これだけに限定されるものではないが、アンモニア、Ｌ−アルギニン、水酸化カルシウム、コリン、メグルミン、リジン、水酸化マグネシウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムが挙げられる。

【0040】

「コリン」は、２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルエンアンモニウムを指す。「コリン塩」は、少なくとも１つの２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルエタンアンモニウム陽イオンを含む塩である。

【0041】

「メグルミン」は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（メチルアミノ）ヘキサン−１，２，３，４，５−ペントールを指す。「メグルミン塩」は、少なくとも１つの（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシ−Ｎ−メチルヘキサン−１−アミニウム陽イオンを含む塩である。

【0042】

「結晶形」は、構成分子が規則的に順序づけられた、反復パターンで集まった化合物の固形を指す。結晶形は、三斜晶、単斜晶、斜方晶、正方晶、三方晶、六方晶、又は立方晶であり得る。結晶形は、すなわち、異なった結晶境界を有する粒子を有する１若しくは複数の領域を含み得る。結晶性固形は、２以上の結晶構造を含み得る。

【0043】

「インテグリン」は、細胞接着、遊走、及びシグナル伝達を媒介する非共有結合α／β−ヘテロ二量体細胞表面受容体を指す。インテグリンは、Ｃ．エレガンス（C. elegans）、ドロソフィラ属（Drosophila sp.）、両生類、爬虫類、鳥類、及びヒトを含めた哺乳動物を含めた様々な生物で発現される。例えば、αＶ、α５などを指定するαサブユニットの数及び例えば、β１、β２、β３、β５などを指定するβサブユニットの数が同定され、そして、これらのサブユニットの様々な組み合わせが、α５β１、αＶβ３及びαＶβ５を含めたインテグリンスーパーファミリーで表される。インテグリンのスーパーファミリーは、例えば、αＶβ３及びαＶβ５を含めたαＶ含有インテグリン又はα５β１及びαＶβ１を含めたβ１含有インテグリンなどの、ファミリーに細分され得る。

【0044】

「β２インテグリン」は、β２−サブユニット（ＣＤ１８とも呼ばれる）を有する白血球に特異的なインテグリンを指す。β２インテグリンは、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、及びＣＤ１１ｄから選択される異なったαサブユニットを有する。高度に発現されたインテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（Ｍａｃ−１、ＣＲ３、及びαＭβ２としても知られている）β２インテグリンは、細胞接着、遊走、動員及び活性化を含め白血球機能を調節する。

【0045】

「β２−媒介性」とは、患者の疾患及び／又は病態に言及するために本明細書中で使用される場合、その疾患又は病態がβ２インテグリンを伴う化学的又は物理的プロセスに（全部又は一部が）起因することを意味する。β２−媒介性疾患及び病態としては、炎症性及び自己免疫性疾患が挙げられる。β２−媒介性疾患及び病態の例としては、これだけに限定されるものではないが、虚血再灌流障害（急性腎不全やアテローム性動脈硬化症を含む）、ループス、炎症性腸疾患、クローン病、関節リウマチ、多発性硬化症、ループス腎炎、巣状分節状糸球体硬化、腎傷害、緑内障、眼の異常、同種移植片拒絶反応（ネフロパシーなど）、移植、移植片対宿主病、神経障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、皮膚炎、組織損傷、脳卒中、血管障害に対応した新生内膜肥厚、抗−ＧＢＭ腎臓炎、疼痛（慢性疼痛を含む）、並びに、例えば、乳癌、黒色腫、前立腺癌、肺癌、膵臓癌及びその他の癌などの原発性腫瘍及び転移性腫瘍を含めた、癌が挙げられる。

【0046】

「癌」とは、急速に増殖する細胞増殖を特徴とする異常な状態又は病態を指す。過剰増殖性及び腫瘍性疾患状態は、すなわち、疾患状態を特徴とするか又は構成する、病理状態と分類されても、或いは、すなわち、正常からは逸脱しているが、疾患状態に関係しない非病理状態と分類されてもよい。一般に、癌は、１若しくは複数の腫瘍、すなわち、異常な細胞塊の存在と関連する。「腫瘍」という用語は、生体内侵入性の組織病理学的タイプ又は病期にかかわらず、すべてのタイプの癌性腫瘍又は発癌性プロセス、転移組織、或いは、悪性形質転換細胞、組織、又は臓器を含むことを意味する。

【0047】

癌の例としては、例えば、肺癌、乳癌、甲状腺癌、リンパ系癌、消化器癌、及び泌尿器管癌などの様々な臓器系の悪性腫瘍が挙げられる。癌はまた、例えば、結腸癌、腎細胞腫、前立腺癌、及び／又は睾丸腫瘍、肺の非小細胞癌、小腸癌、並びに食道癌などの悪性腫瘍を含めた腺癌も指す。癌腫とは、呼吸器系癌腫、胃腸系癌腫、泌尿生殖系癌腫、精巣癌腫、乳癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫、及び黒色腫を含めた上皮又は内分泌組織の悪性腫瘍である。「腺癌」とは、腺組織に由来するか、又は腫瘍細胞が認識可能な腺状構造を形成する癌腫を指す。「肉腫」とは、間葉系由来の悪性腫瘍を指す。

【0048】

「黒色腫」は、メラノサイトから生じる腫瘍を指す。黒色腫は、皮膚で生じることが最も一般的であり、広く転移することが頻繁に観察される。

【0049】

「免疫チェックポイント」とは、生物におけるＴ細胞性活性の共刺激又は抑制性制御に貢献する調節経路を指す。抗原提示細胞及びＴ細胞表面上のタンパク質を含めた「免疫チェックポイントタンパク質」の相互作用は、生物の自己寛容、並びに生理学的な免疫応答の継続期間及び広がりの調整及び維持に貢献する。例えば、D.M. Pardol. Nature Reviews Cancer 12, 252-264 (2012)を参照。免疫チェックポイントタンパク質の例としては、これだけに限定されるものではないが、Ａ２ａＲ（アデノシンＡ２ａ受容体）；ＢＴＬＡ、Ｂ、及びＴ（リンパ球アテネータ）；ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激因子）；ＫＩＲ（キラー細胞の免疫グロブリン様受容体）；ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３）；ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１）；ＣＴＬＡ−４（傷害性Ｔリンパ細胞関連抗原４）；及びＴＩＭ３（Ｔ細胞膜タンパク質３）が挙げられる。

【0050】

「免疫チェックポイント阻害剤」とは、１若しくは複数のチェックポイントタンパク質の活性を、完全に又は部分的に軽減、阻害、干渉、又はその他の形で調節する分子を指す。例えば、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体又は抗体から得られたペプチド様化合物を含んでもよい。

【0051】

「ＰＤ１」とは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び単球によって発現される、ＣＤ２７９としても知られているプログラム細胞死タンパク質１を指す。ＰＤ−１は、膜貫通ドメインに取り付けられたＶ−セット免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）ドメイン及び２つのチロシンに基づくシグナル伝達モチーフを含む細胞質領域を特徴とするＩ型表面糖タンパク質である。ＰＤ１は、少なくとも２つのリガンド：ＰＤ−Ｌ１（Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及び間葉系幹細胞を含めた細胞によって発現される）及びＰＤ−Ｌ２（樹枝状細胞、マクロファージ、マスト細胞を含めた細胞によって発現される）、に結合する。

【0052】

「ＣＴＬＡ−４」とは、Ｔ細胞において排他的に発現される、ＣＤ１５２としても知られている、細胞傷害性Ｔリンパ細胞関連抗原４を指す。ＣＴＬＡ−４は、３つのＣＤＲ様ループを有する単一のＩｇ折り畳み細胞外ドメインを含み、且つ、特に、抗原提示細胞において他と異なって発現される、リガンドＣＤ８０（Ｂ７．１）及びＣＤ８６（Ｂ７．２）に結合する。

【0053】

「白血球マーカー」とは、白血球の細胞表面に見られる生体分子（例えば、ポリペプチド）を指す。白血球マーカーとしては、これだけに限定されるものではないが、Ｔ細胞抗原受容体；ＣＤ１；ＮＫ細胞受容体；ＩＤＯ１／２；ＴＤＯ；ＣＳＦ１Ｒ；ＶＥＧＦＲ；ＳＩＲＰａ；細胞接着分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ５８（ＬＦＡ−３）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８）；β２インテグリン（例えば、ＬｅｕＣＡＭ、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ１１ｂ（ＭＡＣ−１（ＣＲ３））、ＣＤ１１ｃ（ＣＲ４）、ＣＤ１８、ＣＤ１６（ＦｃＲ１１１）、ＣＤ２１（ＣＲ２）、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３５（ＣＲ１））；β３インテグリン（例えば、ＣＤ４１、ＣＤＳ１）；ホーミング受容体（例えば、ＣＤ４４、Ｍｅｌ−１４）；β１インテグリン（例えば、ＣＤ４９ａ−ｆ（ＶＬＡ−１）、ＶＬＡ−２、ＶＬＡ−３、ＶＬＡ−４）；ＣＤ１４；ＣＤ５６；ＣＤ６８；ＣＤ７１；及びＣＤ１６３が挙げられる。

【0054】

「インテグリン」は、細胞接着、遊走、及びシグナル伝達を媒介する非共有結合α／β−ヘテロ二量体細胞表面受容体を指す。インテグリンは、Ｃ．エレガンス（C. elegans）、ドロソフィラ属（Drosophila sp.）、両生類、爬虫類、鳥類、及びヒトを含めた哺乳動物を含めた様々な生物で発現される。例えば、αＶ、α５などを指定するαサブユニットの数及び例えば、β１、β２、β３、β５などを指定するβサブユニットの数が同定され、そして、これらのサブユニットの様々な組み合わせが、α５β１、αＶβ３及びαＶβ５を含めたインテグリンスーパーファミリーで表される。インテグリンのスーパーファミリーは、例えば、αＶβ３及びαＶβ５を含めたαＶ含有インテグリン又はα５β１及びαＶβ１を含めたβ１含有インテグリンなどの、ファミリーに細分され得る。

【0055】

「β２インテグリン」は、β２−サブユニット（ＣＤ１８とも呼ばれる）を有する白血球に特異的なインテグリンを指す。β２インテグリンは、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、及びＣＤ１１ｄから選択される異なったαサブユニットを有する。高度に発現されたインテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（Ｍａｃ−１、ＣＲ３、及びαＭβ２としても知られている）β２インテグリンは、細胞接着、遊走、動員及び活性化を含め白血球機能を調節する。

【0056】

「骨髄細胞」とは、一般的に、リンパ球ではない（例えば、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞でない）任意の白血球細胞（すなわち、白血球）を指す。骨髄細胞としては、マクロファージ、樹状細胞、及び顆粒球細胞が挙げられる。

【0057】

「処置する」という用語は、本明細書中に使用される場合、別段の指示がない限り、斯かる用語が適用される障害又は病態、或いは、斯かる障害又は病態の１若しくは複数の症状の進行を覆すか、緩和するか、阻害するか、或いは、それらを予防することを意味する。「処置」という用語は、本明細書中に使用される場合、「処置する」が直前に規定されているとおりに、処置する行為を指す。

【0058】

「治療上有効な量」とは、患者の組織、血流、又は他の物理的なコンパートメントにおいて所望のレベルの薬剤を提供するのに必要であるＬＡ１塩又は結晶形の量であって、投与の所望のレベルは、ＬＡ１塩又は結晶形が選択される投与経路によって投与されたとき、期待された生理反応又は生物学的効果をもたらす。正確な量は、例えば、特定のＬＡ１塩又は結晶形；利用した具体的な医薬製剤又は送達デバイス；疾患状態の重症度；及び治療計画に対する患者の順守、を含めた多数の要因に依存する。ＬＡ１塩及び結晶形の治療上有効な量は、本明細書中に提供した情報に基づいて当業者によって容易に決定され得る。

【0059】

「約（About）」及び「周辺（around）」は、本明細書中で数値を修飾するために使用される場合、その値の周辺の規定された範囲を示す。「Ｘ」がその値である場合、「約Ｘ」又は「Ｘ周辺」は、例えば０．９８Ｘ〜１．０２Ｘ又は０．９９Ｘ〜１．０１Ｘを含めた０．９５Ｘ〜１．０５Ｘの値を一般的に示す。「約Ｘ」又は「Ｘ周辺」の任意の言及は、少なくともその値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘを具体的に示す。よって、「約Ｘ」及び「Ｘ周辺」は、特許請求の範囲の限界、例えば、「０．９８Ｘ」を教示し、その記述的根拠を提供することを意図している。数量「Ｘ」が整数値のみを含むとき（例えば、「Ｘ個の炭素」）、「約Ｘ」又は「Ｘ周辺」は（Ｘ−１）〜（Ｘ＋１）を示す。このような場合、「約Ｘ」又は「Ｘ周辺」は、少なくともその値Ｘ、Ｘ−１及びＸ＋１を具体的に示す。
ＩＩＩ．ＬＡ１塩

【0060】

当業者は、多くの医薬的に許容し得る塩基がＬＡ１塩を調製するのに使用できることを理解する。医薬的に許容し得る塩基としては、これだけに限定されるものではないが、アンモニア、Ｌ−アルギニン、水酸化カルシウム、コリン、メグルミン、水酸化マグネシウム、ベネタミン、ベンザチン、ベタイン、デアノール、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、ヒドラバミン、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、ｔ−ブチルアミン、トロメタミン、ピペラジン、イミダゾール、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、及びトリエタノールアミンが挙げられる。特定の実施形態において、ＬＡ１塩は、アンモニア、Ｌ−アルギニン、水酸化カルシウム、コリン、メグルミン、及び水酸化マグネシウムから選択される医薬的に許容し得る塩基から得られる陽イオンを含む。

【0061】

一態様において、本発明は、式Ｉの化合物のコリン塩を提供する：

【化2】

【0062】

先に記載したとおり、式ＩはＬＡ１に相当する。コリンはまた、（２−ヒドロキシエチル）トリメチルアンモニウム及び２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルエタンアンモニウムを含めた異名でも呼ばれる。本明細書中に使用される場合、「コリン塩」は、少なくとも１つの２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルエタンアンモニウム陽イオンを含む塩を指す。特定の実施形態において、ＬＡ１のコリン塩は、式ＩＩによる塩である：

【化3】

【0063】

一態様において、本発明は、式Ｉの化合物のコリン塩の結晶形Ｇを提供する：

【化4】

【0064】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｇは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、７．９、１１．２、１３．３、１５．０、１５．７、１６．１、１６．２、１６．５、１６．６、１７．８、１８．１、１８．５、１９．１、１９．８、２０．０、２１．１、２３．０、２４．６、２５．０、２５．６、２６．６、２６．８、２６．９、２９．３、２９．７、３０．６、３０．７、及び３４．４°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｇは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、又は２９個の斯かるピークを含む。

【0065】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｇは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１３．３、１５．０、１５．７、１６．１、１６．６、１９．１、２４．６、２５．０、２５．６、及び２６．８°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0066】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｇは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１３．３、１５．０、１５．７、１６．１、１６．６、１９．１、２４．６、２５．０、２５．６、及び２６．８°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0067】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｇは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図５ＢによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0068】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のコリン塩の結晶形Ｏを提供する：

【化5】

【0069】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｏは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．４、８．８、９．３、１３．３、１４．３、１６．７、１７．０、１８．１、１９．４、１９．６、１９．９、２０．７、２０．９、２１．４、２１．７、２２．５、２３．４、２４．１、及び２５．５°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｏは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、又は１９個の斯かるピークを含む。

【0070】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｏは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．４、８．８、９．３、１６．７、１９．９、２０．７、２１．７、２２．５、２３．４、及び２５．５°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0071】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｏは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図６ＥによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0072】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のコリン塩の結晶形Ｑを提供する：

【化6】

【0073】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｑは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．０、５．２、８．４、９．６、９．９、１１．５、１２．６、１２．８、１３．３、１４．４、１５．８、１６．１、１６．６、１７．５、１８．０、１９．３、２０．６、２０．７、２１．５、２１．７、２２．９、２３．７、２４．８、２５．１、２５．３、２５．３、２５．５、２６．３、２６．９、２７．０、２８．１、２８．８、３０．４、３１．２、３２．０、３５．７、及び３７．４°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｑは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、又は３７個の斯かるピークを含む。

【0074】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｑは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．０、８．４、９．６、９．９、１１．５、１２．８、１３．３、１４．４、１８．０、１９．３、２３．７、及び２５．５°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0075】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｑは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．０、８．４、９．６、９．９、１１．５、１２．８、１３．３、１４．４、１８．０、１９．３、２３．７、及び２５．５°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0076】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｑは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的にＤによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0077】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のコリン塩の結晶形Ｒを提供する：

【化7】

【0078】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｒは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、５．６、８．０、８．２、８．４、９．８、１１．２、１２．７、１３．４、１４．６、１５．１、１５．７、１６．１、１６．３、１６．７、１７．１、１７．８、１８．２、１８．５、１９．１、１９．９、２０．１、２１．１、２２．６、２３．０、２３．４、２４．０、２４．５、２４．７、２５．０、２５．６、２６．０、２６．６、２６．８、２７．１、２７．４、２７．７、２８．１、２９．３、２９．７、３０．６、３１．１、３１．７、３２．２、３２．８、３３．２、３３．５、３４．５、３４．８、３５．１、３５．４、３６．５、３７．６、３８．５、３９．５、４０．４、４１．３、４２．７、及び４４．４°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｒは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、又は５９個の斯かるピークを含む。

【0079】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｒは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１５．１、１６．３、１６．７、１９．１、２０．１、２１．１、２３．０、２４．５、２５．０、２５．６、２６．０、３１．１、３２．８、及び３３．５±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0080】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｒは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．６、１１．２、１５．１、１６．３、１６．７、１９．１、２０．１、２１．１、２３．０、２４．５、２５．０、２５．６、２６．０、３１．１、３２．８、及び３３．５±０．２°２θから選択される少なくとも９つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0081】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｒは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、図７によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。いくつかの実施形態において、結晶形Ｒは、約２２４．５℃における吸熱ピークを含む示差走査熱量測定サーモグラムを特徴とする。

【0082】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のコリン塩の結晶形Ｓを提供する：

【化8】

【0083】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｓは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、８．４、９．６、１０．０、１１．６、１２．９、１３．３、１４．４、１４．９、１５．８、１６．６、１７．４、１８．０、１９．２、１９．３、２０．６、２１．４、２１．７、２２．７、２３．７、２４．８、２５．４、２６．３、２６．８、２８．１、２８．７、２９．６、３０．３、３１．０、３１．９、３３．０、３４．０、３５．７、３７．４、３９．２、４０．５、及び４１．７°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｓは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、又は３７個の斯かるピークを含む。

【0084】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｓは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、８．４、９．６、１０．０、１２．９、１３．３、１６．６、１７．４、１８．０、１９．２、２０．６、２１．４、２１．７、２３．７、２５．４、及び２８．１°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0085】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｓは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．１、８．４、９．６、１０．０、１２．９、１３．３、１６．６、１７．４、１８．０、１９．２、２０．６、２１．４、２１．７、２３．７、２５．４、及び２８．１°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0086】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｓは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図８によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0087】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のメグルミン塩を提供する：

【化9】

【0088】

メグルミンはまた、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン及び（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（メチルアミノ）ヘキサン−１，２，３，４，５−ペントールを含めた異名でも呼ばれる。本明細書中に使用される場合、「メグルミン塩」は、少なくとも１つの（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２、３，４，５、６−ペンタヒドロキシ−Ｎ−メチルヘキサン−１−アミニウム陽イオンを含む塩を指す。特定の実施形態において、ＬＡ１のメグルミン塩は、式ＩＩＩによる塩である：

【化10】

【0089】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のメグルミン塩の結晶形Ｈを提供する：

【化11】

【0090】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｈは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｈは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２個の斯かるピークを含む。

【0091】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｈは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0092】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｈは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0093】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｈは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図６ＢによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0094】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のメグルミン塩の結晶形Ｌを提供する：

【化12】

【0095】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｌは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．９、８．５、９．０、９．９、１０．６、１０．９、１１．６、１２．０、１２．６、１３．１、１４．５、１４．８、１５．０、１５．３、１５．９、１６．２、１６．９、１７．４、１７．８、１８．０、１８．４、１８．８、１９．２、２０．２、２０．８、２１．３、２１．７、２２．１、２３．２、２３．８、２４．５、２５．２、２５．５、２６．３、２６．９、２７．３、２７．９、２８．４、２８．９、２９．２、２９．８、３０．３、３０．６、３１．１、３２．１、３２．８、３４．１、３４．５、３４．９、３５．１、３６．０、３６．５、３７．５、３８．０、３８．９、３９．６、４０．７、４１．７、４２．５、及び４２．９°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｌは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、又は６１個の斯かるピークを含む。

【0096】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｌは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１０．９、１５．０、１６．９、２０．２、２１．７、２３．８、２４．５、２５．２、２６．３、２９．２、及び２９．８°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0097】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｌは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１０．９、１５．０、１６．９、２０．２、２１．７、２３．８、２４．５、２５．２、２６．３、２９．２、及び２９．８°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0098】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｌは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１１によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。いくつかの実施形態において、結晶形Ｌは、約１３６．３℃における吸熱ピークを含む示差走査熱量測定サーモグラムを特徴とする。

【0099】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のメグルミン塩の結晶形Ｍを提供する：

【化13】

【0100】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｍは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．５、８．５、９．０、９．９、１０．６、１１．６、１４．４、１４．８、１５．０、１５．３、１５．９、１６．１、１６．９、１７．８、１８．０、１９．０、２０．４、２０．８、２１．３、２１．７、２３．６、２４．５、２５．２、２６．３、２６．９、２７．５、２７．９、２８．５、２８．９、２９．８、３０．６、３２．１、３２．８、３３．８、３４．５、３６．０、３６．４、３７．１、３８．０、３９．７、４０．７、４１．７、４３．０、及び４４．０°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｍは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、又は４４個の斯かるピークを含む。

【0101】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｍは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１４．８、１５．０、１６．９、１８．０、２１．７、２４．５、２５．２、２６．３、及び２９．８°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0102】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｍは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、８．５、９．０、１４．８、１５．０、１６．９、１８．０、２１．７、２４．５、２５．２、２６．３、及び２９．８±０．２°２θから選択される少なくとも９つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0103】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｍは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１２によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。いくつかの実施形態において、結晶形Ｍは、約２９４．５℃における吸熱ピークを含む示差走査熱量測定サーモグラムを特徴とする。

【0104】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のメグルミン塩の結晶形Ｎを提供する：

【化14】

【0105】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｎは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、４．３、５．０、５．４、６．１、７．５、７．９、８．９、９．５、１０．０、１０．８、１１．４、１２．１、１２．５、１３．８、１４．３、１４．８、１５．６、１６．１、１６．７、１７．４、１８．１、１９．２、１９．５、２０．１、２０．９、２１．４、２１．５、２２．１、２２．５、２３．９、２４．６、２５．３、２６．３、２６．７、２７．１、２７．６、２８．２、２９．０、３０．４、３０．９、３２．０、３２．９、３３．９、３４．７、３６．９、３８．３、３９．１、３９．６、４０．２、及び４１．４°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｎは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０個の斯かるピークを含む。

【0106】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｎは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．１、７．９、８．９、９．５、１０．０、１２．５、１４．３、１４．８、１５．６、１６．１、１７．４、１８．１、１９．５、２０．９、２１．４、２１．５、２３．９、２４．６、２５．３、及び２９．０°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0107】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｎは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．１、７．９、８．９、９．５、１０．０、１２．５、１４．３、１４．８、１５．６、１６．１、１７．４、１８．１、１９．５、２０．９、２１．４、２１．５、２３．９、２４．６、２５．３、及び２９．０°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0108】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｎは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１３によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。いくつかの実施形態において、結晶形Ｎは、約１３９．９℃における吸熱ピークを含む示差走査熱量測定サーモグラムを特徴とする。

【0109】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物のメグルミン塩の結晶形Ｔを提供する：

【化15】

【0110】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｔは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．９、８．２、８．４、９．４、１１．６、１５．０、１５．１、１５．５、１７．２、１７．８、１８．１、２０．５、２１．３、２１．９、２２．３、２３．５、２５．０、及び２６．７°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ｔは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、又は１８個の斯かるピークを含む。

【0111】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｔは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、６．９、８．４、９．４、１１．６、１５．５、１７．２、２１．３、２１．９、２２．３、２３．５、２５．０、及び２６．７°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0112】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｔは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．１、１０．７、１０．９、１６．１、１６．５、１７．７、１８．５、２０．３、２３．６、２４．９、及び２７．２°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0113】

いくつかの実施形態において、結晶形Ｔは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図１０ＥによるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0114】

別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物の固形Ａを提供する：

【化16】

【0115】

いくつかの実施形態において、固形Ａは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．８、１５．２、１８．７、１９．８、２０．３、２０．８、２５．７、２６．３、２６．５、及び２６．９°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。例えば、結晶形Ａは、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１１個の斯かるピークを含む。

【0116】

いくつかの実施形態において、固形Ａは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．８、１５．２、１８．７、１９．８、２０．３、２０．８、２５．７、２６．３、２６．５、及び２６．９°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも６つのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0117】

いくつかの実施形態において、固形Ａは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、５．３、７．８、１５．２、１８．７、１９．８、２０．３、２０．８、２５．７、２６．３、２６．５、及び２６．９°２θ±０．２°２θから選択される少なくとも１０個のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0118】

いくつかの実施形態において、固形Ａは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、実質的に図２によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。

【0119】

関連する態様において、本発明は、ＬＡ１の塩及び結晶形を調製する方法を提供する。一般に、ＬＡ１塩は、塩を形成するのに十分な条件下、ＬＡ１遊離酸と少なくとも１モル当量の好適な塩基を含む混合物（すなわち、塩形成混合物）を形成することによって調製される。混合物は、典型的には、ＬＡ１遊離酸及び／又は塩基が部分的に可溶性であるか又は完全に可溶性である溶媒を含む。ＬＡ１塩を作製するのに有用な溶媒の例としては、これだけに限定されるものではないが、テトラヒドロフラン、ジオキサン、メタノール、エタノール、イソプロパノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ジクロロメタン、水、及びその混合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、塩形成混合物は、テトラヒドロフラン及びメタノールから選択される少なくとも１つの溶媒を含有する。いくつかの実施形態において、その混合物は、テトラヒドロフランを含有する。いくつかの実施形態において、その混合物は、テトラヒドロフラン及びメタノールを含有する。いくつかの実施形態において、その混合物は、アセトンを含有する。いくつかの実施形態において、その混合物は、エタノールを含有する。

【0120】

ＬＡ１遊離酸及び塩基を含む塩形成混合物は、任意の好適な温度にて形成され得るか、又は保持され得る。典型的には、その混合物は、塩形成に十分な時間、約２０℃〜約８０℃に及ぶ温度にて保持される。その混合物は、例えば、約１５分〜約７２時間又はそれ以上にわたって、約２０℃〜約８０℃にて保持され得る。その混合物は、約１時間〜約４８時間にわたって約４０℃〜約６０℃にて、又は約１時間〜約１６時間にわたって約４０℃〜約５０℃にて保持される。

【0121】

いくつかの実施形態において、塩形成混合物は、ＬＡ１遊離酸、水酸化コリン、テトラヒドロフラン、及びメタノールを含有する。いくつかの実施形態において、テトラヒドロフラン対メタノールの比は３：１ ｖ：ｖである。いくつかの実施形態において、結晶形Ｇは、１モル当量のＬＡ１遊離酸と、１モル当量の水酸化コリンと、３：１ ｖ：ｖの比におけるテトラヒドロフランとメタノールの組み合わせ物を含有する混合物を形成することを含むプロセスによって調製される。いくつかの実施形態において、結晶形Ｇを調製するためのプロセスは、約２４時間〜約４８時間にわたり約４０℃〜約５０℃にてその混合物を撹拌することを更に含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｇを調製するためのプロセスは、少なくとも約２４時間にわたり約５０℃にてその混合物を撹拌することを含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｇを調製するためのプロセスは、結晶形Ｇの形成後に留去によって混合物からテトラヒドロフランとメタノールの組み合わせ物を取り除くことを含む。

【0122】

いくつかの実施形態において、塩形成混合物は、ＬＡ１遊離酸、水酸化コリン、及びテトラヒドロフランを含有する。いくつかの実施形態において、テトラヒドロフラン対メタノールの比は３：１ ｖ：ｖである。いくつかの実施形態において、結晶形Ｏは、１モル当量のＬＡ１遊離酸と、１モル当量の水酸化コリンと、テトラヒドロフランを含有する混合物を形成することを含むプロセスによって調製される。いくつかの実施形態において、結晶形Ｏを調製するためのプロセスは、約２４時間〜約４８時間にわたり約２０℃〜約３０℃にてその混合物を撹拌することを更に含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｏを調製するためのプロセスは、少なくとも約２４時間にわたり約３０℃以下にて混合物を撹拌することを含む。

【0123】

いくつかの実施形態において、塩形成混合物は、ＬＡ１遊離酸、水酸化コリン、及び酢酸エチル又はアセトンを含有する。いくつかの実施形態において、結晶形Ｑは、１モル当量のＬＡ１遊離酸と、１モル当量の水酸化コリンと、酢酸エチルを含有する混合物を形成することを含むプロセスによって調製される。いくつかの実施形態において、結晶形Ｑを調製するためのプロセスは、約１２時間〜約４８時間にわたり約２０℃〜約３０℃にて混合物を撹拌することを更に含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｑを調製するためのプロセスは、少なくとも約１２時間にわたり約３０℃以下にて混合物を撹拌することを含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｑを調製するためのプロセスは、結晶形Ｑの形成後に真空濾過によって酢酸エチル又はアセトンを取り除くことを含む。

【0124】

ＬＡ１コリン塩の結晶形を調製することはまた、ＬＡ１コリン塩を再結晶化することを含み得る。再結晶は、プロトン性溶媒（例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、ｎ−ブタノール、及び水）、非プロトン性溶媒（例えば、酢酸イソプロピル、酢酸エチル、及びアセトン）、又はその混合物を含めた任意の好適な溶媒を使用して実施され得る。いくつかの実施形態において、ＬＡ１コリン塩の結晶形を調製することは、プロトン性溶媒からＬＡ１コリン塩を再結晶化することを含む。いくつかの実施形態において、ＬＡ１コリン塩の結晶形Ｒを調製することは、ｎ−ブタノールからＬＡ１コリン塩を再結晶化することを含む。いくつかの実施形態において、ＬＡ１コリン塩の結晶形Ｓを調製することは、メタノールからＬＡ１コリン塩を再結晶化することを含む。

【0125】

いくつかの実施形態において、塩形成混合物は、ＬＡ１遊離酸、メグルミン、テトラヒドロフラン、及びメタノールを含有する。いくつかの実施形態において、テトラヒドロフラン対メタノールの比は２：１ ｖ：ｖである。いくつかの実施形態において、結晶形Ｈは、１モル当量のＬＡ１遊離酸と、１モル当量のメグルミンと、２：１ ｖ：ｖの比におけるテトラヒドロフランとメタノールの組み合わせ物を含有する混合物を形成することを含むプロセスによって調製される。いくつかの実施形態において、結晶形Ｈを調製するためのプロセスは、約２４時間〜約４８時間にわたり約４０℃〜約５０℃にてその混合物を撹拌することを更に含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｈを調製するためのプロセスは、少なくとも約２４時間にわたり約５０℃にてその混合物を撹拌することを含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｈを調製するためのプロセスは、結晶形Ｈの形成後に留去によって混合物からテトラヒドロフランとメタノールの組み合わせ物を取り除くことを含む。

【0126】

いくつかの実施形態において、塩形成混合物は、ＬＡ１遊離酸、メグルミン、及びエタノールを含有する。いくつかの実施形態において、結晶形Ｔは、１モル当量のＬＡ１遊離酸と、１モル当量のメグルミンと、エタノールを含有する混合物を形成することを含むプロセスによって調製される。いくつかの実施形態において、結晶形Ｔを調製するためのプロセスは、約２４時間〜約４８時間にわたり約４０℃〜約５０℃にて混合物を撹拌することを更に含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｔを調製するためのプロセスは、少なくとも約２４時間にわたり約４０℃にて混合物を撹拌することを含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｔを調製するためのプロセスは、結晶形Ｔの形成後に真空濾過によって混合物からエタノールを取り除き、そして、結晶形Ｔの少なくとも一部を単離することを含む。いくつかの実施形態において、結晶形Ｔを調製するためのプロセスは、単離された結晶形Ｔをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄することを更に含む。

【0127】

ＬＡ１メグルミン塩の結晶形を調製することはまた、ＬＡ１メグルミン塩を再結晶化することを含み得る。再結晶は、プロトン性溶媒（例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、ｎ−ブタノール、及び水）、非プロトン性溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸イソプロピル、酢酸エチル、及びアセトン）、又はその混合物を含めた任意の好適な溶媒を使用して実施され得る。いくつかの実施形態において、ＬＡ１メグルミン塩の結晶形を調製することは、非プロトン性溶媒からＬＡ１メグルミン塩を再結晶化することを含む。いくつかの実施形態において、ＬＡ１メグルミン塩の結晶形Ｌを調製することは、酢酸イソプロピルからＬＡ１コリン塩を再結晶化することを含む。いくつかの実施形態において、ＬＡ１メグルミン塩の結晶形Ｍを調製することは、アセトンからＬＡ１コリン塩を再結晶化することを含む。いくつかの実施形態において、ＬＡ１メグルミン塩の結晶形Ｎを調製することは、ＤＭＦからＬＡ１コリン塩を再結晶化することを含む。
ＩＶ．医薬組成物

【0128】

関連する態様において、本発明は、本明細書中に記載した塩及び結晶形の投与のための医薬組成物を提供する。その医薬組成物は、薬学及び薬物送達の技術分野において周知の方法のいずれかによって調製され得る。概して、組成物を調製する方法は、１若しくは複数の副成分を含有する担体と有効成分とを結び付けるステップを含む。医薬組成物は、典型的には、有効成分を均一、且つ、密接に液体担体若しくは微粉化した固形担体又はその両方と結び付けることによって調製され、その後、必要であれば、所望の製剤に生成物を成形することによって調製される。組成物は、便宜上、単位剤形に調製され得る、及び／又は包装され得る。

【0129】

医薬組成物は、無菌の注射可能な水性又は油性の溶液及び懸濁液の形態であり得る。無菌の注射可能な調製物は、水、リンゲル液、及び等張食塩液を含めた無毒性の非経口的に許容し得るビヒクルと、例えば１，３−ブタンジオールなど許容し得る溶媒とを使用して製剤され得る。加えて、無菌の固定油が、溶媒又は懸濁化剤として慣習的に用いられる。このために、モノ又はジグリセリドを含めた任意のブランドの固定油が利用できる。加えて、例えばオレイン酸などの脂肪酸を注射剤の調製に使用する。

【0130】

水性懸濁液は、これだけに限定されるものではないが、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、オレアジノ−プロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントゴム、及びアラビアゴムなどの懸濁化剤；例えばレシチン、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ポリエチレンソルビタンオレイン酸モノエステルなどの分散剤又は湿潤剤；並びに例えばエチル、ｎ−プロピル、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸などの保存料を含めた賦形剤と混合した活性物質を含有する。

【0131】

油性懸濁剤は、有効成分を植物油、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油若しくはココナッツ油、又は流動パラフィンなどの鉱油中に懸濁化することによって製剤化することができる。油性懸濁剤は、増粘剤、例えば蜜蝋、固形パラフィン又はセチルアルコールを含みうる。これらの組成物を、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加によって保存することもできる。

【0132】

（水の添加による水性懸濁剤の調製に好適な）分散性の散剤又は顆粒剤は、分散剤、湿潤剤、懸濁化剤又はその組み合わせ物と混合された有効成分を含有し得る。追加的な賦形剤が存在してもよい。

【0133】

本発明の医薬組成物が、水中油型乳剤の形態にあってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油若しくは落花生油、又は鉱油、例えば流動パラフィン、又はこれらの混合物であってよい。好適な乳化剤は、天然ゴム、例えばアラビアゴム又はトラガカントゴムなど、天然のリン脂質、例えばダイズレシチンなど、及び脂肪酸とヘキシトール無水物由来のエステル又は部分エステル、例えばソルビタンモノオレエートなど、並びに前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどであってよい。

【0134】

本明細書中に記載した塩及び結晶形を含有する医薬組成物はまた、経口使用に好適な形態であることもできる。経口投与に好適な組成物としては、これだけに限定されるものではないが、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性又は油性の懸濁剤、分散性の散剤又は顆粒剤、乳剤、硬カプセル剤又は軟カプセル剤、シロップ剤、エリキシル剤、液剤、口腔内パッチ、経口ゲル、チューインガム、チュアブル錠、発泡散剤及び発泡錠が挙げられる。経口投与のための組成物は、当業者に公知の任意の方法に従って製剤されることができる。斯かる組成物は、医薬に洗練された風味の良い調製物を得るために、甘味剤、香味剤、着色剤、抗酸化剤及び保存料から選択される1若しくは複数の作用物質を含有することができる。

【0135】

錠剤は、不活性希釈剤、例えばセルロース、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、リン酸カルシウムやリン酸ナトリウムなど；粒状化剤及び崩壊剤、例えばコーンスターチやアルギン酸など；結合剤、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、セルロース、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デンプン、ゼラチン及びアラビアゴムなど；並びに潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸及びタルクなどを含めた、無毒性の医薬的に許容し得る賦形剤と混合された有効成分を一般的に含有する。これらの錠剤はコーティングされていなくても、又は、胃腸管における崩壊及び吸収を遅延させ、それによってより長期間にわたる持続的作用を与えるための公知の手法によって、腸溶性又は別の様式でコーティングされていてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリン又はジステアリン酸グリセリンなどの時間遅延性材料を用いてもよい。錠剤はまた、制御放出のために浸透ポンプ組成物を形成するための既知の技術によって半透膜及び任意選択の高分子オスモジェント（osmogents）でコートされてもよい。

【0136】

経口投与のための組成物はまた、有効成分が不活性の固体希釈剤（例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム若しくはカオリンなど）と混合されている硬ゼラチンカプセル、又は有効成分が水若しくは油性媒質（例えば落花生油、流動パラフィン若しくはオリーブ油など）と混合されている軟ゼラチンカプセルとして製剤されてもよい。

【0137】

本明細書中に記載した塩及び結晶形はまた、溶液、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、懸濁液、うがい薬、点眼剤などとして局所的に投与されることもできる。より更に、塩及び結晶形の経皮的送達は、イオン導入パッチ（iontophoretic patch）などによって達成することもできる。化合物はまた、薬物の直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。これらの組成物は、薬物を、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、そのため直腸内で融解して薬物を放出すると考えられる好適な非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。そのような材料には、ココアバター及びポリエチレングリコールが含まれる。

【0138】

いくつかの実施形態において、本明細書中に記載した塩又は結晶形は、腹腔内注射によって投与される。いくつかの実施形態において、塩又は結晶形は、経口的に投与される。いくつかの実施形態において、塩又は結晶形は、静脈内に投与される。

【0139】

ＬＡ１は、これだけに限定されるものではないが、５−フルオロウラシル、ＡＺＤ８０５５、ベバシズマブ、ボルテゾミブ、セツキシマブ、シクロホスファミド、ドセタキセル、ゲムシタビン、イマチニブ、イピリムバブ、ラパチニブ、パクリタキセル、ペルツズマブ、ラパマイシン、シプリューセル−Ｔ（sipuleucel-T）、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、テムシロリムス、ベムラフェニブ、タキソール、パクリタキセル、アビラテロン、ステロイド、コルチコステロイド、プレドニゾン、ＮＳＡＩＤｓ、マイトマイシン、アンドロゲン、抗アンドロゲン、エストロゲン、抗エストロゲン、スタチン、ＣＴＬＡ−４阻害剤、抗ＣＴＬＡ−４抗体、Ｂ７モジュレーター、アバタセプト、リツキシマブ、ベラタセプト、ベンルミマブ（benlumimab）、ＰＤ−１モジュレーター、抗ＰＤ１抗体、ＰＤＬ１モジュレーター、抗ＰＤＬ１抗体、ＩＤＯ１阻害剤及びモジュレーター、ＣＳＦ１モジュレーター、ＣＳＦ１Ｒモジュレーター、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、ＣＤ４７モジュレーター及び阻害剤、ＣＤ２０６モジュレーター及び阻害剤、ＴＮＦα阻害剤及びモジュレーター、抗ＴＮＦα抗体、サイトカインモジュレーター、抗サイトカイン抗体、インターロイキンモジュレーター及び阻害剤、抗インターロイキン抗体、抗ＣＣＬ２、抗ＣＣＬ４、ＣＸＣＲ−４阻害剤、抗ＣＸＣＲ４、抗ＩＬ１７、及び抗ＩＬ２３から成る群から選択される薬物と組み合わせて使用され得る。

【0140】

本発明の医薬組成物はまた、微粉化ＬＡ１若しくは微粉化ＬＡ１塩又は微粉化したＬＡ１塩の結晶形も含み得る。概して、微粉化ＬＡ１を含有する組成物は、実質的に５０μｍ未満の平均直径を有するＬＡ１から成る粒子を含有する。ＬＡ１粒子の平均直径は、例えば、４５μｍ未満、４０μｍ未満、３５μｍ未満、３０μｍ未満、２５μｍ未満、又は２０μｍ未満であってもよい。ＬＡ１粒子の平均直径は、約１０μｍ〜約４９μｍ、又は約１０μｍ〜約４５μｍ、又は約１５μｍ〜約４０μｍ、又は約２０μｍ〜約３５μｍ、又は約２５μｍ〜約３０μｍであってもよい。ＬＡ１粒子の平均直径は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は約２５μｍであってもよい。いくつかの実施形態において、粒子は、実質的にその遊離酸形態の微粉化ＬＡ１から成る。いくつかの実施形態において、粒子は、実質的に、非結晶形又は結晶形の、本明細書中に記載の微粉化ＬＡ１塩から成る。
Ｖ．処置方法

【0141】

本明細書中に記載した塩及び結晶形は、β２インテグリンの活性に関連している疾患又は病態を処置するのに使用され得る。特定の実施形態において、斯かる疾患又は病態は、炎症（急性及び慢性炎症を含むが、これらに限定されない）、炎症性皮膚疾患、免疫関連障害、自己免疫疾患、火傷、免疫不全、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、ミエロペルオキシダーゼ欠損、ウィスコット・アルドリッチ症候群、慢性腎疾患、慢性肉芽腫性疾患、高ＩｇＭ症候群、白血球接着不全、鉄分不足、セディアック−東症候群、重症複合免疫不全、糖尿病、肥満、高血圧、ＨＩＶ、創傷治癒、リモデリング、瘢痕化、線維化、幹細胞療法、悪液質、脳脊髄炎、多発性硬化症、乾癬、ループス、関節リウマチ、免疫関連障害、放射線障害、移植、細胞移植、細胞輸血、臓器移植、骨髄移植、臓器保存、細胞保存、喘息、過敏性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、大腸炎、腸疾患、癌、白血病、虚血−再灌流傷害、卒中、血管損傷と関連する新生内膜肥厚、水疱性類天疱瘡、新生児閉塞性腎症、家族性高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化、脂質異常症、大動脈動脈瘤、動脈炎、脳動脈閉塞を含む血管閉塞、冠状動脈バイパス手術の合併症、慢性自己免疫性心筋炎及びウイルス性心筋炎を含む心筋炎、慢性心不全（ＣＨＦ）を含む心不全、心不全の悪液質、心筋梗塞、狭窄、心臓手術後の再狭窄、無症候性心筋虚血、左室補助装置の移植後合併症、血栓性静脈炎、川崎血管炎を含む血管炎、巨細胞性動脈炎、ウェゲナー肉芽腫、外傷性頭部損傷、虚血後の再灌流傷害、虚血後の脳の炎症、心筋梗塞後の虚血−再灌流傷害、心血管疾患、緑内障、黄斑変性、ブドウ膜炎、及び移植片対宿主病、神経学的な病態、アルツハイマー病、パーキンソン病、皮膚炎、疼痛（慢性疼痛を含む）、並びに原発性腫瘍及び転移性腫瘍を含めた癌、例えば乳癌、前立腺癌、黒色腫、肺癌及び膵臓癌などから選択される。特定の斯かる実施形態において、β２インテグリンの活性に関連している疾患又は病態は、世界中で何百万人もの人々が罹患していて、腎不全につながる病態である炎症性腎臓病、及び非観血的心臓病学において最も一般的な手法の１つである血管形成術を受けた人々にとって共通の問題である再狭窄から選択される。特定の斯かる実施形態において、β２インテグリンは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８である。

【0142】

本明細書中に記載した塩及び結晶形は、患者の癌の処置又は腫瘍の低減に使用され得る。特定の実施形態において、塩及び結晶形は、白血球の腫瘍浸潤を調節する。腫瘍は、新生血管形成を促進するために、例えばＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８などのβ２インテグリンを発現する細胞を動員するように炎症性サイトカインを分泌する。化学療法や放射線療法によるものを含めた癌の処置中、腫瘍は、腫瘍血管系を回復し、且つ、腫瘍再増殖及び再発を可能にする多数の特定の白血球又は骨髄由来細胞を動員する。そのため、本願発明の化合物及び方法は、斯かる細胞の活性、例えば浸潤などを低減するのに有用である。加えて、ＣＤ１１ｂの活性化は、抗腫瘍性免疫応答を高める。従って、本明細書中に記載した塩及び結晶形、並びに他の化合物を含めた、ＣＤ１１ｂを作動させる化合物は、抗腫瘍療法のための免疫調整経路を標的とし、利用するために使用され得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載した塩及び結晶形は、例えば化学療法、抗体療法、放射線療法、及び細胞に基づく療法などの他の癌の処置の応答を高めるのに有用である。

【0143】

いくつかの実施形態において、記載した塩及び結晶形は、哺乳動物における傷害、炎症、細菌感染、ウイルス感染、又は他の疾患及び病態の際の白血球動員を減少させるのに使用され得る。いくつかの実施形態において、塩及び結晶形は、動脈障害による新生内膜過形成を含めた臓器障害を軽減するのに使用され得る。いくつかの実施形態において、塩及び結晶形は、例えば虚血再灌流障害などの急性臓器障害で臓器機能を保存するために使用され得る。例えば、塩及び結晶形は、急性腎傷害で腎臓機能を保存し得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載した塩及び結晶形は、糸球腎炎又はネフローゼで腎臓機能を保存するのに使用され得る。

【0144】

いくつかの実施形態において、本明細書中に記載した塩及び結晶形は、リンパ球や白血球などの炎症細胞の機能を調節するのに使用され得る。化合物は、これだけに限定されるものではないが、眼、脳、皮膚、肝臓、及び腎臓のインテグリン媒介性炎症を含めた、多くの臓器及び組織におけるインテグリン媒介性炎症を処置するのに使用され得る。例えば、塩及び結晶形は、受容動物において移植片寛容性を誘導するために使用され得る。移植片としては、骨髄、骨髄細胞、幹細胞、免疫細胞、遺伝子操作された細胞、臓器、組織又は他の細胞を挙げることができる。同様に、塩及び結晶形は、受容個体における移植片対宿主病を軽減し得る。よって、塩及び結晶形は、移植転帰を改善し得る。

【0145】

従って、本発明は、患者のβ２インテグリン媒介性病態又は疾患を予防するか又は処置するための方法を提供し、そしてその方法は、前記患者に対して本明細書中に記載した塩又は結晶形の処置的に有効な量を投与することを含む。特定の実施形態において、β２インテグリン媒介性病態又は疾患は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８媒介性病態又は疾患である。

【0146】

ＬＡ１はまた、アデノシンＡ２Ａ受容体作動薬アッセイ及びグルココルチコイド受容体作動薬アッセイにおいて有効性に示し、そしてそれは、本明細書中に記載したＬＡ１、並びに塩及び結晶形が、それらの受容体の活性に関連する病態を処置するのに使用され得ることを示唆した。

【0147】

一態様において、本発明は、癌を処置する方法を提供する。その方法は、それを必要としている対象に、
式Ｉによる化合物：

【化17】

又は医薬的に許容し得るその塩の処置的に有効な量、及び
免疫チェックポイント阻害剤の処置的に有効な量を投与することを含む。

【0148】

いくつかの実施形態において、その方法は、式Ｉによる化合物の医薬的に許容し得る塩を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、その塩は、メグルミン塩又はコリン塩である。いくつかの斯かる実施形態において、本発明は、本明細書中に記載したＬＡ１の塩又は結晶形を投与することを含む。

【0149】

いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＩＤＯ１／ＩＤＯ２（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ）、及びＣＧＥＮ−１５０４９から成る群から選択される１若しくは複数の標的の活性を阻害する。

【0150】

いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、及びＣＧＥＮ−１５０４９から成る群から選択される１若しくは複数の標的に結合するタンパク質である。

【0151】

いくつかの実施形態において、そのタンパク質は、抗体及び抗原結合性抗体フラグメントから成る群から選択される。いくつかの実施形態において、そのタンパク質は、ＣＴＬＡ−４抗体、ＯＸ４０抗体、ＰＤ−Ｌ１抗体、ＰＤ１抗体、及びＢＹ５５抗体から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、そのタンパク質は、ＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの実施形態において、そのタンパク質はＰＤ１抗体である。

【0152】

いくつかの実施形態において、そのタンパク質は、トレメリムマブ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＫ−３４７５、ニボルマブ、ＣＴ−０１１、ＡＭＰ２２４、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＬＤＬ３２８０Ａ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、及びイピリムバブから成る群から選択される。

【0153】

いくつかの実施形態において、その癌は、対象における１若しくは複数の白血球マーカーの発現に関連している。いくつかの実施形態において、その白血球マーカーは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８、ＩＤＯ１／２、ＴＤＯ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ６８、ＶＥＧＦＲ、及びＳＩＲＰａから成る群から選択される。

【0154】

いくつかの実施形態において、その癌は、β２インテグリンの１若しくは複数の標的を発現する。いくつかの実施形態において、その標的は、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、フィブロネクチン、ビロネクチン、フィブリノゲン、及び補体断片から成る群から選択される。

【0155】

いくつかの実施形態において、その癌は、黒色腫、肉腫、リンパ腫、神経膠腫、白血病、膵臓癌、腱鞘巨細胞腫、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、胃癌、及び肺癌から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態において、癌患者はまた、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、ループス、関節リウマチ、クローン病、又は潰瘍性大腸炎）とも診断された。

【0156】

別の態様において、本発明は、黒色腫を処置する方法を提供する。その方法は、それを必要としている対象に対して、
式ＩＶによる化合物：

【化18】

｛式中、Ａ⁺は、コリン陽イオン及びメグルミン陽イオンから成る群から選択される｝の処置的に有効な量、及び
ＰＤ１抗体の処置的に有効な量を投与することを含む。

【0157】

別の態様において、本発明は、それを必要としている対象に対して：
式Ｉによる化合物：

【化19】

又は医薬的に許容し得るその塩の処置的に有効な量、及び
骨髄細胞を標的とする作用物質の処置的に有効な量を投与することを含む癌を処置する方法を提供する。

【0158】

いくつかの実施形態において、骨髄細胞を標的とするその作用物質は、ＣＳＦ１Ｒ、ＩＤＯ１／２、ＴＤＯ、ＣＣＲ２、ＣＣＬ２、ＣＸＣＲ４、ＪＡＫ１／２／３／４／５、ＰＩ３Ｋｇ、インテグリンβ１、インテグリンα４β１（ＶＬＡ４）、ＶＥＧＦＲから成る群から選択される１若しくは複数の標的の活性を阻害する。

【0159】

いくつかの実施形態において、骨髄細胞を標的とするその作用物質は、ＳＩＲＰａの活性を増強する。

【0160】

先の態様のいずれか１つのいくつかの実施形態において、その方法は、対象から得られたサンプル中の１若しくは複数の白血球マーカーを検出し、その結果、処置を必要としていると対象を同定することを更に含む。いくつかの斯かる実施形態において、白血球マーカーは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８、ＩＤＯ１／２、ＴＤＯ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ６８、ＶＥＧＦＲ、及びＳＩＲＰａから成る群から選択される。いくつかの斯かる実施形態において、マーカーは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８である。

【0161】

先の態様のいずれか１つのいくつかの実施形態において、その方法は、マクロファージを標的とする造影剤を用いて腫瘍細胞を撮像することによって処置の有効性を観察することを更に含む。先の態様のいずれか１つのいくつかの実施形態において、その方法は、対象の１若しくは複数のマクロファージマーカーのレベルを観察することによって処置の有効性を観察することを更に含む。

【0162】

関連する態様において、本発明は、腫瘍においてＣＤ１１ｂ＋白血球を低減する方法を提供する。その方法は、それを必要としている対象に対して：
式Ｉによる化合物：

【化20】

又は医薬的に許容し得るその塩の有効量、及び
免疫チェックポイント阻害剤、骨髄細胞を標的とする作用物質、及びその組み合わせ物から成る群から選択される作用物質の有効量を投与することを含む。

【0163】

いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ｂ＋白血球は、骨髄細胞である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ｂ＋白血球は、マクロファージである。いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ｂ＋白血球は、好中球である。

【0164】

いくつかの実施形態において、腫瘍組織における抗発癌性マクロファージ対発癌誘発性マクロファージの比が変更される。

【0165】

いくつかの実施形態において、Ｍ１／Ｍ２比が腫瘍において変更される。いくつかの斯かる実施形態において、マクロファージは、Ｍ１表現型に向かって極性化される。

【0166】

いくつかの実施形態において、本発明は、癌に罹患している対象の腫瘍転移を予防する方法を提供する。その方法は、それを必要としている対象に対して：
式Ｉによる化合物：

【化21】

又は医薬的に許容し得るその塩の有効量を投与し、そして、
対象の潜在的転移部位におけるＣＤ１１ｂ＋白血球の浸潤を低減させることを含む。

【0167】

いくつかの実施形態において、腫瘍転移を予防する方法は、免疫チェックポイント阻害剤、骨髄細胞を標的とする作用物質、及びその組み合わせ物から成る群から選択される作用物質の有効な量を投与することを更に含む。

【0168】

本明細書中に記載した塩及び結晶形は、本発明の方法において任意の好適な用量で投与され得る。概して、塩又は結晶形は、対象の体重１キログラムあたり約０．１ミリグラム〜約２０００ミリグラム（すなわち、約０．１〜２０００ｍｇ／ｋｇ）の範囲に及ぶ用量で投与される。塩又は結晶形の用量は、例えば約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、又は約１〜５００ｍｇ／ｋｇ、又は約２５〜２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５０〜１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１０〜１００ｍｇ／ｋｇであり得る。塩又は結晶形の用量は、約１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、１５５０、１６００、１６５０、１７００、１７５０、１８００、１８５０、１９００、１９５０又は２０００ｍｇ／ｋｇであり得る。塩又は結晶形の用量は、約１ｍｇ／ｋｇ未満、約２ｍｇ／ｋｇ未満、約３ｍｇ／ｋｇ未満、約４ｍｇ／ｋｇ未満、約５ｍｇ／ｋｇ未満、約１０ｍｇ／ｋｇ未満、約１５ｍｇ／ｋｇ未満、約２０ｍｇ／ｋｇ未満、約２５ｍｇ／ｋｇ未満、約３０ｍｇ／ｋｇ未満、約３５ｍｇ／ｋｇ未満、約４０ｍｇ／ｋｇ未満、約４５ｍｇ／ｋｇ未満、約５０ｍｇ／ｋｇ未満、約５５ｍｇ／ｋｇ未満、約６０ｍｇ／ｋｇ未満、約６５ｍｇ／ｋｇ未満、約７０ｍｇ／ｋｇ未満、約７５ｍｇ／ｋｇ未満、約８５ｍｇ／ｋｇ未満、約９０ｍｇ／ｋｇ未満、約９５ｍｇ／ｋｇ未満、約１００ｍｇ／ｋｇ未満、約１５０ｍｇ／ｋｇ未満、約２００ｍｇ／ｋｇ未満、約２５０ｍｇ／ｋｇ未満、約３００ｍｇ／ｋｇ未満、約３５０ｍｇ／ｋｇ未満、約４００ｍｇ／ｋｇ未満、約４５０ｍｇ／ｋｇ未満、約５００ｍｇ／ｋｇ未満、約５５０ｍｇ／ｋｇ未満、約６００ｍｇ／ｋｇ未満、約６５０ｍｇ／ｋｇ未満、約７００ｍｇ／ｋｇ未満、約７５０ｍｇ／ｋｇ未満、約８００ｍｇ／ｋｇ未満、約８５０ｍｇ／ｋｇ未満、約９００ｍｇ／ｋｇ未満、約９５０ｍｇ／ｋｇ未満、又は約１０００ｍｇ／ｋｇ未満の用量で投与され得る。いくつかの実施形態において、塩又は結晶形は、対象の体重１ｋｇあたり２００ｍｇ（２００ｍｇ／ｋｇ）未満の化合物の用量で投与される。いくつかの実施形態において、塩又は結晶形は、１００ｍｇ／ｋｇ未満の用量で投与される。いくつかの実施形態において、塩又は結晶形は、５０ｍｇ／ｋｇ未満の用量で投与される。いくつかの実施形態において、塩又は結晶形は、２０ｍｇ／ｋｇ未満の用量で投与される。

【0169】

免疫チェックポイント阻害剤は、本発明の方法において任意の好適な用量で投与され得る。特定の実施形態において、抗体免疫チェックポイント阻害剤は、対象の体重１キログラムあたり約０．１ミリグラム〜約１００ミリグラム（すなわち、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ）の用量の範囲にて投与される。抗体免疫チェックポイント阻害剤の用量は、例えば約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、又は約１〜１０ｍｇ／ｋｇであり得る。抗体免疫チェックポイント阻害剤の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0170】

用量は、患者の要件、処置されるβ２インテグリン媒介性障害又は病態の重症度、及び投与される特定の製剤によって変更され得る。患者に投与される用量は、患者の有益な処置反応をもたらすのに十分でなければならない。用量のサイズはまた、特定の患者において本剤投与に伴ういずれかの不利な副作用の存在、性質、及び程度によっても決定される。特定の状況のための適切な用量の決定は、典型的な開業医の技能の範囲内にある。総用量は、分割され、そして、インテグリン媒介性病態を処置するのに好適な期間にわたって投与され得る。

【0171】

本明細書中に記載した塩又は結晶形の投与は、β２インテグリン媒介性傷害障害又は病態の性質、その重症度、及び患者の概況によって異なる期間にわたって実施され得る。投与は、例えば、毎時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間毎、又は１２時間毎を含めた１日２回、或いはその間にある任意の間隔で実施され得る。投与は、１日１回、３６時間若しくは４８時間毎に１回、又は月毎若しくは数カ月毎に１回実施され得る。処置後、患者は、その人の病態の変化、及びβ２インテグリン媒介性障害又は病態の症状の緩和について観察され得る。塩又は結晶形の用量は、患者が特定の投与量レベルに対して有意に反応しない事象において増加されるか、又はβ２インテグリン媒介性障害又は病態の症状の緩和が観察された場合、或いはその障害又は病態が消散した場合、或いは容認できない副作用が特定の用量で見られた場合、用量が低減され得る。

【0172】

本明細書中に記載した塩又は結晶形の処置的に有効な量は、投薬の間に少なくとも１時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、又は４８時間の間隔を含む処置計画で対象に投与され得る。投与は、少なくとも７２、９６、１２０、１６８、１９２、２１６、若しくは２４０時間、又は同等な日数の間隔で実施され得る。投薬計画は、２以上の異なった間隔セットから成ってもよい。例えば、投薬計画の第一の部分は、毎日複数回、毎日、１日毎、又は３日毎に対象に投与され得る。投薬計画は、１日毎、３日毎、毎週、隔週、又は毎月、対象に投与することから始まり得る。投薬計画の第一の部分は、例えば、７、１４、２１、又は３０日間などの最長３０日間にわたり投与され得る。毎週、１４日毎、又は毎月投与される、異なった間隔投与を有する、その後の投薬計画の第二の部分が、任意選択で、４週間〜最長２年間以上、例えば４、６、８、１２、１６、２６、３２、４０、５２、６３、６８、７８、又は１０４週間にわたり続いてもよい。或いは、β２インテグリン媒介性障害又は病態が小康状態に入るか又は全般的に改善した場合、用量は、維持されても、又は最大量に比べて低く維持されてもよい。障害又は病態が再発した場合、第一の投薬計画が、改善が見られるまで再開されてもよく、そして、第二の投薬計画が、再び実施されてもよい。このサイクルは、必要に応じて、複数回繰り返され得る。

【0173】

特定の実施形態において、ＬＡ１塩及び免疫チェックポイント阻害剤は、相乗的な量で投与され；この場合、組み合わせで投与したときの作用物質の効果は、単剤として単独で投与したときの化合物の相加効果より優れている。いくつかの実施形態において、相乗効果は、単剤として投与されるときの薬剤の最大有効濃度を下回る濃度にてＬＡ１塩及びチェックポイント阻害剤を投与することによって得られる。相乗的な量は、これだけに限定されるものではないが、特定のＬＡ１塩又は結晶形、特定の免疫チェックポイント阻害剤、処置される病態（例えば、癌型）、及び投与の経路又は頻度を含めた要因に依存し得る。相乗効果は、低い細胞毒性、増強された抗増殖及び／又は抗感染効果、或いは、個々の成分と比較した組み合わせ物のその他の何らかの有益効果において観察され得る。

【0174】

いくつかの実施形態において、先に記載したＬＡ１又はＬＡ１塩は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０００ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ量で対象に投与される。いくつかの斯かる実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡ１又はＬＡ１塩と共に相乗的な量で投与される。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＬＡ１又はＬＡ１塩は、経口的に対象に投与される。

【0175】

いくつかの実施形態において、ＬＡ１又はＬＡ１塩は、約２ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ量で対象に投与される。いくつかの斯かる実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡ１又はＬＡ１塩と共に相乗的な量で投与される。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＬＡ１又はＬＡ１塩は、経口的に対象に投与される。

【0176】

ＬＡ１は、これだけに限定されるものではないが、サイトカイン及びケモカインを含めた、１若しくは複数の分泌因子の白血球からの放出を調節し得る。サイトカインとしては、炎症誘発性サイトカイン（例えば、インターロイキン（ＩＬ）−１、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ））及び抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３）が挙げられる。特定の実施形態において、本明細書中に記載した塩又は結晶形の投与は、ＬＡ１によるサイトカイン発現（又は他の可溶性因子）の調節をもたらす。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０から選択される。いくつかの実施形態において、可溶性因子は、ＴＮＦ−α、インターフェロンａ（ＩＦＮａ）、インターフェロンｂ（ＩＦＮｂ）、及びインターフェロン（ＩＦＮ）−γから選択される。例えばサイトカインなどの可溶性因子は、炎症性マーカーであり、特定の病態を処置する際にＬＡ１の有効性（ＬＡ１塩又は結晶形の有効性）を評価するために、患者の血清、患者由来の細胞又は組織においてアッセイされ得る。例えばＩＬ−１β及びＴＮＦ−αなどのサイトカインに関する多くの診断的アッセイが、当該技術分野で知られており、ＬＡ１塩又は結晶形の抗炎症効能を評価するために使用できる。斯かる方法としては、これだけに限定されるものではないが、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）及び
樹脂結合抗体によるサイトカインの捕獲とフローサイトメトリーによる検出のためのビーズアレイシステムが挙げられる。

【0177】

別の態様において、本発明は、癌を処置する方法を提供し、ここで、該方法は：
対象の、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ６８、ＶＥＧＦＲ、ＳＩＲＰａ、ＡＲＧ１、ＵＰＡＲ、ＣＤ１１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸＰ３、ＣＤ３、ＩＣＡＭ１、ＣＤ３１、ＤＥＳＭＩＮ、α−平滑筋アクチン、ＣＤ６４、ＣＤ３２、ＣＤ８９から成る群から選択される１若しくは複数のタンパク質の発現レベルを測定し、そして、該対象にＬＡ１又はその塩若しくは結晶形の処置的に有効な量を投与することを含む。いくつかの実施形態において、タンパク質の発現レベルの測定は、患者から生物検体（生検検体など）を得、そして、その生物検体内のタンパク質の発現レベルを測定することを含む。いくつかの斯かる実施形態において、その方法は、免疫チェックポイント阻害剤の処置的に有効な量を対象に投与することを更に含む。いくつかの斯かる実施形態において、その方法は、評価期間の間のタンパク質の発現レベルを測定し、そして、タンパク質の発現レベルが評価期間の間に変化することが観察された場合、処置を調整することを更に含む。

【0178】

いくつかの実施形態において、その方法は、対象から得られた、例えば生検検体などの生物検体におけるタンパク質の発現レベルが、健常被験者から得られた生物検体サンプルにおけるタンパク質の発現より高いレベルに比べて高いことを判定することを含む。いくつかの実施形態において、その方法は、対象から得られた生検サンプルのタンパク質の発現レベルが、対象から得られた非癌組織サンプルのタンパク質の発現レベルと比べて高いことを判定することを含む。いくつかの斯かる実施形態において、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ６８、ＶＥＧＦＲ、ＳＩＲＰａ、ＡＲＧ１、ＵＰＡＲ、ＣＤ１１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸＰ３、ＣＤ３、ＩＣＡＭ１、ＣＤ３１、ＤＥＳＭＩＮ、α−平滑筋アクチン、ＣＤ６４、ＣＤ３２、及びＣＤ８９から成る群から選択されるもう１つのタンパク質の発現レベルが測定される。

【0179】

いくつかの実施形態において、その方法は、対象から得られた、例えば生検検体などの生物検体におけるタンパク質の発現レベルが、健常被験者から得られた生物検体サンプルにおけるタンパク質の発現より高いレベルに比べて低いことを判定することを含む。いくつかの実施形態において、その方法は、対象から得られた生検サンプルのタンパク質の発現レベルが、対象から得られた非癌組織サンプルのタンパク質の発現レベルと比べて低いことを判定することを含む。いくつかの斯かる実施形態において、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ６８、ＶＥＧＦＲ、ＳＩＲＰａ、ＡＲＧ１、ＵＰＡＲ、ＣＤ１１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸＰ３、ＣＤ３、ＩＣＡＭ１、ＣＤ３１、ＤＥＳＭＩＮ、α−平滑筋アクチン、ＣＤ６４、ＣＤ３２、及びＣＤ８９から成る群から選択されるもう１つのタンパク質の発現レベルが測定される。

【0180】

いくつかの実施形態において、本発明は、癌を処置する方法を提供し、ここで、該方法は、対象の、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）；Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）；ウロキナーゼ受容体（ｕＰＡＲ）；可溶性ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ受容体（ｓｕＰＡＲ）；グリピカン−１；ＣＤ１１ｂ；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；ＶＥＧＦ受容体；例えばＭＭＰ−９などのマトリックスメタロプロテイナーゼ；ＴＮＦα；例えばＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３などのインターロイキン；ＴＧＦβ；ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−βなどを含めたインターフェロン；トリプトファン；リジン；アルギニン；ラクタート；マイクロＲＮＡから成る群から選択される１若しくは複数の物質のレベルを測定し；そして、そのバイオマーカーを有する対象に対してＬＡ１、又はその塩若しくは結晶形の処置的に有効な量を投与すること、を含む。いくつかの実施形態において、物質のレベルを測定することは、患者から血液、血漿、尿、又は唾液サンプルを得、そして、そのサンプルにおけるタンパク質の発現レベルを測定することを含む。いくつかの斯かる実施形態において、その方法は、免疫チェックポイント阻害剤の処置的に有効な量を該対象に投与することを更に含む。いくつかの斯かる実施形態において、その方法は、評価期間の間の物質のレベルを測定し、そして、該物質のレベルが評価期間の間に変化することが観察された場合、処置を調整することを更に含む。

【0181】

いくつかの実施形態において、その方法は、対象から得られた血液、血漿、尿、又は唾液サンプル中の物質のレベルが、健常被験者から得られた同様の血漿サンプル中のタンパク質の発現レベルと比べて高いことを判定することを含む。いくつかの実施形態において、その方法は、対象から得られた血液、血漿、尿、又は唾液サンプル中の物質のレベルが、健常被験者から得られた同様の血漿サンプル中のタンパク質の発現レベルと比べて低いことを判定することを含む。いくつかの斯かる実施形態において、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）；Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）；ウロキナーゼ受容体（ｕＰＡＲ）；可溶性ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ受容体（ｓｕＰＡＲ）；グリピカン−１；ＣＤ１１ｂ；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；ＶＥＧＦ受容体；例えばＭＭＰ−９などのマトリックスメタロプロテイナーゼ；ＴＮＦα；例えばＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３などのインターロイキン；ＴＧＦβ；ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−βなどを含めたインターフェロン；トリプトファン；リジン；アルギニン；ラクタート；マイクロＲＮＡから成る群から選択されるもう１つの物質のレベルが測定される。

【実施例】

【0182】

ＶＩ．実施例
実施例１．ロイカドヘリンＬＡ１のＤＭＳＯ溶媒和物形態Ｉの調製

【0183】

ジエチルエーテル（外側のバイアル、閉鎖）の蒸気拡散を、ＤＭＳＯ溶液（内側のバイアル、開放）の中に調製した。室温にて１日後、（かなりの量のエーテルがＤＭＳＯの入ったバイアルに加えられた）バイアルを、−１０℃の冷凍庫に置いた。ＤＭＳＯは凍結したが、内側のバイアルの上層域に増大した結晶性プレートが存在した。結晶性プレートを解析した。
¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.10 (d, 2H, J = 8.2 Hz), 7.96 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.74 (s, 1H), 7.50 (d, 1H, J = 3.8 Hz) 7.42 (d, 1H, J = 4 Hz), 7.37-7.26 (m, 5H), 5.25 (s, 1H), 3.31 (bs, 1H).

【0184】

ロイカドヘリンＬＡ１の新規結晶形を、粉末Ｘ線回折分光法によって解析し、そしてそれは、特定の結晶形の指紋領域を示した。２θの測定値は、典型的に±０．２度の範囲内の精度を有する。

【0185】

結晶性ロイカドヘリンＬＡ１のＸ線回折データを、１００．０（５）Ｋ.１でのデータ収集のためのBruker SMART APEX II CCDプラットフォームディフラクトメーターを使用して得た。セル定数及び方向マトリックスの予備的なセットを、逆空間の３つの直交化ウェッジから収集した反射から計算した。完全なデータ収集を、６０秒のフレーム時間及び３．９９ｃｍの検出装置距離を用いてＭｏＫα放射線（グラファイトモノクロメータ）を使用して実施した。逆空間のランダム指向領域を調査した：４つの主要部分のフレームを、４つの異なったΦ設定においてωが０．５０°ステップ及び２θが−３８°の検出装置位置を用いて収集した。強度データを吸収に関して補正した。最終的なセル定数を、積分後に実際のデータ収集からの４０４５回の強い反射のｘｙｚ重心から計算した。

【0186】

図１は、ロイカドヘリンＬＡ１のＤＭＳＯ溶媒和物形態Ｉについて測定したＸ線結晶構造を示し、そのデータを、表１及び表２にまとめる。
表１．ＬＡ１のＤＭＳＯ溶媒和物形態Ｉの結晶データ

【表1】

表２．１００．０（５）ＫにおけるロイカドヘリンＬＡ１の位置パラメーター

【表2】

【0187】

ロイカドヘリンＬＡ１の結晶データ及び構造精密化：以下のパラメーターを使用した。温度−１００．０（５）Ｋ、波長−０．７１０７３Å、晶系−三斜晶系、空間群−Ｐ−１、単位セル寸法−（ａ＝８．１５５４（１５）Å、α＝６６．８６０（４）°、ｂ＝１１．５３５（２）Å、β＝８６．５８１（４）°、ｃ＝１４．０９１（３）Å、γ＝７０．６２１（４）°）、体積−１１４６．１（４）ų、Ｚ−２、密度（理論値）−１．４４８Ｍｇ／ｍ³、吸収率−０．３６１ｍｍ^-1、Ｆ（０００）−５２０、結晶の呈色性及び形態−オレンジ色及びプレート、結晶サイズ−０．３６×０．３０×０．１２ｍｍ³、データ収集のためのθ範囲−２．０２３〜３５．０１０°、指数範囲−（−１３＜時間＜１３、−１８＜ｋ＜１８、−２２＜ｌ＜２２）、収集した反射−２５０３６、独立した反射−９９４０［Ｒ（ｉｎｔ）＝０．０５６２］、観察した反射−６０３８、θに対する完全性＝３４．９７０°−９８．７％、吸収補正−マルチスキャン、最大及び最小透過−０．７４６９及び０．６４０５、精密化方法−Ｆ２に対するフルマトリックス最小二乗法、当てはめの適合度−１．００１、最終的なＲ指数［Ｉ＞２シグマ（Ｉ）］−（Ｒ１＝０．０５５３、ｗＲ２＝０．１１７４）、Ｒ指数（すべてのデータ）−（Ｒ１＝０．１０５４、ｗＲ２＝０．１３７２）、ピーク及びホールの最大回折−０．７６６及び−０．５１８ｅ．Å^-3。

【0188】

ロイカドヘリンＬＡ１形態Ｉの非対称ユニットは、両方が通常位置にある、１つの標的分子及び１つの共結晶化ジメチルスルホキシド溶媒分子を含有する。分子のフェニル環は、それぞれ、環Ｃ２−Ｃ７及びＣ１７−Ｃ２２に対して約３．５及び３．６Åのプラナー距離にて対をなして積み重ねられている（図１を参照）。水素結合が、標的分子に溶媒分子を連結している（図１及び表１を参照）。
実施例２．ＬＡ１遊離酸の特性解析

【0189】

ＬＡ１の遊離酸形は、０．７８μｇ／ｍＬの水溶解度、及び４．１の理論的ｐＫａを有する。予め、限定した塩スクリーンを、５種類の無機対イオン（Ｎａ、Ｋ、ＮＨ₄、Ｃａ、及びＭｇ）を使用して実施した。塩は結晶性を呈したが、大部分は吸湿性であった。

【0190】

溶解性の概算：試験溶媒のアリコートを、周囲温度にてＬＡ１の正確に計量したサンプル（〜１０ｍｇ）に加えた。アリコート体積は、概ね２００〜１０００μＬであった。試験物質の完全な溶解を、目視検査によって測定した。溶解性を、完全な溶解を達成するのに使用した総溶媒に基づいて、これらの実験から概算した。多過ぎた溶媒アリコートの使用のため又は溶解の遅い速度に起因して、実際の溶解性が理論値よりも多くなり得ることに注意しなければならない。

【0191】

アリコートの添加によって溶解を示さなかった多くのサンプルを、温度サイクリングレジームに供した。最初に、サンプルを、０．５℃／分にて２０℃から溶媒沸点（又は１００℃、どれでもより低かった）の３℃以内まで加熱し；次に、８００ｒｐｍにて撹拌しながら、０．２℃／分にて２０℃まで冷ました。

【0192】

サンプルバイアルの赤外線（ＩＲ）透過データから、溶解と沈殿事象を、それぞれ、ＩＲの完全な透過点及びＩＲによる混濁度の始まりとして記録した。選択したサンプルはまた、５０℃にてオービタルシェイカーで撹拌し、そして、溶解について目視で観察した。

【0193】

平衡化による溶解性の測定：ＵＨＱ水試験溶媒（１ｍＬ）のアリコートを、ＬＡ１塩の正確に計量したサンプルに加え、周囲温度にて４日間にわたり撹拌した。サンプルを、取り出し、０．２μｍのＰＴＦＥフイルターを通して濾過し、そして、ＨＰＬＣによって分析した。

【0194】

粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）：ＸＲＰＤ分析を、Ｃｕ Ｘ線管及びＰｉｘｃｅｌ検出システムを備えたPanalytical Xpert Proディフラクトメーターを使用して実施した。等温サンプルを、透過モードで分析し、そして、低密度ポリエチレンフィルム間に保持した。フレームを、０．０１３°ステップのω、９９秒のカウント時間で２θが３〜４０°の検出装置位置範囲、及び〜２２分のランタイムで収集した。ＸＲＰＤパターンを、HighScore Plus ２．２ｃソフトウェアを使用して選別及び処理した。

【0195】

熱重量示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）：熱重量分析を、Mettler Toledo TGA/DSC1 STAReにより実施した。キャリブレーション基準は、インジウム及びスズであった。サンプルを、アルミニウムサンプルパンに入れ、ＴＧオーブン内に挿入し、そして、正確に計量した。熱流量シグナルを、１０℃／分の速度の窒素流内で３００℃まで加熱する前に、３０℃にて１分間安定させた。

【0196】

プロトン核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）：プロトンＮＭＲ分析を、ｄ₆−ＤＭＳＯ又はＭｅＯＤ中、Bruker 500MHz又は400MHz装置により実施した。１滴のＤ₂Ｏ及び／又はＴＦＡを、いくつかのサンプルに加え、塩基によるピークとの重複から水のピークをシフトさせた。

【0197】

ＨＰＬＣ分析法：ＨＰＬＣを、周囲温度における水性平衡溶解度を測定するために使用した。ＨＰＬＣを、Supelco Ascentis Express Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍカラム；水中に０．１％のリン酸を含有する移動相Ａ；アセトニトリルを含有する移動相Ｂ；９分間で１０％のＢから９５％のＢに変動する溶媒グラジエント；１．５ｍＬ／分の溶媒流量；１０μＬのサンプル体積；及び２６４ｎｍにおけるＵＶ検出を使用して実施した。ＬＡ１の保持時間は、概ね８．４±０．２分であった。ＨＰＬＣ分析用の基準を、最初に、ＬＡ１遊離酸を使用して調製したが、ＤＭＳＯ：アセトニトリル：水（１：１：１）中に不溶性であり、そのため、別の基準を、ＬＡ１コリン塩を使用して調製し、そしてそれは、アセトニトリル：水（１：１）中に可溶性であった。

【0198】

ＬＡ１の特性解析：得られたＬＡ１は、ＸＲＰＤ分析によって結晶性固形であったが、いくつかの回折ピークのピークブロード化によって示されたたように、何らかの障害を含んでいた（図２）。熱重量／示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）を実施して、温度プロファイル及び付随したＬＡ１の％重量変化を測定した。＜１％の重量減少が、２８０℃未満で観察され、材料が無水であることが示唆された（図３）。０．５％のわずかな重量減少が、２８０〜３００℃から指摘されたが、ＤＴＡトレースに付随する小さい吸熱に相当するが、更なる調査は行わなかった。

【0199】

サンプルのＤＳＣサーモグラムは、〜３１８℃の溶解開始を示した（図４）。ベースラインに対するわずかな偏差が、２６０〜２８０℃の間で示されたが、更なる調査を実施しなかった。ＡＰＩのプロトンＮＭＲスペクトルを、ｄ₆−ＤＭＳＯ中で記録し、そして、分子構造に一致した。恐らく既知のＤＭＳＯ溶媒和物の形成に起因して、ｄ₆−ＤＭＳＯ中へのＡＰＩの溶解直後に、かなりの沈殿がＮＭＲチューブ内で観察された。

【0200】

ＬＡ１の概算された溶解度：得られたＬＡ１の大まかな溶解度を、試験した塩の好適な溶媒を選択するためにアリコート添加法によって８種類の溶媒で概算したが（表３）、それは試験したすべての溶媒中に不溶性であった。いくつかの溶媒混合物を試験したが、ＡＰＩは調査したすべての混合物中に不溶性であった。加熱時でさえ、ＡＰＩは、７３℃にて１０ｍｇ／ｍＬでＤＭＦ中に溶解しただけであった。
表３．２０℃におけるＬＡ１の大まかな溶解度

【表3】

【0201】

〜１０体積(volume)中で溶解を示さなかったそれらの実験物は、先に記載した高温にて温度サイクルに供するか又はスラリー化した。

【0202】

特性解析及び溶媒試験からの結論：ＸＲＰＤ分析は、ＬＡ１が不規則な結晶物質であることを示した。ＴＧ／ＤＴＡデータは、３０〜２８０℃から無視できるほどの重量減少を示し、最小限の湿気又は残留溶媒の含有が示唆され、そして、ＬＡ１が最高２８０℃まで熱に安定な状態を維持することを示した。付随する吸熱を伴った０．５％のわずかな重量減少が２８０〜３００℃から示されたが、更なる調査は行わなかった。サンプルのＤＳＣサーモグラムは、〜３１８℃の溶解開始を示した。ベースラインに対するわずかな偏差が、２６０〜２８０℃の間で示されたが、更なる調査は行わなかった。分子構造を、ｄ₆−ＤＭＳＯを使用した¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認した。沈殿を、ＡＰＩの最初の溶解後にＮＭＲチューブ内で示し、そしてそれは、恐らく、既知のＤＭＳＯ溶媒和物の形成に起因する。ＬＡ１の溶解度を、アリコート添加によって評価し、そして、試験したすべての溶媒中への難溶性を示した。加熱した（７３℃）ＤＭＦ中にのみ、〜１０ｍｇ／ｍＬの溶解を達成した。
実施例３．ＬＡ１塩の調製と特性解析

【0203】

改善された水溶解度及び低吸湿性を有するＬＡ１塩を調製し、そして、解析した。

【0204】

結晶化実験からのすべての固形物を、ＸＲＰＤによって分析し、得られたパターンを、出発物質によって示されたものと比較した。新規ＸＲＰＤパターンには、発見順にアルファベット順の記述子を付与した（パターンＢ、パターンＣなど）。十分な材料が利用できるときには、更なる分析（例えば、ＮＭＲ又はＴＧＡ）を、新規ＸＲＰＤパターンを有する固体に対して実施して、多形体、溶媒和物、水和物、分解物又はその混合物として新規パターンの一時的な指定を可能にした。使用した塩基を表４にまとめる。
表４．塩の試験に使用した材料と試薬

【表4】

【0205】

溶媒に基づく技術：溶媒に基づく実験を、最初に、約９０ｍｇのスケールにて実施した；しかしながら、これを、限られたＡＰＩのためにガラスバイアルでの約２０〜３０ｍｇのスケールに改変した。

【0206】

実験を、等モル化学量論を用い、且つ、過剰量の塩基を使用して２０〜３０ｍｇのスケールで実施した。計量した酸と塩基を、ガラスバイアル内で組み合わせ、続いて溶媒を合わせ、そして、周囲温度又は４０℃にてスラリー化した。或いは、計量した酸を、ガラスバイアル内で過剰量の塩基と組み合わせ、そして、溶媒を加えた。サンプルを、周囲温度又は４０℃／５０℃にて１〜２日間スラリー化した。固形物を、真空濾過、遠心分離によって分離するか、或いは、ゆっくりとした留去によって乾燥させるか、又はＮ₂流下若しくは真空乾燥下でパージした。

【0207】

ゆっくりとした留去：スラリーと設定した一部の実験では、周囲条件下、Ｎ₂流下又は真空乾燥器下で乾燥までの留去を可能にしたので、固形物を分離し、そして、ＸＲＰＤによって分析した。ＡＰＩを過剰量の塩基と組み合わせ、そして、これはＮ₂流下で留去したとき、トロメタミンからのあるサンプルが溶液を生じた。

【0208】

スラリー実験：ＬＡ１と（等モル化学量論の又は過剰量の）塩基をバイアルに入れ、そして、溶媒を加えた。その混合物を、選択した温度にて１又は２日間、磁気撹拌によって撹拌した。固形物を、真空濾過／遠心分離によって分離し、ＸＲＰＤによる分析前に風乾した。

【0209】

超音波処理：
スラリー状実験から生じ、選択した固形物を、パルスプログラムを使用したCole-Parmer 130W超音波処理装置を使用して７０％の強度にて約８分間、超音波処理した。これらの実験が回収したすべての固形物を、ＸＲＰＤを使用して分析した。

【0210】

留去、（周囲温度及び高温での）持続的なスラリー、及び超音波処理技術は、塩基に対するＡＰＩの等モル化学量論を使用して用いられた。過剰量の塩基もまた、不完全な塩形成を示したいくつかの塩基の等モル混合物からの初期結果として多くの実験に使用した。

【0211】

バイアル内での留去：完全に溶解したサンプルのみが、ＤＭＦ又はＭｅＯＨ−ＴＨＦ中のコリンを用いたものであり、暗赤色の溶液を形成した。これらの溶液の留去はオイルを生じ、次にそれを減圧下で乾燥させた。固形物を、乾燥後に一方のサンプルから回収したが、もう片方のサンプルが粘稠のオイルのままだったので、分析しなかった（表５）。その固形物は、結晶物質で構成され（図５）、そして、塩形成は、固形物に関して¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認した。
表５．バイアル内での留去からの結果

【表5】

【0212】

スラリー実験：ＬＡ１及び塩基の懸濁液を、周囲温度又は４０／５０℃にて１〜２日間、様々な溶媒中で撹拌し、ＸＲＰＤによって分析した（表６）。多くのスラリーを、キャップを外したままにするか、又はＮ₂下で乾燥するまで留去した。ＡＰＩの２つの新しい形を多くの実験（パターンＣ及びＤの物質）から分離し、第７項で更に考察した。結晶性固形物をコリン、メグルミン、トロメタミン、及びコリン塩を含めたいくつかの対イオンから分離し（図６）、及び不規則な固形物を、Ｃａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｎａ、及びピペラジンから分離したが（図９）、多くが、ＡＰＩを含有した混合物質であった。コリン塩の新しい形は結晶化され、そして、Ｃａ及びトロメタミン塩の２つの形態が分離された。塩形成を、独特な固形物に関して¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認した。
表６．スラリー実験からの結果

【表6】

【0213】

塩の試験からの結論：ＬＡ１塩は、１２種類の医薬的に許容し得る塩基を使用して調製し、異なった結晶化技術と条件を伴った。

【0214】

結晶性を示す５つの塩：コリン、メグルミン、カルシウム、ピペラジン、及びトロメタミンを分離した。それぞれに関する塩形成を、¹Ｈ ＮＭＲ分析によって確認し、そして、トロメタミン塩がＮＭＰ溶媒和物であるように見えた。塩の複数の形態を、コリン、トロメタミン、及びカルシウム塩について分離した。固形物はまた、結晶性を示したＣａ、Ｍｇ、及びＮａ対イオンからも分離されたが、ＸＲＰＤによってＡＰＩの混合物であるように見えたので、塩が疑われた。１種類のＣａ塩サンプルを除いて、塩への完全な転換が達成されたことがなく、そしてそれは、ＸＲＰＤによって乱された。他の対イオンから分離された固形物は、出発物質の混合物から構成された。
実施例４．結晶性塩の吸湿性及び水溶解度

【0215】

４０℃／７５％ ＲＨでの湿度ストレス：結晶性を示した塩サンプルに、４０°／７５％のＲＨ条件下で５〜６日間ストレスをかけて、潮解性及び吸湿性を評価した。約５ｍｇの結晶性を示したＬＡ１塩を、ガラスバイアルに加え、そしてそれを、ＮａＣｌの飽和水溶液を含むより大きいバイアル内にキャップを外して入れた。より大きいバイアルを閉じ、パラフィルムで密閉し、最長６日間、４０℃のオーブン内に入れた。次に、塩をこれらの条件から取り出し、重量変化及びＸＲＰＤによる分析前に変化を観察した（例えば、呈色性や潮解性など）。サンプルを、ストレス付加後に、目視により調査し、形態組成物をＸＲＰＤ分析によって確認し、及び重量変化を記録した（表７）。
表７．湿度ストレス付加実験からの結果

【表7】

【0216】

試験した湿度条件下で潮解したサンプルはなかったが、３つのサンプル、特にコリン塩に関して、重量が増加した。加えて、ＸＲＰＤ分析は、コリン、トロメタミン、及びピペラジン塩が、ストレス付加後に、水和形態に相変化を受けた可能性がある。コリン塩で示された大きな重量増加は、水和物生成を支持するが、重量減少がピペラジン塩について観察され、その原因はわからなかった。

【0217】

選択した塩の水溶解度：結晶性を示し、且つ、融解性でなかった塩の水溶解度を、周囲温度にてＨＰＬＣ分析法によって測定した。サンプルを、分析前に４〜５日間、水中でスラリー化した。溶解度を表８にまとめる。
表８．水溶解度の概算からの結果

【表8】

【0218】

コリン塩は、７．１ｍｇ／ｍＬにて最も可溶性であり、メグルミン及びトロメタミンがそれに続く。カルシウム及びピペラジン塩は、それほど可溶性でなかった。

【0219】

トロメタミン塩は、スラリー化の間に黄色の固形物へと色が変化した。ＸＲＰＤ分析は、それがスラリー化中に遊離ＡＰＩに変化し、それで、その期間にわたって水中で物理的に安定していなかったことを示した。ＨＰＬＣ法を妥当性確認しなかったため、ＨＰＬＣによる溶解度及び化学的純度の概算は、大まかであった。その結果は、４〜５日間、水性媒質でスラリー化した場合、すべての塩が化学的に安定でないことを示唆する。しかしながら、平衡溶解度を達成するために、４〜５日間のスラリー化後にそのデータを得た；塩が、より短期間、水中で安定であり得ることは可能である。
実施例５．コリン及びメグルミンの製塩のスケールアップ

【0220】

小スケールでの製造：両方の塩を、エタノール中での成分のスラリー化によって小スケールで調製した（表９）。ＥｔＯＨ中への塩の改善された溶解度のため、ＥｔＯＨからの収率が低かったので、コリン塩はまた、アセトン及びＥｔＯＡｃ中でもスラリー化した。

【0221】

ＥｔＯＨからのコリン塩のＸＲＰＤパターンは、ジオキサン−ＴＨＦから作り出した塩のものと合致したが、アセトン及びＥｔＯＡｃからのサンプルは、異なった粉末パターンを示し、そしてそれは、４０°／７５％ ＲＨストレスからのサンプルのものと合致した、第６．１項（図１０）を参照。アセトンからのサンプルを、¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって分析し、そして、塩形成を確認した。１滴のＴＦＡを加えて、コリンによるピークとの重複から水のピークをシフトさせた。アセトンはスペクトル内に検出されなかった。

【0222】

メグルミン塩の調製からの固形物は、独特な粉末パターンを示した（図１０）。塩形成を、¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認し、そして、エタノールが１モルｅｑ．にて存在し、溶媒和物の形成を示唆した。
表９．コリン及びメグルミン塩の結晶化からの結果

【表9】

【0223】

より大きいスケールにおけるＬＡ１メグルミン塩の調製（２１１６−０３３−０２）：ＬＡ１（２０３．３ｍｇ）及びＮ−メチル−Ｄ−グルカミン（９４．１６ｍｇ）を、ガラスバイアル内に計量し、続いて、ＥｔＯＨ（０．６ｍＬ）を追加し、そして、その混合物を、周囲温度にて終夜撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、そして、ｔ−ＢＭＥで洗浄し、次に、ＥｔＯＨで洗浄した。次に、その固形物を、真空オーブン内に入れ、４０〜４７℃にて終夜乾燥させた。赤色／オレンジ色の粉末を収集した、収率＝７１％。

【0224】

より大きいスケールにおけるＬＡ１コリン塩の調製（２１１６−０３３−０４）：ＬＡ１（２０１．３ｍｇ）及び水（１１７．３μＬ）中の〜４６％の水酸化コリン水溶液ガラスバイアル内で組み合わせ、続いて、アセトン（０．７ｍＬ）を追加し、そして、その混合物を、周囲温度にて終夜撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、風乾した。暗赤色の粉末を収集した、収率＝７３％。

【0225】

両方の塩を、最初、エタノールからより大きいスケールで調製した。コリン塩スラリーからの固形物のＸＲＰＤ分析は、塩が形成されたが、少量のＡＰＩを含んでいることを示した（図１４）。いくつかの独特な回折ピークはまた、少量の追加成分の存在を示しているとも考えられた。塩形成を、¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認した。コリン塩の収量は、エタノール中への増大した溶解度のため少なく、そのため、調製を繰り返した。繰り返しのサンプルは、減圧下で乾燥させて、残留エタノールを取り除いたが、ＸＲＰＤ分析は、それが不規則であり、原形と異なっていることを示した（図１４）。そのサンプルはまた、有意な量のＡＰＩを含んでいた。塩形成を、¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認した。

【0226】

良好な収率を有する調製を、アセトンを使用して再び繰り返し、そして、結晶性固形物はパターンＱ物質で構成された（図１４）。塩形成を、¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認した。

【0227】

メグルミン塩を、妥当な収率を有するより大きいスケールで調製したが、ＸＲＰＤパターンは、エタノールからのより小さいスケールで作り出した塩のものと一致していた（図１４）。ＸＲＰＤ分析によると、少量のＡＰＩもまた存在していた。サンプルを乾燥させて、残留溶媒を取り除き、そして、ＸＲＰＤ分析は、固形物が不規則であったが、同じ形態を含んでいたことを示した（図１４）。塩形成を、等モル化学量論を有する、及び０．５モルｅｑ．のエタノールを含む¹Ｈ ＮＭＲ分光法によって確認した。
実施例６．ロイカドヘリンＬＡ１メグルミン塩形態Ｈの調製

【0228】

ロイカドヘリンＬＡ１（２０３．３ｍｇ）及びＮ−メチル−Ｄ−グルカミン（９４．１６ｍｇ）を、ガラスバイアル内に計量した。エタノール（０．６ｍＬ）を加え、そして、その混合物を、周囲温度にて終夜撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、ｔ−ブチルメチルエーテルで洗浄し、次に、エタノールで洗浄した。次に、その固形物を、真空オーブン内に入れ、４０〜４７℃にて終夜乾燥させた。赤色／オレンジ色の粉末を収集した、収率＝７１％。或いは、１：１の比でロイカドヘリンＬＡ１（〜２００ｍｇ）及びＮ−メチル−Ｄ−グルカミンを、ガラスバイアル内に計量した。テトラヒドロフラン：メタノール（２：１、０．６ｍＬ）を加え、その混合物を、窒素雰囲気下でゆっくりと留去しながら、５０℃にて撹拌した。赤色／オレンジ色の固形物を収集した。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.04 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.87 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.74 (s, 1H), 7.41 (ABq, 2H, J_AB = 3.9 Hz), 7.27-7.37 (m, 5H), 5.26 (s, 2H), 3.84 (dt, 1H, J = 4.4, 3.9 Hz), 3.68 (dd, 1H, J = 4.9, 1.5 Hz), 3.60 (dd, 1H, J = 10.9, Hz), 3.50 (m, 1H) 3.44 (dd, 1H, J = 8.1, 1.7 Hz), 3.41 (dd, 1H, J = 10.8, 5.8 Hz), 3.31 (bs, 7H), 2.91 (dd, 1H, J = 12.5, 3.8 Hz), 2.84(dd, 1H, J = 11.3, 7.8 Hz), 2.47 (s, 3H).

【0229】

形態Ｈは、独特な粉末Ｘ線回折パターンを生じる（図６Ｂ；表１０）。
表１０．ロイカドヘリンＬＡ１のメグルミン塩形態Ｈに関する粉末Ｘ線回折ピーク位置及び強度

【表10】

実施例７．ロイカドヘリンＬＡ１のメグルミン塩形態Ｔの調製

【0230】

１：１の比でロイカドヘリンＬＡ１（〜２００ｍｇ）及びＮ−メチル−Ｄ−グルカミンを、ガラスバイアル内に計量した。エタノール（０．６ｍＬ）を加え、その混合物を、５０℃にて２時間撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、ｔ−ブチルメチルエーテルによって洗浄した。赤色／オレンジ色の固形物を収集した。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.04 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.87 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.74 (s, 1H), 7.41 (ABq, 2H, J_AB = 3.9 Hz), 7.27-7.37 (m, 5H), 5.26 (s, 2H), 3.84 (dt, 1H, J = 4.4, 3.9 Hz), 3.68 (dd, 1H, J = 4.9, 1.5 Hz), 3.60 (dd, 1H, J = 10.9, Hz), 3.50 (m, 1H) 3.44 (dd, 1H, J = 8.1, 1.7 Hz), 3.41 (dd, 1H, J = 10.8, 5.8 Hz), 3.31 (bs, 7H), 2.91 (dd, 1H, J = 12.5, 3.8 Hz), 2.84(dd, 1H, J = 11.3, 7.8 Hz), 2.47 (s, 3H).

【0231】

形態Ｔは、独特な粉末Ｘ線回折パターンを生じる（表１１）。
表１１．ロイカドヘリンＬＡ１のメグルミン塩形態Ｔに関する粉末Ｘ線回折ピーク位置及び強度

【表11】

実施例８．ＬＡ１メグルミン（ＮＭＤＧ）塩の多形体の精製

【0232】

ＮＭＤＧ塩を、表１２〜表１３に示した様々な溶媒中、様々な温度又は室温にて加熱することによって再結晶化することで精製した。表１２は、プロトン性溶媒中でのメグルミン塩の多形体スクリーニングを示し、表１３は、プロトン性溶媒中でのメグルミン塩の多形体スクリーニングを示す。プロトン性溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ−ブタノール及び水が挙げられる。非プロトン性溶媒としては、アセトン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）及びＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）が挙げられる。沈殿は、室温にて起こった。加熱により透明な溶液は観察されなかった。図１５は、様々な溶媒においてＬＡ１のメグルミン塩に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。

【0233】

結晶形Ｌを、酢酸イソプロピル中で７０℃にて得、そしてそれは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、図１１によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。結晶形Ｍを、アセトン中で７０℃にて得、そしてそれは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、図１２によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。結晶形Ｎを、ＤＭＦ中で７０℃にて得、そしてそれは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、図１３（及び図１５Ｉ）によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。
表１２．プロトン性溶媒中のメグルミン塩の多形体スクリーニング

【表12】

表１３．非プロトン性溶媒中のメグルミン塩の多形体スクリーニング

【表13-1】

【表13-2】

実施例９．ロイカドヘリンＬＡ１のコリン塩形態Ｇの調製

【0234】

１：１の比でロイカドヘリンＬＡ１（〜２００ｍｇ）と〜４６％の水酸化コリン水溶液を、ガラスバイアル内のテトラヒドロフラン：メタノール（３：１、０．７ｍＬ）溶液中でスラリー化し、そして、その混合物を、窒素雰囲気下でゆっくりと留去しながら５０℃にて撹拌した。暗赤色の固形物を収集した。

【0235】

或いは、１：１の比でロイカドヘリンＬＡ１（〜２００ｍｇ）と〜４６％の水酸化コリン水溶液を、ガラスバイアル内のエタノール：ｔ−ブチルメチルエーテル（２：１、０．７ｍＬ）溶液中でスラリー化し、そしてその混合物を４０℃にて２時間撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、メチルｔ−ブチルエーテルで洗浄し、そして、風乾した。暗赤色の固形物を収集した。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.95 (d, 2H, J = 6.8 Hz), 7.75 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 7.72 (s, 1H), 7.40 (d, 1H, J = 3.8 Hz), 7.37-7.27 (m, 6H), 5.26 (s, 2H), 3.87-3.83 (m, 2H), 3.42-3.39 (m, 2H), 3.11 (s, 9H).

【0236】

形態Ｇは、独特な粉末Ｘ線回折パターンを生じる（表１４）。
表１４．ロイカドヘリンＬＡ１のコリン塩形態Ｇに関する粉末Ｘ線回折ピーク位置及び強度

【表14】

実施例１０．ロイカドヘリンＬＡ１のコリン塩形態Ｏの調製

【0237】

１：１の比でロイカドヘリンＬＡ１（〜２００ｍｇ）と〜４６％の水酸化コリン水溶液を、ガラスバイアル内のＴＨＦ（０．７ｍＬ）溶液中でスラリー化し、そして、その混合物を、周囲温度にて終夜撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、そして、風乾した。暗赤色の固形物を収集した。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.95 (d, 2H, J = 6.8 Hz), 7.75 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 7.72 (s, 1H), 7.40 (d, 1H, J = 3.8 Hz), 7.37-7.27 (m, 6H), 5.26 (s, 2H), 3.87-3.83 (m, 2H), 3.42-3.39 (m, 2H), 3.11 (s, 9H).

【0238】

形態Ｏは、独特な粉末Ｘ線回折パターンを生じる（表１５）。
表１５．ロイカドヘリンＬＡ１のコリン塩形態Ｏに関する粉末Ｘ線回折ピーク位置及び強度

【表15】

実施例１１．ロイカドヘリンＬＡ１のコリン塩形態Ｑの調製

【0239】

１：１の比でロイカドヘリンＬＡ１（〜２００ｍｇ）と〜４６％の水酸化コリン水溶液を、ガラスバイアル内のアセトン（０．７ｍＬ）溶液中でスラリー化し、そして、その混合物を、周囲温度にて終夜撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、そして、風乾した。暗赤色の固形物を収集した。或いは、１：１の比でロイカドヘリンＬＡ１（〜２００ｍｇ）と〜４６％の水酸化コリン水溶液を、ガラスバイアル内の酢酸エチル（０．７ｍＬ）溶液中でスラリー化し、そして、その混合物を周囲温度にて終夜撹拌した。固形物を、真空濾過によって分離し、そして、風乾した。暗赤色の固形物を収集した。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.95 (d, 2H, J = 6.8 Hz), 7.75 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 7.72 (s, 1H), 7.40 (d, 1H, J = 3.8 Hz), 7.37-7.27 (m, 6H), 5.26 (s, 2H), 3.87-3.83 (m, 2H), 3.42-3.39 (m, 2H), 3.11 (s, 9H).

【0240】

形態Ｑは、独特な粉末Ｘ線回折パターンを生じる（表１６）。
表１６．ロイカドヘリンＬＡ１のコリン塩形態Ｑに関する粉末Ｘ線回折ピーク位置及び強度

【表16】

示差走査熱量測定

【0241】

表１７は、コリン及びメグルミン塩の様々な形態の融解温度を示す。
表１７．塩の様々な形態のＤＳＣサーモグラム測定値

【表17】

実施例１２．ＬＡ１コリン塩の多形体の精製

【0242】

コリン塩を、表１８及び表１９に示した様々な溶媒中、様々な温度又は室温にて加熱することによって再結晶化することで精製した。表１８は、プロトン性溶媒中でのコリン塩の多形体スクリーニングを示し、表１９は、非プロトン性溶媒中でのコリン塩の多形体スクリーニングを示す。プロトン性溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ−ブタノール及び水が挙げられる。非プロトン性溶媒としては、アセトン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）及びＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）が挙げられる。沈殿は、室温にて起こった。加熱により透明な溶液は観察されなかった。図１６は、別個の様々な溶媒においてＬＡ１のコリン塩に関して得られたＸＲＰＤパターンを示す。結晶形Ｒを、ｎ−ブタノール中で７０℃にて得、そしてそれは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、図７（及び図１６Ａ）によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。結晶形Ｓを、メタノール中で７０℃にて得、そしてそれは、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用したディフラクトメーターで測定した場合に、図８（図１６Ｌ）によるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする。
表１８．プロトン性溶媒中のコリン塩の多形体スクリーニング

【表18】

表１９．非プロトン性溶媒中のコリン塩の多形体スクリーニング

【表19】

実施例１３．ラットにおけるＬＡ１遊離酸の薬物動態学的特性の解析

【0243】

ＬＡ１の絶対的経口及び腹腔内バイオアベイラビリティを、単回の経口、並びにＩＰ経路（２ｍｇ／ｋｇ）及びＩＶ（１ｍｇ／ｋｇ）投与の後にSprague Dawley（ＳＤ）ラットで評価した。

【0244】

第一の実験では、用量溶液を、２ｍｇ／ｋｇにてＰＢＳ中に調製した３０％ｗ：ｖの２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンで調製した。クリアランス（ｍｌ／分／ｋｇ）及びバイオアベイラビリティ（ｍＭ×時間のＡＵＣ）を表２０にまとめる。改善されたバイオアベイラビリティを必要とした。
表２０．ＰＯ投与に関するＬＡ１遊離酸のＰＫデータ

【表20】

【0245】

第二の実験では、用量溶液を、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中のＴｗｅｅｎ−８０（０．０２％）及び０．５％のメチルセルロースで調製した。ＩＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＩＶ（１ｍｇ／ｋｇ）用量溶液を、５％のＤＭＳＯ及び９５％のＰＥＧ−２００で調製した。ラットＰＫは、表２１に示したように、２０ｍｌ／分／ｋｇの十分なクリアランスを示している。ＰＯ投薬は、計算のためのデータをもたらすような有意な曝露を達成しなかった。ＩＰ投薬は、８２％のバイオアベイラビリティ（３．５ｍＭ×時間）ＰＯ（２ｍｇ／ｋｇ）をもたらした。
表２１．ＰＯ及びＩＰ投与に関するＬＡ１遊離酸のＰＫデータ

【表21】

実施例１４．ラットにおける微粉化ＬＡ１遊離酸の薬物動態学的特性の解析

【0246】

ＰＯ（２ｍｇ／ｋｇ）用量溶液を、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中のＴｗｅｅｎ−８０（０．０２％）及び０．５％のメチルセルロースで調製した。ＩＶ（１ｍｇ／ｋｇ）用量溶液を、５％のＤＭＳＯ及び９５％のＰＥＧ−２００の溶液で調製した。ラットＰＫは、表２２に示したように、２３．４ｍｌ／分／ｋｇの十分なクリアランスを示している。ＰＯ投薬は、２３％のバイオアベイラビリティ（０．７６μＭ×時間）をもたらした。

【0247】

ＬＡ１のＩＶ投与後、ｔ_1/2及びクリアランスは、それぞれ１．１６時間及び１９．７ｍＬ／分／ｋｇであることがわかった。平均分布容積は、２．３９Ｌ／ｋｇであった。ＬＡ１のＩＰ投与後、平均Ｃ_maxは、０．２５時間（ｔ_max）に達する１２８４ｎｇ／ｍＬであった。ｔ_1/2は、０．７８時間であることがわかった。絶対ＩＰバイオアベイラビリティは、８２％であった。
表２２．微粉化ＬＡ１遊離酸のＰＯ投与に関するＰＫデータ

【表22】

実施例１５．ラットにおけるＬＡ１塩の薬物動態学的特性の特性解析

【0248】

ＬＡ１の絶対経口及び腹腔内バイオアベイラビリティを、ＬＡ１、ＬＡ１コリン塩、及びＬＡ１メグルミン塩の単回の経口（口から（per os）、ＰＯ）、腹腔内（ＩＰ）用量（２ｍｇ／ｋｇ）及び静脈内（ＩＶ）（１ｍｇ／ｋｇ）投与後のＳＤラットで評価した。試験を、実施例５に従って調製したコリン塩形態Ｑ及びメグルミン塩形態Ｔを用いて実施した。

【0249】

ＰＫ試験を、内部ＩＡＥＣに承認されたプロトコールＮｏ．ＩＡＥＣ／ＪＤＣ／２０１２／２７に従って実施した。投与の経路は、言い換えれば、ＰＯ（強制飼養）、ＩＰ（ボーラス）及びＩＶ（尾静脈を通じたボーラス）であった。合計４匹の５〜６週齢の雄ＳＤラットを使用した。給餌計画は、１２時間の絶食を含み、且つ、飼料は、用量接種の２時間後に提供し、及び水は任意に提供した。ＰＯ／ＩＰのための採血スケジュールは、０．２５、０．５、１、２、４、８、１０及び２４時であり、ＩＶに関しては、０．１２、０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時であった。ＰＯ用量のために、ミリＱ水中で調製したｔｗｅｅｎ−８０（０．０２％）及び０．５％のメチルセルロースを、ビヒクルとして使用し；ＩＰ及びＩＶ用量のために、５％のＤＭＳＯ及び９５％のＰＥＧ−２００をビヒクルとして使用した。

【0250】

ＬＡ１用量の調製方法：ＰＯ用量において、２．００ｍｇのＬＡ１を、〜３０μＬのＴｗｅｅｎ−８０で濡らせ、乳鉢と乳棒で粉砕し、次に、０．５％のメチルセルロースをゆっくりと加えて、１０．０ｍＬに終量を調整した。ＩＰ用量において、２．０５０ｍｇのＬＡ１を、１００μＬのＤＭＳＯ中に溶解し、ボルテックス処理し、そして最後に、１．９０ｍＬのＰＥＧ−２００を加えた。ＩＶ用量において、２．０１０ｍｇのＬＡ１を、２００μＬのＤＭＳＯ中に溶解し、ボルテックス処理し、そして最後に、３．８０ｍＬのＰＥＧ−２００を加えた。

【0251】

ＬＡ１コリン用量の調製方法：ＰＯ用量において、３．６７０ｍｇのＬＡ１コリン塩を、〜３０μＬのＴｗｅｅｎ−８０で濡らせ、乳鉢と乳棒で粉砕し、次に、０．５％のメチルセルロースをゆっくりと加えて、１３．９０ｍＬに終量を調整した。ＩＰ用量において、４．２８６ｍｇのＬＡ１コリン塩を、１６２μＬのＤＭＳＯ中に溶解し、ボルテックス処理し、そして最後に、３．０７８ｍＬのＰＥＧ−２００を加えた。ＩＶ用量において、２．０２５ｍｇのＬＡ１コリン塩を、１５３μＬのＤＭＳＯ中に溶解し、ボルテックス処理し、そして最後に、２．９０７ｍＬのＰＥＧ−２００を加えた。

【0252】

ＬＡ１メグルミン用量の調製方法：ＰＯ用量において、３．６００ｍｇのＬＡ１メグルミン塩を、〜３０μＬのＴｗｅｅｎ−８０で濡らせ、乳鉢と乳棒で粉砕し、次に、０．５％のメチルセルロースをゆっくりと加えて、１１．７６０ｍＬに終量を調整した。ＩＰ用量において、４．１３４ｍｇのＬＡ１メグルミン塩を、１３５μＬのＤＭＳＯ中に溶解し、ボルテックス処理し、そして最後に、２．５６５ｍＬのＰＥＧ−２００を加えた。ＩＶ用量において、２．０６６ｍｇのＬＡ１メグルミン塩を、１３５μＬのＤＭＳＯ中に溶解し、ボルテックス処理し、そして最後に、２．５６５ｍＬのＰＥＧ−２００を加えた。

【0253】

メタノール中の原液（１７８μｇ／ｍＬ）を、メタノール：水（８０：２０、ｖ／ｖ）を使用して更に希釈して、１０．４〜２０７４５ｎｇ／ｍＬの範囲の希釈標準溶液を得た。

【0254】

ＣＣ／ＱＣサンプルの調製のための方法論：５０μＬのサンプルを、ラベル付きバイアルに等分した。それにＩＳ（１００ｎｇ／ｍＬ；トルブタミド）を含有した２００μＬの１０％のテトラヒドロフランを加え、十分に混合し、５分間ボルテックス処理し、続いて、４℃、１４０００ｒｐｍにて５分間、遠心分離した。上清を分離し、そのうち５μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入した。

【0255】

データ分析：個々の濃度−時間データを、非コンパートメント解析（ＮＣＡ）法によりWinNonlin（バージョン５．３）を使用して分析した。
結果：

【0256】

ラットＰＫは、表２３に示したように、１８ｍｌ／分／ｋｇの十分なクリアランスを示した。ＰＯ投薬は、４１％のバイオアベイラビリティ（１．５ｍＭ×時間）をもたらした。ＩＰ投薬は、８４％のバイオアベイラビリティ（３．２ｍＭ×時間）をもたらした。ＰＯ（２ｍｇ／ｋｇ）用量溶液を、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中のＴｗｅｅｎ−８０（０．０２％）及び０．５％のメチルセルロースで調製した。ＩＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＩＶ（１ｍｇ／ｋｇ）用量溶液を、５％のＤＭＳＯ及び９５％のＰＥＧ−２００で調製した。

【0257】

ＬＡ１コリン塩の結果を表２３に示した。ＬＡ１コリン塩の経口投与後、ＬＡ１の最大血漿中濃度（Ｃ_max：４７７ｎｇ／ｍＬ）は、０．５０時間（ｔ_max）に達成された。ｔ_1/2は、１．５７時間であることがわかった。絶対経口バイオアベイラビリティは、４１％であった。ＬＡ１コリン塩のＩＰ投与後、ＬＡ１の平均Ｃ_maxは、１５９０ｎｇ／ｍＬであり、そしてそれは、０．２５時間（ｔ_max）に達成された。ｔ_1/2は、１．６０時間であることがわかった。絶対ＩＰバイオアベイラビリティは、８４％であった。ＬＡ１コリン塩のＩＶ投与後、ＬＡ１のｔ_1/2及びクリアランスは、それぞれ１．２１時間及び１７．６ｍＬ／分／ｋｇであることがわかった。平均分布容積は、１．７８ｌｉｔ／ｋｇであった。
表２３．ＰＯ及びＩＰ投与に関するＬＡ１コリン塩のＰＫデータ

【表23】

【0258】

ラットＰＫは、表２４に示したように、１８ｍｌ／分／ｋｇの十分なクリアランスを示した。ＬＡ１メグルミン塩のＰＯ投薬は、３７％の優れたバイオアベイラビリティ（１．２ｍＭ×時間）をもたらした。ＬＡ１メグルミン塩の腹腔内（ＩＰ）投与は、１００％超のバイオアベイラビリティを示した（１６７％、５．３ｍＭ×時間）。＞１００％のバイオアベイラビリティに関する可能性のある原因は、腸肝循環である。腸肝循環とは、肝臓から胆汁へ、続いて、小腸に入り、及び腸細胞による再吸収、そして、及び血流に戻る輸送への胆汁酸、ビリルビン、薬剤、又は他の物質の循環を指す。

【0259】

ＬＡ１メグルミン塩の結果を表２４に示した。ＬＡ１メグルミン塩の経口投与後、ＬＡ１の平均Ｃ_max（４６３ｎｇ／ｍＬ）は、０．５０時間（ｔ_max）に達成された。ｔ_1/2は、１．６０時間であることがわかった。絶対経口バイオアベイラビリティは、３７％であった。ＬＡ１メグルミン塩のＩＰ投与後、ＬＡ１の平均Ｃ_maxは、２８６５ｎｇ／ｍＬであり、そしてそれは、０．２５時間（ｔ_max）に達成された。ｔ_1/2は、１．９５時間であることがわかった。平均絶対ＩＰバイオアベイラビリティは、＞１００％であった。ＬＡ１メグルミン塩のＩＶ投与後、ＬＡ１のｔ_1/2及びクリアランスは、それぞれ１．４１時間及び１７．５ｍＬ／分／ｋｇであることがわかった。平均分布容積は、１．８５Ｌ／ｋｇであった。
表２４．ＰＯ及びＩＰ投与に関するＬＡ１メグルミン塩のＰＫデータ

【表24】

【0260】

ＬＡ１コリン塩及びＬＡ１メグルミン塩の両方は、経口投与後に類似したバイオアベイラビリティを示した。ＬＡ１メグルミン塩のＩＰバイオアベイラビリティは、ＬＡ１及びＬＡ１コリン塩のＩＰバイオアベイラビリティより優れていた。ＬＡ１、ＬＡ１コリン塩、及びＬＡ１メグルミン塩は、ＩＶ投与後に類似した薬物動態プロファイルを示した。

【0261】

それぞれ、１、２、及び２ｍｇ／ｋｇの静脈内、腹腔内、及び経口投与後のSprague Dawley（ＳＤ）ラットにおけるＬＡ１、ＬＡ１メグルミン及びＬＡ１コリンの薬物動態を評価した。

【0262】

表２５は、２ｍｇ／ｋｇのＬＡ１、ＬＡ１コリン、及びＬＡ１メグルミンの経口用量後のＳＤラットにおけるＬＡ１の薬物動態パラメーターの比較説明を提供する。図１７は、ＳＤラットへのＬＡ１コリン塩（２ｍｇ／ｋｇ）及びＬＡ１メグルミン塩（２ｍｇ／ｋｇ）の経口投与後に放出されたＬＡ１の濃度対時間プロファイルを示す。
表２５．様々な塩の経口投与に関するＰＫデータの比較

【表25】

【0263】

表２６は、２ｍｇ／ｋｇのＬＡ１、ＬＡ１コリン塩、及びＬＡ１メグルミン塩のＩＰ用量後のＳＤラットにおけるＬＡ１の薬物動態パラメーターの比較説明を提供する。図１８は、ＳＤラットへの、ＬＡ１（２ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与後のＬＡ１、並びにＬＡ１コリン（２ｍｇ／ｋｇ）及びＬＡ１メグルミン（２ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与後に放出されたＬＡ１の濃度対時間プロファイルを示す。
表２６．様々な塩のＩＰ投与に関するＰＫパラメーターの比較

【表26】

【0264】

表２７は、１ｍｇ／ｋｇのＬＡ１、ＬＡ１コリン塩、及びＬＡ１メグルミン塩のＩＶ用量後のＳＤラットにおけるＬＡ１の薬物動態パラメーターの比較説明を提供する。図１９は、ＳＤラットへの、ＬＡ１（１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与後のＬＡ１、並びにＬＡコリン（１ｍｇ／ｋｇ）及びＬＡ１メグルミン（１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与後に放出されたＬＡ１の濃度対時間プロファイルを示す。
表２７．様々な塩のＩＶ投与に関するＰＫパラメーターの比較

【表27】

実施例１６．ラットにおけるＬＡ１製剤の薬物動態学的特性の特性解析

【0265】

投与の経路は、言い換えれば、ＰＯ（強制飼養）及びＩＶ（尾静脈を通じたボーラス）であった。合計４匹の５〜６週齢の雄ＳＤラットを使用した。給餌計画は、１２時間の絶食を含み、且つ、飼料は、用量接種の２時間後に提供し、及び水は任意に提供した。ＰＯのための採血スケジュールは、０．２５、０．５、１、２、４、８、１０及び２４時であり、ＩＶに関しては、０．１２、０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時であった。ＰＯ用量のために、ミリＱ水中で調製したｔｗｅｅｎ−８０（０．０２％）及び０．５％のメチルセルロースを、ビヒクルとして使用し；ＩＶ用量のために、１０％のＤＭＳＯ及び９０％のＰＥＧ−２００をビヒクルとして使用した。

【0266】

用量の調製：ＰＯ用量において、２．５８２ｍｇのＬＡ１を、〜３０μＬのＴｗｅｅｎ−８０で濡らせ、乳鉢と乳棒で粉砕し、次に、０．５％のメチルセルロースをゆっくりと加えて、１２．９１０ｍＬに終量を調整した。ＩＶ用量において、２．１９６ｍｇのＬＡ１を、４４０μＬのＤＭＳＯ中に溶解し、ボルテックス処理し、そして最後に、３．９５２ｍＬのＰＥＧ−２００を加えた。
結果：

【0267】

表２８は、２ｍｇ／ｋｇのＬＡ１コリン及びＬＡ１メグルミンの経口用量後のＳＤラットにおける微粉化ＬＡ１の薬物動態パラメーターの比較説明を示す。
表２８．ＬＡ１製剤の経口投与に関するＰＫデータの比較

【表28】

【0268】

表２９は、１ｍｇ／ｋｇのＬＡ１コリン及びＬＡ１メグルミンのＩＶ用量後のＳＤラットにおける微粉化ＬＡ１の薬物動態パラメーターの比較説明を示す。
表２９．ＬＡ１製剤のＩＶ投与に関するＰＫデータの比較

【表29】

【0269】

ＬＡ１の絶対経口腹腔内バイオアベイラビリティを、微粉化ＬＡ１の単回の経口ＩＶ（１ｍｇ／ｋｇ）投与後にＳＤラットにおいて評価した。微粉化ＬＡ１の経口投与後、ＬＡ１の最大血漿中濃度（Ｃ_max：１２３ｎｇ／ｍＬ）は、０．８８時間（ｔ_max）に達成された。ｔ_1/2は、１．１０時間であることがわかり、そして、絶対経口バイオアベイラビリティは２３％であった。微粉化ＬＡ１のＩＶ投与後、ｔ_1/2、及びクリアランスは、それぞれ１．３６時間及び２３．４ｍＬ／分／ｋｇであることがわかった。また、平均分布容積は、２．６３ｌｉｔ／ｋｇであった。

【0270】

微粉化ＬＡ１は、経口投与後のＬＡ１と比較したときに、より良好な全身曝露を示すと結論づけられる。しかしながら、ＬＡ１及び微粉化ＬＡ１は、ＩＶ投与後に類似した薬物動態プロファイルを示した。
実施例１７．イヌにおけるＬＡ１遊離酸の薬物動態学的特性の特性解析

【0271】

イヌＰＫは、表３０に示したように、２．１ｍｌ／分／ｋｇの優れたクリアランスを示している。経口服用は、５０％の優れたバイオアベイラビリティをもたらした（６．１ｍＭ×時間）。微粉化ＬＡ１のＰＯ（２ｍｇ／ｋｇ）用量溶液を、水中の０．１％のＴｗｅｅｎ−８０ ０．５％（ｗ／ｖ）及びメチルセルロースで調製した。ＩＶ（０．５ｍｇ／ｋｇ）用量溶液を、５％のＤＭＳＯ、９０％のＰＥＧ−２００、及び５％のエタノールで調製した。
表３０．イヌにおけるＬＡ１遊離酸の経口投与に関するＰＫデータ

【表30】

【0272】

試験の目的は、ビーグル犬においてＬＡ１（微粉化粉末）の前臨床薬物動態プロファイルを調査することであった。血漿濃度対時間曲線を描くため及び相対的薬物動態パラメーターを解析するために、ビーグル犬におけるＬＡ１のＰＫ特性、つまり、バイオアベイラビリティ、半減期（ｔ_1/2）、分布容積、Ｃ_max、Ｔ_max、ＡＵＣ、及び消失速度定数、に関するデータを得た。

【0273】

ＬＡ１は、実験室スケールのボールミルを使用して微粉化される粗粒材料であった。そのプロセスで、ＬＡ１の粒度は、〜２０ミクロン（マイクロメートル）まで下げた。微粉化ＬＡ１を回収し、計量し、そして、ガラス容器内で室温にて保存した。静脈内薬物投与のために、イヌにおける投薬に関するＬＡ１賦形剤適合性アッセイを実施した。試験結果から、製剤混合物：５％のＤＭＳＯ＋９０％のポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ−４００）＋５％のエタノール、を使用した透明な溶液を得た。

【0274】

試験品ＬＡ１の微粉化：ＬＡ１の粒度は、実験室スケールのボールミルを使用して〜２０ミクロン（マイクロメートル）まで下げた。要するに、既知量のＬＡ１を、ステンレスでできた円筒のキャップ付きコンテナに入れ、続いて、ステンレス製のボールを追加した。ボールミルを、合計６０分間（６サイクル×１０分間）、その軸上で回転させた。微粉化ＬＡ１を、回収し、計量し、室温にてガラスびん内に保存した。

【0275】

試験系：体重１０〜１２ｋｇ（１０カ月齢）の雄の健常なビーグル犬を、試験に使用した。０２頭のイヌを経口的及び静脈内投与のための試験に使用するクロスオーバーデザインを、実験に採用した。両方の動物を、ペレット飼料を保持するためのホッパー及び別個の水用ホッパーを備えたステンレス製のケージ内に収容した。温度及び湿度は、それぞれ２２±３℃及び４０〜７０％に維持した。照射は、一連の１２時間の点灯及び１２時間の消灯のサイクルを与えるように制御した。すべての動物を、投薬前の少なくとも５日間、実験条件に順応させた。すべての動物に、処置前１０〜１２時間及び薬物投与後４時間を除いて、Ｐｅｄｉｇｒｅｅ（商標）標準ペレット飼料を提供した。水は任意に提供した。

【0276】

製剤及び薬物投与：厳密に９０ｍｇの試験品ＬＡ１（微粉化粉末）を、計量し、乳鉢に移し、そして、乳棒で軽く粉砕した。次に、均一な懸濁液が得られるまで、水中のビヒクル［０．１％のＴｗｅｅｎ−８０を伴った０．５％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロース］少量を、連続して粉砕しながら、ゆっくり加えた。次に、内容物をメスシリンダに移した。試験品をメスシリンダに完全に移すまで乳鉢をすすいだ。次に、ビヒクルで終量を２２５ｍＬに調整して、０．４ｍｇ／ｍＬの所望の濃度を有する均一な懸濁液を得た。投与製剤を、５ｍＬ／ｋｇを超えない用量体積にて経口強制飼養によって与えた。

【0277】

静注薬物製剤：イヌ全血を使用した溶血反応アッセイを、静脈内投与のための賦形剤の選択のために赤血球の損害を評価するために利用した。得られた結果に基づいて、記載した手順を採用した。厳密に２２．５ｍｇの試験品（微粉化粉末）を、目盛付きのチューブ内に計量した。２．２５ｍＬのＤＭＳＯを滴下して加え、ボルテックス処理によって混合した。次に、４０．５０ｍＬのポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ−４００）を、２〜３個に小分けして加え、断続的にボルテックス処理した。次に、２．２５ｍＬのエタノールを滴下して加え、透明な溶液を得るまでボルテックス処理する。製剤を５分間の超音波処理にかけた。用量投与を、注入ポンプを使用して実施し、且つ、０．３３ｍＬ／ｋｇ／分の速度で注入した。用量体積は、１ｍｌ／ｋｇを超えなかった。

【0278】

サンプル収集：連続方法を、血液サンプリングに使用した。血液サンプルを、研究設計（７）項で言及したように収集した。血液サンプル（〜１．５ｍＬ）を、抗凝血物質として２％ ｗ／ｖのＫ₂ＥＤＴＡ溶液を入れた、標識チューブ内に伏在静脈から収集した。全血は、生物分析に供されるまで−２０℃にて保存した。

【0279】

抽出手法：全血から分離した血漿を、生物分析に使用した。検体ＬＡ１を、アセトニトリル沈殿法によって血漿から抽出した。両方の層からの上清を、混合し、１０分間ボルテックス処理した。すべてのサンプル（ＣＣ、ＱＣを含む）を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ装置に注入した。

【0280】

データ分析：上記の血漿中濃度から、ＰＫ解法を使用して、薬物動態分析を実施した。
結果：

【0281】

薬物動態データは、用量後４時間で起こるピーク濃度を有するＬＡ１吸収が中程度であることを示唆した。吸収相は、そのピーク濃度に達するまでＬＡ１レベルの安定した蓄積を示した。ピーク濃度が、６８５．４７ｎｇ／ｍＬであることがわかった。ＬＡ１排出相は、ピーク濃度が達成された直後に安定した減少を示した。ＬＡ１の経口半減期は、約２時間であり、そして、ＡＵＣ_0-12は、２５７２．２４時間×ｎｇ／ｍＬである。ＬＡ１の分布容積は０．３９ｍｌ／時間であり、０．７２ｍｌのクリアランスを伴った。ＬＡ１（微粉化粉末）の絶対経口バイオアベイラビリティは、５０．６２％（０．５ｍｇのｉ．ｖ．対２ｍｇの経口）であることがわかった。

【0282】

血漿中の試験品濃度は、両方の処置動物で検出した。ＬＡ１の薬物動態プロファイルは、２時間の半減期、Ｔ_max＝４時間、Ｃ_max＝６８５．４７ｎｇ／ｍＬ、及びＡＵＣ_0-12＝２５７２．２４時間×ｎｇ／ｍＬを示した。表３１は、ｉ．ｖ．用量におけるｎｇ／ｍＬ単位のＬＡ１（微粉化粉末）の血漿中濃度を提供する。
表３１．異なった時間間隔でのＩＶ投与に関する微粉化ＬＡ１の血漿中濃度

【表31】

【0283】

表３２は、経口用量におけるｎｇ／ｍＬ単位のＬＡ１（微粉化粉末）の血漿中濃度を提供する。
表３２．異なった時間間隔での経口投与に関する微粉化ＬＡ１の血漿中濃度

【表32】

【0284】

表３３は、ビーグル犬におけるまとめたＬＡ１（微粉化粉末）に関する薬物動態パラメーターを提供する。
表３３．ビーグル犬のＩＶ及び経口ＰＫパラメーターの比較

【表33】

【0285】

表３４は、ビーグル犬における、０．５ｍｇ／ｋｇのＢ．ｗｔの静脈内投与でのＬＡ１（微粉化粉末）の個々の動物薬物動態パラメーターを提供する。図２０は、１ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量でのビーグル犬におけるＬＡ１のＰＫプロファイルのグラフである。
表３４．ＩＶ投与に関する様々なビーグル犬の間でのＰＫパラメーターの比較

【表34】

【0286】

表３５は、ビーグル犬における、２ｍｇ／ｋｇのＢ．ｗｔの経口処置でのＬＡ１（微粉化粉末）の個々の動物薬物動態パラメーターを提供する。図２１は、２ｍｇ／ｋｇの経口投薬でのビーグル犬におけるＬＡ１のＰＫプロファイルのグラフを示す。
表３５．経口投与に関する様々なビーグル犬の間でのＰＫパラメーターの比較

【表35】

実施例１８．イヌにおけるＬＡ１コリン塩の薬物動態学的特性の特性解析

【0287】

試験系：体重１０〜１２ｋｇ（１０カ月齢）の雄の健常なビーグル犬を、試験に使用した。０３頭のイヌを経口的及び静脈内投与のための試験に使用するクロスオーバーデザインを、実験に採用した。動物を、ペレット飼料を保持するためのホッパー及び別個の水用ホッパーを備えたステンレス製のケージ内に収容した。温度及び湿度は、それぞれ２３±５℃及び３０〜７０％に維持した。照射は、一連の１２時間の点灯及び１２時間の消灯のサイクルを与えるように制御した。すべての動物を、投薬前の少なくとも５日間、実験条件に順応させた。すべての動物に、処置前１０〜１２時間及び薬物投与後４時間を除いて、Ｐｅｄｉｇｒｅｅ（商標）標準ペレット飼料を提供した。水は任意に提供した。

【0288】

製剤と薬物投与：２５１．０２ｍｇの試験品を清潔な乳鉢に移した。試験品は、乳棒を使用して均一に粉末化した。１．２３５ｍｌのＴｗｅｅｎ８０を加え、そして、材料を混合した。水中の０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロースを少量加え、そして、その混合物は粉砕した。０．５％のメチルセルロースを加え、１９０ｍｌの終量にした。最後に、上記製剤をラベル付きビーカーに移し、５分間超音波処理した。磁気スターラー上に置くことによって、懸濁液を撹拌下で投与した。

【0289】

ＬＡ−１コリンの用量製剤を、給餌用強制飼養チューブを使用した経口強制飼養によって投与した。用量製剤（５ｍｌ／ｋｇ体重）の必要な体積を、目盛付きシリンジ内で作製した。動きを制限するために、別の人の助けを借りて、イヌを適切に押さえつけた。栄養チューブを、食道に向かって胃まで、頬と歯の間の空間を通して口の中にゆっくり挿入した。チューブの適切な位置を、水の入ったコンテナの中にチューブの外側の末端を浸し、気泡を探すことによって、確認した。気泡の不存在で、胃内へのチューブの配置を確認した。ＬＡ−１コリン懸濁液の必要な用量体積を、栄養チューブを通してゆっくり投与した。チューブが空になったのを保証するために、終わりに空気を通した。チューブをゆっくり取り出し、捨てた。

【0290】

静注薬物製剤：厳密に計量した２７．４９ｍｇの試験品を、清潔なチューブ内に移した。０．４１７ｍＬの体積のＤＭＳＯを加え、試験物が完全に溶解するまで混合した。０．４１７ｍＬの体積のＳｏｌｕｔｏｌ：アルコール／（１：１、ｖ／ｖ）を加え、混合し、これに、７．４９６ｍＬの通常の生理的食塩水を加え、そして、ボルテックス処理した。最終的に、上記製剤を投薬に使用した。

【0291】

ＬＡ−１コリンの用量製剤（０．２ｍｌ／ｋｇの重量）の必要な体積を、目盛付きシリンジ内で作製した。投薬前に、シリンジから気泡を取り除いた。イヌを立位に押さえつけた。橈側皮静脈の注射部位の上部を圧迫し、２２Ｇのサイズのバタフライ静脈カテーテルの針を静脈にゆっくり挿入した。血液がカテーテル端のチューブに達した時点で、それをシリンジに接続した。すぐさま、用量製剤をゆっくり注射した。投与終了時に、約０．５ｍＬの通常の生理的食塩水を、カテーテルを介して注射し、必要な用量体積が投与されるのを保証した。最後に、針を取り除いた。

【0292】

サンプル収集：以下の時点０．２５、０．５、１、１．５、２、３、５、８、１０、及び２４時間に関して、各イヌからの投与後の〜１．５ｍｌの血液サンプルを、Ｋ₂ＥＤＴＡ含有ラベル付きヴァキュテイナ遠心分離チューブ内に頚静脈から採取した。血漿は、サンプリングの０．５時間以内に冷却（２〜４℃）下で１０分間、２５００ｇにて血液サンプルを遠心分離することによって得られた。得られた血漿サンプルを、ラベル付きマイクロ遠心チューブ（約〜３００μｌ）内に移し、−７０±１０℃以下にて保存した。サンプル標識としては、例えば研究番号、試験品コードや用量群、及び／又はサンプリング日、動物番号、時点などの詳細が挙げられる。

【0293】

抽出手法：全血から分離した血漿を、生物分析に使用した。検体ＬＡ１を、アセトニトリル沈殿法によって血漿から抽出した。両方の層からの上清を、混合し、１０分間ボルテックス処理した。すべてのサンプル（ＣＣ、ＱＣを含む）を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ装置に注入した。

【0294】

データ分析：上記の血漿中濃度から、ＰＫ解法を使用して、薬物動態分析を実施した。

【0295】

コリン塩のイヌＰＫデータを表３６にまとめる。用量後１．５時間で生じるＬＡ１コリン塩のピーク濃度を示す。吸収相は、そのピーク濃度に達するまでＬＡ１レベルの安定した蓄積を示した。ピーク濃度が、２０６８ｎｇ／ｍＬであることがわかった。ＬＡ１排出相は、ピーク濃度が達成された直後に安定した減少を示した。ＬＡ１の経口半減期は、約３．４時間であり、そして、ＡＵＣ_0-12は、９１８４時間×ｎｇ／ｍＬである。ＬＡ１の分布容積は０．８３Ｌ／ｋｇであり、３．９２ｍｌ／分／ｋｇのクリアランスを伴った。ＬＡ１コリン塩の絶対経口バイオアベイラビリティは、４３．４％（０．５ｍｇのｉ．ｖ．対５ｍｇの経口）であることがわかった。
表３６．雄ビーグル犬におけるＬＡ１コリン塩の投与に関するＰＫデータ

【表36】

【0296】

表３７は、ｉ．ｖ．投与から生じるｎｇ／ｍＬ単位のＬＡ１コリン塩の血漿中濃度を示す。
表３７．異なった時間間隔でのＩＶ投与に関するＬＡ１コリン塩の血漿中濃度

【表37】

【0297】

表３８は、経口投与から生じるｎｇ／ｍＬ単位のＬＡ１コリン塩の血漿中濃度を示す。
表３８．異なった時間間隔での経口投与に関するＬＡ１コリン塩の血漿中濃度

【表38】

【0298】

表３３は、ビーグル犬におけるＬＡ１コリン塩に関する薬物動態パラメーターをまとめたものを提供する。
表３９．ビーグル犬におけるＩＶ及び経口ＰＫパラメーターの比較

【表39】

【0299】

図２２は、０．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量及び５ｍｇ／ｋｇの経口（ＰＯ）用量でのＬＡ１に関するビーグル犬におけるＰＫプロファイルのグラフを示す。
実施例１９．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるマウス黒色腫Ｂ１６Ｆ１０同種移植片を処置するためのＬＡ１のインビボにおける有効性の評価

【0300】

マウス黒色腫腫瘍細胞株（Ｂ１６−Ｆ１０）を、皮下腫瘍モデルを開発するのに使用した。０．１×１０⁶個の細胞を、動物の右側腹部の皮下に注射した。腫瘍が〜４５ｍｍ³に達したとき、動物を、すべての群の平均腫瘍体積が同じくなるように、様々な群（すべての群が動物１０匹）に無作為化した。動物を、無作為化の日（１日目）から処置した。腫瘍寸法（長さ及び直径）を、試験終了日を含めて、１週間に３回、すべての動物について計測した。加えて、研究期間を通じて、マウスを、臨床症状について毎日観察した。１５日目に、曝露を評価するためにＴ_max（０．５時間）にてすべてのマウスから、腫瘍及び血液サンプルを採取した。血液サンプルの一部を、血液分析及び臨床化学のために使用した。また、肺、心臓、肝臓、脾臓、及び腎臓も収集し、組織病理学分析を実施した。

【0301】

腫瘍細胞：Ｂ１６−Ｆ１０細胞を、１０％のＦＢＳ及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンを補ったＤＭＥＭ細胞培地中で培養した。細胞を、ＣＯ２の不存在下、３７℃にて維持した。細胞が７５〜８０％コンフルエントに達したとき、それらをトリプシン処置によって収集し、洗浄し、カウントした。次に、細胞を、１０万個の細胞／７５μｌの濃度にて血清不含培地中に再懸濁した。

【0302】

腫瘍細胞の接種：細胞を、黒色マウスの背側面の皮下に接種した。接種前に、体毛を刈り整え、そして、注射部位（右背側）の皮膚をアルコールで消毒した。血清不含培地（１０万個の細胞／７５μｌ）中の細胞を、３：１の比でＭａｔｒｉｇｅｌと混合し、そして、１００μｌの全容積を、２６Ｇの針に取り付けた１ｍＬのＢＤシリンジを用いて各動物に注射した。

【0303】

無作為化：腫瘍を、接種の７日目前後には触知できた。腫瘍体積が約４５ｍｍ³に達した時点で、動物を、各群の平均腫瘍体積が同じくなるように、様々な群（すべての群が動物１０匹）に無作為化した。

【表40】

【0304】

製剤：ＬＡ１を、５％のＤＭＳＯ、５％のＳｏｌｕｔｏｌ：エタノール（１：１）、２０％のＴｗｅｅｎ２０、及び７０％のＮ−生理的食塩水を含有する溶液と組み合わせた。ＬＡ１メグルミン塩を、５％のＤＭＳＯ、５％のＳｏｌｕｔｏｌ：エタノール（１：１）、及び９０％のＮ−生理的食塩水を含有する溶液と組み合わせた。

【0305】

統計計算：すべての統計計算を、Prism5.0（GraphPad Software Inc、USA）を使用して実施した。試験中及び試験終了時の腫瘍サイズ測定値の比較を、一元配置分散分析、続いてＤｕｎｎｅｔｔ多重比較検定を使用して、処置群とそれぞれのビヒクル対照群との間でおこなった。０．０５未満のｐ値を、有意とみなした。

【0306】

ＬＡ１の曝露：試験終了時点で、ＬＡ１は、それぞれ血液及び腫瘍において３８３±４５０ｎｇ／ｍｌ及び２４．７±１７．６ｎｇ／ｍｌの曝露を示した。同様に、３及び３０ｍｇ／ｋｇのＬＡ１メグルミン塩は、それぞれ血漿中で１５１９±６１３ｎｇ／ｍｌ及び３７４４±１７５５ｎｇ／ｍｌ、そして、腫瘍において１０１７±５１０ｎｇ／ｍｌ及び１６５９±６１１ｎｇ／ｍｌの曝露を示した。

【0307】

組織病理：病理組織学的試験を、肝臓、腎臓、肺、脾臓、心臓、及び胃のサンプルを使用して実施した。肝臓組織の検鏡は、対照群、ＬＡ１塩群、α−ＰＤ１群、α−ＣＴＬＡ４群、及びαＣＴＬＡ４／ＬＡ１塩群のそれぞれにおいて１匹の動物の肝細胞壊死を調節する最小量を明らかにした。腫瘍転移を、対照群、ＬＡ１塩群及びα−ＰＤ１群のそれぞれにおいて１匹の動物の肺組織で観察した。

【0308】

１５日間、毎日３ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇを投与したとき、ＬＡ１メグルミン塩を用いた処置は、溶媒対照と比較して、マウス黒色腫Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍の５８〜６６％の増殖阻害をもたらした。単独で第一の免疫チェックポイント阻害剤（α−ＣＴＬＡ４抗体、三日毎に１００μｇ／マウス）を用いた処置は、約４２％の増殖阻害をもたらした。α−ＣＴＬＡ４抗体及びＬＡ１を使用した複合療法は、単独のα−ＣＴＬＡ４と比較して、更なる腫瘍増殖阻害をもたらした。しかしながら、第二の免疫チェックポイント阻害剤（α−ＰＤ１抗体）及びＬＡ１又はＬＡ１メグルミン塩を使用した複合療法は、単独で使用したいずれかの作用物質よりも強い腫瘍増殖阻害をもたらした。図２３を参照。α−ＰＤ１抗体を用いた処置は、約６４％の腫瘍阻害を示したが、組み合わせ物は、これらのアッセイにおいて約８１％の腫瘍阻害をもたらした。
実施例２０．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるマウス黒色腫Ｂ１６Ｆ１０同種移植片を処置するためのＬＡ１のインビボにおける有効性の評価

【0309】

マウスに、先に記載したとおり、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を接種した。腫瘍体積が約４５ｍｍ³に達した時点で、動物を、各群の平均腫瘍体積が同じくなるように、様々な群（すべての群が動物１０匹）に無作為化した。

【表41】

【0310】

製剤：ＬＡ１を、５％のＤＭＳＯ、５％のＳｏｌｕｔｏｌ：エタノール（１：１）、２０％のＴｗｅｅｎ２０、及び７０％のＮ−生理的食塩水を含有する溶液と組み合わせた。ＬＡ１コリン塩（ｎ−ブタノールからの再結晶化；形態Ｒ）を、５％のＤＭＳＯ、５％のＳｏｌｕｔｏｌ：エタノール（１：１）、及び９０％のＮ−生理的食塩水を含有する溶液と組み合わせた。

【0311】

投与：ＬＡ１コリン塩、抗ＰＤ１抗体、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を、以下に示すように投与した。

【表42】

【0312】

ＬＡ１の曝露：試験終了時で、ＬＡ１遊離酸の経口投与は、血液及び腫瘍における量的制限を下回る曝露をもたらした。経口的に３、１０、３０、及び１００ｍｇ／ｋｇで投与されたＬＡ１コリン塩は、血漿中で３１４±７７．７ｎｇ／ｍｌ、９９６±４０１ｎｇ／ｍｌ、３５１８±１４８３ｎｇ／ｍｌ、及び２１，８２７±５６２８ｎｇ／ｍｌの曝露をもたらした。３、１０、３０、及び１００ｍｇ／ｋｇの用量での経口的なコリン塩の投与は、腫瘍組織において、それぞれ１１８±８３．１ｎｇ／ｍｌ、２５４±１４６ｎｇ／ｍｌ、８５５±３１２ｎｇ／ｍｌ、及び２０９３±１９９７ｎｇ／ｍｌの腫瘍濃度をもたらした。

【0313】

ＬＡ１コリン塩は、用量依存性様式で腫瘍体積を減少させた。図２４を参照。ＬＡ１コリン塩を用いた処置は、３〜１００ｍｇ／ｋｇにて投与したときに、溶媒対照と比較して、約４３〜６８％のマウス黒色腫Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍の増殖阻害をもたらした。単独で第一の免疫チェックポイント阻害剤（α−ＣＴＬＡ４抗体）を用いた処置は、約５３％の増殖阻害をもたらした。α−ＣＴＬＡ４抗体及びＬＡ１コリン塩（３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）を使用した複合療法は、単独のα−ＣＴＬＡ４と比較して、それぞれ６０％及び６７％の更なる腫瘍増殖阻害をもたらした。図２５を参照。

【0314】

第二の免疫チェックポイント阻害剤（α−ＰＤ１抗体）を使用した処置は、約５６％の腫瘍抑制をもたらした。
α−ＰＤ１抗体及びＬＡ１コリン塩（３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）の複合療法は、単独のα−ＰＤ１抗体と比較して、それぞれ６６％及び６８％の更なる腫瘍増殖阻害をもたらした。図２６を参照。

【0315】

本明細書中に記載した実施例及び実施形態は、説明を目的としただけのものであり、そして、その観点から様々な修飾又は変更が当業者に対して示唆され、且つ、本出願の要旨及び権限の範囲内、並びに添付の請求項の範囲内に含まれるべきであることは理解される。本明細書中に引用したすべての公報、特許、特許出願、ウェブサイト、及びデータベースは、参照によってあらゆる目的のためにその全体が援用される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【国際調査報告】