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特表2019-504103ＴＬＲ７アゴニストのトリフルオロ酢酸塩及びその結晶形Ｂ、調製方法、並びに使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】特表2019-504103(P2019-504103A)
(43)【公表日】2019年2月14日
(54)【発明の名称】ＴＬＲ７アゴニストのトリフルオロ酢酸塩及びその結晶形Ｂ、調製方法、並びに使用
(51)【国際特許分類】
C07D 487/04 20060101AFI20190118BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20190118BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20190118BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20190118BHJP
【ＦＩ】
C07D487/04 140
C07D487/04CSP
A61P31/12
A61P43/00 111
A61K31/519
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
【全頁数】24
(21)【出願番号】特願2018-540797(P2018-540797)
(86)(22)【出願日】2017年2月4日
(85)【翻訳文提出日】2018年9月26日
(86)【国際出願番号】CN2017072894
(87)【国際公開番号】WO2017133687
(87)【国際公開日】20170810
(31)【優先権主張番号】201610081899.3
(32)【優先日】2016年2月5日
(33)【優先権主張国】CN
(81)【指定国】
AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ
(71)【出願人】
【識別番号】516089784
【氏名又は名称】チア タイ ティエンチン ファーマシューティカル グループ カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＣＨＩＡ ＴＡＩ ＴＩＡＮＱＩＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＧＲＯＵＰ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】特許業務法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】ディン，ツァオジョン
(72)【発明者】
【氏名】スン，フェイ
(72)【発明者】
【氏名】フゥー，インフゥー
(72)【発明者】
【氏名】シュウ，イーロン
(72)【発明者】
【氏名】ワン，チェン
(72)【発明者】
【氏名】ジャオ，ルイ
(72)【発明者】
【氏名】ヤン，リン
【テーマコード（参考）】
4C050
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C050AA01
4C050BB04
4C050CC08
4C050EE03
4C050FF05
4C050GG04
4C050HH04
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB05
4C086GA14
4C086GA15
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA17
4C086MA21
4C086MA23
4C086MA28
4C086MA35
4C086MA37
4C086MA52
4C086MA56
4C086MA57
4C086MA58
4C086MA59
4C086MA60
4C086MA63
4C086NA14
4C086ZB33
4C086ZC41
(57)【要約】
本発明は、ＴＬＲ７アゴニスト ２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン（式Ｉ）のトリフルオロ酢酸塩、該トリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂ、該トリフルオロ酢酸塩及び結晶形Ｂを調製するための方法、並びに該トリフルオロ酢酸塩及び結晶形Ｂの使用に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉ：
で示される化合物のトリフルオロ酢酸塩。
【化1】
で示される化合物のトリフルオロ酢酸塩。
【請求項2】
式Ｉで示される化合物対トリフルオロ酢酸のモル比が、１：０．５〜２、好ましくは１：１であることを特徴とする、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩。
【請求項3】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１４．０°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．５°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、式Ｉ：
で示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂ。
【化2】
で示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂ。
【請求項4】
ＤＳＣにより特徴付けられる場合、初期温度が１７１．４℃±５℃であり、かつピーク温度が１７３．４℃±５℃であることを特徴とする、請求項３に記載の結晶形Ｂ。
【請求項5】
請求項３又は４に記載の結晶形Ｂを含む結晶組成物であって、該結晶組成物の重量に基づいて、結晶形Ｂが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であることを特徴とする、結晶組成物。
【請求項6】
有効量の、請求項１若しくは２に記載の式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩、請求項３若しくは４に記載の結晶形Ｂ、請求項５に記載の結晶組成物又はそれらの組合せを含む、医薬組成物。
【請求項7】
Ｔｏｌｌ様受容体７関連疾患（好ましくは、疾患は、ウイルス感染症である）を処置するための医薬を製造するための、請求項１若しくは２に記載の式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩、請求項３若しくは４に記載の結晶形Ｂ、請求項５に記載の結晶組成物又は請求項６に記載の医薬組成物の使用。
【請求項8】
以下の工程：
１）結晶化溶媒に式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩を溶解すること；
２）結晶化のために冷却して、洗浄し、そして、乾燥させて、結晶形Ｂを得ること
を含む、請求項３又は４に記載の結晶形Ｂを調製するためのプロセス。
１）結晶化溶媒に式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩を溶解すること；
２）結晶化のために冷却して、洗浄し、そして、乾燥させて、結晶形Ｂを得ること
を含む、請求項３又は４に記載の結晶形Ｂを調製するためのプロセス。
【請求項9】
結晶化溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、第３級ブタノール、アセトン、酢酸エチル、水及びそれらの混合溶媒からなる群より選択され；好ましくはエタノールであることを特徴とする、請求項８に記載の調製プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬化学の分野に関し、特に、ＴＬＲ７アゴニスト（２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン）のトリフルオロ酢酸塩、調製プロセス、それを含む医薬組成物及びその使用に関する。本発明はまた、該塩の結晶形Ｂ、調製プロセス、該結晶形Ｂを含む結晶組成物、該結晶形Ｂ又は結晶組成物を含む医薬組成物、及びその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
背景Ｔｏｌｌ様受容体は、種々の免疫細胞により発現され、高度に保存された構造モチーフ：微生物病原体により発現される病原体関連分子パターン（Pathogen Associated Molecular Pattern）（ＰＡＭＰ）又は死細胞により放出される損傷関連分子パターン（Damage Associated Molecular Patterns）（ＤＡＭＰ）を認識する。ＰＡＭＰ又はＤＡＭＰは、Ｔｏｌｌ様受容体を刺激して、ＡＰ−１、ＮＦ−κＢ及びインターフェロン調節因子のような転写因子の活性化を誘導するシグナルカスケードを誘発する（パルス応答機能）。これが、インターフェロン類、炎症促進性サイトカイン類及びエフェクターサイトカイン類の産生を含む種々の細胞応答をもたらし、それにより、免疫反応が生じる。これまでに、１３種類のＴｏｌｌ様受容体が哺乳動物において発見されている。Ｔｏｌｌ様受容体１、２、４、５及び６は、主として細胞表面上で発現され、一方、Ｔｏｌｌ様受容体３、７、８及び９は、エンドソームにおいて発現される。異なるＴｏｌｌ様受容体は、異なる病原体由来のリガンドを認識する。Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）は、主として形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）により発現され、リガンドを介して認識されて、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）の分泌を誘導する。Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）及びＴｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）は、高度に相同性があり、よって、ＴＬＲ７のリガンドは、多くの場合ＴＬＲ８のリガンドでもある。ＴＬＲ８刺激は、主として腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のようなサイトカイン類及びケモアトラクタントの産生を誘導する。インターフェロンαは、慢性Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎を処置するための医薬のうちの１つであり、一方、ＴＮＦ−αは、炎症促進性サイトカインであり、その過剰分泌は重度の副作用をもたらす。イミキモド（imiquimod）（非特許文献１）、レシキモド（resiquimod）（非特許文献２）、ＧＳ−９６２０（非特許文献３）のような、幾つかのＴＬＲ７アゴニストが報告されている。それにもかかわらず、より良好な選択性、活性及び安全性を有する新規なＴＬＲ７アゴニストを手にすることが望ましい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】British Journal of Dermatology, 2003; 149 (Suppl. 66): 5-8
【非特許文献2】Antiviral Research, 64, (2004), 79-83
【非特許文献3】Gastroenterology, (2013), 144(7), 1508-1517
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
中国特許出願第２０１４１０４０５１３６．０号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）は、低分子、即ち、２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン及びその調製プロセスを開示しており、これは下記の構造を有する：【化1】
【課題を解決するための手段】
【0005】
要約ある態様において、式Ｉ：
【化2】
で示される化合物のトリフルオロ酢酸塩が提供される。
【0006】
別の態様において、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１４．０°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．５°±０．２°に回折ピークを有するＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンによって特徴付けられる、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂが提供される。
【0007】
別の態様において、有効量の、本発明による式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩、結晶形Ｂ又は結晶組成物を含む、医薬組成物が提供される。医薬組成物は更に、薬学的に許容し得る担体、賦形剤及び／又は媒体を更に場合により含むことができる。
【0008】
別の態様において、以下の工程：１）結晶化溶媒に式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩を溶解する（好ましくは、溶解を促進するために加熱する）こと；及び
２）結晶化のために冷却して、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｂを得ること
を含む、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂを調製するためのプロセスが提供される。
【0009】
更なる態様において、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を処置又は予防するための方法であって、それを必要とする被験体に有効量の本発明による式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩、その結晶形Ｂ若しくは結晶組成物又は本発明による医薬組成物を投与することを含む、方法が提供される。好ましくは、疾患は、ウイルス感染症である。
【0010】
更なる態様において、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を処置又は予防するための医薬を製造するための、本発明による式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩、その結晶形Ｂ若しくは結晶組成物又は本発明による医薬組成物の使用もまた提供される。好ましくは、該疾患は、ウイルス感染症である。
【0011】
更に別の態様において、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患の処置又は予防において使用するための、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩、その結晶形Ｂ若しくは結晶組成物又は本発明による医薬組成物が提供される。好ましくは、疾患は、ウイルス感染症である。
【0012】
本発明の一実施態様において、ウイルス感染症は、肝炎ウイルス感染症（特に、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルス感染症）である。
【発明を実施するための形態】
【0014】
詳細な説明一般的な定義及び用語
別段の記載がない限り、本明細書中に使用される用語及び語句は、以下の意味を有する。具体的な用語又は語句が明確に定義されていない場合、それを不明確又は定義されていないと考慮すべきではない。それは、一般的な意味で理解されるべきである。本明細書中に使用される商品名は、対応する製品又は活性成分を指す。
【0015】
そうではないと具体的に定義されない限り、割合（百分率を含む）又は部分は、本明細書中の重量に基づいて計算される。
【0016】
可変数値と共に使用される場合、「およそ」又は「約」という用語は、通常、変数の値、及び実験誤差内（例えば、平均の９５％信頼区間内）若しくは具体的な値の±１０％内の、又はそれより広い範囲の変数の全ての値を指す。
【0017】
「含む（comprise）」又はその同義語である「含有する（contain）」、「含有する（include）」、「有する」などという表現は、非限定的（open-ended）なものであり、記載のない任意の要素、工程又は成分を除外するものではない。「〜からなる（consist of）」という表現は、記載のない任意の要素、工程又は成分を除外する。「実質的に〜からなる」という表現は、クレームされる主題の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を与えない、オプションの要素、工程又は構成要素と一緒になった、所与の範囲内の具体的な要素、工程又は成分を指す。当然のことながら、「含む」という表現は、「実質的に〜からなる」及び「〜からなる」という表現を包含する。
【0018】
「オプションの」又は「場合により」という用語は、その後に記載される事象が起こってもよいし、起こらなくてもよいことを意味する。この用語は、事象が起こる場合と起こらない場合を包含する。
【0019】
「医薬組成物」という用語は、１種以上の薬学的に許容し得る成分（例えば、限定されるものではないが、担体及び／又は賦形剤）と場合により合わせた、活性成分を指す。活性成分は、式Ｉで示される化合物若しくはその塩、本発明による結晶形、又は本発明による結晶組成物として例示される。
【0020】
「薬学的に許容し得る担体」という用語は、著しい刺激がなく、かつ活性化合物の生物活性及び特性を損なわないそのような担体を指す。「薬学的に許容し得る担体」とは、活性成分と一緒に投与され、かつその投与に対して有益である不活性物質を指し、そして、限定されるものではないが、ヒト又は動物（例えば、家畜）における使用のために国家食品薬品監督管理局（State Food and Drug Administration）によって承認された以下の物質：流動促進剤、甘味剤、希釈剤、保存料、色素／着色料、香味剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、崩壊剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶剤又は乳化剤のいずれかを含む。担体の非限定的な例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類及びデンプン類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、並びにポリエチレングリコールなどを含む。担体に関する他の情報は、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005)に見出されるが、その内容は参照により本明細書中に援用される。「賦形剤」という用語は、一般に、有効な医薬組成物を処方するために使用される担体、希釈剤及び／又は媒体を指す。
【0021】
「投与」又は「投与する」などの用語は、化合物又は組成物が生物学的作用の所望の部位に送達されることを可能にする方法を指す。そのような方法には、限定されるものではないが、経口の、非経口（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内注射又は注入を含む）の、局所の、直腸の投与などが含まれる。
【0022】
薬学的又は薬理学的な活性剤について、「有効量」という用語は、毒性はないが所望の効果を達成するのに十分な、医薬又は薬剤の量を指す。本明細書中の経口処方物に関して、組成物中の活性物質についての「有効量」とは、組成物中の別の活性物質と組合せて所望の効果を達成するために必要な量を指す。有効量は、個別に決定されてもよく、そして、レセプタ（receptor）の年齢及び全身状態、並びに具体的な活性物質に依存する。特定の場合における有効量は、従来の試験を経て当業者により決定され得る。
【0023】
「活性成分」、「治療剤」、「活性物質」又は「活性剤」という用語は、標的の障害、疾患又は症状を効果的に処置又は予防するために有用な化学的実体を指す。本明細書中の該用語は、例えば、式Ｉで示される化合物若しくはそのトリフルオロ酢酸塩、本発明による結晶形、又は本発明による結晶組成物を指すことがある。
【0024】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ又はＸＲＤ）スペクトルにおいて、結晶化合物から得られる回折パターンは、一般的に、特定の結晶形について特徴的であり、バンドの相対強度（特に低角度）は、結晶化条件、粒径及び他の測定条件の差に起因する優勢な配向効果で変化し得る。したがって、回折ピークの相対強度は、所与の結晶形について特徴的ではない。結晶形が当該分野で知られているものと同じであるかどうかを決定する場合、それらの相対強度ではなく、ピークの相対位置に留意することがより重要である。更に、任意の所与の結晶形についてピークの位置に僅かな誤差が存在し得、このことは結晶学の分野でもよく知られている。例えば、ピークの位置は、試料の分析中の温度、試料移動又は機器較正の変化に起因してシフトし得；そして、２θ値の測定誤差は、時に約±０．２°に、典型的には約±０．１°になり得る。したがって、結晶構造を決定する場合、この誤差を考慮する必要がある。本発明による結晶形が実質的に図に示されるとおり記載される場合、「実質的に」という用語は、回折ピークにおけるそのような差をも包含することが意図される。
【0025】
ＸＲＰＤパターンにおいて、ピーク位置は、通常、角度２θ又は結晶面間隔ｄで表され、ｄとθとの間の単純な変換はｄ＝λ／２ｓｉｎθ（式中、ｄは、結晶面間隔を表し、λは、入射Ｘ線の波長を表し、そして、θは、回折角である）である。同じ化合物の同じ結晶形については、ＸＲＰＤパターンのピーク位置は全体としては類似しており、相対強度誤差は大きくてもよい。また、混合物の同定においては、含量における低下等の要因に起因して幾つかの回折線が失われることがあるため、高純度試料で観察されるバンド全体を当てにする必要はなく、１つのバンドでさえも所与の結晶についての特徴になり得ることに留意すべきである。
【0026】
本発明において、Ｘ線粉末回折パターンを以下のとおり測定した：装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ＡＤＶＡＮＣＥ Ｘ線回折装置；方法：ターゲット：Ｃｕ：Ｋ−アルファ；波長λ＝１．５４１７９Å；電圧：４０kV；電流：４０mA；走査範囲：４〜４０°；試料回転速度：１５rpm；走査速度：１０°／分。
【0027】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、その結晶構造の変化又は結晶融解に起因し、結晶が熱を吸収又は放出する場合に転移温度を測定するために使用される。熱転移温度及び融点の誤差は、継続的な分析における同じ化合物の同じ結晶形の場合、典型的には約５℃以内、通常は約３℃以内である。化合物が所与のＤＳＣピーク又は融点を有すると記載されている場合、それはＤＳＣピーク又は融点が±５℃であることを意味する。異なる結晶形を同定するためのＤＳＣによる補助的方法が提供される。それらの異なる転移温度特性によって、異なる結晶形を同定してもよい。混合物のＤＳＣピーク又は融点は、広い範囲にわたって変化し得ることに留意する。更に、融解温度は、物質の融解中の分解に起因する温度上昇の速度と関連している。
【0028】
本明細書中の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、以下の方法により測定される：装置：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量計；方法：試料（〜１mg）をＤＳＣアルミニウムパンに入れる、方法：２５℃〜３００℃、加熱速度 １０℃／分。
【0029】
「結晶組成物」という用語は、本発明による結晶形Ｂを含む固体の形態を指す。結晶組成物に含まれる結晶形Ｂの量は、５０％以上、８０％以上、９０％以上、又は９５％以上であってもよい。本発明による結晶形に加えて、結晶組成物はまた、式Ｉで示される化合物若しくはその塩（トリフルオロ酢酸塩など）の他の結晶形若しくは非晶形、又はこれらの物質以外の不純物も場合により含んでもよい。結晶組成物中の成分の含量の合計が１００％であるべきことは、当業者に理解されるべきである。
【0030】
本明細書中で、以下の略語を使用する：ＳＥＭ−Ｃｌ：２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド；ＳＥＭ：２−（トリメチルシリル）エトキシメチル；ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；ｎ−ＢｕＯＨ：ｎ−ブタノール；ＮＨ３・Ｈ２Ｏ：アンモニア水；Ｎａ：ナトリウム；ＸＲＰＤ：Ｘ線粉末回折；ＤＳＣ：示差熱分析。
【0031】
式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩式Ｉ：
【化3】
で示される化合物のトリフルオロ酢酸塩が提供される。
【0032】
ある実施態様において、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩では、式Ｉで示される化合物対トリフルオロ酢酸のモル比は、１：０．５〜２、好ましくは１：１である。
【0033】
式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩は、従来のトリフルオロ酢酸塩の調製プロセスにより調製することができ、例えば、トリフルオロ酢酸塩は、式Ｉで示される化合物及びトリフルオロ酢酸を混合することによるか、又はトリフルオロ酢酸を分離することなく式Ｉで示される化合物を調製することにより得ることができる。
【0034】
結晶形ＢＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１４．０°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．５°±０．２°に回折ピークを有する、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂが提供される。
【0035】
具体的な実施態様において、結晶形Ｂは、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１２．４°±０．２°、１４．０°±０．２°、１４．９°±０．２°、１６．１°±０．２°、１６．６°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２１．１°±０．２°、２１．８°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．５°±０．２°に回折ピークを有する。
【0036】
より具体的な実施態様において、結晶形Ｂは、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１２．４°±０．２°、１３．３°±０．２°、１４．０°±０．２°、１４．９°±０．２°、１６．１°±０．２°、１６．６°±０．２°、１７．３°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２１．１°±０．２°、２１．８°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．１°±０．２°、２３．５°±０．２°、２４．４°±０．２°、２４．７°±０．２°、２６．１°±０．２°、２８．２°±０．２°に回折ピークを有する。
【0037】
特定の実施態様において、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂの回折ピークは、以下のとおり特徴付けられる：
【0038】
【表1】
【0039】
ある実施態様において、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形ＢのＸ線粉末回折パターンは、実質的に図１に示される。
【0040】
式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂはまた、初期温度 １７１．４℃±５℃かつピーク温度 １７３．４℃±５℃である、ＤＳＣにより特徴付けられ得る。
【0041】
式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形ＢのＤＳＣパターンは、図２に示される。
【0042】
別の実施態様において、結晶形Ｂでは、式Ｉで示される化合物対トリフルオロ酢酸のモル比は、１：０．５〜２、好ましくは１：１である。
【0043】
また、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂを含む、結晶組成物が提供される。ある実施態様において、結晶組成物の重量に基づいて、結晶形Ｂの含量は、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上である。結晶組成物はまた、結晶形Ｂに加えて、他の結晶形若しくは非晶形の式Ｉで示される化合物若しくはその塩（トリフルオロ酢酸塩など）、又はこれらの物質以外の不純物を含むこともできる。
【0044】
調製プロセスまた、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩を溶媒から沈殿させることを含む、本発明による式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂを調製するためのプロセスも提供される。
【0045】
ある実施態様において、該プロセスは、以下の工程：１）結晶化溶媒に式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩を溶解する（好ましくは、溶解を促進するために加熱する）こと；及び
２）結晶化のために冷却して、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｂを得ること
を含む。
【0046】
工程１）において、結晶化溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、第３級ブタノール、アセトン、酢酸エチル、水及びこれらの混合溶媒からなる群より選択され；好ましくはエタノールである。
【0047】
工程１）において、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩 １ｇ当たりに添加される結晶化溶媒の量は、１〜５mL、好ましくは２〜３mLである。
【0048】
工程１）において、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩と結晶化溶媒との均一な系を形成するために加熱が利用される。
【0049】
医薬組成物及び投与有効量の式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩；該結晶形Ｂ、又は該結晶形Ｂを含む結晶組成物を含む、医薬組成物が提供される。更に、医薬組成物はまた、薬学的に許容し得る担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでもよいし、含まなくともよい。
【0050】
本発明による化合物は、純粋な形態又は好適な医薬組成物の形態で投与され、これは、同様の用途を有する薬剤の任意の許容し得る投与様式によって実施することができる。本発明による医薬組成物は、本発明による化合物と共に、好適な薬学的に許容し得る担体、希釈剤又は賦形剤を合わせることにより調製してもよく、そして、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、乳剤、懸濁剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア剤、エアロゾル剤などのような、固体、半固体、液体又は気体製剤に処方してもよい。
【0051】
本発明による医薬組成物は、従来の混合、溶解、造粒、糖衣コーティング、研和、乳化、凍結乾燥などのような、当該分野において周知のプロセスにより調製してもよい。
【0052】
本発明による化合物又はその医薬組成物の典型的な投与経路は、限定されるものではないが、経口の、直腸内の、経粘膜の、経腸の投与、又は局所の、経皮の、吸入の、非経口の、舌下の、膣内の、鼻内の、眼内の、腹腔内の、筋肉内の、皮下の、静脈内の投与を含む。
【0053】
好ましい実施態様において、医薬組成物は、経口投与形態である。経口投与に関して、活性化合物は、当該分野において周知の薬学的に許容し得る担体、賦形剤及び／又は媒体と混合されて、医薬組成物を調製してもよい。担体、賦形剤及び媒体は、本発明による化合物を、患者への経口投与に有用な錠剤、丸剤、トローチ剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、スラリー剤、懸濁剤などへと調製するために使用され得る。
【0054】
固体の経口組成物は、従来の混合、充填又は圧縮プロセスによって、例えば、以下のプロセス：活性化合物を固体賦形剤と混合し、得られた混合物を場合により粉砕し、必要に応じて他の適切な補助剤を添加し、次に、錠剤又は糖衣錠のコアを得るために混合物を顆粒へと加工することによって調製してもよい。適切な賦形剤は、限定されるものではないが、充填剤（乳糖、ショ糖、マンニトール又はソルビトールを含む糖；微結晶性セルロースのようなセルロース調製物、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン及びジャガイモデンプン；並びにシリカゲル、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドンのような他の物質など）；崩壊剤（カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸など）を含む。また、アルギン酸ナトリウムのような塩を使用してもよい。糖衣錠のコアは、一般的な製剤実務において周知のプロセス（特に、腸溶性コーティングによって）を介して、場合によりコーティングしてもよい。
【0055】
有益な効果本発明による式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂは、高純度、高結晶性及び良好な安定性という利点を有する。それと同時に、本発明による結晶形Ｂの調製プロセスは単純であり、溶媒は安価でかつ容易に入手可能であり、結晶化条件は穏やかであり、そして、該プロセスは工業的生産に好適である。
【0056】
本発明の技術的な解決は、以下の段落［１］〜［２０］により説明される：［１］式Ｉ：
【化4】
で示される化合物のトリフルオロ酢酸塩。
［２］式Ｉで示される化合物対トリフルオロ酢酸のモル比が、１：０．５〜２、好ましくは１：１であることを特徴とする、段落［１］に記載の式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩。
［３］有効量の段落［１］又は［２］に記載の式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩を含む、医薬組成物。
［４］Ｔｏｌｌ様受容体７関連疾患を処置するための医薬を製造するための、段落［１］若しくは［２］に記載の式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩又は段落［３］に記載の医薬組成物の使用。
［５］疾患が、ウイルス感染症であり；好ましくは、ウイルス感染症が、肝炎ウイルス感染症（特に、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルス感染症）であることを特徴とする、段落［４］に記載の使用。
［６］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１４．０°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．５°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂ。
［７］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１２．４°±０．２°、１４．０°±０．２°、１４．９°±０．２°、１６．１°±０．２°、１６．６°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２１．１°±０．２°、２１．８°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．５°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［６］に記載の結晶形Ｂ。
［８］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝７．０°±０．２°、１０．２°±０．２°、１１．７°±０．２°、１２．４°±０．２°、１３．３°±０．２°、１４．０°±０．２°、１４．９°±０．２°、１６．１°±０．２°、１６．６°±０．２°、１７．３°±０．２°、１８．６°±０．２°、１９．１°±０．２°、２０．２°±０．２°、２１．１°±０．２°、２１．８°±０．２°、２２．２°±０．２°、２３．１°±０．２°、２３．５°±０．２°、２４．４°±０．２°、２４．７°±０．２°、２６．１°±０．２°、２８．２°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［７］に記載の結晶形Ｂ。
［９］実質的に図１に示されるＸ線粉末回折パターンを有することを特徴とする、段落［６］〜［８］のいずれか一つに記載の結晶形Ｂ。
［１０］ＤＳＣにより特徴付けられる場合、初期温度が１７１．４℃±５℃であり、かつピーク温度が１７３．４℃±５℃であることを特徴とする、段落［６］〜［９］のいずれか一つに記載の結晶形Ｂ。
［１１］以下の工程：
１）結晶化溶媒に式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩を溶解する（好ましくは、溶解を促進するために加熱する）こと；
２）結晶化のために冷却して、洗浄し、乾燥して、結晶形Ｂを得ること
を含む、段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｂを調製するためのプロセス。
［１２］工程１）における結晶化溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、第３級ブタノール、アセトン、酢酸エチル及びそれらの混合溶媒からなる群より選択されるか、又は水であることを特徴とする、段落［１１］に記載の調製プロセス。
［１３］結晶化溶媒が、エタノールであることを特徴とする、段落［１２］に記載の調製プロセス。
［１４］工程１）において、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩 １ｇ当たりに添加される結晶化溶媒の量が、１〜５mLであることを特徴とする、段落［１１］〜［１３］のいずれか一つに記載の調製プロセス。
［１５］式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩 １ｇ当たりに添加される結晶化溶媒の量が、２〜３mLであることを特徴とする、段落［１４］に記載の調製プロセス。
［１６］工程１）において、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩と結晶化溶媒との均一系を形成するために加熱が利用されることを特徴とする、段落［１１］〜［１６］のいずれか一つに記載の調製プロセス。
［１７］結晶組成物であって、該結晶組成物の重量に基づいて、段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｂが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であることを特徴とする、結晶組成物。
［１８］有効量の、段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｂ又は段落［２１］に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
［１９］Ｔｏｌｌ様受容体７関連疾患を処置するための医薬を製造するための、段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｂ若しくは段落［１７］に記載の結晶組成物又は段落［１８］に記載の医薬組成物の使用。
［２０］疾患が、ウイルス感染症であり；好ましくは、ウイルス感染症が、肝炎ウイルス感染症（特に、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルス感染症）であることを特徴とする、段落［１９］に記載の使用。
【実施例】
【0057】
本明細書中で使用される溶媒は、市販されており、更に精製することなく使用することができる。調製例における合成反応は、一般的に、不活性窒素雰囲気下、無水溶媒中で行われる。
【0058】
プロトン磁気共鳴のデータは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ４００（４００ＭＨｚ）分光計で記録され、化学シフトは、テトラメチルシラン低磁場で（ｐｐｍ）として示される。質量分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ｐｌｕｓ ６１１０（＆１９５６Ａ）で決定される。ＬＣ／ＭＳ又はＳｈｉｍａｄｚｕ ＭＳには、ＤＡＤ：ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ（ＬＣ）及びＳｈｉｍａｄｚｕ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ２０２０検出器が含まれる。質量分析計は、正又は負モードで操作されるエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を備えている。
【0059】
調製例１：２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン トリフルオロ酢酸塩の調製
【0060】
式ＩＩＩ：２，４−ジクロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン
【化5】
【0061】
式ＩＩで示される化合物（２，４−ジクロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン）（４．００kg、２１．２８mol）をＤＭＦ（２０．００Ｌ）中に溶解し、ＤＩＰＥＡ（２．５８kg、２０．００mol）を室温（２５℃）で何回かに分けて添加し、続いて、３０分間撹拌した。反応液を氷浴で０℃まで冷却し、次に、ＳＥＭ−Ｃｌ（４．００kg、２４．００mol）を１秒当たり１〜２滴の滴下速度で５時間かけてゆっくり滴下した。添加後、反応液を０℃で４時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、反応液をクエンチし、水（７０Ｌ）で希釈して、次に、酢酸エチル（１５Ｌ×３）で抽出した。合わせた有機相を１M 塩酸水溶液（５Ｌ×２）及びブライン（７Ｌ×２）で連続して洗浄し、溶媒を減圧下での蒸留により除去して、式ＩＩＩで示される化合物（６．４０kg、２０．１１mol、収率 ９４．５０％）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 - 8.35 (m, 1 H), 6.70 - 6.85 (m, 1 H), 5.77 (s, 2 H), 3.45 - 3.57 (m, 2 H), 0.74 - 0.86 (m, 2 H), 0.00 (s, 9 H).
【0062】
式ＩＶ：２−クロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化6】
【0063】
式ＩＩＩで示される化合物（１．６０kg、５．０３mol）を１０Ｌオートクレーブ内のイソプロパノール（１．６０Ｌ）中に溶解した。アンモニア水（４Ｌ）を室温（２５℃）で一度に添加して、反応混合物を９５℃で７時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、反応混合物を室温まで放冷し、ブフナーロートに通して濾過し、暗褐色の固体を得た。固体を酢酸エチル／ｎ−ヘプタン（１／１、５Ｌ×２）及び酢酸エチル（４Ｌ）で連続してスラリー化して、褐色の固体として式ＩＶで示される化合物（１．２５kg、４．１８mol、収率 ８３．１％）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.61 - 7.77 (m, 1 H), 6.97 - 7.19 (m, 2 H), 6.28 - 6.38 (m, 1 H), 5.54 - 5.67 (m, 2 H), 3.43 - 3.53 (m, 2 H), 0.76 - 0.91 (m, 2 H), 0.07 (s, 9 H).
【0064】
式Ｖ：２−ブトキシ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化7】
【0065】
ｎ−ＢｕＯＨ（１７．０Ｌ）に、窒素下で金属ナトリウム（５２５．０５ｇ、２２．８４mol）を何回かに分けてゆっくり添加した。添加後、系の温度を６０℃まで上昇させ、金属ナトリウムが完全に溶解するまで該温度で撹拌を継続的に行った。次に、系を２５℃まで冷却して、式ＩＶで示される化合物（１．９５kg、６．５３mol）を何回かに分けて添加した。撹拌しながら均質に混合後、反応混合物を９０℃で８時間、継続的に撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、反応混合物を、２５℃まで自然に放冷し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０Ｌ）中にゆっくり注いだ。次に、反応混合物を酢酸エチル（１５Ｌ×３）で抽出して、合わせた有機相をブライン（２０Ｌ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、濾過した。溶媒を減圧下で留去後、残渣をｎ−ヘプタン（４Ｌ）中でスラリー化した。固体を濾過により分離し、酢酸エチル（５Ｌ）中でスラリー化して、黄白色の固体として式Ｖで示される化合物（１．５３kg、４．５５mol、６９．７％）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.49 - 7.54 (m, 1 H), 6.54 - 6.62 (m, 2 H) , 6.15 - 6.20 (m, 1 H) , 5.54 (s, 2 H) , 4.10 - 4.22 (m, 2 H) , 3.42 - 3.55 (m, 2 H) , 1.58 - 1.73 (m, 2 H) , 1.35 - 1.47 (m, 2 H) , 0.90 - 0.96 (m, 3 H) , 0.83 - 0.89 (m, 2 H) , 0.05 (s, 9 H).
【0066】
式ＶＩ：２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン【化8】
【0067】
式Ｖで示される化合物（１．１０kg、３．２７mol）をＴＦＡ（５．５０Ｌ）中に溶解して、反応液を２５℃で１６時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、ＴＦＡを減圧下で蒸留により除去して、残渣をメタノール（１．２Ｌ）及び氷水（１．２Ｌ）中に溶解した。均一な撹拌下で、濃アンモニア水により系のｐＨを１２に調整した。混合物を２時間撹拌して、沈殿物を溶液から継続的に沈殿させた。濾過後、白色固体としての濾滓（filter cake）を１５％アンモニア水（１．２Ｌ×３）及び酢酸エチル（４Ｌ）で連続してスラリー化して、白色固体として式ＶＩで示される化合物（５５０．００ｇ、２．６７mol、８１．７％）を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.37 (d, J=2.89 Hz, 1 H), 6.29 (d, J=3.01 Hz, 1 H), 4.27 (t, J=6.53 Hz, 2 H), 1.75 (d, J=7.91 Hz, 2 H), 1.44 - 1.61 (m, 2 H), 1.00 (t, J=7.40 Hz, 3 H).
【0068】
式ＶＩＩ：４−（（４−アミノ−２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ヒドロキシメチル）ベンズアルデヒド
【化9】
【0069】
３口フラスコに、テレフタルアルデヒド（７９０．６４mg、５．８２mmol）及びイソプロパノール（１０mL）を添加し、２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１．００ｇ、４．８５mmol）を撹拌しながら添加し、系を０℃まで冷却して、更に１０分間撹拌した。精製水（１０mL）及び炭酸カリウム（８０４．１７mg、５．８２mmol）を添加し、ＬＣＭＳによるモニターをしながら、原料が枯渇するまで２５℃で１６時間反応させた。反応が完了した後に固体が析出した。濾過後、得られた固体を精製水（２０mL）及び（酢酸エチル／ｎ−ヘプタン＝１／２０）（３０mL）でスラリー化し、濾過し、乾燥して、黄色の固体として式ＶＩＩで示される化合物（１．５０ｇ、４．４１mmol、収率 ９０．９％）を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 9.94 (s, 1 H), 7.86 (d, J = 8.16 Hz, 2 H), 7.72 (d, J = 8.16 Hz, 2 H), 7.12 - 7.17 (m, 1 H), 6.19 (s, 1 H), 4.28 (t, J=6.53 Hz, 2 H), 1.68 - 1.77 (m, 2 H), 1.44 - 1.54 (m, 2 H), 0.97 (t, J=7.34 Hz, 3 H).
【0070】
式ＶＩＩＩ：（４−アミノ−２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）（４−（ピロリジン−１−イルメチル）フェニル）メタノール
【化10】
【0071】
３０Ｌクレーブに、式ＶＩＩで示される化合物（４５０．０ｇ、１．３２mol）及びイソプロパノール（４．５Ｌ）を添加して、混合物を５分間撹拌した。次に、氷酢酸（１１９．０ｇ、１．９８mol）を添加して、撹拌しながら温度を０〜１０℃まで下げた。ピロリジン（１１２．４ｇ、１．５８mol）を１０℃未満の温度で滴下した。添加後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（４２０．０ｇ、１．９８mol）を何回かに分けて添加して、液体クロマトグラフィーによるモニターをしながら、原料が枯渇するまで１０〜２０℃で３時間反応させた。反応完了後、精製水（５Ｌ）を添加し、溶液の温度を約−１０℃まで下げ、添加中の溶液温度を０℃未満にしながら１５％アンモニア水（１２Ｌ）を溶液に添加した。撹拌下で固体が析出した。濾過を行い、得られた濾滓を水（２Ｌ）及び酢酸エチル（２Ｌ×２）でスラリー化した。濾過を行い、減圧下、４０℃で１２時間乾燥を行い、黄色固体として式ＶＩＩＩで示される化合物（４６５．０ｇ、１．１８mol、収率 ８９．４％、水分 ０．９％）を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.46 (d, J=7.91 Hz, 1 H), 7.29 (d, J = 8.03 Hz, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 6.12 (s, 1 H), 4.29 (t, J = 6.53 Hz, 2 H), 3.60 (s, 2 H), 2.52 (br. s., 4 H), 1.66 - 1.83 (m, 6 H), 1.49 (d, J = 7.53 Hz, 2 H), 0.98 (t, J = 7.40 Hz, 3 H).
【0072】
式Ｉ：２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化11】
【0073】
２０Ｌクレーブに、式ＶＩＩＩで示される化合物（４４０．０ｇ、１．１１mol）及びジクロロメタン（７．０Ｌ）を添加して、撹拌しながら系の温度を−１５℃未満まで下げた。トリエチルシラン（８８０mL、５．５５mol）を滴下後、添加中の温度を−１０℃未満に維持しながらトリフルオロ酢酸（８８０mL）を滴下した。添加後、反応を０℃で２時間行い、原料点（raw material point）が消失するまで液体クロマトグラフィーによりモニターした。反応完了後、反応液を濃縮乾固して、酢酸エチル（２．２Ｌ）を溶液に添加した。撹拌を行って温度を０℃未満まで下げた。次に、飽和炭酸ナトリウム溶液を添加してｐＨ９〜１０に溶液を調整し、その間、系の温度を１０℃未満に維持した。濾過を行い、得られた濾滓を水（２．２Ｌ）でスラリー化した。濾過を行い、減圧下で乾燥を行い、白色固体として式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩（５５０ｇ）を得、ここで、式Ｉで示される化合物対トリフルオロ酢酸のモル比は１：１であった。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 4.32 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.60 (s, 2H), 2.55 - 2.52 (m, 4H), 1.85 - 1.71 (m, 6H), 1.55-1.48 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
【0074】
実施例１：２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミンのトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂの調製調製例１で得られた白色固体（５５０ｇ）及びエタノール（１．４Ｌ）を撹拌し、固体が完全に溶解するまで加熱還流した。濾過後、結晶化させるために濾液を撹拌し、白色固体を得た。上記のプロセスを繰り返して、再結晶を１回行い、帯白色固体、即ち、式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩の結晶形Ｂ（２１０．０ｇ）を得、ここで、式Ｉで示される化合物対トリフルオロ酢酸のモル比は１：１である。
得られた結晶形は、実質的に図１に示されるとおりの回折ピークを有していた。
【0075】
実施例２：高温安定性試験実施例１で調製された結晶形Ｂを、「医薬品成分及び医薬品の安定性試験ガイドライン（Guidelines for the Stability Test of Pharmaceutical Ingredients and Pharmaceutical Preparations）」（Chinese Pharmacopoeia 2010 Appendix XIXC）により、高温条件下での加速試験において安定性について試験した。
【0076】
結晶形Ｂを、６０℃の開口している清潔な容器に入れた。試料は、それぞれ１０日目、２０日目及び３０日目に試験のために採取した。結果を０日目の初期試験結果と比較した。
【0077】
実施例３：高湿度安定性試験実施例１で調製された結晶形Ｂを、「医薬品成分及び医薬品の安定性試験ガイドライン」（Chinese Pharmacopoeia 2010 Appendix XIXC）により、高湿度条件下での加速試験において安定性について試験した。
【0078】
結晶形Ｂを、４０℃／７５％湿度（開放）の条件下、恒温恒湿槽中で加速試験に付した。試料は、それぞれ３０日目、６０日目及び９０日目に試験のために採取した。結果を０日目の初期試験結果と比較した。
【0079】
実施例４：光安定性光条件下、実施例１で調製された結晶形Ｂを、「医薬品成分及び医薬品の安定性試験ガイドライン」（Chinese Pharmacopoeia 2010 Appendix XIXC）により、安定性について試験した。
【0080】
結晶形Ｂを、５０００Lx±５００Lxの照明環境に置いた。試料は、５日目、１０日目及び３０日目に採取した。試験結果を０日目の初期試験結果と比較した。
【0081】
医薬活性の実施例効能実施例１：Ｔｏｌｌ様受容体７及びＴｏｌｌ様受容体８のインビトロ受容体結合活性スクリーニング
【0082】
試薬：ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ７細胞及びＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ８細胞（InvivoGenから入手可能）
ＤＭＥＭ培地
熱非働化ウシ胎児血清
抗マイコプラズマ試薬 Ｎｏｒｍｏｃｉｎ（商標）
ブレオマイシン
ブラストサイジン
【0083】
使用されたＧＳ−９６２０及びＲ８４８の構造は以下のとおりであるが、ＧＳ−９６２０の調製は、米国特許出願公開第２０１０／０１４３３０１号明細書に開示されたプロセスを参照することができ；Ｒ８４８は、ＡＢＧＥＮＴ（ＩＭＧ−２２０８、仕様：０．５mg）から市販されていた。【化12】
【0084】
スキーム：１．９６ウェル化合物プレートの調製：
１０mmol/Lの濃度で開始して、液体ワークステーションＰＯＤを用いて化合物をＤＭＳＯで３倍に勾配希釈し、１０点希釈した（第２カラム〜第１１カラム、各点はデュプリケイト）。第１２カラムでは、５mg/mL 陽性化合物Ｒ８４８（１μL）を陽性対照として添加した；そして、第１カラムでは、ＤＭＳＯ（１μL）を陰性対照として添加した。各ウェルは、ＤＭＳＯ（１μL）を含有していた。
２．培養フラスコ中の細胞を収集し、細胞密度を２５０，０００細胞／mLに希釈した。
３．調製した化合物プレートに細胞懸濁液（５０，０００細胞／ウェル）（２００μL）を添加し、各ウェル中のＤＭＳＯの最終濃度を０．５％とした。
４．細胞及び化合物を含有する培養プレートを、ＣＯ２インキュベーター中、３７℃、５％ ＣＯ２で２４時間インキュベートした。
５．２４時間のインキュベーション後、上清（２０μL）を各ウェルから９６ウェル透明アッセイプレートへと取り出した。アッセイプレートの各ウェルにＱｕａｎｔｉ−Ｂｌｕｅ試薬（１８０μL）を添加して、プレートをインキュベーター中、３７℃、５％ ＣＯ２で１時間インキュベートした。
６．１時間後、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ ＯＤ６５０を用いて上清（２０μL）中のアルカリホスファターゼの含量を測定した。
７．Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて各化合物のＥＣ５０を得た。
結果を表１に示した：
【0085】
【表2】
【0086】
本発明による式Ｉで示される化合物は、対照（Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト ＧＳ−９６２０）よりも高いＴｏｌｌ様受容体７に対するインビトロ受容体結合活性、及び対照（Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト ＧＳ−９６２０）よりも低いＴｏｌｌ様受容体８に対するインビトロ受容体結合活性を示した。本発明の化合物は、様々な受容体に関して選択性の明白な差を有しており、その効果は先行技術より優れている。
【0087】
効能実施例２：末梢血単核球試験スキームこの実施例の目的は、式Ｉで示される化合物でヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を刺激した２４時間後のサイトカインの発現レベルを測定することである。
【0088】
細胞上清を希釈せずにアッセイし、ＩＦＮ−αのレベルを直接測定した。式で示される化合物を最初に２０mM ＤＭＳＯストック溶液中に調合して、細胞培地で１０倍に勾配希釈して総数１１の希釈点とした。９希釈点の化合物（最高濃度は２００μmol/Lであった）を各ウェルに５０μLで９６ウェルプレートに添加した。新鮮なヒト末梢血単核球を各ウェルに１５０μLで播種して４５０，０００細胞を含むようにした。細胞培養プレートをインキュベーター中、３７℃、５％ ＣＯ２で２４時間インキュベートした。インキュベーション後、培養プレートを１２００rpmで５分間遠心分離して上清を収集し、そして、測定のために−２０℃で保存した。サイトカインの測定は、フローサイトメーター上でＢＤ−ＰｈａｒｍｉｎｇｅｎのＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）を用いて実行した。上記の測定法を用いて、３０pg/mLのＩＦＮ-αの産生を刺激する最低薬物濃度を、サイトカイン刺激試験におけるＭＥＣ値とした。結果を表２に示した。
【0089】
【表3】
【0090】
対照（ＧＳ−９６２０）と比較して、本発明の式Ｉで示される化合物は、より良好なＰＢＭＣのインビトロ ＩＦＮ−α誘導活性と、同等のＴＮＦ−α誘導活性を示した。
【国際調査報告】