特表 2019-509279 ニューロン性疾患の治療におけるニューロン調節のためのＤＲＥＡＤＤの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2019-509279(P2019-509279A)

(43)【公表日】2019年4月4日

(54)【発明の名称】ニューロン性疾患の治療におけるニューロン調節のためのＤＲＥＡＤＤの使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/76 20150101AFI20190308BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20190308BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20190308BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20190308BHJP

   A61K 31/551 20060101ALI20190308BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20190308BHJP

   C12N 5/0793 20100101ALI20190308BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20190308BHJP

   C12N 5/16 20060101ALI20190308BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20190308BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20190308BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/76

   A61K48/00

   A61P25/16

   A61P25/00

   A61K31/551

   A61K38/16

   C12N5/0793

   C07K14/705

   C12N5/16

   C12N15/12

   C12N15/864 100

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】28

(21)【出願番号】特願2018-544356(P2018-544356)

(86)(22)【出願日】2017年3月8日

(85)【翻訳文提出日】2018年9月26日

(86)【国際出願番号】IL2017050294

(87)【国際公開番号】WO2017153995

(87)【国際公開日】20170914

(31)【優先権主張番号】62/305,601

(32)【優先日】2016年3月9日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ

(71)【出願人】

【識別番号】518294524

【氏名又は名称】アサフ，ファディ

(71)【出願人】

【識別番号】518294535

【氏名又は名称】シラー，イツハク

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】アサフ，ファディ

(72)【発明者】

【氏名】シラー，イツハク

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA23

4B065CA44

4C084AA13

4C084DB63

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA35

4C084MA37

4C084MA52

4C084MA56

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA63

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA021

4C084ZA022

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC55

4C086DA28

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA02

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BC83

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZA02

4H045CA40

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

抑制性および／または亢進性ＤＲＥＡＤＤを用いて淡蒼球内節（ＧＰｉ）、前部運動視床および／または淡蒼球外節（ＧＰｅ）および／または視床下核（ＳＴＮ）におけるニューロン活動を調節することにより、ニューロン性運動低下疾患またはニューロン性運動亢進疾患に罹患した患者を治療するための方法が提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ニューロン性運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療するための方法であって、
（ａ）淡蒼球内節（ＧＰｉ）におけるニューロン活動を抑制することと、
（ｂ）前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、視床下核（ＳＴＮ）、またはこれらの任意の組み合わせにおけるニューロン活動を亢進することと、を含み、
前記ニューロン活動を抑制することが、ＧＰｉニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、前記抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、前記ニューロン活動を亢進することが、前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、視床下核（ＳＴＮ）、またはこれらの任意の組み合わせにおけるニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、前記興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、これにより、ニューロン性運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療する、方法。

【請求項2】

前記ＧＰｉニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、または視床下核（ＳＴＮ）のニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはこれらの両方を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記淡蒼球内節（ＧＰｉ）におけるニューロン活動を抑制することと、前記前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）または視床下核（ＳＴＮ）におけるニューロン活動を亢進することとが同時に行われる、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、および前記興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することが、単一のリガンドによって行われる、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、前記興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、またはその両方が、前記ＧＰｉニューロン、前部運動視床ニューロン、ＧＰｅニューロン、ＳＴＮニューロン、またはこれらの任意の組み合わせをＣＮＯと接触させることである、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療することが、前記対象の運動活動性を改善することである、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療することが、パーキンソン病にともなう非運動症状を緩和することである、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

前記運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療することが、脳に永久的な損傷を誘発しないものである、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記ニューロン性運動低下疾患または障害がパーキンソン病である、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療するための方法であって、
（ａ）淡蒼球内節（ＧＰｉ）におけるニューロン活動を亢進することと、
（ｂ）前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、視床下核（ＳＴＮ）、またはこれらの任意の組み合わせにおけるニューロン活動を抑制することと、を含み、
前記ニューロン活動を亢進することが、ＧＰｉニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、前記興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、前記ニューロン活動を抑制することが、前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、または視床下核（ＳＴＮ）のニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、前記抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、これにより、ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療する、方法。

【請求項12】

前記ＧＰｉニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはその両方を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、または視床下核（ＳＴＮ）のニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである、請求項１１に記載の方法。

【請求項14】

前記淡蒼球内節（ＧＰｉ）におけるニューロン活動を亢進することと、前記前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）または視床下核（ＳＴＮ）におけるニューロン活動を抑制することとが同時に行われる、請求項１１に記載の方法。

【請求項15】

前記抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、および前記興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することが、単一のリガンドによって行われる、請求項１１に記載の方法。

【請求項16】

前記抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、前記興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、またはその両方が、ＧＰｉニューロン、前部運動視床ニューロン、ＧＰｅニューロン、ＳＴＮニューロン、またはこれらの任意の組み合わせをＣＮＯと接触させることである、請求項１１に記載の方法。

【請求項17】

前記ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療することが、前記対象の運動活動性を改善することである、請求項１１に記載の方法。

【請求項18】

前記ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療することが、非運動症状を緩和することである、請求項１１に記載の方法。

【請求項19】

前記ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療することが、脳に永久的な損傷を誘発しないものである、請求項１１に記載の方法。

【請求項20】

前記ニューロン性運動低下疾患または疾患が、コレア、ジストニア、ダニ障害、トゥレット症候群、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

抑制性および／または亢進性ＤＲＥＡＤＤを利用してニューロン性運動低下疾患またはニューロン性運動亢進疾患を治療する方法を提供する。

【背景技術】

【0002】

合成リガンドによって、または光によって活性化される操作された受容体を用いたいくつかの新規な手法が、ニューロンの活動の正確な実験的操作を可能とする脳研究の新しい時代を切り拓いた。これらの技術は、現在、複雑な行動への個別の脳回路の関与を調べるために使用されている（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ ａｎｄ Ｎｅｕｍａｉｅｒ， ２０１２）。

【0003】

こうした手法の１つに、デザイナー薬物のみによって活性化されるデザイナー受容体（ｄｅｓｉｇｎｅｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｄｅｓｉｇｎｅｒ ｄｒｕｇｓ）（ＤＲＥＡＤＤ）を用いることで細胞機能を調節するものがある（Ｒｏｇａｎ ａｎｄ Ｒｏｔｈ， ２０１１）。この進歩したムスカリン受容体のファミリーは、通常であれば不活性の合成リガンドであるクロザピン−ｎ−オキシドの投与後に細胞活性を高める（Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ）かまたは低下させる（Ｇｉ／ｏ−ＤＲＥＡＤＤ）ことが示されている（Ａｒｍｂｒｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ， ２００７）。ウイルスベクターに封入するか、または遺伝子導入マウスモデルで発現させることで、これらのツールによって、細胞活性を所定の空間的および時間的に制御することが可能である。例えば、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ受容体による海馬ニューロンの活性化はガンマリズムを増幅し、マウスの自発運動量および常同を高める（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ， ２００９）。膵臓β細胞でＧｓ−ＤＲＥＡＤＤまたはＧｑ−ＤＲＥＡＤＤ受容体を発現および活性化させることでインスリンの放出が増大し、これらの受容体を繰り返し活性化することでβ細胞の肥大につながることから、ＤＲＥＡＤＤ受容体によって非ニューロン細胞の活性を制御することも可能である（Ｇｕｅｔｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ， ２００９）。

【0004】

ＤＲＥＡＤＤはムスカリン受容体の突然変異体である。Ａ：ＤＲＥＡＤＤは、ムスカリン受容体の第３および第５の膜貫通領域の点突然変異により形成される（ｈＭ３のＹ１４９ＣおよびＡ２３９Ｇ）。更に、Ｇｓ共役型ＤＲＥＡＤＤは、Ｍ３ムスカリン受容体の細胞内ループの代わりにβ１−ＡＲの第２および第３の細胞内ループを有している。Ｂ：ヒト肺動脈平滑筋細胞では、ｈＭ３Ｄｑ受容体（ｈＭ３Ｄ）はＡｃｈではなくＣＮＯにより選択的に活性化され、ＰＩＰ２加水分解が起きる。逆に、野生型Ｍ３ムスカリン受容体（ｈＭ３）は、ＣＮＯではなくＡＣｈにより強く活性化される（Ａｒｍｂｒｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００７）。

【0005】

ＤＲＥＡＤＤ受容体技術を細胞特異的に用いることによって、薬物中毒および強迫性障害のような神経精神疾患における線条体回路の役割が解明された。神経ペプチドプロモーター（ダイノルフィンまたはエンケファリン）を用いたウイルスベクターを使用して、線条体の特定の細胞集団を標的としてＤＲＥＡＤＤ受容体を発現させることが行われていた（それぞれ線条体黒質ニューロンと線条体淡蒼球ニューロン）。アンフェタミンに繰り返し曝露されたラットの線条体淡蒼球ニューロンの一時的な活動低下によって行動感作の形成が促進されるのに対して、線条体黒質ニューロンの活動を阻害することでこの現象の持続性が損なわれることを示す結果がある（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ， ２０１１）。したがって、これらの知見は、線条体黒質ニューロンと線条体淡蒼球ニューロンとは、薬物経験依存的な行動可塑性の調節において重要かつ拮抗する役割を有することを明らかに示すものである。

【0006】

ＤＲＥＡＤＤは、グリア細胞の活動を制御して自律神経系を調節するためにも使用されている（Ａｇｕｌｈｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１３）。末梢では、ＤＲＥＡＤＤは、膵臓β細胞（Ｇｕｅｔｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００９）、肝細胞（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１３）および乳癌細胞（Ｙａｇｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）におけるＧＰＣＲシグナル伝達を制御するために使用されている。

【0007】

運動低下疾患または運動低下症とは、身体運動量の低下のことを指す。運動低下症は、大脳基底核の障害による筋運動の部分的または完全な喪失によって特徴付けられる。パーキンソン病（ＰＤ）などの運動低下疾患を有する患者は、筋強剛および運動不能を経験する。運動低下疾患は、他の疾患の中でも、病気による精神衛生疾患および長期の活動不能もともなう。

【0008】

運動亢進性疾患または運動亢進症（ｈｙｐｅｒｋｉｎｅｓｉａｓ）（またはｈｙｐｅｒｋｉｎｅｓｉｓ）とは、過剰な異常運動、過剰な正常運動、または両者の組み合わせを生じうる筋肉活動の増大のことを指す。運動亢進症は、ハンチントン病などの、運動動作を制御する能力に影響を及ぼす広範な疾患で見られる過剰な不穏状態である。多くの運動過剰は、大脳基底核／視床皮質回路の不適切な調節の結果として生じる。多くの場合、運動亢進症は、筋緊張の低下である緊張低下をともなっている。多くの運動亢進性疾患は本質的に心因性のものであり、一般的に小児期に顕著である。

【発明の概要】

【0009】

一実施形態において、本発明は、ニューロン性運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療するための方法であって、淡蒼球内節（ＧＰｉ）のニューロン活動を抑制することと、前部運動視床（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｍｏｔｏｒ ｔｈａｌａｍｕｓ）、視床下核（ＳＴＮ）、または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロン活動を亢進することと、を含み、ニューロン活動を抑制することが、ＧＰｉニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、該抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、ニューロン活動を亢進することが前部運動視床、視床下核（ＳＴＮ）、または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、該興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、これにより、ニューロン性運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療する、方法を提供する。

【0010】

別の実施形態では、ＧＰｉニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることは、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである。

【0011】

別の実施形態では、前部運動視床、視床下核（ＳＴＮ）、または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることは、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはこれらの両方を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである。

【0012】

別の実施形態では、淡蒼球内節（ＧＰｉ）のニューロン活動を抑制することと、前部運動視床、視床下核（ＳＴＮ）または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロン活動を亢進することとは同時に行われる。

【0013】

別の実施形態では、本発明は、抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、またはその両方が、ＧＰｉニューロン、前部運動視床ニューロン、ＳＴＮニューロン、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、またはこれらの任意の組み合わせをＣＮＯと接触させることであることを更に規定する。別の実施形態では、運動低下疾患または障害は、パーキンソン病（ＰＤ）である。

【0014】

別の実施形態において、本発明は、ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療するための方法であって、淡蒼球内節（ＧＰｉ）におけるニューロン活動を亢進することと、前部運動視床（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｍｏｔｏｒ ｔｈａｌａｍｕｓ）、視床下核（ＳＴＮ）、または淡蒼球外節（ＧＰｅ）におけるニューロン活動を抑制することと、を含み、ニューロン活動を亢進することが、ＧＰｉニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、該興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、ニューロン活動を抑制することが前部運動視床、視床下核（ＳＴＮ）、または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、該抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、これにより、ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療する、方法を提供する。

【0015】

別の実施形態では、ＧＰｉニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることは、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはその両方を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである。別の実施形態では、前部運動視床、視床下核（ＳＴＮ）、または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することであるか、またはＧＰｉのニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤ（Ｇｑ）をトランスフェクトすることがＡＡＶウイルスベクターを注入することである。

【0016】

別の実施形態では、ニューロン性運動亢進疾患または疾患は、コレア、ジストニア、ダニ障害、トゥレット症候群、強迫性障害、またはこれらの任意の組み合わせである。
本発明の特定の実施形態を、付属の図面を参照しながらあくまで例として本明細書で説明する。以下に詳細な図面を具体的に参照するが、図に示される細部は、あくまで例示のものであって発明の各実施形態を分かりやすく説明することを目的としたものである点を強調しておく。この点に関し、本説明文を図面と併せ読むことで本発明の各実施形態をどのように実施することができるかが当業者には明らかとなろう。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】正常コントロールマウス（コントロール）および６ＯＨＤＡで誘発させた片側ＰＤを有するマウス（６ＯＨＤＡ）に対するＣＮＯの効果を示す棒グラフである。盲検下でのＣＮＯ投与の効果を、５分間の運動活動性試験における時計回りの回転の回数および割合（％）（ＡおよびＢ）、運動活動性試験における平均速度（Ｃ）、ならびにロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｄ）の３つの行動パラメータについてＮＳと比較した。ＣＮＯは、これらの行動パラメータのいずれにも有意な効果を示さなかった。

【図2】ＧＰｉ（ＥＰ）およびＳＮｒにおける一側性のＧｉ−ＤＲＥＡＤＤの効果、すなわち、６ＯＨＤＡで誘発させた片側ＰＤを有し、ＥＰおよびＳＮｒ核でＧｉ−ＤＲＥＡＤＤを発現しているマウスに対するＣＮＯの効果を示す棒グラフである。盲検下でのＣＮＯ投与の効果を、５分間の運動活動性試験における時計回りの回転の回数および割合（％）（ＡおよびＢ）、運動活動性試験における平均速度（Ｃ）、ならびにロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｄ）の３つの行動パラメータについてＮＳと比較した。検討したすべての行動パラメータについてＣＮＯの有益な効果がみられた。_＊＊ｐ＜０．０１

【図3】ＧＰｉ（ＥＰ）およびＳＮｒにおける両側性のＧｉ−ＤＲＥＡＤＤの効果、すなわち、ＥＰおよびＳＮｒ核の両方でＧｉ−ＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた両側ＰＤに対するＣＮＯの効果を示す棒グラフである。盲検下でのＣＮＯ投与の効果を、運動活動性試験における平均速度（Ａ）、およびロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｂ）の２つの行動パラメータについてＮＳと比較した。平均速度およびロータロッド試験の両方でＣＮＯの有益な効果がみられた。_＊＊ｐ＜０．０１

【図4】ＧＰｅにおける一側性のＧｉ−ＤＲＥＡＤＤの効果、すなわち、ＧＰｅ核でＧｑ−ＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた片側ＰＤに対するＣＮＯの効果を示す棒グラフである。盲検下でのＣＮＯ投与の効果を、５分間の運動活動性試験における時計回りの回転の回数および割合（％）（ＡおよびＢ）、運動活動性試験における平均速度（Ｃ）、ならびにロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｄ）の３つの行動パラメータについてＮＳと比較した。検討したすべての行動パラメータについてＣＮＯの有益な効果がみられた。_＊＊ｐ＜０．０１

【図5】ＧＰｅにおける両側性のＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの効果、すなわち、両方のＧＰｅ核でＧｑ−ＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた両側ＰＤに対するＣＮＯの効果を示す棒グラフである。盲検下でのＣＮＯ投与の効果を、運動活動性試験における平均速度（Ａ）、およびロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｂ）の２つの行動パラメータについてＮＳと比較した。平均速度およびロータロッド試験の両方でＣＮＯの有益な効果がみられた。_＊＊ｐ＜０．０１

【図6】ＳＴＮにおける一側性のＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの効果、すなわち、ＳＴＮ核でＧｑ−ＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた片側ＰＤに対するＣＮＯの効果を示す棒グラフである。盲検下でのＣＮＯ投与の効果を、５分間の運動活動性試験における時計回りの回転の回数および割合（％）（ＡおよびＢ）、運動活動性試験における平均速度（Ｃ）、ならびにロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｄ）の３つの行動パラメータについてＮＳと比較した。反転および平均速度に対するＣＮＯの有益な効果がみられたが、ロータロッド試験ではみられなかった。_＊＊ｐ＜０．０１

【図7】ＳＴＮにおける両側性のＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの効果、すなわち、両方のＳＴＮ核でＧｑ−ＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた両側ＰＤに対するＣＮＯの効果を示す棒グラフである。盲検下でのＣＮＯ投与の効果を、運動活動性試験における平均速度（Ａ）、およびロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｂ）の２つの行動パラメータについてＮＳと比較した。平均速度およびロータロッド試験の両方でＣＮＯの有益な効果がみられた。_＊＊ｐ＜０．０１

【図8A】異なる核、すなわち、ＥＰおよびＳＮｒ核におけるＧｉ、ＧＰｅ核におけるＧｑ、ＳＴＮにおけるＧｑ、両方のＳＴＮ核におけるＧｑ（上の２つのパネル）、ＳＴＮにおけるＧｉ、腹側視床におけるＧｑでＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた実験用ＰＤのマウス、コントロールマウス、および６ＯＨＤＡで誘発させた片側ＰＤのマウスに対するＣＮＯの効果をまとめて示す棒グラフである。ＣＮＯおよびＮＳ（ＣＮＯ／ＮＳ）の相対的な効果を、運動活動性試験における平均速度（Ａ）、ロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｂ）、および５分間の運動活動性試験における時計回りの回転の低下率（％）の３つの行動パラメータについて示す。_＊＊ｐ＜０．０１

【図8B】異なる核、すなわち、ＥＰおよびＳＮｒ核におけるＧｉ、ＧＰｅ核におけるＧｑ、ＳＴＮにおけるＧｑ、両方のＳＴＮ核におけるＧｑ（上の２つのパネル）、ＳＴＮにおけるＧｉ、腹側視床におけるＧｑでＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた実験用ＰＤのマウス、コントロールマウス、および６ＯＨＤＡで誘発させた片側ＰＤのマウスに対するＣＮＯの効果をまとめて示す棒グラフである。ＣＮＯおよびＮＳ（ＣＮＯ／ＮＳ）の相対的な効果を、運動活動性試験における平均速度（Ａ）、ロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｂ）、および５分間の運動活動性試験における時計回りの回転の低下率（％）の３つの行動パラメータについて示す。_＊＊ｐ＜０．０１

【図8C】異なる核、すなわち、ＥＰおよびＳＮｒ核におけるＧｉ、ＧＰｅ核におけるＧｑ、ＳＴＮにおけるＧｑ、両方のＳＴＮ核におけるＧｑ（上の２つのパネル）、ＳＴＮにおけるＧｉ、腹側視床におけるＧｑでＤＲＥＡＤＤを発現している、６ＯＨＤＡで誘発させた実験用ＰＤのマウス、コントロールマウス、および６ＯＨＤＡで誘発させた片側ＰＤのマウスに対するＣＮＯの効果をまとめて示す棒グラフである。ＣＮＯおよびＮＳ（ＣＮＯ／ＮＳ）の相対的な効果を、運動活動性試験における平均速度（Ａ）、ロータロッド試験において回転ロッド上にマウスが乗っていた平均時間（Ｂ）、および５分間の運動活動性試験における時計回りの回転の低下率（％）の３つの行動パラメータについて示す。_＊＊ｐ＜０．０１

【図9】ＧＰｉ（ＥＰ）およびＳＮｒにおける一側性のＧｉ−ＤＲＥＡＤＤの連続５日間の活性化、すなわち、６ＯＨＤＡで誘発させたＰＤマウスのＧＰｅにおけるＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの５日間の活性化による間接路の抑制を示す棒グラフである。オープンフィールド試験およびロータロッド試験を、ＧＰｅ核で一側性にＧｑ−ＤＲＥＡＤＤを発現している６ＯＨＤＡで処理したＰＤマウスに生理食塩水（ＮＳ）およびＣＮＯを５日間投与する間に行った。ＮＳおよびＣＮＯで処理した一側性ＰＤマウス（ｎ＝６）における運動速度（Ａ）、ロータロッドスコア（Ｂ）、ならびに時計回りの回転の回数（Ｃ）および割合（％）（Ｄ）の平均（平均±ＳＥＭ）。＊＊ｐ＜０．０１

【図10】ＧＰｅにおける一側性のＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの連続５日間の活性化、すなわち、６ＯＨＤＡで誘発させたＰＤマウスの出力大脳基底核の活動の５日間の抑制を示す棒グラフである。オープンフィールド試験およびロータロッド試験を、ＧＰｉおよびＳＮＲ核で一側性にＧｉ−ＤＲＥＡＤＤを発現している６ＯＨＤＡで処理したＰＤマウスに生理食塩水（ＮＳ）およびＣＮＯを５日間投与する間に行った。ＮＳおよびＣＮＯで処理した一側性ＰＤマウス（ｎ＝６）における運動速度（Ａ）、ロータロッドスコア（Ｂ）、ならびに時計回りの回転の回数（Ｃ）および割合（％）（Ｄ）の平均（平均±ＳＥＭ）。＊＊ｐ＜０．０１

【図11】ＥＰ（ＧＰｉ）およびＳＮｒにおけるＧｉ−ＤＲＥＡＤＤと、ＧＰｅおよびＳＮｒにおけるＧｑ−ＤＲＥＡＤＤとを同時に一側性で、すなわち、６ＯＨＤＡで誘発させたＰＤマウスの大脳基底核内の３つの標的を連続して５日間同時に操作した場合を示す棒グラフである。オープンフィールド試験およびロータロッド試験を、ＧＰｉおよびＳＮｒ核でＧｉ−ＤＲＥＡＤＤを、ＧＰｅ核でＧｑ−ＤＲＥＡＤＤを、ＳＴＮ核でＧｑ−ＤＲＥＡＤＤを一側性に発現している６ＯＨＤＡで処理したＰＤマウスに生理食塩水（ＮＳ）およびＣＮＯを５日間投与する間に行った。ＮＳおよびＣＮＯで処理した一側性ＰＤマウス（ｎ＝６）における運動速度（Ａ）、ロータロッドスコア（Ｂ）、ならびに時計回りの回転の回数（Ｃ）および割合（％）（Ｄ）の平均（平均±ＳＥＭ）。＊＊ｐ＜０．０１

【発明を実施するための形態】

【0018】

本発明は、一実施形態において、淡蒼球内節（ＧＰｉ）、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、前部運動視床、視床下核（ＳＴＮ）、またはこれらの任意の組み合わせにおけるニューロン活動に影響を及ぼすことによって、身体運動量の調節を要する対象における身体運動量を調節する方法を提供する。一実施形態では、運動機能を制限する神経性またはＣＮＳ疾患に罹患した対象における運動遂行能および／または運動機能を改善するための方法が提供される。一実施形態では、解剖学的に間接路（ＧＰｅ核）を標的化して調節することにより、運動機能を制限する神経性またはＣＮＳ疾患に罹患した対象における運動遂行能および／または運動機能を改善するための方法が提供される。

【0019】

一実施形態では、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤによりＳＴＮの活動を亢進することにより、片側および両側の実験用ＰＤの両方で実証されているように、ニューロン性運動低下疾患に罹患した対象における運動活動の運動遂行能が回復および／または有意に改善される。一実施形態では、ＧＰｅおよびＳＴＮの両方の活性化によって、ＧＰｅがＳＴＮを阻害することから、同じ行動的治療成績が得られることが予期せずして見出された。一実施形態では、ＧＰｅおよびＳＴＮの両方の活性化によって、例えばＰＤなどの（ただしＰＤに限定されない）ニューロン性運動低下疾患に罹患した対象の運動遂行能の有意な改善がみられることが予期せずして見出された。一実施形態では、大脳基底核複合体内の３つの標的、すなわち、間接路核ＧＰｅ、出力核であるＧＰｉおよびＳＮｒ、ならびにＳＴＮのＤＲＥＡＤＤによる調節により、例えばＰＤなどの（ただしＰＤに限定されない）ニューロン性運動低下疾患に罹患した対象における運動遂行能の有意な改善が生じることが予期せずして見出された。

【0020】

一実施形態では、本明細書において、大脳基底核複合体内の３つの標的、すなわち、間接路核ＧＰｅ、出力核であるＧＰｉおよびＳＮｒ、ならびにＳＴＮのＤＲＥＡＤＤによる調節により、ニューロン性運動低下疾患（例えばＰＤ）に罹患した対象における運動遂行能を有意に改善するための方法が提供される。

【0021】

別の実施形態では、「調節する」なる用語は、変化させることである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、活性化する、亢進させる、回復させる、改善する、またはこれらの任意の組み合わせのことである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、阻害することである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、増大させることである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、誘導することである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、上昇させることである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、低減することである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、差次的に活性化することである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、減少させることである。別の実施形態では、「調節する」なる用語は、差次的に阻害することである。

【0022】

別の実施形態では、「身体運動量を調節する」とは、少なくとも１つの運動の頻度を調節することである。別の実施形態では、「身体運動量を調節する」とは、少なくとも１つの運動の振幅を調節することである。

【0023】

一実施形態において、本発明は、ニューロン性運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療するための方法であって、ａ．淡蒼球内節（ＧＰｉ）のニューロン活動を抑制することと、ｂ．前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、視床下核（ＳＴＮ）のニューロン活動を亢進することと、を含み、ニューロン活動を抑制することが、ＧＰｉニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、ニューロン活動を亢進することが前部運動視床、淡蒼球外節（ＧＰｅ）、または視床下核（ＳＴＮ）のニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、これにより、ニューロン性運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療する、方法を提供する。

【0024】

別の実施形態では、ＤＲＥＡＤＤ、抑制性ＤＲＥＡＤＤ、興奮性ＤＲＥＡＤＤ、またはこれらの任意の組み合わせは、Ｇαｑ（Ｇｑ）シグナル伝達と共役し、ニューロンの発射を誘発するｈＭ３Ｄｑ、Ｇαｉシグナル伝達と共役し、ニューロン性およびシナプス性サイレンシングを媒介するｈＭ４Ｄｉ、およびＧαｓシグナル伝達と共役し、ニューロン活動を調節するｒＭ３Ｄｓである。別の実施形態では、抑制性ＤＲＥＡＤＤは、Ｇαｉ（Ｇｉ）シグナル伝達と共役し、ニューロン性およびシナプス性サイレンシングを媒介するｈＭ４Ｄｉである。別の実施形態では、興奮性ＤＲＥＡＤＤは、Ｇαｑ（Ｇｓ）シグナル伝達と共役するｈＭ３Ｄｑである。別の実施形態では、興奮性ＤＲＥＡＤＤは、Ｇαｓシグナル伝達と共役するｒＭ３Ｄｓである。

【0025】

別の実施形態では、本明細書に述べられるＤＲＥＡＤＤは、ニューロン性標的組織または細胞で発現させるためのベクターにより運ばれる。別の実施形態では、本明細書に述べられるＤＲＥＡＤＤは、ニューロン性標的組織または細胞で発現させるためのウイルスベクターにより運ばれる。別の実施形態では、ウイルスベクターにより運ばれたＤＲＥＡＤＤは、４〜３１日以内にニューロン性標的組織または細胞で充分に発現する。別の実施形態では、ウイルスベクターにより運ばれたＤＲＥＡＤＤは、７〜２５日以内にニューロン性標的組織または細胞で充分に発現する。別の実施形態では、ウイルスベクターにより運ばれたＤＲＥＡＤＤは、１０〜２５日以内にニューロン性標的組織または細胞で充分に発現する。別の実施形態では、ウイルスベクターにより運ばれたＤＲＥＡＤＤは、７〜２１日以内にニューロン性標的組織または細胞で充分に発現する。

【0026】

別の実施形態では、本明細書に述べられるすべてのＤＲＥＡＤＤは、ＣＮＯにより活性化される。別の実施形態では、本明細書に述べられるすべてのＤＲＥＡＤＤは非経口投与により投与されるＣＮＯにより活性化される。別の実施形態では、本明細書に述べられるすべてのＤＲＥＡＤＤは経口投与により投与されるＣＮＯにより活性化される。

【0027】

別の実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、クロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）により活性化される。別の実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの用量のクロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）により活性化される。別の実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、１〜５ｍｇ／ｋｇの用量のクロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）により活性化される。

【0028】

別の実施形態では、本発明は、ＧＰｉニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子をＧＰｉニューロンと接触させることであることを規定する。別の実施形態では、本発明は、ＧＰｉニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することであることを規定する。別の実施形態では、本発明は、前部運動視床、および／または視床下核（ＳＴＮ）、および／または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはこれらの両方を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することを含むことを規定する。

【0029】

別の実施形態では、本発明は、前部運動視床のニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはこれらの両方を含むＡＡＶウイルスベクターを、前部運動視床のニューロンと接触させることを含むことを規定する。別の実施形態では、本発明は、視床下核のニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはこれらの両方を含むＡＡＶウイルスベクターを、視床下核のニューロンと接触させることを含むことを規定する。別の実施形態では、本発明は、ＧＰｅのニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることが、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはこれらの両方を含むＡＡＶウイルスベクターを、ＧＰｅのニューロンと接触させることを含むことを規定する。別の実施形態では、ＡＡＶウイルスベクターを接触させることは、ＡＡＶウイルスベクターを本明細書に述べられるニューロン部位に注入することを含む。別の実施形態では、ＡＡＶウイルスベクターを接触させることは、ＡＡＶウイルスベクターを本明細書に述べられるニューロンに注入することを含む。

【0030】

別の実施形態では、本発明は、淡蒼球内節（ＧＰｉ）のニューロン活動を抑制することと、前部運動視床および／または淡蒼球外節（ＧＰｅ）および／または視床下核（ＳＴＮ）のニューロン活動を亢進することとが同時に行われることを規定する。別の実施形態では、本発明は、ＣＮＯの投与が、淡蒼球内節（ＧＰｉ）のニューロン活動を抑制し、前部運動視床および／または視床下核（ＳＴＮ）および／または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロン活動を一度におよび／または同時に亢進することを規定する。別の実施形態では、本発明は、抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、および興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することが、これに限定されないがＣＮＯなどの単一のリガンドによって実現されることを規定する。別の実施形態では、本発明は、抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化することが第１のリガンドによって実現され、興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することが第２のリガンドによって実現されることを規定する。別の実施形態では、第１のリガンドと第２のリガンドとは交差反応しない。

【0031】

別の実施形態では、抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、またはその両方は、ＤＲＥＡＤＤを発現しているＧＰｉニューロン、ＤＲＥＡＤＤを発現している前部運動視床ニューロン、ＤＲＥＡＤＤを発現しているＳＴＮニューロン、ＤＲＥＡＤＤを発現しているＧＰｅニューロン、またはこれらの任意の組み合わせをＣＮＯと接触させることである。

【0032】

一実施形態では、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤによりＳＴＮの活動を亢進することにより、片側および両側の実験用ＰＤの両方の運動遂行能が回復および／または有意に改善される。一実施形態では、ＧＰｅおよびＳＴＮの活性化によって、ＧＰｅがＳＴＮを阻害することから、同じ行動的治療成績が得られることが予期せずして見出された。一実施形態では、ＧＰｅおよびＳＴＮの活性化によって、ＰＤにおける運動遂行能が有意に改善されることが予期せずして見出された。一実施形態では、大脳基底核複合体内の３つの標的、すなわち、間接路核ＧＰｅ、出力核であるＧＰｉおよびＳＮｒ、ならびにＳＴＮのＤＲＥＡＤＤによる調節により、ＰＤマウスにおける運動遂行能の有意な改善が生じることが予期せずして見出された。

【0033】

一実施形態では、間接路核ＧＰｅ、出力核であるＧＰｉおよびＳＮｒ、ならびにＳＴＮのＤＲＥＡＤＤによる調節により、上記に述べたような疾患に罹患した対象における運動機能が改善および／または回復する。

【0034】

別の実施形態では、運動低下疾患または障害に罹患した対象を治療することは、対象の運動活動性を改善することである。別の実施形態では、運動低下疾患は、心血管疾患である。別の実施形態では、運動低下疾患は、癌の一形態である。別の実施形態では、運動低下疾患は、背部痛をともなう。別の実施形態では、運動低下疾患は、背部から生じる機能障害をともなう。別の実施形態では、運動低下疾患は、肥満症である。別の実施形態では、運動低下疾患は、２型糖尿病である。別の実施形態では、運動低下疾患は、骨粗鬆症である。別の実施形態では、運動低下疾患は、変形性関節症である。別の実施形態では、運動低下疾患は、精神疾患をともなう。別の実施形態では、運動低下疾患は、高血圧である。

【0035】

別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、運動低下症または運動活動性の低下に罹患している。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、大脳基底核の損傷を有する。

【0036】

別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、大脳基底核の破壊による筋運動の部分的喪失を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、大脳基底核の破壊による筋運動の完全な喪失を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、パーキンソン病（ＰＤ）に罹患している。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、筋強剛および運動不能を経験している。

【0037】

別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、アキネジアまたはパーキンソン病の重症例を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、動作緩徐または「ストーンフェイス」（無表情）を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、構音障害を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、ジスキネジアを有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、ジストニアを有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、いずれの所望の方向にも筋肉を動かすことができないことにより特徴付けられるフリージングを有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、神経遮断薬悪性症候群を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、核上性麻痺を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、筋緊張の増大を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、「歯車様」硬直を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、「鉛管様」硬直を有する。別の実施形態では、運動低下疾患に罹患した対象は、姿勢動揺を有する。

【0038】

別の実施形態では、「治療する」とは、筋強剛を低下させることである。別の実施形態では、「治療する」とは、筋強剛を低下させることである。別の実施形態では、「治療する」とは、少なくとも１つの肢の運動範囲を増大させることである。別の実施形態では、「治療する」とは、少なくとも１つの臓器の運動範囲を増大させることである。別の実施形態では、「治療する」とは、運動低下疾患または障害にともなう症状を緩和することである。

【0039】

一実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、大脳皮質−大脳基底核ループ内の核の活動を調節するために用いられる。一実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、本明細書に述べられるような疾患（これに限定されないがＰＤなど）により引き起こされるネットワーク異常を打ち消すために用いられる。一実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、本明細書に述べられるような疾患に罹患した対象の運動活動性を増大させるために用いられる。一実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、大脳基底核の出力活動を低下させるために用いられる。

【0040】

一実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤである。一実施形態では、ＤＲＥＡＤＤは、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤである。一実施形態では、核は、淡蒼球外節（ＧＰｅ）核である。一実施形態では、核は、視床下核（ＳＴＮ）核である。一実施形態では、核は、淡蒼球内節（ＧＰｉ）核である。

【0041】

別の実施形態では、「治療する」とは、脳循環の変化を低下させることである。別の実施形態では、「治療する」とは、頭頂葉の縁上回および角回の血流を低下させることである。別の実施形態では、「治療する」とは、心臓活動および心臓血管の張力の変化を低下させることである。別の実施形態では、「治療する」とは、パーキンソン病にともなう非運動症状を緩和することである。

【0042】

別の実施形態では、「治療する」とは、精神神経疾患を緩和することである。別の実施形態では、「治療する」とは、認知障害を緩和することである。別の実施形態では、「治療する」とは、視空間障害を改善することである。別の実施形態では、「治療する」とは、痴呆のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、行動および気分変動の頻度および／または重篤度を低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、うつ病を緩和することである。別の実施形態では、「治療する」とは、アパシーを緩和することである。別の実施形態では、「治療する」とは、不安を緩和することである。別の実施形態では、「治療する」とは、精神病症状のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、幻覚または妄想のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、睡眠障害を緩和することである。別の実施形態では、「治療する」とは、起立性低血圧症のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、脂性肌のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、多汗症のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、尿失禁のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、性機能不全のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、胃運動不全のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、瞬目率の低下、ドライアイ、追跡眼球運動（眼球追跡）不全、および衝動性運動（同じ方向への両眼の素早い自動的な運動）などの眼球および視角異常のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、上方注視障害を低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、かすみ目または複視のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、嗅覚障害のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、痛覚のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、感覚異常症（皮膚の刺痛およびしびれ感）のリスクを低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、脳の永久的損傷にともなう副作用を低減することである。別の実施形態では、「治療する」とは、本発明の治療によって脳への永久的な損傷がないことである。

【0043】

別の実施形態では、ニューロン活動を亢進することは、ニューロン頻度を増大させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を亢進することは、ニューロン入力、出力、またはその両方を増大させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を亢進することは、活動電位を増大させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を亢進することは、ニューロンが発射する速度を高めることである。別の実施形態では、ニューロン活動を亢進することは、ニューロンの活動を増大させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を亢進することは、ニューロンの活動を誘発することである。別の実施形態では、ニューロン活動を亢進することは、振動活性を生成することである。別の実施形態では、ニューロン活動は、当業者には周知の任意の方法または手段によって測定される。

【0044】

別の実施形態では、ニューロン活動を抑制することは、ニューロン頻度を減少させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を抑制することは、ニューロン入力、出力、またはその両方を減少させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を抑制することは、活動電位を減少させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を抑制することは、ニューロンが発射する速度を減少させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を抑制することは、ニューロンの活動を減少させることである。別の実施形態では、ニューロン活動を抑制することは、振動活性を阻害することである。

【0045】

別の実施形態において、本発明は、ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療するための方法であって、ａ．淡蒼球内節（ＧＰｉ）のニューロン活動を亢進することと、ｂ．前部運動視床または淡蒼球外節（ＧＰｅ）、または視床下核（ＳＴＮ）のニューロン活動を抑制することと、を含み、ニューロン活動を亢進することが、ＧＰｉニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、ニューロン活動を抑制することが前部運動視床または視床下核（ＳＴＮ）、または淡蒼球外節（ＧＰｅ）のニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることと、抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化することとを含み、これにより、ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療する、方法を提供する。

【0046】

別の実施形態では、ＧＰｉニューロンに興奮性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることは、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、Ｇｓ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子、またはその両方を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである。別の実施形態では、前部運動視床または淡蒼球外節（ＧＰｅ）、または視床下核（ＳＴＮ）のニューロンに抑制性ＤＲＥＡＤＤをトランスフェクトすることは、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤ遺伝子を含むＡＡＶウイルスベクターを注入することである。別の実施形態では、淡蒼球内節（ＧＰｉ）のニューロン活動を亢進することと、前部運動視床または淡蒼球外節（ＧＰｅ）、または視床下核（ＳＴＮ）のニューロン活動を亢進することとは、一度におよび／または同時に行われる。別の実施形態では、抑制性ＤＲＥＡＤＤを活性化すること、および興奮性ＤＲＥＡＤＤを活性化することは、これに限定されないがＣＮＯなどの単一のリガンドによって実現される。

【0047】

別の実施形態では、ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療することは、対象の運動活動性を改善することである。別の実施形態では、ニューロン性運動亢進疾患または障害に罹患した対象を治療することは、脳に永久的な損傷を誘発しない。

【0048】

別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、運動過剰症または運動亢進症である。別の実施形態では、運動亢進疾患は、ハンチントン病である。別の実施形態では、運動亢進疾患は、低血圧症を更に含む。別の実施形態では、運動亢進疾患または疾患は、コレア、ジストニア、ダニ障害、トゥレット症候群、片側バリズム、またはこれらの任意の組み合わせである。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、アテトーシスである。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、運動失調である。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、片側バリズムである。

【0049】

別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、遅発性ジスキネジアである。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、常同症である。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、ミオクロ−ヌスである。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、片側顔面けいれんである。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、遅発性ジストニアである。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、ウィルソン病である。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、意志運動過剰症（ｖｏｌｉｔｉｏｎａｌ ｈｙｐｅｒｋｉｎｅｓｉａｓ）を含む。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、振戦を含む。別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、脚不穏症候群を含む。

【0050】

別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、脳卒中後後遺症を含む。

【0051】

別の実施形態では、運動亢進疾患または障害は、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症を含む。。

【0052】

一実施形態では、ＰＤなどのニューロン性運動低下疾患に罹患した対象は、大脳基底核ループ内の異なる核の活動を改変することにより、本明細書に述べられる方法にしたがって治療される。一実施形態では、大脳基底核ループ内の異なる核の活動を変化させることは、「デザイナー薬物のみによって活性化されるデザイナー受容体」（ＤＲＥＡＤＤ）（実施例２）によって実現される。一実施形態では、本明細書において、抑制性ＧＰｉおよびＳＮｒ核の腹側視床への出力を低減するための方法が提供される。一実施形態では、本明細書において、新皮質への興奮性ドライブを増大させるための方法が提供される。

【0053】

一実施形態では、本明細書において、大脳基底核ループの３つの異なる核、すなわち、大脳基底核ループの出力核としての機能を有するＧＰｉおよびＳＮｒ核、間接路にのみ関与しているＧＰｅ、ならびにＰＤ患者の深部脳刺激（ＤＢＳ）の主標的としての役割を有するＳＴＮを標的とすることにより、ＰＤの運動症状を改善するための方法が提供される。一実施形態では、本発明は、抑制性出力核（ＧＰｉおよびＳＮｒ核）におけるニューロン発射の阻害を提供する。一実施形態では、本発明は、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤを介した抑制性出力核（ＧＰｉおよびＳＮｒ核）におけるニューロン発射の阻害を提供する。一実施形態では、本発明は、ＳＴＮで発現されるＧｉの活性化を提供する。一実施形態では、ＰＤを治療すること、またはＰＤにともなう副作用を阻害することは、ＳＴＮで発現されるＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの活性化を含む。一実施形態では、ＰＤを治療すること、またはＰＤにともなう副作用を阻害することは、両側性のＧｑ活性化を含む。一実施形態では、治療することは、運動活動性を増大、回復、または亢進することである。

【0054】

一実施形態では、「生理学的に許容される担体」および／または「医薬的に許容される担体」は、ＣＮＯなどのＤＲＥＡＤＤ活性化物質と組み合わされる。一実施形態では、互換可能に使用される「生理学的に許容される担体」および「医薬的に許容される担体」なる語句は、生物に顕著な刺激を生じず、投与された調節物質の生物学的活性および特性を損なわない担体または希釈剤のことを指す。これらの語句にはアジュバントが含まれる。一実施形態では、医薬的に許容される担体に含まれる成分の１つを例えば、有機および水性媒体の両方に広範囲の溶解度を有する生体適合性ポリマーであるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とすることができる（Ｍｕｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９７９））。

【0055】

一実施形態では、「賦形剤」とは、有効成分の投与を更に促進するために医薬組成物に添加される不活性物質のことを指す。一実施形態では、賦形剤として、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種の糖類、ならびに各種のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、およびポリエチレングリコールが挙げられる。

【0056】

薬剤を処方および投与するための技術は、本明細書に参照により援用するところの「レミントン医薬品科学」（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， ペンシルベニア州イーストン、最新刊）に記載されている。

【0057】

一実施形態では、好適な投与経路として、例えば、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、経鼻投与、腸内投与、または、筋肉内注射、皮下注射および脊髄内注射を含む非経口投与、ならびにくも膜下注射、直接心室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射、または眼内注射が挙げられる。

【0058】

一実施形態では、経口投与は、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、チュアブル錠、懸濁液、エマルジョンなどからなる単位剤形を含む。かかる単位剤形は、安全かつ有効な量の１乃至複数の所望の調節物質を含む。経口投与用の単位剤形の調製に適した医薬的に許容される担体は、当該技術分野では周知のものである。

【0059】

特定の実施形態では、錠剤は一般的に、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、マンニトール、ラクトースおよびセルロースなどの不活性希釈剤；デンプン、ゼラチンおよびスクロースなどの結合剤；デンプン、アルギン酸およびクロスカルメロースなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルクなどの潤滑剤などの従来の医薬的に適合性を有するアジュバントを含む。一実施形態では、粉末混合物の流動特性を改善するために二酸化ケイ素などの滑剤を使用することができる。一実施形態では、外観用にＦＤ＆Ｃ色素などの着色料を添加することができる。アスパルテーム、サッカリン、メントール、ペパーミント、およびフルーツフレーバーなどの甘味料および香味剤は、チュアブル錠で有用な補助剤である。カプセル剤は、上記に開示した１以上の固体希釈剤を一般的に含む。特定の実施形態では、担体成分の選択は、味、コスト、および保存安定性などの副次的な考慮事項によって決まるが、これらは本発明の目的にとって重要なものではなく、当業者によって容易に行うことができる。

【0060】

一実施形態では、経口剤形は、所定の放出プロファイルを有する。一実施形態では、本発明の経口剤形は、徐放性の錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、またはチュアブル錠を含む。

【0061】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための組成物は、溶液またはエマルジョンを含み、これらは特定の実施形態では、安全かつ有効な量の本発明の調節物質と必要に応じて他の化合物とを含む水溶液または水性エマルジョンである。

【0062】

別の実施形態では、医薬組成物は、液体製剤の静脈内注射、動脈内注射、または筋肉内注射によって投与される。特定の実施形態では、液体製剤として、溶液、懸濁液、分散液、エマルジョン、オイルなどが挙げられる。一実施形態では、医薬組成物は静脈内投与されるため、静脈内投与に適した形態で配合される。別の実施形態では、医薬組成物は動脈内投与されるため、動脈内投与に適した形態に配合される。一実施形態では、医薬組成物は筋肉内投与されるため、筋肉内投与に適した形態に配合される。

【0063】

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥によるなど、当該技術分野では周知のプロセスによって製造される。

【0064】

別の実施形態では、調節物質は小胞、詳細にはリポソーム中で投与される（Ｌａｎｇｅｒ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３ （１９９０）； Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ， Ｌｏｐｅｚ− Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （ｅｄｓ．）， Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ３５３−３６５ （１９８９）； Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ， 同上， ｐｐ． ３１７−３２７； 概論は同上参照）。

【0065】

一実施形態では、本発明の組成物は、調節物質を含んだ１以上の単位剤形を含む、ＦＤＡにより承認されたキットのようなパックまたはディスペンサー装置で提供される。一実施形態では、パックは例えばブリスターパックのような金属箔またはプラスチック箔からなるものである。一実施形態では、パックまたはディスペンサー装置には、投与の説明書が付属する。一実施形態では、パックまたはディスペンサーは、処方薬用に米国食品医薬品局により認可されたものか、医薬品の製造、使用または販売を規制する行政機関により指定された形態の容器に付属する、行政機関による組成物の形態または人間もしくは家畜への投与の承認を反映した、承認された製品注意書きにしたがうものである。一実施形態では、かかる注意書きは、挿入書きによって承認されたラベリングである。

【0066】

一実施形態では、本発明の調節物質は、更なる有効成分と併用して個人に投与されることで、各薬剤単独による治療と比較して高い治療効果を得ることができる点は認識されよう。別の実施形態では、併用療法にともなう有害な副作用に対して対策が講じられる（例えば相補的な薬剤の投与および選択）。
実施例
材料および方法
動物

【0067】

本実験では、成体のＣ５７ブラックマウスを用いる。
ベクター

【0068】

ＤＲＥＡＤＤは、ウイルス粒子内で与えられる。ウイルス粒子はインサイチューで注射される。

【0069】

ＡＡＶ−ｈＳｙｎ−ｈＭ３Ｄ（Ｇｑ）−ｍＣｈｅｒｒｙおよびＡＡＶ−ｈＳｙｎ−ｈＭ４Ｄ（Ｇｉ）−ｍＣｈｅｒｒｙの２種類のウイルスベクターを用いる。これらのウイルスを標的脳領域（ＧＰｉ、視床、ＧＰｅ、または視床下核のいずれか）に定位固定装置により注入する。
パーキンソン病モデル

【0070】

６ＯＨＤＡモデルを使用した。
行動試験

【0071】

運動障害およびこれらの障害を逆行させるＤＲＥＡＤＤ治療の効果を観察するため、以下の行動試験を行った。オープンフィールド試験：運動活動性機能障害を測定するもの。この試験では、正方形のアリーナ内でのマウスの自然な運動を記録し、定量した。ロータロッド試験：マウスを回転するロッドの上に乗せ、予め設定された加速プログラムを用いて回転速度を４〜４０ＲＰＭに徐々に上げた。ロッド上で測定される最大時間を３００秒として、マウスが回転ロッドから落下した時間を測定した
実施例１：ＤＲＥＡＤＤは、運動亢進症および運動低下症に効果を有する。

【0072】

Ｃ５７ブラックマウスにウイルスベクターを注射する（興奮性ＤＲＥＡＤＤ（Ｇｑ）の遺伝子を含むＡＡＶ−ｈＳｙｎ−ｈＭ３Ｄ（Ｇｑ）−ｍＣｈｅｒｒｙまたは抑制性ＤＲＥＡＤＤ（Ｇｉ）の遺伝子を含むＡＡＶ−ｈＳｙｎ−ｈＭ４Ｄ（Ｇｉ）−ｍＣｈｅｒｒｙのいずれかを、標的脳領域（ＧＰｉ、ＧＰｅ、ＳＴＮまたは前部視床、単独若しくは組み合わせ）に注射する。注射は、定位固定装置に取り付けたマイクロインジェクターにより行う。ウイルスを腹腔内注射した後、６ＯＨＤＡを投与して（定位固定注射）実験用パーキンソン病マウスを作製する。

【0073】

６ＯＨＤＡによる実験用パーキンソン病の誘発のおよそ３週間後に行動実験を行う。ＤＲＥＡＤＤ分子（Ｇｑ、Ｇｉ、または両方）をＣＮＯのＩＰ注射により活性化する。これらの実験では、コントロール条件（注射しないもの）、ＣＮＯの注射、および生理食塩水の偽注射を行ったパーキンソン病マウスの行動を比較する。

【0074】

マウスの運動遂行能をオープンフィールド試験、ロータロッド試験で観察する。

【0075】

以下のＤＲＥＡＤＤを含んだウイルスベクターの各注射を行う。

【0076】

すなわち、１）Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤをＧＰｉに両側性に注射する。２）Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤを視床に両側性に注射する。３）Ｇｉ−またはＧｑ−ＤＲＥＡＤＤのいずれか一方をＳＴＮに両側性に注射する。４）Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤをＧＰｅに両側性に注射する。

【0077】

更に、相乗効果を得るために、ＤＲＥＡＤＤを含むウイルスベクターを２つの別々の脳領域に同時に注射する。すなわち、１）Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤをＧＰｉおよびＳＴＮに両側性に注射する。２）両側性にＧｉ−ＤＲＥＡＤＤをＧＰｉに注射し、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤをＳＴＮに注射する。３）両側性にＧｉ−ＤＲＥＡＤＤをＧＰｉに注射し、Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤを視床に注射する。４）Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤをＧＰｅに両側性に注射する。
実施例２：パーキンソン病の化学遺伝子治療

【0078】

この一群の実験は、ＰＤにともなうネットワーク異常を、本明細書に述べられるような「デザイナー薬剤によってのみ活性化するデザイナー受容体」（Ｄｅｓｉｇｎｅｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ Ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ Ｄｅｓｉｇｎｅｒ Ｄｒｕｇｓ）（ＤＲＥＡＤＤ）を用いて大脳基底核ループ内の異なる核の活性を改変することによって矯正可能であることのエビデンスを与えるものである。

【0079】

各実験は、月齢２〜４ヶ月の野生型Ｃ５７ブラックマウスで行った。実験用ＰＤを誘発するため、６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）を含有する溶液（３ｍｇ／１ｍｌ）１μＬを頭蓋に穿孔した小さな開頭部より内側前脳束に注射した。マウスの頭部を定位固定フレームに固定し、マイクロマニピュレータで掴んだガラスピペットおよびマイクロインジェクターを用いて６ＯＨＤＡ含有溶液を注射した。

【0080】

マウスは手技の全体を通じてイソフルランで麻酔した。６ＯＨＤＡをＭＦＢ（内側前脳束）に一側性または両側性に注射して両側性の実験用ＰＤを誘発させた。

【0081】

６ＯＨＤＡ注射後まもなく、麻酔から回復した後、マウスは時計回りに回転を始めた（注射した側と同側）マウスを６ＯＨＤＡの注射後の最初の数日間、ＩＰグルコースおよび生理食塩水で処置した。更に、注射後の最初の１週間、マウスにスクロース溶液を自由に飲ませた。実験用ＰＤの誘発後少なくとも３週間にわたって行動実験を行った。
ＤＲＥＡＤＤの発現

【0082】

ＤＲＥＡＤＤ（抑制性ＤＲＥＡＤＤ（Ｇｉ）または興奮性ＤＲＥＡＤＤ（Ｇｑ）のいずれか）を発現させるため、ウイルスベクターを注射した（ＡＡＶ８−ｈＳｙｎ−ｈＭ３Ｄ（Ｇｑ）−ｍＣｈｅｒｒｙまたはＡＡＶ８−ｈＳｙｎ−ｈＭ４Ｄ（Ｇｉ）−ｍＣｈｅｒｒｙ）。ウイルスベクターは、マイクロマニピュレータで掴んだガラスピペットおよびマイクロインジェクターを用いて開頭部から注射した。注射を行う際、正確な注射を行うために頭部を定位固定フレームで固定した。マウスは手技の全体を通じてイソフルランで麻酔した。

【0083】

ウイルスベクター（２００〜５００μＬ）を、ＳＴＮ（ＧｉおよびＧｑ）、ＥＰおよびＳＮｒ核（Ｇｉ）、ＧＰｅ（Ｇｑ）、ならびに腹側視床（Ｇｑ）を含む大脳基底核ループの複数の標的に注射した。注射は通常、６ＯＨＤＡ注射を行った側に一側性に行った。しかしながら、両側性に６ＯＨＤＡ注射を行った場合では、ウイルスベクターを標的核に両側性に注射した。通常、ウイルスベクターと６ＯＨＤＡとは同じセッションで注射した。

【0084】

ＤＲＥＡＤＤ発現の位置を確認するため、すべての実験の最後に脳を摘出してパラホルムアルデヒド（４％）中で固定した。数日後にビブラトームを用いて脳を切片化（１００μｍ体軸断面）し、ＤＲＥＡＤＤの発現を蛍光タンパク質ｍＣｈｅｒｒｙの蛍光画像法によってイメージングした。ＤＲＥＡＤＤ発現の解剖学的位置を、脳切片の同時明視野イメージングによって決定した。
クロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）および生理食塩水の投与

【0085】

ＤＲＥＡＤＤ活性化の効果を調べるため、５００μＬの腹腔内ＣＮＯ（５ｍｇ／ｋｇ）または生理食塩水（ＮＳ、０．９％ＮａＣｌ）を投与した。ＣＮＯまたは生理食塩水の投与は盲検的に行った。ＣＮＯおよびＮＳの入ったバイアルは、腹腔内投与も行わなければ行動の分析も行わない第２の実験者によって数値コードで標識させた。腹腔内薬剤投与の約２０〜３０分後に行動実験を行った。
行動試験

【0086】

マウスの行動を観察するために２つの行動試験を行った。（１）オープンフィールド試験：マウスを３０ｃｍ×３０ｃｍ×３０ｃｍの上部が開いた箱に５分間入れ、ビデオに継続的に記録した。結果を実験終了後にオフラインで分析した。ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して、マウスが移動した平均速度および距離を５分間のオープンフィールド試験の間に観察した。更に、１８０°の反転の回数および方向をＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎソフトウェアを用いて観察した。オープンフィールド試験は２日間連続して行った（マウスに薬剤（ＮＳまたはＣＮＯ）を盲検投与した２０〜３０分後）。（２）ロータロッド試験：マウスを回転するロッドの上に乗せ、予め設定された加速プログラムを用いて回転速度を４〜４０ＲＰＭに徐々に上げた。ロッド上で測定される最大時間を３００秒として、マウスが回転ロッドから落下した時間を測定した。各試験セッションについて、ロータロッド試験を連続３日間行った。初日にマウスに４回のトレーニングセッションを行った。残りの２日間では、マウスを一日１回試験した（腹腔内薬剤（盲検投与したＣＮＯまたはＮＳ）を投与した２０〜３０分後）。

【0087】

下記に示す結果は、大脳基底核ループの３つの異なる核、すなわち、大脳基底核ループの出力核としての機能を有するＥＰ（霊長類のＧＰｉに相当）およびＳＮｒ核、間接路にのみ関与しているＧＰｅ、ならびにＰＤ患者の深部脳刺激（ＤＢＳ）の主標的としての役割を有するＳＴＮを標的とすることによって得られたＰＤの運動症状の改善を示している。
脳脚内核（ＥＰ、齧歯類のＧＰｉ）および黒質網様部

【0088】

ＥＰおよびＳＮｒ核は、直接路、間接路、およびハイパー直接路が収束する大脳基底核ループの出力核としての機能を有している。この実験の目的は、Ｇｉ−ＤＲＥＡＤＤを用いてＳＮｒおよびＥＰ核（霊長類ＧＰｉの齧歯類における相当物）の発射を阻害することにより、ＰＤまたはＰＤの症状を治療することにある。

【0089】

詳細には、生理食塩水（ＮＳ）およびＣＮＯの盲検腹腔内投与を、片側パーキンソン病（ＭＦＢに６−ＯＨＤＡを注射したもの）およびコントロールマウスで比較した。検討した行動パラメータとしては、オープンフィールド試験における同側性反転および移動速度、ならびにロータロッド試験において回転ロッドから落下するまでの時間が挙げられる。

【0090】

正常コントロールと、実験用に６ＯＨＤＡで片側ＰＤを誘発させたマウスとでは、ＣＮＯおよびＮＳの盲検腹腔内投与間で、検討した３つの行動パラメータのいずれにおいても有意差は認められなかった（図１）。

【0091】

これに対して、６ＯＨＤＡで片側ＰＤを誘発させ、ＥＰおよびＳＮｒ核でＧｉ−ＤＲＥＡＤＤを発現させたマウスでは、盲検下でのＣＮＯ投与により、ＮＳと比較して検討したすべての行動パラメータで有意かつ驚くほど良好な行動遂行能が生じた。ＮＳと比較して、ＣＮＯでは、オープンフィールド試験における平均速度には３６±９％の改善がみられ、時計回り回転の回数は６８．９±１０．８％低下し、その割合（％）は４６±８．６％低下し、ロータロッド試験における回転ロッド上での時間は３０．５±７．１％増大した（図２）。
淡蒼球外節（ＧＰｅ）核の標的化

【0092】

この一群の実験では、間接路にのみ属する主中継核としての機能を有するＧＰｅ核を標的とした。より詳細には、ＧＰｅニューロンを興奮性Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤを用いて活性化し、６−ＯＨＤＡで誘発させた片側パーキンソン病マウスの行動に対する効果を観察した。

【0093】

これらの実験により、ＣＮＯの盲検投与は、腹腔内（ＩＰ）投与された生理食塩水（ＮＳ）と比較してすべての行動パラメータの有意な改善を生じたことが示された。ＣＮＯの投与により、オープンフィールド試験における平均速度に７７．２±２４．７％の増大がみられ、時計回り回転の回数は３７．７±２０％低下し、その割合（％）は４０±７．８％低下し、ロータロッド試験における回転ロッド上での時間は２５．６±６．１％増大した（図４）。したがって、ＧＰｅ核のＤＲＥＡＤＤ媒介活性化による間接路の活性化を抑制することにより、一側性および両側性の６−ＯＨＤＡ誘発ＰＤマウスで検討したすべての運動パラメータの遂行能が有意に改善された。運動遂行能および／または機能に対するＧＰｅのＤＲＥＡＤＤ媒介活性化の効果は、両側性の６−ＯＨＤＡ誘発ＰＤの場合でより顕著であった（Ｇｑ−ＤＲＥＡＤＤは、片側または両側パーキンソン病マウスのＧＰｅでそれぞれ一側性および両側性に発現させた）。
視床下核（ＳＴＮ）

【0094】

ＧＰｅ核と異なり、ＳＴＮニューロンは間接路およびハイパー直接路の両方に関与している。実験用に６ＯＨＤＡで誘発させたＰＤの行動に対するＳＴＮで発現させた抑制性および興奮性ＤＲＥＡＤＤの効果について試験した。

【0095】

ＮＳに対するＣＮＯの盲検腹腔内投与の効果をオープンフィールド試験およびロータロッド試験で比較したところ、ＳＴＮで発現させたＧｉの活性化によってロータロッド試験における平均速度にも遂行能にも有意な影響は見られないことが示された。ＳＴＮ核で発現したＧｉ−ＤＲＥＡＤＤの活性化は、反転についてはわずかではあるが有意な有益な効果を示した。

【0096】

これに対して、ＳＴＮで発現したＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの活性化は、６−ＯＨＤＡによる実験用ＰＤに対して大きな、予想外かつ有意な有益な効果を示した。ＣＮＯの投与により、オープンフィールド試験における平均速度に１１７．６±２６．９％の増大がみられ、時計回り回転の回数は３７．２±１７％低下し、その割合（％）は４７．６±１１．１％低下した。ロータロッド試験における遂行能は、この群での盲検ＣＮＯおよびＮＳ投与間で有意差は認められなかった（図６）。

【0097】

更に、両側性の実験用ＰＤ（ＭＦＢに６ＯＨＤＡを両側性に注射したもの）に対する両側性のＧｑ活性化の効果について試験した。これらのマウスでのＧｑ活性化は劇的な予想外の効果をもたらすことが見出された。ＣＮＯ投与により、オープンフィールド試験において平均速度は２９４．４±７０．９％増大し、ロータロッドから転落するまでの時間は８１±１５．８％増大した（図７）。この場合、最初に両側性の実験用ＰＤを有するマウスでどちらの側にも回転する傾向をほとんど示さなかったことから（毎分０．１±０．０６の反転）、反転については分析を行わなかった。

【0098】

図８は、これらの実験で行った異なるＤＲＥＡＤＤ媒介操作間の比較を示している。
出力核と間接路の同時抑制

【0099】

この項で得られた結果は、上記に示した知見を更に支持するものである。この一群の実験では、ＮＳとＣＮＯを毎日、連続５日間腹腔内投与した。オープンフィールド試験を２日目および４日目に行った（ＣＮＯおよびＮＳ群の両方で）。ロータロッド試験を３日目および５日目に行った。運動速度、回転、およびロータロッドスコアの結果を、生理食塩水とＣＮＯの投与間で比較した。

【0100】

以下の条件について検討した。出力核の抑制の影響、すなわち、片側パーキンソン病マウスのＧＰｉおよびＳＮｒ核における、ＤＲＥＡＤＤを介したＧｉの活性化の影響を更に支持する結果を図９に示す。片側パーキンソン病マウスのＧＰｅ核におけるＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの活性化による、運動活動性に対する間接路の抑制の影響を更に支持する結果を図１０に示す。出力核と間接路の同時抑制、ならびに、ＧＰｉおよびＳＮＲ核におけるＧｉ−ＤＲＥＡＤＤ、ＧＰｅ核におけるＧｑ−ＤＲＥＡＤＤ、およびＳＴＮにおけるＧｑ−ＤＲＥＡＤＤの同時活性化によるＳＴＮの活性化の影響のエビデンスを図１１に示す。

【0101】

これらの実験群は、実験用パーキンソン病において大脳基底核内の異なる核および経路を標的とすることで、実験用ＰＤの予想外の改善された運動遂行能および／または機能がもたらされることを示すものである。詳細には、ＧＰｅ核を標的とすることにより間接路の活動を抑制し、ＳＴＮを活性化し、更に、出力核であるＧＰｉおよびＳＮｒを標的として大脳基底核の出力活性を抑制することで、ＰＤに罹患したマウスにおける運動遂行能および／または機能の前例のない回復および／または改善がもたらされた。

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4-1】

【図4-2】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9-1】

【図9-2】

【図10-1】

【図10-2】

【図11-1】

【図11-2】

【国際調査報告】