特表 2019-536470 シグレック−１５に対する抗体及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2019-536470(P2019-536470A)

(43)【公表日】2019年12月19日

(54)【発明の名称】シグレック−１５に対する抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20191122BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20191122BHJP

   C07K 16/42 20060101ALI20191122BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20191122BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20191122BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20191122BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20191122BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20191122BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20191122BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20191122BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20191122BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20191122BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20191122BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20191122BHJP

   A61P 37/04 20060101ALN20191122BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/13ZNA

   C07K16/28

   C07K16/42

   C07K19/00

   C07K14/705

   C12N1/15

   C12N1/19

   C12N1/21

   C12N5/10

   A61K39/395 N

   A61K39/395 T

   A61K39/395 U

   A61P35/00

   A61P35/02

   A61P19/10

   G01N33/53 D

   A61P37/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】155

(21)【出願番号】特願2019-537042(P2019-537042)

(86)(22)【出願日】2017年9月21日

(85)【翻訳文提出日】2019年4月24日

(86)【国際出願番号】US2017052714

(87)【国際公開番号】WO2018057735

(87)【国際公開日】20180329

(31)【優先権主張番号】62/451,272

(32)【優先日】2017年1月27日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/500,578

(32)【優先日】2017年5月3日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/397,794

(32)【優先日】2016年9月21日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】519038552

【氏名又は名称】ネクストキュア インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100114889

【弁理士】

【氏名又は名称】五十嵐 義弘

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】リュー リンダ

(72)【発明者】

【氏名】フライズ ダラス ベンジャミン

(72)【発明者】

【氏名】ランゲルマン ソーローモン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC02

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

シグレック−１５結合分子が提供される。該分子は、典型的には、シグレック−１５に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである。シグレック−１５リガンド結合分子も提供される。該分子は、典型的には、シグレック−１５ポリペプチドまたは融合タンパク質である。シグレック−１５に媒介される免疫抑制を低減させるために該分子を、それを必要とする対象において使用する方法も提供される。
【選択図】図１

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【特許請求の範囲】

【請求項1】

６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
前記ＣＤＲが、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７、または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を含むそれらの変異体
からなる群から選択されるポリペプチドの３つの軽鎖ＣＤＲ、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９、または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれ以上の配列同一性を含むそれらの変異体
からなる群から選択されるポリペプチドの３つの重鎖ＣＤＲ
を含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントがシグレック−１５に結合する、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項2】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７、または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を含むそれらの変異体
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９、または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を含むそれらの変異体
からなる群から選択されるアミノ酸配列ポリペプチドを含む重鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項3】

（Ｉ）細胞（とりわけ生細胞）の表面上に配列される；
（ＩＩ）細胞（とりわけ生細胞）の表面上に内因性濃度で配列される；
（ＩＩＩ）生細胞の表面上に配列され、シグレック−１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）と、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα、ＬＲＲＣ４Ｃ、シグレック−１５対抗受容体（Ｓ１５−ＣＲ）、もしくはそれらの組み合わせとの結合を調節する；
（ＩＶ）生細胞の表面上に配列され、ＴＧＦ−βの分泌を低減させる、防止する、または阻害する；
（Ｖ）生細胞の表面上に配列される；または
（ＩＶ）それらの組み合わせを行う、
シグレック−１５に結合する請求項１〜２または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項4】

前記細胞が、マクロファージまたは樹状細胞である、請求項１〜３または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項5】

免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）からの１つまたは複数の定常ドメインを含む、請求項１〜４または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項6】

前記定常ドメインがヒト定常ドメインである、請求項５または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項7】

前記ヒト定常ドメインが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭドメインである、請求項６または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項8】

ヒトＩｇＧ定常ドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインである、請求項７または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項9】

検出可能に標識されるか、またはコンジュゲートされた毒素、薬物、受容体、酵素、受容体リガンドを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項10】

前記抗体が、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または一本鎖抗体である、請求項１〜９または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項11】

前記抗体が、単一特異性、二重特異性、三重特異性、または多重特異性抗体である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項12】

分子がＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合活性の低下を呈するかまたはＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合活性を呈さないように、前記抗体が改変されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項13】

強化された抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を呈するように、前記抗体が改変されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項14】

請求項１〜１３または４６〜５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと、生理学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記抗体が、シグレック−１５のそのリガンドへの結合を低減させるもしくは防止する、及び／またはシグレック−１５に媒介されるシグナル伝達を低減させるもしくは防止する、前記医薬組成物。

【請求項15】

前記リガンドが、シアル酸付加された糖タンパク質、ロイシンリッチリピート含有タンパク質４Ｃ（ＬＲＲＣ４Ｃ）、シグレック−１５対抗受容体、またはそれらの組み合わせである、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

前記リガンドが、腫瘍細胞の表面上に発現される、請求項１４または１５に記載の組成物。

【請求項17】

対象に有効量の請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、治療を必要とする前記対象を治療する方法。

【請求項18】

前記対象が、がんまたは感染性疾患を有する、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記対象が、シグレック−１５のリガンドを発現または過剰発現している細胞を含むがんを有する、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、免疫応答を増大させる、腫瘍増殖を遅延させるもしくは防止する、腫瘍に媒介される免疫抑制を阻害する、腫瘍を排除する、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の活性を枯渇させるもしくはブロックしてその活性を変化させる、ＴＡＭに媒介される免疫抑制を減少させる、Ｔ細胞の抑制を低減もしくは逆転させる、またはそれらの組み合わせを行う、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記がんまたは腫瘍が、シグレック−１５を発現するマクロファージを含む、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記マクロファージによるＴＧＦ−βの発現及び／または分泌を低減させるのに有効な量で前記対象に投与される、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記対象に第２の治療用物質を投与することをさらに含む、請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

（ａ）請求項１〜１３または４６〜５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現をアッセイすること、及び（ｂ）前記シグレック−１５のレベルを対照のレベルと比較することを含む、疾患、障害、または感染症を検出または診断する方法であって、
前記対照のレベルと比較した前記シグレック−１５のアッセイレベルの増加が、前記疾患、障害、または感染症の指標である、前記方法。

【請求項25】

（ａ）請求項１〜１３または４６〜５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、最初の時点及びその後の時点で得られた対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現をアッセイすること；ならびに（ｂ）前記最初の時点及びその後の時点での前記対象の前記細胞中または前記組織試料中の前記シグレック−１５の発現のレベルを比較することを含む、疾患、障害、または感染症の進行をモニタリングするための方法であって、
前記最初の時点と比較した前記その後の時点での前記シグレック−１５のアッセイレベルの増加が、前記疾患、障害、または感染症の進行の指標である、前記方法。

【請求項26】

（ａ）請求項１〜１３または４６〜５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、治療の前後での対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現をアッセイすること；及び（ｂ）前記シグレック−１５の経時的なレベルを比較することを含む、治療に対する応答をモニタリングするための方法であって、
それによる、前記治療前のシグレック−１５のレベルと比較した前記治療後のシグレック−１５のアッセイレベルの減少が、前記治療に対する好適な応答の指標である、前記方法。

【請求項27】

Ｔ細胞の抑制の低減を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、前記対象に有効量の請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項28】

Ｔ細胞におけるサイトカイン産生の増大を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、前記対象に有効量の請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項29】

前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦ−α、またはそれらの組み合わせである；
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせである；または
これらの組み合わせである、
請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

骨成長の増大または骨吸収の低減を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、前記対象に有効量の請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項31】

破骨細胞分化の低減を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、前記対象に有効量の請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項32】

請求項１〜１３または４６〜５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと、生理学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記抗体が、シグレック−１５のそのリガンドへの結合を増大させる及び／またはシグレック−１５に媒介されるシグナル伝達を増大もしくは強化する、前記医薬組成物。

【請求項33】

免疫応答の低減、炎症の低減、炎症反応の低減、自己免疫疾患もしくは障害の治療、移植片もしくは移植拒絶反応の低減、または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療を、それを必要とする前記対象にもたらす方法であって、前記対象に有効量の請求項３２に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項34】

シグレック−１５ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは変異体を含む第１の融合パートナーと、第２の融合パートナーとを含む、融合タンパク質。

【請求項35】

前記第２の融合パートナーがＦｃドメインである、請求項３４に記載の融合タンパク質。

【請求項36】

前記ＦｃドメインがＩｇＧ１に由来する、請求項３５に記載の融合タンパク質。

【請求項37】

前記第１の融合パートナーと第２の融合パートナーとがリンカーによって連結されている、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の融合タンパク質。

【請求項38】

前記リンカーが、ヒンジドメインまたはそのフラグメントである、請求項３７に記載の融合タンパク質。

【請求項39】

前記シグレック−１５ポリペプチドが、前記シグレック−１５細胞外ドメインを含む、請求項３４〜３８のいずれか１項に記載の融合タンパク質。

【請求項40】

前記シグレック−１５ポリペプチドが、前記シグレック−１５細胞外ドメインまたはそのフラグメントからなる、請求項３４〜３９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。

【請求項41】

前記フラグメントが、前記シグレック−１５のＩｇＶドメイン、ＩｇＣ、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４０に記載の融合タンパク質。

【請求項42】

リーダー配列をさらに含む、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。

【請求項43】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９３または１９４に対して少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の配列同一性を含む、融合タンパク質。

【請求項44】

請求項３４〜４３のいずれか１項に記載の融合タンパク質と、生理学的に許容される担体または賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項45】

免疫応答を促進するために、対象に有効量の請求項４４に記載の医薬組成物を投与することを含む、治療を必要とする前記対象を治療する方法。

【請求項46】

ヒト化された抗体が、クローン５Ｇ１２または１Ｈ３に由来する、前記ヒト化抗シグレック−１５抗体。

【請求項47】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５、１９７、１９９、２０１、または２０９のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変軽鎖を有する、ヒト化抗シグレック−１５抗体。

【請求項48】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３、２０６、または２０７のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変重鎖を有する、ヒト化抗シグレック−１５抗体。

【請求項49】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５、１９７、１９９、２０１、または２０９のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変軽鎖、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３、２０６、及び２０７のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変重鎖を有する、ヒト化抗シグレック−１５抗体。

【請求項50】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９、１９５、２０７、１９９、または２０１の軽鎖ＣＤＲ、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３、２０６、または２０７の重鎖ＣＤＲ、ならびにそれらの組み合わせを有する、抗体。

【請求項51】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９、２１０、または２１１の軽鎖アミノ酸配列を有する、抗体。

【請求項52】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２、２１３、２１５、または２１６の重鎖アミノ酸配列を有する、抗体。

【請求項53】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９、２１０、または２１１の軽鎖アミノ酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２、２１３、２１５、または２１６の重鎖アミノ酸配列を有する、抗体。

【請求項54】

破骨細胞形成を阻害するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項１〜１３または４６〜５３のいずれか１項に記載の抗シグレック抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、前記方法。

【請求項55】

破骨細胞形成を阻害するための方法であって、それを必要とする対象に、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む有効量の抗シグレック抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む方法であり、前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２６、２２７、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２０、２２１、２２３、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記方法。

【請求項56】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、治療用物質または細胞傷害性作用物質を含む、請求項５４〜５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

シグレック−１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを構成的または誘導的に発現する細胞であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０〜１３２のいずれか１つを含む軽鎖可変ドメイン及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３〜１４５のいずれか１つからなる群から選択される重鎖可変ドメインをコードする配列を含む１種類または複数種類の核酸を含む、前記細胞。

【請求項58】

シグレック−１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを構成的または誘導的に発現する細胞であって、請求項１〜１３及び４４〜５３のいずれか１項に記載の抗体をコードする配列を含む１種類または複数種類の核酸を含む、前記細胞。

【請求項59】

前記抗体が治療用物質または細胞傷害性作用物質を含む、請求項１〜１３及び４４〜５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年５月３日に出願された米国仮特許出願第６２／５００，５７８号、２０１７年１月２７日に出願された第６２／４５１，２７１号、及び２０１７年９月２１日に出願された第６２／３９７，７９４号の利益及び優先権を主張するものであり、これらの全ては許容可能であればその全体が参照により組み込まれている。

【0002】

発明の分野
本発明は一般に免疫調節の分野に関し、より詳細にはシグレック−１５及びそれから開始されるシグナル伝達を調節するための組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
シアル酸結合Ｉｇ様レクチン（「シグレック」）は、Ｉｇスーパーファミリーのメンバーである。これらの１型膜貫通タンパク質は、シアル酸に結合するＮ末端Ｖセットドメイン、可変数のＣ２セットＩｇドメイン、膜貫通領域、及びサイトゾル側尾部を含み、細胞表面複合糖質の末端領域に結合したシアル酸に特異的に結合する。シグレックの２つの主要なサブセットが確認されており、１つのサブセットは、ヒトにおけるシグレック−５、−６、−７、−８、−９、１０、−１１、−１４、及び−１６、ならびにマウスにおけるＣＤ３３及びシグレック−Ｅ、−Ｆ、−Ｇ、及び−Ｈなど、ＣＤ−３３及びＣＤ３３関連シグレックを含む（Ｃｒｏｃｋｅｒ ａｎｄ Ｒｅｄｅｌｉｎｇｈｕｙｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，３６（６）：１４６７−１４７１（２００８）（非特許文献１））。第２のサブセットは、Ｓｎ（シアロアドヘシン）（シグレック−１）、ＣＤ２２（シグレック−２）、ＭＡＧ（ミエリン関連糖タンパク質）（シグレック−４）、及びシグレック−１５から構成され、これらの全ては哺乳動物においてよく保存されている。神経系に発現するＭＡＧを除いて、シグレックは白血球の様々なサブセットに異なる形で発現し、そこにおいて免疫応答及び炎症反応の正または負の制御に役割を果たす（ＭｃＭｉｌｌａｎ ａｎｄ Ｃｒｏｃｋｅｒ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，３４３：２０５０−２０５６（２００８）（非特許文献２）及びＣｒｏｃｋｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：２５５ ２６６（２００７）（非特許文献３））。

【0004】

多くのシグレックが免疫細胞に発現し、免疫抑制特性を有することが研究から示されている。しかし、シグレック−１５を含めたシグレックのあるサブセットは、シグナルアダプター分子である１２ｋＤａのＤＮＡＸ活性化タンパク質（ＤＡＰ１２）と会合し、これは、免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有し免疫細胞の活性化に関連している（Ｔａｋａｍｉｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２３（２）：１７８−８７（２０１３）（非特許文献４））。シグレック−１５は、脾臓及びリンパ節のマクロファージ及び樹状細胞に特異的に発現し、ｓＴｎ抗原を優先的に認識する（Ａｎｇａｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１７（８）：８３８−４６（２００７） Ｅｐｕｂ ２００７ Ｍａｙ ４（非特許文献５））。ｓＴｎを過剰発現するＨ１５７細胞（Ｈ１５７／ＳＴ６ＧａｌＮＡｃ−Ｉ）によって、シグレック−１５を発現するＭ−ＣＳＦ誘導マクロファージからのＴＧＦ−βの分泌が刺激された（Ｔａｋａｍｉｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２３（２）：１７８−８７（２０１３）（非特許文献４））。加えて、ＴＨＰ−１細胞からのＴＧＦ−βの分泌は、ＴＨＰ−１細胞内のシグレック−１５及びＨ１５７細胞内のＳＴ６ＧａｌＮＡｃ−Ｉ（ｓＴｎ構造の生合成に関与する酵素）の過剰発現によってそれぞれ強化され、それは、シグレック−１５−ＤＡＰ１２誘導シグナル伝達と共に１つまたは複数のＤＡＰ１２非依存的、Ｓｋｙ依存的、またはおそらくＳｋｙ非依存的経路にも少なくとも部分的に依存し得るような様式で行われる。ＴＧＦ−βは、腫瘍細胞とマクロファージを含めた腫瘍浸潤白血球の両方によって産生され、腫瘍細胞の浸潤を強化することによって、また免疫細胞の機能を阻害することによって、腫瘍の進行及び転移に寄与する（Ｆｌａｖｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１０：５５４−５６７（２０１０）（非特許文献６））。これらのデータは、シグレック−１５によって腫瘍関連ｓＴｎが認識されると、骨髄細胞からのＴＧＦ−βの産生を強化するシグナル伝達経路であるＤＡＰ１２−Ｓｙｋ経路が活性化され、最終的には腫瘍細胞に有利に腫瘍微小環境を改変させることを示し得る（Ｔａｋａｍｉｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２３（２）：１７８−８７（２０１３）（非特許文献４））。シグレック１５は、その細胞質ドメインに典型的なＩＴＩＭドメイン

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を有する。その機能は依然として特徴付けられていない。

【0005】

しかしながら、シグレック−１５及びそれから開始されるシグナル伝達を調節するための手段及び技法に対する必要性が依然として存在する。

【0006】

よって、本発明の目的は、シグレック−１５を検出し、調節するための組成物を提供することである。

【0007】

本発明の目的はまた、シグレック−１５及びそれから開始されるシグナル伝達を調節して免疫応答を増大させるまたは免疫抑制を低減もしくは逆転させる方法を提供することである。

【0008】

本発明の目的はまた、破骨細胞分化を調節して骨吸収を低減させるまたは骨形成を増大させる方法を提供することである。

【0009】

本発明の目的はまた、シグレック−１５及びそれから開始されるシグナル伝達を調節することによって疾患及び障害を治療する方法を提供することである。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｃｒｏｃｋｅｒ ａｎｄ Ｒｅｄｅｌｉｎｇｈｕｙｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，３６（６）：１４６７−１４７１（２００８）

【非特許文献2】ＭｃＭｉｌｌａｎ ａｎｄ Ｃｒｏｃｋｅｒ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，３４３：２０５０−２０５６（２００８）

【非特許文献3】Ｃｒｏｃｋｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：２５５ ２６６（２００７）

【非特許文献4】Ｔａｋａｍｉｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２３（２）：１７８−８７（２０１３）

【非特許文献5】Ａｎｇａｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１７（８）：８３８−４６（２００７） Ｅｐｕｂ ２００７ Ｍａｙ ４

【非特許文献6】Ｆｌａｖｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１０：５５４−５６７（２０１０）

【発明の概要】

【0011】

シグレック−１５結合分子が提供される。該分子は、典型的には、シグレック−１５に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである。例えば、幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ここで、該ＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を有するそれらの変異体からなる群から選択されるポリペプチドの３つの軽鎖ＣＤＲ、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を含むそれらの変異体からなる群から選択されるポリペプチドの３つの重鎖ＣＤＲを含み、該シグレック−１５結合分子は、シグレック−１５に結合する。幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、または１０５Ａと本明細書で呼ばれる、マウス抗ヒトモノクローナル抗体のうちの１つの抗体の軽鎖及び／または重鎖ＣＤＲを含む。

【0012】

幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を有するそれらの変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列ポリペプチドを含む軽鎖可変領域、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を有するそれらの変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列ポリペプチドを含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａと本明細書で呼ばれる、マウス抗ヒトモノクローナル抗体のうちの１つの抗体の軽鎖及び／または重鎖可変領域を含む。

【0013】

幾つかの実施形態では、シグレック−１５に結合するシグレック−１５結合分子は、
（Ｉ）細胞（好ましくは生細胞）の表面上に配列される；
（ＩＩ）細胞（好ましくは生細胞）の表面上に内因性濃度で配列される；
（ＩＩＩ）生細胞の表面上に配列され、シグレック−１５（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２など）と、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα、ＬＲＲＣ４Ｃ、シグレック−１５対抗受容体（Ｓ１５−ＣＲ）、もしくはそれらの組み合わせとの結合を調節する；
（ＩＶ）生細胞の表面上に配列され、ＴＧＦ−βの分泌を低減させる、防止する、または阻害する；
（Ｖ）生細胞の表面上に配列される；または
（ＩＶ）それらの組み合わせを行う。

【0014】

シグレック−１５を内因的に発現する細胞には、マクロファージ、樹状細胞、及びがん細胞が含まれる。

【0015】

シグレック−１５結合分子は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）に由来する１つまたは複数の定常ドメインを含むことができる。定常ドメインは、ヒト定常ドメイン、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭドメインであり得る。特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインである。シグレック−１５結合分子は、検出可能に標識され得るか、またはコンジュゲートされた毒素、薬物、受容体、酵素、受容体リガンドを含む。シグレック−１５結合分子は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、もしくは一本鎖抗体、またはその抗原結合フラグメントであり得る。抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、または多重特異性抗体であり得る。

【0016】

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５、１９７、１９９、２０１、または２０９のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変軽鎖を有する、ヒト化抗シグレック−１５抗体を提供する。

【0017】

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３、２０６、または２０７のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変重鎖を有する、ヒト化抗シグレック−１５抗体を提供する。

【0018】

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５、１９７、１９９、２０１、または２０９のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変軽鎖、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３、２０６、及び２０７のアミノ酸配列を有する１つまたは複数の可変重鎖を有する、ヒト化抗シグレック−１５抗体を提供する。

【0019】

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９、１９５、２０７、１９９、または２０１の軽鎖ＣＤＲ、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３、２０６、または２０７の重鎖ＣＤＲ、ならびにそれらの組み合わせを有する抗体を提供する。

【0020】

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９、２１０、または２１１の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体を提供する。

【0021】

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２、２１３、２１５、または２１６の重鎖アミノ酸配列を有する抗体を提供する。

【0022】

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９、２１０、または２１１の軽鎖アミノ酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２、２１３、２１５、または２１６の重鎖アミノ酸配列を有する抗体を提供する。

【0023】

幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、該分子がＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合活性の低下を呈するか、またはＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合活性を呈さないように改変される。幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、強化された抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を呈するように改変される。

【0024】

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９３または１９４と少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一な融合タンパク質を提供する。

【0025】

シグレック−１５結合分子と、生理学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物も提供される。幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、シグレック−１５の、そのリガンド及び／または対抗受容体への結合を低減させるまたは防止する、シグレック−１５に媒介されるシグナル伝達を低減させるまたは防止する、あるいはそれらの組み合わせを行う。リガンドは、シアル酸付加された糖タンパク質であり得る。リガンドは、腫瘍細胞の表面に発現し得る。以降の実施例では、ロイシンリッチリピート含有タンパク質４Ｃ（ＬＲＲＣ４Ｃ）がシグレック−１５のリガンドであり、がん細胞によって発現されることがあることを示している。シグレック−１５−対抗受容体もＴ細胞などの免疫細胞の表面に発現することがあり、これは、シグレック−１５が結合すると、Ｔ細胞阻害につながる。

【0026】

治療を必要とする対象を治療する方法が提供される。典型的には、該方法は、該対象に有効量のシグレック−１５結合分子を、例えば医薬組成物の状態で投与することを含む。

【0027】

幾つかの実施形態では、拮抗性シグレック−１５結合分子は、免疫応答を増大させる、腫瘍増殖を遅延させるもしくは防止する、腫瘍に媒介される免疫抑制を阻害する、腫瘍を排除する、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の活性を枯渇させるもしくはブロックしてその活性を変化させる、ＴＡＭに媒介される免疫抑制を減少させる、Ｔ細胞の抑制を低減もしくは逆転させる、Ｔ細胞の増殖を増大させる、またはそれらの組み合わせを行う。幾つかの実施形態では、がんまたは腫瘍は、シグレック−１５を発現するマクロファージを含む。シグレック−１５結合分子は、該マクロファージによるＴＧＦ−βの発現及び／または分泌を低減させるのに有効な量で対象に投与することができる。幾つかの実施形態では、対象は、がんまたは感染性疾患を有する。がんは、シグレック−１５のリガンドを発現するまたは過剰発現する細胞を含み得る。

【0028】

有効量の拮抗性シグレック−１５結合分子を対象に投与することによって、破骨細胞分化を低減させ、骨吸収を低減させ、骨形成を増大させ、及びそれらの組み合わせを行う方法も提供される。

【0029】

幾つかの実施形態では、拮抗性シグレック−１５結合分子は、免疫応答を減少させ、Ｔ細胞の抑制を増大させるもしくは強化し、Ｔ細胞の増殖を増大させ、またはそれらの組み合わせを行う。シグレック−１５結合分子は、マクロファージによるＴＧＦ−βの発現及び／または分泌を増大させるのに有効な量で対象に投与することができる。幾つかの実施形態では、対象は、炎症、自己免疫疾患を有するか、または移植レシピエントである。

【0030】

幾つかの実施形態は、対象に第２の治療用物質を投与することを含む。

【0031】

検出及び診断方法も提供される。検出及び診断方法はいずれも治療方法と連結させることができる。例えば、疾患、障害、または感染症を検出または診断する方法は、（ａ）開示するシグレック−１５結合分子を使用して、対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現をアッセイすること、及び（ｂ）シグレック−１５のレベルを対照のレベルと比較することを含むことができ、ここでは、対照のレベルと比較したシグレック−１５のアッセイレベルの増加が、疾患、障害、または感染症の指標である。

【0032】

疾患、障害、または感染症の進行をモニタリングするための方法は、（ａ）開示するシグレック−１５結合分子を使用して、最初の時点及びその後の時点で得られた対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現をアッセイすること；ならびに（ｂ）最初の時点及びその後の時点での対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現のレベルを比較することを含むことができ、ここでは、最初の時点と比較したその後の時点でのシグレック−１５のアッセイレベルの増加が、疾患、障害、または感染症の進行の指標である。

【0033】

治療に対する応答をモニタリングするための方法であって、（ａ）開示するシグレック−１５結合分子を使用して、治療の前後での対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現をアッセイすること；及び（ｂ）上記シグレック−１５の経時的なレベルを比較することを含み、それによる、治療前のシグレック−１５のレベルと比較した治療後のシグレック−１５のアッセイレベルの減少が、治療に対する好適な応答の指標である方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0034】

【図1】２匹の免疫化及び２匹の非免疫化シグレック−１５ノックアウトマウスの血漿抗体価を示す曲線である。

【図2A】第１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を強調している、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、及び１０５Ａの配列軽鎖可変領域を示すアラインメントである。

【図2B】第２の相補性決定領域（ＣＤＲ）を強調している、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、及び１０５Ａの配列軽鎖可変領域を示すアラインメントである。

【図2C】第３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を強調している、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、及び１０５Ａの配列軽鎖可変領域を示すアラインメントである。

【図3A】第１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を強調している、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、及び１０５Ａの配列重鎖可変領域を示すアラインメントである。

【図3B】第２の相補性決定領域（ＣＤＲ）を強調している、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、及び１０５Ａの配列重鎖可変領域を示すアラインメントである。

【図3C】第３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を強調している、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、及び１０５Ａの配列重鎖可変領域を示すアラインメントである。

【図4】図４Ａは、ヒトまたはマウスのシグレック−１５発現細胞への抗シグレック−１５抗体の直接結合を測定するためのアッセイの略図である。図４Ｂ（１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２、１Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９）及び図８Ｃ（６Ａ（ＮＣ６）、２８Ａ（ＮＣ２８）、６３Ａ（ＮＣ６３）、７７Ａ（ＮＣ７７）、８０Ａ（ＮＣ８０）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、８３Ｂ（ＮＣ８３）、９２Ａ（ＮＣ９２）、９３Ｂ（ＮＣ９３）、９９Ｂ（ＮＣ９９）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４）、及び１０５Ａ（ＮＣ１０５））は、図４Ａに示すアッセイにおけるシグレック−１５発現細胞への抗シグレック−１５抗体の結合（陽性細胞（％））を示す棒グラフである。図４Ｃは、ホルマリン固定シグレック−１５発現細胞への抗シグレック−１５抗体（１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２、１Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ（ＮＣ６）、２８Ａ（ＮＣ２８）、６３Ａ（ＮＣ６３）、７７Ａ（ＮＣ７７）、８０Ａ（ＮＣ８０）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、８３Ｂ（ＮＣ８３）、９２Ａ（ＮＣ９２）、９３Ｂ（ＮＣ９３）、９９Ｂ（ＮＣ９９）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４）、及び１０５Ａ（ＮＣ１０５））の結合（陽性細胞（％））を示す棒グラフである。

【図5】図５Ａ〜５Ｂは、精製された１Ｃ１２、８Ｈ８、５Ｇ１２、３Ｈ１０、９Ａ５、６Ｆ８、８Ｃ８、１Ｈ３、１０Ｇ９、１Ｂ２、及び１Ｃ３ Ａｂの、Ｋ５６２．ｈＳ１５細胞（９Ａ、バックグラウンド結合を差し引いたもの）及び２９３Ｔ．ｍＳ１５細胞（９Ｂ）への結合を示す線グラフである（一次抗体濃度（μｇ／ｍｌ）の関数としての平均蛍光強度（ＭＦＩ））。図５Ｃは、精製された１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９ Ａｂの、２９３Ｔ．ｍＳ１５への結合（ＭＦＩ）に対するＫ５６２．ｈＳ１５細胞への結合のドットプロットである。

【図6】図６Ａは、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、及び１０Ｇ９ Ａｂの各々によって検出されたｈＳ１５＋Ｕ８７細胞の百分率を示す棒グラフである。図６Ｂは、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、及び１０Ｇ９ Ａｂの各々によって検出されたｈＳ１５＋Ｕ８７細胞のＭＦＩを示す棒グラフである。図６Ｃは、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９ Ａｂの各々によって検出されたＳ１５＋Ｕ８７細胞の百分率を示す棒グラフである。

【図7A】図７Ａは、抗体ブロッキングアッセイを示す図である。リガンドＬＲＲＣ４Ｃを発現する２９３Ｔ細胞を可溶性受容体（ｈＳ１５．ｈＧ１）及び抗Ｓ１５抗体で処置し、続いて結合した受容体をＰＥ抗ｈＦｃ抗体で検出する。

【図7B】図７Ｂは、ｈＳ１５．ｈＧ１−１、及び１０Ｇ９、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１Ｃ３、１Ｃ１２、１Ｈ３、３Ｈ１０、１Ｂ２、ＮＣ１、ＮＣ５、ＮＣ７ ２８Ａ（ＮＣ２８）、ＮＣ３８、ＮＣ４１、ＮＣ５３、６３Ａ（ＮＣ６３）、ＮＣ７３、ＮＣ７４、ＮＣ７６、７７Ａ（ＮＣ７７）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、ＮＣ８４、ＮＣ８７、ＮＣ９０、９２Ａ（ＮＣ９２）、ＣＩ３−３３、ＣＩ１−３３）抗体についてのｈＳ１５．Ｇ１結合（％）を示す棒グラフである。

【図7C】図７Ｃは、対照ｍＡｂ、ならびに１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、８Ｈ８、６Ｆ８、８Ｃ８、９Ａ５、１Ｃ１２、３Ｈ１０、１０Ｇ９、及び５Ｇ１２抗体についてのＳ１５／ＬＲＲＣ４Ｃのブロッキング（％）を示す棒グラフである。

【図7D】図７Ｄは、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２ １Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９についてのＳ１５／ＬＲＲＣ４Ｃのブロッキング（％）を示す棒グラフである。

【図7E】図７Ｅは、６Ａ（ＮＣ６）、２８Ａ（ＮＣ２８）、６３Ａ（ＮＣ６３）、７７Ａ（ＮＣ７７）、８０Ａ（ＮＣ８０）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、８３Ｂ（ＮＣ８３）、９２Ａ（ＮＣ９２）、９３Ｂ（ＮＣ９３）、９９Ｂ（ＮＣ９９）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４）、及び１０５Ａ（ＮＣ１０５））についてのＳ１５／ＬＲＲＣ４Ｃのブロッキング（％）を示す棒グラフである。

【図8】図８Ａは、Ｔ細胞抑制アッセイの略図である。図８Ｂ及び８Ｃは、抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２ １Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９について、ｈＳ１５．ｈＧ１によって媒介されるヒトＴ細胞の抑制のＳ１５ ｍＡｂによる逆転を、ＣＤ８＋Ｔ細胞（１２Ｂ）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（１２Ｃ）の分裂（％）として示し、またｈＳ１５．ｈＧ１と共に（例えば、＋ｈＳ１５．ｈＧ１）（各対の左側の棒）及び伴わずに（例えば、−ｈＳ１５．ｈＧ１）（各対の右側の棒）実施した比較アッセイを示す棒グラフである。図８Ｄ〜８Ｇは、ｈＳ１５．ｈＧ１と共に実施したアッセイに関して、抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２ １Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９について（図８Ｄ及び１２Ｅ）、また６Ａ（ＮＣ６）、２８Ａ（ＮＣ２８）、６３Ａ（ＮＣ６３）、７７Ａ（ＮＣ７７）、８０Ａ（ＮＣ８０）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、８３Ｂ（ＮＣ８３）、９２Ａ（ＮＣ９２）、９３Ｂ（ＮＣ９３）、９９Ｂ（ＮＣ９９）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４）、及び１０５Ａ（ＮＣ１０５）について（図８Ｆ及び８Ｇ）、ｈＳ１５．ｈＧ１によって媒介されるヒトＴ細胞の抑制のＳ１５ ｍＡｂによる逆転を、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図８Ｄ及び８Ｆ）及びＣＤ４＋Ｔ細胞図８Ｅ及び８Ｇ）の分裂（％）として示す棒グラフである。図８Ｈ及び８Ｉは、ＣＤ８Ｔ細胞の増殖を、ｈＳ１５_ＬＲＲＣ４Ｃブロッキング活性（％）の関数としての示すドットプロットである。

【図9】図９Ａは、ＩＮＦγの分泌の変化を測定するためのアッセイの略図である。図９Ｂは、抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２ １Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９についての、図１３Ａに示したアッセイの結果を示す棒グラフである。

【図10】単球を単離し、２通りの方法：ＭＡＣＳカラム選別（左側の図）；または無血清培地でのプラスチックとの結合（右側の図）で富化した新鮮なＰＢＭＣの破骨細胞形成アッセイにおける、抗体１Ｃ１２、８Ｈ８、５Ｇ１２、３Ｈ１０、９Ａ５、６Ｆ８、８Ｃ８、１Ｈ３、１０Ｇ９、１Ｂ２、及び１Ｃ３の存在下でのＴＲＡＰ（酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ）（吸光度５４０ｎｍ）を示す棒グラフである。

【図11】腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるシグレック−１５の免疫の負の制御のモデルを示す略図である（例えば、シグレック−１５（Ｓ１５）：シグレック−１５−対抗受容体（Ｓ１５−ＣＲ）＞＞＞Ｔ細胞を増殖及びサイトカイン阻害に向かわせる、及び／またはシグレック−１５：ＬＲＲＣ４Ｃ＞＞＞マクロファージにＴＧＦ−βを産生させ、ＴＭＥにおいて免疫を抑制させる）。略図は、骨髄細胞、Ｔ細胞、及びがん細胞のシグレック−１５及びそのリガンドの発現、それらからのシグナル伝達、ならびに抗シグレック−１５（ブロッキング及びターゲティング）及びＬＲＲＣ４Ｃ抗体及びシグレック−１５融合タンパク質（非架橋結合／ブロッキング）分子との間の相互作用を示す。

【図12】図１２Ａは、ヒト化５Ｇ１２可変軽鎖Ｌ１〜Ｌ５のアミノ酸配列を示す表である。図１２Ｂは、ヒト化５Ｇ１２可変重鎖Ｈ１〜Ｈ３のアミノ酸配列を示す図である。

【図13A】ヒト化５Ｇ１２可変軽鎖ＶＬ１〜Ｖ１５のマウスＶＬに対する配列アラインメントを示す図である。

【図13B】ヒト化５Ｇ１２可変重鎖ＶＨ１〜ＶＨ３の配列アラインメントを示す図である。

【図14A】図１４Ａは、ヒトＳ１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＴ細胞の増殖（％）の線グラフであり、Ｓ１５ Ｆｃの濃度が増加するとＴ細胞の増殖（％）が減少することを示す。

【図14B】図１４Ｂは、０または５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃで処置された細胞からの馴化上清中のＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフである。

【図14C】図１４Ｃは、０または５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃで処置された細胞からの馴化上清中のＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフである。

【図14D】図１４Ｄは、０または５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃで処置された細胞からの馴化上清中のＩＬ−６（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフである。

【図15】図１５Ａ及び１５Ｂは、ハイブリドーマから精製されたＳ１５ ｍＡｂのヒトＳ１５またはマウスＳ１５発現細胞への結合についての陽性細胞の百分率を示す棒グラフである。

【図16A】図１６Ａ及び１６Ｂは、指定抗体で処置された、分裂したＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率の棒グラフである。

【図16B】図１６Ａ及び１６Ｂは、指定抗体で処置された、分裂したＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率の棒グラフである。

【図16C】図１６Ｃ及び１６Ｄは、指定抗体で処置された、分裂したＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率の棒グラフである。

【図16D】図１６Ｃ及び１６Ｄは、指定抗体で処置された、分裂したＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率の棒グラフである。

【図17A】図１７Ａ及び１７Ｂは、５Ｇ１２で処置した動物における腫瘍細胞接種後の日数に対する生存率（％）を示す線グラフである。

【図17B】図１７Ａ及び１７Ｂは、５Ｇ１２で処置した動物における腫瘍細胞接種後の日数に対する生存率（％）を示す線グラフである。

【図17C】図１７Ｃは、ＩＤ８．ＯＶＡ接種後の日数に対する体重増加率（％）を示す線グラフである。

【図18】ＩＤ８．ＯＶＡ接種後の日数に対する体重増加率（％）を示す線グラフである。

【図19A】図１９Ａは、ヒトＣＤ１４＋単球がＭｉｔｅｎｙｉ単球磁気ビーズを使用してヒトＰＢＭＣから採取され、続いてヒトＭ−ＣＳＦ及びヒトＲＡＮＫＬの存在下で指定抗体と共に９６ウェルプレート中に播種されることを示す概略図である。

【図19B】図１９Ｂは、示した通りに１Ｈ３で処置した破骨細胞を示す顕微鏡写真である。

【図19C】図１９Ｃは、７日後に酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ分析用に収集された上清の吸光度（５４０ｎｍ）の棒グラフである。

【図20】ＩＮＦ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ、及びＴＮＦ−αに関する、サイトカイン（ｐｇ／ｍＬ）を示す棒グラフである。

【図21】ＲＡＮＫＬの存在下で指定抗体と共に培養されたマウスＲＡＷ ２６４．７マクロファージ細胞の吸光度（５４０ｎｍ）の棒グラフである。

【図22】１Ｈ３可変軽鎖の例示的なヒト化アミノ酸配列の比較を示す。

【図23】１Ｈ３可変重鎖の例示的なヒト化アミノ酸配列の比較を示す。

【図24】図２４は、シグレック−１５について提示される作用様式の図解である。

【図25A】図２５Ａは、Ｍ２マクロファージがシグレック−１５を発現することを示す、シグレック−１５ ＰＥに対する計数のＦＡＣＳヒストグラムである。

【図25B】図２５Ｂは、Ｍ１マクロファージについてのシグレック−１５ ＰＥに対する計数のＦＡＣＳヒストグラムである。

【図25C】図２５Ｃは、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）で処置したマウス骨髄由来骨髄細胞についてのシグレック−１５ ＰＥに対する計数のＦＡＣＳヒストグラムである。

【図25D】図２５Ｄは、Ｍ−ＣＳＦ及びインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）で処置したマウス骨髄由来骨髄細胞についてのシグレック−１５ ＰＥに対する計数のＦＡＣＳヒストグラムである。

【図25E】図２５Ｅは、Ｍ−ＣＳＦまたはＭ−ＣＳＦ＋ＩＬ１０で処置し、アイソタイプ−ＰＥ（灰色の枠）または抗シグレック−１５ ＰＥで染色したマウス骨髄由来骨髄細胞についてのＭＦＩ−ＰＥの棒グラフである。

【図26A】図２６Ａは、シグレック−１５ Ｆｃでコーティングされたプレート中（濃度点の左の縦棒）または可溶性シグレック−１５（各濃度点の右の縦棒）に播種された、ドナー番号１６０３由来のヒトＣＤ１４＋単球からの上清についての、吸光度（４５０ｎｍ）の棒グラフである。

【図26B】図２６Ｂは、シグレック−１５ Ｆｃでコーティングされたプレート中（濃度点の左の縦棒）または可溶性シグレック−１５（各濃度点の右の縦棒）に播種された、ドナー番号１７０４由来のヒトＣＤ１４＋単球からの上清についての、吸光度（４５０ｎｍ）の棒グラフである。

【図26C】図２６Ｃは、ドナー番号１６０３由来の細胞についてのシグレック−１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。

【図26D】図２６Ｄは、ドナー番号１６０３由来の細胞についてのシグレック−１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＩＬ−６（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。

【図26E】図２６Ｅは、ドナー番号１６０３由来の細胞についてのシグレック−１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＩＬ−１β（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。

【図26F】図２６Ｆは、ドナー番号１７０４由来の細胞についてのシグレック−１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。

【図26G】図２６Ｇは、ドナー番号１７０４由来の細胞についてのシグレック−１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＩＬ−６（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。

【図26H】図２６Ｈは、ドナー番号１７０４由来の細胞についてのシグレック−１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＩＬ−１β（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。

【図27】図２７Ａは、実施例１９についての実験プロトコルの略図である。図２７Ｂは、ネガティブ選択されたＣＦＳＥ標識自己汎Ｔ細胞（骨髄細胞１：Ｔ細胞２の細胞比で）と、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（汎Ｔ細胞１：ビーズ２）と一緒に共培養した、Ｓ１５ Ｆｃで前処置したヒト骨髄細胞；Ｍ２φ、Ｍ１φ、及び未成熟ＤＣの、ＣＤ８増殖（％）の棒グラフである。図２７Ｃから２７Ｇについて、縦棒は左から右に：Ｔ細胞のみ、Ｔ細胞＋ビーズ、Ｓ１５ Ｆｃ処置、Ｍ２φ、Ｍ１φ、及びｉｍＤＣである。図２７Ｃは、上で処置した通りの細胞についてのＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。図２７Ｄは、上で処置した通りの細胞についてのＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。図２７Ｅは、上で処置した通りの細胞についてのＣＤ４増殖（％）である。図２７Ｆは、上で処置した通りの細胞についてのＩＬ−６（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。図２７Ｇは、上で処置した通りの細胞についてのＩＬ−１０（ｐｇ／ｍＬ）の棒グラフである。

【図28】図２８Ａは、ドナー１７０９由来の細胞についての、ｍＡｂ（μｇ／ｍＬ）に対する吸光度（４５０ｎｍ）の棒グラフである。一番上の線は対照ｍＡｂであり、一番下の線はＳ１５のｍＡｂである。図２８Ｂは図２８Ａと同じであるが、ドナー１７１３由来の細胞に関するものである。

【図29】破骨細胞形成にシグレック−１５が果たす役割を示す略図である。

【図30】図３０Ａは、Ｓ１５ Ｆｃで処置し、０日目に抗α_ｖβ_３インテグリンｍＡｂで染色した、ヒトＣＤ１４＋単球のＦＡＣＳヒストグラムである。図３０Ｂは、Ｓ１５ Ｆｃで処置し、６日目に抗α_ｖβ_３インテグリンｍＡｂで染色した、ヒトＣＤ１４＋単球のＦＡＣＳヒストグラムである。

【発明を実施するための形態】

【0035】

Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、ある分子が第２の分子に「免疫特異的に結合する」ことが可能であると言えるのは、かかる結合が、抗体の特異性及び親和性をその同種抗原に対して呈する場合である。抗体が抗原の標的領域または立体配座（「エピトープ」）に免疫特異的に結合する能力があると言えるのは、かかる結合が免疫グロブリン分子の抗原識別部に関与する場合である。特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体は、他の抗原が、例えば、イムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ、または当技術分野で公知の他のアッセイによって決定したときに抗原識別部によって認識されるある配列または立体構造的類似性を有するならば、より低い親和性で他の抗原に結合することがあるが、全く関係のない抗原とは結合しないはずである。しかし、抗体（及びそれらの抗原結合フラグメント）は、他の抗原と交差反応しないことが好ましい。抗体は、Ｆｃ領域などの抗原識別部位に関与しない分子の他の領域／ドメインにおける結合ドメインによって、例えばＦｃＲ受容体に結合するように、免疫特異的でない方法で他の分子に結合することもある。

【0036】

本明細書で使用される場合、ある分子が第２の分子に「物理特異的にに結合する」と言えるのは、かかる結合が、受容体の特異性及び親和性をその同種結合リガンドに対して呈する場合である。ある分子は、２つ以上の他の分子に物理特異的に結合する能力があり得る。

【0037】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、「可変領域」である抗原識別部位を有する免疫グロブリン分子を意味することが意図される。「可変領域」という用語は、免疫グロブリンのかかるドメインを、抗体に広く共有されるドメイン（抗体Ｆｃドメインなど）から区別することが意図される。可変領域は「超可変領域」を含み、その残基は抗原結合に関与する。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」のアミノ酸残基（すなわち、典型的には、軽鎖可変ドメイン中で、およそ残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９３（Ｌ３）にあり、重鎖可変ドメイン中で、およそ残基２７〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）にある；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））及び／または「超可変ループ」（すなわち、軽鎖可変ドメイン中で、残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、及び９１〜９６（Ｌ３）、重鎖可変ドメイン中で、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）のそうした残基を含む。「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」残基は、本明細書で定義する超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。抗体という用語には、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体（例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０；Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｕｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：２５３；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５；国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号及び第ＷＯ９４／２５５９１号；米国特許第６，００５，０７９号を参照されたい）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、細胞内抗体、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗体に対する抗Ｉｄ抗体及び抗−抗Ｉｄ抗体が含まれる）が含まれる。特に、かかる抗体には、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子が含まれる。

【0038】

本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、抗体の１つまたは複数の部分であって、抗体の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）及び任意で抗体の「可変領域」抗原識別部位を含むフレームワーク残基を含有し、抗原に対する免疫特異的な結合能を呈する、抗体の１つまたは複数の部分を指す。かかるフラグメントには、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖（ＳｃＦｖ）、及びそれらの突然変異体、天然に存在する変異体、ならびに抗体の「可変領域」抗原識別部位と異種タンパク質（例えば、毒素、異なる抗原に対する抗原識別部位、酵素、受容体、または受容体リガンドなど）とを含む融合タンパク質が含まれる。

【0039】

本明細書で使用される場合、「フラグメント」という用語は、少なくとも５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続するアミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。

【0040】

本明細書で使用される場合、「調節する」という用語は、効果、結果、または活性（例えば、シグナル伝達）を変化させる能力に関する。かかる調節は、作動性または拮抗性であり得る。拮抗性調節は、部分的であることも（すなわち、減弱させるが消失させない）、またはかかる活性を完全に消失させることもある（例えば、中和させる）。調節は、抗体結合後の受容体の内在化または標的細胞上での受容体の発現の低減を含み得る。作動性調節は、活性（例えば、シグナル伝達）を強化することか、さもなければ増大させるまたは強化することであり得る。なおさらなる実施形態では、かかる調節は、誘発されるシグナル伝達の性質を変化させるように、リガンドとその同種受容体との間の相互作用の性質を変化させることができる。例えば、分子は、リガンドまたは受容体に結合することによって、他のリガンドまたは受容体に結合するかかる分子の能力を変化させ、それによってその活性全体を変化させることができる。かかる調節によって測定可能な免疫系の活性が少なくとも１０％変化することが好ましく、かかる活性が少なくとも５０％変化するか、または少なくとも２倍、５倍、１０倍変化することがより好ましく、またはかかる活性が少なくとも１００倍変化することがなおさらに好ましい。

【0041】

「実質的に」という用語は、結合または呈示された効果に関して使用される場合、観察された効果が生理学的にまたは治療的に意義があることを意味することが意図される。よって、例えば、ブロックの程度が生理学的にまたは治療的に意義があれば（例えば、かかる程度が、６０％超完全、７０％超完全、７５％超完全、８０％超完全、８５％超完全、９０％超完全、９５％超完全、または９７％超完全であれば）、分子は、リガンドまたは受容体の活性を実質的にブロックすることが可能である。同様に、ある分子が別の分子と実質的に同じ免疫特異性及び／または特性を有すると言えるのは、かかる免疫特異性及び特性が、６０％超同一、７０％超同一、７５％超同一、８０％超同一、８５％超同一、９０％超同一、９５％超同一、または９７％超同一である場合である。

【0042】

本明細書で使用される場合、「共刺激」シグナルは、陽性共刺激シグナル（例えば、活性の強化をもたらすシグナル）及び陰性共刺激シグナル（例えば、活性の阻害をもたらすシグナル）を包含する。

【0043】

本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、親または参照抗体と同じ標的に免疫特異的に結合するが、親もしくは参照抗体またはそれらの抗原結合フラグメントに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上のアミノ酸置換、付加、欠失、または改変を含むことによって、親もしくは参照抗体またはそれらの抗原結合フラグメントとアミノ酸配列が異なる抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。かかる誘導体は、親もしくは参照抗体またはそれらの抗原結合フラグメントと実質的に同じ免疫特異性及び／または特性、あるいは同じ免疫特異性及び特性を有することが好ましい。かかる誘導体のアミノ酸置換または付加は、天然に存在する（すなわち、ＤＮＡにコードされる）または天然に存在しないアミノ酸残基を含むことができる。「誘導体」という用語は、例えば、キメラまたはヒト化変異体、ならびに例えば強化されたまたは弱化されたエフェクターまたは結合特性を呈する変異Ｆｃ領域を有する抗体などを形成するように改変されたＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４領域を有する変異体を包含する。

【0044】

本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、非ヒト抗体に由来する可変領域及びヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体など、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。

【0045】

本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒトフレームワーク領域及び非ヒト（通常、マウスまたはラット）免疫グロブリン由来の１つまたは複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。定常領域は必ずしも存在しなくてもよいが、存在するならば、それは、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９９％、好ましくは約９５％以上同一でなければならない。したがって、ヒト化免疫グロブリンの全ての部分は、おそらくＣＤＲ以外は、天然のヒト免疫グロブリン配列の相当する部分と実質的に同一である。ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖及びヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。例えば、ヒト化抗体は、キメラ抗体の可変領域全体が非ヒトであるなどの理由から、典型的なキメラ抗体を包含しないと考えられる。

【0046】

本明細書で使用される場合、「内因性濃度」という用語は、細胞（この細胞は正常細胞、がん細胞、または感染細胞であり得る）によって分子が本来（すなわち、発現ベクターまたは組換えプロモーターの非存在下で）発現するレベルを指す。

【0047】

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、「治療」、及び「治療用途」という用語は、シグレック−１５またはそのリガンドによって増悪する疾患または障害の１つまたは複数の症状の解消、低減、または改善を指す。

【0048】

本明細書で使用される場合、「治療的有効量」は、かかる症状の臨床的に意義のある解消、低減、または改善を媒介するのに十分な治療用物質の量を指す。ある作用は、その規模がレシピエント対象の健康または予後に影響を及ぼすのに十分であれば、臨床的に意義がある。治療的有効量は、疾患の発症を遅延させるまたは最小限に抑えるのに十分な、例えば、がんの拡がりを遅延させるまたは最小限に抑えるのに十分な治療用物質の量を指すことがある。治療的有効量は、疾患の治療または管理に治療的利益をもたらす治療用物質の量を指すこともある。

【0049】

本明細書で使用される場合、「予防用物質」という用語は、障害または疾患の任意の症状が検出される前にかかる障害または疾患の予防に使用することができる作用物質を指す。「予防的有効」量は、かかる予防を媒介するのに十分な予防用物質の量である。予防的有効量は、疾患の予防に予防的利益をもたらす予防用物質の量を指すこともある。

【0050】

本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、制御されない異常な細胞増殖から生じる新生物または腫瘍を指す。本明細書で使用される場合、がんには、白血病及びリンパ腫が明示的に含まれる。「がん」という用語は、遠位部位に転移する潜在性を有し、かつ非がん細胞のものとは異なる表現型形質、例えば、軟寒天などの三次元基質中でのコロニー（複数可）の形成、または三次元の基底膜もしくは細胞外基質調製物中での管状ネットワークもしくは網状マトリックスの形成を呈する細胞に関与する疾患を指す。非がん細胞は、軟寒天中でコロニーを形成せず、三次元の基底膜または細胞外基質調製物中で明瞭な球状構造を形成する。

【0051】

本明細書で使用される場合、「免疫細胞」は造血系起源の任意の細胞を指し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、樹状細胞、及びマクロファージが含まれるが、これらに限定されない。

【0052】

本明細書で使用される場合、「価数」は、分子当たりの利用可能な結合部位の数を指す。

【0053】

本明細書で使用される場合、「免疫（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ）」応答、「免疫（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ）」応答、または「免疫（ｉｍｍｕｎｅ）」応答という用語は、レシピエント患者内のあるペプチドに向けられる有益な体液性応答（抗体媒介性）及び／または細胞性応答（抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌物によって媒介される）の発生である。かかる応答は、免疫原の投与によって誘導される能動的応答でも、または抗体もしくは初回刺激を受けたＴ細胞の投与によって誘導される受動的応答でもあり得る。細胞性免疫応答は、クラスＩまたはクラスＩＩのＭＨＣ分子と会合したポリペプチドエピトープが提示されて抗原特異的ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞及び／またはＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞が活性化することによって誘発される。この応答には、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、好塩基球、樹状細胞、星状膠細胞、小膠細胞、好酸球の活性化、または好中球または先天免疫の他の構成要素の活性化または動員も関与することがある。細胞媒介性免疫応答の存在は、増殖アッセイ（ＣＤ４^＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイによって決定することができる。免疫原の防御効果または治療効果に対する体液性応答及び細胞性応答の相対的寄与は、免疫化された同系動物から抗体及びＴ細胞を別々に単離して、防御効果または治療効果を第２の対象で測定することによって区別することができる。

【0054】

本明細書で使用される場合、「免疫原性作用物質」または「免疫原」は、任意でアジュバントと併せて哺乳動物に投与されたときに、それ自体に対する免疫応答を誘導する能力がある。

【0055】

本明細書で使用される場合、「個体」、「宿主」、「対象」、及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒト、マウス及びラットなどの齧歯類、ならびに他の実験動物を含めた哺乳動物を指すが、これらに限定されない。

【0056】

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、修飾（例えば、リン酸化またはグリコシル化）にかかわらず、任意の長さのアミノ酸の鎖を指す。ポリペプチドという用語には、タンパク質及びそのフラグメントが含まれる。ポリペプチドは、「外来性」であってもよく、これは、細菌細胞によって産生されるヒトポリペプチドなど、それらが利用される宿主細胞にとってそれらが「異種」、すなわち異物であることを意味している。ポリペプチドは、本明細書ではアミノ酸残基配列として開示される。これらの配列は、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に左から右に書かれる。標準的な命名法に従い、アミノ酸残基配列は、以下に示すような三文字または一文字コードのいずれかで呼ばれる：アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、及びバリン（Ｖａｌ、Ｖ）。

【0057】

本明細書で使用される場合、「変異体」という用語は、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと異なるが、本質的な特性を保持しているポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指す。ポリペプチドの典型的な変異体は、別の参照ポリペプチドとアミノ酸配列が異なる。一般に、差異は、参照ポリペプチドと変異体の配列が全体的によく類似しているように、かつ多くの領域で同一であるように限定される。変異体及び参照ポリペプチドは、１つまたは複数の改変（例えば、置換、付加、及び／または欠失）によってアミノ酸配列が異なっていることがある。置換または挿入されるアミノ酸残基は、遺伝子コードでコードされるものであっても、そうでなくてもよい。ポリペプチドの変異体は、対立遺伝子変異体などの天然に存在するものあっても、天然に存在しないことが知られている変異体であってもよい。

【0058】

本開示のポリペプチドの構造に改変及び変更を加え、それでもそのポリペプチドと同様の特性を有する分子を得ることができる（例えば、保存的アミノ酸置換）。例えば、あるアミノ酸は、活性をそれほど失うことなく配列中で他のアミノ酸に置換され得る。ポリペプチドの生物学的機能活性を定義するものは、そのポリペプチドの相互作用する能力及び性質であるために、あるアミノ酸配列置換をポリペプチド配列に加えても、同様の特性を有するポリペプチドを得ることができる。

【0059】

かかる変更を加える際に、アミノ酸の水治性指標を考慮することができる。相互作用的な生物学的機能をポリペプチドに付与する上での水治性アミノ酸指標の重要性は、当技術分野で一般に理解されている。あるアミノ酸を同様の水治性指標またはスコアを有する他のアミノ酸と置換しても、同様の生物活性を有するポリペプチドが得られることが公知である。各アミノ酸は、その疎水性及び電荷特性に基づいて水治性指標が割り当てられている。これらの指標は、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタメート（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパルテート（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；及びアルギニン（−４．５）である。

【0060】

アミノ酸の相対的な水治性指標特性が、得られるポリペプチドの二次構造を決定し、ひいてはそれがポリペプチドと他の分子、例えば、酵素、基質、受容体、抗体、抗原、及び補助因子との相互作用を定めると考えられている。アミノ酸を同様の水治性指標を有する別のアミノ酸で置換しても、機能的に同等のポリペプチドが得られることが当技術分野では公知である。かかる変更において、±２以内の水治性指標を有するアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものが特に好ましく、±０．５以内のものがなお一層特に好ましい。

【0061】

同様のアミノ酸の置換は、特に、それによって作られる生物学的機能的に同等なポリペプチドまたはペプチドが免疫学的実施形態で使用されることが意図される場合、親水性に基づいて行うこともできる。以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパルテート（＋３．０±１）；グルタメート（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；プロリン（−０．５±１）；スレオニン（−０．４）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；トリプトファン（−３．４）。アミノ酸を同様の親水性値を有する別のアミノ酸によって置換しても、生物学的に同等の、特に免疫学的に同等のポリペプチドが得られることが理解される。かかる変更において、±２以内の親水性値を有するアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものが特に好ましく、±０．５以内のものがなお一層特に好ましい。

【0062】

上に概説したように、アミノ酸置換は一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的な類似性、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づいている。様々な前述の特性を考慮に入れた代表的な置換は当業者には周知であり、以下が挙げられる（当初の残基：代表的な置換）：（Ａｌａ：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ）、（Ａｒｇ：Ｌｙｓ）、（Ａｓｎ：Ｇｌｎ、Ｈｉｓ）、（Ａｓｐ：Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ）、（Ｇｌｎ：Ａｓｎ）、（Ｇｌｕ：Ａｓｐ）、（Ｇｌｙ：Ａｌａ）、（Ｈｉｓ：Ａｓｎ、Ｇｌｎ）、（Ｉｌｅ：Ｌｅｕ、Ｖａｌ）、（Ｌｅｕ：Ｉｌｅ、Ｖａｌ）、（Ｌｙｓ：Ａｒｇ）、（Ｍｅｔ：Ｌｅｕ、Ｔｙｒ）、（Ｓｅｒ：Ｔｈｒ）、（Ｔｈｒ：Ｓｅｒ）、（Ｔｉｐ：Ｔｙｒ）、（Ｔｙｒ：Ｔｒｐ、Ｐｈｅ）、及び（Ｖａｌ：Ｉｌｅ、Ｌｅｕ）。よって、この開示の実施形態は、上記の通りのポリペプチドの機能的または生物学的同等物が企図される。特に、ポリペプチドの実施形態には、関心対象のポリペプチドに対して約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有する変異体が含まれ得る。

【0063】

「配列同一性の百分率（％）」という用語は、配列をアラインメントし、最大の百分率の配列同一性を実現するために必要であればギャップを導入した後に、参照核酸配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸と同一である候補配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の百分率として定義される。配列同一性の百分率を決定することを目的としたアラインメントは、当技術分野内の様々な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して実現することができる。比較される配列の完全長にわたる最大のアラインメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムを含めた、アラインメントを測定するための適正なパラメータは、公知の方法によって決定することができる。

【0064】

ここでの目的のために、所与のヌクレオチドまたはアミノ酸配列Ｃの、所与の核酸配列Ｄに対する、該配列との、または該配列と対比した配列同一性（％）（あるいは、所与の配列Ｄに対して、該配列との、または該配列と対比してある％の配列同一性を有するまたは含む所与の配列Ｃと表現されることもある）は、以下のように算出される：
分数Ｗ／Ｚの１００倍、
ここでは、Ｗは、配列アラインメントプログラムのＣとＤとのアラインメントにおいてそのプログラムによって完全な一致としてスコア化されたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｚは、Ｄ中のヌクレオチドまたはアミノ酸の総数である。配列Ｃの長さが配列Ｄの長さと等しくない場合、Ｄに対するＣの配列同一性（％）がＣに対するＤの配列同一性（％）と等しくならないことは理解されるであろう。

【0065】

本明細書で使用される場合、「医薬として許容される担体」という用語は、標準的な医薬担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩液、水、及びエマルション、例えば、油／水または水／油エマルション、ならびに様々なタイプの湿潤剤のいずれかを包含する。

【0066】

本明細書で使用される場合、「抗原決定基」及び「エピトープ」という用語は互換的に使用され、抗体に認識される構造を指す。

【0067】

本明細書で使用される場合、「立体構造エピトープ」は、抗原のアミノ酸配列の不連続区間を含むエピトープである。抗体は、抗原の三次元の表面特徴、形状、または三次構造に基づいて立体構造エピトープに結合する。

【0068】

本明細書で使用される場合、「線状エピトープ」は、抗原からの連続的なアミノ酸配列によって形成されるエピトープである。線状エピトープは、典型的には約５〜約１０個の連続するアミノ酸残基を含む。抗体は、抗原の一次配列に基づいて線状エピトープに結合する。

【0069】

本明細書で使用される場合、「パラトープ」は、「抗原結合部位」とも呼ばれ、抗原を認識し、抗原と結合する抗体の部分である。

【0070】

ＩＩ．組成物
Ａ．シグレック−１５配列
シアル酸結合Ｉｇ様レクチン１５（「シグレック−１５」、ＣＤ３３抗原様３、及びＣＤ３３Ｌ３とも呼ばれる）は、ヒトの脾臓及びリンパ節のマクロファージ及び／または樹状細胞に発現する１型膜貫通タンパク質である（Ａｎｇａｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１７（８）：８３８−４６（２００７）（これは、その全体が参照により本明細書に明確に組み込まれている））。シグレック−１５の細胞外ドメインは、シアル酸付加された糖タンパク質に結合し、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα構造を優先的に認識する。

【0071】

シグレック−１５は、膜貫通ドメイン中のそのリジン残基（残基Ｋ２７４）を介して活性化アダプタータンパク質であるＤＮＡＸ活性化タンパク質（ＤＡＰ）１２及びＤＡＰ１０と会合し、それが活性化シグナル伝達分子として機能することを示している。シグレック−１５の相同分子種は、哺乳動物だけでなく脊椎動物の他の分岐にも存在し、脊椎動物の免疫系において、保存された制御的役割を果たしていると考えられている。

【0072】

シグレック−１５は、Ｔ細胞の増殖及び炎症誘発性サイトカインの産生を阻害することによってＴ細胞の機能を直接制御する。シグレック−１５は、骨髄細胞を介してＴ細胞の機能に間接的に影響を及ぼす。腫瘍細胞またはＭ２マクロファージに発現するシグレック−１５は、骨髄細胞上の結合パートナーと相互作用して生存及び分化のシグナルをもたらし、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βを産生する独特な骨髄細胞集団を生じる。分泌されたサイトカインは、腫瘍増殖をさらに促進する。骨髄細胞のこのサブセットは、Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γの産生を低減させることによってＴ細胞の機能に影響を及ぼし得る。

【0073】

ヒトシグレック−１５のアミノ酸配列は、当技術分野で公知であり、例えば以下が含まれる。

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ６ＺＭＣ９（ＳＩＧ１５＿ＨＵＭＡＮ）（これは、その全体が参照により明確に組み込まれている）。

【0074】

ヒトシグレック−１５は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１〜１９番目のアミノ酸であるシグナルペプチド配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の２０〜２６３番目のアミノ酸である細胞外ドメイン（太字及び斜字体の文字で示す）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の２６４〜２８４番目のアミノ酸である膜貫通ドメイン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の２８５〜３２８番目のアミノ酸である細胞質ドメインを含む。Ｉｇ様Ｖ型ドメインはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の４０〜１５８番目のアミノ酸（一重下線で示す）と予測され、Ｉｇ様Ｃ２型ドメインはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１６８〜２５１番目のアミノ酸（二重下線で示す）と予測される。ジスルフィド結合は６４〜１４２番目の残基、９５〜１０４番目の残基、及び１８７〜２３７番目の残基に形成されると考えられており、グリコシル化は１７２番目の残基で行われると予測される。２７６〜２７９番目のアミノ酸は、ポリロイシンドメインと呼ばれている。公知の変異体は、Ｆ２７３Ｌ置換変異体である。

【0075】

マウスシグレック−１５のアミノ酸配列は、当技術分野で公知であり、例えば以下が含まれる。

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ａ７Ｅ１Ｗ８（Ａ７Ｅ１Ｗ８＿ＭＯＵＳＥ）（これは、その全体が参照により明確に組み込まれている）。

【0076】

マウスシグレック−１５は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の１〜２３番目のアミノ酸であるシグナルペプチド配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２４〜２６２番目のアミノ酸（太字及び斜字体の文字で示す）である細胞外ドメイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２６３〜２８３番目のアミノ酸である膜貫通ドメイン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２８４〜３４２番目のアミノ酸である細胞質ドメインを含む。Ｉｇ様Ｖ型ドメインはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の４０〜１４５番目のアミノ酸（一重下線で示す）と予測され、Ｉｇ様Ｃ２型ドメインはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の１６９〜２５０番目のアミノ酸（二重下線で示す）と予測される。

【0077】

Ｂ．シグレック−１５結合分子
シグレック−１５結合分子、例えば、抗体及びそれらの抗原結合フラグメント、ならびにシグレック−１５に結合する他のポリペプチドが提供される。マウス抗シグレック−１５抗体に由来する重鎖及び軽鎖可変領域ならびにそれらのＣＤＲの配列が以降に提供される。以降の配列の１つまたは複数を含む、抗体、抗原結合フラグメント、及び他のポリペプチド、ならびにそれらの変異体が提供される。例えば、シグレック−１５に結合する、抗シグレック−１５抗体軽鎖可変領域の１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、及び／または抗シグレック−１５抗体重鎖可変領域の１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む、抗体、抗原結合フラグメント、及びポリペプチドが提供される。幾つかの実施形態では、抗体、抗原結合フラグメント、及びポリペプチドは、抗シグレック−１５抗体の軽鎖可変領域、抗シグレック−１５の重鎖可変領域、またはそれらの組み合わせを含み、シグレック−１５に結合することができる。

【0078】

例えば、開示される分子は、シグレック−１５（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２など）に免疫特異的に結合することができる。例えば、
（Ｉ）細胞（好ましくは生細胞）の表面上に配列される；
（ＩＩ）細胞（好ましくは生細胞）の表面上に内因性濃度で配列される；
（ＩＩＩ）生細胞の表面上に配列され、シグレック−１５（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２など）と、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα、ＬＲＲＣ４Ｃ、シグレック−１５対抗受容体（Ｓ１５−ＣＲ）、もしくはそれらの組み合わせとの結合を調節する；
（ＩＶ）生細胞の表面上に配列され、ＴＧＦ−βの分泌を低減させる、防止する、または阻害する；
（Ｖ）骨髄細胞、例えば、マクロファージもしくは樹状細胞、またはがん細胞（例えば、脳癌細胞、腎細胞癌細胞（ＲＣＣ）、ユーイング肉腫細胞、乳癌細胞、または卵巣癌細胞）である、生細胞の表面上に配列される；
（ＶＩ）それらの組み合わせを行う、
ヒトシグレック−１５に免疫特異的に結合することができる分子が提供される。

【0079】

１． マウス抗ヒトシグレック−１５抗体配列
以降の実施例に説明するように、シグレック−１５ノックアウトマウス（ｎ＝２）を、ＣＦＡ（フロインド完全アジュバント）で乳化したｈＳ１５．ｍＩｇ（マウスＩｇＧ２ａと融合させたヒトシグレック１５細胞外ドメイン［ＥＣＤ］）で免疫化して、マウス抗ヒトシグレック−１５ ｍＡｂのパネルを作製した。

【0080】

本明細書で以下のように呼ばれる、２４種類のハイブリドーマによって生成されるモノクローナル抗体の軽鎖及び重鎖可変領域の配列を以降に示す：１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ（ＮＣ６及び６番とも呼ばれる）、２８Ａ（ＮＣ２８及び２８番とも呼ばれる）、６３Ａ（ＮＣ６３及び６３番とも呼ばれる）、７１Ａ（ＮＣ７１及び７１番とも呼ばれる）、７７Ａ（ＮＣ７７及び７７番とも呼ばれる）、８０Ａ（ＮＣ８０及び８０番とも呼ばれる）、８２Ｂ（ＮＣ８２及び８２番とも呼ばれる）、８３Ｂ（ＮＣ８３及び８３番とも呼ばれる）、９２Ａ（ＮＣ９２及び９２番とも呼ばれる）、９３Ｂ（ＮＣ９３及び９３番とも呼ばれる）、９９Ｂ（ＮＣ９９及び９９番とも呼ばれる）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４及び１０４番とも呼ばれる）、及び１０５Ａ（ＮＣ１０５及び１０５番とも呼ばれる）。軽鎖及び重鎖配列に関して、ＣＤＲは下線を付し、太字で示す。配列及びＣＤＲは、図２Ａ〜３Ｃのアラインメントにも示される。

【0081】

ａ．１Ｂ２配列：
ｉ．軽鎖
１Ｂ２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）であり、この配列は、
１Ｂ２軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）
１Ｂ２軽鎖ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）
１Ｂ２軽鎖ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）
を有する。

【0082】

１Ｂ２の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）である。

【0083】

ｉｉ．重鎖
１Ｂ２の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）であり、この配列は、
１Ｂ２重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＤＹＧＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）
１Ｂ２重鎖ＣＤＲ２：ＹＩＳＳＧＳＳＩＩＹＹＡＤＴＶＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）
１Ｂ２重鎖ＣＤＲ３：ＤＨＹＨＧＮＧＳＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）
を有する。

【0084】

１Ｂ２の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）である。

【0085】

ｂ．１Ｃ３配列
ｉ．軽鎖
１Ｃ３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）であり、この配列は、
１Ｃ３軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：：２５）
１Ｃ３軽鎖ＣＤＲ２：ＲＭＳＮＬＡＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）
１Ｃ３軽鎖ＣＤＲ３：ＭＱＨＬＥＹＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）
を有する。

【0086】

１Ｃ３軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５）である。

【0087】

ｉｉ．重鎖
１Ｃ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）であり、この配列は、
１Ｃ３重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＩＦＴＤＹＹＶＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）
１Ｃ３重鎖ＣＤＲ２：ＫＩＧＰＧＳＶＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）
１Ｃ３重鎖ＣＤＲ３：ＹＹＹＧＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）
を有する。

【0088】

１Ｃ３の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６）である。

【0089】

ｃ．１Ｈ３配列
ｉ．軽鎖
１Ｈ３の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）であり、この配列は、
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ１：ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ２：ＧＡＴＳＬＥＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＷＳＳＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）
を有する。

【0090】

１Ｈ３軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）である。

【0091】

ｉｉ．ヒト化軽鎖
一実施形態は、以下の可変軽鎖アミノ酸配列

[この文献は図面を表示できません]

を有するヒト化抗シグレック−１５抗体を提供し、この配列は、
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ１：ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ２：ＧＡＴＳＬＥＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＷＳＳＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）
を有する。下線を付したアミノ酸は、親配列に対して変更されている。

【0092】

別の実施形態は、以下の可変軽鎖アミノ酸配列

[この文献は図面を表示できません]

を有するヒト化抗シグレック−１５抗体を提供し、この配列は、
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ１：ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ２：ＧＡＴＳＬＥＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＷＳＳＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）
を有する。下線を付したアミノ酸は、親配列に対して変更されている。

【0093】

さらに別の実施形態は、以下の可変軽鎖アミノ酸配列

[この文献は図面を表示できません]

を有するヒト化抗シグレック−１５抗体を提供し、この配列は、
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ１：ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ２：ＧＡＴＳＬＥＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）
１Ｈ３軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＷＳＳＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）
を有する。下線を付したアミノ酸は、親配列に対して変更されている。

【0094】

ｉｉｉ．重鎖
１Ｈ３の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）であり、この配列は、
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ１：ＮＹＧＶＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ２：ＬＩＷＳＤＧＳＴＴＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ３：ＨＰＹＤＤＹＳＧＹＹＹＴＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）
を有する。

【0095】

１Ｈ３の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７）である。

【0096】

ｉｖ．ヒト化重鎖
一実施形態は、以下の可変重鎖アミノ酸配列

[この文献は図面を表示できません]

を有するヒト化抗シグレック−１５抗体を提供し、この配列は、
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ１：ＮＹＧＶＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ２：ＬＩＷＳＤＧＳＴＴＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ３：ＨＰＹＤＤＹＳＧＹＹＹＴＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）
を有する。下線を付したアミノ酸は、親配列に対して変更されている。

【0097】

別の実施形態は、以下の可変重鎖アミノ酸配列

[この文献は図面を表示できません]

を有するヒト化抗シグレック−１５抗体を提供し、この配列は、
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ１：ＮＹＧＶＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ２：ＬＩＷＳＤＧＳＴＴＹＡＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１４）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ３：ＨＰＹＤＤＹＳＧＹＹＹＴＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）．
を有する。下線を付したアミノ酸は、親配列に対して変更されている。

【0098】

さらに別の実施形態は、以下の可変重鎖アミノ酸配列

[この文献は図面を表示できません]

を有するヒト化抗シグレック−１５抗体を提供し、この配列は、
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ１：ＮＹＧＶＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ２：ＬＩＷＳＤＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２４）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ３：ＨＰＹＤＤＹＳＧＹＹＹＴＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）
を有する。下線を付したアミノ酸は、親配列に対して変更されている。

【0099】

別の実施形態は、以下の可変重鎖アミノ酸配列

[この文献は図面を表示できません]

を有するヒト化抗シグレック−１５抗体を提供し、この配列は、
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ１：ＮＹＧＶＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ２：ＬＩＷＳＥＧＳＴＴＹＡＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１７）
１Ｈ３重鎖ＣＤＲ３：ＨＰＹＤＤＹＳＧＹＹＹＴＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）
を有する。

【0100】

ｄ．１Ｃ１２配列：
ｉ．軽鎖
１Ｃ１２軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）であり、この配列は、
１Ｃ１２軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）
１Ｃ１２軽鎖ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）
１Ｃ１２軽鎖ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）
を有する。

【0101】

１Ｃ１２軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７）である。

【0102】

ｉｉ．重鎖
１Ｃ１２の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）であり、この配列は、
１Ｃ１２重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＳＦＳＤＹＧＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）
１Ｃ１２重鎖ＣＤＲ２：ＹＩＳＳＧＳＳＩＬＹＹＡＤＩＶＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）
１Ｃ１２重鎖ＣＤＲ３：ＤＨＹＨＧＮＧＳＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）
を有する。

【0103】

１Ｃ１２の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８）である。

【0104】

ｅ．３Ｈ１０配列
ｉ．軽鎖
３Ｈ１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）であり、この配列は、
３Ｈ１０軽鎖ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＴＳＦＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）
３Ｈ１０軽鎖ＣＤＲ２：ＤＴＳＫＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）
３Ｈ１０軽鎖ＣＤＲ３：ＨＱＲＳＡＹＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）
を有する。

【0105】

３Ｈ１０の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）である。

【0106】

ｉｉ．重鎖
３Ｈ１０の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）であり、この配列は、
３Ｈ１０重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＮＩＫＤＹＹＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）
３Ｈ１０重鎖ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＧＤＩＥＹＤＰＫＦＱＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）
３Ｈ１０重鎖ＣＤＲ３：ＤＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）
を有する。

【0107】

３Ｈ１０重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９）である。

【0108】

ｆ．５Ｇ１２配列
ｉ．軽鎖
５Ｇ１２の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）であり、この配列は、
５Ｇ１２軽鎖ＣＤＲ１：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）
５Ｇ１２軽鎖ＣＤＲ２：ＲＡＮＲＬＶＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）
５Ｇ１２軽鎖ＣＤＲ３：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）
を有する。

【0109】

５Ｇ１２軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９）である。

【0110】

ｉｉ．重鎖
５Ｇ１２の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）であり、この配列は、
５Ｇ１２重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＹＷＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）
５Ｇ１２重鎖ＣＤＲ２：ＤＩＹＣＧＳＤＴＭＨＹＮＥＫＦＫＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）
５Ｇ１２重鎖ＣＤＲ３：ＷＷＤＹＧＳＳＹＤＹＦＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１）
を有する。

【0111】

５Ｇ１２の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０）である。

【0112】

ｇ．６Ｆ８配列
ｉ．軽鎖
６Ｆ８の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）であり、この配列は、
６Ｆ８軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）
６Ｆ８軽鎖ＣＤＲ２：ＲＭＳＮＬＡＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）
６Ｆ８軽鎖ＣＤＲ３：ＭＱＨＬＥＹＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）
を有する。

【0113】

６Ｆ８の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）である。

【0114】

ｉｉ．重鎖
６Ｆ８の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）であり、この配列は、
６Ｆ８重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＤＹＹＶＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）
６Ｆ８重鎖ＣＤＲ２：ＫＩＧＰＧＳＶＳＩＹＹＮＥＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）
６Ｆ８重鎖ＣＤＲ３：ＹＹＹＧＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）
を有する。

【0115】

６Ｆ８の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１）である。

【0116】

ｈ．８Ｃ８配列
ｉ．軽鎖
８Ｃ８軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）であり、この配列は、
８Ｃ８軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）
８Ｃ８軽鎖ＣＤＲ２：ＲＭＳＮＬＡＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）
８Ｃ８軽鎖ＣＤＲ３：ＭＱＨＬＥＹＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）
を有する。

【0117】

８Ｃ８の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１）である。

【0118】

ｉｉ．重鎖
８Ｃ８の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）であり、この配列は、
８Ｃ８重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＤＹＹＶＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）
８Ｃ８重鎖ＣＤＲ２：ＫＩＧＰＥＳＶＳＩＹＹＳＥＫＦＫＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）
８Ｃ８重鎖ＣＤＲ３：ＹＹＹＧＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）
を有する。

【0119】

８Ｃ８の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２）である。

【0120】

ｉ．８Ｈ８配列
ｉ．軽鎖
８Ｈ８軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）であり、この配列は、
８Ｈ８軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＳＧＡＶＴＴＧＮＦＡＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）
８Ｈ８軽鎖ＣＤＲ２：ＧＴＮＮＲＡＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）
８Ｈ８軽鎖ＣＤＲ３：ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）
を有する。

【0121】

８Ｈ８の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）である。

【0122】

ｉｉ．重鎖
８Ｈ８の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）であり、この配列は、
８Ｈ８重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＧＦＷＭＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）
８Ｈ８重鎖ＣＤＲ２：ＤＩＮＳＤＧＳＡＩＮＹＡＰＳＩＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）
８Ｈ８重鎖ＣＤＲ３：ＹＤＤＹＧＹＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）
を有する。

【0123】

８Ｈ８の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３）である。

【0124】

ｊ．９Ａ５配列
ｉ．軽鎖
９Ａ５の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）であり、この配列は、
９Ａ５軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）
９Ａ５軽鎖ＣＤＲ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）
９Ａ５軽鎖ＣＤＲ３：ＷＱＧＴＨＦＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）
を有する。

【0125】

９Ａ５の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）である。

【0126】

ｉｉ．重鎖
９Ａ５の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）であり、この配列は、
９Ａ５重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＹＧＬＩ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）
９Ａ５重鎖ＣＤＲ２：ＥＩＹＰＲＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）
９Ａ５重鎖ＣＤＲ３：ＳＳＰＨＧＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）
を有する。

【0127】

９Ａ５の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４）である。

【0128】

ｋ．１０Ｇ９配列
ｉ．軽鎖
１０Ｇ９の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）であり、この配列は、
１０Ｇ９軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１）
１０Ｇ９軽鎖ＣＤＲ２：ＧＴＮＮＲＡＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）
１０Ｇ９軽鎖ＣＤＲ３：ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）
を有する。

【0129】

１０Ｇ９の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）である。

【0130】

ｉｉ．重鎖
１０Ｇ９の重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）であり、この配列は、
１０Ｇ９重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＤＦＷＭＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）
１０Ｇ９重鎖ＣＤＲ２：ＤＩＮＳＤＧＳＡＶＮＹＡＰＳＩＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）
１０Ｇ９重鎖ＣＤＲ３：ＹＤＤＹＧＹＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）
を有する。

【0131】

１０Ｇ９の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５）である。

【0132】

Ｉ．６Ａ配列
ｉ．軽鎖
６Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６）であり、この配列は、
６Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）
６Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）
６Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７）
を有する。

【0133】

６Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０）である。

【0134】

ｉｉ．重鎖
６Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８）であり、この配列は、
６Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＤＤＹＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２）
６Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＣＩＤＰＥＮＧＤＴＥＹＡＳＫＦＱＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０）
６Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＹＶＧＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２）
を有する。

【0135】

６Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３）である。

【0136】

ｍ．２８Ａ配列
ｉ．軽鎖
２８Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７）であり、この配列は、
２８Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）
２８Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＬＶＳＥＬＤＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３）
２８Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＷＱＧＴＨＦＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）
を有する。

【0137】

２８Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１）である。

【0138】

ｉｉ．重鎖
２８Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９）であり、この配列は、
２８Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＳＹＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３）
２８Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＥＩＨＰＲＳＧＮＴＹＹＮＥＮＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１）
２８Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＧＧＰＧＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３）
を有する。

【0139】

２８Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４）である。

【0140】

ｎ．６３Ａ配列
ｉ．軽鎖
６３Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８）であり、この配列は、
６３Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）
６３Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）
６３Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＷＱＧＴＨＦＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）
を有する。

【0141】

６３Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２）である。

【0142】

ｉｉ．重鎖
６３Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０）であり、この配列は、
６３Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＳＹＧＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４）
６３Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＱＩＹＰＲＳＤＮＴＹＹＮＥＲＦＫＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２）
６３Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＥＧＧＰＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４）
を有する。

【0143】

６３Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５）である。

【0144】

ｏ．７１Ａ配列
ｉ．軽鎖
７１Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９）であり、この配列は、
７１Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）
７１Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）
７１Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７）
を有する。

【0145】

７１Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３）である。

【0146】

ｉｉ．重鎖
７１Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１）であり、この配列は、
７１Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＤＤＹＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２）
７１Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＣＩＤＰＥＮＧＤＩＥＹＡＳＲＦＱＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３）
７１Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＹＶＧＦＧＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５）
を有する。

【0147】

７１Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６）である。

【0148】

ｐ．７７Ａ配列
ｉ．軽鎖
７７Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００）であり、この配列は、
７７Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＮＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）
７７Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）
７７Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７）
を有する。

【0149】

７７Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４）である。

【0150】

ｉｉ．重鎖
７７Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２）であり、この配列は、
７７Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＤＤＹＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２）
７７Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＣＩＤＰＥＮＧＤＴＥＹＡＳＫＦＱＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４）
７７Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＹＶＧＦＧＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５）
を有する。

【0151】

７７Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７）である。

【0152】

ｑ．８０Ａ配列
ｉ．軽鎖
８０Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）であり、この配列は、
８０Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＮＱＳＬＬＮＳＧＤＱＫＮＹＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４７）
８０Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＷＡＳＴＲＥＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４）
８０Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＱＮＤＹＳＹＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８）
を有する。

【0153】

８０Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５）である。

【0154】

ｉｉ．重鎖
８０Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３）であり、この配列は、
８０Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＤＦＹＩＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５）
８０Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＲＩＹＰＧＳＤＥＴＹＹＮＥＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７５）
８０Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＷＦＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６）
を有する。

【0155】

８０Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８）である。

【0156】

ｒ．８２Ｂ配列
ｉ．軽鎖
８２Ｂの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）であり、この配列は、
８２Ｂ軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＮＴＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４８）
８２Ｂ軽鎖ＣＤＲ２：ＬＶＳＥＬＤＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３）
８２Ｂ軽鎖ＣＤＲ３：ＷＱＧＴＨＦＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）
を有する。

【0157】

８２Ｂの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６）である。

【0158】

ｉｉ．重鎖
８２Ｂの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）であり、この配列は、
８２Ｂ重鎖ＣＤＲ１：ＳＤＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６）
８２Ｂ重鎖ＣＤＲ２：ＱＩＨＰＲＳＧＮＴＹＹＮＧＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７６）
８２Ｂ重鎖ＣＤＲ３：ＴＧＴＧＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７）
を有する。

【0159】

８２Ｂの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９）である。

【0160】

ｓ．８３Ｂ配列
ｉ．軽鎖
８３Ｂの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３）であり、この配列は、
８３Ｂ軽鎖ＣＤＲ１：ＱＡＴＱＤＩＶＫＮＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４９）
８３Ｂ軽鎖ＣＤＲ２：ＹＡＴＥＬＡＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）
８３Ｂ軽鎖ＣＤＲ３：ＬＱＦＹＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９）
を有する。

【0161】

８３Ｂの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７）である。

【0162】

ｉｉ．重鎖
８３Ｂの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５）であり、この配列は、
８３Ｂ重鎖ＣＤＲ１：ＤＹＮＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７）
８３Ｂ重鎖ＣＤＲ２：ＹＩＮＰＮＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７）
８３Ｂ重鎖ＣＤＲ３：ＳＤＷＥＤＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８）
を有する。

【0163】

８３Ｂの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０）である。

【0164】

ｔ．９２Ａ配列
ｉ．軽鎖
９２Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４）であり、この配列は、
９２Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０）
９２Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＲＴＳＮＬＡＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６）
９２Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＨＱＷＳＳＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０）
を有する。

【0165】

９２Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８）である。

【0166】

ｉｉ．重鎖
９２Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６）であり、この配列は、
９２Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＳＧＹＹＷＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８）
９２Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＹＩＲＨＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８）
９２Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＥＩＹＤＧＳＳＧＹＦＤＶＷＧＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８９）
を有する。

【0167】

９２Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）である。

【0168】

ｕ．９３Ｂ配列
ｉ．軽鎖
９３Ｂの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５）であり、この配列は、
９３Ｂ軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）
９３Ｂ軽鎖ＣＤＲ２：ＷＡＳＴＲＥＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４）
９３Ｂ軽鎖ＣＤＲ３：ＱＮＤＹＳＦＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）
を有する。

【0169】

９３Ｂの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９）である。

【0170】

ｉｉ．重鎖
９３Ｂの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７）であり、この配列は、
９３Ｂ重鎖ＣＤＲ１：ＤＹＹＩＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９）
９３Ｂ重鎖ＣＤＲ２：ＲＩＹＰＧＮＧＮＴＤＹＮＥＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９）
９３Ｂ重鎖ＣＤＲ３：ＷＹＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０）
を有する。

【0171】

９３Ｂの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２）である。

【0172】

ｖ．９９Ｂ配列
ｉ．軽鎖
９９Ｂの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６）であり、この配列は、
９９Ｂ軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）
９９Ｂ軽鎖ＣＤＲ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）
９９Ｂ軽鎖ＣＤＲ３：ＷＱＧＴＨＦＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）
を有する。

【0173】

９９Ｂの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０）である。

【0174】

ｉｉ．重鎖
９９Ｂの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８）であり、この配列は、
９９Ｂ重鎖ＣＤＲ１：ＳＤＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６）
９９Ｂ重鎖ＣＤＲ２：ＱＩＨＰＲＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０）
９９Ｂ重鎖ＣＤＲ３：ＴＧＴＧＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７）
を有する。

【0175】

９９Ｂの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３）である。

【0176】

ｗ．１０４Ｂ配列
ｉ．軽鎖
１０４Ｂの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７）であり、この配列は、
１０４Ｂ軽鎖ＣＤＲ１：ＫＳＳＬＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）
１０４Ｂ軽鎖ＣＤＲ２：ＬＶＳＫＬＤＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）
１０４Ｂ軽鎖ＣＤＲ３：ＷＱＧＴＨＦＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）
を有する。

【0177】

１０４Ｂの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１）である。

【0178】

ｉｉ．重鎖
１０４Ｂの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９）であり、この配列は、
１０４Ｂ重鎖ＣＤＲ１：ＳＹＧＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４）
１０４Ｂ重鎖ＣＤＲ２：ＱＩＨＰＲＳＧＮＴＹＹＮＥＮＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１）
１０４Ｂ重鎖ＣＤＲ３：ＥＧＧＰＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４）
を有する。

【0179】

１０４Ｂの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４）である。

【0180】

ｘ．１０５Ａ配列
ｉ．軽鎖
１０５Ａの軽鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９）であり、この配列は、
１０５Ａ軽鎖ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）
１０５Ａ軽鎖ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）
１０５Ａ軽鎖ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７）
を有する。

【0181】

１０５Ａの軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２）である。

【0182】

ｉｉ．重鎖
１０５Ａの重鎖可変領域アミノ酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１）であり、この配列は、
１０５Ａ重鎖ＣＤＲ１：ＤＤＹＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２）
１０５Ａ重鎖ＣＤＲ２：ＣＩＤＰＥＮＧＤＩＥＹＡＳＲＦＱＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３）
１０５Ａ重鎖ＣＤＲ３：ＹＶＧＦＧＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５）
を有する。

【0183】

１０５Ａの重鎖可変領域をコードする核酸配列は、

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）である。

【0184】

２．抗シグレック−１５抗体及びその抗原結合フラグメント
１つまたは複数のシグレック−１５ポリペプチドもしくは融合タンパク質、またはそのフラグメントもしくは変異体に結合する、抗体及びその抗原結合フラグメントを含めたシグレック−１５結合分子が開示される。本明細書に開示される抗体は、典型的には、シグレック−１５ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは融合物に存在するエピトープに結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントである。幾つかの実施形態では、該抗体は立体構造エピトープに結合する。幾つかの実施形態では、該抗体は線状エピトープに結合する。線状エピトープは、４、５、６、７、８、９、１０、１１個、またはそれ以上の長さの連続するアミノ酸であり得る。エピトープは１つまたは複数の非アミノ酸エレメント、翻訳後修飾、またはそれらの組み合わせを含み得る。翻訳後修飾の例として、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、シトルリン化、及びユビキチン化が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、該抗体は、１つまたは複数の糖基によって少なくとも部分的に形成されるエピトープに結合することができる。

【0185】

該抗体またはその抗原結合フラグメントは、内因性シグレック−１５ポリペプチド、もしくは組換えシグレック−１５ポリペプチド、またはそれらの組み合わせに存在するエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態では、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、シグレック−１５の細胞外ドメインもしくはそのフラグメント、またはそれらから形成されるエピトープに結合する。幾つかの実施形態では、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、シグレック−１５が１つまたは複数のそのリガンドに結合するのを低減させるもしくは防止する、シグレック−１５によって調節される細胞内シグナル伝達を低減させる、またはそれらの組み合わせを行う機能阻止抗体である。

【0186】

上で考察したように、シグレック−１５は、シアル酸付加された糖タンパク質に結合し、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα構造を優先的に認識する。以降に示す実施例は、シグレック−１５がロイシンリッチリピート含有タンパク質４Ｃ（ＬＲＲＣ４Ｃ）（ネトリン−Ｇ１リガンド、及びＮＧＬ−１とも呼ばれる）（これは、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα構造に依存することも依存しないこともある）に結合することを例示している。ＬＲＲＣ４Ｃの核酸及びポリペプチド配列は当技術分野で公知であり、例えば、以下を含む：

[この文献は図面を表示できません]

（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＨＣＪ２ＬＲＣ４Ｃ＿ＨＵＭＡＮ（これは、その全体が参照により本明細書に明確に組み込まれている））。

【0187】

シグレック−１５は、Ｔ細胞などの免疫細胞上の対抗受容体（Ｓ１５−ＣＲ）に結合し得る。

【0188】

よって、幾つかの実施形態では、機能阻止（拮抗性）シグレック−１５結合分子は、シグレック−１５とそのリガンド、例えば、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα構造、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシグレック−１５対抗受容体を有する糖タンパク質との間の相互作用を低減させる、阻止する、または防止する。

【0189】

幾つかの実施形態では、該抗体またはその抗原結合フラグメントがシグレック−１５に結合すると、免疫活性化の増大、免疫抑制の低減、またはそれらの組み合わせが可能となる。例えば、特定の実施形態では、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、シグレック−１５のＩｇ様Ｖ型ドメインまたはＩｇ様Ｃ２型ドメインに結合する。幾つかの実施形態では、エピトープは、シグレック−１５のシアル酸結合部位を含む（例えば、エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基１４３を含む）。

【0190】

幾つかの実施形態では、該抗体は、モノクローナル抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、または１０５Ａと同じエピトープの一部または全部に結合する。該エピトープは、線状エピトープまたは立体構造エピトープであり得る。幾つかの実施形態では、該抗体は、モノクローナル抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、または１０５Ａと同じエピトープ特異性を有する。これは、モノクローナル抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、または１０５Ａと同じパラトープを含有する組換え抗体を生成することによって実現することができる。幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、または１０５Ａのいずれかの軽鎖ＣＤＲの一部もしくは全部、軽鎖可変領域全体、重鎖ＣＤＲの一部もしくは全部、重鎖可変領域全体、またはそれらの組み合わせを含む。

【0191】

シグレック−１５結合分子は、上に列挙したクローンのＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なＣＤＲを含むことができ、シグレック−１５への免疫特異的な結合を呈する。

【0192】

例えば、開示される分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４〜４５及び１４６〜１６１のいずれかのアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲの１つまたは複数を含むことができる。該分子は少なくとも、１つの軽鎖ＣＤＲ１、１つの軽鎖ＣＤＲ２、及び１つの軽鎖ＣＤＲ３を含むことができる。例えば、該分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４〜３１及び１４６〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１を含むことができる。該分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２〜３８及び１５３〜１５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２を含むことができる。該分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９〜４５及び１５７〜１６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含むことができる。

【0193】

特定の実施形態では、該分子は、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、ここで、該軽鎖ＣＤＲ１、該軽鎖ＣＤＲ２、及び該軽鎖ＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を含む：

[この文献は図面を表示できません]

【0194】

開示される分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６〜７３及び１６２〜１９０のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲの１つまたは複数を含むことができる。該分子は少なくとも、１つの重鎖ＣＤＲ１、１つの重鎖ＣＤＲ２、及び１つの重鎖ＣＤＲ３を含むことができる。該分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６〜５５及び１６２〜１６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１を含むことができる。該分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６〜６６及び１７０〜１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２を含むことができる。該分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜７３及び１８２〜１９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含むことができる。

【0195】

特定の実施形態では、該分子は、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３を含み、ここで、該重鎖ＣＤＲ１、該重鎖ＣＤＲ２、及び該重鎖ＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を含む：

[この文献は図面を表示できません]

【0196】

シグレック−１５結合分子は、上のクローンのいずれかによって産生される抗体の可変重鎖及び／または軽鎖のアミノ酸配列と少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一な可変重鎖及び／または可変軽鎖のアミノ酸配列を含むことができ、ヒトシグレック−１５への免疫特異的な結合を呈する。

【0197】

例えば、開示されるシグレック−１５結合分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、もしくは１０７に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を含むそれらの変異体を有する軽鎖可変領域を含むことができ、シグレック−１５への免疫特異的な結合を呈する。

【0198】

追加的にまたは代替的に、開示されるシグレック−１５結合分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、もしくは１１９に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を含むそれらの変異体を有する重鎖可変領域を含むことができ、シグレック−１５への免疫特異的な結合を呈する。

【0199】

シグレック−１５結合分子は、１つ、２つ、または３つの軽鎖ＣＤＲ、及び１つ、２つ、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、幾つかの実施形態では、３つの軽鎖ＣＤＲ及び３つの重鎖ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン分子（例えば、抗体、ダイアボディ、融合タンパク質など）であることができ、ここで、該軽鎖ＣＤＲには、以下が含まれる：
（１）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の軽鎖ＣＤＲ１；
（２）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の軽鎖ＣＤＲ２；
（３）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の軽鎖ＣＤＲ３；
（４）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ１及び軽鎖ＣＤＲ２；
（５）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ１及び軽鎖ＣＤＲ３；
（６）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３；
あるいは
（７）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３。

【0200】

該分子は、１つ、２つ、または３つの軽鎖ＣＤＲ、及び１つ、２つ、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、幾つかの実施形態では、３つの軽鎖ＣＤＲ及び３つの重鎖ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン分子であることができ、ここで、該重鎖ＣＤＲには、以下が含まれる：
（１）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の重鎖ＣＤＲ１；
（２）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の重鎖ＣＤＲ２；
（３）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の重鎖ＣＤＲ３；
（４）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ１及び重鎖ＣＤＲ２；
（５）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ１及び重鎖ＣＤＲ３；
（６）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３；
あるいは
（７）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３。

【0201】

該分子は、１つ、２つ、または３つの軽鎖ＣＤＲ、及び１つ、２つ、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、幾つかの実施形態では、３つの軽鎖ＣＤＲ及び３つの重鎖ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン分子であることができ、ここで、該軽鎖ＣＤＲには、以下が含まれ：
（１）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の軽鎖ＣＤＲ１；
（２）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の軽鎖ＣＤＲ２；
（３）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の軽鎖ＣＤＲ３；
（４）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ１及び軽鎖ＣＤＲ２；
（５）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ１及び軽鎖ＣＤＲ３；
（６）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３；
あるいは
（７）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３、
該重鎖ＣＤＲには、以下が含まれる：
（１）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の重鎖ＣＤＲ１；
（２）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の重鎖ＣＤＲ２；
（３）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の重鎖ＣＤＲ３；
（４）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ１及び重鎖ＣＤＲ２；
（５）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ１及び重鎖ＣＤＲ３；
（６）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３；
あるいは
（７）マウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのヒト化変異体の、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３。

【0202】

例えば、抗体は、マウス１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５Ａ、またはそれらのキメラ抗体、またはマウス抗ヒトシグレック−１５抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、もしくは１０５ＡのＣＤＲ（複数可）に相当するＣＤＲ（複数可）を有するヒト化変異体のＣＤＲのうちの１つまたは複数を有することができる。

【0203】

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２７、２２８、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一な可変軽鎖アミノ酸配列、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３０、２３１、２３３、及び２３５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一な可変重鎖アミノ酸配列を有する、ヒト化モノクローナル抗体を提供する。

【0204】

３．抗体組成物
開示されるシグレック−１５結合分子は、抗体またはその抗原結合フラグメントであり得る。開示される抗体及びその抗原結合フラグメントには、任意のクラスの免疫グロブリン全体（すなわち、インタクトな抗体）、そのフラグメント、及び抗体の少なくとも抗原結合可変ドメインを含有する合成タンパク質が含まれる。幾つかの実施形態では、開示される分子は、抗体の軽鎖と、抗体の重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。他の実施形態では、かかる分子は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域の１つまたは複数をさらに含むことができる（とりわけ、ＣＨ１及びヒンジ領域、またはＣＨ１、ヒンジ、及びＣＨ２領域、またはＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域）。抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含めた免疫グロブリンの任意のクラスから、ならびにＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４を含めた任意のアイソタイプから選択することができる。幾つかの実施形態では、定常ドメインは、抗体が細胞傷害活性を呈することが所望される場合、補体結合定常ドメインであり、クラスは典型的にはＩｇＧ_１である。他の実施形態では、かかる細胞傷害活性が望ましくない場合、定常ドメインは、ＩｇＧ_２またはＩｇＧ_４クラスのものであり得る。抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプからの配列を含むことができ、特定の定常ドメインを選択して所望のエフェクター機能を最適化することは、当技術分野における通常技術の範囲内である。

【0205】

可変ドメインは抗体間で配列が異なり、特定の抗体毎の、その特定の抗原に対する結合及び特異性において使用される。しかし、可変性は、通常、抗体の可変ドメインにわたって均等に分布していない。それは、典型的には、軽鎖及び重鎖の両可変ドメイン中の相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのうち、より高度に保存されている部分はフレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々４つのＦＲ領域を含み、ＦＲ領域は大部分がβシート構造を取り、βシート構造は、ループを形成する３つのＣＤＲによって接続され、ループは、βシート構造を接続し、ある場合にはβシート構造の一部を形成する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって互いに近接して保持され、他の鎖からのＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。

【0206】

生物活性を有する抗体のフラグメントも開示される。該フラグメントは、他の配列に結合しているか否かにかかわらず、非改変抗体または抗体フラグメントと比較してフラグメントの活性が相当に変化するまたは弱化されることがない限り、特定の領域または特異的なアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、または他の選択された改変を含む。

【0207】

本開示の抗原タンパク質に特異的な一本鎖抗体の生成に、複数の技法を適合させることもできる。一本鎖抗体を生成するための方法は、当業者には周知である。一本鎖抗体は、短いペプチドリンカーを使用して重鎖及び軽鎖の可変ドメインを共に融合し、それによって単一分子上に抗原結合部位を再構成することによって作ることができる。一方の可変ドメインのＣ末端が１５〜２５個のアミノ酸ペプチドまたはリンカーを介して他方の可変ドメインのＮ末端に繋がれた一本鎖抗体可変フラグメント（ｓｃＦｖ）が、抗原結合または結合の特異性を相当に撹乱することなく開発されている。リンカーは、重鎖と軽鎖とがそれらの適正な立体構造的配向で共に結合できるように選択される。

【0208】

２つのｓｃＦｖを連結することによって二価一本鎖可変フラグメント（ｄｉ−ｓｃＦｖ）を作り出すことができる。これは、２つのＶＨ及び２つのＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖を生成し、タンデムｓｃＦｖを得ることによって行うことができる。ｓｃＦｖは、２つの可変領域を共に折り畳むには短過ぎるリンカーペプチド（約５個のアミノ酸）を用いて、ｓｃＦｖを強制的に二量体化させるように設計することもできる。このタイプは、ダイアボディとして公知である。ダイアボディは、相当するｓｃＦｖより最大４０倍低い解離定数を有することが示されており、これは、ダイアボディはその標的に対してはるかに高い親和性を有することを意味している。さらに短いリンカー（１個または２個のアミノ酸）は、三量体（三重特異性抗体、または三特異性抗体）の形成をもたらす。四重特異性抗体も生成されている。これは、その標的に対してダイアボディよりさらに高い親和性を呈する。

【0209】

モノクローナル抗体は、抗体の実質的に均質な、すなわち、抗体分子の小さい部分集団に存在し得る天然に存在する可能な変異を除き、集団内の個々の抗体が同一である集団から得られる。モノクローナル抗体には、「キメラ」抗体（重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の相当する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の相当する配列と同一または相同である）、ならびに所望の拮抗活性を呈する限り、かかる抗体のフラグメントが含まれる。

【0210】

ａ．キメラ及びヒト化抗体
開示される配列及びその機能的変異体の１つまたは複数を含む、キメラ抗体及びその抗原結合フラグメントも提供される。

【0211】

キメラ抗体を生成するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２；Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；及び米国特許第６，３１１，４１５号、第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、及び４，８１６，３９７号を参照されたい。非ヒト種由来の１つまたは複数のＣＤＲとヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを含むキメラ抗体は、例えば、ＣＤＲ移植（ＥＰ２３９，４００；国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号；及び米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、及び第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面形成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５；ならびにＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９６９）、及び鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含めた、当技術分野で公知の種々の技法を使用して生成することができる。

【0212】

開示される分子は、ヒトもしくはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり得る。多くの非ヒト抗体（例えば、マウス、ラット、またはウサギに由来するもの）がヒトにおいて天然に抗原性であり、よって、ヒトに投与されると望ましくない免疫応答を引き起こし得る。したがって、本方法におけるヒトまたはヒト化抗体の使用は、ヒトに投与された抗体が望ましくない免疫応答を誘起する確率を下げるのに役立つ。

【0213】

免疫化時に内因性免疫グロブリンを産生することなくヒト抗体の全レパートリーを産生する能力があるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いることができる。例えば、キメラ及び生殖細胞系列変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（Ｊ（Ｈ））遺伝子のホモ接合型欠失によって、内因性抗体の産生が完全に阻害されることが記載されている。かかる生殖細胞系列変異マウスにヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイを移入すると、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生をもたらすこととなる。

【0214】

任意で、抗体は他の種で作製され、ヒトにおける投与のために「ヒト化」される。ヒト化形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそのフラグメント（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、または抗体の他の抗原結合配列など）である。ヒト化抗体には、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であって、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラット、またはウサギ（ドナー抗体）のＣＤＲの残基によって置き換えられているものが含まれる。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、相当する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基も含有してもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、可変ドメインにおいてＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域、の少なくとも一部も含有する。

【0215】

非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、欧州特許第ＥＰ２３９，４００号、第ＥＰ５９２，１０６号、及び第ＥＰ５１９，５９６号；国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号及び第ＷＯ９３／１７１０５号；米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、第５，５６５，３３２号、第５，５８５，０８９号、第５，７６６，８８６号、及び第６，４０７，２１３号；ならびにＰａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３；Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５；Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：３５３−３６０；Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７−７９；Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９：８９５−９０４；Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ；Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２；Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ １５０：４０９−１０；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−９７３；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９；及びＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６）を参照されたい。

【0216】

一般に、ヒト化抗体は、非ヒトの供給源からそこに導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は「移入」残基と呼ばれることが多く、これは、典型的には、「移入」可変ドメインから取られる。抗体ヒト化技法は一般に、組換えＤＮＡ技術を使用して、抗体分子の１つまたは複数のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ配列を操作することを含む。ヒト化は、本質的に、齧歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列でヒト抗体の相当する配列を置換することによって実施することができる。したがって、ヒト化形態の非ヒト抗体（またはそのフラグメント）は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が非ヒト種由来の相当する配列によって置換されている、キメラ抗体またはフラグメントである。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、一部のＣＤＲ残基及びことによると一部のＦＲ残基が、齧歯類の抗体中の類似部位に由来する残基によって置換されているヒト抗体である。

【0217】

ヒト化抗体の作製に使用しようとするヒト可変ドメイン（軽鎖と重鎖の両方）の選択は、抗原性を低減させるために極めて重要であり得る。「最良適合」法によれば、齧歯類抗体の可変ドメインの配列が、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。齧歯類のものに一番近いヒト配列が、ヒト化抗体用のヒトフレームワーク（ＦＲ）として認められる。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのヒト抗体全てのコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、幾つかの異なるヒト化抗体に使用されてもよい。

【0218】

抗体が抗原に対する高親和性及び他の好適な生物学的特性を保持しながらヒト化されることが、さらに重要である。この目標を達成するために、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用する、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析プロセスによって、ヒト化抗体を調製することができる。三次元免疫グロブリンモデルは一般に利用可能であり、当業者には熟知されている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元立体構造を図で表示することが可能なコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示を調べれば、候補免疫グロブリン配列が機能する際に残基が果たすと考えられる役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能となる。このようにして、標的抗原（複数可）に対する増大した親和性などの所望の抗体特性が実現されるように、ＦＲ残基をコンセンサス及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことにおいて、直接的に、また最も実質的に関与する。

【0219】

ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体誘導体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことができ、可変ドメインにおいてＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに相当し、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。かかる抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域、の少なくとも一部分も含有する。かかる抗体の定常ドメインは、提示する抗体の機能、特に必要とされ得るエフェクター機能に関して選択することができる。幾つかの実施形態では、かかる抗体の定常ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭドメインであるか、またはそれらを含み得る。特定の実施形態では、ヒト化抗体誘導体が治療用途用であることが意図され、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性などの抗体エフェクター機能が必要とされるとき、ヒトＩｇＧ定常ドメイン、とりわけＩｇＧ１及びＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常ドメインが使用される。代替実施形態では、抗体が治療を目的とすることが意図され、抗体エフェクター機能が必要とされないとき、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４アイソタイプが使用される。抗体エフェクター機能を変化させる１つまたは複数のアミノ酸修飾を含むＦｃ定常ドメイン、例えば米国特許出願公開第２００５／００３７０００号及び第２００５／００６４５１４号に開示されるもの。

【0220】

ヒト化抗体のフレームワーク及びＣＤＲ領域は、親配列に正確に相当する必要はなく、例えば、ドナーＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークを少なくとも１つの残基の置換、挿入、もしくは欠失によって変異させて、その部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基がコンセンサスもしくはドナー抗体のいずれにも相当しないようにすることができる。幾つかの実施形態では、かかる変異は広範なものではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、より多くの場合９０％、または９５％超が、親フレームワーク領域（ＦＲ）及びＣＤＲ配列のものに相当する。ヒト化抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を使用して生成することができ、そうした技法として、ＣＤＲ移植（欧州特許第ＥＰ２３９，４００号；国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号；ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、及び第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面形成（欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号及び第ＥＰ５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、第５，７６６，８８６号、第５，５８５，０８９号、国際公開第ＷＯ９３１７１０５号、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． １３：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７−７９、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９：８９５−９０４、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ １５０：４０９−１０、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−７３、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３、及びＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６に開示される技法が挙げられるが、これらに限定されない。

【0221】

多くの場合、フレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させるように、例えば向上させるように、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換される。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法によって特定され、例えば、ＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリングを行って抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定することによって、及び配列比較を行って特定の位置の特殊なフレームワーク残基を特定することによって特定される。（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許出願公開第２００４／００４９０１４号及び第２００３／０２２９２０８号；米国特許第６，３５０，８６１号；第６，１８０，３７０号；第５，６９３，７６２号；第５，６９３，７６１号；第５，５８５，０８９号；及び第５，５３０，１０１号、ならびにＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３を参照されたい）。

【0222】

開示されるマウス抗ヒトシグレック−１５抗体のヒト、キメラ、またはヒト化誘導体は、ヒトにおけるインビボでの方法に使用することができる。マウス抗体または他の種の抗体は、有利なことに多くの用途に用いることができる（例えば、インビトロまたはインサイツでの検出アッセイ、急性インビボ用途など）。かかるヒトまたはヒト化抗体は、１つまたは複数の非ヒトＣＤＲ中にアミノ酸残基の置換、欠失、または付加を含み得る。ヒト化抗体誘導体は、非誘導体ヒト化抗体と比較したときに、実質的に同じ結合、より強い結合、またはより弱い結合を有し得る。特定の実施形態では、ＣＤＲの１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が置換、欠失、または付加されている（すなわち変異されている）。完全ヒト抗体は、ヒト対象の療法的治療に特に望ましい。

【0223】

かかるヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ法を含めた、当技術分野で公知の種々の方法によって作製することができる（米国特許第４，４４４，８８７号及び第４，７１６，１１１号；ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、第ＷＯ９８／５０４３３号、第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９８／１６６５４号、第ＷＯ９６／３４０９６号、第ＷＯ９６／３３７３５号、及び第ＷＯ９１／１０７４１号を参照されたい）。かかるヒト抗体は、機能性の内因性免疫グロブリンを発現する能力はないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して生成することができる。

【0224】

例えば、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、マウス胚性幹細胞内にランダムにまたは相同組換えによって導入することができる。あるいは、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域をマウス胚性幹細胞内に導入することができる。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入とは別に、または同時に非機能性にすることができる。特に、Ｊ_H領域のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生を防止する。改変された胚性幹細胞を増殖させ、胚盤胞内にマイクロインジェクションして、キメラマウスを生成する。次いでキメラマウスを交配して、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を生成する。このトランスジェニックマウスを、選択された抗原、例えば、ポリペプチドの全てまたは一部分を用いて、従来の手法を使用して免疫化する。抗原に対するモノクローナル抗体は、免疫化トランスジェニックマウスから、従来のハイブリドーマ技術を使用して得ることができる（例えば、米国特許第５，９１６，７７１号を参照されたい）。トランスジェニックマウスが保有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子はＢ細胞分化の間に再配列し、続いてクラススイッチ及び体細胞突然変異を受ける。このように、かかる技法を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＥ抗体を生成することが可能である。ヒト抗体を生成するこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ（１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を生成するためのこの技術ならびにかかる抗体を生成するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９６／３４０９６号、及び第ＷＯ９６／３３７３５号；ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号、及び第５，９３９，５９８号（これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）を参照されたい。加えて、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）及びＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）などの会社と提携して、選択された抗原に対するヒト抗体を上記のものに類似した技術を使用して得ることができる。

【0225】

ヒトアクセプターフレームワーク配列をコードするＤＮＡ配列として、ヒト生殖系列ＶＨセグメントＶＨ１−１８及びＪＨ６ならびにヒト生殖系列ＶＬセグメントＶＫ−Ａ２６及びＪＫ４からのＦＲセグメントが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＣＤＲの１つまたは複数が、慣例的な組換えＤＮＡ技法を使用してフレームワーク領域内に挿入される。該フレームワーク領域は、天然に存在するフレームワーク領域またはコンセンサスフレームワーク領域、及びヒトフレームワーク領域であり得る（ヒトフレームワーク領域の列挙については、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９９８，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ Ｉｎ Ｔｈｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９を参照されたい）。

【0226】

ｉ．ヒト化５Ｇ１２
一実施形態は、ヒト化５Ｇ１２抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0227】

ｂ．一本鎖抗体
シグレック−１５結合分子は、一本鎖抗体であり得る。一本鎖抗体を生成する方法は、当技術分野で周知である。一本鎖抗体は、短いペプチドリンカーを使用して重鎖及び軽鎖の可変ドメインを共に融合し、それによって単一分子上に抗原結合部位を再構成することによって作られる。一方の可変ドメインのＣ末端が１５〜２５個のアミノ酸のペプチドまたはリンカーを介して他方の可変ドメインのＮ末端に繋がれた一本鎖抗体可変フラグメント（ｓｃＦｖ）が、抗原結合または結合の特異性を相当に撹乱することなく開発されている。リンカーは、重鎖と軽鎖とがそれらの適正な立体構造的配向で共に結合できるように選択される。これらのＦｖは、天然の抗体の重鎖及び軽鎖に存在する定常領域（Ｆｃ）を欠いている。

【0228】

ｃ．一価抗体
インビトロでの方法は、一価抗体の調製にも適している。抗体を消化してそのフラグメント、特にＦａｂフラグメントを生成することは、当技術分野で公知の慣例的技法を使用して遂行することができる。例えば、消化は、パパインを使用して実施することができる。抗体をパパイン消化すると、典型的には、単一の抗原結合部位を各々有するＦａｂフラグメントと呼ばれる２つの同一な抗原結合フラグメントと、残りのＦｃフラグメントとが生成する。ペプシンで処置すると、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントと呼ばれるフラグメントが得られ、これは２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原と架橋結合する能力がある。

【0229】

抗体消化において生成されたＦａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１定常ドメインも含有する。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含む数個の残基が重鎖ドメインのカルボキシ末端に付加されていることがＦａｂフラグメントと異なる。Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ’フラグメントを含む、二価のフラグメントである。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における呼称である。抗体フラグメントは、元々ヒンジシステインを間に有するＦａｂ’フラグメントの対として生成された。抗体フラグメントの他の化学的結合も公知である。

【0230】

ｄ．抗体フラグメントのコンジュゲートまたは融合物
抗体のターゲティング機能は、抗体またはそのフラグメントを治療用物質とカップリングすることによって治療的に使用することができる。抗体またはフラグメント（例えば、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分）と治療用物質とのかかるカップリングは、抗体または抗体フラグメントと治療用物質とを含む、免疫コンジュゲートを作製することによって、または融合タンパク質を作製することによって実現することができる。

【0231】

抗体またはフラグメントと治療用物質とのかかるカップリングは、抗体または抗体フラグメントと治療用物質とを含む、免疫コンジュゲートを作製することによって、または融合タンパク質を作製することによって、または抗体もしくはフラグメントをｓｉＲＮＡなどの核酸と連結することによって実現することができる。

【0232】

幾つかの実施形態では、抗体は、その半減期が変化するように改変される。幾つかの実施形態では、循環中または治療部位により長い時間存在するように、抗体の半減期を増大することが望ましい。例えば、抗体の力価を循環中または治療すべき場所に長期間維持することが望ましいことがある。抗体は、半減期を延ばすＦｃ変異体を用いて、例えば、Ｘｔｅｎｄ（商標）抗体半減期延長技術（Ｘｅｎｃｏｒ，Ｍｏｎｒｏｖｉａ，ＣＡ）を使用して操作することができる。他の実施形態では、潜在的副作用を低減させるために抗ＤＮＡ抗体の半減期が短縮される。開示されるコンジュゲートは、所与の生物学的応答の改変に使用することができる。薬物部分は、古典的な化学的治療用物質に限定されると解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を保有するタンパク質またはポリペプチドであってもよい。かかるタンパク質として、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素などの毒素を挙げることができる。

【0233】

ｅ．単一及び多重特異性抗体
幾つかの実施形態では、開示される抗体は単一特異性であり、シグレック−１５にだけ結合する。かかる抗体の二重特異性誘導体、かかる抗体の三重特異性誘導体、またはそれ以上の多重特異性の誘導体抗体であって、ヒトシグレック−１５に対するそれらの特異性に加えて、異なる免疫系標的に特異性を呈するものも提供される。例えば、かかる抗体は、ヒトシグレック−１５と、抗体を特定の細胞型または組織に（例えば、治療されている腫瘍のがん抗原に関連する抗原に）ターゲティングさせるのに重要な抗原の両方に結合することができる。別の態様では、免疫調節作用を強化し、リガンドブロッキング、免疫細胞活性化、及び直接的な腫瘍ターゲティングなどの複数の作用機序を１分子に組み合わせるために、かかる多重特異性抗体は、代替的な免疫調節経路、例えば、Ｂ７−Ｈ１、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、４−１−ＢＢ、ＬＩＧＨＴ、またはＬＡＧ３に関与する分子（受容体またはリガンド）に結合する。

【0234】

ｆ．誘導体
開示されるシグレック−１５結合分子のいずれかの「誘導体」の生成及び使用も開示される。誘導体分子、例えば、抗体または抗体フラグメントは、当業者に公知の技法を使用する化学修飾によって改変することができる。こうした化学修飾として、特異的な化学的切断、アセチル化、製剤、ツニカマイシンの代謝合成などが挙げられるが、これらに限定されない。誘導体という用語は、非アミノ酸修飾を包含し、例えば、グリコシル化（例えば、マンノース、２−Ｎ−アセチルグルコサミン、ガラクトース、フコース、グルコース、シアル酸、５−Ｎ−アセチルノイラミン酸、５−グリコールノイラミン酸などの含有量の変化を有する）、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質との連結などが可能なアミノ酸が包含される。幾つかの実施形態では、炭水化物修飾の変化によって、抗体の可溶化、抗体の細胞内輸送及び分泌の亢進、抗体アセンブリの促進、立体構造の完全性、及び抗体媒介性エフェクター機能の１つまたは複数が調節される。

【0235】

特定の実施形態では、炭水化物修飾の変化によって、炭水化物修飾を欠く抗体と比べて抗体媒介性エフェクター機能が強化される。抗体媒介性エフェクター機能の変化をもたらす炭水化物修飾は、当技術分野で周知である（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）“Ｌａｃｋ Ｏｆ Ｆｕｃｏｓｅ Ｏｎ Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｆｃｇａｍｍａ ＲＩＩＩ Ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：２６７３３−２６７４０；Ｄａｖｉｅｓ Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００１）“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｆ ＧｎＴＩＩＩ Ｉｎ Ａ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｎｔｉ−ＣＤ２０ ＣＨＯ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ Ａｌｔｅｒｅｄ Ｇｌｙｃｏｆｏｒｍｓ Ｌｅａｄｓ Ｔｏ Ａｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅ Ｉｎ ＡＤＣＣ Ｔｈｒｏｕｇｈ Ｈｉｇｈｅｒ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｆｏｒ ＦＣ Ｇａｍｍａ ＲＩＩＩ，”Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７４（４）：２８８−２９４を参照されたい）。炭水化物含有量を変化させる方法は当業者に公知であり、例えば、Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）“Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ ＶＨ Ｒｅｓｉｄｕｅ Ｏｆ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｐｈａ（１−−−−６） Ｄｅｘｔｒａｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ Ｉｔｓ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｆｏｒ Ａｎｔｉｇｅｎ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８（３）：１０９９−１１０９；Ｔａｏ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）“Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｏｆ Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｍｏｕｓｅ−Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ．Ｒｏｌｅ Ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｉｎ Ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎｄ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｂｙ Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｒｅｇｉｏｎ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３（８）：２５９５−２６０１；Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ，Ｅ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）“Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ Ｏｆ Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ Ｏｎ Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＣＤ３ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ，”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６０（８）：８４７−５３；Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００３）“Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ Ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈ Ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：４１４−２１；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）“Ｌａｃｋ Ｏｆ Ｆｕｃｏｓｅ Ｏｎ Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｆｃｇａｍｍａ ＲＩＩＩ Ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：２６７３３−２６７４０）を参照されたい。

【0236】

開示される抗体は、組換え手段によって改変して、所望の機能の媒介における抗体の有効性を増大させることができる。よって、抗体は、組換え手段を使用する置換によって改変することができる。典型的には、この置換は保存的置換となる。例えば、抗体の定常領域中の少なくとも１つのアミノ酸を異なる残基で置き換えることができる。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第ＷＯ９９５８５７２号；及びＡｎｇａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−０８（１９９３）を参照されたい。アミノ酸における改変には、アミノ酸の欠失、付加、置換が含まれる。ある場合には、かかる変更は、望ましくない活性、例えば補体依存性細胞傷害を減少させるために行われる。多くの場合、抗体は、検出可能なシグナルをもたらす物質を、共有結合的に、または非共有結合的に接合することによって標識化される。広範な標識及びコンジュゲーション技法が公知であり、科学文献と特許文献の両方に広く報告されている。これらの抗体は、シグレック−１５ポリペプチド、またはそれらのフラグメント、もしくは融合物についてスクリーニングすることができる。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）を参照されたい。

【0237】

幾つかの実施形態では、抗体誘導体は、親抗体と同様のまたは同一の機能を保有することとなる。別の実施形態では、抗体誘導体は、親抗体と比べて変化した活性を呈することとなる。例えば、誘導体抗体（またはそのフラグメント）は、親抗体より堅固にそのエピトープに結合することができるか、またはタンパク質分解に対して高い耐性を有することができる。誘導体化抗体における置換、付加、または欠失は、抗体のＦｃ領域中であってもよく、それによって１つまたは複数のＦｃγＲへの抗体の結合親和性を改変するように機能することができる。１つまたは複数のＦｃγＲへの結合を改変することによって抗体を改変するための方法は、当技術分野で公知であり、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０４／０２９２０７号、第ＷＯ０４／０２９０９２号、第ＷＯ０４／０２８５６４号、第ＷＯ９９／５８５７２号、第ＷＯ９９／５１６４２号、第ＷＯ９８／２３２８９号、第ＷＯ８９／０７１４２号、第ＷＯ８８／０７０８９号、ならびに米国特許第５，８４３，５９７号及び第５，６４２，８２１号を参照されたい。

【0238】

幾つかの実施形態では、抗体は、そのＦｃ領域が欠失されている（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）２など）か、あるいは分子が低下したＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合活性を呈するか、もしくはＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合活性を呈さないように、または強化された抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性もしくは補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を呈するように改変されている。幾つかの実施形態では、抗体は、活性化ＦｃγＲ、例えばＦｃγＲＩＩＩＡに対する変化した親和性を有する。かかる改変は、変化したＦｃ媒介性エフェクター機能も有し得る。Ｆｃ媒介性エフェクター機能に影響を及ぼす改変は、当技術分野で周知である（米国特許第６，１９４，５５１号、及び第ＷＯ００／４２０７２号を参照されたい）。特定の一実施形態では、Ｆｃ領域の改変は、抗体媒介性エフェクター機能の変化、他のＦｃ受容体（例えば、Ｆｃ活性化受容体）への結合の変化、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性の変化、Ｃ１ｑ結合活性の変化、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）、食作用活性の変化、またはそれらの組み合わせを抗体にもたらす。

【0239】

誘導体化抗体は、ヒトなどの哺乳動物において親抗体の半減期（例えば、血清中半減期）を変化させるために使用することができる。例えば、かかる変化によって、半減期を１５日超、２０日超、２５日超、３０日超、３５日超、４０日超、４５日超、２か月超、３か月超、４か月超、または５か月超にすることができる。ヒトなどの哺乳動物においてヒト化抗体またはそのフラグメントの半減期が増大すると、哺乳動物における前記抗体または抗体フラグメントの血清中力価が高くなり、よって、投与しようとする上記抗体または抗体フラグメントの投与の回数及び／または上記抗体または抗体フラグメントの濃度が減少する。インビボ半減期が増大した抗体またはそのフラグメントは、当業者に公知の技法によって作製することができる。例えば、インビボ半減期が増大した抗体またはそのフラグメントは、ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との間の相互作用に関与することが確認されているアミノ酸残基を改変する（例えば、置換、欠失、または付加する）ことによって作製することができる。ヒト化抗体は、生物学的半減期を増大させるように操作することができる（例えば米国特許第６，２７７，３７５号を参照されたい）。例えば、ヒト化抗体は、インビボまたは血清中半減期を増大させるように、Ｆｃ−ヒンジドメインで操作することができる。

【0240】

インビボ半減期が増大した抗体またはそのフラグメントは、上記抗体または抗体フラグメントに高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリマー分子を結合させることによって作製することができる。ＰＥＧは、多官能リンカーを用いてまたは用いずに、上記抗体または抗体フラグメントのＮもしくはＣ末端へのＰＥＧの部位特異的コンジュゲーションを介して、またはリジン残基上に存在するイプシロン−アミノ基を介して、上記抗体または抗体フラグメントに結合することができる。生物活性の喪失が最低限となる直鎖または分枝ポリマー誘導体化が使用されると見込まれる。コンジュゲーションの度合いは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び質量分析により詳細にモニタリングして、ＰＥＧ分子の抗体への適正なコンジュゲーションが確実に行われるようにする。未反応のＰＥＧは、例えば、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーによって、抗体−ＰＥＧコンジュゲートから分離することができる。

【0241】

免疫原性応答を実質的に伴わずに哺乳動物の循環系に注射することができる組成物を得るために、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．によって記載される方法及びカップリング剤によって抗体を改変することもできる（米国特許第４，１７９，３３７号を参照されたい）。

【0242】

ヒト化抗体のフレームワーク残基は、改変することができる。フレームワーク領域中の残基は、抗原結合を変化させるように、例えば向上させるように、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換することができる。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法によって特定され、例えば、ＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリングを行って抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定することによって、及び配列比較を行って特定の位置の特殊なフレームワーク残基を特定することによって特定されることができる。（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７を参照されたい）。開示されるシグレック−１５結合分子は、異種分子（すなわち無関係の分子）と組換えにより融合するか、または化学的にコンジュゲートすること（共有結合的及び非共有結合的コンジュゲーションの両方を含む）ができる。この融合は、必ずしも直接的である必要はなく、リンカー配列を介して行ってもよい。

【0243】

幾つかの実施形態では、かかる異種分子は、少なくとも１０個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも６０個、少なくとも７０個、少なくとも８０個、少なくとも９０個、または少なくとも１００個のアミノ酸を有するポリペプチドである。あるいは、かかる異種分子は、酵素、ホルモン、細胞表面受容体、薬物成分、例えば：マクロファージ特異的ターゲティング試薬（例えば、細胞内カルボキシエステラーゼ、ｈＣＥ１（Ｎｅｅｄｈａｍ，Ｌ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）“Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｏ Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ Ａｎｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｅｓｔｅｒａｓｅ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｔｉｆ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．ＤＯＩ：１０．１１２４／ｊｐｅｔ．１１１．１８３６４０）、キチン及びキトサン（Ｍｕｚｚａｒｅｌｌｉ，Ｒ．Ａ．（２０１０）“Ｃｈｉｔｉｎｓ Ａｎｄ Ｃｈｉｔｏｓａｎｓ Ａｓ Ｉｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔｓ Ａｎｄ Ｎｏｎ−Ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒｓ，”Ｍａｒ Ｄｒｕｇｓ ８（２）：２９２−３１２）、ガラクトシル化低密度リポタンパク質（Ｗｕ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（００９）“Ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｅｄ ＬＤＬ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ Ｔｏ Ｄｅｌｉｖｅｒ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｔｏ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ Ａｎｄ Ｅｎｈａｎｃｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｐｈａｒｍ．６（５）：１５０６−１５１７）、Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（ｆＭＬＦ）、マクロファージ特異的化学誘引物質（Ｗａｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ Ｓｉｚｅ Ａｎｄ Ｃｏｐｙ Ｎｕｍｂｅｒ Ｆｏｒ ＰＥＧ−Ｆｍｌｆ（Ｎ−Ｆｏｒｍｙｌ−Ｍｅｔｈｉｏｎｙｌ−Ｌｅｕｃｙｌ−Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ Ｕｐｔａｋｅ Ｂｙ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１９（１）：２８−３８）、マレイル化もしくはマンノシル化タンパク質、例えば、マレイル化アルブミン（Ａｎａｔｅｌｌｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２００６）“Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ Ｂｙ Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，”Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．３（６）：６５４−６６４；Ｂａｎｓａｌ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）“ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ Ｉ−Ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｍａｌｅｙｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｔｏ Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２（８）：４４３０−４４３７）；Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００３）“Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｔｏ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，”Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８４：１８３−２０９も参照されたい）、毒素（例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素（すなわちＰＥ−４０）、ジフテリア毒素、リシン、ゲロニン、またはアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質）、タンパク質（例えば、腫瘍壊死因子、インターフェロン（例えば、α−インターフェロン、β−インターフェロン）、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、またはアポトーシス性作用物質（例えば、腫瘍壊死因子−α、腫瘍壊死因子−β））、生物学的応答調節物質（例えば、リンホカイン（例えば、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）など）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、もしくはマクロファージコロニー刺激因子（「Ｍ−ＣＳＦ」）、または増殖因子（例えば、成長ホルモン（「ＧＨ」）））、細胞毒（例えば、細胞増殖阻害剤もしくは細胞破壊薬、例えば、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、ならびにそれらの類似体または同族体）、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシル ダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ クロラムブシル、メルファラン、ＢｉＣＮＵ（登録商標）（カルムスチン；ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）、及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、または有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）であり得る。

【0244】

別の実施形態では、Ｓｅｇａｌの米国特許第４，６７６，９８０号においてに記載されるように、分子を第２の抗体とコンジュゲートして抗体のヘテロコンジュゲートを形成する。かかるヘテロコンジュゲート抗体は、追加的に、ハプテン（例えば、フルオレセインなど）、または細胞マーカー（例えば、４−１−ＢＢ、Ｂ７−Ｈ１、ＰＤ−１、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＴＬＡ４、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ−３、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＴＬＲ２、ＬＩＧＨＴなど）、またはサイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＴＧＦ−ベータ、ＩＦＮｇ、Ｆｌｔ３、ＢＬｙ）、またはケモカイン（例えば、ＣＣＬ２１）などに結合することができる。

【0245】

融合タンパク質のＦｃ部分は、例えば、エフェクター機能、半減期の制御、組織への到達性を向上させ、安定性などの生物物理学的特性を増強し、生産効率を向上させる（及びコストを下げる）ために、アイソタイプもしくはサブクラスが異なっていてもよく、キメラもしくはハイブリッドであってもよく、及び／または改変されていてもよい。開示される融合タンパク質の構築に有用な多くの改変及びそれらを作製するための方法は、当技術分野では公知であり、例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｐｏｒｃｉｎｅ ＶＣＡＭ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＩｇＧ２／Ｇ４ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｂｌｏｃｋ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｔｏ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ，”Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（６）：４４１−４５２、Ｓｗａｎｎ，Ｐ．Ｇ．（２００８）“Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４９３−４９９（２００８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．（２００８）“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ａｎｄ Ｄｅｓｉｇｎ Ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４６０−４７０を参照されたい。幾つかの実施形態では、Ｆｃ領域は、天然のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ領域である。幾つかの実施形態では、Ｆｃ領域はハイブリッドであり、例えば、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４のＦｃ定常領域からなるキメラである。Ｆｃ領域に対する改変として、Ｆｃガンマ受容体及び補体に結合しないように改変されたＩｇＧ４、１つまたは複数のＦｃガンマ受容体への結合を向上させるように改変されたＩｇＧ１、エフェクター機能を最低限に抑えるように改変されたＩｇＧ１（アミノ酸変化）、グリカンが変化した／無いＩｇＧ１（典型的には発現宿主の変更による）、ならびにＦｃＲｎへのｐＨ依存結合が変化したＩｇＧ１が挙げられるが、これらに限定されない。Ｆｃ領域は、ヒンジ領域全体、またはヒンジ領域全体より小さい領域を含むことができる。非ホジキンリンパ腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症に対してリツキシマブ（ＣＤ２０に対するキメラマウス／ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体）で治療した患者における治療転帰は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに対する固有の親和性が異なるＦｃγ受容体の対立遺伝子変異体の個体発現に相関した。特に、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）の高親和性対立遺伝子を有する患者は、より高い奏効率を示し、非ホジキンリンパ腫の場合、無増悪生存期間が向上した。したがって、開示される抗体及びフラグメントのＦｃドメインは、低親和性抑制性Ｆｃ受容体ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合を低減させ、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）への結合を野生型レベルに保持するかまたは強化する１つまたは複数のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含有することができる。

【0246】

別の実施形態は、ＦｃγＲへの結合が低減したことによって半減期が増大した、ＩｇＧ２−４ハイブリッド及びＩｇＧ４突然変異体を含む。代表的なＩｇＧ２−４ハイブリッド及びＩｇＧ４突然変異体は、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）“Ａ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ａｂｏｌｉｓｈｅｓ Ｔｈｅ Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ （Ｉｇｇ４）Ａｎｔｉｂｏｄｙ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５−１０８；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｐｏｒｃｉｎｅ ＶＣＡＭ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＩｇＧ２／Ｇ４ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｂｌｏｃｋ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｔｏ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ，”Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（６）：４４１−４５２；及び米国特許第６，９８２，３２３号に記載されている。幾つかの実施形態では、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２ドメインが改変され、例えば、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）は、セリン２４１がプロリンで置き換えられたＩｇＧ１及びＩｇＧ２変異体について記載している。

【0247】

幾つかの実施形態では、かかる分子のＦｃドメインは、ＣＤ１６Ａへの結合を強化するアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含有する。ＣＤ１６Ａへの結合を増大させ、ＣＤ３２Ｂへの結合を低減させる、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインにおける多数の置換が当技術分野で公知であり、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２００７）“Ｆｃ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｔｈｅｉｒ Ａｂｉｌｉｔｙ Ｔｏ Ｋｉｌｌ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｔｕｍｏｒ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｖｉａ Ｌｏｗ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｆｃｇａｍｍａ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７（１８）：８８８２−８８９０に記載されている。ＣＤ３２Ｂへの結合が低減し、及び／またはＣＤ１６Ａへの結合が増大した、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインの代表的な変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、またはＰ２９６Ｌ置換を含有する。これらのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン中に任意の組み合わせで存在し得る。一態様では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、及びＹ３００Ｌ置換を含有する。別の態様では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ２９６Ｌ置換を含有する。別の態様では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｎ２９７Ｑ置換を含有する。何故なら、この変異はＦｃＲ結合を消失させるからである。

【0248】

抗体に治療部分をコンジュゲートするための技法は周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．２４３−５６，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８７，ｐｐ．６２３−５３，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ‘８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．４７５−５０６）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．３０３−１６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．（１９８２）“Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照されたい。

【0249】

開示される分子はいずれも、精製を容易にするために、ペプチドなどのマーカー配列に融合させることができる。幾つかの実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、赤血球凝集素「ＨＡ」タグ（インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに相当する）（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）“Ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎ Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ Ｉｎ Ａ Ｐｒｏｔｅｉｎ，”Ｃｅｌｌ，３７：７６７−７７８）及び「フラグ」タグ（Ｋｎａｐｐｉｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）“Ａｎ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｔａｇ Ｂａｓｅｄ Ｏｎ Ｔｈｅ ＦＬＡＧ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，”Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７（４）：７５４−７６１）である。

【0250】

開示されるシグレック−１５結合分子は、診断用もしくは治療用物質、または血清中半減期を増大させることが所望される別の分子とコンジュゲートすることができる。該抗体を診断に使用して（インビボ、インサイツ、またはインビトロで）、例えば、臨床試験手順の一部として疾患、障害、または感染症の発生または進行をモニタリングして、例えば、所与の治療レジメンの有効性を判断するか、または特定の療法に応答する可能性が高い患者を選択することができる（高レベルのシグレック−１５を発現するものなど）。

【0251】

抗体またはその抗原結合フラグメントなどの分子を検出可能な物質にカップリングすることによって、検出を容易にすることができる。検出可能な物質の例として、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射性材料、陽電子放出金属、及び非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。検出可能な物質は、当技術分野で公知の技法を使用して、直接的にまたは中間体（例えば、当技術分野で公知のリンカーなど）を介して間接的に、抗体に連結またはコンジュゲートすることができる。例えば、診断薬として使用するために抗体とコンジュゲートすることができる金属イオンについては、米国特許第４，７４１，９００号を参照されたい。かかる診断及び検出は、抗体を検出可能な物質にカップリングすることによって遂行することができ、そうした物質として、様々な酵素、酵素として、これらに限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；補欠分子族複合体、例えば、これらに限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチン；蛍光材料、例えば、これらに限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリン；発光材料、例えば、これらに限定されないが、ルミノール；生物発光材料、例えば、これらに限定されないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリン；放射性材料、例えば、これらに限定されないが、ビスマス（^２１３Ｂｉ）、炭素（^１４Ｃ）、クロム（^５１Ｃｒ）、コバルト（^５７Ｃｏ）、フッ素（^１８Ｆ）、ガドリニウム（^１５３Ｇｄ、^１５９Ｇｄ）、ガリウム（^６８Ｇａ、^６７Ｇａ）、ゲルマニウム（^６８Ｇｅ）、ホルミウム（^１６６Ｈｏ）、インジウム（^１１５Ｉｎ、^１１３Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１１１Ｉｎ）、ヨウ素（^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ）、ランタン（^１４０Ｌａ）、ルテチウム（^１７７Ｌｕ）、マンガン（^５４Ｍｎ）、モリブデン（^９９Ｍｏ）、パラジウム（^１０３Ｐｄ）、リン（^３２Ｐ）、プラセオジム（^１４２Ｐｒ）、プロメチウム（^１４９Ｐｍ）、レニウム（^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ）、ロジウム（^１０５Ｒｈ）、ルテニウム（^９７Ｒｕ）、サマリウム（^１５３Ｓｍ）、スカンジウム（^４７Ｓｃ）、セレン（^７５Ｓｅ）、ストロンチウム（^８５Ｓｒ）、イオウ（^３５Ｓ）、テクネチウム（^９９Ｔｃ）、タリウム（^２０１Ｔｉ）、スズ（^１１３Ｓｎ、^１１７Ｓｎ）、三重水素（^３Ｈ）、キセノン（^１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（^１６９Ｙｂ、^１７５Ｙｂ）、イットリウム（^９０Ｙ）、亜鉛（^６５Ｚｎ）；様々な陽子射出断層撮影法を使用する陽電子放出金属、ならびに非放射性常磁性金属イオンが挙げられるが、これらに限定されない。開示される分子は、固体支持体に結合することができ、これは、標的抗原、または抗体もしくは抗原結合フラグメントへの結合を介して支持体に固定化された標的抗原に結合する能力のある他の分子のイムノアッセイまたは精製に特に有用である。かかる固体支持体として、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンが挙げられるが、これらに限定されない。任意のかかる抗体、融合タンパク質、またはフラグメントをコードする核酸分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）、ならびにかかる核酸分子を伝達または複製する能力のあるベクター分子（プラスミドなど）も開示される。該核酸は、一本鎖、二本鎖であることができ、一本鎖部分と二本鎖部分の両方を含有することができる。

【0252】

３．作製方法
シグレック−１５結合分子は、ポリペプチドの生成に有用な当技術分野で公知の任意の方法、例えば、インビトロ合成、組換えＤＮＡ生成などによって生成することができる。ヒト化抗体は、典型的には組換えＤＮＡ技術によって生成される。抗体は、組換え免疫グロブリン発現技術を使用して生成することができる。ヒト化抗体を含めた免疫グロブリン分子の組換え体の生成については、米国特許第４，８１６，３９７号（Ｂｏｓｓ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，３３１，４１５号及び第４，８１６，５６７号（両方ともＣａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．）、英国特許第ＧＢ２，１８８，６３８号（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔａｌ．）、ならびに英国特許第ＧＢ２，２０９，７５７号に記載されている。ヒト化免疫グロブリンを含めた免疫グロブリンの組換え発現のための技法は、Ｇｏｅｄｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１８５ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、及びＢｏｒｒｅｂａｃｋ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ（１９９２）にも見出すことができる。組換え抗体の作製、設計、及び発現に関する追加情報は、Ｍａｙｆｏｒｔｈ，Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（１９９３）に見出すことができる。

【0253】

組換えキメラ抗体を生成するための代表的な方法は、ａ）従来の分子生物学の方法によって、抗シグレック−１５抗体のＣＤＲ及び可変領域がヒト免疫グロブリン由来のＦｃ領域に融合された抗体重鎖をコード及び発現する発現ベクターを構築し、それによってキメラ抗体重鎖を発現するためのベクターを生成すること；ｂ）従来の分子生物学の方法によって、マウス抗ヒトシグレック−１５モノクローナル抗体の抗体軽鎖をコードし及び発現する発現ベクターを構築し、それによってキメラ抗体軽鎖を発現するためのベクターを生成すること；ｃ）従来の分子生物学の方法によって、発現ベクターを宿主細胞に移送して、キメラ抗体を発現するためのトランスフェクトされた宿主細胞を生成すること；ならびにｄ）従来の細胞培養技法によって、キメラ抗体を産生するように、トランスフェクトされた細胞を培養すること、を含むことができる。

【0254】

組換えヒト化抗体を生成するための代表的なプロセスは、ａ）従来の分子生物学の方法によって、ＣＤＲと、ドナー抗体の結合特異性を保持するのに必要とされる可変領域フレームワークの最低限の部分とが抗ヒトシグレック−１５抗体（複数可）のヒト化変異体に由来し、抗体の残部がヒト免疫グロブリンに由来する抗ヒトシグレック−１５重鎖をコード及び発現する発現ベクターを構築し、それによってヒト化抗体重鎖を発現するためのベクターを生成すること；ｂ）従来の分子生物学の方法によって、ＣＤＲと、ドナー抗体の結合特異性を保持するのに必要とされる可変領域フレームワークの最低限の部分とが、開示されるマウス抗ヒトシグレック−１５抗体などの非ヒト免疫グロブリンに由来し、抗体の残部がヒト免疫グロブリンに由来する抗体軽鎖をコード及び発現する発現ベクターを構築し、それによってヒト化抗体軽鎖を発現するためのベクターを生成すること；ｃ）従来の分子生物学の方法によって、発現ベクターを宿主細胞に移送して、ヒト化抗体を発現するためのトランスフェクトされた宿主細胞を生成すること；ならびにｄ）従来の細胞培養技法によって、ヒト化抗体を産生するように、トランスフェクトされた細胞を培養すること、を含むことができる。

【0255】

いずれの代表的方法に関しても、異なる選択マーカーを含有することができるが、重鎖及び軽鎖コード配列以外は同一であり得るような発現ベクターを用いて、宿主細胞に同時にトランスフェクトすることができる。この手順により、重鎖及び軽鎖ポリペプチドが同等に発現される。あるいは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードする単一のベクターを使用することができる。重鎖及び軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡ、または両方を含むことができる。組換え抗体を発現するために使用される宿主細胞は、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）などの細菌細胞、または真核細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはＨＥＫ−２９３細胞）のいずれかであり得る。発現ベクターの選択は、宿主細胞の選択に依存し、選択された宿主細胞において所望の発現及び調節的特性を有するように選択することができる。使用することができる他の細胞株として、ＣＨＯ−Ｋ１、ＮＳＯ、及びＰＥＲ．Ｃ６（Ｃｒｕｃｅｌｌ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0256】

開示される抗体のいずれも、当業者に周知の技法を使用して抗イディオタイプ抗体を作製するために使用することができる（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ，Ｎ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）“Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ，”ＦＡＳＥＢ Ｊ．７：４３７−４４４；及びＮｉｓｉｎｏｆｆ，Ａ．（１９９１）“Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。

【0257】

Ｃ．シグレック−１５リガンド結合分子
シグレック−１５のリガンドに結合する分子、例えば、シグレック−１５タンパク質、シグレック−１５融合タンパク質、及びそれらのフラグメント及び変異体も提供される。シグレック−１５リガンド結合分子は、シグレック−１５のリガンド、例えば、シアル酸付加された糖タンパク質、ＬＲＲＣ４Ｃ、シグレック−１５対抗受容体などに結合することができる。幾つかの実施形態では、シグレック−１５リガンド結合分子は、シグレック−１５のリガンドを介してシグナル伝達を誘導することができる。幾つかの実施形態では、シグレック−１５リガンド結合分子は、シグレック−１５またはそのリガンドを介するシグナル伝達を誘導することなく、シグレック−１５とそのリガンドとの間の相互作用をブロックするか、さもなければ低減させる。以降でより詳細に考察し、実施例で例示する通りに、シグレック−１５リガンド結合分子を使用して、シグレック−１５の活性を調節することができ、また治療的に使用して、治療を必要とする対象を治療することができる。

【0258】

１．シグレック−１５ポリペプチド
幾つかの実施形態では、シグレック−１５リガンド結合分子は、シグレック−１５、またはそのフラグメントもしくは変異体である。例えば、幾つかの実施形態では、シグレック−１５リガンド結合分子には、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１もしくは２またはそのフラグメントと少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一なポリペプチド、例えば、細胞外ドメインまたはそのサブドメイン、例えば、ＩｇＶドメイン、ＩｇＣドメイン、またはそれらの組み合わせが含まれる。幾つかの実施形態では、シグレック−１５ポリペプチドは、可溶性であるか、さもなければ無細胞である。例えば，幾つかの実施形態では、シグレック−１５は、膜貫通ドメイン、細胞質ドメイン、またはリーダー配列の１つまたは複数を欠いている。

【0259】

２．シグレック−１５融合タンパク質
幾つかの実施形態では、シグレック−１５リガンド結合分子は、シグレック−１５融合タンパク質である。他のポリペプチドとカップリングして融合タンパク質を形成したシグレック−１５ポリペプチドを含有する融合タンパク質が提供される。シグレック−１５融合ポリペプチドは、（ｉ）第２のポリペプチドと直接融合したか、または（ｉｉ）任意で第２のポリペプチドに融合したリンカーペプチド配列に融合した、シグレック−１５タンパク質の全部または一部を含む、第１の融合パートナーを含むことができる。融合タンパク質は、任意で、２つ以上の融合タンパク質を二量体化または多量体化するように機能するドメインを含有する。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、二量体化も多量体化もされておらず、それらでもない。ペプチド／ポリペプチドリンカードメインは、別々のドメインであってもよく、あるいは、融合タンパク質の他のドメイン（シグレック−１５ポリペプチドまたは第２のポリペプチド）のうちの１つのドメインの中に含有されていてもよい。同様に、融合タンパク質を二量体化または多量体化するように機能するドメインは、別々のドメインであってもよく、あるいは、融合タンパク質の他のドメイン（シグレック−１５ポリペプチド、第２のポリペプチド、またはペプチド／ポリペプチドリンカードメイン）のうちの１つのドメインの中に含有されていてもよい。幾つかの実施形態では、二量体化／多量体化ドメインとペプチド／ポリペプチドリンカードメインとは同じである。

【0260】

本明細書に開示される融合タンパク質は、式Ｉ：
Ｎ−Ｒ_１−Ｒ_２−Ｒ_３−Ｃ
のタンパク質であり、式中、「Ｎ」は融合タンパク質のＮ末端を表し、「Ｃ」は融合タンパク質のＣ末端を表し、「Ｒ_１」はシグレック−１５ポリペプチド、「Ｒ_２」は任意でのペプチド／ポリペプチドリンカードメイン、「Ｒ_３」は第２のポリペプチドである。あるいは、Ｒ_３がシグレック−１５ポリペプチドであってもよく、Ｒ_１が第２のポリペプチドであってもよい。

【0261】

融合タンパク質は、二量体化または多量体化することができる。二量体化または多量体化は、２つ以上の融合タンパク質の間でドメインの二量体化または多量体化を介して起こり得る。あるいは、融合タンパク質の二量体化または多量体化は、化学的架橋によって起こり得る。形成される二量体または多量体は、ホモ二量体／ホモ多量体またはヘテロ二量体／ヘテロ多量体であり得る。上で考察したように、幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、二量体化も多量体化もされておらず、それらでもない。

【0262】

幾つかの実施形態では、第２のポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖定常領域の１つまたは複数のドメイン、例えば、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ、Ｃ_Ｈ２及び／またはＣ_Ｈ３領域、マウス免疫グロブリンＣγ２ａ鎖のヒンジ、Ｃ_Ｈ２及び／またはＣ_Ｈ３領域、ヒト免疫グロブリンＣγ１のＣ_Ｈ２及び／またはＣ_Ｈ３領域などに相当するアミノ酸配列を含有する。

【0263】

融合タンパク質のＦｃ部分は、例えば、エフェクター機能、半減期の制御、組織への到達性を向上させ、安定性などの生物物理学的特性を増強し、生産効率を向上させる（及びコストを下げる）ために、アイソタイプもしくはサブクラスが異なっていてもよく、キメラもしくはハイブリッドであってもよく、及び／または改変されていてもよい。開示される融合タンパク質の構築に有用な多くの改変及びそれらを作製するための方法は、当技術分野では公知であり、例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．，３４（６）：４４１−４５２（１９９７）、Ｓｗａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．，２０：４９３−４９９（２００８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４６０−４７０（２００８）を参照されたい。幾つかの実施形態では、Ｆｃ領域は、天然のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ領域である。幾つかの実施形態では、Ｆｃ領域はハイブリッドであり、例えば、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４のＦｃ定常領域からなるキメラである。Ｆｃ領域に対する改変として、Ｆｃガンマ受容体及び補体に結合しないように改変されたＩｇＧ４、１つまたは複数のＦｃガンマ受容体への結合を向上させるように改変されたＩｇＧ１、エフェクター機能を最低限に抑えるように改変されたＩｇＧ１（アミノ酸変化）、グリカンが変化した／無いＩｇＧ１（典型的には発現宿主の変更による）、ならびにＦｃＲｎへのｐＨ依存結合が変化したＩｇＧ１が挙げられるが、これらに限定されない。Ｆｃ領域は、ヒンジ領域全体を含んでも、またはヒンジ領域全体より小さい領域を含んでもよい。

【0264】

非ホジキンリンパ腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症に対してリツキシマブ（ＣＤ２０に対するキメラマウス／ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体）で治療した患者における治療転帰は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに対する固有の親和性が異なるＦｃγ受容体の対立遺伝子変異体の個体発現に相関した。特に、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）の高親和性対立遺伝子を有する患者は、より高い奏効率を示し、非ホジキンリンパ腫の場合、無増悪生存期間が向上した。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、低親和性抑制性Ｆｃ受容体ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合を低減させ、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）への野生型レベルの結合を保持するまたはそれへの結合を強化する、１つまたは複数のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含有してもよい。

【0265】

別の実施形態は、ＦｃＲへの結合が低減したことによって半減期が増大した、ＩｇＧ２−４ハイブリッド及びＩｇＧ４突然変異体を含む。代表的なＩｇＧ２−４ハイブリッド及びＩｇＧ４突然変異体は、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３０（１）：１０５−１０８（１９９３）；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｏｎｏｌｏｇｙ，３４（６）：４４１−４５２（１９９７）；及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌによる米国特許第６，９８２，３２３号に記載されている。幾つかの実施形態では、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２ドメインは欠失しており、例えば、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．は、セリン２４１がプロリンで置き換えられたＩｇＧ１及びＩｇＧ２ドメインについて記載している。

【0266】

幾つかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＤ１６Ａへの結合を強化するアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含有する。ＣＤ１６Ａへの結合を増大させ、ＣＤ３２Ｂへの結合を低減させる、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン中の多数の置換が当技術分野で公知であり、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５７（１８）：８８８２−９０（２００７）に記載されている。ＣＤ３２Ｂへの結合が低減し、及び／またはＣＤ１６Ａへの結合が増大した、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインの代表的な変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、またはＰ２９６Ｌ置換を含有する。これらのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン中に任意の組み合わせで存在してもよい。一態様では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、及びＹ３００Ｌ置換を含有する。別の態様では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ２９６Ｌ置換を含有する。別の態様では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｎ２９７Ｑ置換を含有する。何故なら、この変異はＦｃＲ結合を消失させるからである。

【0267】

開示される融合タンパク質は、任意で、シグレック−１５ポリペプチドを第２のポリペプチドから分離するペプチドまたはポリペプチドリンカードメインを含有する。幾つかの実施形態では、リンカードメインは、免疫グロブリンのヒンジ領域を含有する。好ましい実施形態では、ヒンジ領域は、ヒト免疫グロブリンに由来する。ヒンジが由来し得る適切なヒト免疫グロブリンとして、ＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＡが挙げられる。好ましい実施形態では、ヒンジ領域はヒトＩｇＧに由来する。免疫グロブリンのヒンジ領域及び他のドメインのアミノ酸配列は、当技術分野で周知である。

【0268】

代表的な融合タンパク質は、シグレックｌ５ ＥＣＤ−ＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質である（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）。

[この文献は図面を表示できません]

【0269】

マウスのリーダー配列を下線で示す。シグレック−１５細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は斜字体である。ヒンジ領域には二重下線を付す。残りの配列は、ＩｇＧ１のＦｃに由来する。ＩｇＧ１のＦｃドメイン中のＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ変異は、点線の下線を付した太字である。

【0270】

幾つかの実施形態では、リーダー配列は切断されるか、さもなければ融合タンパク質から欠落している。例えば、融合タンパク質は、以下の配列：

[この文献は図面を表示できません]

を有することができる。

【0271】

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９３または１９４と少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一である。

【0272】

幾つかの実施形態では、リーダー配列、リンカー（例えば、ヒンジ領域）、第２の融合パートナー（例えば、ＩｇＧ１のＦｃドメイン）、またはそれらの組み合わせは、別の配列（複数可）（例えば、代替のリーダー配列、ヒンジ、Ｆｃドメインなど）で置換されている。適切な置換は、当技術分野で周知である。例えば、米国特許第９，００５，６１６号（これは、その全体が参照により明確に組み込まれている）を参照されたい。

【0273】

３．シグレック−１５の核酸及び細胞
シグレック−１５ポリペプチド、そのフラグメント及び融合物をコードするベクターも提供される。上記のもののような核酸をベクターに挿入して、細胞内で発現させることができる。よって、シグレック−１５ポリペプチド、そのフラグメント及び融合物を含有し、発現する細胞も提供される。本明細書で使用される場合、「ベクター」とは、プラスミド、ファージ、ウイルス、またはコスミドなどのレプリコンであって、それに別のＤＮＡセグメントを挿入すると、挿入されたセグメントを複製することができるようなレプリコンである。ベクターは、発現ベクターであり得る。「発現ベクター」とは、１つまたは複数の発現制御配列を含むベクターであり、「発現制御配列」とは、別のＤＮＡ配列の転写及び／または翻訳を制御及び調節するＤＮＡ配列である。

【0274】

ベクター中の核酸は、１つまたは複数の発現制御配列に機能的に連結させることができる。本明細書で使用される場合、「機能的に連結された」とは、発現制御配列が関心対象のコード配列の発現を有効に制御するように遺伝子構築物に組み込まれていることを意味する。発現制御配列の例として、プロモーター、エンハンサー、及び転写終結領域が挙げられる。プロモーターは、転写が開始する点（一般に、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位付近）の上流１００ヌクレオチド内のＤＮＡ分子の領域から構成される発現制御配列である。コード配列をプロモーターの制御下に置くために、ポリペプチドの翻訳読み枠の翻訳開始部位をプロモーターの１〜約５０ヌクレオチド下流に位置付けることが必要である。エンハンサーは、時間、位置、及びレベルに関して発現特異性をもたらす。エンハンサーは、プロモーターとは異なり、転写部位から様々な距離に位置するときに機能し得る。エンハンサーは、転写開始部位から下流に位置することもできる。コード配列は、ＲＮＡポリメラーゼがコード配列をｍＲＮＡに転写することが可能であるとき、細胞内で「機能的に連結され」、発現制御配列の「制御下にあり」、次にこのｍＲＮＡを、コード配列によってコードされるタンパク質に翻訳することが可能である。

【0275】

適切な発現ベクターとして、限定されるものではないが、例えば、バクテリオファージ、バキュロウイルス、タバコモザイクウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルスに由来するプラスミド及びウイルスベクターが挙げられる。多数のベクター及び発現系が、Ｎｏｖａｇｅｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のような会社から市販されている。

【0276】

発現ベクターは、タグ配列を含み得る。タグ配列は、典型的には、コードされているポリペプチドとの融合物として発現される。かかるタグは、カルボキシル末端またはアミノ末端を含めて、ポリペプチド中のいずれの位置にでも挿入することができる。有用なタグの例として、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ポリヒスチジン、ｃ−ｍｙｃ、赤血球凝集素、Ｆｌａｇ（商標）タグ（Ｋｏｄａｋ，Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、及びタンパク質Ａが挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、シグレック−１５融合ポリペプチドをコードする核酸分子は、Ｉｇ重鎖定常領域の１つまたは複数のドメイン、例えば、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３領域に相当するアミノ酸配列、をコードする核酸を含有するベクター中に存在する。

【0277】

発現させようとする核酸を含有するベクターは、宿主細胞に移入することができる。「宿主細胞」という用語は、組換え発現ベクターを導入することができる原核及び真核細胞を含むことが意図される。本明細書で使用される場合、「形質転換される」及び「トランスフェクトされる」は、幾つもの技法の一つによって核酸分子（例えば、ベクター）が細胞に導入されることを包含する。特定の技法に限定するものではないが、これらの幾つもの技法が、当技術分野で十分に確立されている。原核細胞は、例えば、電気穿孔または塩化カルシウムに媒介される形質転換によって、核酸で形質転換することができる。核酸は、例えば、リン酸カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストランに媒介されるトランスフェクション、リポフェクション、電気穿孔、またはマイクロインジェクションを含めた技法によって、哺乳類細胞内にトランスフェクトすることができる。宿主細胞（例えば、原核細胞、またはＣＨＯ細胞などの真核細胞）を使用して、本明細書に記載のシグレック−１５融合ポリペプチドを産生することができる。

【0278】

記載のベクターを使用して、細胞内でシグレック−１５を発現させることができる。代表的なベクターとしてアデノウイルスベクターが挙げられるが、これに限定されない。一手法は、初代培養細胞に核酸を移入し、続いてエキソビボで形質転換された細胞を、宿主中に、全身的にまたは特定の器官もしくは組織中に自家移植することを含む。エキソビボでの方法は、例えば、対象から細胞を採取するステップ、細胞を培養するステップ、それらに発現ベクターで形質導入するステップ、及びコードされたポリペプチドの発現に適した条件下で細胞を維持するステップを含むことができる。これらの方法は、分子生物学の技術分野で公知である。形質導入ステップは、例えば、リン酸カルシウム、リポフェクション、電気穿孔、ウイルス感染症、及び遺伝子銃による遺伝子移入を含めたエキソビボでの遺伝子療法に使用される任意の標準的な手段によって遂行することができる。あるいは、リポソームまたはポリマー微粒子を使用することができる。成功裏に形質導入された細胞を、次に、例えば、コード配列の発現または薬物耐性遺伝子に関して選択することができる。次に、細胞に致死的放射線な照射することができ（所望であれば）、それを対象内に注射または移植することができる。一態様では、融合タンパク質をコードする核酸を含有する発現ベクターは、それを必要とする対象に投与される細胞内にトランスフェクトされる。

【0279】

インビボでの核酸療法は、機能的に活性なＤＮＡを哺乳動物の体細胞組織または器官にインビボで直接移入することによって遂行することができる。例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードする核酸は、リンパ組織または腫瘍に直接投与することができる。あるいは、リンパ組織特異的ターゲティングは、リンパ組織特異的転写制御因子（ＴＲＥ）、例えば、Ｂリンパ球特異的ＴＲＥ、Ｔリンパ球特異的ＴＲＥ、または樹状細胞特異的ＴＲＥを使用して実現することができる。リンパ組織特異的ＴＲＥは、当技術分野で公知である。

【0280】

核酸はまた、インビボでウイルス手段によって投与されてもよい。融合タンパク質をコードする核酸分子は、当技術分野で周知のように、複製欠損レトロウイルスを産生するパッケージング細胞株を使用してレトロウイルスベクター内にパッケージングされてもよい。組換えアデノウイルス及びワクシニアウイルスを含めた、非複製性にすることができる他のウイルスベクターも使用されてもよい。裸のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはウイルスベクターに加えて、操作された細菌がベクターとして使用されてもよい。

【0281】

核酸はまた、リポソーム、ポリマー微粒子及びポリマーナノ粒子、ならびにアシアロ糖タンパク質／ポリリジンなどのポリカチオンを含めた他の担体によって送達されてもよい。

【0282】

インビボでのウイルス及び担体に媒介される遺伝子移入に加えて、ＤＮＡを直接移入するために、プラスミドＤＮＡの投与及び微粒子銃に媒介される遺伝子移入を含めた当技術分野で周知の物理的手段を使用することができる。

【0283】

Ｄ．医薬組成物
開示されるシグレック−１５結合分子を含む医薬組成物が提供される。シグレック−１５結合分子を含有する医薬組成物は、非経口（筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）、または皮下注射）、経皮（受動的に、またはイオン導入もしくは電気穿孔を使用する）、もしくは経粘膜（経鼻、経膣、経直腸、または舌下）の投与経路によるか、または生体内分解性挿入物を使用することによる投与を目的とすることができ、各投与経路に適した剤形に製剤化することができる。

【0284】

幾つかのインビボでの手法では、本明細書に開示される組成物は、治療的有効量で対象に投与される。本明細書で使用される場合、「有効量」または「治療的有効量」という用語は、治療している障害の１つもしくは複数の症状を治療する、阻害する、もしくは緩和するか、またはさもなければ所望の薬理学的及び／または生理学的効果をもたらすのに十分な投薬量を意味する。正確な投薬量は、対象に依存する変動要素（例えば、年齢、免疫系の健康など）、疾患、及び実施されている治療などの種々の因子によって変動する。

【0285】

開示されるシグレック−１５結合分子については、さらなる研究が行われるにつれ、様々な患者における様々な状態の治療に適した投薬量レベルに関する情報が明らかになろう。当業者であれば、治療状況、レシピエントの年齢及び全身健康状態を考慮して、妥当な投薬を見極めることができるであろう。選択される投薬量は、所望の治療効果、投与経路、及び所望の治療期間に依存する。一般に、静脈注射または注入の場合、投薬量を下げることができる。

【0286】

患者に投与される投薬量は、典型的には、患者の体重当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。患者に投与される投薬量は、例えば、患者の体重当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、または０．０１〜０．０２５ｍｇ／ｋｇであり得る。代表的な特定の投薬量として、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇが挙げられるが、これらに限定されない。適正な薬力学的効果を生じるために０．０１ｍｇ／ｋｇ程の低い用量で十分であると考えられる。０．１０〜１ｍｇ／ｋｇの用量レベルが、最も適正であると予測される。用量が高くなっても（例えば、１〜３０ｍｇ／ｋｇ）活性であることが期待される。

【0287】

一般に、ヒト抗体は、他の種に由来する抗体よりヒト体内で長い半減期を有し、それは外来性ポリペプチドに対する免疫応答に起因する。よって、ヒト抗体は、投薬量を少なくし、投与回数を減らすことが可能であることが多い。さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントの投薬量及び投与回数は、例えば脂質化などの修飾により抗体の取り込み及び組織浸透を強化することによって低減させることができる。

【0288】

ある特定の実施形態では、シグレック−１５結合分子は、局所的に、例えば、治療しようとする部位に直接注射することによって投与される。典型的には、その注射によってシグレック−１５結合分子組成物の局所濃度が増大し、その濃度は全身投与によって実現し得る濃度より高い。シグレック−１５結合分子組成物を下記の通りのマトリックスと組み合わせることで、治療しようとする部位からのポリペプチドの受動拡散を低減させることによって、局所濃度の増加を生じる助けとすることができる。

【0289】

１．非経口投与用製剤
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、非経口注射または注入によって、水溶液の状態で投与される。製剤はまた、懸濁液または乳濁液の形態であってもよい。一般に、医薬組成物は、有効量のシグレック−１５結合分子を含んで提供され、任意で、医薬として許容される希釈剤、防腐剤、溶解剤、乳化剤、アジュバント、及び／または担体を含む。かかる組成物は、任意で、以下に関して１つまたは複数を含む：希釈剤、滅菌水、様々な緩衝液内容物（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、及びイオン強度の緩衝生理食塩水；及び添加剤、例えば、界面活性剤及び可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート−２０）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリソルベート−８０））、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム）、及び防腐剤（例えば、例えば、チメルソル（Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）、ベンジルアルコール）及び充填物質（例えば、ラクトース、マンニトール）。非水性溶媒またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えば、オリーブ油及びトウモロコシ油、ゼラチン、ならびに注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。製剤は、凍結乾燥され、使用する直前に再溶解／再懸濁されてもよい。製剤は、例えば、細菌保持フィルターによるろ過によって、組成物中に滅菌剤を組み込むことによって、組成物を照射することによって、または組成物を加熱することによって滅菌されてもよい。

【0290】

２．制御送達用ポリマーマトリックス
本明細書に開示されるシグレック−１５結合分子は、放出制御製剤においても投与することができる。放出制御ポリマーデバイスは、ポリマーデバイス（ロッド、シリンダー、フィルム、ディスク）の埋め込みまたは注射（微小粒子）後に全身に長期放出させるために作製することができる。マトリックスは、ミクロスフェアなどの微小粒子の形態であってもよく、この場合、作用物質は固体ポリマーマトリックスまたはマイクロカプセルの内部に分散されており、そのコアはポリマーシェルとは異なる材料のものであり、ペプチドはコア（自然状態で液体であっても、または固体であってもよい）内に分散または懸濁されている。本明細書で特に定義しない限り、微小粒子、ミクロスフェア、及びマイクロカプセルは互換的に使用される。あるいは、ポリマーは、ナノメートルから４センチメートルの範囲の薄い平板もしくはフィルムとして注型されたもの、粉砕もしくは他の標準的な技法によって生成される粉末、またはさらにはヒドロゲルなどのゲルであってもよい。

【0291】

融合ポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードする核酸の送達に、非生分解性または生分解性マトリックスのいずれも使用することができる。これらは、天然ポリマーであっても、または合成ポリマーであってもよい。合成ポリマーの方が、典型的には分解及び放出プロファイルの特性評価が良好である。ポリマーは、所望される放出期間に基づいて選択される。ある場合には線形放出が最も有用であり得るが、他の場合にはパルス放出または「バルク放出」の方が有効な結果をもたらすこともある。ポリマーは、ヒドロゲル（典型的には最大約９０重量％の水を吸収している）の形態であってもよく、任意で多価イオンまたはポリマーと架橋されたものであり得る。

【0292】

マトリックスは、溶媒蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出、及び当業者に公知の他の方法によって形成することができる。生体内分解性のミクロスフェアは、例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，５：１３−２２（１９８７）；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，６：２７５−２８３（１９８７）；及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．，３５：７５５−７７４（１９８８）によって記載されるような、薬物送達用のミクロスフェアを作製するために開発された方法のいずれかを使用して調製することができる。

【0293】

デバイスは、埋め込まれたもしくは注射された部分を治療するための局所放出用（これは典型的には全身を治療するための投薬量よりはるかに少ない投薬量を送達することとなる）または全身送達用に製剤化することができる。これらは、皮下、筋肉内、脂肪内に埋め込むもしくは注射するか、または嚥下することができる。

【0294】

ＩＩＩ．使用方法
開示されるシグレック−１５−結合分子及びシグレック−１５リガンド結合分子を使用する方法も提供される。免疫応答を増大させる、腫瘍増殖を遅延させるもしくは防止する、腫瘍に媒介される免疫抑制を阻害する、腫瘍を排除する、及び／または腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の活性を枯渇させるもしくはブロックしてその活性を変化させる、ＴＡＭに媒介される免疫抑制を減少させる、Ｔ細胞の抑制を低減もしくは逆転させるための、かかる分子の使用が開示される。がん及び他の疾患の診断及び治療におけるかかる分子の使用も提供される。

【0295】

ＴＡＭによって、炎症とがんとが関連付けられる。マクロファージは、活性化された血中単球に由来する免疫系細胞である。それは、病原体、死細胞、細胞残屑、及び細胞外基質（ＥＣＭ）の様々な構成成分を除去する（すなわち貪食する）ように作用することによって、病原体または組織損傷によって誘導された炎症反応に関与すると主に認識されている。マクロファージは、腫瘍微小環境内で重要な構成要素を構成し、腫瘍量の最大５０％を占めることが見出されている。

【0296】

貪食を媒介することに加えて、マクロファージは、血管新生促進性増殖因子及び基質リモデリングプロテアーゼを分泌し、よって腫瘍の発達及び増殖に必要な血管の基盤（すなわち、血管新生）の発達に役割を担っている（Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｗ．（２００９），Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２５９−２７０）。腫瘍内にマクロファージが存在すると、腫瘍の増殖が支援されると思われる。幾つもの研究から、腫瘍内の腫瘍関連マクロファージの存在が、生存の負の予後因子であるという証拠が得られている（Ｆａｒｉｎｈａ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００５），Ｂｌｏｏｄ １０６：２１６９−２１７４；Ｄａｖｅ，Ｓ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５１：２１５９−２１６９；Ｓｏｌｉｎａｓ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２００９），Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８６（５）：１０６５−１０７３）。ＴＡＭ、ならびに好中球、線維芽細胞、及び他の細胞は、腫瘍細胞に協力して、腫瘍における血管新生を促進する（Ｎｕｃｅｒａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ，ｄｏｉ：１０．１３８７／ｉｊｄｂ．１０３２２７ｓｎ；Ｚａｍａｒｒｏｎ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．７（５）：６５１−６５８；Ｌｉｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．６（４）：ｅ１９４９５；Ｒｉｇｏ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０１０），Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ ９（２７３）：１−１３；Ｌｉｎ，Ｊ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ３０（４）：２８０−２８６；Ｖｅｒｇａｔｉ，Ｍ．（２０１１），Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１：１８２４１３）。

【0297】

研究から、シグレック−１５はＴＡＭ上に誘導的に発現され、腫瘍細胞認識をＤＡＰ１２−Ｓｙｋシグナル伝達経路と結びつけることによってＴＧＦ−βの分泌を強化することが示されている（Ｔａｋａｍｉｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２３（２）：１７８−８７（２０１３）。Ｔａｋａｍｉｙａによって提示された特定のモデルにおいて、腫瘍細胞によって分泌されたＭ−ＣＳＦは、マクロファージへの単球分化を誘導し、それに伴ってシグレック−１５が発現する。シアリル−Ｔｎ抗原とシグレック−１５との間の相互作用によって、ＤＡＰ１２−Ｓｙｋ経路を介してマクロファージからのＴＧＦ−βの産生が強化され、それによって腫瘍微小環境が免疫抑制の方向に傾くことにより、腫瘍が進行し、さらには転移が起こる。

【0298】

機能を阻止するまたは低減させる抗シグレック−１５抗体をシグレック−１５に結合させると、シグレック−１５が１つまたは複数のそのリガンドに結合する能力を低減させる、ブロックする、拮抗する、減弱する、または不完全に消失させることができ、したがってシグレック−１５によって媒介される抑制性免疫シグナル伝達（ＴＧＦ−βの分泌が挙げられるが、これに限定されない）を減少させるまたは防止することができる。ＴＧＦ−βの発現の増加は、多くのがんの悪性度及びＴＧＦ−βに応答する細胞増殖阻害の欠損と相関し、免疫抑制に基づく腫瘍形成に至ることが多い。シグレック−１５に媒介されるＴＧＦ−βの分泌を減少させると、対象における免疫応答が全体的に増大し、腫瘍の進行が直接的にまたは間接的に減少する。

【0299】

以降の実施例は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）増殖アッセイにおいて、本明細書に開示されるものを含めた機能低減及び機能阻止抗シグレック−１５抗体が、シグレック−１５に媒介されるＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の抑制を逆転させることができることを示している。

【0300】

よって、免疫抑制を低減させる及び／または免疫応答を増大させる方法であって、最も典型的にはそれを必要とする対象に有効量の抗シグレック−１５機能阻止抗体を投与することによる方法が提供される。

【0301】

適切な抗体、ポリペプチド、及び融合タンパク質は本明細書に開示されており、限定されないが、増殖、遊走、接着、軟寒天増殖、血管新生、細胞−細胞伝達、アポトーシス、輸送、シグナル伝達を含めたインビトロでのアッセイ、及び腫瘍増殖の阻害などのインビトロでのアッセイによってさらに選択することができる。開示される抗体の機能を検査するための代表的なアッセイは、以降の実施例に示す。

【0302】

本明細書に提供される抗体は、診断及び調査用途にも有用であり得る。例えば、非中和抗体は、抗原の受容体結合または生物活性を阻害することなく特異的抗原に結合することができ、捕捉アッセイ及び他のプルダウン法（例えば、ＥＬＩＳＡ）に使用することができる。中和（例えば、機能阻止）抗体は、競合結合測定法に有用であり得る。

【0303】

抗体は、シグレック−１５ポリペプチドまたはそのリガンドを定量化するために使用することができる。

【0304】

Ａ．免疫応答増大分子
１．治療的及び予防的使用
ヒトシグレック−１５及びシグレック−１５リガンド結合分子に免疫特異的に結合し、かつシグレック−１５とそのリガンド及び／または対抗受容体のうちの１つまたは複数との間の結合を低減させる能力のある分子（とりわけ、抗体またはその抗原結合フラグメント）の治療的及び／または予防的使用が提供される（例えば、アンタゴニスト分子）。

【0305】

幾つかの実施形態では、該分子は、シグレック−１５とシアル酸付加された糖タンパク質リガンド、例えば、対象の細胞によって内因的に発現されるシアル酸付加された糖タンパク質との間の結合を低減させるまたは防止し、シグレック−１５に媒介されるシグナル伝達を低減させるまたは防止する。追加的にまたは代替的に、該分子は、シグレック−１５とその対抗受容体との間の結合を低減させるまたは防止することができ、シグレック−１５に媒介されるシグナル伝達及び／または対抗受容体を介するシグナル伝達を低減させるまたは防止することができる。例えば、開示される分子は、シアル酸結合部位を破壊するシグレック−１５上の１つまたは複数の部位（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基１４３を含めたエピトープ）、及び／またはシグレック−１５対抗受容体との結合に重要な結合部位で抗原と結合することができる。代表的な組成物は、以降の実施例に例示する。例えば，幾つかの実施形態では、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、１Ｃ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、及び１Ｂ２は（「強力なブロッカー」）であり、１０Ｇ９、８Ｈ８、及び９Ａ５は（「部分的なブロッカー」）である。したがって、幾つかの実施形態では、免疫応答の上方調節に使用される分子は、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、１Ｃ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、１Ｂ２、１０Ｇ９、８Ｈ８、または９Ａ５の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てのＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、該分子は、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、１Ｃ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、１Ｂ２、１０Ｇ９、８Ｈ８、もしくは９Ａ５の軽鎖可変領域及び／または重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、該分子は、マウス抗ヒト５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、１Ｃ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、１Ｂ２、１０Ｇ９、８Ｈ８、もしくは９Ａ５、またはそれらのキメラもしくはヒト化変異体である。

【0306】

上で考察したように、シグレック−１５とシアル酸付加された糖タンパク質リガンド及び／またはシグレック−１５対抗受容体との間の相互作用によって、Ｔ細胞の増殖が阻害され、ＴＧＦ−βなどのサイトカインの産生が増大し得る。よって、幾つかの実施形態では、開示されるシグレック−１５結合分子を対象に投与すると、シグレック−１５リガンド及び／または対抗受容体の結合／相互作用がブロックされるか、さもなければ拮抗されることによって、対象の免疫系が上方調節される。別の態様では、抗シグレック−１５抗体の結合活性及び／または親和性は、それが極めて高いレベルのシグレック−１５を発現している細胞、例えば、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）またはがん細胞にのみ結合するようなものであり得、それによってこの細胞集団の特異的ターゲティングが可能になる。よって、幾つかの実施形態では、該分子は、例えば腫瘍微小環境におけるＴＧＦ−βの産生を低減させる。幾つかの実施形態では、シグレック−１５を発現する細胞は、単球である。より特定の実施形態では、シグレック−１５を発現する細胞は、マクロファージ、例えばＴＡＭである。

【0307】

上に示したように、開示される抗体及び抗原結合フラグメントは、ＴＡＭの免疫抑制活性を調節するように、ＴＡＭに結合し、実質的にＴＡＭをブロックすることができる。さらに、かかる抗体を使用して、腫瘍微小環境内のシグレック−１５ＴＡＭを枯渇させるか、または末梢血中のＴＡＭの濃度を枯渇させることができる。一態様では、かかる調節または枯渇化は、正常なシグレック−１５の機能を弱化するまたは撹乱するように部位に結合するシグレック−１５抗体を使用して遂行される。そのような撹乱の結果として、ＴＡＭの活性が減少し（調節され）、及び／または腫瘍中のマクロファージの実際のもしくは有効な（機能性）濃度が枯渇する。あるいは、かかる調節または枯渇化は、毒素にコンジュゲートされた抗シグレック−１５抗体を使用して、それがＴＡＭに結合するとマクロファージが死滅するようにして遂行される。

【0308】

加えて、開示されるアンタゴニスト分子を使用して、Ｔ細胞の増殖を誘導する、増大させる、または強化することができる。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞応答は、シグレック−１５がＴ細胞上の対抗受容体と結合するのを低減させるまたは防止することによって誘導される。免疫系の上方調節はがん及び慢性感染症の治療に特に望ましく、よって開示される組成物は、かかる障害の治療に使用することができる。

【0309】

２．治療される対象
ａ．がんの治療
開示される機能低減組成物及び方法を使用して、がんを治療することができる。概して、該方法は、ある量のシグレック−１５結合物を対象に投与することによって、対象においてがんに対する免疫応答を刺激するもしくは強化すること、腫瘍の増殖もしくは進行を低減させるまたは防止すること、またはそれらの組み合わせを含む。該方法は、がんの症状の１つまたは複数を低減させることができる。

【0310】

がん細胞は、その発生の間に、様々な機序を介してではあるが、特徴的な一連の機能的能力を獲得する。かかる能力として、アポトーシスの回避、増殖シグナルの自己充足、抗増殖シグナルに対する非感受性、組織湿潤／転移、無限の複製能、及び持続的血管新生が挙げられる。「がん細胞」という用語は、前悪性がん細胞と悪性がん細胞を両方包含することを意味している。幾つかの実施形態では、がんは、局在したままの良性腫瘍を指す。他の実施形態では、がんは、隣接する身体構造を侵襲して破壊し、遠位部位に広がる悪性腫瘍を指す。さらに他の実施形態では、がんは、特異的がん抗原（例えば、全癌腫抗原（ＫＳ１／４）、卵巣癌抗原（ＣＡ１２５）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＨＥＲ２／ｎｅｕなど）に関連している。

【0311】

本明細書に開示される方法及び組成物は、種々のがんまたは他の異常な増殖性疾患の治療または防止に有用であり、これらとして、癌腫、例えば、膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、頚部、甲状腺、及び皮膚の癌腫；例えば、扁平上皮細胞癌；リンパ系列の造血器腫瘍、例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫；骨髄細胞系列の造血器腫瘍、例えば、急性及び慢性骨髄性白血病、ならびに前骨髄球性白血病；間葉系由来の腫瘍、例えば、線維肉腫及び横紋筋肉腫；他の腫瘍、例えば、黒色腫、精上皮腫、奇形癌、神経芽細胞腫、及び神経膠腫；中央及び末梢神経系の腫瘍、例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及び神経鞘腫；間葉系由来の腫瘍、例えば、線維肉腫、横紋筋肉腫、及び骨肉腫；ならびに他の腫瘍、例えば、黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、精上皮腫、甲状腺濾胞癌、及び奇形癌が挙げられる（これらに限定されない）。

【0312】

アポトーシスの異常によって引き起こされるがんも、開示される方法及び組成物によって治療することができる。かかるがんとして、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異を有する癌腫、乳房、前立腺、及び卵巣のホルモン依存性腫瘍、ならびに前癌病変、例えば、家族性大腸腺腫症、及び骨髄異形成症候群を挙げることができるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、卵巣、膀胱、乳房、結腸、肺、皮膚、膵臓、または子宮における悪性もしくは異常増殖性（ｄｙｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）の変化（化生及び異形成など）、または過剰増殖性障害が、該方法及び組成物によって治療または防止される。他の特定の実施形態では、肉腫、黒色腫、または白血病が、該方法及び組成物によって治療または防止される。

【0313】

開示される組成物及び方法は、異常に高レベルのシグレック−１５自体もしくはシグレック−１５の糖タンパク質リガンドを発現する細胞に関連するがん、マクロファージに関連する多数の腫瘍を有するがん（特にマクロファージがシグレック−１５を発現している場合）、及び／または別の細胞型（複数可）が高レベルのシグレック−１５もしくはシグレック−１５リガンドを発現している別のがんの治療に特に有用である。

【0314】

本明細書に開示される方法及び組成物によって治療または防止される特定のがん及び関連障害として、これらに限定されないが、白血病、例えば、これらに限定されないが、急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、例えば、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、及び骨髄異形成症候群、慢性白血病、例えば、これらに限定されないが、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、ヘアリーセル白血病；真性多血症；リンパ腫、例えば、これらに限定されないが、ホジキン病または非ホジキン病リンパ腫（例えば、びまん性未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陰性、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；びまん性未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性、ＡＬＫ＋未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ））；多発性骨髄腫、例えば、これらに限定されないが、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌性骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞性白血病、孤立性形質細胞腫、及び髄外性形質細胞腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；重度未確定の単クローン性γグロブリン血症；良性単クローン性γグロブリン血症；重鎖病；骨及び結合組織の肉腫、例えば、これらに限定されないが、骨肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性巨細胞腫、骨の線維肉腫、脊索腫、骨膜肉腫、軟部組織肉腫、血管肉腫（血管内皮腫）、線維肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、神経鞘腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫；脳腫瘍、例えば、これらに限定されないが、神経膠腫、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、脳室上衣腫、乏突起膠腫、非グリア性腫瘍、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭管腫瘍、髄芽腫、髄膜腫、松果体細胞腫、松果体芽腫、原発性脳リンパ腫；乳癌、例えば、これらに限定されないが、腺癌、小葉癌（小細胞）癌、乳管癌、髄様乳癌、粘液性乳癌、管状乳癌、乳頭の乳癌、ページェット病、及び炎症性乳癌；副腎癌、例えば、これらに限定されないが、褐色細胞腫及び副腎皮質癌；甲状腺癌、例えば、これらに限定されないが、甲状腺乳頭癌または濾胞性甲状腺癌、甲状腺髄様癌、及び組織非形成性甲状腺癌；膵癌、例えば、これらに限定されないが、インスリノーマ、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、ビポーマ、ソマトスタチン分泌腫瘍、及びカルチノイドまたは島細胞腫瘍；下垂体癌、例えば、これらに限定されないが、クッシング病、プロラクチン分泌腫瘍、先端巨大症、及び尿崩症；眼癌、例えば、これらに限定されないが、眼内黒色腫、例えば、虹彩黒色腫、脈絡膜悪性黒色腫、及び毛様体黒色腫、及び網膜芽細胞腫；腟癌、例えば、これらに限定されないが、扁平上皮細胞癌、腺癌、及び黒色腫；外陰癌、例えば、これらに限定されないが、扁平上皮細胞癌、黒色腫、腺癌、基底細胞癌、肉腫、及びページェット病；子宮頚癌、例えば、これらに限定されないが、扁平上皮細胞癌、及び腺癌；子宮癌、例えば、これらに限定されないが、子宮内膜癌及び子宮肉腫；卵巣癌、例えば、これらに限定されないが、上皮性卵巣癌、境界型腫瘍、胚細胞腫瘍、及び間質性腫瘍；食道癌、例えば、これらに限定されないが、扁平上皮癌、腺癌、腺様嚢胞癌、粘表皮癌、腺扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、形質細胞腫、いぼ状癌、及び燕麦細胞（小細胞）癌；胃癌、例えば、これらに限定されないが、腺癌、菌状（ポリープ状）、潰瘍性、表在拡大型、びまん性拡大型、悪性リンパ腫、脂肪肉腫、線維肉腫、及び癌肉腫；結腸癌；直腸癌；肝臓癌、例えば、これらに限定されないが、肝細胞癌及び肝芽腫、胆嚢癌、例えば、これらに限定されないが、腺癌；胆管癌、例えば、これらに限定されないが、乳頭状、結節性、及びびまん性；肺癌、例えば、これらに限定されないが、非小細胞肺癌、扁平上皮細胞癌（類表皮癌腫）、腺癌、大細胞癌、及び小細胞肺癌；精巣癌、例えば、これらに限定されないが、胚の腫瘍、精上皮腫、未分化型、古典的（典型的）、精母細胞の、非セミノーム、胎児性癌、奇形腫癌、絨毛癌（卵黄嚢腫瘍）、前立腺癌、例えば、これらに限定されないが、腺癌、平滑筋肉腫、及び横紋筋肉腫；腎癌；口腔癌、例えば、これらに限定されないが、扁平上皮細胞癌；基底癌；唾液腺癌、例えば、これらに限定されないが、腺癌、粘表皮癌、及び腺様嚢胞癌；咽頭癌、例えば、これらに限定されないが、扁平上皮癌、及びいぼ状；皮膚癌、例えば、これらに限定されないが、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、及び黒色腫、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、黒子悪性黒色腫、末端性黒子性黒色腫；腎臓癌、例えば、これらに限定されないが、腎細胞癌、腺癌、副腎腫、線維肉腫、移行細胞癌（腎盂及び／または尿管）；ウィルムス腫瘍；膀胱癌、例えば、これらに限定されないが、移行上皮癌、扁平上皮癌、腺癌、癌肉腫が挙げられる。加えて、がんとして、粘液肉腫、骨肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、中皮腫、滑膜腫、血管芽腫、上皮癌、嚢胞腺癌、気管支原性癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌及び乳頭状腺癌が挙げられる（かかる障害の総説に関しては、Ｆｉｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２ｄ Ｅｄ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ及びＭｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｆｏｒｍｅｄ Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｂｏｏｋ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ，Ｖｉｋｉｎｇ Ｐｅｎｇｕｉｎ，Ｐｅｎｇｕｉｎ Ｂｏｏｋｓ Ｕ．Ｓ．Ａ．，Ｉｎｃ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａを参照されたい）。

【0315】

ｂ．感染症の治療
開示される機能低減組成物及び方法を使用して、感染症及び感染性疾患を治療することができる。概して、該方法は、ある量のシグレック−１５結合分子を対象に投与することによって、対象において感染原因物質に対する免疫応答を刺激するもしくは強化すること、感染性疾患の進行を低減させるまたは防止すること、またはそれらの組み合わせを含む。該方法は、感染症の１つまたは複数の症状を低減させることができる。

【0316】

感染症または疾患は、細胞内に入って攻撃される、すなわち細胞傷害性Ｔリンパ球によって攻撃される、細菌、ウイルス、原生動物、蠕虫、または他の微生物病原体によって引き起こされ得る。

【0317】

感染症または疾患は、急性または慢性であり得る。急性感染症は、典型的には短期間の感染症である。急性微生物感染の間に、免疫細胞は、免疫調節性受容体を発現し始める。したがって、幾つかの実施形態では、該方法は、急性感染症に対する免疫刺激応答を増大させることを含む。

【0318】

感染症は、例えば、これらに限定されないが、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ナイセリア・メニンジティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、エシェリキア・コリ、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、またはマイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって引き起こされ得る。

【0319】

幾つかの実施形態では、開示される組成物を使用して、慢性感染症、例えば、Ｔ細胞疲弊またはＴ細胞アネルギーが生じて感染が長時間宿主に存続するようになった感染症を治療する。

【0320】

治療しようとする代表的な感染症は、肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）、ヘルペスウイルス、エプスタイン・バーウイルス、またはヒトパピローマウイルスによって引き起こされる慢性感染症である。

【0321】

ウイルス感染は主にＴ細胞によって除去されるので、感染性ウイルス物質のより迅速なまたは完全なクリアランスが動物またはヒト対象に有益と思われる状況では、Ｔ細胞の活性を増大させれば治療的に有用であるはずである。よって、開示される組成物は、局所または全身のウイルス感染症を治療するために投与することができ、そうしたウイルス感染症として、免疫不全（例えば、ＨＩＶ）、パピローマ（例えば、ＨＰＶ）、ヘルペス（例えば、ＨＳＶ）、脳炎、インフルエンザ（例えば、ヒトインフルエンザウイルスＡ）、及び感冒（例えば、ヒトライノウイルス）、ならびに他のウイルス感染症、例えば、ＨＴＬＶ、肝炎ウイルス、呼吸器系合胞体ウイルス、ワクシニアウイルス、及び狂犬病ウイルスによって引き起こされるものが挙げられるが、これらに限定されない。該分子を局所的に投与して、ウイルス性皮膚疾患、例えば、ヘルペスの病変部、または帯状疱疹、または性器疣贅を治療することができる。該分子を全身的に投与して、全身性ウイルス性疾患を治療することができ、そうした疾患として、ＡＩＤＳ、インフルエンザ、感冒、または脳炎が挙げられるが、これらに限定されない。

【0322】

治療することができる代表的な感染症として、これらに限定されないが、微小生物によって引き起こされる感染症が挙げられ、そうした微生物として、アクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、アナベナ属（Ａｎａｂａｅｎａ）、バシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ブデロビブリオ属（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ）、ボルデテラ属（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ボレリア属（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、コーロバクター属（Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ）、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、クロロビウム属（Ｃｈｌｏｒｏｂｉｕｍ）、クロマチウム属（Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、サイトファーガ属（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）、デイノコッカス属（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、フランキセラ属（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）、ハロバクテリウム属（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリオバクター属（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）Ｂ型（ＨＩＢ）、ヒフォミクロビウム属（Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、レプトスピローシス（Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、髄膜炎菌（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）Ａ、Ｂ、及びＣ、メタノバクテリウム属（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ミオバクテリウム（Ｍｙｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコプラスマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、ミクソコッカス属（Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、ニトロバクター属（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、オシラトリア属（Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ）、プロクロロン属（Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｎ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シュードモナス属、ホドスピリルム属（Ｐｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、スピリルム属（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、スピロヘータ属（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ）、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、スルホロブス属（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ）、サーモプラスマ属（Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ）、チオバチルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、及びトレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラスマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ノカルジア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）、リケッチア・リケッチイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ）、リケッチア・チフィ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・プシタッシ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、クラミジア・トラコーマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、トリパノソーマ・ブルーセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、エントアメーバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、トキソプラズマ・ゴンヂ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、トリコモナス・バギナリス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）ならびにマンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0323】

開示される組成物及び方法を使用して治療することができる他の微小生物として、細菌、例えば、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、セラシア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）の細菌；コレラ、破傷風、ボツリヌス中毒、炭疽、ペスト、及びライム病に関連する病原体；または真菌もしくは寄生性病原体、例えば、カンジダ属（アルビカンス、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラータ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリスなど）、クリプトコックス属、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガーツス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ムコラーレス属（Ｇｅｎｕｓ Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）（ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシヂア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾフス（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロトリクス属（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）（シェンキー（ｓｃｈｅｎｋｉｉ））、ブラストミセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）（デルマティティディス（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ））、パラコクシジオイデス属（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）（ブラシリエンシス（ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ））、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）（ｉｍｍｉｔｉｓ）及びヒストプラスマ属（ｃａｐｓｕｌａｔｕｍａ）、エントアメーバ・ヒストリティカ、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォウレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカンソアメーバ属の種（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ ｓｐ．）、ギアリダ・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム属の種（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ．）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモディウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルーセイ、トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、トキソプラズマ・ゴンヂなど）、スポロトリクス属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属、コクシジオイデス属、ヒストプラスマ属、エントアメーバ・ヒストリティカ、バランチジウム属、ネグレリア属、アカンソアメーバ属、ギアリダ属、クリプトスポリジウム属、ニューモシスチス属、プラスモディウム属、バベシア属、またはトリパノソーマ属などが挙げられる。

【0324】

Ｂ．免疫応答低減分子
１．治療的及び予防的使用
ヒトシグレック−１５またはそのリガンドに結合し、かつシグレック−１５とそのリガンド及び／または対抗受容体の１つまたは複数との結合を増大させるまたは強化する能力のある分子（とりわけ、抗体またはその抗原結合フラグメント）の治療的及び／または予防的使用が提供され（例えば、アゴニスト分子）、あるいはシグレック−１５またはシグレック−１５対抗受容体に媒介されるシグナル伝達を直接増大させるまたは強化する能力のある分子の治療的及び／または予防的使用も提供される。

【0325】

上で考察したように、シグレック−１５とシアル酸付加された糖タンパク質リガンド及び／またはシグレック−１５対抗受容体との間の相互作用は、Ｔ細胞の増殖を阻害し、ＴＧＦ−βなどのサイトカインの産生を増大させることができる。よって、幾つかの実施形態では、機能活性化シグレック−１５結合分子または機能活性化シグレック−１５リガンド結合分子を対象に投与すると、シグレック−１５−リガンド及び／または対抗受容体の結合／相互作用が誘導されるかさもなければアゴナイズされ、またはシグレック−１５またはシグレック−１５対抗受容体のシグナル伝達が直接刺激されることによって、対象の免疫系が下方調節される。幾つかの実施形態では、該分子は、例えばマクロファージなどの単球からの、ＴＧＦ−βの産生及び／または分泌を増大させる。

【0326】

加えて、開示されるアゴニストシグレック−１５結合及びシグレック−１５リガンド結合分子を使用して、Ｔ細胞の増殖を低減または減少させることができる。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞応答は、Ｔ細胞上の対抗受容体へのシグレック−１５の結合を増大させるまたは強化することによって誘導される。免疫系の下方調節は、炎症性及び自己免疫性の疾患及び障害の治療に、また移植片拒絶反応及び／または移植片対宿主病を治療または防止するために特に望ましく、よって開示される組成物を使用して、かかる障害を治療することができる。

【0327】

ａ．炎症反応
幾つかの実施形態では、シグレック−１５アゴニスト分子は、炎症、例えば、急性、慢性、または持続性炎症の１つまたは複数の症状を治療するまたは緩和するために使用される。

【0328】

炎症を含めた免疫応答は、対象、好ましくはヒトにおいて、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＢ細胞）の生物活性を阻害するもしくは低減させるか、または炎症部位における炎症誘発性分子の量を低減させるのに有効な量のシグレック−１５結合分子を投与することによって、阻害するまたは低減させることができる。代表的な炎症誘発性分子として、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１、及びＭＭＰが挙げられるが、これらに限定されない。

【0329】

ｂ．過剰炎症反応
幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子は、免疫系を遅延させる。例えば、シグレック−１５結合分子を使用して、過剰炎症反応を介して健常組織を損傷させる感染症に対する免疫刺激応答を制御することができる。したがって、幾つかの実施形態では、該作用物質は、過剰炎症反応も起こしている感染症を有する対象に投与される。かかる場合では、過剰な免疫応答を制御することは、対象に有益であり得る。

【0330】

ｃ．炎症性及び自己免疫性疾患／障害
開示される組成物を使用して、炎症性または自己免疫性の疾患及び障害を治療することもできる。治療することができる代表的な炎症性または自己免疫疾患／障害として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ａｌｐｓ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー−皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、ドゴー病、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、Ｉｇａ腎症、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、若年性関節炎、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｃｕｌａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0331】

幾つかの実施形態では、炎症または自己免疫疾患は、病原体によって引き起こされるか、または感染症の結果である。

【0332】

ｄ．移植
シグレック−１５結合分子を使用して、対象、好ましくはヒト対象において移植拒絶反応を低減させるまたは阻害することができる。移植拒絶反応は、対象において、免疫細胞の生物活性を阻害するもしくは低減させるために、または炎症誘発性サイトカインまたは関連するもしくは移植部位の炎症を促進する他の分子の量を低減させるために有効な量のアゴニストシグレック−１５結合分子を投与することによって、阻害するまたは低減させることができる。

【0333】

移植される材料は、身体、好ましくはヒトの身体の細胞、組織、器官、手足、指、または一部分であり得る。移植片は、典型的には同種異系または異種である。アゴニストシグレック−１５分子は、典型的には、移植拒絶反応を低減させるまたは阻害するのに有効な量で対象に投与される。該分子は、許容可能な投与経路によって全身的にまたは局所的に投与することができる。幾つかの実施形態では、該分子は、移植前、移植時、または移植後に移植部位に投与される。

【0334】

該分子は、移植しようとする細胞、組織、または器官にエキソビボで直接投与することができる。一態様では、移植材料を、移植前、移植後に、またはその両方でシグレック−１５結合分子と接触させる。

【0335】

他の実施形態では、シグレック−１５結合分子は、免疫組織または器官、例えば、リンパ節または脾臓に投与される。

【0336】

ｉ．細胞
いずれのタイプの細胞の集団でも対象内に移植することができる。細胞は、同種であっても異種であってもよい。異種とは、細胞集団が２つ以上のタイプの細胞を含有することを意味する。代表的な細胞として、ドナーから採取して対象内に移植することができる、幹細胞及び多能性細胞などの前駆細胞が挙げられる。細胞は、任意で移植前にエキソビボで処置される。細胞は、自己細胞であっても異種細胞であってもよい。

【0337】

ｉｉ．組織
いずれの組織も移植片として使用することができる。代表的な組織として、皮膚組織、脂肪組織、心臓血管組織、例えば、静脈、動脈、毛細血管、弁；神経組織、骨髄組織、肺組織、眼組織、例えば、角膜及びレンズ、軟骨組織、骨組織、及び粘膜組織が挙げられる。組織は、上で考察したように修飾することができる。

【0338】

ｉｉｉ．器官
移植に使用することができる代表的な器官として、腎臓、肝臓、心臓、脾臓、膀胱、肺、胃、眼、舌、膵臓、腸などが挙げられるが、これらに限定されない。移植しようとする器官は、上で考察したように移植前に修飾することができる。

【0339】

一実施形態は、対象において、対照と比較して慢性の移植拒絶反応を阻害するまたは低減させるのに有効な量のシグレック−１５結合分子を投与することによって、慢性の移植拒絶反応を阻害するまたは低減させる方法を提供する。

【0340】

ｅ．移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）
該分子を使用して、ＧＶＨＤに関連する１つまたは複数の症状を緩和するのに有効な量のシグレック−１５結合分子を投与することによって、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療することもできる。ＧＶＨＤは、同種異系の造血幹細胞移植に関連する主要な合併症であり、その移植において移植骨髄中の機能性免疫細胞がレシピエントを「異物」として認識して免疫攻撃を開始する。ある特定の状況下では、輸血においても起こり得る。ＧＶＤの症状として、発疹または皮膚の色もしくは質感の変化、下痢、嘔気、異常な肝機能、皮膚の黄変、易感染性の増大、ドライアイ、眼の刺激、及び口腔過敏またはドライマウスが挙げられる。

【0341】

ｆ．糖尿病
アゴニストシグレック−１５結合分子を使用して、糖尿病を治療することもできる。該方法は、インスリン産生細胞を対象内に移植すること、及び移植拒絶反応を低減させるまたは阻害するのに有効な量の分子を対象に投与することを含む。好ましくは、インスリン産生細胞は、ベータ細胞または島細胞である。ある特定の実施形態では、インスリン産生細胞は、インスリンを産生するように操作された組換え細胞である。

【0342】

インスリン産生細胞は、適切なポリマーを使用してポリマーマトリックスなどのマトリックス内に封入することができ、そうしたポリマーとして、アルギネート、アガロース、ヒアルロン酸、コラーゲン、合成モノマー、アルブミン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニン、デキストラン、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、キチン、キトサン、ヘパラン、ヘパラン硫酸、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0343】

Ｃ．破骨細胞骨吸収の治療的阻害
研究から、シグレック−１５の発現及び機能は破骨細胞形成に重要であることが示されている（Ｓｔｕｉｂｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２８９（１０）：６４９８−６５１２（２０１４），Ｉｓｈｉｄａ−Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８７，１７４９３−１７５０２（２０１２）、これらはそれぞれ、その全体が参照により明確に組み込まれている）。シグレック−１５タンパク質は、破骨細胞分化の間に高度に上方制御されるが、このタンパク質は未分化細胞では検出不可能である。結果から、シグレック−１５及びＤＡＰ１２は、破骨細胞中で、内因性発現レベルで複合体を形成することが示されている。シグレック−１５（−／−）ノックアウトマウスは、軽度に骨粗鬆症である。

【0344】

インビボでの研究から、シグレック−１５抗体は生理的状況において破骨細胞の活性を阻害することができ、骨量減少を低減させるための治療方針を提供し得ることも示されている。細胞表面での受容体の活性化及びそれらのエンドサイトーシスによる下方制御は、シグナル伝達の強度及び継続時間を制限する手段として連動することが多いが、シグレック−１５に関しては、シグナル伝達及びエンドサイトーシスは、抗体連結が受容体のクラスタ形成を誘導するのかまたは単に二量体化を誘導するのかに応じて、互いに排他的に起こると思われる。

【0345】

シグレック−１５は、非常に限られた発現パターンを有する破骨細胞に固有の受容体であり、よってシグレック−１５標的療法は選択的である。シグレック−１５抗体は、比較的遅い段階で破骨細胞分化を阻害するために、破骨細胞と骨芽細胞との間に結ばれた情報伝達が保持され、既存の破骨細胞標的療法の合併症（破骨細胞の細胞死を誘導するか（ビスホスホネート）、または初期段階でそれらの分化を防止する（デノスマブ）ことによって、顎の骨壊死及び大腿骨の非定型骨折を含めた望ましくない副作用を生じることがある）が回避される。

【0346】

よって、幾つかの実施形態では、開示される分子（とりわけ、抗体またはその抗原結合フラグメント）であって、免疫特異的にヒトシグレック−１５に免疫特異的に結合し、かつシグレック−１５とそのリガンド及び／または対抗受容体（例えば、アゴニスト分子）の１つまたは複数との間の結合を低減させるまたはブロックする能力のある分子は、破骨細胞の分化、機能、またはそれらの組み合わせを低減させるまたは阻害するのに有効な量で、それを必要とする対象に投与することもできる。幾つかの実施形態では、該分子は、骨量減少を低減させる、骨形成を増大させる、骨塩量を増大させる、またはそれらの組み合わせを行うのに有効な量で投与される。

【0347】

Ｄ．ターゲティング及び検出
開示されるシグレック−１５結合及びシグレック−１５リガンド結合分子は、それらがシグレック−１５の機能に及ぼす影響とは無関係に、治療カーゴを送達する及び／または細胞もしくは組織上のシグレック−１５またはそのリガンドの存在をそれぞれ検出するために使用することができる。例えば、シグレック−１５結合及びシグレック−１５リガンド結合分子は、関心対象の生体分子とコンジュゲートして、コンジュゲートを形成することができる。薬理学的に活性な分子、例えば、無機及び有機分子、医薬品、薬物、ペプチド、タンパク質、遺伝子材料などを含むカーゴを、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子とコンジュゲートすることができ、それによって、次にカーゴを、シグレック−１５またはそのリガンドを発現している細胞または組織にそれぞれターゲティングさせることができる。シグレック−１５分子は、ペプチド結合によって、または化学的もしくはペプチドリンカー分子によって、化学的にポリペプチドに連結させることができる。薬物または他の小分子医薬品を抗体フラグメントに結合させるための方法は周知であり、二官能性の化学的リンカー、例えば、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾエート；スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾエート；４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−．Ａ−ｉｎｖｅｒｔｅｄ．−（２−ピリジルジチオ）トルエン；スルホスクシンイミジル−６−［．アルファ．−メチル−．Ａ−ｉｎｖｅｒｔｅｄ．−（ピリジルジチオール）−トルアミド］ヘキサノエート；Ｎ−スクシンイミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロプリオネート；スクシンイミジル−６−［３（−（−２−ピリジルジチオ）−プロプリオンアミド］ヘキサノエート；スルホスクシンイミジル−６−［３（−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノエート；３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニルヒドラジド、エルマン試薬、ジクロロトリアジン酸、Ｓ−（２−チオピリジル）−Ｌ−システインなどが挙げられる。

【0348】

融合タンパク質を、抗体の重鎖または軽鎖のいずれかのアミノ末端またはカルボキシ末端に関心対象のタンパク質が配置されるように設計することができるが、重鎖全体が必要とされない場合もある。可能性のある構成として、結合したタンパク質の機能的完全性を維持するために必要に応じてスペーサー配列を含むまたは含まない重鎖及び軽鎖の切り取り部分の使用が挙げられる。

【0349】

あるいは、普遍的な担体システムを考案することができる。例えば、様々なタンパク質またはＤＮＡを、通常の担体、例えば、プロテインＡ、ポリ−Ｌ−リジン、ヘキサヒスチジンなどにコンジュゲートすることができる。コンジュゲートした担体は、次いで、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子と複合体を形成することとなる。免疫グロブリンの結合に関与する担体分子の小部分を、担体として使用できると思われる。他の同様の構成として、抗体の重鎖または軽鎖中に操作されたタンパク質と相互作用する担体の設計が挙げられる。

【0350】

幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子をナノ担体上にまたはナノ担体中にコンジュゲートするかさもなければ組み込んで、ナノ担体をシグレック−１５陽性細胞またはシグレック−１５リガンド陽性細胞にターゲティングさせる。ナノ担体、例えば、マイクロまたはナノポリマー粒子、リポソーム、ナノチューブなどは、活性物質を含んで、シグレック−１５陽性細胞またはシグレック−１５リガンド陽性細胞またはそれらの微小環境に送達することができる。

【0351】

同様に、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子は、シグレック−１５またはシグレック−１５リガンドの発現をそれぞれインビトロまたはインビボで検出するために、検出可能なマーカーとコンジュゲートすることができ、またはコンジュゲートせずに二次試薬で検出することができる。よって、該分子は、推測、免疫組織化学、及び他のアッセイのために使用することができる。

【0352】

ＩＶ．併用療法
開示されるシグレック−１５結合及びシグレック−１５リガンド結合分子は、単独で、または１種類または複数種類の追加的な治療用物質と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することができる。幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子及び追加的治療用物質は、別々に、しかし同時に投与される。シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子及び追加的治療用物質は、同じ組成物の一部として投与することもできる。他の実施形態では、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子及び第２の治療用物質は、異なる時間に別々に投与されるが、同じ治療レジメンの一部として投与される。

【0353】

対象には、第１の治療用物質の投与後１、２、３、４、５、６時間もしくはそれ以上、または１、２、３、４、５、６、７日もしくはそれ以上してから第２の治療用物質を投与することができる。幾つかの実施形態では、対象には、１つまたは複数の用量の第１の作用物質を１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８、３５、または４８日毎に投与した後に、第２の作用物質を初回投与することができる。シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子は、第１または第２の治療用物質であり得る。幾つかの実施形態では、１種類または複数種類のシグレック−１５結合分子及び１種類または複数種類のシグレック−１５リガンド結合分子は、組み合わせて投与される。

【0354】

シグレック−１５結合及び／またはシグレック−１５リガンド結合分子及び追加的治療用物質は、治療レジメンの一部として投与することができる。例えば、第１の治療用物質を対象に４日毎に投与できるならば、第２の治療用物質は、１日目、２日目、３日目、もしくは４日目、またはそれらの組み合わせに投与することができる。第１の治療用物質または第２の治療用物質は、治療レジメン全体を通して繰返し投与されてもよい。

【0355】

代表的な分子として、サイトカイン、化学療法薬、放射性核種、他の免疫療法薬、酵素、抗生物質、抗ウイルス薬（とりわけ、ＨＩＶまたはＢ型もしくはＣ型肝炎を治療するためのプロテアーゼインヒビター単独またはヌクレオシドとの組み合わせ）、抗寄生虫薬（蠕虫、原虫）、増殖因子、増殖阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、抗体及びその生体活性フラグメント（例えば、ヒト化、一本鎖、及びキメラ抗体）、抗原及びワクチン製剤（例えば、アジュバント）、ペプチド薬物、抗炎症薬、自然免疫系を活性化するためにＴｏｌｌ様受容体に結合するリガンド（例えば、これらに限定されないが、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐｏｌｙＩ：Ｃ）及びＣｐＧオリゴヌクレオチド）、適応免疫系を動員し、最適化する分子、細胞傷害性Ｔリンパ球、ナチュラルキラー細胞、及びヘルパーＴ細胞の作用を活性化または上方制御する他の分子、ならびに制御因子または制御性Ｔ細胞を不活性化または下方制御する他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。

【0356】

追加的治療用物質は、治療しようとする状態、障害、または疾患に基づいて選択される。例えば、シグレック−１５結合分子は、免疫応答を強化するもしくは促進するまたは免疫応答を低減させるもしくは阻害するように機能する１種類または複数種類の追加的作用物質と同時投与することができる。

【0357】

Ａ．化学療法薬
シグレック−１５結合及びシグレック−１５リガンド結合分子は、１種類または複数種類の化学療法薬及びアポトーシス促進剤と組み合わせることができる。代表的な化学療法薬として、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、リポソーマルドキソルビシン、リポソーマルダウノルビシン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テガフール−ウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。代表的なアポトーシス促進剤として、フルダラビンタウロスポリン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）、シクロヘキシミド、アクチノマイシンＤ、ラクトシルセラミド、１５ｄ−ＰＧＪ（２）、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0358】

Ｂ．他の免疫調節薬
１．ＰＤ−１アンタゴニスト
幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子は、ＰＤ−１アンタゴニストと同時投与される。プログラム死−１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞上で誘導されると負の免疫応答を送達する受容体のＣＤ２８ファミリーのメンバーである。ＰＤ−１とそのリガンドの１つ（Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣ）との間の接触は、Ｔ細胞増殖及び／またはＴ細胞応答の強度及び／または継続時間を減少させる抑制応答を誘導する。適切なＰＤ−１アンタゴニストは、米国特許第８，１１４，８４５号、第８，６０９，０８９号、及び第８，７０９，４１６号（これらは、その全体が参照により本明細書に明確に組み込まれている）に記載されており、これらとして、ＰＤ−１のリガンドと結合するか、もしくはそれをブロックして、リガンドのＰＤ−１受容体への結合を干渉するもしくは阻害するか、またはＰＤ−１受容体を介する抑制性シグナル伝達を誘導することなくＰＤ−１受容体に直接結合し、それをブロックする化合物または作用物質が挙げられる。

【0359】

幾つかの実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、抑制性シグナル伝達をトリガーすることなくＰＤ−１受容体に直接結合し、ＰＤ−１受容体のリガンドにも結合して、リガンドがＰＤ−１受容体を介するシグナル伝達をトリガーするのを低減させるまたは阻害する。ＰＤ−１受容体に結合して抑制性シグナルの伝達をトリガーするリガンドの数及び／または量を低減させることによって、ＰＤ−１シグナル伝達により送達される負のシグナルによって減弱される細胞を減らし、より強固な免疫応答を実現することができる。

【0360】

ＰＤ−１シグナル伝達は、主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）によって提示されるペプチド抗原に近接するＰＤ−１リガンド（Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣなど）に結合することによって促進されると考えられている（例えば、Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，１０５：１０２７５−１０２７６（２００８）を参照されたい）。したがって、ＰＤ−１とＴ細胞膜上のＴＣＲとの共連結を防止するタンパク質、抗体、または小分子も有用なＰＤ−１アンタゴニストである。

【0361】

幾つかの実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、小分子アンタゴニストまたは抗体であって、ＰＤ−１のリガンドまたはＰＤ−１自体と結合することによって（とりわけ、かかる結合後にＰＤ−１とＴＣＲとの共連結が起こらない場合）ＰＤ−１受容体のシグナル伝達を低減させるまたは干渉し、それによってＰＤ−１受容体を介する抑制性シグナル伝達をトリガーしないようにするものである。本発明の方法によって企図される他のＰＤ−１アンタゴニストとして、ＰＤ−１またはＰＤ−１のリガンドに結合する抗体、及び他の抗体が挙げられる。

【0362】

適切な抗ＰＤ−１抗体として、米国特許第７３３２５８２号、第７４８８８０２号、第７５２１０５１号、第７５２４４９８号、第７５６３８６９号、第７９８１４１６号、第８０８８９０５号、第８２８７８５６号、第８５８０２４７号、第８７２８４７４号、第８７７９１０５号、第９０６７９９９号、第９０７３９９４号、第９０８４７７６号、第９２０５１４８号、第９３５８２８９号、第９３８７２４７号、第９４９２５３９号、第９４９２５４０号（これらのすべては、参照によりその全体が組み込まれている）に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0363】

Ｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１４：３０４４３０５１（２００８）もまた参照されたい。

【0364】

代表的な抗Ｂ７−Ｈ１（抗ＰＤ−Ｌ１とも呼ばれる）抗体として、米国特許第８３８３７９６号、第９１０２７２５号、第９２７３１３５号、第９３９３３０１号、及び第９５８０５０７号（これらのすべては、参照によりその全体が本明細書に明確に組み込まれている）に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0365】

抗Ｂ７−ＤＣ（抗ＰＤ−Ｌ２とも呼ばれる）抗体については、米国特許第７，４１１，０５１号、第７，０５２，６９４号、第７，３９０，８８８号、第８１８８２３８号、及び９２５５１４７号（これらのすべては、参照によりその全体が本明細書に明確に組み込まれている）を参照されたい。

【0366】

他の代表的なＰＤ−１受容体アンタゴニストとして、Ｂ７−ＤＣポリペプチド（これらの同族体及び変異体が含まれる）、ならびに前述のいずれかの活性フラグメント、及びこれらのいずれかを組み込んだ融合タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＩｇＧなどの抗体のＦｃ部分に連結されたＢ７−ＤＣの可溶性部分を含み、ヒトＢ７−ＤＣの膜貫通部分の全部または一部が組み込まれていない。

【0367】

ＰＤ−１アンタゴニストは、哺乳動物Ｂ７−Ｈ１のフラグメント、例えばマウスまたは霊長類、例えばヒトに由来するものであり得、ここでは、該フラグメントはＰＤ−１に結合し、それをブロックするが、ＰＤ−１を介する抑制性シグナル伝達をもたらさない。該フラグメントは、融合タンパク質、例えばＩｇ融合タンパク質の一部であることもできる。

【0368】

他の有用なポリペプチドのＰＤ−１アンタゴニストとして、ＰＤ−１受容体のリガンドに結合するものが挙げられる。これらとして、ＰＤ−１のリガンド、例えば、Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣに結合して内因性ＰＤ−１受容体との結合を防止し、それによって抑制性シグナル伝達を防止することができる、ＰＤ−１受容体タンパク質またはその可溶性フラグメントが挙げられる。Ｂ７−Ｈ１は、タンパク質Ｂ７．１に結合することも示されている（Ｂｕｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌ．２７，ｐｐ．１１１−１２２，（２００７））。かかるフラグメントはまた、天然のリガンドとの結合を増大させるＡ９９Ｌ変異などの変異を含む、ＰＤ−１タンパク質の可溶性ＥＣＤ部分を含む（Ｍｏｌｎａｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０５：１０４８３−１０４８８（２００８））。Ｂ７−Ｈ１リガンドに結合して内因性ＰＤ−１受容体との結合を防止し、それによって抑制性シグナル伝達を防止する、Ｂ７−１またはその可溶性フラグメントも有用である。

【0369】

ＰＤ−１及びＢ７−Ｈ１のアンチセンス核酸（ＤＮＡとＲＮＡの両方）ならびにｓｉＲＮＡ分子もＰＤ−１アンタゴニストであり得る。かかるアンチセンス分子は、Ｔ細胞上でのＰＤ−１の発現ならびにＢ７−Ｈ１、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２などのＴ細胞リガンドの産生を防止する。例えば、ポリエチレンイミンなどの担体と複合化されたｓｉＲＮＡ（例えば、約２１ヌクレオチド長のものであって、ＰＤ−１をコードするまたはＰＤ−１リガンドをコードする遺伝子に特異的であり、そのオリゴヌクレオチドを商業的に容易に購入することができるもの）（Ｃｕｂｉｌｌｏｓ−Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９（８）：２２３１−２２４４（２００９）を参照されたい）は、ＰＤ−１ならびにＰＤ−１のリガンドを発現する細胞によって容易に取り込まれ、これらの受容体及びリガンドの発現を低減させてＴ細胞における抑制性シグナル伝達の減少を実現し、それによってＴ細胞を活性化する。

【0370】

２．ＣＴＬＡ４アンタゴニスト
免疫応答におけるＴ細胞の作用を媒介するのに有用な他の分子は、追加的な治療用物質としても企図される。幾つかの実施形態では、該分子はＣＴＬＡ４のアンタゴニストであり、例えば拮抗的な抗ＣＴＬＡ４抗体である。本発明の方法に使用するために企図される抗ＣＴＬＡ４抗体の例として、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４３６９０（Ｆｉｓｃｈｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ／２００７／０５６５３９）に記載されるような抗体が挙げられる。

【0371】

抗ＰＤ−１、抗Ｂ７−Ｈ１、及び抗ＣＴＬＡ４抗体の投薬量は当技術分野で公知であり、例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内、またはより狭い範囲の１〜５０ｍｇ／ｋｇ、または１０〜２０ｍｇ／ｋｇであり得る。ヒト対象に適した用量は、５〜１５ｍｇ／ｋｇであり得、１０ｍｇ／ｋｇの抗体（例えば、ヒト抗ＰＤ−１抗体）が具体的な実施形態であり得る。

【0372】

本発明の方法に有用な抗ＣＴＬＡ４抗体の具体例は、例えば約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体であるイピリムマブ、及び例えば約１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体であるトレメリムマブである。２００９年１２月にオンライン公開されたＳａｍｍａｒｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｋｉｄｎｅｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，３（２）：１３５−１３７（２０１０）も参照されたい。

【0373】

他の実施形態では、アンタゴニストは小分子である。一連の小有機化合物が、Ｂ７−１リガンドに結合してＣＴＬＡ４との結合を防止することが示されている（Ｅｒｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：７３６３−７３６８（２００２）を参照されたい）。かかる小有機物を単独でまたは抗ＣＴＬＡ４抗体と組み合わせて投与すれば、Ｔ細胞の抑制性シグナル伝達を低減させることができると思われる。

【0374】

３．増強剤
幾つかの実施形態では、追加的治療用物質には増強剤が含まれる。増強剤は、おそらく２つ以上の機序によって免疫応答の上方制御因子の有効性を増大させるように働くが、正確な作用機序は本発明の幅広い実践には不可欠ではない。

【0375】

幾つかの実施形態では、増強剤はシクロホスファミドである。シクロホスファミド（ＣＴＸ、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））は、オキサアザホスホリン薬及び類似体、例えば、イホスファミド（ＩＦＯ、Ｉｆｅｘ）、ペルホスファミド、トロホスファミド（トロホスファミド；Ｉｘｏｔｅｎ）、ならびにそれらの医薬として許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、及び代謝産物である（米国特許出願第２００７０２０２０７７号、これはその全体が組み込まれている）。イホスファミド（ＭＩＴＯＸＡＮＡ（登録商標））はシクロホスファミドの構造類似体であり、その作用機序は、シクロホスファミドのものと同一または実質的に同様であると考えられる。ペルホスファミド（４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド）及びトロホスファミドもアルキル化剤であり、これらはシクロホスファミドに構造的に関係している。例えば、ペルホスファミドはＤＮＡをアルキル化し、それによってＤＮＡ複製ならびにＲＮＡ及びタンパク質合成を阻害する。選択性及び応答を向上させながら宿主毒性を低減させようとして、新規なオキサアザホスホリン誘導体が設計され、評価されてきた（Ｌｉａｎｇ Ｊ，Ｈｕａｎｇ Ｍ，Ｄｕａｎ Ｗ，Ｙｕ ＸＱ，Ｚｈｏｕ Ｓ．Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｎｅｗ ｏｘａｚａｐｈｏｓｐｈｏｒｉｎｅ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．２００７；１３（９）：９６３−７８．Ｒｅｖｉｅｗ）。これらには、マホスファミド（ＮＳＣ ３４５８４２）、グルホスファミド（Ｄ１９５７５、ベータ−Ｄ−グルコシルイソホスホルアミドマスタード）、Ｓ−（−）−ブロモホスファミド（ＣＢＭ−１１）、ＮＳＣ ６１２５６７（アルドホスファミドペルヒドロチアジン）、及びＮＳＣ ６１３０６０（アルドホスファミドチアゾリジン）が含まれる。マホスファミドは、４−ヒドロキシ−ＣＰＡの化学的に安定な４−チオエタンスルホン酸塩であるオキサアザホスホリン類似体である。グルホスファミドは、ＩＦＯのアルキル化代謝産物であるイソホスホルアミドマスタードがベータ−Ｄ−グルコース分子にグリコシド結合されたＩＦＯ誘導体である。さらなるシクロホスファミド類似体は、“Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ａｎａｌｏｇｓ ｕｓｅｆｕｌ ａｓ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ａｇｅｎｔｓ”と題された米国特許第５，１９０，９２９号に記載されている（これはその全体が参照により本明細書に組み込まれている）。

【0376】

ＣＴＸ自体は非毒性であるが、その代謝産物の幾つかは、ＤＮＡ架橋結合を誘導し、高用量で鎖を切断する、細胞傷害性アルキル化剤である。多くの細胞は、高レベルの解毒酵素アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）を発現するので、ＣＴＸに耐性を示す。リンパ球は低レベルしかＡＬＤＨを発現せず（造血幹細胞はそうではないが）、周期細胞はＤＮＡアルキル化剤に対して最も感受性が高いので、ＣＴＸは増殖中のリンパ球を標的にする。

【0377】

低用量のＣＴＸ（＜２００ｍｇ／ｋｇ）は、がんのヒト及びマウスモデルにおける抗腫瘍免疫応答の刺激を含めた、免疫刺激作用を有し得る（Ｂｒｏｄｅ＆Ｃｏｏｋｅ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１０９−１２６（２００８））。これらの低用量は治療に至らず、直接的な抗腫瘍活性を持たない。これに対して、高用量のＣＴＸは抗腫瘍応答を阻害する。幾つかの機序によって抗腫瘍免疫応答の増強におけるＣＴＸの役割を説明することができる。すなわち、（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの枯渇（具体的には増殖中のＴｒｅｇであり、これはとりわけ抑制性であり得る）、（ｂ）Ｂリンパ球の枯渇；（ｃ）一酸化窒素（ＮＯ）が誘導され、それにより腫瘍細胞増殖が抑制される；（ｄ）ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋ＭＤＳＣの動員及び増殖である。これらの一次作用は、数々の二次作用を有する。例えば、Ｔｒｅｇの枯渇の後にマクロファージが産生するＩＦＮ−γは多くなり、ＩＬ−１０は少なくなる。ＣＴＸは、Ｉ型ＩＦＮの発現を誘導し、リンパ球の恒常的増殖を促進することも示されている。

【0378】

Ｔｒｅｇの枯渇は、ＣＴＸが抗腫瘍免疫応答を増強する機序として最もよく挙げられる。この結論は、養子移入実験の結果に部分的に基づいている。ＡＢ１−ＨＡ腫瘍モデルでは、９日目にＣＴＸ処置すると７５％の治癒率が得られる。精製したＴｒｅｇを１２日目に移入するとＣＴＸの応答がほぼ完全に阻害された（ｖａｎ ｄｅｒ Ｍｏｓｔ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５８：１２１９−１２２８（２００９）。同様の結果がＨＨＤ２腫瘍モデルで観察され、ＣＴＸで前処置した後にＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇを養子移入すると、ワクチンに対する治療応答が排除された（Ｔａｉｅｂ，Ｊ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：２７２２−２７２９（２００６））。

【0379】

数々のヒト臨床試験によって、低用量のＣＴＸが安全であり、十分に許容性があり、抗腫瘍免疫応答を促進するのに有効な薬剤であることが実証されている（Ｂａｓ，＆ Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｏ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４７：１−１２（１９９８））。

【0380】

抗腫瘍免疫応答を増強するのに最適なＣＴＸの用量は、Ｔｒｅｇを通常範囲を下回るが治療に至らないレベルに下げることによってＴ細胞の総数を少なくするものである（Ｍａｃｈｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３６８９−３６９７（２００１）を参照されたい）。

【0381】

ＣＴＸを免疫増強剤として使用しているヒト臨床試験では、３００ｍｇ／ｍ^２の用量が通常使用されている。平均的な男性の場合（６フィート、１７０ポンド（７８ｋｇ）、体表面積１．９８ｍ^２）、３００ｍｇ／ｍ^２は、８ｍｇ／ｋｇ、または総タンパク質６２４ｍｇである。がんのマウスモデルでは、１５〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で有効性が見られており、これは３０ｇのマウスでは０．４５〜４．５ｍｇの総タンパク質に相当する（Ｍａｃｈｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３６８９−３６９７（２００１），Ｈｅｎｇｓｔ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４１：２１６３−２１６７（１９８１），Ｈｅｎｇｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４０：２１３５−２１４１（１９８０））。

【0382】

大型の哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトの患者などの場合、かかるｍｇ／ｍ^２用量を使用してもよいが、有限の時間にわたり投与される単位用量も使用してもよい。かかる単位用量は、最大３日間、または最大５日間、または最大７日間、または最大１０日間、または最大１５日間、または最大２０日間、または最大２５日間（すべて本発明によって明確に企図される）などの有限期間の間、日単位で投与されてもよい。同じレジメンが、本明細書に挙げられている他の増強剤に適用されてもよい。

【0383】

他の実施形態では、増強剤は、制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ）の活性及び／または数を減少させる薬剤、例えば、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、抗ＴＧＦβまたはイマチニブ（ＧＬＥＥＶＡＣ（登録商標））である。挙げられている治療レジメンは、アジュバントを投与することも含んでもよい。

【0384】

有用な増強剤として、有糸分裂阻害剤、例えばパクリタキセル、アロマターゼ阻害剤（例えばレトロゾール）、及び血管新生阻害剤（ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、アバスチン、ＶＥＧＦ−トラップ）（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００６ Ｎｏｖ １５；１２（２２）：６８０８−１６．を参照されたい）、アントラサイクリン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、ＴＬＲ４アンタゴニスト、ならびにＩＬ−１８アンタゴニストも挙げられる。

【0385】

Ｃ．抗菌薬
一実施形態では、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子は、上で考察したような疾患の治療または防止における防止的または予防的役割に使用することができ、また大きな火傷、開放骨折、事故による切断、または他の創傷のような重度の外傷性傷害の状況にも使用することができる。したがって、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子は、抗菌薬、例えば、抗生物質、抗真菌薬性、抗ウイルス薬、駆虫薬、または精油と組み合わせて対象に投与することができる。

【0386】

幾つかの実施形態では、対象は、さらなる細菌、真菌、またはウイルスによる合併症を防止するために、入院時にシグレック−１５結合分子及び／または抗菌薬を投与される。抗生物質は病原体を標的とし、シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子は免疫系を刺激して、さらなる感染症または疾患を治療または防止するために強化された応答をもたらすことができる。

【0387】

Ｄ．免疫抑制性作用物質
幾つかの実施形態では、シグレック−１５結合分子またはリガンド結合分子と免疫抑制薬である第２の作用物質とを対象に投与することによって、免疫応答、または炎症性／自己免疫性の疾患／障害が治療される。免疫抑制性作用物質として、他のリンパ球表面マーカー（例えば、ＣＤ４０、アルファ−４インテグリン）に対する抗体またはサイトカインに対する抗体）、融合タンパク質（例えば、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））、ＴＮＦＲ−Ｉｇ（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）））、ＴＮＦ−αブロッカー、例えば、Ｅｎｂｒｅｌ、Ｒｅｍｉｃａｄｅ、Ｃｉｍｚｉａ、及びＨｕｍｉｒａ、シクロホスファミド（ＣＴＸ）（すなわち、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、メトトレキサート（ＭＴＸ）（すなわち、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）、Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標））、ベリムマブ（すなわち、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標））、または他の免疫抑制薬物（例えば、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６様化合物、ラパマイシン化合物、またはステロイド）、抗増殖薬、細胞傷害性作用物質、または免疫抑制を促進し得る他の化合物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0388】

治療用物質は、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（アバタセプト）などのＣＴＬＡ−４融合タンパク質であり得る。ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ融合タンパク質は、抗原提示細胞上のＣＤ８０／ＣＤ８６（Ｂ７−１／Ｂ７−２）との結合に関してＴ細胞上の共刺激受容体ＣＤ２８と競合し、よってＴ細胞の活性化を阻害するように機能する。別の実施形態では、治療用物質は、ベラタセプトとして公知のＣＴＬＡ−４−Ｉｇ融合タンパク質である。ベラタセプトは、ＣＤ８６への結合活性をインビボで著しく増大させる２つのアミノ酸置換（Ｌ１０４Ｅ及びＡ２９Ｙ）を含有する。別の態様では、治療用物質はＭａｘｙ−４である。

【0389】

別の態様では、治療用物質はシクロホスファミド（ＣＴＸ）である。シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標）の一般名）は、シトホスファンとしても公知であり、オキサゾホリン群からのナイトロジェンマスタードアルキル化剤である。それは、様々なタイプのがん及び一部の自己免疫性障害を治療するために使用される。シクロホスファミド（ＣＴＸ）は、ループス腎炎を有する患者におけるびまん性増殖性糸球体腎炎に使用される主要な薬物である。

【0390】

治療用物質は、抗二本鎖ＤＮＡ（抗ｄｓＤＮＡ）自己抗体の血中または血清レベルの低減及び／または蛋白尿の低減をそれを必要とする患者にもたらすのに有効な量で投与することができる。

【0391】

別の実施形態では、治療用物質は、血清中のアデノシンの量を増加させる（例えば、ＷＯ０８／１４７４８２を参照されたい）。例えば、第２の治療用物質は、ＣＤ７３−Ｉｇ、組換えＣＤ７３、またはＣＤ７３の発現を増加させる他の作用物質（例えば、サイトカインまたはモノクローナル抗体または小分子）であり得る（例えば、ＷＯ０４／０８４９３３を参照されたい）。別の実施形態では、治療用物質はインターフェロン−ベータである。

【0392】

治療用物質は、タイサブリまたは他のＭＳ用治療薬であり得る。別の実施形態では、第２の治療用物質は慢性炎症を優先的に治療し、それによって治療レジメンは急性炎症と慢性炎症の両方を標的とする。好ましい実施形態では、第２の治療薬はＴＮＦ−αブロッカーである。

【0393】

治療用物質は、Ｔｈ１、Ｔｈ１７、Ｔｈ２２、及び／または炎症分子を分泌するもしくは他の細胞に分泌させる他の細胞（ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１、及びＭＭＰが挙げられるが、これらに限定されない）による分化、増殖、活性、及び／またはサイトカイン産生及び／または分泌を阻害するまたは低減させる小分子であり得る。別の実施形態では、治療用物質は、Ｔｒｅｇと相互作用する、Ｔｒｅｇの活性を強化する、ＴｒｅｇによるＩＬ−１０の分泌を促進もしくは強化する、Ｔｒｅｇの数を増加させる、Ｔｒｅｇの抑制能力を増大させる、またはそれらの組み合わせを行う小分子である。

【0394】

幾つかの実施形態では、組成物は、Ｔｒｅｇの活性または産生を増大させる。代表的なＴｒｅｇ増強剤として、糖質コルチコイドのフルチカゾン、サルメテロール；ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、及びＩＬ−４に対する抗体、ビタミンＤ３、及びデキサメタゾン、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0395】

幾つかの実施形態では、治療用物質は、抗体、例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、またはＩＬ−２１などの炎症誘発性分子に対する機能阻止抗体である。

【0396】

本明細書で使用される場合、「ラパマイシン化合物」という用語には、中性三環式化合物ラパマイシン、ラパマイシン誘導体、ラパマイシン類似体、及びラパマイシンと同じ作用機序（例えば、サイトカイン機能の阻害）を有すると思われる他のマクロライド化合物が含まれる。「ラパマイシン化合物」という言葉には、ラパマイシンと構造的類似性を有する化合物、例えば、同様の大環状構造を有する化合物であって、それらの治療有効性が強化されるように修飾されたものが含まれる。代表的なラパマイシン化合物は、当技術分野で公知である（例えば、ＷＯ９５１２２９７２、ＷＯ９５１１６６９１、ＷＯ９５１０４７３８、米国特許第６，０１５，８０９号；第５，９８９，５９１号；米国特許第５，５６７，７０９号；第５，５５９，１１２号；第５，５３０，００６号；第５，４８４，７９０号；第５，３８５，９０８号；第５，２０２，３３２号；第５，１６２，３３３号；第５，７８０，４６２号；第５，１２０，７２７号を参照されたい）。

【0397】

「ＦＫ５０６様化合物」という言葉には、ＦＫ５０６、ならびにＦＫ５０６誘導体及び類似体、例えば、ＦＫ５０６と構造的類似性を有する化合物、例えば、同様の大環状構造を有する化合物であって、それらの治療有効性が強化されるように修飾されたものが含まれる。ＦＫ５０６様化合物の例として、例えば、ＷＯ００１０１３８５に記載されるものが挙げられる。好ましくは、「ラパマイシン化合物」という言葉には、本明細書で使用される場合、ＦＫ５０６様化合物は含まれない。

【0398】

Ｅ．抗炎症薬
他の適切な治療用物質として、抗炎症剤が挙げられるが、これらに限定されない。抗炎症剤は、非ステロイド系、ステロイド系、またはそれらの組み合わせであり得る。一実施形態は、約１％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）、典型的には約２．５％（ｗ／ｗ）の抗炎症剤を含有する経口組成物を提供する。非ステロイド系抗炎症剤の代表的な例として、限定されるものではないが、オキシカム、例えば、ピロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、スドキシカム；サリチレート、例えば、アスピリン、ジサルシド、ベノリラート、トリリサート、サファプリン（ｓａｆａｐｒｙｎ）、ソルプリン、ジフルニサル、及びフェンドサール；酢酸誘導体、例えば、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、イソキセパク、フロフェナク、チオピナク、ジドメタシン、アセメタシン、フェンチアザク、ゾメピラク、クリンダナク（ｃｌｉｎｄａｎａｃ）、オキセピナク、フェルビナク、及びケトロラク；フェナム酸、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルミン酸、及びトルフェナム酸；プロピオン酸誘導体、例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、インドプロフェン、ピルプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、ミロプロフェン、チオキサプロフェン、スプロフェン、アルミノプロフェン、及びチアプロフェン酸；ピラゾール、例えば、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェプラゾン、アザプロパゾン、及びトリメタゾンが挙げられる。これらの非ステロイド系抗炎症剤の混合物も使用してもよい。

【0399】

ステロイド系抗炎症剤の代表的な例として、限定されるものではないが、副腎皮質ステロイド、例えば、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシルトリアムシノロン、アルファ−メチルデキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、吉草酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、酢酸デスオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、ジクロリソン、二酢酸ジフロラゾン、ジフルコルトロン吉草酸エステル、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロコルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン（フルプレドニリデン）、フルランドレノロン、ハルシノニド、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルオロゾン、フルラドレノロン、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルロゾン、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾン及びそのエステルの残部、クロロプレドニゾン、酢酸クロルプレドニゾン（ｃｈｌｏｒｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ）、クロコルトロン、クレシノロン、ジクロリソン、ジフルプレドナート、フルクロニド、フルニソリド、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンシクロペンチルプロピオネート、ハイドロコルタメート、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、トリアムシノロン、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0400】

Ｖ．診断法
シグレック−１５結合分子、特に抗体及びその抗原結合フラグメントは、例えば、疾患、障害、もしくはシグレック−１５の発現に関連する感染症を検出、診断、もしくはモニタリングするための、または適切な患者集団もしくはプロファイルの決定もしくは識別を決定もしくは支援するための診断目的に使用することができる。該方法のいずれも、対象を治療する方法、例えば、有効量の１種類または複数種類の治療的シグレック−１５結合分子を対象に投与することによる方法と連結させることができる。

【0401】

がんを含めた（これに限定されない）疾患、障害、または感染症の検出または診断は、（ａ）対象の細胞、血清、血漿、血液、または組織試料（例えば、腫瘍試料）におけるシグレック−１５またはその誘導体の発現を、かかる抗原に免疫特異的に結合する１種類または複数種類の抗体（またはそのフラグメント）を使用してアッセイすること；及び（ｂ）該抗原のレベルを対照レベル、例えば、正常組織試料におけるレベルと比較し、それによって、抗原の対照レベルと比較したときの抗原のアッセイレベルの増加を、疾患、障害、または感染症の指標とすることを含むことができる。かかる抗体及びフラグメントは、イムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）に用いることができる。

【0402】

幾つかの実施形態では、該抗体またはフラグメントは、インビトロもしくはインサイツ組織試料の細胞におけるまたはインビボでのＩＨＣ分析に使用される。よって、該抗体及びフラグメントは、ヒトにおける疾患、障害、または感染症の検出及び診断に使用することができる。一実施形態では、かかる診断は、ａ）有効量のかかる標識抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与すること（例えば、非経口的に、皮下に、または腹腔内に）；ｂ）投与後、対象内のシグレック−１５が発現している部位に標識分子を優先的に集中させる（及び非結合標識分子をバックグラウンドレベルまで除去する）ことができる時間間隔を置くこと；ｃ）バックグラウンドレベルを決定すること；ならびにｄ）バックグラウンドレベルを上回るまたは下回る標識抗体の局所的検出から、対象が疾患、障害、もしくは感染症を有していることが示唆されるように、及び／またはシグレック−１５＋組織の場所及び相対的発現レベルが示されるように、対象において標識抗体を検出することを含む。この実施形態によれば、該抗体は、当業者に公知の造影システムを使用してインビボで検出可能な造影成分で標識することができる。バックグラウンドレベルは、検出された標識分子の量を特定のシステムで予め決定された標準値と比較することを含めた様々な方法によって決定することができる。

【0403】

他の方法は、例えば、（ａ）最初の時点及びその後の時点で得られた対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現を、シグレック−１５結合分子を使用してアッセイすること、ならびに（ｂ）最初の時点及びその後の時点での対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現レベルを比較することによって、疾患、障害、または感染症の進行をモニタリングすることを含み、ここで、その後の時点でアッセイされたシグレック−１５のレベルの、最初の時点と比較した増加が、疾患、障害、または感染症の進行の指標である。

【0404】

治療に対する応答をモニタリングするための方法は、（ａ）シグレック−１５結合分子を使用して、治療の前後での対象の細胞中または組織試料中のシグレック−１５の発現をアッセイすること；及び（ｂ）シグレック−１５の経時的なレベルを比較することを含むことができ、それによる、治療前のシグレック−１５のレベルと比較した治療後のシグレック−１５のアッセイレベルの減少が、治療に対する好適な応答の指標である。

【0405】

対象のサイズ及び使用される造影システムが、診断画像を生成するのに必要とされる造影成分の分量を決定することが、当技術分野において理解されよう。

【0406】

使用される標識のタイプ及び投与様式を含めた幾つかの変動要素に応じて、投与後の、対象内の部位に標識分子を優先的に集中させ、かつ非結合標識分子をバックグラウンドレベルまで除去することができる時間間隔は、６〜４８時間、または６〜２４時間、または６〜１２時間である。別の態様では、投与後の時間間隔は、５〜２０日間、または５〜１０日間である。

【0407】

一実施形態では、疾患、障害、または感染症のモニタリングは、疾患、障害、または感染症を診断するための方法を、例えば、初期診断から１か月後、初期診断から６か月後、初期診断から１年後などに繰り返すことによって実施される。

【0408】

標識分子の存在は、インビボでの走査について当技術分野で公知の方法を使用して対象内で検出することができる。これらの方法は、使用される標識のタイプに依存する。当業者であれば、特定の標識を検出するための適正な方法を決定することができるであろう。診断法に使用することができる方法及びデバイスとして、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、全身走査、例えば、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、及び超音波検査が挙げられるが、これらに限定されない。

【0409】

特定の実施形態では、分子は放射性同位体で標識され、放射線に応答する外科用機器を使用して患者内で検出される（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，４４１，０５０号）。別の実施形態では、分子は蛍光化合物で標識され、蛍光に応答する走査機器を使用して患者内で検出される。別の実施形態では、分子は陽電子放出金属で標識され、ポジトロン断層撮影を使用して患者内で検出される。さらに別の実施形態では、分子は常磁性標識で標識され、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者内で検出される。

【0410】

ＶＩ．キット
開示されるシグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子は、アンプルまたは小袋などの分量を示す密閉容器内に包装することができる。該分子は、乾いた滅菌凍結乾燥粉末または無水濃縮物として密閉容器内で供給することができ、例えば、水または生理食塩水で再構成して対象への投与に適正な濃度にすることができる。例えば、該分子は、乾いた滅菌凍結乾燥粉末として密封容器内に、少なくとも５ｍｇ、または少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、もしくは少なくとも７５ｍｇの単位投薬量で供給することできる。凍結乾燥分子は、その元々の容器内に２〜８℃で保存することができ、典型的には、再構成した後、１２時間以内、または６時間以内、または５時間以内、または３時間以内、または１時間以内に投与される。

【0411】

代替実施形態では、分子は、分量及び濃度を示す密閉容器内に液体形態で供給される。幾つかの実施形態では、液体形態の分子は、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌの該分子を含む密閉容器内で供給される。

【0412】

シグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子が充填された１つまたは複数の容器を含む、医薬パック及びキットも提供される。加えて、疾患の治療に有用な１種類または複数種類の他の予防用または治療用物質を医薬パックまたはキットに含むこともできる。医薬パックまたはキットは、開示される医薬組成物の成分の１つまたは複数が充填された１つまたは複数の容器を含むこともできる。任意で、かかる容器（複数可）には、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する行政機関によって規定された形式で、ヒト投与に関する製造、使用、または販売についての行政機関による承認を反映した注意書きが添付されてもよい。

【0413】

上記の方法のために設計されたキットも提供される。実施形態は、典型的には、１種類または複数種類のシグレック−１５結合分子またはシグレック−１５リガンド結合分子を含む。特定の実施形態では、キットは、がんの治療に有用な１種類または複数種類の他の予防用または治療用物質も１つまたは複数の容器内に含む。

【実施例】

【0414】

実施例１：シグレック−１５抗体、ならびにその重鎖及び軽鎖の配列
材料及び方法
マウス抗ヒトシグレック−１５モノクローナル抗体
シグレック−１５ノックアウトマウス（ｎ＝２）を、ＣＦＡ（フロインド完全アジュバント）で乳化したｈＳ１５．ｍＩｇ（マウスＩｇＧ２ａと融合させたヒトシグレック１５細胞外ドメイン［ＥＣＤ］）で免疫化した。マウスには、ＧＭ−ＣＳＦ及び抗ＣＤ４０も注射した。マウスに同じ免疫原を２週間後に抗原投与した。尾部採血から収集した血清を、ｈＳ１５．ｈＩｇ（ヒトＩｇＧ１と融合させたヒトシグレック１５ ＥＣＤ）でコーティングされたＥＬＩＳＡプレート中で１：１０００から最大１：１００，０００，０００までの様々な希釈度で検査することによって、抗血清力価を評価した。図１から、抗ｈＳ１５抗体が＞１：１００，０００の希釈度で検出されたことが示される。マウスは、２週間後に３度目の抗原投与を受けた。最終の追加免疫から３日後に、マウスの脾細胞を採取し、１０％ＦＢＳ及びグルタミンを補充したＲＰＭＩに再懸濁させ、その後融合してハイブリドーマを形成させた。

【0415】

シグレック−１５ノックアウト（Ｓ１５ ＫＯ）脾細胞の電気融合
融合細胞をメチルセルロースゲル／培地中に蒔いた。残った融合細胞は凍結保存し、それらは別の回のクローニングのために解凍することができる。単一のクローンを選択し、１０×９６ウェルプレート（９６０クローン）に入れた。上清を２週間後に収集した。

【0416】

ＲＡＣＥ
重鎖及び軽鎖のＲＡＣＥ（ｃＤＮＡ末端の迅速増幅法）同定は、以下のプロトコルに従って実施した：（１）ｍＲＮＡ変性、（２）ｃＤＮＡ合成、（３）５’ＲＡＣＥ反応、（４）ＰＣＲの結果を解析する（アガロースゲル上で行って増幅されたＤＮＡフラグメントを可視化する−正しい抗体可変領域ＤＮＡフラグメントのサイズは５００〜７００塩基対であるはずである）、（５）ＰＣＲ陽性バンドをＴＯＰＯでクローニングする、（６）ＴＯＰＯクローンをＰＣＲ増幅し、その後ゲル電気泳動及びアガロースゲルから回収を行う、（７）合計２１８個のクローンを配列決定する、（８）配列決定データを使用してＣＤＲ解析を実施する（ＣＤＲ領域は、ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇを通じて利用可能なＶＢＡＳＥ２を使用して定めた）。

【0417】

結果
抗体は、ＲＡＣＥ法を使用してクローニングした。２１８個のクローン化ＤＮＡフラグメントを配列決定した後、抗体配列解析によって、１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、６Ａ、２８Ａ、６３Ａ、７１Ａ、７７Ａ、８０Ａ、８２Ｂ、８３Ｂ、９２Ａ、９３Ｂ、９９Ｂ、１０４Ｂ、及び１０５Ａと本明細書で呼ばれる２４個の抗体試料に、１本の重鎖及び１本の軽鎖が同定された。これらの配列は、下記または上記に示されている。重鎖及び軽鎖の配列及びＣＤＲは、上記、下記、及び図２Ａ〜３Ｃに示されている。

【0418】

１Ｂ２配列：
１Ｂ２ ＶＬアミノ酸配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｂ２ ＶＬヌクレオチド配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｂ２ ＶＨアミノ酸配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｂ２ ＶＨヌクレオチド配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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【0419】

１Ｃ３配列：
１Ｃ３ ＶＬアミノ酸配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｃ３ ＶＬヌクレオチド配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｃ３ ＶＨアミノ酸配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｃ３ ＶＨヌクレオチド配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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【0420】

１Ｈ３配列
１Ｈ３ ＶＬアミノ酸配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｈ３ ＶＬヌクレオチド配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｈ３ ＶＨアミノ酸配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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１Ｈ３ ＶＨヌクレオチド配列（ＦＡＳＴＡフォーマット）

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【0421】

１Ｃ１２配列：
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【0422】

３Ｈ１０配列：
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【0423】

５Ｇ１２配列：
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【0424】

６Ｆ８配列：
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【0425】

８Ｃ８配列：
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【0426】

８Ｈ８配列：
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【0427】

９Ａ５配列：
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【0428】

１０Ｇ９配列：
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【0429】

６Ａ配列：
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【0430】

２８Ａ配列：
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【0431】

６３Ａ配列：
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【0432】

７１Ａ配列：
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【0433】

７７Ａ 配列：
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【0434】

８０Ａ配列：
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【0435】

８２Ｂ配列：
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【0436】

８３Ｂ配列：
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【0437】

９２Ａ配列：
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【0438】

９３Ｂ配列：
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【0439】

９９Ｂ配列：
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【0440】

１０４Ｂ配列：
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【0441】

１０５Ａ配列：
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【0442】

実施例２：抗ｈｕＳ１５抗体はヒトＳ１５またはマウスＳ１５を発現している細胞に結合する
材料及び方法
ヒト２９３Ｔ及びマウスＣＲＣ ＭＣ３８腫瘍細胞株を、ヒトシグレック１５またはマウスシグレック１５を担持するレンチウイルスベクターで形質導入した。細胞を選別して、ヒトＳ１５及びマウスＳ１５安定細胞株を確立した。２９３Ｔ．ｈＳ１５及びＭＣ３８．ｍＳ１５安定細胞をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、インキュベーション前にＦｃ受容体を精製シグレック−１５ ｍＡｂでブロックした。ＦＡＣＳ緩衝液１００μＬ中の１Ｅ０５細胞を別々のチューブに分取し、１μｇの精製ｍＡｂを添加した。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、次いで過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、０．００５μｇの抗マウスＩｇＧ−ＰＥ二次抗体を試料に添加し、３０分間インキュベートし、過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を固定用緩衝液中で固定し、その後フローサイトメトリーによって分析した。

【0443】

該アッセイを図４Ａに示す。

【0444】

結果
１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２、１Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９（図４Ｂ）、及び６Ａ（ＮＣ６）、２８Ａ（ＮＣ２８）、６３Ａ（ＮＣ６３）、７１Ａ（ＮＣ７１）、ＮＣ７４、７７Ａ（ＮＣ７７）、８０Ａ（ＮＣ８０）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、８３Ｂ（ＮＣ８３）、ＮＣ８７、９２Ａ（ＮＣ９２）、９３Ｂ（ＮＣ９３）、９９Ｂ（ＮＣ９９）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４）、１０５Ａ（ＮＣ１０５）（図４Ｃ）を含めた抗ｈｕＳ１５抗体を、ヒトＳ１５またはマウスＳ１５を発現する細胞との結合について試験した。その結果を図４Ｂ〜４Ｃに示す。

【0445】

１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｃ１２、１Ｈ３、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、及び６Ａ（ＮＣ６）、２８Ａ（ＮＣ２８）、６３Ａ（ＮＣ６３）、７７Ａ（ＮＣ７７）、８０Ａ（ＮＣ８０）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、８３Ｂ（ＮＣ８３）、９２Ａ（ＮＣ９２）、９３Ｂ（ＮＣ９３）、９９Ｂ（ＮＣ９９）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４）、または１０５Ａ（ＮＣ１０５）を含めた抗ｈｕＳ１５抗体を、ホルマリン固定細胞との結合についても試験した。その結果を図４Ｄに示す。

【0446】

実施例３：精製抗体はマウス及びヒトシグレック−１５に結合する
材料及び方法
・ Ｓ１５−ＴＭを一過性にトランスフェクトした２９３Ｔ細胞（Ｏｐｅｒｅｔｔａ）
・ Ｓ１５−ＴＭを一過性にトランスフェクトしたＫ５６２細胞（ＦＡＣＳ）
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ系を使用して２９３Ｔ細胞にマウスシグレック−１５プラスミドＤＮＡを一過性にトランスフェクトし、電気穿孔法によってＫ５６２細胞にヒトシグレック−１５プラスミドＤＮＡをトランスフェクトした。ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％の血清を含有するＰＢＳ）１００ｕｌ中の１ｅ５トランスフェクト細胞を別々のチューブに分取し、１ｕｇの精製ｍＡｂを添加した。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、次いで過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を１００ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、０．００５ｕｇの抗マウスＩｇＧ−ＰＥ二次抗体を試料に添加し、３０分間インキュベートし、過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を固定用緩衝液（ＰＢＳ中２％ホルムアルデヒド）中で固定し、その後フローサイトメトリーによって分析した。

【0447】

Ｕ８７細胞をＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、Ｆｃ受容体をインキュベーション前に精製シグレック−１５ ｍＡｂでブロックした。ＦＡＣＳ緩衝液１００ｕｌ中の１ｅ５細胞を別々のチューブに分取し、１ｕｇの精製ｍＡｂを添加した。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、次いで過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を１００ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、０．００５ｕｇの抗マウスＩｇＧ−ＰＥ二次抗体を試料に添加し、３０分間インキュベートし、過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を固定用緩衝液中で固定し、その後フローサイトメトリーによって分析した。

【0448】

結果
精製抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９を、２９３Ｔ細胞（ヒト胎児腎細胞２９３の高度にトランスフェクト可能な誘導体）によって発現されるマウスシグレック−１５（ｍＳ１５）及びＫ−５６２細胞（終末期急性転化における慢性骨髄性白血病を有する５３才女性の胸水）によって発現されるヒトシグレック−１５（ｈＳ１５）との結合について試験した。その結果を図５Ａ〜５Ｃに示す。

【0449】

精製抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、１０Ｇ９、及び５Ｆ１０を、ヒトシグレック−１５（ｈＳ１５）を内因的に発現するヒトＵ８７神経膠腫細胞との結合についても試験した。その結果を図６Ａ〜６Ｃに示し、これらは、それぞれの抗体についてのｈＳ１５＋細胞の百分率（図６Ａ及び６Ｃ）及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）（図６Ｂ）をそれぞれ示す。

【0450】

実施例４：抗シグレック−１５抗体はシグレック−１５の機能をブロックすることができる
材料及び方法
ｈＳ１５．ｈＧ１の製造
ＩｇＧ骨格に融合された完全なＳ１５細胞外ドメインを含む単量体Ｓ１５融合タンパク質を調製して親和性及び競合分析を行った。トロンビン切断可能なｈＳ１５．ｈＦｃ ｃＤＮＡをｐＥＥ１７．４にサブクローニングした。３７℃では、断片化した融合タンパク質は一過性にトランスフェクトしたＣＨＯ細胞には見られるが、２９３細胞には見られない。インタクトな融合タンパク質は、３１℃の方が効率的に発現する。
該融合タンパク質は、以下の配列を有する：

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【0451】

シグナル配列が切断された成熟融合タンパク質は以下の通りである：

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【0452】

マウスのリーダー配列を下線で示す。シグレック−１５細胞外ドメイン（ＥＣＤ））は斜字体である。ヒンジ領域には二重下線を引く。残りの配列はＩｇＧ１ Ｆｃに由来する。ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン中のＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ変異は、点線の下線を引いた太字である。

【0453】

ブロッキング分析
２９３Ｔ．ＬＲＲＣ４Ｃ細胞を２ラウンドのレンチ−ＬＲＲＣ４Ｃ形質導入によって確立した。

【0454】

２９３Ｔ．ＬＲＲＣ４Ｃ安定細胞をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、インキュベーション前にＦｃ受容体をブロックした。ＦＡＣＳ緩衝液１００μＬ中の１Ｅ０５細胞を別々のチューブに分取し、２μｇの精製ｍＡｂを最初に添加し、続いて０．２ｕｇのｈシグレック−１５ｈＦｃを添加した。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、次いで過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液１００μＬに再懸濁させ、０．００５μｇの抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ二次抗体を試料に添加し、３０分間インキュベートし、過剰なＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を固定用緩衝液で固定し、その後フローサイトメトリーによって分析して、シグレック−１５のＬＲＲＣ４Ｃへの結合を判定した。

【0455】

１μｇ／ｍＬのｈＳ１５．ｈＧ１＋１００μＬまたは３３μｇ／ｍＬのＣｌ＃３、＃１の上清（ｓｕｐ）

【0456】

このアッセイを図７Ａに示す。

【0457】

結果
結果を図７Ｂ〜７Ｅに示す。
・ Ｓ１５／ＬＲＲＣ４Ｃ相互作用の完全なブロッカーとして、以下が挙げられる（これらに限定されない）：
ｏ ５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、１Ｃ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、１Ｂ２
・ 部分的ブロッカーとして、以下が挙げられる（これらに限定されないが）：
ｏ １０Ｇ９、８Ｈ８、９Ａ５

【0458】

実施例５：Ｓ１５ ｍＡｂはｈＳ１５．ｈＧ１によって媒介されるヒトＴ細胞の抑制を逆転させる
材料及び方法
ＰＢＭＣ増殖アッセイ
・ 抗ＣＤ３ ０．０５μｇ／ｍＬでコーティング
・ 全ヒトＰＢＭＣ＋／−５μｇ／ｍＬのｈＳ１５．ｈＦｃ及び１２μｇ／ｍＬのシグレック−１５ ｍＡｂ、または示した通りの対照
抗ヒトＣＤ３（クローンＯＫＴ３）を、９６ウェルの平底組織培養プレートのウェル当たり０．０３μｇ／ｍＬ（１００μＬのＰＢＳ中）で、４℃で一晩コーティングした。ＰＢＳ及び結合しなかったＣＤ３を、アッセイ用成分を添加する直前に吸引した。健康なヒトドナーに由来する全ＰＢＭＣを、３７℃のＲＰＭＩ−完全培地（１０％ＦＢＳを含有する）中で１０分間、５μＭのＣＦＳＥで標識し、２回洗浄した後に、２．５Ｅ０５細胞／ウェルの濃度でウェルに添加するために再懸濁させた。可溶性ｈシグレック−１５ｈＦｃまたは対照を５μｇ／ｍｌの最終濃度でウェルに添加しながら、精製シグレック−１５ ｍＡｂまたは対照を１２μｇ／ｍｌの最終濃度でウェルに添加した。プレートを３７℃のＣＯ_２インキュベーターで７２時間インキュベートした。少量の上清をサイトカイン分析用に取り出した後、細胞を丸底プレートに移し、Ｆｃ受容体をブロックし、細胞をＣＤ４及びＣＤ８蛍光ｍＡｂで３０分間４℃で染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、続いてフローサイトメトリーによる分析のために固定した。馴化上清中のＩＦＮガンマレベルをＭＳＤ ＥＬＩＳＡキットによって評価した。

【0459】

このアッセイを図８Ａ及び９Ａに示す。

【0460】

結果
精製抗体１Ｂ２、１Ｃ３、１Ｈ３、１Ｃ１２、３Ｈ１０、５Ｇ１２、６Ｆ８、８Ｃ８、８Ｈ８、９Ａ５、及び１０Ｇ９（図８Ｂ、８Ｃ、８Ｄ、及び８Ｅ）、ならびに６Ａ（ＮＣ６）、２８Ａ（ＮＣ２８）、６３Ａ（ＮＣ６３）、７７Ａ（ＮＣ７７）、８０Ａ（ＮＣ８０）、８２Ｂ（ＮＣ８２）、８３Ｂ（ＮＣ８３）、９２Ａ（ＮＣ９２）、９３Ｂ（ＮＣ９３）、９９Ｂ（ＮＣ９９）、１０４Ｂ（ＮＣ１０４）、１０５Ａ（ＮＣ１０５）（図８Ｆ及び８Ｇ）をＰＢＭＣ増殖アッセイで試験した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞をゲートし、細胞分裂（増殖）の尺度としてのＣＦＳＥ希釈について分析した。希釈の増加によって、細胞増殖が増えたことが示された。その結果から、特定のＳ１５ ｍＡｂはｈＳ１５．ｈＧ１に媒介されるヒトＴ細胞の抑制を逆転させることができることが示される。

【0461】

しかし、ｈＳ１５とＬＲＲＣ４Ｃとの相互作用のブロッキングは、Ｔ細胞機能の強化と相関しない。その結果を図８Ｈ及び８Ｉに示す。

【0462】

Ｓ１５ ｍＡｂは、ｈＳ１５．ｈＧ１に媒介される、ヒトＴ細胞におけるＩＦＮγ産生の減少を逆転させることが確認された。その結果を図９Ｂに示す。

【0463】

実施例６：Ｓ１５ ｍＡｂは破骨細胞形成をブロックすることができる
材料及び方法
新鮮なＰＢＭＣを単離し、単球を２通りの方法：ＭＡＣＳカラム選別（図１０、左側の図）；または無血清培地でのプラスチックとの結合（図１０、右側の図）で富化した。

【0464】

細胞をＭ−ＣＳＦ及びＲＡＮＫＬと共に８日間、２５Ｅ９またはＳ１５ ｍＡｂと共に培養し、ＴＲＡＰ（酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ）についてアッセイした。

【0465】

結果
図１５に示す結果から、Ｓ１５ ｍＡｂが破骨細胞形成をブロックすることができることが示される。

【0466】

実施例７：ヒト化５Ｇ１２抗体
クローン５Ｇ１２をヒト化すると、３つのヒト化重鎖及び５つのヒト化軽鎖が得られた（図１２Ａ及び１２Ｂ）。
５Ｇ１２ ｈＶＬｌ

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５Ｇ１２ ｈＶＬ１のＣＤＲ１

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５Ｇ１２ ｈＶＬ１のＣＤＲ２
ＲＡＮＲＬＶＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）
５Ｇ１２ ｈＶＬ１のＣＤＲ３
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）
５Ｇ１２ ｈＶＬ２

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５Ｇ１２ ｈＶＬ２のＣＤＲ１

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５Ｇ１２ ｈＶＬ２のＣＤＲ２
ＲＡＮＲＬＶＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）
５Ｇ１２ ｈＶＬ２のＣＤＲ３
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）
５Ｇ１２ ｈＶＬ３

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５Ｇ１２ ｈＶＬ３のＣＤＲ１

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５Ｇ１２ ｈＶＬ３のＣＤＲ２
ＲＡＮＲＬＶＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）
５Ｇ１２ ｈＶＬ３のＣＤＲ３
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）
５Ｇ１２ ｈＶＬ４

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５Ｇ１２ ｈＶＬ４のＣＤＲ１

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５Ｇ１２ ｈＶＬ４のＣＤＲ２
ＲＡＮＲＬＶＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）
５Ｇ１２ ｈＶＬ４のＣＤＲ３
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）
５Ｇ１２ ｈＶＬ５

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５Ｇ１２ ｈＶＬ５のＣＤＲ１

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５Ｇ１２ ｈＶＬ５のＣＤＲ２
ＲＡＮＲＬＴＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２）
５Ｇ１２ ｈＶＬ５のＣＤＲ３
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）
５Ｇ１２ ｈＶＨ１

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５Ｇ１２ ｈＶＨ１のＣＤＲ１
ＳＹＷＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４）
５Ｇ１２ ｈＶＨ１のＣＤＲ２

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５Ｇ１２ ｈＶＨ１のＣＤＲ３

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５Ｇ１２ ｈＶＨ２

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ｈＶＨ２のＣＤＲ１
ＳＹＷＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４）
ｈＶＨ２のＣＤＲ２

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ｈＶＨ２のＣＤＲ３

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５Ｇ１２ ｈＶＨ３

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５Ｇ１２ ｈＶＨ３のＣＤＲ１
ＳＹＷＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０８）
５Ｇ１２ ｈＶＨ３のＣＤＲ２

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５Ｇ１２ ｈＶＨ３のＣＤＲ３

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【0467】

実施例８：膜結合Ｓ１５は免疫抑制性である
材料及び方法
ＰＭＢＣのＴ細胞の抑制をインビトロでアッセイする方法：
健康的なドナーのアフェレーシスに由来する多白血球製品（ＫｅｙＢｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮ）から、標準的なフィコール勾配操作によって末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を採取し、その後凍結保存した。アッセイ当日に、凍結したＰＢＭＣを解凍し、ＲＰＭＩ完全培地（ＲＰＭＩ−Ｃ、ＲＰＭＩ［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ］＋１０％ＦｅｔａｌＣｌｏｎｅ ＩＩＩ血清［ＨｙＣｌｏｎｅ］）で洗浄し、計数した。細胞をＲＰＭＩ−Ｃ中５μＭのＣＦＳＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で１０分間３７℃で標識し、その後ＲＰＭＩ−Ｃで２回洗浄した。予め抗ヒトＣＤ３（ＯＫＴ３、５０ｎｇ／ｍＬ；ｅＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）で一晩４℃でコーティングされた９６ウェル平底Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒプレート中に、全ＰＭＢＣ（３Ｅ０５細胞／ウェル）を蒔いた。シグレック−１５ ｈＧ１ Ｆｃ融合タンパク質を、示した通りの最終濃度でウェルに添加した。細胞を３７℃で７２時間培養した。７２時間目に、サイトカインレベルの分析用に、５０μＬの上清をウェルから採取し、直ちに凍結させた。次いで細胞を各ウェルからピペット操作によって採取し、フローサイトメトリー染色及び分析用に丸底プレートに移した。Ｆｃ受容体をＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（２μＬ／ウェル；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、続いてＣＤ４に対する抗体（ＡＰＣ−ｅＦｌｕｏｒ ７８０（２μＬ／ウェル；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ））及びＣＤ８に対する抗体（ｅＦｌｕｏｒ ４５０（２μＬ／ウェル；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ））で、４℃で１時間染色した。インキュベーション後に、プレートをＦＡＣＳ緩衝液（１％のＦｅｔａｌＣｌｏｎｅ ＩＩＩ血清を含有するＰＢＳ）で２回洗浄した。細胞を１５０μＬの固定用緩衝液（ＰＢＳ中３％ホルムアルデヒド）に再懸濁させ、ＹＥＴＩフローサイトメーター（Ｐｒｏｐｅｌ Ｌａｂｓ）で分析した。データをＦｌｏｗＪｏで分析した。データは、ＣＦＳＥ希釈に基づく分裂した細胞の、刺激されていないＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞と比較した百分率として表示されている。上清を、Ｕ−ＰＬＥＸキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ［ＭＳＤ）］）を用いて、使用説明書に従ってＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−６について分析した。Ｕ−ＰＬＥＸは、Ｍｅｓｏ ＱｕｉｃｋＰｌｅｘ ＳＱ １２０機器を使用して読み取った。

【0468】

結果
膜結合Ｓ１５は免疫抑制性である。図１４Ａは、ヒトＳ１５ Ｆｃ（μｇ／ｍＬ）に対するＴ細胞の増殖（％）の線グラフであり、Ｓ１５ Ｆｃの濃度が増加するにつれてＴ細胞の増殖（％）が減少することを示している。ヒトＰＢＭＡは、ＣＦＳＥで標識し、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）でコーティングした９６ウェルプレートに添加し、指定濃度でのヒトＳ１５ Ｆｃ融合タンパク質と共に３日間培養した。図１４Ｂは、０または５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃで処置した細胞からの馴化上清中のＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフである。図１４Ｃは、０または５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃで処置した細胞からの馴化上清中のＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフである。図１４Ｄは、０または５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃで処置した細胞からの馴化上清中のＩＬ−６（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフである。

【0469】

実施例９：ハイブリドーマから精製されたｓ１５ ｍＡｂの、ヒトＳ１５またはマウスｓ１５を発現する細胞への結合
材料及び方法
ヒトＳ１５を安定に発現する２９３Ｔ細胞（２９３Ｔ．ｈＳ１５）及びマウスＳ１５を安定に発現するマウスＭＣ３８細胞（ＭＣ３８．ｍＳ１５）を組織培養物から採取した。ＰＢＳで１回洗浄した後、染色するために細胞を９６ウェルＵ底プレートに播種した（５Ｅ０４細胞／ウェル）。細胞を最初にマウスハイブリドーマから精製した１μｇの指定抗体とＦＡＣＳ染色用緩衝液（１％のＦｅｔａｌＣｌｏｎｅ ＩＩＩ血清を含有するＰＢＳ）中で混合し、氷上で３０分間インキュベートした。次いで細胞をＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄し、続いてＰＥコンジュゲート抗マウスＩｇ抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄し、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させた後、ＹＥＴＩフローサイトメーター（Ｐｒｏｐｅｌ Ｌａｂｓ）で分析した。データをＦｌｏｗＪｏで分析した。データは、前方散乱（ＦＳＣ）及び側方散乱（ＳＳＣ）によってゲートされた、全細胞集団中のＰＥ陽性細胞の百分率として示される。

【0470】

結果
図１５Ａ及び１５Ｂは、ハイブリドーマから精製されたＳ１５ ｍＡｂの、ヒトＳ１５またはマウスＳ１５を発現する細胞への結合について、陽性細胞の百分率を示す。指定抗体とインキュベートし、続いてＰＥコンジュゲート抗マウスＩｇ抗体とインキュベートした細胞をＦＡＣＳ分析により評価することによって、結合を評価した。細胞を、ＦＡＣＳを介してＰＥ^＋集団について分析した。

【0471】

実施例１０：ハイブリドーマから精製されたＳ１５ ｍＡｂは、膜結合Ｓ１５に媒介される抑制を逆転させる
材料及び方法
全ＰＢＭＣのＴ細胞増殖アッセイにおいて、シグレック−１５ ｍＡｂでのシグレック−１５ Ｆｃに媒介される抑制の逆転を試験する方法：
上の図１４と同じだが、わずかな変更がある。

【0472】

健康的なドナーのアフェレーシスに由来する多白血球製品（ＫｅｙＢｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮ）から、標準的なフィコール勾配操作によって末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を採取し、その後凍結保存した。アッセイ当日に、凍結したＰＢＭＣを解凍し、ＲＰＭＩ完全培地（ＲＰＭＩ−Ｃ、ＲＰＭＩ［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ］＋１０％ＦｅｔａｌＣｌｏｎｅ ＩＩＩ血清［ＨｙＣｌｏｎｅ］）で洗浄し、計数した。細胞をＲＰＭＩ−Ｃ中５μＭのＣＦＳＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で１０分間３７℃で標識し、その後ＲＰＭＩ−Ｃで２回洗浄した。予め抗ヒトＣＤ３（ＯＫＴ３、５０ｎｇ／ｍＬ；ｅＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）で一晩４℃でコーティングされた９６ウェル平底Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒプレート中に、全ＰＭＢＣ（３Ｅ０５細胞／ウェル）を蒔いた。シグレック−１５ ｈＧ１融合タンパク質を、５μｇ／ｍｌ（最終濃度）でウェルに添加した。次いで指定のシグレック−１５ ｍＡｂを指定のウェルに１２μｇ／ｍｌ（最終濃度）で添加した。細胞を３７℃で７２時間培養した。７２時間目に、サイトカインレベルの分析用に、５０μＬの上清をウェルから採取し、直ちに凍結させた。次いで細胞を各ウェルからピペット操作によって採取し、フローサイトメトリー染色及び分析用に丸底プレートに移した。Ｆｃ受容体をＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（２μＬ／ウェル；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、続いてＣＤ４に対する抗体（ＡＰＣ−ｅＦｌｕｏｒ ７８０（２μＬ／ウェル；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ））及びＣＤ８に対する抗体（ｅＦｌｕｏｒ ４５０（２μＬ／ウェル；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ））で、４℃で１時間染色した。インキュベーション後に、プレートをＦＡＣＳ緩衝液（１％のＦｅｔａｌＣｌｏｎｅ ＩＩＩ血清を含有するＰＢＳ）で２回洗浄した。細胞を１５０μＬの固定用緩衝液（ＰＢＳ中３％ホルムアルデヒド）に再懸濁させ、ＹＥＴＩフローサイトメーター（Ｐｒｏｐｅｌ Ｌａｂｓ）で分析した。データをＦｌｏｗＪｏで分析した。データは、ＣＦＳＥ希釈に基づく分裂した細胞の、刺激されていないＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞と比較した百分率として表示されている。上清を、Ｕ−ＰＬＥＸキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ［ＭＳＤ）］）を用いて、使用説明書に従ってＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−６について分析した。Ｕ−ＰＬＥＸは、Ｍｅｓｏ ＱｕｉｃｋＰｌｅｘ ＳＱ １２０機器を使用して読み取った。

【0473】

結果
図１６Ａ及び１６Ｂは、指定抗体で処置された、分裂したＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率の棒グラフである。図１６Ｃ及び１６Ｄは、指定抗体で処置された、分裂したＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率の棒グラフである。

【0474】

実施例１１：３種類の腫瘍モデルにおける精製５Ｇ１２のインビボでの生物活性
材料及び方法
インビボでの腫瘍モデルのための方法
大腸腫瘍モデル
図１７Ａ：シグレック−１５が過剰発現するように形質導入され、選別されたＭＣ３８腫瘍細胞（ＡＴＣＣ）を、Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）の剃毛した右脇腹に、１００μＬ中２Ｅ０５の細胞で皮下注射した。５匹のマウス／処置群に、腫瘍注射の６日後から始まる、２００μｇの対照ＩｇＧ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）またはエンドトキシンフリーの精製抗シグレック−１５クローン５Ｇ１２の投与を行った。治療を４日毎に続け、合計４回投与した。腫瘍は、毎週３回測定した。腫瘍体積は、（長さ×幅^２）×０．５として算出した。腫瘍が２０００ｍｍ^３に達したときに、マウスを安楽死させた。

【0475】

リンパ腫腫瘍モデル
図１７Ｂ：ＥＧ７腫瘍細胞（ＡＴＣＣ）は、鶏卵オバルブミン（ＯＶＡ）を発現するようにトランスフェクトされたＥＬ４腫瘍細胞である。細胞を１０日間培養した後に、２Ｅ０５の腫瘍細胞をＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）の剃毛した右脇腹に皮下注射した。マウス１０匹／処置群を、２００μｇの対照ＩｇＧまたはエンドトキシンフリーの精製抗シグレック−１５クローン５Ｇ１２で処置した。処置は、ＥＧ７の注射後８日目から始め、マウスを４日毎に合計４回投与して処置した。腫瘍体積は、（長さ×幅＾２）×０．５として算出した。腫瘍が２０００ｍｍ^３に達したか、または腫瘍が１５ｃｍの平均径に達したときに、マウスを安楽死させた。

【0476】

卵巣癌モデル
図１７Ｃ：ＩＤ８−ＯＶＡ腫瘍細胞は、鶏卵オバルブミン（ＯＶＡ）を発現するように安定にトランスフェクトされたマウスＩＤ８卵巣癌細胞株である。細胞を１０日間培養した後に、５Ｅ０６の細胞を腹腔内注射した。３週間後に、マウスに、ＣＤ８^＋Ｔ細胞ネガティブ選択によって単離された５Ｅ０５のＯＴ−Ｉ Ｔｇ／Ｒａｇ２^−／−Ｔ細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を腹腔内に注射することによって養子移入した。処置は１日後に開始した（２２日目；ｎ＝１０／群）。マウスに、４日毎に２００μｇ、合計５回、対照ＩｇＧまたはエンドトキシンフリーの精製抗シグレック−１５クローン５Ｇ１２を投与した。マウスを腫瘍注射の３０日後から計量し、腫瘍量を体重増加によって分析した。データは、初期重量からの、３０日目のマウス一匹当たりの体重増加率（百分率）として表示する。体重が１５０％の体重増加に達したか、または３０グラムより増えたときに、マウスを安楽死させた。

【0477】

結果
５Ｇ１２は、大腸モデル（図１７Ａ）及びリンパ腫モデル（図１７Ｂ）において生存率（百分率）の増加を示した。５Ｇ１２は、腫瘍量の低減（図１７Ｃ）も示した。図１８は、ＩＤ８／ＯＶＡ接種後の日数に対する生存率（百分率）を示す。

【0478】

実施例１２：組換えｍＡｂのＳ１５単量体タンパク質に対する親和性評価
ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６機器で抗ヒトＦｃ ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ，１８−５０６０；ＦｏｒｔｅＢｉｏ）センサーを使用して、最適化したＫ_Ｄ実験を実施した。アッセイ用緩衝液は０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳであり、再生用緩衝液は１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）であった。抗体を最初に１μｇ／ｍＬで６００秒間ロードした。これに続いて、６０秒のベースラインステップ、Ｓ１５−細胞外ドメイン（ＥＣＤ）単量体での３００秒の会合ステップ、最後に１２００秒の解離ステップを行った。単量体濃度は２倍希釈系列で１００ｎＭ〜１．５６ｎＭの範囲であり、ブランクウェルも含まれていた。データは、ＦｏｒｔｅＢｉｏのＤａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０を使用して、グローバルフィットを使用すると共に参照ウェルを差し引いて処理した。報告する値は、少なくとも３回の独立したｏｃｔｅｔランの平均である。結果は表１である。

【0479】

（表１）Ｓ１５単量体タンパク質に対する組換えｍＡｂの親和性評価（ｎ＝３〜６ラン）

[この文献は図面を表示できません]

【0480】

実施例１３：Ｓ１５ ｍＡｂのエピトープビニング
ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６機器でストレプトアビジン（ＳＡ，１８−５０１９；ＦｏｒｔｅＢｉｏ）センサーを使用して、エピトープビニング実験を実施した。３０秒のベースラインステップ後、ビオチンで標識したＳ１５−ｍＧ１融合タンパク質を、センサーに１０μｇ／ｍＬで６００秒間ロードした。これに続いて、一次抗体（３０μｇ／ｍＬ）での６００秒の会合ステップ、３０秒のベースライン、及び二次抗体（１５μｇ／ｍＬ）での４００秒の会合ステップを行った。アッセイ用緩衝液はＰＢＳであり、再生用は１０ｍＭグリシン（ｐＨ３．０）であった。データは、ＦｏｒｔｅＢｉｏのＤａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０を使用して処理し、二次抗体曲線を競合的結合について個々に評価した。２回目の会合ステップ中の曲線が１回目の会合ステップとは別個であれば、未占有のエピトープと結合していることが示される。さらなる結合がなければ、エピトープがブロックされていることが示される。結果は表２である。

【0481】

（表２）Ｓ１５エピトープビン

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【0482】

実施例１４：抗ヒトＳ１５クローン１Ｈ３は、ヒト破骨細胞形成をインビトロで阻害する
材料及び方法
ＰＢＭＣは、Ｋｅｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，ＬＬＣから購入したアフェレーシス由来の多白血球製品から単離した。多白血球製品をフィコールのクッション上に重層し、４００ＲＣＦで３０分間遠心分離した。フィコールの界面の細胞を取り出し、ＰＢＳ中で３回洗浄し、次いで１０％ＤＭＳＯを有するＦＢＳ中で凍結させた。実験の当日に、凍結したＰＢＭＣのバイアルを液体窒素保管庫から取り出し、解凍した。ＭＡＣＳ単球単離キット（１３０−０９６−５３７；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、製造業者の使用説明書に従って単球を単離した。単離した細胞は９９％生存細胞であった。細胞を、３Ｅ０５細胞／ｃｍ^２、ウェル当たりアッセイ培地１００μＬ中１Ｅ０５細胞の密度で９６ウェル平底組織培養プレートに蒔いた。アッセイ培地は、１０％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２５ｎｇ／ｍｌのヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，１０３−０９６−４９１）、及び３０ｎｇ／ｍｌのヒトＲＡＮＫＬ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，１３０−０９３−９８８）を補充したα−ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ ３２５７１−０３６）から成るものであった。細胞をプレートに３．５時間接着させた後、５０μｇ／ｍＬのＳ１５抗体１０μＬを添加し、最終濃度を４．５５μｇ／ｍＬとした。三重のウェルを各抗体について評価した。３日間のインキュベーション後に、培地を交換し、新たな抗体を添加した。７日目に、上清を元のプレートから丸底９６ウェルプレートに移し、遠心分離して細胞残屑を除去した。Ｂ−Ｂｒｉｄｇｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．製のＴＲＡＰ染色キット（ＰＭＣ−ＡＫ０４Ｆ−ＣＯＳ）を使用して、製造業者の使用説明書に従って単球／破骨細胞を染色し、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＥＶＯＳ ＦＬ Ｃｏｌｏｒを使用して撮像した。上清中のＴＲＡＰ（酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ）レベルを評価するために、ＴＲＡＰ染色キットの緩衝液５０μＬを９μＬの上清を合わせ、３７℃で３時間インキュベートした。各ウェルの５４０ｎＭでの吸光度を記録した。残った上清を、後のサイトカイン分析用に−８０℃で凍結させた。

【0483】

結果
図１９Ａは、ヒトＣＤ１４＋単球がＭｉｔｅｎｙｉ単球磁気ビーズを使用してヒトＰＢＭＣから採取され、続いてヒトＭ−ＣＳＦ及びヒトＲＡＮＫＬの存在下で指定抗体と共に９６ウェルプレート中に播種されることを示す概略図である。図１９Ｂは、破骨細胞を示す顕微鏡写真である。図１９Ｃは、７日後に酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ分析用に収集された上清の吸光度（５４０ｎｍ）の棒グラフである。

【0484】

実施例１５：１Ｈ３は、ヒト単球においてＭ−ＣＳＦ及びＲＡＮＫＬによって媒介されるＩＬ−６及びＴＮＦ−αの産生を低減させる
材料及び方法
上の実験からのＲＡＮＫＬなし（Ｍ−ＣＳＦ単独）、対照ｍＡＢ（Ｍ−ＳＣＦ＋ＲＡＮＫＬ＋対照ｍＡｂ）、及び１Ｈ３（Ｍ−ＣＳＦ＋ＲＡＮＫＬ＋１Ｈ３）のウェルからの上清を収集し、サイトカインを分析するために試験した。

【0485】

結果
図２０は、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ、及びＴＮＦ−αに関する、サイトカイン（ｐｇ／ｍＬ）を示す棒グラフである。

【0486】

実施例１６：抗ヒトＳ１５ ｍＡｂ １Ｈ３は、インビトロでのマウス破骨細胞形成を防止する
材料及び方法
マウスＲＡＷ ２６４．７マクロファージ細胞を、１．５Ｅ０４細胞／ｃｍ^２、ウェル当たり培地９０μＬ中４８００細胞の密度で平底９６ウェルプレートに播種した。培地は、１０％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、及び５０ｎｇ／ｍＬのマウスＲＡＮＫＬ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，１４−８６１２−８０）を有するＤＭＥＭから成るものであった。細胞を２時間接着させた後、１０μＬの指定抗体（５０μｇ／ｍＬ）をウェルに添加し、５μｇ／ｍＬの最終濃度を得た。抗体を三連のウェルで評価した。細胞を５日間分化させ、その時点で細胞を染色し、上清を上記の通りのＴＲＡＰ含有量について評価した。

【0487】

結果
図２１は、ＲＡＮＫＬの存在下で指定抗体と共に培養されたマウスＲＡＷ ２６４．７マクロファージ細胞の吸光度（５４０ｎｍ）の棒グラフである。

【0488】

実施例１７：ヒトＭ２マクロファージにおいてシグレック−１５の発現が上方制御される
材料及び方法
シグレック−１５の発現
ヒトＣＤ１４＋単球をヒトＰＢＭＣから磁性ビーズネガティブ選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を介して単離し、Ｍ−ＣＳＦで３日間処置し、次いで細胞をＩＬ−１０（Ｍ２マクロファージ分極）またはＩＦＮ−γ／ＬｉｐｉＡ（Ｍ１マクロファージ分極）の存在下でさらに３日間培養した。シグレック−１５の細胞表面発現が、抗シグレック−１５抗体染色とその後のＦＡＣＳ分析によって検出された。

【0489】

シグレック−１５の発現の誘導
マウス骨髄細胞をＢａｌｂ／Ｃマウスから採取した。接着細胞をプラスチック製培養皿に付着させることによって除去した。浮遊するマウス造血細胞を採取し、Ｍ−ＣＳＦで３日間処置し、続いてそのままＭ−ＣＳＦで、またはＭ−ＣＳＦ＋ＩＬ−１０でさらに４日間処置した。処置した細胞を採取し、骨髄細胞マーカー（ＣＤ１１ｂ及びＦ４／８０）及びＰＥ標識抗Ｓ１５で染色し、続いてＦＡＣＳ分析を行った。ＰＥの平均蛍光強度を下側の図にグラフ化する。Ｍ−ＣＳＦはＳ１５の発現を若干増大させた。

【0490】

結果
シグレック−１５の発現がヒトＭ２マクロファージには観察されたが（図２５Ａ）、ヒトＭ１マクロファージには観察されなかった（図２５Ｂ）。
Ｍ−ＣＳＦ及びＩＬ−１０は、マウス骨髄由来骨髄細胞においてＳ１５の発現を増大させる（図２５Ｃ〜２５Ｅ）。

【0491】

実施例１８：シグレック−１５は、ヒト骨髄細胞の生存を促進し、炎症誘発性サイトカイン産生を増大させる
材料及び方法
最初にヒトＣＤ１４＋単球をヒトＰＢＭＣ（２人の健康なドナー由来）から磁性ビーズネガティブ選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を介して単離し、図に示す濃度で、シグレック−１５融合タンパク質でコーティングした（シグレック−１５コーティング）９６ウェルプレート、またはコーティングしていないが培養液中のシグレック−１５融合タンパク質を添加した（シグレック−１５可溶性）９６ウェルプレートに播種した。６日後に、ＭＳＤキットを介するサイトカイン分析用に、馴化上清を収集した。ＸＴＴ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）をプレートに添加することによって、細胞生存率を評価した。２時間培養した後、細胞の代謝／生存率を、４５０ｎｍでの吸光度を読み取ることによって測定した。

【0492】

結果
プレートにコーティングしたシグレック−１５ Ｆｃおよび可溶性シグレック−１５ Ｆｃを有するウェルにおいて、吸光度が高くなったことが検出された。サイトカイン分析から、Ｓ１５が、処置したウェルにおいてＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βの産生を用量依存的に増大させたことが示された（ここでは可溶性Ｓ１５ウェルからのデータを提示する）。

【0493】

実施例１９：シグレック−１５ Ｆｃで処置したヒト骨髄細胞は、ヒトＴ細胞の機能に影響を及ぼす
材料及び方法
図２７Ａは、以下の実験の概略図である。ヒトＣＤ１４＋単球をヒトＰＢＭＣ（２人の健康なドナー由来）から磁性ビーズネガティブ選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を介して単離し、シグレック−１５ Ｆｃで上記の通りに６日間処置するか、またはＭ２もしくはＭ１マクロファージに分極させるか、またはＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４で処置して細胞を未成熟樹状細胞（ｉｍＤＣ）に分化させた。細胞を、培養皿から穏やかにこすり取ることによって採取した。細胞を、遠心分離した後に再懸濁させ、ネガティブ選択されたＣＦＳＥ標識自己汎Ｔ細胞と、骨髄細胞１：Ｔ細胞２の細胞比で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（汎Ｔ細胞１：ビーズ２）と一緒に共培養した。５日後に、ＭＳＤ製のＭＳＤマルチプレックスキットを使用するサイトカイン分析用に馴化上清を収集した。細胞を採取し、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８抗体で染色した。ＦＡＣＳ分析してＣＦＳＥ希釈した細胞集団を測定することによって、Ｔ細胞増殖を分析した。

【0494】

結果
データから、シグレック−１５ Ｆｃで処置した骨髄細胞が、この特定のドナー（ドナー番号１７０７）に由来する細胞を使用する、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに媒介されるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞増殖を減少させること、抑制がＭ２マクロファージほど甚大ではない（図２７Ｂ〜２７Ｇ）ことが示された。サイトカイン分析から、Ｓ１５で処置した骨髄細胞が、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに媒介されるＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０の産生を顕著に弱化させることが明らかとなった。試験した他のドナーからのデータから、Ｓ１５で処置した細胞は、Ｔ細胞増殖に対する抑制は限定的だが、ほとんどの場合、サイトカイン産生に著しい抑制をもたらすことが示された。

【0495】

実施例２０：シグレック−１５ ｍＡｂは、ヒト骨髄細胞に及ぼすＳ１５媒介性生存効果を用量依存的にブロックする
材料及び方法
ヒトＣＤ１４＋単球をヒトＰＢＭＣ（２人の健康なドナー由来）から磁性ビーズネガティブ選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を介して単離し、５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃ融合タンパク質とシグレック−１５のｍＡｂと一緒に、２０μｇ／ｍＬから連続的に１：２で希釈して９６ウェルプレートに播種した。細胞を７日間培養した。ＸＴＴ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）をプレートに添加することによって、細胞生存率／代謝を評価した。２時間培養した後、４５０ｎｍでの吸光度を読み取ることによって細胞代謝／生存率を測定した。Ｓ１５ Ｆｃ融合タンパク質を含み、いずれの抗体も含まない（ｍＡｂを含まない）ウェルにおいて高い吸光度が検出された。Ｓ１５ Ｆｃ融合タンパク質を含まない（Ｓ１５ Ｆｃを含まない）ウェルにおいて低い吸光度が得られた。

【0496】

結果
シグレック−１５ ｍＡｂは、吸光度を用量依存的に減少させた（一番下の線）。対照抗体（一番上の線）は、細胞生存及び代謝に何も作用を及ぼさなかった。図２８Ａ（ドナー１７０９）及び２８Ｂ（ドナー１７１３）から、抗Ｓ１５ ｍＡｂが、ヒト骨髄細胞に及ぼすＳ１５媒介性生存効果を用量依存的にブロックすることが示される。

【0497】

実施例２１：シグレック−１５は破骨細胞形成に重大な役割を果たす
骨芽細胞及び間質細胞上に発現するＭ−ＣＳＦは骨髄細胞上にシグレック−１５の発現を誘導し、これはシスまたはトランスのいずれかでシグレック−１５の結合パートナーと相互作用し、骨髄細胞を刺激して、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βなどの炎症誘発性サイトカインを産生し、α_ｖβ_３インテグリンの発現を上方制御する。ＲＡＮＫＬシグナル伝達と共に、破骨細胞前駆細胞は融合し、多核破骨細胞を形成する（図２９）。

【0498】

実施例２２：シグレック−１５は、ヒトＣＤ１４^＋単球におけるａ_ｖβ３インテグリンの発現を誘導する
材料及び方法
ヒトＣＤ１４^＋単球をヒトＰＢＭＣから磁性ビーズネガティブ選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を介して単離し、５μｇ／ｍＬのＳ１５ Ｆｃ融合タンパク質で６日間処置した。６日後に、Ｓ１５ Ｆｃで処置した骨髄細胞を採取し、抗α_ｖβ_３インテグリンで染色した（クローン２３Ｃ６）。

【0499】

結果
アイソタイプ対照抗体の染色及びＳ１５Ｆｃ処置前の細胞の０日目の染色と比較して、Ｓ１５ Ｆｃで処置した骨髄細胞ではａ_ｖβ_３インテグリンの発現が上方制御制御された（図３０Ａ及び３０Ｂ）。

【0500】

特に定義しない限り、本明細書に使用されるすべての技術用語及び科学用語は、開示される発明の属する分野の当業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に引用される文献及び引用される材料は、参照により明確に組み込まれている。

【0501】

当業者であれば、慣例的な実験だけを使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態の多くの均等物を認識し、確認することができよう。かかる均等物は、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。

【図1】

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【図2A】

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【図2B】

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【図2C】

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【図3A】

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【図3B】

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【図3C】

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【図4A】

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【図4B】

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【図4C】

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【図4D】

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【図5】

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【図6】

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【図7A】

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【図7B】

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【図7C】

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【図7D】

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【図7E】

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【図8A】

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【図8B】

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【図8C】

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【図8D】

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【図8E】

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【図8F】

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【図8G】

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【図8H】

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【図8I】

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【図9】

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【図10】

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【図11】

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【図12】

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【図13A】

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【図13B】

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【図14A】

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【図14B】

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【図14C】

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【図14D】

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【図15】

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【図16A】

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【図16B】

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【図16C】

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【図16D】

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【図17A】

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【図17B】

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【図17C】

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【図18】

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【図19A】

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【図19B】

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【図19C】

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【図20】

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【図21】

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【図22】

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【図23】

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【図24】

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【図25A】

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【図25B】

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【図25C】

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【図25D】

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【図25E】

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【図26A】

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【図26B】

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【図26C】

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【図26D】

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【図26E】

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【図26F】

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【図26G】

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【図26H】

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【図27A】

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【図27B】

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【図27C】

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【図27D】

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【図27E】

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【図27F】

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【図27G】

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【図28】

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【図29】

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【図30】

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【国際調査報告】

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