特表 2020-505405 ＳＴＩＮＧアゴニストとしての環状ジヌクレオチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2020-505405(P2020-505405A)

(43)【公表日】2020年2月20日

(54)【発明の名称】ＳＴＩＮＧアゴニストとしての環状ジヌクレオチド

(51)【国際特許分類】

   C07H 19/213 20060101AFI20200124BHJP

   C07H 21/02 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 31/708 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 31/7084 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20200124BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20200124BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20200124BHJP

【ＦＩ】

   C07H19/213CSP

   C07H21/02

   A61K31/708

   A61K31/7084

   A61K9/08

   A61K9/10

   A61K9/14

   A61K9/20

   A61K9/48

   A61P35/00

   A61P43/00 111

   A61P31/12

   A61P31/20

   A61P17/00

   A61P1/00

   A61P15/00

   A61P13/08

   A61P11/00

   A61K48/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】165

(21)【出願番号】特願2019-540518(P2019-540518)

(86)(22)【出願日】2018年1月26日

(85)【翻訳文提出日】2019年9月12日

(86)【国際出願番号】IB2018050498

(87)【国際公開番号】WO2018138685

(87)【国際公開日】20180802

(31)【優先権主張番号】62/451,301

(32)【優先日】2017年1月27日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/451,351

(32)【優先日】2017年1月27日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/454,135

(32)【優先日】2017年2月3日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

(71)【出願人】

【識別番号】509087759

【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100149010

【弁理士】

【氏名又は名称】星川 亮

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】エマニュエル，スチュアート

(72)【発明者】

【氏名】リクター，マーク

(72)【発明者】

【氏名】コノリー，ピーター ジェィ．

(72)【発明者】

【氏名】エドワーズ，ジェームズ パトリック

(72)【発明者】

【氏名】ワン，グァンジ

(72)【発明者】

【氏名】サチコンダ，サントーシュ クマール

(72)【発明者】

【氏名】ビーゲルマン，レオニド

(72)【発明者】

【氏名】ジョン，ミンホン

(72)【発明者】

【氏名】ビグナン，ギルス

(72)【発明者】

【氏名】シェペンス，ウィム

(72)【発明者】

【氏名】ヴィエルヴォイェ，マルセル

(72)【発明者】

【氏名】シューリン，ジョハネス ウィスヘルムス ジョン フィッツジェラルド

【テーマコード（参考）】

4C057

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C057AA17

4C057AA20

4C057BB02

4C057BB03

4C057BB05

4C057CC02

4C057CC03

4C057DD03

4C057LL29

4C057LL40

4C057LL41

4C057LL42

4C057LL48

4C057MM02

4C076AA11

4C076AA22

4C076AA29

4C076AA36

4C076AA51

4C076AA53

4C076BB01

4C076CC27

4C076CC35

4C084AA13

4C084MA17

4C084MA23

4C084MA34

4C084MA52

4C084NA14

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA661

4C084ZA662

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB331

4C084ZB332

4C084ZC511

4C084ZC512

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086EA18

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA17

4C086MA23

4C086MA34

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA81

4C086ZA89

4C086ZB26

4C086ZB33

4C086ZC41

(57)【要約】

ＳＴＩＮＧの調節によって影響を受ける疾患、症候群又は障害を治療するための化合物、組成物及び方法が開示される。このような化合物は次の式（Ｉ）で表される：
【化１】

［式中、Ｒ、Ｒ_１Ｂ、Ｒ_１Ｃ、Ｒ_２Ｂ、Ｒ_２Ｃ、Ｂ_１、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚは本明細書で開示されている］。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物

【化1】

［式中、
ＲはＣＨ_２又はＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、及びｂ８からなる群から選択され、

【化2】

Ｗは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、Ｗ及びＺの１つのみがＮＨであり、
かつ、ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１がｂ６又はｂ７から選択される場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外であり、
更に、式（Ｉ）の化合物が、Ｒ、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺがそれぞれＯであり、Ｒ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシであり、Ｂ_１はｂ１であり、かつＲ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシである化合物以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態。

【請求項2】

Ｂ_１が、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【化3】

【請求項3】

ＷがＯであり、Ｂ_１が、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【化4】

【請求項4】

Ｂ_１がｂ６である、請求項３に記載の化合物。

【化5】

【請求項5】

ＷがＮＨであり、Ｂ_１が、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【化6】

【請求項6】

Ｂ_１がｂ６である、請求項５に記載の化合物。

【化7】

【請求項7】

ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１が、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【化8】

【請求項8】

Ｗ及びＸが−Ｏ−であり、Ｂ_１がｂ６である場合、Ｒ_２Ｂがフルオロ又はヒドロキシ以外である、請求項７に記載の化合物。

【請求項9】

ＲがＯであり、Ｂ_１が、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【化9】

【請求項10】

化合物１〜３３

【化10】

【化11】

【化12】

【化13】

【化14】

【化15】

【化16】

【化17】

【化18】

【化19】

からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態。

【請求項11】

請求項１〜１０に記載の化合物、並びに医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び医薬的に許容される希釈剤のうち少なくとも１つを含む医薬組成物。

【請求項12】

前記組成物が、固体の経口投与形態である、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記組成物が、シロップ剤、エリキシル剤又は懸濁剤である、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項14】

ＳＴＩＮＧによって調節される疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に治療有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。

【請求項15】

疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、前記疾患、症候群又は状態が、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるものであり、前記治療を必要とする対象に治療有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。

【請求項16】

前記疾患、症候群又は状態が、癌である、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記癌が、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記疾患、症候群、又は状態がウイルス感染である、請求項１５に記載の方法。

【請求項19】

前記ウイルス感染が、Ｂ型肝炎である、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、治療有効量の請求項８に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項21】

前記ウイルス感染が、Ｂ型肝炎である、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において前記疾患、症候群又は状態を治療するための医薬を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。

【請求項23】

ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において前記疾患、症候群又は状態を治療する方法において使用するための、請求項１に記載の化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１７年１月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／４５１３０１号、２０１７年２月３日に出願された同第６２／４５４，１３５号、及び２０１７年１月２７日に出願された同第６２／４５１，３５１号に対する優先権を主張し、これらの特許は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

（発明の分野）
本発明は、ＳＴＩＮＧ（Stimulator of Interferon Genes；インターフェロン遺伝子刺激因子）のアゴニストであり、ＳＴＩＮＧタンパク質の調節によって影響を受ける障害の治療に有用な、新規化合物に関する。本発明はまた、かかる化合物のうちの１つ以上を含む医薬組成物、かかる化合物及び組成物の調製プロセス、及び様々な疾患、症候群及び障害を治療するためのかかる化合物又は医薬組成物の使用に関する。本発明は、下流のシグナル伝達経路の活性化に関与していてもよく、更に第２のメッセンジャー及び増殖因子を活性化し、自然免疫及び適応免疫に関与するインターフェロンの産生に関与し得る。より具体的には、本発明は、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及び抗ウイルス療法を含む種々の感染、疾患、症候群及び障害の治療のための、かかる化合物又は医薬組成物の使用に関する。

【背景技術】

【0003】

ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）は、ＴＭＥＭ１７３、ＭＩＴＡ、ＭＰＹＳ及びＥＲＩＳとしても知られ、細胞内部に位置する膜貫通受容体であり、細胞質核酸の重要なセンサーである（Ｚｈｏｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．「Ｔｈｅ Ａｄａｐｔｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＭＩＴＡ Ｌｉｎｋｓ Ｖｉｒｕｓ−Ｓｅｎｓｉｎｇ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｔｏ ＩＲＦ３ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２００８．Ｖｏｌ．２９：５３８−５５０）。最近の研究により、ＳＴＩＮＧの生物学と、マウスモデルにおいて堅牢な抗腫瘍活性をもたらす自然免疫反応を動員する際の役割とが明らかになってきた。ＳＴＩＮＧ経路の活性化によって、ＩＲＦ３（インターフェロン調節因子３）経路によるＩ型インターフェロン（主にＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）の産生が誘導される。ＩＲＦ３の活性化はＴＢＫ１によって介在されると考えられており、ＴＢＫ１は、ＩＲＦ３を動員及びリン酸化させることにより、核に移行してＩ型インターフェロン及びその他の遺伝子を転写させ得るＩＲＦ３ホモ二量体を形成させる（Ｌｉｕ Ｓ，ｅｔ ａｌ．「Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ａｄａｐｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＭＡＶＳ，ＳＴＩＮＧ，ａｎｄ ＴＲＩＦ ｉｎｄｕｃｅｓ ＩＲＦ３ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１５：２６３０−２６３７）。ＴＢＫ１はまた、癌原性転写因子ＮＦ−κＢを介し活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサーをも活性化させ、これにより炎症促進性サイトカイン（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αなど）の産生が誘導される。これに加えて、ＳＴＩＮＧは、ＳＴＡＴ６（シグナル伝達兼転写活性化因子６）を活性化し、ケモカインＣＣＬ２、ＣＣＬ２０及びＣＣＬ２６を含む種々のサイトカインの産生を誘導し（Ｔｈ２型）、増加させ（ＩＬ−１２）、又は減少させる（ＩＬ−１０）（Ｃｈｅｎ Ｈ，ｅｔ ａｌ．「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＡＴ６ ｂｙ ＳＴＩＮＧ Ｉｓ Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ」 Ｃｅｌｌ．２０１１，ｖｏｌ．１４：４３３−４４６）。活性化時のＳＴＩＮＧのＳｅｒ３６６の直接的なリン酸化もまた、ＴＢＫ１又はＵＬＫ１を介して起こることが報告されている（Ｃｏｒｒａｌｅｓ，Ｌ．ｅｔ ａｌ「Ｄｉｒｅｃｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＩＮＧ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ」Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１５，ｖｏｌ．１１：１−１３；Ｋｏｎｎｏ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｒｉｇｇｅｒ ＵＬＫ１（ＡＴＧ１）ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＩＮＧ ｔｏ ｐｒｅｖｅｎｔ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」Ｃｅｌｌ，２０１３，ｖｏｌ．１５５：６８８−６９８）。

【0004】

ＳＴＩＮＧ（２’，３’）環状グアノシンモノホスフェート−アデノシンモノホスフェート（２’，３’−ｃＧＡＭＰ）に結合し、これを活性化させる天然リガンドと、その合成に関与する酵素（ｃＧＡＳ、Ｃ６ｏｒｆ１５０又はＭＢ２１Ｄ１としても知られている）は、この経路を調節する機会を提供することが解明されている。ｃＧＡＭＰは、ＳＴＩＮＧ経路を活性化するための内因性の二次メッセンジャーとして機能する、哺乳動物細胞において産生されるＳＴＩＮＧの高親和性リガンドである。ｃＧＡＭＰは、外因性二本鎖ＤＮＡの存在下（例えば、細菌、ウイルス又は原虫の侵入により放出される）、又は哺乳動物の自己ＤＮＡの存在下でｃＧＡＳによって生成する固有の２’，３’結合を有する環状ジヌクレオチドである（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｓｕｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ ＧＭＰ−ＡＭＰ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｉｓ ａ Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ＤＮＡ Ｓｅｎｓｏｒ Ｔｈａｔ Ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｈｅ Ｔｙｐｅ Ｉ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｐａｔｈｗａｙ」Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，ｖｏｌ．３３９：７８６−７９１；Ｂｈａｔ Ｎ及びＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ ＫＡ．「Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ＤＮＡ ｂｙ ｃＧＡＳ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ＳＴＩＮＧ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓｅｎｓｏｒｓ．」Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４ Ｍａｒ；４４（３）：６３４−４０）。ＳＴＩＮＧ活性化はまた、侵入してきた細菌によって放出される外因性（３’，３）環状ジヌクレオチド（ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ、ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ及び３’３’−ｃＧＡＭＰ）の結合によって起こり得る（Ｚｈａｎｇ Ｘ，ｅｔ ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ ＧＭＰ−ＡＭＰ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｍｉｘｅｄ Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ Ｌｉｎｋａｇｅｓ Ｉｓ Ａｎ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｈｉｇｈ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ＳＴＩＮＧ」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ，２０１３，ｖｏｌ．５１：２２６−２３５；Ｄａｎｉｌｃｈａｎｋａ，Ｏ及びＭｅｋａｌａｎｏｓ，ＪＪ．「Ｃｙｃｌｉｃ Ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ」Ｃｅｌｌ．２０１３．ｖｏｌ．１５４：９６２−９７０）。

【0005】

ＳＴＩＮＧ経路の活性化は、特異的なキラーＴ細胞を生成する免疫反応を引き起こし、このキラーＴ細胞が、腫瘍を収縮させ、かつ再発しないように長く持続する免疫を与えることができる。前臨床モデルにおいてＳＴＩＮＧアゴニストを用いて得られた顕著な抗腫瘍活性は、この標的について高レベルの興奮を作り出し、ＳＴＩＮＧ経路を調節し得る低分子化合物は、癌を治療するのと、自己免疫疾患を減らすのとの両方の可能性がある。

【0006】

ＳＴＩＮＧ経路の活性化はまた、抗ウイルス応答にも関与する。細胞又は生物レベルのいずれかでの機能性応答の喪失は、ＳＴＩＮＧが存在しないとウイルス負荷を制御することができないことを示す。ＳＴＩＮＧ経路の活性化が免疫応答のトリガーとなり、その結果、ウイルスに対抗し免疫系の生得性及び適応性のアームを動員する抗ウイルス性及び炎症性サイトカインが得られる。最終的に、長期持続性の免疫が、病原性ウイルスに対して発達する。前臨床モデルにおいてＳＴＩＮＧアゴニストを用いて得られた顕著な腫瘍活性は、この標的について高レベルの興奮を作り出し、ＳＴＩＮＧ経路を調節し得る低分子化合物は、慢性ウイルス感染（例えばＢ型肝炎）を治療する可能性がある。

【0007】

慢性肝炎Ｂ型ウイルス（ＨＢＶ）への感染は重要な世界的健康問題であり、世界人口の５％以上が感染している（世界中で３億５千万人以上、米国内では１２５万人の患者）。特定のＨＢＶワクチン及び治療が利用可能ではあるが、慢性ＨＢＶ感染の負担は、発展途上国の大部分では治療選択肢が最適とは言えず、また新たな感染の割合が依然高いことから、重要な未解決の世界的な医療上の問題であり続けている。現在の治療は、ウイルスポリメラーゼの阻害剤として作用するインターフェロンα及びヌクレオシド類似体といった２種類の薬剤のみに限定されている。しかしながら、これらの療法の中に疾患を治癒するものはなく、かつ薬物耐性、低有効性、及び忍容性についての課題によりその効果が制限される。ＨＢＶの治癒率が低いのは、少なくとも一部では、単一の抗ウイルス剤によりウイルス産生を完全に抑制することが困難であるとの事実に起因する。しかしながら、ＨＢＶ ＤＮＡの持続的な抑制は、肝臓疾患の進行を遅らせ、肝細胞癌の防止につながる。ＨＢＶ感染患者の現在の治療目標は、血清中のＨＢＶのＤＮＡを低いレベル、又は検出不能なレベルにまで低減させ、最終的には肝硬変及び肝細胞癌の発症を低下又は防止することにある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

したがって、ウイルス産生の抑制を高めることができ、ＨＢＶ感染を治療、寛解、又は予防することができる治療剤が当該技術分野で必要とされている。単独療法として、又は他のＨＢＶ治療若しくは補助的治療との併用で、ＨＢＶ感染した患者に対しかかる治療剤を投与することによって、ウイルス量の大幅な減少、予後の改善、疾患進行の減少、及びセロコンバージョン率の向上がもたらされる。

【0009】

自然免疫及び適応免疫の両方を強化する潜在的な治療効果は、ＳＴＩＮＧを、それ自体による優れた活性を示し、他の免疫療法と組み合わせることもできる、魅力的な治療標的にする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

【0011】

【化1】

［式中、
ＲはＣＨ_２又はＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、及びｂ８からなる群から選択され、

【0012】

【化2】

Ｗは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、Ｗ及びＺの１つのみがＮＨであり、
かつ、ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１がｂ６又はｂ７から選択される場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外であり、
更に、式（Ｉ）の化合物が、Ｒ、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺがそれぞれＯであり、Ｒ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシであり、Ｂ_１はｂ１であり、かつＲ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシである化合物以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0013】

同様に、本発明はまた、医薬的に許容可能な担体、医薬的に許容可能な賦形剤、及び／又は医薬的に許容可能な希釈剤と、式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容可能な塩形態とを含むか、又はそれらからなるか、かつ／又はそれらから本質的になる医薬組成物も提供する。

【0014】

更に、式（Ｉ）の化合物と、医薬的に許容可能な担体、医薬的に許容可能な賦形剤、及び／又は医薬的に許容可能な希釈剤とを混合することを含む、それよりなる、及び／又は本質的にそれよりなる、医薬組成物を製造するためのプロセスが提供される。

【0015】

本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。

【0016】

本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。

【0017】

本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。

【0018】

本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象において、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。

【0019】

本発明はまた、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において当該疾患、症候群又は状態を治療するための医薬が調製される、医薬の調製における本明細書に記載のいずれかの化合物の使用に関する。

【0020】

本発明はまた、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において当該疾患、症候群又は状態を治療するための医薬が調製される、医薬の調製における本明細書に記載のいずれかの化合物の使用に関する。

【0021】

本発明はまた、ＳＴＩＮＧの選択的なアゴニストとして作用する置換環状ジヌクレオチド誘導体の調製に関する。

【0022】

本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧによって調節されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の上述の化合物又は医薬組成物のいずれかを投与することを含む、方法である。

【0023】

本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の上述の化合物又は医薬組成物のいずれかを投与することを含む、方法である。

【0024】

別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物に関する。

【0025】

別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療のための式（Ｉ）の化合物を含む組成物に関する。

【発明を実施するための形態】

【0026】

置換基に関連して用いられる「独立して」という用語は、２個以上の置換基が存在し得る場合に、それらの置換基が互いに同じであっても異なってもよい状況を意味する。

【0027】

単独で用いられるか又は置換基の一部として用いられるかによらず、「アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する、直鎖状及び分岐鎖状の炭素鎖を意味する。したがって、指定された炭素原子の数（例えば、Ｃ_１〜８）は、独立して、アルキル部分又はより大きなアルキル含有置換基のアルキル部の炭素原子数を意味する。複数のアルキル基を有する置換基、例えば、（Ｃ_１〜６アルキル）_２アミノ−において、ジアルキルアミノのＣ_１〜６アルキル基は、同じであっても異なってもよい。

【0028】

「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル基を意味し、ここで「アルキル」という用語は上記で定義されるものである。

【0029】

「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、２〜８個の炭素原子を有する、直鎖状及び分岐鎖状の炭素鎖を意味し、アルケニル鎖は、少なくとも１つの二重結合を含み、アルキニル鎖は、少なくとも１つの三重結合を含む。

【0030】

「シクロアルキル」という用語は、飽和又は部分的に飽和の、単環式又は多環式の、３〜１４個の炭素原子の炭化水素環を意味する。このような環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びアダマンチルが挙げられる。

【0031】

「ヘテロシクリル」という用語は、少なくとも１つの炭素原子とＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１〜４個のヘテロ原子とを含む３〜１０個の環員を有する非芳香族の単環系又は二環系を意味する。ヘテロシクリルという用語の範囲には、１〜２員がＮである５〜７員の非芳香族環、又は０、１若しくは２員がＮであり、２員以下がＯ若しくはＳであり、少なくとも１員がＮ、Ｏ若しくはＳのいずれかでなければならない５〜７員の非芳香族環が含まれる。環は、所望により、０〜１個の不飽和結合を含んでいてよく、環が６又は７員である場合、所望により、２個以下の不飽和結合を含んでいてよい。ヘテロシクリルの環を構成する炭素原子は、完全に飽和していても部分的に飽和していてもよい。「ヘテロシクリル」という用語はまた、架橋されることで二環式環を形成する２個の５員の単環式ヘテロシクロアルキル基も含む。このような基は、完全に芳香族性とはみなされず、ヘテロアリール基とは称されない。ヘテロシクリルが二環式の場合、ヘテロシクリルの両環は、非芳香環であり、かつ、少なくとも一方の環はヘテロ原子の環員を含む。ヘテロシクリル基の例としては、限定するものではないが、ピロリニル（２Ｈ−ピロール、２−ピロリニル又は３−ピロリニルを含む）、ピロリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、及びピペラジニルが挙げられる。特に断らない限り、ヘテロシクリルは、そのペンダント基と、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子で結合している。

【0032】

「アリール」という用語は、６〜１０個の炭素員からなる、不飽和、芳香族性の単環又は二環式環を意味する。アリール環の例としては、フェニル及びナフタレニルが挙げられる。「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子及びＮ、Ｏ及びＳからなる群から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０個の環員を有する芳香族性の単環式又は二環式の芳香環系を指す。ヘテロアリールという用語の範囲には、５又は６員の芳香環が含まれ、ただし環は炭素原子からなり、少なくとも１つのヘテロ原子の環員を有する。適切なヘテロ原子としては、窒素、酸素、及び硫黄が挙げられる。５員環の場合、ヘテロアリール環は、好ましくは、１員の窒素、酸素又は硫黄を含み、更に３個以下の更なる窒素を含む。６員環の場合、ヘテロアリール環は、好ましくは１〜３個の窒素原子を含む。６員環が３個の窒素原子を有する場合では、最大で２個の窒素原子が隣り合う。ヘテロアリール基の例としては、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル及びキナゾリニルが挙げられる。特に断らない限り、ヘテロアリールは、そのペンダント基と、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子で結合している。

【0033】

「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素原子を指す。

【0034】

「アルキル」若しくは「アリール」という用語又はこれらの接頭辞の語根のいずれかが、置換基の名称中に現れる場合（例えば、アリールアルキル、アルキルアミノ）、名称は、「アルキル」及び「アリール」について上記に与えられた限定を含むものとして解釈されるものとする。指定される炭素原子数（例えば、Ｃ_１〜Ｃ_６）は、アルキル部分、アリール部分、又は、アルキルがその接頭辞の語根として現れる、より大きな置換基のアルキル部分の炭素原子数を独立して指す。アルキル及びアルコキシ置換基について、指定される炭素原子数は、指定された所定の範囲内に含まれる全ての独立した構成員を含む。例えば、Ｃ_１〜６アルキルには、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル及びヘキシルを個々に含むだけでなく、それらの下位の組み合わせ（例えば、Ｃ_１〜２、Ｃ_１〜３、Ｃ_１〜４、Ｃ_１〜５、Ｃ_２〜６、Ｃ_３〜６、Ｃ_４〜６、Ｃ_５〜６、Ｃ_２〜５など）も含まれる。

【0035】

一般的に、本開示全体で使用される標準的な命名法の規則の下では、指定される側鎖の末端部分が最初に記載され、続けて結合点の方向に隣接する官能基が記載される。したがって、例えば、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルカルボニル」置換基は下式の基：

【0036】

【化3】

を意味する。

【0037】

立体中心における「Ｒ」という用語は、当該技術分野で定義されているように、その立体中心が純粋にＲ−配置であることを示す。同様に、用語「Ｓ」は、純粋にＳ−配置であることを意味する。本願明細書で使用する場合、立体中心における「^＊Ｒ」又は「^＊Ｓ」という用語は、その立体中心が純粋なものであるが、どちらの配置であるか不明であることを表記するのに使用される。本願明細書で使用する場合、「ＲＳ」という用語は、Ｒ−及びＳ−配置の混合物として存在する立体中心を意味する。同様に、「^＊ＲＳ」又は「^＊ＳＲ」という用語は、Ｒ配置及びＳ配置の混合物として存在し、その分子内の別の立体中心に関してその配置が不明である立体中心を意味する。

【0038】

１個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定なしで図示されているものは、２種類のエナンチオマーの混合物である。２個の立体中心を有する化合物であって、両方とも立体化学的結合の指定なしで図示されているものは、４種のジアステレオマーの混合物である。「ＲＳ」の両方で標識された２個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定を付して図示されているものは、図示されている相対的な立体化学を有する２成分混合物である。「^＊ＲＳ」の両方で標識された２個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定を付して図示されているものは、相対的な立体化学が不明である２成分混合物である。立体化学的結合の指定なしで図示されている未標識の立体中心は、Ｒ−配置とＳ−配置との混合である。立体化学的結合の指定を付して図示されている未標識の立体中心に関しては、その絶対的な立体化学は図示されたとおりのものである。

【0039】

特に断らない限り、分子内の特定の位置における任意の置換基又はその変形物の定義は、その分子内の他の位置におけるその定義とは独立であることが意図されている。本発明の化合物における置換基及び置換パターンは、化学的に安定であり、かつ当技術分野において周知の技術及び本明細書で説明される方法により容易に合成できる化合物を提供するために、当業者が選択することができると理解される。

【0040】

「対象」という用語は、治療、観察又は試験の対象となっている動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。

【0041】

「治療有効量」という用語は、治療される疾患、症候群、状態又は障害の症状の緩和若しくは部分的緩和を含む、研究者、獣医、医師、又は他の臨床専門家が得ようとする生物学的又は医薬的応答を組織系、動物又はヒトにおいて誘導する、本発明の化合物を含む活性化合物又は医薬品の量を指す。

【0042】

「組成物」という用語は、治療有効量の特定の成分を含む生成物、並びに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接又は間接的にもたらされる任意の生成物を意味する。

【0043】

「ＳＴＩＮＧアゴニスト」という用語は、ＳＴＩＮＧに結合することによってＳＴＩＮＧに作用し、ＳＴＩＮＧ機能に関連する分子の活性化によって特徴付けられる下流のシグナル伝達を誘導する、化合物を包含することを意図している。この用語には、ＳＴＩＮＧ、ＩＲＦ３及び／又はＮＦ−κＢの直接リン酸化反応も含まれ、ＳＴＡＴ６も含まれ得る。ＳＴＩＮＧ経路活性化によって、Ｉ型インターフェロン（主にＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）の産生及びインターフェロン刺激遺伝子の発現が増加する（Ｃｈｅｎ Ｈ，ｅｔ ａｌ．「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＡＴ６ ｂｙ ＳＴＩＮＧ Ｉｓ Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」Ｃｅｌｌ．２０１１，ｖｏｌ．１４：４３３−４４６；ａｎｄ Ｌｉｕ Ｓ−Ｙ，ｅｔ ａｌ．「Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ｔｙｐｅ ＩＩ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｆａｃｔｏｒｓ」．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２０１２：ｖｏｌ．１０９ ４２３９−４２４４）。

【0044】

「ＳＴＩＮＧ調節された」という用語は、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などのウイルス感染、疾患又は状態を含む、ＳＴＩＮＧによって直接、又はＳＴＩＮＧ経路を介して影響を受ける状態を指すために用いられる。

【0045】

本明細書で使用するとき、特に断りがない限り、「ＳＴＩＮＧによって調節される障害」という用語は、ウイルス感染、疾患、障害又は状態のうち、その特徴的な症状の少なくとも１つがＳＴＩＮＧアゴニストで治療すると緩和するか、又は除去されることを特徴とするものを意味する。好適な例としては、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎が挙げられる。

【0046】

本明細書で使用される場合、特に断らない限り、（ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性により影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害に言及する場合の）「影響する」又は「影響される」という用語は、当該ウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害の１つ以上の症状又は所見の頻度及び／又は重症度の低下を含み、並びに／又は、当該ウイルス感染、疾患、症候群、状態若しくは障害の１つ以上の症状若しくは所見の進行の予防、又は、ウイルス感染、疾患、状態、症候群又は障害の進行の予防を含む。

【0047】

本発明の化合物は、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性により影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害を治療又は寛解させるための方法に有用である。そのような方法は、そのような処置、改善及び／又は予防を必要とする対象（動物、哺乳類、及びヒトを含む）に、式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容可能な塩の治療有効量を投与することを含む、それからなる、及び／又はそれから本質的になる。

【0048】

特に、式（Ｉ）の化合物又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物若しくは医薬的に許容される塩形態は、例えば黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などの疾患、症候群、状態又は障害を治療するか、又は改善するのに有用である。

【0049】

より具体的には、式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容可能な塩形態は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などの疾患、症候群、状態又は障害を治療するか、又は改善するのに有用であり、当該治療又は改善を必要とする対象に、治療有効量の本明細書で定義した式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容可能な塩形態を投与することを含む。

【0050】

本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ヘパドナウイルス（Hepadnaviridaee）（例えばＢ型肝炎ウイルス、すなわちＨＢＶ）によって引き起こされる感染を含むウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法に関する。この方法は、ウイルス感染症を患っていると特定された対象に、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物を投与することを含んでいてもよい。

【0051】

本明細書に開示された他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の本明細書に記載の１種類以上の化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態）、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。

【0052】

本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療するために使用可能な、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ウイルスの複製を阻害する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。

【0053】

本明細書に記載される他の実施形態は、ウイルスの複製を阻害するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルスの複製を阻害するために使用可能な、本明細書に記載の１種類以上の化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態）、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。

【0054】

いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、Ｂ型肝炎ウイルスの感染であってもよい。方法は、ＨＢＶを患っていると特定された対象に、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物を投与することを含んでいてもよい。

【0055】

本明細書に開示された他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法であって、ＨＢＶに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶを寛解させ、及び／又は治療するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。

【0056】

本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶを寛解させ、及び／又は治療するために使用可能な、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。

【0057】

本明細書に記載される他の実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩を使用することに関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害するために使用可能な、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。

【0058】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、

【0059】

【化4】

［式中、
ＲはＣＨ_２又はＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択され、

【0060】

【化5】

Ｗは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、Ｗ及びＺの１つのみがＮＨであり、
かつ、ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１がｂ６である場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外であり、
更に、式（Ｉ）の化合物が、Ｒ、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺがそれぞれＯであり、Ｒ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシであり、Ｂ_１はｂ１であり、かつＲ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシである化合物以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0061】

本発明の一実施形態は、式Ｉの化合物、

【0062】

【化6】

［式中、
ＲはＣＨ_２又はＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択され、

【0063】

【化7】

Ｗは−Ｏ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、
かつ、ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１がｂ６である場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外であり、
更に、式（Ｉ）の化合物が、Ｒ、Ｘ、Ｙ及びＺがそれぞれＯであり、Ｒ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシであり、Ｂ_１はｂ１であり、かつＲ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシである化合物以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0064】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、

【0065】

【化8】

［式中、
ＲはＣＨ_２又はＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１はｂ６であり、

【0066】

【化9】

Ｗは−Ｏ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、
かつ、ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１がｂ６である場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0067】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、

【0068】

【化10】

［式中、
ＲはＣＨ_２又はＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択され、

【0069】

【化11】

Ｗは−ＮＨ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、
かつ、ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１がｂ６である場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0070】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、

【0071】

【化12】

［式中、
ＲはＣＨ_２又はＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１はｂ６であり、

【0072】

【化13】

Ｗは−ＮＨ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、
かつ、ＲがＣＨ_２であり、Ｂ_１がｂ６である場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0073】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、

【0074】

【化14】

［式中、
ＲはＣＨ_２であり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択され、

【0075】

【化15】

Ｗは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、Ｗ及びＺの１つのみがＮＨであり、
かつ、Ｂ_１がｂ６である場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0076】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、

【0077】

【化16】

［式中、
ＲはＣＨ_２であり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択され、

【0078】

【化17】

Ｗは−Ｏ−であり、
Ｘは−Ｏ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−又は−Ｏ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−又は−Ｏ−であり、
Ｂ_１が又はｂ６である場合、Ｒ_２Ｂはフルオロ又はヒドロキシ以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0079】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物であって、

【0080】

【化18】

［式中、
ＲはＯであり、
Ｒ_１Ｂは水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｒ_２Ｂは水素、ヒドロキシ、メトキシ、又はフルオロであり、
Ｒ_２Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ_３⁻からなる群から選択され、
Ｂ_１は、環ｂ１、ｂ２、ｂ３、ｂ４、ｂ５、ｂ６、及びｂ８からなる群から選択され、

【0081】

【化19】

Ｗは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｘは−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｙは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｚは−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−ＮＨ−であり、
いずれの場合でも、Ｘ及びＹの１つのみがＮＨであり、Ｗ及びＺの１つのみがＮＨであり、
更に、式（Ｉ）の化合物が、Ｒ、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺがそれぞれＯであり、Ｒ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシであり、Ｂ_１はｂ１であり、かつＲ_１Ｂ及びＲ_２Ｂはそれぞれヒドロキシである化合物以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。

【0082】

本発明の実施形態は、式（Ｉａ）の化合物［式中、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、本明細書で定義されるようにそれぞれＯである。］、又はこれらのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容される塩形態を更に含み、本明細書で定義される変数の１つ以上から選択される置換基（例えば、Ｒ、Ｒ_１Ｂ、Ｒ_１Ｃ、Ｒ_２Ｂ、Ｒ_２Ｃ、及びＢ_１）は独立して、下表１の一覧に例示されるものから選択される、任意の個々の置換基、又は置換基の部分集合であるように選択される。

【0083】

【表1-1】

【0084】

【表1-2】

【0085】

本発明の実施形態は、式（Ｉｂ）の化合物［式中、Ｒは本明細書において定義されたようにＯである］、又はこれらのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容される塩形態を更に含み、本明細書で定義される変数の１つ以上から選択される置換基（例えば、Ｒ_１Ｂ、Ｒ_１Ｃ、Ｒ_２Ｂ、Ｒ_２Ｃ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、及びＢ_１）は独立して、下表２の一覧に例示されるものから選択される、任意の個々の置換基、又は置換基の部分集合であるように選択される。

【0086】

【表2】

【0087】

本発明の更なる実施形態は、化合物１〜３３から選択される式（Ｉ）の化合物に関する。

【0088】

【化20】

【0089】

【化21】

【0090】

【化22】

【0091】

【化23】

【0092】

【化24】

【0093】

【化25】

【0094】

【化26】

【0095】

【化27】

【0096】

【化28】

【0097】

【化29】

からなる群から選択される式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態に関する。

【0098】

医療において使用する場合、式（Ｉ）の化合物の塩とは、非毒性の「医薬的に許容される塩」を指す。しかし、他の塩が式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩形態の調製において有用である場合もある。式（Ｉ）の化合物の適切な医薬的に許容される塩としては、例えば、化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸のような医薬的に許容される酸の溶液と混合することにより形成され得る酸付加塩が挙げられる。更に、式（Ｉ）の化合物が酸性部分を有する場合、その適切な医薬的に許容される塩としては例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩又はカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩又はマグネシウム塩）、及び適切な有機リガンドと形成される塩（例えば、第四級アンモニウム塩）を挙げることができる。すなわち、代表的な医薬的に許容される塩としては、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カルシウムエデト酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシラート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシネート、ハイドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イソチオネート、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、パモン酸塩（エンボナート）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド、及び吉草酸塩が挙げられる。

【0099】

医薬的に許容可能な塩の調製に使用することができる代表的な酸及び塩基としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、カンファースルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、α−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩化水素酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びウンデシレン酸を含む酸、並びに、アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン（benethamine）、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リジン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、及び水酸化亜鉛を含む塩基が挙げられる。

【0100】

本発明の実施形態には、式（Ｉ）の化合物のプロドラッグが含まれる。一般的には、このようなプロドラッグは、インビボで必要な化合物に容易に変換可能な化合物の機能的誘導体である。したがって、本発明の治療又は予防の方法の実施形態において、「投与すること」という用語には、具体的に開示された化合物による、又は具体的には開示されていない場合もあるが患者への投与後にインビボで特定の化合物に変換される化合物による、記載された様々な疾患、状態、症候群及び障害の治療又は予防が包含される。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製に関する通常の手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」，ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。

【0101】

本発明の実施形態に基づく化合物が少なくとも１個のキラル中心を有する場合、それに応じて化合物はエナンチオマーとして存在し得る。化合物が２つ以上のキラル中心を有する場合、ジアステレオマーとして追加的に存在してもよい。かかる異性体及びその混合物は全て、本発明の範囲内に包含されると理解される。更に、化合物の結晶型の中には、多形として存在できるものもあり、そのような多形も本発明に含まれることが意図される。加えて、化合物の中には、水との溶媒和物（すなわち、水和物）又は一般的な有機溶媒との溶媒和物を形成できるものもあり、このような溶媒和物もまた、本発明の範囲に包含されることが意図される。当業者は、本明細書で用いる「化合物」という用語が、式（Ｉ）の化合物の溶媒和物を含むことを理解するであろう。

【0102】

本発明の特定の実施形態に基づく化合物の調製プロセスにより立体異性体の混合物を生じる場合、これらの異性体は、分取クロマトグラフィーなどの従来技術により分離することができる。化合物はラセミ体で調製されてもよく、又は個々のエナンチオマーをエナンチオ選択的合成若しくは分解のいずれかにより調製することもできる。化合物は、例えば、（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸及び／又は（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸などの光学活性酸と塩を形成させた後に、分別結晶化を行い、遊離塩基を再生させることによりジアステレオマー対を形成させるなどの標準的技術により、それら化合物の成分であるエナンチオマーに分割することができる。化合物はまた、ジアステレオマーのエステル又はアミドを形成した後、クロマトグラフィー分離を行い、キラル補助基を除去することにより、分解することもできる。あるいは、化合物はキラルＨＰＬＣカラムを用いて分割してもよい。

【0103】

本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物の（＋）−エナンチオマーを含む、それからなる、及び／又はそれから本質的になる医薬組成物を含む組成物であって、当該化合物の（−）−異性体を実質的に含まない、組成物を目的とする。本文脈において、実質的に含まないとは、下式で算出される（−）−異性体が、約２５％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満、更により好ましくは約２％未満、及び更により好ましくは約１％未満であることを意味する。

【0104】

【数1】

【0105】

本発明の別の実施形態は、式（Ｉ）の化合物の（−）−エナンチオマーを含む、それからなる、及びそれから本質的になる医薬組成物を含む組成物であって、当該化合物の（＋）−異性体を実質的に含まない、組成物である。本文脈において、実質的に含まないとは、下式で算出される（＋）−異性体が、約２５％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満、更により好ましくは約２％未満、更により好ましくは約１％未満であることを意味する。

【0106】

【数2】

【0107】

本発明の種々の実施形態の化合物を調製するための任意のプロセスにおいて、関連する分子のいずれかにおける感受性基又は反応性基を保護することが必要及び／又は望ましい場合がある。これは、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９７３；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ＆ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９１；及びＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ＆ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９などに記載されるような従来の保護基を用いることによって達成されるであろう。保護基は、その後の好都合な段階において、当該技術分野で周知の方法を用いて除去することができる。

【0108】

本発明の実施形態の化合物（その医薬的に許容される塩及び医薬的に許容される溶媒和物を含む）は単独で投与することができるが、これらの化合物は、一般的には、意図された投与経路及び標準的な製薬学的又は獣医学的な慣行の観点から選ばれる、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤及び／又は医薬的に許容される希釈剤との混合物として投与される。したがって、本発明の特定の実施形態は、式（Ｉ）の化合物及び少なくとも１つの医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び／又は医薬的に許容される希釈剤を含む製薬学的及び獣医学的組成物を目的とする。

【0109】

一例として、本発明の実施形態の医薬組成物では、式（Ｉ）の化合物は、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤、及びそれらの組み合わせと混合することができる。

【0110】

本発明の化合物を含む固体の経口投与形態、例えば、錠剤又はカプセルを、必要に応じて１回につき少なくとも１つの投与形態で投与することができる。持続放出性製剤で化合物を投与することも可能である。

【0111】

本発明の化合物が投与され得る追加の経口形態としては、エリキシル剤、溶液、シロップ剤及び懸濁液が挙げられる。それぞれ任意選択的に香味剤及び着色剤を含有する。

【0112】

あるいは、式（Ｉ）の化合物は、吸入（気管内又は経鼻的に）により、又は座薬若しくはペッサリーの形態で投与することができる。あるいは、式（Ｉ）の化合物は、ローション、溶液、クリーム、軟膏若しくは散布剤として局所的に塗布することもできる。例えば、式（Ｉ）の化合物は、ポリエチレングリコール又は流動パラフィンの水性エマルジョンを含む、それからなる、及び／又は本質的にそれからなるクリームに添加することができる。式（Ｉ）の化合物は、クリームの約１重量％〜約１０重量％の濃度で、必要に応じて任意の安定剤及び保存剤と共にワックス又は軟パラフィン基剤を含む、それからなる、及び／又はそれから本質的になる軟膏に添加することもできる。投与の代替手段としては、皮膚又は経皮貼付剤を使用することによる経皮投与が挙げられる。

【0113】

本発明の医薬組成物（本発明の化合物単独と同様）は、非経口的に、例えば、陰茎海綿体内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、又は髄腔内に注入することができる。この場合、組成物はまた、適切な担体、適切な賦形剤、及び適切な希釈剤のうちの少なくとも１つを含む。

【0114】

非経口投与について、本発明の医薬組成物は、例えば、溶液を血液と等張に保つうえで充分な塩及び単糖などの他の物質を含んでもよい滅菌水溶液の形態で最もよく使用される。

【0115】

癌の治療のための上述の投与経路に加えて、医薬組成物は、腫瘍内又は腫瘍周囲への注射による投与に適合され得る。このように免疫系を活性化して、離れた部位で腫瘍を死滅させることは、アブスコパル効果として一般的に知られており、多数の治療法を用いて動物において実証されている（ｖａｎ ｄｅｒ Ｊｅｕｇｈｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１５，６（３），１３５９−１３８１）。局所投与又は腫瘍内若しくは腫瘍周囲への投与の更なる利点は、はるかに低用量で同等の有効性を達成し、ひいては高用量の場合に観察され得る有害事象を最小限に抑えるか又は排除するという能力である（Ｍａｒａｂｅｌｌｅ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１４，２０（７），１７４７−１７５６）。

【0116】

口腔又は舌下投与では、本発明の医薬組成物を錠剤又はトローチ剤の形態で投与してもよく、これは従来法で製剤することができる。

【0117】

更なる例として、活性成分として式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つを含有する医薬組成物を、従来の製薬学的配合技術に従って、化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される希釈剤、及び／又は医薬的に許容される賦形剤とを混合することによって調製することができる。担体、賦形剤、及び希釈剤は、所望の投与経路（例えば、経口、非経口など）に応じ、広範な形態を取ることができる。それゆえに、懸濁液、シロップ剤、エリキシル剤及び溶液などの液体経口製剤の場合、適切な担体、賦形剤及び希釈剤としては、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤、安定剤、着色剤及びこれらに類するものが挙げられる。散剤、カプセル剤及び錠剤などの固体経口製剤の場合、適切な担体、賦形剤及び希釈剤としては、デンプン、糖類、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤及びこれらに類するものが挙げられる。吸収及び崩壊の主要部位を調節するために、固体経口製剤を糖などの物質で任意にコーティングするか、又は腸溶性コーティングを施すことができる。非経口投与の場合、担体、賦形剤及び希釈剤は、通常、滅菌水を含み、組成物の溶解度及び保存性を高めるために他の成分を添加してもよい。注射用懸濁剤又は溶剤はまた、水性担体を、適切な添加剤、例えば、可溶化剤及び保存剤と共に使用して、調製することもできる。

【0118】

式（Ｉ）の化合物又はその医薬組成物の治療有効量としては、平均的な（７０ｋｇの）ヒトについて１日当たり、約１〜約４回のレジメンで、約０．０１ｍｇ〜約３０００ｍｇの用量範囲、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲、特に、約０．０５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲、又は更に特定的には、約０．０５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲の活性成分を含む用量を含むが、式（Ｉ）の化合物の治療有効量は、治療される疾患、症候群、状態及び障害によって変動することが当業者には明らかである。

【0119】

経口投与では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物を約１．０、約１０、約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、及び約５００ｍｇ含む錠剤の形態で提供されることが好ましい。

【0120】

有利な点として、式（Ｉ）の化合物は、１日量を１回で投与してもよく、１日当たりの総投与量を１日に２回、３回及び４回に分割して投与してもよい。

【0121】

式（Ｉ）の化合物の投与される最適投与量は、容易に決定することができ、用いられる具体的な化合物、投与形態、製剤の強度、及び疾患、症候群、状態、又は障害の進行状態によって変わる。加えて、治療される具体的な対象に関連する要因、例えば、対象の性別、年齢、体重、食事及び投与タイミングにより、適切な治療レベル及び所望の治療効果を得るために用量を調節する必要が生じる。したがって、上記の投与量は平均的な場合の例である。当然、これより高いか低い用量範囲が有効である個々の例が存在することができ、これらも本発明の範囲内に含まれる。

【0122】

式（Ｉ）の化合物は、これを必要とする対象に式（Ｉ）の化合物を使用することが求められる場合には、上記の組成物及び投与レジメンのいずれかによって、又は当技術分野において確立されているそれらの組成物及び投与レジメンによって投与することができる。

【0123】

ＳＴＩＮＧタンパク質アゴニストとして、式（Ｉ）の化合物は、ＳＴＩＮＧタンパク質の調節（アゴニスト活性を含む）によってウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害が影響を受ける、動物、哺乳類及びヒトなどの対象における、ウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害を治療又は予防するための方法において有用である。かかる方法は、かかる治療又は予防を必要とする動物、哺乳動物及びヒトなどの対象に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、塩、又は溶媒和物を投与する工程を含むか、それよりなるか、及び／又は本質的にそれよりなる。

【0124】

一実施形態では、本発明は、癌の治療、並びに癌疾患及び状態、又はウイルス感染における使用のための、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を目的とする。

【0125】

式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物が潜在的に有益な抗腫瘍効果を有し得る癌疾患及び病状の例としては、限定されないが、肺、骨、膵臓、皮膚、頭部、頸部、子宮、卵巣、胃、結腸、乳房、食道、小腸、腸、内分泌系、甲状腺、副甲状腺、副腎、尿道、前立腺、陰茎、精巣、尿管、膀胱、腎臓又は肝臓の癌、直腸癌；肛門部分の癌；卵管、子宮内膜、子宮頸管、膣、外陰部、腎盂、腎細胞の癌；軟組織の肉腫；粘液腫；横紋筋腫；線維腫；脂肪腫；奇形腫；胆管癌；肝芽腫；血管肉腫；血管腫；肝癌；線維肉腫；軟骨肉腫；骨髄腫；慢性白血病又は急性白血病；リンパ球性リンパ腫；原発性中枢神経リンパ腫；中枢神経系の腫瘍形成；脊髄軸腫瘍；扁平上皮細胞癌；滑膜肉腫；悪性胸骨上皮腫；脳幹神経膠腫；下垂体腺腫；気管支腺腫；軟骨性過誤腫（chondromatous hanlartoma）；中皮腫；ホジキン病、又は前述の癌のうちの１つ以上の組み合わせが挙げられる。好適には、本発明は、脳（神経膠腫）、膠芽腫、星状細胞腫、多型性グリオブラストーマ、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、カウデン病、レルミット・ダクロス病、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽腫、頭頸部、腎臓、肝臓、黒色腫、卵巣、膵臓、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、インスリノーマ、前立腺、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核芽球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、口腔癌、口の癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）及び精巣癌からなる群から選択される癌を治療するか、又は重篤度を下げるための方法に関する。

【0126】

別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける障害の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその意訳的に許容される塩形態に関する。

【0127】

開示される式（Ｉ）の化合物は、ＨＢＶ感染症の治療に有用な１種以上の追加の化合物と併用するのに有用であり得る。これらの追加の化合物は、他にも開示される化合物、及び／又はＨＢＶ感染症の症状又は効果を治療、予防、若しくは低減することが公知である化合物を含み得る。そのような化合物としては、限定されないが、ＨＢＶポリメラーゼ阻害剤、インターフェロン、ウイルス侵入阻害剤、ウイルス成熟阻害剤、文献記載のカプシドアセンブリ調節因子、逆転写酵素阻害剤、免疫調節因子、ＴＬＲ−アゴニスト、及びＨＢＶのライフサイクルに影響を及ぼす、又はＨＢＶ感染症の転帰に影響を及ぼす、異なる又は未知の機構を伴う他の薬剤が挙げられる。

【0128】

非限定的な例では、開示される化合物は、次のものを含む群から選択される１つ以上の薬物（又はその塩）と併用され得る：
ラミブジン（３ＴＣ、Ｚｅｆｆｉｘ、Ｈｅｐｔｏｖｉｒ、Ｅｐｉｖｉｒ、及びＥｐｉｖｉｒ−ＨＢＶ）、エンテカビル（Ｂａｒａｃｌｕｄｅ、Ｅｎｔａｖｉｒ）、アデフォビルジピボキシル（Ｈｅｐｓａｒａ、Ｐｒｅｖｅｏｎ、ｂｉｓ−ＰＯＭ ＰＭＥＡ）、テノホビルジソプロキシルフマレート（Ｖｉｒｅａｄ、ＴＤＦ又はＰＭＰＡ）を含むがこれらに限定されないＨＢＶ逆転写酵素阻害剤、並びにＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼ阻害剤；
インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）、及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）を含むがこれらに限定されないインターフェロン；
ウイルス侵入阻害剤；
ウイルス成熟阻害剤；
カプシドアセンブリ調節因子、例えば、限定されないが、ＢＡＹ４１−４１０９；
逆転写酵素阻害剤；
ＴＬＲ−アゴニストなどの免疫調節因子；及び
異なる又は未知の機序を伴う薬剤、例えば、限定されないが、ＡＴ−６１（（Ｅ）−Ｎ−（１−クロロ−３−オキソ−１−フェニル−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）ベンズアミド）、ＡＴ−１３０（（Ｅ）−Ｎ−（１−ブロモ−１−（２−メトキシフェニル）−３−オキソ−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）−４−ニトロベンズアミド）及びこれらの類似体。

【0129】

一実施形態では、追加の治療剤はインターフェロンである。「インターフェロン」又は「ＩＦＮ」という用語は、ウイルス複製及び細胞増殖を阻害し、免疫反応を調節する、高度に相同な種特異的タンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。例えば、ヒトインターフェロンは、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、及びインターフェロンオメガ（ＩＦＮ−ω）を含むＩ型、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）を含むＩＩ型、並びにインターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）を含むＩＩＩ型の３つに分類される。開発され、市販されている組換え型のインターフェロンは、本明細書で使用する用語「インターフェロン」により包含される。化学修飾インターフェロン又は変異インターフェロンなどのインターフェロンのサブタイプも、本明細書で使用する用語「インターフェロン」に包含される。化学修飾インターフェロンとしては、ペグ化インターフェロン及びグリコシル化インターフェロンを挙げてよい。インターフェロンの例としては、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、インターフェロンアルファｎ１、インターフェロン−ベータ１ａ、インターフェロンベータ１ｂ、インターフェロンラムダ１、インターフェロンラムダ２、及びインターフェロンラムダ３も挙げられるが、これらに限定されない。ペグ化インターフェロンの例としては、ペグ化インターフェロンアルファ２ａ及びペグ化インターフェロンアルファ２ｂが挙げられる。

【0130】

したがって、一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）からなる群から選択されるインターフェロンと併用投与することができる。特定の一実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、又はインターフェロンアルファｎ１である。別の特定の実施形態では、インターフェロンアルファ２ａ又はインターフェロンアルファ２ｂはペグ化されている。好ましい実施形態では、インターフェロンアルファ２ａはペグ化インターフェロンアルファ２ａ（ＰＥＧＡＳＹＳ）である。別の実施形態では、追加の治療剤は、インターフェロンクラスに属する生物学的薬剤を含む、免疫調節療法又は免疫刺激剤療法から選択される。

【0131】

更に、追加の治療剤は、他の必須ウイルスタンパク質又はＨＢＶ複製若しくは持続に要求される宿主タンパク質の機能を破壊する薬剤であってもよい。

【0132】

別の実施形態では、追加の治療剤は、ウイルスの侵入若しくは成熟をブロックする、又はヌクレオシド若しくはヌクレオチド若しくは非ヌクレオシ（チ）ドポリメラーゼ阻害剤などのＨＢＶポリメラーゼを標的とする抗ウイルス剤である。併用療法の更なる実施形態では、逆転写酵素阻害剤又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤は、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、ｄｄＡ、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、アテビラピン、リバビリン、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、テノホビル、アデフォビル、ＰＭＰＡ、シドフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、又はエトラビリンである。

【0133】

一実施形態では、追加の治療剤は、無関係のウイルスに対して免疫応答の誘導をもたらす、自然の限定された免疫応答を誘導する免疫調節剤である。換言すれば、免疫調節因子は、抗原提示細胞の成熟、Ｔ細胞の増殖、及びサイトカイン放出（例、とりわけＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−α、β、及びγ並びにＴＮＦ−α）に影響を及ぼし得る。

【0134】

更なる実施形態では、追加の治療剤は、ＴＬＲ調節因子又はＴＬＲアゴニスト、例えばＴＬＲ−７アゴニスト若しくはＴＬＲ−９アゴニストなどである。併用療法の更なる実施形態において、ＴＬＲ−７アゴニストは、ＳＭ３６０３２０（９−ベンジル−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシ−エトキシ）アデニン）及びＡＺＤ８８４８（メチル［３−（｛［３−（６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）プロピル］［３−（４−モルホリニル）プロピル］アミノ｝メチル）フェニル］アセテート）からなる群から選択される。

【0135】

本明細書で提供する方法のいずれかにおいて、方法は、少なくとも１つのＨＢＶワクチン、ヌクレオシドＨＢＶ阻害剤、インターフェロン、又はそれらの任意の組み合わせを個体に投与することを更に含み得る。一実施形態では、ＨＢＶワクチンは、ＲＥＣＯＭＢＩＶＡＸ ＨＢ、ＥＮＧＥＲＩＸ−Ｂ、ＥＬＯＶＡＣ Ｂ、ＧＥＮＥＶＡＣ−Ｂ、又はＳＨＡＮＶＡＣ Ｂのうちの少なくとも１つである。

【0136】

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヌクレオチド／ヌクレオシド類似体、侵入阻害剤、融合阻害剤、及びこれらの又は他の抗ウイルス機序の任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加の治療剤を投与する工程を更に含む。

【0137】

別の態様では、治療有効量の開示される化合物を単独で、又は逆転写酵素阻害剤と組み合わせて個体に投与すること；及び、個体に治療有効量のＨＢＶワクチンを更に投与することにより、ＨＢＶウイルス負荷を低下させることを含む、必要のある個体においてＨＢＶ感染症を治療する方法を本明細書で提供する。逆転写酵素阻害剤は、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、ｄｄＡ、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、アテビラピン、リバビリン、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、テノホビル、アデフォビル、ＰＭＰＡ、シドフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、又はエトラビリンのうち少なくとも１つであり得る。

【0138】

別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＢＶ感染の治療を必要としている個体においてＨＢＶ感染を治療する方法であって、治療有効量の開示される化合物を単独で、又は、ＨＢＶ核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡ干渉剤と組み合わせて個体に投与するか、治療有効量のＨＢＶワクチンを個体に更に投与することによってＨＢＶウイルス負荷を低下させることを含む、治療方法である。アンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡ干渉剤は、ウイルスゲノムの複製、ウイルスＲＮＡの転写、又はウイルスタンパク質の翻訳を阻害するため、標的のＨＢＶ核酸に対する十分な相補性を有する。

【0139】

別の実施形態では、開示される化合物と少なくとも１種類の更なる治療薬とは同時配合される。更なる別の実施形態では、開示される化合物と少なくとも１種類の更なる治療薬とは同時投与される。本明細書に記載される任意の併用療法では、適切な方法、例えばＳｉｇｍｏｉｄ−Ｅ_ｍａｘ式（Ｈｏｌｆｏｒｄ＆Ｓｃｈｅｉｎｅｒ，１９９８１，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．６：４２９−４５３）、Ｌｏｅｗｅ加法の式（Ｌｏｅｗｅ ＆ Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ，１９２６，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４：３１３−３２６）、及びメジアン効果式（Ｃｈｏｕ ＆ Ｔａｌａｌａｙ，１９８４，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５）などを使用し、相乗効果を計算することができる。上記に挙げた各式に実験データを代入し、対応するグラフを生成して、薬物併用の効果を評価する助けとすることができる。上記の方程式と関連付けられる対応するグラフは、それぞれ濃度−効果曲線、アイソボログラム曲線、及び組み合わせ指標曲線である。

【0140】

本明細書において提供する併用療法を施す方法のいずれかの実施形態では、この方法は、対象のＨＢＶウイルス負荷のモニタリング又は検出を更に含むことができ、方法は、一定期間、例えばＨＢＶウイルスが検出不可となるまで実施される。

【0141】

本明細書、特にスキーム及び実施例で使用される略語は、以下のとおりである。

【0142】

【表3-1】

【0143】

【表3-2】

【0144】

具体的実施例
実施例１に示す反応スキームは、本発明の化合物１、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0145】

実施例１

【0146】

【化30】

【0147】

【化31】

【0148】

【化32】

【0149】

工程１：化合物１ｆの調製
化合物１ｅ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９３，３０：１２１３−１２２０）（５ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）のピリジン（８０．０ｍＬ）溶液に、ＴＭＳＣｌ（９．６１ｇ、８８．４ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。反応混合物を０℃にて０．５時間撹拌した。ベンゾイルクロリド（２．４９ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を０℃にて滴加した。５分後、混合物を室温まで温めて２５℃にて１．５時間撹拌した。混合物を、０℃の水（５ｍＬ）で希釈し、ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（２５％、７．５ｍＬ）を滴加した。次に、反応混合物を減圧下にて濃縮し、残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１〜５：１）により精製して、白色固体として化合物１ｆ（１．０５ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ６）δ１０．８６（ｓ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７６−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．６５−７．６１（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．５３（ｍ，２Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０７−５．０２（ｍ，２Ｈ），４．３０−４．２５（ｍ，１Ｈ），４．０６−４．０５（ｍ，１Ｈ），３．９４−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｂａｒ，２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ６）δ１６５．７，１４４．０，１３６．４，１３３．７，１３２．９，１３２．１，１２８．５，１２８．０，１２６．９，１２５．８，１１７．６，８６．０，７４．８，７３．２，７１．２，６１．６；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ３７１（Ｍ＋１）^＋。

【0150】

工程２：化合物１ｇの調製
化合物１ｆ（５５０ｍｇ、１．４８５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０．０ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルシランジイルビス（トリフルオロメタンスルホネート）（１．３１ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。反応混合物を０℃にて１時間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール（５０５．４９ｍｇ、７．４２ｍｍｏｌ）を一度に０℃にて添加した。５分後、混合物を２５℃にて３０分間撹拌した。混合物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水／ブライン＝１／１（２０ｍＬ×２）、及びブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜１／１）により精製して、白色泡状物として化合物１ｇ（６７０ｍｇ、１．２８１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）９．４９（ｓ，１Ｈ），８．０９−７．９６（ｍ，２Ｈ），７．９０−７．８４（ｍ，１Ｈ），７．８４−７．７８（ｍ，１Ｈ），７．６７−７．４７（ｍ，４Ｈ），５．３４−５．２３（ｍ，１Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｄｄ，Ｊ＝５．２，９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１６−４．０６（ｍ，１Ｈ），４．０３−３．９２（ｍ，２Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１８Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ５１１．２（Ｍ＋１）^＋。

【0151】

工程３：化合物１ｈの調製
化合物１ｇ（２．５３ｇ、４．９５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に、イミダゾール（２．０２４ｇ、２９．７２ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（２．２４ｇ、１４．８６ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。混合物を６０℃にて１２時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜３／１）により精製し、白色固体として化合物３（２．８６ｇ、４．５７７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）９．４７（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９３−７．７５（ｍ，２Ｈ），７．６８−７．４５（ｍ，４Ｈ），５．１７（ｓ，１Ｈ），４．６６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄｄ，Ｊ＝５．３，９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２１−４．１５（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｄｄ，Ｊ＝５．３，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１８Ｈ），０．９２（ｓ，９Ｈ），０．１５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６２５．７（Ｍ＋１）^＋。

【0152】

工程４：化合物１ｉの調製
ピリジンヒドロフルオライド（１．６５ｍＬ、１８．３０６ｍｍｏｌ）を注意深くピリジン（１２ｍＬ）で希釈し、化合物１ｈ（２．８６ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５ｍＬ）溶液に０℃にて滴加した。混合物を室温まで温め、５分間撹拌した。ピリジン（１２ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチし、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈してブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜０／１）により精製し、白色固体として化合物１ｉ（２．０４ｇ、４．２１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）９．５２（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６４−７．５８（ｍ，２Ｈ），７．５７−７．４９（ｍ，２Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．５，８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３０−４．１６（ｍ，２Ｈ），４．０４−３．８５（ｍ，２Ｈ），３．４９（ｓ，１Ｈ），２．８２（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１９（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），０．８３（ｓ，９Ｈ），−０．１２（ｓ，３Ｈ），−０．２７（ｓ，３Ｈ）。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８５．１（Ｍ＋１）^＋。

【0153】

工程５：化合物１ｊの調製
化合物１ｉ（１．８４ｇ、３．７９７ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、ＤＭＴｒＣｌ（１．９３ｇ、５．６９５ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。反応混合物を２５℃にて１２時間撹拌した。ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチし、ＥＡ（１００ｍＬ）で希釈してブライン（５０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜１／１）により精製し、白色泡状物として化合物１ｊ（１．３５ｇ、１．７１５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）９．４７（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６５−７．５７（ｍ，２Ｈ），７．５６−７．４９（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３４−７．２０（ｍ，９Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−６．７８（ｍ，４Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，６Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８８（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），０．８４（ｓ，９Ｈ），−０．１４（ｓ，３Ｈ），−０．３１（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ７８７．３（Ｍ＋１）^＋。

【0154】

工程６：化合物１ｌの調製
化合物１ｊ（６００ｍｇ、０．７６２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６．０ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５９１．２ｍｇ、４．５７ｍｍｏｌ）及び２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（５４１．３３３ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。次に、反応混合物を２５℃にて２時間撹拌した。

【0155】

化合物１ｊ（９３０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０．０ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９１６．３７ｍｇ、７．０９ｍｍｏｌ）及び２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（８３９．０６ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。次に、反応混合物を２５℃にて２時間撹拌した。反応混合物を第１の反応物と合わせ、合わせた混合物にＭｅＯＨ（５ｍＬ）を添加してクエンチして、ＥＡ（５０ｍＬ）で希釈した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜３／１）により精製し、黄色油として化合物１ｌ（１．７６ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を得た。
^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）１５１．４６７（ｓ，１Ｐ），１４８．３３７（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ９０４．４（Ｍ−（Ｎ（ｉＰｒ）_２＋ＯＨ））^＋。

【0156】

工程７：化合物１ｍの調製
化合物１ｌ（１．７６ｇ、１．７８３ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（１０．０ｍＬ）溶液、及び水（６４．２３６μＬ、３．５６ｍｍｏｌ）に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（４１３．１６ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１０．０ｍＬ）を添加し、反応混合物を１５分間室温にて撹拌した。混合物を減圧下にて濃縮し、白色泡状物を得た。残渣をＣＨ_３ＣＮ（１０．０ｍＬ）に溶解して濃縮し、泡状物を得、本プロセスをもう一度繰り返し、白色泡状物として化合物１ｍ（１．８２ｇ、粗生成物）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。

【0157】

工程８：化合物１ｎの調製
化合物１ｍ（１．８２ｇ、粗生成物）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２４ｍＬ）溶液に、水（３８５．３ｍｇ、２１．３８７ｍｍｏｌ）、続いてＣＨ_２Ｃｌ_２（２４ｍＬ）中の６％ジクロロ酢酸を添加した。反応混合物を２５℃にて３０分間撹拌した。ピリジン（１０ｍＬ）を添加して反応をクエンチし、反応混合物を２５℃にて３０分間撹拌した。このとき、反応混合物を減圧下にて濃縮して残渣を得、これをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝１００／１〜５／１）により精製し、白色泡状物として化合物１ｎ（９１０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．８５（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．７３−７．６１（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．５１（ｍ，２Ｈ），６．１９（ｓ，１Ｈ），６．００（ｓ，１Ｈ），５．２６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｄｄ，Ｊ＝５．２，８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｓ，１Ｈ），３．９６−３．８８（ｍ，１Ｈ），３．８４−３．７５（ｍ，１Ｈ），０．７６（ｓ，９Ｈ），−０．０９（ｓ，３Ｈ），−０．３９（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ５４９．１（Ｍ＋１）^＋。

【0158】

工程９：化合物１ｐの調製
化合物１ｎ（９１０ｍｇ、１．６５９ｍｍｏｌ）及び４Åのモレキュラーシーブの、乾燥アセトニトリル（３０ｍＬ）溶液を室温にて窒素下で３分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール塩素酸塩（５．１４ｇ、３０．５２ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、ＭｅＣＮ（１５ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−（２−イソブチルアミド−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９（６Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−シアノエチル）ジイソプロピルホスホロアミダイト（１ｏ：１．７７ｇ、１．８２５ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。混合物を２５℃にて５０分間撹拌した。反応混合物（ＭｅＣＮ中に０．０３６８７Ｍ、４５ｍＬ）を更に精製することなく次の工程で使用した。

【0159】

工程１０：化合物１ｑの調製
化合物１ｐ（ＭｅＣＮ中に０．０３６８７Ｍ、４５ｍＬ）の溶液に、ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（１．５１０ｍＬ、８．３０３ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。反応混合物を２５℃にて１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下にて濃縮して残渣を得た。逆相分取ＨＰＬＣ（中性、カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０×２５ ５μＭ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＡＣＮ、Ｂ％：３３％〜５３％、２５ｍＬ／分、溶出時間：８分）により残渣を精製し、白色固体として化合物１ｑ（６０２ｍｇ、０．５３２ｍｍｏｌ）を得た。
^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）４．０５（ｓ，１Ｐ），３．９２（ｓ，１Ｐ），−２．２０（ｓ，１Ｐ），−２．９８（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １１３１．１（Ｍ＋１）^＋。

【0160】

工程１１：化合物１ｒの調製
化合物１ｑ（６００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及び４Åのモレキュラーシーブのピリジン（１５０ｍＬ）溶液に、ＤＭＯＣＰ（２９３．６６９ｍｇ、１．５９１ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。混合物を２５℃にて１時間撹拌した。反応混合物（Ｐｙ中に０．００３５３Ｍ、１５０ｍＬ）を更に精製することなく次の工程で使用した。

【0161】

工程１２：化合物１ｓの調製
化合物１ｒ（Ｐｙ中に０．００３５３Ｍ、１５０ｍＬ）の溶液に、水（９５．４８ｍｇ、５．３０ｍｍｏｌ）及びＩ_２（６７２．５９４ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ、５．０等量）を２５℃にて添加した。混合物を２５℃にて１時間撹拌した。Ｎａ_２ＳＯ_３水溶液（５０ｍＬ）で反応をクエンチした。混合物を減圧下で濃縮して残渣を得た。逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８ １５０×２５ ５μＭ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＣＨ_３ＣＮ、３５％〜５５％、流速：２５ｍＬ／分）により残渣を精製し、白色固体として化合物１ｓ（２８５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １１３０．１（Ｍ＋１）^＋。

【0162】

工程１３：化合物１ｔの調製
化合物１ｓ（１２０ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）のＭｅＮＨ_２（ＥｔＯＨ中に３３％、１０ｍＬ）溶液を、２５℃にて１６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して黄色固体として粗化合物１ｔ（１２５ｍｇ）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。

【0163】

工程１４：化合物１（トリエチルアンモニウム塩）の調製
化合物１ｔ（１２５ｍｇ、粗生成物）のＰｙ（５ｍＬ）溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（１．４０２ｇ、１３．８６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素（１．１１７ｇ、６．９２９ｍｍｏｌ、５０．０等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を５０℃にて１２時間撹拌した。混合物をＴＨＦ（３ｍＬ）に溶解させ、イソプロポキシトリメチルシラン（３．６６ｇ、２７．７１ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加し、１２時間撹拌した。混合物を減圧下にて濃縮して茶色固体として残渣を得（１０８ｍｇ、粗生成物）、バッチ１として回収した。

【0164】

化合物１ｔ（１８３ｍｇ、粗生成物）のＰｙ（６ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２．０５ｇ、２０．２９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素（１．６３ｇ、１０．１４５ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。反応混合物を５０℃にて１２時間撹拌した。混合物をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、イソプロポキシトリメチルシラン（５．３６ｇ、４０．５８ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加して１２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して、バッチ２として残渣を得た。バッチ２をバッチ１と合わせ、逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８ １５０×２５ ５μＭ；移動相：水（０．０５％アンモニア水酸化物ｖ／ｖ）−ＡＣＮ、０％〜１５％、流速：３５ｍＬ／分）により精製し、白色固体として化合物１（トリエチルアンモニウム塩）（１２５ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）７．７７（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），７．５０−７．１６（ｍ，２Ｈ），５．８６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），５．７４（ｓ，１Ｈ），５．１３（ｓ，１Ｈ），４．９０（ｓ，１Ｈ），４．５４−４．４２（ｍ，２Ｈ），４．３２（ｂｒｓ，１Ｈ），４．２１（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，４Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６７４．０（Ｍ＋１）^＋。

【0165】

工程１５：化合物１（ナトリウム塩）の調製
化合物１（トリエチルアンモニウム塩）を高真空下で乾燥させ、白色固体（１２５ｍｇ）を得た。Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形、１０ｍＬ）をビーカー（１２５ｍｇの化合物１（トリエチルアンモニウム塩）用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、脱イオン水（５０ｍＬ）中の１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を樹脂に添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂を、脱イオン水中の１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、次いで中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、脱イオン水中の１５％ ＮａＯＨ（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、次いで中性になるまで、脱イオン水（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。化合物１（トリエチルアンモニウム塩）を脱イオン水に溶解させ（１０ｍＬ中に１２５ｍｇ）、カラム上部に添加し、脱イオン水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、変換されたナトリウム塩は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥して、白色固体として化合物１（ナトリウム塩、８５ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．０１（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），６．０２（ｂｒｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｓ，１Ｈ），５．１０（ｓ，１Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４５−３．９９（ｍ，６Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）０．６３（ｓ，１Ｐ），−２．９１（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６７３．９（Ｍ＋１）^＋。

【0166】

実施例２

【0167】

【化33】

【0168】

【化34】

【0169】

【化35】

【0170】

工程１：化合物２ｊの調製
２ｉ（国際公開第２０１３１７９２８９号）（２ｇ、５．３９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ_２下にてジ−ｔｅｒｔ−ブチルシランジイルビス（トリフルオロメタンスルホネート）（２．６１ｇ、５．９２ｍｍｏｌ）を０℃にて滴加した。１時間後、イミダゾール（４５８．３２ｍｇ、６．７３ｍｍｏｌ）を一度に０℃にて添加した。５分後、混合物を室温にて２５分間撹拌した。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をＣＨ_３ＣＮ及びＣＨ_２Ｃｌ_２から再結晶させ、白色固体として化合物２ｊ（２．１ｇ、４．１０ｍｍｏｌ、粗生成物）を得た。

【0171】

工程２：化合物２ｋの調製
２ｊ（２．１ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）、イミダゾール（２．２４ｇ、３２．８４ｍｍｏｌ）、及びＴＢＳＣｌ（２．７８ｇ、１８．４７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液を、６０℃にて３時間撹拌した。混合物を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄してＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝２０：１）により残渣を精製し、白色固体として化合物２ｋ（２．２２ｇ、３．５４ｍｍｏｌ）を得た。

【0172】

工程３：化合物２ｌの調製
２ｋ（２．５２ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）溶液を０℃にて撹拌した。混合物にピリジニウムフルオライド（１．６４ｍＬ、１８．１５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温にて８時間撹拌した。混合物を水でクエンチし、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。有機層を水で洗浄してＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１０：１）により残渣を精製し、白色固体として化合物２ｌ（１．６０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を得た。

【0173】

工程４：化合物２ｍの調製
２ｌ（２．３４ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）のピリジン（２３ｍＬ）溶液を室温で撹拌し、これに４，４’−（クロロ（フェニル）メチレン）ビス（メトキシベンゼン）（３．２６ｇ、９．６２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。混合物を水でクエンチし、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。有機層を水で洗浄してＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１０：１）により残渣を精製し、黄色固体として２ｍ（３．５９ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）を得た。

【0174】

工程５：化合物２ｎの調製
２ｍ（５００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２４６．０ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５６ｍＬ）溶液に、３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（４５０．５ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を１５℃にて添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。水を混合物に添加し、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝１：２）により精製し、黄色油として化合物２ｎ（４９８ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）１０．２８（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｓ，１Ｈ），８．４２−８．３３（ｍ，２Ｈ），７．９３−７．７７（ｍ，６Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．５２−７．４３（ｍ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），５．５５−５．４０（ｍ，１Ｈ），５．４１−５．３５（ｍ，１Ｈ），５．０９（ｓ，１Ｈ），４．６２（ｓ，１Ｈ），４．５９−４．３６（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｓ，６Ｈ），３．８７−３．８１（ｍ，１Ｈ），３．５７−３．５３（ｍ，１Ｈ），３．０１−２．９０（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｓ，９Ｈ），０．３１（ｓ，３Ｈ），０．００（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ９２７．８（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

【0175】

工程６：化合物２ｏの調製
２ｎ（８１３ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）の水溶液及びアセトニトリル溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（２０８．１８ｍｇ、１．０７８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。ｔ−ブチルアミン（３．４４ｍＬ）を添加した。得られた混合物を室温で２０分間撹拌した。混合物を濃縮して、黄色固体として粗生成物２ｏ（８３６．３９ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ、粗製物）を得、これをＣＨ_２Ｃｌ_２と共蒸発させ（３回）、次工程で直接使用した。

【0176】

工程７：化合物２ｐの調製
２ｏ（８３６．３９ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）の水溶液及びＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、ジクロロ酢酸（４０７．１４９ｍｇ、３．１５８ｍｍｏｌ）を室温で０．５時間かけて添加した。ピリジン（０．１４５ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、混合物を濃縮し、得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１：０〜５：１）により精製し、白色固体として化合物２ｐ（４６７．２ｍｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）を得た。

【0177】

工程８：化合物２ｒの調製
２ｐ（４６７．２ｍｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）及び４Ａのモレキュラーシーブ（０．５ｇ）のＣＨ_３ＣＮ（２７ｍＬ）溶液を室温でアルゴン雰囲気下にて３分間撹拌した。イミダゾール塩素酸塩（２．５１ｇ、１４．８９ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−（２−イソブチルアミド−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９（６Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−シアノエチル）ジイソプロピルホスホロアミダイト（１ｏ）（８６６．５３ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ溶液を添加した。混合物を２６℃にて１時間撹拌した。ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（０．７４ｍＬ、３．７２ｍｍｏｌ）を添加した。最終混合物を２６℃にて１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として、２分画の所望の生成物２ｒ（６２．７ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、及び９９．４ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １１３２．７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0178】

工程９：化合物２ｔの調製
２ｒ（９９．４ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）及び４Ａのモレキュラーシーブのピリジン（４３ｍＬ）溶液に、ＤＭＯＣＰ（４８．６１ｍｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）を室温でアルゴン雰囲気下にて添加した。混合物を２６℃にて１時間撹拌した。水（１５．８１ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）及びＩ_２（１１１．４１ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２６℃にて１時間撹拌した。Ｎａ_２ＳＯ_３の飽和水溶液で反応物をクエンチした。混合物を濾過し、濾液を減圧下にて濃縮して粗生成物を得、これを逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として化合物２ｔ（５０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １１３０．４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0179】

工程１０：化合物２ｕ及び化合物２ｖの調製
化合物２ｔ（５０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）をＭｅＮＨ_２のＥｔＯＨ（３３％、２０ｍＬ）溶液で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下にて濃縮し、化合物２ｕ及び２ｖ（４０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を得、これを更に精製することなく次工程で使用した。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ 化合物２ｕ ９０３．３；化合物２ｖ ９１７．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0180】

工程１１：化合物２の調製
化合物２ｕ及び２ｖ（４０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）のピリジン（１．９５ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（５３７．２０ｍｇ、５．３１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアンモニウムフルオライド（４２７．９２ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５０℃にて１０時間撹拌した。イソプロポキシトリメチルシラン（１．７６ｇ、１３．２７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を逆相分取ＨＰＬＣにより精製して、それぞれ白色固体として、化合物２（アンモニウム塩：１１．７ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を得た。化合物２：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．１２−７．９５（ｍ，３Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９８−４．８１（ｍ，１Ｈ），４．５９−４．４４（ｍ，２Ｈ），４．３７（ｓ，１Ｈ），４．３１−４．１５（ｍ，３Ｈ），４．１４−４．０７（ｍ，１Ｈ），４．０２（ｂｒｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，３Ｈ）。

【0181】

工程１２：化合物２（ナトリウム塩）の調製
体積が１０ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（１１．７ｍｇの化合物２（アンモニウム塩）用）に添加し、ＤＩ水で洗浄した（２回）。次に、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水（５０ｍＬ）溶液に樹脂を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水溶液を含むカラムに樹脂を移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、次いで、中性になるまでＤＩ水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨのＤＩ水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨのＤＩ水（少なくとも４ＣＶ）溶液で洗浄し、次いで中性となるまで、Ｈ_２Ｏ（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。ＡをＤＩ水に溶解させ（５ｍＬ中に１１．７ｍｇ）、カラム上部に添加し、ＤＩ水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）により検出したように、化合物７は初期の画分として溶出した。生成物を凍結乾燥し、白色固体として化合物２ナトリウム塩（８．８ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．０６（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），５．９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２７（ｓ，１Ｈ），４．９６（ｓ，１Ｈ），４．５８−４．５０（ｍ，１Ｈ），４．３６（ｓ，１Ｈ），４．２９−４．２２（ｍ，２Ｈ），４．２９−４．２２（ｍ，１Ｈ），４．１７（ｓ，１Ｈ），４．１４−４．０８（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−１．１３，−１．７５；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６８８．８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0182】

実施例３に示す反応スキームは、本発明の化合物３、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0183】

実施例３

【0184】

【化36】

【0185】

【化37】

【0186】

実施例４に示す反応スキームは、本発明の化合物４、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0187】

実施例４

【0188】

【化38】

【0189】

【化39】

【0190】

実施例５

【0191】

【化40】

【0192】

【化41】

【0193】

【化42】

【0194】

工程１：化合物５ｂの調製
化合物５ａ（１０．０ｇ、３３．６４ｍｍｏｌ）のピリジン（２５０ｍＬ）溶液に、ＴＭＳＣｌ（１８．２７ｇ、１６８．２０ｍｍｏｌ）を０℃にて滴加した。１５℃にて１時間撹拌した後、イソブチリルクロリド（４．３０ｇ、４０．３７ｍｍｏｌ）を１５℃にて滴加した。１５℃にて２時間撹拌した後、混合物をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）により０℃にてクエンチし、ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）を０℃にて添加した。１０分後、混合物を１５℃にて０．５時間撹拌した。上記手順を繰り返し（２０ｇスケールの化合物５ａ）、２つの反応混合物を合わせた。次に、混合物を減圧下にて濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製して、白色固体として化合物５ｂ（２５．５ｇ）を得た。

【0195】

工程２：化合物５ｃの調製
化合物５ｂ（２４．５ｇ、６６．６９ｍｍｏｌ）のピリジン（５００ｍＬ）溶液に、ジメトキシトリチルクロリド（２４．８５ｇ、７３．３６ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。２５℃にて２時間撹拌した後、溶液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水（３００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を減圧下にて濃縮し、残渣を得た。残渣を別のバッチ（２ｇスケールの化合物５ｂから生成）と合わせ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製し、黄色固体として化合物５ｃ（３０．０ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ ６７０．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0196】

工程３：化合物１ｏの調製
化合物５ｃ（１ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（１．１６ｇ、８．９６ｍｍｏｌ）及び３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）−ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（１．１１ｇ、４．４８ｍｍｏｌ、３等量）を０℃にて添加した。２５℃にて２時間撹拌した後、反応混合物を更なる水（３０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈した。水層を酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて、圧力をかけて濾過濃縮し、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥＡ＝１０／１〜２／１）により精製し、白色固体として化合物１ｏ（０．９９ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７８７．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0197】

工程４：化合物５ｄの調製
化合物１ｏ（０．９９ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７ｍＬ）溶液に、水（０．０４１ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）及びピリジニウムトリフルオロアセテート（０．２６３ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を添加した。ｔｅｒｔ−ブチルアミン（７ｍＬ）を添加し、反応混合物を１５分間２５℃にて撹拌した。次いで混合物を減圧下にて濃縮して泡状物を得た。泡状物をＣＨ_３ＣＮ（１０．０ｍＬ）に溶解させ、減圧下にて濃縮して白色泡状物として化合物５ｄ（０．９２５ｇ）を得、これを更に全く精製することなく次工程に使用した。

【0198】

工程５：化合物５ｅの調製
化合物５ｄ（０．９２５ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）及び水（０．２０５ｇ、１１．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、２，２−ジクロロ酢酸（２０ｍＬ、ＤＣＭ中６％）を添加した。２５℃にて２０分間撹拌後、混合物をピリジン（３ｍＬ）でクエンチして減圧下にて濃縮し、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１〜５／１）により精製し、白色泡状物として化合物５ｅ（０．４３ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４３２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0199】

工程６：化合物５ｇの調製
化合物５ｆ（４ｇ、１０．８３ｍｍｏｌ）のピリジン（４０ｍＬ）溶液に、４，４’−（クロロ（フェニル）メチレン）ビス（メトキシベンゼン）（４．４ｇ、１２．９９ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。２５℃にて２時間撹拌した後、反応混合物をメタノール（５ｍＬ）でクエンチし、減圧下にて濃縮して残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０／１〜２０／１）により精製し、黄色泡状物として化合物５ｇ（６．３ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６７２．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0200】

工程７：化合物５ｈの調製
化合物５ｇ（０．５ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（０．１７ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−イミダゾール（０．１５ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。２５℃にて１２時間撹拌した後、反応混合物をメタノール（２ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出し、有機層をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ×２）、ブライン（２０ｍＬ）で連続して洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて、減圧下にて濾過濃縮し、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０／１〜１０／１）により精製し、黄色油として化合物５ｈ（０．１４ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７８６．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0201】

工程８：化合物５ｉの調製
化合物５ｈ（０．５ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に、０℃にてＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．４９ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）及び３−（（クロロ（ジイソプロピル−アミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（０．４５ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間２５℃にて撹拌した後、反応混合物をＭｅＯＨ（３ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ）及び水（３０ｍＬ）で希釈した。水層を酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を引き続き無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、圧力をかけて濾過濃縮し、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥＡ＝１０／１〜１／１）により精製し、白色固体として化合物５ｉ（０．４８ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ９０３．５［ＭＨ−ｉＰｒ_２］^＋。

【0202】

工程９：化合物５ｊの調製
化合物５ｅ（０．２５ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液に、４Ａのモレキュラーシーブを添加し、得られた混合物を２５℃にて１０分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール塩素酸塩（０．４２ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を更に１０分間２５℃にて撹拌した。化合物５ｉ（０．４８ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃にて１時間撹拌した。次いでＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−（５−スルファニリデン−１，２，４−ジチアゾール−３−イル）−メタンイミドアミド（ＤＤＴＴ）（０．５ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃にて更に１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝１０／１〜３／１）により精製し、白色固体として化合物５ｊ（０．４２ｇ）を得た。

【0203】

工程１０：化合物５ｋの調製
化合物５ｊ（０．４２ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液及び水（０．０５６ｇ、３．１１５ｍｍｏｌ、１０等量）に、２，２−ジクロロ酢酸（ＤＣＭ中６％、２０ｍＬ）を添加した。２５℃にて２０分間撹拌した後、混合物をピリジン（３ｍＬ）でクエンチし、次いで減圧下にて濃縮して残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１〜２／１）により精製し、白色固体として化合物５ｋ（０．２９ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０４６．５［Ｍ＋１］^＋；

【0204】

工程１１：化合物５ｌ及び５ｍの調製
化合物５ｋ（０．３４ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のピリジン（８０ｍＬ）溶液に、２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスフィナン２−オキシド（０．１８ｇ、０．９７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を２５℃にて１時間撹拌した。次に３Ｈ−ベンゾ［ｃ］［１，２］ジチオール−３−オン１，１−ジオキシド（０．３２５ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下にて濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ ＤｕｒａＳｈｅｌｌ １５０ｍｍ×２５ｍｍ×５μｍ；水（１０ｍＭ ＨＮ_４ＨＣＯ_３）−ｖ／ｖ（Ａ）−ＣＨ_３ＣＮ（Ｂ）；Ｂが３７％〜６７％；流速：２５ｍＬ／分）により精製し、白色固体として、類似体５ｍ（４６ｍｇ）及び５ｌ（５９ｍｇ）の混合物を含む２つの画分を得た。各画分を次に、別個に実施した。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １０６０．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。（化合物５ｍ）。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １０６０．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。（化合物５ｌ）。

【0205】

工程１２：化合物５ｏの調製
化合物５ｍ（８０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）をメタンアミン（８ｍＬ、ＥｔＯＨ中に３５％）で処理した。２５℃にて１２時間撹拌した後、反応混合物を減圧下にて濃縮し化合物５ｏ（６２．８ｍｇ）を得、これを更に全く精製することなく、次工程に使用した。

【0206】

工程１３：化合物５及び６の調製
化合物５ｏ（６２．８ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）のピリジン（８ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（０．４６ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素（０．３７ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃にて１０時間撹拌した。イソプロポキシトリメチルシラン（０．９９ｇ、７．５５ｍｍｏｌ）を１５℃にて添加し、混合物を更に２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ ＤｕｒａＳｈｅｌｌ １５０ｍｍ×２５ｍｍ×５μｍ；水（０．０５％アンモニア水酸化物ｖ／ｖ）（Ａ）−ＣＨ_３ＣＮ（Ｂ）；Ｂが１％〜１６％；流速：２５ｍＬ／分）により精製し、白色固体として化合物５（アンモニウム塩：２７ｍｇ）及び化合物６（アンモニウム塩：１１ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。（化合物５）；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。（化合物６）。

【0207】

工程１４：５（ナトリウム塩）の調製
体積が２０ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（５８ｍｇの化合物５用）に添加し、ＤＩ水で洗浄した（２回）。次に、樹脂１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水（５０ｍＬ）溶液に添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水溶液を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積）で洗浄し、次いで、中性となるまでＤＩ水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（少なくとも４カラム体積）で洗浄して、次いで中性となるまで水（少なくとも４カラム体積）で洗浄した。化合物５（アンモニウム塩）をＤＩ水に溶解させ（５ｍＬに５８ｍｇ）、カラム上部に添加し、ＤＩ水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、５は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物５（ナトリウム塩）（５５．１ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝８．３９（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝４．３，８．７，１２．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０９−５．０２（ｍ，１Ｈ），４．９１（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，６．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３０−４．１７（ｍ，３Ｈ），４．０５−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），２．８２−２．６８（ｍ，２Ｈ），１．９３−１．８２（ｍ，１Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝５７．５９９，５４．５５６；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0208】

工程１５：６（ナトリウム塩）の調製
体積が８ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（２２ｍｇの化合物６用）に添加し、ＤＩ水で洗浄した（２回）。次に、ＤＩ水（５０ｍＬ）中の樹脂１５％ Ｈ_２ＳＯ_４に添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、ＤＩ水中の１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積）で洗浄し、次いで、中性となるまでＤＩ水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（少なくとも４カラム体積）で洗浄して、次いで中性となるまで水（少なくとも４カラム体積）で洗浄した。化合物６（アンモニウム塩）をＤＩ水に溶解させ（５ｍＬに３９ｍｇ）、カラム上部に添加し、ＤＩ水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、６は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物６（ナトリウム塩）（１０．１ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝８．４７（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），５．９５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．３，８．４，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１３−５．０５（ｍ，１Ｈ），４．９７−４．９０（ｍ，１Ｈ），４．５８（ｂｒｓ，１Ｈ），４．５３（ｔ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４７−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｔｄ，Ｊ＝５．４，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｂｒｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｂｒｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），２．９１−２．６９（ｍ，２Ｈ），２．１７−２．０１（ｍ，１Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝５５．８９６，５４．９３６；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0209】

実施例５ａ
工程１：化合物５ｐの調製
化合物５ｌ（６０ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）をメタンアミン（６ｍＬ、ＥｔＯＨ中に３５％）で処理した。２５℃にて１２時間撹拌した後、反応混合物を減圧下にて濃縮して化合物５ｐ（４７．１４ｍｇ）を得、これを更に全く精製することなく次工程で使用した。

【0210】

工程２：化合物７及び８の調製
化合物５ｐ（４７．１４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のピリジン（５ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（０．３４ｇ、３．４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素（０．２７ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃にて１０時間撹拌した。イソプロポキシトリメチルシラン（０．７５ｇ、５．６６ｍｍｏｌ）を１５℃にて添加し、混合物を更に２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ ＤｕｒａＳｈｅｌｌ １５０ｍｍ×２５ｍｍ×５μｍ；水（０．０５％アンモニア水酸化物ｖ／ｖ）（Ａ）−ＣＨ_３ＣＮ（Ｂ）；Ｂが１％〜１６％；流速：２５ｍＬ／分）により精製し、白色固体として化合物７（アンモニウム塩：８ｍｇ）及び化合物８（アンモニウム塩：１９ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。（化合物８）ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。（化合物７）。

【0211】

工程３：７（ナトリウム塩）の調製
体積が８ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（２０ｍｇの化合物７用）に添加し、ＤＩ水で洗浄した（２回）。次に、樹脂１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水（５０ｍＬ）溶液に添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水溶液を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積）で洗浄し、次いで、中性となるまでＤＩ水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（少なくとも４カラム体積）で洗浄して、次いで中性となるまで水（少なくとも４カラム体積）で洗浄した。化合物７（アンモニウム塩）をＤＩ水に溶解させ（５ｍＬに３９ｍｇ）、カラム上部に添加し、ＤＩ水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、７は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物７（ナトリウム塩）（１５．５ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝８．３２（ｓ，１Ｈ），８．２５（ｓ，２Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５７−５．４２（ｍ，１Ｈ），４．９８−４．８３（ｍ，３Ｈ），４．６３（ｂｒｓ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｂｒｓ，２Ｈ），４．１４（ｂｒｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），２．８５−２．６４（ｍ，２Ｈ），２．０４−１．９１（ｍ，１Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ５４．１２１，５２．８５３；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0212】

工程４：８（ナトリウム塩）の調製
体積が８ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（３９ｍｇの化合物８用）に添加し、ＤＩ水で洗浄した（２回）。次に、樹脂１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水（５０ｍＬ）溶液に添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水溶液を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積）で洗浄し、次いで、中性となるまでＤＩ水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（少なくとも４カラム体積）で洗浄して、次いで中性となるまで水（少なくとも４カラム体積）で洗浄した。化合物８（アンモニウム塩）をＤＩ水に溶解させ（５ｍＬに３９ｍｇ）、カラム上部に添加し、ＤＩ水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、８は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物８（ナトリウム塩）（２５．８ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝８．２１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），５．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８３−５．７４（ｍ，１Ｈ），５．０１（ｄｔ，Ｊ＝４．１，８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８８−４．８３（ｍ，１Ｈ），４．５９（ｂｒｓ，１Ｈ），４．４９−４．３８（ｍ，２Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２８−４．２０（ｍ，１Ｈ），４．１４−４．０４（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），２．８９−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．１３−２．０３（ｍ，１Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝５４．４８３，５２．２９１；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0213】

実施例６

【0214】

【化43】

【0215】

程１：中間体３ｆの調製
ジオール３ｅ（［１８３４５００−４５−６］、２７．２ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（８．３ｇ、１２１．７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（６００ｍＬ）に溶解させ、続いてｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１０．４ｇ、６９．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、その後ＮａＨＣＯ_３水溶液に注いでＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて減圧下にて濾過濃縮した。シリカカラムクロマトグラフィー（勾配溶離：０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃ）により粗生成物を精製し、中間体１ｂとその３’−ヒドロキシル保護異性体（構造は図示せず）の混合物（合計で２５ｇ、収率７９％）を得た。この位置異性体混合物を分取逆相ＨＰＬＣ（固定相：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ，１０μｍ Ｍａｘ−ＲＰ、２５０×５０ｍｍ；移動相：Ｈ_２Ｏ（Ａ）−ＭｅＣＮ（Ｂ）；定組成溶離：９２％ Ｂ、流速：１１０ｍＬ／分）により精製し、第１の回避異性体（ｅｌｕｄｉｎｇ ｉｓｏｍｅｒ）として純粋な中間体３ｆを得た（１２ｇ、収率３７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ−０．４２（ｓ，３Ｈ），−０．２１（ｓ，３Ｈ），０．６２（ｓ，９Ｈ），１．８９−２．０２（ｍ，１Ｈ），２．１７−２．３０（ｍ，２Ｈ），３．０７−３．１５（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｓ，６Ｈ），３．８３−３．９０（ｍ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０３−５．１５（ｍ，１Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７−７．３８（ｍ，６Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．６３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），８．４８（ｓ，１Ｈ），１１．０５（ｂｒｓ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７８５．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0216】

工程２：化合物６ａの調製
中間体３ｆ（２．５ｇ、３．２ｍｍｏｌ）のピリジン（１２．５ｍＬ）及び１，４−ジオキサン（３５ｍＬ）溶液に、２ｇの４Åの活性化ＭＳを添加し、得られた反応混合物を室温で１５分間撹拌した。２−クロロ−４Ｈ−１，３，２−ベンゾジオキサホスフォリン−４−オン（１．２６ｇ、６．２ｍｍｏｌ）の乾燥１，４−ジオキサン（２．５ｍＬ）溶液を添加し、撹拌を３０分間続けた。水とピリジンの１／１混合物（１５ｍＬ）、続いて過剰量の水（５０ｍＬ）を添加して、反応混合物をクエンチした。得られた混合物を濾過してＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて真空下にて濾過濃縮し、白色固体として粗中間体６ａ（３．３ｇ）を得た。粗生成物を更に精製することなく、次工程にてそのまま使用した。
ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ８４９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0217】

工程３：化合物６ｂの調製
粗中間体６ａ（６．５ｇ、５．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８０ｍＬ）溶液に、Ｈ２Ｏ（１．０ｍＬ、５６．７ｍｍｏｌ）及びジクロロ酢酸（１．４６ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。過剰量のジクロロ酢酸（４７２μＬ、５．７ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を２０分間続けた。ｔｅｒｔ−ブチルアミン（２６ｍＬ、２４８．１ｍｍｏｌ）を添加して反応をクエンチし、真空下にて濃縮した。得られた残渣をシリカカラムクロマトグラフィー（勾配溶離：０〜３０％のＤＣＭ中のＭｅＯＨ）により精製し、白色固体として中間体１ｄを得た（３ｇ、収率：８２％）。ｔｅｒｔ−ブチルアミンの存在下にて１時間、ＤＣＭ（３０ｍＬ）の溶液として撹拌した後、減圧下にて濃縮し高真空下で乾燥させることにより、中間体６ｂを対応するｔｅｒｔ−ブチルアンモニウム塩に転換した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δｐｐｍ−０．４（ｓ，３Ｈ），−０．１（ｓ，３Ｈ），０．６（ｓ，９Ｈ），１．３（ｓ，９Ｈ），１．７−１．８（ｍ，１Ｈ），２．２（ｄｔ，Ｊ＝１２．９，８．６Ｈｚ，１Ｈ），２．３−２．４（ｍ，１Ｈ），３．５−３．６（ｍ，２Ｈ），４．２−４．４（ｍ，２Ｈ），５．１−５．２（ｍ，１Ｈ），５．８（ｂｒｓ，１Ｈ），６．７（ｄ，Ｊ＝５８３．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．６−７．７（ｍ，２Ｈ），８．０（ｂｒｓ，３Ｈ），８．１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），８．５（ｓ，１Ｈ），１１．０（ｂｒｓ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５４７．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0218】

工程４：化合物６ｃの調製
１Ｈ−イミダゾリウム塩素酸塩（ＩＭＰ、２．４ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）を、窒素下にて中間体６ｂ（５００ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（２３ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を室温で１０分間撹拌し、その後、５’−Ｏ−（４，４−ジメトキシトリチル）−Ｎ２−イソブチリル−３’−Ｏ−メチルグアノシン−２’−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）（［１７９４７９−０４−０］、１．４ｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（２ｍＬ）溶液を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、ｔＢｕＯＯＨ（デカン中に５．５Ｍ、０．７１ｍＬ、３．９ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を１時間続けた。反応混合物を減圧下にて濾過濃縮して無色油を得、これを分取逆相ＨＰＬＣ（固定相：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ、５μｍ、１５０×２５ｍｍ；移動相：Ｈ_２Ｏ（Ａ）−ＭｅＣＮ（Ｂ）；勾配溶離：１８％〜４８％のＡ中のＢ、流速：２５ｍＬ／分）により精製し、中間体６ｃを得た（２５０ｍｇ、収率：３１％）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５１５．４［（Ｍ＋Ｈ）／２］^＋。

【0219】

工程５：化合物６ｄの調製
中間体６ｃ（１００ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）のピリジン（６０ｍＬ）溶液にＤＭＯＣＰ（５２ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３時間室温で撹拌した。水（１７ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）及びＩ２（１２０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を１時間続けた。反応をＮａ２ＳＯ３水溶液（８ｍＬ）でクエンチし、減圧下にて濾過濃縮した。残渣を分取逆相ＨＰＬＣ（固定相：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ、５μｍ、１５０×２５ｍｍ；移動相：１０ｍＭの重炭酸アンモニア水溶液（Ａ）−ＭｅＣＮ（Ｂ）；勾配溶離１７％〜４７％のＡ中のＢ；流速：２５ｍＬ／分）により精製し、白色固体として中間体１ｆ（２５０ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）を得た。以前の手順を、同様のスケールを用いて繰り返し、総量が１００ｍｇ（収率：４６％）の中間体６ｄを生成した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １０２７．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0220】

工程６：化合物９の調製
中間体６ｄ（１００ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）を、３３％メチルアミンのエタノール（４０ｍＬ）溶液中で、室温で６時間撹拌し、その後、反応混合物を減圧下にて濃縮した。この手順を６８ｍｇスケールで繰り返した。得られた粗生成物の全量をピリジン（８ｍＬ）に溶解させ、続いてトリエチルアミン（１．１ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素（８４７ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃にて１２時間撹拌し、その後室温まで冷却した。イソプロポキシトリメチルシラン（２．８ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）を添加し、更に１２時間撹拌を続けた。減圧下での濃縮後に得られた残渣を分取逆相ＨＰＬＣ（固定相：Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８，５μｍ，１５０×２５ｍｍ；移動相：０．０５％水酸化アンモニア水溶液（Ａ）−ＭｅＣＮ（Ｂ）；勾配溶離：０〜１５％のＡ中のＢ；流速：３５ｍＬ／分）により精製し、化合物９をアンモニウム塩（６０ｍｇ、５０％）として得た。Ｄｏｗｅｘ（登録商標）５０ＷＸ８ Ｎａ＋形樹脂を詰めたカラムでの、水溶液の溶出により、化合物９（ナトリウム塩）への転換を行った。_１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．２８−１．４１（ｍ，１Ｈ），２．２２−２．３９（ｍ，２Ｈ），３．４９（ｓ，３Ｈ），３．５５−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９０−４．００（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｂｒｓ，１Ｈ），４．３６（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７６−４．８４（ｍ，１Ｈ），４．９０（ｑ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｔｄ，Ｊ＝９．２，４．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．５７（ｂｒｓ，２Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｂｒｓ，２Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），１０．７３（ｓ，１Ｈ）；３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．８３（ｓ，１Ｐ），１．６３（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６８５．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0221】

実施例７

【0222】

【化44】

【0223】

工程１：化合物７ａの調製
中間体６ｂのｔｅｒｔ−ブチルアンモニウム塩（７００ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）及び活性化モレキュラーシーブに、アクティベータ４２（［１７５２０５−０９−１］、９．９ｍＬの０．２５Ｍ溶液、２．４９ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ溶液を添加した。得られた混合物を７５分間窒素下にて振盪し、その後、５’−Ｏ−（４，４−ジメトキシトリチル）−Ｎ２−イソブチリル−３’−Ｏ−メチルグアノシン−２’−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）１ｏ（無水ＭｅＣＮ（９ｍＬ）中に１．２８ｇ、１．４ｍｍｏｌ、使用前にモレキュラーシーブで溶液を乾燥）の溶液を添加した。反応混合物を１時間振盪し、続いて過剰部の１ｏ（ＭｅＣＮ中に２４８ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ、使用前にモレキュラーシーブで溶液を乾燥）を添加し、更に１時間振盪した後、第３部の５’−Ｏ−（４，４−ジメトキシトリチル）−Ｎ２−イソブチリル−３’−Ｏ−メチルグアノシン−２’−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）（ＭｅＣＮ中に９８ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ、使用前にモレキュラーシーブで溶液を乾燥）を添加した。振盪を１時間続け、その後、反応混合物を減圧下にて濃縮した。ピリジン（１０ｍＬ）を添加し、続いてフェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ、８５４ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間振盪した。濾過によりモレキュラーシーブを取り除いてＤＣＭで洗浄し、濾液を濃縮して得られた残渣をＭｅＣＮと共蒸発させた。粗生成物７ａを次工程にてそのまま使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６７２．８［Ｍ−Ｈ］⁻。

【0224】

工程２：化合物７ｂの調製
水（２０４μＬ、１１．３ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（１．８ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）、及びジクロロ酢酸（３７０μＬ、４．５ｍｍｏｌ）を、粗中間体７ａのＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を１時間撹拌し、続いてピリジン（４５７μＬ、５．６ｍｍｏｌ）でクエンチして、減圧下にて濃縮した。粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（勾配溶離：ＤＣＭ中に５〜２０％のＭｅＯＨ）により精製し、中間体７ｂ（７００ｍｇ、純度：７５％、収率：４４％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １０４５．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0225】

工程３：化合物７ｃの調製
ＤＭＯＣＰ（１．１ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を中間体７ｂ（６２５ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）のピリジン（２２ｍＬ）溶液に添加し、反応混合物を室温にて９０分間撹拌した。次に、水（７８ｍｇ、５９．８ｍｍｏｌ）及び３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン（５０３ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を４０分間続けた。ブラインを添加して反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄してＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下にて濾過濃縮して粗中間体７ｃを得、これを次工程にてそのまま使用した。
ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １０５９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0226】

工程４：ジアステレオマー化合物１０〜１３の調製
粗中間体７ｃを、３３％メチルアミンのエタノール（３０ｍＬ）溶液で５０℃にて４時間撹拌した。減圧下での濃縮後に得られた残渣を、トリエチルアミン（４．２ｍＬ）とピリジン（４．８ｍＬ）の混合物に溶解させ、これにトリエチルアミン三フッ化水素（２．５ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を５０℃にて３時間撹拌した後室温まで冷却し、続いてイソプロポキシトリメチルシラン（３．２ｍＬ、１７．９ｍｍｏｌ）を添加して、撹拌を１時間続けた。次に水を添加し、得られた水相をＥｔＯＡｃで洗浄して凍結乾燥した。メタノールを油性の凍結乾燥物に添加し、粗ジアステレオ異性体１０〜１３の沈殿を得た。分取逆相ＨＰＬＣによる精製（固定相：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ ＯＢＤ、５μｍ、２５０×３０ｍｍ；移動相：０．２５％の重炭酸アンモニア水溶液（Ａ）−ＭｅＣＮ（Ｂ）；勾配溶離：Ａ中に０〜１５％のＢ（４５分）、流速：３０ｍＬ／分）により、４種類全てのジアステレオ異性体を得た：化合物１０（２０ｍｇ、収率：中間体７ｂから４．５％）、化合物１１（１８ｍｇ、収率：中間体７ｂから４％）、化合物１２（４４ｍｇ、収率：中間体７ｂから１０％）、及び化合物１３（６０ｍｇ、収率：中間体７ｂから１３．５％）。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ Ｎａ＋形樹脂を詰めたカラムでの、水溶液の溶出により、全てを対応するナトリウム塩に転換した。

【0227】

化合物１０。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３１−１．４３（ｍ，１Ｈ），２．２６（ｄｔ，Ｊ＝１３．２，９．１Ｈｚ，１Ｈ），２．３６−２．４８（ｍ，１Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｍ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７６−３．９１（ｍ，２Ｈ），４．０１−４．１４（ｍ，２Ｈ），４．１８（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，４．１，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｑ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｄｔ，Ｊ＝１０．２，３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．２，８．８，３．９Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｂｒｓ，２Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｂｒｓ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），１０．６４（ｂｒｓ，１Ｈ）；３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ５３．４９（ｓ，１Ｐ），５５．６４（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0228】

化合物１１：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３１−１．４２（ｍ，１Ｈ），２．２２（ｄｔ，Ｊ＝１３．３，８．７Ｈｚ，１Ｈ），２．５２−２．６０（ｍ，１Ｈ），３．５３（ｓ，３Ｈ），３．７１−３．８０（ｍ，２Ｈ），３．８３−３．９０（ｍ，２Ｈ），４．１２（ｂｒｑ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｄｔ，Ｊ＝９．０，４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｑ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．０，９．４，４．１Ｈｚ，１Ｈ），５．４５（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｂｒｓ，２Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｂｒｓ，２Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），１０．５６（ｓ，１Ｈ）；３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ５４．０３（ｓ，１Ｐ），５６．８６（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0229】

化合物１２：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．２１−１．３３（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．３９（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），３．４６−３．５３（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｂｒｔ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１１−４．２６（ｍ，２Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｑ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，８．７，４．３Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｂｒｓ，２Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｂｒｓ，２Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），１０．５６（ｓ，１Ｈ）；３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ５６．３６（ｓ，１Ｐ），５９．３５（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0230】

化合物１３：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３２（ｂｒｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），２．２４−２．４１（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｓ，３Ｈ），３．４９−３．５９（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｑ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９３−４．０５（ｍ，２Ｈ），４．９５（ｂｒｓ，１Ｈ），４．３６（ｄｄ，Ｊ＝９．８，４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．６，４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９３（ｑ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３６−５．５０（ｍ，１Ｈ），５．８０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｂｒｓ，２Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｂｒｓ，２Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），１０．５７（ｓ，１Ｈ）；３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ５４．４６（ｓ，１Ｐ），５８．６３（ｓ，１Ｐ），５８．６６（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７１７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0231】

実施例８に示す反応スキームは、本発明の化合物１４、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0232】

実施例８

【0233】

【化45】

【0234】

【化46】

【0235】

実施例９に示す反応スキームは、本発明の化合物１５、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0236】

実施例９

【0237】

【化47】

【0238】

【化48】

【0239】

実施例１０に示す反応スキームは、本発明の化合物１６、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0240】

実施例１０

【0241】

【化49】

【0242】

【化50】

【0243】

実施例１１

【0244】

【化51】

【0245】

【化52】

【0246】

【化53】

【0247】

工程１：化合物１１ｂの調製
化合物１１ａ（４．１ｇ、１６．３８３ｍｍｏｌ、１．０等量）のピリジン（５０ｍＬ）溶液に、４−ジメチルアミノピリジン（０．４ｇ、３．２７７ｍｍｏｌ、０．２等量）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（３．７０４ｇ、２４．５７５ｍｍｏｌ、１．５等量）を２５℃にて添加した。次に、反応混合物を２５℃にて１２時間撹拌した。溶媒を減圧下にて濃縮して残渣を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０／１〜１０／１）により精製し、白色固体として化合物１１ｂ（２．８６ｇ、収率４８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．３２（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），６．４７（ｄｄ，Ｊ＝５．２，７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３１−４．１８（ｍ，２Ｈ），４．０６−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．９４−３．８４（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．０６（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），０．８５（ｓ，９Ｈ），０．０３（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳｍ／ｚ ３６５．１［Ｍ＋１］^＋。

【0248】

工程２：化合物１１ｃの調製
化合物１１ｂ（３．５ｇ、９．６０２ｍｍｏｌ、１．０等量）の水／ＴＨＦ（ｖ／ｖ ２／１、１５０ｍＬ）溶液に、炭酸ナトリウム（１．３４８ｇ、１２．４８２ｍｍｏｌ、１．３等量）及びベンジルオキシカルボニルクロリド（２．１２９ｇ、１２．４８２ｍｍｏｌ、１．３等量）を添加した。混合物を２５℃にて２４時間撹拌した。ＮＨ_４Ｃｌ（水溶液）を添加して反応混合物をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈した。有機部分を水（５０ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、減圧下にて濾過濃縮して残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝ＥｔＯＡｃに対して１０／１）により精製し、白色固体として化合物１１ｂ（２．７２ｇ、収率５７％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．３４（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．４３−７．２９（ｍ，５Ｈ），６．４２（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６２（ｓ，２Ｈ），５．１９−４．９９（ｍ，３Ｈ），４．５３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｓ，１Ｈ），３．９９−３．７７（ｍ，２Ｈ），２．８６−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．６０−２．４４（ｍ，１Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ５２１．１［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

【0249】

工程３：化合物１１ｄの調製
化合物１１ｃ（２．７ｇ、５．４１５ｍｍｏｌ、１．０等量）のピリジン（３０ｍＬ）溶液に、ベンゾイルクロリド（１．１４２ｇ、８．１２２ｍｍｏｌ、１．５等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を２５℃にて１２時間撹拌した。水（５ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチした後、ＮＨ_４ＯＨ（５ｍＬ）を添加した。混合物を２５℃にて１時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）で洗浄してＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝ＥｔＯＡｃに対して１０／１）により精製し、白色固体として化合物１１ｄ（２．４２ｇ、収率７４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）９．０３（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．６６−７．５７（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．３０（ｍ，５Ｈ），６．６２−６．３７（ｍ，１Ｈ），５．２４−４．９８（ｍ，３Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２４−４．０３（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．７６（ｍ，２Ｈ），２．９７−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．４６（ｍ，１Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６０３．２［Ｍ＋１］^＋。

【0250】

工程４：化合物１１ｅの調製
化合物１１ｄ（２．４ｇ、３．９８２ｍｍｏｌ、１．０等量）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、テトラ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中に１Ｍ、１９．９１ｍＬ、１９．９０９ｍｍｏｌ、５．０等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を２５℃にて２時間撹拌した。反応混合物を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解させ、水（５０ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（アセトン／ＥｔＯＡｃ＝３／１〜１／１）により精製し、白色固体として化合物１１ｅ（１．８９ｇ、収率９７％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．７２（ｓ，２Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７８−７．４７（ｍ，３Ｈ），７．４４−７．２０（ｍ，５Ｈ），６．５３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ），４．１４−３．９９（ｍ，１Ｈ），３．９４−３．６４（ｍ，２Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．４７（ｍ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８９．１［Ｍ＋１］^＋。

【0251】

工程５：化合物１１ｆの調製
化合物１１ｅ（１．４ｇ、２．８６６ｍｍｏｌ、１．０等量）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１．４５７ｇ、４．２９９ｍｍｏｌ、１．５等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を２５℃にて２時間撹拌した。ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチし、混合物を３０分間撹拌した。混合物をＥＡ（５０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）で洗浄してＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝ＥｔＯＡｃに対して１０／１）により精製し、白色固体として化合物１１ｆ（２．０３ｇ、収率８９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．９７（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６７−７．５８（ｍ，１Ｈ），７．５８−７．４８（ｍ，２Ｈ），７．４５−７．１４（ｍ，１５Ｈ），６．７８（ｍ，４Ｈ），６．４４（ｓ，１Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），４．９４（ｓ，１Ｈ），４．５９（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．１１−２．９４（ｍ，１Ｈ），２．６２（ｓ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ７９１．２［Ｍ＋１］^＋。

【0252】

工程６：化合物１１ｇの調製
化合物１１ｆ（２．０３ｇ、２．５６７ｍｍｏｌ、１．０等量）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）溶液に、１０％ Ｐｄ／Ｃ（２．０ｇ）をアルゴン雰囲気下にて添加した。反応混合物を水素雰囲気で置き換えた（３回）。反応混合物を２５℃にて１８時間撹拌した（５０ｐｓｉ）。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（１００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を減圧下にて濃縮し、残渣を得た。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製し、白色固体として化合物１１ｇ（１．２４ｇ、収率７４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）９．１０（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５７（ｍ，１Ｈ），７．５４−７．４６（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．３３（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．１５（ｍ，８Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），６．４２（ｄｄ，Ｊ＝３．６，６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９１−３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，６Ｈ），３．４０（ｍ，２Ｈ），２．８２（ｍ，１Ｈ），２．４５−２．３０（ｍ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６５７．２［Ｍ＋１］^＋。

【0253】

工程７：化合物１１ｈの調製
化合物８ｋ（１６．５０ｇ、４６．６９８ｍｍｏｌ、１．００等量）のピリジン（２００ｍＬ）溶液に、４，４’−（クロロ（フェニル）メチレン）ビス（メトキシベンゼン）（２３．７３４ｇ、７０．０４８ｍｍｏｌ、１．５０等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を、２５℃にて終夜撹拌した。反応混合物をメタノール（１０ｍＬ）でクエンチし、濃縮して残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０／１〜１０／１）により精製し、黄色固体として化合物１１ｈ（２３．９ｇ、収率７８％）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６５６．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0254】

工程８：化合物１１ｉの調製
化合物１１ｈ（２３．９ｇ、３６．４５０ｍｍｏｌ、１．００等量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（８．２４１ｇ、５４．６７５ｍｍｏｌ、１．５０等量）及び１Ｈ−イミダゾール（６．２０４ｇ、９１．１２４ｍｍｏｌ、２．５０等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を、２５℃にて終夜撹拌した。反応混合物をメタノール（５ｍＬ）でクエンチし、濃縮して残渣を得た。残渣を分取ＨＰＬＣ（水（０．２２５％のギ酸−ＣＨ_３ＣＮ））により精製し、黄色固体として化合物１１ｉ（６．７ｇ、収率２４％）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７７０．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0255】

工程９：化合物１１ｊの調製
化合物１１ｉ（５．０００ｇ、６．４９４ｍｍｏｌ、１．００等量）の１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（７９．３３４ｍｇ、０．６４９ｍｍｏｌ、０．１等量）、Ｎ，Ｎ’−メタンジイリデンジシクロヘキサンアミン（４．０２０ｇ、１９．４８２ｍｍｏｌ、３等量）及び４−オキソペンタン酸（１．５０８ｇ、１２．９８８ｍｍｏｌ、２．０等量）を２５℃にて添加した。混合物を２５℃にて３時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を減圧下にて濃縮し、残渣を得た。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解させ、水（５０ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製し、白色泡状物として化合物１１ｊ（５．１ｇ、収率９０％）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ８６８．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0256】

工程１０：化合物１１ｋの調製
化合物１１ｊ（５．１ｇ、５．８７５ｍｍｏｌ、１．００等量）のＤＣＭ（１２ｍＬ）溶液に、２，２，２−トリフルオロ酢酸（３００μＬ）及びトリエチルシラン（６ｍＬ）を添加した。混合物を２５℃にて１０分間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３０ｍＬ×３）で希釈した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０／１〜１０／１）により精製し、黄色固体として化合物１１ｋ（３．１ｇ、収率９３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）１２．１１（ｓ，１Ｈ），１１．６４（ｓ，１Ｈ），８．４２−８．２２（ｍ，１Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７４（ｓ，１Ｈ），５．５４（ｄｄ，Ｊ＝５．０，６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄｄ，Ｊ＝２．４，４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｂｒｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｔｄ，Ｊ＝４．９，１１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６１−３．５１（ｍ，１Ｈ），２．７７（ｓｐｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７０−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ），１．１１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，３Ｈ），０．０６（ｓ，３Ｈ）。

【0257】

工程１１：化合物１１ｌの調製
化合物１１ｋ（３．１ｇ、５．４８０ｍｍｏｌ、１．００等量）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液に、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（４．２５０ｇ、３２．８８０ｍｍｏｌ、６．０等量）及び３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（３．８９１ｇ、１６．４４０ｍｍｏｌ、３．０等量）を０℃にて添加した。混合物を０℃にて２時間撹拌した。ＭｅＯＨ（３ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチし、ＥＡ（５０ｍＬ）で希釈した。有機層をＮａＨＣＯ_３（４０ｍＬ）及び食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜１／１）により精製し、無色の油として化合物１１ｌ（３．１ｇ、収率７４％）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６８３．１［Ｍ−Ｎ（ｉＰｒ）_２＋１８］^＋。

【0258】

工程１２：化合物１１ｍの調製
化合物１１ｌ（２．１ｇ、２．７４２ｍｍｏｌ、１．０等量）のアセトニトリル（１６ｍＬ）溶液に、１Ｈ−テトラゾール（０．４５Ｍ）のアセトニトリル／水（９／１、１８／２ｍＬ）溶液を２５℃にて添加した。溶液を２５℃にて２時間撹拌した。反応混合物を０℃まで冷却し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈して冷水（２０ｍＬ）、５％の冷重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）、冷水（２０ｍＬ）で連続して洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮して無色の油として化合物１１ｍ（１．６２ｇ、収率８７％）を得た。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）１１．４３（ｓ，１Ｐ），７．１０（ｓ，１Ｐ）；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６８３．１［Ｍ＋１］^＋。

【0259】

工程１３：化合物１１ｎの調製
化合物１１ｇ（１．２ｇ、１．８２７ｍｍｏｌ、１．０等量）の、アセトニトリル／ジクロロメタン／テトラクロロメタンの混合物（１／１／１、３０ｍＬ）及びトリエチルアミン（９００μＬ）の溶液を、化合物１１ｍ（１．６２ｇ、２．３７５ｍｍｏｌ、１．３等量）を含有する密閉したフラスコに添加した。得られた溶液を２５℃にて２時間撹拌した。反応混合物を減圧下にて濃縮乾固し、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１００／２）により精製し、白色泡状物として化合物１１ｎ（１．２１ｇ、収率５０％）を得た。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）９．１３（ｓ，１Ｐ），８．７３（ｓ，１Ｐ）；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １３３７．５［Ｍ＋１］^＋。

【0260】

工程１４：化合物１１ｏの調製
化合物１１ｎ（１．１ｇ、０．８２２ｍｍｏｌ、１．０等量）のＭｅＣＮ（３０ｍＬ）溶液に、ヒドラジン酢酸塩（７５７．４６２ｍｇ、８．２２５ｍｍｏｌ、１０．０等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を２５℃にて２時間撹拌した。次に、反応混合物をＥＡ（５０ｍＬ）で希釈して水（５０ｍＬ）とブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１００／５）により精製し、白色固体として化合物１１ｏ（８３３ｍｇ、収率８２％）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １２６１．２［Ｍ＋２３］^＋。

【0261】

工程１４：化合物１１ｐの調製
化合物１１ｏ（６５３ｍｇ、０．５２７ｍｍｏｌ、１．０等量）、及び４Åのモレキュラーシーブの、１，４−ジオキサン（９．０ｍＬ）及びピリジン（３．０ｍＬ）溶液に、２−クロロ−４Ｈ−１，３，２−ベンゾジオキサホスフォリン−４−オン（１６０．０６８ｍｇ、０．７９０ｍｍｏｌ、１．５等量）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）溶液を添加した。反応混合物を２５℃にて３０分間撹拌した。水／ピリジン（１／１、５ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチし、得られた混合物をＮａＨＣＯ_３溶液（２０ｍＬ）に注いだ。混合物をＥｔＯＡｃ（３０×３ｍＬ）で抽出し、層を分画した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を減圧下にて濃縮乾固し、無色の泡状物として化合物１１ｐ（７２３ｍｇ、粗生成物）を得、これを更に精製することなく次工程にて使用した。

【0262】

工程１５：化合物１１ｑの調製
化合物１１ｐ（７２３ｍｇ、粗生成物）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に、水及びＤＣＡ（ＤＣＭ中に６％、５ｍＬ）を添加した。反応混合物を２５℃にて３０分間撹拌した。ピリジン（３ｍＬ）を添加し１０分間撹拌しながら反応混合物をクエンチした。反応混合物を減圧下にて濃縮乾固し残渣を得た。得られた残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０^＊２５ ５μ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＡＣＮ、２２％〜４２％、流速：２５ｍＬ／分、溶出時間：８分）により精製し、白色固体として化合物１１ｑ（１９７ｍｇ、２工程で収率３５％）を得た。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）９．２３（ｓ，１Ｐ），８．６２（ｓ，１Ｐ），４．４８（ｓ，１Ｐ）；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １００１．５［Ｍ＋１］^＋。

【0263】

工程１６：化合物１１ｒの調製
化合物１１ｑ（１９７ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ、１．０等量）及び４Åのモレキュラーシーブのピリジン（６０ｍＬ）溶液に、２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスフィナン２−オキシド（１２７．１３１ｍｇ、０．６８９ｍｍｏｌ、３．５等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を２５℃にて１時間撹拌した。化合物１１ｒを含有する反応混合物（Ｐｙ中に０．００３２８Ｍ、６０ｍＬ）を、更に精製することなく次工程で使用した。

【0264】

工程１７：化合物１１ｓの調製
水（３６．４９ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、１０．０等量）を添加して化合物１１ｒ（Ｐｙ中に０．００３２８Ｍ、６０ｍＬ）の溶液をクエンチし、その後Ｉ_２（２５０ｍｇ、０．９８５ｍｍｏｌ、５．０等量）を溶液に添加した。混合物を２５℃にて１時間撹拌した。次に、Ｎａ_２ＳＯ_３水溶液（２ｍＬ）を添加して本混合物をクエンチして濾過し、濾液を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０^＊２５ ５μ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＡＣＮ、２８％〜４８％、流速：２５ｍＬ／分、溶出時間：８分）により精製し、白色固体として化合物１１ａ（６８ｍｇ、２工程で収率３５％）を得た。ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ９９９．１［Ｍ＋１］^＋。

【0265】

工程１８：化合物１１ｔの調製
化合物１１ｓ（３５ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、１．０等量）のＭｅＮＨ_２溶液（ＥｔＯＨ中に３３％、２ｍＬ）を２５℃にて１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、黄色固体として化合物１１ｔ（粗生成物、３２ｍｇ）を得た。

【0266】

工程１８：化合物１７の調製
化合物１１ｔ（３２ｍｇ、粗生成物）のピリジン（２ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２０９．８０５ｍｇ、２．０７３ｍｍｏｌ、５０等量）及びトリエチルアミン三フッ化水素（１６７．１２４ｍｇ、１．０３７ｍｍｏｌ、２５等量）を２５℃にて添加した。反応混合物を５０℃にて１２時間撹拌した。反応混合物にＴＨＦ（１ｍＬ）及びイソプロポキシトリメチルシラン（５４８．５１６ｍｇ、４．１４７ｍｍｏｌ、１００等量）を２５℃にて添加し、混合物を１２時間撹拌した。混合物を減圧下にて濃縮し残渣を得た。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８ １５０^＊２５ ５μ；移動相：水（０．０５％のアンモニア水酸化物ｖ／ｖ）−ＡＣＮ、０％〜１５％、流速：３５ｍＬ／分、溶出時間：１０分）により精製し、白色固体として、化合物１７をアンモニウム塩として得た（９．５ｍｇ、２工程で収率３５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．６６−７．９８（ｍ，２Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），６．２４（ｓ，１Ｈ），６．０４−５．５０（ｍ，２Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ），４．４２−３．９３（ｍ，７Ｈ），２．７６（ｓ，１Ｈ），２．４４（ｓ，１Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）７．６２（ｓ，１Ｐ），７．４９（ｓ，１Ｐ），−３．４０（ｓ，１Ｐ）。

【0267】

工程１９：化合物１７（ナトリウム塩）の調製
体積５ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形）をビーカー（９．５ｍｇの化合物１７（アンモニウム塩）用）に添加し、脱イオン水（２回）で洗浄した。次に、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水（５０ｍＬ）溶液を樹脂に添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４のＤＩ水溶液を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、次いで、ｐＨが中性となるまでＤＩ水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨ水溶液（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、ｐＨが中性となるまで水（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。化合物１７（アンモニウム塩）をＤＩ水に溶解させ（２ｍＬに９．５ｍｇ）、カラム上部に添加し、ＤＩ水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）により検出されるように、生成物は初期の画分で溶出した。生成物を凍結乾燥して、白色固体として化合物１７（ナトリウム塩）（７．４ｍｇ、純度９８％、収率７１．８１９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．３１（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．６９（ｍ，１Ｈ），４．６６（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．３１（ｍ，２Ｈ），４．２４−４．０６（ｍ，５Ｈ），２．８９−２．８４（ｍ，１Ｈ），２．５１−２．４６（ｍ，１Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）７．５６（ｓ，１Ｐ），−１．８６（ｓ，１Ｐ）；ＬＣＭＳ：ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ６５７．８［Ｍ＋１］^＋。

【0268】

実施例１２

【0269】

【化54】

【0270】

【化55】

【0271】

工程１：化合物１２ｂの調製
化合物１２ａ（７．８ｇ、２９．１８７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２．９９５ｇ、２４．５１７ｍｍｏｌ）のピリジン（２４０ｍＬ）溶液に、ＴｒＣｌ（２７．６６５ｇ、９９．２３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を８０℃にて５時間加熱した後、反応物を周囲温度まで冷却してＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）でクエンチした。反応混合物を濃縮してシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥＡ＝０／１〜１：１）により精製し、白色固体として化合物１２ｂ（１０．４５ｇ、１３．８９９ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７７４．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。

【0272】

工程２：化合物１２ｃの調製
化合物１２ｂ（１１．５ｇ、１５．２９５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（４．６７１ｇ、３８．２３８ｍｍｏｌ）をピリジン（３００ｍＬ）に溶解させた。本溶液を０℃まで冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸無水物の溶液（２０．６７２ｍＬ、１２２．３６２ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を０℃にて３０分間維持し、次いで３時間にわたり、室温まで温めた。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍＬ）で希釈し、水（３００ｍＬ、０℃）で抽出した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル（ＰＥ）／ＥｔＯＡｃ＝１：０〜１：１）により精製し、白色非晶質固体として化合物１２ｃを得た（１１ｇ、１０．８２７ｍｍｏｌ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １０３７．８［Ｍ＋Ｎａ］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），７．３９−７．２９（ｍ，１２Ｈ），７．２８−７．１７（ｍ，１８Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．４５（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８６−５．８１（ｍ，１Ｈ），４．４８（ｑ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｄｄ，Ｊ＝４．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ）。

【0273】

工程３：化合物１２ｄの調製
化合物１２ｃ（９．５ｇ、９．３５０ｍｍｏｌ）を、テトラブチルアンモニウムニトライト（２１．５７９ｇ、７４．８０４ｍｍｏｌ）を含有するトルエン（２００ｍＬ）、及び水（２６ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を４０時間激しく撹拌した後、ｔ−ＢｕＯＣＨ_３（２００ｍＬ）及び水（２×１００ｍＬ）で混合物を抽出した。次に有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮して粗生成物を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１：０〜２：１）により精製し、白色非晶質固体として化合物１２ｄを得た（３．８７ｇ、５．２７４ｍｍｏｌ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７５６．０［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

【0274】

工程４：化合物１２ｅの調製
化合物１２ｄ（３．８７ｇ、５．２７４ｍｍｏｌ）、ＮＨ_４Ｃｌ（０．５６４ｇ、１０．５４７ｍｍｏｌ）、ＮａＮ_３（２．１ｇ、３２．３０３ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１６ｍＬ）及び水（２．４ｍＬ）の混合物を還流状態（１００℃）にて１時間加熱した。次に反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を水（３×１００ｍＬ）で洗浄して無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ １：０〜３：１）により精製し、他の異性体（５００ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）に加えて、白色非晶質固体として化合物１２ｅ（２．８６ｇ、３．６８１ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７９９．１［Ｍ＋Ｎａ］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．００（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｄｔ，Ｊ＝１．５，７．２Ｈｚ，１２Ｈ），７．２６−７．１７（ｍ，１８Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．５３（ｂｒｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５８−４．４９（ｍ，１Ｈ），４．４３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９１−３．８３（ｍ，１Ｈ），３．４９−３．３９（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１０．５Ｈｚ，１Ｈ）。

【0275】

工程５：化合物１２ｆの調製
ＤＡＳＴ（３．７９８ｇ、２３．５６１ｍｍｏｌ）の溶液を、１２ｅ（２．８６ｇ、３．６８１ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）及びピリジン（５．３５９ｍＬ）溶液に滴加した。室温で３０分間撹拌した後、反応混合物を８０℃にて１時間加熱し、ＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ）で希釈した。有機層を７％ ＮａＨＣＯ_３水溶液（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）で連続して洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１：０〜５：１）により精製し、黄色非晶質固体として化合物１２ｆを得た（２．２４ｇ、２．８７６ｍｍｏｌ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．９７（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．４０−７．３０（ｍ，１４Ｈ），７．２５−７．１７（ｍ，１６Ｈ），６．１１（ｄ，Ｊ＝１９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９３−５．７６（ｍ，１Ｈ），４．７９−４．６８（ｍ，１Ｈ），４．２９−４．２２（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｄｄ，Ｊ＝４．０，１１．０Ｈｚ，１Ｈ）。

【0276】

工程６：化合物１２ｇの調製
化合物１２ｆ（１．７ｇ、２．１８３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に、０℃にてＴＦＡ、Ｅｔ_３ＳｉＨ、及びＤＣＭ（２４ｍＬ）を添加した。溶液を２５℃にて２時間撹拌した後、反応混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和水溶液（３０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈してＤＣＭ（５０ｍＬ×２）で抽出した。次に合わせた有機層を減圧下にて濃縮し、残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、白色固体として化合物１２ｇ（４４０ｍｇ、１．４９５ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２９５．０［Ｍ＋１］^＋。

【0277】

工程７：化合物１２ｈの調製
化合物１２ｇ（４４０ｍｇ、１．１９６ｍｍｏｌ）のピリジン溶液に、クロロトリメチルシランを室温で添加した。２時間後、混合物を０℃まで冷却しＢｚＣｌを滴加した。室温で３時間撹拌した後、反応混合物を氷浴で冷却し、０℃にて水を用いてクエンチした。ＮＨ_４ＯＨを次に添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。次に混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。次に合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＮａＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１／０〜１０／１）により精製し、黄色固体として化合物１２ｈを得た（３７２ｍｇ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３９９．１［Ｍ＋１］^＋。

【0278】

工程８：化合物１２ｉの調製
化合物１２ｈ（３７２ｍｇ、０．９３４ｍｍｏｌ）及び４ÅのＭＳ（３ｇ）の、ＣＨ_３ＣＮ（３０ｍＬ）溶液を、Ｎ_２雰囲気下にて室温で３分間撹拌した。１Ｈ−テトラゾール（１２．４５１ｍＬ、５．６０３ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、化合物１ｏのＣＨ_３ＣＮ（５ｍＬ）溶液（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（１．２６８ｇ、１．３０７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２６℃にて１時間撹拌した。次にｔ−ブチルヒドロペルオキシド（０．９３４ｍＬ、４．６６９ｍｍｏｌ）を添加した。２６℃にて１時間撹拌した後、混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、黄色固体として化合物１２ｉ（１．１５ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１２８３．７［Ｍ＋１］^＋。

【0279】

工程９：化合物１２ｊの調製
化合物１２ｉ（１．１５ｇ、０．８９６ｍｍｏｌ）の水及びＤＣＭ溶液に、ジクロロ酢酸（４０６．１４０ｍｇ、８．９６１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次にトリエチルシラン（５ｍＬ）を添加した。室温で４８時間撹拌した後、ピリジン（０．２８９ｍＬ、３．５８４ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して白色固体として化合物１２ｊ（６０７ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９８１．４［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣＬ_３）８．７６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），８．１２−７．９６（ｍ，３Ｈ），７．６４−７．５７（ｍ，１Ｈ），７．５５−７．４７（ｍ，２Ｈ），６．３９−６．２０（ｍ，１Ｈ），６．０２−５．９５（ｍ，１Ｈ），４．７７−４．６２（ｍ，１Ｈ），４．４７（ｂｒｓ，１Ｈ），４．４３−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．２８−４．１６（ｍ，２Ｈ），４．１５−４．０６（ｍ，２Ｈ），４．１５−４．０６（ｍ，１Ｈ），４．１５−４．０６（ｍ，１Ｈ），４．０５−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．９６−３．８７（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｂｒｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４７−３．３７（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．５８（ｍ，３Ｈ），１．２８−１．１３（ｍ，７Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，９Ｈ），０．１２−０．０４（ｍ，６Ｈ）。

【0280】

工程１０：化合物１２ｋの調製
化合物１２ｊ（６０７ｍｇ、０．６１９ｍｍｏｌ）、１Ｈ−テトラゾール（１．０３１ｍＬ、０．４６４ｍｍｏｌ）、ＬｉＣｌ（１３１．１６２ｍｇ、３．０９４ｍｍｏｌ）、及び４ÅのＭＳの、ＤＣＭ（６８ｍＬ）溶液に、ジメチルジイソプロピルホスホロアミダイト（１２５．５４ｍｇ、０．６５０ｍｍｏｌ）を添加した。室温で７２時間撹拌した後、混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８ ２５０^＊５０ １０μ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＡＣＮ、２８％〜５８％、流速：２２ｍＬ／分）により精製し、白色固体として化合物１２ｋ（１６０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９７８．２［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）８．８１（ｓ，１Ｈ），８．３０−８．２１（ｍ，３Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），７．７５−７．６５（ｍ，３Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．２４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４６−５．２８（ｍ，１Ｈ），５．０８−４．９７（ｍ，１Ｈ），５．０２（ｄｔ，Ｊ＝３．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５１−４．３６（ｍ，２Ｈ），４．２９−４．１８（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，３Ｈ），２．８０−２．６９（ｍ，１Ｈ），１．２８−１．２４（ｍ，６Ｈ），１．００（ｓ，９Ｈ），０．３２（ｓ，３Ｈ），０．２７−０．２４（ｍ，３Ｈ）。

【0281】

工程１１：化合物１２ｌの調製
化合物１２ｋ（１６０ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、撹拌しながら濃縮ＮＨ_４ＯＨ（１０ｍＬ）を添加した。反応混合物を５０℃にて２日間撹拌した後、減圧下にて濃縮して、白色粗固体（１２５ｍｇ）として化合物１２ｌを得た。粗生成物を更に精製することなく次工程で使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７９０．５［Ｍ＋１］^＋。

【0282】

工程１２：化合物１８（トリエチルアンモニウム塩）の調製
化合物１２ｌ（１２５ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（９６１．０５６ｍｇ、９．４９８ｍｍｏｌ、及びトリエチルアンモニウムフルオライド（７６５．５４５、４．７４９ｍｍｏｌ）のピリジン（４ｍＬ）溶液を、５０℃にて５時間撹拌した。次いで、反応混合物にイソプロポキシトリメチルシラン（３．１４１ｇ、２３．７４４ｍｍｏｌ）を添加して、反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８ １５０^＊２５ ５μ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＣＨ_３ＣＮ ０％〜１５％、流速：３５ｍＬ／分）により精製して、白色固体として、化合物５をそのトリエチルアンモニウム塩（７０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．５４−７．９９（ｍ，２Ｈ），７．７８（ｂｒｓ，１Ｈ），６．２５（ｂｒｓ，１Ｈ），５．９０−５．８０（ｍ，１Ｈ），５．８５（ｂｒｓ，１Ｈ），５．７１（ｂｒｓ，１Ｈ），５．３２−５．０３（ｍ，１Ｈ），４．５５（ｂｒｓ，１Ｈ），４．３２−４．０１（ｍ，６Ｈ），３．９４（ｂｒｓ，１Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．４２（ｂｒｓ，１Ｐ），−３．４７（ｂｒｓ，１Ｐ）。

【0283】

工程１３：化合物１８（トリエチルナトリウム塩）の調製
体積が７０ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（７０ｍｇの、化合物１８（トリエチルアンモニウム塩）用）に添加し、これを次に、脱イオン水にて洗浄した（２回）。脱イオン水（１００ｍＬ）中に体積１５％で含まれるＨ_２ＳＯ_４を樹脂に添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂を、脱イオン水中に１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積）で、次いでｐＨが中性となるまで脱イオン水にて、連続して洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（１００ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（少なくとも４カラム体積）で洗浄し、その後ｐＨが中性となるまで水（少なくとも４カラム体積）で洗浄した。化合物１８（トリエチルアンモニウム塩）を脱イオン水に溶解させ（５０ｍＬ中に７０ｍｇ）、カラム上部に添加し、ＤＩ水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）により検出されるように、化合物１８は初期の画分で溶出した。生成物を凍結乾燥して、化合物１８（トリエチルナトリウム塩）（４９．９ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６７５．８［Ｍ＋１］＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．３９−８．０６（ｍ，２Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），６．２８（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．８６（ｄ，Ｊ＝．０Ｈｚ，１Ｈ），５．６９（ｓ，１Ｈ），５．３５−５．０８（ｍ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３３−４．０６（ｍ，６Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−２００．５４（ｓ，１Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．４８（ｓ，１Ｐ），−２．７１（ｓ，１Ｐ）。

【0284】

実施例１３に示す反応スキームは、本発明の化合物１９、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0285】

実施例１３

【0286】

【化56】

【0287】

【化57】

【0288】

実施例１４に示す反応スキームは、本発明の化合物２０、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0289】

実施例１４

【0290】

【化58】

【0291】

【化59】

【0292】

実施例１５に示す反応スキームは、本発明の化合物２１、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0293】

実施例１５

【0294】

【化60】

【0295】

【化61】

【0296】

実施例１６に示す反応スキームは、本発明の化合物２２、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0297】

実施例１６

【0298】

【化62】

【0299】

【化63】

【0300】

実施例１７に示す反応スキームは、本発明の化合物２３、及びその医薬的に許容される塩形態を調製するための、１つの可能な経路について説明している。

【0301】

実施例１７

【0302】

【化64】

【0303】

【化65】

【0304】

実施例１８

【0305】

【化66】

【0306】

【化67】

【0307】

工程１：化合物１５ｇの調製
３’−フルオログアノシン（化合物１５ｆ）（２．０ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）を無水トルエン（３×２０ｍＬ）と共蒸発させ、次いで無水ピリジン（３５ｍＬ）に懸濁した。これにクロロトリメチルシラン（８．０ｍＬ、６３．０９ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した後、反応物を０℃まで冷却した。次いで、ｉｓｏ−ブチリルクロリド（１．４６ｍＬ、１４．０２ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を０℃まで冷却し、次いで水（１５ｍＬ）及びＮＨ_３水溶液（１５ｍＬ）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いで蒸発乾固させて粗残渣を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｎ ＣＨ_２Ｃｌ_２に０〜２０％のＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製し、白色固体として化合物１５ｇ（１．８ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ ３５５．９５（Ｍ＋１）＋。

【0308】

工程２：化合物１８ａの調製
３’−フルオロ−Ｎ−イソブチルグアノシン（１５ｇ）（８３０ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）を無水トルエン（２×２０ｍＬ）で共蒸発させ、無水ＤＭＦ（１４ｍＬ）に溶解させた。トリフェニルホスフィン（９２５ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ）、ＮａＮ_３（４５８ｍｇ、７．０５ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムヨーダイド（１７３ｍｇ、０．４７０ｍｍｏｌ）、及びＣＢｒ_４（１．１６ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を終夜室温で撹拌した後、反応混合物を蒸発乾固させ、得られた粗反応混合物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（０〜２０％、ＤＣＭ中のＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製し、白色固体粉末として化合物１８ａ（７８０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ３８１．００［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0309】

工程３：化合物１８ｃの調製
化合物１８ａ（８００ｍｇ、２．１０ｍｍｏｌ）、４Åのモレキュラーシーブ粉末（３ｇ）、及び１Ｈ−イミダゾール塩素酸塩（３．５２ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ_３ＣＮ（８０ｍＬ）溶液を、Ａｒ_（気体）雰囲気下にて１０分間、室温で撹拌した。乾燥ＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）中のアミジト１８ｂ（市販されている、２．１ｇ、２．１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で５０分間撹拌した後、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（５．５Ｍ、１．９０ｍＬ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（１×３０ｍＬ）、及びＮａＣｌ飽和水溶液（１×３０ｍＬ）で洗浄し、有機相を減圧下にて蒸発乾固させた。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２に０〜１５％のＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製し、白色固体として二量体１８ｃ（２．１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １２８３．３０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0310】

工程４：化合物１８ｄの調製
化合物１８ｃ（１．１ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２（２４ｍＬ）に溶解させた。混合物にトリエチルシラン（０．７ｍＬ、５．１４ｍｍｏｌ）とジクロロ酢酸（０．４３ｍＬ、５．１４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３５分間撹拌した後、混合物をピリジン（０．８３ｍＬ、１０．２８ｍｍｏｌ）でクエンチし、蒸発乾固させた。得られた粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２に２０〜８０％のアセトン、ｖ／ｖ）により精製し、白色固体として二量体１８ｄ（０．７５ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ９８１．１５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0311】

工程５及び６：化合物１８ｆの調製
化合物１８ｄ（５７０ｍｇ、０．５８１ｍｍｏｌ）を無水トルエン（２×２０ｍＬ）と共蒸発させ、無水ＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）に溶解させた。４Åのモレキュラーシーブ粉末（２ｇ）及びテトラゾール（８ｍＬ、３．４８ｍｍｏｌ、ＣＨ_３ＣＮ中に０．４５Ｍ）を添加し、反応混合物にＡｒ_（気体）を２分間バブリングシ、１０分間室温で撹拌した。ジメチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト（０．３ｍＬ、１．１６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、反応混合物を濾過し、濾液をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈して、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（１×３０ｍＬ）及びＮａＣｌ飽和水溶液（１×３０ｍＬ）で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ（１０分間撹拌しながら）濾過し、濾液を減圧下にて濃縮乾固した。粗化合物１８ｅを更に精製することなく次工程にて使用した。

【0312】

工程６：化合物１８ｅ（０．５８１ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（２５ｍＬ）に溶解させ、ＬｉＣｌ（１５０ｍｇ、３．４８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃にて５．５時間撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、水（１×２５ｍＬ）で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃで逆抽出した（１×３０ｍＬ）。合わせた有機相を濃縮乾固し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１５％、ＣＨ_２Ｃｌ_２中のＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製し、白色固体として化合物１８ｆ（１５０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １０３１．１５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0313】

工程７：化合物１８ｇの調製
化合物１８ｆ（１２５ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）をＮＨ_３：ＥｔＯＨ水溶液（８ｍＬ、３：１、ｖ／ｖ）に溶解させた。反応物を２０時間５５℃にて撹拌した後、混合物を濃縮乾固した。得られた沈殿物を分取ＨＰＬＣ（移動相：緩衝液Ａ：５０ｍＭのＴＥＡＡ水溶液、緩衝液Ｂ：５０ｍＭのＴＥＡＡのＣＨ_３ＣＮ溶液（２５〜６５％の勾配、２０分））により精製し、白色固体として化合物１８ｇ（５８ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７９０．２５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0314】

工程８：化合物２４の調製
化合物１８ｇ（１２ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解させた。これにテトラブチルアンモニウムフルオリド（０．１５ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ ＴＢＡＦ）を添加した。反応物を２時間室温で撹拌した後、反応混合物を濃縮乾固し、分取ＨＰＬＣ（移動相：緩衝液Ａ：５０ｍＭのＴＥＡＡ水溶液、緩衝液Ｂ：５０ｍＭのＴＥＡＡのＣＨ_３ＣＮ水溶液（０〜２５％の勾配、２０分）により精製し、ＴＥＡ塩として化合物２４（２．５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６７４．１［Ｍ−１］⁻。

【0315】

工程９：化合物２４（ナトリウム塩）の調製
体積３ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗ×８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（２．５ｍｇの化合物２４（ＴＥＡ塩）用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。樹脂に、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４の脱イオン水（５０ｍＬ）溶液を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、脱イオン水中に１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、次いでｐＨが中性となるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨ水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨ水溶液（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、ｐＨが中性となるまで水（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。化合物２４（ＴＥＡ塩）（２．５ｍｇ）を脱イオン水（２ｍＬ）に溶解させ、カラム上部に添加し、脱イオン水で溶出した。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥して、白色泡状物として目標化合物２４（ナトリウム塩）（２．０ｍｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ８．２３（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），５．９５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４２−５．５８（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，０．５Ｈ），５．０１（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，０．５Ｈ），４．６２−４．７０（ｍ，１Ｈ），４．５０−４．５８（ｍ，０．５Ｈ），４．４６−４．５１（ｍ，０．５Ｈ），４．４０−４．４３（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．４０（ｍ，２Ｈ），３．９２−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ７．９５，−２．７６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７９ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ−１９５．５９（五重項）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６７４．１［Ｍ−１］⁻。

【0316】

実施例１９

【0317】

【化68】

【0318】

【化69】

【0319】

工程１：化合物８ｂの調製
化合物８ａ（５．０ｇ、１．８５７ｍｍｏｌ）のピリジン（１００ｍＬ）溶液に、クロロトリメチルシラン（１８．１６ｇ、１６７．１４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１．５時間後、ベンゾイルクロリド（７．８３ｇ、５５．７１ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。最終混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を０℃にて水（５０ｍＬ）でクエンチし、ＮＨ_３−Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）を０℃にて滴加した。反応混合物を濃縮してシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）により精製し、白色固体として化合物８ｂ（５．２ｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ及びＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝８．７３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，２Ｈ），８．０９−８．０２（ｍ，２Ｈ），７．６８−７．６５（ｍ，１Ｈ），７．５９−７．５５（ｍ，２Ｈ），６．４７−６．４２（ｍ，１Ｈ），５．５６−５．４１（ｍ，１Ｈ），４．７１−４．６４（ｍ，１Ｈ），４．１７−４．１５（ｍ，１Ｈ），３．９８−３．９４（ｍ，１Ｈ），３．８１−３．７７（ｍ，１Ｈ）。

【0320】

工程２：化合物１７ｂの調製
化合物８ｂ（１ｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を無水トルエン（２×２０ｍＬ）と共蒸発させ、無水ＤＭＦ（１６ｍＬ）に溶解させた。トリフェニルホスフィン（１．０５ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）、ＮａＮ_３（６５０ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムヨージド（１９７．８７ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）、四臭化炭素（１．３３ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。終夜室温で撹拌した後、反応混合物を蒸発乾固させ、得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）により精製し、白色固体粉末化合物１７ｂ（８９０ｍｇ）を得た。

【0321】

工程３：化合物１９ｂの調製
化合物１９ａ（５．０ｇ、１６．８２ｍｍｏｌ）のピリジン（７２ｍＬ）溶液に、クロロトリメチルシラン（１６．４５ｇ、１５１．３８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１．５時間後、イソブチリルクロリド（５．３８ｇ、５０．４６ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。室温で３時間撹拌した後、反応混合物を水（５０ｍＬ）で０℃にてクエンチし、ＮＨ_３−Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）を０℃にて滴加した。反応混合物を濃縮して、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）により精製し、白色固体として化合物１９ｂ（５．２８ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ３６８．１［Ｍ＋１］^＋。

【0322】

工程４：化合物１９ｃの調製
化合物１９ｂ（１ｇ、２．７２ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−イミダゾール（３１５．０４ｍｇ、４．６３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、ＴＢＳＣｌ（６５６．４６ｍｇ、４．３６ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。室温で４時間撹拌した後、反応混合物をＭｅＯＨ（２７ｍＬ）でクエンチし、濃縮して残渣にした。残渣をＤＣＭ（３５ｍＬ）に溶解させて濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、白色固体として化合物１２ｃ（１．１９ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４８２．２［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝８．０２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１３（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９３−３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），０．８１（ｓ，９Ｈ），０．００（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，６Ｈ）。

【0323】

工程５：化合物１９ｄの調製
化合物１９ｃ（１．１９ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）のＰｙ（１２ｍＬ）溶液に、４，４’−（クロロ（フェニル）メチレン）ビス（メトキシベンゼン）（１．６７ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．３３ｇ、２．７２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。５０℃にて終夜撹拌した後、反応混合物を水でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせて水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）て濾過し、濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）により精製し、白色固体として化合物１９ｄ（１．３７ｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７８４．５［Ｍ＋１］^＋。

【0324】

工程６：化合物１９ｅの調製
化合物１９ｄ（１．３７ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（７．８６ｍＬ、７．８６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で抽出した。次に有機層を合わせてブラインで洗浄し、濾過濃縮して残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）により精製し、白色固体として化合物１９ｅ（１．０１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６７０．１［Ｍ＋１］^＋。

【0325】

工程７：化合物１９ｆの調製
化合物１９ｅ（５００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２８９．４６９ｍｇ、２．２４０ｍｍｏｌのＴＨＦ（１．８８ｍＬ）溶液に、３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパンニトリル（５３０．１０ｍｇ、２．２４０ｍｍｏｌ）を１５℃にて添加した。室温で１時間撹拌した後、水を反応混合物に添加し、次いで混合物をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせてブラインで洗浄し、濾過濃縮して残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：２）により精製し、化合物１９ｆ（４１１ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７８７．１［Ｍ−Ｎ（Ｐｉ）_２］^＋。

【0326】

工程８：化合物１９ｇの調製
化合物１７ｂ（１３４．４２８ｍｇ、０．３３７ｍｍｏｌ）及び４Åのモレキュラーシーブ（２ｇ）のＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）溶液を、室温でアルゴン雰囲気下にて３分間撹拌した。１Ｈ−テトラゾール（４．４９９ｍＬ、２．０２５ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、化合物１９ｆ（４１１ｍｇ、０．４７２ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（３．４４ｍＬ）溶液を室温で添加した。２６℃にて１時間撹拌した後、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（０．３３７ｍＬ、１．６８７ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。２６℃にて１時間撹拌した後、混合物を濃縮して化合物１９ｇを得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。

【0327】

工程９：化合物１９ｈの調製
化合物１９ｇ（２３９．５５ｍｇ、０．２０２ｍｍｏｌ）の水及びジクロロメタン溶液に、ジクロロ酢酸（９１．７６９ｍｇ、０．７１２ｍｍｏｌ）を添加した。室温で３時間撹拌した後、トリエチルシラン（２ｍＬ）を反応混合物に添加した。次に、ピリジン（０．０３３ｍＬ、０．４１ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間室温で撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、淡黄色固体として化合物１９ｈ（１３６．８ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８８１．２［Ｍ＋１］^＋。

【0328】

工程１０：化合物１９ｉの調製
化合物１９ｈ（１３６．８ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）、１Ｈ−テトラゾール（０．２５９ｍＬ、０．１１６ｍｍｏｌ）、ＬｉＣｌ（３２．９２６ｍｇ、０．７７７ｍｍｏｌ）、及び４ÅのモレキュラーシーブのＤＣＭ（１７．１ｍＬ）溶液を、室温で２時間撹拌した。ジメチルジイソプロピルホスホロアミダイト（３１．５１３ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で終夜撹拌した後、反応混合物を濾過濃縮し、逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８ ２５０×５０ １０μｍ；条件：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）（Ａ）−ＣＨ_３ＣＮ（Ｂ）、Ｂ：１６にて開始；Ｂ：４６にて終了；流速：２２ｍＬ／分）により精製し、白色固体として化合物１９ｉ（４０．１ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ８７８．３＝［Ｍ＋１］^＋。

【0329】

工程１１：化合物２５の調製
メタンアミン中の化合物１９ｉ（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６ｍＬ）溶液を、５０℃にて１日撹拌した。次に、反応混合物を濃縮して逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：ＤｕｒａＳｈｅｌｌ １５０×２５ｍｍ ５ｍｍ；条件：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）（Ａ）−ＣＨ_３ＣＮ（Ｂ）；Ｂ：０で開始；Ｂ：１５で終了；流速：３５ｍＬ／分）により精製し、化合物２５（アンモニウム塩）（１．５ｍｇ）を白色固体として得た。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝７．６９，−１．２８。

【0330】

工程１２：化合物２５の調製
ある体積のＤｏｗｅｘ（５０Ｗｘ８，２００−４００，Ｈ形）（９９ｍＬ）をビーカー（７４．９ｍｇの化合物２５（アンモニウム塩）用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。樹脂に、脱イオン水（５０ｍＬ）中の１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、脱イオン水中に１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積（ＣＶ））で洗浄し、次いでｐＨが中性となるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、脱イオン水中の１５％ ＮａＯＨ（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、ｐＨが中性となるまで水（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。化合物２５（アンモニウム塩）を脱イオン水に溶解し（２５ｍＬ中７４．９ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）により検出されるように、化合物２５は初期の画分で溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物２５（ナトリウム塩）（６３．０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８９．９［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝８．０８−８．０５（ｍ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．３７−７．３６（ｍ，１Ｈ），６．４１−６．３３（ｍ，１Ｈ），５．８８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．６４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４４−５．２７（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３８−４．３０（ｍ，２Ｈ），４．２０−４．１１（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２２−３．１８（ｍ，１Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−１９６．８７（ｓ，１Ｆ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）７．８０（ｓ，１Ｐ），−１．２２（ｓ，１Ｐ）。

【0331】

実施例２０
化合物２６及び２７

【0332】

【化70】

【0333】

【化71】

【0334】

工程１：２０ｂの調製
２０ａ（１ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３．８ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（０．５８ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）溶液に、３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（１．０６ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合反応物を室温で１．５時間撹拌した後、水を添加した。有機層をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出し、ブラインで洗浄して減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜２０：１）により精製し、無色固体として２０ｂ（１．３５ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７８７．２［Ｍ−８３］^＋；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）１５０．７１（ｓ，１Ｐ），１５０．４８（ｓ，１Ｐ），１４．１８（ｓ，１Ｐ）。

【0335】

工程２：２０ｃの調製
１２ｈ（７００ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（５０ｍＬ）溶液、及び４Ａのモレキュラーシーブ（７ｇ）を、Ｎ_２雰囲気下にて室温で３分間撹拌した。１Ｈ−テトラゾール（２３．４３ｍＬ、１０．５４ｍｍｏｌ）を次に添加した。１０分間撹拌した後、２０ｂ（２．０６ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（２０ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温で１．５時間撹拌した後、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−（３−チオキソ−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−５−イル）ホルムイミドアミド（ＤＤＴＴ、１．８１ｇ、８．７９ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１時間撹拌した後、反応混合物を減圧下にて濾過濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、黄色固体として１３ｃ（２．１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１９９．５［Ｍ＋１］^＋。

【0336】

工程３：化合物２０ｄの調製
２０ｃ（２．１ｇ）の水（３１５．４９ｍｇ、１７．５１ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（６０ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（７９０．３１６ｍｇ、６．１２９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。Ｅｔ_３ＳｉＨ（１２ｍＬ）を添加し、室温で４８時間撹拌した。ピリジン（０．５６ｍＬ、７．０ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、白色固体として２０ｄ（９０１ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８９７．３［Ｍ＋１］^＋。

【0337】

工程４：２０ｅのパラメータ
２０ｄ（５００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）溶液に、４Ａのモレキュラーシーブ（５ｇ）、１Ｈ−テトラゾール（０．９３ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）、ＬｉＣｌ（１１８．１８ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）、その後ジメチルジイソプロピルホスホロアミダイト（１１３．１２ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７２時間室温で撹拌した後、混合物を減圧下にて濾過濃縮して粗２０ｅ（４９５ｍｇ）を得、これを更に精製することなく次工程で直接使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９４７．３［Ｍ＋１］^＋。

【0338】

工程５：化合物２６及び化合物２７の調製
２０ｅ（４９５ｍｇ、粗生成物）のＥｔＯＨ（１２ｍＬ）溶液に、ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（１２ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を５０℃にて３日間撹拌した後、混合物を濾過し、逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ ＤｕｒａＳｈｅｌｌ １５０ｍｍ×２５ｍｍ×５μＭ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＡＣＮ、１％〜１６％、流速：２５ｍＬ／分）により精製し、白色固体として粗生成物２６及び２７を得た（２２０ｍｇ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝８．２９（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．７０（ｂｒｓ，１Ｈ），６．２５（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９２−５．７０（ｍ，２Ｈ），５．２４−４．９９（ｍ，１Ｈ），４．４３−４．２６（ｍ，３Ｈ），４．２０（ｂｒｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｂｒｓ，３Ｈ），３．４９（ｓ，２Ｈ），３．５６−３．４５（ｍ，１Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−７５．６５（ｓ，１Ｆ），−１９９．９８（ｂｒｓ，１Ｆ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５１．３３（ｂｒｓ，１Ｐ），６．４９（ｂｒｓ，１Ｐ）。

【0339】

工程６：化合物２６及び化合物２７の調製
前述の化合物２６及び化合物２７の混合物を、逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ×４ｕｍ；移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）−ＡＣＮ、０％〜１５％、流速：２５ｍＬ／分）により精製し、白色固体として２６（アンモニウム塩）（１６．３ｍｇ）及び２７（アンモニウム塩）（５０．１ｍｇ）を得た。

【0340】

工程７：２６（ナトリウム塩）の調製
体積が２０ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（１６．３ｍｇの２６用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。樹脂に、脱イオン水（５０ｍＬ）中の１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、脱イオン水中に１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積（ＣＶ））で洗浄し、次いでｐＨが中性となるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、ｐＨが中性となるまで水（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。化合物２６（アンモニウム塩）を脱イオン水に溶解し（２０ｍＬ中１６．３ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）により検出されるように、化合物２６は初期の画分で溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物２６（ナトリウム塩）（８．５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７０５．８；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝８．５０（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９４−５．８０（ｍ，２Ｈ），５．３３−５．１０（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．３５（ｍ，２Ｈ），４．３０−４．１３（ｍ，４Ｈ），４．０９−４．０１（ｍ，２Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７７ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ−２００．６９（ｓ，１Ｆ）^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ＝５３．８９（ｓ，１Ｐ），６．６０（ｓ，１Ｐ）。

【0341】

工程８：２７（ナトリウム塩）の調製
体積が５０ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８、２００−４００（Ｈ形）をビーカー（５０．１ｍｇの２７用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。樹脂に、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４の脱イオン水（５０ｍＬ）溶液中を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、脱イオン水中に１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積（ＣＶ））で洗浄し、次いでｐＨが中性となるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、ｐＨが中性となるまで水（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。化合物２７（アンモニウム塩）を脱イオン水に溶解し（５０ｍＬ中５０．１ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）により検出されるように、化合物２７は初期の画分で溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物２７（ナトリウム塩）（２９ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７０５．８；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ８．２５−８．１１（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８５−５．７３（ｍ，２Ｈ），５．３３−５．１２（ｍ，１Ｈ），４．５１−４．４２（ｍ，２Ｈ），４．３３−４．２６（ｍ，２Ｈ），４．２２−４．１１（ｍ，２Ｈ），４．０９−４．００（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７７ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ−２００．７０（ｓ，１Ｆ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ５１．８７（ｓ，１Ｐ），６．５３（ｓ，１Ｐ）。

【0342】

実施例２１
化合物２８、２９、３０及び３１

【0343】

【化72】

【0344】

【化73】

【0345】

工程１：２１ａの調製
１２ｈ（５００ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）のピリジン（６ｍＬ）溶液に、ＤＭＴｒＣｌ（０．６３８ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を４時間室温で撹拌した後、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）で希釈し、水でクエンチした。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、黄色固体として２１ａ（９３３ｍｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ９．１０（ｓ，１Ｈ），８．８２−８．７５（ｍ，１Ｈ），８．７８（ｓ，１Ｈ），８．６６−８．５７（ｍ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．７２−７．５９（ｍ，２Ｈ），７．５８−７．５０（ｍ，１Ｈ），７．５８−７．５０（ｍ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２６−７．２３（ｍ，４Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，４Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．９９−５．８２（ｍ，１Ｈ），４．７６−４．６５（ｍ，１Ｈ），４．３５−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．６７−３．５７（ｍ，１Ｈ），３．３７（ｄｄ，Ｊ＝３．６，１１．２Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７０１．１［Ｍ＋１］^＋。

【0346】

工程２：２１ｂの調製
ＥｔＯＡｃ（１３０ｍＬ）中の、２１ａ（９３３ｍｇ、１．１０５ｍｍｏｌ）と、触媒としてのＰｄ／Ｃ（２．６０６ｇ、２．２１０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温（大気圧）で水素添加した。２時間後、濾過により触媒を除去し、減圧下にて濾液を濃縮し残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、白色固体として２１ｂ（７１２ｍｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ９．０７（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），８．０７−７．９９（ｍ，２Ｈ），７．６５−７．５８（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２８−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．１７（ｍ，２Ｈ），６．８２−６．７７（ｍ，４Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝１８Ｈｚ，１Ｈ），５．５１−５．３４（ｍ，１Ｈ），４．１３−４．００（ｍ，２Ｈ），３．６４−３．５６（ｍ，１Ｈ），３．４４（ｄｄ，Ｊ＝３．６，１０．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６７５．１［Ｍ＋１］^＋。

【0347】

工程３：２１ｃの調製
２１ｂ（３００ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）と５−ベンジルメルカプトテトラゾール（ＢＭＴ）（２１３．６９ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の混合物をアセトニトリルで３回共沸し、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解させた。１９ｆ（１．５４ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液をＮ_２下にて室温で滴加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。キサンタンヒドリド（１３３．６０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）及びピリジン（１４０．６８ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。１時間室温で撹拌した後、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）を添加し、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で抽出した。次に、有機層を合わせてＮａＨＣＯ_３（３０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で連続して洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ＝１／０〜１０／１）により精製し、黄色油として２１ｃ（５１０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１７４．３［Ｍ＋１］^＋。

【0348】

工程４：化合物２１ｄの調製
２１ｃ（３．１ｇ）の水（４７６．０３ｍｇ、２６．４２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（１．１９ｇ、９．２４８ｍｍｏｌ、ＤＣＭ中に６％）を室温で、続いてトリエチルシラン（２０ｍＬ）を添加した。室温で２４時間撹拌した後、ピリジン（０．８５ｍＬ）を添加した。１０分間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、黄色固体として２１ｄを得た（１．２４７ｇ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ８．６７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１９−８．１４（ｍ，１Ｈ），８．１２−８．０３（ｍ，１Ｈ），８．１２−８．０３（ｍ，３Ｈ），７．６８−７．６１（ｍ，１Ｈ），７．５９−７．５１（ｍ，２Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，１８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．９１−５．８３（ｍ，１Ｈ），５．９１−５．８３（ｍ，１Ｈ），５．６２−５．３８（ｍ，１Ｈ），４．７１−４．５１（ｍ，２Ｈ），４．４４−４．１１（ｍ，８Ｈ），４．０９−３．９６（ｍ，２Ｈ），３．８５−３．７３（ｍ，１Ｈ），３．８５−３．７３（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｓ，１Ｈ），１．２２−１．１７（ｍ，７Ｈ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１７４．３［Ｍ＋１］^＋。

【0349】

工程５：化合物２１ｅの調製
化合物２１ｄ（３７０ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ）を、無水トルエン：アセトニトリルの混合物（１：１、ｖ／ｖ、３×１０ｍＬ）と共蒸発させた。次に、得られた残渣をＣＨ_３ＣＮ／ＴＨＦ（３５ｍＬ、ｖ／ｖ＝７：３）に溶解させ、４Åのモレキュラーシーブ（４ｇ）及びテトラゾール（７．５５ｍＬ、ＣＨ_３ＣＮ中０．４５Ｍ）を添加した。２５℃にて０．５時間撹拌した後、ＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）中の３−（（ビス（ジイソプロピルアミノ）−ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（２０４．９１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を上記溶液に添加した。混合物を２５℃にて２時間撹拌し、追加のテトラゾール（１．８８ｍＬ、ＣＨ_３ＣＮ中０．４５Ｍ）を上記溶液に添加した。混合物を２５℃にて０．５時間撹拌した後、ＤＤＴＴ（４３６．２０ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）をその溶液に添加した。混合物を２５℃にて１．５時間撹拌した後、反応混合物を減圧下にて濾過濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１０：１）により、第２のバッチと共に精製して、２１ｅ（４３６ｍｇ）を得た。

【0350】

工程６：２８〜３１の調製
２１ｅ（４６３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）溶液に、ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を５０℃にて２日間撹拌した後、混合物を減圧下にて濃縮し、ジアステレオ異性体の混合物として化合物２７を得た。次に、化合物２７を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８ １５０ｘ２５ ５μＭ；移動相：水（０．０５％水酸化アンモニウム ｖ／ｖ）−ＣＨ_３ＣＮ、０％〜１３％、流速：３５ｍＬ／分）により精製し、粗生成物を得てこれを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８ １５０×２５ ５μＭ；移動相：水（０．０５％水酸化アンモニウムｖ／ｖ）−ＡＣＮ、０％〜１０％、流速：３５ｍＬ／分）により再度精製し、白色固体（アンモニウム塩）として化合物２８（１０．６ｍｇ）、２９（１３．６ｍｇ）、３０（８．３ｍｇ）、及び３１（５．５ｍｇ）を得た。２８〜３１のＬＣＭＳ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２１．７［Ｍ＋１］^＋。

【0351】

工程７：２８（ナトリウム塩）の調製
体積が１５ｍＬのＤｏｗｅｘ ５０Ｗｘ８，２００−４００（Ｈ形）をビーカー（１０．６ｍｇの１５（アンモニウム塩）用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。樹脂に、脱イオン水（５０ｍＬ）中の１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を添加し、混合物を１５分間撹拌して、デカントした（１回）。樹脂を、脱イオン水中に１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積（ＣＶ））で洗浄し、次いでｐＨが中性となるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌してデカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液（少なくとも４ＣＶ）で洗浄し、ｐＨが中性となるまで水（少なくとも４ＣＶ）で洗浄した。化合物１５（アンモニウム塩）を脱イオン水に溶解し（１５ｍＬ中１０．６ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）により検出されるように、所望の生成物は初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、白色固体として２８（ナトリウム塩）（９．２ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２１．７［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．４２（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），６．３４（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７０−５．４７（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｂｒｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５１−４．４６（ｍ，１Ｈ），４．３９（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２７−４．１８（ｍ，３Ｈ），４．１２−４．０３（ｍ，３Ｈ），３．４９（ｓ，３Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−１２２．３８（ｂｒｓ，１Ｆ），−１９９．７２（ｂｒｓ，１Ｆ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）５５．７５（ｂｒｓ，１Ｐ），５３．６３（ｓ，１Ｐ）．

【0352】

工程８：２９（ナトリウム塩）の調製
工程７（２８（ナトリウム塩）の調製）と同一手順に従い、白色固体として化合物２９（ナトリウム塩）（１２ｍｇ）を調製した；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２１．７［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．４６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９０−５．７８（ｍ，２Ｈ），５．３０−５．１１（ｍ，１Ｈ），４．４７（ｂｒｓ，１Ｈ），４．４３−４．３５（ｍ，１Ｈ），４．３２−４．１８（ｍ，４Ｈ），４．０８−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．４９（ｓ，３Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−１２２．７７（ｂｒｓ，１Ｆ），−１９９．６８（ｂｒｓ，１Ｆ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）５６．０１（ｓ，１Ｐ），５３．３１（ｂｒｓ，１Ｐ）。

【0353】

工程９：３０（ナトリウム塩）の調製
工程７（２８（ナトリウム塩）の調製）と同一手順に従い、白色固体として化合物３０（ナトリウム塩）（７．２ｍｇ）を調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２１．７［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．１７（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），６．３４−６．２６（ｍ，１Ｈ），５．８２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６７−５．４４（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｂｒｓ，１Ｈ），４．４６−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．３４（ｂｒｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｂｒｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１６−３．９９（ｍ，４Ｈ），３．４７（ｓ，３Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−１２２．３５（ｓ，１Ｆ），−１９９．３６（ｂｒｓ，１Ｆ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）５６．００−５５．０６（ｍ，１Ｐ），５１．８９（ｓ，１Ｐ）。

【0354】

工程１０：３１（ナトリウム塩）の調製
工程７（２８（ナトリウム塩）の調製）と同一手順に従い、白色固体として化合物３１（ナトリウム塩）（４．５ｍｇ）を調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２１．７［Ｍ＋１］^＋；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．１６（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８１−５．７６（ｍ，１Ｈ），５．７３−５．６５（ｍ，１Ｈ），５．３５−５．１７（ｍ，１Ｈ），４．５０（ｂｒｓ，１Ｈ），４．４３（ｂｒｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．２２（ｍ，４Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝３．３，１１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄ，Ｊ＝２．４，１１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）−１２２．２４（ｓ，１Ｆ），−１９９．９２（ｓ，１Ｆ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）５５．７３（ｓ，１Ｐ），５１．８０（ｓ，１Ｐ）。

【0355】

実施例２２

【0356】

【化74】

【0357】

工程１：化合物８ｂの調製
化合物８ａ（３０ｇ、１１１．４２８ｍｍｏｌ）のピリジン（４００ｍＬ）溶液に、ＴＭＳＣｌ（８４．８５ｍＬ、６６８．５７ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。混合物を４０分間撹拌した後、ベンゾイルクロリド（４６．９９ｇ、３３４．２８ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。室温で終夜撹拌した後、混合物を濾過して濾液を水（１２０ｍＬ）で０℃にてクエンチし、続いてＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（１２０ｍＬ）を０℃にて滴加した。混合物を１５℃にて０．５時間撹拌した後、混合物を減圧下にて濃縮し、残渣を酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈した。固体を濾過により収集して８ｂ（７０ｇ）を得、これを更に全く精製することなく、次工程に直接使用した。

【0358】

工程２：化合物８ｃの調製
化合物８ｂ（３０ｇ、８０．３５ｍｍｏｌ）のピリジン（２５０ｍＬ）溶液に、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（５４．４５ｇ、１６０．７１ｍｍｏｌ）を添加した。室温で３時間撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）を添加し、混合物を濾過した。有機層をブライン（３００ｍＬ×３）で連続して洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中にＭｅＯＨ＝０％〜５％）により精製し、白色固体として化合物８ｃ（３１．２ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６７６．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0359】

工程３：化合物８ｄの調製
化合物８ｃ（３１．２ｇ、４６．１７ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−イミダゾール（９．４３ｇ、１３８．５２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５００ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（１３．９２ｇ，９２．３５ｍｍｏｌ）をＮ_２下にて室温で添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌した後、混合物を水（１０００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した（４００ｍＬ×３）。次に、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を濃縮して黄色油として粗生成物を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＭｅＯＨ＝０％〜５％）により精製し、黄色固体として８ｄ（２９ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７９０．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0360】

工程４：化合物８ｅの調製
化合物８ｄ（２９ｇ、３６．７１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１６０ｍＬ）溶液に、ＤＣＭ（３２０ｍＬ）、続いてＴＦＡ（８ｍＬ）及びＥｔ_３ＳｉＨ（３２ｍＬ）を０℃にて添加した。０．５時間０℃にて、次いで４時間２５℃にて撹拌した後、反応混合物を減圧下にて濃縮した。得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＭｅＯＨ＝０％〜５％）により精製し、白色固体として８ｅ（１１．５ｇ、２１．６０ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４８８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0361】

工程５：化合物８ｆの調製
化合物８ｅ（１１．５ｇ、２３．５８ｍｍｏｌ）及び１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１９．４６ｇ、９４．３４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（８０ｍＬ）溶液に、ピリジン（２．６５ｇ、３３．４９ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸（２．０１ｇ、１７．６９ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。混合物を２５℃にて１７時間撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）で希釈した。有機層をブライン（１００ｍＬ×２）で連続して洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮して８ｆ（１１．４５ｇ、２３．５８ｍｍｏｌ）を得、これを更に全く精製することなく、次の工程で使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５１８．１［Ｍ＋３３］^＋。

【0362】

工程６：化合物２２ｂの調製
化合物２２ａ（６．３９ｇ、２７．５２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液に、６０％ ＮａＨ（１．４３ｇ、３５．７８ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。混合物を０℃にて０．５時間撹拌した後、化合物８ｆ（１１．４５ｇ、２３．５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液を０℃にて滴加した。０℃にて１時間、次いで２５℃にて２時間撹拌した後、反応混合物をＮＨ_４Ｃｌ（１００ｍＬ）飽和水溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ×２）で抽出した。次に、有機層を合わせて引き続きブライン（１３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＭｅＯＨ＝０％〜５％）により精製し、黄色固体として２２ｂ（６．１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５９２．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0363】

工程７：化合物２２ｃの調製
化合物２２ｂ（１．１ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）及び酸化白金（ＩＶ）（０．３３ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３０ｍＬ）溶液を水素雰囲気下（１５Ｐｓｉ）にて、室温で終夜撹拌した。次に混合物を濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製し、黄色固体として２２ｃ（０．８ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５９４．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0364】

工程８：化合物２２ｄの調製
ＬｉＢｒのＴＨＦ溶液（３０．３２ｍＬ、ＴＨＦ中０．５Ｍ）を、２５℃にて２２ｃ（３ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）に添加した。混合物を５０℃にて４８時間撹拌した後、ＣＨ_３ＣＮ（３０ｍＬ）、水（６０ｍＬ）、及び１Ｍ塩酸（１０ｍＬ）を添加した。次いで、混合物を凍結乾燥した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＭｅＯＨ＝０％〜１５％）により精製し、黄色固体として２２ｄ（２．４ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５８０．１［Ｍ＋１］^＋。

【0365】

工程９：化合物２２ｅの調製
化合物２２ｄ（１．８ｇ、３．１０５ｍｍｏｌ）と化合物２０ａ（２．４９ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）の混合物を、３０ｍＬの乾燥ピリジンと共沸した（３回）。得られた混合物を無水ＤＣＭ／ＴＨＦ（８０ｍＬ、１：１、ｖ／ｖ）で希釈し、続いて４Åのモレキュラーシーブ（２００ｍｇ）、ＮＭＩ（３．０６ｇ、３７．２６ｍｍｏｌ）、及びＴＰＳＣｌ（２．８２ｇ、９．３１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を２５℃にて４８時間、窒素雰囲気下にて撹拌した。反応物をＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、濾過した。濾液をＤＣＭ（８０ｍＬ×３）で抽出し、次いで有機層を合わせ、無水ＭｇＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＭｅＯＨ＝０％〜１０％）により精製し、黄色固体（３ｇ）として粗生成物を得た。粗生成物を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ２５０ｘ５０ｍｍｘ１０μｍ；条件：Ｈ_２Ｏ（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）（Ａ）−ＣＨ_３ＣＮ（Ｂ）；Ｂ：５５にて開始；Ｂ：８５にて終了；流速：１１０ｍＬ／分）により精製し、白色固体として２２ｅ（１．０１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １２３１．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮｄ３，４００ＭＨｚ）δ１１．７３−１２．００（ｍ，１Ｈ），９．６９（ｂｒｓ，１Ｈ），９．３４（ｂｒｓ，１Ｈ），８．５３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．８１−７．９４（ｍ，２Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３６−７．５３（ｍ，３Ｈ），７．２４（ｂｒｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．０１−７．１５（ｍ，７Ｈ），６．６０−６．６９（ｍ，４Ｈ），５．９７−６．１６（ｍ，１Ｈ），５．７９−５．８８（ｍ，１Ｈ），５．２４−５．５６（ｍ，２Ｈ），４．４６−４．６８（ｍ，１Ｈ），３．９９−４．１１（ｍ，２Ｈ），３．８１−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．５９（ｓ，６Ｈ），３．３９（ｓ，１Ｈ），３．３４−３．３７（ｍ，１Ｈ），３．３６（ｓ，１Ｈ），３．２７（ｓ，１Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．３６−２．５５（ｍ，１Ｈ），０．９１−１．０１（ｍ，６Ｈ），０．７７−０．８２（ｍ，９Ｈ），−０．１２−０．０８ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ）。

【0366】

工程１０：化合物２２ｆの調製
化合物２２ｅ（４００ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液に、ＴＨＦ中の１Ｍ ＴＢＡＦ（０．９７５ｍＬ、０．９７５ｍｍｏｌ）を２５℃にて添加した。混合物を２５℃にて２時間撹拌し、次いで酢酸エチル（２０ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）で希釈した。混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。次に、有機層を合わせて引き続きブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＭｅＯＨ＝０％〜５％）により精製し、黄色固体として２２ｆ（３２５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ １１１７．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0367】

工程１１：化合物２２ｇの調製
化合物２２ｆ（３２５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液に、水（５２．３７ｍｇ、２．９３ｍｍｏｌ）及び６％ ＤＣＡのＤＣＭ（４ｍＬ）溶液を添加した。混合物を２５℃にて１時間撹拌した。次に、赤色反応混合物が無色に変わるまで、混合物にピリジンを添加した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＭｅＯＨ＝０％〜１５％）により精製し、白色固体として２２ｇ（１８０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ８１５．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0368】

工程１２：化合物２２ｉの調製
化合物２２ｇ（１８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ／ＴＨＦ（２１．６ｍＬ、ｖ／ｖ＝１：１）溶液に、４Åのモレキュラーシーブ（５００ｍｇ）及びテトラゾール（３．９６ｍＬ、ＣＨ_３ＣＮ中０．４５Ｍ）を添加した。反応混合物を２５℃にて０．５時間撹拌した後、ＣＨ_３ＣＮ（１．８ｍＬ）中の３−（（ビス（ジイソプロピルアミノ）−ホスファニル）オキシ）プロパンニトリル（１３３．１８ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を２５℃にて２時間撹拌した後、追加のテトラゾール（１ｍＬ、ＣＨ_３ＣＮ中０．４５Ｍ）を上記溶液に添加した。混合物を２５℃にて０．５時間撹拌して、化合物２２ｈを得た。Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬（３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１，１−ジオキシド、２２１．１９ｍｇ、１．１０５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃にて０．５時間撹拌した後、濾過した。濾液を減圧下にて濃縮し、２２ｉ（２５０ｍｇ、粗生成物）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ９４６．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0369】

工程１３：化合物３２の調製
化合物２２ｉ（８０ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に、ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（５ｍＬ）を添加した。混合物を５０℃にて４８時間撹拌した後、反応混合物を濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ ４μＭ、Ｈｙｄｒｏ ＲＰ、２５０ｍｍ×３０ｍｍ；移動相：緩衝液Ａ：５０ｍＭのトリエチル酢酸アンモニウム水溶液；緩衝液Ｂ：５０ｍＭトリエチル酢酸アンモニウムのＣＨ_３ＣＮ溶液、勾配：３０分にわたりＢが０〜３０％、流速２４ｍＬ／分）により精製し、続いて逆相分取ＨＰＬＣ（Ｋｉｎｅｔｅｘ ５μｍ、１００Ａ；２５０×２１．２ｍｍ緩衝液Ａ：０．１％ギ酸水溶液緩衝液Ｂ：ＭｅＣＮ中の０．１％ギ酸；流速：１５ｍＬ／分、勾配３０分で緩衝液Ｂが０〜３０％）により第２の精製を行い、白色固体として化合物３２（６．９ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：７０３．００［Ｍ−１］−。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７０５．１０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0370】

化合物３２（ナトリウム塩）の調製
Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗ×８、２００−４００（５ｍＬ、Ｈ形）をビーカーに添加し、脱イオン水（３０ｍＬ）で洗浄した。樹脂に、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４脱イオン水溶液を添加し、混合物を５分間穏やかに撹拌した後、デカントした（３０ｍＬ）。樹脂を、脱イオン水中に１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を含むカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４（少なくとも４カラム体積）で洗浄し、次いで中性となるまで、脱イオン水にて洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカントした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨの水溶液（少なくとも４カラム体積）で洗浄して、次いで中性となるまで脱イオン水で洗浄した。化合物３２（トリエチルアンモニウム塩）（６．９ｍｇ）を最小量の脱イオン水に溶解させ、カラム上部に添加し、脱イオン水にて溶出した。画分をプールして凍結乾燥し、白色固体として化合物３２（ナトリウム塩）（６．１ｍｇ）を得た（約２０％又は不純物又は同じ分子量の他の異性体を含有−主要生成物の分析データ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ８．０８（ｓ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），６．２２（ｄ，１Ｈ），５．７９−５．８５（ｍ，１Ｈ），５．５３−５．７０（ｍ，１Ｈ），４．７３−５．１３（ｍ，３Ｈ），４．４５−４．５０（ｍ，１Ｈ），４．２１−４．３５（ｍ，１Ｈ），３．４０−４．１９（ｍ，４Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．７０（ｍ，２Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ５４．６６（ＰＳピーク），２５．１３（１．０，ホスホネート）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７９ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ−１９９．４８（ｍ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：ＥＳＩ−ＭＳ：７０３．００［Ｍ−１］⁻。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ７０５．１０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0371】

実施例２３

【0372】

【化75】

【0373】

工程１：２３ａの調製
化合物１９ｃ（１ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ_２下にてデス−マーチンペルヨージナン（１．４５ｇ、３．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にて１６時間撹拌した後、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（３ｇ）を含有するＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）を添加して、混合物を０．５時間撹拌した。有機層を分離し、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。次に有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＥｔＯＡｃ／石油エーテル、０／１００〜１／０）により精製し、白色固体として２３ａ（１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４９８．１［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ］^＋

【0374】

工程２：化合物２３ｂの調製
０℃に予冷却したエタノール（１０ｍＬ）中の２３ａに、ＮａＢＨ_４（０．１４ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃にて１０分間、次いで室温で３０分間撹拌し、その後ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で希釈した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した（１０ｍＬ）。次に有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＥｔＯＡｃ／石油エーテル、０／１００〜１／１）により精製し、２３ｂ（３００ｍｇ）を得て、白色固体として２３ａ（２００ｍｇ）を回収した。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１２．０７（ｓ，１Ｈ）１１．７１（ｓ，１Ｈ）８．００（ｓ，１Ｈ）６．０６（ｄ，Ｊ＝４．８５Ｈｚ，１Ｈ）５．８５（ｄ，Ｊ＝５．２９Ｈｚ，１Ｈ）４．２４−４．３４（ｍ，１Ｈ）３．７６−３．９３（ｍ，４Ｈ）３．４０（ｓ，３Ｈ）２．７６（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，１Ｈ）１．１２（ｄ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，６Ｈ）０．９０（ｓ，９Ｈ）０．０４−０．１３（ｍ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４８２．１［Ｍ＋１］^＋。

【0375】

工程３：２３ｃの調製
化合物２３ｂ（１２０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のピリジン（４ｍＬ）溶液、及びＤＩＥＡ（８７．９６ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）に、ジフェニルカルバミルクロリド（１０５．１１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を添加した。２５℃にて１時間撹拌した後、反応混合物を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＥｔＯＡｃ／石油エーテル、０／１００〜１／０）により精製し、白色固体として２３ｃ（１１０ｍｇ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３−ｄ）δｐｐｍ８．３２（ｓ，１Ｈ）７．９６（ｓ，１Ｈ）７．３１−７．５１（ｍ，８Ｈ）７．２５（ｂｒｓ，２Ｈ）６．２１（ｄ，Ｊ＝３．０１Ｈｚ，１Ｈ）４．９０（ｄ，Ｊ＝９．５４Ｈｚ，１Ｈ）４．３７（ｂｒｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，１Ｈ）４．１４（ｄ，Ｊ＝２．２６Ｈｚ，１Ｈ）３．９８（ｓ，１Ｈ）３．９４（ｄ，Ｊ＝３．０１Ｈｚ，１Ｈ）３．９２−３．９９（ｍ，１Ｈ）３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１１．１７，２．３８Ｈｚ，１Ｈ）３．５０（ｓ，３Ｈ）２．９３（ｂｒｓ，１Ｈ）１．２７（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，６Ｈ）０．９３（ｓ，９Ｈ）０．１４（ｓ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６９９．６［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

【0376】

工程４：化合物２３ｄの調製
化合物２３ｃ（２００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のピリジン（５ｍＬ）溶液に、Ｔｆ_２Ｏ（６０６．１１ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。０〜５℃にて３時間撹拌した後、反応混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、ブライン（５ｍＬ×１）で洗浄した。相を分離し、水層をＤＣＭで抽出した（１０ｍＬ×２）。次に有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＥｔＯＡｃ／石油エーテル、０／１００〜１／１）により精製し、白色固体として２３ｄ（２５０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８３１．２［Ｍ＋Ｎａ］^＋

【0377】

工程５：化合物２３ｅの調製
化合物２３ｄ（６１０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、アジ化ナトリウム（８１４ｍｇ、７．０６ｍｍｏｌ）を添加した。２５℃にて１６時間撹拌した後、混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。次に有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて減圧下にて濾過濃縮した。油状の残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＥｔＯＡｃ／石油エーテル０／１００〜１／００）により精製し、白色固体として２３ｅ（５００ｍｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１２．１２（ｓ，１Ｈ）１１．６８（ｓ，１Ｈ）８．２１（ｓ，１Ｈ）５．９１（ｄ，Ｊ＝４．６３Ｈｚ，１Ｈ）４．８７（ｔ，Ｊ＝４．９６Ｈｚ，１Ｈ）４．２６（ｂｒｔ，Ｊ＝５．０７Ｈｚ，１Ｈ）４．０８（ｂｒｄ，Ｊ＝４．４１Ｈｚ，１Ｈ）３．８６（ｂｒｄｄ，Ｊ＝１１．４７，４．１９Ｈｚ，１Ｈ）３．７１−３．８１（ｍ，１Ｈ）３．４６（ｓ，３Ｈ）２．７７−２．８２（ｍ，１Ｈ）１．１２（ｄ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，６Ｈ）０．８７（ｓ，９Ｈ）０．０６（ｓ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５０７．２［Ｍ＋１］^＋。

【0378】

工程６：化合物２３ｆの調製
化合物２３ｅ（４５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＢＡＦ（１．５２ｍＬ、１．５２ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ）を０℃にて添加した。室温で４時間撹拌した後、混合物を減圧下にて濃縮し油を得た。油をＤＭＣＭ（５０ｍＬ）に溶解させ、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。相を分離し、水相をＣＤＭ（２０ｍＬ×２）で抽出した。次に有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させて濾過し、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １／０〜１００／７）により精製し、白色固体として２３ｆ（２２０ｍｇ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３−ｄ）δｐｐｍ１２．１３（ｂｒｓ，１Ｈ）８．５７（ｂｒｓ，１Ｈ）７．８１（ｓ，１Ｈ）５．８４（ｄ，Ｊ＝７．７２Ｈｚ，１Ｈ）５．０８（ｂｒｓ，１Ｈ）４．５９（ｄｄ，Ｊ＝７．５０，５．２９Ｈｚ，１Ｈ）４．３３（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ）４．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．２９，１．９８Ｈｚ，１Ｈ）４．０３（ｄｄ，Ｊ＝１２．４６，２．０９Ｈｚ，１Ｈ）３．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）３．５６（ｓ，３Ｈ）２．６１−２．７６（ｍ，１Ｈ）１．２７−１．３５（ｍ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４１５．０［Ｍ＋Ｎａ］^＋

【0379】

工程７：化合物２３ｈの調製
化合物２３ｆ（２２０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）及び４Åのモレキュラーシーブ（３ｇ）のＣＨ_３ＣＮ（１８ｍＬ）溶液を、Ｎ_２雰囲気下にて室温で３分間撹拌した。１Ｈ−テトラゾール（７．４８ｍＬ、３．３６ｍｍｏｌ、ＣＨ_３ＣＮ中０．４５Ｍ）を滴加した。１０分間撹拌した後、化合物２３ｇのＣＨ_３ＣＮ（４ｍＬ）溶液を滴加した。混合物を室温で１時間撹拌した後、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（０．５６ｍＬ、２．８０ｍｍｏｌ、デカン中５Ｍ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した後、混合物を減圧下にて濾過濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、白色固体として２３ｈ（９５０ｍｇ、粗生成物）を得、これを全く精製することなく、次工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１８３．５［Ｍ＋１］^＋

【0380】

工程８：化合物２３ｉの調製
化合物２３ｈ（９５０ｍｇ、粗生成物）のＤＣＭ（１５ｍＬ）及び水（６８．８３ｍｇ、３．８２ｍｍｏｌ）溶液に、ジクロロ酢酸（１７２．５７ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）を室温で添加し、続いてトリエチルシラン（３．５ｍＬ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、ピリジン（１２１ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を添加して混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで減圧下にて濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出勾配：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜１０：１）により精製し、白色固体として２３ｉ（５７０ｍｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ−ｄ４）δｐｐｍ８．５７−８．７４（ｍ，２Ｈ）８．０４−８．１６（ｍ，３Ｈ）７．６６（ｄ，Ｊ＝６．６１Ｈｚ，１Ｈ）７．５３−７．６１（ｍ，２Ｈ）６．３８−６．５３（ｍ，１Ｈ）５．９０−６．０６（ｍ，１Ｈ）４．５３（ｂｒｄ，Ｊ＝５．５１Ｈｚ，２Ｈ）４．４０−４．４６（ｍ，１Ｈ）４．３１−４．４０（ｍ，４Ｈ）３．９２（ｂｒｄ，Ｊ＝１３．２３Ｈｚ，１Ｈ）３．７３−３．８３（ｍ，１Ｈ）３．５８（ｄ，Ｊ＝１１．６９Ｈｚ，３Ｈ）２．７０−２．７９（ｍ，１Ｈ）１．２１（ｄｄ，Ｊ＝６．８４，２．４３Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８８１．４［Ｍ＋１］^＋

【0381】

工程９：化合物２３ｊの調製
化合物２３ｉ（４７０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、１Ｈ−テトラゾール（０．６６ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ、ＣＨ_３ＣＮ中０．４５Ｍ）、ＬｉＣｌ（８４．２３ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）、及び４Åのモレキュラーシーブ（２ｇ）の、ＤＣＭ（６０ｍＬ）溶液に、ジメチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト（９４．５０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７２時間室温で撹拌し、減圧下にて濾過濃縮し、白色固体として２３ｊ（４００ｍｇ、粗生成物）を得、これを全く精製することなく、次工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９３１．１［Ｍ＋１］^＋

【0382】

工程１０：化合物３３の調製
化合物２３ｊ（４００ｍｇ、粗生成物）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）溶液に、ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（１５ｍＬ）を室温で添加した。５０℃にて３日間攪拌した後、反応混合物を濾過し、濾液を減圧下にて濃縮乾固した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ ４μＭ、Ｈｙｄｒｏ ＲＰ、２５０ｍｍ×３０ｍｍ；移動相：緩衝液Ａ：５０ｍＭのトリエチル酢酸アンモニウム水溶液；緩衝液Ｂ：５０ｍＭトリエチル酢酸アンモニウムのＣＨ_３ＣＮ溶液、勾配：３０分にわたりＢが０〜３０％、流速２４ｍＬ／分）により精製し、化合物３３（２４．５ｍｇ）を得た。逆相分取ＨＰＬＣ（Ｓｙｎｅｒｇｉ ４μＭ、Ｈｙｄｒｏ ＲＰ、２５０ｍｍ×３０ｍｍ、緩衝液Ａ：０．１％ギ酸水溶液緩衝液Ｂ：０．１％ギ酸のＭｅＣＮ溶液；流速：１５ｍＬ／分、勾配３０分で緩衝液Ｂが０〜３０％）により、化合物３３を更に精製し、化合物３３（トリエチルアンモニウム塩）（１６．３ｍｇ）を得た。

【0383】

化合物３３のナトリウム塩交換：
Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗ×８、２００−４００（５ｍＬ、Ｈ形）をビーカーに添加し、脱イオン水（３０ｍＬ）で洗浄した。樹脂に、脱イオン水中の１５％ Ｈ_２ＳＯ_４を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌してデカントした（３０ｍＬ）。樹脂を、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％ Ｈ_２ＳＯ_４で洗浄し（少なくとも４カラム体積）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ ＮａＯＨの脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌してデカントした。樹脂をカラムに移し、１５％ ＮａＯＨ水溶液（少なくとも４カラム体積）で洗浄して、次いで中性となるまで脱イオン水で洗浄した。化合物３３（トリエチルアンモニウム塩）（１６．３ｍｇ）を最小量の脱イオン水に溶解させ、カラム上部に添加し、脱イオン水にて溶出した。画分をプールして凍結乾燥し、白色固体として化合物３３（ナトリウム塩）（１５．４ｍｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δｐｐｍ８．２１（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），６．２２（ｄ，１Ｈ），５．４９（ｄ，１Ｈ），５．２０−５．３６（ｄ，１Ｈ），４．８８（ｄ，１Ｈ），４．３０−４．３７（ｍ，３Ｈ），４．０６−４．１２（ｍ，２Ｈ），３．８０−３．９０（ｍ，２Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ４．２３（アミデート），−１．３２（ホスフェート）；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７９ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ−２０１．９５８（ｍ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：６８７．７０［Ｍ−１］₋。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ６９０．１０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0384】

生物学的実施例
インビトロ・アッセイ
ＳＴＩＮＧ ＳＰＡ結合アッセイ
ヒトＳＴＩＮＧ ＳＰＡ結合アッセイは、トリチウム標識された２’，３’ｃＧＡＭＰ（環状（グアノシン−（２’→５’）−モノホスフェート−アデノシン−（３’→５’）−モノホスフェート）の、ビオチン化ＳＴＩＮＧタンパク質への置換を測定する。４つの膜貫通ドメインを欠いており、２３２位にＲを有する（Ｈ２３２Ｒ）Ｑ８６ＷＶ６の残基１３９−３７９を含む可溶化態様の組み替えＳＴＩＮＧを、Ｅ．ｃｏｌｉで発現させた。集団について対立遺伝子頻度が５８％であることに基づき、Ｈ２３２Ｒは、野生型であると考えられる（Ｙｉ，ｅｔ．ａｌ．，「Ｓｉｎｇｌｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＳＴＩＮＧ ｃａｎ ａｆｆｅｃｔ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｃｙｃｌｉｃ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」ＰＬＯＳ ＯＮＥ．２０１３，８（１０），ｅ７７８４６）。ＳＴＩＮＧコンストラクトは、Ｎ末端にＨＩＳタグを有しており、それに続き、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位及びＡＶＩタグを有しており、ＢｉｒＡビオチンリガーゼによる選択的ビオチン化を可能にする（Ｂｅｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｍｉｎｉｍａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｉｎ ｂｉｏｔｉｎ ｈｏｌｏｅｎｚｙｍｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ．（１９９９）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ８，９２１−９２９）。精製後、かつビオチン化の前に、ＨＩＳタグを切断させる。

【0385】

８ｎＭの［^３Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰ及び４０ｎＭビオチン−ＳＴＩＮＧタンパク質をアッセイバッファー［２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ２５−０６０−Ｃ１）ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ Ｓ５１５０）、０．５ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ １５２６０−０３７）、０．００１％Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ Ｐ７９４９）、分子生物学グレードの水（Ｃｏｒｎｉｎｇ ４６−０００−ＣＭ）］に加えることによって、ウェルあたりの合計体積８μＬで、１５３６ウェルプレートでアッセイを行った。試験化合物（８０ｎＬ）を、アコースティックディスペンサー（ＥＤＣ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて１００％ＤＭＳＯに加え、最終アッセイ濃度を１％ＤＭＳＯとした。プレートを１分間遠心分離し、室温で６０分間インキュベートした。最後に、（２μＬ）ポリスチレンストレプトアビジンＳＰＡビーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＲＰＮＱ０３０６）を加え、プレートを密封し、室温で１分間遠心分離した。プレートを２時間暗所で適応させ、プレート当たり１２分間ＶｉｅｗＬｕｘ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。［^３Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰに関する飽和結合曲線は、ＳＴＩＮＧに対する結合について、天然リガンドについて報告されている値に匹敵する３．６±０．３ｎＭのＫ_Ｄを示した（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｃｌｉｃ ＧＭＰ−ＡＭＰ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｉｘｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ ｌｉｎｋａｇｅｓ ｉｓ ａｎ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ＳＴＩＮＧ。

【0386】

環状ジ−ＧＭＰを含む他の天然リガンドもまた、予想される範囲内で、このアッセイにおいて値を返した。参照化合物はｃＧＡＭＰであり、結果は、阻害率及びＩＣ_５０値として報告される。マウスＳＴＩＮＧに対する結合は、Ｑ３ＴＢＴ３の残基１３８−３７８を含有する上述のものと類似のコンストラクトを使用した。

【0387】

完全長ヒトＳＴＩＮＧ結合アッセイ
２３２位にＲを有し（Ｈ２３２Ｒ）、Ｎ末端に６ＨＩＳタグを有し、それに続きＦＬＡＧタグ、ＴＥＶプロテアーゼ開裂部位及びビオチン化のためのＡＶＩタグを有する、Ｑ８６ＷＶ６の残基１−３７９由来のヒトＳＴＩＮＧを、ＨＥＫ２９３−ＥＸＰＩ細胞内で組換え発現した。これらの細胞から精製膜を調製し、ＳＴＩＮＧ発現を確認し、免疫ブロットにより定量した。Ｇｒｅｉｎｅｒ ３８４ウェルアッセイプレート中でＳＴＩＮＧ含有膜を試験化合物と合わせ、ＳＴＩＮＧ ＳＰＡ結合アッセイに使用したのと同じアッセイバッファー中、室温で１時間インキュベートした。次に、［^３Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰを加え、プレートを室温で３０分間インキュベートした。反応物を予め洗浄したＰａｌｌ ５０７３フィルタープレートに移し、各ウェルを５０μＬのアッセイバッファーで３回洗浄した。フィルタープレートを５０℃で１時間乾燥させた。各ウェルに、１０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔシンチレーション流体を加え、プレートを密封し、ウェル当たり１分間ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。°

【0388】

ＳＴＩＮＧ ＳＰＲ結合アッセイ
化合物を、Ｓ２００ ｂｉａｃｏｒｅ ＳＰＲ装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で分析した。Ｅ．ｃｏｌｉで産生した切断型ＳＴＩＮＧタンパク質を、ビオチン捕捉（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ＃ＢＲ１００５３１）を介して、一連のＳストレプトアビジンチップ上に固定した。化合物を、実施バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．００５％Ｐ２０、１ｍＭ ＴＥＣＥＰ）中、１００ｕＭ〜０．１９５ｕＭまで１：２希釈でスクリーニングした。１：１結合モデルを用いて定常状態の親和性及び動態評価を行った（ＳＴＩＮＧはダイマーとして処理した）。実験パラメータは以下のとおりであった。ＩＦＭ化合物については６０秒オン、３００秒オフ、環状ジ−ＧＭＰ（６０秒オン／６０秒オフ）、チオール異性体１（６０秒オン／３００秒オフ）、及びｃＧＡＭＰ（６０秒オン／１２００秒オフ）、流速５０μＬ／ｍｉｎ及び２５℃、４０Ｈｚでのデータ収集。

【0389】

ＳＴＩＮＧヒト細胞レポーターアッセイ
ヒトＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）により誘導可能なＳＥＡＰレポーターコンストラクトの安定な組み込みによって、ヒトＴＨＰ１単球細胞株由来のＴＨＰ１−ＩＳＧ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，カタログ番号ｔｈｐ−ｉｓｇ）において評価される。ＴＨＰ１ Ｂｌｕｅ ＩＳＧ細胞は、５つのインターフェロン（ＩＦＮ）刺激応答配列と共に、ＩＳＧ５４ミニマルプロモーターの制御下で、分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。結果として、ＴＨＰ１ Ｂｌｕｅ ＩＳＧ細胞により、ＳＥＡＰ活性を測定してＩＲＦ活性化をモニタリングすることが可能になる。細胞培養上清中のＩＲＦ誘導性ＳＥＡＰのレベルは、アルカリホスファターゼ検出培地、ＳＥＡＰ検出試薬によって容易に評価される。これらの細胞は、ゼオシン耐性である。このアッセイにおいて、陽性対照として２’３’ｃＧＡＭＰを使用した。アッセイを行うために、６０，０００個の細胞を、白色で底が不透明の組織培養処理された３８４ウェルプレートに３０μＬ／ウェルで分配した。

【0390】

試験化合物を１０μＬの体積で添加した（最終濃度１％ＤＭＳＯ）。最初に化合物を１００％ＤＭＳＯ中で調製し、中間希釈プレート上にスポットし、その後、移す前に培地で希釈した。アッセイを３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートした後、プレートを１２００ｒｐｍ（１２０ｘｇ）で５分間遠心分離した。最後のインキュベートの後、９０μＬのアルカリホスファターゼ検出培地を新しい３８４ウェル透明プレートの各ウェルに加え、Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸを使用して、１０μＬの細胞上清をアッセイプレートから新しいアルカリホスファターゼ検出培地プレートに移し、４回混合した。プレートを室温で２０分間インキュベートした後、６５５ｎｍでの吸光度をＴｅｃａｎ Ｓａｆｉｒｅ ２で測定した。

【0391】

ＳＴＩＮＧマウス細胞レポーターアッセイ
マウスＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、インターフェロン誘導性Ｌｕｃｉａルシフェラーゼレポーターコンストラクトの安定な組み込みによって、マウスＲＡＷ−２６４．７マクロファージ細胞株由来のＲＡＷ Ｌｕｃｉａ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、カタログ番号ｒａｗｌ−ｉｓｇ）において評価される。ＲＡＷ Ｌｕｃｉａ細胞は、５つのインターフェロン（ＩＦＮ）刺激応答配列と共に、ＩＳＧ５４ミニマルプロモーターの制御下で、分泌型ルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する。結果として、ＲＡＷ Ｌｕｃｉａ細胞により、ルシフェラーゼの活性を測定してＩＲＦ活性化をモニタリングすることが可能になる。細胞培養上清中のＩＲＦ誘導によるルシフェラーゼのレベルは、ルシフェラーゼ検出試薬ＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（商標）を用いて容易に評価される。これらの細胞は、ゼオシン耐性である。このアッセイにおいて、陽性対照として２’３’ｃＧＡＭＰを使用する。アッセイを行うために、１００，０００個の細胞を、組織培養処理された透明で底が平らな９６ウェルプレートに９０μＬ／ウェルで分配した。試験化合物を１０μＬの体積で添加した。このアッセイを、３７℃、５％ＣＯ２で、２４時間及び４８時間インキュベートした。インキュベート後、アッセイプレートから２０μＬの細胞上清を新しい９６ウェル白色プレートに移し、５０ｕＬのＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ基質を加えた。プレートをインキュベートし、室温で５分間振盪した後、０．１秒の積分時間で発光をＥｎＶｉｓｉｏｎ ２１０４で読み取った。

【0392】

ヒトインターフェロン−β誘導アッセイ
ＴＨＰ１ Ｂｌｕｅ ＩＳＧ細胞を使用して、ＳＴＩＮＧ経路活性化後の培養上清へのＩＦＮ−βの分泌を測定する。アッセイを行うために、抗ＩＮＦ−β捕捉抗体を９６ウェルＭｕｌｔｉＡｒｒａｙプレート（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）上にコーティングした。１時間のインキュベート後、プレートを洗浄し、このコーティングされたプレート内で、ＳＴＩＮＧヒト細胞レポーターアッセイプレート由来の５０μＬの上清又はＩＦＮ−β標準を、Ｓｕｌｆｏｔａｇを付加した２０μＬの共役検出抗体と混合した。プレートをインキュベートし、２時間振盪し、洗浄し、読み取りバッファーを加えた。電気化学発光をＳｅｃｔｏｒＩｍａｇｅｒで測定した。

【0393】

ＳＴＩＮＧ細胞シグナル伝達経路の評価
ＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、ホスホ−ＳＴＩＮＧ（Ｓ３６６）、ホスホ−ＴＢＫ１（Ｓ１７２）及びホスホ−ＩＲＦ３（Ｓ３９６）のウェスタンブロットによって、ＴＨＰ１ ＢＬＵＥ ＩＳＧ細胞において測定された。簡潔に述べると、９０μＬのヌクレオフェクション（商標）バッファー中の５万個の細胞を、１０μＬの試験化合物と混合した。これらの混合物を、Ａｍａｘａ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（Ｌｏｎｚａ）上でプログラムＶ−００１を用いてエレクトロポレーションした。細胞を新鮮な培地を入れた１２ウェルプレートに移し、３７℃、５％ＣＯ_２で１時間回復させた。次いで、細胞を冷ＨＢＳＳで洗浄し、ＲＩＰＡバッファーに溶解させた。サンプルは、総タンパク質を正規化し、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅサンプルバッファー又はＬＤＳローディングバッファーのいずれかで希釈した。サンプルを９５℃で５分間加熱変性した後、ＰｅｇｇｙＳｕｅ（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ）を使用してホスホ−及び総ＳＴＩＮＧ及びＩＲＦ３を測定し、一方、ＮｕＰＡＧＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）システムを使用してＴＢＫ１を測定した。データを、Ｃｏｍｐａｓｓ又はＬｉｃｏｒ Ｏｄｙｇｓｅｙソフトウェアを使用してそれぞれ分析した。

【0394】

ＳＴＩＮＧインビボ活性
全ての試験において、雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスはＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から得て、６〜８週齢になり、体重が約２０ｇになったときに使用した。全ての動物を、実験での使用前に最低５日間、あらゆる輸送関連ストレスから順応及び回復させた。逆浸透処理し塩素を添加した水及び食品照射された餌（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｕｔｏｃｌａｖａｂｌｅ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ５０１０、Ｌａｂ Ｄｉｅｔ）を不断給餌で与え、動物を１２時間の明暗サイクルに維持した。使用前にケージ及び床敷きをオートクレーブ処理し、毎週交換した。全ての実験は、Ｔｈｅ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓに従って行い、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒ＆Ｄ（Ｓｐｒｉｎｇ Ｈｏｕｓｅ，ＰＡ）により承認された。各実験群には、８匹のマウスが含まれていた。５００，０００個のＣＴ２６結腸癌腫瘍細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに皮下移植し、腫瘍を１００〜３００ｍｍ^３に成長させることによって、マウスＣＴ２６腫瘍モデルにおけるインビボ有効性を決定した。化合物を、リン酸緩衝生理食塩水中で、１回の注入当たり０．１ｍＬの体積で配合し、腫瘍内注射した。約３日おきに０．０５ｍｇ、合計３回用量をマウスに投与した。次式：（（Ｃ−Ｔ）／（Ｃ））^＊１００（全ての対照動物が試験下にある場合）により、対照腫瘍体積（Ｃ）に対する、治療した腫瘍体積（Ｔ）のサイズの減少によって計算される腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）として、有効性を評価した。治癒は、最後の用量を投与した後に、１０腫瘍体積倍加時間（ＴＶＤＴ）を測定可能な腫瘍が検出されなかった動物の数であると定義された。得られたデータを表３に示す。

【0395】

【表4】

ＮＤ：実施せず

【0396】

インビボ活性の測定
ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに移植し、又はＣＴ２６細胞をＢａｌｂ／ｃマウスの右横腹に移植し、腫瘍を約１００〜２００ｍｍ^３のサイズとすることにより、動物モデルにおける活性を評価することができる。腫瘍には、ビヒクル（ＰＢＳ若しくはＨＢＳＳ）を注射することができ、又は、試験化合物を１回の注射当たり１００μＬの体積で腫瘍内に注射することができる。各治療群は７〜８匹のマウスを有することができ、治療は３日毎に、合計３用量（ｑ３ｄ×３）で投与することができる。腫瘍のサイズをノギスで測定することができ、推定される腫瘍重量を、以下の式を用いて計算することができる：腫瘍重量＝ｗ_２（ｌ）／２（式中、ｗは幅であり、ｌは長さ（ミリメートル）である）。効能は増殖抑制率（％ＴＧＩ）、及びまた、各群における「治癒」の数の両方により測定することができる。％ＴＧＩは、全ての対照動物が依然として研究中であるときに、対照腫瘍体積（Ｃ）に対する治療腫瘍体積（Ｔ）の、サイズ減少割合として、以下の式：（（Ｃ−Ｔ）／（Ｃ−開始サイズ））^＊１００に従い計算することができる。治癒は、最後の用量を投与した後に、１０腫瘍体積倍加時間（ＴＶＤＴ）を測定可能な腫瘍が検出されなかった動物の数であると定義することができる。

【0397】

生物学的実施例２：
ＳＴＩＮＧ初代ヒトＰＢＭＣサイトカイン誘導アッセイ
ヒト全血由来の初代ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）においてヒトＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性を評価する。１パイント（約４２０ｍＬ）の新鮮なドナー血液（ＡｌｌＣｅｌｌｓ Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ））を、リンパ球分離培地（１．０７７〜１．０８０ｇ／ｍＬ、Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））上に層状に配置し、次いで、破壊することなく、室温、５００ｇで２０分間遠心分離する。血清とリンパ球分離培地との間の界面で集めたＰＢＭＣを採取し、洗浄し、次いで計測する。ＰＢＭＣは、Ｂ細胞、Ｔ細胞などのリンパ球及び単球のサブタイプから構成され、文献において、これらのサブタイプは、異なるレベルのＳＴＩＮＧタンパク質を発現するとして特徴付けられている。２’３’−ｃＧＡＭＰなどのＳＴＩＮＧアゴニストに応答して、これらの細胞が活性化され、様々な炎症性及び抗ウイルス性サイトカインの発現が誘導される。また、ＳＴＩＮＧアゴニストで刺激すると、これらの細胞は、活性化マーカーを上方調節する。サイトカイン誘導レベルは、ＥＬＩＳＡ、Ｌｕｍｉｎｅｘ及びＭＳＤを含む様々な方法によって測定することができる。活性化マーカーの上方調節のレベルは、フローサイトメトリーによって測定することができる。

【0398】

アッセイを行うために、１，０００，０００個の細胞を、組織培養処理された底が平らな９６ウェルプレートに２２５μＬ／ウェルで分配した。試験化合物を、１０倍濃度で、２５μＬの体積で添加した。一部の化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解し、これらの化合物を投与する培養物におけるＤＭＳＯの最終濃度は１％とした。このアッセイを、３７℃、５％ＣＯ_２で４８時間インキュベートした。プレートの底部の細胞を乱さないように２００μＬの上清を採取し、次いで、Ｌｕｍｉｎｅｘ測定の時間まで−２０℃にて凍結させた。ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ ＭＡＰ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｂｅａｄ Ｐａｎｅｌ−Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ ｋｉｔからのＧ−ＣＳＦ、ＩＦＮα２、ＩＦＮγ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＴＮＦα、及びＭＩＬＬＩＰＬＥＸ ＭＡＰ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｂｅａｄ Ｐａｎｅｌ ＩＶキット（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビレリカ、ＭＡ）からのＩＦＮβ１検体を用い、製造業者のプロトコルに従って、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを行った。サイトカイン誘導は、Ｌｕｍｉｎｅｘ ＦｌｅｘＭＡＰ ３Ｄ（登録商標）装置（Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ラドノール、ＰＡ））を使用して測定した。収集されたＬｕｍｉｎｅｘデータの分析は、ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して行った。

【0399】

ＳＴＩＮＧ活性化された初代ヒトＰＢＭＣからの馴化培地を使用したＰＨＨ細胞におけるＨＢＶウイルスの抑制
初代ヒト肝細胞は、Ｂ型肝炎ウイルスに感染し得るものであり、感染中は、ＥＬＩＳＡによって検出可能なＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇなどのウイルスタンパク質を産生する。エンテカビルなどの化合物による治療処置は、ＨＢＶ複製を抑制することができ、この抑制は、ウイルスタンパク質の産生の減少によって評価することができる。（細胞数）４×１０^５個／ウェルの初代ヒト肝細胞（ＢｉｏＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎ、ウェストベリー、ＮＹ）を、５００μＬ／ウェルの組織培養処理された底が平らな２４ウェルプレートに分配した。２４時間後、細胞を３０〜７５ｍｏｉのＨＢＶに感染させた。翌日、ＰＨＨを３回洗浄し、新鮮な維持培地を細胞に添加した。同時に、ＰＢＭＣを、上述のとおり単離した。ＰＢＭＣを刺激するために、１０，０００，０００個の細胞を、組織培養物処理された底が平らな２４ウェルプレートに４００μＬ／ウェルで分配した。試験化合物を体積１００μＬで添加した後、培養物を３７℃、５％ＣＯ_２で４８時間インキュベートした。上清を回収した。フローサイトメトリーを使用して、活性化マーカーのアップレギュレーションについて細胞を測定した。簡潔に述べると、細胞を、ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ８ａ、ＣＤ１４、ＣＤ６９、ＣＤ５４、ＣＤ１６１、ＣＤ４及びＣＤ８０を対象とする蛍光標識抗体で染色した。Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カールスバッド、ＣＡ）でサンプルを分析した。

【0400】

刺激したＰＢＭＣ培養物から、上述のとおり、Ｌｕｍｉｎｅｘによるサイトカイン検出のために上清の一部を確保した。残りの上清を半分に分割し、アッセイのｄ８で使用するために１つのアリコートを４℃で保存した。上清の他のアリコートを２ＸＰＨＨ培地で１：１に希釈した後、ｄ４感染したＰＨＨ細胞に添加した。９６時間後、使用済み培地を交換し、上清に、２ＸＰＨＨ培地を添加し１：１希釈した。この時点で、ＨＢｓＡｇ ＥＬＩＳＡキット（Ｗａｎｔａｉ Ｂｉｏ ｐｈａｒｍ、北京、中国）を使用してＨＢｓＡｇの仮測定を行った。９６時間後、培地を回収し、ＨＢｓＡｇを測定した。

【0401】

表４：ＣＤＮ化合物で刺激したＰＢＭＣ培養におけるサイトカインの誘導倍率。誘導倍率は、約２０μＭの化合物で４８時間後に誘導されたサイトカインの濃度を測定し、次いで、ＰＢＳでインキュベートした細胞のサイトカイン産生のベースラインレベルで割ることによって計算される。データは、３つの実験にわたる複数のドナーの平均である。ｎｔ＝試験せず。

【0402】

【表5】

【0403】

表５：より高濃度のＣＤＮ化合物で刺激したＰＢＭＣ培養におけるサイトカインの誘導倍率。誘導倍率は、指定の濃度の化合物で４８時間後に誘導されたサイトカインの濃度を測定し、次いで、ＰＢＳで誘導された細胞のサイトカイン産生のベースラインレベルで割ることによって計算される。データは、３つの実験にわたる複数のドナーの平均である。ｎｔ＝試験せず。

【0404】

【表6】

【0405】

表６．ＣＤＮで刺激されたＰＢＭＣからの馴化培地は、ＨＢＶ感染したＰＨＨ細胞のウイルス負荷を抑制することができる。ＰＢＭＣを、記載のＣＤＮを用いて２０、４、０．８μＭで４８時間刺激した。上澄み液を新鮮な培地と１：１の比率で混合した後、ＨＢＶ感染したＰＨＨ細胞に添加した。ＨＢｓＡｇ産生は、８日後に測定した。データは、２人の独立したドナーの平均である。

【0406】

【表7】

【0407】

表７．ＣＤＮはＰＢＭＣを活性化する。ＰＢＭＣを２０μＭのＣＤＮで４８時間刺激した。細胞を、単球上のＣＤ５４のアップレギュレーションについて、フローサイトメトリーによって評価した。平均蛍光強度の増加倍率は、休止細胞のレベルに対して計算した。データは、２人の独立したドナーの平均である。

【0408】

【表8】

【0409】

上記の明細書は、説明を目的として与えられる実施例と共に本発明の原理を教示するものであるが、本発明の実施には、以下の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内に含まれる全ての通常の変形例、適合例及び／又は改変例が包含される点が理解されるであろう。

【国際調査報告】