特表 2020-514320 髄膜炎菌組成物およびその方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2020-514320(P2020-514320A)

(43)【公表日】2020年5月21日

(54)【発明の名称】髄膜炎菌組成物およびその方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/095 20060101AFI20200424BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20200424BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20200424BHJP

   A61K 47/14 20060101ALI20200424BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20200424BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20200424BHJP

   C07K 14/195 20060101ALN20200424BHJP

   C07K 14/33 20060101ALN20200424BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/095ZNA

   A61K47/64

   A61K47/02

   A61K47/14

   A61P31/04

   A61P37/04

   C07K14/195

   C07K14/33

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】160

(21)【出願番号】特願2019-541143(P2019-541143)

(86)(22)【出願日】2018年1月30日

(85)【翻訳文提出日】2019年9月13日

(86)【国際出願番号】IB2018050563

(87)【国際公開番号】WO2018142280

(87)【国際公開日】20180809

(31)【優先権主張番号】62/452,963

(32)【優先日】2017年1月31日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/503,295

(32)【優先日】2017年5月8日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/613,945

(32)【優先日】2018年1月5日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/623,233

(32)【優先日】2018年1月29日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100137040

【弁理士】

【氏名又は名称】宮澤 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 理愛

(72)【発明者】

【氏名】キャスリン ウテ ジャンセン

(72)【発明者】

【氏名】アナリーサ シビル アンダーソン

(72)【発明者】

【氏名】ジュディス アブサロン

(72)【発明者】

【氏名】ヨハネス フレデリク ベースラー

(72)【発明者】

【氏名】ジョン アーウィン ファーレイ

(72)【発明者】

【氏名】リー ダイアン フレッチャー

(72)【発明者】

【氏名】シャノン リー ハリス

(72)【発明者】

【氏名】トーマス リチャード ジョーンズ

(72)【発明者】

【氏名】ラクシュミー カーンドケ

(72)【発明者】

【氏名】ポール リベレーター

(72)【発明者】

【氏名】ジョン ランス ペレス

(72)【発明者】

【氏名】リン マリー フェラン

(72)【発明者】

【氏名】ゲイリー ウォレン ズロトニック

(72)【発明者】

【氏名】デビッド クーパー

(72)【発明者】

【氏名】ホセ ミゲル アステ−アメザガ

(72)【発明者】

【氏名】イシス カネフスキー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC06

4C076DD26

4C076EE23

4C076EE59

4C085AA03

4C085BA16

4C085EE01

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA53

4H045CA11

4H045DA86

4H045EA22

4H045FA74

(57)【要約】

一態様では、本発明は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）と、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）非血清群Ｂ莢膜多糖とを含む組成物に関する。本発明はさらに、例えば、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株および非血清群Ｂ株に対する免疫応答を惹起するための使用などの、ｆＨＢＰを含む組成物の使用に関する。本明細書に記載の組成物および方法は、成人、青少年、小児、および幼児を含むヒトにおける投与に関するものである。
【図１】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）と、担体タンパク質にコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；担体タンパク質にコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；担体タンパク質にコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；および担体タンパク質にコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖とを含む組成物。

【請求項2】

第１のｆＨＢＰポリペプチドと第２のｆＨＢＰポリペプチドとを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

リン酸アルミニウムをさらに含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

第１のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中のアルミニウムに結合している、請求項２に記載の組成物。

【請求項5】

第２のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中のアルミニウムに結合している、請求項２に記載の組成物。

【請求項6】

ポリソルベート８０をさらに含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド；約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド；リン酸アルミニウムとしての約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム；約０．０２ｍｇのポリソルベート８０；約１０ｍＭのヒスチジン；および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項２に記載の組成物。

【請求項8】

用量あたり、約６０μｇの第１のポリペプチド；約６０μｇの第２のポリペプチド；約７．５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖；約７．５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖；約３．７５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖；約３．２５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖；約９７μｇのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３；４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム；約２８ｍｇのスクロース；約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン；約０．０２ｍｇのポリソルベート８０；約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み；０．５ｍＬの水をさらに含む、請求項２に記載の組成物。

【請求項9】

第１のポリペプチドが配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２に記載の組成物。

【請求項10】

第２のポリペプチドが配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２に記載の組成物。

【請求項11】

ハイブリッドタンパク質を含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

融合タンパク質を含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

凍結乾燥されない、請求項１に記載の組成物。

【請求項14】

ホルムアルデヒドを含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項15】

ジフテリアトキソイドもＣＲＭも含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項16】

アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーの非存在下でＭｅｎＡ莢膜糖を含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項17】

第１のポリペプチドが配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む；第２のポリペプチドが配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖が、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされ、リンカーが、カルボジイミド化学反応により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖が、ＡＤＨリンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされ、リンカーが、カルボジイミド化学反応により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）、請求項２に記載の組成物。

【請求項18】

Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ；塩化ナトリウム；スクロース；Ｌ−ヒスチジン；ポリソルベート８０；およびリン酸アルミニウムをさらに含む、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

請求項１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【請求項20】

請求項１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【請求項21】

請求項１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【請求項22】

請求項１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【請求項23】

患者が１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満である、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

患者が１８〜２４カ月齢未満である、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

患者が２４カ月齢以上〜１０歳未満である、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願との相互参照
本出願は、２０１７年１月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／４５２，９６３号、２０１７年５月８日に出願された米国仮特許出願第６２／５０３，２９５号、２０１８年１月５日に出願された米国仮特許出願第６２／６１３，９４５号、および２０１８年１月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／６２３，２３３号の利益を主張する。前記出願は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法に関する。

【背景技術】

【0003】

髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、敗血症、髄膜炎、および死亡を引き起こし得るグラム陰性被包性細菌である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を、化学的および抗原的に顕著な多糖類莢膜に基づいて少なくとも１２種の血清群（血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ−１３５（現在では主にＷと呼ばれる）、Ｘ、ＹおよびＺ）に分類することができる。５種の血清群（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５）を有する株が、大部分の疾患の原因となる。

【0004】

髄膜炎菌（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）は、抗生物質が利用可能であるにも拘わらず、数時間以内に小児および若年成人を殺傷し得る破壊的な疾患である。髄膜炎菌血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５および／またはＸに対する改善された免疫原性組成物の必要性が存在する。

【0005】

現在、広範囲のＭｎＢならびに髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷおよび／またはＸ単離物に対して有効な交差防御性ワクチンまたは組成物は、依然として商業的に入手可能ではない。例えば、血清群Ｂ疾患に対する防御のためのライセンス供与された多成分組成物に関する公開された現在までの結果は、少なくとも青少年において、非血清群Ｂの莢膜多糖を発現する複数の髄膜炎菌株に対して直接的な殺菌性免疫応答を示さなかった。したがって、多様なＭｎＢならびに髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、ＹおよびＷおよび／またはＸ単離物に対して有効な交差防御性ワクチンまたは組成物は、多様な、または異種性の髄膜炎菌株のパネル（例えば、異なる地理的領域を表す）に対する実社会のワクチン範囲を決定する際に必要である。

【0006】

髄膜炎菌ワクチンを、特に、小児に投与するための改善されたスケジュールを提供することが本発明のさらなる課題である。侵襲性髄膜炎菌感染症（ＩＭＤ）の発生率は年齢と共に変化するが、発生は１カ月齢から１歳までの幼児期に最も高いことが多く、発生の第２のピークは青少年期である。米国では、１９９８年〜２００７年に、２歳未満の年齢の幼児における髄膜炎菌感染症の全体の発生率は、１００，０００人あたり３．９人であった。２〜１０歳の小児では、発生率は、１００，０００人あたり０．６８人であり、この年齢群における症例の４１％が２〜３歳の年齢の小児において発生した。オーストラリアからの全国調査データは、４歳以下の年齢の小児における疾患発生のピークを示すと共に、青少年期および若年成人における第２のピークを示す；全症例の約８５％が、血清群Ｂ疾患に起因する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

これらの、および他の必要性を満たすために、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法に関する。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者らは、驚くべきことに、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）と、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物を発見した。この組成物は、驚くべきことに、安定であり、多成分組成物中のｆＨＢＰバリアントと同種であるｆＨＢＰバリアントを発現する株に対する免疫応答および多成分組成物中のｆＨＢＰバリアントに対して異種であるｆＨＢＰバリアントを発現する株に対する免疫応答を惹起した。

【0009】

組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；および破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖を含む。

【0010】

一実施形態では、組成物は、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；ＡＤＨリンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；およびリンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）を含む。

【0011】

一態様では、本発明は、（ａ）脂質化されたＭｅｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡポリペプチドおよび脂質化されたＭｅｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢポリペプチドを含む第１の組成物；ならびに（ｂ）破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；および破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖を含む第２の組成物を含むキットに関する。一実施形態では、第１の組成物は液体組成物であり、第２の組成物は凍結乾燥組成物である。別の実施形態では、キットは、以下の免疫原性組成物：ＭＥＮＡＣＴＲＡ（Ｒ）、ＭＥＮＶＥＯ（Ｒ）、ＡＤＡＣＥＬ（Ｒ）、ＨＡＶＲＩＸ（Ｒ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（Ｒ）、ＲＥＰＥＶＡＸのどの１つも、そのいずれの組合せもさらに含まない。一実施形態では、キットは、イブプロフェン、パラセタモール、およびアモキシシリンのいずれか１つを含む。

【0012】

一態様では、本発明は、（ｉ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；および（ｉｉ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む液体組成物；ならびにアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；ＡＤＨリンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；およびリンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）を含む凍結乾燥組成物を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、凍結乾燥組成物は、液体組成物を用いて復元される。

【0013】

別の態様では、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法に関する。一部の実施形態では、方法は、ヒトに、ｆＨＢＰタンパク質を含む組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、ヒトに、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および配列番号６２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、ヒトに、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物を投与することを含む。

【0014】

別の態様では、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法に関する。方法は、ヒトに、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；および破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖を含む組成物を投与することを含む。

【0015】

一態様では、本発明は、任意の年齢の患者において免疫応答を惹起するための方法に関する。方法は、ヒトに、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物を投与することを含む。一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０をさらに含む。一実施形態では、組成物は、アルミニウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、ヒスチジンをさらに含む。一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む。さらに別の実施形態では、組成物は、破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；および破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖をさらに含む。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】実施例６に記載されるような、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の非存在下および存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物に関する重ね合わせたＩＥＸ−ＨＰＣクロマトグラムの図である。

【図2】実施例７に記載されるように、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在がＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度の評価を妨害しないことを示すＲＰ−ＨＰＬＣクロマトグラムの重ね合わせた図である。

【図3】実施例１４に記載されるような、組み合わせたＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物におけるｒＬＰ２０８６タンパク質の純度およびピーク比を示すＲＰ−ＨＰＬＣクロマトグラムの重ね合わせた図である。

【図4A】ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ Ａ０５タンパク質の一次アミノ酸配列である。

【図4B】ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ Ａ０５タンパク質の一次構造である。

【図5A】ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢ Ｂ０１タンパク質の一次アミノ酸配列である。

【図5B】ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢ Ｂ０１タンパク質の一次構造である。

【図6A】髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株に由来するＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ｂ１６（配列番号２６）（ｆＨＢＰバリアントＢ１６（ＰＭＢ３２５７、ＭｅｎＡ））のアミノ酸配列である。

【図6B】髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株に由来するｆＨＢＰ Ａ１０（配列番号２７）（ｆＨＢＰバリアントＡ１０（ＰＭＢ５２０８、ＭｅｎＣおよびＰＭＢ５５２３、ＭｅｎＷ））のアミノ酸配列である。

【図6C】髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に由来するｆＨＢＰ Ａ１９（配列番号２８）（ｆＨＢＰバリアントＡ１９（ＰＭＢ５２４８、ＭｅｎＷ））のアミノ酸配列である。

【図6D】髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に由来するｆＨＢＰ Ａ１０（配列番号２７）（ｆＨＢＰバリアントＡ１０（ＰＭＢ５５２３、ＭｅｎＷ））のアミノ酸配列である。

【図6E】髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に由来するｆＨＢＰ Ｂ４７（配列番号２９）（ｆＨＢＰバリアントＢ４７（ＰＭＢ５１８７、ＭｅｎＹ））のアミノ酸配列である。

【図6F】髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に由来するｆＨＢＰ Ｂ４９（配列番号３０）（ｆＨＢＰバリアントＢ４９（ＰＭＢ５５４０、ＭｅｎＸ））のアミノ酸配列である。

【図7】血清殺菌活性、髄膜炎菌感染症のための防御の相関の図である。ヒト補体（ｈＳＢＡ）を使用する血清殺菌アッセイにおける１：４以上の力価が、髄膜炎菌感染症のための防御の確立された相関である。

【図8】ＭｅｎＡ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、およびＸの試験株の選択の図である。

【図9】試験血清のサブセットが無作為に選択された臨床治験の関連群の略図である。

【図10】ＦＨｂｐ反応性ｍＡｂ ＭＮ９９４−１１を使用するフローサイトメトリー実験から決定されたＦＨｂｐ表面発現レベル（ＭＦＩ）の分布を示す図である。血清群内のそれぞれの株に関するＦＨｂｐ表面発現を黒色の点で示し、各血清群内の選択された試験株に関するＦＨｂｐ表面発現レベルを色付きの星で示す。

【図11】ＭｅｎＡ ＰＭＢ３２５７（Ｂ１６）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を有する対象のパーセンテージ）を示す図である。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関して免疫化の前（０カ月）ならびに用量１、２、および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られた幾何平均力価（ＧＭＴ）は、それぞれ、２、３、４、および５であった。陽性対照群における対象の応答率は、ワクチン接種前は３％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群のＧＭＴは、それぞれ、２および９５であった。

【図12】ＭｅｎＣ ＰＭＢ５２０８（Ａ１０）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を有する対象のパーセンテージ）を示す図である。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関して免疫化の前（０カ月）ならびに用量１、２、および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、４、８、１２および２９であった。陽性対照群における対象の応答率は、ワクチン接種前は２０％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９０％であった。陽性対照群のＧＭＴは、それぞれ、３および１１９であった。

【図13】ＭｅｎＷ ＰＭＢ５２４８（Ａ１９）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を有する対象のパーセンテージ）を示す図である。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関して免疫化の前（０カ月）ならびに用量１、２、および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、４、１８、４７および７７であった。陽性対照群における対象の応答率は、ワクチン接種前は４０％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群のＧＭＴは、それぞれ、５および８８であった。

【図14】ＭｅｎＷ ＰＭＢ５５２３（Ａ１０）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を有する対象のパーセンテージ）を示す図である。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関して免疫化の前（０カ月）ならびに用量１、２、および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、７、１５、２１および４２であった。陽性対照群における対象の応答率は、ワクチン接種前は５５％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群のＧＭＴは、それぞれ、８および６０であった。

【図15】ＭｅｎＹ ＰＭＢ５１８７（Ｂ４７）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を有する対象のパーセンテージ）を示す図である。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関して免疫化の前（０カ月）ならびに用量１、２、および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、３、７、３１、および５８であった。陽性対照群における対象の応答率は、ワクチン接種前は１３％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群のＧＭＴは、それぞれ、３および７９であった。

【図16】ＭｅｎＸ ＰＭＢ５５４０（Ｂ４９）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を有する対象のパーセンテージ）を示す図である。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関して免疫化の前（０カ月）ならびに用量１、２、および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、２、３、７および２０であった。陽性対照群における対象の応答率は、ワクチン接種前は０％であり、ＭＣＶ４ワクチンを受けた１カ月後には０％であった。陽性対照群のＧＭＴは、それぞれ、２および２であった。

【発明を実施するための形態】

【0017】

配列識別子
配列番号１は、組換え髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２は、組換え髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０１ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３は、配列番号１および配列番号２の１〜４位のアミノ酸残基を記載する。
配列番号４は、組換え髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＡ ＬＰ２０８６ポリペプチド（ｒＬＰ２０８６）（Ａ０５）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＡ ＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ポリペプチド（Ａ０５）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号８は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１０は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１４は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１５は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１６は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ４４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１７は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１８は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０７のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２０は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２４は、組換え髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＢ ＬＰ２０８６ポリペプチド（ｒＬＰ２０８６）（Ｂ０１）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２５は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＢ ＬＰ２０８６ ＣＤＣ−１５７３ポリペプチド（Ｂ０１）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２６は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ｂ１６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２７は、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株のアミノ酸配列を記載する。配列番号２７はまた、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２８は、ｆＨＢＰ Ａ１９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２９は、ｆＨＢＰ Ｂ４７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３０は、ｆＨＢＰ Ｂ４９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３１は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３２は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０７のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３３は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３４は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３５は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３６は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３７は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３８は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ｂ１６を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３９は、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株のアミノ酸配列を記載する。配列番号３９はまた、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４０は、ｆＨＢＰ Ａ１９を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４１は、ｆＨＢＰ Ｂ４７を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４２は、ｆＨＢＰ Ｂ４９を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４３は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ４４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４４は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４５は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４６は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４７は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０１のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４８は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０１のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４９は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５０は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５３は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５４は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５５は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ６２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５６は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ６２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５７は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５８は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６０は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を記載する。

【0018】

本発明者らは、驚くべきことに、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）と、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物を発見した。この組成物は、驚くべきことに安定であり、多成分組成物中のｆＨＢＰバリアントと同種であるｆＨＢＰバリアントを発現する株に対する免疫応答および多成分組成物中のｆＨＢＰバリアントに対して異種であるｆＨＢＰバリアントを発現する株に対する免疫応答を惹起した。本発明者らはさらに驚くべきことに、ｆＨＢＰポリペプチドが、例えば、１２カ月齢およびそれより上のヒトなどの小児において免疫応答を効率的に惹起することを発見した。さらに、本発明者らは驚くべきことに、ｆＨＢＰポリペプチドが、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する免疫応答を効率的に惹起することを発見した。

【0019】

本発明者らは、驚くべきことに、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；（ｃ）アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｄ）ＡＤＨリンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）を含む組成物を発見した。組成物は、驚くべきことに、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて容易に復元される凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物であって、単一のバイアル中にある組成物を含む。本発明者らは、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物および液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物が、復元後に、室温で少なくとも２４時間にわたって、適合性であり、安定であることを発見した。

【0020】

さらに、本発明者らは、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物が髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対するものだけでなく、Ｂ以外の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群に対する殺菌抗体を惹起することをさらに発見した。例えば、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、およびＸに対する殺菌抗体を惹起する。ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物が髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘに対する殺菌抗体を惹起するという驚くべき発見は、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物が少なくとも２つの多様な髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群に対してヒトにおいて広く交差反応性である殺菌性免疫応答を惹起することを示す。

【0021】

さらに、本発明者らは、驚くべきことに、試験登録時に２４カ月齢以上〜４歳未満の年齢の健康な対象において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｎＢ）試験株を用いて実施されたヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）によって測定された免疫応答を発見した。本発明者らはまた、驚くべきことに、試験登録時に４歳以上〜１０歳未満の年齢の健康な対象において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された免疫応答を発見した。本発明者らはさらに驚くべきことに、試験登録時に２４カ月齢以上〜１０歳未満の年齢の健康な対象において（すなわち、組み合わせた年齢層において）、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された免疫応答を発見した。本発明者らはまた、驚くべきことに、試験登録時に２４カ月齢以上〜４歳未満の年齢の健康な対象において、試験登録時に４歳以上〜１０歳未満の年齢の健康な対象において、および組み合わせた年齢層において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の６カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された免疫応答を発見した。試験登録時に２４カ月齢以上〜４歳未満の年齢の健康な対象において、試験登録時に４歳以上〜１０歳未満の年齢の健康な対象において、および組み合わせた年齢層において、特定の時点で、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された、さらなる評価項目によって、免疫応答をさらに記載した。

【0022】

さらに、本発明者らは驚くべきことに、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｎＢ）株を用いて実施されたヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）によって測定された免疫応答を発見した。本発明者らはまた、驚くべきことに、試験登録時に１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された免疫応答を発見した。本発明者らはさらに驚くべきことに、試験登録時に１２〜２４カ月齢未満の健康な幼児において（すなわち、組み合わせた両方の年齢層）、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された免疫応答を発見した。本発明者らはまた、驚くべきことに、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、ならびに組み合わせた両方の年齢層において、２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の少なくとも６カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された免疫応答を発見した。例えば、ｈＳＢＡを、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、ならびに組み合わせた両方の年齢層において、３回目のワクチン接種の１２、２４、３６、および４８カ月後を含む任意の時点で測定することができる。試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および試験登録時に１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、ならびに組み合わせた両方の年齢層において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の少なくとも１カ月後に測定して、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２つがＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する４つの一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡによって測定された、さらなる評価項目によって、免疫応答をさらに記載した。例えば、ｈＳＢＡを、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、ならびに組み合わせた両方の年齢層において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後を含む任意の時点で測定することができる。また、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、ならびに組み合わせた両方の年齢層において、２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の少なくとも１カ月後に、ＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を発現する二次ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡによって測定された、さらなる評価項目によって、免疫応答を記載した。例えば、ｈＳＢＡを、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、ならびに組み合わせた両方の年齢層において、３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後を含む任意の時点で測定することができる。

【0023】

したがって、一態様では、本発明は、任意の年齢の患者において免疫応答を惹起するための方法に関する。一部の実施形態では、ヒトは、少なくとも４週齢、５週齢、６週齢、７週齢、８週齢、９週齢、１０週齢、１１週齢、または１２週齢である。例えば、好ましい実施形態では、ヒトは、少なくとも６週齢である。当業界で公知のように、ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）などの、髄膜炎菌群Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹコンジュゲートワクチンは、早ければ６週齢の乳児にとって好適であり、６週齢およびそれより上の任意のヒトに投与することができる。一部の実施形態では、ヒトは、少なくとも６カ月齢、７カ月齢、８カ月齢、９カ月齢、１０カ月齢、１１カ月齢、または１２カ月齢である。例えば、好ましい実施形態では、ヒトは、少なくとも１２カ月齢である。一実施形態では、ヒトは、１２〜１８カ月齢である。別の態様では、本発明は、少なくとも１８カ月齢の患者において免疫応答を惹起するための方法に関する。一実施形態では、ヒトは、１８〜２４カ月齢である。さらに別の態様では、本発明は、少なくとも２４カ月齢の患者において免疫応答を惹起するための方法に関する。一実施形態では、ヒトは、２４カ月齢〜１０歳である。別の態様では、本発明は、１０歳およびそれより上の年齢の患者において免疫応答を惹起するための方法に関する。さらなる態様では、本発明は、１０歳〜２５歳の年齢の患者において免疫応答を惹起するための方法に関する。方法は、ヒトに、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物を投与することを含む。一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０をさらに含む。一実施形態では、組成物は、アルミニウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、ヒスチジンをさらに含む。一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む。さらに別の実施形態では、組成物は、破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；および破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖をさらに含む。当業界で公知のように、ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）などの、髄膜炎菌群Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹコンジュゲートワクチンは、早ければ６週齢の乳児にとって好適であり、６週齢およびそれより上の任意のヒトに投与することができる。

【0024】

例示的な組成物のさらなる説明を、以下に記載する。

【0025】

組成物およびワクチン
本発明者らは、ｆＨＢＰを含む組成物が少なくとも１２カ月齢のヒトにおいて有効な免疫応答を惹起することをさらに発見した。組成物はまた、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する免疫応答も惹起する。さらに、本発明者らは驚くべきことに、少なくとも１つのＨ因子結合ポリペプチド（ｆＨＢＰ）と、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物を発見した。組成物は、驚くべきことに安定であり、多成分組成物中のｆＨＢＰバリアントと同種であるｆＨＢＰバリアントを発現する株に対する免疫応答および多成分組成物中のｆＨＢＰバリアントに対して異種であるｆＨＢＰバリアントを発現する株に対する免疫応答を惹起した。一実施形態では、組成物は、例えば、以下のポリペプチド：Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ａ０６、Ａ１５、Ａ２９、Ｂ０１、Ａ６２、Ｂ１５、およびその任意の組合せのいずれか１つなどの、任意のｆＨＢＰを含む。好ましくは、組成物は、Ａ０５とＢ０１ポリペプチドの組合せを含む。別の好ましい実施形態では、組成物は、Ｂ２４とＡ０５ポリペプチドの組合せを含む。別の実施形態では、組成物は、Ａ０５、Ａ１２、Ｂ０９、およびＢ４４ポリペプチドの組合せを含む。一実施形態では、組成物は、脂質化ｆＨＢＰを含む。一実施形態では、組成物は、非脂質化ｆＨＢＰを含まない。

【0026】

別の実施形態では、組成物は、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０３２４８９号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号、国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／１３２４５２号、および米国特許出願公開第ＵＳ２０１６００３０５４３号に記載された非脂質化ｆＨＢＰのいずれか１つなどの、非脂質化ｆＨＢＰを含む。一実施形態では、組成物は、少なくとも１つの非脂質化ｆＨＢＰと、少なくとも１つの脂質化ｆＨＢＰとを含む。

【0027】

一部の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および配列番号６２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性を有するポリペプチドを含む。

【0028】

本発明者らはさらに驚くべきことに、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物が凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を容易に復元することができること、および組み合わせた組成物が適合性であり、安定であることを発見した。

【0029】

一態様では、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する組成物に関する。組成物は、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；（ｃ）アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｄ）ＡＤＨリンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）を含む。

【0030】

別の態様では、本発明は、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物との組合せを含む組成物に関する。ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物とは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂの複数の株に対して有効な広い防御免疫応答を誘導する単一の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ポリペプチド成分を含む組成物を指す。具体的には、一実施形態では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質（配列番号１）およびＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質（配列番号２）を含む。一実施形態では、組成物は、融合タンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、キメラタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ハイブリッドタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ペプチド断片をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、ｆＨＢＰではない髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）ポリペプチドをさらに含まない。例えば、一実施形態では、組成物は、ＰｏｒＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、ＮａｄＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）ヘパリン結合抗原（ＮＨＢＡ）をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）外膜小胞（ＯＭＶ）をさらに含まない。好ましい実施形態では、組成物は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド以外の抗原をさらに含まない。好ましい実施形態では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ポリソルベート８０をさらに含む。一実施形態では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ヒスチジン緩衝液をさらに含む。一実施形態では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、リン酸アルミニウムをさらに含む。一実施形態では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ポリソルベート８０、ヒスチジン緩衝液、塩化ナトリウム、およびリン酸アルミニウムをさらに含む。好ましくは、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ポリペプチドが０．５ｍｇ／ｍＬのリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ_４）を含む１０ｍＭヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０、１５０ｎＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）中、１２０ｍｃｇ／ｍＬ／サブファミリーとして製剤化され、０．５ｍＬ用量中に０．０１８ｍｇのポリソルベート８０をさらに含む、液体製剤である。

【0031】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、それぞれ、約３、約３、約１．５および約１．３の比（ＴＴの多糖に対する比）でＴＴにそれぞれ独立にコンジュゲートされた、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５およびＹの精製莢膜多糖を含む組成物を指す。具体的には、組成物は、（ｃ）アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｄ）ＡＤＨリンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）を含む。好ましくは、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、凍結乾燥粉末として提供される。

【0032】

ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴ、ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴ、ＭｅｎＷ−ＴＴ、およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートは、以下のステップ：多糖薬物物質中間体の製造、ＴＴ薬物物質中間体の製造、多糖の微小流体化、多糖の誘導体化（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴおよびＭｅｎＣＡＨ−ＴＴプロセスのみについて）、ＴＴのさらなる精製、およびＴＴへの個々の多糖のコンジュゲーションによって調製される。

【0033】

ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＡ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、１−シアノ−４−ジメチルアミノ−ピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＡを、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）を用いて誘導体化して、ＭｅｎＡ_ＡＨを形成させる。ＭｅｎＡ_ＡＨと破傷風トキソイド（ＴＴ）とを、カルボジイミド媒介性縮合（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）カップリング技術）によってカップリングして、ＭｅｎＡ_ＡＨ−破傷風トキソイドコンジュゲート（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴ）を形成させる。

【0034】

ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＣ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、ＣＤＡＰを用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＣを、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）を用いて誘導体化して、ＭｅｎＣ_ＡＨを形成させる。ＭｅｎＣ_ＡＨとＴＴとを、カルボジイミド媒介性縮合（ＥＤＡＣカップリング技術）によってカップリングして、ＭｅｎＣ_ＡＨ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴ）を形成させる。

【0035】

ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＷ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、ＣＤＡＰを用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＷを、ＴＴに直接カップリングして、ＭｅｎＷ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＷ−ＴＴ）を形成させる。

【0036】

ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＹ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、ＣＤＡＰを用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＹを、ＴＴに直接カップリングして、ＭｅｎＹ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＹ−ＴＴ）を形成させる。

【0037】

別の態様では、本発明者らは、驚くべきことに、多くても２種の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に由来するポリペプチド抗原が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂの複数の株に対する有効な広く防御的な免疫応答を誘導することを発見した。したがって、一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＡ Ｍ９８２５０７７１株および／または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＢ ＣＤＣ１５７３株に由来しないポリペプチドをさらに含まない。

【0038】

一実施形態では、組成物は、配列番号１に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、配列番号２に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。例えば、組成物は、配列番号１および／または配列番号２の全長に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。

【0039】

一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド、ポリソルベート８０の各ポリペプチドに対するモル比２．８、リン酸アルミニウムとして０．５ｍｇのアルミニウム／ｍｌ、１０ｍＭヒスチジン、および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含み、組成物は、好ましくは、約０．５ｍｌの総量を有する。

【0040】

別の態様では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第１の脂質化ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第２の脂質化ポリペプチド、ポリソルベート８０の各ポリペプチドに対するモル比２．８、リン酸アルミニウムとして０．５ｍｇのアルミニウム／ｍｌ、１０ｍＭヒスチジン、および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む。

【0041】

さらなる態様では、組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド；ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド；ｃ）１８μｇのポリソルベート８０；ｄ）２５０μｇのアルミニウム；ｅ）７８０μｇのヒスチジン、およびｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。

【0042】

例示的な実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド、ポリソルベート８０の第１の脂質化ポリペプチドおよび第２の脂質化ポリペプチドに対するモル比２．８、０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウム、１０ｍＭヒスチジン、および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含み、組成物は、約０．５ｍｌの総量を有する。例示的な実施形態では、組成物は、滅菌等張性緩衝化液体懸濁液である。例示的な実施形態では、組成物は、ｐＨ６．０を有する。例示的な実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、アルミニウムに吸着される。

【0043】

一実施形態では、組成物は、ＴＴ／多糖比の平均３を有するＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＴＴ／多糖比の平均３を有するＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＴＴ／多糖比の平均１．５を有するＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート；およびＴＴ／多糖比の平均１．３を有するＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む。好ましい実施形態では、組成物は、５ｍｃｇのＭｅｎＡ多糖および約１５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート；５ｍｃｇのＭｅｎＣ多糖および約１５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート；５ｍｃｇのＭｅｎＷ多糖および約７．５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート；および５ｍｃｇのＭｅｎＹ多糖および約６．５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む。組成物は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、スクロース、および塩化ナトリウムをさらに含んでもよい。

【0044】

別の実施形態では、組成物は、ＭｅｎＡ多糖；ＭｅｎＣ多糖；ＭｅｎＷ多糖；およびＭｅｎＹ多糖と、ＴＴ担体タンパク質とを含む、ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート；およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む。組成物は、スクロースおよびトロメタノールをさらに含んでもよい。例えば、一実施形態では、組成物は、１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＡ多糖；１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＣ多糖；１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＷ多糖；および１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＹ多糖；８８μｇ／ｍＬのＴＴ担体タンパク質；１６４ｍＭスクロース；および１．６ｍＭトロメタノールを含む。

【0045】

一実施形態では、組成物は、約０．５ｍｌの総量を有する。一実施形態では、組成物の第１の用量は、約０．５ｍｌの総量を有する。「第１の用量」とは、０日目に投与される組成物の用量を指す。「第２の用量」または「第３の用量」とは、第１の用量と同じ量であっても、またはなくてもよい、第１の用量の後に投与される組成物の用量を指す。

【0046】

一態様では、本発明は、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて復元されている凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物から得られる液体免疫原性組成物に関する。復元とは、乾燥凍結乾燥組成物を、液体希釈剤の添加によって液体形態に回復させることを指す。１つの好ましい実施形態では、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物ではない液体組成物を用いて復元された、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と併用投与されない、同時投与されない、および同時に投与されない。例えば、１つの好ましい実施形態では、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、塩化ナトリウムおよび水からなる水性希釈剤を用いて復元され、続いて、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と併用投与されない、同時投与されない、および同時に投与されない。

【0047】

むしろ、好ましい実施形態では、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、ヒトへの１回、すなわち、単回の投与において、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と共に投与される。得られる単回投与（例えば、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物）は、第２の容器に由来する、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と混合される、第１の容器に由来する、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物から生じてもよい。あるいは、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の単回投与は、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物とを含む１つの（単一の）容器から生じてもよい。ワクチンまたは免疫原性組成物のための送達デバイスは、当業界で公知である。一実施形態では、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物は、イブプロフェン、パラセタモール、およびアモキシシリンのいずれか１つと併用投与される。

【0048】

組成物は、ヒトへの第１の用量の投与後に免疫原性である。一実施形態では、第１の用量は、総量で約０．５ｍｌである。

【0049】

組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受けた後のヒトにおいて、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、少なくとも１倍より高い、好ましくは、少なくとも２倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。

【0050】

殺菌力価または殺菌性免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対するものである。好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＢ株に対するものである。最も好ましくは、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、ｆＨＢＰサブファミリーＢ、Ｂ０１株に対するものである。

【0051】

一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、組成物の用量を受けた後のヒトにおいて、前記用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、例えば、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍高いなど、少なくとも１倍より高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。

【0052】

一実施形態では、組成物は、免疫原性組成物である。一実施形態では、組成物は、ヒトのための免疫原性組成物である。別の実施形態では、組成物は、ワクチンである。「ワクチン」とは、抗原に特異的である免疫応答を誘導する少なくとも１つのエピトープを含有する抗原を含む組成物を指す。ワクチンを、皮下、経口、口鼻、または鼻内投与経路によって対象に直接投与することができる。好ましくは、ワクチンは、筋肉内投与される。一実施形態では、組成物は、ヒトワクチンである。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物である。

【0053】

一実施形態では、組成物は、液体組成物である。好ましい実施形態では、組成物は、液体懸濁組成物である。別の好ましい実施形態では、組成物は、凍結乾燥されない。

【0054】

第１のポリペプチド；ＭＮＢ ＲＬＰ２０８６サブファミリーＡ（Ａ０５）タンパク質
一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１に由来する改変Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰの説明は、それぞれその全体が参照により組み込まれる、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／００９３８５２号に開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３つの位置で共有的に連結された３つの主要な脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１でＮ末端脂質化される。第１のポリペプチドは、合計２５８個のアミノ酸を含む。

【0055】

ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ Ａ０５タンパク質の代表的な一次構造は、図４に提示される。タンパク質の一次構造は、Ｎ末端システインおよびグリセリル部分（完全な化学式を使用して描画されている）を除いて、全てのアミノ酸に関して一文字表記を使用して図４に描画されている。この構造は、Ｎ末端システイン残基が脂質化されたタンパク質配列の一次構造を含む。タンパク質のＮ末端のＮ末端システイン残基のアミノ基は、脂肪酸（Ｒ１）に結合して、アミド結合を形成し、システインのスルフヒドリル基は、２つのエステル結合した脂肪酸（Ｒ２）を含有するグリセロール部分に結合する。Ｒ１の構造は、ヘキサデカン酸（Ｃ１６：０）であると推定され、Ｒ２の構造は、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６アイソフォームに応じて変化する。

【0056】

第１のポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１に由来する対応する野生型配列と比較して、ポリペプチドのＮ末端領域中に導入された２つの改変を含む。第２の位置にあるグリシンが、クローニング部位を導入する結果として付加される。第２の改変は、４個のアミノ酸の欠失を含む。したがって、一実施形態では、第１のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号１の最初の４個のアミノ酸残基を参照されたい。

【0057】

第１のポリペプチド配列と野生型髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）配列とのＮ末端の差異を、以下に示す。したがって、一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３個、またはそれより多いアミノ酸残基を含む。好ましくは、第１のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の４個、より好ましくは、少なくとも最初の６個、最も好ましくは、少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。

【0058】

組換えおよび髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＡ ＬＰ２０８６ポリペプチドの推定Ｎ末端配列の比較。
ｒＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ ＣＧＳＳ−−−−−ＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号４）
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）ＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ Ｃ−ＳＳＧＳ−ＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号５）。
＞Ａ０５（配列番号１）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ

【0059】

一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第１のポリペプチドは、合計２５８個のアミノ酸を有する。一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に対する１００％未満の配列同一性を有するアミノ酸配列を含まない。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、アミノ酸配列ＫＤＮを含む。例えば、配列番号１のアミノ酸残基７３〜７５を参照されたい。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0060】

好ましい実施形態では、第１のポリペプチドは、当業界で公知の標準的な技術を使用して組換え宿主細胞中で容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。好ましくは、第１のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の２個、より好ましくは、少なくとも最初の４個、最も好ましくは、少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。

【0061】

別の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。

【0062】

一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約３０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１のポリペプチドを含み、ここで、組成物は、好ましくは、０．５ｍｌの総量を有する。別の実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチドを含む。

【0063】

第２のポリペプチド；ＭＮＢ ＲＬＰ２０８６サブファミリーＢ（Ｂ０１）タンパク質
一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３に由来するＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰの説明は、それぞれその全体が参照により組み込まれる、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／００９３８５２号に開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３つの位置で共有的に連結された３つの主要な脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１でＮ末端脂質化される。第２のポリペプチドは、合計２６１個のアミノ酸を含む。

【0064】

ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ Ｂ０１タンパク質の代表的な一次構造は、図５に提示される。タンパク質の一次構造は、Ｎ末端システインおよびグリセリル部分（完全な化学式を使用して描画されている）を除いて、全てのアミノ酸に関して一文字表記を使用して図５に描画されている。この構造は、Ｎ末端システイン残基が脂質化されたタンパク質配列の一次構造を含む。タンパク質のＮ末端のＮ末端システイン残基のアミノ基は、脂肪酸（Ｒ１）に結合して、アミド結合を形成し、システインのスルフヒドリル基は、２つのエステル結合した脂肪酸（Ｒ２）を含有するグリセロール部分に結合する。Ｒ１の構造は、ヘキサデカン酸（Ｃ１６：０）であると推定され、Ｒ２の構造は、ｒＬＰ２０８６アイソフォームに応じて変化する。

【0065】

第２のポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ−１５７３に由来する対応する野生型配列と比較して、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質のＮ末端領域中に導入された１つの改変を含む。第２の位置にあるグリシンが、クローニング部位を導入する結果である。

【0066】

元の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）配列とのＮ末端の差異を、以下に示す。
組換えおよび髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＢ ＬＰ２０８６タンパク質の推定Ｎ末端配列の比較。
ｒＬＰ２０８６ ＣＤＣ−１５７３ ＣＧＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤ（配列番号２４）
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）ＬＰ２０８６ ＣＤＣ−１５７３ Ｃ−ＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤ（配列番号２５）。

【0067】

一実施形態では、第２のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号２の最初の４個のアミノ酸残基を参照されたい。
＞Ｂ０１（配列番号２）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＥＱＤＰＥＨＳＥＫＭＶＡＫＲＲＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＤＶＭＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＶＡＹＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＥＫＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ

【0068】

一実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第２のポリペプチドは、合計２６１個のアミノ酸を有する。一実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。好ましい実施形態では、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは、それぞれのポリペプチドのＮ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ（配列番号３）配列を含む。

【0069】

好ましい実施形態では、第２のポリペプチドは、当業界で公知の標準的な技術を使用して組換え宿主細胞中で容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。好ましくは、第２のポリペプチドは、配列番号２の少なくとも最初の２個、より好ましくは、少なくとも最初の４個、最も好ましくは、少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。

【0070】

別の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。

【0071】

一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約３０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第２のポリペプチドを含み、ここで、組成物は、好ましくは、０．５ｍｌの総量を有する。別の実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチドを含む。

【0072】

糖
本明細書を通して、用語「糖」は、多糖またはオリゴ糖を示してもよく、その両方を含む。多糖は、公知の方法によって、また、場合によっては、微小流体化によって、細菌から単離されるか、または細菌から単離され、ある程度のサイズに切られる。多糖を切断して、多糖試料の粘度を低下させる、および／またはコンジュゲートされた生成物の濾過性を改善することができる。オリゴ糖は、少数の反復単位（典型的には、５〜３０の反復単位）を有し、典型的には、加水分解された多糖である。

【0073】

それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から独立に選択される担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。１つまたは複数の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、他のものに由来する異なる担体タンパク質にコンジュゲートすることができるが、一実施形態では、それらは全て同じ担体タンパク質にコンジュゲートされる。例えば、それらを全て、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から選択される同じ担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。この文脈では、ＣＲＭ１９７およびＤＴを、それらがただ１つのアミノ酸によって異なるため、同じ担体タンパク質であると考えることができる。好ましい実施形態では、存在する全ての髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＴＴにコンジュゲートする。

【0074】

タンパク質担体が組成物中で２つ以上の糖について同じである場合、その糖を、タンパク質担体の同じ分子にコンジュゲートすることができる（それにコンジュゲートされた２つのさらに異なる糖を有する担体分子）［例えば、ＷＯ０４／０８３２５１を参照されたい；例えば、単一の担体タンパク質を、ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹにコンジュゲートすることができる］。あるいは、糖はタンパク質担体の異なる分子にそれぞれ別々にコンジュゲートすることができる（それにコンジュゲートされた１つの型の糖だけを有するタンパク質担体の各分子）。

【0075】

一実施形態では、少なくとも２つの異なる糖コンジュゲートを、同じ型の担体タンパク質に別々にコンジュゲートし、ここで、１つまたは複数の糖を、タンパク質担体上の第１の型の化学基によって担体タンパク質にコンジュゲートし、１つまたは複数の糖を、タンパク質担体上の第２の（異なる）型の化学基によって担体タンパク質にコンジュゲートする。

【0076】

一実施形態では、２つのコンジュゲートは、同じ担体に連結されるが、異なるコンジュゲーション化学反応によって連結された同じ糖を含む。代替的な実施形態では、２つの異なる糖を、タンパク質担体上の異なる基にコンジュゲートする。

【0077】

「同じ型の担体タンパク質に別々にコンジュゲートされる」とは、糖が、同じ担体に個別的にコンジュゲートされることを意味する（例えば、ＭｅｎＡは、破傷風トキソイド上のアミン基を介して破傷風トキソイドにコンジュゲートされ、ＭｅｎＣは、破傷風トキソイドの異なる分子上のカルボン酸基を介して破傷風トキソイドにコンジュゲートされる）。

【0078】

莢膜糖を、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から独立に選択される同じ担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。本発明のコンジュゲートにおいて使用することができるタンパク質担体のより完全な一覧は、以下に提示される。この文脈では、ＣＲＭ１９７およびＤＴは、それらがただ１個のアミノ酸によって異なるため、同じ担体タンパク質であると考えることができる。ある実施形態では、存在する全ての莢膜糖がＴＴにコンジュゲートされる。

【0079】

糖は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ莢膜糖（ＭｅｎＷ）のいずれか１つ、またはその任意の組合せを含んでもよい。

【0080】

タンパク質担体上に存在する第１および第２の化学基は、互いに異なり、理想的には、コンジュゲーションを目的として容易に使用することができる天然の化学基である。それらは、カルボキシル基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、イミダゾリル基、グアニジル基、およびインドリル基からなる群から独立に選択することができる。一実施形態では、第１の化学基はカルボキシルであり、第２はアミノである、またはその逆である。これらの基は、以下でより詳細に説明される。

【0081】

特定の実施形態では、免疫原性組成物は、１つまたは複数がタンパク質担体上の第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介して担体タンパク質にコンジュゲートされているＭｅｎＡおよびＭｅｎＣからなる第１の群から選択され、１つまたは複数の異なる糖が、タンパク質担体上の第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介して担体タンパク質にコンジュゲートされているＭｅｎＣ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＷからなる第２の群から選択される、少なくとも２つの異なる髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含む。

【0082】

さらなる実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＡ、および第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＣを含む。

【0083】

別の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＣ、および第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＹを含む。

【0084】

別の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＡ、ならびに第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＣ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＷを含む。

【0085】

別の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ、ならびに第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＹおよびＭｅｎＷを含む。

【0086】

医薬（免疫原性）組成物中に含まれる本発明の糖は、破傷風トキソイド（ＴＴ）、破傷風トキソイド断片Ｃ、破傷風毒素の非毒性変異体［ＴＴのそのようなバリアントは全て、本発明の目的にとって同じ型の担体タンパク質であると考えられることに留意されたい］、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、ＣＲＭ１９７、ジフテリア毒素の他の非毒性変異体［ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ１９７、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２１８；３８３８〜３８４４、１９７３）；ＣＲＭ９、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３およびＣＲＭ１０７ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｅｄ：Ｆｒａｎｋｅｌ， Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ、１９９２によって記載された他の変異；Ｇｌｕ−１４８からＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒおよび／もしくはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失もしくは変異および米国特許第４，７０９，０１７号もしくは米国特許第４，９５０，７４０号に開示された他の変異；Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／もしくはＬｙｓ５３４の少なくとも１つもしくは複数の残基の変異ならびに米国特許第５，９１７，０１７号もしくは米国特許第６，４５５，６７３号に開示された他の変異；または米国特許第５，８４３，７１１号に開示された断片など］（ＤＴのそのようなバリアントは全て、本発明の目的にとって同じ型の担体タンパク質であると考えられることに留意されたい）、肺炎球菌ニューモリシン（Ｋｕｏら（１９９５） Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ６３；２７０６〜１３）、ＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質−通常は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから抽出される−ＥＰ０３７２５０１）、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、増殖因子またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４） Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ７２；４８８４〜７）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡもしくはＢ（ＷＯ００／６１７６１）またはプロテインＤ（ＥＰ５９４６１０およびＷＯ００／５６３６０）などの、様々な病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１） Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１；３８１６〜３８２４）などの担体タンパク質にコンジュゲートされている。

【0087】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、そこに含有される少なくとも２つ、３つ、４つまたはそれぞれの糖において同じ型の担体タンパク質を使用する（独立に）。

【0088】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から選択される担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖を含む。

【0089】

本発明の免疫原性組成物は、Ｍｅｎ糖の担体タンパク質に対する比が１：５〜５：１、１：２〜５：１、１：０５〜１：２．５または１：１．２５〜１：２．５（ｗ／ｗ）である、少なくとも１つの髄膜炎菌糖（例えば、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹまたはＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ）コンジュゲートを含んでもよい。１つの好ましい実施形態では、組成物は、それぞれ、約３、約３、約１．５および約１．３の比（トキソイドの多糖に対する比）で破傷風トキソイドにそれぞれコンジュゲートされたＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹを含む。

【0090】

コンジュゲートにおける糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）を、滅菌されたコンジュゲートを使用して決定することができる。タンパク質の量は、Ｌｏｗｒｙアッセイ（例えば、Ｌｏｗｒｙら（１９５１） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９３、２６５〜２７５またはＰｅｔｅｒｓｏｎら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １００、２０１〜２２０（１９７９））を使用して決定され、糖の量は、ＭｅｎＡについてはＩＣＰ−ＯＥＳ（誘導結合プラズマ発光分析）、ＭｅｎＣについてはＤＭＡＰアッセイならびにＭｅｎＷおよびＭｅｎＹについてはレゾルシノールアッセイ（Ｍｏｎｓｉｇｎｙら（１９８８） Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １７５、５２５〜５３０）を使用して決定される。

【0091】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖がリンカー、例えば、二官能性リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートされた、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖コンジュゲートを含む。リンカーは、例えば、反応性アミノ基と反応性カルボン酸基、２つの反応性アミノ基または２つの反応性カルボン酸基を有する、ヘテロ二官能性またはホモ二官能性であってもよい。リンカーは、例えば、４〜２０、４〜１２、５〜１０個の炭素原子を有する。可能なリンカーは、ＡＤＨである。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド（ＷＯ００／１０５９９）、ニトロフェニル−エチルアミン（Ｇｅｖｅｒら（１９７９） Ｍｅｄ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６５；１７１〜２８８）、ハロゲン化ハロアルキル（米国特許第４，０５７，６８５号）、グリコシド結合（米国特許第４，６７３，５７４号、米国特許第４，８０８，７００号）、ヘキサンジアミンおよび６−アミノカプロン酸（米国特許第４，４５９，２８６号）が挙げられる。

【0092】

本発明の免疫原性組成物中に存在する糖コンジュゲートを、任意の公知のカップリング技術によって調製することができる。コンジュゲーション方法は、シアン酸エステルを形成するための１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いる糖の活性化に依拠してもよい。かくして、活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはホロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミドもしくはＮ−スクシンイミジルブロモアセテートブロモアセテートを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化された多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってよい。場合により、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製してもよい）を、ヘキサンジアミンまたはＡＤＨとカップリングし、アミノ誘導体化された糖を、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートする。そのようなコンジュゲートは、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９３／１５７６０（Ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）およびＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／２９０９４に記載されている。

【0093】

他の好適な技術は、カルビイニド（ｃａｒｂｉｉｎｉｄｅ）、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する。多くは、ＷＯ９８／４２７２１に記載されている。コンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基と、ＣＤＩとの反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９７９、２５４；２５７２〜４、Ｈｅａｒｎら、Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ． １９８１． ２１８；５０９〜１８）、次いで、カルバメート結合を形成するタンパク質との反応によって形成され得るカルボニルリンカーを含んでもよい。これは、一次ヒドロキシル基へのアノマー末端の還元、ＣＤＩカルバメート中間体を形成する一次ヒドロキシル基とＣＤＩとの一次ヒドロキシル基の反応の任意選択の保護／脱保護およびタンパク質上でのＣＤＩカルバメート中間体と、アミノ基とのカップリングを含んでもよい。

【0094】

コンジュゲートはまた、米国特許第４，３６５，１７０号（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ）および米国特許第４，６７３，５７４号（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）に記載の直接的還元的アミノ化法によって調製することもできる。他の方法は、ＥＰ−０−１６１−１８８、ＥＰ−２０８３７５およびＥＰ−０−４７７５０８に記載されている。

【0095】

さらなる方法は、例えば、ＥＤＡＣを使用する、カルボジイミド縮合（Ｃｈｕ Ｃ．ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９８３、２４５〜２５６）によるアジピン酸ヒドラジド（ＡＤＨ）を用いて誘導体化されたシアノゲンブロミド（またはＣＤＡＰ）活性化糖のタンパク質担体へのカップリングを含む。

【0096】

ある実施形態では、糖上のヒドロキシル基（場合により、活性化されたヒドロキシル基、例えば、シアン酸エステルによって活性化されたヒドロキシル基）を、タンパク質上のアミノまたはカルボキシル基に直接的に、または間接的に（リンカーを介して）連結される。リンカーが存在する場合、糖上のヒドロキシル基は、例えば、ＣＤＡＰコンジュゲーションを使用することにより、リンカー上のアミノ基に連結されてもよい。リンカー（例えば、ＡＤＨ）中のさらなるアミノ基を、例えば、カルボジイミド化学反応を使用することにより、例えば、ＥＤＡＣを使用することにより、タンパク質上のカルボン酸基にコンジュゲートすることができる。ある実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖（または一般的な糖）は、リンカーが担体タンパク質にコンジュゲートされる前に最初にリンカーにコンジュゲートされる。あるいは、リンカーは糖へのコンジュゲーションの前に担体にコンジュゲートされてもよい。

【0097】

一般的には、タンパク質担体上の以下の型の化学基を、カップリング／コンジュゲーションのために使用することができる：
Ａ）カルボキシル（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸を介する）。一実施形態では、この基は、直接的に糖上のアミノ基に、またはカルボジイミド化学反応を用いて、例えば、ＥＤＡＣを用いてリンカー上のアミノ基に連結される。
Ｂ）アミノ基（例えば、リシンを介する）。一実施形態では、この基は、直接的に糖上のカルボキシル基に、またはカルボジイミド化学反応を用いて、例えば、ＥＤＡＣを用いてリンカー上のカルボキシル基に連結される。別の実施形態では、この基は、直接的に糖上のＣＤＡＰもしくはＣＮＢｒで活性化されたヒドロキシル基に、またはリンカー上のそのような基に；アルデヒド基を有する糖もしくはリンカーに；スクシンイミドエステル基を有する糖もしくはリンカーに連結される。
Ｃ）スルフヒドリル（例えば、システインを介する）。一実施形態では、この基は、ブロモもしくはクロロアセチル化された糖またはマレイミド化学反応を用いてリンカーに連結される。一実施形態では、この基は、ビスジアゾベンジジンを用いて活性化／改変される。
Ｄ）ヒドロキシル基（例えば、チロシンを介する）。一実施形態では、この基は、ビスジアゾベンジジンを用いて活性化／改変される。
Ｅ）イミダゾリル基（例えば、ヒスチジンを介する）。一実施形態では、この基は、ビスジアゾベンジジンを用いて活性化／改変される。
Ｆ）グアニジル基（例えば、アルギニンを介する）。
Ｇ）インドリル基（例えば、トリプトファンを介する）。

【0098】

糖上で、一般的には、以下の基をカップリングのために使用することができる：ＯＨ、ＣＯＯＨまたはＮＨ２。アルデヒド基を、過ヨード酸塩、酸加水分解、過酸化水素などの当業界で公知の様々な処理の後に生成することができる。

【0099】

直接カップリング手法：
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ →シアン酸エステル＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
糖−アルデヒド＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ→シッフ塩基＋ＮａＣＮＢＨ３→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート
糖−ＮＨ２＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート。

【0100】

スペーサー（リンカー）手法による間接カップリング：
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−−ＮＨ２→糖−ＮＨ２＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−ＳＨ＋ＳＨ−Ｐｒｏｔ（露出したシステインを含む、または例えば、ＳＰＤＰによってタンパク質のアミノ基の改変後に得られる天然タンパク質）→糖−Ｓ−Ｓ−Ｐｒｏｔ
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−ＳＨ＋マレイミド−Ｐｒｏｔ（アミノ基の改変）→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−−ＮＨ２→糖−ＮＨ２＋ＥＤＡＣ＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−−ＳＨ＋ＳＨ−Ｐｒｏｔ（露出したシステインを含む、または例えば、ＳＰＤＰによってタンパク質のアミノ基の改変後に得られる天然タンパク質）→糖−Ｓ−Ｓ−Ｐｒｏｔ
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−−ＳＨ＋マレイミド−Ｐｒｏｔ（アミノ基の改変）→コンジュゲート
糖−アルデヒド＋ＮＨ２−−ＮＨ２→糖−−ＮＨ２＋ＥＤＡＣ＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
注：上記のＥＤＡＣの代わりに、任意の好適なカルボジイミドを使用してもよい。

【0101】

まとめると、糖とのカップリングのために一般的に使用することができるタンパク質担体化学基の型は、アミノ基（例えば、リシン残基上の）、ＣＯＯＨ基（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸残基上の）およびＳＨ基（接近可能な場合）（例えば、システイン残基上の）である。

【0102】

ある実施形態では、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖（または一般的な糖）を、担体タンパク質に直接コンジュゲートする；ＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＣ糖を、担体タンパク質に直接コンジュゲートしてもよい。例えば、ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣ；またはＭｅｎＷ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣを、担体タンパク質に直接連結する。少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＣＤＡＰによって直接コンジュゲートしてもよい。例えば、ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣ；またはＭｅｎＷ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣを、ＣＤＡＰによって担体タンパク質に直接連結する（ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／２９０９４を参照されたい）。ある実施形態では、全ての髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、破傷風トキソイドにコンジュゲートする。

【0103】

ある実施形態では、特に、これらの糖を、場合により、ＣＤＡＰを使用して、タンパク質に直接連結する場合、ＭｅｎＷおよび／もしくはＹ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である、ならびに／またはＭｅｎＣ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：４または１：０．５〜１：１．５（ｗ／ｗ）である。

【0104】

ある実施形態では、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖（または一般的な糖）を、リンカー、例えば、二官能性リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする。リンカーは、例えば、反応性アミン基と反応性カルボン酸基、２つの反応性アミン基または２つの反応性カルボン酸基を有する、ヘテロ二官能性またはホモ二官能性であってもよい。リンカーは、例えば、４〜２０個、４〜１２個、５〜１０個の炭素原子を有する。可能なリンカーは、ＡＤＨである。

【0105】

ある実施形態では、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣを、リンカーを介して担体タンパク質（例えば、破傷風トキソイド）にコンジュゲートする。

【0106】

ある実施形態では、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖を、ＣＤＡＰおよびＥＤＡＣを使用してリンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする。例えば、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣを、上記のようにＣＤＡＰおよびＥＤＡＣを使用してリンカー（例えば、ＡＤＨなどの、その末端に２個のヒドラジノ基を有するもの）を介してタンパク質にコンジュゲートする。例えば、ＣＤＡＰを使用して、糖をリンカーにコンジュゲートし、ＥＤＡＣを使用して、リンカーをタンパク質にコンジュゲートする。リンカーを介するコンジュゲーションは、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣについて、１：０．５〜１：６；１：１〜１：５または１：２〜１：４の糖の担体タンパク質に対する比をもたらしてもよい。

【0107】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＡ莢膜糖は、反復単位の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、例えば、反復単位の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の少なくともＯ−３位に存在する。

【0108】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＣ莢膜糖は、（α２→９）連結されたＮｅｕＮＡｃ反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、例えば、反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％のＯ−７および／またはＯ−８位に存在する。

【0109】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＷ莢膜糖は、反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、例えば、反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％のＯ−７および／またはＯ−９位に存在する。

【0110】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＹ莢膜糖は、反復単位の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、反復単位の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の７および／または９位に存在する。

【0111】

Ｏ−アセチル化のパーセンテージは、Ｏ−アセチル化を含有する反復単位のパーセンテージを指す。これは、コンジュゲーションの前および／またはコンジュゲーションの後に糖において測定することができる。

【0112】

本発明の一実施形態では、免疫原性組成物、存在する糖、または存在するそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＴＴにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、別々の担体タンパク質に別々にコンジュゲートする。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートは、１：５〜５：１または１：１〜１：４（ｗ／ｗ）の糖：担体比を有する。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つまたは３つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートを、担体タンパク質に直接コンジュゲートする。さらなる実施形態では、ＭｅｎＷおよび／もしくはＭｅｎＹ、ＭｅｎＷおよび／もしくはＭｅｎＣ、ＭｅｎＹおよび／もしくはＭｅｎＣ、またはＭｅｎＷおよびＭｅｎＣおよびＭｅｎＹを、担体タンパク質に直接コンジュゲートする。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つまたは３つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖コンジュゲートを、ＣＤＡＰ化学によって直接コンジュゲートする。さらなる実施形態では、ＭｅｎＷおよび／またはＹ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である。さらなる実施形態では、ＭｅｎＣ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つまたは３つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、リンカー（２つの反応性アミノ基（ＡＤＨなど）もしくは２つの反応性カルボキシル基、または一方の末端に反応性アミノ基を、他方の末端に反応性カルボキシル基を有する二官能性であってもよい）を介して担体タンパク質にコンジュゲートする。リンカーは、４〜１２個の炭素原子を有してもよい。さらなる実施形態では、リンカーを介してコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＣＤＡＰ化学を用いてリンカーにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、担体タンパク質を、カルボジイミド化学反応を用いて、例えば、ＥＤＡＣを使用してリンカーにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、担体タンパク質をリンカーにコンジュゲートする前にリンカーにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、ＭｅｎＡを、リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする（ＭｅｎＡ糖の担体タンパク質に対する比は、１：２〜１：５（ｗ／ｗ）であってもよい）。さらなる実施形態では、ＭｅｎＣを、リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする（ＭｅｎＣ糖の担体タンパク質に対する比は、１：２〜１：５（ｗ／ｗ）であってもよい）。

【0113】

天然の、またはわずかに切断された多糖コンジュゲートを使用することによって、１つまたは複数の以下の利点を実現することができる：１）０．２μｍのフィルターを通して濾過できる高い免疫原性を有するコンジュゲート；２）免疫記憶を増強することができる（実施例３に記載）；３）コンジュゲート中の多糖のタンパク質に対する比（ｗ／ｗ）を増大させることができるような、コンジュゲート中の多糖のタンパク質に対する比の変化（これは、担体抑制効果の減少をもたらし得る）；４）加水分解を受けやすい免疫原性コンジュゲート（ＭｅｎＡコンジュゲートなど）を、コンジュゲーションのためのより大きい多糖の使用によって安定化することができる。より大きい多糖の使用は、コンジュゲート担体とのより多い架橋をもたらすことができ、コンジュゲートからの遊離糖の遊離を低下させることができる。先行技術において記載されたコンジュゲートワクチンは、コンジュゲーションを改善するためにコンジュゲーションの前に多糖を脱重合する傾向がある。より大きいサイズの糖を保持する髄膜炎菌（または糖）コンジュゲートワクチンは、髄膜炎菌疾患に対する良好な免疫応答を提供することができる。

【0114】

本発明の免疫原性組成物は、かくして、コンジュゲーション前のそれぞれの糖の平均サイズが、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１０ｋＤａ、１２０ｋＤａまたは１３０ｋＤａより上である１つまたは複数の糖コンジュゲートを含んでもよい。一実施形態では、コンジュゲーション後のコンジュゲートは、濾過前の試料と比較して、濾過後に５０、６０、７０、８０、９０または９５％を超える収率が得られるように、０．２μｍのフィルターを通して容易に濾過可能であるべきである。

【0115】

特に、本発明の免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の平均サイズ（重量平均分子量；Ｍｗ）は、５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１０ｋＤａ、１２０ｋＤａまたは１３０ｋＤａより上である。

【0116】

好ましい実施形態では、ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２５０ｋＤａ、２６０ｋＤａ、２７０ｋＤａ、２８０ｋＤａ、または２９０ｋＤａ、最も好ましくは、約３００ｋＤａ、多くても３５０ｋＤａまたは３３０ｋＤａである。好ましい実施形態では、ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも１５０ｋＤａ、１６０ｋＤａ、１７０ｋＤａ、１８０ｋＤａ、または１９０ｋＤａ、最も好ましくは、約２００ｋＤａ、多くても２５０ｋＤａまたは２３０ｋＤａである。好ましい実施形態では、ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２４０ｋＤａ、２５０ｋＤａ、２６０ｋＤａ、または２７０ｋＤａ、最も好ましくは、約２８０ｋＤａ、多くても３３０ｋＤａまたは３１０ｋＤａである。好ましい実施形態では、ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２２０ｋＤａ、２３０ｋＤａ、２４０ｋＤａ、または２５０ｋＤａ、最も好ましくは、約２７０ｋＤａ、多くても３２０ｋＤａまたは３００ｋＤａである。

【0117】

免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、天然の糖であるか、または天然の多糖の重量平均分子量に対して２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍までの係数によって切断される。

【0118】

本発明の目的のために、「天然の多糖」とは、その目的が糖のサイズを減少させるためのものであるプロセスにかけられていない糖を指す。多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少するようになってもよい。そのような糖は、依然として天然である。多糖がサイジング技術にかけられた場合にのみ、多糖は天然ではないと考えられる。

【0119】

本発明の目的のために、「２倍までの係数によって切断される」とは、糖が、糖のサイズを減少させるが、天然の多糖のサイズの半分を超えるサイズを保持することを意図するプロセスにかけられることを意味する。３倍、４倍などは、同じように解釈されるべきであり、すなわち、糖は、多糖のサイズを減少させるが、天然の多糖のサイズの１／３、１／４などを超えるサイズを保持することを意図するプロセスにかけられる。

【0120】

本発明の態様では、免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は天然の多糖である。

【0121】

本発明の態様では、免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍までの係数によって切断される。

【0122】

本発明の免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）、血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ）、血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、血清群ＣおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＣＹ）、血清群ＣおよびＡ莢膜糖（ＭｅｎＡＣ）、血清群ＣおよびＷ莢膜糖（ＭｅｎＣＷ）、血清群ＡおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＹ）、血清群ＡおよびＷ莢膜糖（ＭｅｎＡＷ）、血清群ＷおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＷＹ）、血清群Ａ、ＣおよびＷ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＷ）、血清群Ａ、ＣおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＹ）；血清群Ａ、Ｗ１３５およびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＷＹ）、血清群Ｃ、Ｗ１３５およびＹ莢膜糖（ＭｅｎＣＷＹ）；または血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＷＹ）のコンジュゲートを含んでもよい。これは、本明細書で記載される場合、血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹの「１つ、２つ、３つもしくは４つ」または「少なくとも１つ」、またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の定義である。

【0123】

ある実施形態では、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の平均サイズは、ＭＡＬＬＳによって決定された場合、５０ｋＤａ〜１５００ｋＤａ、５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、５０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜１５００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜５００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜３００ｋＤａである。

【0124】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＡ糖は、５０〜５００ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜５００ｋＤａ、５５〜９０ｋＤａ、６０〜７０ｋＤａまたは７０〜８０ｋＤａまたは６０〜８０ｋＤａの分子量を有する。

【0125】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＣ糖は、１００〜２００ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、１０１〜１３０ｋＤａ、１５０〜２１０ｋＤａまたは１８０〜２１０ｋＤａの分子量を有する。

【0126】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＹ糖は、６０〜１９０ｋＤａ、７０〜１８０ｋＤａ、８０〜１７０ｋＤａ、９０〜１６０ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａまたは１１０〜１４０ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜１４０ｋＤａ、１４０〜１７０ｋＤａまたは１５０〜１６０ｋＤａの分子量を有する。

【0127】

ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＷ糖は、６０〜１９０ｋＤａ、７０〜１８０ｋＤａ、８０〜１７０ｋＤａ、９０〜１６０ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、１１０〜１４０ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａまたは１２０〜１４０ｋＤａの分子量を有する。

【0128】

本明細書における糖の分子量または平均分子量は、コンジュゲーションの前に測定された糖の重量平均分子量（Ｍｗ）を指し、ＭＡＬＬＳによって測定される。

【0129】

ＭＡＬＬＳ技術は、当業界で周知であり、典型的には、実施例２に記載のように実行される。髄膜炎菌糖のＭＡＬＬＳ分析のために、２つのカラム（ＴＳＫＧ６０００および５０００ＰＷｘｌ）を組み合わせて使用することができ、糖は水中に溶出される。糖は、光散乱検出器（例えば、４８８ｎｍの１０ｍＶアルゴンレーザーを装備したＷｙａｔｔ Ｄａｗｎ ＤＳＰ）および干渉屈折計（例えば、Ｐ１００セルおよび４９８ｎｍの赤色フィルターを装備したＷｙａｔｔ Ｏｔｉｌａｂ ＤＳＰ）を使用して検出される。

【0130】

ある実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、天然の多糖であるか、または通常の抽出プロセスの間にサイズが減少した天然の多糖である。

【0131】

ある実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、機械的切断、例えば、微小流体化または超音波処理によって切断される。微小流体化および超音波処理は、濾過できるコンジュゲートを十分に提供するより大きい天然の多糖のサイズを低下させる利点を有する（例えば、０．２μｍのフィルターを通す）。サイジングは、２０、１０、８、６、５、４、３、２または１．５倍以下の係数による。

【0132】

ある実施形態では、免疫原性組成物は、天然の多糖と、２０倍以下の係数によって切断される糖との混合物から作製される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）コンジュゲートを含む。例えば、ＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＡに由来する糖は天然である。例えば、ＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＷに由来する糖は、２０、１０、８、６、５、４、３または２倍以下の係数によって切断される。例えば、免疫原性組成物は、１０倍以下の係数によって切断され、および／または微小流体化されるＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＡから作製されたコンジュゲートを含有する。例えば、免疫原性組成物は、天然のＭｅｎＡおよび／またはＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＹから作製されたコンジュゲートを含有する。例えば、免疫原性組成物は、天然のＭｅｎＣから作製されたコンジュゲートを含む。例えば、免疫原性組成物は、１０倍以下の係数によって切断され、および／または微小流体化される天然のＭｅｎＣおよびＭｅｎＡから作製されたコンジュゲートを含む。例えば、免疫原性組成物は、１０倍以下の係数によって切断され、および／または微小流体化される天然のＭｅｎＣおよびＭｅｎＹから作製されたコンジュゲートを含む。

【0133】

ある実施形態では、糖の多分散性は、１〜１．５、１〜１．３、１〜１．２、１〜１．１または１〜１．０５であり、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、コンジュゲートの多分散性は、１．０〜２．５、１．０〜２．０、１．０〜１．５、１．０〜１．２、１．５〜２．５、１．７〜２．２または１．５〜２．０である。全ての多分散性の測定は、ＭＡＬＬＳによるものである。

【0134】

糖は、細菌から単離された多糖のサイズから１．５、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０倍まで切断されてもよい。

【0135】

一実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、天然の多糖であるか、または１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖は、天然の多糖である。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖は、微小流体化によって切断される。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖は、１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）コンジュゲートは、天然の多糖と、１０倍以下の係数によって切断された糖との混合物から作製される。さらなる実施形態では、血清群Ｙに由来する莢膜糖は、１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、血清群ＡおよびＣに由来する莢膜糖は、天然の多糖であり、血清群Ｗ１３５およびＹに由来する糖は、１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖の平均サイズは、５０ｋＤａ〜３００ｋＤａまたは５０ｋＤａ〜２００ｋＤａである。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える平均サイズまたは５０〜１００ｋＤａもしくは５５〜９０ｋＤａもしくは６０〜８０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＡ莢膜糖を含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または１００〜２００ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、８０〜１２０ｋＤａ、９０〜１１０ｋＤａ、１５０〜２００ｋＤａ、１２０〜２４０ｋＤａ、１４０〜２２０ｋＤａ、１６０〜２００ｋＤａもしくは１９０〜２００ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＣ莢膜糖を含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または６０〜１９０ｋＤａもしくは７０〜１８０ｋＤａもしくは８０〜１７０ｋＤａもしくは９０〜１６０ｋＤａもしくは１００〜１５０ｋＤａ、１１０〜１４５ｋＤａもしくは１２０〜１４０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＹ莢膜糖を含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または６０〜１９０ｋＤａもしくは７０〜１８０ｋＤａもしくは８０〜１７０ｋＤａもしくは９０〜１６０ｋＤａもしくは１００〜１５０ｋＤａ、１４０〜１８０ｋＤａ、１５０〜１７０ｋＤａもしくは１１０〜１４０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＷ莢膜糖を含む。

【0136】

本発明のある実施形態では、少なくとも２つ、３つ、４つのそれぞれ、またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖コンジュゲートの糖用量は、同じであるか、またはほぼ同じであってもよい。

【0137】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ｐＨ７．０〜８．０、ｐＨ７．２〜７．６またはｐＨ約７．４もしくは正確にｐＨ７．４で調整もしくは緩衝化される、またはそこに調整される。

【0138】

本発明の免疫原性組成物またはワクチンを、安定剤、例えば、スクロースまたはトレハロースなどのポリオールの存在下で凍結乾燥してもよい。

【0139】

上記で考察された髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の組合せについて、アルミニウム塩アジュバントを使用しない、またはアジュバントを全く使用しないのが有利であってよい。

【0140】

活性薬剤は、本発明の医薬組成物またはワクチン中に変化する濃度で存在してもよい。典型的には、物質の最小濃度は、その意図される使用を達成するのに必要な量であるが、最大濃度は、溶液中で保持されるか、または初期混合物内に均一に懸濁される最大量である。例えば、治療剤の最小量は、単一の治療的に有効な用量を提供するものであってもよい。生物活性物質については、最小濃度は、復元の際に生物活性にとって必要な量であり、最大濃度は、均一な懸濁液を維持することができない点にある。

【0141】

別の実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ莢膜多糖と、担体分子とのコンジュゲートを含む。血清群Ｘ莢膜多糖の構造は、Ｏ−アセチル基を含まないａｌ−４ホスホジエステル結合によって一緒に保持されたＮ−アセチルグルコサミン−４−リン酸残基からなる。担体分子は、ジフテリアまたは破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７またはプロテインＤであってもよい。好ましい実施形態では、実施例に例示されるように、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ莢膜多糖のコンジュゲートを含まない。

【0142】

安定性
用語「安定な」および「安定性」とは、一定期間にわたって免疫原性を保持する抗原の能力を指す。安定性を、経時的に効力で測定することができる。用語「安定な」および「安定性」はさらに、免疫原性組成物の物理的、化学的、およびコンフォメーション的な安定性を指す。タンパク質組成物の不安定性は、より高次のポリマーを形成するためのタンパク質分子の化学的分解もしくは凝集により、ヘテロ二量体の単量体への解離、脱グリコシル化、グリコシル化の改変、または本発明に含まれるタンパク質組成物の少なくとも１つの生物活性を減少させる任意の他の構造的改変によって引き起こされ得る。安定性を、試料の光散乱、光（吸光度、もしくは光密度）、サイズ（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーによる）の見かけの減弱、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によるｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ ｖｉｖｏでの生物活性および／または特性の測定を含む、当業界で周知の方法によって評価することができる。安定性を評価するための他の方法は、当業界で公知であり、本発明に従って使用することもできる。

【0143】

一部の実施形態では、本発明の安定製剤中の抗原は、少なくとも１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、２４カ月、３０カ月、３６カ月、４２カ月、４８カ月、５４カ月、または６０カ月にわたって、参照標準と比較して、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の効力を維持することができる。一部の実施形態では、本発明の安定製剤中の抗原は、少なくとも１年、２年、３年、４年または５年にわたって、参照標準と比較して、少なくとも５０％の効力を維持することができる。用語「安定な」および「安定性」はまた、一定期間にわたってエピトープまたは免疫反応性を維持する抗原の能力を指す。例えば、本発明の安定製剤中の抗原は、少なくとも１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、２４カ月、３０カ月、３６カ月、４２カ月、４８カ月、５４カ月、または６０カ月にわたって、参照標準と比較して、そのエピトープまたは免疫反応性の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％を維持することができる。一部の実施形態では、安定性は、環境条件に関して測定される。環境条件の非限定例としては、光、温度、凍結／解凍サイクル、撹拌、およびｐＨが挙げられる。当業者であれば、本明細書に開示される方法または当業界で公知の他の方法を使用して、抗原エピトープまたは免疫反応性の存在を決定することができる。一部の実施形態では、抗原の安定性は、その製剤化の日付から測定される。一部の実施形態では、抗原の安定性は、その保存条件の変化の日付から測定される。保存条件の変化の非限定例としては、冷凍から冷蔵への変化、冷凍から室温への変化、冷蔵から室温への変化、冷蔵から冷凍への変化、室温から冷凍への変化、室温から冷蔵への変化、明るいところから暗いところへの変化、または撹拌の導入が挙げられる。

【0144】

一実施形態では、用語「安定な」および「安定性」は、アルミニウムに結合した状態となる、抗原の能力を含む。例えば、本発明の安定製剤は、少なくとも１時間、６時間、１２時間、１８時間、２４時間、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、２４カ月、３０カ月、３６カ月、４２カ月、４８カ月、５４カ月、または６０カ月にわたって、参照標準と比較して、製剤中のアルミニウム（例えば、リン酸アルミニウム）に結合したタンパク質の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％を含む。例えば、実施例１３を参照されたい。好ましい実施形態では、総サブファミリーＡ ｒＬＰ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド）の少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％が、組成物中のアルミニウムに結合している。好ましい実施形態では、総サブファミリーＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド）の少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％が、組成物中のアルミニウムに結合している。

【0145】

アルミニウム結合の決定。アルミニウムと、少なくとも１つのタンパク質抗原とを含む組成物を、アルミニウムが沈降するように遠心分離した。アルミニウムに吸着したタンパク質の遠心分離は、当業界で公知である。例えば、Ｅｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．２７（２４）：３１７５〜３１８０（２００９）を参照されたい。アルミニウムに結合したタンパク質も沈降したが、アルミニウムに結合しなかったタンパク質は上清中に残存した。上清中の総タンパク質およびペレットを、Ｌｏｗｒｙ Ａｓｓａｙによって決定した。結合したタンパク質のパーセンテージを、上清中の総タンパク質を、組成物に添加された総タンパク質で除算し、１００％を乗算することによって算出した。同様に、結合しなかったタンパク質のパーセンテージを、上清中の総タンパク質を、組成物に添加された総タンパク質で除算し、１００％を乗算することによって算出した。サブファミリーＡとサブファミリーＢ抗原との両方を含む組成物については、個々のサブファミリーＡおよびＢタンパク質の上清中の濃度を、イオン交換クロマトグラフィーによって決定した。サブファミリーＡおよびＢタンパク質の分離および溶出を、強力な陰イオンカラムおよび高い塩濃度の溶出液を使用して実行した。サブファミリーＡとＢタンパク質の両方を、励起＝２８０ｒｕｎおよび放出＝３１０ｒｕｎに設定した蛍光検出器を使用して検出および定量した。サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質は、異なる保持時間で溶出し、ｒＬＰ２０８６タンパク質参照材料に対して生成された標準曲線を使用して定量した。結合しなかったタンパク質のパーセンテージを、上清中の総タンパク質を、組成物に添加された総タンパク質で除算し、１００％を乗算することによって算出した。結合したタンパク質のパーセンテージを、１００％から結合しなかったタンパク質のパーセンテージを減算することによって算出した。

【0146】

ポリソルベート８０
ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）は、非イオン性界面活性剤である。ｉｎ ｖｉｔｒｏでのモノクローナル抗体に基づく効力アッセイを使用する加速安定性試験は、最終製剤中のＰＳ−８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するより高いモル比でのサブファミリーＢタンパク質の不安定性を示した。ＰＳ−８０の変化する比を用いるさらなる実験は、効力を保持するためのＰＳ−８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対する最適モル比が、約２．８±１．４であることを示した。

【0147】

組成物中のＰＳ−８０の濃度は、ＰＳ−８０のポリペプチドに対するモル比に依存する。一実施形態では、組成物は、ＰＳ−８０の第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドに対する２．８±１．４のモル比を含む。一実施形態では、組成物は、ＰＳ−８０の第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドに対する２．８±１．１のモル比を含む。一実施形態では、組成物は、ＰＳ−８０のポリペプチドに対する少なくとも１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、または３．３のモル比を含む。一実施形態では、組成物は、ＰＳ−８０のポリペプチドに対する多くても４．０、３．９、３．８、３．７、３．６、３．５、３．４、３．３、３．２、３．１、３．０、または２．９のモル比を含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましくは、組成物は、ＰＳ−８０のポリペプチドに対する２．８のモル比を含む。

【0148】

ＰＳ−８０のポリペプチドに対するモル比は、ＰＳ−８０の測定された濃度と、測定された総ポリペプチド濃度とからの算出によって決定され、ここで、両方の値はモルで表される。例えば、ＰＳ−８０のタンパク質に対するモル比は、最終薬物物質中の、ＰＳ−８０の測定された濃度（例えば、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）による）の、測定された総タンパク質濃度（例えば、イオン交換−高速液体クロマトグラフィー（ＩＥＸ−ＨＰＬＣ）による）に対する算出によって決定され、ここで、両方の値はモルで表される。

【0149】

ＲＰ−ＨＰＬＣは、ワクチン製剤中のポリソルベート８０の濃度を定量するために使用される。デタージェントの濃度は、脂肪酸部分の鹸化によって決定される；ポリソルベート８０は、４０℃でのアルカリ加水分解によって遊離オレイン酸に変換される。試料は、Ｃ１８カラムを使用するＲＰ−ＨＰＬＣによって分離され、２００ｎｍの波長のＵＶ検出器を使用して定量される。

【0150】

第１および第２のポリペプチドは、陰イオン交換ＨＰＬＣによって分解される。ｒＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡおよびＢタンパク質は、異なる保持時間で溶出し、それぞれのｒＬＰ２０８６タンパク質参照材料に対して生成された標準曲線を使用して定量される。

【0151】

用語「モル比」ならびにｆＨＢＰおよびＰＳ−８０を含む免疫原性組成物の説明は、それぞれその全体が参照により組み込まれる、ＷＯ２０１２０２５８７３および米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１７１１９４号にさらに開示されている。

【0152】

本明細書で使用される用語「モル比」とは、組成物中の２つの異なる要素のモル数の比を指す。一部の実施形態では、モル比は、デタージェントのモルの、ポリペプチドのモルに対する比である。一部の実施形態では、モル比は、ＰＳ−８０のモルの、タンパク質のモルに対する比である。一実施形態では、タンパク質およびポリソルベート８０の濃度に基づいて、モル比を、以下の式：
モル比＝ＰＳ−８０（％）／タンパク質（ｍｇ／ｍｌ）ｘ２１６
を使用して算出することができる。

【0153】

一実施形態では、組成物は、効力を保持するために、１．４〜４．２のＰＳ−８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するモル比を含む。一実施形態では、組成物は、少なくとも１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、または２．８を含む。一実施形態では、組成物は、多くても４．２、４．１、４．０、３．９、３．８、３．７、３．７、３．６、３．５、３．４、３．３、３．２、３．１、３．０、２．９、または２．８を含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。

【0154】

一実施形態では、組成物は、約０．００１５、０．００１７、０．００１９、０．００２１、０．００２３、０．００２５、０．００２７、０．００２９、０．００３１、０．００３３、０．００３５、０．００３７、０．００３９、０．００４１、０．００４３、０．００４５、０．００４７、０．００４９、０．００５１ｍｇ／ｍＬのＰＳ−８０を含む。好ましくは、組成物は、約０．００３５ｍｇ／ｍＬのＰＳ−８０を含む。

【0155】

別の実施形態では、組成物は、少なくとも１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、または２５μｇのＰＳ−８０を含む。別の実施形態では、組成物は、多くても３０μｇ、２９μｇ、２８μｇ、２７μｇ、２６μｇ、２５μｇ、２４μｇ、２３μｇ、２２μｇ、２１μｇ、２０μｇ、１９μｇ、または１８μｇのＰＳ−８０を含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましい実施形態では、組成物は、少なくとも１０μｇかつ多くても２０μｇのＰＳ−８０を含む。最も好ましい実施形態では、組成物は、約１８μｇのＰＳ−８０を含む。

【0156】

別の実施形態では、組成物は、０．００００５％〜１％の範囲のＰＳ−８０濃度を含む。例えば、組成物中のＰＳ−８０濃度は、少なくとも０．０００５％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、または１．１％のＰＳ−８０であってもよい。一実施形態では、組成物中のＰＳ−８０濃度は、多くても２．０％、１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、または０．７％のＰＳ−８０であってもよい。好ましい実施形態では、組成物は、約０．０７％のＰＳ−８０を含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。

【0157】

本発明者らは驚くべきことに、第１の組成物と第２の組成物との組合せを含む組成物は、第１の組成物中のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドに関するポリソルベート８０のモル比と比較して、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドに関するポリソルベート８０の異なるモル比を有してもよいが、組み合わせた組成物のためのさらなる界面活性剤は、驚くべきことに、組み合わせた組成物中のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの可溶性および安定性を維持するのに必要ないことを発見した。したがって、一実施形態では、キットは、０．０２ｍｇより多いポリソルベート８０を含まない。

【0158】

アルミニウム
組成物は、リン酸アルミニウムとしてアルミニウムを含む。ＡｌＰＯ_４は、製造性および安定性の増強を提供するための安定剤として添加される。リン酸アルミニウムを製造するためのプロセスは、その全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第ＵＳ２００９／００１６９４６号に記載されている。一実施形態では、組成物は、アルミニウム以外の、多価陽イオンをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、Ａｌ（ＯＨ）_３もＡｌ（ＳＯ_４）_３もさらに含まない。

【0159】

一実施形態では、組成物は、少なくとも５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２１０μｇ、２２０μｇ、２３０μｇ、２４０μｇ、または２５０μｇのアルミニウムを含む。一実施形態では、組成物は、多くても５００μｇ、４９０μｇ、４８０μｇ、４７０μｇ、４６０μｇ、４５０μｇ、４４０μｇ、４３０μｇ、４２０μｇ、４１０μｇ、４００μｇ、３９０μｇ、３８０μｇ、３７０μｇ、３６０μｇ、３５０μｇ、３４０μｇ、３３０μｇ、３２０μｇ、３１０μｇ、３００μｇ、２９０μｇ、２８０μｇ、２７０μｇ、２６０μｇ、または２５０μｇのアルミニウムを含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。最も好ましい実施形態では、組成物は、２５０μｇのアルミニウムを含む。

【0160】

一実施形態では、組成物は、少なくとも０．００５ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、０．０４ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．０６ｍｇ／ｍｌ、０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、０．１０ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、または０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含む。一実施形態では、組成物は、多くても２．０ｍｇ／ｍｌ、１．９ｍｇ／ｍｌ、１．８ｍｇ／ｍｌ、１．７ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、または０．７ｍｇ／ｍｌのＰＳ−８０を含む。好ましい実施形態では、組成物は、約０．０７ｍｇ／ｍｌのＰＳ−８０を含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましい実施形態では、組成物は、０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含む。最も好ましい実施形態では、組成物は、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ_４）として０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウムを含む。この濃度は、サブファミリーＡおよびＢタンパク質のアルミニウムへの結合を維持する（少なくとも９０％の結合またはそれより良好な結合）。

【0161】

本発明者らは驚くべきことに、第１の組成物と第２の組成物との組合せを含む組成物は、第１の組成物中のアルミニウムに結合したＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドのパーセンテージと比較した場合、アルミニウムに結合したＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドのパーセンテージを変化させることができるが、第１と第２の組成物の組合せが驚くべきことに、総ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドのアルミニウムへの結合の少なくとも９０％を維持することを発見した。したがって、一実施形態では、組み合わせた組成物中の総ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドのアルミニウムに対するパーセンテージは、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である。好ましくは、組み合わせた組成物中の総ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドのアルミニウムに対するパーセンテージは、少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも１００％である。

【0162】

別の実施形態では、免疫原性組成物中のアルミニウムに結合したポリペプチドの濃度は、凍結乾燥組成物を復元する前の液体組成物中のアルミニウムに結合したポリペプチドの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。一実施形態では、濃度は、復元前の液体組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％低下する。

【0163】

別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。一実施形態では、濃度は、復元前の凍結乾燥組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％低下する。

【0164】

賦形剤
一実施形態では、組成物は、ヒスチジンを含む。一実施形態では、組成物は、少なくとも６５０μｇ、６６０μｇ、６７０μｇ、６８０μｇ、６９０μｇ、７００μｇ、７１０μｇ、７２０μｇ、７３０μｇ、７４０μｇ、７５０μｇ、７６０μｇ、７７０μｇ、７８０μｇ、７９０μｇ、８００μｇ、８１０μｇ、８２０μｇ、８３０μｇ、８４０μｇ、または８５０μｇのヒスチジンを含む。一実施形態では、組成物は、多くても１５６０μｇ、１５００μｇ、１４００μｇ、１３００μｇ、１２００μｇ、１１００μｇ、１０００μｇ、９５０μｇ、９００μｇ、８９０μｇ、８８０μｇ、８７０μｇ、８６０μｇ、８５０μｇ、８４０μｇ、８３０μｇ、８２０μｇ、８１０μｇ、８００μｇ、７９０μｇ、または７８０μｇのヒスチジンを含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましくは、組成物は、７８０μｇのヒスチジンを含む。

【0165】

一実施形態では、組成物は、トリス、リン酸、またはコハク酸緩衝液を含む。好ましい実施形態では、組成物は、トリス緩衝液を含まない。好ましくは、組成物は、リン酸緩衝液を含まない。１つの好ましい実施形態では、組成物は、コハク酸緩衝液を含まない。好ましい実施形態では、組成物は、ヒスチジン緩衝液を含む。

【0166】

一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムを含む。ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中の塩化ナトリウム濃度は、１６０．５〜１６１．１ｍＭで変化してもよい。

【0167】

一実施形態では、組成物のｐＨは、５．５〜７．５である。好ましい実施形態では、組成物のｐＨは、５．８〜７．０、最も好ましくは、ｐＨ５．８〜ｐＨ６．０である。一実施形態では、組成物のｐＨは、多くても６．１である。一実施形態では、組成物のｐＨは、５．８である。

【0168】

キット
本発明のさらなる態様は、哺乳動物において髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する殺菌抗体を惹起するための組成物の用量を投与するためのキットである。

【0169】

一態様では、キットは、上記の第１のポリペプチドと、上記の第２のポリペプチドとを含む第１の組成物を含む。好ましい実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。別の好ましい実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。キットは、ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート、およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む第２の組成物をさらに含む。一実施形態では、キットは、第１の容器が第１の組成物を含み、第２の容器が第２の組成物を含む、少なくとも２つの容器を含む。

【0170】

一実施形態では、キットは、液体の第１の組成物と、凍結乾燥された第２の組成物とを含む。好ましくは、キットは、液体のＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物とを含む。

【0171】

本発明者らは驚くべきことに、第１の組成物と第２の組成物との組合せを含む組成物が、第１の組成物中のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドに関して、ポリソルベート８０のモル比を変化させるが、組み合わせた組成物のためのさらなる界面活性剤は、驚くべきことに、組み合わせた組成物中でのＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの可溶性および安定性を維持するのに必要ではないことを発見した。したがって、一実施形態では、キットは、０．０２ｍｇより多いポリソルベート８０を含まない。

【0172】

本発明の一実施形態では、キットは、以下の市販の免疫原性組成物：ＭＥＮＡＣＴＲＡ（Ｒ）、ＭＥＮＶＥＯ（Ｒ）、ＡＤＡＣＥＬ（Ｒ）、ＨＡＶＲＩＸ（Ｒ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（Ｒ）、ＲＥＰＥＶＡＸのどの１つも、そのいずれの組合せもさらに含まない。例えば、キットは、好ましくは、担体タンパク質がジフテリアトキソイドである、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まない。一実施形態では、キットは、担体タンパク質がＣＲＭ_１９７である、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まない。一実施形態では、キットは、ＮＩＭＥＮＲＩＸが塩化ナトリウムおよび水からなる希釈剤を含む、ＮＩＭＥＮＲＩＸワクチンをさらに含まない。

【0173】

殺菌活性
ＭｎＢの疾患発生率は、１００，０００人に約１人であり、これは、非常に多数の対象（６００万人以上に対して４００，０００人）が効能の統計的に有意な評価を支援する必要があることを意味する。かくして、防御およびワクチン効能の代用である、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）が、臨床治験において免疫原性を評価するために使用される。

【0174】

Ｐｆｉｚｅｒは、２０００年〜２００６年にＩＭＤを引き起こす単離物を含む広範囲のＭｎＢ株コレクション（Ｎ＝少なくとも１２６３）を構築した。ＭｎＢ単離物は、ＵＳ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（ＣＤＣ）ならびに欧州諸国に由来する保健試験所および参照試験所から体系的に収集した。

【0175】

一実施形態では、組成物をヒトに投与することによって誘導される免疫応答を、４つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｎＢ）株に対するヒト補体（ｈＳＢＡ）を使用する血清殺菌アッセイを使用して決定する。ｈＳＢＡにおいて使用されるＭｎＢ株を、株プールから選択した。株プールは、体系的に収集された臨床的に関連する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株のコレクションであった。

【0176】

全ての試験株、特に、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの両方にとって異種である配列を有するリポタンパク質２０８６バリアントを発現する株に対する高い割合のｈＳＢＡ応答は、組成物が広い防御ワクチンであり、血清群Ｘなどのさらなる血清群を含む、少なくとも血清群Ｂに由来するｒＬＰ２０８６（ＦＨＢＰ）を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対する高い血清防御を提供するのに十分であることを示唆する。

【0177】

サブファミリーＡ株
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡタンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。例えば、一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｍ９８２５０７７１株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。

【0178】

一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。さらなる実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ０４を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ１２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ２２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ１２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ０４を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ１９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ａ０７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。さらなる実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ２２、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７を発現する株のいずれか１つを含む。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０６、Ａ１５、およびＡ２９を発現する株のいずれか１つを含む。

【0179】

一実施形態では、免疫応答は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ａ２２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ａ５６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ａ０６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ａ１５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ａ２９株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ａ６２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１に対して異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。

【0180】

一実施形態では、免疫応答は、第１のポリペプチドに対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８４％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。

【0181】

別の実施形態では、免疫応答は、第１のポリペプチドに対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても８５％、より好ましくは多くても９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。

【0182】

一実施形態では、組成物によって惹起される免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株に対してだけでなく、血清群が血清群Ｂではない、ｆＨＢＰサブファミリーＡポリペプチドを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対しても殺菌性である。例えば、１つの好ましい実施形態では、組成物によって惹起される免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株およびｆＨＢＰ Ａ０５に対して異種であるｆＨＢＰサブファミリーＡポリペプチドを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株に対して殺菌性である。例えば、一実施形態では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株に対するものである。別の実施形態では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ａ１９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、株が髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１に対して異種である、ｆＨＢＰサブファミリーＡポリペプチドを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して殺菌性である。

【0183】

サブファミリーＢ株
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。例えば、一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＣＤＣ１１２７株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。好ましい実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＣＤＣ１５７３株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。

【0184】

一実施形態では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ｂ２４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ｂ４４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ｂ１６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ｂ０３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ｂ０９株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ｂ１５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ Ｂ１５３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３に対して異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。

【0185】

一実施形態では、免疫応答は、第２のポリペプチドに対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも８７％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。

【0186】

別の実施形態では、免疫応答は、第２のポリペプチドに対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても８８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。

【0187】

一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株である。さらなる実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４株とＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株とを含む。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４、およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株を含む。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ１５を含む。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ１５３を含む。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ｂ１６株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ｂ０３株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６ Ｂ０９株である。さらなる実施形態では、ｈＢＳＡ株は、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ｂ０３、およびＢ０９、またはその任意の組合せを含む。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７、またはその任意の組合せを含む。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、またはその任意の組合せを含む。

【0188】

一実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する。好ましくは、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。

【0189】

一実施形態では、組成物によって惹起される免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＢ株に対してだけでなく、血清群が血清群Ｂではない、ｆＨＢＰサブファミリーＢポリペプチドを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対しても殺菌性である。例えば、１つの好ましい実施形態では、組成物によって惹起される免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株およびｆＨＢＰ Ｂ０１に対して異種であるｆＨＢＰサブファミリーＢポリペプチドを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対して殺菌性である。例えば、一実施形態では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ｂ１６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株に対するものである。別の実施形態では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ｂ４７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対するものである。別の実施形態では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ｂ４９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、株が髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株ＣＤＣ１５７３に対して異種である、ｆＨＢＰサブファミリーＢポリペプチドを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して殺菌性である。

【0190】

力価
一実施形態では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、組成物の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、ヒトにおける殺菌力価の増加を誘導する。一実施形態では、殺菌力価の増加は、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、組成物の第１の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、組成物の第１の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較される。一実施形態では、力価の増加は、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、組成物の第２の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、組成物の第２の用量後に観察される。別の実施形態では、殺菌力価の増加は、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、組成物の第３の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、組成物の第３の用量後に観察される。

【0191】

一実施形態では、組成物は、殺菌力価が、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、用量の投与前のヒトにおける殺菌力価よりも少なくとも１倍より高い、用量の投与後のヒトにおける殺菌力価を誘導する。例えば、殺菌力価は、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、組成物の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍高くてもよい。

【0192】

一実施形態では、「応答者」とは、組成物が、用量の投与後のヒトにおいて殺菌力価を誘導し、殺菌力価が用量の投与前のヒトにおける殺菌力価よりも少なくとも１倍より高い、ヒトを指す。好ましい実施形態では、応答者は、用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、ｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍以上の上昇を達成する。そのような応答者を、防御力価を有するものと言うことができる。一部の実施形態では、防御力価は、１：４よりも高いものである。

【0193】

一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、測定可能な効果をもたらす血清試料の最も高い希釈率の逆数である。例えば、一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、Ｔ３０ ＣＦＵ値（すなわち、試験血清を除く全てのアッセイ成分を含有するアッセイウェル中でのインキュベーション後に生存する細菌数；１００％の細菌生存率）と比較して、ＭｎＢ細菌の少なくとも５０％の減少（５０％の細菌生存率）をもたらす試験血清の最も高い２倍希釈率の逆数である。

【0194】

一実施形態では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける殺菌力価よりも少なくとも２倍高い第１の用量を受けた後のヒトにおける殺菌力価を誘導する（例えば、第１の用量の非存在下でのヒトにおける殺菌力価よりも高い）。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける殺菌力価よりも少なくとも４倍高いヒトにおける殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける殺菌力価よりも少なくとも８倍高いヒトにおける殺菌力価を誘導する。

【0195】

好ましい実施形態では、ヒト血清補体は、所与のｈＳＢＡ試験株に関する低い内在性殺菌活性を有するヒトに由来する。低い内在性殺菌活性とは、例えば、所与のｈＳＢＡ試験株に対する少なくとも１：４未満の希釈率の殺菌力価を指す。一実施形態では、ヒト補体は、組成物がヒトに投与されなかった場合、所与のｈＳＢＡ試験株に対する、１：２の希釈率などの、少なくとも１：４未満のｈＳＢＡ力価を有するヒトに由来する。

【0196】

ヒトは、二価ｒＬＰ２０８６組成物などの、組成物の投与前に１：４未満のｈＳＢＡ力価を示してもよいか、またはヒトは、組成物の投与前に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示してもよい。したがって、好ましい実施形態および例では、少なくとも１用量の組成物のヒトへの投与は、投与前のヒトにおける力価よりも少なくとも４倍高いｈＳＢＡ力価をもたらす。一部の実施形態では、少なくとも１用量の組成物のヒトへの投与は、例えば、１：８以上のｈＳＢＡ力価、１：１６以上のｈＳＢＡ力価、および１：３２以上のｈＳＢＡ力価などの、少なくとも１：４より高いｈＳＢＡ力価をもたらす。本明細書に記載のそれぞれの実施例は、二価ｒＬＰ２０８６組成物がヒトに投与された場合の、１：８以上および／または１：１６以上のｈＳＢＡ力価を有するヒト対象の割合の評価を含む。一部の実施形態では、組成物の投与前と比較した組成物の投与後のヒトにおける力価の４倍の上昇は、防御が組成物と関連することを示す。一部の実施形態では、１：４よりも高いｈＳＢＡ力価のそのような好ましい評価は、防御、すなわち、ヒトにおいて誘導される殺菌性免疫応答が組成物と関連することを示す。

【0197】

一実施形態では、ヒトは、組成物の第１の用量の投与後にｈＳＢＡの定量下限（ＬＬＯＱ）と等しいか、またはそれより高いｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の第２の用量の投与後にｈＳＢＡのＬＬＯＱと等しいか、またはそれより高いｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の第３の用量の投与後にｈＳＢＡのＬＬＯＱと等しいか、またはそれより高いｈＳＢＡ力価を有する。

【0198】

方法および投与
一態様では、本発明は、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導する方法に関する。別の態様では、本発明は、ヒトにワクチン接種する方法に関する。一実施形態では、方法は、上記の組成物の少なくとも１用量をヒトに投与することを含む。好ましい実施形態では、方法は、上記の組成物の多くても１用量をヒトに投与することを含む。別の実施形態では、方法は、上記の組成物の少なくとも第１の用量および第２の用量をヒトに投与することを含む。

【0199】

一実施形態では、第２の用量は、第１の用量の少なくとも２０、３０、５０、６０、１００、１２０、１６０、１７０、または１８０日後および第１の用量の多くても２５０、２１０、２００、または１９０日後に投与される。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。

【0200】

別の実施形態では、第２の用量は、第１の用量の約３０日後に投与される。別の実施形態では、第２の用量は、例えば、０、２カ月の免疫化スケジュールにおけるなど、第１の用量の約６０日後に投与される。別の実施形態では、第２の用量は、例えば、０、６カ月の免疫化スケジュールにおけるなど、第１の用量の約１８０日後に投与される。さらに別の実施形態では、第２の用量は、例えば、２、６カ月の免疫化スケジュールにおけるなど、第１の用量の約１２０日後に投与される。

【0201】

一実施形態では、方法は、２用量の組成物および多くても２用量をヒトに投与することを含む。一実施形態では、２用量を、第１の用量後、約６カ月の期間内に投与する。一実施形態では、方法は、ヒトへの追加免疫のさらなる投与を含まない。本明細書で使用される「追加」とは、ヒトへの組成物のさらなる投与を指す。多くても２用量の組成物をヒトに投与することが有利であり得る。そのような利点としては、例えば、ヒトが完全な投与スケジュールを順守することが容易になること、およびスケジュールの費用効果を容易にすることが挙げられる。

【0202】

一実施形態では、第１の用量および第２の用量は、第１の用量の後、約２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００日、多くても４００、３９０、３８０、３７０、３６５、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、または２００日の期間にわたってヒトに投与される。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましくは、第１および第２の用量は、少なくとも４週間空けて、例えば、８週間以上空けて、２カ月以上空けて、３カ月以上空けて、６カ月以上空けてなどで投与される。

【0203】

一実施形態では、第１の用量および第２の用量は、約３０日の期間にわたってヒトに投与される。別の実施形態では、第１の用量および第２の用量は、約６０日の期間にわたってヒトに投与される。別の実施形態では、第１の用量および第２の用量は、約１８０日の期間にわたってヒトに投与される。

【0204】

都合のよいことに、第１の用量を、別のワクチンと実質的に同時に（例えば、同じ医療相談もしくは医療専門家への訪問の間に、または第１の用量の髄膜炎菌ワクチンの２４時間以内に）、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性、もしくは好ましくは、無細胞性のいずれか）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ワクチン、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン、および／またはポリオワクチン（好ましくは、不活化ポリオウイルスワクチン）と実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与されるワクチンはそれぞれ、一価ワクチンであってもよく、または組合せワクチンの一部（例えば、ＤＴＰワクチンの一部）であってもよい。

【0205】

都合のよいことに、第２の用量を、別のワクチンと実質的に同時に（例えば、同じ医療相談もしくは医療専門家への訪問の間に、または第２の用量の髄膜炎菌ワクチンの２４時間以内に）、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性、もしくは無細胞性のいずれか）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ワクチン、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン、ポリオワクチン（好ましくは、不活化ポリオウイルスワクチン）、インフルエンザワクチン、水痘ワクチン、麻疹ワクチン、おたふく風邪ワクチン、および／または風疹ワクチンと実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与されるワクチンはそれぞれ、一価ワクチンであってもよく、または組合せワクチンの一部（例えば、ＭＭＲワクチンの一部）であってもよい。

【0206】

都合のよいことに、第３の用量を、別のワクチンと実質的に同時に（例えば、同じ医療相談もしくは医療専門家への訪問の間に、または第３の用量の髄膜炎菌ワクチンの２４時間以内に）、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性、もしくは無細胞性のいずれか）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ワクチン、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン、ポリオワクチン（好ましくは、不活化ポリオウイルスワクチン）、インフルエンザワクチン、水痘ワクチン、麻疹ワクチン、おたふく風邪ワクチン、および／または風疹ワクチンと実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与されるワクチンはそれぞれ、一価ワクチンであってもよく、または組合せワクチンの一部（例えば、ＭＭＲワクチンの一部）であってもよい。

【0207】

３用量
一実施形態では、組成物の３用量スケジュールは、２用量スケジュールよりも、高いパーセンテージのヒトにおいて、第１および／または第２のポリペプチドに対して異種であるＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）を発現する複数の株に対する殺菌力価を誘導する。

【0208】

一実施形態では、方法は、３用量の組成物をヒトに投与することを含む。別の実施形態では、方法は、多くても３用量の組成物を投与することを含む。一実施形態では、３用量は、第１の用量の後、約６カ月の期間内に投与される。一実施形態では、方法は、第３の用量後にヒトへの追加用量の投与を含む。別の実施形態では、方法は、第３の用量後にヒトへの追加用量の投与を含まない。別の実施形態では、方法は、組成物の第４の、または追加用量をヒトに投与することをさらに含まない。さらなる実施形態では、約６カ月の期間内に多くても３用量がヒトに投与される。

【0209】

例示的な実施形態では、例えば、０、１、６カ月の免疫化スケジュールなどにおいて、第２の用量は、第１の用量の約３０日後に投与され、第３の用量は、第２の用量の約１５０日後に投与される。別の例示的な実施形態では、例えば、０、２、６カ月の免疫化スケジュールなどにおいて、第２の用量は、第１の用量の約６０日後に投与され、第３の用量は、第２の用量の約１２０日後に投与される。

【0210】

一実施形態では、第１の用量、第２の用量、および第３の用量は、約１５０、１６０、１７０、または１８０日、多くても２４０、２１０、２００、または１９０日の期間にわたってヒトに投与される。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましくは、第１の用量、第２の用量、および第３の用量は、約１８０日または６カ月の期間にわたってヒトに投与される。例えば、第２の用量を、第１の用量の約６０日後にヒトに投与し、第３の用量を、第２の用量の約１２０日後にヒトに投与することができる。したがって、例示的な投与スケジュールは、約０、２、および６カ月で用量をヒトに投与することを含む。

【0211】

上記のように、複数用量の免疫原性組成物をヒトに投与することができ、各用量間の日数は変化してもよい。この方法の利点としては、例えば、ヒトが投与スケジュールを順守するための可撓性が挙げられる。

【0212】

一実施形態では、方法は、多くても３用量の同一の免疫原性組成物をヒトに投与することを含む。例えば、好ましい実施形態では、方法は、第１、第２、および第３の組成物が同一でない場合、第１の用量の第１の組成物をヒトに投与すること、第２の用量の第２の組成物をヒトに投与すること、および第３の用量の第３の組成物をヒトに投与することを含まない。別の実施形態では、方法は、多くても４用量の同一の免疫原性組成物をヒトに投与することを含む。

【実施例】

【0213】

以下の実施例は、本発明の実施形態を例示するものである。本明細書で別途記述されない限り、以下の実施例において、組成物の好ましい例示的な実施形態である、１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６用量レベルで、０．５ｍＬ用量あたり、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド、０．５ｍＬ用量あたり、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド、２．８のポリソルベート８０の第１のポリペプチドに対するモル比、２．８のポリソルベート８０の第２のポリペプチドに対するモル比、組成物１ｍｌあたり０．５ｍｇのＡｌ^３＋、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含むＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を参照する。

【0214】

より具体的には、１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６用量レベルの治験用二価組換えｒＬＰ２０８６ワクチンは、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド；（ｃ）１８μｇのポリソルベート８０；（ｄ）２５０μｇのアルミニウム；（ｅ）７８０μｇのヒスチジン；および（ｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。各用量は０．５ｍＬである。

【0215】

本明細書で別途記述されない限り、以下の実施例において、担体タンパク質として破傷風トキソイドにそれぞれカップリングされた、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５およびＹを含む四価髄膜炎菌多糖コンジュゲート組成物の好ましい例示的な実施形態である、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を参照する。髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＡおよびＣ多糖は、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＨ）スペーサーを用いてコンジュゲートされ、破傷風トキソイドに間接コンジュゲートされているが、Ｗ−１３５およびＹ多糖は破傷風トキソイドに直接コンジュゲートされている。組成物は、保存剤またはアジュバントを一切含有しない。

【0216】

より具体的には、以下の実施例に記載される凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、用量（０．５ｍＬ）あたり、破傷風トキソイド担体タンパク質にコンジュゲートされた５マイクログラムの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ多糖；破傷風トキソイド担体タンパク質にコンジュゲートされた５マイクログラムの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ多糖；破傷風トキソイド担体タンパク質にコンジュゲートされた５マイクログラムの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ−１３５多糖；破傷風トキソイド担体タンパク質にコンジュゲートされた５マイクログラムの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ多糖；２８ｍｇのスクロース；９７μｇのトロメタモールを含む。

【0217】

（実施例１）
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物
最終ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物は、筋肉内注射のための０．５ｍＬ用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを引き出すために、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品（以下の実施例２に記載される）バイアルを、０．６７ｍＬのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品（以下の実施例３に記載される）を用いて復元させることによって調製される。ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの調製において使用される全ての成分およびそれらの機能を、以下の表１に提供する。

【0218】

【表1】

【0219】

（実施例２）
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品の説明および組成
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品は、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、ｐＨ６．０と共に、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ_４）として０．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウム中、１２０μｇ／ｍＬ／サブファミリーで製剤化されたｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質から構成される滅菌液体製剤である。ＰＳ−８０のタンパク質に対する標的モル比を得るために、ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）が薬物物質に添加される。したがって、ＰＳ−８０は、薬物製品の製剤化中に添加されないが、同じ比で最終薬物製品中に存在する。薬物製品は、１ｍＬのシリンジ中に充填される。ワクチンの単回用量は、０．５ｍＬであり、保存剤を含まない。

【0220】

【表2】

【0221】

ポリソルベート８０濃度の効果
ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）は、非イオン性界面活性剤である。それは、温度、フィルター、チューブ、容器／閉合接触およびプロセス混合によって引き起こされ得る凝集および吸着を防止することによって、製剤中のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を安定化および可溶化するために使用される。ｉｎ ｖｉｔｒｏでのモノクローナル抗体に基づく効力アッセイを使用する安定性試験は、最終製剤中のＰＳ−８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するより高いモル比でのサブファミリーＢタンパク質の不安定性を証明した。ＰＳ−８０のタンパク質に対する変化するモル比を用いる実験は、ＰＳ−８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対する最適なモル比が、効力を保持するためには約１．４〜４．２であることを証明した。

【0222】

（実施例３）
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の説明および組成
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品は、それぞれ、多糖に対する約３、約３、約１．５および約１．３の比で破傷風トキソイド（ＴＴ）にそれぞれコンジュゲートされた、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹの精製された多糖から構成される。

【0223】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品は、凍結乾燥にとって好適なブロモブチルゴム閉合およびアルミニウムフリップオフキャップを有する３ｍＬのガラスバイアル中で供給される、凍結乾燥粉末として提供される。ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品の製造において使用される全ての成分およびそれらの機能を、表３に提供する。

【0224】

【表3】

【0225】

（実施例４）
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の調製
最終ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物は、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品バイアルを、０．６７ｍＬのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６を用いて復元することによってクリニックで調製される。得られるＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物（ワクチン液体薬物製品）は、筋肉内注射のために１０ｍＭヒスチジンならびに１６０．５〜１６１．１ｍＭの塩化ナトリウム、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）としての０．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウム、０．０３５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０および５６ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ６．０５を含有する１．６ｍＭのトリス緩衝液中、１２０ｍｃｇ／ｍＬ／サブファミリーのｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質、それぞれ、約３、約３、約１．５および約３の比で破傷風トキソイドにコンジュゲートされた１０ｍｃｇ／ｍＬ／タイプの濃度の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）タイプＡ、Ｃ、ＷおよびＹの精製された多糖を含有する。

【0226】

ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンは、２つの薬物製品、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴとＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６とを混合することによって調製される。緩衝成分および賦形剤は、各成分の個々の発達に基づいて選択され、長い保存可能期間のための必要な安定性プロファイルを提供することが示されている。

【0227】

用量検証試験を実施して、ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの投与のために一緒に混合した場合、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品とＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品とが適合すること、ならびに全ての薬物製品および投薬溶液が投与成分と適合すること、ならびに投薬溶液が用量調製および投与操作を実施するのに十分な期間にわたって投与成分中で安定であることを証明した。周囲温度および光条件で保持時間にわたって０．６７ｍＬのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品を用いたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品の復元によって調製されたＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの安定性を、復元されたバイアルおよび投薬シリンジ中で確認した。

【0228】

ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの投薬溶液を代表する試料を、抗原の結合および純度に関するＲＰ−ＨＰＬＣ、所定の許容基準を用いるｂｉｏｐｌｅｘ活性アッセイ、ＥＬＩＳＡ、およびＩＣＰ−ＭＳなどの安定性指示方法を使用して試験した。この試験の結果は、室温および光条件で２４時間のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの許容し得る安定性を示す。これらのデータは、以下の実施例５〜１５で示され、説明される。

【0229】

（実施例５）
ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの評価
凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて復元した場合に許容し得る物理的適合性および短期安定性が存在するかどうかを評価するための試験を実行した。凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物とを混合し、現実の生活条件を近似する制御されていない室温環境中で最大２４時間保存した。凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を、手で穏やかに混合しながら液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて復元することができ、ｐＨと浸透圧の組合せが注射物質の典型的な範囲内にあることが示された。コンジュゲートおよびタンパク質に関する全ての重要な属性は、制御されていない室温環境中で最大２４時間にわたって対照のものと類似していた。

【0230】

物理的適合性を、組合せ薬物製品のｐＨ、外見、復元の容易性、および浸透圧を評価することによって評価した。抗原の安定性を、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質の濃度、純度およびｉｎ ｖｉｔｒｏでの相対的抗原性（ＩＶＲＡ）ならびにコンジュゲートされた髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖の濃度をＥＬＩＳＡによって評価することによって評価した。

【0231】

実施例５〜実施例１５は、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物との組合せ、すなわち、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物が、室温で少なくとも２４時間にわたって適合性であり、安定であることがわかったことを証明する。

【0232】

ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖濃度を決定するためのＥＬＩＳＡ−Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５ ＥＬＩＳＡの開発＆検出のためのｐＡｂのスクリーニング
６つの抗体を、ＥＬＩＳＡアッセイにおける使用のためのスクリーニングで選択した。１０匹のウサギの４つの群のそれぞれを、抗体発生後に続いて放血させたウサギを用いて、Ｍｅｎ Ａ、Ｃ、ＹまたはＷ−１３５多糖ＴＴコンジュゲートで免疫した。それぞれのウサギを、結合および特異性について担体タンパク質ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートしたＭｅｎ Ａ、Ｃ、ＹまたはＷ−１３５多糖を使用して個別にスクリーニングした。ウサギ血清を、バックグラウンド吸光度を３倍より超える吸光度読取り値と等価である、陽性結合シグナルについてスクリーニングした。さらに、ウサギ血清を、ブランクに関する吸光度読取り値を超える、二次または検出抗原を含まない血清組合せに関する任意の吸光度読取り値である、低い非特異的結合、ならびに、バックグラウンド吸光度を超える異種血清型に関する任意の吸光度読取り値である、低い交差反応性についてスクリーニングした。スクリーニング基準を満たしたウサギをプールした。ＣＲＭコンジュゲートを使用して標準曲線範囲を確立し、復元された凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を用いて確認した。ＣＲＭコンジュゲートを使用して標準曲線範囲を確立し、復元された凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を用いて確認した。

【0233】

組合せ薬物製品（ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物）中のＡ、Ｃ、ＹおよびＷコンジュゲートを定量する実現可能性を確立した。ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物のみがアッセイにおいて検出されないことが決定された。さらに、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物試料中のリン酸アルミニウムを可溶化した場合、コンジュゲートの完全な回収が得られた。したがって、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ＥＬＩＳＡによるＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴコンジュゲートの定量化を妨害しないことが決定された。

【0234】

（実施例６）
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を評価するための方法の好適性の評価
ＩＥＸ−ＨＰＬＣを、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物サブファミリーＡおよびＢタンパク質の強度を決定するためのその好適性について評価した。ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の非存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物に関する総タンパク質および結合したタンパク質の結果にアクセスした。重ね合わせたクロマトグラムを、図１に示す。

【0235】

【表4】

【0236】

（実施例７）
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度およびピーク比の評価
ＲＰ−ＨＰＬＣを、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度を決定するためのその好適性について評価した。ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の非存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物に関する純度の結果を比較した。重ね合わせたクロマトグラムを、図２に示す。不純物ピークの統合の例を、図２に差込み図として示す。評価結果は、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在は、ＲＰ−ＨＰＬＣ法を使用するＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度の評価を妨害しないことを示す。

【0237】

（実施例８）
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物ＩＶＲＡの評価
ＩＶＲＡ法を、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質のｉｎ ｖｉｔｒｏでの相対的抗原性の決定のためのその好適性について評価した。

【0238】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下および非存在下でのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質に関するＩＶＲＡの結果を比較した。実現可能性評価結果は、アッセイ変動性の範囲内で、結果が比較可能であること、およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在がｉｎ ｖｉｔｒｏでの相対的抗原性の決定を妨害しないことを示す。

【0239】

（実施例９）
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いるＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物バイアルの復元
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物およびＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物薬物製品を、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物薬物製品を用いて復元されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物バイアルを使用して実施した。食塩水またはＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物マトリックスプラセボのいずれかを用いて復元されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物バイアルを、方法に応じて対照として使用した。

【0240】

【表5】

【0241】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物に関する食塩水復元容量の決定
ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）市販品パッケージは、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を含有するバイアルと、復元のために使用される０．９％の食塩水を含有するシリンジとの両方を含有する。ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いた復元の際に市販のワクチンにおいて最終ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）濃度を再現するために、市販品からシリンジを使用して分注される食塩水の量を決定しなければならない。次いで、この同じ容量のＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を、全ての復元試験のために使用する。

【0242】

ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物バイアルの復元
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を、１０ｍＬのガラスバイアル中にプールした。約８００μＬの溶液を、１ｍＬのシリンジ中に引き出した。シリンジの調整された内容物を、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を含有するバイアル中に注入した。バイアルを回転させて、内容物を溶解させた。

【0243】

ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物に関して２組の試料上でｐＨおよび外見を決定した。食塩水を用いて復元されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物およびＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて復元されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物に関して、３回、浸透圧を測定した。

【0244】

（実施例１０）
ＤＰマトリックス中でのＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の安定性を評価するためのＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ
組合せ薬物製品（ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物）中のコンジュゲート化髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の不安定性を予想できるかどうかを評価するための代用物として、Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖を使用した。

【0245】

Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖の処理
試薬の調製（「完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝液マトリックス」）
２．２４ｇのスクロースと、７．８ｍｇのトリス（トロメタミン）を、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質を含む２０ｍｌの２Ｘ ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物緩衝液マトリックス（ヒスチジン２０ｍＭ ｐＨ６．０、ＮａＣｌ ３００ｍＭ、ＰＳ８０ ０．０７ｍｇ／ｍｌ、ＡＬＰＯ４ １ｍｇ／ｍｌ（８ｍＭ）、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質、それぞれ２４０μｇ／ｍＬ）に添加した。

【0246】

試料の調製
それぞれのＭｅｎｉｎｇ多糖を、完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝液マトリックスで１：１に希釈し、５℃、２５℃および３７℃で、０、６および２４時間インキュベートした。インキュベーション後、試料懸濁液を１４，０００ｒｐｍで１分間スピンした。上清をＳＥＣ−ＭＡＬＬＳによって分析した。

【0247】

（実施例１１）
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の安定性−ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６とＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物との組合せのｐＨ、外見、および浸透圧の評価
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物とＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物との組合せ、すなわち、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物のｐＨおよび外見を、復元の直後に、および２４時間後に再度、評価した。全ての結果は予想通りであった（表６）。

【0248】

【表6】

【0249】

【表7】

【0250】

（実施例１２）
組合せ薬物製品中のＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖コンジュゲートの濃度
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５−ＴＴコンジュゲートの濃度を最初に評価し、２４時間後に再度評価した。４つのコンジュゲートの濃度は、２４時間の期間にわたって安定であった（表８）。

【0251】

【表8】

【0252】

（実施例１３）
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６タンパク質の安定性の評価
組合せ薬物製品中の総および結合したｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質濃度
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物試料を、ＩＥＸ−ＨＰＬＣによって分析して、タンパク質濃度を決定した。表９に示されるように、総タンパク質、結合したタンパク質（アルミニウムに）、およびＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質の両方の結合率（％）（アルミニウムに結合した）は、２４時間以内に変化しなかったが、これは、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質が、２４時間の期間にわたって安定であることを示している。

【0253】

【表9】

【0254】

（実施例１４）
組合せＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のｒＬＰ２０８６タンパク質の純度およびピーク比
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物試料を、ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析して、ｒＬＰ２０８６タンパク質の純度およびピーク比を決定した。図３を参照されたい。１１．９ｍｉｎのピークは、純度の計算から除外される。

【0255】

組合せ薬物製品中でのｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質のＩＶＲＡ
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物試料のＩＶＲＡを、混合後２４時間まで評価した。ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質の相対的抗原性は、２４時間の期間にわたって安定であることが決定された。

【0256】

（実施例１５）
ＳＥＣ−ＭＡＬＳによる完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝液マトリックス中でのＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の安定性
様々な温度での６および２４時間のインキュベーション後のＳＥＣ−ＭＡＬＬＳによる完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝液マトリックス中でのＭｅｎｉｎｇ Ａ ＰＳの安定性
Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ多糖を、完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝液マトリックスと混合し、５℃、２５℃および３７℃で最大２４時間のインキュベーション後にＳＥＣ−ＭＡＬＳによって安定性について評価した。４つ全ての多糖が、５℃および２５℃で最大２４時間、安定であると考えられる。Ｍｅｎｉｎｇ ＡおよびＹについては、３７℃で一部の分解が観察された。初期以外の全ての試験条件下で、高いＭｗの凝集物の形成のため、Ｍｅｎｉｎｇ Ｙ多糖については、分解の程度を決定することができなかった。

【0257】

【表10】

【0258】

（実施例１６）
ＭｅｎＡＣＷＸＹに対するＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物により誘導されるｈＳＢＡ活性交差防御の評価
ＴＲＵＭＥＮＢＡ ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、１つがそれぞれのサブファミリーに由来する２つの脂質化Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）を含有し、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）血清群Ｂに対する防御を提供する。ｆＨＢＰは、血清群Ａ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、およびＸにおいて変化するレベルで発現されることがわかっており、これは、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物がこれらの血清群に対する防御を提供することができることを示唆している。本発明者らは、Ｂ１９７１０１５試験に由来する血清を使用して、ＴＲＵＭＥＮＢＡ ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物が血清群Ａ、Ｃ、Ｗ、ＹおよびＸに対する防御を提供することができることの概念実証を精査した。株を世界レベルで収集した（最近の英国でのアウトブレイクに由来するＭｎＷ株およびアフリカで新しく出現しているＭｎＸを含む）。ｈＳＢＡを開発するための候補株を選択するためのプロセスならびにＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物で免疫された対象のサブセットおよび比較として四価髄膜炎菌莢膜多糖コンジュゲートワクチン（ＭＣＶ４）で免疫されたサブセットに由来する免疫応答を記載する。

【0259】

免疫原性の決定のために使用される血清
２群の対象がＭＥＮＡＣＴＲＡ（髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲートワクチン［ＭＣＶ４］）およびＡＤＡＣＥＬ（破傷風トキソイド、減量ジフテリアトキソイド、無細胞性百日咳ワクチン［Ｔｄａｐ］）または二価ｒＬＰ２０８６（米国で認可された、ＴＲＵＭＥＮＢＡ［髄膜炎菌血清群Ｂワクチン］）のいずれかを受けた、Ｂ１９７１０１５試験、第２相、無作為化、実対照薬、観察者盲検に由来する血清のサブセットを使用して、以下に記載のように選択されたＭｎＡＣＷＹＸ株を使用するｈＳＢＡにおける免疫原性にアクセスした。

【0260】

ベースライン血清陽性率
マイクロコロニーに基づくｈＳＢＡにおけるベースライン血清陽性率を、Ｂ１９７１０１５試験に由来する青少年から得られた非免疫またはワクチン接種前の血清を使用して見積もった。この目的のために、血清陽性は、予測アッセイＬＬＯＱであった、１：８以上のｈＳＢＡ力価と定義される。アッセイ開発のために考慮すべきことに、株は低いベースライン血清陽性（すなわち、約４０％未満のベースライン血清を使用する１：８以上のｈＳＢＡ力価の比率）を示さなければならない。

【0261】

免疫原性の決定のために使用される血清
２群の対象がＭＥＮＡＣＴＲＡ（髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲートワクチン［ＭＣＶ４］）およびＡＤＡＣＥＬ（破傷風トキソイド、減量ジフテリアトキソイド、無細胞性百日咳ワクチン［Ｔｄａｐ］）または二価ｒＬＰ２０８６（米国で認可された、ＴＲＵＭＥＮＢＡ［髄膜炎菌血清群Ｂワクチン］）のいずれかを受けた、Ｂ１９７１０１５試験、第２相、無作為化、実対照薬、観察者盲検に由来する血清のサブセットを使用して、以下に記載のように選択されたＭｎＡＣＷＹＸ株を使用するｈＳＢＡにおける免疫原性にアクセスした。

【0262】

結果および考察
血清群Ａ
血清群ＡのＳＢＡ株プールには、南アフリカに由来する１７種の株、米国に由来する４種の株およびオランダに由来する１種の株があった。このコレクション中の血清群Ａ株の７３パーセントが、Ｂ１６を発現し、２３％がＢ２２を発現する。血清群Ａ株のこのコレクションにおける優勢なクローン複合体は、ＳＴ−１およびＳＴ−５である。１１００ＭＦＩを超えるｆＨＢＰ発現レベルを示すＢ１６を発現する２種の株およびＢ２２を発現する１種の株を、さらなる試験のために選択した。３６ロットのＣ’を、Ｃ’Ｔ３０／Ｔ０比スクリーニングのために使用した。株を非特異的に殺滅しなかった適切なヒト血清補体供給源を、Ｃ’通過速度によって同定することができなかったため、ＰＭＢ１５４６を除外した（表１１）。青少年の免疫前血清に関する、高いベースライン血清陽性率（５２％）のため、ＰＭＢ３１４３を除外した。ＰＭＢ３２５７は、選択基準を満たした：適切な補体供給源が同定され、青少年の免疫前血清に関する低いベースライン血清陽性率が、例えば、０％であり、ｈＳＢＡが技術的に実現可能であった。

【0263】

【表11】

【0264】

血清群Ｃ
血清群ＣのＳＢＡ株プールには、米国に由来する４９種の株およびオランダに由来する１０種の株があった。ｆＨＢＰ配列は、血清群Ｃにおいてはより異種性である。株プールは、少なくとも１７％、すなわち、１９％の、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する株であったＭｅｎＣ株および１０％のＡ１５を発現する株を含有する。血清群Ｃ株のこのコレクションにおける優勢なクローン複合体は、ＳＴ１１／ＥＴ−３７複合体およびＳＴ−１０３である。１１００ＭＦＩを超えるｆＨＢＰ発現レベルを示す、Ａ１０を発現する１種の株およびＡ１５を発現する３種の株を、さらなる試験のために選択した。３６ロットのＣ’を、Ｃ’Ｔ３０／Ｔ０比スクリーニングのために使用した。株を非特異的に殺滅しなかった適切なヒト血清補体供給源を、Ｃ’通過速度によって同定することができなかったため、ＰＭＢ５１８０、およびｆＨＢＰに関してＡ１５を発現するＰＭＢ５１９６を除外した（表１２）。ＰＭＢ５０４３については、Ｃ’通過初期スクリーニング試験は、Ｔ３０／Ｔ０比のためＳＢＡアッセイにおいて失敗した。ＰＭＢ５２０８は、選択基準を満たした：適切な補体供給源が同定され、青少年の免疫前血清に関する低いベースライン血清陽性率、１７％が確認され、ｈＳＢＡが技術的に実現可能であった。

【0265】

【表12】

【0266】

血清群Ｗ
血清群ＷのＳＢＡ株プールには、米国に由来する１４種の株、オランダに由来する９種の株および英国に由来する６種の最近のアウトブレイク株があった。ｆＨＢＰ配列は、血清群Ｗ株のこのコレクションにおいてはより均一である。このプールにおける株の４５％は、ｆＨＢＰ Ａ１９バリアントを発現し、４５％はｆＨＢＰ Ａ１０を発現した。血清群ＷプールにおけるｆＨＢＰ Ａ１９バリアント株に関する優勢なクローン複合体は、ＳＴ−２２であり、ｆＨＢＰ Ａ１０バリアント株に関する優勢なクローン複合体は、ＳＴ−１１／ＥＴ−３７複合体である。米国に由来する、Ａ１９を発現する１種の株およびＡ１０を発現する１種の株を選択した。１１００ＭＦＩを超えるｆＨＢＰ発現レベルを示す、Ａ１０を発現する２種の英国のアウトブレイク株を、さらなる試験のために選択した。３６ロットのＣ’を、Ｃ’Ｔ３０／Ｔ０比スクリーニングのために使用した。４種の株の全てが、この初期のＣ’スクリーニング試験を通過した。青少年の免疫前血清に関する血清陽性率がそれぞれ７４％および４８％であったため、免疫前の比率に基づいて、ＰＭＢ５５２４およびＰＭＢ５１６３を除外した。ＰＭＢ５２４８およびＰＭＢ５５２３は、選択基準を満たした：適切な補体供給源が同定され、青少年の免疫前血清に関する低いベースライン血清陽性率が、例えば、それぞれ、２６％および２８％であり、ｈＳＢＡが技術的に実現可能であった（表１３）。

【0267】

【表13】

【0268】

血清群Ｘ
血清群ＸのＳＢＡ株プールには、アフリカに由来する８種の株およびオランダに由来する１種の株があった。アフリカに由来する５種の株はｆＨＢＰ Ｂ４９バリアントを発現し、３種の株は新しいｆＨＢＰ型を有し、オランダに由来する１種の株はｆＨＢＰ Ｂ０９を発現した。９種全部の株に関するｆＨＢＰ発現は、１１００ＭＦＩを超えていた。３種のアフリカアウトブレイク株およびオランダに由来する１種の株を、さらなる試験のために選択した。３６ロットのＣ’を、Ｃ’Ｔ３０／Ｔ０比スクリーニングのために使用した。４種の株の全てが、Ｃ’初期スクリーニング試験を通過した。青少年の免疫前血清に関する血清陽性率が６８％であったため、免疫前の比率に基づいて、ＰＭＢ５４６７を除外した。ＰＭＢ５５３７、ＰＭＢ５５４０およびＰＭＢ５５３９は、選択基準を満たした：適切な補体供給源が同定され、青少年の免疫前血清に関する低いベースライン血清陽性率が、例えば、０であり、ｈＳＢＡが技術的に実現可能であった（表１４）。ＰＭＢ５５４０を、評価のために選択した。

【0269】

【表14】

【0270】

血清群Ｙ
血清群ＹのＳＢＡ株プールには、米国に由来する８７種の株およびオランダに由来する３０種の株があった。ｆＨＢＰ配列は、血清群Ｙ株のこのコレクションにおいてはより均一である。このプールにおける血清群Ｙ株の６６％は、ｆＨＢＰ Ａ１５を発現する。この血清群ＹコレクションにおけるｆＨＢＰ Ａ１５バリアント発現株に関する優勢なクローン複合体は、ＳＴ−２３／クラスター Ａ３である。このコレクションにおける血清群Ｙ株のわずか１５％が、１１００ＭＦＩを超えるｆＨＢＰ発現レベルを有する。１１００ＭＦＩを超えるｆＨＢＰ発現レベルを示す、Ａ１５バリアント群に由来する３種の株を、さらなる試験のために選択した。３６ロットのＣ’を、Ｃ’Ｔ３０／Ｔ０比スクリーニングのために使用した。株を非特異的に殺滅しなかった適切なヒト血清補体供給源を、Ｃ’通過速度によって同定することができなかったため、ＰＭＢ５１２２、ＰＭＢ５０５３およびＰＭＢ５０５０を除外した（表１５）。ｆＨＢＰ Ｂ４７を有するＰＭＢ５１８７をＣ’Ｔ３０／Ｔ０スクリーニングのために選択し、株を非特異的に殺滅しなかったＣ’供給源を同定することができた（表１５）。ＰＭＢ５１８７が血清群Ｙに関する優勢なｆＨＢＰバリアントを発現しなかったとしても、この株は他の選択基準を満たした：適切な補体供給源が同定され、青少年の免疫前血清に関する低いベースライン血清陽性率が、例えば、４％であり、ｈＳＢＡが技術的に実現可能であった。

【0271】

【表15】

【0272】

それぞれの血清群に関するｆＨＢＰの優勢なバリアントであること、１１００ＭＦＩを超えるｆＨＢＰ発現およびアッセイの実現可能性（例えば、ヒト補体およびベースライン血清陽性率の同定）に基づいて、ｈＳＢＡ開発のためにＭｎＡＣＹＷＸ株を選択した。６種の選択されたＭｎＡＣＹＷＸ株の特徴、ならびに各バリアント群に関するｆＨＢＰ発現中央値を、表１６にまとめる。

【0273】

【表16】

【0274】

免疫原性分析
ＭｎＡＣＹＷＸ試験株をｈＳＢＡにおいて使用して、第２相同時試験Ｂ１９７１０１５に登録した１０歳から１３歳未満の健康な青少年のサブセットにおいて惹起される免疫応答を評価した。選択された６種の株について、ＴＲＵＭＥＮＢＡにより惹起されたｈＳＢＡ応答を、ＭＥＮＡＣＴＲＡにより惹起された（髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲートワクチン［ＭＣＶ４］）ｈＳＢＡ応答と比較した（表１７）。

【0275】

ＭｅｎＡを除くＭｅｎＣＷＹＸ株に関する防御の許容される相関（すなわち、１：４以上のｈＳＢＡ力価）よりも厳密な基準である、１：８以上のｈＳＢＡ力価に基づくと、高い割合のワクチン接種された個体において大きな殺菌抗体応答が観察され、ＭＣＶ４で免疫された対象に由来する９７％と比較してＴＲＵＭＥＮＢＡで免疫された対象に由来する２８％であった。ＴＲＵＭＥＮＢＡの応答は、２種の血清群Ｗ株（ＰＭＢ５２４８、１００％、ＰＭＢ５５２３、９７％）については用量２の１カ月後にピークに達し、血清群Ｃ、Ｙ、Ｘ株については用量３の１カ月後にピークに達し、その応答率は８３％〜１００％であった。ＭＣＶ４の応答は、用量１の１カ月後にピークに達し、ＭｅｎＸについては応答しなかった。ＴＲＵＭＥＮＢＡにより惹起された抗体は、ＭＣＶ４によってカバーされないＭｅｎＸに対して防御する能力を示した。ＭｎＣ、ＷまたはＹ株に対する３用量後のＴＲＵＭＥＮＢＡの応答率（すなわち、１：８以上の％）は、１用量後のＭＣＶ４の応答率と同等である。ＭｎＡＣＹＷＸ ｈＳＢＡ試験株から得られた免疫原性データは、Ｂ以外の血清群に対する防御に関する概念実証を提供する。

【0276】

【表17】

【0277】

結論。それぞれの血清群に関するｆＨＢＰの優勢なバリアントであること、ＭｎＢに関するｆＨＢＰ発現閾値を超えるｆＨＢＰ発現およびアッセイの実現可能性（例えば、ヒト補体およびベースライン血清陽性率の同定）に基づいて、ｈＳＢＡ開発のためにＭｎＡＣＹＷＸ株を選択した。ＭｎＡＣＹＷＸ株を使用するｈＳＢＡにおいてＴｒｕｍｅｎｂａで免疫された対象に由来する血清の使用は、Ｔｒｕｍｅｎｂａにより惹起される抗体がＢ以外の血清群に対する防御を提供することができることの概念実証を提供した。３用量後に二価ｒＬＰ２０８６により惹起される応答（例えば、１：８以上の力価を示す対象のパーセンテージ）は、血清群Ｃ、ＷおよびＹに由来する株については１用量後にＭＣＶ４により惹起される応答と同等であるが、血清群Ａ株については低い。さらに、高い割合の対象における１：８以上の二価ｒＬＰ２０８６により惹起されるｈＳＢＡ力価は、ＭＣＶ４によっては提供されない、ＭｅｎＸに対する防御を示す。

【0278】

（実施例１７）
Ｔｒｕｍｅｎｂａは非血清群Ｂの髄膜炎菌に対する殺菌抗体を惹起する
序論。髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）（Ｍｅｎ）は、幼児、青少年、および若年成人における細菌性髄膜炎および敗血症の主因である。５種の主要な疾患を引き起こす髄膜炎菌血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、ＹおよびＷが存在し、第６の血清群Ｘは、アフリカで出現している。四価髄膜炎菌コンジュゲートワクチン（ＭＣＶ４）は、世界の様々な地域で髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、ＹおよびＷによって引き起こされる疾患から防御するために使用されている。血清群Ｂ疾患に対する防御を提供することを意図する、最近認可されたワクチンであるＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）（ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ、二価ｒＬＰ２０８６、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ、Ｃｏｌｌｅｇｅｖｉｌｌｅ、ＰＡ）は、１つが２つのＨ因子結合タンパク質（ＦＨｂｐ）系統発生サブファミリー２のそれぞれに由来する、２つの組換えリポタンパク質からなる。ＦＨｂｐをコードする遺伝子は、血清群分類に関係なく、ほぼ全ての侵襲性Ｍｅｎ株に見出される。前臨床試験は、他の疾患を引き起こす血清群に対して防御するＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの能力を示した。予備試験において、単一のＦＨｂｐバリアント抗原を含む、ＭｅｎＢワクチンＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）（ＭｅｎＢ−４Ｃ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｉｎｃ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）は、ＭｅｎＸおよびＭｅｎＷ株に対する殺菌性免疫応答を惹起することができた。この試験の目的は、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって青少年において惹起される抗体がＭｅｎＡ、Ｃ、Ｗ、ＹおよびＸ株に対して殺菌性であるかどうかを精査するための探索的アッセイを使用してこれらの観察を拡張し（図７）、それによって、血清群にわたる髄膜炎菌疾患に対する防御の能力を提供することであった。

【0279】

実験の概説。候補株（図８）から、
・ヒト補体殺滅のみの影響を受けにくかった株、
・ＭｅｎＢ株によって発現されるＦＨｂｐを指向する殺菌抗体を有することが示された血清を使用するｈＳＢＡにおいて殺滅された株、
・ワクチン接種前血清（２５のワクチン接種前血清；図９を参照されたい）に関して低いベースライン力価を有する株
を選択する。選択された株（表１８、図１０）について、探索的ｈＳＢＡアッセイを開発する。ｈＳＢＡにおいて試験された血清については、図９を参照されたい。応答率＝防御の確立された相関よりも高い（１：４以上）、１：８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージ（図１１〜１６）。

【0280】

【表18】

【0281】

図９を参照すると、Ａ群０カ月に由来する２５の血清を使用して、前免疫を試験した。０および１カ月で引き出したＡ群および０、１、３および７カ月で引き出したＢ群に由来する３０人の対象に由来する血清を、ｈＳＢＡ試験について使用した。応答率の評価項目は、１：８を超える力価を有する血清のパーセンテージである。

【0282】

図１０−ＦＨｂｐ反応性ｍＡｂ ＭＮ９９４−１１を使用するフローサイトメトリー実験から決定されたＦＨｂｐ表面発現レベル（ＭＦＩ）の分布。血清群内のそれぞれの株に関するＦＨｂｐ表面発現は黒色の点で記載されるが、各血清群内の選択された試験株に関するＦＨｂｐ表面発現レベルは色付きの星印で記載される。

【0283】

図１１−ＭｅｎＡ ＰＭＢ３２５７（Ｂ１６）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージ）。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関する免疫前（０カ月）ならびに用量１、２および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られた幾何平均力価（ＧＭＴ）は、それぞれ、２、３、４、および５であった。陽性対照群の対象に関する応答率は、ワクチン接種前は３％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群に関するＧＭＴは、それぞれ、２および９５であった。

【0284】

図１２−ＭｅｎＣ ＰＭＢ５２０８（Ａ１０）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージ）。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関する免疫前（０カ月）ならびに用量１、２および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、４、８、１２および２９であった。陽性対照群の対象に関する応答率は、ワクチン接種前は２０％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９０％であった。陽性対照群に関するＧＭＴは、それぞれ、３および１１９であった。

【0285】

図１３−ＭｅｎＷ ＰＭＢ５２４８（Ａ１９）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージ）。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関する免疫前（０カ月）ならびに用量１、２および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、４、１８、４７および７７であった。陽性対照群の対象に関する応答率は、ワクチン接種前は４０％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群に関するＧＭＴは、それぞれ、５および８８であった。

【0286】

図１４−ＭｅｎＷ ＰＭＢ５５２３（Ａ１０）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージ）。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関する免疫前（０カ月）ならびに用量１、２および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、７、１５、２１、および４２であった。陽性対照群の対象に関する応答率は、ワクチン接種前は５５％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群に関するＧＭＴは、それぞれ、８および６０であった。

【0287】

図１５−ＭｅｎＹ ＰＭＢ５１８７（Ｂ４７）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージ）。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関する免疫前（０カ月）ならびに用量１、２および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、３、７、３１、および５８であった。陽性対照群の対象に関する応答率は、ワクチン接種前は１３％であり、ＭＣＶ４を受けた１カ月後には９７％であった。陽性対照群に関するＧＭＴは、それぞれ、３および７９であった。

【0288】

図１６−ＭｅｎＸ ＰＭＢ５５４０（Ｂ４９）に関するｈＳＢＡ応答率（１：８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージ）。ＭｅｎＢＦＨｂｐに関する免疫前（０カ月）ならびに用量１、２および３の１カ月後に収集された血清に関する応答率および９５％信頼区間を示す。得られたＧＭＴは、それぞれ、２、３、７および２０であった。陽性対照群の対象に関する応答率は、ワクチン接種前は０％であり、ＭＣＶ４ワクチンを受けた１カ月後には０％であった。陽性対照群に関するＧＭＴは、それぞれ、２および２であった。

【0289】

まとめ。ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって惹起された応答率は、ＭｅｎＷ株、ＰＭＢ５２４８については用量２の１カ月後（３カ月目）にピークに達し（１００％）、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＸ株、ならびに第２のＭｅｎＷ株については用量３の１カ月後（７カ月目）にピークに達した（応答率の範囲は８３％〜１００％である）。

【0290】

ＭｅｎＡ試験株に関するｈＳＢＡによって測定された応答率は、実質的により低く、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの３用量後、２８％でピークに達した。

【0291】

髄膜炎菌疾患に対する防御の認識された相関は、１：４以上のｈＳＢＡ力価である。少なくとも１：８のｈＳＢＡ力価を惹起するＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの能力は、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐがＭＣＶ４によってカバーされないＭｅｎＸを含む、Ｂ以外の髄膜炎菌血清群によって引き起こされる疾患に対して防御することができることの概念実証を提供する。

【0292】

（実施例１８）
２４カ月齢以上〜１０歳未満の健康な対象における、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ二価組換えリポタンパク質２０８６ワクチン（二価ｒＬＰ２０８６、すなわち、現在はＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）ワクチン）の免疫原性、安全性、および忍容性について記述するための第２相、無作為化、対照薬、観察者盲検（Ｂ１９７１０１７−ｓｙｎ）
試験設計：これは、０、２および６カ月のスケジュールの一部として２４カ月齢以上〜１０歳未満の健康な対象に投与される１２０μｇの用量レベルの二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性、安全性、および忍容性を評価するために設計された第２相、無作為化、対照薬、観察者盲検、多施設試験であった（表１９）。約４００人の対象を、３：１の比で２群のうちの１群に無作為に割り当てるよう計画した。第１群は、０カ月（訪問１）で二価ｒＬＰ２０８６を受けた後、２および６カ月でその後のワクチン接種を受けた。第２群は、０カ月（訪問１）および６カ月でライセンス供与された小児Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）ワクチンを受け、盲検を維持するために２カ月で食塩水を用いる注射を受けた。追跡訪問を、それぞれのワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の６カ月後に行って、安全性データを収集し、および／または血液試料を取得した。対象は、最大で１３カ月間、試験に参加した。

【0293】

【表19】

【0294】

投与されたワクチン：第１群の対象には、０、２および６カ月で上腕三角筋に筋肉内注射によって二価ｒＬＰ２０８６を投与した。第２群の対象には、それぞれ、０、２、および６カ月で上腕三角筋にＨＡＶワクチン／食塩水／ＨＡＶワクチンを投与した。

【0295】

免疫原性評価：免疫原性分析を容易にするために、対象は、１回目のワクチン接種の直前、２回目のワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後に収集された約５〜１０ｍＬ（年齢に応じて）の血液を有していた。二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の評価のために、機能的抗体を、偏りのないアルゴリズムを使用して選択された４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて検証されたｈＳＢＡにおいて分析し、ＰｆｉｚｅｒのＭｎＢ血清殺菌アッセイ（ＳＢＡ）株プールから、調節入力に基づいて疫学的有病率について調整した。ｈＳＢＡは、標的髄膜炎菌株の補体依存的破壊を開始させるヒト血清中の抗体を測定するものである。ワクチン成分抗原に対して異種であるＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）バリアントをそれぞれ発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株、ＰＭＢ８０（Ａ２２）、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を、この試験における免疫原性の評価項目の決定のためにｈＳＢＡにおいて使用した。１回目の試験ワクチン接種前、２回目の試験ワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目の試験ワクチン接種の１および６カ月後に全対象から得られた血清を、これらのアッセイにおいて使用した。一次分析のために、２つの一次試験株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）を、対象の半分についてそれぞれの採血時点で試験し（両群において）、他の２つの一次試験株（ＰＭＢ２００１［Ａ５６］およびＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）を、対象の残りの半分についてそれぞれの採血時点で試験した。

【0296】

主要免疫原性評価項目は、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関して定量下限（ＬＬＯＱ）以上のｈＳＢＡ力価を示す２４カ月齢以上〜４歳未満（試験登録時）の対象の割合；および二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す４歳以上〜１０歳未満（試験登録時）の対象の割合であった。

【0297】

副次的免疫原性評価項目は、
・試験登録時に２４カ月齢以上〜１０歳未満の健康な対象における：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・試験登録時に２４カ月齢以上〜４歳未満の健康な対象、試験登録時に４歳以上〜１０歳未満の健康な対象、および組み合わせた年齢層における：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・二価ＲＬＰ２０８６を用いるベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後の４種の一次試験株のそれぞれに関して１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合。
・二価ｒＬＰ２０８６を用いるベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後の４種の一次試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡのＧＭＴ
であった。

【0298】

副次的免疫原性評価項目を、評価可能な免疫原性集団とｍＩＴＴ集団の両方についてまとめた。以下の探索的評価項目を使用して、試験登録時に２４カ月齢以上〜４歳未満の健康な対象、試験登録時に４歳以上〜１０歳未満の健康な対象、および組み合わせた年齢層における応答について記述した：
・それぞれの適用可能な採血時点での１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血時点での４つの一次株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴ。
・ベースライン時から、４つの一次試験株のそれぞれに関する二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍の増加を達成する対象の割合：
・検出限界（ＬＯＤ）より下のベースラインｈＳＢＡ力価または１：４未満のｈＳＢＡ力価を示す対象について、４倍の応答を、１：１６以上またはＬＬＯＱのｈＳＢＡ力価（いずれか力価の高い方）と定義した。
・ＬＯＤ以上（すなわち、１：４以上のｈＳＢＡ力価）かつＬＬＯＱ未満のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍以上の応答を、ＬＬＯＱの４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。
・ＬＬＯＱ以上のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、ベースライン力価の４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。

【0299】

結果
対象：２４カ月齢以上〜１０歳未満の合計４００人の対象を、この試験において無作為化した。無作為化された対象のうち、２９４人の対象は、第１群（二価ｒＬＰ２０８６）にあり、１０６人の対象は第２群（ＨＡＶ／食塩水）にあった。２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の年齢層のそれぞれにおいて無作為化された２００人の対象が存在していた。

【0300】

４００人の無作為化された対象のうち、３９０人（９７．５％）の対象が、試験のワクチン接種期（最後の試験ワクチン接種の１カ月後まで）を完了した。合計３８７人（９６．８％）の対象が、６カ月の追跡電話接触を完了した。ワクチン接種期および６カ月の追跡電話接触を完了した対象のみが、試験を完了したと考えられた。全体として、合計３７５人（９３．８％）の対象が、全ての試験手順を完了し、完了は各年齢層において類似していた。合計３７１人（９２．８％）の対象が評価可能な免疫原性集団に含まれ、２９人（７．３％）の対象が評価可能な免疫原性集団から除外された。４００人の無作為化された対象は全て、ｍＩＴＴ集団に含まれていた。

【0301】

免疫原性の結果：この試験の主目的は、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の健康な対象において３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡにより測定された二価ｒＬＰ２０８６に対する対象の免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層（２４カ月齢以上〜１０歳未満）に関する免疫応答の記述が、副次的目的であった。主目的のための評価項目は、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する各年齢層における対象の割合であった。

【0302】

３用量後に、２４カ月齢以上〜４歳未満の対象については８０．０％〜１００．０％および４歳以上〜１０歳未満の対象については７８．３％〜１００．０％の範囲の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ（Ａ５６、Ｂ２４およびＢ４４については１：８；Ａ２２については１：１６）以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合によって確認されたように、二価ｒＬＰ２０８６の第３の用量の１カ月後の２４カ月齢以上〜１０歳未満の小児について、ロバストな免疫応答が観察された。３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す組み合わせた年齢層における対象の割合は、７９．１％〜１００．０％であった。これらの知見は、大きなＧＭＴ（１９．１〜１９１の範囲）によって、また、両年齢層にわたってベースラインと比較して、二価ｒＬＰ２０８６の３用量後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対して１：４以上（８１．５％〜１００％）または１：１６以上（７５．４％〜１００％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合において、さらに支持される。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までにｈＳＢＡの４倍以上の上昇を達成する組み合わせた年齢層における対象の割合は、７６．９％〜９３．５％であった。

【0303】

試験の副次的目的は、２つの年齢層および組み合わせた年齢層について、ＬＬＯＱ以上の応答、規定のｈＳＢＡ力価およびｈＳＢＡ ＧＭＴによって評価される、二価ｒＬＰ２０８６の第２の用量の１カ月後の免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層については、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、４８．５％〜１００．０％の範囲であり、若い方の年齢層と年上の年齢層の間で意義のある差異は観察されなかった。これらの知見は、ＧＭＴの増加（１１．１〜９６．６の範囲）を示す組み合わせた年齢層によって、また、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対してベースラインと比較して二価ｒＬＰ２０８６の２用量後に１：４以上（５７．７％〜１００％）または１：１６以上（４３．１％〜１００％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合においてさらに支持される。ＧＭＴは、２つの年齢層の間で類似していた。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてベースラインから２回目のワクチン接種の１カ月後までに４倍以上のｈＳＢＡの上昇を達成する組み合わせた年齢層における対象の割合は、４２．３％〜９１．０％であった。

【0304】

また、組み合わせた年齢層について３回目のワクチン接種の１カ月後の７９．１％〜１００％から、３回目のワクチン接種の６カ月後の１０．４％〜８２．４％まで低下するＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合を用いて、二価ｒＬＰ２０８６の第３の用量の６カ月後に免疫持続性を評価した。年上の小児が若い方の小児よりもＬＬＯＱ以上の力価を達成する対象の割合が高かった（４６％、９５％ＣＩ３３．４、５９．１と、１９％、９５％ＣＩ１０．２、３０．９）、Ａ２２を除いて、２つの年齢層間の差異は観察されなかった。しかしながら、ＬＬＯＱ以上の力価のワクチン接種前のベースライン率は、Ａ２２については年上の年齢層においてより高かった（１３．６％と４．４％）。同様の傾向は、３回目のワクチン接種の６カ月後に、１３．３％〜８４．０％の範囲の１：４以上の防御ｈＳＢＡ力価および５．１〜３１．３の範囲のＧＭＴを示す対象の割合について、組み合わせた年齢層についても観察された。

【0305】

まとめると、０、２および６カ月のスケジュール上で３用量として与えられる二価ｒＬＰ２０８６は、２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児の間でロバストな免疫応答を惹起し、第３の用量後に高い割合の対象においてｈＳＢＡによって測定された場合、防御抗体力価が達成される。２４カ月齢以上〜４歳未満の幼児と、４歳以上〜１０歳未満の小児との間で、臨床的に意義のある差異は観察されなかった。抗体応答は、第３の用量の６カ月後に低下するが、ワクチン接種前のベースライン率よりは高く維持される。

【0306】

結論：結論として、０、２、および６カ月のスケジュールの３用量シリーズで２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児に投与される二価ｒＬＰ２０８６は、第２および第３の用量後に大部分の対象によるロバストな免疫応答を惹起し、ｈＳＢＡにより測定された場合、第３の用量後に防御抗体力価が達成される。ｈＳＢＡ力価は、３用量シリーズの６カ月後に低下した。この試験において投与されたワクチンは、２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児に関する許容し得る安全性プロファイルで安全かつ良好に忍容された。

【0307】

（実施例１９）
２４カ月齢以上〜１０歳未満の健康な対象における、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ二価組換えリポタンパク質２０８６ワクチン（二価ｒＬＰ２０８６、すなわち、現在はＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）ワクチン）の免疫原性、安全性、および忍容性について記述するための第２相、無作為化、対照薬、観察者盲検（Ｂ１９７１０１７−ＣＳＲ）
二価ｒＬＰ２０８６の初期製剤（ポリソルベート８０を含まなかった）を、成人、青少年、小児、および幼児において、これらの集団で示された満足のいく安全性、忍容性、および免疫原性プロファイルに関して第１相試験において評価した。初期製剤は、２００μｇの用量まで許容し得る安全性プロファイルを有し、ｈＳＢＡによって測定された場合、免疫原性であることが示された。１８〜３６カ月の幼児において、初期製剤を、２０μｇ、６０μｇ、および２００μｇの用量レベルで試験した（試験６１０８Ａ１−５０２−ＡＵ）。６１０８Ａ１−５０２−ＡＵ試験において、それぞれの用量群における局部反応の頻度は、一般的には、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）ワクチン／プラセボ群におけるものよりも高かったが、多くの事例では、反応は軽度または中等度の重症度のものであった。発熱の発生率は、用量レベルの増加と共に増大する傾向があった。いずれかの用量後に発熱を報告する対象の割合は、２０μｇ群では３６．４％、６０μｇ群では３９．１％、および２００μｇ群では５４．５％であった。それぞれのワクチン群における他の全身事象の頻度は、一般的には、ＨＡＶ／プラセボのものと同等であった。大部分の対象は、３回目のワクチン接種後にＭｎＢ株に関するｈＳＢＡ応答を有していた。

【0308】

初期製剤と比較して、薬物物質の製造プロセスおよび薬物製品の製剤化は、製造のための拡大可能性を増加させ、ワクチンの最終製剤の長期安定性を確保するように設計された増強（ポリソルベート８０の添加を含む）を受けていた。二価ｒＬＰ２０８６の最終製剤を用いる試験に参加する成人および青少年に由来する安全性データは、初期製剤の安全性と一致する。局部反応および全身事象は、一般的には全ての年齢群において軽度または中等度の重症度であった。重篤な事象は相対的に稀であった。さらに、第３の用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、６カ月〜４８カ月の範囲の免疫持続性試験６１０８Ａ１−１００２−ＡＵ、６１０８Ａ１−２００１、およびＢ１９７１０３３に由来する追跡有害事象（ＡＥ）データは、安全性に関する懸念を生じなかった。重篤な有害事象（ＳＡＥ）は稀であり、多くは試験ワクチンと関連しないと考えた。ＡＥに起因する試験中止は数件であった。

【0309】

２つの第２相試験（Ｂ１９７１０１７およびＢ１９７１０３５）を行って、ワクチンの最終製剤を用いて小児（１２カ月齢〜１０歳未満）におけるワクチンの免疫原性および安全性を探索した。Ｂ１９７１０３５試験は進行中であり、１２カ月齢〜２４カ月齢未満の健康な幼児間での２つの異なる用量レベル（６０μｇおよび１２０μｇ）の安全性、忍容性、および免疫原性を評価するように設計される。この試験（Ｂ１９７１０１７）は、０、２、および６カ月のスケジュールの一部として２４カ月齢以上〜１０歳未満の健康な対象に投与された１２０μｇの用量レベル（最終製剤）で二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性、安全性、および忍容性を評価した。約４００人の対象を、３：１の比で２群のうちの１群に無作為化するように計画した。第１群は、０カ月（訪問１）で二価ｒＬＰ２０８６を受けた後、２および６カ月でその後のワクチン接種を受けた。第２群は、０カ月（訪問１）および６カ月でＨＡＶワクチンを受け、２カ月で食塩水を用いる注射を受けた。無作為化を階層化して、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の年齢層に、確実に同数の対象が含まれるようにした。これ（Ｂ１９７１０１７）は、約４００人の対象が３：１の比で２群のうちの１群に無作為に割り当てられるように計画した第２相、無作為化、対照薬、観察者盲検、多施設試験であった。第１群は、０カ月（訪問１）で二価ｒＬＰ２０８６を受けた後、２および６カ月でその後のワクチン接種を受けた。第２群は、０カ月（訪問１）および６カ月でライセンス供与された小児ＨＡＶワクチンを受け、盲検を維持するために２カ月で食塩水を用いる注射を受けた。無作為化を年齢によって階層化して、２４カ月齢以上〜４歳未満の年齢層および４歳以上〜１０歳未満の年齢層に確実に同数の対象が含まれるようにした。試験を、２４カ月齢以上〜４歳未満の約２００人の対象および４歳以上〜１０歳未満の約２００人の対象を登録するように計画した。

【0310】

この試験は、０、２および６カ月のスケジュールの一部として２４カ月齢以上〜１０歳未満の健康な対象に投与された１２０μｇの用量レベルでの二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性、安全性、および忍容性を評価した。追跡訪問を、それぞれのワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の６カ月後に行って、安全性データを収集し、および／または血液試料を取得した。対象は、最大１３カ月間、試験に参加した。二価ｒＬＰ２０８６（滅菌緩衝化等張性懸濁液中、アルミニウムに吸着された、それぞれ６０μｇの精製されたサブファミリーＡおよびサブファミリーＢのｒＬＰ２０８６タンパク質を含有する）を、注射のために０．５ｍＬ用量で提供した。

【0311】

ライセンス供与された小児ＨＡＶワクチンは、注射のために０．５ｍＬ用量で提供された。第１群について、２４カ月齢以上〜４歳未満の対象の５９．３１％および４歳以上〜１０歳未満の対象の５７．０５％が、同時処置を受けた。第２群については、２４カ月齢以上〜４歳未満の対象の５８．１８％および４歳以上〜１０歳未満の対象の５２．９４％が同時処置を受けた。試験中に受けた最も一般的な同時処置は、イブプロフェン、パラセタモール、およびアモキシシリンであった。

【0312】

二価ｒＬＰ２０８６血清殺菌アッセイ−一次試験株
二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の評価のために、機能的抗体を、偏りのないアルゴリズムを使用して選択された４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて検証されたｈＳＢＡにおいて分析し、ＰｆｉｚｅｒのＭｎＢ血清殺菌アッセイ（ＳＢＡ）株プールから、調節入力に基づいて疫学的有病率について調整した。ｈＳＢＡは、標的髄膜炎菌株の補体依存的破壊を開始させるヒト血清中の抗体を測定するものである。ワクチン成分抗原に対して異種であるｆＨＢＰバリアントをそれぞれ発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株、ＰＭＢ８０（Ａ２２）、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を、この試験における免疫原性の評価項目の決定のためにｈＳＢＡにおいて使用した。１回目の試験ワクチン接種前、２回目の試験ワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目の試験ワクチン接種の１および６カ月後に全対象から得られた血清を、これらのアッセイにおいて使用した。

【0313】

一次分析のために、２つの一次試験株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）を、対象の半分についてそれぞれの採血時点で試験し（両群において）、他の２つの一次試験株（ＰＭＢ２００１［Ａ５６］およびＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）を、対象の残りの半分についてそれぞれの採血時点で試験した。

【0314】

免疫原性分析
免疫原性分析のための仮説試験は存在しなかった。推定手法を使用して、主要、副次的、および探索目的を評価した。２回目および３回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の６カ月後に定量下限（ＬＬＯＱ）以上のｈＳＢＡ力価を達成する各群の対象の割合を、それぞれの年齢層および組み合わせた年齢層について、両側９５％正確信頼区間（ＣＩ）と共に、各試験株について計算した。

【0315】

主要免疫原性評価項目
主要免疫原性評価項目は、
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す２４カ月齢以上〜４歳未満（試験登録時）の対象の割合
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す４歳以上〜１０歳未満（試験登録時）の対象の割合
であった。

【0316】

副次的免疫原性評価項目
副次的免疫原性評価項目は、
・試験登録時に２４カ月齢以上〜１０歳未満の健康な対象における：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・試験登録時に２４カ月齢以上〜４歳未満の健康な対象、試験登録時に４歳以上〜１０歳未満の健康な対象、および組み合わせた年齢層における：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・二価ｒＬＰ２０８６を用いるベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後の４種の一次試験株のそれぞれに関して１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合。
・二価ｒＬＰ２０８６を用いるベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後の４種の一次試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡのＧＭＴ
であった。

【0317】

探索的免疫原性評価項目
探索的評価項目については、４種全部の一次ＭｎＢ試験株に対して試験を実施しなかった。その代わりに、ＰＭＢ８０（Ａ２２）またはＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではなく、株ＰＭＢ２００１（Ａ５６）およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を使用して、対象の５０％を試験した。残りの５０％の対象を、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）またはＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）ではなく、株ＰＭＢ８０（Ａ２２）またはＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）を使用して試験した。以下で特定される全ての探索的評価項目は、二価ｒＬＰ２０８６を受けた全対象からのｈＳＢＡの結果に適用されていてもよく、示された時点で適切な株について試験されていてもよい。

【0318】

以下の探索的評価項目を使用して、試験登録時に２４カ月齢以上〜４歳未満の健康な対象、試験登録時に４歳以上〜１０歳未満の健康な対象、および組み合わせた年齢層における応答について記述した：
・それぞれの適用可能な採血時点で１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血時点での４種の一次株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴ。
・４種の一次試験株のそれぞれに関して、ベースラインから、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後までにｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍の増加を達成する対象の割合：
・検出限界（ＬＯＤ）より下のベースラインｈＳＢＡ力価または１：４未満のｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、１：１６以上またはＬＬＯＱのｈＳＢＡ力価（いずれか力価の高い方）と定義した。
・ＬＯＤ以上（すなわち、１：４以上のｈＳＢＡ力価）かつＬＬＯＱ未満のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、ＬＬＯＱの４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。
・ＬＬＯＱ以上のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、ベースライン力価の４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。

【0319】

分析の方法
免疫原性の一次分析は、それぞれの年齢層について、および組み合わせた年齢層における、両側９５％正確信頼区間ＣＩと共に、各試験株について３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する各群の対象の割合に関する見積もりを含んでいた。

【0320】

全てのバイナリー評価項目（主要評価項目を含む）を、厳密法を使用して両側９５％ＣＩと共にまとめた。ｈＳＢＡの結果に関するＧＭＴも、９５％ＣＩと共にまとめた。

【0321】

ＬＬＯＱは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については１：１６、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１：８、ＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については１：８、およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については１：８であった。

【0322】

ＧＭＴの算出のために、ＬＬＯＱより下のｈＳＢＡ結果を、一次分析については０．５ｘＬＬＯＱと設定した。

【0323】

主要評価項目の分析
主目的のための一次分析は、評価可能な免疫原性集団に基づくものであった。３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する各群の対象の割合を、両側９５％正確ＣＩと共に各試験株について計算した。２つの主目的に対処するために、これらのデータを、２つの年齢層：２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満について提示する。

【0324】

全てのバイナリー評価項目（主要評価項目を含む）を、厳密法を使用して両側９５％ＣＩと共にまとめた。ｈＳＢＡの結果に関するＧＭＴも、９５％ＣＩと共にまとめた。

【0325】

一次分析の解釈を支援するために、ｍＩＴＴ集団に基づく同一の分析を行った。

【0326】

副次的評価項目および探索的評価項目の分析
以下の分析は、副次的および探索的免疫原性目的に対処するものであった：
・２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の６カ月後に４種の一次株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合を、評価可能な免疫原性およびｍＩＴＴ集団において、２つの年齢層において別々に、および組み合わせて分析した。
・ベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後に４種の一次試験株のそれぞれについて１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合を、評価可能な免疫原性およびｍＩＴＴ集団において、２つの年齢層において別々に、および組み合わせて分析した。
・ベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、ならびに３回目のワクチン接種の１および６カ月後の４種の一次試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴを、評価可能な免疫原性およびｍＩＴＴ集団において、２つの年齢層において別々に、および組み合わせて分析した。

【0327】

探索的評価項目を、評価可能な免疫原性集団とｍＩＴＴ集団の両方についてそれぞれの適用可能な時点に関して、２つの年齢層において別々に、および組み合わせてまとめた。

【0328】

逆累積分布曲線
経験的逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を、４種の一次株のそれぞれについて、およびそれぞれのサンプリング時点で、評価可能な免疫原性集団について図式的に評価した。

【0329】

免疫原性評価
分析された集団
評価可能な免疫原性集団は、免疫原性分析のための一次分析集団であった。ｍＩＴＴ集団を、免疫原性分析のための支援的免疫原性集団として使用した。

【0330】

合計３７１人（９２．８％）の対象が評価可能な免疫原性集団に含まれ、２９人（７．３％）の対象が評価可能な免疫原性集団から除外された。対象は、１つを超える理由のため免疫原性集団から除外された。合計２１人（５．３％）の対象は、彼らが第１の用量のワクチンの前または３回目のワクチン接種後に引き出されたベースライン血液を有していなかったため、１５人（３．８％）の対象が、いずれかの訪問時に妥当かつ確定的なアッセイ結果を有していなかったため、１１人（２．８％）の対象が、３回目のワクチン接種のための訪問の前もしくは１カ月後に試験に関して適格ではなかった、もしくは不適格になったため、１１人（２．８％）の対象が、全てのワクチン接種訪問時に無作為化されたものとしてワクチンを受けなかったため、および４人（１．０％）の対象が、医学的モニターによって同定された重要なプロトコールの逸脱を有していたため、評価可能な免疫原性集団から除外された。全体として、２つの試験群および２つの年齢層は、評価可能な免疫原性集団から除外された対象のパーセンテージに関して同等であった。

【0331】

全部で４００人の無作為化された対象が、ｍＩＴＴ集団に含まれていた。

【0332】

免疫原性の結果
主要免疫原性評価項目、副次的免疫原性評価項目、および探索的免疫原性評価項目に関する分析の結果を、以下のセクションに提供する。

【0333】

主要および副次的評価項目
ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合
主要免疫原性評価項目は、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、２４カ月齢以上〜４歳未満（試験登録時）、および４歳以上〜１０歳未満（試験登録時）の対象の割合であった。二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、組み合わせた年齢層（試験登録時）における全対象の割合と共に、二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後に、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、個別の、および組み合わせた年齢層における対象の割合が、副次的評価項目であった。

【0334】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、各年齢層における対象の割合を、評価可能な免疫原性集団について表２０に提示する。

【0335】

ベースライン時にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、４．４％および１３．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１．５％および１５．４％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、３．０％および７．５％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、両年齢層について０．０％であった。全体として、ベースライン時にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、組み合わせた年齢層における対象の割合は、第１群において、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９．０％、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については８．３％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については５．２％、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については０．０％であった。

【0336】

２回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、５９．４％および７８．８％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、両年齢層について１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、４９．２％および６５．１％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、５７．１％および４０．３％であった。

【0337】

全体として、２回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、組み合わせた年齢層における対象の割合は、第１群において、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については６９．２％、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については５７．０％、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については４８．５％であった。

【0338】

３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、８３．８％および９１．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、両年齢層について１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、８５．７％および９２．１％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、８０．０％および７８．３％であった。

【0339】

全体として、３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、組み合わせた年齢層における対象の割合は、第１群において、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８７．４％、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８８．９％、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７９．１％であった。一般に、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す第２群の対象の割合は、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。任意の時点でＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、組み合わせた年齢層における対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については４．４％〜８．５％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１４．９％〜２０．９％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については０．０％〜８．９％；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については各時点で０．０％であった。

【0340】

ｍＩＴＴ集団に関する結果は、評価可能な免疫原性集団のものと類似していた。

【0341】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合のサブグループ分析を、性別、人種、および国によって評価可能な免疫原性集団について提示する。実施したサブグループ分析において、臨床的に重要な差異は観察されなかった。

【0342】

免疫持続性：３回目のワクチン接種の６カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合
二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の６カ月後に、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す、２４カ月齢以上〜４歳未満、４歳以上〜１０歳未満、および組み合わせた年齢層（２４カ月齢以上〜１０歳未満）の対象の割合が、副次的免疫原性評価項目であった。それぞれの年齢層における４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合を、評価可能な免疫原性集団について表２０に提示する。

【0343】

一般に、３回目のワクチン接種の６カ月後に両方の年齢層における第１群の対象間で観察された４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合が低下した。

【0344】

３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までの、２４カ月齢以上〜４歳未満の対象について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、８３．８％から１９．０％に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１００．０％から８０．３％に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、８５．７％から９．２％に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、８０．０％から１２．１％に低下した。

【0345】

３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までの、４歳以上〜１０歳未満の対象について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、９１．０％から４６．０％に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１００．０％から８４．３％に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、９２．１％から２１．９％に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、７８．３％から８．７％に低下した。

【0346】

全体として、３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までの、組み合わせた年齢層について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、８７．４％から３２．５％に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１００．０％から８２．４％に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、８８．９％から１５．５％に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、７９．１％から１０．４％に低下した。

【0347】

一般に、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す第２群の対象の割合は、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。

【0348】

【表20-1】

【0349】

【表20-2】

【0350】

ｈＳＢＡ ＧＭＴ。二価ｒＬＰ２０８６を用いる、ベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、および３回目のワクチン接種の１カ月後の、４種の一次試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴが副次的評価項目であった。表２１は、評価可能な免疫原性集団の４種の一次ＭｎＢ株に関するｈＳＢＡ ＧＭＴを提供する。

【0351】

２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象について、ベースライン時のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、８．３および９．１；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、４．１および５．８；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、４．３および４．６；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については両年齢層において４．０であった。

【0352】

２４カ月齢以上〜１０歳未満の第１群の対象について、ベースライン時のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、８．７；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、４．９；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、４．５；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については４．０であった。

【0353】

２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象について、２回目のワクチン接種の１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、１７．４および２３．１；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１０３．８および９０．０；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、９．１および１３．７；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、１７．１および８．２であった。

【0354】

２４カ月齢以上〜１０歳未満の第１群の対象について、２回目のワクチン接種の１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、２０．１、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、９６．６；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、１１．１；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については１１．７であった。

【0355】

２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象について、３回目のワクチン接種の１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、３３．７および３８．２；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１７５．６および１９１．０；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、１９．１および２６．８；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、４３．６および３６．５であった。

【0356】

２４カ月齢以上〜１０歳未満の第１群の対象について、３回目のワクチン接種の１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、３５．８、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１８３．３；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、２２．６；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については３９．８であった。

【0357】

一般に、第２群の対象に関するｈＳＢＡ ＧＭＴは、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。組み合わせた年齢層について、任意の時点でのｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、８．６〜８．９；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、５．６〜６．０；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、４．０〜４．８；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については各時点で４．０であった。

【0358】

【表21-1】

【0359】

【表21-2】

【0360】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴのサブグループ分析を、性別、人種、および国によって評価可能な免疫原性集団について、ならびにｍＩＴＴ集団について提示する。実施したサブグループ分析において臨床的に重要な差異は観察されなかった。

【0361】

免疫持続性：ｈＳＢＡ ＧＭＴ
二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の６カ月後の４種の一次試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴが、副次的評価項目であった。表２１は、評価可能な免疫原性集団の４種の一次ＭｎＢ株に関するｈＳＢＡ ＧＭＴを提供する。全体として、３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までに、両年齢層において第１群の対象について４種の一次試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴの低下が観察された。

【0362】

２４カ月齢以上〜４歳未満の第１群の対象について、３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までに、ｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、３３．７から１０．９に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１７５．６から２７．０に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、１９．１から５．１に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については４３．６から５．２に低下した。

【0363】

４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象について、３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までに、ｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、３８．２から１４．２に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１９１．０から３５．７に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、２６．８から６．２に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については３６．５から５．０に低下した。

【0364】

２４カ月齢以上〜１０歳未満の第１群の対象について、３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までに、ｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、３５．８から１２．４に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１８３．３から３１．３に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、２２．６から５．６に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については３９．８から５．１に低下した。

【0365】

一般に、第２群の対象に関するｈＳＢＡ ＧＭＴは、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。

【0366】

規定のｈＳＢＡ力価
二価ｒＬＰ２０８６を用いる、ベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、および３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次試験株のそれぞれに関して１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を達成する、２４カ月齢以上〜４歳未満、４歳以上〜１０歳未満、および組み合わせた年齢層の対象の割合が、副次的免疫原性評価項目であった。

【0367】

４種の一次ＭｎＢ株に関して規定のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合を、評価可能な免疫原性集団について評価した。

【0368】

１：４以上および１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成した対象を、以下に記載する。１：４以上のｈＳＢＡ力価は、ＩＭＤに対する防御の相関であると広く認識されている；しかしながら、１：１６以上のより保存的なｈＳＢＡ力価は、ワクチン接種前に血清陰性の対象に関する４倍のワクチン効果を示すレベルと考えられた。

【0369】

ベースライン時に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、５．９％および１９．７％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、３．０％および１８．５％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、４．５％および９．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、０．０％および１．４％であった。ベースライン時に１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、４．４％および１３．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１．５％および１５．４％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、３．０％および６．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、両年齢層について０．０％であった。

【0370】

ベースライン時に１：４以上および１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す組み合わせた年齢層における第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、１２．７％および９．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１０．６％および８．３％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、６．７％および４．５％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、０．７％および０．０％であった。

【0371】

２回目のワクチン接種の１カ月後に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、６５．６％および８３．３％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、両年齢層について１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、５３．８％および６８．３％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、４９．３％および６６．７％であった。２回目のワクチン接種の１カ月後に１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、５９．４％および７８．８％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、９８．５％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、４３．１％および５８．７％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、３１．３％および５５．６％であった。

【0372】

２回目のワクチン接種の１カ月後に１：４以上および１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す組み合わせた年齢層における第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、７４．６％および６９．２％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１００．０％および９９．２％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、６０．９％および５０．８％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、５７．７％および４３．１％であった。

【0373】

３回目のワクチン接種の１カ月後に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、８６．８％および９８．５％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、各年齢層について１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、９０．５％および９５．２％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、８１．５％および８２．６％であった。３回目のワクチン接種の１カ月後に１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す第１群における、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の対象は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、８３．８％および９１．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、各年齢層について１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、８１．０％および８８．９％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、８１．５％〜８２．６％および８０．０％〜７５．４％であった。

【0374】

３回目のワクチン接種の１カ月後に１：４以上および１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す組み合わせた年齢層における、第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、９２．６％および８７．４％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、９２．９％および８４．９％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、８２．１％および７７．６％であった。

【0375】

一般に、規定のｈＳＢＡ力価を達成する第２群の対象の割合は、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。

【0376】

ｍＩＴＴ集団に関する結果は、評価可能な免疫原性集団のものと類似していた。

【0377】

免疫持続性：規定のｈＳＢＡ力価
二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の６カ月後に４種の一次試験株のそれぞれに関して１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を達成する、２４カ月齢以上〜４歳未満、４歳以上〜１０歳未満、および組み合わせた年齢層の対象の割合が、副次的免疫原性評価項目であった。４種の一次ＭｎＢ株に関して規定のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合を、評価可能な免疫原性集団について評価した。

【0378】

全体として、３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までに、規定のｈＳＢＡ力価を達成した両年齢層における第１群の対象の割合の低下が観察された。

【0379】

３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までの、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象について、１：４以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、８６．８％から２５．４％および９８．５％から５５．６％に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１００．０％から８２．０％および１００．０％から８５．７％に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、９０．５％から１３．８％および９５．２％から２６．６％に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、８１．５％から１３．６％および８２．６％から１３．０％に低下した。

【0380】

３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までの、組み合わせた年齢層における第１群の対象について、１：４以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、９２．６％から４０．５％に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１００．０％から８４．０％に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、９２．９％から２０．２％に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、８２．１％から１３．３％に低下した。

【0381】

３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までの、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象について、１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、８３．８％から１９．０％および９１．０％から４６．０％に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１００．０％から７７．０％および１００．０％から８２．９％に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、８１．０％から９．２％および８８．９％から２０．３％に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、８０．０％から９．１％および７５．４％から７．２％に低下した。

【0382】

３回目のワクチン接種の１カ月後から３回目のワクチン接種の６カ月後までの、組み合わせた年齢層における第１群の対象について、１：１６以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、８７．４％から３２．５％に；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、１００．０％から８０．２％に；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、８４．９％から１４．７％に；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、７７．６％から８．１％に低下した。

【0383】

一般に、規定のｈＳＢＡ力価を達成する第２群の対象の割合は、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。

【0384】

探索的免疫原性評価項目
一部の探索的免疫原性評価項目の分析は、対象の半分については、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）株、ならびに残りの半分については、ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）株に関するｈＳＢＡの結果に基づくものであった。分析された探索的評価項目は、ベースラインからの４倍以上の増加を示すｈＳＢＡ力価であった。

【0385】

ｈＳＢＡ力価のベースラインからの４倍の増加
表２２は、４種の一次試験株に関する、ベースラインからの４倍以上の上昇を示すｈＳＢＡ力価を示す対象の割合を提示する。

【0386】

ベースラインから２回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、５６．３％および６３．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、１００．０％および８２．１％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、４３．１％および５４．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、５４．０％および３１．３％であった。

【0387】

ベースラインから２回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する組み合わせた年齢層における第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、６０．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、９１．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、４８．４％；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、４２．３％であった。

【0388】

ベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、７９．４％および７７．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、９８．５％および８８．７％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、７７．８％および８２．５％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、７８．５％および７５．４％であった。

【0389】

ベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する組み合わせた年齢層における第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、７８．５％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、９３．５％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、８０．２％；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、７６．９％であった。

【0390】

ベースラインから３回目のワクチン接種の６カ月後までのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、それぞれ、１９．０％および３６．５％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、それぞれ、７５．４％および６４．３％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、それぞれ、６．２％および１７．２％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、それぞれ、７．６％および７．２％であった。

【0391】

ベースラインから３回目のワクチン接種の６カ月後までのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する組み合わせた年齢層における第１群の対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については、２７．８％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については、６９．５％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、１１．６％；およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については、７．４％であった。

【0392】

同様の結果が、ｍＩＴＴ集団についても観察された。

【0393】

【表22-1】

【0394】

【表22-2】

【0395】

さらなる免疫原性分析
一次ＭｎＢ試験株に関する欠測ｈＳＢＡデータの評価
妥当かつ確定的なｈＳＢＡ結果のみを、全ての免疫原性分析に含有させた。ｈＳＢＡの結果は、以下の理由のため、免疫原性分析から除外された（または欠測であると考えた）：
・対象の試験中止。
・対象は試験のための血液試料を有していなかったが、試験を中止しなかった。
・血液の量がアッセイを実施するには不十分であった。これを、アッセイ結果に関して「十分でない量」と入力した。
・試料を試験したが、力価の数値を確実に決定することができなかった。これを、アッセイ結果に関して「不確定」と入力した。

【0396】

逆累積分布曲線
組み合わせた年齢層に関して、４種の一次株のそれぞれについて、およびそれぞれのサンプリング時点で、ｈＳＢＡ応答（ＬＬＯＱ以上）を示す対象の割合のＲＣＤＣを評価した。２４カ月齢以上〜４歳未満の対象に関して、４種の一次株のそれぞれについて、およびそれぞれのサンプリング時点でのＲＣＤＣも評価した。４歳以上〜１０歳未満の対象に関して、４種の一次株のそれぞれについて、およびそれぞれのサンプリング時点でのＲＣＤＣも評価した。

【0397】

ＲＣＤＣにより、両年齢層における対象の大部分が、二価ｒＬＰ２０８６の第２および第３の用量の１カ月後に一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対する測定可能なｈＳＢＡ応答を示すことが示された。

【0398】

免疫原性に関する結論
この試験の主目的は、２４カ月齢以上〜４歳未満および４歳以上〜１０歳未満の健康な対象において３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡにより測定された二価ｒＬＰ２０８６に対する対象の免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層（２４カ月齢以上〜１０歳未満）に関する免疫応答の記述が、副次的目的であった。主目的のための評価項目は、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する各年齢層における対象の割合であった。

【0399】

３用量後に、２４カ月齢以上〜４歳未満の対象については８０．０％〜１００．０％および４歳以上〜１０歳未満の対象については７８．３％〜１００．０％の範囲の４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ（Ａ５６、Ｂ２４およびＢ４４については１：８；Ａ２２については１：１６）以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合によって確認されたように、二価ｒＬＰ２０８６の第３の用量の１カ月後の２４カ月齢以上〜１０歳未満の小児について、ロバストな免疫応答が観察された。３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す組み合わせた年齢層における対象の割合は、７９．１％〜１００．０％であった。これらの知見は、大きなＧＭＴ（１９．１〜１９１の範囲）によって、また、両年齢層にわたってベースラインと比較して、二価ｒＬＰ２０８６の３用量後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対して１：４以上（８１．５％〜１００％）または１：１６以上（７５．４％〜１００％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合において、さらに支持される。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までにｈＳＢＡの４倍以上の上昇を達成する組み合わせた年齢層における対象の割合は、７６．９％〜９３．５％であった。

【0400】

試験の副次的目的は、２つの年齢層および組み合わせた年齢層について、ＬＬＯＱ以上の応答、規定のｈＳＢＡ力価およびｈＳＢＡ ＧＭＴによって評価される、二価ｒＬＰ２０８６の第２の用量の１カ月後の免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層については、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、４８．５％〜１００．０％の範囲であり、若い方の年齢層と年上の年齢層の間で意義のある差異は観察されなかった。これらの知見は、ＧＭＴの増加（１１．１〜９６．６の範囲）を示す組み合わせた年齢層によって、また、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対してベースラインと比較して二価ｒＬＰ２０８６の２用量後に１：４以上（５７．７％〜１００％）または１：１６以上（４３．１％〜１００％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合においてさらに支持される。ＧＭＴは、２つの年齢層の間で類似していた。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてベースラインから２回目のワクチン接種の１カ月後までに４倍以上のｈＳＢＡの上昇を達成する組み合わせた年齢層における対象の割合は、４２．３％〜９１．０％であった。

【0401】

また、組み合わせた年齢層について３回目のワクチン接種の１カ月後の７９．１％〜１００％から、３回目のワクチン接種の６カ月後の１０．４％〜８２．４％まで低下するＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合を用いて、二価ｒＬＰ２０８６の第３の用量の６カ月後に免疫持続性を評価した。年上の小児が若い方の小児よりもＬＬＯＱ以上の力価を達成する対象の割合が高かった（４６％、９５％ＣＩ３３．４、５９．１と、１９％、９５％ＣＩ１０．２、３０．９）、Ａ２２を除いて、２つの年齢層間の差異は観察されなかった。しかしながら、ＬＬＯＱ以上の力価のワクチン接種前のベースライン率は、Ａ２２については年上の年齢層においてより高かった（１３．６％と４．４％）。同様の傾向は、３回目のワクチン接種の６カ月後に、１３．３％〜８４．０％の範囲の１：４以上の防御ｈＳＢＡ力価および５．１〜３１．３の範囲のＧＭＴを示す対象の割合について、組み合わせた年齢層についても観察された。

【0402】

まとめると、０、２および６カ月のスケジュール上で３用量として与えられる二価ｒＬＰ２０８６は、２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児の間でロバストな免疫応答を惹起し、第３の用量後に高い割合の対象においてｈＳＢＡによって測定された場合、防御抗体力価が達成される。２４カ月齢以上〜４歳未満の幼児と、４歳以上〜１０歳未満の小児との間で、臨床的に意義のある差異は観察されなかった。抗体応答は、第３の用量の６カ月後に低下するが、ワクチン接種前のベースライン率よりは高く維持される。

【0403】

考察および全体の結論
免疫原性に関する考察
２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児に与えられた二価ｒＬＰ２０８６の３用量レジメン（０、２、および６カ月のスケジュール）のこの第２相試験に由来する免疫原性の結果は、青少年および若年成人における以前の試験と一致する。二価ｒＬＰ２０８６ワクチン接種に対する免疫原性応答を、防御の許容される相関よりも厳密な基準（１：４以上のｈＳＢＡ力価）を使用して、ワクチン成分抗原に対して異種であるｆＨＢＰバリアントをそれぞれ発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株を使用して検証されたｈＳＢＡにおいて測定した。３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株に関するＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価に基づくと、この試験に参加している幼児および小児は、Ｂ１９７１００９試験に参加している青少年（１０歳〜１９歳未満）と比較して、類似する免疫応答を有しており、３回目のワクチン接種（０、２、６カ月のスケジュール）後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、この試験では７９．１％〜１００％であり、Ｂ１９７１００９試験では８７．１％〜９９．５％であった。特に、Ａ２２（それぞれ、３３．２％と９％）およびＡ５６（それぞれ、２７．５％と８．３％）試験株について、Ｂ１９７１００９試験が、この試験における幼児および小児と比較してＬＬＯＱ以上のワクチン接種前ｈＳＢＡ力価を示す青少年対象の割合がはるかに高かったにも拘わらず、これらの２つの試験間で、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次試験株に関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合において意義のある差異は明らかではない。二価ｒＬＰ２０８６は、２４カ月齢以上〜１０歳未満の集団において高度に免疫原性であると考えられ、防御のｈＳＢＡ相関に基づくと、青少年について予想されるものと同様にＭｎＢ感染に対する防御を提供する可能性がある。

【0404】

副次的目的に関しては、二価ｒＬＰ２０８６の第２の用量の１カ月後の組み合わせた年齢層（２４カ月齢以上〜１０歳未満）に関するこの試験における免疫応答は、４種の一次ＭｎＢ試験株について相対的にロバストであり、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、４８．５％〜１００％であった。Ａ５６株を除いて、これらの応答は、２カ月空けて与えられる２用量の二価ｒＬＰ２０８６を受けるＢ１９７１００９試験に参加する青少年（１０歳〜１９歳未満）の間で観察された免疫応答よりも低く、６４％〜９９．１％の範囲であった。３回目のワクチン接種の６カ月後のｈＳＢＡ力価を測定することにより、幼児および小児について、この試験において免疫持続性を評価した。ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、３回目のワクチン接種の１カ月後の７９．１％〜１００％の範囲から、３回目のワクチン接種の６カ月後の１０．４％〜８２．４％の範囲まで低下した。ＧＭＴおよび規定のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合も、３回目のワクチン接種の６カ月後に低下した。この試験において３回目のワクチン接種の６カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合（１０．４％〜８２．４％）は、６１０８Ａ１−２００１試験に参加する青少年（１１歳〜１９歳未満）についてより低かったが（３６．７％〜８９．４％）、それらはベースライン時（０％〜９％）にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す２４カ月齢以上〜１０歳未満の対象の割合よりも依然として高い。髄膜炎菌定着率は、成人早期を通して年齢と共に増大することがよく確立されている。２４カ月齢以上〜１０歳未満の対象と、年上の年齢群との差異は、Ｂ１９７１００９試験においては２７．５％（Ａ５６）および３３．２％（Ａ２２）、ならびに６１０８Ａ１−２００１試験においてはサブファミリーＡ株に関して７．４％〜１３．４％に達した、ＬＬＯＱ以上のベースライン力価を示す対象の割合に一部起因する可能性がある。さらに、最近の試験により、疾患関連血清群Ｂ株の担持は、防御ｈＳＢＡ力価（ワクチン接種前）を示す対象においてより高いこと、およびワクチン接種が、これらの疾患関連株のその後の担持に影響しないことが示された。これは、担持が、ベースラインｈＳＢＡ力価に影響し得ること、およびワクチン接種後の持続または再定着が、本発明者らが定着される可能性が低いと推測し、ベースライン時のＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価のパーセンテージがより低い、この試験における幼児および小児と比較して、ワクチン接種の６カ月後に青少年間で観察されるＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のより高い割合に寄与し得ることを示唆する。乳児および小児における一価コンジュゲート髄膜炎菌血清群Ｃワクチンを用いる免疫持続性試験は、同様に、防御免疫が急速に減弱することを示す。しかしながら、一次用量の完了の４年後にわずか４６．９％の血清群Ｃに関する１：８を超えるｈＳＢＡ力価のパーセンテージを示す小児のコホート間でさえ、その後の追加用量は、追加の１カ月後および１年後に１００％の対象において１：８を超える力価を提供した。これは、追加用量前に血清陰性であると考えられたものであっても、追加ワクチン接種後、最大で１年間持続する強力な既往応答を有することを示す。したがって、追加後応答および持続性試験は、幼児および小児としてその一次シリーズの二価ｒＬＰ２０８６を受けた個体間で正当化され、青少年期および成人早期を通してＩＭＤに対する防御を提供する際の追加用量の有用性に関するさらなる洞察を提供する。

【0405】

まとめると、０、２、および６カ月のスケジュールで投与される二価ｒＬＰ２０８６は、２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児の間で高度に免疫原性であり、第３の用量後に高い割合の対象においてｈＳＢＡによって測定された場合に防御免疫応答が達成される。この試験において測定される免疫応答は、第２および第３の用量の１カ月後に青少年間での以前の試験において観察されたものと類似すると考えられる。３用量レジメンは、２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児において、高率の防御免疫を提供すると考えられる。

【0406】

全体の結論
結論として、０、２、および６カ月のスケジュールの３用量シリーズで２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児に投与される二価ｒＬＰ２０８６は、第２および第３の用量後に大部分の対象によるロバストな免疫応答を惹起し、ｈＳＢＡにより測定された場合、第３の用量後に防御抗体力価が達成される。ｈＳＢＡ力価は、３用量シリーズの６カ月後に低下した。この試験において投与されたワクチンは、２４カ月齢以上〜１０歳未満の幼児および小児に関する許容し得る安全性プロファイルで安全かつ良好に忍容された。

【0407】

（実施例２０）
１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児に投与された場合の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ二価組換えリポタンパク質２０８６ワクチン（二価ｒＬＰ２０８６）の免疫原性、安全性、および忍容性について記述するために行った第２相、無作為化、対照薬、観察者盲検（Ｂ１９７１０３５−ｓｙｎ）
目的
免疫原性に関する主目的：
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｎＢ）株を用いて実施されたヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）により測定された免疫応答について記述すること。
・試験登録時に１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答について記述すること。

【0408】

安全性に関する主目的：
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満、ならびに組み合わせた両方の年齢層の健康な幼児において、局部反応、全身事象、有害事象（ＡＥ）、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、新しく診断された慢性的な医学的状態（ＮＤＣＭＣ）、医療機関を受診した事象（ＭＡＥ）、および即時のＡＥによって測定された、対照（Ａ型肝炎ウイルス［ＨＡＶ］ワクチン）と比較した二価ｒＬＰ２０８６の安全性プロファイルを評価すること。

【0409】

免疫原性に関する副次的目的：
・試験登録時に１２〜２４カ月齢未満（すなわち、組み合わせた両方の年齢層）の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答について記述すること。
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満、ならびに組み合わせた両方の年齢層の健康な幼児において、２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答について記述すること。

【0410】

免疫原性に関する探索的目的：
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満、ならびに組み合わせた両方の年齢層の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる、２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の１、６、１２、２４、３６、および４８カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答についてさらに記述すること。
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満、ならびに組み合わせた両方の年齢層の健康な幼児において、２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の１、６、１２、２４、３６、および４８カ月後の、ＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を発現する二次ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡにより測定された免疫応答についてさらに記述すること。

【0411】

方法
試験設計：
試験は、１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満によって階層化された約３９６人の健康な幼児を、二価ｒＬＰ２０８６（２つの用量レベル［６０μｇもしくは１２０μｇ］）またはライセンス供与された小児ＨＡＶワクチン（０．５ｍＬ）／注射用滅菌食塩溶液（０．５ｍＬの０．８５％塩化ナトリウム）を受けるように２：１の比に無作為に割り当てた、第２相、無作為化、実対照薬、観察者盲検、出資者非盲検、多施設試験であった。

【0412】

試験を、２段階で行った。段階１は、２つの相：センチネル登録期および拡張登録期にわたってワクチンの免疫原性、安全性、および忍容性を評価した。段階２は、二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の持続期間を評価した。

【0413】

免疫原性について、探索目的を支援する二次ＭｎＢ試験株のデータを除く、３回目のワクチン接種の１カ月後（７回目の訪問）までの全データを提示する。最終報告は、段階２の完了までの全ての免疫原性に関するデータおよび試験の終わりまでの８回目の訪問後の期間（１３回目の訪問、３回目のワクチン接種の４８カ月後）の安全性に関するデータを含む。

【0414】

段階１のセンチネル登録期は、合計４つのセンチネルコホート：それぞれの用量レベル（６０μｇまたは１２０μｇ）の二価ｒＬＰ２０８６に関する２つの年齢層を含むように計画した。若い方の年齢のセンチネルコホートは、１２〜１５カ月齢未満の対象から構成され、年上の年齢のセンチネルコホートは、１８〜２４カ月齢未満の対象から構成されていた。４つのセンチネルコホートはそれぞれ、約３３人の対象を登録するように計画された。センチネル登録期は、予め特定された時点でのＩＲＣによる審査と交互であり、停止規則を適用した。１２０μｇの用量レベルのセンチネルコホートは、６０μｇの用量レベルが、同じ年齢のセンチネルコホートにおいて安全かつ忍容性であるとＩＲＣによって評価されるまで進行しなかった。若い方の年齢の１２０μｇの用量レベルのセンチネルコホートは、この用量レベルが年上の年齢の１２０μｇの用量レベルのセンチネルコホートにおいて安全かつ忍容性であるとＩＲＣによって評価されるまで進行しなかった。

【0415】

段階１の拡張登録期の前に、ＩＲＣはセンチネル対象から得られた全ての１回目のワクチン接種後の７日間の電子日記およびＳＡＥデータを審査した。審査に基づいて、ＩＲＣは、両方の年齢層について段階１の拡張登録期に試験される１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６用量レベルを選択した。若い方の年齢の拡張登録コホート（さらに１３２人の対象を登録する）を、１２〜１８カ月齢未満の対象に拡張し、２つのサブセット：１２〜１５カ月齢未満および１５〜１８カ月齢未満に、年齢で階層化した。年上の年齢の拡張登録コホート（さらに１３２人の対象を登録する）は、拡張登録期に１８〜２４カ月齢未満の対象を登録した。段階１のみを完了する対象に関する合計試験期間は、約１８カ月であろう。段階１のための訪問スケジュールを、表２３に提示する。

【0416】

段階２は、二価ｒＬＰ２０８６に無作為に割り当てられた対象のみを含む（用量レベルとは無関係である）。段階２を完了する対象に関する合計試験期間は、約４．５年（５４カ月）であろう。段階２のための訪問スケジュールを、表２４に提示する。

【0417】

二価ｒＬＰ２０８６を、０、２、および６カ月目（訪問１、４、および６）に投与した。小児ＨＡＶワクチンを、０および６カ月目（訪問１および６）に投与し、食塩水を２カ月目（４回目の訪問）に投与して、盲検を維持した。

【0418】

【表23】

【0419】

【表24】

【0420】

投与されるワクチン：試験の経過にわたって３回、二価ｒＬＰ２０８６（６０μｇまたは１２０μｇ）を投与した：訪問１での１回目のワクチン接種（０カ月）、訪問４での２回目のワクチン接種（２カ月）、および訪問６での３回目のワクチン接種（６カ月）。二価ｒＬＰ２０８６を、三角筋または大腿前外側部筋のいずれかに筋肉内注射として投与した。ＨＡＶワクチンを、試験の経過にわたって２回投与した：訪問１での１回目のワクチン接種（０カ月）および訪問６での３回目のワクチン接種（６カ月）。食塩水を、２回目のワクチン接種（２カ月）の時点で投与した。ＨＡＶワクチン／食塩水を、三角筋または大腿前外側部筋のいずれかに筋肉内注射として投与した。試験スタッフの第三者の非盲検の医療資格者のみが治験薬を投与した。筋肉内注射のために三角筋の量が十分でなかった場合、大腿部が好ましい注射部位であった。

【0421】

免疫原性の評価：免疫原性の評価を容易にするために、対象は、段階１の間の以下の時点：１回目のワクチン接種の前（訪問１）、２回目のワクチン接種の１カ月後（訪問５）、３回目のワクチン接種の１カ月後（訪問７）、３回目のワクチン接種の６カ月後（訪問８）、３回目のワクチン接種の１２カ月後（訪問９）に収集された約５ｍＬの血液を有していた。１８カ月の期間にわたって、合計で２５ｍＬが収集された。局部／局所麻酔を採血の前に使用することができた。

【0422】

免疫応答の持続期間を決定するために、段階２の対象は、以下の時点：３回目のワクチン接種の２年後、３回目のワクチン接種の３年後、および３回目のワクチン接種の４年後に収集された約５ｍＬの血液を有するであろう。約２．５年にわたって、合計で１５ｍＬが収集される。

【0423】

二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の評価のために、機能的抗体を、髄膜炎菌血清群Ｂ株を用いるｈＳＢＡにおいて分析した。ｈＳＢＡは、標的髄膜炎菌株の補体依存的殺滅をもたらすヒト血清中の抗体を測定するものである。ワクチン成分抗原に対して異種であるＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）バリアントをそれぞれ発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株、ＰＭＢ８０（Ａ２２）、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を、この試験における免疫原性評価項目の決定のためにｈＳＢＡにおいて使用した。

【0424】

血清容量の制限のため、一次株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）のうちの２種を、対象の半分（両方の年齢層）についてそれぞれの採血時点で試験し、他の２種の一次株（ＰＭＢ２００１［Ａ５６］およびＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）を、残りの半分の対象についてそれぞれの採血時点で試験した。

【0425】

一度、全対象が登録を完了したら（訪問１）、試験の遂行に関与しない統計チームである、独立統計センター（ＩＳＣ）は、出資者の試料管理チームに、２つの対象一覧（無作為に選択された、ＰＭＢ８０［Ａ２２］／ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］について試験される５０％の対象およびＰＭＢ２００１［Ａ５６］／ＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］について試験される残りの５０％の対象）を提供した。両方の一覧は、試験設計と同じ無作為化比（２：１）および年齢層分布に従った。同じ株の対（ＰＭＢ８０［Ａ２２］／ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］またはＰＭＢ２００１［Ａ５６］／ＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）を、同じ対象について、全ての訪問にわたって試験した。

【0426】

一度、一次分析のための試験が完了したら、また、十分な容量の血清が入手可能であった場合、二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答を評価するためのさらなる試験を以下のように考慮することができる：ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）を、二価ｒＬＰ２０８６を受け、血清試料が元々、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）について試験された対象の５０％に由来する血清試料中で試験することができる。逆に、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を、二価ｒＬＰ２０８６を受け、元々、ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）について試験された対象の５０％に由来する血清試料中で試験することができる。二次株のための試験を実施することができる。

【0427】

統計的方法：
免疫原性に関する主要評価項目は、
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満の健康な幼児において４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関して、３回目のワクチン接種の１カ月後に定量下限（ＬＬＯＱ）以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合。
・試験登録時に１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関して、３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合
であった。

【0428】

全試験に関する全ての副次的免疫原性評価項目がここで説明されるが、本実施例は、訪問１〜７だけに適用可能な免疫原性評価項目に関する結果を提示する。その後の評価項目を分析する。

【0429】

以下の評価項目を、試験登録時に１２〜２４カ月齢未満（すなわち、組み合わせた両方の年齢層）の健康な対象における結果に適用した：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後ならびに二価ｒＬＰ２０１６を用いる３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。

【0430】

以下の評価項目を、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な対象、ならびに組み合わせた両方の年齢層における結果に適用した：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血訪問時に４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上、１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血訪問時に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ幾何平均力価（ＧＭＴ）。

【0431】

以下に特定される全ての探索的評価項目を、二価ｒＬＰ２０８６を受け、適切な時点で適切な株について試験された、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満の全ての健康な対象、ならびに組み合わせた両方の年齢層に由来するｈＳＢＡの結果に適用した：
・それぞれの適用可能な採血時点でＬＬＯＱ以上、１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血訪問時での４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴ。
・４種の一次試験株のそれぞれに関して二価ｒＬＰ２０８６を用いるベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍の増加を達成する対象の割合：
・検出限界（ＬＯＤ）以下のベースラインｈＳＢＡ力価または１：４未満のｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、１：１６以上のｈＳＢＡ力価と定義した。
・ＬＯＤ以上（すなわち、１：４以上のｈＳＢＡ力価）かつＬＬＯＱ未満のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、ＬＬＯＱの４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。
・ＬＬＯＱ以上のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、ベースライン力価の４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。

【0432】

４種全部の一次株に関してそれぞれの対象を試験するため、および／または二次株に関して対象を試験するために利用可能な十分な血清があった場合、以下の評価項目を計画した。
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に、組み合わせた４種全部の一次試験株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］、ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］、ＰＭＢ２００１［Ａ５６］、およびＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）に関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合。これは４種全部の一次株を試験した対象のみに適用された。
・以下のような二次ＭｎＢ株に関するｈＳＢＡを試験するためのさらなる探索的アッセイ：
・２回目および３回目のワクチン接種の１カ月後ならびに／またはその後のそれぞれの採血時点での、試験されたそれぞれの二次ＭｎＢ株に対するｈＳＢＡ ＧＭＴ。
・２回目および３回目のワクチン接種の１カ月後ならびに／またはその後のそれぞれの採血時点での、それぞれの二次ＭｎＢ株に対する、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。

【0433】

主要評価項目の分析
主目的のための一次分析は、それぞれ、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児における、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関する、３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合であった。評価可能な免疫原性集団を、このまとめのために使用し、パーセンテージと信頼区間（ＣＩ）の両方を示す。

【0434】

副次的評価項目の分析
ｍＩＴＴ集団に対して実施された全ての分析を、二次分析と考えた。

【0435】

二次分析はまた、評価可能な免疫原性集団と、ｍＩＴＴ集団との両方について、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセントを含んでいた。

【0436】

本実施例について、２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージを、評価可能な免疫原性集団と、ｍＩＴＴ集団との両方を使用して分析した。最終的な分析のために、３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後の４種のＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージを、評価可能な免疫原性集団と、ｍＩＴＴ集団との両方を使用して分析する。

【0437】

それぞれの適用可能な採血訪問時に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ、１：４、１：８、１：１６、１：３２、１：６４、１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージを、評価可能な免疫原性集団と、ｍＩＴＴ集団との両方を使用して分析した。

【0438】

それぞれの適用可能な採血訪問時の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関するＧＭＴを、評価可能な免疫原性集団と、ｍＩＴＴ集団との両方についてまとめた。

【0439】

探索的評価項目の分析
二価ｒＬＰ２０８６を用いるベースラインから２回目および３回目のワクチン接種の１カ月後までにｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍の上昇を達成する対象の割合を、評価可能な免疫原性集団と、ｍＩＴＴ集団との両方についてまとめた。

【0440】

サブグループ分析
一部の免疫原性および安全性評価項目を、性別により、国により、および年齢層内で記述的にまとめた。

【0441】

結果
対象の性質および人口動態：
１２〜２４カ月齢未満の合計３９６人の対象を、この試験において無作為化した。無作為化された対象のうち、合計４４人の対象は、６０μｇの二価ｒＬＰ２０８６を受け、２２０人の対象は、１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６を受け、１３２人の対象は、ＨＡＶワクチン／食塩水を受けた。それぞれの年齢層（１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満）において無作為化された１９８人の対象が存在していた。

【0442】

３９６人の無作為化された対象のうち、３８５人（９７．２％）の対象が試験のワクチン接種期（１回目の試験ワクチン接種［訪問１］から３回目のワクチン接種の１カ月後［訪問７］まで）を完了した。合計３８６人（９７．５％）の対象が、追跡期（訪問７から３回目のワクチン接種の６カ月後［訪問８］まで）を完了した。全体として、合計３８１人（９６．２％）の対象が、６カ月の追跡訪問（訪問８）までの全ての試験訪問を完了し、完了状態はそれぞれの年齢層（それぞれ、１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の年齢層の１８９人［９５．５％］の対象および１９２人［９７．０％］の対象）について類似していた。

【0443】

全体として、５２．８％の対象が女性であり、大部分の対象が白人（９４．４％）および非ヒスパニック系／非ラテン系（９９．５％）であった。１回目のワクチン接種時の平均年齢（ＳＤ）は、１７．３（３．６１）カ月齢（１２〜２３カ月齢の範囲）であった。人口動態特徴は、一般的には、ワクチン群間で類似していた。

【0444】

ＩＴＴおよびｍＩＴＴ集団の特徴は、安全性集団の特徴と類似していた。

【0445】

免疫原性の結果：
この試験の主目的は、１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な対象において３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡにより測定された二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層（１２〜２４カ月齢未満）に関する免疫応答の記述が、副次的目的であった。主目的の主要評価項目は、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する各年齢層における対象の割合であった。

【0446】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ（Ａ５６、Ｂ２４およびＢ４４については１：８；Ａ２２については１：１６）以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合によって確認されたように、二価ｒＬＰ２０８６の第３の用量の１カ月後に、１２〜１８カ月齢未満の幼児について、および１８〜２４カ月齢未満の幼児について、ならびに組み合わせた年齢層（１２〜２４カ月齢未満）について両方の用量レベルでロバストな免疫応答が観察された。６０μｇ群について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、３用量後に、若い方の幼児（１２〜１８カ月齢未満）については８８．９％〜１００．０％であり、年上の方の幼児（１８〜２４カ月齢未満）については８１．８％〜１００．０％であった。１２０μｇ群について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、３用量後に、１２〜１８カ月齢未満の幼児については７１．１％〜１００．０％であり、１８〜２４カ月齢未満の幼児については７２．０％〜１００．０％であった。組み合わせた年齢層について、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、６０μｇ群については８５．０％〜１００．０％であり、１２０μｇ群については７１．６％〜１００．０％であった。これらの知見は、両方の年齢層および用量レベルにわたってベースラインと比較して、ＧＭＴの増大（ベースラインでの４．０〜８．５から、３回目のワクチン接種の１カ月後での１５．１〜１７１．４の範囲）および二価ｒＬＰ２０８６の３用量後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対する１：４以上（７１．１％〜１００．０％）または１：１６以上（６３．６％〜１００．０％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合の増加によってさらに支持される。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までに４倍以上のｈＳＢＡの上昇を達成する組み合わせた年齢層の対象の割合は、両方の用量レベルについて６７．４％〜１００．０％であった。結論として、０、２、６カ月のスケジュールで投与された６０μｇまたは１２０μｇのいずれかの二価ｒＬＰ２０８６の３用量は、１２〜２４カ月齢未満の幼児（個々の年齢層と、組み合わせた年齢層の両方）においてロバストな免疫応答を誘導した。

【0447】

試験の副次的目的は、２つの年齢層と組み合わせた年齢層に関して、ＬＬＯＱ以上の応答、規定のｈＳＢＡ力価、およびｈＳＢＡ ＧＭＴによって評価された場合、第２の用量の二価ｒＬＰ２０８６の１カ月後の免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層について、二価ｒＬＰ２０８６の第２の用量（第１の用量の２カ月後に投与された）後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、６０μｇ群の対象については５７．９％〜９４．７％であり、１２０μｇ群の対象については３３．７％〜１００．０％であった。

【0448】

２つの個々の年齢層について、類似する結果が得られ、若い方の年齢層と年上の方の年齢層との間に臨床的に意義のある差異はなかった。これらの知見は、ベースラインを超えるＧＭＴの増大（７．２〜１１０．６の範囲）および組み合わせた年齢層について両方の用量レベルにわたってベースラインと比較して二価ｒＬＰ２０８６の２用量後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対する１：４以上（３６．０％〜１００．０％）または１：１６以上（３２．６％〜１００％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合の増加によって支持される。２つの個々の年齢層について、類似する結果が得られた。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてベースラインから２回目のワクチン接種の１カ月後に４倍以上のｈＳＢＡの上昇を達成する組み合わせた年齢層の対象の割合は、３０．２％〜９８．９％であった。結論として、２カ月空けて投与された６０μｇまたは１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６の２用量は、１２〜２４カ月齢未満（個々の年齢層と、組み合わせた年齢層の両方）の幼児において免疫応答を誘導した。まとめると、６０μｇと１２０μｇの両方の用量レベルで、０、２、および６カ月のスケジュールで３用量として与えられる二価ｒＬＰ２０８６は、１２〜２４カ月齢未満の幼児間でロバストな免疫応答を惹起し、ｈＳＢＡによって測定された場合、第３の用量後に高い割合の対象において防御抗体力価が達成される。

【0449】

結論：
結論として、０、２、および６カ月のスケジュールで１２〜２４カ月齢未満の幼児に投与された場合、６０μｇおよび１２０μｇの用量レベルの二価ｒＬＰ２０８６は、ｈＳＢＡにより測定された場合、第３の用量後に防御抗体力価を惹起する。この試験において投与されたワクチンは、安全かつ良好に忍容され、１２〜２４カ月齢未満の幼児について許容される安全性プロファイルを有していた。

【0450】

（実施例２１）
１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児に投与された場合の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ二価組換えリポタンパク質２０８６ワクチン（二価ｒＬＰ２０８６）の免疫原性、安全性、および忍容性について記述するために行われた第２相、無作為化、対照薬、観察者盲検（Ｂ１９７１０３５−ＣＳＲ）
この第２相試験は、２段階で行われた。段階１は、最後の試験ワクチン接種（訪問１０）の１２カ月後まで、１２〜２４カ月齢未満の健康な幼児における二価ｒＬＰ２０８６の安全性、忍容性、および免疫原性を評価するために設計され、行われた。段階１は、４つのセンチネルコホートに関するセンチネル登録期および拡張登録期から構成されていた。センチネルコホートでは、二価ｒＬＰ２０８６を、２つの年齢層（１２〜１５カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満）において２つの用量レベル（６０μｇおよび１２０μｇ）で投与した。拡張登録期に関する用量レベルの選択は、２つの用量レベルの安全性プロファイルの内部審査委員会（ＩＲＣ）の審査に基づくものであった。段階２は、最後の試験ワクチン接種の４年後まで免疫応答の持続期間を評価するよう計画された。

【0451】

免疫原性に関する主目的
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答について記述すること。
・試験登録時に１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答について記述すること。

【0452】

免疫原性に関する副次的目的
・試験登録時に１２〜２４カ月齢未満（すなわち、組み合わせた両方の年齢層）の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答について記述すること。
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満、ならびに組み合わせた両方の年齢層の健康な幼児において、２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答について記述すること。

【0453】

免疫原性に関する探索的目的
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満、ならびに組み合わせた両方の年齢層の健康な幼児において、二価ｒＬＰ２０８６を用いる、２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の１、６、１２、２４、３６、および４８カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株を用いて実施されたｈＳＢＡにより測定された免疫応答についてさらに記述すること。
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満、ならびに組み合わせた両方の年齢層の健康な幼児において、２回目のワクチン接種の１カ月後ならびに３回目のワクチン接種の１、６、１２、２４、３６、および４８カ月後の、ＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を発現する二次ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡにより測定された免疫応答についてさらに記述すること。

【0454】

治験計画
全体の試験設計および計画
試験は、１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満の年齢によって階層化された約３９６人の健康な幼児を、二価ｒＬＰ２０８６（２つの用量レベル［６０μｇもしくは１２０μｇ］のいずれか）またはライセンス供与された小児ＨＡＶワクチン（０．５ｍＬ）／注射用滅菌食塩溶液（０．５ｍＬの０．８５％塩化ナトリウム）を受けるように２：１の比で無作為に割り当てた、第２相、無作為化、実対照薬、観察者盲検、出資者非盲検、多施設試験である。

【0455】

試験を、２段階で行った。段階１は、２つの相：センチネル登録期および拡張登録期にわたってワクチンの免疫原性、安全性、および忍容性を評価した。段階２は、二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の持続期間を評価した。

【0456】

段階１のセンチネル登録期は、合計４つのセンチネルコホート：それぞれの用量レベル（６０μｇまたは１２０μｇ）の二価ｒＬＰ２０８６に関する２つの年齢層を含むように計画した。若い方の年齢のセンチネルコホートは、１２〜１５カ月齢未満の対象から構成され、年上の年齢のセンチネルコホートは、１８〜２４カ月齢未満の対象から構成されていた。４つのセンチネルコホートはそれぞれ、約３３人の対象を登録するように計画された。センチネル登録期は、予め特定された時点でのＩＲＣによる審査と交互であり、停止規則を適用した。１２０μｇの用量レベルのセンチネルコホートは、６０μｇの用量レベルが、同じ年齢のセンチネルコホートにおいて安全かつ忍容性であるとＩＲＣによって評価されるまで進行しなかった。若い方の年齢の１２０μｇの用量レベルのセンチネルコホートは、この用量レベルが年上の年齢の１２０μｇの用量レベルのセンチネルコホートにおいて安全かつ忍容性であるとＩＲＣによって評価されるまで進行しなかった。

【0457】

段階１の拡張登録期の前に、ＩＲＣはセンチネル対象から得られた全ての１回目のワクチン接種後の７日間の電子日記およびＳＡＥデータを審査した。審査に基づいて、ＩＲＣは、両方の年齢層について段階１の拡張登録期に試験される１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６用量レベルを選択した。若い方の年齢の拡張登録コホート（さらに１３２人の対象を登録する）を、１２〜１８カ月齢未満の対象に拡張し、２つのサブセット：１２〜１５カ月齢未満および１５〜１８カ月齢未満に、年齢で階層化した。年上の年齢の拡張登録コホート（さらに１３２人の対象を登録する）は、拡張登録期に１８〜２４カ月齢未満の対象を登録した。段階１のみを完了する対象に関する合計試験期間は、約１８カ月であろう。

【0458】

段階２は、二価ｒＬＰ２０８６に無作為に割り当てられた対象のみを含む（用量レベルとは無関係である）。段階２を完了する対象に関する合計試験期間は、約４．５年（５４カ月）であろう。

【0459】

二価ｒＬＰ２０８６を、０、２および６カ月目（訪問１、４および６）に投与した。小児ＨＡＶワクチンを、０および６カ月目（訪問１および６）に投与し、食塩水を２カ月目（訪問４）に投与して、盲検を維持した。

【0460】

対照群の選択を含む、試験設計の考察
この２段階試験は、１２〜２４カ月齢未満の健康な幼児における、２つの用量レベル（６０μｇおよび１２０μｇ）の二価ｒＬＰ２０８６の安全性、忍容性、および免疫原性を評価した。ＨＡＶワクチン（０および６カ月目）を、この試験における対照として選択した。この年齢群のための他の推奨されるワクチンと比較して、ＨＡＶワクチンは良好な忍容性プロファイルを有する。さらに、ＨＡＶワクチンは、将来の旅行中または他の曝露中のＡ型肝炎ウイルス感染のリスクが増大し得る対象に利益を提供する。ＨＡＶワクチンのための一般的に推奨されるレジメンは、０および６カ月目での２用量である。この試験においては、食塩水を、２カ月目に与えて、盲検を維持した。

【0461】

投与されるワクチン
試験の経過にわたって３回、二価ｒＬＰ２０８６（６０μｇまたは１２０μｇ）を投与した：訪問１での１回目のワクチン接種（０カ月）、訪問４での２回目のワクチン接種（２カ月）、および訪問６での３回目のワクチン接種（６カ月）。二価ｒＬＰ２０８６を、三角筋または大腿前外側部筋のいずれかに筋肉内注射として投与した。ＨＡＶワクチンを、試験の経過にわたって２回投与した：訪問１での１回目のワクチン接種（０カ月）および訪問６での３回目のワクチン接種（６カ月）。食塩水を、２回目のワクチン接種（２カ月）の時点で投与した。ＨＡＶワクチン／食塩水を、三角筋または大腿前外側部筋のいずれかに筋肉内注射として投与した。試験スタッフの第三者の非盲検の医療資格者のみが治験薬を投与した。筋肉内注射のために三角筋の量が十分でなかった場合、大腿部が好ましい注射部位であった。投与部位（例えば、左／右腕／大腿部）を、ソースノートおよびＣＲＦに記載した。

【0462】

治験薬の同一性
二価ｒＬＰ２０８６（滅菌緩衝化等張性懸濁液中のアルミニウムに吸着された、精製されたサブファミリーＡおよびサブファミリーＢのｒＬＰ２０８６タンパク質、それぞれ３０μｇ［６０μｇの用量レベル］または６０μｇ［１２０μｇの用量レベル］のいずれかを含有する）を、注射のために０．５ｍＬ用量で提供した。ライセンス供与された小児ＨＡＶワクチンを、注射のために０．５ｍＬ用量で提供した。プラセボは、０．５ｍＬ用量として供給された注射用の滅菌食塩水（０．８５％塩化ナトリウム）であった。

【0463】

治験薬（二価ｒＬＰ２０８６、ＨＡＶワクチン、および食塩水）を、出資者によって、それぞれの試験場所に提供した。試験ワクチンを、現在の指針ならびに適用可能な地方および法的規制要件に従って治験薬として包装および標識した。それぞれの治験薬を、独特のキット番号を用いて標識した。

【0464】

ワクチン接種レジメンの選択
二価ｒＬＰ２０８６（６０μｇまたは１２０μｇのいずれか）を、０、２および６カ月のスケジュールで投与した。対照群の対象は、０カ月目および６カ月目にＨＡＶワクチンを受け、盲検を維持するために２カ月目に食塩水の注射を受けた。

【0465】

二価ｒＬＰ２０８６血清殺菌アッセイ−一次試験株
二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の評価のために、機能的抗体を、髄膜炎菌血清群Ｂ株を用いるｈＳＢＡにおいて分析した。ｈＳＢＡは、標的髄膜炎菌株の補体依存的殺滅を媒介するヒト血清中の抗体を測定するものである。ワクチン成分抗原に対して異種であるＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）バリアントをそれぞれ発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株、ＰＭＢ８０（Ａ２２）、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を、この試験における免疫原性評価項目の決定のためにｈＳＢＡにおいて使用した。

【0466】

血清容量の制限のため、一次株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）のうちの２種を、対象の半分（両方の年齢層）についてそれぞれの採血時点で試験し、他の２種の一次株（ＰＭＢ２００１［Ａ５６］およびＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）を、残りの半分の対象についてそれぞれの採血時点で試験した。

【0467】

一度、全対象が登録を完了したら（訪問１）、試験の遂行に関与しない統計チームである、独立統計センター（ＩＳＣ）は、出資者の試料管理チームに、２つの対象一覧（無作為に選択された、ＰＭＢ８０［Ａ２２］／ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］について試験される５０％の対象およびＰＭＢ２００１［Ａ５６］／ＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］について試験される残りの５０％の対象）を提供した。両方の一覧は、試験設計と同じ無作為化比（２：１）および年齢層分布に従った。同じ株の対（ＰＭＢ８０［Ａ２２］／ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］またはＰＭＢ２００１［Ａ５６］／ＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）を、同じ対象について、全ての訪問にわたって試験した。

【0468】

さらなるアッセイ
一度、一次分析のための試験が完了したら、また、十分な容量の血清が入手可能であった場合、二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答を評価するためのさらなる試験を以下のように考慮することができる：ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）を、二価ｒＬＰ２０８６を受け、血清試料が元々、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）について試験された対象の５０％に由来する血清試料中で試験することができる。逆に、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を、二価ｒＬＰ２０８６を受け、元々、ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）について試験された対象の５０％に由来する血清試料中で試験することができる。二次株のための試験を実施することができる。

【0469】

免疫原性分析
目的の比較および評価項目−免疫原性に関する主要評価項目
免疫原性に関する主要評価項目は、
・試験登録時に１２〜１８カ月齢未満の健康な幼児において４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関して、３回目のワクチン接種の１カ月後に定量下限（ＬＬＯＱ）以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合。
・試験登録時に１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児において４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関して、３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合
であった。

【0470】

目的の比較および評価項目−免疫原性に関する副次的評価項目
全試験に関する全ての免疫原性に関する副次的評価項目をここで記載するが、本実施例は訪問１〜７（訪問１から３回目のワクチン接種の３カ月後まで）に適用可能な免疫原性に関する評価項目に関する結果のみを提示する。

【0471】

以下の評価項目を、試験登録時に１２〜２４カ月齢未満（すなわち、組み合わせた両方の年齢層）の健康な対象における結果に適用した：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後ならびに二価ｒＬＰ２０１６を用いる３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。

【0472】

以下の評価項目を、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な対象、ならびに組み合わせた両方の年齢層における結果に適用した：
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血訪問時に４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上、１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血訪問時に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ幾何平均力価（ＧＭＴ）。

【0473】

免疫原性に関する探索的評価項目
以下に特定される全ての探索的評価項目を、二価ｒＬＰ２０８６を受け、適切な時点で適切な株について試験された、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満の全ての健康な対象、ならびに組み合わせた両方の年齢層に由来するｈＳＢＡの結果に適用した：
・それぞれの適用可能な採血時点でＬＬＯＱ以上、１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。
・それぞれの適用可能な採血訪問時での４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴ。
・４種の一次試験株のそれぞれに関して二価ｒＬＰ２０８６を用いるベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍の増加を達成する対象の割合：
・検出限界（ＬＯＤ）以下のベースラインｈＳＢＡ力価または１：４未満のｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、１：１６以上のｈＳＢＡ力価と定義した。
・ＬＯＤ以上（すなわち、１：４以上のｈＳＢＡ力価）かつＬＬＯＱ未満のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、ＬＬＯＱの４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。
・ＬＬＯＱ以上のベースラインｈＳＢＡ力価を示す対象については、４倍の応答を、ベースライン力価の４倍以上のｈＳＢＡ力価と定義した。

【0474】

４種全部の一次株についてそれぞれの対象を試験するため、および／または二次株について対象を試験するために利用可能な十分な血清があった場合、以下の評価項目を考慮した。
・二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に、組み合わせた４種全部の一次試験株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］、ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］、ＰＭＢ２００１［Ａ５６］、およびＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］）に関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合。これは４種全部の一次株を試験した対象のみに適用された。
・以下のような二次ＭｎＢ株に関するｈＳＢＡを試験するためのさらなる探索的アッセイ：
・２回目および３回目のワクチン接種の１カ月後ならびに／またはその後のそれぞれの採血時点での、試験されたそれぞれの二次ＭｎＢ株に対するｈＳＢＡ ＧＭＴ。
・２回目および３回目のワクチン接種の１カ月後ならびに／またはその後のそれぞれの採血時点での、それぞれの二次ＭｎＢ株に対する、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合。

【0475】

分析集団
改変された包括解析集団
提唱された分析に関する少なくとも１つの妥当かつ確定的なアッセイ結果を有していた全ての無作為化された対象を、改変された包括解析（ｍＩＴＴ）集団に含有させた。この分析セットは、免疫原性分析に関するものであった。対象をｍＩＴＴ集団の分析において無作為化した治験薬に応じて、対象を分析した。

【0476】

分析方法
対照群および同じ年齢層内の異なるコホートに由来するそれぞれの用量レベル群を、分析のためにプールした。全ての免疫原性分析を、それぞれの年齢層について、ならびに全体の集団について別々にまとめた。

【0477】

これは、仮説検証試験ではなかった；かくして、見積もり手法を使用して、この試験における主目的、副次的目的および探索的目的を評価した。

【0478】

ＬＬＯＱは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については１：１６、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１：８、ＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については１：８、およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については１：８であった。

【0479】

ＧＭＴの算出のために、ＬＬＯＱより下のｈＳＢＡの結果を、一次分析については０．５ｘＬＬＯＱに設定した。

【0480】

主要評価項目の分析
主目的のための一次分析は、それぞれ、試験登録時に１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な幼児における、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関する、３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象の割合であった。評価可能な免疫原性集団を、このまとめのために使用し、パーセンテージと信頼区間（ＣＩ）の両方を示す。

【0481】

副次的評価項目の分析
ｍＩＴＴ集団に対して実施された全ての分析を、二次分析と考えた。

【0482】

副次的評価項目のための分析はまた、評価可能な免疫原性集団とｍＩＴＴ集団の両方について、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種のＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセントを含んでいた。

【0483】

本実施例について、２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージを、評価可能な免疫原性集団とｍＩＴＴ集団の両方を使用して分析し、この報告において提示した。その後の時点（３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後）について、同じ分析が計画される。

【0484】

２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ、１：４、１：８、１：１６、１：３２、１：６４、１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を示す対象のパーセンテージを、評価可能な免疫原性集団とｍＩＴＴ集団の両方を使用して分析し、この報告において提示した。その後の時点（３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後）について、同じ分析が計画される。

【0485】

２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の１カ月後の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関するＧＭＴを、評価可能な免疫原性集団とｍＩＴＴ集団についてまとめ、この報告において提示した。その後の時点（３回目のワクチン接種の６、１２、２４、３６、および４８カ月後）について、同じ分析が計画される。

【0486】

探索的評価項目の分析
二価ｒＬＰ２０８６を用いるベースラインから２回目および３回目のワクチン接種の１カ月後までのｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍の増加を達成する対象の割合を、評価可能な免疫原性集団とｍＩＴＴ集団についてまとめた。

【0487】

逆累積分布曲線
４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについて、また、評価可能な免疫原性集団に関して２回目のワクチン接種の１カ月後および３回目のワクチン接種の１カ月後に、経験的な逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）も評価した。

【0488】

免疫原性評価
分析された集団
評価可能な免疫原性集団は、免疫原性分析のための一次分析集団であった。ｍＩＴＴ集団を、免疫原性分析のための支援的免疫原性集団として使用した。

【0489】

合計３４８人（８７．９％）の対象が評価可能な免疫原性集団に含まれ、４８人（１２．１％）の対象が評価可能な免疫原性集団から除外された。対象は、１つを超える理由のため免疫原性集団から除外された。合計３１人（７．８％）の対象は、彼らがスケジュール化されたワクチン接種前またはワクチン接種後に引き出された血液を有していなかったため（試料が採取されなかった対象およびプロトコールに特定された方法の外側で試料が採取された対象を含む）、１３人（３．３％）の対象が、３回目のワクチン接種のための訪問の前または１カ月後に試験に関して適格ではなかった、または不適格になったため、１１人（２．８％）の対象が、全てのワクチン接種訪問時に無作為化されたものとしてワクチンを受けなかったため、および１６人（４．０％）の対象が、禁止されたワクチンまたは処置を受けたため、評価可能な免疫原性集団から除外された。１２〜１８カ月齢未満の合計８４．３％の対象および１８〜２４カ月齢未満の９１．４％の対象が、評価可能な免疫原性集団に含まれていた。

【0490】

免疫原性の結果
３回目のワクチン接種（訪問７）の１カ月後までの全ての免疫原性データを含む一次分析の結果を、以下のセクションに提供する。免疫原性評価項目の分析は、対象の半分についてはＰＭＢ２００１（Ａ５６）およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）株、残りの半分についてはＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）株に関するｈＳＢＡの結果に基づくものであった。

【0491】

主要および副次的評価項目
ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合
免疫原性に関する主要評価項目は、二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する、１２〜１８カ月齢未満（試験登録時）および１８〜２４カ月齢未満（試験登録時）の対象の割合であった。二価ｒＬＰ２０８６を用いる３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する、組み合わせた年齢層における全ての対象の割合と共に、二価ｒＬＰ２０８６を用いる２回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する個々の、および組み合わせた年齢層における対象の割合が、副次的評価項目であった。

【0492】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する各年齢層における対象の割合を、評価可能な免疫原性集団について表中に提示する。

【0493】

組み合わせた年齢層について、ベースライン時にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については０．０％および３．１％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については０．０％および１．１％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については４．８％および２．１％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については０．０％および１．１％であった。

【0494】

２回目のワクチン接種の１カ月後に、１２〜１８カ月齢未満の年齢層についてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．０％および６４．４％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については７０．０％および２３．８％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７７．８％および７２．３％であった。１８〜２４カ月齢未満の年齢層については、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については６６．７％および８４．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については９０．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については４４．４％および４３．２％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については６０．０％および６３．８％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、２回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については７８．９％および７４．７％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については９４．７％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については５７．９％および３３．７％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については６８．４％および６８．１％であった。

【0495】

３回目のワクチン接種の１カ月後に、１２〜１８カ月齢未満の年齢層についてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８８．９％および９１．１％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８８．９％および７１．１％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については８８．９％および８７．２％であった。１８〜２４カ月齢未満の年齢層では、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．９％および８８．２％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８１．８％および７２．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については９０．０％および８５．１％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、３回目のワクチン接種の１カ月後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．０％および８９．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８５．０％および７１．６％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については８９．５％および８６．２％であった。

【0496】

一般に、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成するＨＡＶ／食塩水群における対象の割合は、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった（表２５）。

【0497】

ｍＩＴＴ集団に関する結果は、評価可能な免疫原性集団のものと類似していた。

【0498】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合のサブグループ分析を、性別および国によって評価可能な免疫原性集団について評価した。実施したサブグループ分析において、臨床的に重要な差異は観察されなかった。

【0499】

【表25-1】

【0500】

【表25-2】

【0501】

【表25-3】

【0502】

ｈＳＢＡ ＧＭＴ
二価ｒＬＰ２０８６を用いる、ベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、および３回目のワクチン接種の１カ月後の、１２〜１８カ月齢未満、１８〜２４カ月齢未満、および組み合わせた年齢層の対象に関する４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれのｈＳＢＡ ＧＭＴが、副次的評価項目であった。表２６は、評価可能な免疫原性手段に関する４種の一次ＭｎＢ株のｈＳＢＡ ＧＭＴを提供する。

【0503】

組み合わせた年齢層について、ベースライン時のｈＳＢＡ ＧＭＴは、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８．０および８．４；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については４．０および４．１；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については４．４および４．１；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については４．０および４．０であった。

【0504】

２回目のワクチン接種の１カ月後に、１２〜１８カ月齢未満の年齢層のｈＳＢＡ ＧＭＴは、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については４２．２および２４．６；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１０１．６および１１７．２；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については１０．６および６．０；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については２３．５および２２．１であった。１８〜２４カ月齢未満の年齢層については、ｈＳＢＡ ＧＭＴは、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については２３．５および３６．８；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については６８．６および１０４．６；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については６．９および８．５；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については２１．１および１７．０であった。全体として、２回目のワクチン接種の１カ月後に、組み合わせた年齢層のｈＳＢＡ ＧＭＴは、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については３２．０および３０．４；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については８２．６および１１０．６；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８．６および７．２；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については２２．２および１９．４であった。３回目のワクチン接種の１カ月後に、１２〜１８カ月齢未満の年齢層のｈＳＢＡ ＧＭＴは、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８０．６および６３．０；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１０９．７および１９０．６；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については２０．２および１５．８；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については２９．６および４６．３であった。１８〜２４カ月齢未満の年齢層については、ｈＳＢＡ ＧＭＴは、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８２．３および７１．４；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１８１．０および１５４．４；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については１７．０および１４．５；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については３４．３および４４．９であった。全体として、３回目のワクチン接種の１カ月後に、組み合わせた年齢層のｈＳＢＡ ＧＭＴは、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８１．６および６７．３；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１４２．８および１７１．４；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については１８．４および１５．１；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については３２．０および４５．６であった。

【0505】

一般に、ＨＡＶ／食塩水群における対象のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。

【0506】

【表26-1】

【0507】

【表26-2】

【0508】

【表26-3】

【0509】

ｍＩＴＴ集団に関する結果は、評価可能な免疫原性集団のものと類似していた。

【0510】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関するｈＳＢＡ ＧＭＴのサブグループ分析を、性別および国によって評価可能な免疫原性集団について評価した。実施したサブグループ分析において、臨床的に重要な差異は観察されなかった。

【0511】

規定のｈＳＢＡ力価
二価ｒＬＰ２０８６を用いる、ベースライン時、２回目のワクチン接種の１カ月後、および３回目のワクチン接種の１カ月後に、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関して１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上のｈＳＢＡ力価を達成する、１２〜１８カ月齢未満、１８〜２４カ月齢未満、および組み合わせた年齢層の対象の割合が、免疫原性に関する副次的評価項目であった。

【0512】

４種の一次ＭｎＢ株に関して規定のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合を、評価可能な免疫原性集団について表２７に提示する。

【0513】

１：４以上および１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成した二価ｒＬＰ２０８６を受ける対象に関する結果を、以下に記載する。１：４以上のｈＳＢＡ力価は、ＩＭＤに対する防御の相関と広く認識されている；しかしながら、１：１６以上のより保存的なｈＳＢＡ力価は、ワクチン接種前の血清陰性の対象のための４倍のワクチン効果を示すレベルであると考えられている。

【0514】

一般に、規定のｈＳＢＡ力価を達成するＨＡＶ／食塩水群における対象の割合は、ベースラインと比較して時間と共に変化しなかった。

【0515】

ｍＩＴＴ集団に関する結果は、評価可能な免疫原性集団のものと類似していた。

【0516】

１：４以上のｈＳＢＡ力価
２回目のワクチン接種の１カ月後に、１：４以上のｈＳＢＡ力価を達成する１２〜１８カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．０％および６４．４％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については７０．０％および２８．６％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７７．８％および７２．３％であった。１：４以上のｈＳＢＡ力価を達成する１８〜２４カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については６６．７％および８６．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については４４．４％および４３．２％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７０．０％および６３．８％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、２回目のワクチン接種の１カ月後に１：４以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については７８．９％および７５．８％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については５７．９％および３６．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７３．７％および６８．１％であった。

【0517】

３回目のワクチン接種の１カ月後に、１：４以上のｈＳＢＡ力価を達成する１２〜１８カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８８．９％および９１．１％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８８．９％および７１．１％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については８８．９％および８７．２％であった。１：４以上のｈＳＢＡ力価を達成する１８〜２４カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．９％および８８．２％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８１．８％および７２．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については９０．０％および８７．２％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、３回目のワクチン接種の１カ月後に１：４以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．０％および８９．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８５．０％および７１．６％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については８９．５％および８７．２％であった。

【0518】

１：１６以上のｈＳＢＡ力価
２回目のワクチン接種の１カ月後に、１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成する１２〜１８カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．０％および６４．４％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については６０．０％および２１．４％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７７．８％および７２．３％であった。１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成する１８〜２４カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については６６．７％および８６．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については９０．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については３３．３％および４３．２％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については６０．０％および６１．７％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、２回目のワクチン接種の１カ月後に１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については７８．９％および７４．７％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については９４．７％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については４７．４％および３２．６％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については６８．４％および６７．０％であった。
３回目のワクチン接種の１カ月後に、１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成する１２〜１８カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８８．９％および９１．１％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および９７．９％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８８．９％および６６．７％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７７．８％および８７．２％であった。１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成する１８〜２４カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．９％および８８．２％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については６３．６％および６８．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については９０．０％および８５．１％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、３回目のワクチン接種の１カ月後に１：１６以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．０％および８９．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および９８．９％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については７５．０％および６７．４％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については８４．２％および８６．２％であった。

【0519】

【表27-1】

【0520】

【表27-2】

【0521】

【表27-3】

【0522】

【表27-4】

【0523】

【表27-5】

【0524】

探索的免疫原性評価項目
ベースラインからの４倍以上のｈＳＢＡ力価の増加
表２８は、４種の一次ＭｎＢ試験株に関するベースラインからの４倍以上の上昇を示すｈＳＢＡ力価を示す対象の割合を提示する。

【0525】

２回目のワクチン接種の１カ月後に、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する１２〜１８カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８０．０％および６２．２％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および９７．９％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については６０．０％および１９．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７７．８％および７０．２％であった。１８〜２４カ月齢未満の年齢層については、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については６６．７％および８０．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については９０．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については３３．３％および４０．９％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については６０．０％および６１．７％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、２回目のワクチン接種の１カ月後にベースラインからのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については７３．７％および７１．６％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については９４．７％および９８．９％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については４７．４％および３０．２％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については６８．４％および６６．０％であった。

【0526】

３回目のワクチン接種の１カ月後に、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する１２〜１８カ月齢未満の対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については７７．８％および８６．７％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および９５．７％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については８８．９％および６６．７％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については７７．８％および８５．１％であった。１８〜２４カ月齢未満の年齢層については、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については９０．９％および８８．２％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および１００．０％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については６３．６％および６８．０％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については９０．０％および８５．１％であった。全体として、組み合わせた年齢層について、３回目のワクチン接種の１カ月後にベースラインからのｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する対象の割合は、それぞれ、６０μｇおよび１２０μｇ群について、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については８５．０％および８７．５％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１００．０％および９７．９％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については７５．０％および６７．４％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については８４．２％および８５．１％であった。

【0527】

３回目のワクチン接種の１カ月後にｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成するＨＡＶ／食塩水群の対象（組み合わせた年齢層）の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）については５．０％；ＰＭＢ２００１（Ａ５６）については１．９％；ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については３．３％；ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）については０．０％であった。

【0528】

【表28-1】

【0529】

【表28-2】

【0530】

同様の結果が、ｍＩＴＴ集団について観察された。

【0531】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を達成する対象の割合のサブグループ分析を、性別および国によって免疫原性集団を評価するために評価した。実施したサブグループ分析において臨床的に重要な差異は観察されなかった。

【0532】

一次ＭｎＢ試験株に関する逆累積分布曲線
組み合わせた年齢層に関する、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについて、およびそれぞれのサンプリング時点で、ｈＳＢＡ応答（ＬＬＯＱ以上）を示す対象の割合のＲＣＤＣを、ＰＭＢ８０［Ａ２２］、ＰＭＢ２００１［Ａ５６］、ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］、およびＰＭＢ２７０７［Ｂ４４］について評価した。ＲＣＤＣにより、二価ｒＬＰ２０８６群対ＨＡＶ／食塩水群について、免疫応答が２回目のワクチン接種および３回目のワクチン接種の後により高いことが示された。二価ｒＬＰ２０８６群の免疫応答は、それぞれのワクチン接種と共に増大した。

【0533】

免疫原性に関する結論
この試験の主目的は、１２〜１８カ月齢未満および１８〜２４カ月齢未満の健康な対象において３回目のワクチン接種の１カ月後に測定して、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、４種の一次ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡにより測定された二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層（１２〜２４カ月齢未満）に関する免疫応答の記述が、副次的目的であった。主目的の主要評価項目は、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する各年齢層における対象の割合であった。

【0534】

４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ（Ａ５６、Ｂ２４およびＢ４４については１：８；Ａ２２については１：１６）以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合によって確認されたように、二価ｒＬＰ２０８６の第３の用量の１カ月後に、１２〜１８カ月齢未満の幼児について、および１８〜２４カ月齢未満の幼児について、ならびに組み合わせた年齢層（１２〜２４カ月齢未満）について両方の用量レベルでロバストな免疫応答が観察された。６０μｇ群について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、３用量後に、若い方の幼児（１２〜１８カ月齢未満）については８８．９％〜１００．０％であり、年上の方の幼児（１８〜２４カ月齢未満）については８１．８％〜１００．０％であった。１２０μｇ群について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、３用量後に、１２〜１８カ月齢未満の幼児については７１．１％〜１００．０％であり、１８〜２４カ月齢未満の幼児については７２．０％〜１００．０％であった。組み合わせた年齢層について、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、６０μｇ群については８５．０％〜１００．０％であり、１２０μｇ群については７１．６％〜１００．０％であった。これらの知見は、両方の年齢層および用量レベルにわたってベースラインと比較して、ＧＭＴの増大（ベースラインでの４．０〜８．５から、３回目のワクチン接種の１カ月後での１５．１〜１７１．４の範囲）および二価ｒＬＰ２０８６の３用量後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対する１：４以上（７１．１％〜１００．０％）または１：１６以上（６３．６％〜１００．０％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合の増加によってさらに支持される。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに関してベースラインから３回目のワクチン接種の１カ月後までに４倍以上のｈＳＢＡの上昇を達成する組み合わせた年齢層の対象の割合は、両方の用量レベルについて６７．４％〜１００．０％であった。結論として、０、２、６カ月のスケジュールで投与された６０μｇまたは１２０μｇのいずれかの二価ｒＬＰ２０８６の３用量は、１２〜２４カ月齢未満の幼児（個々の年齢層と、組み合わせた年齢層の両方）においてロバストな免疫応答を誘導した。

【0535】

試験の副次的目的は、２つの年齢層と組み合わせた年齢層に関して、ＬＬＯＱ以上の応答、規定のｈＳＢＡ力価、およびｈＳＢＡ ＧＭＴによって評価された場合、第２の用量の二価ｒＬＰ２０８６の１カ月後の免疫応答について記述することであった。組み合わせた年齢層について、二価ｒＬＰ２０８６の第２の用量（第１の用量の２カ月後に投与された）後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、６０μｇ群の対象については５７．９％〜９４．７％であり、１２０μｇ群の対象については３３．７％〜１００．０％であった。２つの個々の年齢層について、類似する結果が得られ、若い方の年齢層と年上の方の年齢層との間に臨床的に意義のある差異はなかった。これらの知見は、ベースラインを超えるＧＭＴの増大（７．２〜１１０．６の範囲）および組み合わせた年齢層について両方の用量レベルにわたってベースラインと比較して二価ｒＬＰ２０８６の２用量後に４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれに対する１：４以上（３６．０％〜１００．０％）または１：１６以上（３２．６％〜１００％）のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合の増加によって支持される。２つの個々の年齢層について、類似する結果が得られた。さらに、４種の一次ＭｎＢ試験株のそれぞれについてベースラインから２回目のワクチン接種の１カ月後に４倍以上のｈＳＢＡの上昇を達成する組み合わせた年齢層の対象の割合は、３０．２％〜９８．９％であった。結論として、２カ月空けて投与された６０μｇまたは１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６の２用量は、１２〜２４カ月齢未満（個々の年齢層と、組み合わせた年齢層の両方）の幼児において免疫応答を誘導した。

【0536】

まとめると、６０μｇと１２０μｇの両方の用量レベルで、０、２、および６カ月のスケジュールで３用量として与えられる二価ｒＬＰ２０８６は、１２〜２４カ月齢未満の幼児間でロバストな免疫応答を惹起し、ｈＳＢＡによって測定された場合、第３の用量後に高い割合の対象において防御抗体力価が達成される。

【0537】

考察および全体の結論
免疫原性に関する考察。１２〜２４カ月齢未満の幼児に与えられた二価ｒＬＰ２０８６（２つの用量レベル）の３用量レジメン（０、２、および６カ月のスケジュール）のこの第２相試験の免疫原性に関する結果は、１２０μｇの用量レベルでの青少年および若年成人における以前の試験と一致する。

【0538】

二価ｒＬＰ２０８６のワクチン接種に対する免疫原性応答を、許容された防御の相関よりも厳密な基準（１：４以上のｈＳＢＡ力価）を使用して、ワクチン成分抗原に対して異種であるｆＨＢＰバリアントをそれぞれ発現する４種の一次ＭｎＢ試験株を使用して検証されたｈＳＢＡにおいて測定した。３回目のワクチン接種の１カ月後の４種の一次ＭｎＢ試験株に関するＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価に基づくと、この試験に参加する幼児（いずれかの用量レベル）は、Ｂ１９７１００９試験に参加する青少年（１０〜１９歳未満）ならびにＢ１９７１０１７試験に参加する幼児および小児（２４カ月齢以上〜１０歳未満）と比較して類似する免疫応答を有し、３回目のワクチン接種（０、２、６カ月のスケジュール）後にＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、この試験においては１２０μｇ群（１２〜２４カ月齢未満）について７１．６％〜１００．０％であり、Ｂ１９７１００９試験においては８７．１％〜９９．５％であり、Ｂ１９７１０１７試験においては７９．１％〜１００．０％であった。これらの３つの試験の間で、Ｂ１９７１００９試験が、この試験における幼児と比較してＬＬＯＱ以上のワクチン接種前のｈＳＢＡ力価を示す青少年対象の割合がはるかに高かったという事実にも拘わらず、３回目のワクチン接種の１カ月後に４種の一次ＭｎＢ試験株に関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合の臨床的に意義のある差異は明らかではない。二価ｒＬＰ２０８６は、１２〜２４カ月齢未満の集団において高度に免疫原性であると考えられ、ｈＳＢＡの防御の相関に基づいて青少年について予想されたものと同様に、ＭｎＢ感染に対する防御を提供する可能性が高い。個々の年齢層および組み合わせた両方の年齢層について、３用量後、６０μｇの用量レベルに対する応答は、１２０μｇの用量レベルに対する応答よりも意義のある差異はなかった。

【0539】

副次的目的である、第２の用量の二価ｒＬＰ２０８６（いずれかの用量レベル）の１カ月後の組み合わせた年齢層（１２〜２４カ月齢未満）に関するこの試験における免疫応答に関しては、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合は、２カ月空けて与えられる２用量の二価ｒＬＰ２０８６を受けるＢ１９７１００９試験に参加する青少年（１０歳〜１９歳未満）が６４．２％〜９９．１％であり、Ｂ１９７１０１７試験に参加する幼児および小児（２４カ月齢以上〜１０歳未満）が４８．５％〜１００．０％であったのと比較して、３３．７％〜１００．０％であった。両方の年齢層および組み合わせた年齢層について、６０μｇの二価ｒＬＰ２０８６の２用量後の免疫応答は、１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６の２用量後の応答よりも意義ある差異はなかった。６０μｇ群におけるより小さいサンプルサイズは、６０μｇと１２０μｇの用量レベル間の応答率を比較する場合、明確な結論付けを困難にすることに留意すべきである。

【0540】

まとめると、６０μｇと１２０μｇの両方の用量レベルで、０、２、６カ月のスケジュールで投与された二価ｒＬＰ２０８６は、１２〜２４カ月齢未満の幼児の間で高度に免疫原性であり、第３の用量後の高い割合の対象においてｈＳＢＡによって測定された場合に防御免疫応答が達成される。この試験において測定された場合の免疫応答は、第３の用量の１カ月後に青少年および小児の間で以前の試験において観察されたものと類似すると考えられる。３用量レジメンは、１２〜２４カ月齢未満の幼児において高率の防御免疫を提供すると考えられる。

【0541】

全体の結論。結論として、０、２、および６カ月のスケジュールで１２〜２４カ月齢未満の幼児に投与された場合、６０μｇおよび１２０μｇの用量レベルの二価ｒＬＰ２０８６は、ｈＳＢＡによって測定された場合、第３の用量後に防御抗体力価を惹起する。この試験において投与されたワクチンは、安全であり、１２〜２４カ月齢未満の幼児に関する許容される安全性プロファイルで良好に忍容された。

【0542】

（実施例２２）
ＣＢＡ／ＪマウスにおけるＭｎ五価およびＴｒｕｍｅｎｂａ（登録商標）ワクチンの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂの免疫原性の評価
二価ＭｎＢ ｆＨＢＰワクチン、Ｔｒｕｍｅｎｂａ、または四価ＡＣＷＹ多糖コンジュゲートワクチンと共に製剤化された二価ＭｎＢ ｆＨＢＰワクチン（Ｍｎ五価ＡＢＣＷＹ）のいずれかを用いるワクチン接種後の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ ｆＨＢＰに対する免疫応答を、ＣＢＡ／Ｊマウスにおいて評価した。ＣＢＡ／Ｊマウスの群を、３つの異なるワクチン：五価（ＡＢＣＹＷ）、Ｔｒｕｍｅｎｂａ（登録商標）（ＭｎＢ）およびＮｉｍｅｎｒｉｘ（登録商標）（ＡＣＹＷ）を用いて免疫した（表２９）。

【0543】

【表29】

【0544】

各治療群について、ＣＢＡ／Ｊマウス（２５匹／群）を、それぞれのワクチンの２倍希釈用量レベルを使用して、首筋において皮下的に免疫した（表２９）。マウスに、時間０でワクチンを初回接種し、２週目に追加接種した。ヒト補体を使用する２つの異なる血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）を使用する試験のために、３週目に血清をＰＤ２収集した。一方のｈＳＢＡはｆＨＢＰサブファミリーＡ発現株（Ｍ９８２５０７７１）を使用し、他方はｆＨＢＰサブファミリーＢ発現株（ＣＤＣ１１２７）を使用した。

【0545】

ｈＳＢＡは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対する、抗体依存的、補体媒介性殺菌活性を測定する。簡単に述べると、適切な希釈率の試験血清を、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）Ｂ株（サブファミリーＡまたはＢ）の新鮮に調製された細菌培養物およびヒト補体と、９６ウェルマイクロタイターアッセイプレート中で混合した。アッセイプレートを、オービタルシェーカー上に置き、加湿インキュベータ（３７℃／５％ＣＯ_２）中で３０ｍｉｎ混合した。その後、各ウェルに由来するアッセイ反応物のアリコートを、生存する細菌を数えるために９６ウェルフィルタープレートに移した。

【0546】

ワクチン接種に対する応答率を、ｈＳＢＡにおいて応答する各投薬群（ｎ＝２５）におけるマウスのパーセンテージとして算出した。所定の希釈レベルで試験した場合、Ｔ_３０対照髄膜炎菌の５０％以上を殺滅するマウス血清試料を、応答者と考える。Ｔ_３０対照ウェルは、細菌および補体を含有するが、試験血清を含有せず、３０分のアッセイインキュベーションの終わりに計数される。

【0547】

表３０および表３１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株のサブファミリーＡとサブファミリーＢの両方についてＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）またはＭｎ五価のいずれかによって誘導された同等の用量依存的応答率を示す。予想通り、ＮＩＭＥＮＲＩＸ（商標）は、ＭｎＢ株に対する機能的免疫応答を誘導しなかった。

【0548】

【表30】

【0549】

【表31】

【0550】

以下の条項は、本発明のさらなる実施形態を説明する。

【0551】

Ｃ１．ポリペプチドと、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖コンジュゲート；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖コンジュゲート；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖コンジュゲート；および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物。

【0552】

Ｃ２．ＭｅｎＡ莢膜糖が担体タンパク質にコンジュゲートされている；ＭｅｎＣ莢膜糖が担体タンパク質にコンジュゲートされている；ＭｅｎＷ莢膜糖が担体タンパク質にコンジュゲートされている；およびＭｅｎＹ莢膜糖が担体タンパク質にコンジュゲートされている、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0553】

Ｃ３．組成物が髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ（ＭｅｎＸ）莢膜糖コンジュゲートをさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0554】

Ｃ４．ポリペプチドがＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0555】

Ｃ５．ポリペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および配列番号６２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対する少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0556】

Ｃ６．
ａ．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；
ｂ．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；および
ｃ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖
を含む組成物。

【0557】

Ｃ７．
ａ．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；
ｂ．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；および
ｃ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖
を含む組成物。

【0558】

Ｃ８．
ａ．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；
ｂ．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；および
ｃ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ−１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖
を含む組成物。

【0559】

Ｃ９．
ａ．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；
ｂ．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；および
ｃ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖
を含む組成物。

【0560】

Ｃ１０．
ａ．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；
ｂ．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；
ｃ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；
ｄ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；
ｅ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；
ｆ．担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖
を含む組成物。

【0561】

Ｃ１１．
ａ．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；
ｂ．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチド；
ｃ．破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；
ｄ．破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；
ｅ．破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；
ｆ．破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖
を含む組成物。

【0562】

Ｃ１２．ＭｅｎＡ莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーにコンジュゲートされ、リンカーがカルボジイミド化学反応により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0563】

Ｃ１３．ＭｅｎＣ莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりＡＤＨリンカーにコンジュゲートされ、リンカーがカルボジイミド化学反応により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0564】

Ｃ１４．ＭｅｎＷ莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0565】

Ｃ１５．ＭｅｎＹ莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0566】

Ｃ１６．Ｔｒｉｓ−ＨＣｌをさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0567】

Ｃ１７．塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0568】

Ｃ１８．スクロースをさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0569】

Ｃ１９．ヒスチジンをさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0570】

Ｃ２０．ポリソルベート８０をさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0571】

Ｃ２１．アルミニウムをさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0572】

Ｃ２２．リン酸アルミニウムをさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0573】

Ｃ２３．約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド；約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド；リン酸アルミニウムとしての約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム；約０．０２ｍｇのポリソルベート８０；約１０ｍＭのヒスチジン；および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0574】

Ｃ２４．用量あたり、約６０μｇの第１のポリペプチド；約６０μｇの第２のポリペプチド；約７．５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖；約７．５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖；約３．７５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖；約３．２５μｇのＴＴにコンジュゲートした約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖；約９７μｇのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３；４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム；約２８ｍｇのスクロース；約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン；約０．０２ｍｇのポリソルベート８０；約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み；０．５ｍＬの水をさらに含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0575】

Ｃ２５．１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満の患者における使用にとって好適である、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0576】

Ｃ２６．１８〜２４カ月齢未満の患者における使用にとって好適である、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0577】

Ｃ２７．２４カ月齢以上〜１０歳未満の患者における使用にとって好適である、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0578】

Ｃ２８．少なくとも０．０１０ｍｇのポリソルベート８０および多くても０．０１８ｍｇのポリソルベート８０を含む、条項Ｃ２０に記載の組成物。

【0579】

Ｃ２９．少なくとも０．０１ｍｇのポリソルベート８０および多くても０．０２ｍｇのポリソルベート８０を含む、条項Ｃ２０に記載の組成物。

【0580】

Ｃ３０．配列番号１に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0581】

Ｃ３１．第１のポリペプチドが合計２５８個のアミノ酸を有する、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0582】

Ｃ３２．配列番号２に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0583】

Ｃ３３．第２のポリペプチドが合計２６１個のアミノ酸を有する、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0584】

Ｃ３４．多くても２つの脂質化ポリペプチドを含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0585】

Ｃ３５．ハイブリッドタンパク質を含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0586】

Ｃ３６．キメラタンパク質を含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0587】

Ｃ３７．融合タンパク質を含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0588】

Ｃ３８．凍結乾燥されない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0589】

Ｃ３９．ホルムアルデヒドを含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0590】

Ｃ４０．ジフテリアトキソイドもＣＲＭも含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0591】

Ｃ４１．アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーの非存在下でＭｅｎＡ莢膜糖を含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0592】

Ｃ４２．アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーの非存在下でＭｅｎＣ莢膜糖を含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0593】

Ｃ４３．液体組成物である、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0594】

Ｃ４４．以下の免疫原性組成物：ＭＥＮＡＣＴＲＡ（Ｒ）、ＭＥＮＶＥＯ（Ｒ）、ＡＤＡＣＥＬ（Ｒ）、ＨＡＶＲＩＸ（Ｒ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（Ｒ）、ＲＥＰＥＶＡＸのどの１つも、そのいずれの組合せもさらに含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0595】

Ｃ４５．組成物が髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まず、担体タンパク質がジフテリアトキソイドである、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0596】

Ｃ４６．組成物が髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まず、担体タンパク質がＣＲＭ_１９７である、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0597】

Ｃ４７．ＮＩＭＥＮＲＩＸワクチンをさらに含まない、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0598】

Ｃ４８．組成物がＮＩＭＥＮＲＩＸワクチンをさらに含まず、ＮＩＭＥＮＲＩＸが塩化ナトリウムおよび水からなる希釈剤を含む、条項Ｃ１に記載の組成物。

【0599】

Ｃ４９．（ａ）脂質化されたＭｅｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡポリペプチドと、脂質化されたＭｅｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢポリペプチドとを含む第１の組成物；ならびに（ｂ）破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖；破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖；および破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖を含む第２の組成物を含むキット。

【0600】

Ｃ５０．第１の組成物が液体組成物であり、第２の組成物が凍結乾燥組成物である、条項Ｃ４９に記載のキット。

【0601】

Ｃ５１．凍結乾燥組成物がポリソルベート８０を含まない、条項Ｃ４９に記載のキット。

【0602】

Ｃ５２．以下の免疫原性組成物：ＭＥＮＡＣＴＲＡ（Ｒ）、ＭＥＮＶＥＯ（Ｒ）、ＡＤＡＣＥＬ（Ｒ）、ＨＡＶＲＩＸ（Ｒ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（Ｒ）、ＲＥＰＥＶＡＸのどの１つも、そのいずれの組合せもさらに含まない、条項Ｃ４９に記載のキット。

【0603】

Ｃ５３．キットが髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まず、担体タンパク質がジフテリアトキソイドである、条項Ｃ４９に記載のキット。

【0604】

Ｃ５４．キットが髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まず、担体タンパク質がＣＲＭ_１９７である、条項Ｃ４９に記載のキット。

【0605】

Ｃ５５．ＮＩＭＥＮＲＩＸワクチンをさらに含まない、条項Ｃ４９に記載のキット。

【0606】

Ｃ５６．キットがＮＩＭＥＮＲＩＸ（Ｒ）ワクチンをさらに含まず、ＮＩＭＥＮＲＩＸ（Ｒ）が塩化ナトリウムおよび水からなる希釈剤を含む、条項Ｃ４９に記載のキット。

【0607】

Ｃ５７．
ａ．ｉ．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；および
ｉｉ．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む液体組成物；ならびに
ｂ．ｉ．カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；
ｉｉ．カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたＡＤＨリンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；
ｉｉｉ．リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；および
ｉｖ．リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）
を含む凍結乾燥組成物
を含むキット。

【0608】

Ｃ５８．液体組成物が塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0609】

Ｃ５９．液体組成物がＬ−ヒスチジンをさらに含む、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0610】

Ｃ６０．液体組成物がポリソルベート８０をさらに含む、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0611】

Ｃ６１．液体組成物がリン酸アルミニウムをさらに含む、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0612】

Ｃ６２．液体組成物がＴｒｉｓ−ＨＣｌをさらに含まない、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0613】

Ｃ６３．液体組成物がスクロースをさらに含む、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0614】

Ｃ６４．凍結乾燥組成物が塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0615】

Ｃ６５．凍結乾燥組成物がポリソルベート８０を含まない、条項Ｃ５７に記載のキット。

【0616】

Ｃ６６．液体組成物が少なくとも０．０１０ｍｇのポリソルベート８０および多くても０．０１８ｍｇのポリソルベート８０を含む、条項Ｃ６０に記載のキット。

【0617】

Ｃ６７．液体組成物が少なくとも０．０１０ｍｇのポリソルベート８０および多くても０．０２ｍｇのポリソルベート８０を含む、条項Ｃ６０に記載のキット。

【0618】

Ｃ６８．
ａ．（ｉ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；および（ｉｉ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む液体組成物；ならびに
ｂ．ｉ．カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；
ｉｉ．カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたＡＤＨリンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；
ｉｉｉ．リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；および
ｉｖ．リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）
を含む凍結乾燥組成物
を含む免疫原性組成物。

【0619】

Ｃ６９．凍結乾燥組成物が液体組成物を用いて復元される、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0620】

Ｃ７０．液体組成物がヒスチジンをさらに含む、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0621】

Ｃ７１．液体組成物がポリソルベート８０をさらに含む、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0622】

Ｃ７２．液体組成物がリン酸アルミニウムをさらに含む、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0623】

Ｃ７３．液体組成物が塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0624】

Ｃ７４．１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満の患者における使用にとって好適である、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0625】

Ｃ７５．１８〜２４カ月齢未満の患者における使用にとって好適である、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0626】

Ｃ７６．２４カ月齢以上〜１０歳未満の患者における使用にとって好適である、条項Ｃ６８に記載の免疫原性組成物。

【0627】

Ｃ７７．
ａ．（ｉ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；および（ｉｉ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む液体組成物；ならびに
ｂ．ｉ．カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；
ｉｉ．カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたＡＤＨリンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；
ｉｉｉ．リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；および
ｉｖ．リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）
を含む凍結乾燥組成物であって、免疫原性組成物を生成するために液体組成物を用いて復元される凍結乾燥組成物
を含む免疫原性組成物。

【0628】

Ｃ７８．液体組成物がアルミニウムをさらに含む、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0629】

Ｃ７９．液体組成物がリン酸アルミニウムをさらに含む、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0630】

Ｃ８０．凍結乾燥組成物が塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0631】

Ｃ８１．少なくとも０．０１０ｍｇのポリソルベート８０および多くても０．０１８ｍｇのポリソルベート８０を含む、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0632】

Ｃ８２．少なくとも０．０１ｍｇのポリソルベート８０および多くても０．０２ｍｇのポリソルベート８０を含む、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0633】

Ｃ８３．凍結乾燥組成物がアルミニウムを含有しない、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0634】

Ｃ８４．第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドがアルミニウムに結合している、条項Ｃ７８に記載の免疫原性組成物。

【0635】

Ｃ８５．第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドが免疫原性組成物中のアルミニウムに結合している、条項Ｃ７８に記載の免疫原性組成物。

【0636】

Ｃ８６．免疫原性組成物中のアルミニウムに結合したポリペプチドの濃度が、凍結乾燥組成物を復元する前の液体組成物中のアルミニウムに結合したポリペプチドの濃度と比較して、２４時間後に減少しない、条項Ｃ７８に記載の免疫原性組成物。

【0637】

Ｃ８７．免疫原性組成物中のＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度が、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少しない、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0638】

Ｃ８８．免疫原性組成物中のＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度が、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少しない、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0639】

Ｃ８９．免疫原性組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度が、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少しない、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0640】

Ｃ９０．免疫原性組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度が、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少しない、条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0641】

Ｃ９１．濃度が、復元前の液体組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１％減少する、条項Ｃ８６に記載の免疫原性組成物。

【0642】

Ｃ９２．濃度が、復元前の液体組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても５％減少する、条項Ｃ８６に記載の免疫原性組成物。

【0643】

Ｃ９３．濃度が、復元前の液体組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１０％減少する、条項Ｃ８６に記載の免疫原性組成物。

【0644】

Ｃ９４．濃度が、復元前の凍結乾燥組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１％減少する、条項Ｃ８７〜Ｃ９０に記載の免疫原性組成物。

【0645】

Ｃ９５．濃度が、復元前の凍結乾燥組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても５％減少する、条項Ｃ８７〜Ｃ９０に記載の免疫原性組成物。

【0646】

Ｃ９６．濃度が、復元前の凍結乾燥組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１０％減少する、条項Ｃ８７〜Ｃ９０に記載の免疫原性組成物。

【0647】

Ｃ９７．復元された免疫原性組成物のｐＨが、塩化ナトリウムを用いて復元された場合、凍結乾燥組成物のｐＨより低い、条項６８または条項Ｃ７７に記載の免疫原性組成物。

【0648】

Ｃ９８．ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド、およびｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物。

【0649】

Ｃ９９．ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ９８に記載の組成物。

【0650】

Ｃ１００．６０μｇの第１の脂質化ポリペプチドと、６０μｇの第２の脂質化ポリペプチドとを含む、条項Ｃ９８に記載の組成物。

【0651】

Ｃ１０１．条項Ｃ１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0652】

Ｃ１０２．条項Ｃ６８に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0653】

Ｃ１０３．条項Ｃ７７に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0654】

Ｃ１０４．条項Ｃ１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0655】

Ｃ１０５．条項Ｃ６８に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0656】

Ｃ１０６．条項Ｃ７７に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0657】

Ｃ１０７．条項Ｃ１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0658】

Ｃ１０８．条項Ｃ６８に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0659】

Ｃ１０９．条項Ｃ７７に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0660】

Ｃ１１０．条項Ｃ１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株、および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0661】

Ｃ１１１．条項Ｃ６８に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株、および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0662】

Ｃ１１２．条項Ｃ７７に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株、および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0663】

Ｃ１１３．条項Ｃ９８に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株、および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0664】

Ｃ１１４．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0665】

Ｃ１１５．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0666】

Ｃ１１６．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ａ１９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0667】

Ｃ１１７．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ｂ１６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0668】

Ｃ１１８．配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ｂ４７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0669】

Ｃ１１９．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0670】

Ｃ１２０．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0671】

Ｃ１２１．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ａ１９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0672】

Ｃ１２２．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ｂ１６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0673】

Ｃ１２３．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ｂ４７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0674】

Ｃ１２４．配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも７０％の同一性を有するポリペプチドの有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0675】

Ｃ１２５．条項Ｃ１に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0676】

Ｃ１２６．条項Ｃ６８に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0677】

Ｃ１２７．条項Ｃ７７に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0678】

Ｃ１２８．条項Ｃ９８に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0679】

Ｃ１２９．条項Ｃ９８に記載の組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ｂ４９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0680】

Ｃ１３０．配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む組成物をヒトに投与することを含む、ヒトにおいてＨ因子結合タンパク質Ｂ４９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する方法。

【0681】

Ｃ１３１．組成物が、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも２倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する、条項Ｃ１０１〜Ｃ１３０のいずれか一項に記載の方法。

【0682】

Ｃ１３２．組成物が、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも４倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する、条項Ｃ１０１〜Ｃ１３０のいずれか一項に記載の方法。

【0683】

Ｃ１３３．組成物が、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも８倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する、条項Ｃ１０１〜Ｃ１３２のいずれか一項に記載の方法。

【0684】

Ｃ１３４．患者が１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満である、条項Ｃ１０１〜Ｃ１３２のいずれか一項に記載の方法。

【0685】

Ｃ１３５．患者が１８〜２４カ月齢未満である、条項Ｃ１０１〜Ｃ１３２のいずれか一項に記載の方法。

【0686】

Ｃ１３６．患者が２４カ月齢以上〜１０歳未満である、条項Ｃ１０１〜Ｃ１３２のいずれか一項に記載の方法。

【0687】

Ｃ１３７．（ａ）患者が１２〜１８カ月齢の年齢である場合に、患者に免疫原性組成物を投与することを含み、免疫原性組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む、患者において免疫応答を惹起するための方法。

【0688】

Ｃ１３８．（ａ）患者が１８〜２４カ月齢の年齢である場合に、患者に免疫原性組成物を投与することを含み、免疫原性組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む、患者において免疫応答を惹起するための方法。

【0689】

Ｃ１３９．（ａ）患者が２４カ月齢〜１０歳の年齢である場合に、患者に免疫原性組成物を投与することを含み、免疫原性組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド；配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む、患者において免疫応答を惹起するための方法。

【0690】

Ｃ１４０．組成物がポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ１３７〜Ｃ１３９のいずれか一項に記載の方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【配列表】

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【国際調査報告】