特表 2020-517635 腫瘍溶解性ウイルス療法および免疫療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2020-517635(P2020-517635A)

(43)【公表日】2020年6月18日

(54)【発明の名称】腫瘍溶解性ウイルス療法および免疫療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 48/00 20060101AFI20200522BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20200522BHJP

   C12N 15/34 20060101ALI20200522BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20200522BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20200522BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20200522BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20200522BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20200522BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20200522BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20200522BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20200522BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20200522BHJP

   A61K 47/59 20170101ALI20200522BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20200522BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20200522BHJP

   A61K 39/395 20060101ALN20200522BHJP

   A61K 38/20 20060101ALN20200522BHJP

   A61K 38/45 20060101ALN20200522BHJP

   A61K 38/50 20060101ALN20200522BHJP

   A61K 38/44 20060101ALN20200522BHJP

   A61K 38/48 20060101ALN20200522BHJP

   A61K 38/46 20060101ALN20200522BHJP

【ＦＩ】

   A61K48/00

   C12N15/12ZNA

   C12N15/34

   C12N15/62 Z

   C07K14/705

   C07K19/00

   C12N5/10

   A61P43/00 121

   A61P35/00

   A61K47/68

   A61K35/761

   A61K35/17 Z

   A61K47/59

   A61P37/04

   C12N15/13

   A61K39/395 T

   A61K39/395 L

   A61K38/20

   A61K38/45

   A61K38/50

   A61K38/44

   A61K38/48

   A61K38/46

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】132

(21)【出願番号】特願2019-556860(P2019-556860)

(86)(22)【出願日】2018年4月20日

(85)【翻訳文提出日】2019年12月13日

(86)【国際出願番号】US2018028577

(87)【国際公開番号】WO2018195427

(87)【国際公開日】20181025

(31)【優先権主張番号】62/488,181

(32)【優先日】2017年4月21日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

(71)【出願人】

【識別番号】391058060

【氏名又は名称】ベイラー カレッジ オブ メディスン

【氏名又は名称原語表記】ＢＡＹＬＯＲ ＣＯＬＬＥＧＥ ＯＦ ＭＥＤＩＣＩＮＥ

(74)【代理人】

【識別番号】100140109

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 新次郎

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100120112

【弁理士】

【氏名又は名称】中西 基晴

(74)【代理人】

【識別番号】100135415

【弁理士】

【氏名又は名称】中濱 明子

(72)【発明者】

【氏名】鈴木 正崇

(72)【発明者】

【氏名】ローズウェル ショー，アマンダ

(72)【発明者】

【氏名】ポーター，キャロライン・イレーン

(72)【発明者】

【氏名】渡部 紀宏

(72)【発明者】

【氏名】ブレナー，マルコム・ケイ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE17

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA44

4C084CA53

4C084DA12

4C084DC02

4C084DC22

4C084DC23

4C084DC25

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZB021

4C084ZB091

4C084ZB261

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB01

4C085BB12

4C085BB50

4C085CC03

4C085CC23

4C085CC31

4C085DD62

4C085EE03

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BC83

4C087CA04

4C087CA12

4C087MA02

4C087NA05

4C087ZB02

4C087ZB09

4C087ZB26

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明の開示は、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス ；および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を利用するがんの併用療法に関する。特定の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、ＩＬ−１２および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸を含む。
【選択図】図２４Ｄ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；
（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；および
（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞
を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。

【請求項2】

がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の組合せ。

【請求項3】

がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の使用。

【請求項4】

（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および
（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞
を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。

【請求項5】

がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の組合せ。

【請求項6】

がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の使用。

【請求項7】

前記ＣＡＲを含む細胞が、前記腫瘍溶解性ウイルスに特異的である、請求項１または４に記載の方法、請求項２または５に記載の組合せ、または請求項３または６に記載の使用。

【請求項8】

（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および
（ｉｉ）該腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞
を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。

【請求項9】

がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）該腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞の組合せ。

【請求項10】

がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）該腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞の使用。

【請求項11】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項12】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、アデノウイルス５（Ａｄ５）に由来する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項13】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、Ａｄ５によってコードされたＥ１Ａタンパク質と比較して低下したＲｂタンパク質への結合を呈示するＥ１Ａタンパク質をコードする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項14】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、アミノ酸配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したＥ１Ａタンパク質をコードする、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項15】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、アミノ酸配列の配列番号３４を含むか、またはそれからなるＥ１Ａタンパク質をコードする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項16】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、１つまたはそれより多くの転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項17】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、ＳＴＡＴ１のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項18】

前記がん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つの細胞が、Ｔ細胞である、請求項１〜７または１１〜１７のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項19】

前記ＣＡＲが、ＨＥＲ２への特異的な結合が可能な抗原結合ドメインを含む、請求項１〜７または１１〜１８のいずれか一項に記載の方法組合せまたは使用。

【請求項20】

前記ＣＡＲが、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１８；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１９；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２０を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２１；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号２２；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号２３を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号２６；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号２７；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２８を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２９；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号３０；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号３１を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号５７；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号５８；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号５９を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号６０；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号６１；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号６２を含むＶＨドメイン
を含む抗原−結合ドメインを含む、請求項１〜７または１１〜１９のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項21】

前記ＣＡＲが、
配列番号１６に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号１７に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ；
または
配列番号２４に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号２５に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ；
または
配列番号３２に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号３３に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ；
または
配列番号６３に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号６４に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ
を含む抗原結合ドメインを含む、請求項１〜７または１１〜２０のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項22】

前記免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスが、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）である、請求項１〜３または１１〜２１のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項23】

前記免疫調節因子が、エフェクター免疫応答のアゴニストまたは免疫調節応答のアンタゴニストから選択される、請求項１〜３または１１〜２２のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項24】

前記免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスが、ＩＬ−１２および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸を含む、請求項１〜３または１１〜２３のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項25】

前記免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスが、非毒性因子の細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素をコードする核酸を含む、請求項１〜３または１１〜２４のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項26】

前記酵素が、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、シトクロムＰ４５０、カルボキシペプチダーゼＧ２、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼおよびカルボキシルエステラーゼから選択される、請求項２５に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項27】

前記がんを処置する方法が、
（ａ）対象から少なくとも１つの細胞を単離すること；
（ｂ）がん細胞抗原に特異的なＣＡＲ、またはがん細胞抗原に特異的なＣＡＲをコードする核酸を発現するかまたは含むように、該少なくとも１つの細胞を改変すること、
（ｃ）任意選択で、改変された少なくとも１つの細胞を拡大すること、および；
（ｄ）該改変された少なくとも１つの細胞を対象に投与すること
を含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項28】

前記がんを処置する方法が、
（ａ）対象から免疫細胞を単離すること；
（ｂ）腫瘍溶解性ウイルスのペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下での培養によって該免疫細胞を刺激することを含む方法によって、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成または拡大すること、および；
（ｃ）該腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を対象に投与すること
を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項29】

前記がんが、頭頸部がん、上咽頭癌（ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）および肺がんから選択される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法、組合せまたは使用。

【請求項30】

アミノ酸配列の配列番号３４を含むか、またはそれからなるＥ１Ａタンパク質をコードする腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）。

【請求項31】

ＳＴＡＴ１のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）。

【請求項32】

配列番号５１またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％の配列同一性を有する核酸配列を含む、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）。

【請求項33】

配列番号５５またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％の配列同一性を有する核酸配列を含む、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）。

【請求項34】

ＩＬ−１２および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸を含むヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）。

【請求項35】

加えて、非毒性因子の細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素をコードする核酸を含む、請求項３４に記載のＨＤＡｄ。

【請求項36】

前記酵素が、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、シトクロムＰ４５０、カルボキシペプチダーゼＧ２、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼおよびカルボキシルエステラーゼから選択される、請求項３４または３５に記載のＨＤＡｄ。

【請求項37】

ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１８；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１９；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２０を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２１；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号２２；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号２３を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号２６；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号２７；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２８を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２９；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号３０；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号３１を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号５７；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号５８；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号５９を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号６０；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号６１；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号６２を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項38】

配列番号１６に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号１７に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ；
または
配列番号２４に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号２５に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ；
または
配列番号３２に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号３３に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ
または
配列番号６３に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号６４に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ
を含む抗原結合ドメインを含む、請求項３７に記載のＣＡＲ。

【請求項39】

請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、または請求項３７または３８に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、１つまたは複数の核酸であって、任意選択で単離されたまたは人工の核酸である、上記核酸。

【請求項40】

請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、請求項３７または３８に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、または請求項３９に記載の１つまたは複数の核酸を含む細胞。

【請求項41】

請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、請求項３７または３８に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項３９に記載の１つまたは複数の核酸、または請求項４０に記載の細胞、および医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含む医薬組成物。

【請求項42】

請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、請求項３７または３８に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項３９に記載の１つまたは複数の核酸、請求項４０に記載の細胞、または請求項４１に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。

【請求項43】

がんを処置する方法で使用するための、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、請求項３７または３８に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項３９に記載の１つまたは複数の核酸、請求項４０に記載の細胞、または請求項４１に記載の医薬組成物。

【請求項44】

がんを処置するための医薬品の製造における、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、請求項３７または３８に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項３９に記載の１つまたは複数の核酸、請求項４０に記載の細胞、または請求項４１に記載の医薬組成物の使用。

【請求項45】

前記がんが、頭頸部がん、上咽頭癌（ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）および肺がんから選択される、請求項４２に記載の方法、請求項４３に記載の使用のためのＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、ＣＡＲ、１つまたは複数の核酸、細胞、もしくは医薬組成物、または請求項４４に記載の使用。

【請求項46】

予め決定された量の請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、請求項３７または３８に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項３９に記載の１つまたは複数の核酸、請求項４０に記載の細胞、または請求項４１に記載の医薬組成物を含むパーツのキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の開示は、細胞生物学、分子生物学、免疫学、ウイルス学、およびがん療法などの医学の分野に少なくとも関する。特定の実施態様において、本開示は、腫瘍溶解性ウイルス療法と免疫療法の使用を含む併用処置に関する。

【背景技術】

【0002】

頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）のための腫瘍溶解性ウイルス療法
ＨＮＳＣＣは、世界で６番目に高い発生率のがんである。局所進行性の再発性および転移性ＨＮＳＣＣの処置は、多くの場合、毒性比率に対する不利な効能によって制限され、転移性疾患を有する患者の生存期間中央値は１年未満のままである（ZandbergおよびStrome, Oral Oncology（2014）50：627〜632）。ＨＮＳＣＣは、体の表面またはその近辺に存在する局所領域的な疾患であるため、アデノウイルスベクター（Ａｄ）の最初の腫瘍内注射の影響を受けやすく、局所領域的な抗腫瘍免疫応答を促し、さらに全身性抗腫瘍免疫応答さえも促す（Liuら、Nature Clinical Practice Oncology（2007）4：101〜117）。治療的導入遺伝子をコードする制限増殖型Ａｄ（ＯｎｃＡｄ）または複製欠陥型Ａｄの数々の臨床試験は、をＨＮＳＣＣのＡｄ遺伝子治療の安全性および実行可能性実証しているが、集中的な局所処置は、化学／放射線療法と組み合わせた場合でも遠位部位への転移を予防しなかったことから、改善された全生存を示すことができなかった（Liuら、上記）。ＯｎｃＡｄは一般的に腫瘍内に投与されるが、転移した腫瘍への再標的化は不十分である（Koksiら、Molecular Therapy：The Journal of the American Society of Gene Therapy（2015）23：1641〜1652）。

【0003】

免疫調節性分子を発現するヘルパー依存性Ａｄ（ＨＤＡｄ）を有するＯｎｃＡｄ
アデノウイルスベースのベクター（Ａｄ）は、様々な悪性細胞に感染して、高レベルの溶解性抗原と免疫原性導入遺伝子を発現できることから、がん遺伝子治療のための薬剤として魅力的である（Cerulloら、Advances in Cancer Research（2012）115、265〜318）。ＯｎｃＡｄはがん細胞中で選択的に複製し、がん遺伝子治療のための臨床試験ではＡｄベースのベクターとして一般的に使用される。しかしながら、ＯｎｃＡｄは、限定的な導入遺伝子に関するコード化能力しか有していない（約１．５ｋｂ）。ヘルパー依存性Ａｄ（ＨＤＡｄ）は、ウイルスコード配列を欠いており、単一のベクター中に複数の導入遺伝子を挿入するための最大３４ｋｂのカーゴ能力が可能である（Suzukiら、Human Gene Therapy（2010）21；120〜126）。ＨＤＡｄベクターＤＮＡはパッケージングシグナルをコードするため、ＯｎｃＡｄ複製機構はトランスで作用して、感染した腫瘍細胞内でＯｎｃＡｄとＨＤＡｄの両方を複製してパッケージングし、ＨＤＡｄ（コンビナトリアルアデノウイルスベクター：ＣＡｄ−ＶＥＣ；Farzadら、Molecular Therapy - Oncolytics（2014）1、14008）によってコードされた腫瘍溶解性ウイルスと導入遺伝子の両方の生産および放出の複数サイクルをもたらす。

【0004】

ＣＡＲ Ｔ細胞療法
近年、がん療法剤としてのＴ細胞の使用は、がん細胞抗原に向けられたキメラ抗原受容体の発現によって促進されつつある（ＣＡＲ；Kershawら、Nature（2013）13：525〜541で総論されている）。ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、血液学的悪性腫瘍の処置に有望であることが示されているが（Garfallら、The New England Journal of Medicine（2015）373：1040〜1047）、固形腫瘍の処置ではそれほど有効がなく、これは、部分的に固形腫瘍の微小環境における高度に免疫抑制の性質の結果に起因する可能性がある（Quailら、Nature Medicine（2013）19：1423〜1437）。腫瘍部位における免疫抑制メカニズムのために、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１または２種の共刺激エンドドメインの発現にもかかわらず長期にわたり拡大し持続することができない。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】ZandbergおよびStrome, Oral Oncology（2014）50：627〜632

【非特許文献2】Liuら、Nature Clinical Practice Oncology（2007）4：101〜117

【非特許文献3】Molecular Therapy：The Journal of the American Society of Gene Therapy（2015）23：1641〜1652

【非特許文献4】Cerulloら、Advances in Cancer Research（2012）115、265〜318

【非特許文献5】Suzukiら、Human Gene Therapy（2010）21；120〜126

【非特許文献6】Farzadら、Molecular Therapy - Oncolytics（2014）1、14008

【非特許文献7】Kershawら、Nature（2013）13：525〜541

【非特許文献8】Garfallら、The New England Journal of Medicine（2015）373：1040〜1047

【非特許文献9】Quailら、Nature Medicine（2013）19：1423〜1437

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明の開示は、コンビナトリアルがん療法を含む有効ながん療法に対する長年にわたる切実な必要性への解決法を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0007】

簡潔な要約
一形態において、本発明の開示は、
（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；
（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；および
（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞
を対象に投与することを含む、がんを処置する方法を提供する。

【0008】

がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の組合せも提供される。

【0009】

がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の使用も提供される。

【0010】

（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および
（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞
を対象に投与することを含む、がんを処置する方法も提供される。

【0011】

がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の組合せも提供される。

【0012】

がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の使用も提供される。

【0013】

一部の実施態様において、ＣＡＲを含む細胞は、腫瘍溶解性ウイルスに特異的である。
（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および
（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞
を対象に投与することを含む、がんを処置する方法も提供される。

【0014】

がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞の組合せも提供される。
がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、および（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞の使用も提供される。

【0015】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）である。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルス５（Ａｄ５）に由来する。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、Ａｄ５によってコードされたＥ１Ａタンパク質と比較して低下したＲｂタンパク質への結合を呈示するＥ１Ａタンパク質をコードする。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、アミノ酸配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したＥ１Ａタンパク質をコードする。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、アミノ酸配列の配列番号３４を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＥ１Ａタンパク質をコードする。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、１つまたはそれより多くの転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、ＳＴＡＴ１のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む。

【0016】

一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）である。一部の実施態様において、免疫調節因子は、エフェクター免疫応答のアゴニストまたは免疫調節応答のアンタゴニストから選択される。一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、ＩＬ−１２および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸を含む。一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、非毒性因子の細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素をコードする核酸を含む。一部の実施態様において、酵素は、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、シトクロムＰ４５０、カルボキシペプチダーゼＧ２、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼおよびカルボキシルエステラーゼから選択される。一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、チミジンキナーゼをコードする核酸を含む。

【0017】

一部の実施態様において、がん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つの細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施態様において、ＣＡＲは、ＨＥＲ２への特異的な結合が可能な抗原結合ドメインを含む。一部の実施態様において、ＣＡＲは、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１８；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１９；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２０を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２１；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号２２；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号２３を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号２６；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号２７；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２８を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２９；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号３０；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号３１を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号５７；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号５８；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号５９を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号６０；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号６１；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号６２を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0018】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、
配列番号１６に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号１７に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号２４に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号２５に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号３２に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号３３に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号６３に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号６４に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0019】

一部の実施態様において、本方法は、加えて、
（ａ）対象から少なくとも１つの細胞を単離することであって、具体的な実施態様において、細胞は免疫細胞である、単離すること；
（ｂ）がん細胞抗原に特異的なＣＡＲ、またはがん細胞抗原に特異的なＣＡＲをコードする核酸を発現するかまたは含むように、少なくとも１つの細胞を改変すること、
（ｃ）任意選択で、改変された少なくとも１つの細胞を拡大すること、および；
（ｄ）改変された少なくとも１つの細胞を対象に投与することであって、具体的な実施態様において、改変された細胞は、投与のとき、がん療法のための１つまたはそれより多くの他の薬剤と共に対象に提供される、投与すること
を含む。

【0020】

一部の実施態様において、がんを処置する方法は、
（ａ）対象から少なくとも１つの細胞を単離すること；
（ｂ）がん細胞抗原に特異的なＣＡＲ、またはがん細胞抗原に特異的なＣＡＲをコードする核酸を発現するかまたは含むように、少なくとも１つの細胞を改変すること、
（ｃ）任意選択で、改変された少なくとも１つの細胞を拡大すること、および；
（ｄ）改変された少なくとも１つの細胞を対象に投与すること
を含む。

【0021】

一部の実施態様において、がんを処置する方法は、
（ａ）対象から免疫細胞を単離すること；
（ｂ）腫瘍溶解性ウイルスのペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下での培養によって免疫細胞を刺激することを含む方法によって、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成または拡大すること、および；
（ｃ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を対象に投与すること
を含む。

【0022】

一部の実施態様において、がんは、頭頸部がん、上咽頭癌（ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）および肺がんから選択される。

【0023】

本発明の開示はまた、アミノ酸配列の配列番号３４を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＥ１Ａタンパク質をコードする腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）も提供する。

【0024】

本発明の開示はまた、ＳＴＡＴ１のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）も提供する。一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、配列番号５１またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有する核酸配列を含む。

【0025】

配列番号５５またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有する核酸配列を含むＯｎｃＡｄも提供される。一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、アミノ酸配列の配列番号３４を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＥ１Ａタンパク質をコードする。

【0026】

本発明の開示はまた、ＩＬ−１２および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸を含むヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）も提供する。一部の実施態様において、ＨＤＡｄは、加えて、非毒性因子の細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素をコードする核酸を含む。一部の実施態様において、酵素は、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、シトクロムＰ４５０、カルボキシペプチダーゼＧ２、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼおよびカルボキシルエステラーゼから選択される。

【0027】

一部の実施態様において、ＨＤＡｄは、加えて、チミジンキナーゼをコードする核酸を含む。ＨＤＡｄ核酸がＩＬ−１２および抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする場合において、それぞれの発現配列は、同じ調節配列によって調節されてもよいし、またはそうでなくてもよい。ＨＤＡｄ核酸がＩＬ−１２および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の両方をコードする場合において、ＨＤＡｄ核酸上での位置は、あらゆる好適な立体配置の位置であってもよく、例えば５’から３’方向で、ＩＬ−１２をコードする核酸領域は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸領域の上流または下流のいずれかにある。

【0028】

本発明の開示はまた、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１８；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１９；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２０を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２１；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号２２；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号２３を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号２６；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号２７；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２８を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２９；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号３０；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号３１を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号５７；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号５８；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号５９を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号６０；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号６１；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号６２を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。

【0029】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、
配列番号１６に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号１７に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号２４に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号２５に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号３２に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号３３少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号６３に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより大きい配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号６４に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0030】

本発明の開示はまた、本発明の開示に係る、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、１つまたは複数の核酸、任意選択で単離された１つまたは複数の核酸も提供する。

【0031】

本発明の開示はまた、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、または本発明の開示に係る１つまたは複数の核酸を含む細胞も提供する。

【0032】

本発明の開示はまた、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；本発明の開示に係る１つまたは複数の核酸または細胞を含む医薬組成物であって、医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを伴っていてもよいし、またはそれに含まれていてもよい、上記医薬組成物も提供する。

【0033】

本発明の開示はまた、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、本発明の開示に係る１つまたは複数の核酸、細胞または医薬組成物を対象に投与することを含む、がんを処置する方法も提供する。

【0034】

本発明の開示はまた、がんを処置する方法で使用するための、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、本発明の開示に係る１つまたは複数の核酸、細胞または医薬組成物も提供する。

【0035】

本発明の開示はまた、がんを処置するための医薬品の製造における、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、本発明の開示に係る１つまたは複数の核酸、細胞または医薬組成物の使用も提供する。

【0036】

一部の実施態様において、本発明の開示の様々な形態によれば、がんは、頭頸部がん、上咽頭癌（ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）および肺がんから選択される。

【0037】

本発明の開示はまた、予め決定された量の、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、本発明の開示に係る１つまたは複数の核酸、細胞または医薬組成物を含むパーツのキットも提供する。

【0038】

〔詳細な説明〕
本発明の開示は、がんの処置のための複数の治療剤の併用に関する。特定には、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、（ｉｉ）免疫調節因子を提供するウイルス、および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なＣＡＲを有する免疫細胞（例えばＴ細胞）が、がん療法として組み合わせて使用される。治療剤を組み合わせて、薬剤のいずれか１つが単独で使用される場合に見られる作用と比較して改善された処置作用を提供する。特定の実施態様において、３つの治療剤のうち少なくとも２つは、相加的に作用してがんを処置し、それに対して、他の実施態様において、３つの異なる治療剤のうち少なくとも２つは相乗的に作用して、がんを処置する。

【0039】

いかなる特定の理論にも縛られることは望まないが、改善された処置作用は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖と活性に好都合な免疫環境を提供することと共に、腫瘍溶解性ウイルス療法（例えば固形腫瘍の有効な処置）およびＣＡＲ−Ｔ細胞療法（例えばびまん性／転移がんの有効な処置）の有利な特徴を組み合わせることによって達成されると考えられる。

【0040】

腫瘍溶解性ウイルス
本発明の開示は、腫瘍溶解性ウイルスを採用する。がんを処置するための腫瘍溶解性ウイルスおよびその使用は、例えば、その全体が参照により組み入れられるChioccaおよびRabkin Cancer Immunol Res（2014）2（4）：295〜300で総論されている。

【0041】

腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞中で複製し、がん細胞の溶解を引き起こす。しばしば腫瘍溶解性ウイルスは、非がん性細胞に対してがん細胞に選択的であり、例えば、腫瘍溶解性ウイルスは一般的に、非分裂細胞より優先して分裂細胞中で複製する。したがって腫瘍溶解性ウイルスは、正常な非がん性細胞／組織に実質的なダメージを与えずに、選択的にがん細胞を致死させ腫瘍を破壊するのに有用である。

【0042】

腫瘍溶解性ウイルス療法は、数々の有利な特徴を伴う。腫瘍溶解性ウイルスはしばしば、数々の腫瘍形成性経路を標的化し、細胞傷害性に関する複数のメカニズムを使用し、耐性が生じる機会を最小化する。上述したように、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍中で選択的に複製し非病原性であるため、最小の毒性を呈示する。腫瘍におけるウイルス用量も、ウイルスの複製のために長期にわたり増加し、腫瘍溶解性ウイルスは、例えば薬物に対する感受性操作することによって、安全性が改善するように遺伝学的に操作することもできる。

【0043】

腫瘍溶解性ウイルスには、以下の２つの主要なクラスがある：
（ｉ）天然にがん細胞で優先的に複製するウイルスであって、これは、自然の抗ウイルスシグナル伝達への感受性または腫瘍形成性のシグナル伝達経路への依存性が高いことにしばしば起因して、ヒトにおいて非病原性であるウイルスであり、例えば、自律性パルボウイルス、粘液腫ウイルス（ＭＹＸＶ；ポックスウイルス）、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ；パラミクソウイルス）、レオウイルス、およびセネカバレーウイルス（ＳＶＶ；ピコルナウイルス）などが挙げられる；
（ｉｉ）がん細胞ではなく正常な細胞での複製に必要な、例えば遺伝子中の突然変異／欠失で遺伝子操作されたウイルスであって、例えば、アデノウイルス（Ａｄ）、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、および水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ；ラブドウイルス）などが挙げられ；またはワクチンベクターとして使用するために遺伝子操作されたウイルスであって、例えば、麻疹ウイルス（ＭＶ；パラミクソウイルス）、ポリオウイルス（ＰＶ；ピコルナウイルス）、およびＶＶ（ポックスウイルス）などが挙げられる。

【0044】

遺伝子操作としては、がん細胞に対する選択性の強化、安全性を提供したり、および／またはウイルス親和性を改変したりするための、機能的な配列の挿入／変更を挙げることができる。

【0045】

例えば、腫瘍溶解性ウイルスは、標的細胞においてウイルスの翻訳のみを許容する組織特異的な内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）が導入されるように、および／またはｍｉＲＮＡｓ／ｍｉＲＮＡ応答エレメント（ＭＲＥ）が導入されるように遺伝子操作されていてもよく、そのようにすることで、健康な細胞または特定の組織と腫瘍細胞との間の差次的なｍｉＲＮＡ発現は、ウイルスが健康な細胞／組織を標的化しないようにすることができる。また腫瘍溶解性ウイルスは、細胞または組織特異的な調節領域、例えばプロモーター／エンハンサー（例えば腫瘍細胞特異的プロモーター）の制御下でウイルスゲノムの転写が起こるように操作されていてもよい。一部の実施態様において、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスは、このような目的のための１つまたはそれより多くの改変を含んでいてもよい。

【0046】

ウイルスはまた、例えば、腫瘍細胞を標的化するおよび／または健康な細胞／組織を脱標的化するように、ウイルス受容体／外殻タンパク質の改変を介して、形質導入の標的化のために改変されてもよい。

【0047】

腫瘍溶解性ウイルスは、上記のChioccaおよびRabkinで記載されたように、対象における抗腫瘍溶解性ウイルス応答（例えば抗ウイルス抗体による中和）および肝臓での捕捉を最小化し、腫瘍送達を最大化するような方法で投与されてもよい。例えば、腫瘍溶解性ウイルスは、例えば間葉系間質細胞、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、神経幹細胞、Ｔ細胞、サイトカイン誘導キラー細胞、または放射線照射された腫瘍細胞中の細胞担体に投与されてもよいし、またはナノ粒子でコーティングされてもよい。

【0048】

一部の実施態様において、本発明の開示の腫瘍溶解性ウイルスは、例として、アデノウイルス（Ａｄ）、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）；自律性パルボウイルス、粘液腫ウイルス（ＭＹＸＶ）、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、レオウイルス、セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）麻疹ウイルス、レトロウイルス、インフルエンザウイルス、シンドビスウイルス（ＳＩＮＶ）またはポックスウイルスであるかもしくはそれに由来する。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニアウイルスではない。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニアウイルスＪＸ−５９４ではない。

【0049】

本明細書で使用されるように、参照ウイルス「由来の」腫瘍溶解性ウイルスは、参照ウイルスが有する核酸配列またはアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、参照ウイルス「由来の」腫瘍溶解性ウイルスは、参照ウイルスが有する１つまたはそれより多くの遺伝子を含む。一部の実施態様において、「由来の」腫瘍溶解性ウイルスは、参照ウイルスによってコードされた１つまたはそれより多くのタンパク質をコードする。

【0050】

一部の実施態様において、参照ウイルスに由来する腫瘍溶解性ウイルスは、参照ウイルスの１つまたはそれより多くの機能的なエレメントをコードする核酸配列を含んでいてもよい。「機能的なエレメント」は、例えば、転写調節因子（例えばプロモーター／エンハンサー）、転写後プロセシングの調節因子、翻訳調節因子、転写後プロセシングの調節因子、応答エレメント、反復配列、またはウイルスタンパク質であってもよい。一部の実施態様において、参照ウイルスに由来する腫瘍溶解性ウイルスは、参照ウイルスの１つまたはそれより多くの遺伝子、またはそれによってコードされたタンパク質を含んでいてもよい。

【0051】

一部の実施態様において、本発明の開示の腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）であるかまたはそれに由来する。ＯｎｃＡｄは、例えば、その全体が参照により組み入れられるLarsonら、Oncotarget.（2015）6（24）：19976〜19989で総論されている。

【0052】

一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ種ヒトアデノウイルス（すなわちＨＡｄＶ−Ａ、ＨＡｄＶ−Ｂ、ＨＡｄＶ−Ｃ、ＨＡｄＶ−Ｄ、ＨＡｄＶ−Ｅ、ＨＡｄＶ−ＦまたはＨＡｄＶ−Ｇ）であるかまたはそれに由来する。一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、Ｃ種ヒトアデノウイルスであるかまたはそれに由来する。一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、Ａｄ５、Ａｄ２、Ａｄ１、Ａｄ６またはＡｄ５７であるかまたはそれに由来する。

【0053】

一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、制限増殖型アデノウイルス（またはＣＲＡｄ）である。
一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、例えばＯｎｃＡｄの元となるアデノウイルスの遺伝学的改変の結果として、非がん性細胞に感染する、その中で複製する、および／またはそれを溶解させる能力が低下している（同等のがん性細胞に感染する/その中で複製する、および／またはそれを溶解させる能力と比較して）。

【0054】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、１つまたはそれより多くのタンパク質をコードする配列に対する改変を含む。一部の実施態様において、改変は、コードされたタンパク質の生産または活性を変更する。一部の実施態様において、改変は、タンパク質の短縮化または欠失である。

【0055】

一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、アデノウイルス初期タンパク質への改変を含む。一部の実施態様において、改変は、Ｅ１Ａタンパク質をコードする領域への改変である。一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、野生型Ｅ１Ａタンパク質（例えばＯｎｃＡｄの元となるアデノウイルスによってコードされたＥ１Ａ）と比較してＲｂタンパク質に結合する能力が低下したＥ１Ａタンパク質をコードする。一部の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、アミノ酸配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したＥ１Ａタンパク質をコードする。アミノ酸配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したＥ１Ａタンパク質をコードするＯｎｃＡｄの例は、配列番号５５に示されるＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４である。

【0056】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号３４に少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＥ１Ａタンパク質をコードする。

【0057】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、１つまたはそれより多くの転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位を提供する核酸配列を含む。一部の実施態様において、転写因子は、活性化転写因子（すなわち転写活性化因子）である。１つまたはそれより多くの転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位は、好ましくは、１つまたはそれより多くの機能的なエレメント（例えばウイルスタンパク質）をコードする核酸配列に対して上流に（すなわち５’側に）提供される。

【0058】

一部の実施態様において、転写因子は、同等の非がん性細胞（例えば同じ組織／細胞型由来の非がん性細胞）と比較して、がん性細胞において発現が増加した、または活性が増加した転写因子である。

【0059】

本明細書において、「発現」は、遺伝子発現を指す場合もあるし、またはタンパク質発現を指す場合もある。遺伝子発現は、当業者公知の様々な手段によって、例えば定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によってｍＲＮＡのレベルを測定すること、またはレポーターベースの方法によって測定することができる。同様に、タンパク質発現は、様々な当業界において周知の方法によって、例えば抗体ベースの方法によって、例えばウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、またはレポーターベースの方法によって測定することができる。

【0060】

１つまたはそれより多くの転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位を含むＯｎｃＡｄの例は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるRojasら、2010 Mol Ther 18 1960-1971に記載のＩＣＯＶＩＲ１５である。ＩＣＯＶＩＲ１５は、転写因子Ｅ２Ｆのための８つの結合部位を含む。

【0061】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、その遺伝子もしくはタンパク質発現または細胞中での活性が、免疫細胞によって生産または発現される因子に応答して上方調節される転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位を含む。一部の実施態様において、免疫細胞によって生産または発現される因子は、エフェクター免疫細胞、例えばＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ＣＤ４＋Ｔヘルパー１（Ｔ_Ｈ１）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞によって生産された少なくとも１つのサイトカイン／ケモカイン、またはその細胞表面で発現されるタンパク質であってもよい。

【0062】

一部の実施態様において、本発明の開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ＳＴＡＴ転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位を含む。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、ＳＴＡＴ１のための１つまたはそれより多くの結合部位を含む。本明細書に記載されるＩＣＯＳＴＡＴ ＯｎｃＡｄは、ＳＴＡＴ１のための８つの結合部位を有し、ＳＴＡＴ１は、ＩＦＮγによって上方調節されることが公知である。特定の実施態様において、がん細胞に対する宿主の免疫応答がインサイチュで腫瘍溶解性ウイルスの複製を促進すると予想されるため、ＩＣＯＳＴＡＴは、がんにとって特に有効な処置である。

【0063】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、ＳＴＡＴ１のための１つより多くの結合部位、例えばＳＴＡＴ１のための少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の結合部位を含む。一部の実施態様において、ＳＴＡＴ１のための結合部位は、配列ＴＴＣＣＧＧＧＡＡ（配列番号５３）、またはＴＴＣＴＣＧＧＡＡ（配列番号５４）を含んでいてもよいし、またはそれからなるもしくはそれから本質的になっていてもよい。一部の実施態様において、本発明の開示の腫瘍溶解性ウイルスは、配列ＴＴＣＣＧＧＧＡＡ（配列番号５３）またはＴＴＣＴＣＧＧＡＡ（配列番号５４）の１つまたはそれより多くのコピーを含む。

【0064】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号５１またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0065】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号５５またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0066】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号５５に示される核酸を含むか、それからなるまたはそれから本質的になる腫瘍溶解性ウイルスによってコードされたタンパク質と同じタンパク質をコードする。一部の実施態様において、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号５１に示される核酸を含むか、それからなるまたはそれから本質的になる腫瘍溶解性ウイルスによってコードされたタンパク質と同じタンパク質をコードする。

【0067】

免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス
本発明の開示は、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスを採用する。ウイルスは、免疫調節因子を送達するためのベクターとして作用する。特定の実施態様において、ウイルスは、１つより多くの免疫調節因子をコードする核酸を含む。

【0068】

細胞（例えば初代ヒト免疫細胞）に免疫調節因子をコードする核酸を導入することが可能なあらゆるウイルスを使用することができる。好適なウイルスとしては、ガンマレトロウイルス（例えばマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ワクシニアウイルスおよびヘルペスウイルス、例えば、両方ともその全体が参照により組み入れられるMausら、Annu Rev Immunol（2014）32：189〜225またはMorganおよびBoyerinas、Biomedicines 2016年4月9日に記載されたようなものが挙げられる。一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、またはヘルペスウイルスであるかまたはそれに由来する。

【0069】

一部の実施態様において、少なくとも１つの免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、少なくとも１つの免疫調節因子をコードする核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスである。

【0070】

本発明の開示に係る免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスによってコードされた免疫調節因子は、好ましくは、対象におけるがんに対する免疫応答、特定には細胞媒介免疫応答が容易になるように選択される。一実施態様において、免疫調節因子は、エフェクター免疫細胞（例えばＣＴＬ、Ｔ_Ｈ１細胞、ＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞）の活性化、補充、増殖、活性および／または生存にとって好都合な条件を提供する。

【0071】

一部の実施態様において、免疫調節因子は、エフェクター免疫応答のアゴニスト、例えば、エフェクター免疫細胞の活性化、補充、増殖、活性および／または生存を促進するサイトカインもしくはケモカイン（例えばＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１７、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、ＭＩＰ−１αまたはＲＡＮＴＥＳ）、共刺激受容体のためのアゴニスト抗体（例えば４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＣＤ３０またはＧＩＴＲ）、または共刺激受容体のためのリガンド（例えば４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ３０ＬまたはＧＩＴＲＬ）であってもよい。一部の実施態様において、エフェクター免疫応答のアゴニストは、免疫チェックポイント阻害剤のアンタゴニスト、または免疫チェックポイント阻害剤のアンタゴニストリガンド、例えばＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、Ｇａｌ−９、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡもしくはＢＴＬＡに対するアンタゴニスト抗体、またはエフェクター免疫応答のアンタゴニストであるサイトカイン／ケモカインのアンタゴニスト、例えばＴＧＦβ（すなわちアンタゴニスト抗ＴＧＦβ抗体または可溶性／デコイＴＧＦβ受容体）であってもよい。一部の実施態様において、エフェクター免疫応答のアゴニストは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞などのバイスタンダーエフェクター免疫細胞と結合してそれを利用する分子であってもよい。

【0072】

一部の実施態様において、免疫調節因子は、免疫調節応答のアンタゴニスト、例えば、免疫調節性細胞、例えば調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および／または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、例えばＣＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２の活性化、補充、増殖、活性および／または生存を促進するサイトカイン／ケモカインのアンタゴニストであってもよい。

【0073】

一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、加えて、さらなる機能的な配列をコードする核酸を含んでいてもよい。例えば、ウイルスは、感染細胞の成長／増殖／生存を低下させるためのタンパク質、または感染細胞を所与の薬剤での処置に対して感受性にするためのタンパク質、または免疫細胞浸潤を容易にするために腫瘍構造を崩壊させるためのタンパク質（例えば腫瘍マトリックスを消化するための酵素）をコードする核酸を含んでいてもよい。

【0074】

一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、加えて、非毒性因子の細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素をコードする核酸を含む。酵素は、非毒性のプロドラッグの、その活性な細胞傷害性の形態への変換を触媒することができる。

【0075】

酵素／プロドラッグ系は当業界において周知であり、その例としては、その全体が参照により組み入れられるMalekshahら、Curr Pharmacol Rep.（2016）2（6）：299〜308に記載されるものが挙げられる。非毒性のプロドラッグ、その活性な細胞傷害性の形態、および非毒性のプロドラッグのその活性な細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素の例は、Malekshahらの図２に示される。

【0076】

一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、加えて、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、シトクロムＰ４５０、カルボキシペプチダーゼＧ２、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼおよび／またはカルボキシルエステラーゼをコードする核酸を含む。

【0077】

例えば、ウイルスは、ウイルスを発現する細胞をガンシクロビル（ＧＣＶ）、アシクロビル（ＡＣＶ）および／またはバラシクロビルでの処置に対して感受性にするために、チミジンキナーゼをコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルスは、ウイルスを発現する細胞を、シトシンデアミナーゼによって５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）に変換される５−フルオロシトシン（５−ＦＣ）での処置に対して感受性にするために、シトシンデアミナーゼをコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルスは、ウイルスを発現する細胞をＣＢ１９５４、ニトロ−ＣＢＩ−ＤＥＩおよび／またはＰＲ−１０４Ａでの処置に対して感受性にするために、ニトロレダクターゼをコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルスは、ウイルスを発現する細胞をオキサアザホスホリン（例えばシクロホスファミドまたはイフォスファミド）での処置に対して感受性にするために、シトクロムＰ４５０をコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルスは、ウイルスを発現する細胞をナイトロジェンマスタードベースの薬物（例えばＣＭＤＡまたはＺＤ２７６７Ｐ）での処置に対して感受性にするために、カルボキシペプチダーゼＧ２をコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルスは、ウイルスを発現する細胞を６−メチルプリン２−デオキシリボシドおよび／またはフルダラビン（例えば６−メチルプリン−２’−デオキシリボシド（ＭｅＰ−ｄＲ）、２−Ｆ−２’−デオキシアデノシン（Ｆ−ｄＡｄｏ）またはアラビノフラノシル−２−Ｆ−アデニンモノホスフェート（Ｆ−ａｒａＡＭＰ）での処置に対して感受性にするために、プリンヌクレオシドホスホリラーゼをコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルスは、ウイルスを発現する細胞をインドール−３−酢酸（ＩＡＡ）での処置に対して感受性にするために、ホースラディッシュペルオキシダーゼをコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルスは、ウイルスを発現する細胞をイリノテカンでの処置に対して感受性にするために、カルボキシルエステラーゼをコードする核酸を含んでいてもよい。

【0078】

一部の実施態様において、ウイルスは、増殖因子のアンタゴニストをコードする核酸を含んでいてもよい。
一部の実施態様において、ウイルスは、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）であってもよい。ＨＤＡｄは、例えば、その全体が参照により組み入れられるRosewellら、J Genet Syndr Gene Ther（2011）Suppl 5：001で総論されている。

【0079】

ＨＤＡｄはウイルスタンパク質のコード配列を欠いているため、目的のコード配列を形質導入するための大きいキャパシティー（最大３７Ｋｂ）を有する。ＨＤＡｄは非統合型であり、細胞周期とは独立して多種多様の細胞型を効率的に形質導入することができ、慢性的な毒性を生じることなく長期の導入遺伝子発現を媒介する。

【0080】

ＨＤＡｄは、ゲノム複製（逆方向末端反復（ＩＴＲ））およびキャプシド化（ψ）に必要なシス作用性ウイルスエレメントのみを含み、したがって伝播に関してヘルパーウイルス依存性である。細胞がヘルパーウイルスとＨＤＡｄの両方に感染すると、ヘルパーウイルス複製機構がトランスで作用して、ＨＤＡｄを複製してパッケージングする。

【0081】

本発明の開示の特定の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、ＯｎｃＡｄであり、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、ＨＤＡｄであり、ＯｎｃＡｄおよびＨＤＡｄは、がんの細胞中で同時感染して複製することができる。

【0082】

ＨＤＡｄのＯｎｃＡｄの補助への依存は、免疫調節因子の高度に局在化した発現を提供する。すなわち、ＨＤＡｄは、ＯｎｃＡｄで同時感染した細胞中でのみ増殖でき、これはＯｎｃＡｄががん細胞における複製に選択的であることを意味することから、ＨＤＡｄによってコードされた因子の発現はがん細胞／組織に限定され、副作用が最小化される。

【0083】

さらに、ＯｎｃＡｄおよびＨＤＡｄは腫瘍細胞を効率的に標的化し感染することから、それらの細胞における免疫調節因子の発現は、通常免疫抑制性の腫瘍微環境を変化させて、エフェクター免疫細胞の活性化、補充（すなわち腫瘍の浸入／浸潤）、増殖、活性および／または生存を促進する条件を提供することができる。

【0084】

特定には、処置の方法がＣＡＲ−Ｔ細胞の使用を採用する本発明の開示の状況で、ＨＤＡｄによってコードされた免疫調節因子の発現は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性化、補充、増殖、活性および／または生存の強化をもたらす。

【0085】

本明細書に記載の特定の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、ＩＬ−１２ｐ７０、ＨＳＶ−１チミジンキナーゼおよびアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディをコードする核酸を含むＨＤＡｄである。

【0086】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、ＩＬ−１２をコードする。一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、配列番号３５に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸を含む。

【0087】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達のアンタゴニストをコードする。一部の実施態様において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達のアンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。

【0088】

一部の実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号３９；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号４０；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号４１を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号４２；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号４３；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号４４を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0089】

一部の実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号４５に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号４６に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨを含む。

【0090】

一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、配列番号３８に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸を含む。

【0091】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、チミジンキナーゼをコードするアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、配列番号３６に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸を含む。

【0092】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、配列番号５０またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0093】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＣＡＲ発現細胞
本発明の開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む免疫細胞を採用する。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原と結合する機能と免疫細胞を活性化する機能の両方を提供する組換え受容体である。ＣＡＲの構造と操作は、例えば、その全体が参照により組み入れられるDottiら、Immunol Rev（2014）257（1）で総論されている。ＣＡＲは、細胞膜アンカー領域に連結された抗原結合領域およびシグナル伝達領域を含む。任意選択のヒンジ領域によって抗原結合領域と細胞膜アンカー領域との間が分離されている場合もあり、このようなヒンジ領域はフレキシブルなリンカーとして作用し得る。

【0094】

ＣＡＲの抗原結合領域は、ＣＡＲが標的化される抗原、または標的に結合することが可能な他の薬剤に特異的な抗体の抗原結合領域をベースとしていてもよい。例えば、ＣＡＲの抗原−結合ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）に関するアミノ酸配列、または標的タンパク質に特異的に結合する抗体の全軽鎖および重鎖可変領域アミノ酸配列を含んでいてもよい。ＣＡＲの抗原−結合ドメインは、他のタンパク質：タンパク質相互作用、例えばリガンド：受容体結合をベースとした標的抗原であってもよく、例えば、ＩＬ−１３Ｒα２標的化ＣＡＲが、ＩＬ−１３をベースとした抗原−結合ドメインを使用して開発されている（例えばKahlonら、2004 Cancer Res 64（24）：9160〜9166を参照）。

【0095】

本発明の開示のＣＡＲは、がん細胞抗原に特異的な抗原結合領域を含む。ＣＡＲの抗原結合領域は、あらゆる好適な様式で、例えばｓｃＦｖ、Ｆａｂなどとして提供されてもよい。一部の実施態様において、ＣＡＲの抗原結合領域は、がん細胞抗原結合ｓｃＦｖを含むかまたはそれからなる。

【0096】

がん細胞抗原は、がん細胞によって発現される抗原である。がん細胞抗原は、あらゆるペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、グリコリピド、脂質、またはそれらのフラグメントであってもよい。がん細胞抗原の発現は、がんに関連する可能性がある。がん細胞抗原は、がん細胞によって異常に発現されることもあり（例えばがん細胞抗原は、異常な局在化を伴い発現されることがある）、またはがん細胞によって異常な構造で発現されることもある。がん細胞抗原は、免疫応答を惹起することが可能な場合もある。

【0097】

一部の実施態様において、抗原は、がん細胞の細胞表面で発現される（すなわちがん細胞抗原は、がん細胞表面抗原である）。一部の実施態様において、本発明の開示の二重特異性の抗原結合ポリペプチドと結合する抗原の一部は、がん細胞の外部表面上に提示される（すなわち細胞外である）。一部の実施態様において、抗原は、例えば膜貫通ドメインまたは他の膜アンカー（例えば脂質アンカー、例えばＧＰＩアンカー）を介して細胞膜に固定される。一部の実施態様において、がん細胞抗原は、がん細胞の細胞表面で発現されるが（すなわち細胞膜中または細胞膜で発現される）、細胞の内部で発現される場合もある（すなわち同等の非がん性細胞の内部で発現される）。

【0098】

がん細胞抗原は、がん関連抗原であってもよい。一部の実施態様において、がん細胞抗原は、その発現が、がんの発症、進行および／または症状の重症度に関連する抗原である。がん関連抗原は、がんの原因または病理に関連する場合もあるし、またはがんの結果として異常に発現される場合もある。一部の実施態様において、抗原は、その発現が、例えば同等の非がん性細胞（例えば同じ組織／細胞型由来の非がん性細胞）による発現レベルと比較して、がんの細胞によって上方調節される（例えばＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルで）抗原である。

【0099】

一部の実施態様において、がん関連抗原は、がん細胞によって優先的に発現され、同等の非がん性細胞（例えば同じ組織／細胞型由来の非がん性細胞）によって発現されないものでもよい。一部の実施態様において、がん関連抗原は、突然変異した腫瘍遺伝子または突然変異した腫瘍抑制遺伝子の生成物であってもよい。一部の実施態様において、がん関連抗原は、過剰発現させた細胞タンパク質の生成物、腫瘍ウイルスによって生産されたがん抗原、腫瘍胎児性抗原、または細胞表面グリコリピドもしくは糖タンパク質であってもよい。

【0100】

がん細胞抗原は、Zarour HM、DeLeo A、Finn OJら、Categories of Tumor Antigens. In：Kufe DW、Pollock RE、Weichselbaum RRら編、Holland-Frei Cancer Medicine.第6版、Hamilton (ON)：BC Decker; 2003によって総論されている。がん細胞抗原としては、腫瘍胎児性抗原：ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ−７２；腫瘍ウイルス抗原、例えばＨＰＶＥ６およびＥ７；過剰発現したタンパク質：ＢＩＮＧ−４、カルシウム活性化塩素チャネル２、サイクリン−Ｂ１、９Ｄ７、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ−１、サバイビン（surviving）；がん精巣抗原：ＢＡＧＥ、ＣＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＸＡＧＥ、ＣＴ９、ＣＴ１０、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２；系統制御抗原：ＭＡＲＴ１、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／２、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原；突然変異した抗原：β−カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ−βＲＩＩ；翻訳後修飾によって変更された抗原：ＭＵＣ１、イディオタイプ抗原：Ｉｇ、ＴＣＲが挙げられる。他のがん細胞抗原としては、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、グルコース制御タンパク質７８（ＧＲＰ７８）、ビメンチン、ヌクレオリン、胎児関連膵臓タンパク質（ＦＡＰＰ）、アルカリホスファターゼ胎盤様２（ＡＬＰＰＬ−２）、シグレック−５、ストレス誘導性リンタンパク質１（ＳＴＩＰ１）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、およびシクロフィリンＢが挙げられる。

【0101】

一部の実施態様において、がん細胞抗原は、ＨＥＲ２である。一部の実施態様において、本発明の開示のＣＡＲは、ＨＥＲ２への特異的な結合が可能な抗原結合ドメインを含む。一部の実施態様において、ＣＡＲは、ＨＥＲ２への特異的な結合が可能な抗体のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを含む。一部の実施態様において、ＣＡＲは、ＨＥＲ２への特異的な結合が可能な抗体のＶＬおよびＶＨ領域を含む抗原結合ドメインを含む。

【0102】

特定の実施態様において、ＣＡＲ発現細胞は、それぞれ異なるがん細胞抗原を標的化する２つの別個のＣＡＲを含み、特定の形態において、ＣＡＲの少なくとも一方が、ＨＥＲ２を標的とする。一部の場合において、ＣＡＲは、２種の異なるがん細胞抗原に対して二重特異性であり、２種の異なるがん細胞抗原のうち１種はＨＥＲ２であってもよい。

【0103】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０、配列番号１８、配列番号２６または配列番号５７；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１、配列番号１９、配列番号２７または配列番号５８；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２、配列番号２０、配列番号２８または配列番号５９を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３、配列番号２１、配列番号２９または配列番号６０；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４、配列番号２２、配列番号３０または配列番号６１；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５、配列番号２３、配列番号３１または配列番号６２を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0104】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0105】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１８；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１９；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２０を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２１；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号２２；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号２３を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0106】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号２６；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号２７；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２８を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２９；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号３０；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号３１を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0107】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、を含むＶＬドメイン：
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号５７；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号５８；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号５９を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号６０；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号６１；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号６２を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む。

【0108】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、配列番号１６、２４、３２または６３に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗原結合ドメインを含む。

【0109】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、配列番号１７、２５、３３または６４に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗原結合ドメインを含む。

【0110】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、配列番号１６に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号１７に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨを含む抗原結合ドメインを含む。一部の実施態様において、ＣＡＲは、配列番号２４に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号２５に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨを含む抗原結合ドメインを含む。一部の実施態様において、ＣＡＲは、配列番号３２に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号３３に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨを含む抗原結合ドメインを含む。一部の実施態様において、ＣＡＲは、配列番号６３に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それからなるまたはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号６４に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それからなるまたはそれから本質的になるＶＨを含む抗原結合ドメインを含む。

【0111】

一部の実施態様において、本発明の開示のＣＡＲは、本発明の開示に係る抗体／抗原結合フラグメントを含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる抗原結合領域を含む。

【0112】

細胞膜アンカー領域は、ＣＡＲの抗原結合領域とシグナル伝達領域との間に提供される。細胞膜アンカー領域は、ＣＡＲを、細胞外空間中の抗原結合領域と細胞内部のシグナル伝達領域で、ＣＡＲ発現細胞の細胞膜に固定するために提供される。好適な膜貫通ドメインとしては、ＣＤ２８、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４またはＣＤ８由来の膜貫通領域が挙げられる。

【0113】

一部の実施態様において、細胞膜アンカー領域は、配列番号４に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0114】

ＣＡＲのシグナル伝達領域は、Ｔ細胞の活性化を可能にする。ＣＡＲシグナル伝達領域は、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含んでいてもよく、これは、ＣＡＲを発現するＴ細胞のリン酸化および活性化のための免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を提供する。また他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達領域も、ＣＡＲ、例えばＦｃγＲＩのＩＴＡＭ含有領域を含むドメインで採用されている（Haynesら、2001 J Immunol 166（1）：182〜187）。ＣＤ３−ζの細胞内ドメイン由来のシグナル伝達領域を含むＣＡＲは、第１世代ＣＡＲと称されることが多い。

【0115】

一部の実施態様において、細胞膜アンカー領域は、配列番号６に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0116】

またＣＡＲのシグナル伝達領域は、標的タンパク質に結合したときのＣＡＲを発現するＴ細胞の活性化を容易にするために、共刺激分子のシグナル伝達領域由来の共刺激配列を含んでいてもよい。好適な共刺激分子としては、少なくともＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７が挙げられる。追加の共刺激配列を含むシグナル伝達領域を有するＣＡＲは、第２世代ＣＡＲと称されることが多い。

【0117】

一部の場合において、ＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激がもたらされるように操作される。例えば、ＣＤ２８共刺激に関連するシグナル伝達は、優先的にホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）経路を活性化し、それに対して４−１ＢＢ媒介シグナル伝達は、ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を介する。それゆえにＣＡＲのシグナル伝達領域は時に、１種より多くの共刺激分子のシグナル伝達領域由来の共刺激配列を含有する。複数の共刺激配列と共にシグナル伝達領域を含むＣＡＲは、第３世代ＣＡＲと称されることが多い。

【0118】

一部の実施態様において、本発明の開示のＣＡＲは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７のうち１つまたはそれより多くの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むか、それからなるもしくはそれから本質的になるか、またはそれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる１つまたはそれより多くの共刺激配列を含む。

【0119】

一部の実施態様において、細胞膜アンカー領域は、配列番号５に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0120】

任意選択のヒンジ領域は、抗原−結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に分離をもたらすことができ、フレキシブルなリンカーとして作用することができる。ヒンジ領域は、結合部分を異なる方向に向けることができるフレキシブルなドメインであってもよい。ヒンジ領域は、ＩｇＧ１由来であってもよいし、または免疫グロブリンのＣＨ_２ＣＨ_３領域由来であってもよい。一部の実施態様において、本発明の開示のＣＡＲは、ＩｇＧ１のヒンジ領域または免疫グロブリンのＣＨ_２ＣＨ_３領域のアミノ酸配列を含むか、それからなるもしくはそれから本質的になるか、またはそれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるヒンジ領域を含む。

【0121】

一部の実施態様において、細胞膜アンカー領域は、配列番号９に少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0122】

一部の実施態様において、ＣＡＲは、配列番号１、２、３または５６に少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になる。

【0123】

本発明の開示はまた、本発明の開示に係るＣＡＲを含むかまたはそれを発現する細胞も提供する。本開示に係るＣＡＲをコードする核酸を含むかまたはそれを発現する細胞も提供される。Ｔ細胞へのＣＡＲの操作は、培養中、インビトロで、形質導入および拡大のために実行することができ、例えば、養子Ｔ細胞療法のためのＴ細胞の拡大中に実行することができる。ＣＡＲを発現するように免疫細胞を操作するための方法は当業者公知であり、例えば、その全体が参照により組み入れられるWangおよびRiviere Mol Ther Oncolytics（2016）3：16015に記載される。「少なくとも１つの細胞」は、複数の細胞を包含し、例えばこのような細胞の集団を包含することが理解されるものとする。

【0124】

本発明の開示に係るＣＡＲを含むかまたはそれを発現する細胞は、真核細胞、例えば哺乳類細胞であってもよい。哺乳動物は、ヒト、またはヒト以外の哺乳動物（例えばウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他のげっ歯類（げっ歯目のあらゆる動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（畜牛、例えば乳牛、またはウシ属のあらゆる動物を含む）、ウマ（ウマ科のあらゆる動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。

【0125】

一部の実施態様において、細胞は、ヒト対象由来であってもよいし、またはヒト対象から得られたものでもよい。ＣＡＲ発現細胞が対象の処置に使用される場合、細胞は、ＣＡＲ発現細胞で処置しようとする対象由来であってもよいし（すなわち細胞は自己であってもよい）、または細胞は、異なる対象由来であってもよい（すなわち細胞は異種であってもよい）。

【0126】

細胞は、免疫細胞であってもよい。細胞は、造血細胞起源の細胞、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞もしくは自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ）、またはそれらの前駆体であってもよい。細胞は、例えばＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、またはＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲαまたはＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４またはＣＤ８を発現していてもよい。

【0127】

一部の実施態様において、細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。

【0128】

ＣＡＲ Ｔ細胞の使用は、ＣＡＲ Ｔ細胞は全身投与でき、原発主要と転移した腫瘍の両方に存在するようになるという利点に関連する（Manzoら、Human Molecular Genetics（2015）R67〜73）。

【0129】

一部の実施態様において、細胞は、抗原特異的Ｔ細胞である。本明細書に記載の実施態様において、「抗原特異的」Ｔ細胞は、Ｔ細胞が特異的な抗原、または前記抗原を発現する細胞に応答してＴ細胞の特定の機能特性を呈示する細胞である。一部の実施態様において、特性は、エフェクターＴ細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞に関連する機能特性である。

【0130】

一部の実施態様において、抗原特異的Ｔ細胞は、以下の特性：細胞傷害性、例えばＴ細胞が特異的な抗原を含む／抗原を発現する細胞に対する細胞傷害性；例えばＴ細胞が特異的な抗原またはＴ細胞が特異的な抗原を含む／発現する細胞に応答する、増殖、ＩＦＮγ発現、ＣＤ１０７ａ発現、ＩＬ−２発現、ＴＮＦα発現、パーフォリン発現、グランザイム発現、グラニュライシン発現、および／またはＦＡＳリガンド（ＦＡＳＬ）発現１つまたはそれより多くを示すものでもよい。抗原特異的Ｔ細胞は、適切なＭＨＣ分子によって提示されると、細胞が特異的な抗原のペプチドを認識することが可能なＴＣＲを含む。抗原特異的Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。

【0131】

一部の実施態様において、Ｔ細胞が特異的な抗原は、ウイルス、例えばアデノウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、または単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）のペプチドまたはポリペプチドであってもよい。

【0132】

ウイルスの抗原に特異的なＴ細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）と本明細書で言及される場合がある。ＶＳＴは、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えばＴ_Ｈ細胞）および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞（例えばＣＴＬ）であってもよい。特定のウイルスの抗原に特異的なＴ細胞は、関連ウイルスに特異的であると記載される場合があり、例えば、アデノウイルスの抗原に特異的なＴ細胞は、アデノウイルス特異的Ｔ細胞、または「ＡｄＶＳＴ」と称する場合もある。ＣＡＲ−Ｔ細胞生成のためのウイルス特異的Ｔ細胞の使用は、ナイーブＴ細胞は、輸注後に限定的な長期持久性しか有さない場合があるが、メモリー区画由来のウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）、および遺伝子操作されたＶＳＴは、幹細胞移植受容者において、輸注後に１０年にわたり持続することが示されたという利点に関連する（Cruzら、Cytotherapy（2010）12：743〜749）。例えば、ＧＤ２．ＣＡＲを発現するＶＳＴは、低い腫瘍負荷量の患者において、輸注後に長期間持続し、完全な腫瘍応答をもたらすことが示されている（Sunら、Journal for Immunotherapy of Cancer（2015）3：5およびPuleら、Nature Medicine（2008）14：1264〜1270）。

【0133】

一部の実施態様において、ＣＡＲを含む／発現する細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ、例えばウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えばＴ_Ｈ細胞）および／またはウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えばＣＴＬ）である。一部の実施態様において、ＣＡＲ発現細胞は、アデノウイルス特異的Ｔ細胞（ＡｄＶＳＴ）、サイトメガロウイルス特異的Ｔ細胞（ＣＭＶＳＴ）、エプスタイン−バーウイルス特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）、インフルエンザウイルス特異的Ｔ細胞、麻疹ウイルス特異的Ｔ細胞、Ｂ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＢＶＳＴ）、Ｃ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＣＶＳＴ）、ヒト免疫不全ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＩＶＳＴ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＬＣＭＶＳＴ）、単純疱疹ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＳＶＳＴ）またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶＳＴ）である。

【0134】

一部の実施態様において、ＣＡＲを含む／発現する細胞は、腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞（例えば腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞）であり、例えば本明細書に記載されるようなものである。

【0135】

本開示のあらゆる細胞は、細胞の単離された集団中に含まれていてもよく、この集団は、均一であってもよいし、またはそうでなくてもよい。具体的な実施態様において、細胞集団は、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞である細胞および／またはＣＡＲ発現細胞の大部分を有する。細胞集団中の細胞は、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびに／またはＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、および／もしくはＣＡＲの１つまたはそれより多くをコードする１つまたは複数の核酸を含んでいてもよい。特定の実施態様において、細胞集団は、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびに／またはＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、および／もしくはＣＡＲの１つまたはそれより多くをコードする１つまたは複数の核酸を含む細胞を有する。

【0136】

腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞
本発明の開示の形態は、腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞（本明細書では、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞とも称される）を提供する。腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞は、腫瘍溶解性ウイルスの抗原のペプチドを認識することが可能な受容体を発現する／含む（例えばＭＨＣ分子によって提示される場合）。免疫細胞は、このような抗原受容体をコードする内因性の核酸の発現の結果として、またはこのような受容体を発現するように操作された結果として、このような受容体を発現する／含むことができる。

【0137】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞は、造血細胞起源の細胞、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ）、またはそれらの前駆体であってもよい。細胞は、例えばＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、またはＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲαまたはＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４またはＣＤ８を発現していてもよい。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞は、Ｔ細胞、例えばＣＤ３＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、Ｔヘルパー細胞（Ｔ_Ｈ細胞）である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。

【0138】

腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞（例えば腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞）は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスに特異的であってもよい。すなわち腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスの１つまたはそれより多くの抗原に特異的であってもよい。

【0139】

目的の抗原および／または目的のウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大するための方法は当業界において周知であり、例えば、その全体が参照により組み入れられるWangおよびRiviere Cancer Gene Ther.（2015）22（2）：85〜94に記載されている。

【0140】

このような方法は、免疫細胞（例えば末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ））のヘテロジニアスな集団を、目的の抗原の１つまたはそれより多くのペプチド、またはそのような抗原／ペプチドを含む／発現する細胞と接触させることを含んでいてもよい。抗原／ペプチドを含む／発現する細胞は、抗原を含む／コードするウイルスでの感染、細胞によるその抗原／ペプチドの取り込み、またはその抗原／ペプチドの発現の結果として上記接触を行ってもよい。提示は、抗原提示細胞の細胞表面におけるＭＨＣ分子の環境下にある。

【0141】

抗原／ペプチドを含む／を発現する細胞は、当業者に周知の方法に従って抗原のペプチドと接触させたものでもよい（抗原のペプチドで「パルス」したものでもよい）。抗原性ペプチドは、ペプチド混合物のライブラリー（１つまたはそれより多くの抗原に対応する）の形態で提供されてもよく、これは、ペプミックス（pepmix）と称することもできる。ペプミックスのペプチドは、長さが８〜２０アミノ酸のオーバーラップするペプチドであってもよいし、関連抗原のアミノ酸配列の全てまたは一部をカバーしていてもよい。

【0142】

ペプチドに特異的な受容体を含む免疫細胞の集団中の細胞は、適切な共刺激シグナルの環境下で、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって提示された抗原のペプチドの認識後、活性化されてもよい（増殖するように刺激されてもよい）。「腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞」は、複数形の細胞を包含し、例えばこのような細胞の集団を包含することが理解されるものとする。このような集団は、インビトロおよび／またはエクスビボで生成／拡大させることができる。

【0143】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞は、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、例えば本明細書に記載されるＯｎｃＡｄに特異的である。一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞は、ＯｎｃＡｄの抗原に特異的である。一部の実施態様において、抗原は、ＯｎｃＡｄタンパク質、例えば初期遺伝子（例えばＥ１（例えばＥ１Ａ、Ｅ１Ｂ）、Ｅ２（例えばＥ２Ａ、Ｅ２Ｂ）、Ｅ３またはＥ４）によってコードされたタンパク質、後期遺伝子（例えばＬ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４またはＬ５）によってコードされたタンパク質、ＩＸによってコードされたタンパク質、またはＩＶａ２によってコードされたタンパク質であるかまたはそれに由来する。一部の実施態様において、抗原は、ＯｎｃＡｄのヘキソンおよび／またはペントンであるかまたはそれに由来する。

【0144】

本発明の開示の様々な形態に係る一部の実施態様において、ウイルスに特異的な免疫細胞は、ウイルスのペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下での培養によって、免疫細胞の集団を刺激することを含む方法によって生成／拡大することができる（またはそれにより生成／拡大されたものでもよい）。

【0145】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞は、ヒトアデノウイルス３ヘキソンに対応するオーバーラップするペプチドの混合物を含むペプミックス、および／またはヒトアデノウイルス５ペントンに対応するオーバーラップするペプチドの混合物を含むペプミックスを採用する方法によって調製される。

【0146】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるＣＡＲを発現する／含む。腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞は、例えば、ＣＡＲをコードする核酸での腫瘍溶解性ウイルス特異的免疫細胞のトランスフェクション／形質導入によって、ＣＡＲを発現するように操作されてもよい。

【0147】

本開示の組合せ
本発明の形態は、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を含む／採用する組成物および方法を含む。

【0148】

（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を含む／採用する組成物および方法（すなわち必然的に免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスも採用しない）も提供される。

【0149】

（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を含む／採用する組成物および方法も提供される。
本明細書に記載される様々な形態に係る一部の実施態様において、ＣＡＲを含む／発現する細胞は、採用される腫瘍溶解性ウイルスに特異的である（例えば、腫瘍溶解性ウイルスの抗原に特異的な抗原受容体（例えばＴＣＲ）を含む）。すなわち、一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスとＣＡＲを含む／発現する細胞の特異性は、適合している。一例として、一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルスであり、ＣＡＲを含む／を発現するＣＡＲ発現細胞は、アデノウイルス特異的Ｔ細胞である。

【0150】

同様に、本明細書に記載される様々な形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞（すなわち同じ腫瘍溶解性ウイルス）と組み合わせて採用される。

【0151】

本明細書で言及される「組合せ」は、組合せの成分を含む生成物および組成物（例えば医薬組成物）を包含する。「組合せ」はまた、組合せの成分を採用する治療レジメンも包含する。

【0152】

一部の実施態様において、組合せの成分は、別個の組成物で提供される。一部の実施態様において、１つより多くの組合せの成分は、１つの組成物で提供される。一部の実施態様において、組合せの成分は、１つの組成物で提供される。

【0153】

同様に、一部の実施態様において、組合せの成分は、別々に投与される。一部の実施態様において、組合せの成分は、組合せの別の成分と共に投与される。一部の実施態様において、組合せの成分は、一緒に投与される。

【0154】

例証として、腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスおよびがん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つの細胞を含む組合せの例において、腫瘍溶解性ウイルスおよび免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、一緒に投与されてもよく、がん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つの細胞は、別々に（例えばその後に）投与されてもよい。

【0155】

組合せの成分が一緒に投与される場合、投与は、本明細書の以下で記載されるような同時投与であってもよい。組合せの成分が別々に投与される場合、投与は、本明細書の以下で記載されるような同時投与または逐次投与であってもよい。組合せの成分が別々に投与される場合において、別個の成分の投与は、同じ投与経路を介して投与されてもよいし、またはそうでなくてもよい。

【0156】

機能特性
本発明の開示の薬剤は、１つまたはそれより多くの機能特性への参照によって定義することができる。薬剤は、例えば実験の実施例に記載されたような分析によって、機能特性に関して評価することができる。同様に、本発明の開示の組合せおよび方法は、１つまたはそれより多くの機能特性および／または作用への参照によって定義することができ、例えば実験の実施例に記載されたような分析によって、このような特性／作用に関して評価することができる。

【0157】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスは、以下の機能の１つまたはそれより多くを有していてもよい：
・がん細胞中で複製する、および／またはがん細胞の細胞致死を引き起こす能力；
・がん細胞中で複製する、および／またはがん細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して低下した、非がん性細胞中で複製する、および／または非がん性細胞の細胞致死を引き起こす能力；
・当業界において公知の１つまたはそれより多くの腫瘍溶解性ウイルスの能力と比較して、がん細胞の細胞致死を引き起こす同等のまたは改善された能力；
・ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）の複製を助ける能力；
・当業界において公知の１つまたはそれより多くの腫瘍溶解性ウイルスの能力と比較して、がん細胞中で複製する同等のまたは改善された能力。

【0158】

一部の実施態様において、本発明の開示に係るがん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞は、以下の機能の１つまたはそれより多くを有していてもよい：
・ＨＥＲ２に結合する能力；
・ＨＥＲ２発現細胞に結合する能力；
・ＨＥＲ２発現細胞の細胞致死を引き起こす能力；
・ＨＥＲ２発現細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して低下した、ＨＥＲ２を発現しない細胞の細胞致死を引き起こす能力。

【0159】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節物質をコードする核酸を含むウイルスおよびがん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つの細胞の組合せは、以下の機能の１つまたはそれより多くを有していてもよい：
・成分のいずれか１つの単独での使用による、または成分のいずれか２つを組み合わせて使用することによるがん細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して改善された、がん細胞の細胞致死を引き起こす能力；
・単独で使用される成分によるがん細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して相乗的な（すなわち相加効果を超える）、がん細胞の細胞致死を引き起こす能力。

【0160】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスとがん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つの細胞との組合せは、以下の機能の１つまたはそれより多くを有していてもよい：
・単独で使用されるいずれかの成分によるがん細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して改善された、がん細胞の細胞致死を引き起こす能力；
・単独で使用される成分によるがん細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して相乗的な（すなわち相加効果を超える）、がん細胞の細胞致死を引き起こす能力。

【0161】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスおよび腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の組合せは、以下の機能の１つまたはそれより多くを有していてもよい：
・単独で使用されるいずれかの成分によるがん細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して改善された、がん細胞の細胞致死を引き起こす能力；
・単独で使用される成分によるがん細胞の細胞致死を引き起こす能力と比較して相乗的な（すなわち相加効果を超える）、がん細胞の細胞致死を引き起こす能力。

【0162】

がん細胞の細胞致死を引き起こす能力の分析は、例えばインビトロで、がん細胞の数／生存率の分析によって評価することができる。がん細胞の細胞致死を引き起こす能力の分析はまた、インビボにおいて、適切なモデルで、例えば、がん細胞の数、腫瘍のサイズ／体積および／またはその他いくつかのがん細胞数との相互関係（例えば疾患の進行、がんの症状の重症度など）の分析によって分析することもできる。

【0163】

治療用途
本発明の開示の形態は、特定には、対象におけるがんの処置における、腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、およびがん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つのＴ細胞の使用に関する。

【0164】

したがって、本発明の開示は、腫瘍溶解性ウイルス；免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；およびがん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与することを含む、がんを処置する方法を提供する。

【0165】

本発明の開示はまた、がんを処置する方法で使用するための、腫瘍溶解性ウイルス；免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；およびがん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つのＴ細胞も提供する。がんを処置するための医薬品の製造における、腫瘍溶解性ウイルス；免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；およびがん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つのＴ細胞の使用も提供される。

【0166】

本発明の開示はまた、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を対象に投与することを含む、がんを処置する方法も提供する。がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞も提供される。がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞の使用も提供される。

【0167】

本発明の開示はまた、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を対象に投与することを含む、がんを処置する方法も提供する。がんを処置する方法で使用するための、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞も提供される。がんを処置する方法に使用するための医薬品の製造における、（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；および（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の使用も提供される。

【0168】

本発明の開示のＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、ＣＡＲ、１つまたは複数の核酸、細胞および医薬組成物を対象に投与することを含む、がんを処置するための方法も提供される。がんを処置するための方法で使用するための、本発明の開示のＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、ＣＡＲ、１つまたは複数の核酸、細胞および医薬組成物も提供される。がんを処置するための医薬品の製造における、本発明の開示のＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、ＣＡＲ、１つまたは複数の核酸、細胞および医薬組成物の使用も提供される。

【0169】

「処置」は、例えば、がんの発達もしくは進行の低減、がんの症状の軽減、またはがんの病理の低減であり得る。がんの処置または軽減は、がんの進行を予防する、例えば状態の悪化を予防する、またはより重度の病状の発達速度を遅くするのに有効な場合がある。一部の実施態様において、処置または軽減は、がんの改善、例えばがんの症状の低減、またはがんの重症度／活性のその他いくつかの相関の低減をもたらすことができる。がんの予防は、状態の悪化の予防またはがんの発達の予防、例えば、早期がんが後期段階に発達することを予防することを指す場合もある。

【0170】

一部の実施態様において、処置は、対象におけるがん細胞の数またはがん細胞を含む組織の量を低下させることを目的としていてもよい。一部の実施態様において、処置は、対象における少なくとも１つの腫瘍のサイズを低下させること、および／またはその成長を予防することを目的としていてもよい。

【0171】

一部の実施態様において、処置は、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスを対象に投与することを含む。一部の実施態様において、処置は、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスを含むかまたはそれをコードする細胞または細胞の集団を対象に投与することを含んでいてもよい。一部の実施態様において、処置は、腫瘍溶解性ウイルスおよび本発明の開示に係る免疫調節因子をコードするウイルスを対象に投与することを含む。一部の実施態様において、処置は、腫瘍溶解性ウイルスを含むかまたはそれをコードする細胞もしくは細胞の集団、および／または本発明の開示に係る免疫調節因子をコードするウイルスを対象に投与することを含んでいてもよい。

【0172】

一部の実施態様において、処置は、本発明の開示に係るＣＡＲを含む／発現するように細胞または細胞の集団を改変することを含んでいてもよい。一部の実施態様において、処置は、本発明の開示のＣＡＲを含む／発現するように改変された細胞または細胞の集団を対象に投与することを含んでいてもよい。一部の実施態様において、処置は、例えば本発明の開示に係るＣＡＲ発現細胞を投与すること、または本発明の開示に係るＣＡＲ発現細胞を生成することによって、がん細胞抗原に特異性を有する免疫細胞または免疫細胞の集団を対象に提供することを目的とする。

【0173】

一部の実施態様において、処置は、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞／免疫細胞の集団を対象に投与することを含んでいてもよい。一部の実施態様において、処置は、腫瘍溶解性ウイルスへの特異性を有する免疫細胞／免疫細胞の集団を対象に提供することを目的とする。一部の実施態様において、処置は、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大することを含んでいてもよい。

【0174】

一部の実施態様において、処置は、本発明の開示に係るＣＡＲを含む／発現するように改変された、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞／免疫細胞の集団を対象に投与することを含んでいてもよい。一部の実施態様において、処置は、腫瘍溶解性ウイルスへの特異性を有し、さらにがん細胞抗原への特異性も有する免疫細胞／免疫細胞の集団を対象に提供することを目的とする。一部の実施態様において、処置は、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大すること、および細胞または集団の細胞を、本発明の開示に係るＣＡＲを含む／発現するように改変することを含んでいてもよい。

【0175】

処置しようとする対象は、あらゆる動物またはヒトであってもよい。対象は、好ましくは哺乳類であり、より好ましくはヒトである。対象は、ヒト以外の哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。対象は、男性または女性であってもよいし、またはあらゆる性別を有していてもよい。対象は、患者であってもよい。対象は、処置を必要とするがんと診断された対象でもよいし、このようながんを有する疑いがある対象でもよいし、またはこのようながんが発達するリスクがある対象でもよい。

【0176】

一部の実施態様において、処置しようとするがんは、がん細胞抗原、例えば本明細書に記載されるがん細胞抗原（例えばＨＥＲ２）を発現する細胞を含む。一部の実施態様において、上記細胞は、がん細胞抗原（例えばＨＥＲ２）を細胞表面で発現する。

【0177】

一部の実施態様において、処置しようとするがんは、ＣＡＲが特異的ながん細胞抗原を発現する細胞を含む。一部の実施態様において、ＣＡＲは、がん細胞抗原結合ドメインを含み、処置しようとするがんは、がん細胞抗原を発現する細胞、例えばがん細胞抗原を細胞表面で発現する細胞を含む。

【0178】

一部の実施態様において、がんは、がん細胞抗原を過剰発現する。がん細胞抗原の過剰発現は、等価な非がん性細胞／非腫瘍組織による発現レベルより大きいがん細胞抗原の発現レベルを検出することによって決定することができる。

【0179】

一部の実施態様において、がんは、ＨＥＲ２を発現するがん、例えばＨＥＲ２を細胞表面で発現するがんである。一部の実施態様において、がんは、ＨＥＲ２を過剰発現する。ＨＥＲ２の過剰発現は、等価な非がん性細胞／非腫瘍組織によるＨＥＲ２の発現レベルより大きいＨＥＲ２の発現レベルを検出することによって決定することができる。

【0180】

一部の実施態様において、本発明の開示に係る処置しようとする対象は、対象から得られたがん細胞または腫瘍によるがん細胞抗原の発現／過剰発現の検出に基づく処置のために選択される。

【0181】

所与のがん細胞抗原の発現は、あらゆる好適な手段によって決定することができる。発現は、遺伝子発現であってもよいし、またはタンパク質発現であってもよい。遺伝子発現は、例えばがん細胞抗原をコードするｍＲＮＡの検出によって、例えば定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって決定することができる。タンパク質発現は、例えばがん細胞抗原の検出によって、例えば抗体ベースの方法によって、例えばウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、またはＥＬＩＳＡによって決定することができる。

【0182】

本発明の開示に従って処置／予防しようとするがんは、あらゆる不要な細胞増殖（または不要な細胞増殖が出現するあらゆる疾患）、新生物または腫瘍であってもよい。がんは、良性でも悪性でもよく、原発性でも続発性（転移性）でもよい。がんは、抵抗性であってもよいし（最初に、または処置後に）、および／または、がんは、再発性であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞のあらゆる異常な成長または増殖であってもよく、あらゆる組織に存在する可能性がある。がんは、例えば副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含む場合もあれば、含まない場合もある）、小脳、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎臓の上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ液、リンパ節、リンパ芽球、上顎、縦隔、腸間膜、子宮筋層、上咽頭、網、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ字結腸、皮膚、小腸、軟部組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、口蓋扁桃、気管、子宮、陰門、白血球由来の組織／細胞であってもよい。

【0183】

処置／予防しようとするがんは、あらゆる種類のがんであってもよく、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連のがん（例えばカポジ肉腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫）、肛門がん、虫垂がん、星細胞腫、皮膚の基底細胞癌、胆管がん（例えば胆管細胞癌）、膀胱がん、骨がん（例えばユーイング肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫）、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発不明癌、心臓腫瘍、中枢神経系のがん（例えば非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、胚芽腫、胚細胞腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫）、子宮頸がん、脊索腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性新生物、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（例えば菌状息肉腫、セザリー症候群）、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜がん（子宮がん）、上衣細胞腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、眼のがん（例えば眼内黒色腫、網膜芽細胞腫）、卵管がん、骨の悪性線維性組織球腫、胆嚢がん、胃（gastric、stomach）がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、卵巣胚細胞腫瘍、睾丸がん、妊娠性絨毛性疾患、ヘアリーセル白血病、頭頸部がん、心腫瘍、肝細胞（肝臓）がん、組織球増殖症、ランゲルハンス細胞、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、膵島細胞腫瘍（膵内分泌腫瘍）、腎臓（腎細胞）がん、喉頭がん、乳頭腫症、白血病、口唇口腔がん、肺がん（非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺がん（ＳＣＬＣ））、リンパ腫、男性乳がん、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移がん、潜在性原発性の転移性頸部扁平上皮がん、ＮＵＴ遺伝子関与の正中線癌、口のがん、多発性内分泌腺腫症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性新生物、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、口唇口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腫症、パラガングリオーマ、副鼻腔がん、鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、クロム親和性細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、妊娠および乳がん、原発性腹膜がん、前立腺がん、直腸がん、再発がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、血管性腫瘍、子宮肉腫、皮膚がん、小腸がん、皮膚の扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、咽喉がん、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行上皮がん、尿道がん、膣がん、外陰がんまたはウィルムス腫瘍のいずれか１つが挙げられる。

【0184】

一部の実施態様において、処置しようとするがんは、上咽頭癌（ＮＰＣ；例えばエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）陽性ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ；例えばヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）陽性ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ；例えばＨＰＶ陽性ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ；例えばＥＢＶ陽性ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ；例えばＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）陽性ＨＣＣ）、肺がん（例えば非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、および頭頸部がん（例えば唇、口、鼻、副鼻腔、咽頭または喉頭の組織に由来するがん、例えば頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））の１つまたはそれより多くである。

【0185】

一部の実施態様において、がんは、ウイルスと関連するかまたはウイルスによって引き起こされる。一部の実施態様において、がんは、ＥＢＶ陽性がんである。一部の実施態様において、がんは、ＨＰＶ陽性がんである。

【0186】

一部の実施態様において、がんは、頭頸部がん、上咽頭癌（ＮＰＣ）、口腔咽頭がん（ＯＰＣ）、子宮頸がん（ＣＣ）、胃（gastric／stomach）がん、胃癌または肺がんの１つである。

【0187】

薬物療法の方法はまた、自己および／または異種細胞または不死化細胞株を使用するものを含む、インビボの療法、エクスビボの療法、および養子免疫療法を含んでいてもよい。

【0188】

投与
投与は、好ましくは「治療有効量」でなされ、これは、個体にとって利益を示すのに十分な量である。投与される実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、処置される疾患の性質および重症度によって決まると予想される。処置の処方、例えば投薬の決定などは一般開業医や他の医師の責務の範囲内であり、典型的には、処置しようとする状態、個々の患者の状態、送達の部位、投与方法および医師に公知の他の要因を考慮に入れる。上述の技術およびプロトコールの例は、Remington’s Pharmaceutical Sciences、第20版、2000年公開、Lippincott, Williams & Wilkinsに見出すことができる。

【0189】

本発明の開示に係るウイルス、ＣＡＲ、核酸、および細胞は、臨床用途のための医薬組成物または医薬として製剤化することができ、このような医薬組成物または医薬は、医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでいてもよい。組成物は、局所、非経口、全身性、腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内、眼球内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、髄腔内、経口または経皮経路投与のために製剤化されてもよく、このような投与は、注射または輸注を含み得る。好適な製剤は、滅菌または等張媒体中にウイルス、ＣＡＲ、核酸、または細胞を含んでいてもよい。医薬および医薬組成物は、流体、例えばゲル形態（フォーム）などに製剤化されてもよい。流体製剤は、ヒトまたは動物の体の選択される領域への注射または輸注（例えばカテーテルを介した）による投与のために製剤化されてもよい。

【0190】

腫瘍溶解性ウイルスおよび／または免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、腫瘍内投与のために製剤化されてもよい。一部の実施態様において、本方法は、腫瘍溶解性ウイルスおよび／または免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスの腫瘍内投与を含んでいてもよい。

【0191】

ＣＡＲを含む細胞および／または腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞は、静脈内投与のために製剤化されてもよい。一部の実施態様において、本方法は、ＣＡＲを含む細胞および／または腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の静脈内投与を含んでいてもよい。

【0192】

本発明の開示の組合せの成分（例えば腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；がん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つのＴ細胞；本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞）の投与は、同時であってもよいし、または逐次的であってもよい。本発明の開示はまた、本発明の開示のＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、ＣＡＲ、１つまたは複数の核酸、細胞および医薬組成物の同時または逐次投与も予期する。

【0193】

同時投与は、一緒に、例えば薬剤を含有する医薬組成物（すなわち複合製剤）として薬剤を投与すること、または互いの直後に、任意選択で同じ投与経路を介して、例えば同じ動脈、静脈または他の血管に投与することを指す。特定の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスおよび免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスは、複合製剤の形態で同時に投与してもよい。特定の実施態様において、同時投与のとき、２種またはそれより多くの薬剤を、異なる投与経路を介して投与してもよい。一部の実施態様において、同時投与は、同時に、または例えば１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間もしくは４８時間以内に投与することを指す。

【0194】

逐次投与は、薬剤の１種またはそれより多くを投与し、それに続き、所与の時間間隔の後、他の薬剤を別々に投与することを指す。２つの薬剤は、必ずしも同じ経路で投与されなくてもよいが、一部の実施態様において、そのような場合もある。時間間隔は、数時間、数日、数週間、数ヶ月、または数年などあらゆる時間間隔であってもよい。一部の実施態様において、逐次投与は、少なくとも１０分、３０分、１時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、６週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月または６ヶ月のいずれかの時間間隔で隔てて投与することを指す。

【0195】

一部の実施態様において、処置は、他の治療または予防の介入、例えば化学療法、免疫療法、放射線療法、外科手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法をさらに含んでいてもよい。このような他の治療または予防の介入は、本開示に包含される療法の前、その間および／またはその後に行ってもよく、他の治療または予防の介入の送達は、本開示の療法と異なる投与経路を介して行ってもよい。化学療法および放射線療法はそれぞれ、薬物での、または電離放射線（例えばＸ線またはγ線）を使用する放射線療法でのがんの処置を指す。薬物は、化学実体、例えば小分子の医薬、抗生物質、ＤＮＡインターカレーター、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、または生物学的物質、例えば抗体、抗体フラグメント、核酸もしくはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であってもよい。薬物は、医薬組成物または医薬として製剤化されてもよい。製剤は、１種またはそれより多くの薬物（例えば１種またはそれより多くの活性薬剤）を、１種またはそれより多くの医薬的に許容される希釈剤、賦形剤または担体と共に含んでいてもよい。

【0196】

化学療法剤は、１つまたはそれより多くの投与経路、例えば非経口、静脈注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内経路によって投与されてもよい。
化学療法は、処置計画に従って施すことができる。処置計画は、化学療法投与の予め決定されたタイムテーブル、計画、スキームまたはスケジュールであってもよく、このような計画は、医師または医療技術者が準備してもよく、処置を必要とする患者に適合するように調整してもよい。

【0197】

処置計画は、患者に投与される化学療法のタイプ；各薬物または放射線の用量（線量）；投与間の時間間隔；各処置の長さ；処置猶予日があれば、その数および性質などの１つまたはそれより多くを指示するものであり得る。併用療法の場合、どのように各薬物を投与すべきかを指示する単一の処置計画が提供されてもよい。

【0198】

化学療法薬および生物製剤は、アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イフォスファミド；プリンまたはピリミジン代謝拮抗物質、例えばアザチオプリンまたはメルカプトプリン；アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（商標））、ドセタキセル；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばＩ型トポイソメラーゼ阻害剤であるカンプトテシン、イリノテカン、およびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤であるアムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン（anthracyline）抗生物質）、例えばダクチノマイシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標））、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；抗体ベースの薬剤、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体フラグメント、例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（Ｍａｂｔｈｅｒａ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブ；ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ；抗血管形成剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；がんワクチン、例えばシプリューセル−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標））から選択することができる。

【0199】

さらなる化学療法薬は、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ−Ｄ Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）、Ａｇｒｙｌｉｎ（登録商標）、Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレライド、Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ａｒｅｄｉａ（登録商標）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）、Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）、ロイコボリンカルシウム、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、Ｃａｒａｃ（商標）、カルボプラチン、カルムスチン、Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボラム因子、クラドリビン、コルチゾン、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）、Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、シトキサン（登録商標）、Ｄａｃｏｇｅｎ、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、塩酸ダウノルビシン、ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、デカドロン、デシタビン、Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、デニロイキン、ジフチトクス、ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス（Diodex）、ドセタキセル、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーム、Ｄｒｏｘｉａ（商標）、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｅｌｉｇａｒｄ（商標）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）、エロキサチン（商標）、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｅｍｃｙｔ（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、アービタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチオール（Ethyol）、Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標）、エベロリムス、Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）、エキセメスタン、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクシウリジン、Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、フルダラビン、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ホリニン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）、Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）ウェハー、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ヘキサドロール、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンリン酸エステル、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、イダルビシン、Ｉｆｅｘ（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イフォスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、Ｉｘｅｍｐｒａ（商標）、キドロラーゼ（Kidrolase）、Ｌａｎａｃｏｒｔ（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドマイド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、Ｌｅｕｋｉｎｅ（商標）、ロイプロリド、ロイロクリスチン、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（商標）、リポソームＡｒａ−Ｃ、Ｌｉｑｕｉｄ Ｐｒｅｄ（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標）、Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ（登録商標）、Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、塩酸メクロレタミン、Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、Ｍｅｓｎｅｘ（商標）、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）、ムスチン、Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）、Ｍｙｌｏｃｅｌ（商標）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）、Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）、ネララビン、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（商標）、Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）、ニルタミド、Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）、ナイトロジェンマスタード、Ｎｏｖａｌｄｅｘ（登録商標）、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、Ｏｎｃｏｓｐａｒ（登録商標）、Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）、Ｏｎｔａｋ（登録商標）、Ｏｎｘａｌ（商標）、オプレルベキン、Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｏｒａｓｏｎｅ（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、タンパク質結合パクリタキセル、パミドロネート、パニツムマブ、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標）、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標）、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ペメトレキセド、ペントスタチン、フェニルアラニンマスタード、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）、Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、Ｐｒｏｌｉｆｅｐｒｏｓｐａｎ ２０ ｗｉｔｈ Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ Ｉｍｐｌａｎｔ Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）、ラロキシフェン、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、リツキシマブ、Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標）、塩酸ルビドマイシン、Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）、Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ ＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチム、Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬ（商標）、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）、タモキシフェン、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）、Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）、ＴｈｅｒａＣｙｓ（登録商標）、チオグアニン、Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ Ｔａｂｌｏｉｄ（登録商標）、チオホスファミド、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）、トレチノイン、Ｔｒｅｘａｌｌ（商標）、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標）、Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）、Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標）、Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標）、Ｖｉａｄｕｒ（商標）、Ｖｉｄａｚａ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、Ｖｉｎｃａｓａｒ Ｐｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、Ｖｕｍｏｎ（登録商標）、Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）、Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）、Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）、Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、Ｚｏｍｅｔａ（登録商標）から選択され得る。

【0200】

本発明の開示の実施態様において、非毒性因子の細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素をコードする核酸／ウイルスが採用され、本方法は、酵素のためのプロドラッグ基質と共に投与することをさらに含んでいてもよい。プロドラッグは、非毒性因子の細胞傷害性の形態への変換を触媒することが可能な酵素をコードする核酸／ウイルスの投与と同時に投与してもよいし、または逐次的に投与してもよい。

【0201】

一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがチミジンキナーゼをコードする場合、プロドラッグは、ガンシクロビル（ＧＣＶ）、アシクロビル（ＡＣＶ）および／またはバラシクロビルから選択される。一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがシトシンデアミナーゼをコードする場合、プロドラッグは、５−フルオロシトシン（５−ＦＣ）である。一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがニトロレダクターゼをコードする場合、プロドラッグは、ＣＢ１９５４、ニトロ−ＣＢＩ−ＤＥＩおよび／またはＰＲ−１０４Ａから選択される。一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがシトクロムＰ４５０をコードする場合、プロドラッグは、オキサアザホスホリン（例えばシクロホスファミドまたはイフォスファミド）である。一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがカルボキシペプチダーゼＧ２をコードする場合、プロドラッグは、ナイトロジェンマスタードベースの薬物（例えばＣＭＤＡまたはＺＤ２７６７Ｐ）である。一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがプリンヌクレオシドホスホリラーゼをコードする場合、プロドラッグは、６−メチルプリン２−デオキシリボシドおよび／またはフルダラビン（例えば６−メチルプリン−２’−デオキシリボシド（ＭｅＰ−ｄＲ）、２−Ｆ−２’−デオキシアデノシン（Ｆ−ｄＡｄｏ）またはアラビノフラノシル−２−Ｆ−アデニンモノホスフェート（Ｆ−ａｒａＡＭＰ）である。一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがホースラディッシュペルオキシダーゼをコードする場合、プロドラッグは、インドール−３−酢酸（ＩＡＡ）である。一部の実施態様において、例えば核酸／ウイルスがカルボキシルエステラーゼをコードする場合、プロドラッグは、イリノテカンである。

【0202】

複数回の用量の本発明の開示の薬剤（例えばウイルス（ＯｎｃＡｄ、ＨｄＡｄ）、ＣＡＲ、１つまたは複数の核酸、ベクター、細胞、組成物、組合せ、プロドラッグ）を提供することもできる。用量の１つまたはそれより多くまたは各々は、別の治療剤の同時または逐次投与を伴っていてもよい。

【0203】

複数回の用量は、予め決定された時間間隔で隔てられていてもよく、時間間隔は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくはそれより長い時間、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日、もしくは１、２、３、４、５、もしくは６ヶ月のいずれかであるように選択してもよい。一例として、用量は、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２、または１日）ごとに１回与えてもよい。

【0204】

養子移入
本発明の開示の実施態様において、処置の方法は、免疫細胞の養子移入を含む。養子細胞移入（ＡＣＴ）は、一般的に、典型的には細胞が単離される血液サンプルの採取によって対象から細胞（例えば免疫細胞）を得ることによるプロセスを指す。次いで細胞を、典型的には何らかの方法で処置または改変し、次いで同じ対象（養子移入は、自己細胞移入である）または異なる対象（養子移入は、異種細胞移入である）のいずれかに投与する。この処置の目的は、典型的には、対象に、特定の望ましい特徴を有する細胞の集団を提供すること、またはその対象において、このような特徴を有する細胞の頻度を増加させることを目的とする。本発明の開示において、養子移入は、対象に細胞または細胞の集団を導入する、および／または対象における細胞または細胞の集団の頻度を増加させる目的で実行することができる。

【0205】

一部の実施態様において、細胞が単離される対象は、改変された細胞が投与される対象である（すなわち養子移入は、自己細胞移入である）。一部の実施態様において、細胞が単離される対象は、改変された細胞が投与される対象と異なる対象である（すなわち、養子移入は、異種細胞移入である）。

【0206】

Ｔ細胞の養子移入は、例えば、その全体が参照により組み入れられるKalosおよびJune 2013、Immunity 39（1）：49〜60に記載されている。ＮＫ細胞の養子移入は、例えば、その全体が参照により組み入れられるDavisら、2015、Cancer J. 21（6）：486〜491に記載されている。

【0207】

このような細胞は、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ）、またはそれらの前駆体であってもよい。一部の実施態様において、細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、Ｔヘルパー細胞（Ｔ_Ｈ細胞）である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞である。一部の実施態様において、Ｔ細胞は、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはｓＨＩＶに特異的である。

【0208】

一部の実施態様において、細胞は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞である。したがって、一部の実施態様において、本方法は、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を対象に投与することを含む。一部の実施態様において、本開示の方法は、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大すること、および腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を対象に投与することを含む。

【0209】

一部の実施態様において、本方法は、
（ａ）対象から免疫細胞を単離すること；
（ｂ）腫瘍溶解性ウイルスのペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下での培養によって免疫細胞を刺激することを含む方法によって、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成または拡大すること、および；
（ｃ）腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を対象に投与すること
を含む。

【0210】

一部の実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を生産するための本方法の工程は、対象から血液サンプルを採取すること；血液サンプルからＰＢＭＣを単離すること；腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大すること（例えば、腫瘍溶解性ウイルスの抗原／ペプチドを含む／発現する細胞（例えばＡＰＣ）の存在下でＰＢＭＣを培養することによって）；インビトロまたはエクスビボの細胞培養で腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること；腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を収集すること；腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞をアジュバント、希釈剤または担体と混合すること；改変された細胞を対象に投与することの１つまたはそれより多くを含んでいてもよい。

【0211】

本発明の開示はまた、がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を投与することを含む、対象におけるがんを処置する方法も提供する。この本開示の特徴と関連して、一部の実施態様において、本方法は、加えて、がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を生産するための工程を含む。ＣＡＲは、第１世代、第２世代または第３世代ＣＡＲまたは後続の世代のＣＡＲであってもよい。ＣＡＲは、例えば、１、２、３つ、またはそれより多くの共刺激ドメインを含んでいてもよい。

【0212】

一部の実施態様において、本方法は、本開示に係るＣＡＲを発現するかまたは含むように、対象から得られた少なくとも１つの細胞を改変すること、任意選択で、改変された少なくとも１つの細胞を拡大すること、および改変された少なくとも１つの細胞を対象に投与することを含む。

【0213】

一部の実施態様において、本方法は、
（ａ）対象から少なくとも１つの細胞を単離すること；
（ｂ）本発明の開示に係るＣＡＲまたは本発明の開示に係るＣＡＲをコードする核酸を発現するかまたは含むように、少なくとも１つの細胞を改変すること、
（ｃ）任意選択で、改変された少なくとも１つの細胞を拡大すること、および；
（ｄ）改変された少なくとも１つの細胞を対象に投与すること
を含む。

【0214】

一部の実施態様において、がん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む／発現する細胞は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞である。一部の実施態様において、本方法は、本開示に係るＣＡＲを発現するかまたは含むように、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を改変すること、任意選択で、改変された腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を拡大すること、および改変された腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を対象に投与することを含む。

【0215】

一部の実施態様において、本方法は、
（ａ）対象から免疫細胞を単離すること；
（ｂ）腫瘍溶解性ウイルスのペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下での培養によって免疫細胞を刺激することを含む方法によって、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成または拡大すること；
（ｃ）本発明の開示に係るＣＡＲまたは本発明の開示に係るＣＡＲをコードする核酸を発現するかまたは含むように、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を改変すること、
（ｄ）任意選択で、改変された腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を拡大すること、および；
（ｅ）改変された腫瘍溶解性ウイルスに特異的な少なくとも１つの免疫細胞を対象に投与すること
を含む。

【0216】

本発明の開示に従って改変された少なくとも１つの細胞は、当業者に周知の方法に従ってＣＡＲを含む／発現するように改変してもよい。改変は、移入された核酸の永続的または一過性発現のための核酸移入を含んでいてもよい。本発明の開示に従って細胞を改変するために、あらゆる好適な遺伝子工学プラットフォームを使用することができる。細胞を改変するための好適な方法としては、例えばガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンベースの遺伝子送達およびＲＮＡトランスフェクションなどの遺伝子工学プラットフォームの使用、例えば上記での参照により本明細書に組み入れられるMausら、Annu Rev Immunol（2014）32：189〜225に記載されたようなものが挙げられる。

【0217】

一部の実施態様において、がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を生産するための本方法の工程は、対象から血液サンプルを採取すること；血液サンプルから、少なくとも１つの細胞を単離および／または拡大すること；インビトロまたはエクスビボの細胞培養で少なくとも１つの細胞を培養すること；少なくとも１つの細胞を、本明細書に記載されるＣＡＲまたは本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸に導入することによって、少なくとも１つの細胞を改変すること；少なくとも１つの改変された細胞を拡大すること；少なくとも１つの改変された細胞を収集すること；改変された細胞をアジュバント、希釈剤または担体と混合すること；改変された細胞を対象に投与することの１つまたはそれより多くを含んでいてもよい。

【0218】

一部の実施態様において、本方法は、加えて、ＣＡＲまたはＣＡＲをコードする核酸の発現を誘導／強化する細胞を処置することを含んでいてもよい。例えば、この核酸は、特定の薬剤での処置に応答して核酸からのＣＡＲの発現を誘導性上方調節するための制御エレメントを含んでいてもよい。一部の実施態様において、処置は、本開示に従って改変された細胞が投与された対象に薬剤を投与することによって、インビボでなされてもよい。一部の実施態様において、処置は、エクスビボまたはインビトロでの培養物中の細胞に薬剤を投与することによって、エクスビボまたはインビトロでなされてもよい。

【0219】

当業者は、例えば参照によりその全体が組み入れられるDaiら、2016 J Nat Cancer Inst 108（7）：djv439への参照によって、本発明の開示に係る細胞の養子移入のための適切な試薬および手順を決定することができる。

【0220】

関連する形態において、本発明の開示は、改変された細胞を調製する方法であって、本発明の開示に係るＣＡＲまたは本発明の開示に係るＣＡＲをコードする核酸を、細胞に導入することによって、少なくとも１つの細胞を改変することを含む、上記方法を提供する。本方法は、好ましくはインビトロまたはエクスビボで実行される。

【0221】

組成物／生成物／キット
本発明の開示はまた、任意選択で単離された本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスも提供する。任意選択で単離された腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸も提供される。任意選択で単離された、腫瘍溶解性ウイルスを含む、または腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸を含む細胞も提供される。

【0222】

本発明の開示はまた、任意選択で単離された本明細書に記載される免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスも提供する。任意選択で単離されたウイルスをコードする核酸も提供される。任意選択で単離された、ウイルスを含む、またはウイルスをコードする核酸を含む細胞も提供される。

【0223】

本発明の開示はまた、任意選択で単離された、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。任意選択で単離されたＣＡＲをコードする核酸も提供される。任意選択で単離された、ＣＡＲを含む、またはＣＡＲをコードする核酸を含む細胞も提供される。

【0224】

本発明の開示はまた、本開示に係る腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、キメラ抗原受容体、１つまたは複数の核酸、または細胞を含む組成物も提供する。

【0225】

腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、キメラ抗原受容体、本発明の開示に係る１つまたは複数の核酸または細胞は、臨床用途のための医薬組成物として製剤化されてもよく、医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでいてもよい。本発明の開示の組合せは、単一の組成物で提供されてもよいし、または組合せの成分を含む複数の組成物として提供されてもよい。

【0226】

本発明の開示に従って、医薬的に有用な組成物の生産のための方法も提供され、このような生産方法は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、キメラ抗原受容体、１つまたは複数の核酸または細胞を単離すること；および／または本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、キメラ抗原受容体、１つまたは複数の核酸または細胞を、医薬的に許容される担体、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することから選択される１つまたはそれより多くの工程を含んでいてもよい。

【0227】

例えば、本発明の開示のさらなる形態は、がんの処置で使用するための医薬または医薬組成物を製剤化または生産する方法であって、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、キメラ抗原受容体、１つまたは複数の核酸または細胞を、医薬的に許容される担体、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することによって、医薬組成物または医薬を製剤化することを含む、上記方法に関する。

【0228】

本発明の開示はまた、本発明の開示に係る腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、キメラ抗原受容体、核酸、細胞または組成物の１つまたはそれより多くを含むパーツのキットも提供する。

【0229】

一部の実施態様において、キットは、本開示に係る予め決定された量の腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、キメラ抗原受容体、１つまたは複数の核酸、または細胞または本発明の開示に係る組成物を有する少なくとも１つの容器を有していてもよい。キットは、本発明の開示の組合せの個々の成分を含有する容器を有していてもよいし、または本発明の開示の組合せの成分の組合せを含有する容器を有していてもよい。

【0230】

キットは、腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、ＣＡＲ、核酸、細胞または組成物を、特定されたがんを処置するための患者の投与に関する説明書と共に提供することができる。腫瘍溶解性ウイルス、免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス、ＣＡＲ、１つまたは複数の核酸、細胞または組成物は、腫瘍または血液への注射または輸注にとって好適になるように製剤化することができる。

【0231】

一部の実施態様において、キットは、本発明の開示に係る細胞を生産するための材料を含んでいてもよい。例えば、キットは、本発明の開示に係るウイルスまたはその抗原／ペプチド、ＣＡＲまたは１つまたは複数の核酸を発現するかまたは含むように細胞を改変するための材料、または本発明の開示に係るウイルスまたはその抗原／ペプチドまたは１つまたは複数の核酸を細胞に導入するための材料を含んでいてもよい。キットは、腫瘍溶解性ウイルスに特異的な免疫細胞を生産するための材料を含んでいてもよく、例えば、キットは、１つまたはそれより多くの腫瘍溶解性ウイルスの抗原のペプミックスを含んでいてもよい。

【0232】

一部の実施態様において、キットは、予め決定された量の別の治療剤（例えば抗感染剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器をさらに含んでいてもよい。このような実施態様において、キットはまた、第２の医薬または医薬組成物を含んでいてもよく、その場合、がんのための組み合わされた処置が提供されるように、２種の医薬または医薬組成物は、同時に投与されてもよいし、または別々に投与されてもよい。また治療剤は、腫瘍または血液への注射または輸注にとって好適になるように製剤化することができる。

【0233】

配列同一性
２つまたはそれより多くのアミノ酸または核酸配列間のパーセント同一性を決定する目的のためのペアワイズおよび複数の配列アライメントは、当業者に公知の様々な方法で、例えば、公共的に利用可能なコンピューターソフトウェア、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Soding, J. 2005、Bioinformatics 21、951〜960）、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅ（Notredameら、2000、J. Mol. Biol.（2000）302、205〜217）、Ｋａｌｉｇｎ（Lassmann and Sonnhammer 2005、BMC Bioinformatics、6（298））およびＭＡＦＦＴ（KatohおよびStandley 2013、Molecular Biology and Evolution、30（4）772〜780）ソフトウェアを使用して達成することができる。このようなソフトウェアを使用する場合、例えばギャップペナルティーおよび伸長ペナルティーに関して、デフォルトパラメーターを使用することが好ましい。

【0234】

【表1-1】

【0235】

【表1-2】

【0236】

【表1-3】

【0237】

【表1-4】

【0238】

【表1-5】

【0239】

【表1-6】

【0240】

【表1-7】

【0241】

【表1-8】

【0242】

【表1-9】

【0243】

【表1-10】

【0244】

【表1-11】

【0245】

【表1-12】

【0246】

【表1-13】

【0247】

【表1-14】

【0248】

【表1-15】

【0249】

【表1-16】

【0250】

【表1-17】

【0251】

【表1-18】

【0252】

【表1-19】

【0253】

【表1-20】

【0254】

【表1-21】

【0255】

【表1-22】

【0256】

【表1-23】

【0257】

【表1-24】

【0258】

【表1-25】

【0259】

【表1-26】

【0260】

【表1-27】

【0261】

【表1-28】

【0262】

【表1-29】

【0263】

【表1-30】

【0264】

【表1-31】

【0265】

【表1-32】

【0266】

【表1-33】

【0267】

【表1-34】

【0268】

【表1-35】

【0269】

【表1-36】

【0270】

【表1-37】

【0271】

【表1-38】

【0272】

【表1-39】

【0273】

【表1-40】

【0274】

【表1-41】

【0275】

【表1-42】

【0276】

【表1-43】

【0277】

本開示は、記載された形態および好ましい特徴の組合せを含み、ただしこのような組合せが明らかに容認できないかまたは明示的に回避される場合を除く。
本明細書で使用される章の見出しは、単に系統化する目的のためであり、記載された主題を制限するものとして解釈されないものとする。

【0278】

ここで本発明の開示の形態および実施態様を添付の図面を参照しながら一例として例示する。さらなる形態および実施態様は当業者には明らかであると予想される。本明細書で述べられた全ての文書は、参照により本明細書に組み入れられる。

【0279】

本明細書にわたり、それに続く特許請求の範囲を含め、文脈上別の意味で解釈すべき場合を除き、言葉「含む（comprise）」、ならびに「含む（comprises）」および「含むこと」などの変化形は、他のあらゆる整数もしくは工程または整数もしくは工程の群を除外するのではなく、述べられた整数もしくは工程または整数もしくは工程の群を包含することを示すと理解されるものとする。

【0280】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、および「その（the）」は、文脈上明らかに別段の指示がない限り、複数形の指示対象を包含することに留意しなければならない。範囲は、本明細書において、「約」の１つの特定の値から、および／または「約」の別の特定の値までと表される場合がある。このような範囲が表される場合、別の実施態様は、１つの特定の値から、および／または他の特定の値までを包含する。同様に、先行する「約」の使用によって値が近似値として表される場合、特定の値が別の実施態様を形成することが理解されるものとする。

【0281】

核酸配列が開示される場合、それらの逆相補鎖も明示的に予期される。
図面の簡単な説明
ここで本開示の原理を例示する実施態様および研究を添付の図面を参照しながら論じる。

【図面の簡単な説明】

【0282】

【図1A】図１Ａは、ＨＥＲ２特異的ＣＡＲコンストラクトの例の概略図を示す。

【図1B】図１Ｂは、Ｔ細胞を形質導入してＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔを生産するためのプロトコールの例の略図を示す。

【図2】フローサイトメトリーによって決定された、示されたＨＥＲ２−ＣＡＲコンストラクトで形質導入したＴ細胞におけるＨＥＲ２−ＣＡＲ、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＯおよびＰＤ−１の発現を示すグラフである。

【図3】フローサイトメトリーによって決定された抗ＨＥＲ２クローンＥ４ＣＡＲコンストラクトでの形質導入後の、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞におけるＨＥＲ２−ＣＡＲ、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＯ、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３およびＴＩＭ−３の発現を示すグラフである。

【図4A】図４Ａは、インビトロにおける、^５１Ｃｒ放出アッセイによって決定された、ＭＤＡ細胞の細胞致死（細胞表面でＨＥＲ２を発現しない；陰性対照）、ＭＤＡ−ＨＥＲ２細胞（細胞表面でＨＥＲ２を発現する；陽性対照）、抗ＨＥＲ２クローンＣ５によるＦａＤｕおよびＳＣＣ４７細胞、Ｅ４およびＦ１のＣＡＲ−Ｔ細胞（または非形質導入（ＮＴ）細胞）を示す棒グラフである。

【図4B】図４Ｂは、フローサイトメトリーによって決定された、ＭＤＡ細胞ではなくＭＤＡ−ＨＥＲ２細胞、ＦａＤｕおよびＳＣＣ４７細胞でのＨＥＲ２の発現を示すグラフを示す。

【図5】インビトロにおける、ｆｆＬｕｃ活性アッセイによって決定された、抗ＨＥＲ２クローンＣ５、Ｅ４およびＦ１のＣＡＲ−Ｔ細胞（または非形質導入（ＮＴ）細胞）による、ホタルルシフェラーゼ（ｆｆＬｕｃ）を発現するように遺伝子改変されたＦａＤｕおよびＳＣＣ４７細胞の細胞致死を示す棒グラフである。データは平均±ＳＤ（ｎ＝４）として提示される。^＊Ｐ＜０．００１。

【図6】図６は、ＩＣＯＳＴＡＴ腫瘍溶解性アデノウイルスコンストラクトの例の配列の概略図を示す。

【図7A】ＭＴＳ生存率アッセイによって決定された、示された濃度のウイルス粒子（Ｖｐ）で感染させた後の、Ａ５４９細胞（図７Ａおよび７Ｆ）、ＦａＤｕ細胞（図７Ｂ）、ＳＣＣ４７細胞（図７Ｃ）、ＷＩ−３８細胞（図７Ｄ）およびＡＲＰＥ−１９細胞（図７Ｅ）を致死させるＩＣＯＳＴＡＴ腫瘍溶解性アデノウイルスの能力を示すグラフである。対照条件としてヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）が含まれる。

【図7B】図７Ａの説明と同じ。

【図7C】図７Ａの説明と同じ。

【図7D】図７Ａの説明と同じ。

【図7E】図７Ａの説明と同じ。

【図7F】図７Ａの説明と同じ。

【図8A】定量リアルタイムＰＣＲによるコピー数分析によって決定された、複製し、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）の複製のためのヘルパーとして作用するＩＣＯＳＴＡＴ腫瘍溶解性アデノウイルスの能力を示す棒グラフである。「Ｏｎｃ５／３ＡｄｉｃｏＳＴＡＴ」と命名されたウイルスがＩＣＯＳＴＡＴである。「＋ＨＤ」は、ＩＣＯＳＴＡＴとＨＤＡｄとの重感染を示す。

【図8B】図８Ａの説明と同じ。

【図9A】細胞培養培地中、１０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγの存在または非存在下におけるＦａＤｕ細胞（図９Ａ）におけるＩＣＯＳＴＡＴ腫瘍溶解性アデノウイルスの複製を示すグラフである。

【図9B】細胞培養培地中、１０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγの存在または非存在下におけるＳＣＣ４７細胞（図９Ｂ）におけるＩＣＯＳＴＡＴ腫瘍溶解性アデノウイルスの複製を示すグラフである。

【図10A】図１０Ａは、ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤＬ１コンストラクトの概略図である。

【図10B】図１０Ｂは、示されたヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）コンストラクトでトランスフェクトされた細胞によるＩＬ−１２ｐ７０の生産を示す棒グラフである。

【図10C】図１０Ｃは、ＨＤＡｄコンストラクトでトランスフェクトされた細胞による抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディの生産を示すウェスタンブロットの写真である。

【図10D】図１０Ｄは、ＨＤＡｄコンストラクトでトランスフェクトされた細胞によるＨＳＶチミジンキナーゼ生産を実証するウェルの写真である。

【図11】ＧＦＰをコードするプラスミド（ｐＧＦＰ；陰性対照）、上記のTanoueらに記載されている抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディをコードするプラスミド（ｐＰＤＬ１ミニＴａｎｏｕｅ）またはＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１によってコードされた抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディをコードするプラスミド（ｐＰＤＬ１ミニ）でトランスフェクトされたＡ５４９細胞の連続希釈した細胞培養培地を使用した、組換えヒトＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ−Ｌ１ミニボディ結合活性のＥＬＩＳＡ分析を示すグラフである。連続希釈した抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体を陽性対照として使用した（ＰＤＬ１ ＩｇＧ）。

【図12A】Ｏｎｃ５／２Ｅ１Δ２４腫瘍溶解性アデノウイルスコンストラクトの例の配列（図１２Ａ）の概略図である。

【図12B】Ｏｎｃ５／２Ｅ１Δ２４腫瘍溶解性アデノウイルスコンストラクトをコードするプラスミドの配列（図１２Ｂ）の概略図である。

【図13A】ＭＴＳ生存率アッセイによって決定された、示された濃度のウイルス粒子（Ｖｐ）で感染させた後の、ＦａＤｕ細胞（図１３Ａ）、ＳＣＣ４７細胞（図１３Ｂ）、ＷＩ−３８細胞（図１３Ｃ）およびＡＲＰＥ−１９細胞（図１３Ｄ）を致死させるＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Ａ腫瘍溶解性アデノウイルスの能力を示すグラフである。対照条件としてヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）が含まれる。

【図13B】図１３Ａの説明と同じ。

【図13C】図１３Ａの説明と同じ。

【図13D】図１３Ａの説明と同じ。

【図14】インビトロで、示されたＣＡＲコンストラクトで形質導入してからの示された日数細胞培養した後のＨＥＲ２特異的ＣＡＲ Ｔ細胞の数を示すグラフである。

【図15A】図１５Ａ〜Ｃは、頭頸部扁平上皮癌の正位のＦａＤｕ細胞由来モデルにおける養子移入したルシフェラーゼを発現するＴ細胞の抗がん活性のインビボ分析の結果を示す画像およびグラフである。図１５Ａと図１５Ｂは、細胞の輸注後の示された日における、マウス中の、ルシフェラーゼを発現する非形質導入Ｔ細胞（ＮＴ）、およびＣ５、Ｆ１またはＡ３ＨＥＲ２特異的ＣＡＲを発現するルシフェラーゼを発現するＴ細胞を発現する細胞の数および配置を示す。図１５Ｃは、細胞の輸注後の示された日における、異なる処置グループ中の生存する対象のパーセンテージを示す。マウスにＴ細胞が投与されなかった陰性対照条件は（−）とも示される。

【図15B】図１５Ａの説明と同じ。

【図15C】図１５Ａの説明と同じ。

【図16A】図１６Ａ〜Ｃは、インビボでのＮＳＧマウスにおける養子移入したＴ細胞の分析の結果を示す画像およびグラフである。図１６Ａは、細胞の輸注後の示された日における、マウス中の、ルシフェラーゼを発現する非形質導入Ｔ細胞（ＮＴ）、およびＣ５、Ｆ１またはＡ３ＨＥＲ２特異的ＣＡＲを発現するルシフェラーゼを発現するＴ細胞を発現する細胞の数および配置を示す。

【図16B】図１６Ｂは、細胞の輸注後の示された日における、異なるグループのマウスごとの腹側表面の総流束（１秒当たりの光子；ｐ／秒）に関する測定を示す。

【図16C】図１６Ｃは、０日目の体重のパーセンテージとして表される、細胞の輸注後の示された日における、異なる処置グループ中のマウスの体重を示す。

【図17A】図１７Ａ〜Ｃは、インビボにおけるＣＡｄｔｒｉｏと養子移入したＴ細胞との組合せの抗がん活性の分析のための実験で使用されるＦ１ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる特徴付けの結果を示す散布図およびヒストグラムである。図１７Ａは、Ｆ１．ＣＡＲ−Ｔ集団中のＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。

【図17B】図１７Ｂは、細胞表面でＨＥＲ２ ＣＡＲを発現する細胞のパーセンテージを示す。

【図17C】図１７Ｃは、ＣＣＲ７および／またはＣＤ４５ＲＯを発現するＦ１．ＣＡＲ−Ｔ集団中の細胞のパーセンテージを示す。

【図18A】図１８Ａ〜Ｄは、頭頸部扁平上皮癌の正位のＦａＤｕ細胞由来モデルにおけるＣＡｄｔｒｉｏと養子移入したＴ細胞との組合せの抗がん活性のインビボにおける分析の結果を示す画像およびグラフである。図１８Ａは、細胞の輸注後の示された日における、マウス中の、ルシフェラーゼを発現する非形質導入Ｔ細胞（ＮＴ）、およびＦ１ＨＥＲ２特異的ＣＡＲを発現するルシフェラーゼを発現するＴ細胞を発現する細胞の数および配置を示す右上の図（Ｙ軸は、総流束として標識される）は、「ＣＡＲ Ｔ細胞注射後の日数」である。下の２つの図は、「ＣＡｄｔｒｉｏの注射後の日数」である。

【図18B】図１８Ｂは、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における、異なるグループのマウスごとの腹側表面の総流束（１秒当たりの光子；ｐ／秒）に関する測定を示す。

【図18C】図１８Ｃは、０日目の体重のパーセンテージとして表される、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における異なる処置グループ中のマウスの体重を示す。

【図18D】図１８Ｄは、ＣＡｄｔｒｉｏ投与後の示された日における異なる処置グループ中の生存する対象のパーセンテージを示す。またマウスにＣＡｄｔｒｉｏまたはＴ細胞を投与しなかった陰性対照条件も（−）と示した。

【図19A】図１９Ａ〜Ｃは、頭頸部扁平上皮癌の正位のＦａＤｕ細胞由来モデルにおける、異なる比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１および養子移入したＨＥＲ２特異的ＣＡＲ Ｔ細胞の組合せの抗がん活性のインビボにおける分析の結果を示す画像およびグラフである。図１９Ａは、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における、マウス中のルシフェラーゼを発現するＦａＤｕ細胞の数および配置を示す。

【図19B】図１９Ｂは、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における、異なるグループのマウスごとの腹側表面の総流束（１秒当たりの光子；ｐ／秒）に関する測定を示す。

【図19C】図１９Ｃは、０日目の体重のパーセンテージとして表される、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における異なる処置グループ中のマウスの体重を示す。

【図20A】図２０Ａ〜Ｄは、頭頸部扁平上皮癌の異所性ＦａＤｕ細胞由来モデルにおけるＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４およびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１およびガンシクロビル（ＧＣＶ）の組合せのインビボにおける分析の結果を示す棒グラフおよびグラフである。図２０Ａと２０Ｂは、ＧＣＶ処置有りまたは無しで、感染後２２日にＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４およびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１（ＣＡｄｔｒｉｏ）の組合せを投与したマウスの腫瘍におけるＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４（図２０Ａ）およびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１（図２０Ｂ）のＧＡＰＤＨで正規化したコピー数を示す。

【図20B】図２０Ａと図２０Ｂは、ＧＣＶ処置有りまたは無しで、感染後２２日にＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４およびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１（ＣＡｄｔｒｉｏ）の組合せを投与したマウスの腫瘍におけるＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４（図２０Ａ）およびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１（図２０Ｂ）のＧＡＰＤＨで正規化したコピー数を示す。

【図20C】図２０Ｃは、ＧＣＶ処置有りまたは無しで、ＣＡｄｔｒｉｏ注射後の示された日にＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４およびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１（ＣＡｄｔｒｉｏ）の組合せを投与したマウスのｍｍ^３での腫瘍体積を示す。

【図20D】図２０Ｄは、ＧＣＶ処置有りまたは無しで、ＣＡｄｔｒｉｏ注射後の示された日に得られた血液サンプルのＥＬＩＳＡ分析によって検出されたＩＬ−１２レベルを示す。

【図21A】図２１Ａ〜Ｃは、ガンシクロビル（ＧＣＶ）の存在または非存在下で培養した、異なるＨＤＡｄウイルスで感染させたがん細胞株における導入遺伝子発現の分析の結果を示す棒グラフおよび画像である。図２１Ａは、ＥＬＩＳＡによって決定された細胞培養上清中のＩＬ−１２のレベルを示す。

【図21B】図２１Ｂは、ウェスタンブロットによって細胞培養上清中で検出された抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディを示す。

【図21C】図２１Ｃは、実験の最後におけるクリスタルバイオレット染色によって生存可能な細胞を示す。

【図22A】図２２Ａと図２２Ｂは、実施例９の実験で使用されたアデノウイルス特異的Ｔ細胞（ＡｄＶＳＴ）のフローサイトメトリーによる特徴付けの結果を示す散布図である。図２２Ａは、ＡｄＶＳＴ集団中のＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。

【図22B】図２２Ｂは、ＣＣＲ７および／またはＣＤ４５ＲＯを発現するＡｄＶＳＴ集団中の細胞のパーセンテージを示す。

【図23A】図２３Ａ〜Ｃは、実施例９の実験で使用されたＦ１．ＣＡＲで形質導入したＡｄＶＳＴのフローサイトメトリーによる特徴付けの結果を示す散布図およびヒストグラムである。図２３Ａは、形質導入された集団中のＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。

【図23B】図２３Ｂは、細胞表面でＨＥＲ２ ＣＡＲを発現する細胞のパーセンテージを示す。

【図23C】図２３Ｃは、ＣＣＲ７および／またはＣＤ４５ＲＯを発現するＦ１．ＣＡＲ−ＡｄＶＳＴ集団中の細胞のパーセンテージを示す。

【図24A】図２４Ａ〜Ｄは、アデノウイルス特異的Ｔ細胞（ＡｄＶＳＴ）、Ｆ１．ＣＡＲで形質導入したＡｄＶＳＴ、Ｆ１．ＣＡＲで形質導入したＡｄＶＳＴとＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４との組合せ、およびＦ１．ＣＡＲで形質導入したＡｄＶＳＴとＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４＋ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１（「ＣＡｄｔｒｉｏ」）との組合せの抗がん活性のインビボにおける分析の結果を示す画像およびグラフである。図２４Ａは、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における、マウス中のルシフェラーゼを発現するＦａＤｕ細胞の数および配置を示す。

【図24B】図２４Ｂは、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における、異なるグループのマウスごとの腹側表面の総流束（１秒当たりの光子；ｐ／秒）に関する測定を示す。図２４Ｂに関して、^＊Ｐ＜０．０４、^＊＊Ｐ＜０．０７、^＊＊＊Ｐ＜０．０２。

【図24C】図２４Ｃは、０日目の体重のパーセンテージとして表される、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における異なる処置グループ中のマウスの体重を示す。図２４Ｃに関して、^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊Ｐ＜０．０４、^＊＊＊Ｐ＜０．０２。

【図24D】図２４Ｄは、ＣＡｄｔｒｉｏの投与後の示された日における異なる処置グループ中の生存する対象のパーセンテージを示す。図２４Ｄに関して、^＊Ｐ＝０．０３、^＊＊Ｐ＝０．０２。

【発明を実施するための形態】

【0283】

番号付けした開示の記述
以下の番号付けした段落（パラグラフ）は、本発明の開示の特定の形態および実施態様を記載する：
１．（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス；（ｉｉ）免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルス；および（ｉｉｉ）がん細胞抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む少なくとも１つの細胞を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。

【0284】

２．前記腫瘍溶解性ウイルスが、腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）である、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記腫瘍溶解性ウイルスが、アデノウイルス５（Ａｄ５）に由来するパラグラフ１またはパラグラフ２に記載の方法。

【0285】

４．前記腫瘍溶解性ウイルスが、Ａｄ５によってコードされたＥ１Ａタンパク質と比較して低下したＲｂタンパク質への結合を呈示するＥ１Ａタンパク質をコードする、パラグラフ１〜３のいずれか一項に記載の方法。

【0286】

５．前記腫瘍溶解性ウイルスが、アミノ酸配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したＥ１Ａタンパク質をコードする、パラグラフ１〜４のいずれか一項に記載の方法。
６．前記腫瘍溶解性ウイルスが、アミノ酸配列の配列番号３４を含むか、またはそれからなるＥ１Ａタンパク質をコードする、パラグラフ１〜５のいずれか一項に記載の方法。

【0287】

７．前記腫瘍溶解性ウイルスが、１つまたはそれより多くの転写因子のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む、パラグラフ１〜６のいずれか一項に記載の方法。

【0288】

８．前記腫瘍溶解性ウイルスが、ＳＴＡＴ１のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む、パラグラフ１〜７のいずれか一項に記載の方法。
９．免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスが、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）である、パラグラフ１〜８のいずれか一項に記載の方法。

【0289】

１０．前記免疫調節因子が、エフェクター免疫応答のアゴニストまたは免疫調節応答のアンタゴニストから選択される、パラグラフ１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１１．免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスが、ＩＬ−１２および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸を含む、パラグラフ１〜１０のいずれか一項に記載の方法。

【0290】

１２．免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスが、チミジンキナーゼをコードする核酸を含む、パラグラフ１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
１３．前記がん細胞抗原に特異的なＣＡＲを含む少なくとも１つの細胞が、Ｔ細胞である、パラグラフ１〜１２のいずれか一項に記載の方法。

【0291】

１４．前記ＣＡＲが、ＨＥＲ２への特異的な結合が可能な抗原結合ドメインを含む、パラグラフ１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
１５．パラグラフ１〜１４のいずれか一項に記載の方法であって、前記ＣＡＲが、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１８；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１９；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２０を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２１；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号２２；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号２３を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号２６；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号２７；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２８を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２９；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号３０；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号３１を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含む、方法。

【0292】

１６．パラグラフ１〜１５のいずれか一項に記載の方法であって、前記ＣＡＲが、
配列番号１６に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号１７に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号２４に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号２５に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号３２に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号３３に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ
を含む抗原結合ドメインを含む、方法。

【0293】

１７．パラグラフ１〜１７のいずれか一項に記載の方法であって、前記方法が、加えて、
（ａ）対象から少なくとも１つの細胞を単離すること；
（ｂ）がん細胞抗原に特異的なＣＡＲ、またはがん細胞抗原に特異的なＣＡＲをコードする核酸を発現するかまたは含むように、少なくとも１つの細胞を改変すること、
（ｃ）任意選択で、改変された少なくとも１つの細胞を拡大すること、および；
（ｄ）改変された少なくとも１つの細胞を対象に投与すること
を含む、パラグラフ１〜１６のいずれか一項に記載の方法。

【0294】

１８．前記がんが、頭頸部がん、上咽頭癌（ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）および肺がんから選択される、方法。
１９．アミノ酸配列の配列番号３４を含むか、またはそれからなるＥ１Ａタンパク質をコードする腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）。

【0295】

２０．ＳＴＡＴ１のための１つまたはそれより多くの結合部位を有する核酸を含む腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）。
２１．配列番号５１またはコドン縮重の結果としての等価な配列に少なくとも６０％の配列同一性を有する核酸配列を含む、パラグラフ２０に記載のＯｎｃＡｄ。

【0296】

２２．ＩＬ−１２および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする核酸を含むヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）。
２３．前記ＨＤＡｄが、加えて、チミジンキナーゼをコードする核酸を含む、パラグラフ２２に記載のＨＤＡｄ。

【0297】

２４．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１０；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１１；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号１２を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号１３；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号１４；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号１５を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号１８；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号１９；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２０を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２１；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号２２；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号２３を含むＶＨドメイン；
または
ＬＣ−ＣＲＤ１：配列番号２６；
ＬＣ−ＣＲＤ２：配列番号２７；
ＬＣ−ＣＲＤ３：配列番号２８を含むＶＬドメイン；
および
ＨＣ−ＣＲＤ１：配列番号２９；
ＨＣ−ＣＲＤ２：配列番号３０；
ＨＣ−ＣＲＤ３：配列番号３１を含むＶＨドメイン
を含む抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【0298】

２５．前記ＣＡＲが、
配列番号１６に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号１７に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号２４に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＬ、および配列番号２５に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ；
または
配列番号３２に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＬ、および配列番号３３に少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるもしくはそれから本質的になるＶＨ
を含む抗原結合ドメインを含む、パラグラフ２４に記載のＣＡＲ。

【0299】

２６．パラグラフ１９〜２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、パラグラフ２２またはパラグラフ２３に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、またはパラグラフ２４またはパラグラフ２５に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸であって、任意選択で単離されたまたは人工の核酸である、上記核酸。

【0300】

２７．パラグラフ１９〜２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、パラグラフ２２またはパラグラフ２３に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、パラグラフ２４またはパラグラフ２５に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはパラグラフ２６に記載の核酸を含む細胞であって、任意選択で、細胞は人工であり、天然に見出されない、上記ＯｎｃＡｄ、ＨＤＡｄ、ＣＡＲまたは細胞。

【0301】

２８．パラグラフ１９〜２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、パラグラフ２２またはパラグラフ２３に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、パラグラフ２４またはパラグラフ２５に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、パラグラフ２６に記載の核酸、またはパラグラフ２７に記載の細胞、および医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含む医薬組成物。

【0302】

２９．パラグラフ１９〜２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、パラグラフ２２またはパラグラフ２３に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、パラグラフ２４またはパラグラフ２５に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、パラグラフ２６に記載の核酸、パラグラフ２７に記載の細胞またはパラグラフ２８に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。

【0303】

３０．がんを処置する方法で使用するための、パラグラフ１９〜２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、パラグラフ２２またはパラグラフ２３に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、パラグラフ２４またはパラグラフ２５に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、パラグラフ２６に記載の核酸、パラグラフ２７に記載の細胞またはパラグラフ２８に記載の医薬組成物。

【0304】

３１．がんを処置するための医薬品の製造における、パラグラフ１９〜２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、パラグラフ２２またはパラグラフ２３に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、パラグラフ２４またはパラグラフ２５に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、パラグラフ２６に記載の核酸、パラグラフ２７に記載の細胞またはパラグラフ２８に記載の医薬組成物の使用。

【0305】

３２．前記がんが、頭頸部がん、上咽頭癌（ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）および肺がんから選択される、パラグラフ２９〜３１のいずれか一項に記載の方法、使用または使用。

【0306】

３３．予め決定された量の、パラグラフ１９〜２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス（ＯｎｃＡｄ）、パラグラフ２２またはパラグラフ２３に記載のヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）、パラグラフ２４またはパラグラフ２５に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、パラグラフ２６に記載の核酸、パラグラフ２７に記載の細胞またはパラグラフ２８に記載の医薬組成物を含むパーツのキット。

【実施例】

【0307】

以下の実施例において、発明者らは、新規のＨＥＲ−２特異的ＣＡＲおよびＣＡＲ−Ｔ細胞、腫瘍溶解性アデノウイルスおよびヘルパー依存性アデノウイルスの生成上の機能的な特徴付けを説明する。

【0308】

実施例１：ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞
１．１ ＨＥＲ２特異的ＣＡＲコンストラクトおよびＣＡＲ−Ｔ細胞の生成
ＨＥＲ２結合ＣＡＲコンストラクトを調製した。簡単に言えば、抗ＨＥＲ２抗体クローンＣ５、Ｅ４、Ｆ１またはＡ３のためのｓｃＦｖ（すなわちリンカー配列によって一体化したＶＬドメインおよびＶＨドメイン）をコードするＤＮＡを、５’シグナルペプチド（ＳＰ）、ならびにＣＤ２８膜貫通（ＴＭ）および細胞内ドメイン配列を３’ＣＤ３ζ細胞内ドメイン配列と共に含むＣＡＲコンストラクト骨格にクローニングした。図１Ａに、３つのＨＥＲ２結合ＣＡＲコンストラクトを模式的に示す。

【0309】

ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞を、図１Ｂで図表的に示したように生成した。簡単に言えば、フィコール密度勾配遠心分離によって、ヒトＰＢＭＣを血液サンプルから単離した。ＩＬ−２の存在下における抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）／抗ＣＤ２８での刺激によって細胞を処理して、Ｔ細胞の活性化と増殖を促進し、細胞をＨＥＲ２ ＣＡＲコンストラクトをコードするレトロウイルスで形質導入した。１００ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−２の存在下で培養することによりＴ細胞を拡大し、形質導入から６日後にこれを凍結した。ＨＥＲ２特異的ＣＡＲコンストラクトで形質導入したＴ細胞をインビトロで培養することによって直ちに拡大した（例えば図１４を参照）。

【0310】

Ｔ細胞を融解し、１００ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−２の存在下で５日間拡大し、インビトロ／インビボでの実験および表現型分析のために使用した。
１．２ ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞の特徴付け
１．２．１ 表面マーカーおよびＨＥＲ２ ＣＡＲの発現
抗ＨＥＲ２抗体クローンＥ４のｓｃＦｖをコードするＨＥＲ２ ＣＡＲコンストラクトで形質導入したＴ細胞を、異なる細胞表面分子の発現に関してフローサイトメトリーによって特徴付けた。拡大したＨＥＲ２特異的ＣＡＲ Ｔ細胞を、蛍光標識したモノクローナル抗体で４℃で３０分間染色した。生細胞／死細胞の識別を、染色に７ＡＡＤ（ＢＤファーミンジェン（BD Pharmingen））を含めることによって達成した。染色された細胞を、ＧａｌｌｉｏｓフローサイトメーターおよびＫａｌｕｚａソフトウェア（ＢＤバイオサイエンス（BD Bioscience））を製造元の説明書に従って使用して分析した。

【0311】

図２および３に結果を示す。形質導入された細胞において、ＨＥＲ２−ＣＡＲの強い表面発現が検出された（図２）。
図３は、ＨＥＲ２（Ｅ４）−ＣＡＲで形質導入したＴ細胞の特徴付けの結果を示す。ＣＤ３＋細胞、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を発現するＨＥＲ２（Ｅ４）−ＣＡＲは、非形質導入細胞と比較して、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３およびＴＩＭ−３の発現が増加し、ＣＣＲ７の発現レベルが低下したことを示した（図３）。

【0312】

１．２．２ 細胞致死活性
細胞致死アッセイにおいて、インビトロでＨＥＲ２を発現するがん細胞を致死させる能力に関して、ＨＥＲ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞を分析した。

【0313】

第１の実験で、ＨＥＲ２陰性ＭＤＡ細胞株の細胞（陰性対照）、ＨＥＲ２を安定して発現するＭＤＡ細胞（ＭＤＡ−ＨＥＲ２；陽性対照）、咽頭扁平上皮癌細胞株ＦａＤｕまたは頭頸部扁平上皮癌細胞株ＳＣＣ４７細胞をクロム−５１（^５１Ｃｒ）で標識し、非形質導入Ｔ細胞（ＮＴ）または示されたＣＡＲを発現するＨＥＲ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞と、２０：１のエフェクター：標的細胞の比率で４時間共培養した。遠心分離の後、液体シンチレーションカウンターを使用して細胞培養培地中の^５１Ｃｒレベルを計数した。図４Ａに結果を示す。ＨＥＲ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＨＥＲ２を発現するがん細胞を致死させることが示された。この実験を１０：１のエフェクター：標的細胞の比率を使用して実行したところ、類似の結果が得られた。

【0314】

ＭＤＡ−ＨＥＲ２、ＦａＤｕおよびＳＣＣ４７におけるＨＥＲ２の発現を、フローサイトメトリーによって確認した。簡単に言えば、蛍光標識したモノクローナル抗ＨＥＲ２抗体またはアイソタイプ対照抗体で、細胞を４℃で３０分間染色した。生細胞／死細胞の識別を、染色に７ＡＡＤ（ＢＤファーミンジェン）を含めることによって達成した。染色された細胞を、ＧａｌｌｉｏｓフローサイトメーターおよびＫａｌｕｚａソフトウェア（ＢＤバイオサイエンス）を製造元の説明書に従って使用して分析した。図４Ｂに結果を示す。ＭＤＡ細胞はＨＥＲ２を発現しないが、ＭＤＡ−ＨＥＲ２、ＦａＤｕおよびＳＣＣ４７はＨＥＲ２を発現することが確認された。

【0315】

別の実験において、ホタルルシフェラーゼ（ｆｆＬｕｃ）を発現するように遺伝子改変されたＦａＤｕおよびＳＣＣ４７細胞を２４−ウェルプレートのウェルにシーディングし、ＨＥＲ２（Ｃ５）−ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＨＥＲ２（Ｅ４）−ＣＡＲ−Ｔ細胞、またはＨＥＲ２（Ｆ１）−ＣＡＲ−Ｔ細胞と、１：５のエフェクター：標的細胞の比率で３日間共培養し、プレートリーダー（ライフテクノロジーズ（Life Technologies））を使用してｆｆＬｕｃ活性を測定した。図５に結果を示す。ＨＥＲ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ｆｆＬｕｃ活性（相対発光量、ＲＬＵ）の低減によって証明されたように、ＨＥＲ２を発現するがん細胞を致死させることが示された。１：２０のエフェクター：標的細胞の比率を使用して実験を実行したところ、類似の結果が得られた。

【0316】

実施例２：ＯｎｃＡｄコンストラクト
２．１ ＯｎｃＡｄコンストラクトの生成
組換えＤＮＡ技術を使用して、腫瘍溶解性アデノウイルスをコードする新規のコンストラクトを調製する。特定の実施態様において、ＯｎｃＡｄは、公知のウイルスの改変で生産される。例えば、アデノウイルス５由来のＥ１Ａタンパク質をコードする領域、例えばＲｂタンパク質との結合に関与する配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したものは、同様に配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したアデノウイルス２由来のＥ１Ａタンパク質をコードする配列で置き換えられる。

【0317】

図６に示されるＩＣＯＳＴＡＴを、例えばRojasら、2010 Mol Ther 18 1960〜1971で開示されたＩＣＯＶＩＲ１５から生産した。簡単に言えば、転写因子Ｅ２Ｆのための結合部位の８つのコピーをコードするＩＣＯＶＩＲ１５の領域を、転写因子ＳＴＡＴ１のための結合部位の８つのタンデムコピーをコードする領域で置き換えた。配列番号５１にＩＣＯＳＴＡＴの配列を示す。

【0318】

組換えＤＮＡ技術を使用することによって、配列番号５５に示され、図１２で模式的に表されたＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４（本明細書では、「Ｏｎｃ５／２Ｅ１Δ２４」とも称される）も調製した。Ｏｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４は、例えばFueyoら、2000 Oncogene 19：2〜12（その全体が参照により組み入れられる；Ｏｎｃ５Δ２４は、Fueyoらでは「Δ２４」とも称される）で開示されたＯｎｃ５Δ２４と類似の構造を有するが、Ｏｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４は、配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したアデノウイルスタイプ５（Ａｄ５）由来のＥ１Ａタンパク質ではなく、配列ＬＴＣＨＥＡＣＦ（配列番号５２）が欠失したアデノウイルスタイプ２（Ａｄ２）由来のＥ１Ａタンパク質をコードするという点で異なる。

【0319】

２．２ 細胞致死活性
選択された腫瘍溶解性アデノウイルスまたは実施例２．１で生成したＩＣＯＳＴＡＴのがん細胞を致死させる能力は、例えばＭＴＳアッセイによって分析することができる。簡単に言えば、ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞株Ａ５４９細胞、ＦａＤｕ細胞、ＳＣＣ４７細胞、または非がん性ＷＩ−３８ヒト肺線維芽細胞またはＡＲＰＥ−１９ヒト網膜色素上皮細胞の細胞を９６−ウェルプレートのウェルにシーディングし、異なる量のヘルパー依存性、非複製アデノウイルス（ＨＤＡｄ；陰性対照として）、選択された腫瘍溶解性アデノウイルス（例えば実施例２．１に記載されるＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４）、または上記の実施例２．１に記載されるＩＣＯＳＴＡＴで感染させた。

【0320】

細胞は、例えば４日間培養してもよく、次いで各ウェルにＭＴＳ試薬（プロメガ（Promega））を添加して、細胞を３７℃で２時間インキュベートしてもよい。生細胞は、プレートリーダーを用いて吸光度を４９０ｎｍで測定することによって分析することができる。読み取り値は、各タイプの未処理細胞に対する読み取り値（すなわち未処理細胞＝１００％の細胞生存率）を使用して正規化してもよく、細胞を含まないウェルが０％とみなされることになる。

【0321】

特定の実施態様において、選択された腫瘍溶解性ウイルスは、用量依存性の方式でがん細胞を致死させることができる。選択された腫瘍溶解性ウイルスはまた、具体的な実施態様において、がん性細胞のウイルスによる致死のレベルと比較して、それより低いレベルの非がん性細胞、例えばＷＩ−３８やＡＲＰＥ−１９細胞の細胞致死も示す。

【0322】

図７Ａ〜７Ｆは、ＩＣＯＳＴＡＴは、用量依存性の方式でがん細胞（すなわちＡ５４９、ＦａＤｕおよびＳＣＣ４７細胞）を致死させることができることを示し（図７Ａ〜７Ｃおよび７Ｆ）、がん性細胞の致死のレベルと比較して、それより低いレベルの非がん性細胞ＷＩ−３８およびＡＲＰＥ−１９細胞の細胞致死を示す（図７Ｄおよび７Ｅ）。

【0323】

図１３Ａ〜１３Ｄは、Ｏｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４は、用量依存性の方式でがん細胞（すなわちＦａＤｕおよびＳＣＣ４７細胞）を致死させることができることを示し（図１３Ａおよび１３Ｂ）、がん性細胞の致死のレベルと比較して、それより低いレベルの非がん性のＷＩ−３８およびＡＲＰＥ−１９細胞の細胞致死を示す（図１３Ｃおよび１３Ｄ）。

【0324】

２．３ ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）を助ける能力
選択された腫瘍溶解性アデノウイルスまたは実施例２．１で生成したＩＣＯＳＴＡＴの、ヘルパー依存性アデノウイルス（ＨＤＡｄ）の複製を補助する能力は、がん細胞をＯｎｃｏＡｄとＨＤＡｄとで共感染させ、ウイルスコピー数を決定することによって分析することができる。簡単に言えば、ＦａＤｕまたはＳＣＣ４７細胞を２４−ウェルプレートで平板培養し、ＨＤＡｄ細胞単独で、またはＯｎｃＡｄ＋ＨＤＡｄで（１：１０のＯｎｃＡｄ：ＨＤＡｄの比率で）、ＨＤＡｄ細胞１個当たり１０個のウイルス粒子で感染させた。細胞を感染後４８時間で回収し、ＤＮＡを抽出し、バイオ・ラッドｉＱ５リアルタイムＰＣＲ検出システム（バイオ・ラッド（Bio-Rad））、およびアプライドバイオシステムズ（Applied Biosystems）ＳＹＢＲグリーンＰＣＲマスターミックス（ライフ・テクノロジーズ）を使用した定量リアルタイムＰＣＲ（９５℃で１０分、次いで９５℃で１０秒、６０℃で１５秒、および７２℃で３０秒を４５サイクル）によって、ＨＤＡｄおよびＯｎｃ．Ａｄベクターコピーの両方を分析する。ＧＡＰＤＨに関して検出されたコピー数を使用してコピー数を正規化する。

【0325】

特定の実施態様において、選択された腫瘍溶解性ウイルスは、それ自身とＨＤＡｄを十分に複製することができる。
図８Ａおよび８Ｂは、ＩＣＯＳＴＡＴ（図では「Ｏｎｃ５／３ＡｄｉｃｏＳＴＡＴ」と命名）が、それ自身（図８Ａ）とＨＤＡｄ（図８Ｂ）を複製できることが見出されたことを示す。

【0326】

２．４ がん細胞におけるＩＣＯＳＴＡＴ複製へのＩＦＮγの作用
ＩＣＯＳＴＡＴ ＯｎｃＡｄ複製へのＩＦＮγ処置の作用を分析した。簡単に言えば、ＦａＤｕおよびＳＣＣ４７細胞を２４−ウェルプレートで平板培養し、１０ｖｐ／細胞の選択された腫瘍溶解性ウイルスまたはｉｃｏＳＴＡＴで細胞を感染させ、感染後３時間、細胞培養培地を、１０ｎｇ／ｍＬの組換えＩＦＮγ含有または非含有の培地で感染後３時間で交換し、細胞培養培地を、ここでも感染後２４および４８時間で、１０ｎｇ／ｍＬの組換えＩＦＮγを含有／非含有の新鮮な培地で交換する。感染後３、２４、４８および７２時間で細胞を回収し、ＤＮＡを細胞から抽出し、ウイルスコピー数を定量リアルタイムＰＣＲによって分析し、ＧＡＰＤＨに関して検出されたコピー数を使用して正規化する。

【0327】

図９Ａおよび９Ｂは、ＩＣＯＳＴＡＴが、ＩＦＮγの存在または非存在下でＦａＤｕ細胞およびＳＣＣ４７細胞中で複製することができたことを示す。
実施例３：ヘルパー依存性Ａｄ（ＨＤＡｄ）コンストラクト
３．１ ＨＤＡｄコンストラクトおよび生産
ヘルパー依存性アデノウイルスをコードする新規のコンストラクトを、組換えＤＮＡ技術を使用して調製した。図１０Ａに、ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１と命名された得られたコンストラクトのコード配列を模式的に示す。ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１は、（ｉ）ヒトＩＬ−１２ｐ７０（アルファおよびベータ鎖をコードする配列）、（ｉｉ）ＨＡタグを含むＨＳＶ−１チミジンキナーゼ、および（ｉｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディ（抗ＰＤ−Ｌ１クローンＨ１２＿ｇｌのＣＤＲを含み、例えばＷＯ２０１６１１１６４５Ａ１に記載されている）のための発現カセットをコードする配列を含有する。３つのコード配列はそれぞれそれら自身のポリＡシグナル配列を有する。

【0328】

ＣＭＶプロモーターによって駆動するＥＧＦＰ導入遺伝子を含有するＨＤＡｄ ＨＤΔ２８Ｅ４ＥＧＦＰコンストラクト（ＨＤＡｄｅＧＦＰ）を、Farzadら、Oncolytics 2014 1：14008に記載されたようにして生産した。

【0329】

ＨＤＡｄ「ＨＤＩＬ１２＿ＰＤＬ１」は、ヒトＩＬ−１２ｐ７０タンパク質およびＹＷ２４３．５５．Ｓ７０由来の抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディ（アテゾリズマブ）をコードする配列を含有する。このコンストラクトの抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディは、ヒトＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域ならびにＣ末端ＨＡタグと融合したＹＷ２４３．５５．Ｓ７０のｓｃＦｖからなる（例えばTanoueら、Cancer Res.（2017）77（8）：2040〜2051に記載される通り）。

【0330】

３．２ コードされたタンパク質の発現
プラスミドＨＤＡｄベクターでトランスフェクトされたがん細胞、および培地サンプルを収集して、トランスフェクトされた細胞の細胞培養培地中のＩＬ−１２ｐ７０および抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディレベルをトランスフェクション後４８時間で分析した。

【0331】

培地中のＩＬ−１２ｐ７０レベルを、ＢＤサイトカインマルチプレックスビーズアレイシステム（ＢＤバイオサイエンス）を製造元の説明書に従って使用して測定した。図１０Ｂに結果を示す。ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１コンストラクトでトランスフェクトされた細胞は、ＨＤＩＬ−１２＿ＰＤ−Ｌ１コンストラクトでトランスフェクトされた細胞より高いレベルのＩＬ−１２ｐ７０を生産することが見出された。

【0332】

細胞培養培地への抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディの分泌を、抗ＨＡ抗体（ＨＡタグを有するミニボディを検出するため）を使用したウェスタンブロット分析によって検出した。図１０Ｃは、ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１コンストラクトでトランスフェクトされた細胞が、細胞培養培地に抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディを分泌したことを示す。

【0333】

別の実験において、異なるコンストラクトでトランスフェクトされた細胞の細胞培養培地を、トランスフェクション後８時間で、１０ｎｇ／ｍｌガンシクロビル（ＧＣＶ）を含有する培地で交換した。次いで細胞培養培地を、２４時間ごとに１０ｎｇ／ｍｌを含有する培地で交換し、７日後、ウェルをクリスタルバイオレット溶液で染色して、生存可能な細胞を明らかにした。

【0334】

図１０Ｄに示した結果によれば、ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１コンストラクトでトランスフェクトされた細胞はチミジンキナーゼを発現することが確認される。
さらなる実験で、Ａ５４９、ＦａＤｕまたはＳＣＣ４７細胞（条件１つ当たりｎ＝４ウェル）を、インビトロでＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１、ＨＤＡｄ＿ＰＤ−Ｌ１（例えばTanoueら、上記を参照）、またはｅＧＦＰをコードする対照ＨＤＡｄ（Farzadら、上記を参照）に感染させた。細胞は、ガンシクロビルの非存在下で４８時間培養するか、または感染後８時間で培地を交換し、その後２４時間ごとに１０ｎｇ／ｍｌガンシクロビルを含有する培地で交換するかのいずれかとした。

【0335】

細胞培養上清へのＩＬ−１２の分泌をＥＬＩＳＡによって分析し、抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディの分泌を抗ＨＡ抗体（抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディは、Ｃ末端ＨＡタグを含む）を使用したウェスタンブロットによって分析した。実験の最後に、ウェルをクリスタルバイオレット溶液で染色して、生存可能な細胞を明らかにした。

【0336】

図２１Ａ〜２１Ｃに結果を示す。分析された異なるがん細胞株におけるＨＤＡｄによってコードされた導入遺伝子の発現が確認された。
３．３ ＰＤ−Ｌ１に結合する抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディの確認
ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１によってコードされた抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディのＰＤ−Ｌ１に結合する能力をＥＬＩＳＡによって分析した。

【0337】

簡単に言えば、Ｉｍｍｕｌｏｎ ２高結合９６−ウェルプレート（ＶＷＲ）を、５００ｎｇ／ウェルの組換えヒトＰＤ−Ｌ１（BioVision）でコーティングした。プレートを３％のＢＳＡを含有するＰＢＳ−Ｔでブロッキングした後、ＧＦＰをコードするプラスミド（ｐＧＦＰ；陰性対照）、上記のTanoueらに記載されている抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディをコードするプラスミド（ｐＰＤＬ１ミニＴａｎｏｕｅ）またはＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１によってコードされた抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディをコードするプラスミド（ｐＰＤＬ１ミニ）でトランスフェクトされたＡ５４９細胞の連続希釈した細胞培養培地を添加し、４℃で２４時間インキュベートした。１０μｇ／ウェルから始めて連続希釈した抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体（BioLegend）を陽性対照として使用した（ＰＤＬ１ ＩｇＧ）。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄した後、ＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ（ＰＤ−Ｌ１ミニおよびＰＤＬ１ミニＴａｎｏｕｅの場合）またはＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（バイオ・ラッド；ＰＤ−Ｌ１ ＩｇＧおよびＩｓｏ ＩｇＧの場合）を、検出のために添加し、室温で１時間インキュベートした。次いでプレートを展開し、テカン（Tecan）リーダー（テカン（TECAN））を使用して吸光度を４５０ｎｍで測定した。

【0338】

図１１に結果を示す。抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＨ１２のＣＤＲを含む抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディは、用量依存性の様式でヒトＰＤ−Ｌ１に結合することが見出され、これは、上記のTanoueらで記載された抗ＰＤ−Ｌ１ミニボディによる結合の結合活性と比較して同等の（またはそれより大きい）結合活性であった。

【0339】

実施例４：インビボにおけるがん処置の分析
マウス異種移植片腫瘍モデルで、インビボで、（１）選択された腫瘍溶解性ウイルス＋ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１＋ＨＥＲ２−ＣＡＲ−Ｔおよび（２）ＩＣＯＳＴＡＴ＋ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１＋ＨＥＲ２−ＣＡＲ−Ｔの組合せでの処置の抗がん作用を実証する。

【0340】

第１の実験において、ＰＢＳ中１×１０^６個のＦａＤｕ細胞をＮＳＧ雄マウスの皮下に注射する。１２日後、１×１０^８個のウイルス粒子（１）腫瘍溶解性ウイルスおよびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１または（２）ＩＣＯＳＴＡＴ＋ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１を、１：２０の比率のＯｎｃＡｄ：ＨＤＡｄで腫瘍内注射する。

【0341】

第２の実験において、０．５×１０^６個のＦａＤｕ細胞をＮＳＧ雄マウスの正位に注射する。６日後、１×１０^８個のウイルス粒子（１）腫瘍溶解性ウイルスおよびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１または（２）ＩＣＯＳＴＡＴ＋ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１を、１：２０の比率のＯｎｃＡｄ：ＨＤＡｄで腫瘍内注射する。

【0342】

両方の実験において、ウイルス粒子投与の３日後、１×１０^６個のＨＥＲ２−ＣＡＲ Ｔ細胞を静脈内投与する。
両方の実験において、対照条件は、以下に挙げる通りである：

【0343】

【表2】

【0344】

腫瘍サイズをモニターし、腫瘍体積を、式：幅^２×長さ×０．５を使用して計算する。
腫瘍溶解性ウイルス、ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１およびＨＥＲ２ ＣＡＲ−Ｔの組合せの使用（試験条件１）は、単独の薬剤のいずれかの使用（条件８、１０または１１）と比較して、または３つの薬剤のうち２つの使用（条件３、４および６）と比較して、改善された抗腫瘍作用を有することが見出される。

【0345】

同様に、ＩＣＯＳＴＡＴ、ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１およびＨＥＲ２ ＣＡＲ−Ｔの組合せの使用（試験条件２）は、単独の薬剤のいずれかの使用（条件９、１０または１１）と比較して、または３つの薬剤のうち２つの使用（条件３、５および７）と比較して改善された抗腫瘍作用を有することが見出される。

【0346】

ＳＣＣ４７細胞およびＡ５４９細胞を使用して異種移植片腫瘍が確立される場合も類似の結果が観察される。
実施例５：インビボにおけるＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗がん活性の分析
ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗がん活性（上記の実施例１を参照）を、インビボで、頭頸部扁平上皮がんのＦａＤｕ細胞由来異種移植片モデルで調査した。

【0347】

簡単に言えば、０．５×１０^６個のＦａＤｕ細胞をＮＳＧ雄マウスの正位に注射した。９日後、マウスに、１×１０^６個のＨＥＲ２−ＣＡＲコンストラクトで形質導入されたホタルルシフェラーゼを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、１×１０^６個のＣ５、Ｆ１またはＡ３ＣＡＲコンストラクトで形質導入されたホタルルシフェラーゼを発現するＴ細胞を尾静脈を介して注射した。９日目にマウスにＴ細胞を注射しなかった実験を、対照条件として含めた。

【0348】

マウスのルシフェラーゼ活性（したがって投与されたＴ細胞の数および分布）、体重、生存を長期にわたりモニターした。Ｄ−ルシフェリンを腹膜内注射し（マウス１匹当たり１．５ｍｇ）、ＩＶＩＳイメージャー（キセノジェン（Xenogen））を使用して１０分後マウスを画像化することによって、ルシフェラーゼ活性をモニターした。

【0349】

図１５Ａおよび１５Ｂは、ルシフェラーゼを発現するＴ細胞（すなわち非形質導入Ｔ細胞またはＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞）の注射後の０、４、７、１４、２８、４２、５６および７０日目に獲得した画像を示す（日は、ｆｆＬｕｃ Ｔ細胞注射後の日数を指す）。全身注入されたＴ細胞が正位の腫瘍部位に移動したことが示された。ＨＥＲ２特異的ＣＡＲを発現するように改変されなかったＴ細胞は、７日後、検出不可能であった。それに対して、ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞は存続し、実験にわたり検出可能なままであった。

【0350】

図１５Ｃは、実験経過にわたり異なる処置に供されたマウスの生存パーセンテージを示す。ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞の投与は、生存を増加させることが見出された。
別個の実験において、ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスに、１×１０^６個のＨＥＲ２−ＣＡＲコンストラクトで形質導入されたホタルルシフェラーゼを発現するＴ細胞、または１×１０^６個のＣ５、Ｆ１またはＡ３ＣＡＲコンストラクトで形質導入されたホタルルシフェラーゼを発現するＴ細胞を尾静脈を介して注射した。ルシフェラーゼ活性を上述したようにモニターし、長期にわたりマウスの体重もモニターした。

【0351】

図１６Ａ〜１６Ｃに実験の結果を示す。Ｃ５ ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＮＳＧマウスにおいて非特異的に拡大することが見出された（図１６Ａ）。ＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞が投与されたＮＳＧマウスにおいて有意な体重の減少は観察されなかった（図１６Ｃ）。

【0352】

実施例６：インビボにおける腫瘍溶解性ウイルス、ＨＤＡｄウイルスおよびＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞の組合せの抗がん活性の分析
腫瘍溶解性ウイルス、ＨｄＡｄおよびＨＥＲに特異的なＣＡＲ−Ｔ細胞療法の組合せの抗がん活性を、インビボで、頭頸部扁平上皮がんのＦａＤｕ細胞由来異種移植片モデルで調査した。

【0353】

簡単に言えば、０．５×１０^６個のＦａＤｕ細胞をＮＳＧ雄マウスの正位に注射した。次いで６日後、マウスの１つのグループに、Ｏｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４（実施例２．１に記載される）およびＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１（実施例３．１に記載される）の組合せを腫瘍内注射した（このＯｎｃＡｄおよびＨｄＡｄの組合せは、本明細書では「ＣＡｄｔｒｉｏ」と称される）。合計１×１０^７個のウイルス粒子を、１：１０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１で投与した。

【0354】

３日後、マウスに、１×１０^６個の、クローンＦ１に対応するＨＥＲ２特異的ＣＡＲコンストラクトで形質導入されたホタルルシフェラーゼを発現するように操作されたＴ細胞を尾静脈を介して注射した。ＣＡｄｔｒｉｏが投与されなかったマウスの対照グループに、１×１０^６個のＨＥＲ２−ＣＡＲコンストラクトで形質導入されたホタルルシフェラーゼを発現するＴ細胞を尾静脈を介して注射し、さらなるマウスの対照グループにはＣＡｄｔｒｉｏを投与しなかったかまたはＴ細胞を注射しなかった。マウスのルシフェラーゼ活性、体重および生存を長期にわたりモニターした。

【0355】

実験で使用する前に、Ｆ１．ＣＡＲＴ細胞をフローサイトメトリーで特徴付けた。図１７Ａ〜１７Ｃに結果を示す。この細胞は、７２．５％のＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を含むことが見出された。この細胞の８７％が、細胞表面でＨＥＲ２ ＣＡＲを発現することが決定された。細胞の３９％がＣＣＤＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋であり、細胞の５９．２％がＣＣＲ７−ＣＤ４５ＲＯ＋であった。

【0356】

図１８Ａ〜１８Ｄに、インビボでがんを処置するための腫瘍溶解性ウイルス、ＨＤＡｄウイルスおよびＨＥＲ２特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞の組合せの治療効能を分析する実験の結果を示す。Ｏｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４、ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１およびＦ１．ＣＡＲＴの組合せは、単独のＦ１．ＣＡＲＴ細胞での処置よりも生存を改善することが見出された。

【0357】

さらなる実験において、Ｏｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４とＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１との２つの異なる比率を調査した。
簡単に言えば、０．５×１０^６個のホタルルシフェラーゼを発現するように改変されたＦａＤｕ細胞をＮＳＧ雄マウスの正位に注射した。６日後、マウスに、以下を腫瘍内注射した：
（ｉ）１：１０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１の、１×１０^７個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子；
（ｉｉ）１：２０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１の、１×１０^７個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子；
（ｉｉｉ）１：１０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１の、１×１０^８個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子；または
（ｉｖ）１：２０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１の、１×１０^８個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子。

【0358】

３日後、マウスに、１×１０^６個のＦ１のＣＡＲコンストラクトで形質導入されたＴ細胞（ホタルルシフェラーゼを発現しない）を尾静脈を介して注射した。上述したようにルシフェラーゼ活性の分析によってがんを長期にわたりモニターし、マウスの体重もモニターした。

【0359】

図１９Ａ〜１９Ｃに実験の結果を示す。１：１０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１を投与したマウスは、一般的に、１：２０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１を投与したマウスより少ないルシフェラーゼを発現するＦａＤｕ細胞を有し、１×１０^８個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子を投与したマウスは、一般的に、１×１０^７個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子を投与したマウスより少ないルシフェラーゼを発現するＦａＤｕ細胞を有していた（図１９Ｂ）。

【0360】

実施例７：インビボにおける腫瘍溶解性ウイルス、ＨＤＡｄウイルスおよびガンシクロビル（ＧＣＶ）の組合せの抗がん活性の分析
腫瘍溶解性ウイルスおよびＨｄＡｄ（チミジンキナーゼをコードする）（すなわちＣＡｄｔｒｉｏ）とガンシクロビル（ＧＣＶ）の組合せの抗がん活性を、インビボで、頭頸部扁平上皮がんのＦａＤｕ細胞由来異種移植片モデルで調査した。

【0361】

マウス脇腹にＦａＤｕ細胞を皮下注射することによって異所性のＦａＤｕ腫瘍を確立した。その後マウスに、１×１０^８個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子を１：１０の比率のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１で腫瘍内注射した。次いでマウスの１つのグループ（ｎ＝５）に、ＣＡｄｔｒｉｏ注射後の２、３、４、５、７、１０、１４、１７およびの２１日目に、１０ｍｇ／ｋｇのガンシクロビルを腹腔内注射した。

【0362】

２、７、１４および２１日目に血液サンプルをマウスから収集し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１２発現に関して分析した。腫瘍体積を実験にわたりモニターした。２２日目に、定量リアルタイムＰＣＲ分析によって腫瘍から抽出されたＤＮＡにおけるＯｎｃ．ＡｄおよびＨＤＡｄベクターのコピー数を決定した、ＧＡＰＤＨに関して検出されたコピー数を使用して正規化した。

【0363】

図２０Ａ〜２０Ｄに実験の結果を示す。２２日目において、ガンシクロビル（ＧＣＶ）処置は、Ｏｎｃ．Ａｄベクターコピー数に有意に影響を与えなかったが（図２０Ａ）、ＨＤＡｄベクターコピー数を有意に減少させた（図２０Ｂ）。ＧＣＶ処置も腫瘍制御を改善することが見出されたが（図２０Ｃ）、血液中のＩＬ−１２のレベルに有意に影響を与えなかった（図２０Ｄ）。

【0364】

実施例８：腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞およびＨＥＲに特異的なＣＡＲを発現する腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞の生成
８．１ 腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞の生成および特徴付け
アデノウイルス特異的Ｔ細胞（ＡｄＶＳＴ）および活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を以下のように調製した。

【0365】

抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）および抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を、０．５ｍｌの１：１０００希釈の１ｍｇ／ｍｌ抗体の添加によって組織培養プレートのウェル上にコーティングし、３７℃で２〜４時間、または４℃で一晩インキュベートした。

【0366】

ＰＢＭＣを、標準的なフィコール−パック方法に従って健康なドナーから得られた血液サンプルから単離した。
ＡＴＣ：
１×１０^６個のＰＢＭＣ（２ｍｌの細胞培養培地中）を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７および５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５が補充されたＣＴＬ細胞培養培地（５０％アドバンストＲＰＭＩ、５０％クリック培地、１０％ＦＢＳ、１％グルタマックス（Glutamax）、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有）中の抗ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト抗体でコーティングされたプレート上で培養することによって刺激した。細胞を３７℃、５％ＣＯ_２雰囲気中で維持した。次の日、１ｍｌの細胞培養培地を２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７および１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５を含有する新鮮なＣＴＬ培地で交換した。

【0367】

ＡＴＣを培養中に維持し、その後回収し、実験で使用するかまたは５日目から７日目の間に低温保存した。
ＡｄＶＳＴ：
１×１０^６個のＰＢＭＣ（２ｍｌの細胞培養培地中）を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５が補充されたＣＴＬ細胞培養培地中の抗ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト抗体でコーティングされたプレート上で培養することによって刺激した。

【0368】

２０μｌの２００倍希釈のアデノウイルス特異的ヘキソンペプミックス（ＪＰＴカタログ番号ＰＭ−ＨＡｄＶ３）またはペントンペプミックス（ＪＰＴカタログ番号ＰＭ−ＨＡｄＶ５）をウェルに添加した。細胞を、５％ＣＯ_２雰囲気中、３７℃で維持した。４８時間後、細胞にＣＴＬ培地をフィードして、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５の最終濃度までＩＬ−７およびＩＬ−１５を添加した。

【0369】

８．２ ＣＡＲを発現する腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞の生成
３日目に、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５を含有するＣＴＬ細胞培養培地中０．１２５×１０^６個の細胞／ｍｌの濃度でＡｄＶＳＴを再懸濁した。

【0370】

ＰＢＳで１：１００に希釈したレトロネクチン（クロンテック（Clontech））を３７℃で２〜４時間、または４℃で一晩インキュベートすることによって、レトロネクチンでコーティングされたプレートを調製した。ウェルをＣＴＬ培地で洗浄し、ＨＥＲ２特異的ＣＡＲレトロウイルスの１ｍｌのレトロウイルス上清をウェルに添加し、プレートを２０００ｇで１．５時間遠心分離した。遠心分離工程の最後に、レトロウイルスの上清を吸引し、プレートのウェルに２ｍｌのＡｄＶＳＴ懸濁液（すなわち０．２５×１０^６個の細胞）を添加した。プレートを４００ｇで５分間遠心分離し、５％ＣＯ_２雰囲気中、３７℃でインキュベートした。

【0371】

４８時間後（すなわち６日目）、細胞培養培地を吸引し、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５を含有するＣＴＬ細胞培養培地で交換した。
９日目に、細胞を回収し、実験で使用するかもしくは低温保存し、または第２の刺激に供してＣＡＲを発現するＡｄＶＳＴを拡大した（実施例８．３を参照）。

【0372】

８．３ ＡｄＶＳＴおよびＣＡＲ−ＡｄＶＳＴの拡大
ＡｄＶＳＴおよびＣＡＲを発現するＡｄＶＳＴを、要求に応じて、さらなる刺激によって以下のように拡大した。

【0373】

ペプミックスでパルスした自己ＡＴＣ をＡＰＣとして使用し、Ｋ５６２ｃｓ細胞（例えばNgoら、J Immunother.（2014）37（4）：193〜203を参照）を共刺激細胞として使用した。刺激培養におけるＡｄＶＳＴまたはＣＡＲ−ＡｄＶＳＴ：ＡＴＣ：Ｋ５６２ｃｓ細胞の最終的な比率は、１：１：３〜５であった。

【0374】

ＡｄＶＳＴまたはＣＡＲ−ＡｄＶＳＴを、ＣＴＬ培地中０．２×１０^６個の細胞／ｍｌの濃度に再懸濁した。
１×１０^６個のＡＴＣを、１０μｌの２００倍希釈のアデノウイルス特異的ヘキソンペプミックス（ＪＰＴカタログ番号ＰＭ−ＨＡｄＶ３）またはペントンペプミックス（ＪＰＴカタログ番号ＰＭ−ＨＡｄＶ５）と共に３７℃で３０分間インキュベートした。その後ＡＴＣを３０Ｇｙで放射線照射し、回収した。３〜５×１０^６個のＫ５６２ｃｓ細胞を１００Ｇｙで放射線照射された。

【0375】

次いでＡＴＣおよびＫ５６２ｃｓ細胞を５ｍｌのＣＴＬ培地の総体積で混合し、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７および２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５を添加し、１ｍｌのこの混合物を２４ウェルプレートのウェルに添加し、１ｍｌのＡｄＶＳＴ懸濁液またはＣＡＲ−ＡｄＶＳＴ懸濁液をウェルに添加した。

【0376】

細胞を、５％ＣＯ_２雰囲気中、３７℃で維持した。３〜４日後、必要に応じて細胞培養培地を添加し、６〜７日後、拡大したＡｄＶＳＴまたはＣＡＲ−ＡｄＶＳＴである細胞を実験で使用するために回収した。

【0377】

実施例９：インビボにおける腫瘍溶解性ウイルス、ＨＤＡｄ、腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞およびＣＡＲを発現する腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞の組合せの抗がん活性の分析
腫瘍溶解性ウイルス、ＨＤＡｄ、腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞およびＣＡＲを発現する腫瘍溶解性ウイルス特異的Ｔ細胞の異なる組合せの抗がん活性を、インビボで、頭頸部扁平上皮がんのＦａＤｕ細胞由来異種移植片モデルで調査した。

【0378】

簡単に言えば、０．５×１０^６個のホタルルシフェラーゼを発現するように操作されたＦａＤｕ細胞をＮＳＧ雄マウスの正位に注射した。６日後、マウスのグループに、以下を腫瘍内注射した：
（ｉ）Ｏｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４：ＨＤＡｄＩＬ−１２＿ＴＫ＿ＰＤ−Ｌ１の１：１０の比率の１×１０^７個のＣＡｄｔｒｉｏのウイルス粒子；または
（ｉｉ）１×１０^７個のウイルス粒子のＯｎｃ５／３Ａｄ２Ｅ１Δ２４。

【0379】

３日後、マウスに以下を尾静脈を介して注射した：
（ａ）１×１０^６個のＡｄＶＳＴ、または
（ｂ）１×１０^６個の抗ＨＥＲ２ ＣＡＲクローンＦ１（実施例８に記載したように調製された）で形質導入したＡｄＶＳＴ。

【0380】

実験で使用する前、ＡｄＶＳＴおよびＦ１．ＣＡＲ−ＡｄＶＳＴをフローサイトメトリーによって特徴付けた。図２２Ａおよび２２Ｂ、ならびに図２３Ａ〜２３Ｃに分析の結果を示す。

【0381】

がんを上述したようにルシフェラーゼ活性の分析によって長期にわたりモニターし、マウスの体重もモニターした。
図２４Ａ〜２４Ｄに実験の結果を示す。最大レベルの腫瘍制御がＣＡｄｔｒｉｏ＋ＨＥＲ２特異的ＣＡＲを発現するＡｄＶＳＴの組合せで処置したマウス（すなわち処置グループ（ｉ）（ｂ））で観察された。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図18D】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図20D】

【図21A】

【図21B】

【図21C】

【図22A】

【図22B】

【図23A】

【図23B】

【図23C】

【図24A】

【図24B】

【図24C】

【図24D】

【配列表】

2020517635000001.app

【国際調査報告】