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特表2020-519861ＡＩＭＰ１を含む全身性紅斑性狼瘡診断用バイオマーカー組成物及びそれを用いた全身性紅斑性狼瘡診断方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2020-519861(P2020-519861A)

(43)【公表日】2020年7月2日

(54)【発明の名称】ＡＩＭＰ１を含む全身性紅斑性狼瘡診断用バイオマーカー組成物及びそれを用いた全身性紅斑性狼瘡診断方法

(51)【国際特許分類】

G01N 33/53 20060101AFI20200605BHJP

C12N 15/115 20100101ALN20200605BHJP

C07K 14/52 20060101ALN20200605BHJP

C07K 16/24 20060101ALN20200605BHJP

【ＦＩ】

G01N33/53 P

G01N33/53 D

C12N15/115 Z

C07K14/52

C07K16/24

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

【全頁数】19

(21)【出願番号】特願2019-558482(P2019-558482)

(86)(22)【出願日】2018年4月30日

(85)【翻訳文提出日】2019年11月18日

(86)【国際出願番号】KR2018005001

(87)【国際公開番号】WO2018199709

(87)【国際公開日】20181101

(31)【優先権主張番号】10-2017-0055247

(32)【優先日】2017年4月28日

(33)【優先権主張国】KR

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＷＩＮＤＯＷＳ

(71)【出願人】

【識別番号】515131404

【氏名又は名称】アジュユニバーシティーインダストリー−アカデミックコーオペレイションファウンデーション

【氏名又は名称原語表記】ＡＪＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＩＮＤＵＳＴＲＹ−ＡＣＡＤＥＭＩＣＣＯＯＰＥＲＡＴＩＯＮＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】514163907

【氏名又は名称】インダストリー−アカデミックコーポレーションファウンデーションヨンセイユニバーシティ

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＤＵＳＴＲＹ−ＡＣＡＤＥＭＩＣＣＯＯＰＥＲＡＴＩＯＮＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮ，ＹＯＮＳＥＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ

(74)【代理人】

【識別番号】100147485

【弁理士】

【氏名又は名称】杉村憲司

(74)【代理人】

【識別番号】230118913

【弁護士】

【氏名又は名称】杉村光嗣

(74)【代理人】

【識別番号】100217124

【弁理士】

【氏名又は名称】作山麻衣子

(72)【発明者】

【氏名】パクサンギュ

(72)【発明者】

【氏名】リーサンウォン

【テーマコード（参考）】

4H045

【Ｆターム（参考）】

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA01

4H045DA76

4H045EA50

(57)【要約】

本発明は、ＡＩＭＰ１を有効成分として含むＳＬＥ診断用バイオマーカー組成物及びそれを用いたＳＬＥ診断方法に関するものであって、詳細には、ＡＩＭＰ１を含むＳＬＥ診断用バイオマーカー組成物、それを用いたＳＬＥ診断キット及びＳＬＥ診断方法を提供する。また、本発明は、ＡＩＭＰ１を有効成分として含むＳＬＥ予後予測用バイオマーカー組成物及びそれを用いたＳＬＥ予後予測キット及びＳＬＥ予後予測方法を提供する。したがって、本発明のＡＩＭＰ１は、ＳＬＥ診断及び予後予測に有用に活用されうる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素複合体相互作用多機能性タンパク質−１（ＡＩＭＰ１）を有効成分として含む全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）診断用バイオマーカー組成物。

【請求項2】

ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤を有効成分として含むＳＬＥ診断用組成物。

【請求項3】

前記ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤は、前記ＡＩＭＰ１に特異的に結合する抗体、ペプチド、アプタマーまたは化合物であることを特徴とする請求項２に記載のＳＬＥ診断用組成物。

【請求項4】

請求項２または３に記載の組成物を含むＳＬＥ診断用キット。

【請求項5】

（１）ＳＬＥ患者から分離された試料からＡＩＭＰ１レベルを測定する段階と、
（２）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルを対照群試料と比較する段階と、
（３）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルが対照群試料よりも高い場合、ＳＬＥと判断する段階と、
を含むＳＬＥ診断に必要な情報を提供する方法。

【請求項6】

（１）ＳＬＥ患者から分離された試料からＡＩＭＰ１レベルを測定する段階と、
（２）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルが５〜２０ｎｇ／ｍＬである場合、ＳＬＥと判断する段階と、
を含むＳＬＥ診断に必要な情報を提供する方法。

【請求項7】

前記試料は、血液であることを特徴とする請求項５または６に記載のＳＬＥ診断に必要な情報を提供する方法。

【請求項8】

ＡＩＭＰ１を有効成分として含むＳＬＥ予後予測用バイオマーカー組成物。

【請求項9】

ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤を有効成分として含むＳＬＥ予後予測用組成物。

【請求項10】

前記ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤は、前記ＡＩＭＰ１に特異的に結合する抗体、ペプチド、アプタマーまたは化合物であることを特徴とする請求項９に記載のＳＬＥ予後予測用組成物。

【請求項11】

請求項９または１０に記載の組成物を含むＳＬＥ予後予測用キット。

【請求項12】

（１）ＳＬＥ患者から分離された試料からＡＩＭＰ１レベルを測定する段階と、
（２）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルが１０〜２０ｎｇ／ｍＬである場合、活性ＳＬＥと判断する段階と、
を含むＳＬＥ予後予測に必要な情報を提供する方法。

【請求項13】

前記試料は、血液であることを特徴とする請求項１２に記載のＳＬＥ予後予測に必要な情報を提供する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素複合体相互作用多機能性タンパク質−１（ａｍｉｎｏａｃｙｌ−ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｃｏｍｐｌｅｘｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｔｅｉｎ−１；ＡＩＭＰ１）を含む全身性紅斑性狼瘡（ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ；ＳＬＥ）診断用バイオマーカー組成物及びそれを用いた全身性紅斑性狼瘡診断方法に関する。

【背景技術】

【0002】

全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）は、原型的な全身性免疫疾患であって、病理生理学的に過度な自己抗体の生産及び免疫複合体の形成によって発病する。現在のところ、ＳＬＥの進行及び悪化に寄与する多様な自己反応性兔疫細胞が明かになった。そのうち、樹状細胞及びＢ細胞がＳＬＥの発病において、依然として先頭にあり、これらは、自己抗体だけではなく、インターフェロン−αの生産を促進することもできる。また、自己反応性兔疫細胞は、細胞外シグナル調節キナーゼ（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ；ＥＲＫ）／分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ；ＭＡＰＫ）機作を通じて核内因子κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ；ＮＦ−κＢ）を活性化させることができる。次いで、活性化されたＮＦ−κＢは、インターフェロン−γ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及び腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｕｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ；ＴＮＦ）−αのような下流遺伝子の発現を促進させる。また、ＳＬＥは、Ｔｒｅｇ細胞の減少及びＴｈ１７細胞及び濾胞補助Ｔ細胞の増加のようなＴ細胞群の変化にも影響を受けることができる。すなわち、ＳＬＥ患者の血液で自己反応性免疫細胞の調節障害及びサイトカインの不均衡を示すことができる分子があれば、これは、ＳＬＥ疾患の活性の予測に良いバイオマーカーになる。

【0003】

運搬リボ核酸（ＴｒａｎｓｆｅｒＲｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓ；ｔＲＮＡｓ）は、一般的に７５〜９５個のヌクレオチドで構成されており、伝令ＲＮＡの個別化されたコドンを基盤として、リボソームで特定アミノ酸を伝達するタンパク質翻訳過程において、ｔＲＮＡｓは重要な役割を行う。現在のところ、他の形態の２０個ｔＲＮＡｓがヒトで明かになり、それぞれのアミノ酸は、アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素（ａｍｉｎｏａｃｙｌ−ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ；ＡＲＳｓ）によって同族ｔＲＮＡと結合する。原核細胞ＡＲＳｓに比べて、哺乳類のＡＲＳは、１１個の他のＡＲＳｓ及びアミノアシルｔＲＮＡ合成酵素−相互作用多機能性タンパク質（ａｍｉｎｏａｃｙｌ−ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｔｅｉｎ；ＡＩＭＰ）１／ｐ４３、ＡＩＭＰ２／ｐ３８及びＡＩＭＰ３／ｐ１８のような３個の非酵素的因子を含む多重−ｔＲＮＡ合成酵素複合体を形成する。ＡＩＭＰｓは、複合体−形成酵素の組み立てに関与すると表われたが、その根拠は、次の通りである。１）ＡＩＭＰｓは、互いに強く結合するが、これは、各ＡＩＭＰの細胞内安定性に影響を及ぼす。２）各ＡＩＭＰは、好む相互作用酵素を有する。３）特に、ＡＩＭＰ１は、多重−ｔＲＮＡ合成酵素複合体で中央に位置して、重要な補助因子になると見えるが、これは、結合されたＡＲＳｓの触媒サイトにｔＲＮＡの伝達を促進することもできると見られる。

【0004】

多重−ｔＲＮＡ合成酵素複合体と結合するＡＩＭＰ１の機能とは別途に、ＡＩＭＰ１は、低酸素条件の循環過程及び細胞死／壊死細胞死過程から分泌され、これは、多様な免疫−促進効果を有する。第１に、分泌ＡＩＭＰ１は、ＥＲＫｓ活性化を通じて血管形成を促進することができる。第２に、ＡＩＭＰ１は、ｐ３８ＭＡＰＫ及びＮＦ−κＢを通じてＴＮＦ−α、インターロイキン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ；ＩＬ）−６、ＩＬ−８及び大食細胞走化性タンパク質（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ；ＭＣＰ）−１のような前炎症性サイトカインを生産するために、単核球及び大食細胞を促進することができる。第３に、ＡＩＭＰ１は、樹状細胞の成熟を誘導し、ＩＬ−６及びＩＬ−１２生産を増加させることができる。さらに、本発明者らは、以前にコラーゲン誘導された関節炎を有したマウスでリウマチ関節炎患者から測定された血清ＡＩＭＰ１が元気な対照群に比べて高いということを確認し、ＡＩＭＰ１を標的とする単一クローン抗体が深刻な関節炎を改善させ、血清ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１及びＴＮＦ−αを減少させるということを確認した。しかし、現在のところ、ＡＩＭＰ１とＳＬＥとの関連性に対しては明らかになっていない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明の目的は、ＡＩＭＰ１を有効成分として含むＳＬＥ診断用または予後予測用バイオマーカー組成物及びそれを用いたＳＬＥ診断方法またはＳＬＥ予後予測方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明は、ＡＩＭＰ１を有効成分として含むＳＬＥ診断用バイオマーカー組成物を提供する。

【0007】

また、本発明は、ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤を有効成分として含むＳＬＥ診断用組成物を提供する。

【0008】

また、本発明は、前記ＳＬＥ診断用組成物を含むＳＬＥ診断用キットを提供する。

【0009】

また、本発明は、（１）ＳＬＥ患者から分離された試料からＡＩＭＰ１レベルを測定する段階；（２）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルを対照群試料と比較する段階；及び（３）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルが対照群試料よりも高い場合、ＳＬＥと判断する段階；を含むＳＬＥ診断に必要な情報を提供する方法を提供する。

【0010】

また、本発明は、（１）ＳＬＥ患者から分離された試料からＡＩＭＰ１レベルを測定する段階；及び（２）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルが５〜２０ｎｇ／ｍＬである場合、ＳＬＥと判断する段階；を含むＳＬＥ診断に必要な情報を提供する方法を提供する。

【0011】

また、本発明は、ＡＩＭＰ１を有効成分として含むＳＬＥ予後予測用バイオマーカー組成物を提供する。

【0012】

また、本発明は、ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤を有効成分として含むＳＬＥ予後予測用組成物を提供する。

【0013】

また、本発明は、前記ＳＬＥ予後予測用組成物を含むＳＬＥ予後予測用キットを提供する。

【0014】

また、本発明は、（１）ＳＬＥ患者から分離された試料からＡＩＭＰ１レベルを測定する段階；及び（２）前記測定されたＡＩＭＰ１レベルが１０〜２０ｎｇ／ｍＬである場合、活性ＳＬＥと判断する段階；を含むＳＬＥ予後予測に必要な情報を提供する方法を提供する。

【発明の効果】

【0015】

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】ＳＬＥを有した患者及び元気な対照群間の血清ＡＩＭＰ１の比較結果を示す。活性及び安定ＳＬＥを有した患者のいずれも元気な対照群に比べて、平均血清ＡＩＭＰ１がさらに高く表われた。データは、平均と表示し、エラーバーは、四分位範囲（ｉｎｔｅｒｑｕａｒｔｉｌｅｒａｎｇｅｓ；ＩＱＲ）と表示した。^＊ｐ＜０．００１。

【図2】ＳＬＥを有した患者で疾患活性または炎症因子と関連した実験変数と血清ＡＩＭＰ１の関連性を示す。血清ＡＩＭＰ１は、ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋと非常に関連しており、血清ＡＩＭＰ１は、疾患活性または炎症因子と関連した実験変数とも関連している。

【図3】活性ＳＬＥを予測するための血清ＡＩＭＰ１の最適カットオフ結果を示す。血清ＡＩＭＰ１-１０．０９ｎｇ／ｍＬである患者が、血清ＡＩＭＰ１＜１０．０９ｎｇ／ｍＬである患者よりも活性ＳＬＥがさらによく観測された［８０．５％（２９／３６患者）ｖｓ．４９．１％（６１／１２４患者）］。

【発明を実施するための形態】

【0017】

これにより、本発明者らは、ＳＬＥの発病と分泌ＡＩＭＰ１とが互いに関連しているという仮定下に、血清ＡＩＭＰ１とＳＬＥ疾患活性との関連性を確認し、ＳＬＥ疾患活性インデックス（ＳＬＥｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｄｅｘ；ＳＬＥＤＡＩ）−２Ｋに基づいて活性ＳＬＥを予測し、本発明を完成した。

【0018】

本発明は、アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素複合体相互作用多機能性タンパク質−１（ＡＩＭＰ１）を有効成分として含む全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）診断用バイオマーカー組成物を提供する。

【0019】

本明細書において、用語「診断」は、特定疾病または疾患に対する一客体の感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）を判定すること、一客体が特定疾病または疾患を現在有しているか否かを判定すること、特定疾病または疾患にかかった一客体の予後（ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）を判定すること、またはセラメトリックス（ｔｈｅｒａｍｅｔｒｉｃｓ）（例えば、治療効能についての情報を提供するために、客体の状態をモニタリングすること）を含む。

【0020】

また、本発明は、ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤を有効成分として含むＳＬＥ診断用組成物を提供する。

【0021】

前記ＡＩＭＰ１のレベルを測定する製剤は、当業者に知られている方法で行われるものであれば、制限なしに含まれ、例えば、前記ＡＩＭＰ１に特異的に結合する抗体、ペプチド、アプタマーまたは化合物を含むものであり得るが、これらに制限されるものではない。

【0022】

また、本発明は、前記ＳＬＥ診断用組成物を含むＳＬＥ診断用キットを提供する。

【0023】

【0024】

【0025】

本明細書において、用語「試料」とは、ＡＩＭＰ１レベルにおいて、対照群と差が出る組織、細胞、血液、血清、血しょう、唾液、喀痰、脳脊髄液、または尿のような試料を含むが、これに限定されるものではない。望ましくは、血液であり、さらに望ましくは、血清であり得る。

【0026】

また、本発明は、ＡＩＭＰ１を有効成分として含むＳＬＥ予後予測用バイオマーカー組成物を提供する。

【0027】

本明細書において、用語、「マーカー」、「生物学的マーカー」、「バイオマーカー」は、互いに交換的に使われる。前記マーカーは、一般的に生物学的試料から検出可能な分子または化合物であって、生体の特定変化を把握することができる指標を言う。本発明において、前記マーカーは、ＡＩＭＰ１であり、これらの代謝産物も、本発明の範疇に含まれる。これらのレベルを測定することにより、ＳＬＥを診断するか、予後を予測することができる。

【0028】

また、本発明は、ＡＩＭＰ１のレベルを測定することができる製剤を有効成分として含むＳＬＥ予後予測用組成物を提供する。

【0029】

【0030】

また、本発明は、前記ＳＬＥ予後予測用組成物を含むＳＬＥ予後予測用キットを提供する。

【0031】

本明細書において、用語「抗体」とは、当該技術分野に公知の用語であって、抗原性部位に対して指示される特異的な免疫グロブリンを意味する。前述した１つ以上のタンパク質注入を通じて製造されたもの、または販売されて購入したものがいずれも使用可能である。また、前記抗体は、多クローン抗体、単クローン抗体及びエピトープと結合することができる断片などを含む。前記抗体の形態は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を含み、あらゆる兔疫グロブリン抗体が含まれる。前記抗体は、２個の全長の軽鎖及び２個の全長の重鎖を有する完全な形態を意味する。また、前記抗体は、ヒト化抗体などの特殊抗体も含まれる。

【0032】

また、本発明のキットは、マーカー成分に特異的に結合する抗体、基質との反応によって発色する標識体が接合された２次抗体接合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、前記標識体と発色反応する発色基質溶液、洗浄液及び酵素反応停止液などを含み、使われる試薬成分を含む多数の別途パッケージングまたはコンパートメントで製作することができる。

【0033】

本明細書において、用語「ペプチド」は、標的物質に対する結合力が高い長所があり、熱／化学処理時にも変性が起こらない。また、分子サイズが小さいために、他のタンパク質に結合させて融合タンパク質への利用が可能である。具体的に、高分子タンパク質鎖に結合させて利用可能なので、診断キット及び薬物伝達物質として用いられうる。

【0034】

本明細書において、用語「アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）」とは、それ自体で安定した三次構造を有しながら標的分子に高い親和性と特異性で結合することができる特徴を有した特別な種類の一本鎖核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡまたは変形核酸）で構成されたポリヌクレオチドの一種を意味する。前述したように、アプタマーは、抗体と同様に抗原性物質に特異的に結合することができながらも、タンパク質よりも安定性が高く、構造が簡単であり、合成が容易なポリヌクレオチドで構成されているので、抗体を代替して使われる。

【0035】

一方、前記ＳＬＥ診断用または予後予測用キットは、分析方法に適した一種またはそれ以上の他の構成成分組成物、溶液または装置をさらに含んで構成することができる。

【0036】

【0037】

【0038】

詳細には、前記ＡＩＭＰ１レベルを測定する方法は、具体的に、前記ＡＩＭＰ１に特異的に結合する抗体を利用するものであり、さらに具体的に、免疫測定法、リガンドバインディングアッセイ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（ＭａｔｒｉｘＤｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ＩｏｎｉｚａｔｉｏｎＴｉｍｅｏｆＦｌｉｇｈｔＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（ＳｕｌｆａｃｅＥｎｈａｎｃｅｄＬａｓｅｒＤｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ＩｏｎｉｚａｔｉｏｎＴｉｍｅｏｆＦｌｉｇｈｔＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射線免疫分析、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、補体固定分析法、２次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー質量分析（ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、またはＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ）で行うものであり得るが、これらに制限されるものではない。

【0039】

以下、本発明の理解を助けるために、実施例を挙げて詳細に説明する。但し、下記の実施例は、本発明の内容を例示するものであり、本発明の範囲が、下記の実施例に限定されるものではない。本発明の実施例は、当業者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。

【0040】

＜実験例＞

【0041】

下記の実験例は、本発明によるそれぞれの実施例に共通して適用される実験例を提供するためのものである。

【0042】

１．患者

【0043】

本発明者らは、ＳＬＥを有した患者１６０人の医療記録を検討したが、これらは、大韓民国の延世大学校医科大学セブランス病院リウマチ内科で初めてＳＬＥと診断され、２０１５年３月から２０１６年９月まで血清検査のために血液を提供した。選定基準は、次の通りである。

【0044】

１）１９９７年改定されたＳＬＥに対する米国リウマチ学会分類基準を満たす患者；２）ＳＬＥ以外の腫瘍、炎症性疾患及び自己免疫疾患のように血清ＡＩＭＰ１、赤血球沈降速度（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎｒａｔｅ；ＥＳＲ）及びＣ反応性タンパク質（Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎ；ＣＲＰ）に影響を及ぼす医学的要因がいない患者、３）臨床記録及び血清保管日が同じである血清で評価され、測定されたＳＬＥＤＡＩ−２Ｋの実験項目によってよく整理された医療記録を有した患者、４）血清保管日が同じである血清から測定されたＳＬＥＤＡ１−２Ｋ以外に他の炎症因子関連実験結果を有した患者。元気な対照群（ｎ＝４３）の血清サンプルは、セブランス病院健康検診センターで提供した同意書に同意した元気な志願者から得た。本研究は、セブランス病院の医学研究倫理審査委員会によって承認され、ヘルシンキ宣言に規定された原則によって行われた。

【0045】

２．臨床及び実験データ、薬物

【0046】

人口統計学的結果は、年齢、性別及び有病期間を含む。ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋは、ＳＬＥ疾患活性に対する指標として使用し、臨床特性及び血清保管日が同じである血清から測定された抗ｄｓＤＮＡ、補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ；Ｃ）３、Ｃ４、白血球（ｗｈｉｔｅｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓ；ＷＢＣｓ）、リンパ球及び血小板の数及びヘモグロビンのようにＳＬＥＤＡＩ−２Ｋに属する収集された実験結果を使用して計算した。また、本発明者らは、ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋ実験項目以外のＥＳＲ及びＣＲＰのようにＳＬＥの炎症因子を示す実験データも検討した。本発明者らは、活性化または安定化されたＳＬＥを分類するために、ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋ点数を５でカットオフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）させ、ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋ点数の合計が５以上である患者を活性化されたＳＬＥと定義した。あらゆる実験データは、血清保管日が同じである血清を測定して得た。薬物は、大韓民国医薬品処方調剤支援システムを使用して確認し、最近投薬された薬物は計数した。

【0047】

３．血清ＡＩＭＰ１の測定

【0048】

本発明者らは、ＳＬＥ患者及び元気な対照群の保管血清サンプルを使用して血清ＡＩＭＰ１レベルを測定した。ヒトＡＩＭＰ１ＥＬＩＳＡキットは、Ｃｌｏｕｄ−ＣｌｏｎｅＣｏｒｐ．（Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ７７０８４、ＵＳＡ）から購入し、ＡＩＭＰ１レベルは、製造社の指示によって測定した。簡単に説明すれば、サンプルは、ＰＢＳで１：５の比率で希釈し、１００ｍｌサンプルを各ウェルに添加し、プレートを密封して３７℃で１時間反応させた。次いで、１００ｍｌの検出試薬Ａ作用溶液を各ウェルに添加し、プレートを密封して３７℃で１時間反応させた。各ウェルは、３５０ｍｌの洗浄溶液で３回洗浄した。１００ｍｌの検出試薬Ｂ作用溶液を各ウェルに添加し、プレートを密封して３７℃で３０分間反応させた。プレートは、洗浄緩衝液で５回洗浄した。基質溶液として１００ｍｌの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（３，３’，５，５’−Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ；ＴＭＢ）を添加し、常温で光なしに１５分間反応させた。次いで、５０ｍｌの中断溶液（０．１Ｎ硫酸）を添加し、４５０ｎｍで各ウェルのＯ．Ｄ数値を測定した。

【0049】

４．統計分析

【0050】

連続型変数は、四分位範囲（ＩＱＲ）の中央値（ｍｅｄｉａｎ）を示し、範疇型変数は、頻度及び百分率で表示した。連続型変数は、Ｓｔｕｄｅｎｔ´ｓｔ−ｔｅｓｔを使用して比較し、範疇型データは、ｃｈｉ−ｓｑｕａｒｅｔｅｓｔまたはＦｉｓｈｅｒ´ｓｅｘａｃｔｔｅｓｔを使用して比較した。ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋによる血清ＡＩＭＰ１と、疾患活性または炎症因子と関連した実験変数の間の訂正は、Ｐｅａｒｓｏｎ´ｓｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓを使用して評価した。単変量分析において、オッズ比（ｏｄｄｓｒａｔｉｏ；ＯＲ）は、多変量ロジスティック回帰分析を使用してあらゆる変数に対してｐ−数値＜０．０５で測定した。活性ＳＬＥを予測するための血清ＡＩＭＰ１の適正カットオフ数値は、収容者反応特性曲線（ｒｅｃｅｉｖｅｒｏｐｅｒａｔｏｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｃｕｒｖｅ；ＡＵＲＯＣ）下の領域を計算して評価し、活性及び安定ＳＬＥに対する血清ＡＩＭＰ１の相対危険度（ｒｅｌａｔｉｖｅｒｉｓｋ；ＲＲ）は、分割表（ｃｏｎｔｉｎｇｅｎｃｙｔａｂｌｅｓ）及びｃｈｉ−ｓｑｕａｒｅｔｅｓｔを使用して分析した。あらゆる統計学的分析は、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍｖｅｒｓｉｏｎ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ、ＳａｎＤｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）及びＳＰＳＳｐａｃｋａｇｅｆｏｒＷｉｎｄｏｗｓｖｅｒｓｉｏｎ２１（ＳＰＳＳＩｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ、ＵＳＡ）を使用して行い、両側検定（ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ）ｐ−数値＜０．０５が統計学的有意性があると判断された。

【0051】

＜実施例１＞活性及び安定ＳＬＥを有した患者特性

【0052】

ＳＬＥ患者の特性は、表１に示した。平均年齢は、４１．０であり、患者の９０．０％が女子であった。患者の平均有病基間は、７９．０月であった。平均ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋ及び血清ＡＩＭＰ１レベルは、それぞれ４．５及び６．８ｎｇ／ｍＬであった。グルココルチコイド（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ）が最も多く投薬され（７６．８％）、次いで、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）（４２．５％）及びモフェチル（ｍｏｆｅｔｉｌ）（２２．５％）が投薬された。

【0053】

あらゆるＳＬＥ患者をＳＬＥＤＡＩ点数５でカットオフして、活性及び安定ＳＬＥグループに均一に再分類した（各グループ当たり８０人の患者）。２つのグループ間の年齢及び性別において、有意的差異点はなかったが、安定ＳＬＥを有した患者が活性ＳＬＥを有した患者に比べてさらに長い有病基間を有した。活性ＳＬＥを有した患者は、安定ＳＬＥを有した患者に比べて平均ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋがさらに高かった（７．０ｖｓ．２．０、ｐ＜０．００１）。また、活性ＳＬＥを有した患者は、白血球数を除いてはＳＬＥ疾患活性増加及び炎症要因拡張を反映する因子と大きく関連しているという実験結果を示した。活性ＳＬＥを有した患者は、安定ＳＬＥを有した患者に比べて平均血清ＡＩＭＰ１がさらに高かった（８．０ｖｓ．６．４ｎｇ／ｍＬ、ｐ＜０．００１）。活性及び安定ＳＬＥを有した患者の間において、共に投薬された薬物による差異点は、統計的に明白ではなかった（表１）。

【0054】

【表1】

【0055】

＜実施例２＞ＳＬＥを有した患者及び元気な対照群間の血清ＡＩＭＰ１の比較

【0056】

ＳＬＥを有した患者及び元気な対照群間の血清ＡＩＭＰ１を比較すれば、活性及び安定ＳＬＥを有した患者いずれも元気な対照群に比べて、平均血清ＡＩＭＰ１がさらに高く表われることを確認した（活性ＳＬＥの平均血清ＡＩＭＰ１ｖｓ元気な対照群の平均、ｐ＜０．００１及び安定ＳＬＥの平均血清ＡＩＭＰ１ｖｓ元気な対照群の平均、ｐ＜０．００１）（図１）。

【0057】

＜実施例３＞ＳＬＥを有した患者で疾患活性または炎症因子と関連した実験変数と血清ＡＩＭＰ１の関連性

【0058】

本発明者らは、ＳＬＥを有した患者でＳＬＥＤＡＩ−２Ｋ及び疾患活性または炎症因子と関連した実験変数と血清ＡＩＭＰ１の関連性を確認した．血清ＡＩＭＰ１は、ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋと非常に関連している（ｒ＝−０．３４７、ｐ＜０．００１）。また、血清ＡＩＭＰ１は、疾患活性または炎症因子と関連した実験変数とも関連している。実験変数のうち、血清ＡＩＭＰ１は、Ｃ３と最も強く関連しており（ｒ＝−０．３４０、ｐ＜０．００１）、ヘモグロビン（ｒ＝−０．３０２、ｐ＜０．００１）及び抗ｄｓＤＮＡ（ｒ＝０．２７８、ｐ＜０．００１）とも非常に関連している（図２）。

【0059】

＜実施例４＞活性ＳＬＥに対する有用な予測マーカーとしての血清ＡＩＭＰ１

【0060】

本発明者らは、ＲＯＣ分析を使用して、活性ＳＬＥを予測するために血清ＡＩＭＰ１の最適カットオフを計算した。活性ＳＬＥ予測のための最適血清ＡＩＭＰ１のカットオフは、１０．０９ｎｇ／ｍＬであると表われた［ＡＵＲＯＣ０．６３４、９５％信頼区間（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌ；ＣＩ）０．５５４−０．７０８、ｐ＝０．００２］。最適カットオフによって２個のグループに患者を分類すれば、血清ＡＩＭＰ１-１０．０９ｎｇ／ｍＬである患者が、そうではない患者よりも活性ＳＬＥがさらによく観測された（８０．５％ｖｓ．４９．１％、ｐ＜０．００１）。その上に、血清ＡＩＭＰ１-１０．０９ｎｇ／ｍＬである患者で活性ＳＬＥの危険度が、そうではない患者よりもはるかに高かった（ＲＲ１．６３８、９５％ＣＩ１．２８７−２．０８２、ｐ＜０．００１）（図３）。

【0061】

最終的に、ＳＬＥＤＡＩ−２Ｋに基づいた活性ＳＬＥ予測のための血清ＡＩＭＰ１の可能性を明確にするために、単変量及び多変量ロジスティック回帰分析を行った。単変量分析において、白血球数を除いては疾患活性または炎症因子関連実験変数が活性及び安定ＳＬＥの区別に有用であるということを表わした。しかし、多変量分析においては、血清ＡＩＭＰ１-１０．０９ｎｇ／ｍＬ（ＯＲ３．９１９、９５％ＣＩ１．２２２−１２．５６４、ｐ＝０．０２１）、Ｃ３（ＯＲ０．９５７、９５％ＣＩ０．９３８−０．９７６、ｐ＜０．００１）、リンパ球数（ＯＲ０．９９８、９５％ＣＩ０．９９７−０．９９９、ｐ＜０．００１）、ＥＳＲ（ＯＲ１．０２９、９５％ＣＩ１．００７−１．０５１、ｐ＝０．００８）が活性及び安定ＳＬＥの差の区別に有用であると表われた（表２）。

【0062】

【表2】