特表 2020-523397 水溶性トリメトキシフェニルピリジン型錯化剤および対応するランタニド錯体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2020-523397(P2020-523397A)

(43)【公表日】2020年8月6日

(54)【発明の名称】水溶性トリメトキシフェニルピリジン型錯化剤および対応するランタニド錯体

(51)【国際特許分類】

   C07D 401/14 20060101AFI20200710BHJP

   C07F 5/00 20060101ALI20200710BHJP

   C09K 11/06 20060101ALI20200710BHJP

【ＦＩ】

   C07D401/14

   C07F5/00 DCSP

   C09K11/06

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】55

(21)【出願番号】特願2019-569719(P2019-569719)

(86)(22)【出願日】2018年6月13日

(85)【翻訳文提出日】2020年2月14日

(86)【国際出願番号】FR2018051392

(87)【国際公開番号】WO2018229432

(87)【国際公開日】20181220

(31)【優先権主張番号】1755330

(32)【優先日】2017年6月14日

(33)【優先権主張国】FR

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

(71)【出願人】

【識別番号】514064671

【氏名又は名称】シスビオ バイオアッセイズ

(74)【代理人】

【識別番号】110000914

【氏名又は名称】特許業務法人 安富国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ラマルク， ローラン

(72)【発明者】

【氏名】ズヴィール， ユリアーン

(72)【発明者】

【氏名】ブリエ， エマニュエル

【テーマコード（参考）】

4C063

4H048

【Ｆターム（参考）】

4C063AA05

4C063BB03

4C063CC45

4C063DD12

4C063EE10

4H048AA01

4H048AB92

4H048AC52

4H048BB17

4H048BC10

4H048BC19

4H048VA32

4H048VA70

4H048VB10

(57)【要約】

【課題】水溶性トリメトキシフェニルピリジン型錯化剤および対応するランタニド錯体の提供。
【解決手段】本発明は、下記式（Ｉ）で表される錯化剤に関する。本発明はまた、上記錯化剤から得られるランタニド錯体にも関する。本発明は、生体分子を標識するのに使用することができる。
［化１］

（式中、Ｒａ、Ｃｈｒｏｍ_１、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３は、本明細書に定義される通りである。）
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（Ｉ）で表される錯化剤。

【化1】

（式中、
Ｃｈｒｏｍ_１、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３はそれぞれ、下記式（Ｉａ）または（Ｉｂ）の基を表し、

【化2】

Ｘ_１およびＸ_２はそれぞれ、Ｌ_１−ＣＯ−ＲまたはＬ_２−Ｇ基を表し、
Ｒは、−ＯＲ_２または−ＮＨ−Ｅ基であり、
Ｒａは、Ｈまたは−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｇ基であり、
Ｒ_１は、−ＣＯ_２Ｈまたは−ＰＯ（ＯＨ）Ｒ_３基であり、
Ｒ_２は、Ｈまたは（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルであり、
Ｒ_３は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキル、好ましくはメチル；−ＳＯ_３⁻基によって好ましくはメタ位もしくはパラ位が置換されていてもよいフェニル；またはベンジルであり、
Ｌ_１は、直接結合；酸素原子、窒素原子および硫黄原子から選択される少なくとも１個の原子で中断されていてもよい−（ＣＨ_２）_ｒ−基；−ＣＨ＝ＣＨ−基；−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−基；−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ−基；またはＰＥＧ基であり、
Ｌ_２は、二価の連結基であり、
Ｇは、反応性基であり、
Ｅは、−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｓ−ＣＨ_２−ＳＯ_３⁻もしくは−Ｎ^＋Ａｌｋ_１Ａｌｋ_２Ａｌｋ_３基、またはスルホベタインであり、
ｌは、１〜４の範囲の整数であり、
ｒは、１〜６の範囲の整数、好ましくは１〜３の範囲の整数であり、
ｓは、０、１または２であり、
Ａｌｋ_１、Ａｌｋ_２、Ａｌｋ_３は同一でも異なってもよく、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルを表すが、
ただし、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１個の式（Ｉａ）の基および少なくとも１個のＬ_１−ＣＯ−Ｒ基を含むと理解される。）

【請求項2】

Ｃｈｒｏｍ_１が、Ｘ_１がＬ_２−Ｇ基である式（Ｉａ）の基を表し、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３がそれぞれ、Ｘ_２がＬ_１−ＣＯ−Ｒ基である式（Ｉｂ）の基を表す、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項3】

Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３が同一である、請求項２に記載の錯化剤。

【請求項4】

Ｃｈｒｏｍ_１およびＣｈｒｏｍ_２がそれぞれ、Ｘ_１がＬ_１−ＣＯ−Ｒ基である式（Ｉａ）の基を表し、Ｃｈｒｏｍ_３が、Ｘ_２がＬ_２−Ｇ基である式（Ｉｂ）の基を表す、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項5】

Ｃｈｒｏｍ_１およびＣｈｒｏｍ_２が同一である、請求項４に記載の錯化剤。

【請求項6】

ＲａがＨである、請求項２〜５のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項7】

Ｃｈｒｏｍ_１、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３がそれぞれ、Ｘ_１がＬ_１−ＣＯ−Ｒ基である式（Ｉａ）の基を表し、Ｒａが、−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｇ基である、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項8】

Ｃｈｒｏｍ_１、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３が同一である、請求項８に記載の錯化剤。

【請求項9】

Ｒ_１が、−ＣＯ_２Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ_３基（式中、Ｒ_３が（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルまたはフェニル）である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項10】

Ｌ_１が、直接結合；酸素原子および硫黄原子から選択される少なくとも１個の原子で中断されていてもよい−（ＣＨ_２）_ｒ−基（式中、ｒ＝２または３）；−ＣＨ＝ＣＨ−基；−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−基；または−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ基である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項11】

Ｅが、−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｓ−ＣＨ_２−ＳＯ_３⁻基（式中、ｓ＝０または１）；−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｎ^＋Ａｌｋ_１Ａｌｋ_２Ａｌｋ_３基（式中、Ａｌｋ_１、Ａｌｋ_２、Ａｌｋ_３は同一でも異なってもよく、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルを表し、ｓ＝０または１）；または下記式の基：

【化3】

（式中、Ｒ_４は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルであり、ｔは１または２）である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項12】

Ｌ_２が、
直接結合；
１つまたは複数の二重または三重結合を含んでいてもよい直鎖状または分枝状Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキレン基；
Ｃ_５〜Ｃ_８シクロアルキレン基；Ｃ_６〜Ｃ_１４アリーレン基；
下記式の二価の基から選択される基：

【化4】

（式中、ｎ、ｍ、ｐ、ｑは、１〜１６の整数、好ましくは１〜５の整数であり、ｅは、１〜６の範囲の整数、好ましくは１〜４の範囲の整数である。）から選択されるが、
ただし、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、酸素、窒素、硫黄もしくはリンなどの１個もしくは複数のヘテロ原子、または１個もしくは複数のカルバモイルもしくはカルボキサミド基を含んでいてもよく、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、１〜５個のＣ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１４アリール、スルホナートまたはオキソ基によって置換されていてもよい、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項13】

反応性基Ｇが、アクリルアミド、活性化アミン、活性化エステル、アルデヒド、ハロゲン化アルキル、無水物、アニリン、アジド、アジリジン、カルボン酸、ジアゾアルカン、ハロアセトアミド、ハロトリアジン、ヒドラジン、イミドエステル、イソシアナート、イソチオシアナート、マレイミド、ハロゲン化スルホニル、チオール、ケトン、アミン、酸ハロゲン化物、スクシンイミジルエステル、ヒドロキシスクシンイミジルエステル、ヒドロキシスルホスクシンイミジルエステル、アジドニトロフェニル、アジドフェニル、グリオキサール、トリアジン、アセチレン基、特に下記式の基から選択される基：

【化5】

（式中、ｗは０〜８の範囲であり、ｖは０または１であり、Ａｒは、ハロゲン原子によって置換されていてもよい、１〜３個のヘテロ原子を含む飽和または不飽和５員または６員ヘテロ環である。）から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項14】

−Ｌ_２−Ｇ基が、カルボン酸、アミン、スクシンイミジルエステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、イソチオシアナート、マレイミド基から選択される反応性基Ｇと、１〜５個の炭素原子を含むアルキレン鎖または下記式の基から選択される基：

【化6】

（式中、ｎ、ｍは、１〜１６の範囲の整数、好ましくは１〜５の範囲の整数であり、ｅは、１〜６の範囲の整数、好ましくは１〜４の範囲の整数である。）からなるスペーサーアームＬ_２とからなり、Ｇ基が、上記二価の基の一端または他端に結合している、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項15】

請求項１〜１４のいずれか一項に記載の錯化剤とランタニドとを含むランタニド錯体。

【請求項16】

上記ランタニドが、Ｅｕ^３＋、Ｔｂ^３＋、Ｓｍ^３＋から選択され、好ましくはＴｂ^３＋であることを特徴とする、請求項１５に記載のランタニド錯体。

【請求項17】

（ｉ）Ｇ基を含む請求項１５または１６に記載のランタニド錯体と、（ｉｉ）官能基を含む所望の分子との反応によって得られる蛍光性コンジュゲートであって、上記官能基は、Ｇ基の原子の１個と共有結合を形成するものである、蛍光性コンジュゲート。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、水溶性錯化剤またはリガンド、これらの錯化剤から得られるランタニド錯体、および、分子を標識し、時間分解蛍光法で検出するためのこれらのランタニド錯体の使用に関する。本発明には、１、２または３個の水溶性官能化トリメトキシフェニルピリジン型発色団を含む安定な錯体が記載されている。

【背景技術】

【0002】

ランタニド錯体の使用は、この約２０年にわたって生命科学の分野において大幅に増加している。実際、これらの蛍光化合物は、それらを生体分子を検出するのに好まれる標識としている興味深い分光学的性質を有する。これらの蛍光化合物は、ＦＲＥＴ（フェルスター共鳴エネルギー移動）測定を実施するために適合するフルオロフォアと組み合わせた使用に特に適しており、生体分子間の相互作用の研究へのその応用が、Ｃｉｓｂｉｏ Ｂｉｏａｓｓａｙｓ社およびそのＨＴＲＦ（登録商標）製品群など、いくつかの企業により商業的に利用されている。ランタニド錯体の寿命が比較的長いことにより、時間分解蛍光測定（すなわち、フルオロフォア励起後に遅延時間をおく）を行うことも可能になり、そのため測定媒体による蛍光干渉を制限することができる。後者の性質は、測定媒体が、多数のタンパク質を含むためそれらの蛍光が検討中の化合物の蛍光に干渉するおそれがある生物学的媒体に近くなるほどいっそう有用である。

【0003】

いくつかのランタニド錯体が開示されており、一部は商業的に利用されている。特に、大多環状ランタニドクリプタート（特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５）、ジエチレントリアミン五酸単位に結合したクマリンに由来する単位を含むランタニド錯体（特許文献６）、およびピリジンの誘導体（特許文献７、特許文献８）、ビピリジンの誘導体（特許文献９）またはテルピリジンの誘導体（特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２）を含むランタニド錯体が挙げられる。

【0004】

蛍光性ランタニド錯体は、以下の３つの部分からなる。
・光吸収性発色団（アンテナ効果）、
・錯化性部分、および
・ランタニド基に属している原子（一般にユウロピウムまたはテルビウム）。

【0005】

非常に多くの発色団がこの分野で研究を行っているチームによって使用されており、それらの研究は多くの総説のテーマである（非特許文献１；非特許文献２；および非特許文献３）。これらすべての研究のうち、トリメトキシフェニルピリジン発色団を取り扱っているものはほとんどない。非特許文献１において、著者らは、形態的には、水性環境において不安定なキレートであるトリメトキシフェニルジピコリン酸の誘導体の光物理的特性を記載している。非特許文献４において、著者らは、イムノアッセイにおいて使用可能なものとするためにナノ粒子にこの単位を導入した。しかし、これらの粒子は大きく（直径４５ｎｍ）、このことは、小さい生体分子を蛍光プローブで標識すべき場合には欠点である。

【0006】

特許文献１３は、３個のトリメトキシフェニルピリジン型発色団を含むランタニド錯体の合成に関する。これらの錯体はキレート群に属するものであるため、特に二価のカチオン、またはイムノアッセイ緩衝液中の添加剤として使用されるＥＤＴＡ型錯化剤の存在下、非常に不安定な錯体になる。

【0007】

特許文献１４において、著者らは、トリメトキシフェニルピリジン単位を含む錯体を記載している。これらの発色団は、以下のように様々な構造に組み入れられている。
・キレートに組み入れられる場合、上述の媒体（二価のカチオンおよびＥＤＴＡ）中で不安定な錯体を形成する。
・発色団がトリアザシクロノナン（ＴＡＣＮ）型大環状分子に一体化されると、今度は錯体は安定であるが、生物学的水性媒体に対する溶解性がかなり低い。さらに、官能化は直接的には不可能であり、著者らは、これらの系を官能化する手順を全く記載していない。
・最後に、これらの発色団がトリアザシクロデカン型大環状分子に組み入れられる場合、錯体はやはりまだ生物学的水性媒体に対する溶解性がかなり低い。官能化は、大環状分子のプロピレン鎖の中間炭素において実施され、それによりランタニド原子の周りの対称性、結果として発光スペクトル線の分布が変化する。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】欧州特許第０１８０４９２号明細書

【特許文献2】欧州特許第０３２１３５３号明細書

【特許文献3】欧州特許第０６０１１１３号明細書

【特許文献4】国際公開第２００１／９６８７７号

【特許文献5】国際公開第２００８／０６３７２１号

【特許文献6】米国特許第５，６２２，８２１号明細書

【特許文献7】米国特許第４，９２０，１９５号明細書

【特許文献8】米国特許第４，７６１，４８１号明細書

【特許文献9】米国特許第５，２１６，１３４号明細書

【特許文献10】米国特許第４，８５９，７７７号明細書

【特許文献11】米国特許第５，２０２，４２３号明細書

【特許文献12】米国特許第５，３２４，８２５号明細書

【特許文献13】国際公開第８９／０４８２６号

【特許文献14】国際公開第２００５／０５８８７７号

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１９９７年、７５巻、１４９頁

【非特許文献2】Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、２０１０年、１１０巻、２７２９頁

【非特許文献3】Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１４年、５３巻、１８５４頁

【非特許文献4】Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、７７巻、２６４３頁

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明は、本発明の錯体が、アニオン、カチオンまたは双性イオン型の水可溶化基と、最終的には、トリアザシクロノナン環（ランタニド原子の錯体化に特に適しており、ランタニドの周りのＣ３型対称性に従う環）のエチレン鎖に直接置換されている官能化アームとを含むので、あらゆる生物学的媒体に可溶な大部分の二価のカチオンおよびＥＤＴＡの存在下で安定である錯体を提供することによって、先行技術の化合物の欠点を克服することを目的とする。本発明の錯体は、発光スペクトルがＦＲＥＴ実験における使用に十分に適しており、かつ生体分子を標識するのに非常に便利である化合物を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】本発明の代表的錯体のＵＶスペクトルを示す図である。

【図2】本発明の代表的錯体のクロマトグラムを示す図である。

【図3】本発明の代表的錯体の質量スペクトルを示す図である。

【図4】本発明の代表的錯体のＵＶスペクトルを示す図である。

【図5】本発明の代表的錯体のクロマトグラムを示す図である。

【図6】本発明の代表的錯体の質量スペクトルを示す図である。

【図7】本発明の代表的錯体のＵＶスペクトルを示す図である。

【図8】本発明の代表的錯体のクロマトグラムを示す図である。

【図9】本発明の代表的錯体の質量スペクトルを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0012】

錯化剤
本発明に係る錯化剤は、下記式（Ｉ）で表される化合物である。

【0013】

【化1】

【0014】

（式中、
Ｃｈｒｏｍ_１、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３はそれぞれ、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）の基を表し、

【0015】

【化2】

【0016】

Ｘ_１およびＸ_２はそれぞれ、Ｌ_１−ＣＯ−ＲまたはＬ_２−Ｇ基を表し、
Ｒは、−ＯＲ_２または−ＮＨ−Ｅ基であり、
Ｒａは、Ｈまたは−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｇ基であり、
Ｒ_１は、−ＣＯ_２Ｈまたは−ＰＯ（ＯＨ）Ｒ_３基であり、
Ｒ_２は、Ｈまたは（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルであり、
Ｒ_３は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキル、好ましくはメチル；−ＳＯ_３⁻基によって好ましくはメタ位もしくはパラ位が置換されていてもよいフェニル；またはベンジルであり、
Ｌ_１は、直接結合；酸素原子、窒素原子および硫黄原子から選択される少なくとも１個の原子で中断されていてもよい−（ＣＨ_２）_ｒ−基；−ＣＨ＝ＣＨ−基；−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−基；−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ−基；またはＰＥＧ基であり、
Ｌ_２は、二価の連結基であり、
Ｇは、反応性基であり、
Ｅは、−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｓ−ＣＨ_２−ＳＯ_３⁻もしくは−Ｎ^＋Ａｌｋ_１Ａｌｋ_２Ａｌｋ_３基、またはスルホベタインであり、
ｌは、１〜４の範囲の整数であり、
ｒは、１〜６の範囲の整数、好ましくは１〜３の範囲の整数であり、
ｓは、０、１または２であり、
Ａｌｋ_１、Ａｌｋ_２、Ａｌｋ_３は同一でも異なってもよく、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルを表すが、
ただし、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１個の式（Ｉａ）の基および少なくとも１個のＬ_１−ＣＯ−Ｒ基を含むと理解される。）

【0017】

「ＰＥＧ基」は、式−ＣＨ_２−（ＣＨ_２ＯＣＨ_２）_ｙ−ＣＨ_２ＯＣＨ_３（ｙは１〜５の範囲の整数）で表されるポリエチレングリコール基を意味する。

【0018】

「スルホベタイン」は、下記から選択される基：

【0019】

【化3】

【0020】

（式中、Ｒ_４は、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、好ましくはメチルまたはエチルを表し、ｔは、１、２、３、４、５または６であり、好ましくは１または２である。）を意味し、式−（ＣＨ_３）_２Ｎ^＋−（ＣＨ_２）_３−ＳＯ_３⁻のスルホベタインが好ましい。

【0021】

−ＳＯ_３Ｈ、−ＣＯ_２Ｈおよび−ＰＯ（ＯＨ）_２基は、ｐＨに応じて、脱プロトン化した形態または脱プロトン化していない形態である。したがって、これらの基は、以下の本明細書において、−ＳＯ_３⁻、−ＣＯ_２⁻および−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ⁻基も表し、その逆も表す。

【0022】

錯化剤の第１の好ましいファミリーは、Ｃｈｒｏｍ_１が、Ｘ_１がＬ_２−Ｇ基である式（Ｉａ）の基を表し、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３が同一でも異なってもよく、それぞれ、Ｘ_２がＬ_１−ＣＯ−Ｒ基である式（Ｉｂ）の基を表す、式（Ｉ）の化合物からなる。一実施形態において、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３は同一である。

【0023】

錯化剤の第２の好ましいファミリーは、Ｃｈｒｏｍ_１およびＣｈｒｏｍ_２が同一でも異なってもよく、それぞれ、Ｘ_１がＬ_１−ＣＯ−Ｒ基である式（Ｉａ）の基を表し、Ｃｈｒｏｍ_３が、Ｘ_２がＬ_２−Ｇ基である式（Ｉｂ）の基を表す、式（Ｉ）の化合物からなる。一実施形態において、Ｃｈｒｏｍ_１およびＣｈｒｏｍ_２は同一である。

【0024】

錯化剤の最初の２つの好ましいファミリーに共通の一実施形態において、ＲａはＨである。

【0025】

錯化剤の第３の好ましいファミリーは、Ｃｈｒｏｍ_１、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３が同一でも異なってもよく、それぞれ、Ｘ_１がＬ_１−ＣＯ−Ｒ基である式（Ｉａ）の基を表し、Ｒａが−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｇ基である、式（Ｉ）の化合物からなる。一実施形態において、Ｃｈｒｏｍ_１、Ｃｈｒｏｍ_２およびＣｈｒｏｍ_３は同一である。

【0026】

これら３つの好ましいファミリーのうち、好ましいサブファミリーは、錯化剤が以下の特徴の１つまたは複数を含むものである。
・Ｒ_１は、−ＣＯ_２Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ_３基（式中、Ｒ_３が（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルまたはフェニル）である。
・Ｌ_１は、直接結合；酸素原子および硫黄原子から選択される少なくとも１個の原子で中断されていてもよい−（ＣＨ_２）_ｒ−基（式中、ｒ＝２または３）；−ＣＨ＝ＣＨ−基；−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−基；または−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ−基である。
・Ｅは、−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｓ−ＣＨ_２−ＳＯ_３⁻基（式中、ｓ＝０または１）；−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｎ^＋Ａｌｋ_１Ａｌｋ_２Ａｌｋ_３基（式中、Ａｌｋ_１、Ａｌｋ_２、Ａｌｋ_３は同一でも異なってもよく、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルを表し、ｓ＝０または１）；または下記式の基：

【0027】

【化4】

【0028】

（式中、Ｒ_４は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルであり、ｔは１または２）である。

【0029】

本発明の一実施形態において、式（Ｉ）の錯化剤がいくつかのＥ基を含む場合、これらの基の多くとも１個はスルホベタインを表す。

【0030】

スペーサーアームＬ_２が有する反応性基Ｇによって、本発明に係る化合物と、蛍光化することが望まれる化学種、例えば有機分子、ペプチド、タンパク質またはヌクレオチド（ＲＮＡ、ＤＮＡ）とのカップリングが可能になる。２つの有機分子をコンジュゲーションする方法は、反応性基の使用に基づいており、当業者の一般知識の一部を成す。これらの通常の方法は、例えばＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、第２版、２００８年、１６９〜２１１頁に記載されている。

【0031】

典型的には、反応性基は、それぞれ好適な求核性または求電子性基の存在下で共有結合を形成することができる求電子性または求核性基である。反応性基を含む本発明に係る化合物と官能基を有する有機分子、ペプチドまたはタンパク質とのコンジュゲーション反応によって、反応性基の１個または複数の原子を含む共有結合が形成される。

【0032】

好ましくは、反応性基Ｇは、以下の化合物の１つに由来する基である：アクリルアミド、活性化アミン（例えば、カダベリンまたはエチレンジアミン）、活性化エステル、アルデヒド、ハロゲン化アルキル、無水物、アニリン、アジド、アジリジン、カルボン酸、ジアゾアルカン、ハロアセトアミド、モノクロロトリアジン、ジクロロトリアジンなどのハロトリアジン、ヒドラジン（ヒドラジドを含む）、イミドエステル、イソシアナート、イソチオシアナート、マレイミド、ハロゲン化スルホニル、またはチオール、ケトン、アミン、酸ハロゲン化物、スクシンイミジルエステル、ヒドロキシスクシンイミジルエステル、ヒドロキシスルホスクシンイミジルエステル、アジドニトロフェニル、アジドフェニル、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド、グリオキサール、トリアジン、アセチレン基、特に下記式の基から選択される基。

【0033】

【化5】

【0034】

（式中、ｗは０〜８の範囲であり、ｖは０または１であり、Ａｒは、ハロゲン原子によって置換されていてもよい、１〜３個のヘテロ原子を含む飽和または不飽和５員または６員ヘテロ環である。）

【0035】

好ましくは、反応性基Ｇは、アミン（−ＮＨＢｏｃとして保護されていてもよい）、スクシンイミジルエステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、イソチオシアナート、マレイミド基、またはカルボン酸（−ＣＯ_２Ｍｅ、−ＣＯ_２ｔＢｕ基として保護されていてもよい）である。後者の場合、酸は、求核性種と反応することができるようにエステルとして活性化されなければならない。

【0036】

反応性基Ｇは、共有結合によって、あるいは二価の有機基からなることが有利であるスペーサーアームを介して錯化剤に結合している。したがって、スペーサーアームＬ_２は、下記から選択することができる。
・直接結合；
・１つまたは複数の二重または三重結合を含んでいてもよい直鎖状または分枝状Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキレン基；
・Ｃ_５〜Ｃ_８シクロアルキレン基；Ｃ_６〜Ｃ_１４アリーレン基；
・下記式の二価の基から選択される基。

【0037】

【化6】

【0038】

（式中、ｎ、ｍ、ｐ、ｑは、１〜１６の整数、好ましくは１〜５の整数であり、ｅは、１〜６の範囲の整数、好ましくは１〜４の範囲の整数である。）
ただし、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、酸素、窒素、硫黄、リンなどの１個もしくは複数のヘテロ原子、または１個もしくは複数のカルバモイルもしくはカルボキサミド基を含んでいてもよく、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、１〜５個、好ましくは１〜３個のＣ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１４アリール、スルホナートまたはオキソ基によって置換されていてもよい。

【0039】

好ましくは、−Ｌ_２−Ｇ基は、カルボン酸（−ＣＯ_２Ｍｅ、−ＣＯ_２ｔＢｕ基として保護されていてもよい）、アミン（−ＮＨＢｏｃとして保護されていてもよい）、スクシンイミジルエステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、イソチオシアナート、マレイミド基から選択される反応性基Ｇと、１〜５個の炭素原子を含むアルキレン鎖または下記式の基から選択される基：

【0040】

【化7】

【0041】

（式中、ｎおよびｍは、１〜１６の整数、好ましくは１〜５の整数であり、ｅは、１〜６の範囲の整数、好ましくは１〜４の範囲の整数である。）からなるスペーサーアームＬ_２とからなり、Ｇ基が、上記二価の基の一端または他端に結合している。

【0042】

本発明の説明
上述の問題は、トリアゾ化大環状分子（１，４，７−トリアザシクロノナン、以下ＴＡＣＮ）からなり、その窒素原子は、４位のメトキシがＯ−Ｘ_１基で置き換えられているトリメトキシフェニルピリジン型発色団で置換されているため、水可溶化官能基を容易に導入できる錯化剤によって解決された。本発明に係る錯化剤は、ランタニドと安定な錯体を形成するものであり、所望の分子の蛍光性コンジュゲートを生成するのに使用できる。本発明に係るランタニド錯体は、特にそれらの量子収量、発光寿命、および励起スペクトル（約３３７ｎｍでのレーザー励起に非常に適している）に関して、優れた光物理的特性を有する。本発明の錯体は、１、２または３個の発色団を含むことができ、そのため錯体の総輝度および錯体のサイズを容易に調節できる。錯体が発色団を含む場合、立体障害はほとんどない。３個の発色団が存在することで、錯体のモル吸光係数（ε）、結果として総輝度が著しく増加し、また、水性媒体に対する錯体の溶解性によって、錯体が生物学的媒体における使用に非常に適したものになる。最後に、ＴＡＣＮ環が有するＮＨ_２官能基によって、生体分子とのバイオコンジュゲーションが容易になる。特に、この官能基は、生物学者にとって好ましい官能基であるＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルに容易に変換可能である。

【0043】

錯体
本発明はまた、上述した錯化剤により錯化したランタニド原子からなるランタニド錯体であって、上記ランタニドがＥｕ^３＋、Ｓｍ^３＋、Ｔｂ^３＋、Ｇｄ^３＋、Ｄｙ^３＋、Ｎｄ^３＋、Ｅｒ^３＋から選択されるランタニド錯体にも関する。好ましくは、上記ランタニドは、Ｔｂ^３＋、Ｓｍ^３＋またはＥｕ^３＋であり、さらにより好ましくはＴｂ^３＋である。

【0044】

これらの錯体は、本発明に係る錯化剤とランタニド塩を接触させることによって調製される。したがって、室温における溶媒（上記塩と相溶性があるアセトニトリル、メタノールまたは他の溶媒）または緩衝液中での１当量の錯化剤と１〜５当量のランタニド塩（塩化物、酢酸塩またはトリフル酸塩の形態のユウロピウム、サマリウムまたはテルビウム）との数分間の反応によって、対応する錯体が生じる。

【0045】

上述したように、得られた蛍光性錯体は、特にそれらの量子収量、発光寿命、および励起スペクトル（約３３７ｎｍでのレーザー励起に非常に適している）に関して、優れた光物理的特性を有する。さらに、それらの発光スペクトルのバンド分布によって、シアニン、フルオレセイン、ローダミンまたはアロフィコシアニン型アクセプター（Ｃｉｓｂｉｏ Ｂｉｏａｓｓａｙｓ社販売のＸＬ６６５など）を用いたＦＲＥＴ用途において非常に好ましい特性が錯体に付与される。これらの錯体は、大部分の二価のカチオン（Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋…）またはＥＤＴＡを含む生物学的媒体において安定性が高いため、それらの発光は、先行技術の錯体と比較して優れたままである。

【0046】

コンジュゲート
−Ｌ_２−Ｇ基を含む本発明に係る錯化剤およびランタニド錯体は、反応性基と反応して共有結合を形成することができる官能基を含む有機または生体分子を標識するのに特に適している。したがって、本発明はまた、所望の分子（タンパク質、抗体、酵素、ホルモン、ＲＮＡ、ＤＮＡなど）を標識するためのランタニド錯体の使用にも関する。

【0047】

本発明はまた、本発明に係る錯体で標識された分子にも関する。反応性基と反応することができる官能基を有するならば、いずれの有機または生体分子も本発明に係る錯体とコンジュゲーションすることができる。特に、本発明に係るコンジュゲートは、本発明に係る錯体と、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、抗体、糖、炭水化物鎖、ヌクレオシド、ヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、酵素基質（特に、ベンジルグアニンまたはベンジルシトシンなどの酵素自殺基質（ＳｎａｐｔａｇおよびＣｌｉｐｔａｇという名称で販売されている酵素基質））、クロロアルカン（Ｈａｌｏｔａｇという名称で販売されている酵素基質）、補酵素Ａ（ＡＣＰｔａｇまたはＭＣＰｔａｇという名称で販売されている酵素基質）から選択される分子とを含む。

【0048】

合成
本発明に係る錯化剤（リガンド）および錯体の調製に関する一般戦略を、以下（スキーム１：単一アンテナ、スキーム２：ジアンテナ、スキーム３：トリアンテナ）に概略的に記載し、実験の部にさらに詳述する。

【0049】

【化8】

【0050】

モノ保護トリアザシクロノナン大環状分子Ｂｏｃ１を出発物質として、２個の可溶化基Ｅを付加させるために使用される２個のピリジニル単位を導入した。保護基Ｂｏｃを除去し、次いでアンテナ（発色団）を大環状分子に付加して、したがってリガンド３を得た。エステル（カルボン酸エステルおよびホスフィン酸エステル）の加水分解を塩基性条件を使用して従来法で実施した。そして、これによりランタニド原子（Ｌｎ）を組み込むことができ、したがって錯体５が形成される。この錯体を基にして、２個の水可溶化官能基Ｅを導入した。最後に、アンテナ（発色団）が有する保護基Ｂｏｃの脱保護後、錯体を生体分子にコンジュゲーションすることができるように官能化した（７）。

【0051】

【化9】

【0052】

ジアンテナ系は、同様の戦略を使用するが、ピリジニル単位および発色団の導入の順序を逆にして得られる。今回は、最初にアンテナを導入して、化合物８を得る。Ｂｏｃ基の除去後、最後のピリジニル単位を導入した。残り、すなわちエステル官能基（カルボン酸エステルおよびホスフィン酸エステル）の加水分解、ランタニド錯体の形成、２個の水可溶化官能基Ｅの導入（今回、これらの官能基は発色団が有する）、次いで官能基の組み込みは同一であり、このようにしてジアンテナファミリー１３を得る。

【0053】

【化10】

【0054】

トリアンテナ錯体に関しては、官能基の導入を可能にするアミン官能基がトリアザシクロノナン大環状分子（ＴＡＣＮ）に直接に固定されているので、合成が単純化される。したがって、３個の発色団が第１のステップにおいて導入され、次にエステル官能基（カルボン酸エステルおよびホスフィン酸エステル）の加水分解、次いで所望のランタニドによる錯化が行われる。錯体は、発色団のそれぞれに可溶化基Ｅを固定することによって可溶化する。アミンの脱保護後、この官能基は、バイオコンジュゲーションを可能にする反応性官能基に変換される。

【0055】

１）ピリジニルブロックの調製
以下に示すスキーム（４〜１２）は、以下の三官能性ピリジニル誘導体をもたらす様々な合成経路を示す。
・２位に錯化官能基（カルボン酸またはホスフィン酸）；
・４位に、水可溶化基を導入することができる官能基（メチルエステル官能基）、または官能基を組み込むことができる官能基（保護アミン官能基およびｔｅｒｔ−ブチルエステル官能基）；
・最後に、６位に、ＴＡＣＮ環のアミンと反応することができるように対応するメシラートに変換されるメチルアルコール官能基。

【0056】

【化11】

【0057】

シントン１４ａ〜ｃの合成は上述のものに記載されている（国際公開第２０１３／０１１２３６号および国際公開第２０１４／１１１６６１号を参照のこと）。これらのシントンを出発物質として、連続した以下の３つの反応によって一連の化合物１７ａ〜ｆが得られた。ピリジン誘導体とアルケンの間に炭素−炭素結合を生じるＨｅｃｋ反応。この手順は、例えば欧州特許出願公開第２００２８３６号明細書に記載されている。接触水素化による二重結合の還元の後、メシル化反応を行うことにより、化合物１７ａ〜ｆが得られる。あるいは、二重結合を保持して、系を硬直させ、水可溶化基をアピカル配向させることもできる（１８ａ〜ｆ）。

【0058】

【化12】

【0059】

同じ戦略に従い、対応するアルケンを使用して、ｔｅｒｔ−ブチルエステル形態（１７および１８シリーズの類似体）の化合物２１ａ〜ｆおよび２２ａ〜ｆ（スキーム５）が得られた。

【0060】

【化13】

【0061】

同じ戦略に従い、対応するアルケンを使用して、ＮＨＢｏｃ形態（１７および１８シリーズの類似体）の化合物２５ａ〜ｆおよび２６ａ〜ｆ（スキーム６）が得られた。

【0062】

【化14】

【0063】

同様の戦略に従って、２５シリーズの類似体である（炭素鎖を含まない）化合物２８ａ〜ｃを調製した。ＮＨＢｏｃ基の導入は、例えばＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２０１０年、５１巻、４４４５頁の総説に記載された方法を使用して実施した。

【0064】

【化15】

【0065】

スキーム８に記載された方法により、官能基（ＣＯ_２ＲまたはＮＨＢｏｃ）を有する脂肪族リンカーと芳香環（ピリジン）との間の４位に酸素原子が介在しているピリジニル誘導体を調製した。ケリダム酸２９をメチルジエステルとしてエステル化し、次いで光延反応によって官能基を有するリンカーを導入した（例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁に記載された手順）。水素化ホウ素ナトリウムを使用したモノ還元によって、化合物３２ａ〜ｃを一価のアルコールの形態で得ることができ、次いでこれらは対応するメシル化誘導体３３ａ〜ｃに変換される。

【0066】

【化16】

【0067】

４位のメチルエステル官能基を芳香環（ピリジン）に直接固定することもできる。この場合、市販の化合物３４を出発物質とし、まずエステル化する必要がある。次いで、ピリジンをｍ−ＣＰＢＡの存在下で酸化して、対応するＮ−オキシド誘導体３６を得る。Ｎ−オキシド官能基は無水トリフルオロ酢酸と容易に反応し、転位することにより、加水分解後に６位のメチルアルコール官能基が得られる。後者を通常の条件でメシル化して、化合物３８を得る。

【0068】

【化17】

【0069】

化合物３９を使用して、ホスフィナート誘導体の類似体４４ａ〜ｂを調製した。化合物３９をまずエステル化し、次いでホスフィン酸エステル４１ａ〜ｂに変換する。反応シーケンスの残りは、化合物３８の合成のために使用されたものと同一である。

【0070】

【化18】

【0071】

スキーム１１に記載されている反応シーケンスに従って、誘導体５１ａ〜ｂを調製した。この例では、チオグリコール酸エチルまたはチオグリコール酸ｔｅｒｔ−ブチルを使用してエステル官能基を導入する。

【0072】

【化19】

【0073】

スキーム１２に記載された合成経路に従って、ホスフィナート類似体５６ａ〜ｄを調製する。

【0074】

２）発色団の調製

【0075】

【化20】

【0076】

スキーム１３ａ〜ｂおよび１４に従って、発色団を合成した。フェノール５７は、ＴＢＤＭＳの形態で保護される。次のステップでは、ＯＴＢＤＭＳの４位において選択的リチオ化と、その後の求電子試薬（２−イソプロポキシ−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン）の添加とを行う。化合物５９が収率３９％で得られた。

【0077】

【化21】

【0078】

次いで、化合物５９は、鈴木反応を介してピリジン誘導体１４ａ〜ｃにカップリングされる。反応の条件により、６０ａ〜ｃ（酸形態）と６１ａ〜ｃ（エステル形態）の混合物が得られる。フェノールの保護基もこのステップ中に除去されることに留意されたい。この混合物をエステル化条件で処理することにより、６０シリーズを６１シリーズに変換することができる。フェノール官能基はアルキル化され（６２）、アルコール官能基はメシル化され、それにより化合物６３ａ〜ｃが得られる。

【0079】

【化22】

【0080】

合成上の理由のために、アミン官能基が必要である場合、フェノールをブロモプロピルアミンＮＨＢｏｃでアルキル化して６４シリーズを得ることによって、アミン官能基を発色団に導入し、次いでアルコール官能基をメシル化する（６５シリーズ）。

【0081】

３）モノアンテナ錯体の合成

【0082】

【化23】

【0083】

スキーム１５に従って、モノアンテナ錯体を合成する。Ｂｏｃモノ保護ＴＡＣＮ大環状分子を出発物質として、ピリジニル誘導体（Ｐｙ）を縮合して、化合物６６ａ〜ｓを得る。大環状分子を脱保護し、対応する発色団（Ｐｙが有するものと同一のＺ）をリガンドに導入する。エステル官能基を加水分解し（６８シリーズ）、ランタニド（特にユウロピウムまたはテルビウム）を様々なリガンドにおいて錯化して、錯体６９ａ〜ｓを得る。

【0084】

【化24】

【0085】

６９ａ〜ｓシリーズについては、２個の水可溶化基Ｅ_１〜Ｅ_５を導入することによって、化合物が水性媒体に対して可溶化される。これらの基は、アニオン性（スルホナートＥ_１およびＥ_２）または中性（双性イオン：スルホベタインＥ_３）またはカチオン性（第四級アンモニウムＥ_４およびＥ_５）である。

【0086】

【化25】

【0087】

最後に、Ｂｏｃ基をトリフルオロ酢酸の存在下で除去し、それにより、ＮＨ_２で官能化された錯体７１ａ−Ｅ_１〜５〜７１ｓ−Ｅ_１〜５である本発明の錯体を得る。

【0088】

４）ジアンテナ錯体の合成

【0089】

ジアンテナ錯体の合成をスキーム１８〜２１に記載する。

【0090】

【化26】

【0091】

合成は、３種類の発色団：カルボキシラート、ホスフィン酸メチルおよびホスフィン酸フェニルを用いたモノ保護ＴＡＣＮのアルキル化反応で始まる。Ｂｏｃ保護基を除去し、発色団と同一であるＺを有する対応ピリジンをＴＡＣＮの最後のアルキル化部位に導入する。

【0092】

【化27】

【0093】

リガンドを加水分解し、ランタニド原子を大環状分子に導入して、７４シリーズを得る。

【0094】

【化28】

【0095】

次いで、水可溶化基（Ｅ_１〜Ｅ_５）を２個の発色団に導入する（スキーム２０）。それらは、アニオン性、中性またはカチオン性である。

【0096】

【化29】

【0097】

次いで、最後に、Ｂｏｃまたはｔｅｒｔ−ブチルエステル基をトリフルオロ酢酸の存在下で除去して、化合物７６ａ〜ａｆを得る（スキーム２１）。

【0098】

５）トリアンテナ錯体の合成

【0099】

【化30】

【0100】

スキーム２２に記載されている反応スキームに従って、トリアンテナ錯体を合成した。様々なメシル化ピリジン（６３ａ〜ｃ）を一置換ＴＡＣＮ１ｂに縮合させる。得られたリガンド７７ａ〜ｃを水酸化リチウムの存在下で加水分解し、次いで対応するランタニド塩と接触させ、それによりユウロピウム錯体Ｅｕ−７９ａ〜ｃまたはテルビウム錯体Ｔｂ−７９ａ〜ｃを得る。水可溶化基Ｅ_１〜Ｅ_５の導入後、Ｂｏｃ基をトリフルオロ酢酸の存在下で除去して、錯体Ｅｕ−８１ａ〜ｃおよびＴｂ−８１ａ〜ｃを得る。

【0101】

本発明の錯体Ｅｕ−８１ａ−Ｅ_２、Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_２、Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_４の有効性を明らかにするために、トリメトキシフェニルピリジンアンテナを含む先行技術の錯体８２ａおよび８２ｂと比較した。試験の結果を実験の部に示す。

【0102】

【化31】

【0103】

【化32】

【0104】

３つの本発明の錯体を対応するＮＨＳ官能化錯体に変換した（スキーム２４）。これら３つの錯体は、例えばタンパク質、さらに詳細には抗体を標識するために使用できる。

【0105】

実験の部
使用した略語：
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＡｃＯＨ：酢酸
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ｎ−ＢｕＬｉ：ｎ−ブチルリチウム
ＣＤＣｌ_３：重水素化クロロホルム
ＣＨＣｌ_３：クロロホルム
ＣＨ（ＯＥｔ）_３：オルトギ酸エチル
Ｃｓ_２ＣＯ_３：炭酸セシウム
ＣｕＩ：ヨウ化銅（Ｉ）
ＤＣＭ／ＣＨ_２Ｃｌ_２：ジクロロメタン
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｅｔ：エチル
ＥＳＩ＋：ポジティブモードのエレクトロスプレーイオン化
ＥｔＯＨ：エタノール
ｈ：時間
ＨＡＴＵ：（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）
ＨＮＯ_３：硝酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
Ｈ_２Ｏ：水
Ｈ_２Ｏ_２：過酸化水素
Ｈ_２ＳＯ_４：硫酸
ｄ：日
Ｋ_２ＣＯ_３：炭酸カリウム
ＫＩ：ヨウ化カリウム
Ｋ_３ＰＯ_４：リン酸カリウム
ＬＣ−ＭＳ：質量分析に連結した高速液体クロマトグラフィー
ＬｉＯＨ：水酸化リチウム
ＬｎＣｌ_３：塩化ランタニド
ｍ−ＣＰＢＡ：メタクロロ過安息香酸
Ｍｅ：メチル
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
Ｍｅ_２ＣＯ：アセトン
ＭｅＯＨ：メタノール
ｍｉｎ：分
Ｍｓ：メシル
ＭｓＣｌ：塩化メシル／塩化メタンスルホニル
ＮａＢＨ_４：水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＨ：水素化ナトリウム
Ｐｄ／Ｃ：チャコール担持パラジウム
Ｐｄ（ｄｂａ）_２：ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２：ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＯＡｃ）_２：酢酸パラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４：テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
Ｐｈ：フェニル
ＰｈＭｅ：トルエン
ＰＰｈ_３：トリフェニルホスフィン
ｍｐ：融点
Ｐｙ：ピリジン
Ｒｆ：溶媒先端
Ｒｔ：保持時間
ＲＴ：室温
ＴＥＡ／Ｅｔ_３Ｎ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＢＤＭＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
Ｔｓ：トシル
ＴＳＴＵ：Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート
ＵＰＬＣ−ＭＳ：質量分析に連結した超高速液体クロマトグラフィー
Ｘｐｈｏｓ：２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル

【0106】

クロマトグラフィー
分析および分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を以下の２台の装置で実施した。
・分析ＨＰＬＣ：ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、クォータナリーポンプＰ４０００、重水素ランプ（１９０〜３５０ｎｍ）を備えたＵＶ１０００検出器、Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８分析カラム（３．５μｍ、４．６×１００ｍｍ）
・分取ＨＰＬＣ：Ｓｈｉｍａｄｚｕ社、２台のＬＣ−８Ａポンプ、Ｖａｒｉａｎ製ＰｒｏＳｔａｒ ダイオードアレイＵＶ検出器、Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ．Ｃ１８分取カラム（５μｍ：１９×１００ｍｍまたは５０×１５０ｍｍ）

【0107】

検出器としてＰＤＡ型のダイオードアレイＵＶ検出器またはＳＱＤ２型のシンプル四重極質量検出器を備えたＷａｔｅｒｓ製Ａｃｑｕｉｔｙ ＨＣｌａｓｓ装置で、分析超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）を実施した。使用されたプローブは、ポジティブモードのエレクトロスプレー（キャピラリー電圧３．２ｋＶ、コーン電圧３０Ｖ）である。

【0108】

Ｍｅｒｃｋ製６０シリカゲル（０．０４０〜０．０６３ｍｍ）でシリカカラムクロマトグラフィーを実施した。Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製中性活性型酸化アルミニウムＢｒｏｃｈｍａｎｎ Ｉでアルミナカラムクロマトグラフィーを実施した。

【0109】

分光測定
・核磁気共鳴（ＮＭＲ）
直径５ｍｍの多核種ＢＢＦＯ測定プローブ（Ｚグラジエントおよび^２Ｈロック）を備えたＢｒｕｋｅｒ製Ａｄｖａｎｃｅ４００ＭＨｚ ＮａｎｏＢａｙ分光計（９．４テスラ磁石）を使用して、ＮＭＲスペクトル（^１Ｈ、^１３Ｃおよび^３１Ｐ）を記録した。化学シフト（δ）は百万分率（ｐｐｍ）で表す。以下の略語を使用する。
ｓ：一重線、ｂｓ：ブロードな一重線、ａｐｐ ｓ：見掛け上の一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線、ｄｄ：二重線の二重線、ｄｔ：三重線の二重線、ｄｑ：四重線の二重線、ｄｄｄ：二重線の二重線の二重線、ＡＢ：ＡＢ系。
・質量分析（ＬＲＭＳ）
Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム（３．５μｍ、４．６×１００ｍｍ）を備えたＷａｔｅｒｓ製ＺＱ２０００シングル四重極マルチモードソースＥＳＩ／ＡＰＣＩ分光計、またはＳＱＤ２型シングル四重極質量スペクトルを使用して、質量スペクトル（ＬＣ−ＭＳ）を記録した。
・高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）
気流支援大気圧イオン化（ＡＰＩ）源を備えたＱＳｔａｒ Ｅｌｉｔｅ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＳＣＩＥＸ）を用いて分析を行った。試料をポジティブエレクトロスプレーモードにて以下の条件でイオン化した：エレクトロスプレー電圧（ＩＳＶ）：５５００Ｖ；オリフィス電圧（ＯＲ）：２０Ｖ；ネブライザーガス圧（空気）：２０ｐｓｉ。飛行時間（ＴＯＦ）分析装置を用いて、高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）を得た。正確な質量測定は、二重内部較正を用いて３連で実施した。

【0110】

グラジエントＡ
Ｗａｔｅｒｓ製Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃ１８カラム、３００Å、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ−Ａ／水０．１％ギ酸Ｂ／アセトニトリル０．１％ギ酸ｔ＝０分５％Ｂ−ｔ＝０．２分５％Ｂ−ｔ＝５分１００％Ｂ−０．６ｍＬ／分
グラジエントＢ
Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、５μｍ、５０×１５０ｍｍ−Ａ／水２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ７Ｂ／アセトニトリルｔ＝０分１０％Ｂ−ｔ＝１９分６０％Ｂ−１００ｍＬ／分
グラジエントＣ
Ｗａｔｅｒｓ製Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃ１８カラム、３００Å、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ−Ａ／水５ｍＭ酢酸アンモニウムＢ／アセトニトリルｔ＝０分５％Ｂ−ｔ＝０．２分５％Ｂ−ｔ＝５分１００％Ｂ−０．６ｍＬ／分
グラジエントＤ
Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、５μｍ、２０×１００ｍｍ−Ａ／水２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ７Ｂ／アセトニトリルｔ＝０分５％Ｂ−ｔ＝１９分６０％Ｂ−２０ｍＬ／分
グラジエントＥ
Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、５μｍ、２０×１００ｍｍ−Ａ／水２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ７Ｂ／アセトニトリルｔ＝０分２％Ｂ−ｔ＝１９分４０％Ｂ−２０ｍＬ／分
グラジエントＦ
Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、５μｍ、２０×１００ｍｍ−Ａ／水２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ６Ｂ／アセトニトリルｔ＝０分２％Ｂ−ｔ＝１９分４０％Ｂ−２０ｍＬ／分
グラジエントＧ
Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、５μｍ、５０×１５０ｍｍ−Ａ／水０．２％ＴＦＡ Ｂ／アセトニトリルｔ＝０分１０％Ｂ−ｔ＝１２分５０％Ｂ−８０ｍＬ／分
グラジエントＨ
Ｗａｔｅｒｓ製ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、５μｍ、５０×１５０ｍｍ−Ａ／水０．２％ＴＦＡ Ｂ／アセトニトリルｔ＝０分３０％Ｂ−ｔ＝２０分１００％Ｂ−８０ｍＬ／分

【実施例】

【0111】

化合物１：国際公開第２０１３／０１１２３６号および国際公開第２０１４／１１１６６１号に記載された手順に従って、化合物１を調製した。

【0112】

化合物１４ａ〜１４ｃ：国際公開第２０１３／０１１２３６号および国際公開第２０１４／１１１６６１号に記載された手順に従って、化合物１４ａ〜１４ｃを調製した。

【0113】

化合物１５ａ：１００ｍＬのシュレンクフラスコ中で、化合物１４ａ（４４０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物に、トリ（ｏ−トリル）ホスフィン（９１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（３３．７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．３１４ｍＬ、２．２５２ｍｍｏｌ）、次いでアクリル酸メチル（０．２０３ｍＬ、２．２５２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を７０℃で５時間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に希釈し、水（２×５０ｍＬ）、次いで飽和ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。１００／０から９９／１へのＤＣＭ／ＭｅＯＨ溶媒グラジエントを使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、白色粉末の形態で化合物１５ａ（２３３ｍｇ、６２％）を得た。
ｍｐ＝１５６．４〜１５６．９℃−ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝２．０３分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ２５１．９−Ｒｆ＝０．４１（シリカ，ジクロロメタン−メタノール９６：４−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_１２Ｈ_１４ＮＯ_５^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値、ｍ／ｚ２５２．０８６６、実測値：２５２．０８６８−^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：８．１３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^５）、７．６７（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．６５（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^３）、７．１９（ｄｄ，Ｊ＝；１６．２Ｈｚ，２Ｈ，ＨＣ＝ＣＨ）、６．７１（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．９１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２−ＯＨ）、４．０４（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、３．８５（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＭｅ）、３．４９（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１６６．２０（ＣＯＯＭｅ）、１６５．２４（Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、１６１．５９（Ｐｙ Ｃ^２）、１４７．９７（Ｐｙ−Ｃ＝Ｃ）、１４３．７４（Ｐｙ Ｃ^６）、１４０．９２（Ｐｙ Ｃ^４）、１２３．７７（Ｐｙ Ｃ^３）、１２２．０８（Ｐｙ Ｃ^５）、１２１．８６（Ｐｙ−Ｃ＝Ｃ）、６４．６８（ＣＨ_２−ＯＨ）、５３．１０（Ｐｙ−ＣＯ_２ＣＨ_３）、５２．１９（ＣＯ_２ＣＨ_３）。

【0114】

化合物１５ｂ〜１５ｆ：１５ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って対応するアルケンを使用して、これらの化合物を調製した。

【0115】

化合物１６ａ：５０ｍＬのフラスコ中で、化合物１５ａ（２３３ｍｇ、０．９２７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物に１０％Ｐｄ／Ｃ（２３．６９ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。二水素をバブリングしながら反応液を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を２２μｍのナイロンフィルターに通して濾過し、蒸発乾固して、白色粉末の形態で化合物１６ａ（２３１ｍｇ、９８％）を得た。ｍｐ＝１３３．２〜１３６．４℃−ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝１．８６分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ２５３．２−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_１２Ｈ_１６ＮＯ_５^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値、ｍ／ｚ２５４．１０２３、実測値：２５４．１０２４−^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．９（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^５）、７．４１（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^３）、４．８５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２−ＯＨ）、４．０１（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、３．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＭｅ）、３．０５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）、２．７１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１７２．４１（ＣＯＯＭｅ）、１６５．６５（Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、１６０．４９（Ｐｙ Ｃ^２）、１５１．６７（Ｐｙ Ｃ^４）、１４７．２２（Ｐｙ Ｃ^６）、１４０．９２（Ｐｙ Ｃ^３）、１２３．９６（Ｐｙ Ｃ^３）、１２３．９（Ｐｙ Ｃ^５）、６４．６２（ＣＨ_２−ＯＨ）、５２．９１（Ｐｙ−ＣＯ_２ＣＨ_３）、５１．９１（ＣＯ_２ＣＨ_３）、３３．９７（Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）、３０．０７（Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）。

【0116】

化合物１６ｂ〜１６ｆ：１６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0117】

化合物１７ａ：１００ｍＬのフラスコ中で、化合物１６ａ（２３１ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物を氷浴に入れ、ＴＥＡ（０．１２７ｍＬ、０．９１２ｍｍｏｌ）、次いでＭｓＣｌ（７２μＬ、０．９１２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。混合物を室温に温め、１５分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中に希釈し、水（２×２５ｍＬ）、次いで飽和ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、白色粉末の形態で化合物１７ａ（２４９ｍｇ、８２％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝３．２分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ３３２．３−Ｒｆ＝０．２３（シリカ，ジクロロメタン−メタノール９８：２−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_１３Ｈ_１８ＮＯ_７Ｓ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値、ｍ／ｚ３３２．０７９９、実測値：３３２．０７９９−^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．９８（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^５）、７．５４（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^３）、５．４１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２−ＯＭｓ）、４．００（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、３．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＭｅ）、３．１６（ｓ，３Ｈ，ＯＭｓ）、３．０７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）、２．７２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１７２．２３（ＣＯＯＭｅ）、１６５．２７（Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、１５４．５６（Ｐｙ Ｃ^２）、１５２．４６（Ｐｙ Ｃ^４）、１４７．９３（Ｐｙ Ｃ^６）、１２５．１９（Ｐｙ Ｃ^３）、１２５．０３（Ｐｙ Ｃ^５）、７０．９７（ＣＨ_２−ＯＭｓ）、５３．０８（Ｐｙ−ＣＯ_２ＣＨ_３）、５１．９４（ＣＯ_２ＣＨ_３）、３８．０５（ＣＨ_２−ＯＳＯ_２ＣＨ_３）、３３．８７（Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）、３０．０７（Ｐｙ−ＣＨ_２−ＣＨ_２）。

【0118】

化合物１７ｂ〜１７ｆ：１６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0119】

化合物１８ａ〜１８ｆ：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0120】

化合物１９ａ〜１９ｆ：１５ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0121】

化合物２０ａ〜２０ｆ：１６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0122】

化合物２１ａ〜２１ｆ：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0123】

化合物２２ａ〜２２ｆ：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0124】

化合物２３ａ〜２３ｆ：１５ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って対応するアルケンを使用して、これらの化合物を調製した。

【0125】

化合物２４ａ〜２４ｆ：１６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0126】

化合物２５ａ〜２５ｆ：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0127】

化合物２６ａ〜２６ｆ：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0128】

化合物２７ａ〜ｃ：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２０１０年、５１巻、４４４５頁の論文に記載された手順に従って、化合物２７ａ〜ｃを調製した。

【0129】

化合物２８ａ〜２８ｃ：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0130】

化合物２９：この化合物は市販品である。

【0131】

化合物３０：Ｄａｌｔｏｎ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、２０１０年、３９巻、７０７頁の論文に記載された手順に従って、化合物３０を調製した。

【0132】

化合物３１ａ〜３１ｃ：Ｏｒｇａｎｉｃ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁の論文に記載された手順に従って、化合物３１ａ〜３１ｃを調製した。

【0133】

化合物３２ａ〜３２ｃ：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０年、７５巻、７１７５頁の論文に記載された手順に従って、化合物３２ａ〜３２ｃを調製した。

【0134】

化合物３３ａ〜３３ｃ：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０年、７５巻、７１７５頁の論文に記載された手順に従って、化合物３３ａ〜３３ｃを調製した。

【0135】

化合物３４：この化合物は市販品である。

【0136】

化合物３５：Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１４年、５７巻、１４８頁の論文に記載された手順に従って、化合物３５を調製した。

【0137】

化合物３６：Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１３年、３７２巻、３５頁の論文に記載された手順に従って、化合物３６を調製した。

【0138】

化合物３７：国際公開第２００４／１１１６６１号に記載された手順に従って、化合物３７を調製した。

【0139】

化合物３８：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0140】

化合物３９：市販品。

【0141】

化合物４０：Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１４年、５７巻、１４８頁の論文に記載された手順に従って、化合物４０を調製した。

【0142】

化合物４１ａ〜ｂ：国際公開第２０１４／１１１６６１号に記載された手順に従って対応する触媒を使用して、化合物４１ａ〜ｂを調製した。

【0143】

化合物４２ａ〜ｂ：３６の合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物４２ａ〜ｂを調製した。

【0144】

化合物４３ａ〜ｂ：３７の合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物４３ａ〜ｂを調製した。

【0145】

化合物４４ａ〜ｂ：１７ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物４４ａ〜ｂを調製した。

【0146】

化合物４５：この化合物は市販品である。

【0147】

化合物４６：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ、２０１４年、２０巻、３６１０頁の論文に記載された手順に従って、化合物４６を調製した。

【0148】

化合物４７：化合物４６（０．３１３ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）をＨ_２ＳＯ_４（１１ｍＬ）に室温で溶解し、次いで溶液を氷浴中で冷却した。この混合物にＨＮＯ_３（９．７ｍＬ）を滴下し、溶液を１００℃で２日間加熱した。混合物を室温に冷却し、次いで砕氷（１００ｇ）に注ぎ込んだ。１時間後、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を１つにまとめ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、溶媒混合物（ＣＨ_２Ｃｌ_２−ＡｃＯＨ、９８／２）を使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、白色固体（２２４ｍｇ、５６％）を得た。Ｒ_ｆ（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＡｃＯＨ，９８／２）＝０．３８；ｍｐ：１４７℃；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：１６．４９（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ）、９．０８（ｓ，１Ｈ，Ｈ^３）、８．３６（ｓ，１Ｈ，Ｈ^５）、２．７５（ｓ，３Ｈ，ｐｙ−ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：１５９．４（ＣＯＯＨ）、１５２．４（Ｃ^６）、１４４．４（Ｃ^４）、１３８．７（Ｃ^２）、１２３．１（Ｃ^５）、１２１．７（Ｃ^３）、１８．４（ｐｙ−ＣＨ_３）；ＭＳ Ｃ_７Ｈ_７Ｎ_２Ｏ_５の計算値１９９．０３６。実測値１９９．０３５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0149】

化合物４８：化合物４７（２．９、１４．７ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＯＨ（３ｍＬ）に室温で溶解した。この溶液にＨ_２ＳＯ_４（２００μＬ）を滴下し、溶液を６５℃で３日間加熱した。溶液を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。Ｈ_２Ｏ（３０ｍＬ）を残渣に添加し、溶液をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、５％炭酸水素ナトリウム溶液（２×２０ｍＬ）、次いで飽和塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥させた後、溶媒を濾過し、減圧下で除去して、化合物４８を得た。この化合物をさらに精製することなく合成の残りで使用した（５７ｍｇ、７６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：８．３３（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ ３．１，Ｈ^５）、８．１９（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ ３．１，Ｈ^３）、４．０２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３ＣＯ）、２．５７（ｓ，３Ｈ，ｐｙ−ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：１６０．８（ＣＯＯＭｅ）、１５２．７（Ｃ^６）、１４２．１（Ｃ^４）、１４０．５（Ｃ^２）、１２１．４（Ｃ^５）、１１９．３（Ｃ^３）、５３．８（ＯＣＨ_３）、１８．３（ｐｙ−ＣＨ_３）；ＭＳ Ｃ_８Ｈ_９Ｎ_２Ｏ_５の計算値２１３．０５１。実測値２１３．０５０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0150】

化合物４９：化合物４８（１１４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ_３（１０ｍＬ）溶液に無水トリフルオロ酢酸（１．４８ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を不活性雰囲気下、６０℃で５時間加熱した。この後、反応液を室温に冷却し、次いで溶媒を減圧下で除去した。この黄色油状物に、ＥｔＯＨ（３ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（３ｍＬ）を添加し、溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。７０／３０から５０／５０へのヘキサン／ＡｃＯＥｔ溶媒グラジエントを使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、化合物４９（７４ｍｇ、６５％）を得た。Ｒ_ｆ（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ，９５／５）＝０．６７；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：８．６８（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ ２．１，Ｈ^３）、８．３７（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ ２．１，Ｈ^５）、５．０６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２ＯＨ）、４．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３ＣＯ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：１６４．３（ＣＯＯＭｅ）、１６３．６（Ｃ^６）、１５５．３（Ｃ^４）、１４９．７（Ｃ^２）、１１６．４（Ｃ^５）、１１６．３（Ｃ^３）、６４．５（ＣＨ_２ＯＨ）、２９．５（ＣＯ_２ＣＨ_３）。

【0151】

化合物５０ａ：ＮａＨ（１７ｍｇ、０．７０８ｍｍｏｌ）およびチオグリコール酸エチル（３５μＬ、０．３２０ｍｍｏｌ）を不活性雰囲気下、室温で化合物４９（２１．６ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に添加した。混合物を不活性雰囲気下、室温で２時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、この黄色油状物にＭｅＯＨ（５ｍＬ）およびＨ_２ＳＯ_４（２００μＬ）を添加した。溶液をアルゴン下、６５℃で７２時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣にＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）を添加し、水溶液をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。溶離液としてＣＨ_２Ｃｌ_２−ＭｅＯＨ（９８／２）を使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、化合物５０ａ（８．２ｍｇ、２５％）を得た。Ｒ_ｆ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９５／５）＝０．３５；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：７．８８（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ １．９，Ｈ^５）、７．６３（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ １．９，Ｈ^３）、４．６９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２ＯＨ）、４．０２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｓ）、３．９６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３ＣＯ）、３．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３ＣＯ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：１７０．７（ＣＯＯＭｅ）、１６６．４（ＣＯＯＭｅ）、１６３．３（Ｃ^２）、１５２．３（Ｃ^４）、１４７．８（Ｃ^６）、１２１．２（Ｃ^５）、１２１．１（Ｃ^３）、６５．１（ＣＨ_２ＯＨ）、５３．３（ＣＯ_２ＣＨ_３）、４８．５（ＣＯ_２ＣＨ_３）、３３．６（ＳＣＨ_２）。

【0152】

化合物５０ｂ：５０ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物５０ｂを調製した。

【0153】

化合物５１ａ：ＴＥＡ（１２．５μＬ、０．０９ｍｍｏｌ）およびＭｓＣｌ（３．５μＬ、０．０４５ｍｍｏｌ）を化合物５０ａ（８．２ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に添加した。この溶液を室温で３．５時間撹拌した。この後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）に溶解した。有機相をＨ_２Ｏ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、化合物５１ａを定量的に得た。Ｒ_ｆ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９５／５）＝０．８；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，δ）：７．９５（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ １．５，Ｈ^５）、７．５２（ｄ，１Ｈ，^４Ｊ １．５，Ｈ^３）、５．３５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２ＯＭｓ）、３．９８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｓ）、３．８２（ｓ，２Ｈ，ＣＯＣＨ_３）、３．７７（ｓ，２Ｈ，ＣＯＣＨ_３）、３．１４（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ_３）。

【0154】

化合物５１ｂ：５１ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物５１ｂを調製した。

【0155】

化合物５２ａ〜ｂ：それぞれ１４ｂおよび１４ｃの合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物５２ａ〜ｂを調製した。

【0156】

化合物５３ａ〜ｂ：４６の合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物５３ａ〜ｂを調製した。

【0157】

化合物５４ａ〜ｂ：４９の合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物５４ａ〜ｂを調製した。

【0158】

化合物５５ａ〜ｄ：５０ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物５５ａ〜ｄを調製した。

【0159】

化合物５６ａ〜ｄ：５１ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、化合物５６ａ〜ｄを調製した。

【0160】

化合物５７：この化合物は市販品である。

【0161】

化合物５８：イミダゾール（６．４９ｇ、９４．４ｍｍｏｌ）、次いでＴＢＤＭＳＣｌ（９．７８ｇ、６２．９ｍｍｏｌ）を３，５−ジメトキシフェノール（１０ｇ、６２．９ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１４５ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。この溶液にＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）を添加し、次いで溶液をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。０／９０から８５／１５へ５％ずつ増加させるシクロヘキサン−ＥｔＯＡｃ溶媒グラジエントを使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、無色油状物の形態で化合物５８（１５．８ｇ、９４％）を得た。ＨＰＬＣ−Ｒｔ＝４．１９分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ２７０．３−^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：６．１１（ｓ，１Ｈ，パラ）、６．０３（ｓ，２Ｈ，オルト）、３．７５（ｓ，６Ｈ，ＯＭｅ）、０．９８（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ−ｔｅｒｔ−Ｂｕ）、０．２１（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ−Ｍｅ）

【0162】

化合物５９：化合物５８（１５．８ｇ、５８．９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１３０ｍＬ）溶液に−７８℃でアルゴン下、ヘキサン中の２．５Ｍ ｎ−ＢｕＬｉ（２６．３ｍＬ、６５．８ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で５時間撹拌し、次いで−７８℃に冷却した。この溶液に、２−イソプロポキシ−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（１４．４ｍＬ、７０．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３２ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで砕氷−Ｈ_２Ｏ混合物（４００ｍＬ）に注ぎ込んだ。水相をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣にＭｅＯＨ（９ｍＬ）を添加し、溶液を４℃に終夜冷却した。この後、白色固体が結晶化した。結晶を濾過により回収し、乾燥して、白色固体の形態で化合物５９（８．９１ｇ、３８％）を得た。ＨＰＬＣ−Ｒｔ＝３．８０分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ３９５．３−^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：５．９７（ｓ，２Ｈ，オルト）、３．７（ｓ，６Ｈ，ＯＭｅ）、１．３６（ｓ，１２Ｈ，Ｂ（Ｏ−Ｃ−ｄｉＭｅ））、０．９６（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ−ｔｅｒｔ−Ｂｕ）、０．１７（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ−Ｍｅ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１６４．６；１５９．４；９６．８；８３．８；５５．９；２６．１；２５．０；１８．６、−４．０；

【0163】

化合物６０ａおよび６１ａ：５０ｍＬのシュレンクフラスコ中で、化合物１４ａ（４４０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をアセトン（２ｍＬ）とＨ_２Ｏ（２．５ｍＬ）の混合物に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物に、アセトン（０．５ｍＬ）に溶解した化合物５９（７１０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（５１８ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ｄｂａ）_２（１．７２５ｍｇ、３．００μｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を６５℃で４時間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は完了し、化合物６０ａおよび６１ａの混合物が含まれていた。反応混合物を減圧下で濃縮し、さらに精製することなく合成の残りで使用した。ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝１．４４分−［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚ３０４．６

【0164】

化合物６１ａ：２５０ｍＬのフラスコ中で、化合物６０ａおよび６１ａの混合物（４５８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解して、黄色溶液を得た。反応混合物にＨ_２ＳＯ_４（０．４１６ｍＬ、４．５０ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を還流下、７日間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は不完全であった（９０％）。反応混合物を減圧下で濃縮し、次いで分取ＨＰＬＣ（グラジエントＧ）により直接精製して、黄色粉末の形態で化合物６１ａ（３８５ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、８０％）を得た。ｍｐ＝１６９．７〜１７４．１℃−ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝２．０７分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ３２０．３−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_１６Ｈ_１８ＮＯ_６^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値、ｍ／ｚ３２０．１１２９、実測値：３２０．１１２７−^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ_４）δ：８．２２（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^３）、８．０２（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^５）、６．２５（ｓ，２Ｈ，オルト）、４．８９（ｓ，２Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ_２−ＯＨ）、４．０５（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、３．７７（ｓ，６Ｈ，ＯＭｅ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ_４）δ：１６２．９５；１６１．６４；１５８．７５；１５８．６８；１５０．９１；１４１．３８；１２７．８１；１２７．２２；１０５．６７；９１．９５；６１．７０；５４．８９；５２．５４。

【0165】

化合物６２ａ：２５０ｍＬのフラスコ中で、化合物６１ａ（３５４ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＣＮ（１００ｍＬ）に溶解して、黄色溶液を得た。反応混合物に、Ｋ_２ＣＯ_３（４６０ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）、ＫＩ（２７．６ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）、次いでブロモ酢酸メチル（０．１６２ｍＬ、１．６６ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を６５℃で終夜撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中に希釈し、次いで濾過し、最後に溶離液としてＥｔＯＡｃを使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色粉末の形態で化合物６２ａ（２６１ｍｇ、６０％）を得た。ｍｐ＝１５１．１〜１５４．４℃−ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝２．５８分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ３９３．１−Ｒｆ＝０．３６（シリカ，酢酸エチル）−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_１９Ｈ_２２ＮＯ_８^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値、ｍ／ｚ３９２．１３４０、実測値：３９２．１３４０−^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：８．０３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^３）、７．４８（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^５）、６．２４（ｓ，２Ｈ，オルト）、４．８７（ｓ，２Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ_２−ＯＨ）、４．７１（ｓ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ_２−ＣＯＯＭｅ）、３．９９（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｏ−ＣＨ_２−ＣＯＯＭｅ）、３．７３（ｓ，６Ｈ，ＯＭｅ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１６９．０３；１６６．０３；１５９．８５；１５９．１８；１５８．２０；１４６．３２；１４４．６１；１２７．０５；１２６．７２；１０９．６５；９１．４８；６５．３８；６４．７１；５５．８９；５２．７３；５２．４６。

【0166】

化合物６３ａ：１００ｍＬのフラスコ中で、化合物６２ａ（２２４ｍｇ、０．５７２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物を氷浴に入れ、次いでＭｓＣｌ（４５μＬ、０．５７２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。添加の終わりに、氷浴を取り外し、反応液を１５分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中に希釈し、水（２×４０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。１００／０から９５／５へのＤＣＭ／ＭｅＯＨ溶媒グラジエントを使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、白色粉末の形態で化合物６３ａ（２６４ｍｇ、９８％）を得た。ｍｐ＝１４１．７〜１４４．１℃−ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝２．９６分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ４７０．６−Ｒｆ＝０．４８（シリカ，ジクロロメタン−メタノール ９６：４）−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_２０Ｈ_２４ＮＯ_１０Ｓ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値、ｍ／ｚ４７０．１１１５、実測値：４７０．１１１３−^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：８．１３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^３）、７．６７（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ Ｈ^５）、６．２４（ｓ，２Ｈ，オルト）、５．４６（ｓ，２Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ_２−ＯＨ）、４．７２（ｓ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ_２−ＣＯＯＭｅ）、４．００（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＯＯＭｅ）、３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｏ−ＣＨ_２−ＣＯＯＭｅ）、３．７３（ｓ，６Ｈ，ＯＭｅ）、３．１４（ｓ，３Ｈ，ＯＭｓ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１６８．９８；１６５．７３；１６０．０９；１５８．２０；１５３．２４；１４７．１５；１４５．３０；１２８．２５；１２８．１０；１０９．０８；９１．４９；７１．６６；６５．３７；５５．９０；５２．９４；５２．４８；３８．１７。

【0167】

化合物７７ａ：５０ｍＬのシュレンクフラスコ中で、化合物１ｂ（４１ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物に、無水ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）に溶解した化合物６３ａ（２２３ｍｇ、０．４７６ｍｍｏｌ）、次いでＫ_２ＣＯ_３（８８ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を８５℃で終夜撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＨ）により直接精製して、白色粉末の形態で化合物７７ａ（１０６ｍｇ、４８％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝３．６４分−［Ｍ＋Ｈ］^＋、ｍ／ｚ１３７９．９−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_２０Ｈ_２４ＮＯ_１０Ｓ^＋［Ｍ＋２Ｈ］^２＋の計算値、ｍ／ｚ６８９．７８４３、実測値：６８９．７８４２。

【0168】

化合物Ｅｕ−７９ａ：５０ｍＬのフラスコ中で、化合物７７ａ（５３ｍｇ、３８．５μｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１ｍＬ）および水（５ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物にＬｉＯＨ（０．９４１ｍｇ、３８．５μｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、脱保護は完了した（化合物７８ａ）。反応混合物のｐＨを１Ｍ ＨＣｌで７に調整した。反応混合物に塩化ユウロピウム６水和物（２１ｍｇ、５７．８μｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を室温で終夜撹拌し、この後、反応は完了した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＤ）により直接精製して、白色粉末の形態で化合物７９ａ（４９ｍｇ、８８％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝２．６３分−［Ｍ−２Ｈ］^＋、ｍ／ｚ１４４５．４−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_６３Ｈ_７０Ｎ_７Ｏ_２３Ｅｕ^２＋［Ｍ−Ｈ］^２＋の計算値、ｍ／ｚ７２２．６８６８、実測値：７２２．６８６８。

【0169】

化合物Ｅｕ−８０ａ−Ｅ_２：２５ｍＬのフラスコ中で、化合物７９ａ（４９ｍｇ、３４μｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物に、３−アミノ−１−プロパンスルホン酸（２９ｍｇ、２０４μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３６μＬ、２０４μｍｏｌ）、次いでＨＡＴＵ（５３ｍｇ、１３６μｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を室温で１５分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＣ）でモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＤ）により直接精製して、白色粉末の形態で化合物Ｅｕ−８０ａ−Ｅ_２（１９ｍｇ、１０．２μｍｏｌ、３０％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＣ−Ｒｔ＝１．９２分−［Ｍ−２Ｈ］^＋、ｍ／ｚ１８０８．４−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_７２Ｈ_９１Ｎ_１０Ｏ_２９Ｓ_３Ｅｕ^２＋［Ｍ−Ｈ］^２＋の計算値、ｍ／ｚ９０４．２１６２、実測値：９０４．２１６６。

【0170】

化合物Ｅｕ−８１ａ−Ｅ_２：２５ｍＬのフラスコ中で、化合物Ｅｕ−８０ａ−Ｅ_２（１８．３２ｍｇ、１０．１４μｍｏｌ）をＴＦＡ（４００μＬ）に溶解して、黄色溶液を得た。反応液を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＣ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物をロータリーエバポレーターで蒸発させ、次いで分取ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）により精製して、白色粉末の形態で化合物Ｅｕ−８１ａ−Ｅ_２（７．８９μｍｏｌ、７８％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＣ−Ｒｔ＝１．４８分−［Ｍ−２Ｈ］^＋、ｍ／ｚ１７０９−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_６７Ｈ_８３Ｎ_１０Ｏ_２７Ｓ_３Ｅｕ^２＋［Ｍ−Ｈ］^２＋の計算値、ｍ／ｚ８５４．１８９９、実測値：８５４．１９０６。

【0171】

化合物Ｔｂ−７９ａ：５０ｍＬのフラスコ中で、化合物７７ａ（５３ｍｇ、３８．５μｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１ｍＬ）および水（５ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物にＬｉＯＨ（０．９４１ｍｇ、３８．５μｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）によりモニターした。この後、脱保護は完了した（化合物７８ａ）。反応混合物のｐＨを１Ｍ ＨＣｌで７に調整した。反応混合物に塩化テルビウム６水和物（２２ｍｇ、５７．８μｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を室温で終夜撹拌し、この後、反応は完了した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＤ）により直接精製して、白色粉末の形態で化合物Ｔｂ−７９ａ（１９ｍｇ、１２．８μｍｏｌ、３３％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＡ−Ｒｔ＝２．６３分−［Ｍ−２Ｈ］^＋、ｍ／ｚ１４５１．７−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_６３Ｈ_７０Ｎ_７Ｏ_２３Ｔｂ^２＋［Ｍ−Ｈ］^２＋の計算値、ｍ／ｚ７２５．６８８３、実測値：７２５．６８８７。

【0172】

化合物Ｔｂ−８０ａ−Ｅ_２：２５ｍＬのフラスコ中で、化合物Ｔｂ−７９ａ（９．３ｍｇ、６．４μｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物に、３−アミノ−１−プロパンスルホン酸（５．５ｍｇ、３８．４μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．５μＬ、２５．６μｍｏｌ）、次いでＨＡＴＵ（１０ｍｇ、２５．６μｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を室温で１５分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＣ）でモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＤ）により直接精製して、白色粉末の形態で化合物Ｔｂ−８０ａ−Ｅ_２（７．８ｍｇ、４．３μｍｏｌ、６７％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＣ−Ｒｔ＝１．８９分−［Ｍ−２Ｈ］^＋、ｍ／ｚ１８１５．９−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_７２Ｈ_９１Ｎ_１０Ｏ_２９Ｓ_３Ｔｂ^２＋［Ｍ−Ｈ］^２＋の計算値、ｍ／ｚ９０７．２１７９、実測値：９０７．２１６７。

【0173】

化合物Ｔｂ−８０ａ−Ｅ_４：２５ｍＬのフラスコ中で、化合物Ｔｂ−７９ａ（９．３ｍｇ、６．４μｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解して、無色溶液を得た。反応混合物に、２−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムエチルアミン（３．９６ｍｇ、３８．４μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．５μＬ、２５．６μｍｏｌ）、次いでＨＡＴＵ（１０ｍｇ、２５．６μｍｏｌ）を一度に添加した。反応液を室温で１５分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＣ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＤ）により直接精製して、白色粉末の形態で化合物Ｔｂ−８０ａ−Ｅ_４（６．１ｍｇ、３．６μｍｏｌ、５６％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＣ−Ｒｔ＝２．００分−［Ｍ］^３＋、ｍ／ｚ５６９．３−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_７８Ｈ_１０８Ｎ_１３Ｏ_２０Ｔｂ^４＋［Ｍ−２Ｈ］^４＋の計算値、ｍ／ｚ４２６．４２６６、実測値：４２６．４２６５。

【0174】

化合物Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_２：２５ｍＬのフラスコ中で、化合物Ｔｂ−８０ａ−Ｅ２（７．８ｍｇ、４．３μｍｏｌ）をＴＦＡ（５００μＬ）に溶解して、黄色溶液を得た。反応液を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＣ）によりモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物をロータリーエバポレーターで蒸発させ、次いで分取ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）により精製して、白色粉末の形態で化合物Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_２（２．７８μｍｏｌ、６４％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＣ−Ｒｔ＝１．４５分−［Ｍ−２Ｈ］^＋、ｍ／ｚ１７１５．３−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_６７Ｈ_８３Ｎ_１０Ｏ_２７Ｓ_３Ｔｂ^２＋［Ｍ−Ｈ］^２＋の計算値、ｍ／ｚ８５７．１９１７、実測値：８５７．１９０５。

【0175】

化合物Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_４：２５ｍＬのフラスコ中で、化合物Ｔｂ−８０ａ−Ｅ_４（６．１ｍｇ、３．６μｍｏｌ）をＴＦＡ（２００μＬ）に溶解して、黄色溶液を得た。反応液を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＣ）でモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物をロータリーエバポレーターで蒸発させ、次いで分取ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）により精製して、白色粉末の形態で化合物Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_４（２．２μｍｏｌ、６２％）を得た。ＨＰＬＣグラジエントＣ−Ｒｔ＝１．５７分−［Ｍ］^３＋、ｍ／ｚ５３５．９−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_７３Ｈ_１００Ｎ_１３Ｏ_１８Ｔｂ^４＋［Ｍ−２Ｈ］^４＋の計算値、ｍ／ｚ４０１．４１３５、実測値：４０１．４１２５。

【0176】

錯体Ｅｕ−８１ａ−Ｅ_２のＵＶスペクトル、クロマトグラムおよび質量スペクトルを図１〜３に示す。錯体Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_２のＵＶスペクトル、クロマトグラムおよび質量スペクトルを図４〜６に示す。錯体Ｔｂ−８１ａ−Ｅ_４のＵＶスペクトル、クロマトグラムおよび質量スペクトルを図７〜９に示す。

【0177】

錯体Ｅｕ−８１ａ−Ｅ２、Ｔｂ８１ａ−Ｅ４およびＴｂ−８１ａ−Ｅ２の特性、ならびに国際公開第２００５／０５８８７７号に記載された構造８２ａおよび８２ｂに対応する錯体の特性を決定した。錯体８２ａおよびＥｕ−８１ａ−Ｅ２の光物理的特性は同程度である。しかし、錯体Ｅｕ−８１ａ−Ｅ２は非常に水溶性であるが、錯体８２ａは溶解性が非常に乏しい（下記を参照のこと）。テルビウム錯体に関して、錯体８２ｂならびにＴｂ８１ａ−Ｅ４およびＴｂ−８１ａ−Ｅ２の光物理的特性は同程度であるが、発光スペクトル線の強度および分布については小さな差がある。しかし、錯体Ｔｂ８１ａ−Ｅ４およびＴｂ−８１ａ−Ｅ２は、先行技術の錯体８２ｂと比べて非常に水溶性である（下記を参照のこと）。

【0178】

様々な錯体の溶解性を以下の通り決定した。各錯体について、メタノールを用いてユウロピウム錯体の３つの等モル溶液を調製した。溶媒を減圧下で除去し、残留した固体を水／オクタノール混合物（２：１、１：１、１：２）（０．９ｍＬ）に溶解し、２分間撹拌した。平衡後、メタノール中において各相の発光スペクトルを記録した（メタノール１ｍＬ中５０μＬの溶液）。各混合物について、下記式を使用してＬｏｇＰの値を算出した。
ＬｏｇＰ＝Ｌｏｇ［Ｃ（オクタノール）／Ｃ（水）］
式中、Ｃ（オクタノール）およびＣ（水）はそれぞれ、被験錯体のオクタノール中および水中における濃度を表す。

【0179】

ユウロピウム錯体については、ΔＪ＝２（６０５〜６３５ｎｍ）のバンドを計算で使用したが、テルビウム錯体については、ΔＪ＝５（５２０〜５６５ｎｍ）のバンドを選択した。結果を以下の表に示す。

【0180】

【表1】

【0181】

化合物８２ａおよび８２ｂのＬｏｇＰ値がわずかに正の値であるのとは対照的に、本発明に係る錯体のＬｏｇＰ値は負の値であり、これは水性緩衝液に対する溶解性が完璧であることを反映している。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【国際調査報告】