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特表2021-505706ヘリコバクタ‐・ピロリリポ多糖の外部コアの八炭糖の調製方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】特表2021-505706(P2021-505706A)
(43)【公表日】2021年2月18日
(54)【発明の名称】ヘリコバクタ‐・ピロリリポ多糖の外部コアの八炭糖の調製方法
(51)【国際特許分類】
C08B 37/00 20060101AFI20210122BHJP
A61K 39/106 20060101ALI20210122BHJP
A61K 31/739 20060101ALI20210122BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20210122BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20210122BHJP
C07B 61/00 20060101ALN20210122BHJP
【ＦＩ】
C08B37/00 G
C08B37/00 P
A61K39/106
A61K31/739
A61P37/04
A61P31/04
C07B61/00 300
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
【全頁数】34
(21)【出願番号】特願2020-529450(P2020-529450)
(86)(22)【出願日】2017年12月14日
(85)【翻訳文提出日】2020年7月28日
(86)【国際出願番号】CN2017116187
(87)【国際公開番号】WO2019113889
(87)【国際公開日】20190620
(31)【優先権主張番号】201711304779.6
(32)【優先日】2017年12月11日
(33)【優先権主張国】CN
(81)【指定国】
AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT
(71)【出願人】
【識別番号】514262886
【氏名又は名称】江南大学
【氏名又は名称原語表記】ＪＩＡＮＧＮＡＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林特許業務法人
(72)【発明者】
【氏名】尹健
(72)【発明者】
【氏名】胡静
(72)【発明者】
【氏名】シーバーガー， ピーター
(72)【発明者】
【氏名】鄒小鵬
【テーマコード（参考）】
4C085
4C086
4C090
4H039
【Ｆターム（参考）】
4C085AA03
4C085AA08
4C085BA20
4C085BA33
4C085CC07
4C085CC33
4C085EE01
4C086AA03
4C086AA04
4C086EA20
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB09
4C086ZB35
4C090AA01
4C090AA05
4C090AA09
4C090BB03
4C090BB07
4C090BB12
4C090BB13
4C090BB32
4C090BB33
4C090BB35
4C090BB36
4C090BB38
4C090BB52
4C090BC20
4C090BD41
4C090CA35
4C090DA23
4H039CD10
4H039CD40
4H039CD90
(57)【要約】
ヘリコバクタ-・ピロリリポ多糖の外部コアの八炭糖の調製方法であって、糖化学分野に属する。ヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖の構造はα-Ｄ-Ｇｌｃ-（１-３）-α-Ｄ-Ｇｌｃ-（１-４）-β-Ｄ-Ｇａｌ-（１-７）-Ｄ-α-Ｄ-Ｈｅｐ［α-Ｄ-Ｇｌｃ-（１-６）-α-Ｄ-Ｇｌｃ-（１-６）-α-Ｄ-Ｇｌｃ-（１-２）-Ｄ-α-Ｄ-Ｈｅｐ］-Ｌｉｎｋｅｒである。該構造は、グルコ-ス、ガラクト-ス、ヘプト-スという３種類の単糖からなる。それには、５個のグルコ-スαグリコシド結合、１個のガラクト-スβグリコシド結合及び２つのヘプト-スαグリコシド結合が含まれる。前記調製方法は、遠隔隣接基関与効果、溶媒効果、温度効果、添加剤及び脱離基の相乗作用を利用して該八炭糖を調製する。タンパク質に連結されて免疫学研究用の糖抱合体を調製するために、八炭糖の還元端にはリンカ-が連結されてもよい。【選択図】図６
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉに示されることを特徴とする、ヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖又はその誘導体。
［式中、Ｒは、-（ＣＨ２）ｎ-Ｎ-Ｙ１Ｙ２又は-（ＣＨ２）ｎ-Ｎ-Ｙ１Ｙ２（ｌｉｎｋｅｒ）であり、ｎ＝１〜１０であり、Ｎは窒素であり、Ｙ１はＨ又はベンジル基（Ｂｎ）であり、Ｙ２はＨ又はベンジルメトキシカルボニル基（Ｃｂｚ）であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１２、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１８、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２６はＨ又はベンジル基（Ｂｎ）であり、Ｒ５、Ｒ１１、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２２、Ｒ２５はＨ又は２-ナフチルメチル基（Ｎａｐ）であり、Ｒ４、Ｒ９、Ｒ１３、Ｒ２７はエステル基である。］
【請求項2】
請求項１に記載のヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖の合成方法であって、
所望の単糖ブロックＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄを合成するステップ１と、
（式中、Ｒｎは請求項１に定義された置換基の範囲と同義であるが、Ｈではない。）
グリコシル化反応により八炭糖を組み立てて保護するステップ２と、
八炭糖を脱保護するステップ３と、を含むことを特徴とする合成方法。
所望の単糖ブロックＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄを合成するステップ１と、
グリコシル化反応により八炭糖を組み立てて保護するステップ２と、
八炭糖を脱保護するステップ３と、を含むことを特徴とする合成方法。
【請求項3】
ステップ１では、単糖ブロックＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄの合成において、使用される溶媒は、無水塩化メチレン、酢酸エチル、メタノ-ル、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ピリジン、クロロホルム、８０％酢酸水溶液のうちの１種又は複数種であり、基質の濃度は０．０２〜０．５ Ｍであり、反応試薬又は触媒である酸は、塩酸、酢酸又はｐ-トルエンスルホン酸であり、反応温度は、-７８℃〜溶媒の還流温度であり、反応時間は１〜４８ｈである、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項4】
ステップ２は、（１）三炭糖供与体の組み立て、（２）五炭糖受容体の組み立て、（３）全保護された八炭糖の組み立てを含み、
三炭糖供与体の組み立て条件として、基質は糖ブロックＡ、Ｂであり、反応溶媒はＥｔ２Ｏ／ＤＣＭであり、供与体の１０当量に相当するチオフェンが添加され、乾燥剤が使用され、反応温度は０℃〜室温であり、反応過程に亘って不活性ガスで保護され、反応原料がなくなった後、ピリジン又はトリエチルアミンで反応がクエンチされ、ろ過、洗浄、抽出、乾燥が行われ、生成物はシリカゲルカラムにより精製され、
五炭糖受容体の組み立て条件として、基質は糖ブロックＡ、Ｃ、Ｄであり、反応溶媒はＥｔ２Ｏ／ＤＣＭ又はＤＣＭであり、三炭糖供与体の１０当量に相当するチオフェンが添加され、乾燥剤が使用され、反応温度は０℃〜室温であり、反応過程に亘って不活性ガスで保護され、反応原料がなくなった後、ピリジン又はトリエチルアミンで反応がクエンチされ、ろ過、洗浄、抽出、乾燥が行われ、生成物はシリカゲルカラムにより精製され、
全保護された八炭糖の組み立て条件として、基質は前記三炭糖供与体と五炭糖受容体であり、グリコシド化反応の有機溶媒は無水塩化メチレン、無水エチルエ-テルのうちの１種又は２種の組み合わせであり、ルイス酸の作用下、グリコシル化反応が行われて、保護された八炭糖が得られ、反応原料がなくなった後、ピリジン又はトリエチルアミンで反応がクエンチされ、ろ過、洗浄、抽出、乾燥が行われ、生成物はシリカゲルカラムにより精製される、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
三炭糖供与体の組み立て条件として、基質は糖ブロックＡ、Ｂであり、反応溶媒はＥｔ２Ｏ／ＤＣＭであり、供与体の１０当量に相当するチオフェンが添加され、乾燥剤が使用され、反応温度は０℃〜室温であり、反応過程に亘って不活性ガスで保護され、反応原料がなくなった後、ピリジン又はトリエチルアミンで反応がクエンチされ、ろ過、洗浄、抽出、乾燥が行われ、生成物はシリカゲルカラムにより精製され、
五炭糖受容体の組み立て条件として、基質は糖ブロックＡ、Ｃ、Ｄであり、反応溶媒はＥｔ２Ｏ／ＤＣＭ又はＤＣＭであり、三炭糖供与体の１０当量に相当するチオフェンが添加され、乾燥剤が使用され、反応温度は０℃〜室温であり、反応過程に亘って不活性ガスで保護され、反応原料がなくなった後、ピリジン又はトリエチルアミンで反応がクエンチされ、ろ過、洗浄、抽出、乾燥が行われ、生成物はシリカゲルカラムにより精製され、
全保護された八炭糖の組み立て条件として、基質は前記三炭糖供与体と五炭糖受容体であり、グリコシド化反応の有機溶媒は無水塩化メチレン、無水エチルエ-テルのうちの１種又は２種の組み合わせであり、ルイス酸の作用下、グリコシル化反応が行われて、保護された八炭糖が得られ、反応原料がなくなった後、ピリジン又はトリエチルアミンで反応がクエンチされ、ろ過、洗浄、抽出、乾燥が行われ、生成物はシリカゲルカラムにより精製される、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項5】
前記乾燥剤は、３Å分子篩、４Å分子篩、５Å分子篩、無水硫酸ナトリウム、無水硫酸マグネシウム、無水硫酸カルシウムのうちの１種又は複数種であり、
前記乾燥剤と反応物の質量比は１．０〜４．０であり、
前記不活性ガスは窒素ガス又はアルゴンガスであり、
ルイス酸は、ＴＭＳＯＴｆ、ＴｆＯＨ、ＡｇＯＴｆであり、チオグリコシドが反応するときには、ルイス酸とともに促進剤として機能するＮＩＳを追加する、ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
前記乾燥剤と反応物の質量比は１．０〜４．０であり、
前記不活性ガスは窒素ガス又はアルゴンガスであり、
ルイス酸は、ＴＭＳＯＴｆ、ＴｆＯＨ、ＡｇＯＴｆであり、チオグリコシドが反応するときには、ルイス酸とともに促進剤として機能するＮＩＳを追加する、ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項6】
グリコシル化反応には、基質の濃度は０．０１Ｍ〜０．１Ｍであり、反応温度は-５０℃〜０℃〜室温であり、室温は２０〜３０℃であり、反応時間は１ｈ〜７ｈである、ことを特徴とする請求項４又は５に記載の方法。
【請求項7】
ステップ３では、溶媒としてメタノ-ル、テトラヒドロフラン、塩化メチレンのうちの１種又は２種の混合溶媒を使用して、保護された八炭糖をアルカリ性条件下で脱アシル化し、反応終了後、Ｈ＋樹脂で中和し、反応温度を室温、反応時間を２ｈ〜１２ｈとし、半脱保護された八炭糖を得る、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項8】
ステップ３では、溶媒としてテトラヒドロフラン、塩化メチレン、酢酸エチル、ｔｅｒｔ-ブタノ-ル、水、メタノ-ル、酢酸のうちの複数種を使用して、パラジウム炭素、水素ガスで半脱保護された生成物を全脱保護し、
前記のパラジウム炭素は１０％パラジウム炭素であり、パラジウム炭素と反応物の質量比は０．１：１〜０．５：１であり、ベンジル基と２-ナフチルメチル基の除去に使用される水素ガス圧は１〜１００ａｔｍであり、前記反応温度は常温であり、反応時間は１〜４８ｈである、ことを特徴とする請求項７に記載の方法。
前記のパラジウム炭素は１０％パラジウム炭素であり、パラジウム炭素と反応物の質量比は０．１：１〜０．５：１であり、ベンジル基と２-ナフチルメチル基の除去に使用される水素ガス圧は１〜１００ａｔｍであり、前記反応温度は常温であり、反応時間は１〜４８ｈである、ことを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項9】
ヘリコバクタ-・ピロリ感染により引き起こされる疾患を予防又は治療するためのワクチン又は医薬の開発又は調製における、請求項１に記載のヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖の使用。
【請求項10】
グルコ-スαグリコシド結合の生成方法であって、
グリコシル供与体と受容体をトルエンにて２〜３回共同蒸発し、無水ＤＣＭ又は体積比１：２のＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏを加え、基質の濃度を０．０１-０．１ Ｍとし、活性化させた３Å又は４Å分子篩を乾燥剤とし、グリコシル供与体の１０当量に相当するチオフェンを加え、室温下２０〜３０ ｍｉｎ撹拌した後、-５０〜０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆを促進剤として加え、１〜７ｈ反応させ、ピリジンで反応を停止する、ことを特徴とするグルコ-スαグリコシド結合の生成方法。
グリコシル供与体と受容体をトルエンにて２〜３回共同蒸発し、無水ＤＣＭ又は体積比１：２のＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏを加え、基質の濃度を０．０１-０．１ Ｍとし、活性化させた３Å又は４Å分子篩を乾燥剤とし、グリコシル供与体の１０当量に相当するチオフェンを加え、室温下２０〜３０ ｍｉｎ撹拌した後、-５０〜０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆを促進剤として加え、１〜７ｈ反応させ、ピリジンで反応を停止する、ことを特徴とするグルコ-スαグリコシド結合の生成方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ヘリコバクタ-・ピロリリポ多糖の外部コアの八炭糖（オクト-ス）の調製方法に関し、糖化学分野に属する。
【背景技術】
【0002】
ヘリコバクタ-・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ Ｐｙｌｏｒｉ、Ｈ．Ｐ．）は、１９９４年に世界保健機関によってクラスＩ発がん性物質としてリストされており、これは、上皮細胞の表面に生息し、胃粘膜の表面の粘液によって覆われているグラム陰性菌である。世界の人口の５０％以上が上部消化管でヘリコバクタ-・ピロリに感染しており、開発途上国では感染者は最大で７０％、先進国でも２０％〜３０％に感染しており、急性感染症の患者のうち、２０％は潰瘍まで進行し、１％の感染者は胃癌又は粘膜関連リンパ腫まで進行することがある。２００５年のノ-ベル生理学・医学賞は、消化管疾患及び胃癌の発症におけるヘリコバクタ-・ピロリの重要な役割の発見を認めるために、オ-ストラリアの２人の科学者Ｗａｒｒｅｎ及びＭａｓｈａｌｌに授与された。現在、ヘリコバクタ-・ピロリの最も一般的な治療法は、「トリプル療法（3剤併用療法）」であり、主にプロトンポンプ阻害剤と２種類の抗生物質を使用してヘリコバクタ-・ピロリを除去する。ただし、患者は投薬後に再発する傾向があり、吐き気、下痢、偽膜性腸炎などの有害反応を起こすことがよくある。抗生物質の頻繁な使用により、抗生物質に耐性のあるヘリコバクタ-・ピロリ株が常に発見されており、その結果、ヘリコバクタ-・ピロリの治療における抗生物質の効果が段々低下してしまう。したがって、従来から、ヘリコバクタ-・ピロリワクチンの開発は科学者の研究焦点である。
【0003】
現在、ヘリコバクタ-・ピロリ感染を予防したり、ヘリコバクタ-・ピロリを治療したりできるワクチンは市販されていない。ワクチン開発における新しいタ-ゲット分子として、糖類ワクチンは科学者によってますます注目されて、細菌の表面の多糖構造は、細菌の病原性と人体内の免疫認識に重要な役割を果たすことが多いため、化学的方法によってヘリコバクタ-・ピロリの表面のオリゴ糖・多糖が合成されることは、ヘリコバクタ-・ピロリワクチンの開発に対して非常に重要である。
【0004】
ヘリコバクタ-・ピロリ細胞の表面のオリゴ糖はリポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｄｉｅ、ＬＰＳ）であり、そのＬＰＳはＯ-抗原、コア構造、及びリピドＡの３つの部分から構成されている。ヘリコバクタ-・ピロリには合計６つの血清型Ｏ１-Ｏ６があり、それらの主な違いはＯ-抗原の糖部分である。異なる血清型のヘリコバクタ-・ピロリのＬＰＳのコア構造は比較的保たれるため、ヘリコバクタ-・ピロリ感染を予防及び治療するための糖ワクチンとして、そのコア構造を化学的に合成することは非常に良い選択である。ヘリコバクタ-・ピロリのコア構造には、内部コアと外部コアがあり、外部コア構造は環境に曝されやすく、ヘリコバクタ-・ピロリ感染により引き起こされる免疫反応に非常に重要な役割を果たす。
【0005】
現在研究されているヘリコバクタ-・ピロリリポ多糖のコア構造は、主に生物学的方法によって不活性化細菌から抽出されるものであり、その欠点は、通常、１回の抽出で得られる生成物の量が少なく、抽出された分子構造も均一ではなく、実験の再現性が悪いことにある。そのため、ヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖をタ-ゲット分子として化学的に全合成し、化学合成により、分子が均一で構造が明確であるタ-ゲット構造を大量に得ることができる。
【発明の概要】
【0006】
本発明が解決しようとする技術的課題は、化学的方法によりヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖を合成することであり、この八炭糖の構造に５つのグルコ-スが含まれ、１，２-αグリコシド結合の合成は目的の八炭糖の重要なステップである。本発明は、遠隔隣接基関与効果、溶媒効果、温度効果、添加剤及び脱離基の相乗作用を利用して、グリコシル化過程のα選択性を向上させる。この相乗作用は、グルコ-スαグリコシド結合の形成という難問を解決した。合成されたグルコ-ス糖ブロック、ガラクト-ス糖ブロック、ヘプト-ス糖ブロックを用いて、保護された目的八炭糖を合成し、最後に、脱保護して得られた目的の八炭糖は、式Ｉに示される。また、タンパク質に連結させて糖抱合体ワクチンを調製することを考慮して、八炭糖の還元端は、アミノ付きのリンカ-である。【0007】
本発明は、また、式Ｉに示される化合物の合成方法を提供し、具体的には、ステップ１〜ステップ７を含む。
【0008】
ステップ１、グルコ-ス糖ブロックＡの合成。グルコ-ス糖ブロックＡは、式ＩＩに示される構造を有し、末端基が脱離基としてのＮ-フェニル-トリフルオロアセトイミデ-トであり、残りの置換基Ｒｎが式Ｉに示される。具体的には、単糖ブロックＡの合成方法は、ペルアセチル化グルコ-スを出発原料として、ルイス酸の作用下、ｐ-トルエンチオ-ルと作用してペルアセチル化チオグリコシド化合物を生成し、アルカリ性条件下でアセチルを除去して４つのヒドロキシを露出し、得られたテトラヒドロキシ化合物とベンズアルデヒドジメチルアセタ-ル（ＰｈＣＨ（ＯＣＨ３）２）をｐ-トルエンスルホン酸（ｐ-ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ）により触媒して、４,６-ベンジリデン基で保護されたチオグリコシド化合物を生成することと、４,６-ベンジリデン基で保護されたチオグリコシド化合物の３-ＯＨを２-メチルナフタレン（２-Ｎａｐ）で保護し、２-ＯＨをベンジル基（Ｂｎ）で保護して、全保護化合物を得た後、ボラン（ＢＨ３・ＴＨＦ）とルイス酸の作用下、４,６-ベンジリデン基を選択的に開いて６-ＯＨを露出させ、露出させた６-ＯＨをアシル基で保護し、全保護グルコ-スチオグリコシド化合物を得て、全保護グルコ-スチオグリコシド化合物をＮＢＳ又はＮＩＳ条件下加水分解し、末端基に位置するＯＨを露出させて、末端基に位置する-ＯＨとＣＦ３ＣＮＰｈＣｌを反応させ、グルコ-スブロックＡを得ることと、を含む。
【0009】
ステップ２、ガラクト-ス糖ブロックＢの合成。ガラクト-ス糖ブロックＢは、式ＩＩＩに示される構造を有し、末端基の位置がｔ-ブチルジメチルシリル基（ＴＢＳ）で保護されており、残りの置換基Ｒｎが式Ｉに示される。具体的には、単糖ブロックＢの合成方法は、化合物２,３-ジ-プロピリデン-６-ベンジルエチルチオガラクト-スを出発原料として、２-ＯＨをＢｚで保護し、２-ＯＢｚ化合物を得て、２-ＯＢｚ化合物について酸の作用下でプロピリデンを開いて２,３-ジヒドロキシ化合物を得て、２,３-ジヒドロキシ化合物の３-ＯＨをＢｎで選択的に保護して、３-ＯＢｎ化合物を得て、３-ＯＢｎ化合物の４-ＯＨをＬｅｖで保護して、４-Ｌｅｖチオグリコシド化合物を得て、４-Ｌｅｖチオグリコシド化合物をＮＢＳ条件下で加水分解し、末端基に位置するＯＨを露出させ、末端基に位置する-ＯＨとｔ-ブチルジメチルクロロシラン（ＴＢＳＣｌ）を反応させ、末端基がＴＢＳで全保護されたガラクト-スを得て、酢酸ヒドラジン作用下でＬｅｖを除去してガラクト-スブロックＢを得ることを含む。
【0010】
ステップ３、ヘプト-スブロックＣ、Ｄの合成。式ＩＶに示されるように、糖ブロックＣの末端基の位置がエチルチオで保護されており、Ｒ１７がＮａｐ保護であり、糖ブロックＤの末端基の位置がｌｉｎｋｅｒ、たとえば、Ｏ-（ＣＨ２）ｎ-Ｎ（Ｂｎ）Ｃｂｚ、又はＯ-（ＣＨ２）ｎ-ＳＢｎ、又はＯ-（ＣＨ２）ｎ-Ｎ３であり、Ｒ１７がアシル基保護であり、残りの置換基Ｒｎが式Ｉに示される。具体的には、単糖ブロックＣ、Ｄの合成方法は、２,３-Ｏ-プロピリデン-４-Ｏ-ベンジルマンノ-スエチルチオグリコシドを出発原料として、ｓｗｅｒｎ酸化を行い、対応するアルデヒドを得て、次にウィッティヒ反応により６位の炭素鎖を延長させ、６位が脱酸素化されたオレフィン化合物を得て、オレフィン化合物をジヒドロキシ化して６,７-ジ-ヒドロキシ化合物を得て、７-ＯＨをジブチルスズオキシド（Ｂｕ２ＳｎＯ）で選択的にＮａｐ保護して７-Ｎａｐ化合物を得て、６-ＯＨをＢｎで保護して、全保護化合物を得ることと、全保護化合物から８０％の酢酸作用下でプロピリデンを除去して、２,３-ジ-ヒドロキシ化合物を得て、ジブチルスズオキシド（Ｂｕ２ＳｎＯ）及びＮａｐで３-ＯＨを選択的に保護し、ヘプト-スブロックＣを得ることと、糖ブロックＣの２-ＯＨをＬｅｖで保護して、２-Ｌｅｖ化合物を得て、２-Ｌｅｖ化合物とリンカ-（ｌｉｎｋｅｒ）を反応させ、末端基の位置がリンカ-であるヘプト-ス化合物を得て、７-ＮａｐをＤＤＱの作用下で離脱させ、７-ＯＨ化合物を得て、７-ＯＨ化合物をアセチルで保護して化合物７-ＯＡｃを得て、最後に、酢酸ヒドラジンの作用下でＬｅｖを除去して、ヘプト-スブロックＤを得ることと、を含む。
【0011】
ステップ４、三炭糖供与体の組み立て。糖ブロックを用いて三炭糖ブロックＧ（式Ｖ）を合成し、グリコシル化反応の条件として、反応溶媒がＥｔ２Ｏ／ＤＣＭであり、供与体の１０当量に相当するチオフェンが添加され、４Å分子篩が乾燥剤として使用され、反応温度が０℃であり、反応時間が３〜５ｈであり、反応過程に亘ってアルゴンガスで保護される。反応をＴＬＣ板で監視し、反応が終了すると、ピリジン（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ）で反応をクエンチし、生成物をシリカゲルカラムにより精製する。三炭糖のＧ末端基は、脱離基としてのＮ-フェニル-トリフルオロアセトイミデ-トであり、八炭糖の組み立てにおいてグリコシル供与体として機能する。【0012】
ステップ５、五炭糖受容体の組み立て。糖ブロックを用いて五炭糖ブロックＨ（式ＶＩ）を合成し、フルオログリコシドのグリコシル化反応の条件として、溶媒がＥｔ２Ｏ／ＤＣＭであり、供与体の１０当量に相当するチオフェンが添加され、４Å分子篩が乾燥剤として使用され、反応温度が０℃であり、反応時間が３〜５ｈであり、反応過程に亘ってアルゴンガスで保護される。反応をＴＬＣ板で監視し、反応が終了すると、ピリジンで反応をクエンチし、生成物をシリカゲルカラムにより精製する。チオグリコシドは、グリコシル化反応過程においてＮＩＳ／ＴＭＳＯＴｆ又はＮＩＳ／ＴｆＯＨを促進剤、ＤＣＭを溶媒、４Å分子篩を乾燥剤として用いる。合成された五炭糖は、八炭糖の組みたてにおいてグリコシル受容体として機能する。【0013】
ステップ６、八炭糖受容体の組み立て。八炭糖の組み立てには［３＋５］合成戦略が使用される。反応溶媒がＤＣＭであり、促進剤がＴＭＳＯＴｆであり、反応温度が０℃であり、反応時間が７ ｈであり、反応過程に亘ってアルゴンガスで保護されている。反応をＴＬＣ板で監視し、反応が終了すると、ピリジン（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ）で反応をクエンチし、生成物をシリカゲルカラムにより精製する。【0014】
ステップ７、八炭糖の脱保護。保護された八炭糖をアルカリ性条件下で脱アシル化し、シリカゲルカラムにより精製した後、Ｐｄ／Ｃを用いて、水素化して３日間脱離反応を行い芳香基を除去し、芳香基がすべて脱保護した後、Ｃ１８逆相カラムにより精製して、式ＶＩＩＩに示される目的の八炭糖を得る。【0015】
本発明は、また、グルコ-スαグリコシド結合の生成方法を提供し、グリコシル供与体と受容体をトルエンにて２〜３回共同蒸発し、無水ＤＣＭ又はＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏを加え、基質の濃度を０．０１-０．１ Ｍとし、活性化させた３Å又は４Å分子篩を乾燥剤として、グリコシル供与体の８〜１０当量に相当するチオフェンを加え、室温下で２０〜３０ ｍｉｎ撹拌した後、-５０〜０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆを促進剤として加え、１〜７ｈ反応させ、ピリジンで反応を終了させる。具体的には、グリコシル供与体と受容体をトルエンにて３回共同蒸発し、無水ＤＣＭ又は体積比１：２のＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏを加え、基質の濃度を０．０２-０．０５ Ｍとし、活性化させた３Å又は４Å分子篩を乾燥剤として、グリコシル供与体の１０当量に相当するチオフェンを加え、室温下で２０〜３０ ｍｉｎ撹拌した後、０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆを促進剤として加え、３-５ ｈ反応させ、ピリジンで反応を終了させる。
【0016】
本発明の有益な効果は以下のとおりである。
【0017】
本発明は、ヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖を化学的に合成する。本発明では、保護基戦略、溶媒効果、温度効果を利用して、グルコ-スαグリコシド結合の形成に非常に有利な方法を見出し、この方法をヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖の合成に適用する。合成されたヘリコバクタ-・ピロリの外部コアの八炭糖と抗原タンパク質を連結して、糖抱合体を調製することは、ヘリコバクタ-・ピロリを予防及び治療するためのワクチンの発展に対して重要な役割を果たす。
【図面の簡単な説明】
【0018】
【図1】糖ブロック８の合成である。
【図2】糖ブロック２１の合成である。
【図3】糖ブロック２８の合成である。
【図4】三炭糖供与体３２の集合である。
【図5】五炭糖受容体４２の集合である。
【図6】目的の八炭糖４１の合成である。
【発明を実施するための形態】
【0019】
以下、本発明の実施形態を実施例によって詳細に説明するが、当業者が理解できるように、以下の実施例は本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではない。実施例では、具体的な条件が示されていない場合、従来の条件又は製造元が推奨する条件に従うものとする。使用する試薬や機器は、メ-カ-が明記されていない場合、すべて市販品として入手できる一般的な製品である。本発明の収率の計算方法は、「生成物（ｍｏｌ）／反応基質（ｍｏｌ）×１００％」である。本発明における化合物の構造を同定する方法は、核磁気共鳴スペクトルの測定（４００Ｍ ／ ６００Ｍ ／ ７００Ｍ）、高分解能質量スペクトルの測定、旋光度測定であり、これらの結果は、各化合物の具体的な合成にリストされている。
【0020】
実施例１糖ブロック８の合成は図１に示される。
図１に示されるように、ペルアセチル化グルコ-ス１を出発原料として、三フッ化ホウ素ジエチルエ-テル錯体（ＢＦ３・ＯＥｔ２）の作用下で、ｐ-トルエンチオ-ルと作用してペルアセチル化チオグリコシド化合物２を生成した。ペルアセチル化チオグリコシド化合物２のアセチル基がナトリウムメトキシド（ＮａＯＣＨ３）の作用下で脱アセチル化し、４つのヒドロキシを露出して、テトラヒドロキシ化合物を得た。テトラヒドロキシ化合物とベンズアルデヒドジメチルアセタ-ル（ＰｈＣＨ（ＯＣＨ３）２）をｐ-トルエンスルホン酸（ｐ-ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ）により触媒して、４,６-ベンジリデン基で保護されたチオグリコシド３化合物を生成した。チオグリコシド３化合物の３-ＯＨを２-メチルナフタレン（２-Ｎａｐ）で選択的に保護して、化合物４を得て、化合物４の２-ＯＨをベンジル基（Ｂｎ）で保護して、化合物５を得た。ボラン（ＢＨ３・ＴＨＦ）とトリメチルシリルトリフレ-ト（ＴＭＳＯＴｆ）の作用下で、化合物５の４,６-ベンジリデン基を選択的に開いて６-ＯＨを露出させ、化合物６を得た。化合物６の６-ＯＨをベンゾイル基（Ｂｚ）で保護して、全保護グルコ-スチオグリコシド化合物７を得た。化合物７のチオグリコシドをＮＢＳ条件下で加水分解して、末端基の位置のＯＨを露出させ、末端基の位置の-ＯＨとＣＦ３ＣＮＰｈＣｌを反応させ、グルコ-スブロック８を得た。
具体的な試験操作及びステップ
化合物２：ペルアセチル化グルコ-ス１（１０．０ ｇ、２５．６ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１２８ ｍＬ）に溶解した。０℃でｐ-トルエンチオ-ル（４．８ ｇ、３８．６ ｍｍｏｌ）及びＢＦ３・ＯＥｔ２（４．８ ｍＬ、３８．４ ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温に回復させ、１２時間撹拌した。反応液をＤＣＭで希釈した後、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮させたものをカラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、３：１）、化合物２（１０．１ ｇ、８７％）を得た。[α]22D = 11.6 (c 1.0, CH3Cl); 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ = 7.42 ‐ 7.35 (m, 2H, Ar), 7.12 (m, J = 7.8, 2H, Ar), 5.20 (dd, J = 9.4, 9.4 Hz, 1H, H-3), 5.02 (dd, J = 9.4, 9.8 Hz, 1H, H-4), 4.93 (dd, J = 10.0, 9.4 Hz, 1H, H-2), 4.63 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H-1), 4.25-4.13 (m, 2H, H-6a, 6b), 3.70 (ddd, J = 9.8, 4.8, 2.7 Hz, 1H, H-5), 2.35 (s, 3H, SPhCH3), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.08 (s, 3H, OAc), 2.01 (s, 3H, OAc), 1.98 (s, 3H, OAc). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ = 170.6, 170.2, 169.4, 169.2, 138.8, 133.8, 129.7, 127.5, 85.8 (C-1), 75.8, 74.0, 69.9, 68.2, 62.1, 21.2, 20.8, 20.7, 20.6, 20.6; HRMS (ESI) m/zcalcd for C21H26O9SNa [M+Na]+477.1190, found 477.1198.
化合物３：化合物２（７．３ ｇ、１６．１ ｍｍｏｌ）をメタノ-ル（１０８ ｍＬ）に溶解した。ＭｅＯＮａ（１７３ ｍｇ、３．２ ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温下１ ｈ撹拌した。反応液をＩＲ-１２０樹脂（Ｈ＋）で中和した。ろ過して濃縮させ、粗製品をトルエンと２回共沸した。得られた粗生成物をＤＭＦ（５４ ｍＬ）に溶解し、ｐ-トルアルデヒドジメチルアセタ-ル（３．６ ｍＬ、２４．１ ｍｍｏｌ）及びｐ-トルエンスルホン酸一水和物（４５６ ｍｇ、２．４ ｍｍｏｌ）を加え、反応を６５℃で１２ ｈ撹拌して、ＮＥｔ３で反応をクエンチした。濃縮後、カラムクロマトグラフィ-により精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１：１）、化合物３（５．４ ｇ、８９％）を得た。[α]22D = 25.6 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ = 7.50 ‐ 7.41 (m, 4H, Ar), 7.38 ‐ 7.32 (m, 3H, Ar), 7.16 ‐ 7.11 (m, 2H, Ar), 5.51 (s, 1H, ArCH), 4.54 (d, J = 9.7 Hz, 1H, H-1), 4.36 (m, 1H, H-6a), 3.87 ‐ 3.67 (m, 2H, H-6b, H-4), 3.52 ‐ 3.44 (m, 2H, H-3, H-2), 3.41 (m, 1H, H-5), 2.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H, OH), 2.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H, OH), 2.36 (s, 3H, SPhCH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ = 138.9, 136.9, 133.7, 129.9, 129.3, 128.3, 127.2, 126.3, 101.9, 88.7 (C-1), 80.2, 74.5, 72.5, 70.5, 68.6, 21.2. HRMS (ESI) m/zcalcd for C20H22O5SNa [M+Na]+397.1080, found 397.1078.
化合物４：化合物３（４９８ ｍｇ、１．３３ ｍｍｏｌ）及びＢｕ２ＳｎＯ（３９７ ｍｇ、１．６ ｍｍｏｌ）を無水トルエン（４．３ ｍＬ）に溶解して６時間加熱還流した。混合物を室温に冷却して濃縮させた。粗生成物をＤＭＦ（６．７ ｍＬ）に溶解し、次に、ＣｓＦ（２６０ ｍｇ、１．７３ ｍｍｏｌ）、ＴＢＡＢ（５６０ ｍｇ、１．７３ ｍｍｏｌ）、２-ＮａｐＢｒ（３５０ ｍｇ、１．６ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を７０℃で１２ ｈ撹拌した。原料がすべて反応された後、減圧濃縮させ、塩化メチレンに溶解して、水及び飽和食塩水を順次洗浄した。無水ＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮させ、カラムクロマトグラフィ-により精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、５：１）、化合物４（４１７ ｍｇ、６１％）を得た。[α]22D = -33.8 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.89 ‐ 7.59 (m, 4H, Ar), 7.51 ‐ 7.41 (m, 7H, Ar), 7.39 ‐ 7.34 (m, 3H, Ar), 7.12 (m, J = 7.9 Hz, 2H, Ar), 5.57 (s, 1H, ArCH), 5.09 (d-like, J = 11.8 Hz, 1H, ArCH), 4.96 (d-like, J = 11.8 Hz, 1H, ArCH), 4.55 (d, J = 9.7 Hz, 1H, H-1), 4.37 (dd, J = 10.5, 4.9 Hz, 1H, H-6a), 3.78 (dd, J = 10.5, 10.5 Hz, 1H, H-6b), 3.66 (m, 1H, H-4), 3.66 (dd, J = 9.2, 9.2 Hz, 1H, H-3), 3.56 ‐ 3.42 (m, 2H, H-2, H-5), 2.57 (s, 1H, OH), 2.34 (s, 3H, SPhCH3). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ = 138.8, 137.2, 135.7, 133.8, 133.3, 133.1, 129.8, 129.0, 128.3, 128.2, 127.9, 127.7, 127.2, 126.9, 126.1, 126.0, 126.0, 125.9, 101.4, 88.7 (C-1), 81.5, 81.1, 74.8, 72.3, 70.8, 68.7. HRMS (ESI) m/z calcd for C31H30O5SNa [M+Na]+ 537.1706, found 537.1701.
化合物５：化合物４（１３０ ｍｇ、０．２５ ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１．４ ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。
ＮａＨ（２２．４ ｍｇ、０．５６ ｍｍｏｌ）を加え、次にＢｎＢｒ（４９．９ μＬ、０．４２ ｍｍｏｌ）を加えて、反応液を室温で３．５ ｈ撹拌した。反応物がなくなった後、溶液を０℃に冷却して、水を滴下して反応をクエンチした。反応液をＤＣＭで３回抽出し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、６：１）、化合物５（１３０ ｍｇ、８６％）を得た。[α]22D = -9.3 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.86 ‐ 7.62 (m, 4H, Ar), 7.52 ‐ 7.27 (m, 15H, Ar), 7.11 (d, J = 7.9 Hz, 2H, Ar), 5.60 (s, 1H, ArCH), 5.08 (d-like, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH), 4.93 (d-like, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH), 4.90 (d-like, J = 10.4 Hz, 1H, ArCH), 4.83 (d-like, J = 10.4 Hz, 1H, ArCH), 4.70 (d, J = 9.8 Hz, 1H, H-1), 4.38 (dd, J = 10.3, 5.0 Hz, 1H, H-6a), 3.88 (dd, J = 9.4, 8.3 Hz, 1H, H-3), 3.80 (dd, J= 10.3 , 9.8 Hz, 1H, H-6b), 3.71 (dd, J = 9.4, 9.4 Hz, 1H, H-4), 3.51 (dd, J = 9.8, 8.3 Hz, 1H, H-2), 3.45 (ddd, J = 9.7, 9.8, 4.9 Hz, 1H, H-5), 2.33 (s, 3H, SPhCH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.2, 138.1, 137.3, 135.8, 133.3, 133.0, 133.0, 129.8, 129.2, 129.0, 128.4, 128.3, 128.2, 128.1, 127.9, 127.8, 127.6, 126.8, 126.2, 126.0, 126.0, 125.8, 101.2, 88.6 (C-1), 83.0, 81.5, 80.5, 75.8, 75.3, 70.2, 68.7, 21.1. HRMS (ESI) m/z calcd for C38H36O5SNa [M+Na]+ 627.2176, found 627.2171.
化合物５’：化合物５（７６８ ｍｇ、１．１ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／Ｈ２Ｏ（９：１、ｖ／ｖ、４８．９ ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、反応液を０℃に冷却し、２，３-ジクロロ-５，６-ジシアノ-１，４-ベンゾキノン（ＤＤＱ）（１８６ ｍｇ、０．８２ ｍｍｏｌ）を加え、反応温度を室温まで上昇し、４ ｈ反応させ続けた。反応液をＤＣＭで希釈し、１０％のＮａ２Ｓ２Ｏ３溶液、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で順次に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１０：１）、化合物５’（２７５ ｍｇ、９２％）を得て、構造同定デ-タは文献により報告されている。
化合物６：化合物５（４５５ ｍｇ、０．７５ ｍｍｏｌ）を乾燥したＤＣＭ（３．７５ ｍＬ）に溶解した。溶液を０℃に冷却し、ＢＨ３・ＴＨＦ（１ Ｍ、３．７５ ｍＬ）を加えて、０℃で１０分間撹拌した。ＴＭＳＯＴｆ（２０．３ μＬ、０．１１ ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を室温に回復させ１ ｈ撹拌した。原料がなくなった後、飽和ＮａＨＣＯ３を加えて反応を終了させた。混合液をＤＣＭで３回抽出した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させ、ろ過した。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、５：１）、化合物６（４４１ ｍｇ、９７％）を得た。[α]22D = 17.1 (c 1.0, CH3Cl).1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.86 ‐ 7.62 (m, 4H, Ar), 7.51 ‐ 7.35 (m, 6H, Ar), 7.36 ‐ 7.24 (m, 8H, Ar), 7.12 (d, J = 7.9 Hz, 2H, Ar), 5.06 (d-like, J = 11.2 Hz, 1H, ArCH), 5.01 (d-like, J = 11.2 Hz, 1H, ArCH), 4.95 (d-like, J = 10.3 Hz, 1H, ArCH), 4.87 (d-like, J = 11.0 Hz, 1H, ArCH), 4.78 (d-like, J = 10.3 Hz, 1H, ArCH), 4.67 (d-like, 1H, 11.0 Hz, ArCH), 4.66 (d, J = 9.8 Hz, 1H, H-1), 3.88 (ddd, J = 12.0, 6.3, 2.7 Hz, 1H, H-6a), 3.77 (dd, J = 9.1, 8.9 Hz, 1H, H-3), 3.70 (ddd, J = 12.0, 7.3, 4.9 Hz, 1H, H-6b), 3.59 (dd, J = 9.1, 9.5 Hz, 1H, H-4), 3.49 (dd, J = 9.8, 8.9 Hz, 1H, H-2), 3.38 (ddd, J = 9.5, 4.9, 2.7 Hz, 1H, H-5), 2.34 (s, 3H, SPhCH3), 1.91 (dd, J = 6.3, 7.3 Hz, 1H, OH). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.1, 138.0, 137.9, 135.8, 133.3, 133.0, 132.7, 129.8, 129.5, 128.5, 128.4, 128.2, 128.0, 127.9, 127.9, 127.9, 127.7, 126.5, 126.1, 125.9, 125.8, 87.8 (C-1), 86.6, 81.2, 79.3, 77.7, 75.8, 75.5, 75.1, 62.2, 21.1. HRMS (ESI) m/z calcd for C38H38O5SNa [M+Na]+ 629.2332, found 629.2324.
化合物７：化合物６（１９４ ｍｇ、０．３３ ｍｍｏｌ）をピリジン（３．２ ｍＬ）に溶解し、０℃で５ ｍｉｎ撹拌した。ＢｚＣｌ（７４ μＬ、０．６４ ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰを加えた。反応液を室温で４ ｈ撹拌した。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３、飽和食塩水で一回洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、５：１）、化合物７（２２４ ｍｇ、９８％）を得た。[α]22D = 9.1 (c 1.0, CH3Cl).1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.13 ‐ 7.85 (m, 2H, Ar), 7.87 ‐ 7.65 (m, 4H, Ar), 7.65 ‐ 7.50 (m, 1H, Ar), 7.52 ‐7.38 (m, 9H, Ar), 7.37 ‐ 7.29 (m, 3H, Ar), 7.28 ‐ 7.17 (m, 5H, Ar), 7.04 ‐ 6.66 (m, 2H, Ar), 5.08 (d-like, J = 11.0 Hz, 1H, ArCH), 5.01 (d-like, J = 11.0 Hz, 1H, ArCH), 4.97 (d-like, J = 10.3 Hz, 1H, ArCH), 4.90 (d-like, J = 10.8 Hz, 1H, ArCH), 4.77 (d-like, J = 10.3 Hz, 1H, ArCH), 4.68 (dd, J = 11.9, 1.6 Hz, 1H, H-6a), 4.64 (d-like, J = 10.8 Hz, 1H, ArCH), 4.64 (d, J = 9.7 Hz, 1H, H-1), 4.46 (dd, J = 11.9, 4.5 Hz, 1H, H-6b), 3.81 (dd, J= 8.8, 8.8 Hz, 1H, H-3), 3.70-3.63 (m, 2H, H-4, H-5), 3.52 (dd, J = 9.7, 8.8 Hz, 1H, H-2), 2.26 (s, 3H, SPhCH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.1, 138.1, 137.9, 137.6, 135.7, 133.3, 133.1, 133.1, 133.0, 130.0, 129.8, 129.6, 129.2, 128.5, 128.5, 128.4, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.7, 126.7, 126.1, 126.0, 125.9, 87.5 (C-1), 86.8, 80.8, 77.7, 76.1, 75.5, 75.3, 75.2, 63.6, 21.1. HRMS (ESI) m/zcalcd for C45H42O6SNa [M+Na]+ 733.2594, found 733.2589.
化合物８：化合物７（１００ ｍｇ、０．１４ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／Ｈ２Ｏ（ｖ／ｖ、１０：１、７ ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却し、ＴｆＯＨ（１．２ μＬ、０．０１４ ｍｍｏｌ）を加えた。反応を０℃で３ ｈ撹拌した。ＮＥｔ３を加えて反応を終了させた。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により精製し、中間生成物（７８．６ ｍｇ）を得た。中間生成物を乾燥ＤＣＭ（３．７５ ｍｌ）に溶解し、反応液を０℃に冷却し、Ｎ-フェニルトリフルオロアセチルクロリド（９７ μｌ、０．３６５ ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（５８ μｌ、０．３９ ｍｍｏｌ）を加えた。反応を室温で２ ｈ撹拌し、反応液を濃縮させて、カラムクロマトグラフィ-により精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、２０：１）、化合物８（９６ ｍｇ、８８％）を得た。[α]22D = 71.3 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.14 ‐ 8.00 (m, 5H), 7.94 ‐ 7.73 (m, 12H), 7.68 ‐ 7.07 (m, 37H), 6.87 ‐ 6.67 (m, 5H), 6.55 (bs, 1H, H-1α), 5.80 (bs, 1H, H-1β), 5.27 ‐ 4.80 (m, 13H, ArCH), 4.75 ‐ 4.55 (m, 8H, ArCH, H-6α, H-6β), 4.26 - 4.12 (m, 2H), 3.94 ‐ 3.63 (m, 8H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.2, 166.1, 143.5, 143.4, 137.7, 137.6, 137.5, 137.4, 135.8, 135.6, 133.4, 133.3, 133.2, 133.2, 133.1, 129.8, 129.7, 129.1, 128.8, 128.7, 128.6, 128.6, 128.6, 128.5, 128.4, 128.3, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 128.0, 127.8, 127.7, 127.7, 126.9, 126.7, 126.2, 126.2, 126.1, 126.1, 126.0, 126.0, 125.9, 125.3, 124.4, 124.2, 119.4, 119.3, 97.0 (C-1β), 93.0 (C-1α), 84.5, 81.6, 80.8, 79.5, 77.3, 76.1, 75.9, 75.5, 75.5, 75.3, 75.2, 73.9, 73.4, 71.7, 63.2, 63.0, 21.5. HRMS (ESI) m/z calcd for C46H40F3NO7Na [M+Na]+ 798.2649。
【0021】
実施例２糖ブロック２１の合成スキ-ムは図２に示される。
図２に示されるように、２,３-Ｏ-プロピリデン-４-Ｏ-ベンジルマンノ-スエチルチオグリコシド９を出発原料として、ｓｗｅｒｎ酸化を行い、対応するアルデヒド化合物１０を得た。次にウィッティヒにより６位の炭素鎖を延長させ、６位が脱酸素化されたオレフィン化合物１１を得た。オレフィン化合物をオスミウム酸カリウム（Ｋ２ＯｓＯ４）、フェリシアン化カリウム（Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６）及び炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）による共同作用下で、ジヒドロキシ化して、６,７-ジ-ヒドロキシ化合物１２を得た。７-ＯＨをジブチルスズオキシド（Ｂｕ２ＳｎＯ）で選択的にＮａｐ保護して、化合物１３を得た。６-ＯＨをＢｎで保護して、化合物１４を得た。８０％酢酸作用下でプロピリデンを除去して、化合物１５を得て、Ｎａｐで３-ＯＨを選択的に保護し、ヘプト-スブロック１６を得た。糖ブロック１６の２-ＯＨをＬｅｖで保護して、化合物１７を得た。化合物１７と５炭素リンカ-（ｌｉｎｋｅｒ）を反応させ、末端基の位置がリンカ-であるヘプト-ス１８を得た。７-ＮａｐをＤＤＱの作用下で離脱させ、化合物１９を得た。化合物の７-ＯＨをアセチルで保護して、化合物２０を得て、最後に、酢酸ヒドラジンの作用下でＬｅｖを除去して、ヘプト-スブロック２１を得た。
具体的な試験操作及びステップ
化合物１１：塩化オキサリル（０．３６ ｍＬ、４．２３ ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２．２ ｍＬ）に溶解し、溶液を-７８℃に冷却し、ＤＣＭ（３ ｍＬ）に溶解したＤＭＳＯ（０．６ ｍＬ、８．４６ ｍｍｏｌ）を塩化オキサリル溶液に滴下して、反応を-７８℃で０．５ ｈ撹拌した。化合物９（１．０ ｇ、２．８２ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１１．５ ｍＬ）に溶解したものを反応液に滴下した。反応液を-７８℃で１ ｈ撹拌し、ＮＥｔ３を加え、反応温度を４ ｈ以内に徐々に室温に戻した。原料が完全に反応された後、水を加えて反応を終了させた。反応液をＤＣＭで抽出し、有機相を水、飽和食塩水で順次洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。臭化メチルトリフェニルホスホニウムをＴＨＦに溶解し、溶液を０℃で撹拌し、ｎ-ＢｕＬｉ（４．７ ｍＬ、１１．３ ｍｍｏｌ、２．４ Ｍ ｉｎ ＴＨＦ）を反応フラスコに加えて、撹拌しながら３０ ｍｉｎ反応後、反応の温度を-７８℃に下げ、前のステップの粗生成物をＴＨＦ（５ ｍＬ）に溶解したものを反応液に滴下し、反応を徐々に室温に回復させ、さらに１２ ｈ反応させた。飽和ＮＨ４Ｃｌを加えて反応を終了させ、反応液を酢酸エチルで３回抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、２０：１）、化合物１１（５９２ ｍｇ、６０％）を得た。[α]22D = 129.25 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.39 ‐ 7.26 (m, 5H, Ar), 5.99 (ddd, J = 17.3, 10.6, 5.5 Hz, 1H, H-6), 5.58 (s, 1H, H-1), 5.41 (ddd, J = 17.3, 1.6, 1.6 Hz, 1H, H-7a), 5.25 (ddd, J = 10.6, 1.6, 1.6 Hz, 1H, H-7b), 4.85 (d-like, J = 11.6 Hz, 1H, ArCH), 4.63 (d-like, J= 11.6 Hz, 1H, ArCH), 4.42 (dddd, J = 10.0, 5.5, 1.6, 1.6 Hz, 1H, H-5), 4.29 (dd, J = 7.2, 5.7 Hz, 1H, H-3), 4.19 (d, J = 5.7 Hz, 1H, H-2), 3.38 (dd, J = 10.0, 7.2 Hz, 1H, H-4), 2.72 ‐ 2.39 (m, 2H, SCH2CH3), 1.49 (s, 3H, CH3), 1.36 (s, 3H, CH3), 1.28 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.2, 134.9, 128.2, 128.0, 127.6, 117.3, 109.4, 80.1 (C-1), 79.5, 78.5, 73.2, 69.5, 28.0, 26.4, 24.4, 14.6. HRMS (ESI) m/z calcd for C19H26O4SNa [M+Na]+373.1449, found 373.1447.
化合物１２：Ｋ２ＯｓＯ２（ＯＨ）４（１０３ ｍｇ、０．２８ ｍｍｏｌ）、Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６（１１．２ ｇ、３３．９ ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（５．２ ｇ、３７．３ ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ-ブタノ-ル（５６．５ ｍＬ）と水（５６．５ ｍＬ）を含有する反応フラスコに加えた。反応液を０℃に冷却し、化合物１１をトルエン（２２ ｍＬ）に溶解したものを反応フラスコに加え、反応を０℃で２９ ｈ撹拌し、原料が完全になくなった後、反応液を酢酸エチルで抽出し、有機相を１ Ｍ ＫＯＨで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１：１）、化合物１２（３．２ ｇ、７４％）を得た。[α]22D = 173.6 (c 1.0, CH3Cl).1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.43 ‐ 7.28 (m, 5H, Ar), 5.55 (s, 1H, H-1), 4.98 (d-like, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH), 4.64 (d-like, J= 11.4 Hz, 1H, ArCH), 4.32 (dd, J= 7.0, 5.7 Hz, 1H, H-3), 4.20 (d, J = 5.7 Hz, 1H, H-2), 4.06 (dd, J= 9.9, 6.3 Hz, 1H, H-5), 3.88 (dt, J = 6.3, 4.2 Hz, 1H, H-6), 3.69 (dd, J= 9.9, 7.0 Hz, 1H, H-4), 3.65 (m, 2H, H-7a, H-7b), 3.54 (bs, 1H, OH), 2.80 ‐ 2.47 (m, 2H, SCH2CH3), 2.27 (bs, 1H, OH), 1.54 (s, 3H, CH3), 1.37 (s, 3H, CH3), 1.29 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 137.2, 128.6, 128.3, 128.2, 109.6, 79.6 (C-1), 79.5, 78.3, 76.5, 73.2, 72.8, 67.7, 62.8, 28.1, 26.3, 24.1, 14.1. HRMS (ESI) m/zcalcd for C19H28O6SNa [M+Na]+407.1499, 407.1491.
化合物１３：化合物１２（１１．２ ｍｇ、２９．３ ｍｍｏｌ）をトルエン（１４６ ｍＬ）に溶解し、反応フラスコにＢｕ２ＳｎＯ （１０．９ ｇ、４４ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を４ ｈ加熱還流した。半分のトルエンを蒸発させて、反応液を室温に冷却した。ＣｓＦ（６．７ ｇ、４４ ｍｍｏｌ）、２-ＮａｐＢｒ（９．７ ｇ、４４ ｍｍｏｌ）、ＣＨ３ＣＮ（７３．３ ｍＬ）を加えた。反応液を７０℃で一晩反応させた。反応液を珪藻土でろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、３：１）、化合物１２（３．２ ｇ、７４％）を得た。[α]22D = 78.4 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.83 ‐ 7.75 (m, 4H, Ar), 7.47 ‐ 7.33 (m, 3H, Ar), 7.33 ‐ 7.26 (m, 5H, Ar), 5.51 (s, 1H, H-1), 4.91 (d-like, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH), 4.70 (d-like, J = 12.0 Hz, 1H, ArCH), 4.65 (d-like, J = 12.0 Hz, 1H, ArCH), 4.59 (d-like, J = 11.3 Hz, 1H, ArCH), 4.30 (dd, J = 6.6, 5.8 Hz, 1H, H-3), 4.17 (dd, J = 5.8, 1H, H-2), 4.12 (m, 1H, H-6), 4.09 (dd, J = 9.6, 4.8 Hz, 1H, H-5), 3.70 (dd, J = 9.6, 6.6 Hz, 1H, H-4), 3.61 (m, 2H, H-7a, H-7b), 3.02 (d, J = 2.9 Hz, 1H, OH), 2.70 ‐ 2.37 (m, 2H, SCH2CH3), 1.51 (s, 3H, CH3), 1.36 (s, 3H, CH3), 1.21 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 137.7, 135.7, 133.3, 133.0, 128.4, 128.4, 128.1, 128.1, 127.9, 127.8, 127.7, 126.4, 126.0, 125.8, 125.7, 109.5, 79.7 (C-1), 78.6, 78.0, 76.7, 76.5, 73.6, 72.8, 72.3, 71.0, 68.5, 28.0, 26.4, 24.1, 14.2. HRMS (ESI) m/z calcd for C30H36O6SNa [M+Na]+ 547.2125, found 547.2135.
化合物１４：化合物１３（１０．３ ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１．４ ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却してＮａＨ（１．５６ ｇ、３９．２ ｍｍｏｌ）を加え、次にＢｎＢｒ（４．７ ｍＬ、３９．２ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で３．５ ｈ撹拌した。反応物がなくなった後、溶液を０℃に冷却し、水を滴下して反応をクエンチした。反応液をＤＣＭで３回抽出し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１０：１）、化合物１４（１１．０ ｇ、９１％）を得た。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.83 ‐ 7.69 (m, 4H, Ar), 7.49 ‐ 7.24 (m, 13H, Ar), 5.55 (s, 1H, H-1), 4.82 (d-like, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH), 4.74 (d-like, J= 11.8 Hz, 1H, ArCH), 4.69 (d-like, J= 11.8 Hz, 1H, ArCH), 4.65 (d-like, J= 12.3 Hz, 1H, ArCH), 4.59 (d-like, J= 12.3 Hz, 1H, ArCH), 4.53 (d-like, J= 11.4 Hz, 1H, ArCH), 4.33 ‐ 4.23 (m, 2H, H-3, H-5), 4.14 (d, J = 5.6 Hz, 1H, H-2), 4.08 (ddd, J = 5.8, 5.3, 1.5 Hz, 1H), 3.75 ‐ 3.72 (m, 2H, H-7a, H-7b), 3.70 (dd, J = 10.3, 6.9 Hz, 1H, H-4), 2.77 ‐ 2.41 (m, 2H, SCH2CH3), 1.41 (s, 3H, CH3), 1.34 (s, 3H, CH3), 1.22 (t, J= 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.7, 138.2, 136.0, 133.3, 132.9, 128.2, 128.2, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.6, 127.5, 127.4, 126.2, 126.0, 125.7, 125.6, 109.3, 79.5 (C-1), 79.0, 77.8, 76.4, 76.3, 73.2, 72.7, 72.5, 70.5, 69.3, 28.0, 26.5, 23.8, 14.3. HRMS (ESI) m/z calcd for C37H42O6SNa [M+Na]+ 637.2594, found 637.2587.
化合物１５：化合物１４を８０％酢酸水溶液に溶解し、反応液を６０℃で１２ ｈ撹拌した。ＴＬＣ板により原料が完全に反応されたことを示した反応液が濃縮した後、ＤＣＭで希釈して、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、３：１）、化合物１６（９．８ ｇ、９６％）を得た。[α]22D = 71.5 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.92 ‐ 7.70 (m, 4H, Ar), 7.50 ‐ 7.27 (m, 8H, Ar), 7.25 ‐ 7.15 (m, 5H, Ar), 5.26 (d, J = 1.9 Hz, 1H, H-1), 4.76 (d-like, J = 11.9 Hz, 1H, ArCH), 4.71 (d-like, J = 11.9 Hz, 1H, ArCH), 4.70 ‐ 4.61 (m, 4H, ArCH), 4.30 (dd, J = 9.4, 1.6 Hz, 1H, H-5), 4.03 (ddd, J = 6.8, 5.2, 1.6 Hz, 1H, H-6), 3.94 (dd, J= 3.4, 1.9 Hz, 1H, H-2), 3.89 (dd, J = 8.6, 3.3 Hz, 1H, H-3), 3.84 (dd, J= 10.2, 5.2 Hz, 1H, H-7a), 3.84 (dd, J= 9.4, 8.6 Hz, 1H, H-4), 3.74 (dd, J= 10.2, 6.8 Hz, 1H, H-7b), 2.75 ‐ 2.49 (m, 2H, SCH2CH3), 2.45 (bs, 1H, OH), 2.23 (bs, 1H, OH), 1.24 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.7, 138.3, 135.8, 133.4, 133.1, 128.7, 128.4, 128.3, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 126.6, 126.2, 126.0, 125.9, 83.5 (C-1), 77.8, 76.5, 74.4, 73.6, 72.7, 72.6, 72.2, 71.7, 70.6, 24.8, 14.9. HRMS (ESI) m/z calcd for C34H38O6SNa [M+Na]+ 597.2281, found 597.2278.
化合物１６：化合物１５（５０ ｍｇ、８７ ｕｍｏｌ）をトルエン（０．５８ ｍＬ）に溶解し、反応フラスコにＢｕ２ＳｎＯ （２４．９ ｍｇ、０．１ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を３ ｈ加熱還流した。反応液を室温に冷却した。ＣｓＦ（１５．２ ｍｇ、０．１ ｍｍｏｌ）、ＴＢＡＢ （３２．２ ｍｇ、０．１ ｍｍｏｌ）、ＢｎＢｒ（１１．９ 化合物μＬ， ４４ ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を３時間加熱還流した。反応液を珪藻土でろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、３：１）、化合物１６（４３ ｍｇ、７４％）を得た。[α]22D = 87.2 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.85 ‐ 7.67 (m, 4H), 7.49 ‐ 7.35 (m, 5H), 7.34 ‐ 7.07 (m, 13H), 5.34 (d, J = 1.5 Hz, 1H, H-1), 4.96 ‐ 4.53 (m, 8H, ArCH), 4.32 (dd, J = 9.7, 1.3 Hz, 1H, H-5), 4.06 (dd, J = 3.4, 1.8 Hz, 1H, H-2), 4.04 ‐ 4.01 (m, 1H, H-6), 3.92 (dd, J = 9.7, 9.1 Hz, 1H, H-4), 3.85 (dd, J = 9.1, 3.2 Hz, 1H, H-3), 3.80 (dd, J = 10.3, 4.7 Hz, 1H, H-7a), 3.74 (dd, J = 10.3, 6.9 Hz, 1H, 7H-b), 2.77 ‐ 2.26 (m, 3H, SCH2CH3, OH), 1.24 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.7, 138.7, 138.3, 138.2, 137.5, 137.5, 135.9, 135.9, 133.3, 132.9, 128.6, 128.6, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.6, 127.6, 127.5, 127.4, 127.4, 126.2, 126.0, 126.0, 125.7, 125.7, 83.0 (C-1), 80.9, 78.0, 74.7, 74.6, 73.3, 72.3, 72.1, 71.8, 70.8, 69.6, 69.6, 24.6, 14.7. HRMS (ESI) m/z calcd for C41H44O6SNa [M+Na]+ 687.2751, found 687.2753.
化合物１７：化合物１６（７２８ ｍｇ、１．１ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２４ ｍＬ）に溶解し、ＬｅｖＯＨ（１９２ ｍｇ、１．６５ ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（３４０ ｍｇ、１．６５ ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ-ジメチルピリジン（ＤＭＡＰ）（２０２ ｍｇ、１．６５ ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で２ ｈ撹拌した。濃縮させてカラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、３：１）、化合物１７（８３９ ｍｇ、１００％）を得た。[α]22D = 54.8 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.85 ‐ 7.71 (m, 4H, Ar), 7.50 ‐ 7.36 (m, 5H, Ar), 7.35 ‐ 7.22 (m, 11H, Ar), 7.15 (m, 2H, Ar), 5.40 (dd, J = 2.9, 1.7 Hz, 1H, H-2), 5.25 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-1), 4.85 ‐ 4.57 (m, 8H, ArCH), 4.31 (d, J = 9.1 Hz, 1H, H-5), 4.04 (ddd, J = 6.9, 4.6, 1.2 Hz, 1H, H-6), 3.95 (dd, J = 9.1, 9.1 Hz, 1H, H-4), 3.91 (dd, J = 9.1 , 2.8 Hz, 1H, H-3), 3.79 (dd, J= 10.4, 4.6 Hz, 1H, H-7a), 3.73 (dd, J = 10.4, 6.9 Hz, 1H, H-7b), 2.82 ‐ 2.35 (m, 6H, SCH2CH3, C(O)CH2CH2(O)C), 2.09 (s, 3H, CH3), 1.24 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 206.2, 171.9, 138.7, 138.3, 137.6, 135.9, 133.2, 132.9, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.8, 127.8, 127.6, 127.5, 127.5, 127.4, 126.2, 126.1, 126.0, 125.7, 125.6, 82.0 (C-1), 78.9, 78.4, 76.7, 74.8, 74.5, 73.3, 72.3, 72.2, 71.6, 71.0, 70.4, 37.9, 29.7, 28.0, 25.3, 14.8. HRMS (ESI) m/z calcd for C46H50O8SNa [M+Na]+ 785.3119, found 785.3106.
化合物１８：化合物１７（５９５ ｍｇ、０．７８ ｍｍｏｌ）とＮ-ベンジル-Ｎ-ベンジルオキシカルボニル-５-アミノ-アミルアルコ-ル（５１０ ｍｇ、０．７８ ｍｍｏｌ）をトルエンで３回共同蒸発し、混合物に乾燥ＤＣＭ（５ ｍＬ）、４Å分子篩を加えた。混合液を室温で半時間撹拌した後、０℃に冷却し、ＮＩＳ（２１１ ｍｇ、０．９４ ｍｍｏｌ）とＴＭＳＯＴｆ（１４ μＬ、７８ ｕｍｍｏｌ）を加え、反応液を０℃で３ ｈ撹拌した。ＮＥｔ３を加えて反応を終了させた。ろ過して、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で順次に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、２：１）、化合物１８（５６２ ｍｇ、７２％）を得た。[α]22D = 11.5 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.90 ‐ 7.62 (m, 4H, Ar), 7.53 ‐ 7.29 (m, 21H, Ar), 7.28 ‐ 7.11 (m, 7H, Ar), 5.34 (d, J = 3.1 Hz, 1H, H-2), 5.20 (d, J = 11.0 Hz, 2H, COOCH2Ph), 4.87 (d-like, J = 10.6 Hz, 1H, ArCH), 4.83 -4.74 (m, 3H, H-1, ArCH), 4.72 ‐ 4.60 (m, 7H, ArCH), 4.08 (dd, J = 6.7, 4.6 Hz, 1H, H-5), 3.99 -3.90 (m, 3H, H-3, H-4, H-6), 3.83 (dd, J = 10.4, 4.6 Hz, 1H, H-7a), 3.78 (dd, J = 10.4, 6.7 Hz, 1H, H-7b), 3.63 (m, 1H, OCH2), 3.37 ‐ 3.16 (m, 3H, OCH2, NCH2 ), 2.75 ‐ 2.51 (m, 4H, C(O)CH2CH2(O)C ), 2.11 (s, 1H, CH3), 1.66 ‐ 1.45 (m, 4H, CH2CH2), 1.31 ‐ 1.11 (m, 2H, CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 206.3, 172.0, 138.8, 138.3, 138.0, 135.9, 133.3, 132.9, 128.6, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.1, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.7, 127.6, 127.6, 127.4, 127.2, 126.2, 126.1, 125.8, 125.6, 97.4 (C-1), 78.7, 78.3, 75.0, 74.4, 73.4, 72.5, 72.0, 71.7, 70.9, 68.8, 67.6, 67.2, 50.5, 50.2, 47.1, 46.1, 37.9, 29.8, 29.1, 28.1, 28.0, 27.5, 23.4. HRMS (ESI) m/z calcd for C64H69NO11Na [M+Na]+1050.4763, found 1050.4736.
化合物１９：化合物１８（４２０ ｍｇ、０．４１ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／Ｈ２Ｏ（９：１、ｖ／ｖ、１５．２ ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、反応液を０℃に冷却し、２，３-ジクロロ-５，６-ジシアノ-１，４-ベンゾキノン（ＤＤＱ）（１８６ ｍｇ、０．８２ ｍｍｏｌ）を加え、反応温度を室温に上昇して、３時間反応させ続けた。反応液をＤＣＭで希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１：１）、化合物１９（２７５ ｍｇ、７６％）を得た。[α]22D = 13.8 (c 0.5, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.48 ‐ 7.18 (m, 25H, Ar), 5.35 (s, 1H, H-2), 5.20 (d, J = 15.5 Hz, 2H, COOCH2Ph), 4.93 (d-like, J = 10.7 Hz, 1H, ArCH), 4.78 (bs, 2H, H-1, ArCH), 4.74 ‐ 4.46 (m, 6H, ArCH), 4.02 ‐ 3.90 (m, 2H, H-6, H-5), 3.84 (m, 3H, H-3, H-4, H-7a), 3.65 (m, 3H, H-7b, OCH2), 3.45 ‐ 3.14 (m, 3H, OCH2, NCH2), 2.87 ‐ 2.61 (m, 4H, C(O)CH2CH2(O)C), 2.17 (s, 3H, CH3), 1.74 ‐ 1.46 (m, 4H, CH2CH2), 1.32 ‐ 1.17 (m, 2H, CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 172.0, 137.9, 137.8, 128.6, 128.5, 128.4, 128.4, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.3, 127.2, 97.3 (C-1), 78.6, 75.0, 74.2, 72.0, 71.9, 71.7, 68.7, 67.9, 67.3, 50.5, 50.2, 47.1, 46.1, 38.1, 29.9, 29.1, 28.2, 28.0, 27.5, 23.4. HRMS (ESI) m/z calcd for C53H61NO11Na [M+Na]+ 910.4137, found 910.4117.
化合物２０：化合物１９（２１０ ｍｇ、０．２４ ｍｍｏｌ）をピリジン（２．３ ｍＬ）に溶解し、０℃で酢酸無水物（０．４５ ｍＬ、４．７４ ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰを加え、反応液を室温に回復させて１２ ｈ撹拌し、濃縮させてカラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、３：１）、化合物２０（２０３ ｍｇ、９２％）を得た。[α]22D = 20.4 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.51 ‐ 7.04 (m, 25H, Ar), 5.35 (d, J = 3.1 Hz, 1H, H-2), 5.21 (d, J= 14.5 Hz, 1H, COOCH2Ph), 4.93 (d-like, J = 10.7 Hz, 1H), 4.78 ‐ 4.71 (m, 3H, H-1, ArCH), 4.67 ‐ 4.47 (m, 5H, ArCH), 4.34 (dd, J = 12.1, 3.5 Hz, 1H, H-7a), 4.27 (dd, J = 12.0, 7.8 Hz, 1H, H-7b), 4.02 (dd, J = 8.9, 4.0 Hz, 1H, H-5), 3.95 (dd, J = 7.8, 3.5 Hz, 1H, H-6), 3.92 (m, 1H, H-3), 3.83 (dd, J = 8.9, 8.9 Hz, 1H, H-4), 3.64 (m, 1H, OCH2), 3.44 ‐ 3.12 (m, 3H, OCH2, NCH2), 2.84 ‐ 2.64 (m, 4H, C(O)CH2CH2(O)C), 2.19 (s, 3H, CH3), 2.02 (s, 3H, OAc), 1.62 ‐1.47 (m, 4H, CH2CH2), 1.38 ‐ 1.18 (m, 2H, CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 206.3, 172.0, 170.8, 138.3, 138.1, 137.9, 137.9, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.6, 127.4, 127.3, 127.2, 97.4 (C-1), 78.6, 76.6, 75.0, 74.1, 72.1, 71.7, 71.7, 71.7, 68.6, 67.7, 67.2, 64.6, 50.6, 50.2, 47.1, 46.1, 38.0, 29.9, 29.8, 29.2, 28.2, 27.9, 27.5, 23.4, 23.4, 21.0. HRMS (ESI) m/z calcd for C55H63NO12Na [M+Na]+ 952.4242, found 952.4233.
化合物２１：化合物２０（１９０ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０：１、ｖ／ｖ、４ ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、酢酸ヒドラジン（２７．６ ｍｇ、０．３ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で２ ｈ撹拌して、反応液をＮａＨＣＯ３で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４乾燥させた。濃縮させて、カラムクロマトグラフィ-により精製分離し（石油エ-テル／酢酸エチル、３：１）、化合物２１（１５８ ｍｇ、９５％）を得た。[α]22D = 34.5 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.45 ‐ 7.13 (m, 25H), 5.18 (d, J= 14.0 Hz, 2H, COOCH2Ph), 4.87 (d-like, J = 10.8 Hz, 1H, ArCH), 4.81 (m, 1H, H-1), 4.76 ‐ 4.45 (m, 7H, ArCH), 4.31 (dd, J = 12.1, 3.8 Hz, 1H, H-7a), 4.25 (dd, J = 12.1, 7.6 Hz, 1H, H-7b), 4.00 (s, 1H, H-2), 3.94 ‐ 3.85 (m, 3H, H-3, H-5, H-6), 3.82 (dd, J = 9.6, 8.4 Hz, 1H, H-4), 3.69 ‐ 3.56 (m, 1H, OCH2), 3.37 ‐ 3.16 (m, 3H, OCH2, NCH2), 2.42 (bs, 1H, OH), 1.97 (s, 3H, OAc), 1.63 ‐ 1.64 (m, 4H, CH2CH2), 1.37 ‐ 1.13 (m, 2H, CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.8, 138.3, 138.1, 137.9, 137.8, 128.6, 128.6, 128.5, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.9, 127.7, 127.6, 127.3, 127.2, 98.9 (C-1), 80.8, 76.4, 75.0, 74.1, 72.1, 72.0, 71.4, 68.1, 67.5, 67.2, 64.4, 50.5, 50.2, 47.1, 46.1, 29.1, 27.9, 27.5, 23.4, 21.0. HRMS (ESI) m/z calcd for C50H57NO10Na [M+Na]+854.3875, found 854.3863.
【0022】
実施例３糖ブロック２８の合成スキ-ムは図３に示される。
図３に示されるように、化合物２２を出発原料として、２-ＯＨをＢｚで保護し、化合物２３を得た。化合物２３について８０％酢酸作用下でプロピリデンを開いて、化合物２４を得た。化合物２４の３-ＯＨをＢｎで選択的に保護して、化合物２５を得た。化合物２５の４-ＯＨをＬｅｖで保護し、化合物２６を得た。チオグリコシド２６をＮＢＳ条件下で加水分解し、末端基の位置のＯＨを露出させ、末端基の位置の-ＯＨとｔ-ブチルジメチルクロロシラン（ＴＢＳＣｌ）を反応させて、末端基がＴＢＳで全保護されたガラクト-ス２７を得た。酢酸ヒドラジンの作用下でＬｅｖを除去してガラクト-スブロック２８を得た。
具体的な試験操作及びステップ
化合物２３：化合物２２（４．２ ｇ、１１．８ ｍｍｏｌ）をピリジン（５９．５ ｍＬ）に溶解し、０℃で５ ｍｉｎ撹拌した。ＢｚＣｌ（２．７８ ｍＬ、２４ ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰを加えた。反応液を室温で４ ｈ撹拌した。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３、飽和食塩水で一回洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１０：１）、化合物２３（５．２ ｇ、９６％）を得た。[α]22D = 22.9 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.10 ‐ 7.94 (m, 2H, Ar), 7.60 ‐ 7.51 (m, 1H, Ar), 7.45 ‐ 7.42 (m, 2H, Ar ), 7.38 ‐ 7.27 (m, 5H, Ar), 5.28 (dd, J = 9.9, 6.8 Hz, 1H, H-2), 4.66 (d-like, J = 12.0 Hz, 1H, ArCH), 4.58 (d-like, J = 12.0 Hz, 1H, ArCH), 4.53 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.34 (dd, J = 6.8, 5.4 Hz, 1H, H-3), 4.30 (dd, J = 5.4, 2.0 Hz, 1H, H-4), 4.03 (dt, J = 6.1, 2.0 Hz, 1H, H-5), 3.83 (d, J = 6.1 Hz, 2H, H-6a, H-6b), 2.89 ‐ 2.57 (m, 2H, SCH2CH3), 1.61 (s, 3H, CH3), 1.36 (s, 3H, CH3), 1.25 (t, J= 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 165.5, 138.1, 133.1, 129.9, 129.8, 128.4, 128.3, 127.7, 127.7, 110.5, 82.9 (C-1), 77.1, 75.9, 73.9, 73.6, 72.2, 69.4, 27.8, 26.4, 24.3, 14.9. HRMS (ESI) m/zcalcd for C25H31O6SN [M+NH4]+476.2101, found 476.2104.
化合物２４：化合物２３（１．２ ｇ、２．６ ｍｍｏｌ）を８０％酢酸水溶液（２５ ｍＬ）に溶解し、反応液を６０℃で５ ｈ撹拌した。ＴＬＣ板により原料が完全に反応されたことを示した。反応液濃縮後、ＤＣＭで溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して濃縮させて、カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１：１）、化合物２４（０．９８ ｇ、９０％）を得た。[α]22D = -19.4 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.11 ‐ 7.90 (m, 2H, Ar), 7.63 ‐ 7.51 (m, 1H, Ar), 7.49 ‐ 7.41 (m, 2H, Ar), 7.39 ‐7.28 (m, 5H, Ar), 5.30 (dd, J = 9.6 , 9.6 Hz, 1H, H-2), 4.60 (d, J= 1.8 Hz, 2H, ArCH), 4.56 (d, J= 9.6 Hz, 1H, H-1), 4.13 (ddd, J = 3.6, 3.6, 1.1 Hz, 1H, H-4), 3.82 (m, 2H, H-6a, H-6b), 3.78 (dd, J = 9.6, 3.6 Hz, 1H, H-3), 3.71 (dt, J= 5.3, 1.1 Hz, 1H, H-5), 3.13 (d, J = 7.9 Hz, 1H, OH), 3.03 (d, J = 3.6 Hz, 1H, OH), 2.86 ‐ 2.63 (m, 2H, SCH2CH3), 1.26 (t, J= 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.8, 137.7, 133.3, 130.0, 129.7, 128.5, 128.4, 127.9, 127.8, 83.3 (C-1), 77.2, 73.9, 73.8, 72.3, 69.9, 69.6, 23.9, 15.0. HRMS (ESI) m/z calcd for C22H26O6SNa [M+Na]+441.1342, found 441.1347.
化合物２５：化合物２４（４．２ ｇ、１０．１ ｍｍｏｌ）をトルエン（６０ ｍＬ）に溶解し、反応フラスコにＢｕ２ＳｎＯ （３．８ ｇ、１５．２ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を２ ｈ加熱還流した。反応液を室温に冷却した。ＴＢＡＩ（５．６ ｇ、１５．２ ｍｍｏｌ）、ＢｎＢｒ（１．８ ｇ、１５．２ ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を６５℃で一晩反応させた。反応液を珪藻土でろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、６：１）、化合物２５（４．５ ｇ、８７％）を得た。[α]22D = 19.4 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.12 ‐ 7.89 (m, 2H, Ar), 7.64 ‐ 7.53 (m, 1H, Ar), 7.45 (dd, J = 8.3, 7.2 Hz, 2H, Ar), 7.40 ‐ 7.28 (m, 5H, Ar), 7.23 ‐ 7.12 (m, 5H, Ar), 5.53 (dd, J= 9.7, 9.7 Hz, 1H, H-2), 4.67 (d-like, J = 12.3 Hz, 1H, ArCH), 4.60 (s, 2H, ArCH), 4.53 (d-like, J = 12.3 Hz, 1H, ArCH), 4.48 (d, J = 9.7 Hz, 1H, H-1), 4.19 (ddd, J = 3.1, 1.5, 1.5 Hz, 1H, H-4), 3.83 (dd, J = 9.8, 6.4 Hz, 1H, H-6a), 3.77 (dd, J = 9.8, 5.7 Hz, 1H, H-6b), 3.67 ‐ 3.69 (m, 1H, H-5), 3.65 (dd, J = 9.7, 3.1 Hz, 1H, H-3), 2.81 ‐ 2.65 (m, 2H, SCH2CH3), 2.64 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 1.22 (t, J = 7.5 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 165.4, 137.9, 137.1, 133.1, 130.0, 129.9, 128.4, 128.4, 128.4, 128.3, 128.0, 127.8, 127.8, 83.5 (C-1), 79.3, 73.8, 71.3, 69.6, 69.0, 66.4, 23.6, 14.9. HRMS (ESI) m/z calcd for C29H32O6SNa [M+Na]+531.1811, found 531.1819.
化合物２６：化合物２５（４．０ ｇ、７．９ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５０ ｍＬ）に溶解し、ＬｅｖＯＨ（１．３６ ｇ、１１．７ ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２．４１ ｇ、１１．７ ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ-ジメチルピリジン（ＤＭＡＰ）（１．４３ ｍｇ、１１．７ ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で２ ｈ撹拌した。濃縮させて、カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、４：１）、化合物２６（３．９ ｇ、８２％）を得た。[α]22D = 42.1 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.07 ‐ 7.80 (m, 2H, Ar), 7.64 ‐ 7.55 (m, 1H, Ar), 7.50 ‐ 7.41 (m, 2H, Ar), 7.41 ‐ 7.25 (m, 5H, Ar), 7.22 ‐ 7.04 (m, 5H, Ar), 5.72 (dd, J = 3.4, 1.1 Hz, 1H, H-4), 5.41 (dd, J = 9.8, 9.8 Hz, 1H, H-2), 4.63 (d-like, J = 12.7 Hz, 1H, ArCH), 4.54 -4.51 (m, 3H, H-1, ArCH), 4.41 (d-like, J = 12.7 Hz, 1H, ArCH), 3.80 (ddd, J = 7.0, 5.6, 1.1 Hz, 1H, H-5), 3.66 (dd, J = 9.4, 5.6 Hz, 1H, H-6a), 3.65 (dd, J= 9.4, 3.0 Hz, 1H, H-6b), 3.56 (dd, J = 9.4, 7.0 Hz, 1H, H-6b), 2.91 ‐ 2.57 (m, 6H, SCH2CH3,C(O)CH2CH2(O)C), 2.18 (s, 3H, CH3), 1.22 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 206.4, 172.1, 165.4, 137.7, 137.3, 133.2, 130.0, 129.8, 128.5, 128.3, 128.3, 128.2, 128.0, 127.9, 127.7, 83.9 (C-1), 77.2, 76.2, 73.8, 70.7, 69.5, 68.0, 66.5, 38.1, 29.9, 28.1, 24.2, 14.9. HRMS (ESI) m/zcalcd for C34H38O8SNa [M+Na]+629.2180, found 629.2181.
化合物２７：化合物２６（３１７ ｍｇ、０．５２ ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（ｖ／ｖ、１：１、５ｍＬ）に溶解し、ＮＢＳ（２２３ ｍｇ、１．２５ ｍｍｏｌ）を加えた。反応を室温で５ ｈ撹拌した。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により精製し、中間生成物（２２５ ｍｇ）を得た。中間生成物を乾燥ＤＣＭ（２．５ ｍｌ）に溶解し、反応液を０℃に冷却して、イミダゾ-ル（７５ ｍｇ、１．１１ ｍｍｏｌ）及びＴＢＳＣｌ（８４ ｍｇ、０．５６ ｍｍｏｌ）を加えた。反応を室温で１２ ｈ撹拌し、反応液を飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチし、混合溶液をＤＣＭで３回抽出し、有機相を水洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させ、カラムクロマトグラフィ-により精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、２０：１）、化合物２７（２４８ ｍｇ、７１％）を得た。[α]22D = 44.8 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.02 ‐ 7.80 (m, 2H, Ar), 7.64 ‐ 7.50 (m, 1H, Ar), 7.45 (t, J = 7.7 Hz, 2H, Ar), 7.39 ‐ 7.27 (m, 5H, Ar), 7.20 ‐ 7.04 (m, 5H, Ar), 5.65 (dd, J = 3.2, 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.34 (dd, J = 10.1, 7.7 Hz, 1H, H-2), 4.71 (d, J= 7.7 Hz, 1H, H-1), 4.63 (d-like, J = 12.9 Hz, 1H, ArCH), 4.54 (s, 2H, ArCH), 4.40 (d-like, J = 12.9 Hz, 1H, ArCH), 3.76 (t, J = 6.2 Hz, 1H, H-5), 3.68 ‐ 3.61 (m, 2H, H-6a, H-6b), 3.59 (dd, J = 10.1, 3.2 Hz, 1H, H-3), 2.88 ‐ 2.64 (m, 4H, C(O)CH2CH2(O)C), 2.19 (s, 3H, CH3), 0.75 (s, 9H, OTBS), 0.06 (s, 3H, OTBS), -0.02 (s, 3H, OTBS); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 206.6, 172.1, 165.3, 137.8, 137.5, 133.0, 130.1, 129.8, 128.5, 128.3, 128.2, 128.1, 127.9, 127.8, 127.6, 96.3 (C-1), 76.1, 73.8, 73.1, 72.5, 70.6, 68.2, 66.4, 38.1, 29.9, 28.2, 25.4, 17.8, -4.2, -5.3. HRMS (ESI) m/zcalcd for C34H38O9SiNa [M+Na]+699.2960, found 699.2957.
化合物２８：化合物２７（２０３ ｍｇ、０．３０ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０：１、ｖ／ｖ、３．５ ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、酢酸ヒドラジン（４１．４ ｍｇ、０．４５ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で４ ｈ撹拌し、反応液をＮａＨＣＯ３で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮させて、カラムクロマトグラフィ-により精製分離し（石油エ-テル／酢酸エチル、６：１）、化合物２８を得た。[α]22D = 18.6(c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.00 (m, 2H, Ar), 7.63 ‐ 7.53 (m, 1H, Ar), 7.49 ‐7.40 (m, 2H, Ar), 7.39 ‐ 7.26 (m, 5H, Ar), 7.25 ‐ 7.09 (m, 5H, Ar), 5.42 (dd, J = 9.8, 7.6 Hz, 1H, H-2), 4.71 (d, J = 7.7 Hz, 1H, H-1), 4.69 (d-like, J = 12.4 Hz, 1H, ArCH), 4.61 (s, 2H, ArCH), 4.52 (d-like, J = 12.5 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 3.4, 1.4 Hz, 1H, H-4), 3.87 (dd, J = 9.8, 6.0 Hz, 1H, H-6a), 3.75 (dd, J= 9.8, 6.0 Hz, 1H, H-6b), 3.65 (t, J = 6.0 Hz, 1H, H-5), 3.59 (dd, J= 9.8, 3.3 Hz, 1H, H-3), 2.60 (t, J = 1.6 Hz, 1H, OH), 0.74 (s, 9H, OTBS), 0.07 (s, 3H, OTBS), -0.01 (s, 3H, OTBS). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 165.3, 138.1, 137.2, 132.9, 130.2, 129.8, 128.5, 128.4, 128.3, 127.9, 127.9, 127.8, 96.3 (C-1), 78.1, 73.8, 73.6, 73.2, 71.1, 69.2, 66.2, 25.5, 17.8, -4.2, -5.3. HRMS (ESI) m/z calcd for C33H42O7SiNa [M+Na]+601.2592, found 601.2586.
【0023】
実施例４グリコシル化反応の条件及び脱アシル保護剤の条件：
本発明では、特に説明しない場合、グリコシル化反応の条件（反応条件４．１）は、以下のとおりである。グリコシル供与体と受容体をトルエンにて３回共同蒸発した。乾燥ＤＣＭ又はＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ（ｖ／ｖ、１：２）を加えて、反応濃度を０．０２-０．０５ Ｍとし、活性化させた３Å又は４Å分子篩を加えた。グリコシル供与体の１０当量に相当するチオフェンを加え、混合液を室温で３０ ｍｉｎ撹拌した後、０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆを促進剤として加えて、３-５ ｈ反応させた。反応終了後、ピリジンで反応を終了させた。反応液をろ過して、用ＤＣＭで希釈した後、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により精製分離した。
本発明では、特に説明しない場合、アルカリ性条件での脱アシル条件（反応条件４．２）は、以下のとおりである。出発原料をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（ｖ／ｖ、１：１）に溶解して、反応濃度を０．０５ Ｍとし、０．５当量のＭｅＯＮａ（５Ｍ ｉｎ ＭｅＯＨ）を加えた。反応温度を室温とし、ＴＬＣ板により反応が終了したことを示したとき、Ａｍｅｒｌｉｔｅ ＩＲ １２０ （Ｈ＋） 樹脂で反応液を、ｐＨが７となるまで中和した。ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィ-により精製した。
【0024】
実施例５三炭糖供与体３２の組み立てスキ-ムは図４に示される。
具体的な試験操作及びステップ
化合物２９：反応条件４．１に従って、グリコシル供与体８（３３５ ｍｇ、０．４３ ｍｍｏｌ）とグリコシル受容体２８（３０１ ｍｇ、０．５２ ｍｍｏｌ）を反応させて、化合物２９（３６１ ｍｇ、７２％）を得た。[α]22D = 93.1 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.09 ‐ 7.94 (m, 4H, Ar), 7.85 ‐ 7.67 (m, 4H, Ar), 7.63 ‐ 7.11 (m, 28H), 5.55 (dd, J = 10.2, 7.5 Hz, 1H, H-2b), 5.11 (d, J = 3.8 Hz, 3H, H-1a, 2 × ArCH), 4.97 (t-like, J= 11.3 Hz, 2H, ArCH), 4.77 (d, J= 7.5 Hz, 1H, H-1b), 4.78 ‐ 4.73 (m, 2H, ArCH), 4.68 (d-like, J = 11.2 Hz, 1H, ArCH), 4.62 ‐ 4.50 (m, 2H, H-5a, ArCH), 4.39 (dd, J = 9.4, 9.4 Hz, 1H, H-3a), 4.33 ‐4.18 (m, 5H, H-6a, H-6a’, H-4b, 2 × ArCH), 4.10 ‐ 3.99 (m, 1H, H-6b), 3.79 (t, J = 9.4 Hz, 1H, H-4a), 3.63 (dd, J = 10.1, 3.9 Hz, 2H, H-2a), 3.60 ‐ 3.51 (m, 3H, H-6b’, H-3b, H-5b), 0.80 (s, 9H, OTBS), 0.22 (s, 3H, OTBS), 0.10 (s, 3H, OTBS); 13C NMR (101 MHz, cdcl3) δ166.02, 165.19, 138.61, 138.22, 137.91, 137.47, 136.04, 133.35, 132.95, 132.82, 132.79, 130.39, 130.17, 129.78, 129.63, 128.37, 128.33, 128.29, 128.25, 128.22, 128.12, 127.99, 127.90, 127.69, 127.67, 127.66, 127.63, 127.60, 127.55, 127.38, 127.05, 126.96, 126.31, 125.89, 125.77, 99.46 (C-1a), 96.92 (C-1b), 81.81, 80.84, 77.79, 77.73, 75.90, 74.57, 74.05, 73.77, 73.69, 73.14, 71.44, 69.36, 67.64, 63.08, 25.67, 17.88, -3.84, -4.27. HRMS (ESI) m/z calcd for C71H76O13SiNa [M+Na]+ 1187.4947, found 1187.4907.
化合物３０：化合物２９（９４０ ｍｇ、０．８１ ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１、ｖ／ｖ、１８． ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、反応液を０℃に冷却し、２，３-ジクロロ-５，６-ジシアノ-１，４-ベンゾキノン（ＤＤＱ）（５４５ ｍｇ、２．４ ｍｍｏｌ）を加え、反応温度を室温に上昇して、１０ ｈ反応させ続けた。反応液をＤＣＭで希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により分離精製し（石油エ-テル／酢酸エチル、１：１）、化合物３０（５８１ ｍｇ、７０％）を得た。[α]22D = 75.6 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.04 ‐ 7.92 (m, 4H, Ar), 7.60 ‐ 7.51 (m, 2H, Ar), 7.48 ‐ 7.27 (m, 16H, Ar), 7.22 ‐ 7.11 (m, 8H, Ar), 5.46 (dd, J = 10.3, 7.5 Hz, 1H, H-2b), 5.08 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-1a), 4.86 ‐ 4.77 (m, 2H, ArCH), 4.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H, H-1b), 4.75 ‐ 4.68 (m, 3H, ArCH), 4.56 - 4.48 (dd, 2H, H-5a, ArCH), 4.44 (dd, J = 9.4, 9.4 Hz, 1H, H-3a), 4.24 - 4.26 (d, 3H, H-6a, 2 × ArCH), 4.24 ‐ 4.19 (m, 2H, H-6a’, H-4b), 3.96 (dd, J = 9.3, 7.7 Hz, 1H, H-6b), 3.70 ‐ 3.61 (m, 1H, H-4a), 3.62 ‐ 3.47 (m, 3H, H-3b, H-5b, H-6b’), 3.46 (dd, J= 10.1, 3.4 Hz, 1H, H-2a), 0.76 (s, 9H, OTBS), 0.10 (s, 3H, OTBS), 0.00 (s, 3H, OTBS); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.1, 165.1, 138.4, 138.3, 137.9, 137.4, 132.9, 132.8, 130.3, 130.2, 129.8, 129.7, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.1, 127.8, 127.7, 127.6, 127.5, 98.9 9 (C-1a), 96.7 (C-1b), 80.3, 77.8, 77.5, 73.9, 73.8, 73.6, 73.5, 73.3, 73.1, 72.8, 71.4, 68.8, 67.7, 63.2, 25.6, 17.9, -4.1, -4.9. HRMS (ESI) m/z calcd for C60H68O13SiNa [M+Na]+1047.4321, found 1047.4304.
化合物３１：反応条件４．１に従って、グリコシル供与体８（１００ ｍｇ、０．１３ ｍｍｏｌ）とグリコシル受容体３０（８７．３ ｇ、０．０８５ ｍｍｏｌ）を反応させて、化合物３１（７８ ｍｇ、５７％）を得た。[α]22D = 93.4 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.10 ‐ 7.98 (m, 8H, Ar), 7.85 ‐ 7.68 (m, 4H, Ar), 7.62 ‐ 7.04 (m, 40H, Ar), 5.68 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1a), 5.55 (dd, J = 10.3, 7.5 Hz, 1H, H-2c), 5.15 (d, J = 3.1 Hz, 1H, H-1b), 5.13 ‐ 5.06 (m, 2H, ArCH), 4.99 (d-like, J = 10.9 Hz, 1H, ArCH), 4.89 ‐ 4.82 (d-like, J = 10.9, 1H, ArCH), 4.80 (d, J = 7.6 Hz, 1H, H-1c), 4.79 ‐ 4.62 (m, 8H, H-3b, H-5b, 6 × ArCH), 4.56 ‐ 4.48 (m, 3H, H-5a, 2 × ArCH), 4.47 ‐ 4.38 (m, 2H, H-6a, H-6b), 4.37 ‐ 4.23 (m, 3H, H-6a’, H-3b, ArCH), 4.22 ‐ 4.13 (m, 3H, H-3a, H-6b’, H-3c), 4.03 ‐ 3.95 (m, 2H, H-4b, H-6c), 3.72 (dd, J = 10.4, 9.2 Hz, 1H, H-4a), 3.67 (dd, J= 10.1, 3.1 Hz, 1H, H-2a), 3.64 ‐ 3.52 (m, 4H, H-2b, H-3c, H-5c, H-6c’), 0.75 (s, 9H, OTBS), 0.20 (s, 3H, OTBS), 0.09 (s, 3H, OTBS); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.1, 166.0, 165.0, 138.3, 138.2, 138.0, 137.9, 137.6, 137.4, 136.1, 133.3, 132.9, 132.9, 132.8, 132.7, 130.4, 130.2, 130.2, 129.8, 129.7, 129.7, 129.1, 128.4, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.7, 127.7, 127.6, 127.5, 127.2, 127.1, 126.6, 126.1, 126.0, 125.8, 125.3, 98.6 (C-1b), 97.0 (C-1a), 96.8 (C-1c), 82.3, 80.0, 79.9, 78.6, 78.2, 77.7, 75.8, 75.1, 75.0, 74.7, 73.8, 73.6, 73.5, 73.5, 73.2, 71.9, 71.6, 68.7, 68.4, 68.2, 63.2, 63.1, 25.5, 17.8, -3.8, -4.4. HRMS (ESI) m/z calcd for C98H102O19SiNa [M+Na]+ 1633.6677, found 1633.6667.
化合物３２：化合物３１（５４．０ ｍｇ、０．０３４ ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．７ ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ＡｃＯＨ（１９．４ μＬ、０．３４ ｍｍｏｌ）を加えた後、１ Ｍ ＴＢＡＦ ｉｎ ＴＨＦ（０．３４ ｍＬ、０．３４ ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で２ ｈ撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈した後、３回水洗した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させ、カラムクロマトグラフィ-により分離精製して、中間生成物を得た。中間生成物を乾燥ＤＣＭに溶解して、０℃に冷却し、Ｎ-フェニルトリフルオロアセチルクロリド（２０ μＬ、０．１４ ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（１２．６ μＬ、０．０８４ ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で２ ｈ撹拌した。濃縮させて、クロマトグラフィ-カラムにより分離精製し、化合物３２（４９．３ ｍｇ、８７％）を得た。[α]22D = 122.6 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.08 ‐ 7.94 (m, 6H, Ar), 7.87 ‐ 6.52 (m, 51H, Ar), 5.96 (bs, 1H, H-1c), 5.76 (dd, J = 8.7, 8.7 Hz, 1H, H-2c), 5.67 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1a), 5.15 ‐ 5.04 (m, 3H, H-1b, 2 × ArCH), 4.99 (d-like, J = 10.9 Hz, 1H, ArCH), 4.85 (d-like, J = 10.8 Hz, 1H, ArCH), 4.81 ‐ 4.67 (m, 4H, ArCH), 4.67 ‐ 4.47 (m, 8H, H-5a, H-6a, H-3b, H-5b, 4 × ArCH), 4.47 ‐ 4.28 (m, 3H, H-6a’, H-6b’, ArCH), 4.28 ‐ 4.09 (m, 4H, H-3a, H-6b’, H-4c, ArCH), 3.99 ‐ 3.85 (m, 2H, H-4b, H-6c), 3.82 ‐ 3.51 (m, 5H, H-2a, H-4a, H-2b, H-3c, H-5c, H-6c’); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.1, 164.7, 138.2, 138.1, 137.9, 137.9, 137.5, 137.0, 136.0, 133.3, 133.2, 133.0, 132.9, 132.9, 130.1, 130.0, 129.9, 129.7, 129.6, 129.4, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.3, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.7, 127.6, 127.3, 127.2, 126.6, 126.0, 126.0, 125.8, 120.4, 119.3, 98.6 (C-1a), 97.2 (C-1b), 95.2 (C-1c), 82.4, 80.0, 79.9, 78.7, 77.8, 75.8, 75.3, 75.1, 73.8, 73.2, 71.8, 69.1, 68.9, 63.2, 63.0. HRMS (ESI) m/z calcd for C100H92F3NO19Na [M+Na]+ 1690.6108, found 1690.6102.
【0025】
実施例６五炭糖受容体３９の組み立てスキ-ムは図５に示される。
具体的な試験操作及びステップ
化合物３３：反応条件４．１に従って、グリコシル供与体８（１．３２ ｇ、１．７ ｍｍｏｌ）とグリコシル受容体１６（１．３３ ｇ、２．０ ｍｍｏｌ）を反応させて、化合物３３（１．１７ ｍｇ、５５％）を得た。[α]22D = 71.9 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.09 ‐ 8.03 (m, 2H, Ar), 7.85 ‐ 7.51 (m, 10H, Ar), 7.47 ‐ 7.05 (m, 32H, Ar), 5.46 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1a), 5.37 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-1b), 5.03 ‐ 4.86 (m, 3H, ArCH), 4.81 ‐ 4.60 (m, 9H, ArCH), 4.59 (m, 1H, H-6a), 4.53 ‐ 4.43 (m, 3H, H-6a’, 2 × ArCH), 4.35 ‐ 4.24 (m, 3H, H-4b, H-5b, H-2b), 4.19 (ddd, J= 10.0, 5.5, 1.9 Hz, 1H, H-5a), 4.12 (dd, J = 9.2, 9.2 Hz, 1H, H-3a), 4.02 (dd, J = 7.0, 4.7 Hz, 1H, H-6b), 3.93 (dd, J = 8.6, 2.6 Hz, 1H, H-3b), 3.85 (dd, J = 10.5, 4.7 Hz, 1H, H-7b), 3.77 (dd, J = 10.4, 7 Hz, 1H, H-7b’), 3.63 ‐3.53 (m, 2H, H-2a, H-4a), 2.65 ‐ 2.43 (m, 2H, SCH2CH3), 1.20 (t, J= 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.3, 138.9, 138.5, 138.4, 137.7, 137.7, 136.1, 136.1, 133.3, 133.3, 133.1, 132.9, 132.9, 129.8, 129.8, 128.5, 128.5, 128.4, 128.2, 128.2, 128.2, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.6, 127.6, 127.5, 127.3, 127.3, 127.2, 126.5, 126.0, 126.0, 125.9, 125.9, 125.8, 125.6, 125.6, 97.1 (C-1a), 83.8 (C-1b), 81.8, 81.4, 79.8, 79.1, 77.8, 75.8, 75.4, 75.1, 74.6, 74.6, 73.3, 72.9, 72.8, 72.6, 71.5, 71.5, 69.6, 63.9, 25.4, 14.9. HRMS (ESI) m/z calcd for C79H78O12SNa [M+Na]+ 1273.5106, found 1273.5109.
化合物３４：反応条件４．２に従って、化合物３６（１８０ ｍｇ、０．１４ ｍｍｏｌ）を脱エステル化して、化合物３４（１６１ ｍｇ、当量）を得た。[α]22D = 101.2 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.81 ‐ 7.56 (m, 8H, Ar), 7.46 ‐ 7.05 (m, 31H, Ar), 5.40 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1a), 5.33 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-1b), 4.98 ‐ 4.86 (m, 3H, ArCH), 4.80 ‐ 4.55 (m, 9H, ArCH), 4.48 (t-like, J = 11.0 Hz, 2H, ArCH), 4.30 ‐ 4.21 (m, 2H, H-4b, H-5b), 4.18 (dd, J = 1.7, 2.2 Hz, 1H, H-2b), 4.07 (dd, J = 9.3, 9.3 Hz, 1H, H-3a), 4.01 (dd, J = 6.9, 4.7 Hz, 1H, H-6b), 3.92 (dd, J = 8.3, 2.2 Hz, 1H, H-3b), 3.89 ‐ 3.71 (m,5H, H-5a, H-6a, H-6a’, H-7b, H-7b’), 3.59 ‐ 3.48 (m, 2H, H-2, H-4), 2.72 ‐ 2.51 (m, 2H, SCH2CH3), 1.67 (dd, J = 7.4, 5.3 Hz, 1H, OH), 1.26 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.9, 138.5, 138.4, 138.1, 137.8, 136.3, 136.1, 133.3, 133.3, 132.9, 128.5, 128.2, 128.2, 128.1, 127.9, 127.9, 127.9, 127.9, 127.8, 127.6, 127.5, 127.3, 127.3, 126.3, 126.1, 125.9, 125.9, 125.7, 125.6, 125.6, 97.4 (C-1a), 83.7 (C-1b), 81.7, 81.4, 79.8, 79.1, 75.6, 75.3, 75.1, 74.9, 74.6, 73.3, 73.0, 72.9, 72.5, 71.6, 71.5, 71.5, 62.0, 25.5, 15.1. HRMS (ESI) m/zcalcd for C72H74O11SNa [M+Na]+1169.4844, found 1169.4828.
化合物３５：反応条件４．１に従って、グリコシル供与体８（３５０ ｍｇ、０．４６ ｍｍｏｌ）とグリコシル受容体３７（４００ ｍｇ、０．３５ ｍｍｏｌ）を反応させて、化合物３５（３８０ ｍｇ、６３％）を得た。[α]22D = 48.8 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.01 ‐ 7.94 (m, 2H, Ar), 7.83 ‐ 7.58 (m, 13H, Ar), 7.54 ‐ 7.04 (m, 46H, Ar), 5.42 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1b), 5.36 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-1c), 5.03 (d-like, J = 11.1 Hz, 1H, ArCH), 5.00 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1a), 4.98 ‐ 4.86 (m, 4H, ArCH), 4.77 ‐ 4.58 (m, 12H, ArCH), 4.57 ‐ 4.53 (m, 1H, H-6a), 4.52 ‐ 4.37 (m, 3H, H-6a’, 2 × ArCH), 4.35 ‐ 4.26 (m, 3H, H-2c, H-5c, ArCH), 4.25 ‐ 4.17 (m, 2H, H-3a, H-4c), 4.14 (ddd, J = 10.3, 4.8, 2.0 Hz, 1H, H-5a), 4.06 (dd, J = 9.3, 9.3 Hz, 1H, H-3b), 4.03 ‐ 3.95 (m, 2H, H-5b, H-6c), 3.91 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H, H-3c), 3.90 ‐ 3.79 (m, 2H, H-6b, H-7c), 3.81 ‐ 3.69 (m, 2H, H-6b’, H-7c’), 3.66 ‐ 3.59 (m, 2H, H-2a, H-4a), 3.56 (dd, J = 9.3, 9.3 Hz, 1H, H-4b), 3.36 (dd, J = 9.3, 3.6 Hz, 1H, H-2b), 2.70 ‐ 2.50 (m, 2H, SCH2CH3), 1.19 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.2, 138.9, 138.6, 138.4, 138.4, 138.2, 137.9, 137.8, 136.4, 136.2, 136.1, 133.4, 133.3, 133.3, 133.0, 133.0, 132.9, 132.9, 130.0, 129.6, 128.4, 128.4, 128.4, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.6, 127.6, 127.5, 127.3, 127.2, 127.2, 126.7, 126.3, 126.2, 126.0, 126.0, 125.9, 125.8, 125.7, 125.6, 125.6, 96.7 (C-1a, C-1b), 83.9 (C-1c), 81.9, 81.8, 80.4, 79.8, 79.3, 75.8, 75.6, 75.3, 75.1, 74.6, 73.4, 73.2, 72.8, 72.7, 72.5, 72.5, 71.6, 71.2, 71.1, 68.9, 66.0, 63.6, 25.5, 15.0. HRMS (ESI) m/z calcd for C110H108O17SNa [M+Na]+ 1755.7199, found 1755.7195.
化合物３６：反応条件４．２に従って、化合物３５（５８ ｍｇ、０．０３３ ｍｍｏｌ）を脱エステル化して、化合物３６（５２．６ ｍｇ、９８％）を得た。[α]22D = 73.2 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.82 ‐ 7.66 (m, 13H, Ar), 7.48 ‐ 7.02 (m, 43H, Ar), 5.41 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1b), 5.36 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-1c), 5.13 (d-like, J = 11.2 Hz, 1H, ArCH), 5.00 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-1a), 5.00 ‐ 4.89 (m, 5H, ArCH), 4.76 ‐ 4.44 (m, 13H, ArCH), 4.36 (d-like, J = 12.0 Hz, 1H, ArCH), 4.32 ‐ 4.20 (m, 3H, H-1c, H-4c, H-5c), 4.12 (dd, J= 8.5, 8.5 Hz, 1H, H-3a), 4.08 (dd, J = 8.7, 8.7 Hz, 1H, H-3b), 4.03 ‐ 3.96 (m, 2H, H-5b, H-6c), 3.95 ‐ 3.87 (m, 2H, H-6b, H-3c), 3.84 (dd, J = 10.5, 4.6 Hz, 1H, H-7c), 3.81 ‐ 3.64 (m, 6H, H-5a, H-6a, H-6a’, H-4b, H-6b’, H-7c’), 3.60 ‐3.53 (m, 2H, H-2a, H-4a), 3.44 (dd, J = 9.6, 3.6 Hz, 1H, H-2b), 2.69 -2.53 (m, 2H, SCH2CH3), 1.22 (t, J= 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3).13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138.9, 138.6, 138.5, 138.4, 138.3, 138.3, 137.8, 136.4, 136.4, 136.1, 133.3, 133.3, 133.3, 132.9, 132.9, 132.9, 128.5, 128.4, 128.3, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.6, 127.6, 127.5, 127.3, 127.2, 127.2, 126.5, 126.4, 126.1, 126.0, 125.9, 125.9, 125.7, 125.7, 125.6, 125.6, 97.2 (C-1a), 97.0 (C-1b), 83.8 (C-1c), 81.8, 81.7, 80.3, 79.9, 79.2, 77.7, 75.6, 75.6, 75.3, 75.1, 75.0, 74.6, 73.8, 73.2, 72.8, 72.5, 72.4, 71.5, 71.4, 71.3, 70.9, 66.2, 62.0, 25.5, 15.0. HRMS (ESI) m/z calcd for C103H104O16SNa [M+Na]+ 1651.6937, found 1651.6931.
化合物３７：反応条件４．１に従って、グリコシル供与体８（１６３ ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）とグリコシル受容体３６（２５７ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）を反応させて、化合物３７（２３０ ｍｇ、６５％）を得た。[α]22D = 133.8 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.02 ‐ 7.92 (m, 2H, Ar), 7.85 ‐ 7.01 (m, 76H, Ar), 5.42 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1c), 5.34 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-1d), 5.13 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1a), 5.13 ‐ 5.08 (m, 2H, ArCH), 5.01 ‐ 4.87 (m, 8H, H-1b, 7 × ArCH), 4.81 ‐ 4.52 (m, 15H, ArCH), 4.52 ‐ 4.37 (m, 3H, H-6a, H-6a’, ArCH), 4.35 ‐ 4.17 (m, 4H, H-2d, H-4d, H-5d, ArCH), 4.16 ‐ 4.04 (m, 3H, H-3a, H-3b, H-3c), 4.04 ‐ 3.90 (m, 5H, H-5a, H-5c, H-6c, H-3d, H-6d), 3.88 ‐ 3.80 (m, 4H, H-4a, H-5c, H-6b, H-7d), 3.81 ‐ 3.66 (m, 4H, H-4b, H-6b’, H-6c’, H-7d’), 3.64 (dd, J = 10.1, 8.9 Hz, 1H, H-4c), 3.59 (dd, J = 9.6, 3.5 Hz, 1H, H-2a), 3.45 (dd, J = 10.0, 3.5 Hz, 1H, H-2c ), 3.43 (dd, J = 10.0, 3.5 Hz, 1H, H-2b ), 2.73 ‐ 2.39 (m, 2H, SCH2CH3), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SCH2CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.2, 138.9, 138.6, 138.5, 138.4, 138.3, 137.9, 137.8, 136.5, 136.1, 136.0, 133.3, 133.3, 133.3, 133.0, 132.9, 132.9, 132.9, 129.9, 129.6, 128.4, 128.4, 128.4, 128.4, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.6, 127.5, 127.5, 127.5, 127.3, 127.2, 127.1, 126.8, 126.5, 126.3, 126.2, 126.2, 126.0, 126.0, 125.9, 125.9, 125.9, 125.8, 125.6, 125.6, 97.2 (C-1c), 97.1 (C-1a, C-1b), 83.9 (C-1d), 81.8, 80.5, 80.3, 80.0, 79.2, 75.8, 75.6, 75.3, 75.1, 74.6, 73.7, 73.2, 72.8, 72.5, 72.4, 72.1, 71.5, 71.4, 70.9, 68.9, 66.1, 65.4, 63.3, 29.7, 25.5, 15.0. HRMS (ESI) m/zcalcd for C141H138O22SNa [M+Na]+2237.9292, found 2237.9287.
化合物３８：反応条件４．１に従って、グリコシル供与体３７（１５０ ｍｇ、０．０６８ ｍｍｏｌ）、グリコシル受容体２１（１１３ ｍｇ、０．１３６ ｍｍｏｌ）、ＮＩＳ（３０．６ ｍｇ、０．１３６ ｍｍｏｌ）、ＴｆＯＨ（０．８８ ｕＬ、０．０１ ｍｍｏｌ）を反応させ、温度は-２０℃〜０℃であり、反応時間は６ｈであり、化合物３８（１４８ ｍｇ、７３％）を得た。[α]22D = 62.5 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (700 MHz, Chloroform-d) δ 8.07 ‐ 7.97 (m, 2H, Ar), 7.84 ‐ 6.84 (m, 101H, Ar), 5.68 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1c), 5.17 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1a), 5.16 ‐ 5.02 (m, 4H, ArCH), 4.99 ‐ 4.95 (m, 3H, H-1b, 2 × ArCH), 4.94 ‐ 4.85 (m, 6H), 4.81 (m, 2H, H-1d, ArCH), 4.77 ‐ 4.64 (m, 9H), 4.63 ‐ 4.58 (m, 6H, H-1e), 4.56 ‐ 4.46 (m, 5H), 4.46 ‐ 4.38 (m, 8H), 4.33 (dd, J = 12.1, 3.1 Hz, 1H), 4.28 ‐ 4.15 (m, 5H), 4.08 ‐ 3.99 (m, 3H), 3.98 ‐ 3.92 (m, 2H), 3.92 ‐ 3.86 (m, 3H), 3.85 ‐ 3.78 (m, 3H), 3.77 ‐ 3.67 (m, 4H), 3.66 ‐ 3.57 (m, 4H), 3.50 (dd, J = 9.6, 3.4 Hz, 1H, H-2b), 3.49 ‐ 3.44 (m, 2H, H-2c, H-6b), 3.41 (dd, J = 9.4, 3.5 Hz, 1H, H-2a), 3.29 ‐ 3.06 (m, 3H, OCH2, NCH2), 1.86 (s, 3H, OAc), 1.52 ‐1.36 (m, 4H, CH2CH2), 1.22 ‐ 1.04 (m, 2H, CH2); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 170.6, 166.1, 138.9, 138.8, 138.8, 138.7, 138.6, 138.5, 138.3, 138.0, 137.7, 136.7, 136.5, 136.0, 136.0, 133.3, 133.3, 133.2, 133.0, 133.0, 132.9, 132.8, 132.8, 130.0, 129.6, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.6, 127.6, 127.6, 127.6, 127.5, 127.5, 127.5, 127.4, 127.4, 127.4, 127.3, 127.3, 127.1, 127.0, 126.9, 126.6, 126.3, 126.2, 126.1, 126.0, 126.0, 126.0, 125.9, 125.9, 125.8, 125.7, 125.6, 125.6, 125.6, 125.5, 125.5, 97.3 (C-1a, C-1e), 97.2 (C-1b), 96.4 (C-1d), 95.7 (C-1c), 84.6, 82.1, 81.7, 81.7, 80.7, 80.6, 80.4, 79.4, 77.8, 76.5, 75.8, 75.5, 75.4, 75.1, 74.8, 74.7, 74.6, 73.2, 72.6, 72.5, 71.9, 71.9, 71.8, 71.7, 71.5, 70.9, 70.9, 68.8, 67.8, 67.1, 66.1, 65.4, 64.4, 63.3, 50.5, 50.2, 47.1, 46.1, 29.2, 28.0, 27.5, 23.4, 20.9. HRMS (ESI) m/z calcd for C187H187NO31Na2[M+2Na]2+ 3030.2977, found 1515.1508.
化合物３９：化合物３８（１２６ ｍｇ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１／１、ｖ／ｖ、２．６ ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ＡｃＣｌ（０．２６ ｍＬ）を加えた。反応液を室温で２４ ｈ反応させた。反応終了後、反応液をＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ３で洗浄し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、クロマトグラフィ-カラムにより分離精製し、化合物３９（１０１ ｍｇ、８２％）を得た。 [α]22D = 39.5 (c 0.9, CH3Cl). 1H NMR (700 MHz, Chloroform-d) δ 8.01 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.84 ‐ 6.78 (m, 101H), 5.72 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-1c), 5.18 (d, J= 3.4 Hz, 2H, H-1a, ArCH), 5.18 ‐ 5.12 (m, 2H),5.09 ‐ 5.02 (m, 3H, H-1b, 2 × ArCH), 5.00 ‐ 4.87 (m, 7H), 4.87 ‐ 4.78 (m, 3H, H-1d, 2 × ArCH), 4.76 ‐ 4.54 (m, 15H, H-1e), 4.51 ‐ 4.40 (m, 11H), 4.39 ‐ 4.27 (m, 3H), 4.27 ‐4.15 (m, 3H), 4.12 ‐ 4.02 (m, 3H), 3.98 ‐ 3.72 (m, 14H), 3.71 ‐ 3.52 (m, 8H), 3.48 ‐ 3.41 (m, 2H), 3.29 ‐ 3.06 (m, 3H, OCH2, NCH2), 1.52 ‐ 1.35 (m, 4H, CH2CH2), 1.23 ‐ 1.05 (m, 2H, CH2);13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 192.4, 192.3, 166.2, 156.7, 156.2, 139.0, 138.7, 138.7, 138.7, 138.6, 138.6, 138.5, 138.1, 138.0, 137.9, 137.7, 136.9, 136.7, 136.5, 136.5, 136.1, 136.0, 134.6, 134.5, 133.4, 133.3, 133.3, 133.2, 133.1, 133.0, 132.9, 132.9, 132.8, 132.7, 130.0, 129.8, 129.7, 129.6, 129.1, 129.0, 128.6, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.6, 127.6, 127.6, 127.6, 127.5, 127.5, 127.5, 127.4, 127.4, 127.3, 127.3, 127.2, 127.2, 127.2, 127.1, 127.1, 127.0, 127.0, 126.6, 126.4, 126.3, 126.1, 126.1, 126.0, 126.0, 125.9, 125.9, 125.9, 125.8, 125.8, 125.7, 125.7, 125.6, 125.5, 122.8, 97.4 (C-1a, C-1e), 97.2 (C-1b), 96.6 (C-1d), 95.7 (C-1c), 84.7, 82.0, 81.7, 81.7, 80.7, 80.5, 80.4, 79.4, 78.7, 78.1, 77.7, 77.4, 77.3, 75.9, 75.5, 75.5, 75.3, 75.2, 74.9, 74.8, 74.8, 74.7, 73.2, 72.7, 72.5, 72.1, 71.9, 71.9, 71.8, 71.8, 71.5, 71.0, 70.9, 68.9, 67.7, 67.2, 66.1, 65.4, 63.2, 61.8, 50.5, 50.2, 47.1, 46.2, 29.3, 28.0, 27.5, 23.4. HRMS (ESI) m/z calcd for C189H189NO32Na [M+Na]+ 2965.2979, found 2965.2993.
【0026】
実施例７目的の八炭糖４１の合成スキ-ムは、図６に示される。
具体的な試験操作及びステップ
化合物４０：三炭糖供与体３２（３８．０ ｍｇ、０．０１５ ｍｍｏｌ）と五炭糖受容体３９（２９．４ ｍｇ、０．０１ ｍｍｏｌ）をトルエンにて３回共同蒸発した。乾燥ＤＣＭ（１．０ ｍＬ）、活性化させた４Å分子篩を加え、溶液を室温で３０ ｍｉｎ撹拌した後、０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．０５ Ｍ ｉｎ ＤＣＭ、３０ ｕＬ、１．５ ｕｍｏｌ）を加えて、０℃で６ ｈ撹拌した。反応終了後、ピリジンで反応を終了させた。反応液をろ過して、ＤＣＭを加えて希釈した後、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮させた。カラムクロマトグラフィ-により精製分離し、化合物４０（２４．８ ｍｇ、５６％）を得た。[α]22D = 62.8 (c 1.0, CH3Cl). 1H NMR (700 MHz, Chloroform-d) δ 8.06 ‐ 7.86 (m, 8H), 7.83 ‐ 6.88 (m, 145H), 5.60 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-1c), 5.58 (m, 2H, H-1h, H-2f), 5.10 (m, 2H), 5.07 (d, J = 3.8 Hz, 2H, H-1a, H-1g), 5.07 ‐ 4.98 (m, 6H), 4.98 ‐ 4.87 (m, 10H, H-1b), 4.87 ‐ 4.81 (m, 2H), 4.80 ‐ 4.72 (m, 4H, H-1d), 4.72 ‐ 4.62 (m, 11H), 4.62 ‐4.48 (m, 18H, H-1e), 4.48 ‐ 4.26 (m, 26H, H-1f), 4.25 ‐ 4.17 (m, 8H), 4.16 ‐ 4.10 (m, 3H), 4.09 ‐ 4.01 (m, 3H), 4.01 ‐ 3.92 (m, 5H), 3.93 ‐ 3.84 (m, 5H), 3.82 ‐ 3.64 (m, 7H), 3.63 ‐ 3.45 (m, 12H), 3.45 ‐ 3.29 (m, 6H), 3.25 ‐ 2.93 (m, 3H, OCH2, NCH2), 1.41 ‐ 1.31 (m, 2H, CH2), 1.24 ‐ 1.14 (m, 2H, CH2), 1.09 ‐ 0.88 (m, 2H, CH2). 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 166.1, 166.0, 165.0, 139.4, 139.0, 138.9, 138.9, 138.8, 138.7, 138.7, 138.6, 138.4, 138.2, 138.1, 138.1, 138.0, 138.0, 137.7, 137.6, 137.4, 136.9, 136.5, 136.4, 136.1, 136.1, 136.0, 133.4, 133.3, 133.3, 133.3, 133.1, 133.0, 133.0, 132.9, 132.9, 132.9, 132.8, 132.7, 130.3, 130.2, 130.2, 130.1, 129.9, 129.8, 129.7, 129.7, 129.6, 129.0, 129.0, 128.7, 128.6, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.3, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.9, 127.9, 127.8, 127.7, 127.7, 127.7, 127.6, 127.6, 127.6, 127.6, 127.5, 127.5, 127.4, 127.4, 127.4, 127.3, 127.3, 127.2, 127.2, 127.1, 127.1, 126.9, 126.9, 126.8, 126.7, 126.6, 126.4, 126.4, 126.4, 126.1, 126.1, 126.1, 126.0, 126.0, 125.9, 125.9, 125.8, 125.8, 125.7, 125.7, 125.6, 102.1 (C-1f), 98.4 (C-1a, C-1g), 97.7 (C-1b), 97.2 (C-1e), 97.1 (C-1h), 96.1 (C-1c, C-1d), 84.3, 82.5, 82.2, 81.9, 81.7, 80.8, 80.5, 80.4, 80.3, 80.2, 79.3, 79.1, 78.5, 78.4, 77.9, 76.6, 76.1, 75.8, 75.8, 75.6, 75.6, 75.1, 75.1, 74.9, 74.6, 74.3, 74.2, 73.6, 73.5, 73.3, 73.3, 73.1, 72.7, 72.6, 72.5, 71.9, 71.7, 71.7, 71.6, 71.4, 70.8, 70.2, 69.0, 68.8, 68.6, 67.8, 67.6, 67.1, 65.6, 63.4, 63.3, 63.2, 50.5, 50.1, 47.1, 46.2, 44.8, 32.0, 29.7, 29.5, 29.4, 29.1, 27.9, 27.5, 23.2, 22.7. The JC-H coupling constants were 176.4 Hz (c), 174.4 Hz (h), 170.0 Hz (a), 170.4 Hz (g), 170.4 Hz (b), 168.8 Hz (d), 170.4 Hz (e), 163.6 Hz (f). HRMS (ESI) m/zcalcd for C279H273NO49Na2 [M+2Na]2+4466.8686, found 2233.4497.
化合物４１：化合物４１は、式Ｉに示される構造中のＲｎはすべてＨであるものである。化合物４０（１０ ｍｇ、２．３ μｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／ＴＨＦ（１：１、ｖ／ｖ、１ｍＬ）に溶解し、１５％ＮａＯＨ（１００ μＬ）を加えて１ ｈ撹拌し、ＭｅＯＮａ（５０ ｍｇ）を加えた。溶液を室温で１２ ｈ撹拌し、反応液にＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０ Ｈ＋ 樹脂を加えて、ＰＨが７となるまで中和した。ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィ-により精製分離し、半脱保護された生成物を得た。半脱保護された生成物をＤＣＭ／ｔ-Ｂｕｔａｎｏｌ／Ｈ２Ｏ（３：６：１、ｖ／ｖ／ｖ、２ ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃを加えた。混合物を１大気圧のＨ２圧で３日間反応後、ろ過して濃縮させた。Ｃ１８逆相カラムにより精製し、全脱保護された生成物４１（２．１ ｍｇ、６３％）を得た。1H NMR (700 MHz, D2O) δ 5.37 (d, J = 3.7 Hz, 1H, H-1c), 5.35 (d, J = 3.9 Hz, 1H, H-1f), 5.02 (d, J = 3.7 Hz, 1H, H-1a), 4.99 (d, J = 3.7 Hz, 1H, H-1g), 4.96 (s, 1H, H-1d), 4.95 (d, J = 3.9 Hz, 1H, H-1h), 4.79 (s, 1H, H-1e), 4.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H, H-1f), 4.24 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.23 ‐ 4.16 (m, 3H), 4.13 ‐ 4.08 (m, 2H), 4.08 ‐ 4.01 (m, 4H), 3.99 (dt, J = 10.2, 3.2 Hz, 1H), 3.95 ‐ 3.90 (m, 2H), 3.89 ‐ 3.67 (m, 25H), 3.67 ‐3.59 (m, 4H), 3.59 ‐ 3.52 (m, 7H), 3.51 ‐ 3.41 (m, 3H), 3.02 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.74 ‐ 1.62 (m, 4H), 1.52 ‐ 1.42 (m, 2H). 13C NMR (176 MHz, D2O) δ 103.6, 100.1, 99.5, 99.1, 98.7, 97.8, 97.7, 97.4, 80.0, 76.9, 76.8, 76.4, 75.2, 74.0, 73.4, 73.1, 73.0, 72.6, 72.1, 72.1, 72.0, 71.8, 71.7, 71.6, 71.5, 71.5, 70.9, 70.8, 70.7, 70.7, 70.5, 70.4, 70.3, 69.7, 69.5, 69.4, 69.2, 69.2, 68.0, 67.7, 67.6, 65.2, 62.5, 61.8, 60.5, 60.2, 60.0, 59.8, 39.4, 28.0, 26.6, 22.5. HRMS (ESI) m/z calcd for C55H97NO43Na [M+H]+ 1460.5507, found 1460.547.
【0027】
以上、本発明の好適実施例を開示したが、本発明を限定するものではなく、当業者であれば、本発明の主旨及び範囲を逸脱することなく、さまざまな変更や修正を行うことができ、したがって、本発明の特許範囲は特許請求の範囲により定められる。
【国際調査報告】