特表2021-512875 | 知財ポータル「IP Force」

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特表2021-512875細胞免疫療法の組み合わせ

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2021-512875(P2021-512875A)

(43)【公表日】2021年5月20日

(54)【発明の名称】細胞免疫療法の組み合わせ

(51)【国際特許分類】

A61K 35/17 20150101AFI20210423BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20210423BHJP

A61K 31/44 20060101ALI20210423BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20210423BHJP

A61P 35/02 20060101ALI20210423BHJP

A61K 35/28 20150101ALI20210423BHJP

【ＦＩ】

A61K35/17

A61K45/00

A61K31/44

A61P35/00

A61P35/02

A61K35/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】72

(21)【出願番号】特願2020-542127(P2020-542127)

(86)(22)【出願日】2019年2月2日

(85)【翻訳文提出日】2020年10月1日

(86)【国際出願番号】CN2019074535

(87)【国際公開番号】WO2019149279

(87)【国際公開日】20190808

(31)【優先権主張番号】201810107786.5

(32)【優先日】2018年2月2日

(33)【優先権主張国】CN

(31)【優先権主張番号】201810129611.4

(32)【優先日】2018年2月8日

(33)【優先権主張国】CN

(31)【優先権主張番号】201910008444.2

(32)【優先日】2019年1月4日

(33)【優先権主張国】CN

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

(71)【出願人】

【識別番号】518023832

【氏名又は名称】カースゲンセラピューティクスカンパニーリミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＣＡＲＳＧＥＮＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳＣＯ．，ＬＴＤ．

(71)【出願人】

【識別番号】504200870

【氏名又は名称】上海市腫瘤研究所

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩＣＡＮＣＥＲＩＮＳＴＩＴＵＴＥ

(74)【代理人】

【識別番号】110000578

【氏名又は名称】名古屋国際特許業務法人

(74)【代理人】

【識別番号】100120293

【弁理士】

【氏名又は名称】中谷智子

(72)【発明者】

【氏名】李宗海

(72)【発明者】

【氏名】▲呉▼秀奇

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC17

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZB27

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB43

4C087BB44

4C087MA02

4C087MA52

4C087NA05

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4C087ZB27

(57)【要約】

本発明は、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、式Ｉで表される化合物またはその薬学上許容される塩である第２の治療剤とを、腫瘍に罹患している個体に投与する、腫瘍を治療する方法を提供する。
【化１】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

腫瘍に罹患している個体に免疫エフェクター細胞と第２の治療剤とを投与することを特徴とする、腫瘍を治療する方法であって、前記免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原を認識する受容体を発現し、
前記第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩を含む、方法。

【化1】

［式中、Ａｒ’は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンおよびＣ１−１０アルキル基から選択され、
Ｍは、−Ｏ−またはーＳ−から選択される１つ以上の架橋基であり、
Ｐｙ（Ｘ）はＸで置換されたピリジル基であり、ＸはーＣ（Ｏ）Ｒ_xであり、その中で、Ｒ_xはＮＲ_aＲ_bであり、Ｒ_aとＲ_bはそれぞれ、
ａ）水素、
ｂ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｃ）ヒドロキシで置換されたＣ１−１０アルキル基、
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含むＣ３−１２シクロアルキル基、または
ｅ）−ＯＳｉ（Ｒ_f）３（式中、Ｒ_fはＣ１−１０アルキル基である）
であり、
Ａｒ”は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンまたはＷｎから選択され、ｎ＝０〜３であり、Ｗは、
ａ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｂ）Ｃ１−１０アルコキシ基、
ｃ）Ｃ１−１０ハロアルキル基、
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含むかつＣ１−１０アルキル基で置換されてもよいＣ３−１２ヘテロアリール基
から選択される。］

【請求項2】

腫瘍に罹患している個体に免疫エフェクター細胞と第２の治療剤とを投与することを特徴とする、癌細胞の成長、生存または活力を低下させる方法であって、前記免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原を認識する受容体を発現し、
前記第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩である、方法。

【化2】

［式中、Ａｒ’は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンおよびＣ１−１０アルキル基から選択され、
Ｍは、−Ｏ−またはーＳ−から選択される１つ以上の架橋基であり、
Ｐｙ（Ｘ）はＸで置換されたピリジル基であり、ＸはーＣ（Ｏ）Ｒ_xであり、その中で、Ｒ_xはＮＲ_aＲ_bであり、Ｒ_aとＲ_bはそれぞれ、
ａ）水素、
ｂ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｃ）ヒドロキシで置換されたＣ１−１０アルキル基、
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含むＣ３−１２シクロアルキル基、および
ｅ）−ＯＳｉ（Ｒ_f）３（式中、Ｒ_fはＣ１−１０アルキル基である）
であり、
Ａｒ”は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンまたはＷｎから選択され、ｎ＝０〜３であり、Ｗは、
ａ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｂ）Ｃ１−１０アルコキシ基、
ｃ）Ｃ１−１０ハロアルキル基、および
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含むかつＣ１−１０アルキル基で置換されてもよいＣ３−１２ヘテロアリール基
から選択される。］

【請求項3】

腫瘍に罹患している個体に免疫エフェクター細胞を投与する前に、前記個体に対してリンパ球を除去しないことを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記免疫エフェクター細胞と第２の治療剤の治療効果は、前記免疫エフェクター細胞と第２の治療剤のいずれか１つを単独で使用する効果より大きいことを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。

【請求項5】

前記Ａｒ”は置換フェニル基であり、置換基は、塩素、臭素、フッ素、トリフルオロメチル、メトキシ、及びｔｅｒｔ−ブチルからなる群より選択されるいずれか１つまたはそれらの組み合わせであることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。

【請求項6】

前記ＭはーＯ−であることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。

【請求項7】

前記ＲａとＲｂはそれぞれＨまたはＣ１−１０アルキルであり、好ましくは、ＲａとＲｂはそれぞれＨとメチル基であることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。

【請求項8】

前記薬学上許容される塩は、ａ）無機酸および有機酸の塩基性塩と、ｂ）有機および無機塩基の酸性塩とから選択され、前記酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、１−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸からなる群より選択され、前記有機および無機塩基のカチオンは、アルカリ金属カチオン、アルカリ土類金属カチオン、アンモニウムカチオン、脂肪族基置換アンモニウムカチオン、及び芳香族基置換アンモニウムカチオンからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。

【請求項9】

前記第２の治療剤は、下記の
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルチオ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−カルバモイルー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−カルバモイルー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−２−フルオロ−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルチオ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素
のいずれか１つで示される化合物またはその薬学上許容される塩から選択されるものであることを特徴とする、請求項１〜８に記載の方法。

【請求項10】

前記第２の治療剤は、下記式ＩＩまたは式ＩＩＩで表される化合物、またはその薬学上許容される塩から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の方法。

【化3】

【化4】

【請求項11】

前記薬学上許容される塩は、トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、塩酸塩、メタンスルホン酸塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記第２の治療剤は、式ＩＩＩで表される化合物または式ＩＩＩで表される化合物の水和物であり、好ましくは一水和物であることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。

【請求項13】

前記第２の治療剤を、１日あたり１００〜１０００ｍｇ投与し、好ましくは、１日あたり２００〜８００ｍｇ投与し、より好ましくは、１日あたり４００〜８００ｍｇを投与し、
好ましくは、前記第２の治療剤を１日あたり１〜３回投与し、
より好ましくは、第２の治療剤を１日あたり２回投与し、
さらに好ましくは、薬剤を中止する必要がある、または薬剤を中止することができると医師が評価するまで、例えば、完全に改善された後に薬剤を中止する、または疾患の進行によって薬剤を中止すると医師が評価するまで、前記第２の治療剤を継続的に投与することを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記免疫エフェクター細胞の１回当たりの投与量は約１×１０⁵〜１×１０⁸細胞／ｋｇ被験者の体重であり、
好ましくは、１回あたりの投与量は約１×１０⁵〜１×１０⁷細胞／ｋｇ被験者の体重であることを特徴とする、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

免疫エフェクター細胞と第２の治療剤の投与順序は決まっていなく、
好ましくは、前記第２の治療剤の投与中に前記免疫エフェクター細胞を投与することを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記第２の治療剤は経口投与されることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記受容体は、キメラ抗原受容体（ＣｈｉｍｅｒｉｃＡｎｔｉｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒ、ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（Ｔｃｅｌｌｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（Ｔｃｅｌｌａｎｔｉｇｅｎｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）またはそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記キメラ抗原受容体は、
（ｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン
を有することを特徴とする、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記腫瘍抗原は、
甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ−１；Ｃタイプレクチン様分子−１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ−１３Ｒα）；インターロイキン１１受容体サブユニットα（ＩＬ−１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ−ＥＳＯ−１；ＨＩＶ−１Ｇａｇ；ＭＡＲＴ−１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソセリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）；ステージ特異的胎児抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ；ＴＧＳ５；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；Ｏ−アセチルＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；Ｃｌａｕｄｉｎ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．１；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；κ軽鎖（ｋａｐｐａｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ）；ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２；ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ；ＦＢＰ；胚性ＡｃｈＲ；ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死ゾーンの癌胎児性変異体；Ｇタンパク質共役受容体Ｃグループ５−メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨｇｌｙｃｏｃｅｒａｍｉｄｅのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ｕｒоｐｌａｋｉｎ２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；ｐａｎｎｅｘｉｎ３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；臭覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオゲニン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；ｐ５３変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座ブレークポイント；アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ−ｍｙｃ鳥類骨髄症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロームＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；ｐｒｏａｃｒｏｓｉｎ結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記腫瘍抗原は固形腫瘍抗原であり、好ましくは、前記固形腫瘍抗原は血管内皮増殖因子受容体、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＣ３、またはＣｌａｕｄｉｎ１８．２であり、より好ましくは、前記固形腫瘍抗原はＧＰＣ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、または血管内皮増殖因子受容体であることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項１８に記載の方法。

【請求項22】

前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体のアミノ酸配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有することを特徴とする、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体のキメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、２２、２３または２４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有することを特徴とする、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記キメラ抗原受容体は、
腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナル伝達ドメインを有し、
前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項１７に記載の方法。

【請求項25】

前記キメラ抗原受容体は、
（ｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識するフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識するフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメインを有し、
前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記第２の治療剤は式ＩＩで表される化合物、またはその薬学上許容される塩であり、

【化5】

前記第２の治療剤の１回当たりの投与量として、１日あたり１００〜１０００ｍｇ投与し、好ましくは、１日あたり２００〜８００ｍｇ投与し、より好ましくは、１日あたり４００〜８００ｍｇを投与し、
好ましくは、前記第２の治療剤を１日あたり１〜３回投与し、より好ましくは、１日あたり２回投与し、
さらに好ましくは、薬剤を中止する必要がある、または薬剤を中止することができると医師が評価するまで、例えば、完全に改善された後に薬剤を中止する、または疾患の進行によって薬剤を中止すると医師が評価するまで、前記第２の治療剤を継続的に投与することを特徴とする、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

前記腫瘍は、乳癌、神経膠腫、血液癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎癌または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発性癌、前記癌の組み合わせおよび前記癌の転移巣の組み合わせを含み、
好ましくは、前記腫瘍は、肝臓癌、腎細胞癌、肺扁平上皮癌、及び甲状腺癌から選択されることを特徴とする、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、マスト細胞または骨髄由来の食細胞またはそれらの組み合わせから選択され、
好ましくは、前記免疫エフェクター細胞はＴ細胞またはＮＫ細胞から選択され、
より好ましくは、前記免疫エフェクター細胞は自己免疫エフェクター細胞であることを特徴とする、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

薬物の調製における、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞の使用であって、腫瘍の治療のために前記薬物はソラフェニブと組み合わされ、前記薬物とソラフェニブをそれぞれ単独で使用する場合よリ優れた効果を提供できるように前記薬物とソラフェニブを配合することを特徴とする、使用。

【請求項30】

腫瘍を治療するためのキットであって、前記キットは、
１）腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞；
２）ソラフェニブ；
３）上記１）と２）に記載の物質を含むための容器；および
４）前記キットを使用して腫瘍を治療するための投与プロトコルを含み、
前記免疫エフェクター細胞とソラフェニブをそれぞれ単独で使用する場合よリ優れた効果を提供できるように前記免疫エフェクター細胞とソラフェニブを配合し、
好ましくは、前記免疫エフェクター細胞はＣＡＲＴ細胞であり、
より好ましくは、前記ＣＡＲＴ細胞は、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、グリピカン３、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＢＣＭＡのいずれか１つ以上を特異的に認識することを特徴とする、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、細胞免疫療法の分野に属し、特に、抗腫瘍療法のための免疫エフェクター細胞とキナーゼ阻害剤系化学療法剤との組み合わせの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

近年来、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法などの細胞免疫療法は、血腫の治療において驚くべき治療効果を示している。現在、２００を超えたＣＡＲ−Ｔ細胞が血腫治療の臨床試験で使用されている（ＣｌｉｎｉｃａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＣＡＲＴｃｅｌｌｓ−ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓｉｎｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇｉｎｎｏｖａｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｎｃｅｐｔｓ，ＪｅｓｓｉｃａＨａｒｔｍａｎｎｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＭｏｌｅｃｕｌｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｏｎｌｉｎｅ，Ａｕｇｕｓｔ１，２０１７）。しかしながら、固形腫瘍の治療では、血腫治療の効果を達成するのが難しい。

【0003】

これは、血腫の場合、ＣＡＲ−Ｔ細胞は静脈内注射を通してより容易に腫瘍細胞と接触して殺傷を実現できるが、ＣＡＲ−Ｔ細胞は固形腫瘍の腫瘍組織にホーミングするほうがより困難である。さらに、固形腫瘍は通常、腫瘍細胞、良性細胞、間質細胞、血管細胞などを相互作用させることができる複雑で動的な腫瘍微小環境を持っている。また、腫瘍微小環境には、サイトカインと成長因子の相互作用のネットワークも存在するため、ＣＡＲ−Ｔ療法は固形腫瘍の治療に使用した場合、通常は治療効果が低かった。

【発明の概要】

【0004】

本発明は、固形腫瘍における免疫細胞療法、特にＣＡＲ−Ｔ細胞療法の使用効果を高めるための腫瘍治療方法を提供することを目的としている。
本発明の第一態様では、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、キナーゼ阻害剤である第２の治療剤とを、腫瘍に罹患している個体に投与する、腫瘍を治療する方法が提供されている。

【0005】

具体的な実施形態では、前記第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩であり、

【0006】

【化1】

【0007】

式中、Ａｒ’は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンおよびＣ１−１０アルキル基から選択され、
Ｍは、−Ｏ−またはーＳ−から選択される１つ以上の架橋基であり、
Ｐｙ（Ｘ）はＸで置換されたピリジル基であり、ＸはーＣ（Ｏ）Ｒ_xであり、その中で、Ｒ_xはＮＲ_aＲ_bであり、Ｒ_aとＲ_bはそれぞれ、
ａ）水素、
ｂ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｃ）ヒドロキシで置換されたＣ１−１０アルキル基、
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含むＣ３−１２シクロアルキル基、または
ｅ）−ＯＳｉ（Ｒ_f）３［式中、Ｒ_fはＣ１−１０アルキル基である］、
であり、
Ａｒ”は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンまたはＷｎから選択され、ｎ＝０〜３であり、Ｗは、
ａ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｂ）Ｃ１−１０アルコキシ基、
ｃ）Ｃ１−１０ハロアルキル基、
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含む、Ｃ１−１０アルキル基で置換されてもよいＣ３−１２ヘテロアリール基
から選択される。

【0008】

本発明の第二態様では、腫瘍に罹患している個体に免疫エフェクター細胞と第２の治療剤とを投与することを特徴とする、癌細胞の成長、生存または活力を低下させる方法が提供され、前記免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原を認識する受容体を発現し、
前記第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩であり、

【0009】

【化2】

【0010】

【0011】

一つの好ましい形態では、上記腫瘍を治療する方法、または癌細胞の成長、生存または活力を低下させる方法を使用する場合、腫瘍に罹患している個体に免疫エフェクター細胞を投与する前に、前記個体に対してリンパ球を除去しない。

【0012】

一つの好ましい形態では、上記腫瘍を治療する方法、または癌細胞の成長、生存または活力を低下させる方法を使用する場合、前記免疫エフェクター細胞と第２の治療剤の治療効果は、前記免疫エフェクター細胞と第２の治療剤のいずれか１つを単独で使用する効果より大きい。

【0013】

もう一つの好ましい形態では、前記Ａｒ”は置換フェニル基であり、置換基は、塩素、臭素、フッ素、トリフルオロメチル、メトキシ、及びｔｅｒｔ−ブチルからなる群より選択されるいずれか１つまたはそれらの組み合わせである。

【0014】

もう一つの好ましい形態では、前記ＭはーＯ−である。
もう一つの好ましい形態では、前記ＲａとＲｂはそれぞれＨまたはＣ１−１０アルキルであり、好ましくは、ＲａとＲｂはそれぞれＨとメチル基である。

【0015】

もう一つの好ましい形態では、前記薬学上許容される塩は、ａ）無機酸および有機酸の塩基性塩と、ｂ）有機および無機塩基の酸性塩とから選択され、前記酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、１−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸からなる群より選択され、前記カチオンは、アルカリ金属カチオン、アルカリ土類金属カチオン、アンモニウムカチオン、脂肪族基置換アンモニウムカチオン、及び芳香族基置換アンモニウムカチオンからなる群より選択される。

【0016】

具体的な実施形態では、前記第２の治療剤は、下記の
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルチオ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−カルバモイルー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−カルバモイルー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−２−フルオロ−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）ー４−ピリジルチオ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素
のいずれか１つで示される化合物またはその薬学上許容される塩から選択されるものである。

【0017】

具体的な実施形態では、前記第２の治療剤は、下記式ＩＩまたは式ＩＩＩで表される化合物、またはその薬学上許容される塩から選択される。

【0018】

【化3】

【0019】

【化4】

【0020】

具体的な実施形態では、前記第２の治療剤の薬学上許容される塩は、トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、塩酸塩、メタンスルホン酸塩からなる群より選択される。
具体的な実施形態では、前記第２の治療剤は、式ＩＩで表される化合物または式ＩＩで表される化合物の水和物であり、好ましくは一水和物である。

【0021】

もう一つの好ましい形態では、被験者個体に対して、第２の治療剤を、１日あたり１００〜１０００ｍｇ投与し、好ましくは、１日あたり２００〜８００ｍｇ投与し、より好ましくは、１日あたり４００〜８００ｍｇを投与する。

【0022】

もう一つの好ましい形態では、被験者個体に対して、前記第２の治療剤を１日あたり１〜３回投与し、好ましくは、第２の治療剤を１日あたり２回投与する。
もう一つの好ましい形態では、被験者個体に対して、前記免疫エフェクター細胞の１回当たりの投与量は約１×１０⁵〜１×１０⁸細胞／ｋｇ被験者の体重であり、より好ましくは、１回あたりの投与量は約１×１０⁵〜１×１０⁷細胞／ｋｇ被験者の体重である。

【0023】

もう一つの好ましい形態では、免疫エフェクター細胞と第２の治療剤の投与順序は決まっていなく、第２の治療剤を投与してから免疫エフェクター細胞を投与してもよく、両方を同時に投与してもよく、また、免疫エフェクター細胞を投与してから第２の治療剤を投与してもよく、好ましくは、前記第２の治療剤の投与中に前記免疫エフェクター細胞を投与する。

【0024】

具体的な実施形態では、前記第２の治療剤は経口投与される。
もう一つの好ましい形態では、前記受容体は、キメラ抗原受容体（ＣｈｉｍｅｒｉｃＡｎｔｉｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒ、ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（Ｔｃｅｌｌｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（Ｔｃｅｌｌａｎｔｉｇｅｎｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）またはそれらの組み合わせから選択される。

【0025】

具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、
（ｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。

【0026】

具体的な実施形態では、前記腫瘍抗原は、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ−１；Ｃタイプレクチン様分子−１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ−１３Ｒα）；インターロイキン１１受容体サブユニットα（ＩＬ−１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ−ＥＳＯ−１；ＨＩＶ−１Ｇａｇ；ＭＡＲＴ−１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソセリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）；ステージ特異的胎児抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ；ＴＧＳ５；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；Ｏ−アセチルＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；Ｃｌａｕｄｉｎ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．１；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；κ軽鎖（ｋａｐｐａｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ）；ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２；ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ；ＦＢＰ；胚性ＡｃｈＲ；ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死ゾーンの癌胎児性変異体；Ｇタンパク質共役受容体Ｃグループ５−メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨｇｌｙｃｏｃｅｒａｍｉｄｅのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ｕｒоｐｌａｋｉｎ２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；ｐａｎｎｅｘｉｎ３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；臭覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオゲニン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；ｐ５３変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座ブレークポイント；アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ−ｍｙｃ鳥類骨髄症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロームＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；ｐｒｏａｃｒｏｓｉｎ結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）からなる群より選択される。

【0027】

具体的な実施形態では、前記腫瘍抗原は固形腫瘍抗原である。好ましくは、前記固形腫瘍抗原は血管内皮増殖因子受容体、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＣ３、またはＣｌａｕｄｉｎ１８．２である。より好ましくは、前記固形腫瘍抗原はＧＰＣ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、または血管内皮増殖因子受容体である。

【0028】

具体的な実施形態では、前記血管内皮増殖因子受容体は血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）である。
具体的な実施形態では、前記固形腫瘍抗原はＧＰＣ３である。

【0029】

具体的な実施形態では、前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体は、グリピカン３（ＧＰＣ３）を標的とする抗体である。
一つの好ましい形態では、腫瘍抗原を特異的に認識する抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、１８、１９に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：２０、２１、２２に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。

【0030】

具体的な実施形態では、腫瘍抗原を特異的に認識する抗体のアミノ酸配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、２２、２３または２４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する。

【0031】

一つの好ましい形態では、前記治療は、次の臨床結果、すなわち、免疫エフェクター細胞の抗腫瘍活性の増加、増強または延長；治療前の数と比較して、抗腫瘍免疫エフェクター細胞または活性化免疫エフェクター細胞の数の増加、またはそれらの組み合わせにより決められる。

【0032】

具体的な実施形態では、前記臨床結果は、腫瘍の退縮；腫瘍の縮小；腫瘍の壊死；免疫系を介した抗腫瘍反応；腫瘍の拡大、再発または拡散、またはそれらの組み合わせから選択される。

【0033】

具体的な実施形態では、治療効果は、免疫エフェクター細胞の存在、またはＴ細胞炎症を示す遺伝子マーカーの存在、またはそれらの組み合わせによって予測され、好ましくは、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦαレベルの変化を検出することによって予測される。

【0034】

具体的な実施形態では、前記腫瘍は、血液癌、乳癌、神経膠腫、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎癌または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発性癌、前記癌の組み合わせおよび前記癌の転移巣の組み合わせを含む。好ましくは、肝臓癌、腎細胞癌、肺扁平上皮癌、及び甲状腺癌から選択される。

【0035】

具体的な実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、マスト細胞または骨髄由来の食細胞またはそれらの組み合わせから選択され、好ましくは、前記免疫エフェクター細胞は、自己Ｔ細胞、同種Ｔ細胞または同種ＮＫ細胞から選択され、より好ましくは、前記Ｔ細胞は自己Ｔ細胞である。

【0036】

本発明の第三態様では、本発明は、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、第２の治療剤とを含む、薬剤投与系を提供している。
前記第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩であり、

【0037】

【化5】

【0038】

【0039】

一つの好ましい形態では、前記Ａｒ”は置換フェニル基であり、置換基は、塩素、臭素、フッ素、トリフルオロメチル、メトキシ、及びｔｅｒｔ−ブチルからなる群より選択されるいずれか１つまたはそれらの組み合わせである。

【0040】

【0041】

【0042】

【0043】

具体的な実施形態では、前記第２の治療剤は、下記式ＩＩまたは式ＩＩＩで表される化合物、またはその薬学上許容される塩から選択される。

【0044】

【化6】

【0045】

【化7】

【0046】

式ＩＩまたは式ＩＩＩで表される化合物の化学名はそれぞれ、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−２−フルオロ−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素である。

【0047】

具体的な実施形態では、前記薬学上許容される塩は、トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、塩酸塩、メタンスルホン酸塩である。
もう一つの好ましい形態では、被験者個体に対して、第２の治療剤を、１日あたり１００〜１０００ｍｇ投与し、好ましくは、１日あたり２００〜８００ｍｇ投与し、より好ましくは、１日あたり４００〜８００ｍｇを投与する。

【0048】

【0049】

【0050】

【0051】

【0052】

【0053】

具体的な実施形態では、前記腫瘍抗原は固形腫瘍抗原であり、好ましくは、前記固形腫瘍抗原は血管内皮増殖因子受容体、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＣ３、またはＣｌａｕｄｉｎ１８．２であり、より好ましくは、前記固形腫瘍抗原はＧＰＣ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、または血管内皮増殖因子受容体である。

【0054】

【0055】

具体的な実施形態では、前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体は、グリピカン３（ＧＰＣ３）を標的とする抗体である。
一つの好ましい形態では、腫瘍抗原を特異的に認識する抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５，１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８，１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。

【0056】

【0057】

【0058】

【0059】

【0060】

【0061】

【0062】

本発明の第四態様では、薬物の調製における、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞の使用が提供され、前記薬物はソラフェニブと組み合わせて使用される。

【0063】

具体的な実施形態では、上記使用の場合、ヒト患者における腫瘍治療のために使用され、前記細胞とソラフェニブをそれぞれ単独で使用する場合よリ優れたまたはより大きい治療効果を提供できるように前記細胞とソラフェニブを配合し、すなわち、前記試薬をそれぞれ単独で使用する場合よリ大きい治療効果を提供できるように前記細胞とソラフェニブを配合する。

【0064】

本発明の第五態様では、腫瘍を治療するためのキットが提供され、前記キットは、
１）腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞；
２）ソラフェニブ；
３）上記１）と２）に記載の物質を含むための容器；および
４）前記キットを使用して腫瘍を治療するための投与プロトコルを含み、
前記免疫エフェクター細胞とソラフェニブをそれぞれ単独で使用する場合よリ大きい治療効果を提供できるように前記免疫エフェクター細胞とソラフェニブを配合し、好ましくは、前記免疫エフェクター細胞はＣＡＲＴ細胞であり、より好ましくは、前記ＣＡＲＴ細胞は、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、グリピカン３、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＢＣＭＡを特異的に認識する。

【0065】

具体的な実施形態では、前記ＣＡＲＴ細胞はグリピカン３を特異的に認識する。
本発明の第六態様では、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、第２の治療剤とを含むことを特徴とする、腫瘍を治療するための製品が提供されている。

【0066】

前記製品は、
１）腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞；
２）ソラフェニブ式ＩＩで表される化合物；
３）上記１）と２）に記載の物質を含むための容器；および
４）前記製品を使用して腫瘍を治療するための投与プロトコルを含み、
前記免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現し、前記免疫エフェクター細胞と第２の治療剤は、上記の本発明の第一態様、第二態様、及び第三態様に係る定義と同じである。

【0067】

本発明の第六態様では、薬物または製品の調製における、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と第２の治療剤の使用が提供され、前記薬物は、ヒト患者における腫瘍の治療に使用され、前記細胞と第２の治療剤を処方してなる薬物は、前記細胞と第２の治療剤をそれぞれ単独で使用する場合よリ優れたまたはより大きい治療効果を提供することができる。

【0068】

免疫エフェクター細胞と第２の治療剤は、上記の本発明の第一態様、第二態様、及び第三態様に係る定義と同じである。
本発明の一つの具体的な実施形態では、腫瘍抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、ソラフェニブとを、腫瘍に罹患している個体に投与することを特徴とする、腫瘍を治療する、または癌細胞の成長、生存、または活力を低下させる方法が提供されている。前記キメラ抗原受容体は、腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナル伝達ドメインを有する。前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。前記腫瘍は肝臓癌であり、前記癌細胞は肝臓癌細胞である。

【0069】

本発明の一つの具体的な実施形態では、腫瘍抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、レゴラフェニブとを、腫瘍に罹患している個体に投与することを特徴とする、腫瘍を治療する、または癌細胞の成長、生存、または活力を低下させる方法が提供されている。前記キメラ抗原受容体は、腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナル伝達ドメインを有する。前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。前記腫瘍は肝臓癌であり、前記癌細胞は肝臓癌細胞である。

【0070】

本発明の一つの具体的な実施形態では、腫瘍を治療するための製品またはキットが提供され、前記製品またはキットは、
１）免疫エフェクター細胞；
２）ソラフェニブまたはレゴラフェニブ；
３）上記１）と２）に記載の物質を含むための容器；および
４）前記製品を使用して腫瘍を治療するための投与プロトコルを含み、
前記免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現する。前記キメラ抗原受容体は、腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナル伝達ドメインを有する。前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。前記腫瘍は肝臓癌であり、前記癌細胞は肝臓癌細胞である。

【0071】

なお、本発明の範囲内で、本発明の上記各技術的特徴及び以下に（例えば、実施例）具体的に説明する各技術的特徴を互いに組み合わせて新しいまたは好ましい技術構成を形成できることを理解されたい。スペースの制限上、ここでは一々贅言しない。

【0072】

本発明の有益な効果：
１、本発明により提供される式Ｉで表される化合物と免疫エフェクター細胞とを組み合わせて使用すると、腫瘍細胞を殺す能力を有意に高めることができる。

【0073】

２、本発明の治療スキームを採用することは、癌微小環境における免疫阻害に抵抗することができ、これによって、固形腫瘍に対する作用を有意に高め、難治性および進行性の癌に対してもより良い効果を有する。

【図面の簡単な説明】

【0074】

【図1A】ＰＲＲＬＳＩＮ−ｈｕ９Ｆ２−２８Ｚのプラスミドプロファイルである。

【図1B】ＣＡＲＴ細胞の陽性率の検出を示す図である。

【図2】肝臓癌細胞及びＣＡＲＴ細胞に対するソラフェニブの毒性検出を示す図である。

【図3】ソラフェニブで処理された腫瘍細胞に対するＣＡＲＴ細胞の殺傷能力のインビトロ検出を示す図である。

【図4】Ｈｅｐａ１−６細胞でのＧＰＣ３発現のフローサイトメトリー検出を示す図である。

【図5】ソラフェニブとＣＡＲＴ細胞との組み合わせの使用の、ｈｅｐａ１−６−ＧＰＣ３皮下腫瘍の腫瘍体積に対する阻害効果を示す図である。

【図6】ソラフェニブとＣＡＲＴ細胞との組み合わせの使用の、ｈｅｐａ１−６−ＧＰＣ３皮下腫瘍の腫瘍重量に対する阻害効果を示す図である。

【図7A】ソラフェニブで処理されたＣＡＲＴ細胞の脱顆粒能力のインビトロ検出を示す図である。

【図7B】ソラフェニブで処理されたＣＡＲＴ細胞の増殖能力のインビトロ検出を示す図である。

【図7C】ソラフェニブで処理されたＣＡＲＴ細胞の殺傷能力のインビトロ検出を示す図である。

【図8A】ヒトＣＡＲＴ細胞のサイトカインのＩＬ−２の分泌に対するソラフェニブの影響の検出を示す図である。

【図8B】ヒトＣＡＲＴ細胞のサイトカインのＩＦＮ−γの分泌に対するソラフェニブの影響の検出を示す図である。

【図8C】ヒトＣＡＲＴ細胞のサイトカインのＴＮＦ−αの分泌に対するソラフェニブの影響の検出を示す図である。

【図9A】ソラフェニブとヒトＣＡＲＴ細胞との組み合わせの使用による肝臓癌治療の腫瘍体積を示す図である。

【図9B】ソラフェニブとヒトＣＡＲＴ細胞との組み合わせの使用による肝臓癌治療の腫瘍重量を示す図である。

【図10A】ＣＡＲＴ細胞腫瘍内の浸潤を示す図である。

【図10B】ＣＡＲＴ細胞腫瘍内のアポトーシスを示す図である。

【図10C】ＣＡＲＴ細胞腫瘍内のアポトーシスを示す図である。

【図11】ソラフェニブとヒトＣＡＲＴ細胞がＰＬＣ／ＲＰＦ／５細胞のアポトーシスを相乗的に促進する状況のインビトロ検出を示す図である。

【図12】マウスの肝臓癌移植腫瘍に対する、ＣＡＲＴ細胞とレゴラフェニブとの組み合わせの使用の治療結果を示す図である。

【図13】ＣＡＲＴ細胞とソラフェニブとの組み合わせにより治療した後の被験者の画像を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0075】

本発明は、腫瘍の治療における免疫エフェクター細胞と第２の治療剤（式Ｉで表される化合物）との組み合わせの使用に関するものであり、本発明は、記載されている方法および実験条件に限定されてないことを理解されたい。本明細書で特別に定義されていない限り、使用されるすべての技術用語および科学用語は、遺伝子治療、生化学、遺伝学、分子生物学、及び医薬品化学分野において当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

【0076】

【化8】

【0077】

本明細書に記載されるものと同様または同等の方法および材料は、本発明の実施または試験において使用することができる。本明細書で言及されているすべての出版物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、参考としてその全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、本明細書に含まれる定義に準ずる。また、特に明記しない限り、材料、方法、および実施例は、単に例示的なものであり、限定的なものではない。

【0078】

特に明記しない限り、本発明の実施は、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の伝統的な技術を採用し、これらはすべて本分野の技術範囲に属す。これらの技術は、文献で十分に説明されている。例えば、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＦｒｅｄｅｒｉｃｋＭ.ＡＵＳＵＢＥＬ，２０００，ＷｉｌｅｙａｎｄｓｏｎＩｎｃ，ＬｉｂｒａｒｙｏｆＣｏｎｇｒｅｓｓ，ＵＳＡ）；ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＴｈｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ，２００１，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓs)；ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ.Ｊ.Ｇａｉｔｅｄ.，１９８４）；Ｍｕｌｌｉｓｅｔａｌ. Ｕ.Ｓ. Ｐａｔ. Ｎｏ. ４，６８３，１９５；ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ. Ｄ. Ｈａｒｒｉｅ＆Ｓ. Ｊ. Ｈｉｇｇｉｎｓｅｄｓ１９８４)；ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＡｎｄＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ. Ｄ. Ｈａｍｅｓ＆Ｓ. Ｊ. Ｈｉｇｇｉｎｓｅｄｓ. １９８４）；ＣｕｌｔｕｒｅＯｆＡｎｉｍａｌＣｅｌｌｓ（Ｒ. Ｉ. Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ＡｌａｎＲ. Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ.，１９８７）；ＩｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＣｅｌｌｓＡｎｄＥｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬＰｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ. Ｐｅｒｂａｌ，ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＧｕｉｄｅＴｏＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；ｔｈｅｓｅｒｉｅｓ，ＭｅｔｈｏｄｓＩｎＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ｊ. ＡｂｅｌｓｏｎとＭ. Ｓｉｍｏｎ，ｅｄｓ.−ｉｎ−ｃｈｉｅｆ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ.，ＮｅｗＹｏｒｋ）、特にＶｏｌｓ．１５４と１５５（Ｗｕｅｔａｌ. ｅｄｓ.）とＶｏｌ.１８５，“ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ” （Ｄ. Ｇｏｅｄｄｅｌ，ｅｄ.）；ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒＶｅｃｔｏｒｓＦｏｒＭａｍｍａｌｉａｎＣｅｌｌｓ（Ｊ. Ｈ. ＭｉｌｌｅｒとＭ. Ｐ. Ｃａｌｏｓｅｄｓ.，１９８７，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ)；ＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓＩｎＣｅｌｌＡｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＭａｙｅｒとＷａｌｋｅｒ，ｅｄｓ.，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；ＨａｎｄｂｏｏｋＯｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ−ＩＶ（Ｄ. Ｍ. ＷｅｉｒとＣ. Ｃ. Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ.，１９８６）；およびＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇｔｈｅＭｏｕｓｅＥｍｂｒｙｏ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ.Ｙ.，１９８６）参照できる。

【0079】

本発明は少なくとも部分的に次の認識に基づく。すなわち、第２の治療剤と免疫エフェクター細胞を連続的に、任意の順序で、または実質的に同時に、１つ以上のサイクルおよび／または用量で投与する組み合わせの治療スキームは、一部の被験者の癌の治療では免疫細胞の活性および／または数をより効果的に増加、増強、または延長して、抗腫瘍効果を達成することであり得る。

【0080】

本明細書で使用される用語「約」とは、当業者に容易に分かる各値の通常の誤差範囲を指す。本明細書で言及される「約」に関連する値またはパラメータは、当該値またはパラメータ自体を指す実施形態を含む（且つ説明する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」の記載を含む。例えば、「約」または「含む」は、当該分野内の実際の標準偏差に応じて、１以内または１を超えることを意味することができる。あるいは、「約」または「含む」は、多くとも１０％（つまり、±１０％）の範囲を意味することができる。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇと５．５ｍｇの間の任意の数を含み得る。特定の値または組成が出願および特許出願の範囲で提供される場合、特に明記しない限り、「約」または「含む」は、当該特定の値または組成の許容誤差範囲内であると想定されるべきである。

【0081】

特に断りのない限り、本明細書に記載される濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲のいずれも、当該範囲内の任意の整数、及び適切な場合には、その分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）を含むと理解すべきである。

【0082】

本明細書に記載の「用量」とは、重量に基づいて算出された用量または体表面積（ＢＳＡ）に基づいて算出された用量で表すことができる。重量に基づいて算出された用量は、患者の体重に基づいて算出された、患者に与える用量であり、例えば、ｍｇ／ｋｇである。ＢＳＡに基づいて算出された用量は、患者の表面積に基づいて算出された、患者に与える用量であり、例えば、ｍｇ／ｍ²である。

【0083】

具体的な実施形態では、本発明に使用される第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩である。

【0084】

【化9】

【0085】

【0086】

本発明において、「Ｃ１−１０アルキル」という用語は、１〜１０個の炭素原子を含有する任意の直鎖または分岐鎖基を指し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｔ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−へプチル、ｎ−オクチル、イソオクチル、２−エチルヘキシル、ｎ−ノニル、イソノニル、ｎ−デジルなどが挙げられる。

【0087】

「Ｃ１−１０アルコキシ」という用語は、任意の上記Ｃ１−Ｃ１０アルキル基が酸素原子（−Ｏ−）を介して分子の残りの部分に結合していることを指す。
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素を指す。

【0088】

「ハロアルキル」という用語は、フルオロアルキル、クロロアルキル、ブロモアルキル、ヨードアルキルを指す。
「Ｃ３−１２シクロアルキル」という用語は、３〜１２個の炭素原子を有する非芳香族の、飽和または不飽和の単環式または二環式炭化水素環を指す。例示的な「シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロへプチルなどを含むが、これらに限定されない。

【0089】

「ヘテロアリール」という用語は、芳香族複素環、通常、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜８員複素環を指し、ヘテロアリール環は、芳香族および非芳香族の炭素環および複素環にさらに縮合または結合してもよい。ヘテロアリールの非限定的な例として、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアキサゾリル、ピロリル、フェニル−ピロリル、フラニル、フェニル−フラニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チエニル、ベンゾチエニル、イソインドリニル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、１，２，３−トリアゾリル、１−フェニル−１，２，３−トリアゾリル、２，３−インドリニル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチエニル、ベンゾピラニル、２，３−ジヒドロベンゾオキサジニル、２，３−ジヒドロキノキサリニルなどが挙げられる。

【0090】

上記のすべての説明から当業者にとって明らかなのは、「アリールアミノ」など、その名前が複合名の任意の基である場合、通常にその誘導された部分、例えば、アリール基で置換されたアミノ基から構築されることを指すべきであり、アリール基は上記で定義した通りである。

【0091】

具体的な実施形態では、式Ｉで表される化合物は、式ＩＩおよび式ＩＩＩで表される化合物を含むが、これらに限定されていない。

【0092】

【化10】

【0093】

【化11】

【0094】

具体的な実施形態では、第２の治療剤は、式ＩＩで表される化合物の薬学上許容される塩であってもよく、例えば、トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、塩酸塩、メタンスルホン酸塩などであってもよい。

【0095】

具体的な実施形態では、式ＩＩＩで表される化合物はさらに、その一水和物、二水和物などの水和物を使用してもよく、また、塩酸塩などのその薬学上許容される塩も使用してもよい。

【0096】

出願人は、化合物ＩＩなどの第２の治療剤がＣＡＲＴ細胞によるサイトカインＩＬ２の分泌を促進するだけではなく、腫瘍組織におけるＣＡＲＴ細胞の浸潤を促進し、抗腫瘍効果を改善できることを見出した。したがって、化合物ＩＩなどの第２の治療剤と、腫瘍特異的抗原を標的とする免疫細胞療法との組み合わせの使用は、抗腫瘍効果を有意に改善することができる。

【0097】

出願人はまた、本発明が難治性癌の抗癌効果を改善するだけではなく、ＣＡＲ−Ｔ細胞を使用する時にリンパ球を除去しなくても、良好な抗腫瘍効果を達成できることを見出して、それによって、リンパ球除去による抗癌治療効果の低下を大幅に改善し、正常な組織への損傷による毒性の副作用、特に骨髄に対する激しい抑制を軽減する。

【0098】

具体的な実施形態では、化合物ＩＩなどの第２の治療剤は、それ自体で安全に経口または非経口投与することができ、または薬学上許容される担体賦形剤およびその他の添加剤からなる化合物（例えば、錠剤、徐放性製剤、カプセル、注射剤、溶液）として安全に経口または非経口投与することができる。経口投与される場合、組成物は、錠剤、糖衣錠またはカプセルに配合され得る。経口組成物を調製するために、ラクトースまたはデンプンを担体として使用することができ、ゼラチン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースポリビニルピロリドンなどは適切な結合剤または造粒剤である。崩壊剤として、デンプンまたは微結晶セルロースが選択でき、タルク、コロイダルシリカ、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸マグネシウムなどは、適切な結合防止剤と滑剤としてよく使用される。例えば、湿った顆粒を圧縮することによって錠剤を調製することができる。活性成分と担体、および必要に応じて崩壊添加剤と一緒に混合物を形成し、この混合物は結合剤の含水溶液、アルコール性または含水アルコール性溶液と適切な装置内で造粒され、乾燥した顆粒をその他の崩壊剤に加え、滑剤と抗結合剤でこの混合物を錠剤に形成させる。用量は治療対象、投与方法、症状、およびその他の要素によって変わるが、溶解性を高めるために、複素環式誘導体を遊離させてから薬学上許容される有機酸にしてもよく、好ましくはメタンスルホン酸、フマル酸などにして注射剤の形で投与しやすいようにする。

【0099】

具体的な実施形態では、第２の治療剤はソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（式ＩＩで表される化合物に示される構造を有する）であり、好ましくはソラフェニブトシレートである。

【0100】

具体的な実施形態では、第２の治療剤はレゴラフェニブ（Ｒａｇｏｒａｆｅｎｉｂ）（式ＩＩＩで表される化合物に示される構造を有する）であり、好ましくはレゴラフェニブトシレートである。

【0101】

出願人は、ソラフェニブとＣＡＲ−Ｔ細胞の相乗効果により、低用量のソラフェニブでもより良い効果を達成できるため、本発明の技術構成がソラフェニブの毒副作用を低減できることを発見した。

【0102】

具体的な実施形態では、第２の治療剤の低用量は、単独で投与して達成できる臨床的治療効果の用量より低い用量を指し、例えば、ソラフェニブの低用量とは、ソラフェニブを単独で投与して達成できる臨床的治療効果の用量より低いものを指し、具体的には、臨床的に推奨されるソラフェニブの用量、すなわち、ソラフェニブの推奨用量：１回０．４ｇ（２×０．２ｇ）、１日２回を指す；または、化合物ＩＩの単独投与後の臨床試験における患者の体内のおおよその濃度６．５ｕＭより低いことを指す。

【0103】

本発明におけるソラフェニブの投与量は、臨床的に有効な投与量よりも低くなってもよい。一部の実施形態では、腫瘍に罹患している個体の体内のソラフェニブの平均濃度は、約６、５．５、５、４．５、４、３．５、３、２．５、２、１．５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６５、０．６、０．５５、０．５、０．４５、０．４、０．３５、０．３、０．２５、０．２、０．１５、０．１、０．０９５、０．０９、０．０８５、０．０８、０．０７５、０．０７、０．０６５、０．０６、０．０５５、０．０５、０．０４５、０．０４、０．０３５、０．０３４、０．０３３、０．０３２、０．０３１、０．０３、０．０２９、０．０２８、０．０２７、０．０２６、０．０２５、０．０２４、０．０２３、０．０２２、０．０２１、０．０２、０．０１９、０．０１８、０．０１７、０．０１６、０．０１５、０．０１４、０．０１３、０．０１２、０．０１１、０．０１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、または０．００１ｕＭである。一部の実施形態では、腫瘍に罹患している個体の１日当たりのソラフェニブの経口用量は、約７００、６５０、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１ｍｇであり、好ましくは、４００〜８００ｍｇ／日である。

【0104】

本発明において、ソラフェニブは、１日１回投与してもよく、１日複数回投与してもよく、例えば、１日２回投与してもよい。
ソラフェニブは、１日あたりの投与量が、１００〜１０００ｍｇであってもよく、好ましくは、１日あたり２００〜８００ｍｇ投与し、より好ましくは、１日あたり４００〜８００ｍｇを投与する。

【0105】

本発明において、免疫エフェクター細胞と第２の治療剤の投与順序は決まっていなく、第２の治療剤を投与してから免疫エフェクター細胞を投与してもよく、両方を同時に投与してもよく、また、免疫エフェクター細胞を投与してから第２の治療剤を投与してもよい。

【0106】

一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、第２の治療剤を投与する前の１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、１か月、またはそれらの任意の組み合わせで投与される。

【0107】

一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、第２の治療剤を投与した後の１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、１か月、またはそれらの任意の組み合わせで投与される。

【0108】

一部の実施形態では、薬剤を中止する必要がある、または薬剤を中止することができると医師が評価するまで、例えば、完全に改善された後に薬剤を中止する、または疾患の進行によって薬剤を中止すると医師が評価するまで、第２の治療剤を継続的に投与する。一部の実施例では、第２の治療剤は、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、またはそれ以上に継続的に投与される。免疫エフェクター細胞は、第２の治療剤の継続投与中に投与される。

【0109】

「免疫エフェクター細胞」という用語は、免疫応答に関与する、例えば、免疫効果を促進する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例として、Ｔ細胞、例えば、α／βのＴ細胞及びγ／δＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、マスト細胞、および骨髄由来の食細胞が挙げられる。好ましくは、前記Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞、異種Ｔ細胞、同種Ｔ細胞を含み、前記ナチュラルキラー細胞は同種ＮＫ細胞である。本明細書で使用されるように、「免疫エフェクター機能または免疫エフェクター応答」という用語は、免疫エフェクター細胞の、例えば、標的細胞の免疫攻撃を増強または促進する機能または応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能または応答とは、標的細胞の殺傷を促進する、または成長または増殖を阻害するＴ細胞またはＮＫ細胞の特性をいう。

【0110】

「治療有効量」、「治療に有効」、および「有効量」という用語は、本明細書で置き換えて使用することができ、本明細書に記載の特定の生物学的結果を達成するのに有効な化合物、製剤、物質、または組成物の量を指し、例えば、Ｔ細胞応答を促進するのに十分な量または用量などが挙げられるが、これらに限定されない。「免疫学的有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」、または「治療有効量」を示す場合、投与される本発明の免疫エフェクター細胞、治療剤の正確な数は、個体の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および患者（被験者）の状況を考慮した後に医師が決定してもよい。有効量の免疫エフェクター細胞とは、免疫エフェクター細胞の抗腫瘍活性を増加、増強、または延長させること；抗腫瘍免疫エフェクター細胞または活性化免疫エフェクター細胞の数を増加させること；ＩＦＮ−γ、ＴＮＦαの分泌を促進させること；腫瘍を退縮、腫瘍を縮小、腫瘍を壊死させることができる免疫エフェクター細胞の数を指すが、これらに限定されない。

【0111】

「リンパ球を除去しない」または「リンパ球の除去をしない」という用語は、被験者の体内のリンパ球を除去しないことを意味する。リンパ球スカベンジャー、全身放射線療法、またはそれらの組み合わせ、またはリンパ球枯渇を引き起こす他の手段を与えないことを含むが、これらに限定されない。ただし、リンパ球スカベンジャー、全身放射線療法、またはそれらの組み合わせ、またはリンパ球枯渇を引き起こす他の手段を与えた後、被験者体内のリンパ球の除去率が６０％より低い場合、例えば、体内のリンパ球の除去率が５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、または１０％である場合も等しく、本願の「リンパ球を除去しない」という範囲内にある。

【0112】

本明細書では、リンパ球の除去率は、リンパ球を除去する前のリンパ球の数を検出し、リンパ球除去後のリンパ球の数を検出して算出でき、例えば、リンパ球除去薬を投与する前のリンパ球の数−リンパ球除去薬を投与した後のリンパ球の数／リンパ球除去薬を投与する前のリンパ球の数によって算出できる。リンパ球の検出は、血液ルーチンなど、リンパ球の数を検出ために医療スタッフが一般的に使用する方法で行うことができる。

【0113】

「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は置き換えて使用でき、いずれもペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基からなる化合物を指す。タンパク質またはペプチドは少なくとも２つのアミノ酸を含む必要があり、タンパク質またはペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数には制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用される「キメラ受容体」は、すなわち、異なる供給源からのＤＮＡ断片またはタンパク質対応ｃＤＮＡを遺伝子組換え技術によって接続して形成される融合分子であり、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む。キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、修飾されたＴ細胞（抗原）受容体（ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）を含むが、これらに限定されない。

【0114】

本明細書で使用される「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」とは、免疫エフェクター細胞内にある場合に、標的細胞（通常は癌細胞）に対する特異性を細胞に提供し、細胞内シグナル生成がある一群のポリペプチドをいう。ＣＡＲは通常、少なくとも１つの細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含み、以下に定義される刺激分子及び／または共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む。一部の態様では、ポリペプチド群は互いに隣接している。ポリペプチド群は、二量体化分子の存在下でポリペプチドを互いにカップリングすることのできる二量体化スイッチを含み、例えば、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインにカップリングすることのできるスイッチを含む。一態様では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に結合するζ鎖である。一態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインをさらに含む。一態様では、共刺激分子は、４−１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、および／またはＣＤ２８などの、本明細書に記載される共刺激分子から選択される。一態様では、ＣＡＲはキメラ融合タンパク質を含み、この融合タンパク質は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、ＣＡＲはキメラ融合タンパク質を含み、この融合タンパク質は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインと刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、ＣＡＲはキメラ融合タンパク質を含み、この融合タンパク質は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能的シグナル伝達ドメインを含む。

【0115】

一態様では、本発明は、機能的に同等な分子を生成する出発抗体またはフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列の修飾を想定する。例えば、ＣＡＲに含まれるｓｃＦｖなど、本明細書に記載の癌関連抗原の抗原結合ドメインのＶＨまたはＶＬは、本明細書に記載の癌関連抗原の抗原結合ドメインの出発ＶＨまたはＶＬフレームワーク領域（例えば、ｓｃＦｖ）の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように修飾されてもよい。本発明、機能的に同等な分子を生成するように、ＣＡＲ構築体の複数のドメインの１つ以上のアミノ酸配列の修飾など、ＣＡＲ構築体全体の修飾を想定している。ＣＡＲ構築体は、出発ＣＡＲ構築体の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように修飾されてもよい。

【0116】

本明細書で使用される「膜貫通ドメイン」は、膜貫通領域に隣接する１つ以上の追加のアミノ酸、例えば、前記膜貫通の由来であるタンパク質の細胞外領域に関連する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から１５のアミノ酸）および／または前記膜貫通タンパク質の由来であるタンパク質の細胞外領域に関連する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から１５のアミノ酸）を含むことができる。一態様では、膜貫通ドメインは、キメラ受容体の他のドメインの１つに関連するドメインであり、例えば、一実施形態では、前記膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン、またはヒンジドメインの由来であるタンパク質と同じタンパク質に由来し得る。場合によっては、膜貫通ドメインは、例えば、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするように、選択またはアミノ酸の置換修飾によって、このようなドメインが同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合することを防ぐことができる。一態様では、膜貫通ドメインは、キメラ受容体を発現する細胞の細胞表面上の別のキメラ受容体とホモ二量体化することができる。異なる一態様では、同じキメラ受容体を発現する細胞に存在する天然の結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小限にするように、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は修飾または置換されてもよい。膜貫通ドメインは、天然または組換え供給源に由来することができる。前記供給源が天然の場合、前記ドメインは任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来してもよい。一態様では、前記キメラ受容体が前記標的抗原に結合する限り、膜貫通ドメインは細胞内ドメインにシグナルを伝達することができる。本発明で具体的に使用される膜貫通ドメインは、少なくとも以下の膜貫通ドメイン、例えば、Ｔ−細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４を含むことができる。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも以下の膜貫通ドメイン、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８ )、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１Ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ/Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃを含むことができる。

【0117】

場合によっては、膜貫通ドメインはヒンジ（例えば、ヒトタンパク質からのヒンジ）を介して、ＣＡＲの抗原結合ドメインなどのＣＡＲの細胞外領域に接続することができる。例えば、一実施形態では、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ）、ＧＳリンカー（例えば、本明細書に記載のＧＳリンカー）、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジまたはＣＤ８ａヒンジであってもよい。一態様では、膜貫通ドメインは組換えられたものであってもよく、この場合、主にロイシンやバリンなどの疎水性残基を含むようになる。一態様では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットが、組換え膜貫通ドメインの各末端に見えられる。必要に応じて、２〜１０アミノ酸長の短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカーは、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域との間に結合を形成することができる。グリシン−セリン二量体は、極めて適切なリンカーを提供する。

【0118】

本明細書で使用される「細胞質ドメイン」は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは一般に、キメラ受容体が導入された免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性または補助活性であることができる。そのため、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、特定の機能を実行するように細胞を誘導するタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用できるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を使用する場合、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、完全な鎖の代わりにこのような切断部分を使用することができる。したがって、細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を含むことを意味する。

【0119】

ＴＣＲだけで生成されたシグナルはＴ細胞を完全に活性化するのに十分ではなく、二次シグナルおよび／または共刺激シグナルも必要であることはよく知られている。そのため、Ｔ細胞の活性化は、ＴＣＲを通じて抗原依存性一次活性化をトリガーするもの（一次細胞内シグナル伝達ドメイン）と、抗原非依存的に作用して二次シグナルまたは共刺激シグナルを提供するもの（共刺激ドメインのような二次細胞質ドメイン）という２つの異なる種類の細胞質シグナル伝達配列によって媒介されると言うことができる。

【0120】

「刺激」という用語は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体またはＣＡＲ）とその相同リガンド（またはＣＡＲの場合は腫瘍抗原）と結合し、これによりシグナル伝達イベント（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達、または適切なＮＫ受容体またはＣＡＲのシグナル伝達ドメインを介したシグナル伝達が挙げられるが、これらに限定されない）を媒介して誘導される初期応答を指す。刺激は、一部の分子の変化した発現を媒介することができる。

【0121】

「刺激分子」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現される、細胞質シグナル伝達配列を提供する分子を指し、このシグナル伝達配列は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの面に使用される免疫細胞の活性化を刺激的な方法で調節する。一態様では、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドが担持されているＭＨＣ分子の結合によって開始される一次シグナルであり、増殖、活性化、分化などを含むがこれらに限定されないＴ細胞応答の媒介を引き起こす。刺激的に作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭのシグナル伝達モチーフと呼ばれるものを含んでもよい。本発明で特に使用されるＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達配列の例として、ＣＤ３ζ、一般的なＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃＥｐｓｉｌоｎＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の特異的なＣＡＲにおいて、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列などの細胞内シグナル伝達配列を含む。本発明の特異的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列は、ヒト、またはマウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基である。

【0122】

「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドに特異的に結合し、それによりＴ細胞の共刺激反応を媒介する、Ｔ細胞上の相同結合パートナーを指し、前記Ｔ細胞の共刺激反応として、増殖が挙げられるが、これに限定されない。共刺激分子は、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子であり、効果的な免疫応答を促進する。共刺激分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体、およびＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、および４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含むが、これらに限定されない。このような共刺激分子のさらなる例には、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ/ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ/Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。

【0123】

共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であってもよい。共刺激分子は、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、およびＮＫ細胞受容体というタンパク質ファミリーで表すことができる。このような分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連の抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドなどが含まれる。

【0124】

細胞内シグナル伝達ドメインは、分子のすべての細胞内部分またはすべての天然の細胞内シグナル伝達ドメイン、またはその機能的フラグメントもしくは誘導体を含むことができる。

【0125】

「４−１ＢＢ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＡＡ６２４７８．２で提供されるアミノ酸配列を持つＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバー、またはマウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基を指す。また、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４〜２５５、またはウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基として定義される。一態様では、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ヒト、またはマウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基である。

【0126】

「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントを含む融合タンパク質を指し、前記軽鎖および重鎖可変領域は隣接し（例えば、短い柔軟なポリペプチドリンカーなどの合成リンカーを介して）、一本鎖ポリペプチドとして発現されることができ、しかも前記ｓｃＦｖは、それの由来である完全な抗体の特異性を保持する。特に明記しない限り、本明細書で使用されるように、ｓｃＦｖは任意の順序で（例えば、ポリペプチドのＮ−末端とＣ末端に対して）ＶＬとＶＨ可変領域を持つことができ、ｓｃＦｖはＶＬ−リンカー−ＶＨ、またはＶＨ−リンカー−ＶＬを含むことができる。

【0127】

「抗体重鎖」という用語は、天然に存在する構造として抗体分子に存在し、且つ通常に抗体のタイプを決定する２つのポリペプチド鎖のうちの大きい方を指す。
「抗体軽鎖」という用語は、天然に存在する構造として抗体分子に存在する２つのポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。κ（ｋ）とλ（ｌ）軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖のアイソタイプを指す。

【0128】

「組換え抗体」という用語は、例えば、ファージまたは酵母発現系によって発現する抗体など、組換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子（しかもその中で、ＤＮＡ分子は抗体タンパク質を発現する）または指定された抗体のアミノ酸配列を合成することによって生成された抗体を指すとも解釈すべきであり、前記ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、組換えＤＮＡまたは本分野で利用可能且つよく知られているアミノ酸配列技術によって得られた。

【0129】

「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を引き起こす分子を指す。免疫応答は、抗体の生成または特異的免疫能力を有する細胞の活性化に係ることができる。当業者は理解すべきであるように、また、事実上、すべてのタンパク質またはペプチドの任意の高分子は抗原とされることができる。また、抗原は組換えまたはゲノムＤＮＡに由来することができる。本明細書で当該用語が使用される場合、免疫応答を引き起こすタンパク質をコードするヌクレオチド配列または一部のヌクレオチド配列の任意のＤＮＡが含まれると当業者は理解すべきである。さらに、当業者は、抗原が遺伝子の完全長ヌクレオチド配列のみによってコードされる必要がないことを理解すべきである。本発明は、複数の遺伝子の一部のヌクレオチド配列の使用を含むが、これに限定されず、これらのヌクレオチド配列は、所望の免疫応答を引き起こすポリペプチドをコードするように異なる組み合わせで排列される。また、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要がないことを理解すべきである。抗原は合成によって生成してもよく、生物学的サンプルに由来してもよく、ポリペプチド以外の高分子であってもよい。このような生物学的サンプルは、組織サンプル、腫瘍サンプル、その他の生物学的成分を有する細胞または液体を含むことができるが、これらに限定されない。

【0130】

「腫瘍抗原」とは、細胞癌化の過程で発現される新生物または過剰発現産物をいう。一部の態様では、本発明の過剰増殖性障害抗原は癌に由来する。本発明の腫瘍抗原は、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ−１；Ｃタイプレクチン様分子−１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ−１３Ｒα）；インターロイキン１１受容体サブユニットα（ＩＬ−１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ−ＥＳＯ−１；ＨＩＶ−１Ｇａｇ；ＭＡＲＴ−１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソセリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体；血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）；ステージ特異的胎児抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３；ＴＧＳ５；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；Ｏ−アセチルＧＤ２ガングリオシド；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；Ｃｌａｕｄｉｎ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．１；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；κ軽鎖（ｋａｐｐａｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ）；ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２；ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ；ＦＢＰ；胚性ＡｃｈＲ；ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死ゾーンの癌胎児性変異体；Ｇタンパク質共役受容体Ｃグループ５−メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨｇｌｙｃｏｃｅｒａｍｉｄｅのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ｕｒоｐｌａｋｉｎ２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；ｐａｎｎｅｘｉｎ３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；臭覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオゲニン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；ｐ５３変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座ブレークポイント；アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ−ｍｙｃ鳥類骨髄症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロームＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；ｐｒｏａｃｒｏｓｉｎ結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）を含むが、これらに限定されない。

【0131】

「癌」という用語は、インビトロ（例えば、形質転換された細胞）またはインビボでの過剰増殖性細胞増殖を特徴する広範な病症カテゴリーを指す。本発明の方法により治療または予防できる病状は、例えば、良性または悪性腫瘍、さまざまな過形成などを含む様々な新生物を含む。本発明の方法は、このような病状に係る望ましくない過剰増殖性細胞増殖の阻害および／または逆転を達成することができる。癌は、乳癌、神経膠腫、血液癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎癌または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発性癌、前記癌の組み合わせおよび前記癌の転移巣の組み合わせを含むが、これらに限定されない。

【0132】

「トランスフェクション」または「形質導入（transduction）」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に転移または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクションされた」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクション、形質転換、または形質導入された細胞である。前記細胞は、原発性被験者細胞及びその後代を含む。

【0133】

「特異的に結合する」および「特異的に認識する」という用語は本明細書では同じ意味を有し、サンプルに存在する抗原（例えば、腫瘍抗原）を認識して結合する抗体またはリガンドを指し、当該抗体またはリガンドは基本的にはサンプル内の他の分子を認識または結合することはない。

【0134】

ここで使用される「難治」とは、治療に応答しない癌などの疾患を指す。実施形態では、難治性癌は、治療前または治療開始時に治療に対して耐性があることであってもよい。他の実施形態では、難治性癌は、治療中に耐性があることであってもよい。難治性癌は耐性癌とも呼ばれる。本発明において、難治性癌は、放射線療法に反応しない、放射線療法後に再発する、化学療法に反応しない、化学療法後に再発する、ＣＡＲ−Ｔ治療に反応しないまたは治療後に再発する癌を含むが、これらに限定されない。難治性または再発性の悪性腫瘍について、本明細書に記載されている治療スキームを使用することができる。

【0135】

本明細書で使用される「再発した」とは、改善の期間、例えば、癌治療などの療法による以前の治療後、疾患（例えば、癌）、または癌などの疾患の徴候および症状の回復をいう。
「個体」および「被験者」という用語は、本明細書では同等の意味を有し、ヒトおよび他の種の動物に由来し得る。

【0136】

「増強」という用語は、被験者または腫瘍細胞が本明細書に開示された治療に応答する能力を改善することを可能にすることを指す。例えば、増強された応答は、応答性の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％またはそれ以上の増加を含むことができる。本明細書で使用されるように、「増強」はまた、免疫エフェクター細胞療法などの治療に応答する被験者の数を増やすことを指すこともできる。例えば、増強された応答は、治療に応答する被験者の合計パーセンテージを指すことができ、パーセンテージは、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％またはそれ以上である。

【0137】

一態様では、治療は、次の臨床結果、すなわち、Ｔ細胞の抗腫瘍活性の増加、増強または延長；治療前の数と比較して、抗腫瘍Ｔ細胞または活性化Ｔ細胞の数の増加、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦαの分泌の促進、またはそれらの組み合わせにより決められる。もう一態様では、臨床結果は、腫瘍の退縮；腫瘍の縮小；腫瘍の壊死；免疫系を介した抗腫瘍反応；腫瘍の拡大、再発または拡散、またはそれらの組み合わせである。もう一態様では、治療効果は、Ｔ細胞の存在、Ｔ細胞炎症を示す遺伝子マーカーの存在、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦαの分泌の促進、またはそれらの組み合わせによって予測される。一態様では、腫瘍の治療は、治療によって癌細胞の成長、生存または活力を低下させることを含む。

【0138】

本明細書に開示されたような免疫エフェクター細胞は、経口、または、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、眼窩内、嚢内、腹腔内、直腸内、大槽内、腫瘍内、鼻腔内（ｉｎｔｒａｖａｓａｌｌｙ）、皮内、または皮膚パッチまたは経皮イオントフォレーシスを使用して皮膚を通した受動的または促進された吸収などの非経口胃腸外を含む様々な経路によって個体に投与することができる。

【0139】

本発明の方法を実施する際に投与される試薬の総量は、単一用量としてボーラス注入、または比較的短時間にわたる注入によって被験者に投与することができ、または段階的治療スキームを使用して投与することができ、延長した時間にわたって複数の用量を投与する。被験者の病状を治療するための組成物の量が、被験者の年齢および一般的な健康、並びに投与経路および投与される治療回数を含む多くの要因に依存することは、当業者は分かるであろう。これらの要因を考慮に入れて、当業者は必要に応じて具体的な用量を調整する。一般に、最初に、フェースＩとフェースＩＩの臨床試験を使用して組成物の調製および投与経路と頻度を測定する。

【0140】

範囲：この開示全体を通して、本発明の様々な態様は範囲の形で存在することができる。範囲の形に対する説明は、単に便宜および簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する変更不可能な制限と見なされるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲についての説明は、すべての可能なサブ範囲およびその範囲内の個々の値を具体的に開示したと見なされるべきである。例えば、１〜６のような範囲の説明は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などのサブ範囲、および、１、２、２．７、３、４、５、５．３、および６など、その範囲内の個々の値を具体的に開示したと見なされるべきである。別の例として、９５〜９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性の範囲を含み、さらに、９６〜９９％、９６〜９８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％、および９８〜９９％の同一性などのサブ範囲をも含む。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

【0141】

本開示に基づいて、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、開示された具体的な実施形態において多くの変更または変化をすることができ、しかも依然として同じまたは類似した結果を得ることができると当業者は理解するのであろう。本発明は範囲上で、本明細書に記載の具体的な実施形態（本発明の各態様としての例示説明のみを目的とする）に制限されていなく、機能的に同等の方法および組成は本発明の範囲内にある。実際、本発明の様々な修飾および本明細書に示されて説明された修飾は、前述の説明により当業者にとって明らかになるであろう。

【0142】

次は、具体的な実施例を組み合わせて本発明についてさらに説明する。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例において具体的な条件を示していない実験方法は、通常の条件、例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋらの『ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ』（科学出版社、２００２）に記載の条件、または製造業者によって推奨された条件に従う。

【0143】

本発明の例示的な抗原受容体、ＣＡＲを含み、およびエンジニアリング改善のための、並びに受容体を細胞に導入する方法について、例えば、中国特許出願公開番号ＣＮ１０７０５８３５４Ａ、ＣＮ１０７４６０２０１Ａ、ＣＮ１０５１９４６６１Ａ、ＣＮ１０５３１５３７５Ａ、ＣＮ１０５７１３８８１Ａ、ＣＮ１０６１４６６６６Ａ、ＣＮ１０６５１９０３７Ａ、ＣＮ１０６５５４４１４Ａ、ＣＮ１０５３３１５８５Ａ、ＣＮ１０６３９７５９３Ａ、ＣＮ１０６４６７５７３Ａ、ＣＮ１０４１４０９７４Ａ、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１７１８６１２１Ａ１、ＷＯ２０１８００６８８２Ａ１、ＷＯ２０１５１７２３３９Ａ８、ＷＯ２０１８／０１８９５８Ａ１に開示されたものを参照する。

【実施例】

【0144】

実施例１：ＣＡＲ−Ｔ細胞の構築
図１Ａに示されるプラスミドプロファイルを参照すると、本分野の従来の分子生物学的方法が使用されて、ヒト化抗体ｈｕ９Ｆ２（ヌクレオチド配列はＳＥＱＩＤＮＯ：５に示される通りであり、アミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：１４に示される通りである）の次世代キメラ抗原受容体を発現するレンチウイルスプラスミドＰＲＲＬＳＩＮ−ｈｕ９Ｆ２−２８Ｚが構築された。

【0145】

抗体ｈｕ９Ｆ２は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＳＥＱＩＤＮＯ：１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。

【0146】

Ｈｕ９Ｆ２−２８Ｚ配列は、ＣＤ８αシグナルペプチド（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）、ｈｕ９Ｆ２ｓｃＦｖ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、ＣＤ８ｈｉｎｇｅ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＣＤ２８膜貫通領域（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）と細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、およびＣＤ３の細胞内セグメントＣＤ３ζ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）から構成される。ＰＲＲＬＳＩＮ−ｈｕ９Ｆ２−２８Ｚを２９３Ｔパッケージングレンチウイルスにトランスフェクションして、レンチウイルスを得た。

【0147】

Ｔ細胞の活性化：ヒトＰＢＭＣをＡＩＭ−Ｖ培地で培養し、２％ヒトＡＢ型血清、５００Ｕ／ｍＬ組換えヒトＩＬ−２を加え、ＣＤ３／ＣＤ２８抗体結合磁気ビーズを加えて４８時間活性化した。得られたレンチウイルスを活性化されたＴ細胞に感染させ、ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を得た。フローサイトメトリーの結果は図１Ｂに示され、そのＣＡＲの配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示される。

【0148】

実施例２：ＣＣＫ８実験による、肝臓癌細胞及びＣＡＲ−Ｔ細胞に対するソラフェニブの毒性の検出
実施例１のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を取って、１ウェルあたり１００ｕｌ培地で、４×１０⁴の細胞にするように９６ウェルプレートに広げた。肝臓癌細胞ＰＬＣ／ＲＰＦ／５（ＧＰＣ３を低発現する）、ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＧＰＣ３を発現しない）、Ｈｕｈ７（ＧＰＣ３を高発現する）を取って、１ウェルあたり１００ｕｌ培地で、４０００の細胞にするように９６ウェルプレートに広げた。溶解度の異なるソラフェニブを取ってそれぞれ細胞に加え、６つの勾配（すなわち、１０μＭ、５μＭ、１μＭ、０．５μＭ、０．１μＭ、０μＭの６つの溶解度勾配、１０μＭ、５μＭ、１μＭ、０．５μＭ、０．１μＭは投与群、０μＭ１は０投与群）にし、さらに、培地のみのウェルの群をブランク群として設立した。４８時間後、各ウェルに１０μｌのＣＣＫ８試薬（Ｄｏｊｉｎｄｏ社）を加え、３７℃で１時間インキュベーションした後、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定し、細胞生存率をそれぞれ算出した。

【0149】

計算式は次の通りである：細胞生存率（％）＝［Ａ（投与）−Ａ（ブランク）］／［Ａ（０投与）−Ａ（ブランク）］
その結果は図２に示すように、ソラフェニブはＣＡＲＴ細胞に対して明らかな阻害効果を有さない。

【0150】

実施例３：ソラフェニブで前処理された腫瘍細胞に対するＣＡＲＴ細胞の殺傷活性
Ｈｕｈ７細胞を含む培地に、異なる濃度のソラフェニブ（１μＭ、０．１μＭ、０μＭ）をそれぞれ加え、３７℃で２４時間培養した後、トリプシン消化し、ＰＢＳで残りの薬剤を洗浄した。実施例１のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を取って、上記異なる濃度のソラフェニブで前処理されたＨｕｈ７細胞とそれぞれ１：１でインキュベーションし、１８時間後にＣｙｔｏｘ９６Ｎｏｎ−ＲａｄｉｏａｃｔｉｖｅＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙＡｓｓａｙ（Ｐｒｏｍａｇａ社、ＲＥＦ：Ｇ１７８２）を使用して、異なる濃度のソラフェニブで前処理された腫瘍細胞に対するｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞の殺傷を検出した。

【0151】

その結果、図３に示すように、ソラフェニブを加えなかった群と比較して、０．１μｍソラフェニブで処理された腫瘍細胞は、ＣＡＲＴ細胞の殺傷に対する感受性が１１％増加し、１μｍソラフェニブで処理された腫瘍細胞は、ＣＡＲＴ細胞の殺傷に対する感受性が１６．８％増加した。

【0152】

実施例４：ｈｅｐａ１−６−ＧＰＣ３皮下腫瘍に対する、ソラフェニブとＣＡＲＴ細胞との組み合わせの使用の阻害効果
本実施例では、マウスの遺伝子配列を使用してＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞内ドメインを構築した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（免疫系が正常なマウス）を次の５つの群に分けた：
Ｖｅｈｉｃｌｅ群：ソラフェニブ非投与群；
Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群：ソラフェニブ単独投与群；
ＣＡＲＴ＋ｖｅｈｉｃｌｅ群：ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８ＺＣＡＲＴ細胞と溶媒投与群；
ＵＴＤ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群：ＣＡＲに感染していないＴ細胞とソラフェニブ投与群；
ＣＡＲＴ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群：ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８ＺＣＡＲＴ細胞とソラフェニブ投与群。

【0153】

１、従来の分子生物学的手段を使用して、ヒトマウスキメラＧＰＣ３（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）の過剰発現されたマウス肝臓癌細胞Ｈｅｐａ１細胞モデル（Ｈｅｐａ１−６−ＧＰＣ３）を構築した。図４に示すように、ＧＰＣ３を過剰発現するＨｅｐａ１−６細胞はフローサイトメトリーにより確認された。

【0154】

２、対数増殖期にあり、且つ良好に増殖しているＨｅｐａ１−６−ＧＰＣ３細胞を収集し、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（免疫系が正常なマウス）の右腋窩皮下に１×１０⁷の標的細胞を播種した。

【0155】

３、腫瘍播種後４日目に、マウス脾臓Ｔリンパ球を採取して、ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８ＺＣＡＲＴ細胞を構築した。構築方法は下記の通りである。
マウスＣＤ８αシグナルペプチドのコード配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）、ｈｕ９Ｆ２ｓｃＦｖ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、マウスＣＤ８αヒンジ領域および膜貫通領域のコード配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、マウスＣＤ２８細胞内ドメインのコード配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、マウスＣＤ３ζ細胞内ドメインのコード配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）を順に接続し、ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８Ｚ遺伝子断片をインビトロ遺伝子合成によって取得し、レトロウイルスベクターＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ（Ａｄｄｇｅｎｅから購入）におけるＩＲＥＳ−ＧＦＰフラグメントをＭｌｕＩとＳａｌＩ二重制限酵素消化部位で置き換えて、組換えベクターＭＳＣＶ−ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８Ｚを得た。ＭＳＣＶ−ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８Ｚで２９３Ｔ細胞を感染させ、パッケージングされたレトロウイルスを得た。

【0156】

マウス脾臓Ｔリンパ球を採取し、ＤｙｎａｂｅａｄｓＭｏｕｓｅＴ−ａｃｔｉｖａｔｏｒＣＤ３／ＣＤ２８で活性化したあと、レトロウイルスを加えて１２時間感染させ、ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８ＺＣＡＲＴ細胞を得た。

【0157】

４、腫瘍播種後７日目にソラフェニブまたは溶媒を次のように投与した。すなわち、ソラフェニブを溶媒（５％ＤＭＳＯ、４５％ＰＥＧ４００、５０％Ｈ２Ｏ）に溶解し、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群、ＵＴＤ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群、ＣＡＲＴ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群マウスに強制飼養し、マウスあたりの投与量は７．５ｍｇ／ｋｇであった。Ｖｅｈｉｃｌｅ群とＣＡＲＴ＋ｖｅｈｉｃｌｅ群に溶媒を強制飼養した。ソラフェニブの最初の投与は０日目として記録し、連続５日間、１日１回投与した。

【0158】

５、腫瘍播種後８日目に、ＣＡＲＴ＋ｖｅｈｉｃｌｅ群とＣＡＲＴ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群に対して、各マウスに３×１０⁶のｈｕ９Ｆ２−ｍ２８ＺＣＡＲＴ細胞を与え、ＵＴＤ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群には３×１０⁶のＣＡＲを感染していないＴ細胞を与えた。

【0159】

腫瘍体積の変化を観察し続け、週に３回測定した。腫瘍体積の計算式は、（長さ×幅²）／２である。腫瘍体積の検出結果は図５に示すように、他の群と比較して、ＣＡＲＴ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群は、腫瘍増殖を有意に阻害する効果を有する（Ｔｗｏ−ｗａｙＡＮＯＶＡｗｉｔｈＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉｐｏｓｔ−ｔｅｓｔｓ，＊はｐ＜０．０５を表し、＊＊はｐ＜０．０１を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表す）。

【0160】

治療後２２日までに、ＣＡＲＴ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ併用治療群のマウス６匹中、４匹の腫瘍が消えたが、他の群には腫瘍が消えたマウスはなかった。治療後２２日目（すなわちＤａｙ２２）にマウスの首を切って殺処分し、マウスの皮下腫瘍を剥がして腫瘍の重量を量った。結果は図６に示す。その結果、Ｖｅｈｉｃｌｅ群、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群、ＣＡＲＴ＋ｖｅｈｉｃｌｅ群、ＵＴＤ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ群と比較して、ＣＡＲＴ＋ｓｏｒａｆｅｎｉｂ併用治療群には有意な腫瘍阻害効果があることは示された（Ｕｎｐａｉｒｅｄｔｔｅｓｔ、＊はｐ＜０．０５を表し、＊＊はｐ＜０．０１を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表す）。

【0161】

実施例５：ＣＡＲＴ細胞の脱顆粒、増殖、および殺傷に対するソラフェニブの影響の検出
１、脱顆粒マーカーＣＤ１０７ａに対するソラフェニブの影響
実施例１のｈｕ９Ｆ２−ｍ２８ＺＣＡＲＴ細胞と、異なる濃度のソラフェニブと、ＰＬＣ／ＲＰＦ／５細胞と一緒に２４時間インキュベーションした後、処理されたＣＡＲＴ細胞を収集し、抗ヒトＣＤ１０７ａ−ＰｅｒＣＰ抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびＧＦＰ蛍光タンパク質付きＧＰＣ３タグタンパク質をインキュベーションし、それぞれヒトＣＤ１０７ａとＣＡＲの発現状況を表したＰｅｒＣＰおよびＧＦＰの蛍光強度をフローサイトメトリーで検出した。その結果、図７Ａに示すように、ソラフェニブ未添加群とソラフェニブ処理群のＣＤ１０７ａの発現能力には有意な変化はなかった。

【0162】

２、ＣＡＲＴ細胞の増殖に対するソラフェニブの影響
ＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔキット（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を使用して異なる世代の細胞増殖の状況を監視した。ｈｕ９Ｆ２−ｍ２８ＺＣＡＲＴ細胞を取り、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ色素作業溶液を加え、３７℃でインキュベーションして色素を中和した。

【0163】

上記の処理後のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞とＰＬＣ／ＲＰＦ／５細胞を１：１の比率で２４ウェルプレートに広げ、それぞれ異なる濃度のソラフェニブ（０、１、５、１０μＭ）を加えて２４時間共培養し、各群に３つの複製ウェルを設けた。

【0164】

各群の細胞をフローサイトメトリーで検出し、ソラフェニブの結果を図７Ｂに示す。ソラフェニブ未添加群とソラフェニブ処理群をＧＰＣ３を発現する腫瘍細胞と共インキュベーションした後、ＣＡＲＴ細胞の増殖能力には有意な変化はなかった。

【0165】

３、インビトロ細胞毒性試験
ａ）ＰＬＣ／ＲＰＦ／５細胞を標的細胞とし、実施例１のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞をエフェクター細胞とした。適切な量のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を取り、異なる濃度のソラフェニブ（０、１、５、１０μＭ）で４時間処理した後、それぞれ遠心分離して収集した。

【0166】

実験群プレーティング：標的細胞の数は１００００／ウェルであり、エフェクター細胞は、ソラフェニブで処理されたｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞であった。エフェクター細胞と標的細胞との比率はそれぞれ、２０：１、１０：１、５：１、２．５：１であり、その比率によって異なる数のエフェクター細胞を加えた。各群に５つの複製ウェルを設けた。

【0167】

対照群プレーティング：この実験では、エフェクター細胞、標的細胞から自発的に放出されるＬＤＨの干渉、および培地に含まれるＬＤＨの干渉を排除するために、他の対照群を設置する必要がある。それぞれ、標的細胞の最大放出ＬＤＨ対照群；標的細胞の自発放出ＬＤＨ対照群；エフェクター細胞の自発放出ＬＤＨ対照群；ブランク培地バックグラウンド群；ブランク培地バックグラウンドにライセートを加えた群であった。各群に５つの複製ウェルを設けた。

【0168】

上記の細胞プレーティングを完成した後、３７℃、５％ＣＯ₂恒温インキュベーターでインキュベーションしてから、基質の発色のためにELISAマイクロプレートに移した。４９０ｎｍでの吸光度をマイクロプレートリーダーで測定し、細胞の殺傷毒性をそれぞれ算出した。

【0169】

ｂ）計算式は次の通りである：細胞毒性（％）＝（実験群−エフェクター細胞自発群−標的細胞自発群−バックグラウンド群）／（標的細胞最大群−標的細胞自発群−ライセートバックグラウンド群）。

【0170】

その結果は図７Ｃに示すように、ソラフェニブで処理されたｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞は、ＧＰＣ３陽性の腫瘍細胞に対する殺傷毒性に有意な変化はなかった。
上記の結果は、ソラフェニブがＣＡＲＴ細胞の脱顆粒能力、増殖、および腫瘍細胞に対する殺傷毒性を影響しないことを示した。

【0171】

実施例６：ＣＡＲＴ細胞のサイトカイン分泌に対するソラフェニブの影響
具体的な手順について、ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃｂｅａｄａｒｒａｙｓｙｓｔｅｍ（ＢＤ，ＵＳＡ）の説明書に記載の手順を参照するが、以下のように簡単に説明する。

【0172】

ａ）上澄を収集する：実施例１の１×１０⁵ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞をＧＰＣ３タンパク質コーティングプレートの２４ウェルプレートに広げ、異なる濃度のソラフェニブ（０、１、５、１０μＭ）を加えて処理し、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーターで培養した後に遠心分離して細胞の上澄を収集し、その中のヒトサイトカインＩＬ２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αの濃度を検出した。

【0173】

ｂ）ヒトサイトカインＩＬ２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αの捕捉用ミクロスフェア（ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃｂｅａｄａｒｒａｙｓｙｓｔｅｍ，ＢＤ，ＵＳＡ）を取って懸濁して混合した。

【0174】

ｃ）捕捉用ミクロスフェアの混合液および検出抗体を標準品または上澄サンプルに加え、暗所で室温でインキュベーションした。インキュベーション後、洗浄緩衝液で洗浄し、遠心分離して上澄を捨てた。

【0175】

ＩＬ２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αの分泌レベルをフローサイトメトリーで検出し、その結果は図８Ａ、８Ｂ、８Ｃに示し、その中で、ｎｓはｐ＞０．０５、＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１、＊＊＊はｐ＜０．０００１、１ｗａｙＡＮＯＶＡを表す。

【0176】

実施例７：ソラフェニブとヒトＣＡＲＴ細胞の併用による肝臓癌治療
１、ヒト肝臓癌細胞の移植腫瘍モデルを構築する：対数増殖期のＰＬＣ／ＲＰＦ／５細胞５×１０⁶の細胞をＮＳＧマウスの腋窩皮膚に播種し、播種当日を０日目（Ｄａｙ０）とした。

【0177】

２、１１日目（Ｄａｙ１１）：マウスの皮下腫瘍の体積は約１５０ｍｍ³であり、腫瘍の体積によってランダムに６つの群に分け、各群で５〜６匹にした。ソラフェニブを溶媒（５％ＤＭＳＯ、４５％ＰＥＧ４００、５０％Ｈ２Ｏ）に溶解させた。ソラフェニブ非投与群には溶媒を与えた。

【0178】

（１）対照群（Ｖｅｈｉｃｌｅ）：Ｄａｙ１１から実験群と同じ容量で溶媒を１日１回、２週間与えた。
（２）単独治療群（合計３つの群）：
Ｓｏｒａ７．５：Ｄａｙ１１からソラフェニブ７．５ｍｇ／ｋｇを１日１回、２週間強制飼養した。

【0179】

Ｓｏｒａ３０：Ｄａｙ１１からソラフェニブ３０ｍｇ／ｋｇを１日１回、２週間強制飼養した。
ＣＡＲ＋Ｖｅｈｉｃｌｅ：Ｄａｙ１１から実験群と同じ容量で溶媒を１日１回、２週間与えた。同日（Ｄａｙ１１）に溶媒投与後、実施例１の２×１０⁶のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を尾静脈注射により投与した。

【0180】

（３）併用治療群（合計２つの群）：
ＣＡＲ＋Ｓｏｒａ７．５：Ｄａｙ１１からソラフェニブ７．５ｍｇ／ｋｇを１日１回、２週間強制飼養した。同日（Ｄａｙ１１）にソラフェニブ投与後、実施例１の２×１０⁶のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を尾静脈注射により投与した。

【0181】

ＣＡＲ＋Ｓｏｒａ３０：Ｄａｙ１１からソラフェニブ３０ｍｇ／ｋｇを１日１回、２週間強制飼養した。同日（Ｄａｙ１１）にソラフェニブ投与後、実施例１の２×１０⁶のｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を尾静脈注射により投与した。

【0182】

３、週に２回、マウスの皮下腫瘍の体積変化を測定して記録した。腫瘍体積の計算式は、腫瘍体積＝（腫瘍長さ×腫瘍幅²）／２である。結果を図９Ａに示す。単独治療群と比較して、ソラフェニブとｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞の併用治療は、腫瘍増殖を有意に阻害することができる（Ｐ＜０．００１、２ｗａｙＡＮＯＶＡ）。

【0183】

対照群を参照して腫瘍阻害率を算出し、腫瘍播種後の４３日目（Ｄａｙ４３）の各群の腫瘍阻害率は、Ｓｏｒａ７．５では１８．８％、Ｓｏｒａ３０では３５．８％、ＣＡＲ＋Ｖｅｈｉｃｌｅでは２５．３％、ＣＡＲ＋Ｓｏｒａ７．５では６８．７％、ＣＡＲ＋Ｓｏｒａ３０では７５．２％であった。

【0184】

４３日目（Ｄａｙ４３）にマウスを安楽死させ、皮下腫瘍を剥し、腫瘍の重量を量った。その結果、図９Ｂに示すように、単独治療群と比較して、ソラフェニブとｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞の併用治療（７．５ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ）における腫瘍の重量は有意に減少した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、１ｗａｙＡＮＯＶＡ）。

【0185】

４、ＣＡＲＴ細胞腫瘍内の浸潤と細胞アポトーシス
１）従来の組織切片調製方法を用いて、安楽死させたマウスの腫瘍組織を組織切片にした。

【0186】

２）抗ヒトＣＤ３抗体（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてステップ１）で準備した腫瘍組織切片中のヒトＣＡＲＴ細胞を検出した。結果を図１０Ａに示す。ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞単独で治療したマウスと比較して、ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞とソラフェニブ（７．５ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ）を組み合わせて治療したマウスの方は、腫瘍組織にはより多くのＣＤ３＋のヒトＣＡＲＴ細胞があり（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、１ｗａｙＡＮＯＶＡ）、ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞治療を受けなかった群では、ＣＤ３＋ヒトＣＡＲＴ細胞の染色は観察されなかった。その結果は、ソラフェニブが腫瘍組織におけるＣＡＲＴ細胞の浸潤を促進できることを示した。

【0187】

３）抗ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ−３抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、ステップ１での腫瘍組織切片のアポトーシス細胞を検出した
組織切片を免疫組織化学染色し、腫瘍組織の細胞核をヘマトキシリンで再染色した。結果を図１０Ｂに示す。対照群とｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞で単独治療したマウスと比較して、ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞とソラフェニブ（７．５ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ）を組み合わせて治療したマウスのほうは、腫瘍組織ではより多くのｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ−３陽性細胞を有する。

【0188】

２匹のマウスの腫瘍切片で合計５つの異なる視野から観察して統計した結果、図１０Ｃに示すように、ソラフェニブとＣＡＲＴ細胞を組み合わせて使用する場合、アポトーシスが発生した腫瘍細胞の数は有意に増加した（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、１ｗａｙＡＮＯＶＡ）。

【0189】

実施例８：ソラフェニブとヒトＣＡＲＴ細胞との相乗作用のインビトロ検出
ＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔキットの実験操作を参照して、ヒト肝癌細胞ＰＬＣ／ＲＰＦ／５をＣｅｌｌＴｒａｃｅ色素で標識した。標識されたＰＬＣ／ＲＰＦ／５をｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞と１：１の比率で混合し、異なる濃度のソラフェニブ（０、１、５、１０μＭ）をそれぞれ加えて細胞インキュベーターに４８時間共インキュベーションし、遠心分離して細胞を収集し、ＦＩＴＣＡｎｎｅｘｉｎＶアポトーシス検出キット（ＢＤから購入）における染色緩衝液を使用して細胞ペレットを再懸濁し、染色するためにＡｎｎｅｘｉｎＶ−ＦＩＴＣ色素を加えた。機器による検出：染色された細胞を遠心分離して収集し、染色緩衝液で再懸濁し、フローサイトメトリーで検出した。ＢＶ４２１チャネルで収集された紫色の光のシグナルは、すべての腫瘍細胞を表す。ＦＩＴＣチャネルで収集された緑色の光は、アポトーシスが発生した腫瘍細胞を表す。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアでデータを処理した。

【0190】

その結果、図１１に示すように、ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞とソラフェニブとを組み合わせて治療した腫瘍細胞のアポトーシスの割合は有意に上昇し、アポトーシスが発生した腫瘍細胞の数は有意に増加した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、１ｗａｙＡＮＯＶＡ）。

【0191】

上記のインビトロ実験結果は、ソラフェニブとＣＡＲＴ細胞の併用治療が腫瘍細胞のアポトーシスを相乗的に促進できることを示した。
実施例９：マウスの肝臓癌移植腫瘍の治療に対するＣＡＲＴ細胞とレゴラフェニブとの組み合わせの使用の影響
実施例４の操作を参照して、Ｈｅｐａ１−６−ｃｈＧＰＣ３細胞Ｃ５７ＢＬ／６の移植腫瘍モデルとｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を構築した。

【0192】

腫瘍細胞移植後８日目に、マウスを腫瘍の体積によってランダムに３つの群に分け、レゴラフェニブ治療群と、レゴラフェニブ＋ＣＡＲＴ併用群のマウスに１０ｍｇ／ｋｇのレゴラフェニブを強制飼養し、対照群に溶媒を与え、１日１回、連続して１０日間与えた。

【0193】

腫瘍細胞移植後９日目に、ＣＡＲＴ治療群マウスおよびレゴラフェニブ＋ＣＡＲＴ併用群に２×１０⁶のＣＡＲＴ細胞を尾静脈注射により投与した後、マウスの皮下腫瘍の体積変化を週に２回測定して記録し、その結果を図１２に示す。

【0194】

実施例１０：ソラフェニブとＣＡＲＴ細胞の併用治療の臨床試験
被験者Ａは６０歳、体重７７ｋｇ、身長１７０ｃｍであり、肝細胞癌と診断されて７か月の手術治療後も進行性の状態にあり、免疫組織化学ではＧＰＣ３陽性（７０％、＋＋〜＋＋＋）を示した。この状況下で、患者は本発明の技術構成の治療を受けた。

【0195】

アフェレーシス後、患者はソラフェニブを１日２回、１回当たり２００ｍｇ〜４００ｍｇを経口服用し（患者の耐容用量を基準にして、当該被験者では１回２００ｍｇ）、毎日投与し続けた。

【0196】

実施例１の操作を参照し、レンチウイルスを患者のＴ細胞に感染させた後、ｈｕ９Ｆ２−２８ＺＣＡＲＴ細胞を調製した。
ソラフェニブを投与し始めて２週間後、しかもＣＡＲ−Ｔ細胞の投与前に、患者は、フルダラビン約３９ｍｇ／日×４日（約２０ｍｇ／ｍ²／日）とシクロホスファミド約１０００ｍｇ／日×２日（約５００ｍｇ／ｍ²／日）を含む、リンパ球の除去を受けた。

【0197】

リンパ球の除去処理後の３日目から、５×１０⁸のＣＡＲ−Ｔ細胞（約６．４９×１０⁶のＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者の体重、合計投与量は約０．１３×１０⁸のＣＡＲ−Ｔ細胞）を２日間連続して与えた。

【0198】

ＣＡＲ−Ｔ細胞投与後の３日目に、ＣＡＲ−Ｔ細胞投与前と比較してＡＦＰは３５％低下し、ＣＡＲ−Ｔ細胞投与後の１３日目に、ＣＡＲ−Ｔ細胞投与前と比較してＡＦＰは５８．２％低下した。

【0199】

４週間治療した後にＣＴ検査した結果、画像は図１３に示すように、ベースラインと比べて、３つの可能な標的巣は明らかに縮小し、時点での部分寛解（ＰＲ）に達した。
上記実施例において、例示的に、ＧＰＣ３を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞のＣＡＲに有するＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示されるアミノ酸配列を使用した。当業者は上記実施例の教示に従って、例えば、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、２３、または２４に示される配列を使用することができる。

【0200】

上記実施例において、例示的に、ＧＰＣ３を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞を使用した。当業者は本願の教示に従って、他の標的を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞を使用することができ、例えば、ＥＧＦＲを標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞（例示的に、ＥＧＦＲを標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞のｓｃＦｖの配列はＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示される）、ＣＬＤ１８Ａ２を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞（例示的に、ＣＬＤ１８Ａ２を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞のｓｃＦｖの配列はＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示される）を使用することができる。

【0201】

本発明に係る配列情報は以下の通りである：

【0202】

【表1】

【0203】

本発明において言及されたすべての文献は、各文献が参照として単独で引用されるように、参照として本願に引用される。また、本発明の上記の教示内容を読んだ上で、当業者は本発明について様々な修正または変更をすることができ、これらの同等の形態も、本願の添付の請求の範囲によって限定される範囲内にあると理解されたい。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11】

【図12】

【図13】

【配列表】

2021512875000001.app

【手続補正書】

【提出日】2020年12月3日

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

免疫エフェクター細胞および第２の治療剤を含有することを特徴とする、腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤であって、前記免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原を認識する受容体を発現し、
前記第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩である、腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤

【化1】

［式中、Ａｒ’は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンおよびＣ１−１０アルキル基から選択され、
Ｍは、−Ｏ−またはーＳ−から選択される１つ以上の架橋基であり、
Ｐｙ（Ｘ）はＸで置換されたピリジル基であり、ＸはーＣ（Ｏ）Ｒ_ｘであり、その中で、Ｒ_ｘはＮＲ_ａＲ_ｂであり、Ｒ_ａとＲ_ｂはそれぞれ、
ａ）水素、
ｂ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｃ）ヒドロキシで置換されたＣ１−１０アルキル基、
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含むＣ３−１２シクロアルキル基、または
ｅ）−ＯＳｉ（Ｒ_ｆ）３（式中、Ｒ_ｆはＣ１−１０アルキル基である）
であり、
Ａｒ”は非置換または置換フェニル基であり、置換基はハロゲンまたはＷｎから選択され、ｎ＝０〜３であり、Ｗは、
ａ）Ｃ１−１０アルキル基、
ｂ）Ｃ１−１０アルコキシ基、
ｃ）Ｃ１−１０ハロアルキル基、
ｄ）１〜３個のＮ、ＳまたはＯのヘテロ原子を含むかつＣ１−１０アルキル基で置換されてもよいＣ３−１２ヘテロアリール基
から選択される］。

【請求項2】

腫瘍に罹患している個体に前記免疫エフェクター細胞が投与される前に、前記個体に対してリンパ球が除去されないことを特徴とする、請求項１に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項3】

前記免疫エフェクター細胞および前記第２の治療剤の治療効果は、前記免疫エフェクター細胞および前記第２の治療剤のいずれか１つを単独で使用する効果より大きいことを特徴とする、請求項１に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項4】

前記Ａｒ”は置換フェニル基であり、置換基は、塩素、臭素、フッ素、トリフルオロメチル、メトキシ、及びｔｅｒｔ−ブチルからなる群より選択されるいずれか１つまたはそれらの組み合わせであり、若しくは、
前記ＭはーＯ−であり、若しくは、
前記Ｒａおよび前記ＲｂはそれぞれＨまたはＣ１−１０アルキルであり、好ましくは、前記Ｒａおよび前記ＲｂはそれぞれＨとメチル基であることを特徴とする、請求項１に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項5】

前記薬学上許容される塩は、ａ）無機酸および有機酸の塩基性塩と、ｂ）有機および無機塩基の酸性塩とから選択され、前記無機酸および有機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、１−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸からなる群より選択され、前記有機および無機塩基のカチオンは、アルカリ金属カチオン、アルカリ土類金属カチオン、アンモニウムカチオン、脂肪族基置換アンモニウムカチオン、及び芳香族基置換アンモニウムカチオンからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項6】

前記第２の治療剤は、下記の
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルチオ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−（５−トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−カルバモイルー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−カルバモイルー４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−２−フルオロ−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルチオ）フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ））フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（２−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
Ｎ−（２−メトキシ−４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（３−クロロ−４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素
のいずれか１つで示される化合物またはその薬学上許容される塩から選択されるものであり、
好ましくは、前記第２の治療剤は、下記式ＩＩまたは式ＩＩＩで表される化合物、またはその薬学上許容される塩から選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【化2】

【請求項7】

前記薬学上許容される塩は、トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、塩酸塩、メタンスルホン酸塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項６に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項8】

前記第２の治療剤は、式ＩＩＩで表される化合物または式ＩＩＩで表される化合物の水和物であり、好ましくは一水和物であることを特徴とする、請求項６に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項9】

【請求項10】

前記免疫エフェクター細胞の１回当たりの投与量は約１×１０^５〜１×１０^８細胞／ｋｇ被験者の体重であり、
好ましくは、１回あたりの投与量は約１×１０^５〜１×１０^７細胞／ｋｇ被験者の体重であることを特徴とする、請求項９に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項11】

前記免疫エフェクター細胞および前記第２の治療剤の投与順序は決まっておらず、
好ましくは、前記第２の治療剤の投与中に前記免疫エフェクター細胞を投与し、
更に好ましくは、前記第２の治療剤は経口投与されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項12】

前記受容体は、キメラ抗原受容体（ＣｈｉｍｅｒｉｃＡｎｔｉｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒ、ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（Ｔｃｅｌｌｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（Ｔｃｅｌｌａｎｔｉｇｅｎｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）およびそれらの組み合わせからなる群より選択され、
好ましくは、前記キメラ抗原受容体は、
（ｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメイン；または
（ｉｉｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζの細胞内ドメインを有することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項13】

前記腫瘍抗原は、
甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ−１；Ｃタイプレクチン様分子−１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ−１３Ｒα）；インターロイキン１１受容体サブユニットα（ＩＬ−１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ−ＥＳＯ−１；ＨＩＶ−１Ｇａｇ；ＭＡＲＴ−１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソセリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）；ステージ特異的胎児抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ；ＴＧＳ５；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；Ｏ−アセチルＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；Ｃｌａｕｄｉｎ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．１；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；κ軽鎖（ｋａｐｐａｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ）；ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２；ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ；ＦＢＰ；胚性ＡｃｈＲ；ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死ゾーンの癌胎児性変異体；Ｇタンパク質共役受容体Ｃグループ５−メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨｇｌｙｃｏｃｅｒａｍｉｄｅのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ｕｒоｐｌａｋｉｎ２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；ｐａｎｎｅｘｉｎ３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；臭覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオゲニン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；ｐ５３変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座ブレークポイント；アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ−ｍｙｃ鳥類骨髄症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロームＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；ｐｒｏａｃｒｏｓｉｎ結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）
からなる群より選択され、
好ましくは、前記腫瘍抗原は固形腫瘍抗原であり、好ましくは、前記固形腫瘍抗原は血管内皮増殖因子受容体、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＣ３、またはＣｌａｕｄｉｎ１８．２であり、より好ましくは、前記固形腫瘍抗原はＧＰＣ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、または血管内皮増殖因子受容体であることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項14】

前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体は、配列番号１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および配列番号１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、
好ましくは、前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号１４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有し、
更に好ましくは、前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体のキメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２１、２２、２３または２４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有することを特徴とする、請求項１２に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項15】

前記キメラ抗原受容体は、
腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメント、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナル伝達ドメインを有し、
前記腫瘍抗原を特異的に認識する抗体またはそのフラグメントは、配列番号１５、１６、１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および配列番号１８、１９、２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項１２に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項16】

前記第２の治療剤は式ＩＩで表される化合物、またはその薬学上許容される塩であり、

【化3】

【請求項17】

前記腫瘍は、乳癌、神経膠腫、血液癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎癌または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発性癌、前記癌の組み合わせおよび前記癌の転移巣の組み合わせを含み、
好ましくは、前記腫瘍は、肝臓癌、腎細胞癌、肺扁平上皮癌、および甲状腺癌からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項18】

前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、マスト細胞、骨髄由来の食細胞およびそれらの組み合わせからなる群より選択され、
好ましくは、前記免疫エフェクター細胞はＴ細胞またはＮＫ細胞から選択され、
より好ましくは、前記免疫エフェクター細胞は自己免疫エフェクター細胞であることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項19】

前記第２の治療剤はソラフェニブ又はレゴラフェニブであることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の腫瘍治療剤または癌細胞の成長、生存若しくは活力の低下剤。

【請求項20】

腫瘍を治療するためのキットであって、前記キットは、
１）腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞；
２）第２の治療剤；
３）上記１）および２）に記載の物質を含むための容器；および
４）前記キットを使用して腫瘍を治療するための投与プロトコルを含み、
前記免疫エフェクター細胞と第２の治療剤をそれぞれ単独で使用する場合よリ優れた効果を提供できるように前記免疫エフェクター細胞と第２の治療剤を配合し、
前記第２の治療剤は、式Ｉで表される化合物、またはその薬学上許容される塩を含み、

【化4】