特表 2021-513534 抗癌剤として有用なテトラヒドロキナゾリン誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2021-513534(P2021-513534A)

(43)【公表日】2021年5月27日

(54)【発明の名称】抗癌剤として有用なテトラヒドロキナゾリン誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07D 403/04 20060101AFI20210430BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210430BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20210430BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20210430BHJP

   A61K 31/517 20060101ALI20210430BHJP

   C07D 487/10 20060101ALI20210430BHJP

   C07D 403/14 20060101ALI20210430BHJP

   C07D 239/94 20060101ALI20210430BHJP

【ＦＩ】

   C07D403/04CSP

   A61P43/00 111

   A61P35/00

   A61P35/02

   A61K31/517

   C07D487/10

   C07D403/14

   C07D239/94

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】113

(21)【出願番号】特願2020-542790(P2020-542790)

(86)(22)【出願日】2019年2月7日

(85)【翻訳文提出日】2020年10月6日

(86)【国際出願番号】IB2019050993

(87)【国際公開番号】WO2019155399

(87)【国際公開日】20190815

(31)【優先権主張番号】62/628,350

(32)【優先日】2018年2月9日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/651,796

(32)【優先日】2018年4月3日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/782,408

(32)【優先日】2018年12月20日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100120112

【弁理士】

【氏名又は名称】中西 基晴

(74)【代理人】

【識別番号】100135415

【弁理士】

【氏名又は名称】中濱 明子

(72)【発明者】

【氏名】ブルーン，アレクセイ

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ピン

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ヘンミャオ

(72)【発明者】

【氏名】コリンズ，マイケル・レイモンド

(72)【発明者】

【氏名】リントン，マリア・アンジェリカ

(72)【発明者】

【氏名】マデルナ，アンドレアス

(72)【発明者】

【氏名】永田 麻子

(72)【発明者】

【氏名】パルマー，シンシア

(72)【発明者】

【氏名】プランケン，サイモン

(72)【発明者】

【氏名】スパングラー，ジリアン・エリス

【テーマコード（参考）】

4C050

4C063

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C050AA04

4C050BB02

4C050CC02

4C050EE02

4C050FF01

4C050GG01

4C050HH04

4C063AA01

4C063AA03

4C063BB01

4C063BB02

4C063BB08

4C063CC31

4C063CC34

4C063DD02

4C063DD03

4C063DD22

4C063DD31

4C063EE01

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC50

4C086CB02

4C086GA07

4C086GA12

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZB27

(57)【要約】

一般式：

の化合物、これらの化合物の調製のためのプロセス、これらの化合物を含有する組成物およびこれらの化合物の使用。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物：

【化1】

またはその薬学的に許容可能な塩であって；式中：
Ｊは、３〜１２個の環原子を有する複素環であり、ここで、Ｊは、１、２、３、４、５または６個のＲ^２で置換されていてもよく；
Ｋは、Ｃ_６〜Ｃ_１２アリールであり、またはＫは、５〜１２個の環原子を有するヘテロアリールであり、ここで、Ｋは、１、２、３、４、５、６または７個のＲ^３で置換されていてもよく；
Ｗは、以下の基：

【化2】

からなる群から選択され：
ここで、Ｗは、１、２または３個のＲ^５で置換されていてもよく；
それぞれのＲ^１は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択されるか、または２個のＲ^１が連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成してもよく；
それぞれのＲ^２は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−シアノおよびオキソからなる群から選択されるか、または２個のＲ^２が連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成してもよく；
それぞれのＲ^３は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロ−アルキル、Ｎ（Ｒ^６）_２、オキソおよびシアノからなる群から選択されるか、または２個のＲ^３が場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成してもよく；
Ｒ^４は、−Ｘ−Ｙ−Ｚであり、ここで：
Ｘは、存在しないか、または酸素、硫黄および−ＮＲ^６−からなる群から選択され、
Ｙは、存在しないか、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキレニル（ａｌｋｙｌｅｎｌｙｌ）であり、かつ
Ｚは、Ｈ、−Ｎ（Ｒ^６）_２、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ^６）_２、−ＯＲ^６、３〜１２個の環原子を有する複素環、５〜１２個の環原子を有するヘテロアリールおよびＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルから選択され、
ここで、Ｒ^４は、１個以上のＲ^７で置換されていてもよく；
それぞれのＲ^５は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲンおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
それぞれのＲ^６は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルからなる群から選択されるか、または２個のＲ^６が連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成してもよく；
それぞれのＲ^７は、独立してＲ^７’またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｒ^７’であり、ここで、それぞれのＲ^７’は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ^６）_２、３〜１２個の環原子を有する複素環およびオキソからなる群から選択され；そして
ｍは、０、１、２、３、４、５、６または７である、
前記化合物または塩。

【請求項2】

式（Ｉ）の化合物：

【化3】

またはその薬学的に許容可能な塩であって；式中：
Ｊは、以下の基：

【化4】

からなる群から選択され、ここで、Ｗ^＊は、Ｗへの結合の点を表わし、Ｊは、１、２、３、４、５または６個のＲ^２で置換されていてもよく；
Ｋは、以下の基：

【化5】

からなる群から選択されるか、または
Ｋは、以下の基：

【化6】

からなる群から選択され、ここで、Ｋは、１、２、３、４、５、６または７個のＲ^３で置換されていてもよく；
Ｗは、以下の基：

【化7】

からなる群から選択され、ここで、Ｗは、１、２または３個のＲ^５で置換されていてもよく；
それぞれのＲ^１は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択されるか、または２個のＲ^１が連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成してもよく；
それぞれのＲ^２は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−シアノおよびオキソからなる群から選択され、または２個のＲ^２は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
それぞれのＲ^３は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロ−アルキル、Ｎ（Ｒ^６）_２、オキソおよびシアノからなる群から選択されるか、または２個のＲ^３が連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成してもよく；
Ｒ^４は、−Ｘ−Ｙ−Ｚであり、ここで：
Ｘは、存在しないか、または酸素、硫黄および−ＮＲ^６−からなる群から選択され、
Ｙは、存在しないか、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキレニル（ａｌｋｙｌｅｎｌｙｌ）であり、かつ
Ｚは、Ｈ、−Ｎ（Ｒ^６）_２、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ^６）_２、−ＯＲ^６、３〜１２個の環原子を有する複素環、５〜１２個の環原子を有するヘテロアリールおよびＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルから選択され、
ここで、Ｒ^４は、１個以上のＲ^７で置換されていてもよく；
それぞれのＲ^５は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲンおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
それぞれのＲ^６は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルからなる群から選択されるか、または２個のＲ^６が連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成してもよく；
それぞれのＲ^７は、独立してＲ^７’またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｒ^７’であり、ここで、それぞれのＲ^７’は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ^６）_２、３〜１２個の環原子を有する複素環およびオキソからなる群から選択され；そして
ｍは、０、１、２、３、４、５、６または７である
前記化合物または塩。

【請求項3】

式（Ｉ）の化合物：

【化8】

またはその薬学的に許容可能な塩であって；式中：
Ｊは、以下の基：

【化9】

からなる群から選択され、ここで、Ｗ^＊は、Ｗへの結合の点を表わし、Ｊは、Ｒ^２で置換されていてもよく；
Ｋは、以下の基：

【化10】

からなる群から選択されるか、または
Ｋは、以下の基：

【化11】

からなる群から選択され、ここで、Ｋは、１または２個のＲ^３で置換されていてもよく；
Ｗは、以下の基：

【化12】

からなる群から選択され、ここで、Ｗは、１、２または３個のＲ^５で置換されていてもよく；
Ｒ^１は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキルおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
それぞれのＲ^３は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロ−アルキルおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシからなる群から選択され；
Ｒ^４は、−Ｘ−Ｙ−Ｚであり、ここで：
Ｘは、存在しないか、または酸素であり、
Ｙは、存在しないか、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキレニル（ａｌｋｙｌｅｎｌｙｌ）であり、かつ
Ｚは、Ｈ、−Ｎ（Ｒ^６）_２、−ＯＲ^６および３〜１２個の環原子を有する複素環から選択され、
ここで、Ｒ^４は、１個以上のＲ^７で置換されていてもよく；
それぞれのＲ^５は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲンおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
それぞれのＲ^６は、独立して水素およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルからなる群から選択され；
それぞれのＲ^７は、独立してＲ^７’またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｒ^７’であり、ここで、それぞれのＲ^７’は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキルおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
ｍは、０または１である
前記化合物または塩。

【請求項4】

請求項２に記載の化合物または塩であって、Ｋが、以下の基：

【化13】

からなる群から選択される化合物または塩。

【請求項5】

請求項２に記載の化合物または塩であって、Ｋが、以下の基：

【化14】

からなる群から選択される化合物または塩。

【請求項6】

請求項２に記載の化合物または塩であって、Ｋが、以下の基：

【化15】

である化合物または塩。

【請求項7】

請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または塩であって、Ｗが、以下の基：

【化16】

である化合物または塩。

【請求項8】

請求項１、２、４、５または６のいずれか１項に記載の化合物または塩であって、Ｊが、置換されていてもよい以下の基：

【化17】

である化合物または塩。

【請求項9】

請求項１、２、４、５、６、７または８のいずれか１項に記載の化合物または塩であって、Ｊが、以下の基：

【化18】

からなる群から選択される化合物または塩。

【請求項10】

請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物または塩であって、Ｒ^４が、以下の基：

【化19】

からなる群から選択される化合物または塩。

【請求項11】

【化20-1】

【化20-2】

【化20-3】

からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項12】

【化21-1】

【化21-2】

からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項13】

１個以上の水素原子が重水素原子で置き換えられている、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容可能な塩。

【請求項14】

療法上有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項15】

細胞中のＫＲＡＳ活性を阻害するための方法であって、ＫＲＡＳ活性の阻害が望まれる該細胞を、有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩、または前記の化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩を含有する医薬組成物と接触させることを含む方法。

【請求項16】

哺乳類における異常な細胞増殖を処置する方法であって、該方法が、療法上有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を該哺乳類に投与することを含む方法。

【請求項17】

請求項１６に記載の方法であって、該異常な細胞増殖が、癌である方法。

【請求項18】

請求項１７に記載の方法であって、該癌が、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部の癌、皮膚または眼内メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、慢性または急性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫または下垂体腺腫である方法。

【請求項19】

請求項１７に記載の方法であって、該癌が、肺癌、結腸癌、膵臓癌および卵巣癌である方法。

【請求項20】

請求項１７に記載の方法であって、該癌が、肺癌である方法。

【請求項21】

請求項１７に記載の方法であって、該癌が、膵臓癌である方法。

【請求項22】

哺乳類における異常な細胞増殖の処置において有用な医薬品の調製のための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用。

【請求項23】

請求項２２に記載の使用であって、異常な細胞増殖が、癌である使用。

【請求項24】

請求項２３に記載の使用であって、該癌が、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部の癌、皮膚または眼内メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、慢性または急性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫または下垂体腺腫である使用。

【請求項25】

請求項２３に記載の使用であって、該癌が、肺癌、結腸癌、膵臓癌および卵巣癌である使用。

【請求項26】

請求項２３に記載の使用であって、該癌が、肺癌である使用。

【請求項27】

請求項２３に記載の方法であって、該癌が、膵臓癌である方法。

【請求項28】

請求項１７に記載の方法または請求項２３に記載の使用であって、該癌が、ＫＲＡＳ変異と関係している方法または使用。

【請求項29】

請求項１７に記載の方法または請求項２３に記載の使用であって、該癌が、ＫＲＡＳ変異と関係しており、それが、Ｇ１２Ｃ変異である方法または使用。

【請求項30】

それを必要とする患者において癌を処置するための方法であって、該方法が、以下の工程：
（ａ）該癌が、ＫＲＡＳ変異と関係していることを決定し；そして
（ｂ）該患者に療法上有効量の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬組成物を投与する；
を含む方法。

【請求項31】

請求項３０に記載の方法であって、前記の変異が、Ｇ１２Ｃ変異である方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＫＲＡＳタンパク質の阻害剤として有用な新規テトラヒドロキナゾリン誘導体に関する。本発明は、哺乳類、特にヒトにおける異常な細胞増殖の処置においてそのような化合物を使用する方法に、および抗癌剤としての医薬組成物にも関する。

【背景技術】

【0002】

カーステンラット肉腫癌遺伝子ホモログ（Ｋｉｒｓｔｅｎ Ｒａｔ Ｓａｒｃｏｍａ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｈｏｍｏｌｏｇ）（ＫＲＡＳ）は、細胞の外側からのシグナルを細胞内の増殖および生存シグナルに統合する小型のＧＴＰアーゼである。これは、成長因子が媒介するグアニン交換因子（ＧＥＦ）の活性化を通して生じ、それは、ＲａｓからＧＤＰを除去し、細胞質中に高濃度で存在するＧＴＰが入ることを可能にする。ＧＴＰヌクレオチドが結合すると、２つの無秩序な（ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ）スイッチ領域（スイッチＩおよびスイッチＩＩ）がヌクレオチドのガンマホスフェートと相互作用してＲａｓがＲａｓ結合ドメイン（ＲＢＤ）を介してエフェクター酵素と相互作用することを可能にし、それが、遺伝子発現を変化させるシグナル伝達カスケードを開始する。ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の結合は、ＧＴＰのＧＤＰへの内因性の変換を加速し、タンパク質を不活性状態にしてシグナルを終結させる(Rajalingam, K., R. Schreck, U. R. Rapp and S. Albert (2007). “Ras oncogenes and their downstream targets.”Biochim Biophys Acta 1773(8): 1177-1195.)。

【0003】

Ｒａｓは、ヒト腫瘍の２０％に至るまでにおいてコドン１２、１３および６１の位置で変異しており、それは、そのタンパク質のＧＴＰ結合形態を促進する役割を果たす。これらは、結腸腫瘍、膵臓腫瘍および肺腫瘍を含み、その後者は、全腫瘍の２５〜３０％に至るまでにおいてＫＲＡＳ変異を示し、これらの４０％は、タバコの煙中の発癌物質によって促進されると考えられているＧ１２Ｃ変異を有する。Ｇ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳは、Ｍａｐｋ経路を活性化し、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の増殖および生存を促進する(Prior, I. A., P. D. Lewis and C. Mattos (2012). “A comprehensive survey of Ras mutations in cancer.” Cancer Res 72(10): 2457-2467.)。

【0004】

ヒト腫瘍におけるＫＲＡＳ変異およびこれらのタンパク質によるシグナル伝達の阻害が癌表現型の阻害を引き起こしたことの発見以来、学術グループおよび産業の両方によるＲａｓ阻害剤を見付ける強い望みがあった(Feramisco, J. R., R. Clark, G. Wong, N. Arnheim, R. Milley and F. McCormick (1985). “Transient reversion of ras oncogene-induced cell transformation by antibodies specific for amino acid 12 of ras protein.” Nature 314(6012): 639-642.およびMcCormick, F. (2015). “KRAS as a Therapeutic Target.” Clin Cancer Res 21(8): 1797-1801)。ＫＲＡＳエフェクターＢＲａｆの特異的阻害剤は、単独およびＭａｐｋ経路の他の阻害剤との組み合わせで、このＢＲａｆが頻繁に変異により活性化されているメラノーマにおいて劇的な反応を示している(Flaherty, K. T., I. Puzanov, K. B. Kim, A. Ribas, G. A. McArthur, J. A. Sosman, P. J. O'Dwyer, R. J. Lee, J. F. Grippo, K. Nolop and P. B. Chapman (2010). “Inhibition of mutated, activated BRAF in metastatic melanoma.” N Engl J Med 363(9): 809-819.)。対照的に、一般的なＭａｐｋ阻害剤は、潜在的に正常組織に対する適切な治療指数の欠如または他のＲａｓ経路による代償性シグナル伝達のため、変異型ＫＲＡＳを有する癌において劇的な反応を示さなかった(Turk Turke, A. B., Y. Song, C. Costa, R. Cook, C. L. Arteaga, J. M. Asara and J. A. Engelman (2012). “MEK inhibition leads to PI3K/AKT activation by relieving a negative feedback on ERBB receptors.” Cancer Res 72(13): 3228-3237.e, Song et al. 2012およびJanne, P. A., M. M. van den Heuvel, F. Barlesi, M. Cobo, J. Mazieres, L. Crino, S. Orlov, F. Blackhall, J. Wolf, P. Garrido, A. Poltoratskiy, G. Mariani, D. Ghiorghiu, E. Kilgour, P. Smith, A. Kohlmann, D. J. Carlile, D. Lawrence, K. Bowen and J. Vansteenkiste (2017). “Selumetinib Plus Docetaxel Compared With Docetaxel Alone and Progression-Free Survival in Patients With KRAS-Mutant Advanced Non-Small Cell Lung Cancer: The SELECT-1 Randomized Clinical Trial.” Jama 317(18): 1844-1853.)。

【0005】

変異型ＫＲａｓに選択的に結合する化合物は、それらが正常組織に影響を与えないと考えられ、かつ腫瘍内のＲａｓシグナル伝達を十分に阻害して抗腫瘍活性を引き出すため、非常に望ましい。最近、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃは、生化学的におよび癌細胞においての両方でサイクリング（ｃｙｃｌｉｎｇ）を保持し、活性化を撹乱する機会を作り出すことが示された(Hunter, J. C., A. Manandhar, M. A. Carrasco, D. Gurbani, S. Gondi and K. D. Westover (2015). “Biochemical and Structural Analysis of Common Cancer-Associated KRAS Mutations.”Mol Cancer Res 13(9): 1325-1335.)。Ｇ１２Ｃでのシステイン置換を結合に利用し、ＧＤＰのＧＴＰへの交換を妨げる化合物が、記載された(Ostrem, J. M., U. Peters, M. L. Sos, J. A. Wells and K. M. Shokat (2013). “K-Ras(G12C) inhibitors allosterically control GTP affinity and effector interactions.” Nature 503(7477): 548-551.)。これは、ＫＲＡＳを不活性状態で固定するＧ１２Ｃ結合化合物を利用して、癌処置のための魅力的な機会を作る。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Rajalingam, K., R. Schreck, U. R. Rapp and S. Albert (2007). “Ras oncogenes and their downstream targets.” Biochim Biophys Acta 1773(8): 1177-1195

【非特許文献2】Prior, I. A., P. D. Lewis and C. Mattos (2012). “A comprehensive survey of Ras mutations in cancer.” Cancer Res 72(10): 2457-2467

【非特許文献3】Feramisco, J. R., R. Clark, G. Wong, N. Arnheim, R. Milley and F. McCormick (1985). “Transient reversion of ras oncogene-induced cell transformation by antibodies specific for amino acid 12 of ras protein.” Nature 314(6012): 639-642

【非特許文献4】McCormick, F. (2015). “KRAS as a Therapeutic Target.” Clin Cancer Res 21(8): 1797-1801

【非特許文献5】Flaherty, K. T., I. Puzanov, K. B. Kim, A. Ribas, G. A. McArthur, J. A. Sosman, P. J. O'Dwyer, R. J. Lee, J. F. Grippo, K. Nolop and P. B. Chapman (2010). “Inhibition of mutated, activated BRAF in metastatic melanoma.” N Engl J Med 363(9): 809-819

【非特許文献6】Turk Turke, A. B., Y. Song, C. Costa, R. Cook, C. L. Arteaga, J. M. Asara and J. A. Engelman (2012). “MEK inhibition leads to PI3K/AKT activation by relieving a negative feedback on ERBB receptors.” Cancer Res 72(13): 3228-3237.e, Song et al. 2012

【非特許文献7】Janne, P. A., M. M. van den Heuvel, F. Barlesi, M. Cobo, J. Mazieres, L. Crino, S. Orlov, F. Blackhall, J. Wolf, P. Garrido, A. Poltoratskiy, G. Mariani, D. Ghiorghiu, E. Kilgour, P. Smith, A. Kohlmann, D. J. Carlile, D. Lawrence, K. Bowen and J. Vansteenkiste (2017). “Selumetinib Plus Docetaxel Compared With Docetaxel Alone and Progression-Free Survival in Patients With KRAS-Mutant Advanced Non-Small Cell Lung Cancer: The SELECT-1 Randomized Clinical Trial.”Jama 317(18): 1844-1853

【非特許文献8】Hunter, J. C., A. Manandhar, M. A. Carrasco, D. Gurbani, S. Gondi and K. D. Westover (2015). “Biochemical and Structural Analysis of Common Cancer-Associated KRAS Mutations.” Mol Cancer Res 13(9): 1325-1335

【非特許文献9】Ostrem, J. M., U. Peters, M. L. Sos, J. A. Wells and K. M. Shokat (2013). “K-Ras(G12C) inhibitors allosterically control GTP affinity and effector interactions.” Nature 503(7477): 548-551

【発明の概要】

【0007】

ＫＲＡＳは、様々な生物学的プロセスの制御におけるその役割を考慮すると、低分子阻害剤による調節のための魅力的な標的である。今日まで、有効なＫＲＡＳ阻害剤は少数しか開発されておらず、臨床に入ったＫＲＡＳ阻害剤は、たとえあるとしても少数しかない。

【0008】

下記の本発明の化合物の態様のそれぞれは、本明細書で記載される本発明の化合物のあらゆる他の態様と、それが組み合わせられる態様と矛盾せずに組み合わせられることができる。さらに、本発明を記載する下記の態様のそれぞれは、本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩をその範囲内に想定している。従って、句“またはその薬学的に許容可能な塩”は、本明細書で記載される全ての化合物の記載において暗に示されている。

【0009】

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

【0010】

【化1】

【0011】

またはその薬学的に許容可能な塩が提供される態様を含み；式中：
Ｊは、３〜１２個の環原子を有する複素環であり、ここで、Ｊは、場合により１、２、３、４、５または６個のＲ^２で置換されており；
Ｋは、Ｃ_６〜Ｃ_１２アリールであり、またはＫは、５〜１２個の環原子を有するヘテロアリールであり、ここで、Ｋは、場合により１、２、３、４、５、６または７個のＲ^３で置換されており；
Ｗは、以下の基：

【0012】

【化2】

【0013】

からなる群から選択され：
ここで、Ｗは、場合により１、２または３個のＲ^５で置換されており；
それぞれのＲ^１は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され、または２個のＲ^１は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
それぞれのＲ^２は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−シアノおよびオキソからなる群から選択され、または２個のＲ^２は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
それぞれのＲ^３は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロ−アルキル、Ｎ（Ｒ^６）_２、オキソおよびシアノからなる群から選択され、または２個のＲ^３は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
Ｒ^４は、−Ｘ−Ｙ−Ｚであり、ここで：
Ｘは、存在せず、または酸素、硫黄および−ＮＲ^６−からなる群から選択され、
Ｙは、存在せず、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキレニル（ａｌｋｙｌｅｎｌｙｌ）であり、かつ
Ｚは、Ｈ、−Ｎ（Ｒ^６）_２、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ^６）_２、−ＯＲ^６、３〜１２個の環原子を有する複素環、５〜１２個の環原子を有するヘテロアリールおよびＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルから選択され、
ここで、Ｒ^４は、場合により１個以上のＲ^７で置換されており；
それぞれのＲ^５は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲンおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
それぞれのＲ^６は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルからなる群から選択され、または２個のＲ^６は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
それぞれのＲ^７は、独立してＲ^７’またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｒ^７’であり、ここで、それぞれのＲ^７’は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ^６）_２、３〜１２個の環原子を有する複素環およびオキソからなる群から選択され；かつ
ｍは、０、１、２、３、４、５、６または７である。

【0014】

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

【0015】

【化3】

【0016】

またはその薬学的に許容可能な塩が提供されるさらなる態様を含み；式中：
Ｊは、以下の基：

【0017】

【化4】

【0018】

からなる群から選択され、ここで、Ｗ^＊は、Ｗへの結合の点を表わし、かつここで、Ｊは、場合により１、２、３、４、５または６個のＲ^２で置換されており；
Ｋは、以下の基：

【0019】

【化5】

【0020】

からなる群から選択され、または
Ｋは、以下の基：

【0021】

【化6】

【0022】

からなる群から選択され、ここで、Ｋは、場合により１、２、３、４、５、６または７個のＲ^３で置換されており；
Ｗは、以下の基：

【0023】

【化7】

【0024】

からなる群から選択され、ここで、Ｗは、場合により１、２または３個のＲ^５で置換されており；
それぞれのＲ^１は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され、または２個のＲ^１は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
それぞれのＲ^２は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロアルキル、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−シアノおよびオキソからなる群から選択され、または２個のＲ^２は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
それぞれのＲ^３は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロ−アルキル、Ｎ（Ｒ^６）_２、オキソおよびシアノからなる群から選択され、または２個のＲ^３は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
Ｒ^４は、−Ｘ−Ｙ−Ｚであり、ここで：
Ｘは、存在せず、または酸素、硫黄および−ＮＲ^６−からなる群から選択され、
Ｙは、存在せず、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキレニル（ａｌｋｙｌｅｎｌｙｌ）であり、かつ
Ｚは、Ｈ、−Ｎ（Ｒ^６）_２、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ^６）_２、−ＯＲ^６、３〜１２個の環原子を有する複素環、５〜１２個の環原子を有するヘテロアリールおよびＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルから選択され、
ここで、Ｒ^４は、場合により１個以上のＲ^７で置換されており；
それぞれのＲ^５は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲンおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
それぞれのＲ^６は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルからなる群から選択され、または２個のＲ^６は、場合により連結されて３〜１２個の環原子を有する複素環もしくはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルを形成しており；
それぞれのＲ^７は、独立してＲ^７’またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｒ^７’であり、ここで、それぞれのＲ^７’は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ^６）_２、３〜１２個の環原子を有する複素環およびオキソからなる群から選択され；かつ
ｍは、０、１、２、３、４、５、６または７である。

【0025】

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

【0026】

【化8】

【0027】

またはその薬学的に許容可能な塩が提供されるさらに他の態様を含み；式中：
Ｊは、以下の基：

【0028】

【化9】

【0029】

からなる群から選択され、ここで、Ｗ^＊は、Ｗへの結合の点を表わし、かつここで、Ｊは、場合によりＲ^２で置換されており；
Ｋは、以下の基：

【0030】

【化10】

【0031】

からなる群から選択され、または
Ｋは、以下の基：

【0032】

【化11】

【0033】

からなる群から選択され、ここで、Ｋは、場合により１または２個のＲ^３で置換されており；
Ｗは、以下の基：

【0034】

【化12】

【0035】

からなる群から選択され、ここで、Ｗは、場合により１、２または３個のＲ^５で置換されており；
Ｒ^１は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキルおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
それぞれのＲ^３は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６ハロ−アルキルおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキル−ヒドロキシからなる群から選択され；
Ｒ^４は、−Ｘ−Ｙ−Ｚであり、ここで：
Ｘは、存在せず、または酸素であり、
Ｙは、存在せず、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキレニル（ａｌｋｙｌｅｎｌｙｌ）であり、かつ
Ｚは、Ｈ、−Ｎ（Ｒ^６）_２、−ＯＲ^６および３〜１２個の環原子を有する複素環から選択され、
ここで、Ｒ^４は、場合により１個以上のＲ^７で置換されており；
それぞれのＲ^５は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ハロゲンおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
それぞれのＲ^６は、独立して水素およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルからなる群から選択され；
それぞれのＲ^７は、独立してＲ^７’またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｒ^７’であり、ここで、それぞれのＲ^７’は、独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキルおよび−Ｎ（Ｒ^６）_２からなる群から選択され；
ｍは、０または１である。

【0036】

Ｋが以下の基：

【0037】

【化13】

【0038】

からなる群から選択される本発明の態様も、含まれ；
Ｋが以下の基：

【0039】

【化14】

【0040】

からなる群から選択される態様を含む。
Ｋが以下の基：

【0041】

【化15】

【0042】

からなる群から選択される本発明の態様も、含まれる。
Ｗが以下の基：

【0043】

【化16】

【0044】

である本発明の態様も、含まれる。
Ｊが以下の基：

【0045】

【化17】

【0046】

である本発明の態様も、含まれ；
Ｊが以下の基：

【0047】

【化18】

【0048】

からなる群から選択される態様を含む。
加えて、本発明は、Ｒ^４が以下の基：

【0049】

【化19】

【0050】

からなる群から選択される態様を含む。
さらに、本発明の態様は、以下の化合物：

【0051】

【化20-1】

【0052】

【化20-2】

【0053】

【化20-3】

【0054】

またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される化合物を含む。
本発明の態様は、優先的に以下の化合物：

【0055】

【化21-1】

【0056】

【化21-2】

【0057】

またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される化合物を含む。
本発明の追加の態様は、療法上有効量の本明細書で記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を含む。

【0058】

本発明の追加の態様は、ＫＲＡＳ活性の阻害が望まれる細胞を、療法上有効量の本明細書で記載される化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩または前記の化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩を含有する医薬組成物と接触させることにより細胞中のＫＲＡＳ活性を阻害するための方法も含む。

【0059】

本発明の追加の態様は、癌を処置するための方法であって、癌を有する患者に、療法上有効量の本明細書で記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、単独で、または１種類以上の薬学的に許容可能なキャリヤー、賦形剤もしくは希釈剤との組み合わせで投与することを含む方法も含む。

【0060】

態様はさらに、投与される化合物またはその薬学的に許容可能な塩の療法上有効量が、１日あたり約０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇである；または１日あたり約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇであるそのような方法を含む。

【0061】

本発明の追加の態様は、哺乳類における異常な細胞増殖を処置するための方法であって、療法上有効量の本明細書で記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を哺乳類に投与することを含む方法も含む。特定のそのような態様において、異常な細胞増殖は、癌であり、それらの態様のあるものにおいて、癌は、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部の癌、皮膚または眼内メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、慢性または急性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫または下垂体腺腫である。そのような癌は、ＫＲＡＳ関係の癌であり得る。特に興味深いのは、肺癌、結腸癌、膵臓癌および卵巣癌のような癌である。

【0062】

さらなる態様において、本明細書で記載される化合物を用いて癌を処置する方法が、提供され、ここで、癌は、肺癌、結腸癌、膵臓癌および卵巣癌である。
さらなる態様において、本明細書で記載される化合物を用いて癌を処置する方法が、提供され、ここで、癌は、肺癌である。

【0063】

さらなる態様において、本明細書で記載される化合物を用いて癌を処置する方法が、提供され、ここで、癌は、膵臓癌である。
本発明の態様は、哺乳類における異常な細胞増殖の処置において有用な医薬品の調製のための本明細書で記載される化合物の使用またはその薬学的に許容可能な塩の使用も含む。特定のそのような態様において、異常な細胞増殖は、癌であり、それらの態様のあるものにおいて、癌は、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部の癌、皮膚または眼内メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、慢性または急性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫または下垂体腺腫である。そのような癌は、ＫＲＡＳ関係の癌であり得る。

【0064】

また、癌処置に関連して、本発明の態様は、以下の工程を含む、それを必要としている患者において癌を処置するための方法を含む：（ａ）癌がＫＲＡＳ変異と関係していることを決定し；そして（ｂ）患者に療法上有効量の本明細書で記載される化合物もしくは薬学的に許容可能な塩またはその医薬組成物を投与する。ある態様において、ＫＲＡＳ変異は、Ｇ１２Ｃ変異であるか、またはＧ１２Ｃ変異を組み込んでいる。ある態様において、ＫＲＡＳ変異は、コドン１２、１３および／もしくは６１におけるＲａｓ変異であるか、またはそれを組み込んでいる。

【0065】

定義
別途記載されない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される以下の用語は、下記で論じられる意味を有する。Ｒ、Ｘ、ｎ等のようなこの節で定義される変数は、この節内での参照のためだけのものであり、この定義の節の外で使用され得る意味と同じ意味を有することは、意図されていない。さらに、本明細書で定義される基の多くは、場合により置換されていることができる。この定義の節における典型的な置換基の列挙は、例示的なものであり、本明細書および特許請求の範囲内の他の箇所で定義された置換基を限定することは、意図されていない。

【0066】

“アルケニル”は、本明細書で定義されるように、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素二重結合からなるアルキル基を指す。代表的な例は、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−、２−または３−ブテニル等を含むが、それらに限定されない。“アルケニレン”は、アルケニルの二価形態を指す。

【0067】

“アルコキシ”は、アルキルが好ましくはＣ_１〜Ｃ_８、Ｃ_１〜Ｃ_７、Ｃ_１〜Ｃ_６、Ｃ_１〜Ｃ_５、Ｃ_１〜Ｃ_４、Ｃ_１〜Ｃ_３、Ｃ_１〜Ｃ_２またはＣ_１アルキルである−Ｏ−アルキルを指す。

【0068】

“アルキル”は、１〜２０個の炭素原子（“（Ｃ_１〜Ｃ_２０）アルキル”）、好ましくは１〜１２個の炭素原子（“（Ｃ_１〜Ｃ_１２）アルキル”）、より好ましくは１〜８個の炭素原子（“（Ｃ_１〜Ｃ_８）アルキル”）、または１〜６個の炭素原子（“（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル”）、または１〜４個の炭素原子（“（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキル”）の直鎖および分枝鎖基を含む飽和脂肪族炭化水素基を指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル等を含む。アルキルは、置換されていることができ、または非置換であることもできる。典型的な置換基は、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト，アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロゲン、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、ニトロ、シリル、アミノおよび−ＮＲ^ｘＲ^ｙを含み、ここで、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、例えば水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、カルボニル、アセチル、スルホニル、トリフルオロメタンスルホニルおよび組み合わせられた５または６員ヘテロ脂環式環である。“ハロアルキル”、例えば（Ｃ_１〜Ｃ_６）ハロアルキルは、１〜６個の炭素および１個以上のハロゲン置換基を有するアルキル、例えば−ＣＦ_３および−ＣＨＦ_２を指す。“アルキレン”は、アルキルの二価形態を指す。

【0069】

“アルキニル”は、本明細書で定義されるように、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素三重結合からなるアルキル基を指す。代表的な例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−、２−または３−ブチニル等を含むが、それらに限定されない。“アルキニレン”は、アルキニルの二価形態を指す。

【0070】

“アミノ”は、−ＮＲ^ｘＲ^ｙ基を指し、ここで、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、両方とも水素である。
“（Ｃ_６〜Ｃ_１２）アリール”は、完全に共役したパイ電子系を有する６〜１２個の炭素原子の全て炭素の単環式または縮合環多環式基を指す。同様に、“（Ｃ_５〜Ｃ_１２）アリール”は、完全に共役したパイ電子系を有する５〜１２個の炭素原子の全て炭素の単環式または縮合環多環式基を指す。アリール基の例は、限定ではなく、フェニル、ナフタレニルおよびアントラセニルである。アリール基は、置換されていることができ、または非置換であることもできる。典型的な置換基は、ハロ、トリハロメチル、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ニトロ、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、スルフィニル、スルホニル、アミノおよび−ＮＲ^ｘＲ^ｙを含み、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、上記で定義された通りである。

【0071】

“（Ｃ_６〜Ｃ_１２）アリール”は、追加でそれに縮合した炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｏ）または複素環を含む上記のようなアリール環（ｒｉｇｓ）および環系、例えば以下の基：

【0072】

【化22】

【0073】

も含む。
“シアノ”は、−Ｃ≡Ｎ基を指す。シアノは、ＣＮとして表されることができる。
“（Ｃ_３〜Ｃ_１０）シクロアルキル”は、３〜１０員の全て炭素の単環式環、３〜１０員の全て炭素の二環式環、全て炭素の５員／６員または６員／６員の縮合二環式環、多環式縮合環（“縮合”環系は、系中のそれぞれの環が系中のそれぞれの他の環と隣接する炭素原子の対を共有していることを意味する）基を指し、ここで、環の１個以上が１個以上の二重結合を含有することができるが、完全に共役したパイ電子系および架橋された全て炭素の環系を有する環はない。シクロアルキル基の例は、限定ではなく、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、アダマンタン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエン等である。シクロアルキル基は、置換されていることができ、または非置換であることもできる。典型的な置換基は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ，アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、アミノおよび−ＮＲ^ｘＲ^ｙを含み、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、上記で定義された通りである。

【0074】

“Ｇ１２Ｃ”は、野生型ＫＲＡＳ中の１２位のアミノ酸がグリシン残基からシステイン残基に変異している変異を指す。
“ハロゲン”または接頭辞“ハロ”は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを指す。好ましくは、ハロゲンは、フルオロまたはクロロを指す。

【0075】

“ヘテロアルキル”は、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１２個の炭素原子、より好ましくは１〜８個の炭素原子、または１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子の直鎖または分枝鎖のアルキル基を指し、ここで、その炭素原子の１、２または３個は、ＮＲ^ｘ、Ｎ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｎ（ここで、ｎは、０、１または２である）から選択される複素原子により置き換えられている。典型的には、１個より多くの複素原子が存在するうちの複素原子は、互いに隣接していない。例示的なヘテロアルキルは、アルキルエーテル、二級および三級アルキルアミン、アミド、アルキルスルフィド等を含む。その基は、末端基または架橋基であることができる。本明細書で使用される際、架橋基の文脈で使用される場合の通常鎖（ｎｏｒｍａｌ ｃｈａｉｎ）への言及は、架橋基の２つの末端位置を連結している原子の直接の鎖（ｄｉｒｅｃｔ ｃｈａｉｎ）を指す。“アルキル”と同様に、“ヘテロアルキル”上の典型的な置換基は、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロゲン、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、ニトロ、シリル、アミノおよび−ＮＲ^ｘＲ^ｙを含み、ここで、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、例えば水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、カルボニル、アセチル、スルホニル、トリフルオロメタンスルホニルおよび組み合わせられた５または６員ヘテロ脂環式環である。“ヘテロアルケニル”は、１個以上の炭素−炭素二重結合を有するヘテロアルキルを指す。“ヘテロアルキレン”は、ヘテロアルキルの二価形態を指す。“ヘテロアルケニレン”は、ヘテロアルケニルの二価形態を指す。

【0076】

“ヘテロアリール”は、ＮＲ^ｘ、Ｎ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｎ（ここで、ｎは、０、１または２である）から選択される１個、２個、３個または４個の環複素原子を含有し、加えて完全に共役したパイ電子系を有する５〜１２個の環原子の単環式または縮合環基を指す。好ましいヘテロアリール基は、上記の定義に従う（Ｃ_２〜Ｃ_７）ヘテロアリールを含む。非置換ヘテロアリール基の例は、限定ではなく、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、プリン、テトラゾール、トリアジンおよびカルバゾールである。ヘテロアリール基は、置換されていることができ、または非置換であることもできる。典型的な置換基は、アルキル、シクロアルキル、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ニトロ、カルボニル、チオカルボニル、スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルフィニル、スルホニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、アミノおよび−ＮＲ^ｘＲ^ｙを含み、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、上記で定義された通りである。薬学的に許容可能なヘテロアリールは、本発明の化合物に結合させられ、医薬組成物中に配合され、その後それを必要とする患者に投与されるために十分に安定であるヘテロアリールである。典型的な単環式ヘテロアリール基の例は、以下の単環式ヘテロアリール基を含むが、それらに限定されない：

【0077】

【化23】

【0078】

適切な縮合環ヘテロアリール基の例は、以下の縮合環ヘテロアリール基を含むが、それらに限定されない：

【0079】

【化24】

【0080】

【化25】

【0081】

【化26】

【0082】

“ヘテロシクリル”は、Ｎ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｎ（ここで、ｎは、０、１または２である）から選択される１、２、３または４個の環複素原子および１〜９個の炭素原子を含有する３〜１２個の環原子を有する単環式、スピロ環式または縮合環系を指す。環は、１個以上の二重結合を有することもできる。しかし、環は、完全に共役したパイ電子系を有しない。好ましい複素環は、上記の定義に従う（Ｃ_２〜Ｃ_６）複素環を含む。

【0083】

適切な飽和複素環式基の例は、以下の飽和複素環式基を含むが、それらに限定されない：

【0084】

【化27】

【0085】

適切な部分的に不飽和の複素環式基の例は、以下の部分的に不飽和の複素環式基を含むが、それらに限定されない：

【0086】

【化28】

【0087】

適切な縮合複素環式基の例は、以下の縮合複素環式基を含むが、それらに限定されない：

【0088】

【化29】

【0089】

適切なセミ飽和（ｓｅｍｉ−ｓａｔｕｒａｔｅｄ）縮合複素環式基の例は、以下のセミ飽和縮合複素環式基を含むが、それらに限定されない：

【0090】

【化30】

【0091】

適切なスピロ環式複素環式基の例は、以下のスピロ環式複素環式基を含むが、それらに限定されない：

【0092】

【化31】

【0093】

ヘテロシクリル基は、場合により独立してハロ、低級アルキル、カルボキシで置換された低級アルキル、エステルヒドロキシ、モノもしくはジアルキルアミノまたはオキソから選択される１または２個の置換基で置換されている。さらに、複素環は、複素環上の非隣接炭素間の架橋を含む架橋を含有することができ、架橋は、１〜２個の炭素ならびにＮＲ^ｘ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｎ（ここで、ｎは、０、１または２である）から選択される０〜１個の複素原子を含有する。

【0094】

“ヒドロキシ”または”ヒドロキシル”は、−ＯＨ基を指す。
“インビトロ”は、例えば、限定ではなく、試験管または培養培地中のような人工的な環境で実施される手順を指す。

【0095】

“インビボ”は、限定ではなく、マウス、ラットまたはウサギのような生きている生物内で実施される手順を指す。
“任意に”または“場合により”は、その後で記載される事象または状況が発生し得るが発生する必要はないこと、ならびにその記載がその事象または状況が発生する場合およびそれが発生しない場合を含むことを意味する。例えば、“場合によりアルキル基で置換された複素環基”は、そのアルキルが存在し得るが存在する必要はないことを意味し、その記載は、その複素環基がアルキル基で置換されている状況およびその複素環基がアルキル基で置換されていない状況を含む。

【0096】

“生物”は、少なくとも１個の細胞からなるあらゆる生きている実体を指す。生きている生物は、例えば単一の真核細胞くらい単純であることができ、またはヒトを含む哺乳類くらい複雑であることもできる。

【0097】

“薬学的に許容可能な賦形剤”は、化合物の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例は、限定ではなく、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類および様々なタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコール類を含む。本明細書で使用される際、用語“薬学的に許容可能な塩”は、親化合物の生物学的有効性および特性を保持する塩類を指す。そのような塩類は、以下の塩類を含む：（ｉ）親化合物の遊離塩基の無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、硫酸および過塩素酸等との、もしくは有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、（Ｄ）もしくは（Ｌ）リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸等との反応により得られることができる酸付加塩；または（ｉｉ）親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオンもしくはアルミニウムイオンにより置き換えられているか；もしくは有機塩基、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン等と配位しているかのどちらかである場合に形成される塩類。

【0098】

“医薬組成物”は、本明細書で記載される化合物またはその生理学的に／薬学的に許容可能な塩類、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグの１以上の他の化学的構成要素、例えば生理学的に／薬学的に許容可能なキャリヤーおよび賦形剤との混合物を指す。医薬組成物の目的は、化合物の生物への投与を容易にすることである。

【0099】

本明細書で使用される際、“生理学的に／薬学的に許容可能なキャリヤー”は、生物に著しい刺激を引き起こさず、かつ投与される化合物の生物学的活性および特性を損なわないキャリヤーまたは希釈剤を指す。

【0100】

“療法上有効量”は、処置されている障害の症状の１以上をある程度緩和するであろう投与されている化合物の量を指す。癌の処置に関して、療法上有効量は、以下の作用のうち少なくとも１つを有する量を指す：腫瘍の大きさを低減する；腫瘍の転移を阻害する（すなわちある程度遅らせる、好ましくは停止させる）；腫瘍の成長をある程度阻害する（すなわちある程度遅らせる、好ましくは停止させる）；および癌と関係する１以上の症状をある程度緩和する（または好ましくは除去する）。

【0101】

“処置する”、”処置すること”および”処置”は、メチルトランスフェラーゼに媒介される細胞障害および／またはその付随症状を緩和または抑止する方法を指す。特に癌に関して、これらの用語は、単に、癌に罹患した個体の期待寿命が増大するであろうことまたは疾患の症状の１以上が低減するであろうことを意味する。

【発明を実施するための形態】

【0102】

詳細な説明
本発明の化合物を合成するための一般的なスキームは、本明細書の実施例の節において見付けられることができる。

【0103】

別途示されない限り、本明細書における本発明の化合物への全ての言及は、その塩類、溶媒和物、水和物および錯体への、ならびにその塩類の溶媒和物、水和物および錯体への言及を、その多形、立体異性体および同位体標識されたバージョンを含めて含む。

【0104】

薬学的に許容可能な塩類は、酸付加塩および塩基塩（二塩（ｄｉｓａｌｔｓ）を含む）を含む。適切な酸付加塩は、非毒性の塩類を形成する酸から形成される。例は、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシレート（ｅｓｙｌａｔｅ）、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩,、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、サッカリン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩およびトリフルオロ酢酸塩を含む。

【0105】

適切な塩基塩は、非毒性の塩類を形成する塩基から形成される。例は、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミンおよび亜鉛塩を含む。適切な塩類に関する総説に関して、StahlおよびWermuthによる“Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use”(Wiley-VCH, ドイツ、ヴァインハイム、2002)を参照、その開示は、参照によりそのまま本明細書に援用される。

【0106】

本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、化合物の溶液および所望の酸または塩基を適宜一緒に混合することによって容易に調製されることができる。その塩は、溶液から沈殿して濾過により回収されることができ、または溶媒の蒸発により回収されることもできる。塩におけるイオン化の程度は、完全にイオン化されたものからほとんどイオン化されていないものまで様々であることができる。

【0107】

本発明の化合物は、非溶媒和形態および溶媒和形態の両方で存在することができる。用語‘溶媒和物’は、本明細書において、本発明の化合物および１以上の薬学的に許容可能な溶媒分子、例えばエタノールを含む分子錯体を記載するために使用されている。用語‘水和物’は、溶媒が水である場合に用いられる。本発明に従う薬学的に許容可能な溶媒和物は、結晶化の溶媒が同位体（例えばＤ_２Ｏ、ｄ_６−アセトン、ｄ_６−ＤＭＳＯ）置換されることができる水和物および溶媒和物を含む。

【0108】

錯体、例えばクラスレート、薬物−ホスト包接錯体も、本発明の範囲内に含まれ、ここで、前記の溶媒和物とは対照的に、薬物およびホストは、化学量論量または非化学量論量で存在する。化学量論量または非化学量論量で存在することができる２種類以上の有機性および／または無機性構成要素を含有する薬物の錯体も、含まれる。結果として得られる錯体は、イオン化されている、部分的にイオン化されている、またはイオン化されていないことができる。そのような錯体の総説に関して、J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 by Haleblian (August 1975)を参照、その開示は、参照によりそのまま本明細書に援用される。

【0109】

本発明の化合物の多形、プロドラッグおよび異性体（光学異性体、幾何異性体および互変異性体を含む）も、本発明の範囲内に含まれる。
それら自体はほとんどまたは全く薬理活性を有しない可能性があるが患者に投与された際に例えば加水分解的開裂によって本発明の化合物に変換されることができる本発明の化合物の誘導体。そのような誘導体は、‘プロドラッグ’と呼ばれる。プロドラッグの使用に関するさらなる情報が、‘Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella)および‘Bioreversible Carriers in Drug Design’, Pergamon Press, 1987 (編者 E B Roche, American Pharmaceutical Association)において見付けられることができ、その開示は、参照によりそのまま本明細書に援用される。本発明に従うプロドラッグは、例えば本発明の化合物中に存在する適切な官能性を、例えばH Bundgaardによる“Design of Prodrugs”(Elsevier, 1985)において記載されているような‘プロ部分（ｐｒｏ−ｍｏｉｅｔｉｅｓ）’として当業者に知られている特定の部分で置き換えることにより生成されることができ、その開示は、参照によりそのまま本明細書に援用される。

【0110】

本発明に従うプロドラッグのいくつかの例は、以下のプロドラッグを含む：（ｉ）化合物がカルボン酸官能性−（ＣＯＯＨ）を含有する場合、そのエステル、例えば水素の（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキルによる置換；（ｉｉ）化合物がアルコール官能性（−ＯＨ）を含有する場合、そのエーテル、例えば水素の（Ｃ_１−Ｃ_６）アルカノイルオキシメチルによる置換；および（ｉｉｉ）化合物が第一級または第二級アミノ官能性（−ＮＨ_２または−ＮＨＲ、ここで、Ｒ≠Ｈ）を含有する場合、そのアミド、例えば一方または両方の水素の（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルカノイルによる置換。前記の例および他のプロドラッグのタイプの例に従う置換基のさらなる例は、前記の参考文献において見付けられることができる。

【0111】

最後に、特定の本発明の化合物は、それら自体が本発明の化合物の他のもののプロドラッグの役目を果たすことができる。
１個以上の不斉炭素原子を含有する本発明の化合物は、２種類以上の立体異性体として存在し得る。本発明に従う化合物が少なくとも１個の不斉中心を有する場合、それらは、それゆえに鏡像異性体として存在することができる。化合物が２個以上のキラル中心を有する場合、それらは、さらにジアステレオマーとして存在することができる。同様に、本発明の化合物がシクロプロピル基またはキラリティーが存在する他の環式基およびアルケニルまたはアルケニレン基を含有する場合、幾何シス／トランス（またはＺ／Ｅ）異性体が、可能である。化合物が、例えばケトもしくはオキシム基または芳香族部分を含有する場合、互変異性的異性（‘互変異性’）が、生じ得る。単一の化合物が、１より多くのタイプの異性を示し得る。

【0112】

本発明の化合物の全ての立体異性体、幾何異性体および互変異性型は、本発明の範囲内に含まれ、これは、１より多くのタイプの異性を示す化合物およびそれらの１種類以上の混合物を含む。対イオンが光学活性である酸付加塩もしくは塩基塩、例えばＤ−乳酸塩もしくはＬ−リジン、またはラセミ体、例えばＤＬ−酒石酸塩もしくはＤＬ−アルギニンも、含まれる。

【0113】

シス／トランス異性体は、当業者に周知の従来の技術、例えばクロマトグラフィーおよび分別結晶化によって分離されることができる。
個々のエナンチオマーの調製／単離のための従来の技法は、適切な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成または例えばキラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）を用いたラセミ体（または塩もしくは誘導体のラセミ体）の分割を含む。

【0114】

あるいは、ラセミ体（またはラセミ前駆体）は、適当な光学活性化合物、例えばアルコール、または化合物が酸性もしくは塩基性部分を含有する場合には酸もしくは塩基、例えば酒石酸もしくは１−フェニルエチルアミンと反応させられることができる。結果として得られるジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶化によって分離されることができ、ジアステレオ異性体の一方または両方が、当業者に周知の手段により対応する純粋な鏡像異性体に変換されることができる。

【0115】

立体異性体の集合体は、当業者に既知の従来の技法によって分離されることがでる；例えばE L Elielによる“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley, New York, 1994)を参照、その開示は、参照により本明細書にそのまま援用される。

【0116】

本発明は、本発明の同位体標識された化合物も含み、ここで、１個以上の原子が、同じ原子番号を有するが通常天然に存在する原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられている。本発明の化合物に含まれるのに適した同位体の例は、^２Ｈおよび^３Ｈのような水素の同位体、^１１Ｃ、^１３Ｃおよび^１４Ｃのような炭素の同位体、^３６Ｃｌのような塩素の同位体、^１８Ｆのようなフッ素の同位体、^１２３Ｉおよび^１２５Ｉのようなヨウ素の同位体、^１３Ｎおよび^１５Ｎのような窒素の同位体、^１５Ｏ、^１７Ｏおよび^１８Ｏのような酸素の同位体、^３２Ｐのようなリンの同位体ならびに^３５Ｓのような硫黄の同位体を含む。本発明の特定の同位体標識された化合物、例えば放射性同位体を組み込んでいる化合物は、薬物および／または基質の組織分布研究において有用である。放射性同位体であるトリチウム、^３Ｈおよび炭素−１４、^１４Ｃは、それらの組み込みの容易さおよび迅速な検出手段ゆえにこの目的のために特に有用である。より重い同位体、例えば重水素、^２Ｈによる置換は、より高い代謝安定性、例えば増大したインビボ半減期または低減した投与量の要求の結果もたらされる特定の療法的利点を与えることができ、従ってある状況において好ましい可能性がある。陽電子放出同位体、例えば^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１５Ｏおよび^１３Ｎによる置換は、基質受容体占有率を調べるための陽電子放射断層撮影（Ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ）（ＰＥＴ）研究において有用であり得る。

【0117】

本発明の同位体標識された化合物は、一般に、当業者に既知の従来の技法により、または本明細書で記載されるプロセスに類似したプロセスにより、そうでなければ利用される非標識試薬の代わりに適切な同位体標識された試薬を用いて調製されることができる。

【0118】

本発明に従う薬学的に許容可能な溶媒和物は、結晶化の溶媒が同位体置換されることができる（例えばＤ_２Ｏ、ｄ_６−アセトン、ｄ_６−ＤＭＳＯ）溶媒和物を含む。
医薬的使用に関して意図されている本発明の化合物は、結晶質もしくは非晶質生成物またはそれらの混合物として投与されることができる。それらは、例えば沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥または蒸発乾燥のような方法により、固体のプラグ、粉末またはフィルムとして得られることができる。マイクロ波乾燥または高周波乾燥が、この目的のために使用されることができる。

【0119】

化合物は、単独で、または本発明の１種類以上の他の化合物との組み合わせで投与されることができる。一般に、それらは、１種類以上の薬学的に許容可能な賦形剤を伴なって配合物として投与されるであろう。用語“賦形剤”は、本明細書において、本発明の化合物（単数または複数）以外のあらゆる成分を記載するために用いられる。賦形剤の選択は、特定の投与方式、可溶性および安定性に対する賦形剤の作用ならびに剤形の性質のような要因に大きく依存するであろう。

【0120】

本発明の化合物の送達に適した医薬組成物およびそれらの調製のための方法は、当業者には容易に明らかであろう。そのような組成物およびそれらの調製のための方法は、例えば‘Remington’s Pharmaceutical Sciences’第１９版(Mack Publishing Company, 1995)において見付けられることができ、その開示は、参照により本明細書にそのまま援用される。

【0121】

経口投与：本発明の化合物は、経口投与されることができる。経口投与は、化合物が胃腸管に入るように嚥下することを含むことができ、または化合物が口から直接血流に入るバッカルもしくは舌下投与が、利用されることができる。

【0122】

経口投与に適した配合物は、固体配合物、例えば錠剤、微粒子、液体または粉末を含有するカプセル、ロゼンジ（液体が充填されたものを含む）、噛むもの（ｃｈｅｗｓ）、マルチおよびナノ粒子、ゲル、固溶体、リポソーム、フィルム（粘膜付着性のものを含む）、腔坐剤（ｏｖｕｌｅｓ）、スプレーおよび液体配合物を含む。

【0123】

液体配合物は、懸濁液、溶液、シロップおよびエリキシル剤を含む。そのような配合物は、軟質カプセルまたは硬質カプセル中の充填剤として使用されることができ、典型的にはキャリヤー、例えば水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロースまたは適当な油ならびに１種以上の乳化剤および／または懸濁剤を含む。液体配合物は、例えば小袋からの固体の再構成によって調製されることもできる。

【0124】

本発明の化合物は、速溶性、速崩壊性の剤形、例えばLiangおよびChenによるExpert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986 (2001)において記載されている剤形において用いられることもでき、その開示は、参照により本明細書にそのまま援用される。

【0125】

錠剤剤形に関して、用量に応じて、薬物は、剤形の１重量％〜８０重量％、より典型的には５重量％〜６０重量％を構成し得る。薬物に加えて、錠剤は、一般に崩壊剤を含有する。崩壊剤の例は、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微結晶セルロース、低級アルキル置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、アルファ化デンプンおよびアルギン酸ナトリウムを含む。一般に、崩壊剤は、剤形の１重量％〜２５重量％、好ましくは５重量％〜２０重量％を含むであろう。

【0126】

結合剤は、一般に、錠剤配合物に粘着性の品質を付与するために使用される。適切な結合剤は、微結晶セルロース、ゼラチン、糖類、ポリエチレングリコール、天然および合成ガム、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。錠剤は、希釈剤、例えばラクトース（一水和物、噴霧乾燥された一水和物、無水物等）、マンニトール、キシリトール、デキストロース、スクロース、ソルビトール、微結晶セルロース、デンプンおよび二塩基性リン酸カルシウム二水和物を含有することもできる。

【0127】

錠剤は、場合により、表面活性剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート８０、ならびに滑剤、例えば二酸化ケイ素およびタルクを含むこともできる。存在する場合、表面活性剤は、典型的には錠剤の０．２重量％〜５重量％の量であり、滑剤は、典型的には錠剤の０．２重量％〜１重量％の量である。

【0128】

錠剤は、一般に、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、フマル酸ステアリルナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムのラウリル硫酸ナトリウムとの混合物を含有する。潤滑剤は、一般に、錠剤の０．２５重量％〜１０重量％の量で、好ましくは０．５重量％〜３重量％の量で存在する。

【0129】

他の従来の成分は、抗酸化剤、着色剤、香味料、保存剤および矯味剤を含む。
例示的な錠剤は、約８０重量％までの薬物、約１０重量％〜約９０重量％の結合剤、約０重量％〜約８５重量％の希釈剤、約２重量％〜約１０重量％の崩壊剤および約０．２５重量％〜約１０重量％の潤滑剤を含有する。

【0130】

錠剤ブレンドは、錠剤を形成するために、直接またはローラーによって圧縮されることができる。あるいは、錠剤ブレンドまたはブレンドの一部は、打錠前に湿式、乾式もしくは溶融造粒、溶融凝固または押出成形されることができる。最終配合物は、１以上の層を含むことができ、コーティングされていることができ、もしくはコーティングされていないこともでき；またはカプセル封入されていることもできる。

【0131】

錠剤の配合は、H. LiebermanおよびL. Lachmanによる“Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1”, Marcel Dekker, ニューヨーク州ニューヨーク, 1980 (ISBN 0-8247-6918-X)において詳細に論じられており、その開示は、参照により本明細書にそのまま援用される。

【0132】

経口投与のための固体配合物は、即時放出および／または改変放出であるように配合されることができる。改変放出配合物は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出およびプログラムされた放出を含む。

【0133】

適切な改変放出配合物は、米国特許第６，１０６，８６４号に記載されている。高エネルギー分散物ならびに浸透圧性粒子およびコートされた粒子のような他の適切な放出技術の詳細は、Verma et al, Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001)において見付けられることができる。制御放出を達成するためのチューインガムの使用が、国際公開第００／３５２９８号において記載されている。これらの参考文献の開示は、参照により本明細書にそのまま援用される。

【0134】

非経口投与
本発明の化合物は、血流中、筋肉中、または内臓中に直接投与されることもできる。非経口投与のための適切な手段は、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、髄腔内投与、脳室内投与、尿道内投与、胸骨内投与、頭蓋内投与、筋肉内投与および皮下投与を含む。非経口投与のための適切なデバイスは、針式（マイクロニードルを含む）注射器、針なし注射器および注入技法を含む。

【0135】

非経口配合物は、典型的には賦形剤、例えば塩類、炭水化物および緩衝剤（好ましくは３から９のｐＨにする）を含有し得る水溶液であるが、一部の適用に関して、それらは、無菌の非水溶液として、または無菌の発熱物質を含まない水のような適切なビヒクルと合わせて用いられるための乾燥形態としてより適切に配合されることができる。

【0136】

無菌条件下での、例えば凍結乾燥による非経口配合物の調製は、当業者に周知の標準的な製薬技法を用いて容易に成し遂げられることができる。
非経口溶液の調製において使用される本発明の化合物の可溶性は、可溶性増進剤の組み込みのような適切な配合技法の使用により増大させられ得る。非経口投与のための配合物は、即時放出および／または改変放出であるように配合されることができる。改変放出配合物は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出およびプログラムされた放出を含む。従って、本発明の化合物は、有効化合物の改変放出を提供する埋め込み用デポーとしての投与のための固体、半固体またはチキソトロピー液体として配合されることができる。そのような配合物の例は、薬物でコートされたステントおよびＰＧＬＡマイクロスフィアを含む。

【0137】

局所投与
本発明の化合物は、皮膚または粘膜に局所的に投与される、すなわち皮膚投与または経皮投与されることもできる。この目的のための典型的な配合物は、ゲル、ヒドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏、粉剤、被覆物、泡状物質、フィルム、皮膚パッチ、カシェ剤、インプラント、スポンジ、繊維、包帯およびマイクロエマルジョンを含む。リポソームも、使用されることができる。典型的なキャリヤーは、アルコール、水、鉱物油、流動ワセリン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールを含む。浸透増進剤が、組み込まれることができ；例えば、FinninおよびMorganによるJ Pharm Sci, 88 (10), 955-958 (October 1999)を参照。局所投与の他の手段は、電気穿孔法、イオントフォレーシス、フォノフォレーシス、ソノフォレーシスおよびマイクロニードルまたは針なし（例えばＰｏｗｄｅｒｊｅｃｔ（商標）、Ｂｉｏｊｅｃｔ（商標）等）注射を含む。これらの参考文献の開示は、参照により本明細書にそのまま援用される
局所投与のための配合物は、即時放出および／または改変放出であるように配合されることができる。改変放出配合物は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出およびプログラムされた放出を含む。

【0138】

吸入／鼻内投与
本発明の化合物は、鼻内に、または吸入により、典型的には乾燥粉末（単独で、例えばラクトースとの乾燥ブレンドでの混合物として、または例えばリン脂質、例えばホスファチジルコリンと混合された混合構成要素粒子としてのいずれか）の形態で、乾燥粉末吸入器から、または加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器（好ましくは電気流体力学を使用して微細なミストを生成する噴霧器）またはネブライザーからエアロゾルスプレーとして、噴射剤、例えば１，１，１，２−テトラフルオロエタンまたは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパンを使用して、または使用せずに投与されることもできる。鼻内使用に関して、粉末は、生体付着性薬剤、例えばキトサンまたはシクロデキストリンを含むことができる。

【0139】

加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器またはネブライザーは、例えばエタノール、水性エタノール、または有効物質の分散、可溶化もしくは放出延長のための適切な代替薬剤、溶媒としての噴射剤（単数または複数）および任意の界面活性剤、例えばトリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸またはオリゴ乳酸を含む本発明の化合物（単数または複数）の溶液または懸濁液を含有する。

【0140】

乾燥粉末または懸濁液配合物における使用の前に、薬物生成物は、吸入による送達に適した大きさ（典型的には５ミクロン未満）に微粒子化される。これは、あらゆる適切な粉砕法、例えばスパイラルジェット製粉、流動床ジェット製粉、ナノ粒子を形成するための超臨界流体処理、高圧均質化または噴霧乾燥によって達成され得る。

【0141】

吸入器または注入器における使用のための（例えばゼラチンまたはＨＰＭＣから作られた）カプセル、ブリスターおよびカートリッジは、本発明の化合物、適切な粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンおよび性能調節剤、例えばｌ−ロイシン、マンニトールまたはステアリン酸マグネシウムの粉末混合物を含有するように配合されることができる。ラクトースは、無水または一水和物の形態であることができ、好ましくは後者である。他の適切な賦形剤は、デキストラン、グルコース、マルトース、ソルビトール、キシリトール、フルクトース、スクロースおよびトレハロースを含む。

【0142】

微細なミストを生成するために電気流体力学を使用する噴霧器における使用のための適切な溶液配合物は、作動あたり１μｇ〜２０ｍｇの本発明の化合物を含有することができ、作動量は、１μＬ〜１００μＬまで変動することができる。典型的な配合物は、本発明の化合物、プロピレングリコール、滅菌水、エタノールおよび塩化ナトリウムを含む。プロピレングリコールの代わりに使用されることができる代替溶媒は、グリセロールおよびポリエチレングリコールを含む。

【0143】

適切な香料、例えばメントールおよびレボメントール（ｌｅｖｏｍｅｎｔｈｏｌ）または甘味料、例えばサッカリンもしくはサッカリンナトリウムが、吸入／鼻内投与に関して意図される本発明の配合物に添加されることができる。

【0144】

吸入／鼻内投与のための配合物は、例えばポリ（ＤＬ−乳酸−コグリコール酸（ＰＧＬＡ））を使用して即時放出および／または改変放出であるように配合されることができる。改変放出配合物は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出およびプログラムされた放出を含む。

【0145】

乾燥粉末吸入器およびエアロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達する弁によって決定される。本発明に従う単位は、典型的には計量された量または所望の量の本発明の化合物を含有する“一吹き”を投与するように配分される。全一日量は、単一の用量で、より通常には一日を通して分割された用量として投与されることができる。

【0146】

直腸／膣内投与
本発明の化合物は、例えば、坐剤、腟坐剤または浣腸剤の形態で、直腸または膣に投与されることができる。カカオバターは、伝統的な坐剤用基剤であるが、様々な代替物が、適宜使用されることができる。直腸／膣投与用の配合物は、即時放出および／または改変放出であるように配合されることができる。改変放出配合物は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出およびプログラムされた放出を含む。

【0147】

眼への投与
本発明の化合物は、典型的には微粒子化された等張性のｐＨ調整された滅菌生理食塩水中の懸濁液または溶液の液滴の形態で、眼または耳に直接投与されることもできる。眼および耳への投与に適した他の配合物は、軟膏、生分解性（例えば吸収性ゲルスポンジ、コラーゲン）および非生分解性（例えばシリコーン）のインプラント、カシェ剤、レンズおよび粒子状または小胞状の系、例えばニオソームまたはリポソームを含む。ポリマー、例えば架橋ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロース系ポリマー、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースもしくはメチルセルロース、またはヘテロ多糖類ポリマー、例えばゲランガムが、保存剤、例えば塩化ベンザルコニウムと一緒に組み込まれることができる。そのような配合物は、イオントフォレーシスによって送達されることもできる。

【0148】

眼／耳への投与のための配合物は、即時放出および／または改変放出であるように配合されることができる。改変放出配合物は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出またはプログラムされた放出を含む。

【0149】

他の技術
本発明の化合物は、前記の投与方式のいずれかにおける使用に関するそれらの可溶性、溶解速度、矯味、生分解性および／または安定性を向上させるために、可溶性高分子実体、例えばシクロデキストリンおよびその適切な誘導体またはポリエチレングリコール含有ポリマーと組み合わせられることができる。

【0150】

例えば、薬物−シクロデキストリン複合体は、一般にほとんどの剤形および投与経路に関して有用であることが分かっている。包接錯体および非包接錯体の両方が、使用されることができる。薬物との直接的な錯体形成の代替策として、シクロデキストリンは、補助添加剤、すなわちキャリヤー、希釈剤または可溶化剤として使用されることができる。これらの目的のために最も一般的に使用されるのは、アルファ−、ベータ−およびガンマ−シクロデキストリンであり、その例は、ＰＣＴ公開国際公開第９１／１１１７２号、国際公開第９４／０２５１８号および国際公開第９８／５５１４８号において見付けられることができ、その開示は、参照により本明細書にそのまま援用される。

【0151】

投与量
投与される有効化合物の量は、処置される対象、障害または病気の重症度、投与の速度、化合物の性質および処方する医師の裁量に依存するであろう。しかし、有効投与量は、典型的には、単一または分割用量で、ｋｇ体重あたり１日あたり約０．００１〜約１００ｍｇ、好ましくは約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。７０ｋｇのヒトに関して、これは、約０．０７〜約７０００ｍｇ／日、好ましくは約０．７〜約２５００ｍｇ／日に相当する。ある場合には、前記の範囲の下限未満の投与量レベルが、十分以上であり得るが、他の場合には、さらに大きい用量が、有害な副作用を一切引き起こすことなく使用されることができ、そのようなより大きい用量は、典型的には一日を通した投与のためにいくつかのより小さい用量に分割される。

【0152】

パーツのキット（Ｋｉｔ−ｏｆ−Ｐａｒｔｓ）
同様に、例えば特定の疾患または病気を処置する目的で、有効化合物の組み合わせを投与することが望ましい可能性があるため、２種類以上の医薬組成物（その少なくとも１種類が本発明に従う化合物を含有する）が組成物の同時投与に適したキットの形態で好都合に組み合わせられることができることは、本発明の範囲内である。従って、本発明のキットは、２種類以上の別々の医薬組成物（その少なくとも１種類が本発明の化合物を含有する）および前記の組成物を別々に保持するための手段、例えば容器、分割されたボトルまたは分割されたホイル小包を含む。そのようなキットの例は、錠剤、カプセル等の包装に使用される周知のブリスターパックである。

【0153】

本発明のキットは、異なる剤形、例えば経口剤形および非経口剤形を投与するために、別々の組成物を異なる投与間隔で投与するために、または別々の組成物を互いに対して用量設定するために特に適している。コンプライアンスを支援するために、キットは、典型的には投与のための指示を含み、記憶補助と共に提供されることができる。

【0154】

以下の略語が、本明細書で使用されることができる：Ａｃ（アセチル）；ＡｃＣｌ（アセチルクロリド）；ＡｃＯＨまたはＨＯＡｃ（酢酸）；Ａｃ_２Ｏ（無水酢酸）；ａｑ．（水性）；Ｂｏｃまたはｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）；ＢＯＰ（（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート）；Ｂ_２ｐｉｎ_２（ビス（ピナコラト）ジボロン）；ｃａ．（約またはおおよそ）；ＣＤＣｌ_３（重水素化クロロホルム）；ＣＨ_２Ｃｌ_２および／またはＤＣＭ（ジクロロメタン）；ＤＡＢＣＯ（１，４−ジアザビシクロ［２，２，２］オクタン（１，４−ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［２，２，２］ｐｃｔａｎｅ））；ＤＡＳＴ（ジエチルアミノ硫黄三フッ化物）；ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ−７−エン）；ＤＣＥ（ジクロロエタン）；ＤＥＡ（ジエチルアミン）；ＤＩＢＡＬまたはＤＩＢＡＬ−Ｈ（ジイソブチルアルミニウム水素化物）；ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）；ＤＩＰＥＡまたはヒューニッヒ塩基（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＨＰ（ジヒドロピラン）；ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）；ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）；ＤＭＥ（エチレングリコール）；ＤＭＰ（デス−マーチンペルヨージナン）；ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；ＤＭＳＯ−ｄ_６（重水素化ジメチルスルホキシド）；ＥＤＣまたはＥＤＣＩ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド）；Ｅｔ（エチル）；Ｅｔ_３ＮまたはＴＥＡ（トリエチルアミン）；ＥｔＯＨ（エタノール）；ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；Ｅｔ_２Ｏ（ジエチルエーテル）；ｇまたはｇｍ（グラム（単数または複数））；ＨＡＴＵ（２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート）；ＨＢＴＵ（ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート）；ＨＦＩＰ（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール）；ＨＭＰＴ（トリス（ジメチルアミノ）ホスフィン）；ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）；ＨＯＢＴ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）；ｈまたはｈｒ（時間（単数または複数）、適宜）；ｉＢｕ（イソブチル）；ＩＰＡ（イソプロピルアルコール）；ｉＰｒ（イソプロピル）；ｉＰｒＯＡｃ（酢酸イソプロピル）；ＫＨＭＤＳ（カリウム ビス（トリメチルシリル）アミド）；ＫＯＡｃ（酢酸カリウム）；ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）；ＬＤＡ（リチウム ジイソプロピルアミド）；ＬｉＨＭＤＳ（リチウム ビス（トリメチルシリル）アミド）；ｍＣＰＢＡ（メタ−クロロペルオキシ安息香酸）；Ｍｅ（メチル）；ＭｅＯＨ（メタノール）；ＭｅＯＤ（重水素化メタノール）；ＭｅＣＮ（アセトニトリル）；ｍまたはｍｉｎ（分（単数または複数）、適宜）；ｍｇ（ミリグラム（単数または複数））；Ｍｓ（メチルスルホニル）；ＭｓＣｌ（メタンスルホニルクロリド）；Ｎ（通常）；ＮＢＳ（Ｎ−ブロモスクシンイミド）；ＮＣＳ（Ｎ−クロロスクシンイミド）；ＮＦＳＩ（Ｎ−フルオロジベンゼンスルホンイミド）；ＮＭＲ（核磁気共鳴）；ｎＢｕ（ｎ−ブチル）；ｎＢｕＬｉ（ｎ−ブチルリチウム）；ｎＰｒ（ｎ−プロピル）；Ｐｄ／Ｃ（炭素上パラジウム）；Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０））；Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ））；Ｐｄ［Ｐ（ｏ−ｔｏｌ）_３］_２（ビス［トリス（２−メチルフェニル）ホスフィン］パラジウム）；Ｐｈ（フェニル）；ＰＴＳＡまたはｐＴＳＡ（ｐ−トルエンスルホン酸）；ＰＰＴＳ：（ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ｐｙｒｉｄｉｕｍ ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ））；Ｒｔ（保持時間）；ｒｔ（室温）；ＲｕＣｌ（ｐ−シメン）［（Ｒ，Ｒ）−Ｔｓ−ＤＰＥＮ］（［Ｎ−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−（アミノ−κＮ）−１，２−ジフェニルエチル］−４−メチルベンゼンスルホンアミダート−κＮ］クロロ［（１，２，３，４，５，６−η）−１−メチル−４−（１−メチルエチル）ベンゼン］−ルテニウム）；ｓまたはｓｅｃ（秒（単数または複数）、適宜）；Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（Ｎ−クロロメチル−Ｎ’−フルオロトリエチレン二アンモニウム ビス（テトラフルオロボレート））；ＳＥＭ（２−トリメチルシリルエトキシメトキシ）；ＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）；Ｓｉ−Ｔｈｉｏｌ（シリカ １−プロパンチオール）；ＳＫ−ＣＣＯ２−Ａ（２−（ジメチルアミノメチル）フェロセン−１−イル−パラジウム（ＩＩ）クロリド ジノルボルニルホスフィン）；Ｔ３Ｐ（プロピルホスホン酸無水物）；ＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオリド）；ＴＢＤＭＳＣｌ（ｔ−ブチル−ジメチルシリルクロリド）；ＴＢＭＥまたはＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル）；ｔ−ＢｕＯＨ（２−メチル−２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブチルアルコール）；ｔＢｕ−Ｘｐｈｏｓ（２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル）；ＴＤＡ−１（トリス［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］アミンまたはトリス（３，６−ジオキサヘプチル）アミン）；ＴＥＡ、ＮＥｔ_３またはＥｔ_３Ｎ（トリエチルアミン）；ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；ＴＨＰ（テトラヒドロピラン）；ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）；ＴＭＳ（トリメチルシリル）；ＴＭＳＣｌ（トリメチルシリルクロリド）；ＴＭＳＣＦ_３（トリメチル（トリフルオロメチル）シラン）；Ｔｏｓまたはトシル（４−トルエンスルホニル）；ＴＯＳＭＩＣ（ｐ−トルエンスルホニルメチル イソシアニド）；ＵＶ（紫外線）。

【実施例】

【0155】

本明細書における反応および本明細書で使用される新規の出発物質の調製の全ては、従来のものであり、それらの性能または調製に関する適切な試薬および反応条件ならびに所望の生成物を単離するための手順は、文献の先例ならびに本明細書の実施例および調製を参照して、当業者には周知であろう。

【0156】

記載される工程の一部に関して、反応することが望まれない潜在的な反応性機能を保護し、結果として前記の保護基を切断することが、必要である可能性がある。そのような場合、あらゆる適合性の保護基が、使用されることができる。特に、T.W. Greeneにより記載された方法(Protective Groups in Organic Synthesis, A. Wiley-Interscience Publication, 1981)またはP. J. Kocienskiにより記載された方法(Protecting groups, Georg Thieme Verlag, 1994)のような保護および脱保護の方法が、用いられることができる。

【0157】

一般的な合成スキーム
スキームＩ：

【0158】

【化32】

【0159】

スキームＩで例示されるように、Ｉのような化合物が、購入または合成されることができ(J. Org. Chem. 2012, 77, 9422-9425)、アキラル、ラセミまたはエナンチオピュアであることができる。Ｉのような化合物は、適当な塩基、例えばＫ_３ＰＯ_４、ＫＯＳｉＭｅ_３またはＬｉＯＭｅを溶媒、例えばＨ_２Ｏを添加した、または添加していない１，４−ジオキサン中で用いる適当に置換されたボロン酸またはＢＰｉｎエステル（ＩＩ）とのロジウムに触媒される共役付加を経て、ＩＩＩのような化合物を生成することができる。ＩＩＩのような化合物は、適切な塩基およびカルボニル化（ｃａｂｏｎｙｌａｔｉｎｇ）試薬を適切な溶媒、例えばＴＨＦ中ＮａＨおよび炭酸ジエチル、ＴＨＦ中ＬＤＡおよびシアノギ酸メチルまたはトルエン中ＬＨＤＭＳおよびシアノギ酸メチル中で用いてカルボニル化されて、ＩＶのような化合物を提供することができる。ＩＶのような化合物は、典型的にはアルコキシド塩基を含むアルコール性溶媒中でホルムアミジンと縮合されてＶのような化合物を提供することができる。Ｖのような化合物は、求核性アミン種とカップリングされてＶＩのような化合物を提供することができる。このカップリングは、典型的にはＢＯＰ試薬およびＤＢＵを使用して１工程で、またはＶをＰＯＣｌ_３で処理した後求核性アミン種を添加することによって２工程で実施される。ＶＩのような化合物は、酸、典型的にはＤＣＭ中ＴＦＡまたはＭｅＯＨ中ＨＣｌでの処理によって脱保護されてＶＩＩのような化合物を提供することができる。ＶＩＩのような化合物は、典型的には塩基としてＴＥＡを含むＤＣＭ、塩基としてＮａＨＣＯ_３を含むＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏまたは塩基としてＮａＨＣＯ_３を含むＨＦＩＰ中での塩化アクリロイルによる処理によってアシル化されて、ＶＩＩＩのような化合物を提供することができる。ある態様において、種Ｒは、保護基を含有することができ、それは、合成シーケンスにおける追加の工程によって除去されることができる。Ｒ、Ｒ’、ＡおよびＢは、本明細書における下記の態様、スキーム、実施例および特許請求の範囲における通りに定められる。全ての工程における化合物は、標準的な技法、例えばカラムクロマトグラフィー、結晶化および逆相ＨＰＬＣまたはＳＦＣによって精製されることができる。必要に応じて、ＶＩＩＩの鏡像異性体の分離が、当該技術で既知の標準的な方法、例えばキラルＳＦＣまたはＨＰＬＣの下で実施されて、単一の鏡像異性体を与えることができる。

【0160】

スキームＩＩ：

【0161】

【化33】

【0162】

スキームＩＩで例示されるように、（スキームＩに従って調製された）ＩＶのような化合物は、Ｎ，Ｎ−ジアルキルグアニジンと縮合されてＩＸのような化合物を提供する。典型的には、これらの反応は、適切なアルコキシド塩基を含むアルコール性溶媒中で行われる。ＩＸのような化合物は、求核性アミン種とカップリングされてＸのような化合物を提供することができる。このカップリングは、典型的にはＢＯＰ試薬およびＤＢＵを使用して１工程で、またはＩＸをＰＯＣｌ_３で処理した後求核性アミン種を添加することによって２工程で実施される。Ｘのような化合物は、酸性条件、典型的にはＤＣＭ中ＴＦＡまたはＭｅＯＨ中ＨＣｌの下で脱保護されてＸＩのような化合物を提供することができる。ＸＩのような化合物は、典型的には塩基としてＴＥＡを含むＤＣＭ、塩基としてＮａＨＣＯ_３を含むＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏまたは塩基としてＮａＨＣＯ_３を含むＨＦＩＰ中での塩化アクリロイルによる処理によってアシル化されて、ＸＩＩのような化合物を提供することができる。Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、ＡおよびＢは、本明細書における下記の態様、スキーム、実施例および特許請求の範囲における通りに定められる。全ての工程における化合物は、標準的な技法、例えばカラムクロマトグラフィー、結晶化および逆相ＨＰＬＣまたはＳＦＣによって精製されることができる。必要に応じて、ＸＩＩの鏡像異性体の分離が、当該技術で既知の標準的な方法、例えばキラルＳＦＣまたはＨＰＬＣの下で実施されて、単一の鏡像異性体を与えることができる。

【0163】

スキームＩＩＩ：

【0164】

【化34】

【0165】

スキームＩＩＩで例示されるように、ＩＶのような化合物は、尿素と縮合されてＸＩＩＩのような化合物を提供する。ＸＩＩＩのような化合物は、典型的にはＰＯＣｌ_３で塩素化されてＸＩＶのような化合物を提供し、次いでそれは、塩基性条件下で求核性アミン種とカップリングされてＸＶのような化合物を提供する。典型的には穏やかな触媒酸の存在下でのＤＨＰによるＸＶのような化合物の保護は、ＸＶＩのような化合物を提供する。塩基性条件下でのＸＶＩのような化合物のアルコールとのカップリングは、ＸＶＩＩのような化合物を提供する。酸性条件、典型的にはＤＣＭ中ＴＦＡまたはＭｅＯＨ中ＨＣｌの下でのＸＶＩＩのような化合物の脱保護は、ＸＶＩＩＩのような化合物を提供する。ＸＶＩＩＩのような化合物は、典型的には塩基としてＴＥＡを含むＤＣＭ、ＮａＨＣＯ_３を含むＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏまたは塩基としてＮａＨＣＯ_３を含むＨＦＩＰ中での塩化アクリロイルによる処理によってアシル化されて、ＸＩＸのような化合物を提供することができる。Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’’’は、本明細書における下記の態様、スキーム、実施例および特許請求の範囲における通りに定められる。全ての工程における化合物は、標準的な技法、例えばカラムクロマトグラフィー、結晶化および逆相ＨＰＬＣまたはＳＦＣによって精製されることができる。必要に応じて、ＸＩＸの鏡像異性体の分離が、当該技術で既知の標準的な方法、例えばキラルＳＦＣまたはＨＰＬＣの下で実施されて、単一の鏡像異性体を与えることができる。

【0166】

スキームＩＶ：

【0167】

【化35】

【0168】

スキームＩＶにおいて例示されるように、ＸＸのような化合物は、酵素酸化を受けてＸＸＩのような化合物を提供する。
スキームＶ：

【0169】

【化36】

【0170】

スキームＶにおいて例示されるように、ＸＸＩＩのような化合物は、標準的なＰｄ触媒鈴木カップリング条件下で適切なアリールボロン酸またはアリールＢＰｉｎエステルとカップリングされてＸＸＩＩＩのような化合物を提供する。ＸＸＩＩＩのような化合物は、典型的には触媒的Ｐｄ／ＣまたはＰｔ／Ｃを極性溶媒、例えばＭｅＯＨ中でＨ_２の存在下で用いて水素化されてＸＸＩＶのような化合物を提供する。ＸＸＩＶのような化合物は、酸性条件、典型的にはＤＣＭ中ＴＦＡまたはＭｅＯＨ中ＨＣｌの下で脱保護されてＸＸＶのような化合物を提供する。ＸＸＶのような化合物は、典型的には塩基としてＴＥＡを含むＤＣＭ、塩基としてＮａＨＣＯ_３を含むＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏまたは塩基としてＮａＨＣＯ_３を含むＨＦＩＰ中での塩化アクリロイルによる処理によってアシル化されて、ＸＸＶＩのような化合物を提供することができる。Ｚは、本明細書における下記の態様、スキーム、実施例および特許請求の範囲における通りに定められ、保護基を含有することができ、それは、合成シーケンスにおけるその後の工程により除去されることができる。全ての工程における化合物は、標準的な技法、例えばカラムクロマトグラフィー、結晶化および逆相ＨＰＬＣまたはＳＦＣによって精製されることができる。必要に応じて、ＸＸＶＩの鏡像異性体の分離が、当該技術で既知の標準的な方法、例えばキラルＳＦＣまたはＨＰＬＣの下で実施されて、単一の鏡像異性体を与えることができる。

【0171】

スキームＶＩＩ：

【0172】

【化37】

【0173】

スキームＶＩＩにおいて例示されるように、ＸＸＶＩＩのような化合物は、酵素酸化を受けてＸＸＶＩＩＩのような化合物を提供する。
合成中間体の調製
スキーム１において示されるような［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］ボロン酸 （Ｉｎｔ−１）の調製。

【0174】

スキーム１：

【0175】

【化38】

【0176】

工程１：４−ブロモ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （１ｂ）の合成
この反応は、２個の並行したバッチで行われた。４−ブロモ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール（１００ｇ、４７４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（１Ｌ）中における撹拌溶液に、ＰＰＴＳ（１１．９ｇ、４７．４ｍｍｏｌ、０．１当量）を２８℃で添加した。次いで、ＤＨＰ（１１９．６ｇ、１．４ｍｏｌ、３．０当量）を一度に添加した。混合物を３０℃で１８時間撹拌した。ＴＬＣ分析（２０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）は、出発物質の完全な消費を示した。２個のバッチを仕上げのために一緒に合わせた。反応をＨ_２Ｏ（１．５Ｌ）で停止させ、層を分離した。水層をＤＣＭ（１Ｌ）で抽出した。有機性物質を合わせてＨ_２Ｏ（１Ｌ）およびブライン（１Ｌ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して乾燥させた。残留物を石油エーテル（３００ｍＬ）で摩砕処理すると、４−ブロモ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （１ｂ）が灰白色固体として得られた（２２３ｇ、収率８０％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.00 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.73 (ddd, J = 11.5, 7.7, 6.0 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 2.09 - 1.90 (m, 2H), 1.83 - 1.66 (m, 1H), 1.57 (dt, J = 9.3, 3.9 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 295, 297 (M+H)。

【0177】

工程２：［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］ボロン酸 （Ｉｎｔ−１）の合成
反応は、２個の並行したバッチで実施された。４−ブロモ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（２１０．０ｇ、７１１．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＢ（Ｏ−ｉＰｒ）_３（２６７．６１ｇ、１．４２ｍｏｌ、２．０当量）のＴＨＦ（２．０Ｌ）中における撹拌溶液を、−７０℃に冷却した。次いで、ｎ−ＢｕＬｉ（５２６．５ｍＬ、１．３２ｍｏｌ、１．８５当量）を上記の溶液に３時間の期間をかけて、反応温度を−７０℃〜−６５℃で維持しながら滴加した。添加後、反応混合物を−７０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ分析（２０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）は、出発物質の消費を示した。混合物を飽和水性ＮＨ_４Ｃｌの溶液（２．０Ｌ）で停止させ、ＭＴＢＥ（２．０Ｌ）で希釈した。層を分離し、水層をＭＴＢＥ（１．０Ｌ）で抽出した。有機性物質を合わせてブライン（１．５Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、２５℃で濃縮した。残留物をＭＴＢＥ（３００ｍＬ）中で溶解させた。石油エーテル（１．２Ｌ）を溶液に２０℃（室温）で滴加した。白色固体が、石油エーテルの添加の間に沈殿した。結果として得られた懸濁液を濾過し、フィルターケーキを石油エーテル（８００ｍＬ）で洗浄した。フィルターケーキを真空下で乾燥させると、［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］ボロン酸 （Ｉｎｔ−１）（２８０．０ｇ、収率７６％）が白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.29 (s, 2H), 7.89 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 1H), 3.72 (ddd, J = 11.5, 7.8, 6.2 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.39 (ddd, J= 16.2, 8.4, 3.8 Hz, 1H), 2.10 - 1.97 (m, 1H), 1.91 (dq, J = 13.0, 3.4 Hz, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 1H), 1.57 (dq, J = 9.0, 4.6 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 261 (M+H)。

【0178】

スキーム２において示されているような５−クロロ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−オール （Ｉｎｔ−２）の調製。
スキーム２：

【0179】

【化39】

【0180】

工程１：４−ブロモ−５−クロロ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （２ｂ）の合成
４−ブロモ−５−クロロ−１Ｈ−インダゾール （２ａ）（９５０ｍｇ、４．１０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中における溶液に、ＤＨＰ（５１８ｍｇ、６．１６ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＰＰＴＳ（１０３ｍｇ、０．４１０ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。混合物を５０℃で２０時間撹拌した。ＤＨＰ（１７３ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、０．５当量）の別のバッチを添加し、結果として得られた混合物を５０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質が消費されて生成物が２種類の位置異性体の混合物として得られたことを示した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、２０ｇ、１０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製すると、４−ブロモ−５−クロロ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （２ｂ）が白色固体として得られた（８５０ｍｇ、収率６６％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.11 (s, 1H), 7.84 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.93 - 5.88 (m, 1H), 3.87 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 3.77 - 3.72 (m, 1H), 2.37 - 2.32 (m, 1H), 2.01 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 1.73 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 1.58 (t, J = 6.4 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 315, 317 (M + H)。

【0181】

工程２：［５−クロロ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］ボロン酸 （Ｉｎｔ−２）の合成
４−ブロモ−５−クロロ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （２ｂ）（２．２７ｇ、７．１９３ｍｍｏｌ １．０当量）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中における混合物に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．４Ｍ、４．５ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ、１．５当量）を−７０℃で添加した。混合物をこの温度で２０分間撹拌した。ホウ酸トリメチル（２．２４ｇ、２２ｍｍｏｌ、３．０当量）を−７０℃で添加した。混合物をこの温度で２０分間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望の化合物の形成を示した。反応を飽和水性ＮＨ_４Ｃｌで停止させ、次いでＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０→５０％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）で精製すると、［５−クロロ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］ボロン酸 （Ｉｎｔ−２）が白色固体として得られた（１．４２ｇ、収率７０％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.59 (s, 2H), 7.94 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 8.9, 0.9 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 9.6, 2.6 Hz, 1H), 3.94 - 3.82 (m, 1H), 3.73 (ddd, J = 11.5, 7.9, 5.8 Hz, 1H), 2.45 - 2.28 (m, 1H), 2.08 - 1.97 (m, 1H), 1.94 (dq, J = 13.1, 3.6 Hz, 1H), 1.82 - 1.65 (m, 1H), 1.58 (tt, J = 8.6, 3.7 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 281 (M + H)。

【0182】

スキーム３において示されているような５−クロロ−６−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （Ｉｎｔ−３）の調製。

【0183】

スキーム３：

【0184】

【化40】

【0185】

工程１：１−ブロモ−２−クロロ−５−フルオロ−３−メチルベンゼン （３ｂ）の合成
２−ブロモ−４−フルオロ−６−メチルアニリン （３ａ）（５ｇ、２４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）を濃ＨＣｌ（３０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）の溶液に添加し、結果として得られた混合物を６０〜７０℃で１時間撹拌した。混合物を０〜５℃に冷却し、ＮａＮＯ_２（２．０３ｇ、２９．４ｍｍｏｌ、１．２当量）のＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）中における溶液を添加し、反応を１５分間撹拌した。混合物をＣｕＣｌ（３．６４ｇ、３６．８ｍｍｏｌ、１．５当量）の濃ＨＣｌ（５０ｍＬ）中における溶液中に添加し、７０〜８０℃で３０分間撹拌した。粗製の反応混合物を室温まで冷却し、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、１−ブロモ−２−クロロ−５−フルオロ−３−メチルベンゼン （３ｂ）が褐色の油として得られ（４．５ｇ、収率８０％）、それをそれ以上精製せずに用いた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.23 (dd, J = 7.8, 2.9 Hz, 1H), 6.97 - 6.91 (m, 1H), 2.43 (s, 3H)。

【0186】

工程２：２−ブロモ−３−クロロ−６−フルオロ−４−メチルベンズアルデヒド （３ｃ）の合成
１−ブロモ−２−クロロ−５−フルオロ−３−メチルベンゼン （３ｂ）（１３ｇ、５８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中における溶液に、ＬＤＡ（ＴＨＦ中２．０Ｍ、３５ｍＬ、１．２当量）を−７８℃で添加した。混合物を４０分間撹拌し、次いでＤＭＦ（６．５ｍＬ）を添加した。反応を−７８℃で１時間撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して乾燥させた。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０→１５％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）により精製すると、２−ブロモ−３−クロロ−６−フルオロ−４−メチルベンズアルデヒド （３ｃ）（８．３４ｇ、収率５７％）が淡黄色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.29 (s, 1H), 7.09 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H)。

【0187】

工程３：５−ブロモ−４−メトキシ−１Ｈ−インダゾール （３ｄ）の合成
２−ブロモ−３−クロロ−６−フルオロ−４−メチルベンズアルデヒド （３ｃ）（２２０ｍｇ、０．８７５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中における混合物に、ＮＨ_２ＮＨ_２（５１６ｍｇ、１０．３ｍｍｏｌ、１２当量）を添加した。混合物を１３０℃で３時間撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏ（３５ｍＬ）中に注ぎ、ＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して乾燥させた。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０→２０％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）により精製すると、４−ブロモ−５−クロロ−６−メチル−１Ｈ−インダゾール （３ｄ）（１０８ｍｇ、収率５０％）が白色粉末として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.02 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 2.56 (d, J = 0.6 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 245, 247 (M + H)。

【0188】

工程４：４−ブロモ−５−クロロ−６−メチル−１Ｈ−インダゾール （３ｅ）の合成
４−ブロモ−５−クロロ−６−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （３ｅ）（２．４ｇ、収率５９％）を、反応がＴＨＦ中で５０℃において行われたことを除いて、４−ブロモ−５−メチル−１−（テトラヒドロ２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （１ｂ）を調製するために用いられた手順に従って調製した。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.94 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 5.66 (dd, J = 9.0, 2.6 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.80 - 3.64 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.54 - 2.46 (m, 1H), 2.15 (dd, J = 8.1, 4.4 Hz, 1H), 2.11 - 2.03 (m, 1H), 1.79 - 1.64 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z329, 331 (M + H)。

【0189】

工程５：５−クロロ−６−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （Ｉｎｔ−３）の合成
４−ブロモ−５−クロロ−６−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （３ｅ）（３ｇ、９．１ｍｍｏｌ、１．０当量）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（４．６２ｇ、１８．２ｍｍｏｌ、２．０当量）、ＫＯＡｃ（２．６８ｇ、２７．３ｍｍｏｌ、３．０当量）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（０．６６６ｇ、０．９１０ｍｍｏｌ、０．１当量）の１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）中における混合物を、８０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の完全な消費を示した。反応を２５℃に冷却し、濃縮して乾燥させた。残留物をＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して乾燥させた。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０→２０％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）により精製すると、５−クロロ−６−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （Ｉｎｔ−３）（２．２ｇ、収率６３．７％）が淡黄色のゴムとして得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.06 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 6.08 - 5.29 (m, 1H), 3.92-3.82 (m, 1H), 3.80 - 3.66 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.43-2.33(m, 1H), 2.08 - 2.00 (m, 1H), 1.97 - 1.88 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 1H), 1.63-1.53 (s, 2H), 1.38 (s, 12H); LCMS (ESI) m/z 377 (M + H)。

【0190】

スキーム４に従うｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）−５，６−ジヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｉｎｔ−４）の調製。

【0191】

スキーム４：

【0192】

【化41】

【0193】

工程１：エチル ４−エトキシ−２−オキソシクロヘキサ−３−エン−１−カルボキシレート （４ｂ）の合成
３−エトキシシクロヘキサ−２−エン−１−オン （４ａ）（５０ｇ、３５６．７ｍｍｏｌ、１．０当量）および炭酸ジエチル（８４．３ｇ、７１３ｍｍｏｌ、２．０当量）のＴＨＦ（６００ｍＬ）中における溶液に、ＬＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、７１３ｍＬ、７１３ｍｍｏｌ、２．０当量）を−７８℃で迅速に滴加した。混合物を２０℃に温め、１６時間撹拌した。追加のＬＨＭＤＳ（２５０ｍＬ、２５０ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を添加し、混合物を２０℃で４時間撹拌した。混合物を１Ｎ ＨＣｌ（１Ｌ）中に注ぎ、１時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過および濃縮後、残留物を石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（１０／１）で洗浄すると、エチル ４−エトキシ−２−オキソシクロヘキサ−３−エン−１−カルボキシレート （４ｂ）が黄色固体（５７ｇ、収率７５％）として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ 5.38 (s, 1H), 4.21 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.91 (qd, J = 7.1, 2.2 Hz, 2H), 3.31 (dd, J = 8.9, 5.0 Hz, 1H), 2.56 (dt, J = 17.0, 5.4 Hz, 1H), 2.51 - 2.25 (m, 2H), 2.25 - 2.06 (m, 1H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 213 (M + H)。

【0194】

工程２：７−オキソ−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボキシレート （４ｃ）の合成
エチル ４−エトキシ−２−オキソシクロヘキサ−３−エン−１−カルボキシレート （４ｂ）（２２０ｇ、１．０３ｍｏｌ、１．０当量）の７０％水性酢酸（１．５Ｌ）中における溶液を、６０℃で１６時間撹拌した。混合物を濃縮して乾燥させた。結果として得られた残留物をベンゼン（３×）からの共沸蒸留により乾燥させると、粗製のジケトンが得られた。ジケトンのベンゼン（８００ｍＬ）中における溶液に、エチレングリコール（７０ｇ、１．１３ｍｍｏｌ、１．１当量）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１９．５７ｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加した。フラスコにディーンスタークトラップで蓋をして、混合物を２時間加熱還流した。室温まで冷却した後、溶液を飽和水性ＮａＨＣＯ_３で塩基性にした。生成物をＥｔＯＡｃ（３×２Ｌ）で抽出した。有機性物質を合わせてブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させて乾燥させた。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、２％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）により精製すると、エチル ７−オキソ−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボキシレート （４ｃ）が黄色の油として得られた（４８ｇ、収率２１％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 4.19 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.97-3.82 (m, 5H), 2.49 - 2.42 (m, 2H), 2.27 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.69 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 229 (M + H)。

【0195】

工程３：５’，８’−ジヒドロ−３’Ｈ−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，７’−キナゾリン］−４’（６’Ｈ）−オン （４ｄ）の合成
エチル ７−オキソ−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボキシレート （４ｃ）（４８ｇ、２１０．５ｍｍｏｌ、１．０当量）、ホルムアミジン酢酸塩（４３．７８ｇ、４２１ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＮａＯＭｅ（２２．７ｇ、４２１ｍｍｏｌ、２．０当量）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中における混合物を、４時間還流させた。反応混合物を濃縮して乾燥させ、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ＝ ２０／１）により精製すると、５’，８’−ジヒドロ−３’Ｈ−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，７’−キナゾリン］−４’（６’Ｈ）−オン （４ｄ）が黄色固体として得られた（２９ｇ、収率６６％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.99 (s, 1H), 4.01 - 3.89 (m, 4H), 2.70 (s, 2H), 2.47 (dd, J = 13.8, 7.3 Hz, 2H), 1.78 (t, J = 6.6 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 209 (M + H)。

【0196】

工程４：ｔｅｒｔ−ブチル ４−（５’，８’−ジヒドロ−６’Ｈ−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，７’−キナゾリン］−４’−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （４ｅ）の合成
５’，８’−ジヒドロ−３’Ｈ−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，７’−キナゾリン］−４’（６’Ｈ）−オン （４ｄ）（２９ｇ、１３９．４ｍｍｏｌ、１．０当量）、ｔｅｒｔ−ブチル ピペラジン−１−カルボキシレート（３８．９ｇ、２０９．１ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＢＯＰ試薬（１２３．２ｇ、２７８．８ｍｍｏｌ、２．０当量）のＤＭＦ（３００ｍＬ）中における混合物にＤＢＵ（６３．５６ｇ、４１８．２ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加し、混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加し、混合物をＨ_２Ｏ（３×３００ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過および濃縮後、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ＝ ２／３）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（５’，８’−ジヒドロ−６’Ｈ−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，７’−キナゾリン］−４’−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （４ｅ）が黄色の油として得られた（２５ｇ、収率４７．５％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.48 (s, 1H), 3.97 (td, J = 6.4, 1.9 Hz, 4H), 3.46 - 3.42 (m, 4H), 3.32 - 3.27 (m, 4H), 2.92-2.89 (m, 2H), 2.68 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.81 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 377 (M + H)。

【0197】

工程５：４−（ピペラジン−１−イル）−５，６−ジヒドロキナゾリン−７−オール （４ｆ）の合成
ｔｅｒｔ−ブチル ４−（５’，８’−ジヒドロ−６’Ｈ−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，７’−キナゾリン］−４’−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （４ｅ）（２５ｇ、６６．３１ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（３００ｍＬ）中における溶液に、ＨＣｌ（１，４−ジオキサン中４．０Ｎ、６０ｍＬ、２４０ｍｍｏｌ、３．６当量）を添加し、混合物を５０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費を示した。混合物を濃縮して乾燥させると、４−（ピペラジン−１−イル）−５，６−ジヒドロキナゾリン−７−オール （４ｆ）が得られ、それをそれ以上精製せずに用いた。LCMS (ESI) m/z 233 (M + H)。

【0198】

工程６：ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （４ｇ）の合成
粗製の４−（ピペラジン−１−イル）−５，６−ジヒドロキナゾリン−７−オール 塩酸塩 （４ｆ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（６０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中における溶液を、ｐＨ＝７に調整し、（Ｂｏｃ）_２Ｏ（１５．１８ｇ、６９．６２ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加した。次いで、Ｋ_２ＣＯ_３（９．１５ｇ、６６．３１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２０℃で３０分間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（２×４００ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過および濃縮後、残留物をＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／４０）で摩砕処理すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （４ｇ）（１６ｇ、収率７３％、２工程）が黄色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.62 (s, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.57 (dd, J = 6.2, 3.9 Hz, 4H), 3.44 - 3.32 (m, 4H), 2.92 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.65 - 2.52 (m, 2H), 1.49 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 333 (M + H)。

【0199】

工程７：ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）−５，６−ジヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｉｎｔ−４）の合成
磁気撹拌子を備えた５０ｍＬフラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （４ｇ）（１．０ｇ、３．００８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）を入れた。混合物を−７８℃に冷却した。ＬＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、３．０１ｍＬ、３．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加した。１０分後、ＰｈＮＴｆ_２（１．０２ｇ、２．８６ｍｍｏｌ、０．９５当量）を添加した。混合物を−７８℃で２時間撹拌し、次いで室温に一夜温めた。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物の形成および出発物質の完全な消費を示した。混合物を１Ｍ水性ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）で停止させ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせて水およびブラインで洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。混合物を濾過し、濃縮して乾燥させると、残留物が得られ、それをフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０→６０％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン類）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）−５，６−ジヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｉｎｔ−４）（１．４ｇ、収率１００％）が淡黄色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.66 - 8.59 (m, 1H), 6.62 - 6.42 (m, 1H), 3.62 - 3.49 (m, 4H), 3.38 - 3.22 (m, 4H), 3.00 - 2.87 (m, 2H), 2.78 - 2.65 (m, 2H), 1.49 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 465 (M + H)。

【0200】

スキーム５に従う６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （Ｉｎｔ−５）の調製。

【0201】

スキーム５：

【0202】

【化42】

【0203】

工程１：４−クロロ−２−フルオロ−５−メチルアニリン （５ｂ）の合成
１−クロロ−５−フルオロ−２−メチル−４−ニトロベンゼン （５ａ）（２３．０ｇ、１２１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ／Ｈ_２Ｏ（２００ｍＬ、１：１）中における溶液に、１２Ｍ ＨＣｌ（１０．１ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８０℃に加熱し、Ｆｅ（２３．７ｇ、４２５ｍｍｏｌ）を３０分間の期間をかけてゆっくりと添加した。混合物を同じ温度で１時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質が消費されたことおよび所望される生成物が形成されたことを示した。混合物を２５℃に冷却し、酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ_３でｐＨ＝８〜９に塩基性化した。層を濾過し、分離し、水層を酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮すると、４−クロロ−２−フルオロ−５−メチルアニリン （５ｂ）が黄色固体として得られた（１８．０ｇ、収率９３％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.08 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 2.15 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 160, 162 (M + H)。

【0204】

工程２：２−ブロモ−４−クロロ−６−フルオロ−３−メチルアニリン （５ｃ）の合成
４−クロロ−２−フルオロ−５−メチルアニリン （５ｂ）（１８．７ｇ、１１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中における溶液に、ＮＢＳ（２０．９ｇ、１１７ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくりと添加した。次いで、混合物を２５℃まで温め、１時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質が消費されたことおよび所望される生成物が形成されたことを示した。混合物を飽和水性ＮａＨＣＯ_３で停止させ、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて水およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、１２０ｇ、石油エーテル／酢酸エチル＝９８：２）により精製すると、２−ブロモ−４−クロロ−６−フルオロ−３−メチルアニリン （５ｃ）が黄色固体として得られた（２２．１ｇ、収率７９％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.30 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 5.45 (s, 2H), 2.36 (d, J = 1.0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 238, 240 (M + H)。

【0205】

工程３：３−ブロモ−１−クロロ−５−フルオロ−４−ヨード−２−メチルベンゼン （５ｄ）の合成
濃Ｈ_２ＳＯ_４（６２ｍＬ）のＨ_２Ｏ（２５０ｍＬ）中における溶液に、２−ブロモ−４−クロロ−６−フルオロ−３−メチルアニリン （５ｃ）（２２．１ｇ、９３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１０分間撹拌し、５℃に冷却した。Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）中のＮａＮＯ_２（７．１ｇ、１０２ｍｍｏｌ）を、滴加した。結果として得られた混合物を、５℃で２０分間撹拌し、ＫＩ（６２ｇ、３７０ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）中における溶液に添加し、それを５℃で２０分間撹拌し、次いで２５℃で１８時間温めた。ＴＬＣ分析（石油エーテル）は、出発物質が消費されたことを示した。混合物を水（１５０ｍＬ）で停止させ、酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて飽和水性Ｎａ_２ＳＯ_３およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、１２０ｇ、石油エーテル）により精製すると、３−ブロモ−１−クロロ−５−フルオロ−４−ヨード−２−メチルベンゼン （５ｄ）が淡黄色固体として得られた（１８ｇ、収率５６％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.60 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 2.56 (d, J = 1.1 Hz, 3H)。

【0206】

工程４：２−ブロモ−４−クロロ−６−フルオロ−３−メチルベンズアルデヒド （５ｅ）の合成
３−ブロモ−１−クロロ−５−フルオロ−４−ヨード−２−メチルベンゼン （５ｄ）（１７．５ｇ、５０．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中における溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン類中２．５Ｍ、２０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を−１００℃で滴加した。混合物を同じ温度で３０分間撹拌した。乾燥ＤＭＦ（４．０ｇ、５５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を−１００℃で２０分間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル）は、出発物質のほとんど全てが消費されたことおよび所望される生成物が形成されたことを示した。粗製の反応混合物を１Ｎ ＨＣｌで停止させた。水を混合物に添加し、水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせてＨ_２Ｏで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、１２０ｇ、石油エーテル／酢酸エチル＝９７：３）により精製すると、２−ブロモ−４−クロロ−６−フルオロ−３−メチルベンズアルデヒド （５ｅ）が黄色固体として得られた（８．６ｇ、収率６８％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.18 (s, 1H), 7.75 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.52 - 2.50 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 251, 253 (M + H)。

【0207】

工程５：４−ブロモ−６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール （５ｆ）の合成
４−ブロモ−６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール （５ｆ）（６．７ｇ、収率８０％）を、反応が９０℃で２１時間行われたことを除いて、５−ブロモ−４−メトキシ−１Ｈ−インダゾール （３ｄ）を調製するために用いられた手順に従って調製した。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.43 (s, 1H), 8.00 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 2.53 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 245, 247 (M + H)。

【0208】

工程６：４−ブロモ−６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （５ｇ）の合成
４−ブロモ−６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （５ｇ）（５．７ｇ、収率７３％）を、反応が８０℃においてＴＨＦ中で行われたことを除いて、４−ブロモ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （１ｂ）を調製するために用いられた手順に従って調製した。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.05 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 5.88 (dd, J = 9.6, 2.4 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 3.80 - 3.73 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.38 - 2.31 (m, 1H), 2.05 - 1.94 (m, 2H), 1.71 (dd, J = 9.1, 3.3 Hz, 1H), 1.57 (dt, J = 9.1, 4.6 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 329, 331 (M + H)。

【0209】

工程７：６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （Ｉｎｔ−５）の合成
４−ブロモ−６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （７ｇ、２０ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（５．９３ｇ、２３．４ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（６．２５ｇ、６３．７ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（０．７７７ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）中における混合物を、Ｎ_２下で１６時間８５℃に加熱した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質のほとんどが消費されたことを示した。混合物を２５℃に冷却し、濾過した。濾液を濃縮した。残留物をＨ_２Ｏ（８０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。粗製の物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０〜１０％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製すると、６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール （Ｉｎｔ−５）（７．４ｇ、収率９０％、純度６５％）が白色固体として得られ、それには６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾールが混入していた。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.19 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 3.90 - 3.82 (m, 1H), 3.80 - 3.68 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.44 - 2.26 (m, 1H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.97 - 1.86 (m, 1H), 1.79 - 1.66 (m, 1H), 1.64 - 1.50 (m, 2H), 1.38 (s, 12H). LCMS (ESI) m/z 377, 379 (M + H)。

【0210】

実施例の調製：
実施例Ａ１ （スキームＡ）：１−｛４−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン
実施例Ａ２ （スキームＡ）：１−｛４−［（７Ｒ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン
実施例Ａ３（スキームＡ）：１−｛４−［（７Ｓ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン
スキームＡ：

【0211】

【化43】

【0212】

工程１：３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ａ−１）の合成
磁気撹拌子を備えた２５ｍＬフラスコに、［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］ボロン酸 （Ｉｎｔ−１）（６５０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ、１．０当量）、［ＲｈＣｌ（ＣＯＤ）］_２（６１．６ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、０．０５当量）およびＮａＨＣＯ_３（６２０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ、２．０当量）を入れた。フラスコに窒素をパージし、次いで水（１２．５ｍＬ）およびシクロヘキサノン（７２１ｍｇ、７．５ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。混合物を８０℃で一夜撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、ボロン酸の完全な消費を示した。反応を室温まで冷却した。混合物を分液漏斗中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、２５ｇ ＳｉＯ_２、２５％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン類）により精製すると、３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ａ−１）（ジアステレオ異性体の１：１混合物、６８０ｍｇ、収率８７％）が透明な油として得られ、それは、静置すると凝固して灰白色固体になった。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.18 (s, 1H), 7.39 (dd, J = 8.5, 3.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.71 (dt, J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.84 - 3.69 (m, 1H), 3.54 (tt, J= 13.1, 3.9 Hz, 1H), 3.01 (t, J= 13.9 Hz, 1H), 2.68 - 2.48 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.41 - 2.35 (m, 1H), 2.34 - 2.22 (m, 1H), 2.19 (s, 1H), 2.12 - 1.92 (m, 2H), 1.94 - 1.75 (m, 3H), 1.69 (d, J = 3.1 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 313 (M + H)。

【0213】

工程２：３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ａ−２）の合成
磁気撹拌子を備えた５０ｍＬフラスコに、３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ａ−１）（６７７ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、１．０当量）、炭酸ジエチル（３ｍＬ）およびＴＨＦ（６ｍＬ）を入れた。水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、２１７ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ、２．５当量）を一度に添加した。フラスコに還流凝縮器を装備させ、次いで混合物を７０℃に加熱した。１時間後、反応をＬＣＭＳによりチェックし、それは、出発物質の消費およびジアステレオ異性体の複合混合物としての生成物の形成を示した。反応を分液漏斗中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和水性ＮＨ_４Ｃｌで洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機性物質を合わせてブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、２５ｇ ＳｉＯ_２、１０→２５％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン類）により精製すると、３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ａ−２）が黄色の油として得られ（６８０ｍｇ、収率８２％）、それをそれ以上精製せずに用いた。LCMS (ESI) m/z 385 (M + H)。

【0214】

工程３：７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ａ−３）の合成
磁気撹拌子を装備した２ドラムバイアル（２ ｄｒａｍ ｖｉａｌ）に、エチル ４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ａ−２）（３８４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）およびホルムアミジン酢酸塩（５２１ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ、５．０当量）を入れた。ナトリウムメトキシド（ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、２０ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、混合物を一夜加熱還流させた。反応を室温まで冷却し、濃縮して乾燥させた。残留物をＥｔＯＡｃ中で溶解させ、飽和水性ＮＨ_４Ｃｌで洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機性物質を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、１０ｇ ＳｉＯ_２、１００％ ＥｔＯＡｃ→１５％ ＥｔＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により精製すると、７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ａ−３）が白色固体として得られた（ジアステレオ異性体の１：１混合物、３６４ｍｇ、収率４８％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.06 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.39 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.70 (dd, J = 9.4, 2.7 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.74 (td, J = 11.1, 2.8 Hz, 1H), 3.52 (tdd, J = 12.4, 5.2, 2.9 Hz, 1H), 3.24 (dd, J = 17.3, 11.7 Hz, 1H), 2.98 (dd, J= 17.3, 5.0 Hz, 1H), 2.88 (dd, J= 18.4, 4.6 Hz, 1H), 2.67 - 2.52 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 1H), 2.20 - 2.02 (m, 3H), 1.81 - 1.61 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 365 (M + H)。

【0215】

工程４：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ａ−４）の合成
磁気撹拌子を備えた１０ｍＬフラスコに、７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ａ−３）（３６４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＤＭＦ（２．５ｍＬ）、ＤＢＵ（３０４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、２．０当量）、ＢＯＰ試薬（４６４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１．０５当量）およびｔｅｒｔ−ブチル ピペラジン−１−カルボキシレート（２３３ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ、１．２５当量）を入れた。混合物を６５℃に一夜加熱した。ＬＣＭＳ分析は、ジアステレオ異性体の１：１混合物としての所望される生成物への変換を示した。反応を室温まで冷却し、水を添加した。白色固体が形成され、それを濾過により収集した。フィルターケーキを水で洗浄し、真空下で乾燥させた。結果として得られた固体をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中で溶解させ、０．１Ｎ ＨＣｌ（２×２０ｍＬ）およびブラインで洗浄した。有機性溶液を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、２５ｇ ＳｉＯ_２、６０→１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン類）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレートが灰白色固体として得られた（ジアステレオ異性体の１：１混合物、３２７ｍｇ、収率６１％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.55 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.32 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.62 (ddd, J = 9.5, 4.2, 2.8 Hz, 1H), 4.00 - 3.88 (m, 1H), 3.73 - 3.62 (m, 1H), 3.56 (t, J = 3.5 Hz, 3H), 3.43 (d, J = 9.9 Hz, 4H), 3.30 - 3.16 (m, 3H), 3.08 (dd, J = 18.8, 6.3 Hz, 1H), 2.81 - 2.61 (m, 3H), 2.56 - 2.43 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.24 - 1.99 (m, 4H), 1.75 - 1.63 (m, 2H), 1.42 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 533 (M + H)。

【0216】

工程５：７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ａ−５）の合成
磁気撹拌子を備えた２５ｍＬフラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ａ−４）（３２５ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＭｅＯＨ（６．１ｍＬ）およびＨＣｌ（１，４−ジオキサン中４．０Ｎ、３．１ｍＬ、１２．２ｍｍｏｌ、２０当量）を入れた。反応を一夜撹拌しておいた。ＬＣＭＳ分析は、完全に脱保護された生成物の形成を示した。反応を濃縮して乾燥させると、７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ａ−５）（２１４ｍｇ、収率１００％）が褐色の油として得られた。それをそれ以上精製せずに次の工程に用いた。LCMS (ESI) m/z 349 (M + H)。

【0217】

工程６：１−｛４−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ａ１）の合成
磁気撹拌子を備えた２５ｍＬフラスコに、７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ａ−５）（３４．８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＤＣＭ（４ｍＬ）、ＴＥＡ（１０１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１０当量）および塩化アクリロイル（１３．６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．５当量）を入れた。２時間後、反応をＬＣＭＳによりチェックし、それは、所望される生成物への変換を示した。反応を濃縮して乾燥させ、フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、１０ｇ ＳｉＯ_２、２０％ ＥｔＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により精製すると、１−｛４−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オンが白色固体として得られた（１４．７ｍｇ、収率３７％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.58 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.29 (d, J= 9.9 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 16.7, 10.6 Hz, 1H), 6.27 (dd, J = 16.8, 1.7 Hz, 1H), 5.74 (dd, J = 10.6, 1.7 Hz, 1H), 4.11 - 3.63 (m, 9H), 3.25 - 3.15 (m, 2H), 3.01 - 2.83 (m, 1H), 2.84 - 2.70 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.32 - 2.06 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 403 (M + H)。

【0218】

工程７：１−｛４−［（７Ｒ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ａ２）および１−｛４−［（７Ｓ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ａ３）の合成
磁気撹拌子を備えた２５ｍＬフラスコに、７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン（２１４ｍｇ、０．６１４ｍｍｏｌ、０．６１４当量）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）、ＴＥＡ（６２１ｍｇ、６．１４ｍｍｏｌ、１０当量）および塩化アクリロイル（８３．３ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ、１．５当量）を入れた。１時間後、反応を濃縮して乾燥させた。残留物をＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＤ−３（４．６ｍｍ×１００ｍｍ、３ミクロン粒径）カラム上でのキラルＳＦＣにより精製し、それを１２０ｂａｒにおいて２５℃で保たれたＣＯ_２中で４０％ＩＰＡにより溶離した。４．０ｍＬ／分の流速は、Ｒｔ_{（ピーク１）}＝１．６２分およびＲｔ_{（ピーク２）}＝１．６２分を与えた。１−｛４−［（７Ｒ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ａ２）（ピーク１）：３６ｍｇ、＞９９％ ｅｅ、収率１５％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.94 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.30 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 16.7, 10.4 Hz, 1H), 6.15 (dd, J = 16.7, 2.4 Hz, 1H), 5.72 (dd, J= 10.4, 2.4 Hz, 1H), 3.85 - 3.70 (m, 2H), 3.69 - 3.57 (m, 3H), 3.55 - 3.48 (m, 2H), 3.30 - 3.23 (m, 2H), 3.20 - 3.07 (m, 1H), 3.05 - 2.88 (m, 2H), 2.70 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.36 - 2.20 (m, 1H), 2.00 (d, J = 12.4 Hz, 1H); [α]_d²²= -44.0 (C=0.1, CHCl₃); LCMS (ESI) m/z 403 (M + H)。１−｛４−［（７Ｓ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ａ３）（ピーク２）：３４．３ｍｇ、約９８％ ｅｅ、収率１４％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.94 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.30 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 16.7, 10.5 Hz, 1H), 6.15 (dd, J = 16.7, 2.4 Hz, 1H), 5.72 (dd, J= 10.5, 2.4 Hz, 1H), 3.86 - 3.69 (m, 2H), 3.70 - 3.57 (m, 3H), 3.57 - 3.44 (m, 2H), 3.30 - 3.22 (m, 2H), 3.15 (dd, J= 18.3, 11.5 Hz, 1H), 3.04 - 2.87 (m, 2H), 2.70 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.35 - 2.19 (m, 1H), 2.00 (d, J = 12.3 Hz, 1H); [α]_d²²= +53.3° (C=0.2, CHCl₃); LCMS (ESI) m/z 403 (M + H)。

【0219】

表Ａ中の実施例は、スキームＡにおける類似の化学ならびに１−｛４−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ａ１）および［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−６−イル］メタノール （Ａ−７）を調製するために用いられた手順を用いて調製された。以下の実施例は、実施例Ａ１を調製するために用いられた例示された手順に対する重要ではない変更または置換により作製され、当業者はそれを実現することができるであろう。

【0220】

【表1-1】

【0221】

【表1-2】

【0222】

以下の調製において詳述される中間体Ａ−６は、方法Ａに従って実施例Ａ７を与える。しかし、この実施例は、完全性のために必要とされる脱保護工程およびこの化学が下記に含まれているため、先行する実施例の合成範囲から外れている。最終的な実施例を与えるためのその後の化学は、方法Ａの実施例に類似しており、当業者が理解し得る最小限の追加または変更がある。

【0223】

［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−６−イル］メタノール （Ａ−７）の合成

【0224】

【化44】

【0225】

１０ｍＬのステンレス鋼の反応容器に、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−６−［（ベンジルオキシ）メチル］−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ａ−６）（３４０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＭｅＯＨ（５．２ｍＬ）およびＨＣｌ（１，４−ジオキサン中４．０Ｎ、０．２６ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．０当量）を入れた。Ｐｄ／Ｃ（１０％装填、７０ｍｇ）を添加し、容器をＨ_２で８ｂａｒに加圧し、５０℃に一夜加熱した。ＬＣＭＳ分析は、完全な脱ベンジルとＴＨＰおよびＢｏｃ基の部分的な脱保護を示した。粗製の反応物をセライトの薄いパッドを通して濾過した。混合物をロータリーエバポレーター（ｒｏｔｏｖａｐ）上で濃縮し、次いでＭｅＯＨ（６ｍＬ）中で溶解させた。追加のＨＣｌ（１，４−ジオキサン中４．０Ｎ、１．３ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ、１０当量）を、完全な脱保護を誘導するために添加した。混合物を一夜撹拌しておいた。混合物を濃縮して乾燥させると、［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−６−イル］メタノール （Ａ−７）が灰白色固体として得られ（１９５ｍｇ、収率９９％）、それをそれ以上精製せずに用いた。LCMS (ESI) m/z 379 (M + H)。

【0226】

【表2】

【0227】

実施例Ｂ１（スキームＢ）：１−｛６−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］−２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタ−２−イル｝プロパ−２−エン−１−オンを、ライブラリ形式で調製した。

【0228】

スキームＢ：

【0229】

【化45】

【0230】

工程１：４−クロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｂ−１）の合成
４０ｍＬバイアルに、７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ａ−４）（３００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＰＯＣｌ_３（５ｍＬ）およびトルエン（５ｍＬ）を入れた。ＤＩＰＥＡ（３２０ｍｇ、２．４７５ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。バイアルに蓋をして、１１０℃で１６時間振盪した。溶媒を減圧下で除去すると、４−クロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｂ−１）が得られ、それをそれ以上精製せずに直接次の工程において用いた。

【0231】

工程２：ｔｅｒｔ−ブチル ６−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］−２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタン−２−カルボキシレート （Ｂ−２）の合成
８ｍＬバイアルに、ｔｅｒｔ−ブチル ２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタン−２−カルボキシレート（９０μｍｏｌ、１．２当量）の溶液を入れた。ＴＥＡ（２２５μｍｏｌ、３．０当量）をバイアルに添加した後、４−クロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｂ−１）（７５μｍｏｌ、１．０当量）のＮＭＰ（０．９ｍＬ）中における溶液を添加した。バイアルに蓋をして、１３０℃で１６時間振盪した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示している。溶媒を真空中で除去し、結果として得られた残留物を分取ＴＬＣにより精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ６−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］−２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタン−２−カルボキシレート （Ｂ−２）が得られた。

【0232】

工程３：４−（２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタ−２−イル）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｂ−３）の合成
８ｍＬバイアルにｔｅｒｔ−ブチル ６−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］−２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタン−２−カルボキシレート （Ｂ−２）およびＨＣｌ（ＭｅＯＨ中４．０Ｍ、７５０μＬ）を入れた。バイアルに蓋をして、３０℃で２時間振盪した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。溶媒を真空下で除去すると、４−（２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタ−２−イル）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｂ−３）が得られ、それをそれ以上精製せずに用いた。

【0233】

工程４：１−｛６−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］−２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタ−２−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｂ１）の合成
４−（２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタ−２−イル）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｂ−３）を含有するバイアルに、飽和水性ＮａＨＣＯ_３（５００μＬ）、ＴＨＦ（５００μＬ）および塩化アクリロイルの溶液（ＴＨＦ中０．１５Ｍ、５００μＬ、７５μｍｏｌ、１．０当量）を添加した。バイアルに蓋をして、３０℃で２時間振盪した。ＬＣＭＳ分析は、生成物への変換を示した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×１．５ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせて無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（Ａｇｅｌａ Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ Ｃ１８、１５０×２５ｍｍ、５μｍ、アセトニトリルおよび水（０．２２％ギ酸）の０〜３５％勾配、３０ｍＬ／分）により精製すると、１−｛６−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］−２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタ−２−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｂ１）が得られた。LCMS (ESI) m/z 414 (M + H)。

【0234】

表Ｂにおける実施例は、スキームＢにおける類似の化学および１−｛６−［７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］−２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタ−２−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｂ１）を調製するために用いられた手順を用いてライブラリ形式で調製された。以下の実施例は、実施例Ｂ１を調製するために用いられた例示された手順に対する重要ではない変更または置換により作製され、当業者はそれを実現することができるであろう。

【0235】

【表3】

【0236】

実施例Ｃ１ （スキームＣ）：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛２−クロロ−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート
スキームＣ：

【0237】

【化46】

【0238】

工程１：エチル ４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｃ−１）の合成
エチル ４−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ａ−２）（１１．５ｇ、２９．９ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＯＨ（４００ｍＬ）中における溶液に、尿素（３．５９ｇ、５９．８ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＮａＯＭｅ（３．２３ｇ、５９．８ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応を８０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物の形成を示した。混合物を濃縮して乾燥させ、粗製の残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製すると、エチル ４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｃ−１）（２．３ｇ、収率２０％）が得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.95 (s, 1H), 10.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.79 (dd, J = 9.8, 2.5 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.79 - 3.65 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 1H), 2.94 - 2.77 (m, 1H), 2.57 - 2.47 (m, 1H), 2.46 - 2.34 (m, 5H), 2.31 - 2.15 (m, 2H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.93 (dd, J = 13.3, 3.2 Hz, 1H), 1.84 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 1.79 - 1.65 (m, 1H), 1.62 - 1.50 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 381 (M + H)。

【0239】

工程２：２，４−ジクロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｃ−２）の合成
エチル ４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｃ−１）（２．３ｇ、６．０ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ_３（３０ｍＬ）中における溶液を、１０５℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の完全な消費を示した。混合物を濃縮して乾燥させた。残留物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、ＴＥＡを添加してｐＨを８に調整した。溶媒を蒸発させた。粗製の残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、３３％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）により精製すると、２，４−ジクロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｃ−２）（１ｇ、収率５０％）が得られた。LCMS (ESI) m/z 333 (M + H)。

【0240】

工程３：ｔｅｒｔ−ブチル ４−［２−クロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−３）の合成
２，４−ジクロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｃ−２）（１ｇ、３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中における溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル ピペラジン−１−カルボキシレート（６７１ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＤＩＰＥＡ（７７６ｍｇ、６ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応を８０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物への変換を示した。反応混合物を室温まで冷却し、分液漏斗の中に注いだ。水（５０ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して乾燥させた。粗製の物質をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、２５％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−［２−クロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−３）（１ｇ、収率７０％）が得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.04 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.72 - 3.43 (m, 8H), 3.44 - 3.35 (m, 2H), 3.30 (dd, J = 19.2, 11.5 Hz, 1H), 3.14 (dd, J = 19.1, 6.4 Hz, 1H), 2.79 - 2.66 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.32 - 2.02 (m, 2H), 1.49 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 483 (M + H)。

【0241】

工程４：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛２−クロロ−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−４）の合成
ｔｅｒｔ−ブチル ４−［２−クロロ−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−３）（５２０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（４００ｍＬ）中における０℃の溶液に、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（２７２ｍｇ、３．２３ｍｍｏｌ、３．０当量）および４−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ｐｒｉｄｉｎｉｕｍ ４−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（２７．１ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。反応を２０℃に温め、１８時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物への変換を示した。混合物を濃縮して乾燥させ、粗製の残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、５０％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛２−クロロ−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−４）（５００ｍｇ、収率８２％）が得られた。LCMS (ESI) m/z 567 (M + H)。

【0242】

工程５：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛２−（２−メトキシエトキシ）−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−５）の合成
ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛２−クロロ−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−４）（２００ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中における溶液に、２−メトキシエタン−１−オール（１０７ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ、４．０当量）およびＮａＨ（鉱油中６０％分散液、７０．５ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。反応を９０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物への変換を示した。反応を水（１０ｍＬ）の添加により停止させた。混合物を分液漏斗中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して乾燥させた。粗製の残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、５０％ ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛２−（２−メトキシエトキシ）−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−５）（２００ｍｇ、収率９４％）が得られた。LCMS (ESI) m/z 607 (M + H)。

【0243】

工程６：２−（２−メトキシエトキシ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｃ−６）の合成
ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛２−（２−メトキシエトキシ）−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｃ−５）（２００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ中２５％ＴＦＡ（２０ｍＬ）中における溶液を、２０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物への変換を示した。反応混合物を濃縮して乾燥させると、２−（２−メトキシエトキシ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｃ−６）（１２０ｍｇ、収率８６％）が得られ、それをそれ以上精製せずに用いた。LCMS (ESI) m/z 423 (M + H)。

【0244】

工程７：１−｛４−［２−（２−メトキシエトキシ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｃ１）
２−（２−メトキシエトキシ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｃ−６）（１２０ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中における溶液に、飽和ＮａＨＣＯ_３の溶液（１０ｍＬ）を添加した。塩化アクリロイル（３１ｍｇ、０．３４１ｍｍｏｌ、１．２当量）のＥｔＯＡｃ中における溶液を添加し、反応を２０℃で２０分間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物への変換を示した。反応混合物を分液漏斗中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して乾燥させた。粗製の残留物を分取ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ ５ｕ Ｃ１８、１５０×２１．２ｍｍ、４０〜５０％アセトニトリル、２０ｍＬ／分）により精製すると、１−｛４−［２−（２−メトキシエトキシ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｃ１）（２５．７ｍｇ、収率１９％）が得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.14 - 7.94 (m, 1H), 7.30 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.60 (dd, J = 16.7, 10.6 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.07 - 3.88 (m, 1H), 3.78 (d, J = 32.0 Hz, 4H), 3.63 (s, 4H), 3.52 - 3.08 (m, 7H), 2.75 (s, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.21 (d, J = 32.3 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 477 (M + H)。

【0245】

表Ｃにおける実施例は、スキームＣにおける類似の化学および１−｛４−［２−（２−メトキシエトキシ）−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｃ１）を調製するために用いられた手順を用いて調製された。以下の実施例は、実施例Ｃ１を調製するために用いられた例示された手順に対する重要ではない変更または置換により作製され、当業者はそれを実現することができるであろう。

【0246】

【表4-1】

【0247】

【表4-2】

【0248】

【表4-3】

【0249】

【表4-4】

【0250】

【表4-5】

【0251】

実施例Ｄ１（スキームＤ）：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−［５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
スキームＤ：

【0252】

【化47】

【0253】

２個の無菌の２５０ｍＬ Ｎａｌｇｅｎｅフラスコ（バッフル付き、通気孔付き）のそれぞれに、２５ｍＬの無菌Ｉｏｗａ培地（デキストロース（２０ｇ）、栄養大豆粉（Ｎｕｔｒｉｓｏｙ ｆｌｏｕｒ）（５ｇ）、ＮａＣｌ（５ｇ）、酵母抽出物（５ｇ）、Ｋ_２ＨＰＯ_４（５ｇ）、Ｐ２０００消泡剤（１ｍＬ）、脱イオン水（１０００ｍＬ））を入れた。ｐＨを１Ｎ ＨＣｌで７．０に調整し、溶液を滅菌するためにオートクレーブした（１２１℃、２５分／Ｌ））。ストレプトマイセス・スペクタビリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ ２７４６５の解凍された増殖性ストック（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｓｔｏｃｋ）での溶液（０．２５ｍＬ）を、それぞれのフラスコに添加した。フラスコに蓋をして、２”スロー（ｔｈｒｏｗ）ロータリーシェーカー（Ｉｎｎｏｖａ ４９００、２１０ｒｐｍ）上で３０℃で２日間インキュベートした。１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ａ６）（５ｍｇ、１２μｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中における溶液を、それぞれのフラスコに添加した。フラスコに蓋をして、上記のようにインキュベートした。５日後、それぞれの培養に関する２個のフラスコを合わせて分液漏斗中に注いだ。溶液をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機性物質を合わせて無水ＭｇＳＯ_４のパッドを通して濾過した。フィルターケーキをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄し、有機性物質を合わせて濃縮して乾燥させた。粗製の物質をＰｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｍｅｔｈａｎｅ Ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ（１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５ミクロン粒径）カラム上での分取ＳＦＣにより精製し、それを２５℃において１００ｂａｒで保たれたＣＯ_２中で６０％ ＭｅＯＨで、１０ｍＬ／分の流速で溶離すると、１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−［５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｄ１）（１１μｇ、収率０．２％）が得られた。LCMS (ESI) m/z 433 (M + H)。

【0254】

実施例Ｅ１（スキームＥ）：１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−７−（７−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン
スキームＥ：

【0255】

【化48】

【0256】

１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−７−（７−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｅ１）（２６μｇ、収率０．５％）を、ストレプトマイセス・スペクタビリスＡＴＣＣ １３２７３が細胞株として用いられたことを除いて、実施例Ｄ１に関する一般的な手順に従って調製した。LCMS (ESI) m/z 433 (M + H)。

【0257】

実施例Ｆ１（スキームＦ）：１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン
実施例Ｆ２（スキームＦ）：１−｛４−［（６Ｓ，７Ｓ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン
実施例Ｆ３（スキームＦ）：１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン
スキームＦ：

【0258】

【化49】

【0259】

工程１：（３Ｒ，４Ｒ）−ｒｅｌ−４−メチル−３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ｆ−１）の合成
（３Ｒ，４Ｒ）−ｒｅｌ−４−メチル−３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ｆ−１）（１１８ｇ、収率９０％、＞２０：１ｄｒ）を、ＫＯＳｉＭｅ_３が１，４−ジオキサン／Ｈ_２Ｏ（２０：１）の溶媒混合物中の塩基として用いられたことを除いて、３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ａ−１）の合成に関する手順に従って調製し、所望される生成物が黄色のゴムとして得られた。LCMS (ESI) m/z 327 (M + H)。

【0260】

工程２：エチル （４Ｒ，５Ｒ）−ｒｅｌ−５−メチル−４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｆ−２）およびエチル （２Ｓ，３Ｒ）−ｒｅｌ−３−メチル−２−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−６−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｆ−３）の合成
エチル （４Ｒ，５Ｒ）−ｒｅｌ−５−メチル−４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｆ−３）およびエチル （２Ｓ，３Ｒ）−ｒｅｌ−３−メチル−２−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−６−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｆ−２）の約１：１混合物（８６．８ｇ、収率４４．０２％）を、３−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］シクロヘキサノン （Ａ−２）を合成するために用いられた一般的な手順に従って調製すると、生成物が灰白色固体として得られた。LCMS (ESI) m/z 399 (M + H)。

【0261】

工程３：（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−４）の合成
エチル （４Ｒ，５Ｒ）−ｒｅｌ−５−メチル−４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｆ−３）およびエチル （２Ｓ，３Ｒ）−ｒｅｌ−３−メチル−２−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−６−オキソシクロヘキサンカルボキシレート （Ｆ−２）の約１：１混合物（８８５ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１．０当量）ならびに３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−カルボキシイミドアミド塩酸塩（４１１ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ、２．６当量）（国際公開第１５０８９３２７号）の乾燥ＥｔＯＨ（５ｍＬ）中における撹拌溶液に、ＮａＯＥｔの溶液［Ｎａ金属（２０４ｍｇ、８．８８ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）に添加することにより調製された］を添加した。結果として得られた混合物を、２５℃で４時間撹拌した。ＬＣＭＳは、エチル （４Ｒ，５Ｒ）−ｒｅｌ−５−メチル−４−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−オキソシクロヘキサンカルボキシレートのみの消費を示した。混合物を濾過し、ケーキをＥｔＯＨ（２×３ｍＬ）で洗浄した。濾液を合わせて濃縮した。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０→１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製すると、（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−４）（３００ｍｇ、収率５７％）がゴム状の白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.05 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.81 - 5.57 (m, 1H), 4.18 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.04 (t, J = 12.6 Hz, 3H), 3.75 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 3.33 (s, 1H), 3.21 (s, 1H), 3.16 - 3.03 (m, 1H), 2.87 (dd, J= 17.3, 4.6 Hz, 1H), 2.70 (dd, J= 18.1, 4.4 Hz, 1H), 2.56 (s, 1H), 2.42 (s, 4H), 2.28 (s, 6H), 2.09 (dd, J = 28.1, 10.2 Hz, 3H), 1.81 - 1.60 (m, 3H), 0.74 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 477 (M + H)。

【0262】

工程４：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−５）の合成
磁気撹拌子を備えた２５０ｍＬフラスコに、（６Ｒ，７Ｒ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−４）（１ｇ、２．１ｍｍｏｌ、１．０当量）、ｔｅｒｔ−ブチル ピペラジン−１−カルボキシレート（１．９５ｇ、１０．５ｍｍｏｌ、５．０当量）およびＢＯＰ試薬（１．４ｇ、３．１５ｍｍｏｌ、１．５当量）を入れた。ＭｅＣＮ（２１ｍＬ）およびＤＢＵ（６３９ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加し、混合物を６０℃に加熱した。４８時間後、反応をＬＣＭＳによりチェックし、それは、所望される生成物への変換を示した。反応混合物を室温まで冷却し、分液漏斗中に注いだ。混合物をＴＢＭＥ（５０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）の間で分配した。有機層を水（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、２５ｇ ＳｉＯ_２、４０→６０％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン類 ＋２％ ＮＥｔ_３）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−５）が灰白色固体として得られた（１．３３ｇ、収率９９％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.98 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 15.0, 8.6 Hz, 1H), 7.23 - 7.15 (m, 1H), 5.68 (ddd, J= 12.6, 9.7, 2.6 Hz, 1H), 4.16 - 3.86 (m, 5H), 3.75 (dd, J = 10.8, 8.1 Hz, 1H), 3.62 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 3.46 (d, J = 11.2 Hz, 3H), 3.34 - 3.03 (m, 6H), 2.70 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.64 - 2.50 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.32 (q, J = 11.9, 11.0 Hz, 2H), 2.21 (s, 6H), 2.15 (s, 1H), 2.06 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 1.80 - 1.72 (m, 3H), 1.49 (s, 9H), 0.76 (d, J = 5.6 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 645 (M + H)。

【0263】

工程５：Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］アゼチジン−３−アミン （Ｆ−６）の合成
ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−［５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−５）（１２５ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（８ｍＬ）中における撹拌溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。結果として得られた溶液を、２５℃で７２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、生成物への変換を示した。溶媒を減圧下で除去すると、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］アゼチジン−３−アミン （Ｆ−６）（８９ｍｇ、収率１００％）が褐色の油として得られ、それをそれ以上精製せずに用いた。LCMS (ESI) m/z 461 (M + H)。

【0264】

工程６：１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］アゼチジン−３−アミン （Ｆ−６）（８９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１．０当量）のＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）中における撹拌混合物に、塩化アクリロイル（１７．５ｍｇ、０．１９３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中における溶液を０〜５℃で滴加した。結果として得られた混合物を、同じ温度で２０分間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費を示した。有機層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。粗製の物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０→５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製すると、１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１）（２６ｍｇ、収率２７％）が白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.94 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.84 (dd, J = 16.7, 10.5 Hz, 1H), 6.14 (dd, J = 16.7, 2.4 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 3.85 - 3.75 (m, 1H), 3.76 - 3.67 (m, 3H), 3.64 - 3.57 (m, 2H), 3.49 - 3.40 (m, 2H), 3.29 - 3.15 (m, 3H), 3.12 - 2.94 (m, 2H), 2.81 (dd, J = 18.3, 6.2 Hz, 1H), 2.69 - 2.61 (m, 1H), 2.60 - 2.51 (m, 1H), 2.45 - 2.34 (m, 4H), 2.09 (s, 6H), 0.68 (d, J = 6.1 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 515 (M + H)。

【0265】

工程７：１−｛４−［（６Ｓ，７Ｓ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ２）および１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ３）の合成
１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （２１８ｍｇ）をＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＤ−３（４．６ｍｍ×１００ｍｍ、３ミクロン粒径）カラム上でのキラルＳＦＣにより精製し、それを１２０ｂａｒにおいて２５℃で保たれたＣＯ_２中で３０％ ＩＰＡ ＋ １０ｍＭ ＮＨ_３により溶離した。４．０ｍＬ／分の流速は、Ｒｔ_{（ピーク１）}＝２．５３分およびＲｔ_{（ピーク２）}＝４．５８分を与えた。１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ２）（ピーク１）：２９．８ｍｇ、＞９９％ ｅｅ、収率１４％。¹H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 8.03 (s, 1H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.83 (ddd, J = 14.9, 10.0, 4.1 Hz, 1H), 6.14 (dd, J = 16.6, 2.3 Hz, 1H), 5.71 (dt, J = 10.7, 1.8 Hz, 1H), 3.94 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.78 (s, 1H), 3.73 - 3.68 (m, 3H), 3.60 (s, 2H), 3.41 - 3.34 (m, 3H), 3.27 - 3.14 (m, 1H), 3.08 - 2.96 (m, 2H), 2.81 (dd, J = 18.5, 6.6 Hz, 1H), 2.67 - 2.61 (m, 2H), 2.49 - 2.34 (m, 5H), 2.07 (s, 6H), 0.68 (s, 3H); [α]_d²²= -27.3° (C=0.1, MeOH); LCMS (ESI) m/z 515 (M + H)。１−｛４−［（６Ｓ，７Ｓ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ３）（ピーク２）：３２．７ｍｇ、約９９％ ｅｅ、収率１５％。¹H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 8.04 (s, 1H), 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.94 - 6.72 (m, 1H), 6.25 - 5.97 (m, 1H), 5.71 (dt, J= 10.5, 1.9 Hz, 1H), 3.94 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 3.79 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 3.74 - 3.67 (m, 3H), 3.61 (s, 2H), 3.41 - 3.34 (m, 3H), 3.31 - 3.13 (m, 1H), 3.08 - 2.97 (m, 2H), 2.81 (dd, J = 18.5, 5.8 Hz, 1H), 2.63 (d, J = 15.4 Hz, 2H), 2.49 - 2.34 (m, 5H), 2.07 (s, 6H), 0.68 (d, J = 6.3 Hz, 3H); [α]_d²²= 51.2° (C=0.1, MeOH); LCMS (ESI) m/z 515 (M + H)。

【0266】

実施例Ｆ１４（スキームＦ’）：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
スキームＦ’：

【0267】

【化50】

【0268】

工程１：（３Ｒ，４Ｒ）−３−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−４−メチルシクロヘキサン−１−オン （Ｆ−７）の合成
磁気撹拌子を備えたオーブン乾燥したフラスコに、６−クロロ−５−メチル−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（９．４ｍｇ、２５ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＭｅ（１．１ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）および［ＲｈＣｌ（ＣＯＤ）］_２（２４７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を入れた。フラスコに徹底的にＮ_２をパージした。脱気した１，４−ジオキサン（Ｎ_２を１時間注入してかき混ぜた）および（４Ｒ）−４−メチルシクロヘキサ−２−エン−１−オン（３．５８ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応を４０℃に加熱し、この温度で４８時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費と所望される生成物の質量の形成を示した。反応を分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃおよび飽和水性ＮＨ_４Ｃｌの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、５０ｇ ＳｉＯ_２、１５〜２５％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン類）により精製すると、（３Ｒ，４Ｒ）−３−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−４−メチルシクロヘキサン−１−オン （Ｆ−７）（６．１５ｇ、収率６８％）が濃い白色の泡状物質として得られ、それは、静置すると凝固した。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.25 - 8.09 (m, 1H), 7.59 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 5.64 (td, J = 9.7, 2.7 Hz, 1H), 4.13 - 3.93 (m, 1H), 3.86 - 3.68 (m, 1H), 3.30 (ddd, J = 14.3, 11.0, 4.3 Hz, 1H), 3.10 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.37 (m, 8H), 2.31 - 2.03 (m, 3H), 1.90 - 1.56 (m, 4H), 0.73 (dd, J = 6.5, 3.6 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 361 (M + H)。

【0269】

工程２：メチル （４Ｒ，５Ｒ）−４−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−９）およびメチル （５Ｒ，６Ｒ）−６−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−８）の合成
磁気撹拌子を備えたオーブン乾燥したバイアルフラスコに、トルエン（３９．６ｍｌ、ｃ＝０．１４Ｍ）、ＬＨＭＤＳ（ＰｈＭｅ中１．０Ｍ、１１．１ｍＬ、１１．１ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（６．７３ｇ、９．２７ｍＬ、６６．５ｍｍｏｌ）を入れた。混合物を−７８℃に冷却した。（３Ｒ，４Ｒ）−３−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−４−メチルシクロヘキサン−１−オン （Ｆ−７）（２．０ｇ、５．５４ｍｍｏｌ）のトルエン（１０ｍＬ）中における溶液を滴加し、混合物を−７８℃で撹拌した。山吹色の反応溶液が、生成された。シアノギ酸メチル（５６６ｍｇ、０．５４ｍｌ、６．６５ｍｍｏｌ）のトルエン（１０ｍＬ）中における溶液を滴加した。混合物を５分間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費と所望される生成物の質量の形成を示した。反応を飽和水性ＮＨ_４Ｃｌの添加により停止させ、混合物を分液漏斗に移した。反応をＥｔＯＡｃおよび水の間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮すると（２．３ｇ）、白色の泡状物質になった。^１Ｈ ＮＭＲ分析は、粗製の物質が、主な位置異性体としてのメチル （４Ｒ，５Ｒ）−４−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−９）および少ない方の位置異性体としてのメチル （５Ｒ，６Ｒ）−６−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−８）を含むジアステレオ異性体の複合混合物であることを示した。LCMS (ESI) m/z 419 (M + H)。

【0270】

工程３：（６Ｒ，７Ｒ）−７−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−１０）の合成
磁気撹拌子を備えたフラスコに、メチル （４Ｒ，５Ｒ）−４−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−９）（２．３ｇ、５．５ｍｍｏｌ）、３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−カルボキシイミドアミド 二塩酸塩（国際公開第１５０８９３２７号）（１．２ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を含有する粗製の混合物を窒素の下で入れた。ＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中１Ｍ、１６．６ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を周囲温度で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、Ｆ−９の選択的かつ完全な消費と所望される生成物の質量の形成を示した。反応を飽和水性ＮａＨＣＯ_３で停止させ、ＤＣＭ（３×）で抽出した。有機性抽出物を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、黄色固体になった。粗製の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、４０ｇ ＳｉＯ_２、０〜１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ ＋２％ ＴＥＡ）により精製すると、（６Ｒ，７Ｒ）−７−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−１０）（１．４ｇ、収率４９％）が灰白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 11.24 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 5.94 - 5.74 (m, 1H), 3.98 (td, J = 8.0, 7.3, 1.9 Hz, 2H), 3.91 - 3.82 (m, 1H), 3.75 (td, J = 11.1, 9.0, 6.2 Hz, 3H), 3.40 - 3.19 (m, 2H), 3.15 - 3.03 (m, 1H), 2.94 (td, J= 14.6, 11.6, 6.8 Hz, 1H), 2.70 (dt, J= 17.5, 4.3 Hz, 1H), 2.56 - 2.47 (m, 1H, under DMSO), 2.47 - 2.29 (m, 4H), 2.06 (s, 9H), 1.80 - 1.65 (m, 1H), 1.57 (dq, J = 10.4, 6.2, 4.8 Hz, 2H), 0.63 (dd, J =9.0, 6.4 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 511 (M + H)。

【0271】

工程４：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−１１）の合成
磁気撹拌子を備えた丸底フラスコに、（６Ｒ，７Ｒ）−７−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−１０）（１．４ｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル ピペラジン−１−カルボキシレート（３．５ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）を入れた。フラスコに窒素をパージし、ＭｅＣＮ（６．６３ｍＬ、ｃ＝０．４Ｍ）、ＤＢＵ（０．８ｍＬ、５．３ｍｍｏｌ）およびＢＯＰ試薬（１．８ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応を５０℃に加熱し、この温度で２４時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費と所望される生成物の質量の形成を示した。反応を室温まで冷却し、次いで水中に注いだ。混合物を１時間撹拌し、次いでＭＴＢＥ（２×）で抽出した。有機層を合わせて水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮すると、黄色の残留物が得られた。その物質をフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、ＳｉＯ_２、１０〜１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ ＋ ２％ ＴＥＡ）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−１１）（１．８ｇ、収率８２％）が灰白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.19 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 3.93 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.76 (q, J = 7.1, 6.0 Hz, 1H), 3.70 (dd, J = 8.5, 5.7 Hz, 2H), 3.52 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 3.39 (dd, J = 18.6, 10.3 Hz, 5H), 3.22 - 3.10 (m, 2H), 3.03 (q, J = 6.2 Hz, 1H), 2.99 - 2.91 (m, 1H), 2.86 (td, J = 11.2, 5.8 Hz, 1H), 2.69 - 2.54 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.39 (dd, J= 22.2, 11.5 Hz, 2H), 2.07 (s, 8H), 1.82 - 1.63 (m, 1H), 1.57 (s, 2H), 1.42 (s, 9H), 0.67 (dd, J= 8.7, 6.0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 679 (M + H)。

【0272】

工程５：１−［（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン （Ｆ−１２）の合成
磁気撹拌子を備えたバイアルに、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−［６−クロロ−５−メチル−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−１１）（１．１ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を入れた。ＤＣＭ（５．１ｍＬ、ｃ＝０．３Ｍ）およびＴＦＡ（７．４ｇ、５．０ｍＬ、６６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３時間撹拌し、それは、出発物質の消費と所望される生成物の質量の形成を示した。反応混合物を注意深く水性飽和ＮａＨＣＯ_３中に注ぎ（ガス発生）、ＤＣＭ（４回）で抽出した。有機性抽出物を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、１−［（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン （Ｆ−１２）（７８６ｍｇ、収率１００％）が得られ、それをそれ以上精製せずに用いた。LCMS (ESI) m/z 495 (M + H)。

【0273】

工程６：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１４）
磁気撹拌子を備えたバイアルに、１−［（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン （Ｆ−１２）（１．１ｇ、２．２ｍｍｏｌ）およびＨＦＩＰ（１１ｍＬ、ｃ＝０．２Ｍ）を入れた。混合物を、固体が溶解するまで撹拌した。ＮａＨＣＯ_３（１．１ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）および塩化アクリロイル（２３４ｍｇ、０．２１ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物の質量の形成と約２０％の残っている出発物質を示した。追加の塩化アクリロイル（０．０３５ｍＬ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、反応をＭＴＢＥで希釈し、分液漏斗に移し、Ｈ_２Ｏで洗浄した。水層をＭＴＢＥで抽出した。有機性物質を合わせて無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、黄色の残留物が得られた。粗生成物をＤＭＳＯ中で溶解させ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｏｍｅｇａ Ｐｏｌａｒ Ｃ１８カラム（２５０×５０ｍｍ、５μｍ粒径）を用いる分取ＨＰＬＣにより精製し、それを５〜３０％ ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（＋０．１％ ＡｃＯＨ）で、８５ｍＬ／分の流速で溶離すると、１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１４）（５８８ｍｇ、収率４７％）が灰白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.06 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 6.84 (dd, J= 16.7, 10.5 Hz, 1H), 6.14 (dd, J= 16.7, 2.4 Hz, 1H), 5.71 (dd, J= 10.4, 2.4 Hz, 1H), 3.94 (dd, J= 8.7, 7.0 Hz, 2H), 3.86 - 3.67 (m, 4H), 3.61 (s, 2H), 3.50 - 3.37 (m, 3H), 3.24 (d, J= 26.7 Hz, 2H), 3.08 - 2.94 (m, 2H), 2.84 (dd, J= 18.3, 6.3 Hz, 1H), 2.63 (dd, J= 15.0, 3.5 Hz, 1H), 2.47 (s, 5H), 2.08 (s, 6H), 0.68 (d, J= 6.0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 549 (M + H)。

【0274】

実施例Ｆ５（スキームＦ’’）：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
実施例Ｆ１０（スキームＦ’’）：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
実施例Ｆ１１（スキームＦ’’）：１−（４−｛（６Ｓ，７Ｓ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
スキームＦ’’：

【0275】

【化51】

【0276】

工程１：（３Ｒ，４Ｒ）−ｒｅｌ−３−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−４−メチルシクロヘキサン−１−オン （Ｆ−１３）の合成
（５−クロロ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル）ボロン酸 （Ｉｎｔ−２）（１．８ｇ、６．４３ｍｍｏｌ）、４−メチルシクロヘキサ−２−エン−１−オン（１．０６ｇ、９．６３ｍｍｏｌ）およびＫ_３ＰＯ_４（４．０９ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）の、１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（９ｍＬ）の混合物中における撹拌溶液に、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］_２（１６０ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）を不活性雰囲気下で添加した。結果として得られた混合物を、Ｎ_２の下で４０℃において１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費と所望される生成物の質量の形成を示した。反応をブライン（５０ｍＬ）の添加により停止させ、混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０〜３０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製すると、（３Ｒ，４Ｒ）−ｒｅｌ−３−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−４−メチルシクロヘキサン−１−オン （Ｆ−１３）（９５５ｍｇ、収率４３％）が白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.66 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.94 - 5.77 (m, 1H), 3.87 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.75 (dq, J = 11.5, 6.3, 5.4 Hz, 1H), 3.50 (ddd, J = 13.6, 11.2, 4.2 Hz, 1H), 3.11 (td, J = 13.9, 6.8 Hz, 1H), 2.92 (td, J = 14.1, 6.1 Hz, 1H), 2.72 - 2.54 (m, 1H), 2.46 - 1.91 (m, 6H), 1.75 (dd, J = 12.5, 8.0 Hz, 1H), 1.64 - 1.44 (m, 3H), 0.64 (dd, J = 8.7, 6.4 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 347 (M+H)。

【0277】

工程２：メチル （５Ｒ，６Ｓ）−ｒｅｌ −６−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−１４）およびメチル （４Ｒ，５Ｒ）−４−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−１５）の合成
（３Ｒ，４Ｒ）−ｒｅｌ−３−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−４−メチルシクロヘキサン−１−オン （Ｆ−１３）（９５０ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中における溶液に、ＬＤＡ（ＴＨＦ中２Ｍ、２．７４ｍＬ、５．４８ｍｍｏｌ）を−７８℃で滴加した。混合物を３０分で−７８℃撹拌した。次いで、シアノギ酸エチル（４０７ｍｇ、４．１１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を−７８℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、出発物質がないことを示した。混合物を飽和水性ＮＨ_４Ｃｌで停止させ、ＥｔＯＡｃ（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機性物質を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／ＥＡ＝３／２）により精製すると、エチル （５Ｒ，６Ｓ）−ｒｅｌ−６−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−１４）およびエチル （４Ｒ，５Ｒ）−４−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−１５）（１．０ｇ、収率８７％、約１：１混合物）がジアステレオ異性体の複合混合物として、黄色の油として得られた。LCMS (ESI) m/z 419 (M+H)。

【0278】

工程３：（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オンの合成
エチル （５Ｒ，６Ｓ）−ｒｅｌ−６−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−１４）およびエチル （４Ｒ，５Ｒ）−４−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキサ−１−エン−１−カルボキシレート （Ｆ−１５）（１．０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）および３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−カルボキシイミドアミド（６７９ｍｇ、４．７７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中における混合物に、ＮａＯＭｅ（２５８ｍｇ、４．７７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１６時間還流状態で撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、Ｆ−１５の完全かつ選択的な消費と所望される生成物の質量の形成を示した。混合物を濃縮して乾燥させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１：１）により精製すると、（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−１６）（４００ｍｇ、収率３４％）が黄色固体として得られた。LCMS (ESI) m/z 497 (M+H)。

【0279】

工程４：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−１７）の合成
（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン （Ｆ−１６）（４００ｍｇ、０．８０５ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル ピペラジン−１−カルボキシレート（３００ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）およびＢＯＰ試薬（７１１ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中における混合物に、ＤＢＵ（２４５ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、ＨＯＢｔ付加物の形成を示した。混合物を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝７／３）により精製すると、１−｛（６Ｒ，７Ｒ）−４−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）オキシ］−７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン（４００ｍｇ、収率８２％）が得られた。ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のこの中間体（４００ｍｇ、０．６５１ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル ピペラジン−１−カルボキシレート（２４３ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）に、ＤＢＵ（１９８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を９０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費と所望される生成物の形成を示した。混合物を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−１７）（３００ｍｇ、収率６９％）が褐色の油として得られた。LCMS (ESI) m/z 665 (M+H)。

【0280】

工程５：１−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン （Ｆ−１８）の合成
ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｆ−１７）（３００ｍｇ、０．４５１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中における溶液に、ＨＣｌ（１，４−ジオキサン中４Ｍ、３ｍＬ）を添加した。混合物を２０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発物質の消費と所望される生成物の質量の形成を示した。混合物を濾過し、濃縮すると、１−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン （Ｆ−１８）（２３３ｍｇ、収率１００％）が褐色の固体として得られ、それをそれ以上精製せずに用いた。LCMS (ESI) m/z 481 (M+H)。

【0281】

工程６：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ５）の合成
１−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン （Ｆ−１８）（２３３ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）および飽和水性ＮａＨＣＯ_３（４０ｍＬ）中における溶液に、塩化アクリロイル（４５ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。混合物をＥＡ（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機性抽出物を合わせてブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をＧｅｍｉｎｉ−１８カラム（１００×２１．２ｍｍ、５μｍ粒径）を用いる分取ＨＰＬＣにより精製し、それを４５〜５５％ ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（＋０．０５％ ＮＨ_３）で溶離すると、１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（実施例Ｆ５）（２８ｍｇ、収率１２％）が白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.13 (s, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 2H), 6.81 (dd, J = 16.8, 10.6 Hz, 1H), 6.26 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 5.81 - 5.75 (m, 1H), 4.12 - 4.09 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 4H), 3.71 - 3.60 (m, 4H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.25 - 3.05 (m, 3H), 3.00 - 2.94 (m, 1H), 2.76 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.54 - 2.40 (m, 2H), 2.21 (s, 6H), 0.82 (d, J = 5.7 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 535, (M+H)。

【0282】

工程７：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１０）および１−（４−｛（６Ｓ，７Ｓ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１１）の合成
１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（１８．２ｍｇ）（実施例Ｆ５）を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ Ａｍｙｌｏｓｅ−１カラム（１００×４．６ｍｍカラム、３μｍ）を用いる分取ＳＦＣにより精製し、それをＣＯ_２中で５〜６０％ ＩＰＡ（＋１０ｍＭ ＮＨ_３）で溶離した。４ｍＬ／分の流速は、Ｒｔ_{（ピーク１）}＝２．８４分およびＲｔ_{（ピーク２）}＝３．３６分を与えた。１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１０）（ピーク１）：６．０２ｍｇ、＞９９％ ｅｅ、収率３３％。¹H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 13.35 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 16.7, 10.5 Hz, 1H), 6.19 (dd, J = 16.7, 2.4 Hz, 1H), 5.76 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H), 3.99 (ddd, J = 9.8, 7.1, 3.2 Hz, 2H), 3.87 - 3.58 (m, 8H), 3.52 - 3.47 (m, 2H), 3.31 - 3.23 (m, 2H), 3.15 - 3.02 (m, 2H), 2.85 (dd, J= 18.3, 6.2 Hz, 1H), 2.70 (d, J= 12.3 Hz, 1H), 2.50 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 2.12 (s, 6H), 0.76 (d, J= 5.4 Hz, 3H); [α]_d²² = -45.5°(c = 0.1, MeOH); LCMS (ESI) m/z 535 (M+H)。１−（４−｛（６Ｓ，７Ｓ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１１）（ピーク２）：６．３８ｍｇ、＞９９％ ｅｅ、収率３５％。¹H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 13.35 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.41 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.89 (dd, J = 16.7, 10.4 Hz, 1H), 6.19 (dd, J= 16.7, 2.4 Hz, 1H), 5.76 (dd, J= 10.5, 2.3 Hz, 1H), 4.08 - 3.92 (m, 2H), 3.88 - 3.59 (m, 8H), 3.51 - 3.46 (m, 2H), 3.32 - 3.21 (m, 2H), 3.15 - 3.04 (m, 2H), 2.85 (dd, J = 18.3, 6.1 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.50 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.12 (s, 6H), 0.76 (d, J = 5.4 Hz, 3H); [α]_d²² = +78.9°(c = 0.1, MeOH); LCMS (ESI) m/z 535 (M+H)。

【0283】

表Ｆ中の実施例は、スキームＦ、スキームＦ’およびスキームＦ’’における類似の化学ならびに１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１）、１−｛４−［（６Ｓ，７Ｓ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ２）、１−｛４−［（６Ｒ，７Ｒ）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−７−（５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ３）、１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１４）、１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−ｒｅｌ−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ５）、１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１０）、１−（４−｛（６Ｓ，７Ｓ）−７−（５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１１）を調製するために用いられた手順を用いて調製された。以下の実施例は、実施例Ｆ１を調製するために用いられた例示された手順に対する重要ではない変更または置換により作製され、当業者はそれを実現することができるであろう。

【0284】

【表5-1】

【0285】

【表5-2】

【0286】

【表5-3】

【0287】

実施例Ｇ１（スキームＧ）：１−（４−（７−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
スキームＧ：

【0288】

【化52】

【0289】

工程１：ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６−ジヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｇ−１）の合成
磁気撹拌子を備えた２５ｍＬフラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝−５，６−ジヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｉｎｔ−４）（１８６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。その物質をＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（９：１、５ｍＬ）中で溶解させた。［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］ボロン酸（１５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）（２９．３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。フラスコを排気し、窒素（３×）を充填し、次いでトリエチルアミン（０．５６ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ、１０当量）を添加した。混合物を６０℃で２時間加熱した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物の形成および出発物質の完全な消費を示した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。混合物を濃縮して乾燥させ、残留物をＩＳＣＯ（０〜５０％ アセトン／ヘプタン類）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６−ジヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｇ−１）（２００．０ｍｇ、収率８５％）が灰白色／淡黄色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ = 8.67 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (s, 2H), 6.67 - 6.59 (m, 1H), 5.81 - 5.71 (m, 1H), 4.04 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.84 - 3.72 (m, 1H), 3.59 (br s, 4H), 3.37 (br s, 4H), 3.00 - 2.85 (m, 2H), 2.70 (br s, 2H), 2.61 - 2.47 (m, 1H), 2.17 (s, 1H), 1.88 - 1.62 (m, 4H), 1.50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 585.7 (M + H)。

【0290】

工程２：４−（ピペラジン−１−イル）−７−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｇ−２）の合成
磁気撹拌子を備えた５０ｍＬチューブに、ｔｅｒｔ−ブチル ４−（７−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−５，６−ジヒドロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｇ−１）（３０ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）およびＰｔ／Ｃ（５％装填、７０ｍｇ）を入れた。混合物をＨ_２（１００ｐｓｉ）で加圧し、次いで６０℃で３日間加熱した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物の形成および出発物質のほぼ完全な消費を示した。混合物をセライトのパッドを通して濾過した。濾液を濃縮し、粗製の物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、０〜７０％、アセトン／ヘプタン類）により精製すると、４−（ピペラジン−１−イル）−７−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｇ−２）（１７．０ｍｇ、収率５６％）が黄色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.63 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.62 - 7.51 (m, 1H), 5.83 - 5.66 (m, 1H), 4.10 - 3.97 (m, 1H), 3.90 - 3.73 (m, 2H), 3.71 - 3.60 (m, 2H), 3.51 (d, J = 9.8 Hz, 4H), 3.43 - 3.18 (m, 4H), 2.80 (br. s., 1H), 2.64 - 2.47 (m, 1H), 2.17 (m, 4H), 1.87 - 1.63 (m, 4H), 1.50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 587.6 (M + H)。

【0291】

工程３：４−（ピペラジン−１−イル）−７−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｇ−３）の合成
磁気撹拌子を備えた８ｍＬバイアルに、ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛７−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート （Ｇ−２）（６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＤＣＭ（０．４ｍＬ）およびＴＦＡ（０．２ｍＬ）を添加した。反応を１５分間撹拌しておいた。ＬＣＭＳ分析は、完全に脱保護された生成物の形成を示した。反応を濃縮して乾燥させると、４−（ピペラジン−１−イル）−７−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｇ−３）（６ｍｇ、収率１００％）が褐色の残留物として得られ、それをそれ以上精製せずに次の工程に用いた。LCMS (ESI) m/z 403.3 (M + H)。

【0292】

工程４：１−（４−｛７−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｇ１）の合成
４−（ピペラジン−１−イル）−７−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン （Ｇ−３）を、ＴＨＦ（１ｍＬ）中で溶解させ、０℃に冷却した。混合物を塩化アクリロイル（０．９４５ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、０．８５μＬ、１．０当量）およびトリエチルアミン（７．１３μＬ、０．０５ｍｍｏｌ、１０．０当量）で処理した。混合物を０℃で１５分間で撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、所望される生成物の形成および出発物質の完全な消費を示した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＨＰＬＣにより精製すると、１−（４−｛７−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｇ１）（３．０ｍｇ、収率４０％）が灰白色固体として得られた。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.61 (s, 1H), 8.16 - 8.10 (m, 1H), 7.65 - 7.57 (m, 1H), 7.52 - 7.41 (m, 1H), 6.62 - 6.50 (m, 1H), 6.34 - 6.22 (m, 1H), 5.82 - 5.66 (m, 1H), 4.14 - 3.59 (m, 8H), 3.53 - 3.39 (m, 2H), 3.12 - 2.60 (m, 3H), 2.36 - 2.08 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 457.5 (M + H)。

【0293】

以下の調製において詳述される中間体Ｇ−４は、方法Ｇに従って実施例Ｇ２およびＧ３を与える。しかし、この実施例は、完全性のために必要とされる脱保護工程およびこの化学が下記に含まれているため、先行する実施例の合成範囲から外れている。最終的な実施例を与えるためのその後の化学は、方法Ｇの実施例に類似しており、当業者が理解し得る最小限の追加または変更がある。

【0294】

工程５：１−｛４−［（７Ｒ）−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｇ２）および１−｛４−［（７Ｓ）−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｇ３）の合成

【0295】

【化53】

【0296】

１−｛４−［７−（３−メトキシナフタレン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン （Ｇ−４）（１６６ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）の窒素下のＤＣＭ（１０ｍＬ）中における溶液を、氷浴で０℃に冷却した。混合物を三臭化ホウ素の溶液（１．０Ｍ、１．９４ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ、５．０当量）で一滴ずつ処理すると、桃色の懸濁液が得られ、それをゆっくりと室温に温め、さらに４時間撹拌した。懸濁液を氷浴で冷却し、注意深く飽和水性ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）で停止させた。層を分離し、水層をＤＣＭ：ＭｅＯＨ（９５：５、４回）で抽出した。有機性物質を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗製の物質をＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−３（４．６×１００ｍｍ）カラム上での分取ＳＦＣにより精製し、それを１２０ｂａｒにおいてＣＯ_２中で４０％ ＩＰＡで溶離した。４ｍＬ／分の流速は、Ｒｔ_{（ピーク１）}＝２．８３分およびＲｔ_{（ピーク２）}＝３．４９分を与えた。１−｛４−［（７Ｒ）−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン（ピーク１）（実施例Ｇ２）：２３ｍｇ、＞９９％ ｅｅ、収率３２％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) = 9.66 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m,1H), 7.05 - 6.97 (m, 2H), 6.84 (dd, J = 10.4, 16.6 Hz, 1H), 6.15 (dd, J = 2.3, 16.8 Hz, 1H), 5.77 - 5.65 (m, 1H), 3.92 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 3.84 - 3.58 (m, 4H), 3.50 (td, J = 3.5, 13.0 Hz, 2H), 3.29 - 3.25 (m, 2H), 3.17 (dd, J = 5.0, 18.1 Hz, 1H), 3.01 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.85 (dd, J = 11.0, 18.2 Hz, 1H), 2.64 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.15 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 1.87 (dd, J = 3.3, 11.5 Hz, 1H). [α]_d²²= 27.7° (C=0.1, MeOH); LCMS (ESI) m/z 415 (M + H)。１−｛４−［（７Ｓ）−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパ−２−エン−１−オン（ピーク２）（実施例Ｇ３）：２７ｍｇ、約９９％ ｅｅ、収率３７％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.66 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m,1H), 7.07 - 6.97 (m, 2H), 6.84 (dd, J = 10.5, 16.6 Hz, 1H), 6.15 (dd, J = 2.3, 16.8 Hz, 1H), 5.79 - 5.64 (m, 1H), 3.92 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 3.83 - 3.58 (m, 4H), 3.55 - 3.44 (m, 2H), 3.29 - 3.25 (m, 2H), 3.17 (dd, J = 4.8, 18.3 Hz, 1H), 3.00 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 2.85 (dd, J = 11.1, 18.2 Hz, 1H), 2.71 - 2.59 (m, 1H), 2.15 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 1.87 (dd, J = 3.8, 12.0 Hz, 1H). [α]_d²²= -24.8° (C=0.1, MeOH); LCMS (ESI) m/z 415 (M + H)。

【0297】

実施例Ｈ１（スキームＨ）：１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−２−［３−（メチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｈ１）の合成

【0298】

【化54】

【0299】

５００ｍＬのエルレンマイヤーフラスコに、脱イオンＨ_２Ｏ（２７．０４ｍＬ）を入れ、ｐＨ７．５（４．０ｍＬ）の１．０Ｍリン酸カリウム緩衝溶液、０．１６５Ｍ ＭｇＣｌ溶液（０．８ｍＬ、１３２μｍｏｌ）および１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−２−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｆ１４）（０．１６ｍＬ、０．８μｍｏｌ）のＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１）中における０．００５Ｍ溶液で処理した。混合物をデキサメタゾンに誘発されるオスラット肝ミクロソーム（新しく調製されたもの、２ｍｇ／ｍＬ）で処理した後、新しく調製されたＮＡＤＰＨの０．０１３Ｍ水溶液（４．０ｍＬ、５２μｍｏｌ）を添加した。蓋をされていないエルレンマイヤーフラスコを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎシェーカーを用いて３７℃において１”スローで１時間振盪した。反応混合物を等分（各２０ｍＬ）に分け、２本の５０ｍＬ Ｆａｌｃｏｎコニカル遠心管中に注いだ。溶液を、ＭｅＣＮ（２０ｍｌ）のそれぞれのＦａｌｃｏｎチューブへの添加により停止した。Ｆａｌｃｏｎチューブをボルテックスし、Ｃｅｔｒｉｆｕｇｅ ＣＴ４２２機器を用いて３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清をデカンテーションし、２本の５０ｍｌ Ｆａｌｃｏｎコニカル遠心管に等分（各２０ｍＬ）で移し、ＥＺ−２ Ｐｌｕｓ Ｇｅｎｅｖａｃ（１時間ＨＰＬＣ設定、３４℃／２３８ｍｂａｒ〜４１℃／７ｍｂａｒ）を用いて溶媒を蒸発させた。残りの水溶液を合わせて（約２０ｍＬ）５０ｍｌ Ｆａｌｃｏｎコニカル遠心管中に入れ、ＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）で処理し、ニートのギ酸（０．５ｍＬ）で処理し、５０ｍＬの終体積まで脱イオンＨ_２Ｏを入れた。溶液を等分（各２５ｍＬ）に分け、２本の高速遠心管中に注ぎ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ａｌｌｅｇｒａ ６４Ｒ（速度２６２００、２４℃）機器を用いて４０，０００Ｇで３０分間遠心分離した。上清を５０ｍＬのガラスコニカルチューブ中にデカンテーションし、透明な溶液をＪＡＳＣＯ ＰＵ−１５８０ ＨＰＬＣポンプを使用して０．８ｍｌ／分の流速で約６０分間かけてＣ１８ ＨＰＬＣカラム（Ｚｏｒｂａｘ Ｐｏｌａｒｉｓ、Ｃ１８−Ａ、２５０×４．６ｍｍ、５μｍ粒径）上に吸収させた。ＨＰＬＣカラムを、クォータナリポンプ、オートサンプラーおよびフォトダイオードアレイ紫外／可視検出器で構成されるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＨＰＬＣ機器につながったＴｈｅｒｍｏ ＬＴＱ Ｖｅｌｏｓ質量分析計に移した。勾配（ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ ＋ ０．１％ギ酸）を適用して、対象の生成物を分離した。ＰＤＡ検出器を通過した後、溶離液を約１５：１の比率で分け、より大きい部分がフラクション検出器（Ｃｏｌｌｅｃｔ ＰＡＬ，Ｌｅａｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に行き、より小さい部分が質量分析計に行った（フラクションは、２０秒ごとに収集された）。対象のピークを含有するフラクションを、Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃｃｅｌａｒ ＵＨＰＬＣおよびダイオードアレイ紫外／可視検出器につながったＴｈｅｒｍｏ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ高分解能イオントラップ質量分析計をＣＴＣ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ Ｌｅａｐオートインジェクター（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）と共に用いるＵＨＰＬＣ−ＵＶ−ＨＲＭＳにより分析した。試料をＣ１８ ＵＨＰＬＣカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ、Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ粒径）上に注入し（２μＬ）、ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ ＋０．１％ギ酸勾配を、０．４ｍＬ／分の流速で適用し、４５℃で維持した。ＵＨＰＬＣ−ＵＶ−ＨＲＭＳ分析後、フラクションをプールし、ＥＺ−２ Ｐｌｕｓ Ｇｅｎｅｖａｃ（３時間ＨＰＬＣ 設定３４℃／２３８ｍｂａｒ→４１℃／７ｍｂａｒ）を用いて溶媒を除去すると、１−（４−｛（６Ｒ，７Ｒ）−７−（６−クロロ−５−メチル−１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−メチル−２−［３−（メチルアミノ）アゼチジン−１−イル］−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン （実施例Ｇ１）（３２μｇ、６０ｎｍｏｌ、収率７．５％）が得られた。乾燥した試料を、Ｔｏｐｓｐｉｎ Ｖ３．２によるＥＲＥＴＩＣ２機能を用いて、ＮＭＲ分光法により分析し、ＤＭＳＯ−ｄ_６中での５．０ｍＭ安息香酸標準溶液の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルに対する外部較正により定量化した。¹H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 13.12 (br. s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 6.85 (dd, J = 16.7, 10.4 Hz, 1H), 6.15 (dd, J = 16.7, 2.3, 1H), 5.72 (dd, J = 10.4, 2.3 Hz, 1H), 4.03 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.87 - 3.77 (m, 1H), 3.77 - 3.67 (m, 1H), 3.65 - 3.56 (m, 4H), 3.50 - 3.40 (m, 4H), 3.24 - 3.15 (m, 2H), 3.04 - 2.96 (m, 1H), 2.89 - 2.81 (m, 1H), 2.64 - 2.61 (m, 1H), 2.49 - 2.47 (m, 4H), 2.43 - 2.39 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 0.68 (d, J = 6.3 Hz, 3H). HRMS (ESI-TOF) C₂₈H₃₆ClN₈Oに関して計算 [M+H]: m/z = 535.2701, 実測値535.2700 (0.2 ppm)。

【0300】

生物学的実施例および生化学的アッセイ法
質量分析反応性アッセイ（ＭＳＲＡ）
本発明で示される化合物は、ｋＲａｓ Ｇ１２Ｃに共有結合し、例示的な化合物およびｋＲａｓ Ｇ１２Ｃの共有結合性付加物を検出するためにＭＳＲＡを使用する。

【0301】

ＧＤＰを装填されたｋＲａｓ（１−１６９）Ｇ１２Ｃ、Ｃ５１Ｓ、Ｃ８０Ｌ、Ｃ１１８Ｓを、タンパク質アッセイ緩衝液２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．５、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール中で５μＭの濃度に希釈し、２０μｌのタンパク質を９６ウェルプレート中に移した。最初の化合物ストックは、それらの所望されるアッセイ濃度の１００倍高い濃度で生成された。Ｋ−Ｒａｓ（Ｇ１２Ｃ）阻害剤は、ＧＴＰ親和性およびエフェクター相互作用をアロステリックに制御する；Ostrem JM, Peters U, Sos ML, Wells JA, Shokat KM; Nature. 2013, Nov 28; 503(7477):548-51。

【0302】

ＤＭＳＯ中で溶解された例示的な化合物を、反応を開始するために、９６ウェルプレート中の２０μＬの５μＭ ＫＲａｓタンパク質を含有する溶液中に１００倍希釈した。Ｍｏｓｑｕｉｔｏ（ＴＰＰ Ｌａｂ ｔｅｃｈ）液体取り扱いロボットを用いて、タンパク質溶液に化合物を添加した。化合物の典型的な終濃度は、１０μＭであった。プレートをシェーカー上に室温で１分間置き、密封し、室温で指定された期間の間インキュベートした。５μｌの反応混合物を１０μｌの０．２％ギ酸停止溶液に添加し、よく混合した。典型的な終点は、３０、１２０、６００および１４４０分であった。

【0303】

データを、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈ−ｃｌａｓｓ ＵＰＬＣシステム／Ｘｅｖｏ Ｇ２−ＸＳ ＴＯＦ質量分析計を用いて収集した。タンパク質をそれらの液相においてＢｒｕｋｅｒ Ｍｉｃｒｏｔｒａｐタンパク質カラムＴＲ１／１５１０９／０３上に注入した。以下の緩衝液を使用してＬＣ勾配を設定した：緩衝液Ａ：０．２％ギ酸Ｈ２０；Ｂ：０．２％ギ酸ＣＡＮ。タンパク質を以下のＬＣ勾配を用いてカラムから溶離した：０〜０．４分、１０％Ｂ〜３０％Ｂ；０．４分〜２．４分、９０％Ｂへ、２．５分、１０％Ｂ、３分、１０％Ｂ。初期データ解析は、データ取得直後にＭａｘＥｎｔソフトウェアを用いて実施された。

【0304】

標準的な自動処理機能を用いて、データ取得直後にＭｅｘＥｎｔソフトウェアを用いて未修飾および修飾ｋＲａｓタンパク質の百分率を定めた。最大のピークを１００％と定め、一方でより小さいピークは自動処理機能により定められた数を割り当てられた。例示的な化合物で修飾されたものおよび未修飾のＫＲａｓ ＧＤＰ装填ｋＲａｓ（１−１６９）Ｇ１２Ｃ、Ｃ５１Ｓ、Ｃ８０Ｌ、Ｃ１１８Ｓに対応する修飾のパーセントを、Ｘｃｅｌデータ解析ソフトウェアにエクスポートした。

【0305】

例示的な化合物の定められた濃度における修飾されたタンパク質のパーセントを、以下の式を用いて計算した：％修飾 ＝ 修飾されたピークの数／修飾＋未修飾の合計。結果として得られた値は、パーセント修飾（ＰＭ）として定義され、ＰＭにおける増大は、その特定の化合物が所与の時点において指定された化合物濃度において他の化合物よりも良好であることを反映している。

【0306】

ＭｉａＰａＣａ２細胞活性アッセイ
本発明で示された化合物は、ヒト癌細胞株の処置の際にＧＤＰ結合型ＲＡＳの蓄積をもたらす。

【0307】

細胞環境におけるＧＤＰ結合型ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃの蓄積を、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃがその活性なＧＴＰ結合状態にある場合にのみその下流のキナーゼであるＲａｆ−１（ＭＡＰキナーゼキナーゼキナーゼ）に結合するという原理に基づいて測定した。この状態では、Ｒａｓは、Ｒａｓ結合ドメイン（ＲＢＤ）と呼ばれるＲａｆ−１キナーゼのドメインに結合した。

【0308】

ＭｉａＰａＣａ２細胞を、１０％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補ったＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ １１９９５）中で増殖させた。細胞を、９６ウェル組織培養プレート中に４０，０００細胞／ウェルの密度でまき、１６〜２４時間接着させた。試験化合物を、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックとして調製し、３倍希釈スキームを用いて１００％ＤＭＳＯ中で系列希釈した。完全増殖培地中の中間的な５倍濃縮されたプレートを作製し、０．１％ＤＭＳＯの終濃度のために２５μｌ／ウェルを１００μｌの細胞に添加した。例示的な化合物の各濃度を二重に試験した。陰性対照ウェルは、１０μＭの対照阻害剤を用いた細胞であり、陽性対照ウェルは、薬物を用いずＤＭＳＯのみの細胞であった。プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした。処理後、細胞を氷冷ＰＢＳで３回洗浄し、１００μｌ／ウェルの氷冷１×Ａｓｓａｙ／Ｌｙｓｉｓで洗浄した。プロテアーゼ阻害剤を含む緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２％グリセロール）を添加した。溶解後、試料を−８０℃で凍結させた。

【0309】

Ｒａｆ−１ ＲＢＤ（ＬＪＩＣ−１９８８Ａ１）をＰＢＳ中で１００ｎｇ／ウェルに希釈し、５μｌ／ウェルをＭＳＤ高結合ＳＥＣＴＯＲプレート（Ｌ１５ＸＢ）上にスポットコートした。プレートをオービタルシェーカー上で室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄し、５０μｌ／ウェルの解凍した溶解物試料を添加した後、５０μｌのＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｒ９３ＢＡ）中の１％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａを添加した。プレートをオービタルシェーカー上で１時間インキュベートし、ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した。２５μｌ／ウェルの１：３０００希釈した抗ｐａｎ−Ｒａｓ抗体（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ ２４４００３）を１％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ溶液中で添加し、プレートをオービタルシェーカー上で１時間インキュベートし、ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した。ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧヤギ抗マウス二次抗体（ＭＳＤ Ｒ３２ＡＣ）をＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ溶液中で１：５００希釈し、２５μＬ／ウェルで添加した。プレートをオービタルシェーカー上で１時間インキュベートし、ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した。１５０μｌ／ウェルのＨ_２Ｏ中で１：３希釈したＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（ＭＳＤ Ｒ９２ＴＣ）を添加し、プレートをＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ Ｓ６００上で読み取った。

【0310】

ＫＲＡＳシグナルを最大阻害およびＤＭＳＯ対照値に対して標準化し、用量反応曲線の４パラメーター当てはめを用いてＩＣ５０値を生成した。ＩＣ５０における減少は、例示的な化合物が癌細胞株の処置の特定の時点で別の例示的な化合物よりも高いレベルのＧＤＰ結合型ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃの蓄積をもたらすことを反映している。

【0311】

Ｈ３５８細胞活性アッセイ
本発明で示された化合物は、ヒト癌細胞株の処置の際にＧＤＰ結合型Ｒａｓの蓄積をもたらす。

【0312】

細胞環境におけるＧＤＰ結合型ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃの蓄積を、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃがその活性なＧＴＰ結合状態にある場合にのみその下流のキナーゼであるＲａｆ−１（ＭＡＰキナーゼキナーゼキナーゼ）に結合するという原理に基づいて測定した。この状態では、ＲａｓはＲａｓ結合ドメイン（ＲＢＤ）と呼ばれるＲａｆ−１キナーゼのドメインに結合していた。

【0313】

Ｈ３５８細胞を、１０％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補ったＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ １１８７５）中で増殖させた。細胞を４０，００００細胞／ウェルの密度で９６ウェル組織培養プレートにまき、１６〜２４時間接着させた。試験化合物を、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックとして調製し、３倍希釈スキームを用いて１００％ＤＭＳＯ中で系列希釈した。完全増殖培地中の中間的な５倍濃縮されたプレートを作製し、０．１％ＤＭＳＯの終濃度のために２５μｌ／ウェルを１００μｌの細胞に添加した。例示的な化合物の各濃度を二重に試験した。陰性対照ウェルは、１０μＭの対照阻害剤を用いた細胞であり、陽性対照ウェルは、薬物を用いずＤＭＳＯのみの細胞であった。プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした。処理後、細胞を氷冷ＰＢＳで３回洗浄し、１００μｌ／ウェルの氷冷１×Ａｓｓａｙ／Ｌｙｓｉｓで洗浄した。プロテアーゼ阻害剤を含む緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２％グリセロール）を添加した。溶解後、試料を−８０℃で凍結させた。

【0314】

Ｒａｆ−１ ＲＢＤ（ＬＪＩＣ−１９８８Ａ１）をＰＢＳ中で１００ｎｇ／ウェルに希釈し、５μｌ／ウェルをＭＳＤ高結合ＳＥＣＴＯＲプレート（Ｌ１５ＸＢ）上にスポットコートした。プレートをオービタルシェーカー上で室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄し、５０μｌ／ウェルの解凍した溶解物試料を添加した後、５０μｌのＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０中の１％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ（Ｒ９３ＢＡ）を添加した。プレートをオービタルシェーカー上で１時間インキュベートし、ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した。２５μｌ／ウェルの１：３０００希釈した抗ｐａｎ−Ｒａｓ抗体（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ ２４４００３）を１％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ溶液中で添加し、プレートをオービタルシェーカー上で１時間インキュベートし、ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した。ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧヤギ抗マウス二次抗体（ＭＳＤ Ｒ３２ＡＣ）をＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ溶液中で１：５００希釈し、２５μＬ／ウェルで添加した。プレートをオービタルシェーカー上で１時間インキュベートし、ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した。１５０μｌ／ウェルのＨ_２Ｏ中で１：３希釈したＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（ＭＳＤ Ｒ９２ＴＣ）を添加し、プレートをＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ Ｓ６００上で読み取った。

【0315】

ＫＲＡＳシグナルを最大阻害およびＤＭＳＯ対照値に対して標準化し、用量反応曲線の４パラメーター当てはめを用いてＩＣ５０値を生成した。ＩＣ５０における減少は、例示的な化合物が癌細胞株の処置の特定の時点で別の例示的な化合物よりも高いレベルのＧＤＰ結合型ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃの蓄積をもたらすことを反映している。

【0316】

ＭＳＲＡデータおよびＭＩＡＰａＣａ−２細胞活性アッセイデータ

【0317】

【表6-1】

【0318】

【表6-2】

【国際調査報告】