特表 2021-523931 メラノコルチン受容体特異的ペプチド製剤及び消化管特異的送達方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2021-523931(P2021-523931A)

(43)【公表日】2021年9月9日

(54)【発明の名称】メラノコルチン受容体特異的ペプチド製剤及び消化管特異的送達方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/08 20190101AFI20210813BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20210813BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20210813BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20210813BHJP

   A61K 9/64 20060101ALI20210813BHJP

   A61K 9/34 20060101ALI20210813BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20210813BHJP

   C07K 7/54 20060101ALN20210813BHJP

   C07K 17/08 20060101ALN20210813BHJP

【ＦＩ】

   A61K38/08

   A61P1/04

   A61K9/14

   A61K47/42

   A61K9/64

   A61K9/34

   A61K47/32

   C07K7/54ZNA

   C07K17/08

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】93

(21)【出願番号】特願2021-500503(P2021-500503)

(86)(22)【出願日】2019年3月22日

(85)【翻訳文提出日】2020年11月16日

(86)【国際出願番号】US2019023575

(87)【国際公開番号】WO2019183472

(87)【国際公開日】20190926

(31)【優先権主張番号】62/647,000

(32)【優先日】2018年3月23日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

(71)【出願人】

【識別番号】508041600

【氏名又は名称】パラティン テクノロジーズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】ドッド，ジョン ハロルド

(72)【発明者】

【氏名】ドードュノー，シュテファン クワク

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA44

4C076AA45

4C076AA64

4C076BB01

4C076EE11

4C076EE12

4C076EE13

4C076EE42

4C076EE48

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA01

4C084BA09

4C084BA16

4C084BA24

4C084CA59

4C084DB37

4C084MA34

4C084MA35

4C084MA37

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA68

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA01

4H045BA14

4H045BA31

4H045BA51

4H045BA60

4H045CA40

4H045EA20

(57)【要約】

メラノコルチン受容体特異的ペプチド、特にメラノコルチン−１受容体について選択的且つ特異的な環状ペプチドの、消化管のメラノコルチン受容体媒介性又は応答性の疾患、徴候、症状、及び症候群の処置のための、消化管の管腔への送達のための製剤、組成物、及び方法。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む粒子マトリックス内に配置された、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を含む、下方消化（ＧＩ）管放出医薬製剤。

【請求項2】

前記遅延放出ポリマーは、ｐＨ依存性放出ポリマーである、請求項１に記載の製剤。

【請求項3】

前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、前記粒子マトリックス内で混合されることによって、前記粒子マトリックス、及び前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物が形成される、請求項２に記載の製剤。

【請求項4】

前記粒子マトリックス、及び前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩の前記混合物は、水性可溶性カプセル内に配置されている、請求項３に記載の製剤。

【請求項5】

前記水性可溶性カプセルは、ゼラチンカプセルである、請求項４に記載の製剤。

【請求項6】

前記粒子マトリックス、及び前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩の前記混合物は、タブレットに形成されている、請求項３に記載の製剤。

【請求項7】

前記カプセル又はタブレットはさらに、シールコーティング及び腸溶コーティングの少なくとも１つを含む、請求項４又は６に記載の製剤。

【請求項8】

シールコーティング及び腸溶コーティングの前記少なくとも１つは、ｐＨ依存性放出ポリマー腸溶コーティングを含む、請求項７に記載の製剤。

【請求項9】

前記ｐＨ依存性放出ポリマーは、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを含む、請求項２に記載の製剤。

【請求項10】

前記ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーは、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dからなる群から選択される、請求項９に記載の製剤。

【請求項11】

前記Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在する、請求項１０に記載の製剤。

【請求項12】

前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、メラノコルチン−１受容体（ＭＣ１ｒ）特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の製剤。

【請求項13】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値が約１ｎＭ未満である、請求項１２に記載の製剤。

【請求項14】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、メラノコルチン−４受容体（ＭＣ４ｒ）での機能的ＥＣ_５０値が、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値の少なくとも１００倍である、請求項１３に記載の製剤。

【請求項15】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ４ｒでの機能的ＥＣ_５０値が、少なくとも約５００ｎＭである、請求項１４に記載の製剤。

【請求項16】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、メラノコルチン−２受容体（ＭＣ２ｒ）、メラノコルチン−３受容体（ＭＣ３ｒ）、及びメラノコルチン−５受容体（ＭＣ５ｒ）にて機能的に不活性である、請求項１２に記載の製剤。

【請求項17】

前記遅延放出ポリマーは、前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩の少なくとも一部を結腸内で放出する、請求項１２に記載の製剤。

【請求項18】

前記遅延放出ポリマーは、前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩の治療的に有効な量を結腸内で放出する、請求項１２に記載の製剤。

【請求項19】

前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の製剤。

【請求項20】

少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む前記粒子マトリックスは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む混合物である、請求項１９に記載の製剤。

【請求項21】

前記Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、最大粒子サイズが直径１０００μｍ以下の粒子である、請求項２０に記載の製剤。

【請求項22】

前記粒子は、最大粒子サイズが直径約６００μｍ以下且つ最小粒子サイズが少なくとも直径約２５０μｍである、請求項２０に記載の製剤。

【請求項23】

遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約２％以下である、請求項１９に記載の製剤。

【請求項24】

遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約１％以下である、請求項２３に記載の製剤。

【請求項25】

遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約１０％以下である、請求項１９に記載の製剤。

【請求項26】

界面活性剤、崩壊剤、潤滑剤、及びバインダーからなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤をさらに含む、請求項２０に記載の製剤。

【請求項27】

前記少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、ヒト患者に投与された場合に、前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩の最大放出を、結腸内でもたらす、請求項１に記載の製剤。

【請求項28】

前記少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、ｐＨ依存性放出ポリマーである、請求項２７に記載の製剤。

【請求項29】

前記少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む混合物である、請求項２８に記載の製剤。

【請求項30】

前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒ、並びにＭＣ３ｒ、ＭＣ４ｒ、及びＭＣ５ｒからなる群から選択される少なくとも１つの付加的なメラノコルチン受容体にて、機能的に活性である、請求項１に記載の製剤。

【請求項31】

ａ．約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比でEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dの溶液混合物を用意する工程と；
ｂ．前記溶液混合物にＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩を加える工程と；
ｃ．Ａｃ−Ｎｌｅ−ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩を含む溶液混合物を乾燥させる工程と；
ｄ．前記乾燥させた混合物を粒子に変換する工程であって、生じた粒子サイズは、直径約１０００μｍ以下であり、且つ約２５以下である、工程と
を含むプロセスによって調製された、下方ＧＩ管放出医薬製剤。

【請求項32】

Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩の重量ベースで約２％以下が、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dの前記溶液混合物に加えられる、請求項３１に記載のプロセス。

【請求項33】

乾燥は、真空乾燥を含む、請求項３１に記載のプロセス。

【請求項34】

変換は、前記乾燥させた混合物を粉砕することと、スクリーンを通して篩にかけることとを含む、請求項３１に記載のプロセス。

【請求項35】

前記生じた粒子サイズは、直径約２５０μｍ〜６００μｍである、請求項３１に記載のプロセス。

【請求項36】

単一の活性医薬成分としてＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、
ｐＨ依存性ポリマー及びｐＨ非依存性ポリマーからなる群から選択される少なくとも１つの放出制御ポリマーと
を含む修飾放出製剤であって；
ヒト患者への経口投与の直ぐ後に、前記ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、前記ヒト患者の結腸の管腔に、実質的に未変化で送達される、修飾放出製剤。

【請求項37】

炎症性腸疾患の処置用の、経口投与に適した医薬組成物であって：
タブレットコアであって、単一の活性医薬成分としてＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩から選択される活性化合物、及び薬学的に許容される賦形剤を含むタブレットコアと；
腸溶コーティングと
を含む医薬組成物。

【請求項38】

炎症性腸疾患の処置用の、経口投与に適した医薬組成物であって：
少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含むカプセル化された粒子マトリックス内に配置されたメラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩と；
カプセルをカバーする腸溶コーティングと
を含む医薬組成物。

【請求項39】

前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩である、請求項３８に記載の医薬組成物。

【請求項40】

前記少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを含む、請求項３８又は３９に記載の医薬組成物。

【請求項41】

ヒト炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者においてＩＢＤを処置する方法であって：
少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む粒子マトリックス内に配置されたメラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を投与すること
を含む方法。

【請求項42】

前記遅延放出ポリマーは、ｐＨ依存性放出ポリマーである、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、前記粒子マトリックス内で混合されることによって、前記粒子マトリックス、及び前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物を形成する、請求項４１に記載の方法。

【請求項44】

前記粒子マトリックス、及び前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩の前記混合物は、水性可溶性カプセル内に配置される、請求項４２に記載の方法。

【請求項45】

前記水性可溶性カプセルは、ゼラチンカプセルである、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記粒子マトリックス、及び前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩の前記混合物は、タブレットに形成される、請求項４３に記載の方法。

【請求項47】

前記タブレットはさらに、腸溶コーティングを含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記腸溶コーティングは、ｐＨ依存性放出ポリマーを含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項49】

前記ｐＨ依存性放出ポリマーは、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを含む、請求項４２に記載の方法。

【請求項50】

前記ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーは、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dからなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在する、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩である、請求項４１に記載の方法。

【請求項53】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値が約１ｎＭ未満である、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ４ｒでの機能的ＥＣ_５０値が、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値の少なくとも１００倍である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ４ｒでの機能的ＥＣ_５０値が少なくとも約５００ｎＭである、請求項５３に記載の方法。

【請求項56】

前記ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ２ｒ、ＭＣ３ｒ、及びＭＣ５ｒにて機能的に不活性である、請求項５２に記載の方法。

【請求項57】

前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩である、請求項４１に記載の方法。

【請求項58】

少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む前記粒子マトリックスは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む混合物である、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、最大粒子サイズが直径１０００μｍ以下の粒子である、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記粒子は、最大粒子サイズが直径約６００μｍ以下であり、且つ最小粒子サイズが少なくとも直径約２５０μｍである、請求項５８に記載の方法。

【請求項61】

遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約２％以下である、請求項５７に記載の方法。

【請求項62】

遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約１％以下である、請求項５７に記載の方法。

【請求項63】

遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約１０％以下である、請求項５７に記載の方法。

【請求項64】

前記少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、前記ヒトＩＢＤ患者に投与された場合に、前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩の最大放出を、結腸内でもたらす、請求項４１に記載の方法。

【請求項65】

前記少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、ｐＨ依存性放出ポリマーである、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む混合物である、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒ、並びにＭＣ３ｒ、ＭＣ４ｒ、及びＭＣ５ｒからなる群から選択される少なくとも１つの付加的なメラノコルチン受容体にて機能的に活性である、請求項４１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６２／６４７，０００号（表題「Melanocortin Receptor-Specific Peptide Formulations and Methods for Gastrointestinal Tract-Specific Delivery」）（２０１８年３月２３日出願）の優先権及び利益を主張し、その明細書及び特許請求の範囲は、参照によって本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出されており、そしてその全体が参照によって本明細書に組み込まれる配列表を含む。前記ＡＳＣＩＩコピー（２０１９年３月１８日作成）は、1903-187-Sequence_ST25.txtと命名され、サイズは４０ＫＢである。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
本発明の分野（技術分野）：
本発明は、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、特にメラノコルチン−１受容体について選択的且つ特異的な環状ペプチドの使用、並びにそのようなペプチドを含む、消化管特異的送達（結腸特異的送達が挙げられる）のための、メラノコルチン受容体媒介性又は応答性の疾患、徴候、症状、及び症候群（メラノコルチン−１受容体媒介性又は応答性の疾患、徴候、症状、及び症候群が挙げられる）の処置のための方法、組成物、及び製剤に関する。

【0004】

関連技術の説明：
メラノコルチン受容体型及び亜型のファミリーが同定されてきた。受容体型として、メラノコルチン−１受容体（ＭＣ１ｒ）が挙げられ、正常なヒトメラニン形成細胞中に、そして黒色腫細胞上に発現されることが一般的に知られているが、他の種々の細胞（免疫応答に関係するもの、例えば、単球、好中球、リンパ球、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び内皮細胞が挙げられる）中で発現されることも報告されている。一般に、Kang, L., et al., “A selective small molecule agonist of melanocortin-1 receptor inhibits lipopolysaccharide-induced cytokine accumulation and leukocyte infiltration in mice, ” J. Leuk. Biol. 80:897-904 (2006)、及びその中の引用文献参照。種々のヒトＭＣ１ｒ亜型及び変異体が知られており、米国特許第６，６９３，１８４号及び米国特許第７，１１５，３９３号に開示されるものが挙げられる。ＭＣ１ｒに加えて、他のメラノコルチン受容体型として、ＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）についてのメラノコルチン−２受容体（ＭＣ２ｒ）（副腎の細胞中で発現される）、メラノコルチン−３受容体（ＭＣ３ｒ）及びメラノコルチン−４受容体（ＭＣ４ｒ）（視床下部、中脳、及び脳幹、並びに末梢組織内の細胞中で主に発現される）、並びにメラノコルチン−５受容体（ＭＣ５ｒ）（末梢組織の広範囲において発現される）が挙げられる。

【0005】

高度に選択的且つ特異的なＭＣ１ｒアゴニストペプチドが知られており、米国特許第９，４４７，１４８号、米国特許第８，８７７，８９０号、及び米国特許第８，４９２，５１７号に開示される環状ペプチド、並びに米国特許第９，５８０，４６６号及び米国特許第８，９３３，１９４号に開示される直鎖状ペプチドが挙げられる。

【0006】

いくつかの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が知られており、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病の双方が挙げられる。双方の疾患は、消化（ＧＩ）管の慢性ＩＢＤ及び再発／寛解型ＩＢＤである。クローン病によってほとんどの場合影響を受けるＧＩ管の領域は、小腸及び大腸（結腸とも呼ぶ）（直腸を含む）であるが、クローン病は、口から肛門までのＧＩ管全体に影響を与え得ることが知られている。ＵＣは一般的に、結腸を含む大腸に影響を与える。疾患の共通の病徴として、下痢、腹痛、直腸出血、及び体重減少が挙げられる。加えて、クローン病は、腸管膿瘍、瘻管（腸管の一部から別の部分に通じ、且つ流体又は分泌物の通過を可能にする異常な通路）、及び腸管閉塞を含み得る。

【0007】

ＭＣ１ｒは、ある種の実験大腸炎動物モデルにおいて上方制御されて、腸管上皮の細胞表面上に発現されることが知られている。Maaser C., et al. Crucial role of the melanocortin receptor MC1R in experimental colitis. Gut. 2006; 55(10): 1415-1422。しかしながら、これまで、ＵＣ、クローン病、又はＩＢＤの処置用のＭＣ１ｒ特異的化合物の使用は、全身投与経路に限られてきた（例えば、国際公開第２０１６／０６６７０２号、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０７５０１９号に開示されている）。

【0008】

メラノコルチン受容体特異的ペプチドに対する強い科学的且つ医薬的関心があるにも拘らず、医薬用途に用いられる高度に選択的且つ特異的なＭＣ１ｒアゴニストペプチド、並びに標的部位、例えば結腸の管腔内にＭＣ１ｒアゴニストペプチドを送達する製剤及び方法のニーズが依然として残されたままである。この背景に対して、本発明はなされた。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明の簡単な概要
一態様において、本発明は、少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む粒子マトリックス、例えばマイクロ粒子マトリックス内に配置された、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を含む、下方消化（ＧＩ）管放出医薬製剤を提供する。製剤において、遅延放出ポリマーは、ｐＨ依存性放出ポリマーであってもよい。ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、粒子マトリックス内で混合されることによって、粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物を形成し得る。粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物は、水性可溶性カプセル内に配置されてもよく、当該カプセルは、ゼラチンカプセルであってもよく、当該カプセルはさらに、シールコーティング及び腸溶コーティングの少なくとも１つを含んでもよい。或いは、粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物は、タブレットに形成されてもよく、そして当該タブレットはさらに、シールコーティング及び腸溶コーティングの少なくとも１つを含んでもよい。

【0010】

少なくとも１つの遅延放出ポリマーとして、場合によっては、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマー、例えば、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dからなる群から選択されるコポリマーを含む、ｐＨ依存性放出ポリマーが挙げられ得る。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dコポリマーは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在してもよい。

【0011】

製剤内のメラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩であってもよい。ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値が約１ｎＭ未満であり得、そしてさらに、ＭＣ４ｒでの機能的ＥＣ_５０値が、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値の少なくとも１００倍であり得る。一態様において、ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ４ｒでの機能的ＥＣ_５０値が、少なくとも約５００ｎＭである。別の態様において、ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ２ｒ、ＭＣ３ｒ、及びＭＣ５ｒにて機能的に不活性であり得る。

【0012】

一態様において、遅延放出ポリマーは、少なくとも一部のＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を結腸内で放出し、そして好ましくは、治療的に有効な量のＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を結腸内で放出する。

【0013】

別の態様において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩である。Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩を含む製剤において、粒子マトリックスは、マイクロ粒子マトリックスであってもよく、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む遅延放出ポリマー混合物を含んでもよい。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、最大粒子サイズが直径１０００μｍ以下、好ましくは直径約６００μｍ以下且つ最小粒子サイズが少なくとも直径約２５０μｍのマイクロ粒子であってもよい。遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約２％以下であってもよく、又は代わりに、重量ベースで約１％以下であってもよく、又は代わりに、重量ベースで約１０％以下であってもよい。製剤はさらに、界面活性剤、崩壊剤、潤滑剤、及びバインダーからなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤を含んでもよい。

【0014】

別の態様において、少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む粒子マトリックス内に配置された、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を含む製剤は、ヒト患者に投与された場合に、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩の最大放出を、結腸内でもたらす。この態様において、少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む混合物が挙げられる、ｐＨ依存性放出ポリマーであってもよい。

【0015】

本発明の別の態様において、少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む粒子マトリックス内に配置されたメラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を含む製剤において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒ、並びにＭＣ３ｒ、ＭＣ４ｒ、及びＭＣ５ｒからなる群から選択される少なくとも１つの付加的なメラノコルチン受容体にて、機能的に活性である。

【0016】

別の態様において、本発明は、以下の工程を含むプロセスによって調製された、下方ＧＩ管放出医薬製剤を提供する：
ａ．約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比でEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dの溶液混合物を用意する工程と；
ｂ．溶液混合物にＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩を加える工程と；
ｃ．Ａｃ−Ｎｌｅ−ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩を含む溶液混合物を乾燥させる工程と；
ｄ．乾燥させた混合物をマイクロ粒子に変換する工程であって、生じた粒子サイズは、直径約１０００μｍ以下であり、好ましくは、生じた粒子サイズは、直径約２５０μｍ〜約６００μｍである、工程。

【0017】

前述のプロセスにおいて、一態様において、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩の重量ベースで約２％以下が、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dの溶液混合物に加えられる。当該プロセスにおいて、乾燥は、真空乾燥を含んでもよい。当該プロセスにおいて、変換は、乾燥させた混合物を粉砕することと、スクリーンを通して篩にかけることとを含んでもよい。

【0018】

別の態様において、本発明は、
単一の活性医薬成分としてＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、
ｐＨ依存性ポリマー及びｐＨ非依存性ポリマーからなる群から選択される少なくとも１つの放出制御ポリマーと
を含む修飾放出製剤を提供し；
ヒト患者への経口投与の直ぐ後に、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ヒト患者の結腸の管腔に、実質的に未変化で送達される。

【0019】

別の態様において、本発明は、炎症性腸疾患の処置用の、経口投与に適した医薬組成物を提供し、医薬組成物は：
タブレットコアであって、単一の活性医薬成分としてＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩から選択される活性化合物、及び薬学的に許容される賦形剤を含むタブレットコアと；
腸溶コーティングと
を含む。

【0020】

別の態様において、本発明は、炎症性腸疾患の処置用の、経口投与に適した医薬組成物を提供し、医薬組成物は：
少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含むカプセル化されたマイクロ粒子マトリックス内に配置されたメラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩と；
カプセルをカバーする腸溶コーティングと
を含む。

【0021】

医薬組成物において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩であってもよく、そして少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを含んでもよい。

【0022】

さらに別の態様において、本発明は、ヒトＩＢＤ患者においてＩＢＤを処置する方法であって、少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含むマイクロ粒子マトリックス内に配置されたメラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。この方法において、遅延放出ポリマーは、ｐＨ依存性放出ポリマーであってもよい。ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、マイクロ粒子マトリックス内で混合されることによって、マイクロ粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物を形成し得る。マイクロ粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物は、ゼラチンカプセルが挙げられる水性可溶性カプセル内に配置されてもよく、当該カプセルはさらに、ｐＨ依存性放出ポリマーを含む腸溶コーティングを含んでもよい。或いは、マイクロ粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物は、タブレットに形成されてもよく、当該タブレットはさらに、ｐＨ依存性放出ポリマーを含む腸溶コーティングを含んでもよい。

【0023】

ヒト患者においてＩＢＤを処置する方法において、ｐＨ依存性放出ポリマーは、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dからなる群から選択されるコポリマーが挙げられるｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを含んでもよい。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在してもよい。

【0024】

患者においてＩＢＤを処置する方法において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩であってもよい。ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値が約１ｎＭ未満であり得る。ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ４ｒでの機能的ＥＣ_５０値が、ＭＣ１ｒでの機能的ＥＣ_５０値の少なくとも１００倍であり得る。一態様において、当該方法において、ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ４ｒでの機能的ＥＣ_５０値が少なくとも約５００ｎＭである。別の態様において、ＭＣ１ｒ特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ２ｒ、ＭＣ３ｒ、及びＭＣ５ｒにて機能的に不活性であり得る。

【0025】

ヒトＩＢＤ患者においてＩＢＤを処置する方法の一態様において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、Ａｃ−Ｎｌｅ−ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩であってもよい。この態様において、マイクロ粒子マトリックスはさらに、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む混合物であってもよい。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、最大粒子サイズが直径１０００μｍ以下、又は代わりに直径約６００μｍ以下のマイクロ粒子であってもよい。遅延放出ポリマーのＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩のパーセンテージは、重量ベースで約２％以下、又は代わりに重量ベースで約１％以下、又は代わりに重量ベースで約１０％以下である。

【0026】

ヒトＩＢＤ患者においてＩＢＤを処置する方法の一態様において、少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、ヒトＩＢＤ患者に投与された場合に、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩の最大放出を、結腸内でもたらす。少なくとも１つの遅延放出ポリマーは、ｐＨ依存性放出ポリマー、場合によっては約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含む混合物であってもよい。

【0027】

ヒトＩＢＤ患者においてＩＢＤを処置する方法の別の態様において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ＭＣ１ｒ、並びにＭＣ３ｒ、ＭＣ４ｒ、及びＭＣ５ｒからなる群から選択される少なくとも１つの付加的なメラノコルチン受容体にて機能的に活性である。

【0028】

別の態様において、本発明は、ＧＩ管メラノコルチン受容体媒介性の疾患、徴候、症状、及び症候群の処置に用いられるメラノコルチン受容体特異的ペプチドベースの医薬組成物を提供する。

【0029】

別の態様において、本発明は、ペプチドベースのメラノコルチン受容体特異的医薬を提供し、ペプチドは、ＭＣ１ｒ関連ＩＢＤ障害、疾患、徴候、症状、及び／又は症候群の処置に用いられる、ｐＨ依存性ポリマーマイクロ粒子マトリックス内に配置された選択的ＭＣ１ｒリガンドである。

【0030】

別の態様において、本発明は、処置に用いられるペプチドメラノコルチン受容体特異的医薬を提供し、処置の実施は、結腸を含むＧＩ管内でのペプチドの放出を実現するポリマーマトリックスの経口投与を介してなされる。

【0031】

別の態様において、本発明は、ｐＨ依存性ポリマー放出制御マトリックスを利用して、結腸を含む下方ＧＩ管の管腔への標的化された送達に使用され得る、特異的なＭＣ１ｒ環状ペプチドを使用する製剤及び方法を提供する。

【0032】

別の態様において、本発明は、下方ＧＩ管の管腔内での、受容体に特異的なＭＣ１ｒ環状ペプチドの投与のための製剤及び方法を提供し、ペプチドは、そのようなペプチドの全身送達が全くなくとも、又は実質的に全くなくとも（心血管循環系へのそのようなペプチドの全身送達が実質的に全くないことを含む）、送達される。

【0033】

本発明のさらに別の態様は、ＩＢＤ患者の、結腸を含む下方ＧＩ管の管腔内での、受容体に特異的なＭＣ１ｒ環状ペプチドの、ｐＨ依存性ポリマーマイクロ粒子マトリックス内に配置されたペプチドの経口投与による部位特異的送達を提供し、ペプチドは、患者の循環系内でのペプチドの存在が全く生じなくとも、又は実質的に全く生じなくとも、結腸を含む下方ＧＩ管の管腔に送達されて、その内部で放出される。

【0034】

他の態様及び新規の特徴、並びに本発明の適用性の更なる範囲は、後に続く詳細な説明において部分的に示されており、そして部分的に、以下を吟味すれば直ぐに、当業者に明らかとなり、又は本発明の実行によって情報を得ることができる。本発明の態様は、添付の特許請求の範囲において特に指摘される手段及び組合せによって実現且つ達成することができる。

【0035】

図面の簡単な説明
明細書の一部に組み込まれ、且つ明細書を形成する添付の図面は、本発明の１つ以上の実施形態を例示し、そして明細書と一緒に、本発明の原理を説明するのに役立つ。図面は、本発明の１つ以上の好ましい実施形態を例示する目的しかなく、本発明を限定するものとして解釈されるべきでない。

【図面の簡単な説明】

【0036】

【図1A】図１Ａ及び図１Ｂは、ＤＮＢＳ誘導腸炎症を患うラットにおける、結腸カニューレを介して投与される実施例９．３のペプチド、及び経口投与されるスルファサラジンの、炎症スコア（図１Ａ）、そして結腸重量（図１Ｂ）に及ぼす作用のグラフである。「＊」は、０．０５未満のｐ値を示し、ＩＣは結腸内であり、ＰＯは経口である。

【図1B】図１Ａ及び図１Ｂは、ＤＮＢＳ誘導腸炎症を患うラットにおける、結腸カニューレを介して投与される実施例９．３のペプチド、及び経口投与されるスルファサラジンの、炎症スコア（図１Ａ）、そして結腸重量（図１Ｂ）に及ぼす作用のグラフである。「＊」は、０．０５未満のｐ値を示し、ＩＣは結腸内であり、ＰＯは経口である。

【図2】図２は、ラット腸管を通る本発明の経口カプセルを介して投与されたロット４１のマイクロ粒子マトリックス内に配置された実施例９．３のペプチドの前進のグラフであり、「結腸」は、直腸及び遠位結腸を含み、「大腸」は、遠位腸管を含み、「小腸」は、近位腸管を含む。

【図3A】図３Ａは、ＤＮＢＳ誘導腸炎症を患うラットにおける、本発明の経口カプセルを介して投与される実施例９．３のペプチド、及び経口投与されるスルファサラジンの、ベースライン補正した巨視的障害スコアに及ぼす作用のグラフである。「^＊」は、０．０５未満のｐ値を示し、「^＊＊」は、０．０１未満のｐ値を示し、「^＊＊＊」は、０．００１未満のｐ値を示す。

【図3B】図３Ｂは、ＤＮＢＳ誘導腸炎症を患うラットにおける、本発明の経口カプセルを介して投与される実施例９．３のペプチド、及び経口投与されるスルファサラジンの、ベースライン補正した炎症スコアに及ぼす作用のグラフである。「^＊」は、０．０５未満のｐ値を示し、「^＊＊」は、０．０１未満のｐ値を示し、「^＊＊＊」は、０．００１未満のｐ値を示す。

【図4】図４は、ｐＨ６．８でのリン酸バッファ中への、Eudragit（登録商標）マイクロ粒子ロット２３、２４、及び２７からの、実施例９．３のペプチドの溶解のグラフである。

【図5】図５は、ｐＨ１．２〜ｐＨ７．４のｐＨ範囲での種々のEudragit（登録商標）マイクロ粒子ロットからの、経時的な実施例９．３のペプチドの溶解のグラフである。

【図6】図６は、ｐＨ１．２〜ｐＨ７．４のｐＨ範囲でのEudragit（登録商標）マイクロ粒子ロット２３、２４、２７、及び３１からの、経時的な実施例９．３のペプチドの溶解のグラフであり、ペプチド濃度は１％又は２％である。

【図7】図７は、４０％のロット２９（６０％ Eudragit（登録商標）L-100-55／４０％ FS）及び６０％のロット３１Ｒ（Eudragit（登録商標）S100）を含むロット３５の経時的な溶解プロファイルのグラフである。

【図8】図８は、バッファ（バッファは、ｐＨ４．５〜５．５及びｐＨ４．５〜７．５に経時的にｐＨ調整されていた）中へのロット４０からの、実施例９．３のペプチドの溶解のグラフである。

【図9】図９は、ロット２９、３４、及び３８についての、経時的にｐＨが増大する（ｐＨ４．５〜７．５）、実施例９．３のペプチドの累積放出のグラフである。

【図10】図１０は、ロット３８及び４１についての、経時的にｐＨが増大する（ｐＨ４．５〜７．５）、実施例９．３のペプチドの累積放出のグラフである。

【図11】図１１は、ロット４１の２つのランの、経時的にｐＨが増大する（ｐＨ４．５〜７．５）、実施例９．３のペプチドの累積放出のグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0037】

発明の詳細な説明
１．０ 定義。
本発明の説明に進む前に、本明細書中で示す特定の用語を定義する。

【0038】

本発明に従うペプチドについて記載される配列において、アミノ酸残基は、米国特許審査便覧（Manual of Patent Examining Procedure）第９版の第２４００章に記載される従来の意味を有する。ゆえに、「Ｎｌｅ」はノルロイシンであり、「Ａｓｐ」はアスパラギン酸であり、「Ｈｉｓ」はヒスチジンであり、「Ｐｈｅ」はフェニルアラニンであり、「Ａｒｇ」はアルギニンであり、「Ｔｒｐ」はトリプトファンであり、「Ｌｙｓ」はリシンである等である。Ｄ−異性体は、３文字コード又はアミノ酸名の前の「Ｄ−」によって示される（例えば、Ｄ−Ｐｈｅは、Ｄ−フェニルアラニンである）ことが理解されよう。前述のものによって包含されないアミノ酸残基として、以下のアミノ酸又はアミノ酸側鎖が挙げられ、そのようなアミノ酸残基は、Ｌ−異性体又はＤ−異性体であり得ることが理解されよう：

【0039】

【表1】

【0040】

【表2】

【0041】

用語「アルファアミノ酸」は、一般的な構造の任意のアミノ酸

【化1】

（そのイオン化してない形態で示される）を含み、Ｒは、任意の側鎖基又は水素であり、限定されないが、先の表及び段落において記載されるアミノ酸残基又は側鎖基が挙げられる。

【0042】

「Ｎ置換されたアミノ酸」は、アミノ酸側鎖部分が、骨格アミノ基に共有結合した任意のアミノ酸を意味し、場合によっては、α−炭素位置に、Ｈ以外の置換基がない場合が挙げられる。サルコシンは、Ｎ置換されたアミノ酸の例である。一例として、サルコシンは、サルコシン及びＡｌａのアミノ酸側鎖部分が同じ、メチルであるという点で、ＡｌａのＮ置換されたアミノ酸誘導体と呼ぶことができる。特許請求の範囲又は本明細書中の説明が「アミノ酸」を指す場合はいつでも、そのような呼称は、「Ｎ置換されたアミノ酸」を含むが、これに限定されない。

【0043】

用語「Ｌ−異性体アミノ酸又はＤ−異性体アミノ酸」は、本明細書中で定義される任意のアミノ酸残基を意味し、具体的には任意のアルファ−アミノ酸、ベータ−アミノ酸、ガンマ−アミノ酸、又はデルタ−アミノ酸が挙げられ、限定されないが、ＤＮＡによって直接コードされているアミノ酸、翻訳後に修飾されたアミノ酸、直接的なＤＮＡによる以外の生物学的手段によって発現されたアミノ酸、タンパク質構成アミノ酸若しくは非タンパク質構成アミノ酸、又は任意の合成アミノ酸若しくは人工アミノ酸が挙げられる。

【0044】

アミノ酸（Ｌ−異性体アミノ酸又はＤ−異性体アミノ酸を含む）は、「アミド結合（amide bond or amide linkages）」によって一緒に結合されて、あるアミノ酸の骨格カルボン酸基を、別のアミノ酸の骨格アミノ基と連結する共有結合、ペプチド結合を形成することによって、ペプチド結合（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−）を形成する。

【0045】

特定の例において、基はアミノ酸と、例えば、特にアミノ酸の代わりにジカルボン酸を用いて、置換されてもよい。本明細書中で利用される１つの特定のジカルボン酸は、コハク酸であり、「Ｓｕｃ」と略され、これは構造式

【化2】

を有する。

【0046】

用語「アルカン」は、直鎖状飽和炭化水素又は分枝状飽和炭化水素を含む。直鎖状アルカン基の例として、メタン、エタン、プロパンが挙げられる。分枝状アルカン基又は置換アルカン基の例として、メチルブタン又はジメチルブタン、メチルペンタン、ジメチルペンタン、又はトリメチルペンタンが挙げられる。一般に、任意のアルキル基は、アルカンの置換基であってもよい。

【0047】

用語「アルケン」は、１つ以上の炭素二重結合を含有する不飽和炭化水素を含む。そのようなアルケン基の例として、エチレン、プロペンが挙げられる。

【0048】

用語「アルケニル」は、２〜６個の炭素原子の一価の直鎖状炭化水素基、又は少なくとも１つの二重結合を含有する３〜６個の炭素原子の一価の分枝状炭化水素基を含む；それらの例として、エテニル、２−プロペニルが挙げられる。

【0049】

本明細書中で定められる「アルキル」基として、直鎖状鎖又は分枝状鎖の飽和脂肪族炭化水素基である指定された長さのアルキル基が挙げられる。そのようなアルキル基の非限定的な例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ターシャリーブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシルが挙げられる。

【0050】

用語「アルキン」は、２〜６個の炭素原子の一価の直鎖状炭化水素基、又は少なくとも１つの三重結合を含有する３〜６個の炭素原子の一価の分枝状炭化水素基を含む；それらの例として、エチン、プロピレン（propyne）、ブチンが挙げられる。

【0051】

用語「アリール」は、６〜１２個の環原子の単環式芳香族炭化水素基又は二環式芳香族炭化水素基を含み、そして場合によっては、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロ、ニトロ、アシル、シアノ、アミノ、一置換アミノ、二置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、又はアルコキシ−カルボニルから選択される１つ以上の置換基で独立して置換されている。アリール基の例として、フェニル、ビフェニル、ナフチル、１−ナフチル、及び２−ナフチル、それらの誘導体が挙げられる。

【0052】

用語「アラルキル」は、基−Ｒ^ａＲ^ｂを含み、式中、Ｒ^ａは、アルキレン（二価アルキル）基であり、Ｒ^ｂは、先で定義されたアリール基である。アラルキル基の例として、ベンジル、フェニルエチル、３−（３−クロロフェニル）−２−メチルペンチルが挙げられる。

【0053】

用語「脂肪族」は、炭化水素鎖、例えば、アルカン、アルケン、アルキン、及びそれらの誘導体を有する化合物を含む。

【0054】

用語「アシル」は、基Ｒ（Ｃ＝Ｏ）−を含み、式中、Ｒは、有機基、例えば、アルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル、又はヘテロシクリルである。非限定的な例として、アセチル基ＣＨ_３−Ｃ（＝Ｏ）−があり、本明細書中で、以下「Ａｃ」と呼ばれる。本明細書中で用いられるＲは、Ｃ_１〜Ｃ_１７の直鎖状又は分枝状のアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、又はアルキルアリールを含んでもよい。

【0055】

ペプチド又は脂肪族部分は、先で定義されるアルキル基又は置換アルキル基が、１つ以上のカルボニル｛−（Ｃ＝Ｏ）｝基を介して結合されている場合、「アシル化されている」。ペプチドは、通常、Ｎ末端にてアシル化されている。

【0056】

用語「ヘテロアリール」は、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する単環式芳香族環及び二環式芳香族環を含む。５員又は６員のヘテロアリールは、単環式芳香族複素環である；それらの例として、チアゾール、オキサゾール、チオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、イソキサゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアジアゾール、テトラゾール、オキサジアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンが挙げられる。二環式芳香族複素環として、以下に限定されないが、ベンゾチアジアゾール、インドール、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、ベンズイミダゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、キノリン、ベンゾトリアゾール、ベンゾキサゾール、イソキノリン、プリン、フルオロピリジン（furopyridine）、及びチエノピリジンが挙げられる。

【0057】

本明細書中で用いられる用語「アミド」は、三価窒素がカルボニル基に取り付けられている化合物、すなわち−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２（すなわち一級アミド）、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＲ_ｃ、及び−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ_ｃＲ_ｄを含み、式中、Ｒ_ｃ及びＲ_ｄはそれぞれ独立して、有機基を表す。本明細書中で置換アミド基に言及する場合、これは、前記有機基（Ｒ_ｃ及びＲ_ｄ）の少なくとも１つが置換されていることを意味する。アミドの例として、メチルアミド、エチルアミド、プロピルアミドが挙げられる。

【0058】

「イミド」は、イミド基（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−）を含有する化合物を含む。

【0059】

「アミン」は、アミノ基（−ＮＨ_２）、−ＮＨＲ_ａ、及び−ＮＲ_ａＲ_ｂを含有する化合物を含み、式中、Ｒ_ａ及びＲ_ｂはそれぞれ独立して、有機基を表す。本明細書中で置換アミン基に言及する場合、これは、有機基（Ｒ_ａ及びＲ_ｂ）の少なくとも１つが置換されていることを意味する。

【0060】

「ニトリル」は、カルボン酸誘導体であり、且つ有機基に結合した（−ＣＮ）基を含有する化合物を含む。

【0061】

用語「ハロゲン」は、ハロゲン原子、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素、並びに１つ以上のハロゲン原子を含む基、例えば−ＣＦ_３を含む。

【0062】

用語「組成物」は、医薬組成物等であり、活性成分、及びキャリアを作り上げる不活性成分を含む生成物、並びに、直接的又は間接的に、当該成分のいずれか２つ以上の組合せ、錯体化、若しくは凝集に、又は当該成分の１つ以上の解離に、又は当該成分の１つ以上の他のタイプの反応若しくは相互作用に由来するあらゆる生成物を包含する。したがって、医薬組成物は、活性成分及び１つ以上の薬学的に許容されるキャリアを混合することによって製造されるあらゆる組成物を包含する。

【0063】

メラノコルチン受容体「アゴニスト」によって意味されるのは、内因性物質、原薬、又は本明細書中で開示される特定のペプチド化合物が挙げられる化合物であり、これは、メラノコルチン受容体と相互作用して、薬理学的応答を開始することができ、以下に限定されないが、メラノコルチン受容体に特有の、アデニルシクラーゼ活性化等の、シグナル伝達を開始することが挙げられる、受容体の活性化が挙げられる。メラノコルチン受容体アゴニストは、ＭＣ１ｒ、ＭＣ２ｒ、ＭＣ３ｒ、ＭＣ４ｒ、及びＭＣ５ｒの１つ以上にてアゴニストであってもよい。本発明にとって、ＭＣ１ｒにてアゴニストであるメラノコルチン受容体アゴニストが好ましい。

【0064】

「α−ＭＳＨ」によって意味されるのは、ペプチドＡｃ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ_２（配列番号２）、並びにその類似体及び相同体であり、限定されないが、ＮＤＰ−α−ＭＳＨが挙げられる。

【0065】

「ＮＤＰ−α−ＭＳＨ」によって意味されるのは、ペプチドＡｃ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ_２（配列番号３）、並びにその類似体及び相同体である。

【0066】

「ＥＣ_５０」によって意味されるのは、部分アゴニストを含むアゴニストの、そのアゴニストについて考えられる最大応答の５０％をもたらすモル濃度である。一例として、７２ｎＭの濃度にて、ＭＣ１ｒ細胞発現系でのｃＡＭＰアッセイで判定される、化合物について考えられる最大応答の５０％をもたらす試験化合物は、ＥＣ_５０が７２ｎＭである。特に明記しない限り、ＥＣ_５０の判定と関連するモル濃度は、リットルあたりのナノモル（ｎＭ）である。

【0067】

「Ｋｉ（ｎＭ）」によって意味されるのは、コンペティタの不在下での平衡時に受容体の結合部位の半分に結合する競合化合物のモル濃度を表す、平衡インヒビタ解離定数である。一般に、Ｋｉの数値は、Ｋｉが低ければ、親和性が高いというように、受容体に対する化合物の親和性に逆に相関する。Ｋｉは、Cheng及びPrusoffの式（Cheng Y., Prusoff W. H., Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108, 1973）：

【数1】

を用いて判定することができ、式中、「リガンド」は、コンペティタの濃度であり、Ｋ_Ｄは、コンペティタによる５０％の受容体占有をもたらす、コンペティタに対する受容体親和性の逆の尺度である。特に明記しない限り、Ｋｉ判定と関連するモル濃度は、ｎＭである。Ｋｉは、特定の受容体（例えば、ＭＣ１ｒ、ＭＣ３ｒ、ＭＣ４ｒ、又はＭＣ５ｒ）、特定の種（例えば、ヒト又はマウス）、及び特定のリガンド（例えば、α−ＭＳＨ又はＮＤＰ−α−ＭＳＨ）に関して表すことができる。

【0068】

「阻害」によって意味されるのは、競合阻害アッセイにおける、知られている標準と比較した、受容体結合の減衰パーセント又は低下である。ゆえに、「１μＭ（ＮＤＰ−α−ＭＳＨ）での阻害」によって意味されるのは、例えば後に記載されるアッセイ条件下での、試験されることとなる化合物の決定量、例えば１μＭの試験化合物の追加によるＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合の低下パーセントである。一例として、ＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合を阻害しない試験化合物は、阻害が０％であり、ＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合を完全に阻害する試験化合物は、阻害が１００％である。典型的には、後に記載されるように、例えばＩ^１２５標識ＮＤＰ−α−ＭＳＨによる、検出可能標識アッセイ、又は、例えばＥｕ−ＮＤＰ−α−ＭＳＨによる、ランタニドキレート蛍光アッセイが、競合阻害試験に用いられる。しかしながら、様々な標識系又はタグ系の使用を含む、競合阻害を試験する他の方法が知られており、そして一般に、競合阻害を試験する、当該技術において知られているあらゆる方法が、本発明に使用されてもよい。ゆえに、「阻害」は、試験化合物がメラノコルチン受容体へのα−ＭＳＨの結合を減弱するかを判定するための一尺度であることがわかる。

【0069】

「結合親和性」によって意味されるのは、本明細書中でＫｉ（ｎＭ）として表される、化合物又は薬物の、その生物学的標的に結合する能力である。

【0070】

Ｅ_ｍａｘによって意味されるのは、指定されたメラノコルチン受容体発現細胞系において、化合物、例えばアデニリルシクラーゼの最大刺激によって達成可能な、最大機能活性である。ＮＤＰ−α−ＭＳＨによって達成される最大刺激は、１００％のＥ_ｍａｘと表され、ＮＤＰ−α−ＭＳＨの最大活性の半分を刺激することができる化合物は、Ｅ_ｍａｘが５０％であると表される。本明細書中に記載されるアッセイ条件下でＥ_ｍａｘが７０％以上である本発明の化合物は、アゴニストとして分類され得、Ｅ_ｍａｘが１０％〜７０％である化合物は、部分アゴニストと分類され得、Ｅ_ｍａｘが１０％未満である化合物は、不活性であると分類され得る。

【0071】

一般に、「機能活性」は、化合物による受容体の活性化の直後の、例えばメラノコルチン受容体による、受容体のシグナリングの尺度、又は受容体関連シグナリングの変化の尺度である。メラノコルチン受容体は、ヘテロ三量体Ｇタンパク質の活性化により、シグナル伝達を開始する。一態様において、メラノコルチン受容体は、Ｇα_Ｓを介してシグナルを発し、これは、アデニリルシクラーゼによってｃＡＭＰの生成を触媒する。ゆえに、アデニリルシクラーゼの刺激の判定、例えばアデニリルシクラーゼの最大刺激の判定は、機能活性の一尺度であり、そして本明細書中で例示される主要な尺度である。しかしながら、機能活性の代用の尺度が、本発明の実行に使用されてもよく、そして本発明の範囲内で具体的に意図されて含まれることが理解されるべきである。ゆえに、一例において、Mountjoy K.G. et al., Melanocortin receptor-medicated mobilization of intracellular free calcium in HEK293 cells. Physiol Genomics 5:11-19, 2001、又はNewman et al., Activation of the melanocortin-4 receptor mobilizes intracellular free calcium in immortalized hypothalamic neurons. J Surg Res: 132:201-207, 2006によって報告されている、そしてこれらに開示されている方法を用いる、カルシウムに結合する特定の蛍光分子、例えばＦｕｒａ２を用いて、細胞内遊離カルシウムが測定されてもよい。Ｆｌｕｏ−４は、一般的に用いられている代用のカルシウム結合色素でもある（Nohr et al., The orphan G protein-coupled receptor GPR139 is activated by the peptides: Adrenocorticotropic hormone (ACTH), α-, and β-melanocyte stimulating hormone (α-MSH, and β-MSH), and the conserved core motif HFRW. Neurochem Int 102: 105-113, 2017）。さらに、Ｃａ２^＋放出事象の上流で、そして同経路において、ホスファチジルイノシトール４，５−二リン酸からのイノシトール三リン酸又はジアシルグリセロールの生成の測定、例えば市販の入手可能なＨＴＲＦアッセイ（Liu et al., Comparison on functional assays for Gq-coupled GPCRs by measuring inositol monophospate-1 and intracellular calcium in 1536-well plate format. Curr Chem Genomics 1: 70-77, 2008）によって、活性化を測定することも可能である。機能活性のさらに別の尺度は、受容体内在化であり、これは、例えばNickolls S.A. et al., Functional selectivity of melanocortin 4 receptor peptide and nonpeptide agonists: evidence for ligand specific conformational states. J Pharm Exper Therapeutics 313:1281-1288, 2005に開示される方法を用いた、調節経路の活性化に由来する。機能活性のさらに別の尺度は、Ｇタンパク質受容体の活性化と関連するヌクレオチドの交換及び交換速度、例えば、Ｇタンパク質αサブユニット上でのＧＤＰ（グアノシン二リン酸）の、ＧＴＰ（グアノシン三リン酸）（guanosine triphosphase）との交換であり、これは、Manning D.R., Measures of efficacy using G proteins as endpoints: differential engagement of G proteins through single receptors. Mol Pharmacol 62:451-452, 2002に開示されるように、グアノシン５’−（γ−［^３５Ｓ］チオ）−三リン酸を用いたラジオアッセイが挙げられる、いくつもの手段によって測定することができる。Ｇｉ、Ｇｑ、Ｇｓ、Ｇｉ２／ｉ３サブファミリに属する１４の異なるＧα種の活性／係合を測定するための、比較的新しいアッセイプラットフォームが考案された。というのもこれは、リガンド結合直後のＧαサブユニット及びＧγサブユニットの離脱を測定するためにＢＲＥＴ（生物発光共鳴エネルギー伝達）ベースのバイオセンサを用いる受容体に関係するからである（Zhao et al., Biased signaling of protease-activated receptors. Front Endocrinol 5:67, 2014、van der Westhuizen et al., Quantification of ligand bias for clinically relevant β2-adrenergic receptor ligands: Implications for drug taxonomy. Molecular Pharm 85:492-509, 2014）。種々の遺伝子ベースのアッセイが、Ｇ結合タンパク質の活性化を測定するために開発されており、例えば、Chen W. et al., A colorimetric assay from measuring activation of Gs- and Gq-coupled signaling pathways. Anal Biochem 226:349-354, 1995；Kent T.C. et al., Development of a generic dual-reporter gene assay for screening G-protein-coupled receptors. Biomol Screening, 5:437-446, 2005；又はKotarsky K. et al., Improved receptor gene assays used to identify ligands acting on orphan seven-transmembrane receptors. Pharmacology & Toxicology 93:249-258, 2003に開示されるものがある。Chen et al.の比色アッセイは、Hruby V.J. et al., Cyclic lactam α-melanocortin analogues of Ac-Nle4-cyclo[Asp5,D-Phe7,Lys10] α-melanocyte-stimulating hormone-(4-10)-NH2 with bulky aromatic amino acids at position 7 shows high antagonist potency and selectivity at specific melanocortin receptors. J Med Chem 38:3454-3461, 1995に開示されるように、メラノコルチン受容体活性化の測定用に適合されてきた。一般に、機能活性は、いかなる方法によって測定されてもよく、Ｇ結合受容体の活性化及び／又はシグナリングを判定する方法が挙げられ、そしてさらに、将来開発又は報告されるかもしれない方法が挙げられる。前述の論文及びその中で開示される方法はそれぞれ、あたかも全部が示されているかの如く、参照によって本明細書に組み込まれる。

【0072】

ペプチドは、確認可能であるならば、そのようなペプチドについてのＥＣ_５０値が約１０００ｎＭよりも大きい場合、「機能的に不活性である」。

【0073】

略語「μｍ」は、尺度の国際単位の記号であり、マイクロメーター又はマイクロメートルとして知られており、そしてまた一般的にミクロンとしても知られている。

【0074】

本明細書中で用いられる用語「粒子」は、その性質及びサイズについて何ら限定されず、あらゆる粒子、マイクロ粒子、球体、ビーズ、顆粒、ペレット、微粒子、又は経口剤型に組み込まれ得るあらゆる構造単位を含み、そして直径が約１０００μｍ未満の粒子が挙げられる、本明細書中で用いられる「マイクロ粒子」を含む。

【0075】

本明細書中で用いられる用語「処置する」及び「処置」は、患者が、指定された疾患又は障害を患っている間に生じる疾患又は障害の重症度を引き下げる作用を意図している。

【0076】

本明細書中で用いられる用語「薬理的に有効な量」（「治療的に有効な量」を含む）は、所望の治療効果又は生物学的効果を誘導するのに十分な、本発明に従って投与されるペプチドの量を意味する。

【0077】

本明細書中で用いられる用語「予防的に有効な」又は「予防的な」は、患者が、指定された疾患又は障害に苦しみ始める前に、医者又は他の臨床医が予防し、阻害し、又は軽減しようと試みる医学的状態にある哺乳動物の苦痛を予防若しくは阻害し、又は苦痛を軽減することとなる、本発明のペプチドを含む化合物の量を意味する。

【0078】

２．０ 製剤及び用途。
２．１ 好ましい実施形態において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、好ましくはＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド、又はそれらの薬学的に許容される塩は、ｐＨ依存性放出形態に製剤化され、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、少なくとも１つの遅延放出ポリマーを含む粒子マトリックス又はマイクロ粒子マトリックス内に配置される。ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、マイクロ粒子マトリックス内で混合されることによって、マイクロ粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物を形成し得る。マイクロ粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物は、水性可溶性カプセル内に配置されてもよく、当該カプセルは、ゼラチンカプセルであってもよい。或いは、マイクロ粒子マトリックス、及びペプチド又はその薬学的に許容される塩の混合物は、タブレットに形成されてもよく、当該タブレットはさらに、シールコーティング及び腸溶コーティングの少なくとも１つを含んでもよい。少なくとも１つの遅延放出ポリマーとして、場合によっては、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dからなる群から選択されるコポリマー等の、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを含む、ｐＨ依存性放出ポリマーが挙げられ得る。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dコポリマーは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在してもよい。

【0079】

別の実施形態において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩である。Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）又はその薬学的に許容される塩を含む製剤において、粒子マトリックス又はマイクロ粒子マトリックスは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含むｐＨ依存性遅延放出ポリマー混合物が挙げられ得る。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、最大粒子サイズが直径１０００μｍ以下、好ましくは直径約６００μｍ以下、さらに好ましくは少なくとも直径約２５０μｍである粒子、例えばマイクロ粒子であってもよい。一態様において、最大粒子サイズは、少なくとも直径約１５００μｍ、直径１４００μｍ、直径１３００μｍ、直径１２００μｍ、直径１１００μｍ、直径１０００μｍ、直径９００μｍ、直径８００μｍ、直径７００μｍ、直径６００μｍ、又は直径５００μｍを含んでもよい。別の態様において、最小粒子は、直径約２．５μｍ、直径５μｍ、直径１０μｍ、直径１５μｍ、直径２０μｍ、直径２５μｍ、直径５０μｍ、直径７５μｍ、直径１００μｍ、直径１２５μｍ、直径１５０μｍ、直径１７５μｍ、直径２００μｍ、直径２２５μｍ、直径２５０μｍ、直径３００μｍ、直径３５０μｍ、又は直径４００μｍ以上であってもよい。さらに別の態様において、最小直径及び最大直径は、前述の群から選択され、そして最小粒径と最大粒径間の差異は、約１００μｍ、１２５μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ、５００μｍ、５５０μｍ、又は６００μｍ以下である。部分的に、最大粒径、最小粒径、及び最小粒径と最大粒径間の差異は、処置されることが所望されるＧＩ管の領域へのメラノコルチン受容体特異的ペプチドの最大送達を得るように最適化することができる。

【0080】

一部の実施形態において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、好ましくはＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、ｐＨ依存性放出形態で製剤化される。或いは、そのようなペプチドは、ＧＩ管、例えば、十二指腸、空腸、回腸、末端回腸、上行結腸、横断結腸、下行結腸、Ｓ状結腸、又は直腸の特定の領域にてペプチドを放出する形態で製剤化される。一態様において、製剤は、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩、及び特定のｐＨ（例えばｐＨ５又はｐＨ７）にて当該ペプチドを放出する腸溶コーティングでコーティングされた不活性キャリアを含有してもよい。一態様において、十二指腸放出又は空腸放出に好ましいｐＨは、ｐＨ４．５〜５．５又はｐＨ５．５〜６．５である。別の態様において、回腸放出、末端回腸放出、又は結腸放出に好ましいｐＨは、ｐＨ５．５〜６．５又はｐＨ６．５〜７．５である。不活性キャリアが利用されるならば、マンニトール、ラクトース、微結晶セルロース、又はデンプンが挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0081】

特定の実施形態及びＩＢＤ徴候、例えばＵＣについて、活性薬物、例えばＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩の放出を、約５．５のｐＨにて開始するが、２時間を超えるが７時間未満の期間にわたって、好ましくは約４〜約７時間の期間にわたって、活性薬物の２０％以下をｐＨ５．５にて放出し、且つ約６．０を超える、又は代わりに約６．５のｐＨにて８０％以上の活性薬物を放出する複合経口薬を利用することが所望される。

【0082】

別の実施形態において、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、粒子マトリックス又はマイクロ粒子マトリックス内に製剤化され、例えば、カプセル内に配置された、遅延放出ポリマー混合物又はｐＨ依存性放出ポリマー混合物であり、当該カプセルはさらに、シールコーティング若しくは腸溶コーティングを、又はこれらの双方を含んでもよい。ｐＨ依存性放出ポリマーは、約６：６：１、又は約６．２：６．２：１、又は約２３．２５：２３：３．７５からなる群から選択されるL100-55対S100対FS30Dの重量比で存在するEudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを含むポリマー混合物を含んでもよい。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dは、最大粒子サイズが直径１０００μｍ以下、好ましくは直径約６００μｍ以下、さらに好ましくは少なくとも直径約２５μｍ、又は少なくとも直径約２５０μｍのマイクロ粒子であってもよい。

【0083】

別の実施形態において、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、タブレットコア、シールコーティング、及び腸溶コーティングを含む微粒子の形態又はタブレット形態で製剤化され、タブレットコアは、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、及びＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩を含む。一例として、限定されないが、タブレットコアの製剤は、糖アルコール、例えば、アラビトール、エリトリトール、グリセロール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、若しくはキシリトール、又は所望されるあらゆる平均粒子サイズ、例えば、約５０μｍ、約１００μｍ、約２５０μｍ、若しくは好ましくは約１，０００μｍ未満の所望されるあらゆる平均粒子サイズの微結晶セルロースを含んでもよい。タブレット又は他の製剤はさらに、薬学的に許容される賦形剤、例えば、ポビドン、ラウリル硫酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、クエン酸塩、例えばクエン酸ナトリウム又はステアリン酸マグネシウムを含んでもよい。そのような賦形剤は、界面活性剤、崩壊剤、潤滑剤、又はバインダーとして機能し得る剤を含む。ゆえに、一般的な薬学的バインダー、例えばポビドン、希釈剤、滑剤、フィラー、例えば微結晶セルロース、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、崩壊剤、例えばクロスカルメロースナトリウム、保存剤、着色剤等が使用されてもよい。

【0084】

２．２ 本明細書中で開示される組成物、製剤、及び方法は、医療用途、及び動物管理又は獣医学的用途の双方に用いることができる。典型的には、当該方法は、ヒトに用いられるが、他の哺乳動物に用いられてもよい。用語「患者」は、哺乳動物の個体を表し、明細書の全体を通して、そして特許請求の範囲において、そのように用いられる。本発明の主要な用途は、ヒト患者に関わるが、本発明は、ラボ、農場、動物園、野生、ペット、スポーツ、又は他の動物に用いられてもよい。臨床徴候及び具体的なユーティリティとして、以下が挙げられる：

【0085】

本発明のペプチド、組成物、製剤、及び方法は、対象において、ＵＣ及びクローン病が挙げられるがこれらに限定されないＩＢＤの処置に関する。別の態様において、炎症性疾患として、ＩＢＤ、例えば、クローン病、ＵＣ、膠原性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎（diversion colitis）、ベーチェット症候群、感染性大腸炎、及び分類不能大腸炎の形態が挙げられる。

【0086】

種々のサイトカインの発現が、ある種の形態のＩＢＤに次ぐ、又は同時に起こる炎症プロセスが挙げられる炎症プロセス中に、増大する。ＴＮＦ−αは、主にマクロファージによって、そしてまた、他のタイプの細胞によって生成される多面発現性サイトカインである。炎症プロセス中に増大する他のサイトカインとして、ＩＬ−１及びＩＬ−６が挙げられる。ＴＮＦ−α等のサイトカインが、多くの例において有益な作用を有する一方、大幅なレベルの増大、又はかなりの期間のレベルの増大により、病理作用が及び得る。

【0087】

一実施形態において、本発明は、ＩＢＤに次ぐ炎症誘発性サイトカインの産生及び発現を減少させることを含む、炎症誘発性サイトカインの産生及び発現を減少させるために、本発明のペプチドの１つ以上を用いる方法に関する。限定されないが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、及びＩＬ−６の１つ以上が挙げられる炎症誘発性サイトカインの産生及び発現の減少は、好ましくは、ＩＢＤ等の疾患の部位での組成物からのペプチドの放出後の短い期間内で起こる。

【0088】

関連する実施形態において、本発明は、抗炎症性サイトカインの産生及び発現を増大させるために、本発明のペプチドの１つ以上を用いる方法に関する。限定されないが、ＩＬ−１０が挙げられる抗炎症性サイトカインの産生及び発現の増大は、好ましくは、ＩＢＤ等の疾患の部位での組成物からペプチドの放出後の短い期間内で起こる。

【0089】

一般に、患者に投与されるＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩の実際の量は、投与の様式、用いられる製剤、及び所望される応答によって決まるかなり広い範囲の間で変動することとなる。処置用の投薬は、所望される治療効果をもたらすのに十分な量の、前述の手段又は当該技術において知られている他のあらゆる手段のいずれかによる投与である。ゆえに、治療的に有効な量として、患者において、ＵＣ及びクローン病が挙げられるＩＢＤを治療的に緩和するのに、又はＩＢＤの発症若しくは再発を予防し、若しくは遅延させるのに、又はＵＣ及びクローン病が挙げられるＩＢＤの増悪の再発を予防若しくは制限する際に、予防的に効果的である、若しくは予防的であるのに十分な、本発明のペプチド又は医薬組成物の量が挙げられる。

【0090】

一般に、本発明の実行に利用されるＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、高度に活性である。例えば、当該環状ペプチドは、選択された特定のペプチド、送達剤型、所望される治療応答、及び当業者に知られている他の要因に応じて、ＧＩ管の管腔、例えば結腸又は大腸の管腔に、好ましくはＩＢＤ又は他の疾患の部位の近位に、約０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、５０、１００、５００、１０００、又は５０００μｇ／体重ｋｇにて投与されてもよい。

【0091】

３．０ 特定の徴候用の併用療法。
本発明のペプチド、組成物、及び方法は、ＩＢＤ、ＵＣ、若しくはクローン病、又はＭＣ１ｒ媒介性若しくはＭＣ１ｒ応答性である、ＧＩ管のあらゆる疾患、徴候、症状、若しくは症候群の、１つ以上の他の医薬的に活性な化合物と組み合わせた投与による処置に用いられてもよい。そのような組合せ投与は、本発明のペプチド、及び１つ以上の他の医薬的に活性な化合物の双方を含む単一の剤型によってもよく、そのような単一の剤型として、タブレット又はカプセルが挙げられる。或いは、組合せ投与は、２つの異なる剤型の投与によってもよく、一方の剤型は、本発明のペプチドを含有し、そして他方の剤型は、別の医薬的に活性な化合物を含む。この例において、剤型は、同じであっても異なってもよい。用語「共投与する」は、併用療法において少なくとも２つの化合物がそれぞれ、生物活性のそれぞれの期間又は作用が重なる時間枠の間に投与されることを示す。ゆえに、当該用語は、化合物の連続投与及び同時投与を含み、一化合物が、本発明のペプチドの１つ以上である。複数の化合物が共投与されるならば、２つ以上の化合物の投与経路は、同じである必要はない。併用療法を限定する意味はないが、以下は、使用されてもよい特定の併用療法を例示する。

【0092】

ＧＩ管の炎症関連疾患、徴候、症状、及び症候群の処置のために、本発明のペプチドが、１つ以上の抗炎症剤との共投与によることを含む併用療法に用いられてもよい。抗炎症剤の一クラスが、グルココルチコイドであり、以下に限定されないが、コルチゾンが挙げられ、酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、プレドニゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、及びアルドステロンが挙げられる。抗炎症剤の別のクラスが、アミノサリチラートであり、以下に限定されないが、５−アミノサリチル酸、例えば、メサラミン、バルサラジド、及びオルサラジンが挙げられる。

【0093】

共投与によるものを含む併用療法に用いられ得る他の抗炎症剤として、アスピリン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、イブプロフェン及びナプロキセン（naproxin））、ＴＮＦ−αインヒビタ（例えば、テニダプ及びラパマイシン、又はそれらの誘導体）、若しくはＴＮＦ−αアンタゴニスト（例えば、インフリキシマブ、ＯＲ１３８４）、シクロオキシゲナーゼインヒビタ（すなわち、ＣＯＸ−１及び／又はＣＯＸ−２インヒビタ）、ＣＴＬＡ４−ｌｇアゴニスト／アンタゴニスト、ＣＤ４０リガンドアンタゴニスト、ＩＭＰＤＨインヒビタ、例えばミコフェノレート、インテグリンアンタゴニスト、アルファ−４ベータ−７インテグリンアンタゴニスト、細胞接着インヒビタ、インターフェロンガンマアンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１、プロスタグランジン合成インヒビタ、ブデソニド、クロファジミン、ｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼインヒビタ、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）インヒビタ、ＩＫＫインヒビタ、過敏性大腸症候群の処置用の他の療法（例えば、米国特許第６，１８４，２３１号に開示されるもの）、又は他のＮＦ−κＢインヒビタ、例えば、コルチコステロイド、カルフォスチン、ＣＳＡＩＤ、４−置換イミダゾ［１，２−Ａ］キノキサリン（米国特許第４，２００，７５０号に開示される）；インターロイキン−１０、サリチラート、一酸化窒素、及び他の免疫抑制剤；並びに核転座インヒビタ、例えばデオキシスペルグアリンが挙げられる。共投与されてもよい免疫抑制薬として、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、及びメトトレキサートが挙げられる。また、共投与は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファインヒビタ、例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、及びゴリムマブと共に使用されてもよい。用いられてもよい他の生物学的療法は、ナタリズマブ、ベドリズマブ、及びウステキヌマブを含む。共投与は、プロトンポンプインヒビタ（例えば、オメプラゾール、パントプラゾール、エゾメプラゾール、ランソプラゾール、ラベプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾールナトリウム、オメプラゾールマグネシウム、パントプラゾールナトリウム、ナプロキセン／エゾメプラゾール、エゾメプラゾールマグネシウム、エゾメプラゾールナトリウム、又はオメプラゾール／重炭酸イオン）と共に、又は小腸内細菌過増殖を制御する抗生物質（例えば、リファキシミン又はネオマイシン）と共に使用されてもよい。

【0094】

４．０ 多微粒子送達製剤を製造する方法。
一態様において、ＭＣ１ｒ特異的ペプチドが挙げられる、本発明に使用されるペプチドは、ＧＩ管の管腔への、好ましくはＧＩ管のより下方の領域の管腔への、さらに好ましくは、ＧＩ管におけるＩＢＤ等の疾患のあらゆる位置の前（直前が挙げられる）への、未変化のペプチドの経口送達用に製剤化される。胃、及びＧＩ管の上方の領域、例えば小腸を回避することで、ＧＩ管の下方の領域に薬物を送達することが、多くの薬物分子、特に、タンパク質又はペプチドを含むタンパク質薬物に所望される。口及び胃は、アミノ酸鎖を壊すことができる種々の酵素を含む。小腸は、ペプチドが挙げられるアミノ酸鎖を、ジペプチド及び単一のアミノ酸残基が挙げられる、吸収且つ消化され得る小さな単位に小さくすることができる種々のペプチダーゼを生成する。ゆえに、結腸が挙げられる下方ＧＩ管の管腔への未変化のペプチドの送達のために、ペプチド分解なしで胃、及び消化管の上方の領域を通過する方法及び製剤が使用されなければならない。また、ペプチドが、ｐＨ又は酵素活性に起因して、胃の酸性環境において安定しないならば、このアプローチが用いられてもよい。

【0095】

プロドラッグの使用、ｐＨ感応性ポリマーによるコーティング、徐放性剤型の設計、又は生物分解性ポリマー、例えば結腸細菌によって排他的に分解するアゾポリマー及び多糖の利用が挙げられる下方ＧＩ管の標的化を達成するのに概念的に利用されてもよいいくつかのアプローチがある。各系は、利点及び不利点がある。

【0096】

結腸送達用の単一ユニットの剤型は、結腸内での局所的治療作用の喪失の原因となり得る、高い患者間実行可能性（viability）及び患者内実行可能性、並びに不十分な再現性に起因して、製剤の早期崩壊の不利益を被り得る。多微粒子送達系は、より良好な生体利用性、局所的炎症のリスクの引下げ、及び予測可能な胃排出等の利益をもたらす。

【0097】

ゆえに、一態様において、本発明は、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、例えばＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩を含有する微粒子剤型を提供し、当該微粒子剤型は、胃の酸性環境内で、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を保護する一方、小腸、又は上方のＧＩ管内で、プロテアーゼ分解を妨げ、又は制限するが、下方ＧＩ管、例えば大腸又は結腸内で、未変化のメラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩を放出する。この手段によって、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、大腸若しくは結腸が挙げられる下方ＧＩ管の管腔に、又は大腸若しくは結腸が挙げられる下方ＧＩ管の管腔の近位に存在する、１つ以上のＭＣ受容体、好ましくはＭＣ１ｒに結合して、これをアゴナイズすることによって、治療応答をもたらす。

【0098】

このアプローチは、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを用いる遅延放出（腸溶）マイクロ粒子を利用することによって、使用されてもよい。利用されてもよいｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーの一形態が、Evonik Industriesによって製造されているEudragit（登録商標）ポリマーであるが、他の様々なｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマー、及び他の様々なｐＨ感応性ポリマー又はコポリマーが、本発明に使用されてもよいことが理解される。

【0099】

メラノコルチン受容体特異的ペプチドは、重量ベースで、約０．１％〜約３０％のｐＨ感応性遅延放出粒子を構成してもよい。好ましくは、メラノコルチン受容体特異的ペプチドは、重量ベースで、約１％〜約１０％、又は約２％〜約５％のｐＨ感応性遅延放出粒子を構成する。

【0100】

粒子又はマイクロ粒子は、硬ゼラチンカプセル等のカプセル中に充填されてもよいし、タブレット、ビーズ、顆粒、粉末、カプレット、トローチ、サシェ、カシェ剤、パウチ、ガム、スプリンクル、及び懸濁液等に製剤化されてもよい。一態様において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、好ましくはＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩を含む粒子、及びｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーが、カプセル又はタブレット等の固体形態に製剤化されるならば、カプセル又はタブレットは、シールコーティング又は腸溶コーティングでコーティングされても、双方でコーティングされてもよい。一般に、タブレット、ビーズ、顆粒、カプレットが挙げられる、薬物送達のあらゆる固体形態は、シールコーティング又は腸溶コーティングでコーティングされても、双方でコーティングされてもよい。腸溶コーティングは、ｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーを含んでもよい。

【0101】

一態様において、本発明は、１０％未満の活性薬物、例えばメラノコルチン受容体特異的ペプチド、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド、又はその薬学的に許容される塩が、約１〜約３の酸性ｐＨで２時間の期間に放出され、追加の１０％未満の活性薬物が、約４．５〜５．５の酸性ｐＨで１時間の期間に放出され、そして８０％以上の活性薬物が、約６を超えるｐＨにて４〜７時間の期間に放出される製剤、剤型、及び方法を提供する。

【0102】

本発明において、特に有用なのが、ｐＨ依存性ポリメタクリレート、例えば、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）L100、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dである。これらのポリメタクリレートは、以下を含む：

【0103】

Eudragit（登録商標）L100-55：固体物質。当該製品は、固体物質で０．７％ラウリル硫酸ナトリウムPh. Eur./NF及び２．３％ポリソルベート８０ Ph. Eur./NFを含有する。Eudragit（登録商標）L100-55は、メタクリル酸及びアクリル酸エチルに基づくアニオンコポリマーを含有する。遊離カルボキシル基の、エステル基に対する比率は、おおよそ１：１である。モノマーは、コポリマー鎖に沿ってランダムに分配されている。ＳＥＣ方法に基づいて、Eudragit（登録商標）L100-55の重量平均モル質量（Ｍｗ）は、おおよそ３２０，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0104】

Eudragit（登録商標）L100：固体物質。当該製品は、固体物質で０．３％ラウリル硫酸ナトリウムPh. Eur./NFを含有する。Eudragit（登録商標）L100は、メタクリル酸及びメタクリル酸メチルに基づくアニオンコポリマーである。遊離カルボキシル基の、エステル基に対する比率は、Eudragit（登録商標）L100において、おおよそ１：１である。ＳＥＣ方法に基づいて、Eudragit（登録商標）L100の重量平均モル質量（Ｍｗ）は、おおよそ１２５，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0105】

Eudragit（登録商標）S100：固体物質。当該製品は、固体物質で０．３％ラウリル硫酸ナトリウムPh. Eur./NFを含有する。Eudragit（登録商標）S100は、メタクリル酸及びメタクリル酸メチルに基づくアニオンコポリマーである。遊離カルボキシル基の、エステル基に対する比率は、Eudragit（登録商標）S100において、おおよそ１：２である。ＳＥＣ方法に基づいて、Eudragit（登録商標）S100の重量平均モル質量（Ｍｗ）は、おおよそ１２５，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0106】

Eudragit（登録商標）FS30D：３０％乾燥物質入り水性分散系として供給される。水は、”Purified Water in bulk” Ph. Eur.の仕様に従って、そしてConductivity of ”Purified Water” USPについての仕様に従って、試験される。分散系は、固体物質で０．３％ラウリル硫酸ナトリウムPh. Eur./NF及び１．２％ポリソルベート８０ Ph. Eur./NFを、乳化剤として含有する。Eudragit（登録商標）FS30Dは、アクリル酸メチル、メタクリル酸メチル、及びメタクリル酸に基づくアニオンコポリマーの水性分散系である。遊離カルボキシル基の、エステル基に対する比率は、おおよそ１：１０である。モノマーは、コポリマー鎖に沿ってランダムに分配されている。ＳＥＣ方法に基づいて、Eudragit（登録商標）FS30Dの重量平均モル質量（Ｍｗ）は、おおよそ２８０，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0107】

Eudragit（登録商標）L100、Eudragit（登録商標）L100-55、又はEudragit（登録商標）S100の１ｇが、７ｇのメタノール、エタノール中、水性イソプロピルアルコール中、アセトン（おおよそ３％の水を含有する）中、そして１Ｎ水酸化ナトリウム中に溶解して、澄明〜濁った溶液を与える。これらの特定のEudragit（登録商標）調製物は、酢酸エチル、塩化メチレン、石油エーテル、及び水中に実質的に不溶性である。Eudragit（登録商標）L100-55は、ｐＨ５．５を超えて溶解する；Eudragit（登録商標）L100は、ｐＨ６．０を超えて溶解する；Eudragit（登録商標）S100は、ｐＨ７．０を超えて溶解する；そしてEudragit（登録商標）FS30Dは、ｐＨ７．０を超えて溶解する。

【0108】

種々の技術が、薬物カプセル化に利用可能である。一態様において、固体分散系を介したマイクロ粒子形成に続く微粉化が利用されてもよく、これは単純であり、高いカプセル化効率及び高い収率を実現する。

【0109】

薬物を製造するために、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド、又はそれらの薬学的に許容される塩は、適切な溶媒、例えば、アセトン、メタノール、若しくは水、又は前述の一部若しくは全部の組合せ中に分散されてもよい。Eudragit（登録商標）コポリマーは、メタノール又はアセトン中に溶解されてもよい。ペプチドを含む薬物分散系は、コポリマー溶液に、撹拌されながら加えられる。次に、生じた混合液は、真空乾燥されて、粉砕されて、適切なスクリーンを通して篩にかけられる。一態様において、６０メッシュスクリーン上に３０メッシュスクリーンが使用され、６０メッシュスクリーン上に収集された生じた粒子サイズは、直径２５０〜６００μｍである。別の態様において、６０メッシュスクリーン上に収集された粒子は、０．１Ｍ塩酸溶液ｐＨ１．２で懸濁又はリンスされて、表面ＭＣ１ｒペプチド薬物分子を除去してから、乾燥させた。生じたマイクロ粒子は、カプセル化されてもよいし、タブレット化されてもよい。また、充填されたカプセル又はタブレットは、上方消化管内で放出される薬物の量をさらに減らすことによって、より多くの薬物が結腸に達することができるように、腸溶コーティングされる。

【0110】

或いは、メタノール、メタノール−水（例えば２：１の混合液）、及び水が、メラノコルチン受容体特異的ペプチド又はその薬学的に許容される塩用の溶媒／分散剤として使用されてもよい。或いは、アセトン又はアセトン−水が、溶媒／分散剤として使用されてもよい。一態様において、水が使用されるならば、コポリマーを溶解させるのに用いられるアセトンの量の約３％以下となるような量で用いられてもよい。

【0111】

本発明に使用される製剤は、一実施形態において、可溶性であり、且つより低いｐＨにて関連ペプチドを放出するEudragit（登録商標）ポリマー、例えばL100-55を、可溶性であり、且つより高いｐＨにて関連ペプチドを放出するポリマー、例えばEudragit（登録商標）S100若しくはFS30D、又は双方と組み合わせて、組み込んでもよい。この混合物は、より広いｐＨ範囲にわたる放出を確実にする。より広いｐＨ範囲での放出は、単一の特定のｐＨでの結腸放出用の先行技術の製剤よりも優れている。なぜなら、一部の患者において疾患が存在し得る、ＧＩ管内のより上方での部分的な放出を可能にするため、そしてまた、健康な対象においてみられるよりもＧＩ管のｐＨが低い（より低いｐＨ値は、ＩＢＤ疾患状態に起因する）患者のＧＩ管の一部において、放出を実現するためである。所望されるならば、特定のＩＢＤ疾患状態での下方ＧＩ管のｐＨの場合のように、様々なEudragit（登録商標）ポリマー（例えば、Eudragit（登録商標）L100-55）が部分的に中和されてもよく、且つ／或いは他の添加物、例えば、アルギン酸、ソルビン酸、若しくはコハク酸、又はそれらの塩が加えられて、４．５〜５．５等のより低いｐＨでの薬物の放出を増大させてもよい。メラノコルチン受容体特異的ペプチド（当該メラノコルチン受容体特異的ペプチドは、全身吸収を通して治療利益を提供するのではなく、ＧＩ管の管腔表面上に、又は表面内に存在する受容体に結合する）と組み合わされる広範囲のｐＨ放出プロファイルの利用は、多種多様な患者の処置に適した治療剤を提供する。ゆえに、メラノコルチン受容体特異的ペプチドの全身吸収がほとんど、又は全くないので、そして、起こり得るあらゆる全身吸収からの治療利益がほとんど、又は全くないので、製剤は、好ましくは、疾患が存在する、又は存在し得るＧＩ管の範囲を通して利益を提供することが、そしてＩＢＤの寛解又は治療をもたらすような範囲内で十分な投薬を実現することが意図される。特に、メラノコルチン受容体特異的ペプチドの全身吸収がほとんど、又は全くないので、消化管の管腔に送達され得るメラノコルチン受容体特異的ペプチドの量を制限する全身毒性も全身性副作用もほとんど、又は全くないことに注目することが重要である。

【0112】

一部の実施形態において、遅延放出（腸溶）粒子又はマイクロ粒子として製剤化された様々なｐＨ感応性メタクリル酸メチル／メタクリル酸コポリマーの組合せが使用される。一部の実施形態において、粒子又はマイクロ粒子は、Eudragit（登録商標）L100-55及びEudragit（登録商標）S100を、約１：１、又は約２：３、又は約１：２、又は約３：２、又は約２：１のL100-55対S-100の重量比で含む。他の実施形態において、粒子又はマイクロ粒子は、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）L100、及びEudragit（登録商標）S100を、約１：１：１、又は約４：３：３、又は約３：４：３、又は約１：１：１、又は約１：２：１、又は約１：２：２、又は約２：１：１、又は約２：２：１、又は約２：１：２のL100-55対L100対S-100の重量比で含む。他の実施形態において、粒子又はマイクロ粒子は、Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S100、及びEudragit（登録商標）FS30Dを、約６：６：１、又は約２３．３５：２３：３．７５、又は約５：５：１、又は約４：４：１、又は約６：５：１、又は約５：６：１、又は約３：３：１、又は約６：５：２、又は約５：６：２のL100-55対S100対FS30Dの重量比で含む。特に好ましいのは、約６：６：１又は約２３．２５：２３：３．７５のL100-55対S100対FS30Dの重量比である。

【0113】

メラノコルチン受容体特異的ペプチドの量は、ｐＨ感応性遅延放出ポリマーの重量ベースで、約０．１％〜約３０％を構成してもよい。好ましくは、メラノコルチン受容体特異的ペプチドは、重量ベースで、約１％〜約１０％、又は約２％〜約５％のｐＨ感応性遅延放出ポリマーを構成する。

【0114】

一般に、ｐＨ依存性放出ポリマーマトリックス内に配置されたメラノコルチン受容体特異的ペプチドの固体形態は、本明細書中に記載される方法によって、又は、以下に限定されないが、加熱、冷却、冷凍乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥、急速溶媒蒸発、溶媒再結晶、マイクロ波誘起析出、超音波処理誘起析出が挙げられる技術によって調製されてもよい。生じた固体形態の粒子サイズは、例えば、約２５μｍ以上の最小寸法から約１０００μｍ直径以下の最大寸法まで変動し得、例えば、摩擦、ミリング、微粒子化、若しくは超音波処理（適切なスクリーンを通した篩分けがあってもなくてもよい）、又は当該技術において知られている他の方法が挙げられる粒子サイズ引下げ技術によって、指定の最小から指定の最大までの粒子サイズの所望の範囲を選択するように制御することができる。一態様において、粒子サイズは、直径約１０００μｍ未満、又は直径約６００μｍ未満、且つ直径約２５μｍ超、又は直径約２５０μｍ超である。

【0115】

５．０ 腸溶コーティング。
一態様において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド、又はそれらの薬学的に許容される塩は、経口送達用に、例えばカプセル形態又はタブレット形態に製剤化される。ペプチドは、好ましくは、タブレット又はカプセルが胃を通過するまで、そして場合によっては、小腸の全部又は一部をさらに通過するまで、ペプチドが放出されないように、ペプチドが、腸溶保護剤内に入れられたカプセル形態又はタブレット形態であるように、製剤化されてもよい。本出願の文脈において、用語腸溶コーティング又は腸溶材料は、本質的には未変化で胃を通過することとなるが、腸管、好ましくは、以下に限定されないが、大腸内で迅速に分解して活性ペプチド原薬を放出することとなるコーティング又は材料を指すことが理解されよう。用いられてもよい一腸溶コーティング溶液は、酢酸フタル酸セルロース、そして場合によっては、他の成分、例えば、水酸化アンモニウム、トリアセチン、エチルアルコール、メチレンブルー、及び精製水を含む。酢酸フタル酸セルロースは、個々の剤型、例えばタブレット及びカプセルを腸溶コーティングするのに用いることができるポリマーであり、約５．５〜約６．０未満のｐＨにて水中に可溶性でない。酢酸フタル酸セルロースが挙げられる腸溶コーティングは、胃の酸性環境からの保護を実現するが、十二指腸（約６〜６．５のｐＨ）の環境内で溶解し始め、そして剤型が回腸（約７〜８のｐＨ）に達する時までには、完全に溶解する。酢酸フタル酸セルロースに加えて、他の腸溶コーティング材料が知られており、本発明に用いられてもよく、限定されないが、コハク酸ヒドロキシプロピルメチルエチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸フタル酸ビニル、及びメタクリル酸−メタクリル酸メチルコポリマーが挙げられる。使用される腸溶コーティングは、主に胃の外側の部位にて剤型の溶解を促進し、そして、腸溶コーティングが、おおよそ少なくとも６．０のｐＨにて、より好ましくは約６．０〜約８．０のｐＨにて溶解するように選択されてもよい。好ましい一態様において、腸溶コーティングは、回腸付近で溶解して分解する。

【0116】

一部の実施形態において、メラノコルチン受容体特異的ペプチド、ＭＣ１ｒ特異的環状ペプチド、又はそれらの薬学的に許容される塩は、外側がコーティングされた微粒子充填カプセル又はタブレット形態に製剤化され、当該コーティングは、場合によっては、ｐＨ≦６．０等の低いｐＨにて安定しているが、約６．０よりも大きいｐＨにて溶解するポリマーを含む、又はこれからなる。外側のコーティングはさらに、胃内が挙げられる酸性条件で安定するが、結腸の管腔のｐＨ等のより高いｐＨにて溶解し得るポリマーを含んでもよいし、これからなってもよい。また、コーティングの溶解の速度が、所望される放出パラメータに応じて変動し得ることが有利であり、且つ意図される。

【0117】

外側のコーティングは、一例として、限定されないが、指定されたｐＨ範囲に対して応答性であり、且つ当該ｐＨ範囲内で可溶性である、ポリ（メタ）アクリラート等のポリマーが挙げられるポリマーからなってもよいし、これを含んでもよい。一態様において、外側のコーティングは、アニオン基、又はアニオン基に変換され得る基を有する、１つ以上のポリマー又はコポリマーからなる、又はこれを含む。別の態様において、外側のコーティングは、アニオン基、又はアニオン基に変換され得る基を有する１つ以上のポリマー又はコポリマーと一緒に、カチオン基、又はカチオン基に変換され得る基を有する１つ以上の（メタ）アクリラートコポリマーからなる、又はこれを含む。そのような特定のポリマー、コポリマー、及び（メタ）アクリラートコポリマーが、米国特許第９，２３７，７６０号（あたかも全部が示されているかの如く、参照によって本明細書に組み込まれる）に教示されている。ゆえに、腸溶コーティングは、アクリラートポリマー、例えばEudragit（登録商標）S100であってもEudragit（登録商標）L100であってもよい。Eudragit（登録商標）S100は、約ｐＨ７．０にて溶解する一方、Eudragit（登録商標）L100は、約ｐＨ６．０にて溶解する。前述の腸溶コーティングのいずれも、前述の製剤に使用することができ、限定されないが、Eudragit（登録商標）多微粒子製剤を含む製剤が挙げられる。

【0118】

一部の実施形態において、カプセル又はタブレットが挙げられる医薬組成物はさらに、シーリングを含んでもよいし、シールコーティングを含んでもよい。このコーティングは、タブレット中への水分浸透を防止し得る。ゆえに、シールコーティングは、水分に対する、薬学的に許容されるバリアを提供するポリマー又は他の材料を含み得る。そのようなシールコーティングとして、場合によっては所望の色素を有する、ポリビニルアルコール、並びにポリマー及び可塑剤の種々の組合せが挙げられ得る。

【0119】

腸溶コーティングとして用いることができる他のｐＨ依存性ポリマーとして、先で開示されたものに加えて、以下に限定されないが、腸溶セルロース誘導体、例えば、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース；天然樹脂、例えばセラック及びゼイン；腸溶アセタート誘導体、例えばポリ酢酸フタル酸ビニル、酢酸フタル酸セルロース、酢酸アセトアルデヒドジメチルセルロース；並びに種々のポリメタクリレートベースのポリマーが挙げられる。また、ｐＨ依存性腸溶コーティングは、前述のもののいずれかを含む、２つ以上のｐＨ依存性ポリマーの組合せを含んでもよい。

【0120】

６．０ 本発明に利用されるペプチド。
一態様において、本発明は、環状部分内にＨｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇに由来するコア配列を含有するが、コア部分内にＴｒｐを含まない環状ペプチドを利用し、Ｔｒｐ、又はその誘導体若しくは模擬物（以下に限定されないが、Ｎａｌ １又はＮａｌ ２が挙げられる、少なくとも１つのアリール又はヘテロアリールを含む側鎖を有するアミノ酸残基と定義される）は、Ｃ末端側の環状部分の直ぐ外側のアミノ酸残基である。一態様において、配列Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ^６−Ｔｒｐ（配列番号１）が使用され、Ｘａａ^６はアミノ酸であって、その側鎖が、ペプチドの別のアミノ酸の側鎖とともに環状の架橋を形成するアミノ酸である。

【0121】

Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ^６−Ｔｒｐ（配列番号１）に由来するコア配列は、いくつかの置換を含んでもよい。Ｈｉｓ位置は、Ｈｉｓであってもよいし、置換された、又は非置換のＰｒｏであってもよいし、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコール、エーテル、スルフィド、スルホン、スルホキシド（sufoxide）、カルボニル（carbomyl）、又はカルボキシルを含む側鎖を有するアミノ酸であってもよい。置換されたＰｒｏとして、以下に限定されないが、アミノ酸、例えば、Ｈｙｐ、Ｈｙｐ（Ｂｚｌ）、Ｐｒｏ（４Ｒ−Ｂｚｌ）、又はＰｒｏ（４Ｒ−ＮＨ_２）が挙げられる。Ｐｈｅ位置は、Ｐｈｅであってもよいが、最も典型的には、置換された、若しくは非置換のＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｎａｌ １、Ｄ−Ｎａｌ ２、又は、ピリジルを含む側鎖を有するアミノ酸である。Ａｒｇ位置は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、又はＤａｐであっても、置換された、又は非置換のＰｒｏであっても、Ｃｉｔであってもよいし、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、グアニジン、尿素、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はエーテルを含む側鎖を有するアミノ酸であってもよい。Ｘａａ^６は、第一級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸、例えば、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、Ｄａｐ、カルボキシル基を有するアミノ酸、例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、若しくはｈＧｌｕ、又はジスルフィド基を有するアミノ酸、例えば、Ｃｙｓ若しくはＰｅｎであってもよく、全て、環状の架橋の性質に従う。Ｔｒｐ位置は、少なくとも１つの置換された、又は非置換のアリール又はヘテロアリール、例えば、Ｔｒｐ、Ｎａｌ １、又はＮａｌ ２を含む側鎖を有するアミノ酸であってもよい。

【0122】

一態様において、本発明は、式（Ｉ）の環状ペプチド：

【化3】

（その鏡像異性体、立体異性体、若しくはジアステレオ異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容される塩が全て挙げられる）を含む製剤を利用し、
式中：
Ｒ_１は、−Ｈ、−ＮＨ−Ｒ_１０、−ＮＨ−Ｒ_１０−Ｒ_１１、又は−ＮＨ−Ｒ_１１であり；
Ｒ_２は、−ＣＨ−又は−Ｎ−であり；
Ｒ_３は−Ｈ、−ＣＨ_３、又は−ＣＨ_２−であり、−ＣＨ_２−であるならば、Ｒ_４と共に、一般的な構造の環

【化4】

を形成し；
Ｒ_４は、−Ｈ、−（ＣＨ_２）_ｚ−であり、Ｒ_３が−ＣＨ_２−であるならば、そして−（ＣＨ_２）_ｚ−であるならば、Ｒ_３と共に環を形成し、式中、−（ＣＨ_２）_ｚ−中のあらゆるＨは、場合によっては、Ｒ_１２で置換されており、又はＲ_４は、−（ＣＨ_２）_ｗ−Ｒ_１３−（ＣＨ_２）_ｗ−Ｒ_１４であり、式中、いずれかの（ＣＨ_２）_ｗ中のあらゆるＨは、場合によっては、−（ＣＨ_２）_ｗ−ＣＨ_３で置換されており；
Ｒ_５は、−（ＣＨ_２）_ｗ−Ｒ_１５であり；
Ｒ_６は、−Ｈ、−ＣＨ_３、又は−ＣＨ_２−であり、−ＣＨ_２−であるならば、Ｒ_７と共に、一般的な構造の環

【化5】

を形成し；
Ｒ_７は、−（ＣＨ_２）_ｚ−であり、Ｒ_６が−ＣＨ_２−であるならば、そして−（ＣＨ_２）_ｚ−であるならば、Ｒ_６と共に環を形成し、又はＲ_７が−（ＣＨ_２）_ｗ−Ｒ_１６であり；
Ｒ_８は、−Ｒ_１７−Ｒ_１８又は−Ｒ_１８であり；
Ｒ_９は、
−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−、
−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｙ−、
−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｚ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｙ−、
−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｙ−、
−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−、
−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｚ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−、又は
−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ_２）_ｙ−であり；
Ｒ_１０は、１〜３個のアミノ酸残基であり；
Ｒ_１１は、Ｈ、又はＣ_１〜Ｃ_１７アシル基であり、式中、Ｃ_１〜Ｃ_１７は、直鎖状又は分枝状のアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、又はアルキルアリールを含み；
Ｒ_１２は、場合によっては存在し、そして存在するならば、それぞれの例において、独立して、−Ｒ_１３−（ＣＨ_２）_ｗ−Ｒ_１４であり；
Ｒ_１３は、場合によっては存在し、そして存在するならば、それぞれの例において、独立して、
−Ｏ−、
−Ｓ−、
−ＮＨ−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２−、
−Ｓ（＝Ｏ）−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２−ＮＨ−、
−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、
−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、
−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、又は
−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｒ_１４は、それぞれの例において、独立して、
−Ｈ、−ＣＨ_３、−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｚ−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−ＮＨ−ＣＨ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−ＮＨ−ＣＨ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−Ｏ（Ｒ_１９ａ）、−（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−Ｓ（＝Ｏ）_２（Ｒ_１９ａ）、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（Ｒ_１９ａ）、

【化6】

であり、
式中、Ｒ_１４中のあらゆる環は、場合によっては、１つ以上の環置換基で置換されており、そして１つ以上の置換基が存在する場合、同じであり、又は異なっており、そして独立して、ヒドロキシル、ハロゲン、スルホンアミド、アルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリール、Ｃ−（＝Ｏ）ＯＨ、又はＣ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）であり；
Ｒ_１５は、フェニル、ナフチル、又はピリジルであり、場合によっては、ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルコキシ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ニトロ、ニトリル、スルホンアミド、アミノ、一置換アミノ、二置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、及びアルコキシ−カルボニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されており；
Ｒ_１６は、−Ｈ、−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｚ−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−ＮＨ−ＣＨ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−ＮＨ−ＣＨ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−Ｏ（Ｒ_１９ａ）、直鎖状又は分枝状のＣ_１〜Ｃ_１７アルキル鎖、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−Ｓ（＝Ｏ）_２（Ｒ_１９ａ）、

【化7】

であり、
式中、あらゆる環は、場合によっては、１つ以上の任意選択の環置換基で置換されており、そして１つ以上の置換基が存在する場合、同じであり、又は異なっており、そして独立して、ヒドロキシル、ハロゲン、スルホンアミド、アルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、アラルキル、Ｏ−アラルキル、又は−Ｏ−アリールであり；
Ｒ_１７は、１〜３個のアミノ酸残基であり；
Ｒ_１８は、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（Ｒ_１９ｂ）、−Ｎ（Ｒ_１９ａ）（ＣＨ_２）_ｗ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）シクロアルキル、又は−Ｏ−（ＣＨ_２）_ｗ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）シクロアルキルであり；
Ｒ_１９ａ及びＲ_１９ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ_１〜Ｃ_４の直鎖状若しくは分枝状のアルキル鎖であり；
ｗは、それぞれの例において、独立して、０〜５であり；
ｘは、１〜５であり；
ｙは、１〜５であり；そして
ｚは、それぞれの例において、独立して、１〜５である。

【0123】

式（Ｉ）の環状ペプチドにおいて、Ｒ_１７は、式

【化8】

の単一のアミノ酸残基であってもよく、
式中、Ｒ_２０は、

【化9】

であり、場合によっては、１つ以上の環置換基で置換されており、そして１つ以上が存在する場合、同じであり、又は異なっており、そして独立して、ヒドロキシル、ハロゲン、スルホンアミド、アルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、又は−Ｏ−アリールである。

【0124】

別の態様において、本発明は、式（ＩＩ）：

【化10】

の環状ペプチドを利用し、
式中、可変部分は、式（Ｉ）に指定された通りである。

【0125】

別の態様において、本発明は、式（ＩＩＩ）：

【化11】

の環状ペプチドを利用し、
式中、Ｒ_２１ａ、Ｒ_２１ｂ、及びＲ_２１ｃは、それぞれの例において、独立して、水素、ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルコキシ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ニトロ、ニトリル、スルホンアミド、アミノ、一置換アミノ、二置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、又はアルコキシ−カルボニルであり、そして他の全ての可変部分は、式（Ｉ）に指定された通りである。

【0126】

別の態様において、本発明は、式（ＩＶ）：

【化12】

の環状ペプチドを利用し、
式中、Ｒ_２２は、Ｈ、又はＣ_１〜Ｃ_９の直鎖状若しくは分枝状のアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、若しくはアルキルアリールであり；
Ｒ_２１ａ、Ｒ_２１ｂ、及びＲ_２１ｃは、式（ＩＩＩ）について定義された通りであり；そして
他の全ての可変部分は、式（Ｉ）に指定された通りである。

【0127】

別の態様において、本発明は、式（Ｖ）：

【化13】

の環状ペプチドを利用し、
式中、可変部分は、式（ＩＶ）の環状ペプチドに指定された通りである。

【0128】

別の態様において、本発明は、式（ＶＩ）：

【化14】

の環状ペプチドを利用し、
式中、可変部分は、式（ＩＩＩ）の環状ペプチドに指定された通りである。

【0129】

式（Ｉ）の環状ペプチドにおいて、Ｒ_９は、−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−であってもよく、式中、ｘは４であり、且つｙは３であり、ｘは３であり、且つｙは２であり、又はｘは２であり、且つｙは１である。或いは、Ｒ_９は、−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｙ−であってもよく、式中、ｘは１であり、且つｙは２であり、ｘは２であり、且つｙは３であり、又はｘは３であり、且つｙは４である。

【0130】

式（Ｉ）の環状ペプチドにおいて、Ｒ_３は、Ｒ_４と共に、一般的な構造の環

【化15】

を形成してもよく、
式中、ｚは３である。

【0131】

式（Ｉ）の環状ペプチドにおいて、Ｒ_１７は、式

【化16】

の単一のアミノ酸残基であってもよい。

【0132】

ゆえに、本発明は、一態様において、式（ＶＩＩ）：
Ｚ−Ｘａａ^１−Ｘａａ^２−Ｘａａ^３−Ｘａａ^４−Ｘａａ^５−Ｘａａ^６−Ｘａａ^７−Ｙ （ＶＩＩ）
の環状ペプチド、又はその薬学的に許容される塩を利用してもよく、式中：
Ｚは、Ｈ又はＮ末端基であり；
Ｘａａ^１は、場合によっては存在し、そして存在するならば、１〜３個のＬ−又はＤ−異性体アミノ酸残基であり；
Ｘａａ^２及びＸａａ^６は、Ｌ−又はＤ−異性体アミノ酸であり、その側鎖は、環状の架橋を含み；
Ｘａａ^３は、Ｌ−若しくはＤ−Ｐｒｏであり、場合によっては、ヒドロキシル、ハロゲン、スルホンアミド、アルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、アルキル−アリール、アルキル−Ｏ−アリール、アルキル−Ｏ−アルキル−アリール、若しくは−Ｏ−アリールで置換されており、又はＸａａ^３は、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、エーテル、スルフィド、若しくはカルボキシルを含む側鎖を有するアミノ酸のＬ−若しくはＤ−異性体であり；
Ｘａａ^４は、フェニル、ナフチル、又はピリジルを含む側鎖を有するＬ−又はＤ−異性体アミノ酸であり、場合によっては、環は、ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルコキシ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ニトロ、ニトリル、スルホンアミド、アミノ、一置換アミノ、二置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、及びアルコキシ−カルボニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されており；
Ｘａａ^５は、Ｌ−若しくはＤ−Ｐｒｏであり、又はＸａａ^５は、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、グアニジン、尿素、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、若しくはエーテルを含む側鎖を有するＬ−若しくはＤ−異性体アミノ酸であり；
Ｘａａ^７は、場合によっては存在し、そして存在するならば、１〜３個のＬ−又はＤ−異性体アミノ酸残基であり；そして
Ｙは、Ｃ末端基である。

【0133】

一態様において、Ｘａａ^４は、Ｄ−Ｐｈｅであってもよく、場合によっては、ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルコキシ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ニトロ、ニトリル、スルホンアミド、アミノ、一置換アミノ、二置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、及びアルコキシ−カルボニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されている。

【0134】

別の態様において、Ｘａａ^２及びＸａａ^６の一方が、Ａｓｐ、ｈＧｌｕ、又はＧｌｕのＬ−又はＤ−異性体であってもよく、そしてＸａａ^２及びＸａａ^６の他方が、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、又はＤａｐのＬ−又はＤ−異性体である。代替の態様において、Ｘａａ^２及びＸａａ^６はそれぞれ、Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｐｅｎ、又はＤ−Ｐｅｎであってもよい。

【0135】

別の態様において、Ｘａａ^１は、直鎖状又は分枝状のアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリールを含む側鎖を有するアミノ酸であってもよい。

【0136】

別の態様において、Ｘａａ^７は、少なくとも１つのアリール又はヘテロアリールを含む側鎖を有するアミノ酸であってもよく、場合によっては、１つ以上の環置換基で置換されており、そして１つ以上の置換基が存在する場合、同じであり、又は異なっており、そして独立して、ヒドロキシル、ハロゲン、スルホンアミド、アルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、又は−Ｏ−アリールである。

【0137】

別の態様において、Ｎ末端基は、Ｃ_１〜Ｃ_１７アシル基であってもよく、Ｃ_１〜Ｃ_１７は、直鎖状若しくは分枝状のアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、若しくはアルキルアリール、直鎖状若しくは分枝状のＣ_１〜Ｃ_１７アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケン、アルケニル、若しくはアラルキル鎖、又はＮ−アシル化された直鎖状若しくは分枝状のＣ_１〜Ｃ_１７アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケン、アルケニル、若しくはアラルキル鎖を含む。

【0138】

別の態様において、Ｙは、１つ又は２つの直鎖状又は分枝状のＣ_１〜Ｃ_１７アルキル、シクロアルキル、アリール、アルキルシクロアルキル、アラルキル、ヘテロアリール、アルケン、アルケニル、又はアラルキル鎖で置換されているヒドロキシル、アミド、又はアミドであってもよい。

【0139】

ゆえに、本発明は、別の態様において、先で定義された式（ＶＩＩ）の環状ペプチドを提供するが、
Ｘａａ^４は、Ｄ−Ｐｈｅであり、場合によっては、ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルコキシ、（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ニトロ、ニトリル、スルホンアミド、アミノ、一置換アミノ、二置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、及びアルコキシ−カルボニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されており；
Ｘａａ^５は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、又はＤａｐのＬ−又はＤ−異性体であり；そして
Ｘａａ^７は、Ｔｒｐ、Ｎａｌ １、又はＮａｌ ２のＬ−又はＤ−異性体である。

【0140】

前述のものにおいて、一態様において、Ｘａａ^３は、ＨｉｓのＬ−又はＤ−異性体であってもよく、そして別の態様において、Ｚは、Ｃ_１〜Ｃ_１７アシル基であってもよく、そしてＸａａ^１は、ＮｌｅのＬ−又はＤ−異性体であってもよい。

【0141】

前述のものにおいて、そして式（Ｉ）において、置換Ｐｒｏは、例えば、Ｈｙｐ、Ｈｙｐ（Ｂｚｌ）、Ｐｒｏ（４−Ｂｚｌ）、及びＰｒｏ（４−ＮＨ_２）であってもよい。

【0142】

式（Ｉ）〜式（ＶＩＩ）内に包含されるペプチドは、１つ以上の非対称の要素、例えばステレオジェニック（stereogenic）中心、ステレオジェニック軸を含有するので、式（Ｉ）内に包含されるペプチドは、様々な立体異性型で存在し得る。式（Ｉ）〜式（ＶＩＩ）内に包含されるペプチドが挙げられる、具体的に記載されるペプチド及び一般的に記載されるペプチドの双方について、鏡像異性体及びジアステレオ異性体が挙げられる、全てのキラル中心又は他の異性体中心（isomeric center）での異性体の全ての形態は、本明細書中で包含されることが意図される。本発明のペプチドはそれぞれ、複数のキラル中心を含み、そして、本発明のペプチドの、エナンチオピュアな調製物での使用に加えて、ラセミ体の混合物又は鏡像異性体的に富化された混合物として用いられてもよい。典型的には、本発明のペプチドは、キラル的に純粋な試薬、例えば、指定されたＬ−又はＤ−アミノ酸を用いて、エナンチオ純度が維持されるように試薬、条件、及び方法を用いて合成されることとなるが、ラセミ体の混合物が製造され得ることが考えられ、且つ意図される。そのようなラセミ体の混合物は、場合によっては、周知の技術を用いて分離されてもよく、そして個々の鏡像異性体が、単独で用いられてもよい。ペプチドが互変異性型で存在し得る温度、溶媒、及びｐＨのケースにおいて、そしてそれらの特定の条件下で、各互変異性型は、平衡して存在するか、主に１つの型で存在するかに拘わらず、本発明内に含まれると意図される。ゆえに、式（Ｉ）のペプチドの単一の鏡像異性体は、光学活性形態であり、非対称の合成、光学的に純粋な前駆体からの合成によって、又はラセミ体の分解能によって得ることができる。

【0143】

本発明はさらに、本ペプチドのプロドラッグを含むことが意図され、これは、投与の直後に、代謝プロセスによる化学変換を経てから、活性のある薬理学的ペプチドとなるものである。一般に、そのようなプロドラッグは、本ペプチドの機能的誘導体であり、式（Ｉ）〜式（ＶＩＩ）のペプチドにインビボで容易に変換可能である。プロドラッグは、式（Ｉ）〜式（ＶＩＩ）の活性のある親ペプチド薬物をインビボ放出する、共有結合したあらゆる化合物である。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製のための従来の手順が、例えば、”Design of Prodrugs”, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985に記載されている。プロドラッグの典型的な例が、官能部分上に、例えばヒドロキシル、カルボキシル、又はアミノ官能基のエステル化により、生物学的に不安定な保護基を有するものである。ゆえに、一例として、限定されないが、プロドラッグは、式（Ｉ）のペプチドを含み、エステルプロドラッグ形態、例えば、例えばＲが−ＯＨである、式（Ｉ）のＲ基の低級アルキルエステルであって、アルキル基内に１〜８個の炭素を含んでもよい低級アルキルエステル、又はアラルキル基内に６〜１２個の炭素を有するアラルキルエステルが使用される。大まかに言って、プロドラッグとして、酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、水酸化、脱水酸化、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、リン酸化、又は脱リン酸化されて、式（Ｉ）の活性のある親ペプチド薬物をインビボで生成し得る化合物が挙げられる。

【0144】

また、本発明は、式（Ｉ）〜式（ＶＩ）に記載されるペプチドと同一であるが、式（Ｉ）〜式（ＶＩ）において示される１つ以上の原子が、通常自然界で見出される原子質量又は質量数と異なる原子質量又は質量数を有する原子によって置換されているペプチドを含む。本発明の化合物中に組み込まれてもよい同位体の例として、水素、炭素、窒素、及び酸素の同位体、例えば、それぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏ、及び^１７Ｏが挙げられる。上述の同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含有する、本発明のペプチド、及び薬学的に許容される塩、又は前記化合物の溶媒和物は、本発明の範囲内である。本発明のある種の同位体標識された化合物、例えば、^３Ｈ及び^１４Ｃ等の放射性同位体が組み込まれたものは、種々のアッセイ、例えば、薬物及び／又は基質組織分配アッセイに使用されてもよい。より重い同位体との置換、例えば重水素（^２Ｈ）との１つ以上の水素原子の置換は、ある場合に、代謝安定性の増大が挙げられる、薬理学的利益をもたらすことができる。式（Ｉ）〜式（ＶＩ）の同位体標識されたペプチドは、通常、同位体標識されていない試薬の代わりに同位体標識された試薬を用いることによって、調製することができる。

【0145】

７．０ 本発明に利用されるペプチドを製造する方法。
一般に、本発明のペプチドは、固相合成によって合成されて、当該技術において知られている方法に従って精製されてもよい。種々の樹脂及び試薬を利用するいくつかの周知の手順のいずれかを用いて、本発明のペプチドが調製されてもよい。

【0146】

本発明の環状ペプチドは、アミノ酸間でのペプチド結合の形成のための知られている従来の手順によって、容易に合成することができる。そのような従来の手順として、例えば、カルボキシル基及び他の反応基が保護されているアミノ酸の遊離アルファアミノ基又はその残基と、アミノ基又は他の反応基が保護されている別のアミノ酸の遊離第一級カルボキシル基又はその残基との間での縮合を可能にするあらゆる溶液相手順が挙げられる。従来の好ましい手順において、本発明の環状ペプチドは、固相合成によって合成されて、当該技術において知られている方法に従って精製することができる。種々の樹脂及び試薬を利用するいくつかの周知の手順のいずれかを用いて、本発明のペプチドを調製することができる。

【0147】

環状ペプチドを合成するプロセスは、所望のペプチドを提供するために、所望される配列内の各アミノ酸が、別のアミノ酸又はその残基に１つずつ連続して加えられる手順によって、又は所望されるアミノ酸配列を有するペプチドフラグメントが、最初に従来通り合成されてから縮合される手順によって、実行されてもよい。生じたペプチドはその後、環化されて、本発明の環状ペプチドが得られる。

【0148】

固相ペプチド合成方法は周知であり、当該技術において実行される。そのような方法において、本発明のペプチドの合成は、固相方法の一般的な原理に従って、所望されるアミノ酸残基を１つずつ、成長するペプチド鎖中に順次組み込むことによって実行することができる。当該方法は、Merrifield, R.B., ”Solid phase synthesis (Nobel lecture), ”Angew Chem 24:799-810 (1985)及びBarany et al., The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E. and Meienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284 (1980)が挙げられる多数の参考文献に開示されている。

【0149】

ペプチドの化学合成において、種々のアミノ酸残基の反応性側鎖基が、適切な保護基で保護されており、これは、保護基が除去されるまで、その部位にて化学反応が起こるのを妨げている。また、共通するのは、アミノ酸残基又はフラグメントのアルファアミノ基の保護である一方、その実体は、カルボキシル基にて反応してから、アルファアミノ保護基が選択的に除去されて、その部位にて以降の反応が起こるのを可能にする。特定の保護基が、固相合成方法及び溶液相合成方法で開示されており、且つ知られている。

【0150】

アルファアミノ基は、ウレタン型保護基、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）及び置換ベンジルオキシカルボニル、例えば、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニル−イソプロポキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、及びｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）、並びに脂肪族ウレタン型保護基、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、及びアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）が挙げられる適切な保護基によって保護されてよい。Ｆｍｏｃは、アルファアミノ保護に好まれる。

【0151】

グアニジノ基は、適切な保護基、例えばニトロ、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、Ｚ、ペンタメチルクロマンスルホニル（Ｐｍｃ）、アダマンチルオキシカルボニル、ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、及びＢｏｃによって保護されてもよい。Ｐｂｆ及びＰｍｃは、Ａｒｇに好まれる保護基である。

【0152】

本明細書中に記載される本発明のペプチドは、固相合成を用いて、例えば、Symphony Multiplex Peptide Synthesizer（Rainin Instrument Company）自動ペプチド合成装置によって、メーカーによって提供されるプログラミングモジュールを用いて、且つメーカーのマニュアルに示されるプロトコルに従って、調製した。

【0153】

固相合成は、保護されたアルファアミノ酸を適切な樹脂に結合させることによって、ペプチドのＣ末端から開始される。そのような出発物質は、９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−３−イルオキシ−Merrifield樹脂（Sieber Amide樹脂）への、若しくは４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ樹脂（Rink Amide樹脂）へのアミド結合によって、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Wang）樹脂、２−クロロトリチルクロリド樹脂、若しくはオキシム樹脂へのエステル結合によって、又は当該技術において周知の他の手段によって、アルファアミノ保護アミノ酸を取り付けることによって調製される。必要に応じて、樹脂は、反復的なサイクルに入れられて、アミノ酸が順次加えられる。アルファアミノＦｍｏｃ保護基は、塩基性の条件下で除去される。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のピペリジン、ピペラジン、ジエチルアミン、又はモルホリン（２０〜４０ｖ／ｖ％）が、この目的のために用いられてもよい。

【0154】

アルファアミノ保護基の除去後、以降の保護されたアミノ酸が、所望される順序で段階的に連結されて、中間の、保護されたペプチド樹脂が得られる。ペプチドの固相合成においてアミノ酸の連結に用いられる活性化試薬は、当該技術において周知である。ペプチドが合成された後に、所望されるならば、直交的に保護された（orthogonally protected）側鎖保護基は、ペプチドの更なる誘導体化のために、当該技術において周知である方法を用いて除去されてもよい。

【0155】

典型的には、直交保護基が、必要に応じて用いられる。例えば、本発明のペプチドは、アミノ基含有側鎖を有する複数のアミノ酸を含有する。一態様において、Ａｌｌｙｌ−Ａｌｌｏｃ保護スキームが使用され、アミノ酸は、その側鎖によってラクタム架橋を形成し、そして様々な反応条件下で切断可能な直角保護基が、アミノ基含有側鎖を有する他のアミノ酸に用いられる。ゆえに、例えば、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ−（Ａｌｌｏｃ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ−（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＡｌｌ）−ＯＨ、又はＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）−ＯＨアミノ酸は、環化と同時にラクタム架橋を形成する位置に使用することができる一方、アミノ基含有側鎖を有する他のアミノ酸は、異なる直交保護基を有し、例えばＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨを有する。他の保護基が同様に使用されてもよい；一例として、限定されないが、Ｍｔｔ／ＯＰｐ（４−メチルトリチル／２−フェニルイソプロピル）が使用されてもよく、側鎖は、環化と同時にラクタム架橋を形成し、直交保護基は、Ｍｔｔ／ＯＰｐの切断に適した条件を用いて切断可能でない他の位置に利用される。

【0156】

ペプチド中の反応基は、固相合成中に、又は樹脂からの除去後に、選択的に修飾することができる。例えば、ペプチドは、樹脂上にありながら、Ｎ末端修飾、例えばアセチル化を得るように修飾することもできるし、切断試薬の使用によって樹脂から取り外してから修飾することもできる。同様に、アミノ酸の側鎖を修飾する方法は、ペプチド合成の技術の当業者に周知である。ペプチド上に存在する反応基になされる修飾の選択は、部分的に、ペプチドに所望される特徴によって決定されることとなる。

【0157】

本発明のペプチドにおいて、一実施形態において、Ｎ末端基は、Ｎ−アセチル基の導入によって修飾される。一態様において、Ｎ末端での保護基の除去後に、樹脂結合ペプチドが、ピリジン等の有機塩基の存在下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中無水酢酸と反応する方法が使用される。溶液相アセチル化が挙げられる、Ｎ末端アセチル化の他の方法が当該技術において知られており、これが使用されてもよい。

【0158】

ペプチドは、一実施形態において、ペプチド樹脂からの切断前に環化することができる。反応性側鎖部分を介した環化のために、所望される側鎖が脱保護されて、ペプチドが、適切な溶媒中に懸濁されて、環カップリング剤が加えられる。適切な溶媒として、ＤＭＦ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、又は１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）が挙げられる。適切な環カップリング試薬として、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）、２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＡＴＵ）、２−（２−オキソ−１（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＰＴＵ）、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＤＣＣＩ／ＨＯＢｔ）が挙げられる。カップリングは、従来通り、適切な塩基、例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ｓｙｍ−コリジン、又はＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）の使用によって開始される。

【0159】

非ラクタム環架橋を有するペプチド、例えば以下の架橋：
−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｚ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−
（式中、ｘ、ｙ、及びｚは、それぞれ独立して、１〜５である）
を含有するペプチドについて、当該ペプチドは、環化されることとなる位置に側鎖保護ジアミンアミノ酸を使用する固相合成を用いて、製造することができる。そのような位置において特に好ましいのが、Ｄａｐ、Ｄａｂ、又はＬｙｓであり、好ましくは、アミン保護基、例えば、Ａｌｌｏｃ、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ（メトキシトリチル）、Ｄｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン））エチル）、ｉｖＤｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−メチルブチル）、又は他のあらゆる直交的に切断可能な保護基を有する。典型的には、１つの側鎖保護基が、最初に除去され、例えば、ジクロロメタン中２％ＴＦＡを用いてＭｔｔが除去される。樹脂の洗浄後、生じた樹脂結合脱保護アミンは、例えば、環状無水物、例えば無水コハク酸又はグルタル酸無水物（ジクロロメタン／ピリジン中１：１）の０．５Ｍ溶液でアシル化される。追加の洗浄工程の後に、第２のジアミノアミノ酸の直交的に切断可能な保護基が切断され、例えば、ジクロロメタン中テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）及びフェニルシランを用いてＡｌｌｏｃが除去される。ジクロロメタン及びＤＭＦで洗浄した後に、樹脂結合ペプチドは、標準的なカップリング試薬、例えばＴＢＴＵ及び塩基を用いて環化される。或いは、ｉｖＤｄｅ保護樹脂結合ジアミノアミノ酸が、ＤＭＦ中５％ヒドラジン溶液を用いて脱保護され得、そしてＤＭＦによる洗浄後、生じた樹脂結合アミンは、環状無水物でアシル化されてもよいし、樹脂結合カルボン酸で環化されてもよい。

【0160】

次に、環化されたペプチドは、適切なあらゆる試薬、例えばＤＣＭ中エチルアミン、又は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）、ジメトキシベンゼン（ＤＭＢ）、水等の剤の種々の組合せを使用して、固体相から切断することができる。生じた粗ペプチドを乾燥させて、もしあれば、残ったアミノ酸側鎖保護基を、適切なあらゆる試薬、例えばＴＦＡを、水、ＴＩＳ、２−メルカプトエタノール（mercaptopethane）（ＭＥ）、及び／又は１，２−エタンジチオール（ＥＤＴ）の存在下で用いて、切断する。最終生成物は、低温エーテルを加えることによって析出させて、濾過によって収集する。最終の精製は、適切なカラム、例えばＣ_１８カラムを用いる逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によるものであり、又は分離若しくは精製の他の方法、例えば、ペプチドのサイズ又は電荷に基づく方法を使用することもできる。一旦精製されると、ペプチドは、いくつもの方法、例えば、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、アミノ酸分析、質量分析によって特徴付けることができる。

【0161】

Ｃ末端置換アミド誘導体又はＮ−アルキル基を有する本発明のペプチドについて、保護されたアルファアミノ酸を適切な樹脂に結合させることによる、ペプチドのＣ末端から開始される固相合成によって、合成を進めてもよい。置換されたアミド誘導体を固相上に調製するそのような方法は、当該技術において説明されてきた。例えば、Barn, D. R., et al., “Synthesis of an array of amides by aluminum chloride assisted cleavage on resin bound esters, ” Tetrahedron Letters, 37:3213-3216 (1996)；DeGrado, W. F. and Kaiser E. T., “Solid-phase synthesis of protected peptides on a polymer bound oxime: Preparation of segments comprising the sequences of a cytotoxic 26-peptide analogue, ” J. Org. Chem., 47:3258-3261 (1982)参照。そのような出発物質は、アルファアミノ保護アミノ酸をエステル結合によってｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Wang）樹脂に、又は周知の手段によってオキシム樹脂に取り付けることによって、調製することができる。ペプチド鎖は、アミノ酸の所望の配列、環化されたペプチド、及び適切なアミン（メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン等）の溶液により処理されたペプチド樹脂により成長する。ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Wang）樹脂を使用したペプチドは、ＤＣＭ中塩化アルミニウムによって樹脂から切断することができ、そしてオキシム樹脂を使用したペプチドは、ＤＣＭによって切断することができる。Ｃ末端置換アミドを有するペプチドを調製する別の方法は、ホルミル樹脂、例えば４−（４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ）ブチリル-AM樹脂（FMPB AM樹脂）への還元的アミノ化によってアルキルアミンを取り付けてから、順次、固相合成の一般的な原理を利用して、所望されるアミノ酸残基を組み込むものである。

【0162】

主に固相Ｆｍｏｃ化学を参照して合成を説明してきたが、本発明の環状ペプチドを製造する他の化学及び合成方法、例えば、一例として、限定されないが、Ｂｏｃ化学、溶液化学を使用する方法、並びに他の化学及び合成方法が使用されてもよいことが理解されるべきである。

【実施例】

【0163】

８．０ 本発明に利用されるペプチドの評価に使用される試験及びアッセイ。
本発明に利用されるメラノコルチン受容体特異的ペプチドは、結合、機能状態、及び有効性を判定するために、種々のアッセイ系及び動物モデルによって試験することができる。

【0164】

８．１ ［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨを用いた競合阻害アッセイ。
競合阻害結合アッセイを、組換えｈＭＣ１ｒ若しくはｈＭＣ４ｒ（各例において、接頭辞ｈはヒトを指す）を発現するＨＥＫ−２９３細胞から調製した膜ホモジェネート、又は代わりに、内因性マウスＭＣ１ｒを含有するＢ１６−Ｆ１０マウス黒色腫細胞由来の膜ホモジェネートを用いて実行した。後に続く実施例において、ＭＣ１ｒ及びＭＣ４ｒの全ての値は、特に明記しない限り、ヒト組換え受容体についてである。アッセイを、９６穴ポリプロピレン丸底プレート（VWRカタログ番号12777-030）内で実行した。膜ホモジェネートを、０．１ｎＭ［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨ（Perkin Elmer）と共にインキュベートし、そして１００ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ_２、２ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．３ｍＭ １，１０−フェナントロリン、及び０．２％ウシ血清アルブミン入り２５ｍＭ ＨＥＰＥＳバッファ（ｐＨ７．５）を含有するバッファ中で、本発明の試験ペプチドの濃度を高めた。３７℃にて９０分間のインキュベーションの後、アッセイ混合液を、GF/B Unifilterプレート（Perkin-Elmerカタログ番号6005177）上に濾過して、ウェルあたり３ｍＬの氷冷バッファで洗浄した。フィルタを空気乾燥させて、３５μＬのシンチレーションカクテルを各ウェルに加えた。プレートを、結合放射活性について、Microbetaカウンター内でカウントした。非特異的結合を、１μＭ ＮＤＰ−α−ＭＳＨの存在下での［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合の阻害によって測定した。最大特異的結合（１００％）を、１μＭ ＮＤＰ−α−ＭＳＨの不在下、そして存在下で細胞膜に結合した放射活性（ｃｐｍ）の差異として定義した。各アッセイを二反復で行って、実際の平均値を記載し、０％未満の結果は０％と報告した。本発明のペプチドについてのＫｉ値を、Graph-Pad Prism（登録商標）曲線適合ソフトウェアを用いて求めた。

【0165】

８．２ アゴニスト活性についてのアッセイ。
細胞内ｃＡＭＰの蓄積を、ｈＭＣ１ｒ（Kang, L., et al., “A selective small molecule agonist of MC1r inhibits lipopolysaccharide-induced cytokine accumulation and leukocyte infiltration in mice,”J. Leuk. Biol. 80:897-904 (2006)参照）を発現するヒト黒色腫細胞株、ＨＢＬ、又はｈＭＣ４ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞内で機能的応答を誘発する本発明のペプチドの能力の尺度として調査した。ｈＭＣ１ｒを発現するコンフルエントＨＢＬ細胞、又は組換えｈＭＣ４ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞を、酵素フリー細胞分離バッファ中でのインキュベーションによって培養プレートから剥離した。分散した細胞を、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭグルタミン、０．５％アルブミン、及び０．３ｍＭ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、ホスホジエステラーゼインヒビタを含有するEarle’s Balanced Salt Solution中に懸濁させた。細胞を、ＨＢＬ細胞についてウェルあたり０．４×１０^５細胞の、そしてＨＥＫ−２９３細胞についてウェルあたり０．５×１０^５細胞の密度にて、９６ウェルプレート内にプレーティングして、１０分間予めインキュベートした。細胞を、ＤＭＳＯ（１％の最終ＤＭＳＯ濃度）中に、２００μＬの総アッセイ容量中０．０５〜５０００ｎＭの濃度範囲にて溶解させた本発明のペプチドに、３７℃にて１５分間曝した。ＮＤＰ−α−ＭＳＨを、参照アゴニストとして用いた。クリプタート標識抗ｃＡＭＰ及びｄ２標識ｃＡＭＰを利用する、Cisbio Bioassays由来のHTRF（登録商標）ｃＡＭＰ細胞ベースのアッセイ系によって、ｃＡＭＰレベルを判定した。プレートを、６６５及び６２０ｎＭにて、Perkin-Elmer Victorプレートリーダーで読んだ。データ分析を、Graph-Pad Prism（登録商標）ソフトウェアにより、非線形回帰分析法によって実行した。最大効力（Ｅ_ｍａｘ）値を、本発明の各試験ペプチドについて、参照メラノコルチンアゴニストＮＤＰ−α−ＭＳＨによって達成される値と比較して求めた。

【0166】

９．０ 本発明で利用されるペプチドの例。
以下の構造のペプチドを合成して、示すように、平均したＭＣ１ｒ及びＭＣ４ｒのＫｉ値を求めた。Ｋｉ値は、−［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨを用いて求めた。全ての結果を、パーセンテージ値であるＥ_ｍａｘ値を除いて、ｎＭで表す。上述の７節に記載するように、見出しを付けた主要な配列を有するペプチドを合成して、精製した。生じたペプチドは、示す構造を有した。合成及び精製の後、ペプチドを、上述の８節に記載するように試験して、結果を示した。

【0167】

９．１ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号４）

【化17】

【0168】

９．２ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５）

【化18】

【0169】

９．３ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６）

【化19】

【0170】

９．４ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号７）

【化20】

【0171】

９．５ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号８）

【化21】

【0172】

９．６ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号９）

【化22】

【0173】

９．７ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｄ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号１０）

【化23】

【0174】

９．８ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号１１）

【化24】

【0175】

９．９ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｄ−Ｎａｌ １−ＮＨ_２（配列番号１２）

【化25】

【0176】

９．１０ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｎａｌ ２−ＮＨ_２（配列番号１３）

【化26】

【0177】

９．１１ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｄ−Ｎａｌ ２−ＮＨ_２（配列番号１４）

【化27】

【0178】

９．１２ Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号１５）

【化28】

【0179】

９．１３ Ａｃ−Ｐｈｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号１６）

【化29】

【0180】

９．１４ シクロ（Ｓｕｃ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号１７）

【化30】

【0181】

９．１５ ＣＨ_３−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号１８）

【化31】

【0182】

９．１６ ＣＨ_３−（ＣＨ_２）_３−Ｃ（＝Ｏ）−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号１９）

【化32】

【0183】

９．１７ ＣＨ_３−（ＣＨ_２）_４−Ｃ（＝Ｏ）−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２０）

【化33】

【0184】

９．１８ ＣＨ_３−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２１）

【化34】

【0185】

９．１９ シクロ−プロパノイル−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２２）

【化35】

【0186】

９．２０ シクロ−ヘキサノイル−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２３）

【化36】

【0187】

９．２１ シクロペンチルアセチル−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２４）

【化37】

【0188】

９．２２ シクロヘキシルアセチル−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２５）

【化38】

【0189】

９．２３ フェニルアセチル−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２６）

【化39】

【0190】

９．２４ フェニルプロパノイル−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号２７）

【化40】

【0191】

９．２５ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ａｌａ−ＮＨ_２（配列番号２８）

【化41】

【0192】

９．２６ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｐ）−Ｔｒｐ−ＯＨ（配列番号２９）

【化42】

【0193】

９．２７

【化43】

【0194】

９．２８

【化44】

【0195】

９．２９

【化45】

【0196】

９．３０ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｎａｌ １−ＮＨ_２（配列番号３３）

【化46】

【0197】

９．３１ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＯＨ（配列番号３４）

【化47】

【0198】

９．３２ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号３５）

【化48】

【0199】

９．３３ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号３６）

【化49】

【0200】

９．３４ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号３７）

【化50】

【0201】

９．３５ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号３８）

【化51】

【0202】

９．３６ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号３９）

【化52】

【0203】

９．３７ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号４０）

【化53】

【0204】

９．３８ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｃｉｔ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号４１）

【化54】

【0205】

９．３９ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｌｙｓ−ＮＨ_２（配列番号４２）

【化55】

【0206】

９．４０ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号４３）

【化56】

【0207】

９．４１ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｄａｂ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号４４）

【化57】

【0208】

９．４２ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号４５）

【化58】

【0209】

９．４３

【化59】

【0210】

９．４４ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号４７）

【化60】

【0211】

９．４５ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号４８）

【化61】

【0212】

９．４６ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号４９）

【化62】

【0213】

９．４７ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５０）

【化63】

【0214】

９．４８ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５１）

【化64】

【0215】

９．４９ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５２）

【化65】

【0216】

９．５０ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５３）

【化66】

【0217】

９．５１ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｃｉｔ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５４）

【化67】

【0218】

９．５２ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｌｙｓ−ＮＨ_２（配列番号５５）

【化68】

【0219】

９．５３ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５６）

【化69】

【0220】

９．５４ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｄａｂ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５７）

【化70】

【0221】

９．５５ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号５８）

【化71】

【0222】

９．５６ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号５９）

【化72】

【0223】

９．５７ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（２−Ｃｌ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６０）

【化73】

【0224】

９．５８ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（３−Ｃｌ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６１）

【化74】

【0225】

９．５９ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６２）

【化75】

【0226】

９．６０ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（２−Ｆ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６３）

【化76】

【0227】

９．６１ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６４）

【化77】

【0228】

９．６２ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（３，４−Ｆ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６５）

【化78】

【0229】

９．６３ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｍｅ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６６）

【化79】

【0230】

９．６４ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｏｒｎ−Ｄ−Ｐｈｅ（４−ＯＭｅ）−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６７）

【化80】

【0231】

９．６５ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−ＮＨ_２（配列番号６８）

【化81】

【0232】

９．６６ Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｄａｂ）−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（配列番号６９）

【化82】

【0233】

１０． 本発明に利用した多微粒子製剤の例。
以下に記載したロットの製剤を製造した：

【0234】

【表3】

【0235】

種々のロットに、約１％〜２％（ペプチド／ポリマーのｗ／ｗ）の実施例９．３の環状ペプチドをロードした。Ｃ−１８カラムを使用するＨＰＬＣ方法を、種々の酸及びｐＨ範囲での環状ペプチド放出の研究を含むアッセイに使用した。マイクロ粒子の薬物ロード（drug load）及びカプセル化効率を、製造プロセス後に求めた。マイクロ粒子の性能を、インビトロ放出方法によって特徴付けた。

【0236】

リン酸バッファ（水酸化ナトリウムでｐＨを７．５に調整した０．５ｍＬリン酸を含有する１Ｌバッファ）ｐＨ７．５〜８．０の適切な容量中に、重量の知られているマイクロ粒子を溶解させることによって、薬物ローディングを求めた。生じた溶液を、薬物について、ＨＰＬＣを用いて分析した。カプセル化効率（ＥＥ）について、マイクロ粒子を０．１Ｍ ＨＣｌでリンスして、乾燥させて、薬物ローディングについて、記載したように用いた。薬物ローディング及びＥＥ値を、薬物及びポリマーの開始重量に基づいて算出した。薬物ローディングは９９％よりも大きく、そして調製した全てのサンプルのカプセル化効率は、９５％よりも大きかった。

【0237】

【表4】

【0238】

実施例９．３の環状ペプチドを含有するEudragit（登録商標）マイクロ粒子の溶解を、ＵＳＰ装置２を用いて、０．１Ｍ ＨＣｌ ｐＨ１．２又は酢酸バッファｐＨ４．５である酸の５００ｍＬから開始して行った。約１ｇのマイクロ粒子を、正確に秤量して、３７℃にて２時間、酸の中に懸濁させた。次に、媒体のｐＨを順次、ｐＨ５．５に１時間、そしてｐＨ６．８にもう１時間、そして最後にｐＨ７．４に７時間、調整した。

【0239】

図４〜図１１は、種々のEudragit（登録商標）ポリマー及びそれらの混合物を用いて調製したマイクロ粒子からの、実施例９．３の環状ペプチドの代表的な放出プロファイルである。通常、薬物の放出は、ｐＨ依存性であり、速度は、用いたポリマーのタイプによって決まる。

【0240】

図４〜図８は、指定されたEudragit（登録商標）ポリマー及びその混合物を用いて調製したマイクロ粒子からの、実施例９．３の環状ペプチドの放出プロファイルを示す。図８に示すように、ペプチド放出はｐＨ依存性であり、そしてｐＨ４．５〜５．５にて放出はなく、ｐＨ４．５〜７．５にておおよそ全体が放出した。

【0241】

一生成物標的プロファイルは、ｐＨ５．５にて約２０％から始まる、ＧＩ管の全体を通じた薬物放出であった。様々なポリマーを用いて調製したマイクロ粒子の混合物を試験した。図９は、混合したマイクロ粒子から得られた放出プロファイルを示す。４０％のロット２９、３０％のロット２７、及び３０％のロット３１を含むロット３８を、更なる開発用に選択した。調製プロセスを単純化して、混合の均一性を確実にするために、混合マイクロ粒子ロット３８と同じ比率でポリマー型を共溶解させることによって、多くのマイクロ粒子（ロット４１）を調製し、そして、マイクロ粒子を調製する際に、製剤が、重量ベースで約４６．５％のEudragit（登録商標）L100-55、４６％のEudragit（登録商標）S100、及び７．５％のEudragit（登録商標）FS30Dを含むように用いた。図１０は、ロット４１の放出プロファイルを示しており、これは、予め混合したポリマーから調製したものであり、ロット３８マイクロ粒子混合物と同じ比率である。このロットを、臨床前の薬物動態学的研究及び効力研究における評価用に選択した。図１１は、ロット４１（ｎ＝３）についての繰返し溶解プロファイルを示す。

【0242】

ロット４１のようにEudragit（登録商標）ポリマー混合物を含有するプラセボマイクロ粒子（ロット４９）を調製して、活性ロット４１用の希釈剤として用いて、臨床前ラットカプセルサイズ９に充填した。プラセボ及び活性マイクロ粒子を秤量して、幾何学的希釈によって混合した。混合物の均一性試験を行って、マイクロ粒子を臨床前カプセルに充填して、１７ｍｇの充填重量を含有させた。１００、５０、２０、又は１０μｇの実施例９．３の環状ペプチド含量（strength）を含有するカプセルを、動物モデルでの試験用に調製した。全ての充填カプセルを個々に秤量して、重量を記録した。

【0243】

１１． 実験モデル。
１１．１ 内因性ＭＣ１ｒアゴニストＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）及びα−ＭＳＨ（アルファ−メラノコルチン刺激ホルモン）と比較する、実施例９．３の環状ペプチドのインビトロ選択性の評価を、仏国のCerepにて行った。結果は以下の通りであった：

【0244】

【表5】

【0245】

１１．２ 活性研究及び安全性研究をインビトロで行った。実施例９．３の環状ペプチドは、α−ＭＳＨ及びＡＣＴＨに匹敵する、リポ多糖誘導ＴＮＦ−α阻害を実証した。それとは別に、Eurofins lead profileにおいて、活性は、１０μＭでの７２個のインビトロアッセイのいずれにおいても検出されなかった

【0246】

１１．３ ジニトロベンゼンスルホン酸（ＤＮＢＳ）を溶液として、雄の２００ｇのWistarラットの直腸に投与して腸管腔の炎症を誘導した、腸炎症の、カニューレを挿入したラットモデルにおいて実施例９．３の環状ペプチドを評価した。ラットの上行結腸の近位部分内にカテーテルを挿入した。カテーテルは、投薬アクセスのために、首筋から出した。１０個の群において、ラットに：０．５μｇ及び５．０μｇの、実施例９．３の環状ペプチド及びビヒクル（滅菌水）を、結腸内注射を介して、ＤＮＢＳの誘発（challenge）の２４時間、１２時間、及び２時間前に、そしてＤＮＢＳの誘発の６時間後に投薬してから、７日目まで５日間連続して１日２回投薬した。カニューレ非挿入対照ラットに、スルファサラジン（陽性対照）及びビヒクル（非処置対照）を投与した。図１Ａ及び図１Ｂに示すように、腸炎症のＤＮＢＳラットモデルにおいて、腸の管腔に送達された実施例９．３の環状ペプチドは、腸炎症のパラメータ（結腸重量及び炎症スコア）の引下げにおいて、スルファサラジン（標準治療）と同程度に活性であり、且つ非処置の対照よりも優れていた。

【0247】

１１．４ 結腸放出用の実施例９．３の環状ペプチドを含有する先の１０節のロット４１の経口カプセル製剤の薬物動態学及び薬力学を、ラットにおいて評価した。２５０〜３５０グラムの重さの７〜９週齢の合計２４頭のSprague-Dawleyラットを利用して、一晩絶食させてから、実施例９．３の０．１ｍｇの環状ペプチドを含有する単カプセルを経口投薬した。食物及び水は不断給餌であった。腸管及び結腸の内容物を、特定の時点にて（ｎ＝２０）、そして試験後（ｎ＝４）に収集した。図２に示すように、ロット４１の実施例９．３の環状ペプチドの経口製剤は、結腸内で放出されて、９時間以内にラット腸管を経て前進した。

【0248】

１１．５ ラットにおける大腸炎のＤＮＢＳモデルにおいて、実施例９．３の環状ペプチドの１０μｇ、２０μｇ、及び５０μｇを含有するロット４１の経口カプセル製剤を、１日２回（ｂｉｄ）投与で、ロット４９のプラセボビヒクル及びスルファサラジン処置と比較して評価した。図３Ａ及び図３Ｂに示すように、ベースライン補正した炎症スコア及び巨視的障害スコアは双方とも、５０μｇの実施例９．３の環状ペプチドを含有するカプセルにより、プラセボビヒクルに対して有意に低く（向上し）、そしてスルファサラジンと同程度であった。血漿のアッセイは、実施例９．３の全身性環状ペプチドを全く検出しなかった。

【0249】

１２． ヒト臨床研究。
実施例９．３のＣ_１４標識環状ペプチドの経口製剤を、ロット４１のように製剤化した。Ｃ_１４標識を用いて、単回の経口投与の後に、遠位ＧＩ管内での実施例９．３のペプチドの放出及び吸収を評価した。Eudragit（登録商標）L100-55、Eudragit（登録商標）S-100、及びEudragit（登録商標）FS30Dのポリメタクリレートの組合せを選択して、２３．２５：２３．０：１２．５の重量比にて利用した。L100-55及びS-100の重量は、固体材料の乾燥重量であり、FS30Dの重量は、商業的に調製された水性製剤のものであり、１２．５グラムの液体FS30Dは、２３．２５：２３：３．７５のポリマーの重量比について、３．７５グラムのポリマーを含有した。ポリメタクリレートの組合せをアセトン中に入れて、長期間撹拌した。実施例９．３のＣ_１４標識ペプチドの適切な量を水中に溶解させて、調製したアセトン−ポリメタクリレート溶液と混合して、長期間撹拌して、真空下で乾燥させた。乾燥した材料を回収して、ペプチドを含有しない更なる乾燥ポリメタクリレート混合液で希釈して、予め定めた量の材料中で所望の標的濃度を得て、所望の直径に粉砕して、篩にかけた。篩にかけた材料を、ゼラチンサイズ２カプセル内に配置して、経口製剤を用意した。

【0250】

経口製剤を、２４人の対象に微小用量レベルで投与して、それぞれ４人の対象の６つのコホートに分割した。コホート１〜５の対象には、服用後５、８、１１、１４、及び１７時間にて下剤を投与し、そしてコホート６の対象には、下剤を投与しなかった。血液、尿、及び糞便のサンプルの薬物動態学的分析（実施例９．３のペプチド、及び実施例９．３のペプチドの代謝物質、Ｎ末端が遊離酸である実施例９．２６のペプチドの存在についての分析を含む）を、全てのコホート内の対象について行った。

【0251】

実施例９．２６のペプチドの存在は、ポリマーマトリックスからの実施例９．３のペプチドの放出の証拠を提供する。なぜなら、実施例９．３のＣ末端アミドの、実施例９．２６の酸への変換が、ポリマーマトリックスからのペプチドの放出後にのみ起こり得るからである。実施例９．３及び実施例９．２６の双方のペプチドは、分析した糞便のサンプル中で有意に、且つおおよそ等しいレベルで見出された。また、実施例９．３及び実施例９．２６のどちらの未変化ペプチドも、血漿中又は尿中で見出されなかった。尿中で同定された唯一の放射性物質は、Ｃ_１４標識フェニルアラニンであった。これらの結果は、結腸中に薬物生成物が後に放出される、上方のＧＩ管を通る薬物生成物の重要な保護及び送達を示している。加えて、血漿又は尿のサンプル中での実施例９．３又は実施例９．２６の検出可能なあらゆるペプチドの欠如によって明示されるように、体循環中に吸収された薬物生成物はなかった。

【0252】

本発明を、これらの好ましい実施形態を具体的に参照して詳細に説明してきたが、他の実施形態が同じ結果を達成することもできる。本発明の変形及び変更は、当業者にとって明らかであろう。そして、そのような変更及び均等物を全て包含することが意図されている。先で引用した全ての参照、出願、特許、及び刊行物の開示の全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

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【国際調査報告】