特表 2021-530237 Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの種に対する抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】特表2021-530237(P2021-530237A)

(43)【公表日】2021年11月11日

(54)【発明の名称】Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの種に対する抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20211015BHJP

   C07K 16/12 20060101ALI20211015BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20211015BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20211015BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20211015BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20211015BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20211015BHJP

   A01K 67/027 20060101ALI20211015BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20211015BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20211015BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20211015BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/13

   C07K16/12ZNA

   C12N15/63 Z

   C12N1/15

   C12N1/19

   C12N1/21

   C12N5/10

   A01K67/027

   A61P31/04 171

   A61P1/04

   A61K39/395 R

   A61K39/395 D

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

【全頁数】108

(21)【出願番号】特願2021-503011(P2021-503011)

(86)(22)【出願日】2019年7月16日

(85)【翻訳文提出日】2021年3月11日

(86)【国際出願番号】US2019042070

(87)【国際公開番号】WO2020018584

(87)【国際公開日】20200123

(31)【優先権主張番号】62/699,573

(32)【優先日】2018年7月17日

(33)【優先権主張国】US

(81)【指定国】 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DJ,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR,IS,JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT

(71)【出願人】

【識別番号】521020859

【氏名又は名称】ウーマブス ビオメド エセアー

(71)【出願人】

【識別番号】511017287

【氏名又は名称】インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシン

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＦＯＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮ ＢＩＯＭＥＤＩＣＩＮＥ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】グラッシ， ファビオ

(72)【発明者】

【氏名】ペッルーツァ， リーサ

(72)【発明者】

【氏名】ピッツート， マッテオ

(72)【発明者】

【氏名】ベニーニ， ファビオ

(72)【発明者】

【氏名】コルティ， ダヴィデ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB33

4C085CC01

4C085CC02

4C085CC07

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG08

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本開示は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに特異的であり、ある特定の実施形態では、被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を中和することができる抗体およびその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、例えば分泌型ＩｇＡ抗体などのＩｇＡ抗体を含む。開示される抗体または抗原結合性断片を含む医薬組成物も提供される。被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置または防止するために抗体、抗原結合性断片、および組成物を使用する方法も提供される。ある特定の実施形態では、本開示の組換え分泌型ＩｇＡ抗体を、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有するまたはそれが発生するリスクがある被験体に経口投与する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質（ＦｌｉＤ）エピトープに特異的である、単離された抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項2】

前記エピトープが、コンフォメーショナルエピトープである、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項3】

前記エピトープが、直鎖状エピトープである、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項4】

前記抗体または抗原結合性断片が、前記ＦｌｉＤエピトープに、ＥＬＩＳＡによって測定して約０．１μｇ／ｍＬ未満、または約０．０５μｇ／ｍＬ未満、または約０．０３μｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０で結合することができる、請求項１から３までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項5】

前記抗体または抗原結合性断片が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞運動性アッセイにおける前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの運動性を低下させることができる、請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項6】

前記抗体または抗原結合性断片が、被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を中和することができる、請求項１から５までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項7】

前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ、またはその両方を含む、請求項１から６までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項8】

前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６、Ｃ．ｃｏｌｉ １００９２／ＡＴＢ、またはその両方を含む、請求項１から７までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項9】

前記抗体または抗原結合性断片が、
（ｉ）それぞれ配列番号９〜１４；または
（ｉｉ）それぞれ配列番号２５〜３０
に従ったＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項１から８までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項10】

前記抗体または抗原結合性断片が、親抗体または抗原結合性断片と比較して、可変領域内に生殖細胞系列でコードされるアミノ酸を少なくとももう１つ含み、ただし、前記親抗体または抗原結合性断片は１つまたは複数の体細胞変異を含む、請求項１から９までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項11】

前記抗体または抗原結合性断片が、
（ｉ）配列番号２に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨおよび配列番号４に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬ；または
（ｉｉ）配列番号２２に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨおよび配列番号２４に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬ
を含む、請求項１から１０までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項12】

前記抗体または抗原結合性断片が、
（ｉ）配列番号２に従ったＶＨおよび配列番号４に従ったＶＬ；または
（ｉｉ）配列番号２２に従ったＶＨおよび配列番号２４に従ったＶＬ
を含む、請求項１１に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項13】

前記抗体または抗原結合性断片が、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭアイソタイプである、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項14】

前記抗体または抗原結合性断片が、ＩｇＡアイソタイプである、請求項１３に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項15】

前記抗体または抗原結合性断片が、ＩｇＡ１アイソタイプである、請求項１４に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項16】

前記抗体または抗原結合性断片が、ＩｇＡ２アイソタイプである、請求項１４に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項17】

前記抗体または抗原結合性断片が、Ｆｃポリペプチドまたはその断片を含む、請求項１から１６までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項18】

配列番号４０〜４２のいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖定常領域を含む、請求項１７に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項19】

前記抗体または抗原結合性断片が、ＩｇＡ二量体分子を含む、請求項１４から１８までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項20】

前記抗体または抗原結合性断片が、分泌型ＩｇＡ分子を含む、請求項１４から１９までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項21】

前記抗体または抗原結合性断片が、モノクローナル抗体または抗原結合性断片である、請求項１から２０までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項22】

前記抗体または抗原結合性断片が、キメラ抗体もしくは抗原結合性断片、ヒト化抗体もしくは抗原結合性断片、またはヒト抗体もしくは抗原結合性断片である、請求項１から２１までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。

【請求項23】

請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤とを含む組成物。

【請求項24】

（ｉ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質（ＦｌｉＤ）直鎖状エピトープに特異的である、第１の抗体またはその抗原結合性断片と、
（ｉｉ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質（ＦｌｉＤ）コンフォメーショナルエピトープに特異的である、第２の抗体またはその抗原結合性断片と
を含むキット。

【請求項25】

（ｉ）前記第１の抗体または抗原結合性断片が、それぞれ配列番号９〜１４に従ったＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の配列を含み、
（ｉｉ）前記第２の抗体または抗原結合性断片が、それぞれ配列番号２５〜３０に従ったＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の配列を含む、
請求項２４に記載のキット。

【請求項26】

（ｉ）前記第１の抗体または抗原結合性断片が、配列番号２に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨおよび配列番号４に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、
（ｉｉ）前記第２の抗体または抗原結合性断片が、配列番号２２に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨおよび配列番号２４に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含む、
請求項２４または２５に記載のキット。

【請求項27】

（ｉ）前記第１の抗体または抗原結合性断片が、配列番号２に従ったＶＨおよび配列番号４に従ったＶＫを含み、
（ｉｉ）前記第２の抗体または抗原結合性断片が、配列番号２２に従ったＶＨおよび配列番号２４に従ったＶＬを含む、
請求項２６に記載のキット。

【請求項28】

前記第１の抗体または抗原結合性断片と前記第２の抗体または抗原結合性断片が、それぞれ同じアイソタイプである、請求項２４から２７までのいずれか一項に記載のキット。

【請求項29】

前記第１の抗体または抗原結合性断片と前記第２の抗体または抗原結合性断片が、それぞれ分泌型ＩｇＡである、請求項２８に記載のキット。

【請求項30】

請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチド。

【請求項31】

前記ポリヌクレオチドが、宿主細胞における発現のためにコドン最適化されている、請求項３０に記載の単離されたポリヌクレオチド。

【請求項32】

（ｉ）配列番号１、５、７、８、２１、３７、または３８のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド；
（ｉｉ）配列番号３、６、２３、または３９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド；および／または
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１５〜２０、またはそれぞれ配列番号３１〜３６に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ＨＣＤＲ１をコードする配列、ＨＣＤＲ２をコードする配列、ＨＣＤＲ３をコードする配列、ＬＣＤＲ１をコードする配列、ＬＣＤＲ２をコードする配列、およびＬＣＤＲ３をコードする配列
を含む、請求項３０または３１に記載の単離されたポリヌクレオチド。

【請求項33】

請求項３０から３２までのいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項34】

請求項３０から３２までのいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド、または請求項３３に記載のベクターを含む組換え宿主細胞。

【請求項35】

前記宿主細胞が哺乳動物細胞を含む、請求項３４に記載の組換え宿主細胞。

【請求項36】

前記宿主細胞がＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｙ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ細胞である、請求項３５に記載の組換え宿主細胞。

【請求項37】

請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を作製する方法であって、請求項３４から３６までのいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を、前記抗体または抗原結合性断片の発現に適した条件下で、かつ、それに適した時間にわたって培養することを含む方法。

【請求項38】

被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置するための方法であって、前記被験体に、有効量の請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片、または有効量の請求項２３に記載の組成物を投与することを含む方法。

【請求項39】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体における腸炎症を低減するための方法であって、前記被験体に、有効量の請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片、または有効量の請求項２３に記載の組成物を投与することを含む方法。

【請求項40】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体によるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの腸からの排出を増加させる方法であって、前記被験体に、有効量の請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片、または有効量の請求項２３に記載の組成物を投与することを含む方法。

【請求項41】

前記抗体または抗原結合性断片が、分泌型ＩｇＡ分子を含む、請求項３８から４０までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記投与が、前記抗体、抗原結合性断片、または組成物の経口投与を含む、請求項３８から４１までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記投与することが、前記抗体、抗原結合性断片、または組成物を前記被験体に２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回またはそれよりも多く投与することを含む、請求項３８から４２までの請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記方法が、前記抗体、抗原結合性断片、または組成物を前記被験体に複数回投与することを含み、第２のまたは逐次的な投与が、それぞれ第１のまたは前の投与の約６時間後、約７時間後、約８時間後、約９時間後、約１０時間後、約１１時間後、約１２時間後、約２４時間後、約４８時間後、約７４時間後、約９６時間後、またはそれよりも後におこなわれる、請求項３８から４３までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記抗体、抗原結合性断片、または組成物が前記被験体に、前記被験体が前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに感染する前に少なくとも１回投与される、請求項３８から４４までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記投与の後に、前記被験体由来の便試料が、有効量の前記抗体、抗原結合性断片、または組成物が投与される前の前記被験体由来の便試料と比較して増加した数のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒコロニー形成単位（ＣＦＵ）を含む、請求項３８から４５までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記投与の後に、前記被験体由来の便試料が、有効量の前記抗体、抗原結合性断片、または組成物が投与される前の前記被験体由来の便試料と比較して減少した量のリポカリン−２（ＬＣＮ２）を含む、請求項３８から４６までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記投与の後に、前記被験体が、有効量の前記抗体、抗原結合性断片、または組成物が投与される前の前記被験体と比較して減少した量の多形核（ＰＭＮ）細胞浸潤物を盲腸に含み、前記ＰＭＮ細胞が、Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋である、請求項３８から４７までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記投与の後に、前記被験体は、有効量の前記抗体、抗原結合性断片、または組成物が投与される前の前記被験体と比較して改善された盲腸の組織学的検査所見を有する、請求項３８から４８までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記投与の後に、前記抗体または抗原結合性断片が前記被験体の盲腸および／または糞便中に前記投与後少なくとも４時間にわたってまたは少なくとも８時間にわたって存在する、請求項３８から４９までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

（ａ）被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置する；
（ｂ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体における腸炎症を低減する；および／または
（ｃ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体によるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの腸からの排出を増加させる
方法における使用のための、請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片、または請求項２２に記載の組成物。

【請求項52】

（ａ）被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置するため；
（ｂ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体における腸炎症を低減するため；および／または
（ｃ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体によるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの腸からの排出を増加させるための
医薬を製造または調製する方法における使用のための、請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片、または請求項２３に記載の組成物。

【請求項53】

前記医薬が経口投与用に製剤化されている、請求項５２に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合性断片、または組成物。

【請求項54】

（ｉ）成熟した胃腸免疫系を有さず、かつ
（ｉｉｉ）減損した腸内細菌叢を有し、前記減損が、抗生剤によって引き起こされたものである、
離乳した非ヒト哺乳動物。

【請求項55】

前記離乳した非ヒト哺乳動物が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染をさらに含む、請求項５４に記載の離乳した非ヒト哺乳動物。

【請求項56】

前記非ヒト哺乳動物が、マウスまたはラットである、請求項５４または５５に記載の離乳した非ヒト哺乳動物。

【請求項57】

前記非ヒト哺乳動物が、約１８〜約２４日齢のマウスである、請求項５６に記載の離乳した非ヒト哺乳動物。

【請求項58】

前記哺乳動物が、最近離乳した、請求項５４から５７までのいずれか一項に記載の離乳した非ヒト哺乳動物。

【請求項59】

前記抗生剤が、バンコマイシンまたはその類似体を含む、請求項５４から５８までのいずれか一項に記載の離乳した非ヒト哺乳動物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表に関する記述
本出願に付随する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、これにより参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイル名は４７００８２＿４０６ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。テキストファイルは３０４ＫＢであり、２０１９年７月１６日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出される。

【背景技術】

【0002】

背景
Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒは、世界的に細菌による胃腸炎の最も一般的な原因であり、最近、ヒト健康に対する世界的脅威の潜在性を提起する抗生物質耐性細菌の世界保健機関（ＷＨＯ）リストに加えられた（例えば、"WHO publishes list of bacteria for which new antibiotics are urgently needed", World Health Organization news release, February 27 2017; who.int/en/news-room/detail/27-02-2017-who-publishes-list-of-bacteria-for-which-new-antibiotics-are-urgently-neededを参照されたい）。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの種（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ）は先進国における旅行者下痢の重要な原因であり、また、発展途上国における２歳未満の小児の生命を脅かす急性水様下痢の主要な原因である。現在、カンピロバクター症を防止するための認可されたワクチンは存在しない。補水が主要な治療形態であり、重症感染症では抗生物質が有益であることが示されているが、耐性が急速に発生することを回避するために推奨されないことも多い。

【0003】

したがって、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を防止または処置するための新しい治療法が必要とされている。

【図面の簡単な説明】

【0004】

【図1】図１は、本開示のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ（「Ｃａｍｐｙ」）反応性ｒＳＩｇＡのマウス微生物叢との交差反応性および幅を示す。

【0005】

【図2】図２は、本開示のＣａｍｐｙ反応性ｒＳＩｇＡの細菌運動性を限定する能力を調査する細菌運動性アッセイの設計を示す。

【0006】

【図3】図３は、図２に示した実験の結果を示す。培養プレートは以下の通りであった：（左から右に）＝偽感染；ｍＡｂなし；対照ｒＳＩｇＡ；Ｃａｍｐｙ反応性ｒＳＩｇＡ。

【0007】

【図4A】図４Ａは、１０^９ＣＦＵのＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６株を感染させる１時間前にＣａｍｐｙ反応性ｒＳＩｇＡの予防投薬を受け、その後、感染の６時間後にｒＳＩｇＡの第２の投薬を受けたＣ５７ＢＬ／６マウスの便中のヒトＩｇＡでコーティングされた細菌に関するＦＡＣＳ分析を示す。示されている通り、感染の４時間後、６時間後、および９時間後に便試料を取得した。

【0008】

【図4B】図４Ｂは、無感染マウス（左）と感染マウス（右）の便中の抗ヒトＩｇＡでコーティングされた細菌を示す。

【0009】

【図5A】図５Ａおよび５Ｂは、（Ａ）感染の２４時間後および（Ｂ）感染の７２時間後の、処置を受けた動物および処置を受けていない動物におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの排出を示す。

【図5B】図５Ａおよび５Ｂは、（Ａ）感染の２４時間後および（Ｂ）感染の７２時間後の、処置を受けた動物および処置を受けていない動物におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの排出を示す。

【0010】

【図6】図６は、感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中のリポカリン−２のＥＬＩＳＡによる数量化を示す。

【0011】

【図7A】図７Ａ〜７Ｅは、ＦｌｉＤに結合する本開示の例示的な抗体であるＣＡＡ１およびＣＣＧ４（ｒＳＩｇＡと表される）に関するｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特徴付けを示す。（Ａ）ＥＬＩＳＡによって測定した、ＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのコーティングされた組換えＦｌｉＤへの結合。３種のｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｂ）バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって実施した交差競合試験。ＦｌｉＤ抗原をＡＰＳセンサーに固定化し、次いで、ＣＡＡ１と一緒にインキュベートした後、１％ＢＳＡを伴うＣＧＧ４、ＣＡＡ１またはＰＢＳと会合させた。（Ｃ）還元および変性条件下でのＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのＦｌｉＤ抗原（７０ＫＤａ）への結合に関するウエスタンブロット分析。（Ｄ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｅ）共焦点顕微鏡で観察されたＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉへの結合。細菌はＳｙｔｏ ＢＣを使用して染色し、一方ｍＡｂはＡＦ６４７とコンジュゲートした抗ヒトＩｇＡを使用して検出した。

【図7B】図７Ａ〜７Ｅは、ＦｌｉＤに結合する本開示の例示的な抗体であるＣＡＡ１およびＣＣＧ４（ｒＳＩｇＡと表される）に関するｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特徴付けを示す。（Ａ）ＥＬＩＳＡによって測定した、ＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのコーティングされた組換えＦｌｉＤへの結合。３種のｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｂ）バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって実施した交差競合試験。ＦｌｉＤ抗原をＡＰＳセンサーに固定化し、次いで、ＣＡＡ１と一緒にインキュベートした後、１％ＢＳＡを伴うＣＧＧ４、ＣＡＡ１またはＰＢＳと会合させた。（Ｃ）還元および変性条件下でのＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのＦｌｉＤ抗原（７０ＫＤａ）への結合に関するウエスタンブロット分析。（Ｄ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｅ）共焦点顕微鏡で観察されたＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉへの結合。細菌はＳｙｔｏ ＢＣを使用して染色し、一方ｍＡｂはＡＦ６４７とコンジュゲートした抗ヒトＩｇＡを使用して検出した。

【図7C】図７Ａ〜７Ｅは、ＦｌｉＤに結合する本開示の例示的な抗体であるＣＡＡ１およびＣＣＧ４（ｒＳＩｇＡと表される）に関するｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特徴付けを示す。（Ａ）ＥＬＩＳＡによって測定した、ＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのコーティングされた組換えＦｌｉＤへの結合。３種のｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｂ）バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって実施した交差競合試験。ＦｌｉＤ抗原をＡＰＳセンサーに固定化し、次いで、ＣＡＡ１と一緒にインキュベートした後、１％ＢＳＡを伴うＣＧＧ４、ＣＡＡ１またはＰＢＳと会合させた。（Ｃ）還元および変性条件下でのＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのＦｌｉＤ抗原（７０ＫＤａ）への結合に関するウエスタンブロット分析。（Ｄ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｅ）共焦点顕微鏡で観察されたＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉへの結合。細菌はＳｙｔｏ ＢＣを使用して染色し、一方ｍＡｂはＡＦ６４７とコンジュゲートした抗ヒトＩｇＡを使用して検出した。

【図7D】図７Ａ〜７Ｅは、ＦｌｉＤに結合する本開示の例示的な抗体であるＣＡＡ１およびＣＣＧ４（ｒＳＩｇＡと表される）に関するｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特徴付けを示す。（Ａ）ＥＬＩＳＡによって測定した、ＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのコーティングされた組換えＦｌｉＤへの結合。３種のｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｂ）バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって実施した交差競合試験。ＦｌｉＤ抗原をＡＰＳセンサーに固定化し、次いで、ＣＡＡ１と一緒にインキュベートした後、１％ＢＳＡを伴うＣＧＧ４、ＣＡＡ１またはＰＢＳと会合させた。（Ｃ）還元および変性条件下でのＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのＦｌｉＤ抗原（７０ＫＤａ）への結合に関するウエスタンブロット分析。（Ｄ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｅ）共焦点顕微鏡で観察されたＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉへの結合。細菌はＳｙｔｏ ＢＣを使用して染色し、一方ｍＡｂはＡＦ６４７とコンジュゲートした抗ヒトＩｇＡを使用して検出した。

【図7E】図７Ａ〜７Ｅは、ＦｌｉＤに結合する本開示の例示的な抗体であるＣＡＡ１およびＣＣＧ４（ｒＳＩｇＡと表される）に関するｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特徴付けを示す。（Ａ）ＥＬＩＳＡによって測定した、ＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのコーティングされた組換えＦｌｉＤへの結合。３種のｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｂ）バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって実施した交差競合試験。ＦｌｉＤ抗原をＡＰＳセンサーに固定化し、次いで、ＣＡＡ１と一緒にインキュベートした後、１％ＢＳＡを伴うＣＧＧ４、ＣＡＡ１またはＰＢＳと会合させた。（Ｃ）還元および変性条件下でのＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡのＦｌｉＤ抗原（７０ＫＤａ）への結合に関するウエスタンブロット分析。（Ｄ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｅ）共焦点顕微鏡で観察されたＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉへの結合。細菌はＳｙｔｏ ＢＣを使用して染色し、一方ｍＡｂはＡＦ６４７とコンジュゲートした抗ヒトＩｇＡを使用して検出した。

【0012】

【図8A】図８Ａ〜８Ｄは、離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスがＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して高度に感受性であることを示す。（Ａ〜Ｃ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを経口感染させた。感染の６日後に、感染した動物の便中の（Ａ）細菌負荷量（ＣＦＵ）、および（Ｂ）リポカリン２（ＬＣＮ２）を決定した。（Ｃ）感染の６日後の、感染マウス由来の盲腸の代表的なＨ＆Ｅ切片および病理組織学的スコアの統計解析。白色の矢印：粘膜下炎症；白色のアスタリスク：杯細胞の数の減少を伴う陰窩過形成；黒色のアスタリスク：上皮剥離；黒色の矢印：粘膜炎症。スケールバー：２００μｍ。（Ｄ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中ＩｇＡ濃度の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図8B】図８Ａ〜８Ｄは、離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスがＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して高度に感受性であることを示す。（Ａ〜Ｃ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを経口感染させた。感染の６日後に、感染した動物の便中の（Ａ）細菌負荷量（ＣＦＵ）、および（Ｂ）リポカリン２（ＬＣＮ２）を決定した。（Ｃ）感染の６日後の、感染マウス由来の盲腸の代表的なＨ＆Ｅ切片および病理組織学的スコアの統計解析。白色の矢印：粘膜下炎症；白色のアスタリスク：杯細胞の数の減少を伴う陰窩過形成；黒色のアスタリスク：上皮剥離；黒色の矢印：粘膜炎症。スケールバー：２００μｍ。（Ｄ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中ＩｇＡ濃度の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図8C】図８Ａ〜８Ｄは、離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスがＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して高度に感受性であることを示す。（Ａ〜Ｃ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを経口感染させた。感染の６日後に、感染した動物の便中の（Ａ）細菌負荷量（ＣＦＵ）、および（Ｂ）リポカリン２（ＬＣＮ２）を決定した。（Ｃ）感染の６日後の、感染マウス由来の盲腸の代表的なＨ＆Ｅ切片および病理組織学的スコアの統計解析。白色の矢印：粘膜下炎症；白色のアスタリスク：杯細胞の数の減少を伴う陰窩過形成；黒色のアスタリスク：上皮剥離；黒色の矢印：粘膜炎症。スケールバー：２００μｍ。（Ｄ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中ＩｇＡ濃度の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図8D】図８Ａ〜８Ｄは、離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスがＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して高度に感受性であることを示す。（Ａ〜Ｃ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを経口感染させた。感染の６日後に、感染した動物の便中の（Ａ）細菌負荷量（ＣＦＵ）、および（Ｂ）リポカリン２（ＬＣＮ２）を決定した。（Ｃ）感染の６日後の、感染マウス由来の盲腸の代表的なＨ＆Ｅ切片および病理組織学的スコアの統計解析。白色の矢印：粘膜下炎症；白色のアスタリスク：杯細胞の数の減少を伴う陰窩過形成；黒色のアスタリスク：上皮剥離；黒色の矢印：粘膜炎症。スケールバー：２００μｍ。（Ｄ）１２日齢、２１日齢および５６日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中ＩｇＡ濃度の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【0013】

【図9A】図９Ａ〜９Ｄは、離乳したばかりのマウスにおける、経口投与されたＣＡＡ１およびＣＣＧ４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する予防活性を示す。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ｃｆｕのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＰＢＳ中２００μｇの示されているｍＡｂを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）を決定した。（Ｂ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）レベル。（Ｃ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる多形核（ＰＭＮ）細胞浸潤物の統計解析。（Ｄ）感染の７２時間後に、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアを決定した。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図9B】図９Ａ〜９Ｄは、離乳したばかりのマウスにおける、経口投与されたＣＡＡ１およびＣＣＧ４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する予防活性を示す。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ｃｆｕのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＰＢＳ中２００μｇの示されているｍＡｂを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）を決定した。（Ｂ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）レベル。（Ｃ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる多形核（ＰＭＮ）細胞浸潤物の統計解析。（Ｄ）感染の７２時間後に、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアを決定した。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図9C】図９Ａ〜９Ｄは、離乳したばかりのマウスにおける、経口投与されたＣＡＡ１およびＣＣＧ４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する予防活性を示す。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ｃｆｕのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＰＢＳ中２００μｇの示されているｍＡｂを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）を決定した。（Ｂ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）レベル。（Ｃ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる多形核（ＰＭＮ）細胞浸潤物の統計解析。（Ｄ）感染の７２時間後に、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアを決定した。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図9D】図９Ａ〜９Ｄは、離乳したばかりのマウスにおける、経口投与されたＣＡＡ１およびＣＣＧ４ ｒＳＩｇＡ２のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する予防活性を示す。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ｃｆｕのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＰＢＳ中２００μｇの示されているｍＡｂを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）を決定した。（Ｂ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）レベル。（Ｃ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる多形核（ＰＭＮ）細胞浸潤物の統計解析。（Ｄ）感染の７２時間後に、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアを決定した。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【0014】

【図10A】図１０Ａ〜１０Ｄは、ＣＡＡ１ ＳＩｇＡ１およびＳＩｇＡ２がＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して同様の予防活性を有することを。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ１またはｒＳＩｇＡ２として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図10B】図１０Ａ〜１０Ｄは、ＣＡＡ１ ＳＩｇＡ１およびＳＩｇＡ２がＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して同様の予防活性を有することを。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ１またはｒＳＩｇＡ２として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図10C】図１０Ａ〜１０Ｄは、ＣＡＡ１ ＳＩｇＡ１およびＳＩｇＡ２がＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して同様の予防活性を有することを。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ１またはｒＳＩｇＡ２として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図10D】図１０Ａ〜１０Ｄは、ＣＡＡ１ ＳＩｇＡ１およびＳＩｇＡ２がＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対して同様の予防活性を有することを。（Ａ〜Ｄ）２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ１またはｒＳＩｇＡ２として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【0015】

【図11A】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＩｇＧへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＡＡ１予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図11B】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＩｇＧへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＡＡ１予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図11C】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＩｇＧへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＡＡ１予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図11D】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＩｇＧへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＡＡ１予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＣＡＡ１をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後、４８時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）Ｇｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋としてゲーティングされる、盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【0016】

【図12-1】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-2】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-3】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-4】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-5】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-6】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-7】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-8】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-9】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-10】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-11】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-12】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-13】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-14】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-15】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-16】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-17】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-18】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-19】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-20】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-21】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-22】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-23】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-24】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-25】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-26】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-27】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-28】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-29】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-30】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-31】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【図12-32】図１２は、ＦｌｉＤアミノ酸配列保存の解析を示す。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ分離株由来のＦｌｉＤアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋから検索し、ＣＬＣ Ｍａｉｎ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して解析した。配列ロゴの各文字の高さは、特定の部位におけるそのアミノ酸の保存のレベルを表す。ＦｌｉＤのコンセンサス配列が一番上に示されている。

【0017】

【図13】図１３は、種々の扁桃試料由来のＦｌｉＤ反応性ＩｇＡ^＋およびＩｇＧ^＋メモリーＢ細胞の頻度を示す。種々の扁桃試料についてのＩｇＡ^＋（上のパネル）およびＩｇＧ^＋（下のパネル）メモリーＢ細胞レパートリーのＦｌｉＤ抗原に対する反応性の分析が示されている。

【0018】

【図14A】図１４Ａ〜１４Ｃは、ＦｌｉＤ反応性ｍＡｂのマウス微生物叢との交差反応性および離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスの盲腸における持続性を示す。（Ａ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉまたはＣ．ｃｏｌｉを偽感染または感染させたマウスの糞便微生物叢に対する示されているｍＡｂの特異的結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｂ〜Ｃ）示されている時点での種々のマウス腸亜区画におけるＨＧＮ１９４（Ｂ）ｒＳＩｇＡおよび（Ｃ）ｒＩｇＧ抗体のＥＬＩＳＡによる薬物動態学評価。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図14B】図１４Ａ〜１４Ｃは、ＦｌｉＤ反応性ｍＡｂのマウス微生物叢との交差反応性および離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスの盲腸における持続性を示す。（Ａ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉまたはＣ．ｃｏｌｉを偽感染または感染させたマウスの糞便微生物叢に対する示されているｍＡｂの特異的結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｂ〜Ｃ）示されている時点での種々のマウス腸亜区画におけるＨＧＮ１９４（Ｂ）ｒＳＩｇＡおよび（Ｃ）ｒＩｇＧ抗体のＥＬＩＳＡによる薬物動態学評価。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図14C】図１４Ａ〜１４Ｃは、ＦｌｉＤ反応性ｍＡｂのマウス微生物叢との交差反応性および離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスの盲腸における持続性を示す。（Ａ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉまたはＣ．ｃｏｌｉを偽感染または感染させたマウスの糞便微生物叢に対する示されているｍＡｂの特異的結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｂ〜Ｃ）示されている時点での種々のマウス腸亜区画におけるＨＧＮ１９４（Ｂ）ｒＳＩｇＡおよび（Ｃ）ｒＩｇＧ抗体のＥＬＩＳＡによる薬物動態学評価。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【0019】

【図15A】図１５Ａ〜１５Ｄは、種々のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染用量でのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡの予防活性を示すさらなるデータを提示する。（Ａ〜Ｂ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた２４時間後、７２時間後および１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｃ〜Ｄ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中リポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図15B】図１５Ａ〜１５Ｄは、種々のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染用量でのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡの予防活性を示すさらなるデータを提示する。（Ａ〜Ｂ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた２４時間後、７２時間後および１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｃ〜Ｄ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中リポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図15C】図１５Ａ〜１５Ｄは、種々のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染用量でのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡの予防活性を示すさらなるデータを提示する。（Ａ〜Ｂ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた２４時間後、７２時間後および１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｃ〜Ｄ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中リポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図15D】図１５Ａ〜１５Ｄは、種々のＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染用量でのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡの予防活性を示すさらなるデータを提示する。（Ａ〜Ｂ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた２４時間後、７２時間後および１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｃ〜Ｄ）１０^７または１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させた１２０時間後に測定した、２００μｇのＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２を強制飼養によって投与した２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける糞便中リポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。少なくとも２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【0020】

【図16A】図１６Ａ〜１６Ｄは、ＩｇＡアイソタイプスイッチがＩｇａｓｅ感受性には影響を及ぼすが、ＦｌｉＤ親和性または特異性には影響を及ぼさないことを示す。（Ａ）ＰＢＳまたはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ．からのｒＩｇＡプロテアーゼ（ＩｇＡｓｅ Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｐｒｏ）と一緒に終夜（１８時間）インキュベートしたＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２の変性非還元ゲル（１：ＳＩｇＡ１＋ＰＢＳ；２：ＳＩｇＡ２＋ＰＢＳ；３：ＳＩｇＡ１＋Ｉｇａｓｅ；４：ＳＩｇＡ２＋Ｉｇａｓｅ）。（Ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２ ＣＡＡ１のＦｌｉＤへの結合。ｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｃ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特異的結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｄ）感染していない離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスの糞便微生物叢に対するＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２結合の代表的なヒストグラム。

【図16B】図１６Ａ〜１６Ｄは、ＩｇＡアイソタイプスイッチがＩｇａｓｅ感受性には影響を及ぼすが、ＦｌｉＤ親和性または特異性には影響を及ぼさないことを示す。（Ａ）ＰＢＳまたはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ．からのｒＩｇＡプロテアーゼ（ＩｇＡｓｅ Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｐｒｏ）と一緒に終夜（１８時間）インキュベートしたＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２の変性非還元ゲル（１：ＳＩｇＡ１＋ＰＢＳ；２：ＳＩｇＡ２＋ＰＢＳ；３：ＳＩｇＡ１＋Ｉｇａｓｅ；４：ＳＩｇＡ２＋Ｉｇａｓｅ）。（Ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２ ＣＡＡ１のＦｌｉＤへの結合。ｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｃ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特異的結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｄ）感染していない離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスの糞便微生物叢に対するＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２結合の代表的なヒストグラム。

【図16C】図１６Ａ〜１６Ｄは、ＩｇＡアイソタイプスイッチがＩｇａｓｅ感受性には影響を及ぼすが、ＦｌｉＤ親和性または特異性には影響を及ぼさないことを示す。（Ａ）ＰＢＳまたはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ．からのｒＩｇＡプロテアーゼ（ＩｇＡｓｅ Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｐｒｏ）と一緒に終夜（１８時間）インキュベートしたＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２の変性非還元ゲル（１：ＳＩｇＡ１＋ＰＢＳ；２：ＳＩｇＡ２＋ＰＢＳ；３：ＳＩｇＡ１＋Ｉｇａｓｅ；４：ＳＩｇＡ２＋Ｉｇａｓｅ）。（Ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２ ＣＡＡ１のＦｌｉＤへの結合。ｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｃ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特異的結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｄ）感染していない離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスの糞便微生物叢に対するＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２結合の代表的なヒストグラム。

【図16D】図１６Ａ〜１６Ｄは、ＩｇＡアイソタイプスイッチがＩｇａｓｅ感受性には影響を及ぼすが、ＦｌｉＤ親和性または特異性には影響を及ぼさないことを示す。（Ａ）ＰＢＳまたはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ．からのｒＩｇＡプロテアーゼ（ＩｇＡｓｅ Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｐｒｏ）と一緒に終夜（１８時間）インキュベートしたＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２の変性非還元ゲル（１：ＳＩｇＡ１＋ＰＢＳ；２：ＳＩｇＡ２＋ＰＢＳ；３：ＳＩｇＡ１＋Ｉｇａｓｅ；４：ＳＩｇＡ２＋Ｉｇａｓｅ）。（Ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２ ＣＡＡ１のＦｌｉＤへの結合。ｍＡｂの段階希釈物を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で１時間インキュベートした。ビオチン化抗ヒトＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を実施した。（Ｃ）Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉの純粋培養物に対する示されているｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特異的結合の代表的なヒストグラム。３回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。（Ｄ）感染していない離乳したばかりのＣ５７ＢＬ／６マウスの糞便微生物叢に対するＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ１およびｒＳＩｇＡ２結合の代表的なヒストグラム。

【0021】

【図17A】図１７Ａ〜１７Ｄは、ＩｇＧフォーマットへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＣＧ４の予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにＣＣｇ４をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）感染の７２時間後の盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化、および（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図17B】図１７Ａ〜１７Ｄは、ＩｇＧフォーマットへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＣＧ４の予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにＣＣｇ４をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）感染の７２時間後の盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化、および（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図17C】図１７Ａ〜１７Ｄは、ＩｇＧフォーマットへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＣＧ４の予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにＣＣｇ４をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）感染の７２時間後の盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化、および（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【図17D】図１７Ａ〜１７Ｄは、ＩｇＧフォーマットへの変換により、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する経口ＣＣＧ４の予防活性が低下することを示す。（Ａ〜Ｄ）１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉを感染させる２時間前に、２１日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにＣＣｇ４をｒＳＩｇＡ２またはｒＩｇＧ１として２００μｇを強制飼養することによって経口投与した。（Ａ）感染の２４時間後および７２時間後の動物の便中の細菌負荷量（ＣＦＵ）の数量化。（Ｂ）感染の７２時間後の盲腸に浸潤した多形核細胞の代表的なドットプロットおよび相対的な数量化。（Ｃ）便中のリポカリン−２（ＬＣＮ）の数量化、および（Ｄ）感染の７２時間後の、異なる処置条件下での盲腸における病理組織学的スコアの統計解析。ドットは個々のマウスを表し、結果は±ＳＥＭとして表されている。マン・ホイットニー検定（Ａ〜Ｄ）を使用した。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２回の実験のうちの代表的な１回の実験が示されている。

【発明を実施するための形態】

【0022】

詳細な説明
Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに特異的な抗体および抗原結合性断片、それを含む組成物、ならびに、被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置する（例えば、低減する、遅延させる、排除する、または防止する）ための、抗体および組成物の使用方法が本明細書に提示される。一部の実施形態では、本開示の抗体は、二量体ＩｇＡ分子などのＩｇＡ分子を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＩｇＡ抗体は、本明細書に記載の分泌形態（ＳＩｇＡ）で提供される。本開示の抗体および抗原結合性断片の投与、例えば、ここに開示されるＳＩｇＡの経口送達による投与により、重症新生児胃腸炎に関連するＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの種などのＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒによる感染を処置することができる。

【0023】

背景として、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒは、世界的に確立された下痢の原因であり、最近、抗生物質耐性によりヒト健康に対する世界的脅威が提起され得る細菌のＷＨＯリストに加えられた（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）、２０１７）。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの疫学は、この細菌との遭遇が散発的である高所得国と、幼児期の感染がほぼ普遍的であり、乳児における生命を脅かす急性水様下痢の主要な原因になっている低所得および中所得国との間で異なる（Riddle and Guerry, Vaccine, 34:2903-2906 (2016)）。

【0024】

主要な人畜共通感染症であることを考慮すると、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染は、汚染された加熱不十分な動物肉（家禽が主要な細菌保有宿主である）、水または低温殺菌されていない牛乳の消費に主に関連付けられる（Kaakoush et al., Clin.Microbiol.Rev., 28:687-720 (2015)）。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉがヒトにおけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ腸炎の主要な原因である（Man, Nat.Rev.Gastroenterol.Hepatol., 8:669-685 (2011)）。

【0025】

カンピロバクター症は、一般には、平均で６日間続く水様または血性下痢、発熱、体重減少、および痙攣を特徴とする急性胃腸疾病をもたらすKaakoush et al., Clin.Microbiol.Rev., 28:687-720 (2015)；World Health Organization (WHO) (2013)）。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ腸炎に付随する重症脱水は、特に発展途上国における新生児および小児の死亡の重要な原因である（Platts-Mills et al., Lancet Glob.Health., 3: e564-75 (2015)）。さらに、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染は、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）などの自己免疫性状態（Islam et al., PLoS One, 7: e43976 (2012)；Yuki et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 101:11404-11409 (2004)）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（Gradel et al., Gastroenterology, 137:495-501 (2009)）の発症に一貫して結び付けられてきた。

【0026】

実験動物モデルおよびヒト健康志願者試験の両方で示されている通り、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの毒力および病原性には鞭毛に媒介される運動性が重要であると考えられる（Black et al., J.Infect.Dis., 157:472-479 (1988)；Morooka et al., J.Gen.Microbiol., 131:1973-1980 (1985)）。しかし、鞭毛の主要な構成物であるフラジェリン（ＦｌａＡ）は、同じＣ．ｊｅｊｕｎｉ種内であってさえ高レベルの保存を示さず、また、その多数のグリコシル化パターンは株および成長相に応じて著しく変動する（Parkhill et al., Nature, 403:665-668 (2000)；Thibault et al., J.Biol.Chem., 276:34862-34870 (2001)）。組換え非グリコシル化形態のＣ．ｊｅｊｕｎｉフラジェリンは免疫原性が低いことが臨床試験において示され（Riddle and Guerry, Vaccine, 34:2903-2906 (2016)）これにより、ＦｌａＡが治療の標的として難しいものになっている。さらに、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉをワクチンに使用する可能性は、細菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）のガングリオシド模倣物に付随するＧＢＳ発生のリスクによって限定されている（Riddle and Guerry, Vaccine, 34:2903-2906 (2016)）。

【0027】

これらの欠点に起因して、現在、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を防止するための世界的な規制当局に認可されたワクチンは存在しない。補水が主要な治療形態であり、また、重症感染では抗生物質が有益であることが示されているが、抗生物質耐性が急速に発生することに起因して推奨されないことも多い。感染から回復した場合であっても、低所得国における乳児のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒを含めた腸内病原体への継続的な曝露が、栄養分の吸収不良、成長不良、認知発達障害、微生物叢の変化、および経口ワクチン接種に対する応答性の低下に関連する小腸の無症状の慢性炎症である環境性腸疾患（ＥＥ）／環境性腸内機能障害（ＥＥＤ）に結び付けられている（Watanabe and Petri, EBioMedicine, 10:25-32 (2016)）。

【0028】

本開示は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質ＦｌｉＤに結合する抗体および抗原結合性断片を提供する。本開示による抗体は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの運動性を有利に限定し、本開示に記載のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染の動物モデルにおいて、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染クリアランスを追加刺激し、上皮損傷および多形核（ＰＭＮ）細胞浸潤に関連する炎症マーカーのレベルを有意に低下させることができる。

【0029】

本開示のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ＦｌｉＤに特異的な抗体または抗原結合性断片、抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含有するベクター、ならびに抗体もしくは抗原結合性断片を発現し、かつ／または本開示のポリヌクレオチドもしくはベクターを含むもしくは含有する宿主細胞を含む組成物も本明細書に提示される。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置するため、および／または付随する症状を低減するための方法および使用も提供される。

【0030】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を研究するための非ヒト動物モデルも提供される。

【0031】

本開示をより詳細に記載する前に、本開示を理解するために本明細書で使用される特定の用語の定義を提示することが役立ち得る。追加的な定義が本開示全体を通して記載される。

【0032】

本説明では、濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲はいずれも、別段の指定のない限り、記載されている範囲内のあらゆる整数の値、および、適切な場合にはその分率（整数の１０分の１および１００分の１など）を含むものと理解されるべきである。また、ポリマーサブユニット、サイズまたは厚さなどの任意の物理的特色に関する本明細書に記載の数の範囲はいずれも、別段の指定のない限り、記載されている範囲内のあらゆる整数を含むものと理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、別段の指定のない限り、示されている範囲、値、または構造の±２０％を意味する。「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」という用語は、本明細書で使用される場合、列挙されている構成成分の「１つまたは複数（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」を指すことが理解されるべきである。選択肢（例えば、「または（ｏｒ）」）は、選択肢の一方、両方、またはこれらの任意の組合せのいずれかを意味するものと理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は同義に使用され、これらの用語およびその変形は、非限定的なものと解釈されることが意図されている。

【0033】

「必要に応じた」または「必要に応じて」は、その後に記載される要素、構成成分、事象、または状況が存在してもしなくてもよいこと、ならびに、記載には、要素、構成成分、事象、または状況が存在する例およびそれらが存在しない例が含まれることを意味する。

【0034】

さらに、本明細書に記載の構造およびサブユニットの種々の組合せに由来する個々の構築物または構築物の群は、各構築物または構築物の群が個別に記載されているものと同じ程度に本出願により開示されることが理解されるべきである。したがって、特定の構造または特定のサブユニットの選択は本開示の範囲内に入る。

【0035】

「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と等価ではなく、請求項の指定の材料もしくはステップ、または特許請求された主題の基本的な特徴に実質的な影響を及ぼさない指定の材料もしくはステップを指す。例えば、タンパク質ドメイン、領域、もしくはモジュール（例えば、結合性ドメイン、ヒンジ領域、もしくはリンカー）またはタンパク質（１つもしくは複数のドメイン、領域、もしくはモジュールを有し得る）は、ドメイン、領域、モジュール、もしくはタンパク質のアミノ酸配列（例えば、アミノ末端またはカルボキシ末端またはドメイン間にあるアミノ酸）に含まれる伸長、欠失、変異、またはこれらの組合せの、ドメイン、領域、モジュール、もしくはタンパク質の長さへの寄与が、組み合わせて最大で２０％（例えば、最大で１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％または１％）であり、ドメイン（複数可）、領域（複数可）、モジュール（複数可）、もしくはタンパク質の活性（例えば、結合性タンパク質の標的結合親和性）に実質的な影響を及ぼさない（すなわち、活性を５０％よりも大きく、例えば、４０％よりも大きく、３０％よりも大きく、２５％よりも大きく、２０％よりも大きく、１５％よりも大きく、１０％よりも大きく、５％よりも大きく、または１％よりも大きくは低下させない）ものであれば、特定のアミノ酸配列「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」。

【0036】

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸、ならびに後に修飾されているアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基と結合したα−炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化学化合物を指す。

【0037】

本明細書で使用される場合、「変異」は、核酸分子またはポリペプチド分子の、それぞれ参照または野生型核酸分子またはポリペプチド分子と比較した配列の変化を指す。変異の結果、ヌクレオチド（複数可）またはアミノ酸（複数可）の置換、挿入または欠失を含めたいくつかの異なる型の配列の変化が生じ得る。

【0038】

「保存的置換」とは、特定のタンパク質の結合特徴に著しく影響しないまたはそれを著しく変更させないアミノ酸置換を指す。一般に、保存的置換は、置換されるアミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。保存的置換は、以下の群のうちの１つにおいて見いだされる置換を含む：群１：アラニン（ＡｌａまたはＡ）、グリシン（ＧｌｙまたはＧ）、セリン（ＳｅｒまたはＳ）、トレオニン（ＴｈｒまたはＴ）；群２：アスパラギン酸（ＡｓｐまたはＤ）、グルタミン酸（ＧｌｕまたはＺ）；群３：アスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）、グルタミン（ＧｌｎまたはＱ）；群４：アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）、リシン（ＬｙｓまたはＫ）、ヒスチジン（ＨｉｓまたはＨ）；群５：イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）、ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）、メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）、バリン（ＶａｌまたはＶ）；および群６：フェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）、チロシン（ＴｙｒまたはＹ）、トリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）。それに加えて、またはその代わりに、アミノ酸を、同様の機能、化学構造、または組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、または硫黄含有）によって保存的置換群に群分けすることができる。例えば、脂肪族群分けは、置換目的に関して、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅを含み得る。他の保存的置換群としては、硫黄含有：Ｍｅｔおよびシステイン（ＣｙｓまたはＣ）；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、およびＧｌｎ；低分子脂肪族、非極性またはわずかに極性を有する残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、およびＧｌｙ；極性、負に荷電した残基およびそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、およびＧｌｎ；極性、正に荷電した残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、およびＬｙｓ；高分子脂肪族、非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、およびＣｙｓ；ならびに高分子芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐが挙げられる。追加的な情報は、Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Companyに見いだすことができる。

【0039】

本明細書で使用される場合、「タンパク質」または「ポリペプチド」は、アミノ酸残基のポリマーを指す。タンパク質は、天然に存在するアミノ酸ポリマー、ならびに１つまたは複数のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸ポリマーの人工的な化学的模倣物であるアミノ酸ポリマーに適用される。本開示のタンパク質、ペプチド、およびポリペプチドのバリアントも意図されている。ある特定の実施形態では、バリアントタンパク質、ペプチド、およびポリペプチドは、本明細書に記載の定義されたまたは参照アミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0040】

「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」または「ポリ核酸」は、天然のサブユニット（例えば、プリンまたはピリミジン塩基）で構成されたものであっても非天然サブユニット（例えば、モルホリン環）で構成されたものであってもよい、共有結合により連結したヌクレオチドを含む高分子化合物を指す。プリン塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、およびキサンチンを含み、ピリミジン塩基は、ウラシル、チミン、およびシトシンを含む。核酸分子は、ｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ウイルスゲノムＲＮＡ、および合成ＲＮＡを含むポリリボ核酸（ＲＮＡ）、ならびにｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡを含むポリデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含み、これらはいずれも一本鎖であっても二本鎖であってもよい。一本鎖である場合、核酸分子は、コード鎖であっても非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。アミノ酸配列をコードする核酸分子は、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列の一部のバージョンは、イントロン（複数可）が転写と同時のまたは転写後の機序によって取り除かれる限りはイントロン（複数可）も含んでよい。言い換えれば、遺伝暗号重複性または縮退の結果として、またはスプライシングにより、異なるヌクレオチド配列が同じアミノ酸配列をコードし得る。

【0041】

本開示の核酸分子のバリアントも意図されている。バリアント核酸分子は、本明細書に記載の定義されたまたは参照ポリヌクレオチドの核酸分子と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％同一であり、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９．９％同一であることが好ましい、または、０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、約６５〜６８℃、もしくは０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、および５０％ホルムアミド、約４２℃というストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でポリヌクレオチドにハイブリダイズする。核酸分子バリアントは、標的分子への結合などの本明細書に記載の機能性を有するその結合性ドメインをコードする能力を保持する。

【0042】

「パーセント配列同一性」は、配列を比較することによって決定される、２つまたはそれよりも多くの配列間の関係を指す。配列同一性を決定するための好ましい方法は、比較される配列間の最良の一致がもたらされるように設計される。例えば、最適に比較するために配列をアラインメントする（例えば、最適なアラインメントのために第１のアミノ酸配列または核酸配列と第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができる）。さらに、比較する目的で非相同配列を無視することができる。本明細書において参照されるパーセント配列同一性は、別段の指定のない限り、参照配列の長さにわたって算出される。配列同一性および類似性を決定する方法は、公的に利用可能なコンピュータープログラムに見いだすことができる。配列アラインメントおよびパーセント同一性の算出は、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ２．０、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、またはＢＬＡＳＴＸ）を使用して実施することができる。ＢＬＡＳＴプログラムで使用される数学アルゴリズムは、Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997に見いだすことができる。本開示の文脈内では、配列解析ソフトウェアを解析に使用する場合、解析の結果は、参照されるプログラムの「デフォルト値」に基づくことが理解されよう。「デフォルト値」とは、最初の初期化時にソフトウェアに元々ロードされた任意の値またはパラメーターのセットを意味する。

【0043】

「単離された」という用語は、材料が元の環境（例えば、天然に存在する場合には天然の環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物中に存在する天然に存在する核酸またはポリペプチドは単離されていないが、同じ核酸またはポリペプチドが、天然の系では共存している材料の一部または全部から分離されている場合、それは単離されたものである。そのような核酸は、ベクターの一部であり得る、かつ／またはそのような核酸もしくはポリペプチドは、組成物（例えば、細胞溶解物）の一部であり得るが、それでもなお、そのようなベクターまたは組成物が当該核酸またはポリペプチドの天然の環境の一部ではないという点で、単離されたものである。

【0044】

「遺伝子」という用語は、ポリペプチド鎖の生成に関与するＤＮＡまたはＲＮＡのセグメントを意味する。遺伝子は、コード領域の前後の領域（例えば、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）および３’ＵＴＲ）ならびに個々のコードセグメント（エクソン）の間の介在配列（イントロン）を含む。

【0045】

「機能的バリアント」とは、本開示の親または参照化合物と構造的に類似しているまたは実質的に構造的に類似しているが、組成がわずかに異なる（例えば、１つの塩基、原子または官能基が異なる、付加された、または除去された）ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指し、したがって、ポリペプチドまたはコードされるポリペプチドは、親ポリペプチドの少なくとも１つの機能を、少なくとも５０％の効率で、好ましくは、親ポリペプチドの活性の少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のレベルで果たすことができる。言い換えれば、本開示のポリペプチドまたはコードされるポリペプチドの機能的バリアントは、結合親和性を測定するためのアッセイ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）または会合定数（Ｋａ）または解離定数（ＫＤ）を測定する四量体染色）などの選択されたアッセイにおいて親または参照ポリペプチドと比較して機能的バリアントが示す性能の低下が５０％以下であれば、「同様の結合性」、「同様の親和性」または「同様の活性」を有する。

【0046】

本明細書で使用される場合、「機能的部分」または「機能的断片」とは、親または参照化合物のドメイン、部分または断片のみを含むポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指し、ポリペプチドまたはコードされるポリペプチドは、親または参照化合物のドメイン、部分または断片に付随する少なくとも５０％の活性、好ましくは親ポリペプチドの活性の少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、もしくは１００％のレベルを保持する、または、生物学的利益（例えば、エフェクター機能）をもたらす。本開示のポリペプチドまたはコードされるポリペプチドの「機能的部分」または「機能的断片」は、選択されたアッセイにおいて親もしくは参照ポリペプチドと比較して機能的部分または断片が示す性能の低下が５０％以下（好ましくは２０％以下もしくは１０％以下、または親和性に関しては親もしくは参照と比較して対数差以下）であれば、「同様の結合性」または「同様の活性」を有する。

【0047】

本明細書で使用される場合、「工学的に操作された」、「組換え」または「非天然」という用語は、少なくとも１つの遺伝子の変更を含む、または外因性もしくは異種核酸分子の導入によって改変された生物体、微生物、細胞、核酸分子、またはベクターを指し、そのような変更または改変は、遺伝子工学（すなわち、人為的な介入）によって導入される。遺伝子の変更としては、例えば、機能的なＲＮＡ、タンパク質、融合タンパク質もしくは酵素をコードする発現可能な核酸分子が導入される改変、または他の核酸分子の付加、欠失、置換、もしくは細胞の遺伝子材料の他の機能的破壊が挙げられる。追加的な改変としては、例えば、改変によりポリヌクレオチド、遺伝子、またはオペロンの発現が変更される非コード調節領域が挙げられる。

【0048】

本明細書で使用される場合、「異種」または「非内因性」または「外因性」とは、宿主細胞もしくは被験体に対してネイティブではない任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、もしくは活性、または、宿主細胞もしくは被験体に対してネイティブであるが変更されている任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、もしくは活性を指す。異種、非内因性、または外因性とは、ネイティブな遺伝子と変更された遺伝子、タンパク質、化合物、または核酸分子の間で構造、活性、またはその両方が異なるように変異させたまたは他のやり方で変更された遺伝子、タンパク質、化合物、または核酸分子を含む。ある特定の実施形態では、異種、非内因性、または外因性遺伝子、タンパク質、または核酸分子（例えば、受容体、リガンドなど）は、宿主細胞または被験体に対して内因性でなくてよく、その代わりに、そのような遺伝子、タンパク質、または核酸分子をコードする核酸は、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔などによって宿主細胞に付加されたものであってよく、付加された核酸分子は、宿主細胞のゲノムに組み込まれていてもよく、染色体外遺伝子材料（例えば、プラスミドまたは他の自己複製性ベクター）として存在してもよい。「相同な」または「ホモログ」という用語は、宿主細胞、種、または系統において見いだされるまたはそれに由来する遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、または活性を指す。例えば、ポリペプチドをコードする異種または外因性ポリヌクレオチドまたは遺伝子は、ネイティブなポリヌクレオチドまたは遺伝子と相同であり得、相同なポリペプチドまたは活性をコードするが、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは変更された構造、配列、発現レベル、またはこれらの任意の組合せを有し得る。非内因性ポリヌクレオチドまたは遺伝子、ならびにコードされるポリペプチドまたは活性は、同じ種、異なる種、またはこれらの組合せに由来するものであり得る。

【0049】

ある特定の実施形態では、宿主細胞に対してネイティブな核酸分子もしくはその一部は、変更されているかもしくは変異している場合には宿主細胞に対して異種とみなされる、または、宿主細胞に対してネイティブな核酸分子は、異種発現制御配列を用いて変更されているかもしくは宿主細胞に対してネイティブな核酸分子に通常は付随しない内因性発現制御配列を用いて変更されている場合には異種とみなされ得る。さらに、「異種」という用語は、宿主細胞に対して異なる、変更された、または内因性ではない生物活性を指し得る。本明細書に記載の通り、１つよりも多くの異種核酸分子を、別々の核酸分子として、複数の個別に制御される遺伝子として、ポリシストロニックな核酸分子として、融合タンパク質をコードする単一の核酸分子として、またはこれらの任意の組合せで宿主細胞に導入することができる。

【0050】

本明細書で使用される場合、「内因性」または「ネイティブな」という用語は、宿主細胞または被験体に通常存在するポリヌクレオチド、遺伝子、タンパク質、化合物、分子、または活性を指す。

【0051】

「発現」という用語は、本明細書で使用される場合、遺伝子などの核酸分子のコード配列に基づいてポリペプチドが産生されるプロセスを指す。プロセスは、転写、転写後制御、転写後修飾、翻訳、翻訳後制御、翻訳後修飾、またはこれらの任意の組合せを含み得る。発現される核酸分子は、一般には、発現制御配列（例えば、プロモーター）に作動可能に連結している。

【0052】

「作動可能に連結」という用語は、単一の核酸断片上の２つまたはそれよりも多くの核酸分子の、一方の機能が他方の影響を受けるような会合を指す。例えば、プロモーターは、コード配列の発現に影響を及ぼすことができる場合、そのコード配列と作動可能に連結している（すなわち、コード配列はプロモーターによる転写制御下にある）。「連結していない」とは、付随する遺伝子エレメントが互いに密接に関連せず、一方の機能が他方に影響を及ぼさないことを意味する。

【0053】

本明細書に記載の通り、１つよりも多くの異種核酸分子を、別々の核酸分子として、複数の個別に制御される遺伝子として、ポリシストロニックな核酸分子として、融合タンパク質をコードする単一の核酸分子として、またはこれらの任意の組合せで宿主細胞に導入することができる。２つまたはそれよりも多くの異種核酸分子を宿主細胞に導入する場合、その２つまたはそれよりも多くの異種核酸分子を、単一の核酸分子として（例えば、単一のベクター上）、別々のベクター上で、宿主染色体の単一の部位もしくは多数の部位に組み込んで、またはこれらの任意の組合せで導入することができることが理解される。参照される異種核酸分子またはタンパク質活性の数は、宿主細胞に導入される別々の核酸分子の数ではなく、コード核酸分子の数またはタンパク質活性の数を指す。

【0054】

「構築物」という用語は、組換え核酸分子（または、文脈から明白に示される場合、本開示の融合タンパク質）を含有する任意のポリヌクレオチドを指す。（ポリヌクレオチド）構築物は、ベクター（例えば、細菌ベクター、ウイルスベクター）中に存在してもよく、ゲノムに組み込むこともできる。「ベクター」は、別の核酸分子を輸送することができる核酸分子である。ベクターは、例えば、染色体内、非染色体内、半合成または合成核酸分子を含み得るプラスミド、コスミド、ウイルス、ＲＮＡベクターまたは直鎖状もしくは環状ＤＮＡもしくはＲＮＡ分子であり得る。本開示のベクターは、トランスポゾン系も含む（例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ、例えば、Geurts et al., Mol. Ther. 8: 108, 2003：Mates et al., Nat. Genet. 41: 753, 2009を参照されたい）。例示的なベクターは、自律複製することができるベクター（エピソームベクター）、ポリヌクレオチドを細胞ゲノムに送達することができるベクター（例えば、ウイルスベクター）、または連結した核酸分子を発現させることができるベクター（発現ベクター）である。

【0055】

本明細書で使用される場合、「発現ベクター」または「ベクター」は、適切な宿主における核酸分子の発現をもたらすことができる適切な制御配列と作動可能に連結した核酸分子を含有するＤＮＡ構築物を指す。そのような制御配列は、転写をもたらすためのプロモーター、そのような転写を制御するための必要に応じたオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合性部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳の終結を制御する配列を含む。ベクターは、プラスミド、ファージ粒子、ウイルス、または単に潜在的なゲノム挿入断片であり得る。ベクターは、適切な宿主に形質転換されたら、宿主ゲノムとは独立して複製し、機能することができる、または、一部の例では、ゲノムにそれ自体が組み込まれるもしくはベクターに含有されるポリヌクレオチドをベクター配列を伴わずにゲノム内に送達することができる。本明細書では、「プラスミド」、「発現プラスミド」、「ウイルス」、および「ベクター」は、多くの場合、互換的に使用される。

【0056】

「導入される」という用語は、核酸分子を細胞に挿入することに関しては、「トランスフェクション」、「形質転換」または「形質導入」を意味し、核酸分子を細胞のゲノム（例えば、染色体、プラスミド、色素体、またはミトコンドリアＤＮＡ）に組み込むこともでき、自律的なレプリコンに変換することもでき、一過性に発現させることもできる核酸分子の真核細胞または原核細胞への組み入れへの言及を含む（例えば、トランスフェクトされたｍＲＮＡ）。

【0057】

ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドをベクターのある特定のエレメントと作動可能に連結することができる。例えば、ライゲーションされるコード配列の発現およびプロセシングをもたらすために必要とされるポリヌクレオチド配列を作動可能に連結することができる。発現制御配列は、妥当な転写開始、終結、プロモーター、およびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；および場合によって、タンパク質分泌を増強する配列を含み得る。発現制御配列は、目的の遺伝子と隣接しており、発現制御配列がトランスにまたは目的の遺伝子が制御される距離で作用する場合、作動可能に連結し得る。

【0058】

ある特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクターまたはγ−レトロウイルスベクター）を含む。ウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、オルト−ミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）などのマイナス鎖ＲＮＡウイルス、ラブドウイルス（例えば、狂犬病および水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹およびセンダイ）、ピコルナウイルスおよびアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス、ならびにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型および２型、エプスタイン・バーウイルス、サイトメガロウイルス）、およびポックスウイルス（例えば、ワクシニア、鶏痘、およびカナリアポックス）を含めた二本鎖ＤＮＡウイルスが挙げられる。他のウイルスとしては、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス、および肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例としては、トリ白血症肉腫、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ群、レンチウイルス、スプーマウイルスが挙げられる（Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, In Fundamental Virology, Third Edition, B. N. Fields et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996）。

【0059】

「レトロウイルス」は、ＲＮＡゲノムを有するウイルスであり、ＲＮＡゲノムは、逆転写酵素を使用してＤＮＡに逆転写され、次いで、逆転写されたＤＮＡが宿主細胞のゲノムに組み入れられる。「ガンマレトロウイルス」は、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科の属を指す。ガンマレトロウイルスの例としては、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、およびトリ細網内皮症ウイルスが挙げられる。

【0060】

「レンチウイルスベクター」は、遺伝子送達のためのＨＩＶに基づくレンチウイルスベクターを含み、これは組込み型または非組込み型であり得、比較的大きなパッケージング容量を有し、様々な異なる細胞型に形質導入することができる。レンチウイルスベクターは、通常、３つ（パッケージング、エンベロープ、および移入）またはそれよりも多くのプラスミドを産生細胞に一過性トランスフェクションした後に生成される。ＨＩＶと同様に、レンチウイルスベクターは、標的細胞に、ウイルス表面糖タンパク質と細胞表面上の受容体の相互作用を通じて侵入する。侵入したら、ウイルスＲＮＡは、ウイルス逆転写酵素複合体によって媒介される逆転写を受ける。逆転写産物は二本鎖直鎖状ウイルスＤＮＡであり、これが感染細胞のＤＮＡへのウイルスの組込みの基体になる。

【0061】

ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ガンマレトロウイルス、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクターであり得る。他の実施形態では、ウイルスベクターは、より複雑なレトロウイルス由来ベクター、例えば、レンチウイルス由来ベクターであり得る。ＨＩＶ−１由来ベクターがこのカテゴリーに属する。他の例としては、ＨＩＶ−２、ＦＩＶ、ウマ伝染性貧血ウイルス、ＳＩＶ、およびマエディ−ビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターが挙げられる。導入遺伝子を含有するウイルス粒子を用いて哺乳動物宿主細胞への形質導入を行うためにレトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターならびにパッケージング細胞を使用する方法は当技術分野で公知であり、以前に、例えば、米国特許第８，１１９，７７２号；Walchli et al., PLoS One 6: 327930, 2011；Zhao et al., J. Immunol. 174: 4415, 2005；Engels et al., Hum. Gene Ther. 14: 1155, 2003；Frecha et al., Mol. Ther. 18: 1748, 2010；およびVerhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506: 97, 2009に記載されている。レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクター構築物および発現系も市販されている。例えばアデノウイルスに基づくベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくベクターを含めたＤＮＡウイルスベクター；アンプリコンベクター、複製欠損ＨＳＶおよび弱毒化ＨＳＶを含めた単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に由来するベクターを含めた他のウイルスベクターもポリヌクレオチド送達のために使用することができる（Krisky et al., Gene Ther. 5: 1517, 1998）。

【0062】

本開示の組成物および方法と共に使用することができる他のベクターとしては、バキュロウイルスに由来するベクターおよびα−ウイルスに由来するベクター（Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. pp 209-40 in Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab）、またはプラスミドベクター（例えば、ｓｌｅｅｐｉｎｇ ｂｅａｕｔｙまたは他のトランスポゾンベクターなど）が挙げられる。

【0063】

ウイルスベクターゲノムが、宿主細胞において発現させる複数のポリヌクレオチドを別々の転写物として含む場合、ウイルスベクターは、バイシストロン性または多シストロン性発現を可能にするために、２つ（またはそれよりも多くの）転写物の間に追加的な配列も含み得る。ウイルスベクターに使用されるそのような配列の例としては、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。

【0064】

本明細書で使用される場合、「宿主」という用語は、目的のポリペプチド（例えば、本開示の抗体）を作製するための異種核酸分子を用いた遺伝子改変の標的とされる細胞または微生物を指す。

【0065】

宿主細胞は、ベクター、もしくは核酸の組み入れを受けることまたはタンパク質を発現させることができる任意の個々の細胞または細胞培養物を含み得る。この用語は、遺伝学的にまたは表現型的に同じであるか異なるかにかかわらず、宿主細胞の後代も包含する。適切な宿主細胞は、ベクターに依存し得、それらとして、哺乳動物細胞、動物細胞、ヒト細胞、サル細胞、昆虫細胞、酵母細胞、および細菌細胞を挙げることができる。これらの細胞を、ウイルスベクター、リン酸カルシウム沈殿による形質転換、ＤＥＡＥ−デキストラン、電気穿孔、微量注射、または他の方法を使用してベクターまたは他の材料を組み入れるように誘導することができる。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2d ed. (Cold Spring Harbor Laboratory, 1989)を参照されたい。

【0066】

本明細書で使用される場合、「鞭毛キャッピングタンパク質」は、「ＦｌｉＤ」、および「フック関連タンパク質２（ＨＡＰ２）」とも称され、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ種にわたって高い配列保存を有するおよそ７０ｋＤａのタンパク質である（Chintoan-Uta et al., Vaccine, 34:1739-1743 (2016)）（例えば、図１２；配列番号：４３から９５）。理論に束縛されることを望むものではないが、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ＦｌｉＤオリゴマーは、フラジェリン分子のアセンブリを調節することによってフィラメントの末端成長を制御する、鞭毛の先端に位置するキャップタンパク質複合体を形成すると考えられる。フィラメント伸長におけるその機能的役割に起因して、ＦｌｉＤ欠損変異体は、細菌運動性に欠陥を示す（Song et al., J.Mol.Biol., 429:847-857 (2017)）。ＦｌｉＤは、ニワトリにおける天然の感染の間の細胞接着（Freitag et al., Cell.Microbiol., (2017)）および免疫原性に関与することが提唱されている。

【0067】

「抗原」または「Ａｇ」とは、本明細書で使用される場合、免疫応答を惹起する免疫原性分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、特定の免疫コンピテント細胞の活性化、補体の活性化、抗体依存的な細胞傷害性、またはこれらの任意の組合せを伴い得る。抗原（免疫原性分子）は、例えば、ペプチド、グリコペプチド、ポリペプチド、グリコポリペプチド、ポリヌクレオチド、多糖、脂質などであり得る。抗原は合成されていても組換えによって作製されたものであっても生体試料に由来するものであってもよいことが容易に明らかになる。１つまたは複数の抗原を含有し得る例示的な生体試料としては、組織試料、便試料、細胞、生体液、またはこれらの組合せが挙げられる。抗原は、抗原を発現するように改変または遺伝子操作された細胞によって産生され得る。抗原はまた、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに存在するもの；例えば、ＦｌｉＤタンパク質またはその一部の場合もある。

【0068】

「エピトープ」または「抗原エピトープ」という用語は、免疫グロブリン、または他の結合性分子、ドメイン、もしくはタンパク質などの同類の結合性分子が認識し、特異的に結合する任意の分子、構造、アミノ酸配列、またはタンパク質決定因子を含む。エピトープ決定因子は、一般に、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群分けを含有し、特定の三次元構造的特徴、ならびに特定の電荷特徴を有することができる。抗原がペプチドまたはタンパク質であるかまたはそれを含む場合、エピトープは、連続したアミノ酸で構成され得る（例えば、直鎖状エピトープ）、またはタンパク質フォールディングによって近傍になるタンパク質の異なる部分もしくは領域に由来するアミノ酸（例えば、不連続もしくはコンフォメーショナルエピトープ）、もしくはタンパク質フォールディングとは無関係に極めて近傍にある連続していないアミノ酸で構成され得る。

【0069】

抗体、抗原結合性断片、および組成物
一態様では、本開示は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質（ＦｌｉＤ）エピトープに特異的である、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、エピトープは、コンフォメーショナルエピトープである。他の実施形態では、エピトープは、直鎖状エピトープである。

【0070】

本開示の抗体または抗原結合性断片は、ＦｌｉＤエピトープまたは抗原に「特異的」である、つまり、エピトープまたはエピトープを含む抗原とは会合または合体する一方で、試料中の他の分子または構成成分のいずれにも顕著には会合または合体しない。ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、ＦｌｉＤとは会合または合体する（例えば、結合する）一方で、試料中の他の分子または構成成分（例えば、他のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒタンパク質を含めた他の抗原または潜在的な抗原）とは顕著には会合しない。ある特定の実施形態では、ＦｌｉＤに特異的な本開示の抗体または抗原結合性断片は、ＦｌｉＤエピトープに、ＥＬＩＳＡによって測定して約０．１μｇ／ｍＬ未満、または約０．０５μｇ／ｍＬ未満、または約０．０３μｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０で結合することができる。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＦｌｉＤエピトープに、約０．０３μｇ／ｍＬ、または約０．０２５μｇ／ｍＬ、または約０．０２０μｇ／ｍＬのＥＣ５０で結合することができる。

【0071】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、ＦｌｉＤエピトープに、ＥＬＩＳＡによって測定して（例えば、ＯＤ ４５０ｎｍの読み取りで）約０．１μｇ／ｍＬ未満（すなわち、約０．１μｇ／ｍＬ未満、約０．０９μｇ／ｍＬ未満、約０．０８μｇ／ｍＬ未満、約０．０７μｇ／ｍＬ未満、約０．０６μｇ／ｍＬ未満、約０．０５μｇ／ｍＬ未満、約０．０４μｇ／ｍＬ未満、約０．０３μｇ／ｍＬ未満、約０．０２５μｇ／ｍＬ未満、または約０．０２μｇ／ｍＬ未満、またはそれよりも小さい）ＥＣ５０で結合することができる。ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、ＦｌｉＤエピトープに、ＥＬＩＳＡによって測定して（例えば、ＯＤ ４５０ｎｍの読み取りで）約０．０５μｇ／ｍＬ未満、または約０．０３μｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０で結合することができる。

【0072】

抗体または抗原結合性断片のＦｌｉＤに対するＥＣ５０を測定するための例示的なアッセイは、抗体または抗原結合性断片を、ＦｌｉＤを予めコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて室温で約１時間インキュベートし、次いで、ビオチン化抗Ｉｇ ＳＣ抗体を使用し、その後、ストレプトアビジン−ＡＰと一緒にインキュベートして検出を行うことを含む。

【0073】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」は、抗体または抗原結合性断片が、抗原とは１０^５Ｍ^−１（この会合反応の会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）［Ｋ_ｏｎ］の解離速度（ｏｆｆ ｒａｔｅ）［Ｋ_ｏｆｆ］に対する比と等しい）と等しいまたはそれよりも大きい親和性またはＫ_ａ（すなわち、単位１／Ｍの特定の結合相互作用の平衡会合定数）で会合または合体する一方で、試料中の他の分子または構成成分のいずれとも顕著には会合または合体しないことを指す。あるいは、親和性は、単位Ｍの特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋ_ｄ）として定義することができる（例えば、１０^−５Ｍ〜１０^−１３Ｍ）。抗体は、「高親和性」抗体または「低親和性」抗体に分類することができる。「高親和性」抗体とは、Ｋ_ａが少なくとも１０^７Ｍ^−１、少なくとも１０^８Ｍ^−１、少なくとも１０^９Ｍ^−１、少なくとも１０^１０Ｍ^−１、少なくとも１０^１１Ｍ^−１、少なくとも１０^１２Ｍ^−１、または少なくとも１０^１３Ｍ^−１である抗体を指す。「低親和性」抗体とは、Ｋ_ａが最大１０^７Ｍ^−１、最大１０^６Ｍ^−１、最大１０^５Ｍ^−１である抗体を指す。あるいは、親和性は、単位Ｍの特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋ_ｄ）として定義することができる（例えば、１０^−５Ｍ〜１０^−１３Ｍ）。

【0074】

特定の標的に結合する本開示の抗体を同定するため、ならびに結合性ドメインまたは結合性タンパク質の親和性を決定するための種々のアッセイ、例えば、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、分析用超遠心、分光法、および表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））分析などが公知である（例えば、Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51: 660, 1949；Wilson, Science 295: 2103, 2002；Wolff et al., Cancer Res. 53: 2560, 1993；および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号、または均等物を参照されたい）。親和性または見かけの親和性または相対的な親和性を評価するためのアッセイも公知である。特定の実施例では、免疫グロブリン結合性タンパク質の見かけの親和性を、例えば、標識された四量体を使用したフローサイトメトリーによって種々の濃度の四量体への結合を評価することにより、測定する。一部の実施例では、免疫グロブリン結合性タンパク質の見かけのＫ_ｄを、様々な濃度の標識された四量体の２倍希釈物を使用し、その後、非線形回帰によって結合曲線を決定することで測定し、見かけのＫ_ｄを、最大半量の結合をもたらすリガンドの濃度として決定する。

【0075】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞運動性アッセイにおけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの運動性を低下させることができる。例示的な運動性アッセイを図２に概略的に例示する；Riazi et al., PLoS One 8 (12): e83928 (2013)も参照されたい。

【0076】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、１つまたは複数のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐによる感染を中和することができる。本明細書で使用される場合、「中和抗体」は、宿主への感染を開始し、かつ／または永続させる病原体の能力を中和する、すなわち、防止する、阻害する、低下させる、妨害する、または干渉することができる抗体である。「中和抗体」および「中和する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈａｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｓ）」または「中和する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」という用語は、本明細書では互換的に使用される。

【0077】

ここに開示される実施形態のいずれかでは、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒは、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ、またはその両方を含む。ある特定の実施形態では、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒは、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６、Ｃ．ｃｏｌｉ １００９２／ＡＴＢ、またはその両方を含む。

【0078】

抗体技術の当業者によって理解される用語は、それぞれ、本明細書において明白に違う定義がなされていなければ、当技術分野において得られた意味が与えられる。例えば、「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続した少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖で構成されるインタクトな抗体、ならびに、インタクトな抗体によって認識される抗原標的分子に結合する能力を有するまたは保持するインタクトな抗体の任意の抗原結合性部分または断片、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはＦａｂ’２断片などを指す。したがって、本明細書では、「抗体」という用語は、最も広範な意味で使用され、インタクトな抗体と、断片抗原結合性（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、単鎖可変性断片（ｓｃＦｖ）を含めた単鎖抗体断片、および単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片を含めたその機能的（抗原結合性）抗体断片とを含めたポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を含む。この用語は、細胞内抗体、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性、例えば、二重特異性抗体、ジアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、タンデムジ−ｓｃＦｖ、およびタンデムトリ−ｓｃＦｖなどの、遺伝子操作された形態および／または他のやり方で改変された形態の免疫グロブリンを包含する。別段の指定のない限り、「抗体」という用語は、その機能的抗体断片を包含するものと理解されるべきである。この用語は、ＩｇＧおよびそのサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤを含めた任意のクラスまたはサブクラスの抗体を含めたインタクトなまたは全長抗体も包含する。

【0079】

「Ｖ_Ｌ」または「ＶＬ」および「Ｖ_Ｈ」または「ＶＨ」という用語は、それぞれ抗体軽鎖および重鎖に由来する可変結合性領域を指す。ある特定の実施形態では、ＶＬは、カッパ（κ）クラス（本明細書では「ＶＫ」とも）である。ある特定の実施形態では、ＶＬは、ラムダ（λ）クラスである。可変結合性領域は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）および「フレームワーク領域」（ＦＲ）として公知の別個の明確に定義された小領域で構成される。「相補性決定領域」、および「ＣＤＲ」という用語は、「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義であり、一般に、抗体の抗原特異性および／または結合親和性を付与し、フレームワーク領域によって互いに分離されている、抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。各可変領域内に３つのＣＤＲが存在する（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３；それぞれＣＤＲＨおよびＣＤＲＬとも称される）。ある特定の実施形態では、抗体ＶＨは、以下の通り４つのＦＲおよび３つのＣＤＲを含み：ＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＦＲ４；抗体ＶＬは、以下の通り４つのＦＲおよび３つのＣＤＲを含む：ＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＦＲ４。一般に、ＶＨとＶＬは、それらのそれぞれのＣＤＲを通じて一緒になって抗原結合性部位を形成する。

【0080】

本明細書で使用される場合、ＣＤＲの「バリアント」は、最大１〜３つのアミノ酸置換（例えば、保存的または非保存的置換）、欠失、またはこれらの組合せを有するＣＤＲ配列の機能的バリアントを指す。

【0081】

ＣＤＲおよびフレームワーク領域の番号付けは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＥＵ、ＩＭＧＴ、およびＡＨｏ番号付けスキームなどの任意の公知の方法またはスキームに従うことができる（例えば、Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.；Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)）；Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27: 55, 2003；Honegger and Pluckthun, J. Mol. Bio. 309: 657-670 (2001)を参照されたい）。Ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ Ａｎｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＡＮＡＲＣＩ）ソフトウェアツール（2016, Bioinformatics 15: 298-300）を使用して、比較する異なる分子に対して等価の残基位置をアノテートすることができる。

【0082】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、（ｉ）それぞれ配列番号９〜１４；または（ｉｉ）それぞれ配列番号２５〜３０に従ったＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0083】

「ＣＬ」という用語は、「免疫グロブリン軽鎖定常領域」または「軽鎖定常領域」、すなわち、抗体軽鎖に由来する定常領域を指す。「ＣＨ」という用語は、「免疫グロブリン重鎖定常領域」または「重鎖定常領域」を指し、これは、抗体のアイソタイプに応じてＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ）、またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ、ＩｇＭ）にさらに分けられる。

【0084】

「Ｆａｂ」（抗原結合性断片）は、抗体の抗原に結合する部分であり、軽鎖と鎖間ジスルフィド結合によって連結した重鎖の可変領域およびＣＨ１を含む。各Ｆａｂ断片は、抗原結合性に関して一価である、すなわち、単一の抗原結合性部位を有する。抗体をペプシン処置することにより、二価の抗原結合活性を有し、なお抗原と架橋結合することができる、２つのジスルフィド連結したＦａｂ断片に大まかに対応する単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が得られる。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２はどちらも、「抗原結合性断片」の例である。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含めた追加的な数残基を有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離のチオール基を有するＦａｂ’に対する本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として作製された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。

【0085】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合性部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、非共有結合性により密接に会合した重鎖可変領域ドメイン１つと軽鎖可変領域ドメイン１つの二量体からなる。これらの２つのドメインのフォールディングにより、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみで構成されるＦｖの半分）でも、抗原を認識し、それに結合する能力を有するが、一般には、結合性部位全体よりも親和性が低い。

【0086】

「単鎖Ｆｖ」は、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも省略され、Ｖ_Ｈ抗体ドメインとＶ_Ｌ抗体ドメインが接続して単一のポリペプチド鎖になった抗体断片である。ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原への結合のための所望の構造を形成することが可能になるポリペプチドリンカーをＶ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインの間にさらに含むことが好ましい。ｓＦｖの概説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)；Borrebaeck 1995, infraを参照されたい。

【0087】

抗体発生の間、生殖細胞系列可変（Ｖ）、接合（Ｊ）、および多様性（Ｄ）遺伝子遺伝子座のＤＮＡが再構成され得、コード配列にヌクレオチド挿入および／または欠失が生じ得る。得られた配列によって体細胞変異がコードされる可能性があり、これは、対応する既知の生殖細胞系列配列を参照することによって同定することができる。一部の状況では、抗体の所望の特性（例えば、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．への特異的結合）に重要ではない、または抗体に望ましくない特性（例えば、抗体が投与される被験体における免疫原性のリスクの増大）を付与する、またはその両方である体細胞変異を、対応する生殖細胞系列でコードされるアミノ酸によって、または異なるアミノ酸によって置き換えることができ、その結果、抗体の望ましい特性が改善または維持され、抗体の望ましくない特性が減少するまたは抑止される。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、親抗体または抗原結合性断片が１つまたは複数の体細胞変異を含むのであれば、親抗体または抗原結合性断片と比較して、可変領域内に生殖細胞系列でコードされるアミノ酸を少なくとももう１つ含む。本開示の例示的な抗Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ抗体の可変領域アミノ酸配列を本明細書の表１に提示し、体細胞変異が下線によって示されている。

【0088】

ここに開示される（「親」）抗体と比較して可変領域（例えば、ＶＨ、ＶＬ、フレームワークまたはＣＤＲ）に１つまたは複数のアミノ酸の変更を含むバリアント抗体であって、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ＦｌｉＤエピトープに親抗体と同様のまたはより強力な親和性で特異的に結合することができるバリアント抗体も本明細書に提示される。例えば、一部の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２または２２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、および配列番号４または２４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、但し、バリアント抗体または抗原結合性断片がＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ＦｌｉＤエピトープに、それぞれ配列番号２または２２に従ったＶＨおよび配列番号４または２４に従ったＶＬを有する親抗体と同様のまたはより良好な親和性で特異的に結合することを条件とする。

【0089】

ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号２に対して少なくとも８５％（すなわち、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、またはそれよりも大きな）アミノ酸同一性を有するＶＨ、および配列番号４に対して少なくとも８５％（すなわち、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、またはそれよりも大きな）アミノ酸同一性を有するＶＬ；または（ｉｉ）配列番号２２に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨおよび配列番号２４に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み得る。

【0090】

さらなる実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号２に従ったＶＨおよび配列番号４に従ったＶＬ；または（ｉｉ）配列番号２２に従ったＶＨおよび配列番号２４に従ったＶＬを含む。

【0091】

ここに開示される実施形態のいずれかでは、抗体または抗原結合性断片は、多重特異性；例えば、二重特異性、三重特異性などである。

【0092】

ここに開示される実施形態のいずれかでは、抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭアイソタイプである。

【0093】

ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＡアイソタイプである。ヒトでは、ＩｇＡ抗体は、単量体形態、二量体形態、または四量体形態で見いだされる。ＩｇＡサブクラスは、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む。ＩｇＡ１は、ＩｇＡ２よりも長いヒンジ配列（ＦａｂアームとＦｃの間）を有する。例えば、Woof and Kerr, Immunology 113 (2): 175-177 (2004)を参照されたい。

【0094】

理論に束縛されることを望むものではないが、ＩｇＡ二量体は、一般に、少なくとも、ＩｇＡ分泌細胞において形成される接続鎖（「Ｊ鎖」）ポリペプチドによって連結した２つのＩｇＡ単量体を含む。可溶性ＩｇＡ二量体は、一般に、上皮細胞の基底膜側に見いだされるポリ−Ｉｇ受容体（「ｐＩｇＲ」）タンパク質と複合体を形成することができる。ＩｇＡ二量体−ｐＩｇＲ複合体は、形成された後、上皮細胞に内部移行し、管腔への放出のために管腔側に輸送される。管腔への分泌前に、ｐＩｇＲの一部が切断され、一方、分泌型構成成分または「ＳＣ」として公知の部分はＩｇＡと結合したままであり、分泌型ＩｇＡ（ＳＩｇＡ）を形成する。理論に束縛されることを望むものではないが、ＳＣにより、おそらくＩｇＡ二量体内のタンパク質分解感受性部位が保護されることによって小胞および管腔環境におけるＩｇＡ二量体の安定性が改善されると考えられる。

【0095】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＡ１アイソタイプまたはＩｇＡ２アイソタイプである。

【0096】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＡ二量体分子を含む。

【0097】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、分泌型ＩｇＡ分子を含む。

【0098】

「Ｆｃ」断片またはＦｃポリペプチドは、ジスルフィドによって一緒に保持された両方の抗体Ｈ鎖のカルボキシ末端部分（すなわち、ＩｇＧのＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含む。抗体のエフェクター機能はＦｃ領域内の配列によって決定される。Ｆｃドメインは、ＦｃＲなどの細胞受容体によって認識され、また、補体活性化タンパク質であるＣ１ｑが結合する、抗体の部分である。本明細書で考察されている通り、Ｆｃ含有ポリペプチド（例えば、本開示の抗体）の１つまたは複数の機能性を改変する（例えば、改善する、低下させる、または除去する）ために、Ｆｃドメインに対して改変（例えば、アミノ酸置換）を行うことができる。ここに開示される実施形態のいずれかでは、抗体または抗原結合性断片は、ＣＨ２（もしくはその断片）、ＣＨ３（もしくはその断片）、またはＣＨ２およびＣＨ３を含めたＦｃポリペプチドまたはその断片を含み、ここで、ＣＨ２、ＣＨ３、またはその両方は、任意のアイソタイプのものであってよく、また、それぞれ対応する野生型ＣＨ２またはＣＨ３と比較してアミノ酸置換または他の改変を含有してよい。ある特定の実施形態では、本開示のＦｃポリペプチドは、会合して二量体を形成する２つのＣＨ２−ＣＨ３ポリペプチドを含む。

【0099】

ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号４０〜４２のいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性（すなわち、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有する重鎖定常領域を含む。

【0100】

ここに開示される実施形態のいずれかでは、抗体または抗原結合性断片は、モノクローナル抗体または抗原結合性断片である。「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、一部の場合に微量で存在し得る、可能性のある天然に存在する変異以外は同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、異なるエピトープに対するものである異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原の単一のエピトープに対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体の混入を伴わずに合成することができるという点で有利である。「モノクローナル」という用語は、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とするものとは解釈されない。例えば、本発明において有用なモノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature 256: 495 (1975)に最初に記載されたハイブリドーマ方法体系によって調製することもでき、細菌細胞、真核動物細胞、または植物細胞において組換えＤＮＡ法を使用して作製することもできる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。モノクローナル抗体はまた、例えばClackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)and Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)に記載されている技法を使用してファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。モノクローナル抗体はまた、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０７６６７７Ａ２号に開示されている方法を使用して得ることもできる。

【0101】

本開示の抗体および抗原結合性断片は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、一方、鎖（複数可）の残りは別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である「キメラ抗体」、ならびに、所望の生物活性を示す限りは、そのような抗体の断片を含む（米国特許第４，８１６，５６７号；同第５，５３０，１０１号および同第７，４９８，４１５号；ならびにMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)を参照されたい）。例えば、キメラ抗体は、ヒト残基と非ヒト残基とを含み得る。さらに、キメラ抗体は、レシピエント抗体においてもドナー抗体においても見いだされない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するために行われる。さらなる詳細に関しては、Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988)；およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)を参照されたい。キメラ抗体はまた、霊長類化抗体およびヒト化抗体も包含する。

【0102】

「ヒト化抗体」は、一般に、非ヒトである供給源に由来する１つまたは複数のアミノ酸残基が導入されたヒト抗体であるとみなされる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、一般には、可変ドメインから取得される。ヒト化は、Winterおよび共同研究者の方法に従い（Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986)；Reichmann et al., Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)）、非ヒト可変配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによって実施することができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、実質的に少ないインタクトなヒト可変ドメインが非ヒト種由来の対応する配列によって置換されたキメラ抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号；同第５，５３０，１０１号および同第７，４９８，４１５号）。一部の例では、「ヒト化」抗体は、非ヒト細胞または動物によって産生され、ヒト配列、例えばＨ_Ｃドメインを含む抗体である。

【0103】

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体に存在する配列のみを含有する抗体である。しかし、本明細書で使用される場合、ヒト抗体は、本明細書に記載の改変およびバリアント配列を含めた、天然に存在するヒト抗体（例えば、ヒトから単離される抗体）においては見いだされない残基または改変を含み得る。これらの改変は、一般には、抗体の性能をさらに改良または増強するために行われる。一部の例では、ヒト抗体は、トランスジェニック動物によって産生されたものである。例えば、米国特許第５，７７０，４２９号；同第６，５９６，５４１号および同第７，０４９，４２６号を参照されたい。

【0104】

ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は、キメラ抗体または抗原結合性断片、ヒト化抗体または抗原結合性断片、またはヒト抗体または抗原結合性断片である。

【0105】

本明細書に開示される任意の抗体または抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤とを含む組成物も本明細書に提示される。そのような組成物に使用するための薬学的に許容される構成成分を本明細書においてさらに考察する。

【0106】

別の態様では、本開示は、（ｉ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質（ＦｌｉＤ）直鎖状エピトープに特異的である第１の抗体またはその抗原結合性断片；および（ｉｉ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質（ＦｌｉＤ）コンフォメーショナルエピトープに特異的である第２の抗体またはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。

【0107】

ある特定の実施形態では、（ｉ）第１の抗体または抗原結合性断片は、それぞれ配列番号９〜１４に従ったＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列を含み、（ｉｉ）第２の抗体または抗原結合性断片は、それぞれ配列番号２５〜３０に従ったＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列を含む。

【0108】

ある特定の実施形態では、（ｉ）第１の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨおよび配列番号４に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、（ｉｉ）第２の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２２に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨおよび配列番号２４に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含む。さらなる実施形態では：（ｉ）第１の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２に従ったＶＨおよび配列番号４に従ったＶＬを含み、（ｉｉ）第２の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２２に従ったＶＨおよび配列番号２４に従ったＶＬを含む。

【0109】

ある特定の実施形態では、キットの第１の抗体または抗原結合性断片と第２の抗体または抗原結合性断片は、それぞれ同じアイソタイプである。特定の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片と第２の抗体または抗原結合性断片は、それぞれ分泌型ＩｇＡである。

【0110】

ある特定の実施形態では、キットは、例えば、被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置または診断するための、第１の抗体または抗原結合性断片および第２の抗体または抗原結合性断片の使用に関する指示または説明書をさらに含む。

【0111】

ポリヌクレオチド、ベクター、および宿主細胞
別の態様では、本開示は、ここに開示される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、宿主細胞における発現のためにコドン最適化されたものである。コード配列が分かったまたは同定されたら、公知の技法およびツールを使用して、例えば、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＯｐｔｉｍｉｕｍＧｅｎｅ（商標）ツールを使用してコドン最適化を実施することができる；Scholten et al., Clin. Immunol. 119: 135, 2006も参照されたい）。コドン最適化された配列は、部分的にコドン最適化された配列（すなわち、１つまたは複数のコドンが宿主細胞における発現のために最適化された配列）および完全にコドン最適化された配列を包含する。

【0112】

本開示の抗体および抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、異なるヌクレオチド配列を有する一方で、それでも、例えば、遺伝暗号の縮退、スプライシングなどに起因して同じ抗体または抗原結合性断片をコードする可能性があることも理解されよう。

【0113】

ある特定の実施形態では、ＦｌｉＤに特異的な抗体または抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１、５、７、８、２１、３７、もしくは３８のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性（すなわち、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド；（ｉｉ）配列番号３、６、２３、もしくは３９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド；ならびに／または（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１５〜２０、もしくはそれぞれ配列番号３１〜３６に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ＨＣＤＲ１をコードする配列、ＨＣＤＲ２をコードする配列、ＨＣＤＲ３をコードする配列、ＬＣＤＲ１をコードする配列、ＬＣＤＲ２をコードする配列、およびＬＣＤＲ３をコードする配列を含む。

【0114】

本明細書に開示されるポリヌクレオチド（すなわち、ＦｌｉＤに特異的な抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド）を含むまたは含有するベクターも提供される。ベクターは、本明細書に開示されるベクターの任意の１つまたは複数を含み得る。

【0115】

別の態様では、本開示は、本開示による抗体もしくは抗原結合性断片を発現する；または本開示によるベクターもしくはポリヌクレオチドを含むもしくは含有する宿主細胞も提供する。

【0116】

そのような細胞の例としては、これだけに限定されないが、真核細胞、例えば、酵母細胞、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞；およびＥ．ｃｏｌｉを含めた原核細胞が挙げられる。一部の実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。特定のそのような実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞（例えば、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub et al., PNAS 77: 4216 (1980)）、ヒト胎児由来腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｙ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、例えばＨｅｐａ ＲＧ細胞、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ細胞などの哺乳動物細胞株である。哺乳動物宿主細胞株の他の例としては、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４細胞）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；およびＦＳ４細胞が挙げられる。抗体産生に適した哺乳動物宿主細胞株としては、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)に記載されているものも挙げられる。

【0117】

ある特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞である。Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞におけるペプチドの発現は、十分に確立されている（例えば、Pluckthun, A. Bio/Technology 9: 545-551 (1991)を参照されたい）。例えば、特に、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要でない場合に、細菌において抗体を産生させることができる。抗体断片およびポリペプチドの細菌における発現に関しては、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号；同第５，７８９，１９９号；および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。

【0118】

特定の実施形態では、細胞に、本説明によるベクターを発現ベクターと共にトランスフェクトすることができる。「トランスフェクション」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子などの核酸分子の、真核細胞などの細胞への導入を指す。本説明に関しては、「トランスフェクション」という用語は、核酸分子を、哺乳動物細胞を含めた真核細胞などの細胞に導入するための当業者に公知の任意の方法を包含する。そのような方法は、例えば、電気穿孔、リポフェクション、例えば、カチオン性脂質および／またはリポソームに基づくもの、リン酸カルシウム沈殿、ナノ粒子に基づくトランスフェクション、ウイルスに基づくトランスフェクション、または、ＤＥＡＥ−デキストランもしくはポリエチレンイミンなどのカチオン性ポリマーに基づくトランスフェクションなどを包含する。ある特定の実施形態では、導入は、ウイルスによるものではない。

【0119】

さらに、本開示の宿主細胞に、例えば、本開示による抗体またはその抗原結合性断片を発現させるために、本開示によるベクターを安定にまたは一過性にトランスフェクトすることができる。そのような実施形態では、細胞に、本明細書に記載のベクターを安定にトランスフェクトすることができる。あるいは、細胞に、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片をコードする本開示によるベクターを一過性にトランスフェクトすることができる。ここに開示される実施形態のいずれかでは、ポリヌクレオチドは、宿主主細胞に対して異種であり得る。

【0120】

したがって、本開示は、本開示の抗体または抗原結合性断片を異種性に発現する組換え宿主細胞も提供する。例えば、細胞は、抗体を完全にまたは部分的に得た種とは異なる種の細胞（例えば、ヒト抗体または工学的に操作されたヒト抗体を発現するＣＨＯ細胞）であり得る。一部の実施形態では、宿主細胞の細胞型は、抗体または抗原結合性断片を天然には発現しない。さらに、宿主細胞は、抗体または抗原結合性断片に対して、抗体または抗原結合性断片のネイティブな状態（または抗体もしくは抗原結合性断片を工学的に操作したもしくはそれが由来する親抗体のネイティブな状態）では存在しない翻訳後修飾（ＰＴＭ；例えば、グリコシル化またはフコシル化）を付与し得る。そのようなＰＴＭの結果、機能的差異（例えば、免疫原性の低下）が生じ得る。したがって、本明細書に開示される宿主細胞によって産生される本開示の抗体または抗原結合性断片は、ネイティブな状態にある抗体（または親抗体）とは別個の１つまたは複数の翻訳後修飾を含み得る（例えば、ＣＨＯ細胞によって産生されるヒト抗体は、ヒトから単離されたおよび／またはネイティブなヒトＢ細胞または形質細胞によって産生された抗体とは別個の、より多くの翻訳後修飾を含み得る）。

【0121】

本開示の結合性タンパク質の発現に有用な昆虫細胞は当技術分野で公知であり、それらとして、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒａ Ｓｆ９細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＢＴＩ−ＴＮ５Ｂ１−４細胞、およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒａ ＳｆＳＷＴ０１「Ｍｉｍｉｃ（商標）」細胞が挙げられる。例えば、Palmberger et al., J. Biotechnol. 153 (3-4): 160-166 (2011)を参照されたい。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞へのトランスフェクションのために昆虫細胞と併せて使用することができる多数のバキュロウイルス株が同定されている。

【0122】

糸状菌または酵母などの真核微生物も、タンパク質をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主であり、それらとして、「ヒト化」グリコシル化経路を有し、部分的にまたは完全にヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌および酵母株が挙げられる。Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004)；Li et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006)を参照されたい。

【0123】

植物細胞を本開示の結合性タンパク質を発現させるための宿主として利用することもできる。例えば、ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術（例えば、米国特許第５，９５９，１７７号；同第６，０４０，４９８号；同第６，４２０，５４８号；同第７，１２５，９７８号；および同第６，４１７，４２９号に記載されている）では、トランスジェニック植物を使用して抗体を産生させる。

【0124】

ある特定の実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞を含む。特定の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｙ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ細胞である。

【0125】

関連する態様では、本開示は、抗体、抗原結合性断片を産生させるための方法であって、本開示の宿主細胞を、抗体または抗原結合性断片の産生に十分な条件下で、かつ、それに適した時間にわたって培養することを含む方法を提供する。組換えによって産生された抗体の単離および精製に有用な方法は、例として、組換え抗体を培養培地中に分泌する適切な宿主細胞／ベクター系から上清を得、次いで、市販のろ過装置を使用して培地を濃縮することを含み得る。濃縮後、濃縮物を単一の適切な精製マトリックスまたは一連の適切なマトリックス、例えば、親和性マトリックスまたはイオン交換樹脂などに適用することができる。組換えポリペプチドをさらに精製するために１つまたは複数の逆相ＨＰＬＣステップを使用することができる。これらの精製方法は、免疫原をその天然の環境から単離する場合にも使用することができる。本明細書に記載の単離された／組換え抗体の１つまたは複数を大規模生産するための方法は、妥当な培養条件を維持するためにモニタリングおよび制御されるバッチ細胞培養を含む。可溶性抗体の精製は、本明細書に記載されており、また、当技術分野で公知であり、国内および外国の規制当局の法律およびガイドラインに適合する方法に従って実施することができる。

【0126】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染のモデル
さらに別の態様では、本開示は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染および病理発生、ならびに潜在的な治療法および研究用試薬を調査するための動物モデルを提供する。

【0127】

簡単に述べると、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ病原体を研究するための既存の動物モデルには、費用が高いことおよび集中的な注意を払う状況（例えば、ノトバイオートまたは無菌動物）、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒによる腸コロニー形成に対する抵抗性（例えば、実験用マウス）、ならびにトランスジェニック動物（例えば、ＳＩＧＩＲＲまたはＩＬ１０^−／−マウス）の予測不可能なまたは有害な作用など、多数の欠点がある。実施例に記載の通り、すでに母親の抗体を受け取っていないが、成熟した胃腸免疫系を保有しておらず、減損した（depleted）腸内細菌叢を有する離乳した動物（マウス２１日齢）が、驚いたことに、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに感染しやすいことが最近見いだされ、したがって、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの病理発生およびその潜在的な処置を研究するための改善されたモデルがもたらされる。

【0128】

ある特定の実施形態では、（ｉ）成熟した胃腸免疫系を有さず、（ｉｉ）減損した腸内細菌叢を有し、減損が、抗生剤（antibiotic agent）によって引き起こされたものである、離乳した哺乳動物を含む、非ヒト哺乳動物が提供される。ある特定の実施形態では、非ヒト哺乳動物は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染をさらに含む。

【0129】

ある特定の実施形態では、本開示の非ヒト哺乳動物は、マウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウス）、ラット、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）などであるかまたはそれを含む。離乳した非ヒト哺乳動物は、すでに母親哺乳動物（すなわち、非ヒト哺乳動物を出産した母親、または代理の母親）の乳を介して栄養分を受け取っていない。

【0130】

本開示による成熟した胃腸免疫系は、抗原または病原体に対する機能的な内因性免疫活性（例えば、粘膜保護）を果たすことができるものである。例えば、成熟した胃腸免疫系は、消化管関連リンパ組織におけるＴ細胞への提示のためにミクロフォールド細胞、樹状細胞、およびマクロファージを介して抗原を処理し、また、Ｂ細胞を介して抗原中和性ＩｇＡ免疫グロブリンを産生させる。例えば、Gutzeit et al., Immunol. Rev. 260 (2): 76-85 (2014)を参照されたい。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される非ヒト哺乳動物は、ＩｇＡ免疫グロブリンを内因性に産生しないか、または、胃腸免疫系が成熟かつ機能的であるとみなされる年齢および／または発育段階にある参照健康非ヒト哺乳動物（すなわち、同じ種のもの）と比較して減少した量のＩｇＡ免疫グロブリンを産生する。成熟した胃腸免疫系は、一般には、健康な動物において年齢と共に天然に生じる。例えば、健康な成体マウス（５６日齢）は成熟した胃腸免疫系を有する。

【0131】

共生細菌（集合的に「叢」または「微生物叢」とも称される）は、腸に存在し、宿主に種々の防御能および代謝能を付与することが理解される（Gutzeit et al., Immunol. Rev. 260 (2): 76-85 (2014)を参照されたい）。叢は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒなどの病原体によるコロニー形成を防止または阻害し得る。減損した腸内細菌叢は、健康な参照非ヒト哺乳動物（すなわち、同じ種かつ同じ年齢またはほぼ同じ年齢）の腸内細菌叢と比較して以下のものの１つまたは複数の統計的に有意な低減を有するものである：細菌の全体数；細菌の１つもしくは複数の成長速度；細菌の代謝機能；細菌の防御機能；および／または細菌の多様性。

【0132】

そのような非ヒト哺乳動物が母親からの離脱によって離乳し得る年齢または発育段階は、関連する動物飼育標準およびその生物体に関する公知の生物学に従うことになる。例えば、マウスは、生後約１５日目、生後約１６日目、生後約１７日目、生後約１８日目、生後約１９日目、生後約２０日目、生後約２１日目、生後約２２日目、生後約２３日目、生後約２４日目、生後約２５日目、生後約２６日目、生後約２７日目、生後約２８日目、生後約２９日目、または生後約３０日目、またはそれよりも後に離乳し得る。ある特定の実施形態では、離乳したマウスは、１８日齢、１９日齢、２０日齢、２１日齢、２２日齢、２３日齢、または２４日齢、またはそれよりも上である。ある特定の実施形態では、非ヒト哺乳動物を、それぞれその非ヒト哺乳動物が成熟した胃腸免疫系を保有する年齢または発育段階の年齢未満または発育段階前の年齢または発育段階で選択する。他の実施形態では、非ヒト哺乳動物を操作して（例えば、遺伝学的にまたは他のやり方で）、成熟した胃腸免疫系の発達を遅延させるまたは防止することができる。胃腸免疫系は経時的に成熟し得、したがって、好ましい実施形態では、非ヒト哺乳動物は最近離乳したものであることが理解されよう。最近離乳した哺乳動物は、約１日から約１０日までに離乳した哺乳動物である。

【0133】

本開示による非ヒト哺乳動物は、減損した腸内細菌叢を有する。当業者に公知の方法を使用して細菌数、成長速度、代謝機能、防御機能、および多様性を決定し、参照と比較することができる。

【0134】

腸内細菌叢を、例えば、抗生剤を投与することによって減損させることができる。例示的な抗生剤としては、バンコマイシンおよび他のグリコペプチド系抗生物質、トリメトプリム、アンピシリン、メトロニダゾール、およびストレプトマイシン、およびその類似体、およびこれらの組合せが挙げられる。好ましい実施形態では、抗生剤は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが耐性を有する薬剤、例えば、バンコマイシンまたはその類似体であるかまたはそれを含む。腸内細菌叢を減損させるための抗生剤の用量設定および投与は、例えば、非ヒト哺乳動物の年齢、サイズ、および／または健康を説明する公知の原理、ならびに所望の効果に従って決定することができる。

【0135】

さらなる実施形態では、非ヒト哺乳動物は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ（例えば、目的のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、例えば、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ、Ｃ．ｃｏｌｉ、またはその両方など）をさらに含む。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒは、例えば、腸においてコロニーを形成させるために十分な量で、経口的に（例えば、強制飼養によって）投与することができる。例えば、１２日齢、２１日齢、または５６日日齢のマウスに１０^８〜１０^９個のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒを接種する。ある特定の実施形態では、非ヒト哺乳動物に導入されるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒは、約１０^５個、約５×１０^５個、約１０^６個、約５×１０^６個、約１０^７個、約５×１０^７個、約１０^８個、約５×１０^８個、約１０^９個、約５×１０^９個、約１０^１０個、約５×１０^５個、約１０^１１個、約５×１０^１１個、または約１０^１２個のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、またはそれよりも多くを含む。投与されたら、非ヒト哺乳動物宿主においてＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの数はより大きな数に成長し得る。

【0136】

関連する態様では、（ｉ）成熟した胃腸免疫系を有さず、（ｉｉ）減損した腸内細菌叢を有する離乳した非ヒト哺乳動物に、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒを非ヒト哺乳動物における腸管感染を引き起こすために十分な量で投与または接種することを含む方法が提供される。

【0137】

別の態様では、（ｉ）離乳しており、（ｉｉ）成熟した胃腸免疫系を有さない非ヒト哺乳動物に、非ヒト哺乳動物の腸内細菌叢を減損させる薬剤を投与することを含む方法が提供される。ある特定の実施形態では、薬剤は、例えば、バンコマイシンまたはその類似体などの、本明細書に開示される抗生剤を含む。ある特定の実施形態では、方法は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒを、非ヒト哺乳動物においてＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒを含む腸管感染を引き起こすために十分な量で非ヒト哺乳動物に投与すること、または非ヒト哺乳動物に接種することをさらに含む。

【0138】

方法および使用
本開示の抗体もしくは抗原結合性断片、またはそれを含む組成物を使用して被験体を処置する方法であって、被験体が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐによる感染を有する、有すると考えられる、または有するリスクがある、方法も本明細書に提示される。「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「好転させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）」とは、被験体（例えば、ヒトまたは霊長類、ウマ、ネコ、イヌ、ヤギ、マウス、もしくはラットなどの非ヒト哺乳動物）の疾患、障害、または状態の医学的管理を指す。一般に、本開示の抗体または組成物を含む妥当な用量または処置レジメンを、治療的または予防的利益を引き出すために十分な量で投与する。治療的または予防的／防止的利益としては、臨床転帰の改善；疾患に付随する症状の軽減もしくは緩和；症状の発生の減少；生活の質の改善；長期にわたる無疾患状態；疾患の程度の低下、病態の安定化；疾患増悪の遅延；寛解；生存；長期生存；またはこれらの任意の組合せが挙げられる。

【0139】

本開示の抗体、抗原結合性断片、または組成物の「治療有効量」または「有効量」とは、臨床転帰の改善；疾患に付随する症状の軽減もしくは緩和；症状の発生の減少；生活の質の改善；長期にわたる無疾患状態；疾患の程度の低下、病態の安定化；疾患増悪の遅延；寛解；生存；または長期生存を含めた治療効果を統計的に有意な様式でもたらすために十分な組成物または分子の量を指す。単独で投与される個々の活性成分について言及する場合、治療有効量は、その成分またはその成分を発現する細胞の単独での効果を指す。組合せについて言及する場合、治療有効量は、段階的に投与されるか、逐次的に投与されるか、または同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす、複数の活性成分を合わせた量または組み合わされる補助活性成分と活性成分を発現する細胞を合わせた量を指す。組合せは、例えば、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．エピトープ（例えば、ＦｌｉＤエピトープ）に特異的に結合する２つの異なる抗体を含み得、当該エピトープは、ある特定の実施形態では同じもしくは異なるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．のものであり得、かつ／または同じもしくは異なるエピトープを含み得る。

【0140】

したがって、ある特定の実施形態では、被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置するための方法であって、被験体に、有効量の本明細書に開示される抗体、抗原結合性断片、または組成物を投与することを含む方法が提供される。

【0141】

ある特定の実施形態では、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体における腸炎症を低減する（すなわち、低減するまたは完全に抑止する）ための方法であって、被験体に、有効量の本明細書に開示される抗体、抗原結合性断片、または組成物を投与することを含む方法が提供される。

【0142】

ある特定の実施形態では、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体によるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの腸からの排出を増加させる方法であって、被験体に、有効量の本明細書に開示される抗体、抗原結合性断片、または組成物を投与することを含む方法が提供される。

【0143】

ここに開示される実施形態のいずれかでは、抗体または抗原結合性断片は、分泌型ＩｇＡ分子を含む。

【0144】

本開示によって処置することができる被験体は、一般に、ヒトおよび獣医薬のための他の霊長類被験体、例えば、サルおよび類人猿などである。マウスおよびラットなどの他のモデル生物体も本開示に従って処置することができる。上述の実施形態のいずれかでは、被験体は、ヒト被験体であり得る。被験体は、雄／男性であっても雌／女性であってもよく、また、乳児、若年、青年、成体、および老齢被験体を含めた任意の適切な年齢の被験体であってよい。

【0145】

したがって、ここに開示される組成物の投与の典型的な経路としては、限定することなく、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、直腸、膣、および鼻腔内が挙げられる。「非経口」という用語は、本明細書で使用される場合、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技法を含む。ある特定の実施形態では、投与は、経口、静脈内、非経口、胃内、胸膜内、肺内、直腸内、皮内、腹腔内、腫瘍内、皮下、局所、経皮、大槽内、髄腔内、鼻腔内、および筋肉内から選択される経路による投与を含む。特定の実施形態では、方法は、抗体、抗原結合性断片、または組成物を被験体に経口投与することを含む。

【0146】

本発明のある特定の実施形態による医薬組成物は、患者に組成物が投与されると、その中に含有される活性成分を生物が利用可能になるように製剤化される。被験体または患者に投与される組成物は、１つまたは複数の投薬単位の形態を取り得、例えば、錠剤は単一の投薬単位であり得、また、エアロゾル形態の本明細書で説明される抗体または抗原結合性断片の容器は複数の投薬単位を保持し得る。そのような剤形を調製する実際の方法は当業者には公知であるまたは明らかになる。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition (Philadelphia College of Pharmacy and Science, 2000)を参照されたい。投与される組成物は、いずれにしても、本明細書における教示に従って目的の疾患または状態を処置するための有効量の本開示の抗体またはその抗原結合性断片を含有する。

【0147】

組成物は、固体または液体の形態であり得る。一部の実施形態では、担体（複数可）は粒子であり、したがって、組成物は、例えば錠剤または散剤の形態である。担体（複数可）は液体であり得、それに伴って組成物は例えば経口油、注射液またはエアロゾルになり、これは、例えば、吸入による投与に有用である。経口投与が意図されている場合、医薬組成物は、固体または液体のいずれかの形態であることが好ましく、半固体、半流動体、懸濁液およびゲルの形態は本発明で固体または液体のいずれかとみなされる形態に含まれる。

【0148】

経口投与用の固体組成物として、医薬組成物を散剤、顆粒剤、圧縮された錠剤、ピル、カプセル剤、チューインガム、ウェーハなどに製剤化することができる。そのような固体組成物は、一般には、１つまたは複数の不活性な希釈剤または食用担体を含有する。さらに、以下の１つまたは複数が存在し得る：結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、結晶セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチンなど；賦形剤、例えば、デンプン、ラクトースまたはデキストリンなど、崩壊剤、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモゲル、トウモロコシデンプンなど；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｘなど；滑剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素など；甘味剤、例えば、スクロースまたはサッカリンなど；香味剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香味剤など；および着色剤。組成物がカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセルの形態である場合、上記の型の材料に加えて、ポリエチレングリコールまたは油などの液体担体を含有し得る。

【0149】

組成物は、液体、例えば、エリキシル剤、シロップ剤、液剤、エマルションまたは懸濁剤の形態であり得る。液体は、２つの例として、経口投与用または注射による送達用であり得る。経口投与が意図されている場合、好ましい組成物は、本化合物に加えて、甘味剤、保存剤、色素／着色剤および調味料のうちの１つまたは複数を含有する。注射によって投与されることが意図された組成物には、界面活性物質、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝液、安定剤および等張化剤のうちの１つまたは複数を含めることができる。

【0150】

液体の医薬組成物は、液剤であるか、懸濁剤であるか、または他の同様の形態であるかにかかわらず、以下のアジュバントのうちの１つまたは複数を含み得る：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、生理食塩水溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウムなど、不揮発性油、例えば、溶媒または懸濁媒としての機能を果たし得る合成モノまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒など；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸など；緩衝液、例えば、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液またはリン酸緩衝液など、および張度を調整するための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはブドウ糖など。非経口調製物は、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投薬用バイアルに封入することができる。生理食塩水が好ましいアジュバントである。注射可能な医薬組成物は、滅菌されていることが好ましい。

【0151】

非経口投与または経口投与のいずれかが意図された液体組成物は、適切な投薬量が得られる量の本明細書において開示されている抗体または抗原結合性断片を含有すべきである。一般には、この量は、組成物中少なくとも０．０１％の抗体または抗原結合性断片である。経口投与が意図されている場合、この量は、組成物の重量の０．１％から約７０％の間に変動し得る。ある特定の経口医薬組成物は、約４％から約７５％の間の抗体または抗原結合性断片を含有する。ある特定の実施形態では、本発明による医薬組成物および調製物は、希釈前に非経口投薬単位が０．０１〜１０重量％の抗体または抗原結合性断片を含有するように調製される。

【0152】

組成物は局所投与が意図されたものであり得、その場合、担体は、溶液、エマルション、軟膏剤またはゲル基剤を適切に含み得る。基剤は、例えば、以下の１つまたは複数を含み得る：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、水およびアルコールなどの希釈剤、ならびに乳化剤および安定剤。局所投与用の組成物中には増粘剤が存在し得る。経皮投与が意図されている場合、組成物は、経皮吸収パッチまたはイオン導入デバイスを含み得る。医薬組成物は、例えば、直腸内で融解し、薬物を放出する坐薬の形態での直腸内投与が意図されたものであり得る。直腸内投与用の組成物は、適切な非刺激性賦形剤として油性基剤を含有する。そのような基剤としては、限定することなく、ラノリン、カカオバターおよびポリエチレングリコールが挙げられる。

【0153】

組成物は、固体または液体投薬単位の物理的形態を改変する様々な材料を含み得る。例えば、組成物は、活性成分の周りにコーティング殻を形成する材料を含み得る。コーティング殻を形成する材料は、一般には、不活性であり、例えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択することができる。あるいは、活性成分をゼラチンカプセルで包むことができる。固体または液体の形態の組成物は、本開示の抗体または抗原結合性断片に結合し、それにより、化合物の送達を補助する薬剤を含み得る。この能力で作用し得る適切な薬剤としては、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、１つまたは複数のタンパク質またはリポソームが挙げられる。組成物は、エアロゾルとして投与することができる投薬単位から本質的になり得る。エアロゾルという用語は、コロイド性の系から加圧パッケージからなる系までにわたる種々の系を示すために使用される。送達は、液化もしくは圧縮ガスによるもの、または活性成分を分配する適切なポンプ系によるものであり得る。活性成分（複数可）を送達するためにエアロゾルを単一相、二相、または三相系で送達することができる。エアロゾルの送達は、一緒にキットを形成し得る必要な容器、活性化因子、弁、副容器などを含む。当業者は、過度な実験を伴わずに好ましいエアロゾルを決定することができる。

【0154】

医薬組成物は、製薬技術分野で周知の方法体系によって調製することができる。例えば、注射によって投与されることが意図された組成物は、本明細書に記載の抗体、その抗原結合性断片、または抗体コンジュゲートを含む組成物、ならびに必要に応じて塩、緩衝液および／または安定剤のうちの１つまたは複数を、滅菌蒸留水と合わせて溶液を形成することによって調製することができる。均一な溶液または懸濁液の形成を容易にするために界面活性物質を添加することができる。界面活性物質は、ペプチド組成物と非共有結合により相互作用して、抗体またはその抗原結合性断片の水性送達系中への溶解または均一な懸濁を容易にする化合物である。

【0155】

一般に、妥当な用量および処置レジメンは、組成物（複数可）を、治療的および／または予防的利益（例えば、臨床転帰の改善（例えば、下痢もしくは付随する脱水、もしくは炎症の頻度、持続時間、もしくは重症度の低減）、またはより長い無疾患および／もしくは全生存、または症状の重症度の低下を含めた本明細書に記載のものなど）をもたらすために十分な量で提供するものである。予防的使用に関しては、用量は、疾患または障害に関連する疾患を防止する、その発症を遅延させる、またはその重症度を低下させるために十分なものであるべきである。本明細書に記載の方法に従って投与される組成物の予防的利益は、前臨床試験（ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ動物試験を含む）ならびに臨床試験を実施し、それにより得られたデータを、妥当な統計学的、生物学的、および臨床的方法および技法によって解析することによって決定することができ、これらは全て当業者が容易に実施することができる。

【0156】

組成物は有効量（例えば、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置するための）で投与され、有効量は、使用される特定の化合物の活性；化合物の代謝安定性および作用の長さ；被験体の年齢、体重、全体的な健康、性別、および食事；投与方式および時間；排泄速度；薬物の組合せ；特定の障害または状態の重症度；および治療を受けている被験体を含めた種々の因子に応じて変動する。ある特定の実施形態では、本開示の製剤および方法に従った治療の施行後、試験被験体は、プラセボで処置されたまたは他の適切な対照被験体と比較して、処置される疾患または障害に付随する１つまたは複数の症状の約１０％から約９９％までの低減を示す。

【0157】

一般に、治療的に有効な１日用量は（７０ｋｇの哺乳動物に対して）約０．００１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．０７ｍｇ）から約１００ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７．０ｇ）であり、治療有効用量は（７０ｋｇの哺乳動物に対して）約０．０１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．７ｍｇ）から約５０ｍｇ／ｋｇ（すなわち、３．５ｇ）までであることが好ましく、治療有効用量は（７０ｋｇの哺乳動物に対して）約１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７０ｍｇ）から約２５ｍｇ／ｋｇ（すなわち、１．７５ｇ）までであることがより好ましい。

【0158】

ある特定の実施形態では、方法は、抗体、抗原結合性断片、または組成物を被験体に２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回またはそれよりも多く投与することを含む。

【0159】

ある特定の実施形態では、方法は、抗体、抗原結合性断片、または組成物を対象に複数回投与することを含み、第２のまたは逐次的な投与を、それぞれ第１のまたは前の投与の約６時間後、約７時間後、約８時間後、約９時間後、約１０時間後、約１１時間後、約１２時間後、約２４時間後、約４８時間後、約７４時間後、約９６時間後、またはそれよりも後に実施する。

【0160】

ある特定の実施形態では、方法は、被験体がＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに感染する前に、抗体、抗原結合性断片、または組成物を少なくとも１回投与することを含む。

【0161】

ここに開示される方法のいずれかでは、投与後に、被験体由来の便試料は、有効量の抗体、抗原結合性断片、または組成物を投与する前の被験体由来の便試料と比較して増加した数のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒコロニー形成単位（ＣＦＵ）を含む。

【0162】

リポカリン−２（ＬＣＮ２）は、腸炎症のマーカーであり、上皮損傷および好中球浸潤に結び付けられる。ここに開示される方法のいずれかでは、投与後に、被験体由来の便試料は、有効量の抗体、抗原結合性断片、または組成物を投与する前の被験体由来の便試料と比較して減少した量のＬＣＮ２を含む。ＬＣＮ２は、例えば、抗ＬＣＮ２抗体を使用し、ＥＬＩＳＡアッセイを行って測定することができる。

【0163】

ここに開示される方法のいずれかでは、投与後に、被験体は、有効量の抗体、抗原結合性断片、または組成物を投与する前の被験体と比較して減少した量の多形核（ＰＭＮ）細胞浸潤物を被験体の盲腸に含む、ここで、ＰＭＮ細胞はＧｒ１^＋ＣＤ１１ｂ^＋である。

【0164】

ここに開示される方法のいずれかでは、投与後に、被験体は、有効量の抗体、抗原結合性断片、または組成物を投与する前の被験体と比較して改善された盲腸の組織学的検査所見を有する。標準の組織学的分析およびスコア化技法を使用して、組織（例えば、盲腸）を損傷、炎症、または他のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染のしるしについてスコア化することができる。

【0165】

ここに開示される方法のいずれかでは、投与後に、抗体または抗原結合性断片が被験体の盲腸および／または糞便中に投与後少なくとも４時間にわたってまたは少なくとも８時間にわたって存在する。

【0166】

本開示の抗体または抗原結合性断片を含む組成物は、１つまたは複数の他の治療剤の投与と同時に、その前に、またはその後に投与することもできる。そのような併用療法は、本発明および１つまたは複数の追加的な活性薬剤の化合物を含有する単一の医薬投薬形態（ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）の投与、ならびに本開示の抗体または抗原結合性断片を含む組成物および各活性薬剤のそれ自体の別々の投薬形態での投与を含み得る。例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片と他の活性薬剤を患者に錠剤またはカプセル剤などの単一の経口投薬組成物として一緒に投与することもでき、各薬剤を別々の経口投薬形態で投与することもできる。同様に、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片と他の活性薬剤を被験体に生理食塩水溶液または他の生理的に許容される溶液中などの単一の非経口投薬組成物として投与することもでき、各薬剤を別々の非経口投薬形態で投与することもできる。別々の投薬形態を使用する場合、抗体または抗原結合性断片と１つまたは複数の追加的な活性薬剤を含む組成物を基本的に同じ時間、すなわち、同時に投与することもでき、別々に時間差で、すなわち、逐次的におよび任意の順序で投与することもできる。併用療法は、これらのレジメン全てを包含するものと理解される。

【0167】

関連する態様では、ここに開示される抗体、抗原結合性断片、および組成物の使用が提供される。

【0168】

ある特定の実施形態では、（ａ）被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置する；（ｂ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体における腸炎症を低減する；および／または（ｃ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体によるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの腸からの排出を増加させる方法において使用するための、抗体、抗原結合性断片、または組成物が提供される。処置、炎症の低減、および腸からの排出の増加は本明細書に記載の通りであることが理解されよう。

【0169】

ある特定の実施形態では、（ａ）被験体におけるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を処置するため；（ｂ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体における腸炎症を低減するため；および／または（ｃ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染を有する被験体によるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの腸からの排出を増加させるための医薬を製造または調製する方法における使用のための、抗体、抗原結合性断片、または組成物が提供される。ある特定の実施形態では、医薬を経口投与用に製剤化する。

【実施例】

【0170】

（実施例１）
実験方法
細菌運動性、接着、または粘膜侵入に関連する選択されたＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ抗原に対する免疫グロブリンを単離し、効力、選択性、および幅についてｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｅｘ−ｖｉｖｏで試験した。対応する組換えＳＩｇＡ（ｒＳＩｇＡ）を同時トランスフェクションによって哺乳動物細胞において発現させ、アフィニティーカラムクロマトグラフィーを使用して精製した。

【0171】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの運動性を抑えるｒＳＩｇＡの能力をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて運動性アッセイによって評価し（Riazi et al., PLoS one 2013）、一方、ｒＳＩｇＡの幅およびマウス微生物叢との交差反応性を、ｍＡｂを感染または偽感染マウスの便と一緒にインキュベートし、その後、ヒトＩｇＡでコーティングされた細菌のＦＡＣＳ分析を行うことによって評価した。

【0172】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染に対する経口投与されたｒＳＩｇＡの予防活性をＣ５７ＢＬ／６マウスモデルにおいて試験した。第１の実験では、Ｃ５７／ＢＬ６マウスを、ｍＡｂ投与の４８時間前にバンコマイシンの経口強制飼養によって３回前処置した。次に、１時間後に、動物に１０^９ＣＦＵのＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６株（コレクション番号ＡＴＣＣ ＢＡＡ−２１５１）を感染させ、次いで、抗体を６時間間隔で再度２回投与した。別の実験では、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（２１日齢）を、ｍＡｂ投与の４８時間前、２４時間前および１２時間前にＰＢＳ ２００μｌ中１０ｍｇのバンコマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で前処置した。次いで、マウスにＰＢＳ ２００μｌ中２００μｇのＦｌｉＤ反応性ｍＡｂを単回経口投与し、２時間後に１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６（コレクション番号ＡＴＣＣ ＢＡＡ−２１５１）を経口強制飼養によって感染させた。この感染は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ株１００９２／ＡＴＢ（コレクション番号ＮＣＴＣ １１４３７）などの他のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種を用いて行うこともできる。実験全体を通して動物の便中の細菌排出をモニタリングした。便試料中の腸炎症のマーカーであるリポカリン−２をＥＬＩＳＡによって測定し、盲腸に関する組織学的評価を実施して、粘膜上皮の細菌侵入および変化を調査した。

【0173】

（実施例２）
Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ特異的モノクローナルＩｇＡ抗体の生成
Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛キャッピングタンパク質（ＦｌｉＤ）は、これまで治療用モノクローナル抗体の潜在的な標的としては評価されていない。ＦｌｉＤをｍＡｂ開発の抗原として選択した。スイス起源の５０の扁桃試料中のＩｇＧ^＋およびＩｇＡ^＋ＦｌｉＤ反応性メモリーＢ細胞の頻度を、抗原特異的メモリーＢ細胞レパートリー分析（Ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ−Ｍｅｍｏｒｙ−Ｂ−ｃｅｌｌ−Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ−Ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＡＭＢＲＡ）を使用して評価した（Pinna et al., Eur.J.Immunol., 39:1260-1270 (2009)）（図１３）。次いで、選択された扁桃由来のＩｇＧ^＋およびＩｇＡ^＋メモリーＢ細胞を不死化し（Traggiai et al., Nat.Med., 10:871-875 (2004)）、培養上清を３８４ウェルプレートに基づくハイスループットプラットフォームを使用してスクリーニングして、ＦｌｉＤ反応性抗体を発現する細胞クローンを同定した。

【0174】

ヒトモノクローナル抗体「ＣＡＡ」および「ＣＣＧ４」を産生するメモリーＢ細胞クローンを単離し、ＦｌｉＤ抗原に対するそれらの特異性および親和性に基づいて選択した。ＣＡＡ１は、２１アミノ酸のＨＣＤＲ３およびＶ_Ｋ１−３９／Ｊ_Ｋ５を有するＶ_Ｈ３−４８／Ｄ２−１５／Ｊ_Ｈ３によってコードされるＩｇＡ１として単離された。ＣＣＧ４は、より短い（１１アミノ酸）ＨＣＤＲ３およびＶ_Ｌ３−２７／Ｊ_Ｌ３を有するＶ_Ｈ３−９／Ｄ１−７／Ｊ_Ｈ１によってコードされるＩｇＧ３として単離された。例示的なｍＡｂ由来の可変領域の核酸およびアミノ酸配列を表１に提示する。

【0175】

ヒトは、主にヒンジ領域の長さおよびグリコシル化が異なる２つのＩｇＡアイソタイプサブクラスを示す。ＩｇＡ１は、ＩｇＡ２よりも１３アミノ酸長いヒンジを有し、セリン残基およびトレオニン残基に最大５つのＯ結合グリカンを含有する。ＩｇＡ１のヒンジがより長いことは、より大きな柔軟性およびより長いＦａｂリーチを付与すると考えられるが、ＩｇＡ１のＩｇＡ１プロテアーゼに対する感受性にも寄与する可能性がある。ＩｇＡ２はプロリン−セリンおよび／またはプロリン−トレオニンペプチド結合を欠くより短いヒンジ領域を有し、ＩｇＡ１プロテアーゼに対する抵抗性を有する（Plaut, Annu.Rev.Microbiol., 37:603-622 (1983)）。さらに、ＩｇＡ２アイソタイプは、ＰＰｓ Ｍ細胞の表面上のデクチン−Ｉ受容体と接触することにより逆トランスサイトーシスを受ける可能性がある（Rochereau et al., PLoS Biol., 11: e1001658 (2013)）。ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩｇＡ１アイソタイプはこの能力を有さないと考えられている。Ｃα１領域およびＩｇＡ２のグリコシル化パターンはどちらも、病原体に対する適応免疫を追加刺激し得るデクチン−Ｉ受容体との相互作用に重要であると考えられる（Rochereau et al., Eur.J.Immunol., 45:773-779 (2015)）。

【0176】

さらなる試験のためにＩｇＡ１と比較してＩｇＡ２足場を最初に選択し、ＣＡＡ１およびＣＣＧ４の両方をｒＳＩｇＡ２として作製した後、さらなるｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特徴付けを行った。抗原と非反応性の対照抗体として、ＨＩＶ糖タンパク質を標的とするＨＧＮ１９４ ｍＡｂ（Corti et al., PLoS One, 5: e8805 (2010)）もｒＳＩｇＡ２として発現させた。抗体を哺乳動物細胞へのプラスミドの同時トランスフェクションによってｒＳＩｇＡ２として発現させ、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＡアフィニティーカラムを使用して精製した。

【0177】

精製されたｒＳＩｇＡの構造的および機能的特徴付けをＥＬＩＳＡおよびＵＰＬＣ分析を使用して実施した。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ反応性ｒＳＩｇＡは、最近の臨床分離株を含めた重症感染に関連付けられる最も一般的なＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種を認識し、それに結合することができ（図１）、マウス微生物叢との限定された交差反応性を示し、これは、共生の種の鞭毛における同様の抗原との相同性のレベルが穏当であること、または非Ｆａｂ媒介性相互作用に起因する可能性がある。

【0178】

表１に本開示による例示的な抗ＦｌｉＤ ｍＡｂの配列、ならびに例示的なＦｌｉＤタンパク質の配列を提示する。抗体のＣＤＲ配列（アミノ酸およびヌクレオチド）が太字で示されている。体細胞変異から生じた抗体残基に下線が引かれている。

【0179】

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【表1-10】

【表1-11】

【表1-12】

【表1-13】

【表1-14】

【表1-15】

【表1-16】

【表1-17】

【表1-18】

【表1-19】

【表1-20】

【表1-21】

【表1-22】

【表1-23】

【表1-24】

【表1-25】

【表1-26】

【表1-27】

【表1-28】

【表1-29】

【表1-30】

【表1-31】

【0180】

（実施例３）
ｒＳＩｇＡ２であるＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ特異的抗体はＦＬｉＤに結合する
ＣＡＡ１およびＣＣＧ４は、ＳＩｇＡ２フォーマットで元のＦｌｉＤ結合活性を維持し、鞭毛タンパク質に対して同様のＥＣ５０を示した（図７Ａ）。ＣＡＡ１ ＳＩｇＡ２のＥＣ５０は０．０２３７２であり、ＣＣＧ４ ＳＩｇＡ２のＥＣ５０は０．０２９５４であった。エピトープビニングから、一方の抗体の抗原への結合によって他方のｍＡｂの結合が妨げられないことが示され（図７Ｂ）、したがって、２つの異なるエピトープが認識されることが示される。変性還元条件でのウエスタンブロット分析により、この２種のｍＡｂが構造的に異なる抗原性決定因子に結合し、ＣＡＡ１は直鎖状エピトープを標的とし、ＣＣＧ４はコンフォメーショナルエピトープを標的とすることが示された（図７Ｃ）。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉおよびＣ．ｃｏｌｉ歴史的分離株の鞭毛におけるこれらのエピトープへの抗体の接近可能性をフローサイトメトリーによって、および共焦点イメージングによって確認した（図７Ｄ、７Ｅ）。

【0181】

（実施例４）
ｒＳＩｇＡはｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの運動性を阻害する
運動性アッセイが図２に概略的に示されている。結果が図３に提示されている。ＣＡＡ１（ｒＳＩｇＡ２）のＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ鞭毛への結合により、感染および侵入力を最大にするために必要な条件である細菌運動性が低下する。ＨＩＶ−１ｇｐ１２０に対する対照ｒＳＩｇＡ２ ＨＧＮ１９４は運動性アッセイにおいて細菌の拡散を抑えることができず、それにより、細菌運動性の阻害がＳＩｇＡの高度にグリコシル化された構造の「生得的な」交差反応性に起因するものではないことが示された。

【0182】

（実施例５）
Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染のマウスモデル
Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ病理発生を研究するためのモデルとして、ＳＩＧＩＲＲまたはＩＬ１０^−／−マウスなどの、細菌に対する炎症反応の悪化を特徴とする遺伝子操作された動物が提唱されている（Heimesaat et al., Front.Cell.Infect.Microbiol., 4: 77 (2014)；Stahl et al., PLoS Pathog., 10: e1004264 (2014)）。しかし、これらの変異は、共生微生物の存在によってさえ潜在的に自然発症腸炎が生じる程度までマウス免疫系を劇的に変更させるものである（Mansfield et al., Infect.Immun., 75:1099-1115 (2007)）。

【0183】

さらに、マウス腸は、コロニー形成抵抗性、および炎症を限定するある特定のレベルの寛容性に起因してＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに対する抵抗性が高いことが示されている（Bereswill et al., PLoS One, 6: e20953 (2011)；Chang and Miller, Infect.Immun., 74:5261-5271 (2006)；Masanta et al., Clin.Dev.Immunol., 2013: 526860 (2013)）。常在微生物叢の潜在的な影響を克服するために、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種が本質的に抵抗性を有するバンコマイシン（Taylor and Courvalin, Antimicrob.Agents Chemother., 32:1107-1112 (1988)）の経口強制飼養による前処置を採用した。前処置により盲腸における頑強な細菌コロニー形成が可能になるが、観察された炎症の徴候は最小であったので、成体野生型マウスにおける病理は増強されないと思われる（Stahl et al., PLoS Pathog., 10: e1004264 (2014)）。

【0184】

乳児野生型マウスは成体動物と比較してＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する易罹患性が高いことが以前に報告されており、微生物叢組成が著しく異なることに結び付けられている（Haag et al., Eur.J.Microbiol.Immunol. (Bp), 2:2-11 (2012)）。免疫適格条件下の新生児および乳児における疾患を再現することができるモデルを設定するために、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６感染に対する感受性を子（１２日齢）、離乳したばかり（２１日齢）および成体（５６日齢）Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。動物を、マウス微生物叢を減損させるためにバンコマイシンを用いて経口強制飼養によって前処置した後、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６をマウス当たり１０^９ＣＦＵで感染させた。感染の６日後に便からＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒを単離し、２１日齢の動物では１２日齢および５６日齢のマウスよりもほぼ２ログ高い排出が明らかになった（図８Ａ）。これらの結果と一致して、離乳したばかりのマウスでは、便中のリポカリン−２のレベルおよび盲腸の組織学的スコア値によって測定して、子および成体マウスと比較して有意に高い腸炎症が示された（図８Ｂ〜８Ｃ）。

【0185】

抗生物質による前処置により、異なる動物において同等の、感染の生態学的ニッチがもたらされることが予想されるので、３群のマウスによって示されたＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する異なる感受性は他の因子によって説明される可能性がある。１２日齢、２１日齢および５６日齢のマウスの便中のマウスＩｇＡの分析により、群の間で濃度が異なることが明らかになった（図８Ｄ）。特に、離乳したばかりのマウスで示された便中のＩｇＡは子および成体マウスと比較して無視できるレベルであった。理論に束縛されることを望むものではないが、この観察は、乳によってもたらされる母親の抗体の外因性供給（１２日齢のマウス）から成体動物（５６日齢のマウス）において確立される内因性産生への転移と一致する可能性がある。したがって、離乳したばかりのマウスのＣ．ｊｅｊｕｎｉ感染に対する易罹患性に関する因子は、これらの動物では腸免疫系が相対的に未熟であることおよび母親の抗体が枯渇していることに起因して分泌型ＩｇＡの濃度が低いことであり得る。これらのデータに基づいて、離乳したばかりのマウスを、ＦｌｉＤ反応性ｍＡｂの予防活性を試験するための免疫コンピテントマウスモデルとして選択した。

【0186】

ＣＡＡ１およびＣＣＧ４のマウス微生物叢へのオフターゲットの結合の結果、ｍＡｂ利用可能性が低下し、したがって、予防的状況における病原体に対する活性が低下する可能性がある。これを調査するために、ｒＳＩｇＡの、離乳したばかりのマウスの微生物叢との潜在的な交差反応性を評価した。Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＰＢＳ（偽感染）を経口感染させた動物由来の便を感染の２４時間後に採取し、２種のＦｌｉＤ反応性ｍＡｂおよび対照ｒＳＩｇＡ ＨＧＮ１９４と一緒にインキュベートした。偽および感染動物の便由来のヒトＩｇＡでコーティングされた細菌を分析することにより、どちらのＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ反応性ｒＳＩｇＡも重症感染に関連付けられる最も一般的な種を認識し、それに結合することができ、それにより、マウス微生物叢との交差反応性が限定されていることが示される（図１４Ａ）。

【0187】

抗体の予防有効性を試験するための条件を設定するために、離乳したばかりのマウスの異なる胃腸管における経口投与されたＳＩｇＡの薬物動態学を評価した。マウス微生物叢との交差反応性を示さなかったＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒに関連しないＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ２（図１４Ａ）をＰＢＳ中１５０μｇ（≒１５ｍｇ／Ｋｇ）の単回経口強制飼養として投与し、投与の２時間後、４時間後および８時間後の異なる腸亜区画におけるその濃度を測定した（図１４Ｂ）。盲腸におけるＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ濃度は、投与後最初の４時間はほぼ一定に維持され、次いで、８時間後までに劇的に低下する傾向があった（図１４Ｂ）。投与の１２時間後または２４時間後にヒト抗体は検出可能でなかった（データは示していない）。

【0188】

（実施例６）
経口投与されたｒＳＩｇＡの予防効果
離乳したばかりの動物（２１日齢）をバンコマイシンで処置し、次いで、マウス当たり２００μｇのｒＳＩｇＡ２ ＣＡＡ１、ＣＣＧ４、ＨＧＮ１９４またはＰＢＳを単回経口強制飼養により投与し、２時間後にマウス当たり１０^８ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６を経口感染させた。処置した動物および対応する対照群を７２時間にわたってモニタリングし、その間、感染の重症度および炎症の程度を記録した。処置したマウスの便を分析することにより、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの排出が感染の２４時間後に高く、その後、経時的に有意に低減したことを特徴とする傾向が明らかになった。逆に、無処置群およびＨＧＮ１９４処置群では、初期の時点で低排出が示され、その後、感染の４８時間後にＣＦＵが一貫して増加した（図９Ａ）。図５Ａおよび５Ｂは、マウスに２００μｇのｍＡｂをマウス当たり１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６を感染させる前に１回、および感染させた後に２回投与した別々の実験のデータを示す。

【0189】

これらの結果から、ＣＡＡ１およびＣＣＧ４により、粘膜上皮の表面に接着する病原体の能力が妨げられるかまたは低下し、したがって、感染後初期の蠕動または粘膜線毛活性による細菌のクリアランスを容易にすることができることが示唆される。この仮説は、感染の７２時間後にＣＡＡ１およびＣＣＧ４で処置した動物の便において記録された上皮損傷および好中球浸潤に結び付けられる腸炎症のマーカーであるリポカリン−２のレベルが対照群と比較して有意に低いことによってさらに裏付けられた（感染／無感染および感染／ＨＧＮ１９４処置群）（図９Ｂ）。図６は、マウスに、２００μｇのｍＡｂを、マウス当たり１０^９ＣＦＵのＣ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６を感染させる前に１回、および感染させた後に２回投与した別々の実験のデータを示す。

【0190】

Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種菌をより多くまたはより少なく投与した動物においても同様の所見が観察された（マウス当たり１０^７または１０^９ＣＦＵ；図１５Ａ、１５Ｂ）。さらに、ＦｌｉＤ反応性ｍＡｂの単回投与で処置した動物では、無感染マウスと同等であり、ＨＧＮ１９４処置群よりも有意に低下したＰＭＮ細胞浸潤のレベルおよび盲腸における組織学的スコア値が示され、したがって、「生得的な活性」によって駆動されるものではなく（Kaetzel, Immunol.Rev., 206:83-99 (2005)；Phalipon et al., Immunity, 17:107-115 (2002)）高度にグリコシル化されたＳＩｇＡに関連するｉｎ ｖｉｖｏ有効性が裏付けられる（図９Ｃ、９Ｄ）。

【0191】

これらの結果から、ｒＳＩｇＡ２フォーマットの本開示のＦｌｉＤ特異的抗体が、経口送達後に、感染後初期の細菌クリアランスを加速することによってＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染および炎症を保護することが示される。

【0192】

（実施例７）
ＩｇＡアイソタイプスイッチはＣＡＡ１予防活性に影響を及ぼさない
ＩｇＡ１およびＩｇＡ２は、腸におけるポリマーＩｇの架橋結合能および／または持続性に影響を及ぼす可能性があるＦａｂリーチ、柔軟性、およびグリコシル化に差異を有し得るので、以下の実験を実施して、この２種のＩｇＡアイソタイプが、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染の本明細書に記載の免疫適格性マウスモデルにおいて異なる予防活性を発揮し得るかどうかを決定した。

【0193】

ＦｌｉＤ反応性ＣＡＡ１をＳＩｇＡ１およびＳＩｇＡ２として組換えによって作製した。この２つのサブクラスが適当にアセンブリされたことを分析方法によって、およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｈｏｒｒｅｈｏｅａｅ由来のＩｇＡ１プロテアーゼで消化することによって確認した（図１６Ａ）。ＣＡＡ１ ＳＩｇＡ１およびＳＩｇＡ２はＦｌｉＤに対して同等の結合を示し（図１６Ｂ）、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてもｅｘ ｖｉｖｏにおいてマウス微生物叢を用いた場合にも、２つのフォーマット間でＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種に対する反応性に有意差は観察されなかった（図１６Ｃ、１６Ｄ）。

【0194】

次いで、２つのサブクラスの予防活性をＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染のマウスモデルにおいて試験した。以前の所見と一致して、ＦｌｉＤ反応性ｍＡｂを投与した動物では、感染後初期の時点でより高いＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒの排出が示され、その後、経時的に低減したが、感染した無処置動物では逆の傾向が生じた（図１０Ａ）。ＣＡＡ１ ｒＳＩｇＡ２では排出がｒＳＩｇＡ１よりも加速されたが、感染の７２時間後の便におけるリポカリン−２のレベル、ＰＭＮ浸潤および盲腸における対応する組織学的スコアによって示される通り、どちらのサブクラスも感染動物において同等に炎症を限定することができた（図１０Ｂ〜１０Ｄ）。

【0195】

これらの結果から、ＩｇＡ１とＩｇＡ２の構造的差異により、ｉｎ−ｖｉｖｏモデルにおいてこれらの２つのＣＡＡ１フォーマットによって発揮される予防活性の差異は生じないことが示される。

【0196】

（実施例８）
ｍＡｂ ＣＡＡ１およびＣＣＧ４はＩｇＧとして発現させた場合には経口予防活性が低下する
ＳＩｇＡは、腸粘膜と関連して発現される最も豊富な抗体であり、腸内病原体に対する防御の最前線になり得ると考えられるが、複雑なタンパク質構造を特徴とし、薬物として開発することは現在のところＩｇＧに基づくモノクローナル抗体と比較して困難であり得る。Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ反応性ｍＡｂの活性はＦｌｉＤに対する特異性に依存することが示されたので、ＣＡＡ１、ＣＣＧ４およびＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒとは無関係の抗体ＨＧＮ１９４をｒＩｇＧ１として生成し、予防活性についてそれらの対応するＳＩｇＡ２対応物と比較して評価した。

【0197】

グリコシル化が粘膜表面上のムチンと相互作用するｍＡｂの能力に影響を及ぼす可能性があるので、対照ｍＡｂであるｒＩｇＧ１としてのＨＧＮ１９４のマウス腸管における局在化および持続性を、抗体を２１日齢のマウスに単回経口強制飼養として投与し、次いで、２時間後、４時間後および８時間後に異なる腸亜区画における当該抗体の濃度を測定することによって評価した（図１４Ｃ）。ＨＧＮ１９４ ｒＳＩｇＡ２を用いた場合と同様に、すべての時点で盲腸においてｒＩｇＧ１の最高濃度が検出された；しかし、この腸亜区画では、ｒＩｇＧ１濃度はｒＳＩｇＡ２よりも速く低下する傾向があり、投与の４時間後までに有意な低下が観察された（図１４Ｂ、１４Ｃ）。

【0198】

ＦｌｉＤ反応性ｍＡｂ ＣＡＡ１およびＣＣＧ４のｒＩｇＧ１またはＳＩｇＡ２としての予防活性も評価した。ｍＡｂを離乳したばかりのマウスに経口投与し、その２時間後にＣ．ｊｅｊｕｎｉ ８１−１７６を感染させた。興味深いことに、ＳＩｇＡ２抗体で処置した動物では、排出が感染の２４時間後に高く、その後、４８時間後および７２時間後には有意に低減することを特徴とする、以前に観察されたパターンが示され、同じ抗体のＩｇＧバージョンで処置された群では、無処置群と同様の傾向が明らかになった（図１１Ａおよび１７Ａ）。感染の７２時間後の感染動物の盲腸におけるＰＭＮ細胞浸潤および便中のリポカリン−２レベルによって示された通り、ＣＡＡ１およびＣＣＧ４ ＩｇＧの炎症を限定する能力がそれらのポリマー対応物と比較して低いことにより、ｉｎ ｖｉｖｏ有効性に関するＳＩｇＡフォーマットの重要性がさらに確認された（図１１Ｂ、Ｃおよび１７Ｂ、１７Ｃ）。全体として、ＦｌｉＤ反応性ＩｇＧ抗体で処置したマウスと無処置の動物の間に組織学的スコアに有意差は観察されなかった。逆に、ＳＩｇＡバージョンの抗体では、以前に観察された有益な効果を再現することができ、盲腸における組織学的スコアが無処置マウスおよびＩｇＧで処置したマウスのどちらよりも有意に低い値に維持された（図１１Ｄおよび１７Ｄ）。

【0199】

これらのデータから、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染の前に経口投与されたＣＡＡ１およびＣＣＧ４ ＩｇＧの予防活性が、ＳＩｇＡとして発現させた同じ抗体と比較して限定されたものであることが示される。理論に束縛されることを望むものではないが、経口投与されたＣＡＡ１およびＣＣＧ４ ＩｇＧの活性の欠如は、胃腸管内での持続性、および、ＳＩｇＡフォーマットに関連する異なる架橋結合性の両方に依拠する可能性がある。

【0200】

上記の種々の実施形態を組み合わせて別の実施形態をもたらすことができる。本明細書において参照されているおよび／または本出願データシートに列挙されている米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は、２０１８年７月１７日出願の米国仮特許出願第６２／６９９，５７３号を含め、全てがそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。さらに別の実施形態をもたらすために種々の特許、適用および刊行物の概念を使用するために必要であれば、実施形態の態様を改変することができる。

【0201】

上記の詳細な説明を踏まえてこれらおよび他の変化を実施形態に加えることができる。一般に、以下の特許請求の範囲において使用される用語は、当該請求項を本明細書および特許請求の範囲に開示されている特定の実施形態に限定するものと解釈されるべきではなく、可能性のある全ての実施形態をそのような特許請求の範囲に権利が与えられる均等物の全範囲と共に含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は本開示により限定されない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図12-1】

【図12-2】

【図12-3】

【図12-4】

【図12-5】

【図12-6】

【図12-7】

【図12-8】

【図12-9】

【図12-10】

【図12-11】

【図12-12】

【図12-13】

【図12-14】

【図12-15】

【図12-16】

【図12-17】

【図12-18】

【図12-19】

【図12-20】

【図12-21】

【図12-22】

【図12-23】

【図12-24】

【図12-25】

【図12-26】

【図12-27】

【図12-28】

【図12-29】

【図12-30】

【図12-31】

【図12-32】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図16D】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【配列表】

2021530237000001.app

【国際調査報告】