特開 2015-93848 皮膚化粧料及び頭髪化粧料

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2015-93848(P2015-93848A)

(43)【公開日】2015年5月18日

(54)【発明の名称】皮膚化粧料及び頭髪化粧料

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/34 20060101AFI20150421BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20150421BHJP

   A61Q 19/02 20060101ALI20150421BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20150421BHJP

   A61Q 7/00 20060101ALI20150421BHJP

   A61Q 5/00 20060101ALI20150421BHJP

   A61K 31/05 20060101ALI20150421BHJP

   A61P 39/06 20060101ALI20150421BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20150421BHJP

   A61P 17/16 20060101ALI20150421BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20150421BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20150421BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20150421BHJP

【ＦＩ】

   A61K8/34

   A61Q19/00

   A61Q19/02

   A61Q19/08

   A61Q7/00

   A61Q5/00

   A61K31/05

   A61P39/06

   A61P29/00

   A61P17/16

   A61P17/14

   A61P17/02

   A61P17/06

【審査請求】未請求

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】26

(21)【出願番号】特願2013-234010(P2013-234010)

(22)【出願日】2013年11月12日

(71)【出願人】

【識別番号】591082421

【氏名又は名称】丸善製薬株式会社

(71)【出願人】

【識別番号】505314022

【氏名又は名称】独立行政法人医薬基盤研究所

(74)【代理人】

【識別番号】100108833

【弁理士】

【氏名又は名称】早川 裕司

(74)【代理人】

【識別番号】100162156

【弁理士】

【氏名又は名称】村雨 圭介

(72)【発明者】

【氏名】新穂 大介

(72)【発明者】

【氏名】吉松 嘉代

【テーマコード（参考）】

4C083

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C083AA072

4C083AA082

4C083AA112

4C083AA122

4C083AB032

4C083AC022

4C083AC072

4C083AC102

4C083AC122

4C083AC182

4C083AC242

4C083AC422

4C083AC442

4C083AC471

4C083AC472

4C083AC482

4C083AC532

4C083AC642

4C083AC712

4C083AC782

4C083AC792

4C083AC852

4C083AD092

4C083AD282

4C083AD332

4C083AD352

4C083AD392

4C083AD512

4C083AD532

4C083AD552

4C083AD662

4C083CC02

4C083CC05

4C083CC31

4C083CC37

4C083CC38

4C083EE12

4C083EE16

4C083EE22

4C083EE35

4C206AA01

4C206AA02

4C206CA19

4C206KA01

4C206MA01

4C206MA04

4C206NA14

4C206ZA89

4C206ZA92

4C206ZB11

4C206ZC20

4C206ZC37

(57)【要約】

【課題】安全性の高い天然物の中から抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、抗老化作用または育毛作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤を提供する。
【解決手段】本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤の有効成分として、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を含有させる。また、本発明の皮膚化粧料および頭髪化粧料に、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を配合する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。

【請求項2】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。

【請求項3】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。

【請求項4】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。

【請求項5】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。

【請求項6】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を配合したことを特徴とする皮膚化粧料。

【請求項7】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を配合したことを特徴とする頭髪化粧料。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、皮膚化粧料および頭髪化粧料に関するものである。

【背景技術】

【0002】

近年、特に生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、活性酸素としては、スーパーオキサイド（すなわち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン：・Ｏ_２⁻）、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）及び一重項酸素（^１Ｏ_２）等が挙げられる。これらの活性酸素は、食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。

【0003】

しかしながら、活性酸素の過剰な生成は、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。通常、生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されているが、スーパーオキサイドの産生が過剰である場合、又はＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分となり、スーパーオキサイド濃度が高くなる。その結果、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、各種動脈硬化症（虚血性心疾患，心筋梗塞，脳虚血，脳梗塞等）、神経変性疾患（アルツハイマー病，パーキンソン病，ハンチントン舞踏病等）、癌、喫煙等が原因の肺疾患、白内障、糖尿病、しわ、肩凝り、冷え性等の様々な疾患を誘発する。

【0004】

特に、皮膚は、紫外線等の環境因子の刺激を直接受けることから、スーパーオキサイドが生成しやすい器官であるため、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解し、変性し又は架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされる障害が、皮膚のしわ形成や皮膚の弾力低下等の老化の原因になるものと考えられている（非特許文献１参照）。したがって、活性酸素や生体内ラジカルの生成を阻害・抑制することにより、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、活性酸素による酸化ストレスが原因となって誘発される上記の疾患群を予防、治療又は改善できるものと考えられる。ラジカル消去作用を有するものとして、テンニンカ抽出物（特許文献１参照）、クチナシ属植物の抽出物（特許文献２参照）等が知られている。

【0005】

また、グルタチオンは、グルタミン酸、システイン及びグリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンは、ラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、異物代謝、各種酵素のＳＨ供与体としての機能を果たすものであり、抗酸化成分としても知られている。その作用発現は、システイン残基に由来すると考えられている。しかしながら、過剰な酸化ストレスや異物の付加、加齢などにより、細胞内のグルタチオン量が欠乏又は低下することが報告されており、このことが細胞の酸化ストレスに対する防御能を低下させ、細胞のＤＮＡ及びタンパク質等の構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。

【0006】

このような、細胞内のグルタチオン量の低下又は欠乏が病態と関連することが知られている疾患として、酸化ストレスが原因となって誘発される上記の疾患群のほか、肝障害（アルコールの多飲、又は重金属や化学物質等の異物の摂取が原因となる）等が知られている。

【0007】

すなわち、グルタチオンの産生を促進することは、細胞の酸化ストレスに対する防御能を高め、細胞内のグルタチオン量が低下又は欠乏することに起因する上記の疾患群を予防・治療することができると考えられる。このようなグルタチオン産生促進作用を有するものとして、テンニンカ抽出物（特許文献３参照）、クチナシ属植物の抽出物（特許文献４参照）等が知られている。

【0008】

炎症性疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、アトピー性皮膚炎、その他肌荒れを伴う各種皮膚炎症性疾患の原因及び発症機構は、多種多様である。その原因の一つに、各種洗浄用組成物やその他の家庭用製品などに含まれる界面活性剤による刺激が挙げられる。

【0009】

界面活性剤は、皮膚などに付着した汚れを落とすために欠かせない物質であるが、一方で皮膚に接触して皮膚の構成成分を変性させ得るものである。皮膚の構成成分が界面活性剤により変性すると、皮膚は、皮膚組織の剥脱等のダメージを受けることとなり、肌荒れ等の原因となる。例えば、界面活性剤の一つであるドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）は、ヒトの顔の様々な部位において、肌荒れの指標となる経表皮水分蒸散量を有意に上昇させることが知られている（非特許文献２参照）。

【0010】

すなわち、必要量以上の界面活性剤を皮膚に接触させると、皮膚のダメージを誘発し、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患が発症し、またはこれらの皮膚炎症性疾患を悪化させてしまう原因となる。したがって、界面活性剤による皮膚のダメージを抑制することができれば、上記の各種炎症性疾患等の予防又は改善に効果があるものと考えられる。

【0011】

皮膚においてメラニンは、紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般にメラニンは、色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、ついで５，６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成されるものとされている。したがって、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）、シミ、ソバカス等を予防、治療又は改善するためには、メラニンの産生に関与するチロシナーゼの活性を阻害すること、又はメラニンの産生を抑制することが考えられる。

【0012】

従来、皮膚色素沈着症、シミ、ソバカス等の予防、治療又は改善には、ハイドロキノン等の化学合成品を有効成分とする美白剤を外用する処置が行われてきた。しかしながら、ハイドロキノン等の化学合成品は、皮膚刺激、アレルギー等の副作用のおそれがある。そこで、安全性の高い天然原料を有効成分とする美白剤の開発が望まれており、チロシナーゼ活性阻害作用を有するものとしては、例えば、藤茶抽出物（特許文献５参照）、ヤナギタデ抽出物（特許文献６参照）等が知られている。また、メラニン産生抑制作用を有するものとしては、例えば、トウゴマ根部からの抽出物（特許文献７参照）、サウスウレア（Saussurea）属に属する植物からの抽出物（特許文献８参照）等が知られている。

【0013】

皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン及びヒアルロン酸等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、コラーゲン等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。

【0014】

ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲン及びヒアルロン酸の産生量が減少するとともに、分解や変質を引き起こす。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が生じるため、肌は張りや艶を失い、肌荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン及びヒアルロン酸等の真皮マトリックス成分の減少・変性等が関与している。

【0015】

近年、皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ；Matrix metalloproteinases）の関与が指摘されている。このＭＭＰｓの中でも、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）は、上述した真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワの形成、弾力性の低下等の大きな要因となると考えられている。したがって、ＭＭＰ−１の活性を阻害することは、皮膚の老化症状を予防・改善する上で重要である。

【0016】

また、ＭＭＰ−１の活性が亢進すると、細胞外マトリックスが破壊される。細胞外マトリックスの破壊は、癌の浸潤・転移、関節リュウマチ、変形性膝関節症、歯周病、加齢黄斑変性症等、様々な疾患と関連することが知られている。そのため、ＭＭＰ−１の活性を阻害することにより、細胞外マトリックスの破壊と関連する疾患等を治療・予防することができると考えられる。

【0017】

このようなＭＭＰ−１活性阻害作用を有するものとしては、例えば、ヒマラヤザクラからの抽出物（特許文献９参照）、ショウガ科ジンギバーカッサムナー又はクワ科フィカスネリフォリアからの抽出物（特許文献１０参照）等が知られている。

【0018】

他方、上述の細胞外マトリックス成分のうち、ヒアルロン酸はムコ多糖の一種であり、加齢や紫外線の照射等に伴ってヒアルロン酸が減少・変性すると、皮膚の荒れ、しわ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下及び保湿機能の低下等の老化症状を呈するようになる。そのため、ヒアルロン酸の産生を促進することにより、皮膚の老化症状を予防・改善できると考えられる。

【0019】

また、ヒアルロン酸は、皮膚組織の他にも、軟骨、関節液、臍帯、眼硝子体、その他の結合組織に存在する。ヒアルロン酸は、細胞間の間隙に充填されることにより細胞を保持する機能を有し、さらに細胞間隙への水分の保持、組織への潤滑性や柔軟性の付与、機械的障害等の外力に対する抵抗等、数多くの機能を有している。

【0020】

このうち、関節液に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、ヒアルロン酸が有する潤滑機能、軟骨に対する被覆・保護機能等により、関節の円滑な作動に役立っている。一方、慢性関節リウマチ等の関節炎において、関節液におけるヒアルロン酸の濃度が低下していることが知られている。したがって、ヒアルロン酸の産生を促進することで、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、化膿性関節炎、痛風性関節炎、外傷性関節炎、又は骨関節炎等の関節炎を予防又は治療することができると考えられる。

【0021】

さらに、創傷又は熱傷の治癒過程において、肉芽（組織）が形成するが、肉芽中にヒアルロン酸が著しく増加することが知られている。そのため、ヒアルロン酸の産生を促進することで、創傷又は熱傷の治癒を促進することができると考えられる。

【0022】

従来、ヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、クスノハガシワからの抽出物（特許文献１１参照）、スターフルーツの果実からの抽出物（特許文献１２参照）等が知られている。

【0023】

表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、最下層である基底層から始まって、有棘層、顆粒層、角質層へと連なる４層構造から構成されている。各層に存在する大部分の細胞は、基底層から分化した角化細胞である。基底層で分裂、増殖した角化細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し角質細胞となって、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層を構成し、最終的には垢として角質層から脱落する。特に、顆粒層では、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ−１の作用により、蛋白分子間がグルタミル−リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能の基礎が形成される。

【0024】

しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈したり、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）を発症したりするようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生を促進することにより、皮膚の老化症状や乾燥性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。このようなトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有するものとして、フロリジン及び／又はフロレチン（特許文献１３参照）、ニガリ又はその構成成分である塩化カルシウム（特許文献１４参照）等が知られている。

【0025】

近年、メイラード（Maillard）反応が、皮膚の褐変、老化現象に深く関与していることが報告されている。メイラード反応は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質のアミノ基、ケトン、アルデヒド、特に還元糖が反応して褐色色素を生成するもので、食品分野では、その褐色と風味とが広く利用され、また研究されている。また、メイラード反応は、食品の劣化の指標となる場合もあるため、メイラード反応の抑制に関する研究も進められている。この反応生成物である褐変した色素の存在と蓄積とが、皮膚においても確認されている（非特許文献３，４参照）。この反応が、皮膚コラーゲンについても起こり、特に加齢に伴うコラーゲンの変性による皮膚の張り及び艶の消失の一因となることが報告されている。このようなメイラード反応抑制作用を有するものとして、例えば、カルカデ、ハイビスカス、シャゼンシ、トウニン、マロニエ、ケイシ、ゴミシ、シコン、センナ、トシシ及びビャッキュウからの抽出物（特許文献１５参照）等が知られている。

【0026】

ＳＩＲＴ１は、サーチュインと呼ばれるファミリーに包含されるタンパク質であり、細胞核内および細胞質に存在し、ＮＡＤ依存性タンパク質脱アセチル化酵素として機能することが知られている。近年、このＳＩＲＴ１が、細胞老化を抑制するという面で重要な役割を演じており、特に皮膚組織において発現し皮膚老化の抑制に関与していることが明らかになっている（非特許文献５参照）。また、ＳＩＲＴ１は、細胞老化のほか、糖尿病改善作用、心血管保護作用、腎疾患改善作用、炎症性サイトカイン産生の抑制作用、神経保護作用等、様々な機能を有することが明らかになっている。

【0027】

そのため、ＳＩＲＴ１を活性化することができれば、皮膚老化等の老化、糖尿病、心血管疾患、神経系疾患、炎症性疾患などの各種疾患の予防・治療または改善に有用であると考えられている。

【0028】

毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を担っている（非特許文献６参照）。

【0029】

このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を果たしており、毛乳頭細胞の増殖を促進することで、脱毛症を予防・改善することができると考えられる。これまでに、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するものとしては、例えば、ミズヒキ抽出物（特許文献１６参照）、ハトムギ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びスギナ抽出物等が知られている（以上、特許文献１７参照）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0030】

【特許文献1】特開２００８−２８５４２２号公報

【特許文献2】特開２００６−３４７９３４号公報

【特許文献3】特開２００８−２８５４２２号公報

【特許文献4】特開２００６−３４７９３４号公報

【特許文献5】特開２００２−３７０９６２号公報

【特許文献6】特開２００４−８３４８８号公報

【特許文献7】特開２００１−２１３７５７号公報

【特許文献8】特開２００２−２０１１２２号公報

【特許文献9】特開２００３−１７６２３２号公報

【特許文献10】特開２００３−１７６２３０号公報

【特許文献11】特開２００３−１４６８３７号公報

【特許文献12】特開２００３−３００８９３号公報

【特許文献13】特開２００４−５１５９６号公報

【特許文献14】特開２００７−１０６７１２号公報

【特許文献15】特開平１１−１０６３３６号公報

【特許文献16】特開２００６−０８３０８４号公報

【特許文献17】特開２００６−２１９４０７号公報

【非特許文献】

【0031】

【非特許文献1】「フレグランスジャーナル臨時増刊」，1995年，No.14，p.156

【非特許文献2】"Skin Pharmacol. Physiol."，2006年，Vol.19，No.3，p.177-180

【非特許文献3】"Z. Ernaehrungswiss"，1991年，Vol.30，p.29-45

【非特許文献4】"Science"，1981年，Vol.211，No.4481，p.491-493

【非特許文献5】"Cosmetics & Toiletries"，2008年，Vol.123，No.1，p.69-72

【非特許文献6】"Trends Genet."，1992年，Vol.8，p.55-61

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0032】

本発明は、天然物由来の化合物の中から抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、抗老化作用または育毛作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤、並びに当該化合物を配合した皮膚化粧料及び頭髪化粧料を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0033】

上記課題を解決するために、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤は、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有することを特徴とする。また、本発明の皮膚化粧料及び頭髪化粧料は、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を配合したことを特徴とする。

【発明の効果】

【0034】

本発明によれば、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有させることにより、作用効果に優れた抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤を提供することができる。さらに、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を配合することにより、上記作用に優れた皮膚化粧料および頭髪化粧料を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0035】

以下、本発明の実施の形態について説明する。
本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤は、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）を有効成分として含有するものである。また、本実施形態の皮膚化粧料及び頭髪化粧料は、ガンカオニンＲ（Gancaonin R）が配合されるものである。

【0036】

ガンカオニンＲ（Gancaonin R）は、下記式（Ｉ）で表される化学構造を有するポリフェノールである。

【0037】

【化1】

【0038】

ガンカオニンＲは、ガンカオニンＲを含有する植物抽出物から単離・精製することにより製造することができる。このようなガンカオニンＲを含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。ガンカオニンＲを含有する植物としては、例えば、甘草の葉部等が挙げられる。

【0039】

甘草は、マメ科グリチルリーザ（Glycyrrhiza）属に属する多年生草本である。甘草には、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）、グリチルリーザ・アスペラ（Glychyrrhiza aspera）、グリチルリーザ・ユーリカルパ（Glychyrrhiza eurycarpa）、グリチルリーザ・パリディフロラ（Glychyrrhiza pallidiflora）、グリチルリーザ・ユンナネンシス（Glychyrrhiza yunnanensis）、グリチルリーザ・レピドタ（Glychyrrhiza lepidota）、グリチルリーザ・エキナタ（Glychyrrhiza echinata）、グリチルリーザ・アカンソカルパ（Glychyrrhiza acanthocarpa）等、様々な種類のものがあり、これらのうち、いずれの種類の甘草を抽出原料として使用してもよいが、特にグリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）、及びグリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）を抽出原料として使用することが好ましい。

【0040】

抽出原料として使用し得る甘草の構成部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、蕾部、果実部等の地上部、根部、根茎部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。

【0041】

甘草の葉部からの抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、甘草葉部の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

【0042】

抽出溶媒としては、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。

【0043】

抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

【0044】

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。

【0045】

２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を抽出溶媒として使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比が９：１〜１：９（容量比）であることが好ましく、７：３〜２：８（容量比）であることがさらに好ましい。また、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族ケトンとの混合比が９：１〜２：８（容量比）であることが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水と多価アルコールとの混合比が５：５〜１：９（容量比）であることが好ましい。

【0046】

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。

【0047】

以上のようにして得られた抽出液、当該抽出液の濃縮物又は当該抽出液の乾燥物からガンカオニンＲを単離・精製する方法は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。例えば、抽出物を展開溶媒に溶解し、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、ガンカオニンＲを含む画分を回収する方法等が挙げられる。この場合、展開溶媒は使用する固定相に応じて適宜選択すればよいが、例えば固定相としてシリカゲルを用いた順相クロマトグラフィーにより抽出物を分離する場合、展開溶媒としてはクロロホルム：メタノール＝９５：５等が挙げられる。さらに、カラムクロマトグラフィーにより得られたガンカオニンＲを含む画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液−液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。

【0048】

〔抗酸化剤，抗炎症剤，美白剤，抗老化剤，育毛剤〕
以上のようにして得られるガンカオニンＲは、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、抗老化作用および育毛作用を有しているため、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤の有効成分として用いることができる。本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品等の幅広い用途に使用することができる。

【0049】

ここで、ガンカオニンＲが有する抗酸化作用は、例えば、ラジカル消去作用および／またはグルタチオン産生促進作用に基づいて発揮される。ただし、ガンカオニンＲが有する抗酸化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるものではない。また、ガンカオニンＲは、そのラジカル消去作用またはグルタチオン産生促進作用を利用して、それぞれラジカル消去剤またはグルタチオン産生促進剤の有効成分として使用してもよい。

【0050】

ガンカオニンＲが有する抗炎症作用は、例えば、界面活性剤による皮膚へのダメージを抑制する作用（以下、本明細書において「界面活性剤ダメージ抑制作用」と呼ぶことがある。）に基づいて発揮される。ただし、ガンカオニンＲが有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。また、ガンカオニンＲは、その界面活性剤ダメージ抑制作用を利用して、界面活性剤ダメージ抑制作用剤の有効成分として使用してもよい。

【0051】

ガンカオニンＲが有する美白作用は、例えば、チロシナーゼ活性阻害作用および／またはメラニン産生抑制作用に基づいて発揮される。ただし、ガンカオニンＲが有する美白作用は、上記作用に基づいて発揮される美白作用に限定されるものではない。また、ガンカオニンＲは、そのチロシナーゼ活性阻害作用またはメラニン産生抑制作用を利用して、それぞれチロシナーゼ活性阻害剤またはメラニン産生抑制作用剤の有効成分として使用してもよい。

【0052】

ガンカオニンＲが有する抗老化作用は、例えば、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用、ＳＩＲＴ１産生促進作用からなる群より選択される１または２以上の作用に基づいて発揮される。ただし、ガンカオニンＲが有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。また、ガンカオニンＲは、そのＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用またはＳＩＲＴ１産生促進作用を利用して、それぞれＭＭＰ−１活性阻害剤、ヒアルロン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、メイラード反応阻害剤またはＳＩＲＴ１産生促進剤の有効成分として使用してもよい。

【0053】

ガンカオニンＲが有する育毛作用は、例えば、毛乳頭細胞増殖促進作用に基づいて発揮される。ただし、ガンカオニンＲが有する育毛作用は、上記作用に基づいて発揮される育毛作用に限定されるものではない。また、ガンカオニンＲは、その毛乳頭細胞増殖促進作用を利用して、毛乳頭細胞増殖促進作用の有効成分として使用してもよい。

【0054】

本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤は、ガンカオニンＲのみからなるものでもよいし、ガンカオニンＲを製剤化したものでもよい。

【0055】

本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料、頭髪化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。

【0056】

本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤を製剤化した場合、ガンカオニンＲの含有量は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定することができる。

【0057】

なお、本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤は、必要に応じて、抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、抗老化作用または育毛作用を有する他の天然抽出物等を、ガンカオニンＲとともに配合して有効成分として用いることができる。

【0058】

本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤の患者に対する投与方法としては、経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。

【0059】

本実施形態の抗酸化剤は、有効成分であるガンカオニンＲが有するラジカル消去作用および／またはグルタチオン産生促進作用を通じて、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化を予防・改善できるとともに、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着を予防・改善することができる。ここで、「活性酸素」には、スーパーオキサイド、過酸化水素、ヒドロキシラジカル、一重項酸素等が含まれる。また、「ラジカル」とは、不対電子を１つ又はそれ以上有する分子又は原子を意味し、スーパーオキサイド、ヒドロキシラジカル、ＤＰＰＨ等が含まれる。

【0060】

また、本実施形態の抗酸化剤は、ガンカオニンＲが有するラジカル消去作用および／またはグルタチオン産生促進作用を通じて、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、各種動脈硬化症（虚血性心疾患，心筋梗塞，脳虚血，脳梗塞等）、神経変性疾患（アルツハイマー病，パーキンソン病，ハンチントン舞踏病等）、癌、喫煙等が原因の肺疾患、白内障、糖尿病、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種疾患；肝障害（アルコールの多飲，又は重金属や化学物質等の異物の摂取が原因となる）等の細胞内グルタチオン量の低下又は欠乏が病態と関連することが知られている疾患；などを予防又は治療することもできる。ただし、本実施形態の抗酸化剤は、これらの用途以外にもラジカル消去作用またはグルタチオン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

【0061】

本実施形態の抗炎症剤は、有効成分であるガンカオニンＲが有する界面活性剤ダメージ抑制作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患を予防又は改善することができる。ここで、「界面活性剤」には、親水性基および疎水性基を有し、各種洗浄用組成物や家庭用製品に用いられるものであれば特に限定されない。なお、各種洗浄用組成物や家庭用製品に用いられる代表的な界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、リニア・アルキルベンゼンスルホン酸塩（ＬＡＳ）などが挙げられる。ただし、本実施形態の抗炎症剤は、これらの用途以外にも界面活性剤ダメージ抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

【0062】

本実施形態の美白剤は、有効成分であるガンカオニンＲが有するチロシナーゼ活性阻害作用および／またはメラニン産生抑制作用を通じて、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着を予防・改善することができる。ただし、本実施形態の美白剤は、これらの用途以外にもチロシナーゼ活性阻害作用またはメラニン産生抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

【0063】

本実施形態の抗老化剤は、有効成分であるガンカオニンＲが有するＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用およびＳＩＲＴ１産生促進作用からなる群より選択される１または２以上の作用を通じて、皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状を予防、治療または改善することができる。ただし、本実施形態の抗老化剤は、これらの用途以外にもＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用またはＳＩＲＴ１産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

【0064】

例えば、本実施形態の抗老化剤または上述したＭＭＰ−１活性阻害剤もしくはヒアルロン酸産生促進剤は、ガンカオニンＲが有するＭＭＰ−１活性阻害作用またはヒアルロン酸産生促進作用を通じて、創傷治療や皮膚疾患の治療、さらには再生医療分野への応用等の用途に使用することができるとともに、細胞外マトリックスの破壊が病態と関連していることが知られている疾患等の治療・予防の用途に使用することができる。このような疾患として、癌の浸潤・転移、関節リュウマチ、変形性膝関節症、歯周病、加齢黄斑変性症等が挙げられる。

【0065】

また、本実施形態の抗老化剤または上述したトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤は、ガンカオニンＲが有するトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を通じて、肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）を治療することができる。さらに、本実施形態の抗老化剤または上述したＳＩＲＴ１産生促進剤は、ガンカオニンＲが有するＳＩＲＴ１産生促進作用を通じて、糖尿病、心血管疾患、神経系疾患、炎症性疾患などの各種疾患を予防・治療または改善することができる。

【0066】

本実施形態の育毛剤は、有効成分であるガンカオニンＲが有する毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、毛乳頭細胞を活性化し、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成を促進することができるとともに、毛周期において成長期から退行期及び休止期へと移行するのを防ぎ、成長期を延長させることができる。これにより、脱毛症を予防・改善することができる。本実施形態の育毛剤が予防・改善可能な脱毛症としては、例えば、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等が挙げられる。また、本実施形態の育毛剤または上述した毛乳頭細胞増殖促進剤は、ガンカオニンＲが有する毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、毛乳頭細胞を用いた毛髪再生等の再生医療分野への応用に使用することもできる。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にも、毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

【0067】

また、本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、抗老化作用または育毛作用を有するため、例えば、皮膚外用剤に配合するのに好適である。この場合に、ガンカオニンＲをそのまま配合してもよいし、ガンカオニンＲから製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤を配合してもよい。

【0068】

ここで、皮膚外用剤としては、その区分に制限はなく、後述する皮膚化粧料のほか、経皮的に使用される医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものである。

【0069】

また、本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、抗老化作用または育毛作用を有するので、これらの作用機構に関する研究のための試薬としても好適に利用することができる。

【0070】

〔皮膚化粧料，頭髪化粧料〕
ガンカオニンＲは、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、抗老化作用または育毛作用を有しているため、皮膚化粧料または頭髪化粧料に配合するのに好適である。この場合、ガンカオニンＲをそのまま配合してもよいし、ガンカオニンＲから製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤または育毛剤を配合してもよい。

【0071】

ガンカオニンＲまたは上記抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤もしくは育毛剤を配合することにより、皮膚化粧料または頭髪化粧料に抗酸化作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、抗炎症作用、界面活性剤ダメージ抑制作用、美白作用、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、抗老化作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用、ＳＩＲＴ１産生促進作用、育毛作用または毛乳頭細胞増殖促進作用を付与することができる。

【0072】

ガンカオニンＲまたは上記抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤もしくは育毛剤を配合し得る皮膚化粧料又は頭髪化粧料の種類は特に限定されるものではなく、皮膚化粧料としては、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション等が挙げられ、また、頭髪化粧料としては、例えば、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス等が挙げられる。

【0073】

ガンカオニンＲを皮膚化粧料又は頭髪化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料又は頭髪化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。

【0074】

本実施形態の皮膚化粧料または頭髪化粧料は、ガンカオニンＲが有する抗酸化作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、抗炎症作用、界面活性剤ダメージ抑制作用、美白作用、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、抗老化作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用、ＳＩＲＴ１産生促進作用、育毛作用または毛乳頭細胞増殖促進作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料または頭髪化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された他の有効成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。

【0075】

本実施形態の皮膚化粧料は、ガンカオニンＲが有する抗酸化作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、抗炎症作用、界面活性剤ダメージ抑制作用、美白作用、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、抗老化作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用およびＳＩＲＴ１産生促進作用からなる群より選択される１または２以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患の予防又は改善；皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着の予防または改善；皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状の予防、治療または改善；創傷又は熱傷の治癒の促進；肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）の治療；などをすることができる。

【0076】

また、本実施形態の頭髪化粧料は、ガンカオニンＲが有する抗酸化作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、抗炎症作用、界面活性剤ダメージ抑制作用、抗老化作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用、ＳＩＲＴ１産生促進作用、育毛作用および毛乳頭細胞増殖促進作用からなる群より選択される１または２以上の作用通じて、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等の脱毛症の予防、治療または改善；肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）の治療；などをすることができる。

【0077】

なお、本実施形態の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、皮膚化粧料または頭髪化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば，マウス，ラット，ハムスター，イヌ，ネコ，ウシ，ブタ，サル等）に対して適用することもできる。

【実施例】

【0078】

以下、製造例及び試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。

【0079】

〔製造例１〕ガンカオニンＲの製造
乾燥した甘草葉部９２．７ｇに１０倍量の７０容量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱抽出し、ろ過してろ液を得た。さらに、抽出残渣に同量の７０容量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱抽出し、ろ過してろ液を得た。得られた抽出ろ液を合わせ、溶媒留去および凍結乾燥を行い、甘草葉部抽出物（２８．６ｇ，原料からの収率：３０．９％）を得た。得られた甘草葉部抽出物２８．６ｇに水１Ｌを加え懸濁し、多孔性樹脂（ダイヤイオンＨＰ−２０，三菱化学社製）５００ｇ上に付し、水５Ｌ、８０容量％メタノール５Ｌ、アセトン５Ｌの順で溶出させた。次いで、８０容量％メタノール５Ｌで溶出させた画分について溶媒留去および凍結乾燥を行い、甘草葉部抽出物８０％メタノール溶出画分（６．９ｇ，原料からの収率：７．４％）を得た。

【0080】

得られた８０％メタノール溶出画分６．９ｇを、クロロホルム：メタノール＝９５：５（容量比）の混合溶媒に溶解し、シリカゲル（シリカゲル６０，メルク社製）を充填したガラス製のカラム上部から注入して、シリカゲルに吸着させた。次いで、移動相としてクロロホルム：メタノール＝９５：５（容量比）を流し、その溶出液を８００ｍＬごとに分画し、３番目の画分を脱溶媒して、粗精製画分１（２．３２ｇ）を得た。得られた粗精製画分を４０容量％アセトニトリルに溶解し、ＯＤＳ（クロマトレックスＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ，富士シリシア化学社製）を充填したガラス製のカラム上部から注入して、ＯＤＳに吸着させた。次いで、移動相として４０容量％アセトニトリルを流し、その溶出液を１００ｍＬごとに分画し、２番目の画分を脱溶媒して、粗精製画分２（１．１６ｇ）を得た。次に１．１６ｇの粗精製画分２を下記の高速液体クロマトグラフィー条件にて分画し、精製物（９９４ｍｇ，原料からの収率：１．１％，試料１）を単離した。

【0081】

＜高速液体クロマトグラフィー条件＞
使用機器：ＬＣ−９０８（日本分析工業社製）
固定相：ＪＡＩＧＥＬ−ＧＳ３１０（日本分析工業社製） ２本連結
カラム径：２０ｍｍ
カラム長：５００ｍｍ
移動相：メタノール
移動相流速：５ｍＬ／ｍｉｎ

【0082】

上記のようにして精製して得られた精製物について、^１Ｈ−ＮＭＲ分析及び^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を行った。かかる分析結果を下記に示す。

【0083】

＜^１Ｈ−ＮＭＲ（acetone-d₆）δ＞
1.64(6H, br s, H₃-10, 15)，1.74(6H, br s, H₃-11, 16)，2.63(2H, m, H₂-β)，2.79(2H, m, H₂-α)，3.35(4H, br d, J=8.0Hz, H₂-7, 12)，5.12(1H, m, H-8, 13)，6.36(1H, s, H-4)，6.60(1H, dd, J=2.4, 8.3Hz, H-6')，6.77(2H, m, H-2', 5')

【0084】

＜^１３Ｃ−ＮＭＲ（acetone-d₆）δ_Ｃ＞
18.2(C-10, 15)，25.7(C-7, 12)，25.8(C-11, 16)，32.8(C-α)，37.3(C-β)，101.7(C-4)，116.1(C-2', 5')，118.7(C-2, 6)，120.3(C-6')，126.2(C-8, 13)，130.1(C-9, 14)，135.2(C-1')，141.3(C-1)，144.0(C-4')，145.9(C-3')，154.5(C-3, 5)

【0085】

以上の分析結果から、甘草葉部抽出物から得られた化合物が、下記式（Ｉ）で表されるガンカオニンＲ（Gancaonin R）であることが確認された。

【0086】

【化2】

【0087】

〔試験例１〕ラジカル消去作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてラジカル消去作用を試験した。

【0088】

１５０μｍｏｌ／Ｌ ＤＰＰＨ（diphenyl-p-picrylhydrazyl）エタノール溶液３ｍＬに被験試料溶液（試料１，試料濃度は下記表１を参照）３ｍＬを加え密栓した後、振り混ぜて３０分間放置した。放置後、波長５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えた後、直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、コントロールとして、試料溶液に代えて試料の溶解に使用した溶媒のみを加えて同様の操作を行い、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。得られた結果から、下記式によりラジカル消去率（％）を算出した。

【0089】

ラジカル消去率（％）＝｛Ｃ−（Ｓｔ−Ｓｂ）｝／Ｃ×１００
式中、Ｃは「コントロールの吸光度」を表し、Ｓｔは「試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｓｂは「ブランクの吸光度」を表す。
結果を表１に示す。

【0090】

【表1】

【0091】

表１に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたラジカル消去作用を有していると認められた。また、ラジカル消去作用の程度は、ガンカオニンＲの濃度によって調節できることが確認された。

【0092】

〔試験例２〕グルタチオン産生促進作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてグルタチオン産生促進作用を試験した。

【0093】

ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ培地で希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェル当たり２００μＬずつ播種し、一晩培養した。

【0094】

培養後、被験試料（試料１，試料濃度は下記表２を参照）が溶解した１％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を各ウェルに２００μＬ添加し、２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の１％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。培養終了後、各ウェルから培地を除去し、４００μＬのＰＢＳ緩衝液にて洗浄した後、１５０μＬのＭ−ＰＥＲ（PIERCE社製）を使用して細胞を溶解した。

【0095】

このうちの１００μＬを使用して総グルタチオンの定量を行った。すなわち、９６ウェルプレートに溶解した細胞抽出液１００μＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液５０μＬ、２ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＡＤＰＨ２５μＬ及びグルタチオンレダクターゼ２５μＬ（終濃度１７．５ｕｎｉｔ／ｍＬ）を加え３７℃で１０分間加温した後、１０ｍｍｏｌ／Ｌ 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオン（和光純薬社製）を使用して作成した検量線をもとに算出した。得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率（％）を算出した。

【0096】

グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
上記式において、Ａは「試料無添加の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）」を表し、Ｂは「被験試料を添加した細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量」を表す。
結果を表２に示す。

【0097】

【表2】

【0098】

表２に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたグルタチオン産生促進作用を有していると認められた。

【0099】

〔試験例３〕ケラチノサイトに対するＳＤＳダメージ抑制作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてケラチノサイトに対するＳＤＳダメージ抑制作用を試験した。

【0100】

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト新生児表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにＫＧＭ培地で希釈した後、コラーゲンコートした４８ウェルプレートに１ウェル当たり２００μＬずつ播種（２．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ウェル）し、一晩培養した。

【0101】

培養終了後、被験試料（試料１，試料濃度は下記表３を参照）を溶解したＫＧＭ培地を各ウェルに２００μＬ添加し、２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＧＭ培地を用いて同様に培養した。培養終了後、ＳＤＳ（終濃度２５μｇ／ｍＬ）が溶解したＫＧＭ培地を各ウェルに２００μＬ添加し、３時間培養した。培養終了後、ＭＴＴアッセイによりＳＤＳダメージ抑制作用を測定した。すなわち、培地を除去し、ＰＢＳ緩衝液にて洗浄した後、０．４ｍｇ／ｍＬのＭＴＴが溶解したＰＢＳ緩衝液を各ウェルに２００μＬずつ添加し、さらに２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。この抽出液について、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様に細胞播種した後、ＳＤＳを処理しない細胞およびＳＤＳを処理し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非処理群と処理群とした。測定結果から、下記式に基づいて、ＳＤＳダメージ抑制率（％）を算出した。

【0102】

ＳＤＳダメージ抑制率（％）＝｛（Ｎｔ−Ｃ）−（Ｎｔ−Ｓａ）｝／（Ｎｔ−Ｃ）×１００
式中、Ｎｔは「ＳＤＳを処理しない細胞での吸光度」を表し、Ｃは「ＳＤＳを処理し試料無添加の細胞での吸光度」を表し、Ｓａは「ＳＤＳを処理し被験試料を添加した細胞での吸光度」を表す。
結果を表３に示す。

【0103】

【表3】

【0104】

表３に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたＳＤＳダメージ抑制作用を有していると認められた。

【0105】

〔試験例４〕チロシナーゼ活性阻害作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてチロシナーゼ活性阻害作用を試験した。

【0106】

４８ウェルプレートに、Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６．８）０．２ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬチロシン溶液０．０６ｍＬ、被験試料（試料１，試料濃度は下記表４を参照）の２５％ＤＭＳＯ溶液０．１８ｍＬを加え、３７℃で１０分間静置した。これに、８００ｕｎｉｔｓ／ｍＬチロシナーゼ溶液０．０２ｍＬを加え、引き続き３７℃で１５分間反応させた。反応終了後、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法で空試験を行った。得られた測定結果から、下記式によりチロシナーゼ活性阻害率（％）を算出した。

【0107】

チロシナーゼ活性阻害率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「酵素添加・被験試料添加での吸光度」を、Ｓｂは「酵素無添加・被験試料添加での吸光度」を、Ｃｔは「酵素添加・被験試料無添加での吸光度」を、Ｃｂは「酵素無添加・被験試料無添加での吸光度」を示す。
結果を表４に示す。

【0108】

【表4】

【0109】

表４に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有していると認められた。

【0110】

〔試験例５〕Ｂ１６メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてＢ１６メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用を試験した。

【0111】

Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２４．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳおよび１ｍｍｏｌ／Ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭ培地で希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェルあたり３００μＬずつ播種し、６時間培養した。

【0112】

培養終了後、被験試料（試料１，試料濃度は下記表５を参照）を添加した１０％ＦＢＳおよび１ｍｍｏｌ／Ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭ培地を各ウェルに３００μＬ添加し、４日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の１０％ＦＢＳおよび１ｍｍｏｌ／Ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。培養終了後、培地を除去し、２ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ溶液２００μＬを添加して超音波破砕機により細胞を破壊し、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。測定した吸光度の値から、合成メラニン（SIGMA社製）を用いて作成した検量線をもとにメラニン量を算出した。

【0113】

また、細胞生存率を測定するために、上記と同様にして培養した後、培地を除去し４００μＬのＰＢＳ緩衝液で洗浄して、終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したニュートラルレッドを各ウェルに２００μＬ添加し、２．５時間培養した。培養後、ニュートラルレッド溶液を除去し、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９）を各ウェルに２００μＬ添加し、色素を抽出した。抽出後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。得られた結果から、下記式により細胞生存率により補正したメラニン産生抑制率（％）を算出した。

【0114】

メラニン産生抑制率(％)＝{１−（Ｂ／Ｄ）／（Ａ／Ｃ）}×１００
式中、Ａは「試料無添加のサンプルにおけるメラニン量」を表し、Ｂは「被験試料を添加したサンプルにおけるメラニン量」を表し、Ｃは「試料無添加のサンプルにおける５４０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｄは「被験試料添加のサンプルにおける５４０ｎｍにおける吸光度」を表す。
結果を表５に示す。

【0115】

【表5】

【0116】

表５に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたメラニン産生抑制作用を有していると認められた。

【0117】

〔試験例６〕ＭＭＰ−１活性阻害作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてＭＭＰ−１活性阻害作用を試験した。

【0118】

蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した被験試料（試料１，試料濃度は下記表６を参照）５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液（Sigma社製，COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum）５０μＬ、及びＰｚペプチド溶液（BACHEM Feinchemikalien AG社製，Pz-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-OH）４００μＬを混合し、３７℃にて３０分反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。

【0119】

その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１６００×ｇ，１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様にして空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式によりＭＭＰ−１活性阻害率（％）を算出した。

【0120】

ＭＭＰ−１活性阻害率(％)={１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃは「試料添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｄは、「試料添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度」を表す。
結果を表６に示す。

【0121】

【表6】

【0122】

表６に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたＭＭＰ−１活性阻害作用を有していると認められた。また、ＭＭＰ−１活性阻害作用の程度は、ガンカオニンＲの濃度によって調節できることが確認された。

【0123】

〔試験例７〕表皮ヒアルロン酸産生促進作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにして表皮ヒアルロン酸産生促進作用を試験した。

【0124】

ヒト正常新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにEpilife-KG2培地で希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、２４時間培養した。

【0125】

培養終了後、被験試料（試料１，試料濃度は下記表７を参照）を添加したEpilife-KG2培地を各ウェルに１００μＬずつ添加し、７日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のEpilife-KG2培地を用いて同様に培養した。培養後、各ウェルの培地中のヒアルロン酸量を、ヒアルロン酸結合タンパク（ＨＡＢＰ）を用いたサンドイッチ法により測定した。測定結果から、下記式によりヒアルロン酸産生促進率（％）を算出した。

【0126】

表皮ヒアルロン酸産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式において、Ａは「被験試料添加時のヒアルロン酸量」を表し、Ｂは「試料無添加時のヒアルロン酸量」を表す。
結果を表７に示す。

【0127】

【表7】

【0128】

表７に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は優れた表皮ヒアルロン酸産生促進作用を有していると認められた。

【0129】

〔試験例８〕トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。

【0130】

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト新生児表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、２日間培養した。

【0131】

培養終了後、被験試料（試料１，試料濃度は下記表８を参照）を添加したＫＧＭ培地を各ウェルに１００μＬずつ添加し、２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＧＭ培地を用いて同様に培養した。培養終了後、培地を除去し、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量を、モノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．社製）を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりトランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）を算出した。

【0132】

トランスグルタミナーゼ−１産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
上記式において、Ａは「被験試料添加での吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加での吸光度」を表す。
試験結果を表８に示す。

【0133】

【表8】

【0134】

表８に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有していると認められた。

【0135】

〔試験例９〕メイラード反応阻害作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてメイラード反応阻害作用を試験した。

【0136】

被験試料溶液（試料１，試料濃度は下記表９を参照）５０μＬ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｄ（−）−リボース２００μＬ、２５ｍｇ／ｍＬリゾチーム２００μＬ、１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸水素ナトリウム水溶液（ｐＨ７．４）５００μＬ、滅菌蒸留水５０μＬを混合し（全量：１０００μＬ）、３７℃で静置した。なお、コントロールとして、被験試料溶液に替えて蒸留水としたものを同様に試験し、ブランクとして、被験試料溶液に替えて蒸留水としたものを４℃で同じく静置した。

【0137】

７日後、ボルテックスで攪拌し、反応液４０μＬにＳＤＳ−ＰＡＧＥ用サンプルバッファー４０μＬを混合した後、沸騰浴中で３分間加熱し、分析サンプルとした。アクリルアミド濃度を分離ゲル１５％、濃縮ゲル４％に調製したポリアクリルアミドゲルに、分析サンプル１２μＬをアプライし、電気泳動を行った。泳動したゲルをクマシーブリリアントブルー染色後脱色し、画像撮影装置ChemiDoc XRS Plus（Bio-Rad Laboratories社製）を用いて検出し、バンドをImage Lab Software version 2.0（Bio-Rad Laboratories社製）にて定量的に測定した。得られた結果から、各バンドのNet intensity（バンド強度）を用いて、リゾチームの二量体、三量体の形成阻害率を計算し、下記式にてメイラード反応阻害率（％）を算出した。

【0138】

メイラード反応阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）｝×１００
式中、Ａは「被験試料添加での二量体と三量体のNet intensityの和」を表し、Ｂは「試料無添加（コントロール）での二量体と三量体のNet intensityの和」を表し、Ｃは「ブランクでの二量体と三量体のNet intensityの和」を表す。
結果を表９に示す。

【0139】

【表9】

【0140】

表９に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたメイラード反応阻害作用を有していると認められた。

【0141】

〔試験例１０〕ＳＩＲＴ１産生促進作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにしてＳＩＲＴ１産生促進作用試験を試験した。

【0142】

ヒト正常線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地で希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェル当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。

【0143】

培養終了後、培地を除去し、被験試料（試料１，試料濃度は表１０を参照）が溶解した０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を各ウェルに１００μＬ添加し、４８時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。培養終了後、４％ホルマリン液で細胞を固定し、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘにて細胞膜を可溶化させた後、細胞内に発現したＳＩＲＴ１の量を、マウスモノクローナル抗ヒトＳＩＲＴ１抗体（SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY社製）を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。また、その後に０．０５％メチレンブルー溶液で核を染色することにより細胞数を測定し、ＳＩＲＴ１量／細胞数の比を求め、単位細胞当りのＳＩＲＴ１量を算出した。得られた結果より、下記式にてＳＩＲＴ１産生促進率（％）を算出した。

【0144】

ＳＩＲＴ１産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「被験試料添加でのＳＩＲＴ１量／細胞数」を表し、Ｂは「試料無添加でのＳＩＲＴ１量／細胞数」を表す。
結果を表１０に示す。

【0145】

【表10】

【0146】

表１０に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れたＳＩＲＴ１産生促進作用を有していると認められた。

【0147】

〔試験例１１〕毛乳頭細胞増殖促進作用試験
製造例１により得られたガンカオニンＲ（試料１）について、以下のようにして毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。

【0148】

正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ，男性頭頂部由来）を、１％ＦＣＳ及び増殖添加剤を含有する毛乳頭細胞増殖培地（ＰＣＧＭ，東洋紡績社製）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を用いて１．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり２００μＬずつ播種し、３日間培養した。

【0149】

その後、培地を除去し、無血清ＤＭＥＭ培地に溶解させた被験試料（試料１，試料濃度は表１１を参照）含有培地２００μＬを各ウェルに添加し、さらに４日間培養した。培養終了後、ＭＴＴアッセイにより毛乳頭細胞増殖促進作用を測定した。すなわち、培地を除去し、０．４ｍｇ／ｍＬのＭＴＴを含む無血清ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２時間培養した後、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。この抽出液について、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。なお、コントロールとして、被験試料含有培地に代えて無血清ＤＭＥＭ培地で培養した場合についても、同様の測定を行った。測定結果から、下記式に基づいて、毛乳頭細胞増殖促進率（％）を算出した。

【0150】

毛乳頭細胞増殖促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「被験試料添加でのブルーホルマザン生成量」を表し、Ｂは「試料無添加でのブルーホルマザン生成量」を表す。
結果を表１１に示す。

【0151】

【表11】

【0152】

表１１に示すように、ガンカオニンＲ（試料１）は、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有していると認められた。

【0153】

〔配合例１〕
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
ガンカオニンＲ（製造例１） ０．０１ｇ
ホホバオイル ４．００ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．００ｇ
アルブチン ３．００ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.） ２．５０ｇ
オリーブオイル ２．００ｇ
スクワラン ２．００ｇ
セタノール ２．００ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．００ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ２．００ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
グリチルリチン酸ステアリル ０．１０ｇ
黄杞エキス ０．１０ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１０ｇ
イチョウ葉エキス ０．１０ｇ
コンキオリン ０．１０ｇ
オウバクエキス ０．１０ｇ
カミツレエキス ０．１０ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【0154】

〔配合例２〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
ガンカオニンＲ（製造例１） ０．０５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
オウゴンエキス ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【0155】

〔配合例３〕
下記組成の美容液を常法により製造した。
ガンカオニンＲ（製造例１） ０．０１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
ニンジンエキス ０．１ｇ
キサンタンガム ０．３ｇ
ヒドロキシエチルセルロース ０．１ｇ
カルボキシビニルポリマー ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ４．０ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
グリセリン ２．０ｇ
水酸化カリウム ０．２５ｇ
香料 ０．０１ｇ
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
エタノール ２．０ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【0156】

〔配合例４〕
下記組成のヘアトニックを常法により製造した。
ガンカオニンＲ（製造例１） ０．４ｇ
酢酸トコフェロール 適量
セファラチン ０．００２ｇ
イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
グリセリン １５．０ｇ
エタノール １５．０ｇ
香料 適量
キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
防腐剤（ヒノキチオール） 適量
可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【0157】

〔配合例５〕
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
ガンカオニンＲ（製造例１） ０．５ｇ
マジョラム抽出物 １．０ｇ
ウメ果実部抽出物 ０．２ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
プロピレングリコール ２．０ｇ
香料 適量
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【産業上の利用可能性】

【0158】

本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤および育毛剤は、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患の予防又は改善；皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着の予防または改善；皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状の予防、治療または改善；創傷又は熱傷の治癒の促進；肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）の治療；男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等の脱毛症の予防、治療または改善；などに大きく貢献できる。