特開 2018-177654 脳の機能改善剤および脳の機能改善用飲食品

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2018-177654(P2018-177654A)

(43)【公開日】2018年11月15日

(54)【発明の名称】脳の機能改善剤および脳の機能改善用飲食品

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/906 20060101AFI20181019BHJP

   A61Q 1/00 20060101ALI20181019BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20181019BHJP

   A61K 8/9794 20170101ALI20181019BHJP

   A23L 33/105 20160101ALI20181019BHJP

   A23L 2/52 20060101ALI20181019BHJP

   A23L 2/38 20060101ALI20181019BHJP

   A23F 5/24 20060101ALI20181019BHJP

【ＦＩ】

   A61K36/906

   A61Q1/00

   A61P25/28

   A61K8/9794

   A23L33/105

   A23L2/00 F

   A23L2/38 C

   A23F5/24

【審査請求】有

【請求項の数】2

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】12

(21)【出願番号】特願2017-74671(P2017-74671)

(22)【出願日】2017年4月4日

(71)【出願人】

【識別番号】591082421

【氏名又は名称】丸善製薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100108833

【弁理士】

【氏名又は名称】早川 裕司

(74)【代理人】

【識別番号】100162156

【弁理士】

【氏名又は名称】村雨 圭介

(74)【代理人】

【識別番号】100201606

【弁理士】

【氏名又は名称】田岡 洋

(72)【発明者】

【氏名】阿波 里佳

(72)【発明者】

【氏名】岩橋 弘恭

(72)【発明者】

【氏名】桑原 浩誠

【テーマコード（参考）】

4B018

4B027

4B117

4C083

4C088

【Ｆターム（参考）】

4B018LB08

4B018LB10

4B018MD07

4B018MD53

4B018ME14

4B018MF01

4B027FB24

4B027FC06

4B027FK08

4B027FQ19

4B117LC04

4B117LC05

4B117LG00

4B117LG07

4B117LK21

4B117LP01

4C083AA111

4C083CC01

4C083CC02

4C083FF01

4C088AB81

4C088AC13

4C088BA08

4C088CA08

4C088MA16

4C088MA52

4C088NA14

4C088ZA15

(57)【要約】

【課題】安全性の高い天然物の中から脳の機能を改善する作用を有するものを見出し、それを有効成分とする脳の機能改善剤、ならびに当該成分を配合した脳の機能改善用飲食品を提供する。
【解決手段】本発明に係る脳の機能改善剤の有効成分として、ブラックジンジャーの抽出物を含有させる。また、本発明に係る脳の機能改善用飲食品に、ブラックジンジャーの抽出物を配合する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ブラックジンジャーの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする脳の機能改善剤。

【請求項2】

ブラックジンジャーの抽出物を配合したことを特徴とする脳の機能改善用飲食品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、脳の機能改善剤および脳の機能改善用飲食品に関するものである。

【背景技術】

【0002】

高齢化社会となりつつある近年においては、心身ともに健康でありたいという願望がますます高まっている。ヒトは、高齢になるにつれ記憶力や学習能力が徐々に衰えていく。また、アルツハイマー病やパーキンソン病等においては、神経の変性による認知機能の障害が大きな問題となっている。一方、仕事環境、家庭的事情、人間関係などの様々なストレスによるうつ病等の気分障害をはじめ、高齢でなくとも脳の機能に問題を抱えている患者数は年々増加している。

【0003】

従来から研究されている脳の機能の改善方法としては、脳における神経細胞への栄養や酸素の供給の改善（例えば、脳内グルコースの上昇、血流の改善等）；シナプス間隙で行われる神経伝達の改善（神経伝達物質の前駆体の供給、神経伝達物質の放出の増加、受容体の活性化、放出された神経伝達物質の変換阻害等）；などが挙げられる。

【0004】

また、アストロサイトやマイクログリア等の活性化が、様々な脳の機能の障害に関連することが明らかになりつつある。例えば、老化した脳においては、マイクログリアが活性化した状態となって、神経障害因子であるＩＬ−１β（interleukin-1β）や一酸化窒素（ＮＯ）等の産生亢進が起こっており、神経障害の原因となる。ここで、神経障害の亢進または慢性化は、認知障害、抑うつ等のほか、アルツハイマー病やパーキンソン病等の神経変性疾患と関連があることが分かっている（非特許文献１）。そのため、神経障害を抑制することができれば、老化等による神経障害に起因して低下した認知機能（記憶能力や学習能力等）を改善させることができ、また認知機能障害、気分障害、さらにはアルツハイマー病やパーキンソン病等の神経変性疾患の予防、治療または改善につながるものと考えられている（非特許文献２）。一方で、脳において、ＴＧＦ−β（tumor necrosis factor-β）が、神経障害を抑制する神経保護因子として作用することも知られている（非特許文献３）。

【0005】

一方、食品成分が脳の機能に影響を及ぼすことが近年の研究で明らかになりつつあり、脳の機能改善、抗うつ、抗認知症などに関する効果を有する食品成分が注目されている。例えば、イチョウ葉エキスについては、脳の細胞の活性化作用等が知られている（特許文献１）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】特開２００７−２７７１８３号公報

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】臨床神経学，2014年，54巻，12号，pp.1119-1121

【非特許文献2】精神神経学雑誌，2012年，114巻，2号，pp.124-133

【非特許文献3】Int. J. Mol. Sci.，2012年，vol.13，issue 7，pp.8219-8258.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、安全性の高い天然物の中から脳の機能を改善する作用を有するものを見出し、それを有効成分とする脳の機能改善剤、ならびに当該成分を配合した脳の機能改善用飲食品を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0009】

上記課題を解決するために、本発明に係る脳の機能改善剤は、ブラックジンジャー抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。また、本発明に係る脳の機能改善用飲食品は、ブラックジンジャー抽出物を配合したことを特徴とする。

【発明の効果】

【0010】

本発明によれば、天然物に由来するブラックジンジャー抽出物を有効成分として含有させることにより、作用効果に優れ、かつ安全性の高い脳の機能改善剤を提供することができる。さらに、ブラックジンジャー抽出物を配合することにより、上記作用に優れた脳の機能改善用飲食品を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0011】

以下、本発明の実施の形態について説明する。
本実施形態に係る脳の機能改善剤は、ブラックジンジャー抽出物を有効成分として含有するものである。また、本実施形態に係る脳の機能改善用飲食品は、ブラックジンジャー抽出物が配合されるものである。

【0012】

前記ブラックジンジャー（黒ショウガ）は、ショウガ科バンウコン属の植物であり、学名はＫａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａである。
前記ブラックジンジャーは、東南アジアのタイ等に分布しており、この地域から容易に入手可能である。

【0013】

前記ブラックジンジャーの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。なお、前記ブラックジンジャーの抽出物には、ブラックジンジャーの抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。

【0014】

前記ブラックジンジャーの抽出原料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブラックジンジャーの根茎部などを用いることができる。

【0015】

前記抽出原料であるブラックジンジャーの根茎部は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。前記ブラックジンジャーは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。なお、脱脂等の前処理を行うことにより、ブラックジンジャーの極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

【0016】

前記抽出に用いる溶媒としては、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒を室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

【0017】

前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部添加することが好ましい。

【0018】

本発明において、抽出原料であるブラックジンジャーから、脳の機能改善作用を有する物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。

【0019】

具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としてのブラックジンジャーの根茎部を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、濾過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の脳の機能改善作用剤として用いることができる。

【0020】

得られるブラックジンジャーの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。

【0021】

〔脳の機能改善剤〕
以上のようにして得られるブラックジンジャーの抽出物は、優れた脳の機能改善作用を有しているため、脳の機能改善剤の有効成分として用いることができる。本実施形態に係る脳の機能改善剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品等の幅広い用途に使用することができる。

【0022】

ブラックジンジャーの抽出物が有する脳の機能改善作用は、例えば、アストロサイトにおける神経障害因子の産生抑制作用および／またはアストロサイトにおける神経保護因子の産生促進作用に基づいて発揮される。ここで、前記神経障害因子としては、ＩＬ−１β（interleukin-1β）、ＴＮＦ−α（tumor necrosis factor-α）、ＩＬ−６（interleukin-6）等の神経障害性サイトカインの他、一酸化窒素（ＮＯ）等の低分子化合物も含まれる。また、ＮＯを産生するｉＮＯＳ（inducible nitric oxide synthase）も、神経障害因子に含まれる。本実施形態において、前記アストロサイト神経障害因子産生抑制作用は、アストロサイト一酸化窒素産生抑制作用、アストロサイトｉＮＯＳ発現上昇抑制作用、アストロサイトＩＬ−１β発現上昇抑制作用、アストロサイトＴＮＦ−α発現上昇抑制作用、およびアストロサイトＩＬ−６発現上昇抑制作用からなる群より選択される１種または２種以上の作用であることが好ましい。

【0023】

一方、前記神経保護因子としては、ＴＧＦ−β（tumor necrosis factor-β）、グリア細胞由来神経栄養因子（glial cell line-derived neurotrophic factor：ＧＤＮＦ）等が挙げられる。本実施形態において、前記アストロサイト神経保護因子産生促進作用は、アストロサイトＴＧＦ−β産生促進作用であることが好ましい。

【0024】

ただし、ブラックジンジャーの抽出物が有する脳の機能改善作用は、上記作用に基づいて発揮される脳の機能改善作用に限定されるものではない。

【0025】

また、ブラックジンジャーの抽出物は、そのアストロサイト神経障害因子産生抑制作用および／またはアストロサイト神経保護因子産生促進作用を利用して、アストロサイト神経障害因子産生抑制作用剤またはアストロサイト神経保護因子産生促進剤の有効成分として使用してもよく、さらに具体的には、アストロサイト一酸化窒素産生抑制剤、アストロサイトｉＮＯＳ発現上昇抑制剤、アストロサイトＩＬ−１β発現上昇抑制剤、アストロサイトＴＮＦ−α発現上昇抑制剤、アストロサイトＩＬ−６発現上昇抑制剤、またはアストロサイトＴＧＦ−β産生促進剤の有効成分として使用してもよい。

【0026】

本実施形態に係る脳の機能改善剤は、ブラックジンジャーの抽出物のみからなるものでもよいし、ブラックジンジャーの抽出物を含有する組成物を製剤化したものでもよい。

【0027】

本実施形態に係る脳の機能改善剤は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。脳の機能改善剤は、他の組成物（例えば、脳の機能改善用飲食品等）に配合して使用することができるほか、錠剤、カプセル剤等として使用することができる。

【0028】

本実施形態に係る脳の機能改善剤を製剤化した場合、ブラックジンジャーの抽出物を含有する組成物の含有量は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定することができる。

【0029】

なお、本実施形態に係る脳の機能改善剤は、必要に応じて、脳の機能改善作用を有する他の天然抽出物等を、ブラックジンジャーの抽出物を含有する組成物とともに配合して有効成分として用いることができる。

【0030】

本実施形態に係る脳の機能改善剤の患者に対する投与方法としては、経口投与、静脈内投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防または治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本実施形態に係る脳の機能改善剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。

【0031】

本実施形態に係る脳の機能改善剤は、有効成分であるブラックジンジャーの抽出物が有するアストロサイト神経障害因子産生抑制作用および／またはアストロサイト神経保護因子産生促進作用を通じて、神経障害を抑制するとともに神経細胞を保護し、記憶能力や学習能力の向上；健忘症や老年性認知機能障害の予防、治療または改善；アルツハイマー病やパーキンソン病等の神経変性疾患の予防、治療または改善；うつ病等の気分障害の予防、治療または改善；に用いることができる。ただし、本実施形態に係る脳の機能改善剤は、これらの用途以外にもアストロサイト神経障害因子産生抑制作用および／またはアストロサイト神経保護因子産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

【0032】

また、本実施形態に係る脳の機能改善剤は、優れた脳の機能改善作用を有するので、これらの作用機構に関する研究のための試薬としても好適に利用することができる。

【0033】

〔脳の機能改善用飲食品〕
ブラックジンジャーの抽出物は、優れた脳の機能改善作用を有しているため、脳の機能改善用の飲食品に配合するのに好適である。この場合、ブラックジンジャーの抽出物をそのまま配合してもよいし、ブラックジンジャーの抽出物から製剤化した脳の機能改善剤を配合してもよい。

【0034】

ここで、飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口または消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品等の区分に制限されるものではない。したがって、本実施形態における「飲食品」は、経口的に摂取される一般食品、健康食品（機能性飲食品）、保健機能食品（特定保健用食品，栄養機能食品）、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものである。

【0035】

ブラックジンジャーの抽出物または上記脳の機能改善剤を飲食品に配合することにより、脳の機能改善作用、アストロサイト神経障害因子産生抑制作用またはアストロサイト神経保護因子産生促進作用を飲食品に付与することができる。

【0036】

ブラックジンジャーの抽出物、またはブラックジンジャーの抽出物から製剤化した脳の機能改善剤を飲食品に配合して脳の機能改善用飲食品とする場合、それらにおける有効成分の配合量は、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができるが、添加対象となる飲食品の一般的な摂取量を考慮して、成人１日あたりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが好ましい。なお、添加対象飲食品が顆粒状、錠剤状またはカプセル状の飲食品の場合、ブラックジンジャーの抽出物、またはブラックジンジャーの抽出物から製剤化した脳の機能改善剤の添加量は、添加対象飲食品に対して通常０．１〜１００質量％であり、好ましくは５〜１００質量％である。

【0037】

本実施形態に係る脳の機能改善用飲食品は、ブラックジンジャーの抽出物をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合したものであってもよいし、ブラックジンジャーの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。

【0038】

本実施形態に係る脳の機能改善用飲食品を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類などの任意の助剤を添加して任意の形状の飲食品にすることができる。

【0039】

ブラックジンジャーの抽出物を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液および調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂および油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などが挙げられ、これらの飲食品にブラックジンジャーの抽出物を配合するときに、通常用いられる補助的な原料や添加物を併用することができる。

【0040】

なお、本実施形態に係る脳の機能改善剤および脳の機能改善用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば，マウス，ラット，ハムスター，イヌ，ネコ，ウシ，ブタ，サル等）に対して適用することもできる。

【実施例】

【0041】

以下、製造例及び試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。

【0042】

〔製造例１〕
−ブラックジンジャーの抽出物の製造−
抽出原料としてブラックジンジャーの根茎部の粉砕物１００ｇを、６０質量％エタノール１，０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、濾過した。濾液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を２３．９ｇ得た（試料１）。

【0043】

〔試験例１〕アストロサイト一酸化窒素産生抑制作用試験
製造例１で得られたブラックジンジャー抽出物（試料１）について、アストロサイトにおける一酸化窒素産生抑制作用を以下のように試験した。

【0044】

正常マウス由来アストロサイト（ＡＳＴＣ５７）を、アストロサイト用培養メディウム（ＡＳＴＭ）を用いて前培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を５×１０⁴ cells/ｍＬの細胞密度になるようにＡＳＴＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１００μＬずつ播種し、３７℃・５％ＣＯ₂ 下でコンフルエントになるまで培養した。

【0045】

培養終了後、培地を除去し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含むフェノールレッド不含有ＡＳＴＭに溶解した被験試料（試料１，試料濃度は下記表１を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、続けてフェノールレッド不含有ＡＳＴＭに溶解した終濃度０．５μg/ｍＬのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（E.coli 0111;B4，SIGMA社製）および５ng/ｍＬのインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）（from mouse，R&D systems社製）を１００μＬ加え、２４時間培養した。なお、対照として、試料無添加の０．５％ＤＭＳＯを含むフェノールレッド不含有ＡＳＴＭ １００μＬおよびフェノールレッド不含有・ＬＰＳ・ＩＦＮ−γ含有ＡＳＴＭ １００μＬを加え、同様に培養した。

【0046】

一酸化窒素（ＮＯ）産生量は、亜硝酸イオン（ＮＯ₂ ⁻）量を指標に測定した。培養終了後、各ウェルの培養液１００μＬに、同量のグリス試薬（１質量％スルファニルアミド，０．１質量％ N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochlorideを含む５質量％リン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応させた。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。ＮＯ産生抑制率（％）は、試料無添加時（コントロール）のＮＯ産生量をもとに、下記式により算出した。

【0047】

ＮＯ産生抑制率（％）＝｛（Ｂ−Ａ）／Ｂ｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加時のＮＯ量
Ｂ：被験試料無添加時のＮＯ量
結果を表１に示す。

【0048】

【表1】

【0049】

表１に示すように、ブラックジンジャー抽出物（試料１）は、アストロサイトに対し、優れた一酸化窒素産生抑制作用を示すことが確認された。また、ブラックジンジャー抽出物の一酸化窒素産生抑制作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。

【0050】

〔試験例２〕アストロサイトにおける神経障害遺伝子発現上昇抑制作用試験
製造例１で得られたブラックジンジャー抽出物（試料１）について、アストロサイトにおける神経障害遺伝子発現上昇抑制作用を以下のように試験した。

【0051】

正常マウス由来アストロサイト（ＡＳＴＣ５７）を、アストロサイト用培養メディウム（ＡＳＴＭ）を用いて前培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を５×１０⁴ cells/ｍＬの細胞密度になるようにＡＳＴＭで希釈した後、３５ｍｍシャーレに２ｍＬずつ播種し、３７℃・５％ＣＯ₂ 下でサブコンフルエントになるまで培養した。

【0052】

培養終了後、培地を除去し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含むＡＳＴＭに溶解した被験試料（試料１，試料濃度は下記表２を参照）を各シャーレに１ｍＬ添加し、続けてＡＳＴＭに溶解した終濃度０．５μg/ｍＬのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（E.coli 0111;B4，SIGMA社製）および５ng/ｍＬのインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）（from mouse，R&D systems社製）を１ｍＬ加え、２４時間培養した。なお、陰性対照として試料無添加のＡＳＴＭ １ｍＬおよびＬＰＳ・ＩＦＮ−γ無添加のＡＳＴＭ １ｍＬを加え、また比較対照として試料無添加のＡＳＴＭ １ｍＬおよびＬＰＳ・ＩＦＮ−γ含有ＡＳＴＭ １ｍＬを加え、同様に培養した。培養後、培養液を除去し、RNAqueous phenol free total RNA isolation kit（invitrogen社製，Cat. No. AM1912）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１００ng/μＬになるように総ＲＮＡを調製した。

【0053】

この総ＲＮＡを鋳型とし、ｉＮＯＳ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、および内部標準であるβ-actinについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。ここで、ｉＮＯＳ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６は、いずれも神経障害遺伝子であり、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γの刺激により発現が上昇することが知られている。ｍＲＮＡの検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製，code No. RR063A）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。各遺伝子ｍＲＮＡの発現量はβ-actinの発現量で補正し算出した。得られた値から、下記式により各遺伝子のｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。

【0054】

ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：ＬＰＳ・ＩＦＮ−γ未刺激・試料無添加（陰性対照）での補正値
Ｂ：ＬＰＳ・ＩＦＮ−γ刺激・試料無添加（比較対照）での補正値
Ｃ：ＬＰＳ・ＩＦＮ−γ刺激・被験試料添加での補正値
結果を表２に示す。

【0055】

【表2】

【0056】

表２に示すように、ブラックジンジャー抽出物（試料１）は、アストロサイトにおいて、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γの刺激によるｉＮＯＳ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６の各遺伝子ｍＲＮＡの発現上昇を抑制した。そのため、ブラックジンジャー抽出物は、神経障害の予防、治療または改善に有効であると考えられる。

【0057】

〔試験例３〕アストロサイトにおけるＴＧＦ−β ｍＲＮＡ発現促進作用試験
製造例１で得られたブラックジンジャー抽出物（試料１）について、アストロサイトにおけるＴＧＦ−β ｍＲＮＡ発現促進作用を以下のように試験した。

【0058】

正常マウス由来アストロサイト（ＡＳＴＣ５７）を、アストロサイト用培養メディウム（ＡＳＴＭ）を用いて前培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を５×１０⁴ cells/ｍＬの細胞密度になるようにＡＳＴＭで希釈した後、３５ｍｍシャーレに２ｍＬずつ播種し、３７℃・５％ＣＯ₂ 下でサブコンフルエントになるまで培養した。

【0059】

培養終了後、培地を除去し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含むＡＳＴＭに溶解した被験試料（試料１，試料濃度は下記表３を参照）を各シャーレに１ｍＬ添加し、続けてＡＳＴＭに溶解した終濃度０．５μg/ｍＬのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（E.coli 0111;B4，SIGMA社製）および５ng/ｍＬのインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）（from mouse，R&D systems社製）を１ｍＬ加え、２４時間培養した。なお、対照として、試料無添加のＡＳＴＭ １ｍＬおよびＬＰＳ・ＩＦＮ−γ含有ＡＳＴＭ １ｍＬを加え、同様に培養した。培養後、培養液を除去し、RNAqueous phenol free total RNA isolation kit（invitrogen社製，Cat. No. AM1912）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１００ng/μＬになるように総ＲＮＡを調製した。

【0060】

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＴＧＦ−β、および内部標準であるβ-actinについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。ｍＲＮＡの検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製，code No. RR063A）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。ＴＧＦ−β ｍＲＮＡの発現量はβ-actinの発現量で補正し算出した。得られた値から、下記式によりＴＧＦ−β ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

【0061】

ＴＧＦ−β ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表３に示す。

【0062】

【表3】

【0063】

表３に示すように、ブラックジンジャー抽出物（試料１）は、アストロサイトにおいて、優れたＴＧＦ−β ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。そのため、ブラックジンジャー抽出物は、神経保護にも寄与するものと考えられる。

【0064】

〔配合例１〕
常法により、以下の組成を有する脳の機能改善用錠剤を製造した。
ブラックジンジャー抽出物 ５．０ｍｇ
ドロマイト（カルシウム20％、マグネシウム10％含有） ８３．４ｍｇ
カゼインホスホペプチド １６．７ｍｇ
ビタミンＣ ３３．４ｍｇ
マルチトール １３６．８ｍｇ
コラーゲン １２．７ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル １２．０ｍｇ

【0065】

〔配合例２〕
常法により、以下の組成を有する脳の機能改善用経口液状製剤を製造した。
＜１アンプル（１本１００ｍＬ）中の組成＞
ブラックジンジャー抽出物 ０．３質量％
ソルビット １２．０質量％
安息香酸ナトリウム ０．１質量％
香料 １．０質量％
硫酸カルシウム ０．５質量％
精製水 残部（１００質量％）

【0066】

〔配合例３〕
常法により、下記の組成を有するコーヒー飲料を製造した。
ブラックジンジャー抽出物 ０．１質量部
コーヒー抽出液（Ｌ（明度）＝２０、Ｂｒｉｘ＝３） ４０質量部
マルチトール ２質量部
香料 適量
水 残部（１００質量部）

【産業上の利用可能性】

【0067】

本発明に係る脳の機能改善剤および脳の機能改善用飲食品は、記憶能力や学習能力の向上；健忘症や老年性認知機能障害の予防、治療または改善；アルツハイマー病やパーキンソン病等の神経変性疾患の予防、治療または改善；うつ病等の気分障害の予防、治療または改善；などに大きく貢献できる。

【手続補正書】

【提出日】2018年6月28日

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ブラックジンジャーの抽出物を有効成分とし、
アストロサイト一酸化窒素産生抑制用途、アストロサイトｉＮＯＳ発現上昇抑制用途、アストロサイトＩＬ−１β発現上昇抑制用途、アストロサイトＴＮＦ−α発現上昇抑制用途、アストロサイトＩＬ−６発現上昇抑制用途、およびアストロサイトＴＧＦ−β産生促進用途からなる群より選択される１種または２種以上の用途に用いられる
ことを特徴とする脳の機能改善剤（バルプロ酸と併用するものを除く）。

【請求項2】

ブラックジンジャーの抽出物が配合され、
アストロサイト一酸化窒素産生抑制用途、アストロサイトｉＮＯＳ発現上昇抑制用途、アストロサイトＩＬ−１β発現上昇抑制用途、アストロサイトＴＮＦ−α発現上昇抑制用途、アストロサイトＩＬ−６発現上昇抑制用途、およびアストロサイトＴＧＦ−β産生促進用途からなる群より選択される１種または２種以上の用途に用いられる
ことを特徴とする脳の機能改善用飲食品（バルプロ酸が配合されたものを除く）。