特許 5863721 肥満解消剤、脂肪分解促進剤、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害剤、及びラット副睾丸脂肪細胞の脂肪分解促進剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5863721

(24)【登録日】2016年1月8日

(45)【発行日】2016年2月17日

(54)【発明の名称】肥満解消剤、脂肪分解促進剤、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害剤、及びラット副睾丸脂肪細胞の脂肪分解促進剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/18 20060101AFI20160204BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20160204BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20160204BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20160204BHJP

【ＦＩ】

   A61K36/18

   A23L1/30 B

   A61P3/04

   A61P43/00 107

   A61P43/00 111

【請求項の数】8

【全頁数】32

(21)【出願番号】特願2013-153397(P2013-153397)

(22)【出願日】2013年7月24日

(62)【分割の表示】特願2012-127275(P2012-127275)の分割

【原出願日】2007年8月29日

(65)【公開番号】特開2013-224326(P2013-224326A)

(43)【公開日】2013年10月31日

【審査請求日】2013年7月24日

【審判番号】不服2014-9226(P2014-9226/J1)

【審判請求日】2014年5月19日

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】591082421

【氏名又は名称】丸善製薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100107515

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100107733

【弁理士】

【氏名又は名称】流 良広

(72)【発明者】

【氏名】桑原 浩誠

(72)【発明者】

【氏名】周 艶陽

(72)【発明者】

【氏名】土肥 圭子

【合議体】

【審判長】 松浦 新司

【審判官】 齊藤 光子

【審判官】 小川 慶子

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００７−２８４３７３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平１１−１８０８６９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００４／０７８７４１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００６−３３５７５８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００６／００１２７８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００８−５０８２８４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平１１−３４６７５３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 武蔵野大学 薬学部・薬学研究所 教育・研究年報，武蔵野大学 薬学部・薬学研究所，２００７年 ７月３１日，第３巻，表紙、目次、第１４５頁〜第１５２頁

【文献】 ＲＣ Ｈｉｃｋｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，’’Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｂｏｄｙ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｅＮＯＳ’’，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．，２００６年発行，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．２，Ｐａｇｅ．３０８−３１２

【文献】 Ｎｉｃｏｌａｓ Ｇａｕｄｉｏｔ ｅｔ ａｌ，’’Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｉｓ ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ−ｒｅｌａｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔ’’，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏ，２０００年発行，Ｖｏｌ．２７９，Ｃ１６０３−Ｃ１６１０

【文献】 Ｃｈａｖｉ Ｙｅｎｊａｉ ｅｔ ａｌ．，’’Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ’’，Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２００４年発行，Ｖｏｌ．７５，ｐａｇｅ．８９−９２

【文献】 ＤＥＮＰＯＮＧ ＰＡＴＡＮＡＳＥＴＨＡＮＯＮＴ ｅｔ ａｌ．，’’Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ Ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｌａｖｏｎｅ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｎ Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ’’，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００７年発行，Ｖｏｌ．９６，ＮＯ．１，Ｐａｇｅ．２２３−２３３

【文献】 Ｋ．ＳＯＯＫＫＯＮＧＷＡＲＥＥ ｅｔ ａｌ．，’’Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｂｙ Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ａｎｄ ｆｌｏｖｏｎｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ’’，Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，２００６年発行，Ｖｏｌ．６１，ｐａｇｅ．７１７−７２１

【文献】 ＴＡＭＯＴＳＵ ＮＩＫＡＩＤＯ ｅｔ ａｌ．，’’Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ３’，５’−Ｃｙｃｌｉｃ Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ｂｙ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．ＩＩ’’，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９８８年発行，Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．２，ｐａｇｅ．６５４−６６１

【文献】 Ｐａｉｗａｎ Ｓｕｄｗａｎ ｅｔ ａｌ．，’’ＳＰＥＲＭ ＤＥＮＳＩＴＹ ＡＮＤ ＵＬＴＲＡＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＯＦ ＳＥＲＴＯＬＩ ＣＥＬＬＳ ＩＮ ＭＡＬＥ ＲＡＴＳ ＴＲＥＡＴＥＤ ＷＩＴＨ ＫＡＥＭＰＦＥＲＩＡ ＰＡＲＶＩＦＬＯＲＡ ＷＡＬＬ．ＥＸ ＢＡＫＥＲ ＥＸＴＲＡＣＴ’’，ＳＯＵＴＨＥＡＳＴ ＡＳＩＡＮ Ｊ ＴＲＯＰ ＭＥＤ ＰＵＢＬＩＣ ＨＥＡＬＴＨ，２００７年発行，ＶＯＬ．３８（ｓｕｐｐｌ １），ｐａｇｅ．２４９−２５４

【文献】 平井俊次 他，’’加熱処理が果実のポリフェノール化合物に与える影響’’，飯田女子短期大学紀要，２００６年発行，第２３集，７５−９５頁

【文献】 沖縄地域重要産業技術調査報告書，平成１９年発行，８１頁

【文献】 Ｔａｋａｎｏｒｉ Ｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．，’’Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｒａｔ ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ’’，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １７３３，２００５年発行，ｐａｇｅ．１３７−１４７

【文献】 ＪＡＭＥＳ Ｅ．ＦＥＲＲＥＬＬ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ Ａｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｃｙｃｌｉｃ ＡＭＰ Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ Ｑｕａｎｔｕｍ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｉｃｅｓ’’，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ，１９７９年発行，Ｖｏｌ．６６，ｐａｇｅ．５５６−５６８

【文献】 Ｄｏｒｉｓ Ｍａｒｋｏ ｅｔ ａｌ．，’’Ｔｈｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ａｆｆｅｃｔｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃａｓｃａｄｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ’’，Ｍｏｌ． Ｎｕｔｒ． Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ．，２００４年発行，Ｖｏｌ．４８，ｐａｇｅ．３１８−３２５

【文献】 Ｊｅｓｓｉｃａ Ｆｒｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，’’Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｍａｌｖｉｄｉｎ，ａ ｒｅｄ ｗｉｎｅ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ’’，Ｍｏｌ． Ｎｕｔｒ． Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ．２００６年発行，Ｖｏｌ．５０，ｐａｇｅ．３９０−３９５

【文献】 ’’メタボリックシンドロームの定義と診断基準’’，日本内科学会雑誌，平成１７年発行，第９４巻，第４号，１８８−２０３頁

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K8/00-8/99

A61Q1/00-90/00

ＢＩＯＳＩＳ／ＣＡｐｌｕｓ／ＥＭＢＡＳＥ／ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ）

ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０／ＪＳＴＰｌｕｓ（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ブラックジンジャー（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）の根茎部の水抽出物、ブラックジンジャーの根茎部の水とエタノールとの混合溶媒抽出物、及びブラックジンジャーの根茎部のエタノール抽出物のいずれかを含有することを特徴とする肥満解消剤。

【請求項2】

脂肪代謝を促進することで、肥満を解消する請求項１に記載の肥満解消剤。

【請求項3】

ブラックジンジャー（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）の根茎部の水抽出物及びブラックジンジャー（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）の根茎部の５０質量％エタノール抽出物のいずれかを含有する請求項１から２のいずれかに記載の肥満解消剤。

【請求項4】

サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用及びラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用の少なくともいずれかを有する請求項１から３のいずれかに記載の肥満解消剤。

【請求項5】

ブラックジンジャー（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）の根茎部の水抽出物、ブラックジンジャーの根茎部の水とエタノールとの混合溶媒抽出物、及びブラックジンジャーの根茎部のエタノール抽出物のいずれかを含有することを特徴とする脂肪分解促進剤。

【請求項6】

脂肪代謝を促進することで、肥満を解消する請求項５に記載の脂肪分解促進剤。

【請求項7】

ブラックジンジャー（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）の根茎部の水抽出物、ブラックジンジャーの根茎部の水とエタノールとの混合溶媒抽出物、及びブラックジンジャーの根茎部のエタノール抽出物のいずれかを含有することを特徴とするサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害剤。

【請求項8】

ブラックジンジャー（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）の根茎部の水抽出物、ブラックジンジャーの根茎部の水とエタノールとの混合溶媒抽出物、及びブラックジンジャーの根茎部のエタノール抽出物のいずれかを含有することを特徴とするラット副睾丸脂肪細胞の脂肪分解促進剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ブラックジンジャーの抽出物を含有する肥満解消剤、脂肪分解促進剤、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害剤、及びラット副睾丸脂肪細胞の脂肪分解促進剤に関する。

【背景技術】

【0002】

近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ_２⁻）、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）、一重項酸素（^１Ｏ_２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。
これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある（非特許文献１参照）。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウの抽出物（特許文献３参照）、スイオウの抽出物（特許文献４参照）、などに有効性が確認されている。

【0003】

皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの産生量が減少すると共に架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与している。

【0004】

近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群の分解及び再構築がある。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群(ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３)、（２）ゼラチナーゼ群(ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９)、（３）ストロメライシン群(ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０)、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献５参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９は、ゼラチナーゼ群に分類されるが、細胞外マトリックスのゼラチンのみでなく、皮膚基底膜の主成分であるＩＶ型コラーゲン、Ｖ型コラーゲン、Ｉ型コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、プロテオグリカン及びエラスチンなど、多様な基質を切断する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。

【0005】

また、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因としてヘキソサミニダーゼ（ヒスタミン）遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、によるものが知られている。

【0006】

前記ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このようなヒスタミン遊離抑制剤として、例えばトラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジンなどが用いられてきた。しかし、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題があった。

【0007】

前記一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。
このような炎症性疾患において、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献６参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）、などが報告されている。

【0008】

また、炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、機能障害などの症状を示す複雑な反応である。微視的に見ると、血漿漏出を起こす血管反応、白血球の浸潤、炎症性細胞による組織破壊などの共通する反応からなり、発熱反応や痛覚過敏など中枢神経系が関与する全身の反応も引き起こす場合がある。このような炎症の個々の反応にはプロスタグランジンが重要な役割を果たしており、この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２の関与が明らかとなっている。
このため、炎症反応の防止及び予防を図る目的で、アスピリンに代表される多くのシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤が用いられている（非特許文献３参照）。また、植物由来のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤としては、マンゴスチン果皮抽出物中のα−マンゴスチン及びγ−マンゴスチンが知られている（特許文献７参照）。また、前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有する化合物としては、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン、その塩、又はその水和物が知られている（特許文献８参照）。

【0009】

また、肥満の防止には、脂肪の代謝促進に関与しているサイクリックＡＭＰを分解する酵素であるサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑制することが有効であると考えられる。実際、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑えると、細胞内サイクリックＡＭＰの濃度が上昇して脂質代謝が活発になり、肥満が解消されることが知られている。
そこで、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有する物質を天然物から抽出することが試みられており、例えば、藤茶抽出物（特許文献９参照）、カエデ属植物の抽出物（特許文献１０参照）、などが報告されている。

【0010】

多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。

【0011】

前記アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等のさまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性な５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法や、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法が提案されている。
このような５α−ＤＨＴとその受容体との結合を阻害する作用を有する植物抽出物としては、例えば、マジト及びカチュアの少なくともいずれかの抽出物などが知られている（特許文献１１参照）。

【0012】

毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖乃至分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等、毛包上皮系細胞の増殖乃至分化及び毛髪の形成において重要な役割を担っている（非特許文献４参照）。前記毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖乃至分化及び毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、培養毛乳頭細胞に対象物質を接触させて、その細胞の増殖活性の有無及び／又は強弱を特定することで、その対象物質の育毛効果を検定する方法が提案されている（特許文献１２参照）。このような毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬として、例えば、オウギ抽出物、オウレン抽出物、クマノギク抽出物等が知られている（特許文献１３及び特許文献１４参照）。

【0013】

これまでの美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、最近、紫外線ＵＶＢ照射後に表皮ケラチノサイトからの産生が上昇し、色素細胞（メラノサイト）を活性化するサイトカインとしてα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、一酸化窒素（ＮＯ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）等が報告されており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニン産生を抑制して美白効果を導く物質の開発が盛んに行われるようになってきている。このようなエンドセリン−１（ＥＴ−１）の色素細胞（メラノサイト）への作用を阻害する生薬の抽出物として、例えばカミツレ抽出物及びアルテア抽出物が報告されている（非特許文献５参照）。

【0014】

しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0015】

【特許文献1】特開２００３−８１８４８号公報

【特許文献2】特開２００５−２９４８３号公報

【特許文献3】特開２００６−３２１７３０号公報

【特許文献4】特開２００７−８９０２号公報

【特許文献5】特開２０００−３４４６７２号公報

【特許文献6】特開２００２−８７９７５号公報

【特許文献7】特開２００２−４７１８０号公報

【特許文献8】特開２０００−１６９３５号公報

【特許文献9】特開２００３−１２５３２号公報

【特許文献10】特開２００３−１１３０６８号公報

【特許文献11】特開２００２−２４１２９７号公報

【特許文献12】特開平１０−２２９９７８号公報

【特許文献13】特開平９−２０８４３１号公報

【特許文献14】特開平１１−１２１３４号公報

【非特許文献】

【0016】

【非特許文献1】「フレグランスジャーナル」臨時増刊Ｎｏ．１４、ｐ１５６、１９９５年

【非特許文献2】「和漢医薬学雑誌」，Ｖｏｌ．１５，ｐ．３０２−３０３，１９９８年発行

【非特許文献3】薬理学アトラス（Ｐ１８４）、福原武彦監訳、文光堂

【非特許文献4】「Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ.５６−６１

【非特許文献5】「フレグランスジャーナル」，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．９，ｐ６５〜７１，２０００年発行

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第１に、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗酸化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及び表皮角化細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第３に、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗炎症剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第４に、アンドロゲンレセプター拮抗作用及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系育毛剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第５に、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用及びラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗肥満剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第６に、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第７に、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した化粧料及び美容用飲食品を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0018】

前記課題を解決するため、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤について本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、ブラックジンジャーの抽出物が、（１）優れたスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有し、抗酸化剤として有用であること、（２）優れたマトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及び表皮角化細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、抗老化剤として有用であること、（３）優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかを有し、抗炎症剤として有用であること、（４）優れたアンドロゲンレセプター拮抗作用及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、育毛剤として有用であること、（５）優れたサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用及びラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用の少なくともいずれかを有し、抗肥満剤として有用であること、（６）優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有し、美白剤として有用であることを、それぞれ知見した。

【0019】

本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ ブラックジンジャーの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞ スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞ ブラックジンジャーの抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞ マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及び表皮角化細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞ ブラックジンジャーの抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜６＞ ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかを有する前記＜５＞に記載の抗炎症剤である。
＜７＞ ブラックジンジャーの抽出物を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞ アンドロゲンレセプター拮抗作用及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜７＞に記載の育毛剤である。
＜９＞ ブラックジンジャーの抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤である。
＜１０＞ サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用及びラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜９＞に記載の抗肥満剤である。
＜１１＞ ブラックジンジャーの抽出物を含有することを特徴とする美白剤である。
＜１２＞ エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１１＞に記載の美白剤である。
＜１３＞ 前記＜１＞から＜１２＞のいずれかに記載のブラックジンジャーの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする化粧料である。
＜１４＞ 前記＜１＞から＜１２＞のいずれかに記載のブラックジンジャーの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美容用飲食品である。

【発明の効果】

【0020】

本発明の抗酸化剤によると、優れたスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを通じて、生体内の酸化防止、皮膚の老化を防止乃至改善することができる。
本発明の抗老化剤によると、優れたマトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及び表皮角化細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワ及び皮膚の弾力低下の防止乃至改善することができる。
本発明の抗炎症剤によると、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかを通じて、炎症性疾患を防止乃至改善することができる。
本発明の育毛剤は、優れたアンドロゲンレセプター拮抗作用及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを通じて、男性型脱毛症等の予防乃至治療に極めて有用である。
本発明の抗肥満剤は、優れたサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用及びラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用の少なくともいずれかを通じて、肥満を予防乃至防止することができる。
本発明の美白剤は、優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを通じて、美白効果を奏することができる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は、天然系抽出物であり安全性に優れ、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさないので化粧料に配合したり、美容用飲食品に添加して用いるのに好適なものである。

【発明を実施するための形態】

【0021】

（抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤）
本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は、ブラックジンジャーの抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。

【0022】

前記抗酸化剤は、抗酸化作用として、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗老化剤は、抗老化作用として、マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及び表皮角化細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗炎症剤は、抗炎症作用として、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかを有している。
前記育毛剤は、育毛作用として、アンドロゲンレセプター拮抗作用及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗肥満剤は、抗肥満作用として、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用及びラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用の少なくともいずれかを有している。
前記美白剤は、美白作用として、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有している。
前記ブラックジンジャーの抽出物における抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及美白作用の少なくともいずれかを有する物質の詳細については不明であるが、該ブラックジンジャーの抽出物がこれらの優れた作用を有し、抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として有用であることは現在までのところ全く知られておらず、これらのことは、本発明者らの鋭意研究による新知見である。

【0023】

前記ブラックジンジャー（黒ショウガ）は、ショウガ科バンウコン属の植物であり、学名はＫａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａである。
前記ブラックジンジャーは、東南アジアのタイ等に分布しており、この地域から容易に入手可能である。

【0024】

前記ブラックジンジャーの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。なお、前記ブラックジンジャーの抽出物には、ブラックジンジャーの抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。

【0025】

前記ブラックジンジャーの抽出原料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブラックジンジャーの根茎部などを用いることができる。

【0026】

前記抽出原料であるブラックジンジャーの根茎部は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。前記ブラックジンジャーは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。なお、脱脂等の前処理を行うことにより、ブラックジンジャーの極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

【0027】

前記抽出に用いる溶媒としては、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒を室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

【0028】

前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部添加することが好ましい。

【0029】

本発明において、抽出原料であるブラックジンジャーから、抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有する物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。

【0030】

具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としてのブラックジンジャーの根茎部を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、濾過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として用いることができる。

【0031】

得られるブラックジンジャーの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。

【0032】

なお、得られるブラックジンジャーの抽出液は、そのままでも抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、前記ブラックジンジャーの抽出物は、特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料及び美容用飲食品に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製としては、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。

【0033】

以上のようにして得られるブラックジンジャーの抽出物は、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、アンドロゲンレセプター拮抗作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用、ラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有しており、これらの作用に基づいて、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として使用することができる。

【0034】

本発明の抗酸化剤における抗酸化作用は、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及び表皮角化細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の育毛剤における育毛作用は、アンドロゲンレセプター拮抗作用及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗肥満剤における抗肥満作用は、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用、及びラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の美白剤における美白作用は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明のブラックジンジャーの抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有すると共に、皮膚及び頭皮に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、特に、以下に説明する本発明の化粧料に配合するのに好適である。
また、本発明のブラックジンジャーの抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有すると共に、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、特に、以下に説明する本発明の美容用飲食品に配合するのに好適である。

【0035】

（化粧料）
本発明の化粧料は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。

【0036】

ここで、前記化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス、などが挙げられる。

【0037】

本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、又は前記美白剤の前記化粧料全体における配合量は、化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記ブラックジンジャーの抽出物に換算して０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜１質量％がより好ましい。

【0038】

前記化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、本発明の前記抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。これらの成分は、前記ブラックジンジャーの抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた作用効果をもたらすことがある。

【0039】

本発明の化粧料は、皮膚及び頭皮に使用した場合に高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、アンドロゲンレセプター拮抗作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用、ラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを効果的に発揮して、生体内の酸化防止、育毛、美白、老化防止、及び炎症性疾患の予防乃至治療に有用である。

【0040】

（美容用飲食品）
本発明の美容用飲食品は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。

【0041】

本発明の前記美容用飲食物は、ブラックジンジャーの抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、ブラックジンジャーの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。

【0042】

前記美容用飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。

【0043】

前記その他の成分としては、前記美容用飲食品を製造するに当たって通常用いられる補助的原料又は添加物、などが挙げられる。
前記原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、などが挙げられる。

【0044】

前記美容用飲食品における本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、又は前記美白剤の添加量は、対象となる美容用飲食品の種類に応じて異なり一概には規定することができないが、美容用飲食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、各種対象美容用飲食品に対し、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、顆粒、錠剤又はカプセル形態の美容用飲食品の場合には、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。

【0045】

本発明の美容用飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分であるブラックジンジャーの抽出物の働きによって、抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを極めて効果的に発揮させることができる。

【0046】

なお、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、美白剤、化粧料、及び美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。

【実施例】

【0047】

以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。

【0048】

（製造例１）
−ブラックジンジャーの水抽出物の製造−
抽出原料としてブラックジンジャーの根茎部の粉砕物１００ｇを、水１，０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、濾過した。濾液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。

【0049】

（製造例２）
−ブラックジンジャーの５０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料としてブラックジンジャーの根茎部の粉砕物１００ｇを、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）１，０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、濾過した。濾液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。

【0050】

（製造例３）
−ブラックジンジャーのエタノール抽出物の製造−
抽出原料としてブラックジンジャーの根茎部の粉砕物１００ｇを、エタノール１，０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、濾過した。濾液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。

【0051】

【表1】

【0052】

（実施例１）
−スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
試験管に０．０５ｍｏｌ／Ｌの炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬ、２ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン０．１ｍＬ、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡを０．１ｍＬ、５０μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）０．１ｍＬ、及び０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム０．１ｍＬを加えた。これに各試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。
次に、キサンチンオキシダーゼ溶液０．１ｍＬを加え、素早く攪拌し、２５℃で２０分間反応した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
測定した各吸光度より、下記数式１によりスーパーオキサイド消去率を求めた。
＜数式１＞
スーパーオキサイド消去率（％）＝
｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
ただし、前記数式１中、Ｓｔは試料溶液の波長５６０ｎｍにおける吸光度、Ｓｂは試料溶液ブランクの波長５６０ｎｍにおける吸光度、Ｃｔはコントロール溶液の波長５６０ｎｍにおける吸光度、Ｃｂはコントロール溶液ブランクの波長５６０ｎｍにおける吸光度、をそれぞれ表す。

【0053】

次に、試料濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表２に示す。

【0054】

【表2】

表２の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、高いスーパーオキサイド消去作用を有し、ＳＯＤ様作用を有することが確認できた。

【0055】

（実施例２）
−一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用を試験した。
透明サンプル瓶（ガラス製）１０ｍＬに２質量％の赤血球懸濁液５ｍＬ、ＰＢＳ（−）５ｍＬ、又は各試料溶液を含むＰＢＳ（−）５ｍＬ、及び１０ｍｍｏｌ／Ｌのヘマトポルフィリン−２０ｍｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム溶液０．０１ｍＬを加え、よく混和した。この反応溶液をメリーゴーランド上で、１５Ｗハロゲンランプで３５分間均一に光を照射して^１Ｏ_２を発生させ、赤血球を溶血させた。
反応終了後、反応溶液１ｍＬを採取し、ＰＢＳ（−）２ｍＬを加え、よく混和した。遠心分離（１６６０×ｇ、５分、４℃）した後、上清の波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。対照として反応溶液１ｍＬに精製水２ｍＬを加え、完全に赤血球を溶血させた混合液を作製した。この混合液の波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた結果から、下記数式２により一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制率を算出した。試料濃度５０μｇ／ｍＬでの膜脂質の過酸化抑制率を表３に示す。
＜数式２＞
膜脂質の過酸化抑制率（％）＝（１−Ｂ／Ａ）×１００
ただし、前記数式２中、Ａは完全溶血液の波長５４０ｎｍにおける吸光度、Ｂは反応溶液の上清の波長５４０ｎｍにおける吸光度を表す。

【0056】

【表3】

表３の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用を有することが確認できた。

【0057】

（実施例３）
−過酸化水素消去作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により過酸化水素消去作用を試験した。
１．５ｍｍｏｌ／Ｌの過酸化水素溶液１０μＬに、各試料溶液１０μＬを加え、３７℃で２０分間反応した後、発色溶液〔１００μｍｏｌ／ＬのＤＡ−６４、０．５質量％のトライトンＸ−１００含有０．１ｍｏｌ／ＬのＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１００ｍＬに１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペルオキシダーゼ１ｍＬを添加〕２．９８ｍＬを添加し、３７℃で５分間反応した。反応終了後、波長７２７ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた結果から、下記数式３により過酸化水素消去率を算出した。試料濃度１００μｇ／ｍＬでの過酸化水素消去率を表４に示す。
＜数式３＞
過酸化水素消去率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
ただし、前記数式３中、Ｓｔは試料溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度、Ｓｂは試料溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度、Ｃｔはコントロール溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度、Ｃｂはコントロール溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度をそれぞれ表す。

【0058】

【表4】

表４の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、過酸化水素消去作用を有することが確認できた。

【0059】

（実施例４）
−ＤＰＰＨに対するラジカル消去試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により非常に安定なラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、測定した各吸光度より、下記数式４によりＤＰＰＨラジカル消去率（％）を算出した。試料濃度２００μｇ／ｍＬでのＤＰＰＨラジカル消去率を表５に示す。
＜数式４＞
ＤＰＰＨラジカル消去率（％）＝｛Ｃ−（Ｓｔ−Ｓｂ）｝／Ｃ×１００
ただし、前記数式４中、Ｓｔは試料溶液の波長５２０ｎｍにおける吸光度、Ｓｂは試料溶液ブランクの波長５２０ｎｍにおける吸光度、Ｃはコントロール溶液の波長５２０ｎｍにおける吸光度、をそれぞれ表す。

【0060】

【表5】

表５の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用を有することが確認できた。

【0061】

（実施例５）
−一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２質量％のＤＭＳＯを含む１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ_２⁻）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｐｒｉｄｅ ｉｎ ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールの一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基にして、下記数式５からＮＯ産生抑制率を算出した。

【0062】

＜数式５＞
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
ただし、前記数式５中、Ａは試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＣはコントロールのＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＤはコントロールのＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、をそれぞれ表す。

【0063】

次に、製造例１〜３の各抽出物溶液の濃度を段階的に減少させて上記ＮＯ産生抑制率を測定し、ＮＯ産生抑制率が５０％になる濃度ＩＣ_５０を内挿法により求めた（このＩＣ_５０値が小さいほどＮＯ産生抑制作用が強い）。結果を表６に示す。

【0064】

【表6】

表６の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、高い一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有することが認められた。

【0065】

（実施例６）
−ヒアルロニダーゼ活性阻害試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりヒアルロニダーゼ活性阻害作用について試験した。
まず、各抽出物を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液(ｐＨ３．５)０．２ｍＬにヒアルロニダーゼ溶液〔Ｔｙｐｅ ＩＶ−Ｓ(ｆｒｏｍ ｂｏｖｉｎｅ ｔｅｓｔｉｓ;ＳＩＧＭＡ ４００ ＮＦ ｕｎｉｔｓ／ｍＬ)〕０．１ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応した。更に、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃にて２０分間反応した。これに０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｆｒｏｍ ｒｏｂｓｔｅｒ ｃｏｍｂ）０．５ｍＬを加え、３７℃にて４０分間反応した。その後、０．４ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム０．２ｍＬを加え、反応を止めて冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬６ｍＬを加え、３７℃にて２０分間反応した。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、これらの結果から、下記数式６によりヒアルロニダーゼ活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのヒアルロニダーゼ活性阻害率を表７に示す。
＜数式６＞
ヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）＝
［１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）］×１００
ただし、前記数式６中、Ｓｔは、試料溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｓｂは、試料溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃｔは、コントロール溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃｂは、コントロール溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。

【0066】

【表7】

表７の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することが確認できた。

【0067】

（実施例７）
−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物について、下記の試験方法によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。なお、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に培地で希釈し、ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ（ＳＩＧＭＡ社製）が終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるよう添加した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した試料溶液１０μＬを加え、３７℃にて１０分静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ（ＬＳＬ Ｃｏ．，Ｌｔｄ製）溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６穴プレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各穴の細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ＮＡＧ（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ Ｎ−ａｃｅｔｙｌ β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ；（ＳＩＧＭＡ社製））溶液１０μＬを、新たな９６穴プレートに添加し、３７℃、１時間反応させた。反応終了後、各穴に０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３を２５０μＬ加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬ、及び０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３を２５０μＬ混合した液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。そして、下記数式７からヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出した。
＜数式７＞
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式７中、Ａは、試料溶液無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、ｐ−ＮＡＧ無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。

【0068】

次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率の測定を行い、ヘキソサミニダーゼの遊離を５０％抑制する試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表８に示す。

【0069】

【表8】

表８の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制（ヒスタミン遊離抑制）作用を有することが確認できた。

【0070】

（実施例８）
−シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）活性阻害作用について試験した。
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、１８時間培養した。培養終了後、既に存在するＣＯＸ−１及び少量発現しているＣＯＸ−２をアセチル化し失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌのアスピリン含有培地に交換し、４時間培養した。細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄し、終濃度０．５質量％のＤＭＳＯを含む１０％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、各穴の培養上清中のプロスタグランジンＥ２量をＰＧＥ２ ＥＩＡ Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を用いて定量した。
そして、得られた結果から、下記数式８によりシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）活性阻害率を算出した。
＜数式８＞
ＣＯＸ−２活性阻害率（％）＝{１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）}×１００
ただし、前記数式８中、Ａは試料添加、ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量、Ｂは試料無添加、ＬＰＳ刺激時プロスタグランジンＥ２量、Ｃは試料無添加、ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量、をそれぞれ表す。

【0071】

次に、製造例１〜３の各抽出物溶液の濃度を段階的に減少させて上記ＣＯＸ−２活性阻害率を測定し、ＣＯＸ−２の活性抑制率が５０％になる濃度ＩＣ_５０を内挿法により求めた。結果を表９に示す。

【0072】

【表9】

表９の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、極めて強いシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）活性阻害作用を有することが確認できた。

【0073】

（実施例９）
−エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermis keratinocyte;ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ^２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ_２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０^４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ_２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ^２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した各試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ_２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ^（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、Ｔａｋａｒａ ＳＹＢＲ ＥｘＳｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）によるリアルタイム ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＥＴ−１の発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式９によりＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１μｇ／ｍＬ及び０．１μｇ／ｍＬでのＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表１０に示す。
＜数式９＞
エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式９中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。

【0074】

【表10】

表１０の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが確認できた。

【0075】

（実施例１０）
−ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ^２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ_２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０^４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ_２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ^２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した各試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ_２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＳＣＦ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ^（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）によるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＳＣＦの発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式１０によりＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１μｇ／ｍＬでのＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表１１に示す。
＜数式１０＞
ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式１０中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。

【0076】

【表11】

表１１の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが確認できた。

【0077】

（実施例１１）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）活性阻害作用を試験した。
（１）ＭＭＰ−２の調製
ヒトＭＭＰ−２ ｃＤＮＡを、５’ＰＣＲプライマー：５’−ｇｇｃｇｇａｔｃｃａｔｇｇｃｇｃｃｇｔｃｇｃｃｃａｔｃａｔｃ−３’、及び３’ＰＣＲプライマー：３’−ｇｃｃｇｔｃｇａｃｔａｃａａｔｇｔｃｃｔｇｔｔｔｇｃａｇａｔ−５’を用い、ＭＭＰ−２の３．３ｋｂ ｃＤＮＡ断片を含むｐＳＧ−ＧｅｌＡを鋳型として、ＰＣＲ反応を行った。得られた３０Ａｌａから４７４Ｖａｌまでをコードする１．３ｋｂ ＰＣＲ断片をＢａｍ ＨＩ／Ｓａｌ Ｉで消化し、ｐＴＨ−７２発現ベクター（ｐＴＨ−ＭＭＰ２−ＰＣ）のＢａｍ ＨＩ／Ｓａｌ Ｉ部位にクローン化した。
ヒトＭＭＰ−２の発現は、Ｉｔｏｈ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｂｉｏｌｃｈｅｍ．，１１９：６６７−６７３（１９９６）、精製及び巻き戻し（「リフォールディング」と称することもある）は、西村義文、大野茂雄 監修：タンパク実験プロトコール、細胞工学別冊 実験プロトコールシリーズ２ 構造解析編、１９９７に準じて行った。また、ｃＤＮＡは、Ｃｏｌｌｉｅｒ，Ｉ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６３（
１４），６５７９−６５８７（１９９８）に記載されているものを使用した。
具体的には、ＭＭＰ−２のｃＤＮＡを含む発現ベクター（ｐＴＨ−ＭＭＰ−２）を、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株にトランスフェクトし、ＩＰＴＧで発現誘導した。発現タンパクは、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂（ＱＵＩＡ Ｉｎｃ．,米国）を用いてアフィニティー精製後、リフォールディングを行い、酢酸４−アミノフェニル水銀と３７℃で６０分間反応を行うことで活性型へ移行させた後、ＥＤＴＡを加えた。これを酵素標本とし、蛍光性ペプチド基質（ＭＯＣＡｃ／ＤＮＰ ｐｅｐｔｉｄｅ）切断活性反応を行い、高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ５Ｃ１８、溶離液：３０質量％のアセトニトリル＋０．１質量％のＴＨＦ、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出：励起波長３２５ｎｍ、蛍光波長４１０ｎｍ）による生成物のピーク面積を測定し、これを酵素活性の指標とした。

【0078】

（２）植物抽出物のＭＭＰ−２阻害活性の測定
被験試料を、蒸留水に溶解させて８．０ｍｇ／ｍＬとした後、蒸留水にて４．０ｍｇ／ｍＬ、及び２．０ｍｇ／ｍＬに希釈し、懸濁物を除くため、濾過を行った。ＭＭＰ−２阻害活性の測定は、活性型ＭＭＰ−２を４０μＬ、各試料溶液２０μＬ、アッセイバッファー２０μＬ〔トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）５００ｍｍｏｌ／Ｌ、塩化ナトリウム１．５ｍｏｌ／Ｌ、塩化カルシウム１００ｍｍｏｌ／Ｌ、硫酸亜鉛５００μｍｏｌ／Ｌ、アジ化ナトリウム３０ｍｍｏｌ／Ｌ、０．０５質量％のＢｒｉｊ３５〕を、３７℃で１５分間プレインキュベーションした後、ＭＯＣＡｃ／ＤＮＰ ｐｅｐｔｉｄｅを１２０μＬ（４．１６μｍｏｌ／Ｌ）添加し、３７℃で２時間反応させた後、ＥＤＴＡを１０μＬ（２００ｍｍｏｌ／Ｌ）添加した。反応液中の生成物について高速液体クロマトグラフィー分析によるピーク面積を測定した。試料溶液の代わりに蒸留水を加えた反応液の生成物を１００％として、試料濃度２００μｇ／ｍＬ及び４００μｇ／ｍＬでのＭＭＰ−２活性阻害率（％）を求めた。結果を表１２に示す。

【0079】

【表12】

表１２の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、ＭＭＰ−２活性阻害作用を有することが確認できた。

【0080】

（実施例１２）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＭＭＰ−９ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ^２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ_２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０^４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ_２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ^２）を行った。その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した各試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ_２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌＲＮＡを鋳型とし、ＭＭＰ−９及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ^（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ^（Ｒ）ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ^ＴＭ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２ Ｓｔｅｐ ＲＴ-ＰＣＲ反応により行った。なお、ＭＭＰ−９のプライマーとしては、Ｆ：ａｃｇｃａｃｇａｃｇｔｃｔｔｃｃａｇｔａ、Ｒ:ｃａａｃｔｃａｃｔｃｃｇｇｇａａｃｔｃａを使用した。ＭＭＰ−９の発現量はＧＡＰＤＨで補正し、算出した。
得られた結果から、下記数式１１によりＭＭＰ−９ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１μｇ／ｍＬでのＭＭＰ−９ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表１３に示す。
＜数式１１＞
ＭＭＰ−９ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式１１中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。

【0081】

【表13】

表１３の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、ＭＭＰ−９ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが確認できた。

【0082】

（実施例１３）
−表皮角化細胞増殖促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した各試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式１２により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。試料濃度３．１２５μｇ／ｍＬ及び１２．５μｇ/ｍＬでの表皮角化細胞増殖促進率を表１４に示す。
＜数式１２＞
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ／Ｃｔ）×１００
ただし、前記数式１２中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度を表す。

【0083】

【表14】

表１４の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認できた。

【0084】

（実施例１４）
−アンドロゲンレセプター拮抗作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりアンドロゲンレセプター拮抗作用を試験した。
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌、ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２％のＤＣＣ−ＦＢＳ、及び１０^−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロン含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）で希釈し、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０^−９ｍｏｌ／Ｌのジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を含む０．５質量％のＢＳＡ含有Ｈａｍ Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した試料溶液を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ／２に溶解したＭＴＴを各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０^−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
そして、これらの結果から、下記数式１３により、アンドロゲンレセプター拮抗率を算出した。試料濃度５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、及び１２．５μｇ／ｍＬでのアンドロゲンレセプター拮抗率を表１５に示す。
＜数式１３＞
アンドロゲンレセプター拮抗率（％）
＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式１３中、Ａは、ＤＨＴ添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、ＤＨＴ無添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、ＤＨＴ添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、ＤＨＴ無添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。

【0085】

【表15】

表１５の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、アンドロゲンレセプター拮抗作用を有することが確認できた。

【0086】

（実施例１５）
−毛乳頭細胞増殖促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
正常ヒト毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＣＡ６０２０５）を含有した毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）を用いて２．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当り１００μＬ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、無血清ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）に溶解した各試料溶液を各穴に２００μＬ添加し、更に４日間培養した。毛乳頭細胞増殖促進作用はＭＴＴアッセイを用いて測定した。具体的には、培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ)−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、毛乳頭細胞増殖促進率を下記数式１４から算出した。試料濃度１．５６２５μｇ／ｍＬの時の毛乳頭細胞増殖促進率を表１６に示す。
＜数式１４＞
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、前記数式１４中、Ａは試料溶液添加時の吸光度、Ｂは試料溶液無添加時の吸光度を表す。

【0087】

【表16】

表１６の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが確認できた。

【0088】

（実施例１６）
−サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。
まず、５ｍｍｏl／Ｌの塩化マグネシウム含有５０ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに、２．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液０．１ｍＬ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬ、各試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間予備反応した。これに０．５ｍｇ／ｍＬのｃＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間反応した。３分間沸騰水浴上で煮沸することにより反応を停止した。これを遠心（２２６０×ｇ、１０分間、４℃）し、上清を試料反応液として、下記の条件でＨＰＬＣ分析した。同様の方法で空試験を行い補正した。
〔ＨＰＬＣ条件〕
・カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ Ｃ_１８−ＯＤＳ ５μｍ
・移動相：１ｍｍｏｌ／ＬのＴＢＡＰ ｉｎ ２５ｍｍｏｌ／ＬのＫＨ_２ＰＯ_４：ＣＨ_３ＣＮ＝９０：１０
・流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
・検出：ＵＶ、２６０ｎｍ

【0089】

次に、サイクリックＡＭＰ標準品のピーク面積（Ａ）とサイクリックＡＭＰ標準品とホスホジエステラーゼ反応した上清のピーク面積（Ｂ１）とサイクリックＡＭＰ標準品と被験試料とホスホジエステラーゼ反応した上清のピーク面積（Ｂ２）を下記数式１８に基ついて標準品の分解率（Ｃ）と被験試料の分解率（Ｄ）を求めた。
＜数式１８＞
分解率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
ただし、式中のＢは、Ｂ１又はＢ２のいずれかを表す。

【0090】

その後、前記数式１８から求めた分解率に従い、ホスホジエステラーゼ活性阻害率を下記数式１９に基づいて算出した。
＜数式１９＞
ホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）＝（Ｃ−Ｄ）／Ｃ×１００

【0091】

次に、試料溶液の試料濃度を段階的に減少させて上記サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率の測定を行い、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性を５０％阻害する試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表１７に示す。

【0092】

【表17】

表１７の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、高いサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有することが確認された。

【0093】

（実施例１７）
−ラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用を試験した。
（１）脂肪細胞の調製
ウィスター系雄性ラット（７週齢）７匹をエーテル麻酔にかけ、麻酔下で断頭により放血致死させた。副睾丸上の脂肪組織を切り出し、３７℃に保温した生理食塩水中で組織をハサミで細かく切った。組織小片を小型の三角フラスコに入れ、これに１０ｍＬの緩衝液Ａ（１１９ｍｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウム、４．７ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カリウム、２．６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム、１．２ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素カリウム、１．２ｍｍｏｌ／Ｌの硫酸マグネシウム、３２．３ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、２０ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、２ｍｍｏｌ／Ｌのグルコース）に溶解した１０ｍｇのコラゲナーゼを入れて１時間、３７℃で攪拌（１００ｒｐｍ／ｍｉｎ）しながら反応した。反応後、ガーゼで濾過して未消化組織を除き、濾液は蓋付きスピッツ管に取って遠心分離（１８０×ｇ、２０秒）し、下層をパスツールピペットで取り除いた。これに緩衝液Ａを１０ｍＬ加え、混合した後、再度遠心した。この操作を４回繰り返し、コラゲナーゼを十分取り除いた。最後に、１０ｍＬ程度の緩衝液Ａを加えて、脂肪細胞液とした。

【0094】

（２）脂肪分解促進試験
上記で調製した脂肪細胞液を９６穴マイクロプレートに１穴当たり９０μＬずつ播種し、これに溶解可能な溶媒により溶解した各試料溶液を各穴に１０μＬ添加して、１．５時間培養した。培養終了後、各穴から５μＬずつ採取して、遊離した脂肪酸をＮＥＦＡ−Ｃテストワコー（和光純薬株式会社製）により測定した。
そして、得られた測定結果から、下記数式１６により脂肪分解促進率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでの脂肪分解促進率を表１８に示す。
＜数式１６＞
脂肪分解促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式１６中、Ａは試料添加時の遊離脂肪酸量、Ｂは試料溶液無添加（対照）時の遊離脂肪酸量をそれぞれ表す。

【0095】

【表18】

表１８の結果から、製造例１〜３のブラックジンジャーの抽出物が、ラット副睾丸脂肪細胞を用いた脂肪分解促進作用を有することが確認できた。

【0096】

（配合実施例１）
−乳液−
下記組成から乳液を常法により製造した。
・製造例１のブラックジンジャーの水抽出物・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カツミレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）

【0097】

（配合実施例２）
−化粧水−
下記組成から化粧水を常法により製造した。
・製造例２のブラックジンジャーの５０質量％エタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）

【0098】

（配合実施例３）
−クリーム−
下記組成からクリームを常法により製造した。
・製造例３のブラックジンジャーのエタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）

【0099】

（配合実施例４）
−パック−
下記組成からパックを常法により製造した。
・製造例１のブラックジンジャーの水抽出物・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）

【0100】

（配合実施例５）
−ヘアトニック−
下記組成の育毛作用を有するヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・製造例２のブラックジンジャーの５０質量％エタノール抽出物・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

【0101】

（配合実施例６）
−シャンプー−
下記組成の育毛作用を有するシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・製造例１のブラックジンジャーの水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

【0102】

（配合実施例７）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例１のブラックジンジャーの水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

【0103】

（配合実施例８）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例３のブラックジンジャーのエタノール抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

【0104】

（配合実施例９）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・製造例１のブラックジンジャーの水抽出物・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ

【0105】

（配合実施例１０）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例２のブラックジンジャーの５０質量％エタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ

【0106】

（配合実施例１１）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例３のブラックジンジャーのエタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ

【産業上の利用可能性】

【0107】

本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤の少なくともいずれかを配合した化粧料は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有し、生体内の酸化防止、育毛、美白、皮膚のシワや皮膚の弾力低下の防止及び改善、肌荒れの予防、肌荒れの防止に有効であり、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどに幅広く用いられる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤の少なくともいずれかを添加した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有し、安全性にも優れているので、例えば健康食品、栄養補助食品などに幅広く用いられる。